KR20210078462A

KR20210078462A - 안정한 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법

Info

Publication number: KR20210078462A
Application number: KR1020210079877A
Authority: KR
Inventors: 조중웅; 김경해; 이일웅
Original assignee: 주식회사 삼양홀딩스
Priority date: 2018-05-30
Filing date: 2021-06-21
Publication date: 2021-06-28
Also published as: KR20190136284A; WO2019231225A1; JP2022500350A; JP7148642B2; JP2022185009A

Abstract

본 발명은 아세토니트릴을 포함하는 용매 및 저온 공정을 이용하여 안정한 아자시티딘-함유 약제학적 조성물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

안정한 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법 {METHOD FOR PREPARING STABLE AZACITIDINE-CONTAINING PHARMACEUTICAL COMPOSITION}

아래와 같은 화학 구조를 가지는 아자시티딘 (azacitidine, AZA)은 4-아미노-1-(3,4-디히드록시-5-히드록시메틸-테트라히드로푸란-2-일)-1H-[1,3,5]트리아진-2-온 또는 5-아자시티딘 등으로도 공지되어 있으며, 현재 의약품 VIDAZA(비다자)^TM으로 시판되고 있다.

아자시티딘

아자시티딘은 DNA 및 RNA에 존재하는 뉴클레오시드인 시티딘의 화학적 유사체이며, 아자시티딘과 이의 디옥시유도체인 5-아자-2'데옥시시티딘은 DNA 메틸화를 감소시키기 위해 디자인된 뉴클레오시드 아날로그로서 급성 골수 백혈병 등을 치료하기 위해 임상적으로 이용되어 왔다 (Molecules, v.19, no.3, pp.3149-3159, 2014). 아자시티딘은 복제 DNA 내로 혼입된 후에 DNA 메틸트랜스퍼라제와의 공유 착물을 형성하고 그 활성을 억제하여 DNA 히포메틸화를 유도함으로써, 정상적인 세포 주기 조절, 분화 및 사멸에 관여하는 유전자의 재-발현에 의해 세포가 정상 기능을 회복하도록 한다. 또한 아자시티딘의 세포독성 효과는 정상 세포 성장 제어 메카니즘에 대해 더 이상 반응하지 않는, 암 세포를 비롯한 급속히 분할하는 세포의 사멸을 초래할 수 있다. 따라서, 아자시티딘은 임상 시험에서 시험되어 왔으며, 특히 골수이형성 증후군 (MDS)의 치료 등에서 상당한 항종양 활성을 나타낸 바 있다.

그러나 아자시티딘은 가수분해되기 쉬운 특성 때문에 상업적 목적의 대규모 합성, 처리 및 보관이 곤란하다는 문제가 있었다. 아자시티딘의　s-트리아진 고리는 물에서 분해되는 경향이 있는데, 중성 pH의 수용액 중에서 아자시티딘의 5,6-이민 이중 결합의 수화가 급속히 일어난 후 결합이 개열되어 포르밀 유도체인　N-(포르밀아미디노)-N'-β-D-리보푸라노실우레아 (RGU-CHO)가 수득되고, 이는 이어서 탈포르밀화됨으로써 1-β-D-리보푸라노실-3-구아닐우레아 (RGU)를 비가역적으로 생성한다. 이와 같은 수용액 중 아자시티딘의 불안정성으로 인해, 물을 함유하는 용매 내에서의 아자시티딘의 처리 및 보관이 용이하지 않았다.

따라서, 안정적이고 간편하며 산업적 규모로 수행가능한 아자시티딘의 처리 및 보관방법에 대한 필요성이 존재하였다.

아자시티딘과 같은 화합물들의 동결건조 제제를 제조하기 위해서는 용액 상태의 화합물을 만들고, 이를 멸균한 후 동결건조하여 용매를 제거하는 공정을 거쳐야 하는데, 그러한 과정에서 수 시간 동안 아자시티딘이 수용액에 노출됨으로써 가수분해에 의해 유연물질 (불순물, impurities)이 생성되는 문제가 있었다.

이에 본 발명의 목적은, 아자시티딘의 가수분해를 억제할 수 있는 온도 및 용매 조건을 탐색함으로써, 유연물질 형성을 최소화하여 아자시티딘-함유 약제학적 조성물을 제조할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.

명시적인 다른 기재가 없는 한, 본 명세서 전체에서 사용되는 몇 가지 용어는 다음과 같이 정의될 수 있다.

본 명세서 전체에서 특별한 언급이 없는 한 "포함" 또는 "함유"라 함은 어떤 구성 요소 (또는 구성 성분)를 별다른 제한 없이 포함함을 지칭하며, 다른 구성 요소 (또는 구성 성분)의 부가를 배제하는 것으로 해석되지 않는다.

또한, "아자시티딘"은 아자시티딘 유리 염기뿐만 아니라 아자시티딘의 염, 다형체, 이성체 (isomer), 거울상이성체, 무수물, 반수화물, 용매화물, 전구약물 또는 이들의 임의의 혼합물일 수 있다. 여기서 아자시티딘의 "염"은 무기산 및/또는 유기산으로부터 유래된 아자시티딘의 산 부가염을 지칭하며, 염산, 브로민화수소산, 붕산, 인산, 또는 황산으로부터 형성될 수 있다. 또는, 염은 아세트산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 말산, 말론산, 옥살산, 숙신산, 타르타르산, p-톨루엔술폰산, 트리플루오로메탄술폰산, 또는 트리플루오로아세트산으로부터 형성될 수 있다. 여기서 아자시티딘의 “다형체”는 아자시티딘의 고체 결정질 형태 또는 그의 염 또는 착물을 지칭한다. 또한 아자시티딘의 "용매화물"은 비공유성 분자간 힘에 의해 결합된 화학양론적 또는 비-화학양론적 양의 용매를 추가로 포함하는, 아자시티딘 또는 그의 염을 지칭한다. 용매가 물인 경우, 용매화물은 수화물, 예를 들어, 일수화물, 이수화물, 삼수화물 또는 사수화물 일 수 있다. 또한 아자시티딘의 “전구약물”은 아자시티딘의 기능성 유도체이고 생체 내에서 아자시티딘으로 용이하게 전환가능한 화합물을 지칭한다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 1) 온도가 -8℃ 내지 -1℃로 유지되는 아세토니트릴과 물의 혼합용매에 아자시티딘을 용해시키는 단계; 및 2) 단계 1)의 용액을 외기 온도가 15℃ 이하로 유지되는 조건 하에서 용기에 충진하는 단계를 포함하는 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법을 제공할 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

일 구체예에서, 상기 단계 2)에서 외기 온도가 10℃ 이하로 유지되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 외기 온도가 상기 온도 이하로 유지되는 경우, 용기 충진 공정 중의 아자시티딘의 가수분해가 억제될 수 있다. 상기 단계 1)에서의 아자시티딘 용해가 저온에서 수행되었다고 해도 용기 충진 단계에서 외기 온도가 15℃ 초과, 예를 들어 실온인 경우 아자시티딘이 급속히 가수분해되어 유연물질 생성이 증가되므로, 단계 2)에서의 외기 온도를 일정 온도 이하로 유지하는 것이 중요하다.

일 구체예에서, 상기 단계 2)에서 용액을 3 시간 이내, 더욱 바람직하게는 2 시간 이내로 충진하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 산업적 제조시 충진작업에 어느 정도의 시간이 소요되며, 이 때 충진 작업의 온도와 소요 시간에 따라 아자시티딘이 가수분해되어 바람직하지 못한 유연물질이 생성되나, 본 발명의 일 구체예에 따라 단계 2)의 수행시 15℃ 또는 10℃ 이하의 외기온도에서 3 시간 또는 2 시간 이내로 충진 작업을 완료하고 동결건조를 시작할 경우 유연물질의 생성이 최소화될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 단계 1)에서 혼합용매의 온도가 -3℃ 이하, 예를 들어 -7℃ 내지 -3℃로 유지되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 혼합 용매의 온도가 상기 범위 이내일 경우, 아자시티딘 용해 공정 중의 가수분해가 더욱 억제될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 단계 1)에서 아세토니트릴과 물의 부피비가 5:95 내지 30:70일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 아세토니트릴의 부피비가 상기 범위를 초과할 경우 아자시티딘의 안정성이 감소될 뿐만 아니라 추후 잔류용매의 제거 문제가 발생할 수 있으며, 아세토니트릴의 부피비가 상기 범위 미만일 경우 아자시티딘의 안정성이 충분히 확보되지 못할 수 있다. 아세토니트릴과 물의 부피비는 바람직하게는 10:90 내지 25:75일 수 있고, 더욱 바람직하게는 20:80일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

일 구체예에서, 상기 약제학적 조성물 내의 아자시티딘 농도는 약 0.001 내지 50 mg/ml일 수 있고, 바람직하게는 약 0.1 내지 10 mg/ml일 수 있고, 더욱 바람직하게는 약 1 내지 10 mg/ml, 약 2 내지 7 mg/ml, 또는 약 3 내지 5 mg/ml일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있으며 투여 대상 및 목적 등에 따라 적절히 조절될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 단계 1)의 용액을 멸균 여과하는 단계를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기 멸균 여과하는 단계는 단순 필터링(filtering)에 의해 수행될 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있고, 원하는 멸균의 정도에 따라 필터의 기공 크기를 달리하여 선택할 수 있으며, 그 외에도 본 발명이 속하는 분야에서 통상적으로 수행되는 멸균 여과 방법에 의해 특별한 제한 없이 수행될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 단계 2)의 충진물을 동결건조하는 단계를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기 동결건조하는 단계는 본 발명이 속하는 분야에서 통상적으로 수행되는 동결건조 방법에 의해 특별한 제한 없이 수행될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 단계 1)에서 혼합용매가 동결건조 보조제를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

일 구체예에서, 상기 동결건조 보조제는 만니톨, 소듐 디하이드로젠 포스페이트, 포타슘 디하이드로젠 포스페이트, 타르타르산, 젤라틴, 글리세린, 덱스트로스, 덱스트란, 시트르산, 아스코르브산, 타르타르산 소듐 하이드로젠 설파이트, 소듐 하이드록사이드, 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있으며, 통상적으로 사용되는 동결건조 보조제들로부터 통상의 기술자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다.

예를 들어, 상기 동결건조 보조제는 단계 1)의 혼합용매 내에 1 내지 10 mg/ml, 바람직하게는 2 내지 8 mg/ml, 더욱 바람직하게는 5 mg/ml 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있으며, 유효성분의 농도 및 동결건조 보조제의 종류 등을 고려하여 통상의 기술자가 그 양을 적절히 조절하여 사용할 수 있다.

일 구체예에서, 상기 단계 1)이 1-a) 동결건조 보조제를 물에 용해시켜 용액을 얻고, 1-b) 상기 용액에 아세토니트릴을 가하여 혼합용매를 얻고, 1-c) 상기 혼합용매의 온도를 -8℃ 내지 -1℃로 낮추고, 1-d) 상기 온도의 혼합용매에 아자시티딘을 용해시키는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 골수이형성 증후군 및 급성골수성백혈병(AML)을 포함하는 다양한 암 및 종양 관련 질환의 치료 또는 개선을 위해 사용될 수 있다. 더욱 구체적으로 상기 약제학적 조성물은, 비정상적 세포 증식과 관련된 장애 및 혈액 장애와 같은 질환을 치료 또는 개선을 위해 사용될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 약제학적 조성물에 포함된 아자시티딘-유래 유연물질의 함량이 2.5% 미만, 2% 미만, 1.5% 미만, 1.2% 미만, 1% 미만, 0.8% 미만, 0.6% 미만, 0.5% 미만, 0.4% 미만, 0.3% 미만, 0.2% 미만 또는 0.1% 미만일 수 있으며, 이러한 유연물질의 함량은 유연물질의 판단 기준, 공정에 소요된 시간, 공정 온도 및 아세토니트릴의 농도와 같은 조건에 의해 달라질 수 있다.

상기 약제학적 조성물의 투여 경로는, 이에 한정되지는 않으나, 경구적 또는 비경구적으로 투여 될 수 있다. 비경구적 투여 경로로는 주사 투여, 예를 들어 경피, 비강, 복강, 근육, 피하, 정맥 주사 등의 여러 경로가 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

따라서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있으며, 그 외에도 완충제, 등장화제 및/또는 항균제를 추가로 포함할 수 있다.

일 구체예에서, 상기 아자시티딘-함유 약제학적 조성물이 주사용 제제일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

예를 들어 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 비경구용 담체와 함께 주사용 제제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화 될 수 있다. 이 경우 주사용 제제는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 적합한 비경구용 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌글리콜 및 액체 폴리에틸렌글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS (phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 또한, 상기 주사용 제제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또는, 상기 주사용 제제는 만니톨, 락토오스, 덱스트로오스 및 트리할로오스로 이루어진 군에서 선택된 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체 등으로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition, 1995, Mack Publishing Company, Easton, PA). 또한, 상기 상기 주사용 제제는 약제학적으로 적합한 용기 내에 충전될 수 있다.

일 구체예에서, 상기 단계 2)의 용기는 유리 바이알일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.

본 발명에 따르면, 아세토니트릴을 포함하는 혼합 용매의 온도를 -8℃ 내지 -1℃로 유지시킨 상태에서 아자시티딘을 용해시키고, 이를 15℃ 이하의 외기 온도에서 용기에 충진함으로써, 아자시티딘의 가수분해로 인한 유연물질의 발생을 최소화하는 안정한 아자시티딘-함유 약제학적 조성물을 제조할 수 있다. 또한, 상기와 같은 안정한 아자시티딘-함유 약제학적 조성물은 포유동물에서 다양한 종류의 암 및 종양 관련 질환의 치료에 사용될 수 있다.

[제조예 1 내지 4] 용매에 따른 저온 조제액 제조

(1) 주사용수를 이용한 저온 조제액 제조

조제탱크 내 주사용수 3000 ml에 만니톨 15 g을 넣어 완전히 녹였다. 이 조제탱크를 5±3℃로 유지되도록 충분히 온도를 낮추었다. 조제액의 온도가 냉장온도 (5±3℃)로 내려간 것을 확인한 후 아자시티딘 15 g을 넣고 500±50 rpm으로 20±10 분간 교반하였다. 완전히 녹은 것을 확인하고 이 조제액을 멸균필터링하였다.

(2) 유기용매를 이용한 저온 조제액 제조

조제탱크 내 주사용수 2400 ml에 만니톨 15 g을 넣어 완전히 녹였다. 이 조제탱크를 -3±2℃로 유지되도록 충분히 온도를 낮추었다. 만니톨이 완전히 용해되면 아래 표 1과 같은 종류의 유기용매 (아세토니트릴, 에탄올 또는 3차 부탄올) 600 ml를 각각 넣고 충분히 혼합하였다. 조제액의 온도가 -3±2℃로 내려간 것을 확인한 후 아자시티딘 15 g을 넣고 500±50 rpm으로 70±10 분간 교반하였다. 완전히 녹은 것을 확인하고 이 조제액을 멸균필터링하였다.

위의 조제액들을 30 ml씩 바이알에 담은 후 5℃, 15℃ 또는 25℃ 챔버에 보관하고 1 시간 간격으로 샘플링하여 4 시간까지 유연물질을 측정하였다.

[표 1]

[실험예 1] 용매 종류에 따른 보관온도별 유연물질 평가

아래와 같은 방법으로 제조예 1 내지 4의 조제액 내 유연물질을 분석하였다. 분석시 표준액 및 검액은 2~8℃에 보관하였다.

1) 희석액 조제

정제수를 이용해 아황산수소나트륨의 농도를 10.0 g/L로 만들고, 희석된 황산을 이용해 pH 2.5로 맞추었다.

2) 표준액 조제

50 mL 용량플라스크에 아자시티딘 5.0 mg을 정밀하게 취해 넣고, 20% 아세토니트릴로 표선을 맞추고, 이 용액 1 mL을 10 mL 용량플라스크에 넣고, 여기에 20% 아세토니트릴 3 mL을 넣은 후, 희석액으로 표선을 맞추었다 (농도 0.01 mg/mL).

3) 시스템적합성용액 조제

아자시티딘 표준품 25 mg을 정확히 달아 5 mL 용량플라스크에 넣고, 20% 아세토니트릴을 가해 녹이고 표선을 맞추었다. 이 용액을 2 mL 취하여 희석액이 3 ml 들어있는 바이알에 넣고 잘 혼합하였다 (농도 2 mg/mL).

4) 검액 조제

잘 용해된 상기 용액 (5 mg/mL)을 2 mL 취하여 희석액이 3 ml 들어있는 바이알에 넣고 잘 혼합하여 검액으로 하였다 (농도 2 mg/mL).

5) 액체크로마토그래프 조건

a. 칼 럼 : Orosil C18, 4.6mm×25cm, 3㎛, 또는 이와 유사한 칼럼

b. 검출기 : 자외부흡광광도계 (측정파장: 210㎚)

c. 주입량 : 5㎕

d. 유 속 : 0.8 mL/min

e. 자동시료 주입기 온도 : 5℃

g. 이동상 : 구배 용출

수행 조건은 아래의 표 2에 나타나 있다.

[표 2]

이동상 A: 1.54 g/L 암모늄 아세테이트 수용액.

이동상 B: 아세토니트릴 : 메탄올 : 이동상 A = 20:30:50

6) 시스템적합성 및 조작법

시스템적합성용액을 주입하여 아자시티딘 피크의 테일링이 2.0 이하, 표준액을 6회 이상 주입하여 피크면적의 상대표준편차가 10.0% 이하일 때 시스템이 적합한 것으로 판단하고 표준액, 검액 순으로 주입하여 피크면적을 구하였다.

7) 계산

하기 계산식을 사용하여 각 유연물질의 농도를 계산하였다.

각 유연물질 (%) =

아자시티딘 유연물질의 판정기준은 아래의 표 3에 나타나 있다 (단, 0.04% 이하의 피크는 보고하지 않는다). 또한, 사용된 아자시티딘 용매별, 그리고 온도별 유연물질 분석 결과가 표 4 내지 표 7에 나타나 있다. 표 4는 주사용수 (제조예 1), 표 5는 아세토니트릴 (제조예 2), 표 6은 에탄올 (제조예 3), 그리고 표 7은 3차 부탄올 (제조예 4)을 용매로 사용하여 조제액 제조 후 유연물질 분석 결과를 나타낸 것이다.

[표 3]

[표 4]

[표 5]

[표 6]

[표 7]

유기용매를 사용하지 않고 물로만 제조한 조성의 경우 0℃ 이하에서 제조할 경우 조제액의 동결이 일어났으므로 냉장온도 이하에서 제조하는데 문제가 있었다. 그러므로, 주사용수로 제조한 조성물의 경우 5℃ 보관을 제외하고는 모든 온도에서 1 시간도 유연물질 기준 이하를 유지하지 못하였다. 반면, 유기용매를 사용하여 제조한 조제액의 경우 어는점이 낮아졌기 때문에 -3℃의 저온에서도 제조가 가능하였다. 즉, 아세토니트릴, 에탄올 및 3차 부탄올 세 용매를 이용하여 제조한 조제액에서 아세토니트릴이 가장 우수한 안정성을 보여 주었으며, 다음으로 에탄올, 3차 부탄올 순으로 우수한 안정성을 나타내었다. 이 결과로부터 아자시티딘 저온제조에 있어서 안정성이 가장 우수한 용매는 아세토니트릴로 볼 수 있었다.

[제조예 5 내지 7] 아세토니트릴 농도별 조제액 제조

조제탱크 내의 주사용수 2100 ml에 만니톨 15 g을 넣어 완전히 녹였다. 이 조제탱크를 -3±2℃로 유지되도록 충분히 온도를 낮추었다. 만니톨이 완전히 용해되면 아래 표 8과 같이 주사용수 및/또는 아세토니트릴을 가하고 충분히 혼합하였다. 조제액의 온도가 -3±2℃로 내려간 것을 확인하고, 아자시티딘 15 g을 넣은 후 500±50 rpm으로 70±10 분간 교반하였다. 완전히 녹은 것을 확인하고 이 조제액을 멸균필터링하였다.

이 조제액을 30 ml씩 바이알에 담은 후 5℃, 10℃ 또는 15℃ 챔버에 보관하고 1시간 간격으로 샘플링하여 3 시간까지 유연물질을 측정하였다.

[표 8]

[실험예 2] 아세토니트릴 농도에 따른 보관온도 별 유연물질 평가

상기 실험예 1과 같은 방법으로 제조예 5 내지 7에 따른 조제액 내 유연물질을 분석하였다. 아래의 표 9 내지 표 11은 각각 10%, 20% 및 30% 아세토니트릴 (ACN)을 이용한 조제액 제조 후 유연물질 분석 결과를 나타낸 것이다.

[표 9]

[표 10]

[표 11]

10% 아세토니트릴을 이용하여 조제한 조제액 (제조예 5)의 경우 10℃에서 2 시간, 15℃에서는 1 시간 만에 유연물질 기준을 초과하였다. 30% 아세토니트릴 용액으로 제조한 조제액 (제조예 7)의 경우 10℃에서 3 시간만에 유연물질이 기준을 초과하였으나, 20% 아세토니트릴 용액으로 조제한 조제액 (제조예 6)의 경우 10℃에서는 3 시간, 15℃에서는 2 시간의 안정성을 보여 아세토니트릴의 비율 20%에서 가장 우수한 안정성을 보임을 확인할 수 있었다. 잔류용매를 고려하였을 경우에도 20%를 초과하는 아세토니트릴을 사용할 경우 잔류용매 제거에 문제가 발생할 수도 있다.

위의 결과로부터 20% 아세토니트릴을 사용하여 -3℃ 이하의 저온에서 제조한 조제액의 경우 10℃ 이하의 외기온도에서 작업을 하면 3 시간까지는 유연물질의 기준을 초과하지 않을 것임을 예측할 수 있었다. 이는 즉, 실제 생산에 있어서도 작업장의 온도를 10℃로 유지하여 3 시간 이내에 충진작업을 마치고 동결건조를 시작하면 유연물질의 상승을 최소화하여 우수한 안정성을 가지는 아자시티딘 동결건조제를 생산할 수 있음을 보여주는 결과이다.

[실시예 1] 20% 아세토니트릴을 이용한 저온공정에서의 샘플제조

조제탱크 내 주사용수 2400 ml에 만니톨 15 g을 넣어 완전히 녹였다. 이 조제탱크를 -3±2℃로 유지되도록 충분히 온도를 낮추었다. 만니톨이 완전히 용해되면 600 ml 아세토니트릴을 가하고 충분히 혼합하였다. 조제액의 온도가 -3±2℃로 내려간 것을 확인한 후 아자시티딘 15 g을 넣고 500±50 rpm으로 70±10 분간 교반하였다. 완전히 녹은 것을 확인하고 이 조제액을 멸균필터링하였다. 위의 조제액을 10℃ 이하의 조건에서 바이알에 충진한 후 실제 공장에서 충진에 걸리는 시간을 고려하여 10℃ 챔버에 2 시간 더 보관하고 동결건조기에 넣어 동결건조한 후 샘플을 취하여 분석하였다.

[비교예 1] 20% 아세토니트릴을 이용한 실온공정에서의 샘플제조

조제탱크 내 주사용수 2400 ml에 만니톨 15 g을 넣어 완전히 녹였다. 이 조제탱크를 -3±2℃로 유지되도록 충분히 온도를 낮추었다. 만니톨이 완전히 용해되면 600 ml 아세토니트릴을 가하고 충분히 혼합하였다. 조제액의 온도가 -3±2℃로 내려간 것을 확인한 후 아자시티딘 15 g을 넣고 500±50 rpm으로 70±10 분간 교반하였다. 완전히 녹은 것을 확인하고 이 조제액을 멸균필터링하였다. 위의 조제액을 실온에서 바이알에 충진한 후 실제 공장에서 충진에 걸리는 시간을 고려하여 실온에서 2 시간 더 보관하고 동결건조기에 넣어 동결건조한 후 샘플을 취하여 분석하였다.

[비교예 2] 정제수를 이용한 저온공정에서의 샘플제조

조제탱크 내 주사용수 3000 ml에 만니톨 15 g을 넣어 완전히 녹였다. 이 조제탱크를 5±3℃로 유지되도록 충분히 온도를 낮추었다. 조제액의 온도가 5±3℃로 내려간 것을 확인한 후 아자시티딘 15 g을 넣고 500±50 rpm으로 20±10 분간 교반하였다. 완전히 녹은 것을 확인하고 이 조제액을 멸균필터링하였다. 위의 조제액을 10℃ 이하의 조건에서 바이알에 충진한 후 실제 공장에서 충진에 걸리는 시간을 고려하여 10℃ 챔버에 2 시간 더 보관하고 동결건조기에 넣어 동결건조한 후 샘플을 취하여 분석하였다.

[비교예 3] 정제수를 이용한 실온공정에서의 샘플제조

조제탱크 내 주사용수 3000 ml에 만니톨 15 g을 넣어 완전히 녹였다. 이 조제탱크를 5±3℃로 유지되도록 충분히 온도를 낮추었다. 조제액의 온도가 5±3℃로 내려간 것을 확인한 후 아자시티딘 15 g을 넣고 500±50 rpm으로 20±10 분간 교반하였다. 완전히 녹은 것을 확인하고 이 조제액을 멸균필터링하였다. 위의 조제액을 실온조건에서 바이알에 충진한 후 실제 공장에서 충진에 걸리는 시간을 고려하여 실온에서 2 시간 더 보관하고 동결건조기에 넣어 동결건조한 후 샘플을 취하여 분석하였다.

비교예 1 내지 3에 따른 조제 조건이 아래 표 12에 비교되어 나타나 있다.

[표 12]

[실험예 3] 최적의 온도 및 보관조건을 위한 유연물질 평가

실험예 1과 같은 방법으로 실시예 1 및 비교예 1 내지 3에 따른 동결건조 샘플 내 유연물질을 분석하였다. 이 때, 동결건조가 끝난 시료는 주사기를 이용하여 20% 아세토니트릴을 10 mL 정도 첨가하고 잘 흔들어 용해한 후 20 mL 용량플라스크에 옮겼다. 소량의 20% 아세토니트릴로 바이알을 1∼2 회 헹구어 내어 용량플라스크에 넣고 20% 아세토니트릴로 표선을 맞추었다 (농도 5 mg/mL). 잘 용해된 이 용액을 2 mL 취하여 희석액이 3 ml 들어있는 바이알에 넣고 잘 혼합하여 검액으로 하였다 (농도 2 mg/mL). 동결건조된 샘플들의 유연물질 분석 결과가 아래의 표 13에 나타나 있다.

[표 13]

위의 결과에 비추어 볼 때, 20% 아세토니트릴을 이용하여 -3℃ 이하의 저온상태로 조제액을 제조하고 10℃ 이하의 외기 온도에서 3 시간 이내에 작업을 마칠 경우 가장 엄격한 조건 (USP momograph)의 유연물질 기준에도 부합할 수 있는 제품을 제조할 수 있을 것으로 예상된다. 특히 물과 온도에 민감한 RGU-CHO의 경우는 저온조건에서 생산한 후 동결건조할 경우 동결건조 과정에서 수분이 제거됨으로써 조제액에 비하여 월등하게 유연물질이 감소함을 볼 수 있었다. 종합적으로 보면 -3℃ 이하의 저온에서 제조하기 위해서는 유기용매의 병용이 필수적이고, 그 중에서 아세토니트릴이 가장 우수한 안정성을 보였으며, 그 비율은 20% 임을 알 수 있었다. 다만 -3℃ 이하의 저온에서 제조된 조제액이라 하더라도 충진하는 시간 동안 10℃ 이상의 온도에서 2~3 시간 노출되면 급속히 유연물질이 늘어났으므로, 10℃ 이하에서 3 시간 이내에 동결건조기에 투입하는 것이 가장 중요한 공정이라고 볼 수 있다.

Claims

1) 온도가 -8℃ 내지 -1℃로 유지되는 아세토니트릴과 물의 혼합용매에 아자시티딘을 용해시키는 단계; 및
2) 단계 1)의 용액을 외기 온도가 15℃ 이하로 유지되는 조건 하에서 용기에 충진하는 단계:
를 포함하는, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제1항에 있어서, 단계 2)에서 외기 온도가 10℃ 이하로 유지되는, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제1항에 있어서, 단계 2)에서 용액을 3 시간 이내로 충진하는, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제3항에 있어서, 단계 2)에서 용액을 2 시간 이내로 충진하는, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 1)에서 혼합용매의 온도가 -7℃ 내지 -3℃로 유지되는, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 1)에서 아세토니트릴과 물의 부피비가 5:95 내지 30:70인, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 1)의 용액을 멸균 여과하는 단계를 추가로 포함하는, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 2)의 충진물을 동결건조하는 단계를 추가로 포함하는, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제8항에 있어서, 단계 1)에서 혼합용매가 동결건조 보조제를 추가로 포함하는 것인, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제9항에 있어서, 동결건조 보조제는 만니톨, 소듐 디하이드로젠 포스페이트, 포타슘 디하이드로젠 포스페이트, 타르타르산, 젤라틴, 글리세린, 덱스트로스, 덱스트란, 시트르산, 아스코르브산, 타르타르산 소듐 하이드로젠 설파이트, 소듐 하이드록사이드, 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 1)이
1-a) 동결건조 보조제를 물에 용해시켜 용액을 얻고,
1-b) 상기 용액에 아세토니트릴을 가하여 혼합용매를 얻고,
1-c) 상기 혼합용매의 온도를 -8℃ 내지 -1℃로 낮추고,
1-d) 상기 온도의 혼합용매에 아자시티딘을 용해시키는 단계를 포함하는 것인, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물이 주사용 제제인, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 2)의 용기는 유리 바이알인, 아자시티딘-함유 약제학적 조성물의 제조방법.