KR20210072039A

KR20210072039A - 면역절제 요법

Info

Publication number: KR20210072039A
Application number: KR1020217013417A
Authority: KR
Inventors: 테레사 데이셔
Original assignee: 에이브이엠 바이오테크놀로지, 엘엘씨
Priority date: 2018-10-03
Filing date: 2019-10-03
Publication date: 2021-06-16
Also published as: US12048705B2; WO2020072713A1; US20210338689A1; CN113164497A; BR112021006280A2; MX2021003797A; US20200108078A1; EP3488851A1; SG11202103031SA; ZA202102727B; AU2019355004A1; JP2020059703A; EP3860612A1; US11446314B2; CA3113969A1; EA202190927A1; ES2863369T3

Abstract

본 발명은 면역 절제에 의한 질병의 치료용 글루코코르티코이드를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 림프구와 같은 면역 세포에 의해 매개되는 질병의 치료에 사용하기 위한 것일 수 있다.

Description

면역절제 요법

본 발명은 면역절제에 의한 질병의 치료용 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명의 조성물은 림프구와 같은 면역 세포에 의해 매개되는 질병의 치료 용도로 사용하기 위한 것일 수 있다.

본 발명자들은 고농도의 글루코코르티코이드가 입양 T 세포 요법과 같은 세포 면역 요법의 효능을 향상시키기 위해 환자를 컨디셔닝하는데 사용될 수 있음을 확인하였으며, 국제특허 출원 PCT/US2018/025517 (WO2018/183927로 공개)에 개시되어 있다. 이의 응용에 있어서, 본 발명자들은 비선택적으로 비장의 세포충실도(cellularity)를 파괴하는 것으로 여겨지는 화학 요법 및 방사선 매개 사전 컨디셔닝과 관련된 독성에 주목하였으며, 본 발명자들은 글루코코르티코이드(스테로이드의 서브클래스) 및 기타 비-독성 림프고갈제를 급성 용량(acute doses)으로 제공하여 세포 면역요법을 받는 암환자에게 이점을 제공하였다.

WO2018/183927은 고용량 글루코코르티코이드가 림프조직의 절제를 유발하여, 림프 조직, 특히 림프절의 배중심(germinal centers) 및 변연부(marginal zones)에 세포 면역 요법의 결합을 감소시킬수 있음을 주목한다. WO2018/183927은 또한 고용량 글루코코르티코이드가 (화학요법 또는 방사선 요법을 사용한 사전컨디셔닝을 기반하는 세포독성 메커니즘과는 대조적으로) 생물학적 메커니즘을 통해 말초 혈액 림프구를 림프고갈(lymphodeplete)시킨다는 점에 주목한다.

ACT 전, 환자를 사전컨디셔닝하기 위한 스테로이드의 사용에 대한 이전의 연구는 이러한 접근법이 효과가 없음을 보여주었다. Hinrichs (J Immunother. 2005 Nov-Dec;28(6):517-24.)는 ACT 전, 덱사메타손을 사전컨디셔닝 치료로서 평가하였다. 전신 방사선 조사(total body irradiation; TBI)와 비교하여, Hinrichs는 -6일, -4일, 및 -2일에 투여된 0.8mg/kg의 HED가 5Gy TBI와 동등하게 림프고갈 시킴을 입증하였다. Hinrichs는 ACT 전, -6, -4 및 -2일에 10mg/kg(HED 0.81mg/kg)의 전신 복강내 덱사메타손의 전처리를 실시하였으나, 이러한 전처리가 ACT 종양 사멸을 향상시키지 않았음을 나타내었다. 대조적으로, Hinrichs는 방사선을 이용한 전처리가 ACT 종양 사멸을 향상시키는 것으로 개시하였다. Hinrichs의 논문에서, 덱사메타손은 99% 감소된 비장 세포충실도에 의해 입증되는 바와 같이 비장 림프고갈을 유발하는 것으로 보고되었다. 그러나 Hinrichs는 99% 림프고갈에도, ACT 종양 사멸의 향상은 관찰되지 않았음을 보고한다. 대조적으로 Hinrichs는 방사선이 ACT 종양 사멸을 향상시킨다는 것을 관찰하였다. 그러나, 반복된 실험에서, Hinrichs는 -2일, -4일 및 -6일에서 10mg/kg(HED 0.81 mg/kg)의 복강 내 덱사메타손의 Hinrichs 투여방법이 말초 혈액 림프구를 효과적으로 림프고갈시키지 않는다는 점을 입증하였다. Hinrichs 투여방법의 경우, 오직 말초혈액 내의 B 림프구만이 CD3-CD19+ 세포의 유동세포 분석에 의해 측정 시 유의하게 10680개(비히클 대조군)에서 3733개의 라이브 이벤트(live event)로 림프고갈되었다(65% 감소). 대조적으로 CD3+T 림프구는 3370에서 2441개의 라이브 이벤트로 유의미하지 않게 33% 감소되었다. CD3+CD4+ T 림프구는 1779에서 902개의 라이브이벤트로 감소되었으며, 유의미하지 않게 50% 감소하였다. CD3+CD8_T 림프구는 1318에서 1277개의 라이브 이벤트로 감소했으며, 단지 3% 감소하였다. CD3+CD4+CD25+FoxP3+ Tregs는 라이브 이벤트 198 개에서 70 개로 감소했으며, 65% 감소하였다. 자연 살해 (NK) 세포는 1153에서 958 개의 라이브 이벤트로 감소했으며, 유의미하지 않은 17% 감소에 불과하였다.

자가면역(autoimmunity)은 대상 자신의 구성성분에 대한 공격을 비정상적으로 증가시키는 면역시스템의 현상이다(건강한 대상의 경우, 면역 시스템은 대상의 자신 구성성분에 대한 내성을 확립하여, 손상성 자가면역 반응을 회피한다). 손상성 자가면역 반응(damaging autoimmune reactions)으로 인한 질병을 자가면역 질환으로 일컫는다. 다른 자가면역 질환은 신체의 상이한 부분에 영향을 미친다. 이들은 쇠약성(debilitating; 예, 관절에 영향을 주는 류마티스 관절염의 경우) 신경퇴행성/신경파괴성(neurodegenerative/neurodestructive; 예, 다발성 경화증의 경우)일 수 있으며, 당뇨병과 같은 일부 경우, 높은 치사율과도 연관이 있다(Thomas et al., 2010).

자가 면역 질환의 발병은 기여하여 염증 조직 및 혈관 손상을 초래하는 T 및 B 림프구가 자기 항원을 부적절하게 인식하고 세포 매개 반응 또는 체액 반응을 시작하는 중심적 역할에 광범위하게 연관된다(Sullivan et al., 2010; Shlomchik et al., 2001).

자가면역 질환은 매우 빈번하게 스테로이드와 같은 면역 억제제의 장기간 투여에 의해 치료된다. 예를 들어, 천포창(pemphigus) 환자는 3일 동안 매일2시간 동안 IV 주사를 통해 100mg의 덱사메타손으로 치료된다(Pasricha et al., 2008). 이러한 투여는 림프절제법이 아니다. 천포창 환자는 완치까지 28일마다 상기한 방법으로 치료받았으며, 치료에 3개월 내지 12개월의 기간이 소요되었다. 재발률은 15%였으며, 모든 환자는 다른 Dexa 치료로 관해(remission)에 들어갔다. 이러한 Dexa 용량은 약 1-2mg/kg 이다. 자가면역 질환을 관리하고 경감시키는데 도움이 되지만, 이러한 치료요법은 치유적이지 않으며, 몇가지 장기적 부작용 및 감염위험의 증가가 수반된다(Patt et al., 2013).

림프고갈 요법은 면역 손상을 제어하기 위해 점점 시험되고 있다. 이러한 치료법의 한가지 매력적인 전제는 면역 시스템을 '재부팅'하고 면역 내성을 회복시킬 수 있다는 것이다(Lu et al., 2011). 그러나, 림프고갈 요법의 면역관용적 잠재력은 여전히 논란의 여지가 있다. 이러한 논의의 예는 면역고갈 약물의 프로토타입인 항-흉선세포 글로불린(anti-thymocyte globulin (ATG))의 연구로부터의 상충적인 증거, 특히 CD4+ CD25+ Foxp3+ 조절 T 세포(Treg)를 유도하는지 여부이다. 생체 내 클론 수준에서, ATG가 T 세포에 미치는 영향을 이해하기 위해, Lu et al,.은 생리적 자가-항원에 특이적인 병원성 T 이펙터(Teff) 세포의 단일 클론으로 구성된 T 림프구 레퍼토리의 환원주의적 모델에서 항-마우스 흉선세포 글로불린(mATG)의 효과를 연구하였다. mATG의 처리는 흉선 침범과 무관하게,다른 단일 클론 Teff 레퍼토리로부터 항원 특이적 Treg 세포의 말초 유도를 이끌었다. Treg 세포의 새로운 유도는 국소 배액 림프절(draining lymph nodes)에서 일관되게 발생하였으며, 유도된 Treg 세포의 혈중 지속성은 자가면역 파괴로부터의 장기적인 보호와 상관관계에 있었다(Lu et al., 2011). 따라서, 면역 결핍 요법의 세팅에서, 병원성 자가-항원-특이적 Teff 세포로부터 Treg 세포로의 클론 전환에 대한 생체 내 증거를 제공하였다.

제1형 진성 당뇨병(Type 1 diabetes mellitus; T1D)은 임상적 결과로 유의한 고혈당증 및 대사 불안정성에 이르는 인슐린 분비 β-세포의 고갈을 점진적으로 초래하는 자가면역 질환이다(Atkinson et al., 2014). 전반적으로 T1D는 당뇨병의 약 5%를 차지하며 전세꼐적으로 약 2천만명에게 영향을 미치고 있다(Menke et al., 2013). 약 125만명의 미국인이 T1D를 앓고 있으며, 미국에서 매년 약 4만명이 새롭게 진단받는다(American Diabetes Association, Diabetes Care 37, 2014). TD1은 의료비 및 소득 손실과 같은 간접 비용을 고려할 ?? 미국에서 연간 144억 달러의 경제적 부담과 관련이 있다.

치료 용 인슐린 및 외부 저혈당 제제에 기초한 기타 치료는 T1D를 치료하지 않고, 단순히 혈당 수준을 제어하는 솔루션을 제공한다. 환자는 여전히 불안정한 혈당 수치와 미세 혈관 및 거대 혈관 당뇨병 합병증의 발생에 취약하다(Peng et al., 2018).

당뇨병 환자로부터 자가면역 기질을 제거하기 위한 안전한 중재가 누락되었다. TD1의 자가면역은 면역 반응의 많은 부분을 포함한다(Snarski et al 2016; Cantu-Rodriguez et al., 2016). 결과적으로, 항체, 융합 단백질, 사이토카인, 조절 T 세포, 및 소분자 억제제의 사용을 기반으로 하는 항원 특이적 면역요법은 T1D 환자의 β-세포 보존 및 혈당 수준의 감소로 이어진다 (Kim et al., 2013). 병용 투여에서도, 면역 레퍼토리의 특정한 구성요소를 표적으로 하는 면역 요법은 인슐린 독립성 회복을 보장하지 못했다(Bone et al., 2017).

자가 조혈 줄기세포 이식(Autologous hematopoietic stem cell transplantation; Autologous HSCT)은 지금까지 T1D 치료를 위한 유일하게 입증된 전략이다(Voltarelli et al., 2007). 자가 HSTC는 다발성 경화증, 전신성 경화증, 류마티스 관절염, 전신성 홍반성 루프스, 크론병과 같은 자가면역 질환(AD)의 치료 옵션으로 12년동안 수행되어왔다(Swart et al., 2017). 이보다 강력하고 광범위한 면역학적 접근법은 고용량 면역 억제와 함께 수행되는 “면역학적 재설정”으로 구성되며, 이는 자가 반응성 T 세포 및 B 세포 반응을 비특이적으로 폐지한 후 내성 면역 체계의 재구성을 위한 조혈 줄기 세포의 이식을 포함한다. 놀랍게도, 임상시험에서의 이 접근법은 T1D 환자의 최대 80%가 혼합 식사 내성 테스트 동안 C-펩티드 수준의 관련 증가와 병행하여 인슐린 독립적 기간을 경험할 수 있도록 하였다(Couri et al., 2018). 그러나, T1D에 대한 치료적 접근 방식으로 면역학적 재설적을 채택하는 것을 방해하는 심각한 우려가 있다.

HSCT 절차와 관련된 위험은 T1D에 대해 제공되는 긍정적인 효과를 넘어선다: HSCT는 여전히 심각한 독성 및 최대 3%의 사망률과 관련이 있다(Alexander et al., 2018; Pallera et al., 2004; Henig et al., 2014). 더욱이, 면역학적 재설정을 위한 현재의 프로토콜은 환자를 단기 감염 위험, 급성 장기 기능 장애 및 사망, 악성 종양 및 2차 자가면역 질환의 장기적 위험과 같은 일련의 안전 문제에 노출시키는 세포독성 면역 억제 요법(예를 들어, 화학요법, 방사선 요법)을 기반으로 한다 (Daikeler et al., 2012).

HSCT로 치료된 거의 모든 T1D 환자는 외인성 인슐린의 사용을 재개했으며, 사전컨디셔닝(PC) 후, 자가면역 병리생리학적 기질의 불완전한 절제효과로서, C-펩타이드 수준의 후속적인 감소(Magdalena et al., 2018)를 나타낸다(Loh et al., 2007). 이식 컨디셔닝 요법의 강도를 높이거나 치료 결과를 개선하기 위해 절차를 반복하면 환자가 과도한 위험과 독성에 노출될 수 있다 (Couri et al., 2018).

HSCT는 HSCT 이전에 제공되는 컨디셔닝 요법, 이식 유형, 및 입원 기간과 관련된 입원비용에 따라 약 $80,000 내지 $300,000의 높은 비용과 연관된다 (Broder et al., 2017).

자가면역 장애 및 림프구에 의해 매개되는 기타 질병의 추가적인 치료요법에 대한 요구가 존재하며, HSCT보다 더욱 간단하고 비용이 적게 발생하는 추가 치료가 필요하다.

본 발명은 고용량의 글루코코르티코이드가 다른 세포의 세포 수에 유의미한 영향을 주지 않으면서 말초 혈액 림프구의 림프고갈을 유발하는 작용을 할 수 있다는 놀라운 발견에 기초한 것이다. 배중심의 절제와 같은 추가 작용은 또한 본 발명의 특정한 관점을 뒷받침한다. 본 발명은 고용량 글루코코르티코이드 작용제의 이러한 작용의 의학적 적용; 림프구 매개 질환 치료에의 사용을 제공한다.

따라서, 일 관점에서, 본 발명은 대상에서 림프구 매개 질환을 치료하기 위한 글루코코르티코이드를 포함하는 약학 조성물을 제공하며, 여기서 상기 치료는 환자에게 약 3 ~ 26 mg/kg의 덱사메타손 베이스의 인간 등가 용량(human equivalent dose; HED)으로 글루코코르티코이드를 전달하기 위한 약학 조성물의 용량(dose)을 투여하는 것을 포함한다.

상기 글루코코르티코이드의 용량(dose)은 '급성 고용량(acute high dose)'이라 할 수 있다. 일부 실시예에서, 약 10 - 26 또는 약 12 - 26 mg/kg 인간 등가 용량(HED)에 해당하는 용량으로 환자에게 글루코코르티코이드를 전달하기 위한 약학 조성물의 용량이다. 상기 약학 조성물은 본 명세서에 정의된 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 상기 약학 조성물은 본 명세서에 정의된 약학적으로 허용가능한 보존제를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 상기 약학 조성물은 본 명세서에 정의된 약학적으로 허용가능한 킬레이트제를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 그러나, 이러한 관점의 모든 실시예에서, 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 보존제 및/또는 킬레이트제로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 성분을 포함한다. 상기 약학 조성물은 일부 실시예에서 부형제를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 보존제를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 보존제를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 킬레이트제를 포함한다. 본 발명의 실시예는 대상에게서 전신성 림프고갈을 달성하기 위해 작용하는 것으로 정의될 수 있다.

일부 실시예에서, 림프구 매개 질환은 자가면역 질환, 예를 들어, 제1형 당뇨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 경피증, 천포창 및 루프스로 구성된 군으로부터 선택되는 자가면역 질환이다. 본 발명의 림프고갈 작용은 이러한 실시예의 효능을 뒷받침한다.

글루코코르티코이드가 많은 자가면역 조건에서의 용도가 잘 확립되었음에도 불구하고(Flammer et al., 2011) 면역학적 재설정을 고려한적은 없다. 또한, 자가 세포 이식 전 환자를 사전컨디셔닝하기 위해 약학적 저용량의 사용을 기반으로 한 연구는 이러한 접근법이 효과가 없음을 보여주었다(Medicines Agency; 2017). 본 발명의 약학 조성물의 다중 생체 내 효과에 기초한 복합적 작용 방식은 당뇨병과 같은 자가면역 상태의 치료를 위한 안전한 면역학적 재설정요법으로 사용될 수 있는 화학요법에 대한 첫번째 효과적인 대체를 제공한다.

약학 조성물의 작용과 관련하여 다음을 포함하는 본 발명의 몇 가지 이점이 있다. (i) 비-골수파괴성 면역학적 재설정: 상기 약학 조성물은 특정 수용체 매개 작용 방식에 기반하여 예를 들어, 당뇨성 자가면역을 담당하는 아이슬렛(islet)-특이적 자가 반응성 T 세포를 포함하는 모든 말초 혈액 림프구 유형을 고갈시킬 수 있으나, 호중구, 혈소판, RBC 및 줄기세포(HSCs 및 MSCs 모두)를 유지시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은 감염 위험을 줄이고 면역 재설정 후 혈액 세포를 회복이라는 HSTC의 요구를 제거한다. 그 결과 화학요법에 필적하는 효능으로도 안전한 면역학적 재설정을 수행할 수 있는 비-골수파괴적 요법이 수행된다. (ii) 2차 림프관에서 배중심(GCs) 및 변연부의 감소. 상기 약학 조성물은 자가면역 병리생리학적 기질에 비해 증가된 효능을 위해 고 친화성 항체 및 수명이 긴 형질 세포(DeFranco et al., 2016)를 생산하는 2차 림프기관의 배중심을 일시적으로 절제한다. (iii) 간단한 투여모드. 상기 약학 조성물은 경구 또는 정맥 내 투여 경로로 제형화될 수 있으며, 7 내지 14일 이내에 림프구 및 GC 회복을 동반하는 시간 내에 효과적이다. 최초로, 완전한 림프고갈이 입원을 필요로 하지 않을 것이다. (iv) 재발 가능성 감소. 화학요법 또는 방사선과 달리, 본 발명의 약학 조성물은 재발의 원인이 되는 기억 T 세포 및 B 세포를 제거하기 위해, 완전하게 림프절제가능한 용량으로 안전하게 투여될 수 있다. (v) 재투여의 허용. 자가면역 병리생리학적 기질(autoimmune pathophysiologic substrates)이 재발하는 경우, 고용량 글루코코르티코이드의 안정성 프로파일은 본 발명의 약학 조성물의 반복적 투여를 가능케 한다.

본 명세서에 개시된 본 발명과 관련된 이러한 작용 및 이점은 본 발명이 자가면역 질환 및 본 명세서에 논의된 다른 림프구 매개 질환을 치료하기 위한 효과적인 전략을 제공한다는 점을 통상의 기술자가 이해할 수 있음을 의미한다.

일부 실시예에서, 상기 림프구 매개 질환은 잔류 HIV 질환이다. 이러한 실시예에서, 본 명세서에 기재된 것과 같이, 대상의 림프 기관에서 감소된 수의 배중심은 이들 중심의 틈새(niches)에 결합하는 잔류 HIV 감염 T 세포를 면역 시스템 또는 표준요법에 의해 이들이 제거될 수 있는 순환계로 강제한다. 본 개시내용의 맥락에서, 통상의 기술자는 바이러스가 T 림프구를 감염시킨다는 의미에서, HIV가 림프구 매가 질환이라는 것을 이해할 것이다. 본 발명의 림프고갈성 작용은 또한 이러한 실시예의 효능에 기여한다.

다른 실시예에서, 상기 림프구 매개 질환은 림프종, 예를 들어 배중심 림프종(GC lymphoma) 또는 변연부 림프종(Marginal zone lymphoma)이다. 이러한 실시예에서, 본 명세서에 기재된 것과 같이, 대상의 림프 기간에서 감소된 수의 배중심은 이들 중심의 틈새(niches)에 결합하는 암세포(예, 배 중심 림프종)를 면역 시스템 또는 표준요법에 의해 이들이 제거될 수 있는 순환계로 강제한다. 통상의 기술자는 표준 암 요법이 예를 들어, 화학요법을 포함한다는 것을 이해할 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 글루코코이드 기반의 요법은 화학요법과 조합하여, 바람직하게는 감소된 강도의 세포독성 화학요법과 조합하여 사용될 수 있다(여기서, 본 명세서에 설명된 고용량 글루코코르티코이드 기반 요법과 함꼐 사용되는 경우의 화학 요법의 유효용량이 본 명세서에 기재된 고용량 글루코코르티코이드 기반 요법이 없는 동일한 화학 요법의 유효용량보다 적다). 본 발명의 림프고갈 작용은 또한 이러한 실시예에서의 효능에 기여한다. 특정 실시예에서, 버킷 림프종(Burkitt's Lymphoma; BL)의 치료가 구체적으로 고려된다. 아프리카에서 BL의 치료는 세가지 화학요법 약물인 Cyclophosphamide, Vincristine, 및 Methotrexate(전신 및 척수강 내)의 조합을 중심으로 진행된다. 이러한 조합은 12주에 걸쳐 총 6사이클을 2주 간격으로 반복된다(Burkitt's Lymphoma National Treatment Guidelines. 2009). 더 낮은 용량의 덱사메타손은 현재 WHO 필수 의약품 목록에 있으나, 본 발명의 높은 용량은 제조에 있어서, 독성 수준에 도달하는 벤질 알코올 또는 파라벤과 같은 부형제뿐만 아니라, 오염 또는 환자에게서 심각하거나 치명적인 감염을 이끌 수 있는 제조 바이알을 필요로 하기 때문에 기존의 WHO 등재 덱사메타손 제품은 BL의 치료에 적합하지 않다.

또 다른 실시예에서, 상기 림프구 매개 질환은 이식편 대 숙주 질환(graft versus host disease; GvHD)이다. GvHD는 유전적으로 상이한 사람으로부터 이식된 조직을 받은 후, 발생하는 의학적 합병증이다. GvHD는 자가이식에서도 발생할 수 있으며, 이식된 세포가 신체를 이물질로 인식하도록 하는 자가 세포의 처리 및 저장에 의해 발생했을 가능성이 가장 높다. GvHD에서 공여된 조직(이식편, the graft) 내에 남아있는 공여자의 면역 시스템의 백혈구는 수여자(숙주)를 외래(비-자신)로 인식한다. 이식된 조직 내에 존재하는 백혈구가 수여자의 신체 세포를 공격하여 이러한 상태로 이어진다. GvHD는 일반적으로 골수 이식과 같은 줄기 세포 이식과 관련이 있다. GvHD는 고형 장기 이식과 같은 다른 형태의 이식 조직에도 적용된다. 본 발명의 림프고갈 작용은 또한 이러한 실시예에서의 효능에 기여한다.

다른 실시예에서, 상기 림프구 매개 질환은 알레르기 장애이다. 여기에는 만성 및 급성 알레르기가 포함된다. 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물은 천식의 치료에 사용될 수 있다. 본 발명의 림프고갈 작용은 또한 이러한 실시예에서의 효능에 기여한다.

일부 실시예에서, 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 약학 조성물은 보존제 및/또는 킬레이트제를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 약학 조성물은 보존제를 포함한다. 바람직하게는 상기 보존제는 아황산염(sulfite)이다. 일부 실시예에서, 상기 약학 조성물은 EDTA일 수 있는 킬레이트제를 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 약학 조성물의 글루코코르티코이드는 덱사메타손을 포함한다. 이는 덱사메타손 베이스, 덱사메타손 인산 나트륨 또는 덱사메타손 아세테이트의 형태일 수 있다. 가장 바람직하게는 상기 글루코코르티코이드는 덱사메타손 인산 나트륨이다.

상기 언급되고 청구범위에 의해 정의된 것과 같이, 본 발명의 약학 조성물은 림프구 매개 질환의 치료에 사용하기 위한 것이다. 상기 치료는 약학 조성물의 용량(dose)을 단일 급성 용량으로 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 대안적으로, 상기 치료는 약 72시간동안 제공된 총 용량으로 약학 조성물의 용량(dose)을 투여하는 단계를 포함한다.

상기 림프구 매개 질환의 치료는 항 염증, 면역 억제, 림프절제, 배 중심 제거, IL-2 IL-7 IL-12 및/또는 IL-15의 상승, 중간엽 줄기 세포의 상승, G-CSF 증가, 또는 호중구 증가를 필요로하는 환자에게 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 또한, 상기 림프구 매개 질환의 치료는 PD-1 또는 PD-L1 또는 CTLA-4 발현에서 검출가능한 변화를 초래할 수 있다.

상기 언급되고, 청구범위에 의해 정의된 것과 같이, 본 발명의 약학 조성물은 림프구 매개 질환의 치료에 사용하기 위한 것이며, 상기 치료는 약학 조성물의 용량을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 상기 약학 조성물은 정맥 내(IV) 또는 경구로 투여될 수 있다. 정맥 내 투여시 바람직하게는 0.25 내지 2시간에 걸쳐 1회 IV 주입으로 투여된다. 주입된 조성물은 정상 또는 절반 정상 식염수 또는 젖산 링거(Lactated Ringer's), 또는 5% 텍스트로스 또는 다른 표준 IV 수액 용액일 수 있다. 경구 투여를 위해 상기 조성물은 소량의 주스 또는 감미료와 혼합된 단일 경구 용량으로 제공될 수 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 약학 조성물은 수성 글루코코르티코이드 용액으로 제공된다. 통상의 기술자는 물이 이러한 실시예의 약학 조성물에서 용매로서 사용된다는 것을 의미한다는 것을 이해할 수 있다.

본 발명에 따른 용도를 위한 약학 조성물은 적어도 약 3 mg/kg, 적어도 약 4 mg/kg, 적어도 약 5 mg/kg, 적어도 약 6 mg/kg, 적어도 약 7 mg/kg, 적어도 약 8 mg/kg, 적어도 약 9 mg/kg, 적어도 약 10 mg/kg, 적어도 약 11 mg/kg, 적어도 약 12 mg/kg, 또는 적어도 약 13 mg/kg, 또는 적어도 약 14 mg/kg, 또는 적어도 약 15 mg/kg, 또는 적어도 약 16 mg/kg, 또는 적어도 약 17 mg/kg, 또는 적어도 약 18 mg/kg, 또는 적어도 약 19 mg/kg, 또는 적어도 약 20 mg/kg, 또는 적어도 약 21 mg/kg, 또는 적어도 약 22 mg/kg, 또는 적어도 약 23 mg/kg, 또는 적어도 약 24 mg/kg, 또는 적어도 약 25 mg/kg, 또는 적어도 약 26 mg/kg의 덱사메타손 베이스의 인간 등가 용량(HED)에 상응하는 용량으로 글루코코르티코이드를 전달하기 위해 투여된다. 상기 약학 조성물의 용량은 덱사메타손 베이스의 HED와 동등한 용량 범위로부터 얻은 값과 동등한 용량으로 글루코코르티코이드를 전달하는 것으로 정의될 수 있으며, 여기서 범위는 상기 값 목록에서 선택되는 종점, 예를 들어, 약 10 mg/kg ~ 26 mg/kg, 또는 약 15 mg/kg ~ 25 mg/kg(또는 위 목록의 두 값)에 의해 정의된다. 바람직한 실시예에서, 상기 대상은 인간이고, 상기 글루코코르티코이드는 덱사메타손 베이스를 함유하고, 상기 약학 조성물은 약 3.0 내지 약 18.0 mg/kg의 덱사메타손 염기의 용량으로 인간 대상에 투여된다.

통상의 기술자는 본 발명에 의해 달성된 림프고갈을 측정하기 위해 통상적인 방법이 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, CD4+, CD8+, Tregs 및/또는 B 세포 집단은 상기 약학 조성물이 투여된 후, 예를 들어 48시간 후에 측정될 수 있다. 유동세포 분석은 세포를 계수하는데 사용할 수 있는 한가지 예시적 방법이다.

통상의 기술자는 본 발명이 본 명세서에 기재된 다른 치료적 접근법, 예를 들어, 화학요법 및/또는 세포 기반의 요법과 함께 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 이러한 실시예에서, 상기 대상은 세포 기반 요법을 투여받을 수 있다. 그러나, 본 발명의 대부분의 실시예에서 화학 요법 또는 세포 기반 요법을 포함하지 않는다. 따라서, 일부 실시예에서, 상기 대상은 화학 요법제를 투여받지 않는다. 일부 실시예에서, 상기 대상은 세포 기반 요법제를 투여받지 않는다.

본 발명의 작용 메커니즘은 본 명세서에서 상세하게 논의되며, 이러한 메커니즘은 일부 경우, 특히 상기 메커니즘이 새로운 임상적 상황을 만드는 경우(예를 들어, 대상으로 선택되는 환자 하위그룹을 허락함으로 써) 본 발명의 독특한 특징의 일부를 형성할 수 있다.

본 발명의 원리를 설명하는 실시예 및 실험이 첨부된 도면을 참조하여 논의 된다.
도 1. 급성 고용량 덱사메타손은 마우스 비장 및 2차 림프관에서 결합 틈새(niches)를 제거한다. 비장 수확 96시간 전 IP 인간 등가 용량(HED) 9.3mg/kg 덱사메타손 베이스를 투여한 마우스로부터 배 중심을 정량하기 위해, FITC-PNA로 염색한 신선하고 두꺼운 비장 섹션의 흑백 스케일의 명시야(위) 및 면역 형광(아래) 이미지를 표시하였다. 그래프는 비장 수확 96시간 전에 IP 위약 대조군 및 IP HED 9.3 mg/kg 덱사메타손 베이스를 투여한 마우스에 대한 비장 면적 + 평균 표준 면적(SEM)당 평균 배 세포(germinal cell)의 컬럼 플롯을 나타내다. 대조군 마우스는 상당한 FITC-PNA 면역 형광을 가진 반면, 덱사메타손을 주사한 마우스는 면역 형광 신호가 거의 없다.
도 2. 급성 고용량 덱사메타손은 용량 의존적으로 마우스 비장에서 결합 틈새를 제거한다. FITC-PNA로 염색된 신선한 두꺼운 비장 섹션의 면역 형광 염색을 사용하여 측정된 평균 배 중심 염색 강도의 컬럼 플롯의 그래프이다. 면역형광 강도는 역치 및 메타모르프 이미지 분석(thresholding and MetaMorph Image Analysis)을 사용하여 계산하였다. 칼럼은 평균 +SEM이다. 마우스는 비장 수확 48시간 전에 위약, 3 mg/kg HED, 6 mg/kg HED, 9 mg/kg HED, 또는 12 mg/kg HED 덱사메타손 베이스를 투여하였다. 배 중심 감소는 HED 6 mg/kg에서 명확하게 나타나며, HED 9 및 12 mg/kg 용량에서 현저하게 감소한다.
도 3. 급성 고용량 덱사메타손은 랫 비장(MZ:변연부)에서 결합 틈새를 제거한다. 비장의 수확 48시간 전 위약, 20 mg/kg (HED 3.23 mg/kg), 40 mg/kg (HED 6.45 mg/kg) 또는 80 mg/kg (HED 12.9 mg/kg) 덱사메타손 베이스를 IV 또는 PO 처리한 랫의 5마이크론 비장 섹션에서 측정한 변연부 넓이의 컬럼 플롯을 도시하였다. 변연부 면적은 모든 덱사메타손 용량에서 감소했으며, 12.9 mg/kg HED에서 최대로 억제되었다. n=그룹당 5. * p<0.05 (Dunnett's post-hoc) vs. Vehicle IV; † p<0.05 ANOVA (Dunnett's post-hoc) vs. Vehicle PO; ‡ p<0.05 Student's t-test vs. Vehicle IV.
도 4. 급성 고용량 덱사메타손은 랫 비장에서 결합 틈새를 제거한다. 섹션당 주어진 배아 중심 수의 척도로 5 마이크론 고정 비장 섹션의 BCL-6 염색의 비장당 면적의 컬럼 플롯을 도시하였다. 랫은 비장의 수확 48시간 전 위약, 20 mg/kg (HED 3.23 mg/kg), 40 mg/kg (HED 6.45 mg/kg) 또는 80 mg/kg (HED 12.9 mg/kg) 덱사메타손 베이스를 IV 또는 PO 처리하였다. 모든 덱사메타손 용량에서 배 중심 영역이 감소했으며, 12.9 mg/kg HED에서 최대로 억제되었다. 그룹 1-4 IV: 1 = 20 mg/kg (HED 3.23 mg/kg), 2 = 40 mg/kg (HED 6.45 mg/kg), 3 = 80 mg/kg (HED 12.9 mg/kg), 4 = 위약. 그룹 5-9 PO: 5 = 20 mg/kg (HED 3.23 mg/kg), 6 = 40 mg/kg (HED 6.45 mg/kg), 7 = 80 mg/kg (HED 12.9 mg/kg), 8 = 위약.
도 5. 급성 고용량 덱사메타손은 흉선 질량을 감소시킨다. 사진은 위약 처리된 뮤린 피험자로부터 흉선 크기(상단 사진) 및 본 발명의 약학 조성물의 6 mg/kg의 용량으로 치료된 뮤린 피험자의 흉선 크기(아래 사진)을 나타낸 것이다. 하단 패널은 위약 치료 대상(대조군) 및 3 mg/kg HED, 6 mg/kg HED, 9 mg/kg HED 및 12 mg/kg HED의 본 발명의 조성물로 치료된 대상의 휴선에서 흉선 중량대 체중 백분율을 나타낸다.
도 6. 급성 고용량 덱사메타손은 랫 림프구 수를 감소시킨다. 랫을 위약, 20 mg/kg (HED 3.23 mg/kg), 40 mg/kg (HED 6.45 mg/kg) 또는 80 mg/kg (HED 12.9 mg/kg) 덱사메타손 베이스를 48시간동안 IV 또는 PO 처리한 후 일반 혈액 검사로 측정한 개별 절대 림프구 수 및 평균 그래프를 도시하였다. 덱사메타손은 채혈 48시간 전에 투여되었으며, IV(오른쪽) 또는 경구투여(왼쪽)에 관계없이 랫의 대조군에 비해 모든 용량에서 유의한 림프고갈이 관찰되었다. 용량은 HED(인간 등가 용량)로 표시하였다.
도 7. 급성 고용량 덱사메타손은 랫 호중구 수를 감소시키지 않는다. . 랫을 위약, 20 mg/kg (HED 3.23 mg/kg), 40 mg/kg (HED 6.45 mg/kg) 또는 80 mg/kg (HED 12.9 mg/kg) 덱사메타손 베이스를 48시간동안 IV 또는 PO 처리한 후 일반 혈액 검사로 측정한 개별 절대 호중구 수 및 평균 그래프를 도시하였다. 도 3, 4 및 6의 데이터는 동일한 쥐에서 가져온 것이다. 급성 고용량 덱사메타손은 호중구를 유지하는 림프고갈 프로파일을 갖는다. 경구(왼쪽) 및 IV(오른쪽) 용량은 채혈 전 1x 48시간 전에 투여되었다. 용량은 HED(인간 등가 용량)로 표시하였다.
도 8. CD3 및 CD4 양성 림프구. 개별 CD3+(왼쪽) 및 CD4+(오른쪽) 림프구의 그래프 및 마우스를 위약, HED 3 mg/kg, HED 6 mg/kg) 또는 HED 12 mg/kg 덱사메타손 베이스로 IV 또는 PO 처리하고 48시간 후 유동 세포 분석에 의해 상대 수(relative counts)로 측정되고 일반 혈액 검사를 사용하여 상대 절대 수(relative absolute count)로 정규화된 평균의 그래프. 상대수/μl= 유세포 분석 및 일반 혈액 검사를 결합하였다. 대조군과 비교하여, 12 mg/kg 그룹에서: CD3+ 세포의 65% 감소; CD4+ 세포의 75% 감소. 용량은 HED(인간 등가용량)로 표시하였다. one-way ANOVA에 이은 Tukey's test를 통합하여 치료 그룹 간의 통계적 유의성을 결정하였다. *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001
도 9. 급성 고용량 덱사메타손은 마우스 CD8 양성 림프구 및 Treg을 감소시킨다. 개별 CD8+ (left) 및 Treg (right) 림프구 및 마우스를 위약, HED 3 mg/kg, HED 6 mg/kg) 또는 HED 12 mg/kg 덱사메타손 베이스로 IV 또는 PO 처리하고 48시간 후 유동 세포 분석에 의해 상대 수로 측정되고 일반 혈액 검사를 사용하여 상대 절대 계수로 정규화된 평균의 그래프을 도시하였다. 대조군과 비교하여, 12 mg/kg 그룹: CD8+ 세포 56% 감소; 마우스 Treg 78% 감소. 용량은 HED(인간 등가 용량)로 표시하였다. one-way ANOVA에 이은 Tukey's test를 통합하여 치료 그룹 간의 통계적 유의성을 결정하였다. *p<0.05, **p<0.01.
도 10. 급성 고용량 덱사메타손은 마우스 NK 세포 및 B 세포를 감소시킨다. 개별 자연 살해 (NK) 세포(왼쪽) 및 B 림프구(오른쪽)의 그래프 및 마우스를 위약, HED 3 mg/kg, HED 6 mg/kg) 또는 HED 12 mg/kg 덱사메타손 베이스로 PO 처리하고 48시간 후 일반 혈액 검사를 사용하여 상대 절대 수로 정규화된 평균을 도시하였다. NK 세포는 CD3-CD49b+로 동정되었다. B 림프구는 CD3-B220+로 동정되었다. 상대적 수(Relative counts)/ul = 유동 세포 분석 및 일반 혈액 검사를 결합하였다. 대조군과 비교하여, 12 mg/kg 그룹: NK 세포 87% 감소; B세포 83% 감소. 용량은 HED(인간 등가 용량)로 표시하였다. one-way ANOVA에 이은 Tukey's test를 통합하여 치료 그룹 간의 통계적 유의성을 결정하였다. *p<0.05, **p<0.01; *** p <0.001.
도 11. 급성 고용량 덱사메타손은 호중구를 유지하면서, 마우스 절대 림프구 수를 감소시킨다. 개별 절대 호중구(왼쪽) 및 총 림프구(오른쪽) 및 마우스를 위약, HED 3 mg/kg, HED 6 mg/kg, HED 9 mg/kg, HED 12.mg/kg, 또는 HED 17.5 mg/kg 덱사메타손 베이스로 PO 처리하고 24~48시간 후 유동 세포 분석에 의해 상대 수로 측정되고 일반 혈액 검사를 사용하여 상대 절대 수로 정규화된 평균의 그래프를 도시하였다. 세포/μl= 일반 혈액 검사(CBC)에서 얻은 절대 수. 급성 고용량 덱사메타손은 12 mg/kg 이상의 HED 용량에서 거의 완전한 림프절제를 유발하나 호중구에는 영향을 미치지 않는다. 따라서, 급성 고용량 덱사메타손은 수혈의 필요성을 없애고, 화학치료 요법에 대한 보다 안전한 무독성 대안을 제공한다. 용량은 HED(인간 등가 용량)로 표시된다.
도 12. 급성 고용량 덱사메타손은 마우스 RBCs 및 혈소판을 유지한다. 개별 절대 적혈구(왼쪽) 및 혈소판(오른쪽) 및 마우스를 위약, HED 3 mg/kg, HED 6 mg/kg, HED 9 mg/kg, HED 12.mg/kg, 또는 HED 17.5 mg/kg 덱사메타손 베이스로 PO 처리하고 24~48시간 후 유동세포 분석에 의해 상대 수로 측정되고 일반 혈액 검사로 정규화된 평균의 그래프를 도시하였다. 세포/μl= 일반 혈액 검사(CBC)에서 얻은 절대 수. 급성 고용량 덱사메타손은 적혈구나 혈소판에 영향을 주지 않고 수혈의 필요성을 제거하므로, 화학치료 요법에 대한 보다 안전한 무독성 대안을 제공한다. 용량은 HED(인간 등가 용량)로 표시된다.
도 13. naive 마우스를 위약(비히클) 또는 저용량 또는 고용량의 급성 고용량 덱사메타손으로 처리하고 48시간 뒤 측정된 살아있는 조혈 줄기 세포의 수를 도시하였다. 고용량 급성 고용량 덱사메타손조차도 살아있는 조혈 줄기 세포의 수를 유의미하게 변화시키지 않았다. 따라서, 급성 고용량 덱사메타손으로 대표되는 비 골수 파괴 요법은 면역 재설정후 조혈 줄기세포의 회복을 위한 수혈의 필요성을 제거할 수 있다.
도 14. 3 mg/kg 덱사메타손 베이스로 처리된 인간 환자의 50%(4명 중 2명)는 CD3, CD4 및 CD8 양성 림프구를 고갈시켰다. 4명의 인간 환자에게 3 mg/kg 덱사메타손 베이스를 경구 투여하고 48시간 뒤, 개별 치료 전 및 후에 유동 세포 측정법에 의해 측정된 CD3+, CD4+ 및 CD8+ 림프구의 값 및 선 플롯을 도시하였다. 각 환자의 치료 전 값은 연결선으로 치료 후 값과 연결된다. CD4+ 세포는 또한 CD3+이다. CD8+ 세포는 또한 CD3+이다.
도 15. 3 mg/kg 덱사메타손 베이스로 처리된 인간 환자의 25%(4명 중 1명)는 Tregs 및 B 림프구를 고갈시켰다. 라인은 4명의 인간 환자에게 3 mg/kg 덱사메타손 베이스를 경구 투여하고 48시간 뒤, 치료 전, 후 유동세포 측정법에 의해 측정된 Treg 및 B 림프구의 값 및 라인 플롯이다. 각 환자의 치료 전 값은 연결 선으로 치료 후 값과 연결된다. Tregs는 CD3 + CD4 + CD25 + FoxP3 +로 식별된다. B 림프구는 CD3-CD19+로 식별된다.
도 16. 3 mg/kg 덱사메타손 베이스로 치료된 인간 환자의 75%(4명 중 3명)는 NK 세포를 고갈시켰지만, 조혈 줄기 세포는 보존되었다. 라인은 4명의 인간 환자에게 3 mg/kg 덱사메타손 베이스를 경구 투여하고 48시간 후, 개별 치료 전 및 후 유동세포 분석에 의해 측정된 NK 세포 및 조혈 줄기 세포(HSC)의 값 및 라인 플롯이다. 각 환자의 치료 전 값은 연결선으로 치료 후 값과 연결된다. NK 세포는 CD3-CD16/56+로 식별된다. HSC는 CD34+CD38-로 식별된다.
도 17. 3 mg/kg 덱사메타손 베이스로 치료된 인간 환자의 100 %는 혈청 IL-2 및/또는 IL-15 수준이 증가했지만 IL-6은 상승하지 않았다. 4 명의 인간 환자에게 3 mg/kg 덱사메타손 베이스를 경구 투여하고 48 시간 후, 치료 전 및 후 ProCartaPlex-9 plx Luminex 분석으로 측정한 인터루킨 2 및 인터루킨 15의 혈장 수준의 각 환자의 컬럼 플롯. 도 14, 도 15, 도 16 및 도 17은 동일한 4 명의 인간 환자의 데이터를 나타낸다.
도 18. 3 mg / kg 덱사메타손 베이스의 경구 투여는 48 시간 후에 골수 MSC 수치를 증가시켰다. MarrowCellution^TM 바늘을 사용하여 회장에서 농축된 골수를 흡인하기 48시간 전 3 mg/kg 덱사메타손베이스로 치료한 31명의 historical naive 대조군 인간 및 두 명의 인간 환자의 데이터의 컬럼 플롯. 플롯은 골수 CFU/ml +/- 표준편차를 나타낸다. 제어된 실온에서 골수를 수확하고 보관한 24시간 후 추가적인 조작 없이 콜로니 형성 유닛 분석 섬유아세포(CFU-F) 배지에 직접 첨가하였다. CFUF 콜로니 수는 출발 물질에서 중간엽 줄기 세포(MSC)수의 척도이다. 3mg/kg 덱사메타손 염기를 경구 투여한지 48시간 뒤, 장골 능선 골수 MSC 수치는 31개의 히스토리컬 대조군보다 약 2배 높은 것으로 나타낫다. 3 mg/kg 경구 덱사메타손 베이스는 환자 M 및 환자 P의 경우, 동일한 MarrowCellution^TM 바늘을 사용하여 흡인된 골수31개의 히스토리컬 대조군에 비해 48시간 후 ml당 인간 골수 CFU-F를 증가시킨다.
도 19. -2일에 12 mg/kg 및 17 내지 18 mg/kg 덱사메타손 베이스 경구 투여와 -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg (HED 500 mg/m²) 및 플루다라빈 10 mg/kg의 단일투여와 결합된 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스, 및 -5일 및 -4일의 2일간의 사이클로포스파미드 166 mg/kg의 2일 반복 및 -5, -4, -3, -2일의 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg (HED 30 mg/m²)의 비교. 마우스에 PBS (Vehicle)투여, 또는 -5일 및 -4일에 Cyclophosphamide 166 mg/kg 반복 IP 및 -5, -4, -3, -2일에, 4일간의 Fludarabine 10 mg/kg (HED 30 mg/m²)의 IP (Flu+Cy) 투여, 또는 -5일에 Cyclophosphamide 166 mg/kg (HED 500 mg/m²) 단일 IP 투여 및 Fludarabine 10 mg/kg IP 이후 -2일에 경구 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스 투여(Flu+Cy + AVM0703(12 mg/kg); Flu+Cy + AVM0703(17 mg/kg)), 또는 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스 투여 (AVM0703(12 mg/kg); AVM0703(17 mg/kg)), IP 투여 48시간 후 유동세포 분석에 의해 상대 수로 측정되고 일반 혈액 검사로 정규화된 평균(좌측)의 그래프를 도시하였다. 또한, 오른쪽은 이러한 요법의 마우스에서의 투여일정을 도시한 것이다.
도 20. -5일에 Cyclophosphamide 166 mg/kg (HED 500 mg/m²) 및 Fludarabine 10 mg/kg의 단일 용량과 -2일에 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스의 결합은 -5일 및 -4일에 2일간의 Cyclophosphamide 166 mg/kg 반복 및 -5, -4, -3, -2일에 4일간의 Fludarabine 10 mg/kg (HED 30 mg/m²)와 비교하여 CD3+ 및 CD4+ 림프구를 동등하게 감소시켰다. 개별 CD3+(왼쪽) 및 CD4+(오른쪽) 림프구 및 마우스를 PBS (Vehicle)로, 또는 -5일 및 -4일에 Cyclophosphamide 166 mg/kg 반복 IP 및 -5, -4, -3, -2일에, 4일간의 Fludarabine 10 mg/kg (HED 30 mg/m²)의 IP (Flu+Cy)로, 또는 -5일에 Cyclophosphamide 166 mg/kg (HED 500 mg/m²) 단일 IP 및 Fludarabine 10 mg/kg IP 이후 -2일에 경구 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스(Flu+Cy + AVM0703(12 mg/kg); Flu+Cy + AVM0703(17 mg/kg))로, 또는 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스(AVM0703(12 mg/kg); AVM0703(17 mg/kg))로 IP 처리한 후, 48시간 후 유동세포 분석에 의해 상대 수로 측정되고 일반 혈액 검사로 정규화된 평균을 나타낸다.
도 21. -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 단일용량 및 플루다라빈 10 mg/kg의 단일용량과 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스의 조합은 -5일 및 -4일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg 및 -5, -4, -3, -2일 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg와 비교하여 동등하게 CD8+ 림프구 및 Tregs를 림프고갈시켰다. 각각의 Treg(오른쪽) 및 CD8+림프구(왼쪽)의 그래프 및 마우스를 PBS(비히클)로 IP 처리, 또는 -5 및 -4일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg 및 -5, -4, -3, -2일 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg로 반복 IP(Flu+Cy), 또는 -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 단일 IP 용량 및 플루다라빈 10 mg/kg의 IP 모두를 투여하고 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스를 경구 투여(Flu+Cy+AVM0703(12 mg/kg); Flu+Cy + AVM0703(17 mg/kg)), 또는 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스의 경구투여(AVM0703(12 mg/kg); AVM0703(17 mg/kg))한 후 48시간 뒤 유동세포 분석에 의해 상대 수로 측정되고 일반 혈액 검사로 정규화된 평균을 나타낸다. CD8+ 플롯(왼쪽) 및 CD4+ 플롯 (오른쪽) 모두에서, 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스 데이터를 각각의 오른쪽 열에 나타내었다(상대 수는 ‘33', '1.4', '0.2' 및 '0.5').
도 22. -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 및 플루다라빈 10 mg/kg의 단일용량과 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스의 조합은 -5일 및 -4일, 2일간의 사이클로포스파미드 166 mg/kg 반복 및 -5, -4, -3, -2일, 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg(HED 30 mg/m²)와 비교하여 동등하게 NK 세포 및 B 림프구를 림프고갈시켰다. 개별 B 림프구(왼쪽) 및 NK 세포림프구(오른쪽)의 그래프 및 마우스를 PBS(비히클)로 IP 처리, 또는 -5 및 -4일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg 및 -5, -4, -3, -2일 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg (HED 30 mg/m²)로 반복 IP(Flu+Cy), 또는 -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 단일 IP 용량 및 플루다라빈 10 mg/kg의 IP 모두를 투여하고 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스를 경구 투여(Flu+Cy+AVM0703(12 mg/kg); Flu+Cy + AVM0703(17 mg/kg)), 또는 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스의 경구투여(AVM0703(12 mg/kg); AVM0703(17 mg/kg))한 후 48시간 뒤 유동세포 분석에 의해 상대 수로 측정되고 일반 혈액 검사로 정규화된 평균을 나타낸다. B 세포 플롯(왼쪽) 및 NK 세포 플롯 (오른쪽) 모두에서, 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스 데이터를 각각의 오른쪽 열에 나타내었다(B 세포의 경우 상대 수는 '111' 및 '58'; NK 세포의 경우 도시하지 않음).
도 23. -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 및 플루다라빈 10 mg/kg의 단일용량과 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스의 조합은 -5일 및 -4일, 2일간의 사이클로포스파미드 166 mg/kg 반복 및 -5, -4, -3, -2일, 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg(HED 30 mg/m²)와 비교하여 동등하게 절대 림프구를 림프고갈시켰으나, 호중구는 유지시켰다. 개별 절대 호중구(왼쪽) 및 절대 림프구(오른쪽)의 그래프 및 마우스를 PBS(비히클)로 IP 처리, 또는 -5 및 -4일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg 및 -5, -4, -3, -2일 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg (HED 30 mg/m²)로 반복 IP(Flu+Cy), 또는 -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 단일 IP 용량 및 플루다라빈 10 mg/kg IP 모두를 투여하고 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스를 경구 투여(Flu+Cy+AVM0703(12 mg/kg); Flu+Cy + AVM0703(17 mg/kg)), 또는 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스의 경구투여(AVM0703(12 mg/kg); AVM0703(17 mg/kg))한 후 48시간 뒤 유동세포 분석에 의해 상대 수로 측정되고 일반 혈액 검사로 정규화된 평균을 나타낸다. 호중구 플롯(왼쪽) 및 림프구 플롯 (오른쪽) 모두에서, 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스 데이터를 각각의 오른쪽 열에 나타내었다(상대 수는 '321', '605', '521' 및 '88').
도 24. -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 및 플루다라빈 10 mg/kg의 단일용량과 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스의 조합은 적혈구(RBC) 및 혈소판을 유지시켰다. 개별 절대 혈소판 및 절대 적혈구의 그래프 및 마우스를 PBS(비히클)로 IP 처리, 또는 -5 및 -4일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg 및 -5, -4, -3, -2일 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg (HED 30 mg/m²)로 반복 IP(Flu+Cy), 또는 -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 단일 IP 용량 및 플루다라빈 10 mg/kg IP 모두를 투여하고 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스를 경구 투여(Flu+Cy+AVM0703(12 mg/kg); Flu+Cy + AVM0703(17 mg/kg)), 또는 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스의 경구투여(AVM0703(12 mg/kg); AVM0703(17 mg/kg))한 후 48시간 뒤 유동세포 분석에 의해 상대 수로 측정되고 일반 혈액 검사로 정규화된 평균을 나타낸다. 적혈구 플롯(왼쪽) 및 혈소판 플롯 (오른쪽) 모두에서, 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스 데이터를 각각의 오른쪽 열에 나타내었다(상대 수는 ‘10', '10', '348' 및 '373').
도 25. -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 및 플루다라빈 10 mg/kg의 단일용량과 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스의 조합은 -5일 및 -4일, 2일간의 사이클로포스파미드 166 mg/kg 반복 및 -5, -4, -3, -2일, 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg(HED 30 mg/m²)와 비교하여 독성 측정 값인, 체중을 유지하였다. 왼쪽은 개별 체중 그래프 및 마우스를 PBS(비히클)로 IP 처리, 또는 -5 및 -4일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg 및 -5, -4, -3, -2일 4일간의 플루다라빈 10 mg/kg (HED 30 mg/m²)로 반복 IP(Flu+Cy), 또는 -5일에 사이클로포스파미드 166 mg/kg(HED 500 mg/m²) 단일 IP 용량 및 플루다라빈 10 mg/kg IP 모두를 투여하고 -2일의 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg의 덱사메타손 베이스를 경구 투여(Flu+Cy+AVM0703(12 mg/kg); Flu+Cy + AVM0703(17 mg/kg)), 또는 12 mg/kg 또는 17-18 mg/kg 덱사메타손 베이스의 경구투여(AVM0703(12 mg/kg); AVM0703(17 mg/kg))한 후, 처리전 체중에서 48시간 뒤 체중을 빼서 계산된 평균을 나타낸다. 급성 고용량 덱사메타손 그룹은 화학요법 그룹과 달리 체중 감소와 관련이 없다. 따라서, 급성 고용량 덱사메타손은 화학요법과 유사한 림프 고갈효과를 제공하지만 관련된 독성은 없다. 또한, 오른쪽은 이러한 요법의 투여일정을 나타낸다.
도 26. 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED(AVM0703)와 표준 화학 요법의 비교: 항종양 효능. A20 B 세포 림프종 마우스(8~10주령)는 PBS (대조군), 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED (AVM0703), 또는 1사이클 또는 2사이클의 사이클로포스파미드 100 mg/kg i.p, 독소루비신 6 mg/kg i.p, 빈크리스틴 0.1 mg/kg i.p 및 덱사메타손 0.2 mg/kg i.p (CHOP)으로 처리되었다. 1주기 CHOP에 대한 투여는 0일에 수행되었으며, 2주기 CHOP 마우스는 0일 및 10일에 투여되었고, 덱사메타손 투여는 7, 10, 18, 23, 24, 28, 35, 및 42일에 수행되었다(화살표로 표시). 2~3일마다 종양 부피(mm³)를 측정하여 종양 성장을 추적하였다. 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED의 효능은 CHOP의 1주기보다 높았지만 종양 부피 조절 측면에서 CHOP의 2주기만큼 효과적이지는 않았다. 그러나, 그러나 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED는 CHOP의 2주기에 비해 훨씬 유리한 독성 프로필과 연관이 있다.
도 27. 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED(AVM0703)와 표준 화학 요법의 비교: 독성 비교. 패널 A는 PBS 대조군과 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED(AVM0703)의 경우에 대한 체중 변화율(%)을 나타낸다. 패널 B는 PBS 대조군과 비교하여, 1사이클 또는 2사이클의 사이클로포스파미드 100 mg/kg i.p, 독소루비신 6 mg/kg i.p, 빈크리스틴 0.1 mg/kg i.p 및 덱사메타손 0.2 mg/kg i.p (CHOP)의 경우에 대한 체중 감소를 나타낸다. 2주기의 CHOP(B)로 처리된 마우스에서 보이는 체중 감소는 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED(AVM0703)로 처리된 마우스에서 나타난 것보다 훨씬 크다. 또한, 2주기의 CHOP로 처리된 마우스의 18%가 CHOP 처리로 인해 사망한 반면, 덱사메타손 처리로 인해 사망한 마우스는 없다.
도 28. 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED(AVM0703)와 PBS 대조군의 통계적 비교. A20 B 세포 림프종 마우스(8~10주령)는 PBS (대조군) 또는 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED (AVM0703)로 처리되었다. 덱사메타손 투여는 7, 10, 18, 23, 및 24일에 수행되었다(화살표로 표시). 2~3일마다 종양 부피(mm³)를 측정하여 종양 성장을 추적하였다. 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED의 효능(검은색 사각형)은 종양 성장의 감소에서 나타나는 것과 같이 대조군(검은색 원)보다 크다. 종양 부피에서 유의한 차이는 15일, 17일 및 20일에 관찰되었다.
도 29. 글루코코르티코이드 요법은 효과적인 화합요법에 필요한 용량을 감소시킨다. PBS 단독('대조군') 또는 덱사메타손 베이스('AVM0703')으로 치료한 종양 보유 대상은 일반적으로 20일 후 높은 성장률을 나타내는 지속적인 종양 성장을 나타낸다. 11일에 AVM0703으로 치료된 후, 14일에 Cy/Flu 화학요법('콤보')으로 치료된 종양 보유 대상은 11일 및 14일 2회의 Cy / Flu 화학 요법으로 치료된 대상의 종양과 유사한 수준으로 종양 부피의 꾸준하고 지속적인 감소를 나타내었다.
도 30. 고용량 글루코코르티코이드 요법은 체중에 큰 영향을 미치지 않으면서 종양 밀도를 감소시킨다. 종양의 확립후, 글루코코르티코이드 AVM0703을 매주 6 mg/Kg HED, 매주 15 mg/Kg HED 또는 매주 21 mg/Kg HED의 주간 용량으로 투여한 후, 대상의 종양 밀도를 측정하였다(왼쪽 패널). 연구 과정에서, 마우스의 체중도 나타내었다(오른쪽 패널). 점선은 연구 시작 시 마우스 평균 체중의 20% 손실을 나타낸다. 독성으로 인해 체중이 크게 감소하지 않았으며, 마우스를 쓰러뜨리지도(take down) 않았다.

세포독성 화학 요법제는 수용체 비 매개성 메커니즘 또는 수단을 통해 세포 사멸을 유발한다. 세포독성 화학 요법제는 세포 분열, 신진 대사 또는 세포 생존에 필요한 기능을 방해하여, 세포의 사멸을 유발한다. 이러한 작용기전으로 인해 빠르게 성장(즉, 증식 또는 분열을 의미함)하거나 대사적으로 활성인 세포는 그렇지 않은 세포보다 우선적으로 사멸된다. 세포가 분열하거나 에너지를 사용(세포의 기능을 지원하는 대사작용)하는 것과 같은 신체의 상이한 세포의 상태는 세포의 죽음을 유발하는 화학요법제의 용량(dose)을 결정한다. 통상의 기술자는 본 발명에서 사용되는 글루코코르티코이드가 세포독성 화학요법제가 아님을 이해할 것이다. 세포독성 화학 요법제는 비-배타적으로, 알킬화제, 항-대사산물, 식물 알칼로이드, 토포아이소머라아제 억제제, 항신생물제(antineoplastic) 및 삼산화 비소(arsenic trioxide), 카르무스틴(carmustine), 플루다라빈(fludarabine), IDA ara-C, 마이알로탱(myalotang), GO, 무스타젠(mustargen), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 젬시타빈(gemcitabine), 벤다무스틴(bendamustine), 전신 방사전조사(total body irradiation), 사이타라빈(cytarabine), 에토포사이드(etoposide), 멜팔란(melphalan), 펜토스타틴(pentostatin_ 및 방사선과 관련이 있다.

본 발명은 면역절제(immunoablation)에 의한 질병의 치료에 사용하기 위한 글루코코르티코이드를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명의 조성물은 림프구와 같은 면역 세포에 의해 매개되는 질병의 치료에 사용하기 위한 것일 수 잇다. 상기 치료는 약 3 - 26 mg/kg의 덱사메타손 베이스의 인간 등가 용량(HED)과 동등한 용량으로 글루코코르티코이드를 전달하기 위해 환자에게 약학 조성물의 용량을 투여하는 것을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 용어, 글루코코르티코이드는 글루코코르티코이드 수용체 작용제 및 글루코코르티코이드 수용체에 결합하는 임의의 화합물을 포함한다. 이러한 화합물은 덱사메타손, 덱사메타손 함유 제제, 하이드로코티손 (hydrocortisone), 메틸 프레디손(methyl predisone), 프레드니손(prednisone), 코르티콘(corticone), 부데소니드(budesonide), 베타메타손(betamethasone) 및 베크로메타손(beclomethasone)과 관련이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 기타 글루코코르티코이드는 프레트니솔론(prednisolone), 모메타손 푸로에이트(mometasone furoate), 트리암시놀론 아세토니드(Triamcinolone Acetonide) 및 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)을 포함한다. 글루코코르티코이드는 글루코코르티코이드 수용체 조절 작용제를 추가로 포함한다. 추가적으로, 선택적 글루코코르티코이드 수용체 작용제는 본 발명에서 개시하는 약학 적 조성물에 사용될 수 있다. 이러한 작용제 또는 조절제는 예를 들어 선택적 글루코코르티코이드 수용체 조절제(selective glucocorticoid receptor modulators; SEGRMs) 및 선택적 글루코코르티코이드 수용체 작용제(selective glucocorticoid receptor agonists; SEGRAs)를 포함한다. 본 명세서에 개사된 방법 및 조성물에서 사용될 수 있는 글루코코르티코이드, 글루코코르티코이드 수용체 조절제 및 선택적 글루코코르티코이드 수용체 작용제 (SEGRA)는 통상의 기술자에게 잘 알려져 있다.

글루코코르티코이드 및 글루코코르티코이드 수용체(GR) 조절제는 유전자 발현을 활성화 또는 억제하는 막 글루코코르티코이드 수용체와 세포질 GR을 통해 그 효과를 발휘한다. 글루코코르티코이드 및 GR 조절제의 바람직한 림프고갈 효과 중 일부는 이들의 유전적 효과 외에도 막 GR 도는 기타 비 유전적 효과를 통해 매개되는 것으로 보인다. 흥미롭게도 덱사메타손과의 공동처리는 글루코코르티코이드 내성을 감소시킬 수 있는 것으로 나타났다(Serafin et al., 2017).

글루코코르티코이드의 효과는 복잡하며, GR 및 미네랄코르티코이드 수용체(mineralocorticoid receptor; MR)에 대한 각각의 특정 글루코코르티코이드의 친화성에 따라 달라진다. 또한, 확인은 되었지만, 완전히 특성화되지 않은 세포질 GR 및 추가적인 막 발현 GR 수용체의 9개의 이소형(isoform)이 있다. 글루코코르티코이드는 투여된 글루코코르티코이드의 농도와 처리 기간에 따라 림프구 수준에 다양한 영향을 미치는 것으로 보고되었다. 일반적으로, 만성 치료(chronic therapy)에 사용되는 저용량의 글루코코르티코이드는 말초 혈액에서 골수로 림프구를 재분배하는 것으로 보고되었으며, 중간 용량의 글루코코르티코이드는 백혈구의 증가를 유발하여 골수, 비장 및 흉선의 백혈구가 말초 혈액으로 재분배되는 것으로 생각되고, 고용량에서 글루코코르티코이드는 세포 사멸과 괴사를 유발하여 림프구에 림프독성 작용을 나타내는 것으로 보고되었다. 효과의 기간 또한 용량 수준에 따라 달라진다. 예를 들어, Fauci et al (1976)는 단일 경구 0.24 mg/kg 덱사메타손 용량이 말초 혈액 T 및 B 림프구를 80% 억제하고, 12시간부터 회복되기 시작하여, 24시간에 정상수준이 된다고 보고하였다. 그러나, 본 발명은 투여 후 24 ~ 48시간에 말초 혈액 T 및 B 세포를 감소시키기 위해 3 mg/kg의 급성 경구 용량이 필요하며, 투여 후 약 5 내지 14일 뒤 기준선 수준으로 복귀하는 것을 확인하였다.

예시적인 글루코코르티코이드의 바람직한 생체 내 효과는 2차 림프관에서 배 중심 및 변연부의 감소, 일부 암; 특히, 다발성 골수종(multiple myeloma), 신장 세포 암종(renal cell carcinoma), 백혈병 및 림프종(leukemia and lymphoma), 비소세포 폐암(non-small cell lung cancer; NSCLC), 전립선 및 유방암(prostate and breast cancer);의 직접적인 종양 사멸, 모든 말초 혈액 림프구 유형의 고갈, BM 또는 기타 기관으로의 림프구 재분배 부족, IL-2, 및/또는 IL-7, 및/또는 IL12, 및/또는 IL-15를 ?l마하는 혈장 사이토카인의 바람직하게는 20 pg/ml 이상의 수준으로의 상승 등을 포함한다. 모범적 글루코코르티코이드는 ACT 유도된 사이토카인 방출 증후군(CRS)의 주요 원인 중 하나인 IL-6의 혈장 수준을 상승시키지 않는다. 모범적 글루코코르티코이드는 ACT 유도된 신경 부종의 주요 원인 중 하나인 GM-CSF의 혈장 수준을 상승시키지 않는다. 약 HED 6 mg/kg 이상의 덱사메타손 급성 용량은 2차 림프관에서 배 중심과 변연부를 감소시킨다; 48시간 동안의 약 1.6 mg/kg HED의 덱사메타손의 급성 용량은 다발성 골수종 및 기타 암 세포주에 대해 약 50%의 직접 종양 사멸을 나타내며 이는 유지되지만 최대 12 mg/kg HED의 용량까지 증가하지 않는다; 림프고갈을 위해 약 3 mg/kg HED 이상의 덱사메타손 급성 용량이 필요하다는 점은 3 mg/kg HED를 처리한 환자의 50% 가 림프구 증가증을 나타내었다는 관찰에 의해 증명된다(도 14); 혈장 IL-2 및 IL-15 사이토카인 상승은 약 HED 3 mg/kg 이상의 덱사메타손 베이스 용량에서 관찰된다(도 17). 본 출원에 개시된 적응증에서 원하는 생체 내 효과에 기초하여, 가장 바람직한 급성 덱사메타손 베이스 용량(본 명세서의 설명 또는 알려진 계산법을 기반으로 기타 글루티코이드의 등가용량으로 변환 가능함)은 HED 9 mg/kg 이상일 가능성이 높다.

단일 고용량의 글루코코르티코이드는 경구 투여 또는 약 1시간의 IV 주입으로 제공될 수 있다. 총 용량은 반복적 IV 또는 경구 용량으로 제공될 수 있다. 예를 들어, 덱사메타손의 총 용량은 약 24 시간 내지 72시간 내에 약 3 mg/kg 내지 약 26 mg/kg이다.

다른 글루코코르티코이드 또는 글루코코르티코이드 수용체 조절제의 등가용량은 공개적으로 이용가능한 코르티코이드 변환 알고리즘, 바람직하게는 http://www.medcalc.com을 이용하여 쉽게 계산할 수 있다. 예를 들어, 덱사메타손 3 ~ 12 mg/kg는 프레드니손 19 ~ 75mg/kg로 변환된다. 프레드니손의 생물학적 반감기는 약 20시간이고 덱사메타손의 생물학적 반감기는 약 36~54시간이기 때문이다. 따라서, 프레드니손은 동등한 생물학적 투여량을 위해 24시간마다 19 ~ 75 mg/kg으로 투여된다. 보다 구체적으로 12 mg/kg 용량의 덱사메타손은 1) 24시간 마다 약 2 내지 약 3회 용량의 반복 투여를 필요로하는 75 mg/kg 용량의 프레드니솔론에 해당한다. 10 mg/kg의 덱사메타손은 약 12 mg/kg 용량의 베타메타손이며, 덱사메타손과 유사한 약역학적(pharmacodynamics)(생물학적) 반감기를 갖는다 그러나 베타메타손은 24mg/50kg의 용량에서 적혈구를 감소시킨다(Gaur 2017).

본 출원의 실시예에서 DEX (덱사메타손 베이스)용량은 인간 등가 용량 (HED)으로 제공된다. 주어진 실시예에서 AVM0703 (AugmenStem^TM 또는 PlenaStem ^TM이라고도 함)은 전매 버퍼(proprietary buffer)에서 덱사메타손 인산 나트륨(dexamethasone sodium phosphate)인 Dex(덱사메타손 베이스)이다.

인간 등가 용량(HED)을 계산하는 방법은 본 발명의 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, FDA의 약물 평가 및 연구센터(CDER)는 2005년 고인용 가이드 문서를 발행하였으며(U.S Department of Health CDER, 2005), 여기서 해당 문서 7페이지의 표 1에서 체표면적 (종간의 용량을 추정하기 위해 일반적으로 인정되는 방법)을 기반으로 동물 용량을 HED로 변환하는 확립된 알고리즘을 설정한다. 참조를 위해 표 1은 다음과 같다. 통상의 기술자는 아래에 설명된 mg/kg 단위의 동물 용량이 표 1의 오른쪽 열에 있는 표준 변환 계수를 사용하여 HED를 쉽게 계산할 수 있음을 이해할 것이다.

체표면적을 기반으로 하는 동물 용량의 인간 등가 용량으로 전환

		동물 용량(mg/kg)을 HED^a로 변환하려면 다음 중 하나를 수행:
종	동물 용량(mg/kg)을 mg/m²단위의 용량으로 변환하기 위한, k_m의 곱	동물 용량을 다음으로 나눔	동물 용량을 다음으로 곱함
Human	37	---	---
Child (20 kg)^b	25	---	---
Mouse	3	12.3	0.08
Hamster	5	7.4	0.13
Rat	6	6.2	0.16
Ferret	7	5.3	0.19
Guinea pig	8	4.6	0.22
Rabbit	12	3.1	0.32
Dog	20	1.8	0.54
Primates:
Monkeys^c	12	3.1	0.32
Marmoset	6	6.2	0.16
Squirrel monkey	7	5.3	0.19
Baboon	20	1.8	0.54
Micro-pig	27	1.4	0.73
Mini-pig	35	1.1	0.95

^a: 60kg의 사람으로 가정. 나열되지 않은 종 또는 표준 범위를 벗어난 무게의 경우 HED는 다음의 공식으로 계산할 수 있음:HED = 동물 용량(mg/kg) x (동물 체중(kg)/인간 체중(kg))^0.33

^b:이 km 값은 건강한 어린이가 1상 시험에 거의 자원하지 않으므로, 참고용으로만 제공됨

^c:예를 들어, cynomolgus, rhesus, 및 stumptail.

본 명세서에 기재된 용량은 “체중 기반 용량” 또는 “체표면적(BSA) 기반 용량”으로 제시될 수 있다. 체중 기반 용량은 환자의 체중을 기준으로 계산되는 한자에게 투여하기 위한 용량이다(예: mg/kg). BSA 기반 용량은 환자의 표면적(예, mg/m²)을 기반으로 계산된 환자에게 투여하기 위한 용량이다. 두 가지 형태의 용량 측정은 위의 표 1에 개시된 바와 같이 체중 기반 용량에 37을 곱하거나 BSA 기반 용량을 37로 나눔으로써 인간 용량의 맥락으로 변환될 수 있다.

용어, “대상” 및 “환자”는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되며, 인간 또는 동물을 지칭한다.

등가 용량의 다른 글루코코르티코이드 스테로이드와 마찬가지로 덱사메타손은 림프 조직에서 배 중심의 형성 및 증식을 억제하고 말초 혈액을 림프고갈시킨다. 글루코코르티코이드, 특히 덱사메타손의 용량은 바람직하게는 75%를 초과하는 림프고갈을 달성한다. 더욱 바람직하게는 글루코코르티코이드, 특히 덱사메타손의 용량은 80%를 초과하는 림프고갈을 달성한다. 가장 바람직하게는, 글루코코르티코이드, 특히 덱사메타손의 용량은 95%를 이상의 림프고갈을 달성한다. 통상의 기술자는 완전한 혈구 수(complete blood counts; CBCs)를 측정하여 림프고갈을 쉽게 측정할 수 있음을 이해할 것이다.

덱사메타손 및 기타 바람직한 글루코코르티코이드는 호중구를 유지(spare)하며, 호중구의 기능을 억제하지 않고 (Schleimer RP, J Pharmacol Exp Ther 1989;250:598-605), 적혈구(RBCs), 혈소판, 중간엽 줄기세포(MSC) 및 조혈 줄기 세포(HSC)를 유지한다. 인간에서 호중구의 유지(sparing)는 500/mm³ 초과의 절대 호중구 수(absolute neutrophil count; ANC)이다. 호중구, 적혈구 및 혈소판을 유지함으로써, 림프절제 글루코코르티코이드(Lymphoablating glucocorticoids)는 수혈의 필요성을 줄이거나 없앨 수 있다. 림프절제 글루코코르티코이드는 또한 골수 중간엽 줄기세포(MSC)를 유지하고, 골수 MSC가 연골세포, 골 세포 또는 지방세포로 분화하는 능력에 영향을 미치지 않는다. 림프절제 글루코코르티코이드(Lymphoablating glucocorticoids)는 또한 인간과 말 모두에서 BM MSC의 내인성 수(endogenous number) 또는 이들의 생체 외(ex vivo) 생존을 증가시킨다. 림프 절제 글루코코르티코이드는 혈장 IL-2, IL-7, IL-12 및 IL-15 수준을 증가시키지만, IL-6 또는 GM-CSF 수준은 증가시키지 않는다. 본 발명의 일부 실시예에서, 대상은 이러한 사이토카인 중 하나 이상의 혈장 수준의 측정에 기초하여, 치료 전에 선택되고/선택되거나 치료 후에 평가된다.

덱사메타손은 치료되는 질병에 따라 하루 0.5 내지 9mg의 덱사메타손 나트륨 포스페이트 주사의 초기 투여로 사용하도록 승인되었으며, 이는 50kg BW을 기준으로 0.01 내지 0.18mg/kg의 일일 투여량이다. 덜 심각한 질병의 경우, 0.5mg 미만의 용량으로 충분할 수 있으며, 심각한 질병의 경우 9mg 이상의 용량이 필요할 수 있다. 현재 의료계에서 무반응 쇼크의 치료를 위해 고용량(약리학적) 코르티코스테로이드를 사용하는 경향이 있다. 뇌부종의 경우 덱사메타손 나트륨 포스페이트 주사는 일반적으로 처음 10mg의 용량으로 정맥 내 투여한 다음 6시간마다 4mg의 용량을 뇌부종의 증상이 가라앉을 때까지 근육 내 투여한다. 이 총 용량은 약 .34 내지 .48mg/kg의 총 24시간 용량 및 72시간 내의 0.8 내지 1.12 mg/kg의 총 72시간 용량에 상응하며, 이는 본 발명에 따른 유효용량인 약 3 mg/kg에서 약 26 mg/kg 사이의 용량의 사용이 아니다.

급성 알레르기 장애의 경우, 덱사메타손 나트륨 포스페이트 주사, USP 4 mg/mL이 권장된다: 첫날, 1 또는 2mL (4 또는 8mg), 근육내, 그 뒤 덱사메타손 나트륨 포스페이트 정제, 0.75mg; 2일 및 3일째 매일 2회로 분할 복용하는 4 정; 4일째, 2회로 분할 복용하는 2정; 5일 및 6일째, 매일 1정; 7일째 미투여; 8일째 후속 방문. 응급실에서 덱사메타손은 본 발명에서 정의된 글루코코르티코이드 용량보다 낮은 용량인 2mg/kg로 중증 급성 소아 천식을 위해 사용되었다.

덱사메타손과 같은 글루코코르티코이드의 통상적인 제형은 본 발명의 치료용도에 사용하기에 적합하지 않을 수 있다. 예를 들어, 덱사메타손 나트륨 포스페이트(DSP)는 현재 벤질 알코올(BA) 및 포르필파라벤(PP)과 같은 항균방부제를 함유하는 저용량(2-4 mg/ml)및 저용량 제형(예: APP Pharmaceuticals, Mylan)으로 제공된다. 완전한 림프절제를 수행하는데 필요한 DSP의 목표 용량은 여러 바이알의 사용을 수반함으로써, 부형제의 과다 복용을 초래한다. 벤질 알코올 및 프로필 파라벤의 WHO 허용 일일 섭취량(ADI)을 초과하는 경우, 유전 독성 및 암 위험 증가 (Darbre et al., 2014), 생식 독성 (Aker et al., 2016), 알레르기 질환 위험 증가 (Savage et al., 2012; Spanier et al., 2014), 및 신생아 CNS 기능 장애 (Medicines Agency, 2017)과 연관이 있다. 또한 시중에서 판매되는 DSP 패키지 삽입물을 사용하면 스테로이드를 투여받는 환자의 약 6%에 심각한 신경정신병적 영향이 발생한다 (Malmegrim et al., 2017). 본 발명은 고용량의 글루코코르티코이드의 투여를 포함하기 때문에, 잠재적으로 독성이 있는 방부제의 수준이 낮은 제형, 또는 독성 방부제가 없는 제형을 사용해야 한다. 바람직하게는 상기 방부제는 항산화제이다.

본 발명의 약학 조성물은 조성물의 안정성을 유지하기 위해 아황산나트륨(sodium sulfite)과 같은 보존 첨가제(예를 들어, 항산화제)를 포함할 수 있다. 황산염은 또한 제약 산업에서, 방부제 및 항산화 첨가제로 널리 사용된다. 이러한 아황산염에 대한 노출은 피부염, 두드러기, 홍조, 저혈압 및 복통에서부터 생명을 위협하는 아나필락시스 및 천식반응에 이르기까지 민감한 개인에게 다양한 임상적 부작용을 유발하는 것으로 보고되었다. 아황산염 유도된 증상은 일부 개인의 경우 중증에서 어떤 사람의 경우 중증까지 다양하며, 일부 개인의 경우 반응이 생명을 위협할 수 있다. 아황산나트륨이 항산화제로서 포함되는 바람직한 실시예에서, 농도는 0 내지 7 ppm 아황산나트륨(무수화물, Anhydrous)이다.

항산화제는 글루코코르티코이드 함유 조성물에서 전형적으로 사용되는 수준에서 감소된 양으로 첨가되어, 이러한 항산화제의 사용과 관련된 독성 및 부작용을 감소시킬 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 제형은 항산화제의 첨가가 부족할 수 있다.

본 발명에서 사용된 것과 같이, 항산화제는 분자의 산화 과정을 지연시키거나 억제하여 조성물의 안정성을 증가시키는 부형제이다. 사용가능한 항산화제는 예를 들어, 아스코르브산(ascorbic acid), 아세틸시스테인(acetylcysteine), 부틸하이드록시아니솔(butylhydroxyanisol), 시스테인 하이드로클로라이드(cysteine hydrochloride), 다이티오나이트 나트륨(dithionite sodium), 겐티산(gentisic acid), 글루타메이트 일나트륨(glutamate monosodium), 글루타티온(glutathione), 포름알데히드 설폭실레이트 나트륨(formaldehyde sulfoxylate sodium), 메티오닌(methionine), 모노티오글리세롤(monothioglycerol), 프로필 갈레이트(propyl gallate), 아황산염(sulfites), 나트륨 티오글리콜레이트(sodium thioglycolate), 알파-티오글리세롤(α-thioglycerol), 토코페롤 알파(tocopherol alpha), 알파토코페롤 수소 숙신산염(alpha tocopherol hydrogen succinate) 및 티오글리콜레이트 나트륨(thioglycolate sodium)을 포함한다. 활성 글루코코르티코이드 및 항산화제에 더하여, 통상의 기술자에게 잘 알려진 추가 성분이 본 발명의 약학 조성물에 포함될 수 있다. 약학 조성물은 안전하고 효과적으로 간주되는 물질로 구성된 약학적으로 허용 가능한 “담체”를 사용하여 제조될 수 있다. “약학적으로 허용가능한”은 “일반적으로 안전한 것으로 간주되는” 분자 독립체 및 조성물을 지칭하며, 예를 들어 생리학적으로 견고하고(tolerable), 일반적으로 인간에게 투여할 때, 알레르기 또는 유사한 부작용, 예를 들어 위장 장애를 일으키지 않는다. 일부 실시예에서, 이 용어는 미국 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인된 분자 독립체(molecular entities) 및 조성물을 의미하며, 이는 GRAS list under section 204(s) and 409 of the Federal Food, Drug and Cosmetic Act, 즉, FDA 또는 유사한 목록, U.S. 약전(Pharmacopeia) 또는 동물, 특히 인간에게서 사용하기 위해 일반적으로 인정되는 다른 약전의 시판 전 검토 및 승인을 받아야한다.

용어, “담체”는 희석제, 결합제, 윤활제, 및 붕해제를 의미한다. 통상의 기술자는 이러한 약학적 담체 및 이를 사용하여 약학적 조성물을 배합하는 방법에 익숙하다.

본 발명에서 제공되는 약학 조성물은 하나 이상의 부형제, 예를 들어, 용매, 용해도 향상제, 현탁제, 완충제, 등장화제, 항산화제 또는 항균 보존제르르 포함할 수 있다. 사용될 때, 조성물의 부형제는 조성물에 사용되는 활성 성분, 즉 글루코코르티코이드의 안정성, 생체 이용률, 안전성 및/또는 효능에 악영향을 미치지 않을 것이다. 따라서, 통상의 기술자는 투여 형태의 임의의 성분 사이에 비호환성이 없는 조성물이 제공된다는 것을 인식할 수 잇다. 부형제는 완충제, 가용화제, 등장화제, 킬레이트제, 항산화제, 항균제 및 방부제로 구성된 군에서 선택될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 조성물에 존재할 수 있는 금속 이온의 반응성을 격리하고 감소시키는데 사용되는 킬레이트제를 포함할 수 있다. 가능한 킬레이트제는 칼슘 다이소듐 EDTA(calcium disodium EDTA) 0.01-0.1% (EDTA = Ethylenediaminetetra acetic acid 또는 Edetate), 다이소듐 EDTA(Disodium EDTA) 0.01-0.11%, 나트륨 EDTA(Sodium EDTA) 0.20%, 칼슘 베르세타마이드 나트륨(Calcium Versetamide Sodium) 2.84%, 칼테리돌(Calteridol) 0.023%, DTPA(Diethylenetriaminepenta acetic acid) 0.04-1.2%이다. 바람직한 실시예에서, 다이소듐 EDTA(Edetate)의 농도는 0 내지 500ppm이다.

WO2018/183927에 개시된 바와 같이, 글루코코르티코이드는 또한 입양 세포 요법(ACT)과 함께 사전컨디셔닝제로 사용될 수 있다. 글루코코르티코이드, 특히 세포 면역 요법 투여 전 약 12 내지 약 72시간 사이에 약 3 mg/kg 내지 약 26 mg/kg의 단일 급성 용량으로 투여된 덱사메타손 또는 약 12 내지 약 72시간의 세포 요법 투여에 주어진 약 3mg/kg 내지 26 mg/kg의 총 용량은 혈장 IL-2 및 IL-15 수준을 증가시킨다.

글루코코르티코이드, 특히 약 3mg/kg 내지 약 26 mg/kg 단일 급성 용량 또는 약 3mg/kg 내지 약 26 mg/kg의 총용량으로, 단독 또는 감소된 강도의 세포독성 사전컨디셔닝제와 함께 투여된 덱사메타손은 자가면역 질환의 치료에 유용할 수 있다. 자가 면역 질환의 치료를 위해 ACT는 자가면역 인식 세포를 제거하기 위해 질병을 유발하는 면역 세포를 표적으로 삼을 수 있다. 또한, 자가면역 질환의 경우 ACT는 CAR 또는 TCR에 의해 표적화된 Treg 또는 자가면역 공격이 진행되는 신체의 영역 또는 기관에 의해 특이적 또는 선택적으로 발현된 항원에 대해 발현된 항체일 수 있다. 상기 Treg은 비-배타적으로 CD4+ Tregs, CD4+CD45RA+ Tregs, CD4+CD25+CD45RA+ Tregs, FoxP3+ Tregs, CD4+CD25+FoxP3+CD152+ Tregs, CD4+CD25+CD152+ Tregs, CD8+ Tregs, CD8+CD28- Tregs, CD4+CD25int/high, CD127low, CTLA4+, GITR+, FoxP3+, CD127low, CD4+CD25- -induced Tregs, 또는 Type I T regs와 연관된다.

CD4 및 CD25의 구성적 발현에 의해 원래 인식된 “천연” 조절 T 세포는 전사인자 FoxP3 및 표면 CD152의 발현에 의해 추가로 정의될 수 있다. 이들의 생성 및 이들의 억제활성 중 일부는 TGF-beta에 의존하며, CD80/86의 CD152 매개된 결찰에 의해 적절한 DC에서 IDO를 유도할 수 있음이 입증되었다. 공동 자극이 없는 상태에서, 항원 자극에 의해 생성된 Anergic CD4+ T 세포는 GRAIL, c-cbl 및 itch와 같은 E3 유비퀴틴 라이게이즈의 발현에 의해 유지될 수 있는 항원 자극에 대한 역치의 본질적인 상승을 특징으로 하는 것으로 보인다. Anergic 세포는 항원 제시 부위에서 경쟁하고 IL-2와 같은 자극성 사이토카인을 흡수함으로써 조절 T 세포로서 작용할 수 있다. Tr1 세포는 분화 및 이들의 조절 특서의 일부에 대해 IL-10에 의존하는 CD4 헬퍼 T 세포의 유도된 하위집합을 나타낸다. 이들은 FoxP3를 발현하지 않지만 Th2 세포 및 GATA 억제자(repressor of GATA; ROG)와 관련된 마커를 발현할 수 있다. 천연 Tregs와 마찬가지로, 이들은 높은 수준의 표면 CD152를 발현하고, 적절한 DC에서 IDO 및 트립토판 카타볼리즘(tryptophan catabolism)을 유도할 수 있다. CD8+CD28- 억제 T (Ts)세포는 인간에서 처음 특성화 되었으나, 최근에는 설치류에서도 입증되었다. Tr1 세포와 마찬가지로 이들은 IL-10의 존재하에 유도되며, IL-10은 수지상 세포 공동 자극의 하향조절 및 T 세포의 추가 코호트를 허용하기 위해 중요한 역할을 하는 것으로 보이는 ILT-3 및 ILT-4(인간 DC에서)의 상향조절에 관여할 수 있다.

조절 T 세포 (Tregs)는 면역 항상성을 유지하는 데 중요한 역할을 한다 1. Tregs는 다른 T세포의 기능을 억제하여 면역 반응을 억제한다. Tregs의 수와 기능의 변화는 다발성 경화증, 활동성 류마티스 관절염 및 제1형 당뇨병을 포함한 여러가지 자가면역 질환과 관련이 있다. 폐암, 췌장암 및 유방암을 포함한 많은 악성 질환에서 높은 수준의 Tregs가 발견되었다. Tregs는 또한 항 종양 면역 반응을 방해하여 사망률을 증가시킬 수도 있습니다.

현재까지 두 가지 주요 Tregs 분류가 확인되었다: CD4 및 CD8 Tregs. CD4 Tregs는 CD25와 FoxP3를 구성으로 발현하는 "천연(natural)" Tregs(nTregs)와 소위 적응형 또는 유도성 Tregs(iTregs)의 두 가지 유형으로 구성된다.

천연 Tregs(nTregs)는 전사 인자(및 계통 마커) FoxP3와 함께 높은 수준의 CD25를 발현하는 CD4+ 세포로서 흉선에서 유래한다. nTregs는 전체 CD4+ T 세포 집단의 약 5-10%를 차지하며 T 림프구 발달의 단일-양성 단계에서 처음 관찰할 수 있다. 이들은 자기 항원에 대한 상대적으로 높은 친화력을 가진 양성 선택된 흉선세포이다((Feh

rvari Z, Sakaguchi S. Development and function of CD25+CD4+ regulatory T cells. Curr Opin Immunol. 2004;16:203-208.).

Treg 세포로 발전하기 위한 신호는 T 세포 수용체 및 MHC II와 흉선 기질(tymic stroma)에서 발현되는 자가 펩타이드의 상호작용에서 오는 것으로 생각된다. nTreg는 본질적으로 사이토카인 독립적이다.

적응성 또는 유도성 Treg은 단일-양성 CD4 세포로서 흉선에서 유래한다. 동족 항원과 T TGF-β, IL-10, 및 IL-4와 같은 특수한 면역조절 사이토카인의 존재 아래 적절한 항원 자극 후 CD25 및 FoxP3 발현 Treg(iTreg)으로 분화된다 (Chatenoud L, Bach JF. Adaptive human regulatory T cells: myth or reality? J Clin Invest. 2006;116:2325-2327.).

FoxP3- Treg의 소수 집단에 대한 보고가 있었으나, FoxP3는 현재 Tregs의 마커로서 가장 많이 받아들여지는 마커이다. Tregs의 마커로서 전사 인자 FoxP3의 발견으로 과학자들은 Treg 집단을 더욱 잘 정의하여, CD127을 포함하는 추가 Treg 마커를 발견할 수 있었다.

글루코코르티코이드, 특히 약 3mg/kg 내지 약 26 mg/kg 단일 급성 용량 또는 72시간 내에 주어진 약 3mg/kg 내지 약 26 mg/kg의 총용량으로 투여된 덱사메타손은, 단독 또는 감소된 강도의 세포독성 화학요법 또는 방사선과 병행하여 잔류 HIV 질환의 치료 및 버킷 림프종과 같은 배 중심 림프종 치료에 유용할 수 있다.

2차 림프 조직 내의 B 세포 여포에 존재하는 여포성 헬퍼 CD4 T 세포(TFH)는 AIDS 바이러스에 의해 쉽게 감염되며, 바이러스 복제의 상대적인 조절에도 불구하고 지속적인 바이러스의 주요 공급원이다. 이러한 지속성은 적어도 부분적으로 B 세포 여포(B-cell follicles)에서 효과성 항 바이러스 CD8 T 세포를 상대적으로 배제하기 때문이다. 효과성 약물 치료를 받는 개인 또는 자발적으로 바이러스 혈증(viremia)을 제어하는 사람들의 AIDS 바이러스 지속성은 결정적인 치료의 장애물로 남아있다. 감염된 여포성 헬퍼 CD4 T 세포, TFH는 B 세포 여포 내부에 존재하며, 이러한 잔류 바이러스의 주요 원인이다. 효과성 CD8 T 세포 반응은 약물 요법과 병용하여 또는 드물게는 자발적으로 바이러스 복제를 제어할 수 있으나, 대부분의 항 바이러스 CD8 T 세포는 B 세포 여포에 들어가지 않으며, TFH 집단에서 바이러스 복제를 강력하게 제어하지 못하는 세포이다. 따라서, 이러한 부위는 AIDS 바이러스 복제의 보호 영역이자 저장소이다. 림프고갈과 비장의 배 중심 및 변연부의 감소는 잔류 HIV 감염 세포를 혈류로 밀어넣음으로써 기존의 치료법에 의해 사멸시킬 수 있다. 잠복적으로 감염된 휴지기 CD4 T 세포는 HIV-1에 감염된 개인의 말초 혈액, 위장(GI) 관(gastrointestinal (GI) tract), 및 림프절에서 발견되며, 림프 조직을 포함하는 다른 기관에도 존재할 가능성이 있다.

고활성 항 레트로바이러스 요법(Highly active antiretroviral therapy; HAART)은 감염된 사람에서 혈장 HIV-1의 로드(load)를 장기적으로 억제할 수 있지만, 저수준의 바이러스는 치료 중단 후에도 지속되며 리바운드 된다, HAART 동안 이 바이러스는 CD4 T 세포와 같은 잠복성 감염 세포 및 잔류 바이러스 복제를 지원할 수 있는 다른 세포 유형에 상주한다. 치료적 박멸은 모든 저장소에서의 바이러스를 제거하는 것을 요구한다.

버킷 림프종(BL)은 항상 c-Myc 활성화 염색체 전위와 관련된 2차 림프계 내에서 발생하고 성장하는 배 중심 림프종이다. 가장 빠르게 성장하는 암 중 하나이며, 14 내지 18시간마다 크기가 2배가 될 수 있다. BL은 비장 및 이차 림프관의 배 중심에서 발견되는 공격적인 B 세포 림프종이다. BL은 1958년 적도 아프리카에서 일하면서 해당 질병을 처음으로 보고했던 외과의, Denis parsons Burkitt박사의 이름을 따서 명명되었다(1958). BL은 사하라 사막 이남 아프리카에 사는 어린이에게서 가장 흔하게 발견되며 동 아프리카에서 가장 높은 발병률과 사망률을 보인다 (Orem, J., et al.,). 남자 아이가 여자 아이보다 BL에 더 취약하다. 아프리카 이외의 지역에서는 면역 체계가 손상된 사람들에게서 BL이 발생할 가능성이 가장 높다.

B-세포 악성 종양 중에서 CLL은 입루티닙(ibrutinib)에 가장 잘 반응하며, 따라서 불행히도 입루티닙은 버킷 림프종 및 기타 배 중심 리프종을 앓는 사람들에게 큰 도움이 되지 않는다. 그러나, 버킷 림프종과 같은 배 중심 림프종에서 2차 림프 배 중심을 제거하는 약제를 사용하여 화학요법에 더욱 민감하고 증식이 감소하는 순환계로 B 세포 암의 재분배를 달성할 수 있다. 따라서, 일부 실시예에서, 본 발명은 화학 요법에 대한 림프조으이 감수성을 증가시키고/증가시키거나 글루코코르티코이드, 예를 들어 덱사메타손과 함께 감소된 강도의 세포독성 화학 요법을 수행하는 병용 요법을 제공한다. 다양한 적합한 화학 요법이 본 명세서에 개시되어있다.

만성 림프구성 백혈병의 치료를 위한 Bruton의 티로신 키나아제 억제제 입루티닙의 능력에 대한 임상 관찰 결과, 림프관에서 혈류로 CLL 세포를 재분배하는 것이 CLL에서 이의 이점을 증명한다. 순환하는 CLL 세포는 증식하지 않으며, 클론의 증식은 림프 미세환경으로 제한된다. 따라서, 혈류로의 재분배는 암의 증식을 감소시킨다. 유사하게, 골수에서 혈류로 ALL의 재분배는 표준 화학 요법에 대한 민감도를 향상시키는 것으로 보고되었다 (Chang BY, Blood 2013 122 : 2412-24; ).

글루코코르티코이드는 투여량, 투여기간 및 조사된 종에 따라 림프구에 대해 여러가지 모순적인 작용을 하는 것으로 보고되었다. 글루코코르티코이드는 일반적으로, 0.1 ~ 0.2 mg/kg 덱사메타손 등가 용량인 0.5 내지 1 mg/kg의 프레드니손과 함께 1943년부터 림프구 증가 유도제, 순환 림프구 수 증가용 제제로서 조사되었다. 대조적으로 불응성 CLL(refractory CLL)에 사용되는 고용량 메틸프레드니손은 메틸프레드니손 등가 0.5~1.0 mg/kg에서 프레드니손과 같은 림프구증가를 유도하지 않는 것으로 나타났다. 림프독성 고용량 스테로이드는 일반적으로 매일 약 100mg의 프레드니손 등가물로 간주되며, 이는 덱사메타손 등가 용량인 16mg(약 0.23~0.32 mg/kg)이고, 이는 우리가 입증한 효과적인 사전컨디셔닝 용량이 아니다. 덱사메타손은 약 3mg/kg 이상의 HED가 투여될 때까지 생쥐의 배 중심을 감소시키지 않았으며, 프레드니손은 13주 동안 매일 2.5 mg/kg po 이상으로 마우스에 투여할 때까지 비장 무게 또는 배 중심에 큰 영향을 미치지 않았다 (Yan et al., 2015). 하루 30mg(~0.48 - 0.72 mg/kg)의 용량으로 허용되지 않는 미네랄코르티코이드활성을 갖는 인간 용량은 사람 루푸스 환자에서 고용량으로 간주된다.

COPADM과 같은 표준 화학 요법을 사용한 버킷 림프종(BL) 치료의 경우, 프레드니손은 일반적으로 60 mg/m²으로 다양한 사이클에 포함되며, 이는 효과적인 사전컨디셔닝 용량이 아닌 1.62 mg/kg 프레드니손 및 등가 0.3 mg/kg 덱사메타손 용량으로 변환된다. 덱사메타손은 또한 B 세포 암 치료를 위해 일반적으로 경구 4~5일간 매일 40mg의 요법 또는 5일간의 6mg/m²으로 임상적으로 사용된다. ALL과 같은 일부 적응증에서 덱사메타손은 몇 주동안 매일 투여되며, 특히 청소년기 소년에서 골괴사와 연관될 수 있다. 골괴사의 위험은 덱사메타손의 격주 투여를 통해 실질적으로 제거될 수 있으며, ALL에 대한 치료의 일부인 아스파라기나아제(asparaginase) 요법으로 인해 특히 ALL에 존재할 수 있다 (Chang BY, Blood 2013 122 : 2412-24).

앱스타인-바 바이러스(EBV) 감염은 거의 모든 아프리카 BL 환자에게서 발견되며, 만성 말라리아는 EBV에 대한 내성을 감소시켜 이를 유지시키는 것으로 여겨진다. 이 질병은 특징적으로 턱 또는 기타 안면 뼈, 원위회장(distal ileum), 맹장, 난소, 신장 또는 유방을 포함한다. 또한 BL은 HIV 환자와 같이 면역력이 약한 사람을 공격한다.

BL은 세 가지 주요 임상 변종으로 분류된다: 풍토성, 산발성 및 면역 결핍 관련 변종, 풍토병 변종 ("아프리카 변종"이라고도 함)은 세계의 말라리아 풍토병 지역에 사는 어린이에게 가장 흔하게 발생한다.

본 발명의 일 효과는 배 중심 및/또는 변연부를 절제하여 BL 및 다른 배 중심 암세포 또는 변연부 암세포를 배 중심 또는 변연부로부터 화학요법 또는 다른 제제에 의해 쉽게 사멸할 수 있도록 순환계로 유도하는 것이다. 이것은 BL 치료 결과를 극적으로, 안전하고 비용적으로 효율적이도록 발전시킬 수 있다.

천식은 폐 조직의 CD8+ type-1 T 림프구 및 대식세포의 수를 증가시키고 기도 내강의 호중구 증가를 특징으로 하는 만성 염증이다. 두 가지 염증 상태에서 현저히 다른 림프구는 천식과 COPD의 병증에 중요한 역할을 한다. 현재 천식에서 T 세포의 중요한 역할, 특히, 아토피성 알레르기성 천식 및 비아토피성 직업성 천식에서 T 헬퍼 type 2(Th2)세포의 관여를 뒷받침하는 압도적 증거가 있다. 또한, T 세포독성 type2 CD8++ T 세포로부터 약간의 기여가 있을 수 있다. 몇몇 Th2 사이토카인, 특히 동물 모델에서 IgE 및 호산구 증가증가 무관하게 기도 과민반응을 유도하는 인터루킨-13은 기도 염증을 조절하는 잠재력이 있다. 천식 및 만성폐쇄성 폐 질환(COPD)은 일반적인 기능적 이상, 즉 공기흐름을 제한하는 폐의 두가지 상이한 염증성 질환이다 (Baraldo et al., 2007).

천식에서 공기흐름의 제한은 자발적으로 또는 치료를 통해 대체적으로 가역적이며 대부분의 경우 진행되지 않는다. 반면 COPD의 공기흐름의 제한은 일반적으로 점진적이며 가역성이 떨어진다. 천식에서 만성 염증은 다양한 자극에 대한 기도반응을 증가시켜 특히 밤과 이른 아침 반복되는 쌕쌕거림, 숨가쁨, 흉부 압박감 및 기침을 반복적으로 유발한다. 많은 세포가 천식의 염증 반응에 관여하며, 이 중에서 CD4+ type 2 림프구, 비만세포 및 호산구가 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다. COPD에서 가역성이 좋지 않은 공기흐름의 제한은 유해한 입자 또는 가스에 대한 폐의 비정상적인 염증반응과 관련이 있다. 이러한 만성 염증은 폐 조직의 CD8+ type-1 T-림프구와 대식세포의 증가와 기도 내강의 호중구의 증가를 특징으로 한다. 두 가지 염증 상태에서 현저하게 다른 림프구는 천식과 COPD의 병인에 중요한 역할을 한다 (Baraldo et al., 2007).

정의

본 발명의 실시예를 설명하기 위해 사용된 정의:

림프고갈(lymphodepletion)의 생물학적 메커니즘은 세포자연사멸(apoptosis) 또는 괴사(necroptosis) 또는 파이롭토시스(pyroptosis) 또는 자가포식(autophagy) 또는 종양증(oncosis)을 통해 예정된 세포 사멸의 유도를 의미한다. 다양한 자극은 세포사멸에 필요한 카스파제가 억제제될 때 발생하는 괴사(necroptosis)라 불리는 비 자연사멸 형태의 세포사멸에 관여할 수 있다. 파이롭토시스(pyroptosis)는 세포자연사멸(apoptosis)과 많은 측면에서 상이한 카스파제 의존적 형태의 예정 세포 사멸이다. 세포자연사멸과는 달리 caspase-1 또는 caspase-11(인간에서는 caspase-5)의 활성화에 의존한다. 자가포식은 리소좀 의존적과정이다.

세포자연사멸(Apoptosis): 프로그램 된 일련의 사건이 주변 지역으로 유해 물질을 방출하지 않고 세포를 제거하는 세포 사멸의 한 형태이다. 세포자연사멸은 오래된 세포, 불필요한 세포 및 건강에 해로운 세포를 제거하여 신체의 건강을 개발하고 유지하는 데 중요한 역할을 한다.

본 명세서에서 사용된 용어 "및/또는(and/or)" 는 두 개의 특정한 특징 또는 구성요소 각각의 서로 간의 존재 유무에 대한 구체적인 개시이다. 따라서, 본 명세서에서 “A 및/또는 B”와 같은 문맥에서 사용된 용어 “및/또는”은 “A및 B”, "A 또는 B," "A" (단독), 및 "B" (단독)를 포함한다. 마찬가지로, 용어 “A, B 및/또는 C”와 같은 문구에서 사용된 용어 “및/또는”은 다음 측면 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).

양, 시간적 기간 등과 같은 측정 가능한 값을 지칭 할 때, "약"이라는 용어는 +/- 20 % 또는 +/- 10 %의 변동을 의미한다.

“투여(Administering)”는 통상의 기술자에게 공지된 다양한 방법 및 전달 시스템 중 임의의 것을 사용하여 대상에게 제제를 물리적으로 도입하는 것을 의미한다. 본 명세서에 개시된 제형에 대한 예시적인 투여경로는 정맥 내, 근육 내, 피하, 복강 내, 척추 또는 다른 비경구 투여경로, 예를 들어 주사 또는 주입을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 “비경구 투여”라는 문구는 일반적으로 주사에 의한 장 및 국소 투여 외의 투여방식을 의미하며, 정맥 내, 근육 내, 동맥 내, 척수강 내, 림프 내, 병변 내, 피막 내, 안와 내, 심장 내, 피 내(intradermal), 복강 내(intraperitoneal), 기관경유(transtracheal), 피하(subcutaneous), 피하 내(subcuticular), 관절내(intraarticular), 피막 하(subcapsular), 지주막하(subarachnoid), 척추 내(intraspinal), 경막 외(epidural) 및 흉굴내 주사 및 주입뿐만아니라 생체 내 전기천공(in vivo electroporation)을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 실시예에서, 제제는 비-비경구경로를 통해, 예를 들어 경구로 투여된다. 다른 비-비경구 경로는 국소, 표피, 또는 점막투여 경로, 예를 들어 비강 내, 질내, 직장, 설하 또는 국소(topically) 점막투여를 포함한다.

약리학적 용량(pharmacologic dose)은 신체의 정상 수준을 한참 초과하는 용량이다.

본 명세서에서 사용된 “항종양 효과”는 종양 부피 감소, 종양 세포 수 감소, 종양 세포 증식 감소, 전이 수 감소, 전체 또는 무진행 생존의 증가, 기대 수며ㅑㅇ의 증가 또는 종양과 관련된 다양한 생리학적 증상의 개선으로 나타날 수 있는 생물학적 효과를 지칭한다. 항종양 효과는 예를 들어, 백신과 같은 종양 발생의 예방을 의미할 수도 있다.

치료제(therapeutic agent)는 상기 치료제가 없는 세포 면역 요법에 비해 세포 면역 요법의 효능을 향상시키는 작용제이다.

용어,”자가(autologous)”는 개인이 인간 또는 다른 동물이던 간에 관계없이 나중에 재도입될 동일한 개인으로부터 유래된 임의의 물질을 의미한다.

용어 "동종이형(allogeneic)"은 개인이 인간 또는 다른 동물이던 간에 관계없이, 동일한 종의 다른 개체에게 도입되는 한 개체로부터 파생된 모든 물질을 의미한다.

용어 덱사메타손(Dex로도 언급됨)은 비배타적으로, 덱사메타손을 유효성분으로 함유하는액체 용액(liquid solution), 액체 현탁액(liquid suspension), 경구 용액(oral solution), 정제(tablet form), 액체에 용해된 정제, 주사가능 제형(injectable form), 겔 제형(gel formulation), 패치 제형(patch formulation) 또는 유효성분 덱사메타손을 함유하는 임의의 제형에 관한 것이다.

용어 글루코코르티코이드-수용체 조절제는 비배타적으로 글루코코르티코이드 수용체 작용제 또는 글루코코르티코이드 수용체 조절제에 관한 것으로, 다음을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 화합물 A [CpdA; (2-((4-acetophenyl)-2-chloro-N-methyl)ethylammonium-chloride)] 및 N-(4-methyl-1-oxo-1H-2,3-benzoxazine-6-yl)-4-(2,3-dihydrobenzofuran-7-yl)-2-hydroxy-2-(trifluoromethyl)-4-methylpentanamide (ZK216348), AL-438, Mapracorat , LGD-5552 , RU-24858, Fosdagrocorat, PF-802, Compound 10, MK5932, C108297, LGD5552, 및 ORG 214007-0.

면역 독소는 표적 세포에 특이 적으로 결합하는 항체 또는 성장 인자와 함께 독소를 포함하는 단백질이다. 면역 독소는 항체를 천연 결합 도메인이없는 전체 단백질 독소에 화학적으로 접합하여 생성된다. 성장 인자 및 사이토카인과 같이 단클론 항체 (MoAbs)보다 작은 면역학적 단백질 또한 단백질 독소에 화학적으로 결합되거나 유전적으로 융합될 수 있다. 면역 독소 구조에 사용되는 독소는 박테리아, 곰팡이 및 식물에서 파생되며 대부분의 기능은 단백질 합성을 억제한다. 면역 독소에 일반적으로 사용되는 박테리아 독소에는 디프테리아 독소 (Diphtheria toxin; DT)와 슈도모나스 외독소 유래 독소 (Pseudomonas exotoxinPE)가 있습니다. 면역 독소에 사용되는 식물 독소에는 RTA(A chain of ricin), 리보솜 비활성화 단백질 (RIPs) 겔로닌(gelonin), pokeweed 항바이러스 단백질 및 도데칸드론(dodecandron)이 있다. 이들은 효소이기 때문에 하나의 독소 분자가 많은 기질 분자에 작용하여 세포에 치명적인 영향을 미칠 수 있다. 디프테리아 독소 (DT) 및 슈도모나스 외독소 (PE)와 같은 독소는 신장 인자 2 (EF-2)에 대한 영향으로 단백질 합성을 방지한다.

본 명세서에서 사용되는 용어, 전신 주사(systemic injection)는 비배타적으로 수 초 또는 수 시간 내에 빠르게 세포성 면역 요법의 순환 수준을 유도하는 투여 경로와 연관되며, 비배타적으로, 정맥 내, 복강 내, 피하, 비강 점막을 통해 (via nasal submucosa), 혀(lingual), 기관지경을 통해(via bronchoscopy), 정맥 내(intravenous), 동맥 내(intra-arterial), 근육 내(intra-muscular), 안구 내(intro-ocular), 선조체 내(intra-striatal), 피하(subcutaneous), 피내(intradermal), 더말 패치에 의해(by dermal patch), 피부 패치에 의해(by skin patch), 패치에 의해(by patch), 뇌척수액으로(into the cerebrospinal fluid), 문맥으로(into the portal vein), 뇌로(into the brain), 림프계로(into the lymphatic system), 흉막 내(intra-pleural), 후-안와(retro-orbital), 피부 내(intra-dermal), 비장으로(into the spleen), 림프 내(intra-lymphatic) 등에 관한 것이다.

본 명세서에서 사용된 용어 '주사 부위(site of injection)' 는 비배타적으로, 종양 내(intra-tumor), 또는 신장 또는 간, 또는 췌장 또는 심장 또는 폐 또는 뇌 또는 비장 또는 눈과 같은 기관 내(intra-organ), 근육 내(intra-muscular), 안구 내(intro-ocular), 선조체 내(intra-striatal), 피 내(intradermal), 더말 패치에 의해(by dermal patch), 피부 패치에 의해(by skin patch), 패치에 의해(by patch), 뇌척수액으로(into the cerebrospinal fluid, 뇌로(into the brain), 등에 관한 것이다.

본 명세서에서 사용된 용어 림프고갈(lymphodepletion)은 비배타적으로 골수, 흉선, 림프절, 폐 또는 비장 또는 기타 기관과 같은 다른 기관으로의 림프구 재분배의 유발 없이, 말초 혈액에서 림프구 수의 감소에 관한 것이다.

본 명에서에서 사용된 용어 림프절제(lymphoablation)는 비배타적으로 림프구를 골수, 흉선, 림프절, 폐 또는 비장 또는 기타 기관과 같은 다른 기관으로의 림프구 재분배 없이, 말초 혈액의 림프구 수를 마이크로리터당 200개 미만, 바람직하게는 마이크로리터당 100개 미만으로 감소시키는 것에 관한 것이다.

본 명세서에서 사용된 용어 세포독성 림프고갈은 ADCC 메커니즘, 세포 매개된 세포독성, 또는 림프구의 직접적인 용혈 또는 세포독성 제거, 화학요법 또는 방사선에 의한 말초 혈액에서의 림프구 수의 감소에 관한 것이다.`

항체 의존성 세포 매개 세포 독성(ADCC)은 항체 의존 세포성 세포독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity)이라고도 하며, 세포 매개된 면역 방어 메커니즘으로, 면역계의 이펙터 세포가 막 표면 항원이 특정항체에 의해 결합된 표적 세포를 적극적으로 용해시킨다.

본 명세서에서 사용된 용어 '세포 면역요법(cellular immunotherapy)', '입양 세포 면역요법(adoptive cellular immunotherapy)', '입양 세포 요법(adoptive cellular therapy; ACT)' 또는 세포 면역 요법(cell immunotherapy) 또는 세포 요법(cell therapy)은 비배타적으로 면역계가 질병과 싸우기 위해 사용되는 세포 또는 암, 자가면역 질환 및 특정 바이러스 감염과 같은 질병과 직접 싸우는 면역 계통의 세포를 포함하는 치료에 관한 것이다. 세포 면역요법은 자가 또는 동종이형 원천으로부터 나올 수 있다. 바람직한 실시예에서 사용되는 입양 면역요법은 입양 T 세포 면여요법, 즉 'T 세포 요법'일 수 있다.

본 명세서에 사용된 용어 사전컨디셔닝(preconditioning)은 ACT 전에 세포독성 림프구고 제제 또는 비 독성 림프고갈 제제로 환자를 준비하는 것에 관한 것이다.

본 명세서에서 사용된 용어, 면역요법(생물학적 요법이라고도 함)은 비배타적으로 암, 자가면역 질환 또는 감염과 싸우기 위해 신체의 자연적 방어를 강화하도록 설계된 암, 자가 면역질환 또는 감염 치료의 유형에 관한 것이다. 면역 체계 기능을 개선하거나 회복하기 위해 신체 또는 실험실에서 만든 물질을 사용한다. 용어 “면역요법(immunotheraphy)”은 면역 반응을 유도, 강화, 억제, 또는 달리 수정하는 것을 포함하는 방법으로 질병을 앓을 위험이 있거나, 질병을 앓거나, 고통받거나 재발할 위험이 있는 대상의 치료를 의미한다. 면역요법의 예는 T 세포요법을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. T 세포 요법에는 입양 T 세포 요법, 종양 침윤 림푸구(TIL) 면역 요법, 자가 세포요법, 조작된 자가세포 요법(eACT) 및 동종 T 세포 이식이 포함될 수 있다. 그러나 통상의 기술자는 본 발명에 개시된 컨디셔닝 방법이 임의의 이식된 T 세포 요법의 효과를 향상시킬 수 있음을 이해할 수 있다. T 세포 요법의 예는 미국 특허 공개 제2014/0154228호 제2002/0006409호, 미국 등록 특허 제5,728,388호, 및 국제 공개문헌 제WO 2008/081035호에 개시되어 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어, '면역 조절'은 암, 자가면역 질환 또는 감염에서 종양, 자가면역 유발 세포 또는 바이러스 조절, 안정화, 및 질병의 잠재적 박멸을 달성하기 위해 환자의 면역 체계를 활용하는 것을 목표로 하는 다양한 치료에 관한 것이다.

본 명세서에서 사용된 용어 면역조절제(immunomodulator)는 비배타적으로 (항체 형성의 자극 또는 백혈구 활동의 억제에 의해)면역 반응 또는 면역계의 기능을 변경하는 화학 작용제(예: 덱사메타손) 또는 생물학적 제제(예: HUMIRA® 및 리툭시맙(rituximab))에 관한 것이다. 면역 억제제인 전통적 면역조절 약물은 비배타적으로 글루코코르티코이드, 칼시뉴린 억제제, 항대사물질 및 알킬화제와 관련이 있다. 항대사물질은 비배타적으로 퓨린 유사체 (purine analogues) (예, 아자티오프린(azathioprine) 및 마이코페놀레이트 모페틸(mycophenolate mofetil)), 및 엽산 길항제(folate antagonists) (예, 메토트렉세이트 및 댑손)와 관련이 있다.

면역 억제제(Immunesuppressants 또는 immunosuppressants)는 면역 반응을 억제하거나 예방할 수 있는 화학적 또는 생물학적 제제일 수 있다. 예를 들어, CD26 길항제 및 덱사메타손이 면역 억제제이다. 본 발명에서 사용된 NTLA는 NTLA 면역억제제일 수 있다.

본 명세서에서 상호호환적으로 사용된 용어 "컨디셔닝(conditioning)" 및 "사전컨디셔닝(pre-conditioning)"은 T 세포 요법이 필요한 환자 또는 동물을 적절한 상태로 준비하는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 컨디셔닝은 T 세포 요법 전의 배 중심 및 변연부의 수 감소, 내인성 림프구 수 감소, 사이토카인 싱크(cytokine sink) 제거, 하나 이상의 항상성 사이토카인 또는 전 염증 인자의 혈청 수준 증가, 컨디셔닝 후 투여된 T 세포의 이펙터 기능 향상, 항원 제시세포 활성화 및/또는 가용성 향상 또는 이들의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용된 용어 '입양 면역 요법(adoptive immunotherapy)' 또는 '세포 입양 면역요법(cellular adoptive immunotherapy)'은 비배타적으로 환자(자가(autologous) 또는 자가발생(autogenic)) 또는 기증자(동종이형(allogenic))수집되고 실험실에서 성장된 관련되거나 관련이 없는 면역세포에 관한 것이다. 이것은 암세포를 죽이고 자가면역을 일으키는 세포를 죽이거나 감염과 싸울 수 있는 면역 세포의 수를 증가시킨다. 이 면역 세포는 면역 시스템이 질병과 싸우도록 돕기 위해 환자에게 다시 제공된다. 이를 세포 입양 면역요법이라고도 한다. 상기 면역 세포는 T 세포 및/또는 대식세포, 단핵구, 수지상 세포, 호중구, 과립구, 식세포, 비만세포, 호염기구, 흉선세포 또는 선천성 림프세포 또는 이의 임의의 조합과 비배타적으로 관련이 있는 면역 시스템의 다른 세포일 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 작용제(agonist)는 비배타적으로 수용체의 효과(들)를 매개하는데 필수적인 특정 수용체 또는 하위 신호 전달 경로를 활성화하는 임의의 실체에 관한 것이다. 상기 작용제는 항체, 항체 단편, 가용성 리간드, 소분자, 고리형 펩타이드, 가교제와 비배타적으로 연관될수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용된 용어 길항제(antagonist)는 수용체의 카운터 구조(들)의 결합을 방해하거나 수용체의 효과(들)을 매개하는데 필수적인 특정 수용체 또는 하위 신호 전달 경로의 활성화를 방해하는 임의의 실체와 관련이 있습니다. 상기 길항제는 항체, 항체 단편, 가용성 리간드, 소분자, 고리형 펩타이드, 가교제와 비배타적으로 연관될수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용된 용어 억제제(inhibitor)는 비배타적으로 특정 수용체의 표적 효과를 감소시키는 임의의 실체에 관한 것이다. 상기 억제제는 소분자, 안티센스 제제, siRNA 및 micromRNA를 포함하는 핵산일 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어 “림프구(lymphocyte)”는 자연 살해(NK) 세포, T 세포 또는 B 세포를 포함한다. NK세포는 고유한 면역 시스템의 구성요소인 세포독성 림프구의 일종이다. NK 세포는 종양 및 바이러스 감염된 세포를 거부한다. 이들은 자연사멸(apoptosis) 또는 예정 세포사멸(programmed cell death)의 프로세스를 통해 작용한다. 이들은 세포를 죽이기 위해서 활성화가 필요하지 않기 ??문에 “자연 살해자(natural killers)”로 불렸다. T 세포는 세포 매개 면역(항체의 개입이 없는)에서 중요한 역할을 한다. T 세포 수용체(TCR)는 다른 림프구 유형과 구분된다. 면역 시스템의 특수기관인 흉선은 주로 T 세포의 성숙을 담당한다. T-세포에는 다음의 6가지 유형이 있다: 헬퍼 T 세포(Helper T-cells (예, CD4+ cells)), 세포독성 T 세포(TC, cytotoxic T lymphocyte, CTL, T-killer cell, cytolytic T cell, CDS+ T-cells 또는 killer T cell로도 알려져 있음), 기억 T-세포((i) naive 세포와 유사한 줄기 기억 T scM 세포는 CD45RO-, CCR 7 +, CD45RA+, CD62L+(L-selectin), CD27+, CD28+ 및 IL-7Ra+이나, 이들은 많은 양의 CD95, IL-2R~, CXCR3, 및 LFA-1를 발현하고 기억 세포 특유의 수많은 기능적 특징을 나타냄); (ii) 중앙 기억 TcM 세포(central memory TcM cells)는 L-selectin 및 CCR7을 발현함, 이들은 IL-2를 분비하나, IFNy 또는 IL-4를 분비하지 않음, 및 (iii) 효과 기억 T EM 세포(effector memory T EM cells) L-selectin 또는 CCR 7를 발현하지 않으나 IFNy 및 IL-4과 같은 이펙터 사이토카인을 생산함)), 조절 T 세포(Treg, 억제자 T 세포, 또는 CD4+CD25+ 조절 T 세포), 자연 살해 T 세포(Natural Killer T-cells; NKT) 및 감마델타 T-세포(Gamma Delta T-cells). 반면, B 세포는 체액성 면역(항체와 연관)에서 주요한 역할을 한다. 이들은 항체와 항원을 만들며, 항원 제시 세포(APCs)로의 역할을 수행하고, 항원 상호 작용에 의해 활성화된 후, 기억 B 세포로 변한다. 포유류에서, 미성숙 B 세포는 이름이 유래한 골수에서 형성된다.

용어 “암(cancer)”은 비정상적인 세포의 제어되지 않은 성장을 특징으로 하는 질병을 의미한다. 암세포는 국소적으로 또는 혈류 및 림프계를 통해 신체의 다른 부분으로 퍼질 수 있다. 다양한 암의 예가 본 명세서에 기재되어 있으며, 유방암(breast cancer), 전립선암(prostate cancer), 난소암(ovarian cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 피부암(skin cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 결장암(colorectal cancer), 신장암(renal cancer), 간암(liver cancer), 뇌암(brain cancer), 림프종(lymphoma), 백혈병(leukemia), 폐암(lung cancer) 등을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 용어 “종양” 및 “암”은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되며, 예를 들어 두 용어 모두 고체 및 액체 예를 들어, 확산 또는 순환 종양을 포함한다. 본 명세서에 사용된 용어 “암” 또는 “종양”은 악성 암 및 종양 뿐아니라 전암(premalignant)을 포함한다.

특정 암은 화학 요법 또는 방사선 요법에 반응할 수 있고 또는 암은 불응성일 수 있다. 불응성 암은 외과적 개입으로 수정할 수 없는 암을 말하며, 암은 초기에 화학요법 또는 방사선 요법에 반응하지 않거나 암이 시간이 지남에 따라 반응하지 않게 된다.

본 명세서에서 사용된 “항종양 효과(anti-tumor effect)"는 종양 부피 감소, 종양 세포 수 감소, 종양 세포 증식 감소, 전이 수 감소, 전체 또는 무진행 생존의 증가, 기대 수명의 증가 또는 종양과 관련된 다양한 생리학적 증상의 개선을 나타내는 생물학적 효과를 의미한다. 항종양 효과는 예를 들어, 백신과 같은 종양 발생의 예방을 의미할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 것과 같이, PFS로 약칭되는 용어 “무진행 생존(progression-free survival)"은 악성 림프종에 대해 개정된 IWG 반응 기준 또는 임의의 원인으로 인한 사망당 치료 날짜부터 질병 진행일까지의 시간을 의미한다.

“질병 진행(Disease progression)”은 방사선 사진에서 악성 병변의 측정 또는 부작용으로 보고되지 않는 다른 방법으로 평가된다. 징후 및 증상이 없는 상태에서 질병 진행으로 인한 사망은 원발성 종양 유형(예, DLBCL)으로 보고하여야한다.

본 명세서에서 사용된 DOR로 약칭되는 “반응기간(duration of response)”은 악성 림프종에 대한 개정된 IWG 반응 기준 또는 사망 당 대상의 첫 객관적 반응의 확인부터 질병 진행이 확인된 날짜까지의 기간을 의미한다.

OS로 약칭되는 “전체 생존(overall survival)”은 치료일부터 사망일까지의 시간으로 정의된다.

용어 “감소(reducing)” 및 “감소(decrease)”는 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용되며, 원본보다 적게 변화하는 것을 의미한다. “reducing” 및 “decrease”는 상대적인 용어로 사전 측정 및 사후 측정을 비교하여야 한다. “reducing” 및 “decrease”는 완전한 고갈을 포함한다.

“치료(treatment)” 및 “치료하는 단계(treating)”는 발병, 진행, 발달, 심각성 또는 증상의 재발, 합병증 또는 증상 또는 질병과 관련된 생화학적 표시를 반전, 완화, 개선, 억제, 감속 또는 예방을 목적으로 대상에게 모든 유형의 개입 또는 수행되는 방법, 또는 활성 성분의 투여를 의미한다. 일 실시예에서, “치료(treatment)” 및 “치료하는 단계(treating)”는 부분적인 관해를 포함한다. 다른 실시예에서, “치료(treatment)” 및 “치료하는 단계(treating)”는 완전한 관해를 포함한다.

선택적 표현(alternative)(예, 또는(or))의 사용은 대안 중 하나, 둘 모두, 또는 이들의 임의의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에서 사용된 부정 관사 “a” 또는 “an”은 임의의 언급되거나 열거된 구성 요소의 “하나 이상”을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다.

용어 “약(about)” 또는 ”실질적으로 포함하는(comprising essentially of)”은 통상의 기술자에 의해 결정된 특정한 값 또는 조성에 대해 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 값 또는 조성을 지칭하며, 이는 부분적으로 값 또는 조성이 측정되거나 결정되는 방법, 즉 측정 시스템의 한계에 부분적으로 의존한다. 예를 들어, “약(about)” 또는 ”실질적으로 포함하는(comprising essentially of)”은 본 기술분야의 실시당 1 또는 1 초과의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 선택적으로, “약(about)” 또는 ”실질적으로 포함하는(comprising essentially of)”은 최대 20%의 범위를 의미할 수 있다(즉, ±20%). 예를 들어, 약 3mg은 2.3mg에서 3.6mg(20%) 사이의 숫자를 포함할 수 있다. 더욱이, 특히 생물학적 시스템 또는 과정과 관련하여 용어는 최대 10배 또는 최대 5배의 값을 의미할 수 있다. 특정 값 또는 조성이 출원 및 청구범위에 기재될 때, 별도로 언급되지 않는 한, “약(about)” 또는 ”실질적으로 포함하는(comprising essentially of)”의 의미는 특정 값 또는 조성에 대해 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 것으로 간주되어야 한다.

본 명세서에 개시된 바와 같이, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비율 범위 또는 정수 범위는 별도로 표시되지 않는 한, 언급된 범위 내의 임의의 정수의 값 적절한 경우 이의 분수 값(예: 1/10 및 1/100)을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

범위: 본 발명의 다양한 관점은 범위 형식으로 제공된다. 범위 형식의 설명은 편의성과 간결성을 위한 것이며, 본 발명의 범위에 대해 유연성 없이 제한적으로 해석되어서는 안된다. 따라서, 범위에 대한 설명은 가능한 모든 하위 범위와 해당 범위 내의 개별 수치를 구체적으로 공개한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어 3 내지 12의 범위에는 3.1, 3.2, 3.3 등이 포함된다.

HSCT보다 더욱 간단하고 비용이 적게드는 치료가 필요한 자가면역 질환 및 기타 림프구 매개된 질병은 다음 목록과 관련이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다: 알레르기(allergies), 천식(asthma), 잔류 HIV(residual HIV), 버μ 림프종 및 확산 거대 B 세포 림프종과 같은 배 중심 림프종(germinal center lymphomas), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma), 이식편 대 숙주 질환(graft versus host disease; GvHD), 스테로이드 내성 GvHD(steroid-resistant GvHD), 이완불능증(Achalasia), 에디슨 병(Addison's disease), 성인 스틸병(Adult Still's disease), 무감마글로불린혈증(Agammaglobulinemia), 원형탈모(Alopecia areata), 아밀로이드증(Amyloidosis), 강직성 척추염(Ankylosing spondylitis), 항 GBM/항 TBM 신염(Anti-GBM/Anti-TBM nephritis), 항인지질 증후군(Antiphospholipid syndrome), 자가면역 혈관 부종(Autoimmune angioedema), 자가면역 자율신경장애(Autoimmune dysautonomia), 자가면역 뇌척수염(Autoimmune encephalomyelitis), 자가면역 간염(Autoimmune hepatitis), 자가면역 내이 질환(Autoimmune inner ear disease (AIED)), 자가면역 심근염(Autoimmune myocarditis), 자가면역 난소염(Autoimmune oophoritis), 자가면역 고환염(Autoimmune orchitis), 자가면역 췌장염(Autoimmune pancreatitis), 자가면역 망막병증(Autoimmune retinopathy), 자가면역 두드러기(Autoimmune urticaria), 축삭 및 신경 신경병증(Axonal & neuronal neuropathy (AMAN)), 발로 병(Balo disease), 베체트병(Behcet's disease), 양성 점막 천포창(Benign mucosal pemphigoid), 수포성 천포창(Bullous pemphigoid), 캐슬맨 병(Castleman disease (CD)), 체강 병(Celiac disease), 샤가스 병(Chagas disease), 만성 염증성 탈수초성 다발 신경병증(Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy (CIDP)), 만성 재발성 다초점 골수염(Chronic recurrent multifocal osteomyelitis (CRMO)), 척 스트라우스 증후군 또는 호산구성 육아종증(Churg-Strauss Syndrome (CSS) or Eosinophilic Granulomatosis (EGPA)), 간질성 천포창(Cicatricial pemphigoid), 코건 증후군(Cogan's syndrome), 냉응집병(Cold agglutinin disease), 선천성 심장 차단(Congenital heart block), 콕사키 심근염(Coxsackie myocarditis), CREST 증후군(CREST syndrome), 크론병(Crohn's disease), 헤르페티포르미스 피부염(Dermatitis herpetiformis), 피부근염(Dermatomyositis), 데빅병(Devic's disease (neuromyelitis optic)), 점성 루푸스(Discoid lupus), 드레슬러 증후군(Dressler's syndrome), 자궁내막증(Endometriosis), 호산구성 식도염(Eosinophilic esophagitis (EoE)), 호산구성 근막염(Eosinophilic fasciitis), 결절 홍반(Erythema nodosum), 필수 혼합 한랭 글로불린 혈증(Essential mixed cryoglobulinemia), 에반스 증후군(Evans syndrome), 섬유근통(Fibromyalgia), 섬유성 폐포염(Fibrosing alveolitis), 거대 세포염(Giant cell arteritis (temporal arteritis)), 거대 세포 심근염(Giant cell myocarditis), 사구체 신염(Glomerulonephritis), 굿파스처 증후군(Goodpasture's syndrome), 다발성 혈관염을 동반한 육아종증(Granulomatosis with Polyangiitis), 그레이브스 병(Graves' disease), 길랑-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 하시모토 감성선염(Hashimoto's thyroiditis), 용혈성 빈혈(Hemolytic anemia), 헤녹 스콜린 자반병(Henoch-Schonlein purpura (HSP)), 임신 헤르페스 또는 임신성 천포창(Herpes gestationis or pemphigoid gestationis (PG)), 화농성 열선염(Hidradenitis Suppurativa (HS) (Acne Inversa)), 저감마 글로불린혈증(Hypogammalglobulinemia), IgA 신병증(IgA Nephropathy), IgG4 관련 경화성 질환(IgG4-related sclerosing disease), 면역 혈소판 감소성 자반병(Immune thrombocytopenic purpura (ITP)), 봉입체 근염(Inclusion body myositis (IBM)), 간질성 방광염(Interstitial cystitis (IC)), 청소년 관절염(Juvenile arthritis), 청소년 당뇨병(Juvenile diabetes (Type 1 diabetes)), 청소년 근염(Juvenile myositis (JM)), 카와사키 병(Kawasaki disease), 램버트 이튼 증후군(Lambert-Eaton syndrome), 백혈구 쇄골 혈관염(Leukocytoclastic vasculitis), 편평 태선(Lichen planus), 공막 태선(Lichen sclerosus), 결막염(Ligneous conjunctivitis), 선형 IgA 질환(Linear IgA disease (LAD)), 루푸스(Lupus), 만성 라임병(Lyme disease chronic), 메니에르병(Meniere's disease), 현미경 다발 혈관염(Microscopic polyangiitis (MPA)), 혼합 결합 조직 질환(Mixed connective tissue disease (MCTD)), 무렌 궤양(Mooren's ulcer), 무카-하버만 질환(Mucha-Habermann disease), 다초점 운동 신경병증 (Multifocal Motor Neuropathy (MMN) or MMNCB), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 중증 근무력증(Myasthenia gravis), 근염(Myositis), 기면증(Narcolepsy), 신생아 루푸스(Neonatal Lupus), 시신경 세포염(Neuromyelitis optica), 호중구감소증(Neutropenia), 안구 간질성 천포창(Ocular cicatricial pemphigoid), 시신경염(Optic neuritis), 구문성 류머티즘(Palindromic rheumatism (PR)), PANDAS, 부종 양성 소뇌 변성(Paraneoplastic cerebellar degeneration (PCD)), 발작성 야행성 혈갯 소뇨증(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH)), 페리 롬베르그 증후군(Parry Romberg syndrome), 말초 포도막염(Pars planitis (peripheral uveitis)), 파르소냐 터너 증후군(Parsonage-Turner syndrome), 천포창(Pemphigus), 말초신경병증(Peripheral neuropathy), 경막성 뇌근막염(Perivenous encephalomyelitis), 악성 빈혈 (Pernicious anemia (PA)), POEMS 증후군, 다발성 동맥염(Polyarteritis nodosa), I, II, III형 다선 증후군(Polyglandular syndromes type I), (II), (III), 류마티스성 다발근통(Polymyalgia rheumatica), 다발 근염(Polymyositis), 심근경색 증후군(Postmyocardial infarction syndrome), 심낭 절개 후 증후군 (Postpericardiotomy syndrome), 원발성 담즙성 간경변 (Primary biliary cirrhosis), 원발성 경화성 담관염 (Primary sclerosing cholangitis), 프로게스테론 피부염(Progesterone dermatitis), 건선(Psoriasis), 건선성 관절염(Psoriatic arthritis), 순수 적혈구 무형성증(Pure red cell aplasia (PRCA)), 괴저성 농피증(Pyoderma gangrenosum), 레이노 현상(Raynaud's phenomenon), 반응성 관절염(Reactive Arthritis), 반사 교감 신경 영양 장애(Reflex sympathetic dystrophy), 재발성 다발성 연골염(Relapsing polychondritis), 하지 불안 증후군(Restless legs syndrome (RLS)), 후복막 섬유증(Retroperitoneal fibrosis), 류마티스 열(Rheumatic fever), 류마티스 관절염(Rheumatoid arthritis), 유육종증(Sarcoidosis), 슈미트 증후군(Schmidt syndrome), 공막염(Scleritis), 경피증(Scleroderma), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 정자 및 고환 자가면역(Sperm & testicular autoimmunity), 뻣뻣한 사람 증후군(Stiff person syndrome (SPS)), 아급성 세균성 심내막염(Subacute bacterial endocarditis (SBE)), 수삭 증후군(Susac's syndrome), 교감성 안염(Sympathetic ophthalmia (SO)), 타카야수 동맥염(Takayasu's arteritis), 측두 동맥염/거대세포 동맥염(Temporal arteritis/Giant cell arteritis), 혈소판 감소성 자반병(Thrombocytopenic purpura (TTP)), 토롤로사 헌트 증후군(Tolosa-Hunt syndrome (THS)), 횡단 척수염(Transverse myelitis), 제1형 당뇨병(Type 1 diabetes), 궤양성 대장염(Ulcerative colitis (UC)), 미분화 결합 조직 질환(Undifferentiated connective tissue disease (UCTD)), 포도막염(Uveitis), 혈관염(Vasculitis), 백반증(Vitiligo), Vogt-Koyanagi-Harada 질환.

본 발명의 특정 실시예에서 다음과 같은 질병을 배제하고자 할 수 있다: 알레르기(allergies), 천식(asthma), 잔류 HIV(residual HIV), 버μ 림프종 및 확산 거대 B 세포 림프종과 같은 배 중심 림프종(germinal center lymphomas), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma), 이식편 대 숙주 질환(graft versus host disease; GvHD), 스테로이드 내성 GvHD(steroid-resistant GvHD), 이완불능증(Achalasia), 에디슨 병(Addison's disease), 성인 스틸병(Adult Still's disease), 무감마글로불린혈증(Agammaglobulinemia), 원형탈모(Alopecia areata), 아밀로이드증(Amyloidosis), 강직성 척추염(Ankylosing spondylitis), 항 GBM/항 TBM 신염(Anti-GBM/Anti-TBM nephritis), 항인지질 증후군(Antiphospholipid syndrome), 자가면역 혈관 부종(Autoimmune angioedema), 자가면역 자율신경장애(Autoimmune dysautonomia), 자가면역 뇌척수염(Autoimmune encephalomyelitis), 자가면역 간염(Autoimmune hepatitis), 자가면역 내이 질환(Autoimmune inner ear disease (AIED)), 자가면역 심근염(Autoimmune myocarditis), 자가면역 난소염(Autoimmune oophoritis), 자가면역 고환염(Autoimmune orchitis), 자가면역 췌장염(Autoimmune pancreatitis), 자가면역 망막병증(Autoimmune retinopathy), 자가면역 두드러기(Autoimmune urticaria), 축상 및 신경 신경병증(Axonal & neuronal neuropathy (AMAN)), 발로 병(Balo disease), 베체트병(Behcet's disease), 양성 점막 천포창(Benign mucosal pemphigoid), 수포성 천포창(Bullous pemphigoid), 캐슬맨 병(Castleman disease (CD)), 체강 병(Celiac disease), 샤가스 병(Chagas disease), 만성 염증성 탈수초성 다발 신경병증(Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy (CIDP)), 만성 재발성 다초점 골수염(Chronic recurrent multifocal osteomyelitis (CRMO)), 척 스트라우스 증후군 또는 호산구성 육아종증(Churg-Strauss Syndrome (CSS) or Eosinophilic Granulomatosis (EGPA)), 간질성 천포창(Cicatricial pemphigoid), 코건 증후군(Cogan's syndrome), 냉응집병(Cold agglutinin disease), 선천성 심장 차단(Congenital heart block), 콕사키 심근염(Coxsackie myocarditis), CREST 증후군(CREST syndrome), 크론병(Crohn's disease), 헤르페티포르미스 피부염(Dermatitis herpetiformis), 피부근염(Dermatomyositis), 데빅병(Devic's disease (neuromyelitis optic)), 점성 루푸스(Discoid lupus), 드레슬러 증후군(Dressler's syndrome), 자궁내막증(Endometriosis), 호산구성 식도염(Eosinophilic esophagitis (EoE)), 호산구성 근막염(Eosinophilic fasciitis), 결절 홍반(Erythema nodosum), 필수 혼합 한랭 글로불린 혈증(Essential mixed cryoglobulinemia), 에반스 증후군(Evans syndrome), 섬유근통(Fibromyalgia), 섬유성 폐포염(Fibrosing alveolitis), 거대 세포염(Giant cell arteritis (temporal arteritis)), 거대 세포 심근염(Giant cell myocarditis), 사구체 신염(Glomerulonephritis), 굿파스처 증후군(Goodpasture's syndrome), 다발성 혈관염을 동반한 육아종증(Granulomatosis with Polyangiitis), 그레이브스 병(Graves' disease), 길랑-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 하시모토 감성선염(Hashimoto's thyroiditis), 용혈성 빈혈(Hemolytic anemia), 헤녹 스콜린 자반병(Henoch-Schonlein purpura (HSP)), 임신 헤르페스 또는 임신성 천포창(Herpes gestationis or pemphigoid gestationis (PG)), 화농성 열선염(Hidradenitis Suppurativa (HS) (Acne Inversa)), 저감마 글로불린혈증(Hypogammalglobulinemia), IgA 신병증(IgA Nephropathy), IgG4 관련 경화성 질환(IgG4-related sclerosing disease), 면역 혈소판 감소성 자반병(Immune thrombocytopenic purpura (ITP)), 봉입체 근염(Inclusion body myositis (IBM)), 간질성 방광염(Interstitial cystitis (IC)), 청소년 관절염(Juvenile arthritis), 청소년 당뇨병(Juvenile diabetes (Type 1 diabetes)), 청소년 근염(Juvenile myositis (JM)), 카와사키 병(Kawasaki disease), 램버트 이튼 증후군(Lambert-Eaton syndrome), 백혈구 쇄골 혈관염(Leukocytoclastic vasculitis), 편평 태선(Lichen planus), 공막 태선(Lichen sclerosus), 결막염(Ligneous conjunctivitis), 선형 IgA 질환(Linear IgA disease (LAD)), 루푸스(Lupus), 만성 라임병(Lyme disease chronic), 메니에르병(Meniere's disease), 현미경 다발 혈관염(Microscopic polyangiitis (MPA)), 혼합 결합 조직 질환(Mixed connective tissue disease (MCTD)), 무렌 궤양(Mooren's ulcer), 무카-하버만 질환(Mucha-Habermann disease), 다초점 운동 신경병증 (Multifocal Motor Neuropathy (MMN) or MMNCB), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 중증 근무력증(Myasthenia gravis), 근염(Myositis), 기면증(Narcolepsy), 신생아 루푸스(Neonatal Lupus), 시신경 세포염(Neuromyelitis optica), 호중구감소증(Neutropenia), 안구 간질성 천포창(Ocular cicatricial pemphigoid), 시신경염(Optic neuritis), 구문성 류머티즘(Palindromic rheumatism (PR)), PANDAS, 부종 양성 소뇌 변성(Paraneoplastic cerebellar degeneration (PCD)), 발작성 야행성 혈갯 소뇨증(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH)), 페리 롬베르그 증후군(Parry Romberg syndrome), 말초 포도막염(Pars planitis (peripheral uveitis)), 파르소냐 터너 증후군(Parsonage-Turner syndrome), 천포창(Pemphigus), 말초신경병증(Peripheral neuropathy), 경막성 뇌근막염(Perivenous encephalomyelitis), 악성 빈혈 (Pernicious anemia (PA)), POEMS 증후군, 다발성 동맥염(Polyarteritis nodosa), I, II, III형 다선 증후군(Polyglandular syndromes type I), (II), (III), 류마티스성 다발근통(Polymyalgia rheumatica), 다발 근염(Polymyositis), 심근경색 증후군(Postmyocardial infarction syndrome), 심낭 절개 후 증후군 (Postpericardiotomy syndrome), 원발성 담즙성 간경변 (Primary biliary cirrhosis), 원발성 경화성 담관염 (Primary sclerosing cholangitis), 프로게스테론 피부염(Progesterone dermatitis), 건선(Psoriasis), 건선성 관절염(Psoriatic arthritis), 순수 적혈구 무형성증(Pure red cell aplasia (PRCA)), 괴저성 농피증(Pyoderma gangrenosum), 레이노 현상(Raynaud's phenomenon), 반응성 관절염(Reactive Arthritis), 반사 교감 신경 영양 장애(Reflex sympathetic dystrophy), 재발성 다발성 연골염(Relapsing polychondritis), 하지 불안 증후군(Restless legs syndrome (RLS)), 후복막 섬유증(Retroperitoneal fibrosis), 류마티스 열(Rheumatic fever), 류마티스 관절염(Rheumatoid arthritis), 유육종증(Sarcoidosis), 슈미트 증후군(Schmidt syndrome), 공막염(Scleritis), 경피증(Scleroderma), 쇼그렌 증후군(Sj

gren's syndrome), 정자 및 고환 자가면역(Sperm & testicular autoimmunity), 뻣뻣한 사람 증후군(Stiff person syndrome (SPS)), 아급성 세균성 심내막염(Subacute bacterial endocarditis (SBE)), 수삭 증후군(Susac's syndrome), 교감성 안염(Sympathetic ophthalmia (SO)), 타카야수 동맥염(Takayasu's arteritis), 측두 동맥염/거대세포 동맥염(Temporal arteritis/Giant cell arteritis), 혈소판 감소성 자반병(Thrombocytopenic purpura (TTP)), 토롤로사 헌트 증후군(Tolosa-Hunt syndrome (THS)), 횡단 척수염(Transverse myelitis), 제1형 당뇨병(Type 1 diabetes), 궤양성 대장염(Ulcerative colitis (UC)), 미분화 결합 조직 질환(Undifferentiated connective tissue disease (UCTD)), 포도막염(Uveitis), 혈관염(Vasculitis), 백반증(Vitiligo), Vogt-Koyanagi-Harada 질환.

본 발명의 면역 세팅에 대한 추가적인 논의

비장은 흰색 펄프(pulp)와 적색 펄프를 모두 포함한다. 비장의 적색 펄프에는 일반적으로 노화 또는 결함이 있는 적혈구(RBC)와 하체 코팅 박테리아 또는 적혈구를 순환계에서 여과하고 제거하는 대식세포가 있다. 비장의 백색 펄프는 림프 구획을 포함하고 있으며 면역 감시 및 반응에 중요하다. 침입하는 병원체에 대한 항체를 합성하고 출혈이나 감염에 대한 반응으로 혈소판과 호중구를 방출한다. 발달과정에서 비장은 조혈의 첫 번째 부위 (임신 6 주)를 포함하여 여러 역할을 하는 것으로 믿어진다. 전임상 및 임상 시험에서 세포독성 화학 요법 사전컨디셔닝 없이는 세포 면역 요법이 투여 후 1 시간 이내에 순환계에서 제거되고 비장에 축적된다는 사실이 입증되었다. 세포독성 화학 요법 사전컨디셔닝은 일반적으로 세포 면역 요법을 투여하기 48 시간 전에 순환계에서 세포 면역 요법을 유지하기 위해 세포 면역 요법의 투여에 즉시 이루어져야 한다. 세포독성 화학 요법 사전컨디셔닝이 4주 전 또는 골수가 회복되는 전처리 기간에 주어질 때, 순환계에서 세포 면역 요법을 유지하는 것에 효과적이지 않다(Ritchie DS et al. Mol Ther. Nov;21(11):2122-9 (2013)).

비장의 흰 펄프의 동맥 주위 림프절 (PALS)은 주로 T 세포로 채워져 있고 림프 부분은 주로 B 세포로 채워져 있다. 배 중심(GC)은 말초 림프 조직의 림프절 또는 림프절 내에 있는 부위이며, 강렬한 성숙 B 림프구 (또는 Centrocytes라고도 함)가 항체 반응 동안 체성 과변이 및 클래스 전환을 통해 빠르게 증식, 분화, 돌연변이를 일으키는 부위이다. "k 중심은 B 세포 체액성 면역 반응의 중요 부분이다. 이들은 T 의존적 항원에 의한 B 세포의 활성화 후 동적으로 발달한다. 조직학적으로 GC는 림프 조직에서 현미경으로 구별할 수 있는 부분으로 설명된다. 활성화된 B 세포는 1차 병소에서 1차 여포성 시스템으로 이동하고, 여포 수지상 세포(FDC)의 환경에서 단일클론 확장을 시작한다.

비장의 백색 펄프 영역에 포함 된 B 세포는 특정 분자 마커로 염색하여 특정 영역으로 더 나눌 수 있다. 비장의 변연부에는 백색 펄프와 경계를 이루는 비순환 성숙 B세포를 포함하여 백색 펄프와 적색 펄프 사이를 분리하고 높은 수준의 CD21 및 IgM 및 CD24 및 CD79a, 및 측정 가능한 수준의 CD9 및 CD22를 발현한다. 맨틀 영역(mantle zone)은 정상적인 배 중심 여포를 둘러싸고 있으며, CD21, CD23 및 CD38을 발현한다. 여포 영역(follicaular zone)은 배 중심에 포함되어 있으며, 높은 수준의 IgD 및 CD23, 중간 수준의 CD21 및 CD24를 발현하며, PNA 염색으로 식별이 가능하다. 배 중심은 PNA 결합으로 가장 잘 구별되며, 여포 영역보다 높은 수준의 CD54를 발현한다. 배 중심에는 모든 배 중심에 고르게 분포하는 것처럼 보이는 특별한 헬퍼 T 세포 집단이 있다. 배 중심은 전통적으로 T 헬퍼 세포를 필요로 하는 면역 반응과 연관되어 있지만 절대적인 것은 아니다. 배 중심은 초 가변적 유전자 돌연변이가 발생하고, 고친화성 IgG 생성 B 세포가 생산되는 곳이다. 활성 배 중심에는 유형의 대식세포와, CD21 발현 수지상 세포가 존재한다. 여포 중심은 CD45R(B220)의 발현으로도 확인할 수 있다. (Cytotoxicologic Pathology, 35:366-375, 2007). CD45R 여포 중심은 Bcl6 및 Bcl2를 발현하는 배 중심 주변에서 발견된다. [BioEssays 29:166-177, 2007; Cytotoxicol Pathol 34(5): 648-655, (2006)]

병원체 또는 암세포에 대한 반응은 면역 반응에 관여하는 수많은 다양한 세포 유형의 복잡한 상호작용 및 활동에 의해 조율된다. 선천성 면역 반응은 첫번째 방어선이며, 병원체에 노출된 직후 발생한다. 호중구 및 대식세포, 세포 독성 자연살해 (NK) 세포 및 과립구와 같은 식세포에 의해 수행된다. 이후의 적응 면역 반응은 항원 특이적 방어 메커니즘을 이끌어내며 발달하는데 수 일이 걸릴 수 있다. 적응 면역에서 중요한 역할을 하는 세포 유형은 대식세포 및 수지상 세포를 포함하는 항원 제시세포이다. T 세포 서브셋, B 세포 및 대식세포를 포함한 세포 유형의 항원 의존적 자극은 모두 숙주의 방어에 중요한 역할을 수행한다. 면역 세포는 비 배타적으로 다음과 연관된다: B 세포, 수지상 세포, 과립구, 선천성 림프구(ILCs), 거핵구, 단핵구/대식세포, 골수 유래 억제세포(MDSC), 자연 살해 (NK) 세포, 혈소판, 적혈구 (RBCs), T 세포, 흉선세포.

Zwang 등(2014)은 림프고갈 후, 림프구는 강화된 흉선 생성과 잔류 비고갈 말초 림프구의 증식을 통해 면역 공간을 다시 채우는 것으로 관찰되었다. 용어 항상성 증식 (homeostatic proliferation) (선택적으로 항상성 확장(homeostatic expansion) 또는 림프구 감소증에 의한 증식(lymphopenia-induced proliferation))은 후자의 과정을 의미한다. 항상성 증식은 이식(transplantation)에서 면역고갈 요법 후 림프구 구획의 재구성과 특히 관련이 있다. 림프구를 다시 채우는 것은 이식 거부,자가 면역 또는 동종 골수 이식의 경우 이식편 대 숙주 질환을 유발할 수 있는 이펙터 기억 유형으로 왜곡될 수 있다.

두 가지 면역-고갈 제제(immune-depleting agents)인, 알렘투주맙(alemtuzumab) 및 토끼 항흉선 세포 글로불린(rabbit antithymocyte globulin)은 림프구를 다시 채울 때 이펙터 기억 표현형을 유도하는 능력을 갖는 것으로 잘 알려져 있다.

항상성 증식에 대한 초기 연구에 따르면 림프고갈에서 살아남은 T 세포가 분열되고 기억 표현형과 기능이 발달 한 다음 공동 자극 차단을 통해 동물이 심장 또는 신장 동종 이식 내성에 저항성을 갖도록 하는 지배적인 방식으로 작용했음을 나타내었다(1,2). 이러한 발견 선상에서, 최근 연구에 따르면 림프 감소증 자체가 안정적인 공동 자극 차단 기반의 말초 내성을 깨기에 충분하다는 사실이 밝혀졌다(3). MHC-일치하지 않는 심장 이식된 마우스 모델에서, 림프감소증(방사선 조사 또는 항 CD4+/CD8+ 단일클론 항체에 의해 달성됨)은 급성 T 및 B 세포 매개 거부를 유발하고 CD44hi 이펙터 기억 (EM)표현형으로의 T 세포 이동 및 공여자 특이적 항체의 출현을 동반하였다. 항상성 증식 과정은 “느린”(24~36 시간당 한 번의 세포분열) 또는 “빠른”(6~8 시간에 한번의 분열) 동역학으로 구분된다. 느린 증식은 “빈 공간의 감지”에 대한 반응으로 발생하나, 빠른 증식은 주로 장 항원에 의해 유도되는 과정이다(4). 느린 항상성 증식은 마우스 모델에서 림프고갈 후 항상성 증식에서 지배적이다. 또한 T 세포와 B 세포 모두 항상성 증식을 겪을 수 있다.

알렘투주맙(Alemtuzumab, 항-CD52)는 이식 및 다발성 경화증의 치료를 위한 유도요법으로 사용되는 강력한 림프고갈제이다. CD4+ 세포 및 보다 적은 규모의 naive CD8+ 세포는 알렘투주맙에 의한 림프고갈에 가장 취약하다(5,6,7,8). 더욱 많은 naive T 세포 집단은 삭제되지 않은 상태로 남아 있을 수 있지만, 말초 림프절은 알렘투주맙 유도후 이러한 세포의 저장소가 될 수 있기 때문이다(9). 알렘투주맙 요법은 신장 이식 수여자에서, 기억 CD4+ 및 CD8+ 표현형 방향으로 치우치게(skewing)한다; 알렘투주맙 요법후 거부(생검(biopsy), 새로운 또는 공여자 특이적 항체에 의한) 증거가 있는 사람들은 CD8+ 이펙터 기억 세포 (CD45RO-CD62L-)의 비율이 증가했다(10). 이 같은 환자들은 CD4+세포들 사이에서 조절 T 세포(Tregs)의 빈도가 더욱 감소하였다. 대조적으로 다른 연구에서는 알렘투주맙 유도 후, FoxP3+ 세포의 증가된 빈도를 제안했다(11). 이 경우, FoxP3 발현은 T 세포 활성화의 일시적인 마커일 수 있다(12, 13, 14). 다발성 경화증 환자 중 알렘투주맙 치료 후, 항상성 증식은 CD4+ 및 CD8+ 세포의 고도로 활성화된, 증식성, 올리고클론성, 및 기억 유사 집단의 회복으로 이어진다(15). 특히, CD8 풀은 퍼포린(perforin)과 그랜자임 B(Granzyme B)를 발현하는 최정적으로 분화된 이펙터 메모리 CD28CD57+CD8 집단에 의해 지배된다. 이러한 집단은 자가면역과 관련이 있는 것으로 알려져 있으며, 실제로 87명의 환자를 대상으로 한 이 연구에서, 2/3이 (주로 갑상선) 자가면역을 발달시켰다.

신장 이식에서 유도 요법으로 제공된 rATG 후 림프구 고갈의 동역학을 최근 조사한 결과, rATG는 6개월에 T 세포 구획을 지속적으로 고갈시켜, 바실릭시맙(basiliximab) 후 또는 유도 요법 없이 최소 T 세포 고갈과 비교하여 250 CD3+ cells/uL 미만으로 계수되도록 하였다(19). 이전의 연구와는 대조적으로, 최근의 이러한 조사는 rATG 유도 후 한달 동안 흉선 생성(즉, CD4+ or CD8+ 세포 중 CD31+ 세포)의 증가가 없음을 확인하였다. 오히려, rATG 치료후 첫 달에, Stat5를 통한 IL-7 및 IL-15에 의한 말초 사이토카인 매개된 신호전달이 특히 기억 T 세포 서브셋 사이에서에 증가하였다. 이연구는 ATG후 T 세포 회복이 흉선 형성을 높이기보다 말초 T 세포 풀에서 비롯된 것임을 의미한다.

인간의 경우, 마우스와 달리 증식하는 T 세포의 대부분은 흉선이 아닌 말초에서 유래한다(20). 따라서 말초 사이토카인 신호 전달은 림프 부족 상태를 유지하고, 림프감소증에서 T 세포 구획을 다시 채우는데 필수적이다. IL-7은 T 세포 항상성 증식을 담당하는 1차 사이토카인이다. 젊은 흉선 절제술(thymectomized)을 받은 성인과 노인에서 순환하는 IL-7 수치는 건강한 대조군 보다 높다(21). 흉선 기능이 낮거나 없는 이들 환자의 IL-7은 STAT5 신호를 통해 T 세포 증식을 자극하는 것으로 보인다. IL-7 자체는 T 세포 구획을 유지하기 위한 “가변저항(rheostat)”으로 설명된다(22). 림프구 감소증에서 과도한 IL-7은 T 세포 증식을 자극한다. 증식하는 T 세포는 IL-7을 소비하고, T 세포 구획이 다시 채워짐에 따라 수준이 기본 상태로 떨어진다. 이러한 메커니즘은 과도한 증식을 방지하고, T 세포 항상성을 보존한다. 최근 연구에 따르면, IL-7에 의해 유도된 증식은 간헐적(연속적이지 않은) 신호전달을 필요로 하며, TCR의 엔게이지먼트(engagement)는 이러한 중단을 제공한다(23). 말초(자기) TCR 리간드에 대해 부적절한 친화력을 갖는 T 세포는 연장된 IL-7 신호 전달 후에 죽는다; 이러한 메커니즘은 자기리간드에 대한 적절한 친화성을 갖는 T 세포 집단을 유지한다. IL-7 외에도 IL-15 신호전달은 CD8+ T 세포 생존 및 증식에 중요하다(24, 25, 26). IL-15는 기억 CD8+ 세포의 항상성 증식을 향상시키는 반면, IL-15 단독으로는 naive CD8 T 세포의 항상성 증식에 충분하지 않다(27). 나이브 CD8+ 세포에서 T MHC I 엔게이지먼트는 항상성 증식을 위해 필요하다(28). 새로운 데이터는 기억 CD4+가 IL-15에도 반응할 수 있음을 나타낸다(29,30,31). 최종적으로 TGB-β 는 IL-15 신호를 약화시키고 항상성 증식에 의한 자가면역의 제동역할을 할 수 있다(32, 33, 34, 35, 36, 37).

CD4 + 및 CD8 + 세포에서 TCR 신호 전달을 약화시키는 단백질 티로신 포스파타제 유전자 산물 PTPN2는 인간자가 면역과 관련이 있다(38,39). 마우스 모델에서 PTPN2의 T 세포 녹아웃은 대조군 동물에 비해 더 빠른 림프 감소증 유발 CD8+ 증식을 초래했다. PTPN2- 결실된 CD8+ 세포를 congenic 숙주로 입양 전달하면 대조군 CD8+ 세포의 입양 전달과 비교하여 이펙터/기억 분화 및 자가면역이 발생하였다. 이러한 반응은 IL-7에 독립적이었다. miRNA-181a는 부분적으로 다른 단백질 포스파타제의 발현을 억제함으로써 TCR 신호 전달을 향상시킨다(41). 따라서, miRNA-181 또는 다른 miRNA는 PTPN2 발현을 억제하여 림프 감소증 유발 증식을 완화할 수 있다. 전사 인자는 조혈 줄기 세포의 림프구 구획을 다시 채우는 능력을 조절할 수 있다고 제안되었다. 예를 들어, Hoxb4 신호 전달은 림프 감소증에 반응하여 조혈 줄기 세포 CD4+ 중심 기억(CD44hiCD62L+) 표현형을 촉진할 수 있다(42). 경쟁적 입양 전달 실험에서 Hoxb4- 과발현 중앙 기억 세포는 림프 기관의 재구성에 야생형 중앙 기억 세포보다 덜 기여했다. 마지막으로, 인테그린 CD18 (lymphocyte function-associated antigen-1, 또는 LFA-1)은 장과 이차 림프 기관 사이의 naive T 세포 trafficking에서 기능하며 장 자가면역과 관련이 있다(45). CD4+CD18-/-세포의 Rag-/-숙주로의 입양 전달은 빠르고 느린 림프구 감소증 유도된 증식 모두에 대해 CD18의 필요를 보여주었다(46). 위의 연구는 항상성 증식에서 이펙터 기억 표현형으로 치우치게 하는 항상성 증식의 비 사이토카인 조절제의 중요성을 설명한다.

이식에 대한 장벽으로서 항상성 증식을 극복하는 또 다른 잠재적인 접근법은 이식 수여자에게 특이적으로 잠재적으로 병리적인 CD8+ 세포를 삭제하는 것이다. Yamada 등은 비인간 영장류에서 MHC 불일치 신장 이식의 혼합 키메라 모델에서 림프고갈시 항-CD8 mAb를 사용하여 이러한 접근법을 사용했다(54). CD8 고갈된 동물에서 감소된 Tmem 반응의 발견은 고무적이다. 동일한 그룹은 이후, 인간 백혈구 기능 항원-3(leukocyte function antigen-3; LFA-3) 접착 분자의 세포 외 CD2-결합 부분의 융합 단백질인 알레파셉트(alefacept)를 연구했다(55). 이 약제는 이펙터 기억 CD2+ 세포와 LFA-3 사이의 상호작용을 차단함으로써 세포독성 이펙터 기억 T 세포 증식을 방해하는 것으로 생각된다. 건선에 대한 알레파셉트 요법은 우선적으로 피부 병변의 임상적 개선과 관련이 있는 CD4+CD45RO+ 이펙터 기억세포를 고갈시켰다(56). 알레파셉트는 비인간 영장류 이식 모델에서 우선적으로 그리고 가역적으로 CD8+ 이펙터 기억(CD28-CD95+) 세포를 고갈시켰다; 이 동물 모델에서 CD28- 세포는 CD2hi 였으며, CD8+ 세포를 우선적으로 고갈시키는 알레파셉트의 능력을 설명하는데 도움이 되었다.

이식 후, 사이클로포스파미드 투여는 유도요법에서 살아남을수 있는 alloreactive CD8+T세포를 고갈시켜 GVHD를 방지하는데 매력적인 접근법이다(58,59). 최근 데이터는 이식 후 사이클로포스파미드 투여가 주로 빠르게 분열하는 allo-특이적 세포를 표적으로 하며, HSTC후 면역 능력을 유지하는데 필수적인 naive 세포를 상대적으로 유지시킨다는 것을 나타낸다(60). CD4+Foxp3+ Tregs는 사이클로포스파미드에 내성을 나타내며, 동종이형 골수이식을 위한 사이클로포스파미드 유도 후 빠르게 회복된다(61). Tregs의 유지는 부분적으로 사이클로포스파미드가 GVHD를 예방하는 메커니즘의 기초가 될 수 있다.

Thangavelu 등(2005)은 림프구 고갈 치료 후 류마티스 관절염 (RA) 환자에서 장기간의 심각한 CD4+ T-림프구 감소증을 입증했다. 불량한 재구성은 흉선을 통한 새로운 T 세포 생산 감소 또는 잔류 T 세포의 주변 확장 불량으로 인해 발생할 수 있다. 인터루킨-7 (IL-7)은 흉선을 자극하여 새로운 T-세포를 생성하고 순환하는 성숙한 T-세포가 확장되도록 함으로써 T-세포 항상성에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 현재 연구에서, 우리는 RA 환자의 단면(cross-section)에서, 순환하는 IL-7의 감소된 수준을 입증했다. 골수 기질 세포 배양에 의한 IL-7 생산 또한 RA 에서 손상되었다. 이러한 IL-7 결핍이 치료적 림프고갈 후 RA에서 관찰되는 장기간의 림프감소증을 설명할 수 있는지 확인하기 위해, 및 자가 전구 세포 레스큐와 고-용량 화학요법으로 처리된 RA 환자 및 고형 암 환자를 비교하였다. 화학 요법은 모든 환자를 비슷하게 림프구 감소증으로 만들었지만, 암환자에서 3~4개월까지 발생한 재구성과 비교하여, RA 환자에서는 12개월간 지속되었다. 두 코호트 모두 T 세포 수용체 절제 서클을 포함하는 naive T-세포를 생산했다. 그룹 사이의 주요한 특징은 RA 에서 치료 후 첫 3개월 동안 말초 T 세포, 특히 기억세포를 확장하지 못했다는 것이다. 가장 중요한 것은 리프감소증 당시 비-RNA 대조군 개체에서 혈청 IL-7 수준이 4배 증가한 것에 비해 RA 에서는 증가가 없었다는 것이다. 따라서, 우리의 데이터는 RA 환자가 상대적으로 IL-7결핍되었으며, 이러한 결핍이 치료적 림프고갈 후, RA의 초기 T 세포 재구성에 중요한 기여요인이 될 가능성이 있음을 의미한다. 더욱이 안정적이고 잘 통제된 질환을 앓는 RA 환자에서, IL-7 수준은 CD4+ T-세포의 T 세포 수용체 절제 서클 함량과 양의 상관관계를 나타냈으며, 이러한 코호트에서 IL-7의 흉선 활성에 대한 직접적인 효과를 입증한다.

실시예

아래 실시예는 고용량 글루코코르티코이드 수용체 작용제가 말초 혈액 림프구의 거의 완전한 림프고갈을 유발할 수 있을뿐만 아니라, 림프 기관의 배 중심의 수를 감소시키고, 흉선 림프구를 고갈시킬 수 있음을 입증한다. 이러한 효과는 호중구, 혈소판, 적혈구 및 줄기 세포(HSCs 및 MSCs 모두)의 세포 수에 실질적으로 영향을 주지 않고 달성된다.

이들 실시예는 또한 고용량의 글루코코르티코이드 작용제의 이러한 리프고갈 프로파일이 표준 화학요법제 요법(사이클로포스파미드(Cy) 및 플루다라빈(Flu)에 기초함)과 유사하지만, 관련된 체중 감소를 유발하지 않음을 나타낸다(화학요법의 독성의 일반적 측정).

따라서, 고용량의 글루코코르티코이드 작용제는 화학요법에 필적하는 효능을 갖지만 관련된 독성 없이, “면역학적 재설정”을 생성할 수 있는 비골수 파괴 요법을 의미한다. 따라서, 고용량 글루코코르티코이드 수용체 작용제는 림프구와 같은 면역세포에 의해 매개되는 질병의 치료에 사용하기 위한 유망한 치료법을 의미한다.

실시예 1: 2차 및 1차 림프 부위의 면역억제성 감소

본 명세서에서 급성 고용량 덱사메타손은 DEX, AugmenStem^TM, PlenaStem^TM 또는 AVM0703으로 지칭될수 있다.

마우스의 경우, 수컷 마우스에게 덱사메타손 나트륨 포스페이트를 114.6 mg/kg 덱사메타손 베이스(HED 9.32mg/kg)으로 0일차에 복강 주사하고, 덱사메타손 주입 96시간 뒤 희생시켰다. 마우스를 방혈(exsanguination)로 희생시키고, 흉부 경정맥으로 역행 플러시를 통해 5U 헤파린/ml PBS로 잔류 적혈구를 플러쉬하였다. 비장을 제거하고, 습윤 상태로 무게를 잰 다음 10% 포르말린에 고정하였다. 그 후, 비장을 유통되는 방법을 통해 절편한 뒤, FITC-PNA와 함께 4℃에서 24시간 인큐베이트하고 세척하여 슬라이드에 놓고 면역 형광 이미지를 캡처하였다. 메타모르프 소프트웨어를 사용하여 면역 형광신호를 정량화하였다. 비장 영역으로 정규화된 샘플 이미지 및 결과는 도 1에 도시하였다.

대조군 마우스는 상당한 FITC-PNA 면역 형광을 갖는 반면, 덱사메타손 나트륨 포스페이트를 주사한 마우스는 면역 형광신호가 거의 없었다. FITC-PNA는 비배타적으로 비장 및 림프절과 관련된 배중심을 표시한다. 본 실시예는 고용량 덱사메타손이 림프 기관의 배 중심(GC) 수를 감소시킬 수 있는 능령을 나타내며, 이는 자가 반응 면역 기억을 제거할 수 있음을 입증한다. 림프 기관의 배 중심 수를 줄이면, 암세포(예 배 중심 림프종) 또는 이들 중심의 틈새(niches)에 결합하는 잔류 HIV 감염 T 세포가 순환계로 유입되어 면역 시스템 또는 표준 요법에 의해 제거될 수 있다.

도 2는 마우스 비장에서 배 중심 수에 대한 급성 고용량 덱사메타손(HED에서) 효과의 용량 반응을 나타낸 것이다. 배 중심 감소는 HED 6 mg/kg에서 명백하지만, HED가 9 및 12 mg/kg 용량이 될 때까지 크게 감소하지 않는다.

랫(rat)의 경우, 3.23, 6.45 및 12.9 mg / kg (랫 용량 20, 40 및 80 mg / kg)의 덱사메타손 HED를 투여하여 (IV 또는 PO) 48 시간 후 GC 및 변연부의 억제를 결정했다. 랫에서, 12.9 mg/kg의 HED Dex 용량은 도 3 및 도4에 도시된 것과 같이, GC 및 변연부의 수와 면적을 최대로 억제하였다.

포르말린으로 고정된 비장은 5개 조각으로 절편된 뒤, 다듬어져 파라핀에 포매하고, H&E(hematoxylin and eosin)으로 절단 및 염색하였다. 안구 마이크로미터를 사용하여 PAL이 가장 큰 백색 펄프 영역에서 동맥 주위 림프절(periarteriolar lymphoid sheath; PAL)의 직경 과 변연부(MZ)의 폭을 측정하였다. 랫 비장에서 BCL-6 면역 조직 화학 염색을 평가하여 자동 이미지 분석 방법을 사용하여 GC 영역을 결정하였다.

급성 고용량 덱사메타손은 또한 흉선 질량 및 부피를 감소시킨다(도 5). 마우스의 경우, 수컷 마우스에게 비히클 또는 3, 6, 9 및 12 mg / kg HED 덱사메타손 베이스의 덱사메타손 나트륨 포스페이트를 0일에 투여하고 덱사메타손 처리후 48시간 뒤 희생시켰다. 마우스를 방혈(exsanguination)로 희생시키고, 흉부 경정맥으로 역행 플러시를 통해 5U 헤파린/ml PBS로 잔류 적혈구를 플러쉬하였다. 흉선을 각 마우스로부터 제거하고, 습윤 상태로 무게를 측정하여, 흉선 무게/체중으로 그래프를 표시하였다.

실시예 2: 호중구, 적혈구 혈소판 및 줄기세포 유지 특성이 있는 덱사메타손의 급성투여 24 ~ 48시간 후 마우스 및 랫에서 면역억제성 림프고갈

나이브 마우스 및 랫 모델에서 수행된 예비 용량 증가(Preliminary dose escalation)연구는 고용량 덱사메타손의 투여가 완전한 리프고갈을 초래함을 보여주였다(도 11 오른쪽). 고용량의 덱사메타손은 투여 후 48시간에 측정된 CD4+, CD8+, Tregs 및 B 세포 집단에서 ~98% 감소를 유도하여 자가면역 병리생리학적 기질의 신속한 절제를 지원하였다. 초기 단계 검증에 따르면, 급성 고용량 덱사메타손은 2~3시간의 약동학적 반감기(half-life by pharmacokinetic)와 4~5일의 약력학 반감기(pharmacodynamics half-life)를 가져, 장기간동안의 면역 억제를 배제한다. 또한, 급성 고용량 덱사메타손의 경구 투여는 정맥 투여와 유사한 효과를 가지며, 이는 단일 경구 치료로서 급성 고용량 덱사메타손의 사용을 뒷받침한다.

도 6에 도시된 것과 같이, 체중이 250 내지 300 그램인 수컷 루이스 랫에 20 (3.2 HED), 40 (6.5 HED) 또는 80 (12.9 HED) mg/kg의 덱사메타손을 IV 또는 PO 투여하고 48 시간 뒤 모든 용량에서 위약과 비교하여 림프구 수가 현저히 감소한다. 대조적으로 도 7에 도시된 것과 같이 호중구는 급성 고용량 덱사메타손에 의해 감소되지 않았다. 호중구 수는 실제로 탈출감소(demargination) 효과를 통해 모든 용량의 덱사메타손에 의해 증가한다. RBCs, 혈소판, Hct, HgB는 덱사메타손 처리에 영향을 받지 않았다.

3 mg/kg (n=4), HED 6 mg/kg (n=6), 9 mg/kg (n=4), 12 mg/kg (n=4), 15 mg/kg (n=4) 또는 17.5 mg/kg (n=4)의 HED로 C57BI 수컷 마우스에 덱사메타손의 겨ㅑㅇ구 급성 투여는 위약(n=7)과 비교하여 CD3+ T 림프구의 65% 감소 및 CD4+ T 림프구의 75% 감소(도 8), CD8+ T 림프구의 56% 감소 및 Tregs의 78% 감소 (도 9), 자연 살해 세포(NK)의 87% 감소 및 B 림프구의 83% 감소시키고(도 10), 절대 림프구 수는 84% 감소했지만 호중구(도 11), RBcs(도 12) 및 혈소판(도 13)은 유지되었다, 일반 혈액 화학(CBC) 및 유세포 분석을 위해 덱사메타손을 경구 위관 영양법으로 투여하고 24 ~ 48 시간 후에 혈액을 채취하였다. 12 mg/kg 이상의 HED 용량에서 정상마우스에서 거의 완전한 림프절제가 관찰되었다. 종양을 갖는 마우스에서 거의 완전한 림프절제용량은 6mg/kg 초과의 HED 일 것이다.

급성 고용량 덱사메타손은 카스파제 경로를 통해 수용체 매개 세포 사멸을 활성화하고, 사용된 용량에 따라 모든 림프구를 림프고갈 시키거나 림프절제한다. 수용체 매개 작용 방식에서 예상한 바와 같이, 덱사메타손은 이들 세포에 다른 글루코코르티코이드 수용체 유무에 의해 호중구, 혈소판 및 적혈구 (RBC)를 절약하는 림프 고갈을 유도한다. 고용량의 덱사메타손을 투여하면 말초 혈액과 골수 모두에서 호중구 수가 위약보다 높아지는 경향이 관찰되어 림프 결핍 치료 중 감염에 대한 가능한 보호를 지원한다.

놀랍게도, 고용량의 덱사메타손은 마우스에서 조혈 줄기 세포의 양을 크게 변경하지 않았다 (도 13). 따라서 급성 고용량 덱사메타손으로 대표되는 비 골수 파괴 요법은 면역 재설정 후 조혈 회복을 위해 줄기 세포 수혈의 필요성을 없앨 수 있다.

실시예 3: 호중구, 적혈구 혈소판 및 줄기세포 유지 특성이 있는 덱사메타손의 급성투여 36 ~ 48시간 후 인간에서 면역억제성 림프고갈

3 mg/kg 덱사메타손 베이스 등가물(본 실시예에서 주어진 모든 용량은 덱사메타손 베이스 등가물임)의 경구 급성 투여를 무릎 골관절염 3명 및 대동맥류 1명을 포함하는 4명의 인간환자에게 투여하였다. 림프구 및 기타 혈액 세포 집단을 결정하기 위해, 약물 치료 전 및 치료 48시간 후 CBC 분석 및 유세포 분석을 위해 혈액을 채취하였다. 혈청은 사이토카인 수준에 대해 분석되었다. 한 환자의 경우, 치료 전 CBC가 작성되지 않아 3명의 환자에 대해서만 정규화된 유세포 분석 데이터가 표시된다. 비정규화된 유세포 분석데이터에 의해 4명의 환자중 2명만이 림프고갈로 덱사메타손에 반응한 반면(도 14, 15 및 16), 이 용량의 덱사메타손에 대해 4명의 환자 중 2명은 CD3 및 CD4 림프구에서 림프구 증가반응을 보였고, 4명의 환자 중 1명은 CD8, B 림프구 및 NK 세포에서 림프구 증가반응을 보였다. 환자 4명중 3명은 IL-2 수치가 상승했으며, 4명 중 4 명 중 4 명은 급성 경구 덱사메타손 베이스 (3mg / kg) 48 시간 후에 IL-15 수치가 상승했다(도 17). 잠재적으로 치명적인 사이토카인 방출 증후군(CRS)의 주요 동인으로 알려진 사이토카인 IL-6은 어떤 환자에서도 상승하지 않았다. 3 mg/kg 용량에서 암이 아닌 환자 4명 중 2명에서 관찰된 림프구증가 반응을 기반으로, 바람직한 림프고갈 용량은 3 mg/kg 이상이 될 것이며, 여기서 최소 치사 용량은 건강한 마우스에서 HED 114 mg/kg에 비해 종양 보유 마우스에서 HED 43 mg/kg 였다 (Scorza Barcellona, 1984).

덱사메타손 투여 48시간 후 골수를 채취하고, 콜로니 형성 분석 섬유 아세포(colony-forming assay fibroblast; CFU-F)에 의해 중간엽 줄기 세포(MSC) 수를 결정하였다. 덱사메타손 베이스 3 mg/kg의 경구투여는 회장 장 골수(BM) MSC를 거의 2배 증가시켰다(도 18). 말에 대한 연구에서 BM MSC의 3 계통 분화능력도 결정되었다. 6 mg/kg HED는 말에 1시간 IV 주입 투여 후, 48시간에 흉골 BM MSC 줄기 세포의 수를 2배로 늘렸지만, 골세포, 연골세포, 또는 지방세포에 대한 MSC의 3계통 분화 능력을 변경시키지 않았다.

실시예 4: 표준 Cy(사이클로포스파미드) Flu(플루다라빈) 화학요법에 대한 급성 12 mg/kg 및 17.5 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED의 비교

덱사메타손 베이스는 -2일에 12 mg/kg 또는 17.5 mg/kg HED로 성인 수컷 마우스에게 경구 위관 영양법에 의해 투여하였다. 다른 그룹의 마우스에게 Cy는 -5일 및 -4일에 166 mg/kg(HED mg/m²)으로 IP 투여하고, -5, -4, -3, -2일에 플루다라빈 10 mg/kg(HED 30mg/m²)을 투여하였다. 세번째 그룹의 마우스에게 Cy는 Cy는 -5일에 166 mg/kg(HED mg/m²)으로 IP 투여하고, -5일에 플루다라빈 10 mg/kg(HED 30mg/m²)을 투여한뒤, 02일에 12 mg/kg 또는 17.5 mg/kg HED 덱사메타손 베이스를 경구 투여하였다. CBC 및 유세포 분석결과는 도 19 내지 24에 도시하였으며, 체중은 도 25에 도시하였다.

덱사메타손 베이스 12 mg/kg 또는 17.5 mg/kg HED를 채혈 전 12 내지 72시간 사이에 투여하면 2일 Cy 및 4일 Flu와 비교하여 비슷한 림프 고갈 프로파일이 나타나며, -5일에 단일 Cy 및 -5일 단일 Flu와 함께 -2일에 12 mg/kg 덱사메타손 HED를 병용투여하는 경우도 마찬가지였다(도 23). 단일 Cy 및 단일 Flu 용량은 동일한 효과로 -6일, -4일, 또는 -3일에 투여될 수 있다. 덱사메타손 단독의 림프고갈 프로파일은 절대 림프구가 CyFlu만큼 극적으로 고갈되지 않으며, 림프고갈은 CyFlu 후 입양세포 치료를 받을 때의 긴경부종과 관련이 있을 수 있기 때문에 바람직할 수 있다.

표준 반복 CyFlu 요법은 독성의 일반적인 척도로서 체중을 상당히 감소시켰지만, 12 mg/kg 또는 17.5 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED는 체중에 영향을 미치지 않았다. -5일에 한 번의 Cy 및 한번의 Flu 용량과 12 mg/kg 덱사메타손 HED의 조합은 표준 CyFlu 요법보다 체중에 훨씬 적은 영향을 미치는 반면, -5일에 한 번의 Cy 및 한번의 Flu 용량과 17.5 mg/kg 덱사메타손 HED의 조합은 체중에 영향을 미치지 않았다(도 25). 이는 급성 고용량 덱사메타손이 사이클로포스파미드(Cy) 및 플루다라빈(Flu)을 기반으로하는 표준 화학 요법과 동등한 림프고갈 프로파일을 갖지만 관련 체중 감소가 없으므로 화학요법과 비교하여 덱사메타손 제제의 안전성을 확인하였다.

추가로, 급성 고용량 덱사메타손을 사용한 이중 맹검 대조된 말 시험에서, 70일까지 부작용이 관찰되지 않았다.

지금까지 수집된 데이터는 급성 고용량 덱사메타손이 승인된 DSP 제품과 일치하는 안전성 프로파일을 나타낸다. 제안된 급성 고용량 덱사메타손(HED 3-18 mg/kg) 용량은 다양한 조건에서 최대 5일간 매일 펄스 요법에 안전하고 효과적으로 사용되는 DSP의 누적 용량과 동일하거나 적으며, DSP는 의사가 시작한 고용량 펄스 요법 임상 용도에서 잘 견뎠다 (Han et al, 2014; Annane et al, 2004; Ayache et al, 2014). 소수의 인간 골관절염 환자를 대상으로 수행된 예비 연구에서 급성 고용량 덱사메타손은 염증성 사이토카인(예: IL-6)의 농도에 영향을 주지 않으면서, 화학 요법 후 관찰되는 것(US9855298B2) 과 같이, 혈장 IL-2 및 IL-15 사이토카인의 수준을 높인다.

실시예 5: 자가면역 질환 환자의 치료

이에 제한되는 것은 아니나, 다음과 같은 자가면역 질환을 앓는 환자는 글루코코르티코이드 면역 억제제 또는 덱사메타손 용량으로 치료할 수 있다: SLE, 건선(psoriasis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 포자성 관절염(sporiatic arthritis), 제1형 당뇨병(type I diabetes), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 쇼그렌 증후군(Sjogren's Syndrome), 경피증(scleroderma), 그레이브스 병(Grave's Disease), 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 셀리악 병(Celiac Disease), 에디슨 병(Addison's Disease), 중증근 무력증(Myasthenia Gravis), 자가면역 간염(Autoimmune hepatitis), 항인지질 증후군(Antiphospholipid syndrome), 담즙성 담관염(biliary cholangitis). 급성 고용량 덱사메타손(베이스로서) 용량은 약 3 mg/kg 내지 약 24 mg/kg 범위이며, 약 9 mg/kg 내지 약 18 mg/kg가 바람직하다.

B 림프구 수는 급성 고용량 덱사메타손 복용으로 90%이상 감소하고, 기억 B 세포가 20세 이상의 사람에서 B 세포 구획의 약 50%를 구성하여 기억 B 세포 집단 또한 90% 이상 감소한다. 환자의 자가면역 공격 B 세포가 아폽토시스되고 환자는 능동적 자가면역 공격을 중단한다. 환자의 신체적 증상은 개선 또는 제거된다. 자가면역 질환의 관해는 대부분 환자에서 무기한 지속되지만 재발하는 경우, 글루코코르티코이드 면역 억제제, 덱사메타손 용량 또는 CD26의 길항제의 반복 용량이 투여될 수 있다. 반복 치료는 필요한 경우 한달에 한번 정도로 자주 발생할 수 있지만, 바람직하게는 1년에 1회 이하, 가장 바람직하게는 5년에 1회 이하이다.

실시예 6: 잔류 HIV 의 치료

잔류 HIV 환자는 글루코코르티코이드 면역억제제 또는 덱사메타손으로 치료된다. 급성 고용량 덱사메타손(베이스) 용량은 약 3 mg/kg 내지 약 24 mg/kg 범위이며, 약 9 mg/kg 내지 약 18 mg/kg가 바람직하다. 상기 치료는 HIV가 숨어있는 비장의 틈새(niches)를 제거하고, 감염된 T 세포를 순환계로 보내 뉴클레오시드 역전사효소 억제제(NTRIs), 비 뉴클레오시드 역전사 효소 억제제(NNRTIs), 프로테아제 억제제 (PIs), 융합 및 진입 억제제, 약동학적 향상 및 인테그라아제 가닥 전이 억제제 (INSTIs)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 항 레트로 바이러스 약물을 포함하는 HIV 요법으로 죽일 수 잇다.

실시예 7: 배 중심 림프종, 예를 들어 버킷 림프종의 치료

예를들어, 버킷 림프종 또는 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)과 같으나 이에 제한되지는 않는 배 중심 림프종 환자는 글루코코르티코이드 면역 억제제 또는 덱사메타손으로 치료된다. 급성 고용량 덱사메타손(베이스) 용량은 약 3 mg/kg 내지 약 24 mg/kg 범위이며, 약 9 mg/kg 내지 약 18 mg/kg가 바람직하다. 상기 치료는 배 중심 림프종이 결합하는 비장의 틈새(niches)를 제거하고, 세포를 순환계로 보내 R-CHOP과 같은 표준 화학 요법에 의해, 또는 Rituxan, Bexxar 또는 Zevalin과 같은 CD20 항체에 의해, Lymphocide 또는 Vorsetuzumab mafodotin과 같은 CD22 또는 CD70 항체에 의해, 또는 Oblimersen sodium, ABT-737 (oral form navitoclax, ABT-263), 또는 Fenretinide와 같은 Bcl-2 억제제에 의해, 또는 Fostamatinib 또는 Tamatinib과 같은 Syk 억제제에 의해, 또는 Bortezomib (Velcade), 또는 COMPADME, CODOX-M/IVAC과 같은 프로테아좀에 의해 더욱 완전하게 또는 더욱 낮은 용량으로 제거할 수 있다. 재발률이 감소하고 무병 생존률이 높아진다.

실시예 8: 덱사메타손 용량을 또 다른 글루코코르티코이드의 등가용량으로 전환

또 다른 글루코코르티코이드의 등가 투여량을 계산하기 위해, 덱사메타손의 투여량은 공개적으로 이용가능한 글루코코르티코이드 전환 계산기, 바람직하게는 http://www.medcalc.com에 입력된다. 그 뒤, 총 투여량은 글루코코르티코이드의 반감기를 기준으로 결정된다. 예를 들어, 덱사메타손 3~12 mg/kg은 프레드니손 19~ㅡ75 mg/kg로 전환된다. 프레드니손의 생물학적 반감기는 약 20시간이고, 덱사메타손의 생물학적 반감기는 약 36~54시간이기 때문이다. 따라서, 프레드니손은 동등한 생물학적 용량을 위해 24시간마다 19 ~ 75 mg/kg로 투여된다.

실시예 9: 프레드니손을 사용한 자가면역 질환 환자의 치료

이에 제한되는 것은 아니나, 다음과 같은 자가면역 질환을 앓는 환자는 급성 고용량 프레드니손으로 치료할 수 있다: SLE, 건선(psoriasis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 포자성 관절염(sporiatic arthritis), 제1형 당뇨병(type I diabetes), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 쇼그렌 증후군(Sjogren's Syndrome), 경피증(scleroderma), 그레이브스 병(Grave's Disease), 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 셀리악 병(Celiac Disease), 에디슨 병(Addison's Disease), 중증근 무력증(Myasthenia Gravis), 자가면역 간염(Autoimmune hepatitis), 항인지질 증후군(Antiphospholipid syndrome), 담즙성 담관염(biliary cholangitis). 급성 고용량 프레드니손 투여량은 약 19 mg/kg 내지 약 150 mg/kg 범위이며, 바람직하게는 약 56 mg/kg 내지 112 mg/kg의 용량이 바람직하고, 최초 투여 이후 24시간 후 반복(2차) 투여 및 48 ~ 72시간 후 이 용량으로 선택적 반복 투여(3차)될 수 있다.

B 림프구 수는 급성 고용량 프레드니손 투여로 90% 이상 감소하고, 기억 B 세포는 20세 이상의 사람에서 B 세포 구획의 약 50를 구성하므로, 기억 B 세포 집단도 90% 이상 더 많이 감소한다. 환자의 자가면역 공격 B 세포가 아폽토시스되고 환자는 능동적 자가면역 공격을 중단한다. 환자의 신체적 증상은 개선 또는 제거된다. 자가면역 질환의 관해는 대부분 환자에서 무기한 지속되지만 재발하는 경우, 프레드니손의 반복 용량이 투여될 수 있다. 반복 치료는 필요한 경우 한달에 한번 정도로 자주 발생할 수 있지만, 바람직하게는 1년에 1회 이하, 가장 바람직하게는 5년에 1회 이하이다.

실시예 10: 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED와 표준 화학치료 요법의 비교

이전 연구는 공격적인 비-호 지킨 림프종에 대한 표준 화학 요법이 A20 B 세포 림프종 마우스 모델에서 상당한 독성을 갖는다는 것을 보여주었다 (Bascus et al., 2016).

공격적인 NHL 환자뿐만 아니라 지연형 NHL(indolent NHL) 환자에 가장 많이 사용되는 표준 화학요법은 사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니손/스테로이드(CHOP)의 조합으로 21일 마다 6 내지 8주기로 투여된다. Bascus et al. (2016)은 A20 B 세포 림프종 마우스 모델에서 CHOP의 효능과 독성을 평가했다.

Bascus et al.(2016) 연구에서, 8~10주령의 암컷 BALB/c 마우스를 생체 내 실험에 사용하였다. 동물은 음식과 물이 무제한으로 제공되는 여과된 공기가 있는 랙(rack)에서 12:12시간의 명암주기로 수용되었다. A20 세포주는 오래된 BALBcAnN 마우스의 자연 발생 소포 세포 육종의 B 림프구에서 유래하였으며, American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA)에서 입수하였다. 각각의 화학 요법 주기에서 다음 용량이 사용되었다: 사이클로포스파미드 100 mg/kg i.p, 독소루비신(doxorubicin) 6 mg/kg i.p, 빈크리스틴(vincristine) 0.1 mg/kg i.p 및 덱사메타손(dexamethasone) 0.2 mg/kg i.p. 종양 이식 후(p.t.i) 25일 째, A20 세포주를 접종한 마우스 그룹(n=9)을 1주기의 화학요법(CHOPx1), 2주기의 화학요법(CHOPx2) 또는 대조군으로 PBS를 사용하고 종양 성장을 추적하였다. 종양 부피(mm³)는 2~3일마다 측정되었다. 생체 내 독성을 평가하기 위해 CHOP 투여 전후 체중을 측정했다.

본 연구에서, 마우스는 BAscus et al.(2016) 연구에서 보고된 것과 동일한 방법으로 수용, 접종 및 처리되었다. 마우스를 대조군으로 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED 또는 PBS 로 처리하고, 종양성장을 추적하였다. 덱사메타손 투여는 A20 2M 종양세포 접종 후 7, 10, 18, 23, 24, 28, 35, 및 42일에 15 mg/kg HED로 수행되었다. 종양 부피(mm³)는 2~3일마다 측정하였다. 생체 내 독성을 평가하기 위해 덱사메타손 투여 전 및 후에 체중을 측정했다.

CHOP 및 PBS 대조군과 비교한 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED의 효능은 도 26에 도시하였다. 도 26에 도시된 바와 같이, 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED의 효능은 CHOP의 1사이클보다 크다, 그러나 종양 부피 조절 측면에서는 CHOP의 2 사이클만큼 효과적이지는 않았다.

그러나, 도 27은 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED가 2 사이클의 CHOP에 비해 유리한 독성 프로파일을 갖는다는 것을 입증하며, 2사이클의 CHOP로 처리된 마우스에서 보이는 체중감소(도 27B)는 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED로 처리된 마우스에서 관찰된 것(도 27A)보다 현저히 크다. 또한, 2사이클의 CHOP로 처리된 마우스의 18%가 CHOP 처리로 인해 사망한 반면, 덱사메타손을 처리한 마우스는 사망하지 않았다. 따라서, 덱사메타손은 관련한 독성 없이 전통적인 화학요법만큼 효과적일 수 있다고 결론지을 수 있다. PBS 대조군과 비교한 15 mg/kg 덱사메타손 베이스 HED의 통계적 분석 결과를 도 28A에 도시하였다. 이는 연구동안 여러 시점에서 종양 부피의 유의한 차이를 보여주며, 데갓메타손 처리된 마우스는 현저하게 감소된 종양 부피를 나타낸다.

실시예 11: 화학 요법에 대한 민감성

이 실시예는 글루코코르티코이드 요법이 효과적인 화학 요법에 필요한 용량을 감소 시킨다는 것을 보여준다.

A20 B 세포 림프종 마우스 모델은 실질적으로 실시예 10에 기술 된 바와 같이 사용되었지만 암컷 마우스가 아닌 수컷 마우스가 사용되었다. 마우스를 0 일에 접종했습니다. PBS 단독('대조군') 또는 HED 15mg/kg 덱사메타손 베이스('AVM0703')로 11일 및 14일에 처리된 마우스는 20 일 후 높은 성장률과 함께 지속적인 종양 성장을 나타내었다(도 29 참조). '병용 요법'은 11 일에 HED 15mg/kg 덱사메타손 베이스를 투여 한 후 14일에 Cy/Flu 요법(13.5mg/kg HED 사이클로포스파미드 및 0.8mg/kg HED 플루다라빈)을 투여한 후 종양 부피의 꾸준한 감소를 나타내어, 24 일 및 26 일 후 11일 및 14일에 Cy/Flu 화학 요법 (13.5 mg/kg HED 사이클로포스파미드 및 0.8 mg/kg HED 플루다라빈)의 2회 투여로 처리된 마우스의 종양 크기와 유사한 정도로 감소했다(도 29). 병용 요법 또는 이중 용량의 Cy / Flu로 치료받은 대상은 14 일 후에 종양 부피 감소를 나타낸다. HED 용량 증가(6-12 mg/kg)에서 급성 고용량 덱사메타손으로 처리된 마우스의 임상 화학에 대한 전체 분석은 급성 경구 용량이 안전하고 콜레스테롤 및 총 단백질을 포함하는 임상 화학 수준이 정상 범위를 벗어나지 않음을 나타내었다. 더욱이, DSP 만성 저용량은 체중 증가 및 포도당 증가를 포함하는 바람직하지 않은 부작용을 유발하는 것으로 나타났으나(Ferris & Kahn, 2012), 급성 고용량 덱사메타손 후 포도당 수치가 정상 범위 이상으로 상승하지 않는 것으로 나타났다. 전체적으로 급성 고용량 덱사메타손의 림프절 감소 활성과 이의 안전한 프로파일은 화학 요법에 필적하는 효능을 가진 자가면역 질환에 대한 면역학적 재설정 치료로서의 용도를 강력하게 지지한다.

-1일 또는 -2일 또는 -3일 또는 -4일 또는 -5일에 단일 용량(들)으로 제공될 수 있고 -2일에 약 3 내지 약 12 mg/kg 사이의 덱사메타손과 조합될 수 있는 다른 표준 화학요법은 다음을 포함한다: Cy 120 mg/kg 및 Flu 75 mg/m²; 30 mg/m² Flu 및 50 mg/kg Cy 및 200 cGy TBI; Cy 1500 mg/m² 및 Bendamustine 120 mg/m²; 약 300 mg/m² 및 약 2300 mg/m² 사이 Cy; 약 10 mg/m² 및 약 900 mg/m² Flu; Cy 600 mg/m² 및 Flu 30 mg/m²; Busulfan 및 Melphalan 및 Flu; Busulfan (체중에 따른 용량 조절) 및 Thiotepa (10 mg/kg) 및 Fludarabine (160 mg/m²); Flu 30 mg/m² 및Cy 300 mg/m² 및 Mensa 300 mg/m²; Flu 30 mg/m² 및 Cy 60 mg/m² 및 Alemtuzumab 0.2 mg/kg.

실시예 12: 림프종에서 글루코코르티코이드의 종양 선택성

이 실시예는 고용량 덱사메타손의 투여가 암세포에 우선적으로 영향을 미친다는 것을 나타낸다.

A20 B 세포 림프종 마우스 모델은 실질적으로 실시예 10에 기재된 것과 같이 사용되었으나, 암컷 마우스가 아닌 수컷 마우스가 사용되었다. 마우스는 0일에 접종하였으며, 28일에 PBS(위약) 또는 15mg/kg HED 덱사메타손으로 처리하였다. 세포 수는 Complete Blood Count analyzer (CBC analyzer)사용하여 측정하고 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

Test	1907100234 7/10/2019	1907100232 7/10/2019	1907100231 7/10/2019	1907100230 7/10/2019
처리	15 mg/kg Dexa		Placebo
animal id	12	7	4	1
WBC	860	1150	2170	1.7
RBC	9.32	9.76	8.90	8.87
HGB	14.8	15.2	13.8	14.0
HCT	44.3	47.6	42.3	42.4
MCV	47.5	48.8	47.6	47.8
MCH	15.9	15.6	15.5	15.7
MCHC	33.5	31.9	32.7	32.9
pltc	423	402	496	764
NEU%	70	44	27	23
LYM%	30	53	68	76
MON%	0	3	4	0
EOS%	0	0	1	1
BAS%	0	0	0	0
NEUCT	550	280	488	391
LYMCT	134	683	1473	1292
MONCT	10	35	23	0
EOSCT	158	92	86	17
BASCT	38	57	21	0
Meta%	0	0	0	0
NRBC	0 *	0 *
RETIC	N	N	N	N
Comments	응집으로 인해 정확한 혈소판 수를 얻을 수 없음 50 세포 차이.	응집으로 인해 정확한 혈소판 수를 얻을 수 없으며, 다색증(polychromasia)이 존재함, 이 종의 정상적인 한계 내에 있음.	응집으로 인해 정확한 혈소판 수를 얻을 수 없으며, 다색증(polychromasia)이 존재함, 이 종의 정상적인 한계 내에 있음.	응집으로 인해 정확한 혈소판 수를 얻을 수 없으며, 다색증(polychromasia)이 존재함, 이 종의 정상적인 한계 내에 있음.
PTR	N	N	N	N
GLU	155	133	112	132
BUN	29	28	31	24
CRE	0.5	0.5	0.5	0.5
CA	9.9	10.0	8.6	9.1
PHOS	10.7	9.2	7.7	7.7
TP	5.5	5.4	4.3	4.4
ALB	3.6	3.3	2.8	3.0
GLO	1.9	2.1	1.5	1.4
A/G	1.9	1.6	1.9	2.1
TBIL	0.2	0.1	0.1	0.1
ALP	37	72	78	75
GGT	0	0	0	0
ALT	94	74	41	31
AST	250	267	196	120
CHOL	231	208	112	106

표 2에 제시된 데이터는 종양 보유 마우스의 덱사메타손에 대한 증가된 감수성의 관찰을 뒷받침한다(본 명세서에서 논의됨; 예를 들어 실시예 3 참조). 덱사메타손이 종양에 흡수되는 것으로 나타났기 ??문에, 종양이 있는 마우스에서는 말초 림프고갈이 관찰되지 않는다. 대조적으로 건강한 마우스는 림프고갈을 나타낸다. 이는 덱사메타손이 종양에 직접적인 영향을 미치고, 종양에서 심각한 림프고갈 가능성을 높이며, 따라서, 본 명세서에 기재된 고용량 글루코코르티코이드 요법이 더욱 뛰어난 종양 표적화 프로파일을 가지는 것을 의미한다. 덱사메타손은 종양이 있는 마우스에서 테스트 했을 때, 말초 림프구보다 종양 침윤 림프구(TIL)에 더욱 특이적이다.

실시예 13: 증가하는 용량의 글루코코르티코이드 치료에 대한 종양 반응

이 연구의 목적은 다양한 용량의 덱사메타손이 종양에 미치는 영향을 평가하는 것이다. 10주령 BALB/c 마우스에서 종양을 확립한 후, 마우스를 Excel을 통해 대략적으로 동등한 평균 종양 부피를 갖는 4개의 그룹으로 무작위화 하였다. 마우스에 매주 6mg/kg HED 덱사메타손, 매주 15 mg/kg HED 덱사메타손, 또는 4주기동안 매주 21 mg/kg의 덱사메타손을 투여하였다(각 투여군에서 마우스는 5마리). 마우스는 엔드포인트에 있는 것으로 간주되었고, 공지된 공식 V=LxW²x0.5를 사용하여 종양이 1500mm³ 부피에 도달하면 살해하였다. 도 30에 도시된 것과 같이, 덱사메타손의 용량을 증가시키면 종양 밀도 당 평균세포가 감소한다.

참조문헌

본 발명 및 본 발명이 속하는 최신 기술을 보다 완전하게 설명하고 개시하기 위해 다수의 간행물을 위에서 인용하였다. 이러한 참조문헌에 대한 전체 인용문헌은 아래와 같다:

Aker, A. M. et al. Phenols and parabens in relation to reproductive and thyroid hormones in pregnant women. Environ. Res. 151, 30-37 (2016)

Alexander, T. et al. Hematopoietic stem cell therapy for autoimmune diseases - Clinical experience and mechanisms. J. Autoimmun. 92, 35-46 (2018).

American Diabetes Association. Diagnosis and classification of diabetes mellitus. Diabetes Care 37 Suppl 1, S81-90 (2014)

American Diabetes Association. Type 1 Diabetes. (2018)

Atkinson, M. A., Eisenbarth, G. S. & Michels, A. W. Type 1 diabetes. Lancet (London, England) 383, 69-82 (2014) autoimmune disease. Nat Rev Immunol; 1:147-153 (2001)

Autoimmune disease: Updates from Europe and the United States. Biol Blood Marrow Transplant; 16(1 Suppl): S48-S56. doi:10.1016/j.bbmt.2009.10.034 (2010)

Baraldo, S., Kim Lokar Oliani, Graziella Turato, Renzo Zuin and Marina Saetta, “ The Role of Lymphocytes in the Pathogenesis of Asthma and COPD”, Current Medicinal Chemistry 14: 2250. (2007)

Bascus T., Moreno M., Monaco A., Reyes L, Paolino A., Oliver P., Kramer M.G., Engler H., Pacheco J.P., Grille S., Chabalgoity J. A novel non-Hodgkin lymphoma murine model closer to the standard clinical scenario. J Transl Med. 2016 Nov 22;14(1):323.

Bone, R. N. & Evans-Molina, C. Combination Immunotherapy for Type 1 Diabetes. Curr. Diab. Rep. 17, 50 (2017)

Broder, M. S. et al. The Cost of Hematopoietic Stem-Cell Transplantation in the United States. Am. Heal. drug benefits 10, 366-374 (2017).

Burger, J. A. & Montserrat, E., Coming full circle: 70 years of chronic lymphocytic leukemia cell redistribution, from glucocorticoids to inhibitors of B-cell receptor signaling; Blood 2013 vol. 121 no. 9 1501-1509, doi: https://doi.org/10.1182/blood-2012-08-452607 (2013).

Burkitt's Lymphoma National Treatment Guidelines. Health, IMA World. 2009

Burkit, D. A sarcoma involving the jaws in African children. The British Journal of Surgery., Vols. 46 (197): 218-23 (1958)

Cantu-Rodriguez, O. G. et al. Long-Term Insulin Independence in Type 1 Diabetes Mellitus Using a Simplified Autologous Stem Cell Transplant. J. Clin. Endocrinol. Metab. 101, 2141-2148 (2016)

Couri, C. E. B., Malmegrim, K. C. R. & Oliveira, M. C. New Horizons in the Treatment of Type 1 Diabetes: More Intense Immunosuppression and Beta Cell Replacement. Front. Immunol. 9, 1086 (2018).

Daikeler, T., Tichelli, A. & Passweg, J. Complications of autologous hematopoietic stem cell transplantation for patients with autoimmune diseases. Pediatr. Res. 71, 439-444 (2012).

Darbre, P. D. & Harvey, P. W. Parabens can enable hallmarks and characteristics of cancer in human breast epithelial cells: a review of the literature with reference to new exposure data and regulatory status. J. Appl. Toxicol. 34, 925-938 (2014)

DeFranco, A. L. Germinal centers and autoimmune disease in humans and mice. Immunol. Cell Biol. 94, 918-924 (2016)

Fauci AS. Mechanisms of corticosteroid action on lymphocyte subpopulations. II. Differential effects of in vivo hydrocortisone, prednisone and dexamethasone on in vitro expression of lymphocyte function. Clinical and Experimental Immunology; 24(1):54-62 (1976)

Flammer, J. R. & Rogatsky, I. Minireview: Glucocorticoids in autoimmunity: unexpected targets and mechanisms. Mol. Endocrinol. 25, 1075-1086 (2011)

Henig, I. & Zuckerman, T. Hematopoietic stem cell transplantation-50 years of evolution and future perspectives. Rambam Maimonides Med. J. 5, e0028 (2014).

Kim, J. H., Jin, S.-M., Kim, H. S., Kim, K.-A. & Lee, M.-S. Immunotherapeutic treatment of autoimmune diabetes. Crit. Rev. Immunol. 33, 245-281 (2013)

Loh, Y. et al. Development of a secondary autoimmune disorder after hematopoietic stem cell transplantation for autoimmune diseases: role of conditioning regimen used. Blood 109, 2548-2643 (2007).

Lu, Y., Suzuki, J., Guillioli, M., Umland, O., & Chen, Z. Induction of self-antigen-specific Foxp3+ regulatory T cells in the periphery by lymphodepletion treatment with anti-mouse thymocyte globulin in mice. Immunology 134, 50-59 (2011)

Magdalena, W. et al. Lack of persistent remission following initial recovery in patients with type 1 diabetes treated with autologous peripheral blood stem cell transplantation. Diabetes Res. Clin. Pract. (2018). doi:10.1016/j.diabres.2018.07.020

Malmegrim, K. C. R. et al. Immunological Balance Is Associated with Clinical Outcome after Autologous Hematopoietic Stem Cell Transplantation in Type 1 Diabetes. Front. Immunol. 8, 167 (2017)

Medicines Agency, E. Benzyl alcohol and benzoic acid group used as excipients. (2017)

Menke, A. et al. The prevalence of type 1 diabetes in the United States. Epidemiology (Cambridge, Mass.) 24, 773-774 (2013)

Orem, J., et al. Burkitt's Lymphoma in Africa, a Review of the Epidemiology and Etiology. s.l. : African Health Sciences, Vols. 7.3: 166-175 (2007)

Pallera, A. M. & Schwartzberg, L. S. Managing the toxicity of hematopoietic stem cell transplant. J. Support. Oncol. 2, 223-228-247 (2004).

Pasricha, J. Current regimen of pulse therapy for pemphigus: Minor modifications, improved results. Indian J Dermatol Venereol Leprol 74;3, pp217-221 (2008)

Patt H, Bandgar T, Lila A, Shah N. Management issues with exogenous steroid therapy. Indian Journal of Endocrinology and Metabolism. 17(Suppl 3):S612-S617. doi:10.4103/2230-8210.123548 (2013)

Peng, B.-Y. et al. Addressing Stem Cell Therapeutic Approaches in Pathobiology of Diabetes and Its Complications. J. Diabetes Res. 2018, 7806435 (2018)

Ponchel et al., Interleukin-7 deficiency in rheumatoid arthritis: consequences for therapy-induced lymphopenia. Arthritis Res Ther, 7:R80-R92 (DOI 10.1186/ar1452) (2005)

Savage, J. H., Matsui, E. C., Wood, R. A. & Keet, C. A. Urinary levels of triclosan and parabens are associated with aeroallergen and food sensitization. J. Allergy Clin. Immunol. 130, 453-60.e7 (2012)

Serafin, V., Capuzzo, G., Milani, G., Minuzzo, S. A., Pinazza, M., Bortolozzi, R., Bresolin, S., Porc

, E., Frasson, C., Indraccolo, S., Basso, G., & Accordi, B. Glucocorticoid resistance is reverted by LCK inhibition in pediatric T-cell acute lymphoblastic leukemia. Blood, 130(25), 2750-2761 (2017)

Shlomchik MJ, Craft JE, Mamula MJ. From T to B and back again: positive feedback in systemic

Snarski, E. et al. Immunoablation and autologous hematopoietic stem cell transplantation in the treatment of new-onset type 1 diabetes mellitus: long-term observations. Bone Marrow Transplant. 51, 398-402 (2016)

Spanier, A. J., Fausnight, T., Camacho, T. F. & Braun, J. M. The associations of triclosan and paraben exposure with allergen sensitization and wheeze in children. Allergy asthma Proc. 35, 475-481 (2014)

Sullivan, K., Muraro, P., & Tyndall, A. Hematopoietic cell transplantation for

Swart, J. F. et al. Haematopoietic stem cell transplantation for autoimmune diseases. Nat. Rev. Rheumatol. 13, 244-256 (2017).

Thomas SL, Griffiths C, Smeeth L, Rooney C, Hall AJ. Burden of Mortality Associated With Autoimmune Diseases Among Females in the United Kingdom. American Journal of Public Health. 100(11):2279-2287. doi:10.2105/AJPH.2009.180273 (2010)

Thangavelu G1, Parkman JC, Ewen CL, Uwiera RR, Baldwin TA, Anderson CC. Programmed death-1 is required for systemic self-tolerance in newly generated T cells during the establishment of immune homeostasis. Arthritis Res Ther.7(1):R80-92. (2005)

U.S Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER) Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers. Pharmacology and Toxicology July (2005)

Voltarelli, J. C. et al., Autologous nonmyeloablative hematopoietic stem cell transplantation in newly diagnosed type 1 diabetes mellitus. JAMA 297, 1568-1576 (2007).

Yan, SX et al., Prednisone treatment inhibits the differentiation of B lymphocytes into plasma cells in MRL/MpSlac-lpr mice, Acta Pharmacologica Sinica volume 36, pages 1367-1376 (2015).

Zwang Homeostatic expansion as a barrier to lymphocyte depletion strategies Curr Opin Organ Transplant. August ; 19(4): 357-362 (2014)

번호가 매겨진 단락

우리의 제안의 관점을 설명하는 하기 번호가 매겨진 단락은 설명의 일부이다.

1. 글루코코르티코이드를 포함하는 대상의 림프구 매개 질환의 치료용 약학 조성물로,

상기 치료는 환자에게 약 3 내지 26 mg/kg의 덱사메타손 베이스의 인간 등가 용량(HED)과 동등한 용량으로 환자에게 글루코코르티코이드를 전달하기 위해 약학적 조성물의 용량(dose)을 투여하는 단계를 포함하고,

상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 방부제 및/또는 킬레이트제를 포함하는 약학 조성물.

2. 단락 1에 있어서, 상기 림프구 매개 질환은 자가면역 질환인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

3. 단락 1에 있어서, 상기 림프구 매개 질환은 잔류 HIV 질환인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

4. 단락 1에 있어서, 상기 림프구 매개 질환은 배 중심 림프종인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

5. 단락 1에 있어서, 상기 림프구 매개 질환은 이식편 대 숙주 질환인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

6. 단락 1에 있어서, 상기 림프구 매개 질환은 알레르기 질환이고, 선택적으로 상기 알레르기 질환은 천식인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

7. 단락 2에 있어서, 상기 자가면역 질환은 제1형 당뇨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 경피증, 천포창 및 루푸스로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

8. 상기 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 약학 조성물은 보존제를 포함하고, 상기 보존제는 아황산염(sulfite)인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

9. 상기 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 약학 조성물은 킬레이트제를 포함하고, 상기 킬레이트제는 EDTA인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

10. 상기 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 글루코코르티코이드는 덱사메타손을 포함하고, 선택적으로 상기 덱사메타손은 덱사메타손 베이스, 덱사메타손 나트륨 포스페이트 및 덱사메타손 아세테이트로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

11. 단락 10에 있어서, 상기 덱사메타손은 덱사메타손 나트륨 포스페이트인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

12. 상기 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 약학 조성물의 용량(dose)은 단일 급성 용량 또는 약 72시간동안 제공된 총 용량인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

13. 상기 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 약학 조성물은 정맥 내(IV) 또는 경구 투여로 투여되고, 선택적으로 상기 IV 또는 경구 투여는 단일 IV 또는 경구투여인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

14. 상기 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 약학 조성물은 수성 글루코코르티코이드 용액인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

15. 상기 단락 중 어느 하나에 있어서, 상기 약학 조성물은 덱사메타손 베이스의 적어도 약 4 mg/kg, 적어도 약 5 mg/kg, 적어도 약 6 mg/kg, 적어도 약 7 mg/kg, 적어도 약 8 mg/kg, 적어도 약 9 mg/kg, 적어도 약 10 mg/kg, 적어도 약 11 mg/kg, 적어도 약 12 mg/kg, 적어도 약 15 mg/kg, 적어도 약 18 mg/kg, or 적어도 약 24 mg/kg 의 인간 등가 용량(HED)과 동등한 용량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.

본 발명은 다음의 청구범위를 참조하여 해석되어야 한다:

Claims

글루코코르티코이드(glucocorticoid)를 포함하는 환자에서 림프구 매개 질환(lymphocyte mediated disease)의 치료용 약학 조성물로,
상기 치료는 환자에게 덱사메타손 베이스의 6 내지 26 mg/kg의 인간 등가 용량(HED)과 동등한 용량으로 환자에게 글루코코르티코이드를 전달하기 위해 약학적 조성물의 용량(dose)을 투여하는 단계를 포함하고,
상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 방부제 및/또는 킬레이트제를 포함하며, 및
상기 림프구 매개 질환은 자가면역 질환, 암, 잔류 HIV 질환, 이식편 대 숙주 질환(graft versus host disease) 및 알레르기 질환으로부터 선택되는 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 림프구 매개 질환은 알레르기 질환이고, 상기 알레르기 질환은 천식인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 림프구 매개 질환은 암이고, 상기 암은 배 중심 림프종(germinal centre lymphoma)인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 림프구 매개 질환은 암이고, 상기 암은 백혈병, 림프종 또는 다발성 골수종인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 림프구 매개 질환은 자가면역 질환이고, 상기 자가면역 질환은 제1형 당뇨병(Type 1 diabetes), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 경피증(scleroderma), 천포창(pemphigus) 및 루푸스(lupus)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 보존제를 포함하고, 상기 보존제는 아황산염(sulfite)인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 킬레이트제를 포함하고, 상기 킬레이트제는 EDTA인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 글루코코르티코이드는 덱사메타손을 포함하고, 선택적으로 상기 덱사메타손은 덱사메타손 베이스, 덱사메타손 나트륨 포스페이트(dexamethasone sodium phosphate) 및 덱사메타손 아세테이트(dexamethasone acetate)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제8항에 있어서, 상기 덱사메타손은 덱사메타손 나트륨 포스페이트인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물의 용량(dose)은 단일 급성 용량 또는 약 72시간동안 제공된 총 용량인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 정맥 내(IV) 또는 경구 투여로 투여되고, 선택적으로 상기 IV 또는 경구 투여는 단일 IV 또는 경구 투여인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 수성 글루코코르티코이드 용액인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 덱사메타손 베이스의 적어도 약 7 mg/kg, 적어도 약 8 mg/kg, 적어도 약 9 mg/kg, 적어도 약 10 mg/kg, 적어도 약 11 mg/kg, 적어도 약 12 mg/kg, 적어도 약 15 mg/kg, 적어도 약 18 mg/kg, 또는 적어도 약 24 mg/kg의 인간 등가 용량(HED)과 동등한 용량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.