KR20210068390A

KR20210068390A - 셀룰라이트의 치료를 위한 주사 기법

Info

Publication number: KR20210068390A
Application number: KR1020217004162A
Authority: KR
Inventors: 사지 비자얀; 매튜 더블유. 데이비스; 마이클 맥레인; 조지 옴부로; 토드 커비
Original assignee: 엔도 글로벌 에스테틱스 리미티드
Priority date: 2018-07-12
Filing date: 2019-07-12
Publication date: 2021-06-09
Also published as: MX2021000380A; WO2020021330A2; JP2021532177A; US20210187084A1; BR112021000432A2; CA3106065A1; AU2019309324A1; EP3820437A2; IL280066A; WO2020021330A3; CN112996484A

Abstract

본 발명은 유효량의 콜라게나아제를 투여한 다음 하나 이상의 척도로 셀룰라이트 중증도의 감소를 평가함으로써 인간 피험자의 허벅지 또는 엉덩이에 있는 셀룰라이트를 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

셀룰라이트 치료를 위한 주사 기법

관련 출원

본 출원은 2019년 7월 11일자로 출원된 국제 출원 제PCT/US19/41494호, 2018년 7월 12일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 제62/697,376호 및 2018년 9월 18일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 제62/733,046호에 대한 우선권을 주장하며, 이들은 그 전문이 법률이 허용하는 전체 범위까지 본원에 참조로 포함된다.

기술 분야

본 발명은 셀룰라이트를 평가하고 치료하는 분야에 관한 것이다.

셀룰라이트(부종성 섬유경화성 지방층 병변(edematous fibrosclerotic panniculopathy; EFP)으로도 공지됨)는 피하 접합부에서 구조적 특성과 생체 역학적 특성(즉, 섬세한 봉쇄력 및 압출력) 사이의 불균형으로 이해될 수 있는 미적 상태이다(참조: Rudolph et al, "Structural Gender Dimorphism and the Biomechanics of the Gluteal Subcutaneous Tissue: Implications for the Pathophysiology of Cellulite," Plast . Reconstr . Surg. 2019;143(4):1077-1086). 따라서, 셀룰라이트 치료의 목표는 피하 계면을 강화하고/하거나 다양한 유형의 진피절제술(subcision)을 통해 섬유성 격막(fibrous septae)을 방출하는 것이다(상기 문헌 [Rudolph et al.] 참조). 섬유성 격막은 해부학적 및 이미지 분석 연구를 통해 셀룰라이트의 근본적인 원인이며 셀룰라이트 치료의 대상으로 인식되었다(참조: Hexsel et al, "Side-by-side comparison of areas with and without cellulite depressions using magnetic resonance imaging," Dermatol Surg. 2009;35(10):1471-1477; Hexsel et al. "Magnetic Resonance Imaging of Cellulite Depressed Lesions Successfully Treated by Subcision," Dermatol Surg. 2016;42(5):693-696; Mirrashed F, Sharp JC, Krause V, Morgan J, Tomanek B. "Pilot study of dermal subcutaneous fat structures by MRI in individuals who differ in gender, BMI, and cellulite grading," Skin Res Technol. 2004;10(3):161-168; Nuernberger and Mueller, "So-called cellulite: an invented disease," J Dermatol Surg Oncol .1978;4(3):221-229; Pi

rard et al, "Cellulite: from standing fat herniation to hypodermal stretch marks," Am J Dermatopath. 2000;22(1):34-37; Querleux et al, "Anatomy and physiology of subcutaneous adipose tissue by in vivo magnetic resonance imaging and spectroscopy: relationships with sex and presence of cellulite," Skin Res Technol. 2002;8(2):118-124). 셀룰라이트를 효과적으로 치료하려면 콜라겐으로 구성된 진피 격막(dermal septa)을 용해하거나 파괴하는 치료 방법이 필요하며(도 1) 많은 여성에게 거슬리는 피부 딤플링(dimpling)을 유발한다.

셀룰라이트를 치료하기 위해 사용된 요법이 있지만; 승인된 약리학적 치료법은 없다. 여러 가지 치료 방식에도 불구하고, 현재의 비-약리학적 치료법 중 어느 것도 유익하다는 과학적 증거는 거의 없다. 사실 대부분의 증거는 일화적이거나 주관적이거나 환자 자체 평가에만 근거한다. EFP에 대한 과거 치료법 중 일부에는 체중 감소, 국소 제제, 마사지, 지방 흡인술, 메조테라피(mesotherapy), 고주파, 진피절제술, 파워 진피절제술(powered subcision) 및 레이저 요법이 포함되었다. 이러한 치료법 중 다수는 바람직하지 않은 부작용을 나타낸다(참조: Avram MM, "Cellulite: a review of its physiology and treatment," J Cosmet Laser Ther. 2004;6(4):181-185; Collis et al, "Cellulite treatment: a myth or reality: a prospective randomized, controlled trial of two therapies, endermologie and aminophylline cream," Plast Reconstr Surg. 1999;104(4):1110-1114; Khan MH, Victor F, Rao B, Sadick NS. "Treatment of cellulite: Part I. Pathophysiology." J Am Acad Dermatol. 2010;62(3):361-370; Hexsel DM, Mazzuco R. "Subcision: a treatment for cellulite." Int J Dermatol. 2000;39(7):539-544; Boyce et al, "Clinical evaluation of a device for the treatment of cellulite: Triactive." Am J Cosmet Surg. 2005;22:233-237; DiBernardo BE. "Treatment of cellulite using a 1440-nm pulsed laser with one-year follow-up." Aesthet Surg J. 2011;31(3):328-341). 따라서 많은 의사들은 미적 상태에 대한 개선을 쉽게 얻지 못한다는 견해를 가지고 있다. 따라서, 셀룰라이트가 있는 여성의 미적 결과를 개선하기 위해 안전하고 효과적인 비수술적 치료에 대한 충족되지 않은 요구가 남아 있다.

본 발명은 상기 요구를 충족시키고, 치료적 유효량의 콜라게나아제를 피하 주사함으로써 인간 환자에서 셀룰라이트를 치료하는 방법에 관한 것이다(상세한 설명에 정의된 바와 같음). 이러한 방법은 환자의 셀룰라이트 중증도 기준선을 설정하기 위해 다양한 척도 및 평가 기술을 사용한 환자의 셀룰라이트 중증도의 치료전 평가에 관한 것이다. 그 다음 콜라게나아제를 피하 주사하여 셀룰라이트를 치료한다. 콜라게나아제의 투여량 및 투여는 다양할 수 있으며, 콜라게나아제는 콜라게나아제 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물의 형태일 수 있다. 이러한 부형제는 주사용수, pH 조절제 및 안정제를 포함할 수 있다. 치료 후 평가는 기준선과 비교하여 치료의 효능을 확인하기 위해 수행된다. 본 발명의 치료 방법은 셀룰라이트 외관을 현저하게 감소시킨다.

상세한 설명에서 설명된 바와 같이, 네 단계의 치료가 있지만, 이는 선택 사항이고 순서가 엄격하게 제한되는 것은 아니다.

1. 제1 단계에서 임상의는 치료할 셀룰라이트 딤플(dimple)을 선택한다. 다음으로, 주사 전에 평가가 수행되고, 예를 들어, 임상의 및/또는 환자는 다음의 척도 또는 기타 평가 방법 중 하나 이상을 사용하여 셀룰라이트의 치료전 중증도를 독립적으로 평가한다(상세한 설명에 정의된 바와 같음):

o 헥셀 셀룰라이트 중증도 척도(Hexsel Cellulite Severity Scale; 헥셀 CSS)

o 헥셀 함몰부 깊이 척도(Hexsel Depression Depth Score)

o 리커트 척도(Likert Scale)

o 딤플 분석

o 임상의가 보고한 광수치 셀룰라이트 중증도 척도(Clinician Reported Photonumeric Cellulite Severity Scale; CR-PCSS)

o 환자가 보고한 광수치 셀룰라이트 중증도 척도(PR-PCSS)

o 연구자의 전반적인 미적 개선 척도(Investigator Global Aesthetic Improvement Scale; I-GAIS)

o 피험자의 전반적인 미적 개선 척도(S-GAIS)

o 환자가 보고한 셀룰라이트 영향 척도(Patient Reported Cellulite Impact Scale; PR-CIS)

o 간이형 PR-CIS

o 피험자 자가 평가 척도(Subject Self-Rating Scale; SSRS)

o 셀룰라이트 치료에 대한 피험자 만족도(Subject Satisfaction with Cellulite Treatment; SSCT)

o 셀룰라이트 중증도에 대한 임상의 평가(사진 또는 기타 이미지)

o 바디-Q(Body-Q)

o 피츠패트릭 척도(Fitzpatrick scale)

o 허벅지 셀룰라이트 효능 척도(Thigh Cellulite Efficacy Scale)(PR-TCES; CR-TCES)

o 임상의 및/또는 환자가 셀룰라이트 중증도, 개선 및/또는 환자 만족도를 평가하기 위해 사용하는 검증된 임의의 광수치 또는 기타 척도(예를 들어, 헥셀-메르츠 척도(Hexsel-Merz Scale)(미국 피부과 학회(American Academy of Dermatology) 2019년 회의의 포스터 간행물).

또한, 임상의와 환자에 의한 치료전 평가는 각각 셀룰라이트 중증도 등급 또는 수준이 상이한 일련의 3개 내지 15개의 사진, 삽화, 그림, 컴퓨터 이미지, 3-D 모델, MRI 이미지, 서모그램(thermogram), 초음파 조영 사진, 환자의 구두 피드백 등을 분석하여 수행될 수 있다.

2. 제2 치료 단계에서 치료할 딤플은 점 또는 기타 표시로 임상의가 표시한다(도 6). 저점이 있다면, 이는 통상적으로 딤플의 제일 저점에 배치된다. 더 많은 사진을 찍고 다른 평가를 수행할 수 있다.

3. 제3 치료 단계에서 치료적 유효량의 콜라게나아제가 하나 이상의 치료 부위에서 단일 용량 또는 분할 용량으로 딤플(들)에 피하 주사된다(상세한 설명에 정의된 바와 같음). 용량 및 주사 기법은 다양하다. 예를 들어, 방법은 다음의 절차에 따라 깊은 주사 및 얕은 주사를 포함할 수 있다(도 10(치료 IV)에 도시됨)):

ㆍ 바늘을 주사 부위의 피부 표면에 대해 대략 30° 각도로 피험자의 머리를 향해 놓고, 바늘을 끝까지(1인치) 밀어 넣고 주사기 플런저(syringe plunger)를 부드럽게 밀어 넣어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 대해 각도를 30°로 유지하면서 바늘 길이의 약 절반(1/2인치)을 부드럽게 빼내고, 피험자의 한쪽으로 바늘을 재배치한다(위치 B). 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 약 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하고, 바늘을 위치 A와 B 사이의 중간으로 재배치하고(위치 C, 피험자의 어깨 쪽), 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 약 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 바늘의 30° 각도를 유지하고, 바늘을 위치 B(위치 D)와 정확히 반대 방향으로 재배치하고, 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 약 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 바늘의 30° 각도를 유지하고, 바늘을 위치 A와 D 사이의 중간(위치 E, 피험자의 다른 어깨 쪽)으로 재배치하고, 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 약 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 콜라게나아제 조성물 1.5mL가 포함된 3mL 주사기는 한쪽 주사 부위에 충분하다.

ㆍ 각 치료 부위(각 엉덩이 또는 각 허벅지)에 12개의 3mL 주사기를 사용하여 12곳의 주사 부위에 1.5 mL를 총 12번 주사로 투여한다(총 18.0mL, 각각 0.3mL씩 5회 분취량).

ㆍ 각 치료 방문시 2곳의 치료 부위(엉덩이 2곳 또는 허벅지 2곳)에 총 24회 주사한다.

또 다른 예에서, 바늘은 딤플에 세 가지 각도, 즉 피부 표면에 대해 약 90°, 피부 표면 및 딤플의 장축에 대해 약 45°, 피부 표면 및 딤플의 장축에 대해 약 135°로 주입될 수 있다. 하나의 비제한적인 예에서, 상기 세 가지 주사는 0.1mL 구배와 30-게이지 ½인치 바늘이 있는 1mL 주사기를 사용하여 0.1mL 분취량 3개로 딤플에 직접 전달된다. 기타 기술은 상세한 설명에 설명되어 있다.

4. 제4 치료 단계에서는 상기 언급된 척도 및 기타 평가 방법(예를 들어, 멍(bruising) 분석)을 사용하여 주사 후 평가를 수행한다. 특정 콜라게나아제 치료의 효능은 단일 임상의 등급 또는 환자 등급을 기반으로 하거나, 임상의 등급 및 환자 등급을 포함하는 복합 평가변수를 기반으로 할 수 있으며, 여기서 개선은 동일한 피험자에 대해 두 척도 모두에서 나타나며, 즉 미리 지정된 개선 수준이 임상의와 환자 척도 모두에서 입증된다.

콜라게나아제는 단일 용량 또는 분할 용량으로 약 0.01mg 내지 약 20mg의 양으로 주입되며, 다음의 특징 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 0.08 내지 7.70(SRC 검정), 또는 약 0.3 내지 30.5(GPA 검정)의 V_max(분^-1)

ㆍ 약 4.1 내지 410 나노몰(SRC 검정), 또는 약 0.03 내지 3.1mM(GPA 검정)의 K_M

ㆍ 약 1.1 내지 107(SRC 검정), 또는 약 93 내지 9,179(GPA 검정)의 K_cat(초^-1)

ㆍ 약 376 내지 37,222(SRC 검정), 또는 약 4 내지 428(GPA 검정)의 1/ K_cat, 마이크로초

ㆍ 약 5,140 내지 508,814(SRC 검정), 또는 약 60 내지 5,934(GPA 검정)의 K_cat/K_M, mM^-1초^-1

ㆍ 약 60 kDa 내지 약 130 kDa, 또는 약 70 내지 약 130 kDa, 또는 약 80 내지 약 120 kDa, 또는 약 90 내지 약 120 kDa, 또는 약 100 내지 약 110 kDa의 분자 질량.

ㆍ 역상 HPLC(고압 액체 크로마토그래피)로 측정시 적어도 80%의 면적 순도

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도(specific activity))

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 클로스트리파인(clostripain), 젤라티나아제(gelatinase), 및 류펩틴(leupeptin)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 불순물 면적이 1% 이하

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수(bioburden)

본원에 사용된 바와 같이, 관련 동역학 파라미터는 본원에 기재된 바와 같이 큐벳(cuvette) 검정 또는 마이크로플레이트 검정(예를 들어, SRC 큐벳 검정, SRC 마이크로플레이트 검정, GPA 큐벳 검정, 및 GPA 마이크로플레이트 검정)을 사용하여 측정될 수 있다.

일부 구현예에서, 조성물에 존재하는 콜라게나아제는 대략 1:1의 비율로 콜라게나아제 I 및 콜라게나아제 II를 포함한다. 0.1-2:1, 또는 0.25-2:1, 또는 0.5-2:1, 또는 0.75-2:1, 또는 1:0.1-2, 또는 1:0.25-2, 또는 1:0.5-2, 또는 1:0.75-2, 또는 1:0, 또는 0:1과 같이 다른 비율의 콜라게나아제 I 및 콜라게나아제 II가 사용될 수 있다. 각각의 콜라게나아제 I 및 콜라게나아제 II는 역상 HPLC에 의해 측정될 때 면적 순도가 적어도 80%, 또는 85%, 또는 90%, 또는 91%, 또는 92%, 또는 93%, 또는 94%, 또는 95%, 또는 96%, 또는 97%, 또는 98%, 또는 99%, 또는 100%일 수 있다.

또 다른 구현예에서, 콜라게나아제 조성물은 AUX I 및 AUX II 비율이 대략 1:1인 CCH(상세한 설명에 정의된 바와 같음)를 포함한다. 0.1-2:1, 또는 0.25-2:1, 또는 0.5-2:1, 또는 0.75-2:1, 또는 1:0.1-2, 또는 1:0.25-2, 또는 1:0.5-2, 또는 1:0.75-2, 또는 1:0, 또는 0:1과 같이 다른 비율의 AUX I 및 AUX II가 사용될 수 있다. 각각의 AUX I 및 AUX II는 역상 HPLC에 의해 측정될 때 면적 순도가 적어도 80%, 또는 85%, 또는 90%, 또는 91%, 또는 92%, 또는 93%, 또는 94%, 또는 95%, 또는 96%, 또는 97%, 또는 98%, 또는 99%, 또는 100%일 수 있다.

다른 예에서, 콜라게나아제 조성물은 액체일 수 있거나 희석제를 사용하여 동결건조된 고체 형태로부터 재구성된다. 혼합물의 용량은 희석제와 상관없이 존재하는 콜라게나아제의 양에 의해 측정되며, 1회 이상의 주사에서 약 0.1mg 내지 약 20mg을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 투여되는 용량은 1회 이상의 주사에서 약 0.06mg, 0.48mg, 0.84mg, 1.68mg, 2.52mg, 3.36mg, 4.2mg, 5.04mg, 5.88mg, 6.72mg, 7.56mg, 또는 8.4mg이다. 예를 들어, 약 0.06mg, 0.48mg, 0.84mg, 또는 1.68mg이 약 12회 분할 주사로 투여된다. 주사되는 콜라게나아제 조성물의 용적은 주사당 0.01mL 내지 3mL, 또는 치료 방문당 총 약 0.2mL 내지 150mL의 범위일 수 있다(상세한 설명에 정의된 바와 같음). 특정 구현예에서, 상기 용량은 CCH를 포함하는 콜라게나아제 조성물에 대한 것이다. 또 다른 구현예에서, 상기 용량은 다음의 특성 중 하나 이상을 갖는 콜라게나아제 조성물에 대한 것이다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 클로스트리파인, 젤라티나아제, 및 류펩틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 불순물 면적이 1% 이하

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

또 다른 구현예에서, 약 0.84mg의 CCH가 치료 부위당 약 12회의 균등하게 분할된 주사로 주입된다(약 0.07mg x 12회 주사 = 약 0.84mg). 일부 경우에, 0.84mg을 사용한 이러한 치료는 1회 치료 방문시 발생하거나 2, 3, 4 또는 5회 치료 방문에 대해 10 내지 40일마다 발생한다. 다른 경우에, 2회, 3회, 4회 또는 5회 치료 방문에 대해 10 내지 40일마다 하나 이상의 치료 부위에 0.84mg을 주입한다. 이러한 주사는 5회 이상의 치료 방문시 투여될 수 있다.

또한, 상세한 설명에 기재된 바와 같이, 콜라게나아제 주사는 셀룰라이트 치료에 효과적이다. 예를 들어, 헥셀 함몰부 깊이 척도, 리커트 척도 점수 및 딤플 분석에 의해 셀룰라이트 외관의 현저한 개선이 입증된다.

본 조성물, 척도, 방법 등의 추가 구현예는 다음의 설명, 도면, 실시예 및 청구범위로부터 명백해질 것이다. 상기 및 다음의 설명으로부터 이해될 수 있는 바와 같이, 본원에 기재된 각각의 그리고 모든 특징, 및 이러한 특징들 중 둘 이상의 각각의 그리고 모든 조합은 이러한 조합에 포함된 특징이 서로 모순되지 않는다면 본 발명의 범위 내에 포함된다. 또한, 임의의 특징 또는 특징의 조합은 임의의 구현예 또는 측면에서 특별히 제외될 수 있다. 추가의 측면 및 구현예는 특히 첨부된 실시예 및 도면과 함께 고려될 때 다음의 설명 및 청구범위에 제시된다.

특허 또는 출원 파일은 컬러로 작성된 적어도 하나의 도면을 포함한다. 컬러 도면이 있는 이 특허 또는 특허 출원 공개공보의 사본은 요청시 필요한 비용이 지불되면 해당 특허청에 의해 제공될 것이다.
전술한 구현예의 특징은 첨부된 도면을 참조하여 취해진 다음의 상세한 설명을 참조함으로써 더 쉽게 이해될 것이며, 여기서:
도 1은 콜라겐 격막을 묘사하는 피부 및 피하 조직의 단면도이다.
도 2는 AUX-I의 아미노산 서열 목록(서열번호 5)이다.
도 3은 AUX-II의 아미노산 서열 목록(서열번호 6)이다.
도 4는 헥셀 셀룰라이트 중증도 척도(CSS) (B) 함몰부의 깊이를 보여준다.
도 5는 PR- 및 CR-허벅지 셀룰라이트 효능 척도를 보여준다.
도 6은 엉덩이 상의 대상 딤플 및 주사 부위 표시의 예를 보여준다.
도 7은 치료 I(얕은 주사, 3회 분취량)에 사용된 주사 기법을 묘사한다.
도 8은 치료 II(얕은 주사, 1회 분취량)에 사용된 주사 기법을 묘사한다.
도 9는 치료 III(깊은 주사, 1회 분취량)에 사용된 주사 기법을 묘사한다.
도 10은 치료 IV(깊은 주사 및 얕은 주사, 5회 분취량)에 사용된 주사 기법을 묘사한다.
도 11은 치료 V(얕은 주사, 4회 분취량)에 사용된 주사 기법을 묘사한다.
도 12는 콜라게나아제 또는 위약을 셀룰라이트 딤플에 투여하는 데 유용한 주사 기법의 예시이다.
도 13은 격자에 대한 3-D 정합이다(1일 표시 전).
도 14는 이미지 등록을 위한 거리별 색상 지도(color-by-distance map)이다.
도 15는 관심 부위의 주요 딤플이다.
도 16은 관심 부위의 주요 딤플을 전환(transposing)한 것이다.
도 17은 피험자의 왼쪽 엉덩이에 주사 후 4일, 8일 및 15일에 정상 조직 및 멍든 조직의 윤곽을 묘사한다.
도 18a는 왼쪽 엉덩이에 주사 후 4일, 8일 및 15일에 정상 조직 및 멍든 조직의 윤곽을 묘사하고, 이러한 조직에서 L*, a* 및 b* 색상 측정값을 제공한다.
도 18b는 왼쪽 엉덩이에 주사 후 4일, 8일 및 15일에 정상 조직 및 멍든 조직의 윤곽을 묘사한다. 정상 및 멍든 조직에 대한 평균 색상 및 ΔE는 L*a*b* 색상값에 기초하여 계산된다.
도 19a 내지 19c는 딤플 분석을 묘사한다. 도 19a는 딤플 분석 파라미터에서 1일 표시 전 이미지로부터 관찰 및 변화를 보여준다. 도 19b는 딤플의 최대 길이와 최대 너비를 보여준다. 도 19c는 딤플 기저부와 보간된(interpolated) 표면 사이의 표면적 및 용적을 보여준다.
도 20은 허벅지의 부종성 섬유경화성 지방층 병변의 치료에서 CCH의 2b상, 무작위, 이중 맹검, 위약 대조 연구의 연구 흐름도를 도시한다.

이제 다양한 측면 및 구현예가 본원에 완전히 설명될 것이다. 그러나, 이러한 측면 및 구현예는 다수의 상이한 형태로 구현될 수 있으며, 제한하는 것으로 해석되어서는 안되며; 오히려, 이러한 구현예는 본 개시내용이 철저하고 완전할 것이며, 본 주제의 범위를 당업자에게 완전히 전달할 수 있도록 제공된다. 본원에 인용된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은, 전술되든 후술되든, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

A. 정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 용어 및 문구는 용어 또는 문구가 사용되는 문맥에서 상반되는 것이 명확하게 표시되거나 명백하지 않는 한, 용어 및 문구가 당해 분야에서 획득한 의미를 포함한다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 이제 특정 방법 및 물질이 설명된다.

달리 명시되지 않는 한, 개별 수치 값의 사용은 마치 값 앞에 "약" 또는 "대략"이라는 단어가 선행된 것처럼 근사치로 명시된다. 유사하게, 달리 분명히 명시되지 않는 한, 본 출원에 지정된 다양한 범위 내의 수치 값은 언급된 범위 내의 최소 및 최대 값이 모두 앞에 "약" 또는 "대략"이라는 단어가 선행된 것처럼 근사치로 명시된다. 이러한 방식으로, 명시된 범위의 위와 아래의 편차가 범위 내의 값과 실질적으로 동일한 결과를 얻기 위해 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 수치 값을 지칭할 때 "약" 및 "대략"이라는 용어는 개시된 주제가 가장 밀접하게 관련된 분야 또는 쟁점이 되고 있는 범위 또는 요소와 관련된 분야의 숙련가에게 평범하고 일반적인 의미를 가져야 한다. 엄격한 수치 경계에서 확장되는 양은 여러 요인에 따라 달라진다. 예를 들어, 고려될 수 있는 몇몇 인자에는 요소의 임계(criticality) 및/또는 주어진 변동량이 청구된 주제의 성능에 미칠 영향, 뿐만 아니라 당업자에게 공지된 다른 고려 사항이 포함된다. 본원에 사용된 바와 같이, 상이한 수치 값에 대해 상이한 정도의 유효 숫자를 사용한다고 해서 "약" 또는 "대략"이라는 단어를 사용하여 특정 수치 값 또는 범위를 확장하는 방법을 제한하는 것은 아니다. 따라서 일반적으로 "약" 또는 "대략"은 수치 값을 확장시킨다. 또한, 범위의 개시는 최소값과 최대값 사이의 모든 값과 "약" 또는 "대략"이라는 용어의 사용에 의해 제공되는 범위의 확장을 포함하는 연속 범위로 의도된다. 결과적으로, 본원에서 값의 범위를 나열하는 것은 단지 그 범위 내에 있는 각각의 개별 값을 개별적으로 언급하는 약식 방법으로 사용되는 것으로 의도되고, 각각의 개별 값은 마치 본원에 개별적으로 나열된 것처럼 명세서에 포함된다.

본원에 사용된 "환부" 또는 "치료 부위"는 콜라게나아제(하기 정의됨)로 치료를 받거나 치료받은 인간 환자에서의 셀룰라이트 부위를 의미한다. 여기에는 사분면(즉, 왼쪽 엉덩이, 오른쪽 엉덩이, 왼쪽 후외측 허벅지, 오른쪽 후외측 허벅지)이 포함될 수 있다. 환부 또는 치료 부위는 엉덩이 또는 허벅지에 제한되지 않는다. 오히려 셀룰라이트가 있는 신체의 임의의 부위를 치료 부위로 취급할 수 있다.

본원에 사용된 "이상 사례" 또는 "AE"는 신체 구조(징후), 신체 기능(증상), 실험실 결과(예를 들어, 화학, ECG, X-선 등)의 모든 바람직하지 않거나 의도하지 않은 변화 또는 연구 약물과 관련이 있는 것으로 간주되는지 여부에 관계없이 연구 약물의 사용과 일시적으로 관련된 기존 상태의 악화를 의미한다.

본원에 사용된 "바디-Q"는 메모리얼 슬론 케터링 암 센터(Memorial Sloan Kettering Cancer Center)의 라이센스 하에 상업적으로 이용 가능한 환자가 보고한 결과 도구이다. 이는 환자의 신체 윤곽 및/또는 체중 감소에 대한 인식을 기반으로 한다. 이는 18개의 독립적으로 작동하는 척도를 통해 외모, 건강과 관련된 삶의 질(health-related quality of life; HRQL), 및 의료 서비스에 대한 환자 경험의 세 가지 영역을 측정한다. 환자가 보고한 결과 도구는 문헌(참조: BODY-Q: User's Manual BODY-Q: User's Manual, Version 1.0, July 2015, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, McMaster University and Stefan Cano)에 기재되어 있다. 바디-Q에는 셀룰라이트를 측정하는 척도가 포함된다. 문헌(참조: https://www.mskcc.org/sites/default/files/node/174457/documents/body-q-users-guide.pdf (2019. 7. 3 접속))을 참조한다. 셀룰라이트의 경우, 지난주의 시간 프레임 동안 "전혀"에서 "대단히 신경쓰임"에 이르는 응답 옵션이 있고, 플레쉬-킨카이드(Flesch-Kincaid) 등급 독해 수준을 추정하는 16개의 척도 항목이 있다. 환자에게 다음과 같이 질문한다: "지난주에 셀룰라이트를 염두에 두고, 얼마나 신경이 쓰였습니까?: [환자가 응답을 1- 대단히 신경쓰임; 2-보통 신경쓰임; 3-조금 신경쓰임; 4-전혀 신경쓰이지 않음으로 순위를 매기는 16개의 질문이 이어짐]. 점수는 16점(대단히 신경쓰임)에서 64점(전혀 아님)까지이다.

통상적으로, 멍의 임상 검사는 피험자의 의학적, 외과적 및 병용 약물 이력의 평가와 함께 멍든 부위 및 주변 부위의 육안 검사를 포함한다. 이 해석의 결과는 주관적이며, 관측 기하학(viewing geometry), 주변 조명, 노출되지 않은 주변 피부의 색상, 관찰자의 경험 및 시력을 포함하여, 관련 없는 여러 요인의 영향을 받는다. 본원에 사용된 바와 같은 "멍 분석"은 모든 피험자 이미지에 균일하게 적용된 미국 특허 공개공보 제2019/0035080호에 개시된 객관적 이미지 캡처 및 추적 방법론을 사용하여 피험자의 콜라게나아제-처리된 부위의 이미지로부터 평가된 피부색의 가시적 변화를 감지하는 것을 의미한다. 이 객관적 분석은 피험자 내(상이한 시점에 동일한 피험자 내) 및 피험자 간(상이한 피험자 간) 수준의 멍을 정량화, 구별 및 평가할 수 있는 능력을 제공함으로써 의료인에 의한 멍에 대한 시각적 및 임상 검사를 돕거나 심지어 대체할 가능성이 있다. 이 분석은 두 색상이 동시에 적색과 녹색이 되거나 동시에 황색과 청색이 될 수 없다는 색-반대 이론(opponent)을 명시한 후에 모델링된 국제 조명 위원회(Commission Internationale de l'Eclairage; CIE)에서 정의한 L^*a^*b^* 색 공간(color space)을 사용한다. 아래에 표시된 바와 같이, L^*은 밝기/어둡기를 나타내고, a^*는 적색/녹색 좌표이고, b^*는 황색/청색 좌표이다. L^*(ΔL^*), a^*(Δa^*) 및 b^*(Δb^*)에 대한 델타는 양수(+) 또는 음수(-)일 수 있다. 그러나 델타 E(ΔE^*)는 항상 양수이다.

ㆍ ΔL^*(L^* 샘플 - L^* 표준) = 밝기와 어둡기 간의 차이(+ = 더 밝음, - = 더 어두움); 낮은 숫자(0-50)는 어두움을 나타내고, 높은 숫자(51-100)는 밝음을 나타냄

ㆍ Δa^*(a^* 샘플 - a^* 표준) = 적색과 녹색 간의 차이(+ = 더 적색임, - = 더 녹색임)

ㆍ Δb^*(b^* 샘플 - b^* 표준) = 황색과 청색 간의 차이(+ = 더 황색임, - = 더 청색임)

피험자의 색상을 완전히 설명하려면 세 가지 값이 모두 필요하다(이 경우 피험자의 치료된 부위 이미지에 캡처된 멍). L^*a^*b^* 값의 데이터 출력과 함께 콜라게나아제로 치료된 부위(프로토콜 지정 시점의 치료전 및 치료 후 이미지)의 이미지 분석을 위한 객관적인 방법론을 통해 피부색과 그 안의 임의의 변화를 빠르고 쉽고 정확하고 반복 가능하며 편향되지 않게 정량화할 수 있다. 이 방법론은 이미지의 기존 주관적인 시각적 추정과 관련된 내재된 가변성을 배제한다. ΔE는 다음과 같이 계산된다:

ΔE(멍든 조직과 정상 조직 간의 색상 차이) = SQRT[(L^* _B-L^* _N)² + (A^* _B-A^* _N)² + (B^* _B-B^* _N)²], 여기서

L^* _B = 멍든 조직 L^*

L^* _N = 정상 조직 L^*

A^* _B = 멍든 조직 A^*

A^* _N = 정상 조직 A^*

B^* _B = 멍든 조직 B^*

B^* _N = 정상 조직 B^*

도 18b는 치료 부위의 멍 분석을 보여준다.

본원에 사용된 "CCH"는 클로스트리디움 히스톨리티쿰(Clostridium histolyticum)(하테와야 히스톨리티카(Hathewaya histolytica)로도 공지됨)의 발효로 얻은 대략 1:1 비율의 콜라게나아제의 AUX-I(서열번호 5(도 2)) 및 AUX-II(서열번호 6(도 3)) 혼합물을 의미한다. CCH는 특정 부형제와 함께 AUX-I 및 AUX-II 혼합물을 포함하는 상표 지아플렉스(XIAFLEX)®로 동결건조 분말로 상업적으로 입수 가능하지만, CCH는 다른 적합한 부형제와 함께 사용될 수 있다.

본원에 사용된 "임상의가 보고한 광수치 셀룰라이트 중증도 척도(CR-PCSS)"는 의사/임상의가 사용하고, 셀룰라이트의 중증도를 5개의 단계로 평가하도록 설계된 PCT 특허 출원 PCT/US2018/020551(2018년 9월 7일자로 WO2018/160905로 공개됨)에 설명된 광수치 척도이다.

본원에서 달리 제공된 경우를 제외하고, "콜라게나아제"는 다음 중 어느 것을 의미한다: (a) EC 3.4.24.3(https://www.brenda-enzymes.org/enzyme.php?ecno=3.4.24.3 (2019. 7. 3 접속)에 정의된 활성을 갖는 콜라게나아제(돌연변이 포함); (b) 클로스트리디움 히스톨리티쿰(하테와야 히 스톨리티카로도 공지됨)의 발효로 생산된 콜라게나아제; (c) CCH(상기 정의된 바와 같음); (d) BLAST로 결정된 바와 같이 AUX-I과 적어도 50%의 서열 정렬을 갖는 콜라게나아제; (e) BLAST로 결정된 바와 같이 AUX-II와 적어도 50%의 서열 정렬을 갖는 콜라게나아제; (f) 다른 공급 유기체(즉, 비-클로스트리디움 히스톨리티쿰)의 발효로 생산된 콜라게나아제, 예를 들어, 포유류, 갑각류, 균류, 세균성 또는 미생물 콜라게나아제; (g) 재조합 기술로 획득한 콜라게나아제; (h) 분자 질량이 약 65kDa 내지 약 130kDa인 콜라게나아제; (i) 부류 I 또는 부류 II로 지정된 콜라게나아제(콜라게나아제 I(또는 1), 콜라게나아제 II(또는 2), 유형 I 콜라게나아제, 유형 2 콜라게나아제로도 지칭됨); (j) 콜라게나아제 I과 II의 혼합물; (k) 균주 JCM 1403(ATCC 19401) 또는 이의 유도체로부터의 콜라게나아제; (l) 균주 ATCC 21000 또는 이의 유도체로부터의 콜라게나아제; (m) ATCC 69334 또는 이의 유도체로부터의 콜라게나아제; (n) C. 퍼프링겐스(C. perfringens) 유래 콜라게나아제; (o) 비브리오 알기놀리티쿠스(Vibrio alginolyticus) 유래 콜라게나아제; (p) 스트렙토마이세 스(Streptomyces) 유래 콜라게나아제; (q) 슈도모나스(Pseudomonas) 유래 콜라게나아제; (r) 아크로모박터 아이오파거스(Achromobacter iophagus) 유래 콜라게나아제 (s) 워싱턴 바이오케미칼 코포레이션(Worthington Biochemical Corp.)(www. Worthington-biochem.com; "Product Highlights")에 기재된 콜라게나아제; (t) 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)(www.sigma-aldrich.com)에 기재된 콜라게나아제; (u) 다음의 특성 중 하나 이상을 갖는 콜라게나아제:

ㆍ 약 5,140 내지 508,814(SRC 검정), 또는 약 60 내지 5,934(GPA 검정)의 K_cat/K_M, mM^-1초^-1;

(v) 노르트마르크 아르츠나이미텔 게엠베하 운트 콤파니 카게(Nordmark Arzneimittel GmbH & Co. KG)에 기재된 콜라게나아제; (w) 균주 004 유래 콜라게나아제; 또는 (x) 전술한 것들 중 어느 것의 등가물 또는 혼합물. 본원의 개시내용에 사용될 수 있는 콜라게나아제의 비제한적인 예는 미국 특허 제7,811,560호; 제9,757,435호; 제9,744,138호; 및 제WO2012/125948호에 기재되어 있다.

본원에 사용된 "딤플 분석"은 하나 이상의 선택된 딤플의 분석을 의미하며, 여기서 딤플 용적, 길이, 폭 및 표면적과 같은 파라미터가 측정된다. 측정은 에크하우스(Eckhouse) 등 WO 2018/116304 및 WO 2018/116305에 기재된 방법, 체리 이미징(Cherry Imaging)(www.cherryimaging.com) 및 캔필드 사이언티픽, 인코포레이티드(Canfield Scientific, Inc)로부터 이용 가능한 방법과 같은 여러 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다. 또한 문헌(참조: Salameh et al., "Novel Stereoscopic Optical System for Objectively Measuring Above-Surface Scar Volume―First-Time Quantification of Responses to Various Treatment Modalities," Dermatol. Surg. 00:1-7 (2017); 및 미국 특허 제9,996,923호)을 참고한다. 이러한 용적, 길이, 너비 및 표면적의 측정은 디지털 3-D 그레이스케일 이미지(X 및 Y 축 회전 기능 포함) 및 디지털 3-D 텍스처 및 리트(lit) 이미지(X 및 Y 회전 기능 포함)를 그러한 이미지를 분석하는 컴퓨터 프로그램과 함께 사용하여 계산할 수 있다. 예로서, 엉덩이 치료 부위 경우, 치료전후의 각 환자에 대해 치료된 왼쪽 엉덩이 및/또는 치료된 오른쪽 엉덩이의 이미지를 촬영할 수 있다. 허벅지 치료 부위의 경우, 치료전후 0도, 45도 및 90도에서 각각의 허벅지 치료 부위의 이미지를 촬영할 수 있다. 허벅지 치료 부위의 경우, 캔필드 사이언티픽의 방법을 사용하여 촬영한 이미지는 치료전후 0도, 45도 및 90도에서 각각의 허벅지 치료 부위를 촬영할 수 있다.

본원에 사용된 "지속성"은 치료 효과가 지속되는 기간을 의미한다. 이 기간은 약 3개월 내지 약 20년, 또는 약 1년 내지 19년, 또는 약 2년 내지 18년, 또는 약 3년 내지 17년, 또는 약 4년 내지 16년, 또는 약 5년 내지 15년, 또는 약 6년 내지 14년, 또는 약 7년 내지 13년, 또는 약 8년 내지 12년, 또는 약 9년 내지 11년의 범위일 수 있다. 상기 기간은 약 6개월, 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 약 5년, 약 10년, 약 15년 또는 약 20년 동안일 수 있다.

본원에 사용된 "피츠패트릭 척도"는 표 1에 나타낸 피험자의 피부 유형을 평가하기 위해 사용되는 척도를 의미한다.

본원에 사용된 "헥셀 셀룰라이트 중증도 척도" 또는 "헥셀 CSS" 또는 "셀룰라이트 중증도 척도(CSS)"는 셀룰라이트의 5가지 주요 형태학적 특징을 평가하는 다음의 광수치 척도를 의미한다(표 2):

점수의 합은 다음과 같이 분류된다.

본원에 사용된 "헥셀 함몰부 깊이 척도"는 헥셀 CSS로부터 (B) 함몰부 깊이만 평가하는 것을 의미한다(도 4):

0=함몰부 없음

1=표면적 함몰부

2=중간 깊이 함몰부

3=깊은 함몰부.

본원에 사용된 "이미지(Image or Imagery)"는 사진, 삽화, 그림, 모델, 3-D 모델, 컴퓨터 생성 이미지, MRI 이미지 등을 의미한다.

본원에 사용된 "리커트 척도 점수"는 1일 치료전(기준선) 셀룰라이트의 사진(2-D 컬러, 3-D 컬러 및 3-D 그레이스케일)을 치료 후 방문에 대한 사진과 비교함으로써 각각의 치료 후 방문시 치료 부위(엉덩이 또는 허벅지)의 변화에 대해 독립적인 맹검 평가자에 의해 확인된 점수를 의미한다. 점수는 다음의 5점 리커트 척도에서 캡처된다:

"임의의" 또는 "임의로"는 이후에 설명되는 요소, 구성 요소 또는 상황이 발생하거나 발생하지 않을 수 있음을 의미하므로, 설명에는 요소, 구성 요소 또는 상황이 발생하는 경우와 발생하지 않는 경우가 포함된다.

본원에 사용된 "환자가 보고한 셀룰라이트 영향 척도(PR-CIS)"는 6개의 질문으로 구성된 설문 조사를 사용하여 셀룰라이트의 시각적 및 정서적 영향(만족함, 신경쓰임, 의식적, 창피함, 늙어보임, 또는 과체중 또는 몸매가 엉망인 것처럼 보임)을 평가하는 것을 의미하며, 각각의 질문은 0(전혀 아님)에서 10(대단히 그러함)까지 숫자 등급 척도로 평가된다. 보다 구체적으로, PR-CIS는 셀룰라이트의 시각적 및 정서적 영향(만족함, 신경쓰임, 의식적, 창피함, 늙어보임, 또는 과체중 또는 몸매가 엉망인 것처럼 보임)을 평가하는 6개 항목 고정적 설문지이며; 각각의 항목은 엉덩이 또는 허벅지의 디지털 이미지를 관찰하면서 0(전혀 아님)에서 10(대단히 그러함)까지 11-단계의 숫자 등급 척도로 피험자가 응답한다. 이 평가는 각각의 개별 영역을 따로따로 평가하는 것이 아닌 모든 허벅지 및/또는 엉덩이를 함께 평가하는 것일 수 있다. PR-CIS 총점은 6개의 개별 질문으로부터 도출될 수 있다:

질문 1―치료를 위해 선택된 부위를 생각하면, 당신의 셀룰라이트 모습에 얼마나 만족하십니까?

질문 2―치료를 위해 선택된 부위를 생각하면, 당신의 셀룰라이트 모습에 얼마나 신경이 쓰이십니까?

질문 3―치료를 위해 선택된 부위를 생각하면, 당신의 셀룰라이트 모습에 대해 얼마나 남의 시선을 의식합니까?

질문 4―치료를 위해 선택된 부위를 생각하면, 당신의 셀룰라이트 모습에 얼마나 창피합니까?

질문 5―치료를 위해 선택된 부위를 생각하면, 당신의 셀룰라이트로 인해 얼마나 더 나이가 들어 보입니까?

질문 6―치료를 위해 선택된 부위를 생각하면, 당신의 셀룰라이트로 인해 얼마나 과체중 또는 몸매가 엉망인 것처럼 보입니까?

본원에 사용된 "환자가 보고한 셀룰라이트 영향 척도(간이형)"(간이형 PR-CIS)는 5개의 질문으로 구성된 설문 조사를 사용하여 셀룰라이트의 시각적 및 정서적 영향(만족함, 신경쓰임, 의식적, 창피함, 또는 과체중 또는 몸매가 엉망인 것처럼 보임)을 평가하는 것을 의미하며, 각각의 질문은 0(전혀 아님)에서 10(대단히 그러함)까지 숫자 등급 척도로 평가된다. 보다 구체적으로, 간이형 PR-CIS는 셀룰라이트의 시각적 및 정서적 영향(만족함, 신경쓰임, 의식적, 창피함, 또는 과체중 또는 몸매가 엉망인 것처럼 보임)을 평가하는 5개 항목 고정적 설문지이며; 각각의 항목은 엉덩이 또는 허벅지의 디지털 이미지를 관찰하면서 0(전혀 아님)에서 10(대단히 그러함)까지 11-단계의 숫자 등급 척도로 피험자가 응답한다. 이 평가는 각각의 개별 영역을 따로따로 평가하는 것이 아닌 모든 허벅지 및/또는 엉덩이를 함께 평가하는 것일 수 있다. 비제한적인 예에서, 간이형 PR-CIS 총점은 5개의 개별 질문으로부터 도출될 수 있다:

질문 5―치료를 위해 선택된 부위를 생각하면, 당신의 셀룰라이트로 인해 얼마나 과체중 또는 몸매가 엉망인 것처럼 보입니까?

간이형 PR-CIS 총점은 전체 PR-CIS의 다른 5개 질문 세트로부터 도출될 수 있다.

본원에 사용된 "환자가 보고한 광수치 셀룰라이트 중증도 척도(PR-PCSS)"는 환자가 사용하고, 셀룰라이트의 중증도를 5개의 단계로 평가하도록 설계된 PCT 특허 출원 PCT/US2018/020551(2018년 9월 7일자로 WO2018/160905로 공개됨)에 설명된 광수치 척도이다.

본원에 사용된 "광수치"는 일련의 사진, 삽화, 그림, 모델, 3-D 모델, 컴퓨터 생성 이미지, MRI 이미지, 이미지 등을 사용하여 각각 다른 수준의 셀룰라이트 중증도에 배정하는 것을 의미한다.

본원에 사용된 "순차 방문"은 2회 이상의 임상의 방문 또는 셀룰라이트 변화가 척도로 평가되는 때를 의미한다. 방문 사이의 시간은 약 2주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 1년, 약 2년, 약 3년, 또는 약 5년 또는 그 이상일 수 있다.

본원에 사용된 "심각한 이상 사례"는 사망을 초래하거나, 즉각적으로 생명을 위협하거나, 환자 입원을 초래하거나 환자 입원 기간을 연장하거나, 영구적 또는 실질적 장애를 초래하거나, 선천성 기형/출생 결함이거나, 또는 중요한 의학적 사건인 것으로 간주되는 이상 사례를 의미한다.

용어 "피험자" 또는 "환자"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되며, 인간 또는 기타 포유류를 지칭한다.

본원에 사용된 "피험자의 전반적인 미적 개선 척도(S-GAIS)" 및 "연구자의 전반적인 미적 개선 척도(I-GAIS)"는 셀룰라이트 중증도 및/또는 개선을 평가하기 위한 다음의 척도를 의미한다. 피험자는 다음과 같은 입문 질문을 받는다: "치료 후 치료된 셀룰라이트 외관을 어떻게 평가하겠습니까?" 등급은 표 3에 나타낸 바와 같이 피험자의 응답에 따라 -3(매우 많이 악화)에서 +3(매우 많이 개선)까지 다양하다.

본원에 사용된 "셀룰라이트 치료에 대한 피험자 만족도"(SSCT)는 -2에서 +2까지 범위의 피험자 만족도 등급을 의미한다. 예로서, 하기 표 4는 엉덩이에 대한 셀룰라이트 치료에 대한 이러한 평가를 제공한다. 환자에게 다음과 같이 질문한다: "오늘, 치료를 받은 엉덩이의 특정 부위 또는 부위들에 받은 셀룰라이트 치료 결과에 얼마나 만족하십니까?" 그 다음 환자는 표 4에 제시된 답변/등급을 선택한다.

표 5는 허벅지에 대한 셀룰라이트 치료에 대한 이러한 평가를 제공한다. 환자에게 다음과 같이 질문한다: "오늘, 치료를 받은 허벅지의 특정 부위 또는 부위들에 받은 셀룰라이트 치료 결과에 얼마나 만족하십니까?" 그 다음 환자는 표 5에 제시된 답변/등급을 선택한다.

본원에 사용된 "피험자 자가 평가 척도(SSRS)"는 표 6에 제시된 0(대단히 불만족)에서 6(대단히 만족)까지 범위의 7 단계 척도의 정수를 사용하여 셀룰라이트와 관련된 외관에 대한 만족도를 평가하기 위해 피험자가 사용하는 척도이다.

본원에 사용된 용어 "치료적 유효량"은 환자 또는 통계적으로 유의한 환자 집단에서 셀룰라이트의 중증도를 감소시키는 데 필요한 콜라게나아제의 양을 지칭한다. 사용되는 콜라게나아제 조성물의 양은 원하는 결과를 달성하기 위해 필요한 콜라게나아제의 양을 전달하는 데 필요한 양일 것이다. 실제로 이는 주입되는 콜라게나아제, 주입 기술, 및 치료 부위의 효소 활성에 따라 달라질 것이다.

본원에 사용된 용어 "치료로 인한 이상 사례" 또는 "TEAE"는 연구 약물로 치료하기 전에 존재하지 않았지만 치료 후에 나타났거나, 치료 시작시 존재했지만 치료 중에 악화되었거나, 치료 시작시 존재했지만 해결된 후 개인이 치료를 받는 동안 다시 나타난(치료가 시작될 때 AE의 강도와 관계없이) 임의의 상태이다.

본원에 사용된 용어 "허벅지 셀룰라이트 효능 척도" 또는 "TCES"는 허벅지 셀룰라이트 중증도, 개선 및/또는 환자 만족도를 평가하고, 콜라게나아제 효능 평가를 돕기 위해 임상의 및 환자가 사용하는 도 5에 제시된 광수치 척도(또는 실질적으로 유사한 척도)를 의미한다. 환자가 보고한 버전을 PR-TCES라고 하며; 임상의가 보고한 버전을 CR-TCES라고 한다.

본원에 사용된 용어 "치료 방문" 또는 "치료"는 단일 사무실 방문에서 셀룰라이트를 치료하는 데 유용한 적어도 하나의 활성제의 치료적 유효량을 사용한 환부(들)에 대한 하나 이상의 주사 또는 치료를 의미한다.

본원에 사용된 용어 "타당성 검증된", "타당성" 또는 "타당성 검증"은 동일한 결과가 일관되게 얻어질 수 있도록 시각적 평가의 반복성을 포함하여, 특정 척도가 정확하고 신뢰할 수 있는 것으로 입증되는 프로세스를 의미한다. 타당성 검증은 척도의 정밀도, 정확도 및 감도를 추가로 검사하여 측정값이 신뢰할 수 있고, 재현 가능하며 견고하다는 것을 확인한다.

B. 도입

본 발명은 셀룰라이트를 치료하는 방법에 관한 것으로, 하기 기재된 특정 주사 기법의 사용을 통해 셀룰라이트 외관을 갖는 피험자에게 치료적 유효량의 하나 이상의 콜라게나아제를 투여하는 것을 포함한다.

일반적으로, 치료에는 4 단계가 있다: (1) 임상의와 환자는 치료전 기준선을 결정하기 위해 치료전 평가를 수행하고, 임상의는 치료할 딤플을 선택하고; (2) 저점이 있다면, 임상의는 제일 저점에 치료할 딤플을 표시하고; (3) 임상의는 콜라게나아제로 환자를 치료하고; (4) 임상의와 환자는 치료 후 평가를 수행한다. 이러한 단계는 하기에 자세히 설명되어 있다. 단계와 그 안의 스텝은 선택 사항이며, 스텝의 순서가 달라도 유사한 결과를 얻을 수 있으므로 스텝의 순서는 제한되지 않는 것으로 의도된다.

C. 단계 1―치료전 평가

본원에 기재된 셀룰라이트 치료 방법의 제1 단계에서, 임상의는 다음의 기준에 기초하여 치료할 셀룰라이트 딤플을 선택한다:

ㆍ 사진으로 확인된 바와 같이 환자가 이완된 자세(둔근이 이완된 서 있는 자세)로 서 있을 때 딤플이 뚜렷하게 윤곽을 드러내고 자연스럽게 눈에 띄어야 함

ㆍ 선택된 딤플은 임상의가 전체 엉덩이, 허벅지 또는 기타 환부 각각의 미적 외관을 개선할 가능성이 가장 높다고 생각하는 것이어야 함

ㆍ 환자가 이완된 자세로 서있을 때 치료전 환부 사진을 찍음

ㆍ 주사 전에 평가가 수행됨, 즉, 임상의 및/또는 환자가 독립적으로 사진을 평가하고, 다음의 척도 또는 평가 방법 중 하나 이상을 사용하여 결과에 점수를 매김:

o 헥셀 셀룰라이트 중증도 척도(Hexsel CSS)

o 헥셀 함몰부 깊이 척도

o 리커트 척도

o 딤플 분석

o 임상의가 보고한 광수치 셀룰라이트 중증도 척도(CR-PCSS)

o 환자가 보고한 광수치 셀룰라이트 중증도 척도(PR-PCSS)

o 연구자의 전반적인 미적 개선 척도(I-GAIS)

o 피험자의 전반적인 미적 개선 척도(S-GAIS)

o 환자가 보고한 셀룰라이트 영향 척도(PR-CIS)

o 피험자 자가 평가 척도(SSRS)

o 셀룰라이트 치료에 대한 피험자 만족도(SSCT)

o 허벅지 셀룰라이트 효능 척도(PR-TCES; CR-TCES)

o 바디-Q

o 피츠패트릭 척도

o 임상의 및/또는 환자가 셀룰라이트 중증도, 개선 및/또는 환자 만족도를 평가하기 위해 사용하는 검증된 임의의 광수치 또는 기타 척도

D. 단계 2―치료할 딤플 표시

본원에 기재된 치료의 제2 단계에서, 임상의는 치료할 딤플을 점(들)으로 표시할 수 있다. 더 많은 사진을 찍을 수 있다.

E. 단계 3― 콜라게나아제 주사

치료의 제3 단계에서, 임상의는 콜라게나아제 주사로 환자를 치료한다.

1. 콜라게나아제의 유형

본 발명에 유용한 콜라게나아제는 상기 정의된 임의의 콜라게나아제를 포함한다. 추가 배경으로, 기질 메탈로프로테이나아제(MMP)는 본원의 정의에 속하는 콜라게나아제로 구성될 수 있다. 예를 들어, MMP-1을 콜라게나아제 1을 포함하고; MMP-8은 콜라게나아제 2/호중구 콜라게나아제를 포함하고; MMP-13은 콜라게나아제 3을 포함하고; MMP-18은 콜라게나아제 4를 포함한다. 또한, 카텝신도 콜라게나아제로 분류될 수 있다.

2. 콜라게나아제 효소 동력학

본 발명에 유용한 콜라게나아제는 또한 이의 효소 동력학에 의해 규정될 수 있다. 여기서 셀룰라이트를 치료하는 데 효과적인 하나 이상의 콜라게나아제의 대략적인 동력학적 값은 다음을 포함한다:

V_max = 최대 속도

K_M = V_max의 50%에서 [기질]

K_cat = 초당 절단되는 기질 분자

1/ K_cat = 기질 분자를 절단하는 데 필요한 마이크로초.

이러한 값은 아래 설명된 마이크로플레이트 검정을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있지만, 기질과 시간이 다르다. 다른 검정 및 파라미터가 사용될 수 있다.

이러한 값은 미하엘리스-멘텐 방정식(Michaelis-Menten Equation)에 기초한 효소 거동의 정량적 표현을 반영한다:

여기서 V₀은 기질 농도[S]에서의 반응 속도(속도)이고, V_max는 관찰 가능한 최대 속도이며, K_M은 V_max의 50%를 생성하는 기질의 농도와 관련이 있는 미하엘리스 상수이다.

여기서 k₁, k_-1 및 k₂는 다음 단계에 대한 속도 상수이다:

여기서 E는 효소이고, S는 기질이고, ES는 효소-기질 복합체이고, P는 생성물이다.

촉매 상수 K_cat는 전환수(turnover number), 즉 ES 복합체가 E+P로 진행하는 속도를 나타낸다. 이는 각각의 활성 부위가 단위 시간당 겪는 촉매 주기의 수를 반영한다.

특정 구현예에서, AUX-I 및 AUX-II는 다음의 특성을 갖는다:

ㆍ AUX I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ AUX II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

가정:

K_cat = V_max/[AUX] = (nmol 기질/nG AUX*분^-1)/nG AUX

촉매 효율(K_cat/K_M)은 일반적으로 기질을 생성물로 전환하는 효소의 전반적인 능력을 나타내며, 결합 및 촉매 사건을 모두 반영한다. 또 다른 구현예에서, AUX-I 및 AUX-II는 다음의 특성을 포함한다.

ㆍ V_max = 최대 속도

ㆍ K_M = V_max의 50%에서 [기질]

ㆍ K_cat = 초당 절단되는 기질 분자

ㆍ 1/K_cat = 기질 한 분자를 절단하는 데 필요한 시간.

ㆍ K_cat/ K_M은 효소의 촉매 효율을 나타내는 데 종종 사용된다.

* SRC 마이크로플레이트 검정

+ GPA 마이크로플레이트 검정

3. 콜라게나아제(들)의 효능(비활성도)

콜라게나아제의 비활성도(효능)를 결정하기 위한 검정이 개발되고 사용되었다. 이러한 검정은 하위 섹션 a 내지 c에 설명되어 있으며, 미리 결정된 효소 농도로 주어진 기간 내에 기질을 생성물로 전환하는 능력에 의해 콜라게나아제를 규정한다. 특정 비-제한적인 구현예에서, 이러한 검정은 각각의 AUX-I 및 AUX-II, 및 조합된 CCH 약물 생성물(1:1 비율의 AUX-I 및 AUX-II)의 효능을 결정하기 위해 사용된다. SRC 검정(하기 설명됨)은 반응 기질로서 콜라겐을 사용한다. SRC 검정은 기질로서 가용성 래트(꼬리) 콜라겐(SRC)을 사용하고, 유형 I 콜라게나아제 활성을 측정하기 위해 사용되며, 유형 II 콜라게나아제는 콜라게나아제 혼합물의 관찰된 활성의 대략 20%에 기여한다. SRC 검정은 형광 분석법이며, 플루오레사민을 사용하여 SRC의 유형 I 분해에 의해 생성된 펩티드를 검출한다. 반응은 25℃에서 2.5시간 동안 15 mM 2가 칼슘 이온을 함유하는 4-(2-하이드록시에틸)-1-페피라진에탄설폰산(HEPES) 버퍼에서 pH 7.2에서 실행된다.

소 힘줄 콜라겐(bovine tendon collagen; BTC) 검정(하기 설명됨)은 문헌(참조: Keller and Mandl, Arch. Biochem . Biophys. 101: 81-88 (1963))에서 수정된 문헌(참조: Mandl et al., Arch. Biochem . Biophys. 74: 465-475 (1958))의 절차를 기반으로 한다. 또한, 문헌(참조: Rosen, Arch. Biochem . Biophys. 67: 10-15 (1957))을 참조한다. BTC 검정은 불용성 소 힘줄 콜라겐을 기질로 사용하고, 유형 I 및 유형 II 활성(예컨대 AUX-I 및 II 콜라게나아제)을 모두 측정한다. BTC 검정은 비색법이며, 닌하이드린을 사용하여 BTC의 유형 I 및 유형 II 분해에 의해 생성된 펩티드를 검출한다. 이 반응은 pH 7.2에서도 실행되지만, 10mM 2가 칼슘 이온을 함유하는 트리스(하이드록시메틸) 아미노메탄(TRIS) 버퍼에서 37℃에서 22시간 동안 실행된다.

세 번째 콜라게나아제 유형의 검정인, GPA 검정(하기 설명됨)은 가용성의 유도체화된 헥사펩티드(카보벤족시-GPGGPA)를 기질로 사용한다. GPA 검정은 주로 유형 II 활성을 측정하는 데 사용되며, 유형 I은 관찰된 활성의 대략 10%에 기여한다. 유형 II 콜라게나아제는 헥사펩티드를 두 개의 트리펩티드로 절단하며, 그 중 하나(GPA)는 플루오레사민과 반응하여 형광 생성물을 제공하는 자유 아미노 말단을 갖는다. GPA 검정은 25℃에서 10분 동안 100 mM 2가 칼슘 이온을 함유하는 HEPES 버퍼에서 pH 7.2에서 실행된다.

SRC 및 BTC 검정은 둘 다 천연 기질(콜라겐)을 분해하며, 이는 콜라게나아제 주입이 치료적으로 수행되도록 설계된 것에 더 가깝다. GPA 검정은 잘 정의된 저분자량 헥사펩티드를 기질로 사용하고 두 개의 잘 정의된 트리펩티드가 생성된다는 장점이 있다. GPA 검정은 형광 신호를 생성하고 매우 민감하다. 마지막으로, GPA 검정은 단일 기질과 초기 효소 속도에 근접한 반응 조건(10분 항온배양)을 사용하기 때문에 미하엘리스-멘텐 동력학 분석에 적합하다. SRC 검정은 콜라겐 결합 도메인이 있는 콜라겐-분해 효소에 적합하지만, GPA 검정은 종종 젤라티나아제라고도 하는, 콜라겐 결합 도메인이 없는 콜라겐-분해 효소에 적합하다.

a. GPA 단위 검정 방법 및 비활성 단위

i. GPA 검정( 큐벳 ) 으로 측정된 콜라게나아제 효능

GPA 검정은 주로 부류 II 콜라게나아제의 효능을 측정하기 위해 사용된다. 검정의 첫 번째 단계는 콜라게나아제 샘플에 의해 기질 카보벤족시-글리실-L-프롤릴-글리실-글리실-프롤릴-L-알라닌(zGPGGPA)을 2개의 펩티드, 즉 카보벤족시-글리실-L-프롤릴-글리신(zGPG) 및 글리실-프롤릴-L-알라닌(GPA)으로 분해하는 것을 수반하는 효소 반응을 포함한다. 두 번째 단계는 형광 유도체 플루오레사민으로 유리된 GPA의 후속 측정을 포함한다. 검정은 하기 방법론을 따르지만, 당업자는 특정 변형(예를 들어, 희석 농도 및 시간)이 이루어질 수 있지만 검정의 목적을 수행할 수 있음을 이해할 것이다.

일반적인 방법론은 다음과 같다. 류신 표준이 준비된다. 콜라게나아제 샘플을 얻고, 콜라게나아제에 의한 zGPGGPA(이하 "기질")의 효소적 절단을 위해 제1 단계에서 사용될 용액을 준비한다. 이 단계 후, 콜라게나아제로 처리된 샘플(유리된 GPA 포함) 및 류신 표준을, 생성된 GPA 및 류신 분자의 유리 아미노 그룹을 각각 형광으로 태그하기 위해 플루오레사민으로 일정 시간 동안 실온에서 처리한다. 480nm에서 각 용액의 형광 방출은 392nm에서 여기 후 측정된다. 이어서 류신 및 콜라게나아제 샘플 곡선의 결과적 기울기는 다음과 같이 효능 단위를 계산하는 데 사용된다:

효능(f-GPA 단위/mg) = (M_샘플 / M_류신) x (DF / T)

여기서:

M_샘플 = 콜라게니아제 샘플 효능 곡선의 기울기

M_류신 = 류신 표준 곡선의 기울기

DF = 희석 인자

T = 반응 시간

GPA 검정 방법론에 관한 추가의 비제한적인 세부 사항은 하기에 설명되어 있다.

버퍼 및 시약

1. f-아펠 버퍼(f-Appel's Buffer), pH 7.2(55mM HEPES, 100mM 아세트산칼슘)

2. 1mM 류신 작업 원액

3. 200mM 보레이트, pH 9.0

4. 아세톤 중 0.5mM 플루오레사민 용액

5. f-아펠 버퍼 중 2mg/mL zGPGGPA 기질

용액 제조

용액은 다음과 같이 제조된다:

f-아펠 버퍼: HEPES 13.0g 및 아세트산칼슘 17.6g을 대략 800mL의 물에 용해한다. 수산화나트륨으로 pH를 7.2로 조정하고, 물을 1L까지 충분히 채운다. 2 내지 8℃에서 보관한다.

10mM 류신 원액: 류신 65.5mg을 물 50mL에 용해한다. 류신은 저울 위에 있는 100mL(또는 상응하는) 유리 비커 내로 직접 계량해야 한다. 대략 65mg(목표 중량)의 류신을 비커에 넣는다. 계량된 류신의 중량을 기준으로 하기 방정식을 사용하여 비커에 추가할 물의 양을 계산한다. 계산된 용적의 물을 비커에 첨가하고 류신이 완전히 용해되도록 철저히 혼합한다. 1mL 분취량으로 분배한다. 20℃ 이하에서 보관한다.

여기서:

C2 = 계량된 류신의 질량(mg)

V1 = 50(mL의 물)

C1 = 65.5(mg의 류신)

V2 = 10mM 원액을 생성하는 데 필요한 물의 용적(mL)

1mM 류신 작업 원액: 10mM 류신 원액 바이알을 해동하고, 150μL를 1350μL 물과 배합하여 1mM로 희석한다. 사용 전에 잘 혼합한다.

0.5N HCl: 물로 HCl을 0.5N으로 희석하고 잘 혼합한다. 실온에서 보관한다. 대안적으로, 상업적으로 입수 가능한 0.5N HCl을 사용할 수 있다.

200nM 보레이트, pH 9.0: 2.4g 붕산을 대략 150mL의 물에 용해한다. 수산화나트륨을 사용하여 pH를 9.0으로 조정한다. 물을 200mL까지 충분히 채워, 잘 혼합한다. 2 내지 8℃에서 보관한다.

0.5mM 플루오레사민 용액: 플루오레사민 15mg을 아세톤 100mL와 혼합하고, 스월링(swirling)하여 용해시킨다. 빛으로부터 보호되는 2 내지 8℃에서 보관한다.

기질 용액(2mg/mL zGPGGPA): f-아펠 버퍼를 사용하여 기질을 2mg/mL로 제조한다. 기계식 진탕/회전 장치에서 완전한 용해를 위해 충분한 시간을 두어 용해한다(약 15분).

류신 표준 곡선

류신 표준 곡선을 표 7에 따라 작성한다.

"L1"은 류신 표준 샘플 1을 의미한다.

이어서 플루오레사민 검출을 위해 각각의 류신 표준 100μL를 별도의 튜브로 옮긴다.

콜라게나아제 샘플 제조

f-아펠 버퍼를 사용하여 콜라게나아제 샘플을 두 단계로 0.01mg/mL로 희석하고, 가볍게 와동하여 혼합한다. 다음은 희석 계획의 예이다:

1. 100μL x 1.0mg/mL -→ 1000μL = 0.1mg/mL

2. 100μL x 0.1mg/mL -→ 1000μL = 0.01mg/mL

블랭크 제조

블랭크는 효소를 불활성화시키기 위해 희석된 제제 45μL와 0.5N 염산 500μL를 배합하여 제조된다. zGPGGPA 기질 용액 455μL를 첨가하고, 와동하여 철저히 혼합한다. 플루오레사민과 반응할 수 있는 불순물의 검출을 위해 각각의 블랭크 100μL를 별도의 튜브로 옮긴다.

효능 곡선

다음과 같이 각각의 콜라게나아제 샘플에 대해 일련의 효능 곡선을 작성한다:

기질과 버퍼를 함유하는 튜브를 25℃의 수욕에서 최소 15분 동안 가온한다. 제2 튜브 세트를 라벨링하고, 0.5N 염산 50μL를 각각에 첨가한다. 10분 항온배양 동안 희석된 콜라게나아제 샘플 제제(0.01mg/mL)를 표 8에 따라 튜브에 첨가하고, 혼합한 다음 25℃의 수욕으로 돌려보낸다. 예열된 기질에 첫 번째 제제를 첨가하면 항온배양 기간이 시작한다.

10분 항온배양에서 1 내지 2분을 남겨두고 수욕에서 제제를 제거하고, 가볍게 와동하여 혼합한다. 첫 번째 제제를 기질에 첨가하고 10분 후 각각의 튜브에서 50μL를 0.5N HCl 50μL를 함유하는 튜브로 옮긴다. 분해를 켄칭하기 위해 제제를 산에 직접 첨가해야 한다. 모든 제제를 켄칭한 후 각각의 튜브를 와동하여 잘 혼합한다.

검출

200mM 보레이트 버퍼 400μL 및 0.5mM 플루오레사민 용액 500μL를, 각각의 제제(블랭크, 콜라게나아제 샘플 효능 곡선, 및 류신 표준) 100μL를 함유하는 모든 검출 튜브에 첨가한다. 철저히 와동하여 혼합한다. 튜브를 실온에서 최소 10분 동안 항온배양한다.

형광측정기 설정

다음의 기기 파라미터로 형광측정기를 설정하고, 1시간의 유도체화로 각 제제의 형광을 판독한다.

계산

480nm(Y축)에서 형광 반응에 대한 각각의 류신 표준(X축)의 농도를 플롯팅한다. 기울기(m)와 결정 계수(R²)를 결정한다. 각 효능 곡선 제제의 평균 형광을 결정한다. 480nm(Y축)에서 평균 형광 반응에 대한 각 제제(X축)의 농도를 플롯팅하여 콜라게나아제 샘플 및 류신 효능 곡선을 작성한다. 결과적 선형 곡선에 대한 기울기(m) 및 결정 계수(R²)를 결정한다.

콜라게나아제 샘플의 효능 결정

효능 (f-GPA 단위/mg) = (M_샘플/M_류신) x (DF/T)

여기서:

M_샘플 = 콜라게니아제 샘플 효능 곡선의 기울기

M_류신 = 류신 표준 곡선의 기울기

DF = 희석 인자(1100μL / 50μL = 22)

T = 반응 시간(10분)

ii. 콜라게나아제 샘플에서 부류 II 콜라게나아제 활성 측정을 위한 GPA 마이크로플레이트 검정

이 방법은 마이크로플레이트에서 수행되는 것을 제외하고는 상기 GPA 검정과 유사하다. 상기 검정과 마찬가지로, 마이크로플레이트 검정은 기질 카벤족시-글리실-L-프롤릴-글리실-글리실-L-프로필-L-알라닌(zGPGGPA)(이하 "기질")의 효소 절단에서 콜라게나아제 샘플의 단백질 분해 활성을 측정한다. 검정은 하기 방법론을 따르지만, 당업자는 특정 변형(예를 들어, 희석 농도 및 시간)이 이루어질 수 있지만 검정의 목적을 수행할 수 있음을 이해할 것이다.

시약

1. 펩티드 기질(zGPGGPA)(바헴(Bachem) M1260 또는 동급)

2. 트리펩티드 GPA(바헴 H3615 또는 동급)

3. 플루오레사민(아크로스(Acros) 191675000 또는 동급)

4. 정제수(밀리-Q-플러스(Milli-Q-Plus) 18.2 MΩ 시스템 또는 동급)

5. 1M HEPES 버퍼(깁코(Gibco) 15630-080 또는 동급)

6. 서팩트(Surfact)-Amps 20™(10% 트윈 용액)(피어스(Pierce) Cat.#28320 또는 동급)

7. 1M 아세트산칼슘(Ca(C₂H₃O₂)₂)(에메랄드 바이오사이언시즈(Emerald Biosciences) Cat.#EBS-100-CAAC 또는 동급)

8. 붕산(시그마 B7660 또는 동급)

9. 2.5N NaOH(제이.티 베이커(J.T Baker) 5666-02 또는 동급)

10. 0.5N 염산(VWR 101223-134 또는 동급)

11. 아세톤(시그마 270725 또는 동급)

용액의 제조

(i) 검정 버퍼(50mM HEPES pH 7.1/0.05% 트윈 20 /5mM (Ca(C₂H₃O₂)₂)의 제조: 1M HEPES 50mL의 양을 탈이온수 800mL에 피펫팅한다. 1M(Ca(C₂H₃O₂)₂) 5mL 및 서팩트-Amps(10% 트윈 20) 5mL를 첨가한다. pH를 확인하고, 필요한 경우 7.1 ± 0.05로 조정한다. 충분한 양의 물을 첨가하여 용적을 1L로 조정하고 용액을 0.22 마이크론 필터를 통해 여과한다. 이 검정 버퍼를 실온에서 최대 3개월 동안 보관할 수 있다.

(ii) 0.1N NaOH의 제조: 2.5N NaOH 2mL의 양을 탈이온수 48mL에 첨가한다. 이 용액을 실온에서 최대 3개월 동안 보관할 수 있다.

(iii) 4mg/mL 트리펩티드 GPA 원액의 제조: 트리펩티드 GPA 400mg(± 1mg)의 양을 0.1N NaOH 10mL에 용해하고, 완전히 용해될 때까지 와동한다. 충분한 양의 검정 버퍼를 첨가하여 용적이 100mL가 되도록 하고, 용액을 0.5mL 분취량으로 분배하고, -70℃에서 보관한다. 4mg/mL 트리펩티드 GPA 원액을 -70℃에서 최대 1년 동안 보관할 수 있다.

(iv) 4mg/mL(6.8mM) 펩티드 기질 zGPGGPA의 제조: 펩티드 기질 zGPGGPA 400mg(+ 1mg)의 양을 0.1N NaOH 10mL에 용해하고, 완전히 용해될 때까지 와동한다. 충분한 양의 검정 버퍼를 첨가하여 용적이 100mL가 되도록 한다. 이 용액을 4℃에서 최대 3개월 동안 보관할 수 있다.

(v) 120mM 붕산 pH 9.0의 제조: 붕산 7.4g(± 0.5g)의 양을 탈이온수 800mL에 용해한다. 용액을 NaOH를 사용하여 pH 9.0으로 적정한다. 용적을 1L로 조정하기 위해 충분한 양의 탈이온수를 첨가한다. 이 용액을 실온에서 최대 3개월 동안 보관할 수 있다.

(vi) 아세톤 중 1mM 플루오레사민의 제조: 플루오레사민 28 ± 2mg의 양을 아세톤 100mL에 용해한다. 이 용액은 신선하게 준비되고, 빛과 습기로부터 보호되어야 했다.

트리펩티드 GPA 표준 및 연속 희석물의 제조

0.08mg/mL(329μM) 트리펩티드 GPA 표준은 검정 버퍼에 4mg/mL 트리펩티드 GPA 원액을 50배 희석하여 준비된다(예를 들어, 검정 버퍼 980μL 중 4mg/mL 트리펩티드 GPA 20μL). 검정 플레이트, A 행에서, 329μM 트리펩티드 GPA 표준 200μL를 A1 및 A7에 피펫팅한다. 검정 버퍼 100μL의 양을 A2-A6 및 A8-Al2에 피펫팅한다.

트리펩티드 GPA 표준 연속 희석물의 경우, Al에서 A2로 100μL의 양을 옮겨 혼합하고, A2에서 A3으로 100μL의 양을 옮기고, A5까지 반복한다. 최종 용적이 100μL가 되도록 A5 웰로부터 100μL의 양을 취한다. A6 웰에는 버퍼만 포함되어 있다.

두 번째 트리펩티드 GPA 표준 연속 희석물의 경우, A7에서 A8로 100μL의 양을 옮겨 혼합하고, A8에서 A9로 100μL의 양을 옮기고, All 웰까지 반복한다. 최종 용적이 100μL가 되도록 A11 웰로부터 100μL의 양을 취한다. A12 웰에는 버퍼만 포함되어 있다.

콜라게나아제 샘플의 제조

콜라게나아제 샘플(예를 들어, 동결건조된 콜라게나아제 약물 제품)의 경우 샘플을 적어도 10분 동안 실온에 두고, 재구성하여 500ng/mL 원액을 형성한다. 상이한 농도를 사용할 수 있다. 시험용 콜라게나아제 샘플(T1A)은 원액으로부터 검정 버퍼로 희석하여 준비된다. 이 절차를 반복하여 3중 시험 샘플(T1A, T1B, T1C)을 준비한다.

논의

이 방법에서는 50μL의 증가하는 농도의 콜라게나아제 시험 샘플을 96-웰 플레이트에서 50μL의 과잉 기질(2.0mg/mL 최종 농도)과 혼합한다. 검정 버퍼 50μL의 양을 U자 바닥 96웰 폴리프로필렌 반응 플레이트의 C-G 행에 첨가한다. 콜라게나아제 샘플 150μL를 B 행에 피펫팅한다. 이어서, B 행에서 C 행으로 콜라게나아제 샘플 100μL를 옮기고, 혼합하고, G 행에 도달할 때까지 그 과정을 반복하여 다중-채널 피펫을 사용하여 1/1.5 연속 희석을 수행한다. G 행에서 100μL의 양을 꺼내 버린다. 표 9에는 B 행에서 H 행까지 기질 50μL를 첨가한 후의 최종 콜라게나아제 농도가 포함되어 있다.

블랭크는 검정 버퍼 50μL를 H 행에 피펫팅하여 H 행에서 준비된다. 이 행에는 효소가 포함되어 있지 않다. 예시적인 농도는 표 9에 표시되어 있다.

콜라게나아제 반응

zGPGGPA 기질은 실온에서 15분의 항온배양 시간 동안 부류 II 콜라게나아제에 의해 zGPG 및 GPA로 절단된다. 항온배양기와 온도 프로브가 켜져 있다(플레이트에 기질을 첨가하기 전 온도 22 ± 1℃). B-H 행의 1-12 열에 4mg/mL(6.8mM) zGPGGPA 기질 50μL를 열별로 첨가한 다음 혼합한다. 반응 개시 시간은 기질이 첫 번째 열에 첨가된 후 시작된다. 플레이트를 덮고 15 ± 1분의 총 반응 시간 동안 22 ± 1℃ 항온배양기에 넣는다.

항온배양 후, 염산을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 방출된 GPA 펩티드의 양을 펩티드의 유리 아미노 말단을 형광 시약인 플루오레사민과 반응시킨 후 정량화한다. 반응을 켄칭하기 위해 100μL의 0.5N HCl을 A 행에서 H 행까지 각 웰에 첨가하고, 열별로 첨가한 다음 혼합한다. 반응 시간은 HCl이 첫 번째 열에 첨가된 후 종료된다.

검출

120mM 보레이트 pH 9.0 195μL의 양을 마이크로플레이트 그라이너(Greiner) 폴리프로필렌 블랙 판독 플레이트의 각 웰에 첨가한다. 켄칭된 반응 혼합물 30μL를 반응 플레이트에서 판독 플레이트의 해당 웰로 옮기고 잘 혼합한다. 이어서 1mM 플루오레사민 75μL를 판독 플레이트의 각 웰에 첨가하고(플루오레사민/아세톤을 분배하기 위해 폴리프로필렌 트레이 사용) 첨가할 때마다 즉시 혼합한다. 플루오레사민 첨가 후 15분 이내에 다음 설정을 사용하여 몰레큘러 디바이시즈(Molecular Devices) M2 형광 플레이트 판독기로 플레이트를 판독한다: 여기 380nm, 방출 473nm, 컷오프 455nm, 6회 판독/웰, PMT 배지.

GPA 농도(μM) 대 473nm에서의 방출 및 콜라게나아제 농도(ng/mL) 대 473nm에서의 방출을 플롯팅한다. 각각의 플롯에 대해, 고정된 파라미터 없이 선형 회귀가 피팅된다. 콜라게나아제 시험 샘플의 경우, 0점 데이터를 선형 피팅에서 제외하고, 각 샘플에 대한 전체 3중 데이터 세트가 플롯을 생성하는 데 사용된다. 트리펩티드 GPA 표준과 콜라게나아제 샘플의 기울기를 결정한다.

효능 결정

콜라게나아제 샘플의 비활성도는 다음과 같이 계산할 수 있다:

GPA 마이크로플레이트 검정 단위 = ((콜라게나아제 샘플의 기울기) / (트리펩티드 GPA의 기울기 x 항온배양 시간)) x 10⁶.

콜라게나아제 시험 샘플의 비활성도를 트리펩티드 GPA 표준의 기울기로부터 결정하고, 곡선-피팅 프로그램으로 계산한다. 마이크로플레이트 방법을 사용하면 미하엘리스-멘텐에 따라 효소 동력학을 계산하는 데 상이한 농도의 기질 및 상이한 시간을 사용할 수 있다.

iii. GPA 검정으로 측정된 콜라게나아제 효능

본 발명에 유용한 콜라게나아제는 약 100,000 내지 약 300,000 GPA 단위/mg, 또는 약 175,000 내지 약 300,000 f-GPA 단위/mg의 효능을 가질 수 있다. 다른 구현예에서, 효능은 약 70,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg, 또는 약 100,000 내지 약 375,000 GPA 단위/mg, 또는 약 125,000 내지 약 350,000 GPA 단위/mg, 또는 약 150,000 내지 약 325,000 GPA 단위/mg, 또는 약 175,000 내지 약 300,000 GPA 단위/mg, 또는 약 200,000 내지 약 275,000 GPA 단위/mg일 수 있다. 대안적으로, 효능은 약 70,000 내지 약 400,000 f-GPA 단위/mg, 또는 약 100,000 내지 약 375,000 f-GPA 단위/mg, 또는 약 125,000 내지 약 350,000 f-GPA 단위/mg, 또는 약 150,000 내지 약 325,000 f-GPA 단위/mg, 또는 약 175,000 내지 약 300,000 f-GPA 단위/mg, 또는 약 230,000 내지 약 430,000 f-GPA 단위/mg, 또는 약 200,000 내지 약 275,000 f-GPA 단위/mg일 수 있다. 콜라게나아제는 또한 약 30,100 내지 87,100, 또는 약 43,000 내지 67,000 GPA 마이크로플레이트 검정 단위의 효능을 가질 수 있다. 상기 GPA 검정은 임의의 콜라게나아제의 비활성도를 분석하는 데 사용될 수 있다.

b. SRC 단위 검정 방법 및 비활성도 단위

i. SRC 검정( 큐벳 ) 으로 측정된 콜라게나아제 효능

SRC 검정은 주로 부류 I 콜라게나아제의 효능을 측정하기 위해 사용된다. 일반적인 방법론은 다음과 같다. 류신 표준 및 콜라게나아제 샘플 용액이 준비된다. 검정의 첫 번째 단계는 콜라게나아제에 의한 가용성 래트-꼬리 힘줄 콜라겐(SRC)의 분해를 수반하는 효소 반응을 포함한다. 두 번째 단계는 형광 유도체 플루오레사민으로 유리된 펩티드 단편/아미노산의 후속 측정을 포함한다. 검정은 하기 방법론을 따르지만, 당업자는 특정 변형(예를 들어, 희석 농도 및 시간)이 이루어질 수 있지만 검정의 목적을 수행할 수 있음을 이해할 것이다.

이러한 콜라게나아제 및 류신 표준 샘플은 생성된 GPA를 플루오레사민으로 태그하기 위해 시약으로 처리된다. 류신 표준 및 콜라게나아제 샘플은 각각 392 및 480nm 여기 및 방출 파장에서 각 용액의 형광을 결정하기 전에 실온에서 10분 동안 항온배양되도록 한다. 이어서 류신 및 콜라게나아제 샘플 곡선의 결과적 기울기는 다음과 같이 효능 단위를 계산하는 데 사용된다:

효능(f-SRC 단위/mg) = (M_샘플 / M_류신) x (DF / T) x CF

여기서:

M_샘플 = 콜라게니아제 샘플 효능 곡선의 기울기

M_류신 = 류신 표준 곡선의 기울기

DF = 희석 인자(1500μL / 100mL = 15)

T = 반응 시간(2.5시간 x 60분 / 1시간 = 150분)

CF = 전환 계수(1000μg / 1mg = 1000)

SRC 검정 방법론에 관한 추가의 비제한적인 세부 사항은 하기에 설명되어 있다.

버퍼 및 시약

1. F-TC 검정 버퍼, pH 7.2(22g HEPES [4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산], 4.4g 아세트산칼슘)

2. F-효소 버퍼, pH 7.2

3. 200mM 보레이트, pH 9.0

4. 10mM 류신 원액

5. 1mM 류신 작업 원액

6. 아세톤 중 1mM 플루오레사민 용액

7. 0.02N 아세트산 중 2 mg/mL 래트 꼬리 콜라겐

용액 제조

용액은 다음과 같이 제조된다:

F-TC 검정 버퍼: HEPES 22g 및 아세트산칼슘 4.4g을 대략 900mL의 물에 용해한다. 수산화나트륨을 사용하여 pH를 7.2로 조정하고, 물을 1L까지 충분히 채운다. 2 내지 8℃에서 보관한다.

F-효소 버퍼: F-TC 검정 버퍼 4mL를 물 16mL와 배합하여 희석한다. 2 내지 8℃에서 보관한다.

10mM 류신 원액: 류신 65.5mg을 물 50mL에 용해한다. 류신은 저울 위에 있는 100mL(또는 상응하는) 유리 비커 내로 직접 계량해야 한다. 대략 65mg(목표 중량)의 류신을 비커에 넣는다. 계량된 류신의 중량을 기준으로 하기 방정식을 사용하여 비커에 추가할 물의 양을 계산한다. 계산된 용적의 물을 비커에 첨가하고 류신이 완전히 용해되도록 철저히 혼합한다. 1mL 분취량으로 분배한다. -20℃ 이하에서 보관한다.

여기서:

C2 = 계량된 류신의 질량(mg)

V1 = 50(mL의 물)

C1 = 65.5(mg의 류신)

V2 = 10mM 원액을 생성하는 데 필요한 물의 용적(mL)

0.02N 아세트산: 1N 아세트산 1mL를 물 49mL와 배합하고 잘 혼합한다. 실온에서 보관한다.

200mM 보레이트, pH 9.0: 2.4g 붕산을 대략 150mL의 물에 용해한다. 수산화나트륨을 사용하여 pH를 9.0으로 조정한다. 물을 200mL까지 충분히 채워, 잘 혼합한다. 2 내지 8℃에서 보관한다.

1mM 플루오레사민 용액: 플루오레사민 15mg을 아세톤 50mL에 용해시키고, 스월링하여 용해시킨다.

기질 용액(2mg/mL 래트 꼬리 콜라겐): 0.02N 아세트산을 사용하여 원액 래트 꼬리 콜라겐을 2mg/mL로 희석한다. 2 내지 8℃에서 보관한다.

류신 표준 곡선

류신 표준 곡선을 표 10에 따라 작성한다.

이어서 플루오레사민 검출을 위해 각각의 류신 표준 100μL를 별도의 원심분리 튜브로 옮긴다.

콜라게나아제 샘플 및 블랭크 제조

F-효소 버퍼를 사용하여 샘플을 두 단계로 0.01mg/mL로 희석하고, 가볍게 와동하여 혼합한다. 다음은 희석 계획의 예이다:

1. 100μL x 1.0mg/mL → 1000μL = 0.1mg/mL

2. 100μL x 0.1mg/mL → 1000μL = 0.01mg/mL

희석된 샘플은 사용시까지 실온에서 유지된다.

블랭크는 표 11에 따라 버퍼와 기질이 첨가되기 전에 효소를 불활성화시키기 위해 우선 샘플과 0.5N 염산을 배합하여 제조된다.

표 11에 따라 라벨링된 튜브의 콜라게나아제 샘플. 튜브 1, 2, 4 및 6은 하나의 제제로부터 준비되고, 튜브 3, 5 및 7은 중복 제제로부터 준비된다.

튜브의 뚜껑을 닫고 가볍게 와동하여 혼합한다. 효능 곡선 제제는 25℃ ± 3℃ 수욕에서 2.5시간 동안 항온배양된다. 항온배양 종료시, 수욕에서 효능 곡선 튜브를 제거한다. 0.5N HCl 750μL를 각각의 제제에 첨가하고 철저히 와동하여 혼합한다. 검출 전 제제를 최대 22시간 동안 2 내지 8℃에서 보관할 수 있다.

검출/ 형광측정기 설정

류신 표준이 상기 기재된 바와 같이 준비된다.

다음의 기기 파라미터를 사용하여 발광 분광기를 설정하고, 1시간의 유도체화로 각각의 제제의 형광을 판독한다.

계산

480nm에서의 형광 반응(Y축)에 대한 각각의 류신 표준의 농도(X축)를 플롯팅한다. 기울기(m) 및 결정 계수(R²)를 결정한다. 강제로 0을 통과하지 않는다. 각각의 중복 제제의 평균 형광을 결정한다. 각각의 콜라게나아제 샘플 제제의 순 형광을 계산한다.

F(순) = 평균 콜라게나아제 샘플(EM₄₈₀) - 블랭크(EM₄₈₀)

순 형광(Y축)에 대한 각각의 제제(X축)에서 콜라게나아제 샘플의 양을 플롯팅한다. 기울기(m) 및 결정 계수(R²)를 결정한다. 강제로 0을 통과하지 않는다.

콜라게나아제 샘플의 효능 결정

효능(f-SRC 단위/mg) = (M_샘플 / M_류신) x (DF / T) x CF

여기서:

M_샘플 = 콜라게니아제 샘플 효능 곡선의 기울기

M_류신 = 류신 표준 곡선의 기울기

DF = 희석 인자(1500μL / 100mL = 15)

T = 반응 시간(2.5시간 x 60분 / 1시간 = 150분)

CF = 전환 계수(1000μg / 1mg = 1000)

상기 SRC 검정은 임의의 콜라게나아제의 비활성도를 분석하는 데 사용될 수 있다.

ii. 콜라게나아제 샘플에서 부류 I 콜라게나아제 활성을 결정하기 위한 SRC 마이크로플레이트 검정

이 방법은 마이크로플레이트에서 수행되는 것을 제외하고는 상기 SRC 검정과 유사하다. 상기 SRC 검정과 마찬가지로, 마이크로플레이트 검정은 가용성 쥐-꼬리 콜라겐(SRC) 기질(이하 "기질")에 대한 콜라게나아제 활성을 측정한다. 검정은 하기 방법론을 따르지만, 당업자는 특정 변형이 이루어질 수 있지만 검정의 목적을 수행할 수 있음을 이해할 것이다.

시약

1. 가용성 래트 콜라겐 기질(비디 바이오사이언시즈(BD Biosciences) 354236)

2. 트리펩티드 GPA(바헴 H3615 또는 동급)

3. 플루오레사민(아크로스 191675000 또는 동급)

4. 정제수(밀리포어(Millipore), 밀리-Q-플러스 18.2 MΩ 시스템 또는 동급)

5. 1M HEPES 버퍼(깁코 15630-080 또는 동급)

6. 1M 아세트산칼슘(Ca(C₂H₃O₂)₂)(에메랄드 바이오사이언시즈 EBS-100-CAAC 또는 동급)

7. 서팩트-Amps 20™(10% 트윈 용액)(피어스 Cat.#28320 또는 동급)

8. 1.0N 아세트산(시그마 318590 또는 동급)

9. 0.5N 염산(VWR 101223-134 또는 동급)

10. 붕산(시그마 B7660 또는 동급)

11. 2.5N 수산화나트륨(제이.티 베이커 5666-02 또는 동급)

12. 아세톤(시그마 270725 또는 동급)

용액의 제조

(i) 검정 버퍼(50mM HEPES pH 7.1/0.05% 트윈 20 /5mM (Ca(C₂H₃O₂)₂)의 제조: 1M HEPES 50mL의 양을 800mL 탈이온수에 피펫팅한다. 1M (Ca(C₂H₃O₂)₂) 5mL 및 서팩트-Amps(10% 트윈 20) 5mL를 첨가한다. pH를 확인하고, 필요한 경우 7.1 ± 0.1로 조정한다. 충분한 양의 물을 첨가하여 용적을 1L로 조정하고 용액을 0.22 마이크론 필터를 통해 여과한다. 이 검정 버퍼를 실온에서 최대 3개월 동안 보관할 수 있다.

(iii) 4mg/mL 트리펩티드 GPA 원액의 제조: GPA 트리펩티드 400mg(± 1mg)의 양을 0.1N NaOH 10mL에 용해하고, 완전히 용해될 때까지 와동한다. 충분한 양의 검정 버퍼를 첨가하여 용적이 100mL가 되도록 하고, 용액을 0.5mL 분취량으로 분배하고, -70℃에서 보관한다. 4mg/mL 트리펩티드 GPA 원액을 -70℃에서 최대 1년 동안 보관할 수 있다.

(iv) 0.02N 아세트산의 제조: 1.0N 아세트산 1mL의 양을 정제수 40mL에 첨가한다. 충분한 양의 정제수를 첨가하여 용적을 50mL로 조정한다. 이 용액을 실온에서 최대 1년 동안 보관할 수 있다.

(v) 2mg/mL SRC 기질 원액의 제조: 0.02N 아세트산 23.3mL의 양을 기질이 공급되는 바이알에 직접 첨가한다(하나의 비제한적인 예로 3.75mg/mL에서 100mg SRC로 제공됨). 다른 농도의 SRC 기질이 사용될 수 있다. 계산은 하기와 같다:

100mg ÷ 3.75mg/mL = 26.7mL;

총 용적(mL) = (3.75mg/mL x 26.7mL) / 2mg/mL;

총 용적(50.0mL) - 26.7mL = 23.3mL

용액은 거꾸로 뒤집어 완전히 혼합하고, 2 내지 8℃에서 최대 3개월 동안 보관할 수 있다.

(vi) 0.6mg/mL SRC 기질 작업 용액의 제조: 검정 버퍼 4.2mL의 양을 15mL 원뿔형 튜브에 첨가한다. 이어서 2mg/mL SRC 기질 원액 1.8mL를 첨가하고 용액을 거꾸로 뒤집어 혼합한다. 이 용액은 플레이트에 첨가하기 직전에 준비되어야 한다.

(vii) 120mM 붕산 pH 9.0의 제조: 붕산 7.4g(± 0.5g)의 양을 탈이온수 800mL에 용해한다. 용액을 NaOH를 사용하여 pH 9.0으로 적정하고, 용적을 1L로 조정하기 위해 충분한 탈이온수를 첨가한다. 이 용액을 실온에서 최대 3개월 동안 보관할 수 있다.

(viii) 아세톤 중 1mM 플루오레사민의 제조: 플루오레사민 28 ± 2mg의 양을 아세톤 100mL에 용해한다. 이 용액은 신선하게 준비되고, 빛과 습기로부터 보호되어야 했다.

트리펩티드 GPA 표준 및 연속 희석물의 제조

0.08mg/mL(329μM) 트리펩티드 GPA 표준은 검정 버퍼에 4mg/mL 트리펩티드 GPA 원액을 50배 희석하여 준비된다(예를 들어, 검정 버퍼 980μL 중 4mg/mL GPA 20μL). 검정 플레이트, A 행에서, 329μM 트리펩티드 GPA 표준 200μL를 A1 및 A7에 피펫팅한다. 검정 버퍼 100μL의 양을 A2-A6 및 A8-Al2에 피펫팅한다.

콜라게나아제 시험 샘플의 제조

콜라게나아제 샘플(예를 들어, 동결건조된 콜라게나아제 약물 제품)의 경우 샘플을 적어도 10분 동안 실온에 두고, 재구성하여 3.0μg/mL 원액을 형성한다. 상이한 농도를 사용할 수 있다. 시험용 콜라게나아제 샘플(T1A)은 원액으로부터 검정 버퍼로 희석하여 준비된다. 이 절차를 반복하여 3중 시험 샘플(T1A, T1B, T1C)을 준비한다.

논의

이 방법에서는 50μL의 증가하는 농도의 콜라게나아제 시험 샘플을 96-웰 플레이트에서 50μL의 과잉 기질(0.2mg/mL 최종 농도)과 혼합한다. 검정 버퍼 50μL의 양을 U자 바닥 96웰 폴리프로필렌 반응 플레이트의 C-G 열에 첨가한다. 콜라게나아제 샘플 150μL를 B 열에 피펫팅한다. 이어서, B 열에서 C 열로 콜라게나아제 샘플 100μL를 옮기고, 혼합하고, G 열에 도달할 때까지 그 과정을 반복하여 다중-채널 피펫을 사용하여 1/1.5 연속 희석을 수행한다. G 열에서 100μL의 양을 꺼내 버린다. 블랭크는 검정 버퍼 50μL를 H 열에 피펫팅하여 H 열에서 준비된다. 이 열에는 효소가 포함되어 있지 않다. 표 12에는 B 열에서 H 열까지 기질 50μL를 첨가한 후의 최종 콜라게나아제 농도가 포함되어 있다.

콜라게나아제 반응

항온배양기와 온도 프로브가 켜져 있다(플레이트에 기질을 첨가하기 전 온도 22 ± 1℃). 0.6mg.mL SRC 50μL의 양을 B 행 내지 H 행의 각각의 웰에 첨가하고, 열별로 첨가한 다음 혼합한다. 반응 개시 시간은 기질이 첫 번째 열에 첨가된 후 시작된다. 플레이트를 덮고 45 ± 5분의 총 반응 시간 동안 22 ± 1℃ 항온배양기에 넣는다. 반응을 켄칭하기 위해, 0.5N HCl 100μL를 희석 플레이트의 각각의 웰에 열별로 첨가하고, 혼합한다. 반응 시간은 HCl이 첫 번째 열에 첨가된 후 종료된다.

검출

120mM 보레이트 pH 9.0 195μL의 양을 마이크로플레이트 그라이너 폴리프로필렌 블랙 판독 플레이트의 각 웰에 첨가한다. 켄칭된 반응 혼합물 30μL를 반응 플레이트에서 판독 플레이트의 해당 웰로 옮기고 잘 혼합한다. 이어서 1mM 플루오레사민 75μL를 판독 플레이트의 각 웰에 첨가하고(플루오레사민/아세톤을 분배하기 위해 폴리프로필렌 트레이 사용) 첨가할 때마다 즉시 혼합한다. 플루오레사민 첨가 후 15분 이내에 다음 설정을 사용하여 몰레큘러 디바이시즈 M2 형광 플레이트 판독기로 플레이트를 판독한다: 여기 380nm, 방출 473nm, 컷오프 455nm, 6회 판독/웰, PMT 배지.

GPA 농도(μM) 대 473nm에서의 방출 및 콜라게나아제 농도(ng/mL) 대 473nm에서의 방출을 플롯팅한다. 각각의 플롯에 대해, 고정된 파라미터 없이 선형 회귀가 피팅된다. 콜라게나아제 샘플의 경우, 0점 데이터를 선형 피팅에서 제외하고, 각 샘플에 대한 전체 3중 데이터 세트가 플롯을 생성하는 데 사용된다. 트리펩티드 GPA 표준과 콜라게나아제 샘플의 기울기를 결정한다.

비활성도 및 상대 효능 결정

콜라게나아제 샘플 비활성도를 아래와 같이 계산할 수 있다:

SRC 마이크로플레이트 검정 단위 = ((콜라게나아제 샘플의 기울기) / (트리펩티드 GPA의 기울기 x 항온배양 시간)) x 10⁶

iii. SRC 검정으로 측정된 콜라게나아제 효능

본 발명에 유용한 콜라게나아제는 약 500 내지 약 15,000 SRC 단위/mg의 효능을 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 효능은 약 500 내지 약 12,500 SRC 단위/mg, 또는 약 700 내지 약 10,000 SRC 단위/mg, 또는 약 1,000 내지 약 7,500 SRC 단위/mg, 또는 1,500 내지 약 6,000 SRC 단위/mg, 또는 약 2,500 내지 약 5,000 SRC 단위/mg이다. 대안적으로, 효능은 약 5,000 내지 약 35,000 f-SRC 단위/mg, 또는 약 10,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg, 또는 약 13,000 내지 약 23,000 f-SRC 단위/mg, 또는 약 15,000 내지 약 25,000 f-SRC 단위/mg일 수 있다. 콜라게나아제는 또한 약 980 내지 3,510, 또는 약 1,400 내지 2,700 SRC 마이크로플레이트 검정 단위의 효능을 가질 수 있다.

c. BTC 단위 검정에서 콜라게나아제 효능

콜라게나아제에 대한 소 힘줄 콜라겐 검정은 켈러 및 맨들(Keller and Mandl)(1963)에 의해 수정된, 맨들 등(Mandl et al., 1958)의 절차를 기반으로 한다. 소 힘줄 콜라겐은 불용성 기질이기 때문에 미세하게 분할하는 것이 중요하다. 트립신은 변성된 콜라겐 또는 기타 단백질 불순물의 존재를 설명하기 위해 대조군으로 실행된다. 검정은 콜라게나아제 활성에 필요한 칼슘 이온의 존재하에 실행된다. 가용화된 펩티드의 수는 펩티드의 N-말단 아미노 그룹을 닌히드린과 반응시키고 형성된 부가물의 양을 비색적으로 측정함으로써 결정된다(참조: Rosen 1957).

이 절차의 목적은 콜라겐 기질을 사용하여 콜라게나아제 효소의 비활성도를 시험하는 것이다.

시약 및 용액

1. 콜라겐 기질(콜라겐)

2. 탈이온수(물)

3. 트리스 검정 버퍼

4. 트립신 원액

5. 0.5M HCl

6. 류신 표준 검정 용액(1mM 류신)

7. 로젠 버퍼(Rosen Buffer)

8. 3% 닌히드린

9. 50% 이소프로판올

항온배양

다음과 같이 반응 튜브를 설정하고 라벨링한다: 트립신 대조군용 튜브 3개, 기준 용액용 튜브 6개, 시험중인 각 샘플용 튜브 6개. 각 튜브를 라벨링하고, 뚜껑을 연다. 표 13의 순서로 콜라겐 10 ± 1mg을 계량하고, 계량된 콜라겐을 각 반응 튜브에 넣는다.

시험중인 샘플의 경우 효소의 양은 반응 튜브당 1.6 내지 5.7nmol leu eq/분(ACT)의 활성을 포함해야 한다. 용해되지 않은 샘플은 분석에 사용되기 전에 먼저 트리스 검정 버퍼에 용해해야 한다. 농도(반응 튜브에 첨가하기 전)는 0.0065mg/mL 이상이어야 한다.

매트릭스 패턴을 갖도록 표 14에 따라 반응 튜브를 설정한다. 다음 표에서는 2개의 시험중 샘플을 추정한다. 더 많거나 적은 샘플이 실행되는 경우, 반응 튜브의 수가 조정되지만 패턴은 유지된다. 용적이 일정한 경우, 이는 표 14에 나열되어 있다.

반응 튜브를 닫는다. 내용물을 가볍지만 철저하게 혼합한다. 반응 튜브를 37℃ 수욕에 놓는다. 22 ± 0.5시간 동안 항온배양한다. 항온배양이 시작된 실제 시간, 37℃, 사용된 수욕의 수, 콜라겐 지질의 로트 번호, 및 사용된 로트에 대한 콜라겐 보정 계수 및 사용된 모든 용액의 로트 번호를 기록한다.

켄칭 및 여과

항온배양된 각 반응 튜브에 해당하도록 여과 튜브를 라벨링한다. 라벨링된 각 여과 튜브에 깔때기를 포함하고 접힌 여과지를 놓는다. 항온배양 기간이 끝나면 수욕에서 반응 튜브를 제거한다. 항온배양이 끝난 실제 시간을 기록한다.

반응 튜브의 뚜껑을 열고 뚜껑을 버린다. 각 반응 튜브에 0.5M HCl 2mL를 분배하여 반응을 켄칭한다. 튜브의 내용물을 철저히 혼합한다. 각 반응 튜브의 내용물을 적절한 여과 튜브로 여과한다.

분해되지 않은 콜라겐은 단시간에 HCl에 의해 용해될 수 있기 때문에 이전의 두 단계는 가능한 한 빨리 완료되어야 한다. 여액은 발색 전 최대 95.5시간 동안 커버가 있는 여과 튜브에서 냉장 보관할 수 있다. 냉장 및 보관 시간을 기록한다.

발색

다음과 같이 비등 튜브를 설정하고 라벨링한다: 물 및 류신 대조군용 튜브 6개(단계 1) 및 각각의 여과통(filtrate tub)용 튜브 2개(단계 1). 다음 양의 물과 류신 표준 검정 용액을 6개의 류신 대조군 튜브에 넣는다.

물 0.8mL를 각각의 비등 튜브에 피펫팅한다(단계 2). 각 샘플에서 여액 0.2mL을 적절하게 라벨링된 비등 튜브에 피펫팅한다. 로젠 버퍼 0.5mL를 각각의 비등 튜브에 분배한다. 봉쇄 후드 아래에서 3% 닌히드린 0.5mL를 각각의 비등 튜브에 분배한다. 와동 믹서에서 각 튜브의 내용물을 철저히 혼합한다. 흄 후드 내의 비등 수욕에 비등 튜브를 놓는다. 15 ± 1분 동안 비등시킨다. 비등 기간이 끝나면 수욕에서 비등 튜브를 제거한다. 봉쇄 후드 아래에서 각각의 비등 튜브에 50% 이소프로판올 5.0mL를 분배하고, 내용물을 철저히 혼합한다. 흡광도를 판독하기 전에 비등 튜브가 주변 온도(적어도 10분)에 도달하도록 한다.

흡광도 판독

봉쇄 후드 아래에서 작업하는 동안 튜브의 흡광도를 판독한다. 분광 광도계를 켜고 예열되도록 한다. 분광 광도계의 파장을 570nm로 설정한다. 50% 이소프로판올에 대해 분광 광도계를 제로화한다. 물, 류신, 트립신 대조군 및 시험중인 샘플의 흡광도(A₅₇₀)를 판독한다. 첫 번째 샘플이 판독된 시간을 시간 단위로 기록한다. 판독 값을 1000 X A₅₇₀으로 기록하고 마지막 샘플이 판독된 시간을 시간 단위로 기록한다. 모든 판독은 1시간 간격 이내로 수행해야 한다.

계산 원리

총 판독 시간 및 총 항온배양 시간을 분 단위로 계산한다. 총 판독 시간은 60분 미만이어야 하며, 총 항온배양 시간은 1290 내지 1350분이어야 한다. 선형 최소 제곱법을 사용하여 류신 표준에 대한 기울기 "b" 및 상관 계수 "r"을 계산한다(x = nmol 류신 대 y = A₅₇₀ 판독 값). "b" 값의 단위는 A₅₇₀/nmol 류신이다. "b" 값을 소수점 둘째 자리까지 기록한다. 류신에 대한 b 값은 2.88 내지 3.33이여야 한다. 트립신 대조군(T)에 대한 평균 판독 값을 계산한다. 트립신 대조군(T)에 대한 평균 판독 값은 221 내지 338이어야 한다. 이 평균을 가장 가까운 정수로 기록한다(단계 A). 각 반응 튜브에 대한 평균 중복 샘플 A₅₇₀ 판독 값. 이 숫자를 가장 가까운 정수로 기록한다. 평균 샘플 A₅₇₀ 판독 값에서 평균 트립신(단계 A)을 빼서 순 샘플 판독 값을 얻는다.

다음과 같이 nmol leu eq/분으로 튜브당 활성(ACT)을 계산한다:

여기서 20은 전개된 반응 혼합물의 양에 대한 희석 인자이고, "b"는 류신 표준 곡선의 기울기이다. 이 숫자를 소수점 한 자리까지 기록한다. 시험중인 샘플의 튜브당 활성은 1.6 내지 5.7 nmol leu eq/분이어야 한다.

다음과 같이 BTC 단위로 활성을 계산한다:

BTC 단위 = 활성(nmol leu eq/분) x 콜라겐 보정 계수.

다음과 같이 샘플 1mL당 BTC 단위로 활성을 계산한다:

다음과 같이 BTC 단위/mm로 샘플의 비활성도를 계산한다:

BTC 단위를 ABC 단위로 전환하는 방법은 다음과 같다:

ABC 단위 = BTC 단위 x 1.09

i. BTC 단위 및 ABC 단위

콜라게나아제가 약 5,000 BTC 단위/mg 내지 약 25,000 BTC 단위/mg, 또는 약 10,000 BTC 단위/mg 내지 약 25,000 BTC 단위/mg, 또는 약 15,000 BTC 단위/mg, 또는 약 17,500 BTC 단위/mg, 또는 약 20,000 BTC 단위/mg, 또는 약 22,500 BTC 단위/mg, 또는 약 9,175 BTC 단위/0.58 mg, 또는 15,817 BTC 단위/mg의 비활성도를 갖는 다양한 콜라게나아제 조성물이 사용될 수 있으며, 여기서 "mg"은 (부형제 및 기타 성분과는 다른) 조성물에 존재하는 콜라게나아제(들)의 양을 나타낸다.

또한, 콜라게나아제가 약 5,000 ABC 단위/mg 내지 약 25,000 ABC 단위/mg, 또는 약 10,000 ABC 단위/mg 내지 약 25,000 ABC 단위/mg, 또는 약 15,000 ABC 단위/mg, 또는 약 17,500 ABC 단위/mg, 또는 약 20,000 ABC 단위/mg, 또는 약 22,500 ABC 단위/mg, 또는 약 10,000 ABC 단위/0.58 mg, 또는 17,241 ABC 단위/mg의 비활성도를 갖는 다양한 콜라게나아제 조성물이 사용될 수 있으며, 여기서 "mg"은 (부형제 및 기타 성분과는 다른) 조성물에 존재하는 콜라게나아제(들)의 양을 나타낸다.

d. 기타 검정법

표지된 콜라겐을 사용하는 검정 방법은 문헌(참조: Gisslow et al., Anal. Biochem., 68: 70-78 (1975); Robertson et al., Clinica Chimica Acta, 42:43-45 (1972); Sakamoto et al., A New Method for the Assay of Tissue Collagenase (36297) (1972))에 보고되었다. 기타 검정법 중 하나는 워싱턴 바이오케미칼 코포레이션 검정법(http://www.worthington-biochem.com/CLS/assay.html)(2019년 7월 3일 엑세스)이다.

4. 콜라게나아제의 용량

본원에 사용된 콜라게나아제 용량에 대해, 본 발명은 피하 주사시 격막에 결합하고 용해하기에 충분한 콜라게나아제의 치료적 유효량을 제공하여 치료전 기준선에 비해 셀룰라이트의 외관을 감소시킨다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 약 0.01mg 내지 약 20mg의 양으로 단일 또는 분할 용량으로 주사될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 0.05mg 내지 약 15mg의 양으로 단일 또는 분할 용량으로 주사될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 0.10mg 내지 약 10mg의 양으로 단일 또는 분할 용량으로 주사될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 0.15mg 내지 약 5mg의 양으로 단일 또는 분할 용량으로 주사될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 0.20mg 내지 약 3mg의 양으로 단일 또는 분할 용량으로 주사될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 0.25mg 내지 약 2mg의 양으로 단일 또는 분할 용량으로 주사될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 0.05mg, 약 0.10mg, 약 0.15mg, 약 0.20mg, 약 0.25mg, 약 0.30mg, 약 0.35mg, 약 0.40mg, 약 0.45mg, 약 0.50mg, 약 0.55mg, 약 0.60mg, 약 0.65mg, 약 0.70mg, 약 0.75mg, 약 0.80mg, 약 0.85mg, 약 0.90mg, 약 0.95mg, 약 1.00mg, 1.05mg, 약 1.10mg, 약 1.15mg, 약 1.20mg, 약 1.25mg, 약 1.30mg, 약 1.35mg, 약 1.40mg, 약 1.45mg, 약 1.50mg, 약 1.55mg, 약 1.60mg, 약 1.65mg, 약 1.70mg, 약 1.75mg, 약 1.80mg, 약 1.85mg, 약 1.90mg, 약 1.95mg, 약 2.00mg, 2.05mg, 약 2.10mg, 약 2.15mg, 약 2.20mg, 약 2.25mg, 약 2.30mg, 약 2.35mg, 약 2.40mg, 약 2.45mg, 약 2.50mg, 약 2.55mg, 약 2.60mg, 약 2.65mg, 약 2.70mg, 약 2.75mg, 약 2.80mg, 약 2.85mg, 약 2.90mg, 약 2.95mg, 약 3.00mg, 3.05mg, 약 3.10mg, 약 3.15mg, 약 3.20mg, 약 3.25mg, 약 3.30mg, 약 3.35mg, 약 3.40mg, 약 3.45mg, 약 3.50mg, 약 3.55mg, 약 3.60mg, 약 3.65mg, 약 3.70mg, 약 3.75mg, 약 3.80mg, 약 3.85mg, 약 3.90mg, 약 3.95mg, 약 4.00mg, 4.05mg, 약 4.10mg, 약 4.15mg, 약 4.20mg, 약 4.25mg, 약 4.30mg, 약 4.35mg, 약 4.40mg, 약 4.45mg, 약 4.50mg, 약 4.55mg, 약 4.60mg, 약 4.65mg, 약 4.70mg, 약 4.75mg, 약 4.80mg, 약 4.85mg, 약 4.90mg, 약 4.95mg, 약 5.00mg, 5.05mg, 약 5.10mg, 약 5.15mg, 약 5.20mg, 약 5.25mg, 약 5.30mg, 약 5.35mg, 약 5.40mg, 약 5.45mg, 약 5.50mg, 약 5.55mg, 약 5.60mg, 약 5.65mg, 약 5.70mg, 약 5.75mg, 약 5.80mg, 약 5.85mg, 약 5.90mg, 약 5.95mg, 또는 약 6.00mg의 양으로 주사될 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 2.6분^-1 내지 5.2분^-1의 V_max를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 3.0분^-1 내지 5.0분^-1의 V_max를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 3.4분^-1 내지 4.8분^-1의 V_max를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 3.5분^-1 내지 4.5분^-1의 V_max를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 2.0분^-1, 약 2.1분^-1, 약 2.2분^-1, 약 2.3분^-1, 약 2.4분^-1, 약 2.5분^-1, 약 2.6분^-1, 약 2.7분^-1, 약 2.8분^-1, 약 2.9분^-1, 약 3.0분^-1, 약 3.1분^-1, 약 3.2분^-1, 약 3.3분^-1, 약 3.4분^-1, 약 3.5분^-1, 약 3.6분^-1, 약 3.7분^-1, 약 3.8분^-1, 약 3.9분^-1, 약 4.0분^-1, 약 4.1분^-1, 약 4.2분^-1, 약 4.3분^-1, 약 4.4분^-1, 약 4.5분^-1, 약 4.6분^-1, 약 4.7분^-1, 약 4.8분^-1, 약 4.9분^-1, 약 5.0분^-1, 약 5.1분^-1, 약 5.2분^-1, 약 5.3분^-1, 약 5.4분^-1, 약 5.5분^-1, 약 5.6분^-1, 약 5.7분^-1, 약 5.8분^-1, 약 5.9분^-1, 또는 약 6.0분^-1의 V_max를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.7분^-1 내지 7.6분^-1의 V_max, 또는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 1 내지 6, 또는 약 2 내지 5, 또는 약 3 내지 4분^-1의 V_max를 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 135분^-1 내지 268분^-1의 V_max를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 150분^-1 내지 250분^-1의 V_max를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 175분^-1 내지 225분^-1의 V_max를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 130분^-1, 약 135분^-1, 약 140분^-1, 약 145분^-1, 약 150분^-1, 약 155분^-1, 약 160분^-1, 약 165분^-1, 약 170분^-1, 약 175분^-1, 약 180분^-1, 약 185분^-1, 약 190분^-1, 약 195분^-1, 약 200분^-1, 약 205분^-1, 약 210분^-1, 약 215분^-1, 약 220분^-1, 약 225분^-1, 약 230분^-1, 약 235분^-1, 약 240분^-1, 약 245분^-1, 약 250분^-1, 약 255분^-1, 약 260분^-1, 약 265분^-1, 약 270분^-1, 약 275분^-1, 또는 약 280분^-1의 V_max를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 4분^-1 내지 400분^-1의 V_max, 또는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.3 내지 30.5, 또는 약 10 내지 375, 또는 약 20 내지 350, 또는 약 50 내지 300, 또는 약 100 내지 275분^-1의 V_max를 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 75mM 내지 147mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 80mM 내지 140mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 85mM 내지 130mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 90mM 내지 120mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 70mM, 약 72mM, 약 75mM, 약 77mM, 약 80mM, 약 82mM, 약 85mM, 약 87mM, 약 90mM, 약 92mM, 약 95mM, 약 97mM, 약 100mM, 약 102mM, 약 105mM, 약 107mM, 약 110mM, 약 112mM, 약 115mM, 약 117mM, 약 120mM, 약 122mM, 약 125mM, 약 127mM, 약 130mM, 약 132mM, 약 135mM, 약 137mM, 약 140mM, 약 142mM, 약 145mM, 약 147mM, 약 150mM, 약 152mM, 약 155mM, 또는 약 157mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 4.4mM 내지 437mM의 K_m, 또는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 5 내지 400, 또는 약 20 내지 375, 또는 약 50 내지 325, 또는 약 100 내지 275, 또는 약 150 내지 250mM, 또는 약 4.1 내지 410 나노몰의 K_m을 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.03mM 내지 3.1mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 1.00mM 내지 1.60mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 1.10mM 내지 1.50mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 1.15mM 내지 1.40mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.80mM, 약 0.82mM, 약 0.85mM, 약 0.87mM, 약 0.90mM, 약 0.92mM, 약 0.95mM, 약 0.97mM, 약 1.00mM, 약 1.02mM, 약 1.05mM, 약 1.07mM, 약 1.10mM, 약 1.12mM, 약 1.15mM, 약 1.17mM, 약 1.20mM, 약 1.22mM, 약 1.25mM, 약 1.27mM, 약 1.30mM, 약 1.32mM, 약 1.35mM, 약 1.37mM, 약 1.40mM, 약 1.42mM, 약 1.45mM, 약 1.47mM, 약 1.50mM, 약 1.52mM, 약 1.55mM, 약 1.57mM, 약 1.60mM, 약 1.62mM, 약 1.65mM, 또는 약 1.67mM의 K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.027mM 내지 2.7mM의 K_m, 또는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.1 내지 2, 또는 약 0.5 내지 1.5, 또는 약 1 내지 1.35mM의 K_m을 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 36초^-1 내지 671초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 50초^-1 내지 600초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 60초^-1 내지 500초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 70초^-1 내지 400초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 100초^-1 내지 350초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 30초^-1, 약 40초^-1, 약 50초^-1, 약 60초^-1, 약 70초^-1, 약 80초^-1, 약 90초^-1, 약 100초^-1, 약 110초^-1, 약 120초^-1, 약 130초^-1, 약 140초^-1, 약 150초^-1, 약 160초^-1, 약 170초^-1, 약 180초^-1, 약 190초^-1, 약 200초^-1, 약 210초^-1, 약 220초^-1, 약 230초^-1, 약 240초^-1, 약 250초^-1, 약 260초^-1, 약 270초^-1, 약 280초^-1, 약 290초^-1, 약 300초^-1, 약 310초^-1, 약 320초^-1, 약 330초^-1, 약 340초^-1, 약 350초^-1, 약 360초^-1, 약 370초^-1, 약 380초^-1, 약 390초^-1, 약 400초^-1, 약 410초^-1, 약 420초^-1, 약 430초^-1, 약 440초^-1, 약 450초^-1, 약 460초^-1, 약 470초^-1, 약 480초^-1, 약 490초^-1, 약 500초^-1, 약 510초^-1, 약 520초^-1, 약 530초^-1, 약 540초^-1, 약 550초^-1, 약 560초^-1, 약 570초^-1, 약 580초^-1, 약 590초^-1, 약 600초^-1, 약 610초^-1, 약 620초^-1, 약 630초^-1, 약 640초^-1, 약 650초^-1, 약 660초^-1, 약 670초^-1, 약 680초^-1, 약 690초^-1, 약 700초^-1, 약 710초^-1, 약 720초^-1, 약 730초^-1, 약 740초^-1, 약 750초^-1, 또는 약 760초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 1초^-1 내지 107초^-1의 K_cat, 또는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 10 내지 100, 또는 약 20 내지 80, 또는 약 30 내지 70, 또는 약 40 내지 60초^-1의 K_cat를 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 90 내지 10,000, 또는 약 41,000초^-1 내지 약 81,000초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이 약 45,000초^-1 내지 약 75,000초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 50,000초^-1 내지 약 70,000초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 55,000초^-1 내지 약 65,000초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 35,000초^-1, 약 37,500초^-1, 약 40,000초^-1, 약 42,500초^-1, 약 45,000초^-1, 약 47,500초^-1, 약 50,000초^-1, 약 52,500초^-1, 약 55,000초^-1, 약 57,500초^-1, 약 60,000초^-1, 약 62,500초^-1, 약 65,000초^-1, 약 67,500초^-1, 약 70,000초^-1, 약 72,500초^-1, 약 75,000초^-1, 약 77,500초^-1, 약 80,000초^-1, 약 82,500초^-1, 또는 약 85,000초^-1의 K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 1215초^-1 내지 약 120,000초^-1의 K_cat, 또는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 2,000 내지 100,000, 또는 약 10,000 내지 90,000, 또는 약 20,000 내지 80,000, 또는 약 30,000 내지 70,000, 또는 약 40,000 내지 60,000초^-1의 K_cat를 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 376 내지 38,000μ초, 또는 약 14,000μ초 내지 약 28,000μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 16,000μ초 내지 약 26,000μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다. 일 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 18,000μ초 내지 약 24,000μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다. 일 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 20,000μ초 내지 약 22,000μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 12,500μ초, 약 12,750μ초, 약 13,000μ초, 약 13,250μ초, 약 13,500μ초, 약 13,750μ초, 약 14,000μ초, 약 14,250μ초, 약 14,750μ초, 약 15,000μ초, 약 15,250μ초, 약 15,500μ초, 약 15,750μ초, 약 16,000μ초, 약 16,250μ초, 약 16,500μ초, 약 16,750μ초, 약 17,000μ초, 약 17,250μ초, 약 17,500μ초, 약 17,750μ초, 약 18,000μ초, 약 18,250μ초, 약 18,500μ초, 약 18,750μ초, 약 19,000μ초, 약 19,250μ초, 약 19,500μ초, 약 19,750μ초, 약 20,000μ초, 약 20,250μ초, 약 20,500μ초, 약 20,750μ초, 약 21,000μ초, 약 21,250μ초, 약 21,500μ초, 약 21,750μ초, 약 22,000μ초, 약 22,250μ초, 약 22,500μ초, 약 22,750μ초, 약 23,000μ초, 약 23,250μ초, 약 23,500μ초, 약 23,750μ초, 약 24,000μ초, 약 24,250μ초, 약 24,500μ초, 약 24,750μ초, 약 25,000μ초, 약 25,250μ초, 약 25,500μ초, 약 25,750μ초, 약 26,000μ초, 약 26,250μ초, 약 26,500μ초, 약 26,750μ초, 약 27,000μ초, 약 27,250μ초, 약 27,500μ초, 약 27,750μ초, 약 28,000μ초, 약 28,250μ초, 약 28,500μ초, 약 28,750μ초, 약 29,000μ초, 또는 약 29,250μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 370μ초 내지 약 36,700μ초의 1/K_cat, 또는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 750 내지 30,000, 또는 약 2,500 내지 25,000, 또는 약 5,000 내지 20,000, 또는 약 10,000 내지 18,000, 또는 약 15,000μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 4μ초 내지 약 430μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 14μ초 내지 약 23μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 16μ초 내지 약 21μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 10.0μ초, 약 10.2μ초, 약 10.4μ초, 약 10.6μ초, 약 10.8μ초, 약 11.0μ초, 약 11.2μ초, 약 11.4μ초, 약 11.6μ초, 약 11.8μ초, 약 12.0μ초, 약 12.2μ초, 약 12.4μ초, 약 12.6μ초, 약 12.8μ초, 약 13.0μ초, 약 13.2μ초, 약 13.4μ초, 약 13.6μ초, 약 13.8μ초, 약 14.0μ초, 약 14.2μ초, 약 14.4μ초, 약 14.6μ초, 약 14.8μ초, 약 15.0μ초, 약 15.2μ초, 약 15.4μ초, 약 15.6μ초, 약 15.8μ초, 약 16.0μ초, 약 16.2μ초, 약 16.4μ초, 약 16.6μ초, 약 16.8μ초, 약 17.0μ초, 약 17.2μ초, 약 17.4μ초, 약 17.6μ초, 약 17.8μ초, 약 18.0μ초, 약 18.2μ초, 약 18.4μ초, 약 18.6μ초, 약 18.8μ초, 약 19.0μ초, 약 19.2μ초, 약 19.4μ초, 약 19.6μ초, 약 19.8μ초, 약 20.0μ초, 약 20.2μ초, 약 20.4μ초, 약 20.6μ초, 약 20.8μ초, 약 21.0μ초, 약 21.2μ초, 약 21.4μ초, 약 21.6μ초, 약 21.8μ초, 약 22.0μ초, 약 22.2μ초, 약 22.4μ초, 약 22.6μ초, 약 22.8μ초, 약 23.0μ초, 약 23.2μ초, 약 23.4μ초, 약 23.6μ초, 약 23.8μ초, 약 24.0μ초, 약 24.2μ초, 약 24.4μ초, 약 24.6μ초, 약 24.8μ초, 약 25.0μ초, 약 25.2μ초, 약 25.4μ초, 약 25.6μ초, 약 25.8μ초, 약 26.0μ초, 약 26.2μ초, 약 26.4μ초, 약 26.8μ초, 약 27.0μ초, 약 27.2μ초, 또는 약 27.4μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.3μ초 내지 약 32μ초의 1/K_cat, 또는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 1 내지 30, 또는 약 5 내지 25, 또는 약 10 내지 20, 또는 약 15μ초의 1/K_cat를 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 5,140 mM^-1초^-1 내지 약 508,814 mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.50 mM^-1초^-1 내지 약 7.75 mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.75 mM^-1초^-1 내지 약 7.00 mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 1.00mM^-1초^-1 내지 약 6.00mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.10mM^-1초^-1, 약 0.20mM^-1초^-1, 약 0.30mM^-1초^-1, 약 0.40mM^-1초^-1, 약 0.50mM^-1초^-1, 약 0.60mM^-1초^-1, 약 0.70mM^-1초^-1, 약 0.80mM^-1초^-1, 약 0.90mM^-1초^-1, 약 1.00mM^-1초^-1, 약 1.10mM^-1초^-1, 약 1.20mM^-1초^-1, 약 1.30mM^-1초^-1, 약 1.40mM^-1초^-1, 약 1.50mM^-1초^-1, 약 1.60mM^-1초^-1, 약 1.70mM^-1초^-1, 약 1.80mM^-1초^-1, 약 1.90mM^-1초^-1, 약 2.00mM^-1초^-1, 약 2.10mM^-1초^-1, 약 2.20mM^-1초^-1, 약 2.30mM^-1초^-1, 약 2.40mM^-1초^-1, 약 2.50mM^-1초^-1, 약 2.60mM^-1초^-1, 약 2.70mM^-1초^-1, 약 2.80mM^-1초^-1, 약 2.90mM^-1초^-1, 약 3.00mM^-1초^-1, 약 3.10mM^-1초^-1, 약 3.20mM^-1초^-1, 약 3.30mM^-1초^-1, 약 3.40mM^-1초^-1, 약 3.50mM^-1초^-1, 약 3.60mM^-1초^-1, 약 3.70mM^-1초^-1, 약 3.80mM^-1초^-1, 약 3.90mM^-1초^-1, 약 4.00mM^-1초^-1, 약 4.10mM^-1초^-1, 약 4.20mM^-1초^-1, 약 4.30mM^-1초^-1, 약 4.40mM^-1초^-1, 약 4.50mM^-1초^-1, 약 4.60mM^-1초^-1, 약 4.70mM^-1초^-1, 약 4.80mM^-1초^-1, 약 4.90mM^-1초^-1, 약 5.00mM^-1초^-1, 약 5.10mM^-1초^-1, 약 5.20mM^-1초^-1, 약 5.30mM^-1초^-1, 약 5.40mM^-1초^-1, 약 5.50mM^-1초^-1, 약 5.60mM^-1초^-1, 약 5.70mM^-1초^-1, 약 5.80mM^-1초^-1, 약 5.90mM^-1초^-1, 약 6.00mM^-1초^-1, 약 6.10mM^-1초^-1, 약 6.20mM^-1초^-1, 약 6.30mM^-1초^-1, 약 6.40mM^-1초^-1, 약 6.50mM^-1초^-1, 약 6.60mM^-1초^-1, 약 6.70mM^-1초^-1, 약 6.80mM^-1초^-1, 약 6.90mM^-1초^-1, 약 7.00mM^-1초^-1, 약 7.10mM^-1초^-1, 약 7.20mM^-1초^-1, 약 7.30mM^-1초^-1, 또는 약 7.40mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.0048mM^-1초^-1 내지 약 0.47mM^-1초^-1의 K_cat/K_m, 또는 SRC 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 0.009 내지 약 0.3, 또는 약 0.01 내지 약 0.25, 또는 약 0.1 내지 0.25mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 60mM^-1초^-1 내지 약 6,000mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 30,000mM^-1초^-1 내지 약 85,000mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 36,000mM^-1초^-1 내지 약 77,000mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 40,000mM^-1초^-1 내지 약 70,000mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 40,000mM^-1초^-1, 약 42,000mM^-1초^-1, 약 44,000mM^-1초^-1, 약 46,000mM^-1초^-1, 약 48,000mM^-1초^-1, 약 50,000mM^-1초^-1, 약 52,000mM^-1초^-1, 약 54,000mM^-1초^-1, 약 56,000mM^-1초^-1, 약 58,000mM^-1초^-1, 약 60,000mM^-1초^-1, 약 62,000mM^-1초^-1, 약 64,000mM^-1초^-1, 약 66,000mM^-1초^-1, 약 68,000mM^-1초^-1, 약 70,000mM^-1초^-1, 약 72,000mM^-1초^-1, 약 74,000mM^-1초^-1, 약 76,000mM^-1초^-1, 약 78,000mM^-1초^-1, 약 80,000mM^-1초^-1, 약 82,000mM^-1초^-1, 약 84,000mM^-1초^-1, 약 86,000mM^-1초^-1, 약 88,000mM^-1초^-1, 약 90,000mM^-1초^-1, 약 92,000mM^-1초^-1, 약 94,000mM^-1초^-1, 또는 약 96,000mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 900mM^-1초^-1 내지 약 90,000mM^-1초^-1의 K_cat/K_m, 또는 GPA 검정을 사용하여 측정된 바와 같이, 약 2,000 내지 80,000, 또는 약 10,000 내지 70,000, 또는 약 20,000 내지 60,000, 또는 약 30,000 내지 50,000, 또는 약 40,000 내지 45,000mM^-1초^-1의 K_cat/K_m을 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 약 60kDa 내지 약 130kDa의 분자 질량을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 70kDa 내지 약 130kDa의 분자 질량을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 80kDa 내지 약 120kDa의 분자 질량을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 90kDa 내지 약 120kDa의 분자 질량을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 100kDa 내지 약 110kDa의 분자 질량을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 55kDa, 약 57kDa, 약 60kDa, 약 62kDa, 약 65kDa, 약 67kDa, 약 70kDa, 약 72kDa, 약 75kDa, 약 77kDa, 약 80kDa, 약 82kDa, 약 85kDa, 약 87kDa, 약 90kDa, 약 92kDa, 약 95kDa, 약 97kDa, 약 100kDa, 약 102kDa, 약 105kDa, 약 107kDa, 약 110kDa, 약 112kDa, 약 115kDa, 약 117kDa, 약 120kDa, 약 122kDa, 약 125kDa, 약 127kDa, 약 130kDa, 약 132kDa, 약 135kDa, 또는 약 137kDa의 분자 질량을 가질 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 역상 HPLC에 의해 측정된 바와 같이, 적어도 80%의 순도를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 역상 HPLC에 의해 측정된 바와 같이, 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99%의 순도를 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 면적 기준으로 1% 이하의 클로스트리파인을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 면적 기준으로 1% 이하의 젤라티나아제를 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 면적 기준으로 1% 이하의 류펩틴을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 1 cfu/mL 이하의 생균수를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 2,500 내지 약 25,000 SRC 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 5,000 내지 약 20,000 SRC 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 500, 약 1,000, 약 1,500, 약 2,000, 약 2,500, 약 3,000, 약 3,500, 약 4,000, 약 4,500, 약 5,000, 약 5,500, 약 6,000, 약 6,500, 약 7,000, 약 7,500, 약 8,000, 약 8,500, 약 9,000, 약 9,500, 약 10,000, 약 10,500, 약 11,000, 약 11,500, 약 12,000, 약 12,500, 약 13,000, 약 13,500, 약 14,000, 약 14,500, 약 15,000, 약 15,500, 약 16,000, 약 16,500, 약 17,000, 약 17,500, 약 18,000, 약 18,500, 약 19,000, 약 19,500, 약 20,000, 약 20,500, 약 21,000, 약 21,500, 약 22,000, 약 22,500, 약 23,000, 약 23,500, 약 24,000, 약 24,500, 약 25,000, 약 25,500, 약 26,000, 약 26,500, 약 27,000, 약 27,500, 약 28,000, 약 28,500, 약 29,000, 약 29,500, 또는 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 7,500 내지 약 25,000 f-SRC 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 10,000 내지 약 20,000 f-SRC 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 2,500, 약 3,000, 약 3,500, 약 4,000, 약 4,500, 약 5,000, 약 5,500, 약 6,000, 약 6,500, 약 7,000, 약 7,500, 약 8,000, 약 8,500, 약 9,000, 약 9,500, 약 10,000, 약 10,500, 약 11,000, 약 11,500, 약 12,000, 약 12,500, 약 13,000, 약 13,500, 약 14,000, 약 14,500, 약 15,000, 약 15,500, 약 16,000, 약 16,500, 약 17,000, 약 17,500, 약 18,000, 약 18,500, 약 19,000, 약 19,500, 약 20,000, 약 20,500, 약 21,000, 약 21,500, 약 22,000, 약 22,500, 약 23,000, 약 23,500, 약 24,000, 약 24,500, 약 25,000, 약 25,500, 약 26,000, 약 26,500, 약 27,000, 약 27,500, 약 28,000, 약 28,500, 약 29,000, 약 29,500, 또는 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 150,000 내지 약 350,000 GPA 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 200,000 내지 약 300,000 GPA 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 100,000, 약 110,000, 약 120,000, 약 130,000, 약 140,000, 약 150,000, 약 160,000, 약 170,000, 약 180,000, 약 190,000, 약 200,000, 약 210,000, 약 220,000, 약 230,000, 약 240,000, 약 250,000, 약 260,000, 약 270,000, 약 280,000, 약 290,000, 약 300,000, 약 310,000, 약 320,000, 약 330,000, 약 340,000, 약 350,000, 약 360,000, 약 370,000, 약 380,000, 약 390,000, 또는 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 250,000 내지 약 450,000 f-GPA 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 300,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 175,000, 약 185,000, 약 195,000, 약 205,000, 약 215,000, 약 225,000, 약 235,000, 약 245,000, 약 255,000, 약 265,000, 약 275,000, 약 285,000, 약 295,000, 약 305,000, 약 315,000, 약 325,000, 약 335,000, 약 345,000, 약 355,000, 약 365,000, 약 375,000, 약 385,000, 약 395,000, 약 405,000, 약 415,000, 약 425,000, 약 435,000, 약 445,000, 약 455,000, 약 465,000, 약 475,000, 약 485,000, 또는 약 495,000 f-GPA 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 콜라게나아제는 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 콜라게나아제는 약 7,500 내지 약 20,000 ABC 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 콜라게나아제는 약 10,000 내지 약 17,500 ABC 단위/mg의 효능을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 콜라게나아제는 약 5,000, 약 5,500, 약 6,000, 약 6,500, 약 7,000, 약 7,500, 약 8,000, 약 8,500, 약 9,000, 약 9,500, 약 10,000, 약 10,500, 약 11,000, 약 11,500, 약 12,000, 약 12,500, 약 13,000, 약 13,500, 약 14,000, 약 14,500, 약 15,000, 약 15,500, 약 16,000, 약 16,500, 약 17,000, 약 17,500, 약 18,000, 약 18,500, 약 19,000, 약 19,500, 약 20,000, 약 20,500, 약 21,000, 약 21,500, 약 22,000, 약 22,500, 약 23,000, 약 23,500, 약 24,000, 약 24,500, 또는 약 25,000 ABC 단위/mg을 포함할 수 있다.

또 다른 구현예에서, 콜라게나아제 조성물은 AUX I과 AUX II 비율이 대략 1:1인 CCH를 포함한다. 0.1-2:1, 또는 0.25-2:1, 또는 0.5-2:1, 또는 0.75-2:1, 또는 1:0.1-2, 또는 1:0.25-2, 또는 1:0.5-2, 또는 1:0.75-2, 또는 1:0, 또는 0:1과 같이 다른 비율의 AUX I 및 AUX II를 사용할 수 있다. 각각의 AUX I 및 AUX II는 역상 HPLC에 의해 측정된 바와 같이 적어도 80%, 또는 85%, 또는 90%, 또는 91%, 또는 92%, 또는 93%, 또는 94%, 또는 95%, 또는 96%, 또는 97%, 또는 98%, 또는 99%, 또는 100%의 면적 순도를 가질 수 있다.

다른 예에서, 콜라게나아제 조성물은 액체일 수 있거나 희석제를 사용하여 동결건조된 고체 형태로부터 재구성된다. 혼합물의 용량은 희석제와 상관없이 존재하는 콜라게나아제의 양에 의해 측정되며, 1회 이상의 주사에서 약 0.1mg 내지 약 20mg을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 투여되는 용량은 1회 이상의 주사에서 약 0.06mg, 0.48mg, 0.84mg, 1.68mg, 2.52mg, 3.36mg, 4.2mg, 5.04mg, 5.88mg, 6.72mg, 7.56mg, 또는 8.4mg이다.

예를 들어, 약 0.06mg, 0.48mg, 0.84mg, 또는 1.68mg이 약 12회 분할 주사로 투여된다. 주사되는 콜라게나아제 조성물의 용적은 주사당 0.01mL 내지 3mL, 또는 치료 방문당 총 약 0.2mL 내지 150mL의 범위일 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 용량은 CCH를 포함하는 콜라게나아제 조성물에 대한 것이다. 또 다른 구현예에서, 상기 용량은 다음의 특성 중 하나 이상을 갖는 콜라게나아제 조성물에 대한 것이다:

ㆍ 약 60kDa 내지 약 130kDa, 또는 약 70 내지 약 130kDa, 또는 약 80 내지 약 120kDa, 또는 약 90 내지 약 120kDa, 또는 약 100 내지 약 110kDa의 분자 질량.

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

또 다른 구현예에서, 약 0.84mg의 CCH가 치료 부위당 약 12회의 균등하게 분할된 주사로 주입된다(약 0.07mg x 12회 주사 = 약 0.84mg). 일부 경우에, 0.84mg을 사용한 이러한 치료는 2, 3, 4 또는 5회 치료 방문에 대해 10 내지 40일마다 발생한다. 다른 경우에, 1회 치료 방문시 또는 2회, 3회, 4회 또는 5회 치료 방문에 대해 10 내지 40일마다 하나 이상의 치료 부위에 0.84mg을 주입한다. 다른 구현예에서, 5회 초과의 치료 방문이 있다.

또 다른 측면에서, 치료 부위(들)에 주사될 수 있는 콜라게나아제의 양은 1회 이상의 주사에서 치료 방문당 약 0.001mg 내지 20mg 콜라게나아제이고, 예를 들어, 용량은 약 3 내지 약 100회 주사로 균등하게 분할된다. 콜라게나아제는 액체 형태이거나 희석제를 사용하여 동결건조된 고체로부터 재구성된다. 콜라게나아제의 용량은 희석제와 상관없이 콜라게나아제의 양에 의해 측정되며, 약 0.1mg 내지 1mg, 또는 0.25mg 내지 0.75mg, 또는 0.1mg 내지 2mg, 또는 0.25mg 내지 1.75mg, 또는 0.5mg 내지 1mg, 0.1mg 내지 3mg, 또는 0.25mg 내지 2.75mg, 또는 0.5mg 내지 2.5mg, 또는 0.75mg 내지 2.25mg, 또는 1mg 내지 2mg, 또는 0.1mg 내지 4mg, 또는 0.25mg 내지 3.75mg, 또는 0.5mg 내지 3.5mg, 또는 0.75mg 내지 3mg, 또는 1mg 내지 3mg을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 용량은 1회 이상의 주사에서 약 0.001mg, 0.01mg, 0.04mg, 0.05mg, 0.07mg, 0.1mg, 0.2mg, 0.3mg, 0.4mg, 0.5mg, 0.6mg, 0.7mg, 0.8mg, 0.9mg, 1mg, 1.1mg, 1.2mg, 1.3mg, 1.4mg, 1.5mg, 1.6mg, 1.7mg, 1.8mg, 1.9mg, 2mg, 2.25mg, 2.5mg, 2.75mg, 3mg, 3.25mg, 3.5mg, 3.75mg, 4.0mg, 4.25mg, 4.5mg, 4.75mg, 5.0mg, 5.25mg, 5.5mg, 5.75mg, 6mg, 6.25mg, 6.5mg, 6.75mg, 7mg, 7.25mg, 7.5mg, 7.75mg, 8mg, 8.25mg, 8.5mg, 8.75mg, 9mg, 9.25mg, 9.5mg, 9.75mg, 10mg, 11mg, 12,mg, 13mg, 14mg, 15mg, 16mg, 17mg, 18mg, 19mg, 또는 20mg이다.

또 다른 구현예에서, 투여되는 용량은 1회 이상의 주사에서 약 0.06mg, 0.48mg, 0.84mg, 1.68mg, 2.52mg, 3.36mg, 4.2mg, 또는 5.04mg이다. 또 다른 예에서, 약 0.06mg, 0.48mg, 0.84mg, 1.68mg, 2.52mg, 3.36mg, 4.2mg, 또는 5.04mg이 치료 부위에 약 12회 분할 주사로 투여된다. 다른 예에서, 콜라게나아제의 용량은 3회 이상의 주사로 분할된다. 주사되는 콜라게나아제 조성물의 용적은 주사당 0.01mL 내지 3mL, 또는 치료 방문당 총 약 1mL 내지 150mL의 범위일 수 있다.

일 측면에서, 상기 기재된 AUX I 및 II 혼합물("CCH")은 1회 이상의 주사에서 치료 방문당 약 0.01mg 내지 10mg 콜라게나아제의 양으로 주사될 수 있으며, 예를 들어, 용량은 약 3 내지 약 50회 주사로 균등하게 분할된다. 콜라게나아제는 액체일 수 있거나 희석제를 사용하여 동결건조된 형태로부터 재구성될 수 있다. 혼합물의 용량은 희석제와 상관없이 콜라게나아제의 양에 의해 측정되며, 1회 이상의 주사에서 약 0.1mg 내지 1mg, 또는 0.25mg 내지 0.75mg, 또는 0.1mg 내지 2mg, 또는 0.25mg 내지 1.75mg, 또는 0.5mg 내지 1mg, 0.1mg 내지 3mg, 또는 0.25mg 내지 2.75mg, 또는 0.5mg 내지 2.5mg, 또는 0.75mg 내지 2.25mg, 또는 1mg 내지 2mg, 또는 0.1mg 내지 4mg, 또는 0.25mg 내지 3.75mg, 또는 0.5mg 내지 3.5mg, 또는 0.75mg 내지 3mg, 또는 1mg 내지 3mg, 또는 약 0.05mg, 0.1mg, 0.2mg, 0.3mg, 0.4mg, 0.5mg, 0.6mg, 0.7mg, 0.8mg, 0.9mg, 1mg, 1.1mg, 1.2mg, 1.3mg, 1.4mg, 1.5mg, 1.6mg, 1.7mg, 1.8mg, 1.9mg, 2mg, 2.25mg, 2.5mg, 2.75mg, 3mg, 3.25mg, 3.5mg, 3.75mg, 4.0mg, 4.25mg, 4.5mg, 4.75mg, 5.0mg, 5.25mg, 5.5mg, 5.75mg, 6mg, 6.25mg, 6.5mg, 6.75mg, 7mg, 7.25mg, 7.5mg, 7.75mg, 8mg, 8.25mg, 8.5mg, 8.75mg, 9mg, 9.25mg, 9.5mg, 9.75mg 또는 10mg을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 투여되는 CCH의 용량은 1회 이상의 주사에서 약 0.06mg, 0.48mg, 0.84mg, 또는 1.68mg 2.52mg, 3.36mg, 4.2mg, 또는 5.04mg이다. 예를 들어, 약 0.06mg, 0.48mg, 0.84mg, 또는 1.68mg 2.52mg, 3.36mg, 4.2mg, 또는 5.04mg이 12회 주사로 투여된다. 주사되는 콜라게나아제 조성물의 용적은 주사당 0.01mL 내지 3mL, 또는 치료 방문당 총 약 1mL 내지 80mL의 범위일 수 있다.

콜라게나아제의 용량은 또한 1회 주사당 약 0.001mg 내지 0.5mg, 1회 주사당 약 0.01mg 내지 약 5mg, 또는 1회 주사당 약 0.005mg 내지 약 0.1mg, 또는 약 0.005mg, 0.04mg, 또는 0.07mg과 같이 1회 주사당 mg(희석제와는 무관)으로 표현될 수 있다.

특정 측면에서, 본 발명은 치료 방문당 약 500 ABC 단위 내지 약 50,000 ABC 단위, 또는 치료 방문당 약 10,000 ABC 단위 내지 약 25,000 ABC 단위를 주사하는 것을 고려한다. 또 다른 구현예에서, 1회 주사당 콜라게나아제의 용량은 약 50 ABC 단위 내지 약 2,500 ABC 단위, 또는 약 85 ABC 단위 내지 약 2,000 ABC 단위, 또는 약 150 ABC 단위 내지 약 1,750 ABC 단위, 또는 약 200 ABC 단위 내지 약 1,500 ABC 단위, 또는 약 300 ABC 단위 내지 약 1,250 ABC 단위, 또는 약 500 ABC 단위 내지 약 1,000 ABC 단위이다.

특정 구현예에서, 다양한 비활성도에 따른 용량은 다음과 같다:

특정 측면에서, 본 발명은 약 5,000 BTC 단위 내지 약 25,000 BTC 단위, 또는 약 10,000 BTC 단위 내지 약 25,000 BTC 단위, 또는 약 15,000 BTC 단위, 또는 약 17,500 BTC 단위, 또는 약 20,000 BTC 단위, 또는 약 22,500 BTC 단위, 또는 약 9,175 BTC 단위, 또는 약 15,817 BTC 단위의 양으로 콜라게나아제를 주사하는 것을 고려한다.

5. 제형

CCH 또는 다른 콜라게나아제는 CCH 또는 콜라게나아제 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 제형의 형태일 수 있다. 이러한 부형제는 멸균수 또는 주사용 염화나트륨/염화칼슘, pH 조절제 및 안정제를 포함할 수 있다.

하나의 비제한적인 예는 재구성용 멸균 동결건조 분말로서 CCH 0.9mg을 함유하는 일회용 유리 바이알로서 출원인에 의해 상업적으로 공급되는 지아플렉스®이다. 재구성용 멸균 희석제는 일회용 유리 바이알로도 제공된다. 비활성 성분에는 염산, 수크로오스 및 트로메타민이 포함된다. 희석제는 0.9% 염화나트륨에 염화칼슘 이수화물을 함유한다. 지아플렉스® 처방 정보(2018).

또 다른 구현예에서, CCH는 5-mL 바이알에 0.92mg CCH, 수크로오스, 트리스, 만니톨 및 염산을 포함하는 멸균 동결건조 분말이다. 재구성용 멸균 희석제는 개별 5mL 바이알에 채워진 주사용 증류수, 생리식염수, 또는 주사용 증류수 중 0.6% 염화나트륨 및 0.03% 염화칼슘 이수화물을 포함할 수 있다.

콜라게나아제 또는 CCH는 다른 크기의 바이알, 예를 들어, 10mL, 15mL, 20mL, 또는 30mL에 채워질 수 있다. 다른 pH 조절제, 당, 폴리올 및 안정화제는 문헌(참조: Rowe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients (5^th Ed.)]에서 찾을 수 있다.

6. 치료 방법: 주사 기법 및 투여 요법

상기 콜라게나아제 조성물은 인간 대상체에서 셀룰라이트의 중증도를 치료하거나 감소시키는 방법에 유용하다. 본 발명은 인간 환자에서 셀룰라이트의 중증도를 감소시키는 방법에 관한 것으로, 적어도 하나의 콜라게나아제를 포함하는 조성물을 제공하는 단계; 및 치료적 유효량의 조성물을 하나 이상의 딤플에 주사하는 단계를 포함하며, 여기서 환자는 치료전 기준선 중증도 수준과 비교하여 셀룰라이트의 중증도 감소를 나타낸다. 하기에 더 상세히 설명되는 바와 같이, 조성물은 다양한 주사 기법에 의해 투여될 수 있으며, 다수의 척도 및 기타 측정 도구에 의해 효능을 측정할 수 있다.

출원인은 이전에 관련 치료 방법을 설명했으며, 이로써 이의 특허 출원들, PCT 특허 출원 PCT/US2018/020551(2018년 9월 7일에 WO2018/160905로 공개됨); 2018년 7월 12일에 출원된 제목 "부종성 섬유경화성 지방층 병변의 치료를 위한 주사 기법(Injection Techniques for the Treatment of Edematous Fiberosclerotic Panniculopathy)"의 미국 가출원 제62/697,376호; 2018년 9월 18일에 출원된 제목 "부종성 섬유경화성 지방층 병변을 치료하기 위해 4개의 사분면에서 단일 용량의 콜라게나아제를 투여하는 조성물 및 방법(Composition and Method of Administering a Single Dose of Collagenase in Four Quadrants to Treat Edematous Fiberosclerotic Panniculopathy)"의 미국 가출원 제62/733,046호; 및 2018년 3월 28일에 출원된 제목 "콜라게나아제 제조 방법(method of Producing Collagenase)"의 미국 특허 출원 공개공보 제US20180327731호를 그 전체로 참조로 포함한다.

본원에 기재된 콜라게나아제 조성물의 투여는 치료 방문 동안 단일 대상체에서 양측(두 허벅지 또는 두 엉덩이) 또는 모든 4개의 사분면(양쪽 엉덩이 및 양쪽 허벅지)에 투여될 수 있다. 이러한 치료 방문은 1년 동안 2, 3, 4 또는 5회의 치료 방문에 대해 10 내지 40일마다 발생할 수 있다.

콜라게나아제에 대한 다양한 주사 파라미터 및 환자 치료를 위한 관련 기술의 일반적인 개요가 표 15에 제공된다.

본 발명에 의해 고려되는 주사 기법 및 치료의 5개의 비제한적인 예는 도 7-11에 나타낸 주사 기법에 대응하는 표 16에 개괄되어 있다.

치료 I 내지 V에 관한 추가 세부 사항은 하기에 설명되어 있다.

치료 I: 콜라게나아제 얕은 주사, 3회 분취량

도 7에 도시된 바와 같이, 이 예("치료 I")에서, 콜라게나아제는 피험자가 엎드린 자세로 있는 동안 딤플의 장축에 수직으로 피하 주사된다. 각 주사는 콜라게나아제의 단일 피부 주사로 0.1mL 분취량 3개로 구성된다(총 주사 용적 0.3mL). 각 치료 방문 동안, 8개의 주사기(치료 영역당 4개의 주사기)가 투여를 위해 준비된다. 각 주사기에는 0.9mL의 콜라게나아제 조성물이 포함되어 있다(각 주사기로 3회 주사). 피험자당 용량은 치료 부위당 약 0.5mg 내지 약 5mg의 콜라게나아제 총 용량으로 다양할 수 있다.

보다 구체적으로, 다음 절차를 따른다:

ㆍ 바늘이 피부 표면에 수직이고 딤플이 길쭉한 골 모양 딤플(위치 A)인 경우 딤플의 장축에 수직인 위치에 바늘을 끝까지(1/2인치) 밀어 넣고 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.1mL를 주입한다. 대부분의 경우 주입 지점 A, B 및 C를 포함하는 평면은 피험자 신체의 장축과 평행하다.

ㆍ 바늘을 약간 빼내고 피부 표면에 대해 대략 45° 각도로 피험자의 머리를 향해 재배치한 후(위치 B), 바늘을 끝까지 밀어 넣고 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.1mL를 주입한다. 위치 B는 바람직하게는 피험자의 머리 쪽이다.

ㆍ 바늘을 약간 빼내고 피부 표면에 대해 대략 45° 각도로 피험자의 발을 향해 재배치한 후(위치 C), 바늘을 끝까지 밀어 넣고 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.1mL를 주입한다. 위치 C는 바람직하게는 피험자의 발을 향해 있다.

ㆍ 바늘을 주사 부위에서 완전히 빼내고 다음 주사 부위로 진행한다.

ㆍ 콜라게나아제 조성물 0.9mL가 포함된 주사기는 3곳의 주사 부위에 충분하다.

ㆍ 각 치료 부위(각 엉덩이 또는 각 허벅지)에 0.9mL 주사기 4개를 사용하여 12곳의 주사 부위에 총 12회 0.3mL 주사(각각 0.1mL의 분취량 3개)를 투여한다.

치료 II: 콜라게나아제 얕은 주사, 1회 분취량

도 8에 도시된 바와 같이, 이 예("치료 II")에서, 콜라게나아제는 피험자가 엎드린 자세로 있는 동안 피하 주사된다. 각 주사는 0.3mL 분취량의 단일 얕은 주사로 콜라게나아제의 단일 피부 주사로 구성된다. 각 치료 방문 동안, 8개의 주사기(치료 영역당 4개의 주사기)가 투여를 위해 준비된다. 각 주사기에는 0.9mL의 콜라게나아제 조성물이 포함되어 있다(각 주사기로 3회 주사). 피험자당 용량은 각 치료 부위에서 약 0.5mg 내지 약 5mg의 콜라게나아제 총 용량으로 다양할 수 있다.

각 치료 방문 동안, 8개의 주사기(치료 영역당 4개의 주사기)가 투여를 위해 준비된다. 각 주사기에는 0.9mL의 콜라게나아제 조성물이 포함되어 있다(각 주사기로 3회 주사). 보다 구체적으로, 다음 절차를 따른다:

ㆍ 바늘을 주사 부위의 피부 표면에 대해 대략 30°로 피험자의 머리를 향해 놓고, 바늘을 끝까지(1/2인치) 밀어 넣고 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 콜라게나아제 조성물 0.9mL가 포함된 주사기는 3곳의 주사 부위에 충분할 것이다.

치료 III: 콜라게나아제 깊은 주사, 1회 분취량

도 9에 도시된 바와 같이, 이 예("치료 III")에서, 콜라게나아제는 피험자가 엎드린 자세로 있는 동안 피하 주사된다. 각 주사는 0.3mL 콜라게나아제 조성물 분취량의 단일 깊은 주사로 콜라게나아제 조성물의 단일 피부 주사로 구성된다. 각 치료 방문 동안, 8개의 주사기(치료 영역당 4개의 주사기)가 투여를 위해 준비된다. 각 주사기에는 0.9mL의 콜라게나아제 조성물이 포함되어 있다(각 주사기로 3회 주사). 피험자당 용량은 치료 부위당 약 0.5mg 내지 약 5mg의 콜라게나아제 총 용량으로 다양할 수 있다.

보다 구체적으로, 다음 절차를 따른다:

ㆍ 바늘을 주사 부위의 피부 표면에 대해 대략 30° 각도로 피험자의 머리를 향해 놓고, 바늘을 끝까지(1인치) 밀어 넣고 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL 단일 분취량을 주입한다.

ㆍ 각 치료 부위(각 엉덩이 또는 각 허벅지)에 0.9mL 주사기 4개를 사용하여 12곳의 주사 부위에 총 12회 0.3mL 주사(단일 0.3mL 분취량)를 투여한다.

ㆍ 사용한 바늘과 주사기는 폐기한다.

치료 IV: 콜라게나아제 깊은 주사 및 얕은 주사, 5회 분취량

도 10에 도시된 바와 같이, 치료 IV에서, 콜라게나아제는 피험자가 엎드린 자세로 있는 동안 피하 주사된다. 각 주사는 콜라게나아제의 단일 피부 주사로 (1.5mL의 총 주사 용적에 대해) 5개의 0.3mL로 구성된다. 각 치료 방문 동안, 24개의 주사기(치료 영역당 12개의 주사기)가 투여를 위해 준비된다. 각 주사기에는 1.5mL의 콜라게나아제가 포함되어 있다(각 주사기로 각 주사에 대해 0.3mL씩 5회 분취량). 피험자당 용량은 치료 부위당 약 0.5mg 내지 약 5mg의 총 용량으로 다양할 수 있다.

각 치료 방문 동안, 24개의 주사기(치료 영역당 12개의 주사기)가 투여를 위해 준비된다. 각 주사기에는 1.5mL의 콜라게나아제 조성물이 포함되어 있다(각 주사기로 각 주사에 대해 0.3mL씩 5회 분취량). 보다 구체적으로, 다음 절차를 따른다:

ㆍ 바늘을 주사 부위의 피부 표면에 대해 대략 30° 각도로 피험자의 머리를 향해 놓고, 바늘을 끝까지(1인치) 밀어 넣고 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하면서 바늘 길이의 절반(1/2인치)을 부드럽게 빼내고, 피험자의 한쪽으로 바늘을 재배치한다(위치 B). 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하고, 바늘을 위치 A와 B 사이의 중간(위치 C, 피험자의 어깨 쪽)으로 재배치하고, 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 약 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하고, 바늘을 위치 B(위치 D)와 정확히 반대 방향으로 재배치하고, 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하고, 바늘을 위치 A와 D 사이의 중간(위치 E, 피험자의 다른 어깨 쪽)으로 재배치하고, 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 콜라게나아제 조성물 1.5mL가 포함된 3mL 주사기는 1곳의 주사 부위에 충분할 것이다.

ㆍ 각 치료 부위(각 엉덩이 또는 각 허벅지)에 3mL 주사기 12개를 사용하여 12곳의 주사 부위에 총 12회 1.5mL 주사(총 18.0mL, 각각 0.3mL씩 5회 분취량)를 투여한다.

치료 V: 콜라게나아제 얕은 주사, 4회 분취량

도 11에 도시된 바와 같이, 이 예("치료 V")에서, 콜라게나아제는 피험자가 엎드린 자세로 있는 동안 피하 주사된다. 각 피험자에게 (1.2mL의 총 주사 용적에 대해) 4개의 0.3mL 분취량으로 콜라게나아제의 단일 피부 주사가 투여된다. 각 치료 방문 동안, 24개의 주사기(치료 영역당 12개의 주사기)가 투여를 위해 준비된다. 각 주사기에는 1.2mL의 콜라게나아제가 포함될 것이다(각각 0.3mL씩 4회 분취량). 피험자당 용량은 치료 부위당 약 0.5mg 내지 약 5mg의 총 용량으로 다양할 수 있다.

각 치료 방문 동안, 24개의 주사기(치료 영역당 12개의 주사기)가 투여를 위해 준비되었다. 각 주사기에는 1.2mL의 콜라게나아제 조성물이 포함되었다(각각 0.3mL씩 4회 분취량). 보다 구체적으로, 다음 절차를 따른다:

ㆍ 바늘을 피험자의 한쪽을 향하게 한 상태로 주사 부위의 피부 표면에 대해 대략 30° 각도로 놓고, 바늘을 끝까지(1/2인치) 밀어 넣고 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하고, 바늘을 위치 A로부터 대략 60°로 피험자의 어깨 쪽으로 재배치하고(위치 B), 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하고, 바늘을 위치 B로부터 대략 60°로 피험자의 다른 어깨 쪽으로 재배치하고(위치 C), 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하고, 바늘을 위치 A와 반대 방향으로 피험자의 다른 쪽(위치 D)으로 재배치하고, 주사기 플런저를 부드럽게 밀어 콜라게나아제 조성물 0.3mL를 주입한다.

ㆍ 콜라게나아제 조성물 1.2mL가 포함된 3mL 주사기는 1곳의 주사 부위에 충분할 것이다.

ㆍ 각 치료 부위(각 엉덩이 또는 각 허벅지)에 3mL 주사기(각각 콜라게나아제 조성물 1.2mL 포함) 12개를 사용하여 12곳의 주사 부위에 각각 1.2mL씩 총 12회(총 14.4mL, 각각 0.3mL씩 4회 분취량) 주사한다.

ㆍ 2곳의 치료 부위에 총 24회 주사한다.

추가 구현예에서, 콜라게나아제는 도 12에 예시된 바와 같이 환부에 주사된다. 주사의 간격은 약 0.1cm 내지 약 15cm, 또는 약 1cm 내지 약 10cm, 또는 약 0.5cm 내지 약 2cm로 다양할 수 있다. 도 12에 도시된 바와 같이, 각 주사는 0.1mL 분취량 3개(주사당 0.3mL)로 투여된다. 첫 번째 분취량은 바늘이 피부 표면에 수직인 상태로 투여된다. 두 번째 및 세 번째 분취량의 경우 바늘을 약간 빼내어 수직축의 왼쪽으로 약 45°, 오른쪽으로 45°로 향하게 한다.

도 7 내지 11에 도시된 치료 1 내지 V 및 도 12에 도시된 주사 기법은 상이한 용량, 주사 각도, 용적, 주사기 수, 주사 깊이 및 표 15 및 16에 상세히 설명된 다른 파라미터를 사용할 수 있다. 이러한 모든 변형은 본 발명에 포함된다.

또 다른 예로, 약 0.84mg의 CCH가 사분면(즉, 오른쪽 또는 왼쪽 엉덩이 또는 오른쪽 또는 왼쪽 허벅지)과 같은 환부에 약 12회의 균등하게 분할된 주사로 주입된다(약 0.07mg x 12회 주사 = 약 0.84mg CCH). 일부 경우에 0.84mg을 사용한 이러한 치료는 2, 3, 4 또는 5회 치료를 위해 10 내지 40일마다 발생한다. 다른 경우에는 2, 3, 4 또는 5회 치료를 위해 10 내지 40일마다 한 곳 이상의 환부 또는 사분면에 0.84mg를 주사한다.

특정 구현예에서, 환자는 표 17에 나타낸 바와 같은 콜라게나아제를 투여받는다.

^a 콜라게나아제의 각 주사는 3개의 0.1mL 분취량으로 0.3mL 투여된다.

또한, 어떤 특정 구현예에서, 치료 환자에 대한 파라미터는 표 18 및 19에 제공되어 있다.

일 구현예에서, 재구성 생성물의 삼투압몰농도는 약 50 내지 약 1,000, 약 100 내지 약 900, 약 200 내지 약 800, 약 300 내지 약 700, 약 400 내지 약 600, 약 50, 약 100, 약 150, 약 200, 약 250, 약 300, 약 350, 약 400, 약 450, 약 500, 약 550, 약 600, 약 650, 약 700, 약 750, 약 800, 약 850, 약 900, 약 950, 또는 약 1,000mOsm/kg이다. 또 다른 구현예에서, 재구성 생성물의 삼투압몰농도는 약 512 mOsm/kg, 약 275 mOsm/kg, 약 281mOsm/kg, 또는 약 227mOsm/kg이다.

상기 방법에 추가하여, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서 EFP를 치료 또는 감소시키는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은 EFP의 일반적인 절차 및 치료에 비해 다음 이점 중 적어도 하나를 제공한다:

a. 의사의 사용 용이성;

b. 치료 시간 단축;

c. 미적 상태의 개선을 얻기 어렵다는 의사의 일반적인 견해에 비추어 볼 때 예상치 못한 효능;

d. 히알루로니다아제 사용 불필요;

e. 열 사용 불필요;

f. 레이저 사용 불필요;

g. 진피절제술 없음;

h. 마취 불필요(멍든 경우에도);

i. 압축복(compressive garment) 불필요; 및

j. 진공 미사용.

또 다른 구현예에서, 셀룰라이트의 치료 또는 감소 방법은 치료할 셀룰라이트의 중증도에 제한을 두지 않으며, 예를 들어, 콜라게나아제를 사용한 치료는 셀룰라이트의 유병률이나 중증도에 관계없이 안전하고 효과적이다.

F. 단계 4―치료적 평가변수 및 효능 측정

본원에 기재된 치료는 하기 기재된 다수의 조치에 의해 셀룰라이트를 치료하는 데 효과적이다. 본원에 사용된 바와 같이 "일"은 연구일을 의미하고; 따라서, 예를 들어, 22일은 첫 번째 주사 후 21일이다. 또한, 일 예에서 "일"은 +/- 7일이다.

1. CR - PCSS 및 PR- PCSS로 측정된 효능

임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 점수 또는 등급에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 평균 점수 또는 등급으로부터 평균 점수 또는 등급의 약 0.1의 개선이다. 반응자는 기준선에서 최대 총 점수 또는 등급의 적어도 25% 개선을 보이는 임의의 환자이다. 특정 구현예에서, 상기 자세히 설명된 치료 방법은 CR-PCSS 및/또는 PR-PCSS로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

1. 기준선 대비 CR-PCSS 및/또는 PR-PCSS 등급에서 적어도 0.1 개선.

2. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 CR-PCSS의 중증도가 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 2 레벨 개선.

3. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 PR-PCSS의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 2 레벨 개선.

4. CR-PCSS의 중증도가 기준선에서 적어도 2 레벨 개선되고, PR-PCSS의 중증도가 기준선에서 적어도 2 레벨 개선된 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 2-레벨 복합 반응으로 입증된 개선.

5. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 CR-PCSS의 중증도가 기준선 대비 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 1 레벨 개선.

6. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 PR-PCSS의 중증도가 기준선 대비 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 1 레벨 개선.

7. CR-PCSS의 중증도가 기준선에서 적어도 1 레벨 개선되고, PR-PCSS의 중증도가 기준선에서 적어도 1 레벨 개선된 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 1-레벨 복합 반응으로 입증된 개선.

8. 모두 중등증 또는 중증의 CR-PCSS 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서의 개선은 위약과 비교하여 통계적으로 유의했으며, 여기서 개선은 상기 1번 내지 7번 중 하나 이상이다.

9. 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지했다. 특정 경우에, 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30% 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 적어도 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 2년 또는 3년, 또는 4년, 또는 5년 동안 이러한 수준을 유지했다. 다른 경우에, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 치료전 기준선 대비 개선을 나타냈고, 시간이 지남에 따라 개선의 추가 증가를 나타냈다. 일부 치료 결과 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30%, 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 1개월, 또는 3개월, 또는 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 24개월에 개선의 추가 증가와 동반된 개선을 나타냈다.

10. 180일째, 기준선 대비 CR-PCSS 등급에서 나타난 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

11. 모두 중등증 또는 중증의 CR-PCSS 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 2-레벨 CR-PCSS 및/또는 PR-PCSS 개선까지의 중간 시간은 약 50일, 또는 60일, 또는 70일, 또는 80일 또는 90일이다.

12. 모두 중등증 또는 중증의 CR-PCSS 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 1-레벨 CR-PCSS 및/또는 PR-PCSS 개선까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

13. 모두 중등증 또는 중증의 CR-PCSS 등급을 받은 환자 집단에서, 평균 피험자 CR-PCSS 및/또는 PR-PCSS 점수는 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

14. 모두 중등증 또는 중증의 CR-PCSS 등급을 받은 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 CR-PCSS 및/또는 PR-PCSS로 측정된 2-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

15. 모두 중등증 또는 중증의 CR-PCSS 등급을 받은 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 CR-PCSS 및/또는 PR-PCSS로 측정된 1-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

16. 모두 중등증 또는 중증의 CR-PCSS 등급을 받은 환자 집단에서, 환자의 3분의 1, 또는 2분의 1, 또는 3분의 2, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 적어도 1-레벨 CR-PCSS 및/또는 적어도 1-레벨 PR-PCSS 반응을 보이며, 여기서 CR-PCSS 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

17. 셀룰라이트 중증도의 감소는 첫 번째 치료 방문 후 약 7, 또는 14, 또는 21, 또는 30, 또는 35, 또는 40, 또는 45, 또는 50일 이내에 빠르게 발생한다.

또 다른 구현예에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 17번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 17번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

또 다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 17번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

또 다른 예에서, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 CCH 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 17번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 주사되어 상기 1번 내지 17번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

다른 비율이 사용될 수 있다(예를 들어, 0.1-2:1, 또는 0.25-2:1, 또는 0.5-2:1, 또는 0.75-2:1, 또는 1:0.1-2, 또는 1:0.25-2, 또는 1:0.5-2, 또는 1:0.75-2, 또는 1:0, 또는 0:1). 또한, 유형 I 및 유형 II 콜라게나아제는 각각 AUX-I 및 AUX-II일 수 있다.

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 치료 I 내지 V 중 하나를 사용하여 주사되어 상기 1번 내지 17번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

다른 구현예에서, 상기 치료에 대한 반응으로, 환자는 평가 시점에 기준선에서 적어도 2 레벨의 CR-PCSS 등급 개선(-2, -3 또는 -4의 변화)을 보인 2 레벨 CR-PCSS 반응자이다. 1 레벨 CR-PCSS 반응자는 평가 시점에 기준선에서 적어도 1 레벨의 CR-PCSS 등급 개선(-1, -2, -3, 또는 -4의 변화)을 나타낸 환자이다. 환자는 평가 시점에 기준선에서 적어도 2 레벨의 PR-PCSS 등급 개선(-2, -3 또는 -4의 변화)을 보인 2 레벨 PR-PCSS 반응자이다. 1 레벨 PR-PCSS 반응자는 평가 시점에 기준선에서 적어도 1 레벨의 PR-PCSS 등급 개선(-1, -2, -3, 또는 -4의 변화)을 나타낸 환자이다. 다른 측면에서, 2 레벨 복합 반응자는 평가 시점에 2-레벨 PR-PCSS 반응자 및 2-레벨 CR-PCSS 반응자 둘 다인 환자이다. 1 레벨 복합 반응자는 평가 시점에 1-레벨 PR-PCSS 반응자 및 1-레벨 CR-PCSS 반응자 둘 다인 환자이다.

2. 헥셀 셀룰라이트 중증도 척도( 헥셀 CSS)로 측정된 효능

헥셀 CSS에서, 임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 점수에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 평균 헥셀 CSS 점수 또는 등급으로부터 평균 헥셀 CSS 점수 또는 등급의 약 0.1 개선이다. 반응자는 기준선에서 최대 총 점수 또는 등급의 적어도 25% 개선을 보이는 임의의 환자이다. 특정 구현예에서, 상기 자세히 설명된 치료 방법은 헥셀 CSS로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

1. 모두 기준선 1일 헥셀 CSS 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제를 주사한 결과 통계적으로 유의한 수의 이러한 환자가 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 충족시켰다:

ㆍ 중증에서 중등증으로의 전환(11-15점에서 6-10점으로)

ㆍ 중증에서 경증으로의 전환(11-15점에서 1-5점으로)

ㆍ 중증에서 0으로의 전환(11-15점에서 0으로)

ㆍ 중등증에서 경증으로의 전환(6-10점에서 1-5점으로)

ㆍ 중등증에서 0으로의 전환(6-10점에서 0으로)

ㆍ 경증에서 0으로의 전환(1-5점에서 0으로)

2. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 헥셀 CSS의 중증도가 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 2 레벨 변화.

3. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 헥셀 CSS의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 2 레벨 변화.

4. 임상의 평가에 의한 헥셀 CSS의 중증도가 기준선에서 적어도 2 레벨 개선되고, 환자 평가에 의한 헥셀 CSS의 중증도가 기준선에서 적어도 2 레벨 개선된 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 2-레벨 복합 반응으로 입증된 변화.

5. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 헥셀 CSS의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 1 레벨 변화.

6. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 헥셀 CSS의 중증도가 기준선 대비 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 1 레벨 변화.

7. 임상의 평가에 의한 헥셀 CSS의 중증도가 기준선에서 적어도 1 레벨 개선되고, 환자 평가에 의한 헥셀 CSS의 중증도가 기준선에서 적어도 1 레벨 개선된 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 1-레벨 복합 반응으로 입증된 변화.

8. 모두 중등증 또는 중증의 헥셀 CSS 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서의 개선은 위약과 비교하여 통계적으로 유의했으며, 여기서 변화는 상기 2번 내지 7번 중 하나 이상이다.

10. 180일째, 기준선 대비 헥셀 CSS 등급에서 나타난 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

11. 모두 중등증 또는 중증의 헥셀 CSS 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 2-레벨 헥셀 CSS 개선까지의 중간 시간은 약 50일, 또는 60일, 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

12. 모두 중등증 또는 중증의 헥셀 CSS 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 1-레벨 헥셀 CSS 개선까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

13. 모두 중등증 또는 중증의 헥셀 CSS 등급을 받은 환자 집단에서, 평균 피험자 헥셀 CSS 점수는 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

14. 모두 중등증 또는 중증의 헥셀 CSS 등급을 받은 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 헥셀 CSS로 측정된 2-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

15. 모두 중등증 또는 중증의 헥셀 CSS 등급을 받은 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 헥셀 CSS로 측정된 1-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

16. 모두 중등증 또는 중증의 헥셀 CSS 등급을 받은 환자 집단에서, 환자의 3분의 1, 또는 2분의 1, 또는 3분의 2, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 적어도 1-레벨 헥셀 CSS 반응을 보이며, 여기서 헥셀 CSS 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ K_M,　 of 약 4.1 내지 410 나노몰(SRC 검정), 또는 약 0.03 내지 3.1mM(GPA 검정)

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^- ¹: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

3. 헥셀 함몰부 깊이 척도로 측정된 효능

헥셀 함몰부 깊이 척도에서, 임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 점수에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 평균 헥셀 함몰부 깊이 척도 또는 등급으로부터 평균 헥셀 함몰부 깊이 척도 또는 등급의 약 0.1의 개선이다. 반응자는 기준선에서 최대 총 점수 또는 등급의 적어도 25% 개선을 보이는 임의의 환자이다. 특정 구현예에서, 상기 자세히 설명된 치료 방법은 헥셀 함몰부 깊이 척도로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

1. 모두 기준선 1일 헥셀 함몰부 깊이 척도 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제를 주사한 결과 통계적으로 유의한 수의 이러한 환자가 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 충족시켰다:

ㆍ 깊은 함몰부(3)에서 중간 깊이(2)로의 전환

ㆍ 깊은 함몰부(3)에서 표면적 함몰부(1)로의 전환

ㆍ 깊은 함몰부(3)에서 함몰부 없음(0)으로의 전환

ㆍ 중간 깊이(2)에서 표면적 함몰부(1)로의 전환

ㆍ 중간 깊이(2)에서 함몰부 없음(0)으로의 전환

ㆍ 표면적 함몰부(1)에서 함몰부 없음(0)으로의 전환

2. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 2 레벨 변화.

3. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 2 레벨 변화.

4. 임상의 평가에 의한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선에서 적어도 2 레벨 개선되고, 환자 평가에 의한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선에서 적어도 2 레벨 개선된 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 2-레벨 복합 반응으로 입증된 변화.

5. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 1 레벨 변화.

6. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 1 레벨 변화.

7. 임상의 평가에 의한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선에서 적어도 1 레벨 개선되고, 환자 평가에 의한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선에서 적어도 1 레벨 개선된 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 1-레벨 복합 반응으로 입증된 변화.

8. 모두 중간 또는 깊은 함몰부의 헥셀 CSS 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서의 개선은 위약과 비교하여 통계적으로 유의했으며, 여기서 변화는 상기 2번 내지 7번 중 하나 이상이다.

10. 180일째, 기준선 대비 헥셀 함몰부 깊이 척도 등급에서 나타난 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

11. 모두 중간 또는 깊은 함몰부의 헥셀 함몰부 깊이 척도 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 2-레벨 헥셀 함몰부 깊이 척도 개선까지의 중간 시간은 약 50일, 또는 60일, 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

12. 모두 중간 또는 깊은 함몰부의 헥셀 함몰부 깊이 척도 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 1-레벨 헥셀 함몰부 깊이 척도 개선까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

13. 모두 중간 또는 깊은 함몰부의 헥셀 함몰부 깊이 척도 등급을 받은 환자 집단에서, 평균 피험자 헥셀 함몰부 깊이 척도는 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

14. 모두 중간 또는 깊은 함몰부의 헥셀 함몰부 깊이 척도 등급을 받은 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 헥셀 함몰부 깊이 척도로 측정된 2-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

15. 모두 중간 또는 깊은 함몰부의 헥셀 함몰부 깊이 척도 등급을 받은 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 헥셀 함몰부 깊이 척도로 측정된 1-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

16. 모두 중간 또는 깊은 함몰부의 헥셀 함몰부 깊이 척도 등급을 받은 환자 집단에서, 환자의 3분의 1, 또는 2분의 1, 또는 3분의 2, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 적어도 1-레벨 헥셀 함몰부 깊이 척도 반응을 보이며, 여기서 헥셀 함몰부 깊이 척도 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

18. 기준선에서 71일까지 하나 이상의 치료 부위에서 약 -0.1 내지 약 -2.0의 점수 변화.

19. 통계적으로 유의한 환자 집단에서, 최소 제곱(LS) 평균은 하나 이상의 치료 부위에 대해 약 -0.1 내지 약 -1.5(95% 신뢰 구간(CI))이다.

또 다른 구현예에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 19번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 60kDa 내지 약 130kDa, 또는 약 70 내지 약 130kDa, 또는 약 80 내지 약 120kDa, 또는 약 90 내지 약 120kDa, 또는 약 100 내지 약 110kDa의 분자 질량.

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 19번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

또 다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 19번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

또 다른 예에서, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 CCH 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 19번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 주사되어 상기 1번 내지 19번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 치료 I 내지 V 중 하나를 사용하여 주사되어 상기 1번 내지 19번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

4. 미적 외관에 대해 리커트 척도로 측정된 효능

리커트 척도에서, 임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 치료전 또는 임의의 이전 점수에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 치료전 또는 임의의 이전 평균 리커트 점수 또는 등급으로부터 평균 리커트 점수 또는 등급의 약 0.1의 개선이다. 특정 구현예에서, 상기 자세히 설명된 치료 방법은 리커트 척도 점수로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

1. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제를 주사한 결과 통계적으로 유의한 수의 이러한 환자가 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 충족시켰다:

ㆍ "개선됨"의 리커트 척도 점수(1)

ㆍ "많이 개선됨"의 리커트 척도 점수(2)

ㆍ "매우 많이 개선됨"의 리커트 척도 점수(3)

2. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 리커트 척도 점수에서 치료전과 비교하여 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 치료 부위 외관의 적어도 2 레벨 개선.

3. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 리커트 척도 점수에서 치료전과 비교하여 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 치료 부위 외관의 적어도 2 레벨 개선.

4. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 리커트 척도 점수에서 치료전과 비교하여 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 치료 부위 외관의 적어도 1 레벨 개선.

5. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 리커트 척도 점수에서 치료전과 비교하여 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 치료 부위 외관의 적어도 1 레벨 개선.

6. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 리커트 척도 점수의 개선은 통계적으로 유의하였고, 여기서 개선은 상기 2번 내지 7번 중 하나 이상이다.

7. 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지했다. 특정 경우에, 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30% 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 적어도 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 2년 또는 3년, 또는 4년, 또는 5년 동안 이러한 수준을 유지했다. 다른 경우에, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 치료전 기준선 대비 개선을 나타냈고, 시간이 지남에 따라 개선의 추가 증가를 나타냈다. 일부 치료 결과 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30%, 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 1개월, 또는 3개월, 또는 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 24개월에 개선의 추가 증가와 동반된 개선을 나타냈다.

8. 180일째, 기준선 대비 리커트 척도 점수 등급에서 나타난 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

9. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 2-레벨 리커트 척도 점수 개선까지의 중간 시간은 약 50일, 또는 60일, 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

10. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 1-레벨 리커트 척도 점수 개선까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

11. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 평균 피험자 리커트 척도 점수는 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

12. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 리커트 척도 점수로 측정된 2-레벨 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

13. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 리커트 척도 점수로 측정된 1-레벨 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

14. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 환자의 3분의 1, 또는 2분의 1, 또는 3분의 2, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 적어도 1-레벨 리커트 척도 점수 반응을 보이며, 여기서 리커트 척도 점수 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

15. 셀룰라이트 중증도의 감소는 첫 번째 치료 방문 후 약 7, 또는 14, 또는 21, 또는 30, 또는 35, 또는 40, 또는 45, 또는 50일 이내에 빠르게 발생한다.

또 다른 구현예에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 15번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 15번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

또 다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 15번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

또 다른 예에서, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 CCH 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 15번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 주사되어 상기 1번 내지 15번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

5. 딤플 분석

특정 구현예에서, 콜라게나아제(들)로 셀룰라이트를 처리하면 다음과 같이 딤플 크기 파라미터가 감소한다:

ㆍ 깊이: 약 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 25%, 또는 20%, 또는 15%, 또는 10%, 또는 5%, 또는 2.5%, 또는 2%, 또는 1% 감소

ㆍ 너비: 약 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 25%, 또는 20%, 또는 15%, 또는 10%, 또는 5%, 또는 2.5%, 또는 2%, 또는 1% 감소

ㆍ 길이: 약 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 25%, 또는 20%, 또는 15%, 또는 10%, 또는 5%, 또는 2.5%, 또는 2%, 또는 1% 감소

ㆍ 전체 용적: 약 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 25%, 또는 20%, 또는 15%, 또는 10%, 또는 5%, 또는 2.5%, 또는 2%, 또는 1% 감소

ㆍ 표면적: 약 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 25%, 또는 20%, 또는 15%, 또는 10%, 또는 5%, 또는 2.5%, 또는 2%, 또는 1% 감소

일부 구현예에서, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지했다. 특정 경우에, 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30% 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 적어도 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 2년 또는 3년, 또는 4년, 또는 5년 동안 이러한 수준을 유지했다. 다른 구현예에서, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 치료전 기준선 대비 개선을 나타냈고, 시간이 지남에 따라 개선의 추가 증가를 나타냈다. 일부 치료 결과 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30%, 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 1개월, 또는 3개월, 또는 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 24개월에 개선의 추가 증가와 동반된 개선을 나타냈다.

또 다른 구현예에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 딤플 크기 파라미터 중 적어도 하나가 적어도 5%, 또는 적어도 10% 또는 적어도 20% 감소하며, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 딤플 크기 파라미터 중 적어도 하나가 적어도 5%, 또는 적어도 10% 또는 적어도 20% 감소한다.

또 다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 딤플 크기 파라미터 중 적어도 하나가 적어도 5%, 또는 적어도 10% 또는 적어도 20% 감소하고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

또 다른 예에서, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 CCH 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 딤플 크기 파라미터 중 적어도 하나가 적어도 5%, 또는 적어도 10% 또는 적어도 20% 감소한다.

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 주사되어 딤플 크기 파라미터 중 적어도 하나가 적어도 5%, 또는 적어도 10% 또는 적어도 20% 감소하고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 치료 I 내지 V 중 하나를 사용하여 주사되어 딤플 크기 파라미터 중 적어도 하나가 적어도 5%, 또는 적어도 10% 또는 적어도 20% 감소하고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

6. 피험자의 전반적인 미적 개선 척도(S- GAIS ) 및 연구자의 전반적인 미적 개선 척도(I- GAIS ) 로 측정된 효능

상기 자세히 설명된 치료 방법은 S-GAIS 및 I-GAIS로 측정된 바와 같이 개선된 반응을 초래한다. 2-레벨 S-GAIS 반응자는 평가 시점에 적어도 2(+2 또는 +3)의 S-GAIS 등급을 받은 피험자이다. 1-레벨 S-GAIS 반응자는 평가 시점에 적어도 1(+1, +2, 또는 +3)의 S-GAIS 등급을 받은 피험자이다. 2-레벨 I-GAIS 반응자는 평가 시점에 적어도 2(+2 또는 +3)의 I-GAIS 등급을 받은 피험자이다. 1-레벨 I-GAIS 반응자는 평가 시점에 적어도 1(+1, +2, 또는 +3)의 I-GAIS 등급을 받은 피험자이다. 임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 점수에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 평균 점수 또는 등급으로부터 평균 점수 또는 등급의 약 0.1의 개선이다.

특정 구현예에서, 상기 자세히 설명된 치료 방법은 S-GAIS 및/또는 I-GAIS로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

ㆍ "개선됨"의 S-GAIS 및/또는 I-GAIS 점수(+1)

ㆍ "많이 개선됨"의 S-GAIS 및/또는 I-GAIS 점수(+2)

ㆍ "매우 많이 개선됨"의 S-GAIS 및/또는 I-GAIS 점수(+3)

2. 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 I-GAIS에서 적어도 2 레벨의 개선.

3. 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 S-GAIS에서 적어도 2 레벨의 개선.

4. 임상의 평가에 의한 I-GAIS에서 적어도 2 레벨의 개선 및 환자 평가에 의한 S-GAIS에서 적어도 2 레벨의 개선이 있는 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 2-레벨 복합 반응으로 입증된 개선.

5. 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 I-GAIS에서 적어도 1 레벨의 개선.

6. 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 S-GAIS에서 적어도 1 레벨의 개선.

7. 임상의 평가에 의한 I-GAIS에서 적어도 1 레벨의 개선 및 환자 평가에 의한 S-GAIS에서 적어도 1 레벨의 개선이 있는 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 1-레벨 복합 반응으로 입증된 개선.

8. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 I-GAIS 및/또는 S-GAIS의 개선은 위약과 비교하여 통계적으로 유의하였고, 여기서 개선은 상기 2번 내지 7번 중 하나 이상이다.

9. 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 개선 수준을 유지했다. 특정 경우에, 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30% 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 적어도 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 2년 또는 3년, 또는 4년, 또는 5년 동안 이러한 수준을 유지했다. 다른 경우에, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 개선을 나타냈고, 시간이 지남에 따라 개선의 추가 증가를 나타냈다. 일부 치료 결과 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30%, 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 1개월, 또는 3개월, 또는 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 24개월에 개선의 추가 증가와 동반된 개선을 나타냈다.

10. 180일째, I-GAIS 및 S-GAIS 등급에서 나타난 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

11. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 2-레벨 I-GAIS 및/또는 S-GAIS 개선까지의 중간 시간은 약 50일, 또는 60일, 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

12. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 1-레벨 I-GAIS 및/또는 S-GAIS 개선까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

13. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 평균 피험자 I-GAIS 및/또는 S-GAIS는 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

14. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 I-GAIS 및/또는 S-GAIS로 측정된 2-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

15. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 I-GAIS 및/또는 S-GAIS로 측정된 1-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

16. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 환자의 3분의 1, 또는 2분의 1, 또는 3분의 2, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 적어도 1-레벨 I-GAIS 및/또는 S-GAIS 반응을 보이며, 여기서 GAIS 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

7. PR-CIS로 측정된 효능

상기 자세히 설명된 치료 방법은 PR-CIS로 측정된 바와 같이 개선된 반응을 초래한다. PR-CIS 총점은 척도에 있는 6개 항목의 합이다. 피험자가 셀룰라이트의 외관에 대해 얼마나 만족하는지 묻는 PR-CIS의 항목 #1은 10에서 피험자의 보고된 평가를 빼서 반전된다. PR-CIS 총점은 0에서 60까지의 범위일 수 있으며, 숫자가 높을수록 셀룰라이트의 부정적인 영향이 커진다는 것을 반영한다. PR-CIS 총점의 경우, 반응자는 평가 시점에 PR-CIS 총점이 기준선에서 적어도 12점 감소한 피험자이다. 개별 PR-CIS 영향 점수의 경우, 반응은 각 시점에 기준선에서 적어도 2점 점수 간격의 개선이다. 또한, 반응자는 기준선 대비 적어도 20%의 최대 총점 개선을 보이는 임의의 환자이다. 임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 점수에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 평균 점수 또는 등급으로부터 평균 점수 또는 등급의 약 0.1의 개선이다. 또한, 개선은 60 중 적어도 1 레벨의 기준선 대비 변화이다.

특정 구현예에서, 상기 자세히 설명된 치료 방법은 PR-CIS로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

ㆍ PR-CIS는 만족함, 신경쓰임, 의식적, 창피함, 늙어보임, 또는 과체중/몸매가 엉망인 것처럼 보임으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 영역에서의 개선을 보여줌

ㆍ 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 12점의 PR-CIS 총점 감소

ㆍ 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 2점 점수 간격의 개선을 보여주는 PR-CIS 영향 점수

ㆍ 개선은 60 중 적어도 1 레벨의 기준선 대비 변화임

2. 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 대상 허벅지에 대한 PR-CIS에서 적어도 12점의 중증도 개선.

3. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 기준선(치료전 1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 대상 허벅지에 대한 PR-CIS에서 적어도 12점의 위약 대비 중증도의 통계적으로 유의한 개선.

4. 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지했다. 특정 경우에, 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30% 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 적어도 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 2년 또는 3년, 또는 4년, 또는 5년 동안 이러한 수준을 유지했다. 다른 경우에, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 치료전 기준선 대비 개선을 나타냈고, 시간이 지남에 따라 개선의 추가 증가를 나타냈다. 일부 치료 결과 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30%, 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 1개월, 또는 3개월, 또는 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 24개월에 개선의 추가 증가와 동반된 개선을 나타냈다.

5. 180일째, 기준선 대비 PR-CIS 등급에서 보인 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

6. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에 대해 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 12의 PR-CIS 총점 감소까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

7. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 평균 피험자 PR-CIS 점수는 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

8. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 환자의 3분의 1 이상, 또는 2분의 1 이상, 또는 3분의 2 이상, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 한 번 이상의 평가 시점에 PR-CIS 총 점수가 기준선 대비 적어도 12점 감소하고, 여기서 PR-CIS 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

9. 셀룰라이트 중증도의 감소는 첫 번째 치료 방문 후 약 7, 또는 14, 또는 21, 또는 30, 또는 35, 또는 40, 또는 45, 또는 50일 이내에 빠르게 발생한다.

또 다른 구현예에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 9번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 9번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

또 다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 9번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

또 다른 예에서, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 CCH 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 9번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 주사되어 상기 1번 내지 9번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 치료 I 내지 V 중 하나를 사용하여 주사되어 상기 1번 내지 9번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

8. 간이형 PR-CIS로 측정된 효능

상기 자세히 설명된 치료 방법은 간이형 PR-CIS로 측정된 바와 같이 개선된 반응을 초래한다. 간이형 PR-CIS 총점은 척도에 있는 5개 항목의 합일 것이다. 피험자가 셀룰라이트의 외관에 대해 얼마나 만족하는지 묻는 PR-CIS의 항목 #1은 10에서 피험자의 보고된 평가를 빼서 반전될 것이다. 간이형 PR-CIS 총점은 0에서 50까지의 범위일 수 있으며, 숫자가 높을수록 셀룰라이트의 부정적인 영향이 커진다는 것을 반영한다. 간이형 PR-CIS 총점의 경우, 반응자는 평가 시점에 PR-CIS 총점이 기준선 대비 적어도 10점 감소한 피험자이다. 개별 간이형 PR-CIS 영향 점수의 경우, 반응은 각 시점에 기준선 대비 적어도 2점 점수 간격의 개선이다. 또한, 반응자는 기준선 대비 적어도 20%의 최대 총점 개선을 보이는 임의의 환자이다. 임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 점수에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 평균 점수 또는 등급으로부터 평균 점수 또는 등급의 약 0.1의 개선이다. 또한, 개선은 50 중 적어도 1 레벨의 기준선 대비 변화이다.

특정 구현예에서, 상기 자세히 설명된 치료 방법은 간이형 PR-CIS로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

ㆍ 간이형 PR-CIS는 만족함, 신경쓰임, 의식적, 창피함, 늙어보임, 및 과체중/몸매가 엉망인 것처럼 보임으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 영역에서의 개선을 보여줌

ㆍ 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 10점의 간이형 PR-CIS 총점 감소

ㆍ 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 2점 점수 간격의 개선을 보여주는 간이형 PR-CIS 영향 점수

ㆍ 또한, 개선은 50 중 적어도 1 레벨의 기준선 대비 변화임

2. 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 대상 허벅지에 대한 간이형 PR-CIS에서 적어도 12점의 중증도 개선.

3. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 기준선(치료전 1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 대상 허벅지에 대한 간이형 PR-CIS에서 적어도 10점의 위약 대비 중증도의 통계적으로 유의한 개선.

5. 180일째, 기준선 대비 간이형 PR-CIS 등급에서 보인 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

6. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에 대해 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 10의 간이형 PR-CIS 총점 감소까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

7. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 평균 피험자 간이형 PR-CIS 점수는 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

8. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 환자의 3분의 1 이상, 또는 2분의 1 이상, 또는 3분의 2 이상, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 한 번 이상의 평가 시점에 간이형 PR-CIS 총 점수가 기준선 대비 적어도 10점 감소하고, 여기서 PR-CIS 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

9. 피험자 자가 평가 척도( SSRS )로 측정된 효능

상기 자세히 설명된 치료 방법은 SSRS로 측정된 바와 같이 개선을 초래한다. SSRS 반응자는 71일째에 허벅지의 셀룰라이트 외관에 대해 최소한 약간 만족(약간 만족[4], 매우 만족[5] 또는 대단히 만족[6])하는 피험자이다. 또한, 반응자는 기준선 대비 적어도 17%의 최대 총점 개선을 보이는 임의의 환자이다. 임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 점수에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 평균 점수 또는 등급으로부터 평균 점수 또는 등급의 약 0.1의 개선이다. 특정 구현예에서, 치료 방법은 SSRS 등급으로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

ㆍ "약간 만족"의 SSRS 등급

ㆍ "만족"의 SSRS 등급

ㆍ "대단히 만족"의 SSRS 등급

2. 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 대상 허벅지의 SSRS 등급에서 적어도 2 레벨의 개선.

3. 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 대상 허벅지의 SSRS 등급에서 적어도 1 레벨의 개선.

4. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 SSRS 등급의 개선이 위약과 비교하여 통계적으로 유의하였고, 여기서 개선은 상기 2번 내지 3번 중 하나 이상이다.

5. 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지했다. 특정 경우에, 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30% 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 적어도 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 2년 또는 3년, 또는 4년, 또는 5년 동안 이러한 수준을 유지했다. 다른 경우에, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 치료전 기준선 대비 개선을 나타냈고, 시간이 지남에 따라 개선의 추가 증가를 나타냈다. 일부 치료 결과 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30%, 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 1개월, 또는 3개월, 또는 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 24개월에 개선의 추가 증가와 동반된 개선을 나타냈다.

6. 첫 번째 주사 후 180일째, 기준선 대비 SSRS 등급에서 보인 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

7. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 2-레벨 SSRS 등급 개선까지의 중간 시간은 약 50일, 또는 60일, 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

8. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 1-레벨 SSRS 등급 개선까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

9. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 평균 피험자 SSRS 등급은 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

10. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 SSRS 등급으로 측정된 2-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

11. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 SSRS 등급으로 측정된 1-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

12. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 환자의 3분의 1, 또는 2분의 1, 또는 3분의 2, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 적어도 1-레벨 SSRS 등급 반응을 보이며, 여기서 SSRS 등급 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

13. 셀룰라이트 중증도의 감소는 첫 번째 치료 방문 후 약 7, 또는 14, 또는 21, 또는 30, 또는 35, 또는 40, 또는 45, 또는 50일 이내에 빠르게 발생한다.

또 다른 구현예에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 13번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 13번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

또 다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 13번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

또 다른 예에서, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 CCH 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 13번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 주사되어 상기 1번 내지 13번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 치료 I 내지 V 중 하나를 사용하여 주사되어 상기 1번 내지 13번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

10. 셀룰라이트 치료에 대한 피험자 만족도( SSCT )로 측정된 효능

상기 자세히 설명된 치료 방법은 SSCT로 측정된 바와 같이 개선을 초래한다. 71일째에 SSCT 평가에서 "만족" 또는 "매우 만족"으로 응답한 피험자는 효능을 보인 반응자로 간주된다. 임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 점수 또는 등급에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 평균 점수 또는 등급으로부터 평균 점수 또는 등급의 약 0.1의 개선이다. 또한, SSCT의 경우 개선은 위약에 비해 적어도 0.1이다. 특정 구현예에서, 치료 방법은 SSCT 등급으로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

ㆍ "만족"의 SSCT 등급

ㆍ "매우 만족"의 SSCT 등급

2. 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 대상 허벅지의 SSCT 등급(예를 들어, 1 내지 2, 등)이 증가한다.

3. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 SSCT 등급의 증가는 위약과 비교하여 통계적으로 유의하였고, 여기서 개선은 대상 허벅지의 SSCT 등급에서 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 나타났다.

4. 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 개선 수준을 유지했다. 특정 경우에, 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30% 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 적어도 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 2년 또는 3년, 또는 4년, 또는 5년 동안 이러한 수준을 유지했다. 다른 경우에, 다른 경우에, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 개선을 나타냈고, 시간이 지남에 따라 개선의 추가 증가를 나타냈다. 일부 치료 결과 환자의 적어도 10%, 또는 20%, 또는 30%, 또는 40% 또는 50%가 초기 투여 후 1개월, 또는 3개월, 또는 6개월, 또는 9개월, 또는 12개월, 또는 18개월, 또는 24개월에 개선의 추가 증가와 동반된 개선을 나타냈다.

5. 180일째, SSCT 등급에서 보인 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관된다.

6. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 SSCT 등급 개선까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

7. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 평균 피험자 SSCT 등급은 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

8. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 SSCT 등급이 개선된 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

9. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 환자의 3분의 1, 또는 2분의 1, 또는 3분의 2, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 SSCT 등급이 개선되고, 여기서 SSCT 등급 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

10. 셀룰라이트 중증도의 감소는 첫 번째 치료 방문 후 약 7, 또는 14, 또는 21, 또는 30, 또는 35, 또는 40, 또는 45, 또는 50일 이내에 빠르게 발생한다.

또 다른 구현예에서, 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 10번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 10번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

또 다른 경우에, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 콜라게나아제 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 10번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제는 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다:

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

또 다른 예에서, 치료 I 내지 V 중 하나에 따라 CCH 약 1mg 내지 약 20mg을 주사하면 상기 1번 내지 10번 결과 중 하나 이상이 얻어진다.

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 적어도 한 번의 치료 방문 동안 적어도 하나의 치료 부위에 주사되어 상기 1번 내지 10번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

특정 구현예에서, 대략 1:1 비율의 콜라게나아제 유형 I 및 콜라게나아제 유형 II 약 1mg 내지 약 20mg이 치료 I 내지 V 중 하나를 사용하여 주사되어 상기 1번 내지 10번 결과 중 하나 이상이 얻어지고, 여기서 콜라게나아제 I 및 II는 다음의 특성을 나타낸다:

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

11. 허벅지 셀룰라이트 효능 척도( CR - TCES ; PR- TCES )로 측정된 효능

임의의 방문시 개별 환자에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 점수 또는 등급에서 적어도 1 레벨 또는 1 등급의 개선이다. 어떤 방문에서든 환자 그룹에 대한 개선은 기준선 또는 임의의 이전 평균 점수 또는 등급으로부터 평균 점수 또는 등급의 약 0.1의 개선이다. 반응자는 기준선 대비 최대 총 점수 또는 등급의 적어도 20% 개선을 보인 임의의 환자이다. 특정 구현예에서, 상기 자세히 설명된 치료 방법은 CR-TCES 및/또는 PR-TCES로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

1. 기준선 대비 CR-TCES 및/또는 PR-TCES 등급에서 적어도 0.1의 개선.

2. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 CR-TCES의 중증도가 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 2 레벨 개선.

3. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 PR-TCES의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 2 레벨 개선.

4. CR-TCES의 중증도가 기준선 대비 적어도 2 레벨 개선되고, PR-TCES의 중증도가 기준선 대비 적어도 2 레벨 개선된 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 2-레벨 복합 반응으로 입증된 개선.

5. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 CR-TCES의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 1 레벨 개선.

6. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 PR-TCES의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 1 레벨 개선.

7. CR-TCES의 중증도가 기준선 대비 적어도 1 레벨 개선되고, PR-TCES의 중증도가 기준선 대비 적어도 1 레벨 개선된 피험자로 정의된 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 1-레벨 복합 반응으로 입증된 개선.

8. 모두 중등증 또는 중증의 CR-TCES 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서의 개선은 위약과 비교하여 통계적으로 유의했으며, 여기서 개선은 상기 1번 내지 7번 중 하나 이상이다.

10. 180일째, 기준선 대비 CR-TCES 및/또는 PR-TCES에서 보인 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

11. 모두 중등증 또는 중증의 CR-TCES 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 2-레벨 CR-TCES 및/또는 PR-TCES 개선까지의 중간 시간은 약 50일, 또는 60일, 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

12. 모두 중등증 또는 중증의 CR-TCES 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서 가장 빠른 1-레벨 CR-TCES 및/또는 PR-TCES 개선까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

13. 모두 중등증 또는 중증의 CR-TCES 등급을 받은 환자 집단에서, 평균 피험자 CR-TCES 및/또는 PR-TCES scores는 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

14. 모두 중등증 또는 중증의 CR-TCES 등급을 받은 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 CR-TCES 및/또는 PR-TCES로 측정된 2-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

15. 모두 중등증 또는 중증의 CR-TCES 등급을 받은 환자 집단에서, 71일째에 적어도 하나의 치료 부위에서 CR-TCES 및/또는 PR-TCES로 측정된 1-레벨 복합 반응을 갖는 피험자의 백분율은 약 1% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 또는 50% 초과이다.

16. 모두 중등증 또는 중증의 CR-TCES 등급을 받은 환자 집단에서, 환자의 3분의 1, 또는 2분의 1, 또는 3분의 2, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 적어도 1-레벨 CR-TCES 반응 및/또는 적어도 1-레벨 PR-TCES 반응을 보이며, 여기서 CR-TCES 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

12. 바디 -Q로 측정된 효능

상기 자세히 설명된 치료 방법은 바디-Q로 측정된 바와 같이 개선된 반응을 초래한다. 셀룰라이트의 경우, 지난주의 시간 프레임 동안 "전혀"에서 "대단히 신경쓰임"에 이르는 환자 응답 옵션이 있고, 플레쉬-킨카이드 등급 독해 수준을 추정하는 16개의 척도 항목이 있다. 점수는 16점(대단히 신경쓰임)에서 64점(전혀 아님)까지이다. 바디-Q 총점의 경우, 반응자는 평가 시점에 바디-Q 총점이 기준선 대비 적어도 16점 증가한 피험자이다. 개별 바디-Q 영향 점수의 경우, 반응은 각 시점에 기준선 대비 적어도 1점 점수 간격의 개선이다. 대안적인 구현예에서, 척도 항목은 16개보다 많거나 적을 수 있으며, 반응자는 기준선 대비 적어도 25%의 최대 총점 개선을 보이는 임의의 환자이다.

특정 구현예에서, 상기 자세히 설명된 치료 방법은 바디-Q로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 하나 이상을 유도한다:

ㆍ 바디-Q는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 영역에서의 개선을 보여준다:

o 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 16의 바디-Q 총점 증가;

o 개별 바디-Q 영향 점수의 경우, 각 시점에 기준선 대비 적어도 1점 점수 간격의 개선; 및

o 기준선 대비 적어도 25%의 최대 총점 개선.

ㆍ 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 16의 바디-Q 총점 증가

ㆍ 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 1점 점수 간격의 개선을 보여주는 바디-Q 영향 점수

ㆍ 90일 및/또는 180일째에 셀룰라이트의 바디-Q 평가에서 기준선 대비 평균 변화

2. 대상 허벅지에 대한 바디-Q에서 적어도 16점 증가된 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 적어도 2 레벨 개선.

3. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 대상 허벅지에 대한 바디-Q에서 적어도 16점 증가로 표시되는 기준선(치료전 1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180, 365 또는 730일째에 위약 대비 중증도의 통계적으로 유의한 개선.

5. 첫 번째 주사 후 180일째, 기준선 대비 바디-Q 등급에서 보인 개선은 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일관되었다.

6. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에 대해 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 적어도 16점의 바디-Q 총점 증가까지의 중간 시간은 약 15일, 또는 20일, 또는 30일, 또는 40일, 또는 50일, 또는 60일 또는 70일, 또는 80일, 또는 90일이다.

7. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 평균 피험자 바디-Q 점수는 첫 번째 치료 후 21일에 위약과 분리되고, 후속 치료 후 지속적이고 상당한 개선을 나타낸다.

8. 셀룰라이트가 있는 환자 집단에서, 환자의 3분의 1 이상, 또는 2분의 1 이상, 또는 3분의 2 이상, 또는 4분의 3 이상이 치료 후 71일까지 적어도 하나의 치료 부위에서 한 번 이상의 평가 시점에 기준선 대비 바디-Q 총 점수가 적어도 16점 증가하고, 여기서 바디-Q 결과는 연령, BMI 또는 피부색과 무관하다.

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ 약 500 내지 약 30,000 SRC 단위/mg의 효능(즉, 비활성도)

ㆍ 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능

ㆍ 약 100,000 내지 약 400,000 GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능

ㆍ 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능

ㆍ 1 cfu/mL 이하의 생균수

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

ㆍ 유형 I

o 검정: SRC 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70

o K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰

o K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814

ㆍ 유형 II

o 검정: GPA 마이크로플레이트

o V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5

o K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1

o K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179

o 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428

o K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934

13. 3-D 사진/이미지로 측정된 치료 효과 평가

하기 실시예에 기재된 바와 같이, 특히 딤플 분석을 위해 치료 효과의 평가에 3-D 사진 또는 기타 이미지가 사용될 수 있다. 3-D 이미지를 사용한 딤플 분석(상기 정의됨)에는 딤플 용적, 길이, 너비 및 면적 계산이 포함될 수 있다. 계산은 에크하우스 등 WO 2018/116304 및 WO 2018/116305에 기재된 방법, 체리 이미징 및 캔필드 사이언티픽, 인코포레이티드로부터 이용 가능한 방법과 같은 여러 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다. 이러한 용적, 길이, 너비 및 면적의 측정은 디지털 3-D 그레이스케일 이미지(X 및 Y 축 회전 기능 포함) 및 디지털 3-D 텍스처 및 리트 이미지(X 및 Y 회전 기능 포함)를 그러한 이미지를 분석하는 컴퓨터 프로그램과 함께 사용하여 계산할 수 있다. 일 구현예에서, 엉덩이 치료 부위는 치료전후의 각 환자에 대해 치료된 왼쪽 엉덩이 및/또는 치료된 오른쪽 엉덩이의 이미지를 촬영할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 허벅지 치료 부위는 치료전후 0도, 45도 및 90도에서 각각의 허벅지 치료 부위의 이미지를 촬영할 수 있다.

임상의 및 환자는 본원에 기재된 척도 및 기타 도구를 사용하거나 사용하지 않고 셀룰라이트의 중증도를 평가하기 위해 사진 및 이미징 도구를 사용할 수 있다. 일 구현예에서, 임상의/연구자 또는 자격을 갖춘 피지명자는 제공된 표준화된 3-D 카메라를 사용하여 표준화된 방식으로 각 치료 부위(각 엉덩이 또는 각 허벅지)를 촬영한다. 피험자는 각 사진 세션을 찬성하며, 표준화된 사진 의상을 착용한다. 임상의/연구자 또는 자격을 갖춘 피지명자는 피험자가 일관되고 표준화된 이완된 자세로 서있는 동안 2곳의 치료 부위(엉덩이 2곳 또는 허벅지 2곳) 각각을 촬영한다. 상기에서 설명된 이러한 사진과 이미지는 하기에 설명된 효능 분석에 사용될 수 있다.

G. 효과의 지속성

본원에 기재된 콜라게나아제 치료는 본원에 개시된 임의의 척도 또는 평가 방법에 의해 측정된 바와 같이 유효성 면에서 지속성을 갖는다. 이러한 지속성은 약 3개월에서 5년 이상까지 다양할 수 있다. 단일 주사 또는 일련의 주사는 셀룰라이트의 개선을 유지하거나 셀룰라이트 외관을 계속 개선하거나 장시간 동안, 예를 들어, 약 6개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 또는 5년 또는 그 이상 동안 셀룰라이트 외관의 중증도를 감소시킬 수 있다.

특정 구현예에서, 콜라게나아제 주사를 받은 환자는 치료 후 약 6개월에 CR-PCSS 및 PR-PCSS 점수 중 하나 또는 둘 모두에 대해 기준선 대비 1점 이상의 개선을 계속 나타내거나 치료 후 약 12개월에 CR-PCSS 및 PR-PCSS 점수 중 하나 또는 둘 모두에 대해 기준선 대비 1점 이상의 개선을 나타낸다. 또한, 이러한 환자는 치료 후 약 22일, 43일, 90일, 또는 180일째에 CR-PCSS 및 PR-PCSS 점수 중 하나 또는 둘 모두에 대해 기준선 대비 1점 이상의 개선을 나타낸다. 예를 들어, 환자의 적어도 약 10%, 또는 15%, 또는 20%, 또는 25%, 또는 30%, 또는 35%, 또는 40%, 또는 45%, 또는 50%, 또는 55%, 또는 60%, 또는 65%, 또는 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90%, 또는 95%, 또는 100%가 이러한 지속성을 입증한다.

또 다른 측면에서, 치료 방법은 2-레벨 복합 반응자(PR-PCSS 및 CR-PCSS 둘 모두에서 적어도 2 레벨의 셀룰라이트 중증도가 개선된 환자)에 대한 효과의 지속성을 평가한 결과 통계적으로 유의한 수가 6개월 및 12개월에 효과의 지속성을 입증한다. 특정 구현예에서, 환자의 적어도 약 10%, 또는 15%, 또는 20%, 또는 25%, 또는 30%, 또는 35%, 또는 40%, 또는 45%, 또는 50%, 또는 55%, 또는 60%, 또는 65%, 또는 70%, 또는 75%, 또는 80%, 또는 85%, 또는 90%, 또는 95%, 또는 100%가 이러한 지속성을 입증한다.

지속성의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

a. CR-PCSS 등급의 감소는, 양측 엉덩이 또는 양측 허벅지에 치료 부위당 12회 피하 주사(x 2곳의 치료 부위)로 투여된 CCH 0.84mg의 3회 치료 세션의 유효성을 뒷받침하는 셀룰라이트 치료에 대한 피험자 만족도 척도 점수와 결합하여 180일까지 유지된다.

b. 180일째, 기준선(스크리닝 방문)으로부터 CR-PCSS 등급의 감소는 오른쪽과 왼쪽에서 일관된다.

c. 적어도 1곳의 치료 부위에서 CR-PCSS 등급의 2-레벨 개선은 180일째에 관찰된다. 엉덩이와 허벅지 부위 및 왼쪽과 오른쪽에 대한 반응은 비슷하다.

d. 적어도 한 부위에서 CR-PCSS 등급의 1-레벨 개선은 180일째에 관찰된다. 엉덩이와 허벅지 부위 및 왼쪽과 오른쪽에 대한 반응은 비슷하다.

e. 적어도 한 부위에서 가장 빠른 2-레벨 CR-PCSS 응답까지의 중간 시간은 83일에 관찰된다.

f. 가장 빠른 1-레벨 CR-PCSS 응답까지의 중간 시간은 41일이다.

g. 180일째에는 환자의 절반 이상이 치료에 만족하거나 매우 만족하였다.

h. 헥셀 CSS에 대한 환자의 점수가 처음에 중증(11-15)의 기준선 분류에 비해 중등증(6-10) 또는 경증(1-5)으로 분류되었고, 중등증(6-10) 또는 경증(1-5)으로 계속 분류된 기간.

i. CR-PCSS, PR-PCSS, 헥셀 CSS, 헥셀 함몰부 깊이 척도, 리커트 척도, 딤플 분석, I-GAIS, S-GAIS, PR-CIS, 간이형 PR-CIS, SSRS, SSCT, CR-TCES, PR-TCES, 바디-Q, 사진 또는 기타 이미지에 의한 평가, 또는 임상의 및/또는 환자가 셀룰라이트 중증도, 개선 및/또는 환자 만족도를 평가하기 위해 사용하는 임의의 다른 검증된 광수치 또는 기타 척도 중 하나 이상으로 측정된 바와 같이 측정된 개선 일자부터 개선을 입증한 후 환자가 기준선으로 복귀하거나 악화된 날짜까지 측정된 기간.

j. CR-PCSS, PR-PCSS, 헥셀 CSS, 헥셀 함몰부 깊이 척도, 리커트 척도, 딤플 분석, I-GAIS, S-GAIS, PR-CIS, 간이형 PR-CIS, SSRS, SSCT, CR-TCES, PR-TCES, 바디-Q, 사진 또는 기타 이미지에 의한 평가, 또는 임상의 및/또는 환자가 셀룰라이트 중증도, 개선 및/또는 환자 만족도를 평가하기 위해 사용하는 임의의 다른 검증된 광수치 또는 기타 척도 중 하나 이상으로 측정된 바와 같이 측정된 개선 일자부터 피험자가 치료에 대한 반응의 관찰 가능한 상실을 보이는 날짜까지 측정된 기간.

k. 치료에 대한 반응의 기준 시점부터 피험자가 반응에 변화(치료에 대한 초기 반응 대비 개선을 포함함)를 보일 때까지 측정된 기간. 반응 및/또는 개선의 변화는 CR-PCSS, PR-PCSS, 헥셀 CSS, 헥셀 함몰부 깊이 척도, 리커트 척도, 딤플 분석, I-GAIS, S-GAIS, PR-CIS, 간이형 PR-CIS, SSRS, SSCT, CR-TCES, PR-TCES, 바디-Q, 사진 또는 기타 이미지에 의한 평가, 또는 임상의 및/또는 환자가 셀룰라이트 중증도, 개선 및/또는 환자 만족도를 평가하기 위해 사용하는 임의의 다른 검증된 광수치 또는 기타 척도 중 하나 이상으로 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 기준 시점은 기준선(투여 전, 1일) 또는 치료 후 71일이다.

l. 피험자가 CR-PCSS 및 PR-PCSS에 따라 2-레벨 복합 반응자가 된 방문 날짜부터 평가 등급이 복귀되고 기준선 등급까지 유지되는 2회 연속 방문의 첫 번째 날짜까지 측정된 기간.

m. 피험자가 CR-PCSS 및 PR-PCSS에 따라 1-레벨 복합 반응자가 된 방문 날짜부터 평가 등급이 복귀되고 기준선 등급으로 유지되는 2회 연속 방문의 첫 번째 날짜까지 측정된 기간.

H. 콜라게나아제 주사의 안전성

지금까지 수행된 연구들 중 일부는 하기 실시예에 상세히 설명되어 있으며, 본원에 기재된 치료의 안전성을 확립한다. 예를 들어, 이러한 연구는 4곳의 치료 부위에 CCH 3.36mg을 동시에 피하 투여한 후 콜라게나아제의 전신 노출이 없음을 입증한다. 실제로, 4곳의 치료 부위에 동시 투여시 콜라게나아제의 안전성 프로파일에 대한 새로운 우려는 관찰되지 않았다. 흔히 보고된 사건은 현재 알려진 콜라게나아제의 이상 사례 프로파일과 일치했다.

CCH로 치료받은 대부분의 피험자는 중증도가 경증 내지 중등증인 적어도 하나의 TEAE를 경험했다. 허벅지 또는 엉덩이 치료 부위별 TEAE를 경험한 피험자에서 눈에 띄는 차이는 없었다. 가장 흔한 유형의 TEAE는 주사 부위 반응, 특히 주사 부위 멍이었는데, 이는 치료 부위(엉덩이 또는 허벅지) 간에 차이가 없었다. 대부분의 TEAE는 21일 이내에 해결되었다. 임상 및 혈액학 실험실 파라미터, 소변 검사 결과, 활력 징후 또는 병용 약물에 임상적으로 의미 있는 변화가 없었다. 항-약물 항체 또는 중화 항체를 가진 피험자에게서 임상적으로 관련된 소견은 없었다.

정의, 실시예 1 및 도 16 내지 18에 상세히 설명된 바와 같이, 멍 분석을 수행하여 시간 경과에 따른 멍의 정도를 측정할 수 있다. 특정 구현예에서, 콜라게나아제 치료로 인한 임의의 멍은 치료 방문 후 약 3일, 또는 4일, 또는 5일, 또는 6일, 또는 7일, 또는 8일, 또는 9일, 또는 10일, 또는 11일, 또는 12일, 또는 13일, 또는 14일, 또는 15일, 또는 20일째에 해결되거나 색 강도가 현저하게 감소할 수 있다.

I. 실시예

다음의 실시예는 본 발명의 특정 구현예를 입증하기 위해 포함된다. 그러나, 당업자는 본 개시내용에 비추어 볼 때, 개시된 특정 구현예에서 수정이 이루어질 수 있고, 여전히 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 비슷하거나 유사한 결과를 얻을 수 있음을 인식해야 한다. 따라서 제시된 모든 사항은 제한적인 의미가 아니라 예시적인 것으로 해석되어야 한다. 예를 들어, CCH를 사용하는 연구에서 다른 콜라게나아제가 CCH에 필적하는 활성 및 반응을 생성하기에 충분한 양(치료적 유효량)으로 사용될 수 있다. 하기 설명된 임상 시험 결과에서, 보고된 각 수치 값은 엄격하게 제한하려는 의도가 아님을 이해해야 한다. 본 개시내용의 범위는 본원에 설명된 발명의 사실 및 원리와 일치하는 각 값 주변 범위를 포함한다. 따라서, 각 값은 약 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%까지 위아래로 달라질 수 있다. 일부 경우에 특정 값의 맥락 및 상황에 따라 약 125%, 150%, 175%, 200%, 225%, 250%, 275%, 또는 300%까지 위아래로 달라질 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 치료 후 71일째에 허벅지의 딤플 용적에서 기준선 대비 평균 감소율은 10%이다. 그러나 이러한 감소는 30%가 될 수 있다.

실시예 1― EFP 치료를 위한 CCH의 5가지 상이한 주사 기법의 안전성과 효능을 평가하는 임상 연구(연구 209)

경증, 중등증 또는 중증 EFP(임상의가 보고한 광수치 셀룰라이트 중증도 척도(CR-PCSS)를 사용하여 연구자가 평가함)가 있는 성인 여성의 치료를 위해 CCH를 피하 투여할 때 5가지 상이한 주사 기법의 안전성 및 효과를 평가하기 위해 개방-표지, 다기관 연구를 수행했다.

주사 기법 I(얕은 주사, 3회 분취량 ). 주사 기법 I에서는, 피험자가 엎드린 자세로 누워 있는 동안 0.1mL 구배가 있는 1mL 주사기를 사용하여 CCH를 피하 주사하였다. 바늘은 30 게이지이고 길이가 ½인치였다. 각 주사는 위치 A, B 및 C에 0.1mL 분취량 3개(총 주사 용적 0.3mL)로 투여된 CCH의 단일 피부 주사로 구성되었다. 도 7에 예시된 바와 같이, 치료 I에 사용된 주사 기법은 다음과 같다: (1) 바늘을 피부 표면에 수직이고 딤플이 길쭉한 골 모양 딤플인 경우 딤플의 장축에 수직인 위치에 배치하고, 주사기에서 아래로 어떠한 압력도 가하지 않고 바늘의 길이를 피부를 통해 삽입하고(위치 A), 연구 약물 0.1mL을 주입함; (2) 바늘을 약간 빼내고 피부 표면에 대해 대략 45° 각도로 피험자의 머리를 향해 재배치하고, 주사기에서 아래로 어떠한 압력도 가하지 않고 바늘의 나머지 길이를 삽입하고(위치 B), 연구 약물 0.1mL을 주입함; (3) 바늘을 약간 빼내고 피부 표면에 대해 대략 45° 각도로 피험자의 발을 향해 재배치하고, 주사기에서 아래로 어떠한 압력도 가하지 않고 바늘의 나머지 길이를 삽입하고(위치 C), 연구 약물 0.1mL을 주입함; 및 (4) 바늘을 주사 부위에서 완전히 빼내고 다음 주사 부위로 진행함. 0.9mL 주사기 4개를 사용하여 각 치료 세션 동안 각 치료 부위의 12곳의 주사 부위에 연구 약물 0.3mL(각각 0.1mL의 분취량 3개)를 투여하였다.

주사 기법 II(얕은 주사, 1회 분취량 ). 주사 기법 II에서는, 피험자가 엎드린 자세로 누워 있는 동안 0.1mL 구배 및 30-게이지 ½-인치 바늘이 있는 1mL 주사기를 사용하여 CCH를 피하 주사하였다. 각 주사는 0.3mL 연구 약물의 단일 얕은 주사로 투여된 CCH의 단일 피부 주사로 구성되었다. 도 8에 예시된 바와 같이, 치료 II에 사용된 주사 기법은 다음과 같다: (1) 바늘을 주사시 피부 표면에 대해 약 30°의 각도로 피험자의 머리를 향해 배치하고, 바늘의 길이를 피부를 통해 삽입하고, 연구 약물 0.3mL를 주입함; (2) 바늘을 주사 부위에서 완전히 빼내고 다음 주사 부위로 진행함. 0.9mL 주사기 4개를 사용하여 각 치료 세션 동안 각 치료 부위의 12곳의 주사 부위에 연구 약물 0.3mL를 투여하였다.

주사 기법 III(깊은 주사, 1회 분취량 ). 주사 기법 III에서, 피험자가 엎드린 자세로 누워 있는 동안 0.1mL 구배 및 30-게이지 1-인치 바늘이 있는 1mL 주사기를 사용하여 CCH를 피하 주사하였다. 각 주사는 0.3mL 연구 약물의 단일 1-인치 주사로 투여된 CCH의 단일 피부 주사로 구성되었다. 도 9에 예시된 바와 같이, 치료 III에 사용된 주사 기법은 다음과 같다: (1) 바늘을 주사시 피부 표면에 대해 약 30°의 각도로 피험자의 머리를 향해 배치하고, 바늘의 길이를 피부를 통해 삽입하고, 연구 약물 0.3mL를 주입함; 및 (2) 바늘을 주사 부위에서 완전히 빼내고 다음 주사 부위로 진행함. 연구 약물 0.9mL를 함유하는 주사기 4개를 사용하여 각 치료 세션 동안 각 치료 부위의 12곳의 주사 부위에 연구 약물 0.3mL를 투여하였다.

주사 기법 IV(깊은 주사 및 얕은 주사, 5회 분취량 ). 주사 기법 IV에서, 피험자가 엎드린 자세로 누워 있는 동안 0.1mL 구배 및 30-게이지 1-인치 바늘이 있는 3mL 주사기를 사용하여 CCH를 피하 주사하였다. 각 주사는 위치 A, B, C, D 및 E에 0.3mL 분취량 5개(총 주사 용적 1.5mL)로 투여된 CCH의 단일 피부 주사로 구성되었다. 도 10에 예시된 바와 같이, 치료 IV에 사용된 주사 기법은 다음과 같다: (1) 바늘을 피부 표면에 대해 약 30°의 각도로 피험자의 머리를 향해 배치하고, 바늘의 길이(1인치)를 피부를 통해 삽입하고(위치 A), 연구 약물 0.3mL을 주입함; (2) 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하면서, 바늘을 0.5인치 빼내 피험자의 한쪽으로 재배치하고(위치 B), 연구 약물 0.3mL을 주입함; (3) 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하면서, 바늘을 위치 A와 B 사이의 중간으로 재배치하고(위치 C, 피험자의 어깨 쪽), 연구 약물 0.3mL을 주입함; (4) 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하면서, 바늘을 위치 B의 반대쪽으로 재배치하고(위치 D), 연구 약물 0.3mL을 주입함; (5) 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하면서, 바늘을 위치 A와 D 사이의 중간으로 재배치하고(위치 E, 피험자의 다른 어깨 쪽), 연구 약물 0.3mL을 주입함; 및 (6) 바늘을 주사 부위에서 완전히 빼내고 다음 주사 부위로 진행함. 1.5mL를 함유하는 주사기 12개를 사용하여 각 치료 세션 동안 각 치료 부위의 12곳의 주사 부위에 연구 약물 1.5mL를 0.3mL 분취량으로 투여하였다.

주사 기법 V(얕은 주사, 4회 분취량 ). 주사 기법 V에서, 피험자가 엎드린 자세로 누워 있는 동안 0.1mL 구배 및 30-게이지 ½-인치 바늘이 있는 3mL 주사기를 사용하여 CCH를 피하 주사하였다. 각 주사는 위치 A, B, C 및 D에 0.3mL 분취량 4개(총 주사 용적 1.2mL)로 투여된 CCH의 단일 피부 주사로 구성되었다. 도 11에 예시된 바와 같이, 치료 V에 사용된 주사 기법은 다음과 같다: (1) 바늘을 피부 표면에 대해 약 30°의 각도로 피험자의 머리를 향해 배치하고, 바늘의 길이(1/2인치)를 피부를 통해 삽입하고(위치 A), 연구 약물 0.3mL를 주입함; (2) 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하면서, 바늘을 위치 A로부터 대략 60°로 피험자의 어깨 쪽으로 재배치하고(위치 B), 연구 약물 0.3mL을 주입함; (3) 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하면서, 위치 B로부터 대략 60°로 피험자의 다른 어깨 쪽으로 재배치하고(위치 C), 연구 약물 0.3mL을 주입함; (4) 피부 표면에 대해 바늘의 각도를 30°로 유지하면서, 바늘을 위치 A의 반대쪽으로 피험자의 다른 쪽으로 재배치하고(위치 D), 연구 약물 0.3mL을 주입함; 및 5) 바늘을 주사 부위에서 완전히 빼내고 다음 주사 부위로 진행함.

연구 약물인, CCH는 0.92mg의 콜라게나아제 클로스트리디움 히스톨리티쿰, 수크로오스, 트리스, 만니톨 및 pH 8.5까지 충분한 양의 염산을 포함하는 멸균 동결건조 분말이었다. 재구성을 위한 CCH 멸균 희석제는 주사용수 중 0.6% 염화나트륨 및 0.03% 염화칼슘 탈수물이었다. 희석제는 바이알당 4mL의 최종 멸균 액체로 공급되었다. CCH는 온도 조절이 가능한 냉장고에 2 내지 8℃에서 보관되었고, 재구성된 CCH 용액은 재구성 후 실행 가능한 대로 최대한 빨리 투여되었다.

연구 대상은 18세 이상의 임신하지 않은 여성이었다. 각 피험자는 CR-PCSS 척도를 사용하여 연구자에 의해 결정된 바와 같이, 스크리닝 방문시 두 허벅지 또는 두 엉덩이에 대해 2(경증), 3(중등증) 또는 4(중증)의 점수를 받았다. 피험자는 각 치료 부위에 적어도 2개의 딤플이 있었는데, 이 딤플은 격리되어 있고, 임의의 다른 딤플과 적어도 5cm 떨어져 있었으며, 헥셀 함몰부 깊이 척도에서 2점 또는 3점을 받았고, 폭:길이 비율이 0.5 이상이었다. 모든 피험자는 병력, 신체검사 및 스크리닝시 실험실 프로파일의 결과를 토대로 건강 상태가 양호한 것으로 간주되었다. 총 64명의 피험자가 이 연구에 등록되었다. 총 32명의 피험자가 엉덩이 치료 그룹에 등록되었고, 31명의 피험자는 안전성 모집단에 포함되고, 29명의 피험자는 평가 가능한 모집단에 포함되었다. 엉덩이 치료 그룹의 한 피험자는 치료를 받지 않았기 때문에 안전성과 평가 가능한 모집단에서 제외되었다. 총 32명의 피험자가 허벅지 치료 그룹에 등록되었고, 32명의 피험자는 안전성 모집단에 포함되고, 29명의 피험자는 평가 가능한 모집단에 포함되었다. 허벅지 치료 그룹의 3명의 피험자는 리커트 척도 데이터가 이용 가능하지 않았기 때문에 평가 가능한 모집단에서 제외되었다.

치료전 1일 방문에서, 지정된 치료 부위(엉덩이 2곳 또는 허벅지 2곳)를 촬영하고, 스크리닝 동안 수행한 것과 동일한 방식으로 적격성에 대해 평가하였다. 포함/제외 기준을 확인한 후, 연구자는 피험자가 일관된 이완된 자세로 서 있을 때(피부 꼬집기(skin pinching) 또는 근육 수축과 같은 어떠한 조작도 사용하지 않음) 뚜렷하게 윤곽을 드러내고, 눈에 띄고, 치료에 적합한 치료 부위(왼쪽 및 오른쪽 엉덩이 또는 왼쪽 및 오른쪽 후외측 허벅지) 내 딤플을 선택하고 표시했다. 단일 피험자에 대해 양쪽 엉덩이와 양쪽 허벅지가 진입 기준을 충족하면, 허벅지가 치료 대상이 되었다. 이 연구 동안 엉덩이와 허벅지 모두에서 EFP 치료를 받은 피험자는 없었다.

연구자는 다른 딤플과 5cm 이상 간격을 두고, 헥셀 CSS(B) 함몰부 깊이 척도에서 2점 또는 3점을 받은 치료 부위당 적어도 2개의 딤플을 식별했다. 치료를 위해 선택된 치료 부위의 딤플을 표시하고, 딤플 표시 후 해당 부위를 다시 촬영했다.

1일에, 치료는 5가지 주사 기법 중 하나에 순차적으로 배정되었고, 피험자는 24회 주사(치료 부위당 12회 주사)로 치료받았다. 모든 치료 방문시, 배정된 치료군(주사 기법)에 관계없이, 모든 적격 피험자는 배정된 각 치료 부위에 동일한 양의 CCH(0.84mg)가 주입되었다. 피험자는 최대 2번의 추가 세션을 위해 복귀했으며 동일한 절차(사진, 평가, 표시, 사진, 치료)를 따랐다. 각 치료 세션은 대략 21일 간격이었다. 각 피험자에 대한 모든 24회 주사(각 치료 부위에 대해 12회)는 3번의 모든 세션에 대해 배정된 치료 부위 내에서 이루어져야 한다. 각 피험자는 3번의 치료 세션을 모두 받았다. 치료 세션 2에서 주사가 제공되지 않은 경우, 피험자는 치료 세션 3을 위해 계속해서 복귀했고, 이때 치료 부위를 다시 촬영하고 평가했다. 연구 종료(EOS)는 마지막 피험자가 71일 연구 종료 방문을 완료했을 때였다. EOS/조기 종료(ET) 방문시, 각 피험자의 각 치료 부위를 촬영하여 평가하고, 안전성 평가를 수행했다.

각 치료군에 대한 주사 용적 및 농도는 표 20에 개괄되어 있다.

이 연구에 대한 효능 평가변수에는 다음이 포함된다: (a) 각 치료군별로 22, 43 및 71일째에 각 치료 부위(엉덩이 또는 허벅지)의 미적 외관에 대한 맹검 평가자의 리커트 척도 점수에서 기준선 대비 변화, (b) 정상 피부에 비해 치료 부위의 멍 값의 변화, 및 (c) 치료군별로 22, 43 및 71일째에 헥셀 CSS(B) 함몰부 깊이 척도에서 기준선 대비 변화. 딤플 용적이 3-D 사진을 사용하여 또한 분석되었다.

리커트 척도 점수로 측정된 효능. 하기 표에 나타난 바와 같이, 각 주사 유형(I-V), 연구 방문, 치료군과 연구 방문의 상호작용을 고정 효과로 사용하는 선형 모델을 사용하여 기준선 대비 미적 외관의 개선에 대한 리커트 척도 점수를 분석했다. 치료군과 연구 방문의 상호작용 효과에 대한 고정 효과 추정치 및 95% 신뢰 구간(CI)이 제공된다. 이 모델은 각 치료 부위(즉, 왼쪽 엉덩이, 오른쪽 엉덩이, 왼쪽 허벅지, 오른쪽 허벅지), 및 치료 부위의 왼쪽과 오른쪽의 평균(즉, 왼쪽 엉덩이와 오른쪽 엉덩이의 평균; 왼쪽 허벅지와 오른쪽 허벅지의 평균)에 대한 반응을 사용하여 피팅되었다. 각 치료 부위에 대한 미적 외관의 기준선 대비 개선은 5점 리커트 척도를 사용하여 맹검 중앙 평가자가 평가한다.

기준선 대비 미적 외관의 개선에 대한 리커트 척도 등급은 각 치료 부위에 대한 치료군 및 연구 방문/일자(22, 43 및 71일)별 카운트 및 백분율을 사용하여 평균 및 SD와 함께 요약되었다. 상기 설명된 캡처된 이미지를 사용하여 중앙 평가자는 각 치료 부위에서 달성된 기준선 대비 미적 개선 수준을 측정하는 5점 리커트 척도를 완료했다. 미적 개선은 악화됨(-1), - 동일하게 유지됨(0), 개선됨(1), 많이 개선됨(2) 및 매우 많이 개선됨(3)으로 평가되었다. 효능은 22, 43 및 71일째에 평가되었다. 각 치료 부위(엉덩이 또는 허벅지)에 대한 미적 외관의 기준선 대비 개선은 각 치료군에 대해 22, 43 및 71일째에 5점 리커트 척도를 사용하여 맹검 중앙 평가자에 의해 평가되었다. 리커트 점수는 다음과 같았다: 악화됨(-1), 변화 없음(0), 개선됨(1), 많이 개선됨(2), 및 매우 많이 개선됨(3). 평가자에게는 동시에 2개의 이미지가 제공되었고; 기준선은 스크린의 왼쪽에 있었고, 방문 이미지는 스크린의 오른쪽에 있었다. 평가자는 기준선과 비교하여 방문 이미지를 평가하고, 리커트 점수를 기록했다. 엉덩이의 경우, 기준선 이미지와 비교하기 위해 방문당 1개의 오리엔테이션 이미지만이 있었다. 그러나, 허벅지의 경우에는 3개의 오리엔테이션 이미지가 있었고; 따라서 방문할 때마다 3쌍의 이미지가 있었다; 1쌍 0°(외측), 1쌍 45°(경사), 1쌍 90°(후방). 따라서 평가자는 세 쌍(즉, 기준선 외측 및 71일 외측, 기준선 경사 및 71일 경사, 기준선 후방 및 71일 후방)을 모두 본 다음 허벅지 전체에 대해 단일 리커트 점수(1개 값)를 기록해야 했다.

일반적으로, 하기 표 21 및 22에 나타난 바와 같이, 왼쪽 및 오른쪽 엉덩이는 각 치료군에 대한 리커트 점수를 기반으로 하는 미적 외관에서 기준선과 유사한 LS평균 개선을 나타냈다.

또한, 표 21에서 볼 수 있듯이, 71일째에, 왼쪽 및 오른쪽 엉덩이를 평균화한 결과, 모든 주사 유형에서 기준선에 비해 미적 외관이 개선되었고, 주사 유형 I, II, III 및 V에서는 상당한 개선을 보였고; 주사 유형 IV에서는 22일 및 43일에만 상당한 개선을 나타냈다. 일반적으로, 기준선과 비교하여 엉덩이의 미적 외관에서 LS평균 개선은 주사 유형 IV를 제외하고 22일부터 71일까지 개선되는 경향이 있었다. 주사 유형 IV에 속하는 피험자의 절반은 왼쪽 및 오른쪽 엉덩이에서 기준선과 비교하여 71일째에 변화가 없거나 악화된 리커트 점수를 나타냈다. 일반적으로 왼쪽 및 오른쪽 허벅지에서는 각 치료군에 대해 미적 외관에서 기준선과 비슷한 LS평균 개선을 나타냈다. 71일째에 왼쪽 및 오른쪽 허벅지를 평균화한 결과, 모든 주사 유형에서 기준선에 비해 미적 외관이 개선되었고, 주사 유형 I에서는 상당한 개선을 보였다. 일반적으로, 기준선과 비교하여 허벅지의 미적 외관에서 LS평균 개선은 모든 주사 유형에서 22일부터 71일까지 감소하는 경향이 있었다. 오른쪽 및 왼쪽 허벅지에서 일부 피험자는 기준선과 비교하여 71일째에 악화된 리커트 점수를 받았지만, 출원인은 3쌍을 사용하여 1개의 전체 허벅지 점수를 생성하는 방법이 결함이 있을 수 있다고 생각한다.

리커트 척도 등급 데이터로부터 추가 효능 결과는 하기 표 22 및 23에 요약되어 있다.

헥셀 CSS(B) 함몰부 깊이. 헥셀 CSS는 셀룰라이트의 5가지 주요 형태학적 특징을 평가하는 광수치 척도이다: (A) 분명한 함몰부의 수, (B) 함몰부의 깊이, (C) 피부 표면 변화의 형태학적 외관, (D) 이완되거나, 탄력이 없거나 처진 피부, 및 (E) 의학 문헌에 근거한 현재 분류 척도(Hexsel, 2010; Nuernberger, 1978). 이 연구에서는 "B - 함몰부의 깊이"만 평가되었다. 연구자 또는 자격을 갖춘 피지명자는 헥셀 CSS를 사용하여 각 엉덩이 또는 각 허벅지에서 EFP의 함몰부 깊이를 평가했다. 평가는 피험자가 둔근이 이완된 상태로 서있는 자세로 있는 동안 수행되었다. 딤플 깊이 함몰부는 스크리닝 방문시, 22, 43, 및 71일째에 헥셀 CSS(B) 함몰부 깊이 척도를 사용하여 연구자에 의해 평가되고, 다음과 같이 등급이 매겨졌다: 함몰부 없음(0), 표면적 함몰부(1), 중간 깊이 함몰부(2) 및 깊은 함몰부(3). 각각의 기준선 이후 방문시 기준선 대비 변화를 분석하고, 각 치료 부위에 대한 헥셀 CSS(B) 함몰부 깊이 척도 점수에 대해 요약했다.

주사 유형별 22, 43 및 71일째에 헥셀 CSS(B) 함몰부 깊이 척도에서 기준선 대비 변화가 평가되고 다음과 같이 등급이 매겨졌다: 함몰부 없음(0), 표면적 함몰부(1), 중간 깊이 함몰부(2) 및 깊은 함몰부(3). 1일부터 71일까지 헥셀 CSS(B)의 음의 변화는 함몰부 깊이가 개선됨을 나타낸다. 일반적으로, 왼쪽과 오른쪽 엉덩이는 각 주사 유형에 대해 헥셀 CSS(B) 딤플 함몰부 깊이에서 기준선과 비슷한 LS평균 개선을 보였다. 71일째에, 왼쪽과 오른쪽 엉덩이를 평균화한 결과, 모든 주사 유형에서 LS평균 함몰부 깊이가 개선되었다. 주사 유형 I이 가장 큰 개선을 보였고(-1.17), 그 다음은 주사 유형 IV였으며(-0.83), 개선은 통계적으로 유의하였다. 이러한 결과는 하기 표 24에 요약되어 있다.

주사 유형 I에서, 엉덩이 그룹(왼쪽 및 오른쪽 평균)은 22일부터 71일까지 개선된 딤플 함몰부 깊이의 LS평균 개선을 나타냈다. 주사 유형 IV에서, 엉덩이 그룹(왼쪽 및 오른쪽 평균)은 22일부터 71일까지 유지된 딤플 함몰부 깊이의 LS평균 개선을 나타냈다.

일반적으로, 왼쪽 및 오른쪽 허벅지는 각 주사 유형에 대해 헥셀 CSS(B) 딤플 함몰부 깊이에서 기준선과 비슷한 LS평균 개선을 나타냈다. 71일째에, 왼쪽과 오른쪽 허벅지를 평균화한 결과, 모든 주사 유형에서 LS평균 함몰부 깊이가 개선되었다. 주사 유형 IV가 가장 큰 개선을 보였고(-1.40), 그 다음은 주사 유형 V였으며(-0.80), 개선은 통계적으로 유의하였다. 주사 유형 IV 및 V 둘 모두에서, 허벅지 그룹(왼쪽 및 오른쪽 평균)은 22일부터 71일까지 개선된 딤플 함몰부 깊이의 LS평균 개선을 나타냈다.

3-D 사진에 의한 이미지 분석. 치료 효과 평가는 3-D 사진으로 수행되었다. 연구자 또는 자격을 갖춘 피지명자는 치료 1, 22 및 43일에 딤플 및 주사 부위를 표시하기 전후에 표준화된 방식으로 표준화된 디지털 카메라를 사용하여 주사 전 각 치료 부위(양쪽 엉덩이 또는 양쪽 허벅지)를 촬영했다. 스크리닝 및 기타 모든 비-투여 방문시 각 치료 부위에 대해 단일 세트의 사진을 촬영했다. 4, 8, 15, 22, 43 및 71일(연구 종료/ET)에 촬영한 사진은 치료군과 연구 방문일에 맹검된 중앙 평가자에 의해 검토되었다.

멍, 용적, 표면적 및 최대 길이/너비를 평가하는 데 사용되는 표준 이미지 분석(IA) 절차가 하기에 논의되어 있다. 이 연구에 사용된 카메라 시스템은 맞춤형 조명, 벡트라(Vectra) M1 카메라, 및 캔필드 캡처(Canfield Capture) 소프트웨어(v. 3.5)가 장착된 캔필드 사이언티픽(Canfield Scientific)에서 입수 가능한 인텔리스튜디오(IntelliStudio)였다. 이미지 유형, 속성, 뷰(view) 및 방문 창을 정의하고, 연구 프로토콜 내에서 디지털 모니터링 시스템(Digital Monitoring System; DMS)에 직접 입력했다. DMS의 연구 설정에는 다음이 포함되었다:

이미지를 캡처하여 DMS로 스테이징하고, 검토할 수 있다. 사진 방문은 다음을 포함했다: 스크리닝, 1일/표시 전, 1일/표시 후, 4일, 8일, 15일, 22일/표시 전, 22일/표시 후, 43일/표시 전, 43일 표시 후, 및 71일/ET.

딤플 분석: 이미지를 검토하여 주요 딤플이 각 사분면에 지시된 대로 "X"로 표시되었는지 확인했다. 주요 딤플이 표지되지 않은 경우, 다음의 단계를 수행했다:

1. 이미지(들)와 이미지 배치(place the images)를 파워포인트(PowerPoint)로 내보냈다.

2. 사이트에 연락하여 사이트의 연구자에게 파워포인트 내의 이미지에 X로 주요 딤플을 표시하도록 요청했다.

3. 대응물(correspondence)을 저장하고 이미지 분석(IA) 팀과 공유했다.

딤플 분석은 1(표시 전), 22, 43 및 71일째에 수행되었다.

IAT는 1일-표시 전 이미지에서 목표 딤플의 위치를 결정하기 위해 1일-표시 후 이미지를 기준으로 사용했다. 1일-표시 전에 딤플의 오목한 테두리 주위에서 트레이싱이 이루어졌다. 딤플 트레이싱은 22일-표시 전, 43일-표시 전, 및 71일/ET 이미지로 전환되었다. 이 트레이싱은 (i) 최대 길이(즉, 딤플을 가로지르는 가장 긴 직선 거리); (ii) 최대 너비(즉, 최대 길이 측정값에 수직인 가장 긴 직선 거리); (iii) 딤플의 표면적; 및 (iv) 딤플 기저부와 보간된 표면 사이의 용적을 측정하는 데 사용되었다.

멍 분석: 이미지를 검토하여 각 이미지와 멍든 부위 외부에 흰색 참조 라벨이 있는지 확인했다. 참조 라벨이 없거나 멍든 부위를 가리지 않는 경우, 가능하면 해당 방문에 재촬영이 요청되었다. 멍 분석은 1(표시 전), 4, 8, 및 15일에 수행되었다.

부위 표시 분석: 1일 표시 후 방문시 딤플이 표시되었는지 확인하기 위해 이미지를 검토했다. 딤플이 표시되지 않은 경우, 가능하면 해당 방문에 재촬영이 요청되었다. 부위 표시 분석:

이미지 분석(IA) 워크플로우: 분석을 위해 선택된 모든 이미지에는 조사 부위, 피험자 이차 식별자 및/또는 치료군과 같은 정보에 대해 이미지 분석 기술자(IAT)에게 맹검된 무작위 추적 번호가 배정되었다. 특정 방문에 대해 수행된 분석 절차는 방문 이름에 기반하여 미리 결정되었다. 딤플 분석은 사전-식별된 주요 딤플에 대해 수행되었으며, 용적, 표면적 및 최대 길이/너비 측정을 포함할 것이다. 멍 분석에는 감지된 멍든 부위 및 영향을 받지 않은 피부에서 감지된 멍의 외부 영역에서 L*a*b* 색상 측정이 포함되었다. 부위 표시 분석은 트레이싱의 표면적 측정에 더하여 최대 길이/너비로 구성되었다.

이미지 등록: 1일 표시 전(기준선) 방문을 받으면, IAT는 벡트라 분석 모듈(Vectra Analysis Module; VAM) 소프트웨어에서 표시 전 이미지를 열고 상기 이미지를 3-D 공간의 격자에서 중심에 두었다. 격자를 참조로 사용하여 IAT는 이미지의 대략적인 중심이 격자의 원점에 배치되도록 기준선 이미지를 배치했다. 허벅지/엉덩이는 +z-방향으로 앞쪽을 향하고, 위쪽 허벅지/엉덩이는 +y-방향을 가리키고, 아래쪽 허벅지/엉덩이는 -y-방향을 가리켰다(도 13). 1일 표시 후 이미지를 포함한 모든 후속 시점이 알고리즘 등록 기능을 사용하여 격자에서 기준선 이미지의 위치에 등록되었다.

IAT가 등록을 검토하기 위해 사용한 VAM 내에서 거리별 색상 지도가 생성되었다. 거리별 색상 지도는 +5 내지 -5 밀리미터(mm)의 색상 척도를 기반으로 두(2) 이미지 모델 간의 거리를 나타냈다(도 14). IAT는 이미지 대부분이 녹색으로 표시되도록 하였고, 이는 두 이미지 간의 거리가 무시할 수 있고 적절하게 정렬되었음을 나타낸다.

표면 추적 처리: 이미지 등록 후, 1일(표시 전), 4일, 8일, 15일, 22일, 43일 및 71일 이미지는 표면 추적 처리를 받았다. IAT는 먼저 스크립트를 사용하여 1일, 기준선 이미지의 고밀도 메시 템플릿을 생성했다. 한 번에 하나의 후속 이미지를 기준선 및 메시 템플릿과 함께 VAM 소프트웨어에서 열었다. 추적 시드 랜드마크(tracking seed landmark)를 참조로 식별 가능한 피부 특징에 배치했다. 추적 스크립트는 세(3) 개의 신규 3-D 이미지, 추적된 기준선 이미지, 추적된 후속 이미지, 및 추적된 후속 이미지의 모양이며, 추적 품질에 관한 정보를 전달하는 품질 관리(QC) 이미지를 프로그래밍 방식으로 생성하고 저장하기 위해 실행되었다.

품질 검사 IAT는 추적된 후속 이미지 및 QC 이미지의 품질을 검토하여 성공적인 추적을 입증했다. 딤플 분석을 받은 방문의 경우, IAT는 또한 추적된 후속 이미지 위에 QC 이미지를 겹쳐 주요 딤플 영역의 QC 이미지에 큰 구멍이 없는지 확인했다. QC 이미지의 메시에 있는 구멍은 드롭 아웃(drop out) 영역에서 추적 정보 손실을 나타냈다. IAT가 분석할 영역 내의 정보 손실로 인해 추적이 허용되지 않는다고 판단한 경우, 추적 시드 랜드마크가 조정되고 추적 스크립트가 다시 실행된다. IAT는 섬광(glare), 짙은 그림자, 옷이 남긴 피부의 흔적, 피험자 위치의 큰 변화 또는 피부 착색의 큰 변화로 인한 좋지 않은 표면 추적 품질의 불가피한 사례에 주의했다. QC 이미지의 메시에 있는 구멍은 강한 멍이 있는 부위로 예상되었다.

관심 있는 주요 딤플 영역( AOI ) 묘사: 성공적인 표면 추적 후, IAT는 추적된 기준선 이미지를 열고, VAM에 1일-표시 후 이미지를 등록했다. 1일-표시 후 이미지에서 IAT는 주요 딤플 부위 표시의 바깥쪽 테두리를 트레이싱했다. 이 트레이싱은 표시 부위의 표면적, 표시 부위를 가로질러 가장 큰 축(최대 딤플 길이) 및 가장 큰 수직 축의 길이(최대 딤플 너비)를 측정하는 데 사용되었다. 이 트레이싱은 딤플 또는 멍 분석을 위한 AOI를 묘사하는 데 사용되지 않았다. 주요 딤플이 부위에서 식별되지 않은 경우, IAT는 가장 큰 것으로 인식된 딤플을 트레이싱했다.

IAT는 1일-표시 전 이미지에서 목표 딤플의 위치를 찾기 위해 1일-표시 후 이미지를 참조로 사용했다. 그 다음 IAT는 추적된 사전-표시 이미지에서 주요 딤플의 경계를 트레이싱했다. 트레이싱은 딤플이 오목해져 딤플 분석을 위해 주요 딤플 AOI를 묘사하는 능선 바로 바깥쪽에 있을 때까지 필요에 따라 조정되었다(도 15). 추적된 사전-표시 이미지의 딤플 트레이싱은 기준선에 대한 각 후속 이미지의 고유한 표면 추적 관계를 기반으로 22일, 43일 및 71일 후속 이미지로 전환되었다(도 16). IAT는 전환된 AOI에 영향을 미치는 이미지 품질이 좋지 않은 임의의 사례를 주의했다.

관심 있는 멍 영역( AOI ) 묘사: IAT는 4일 이미지에서 감지할 수 있는 가장 큰 멍 주변의 단일 연속 트레이싱인, "멍든 조직" AOI를 생성했다(도 17). IAT는 멍든 피부와 영향을 받지 않은 피부 사이의 피부 착색의 차이를 결정할 수 있는 경계를 트레이싱했다. 피부는 주변 피부 색조와 구별되는 청색/자주색, 녹색 또는 황색/갈색 착색을 보이는 경우 멍든 것으로 간주되었다. 4일 이미지에서 식별할 수 있는 멍이 없는 경우, 피험자는 멍 분석의 목적에 부적합하였다.

추가로, IAT는 두 번째 트레이싱인, "정상 조직" AOI를 생성했다. 정상 조직 AOI는 의복 압박 선, 비정상적인 발적 또는 여드름이나 흉터 조직과 같은 피부 특징으로 인한 피부 질감 왜곡에 영향을 받지 않는 피부 영역에 생성되었다. 가능하고 적용 가능한 경우, 정상 조직 AOI는 1일 표시 전 멍든 조직 AOI의 굴곡에 걸쳐 존재하는 임의의 음영, 빛 또는 섬광과 일치시키려고 했다. 정상 조직 AOI의 크기와 모양은 이용 가능한 자연스럽게 보이는 피부의 양에 따라 피험자마다 달랐다. 일단 트레이싱되면, IAT는 4일 이미지에 대한 표면 추적 관계를 기반으로 멍든 조직 및 정상 조직 AOI를 4일 이미지에서 1일-표시 전, 8일 및 15일 이미지로 전환했다. 멍든 조직 AOI 또는 정상 조직 AOI가 특정 피험자 또는 피험자의 측면에 대해 다른 멍 분석 방문의 가장자리를 넘어 확장된 경우, AOI는 모든 방문에서 일관될 때까지 조정되었다.

IAT는 1일-표시 전, 4일, 8일 및 15일 이미지에서 흰색 참조 라벨을 수동으로 트레이싱하고 트레이싱을 "흰색"으로 라벨링했다. 흰색 참조 라벨이 멍든 부위 내에 배치된 경우, IAT는 라벨의 경계를 트레이싱하고, 영향을 받은 각 방문시 멍 AOI로부터 이를 뺀다. 이미지에 흰색 참조 라벨이 없는 경우, 해당 이미지는 멍 분석의 목적에 부적합하였다.

품질 관리( QC ) 검사: QC 검사는 이미지에 대한 분석을 수행한 IAT와는 독립적인 IAT에 의해 수행되었다. 주어진 방문에 대한 분석 절차에 따라 별도의 QC 검사 세트가 수행되었다. QC 검사 내내 QC IAT에 의해 만들어진 임의의 조정은 분석으로 넘어가기 전에 또 다른 IAT에 의해 기록되고 다시 QC 검사되었다. QC를 시작하기 전에 QC IAT는 이미지 품질 문제와 관련하여 최초 IAT가 작성한 모든 메모를 검토했다.

ㆍ 1일-표시 전 이미지는 VAM 격자에 대한 적절한 등록을 위해 QC IAT에 의해 검토되었다. QC IAT는 또한 1일(표시 후) 이미지를 참조하여 1일(표시 전) 이미지에서 주요 딤플이 올바르게 식별되고 트레이싱되었는지 확인했다. QC IAT는 주요 딤플 AOI를 검토하여 AOI의 주변이 딤플이 오목해지는 능선 바로 바깥쪽에 있는지 확인했다. 그 다음 QC IAT는 정상 조직 및 멍든 조직 AOI의 존재를 검사하여 정상 조직 AOI가 대표적인 색상 샘플임을 확인했다. QC IAT는 필요한 경우에만 각 AOI의 경계를 조정하여 일어난 모든 변경을 기록했다. AOI 또는 랜드마크 배치가 변경된 경우, IAT는 업데이트된 AOI를 적절한 후속 이미지로 변경했다.

ㆍ 1일-표시 후 이미지는 QC IAT에 의해 검토되어 부위 딤플 표시의 바깥쪽 경계를 따라 적절한 트레이싱이 이루어졌는지 확인했고, 부적절한 선택이 이루어진 경우 AOI를 조정했다. 부적절한 선택에는 표시 부위의 내부 경계에 대한 트레이싱 또는 주요 딤플로 지정되지 않은 딤플의 트레이싱이 포함되었다.

ㆍ 22일, 43일 및 71일 이미지는 허용 가능한 추적 품질에 대해 QC IAT에 의해 검토되었다. QC IAT는 QC 후속 이미지를 참조하여 주요 딤플 AOI 내의 QC 이미지에 구멍이 없는지 확인했다. 주요 딤플 AOI 내에 구멍이 있으면, QC IAT는 방문에 대해 "추적 품질이 좋지 않음"이란 메모를 추가했다. 주요 딤플 AOI의 대부분이 표면 추적 드롭아웃으로 구성된 경우, QC IAT는 이미지가 부적합한 것으로 제안했다.

ㆍ 4일, 8일 및 15일 후속 이미지를 먼저 적절한 멍 묘사를 위해 검토하였다. QC IAT는 최초 경계가 지속적으로 더 많은 멍 변색을 포함하는 경우에 또는 경계가 멍들지 않은 피부를 포함할 때 4일 이미지에서 멍 AOI의 경계를 조정했다. QC IAT는 멍든 조직 AOI에 대한 모든 조정을 기록했으며, 또한 멍든 피부색과 정상 피부색 사이에 식별할 수 있는 경계가 없는 경우 피험자를 멍 분석 실패 사례로 제안했다. 그 다음 QC IAT는 정상 조직 AOI의 존재에 대해 검사하여 AOI의 적절한 명명(naming), 및 정상 조직 AOI가 일관되고 대표적인 색상 샘플인지 확인했다. QC IAT는 기본 피부 AOI 내의 비정상적이고 불가피한 모든 착색을 기록했다. 4일 이미지에서 멍든 조직 또는 정상 조직 AOI가 조정된 경우, IAT는 조정된 트레이싱을 1일-표시 전, 8일 및 15일 이미지로 변경했다. 마지막으로 IAT는 각 이미지의 흰색 참조 라벨이 트레이싱되고 "백색"으로 올바르게 명명되었는지 확인했다. 참조 라벨이 멍든 조직 내에 배치된 경우, QC IAT는 라벨이 멍든 조직 AOI에서 공제되도록 했다. 흰색 참조 라벨이 없는 이미지는 멍 분석에 부적합했다.

분석 측정: 이미지가 QC를 통과한 후, 분석 IAT는 QC IAT의 메모를 검토했다. 그 다음 분석 IAT는 스크립팅된 분석 절차를 실행했다. 주어진 방문에 따라 절차 및 분석 종료 시점이 이미지 간에 달랐다. 딤플 용적 분석을 위해 주요 딤플 AOI 상단에 보간된 표면이 생성되었다. 용적 측정값은 보간된 표면과 딤플 기저부 사이의 공간에 해당했다.

표면적은 주요 딤플 AOI 또는 1일-표시 후 이미지의 경우 부위 트레이싱 AOI의 전체 표면적으로서 측정되었다. 최대 딤플 길이는 주요 딤플 AOI에 걸쳐 가장 큰 지점간 축으로 측정되었다. 최대 딤플 너비는 최대 딤플 길이 축에 수직인 가장 큰 지점간 거리로 측정되었다.

멍 분석은 2번의 L^*a^*b^* 색상 측정값으로 구성되었다. L^*a^*b^* 색상값은 멍든 조직 및 정상 조직 AOI 내에서 측정되었다(도 18a). 다음 표에는 수행된 분석이 요약되어 있다(표 25).

데이터 허용: 이미지 분석이 완료되면, 분석 IAT는 이미지를 허용하거나 이미지를 분석용으로 허용하지 않았다. 이미지는 부분적으로 허용되지 않을 수 있는데, 예를 들어, 1일 표시 전 방문은 4일에 눈에 띄는 멍이 없어서 멍 분석에 허용되지 않지만, 딤플 분석에는 여전히 허용되었다. 모든 부적합은 이미지 모델이 분석에 허용되지 않는 이유를 자세히 설명하는 필수 부적합 메모를 받았다. 이미지 부적합은 이미지 품질 불량, 추적 품질 불량 또는 AOI 내의 장애물과 같은 요인으로 인해 발생할 수 있다. 이미지는 QC IAT가 부적합으로 제안하고, 분석 IAT가 검토하였다. 분석 IAT가 부적합 제안에 동의하면, 이미지는 허용되지 않았다.

멍 분석. 멍든 조직 및 정상 조직은 1, 4, 8 및 15일에 2번의 L^*a^*b^* 색상 측정값을 사용하여 3-D 사진에서 평가되었다(도 18b). L^*a^*b^* 색상 강도 측정값이 클수록 멍이 더 심했다. 각 치료 부위 및 주사 유형에 대한 멍든 조직 대 정상 조직의 두 가지 색상 간의 시각적 인식의 변화는 하기 표 26에 나와 있다.

1일 표시 전에, 색 좌표는 모든 주사 유형에서 비슷했다. 엉덩이(왼쪽 및 오른쪽)에서 멍은 유형 I, III, IV 및 V의 주사에서 4일에 최고조에 달했고; 주사 유형 II에서는 8일에 최고조에 달했다. 엉덩이 멍은 주사 유형 III 및 IV에서 가장 컸다. 엉덩이 멍은 모든 주사 유형에서 15일에 상당히 감소했다. 허벅지(왼쪽 및 오른쪽)에서 멍은 모든 주사 유형에서 4일에 최고조에 달했다. 허벅지 멍은 주사 유형 I에서 가장 컸다. 허벅지 멍은 모든 주사 유형에서 15일에 상당히 감소했다.

딤플 용적 분석. 치료된 각 엉덩이와 허벅지에 대해, 목표 딤플의 최대 길이(딤플을 가로질러 가장 긴 직선 거리), 최대 너비(최대 길이 측정값에 수직인 가장 긴 직선 거리), 표면적 및 용적(딤플의 기저부와 보간된 표면 사이)을 포함한 4가지 딤플 파라미터를 평가했다. 각 허벅지에서, 외측, 경사 및 후방 뷰에서 목표 딤플의 최대 길이, 최대 너비, 표면적 및 용적을 측정했다. 1일로부터 음의 변화는 개선을 나타낸다. 결과는 하기 표 27에 요약되어 있다.

엉덩이에서, 모든 주사 유형은 딤플 표면적에서 기준선 대비 평균 퍼센트 개선을 나타냈으며, 주사 유형 V(왼쪽 엉덩이) 및 주사 유형 IV(오른쪽 엉덩이)에서 가장 큰 개선이 발생했다. 허벅지의 경우, 주사 유형 IV(왼쪽 허벅지) 및 주사 유형 II(오른쪽 허벅지)에서 표면적이 가장 크게 개선된 반면, 주사 유형 III에서는 왼쪽 허벅지의 표면적이 개선되지 않았다.

일반적으로, 왼쪽 및 오른쪽 엉덩이에서는 각 주사 유형에 대해 딤플 용적에서 기준선과 비슷한 LS평균 개선을 보였다. 71일째에, 왼쪽과 오른쪽 엉덩이를 평균화한 결과, 모든 주사 유형에서는 기준선에 비해 딤플 용적이 개선되었고, 주사 유형 II 및 V는 상당한 개선을 보였다. 일반적으로 기준선과 비교하여 엉덩이의 딤플 용적의 개선은 주사 유형 III을 제외하고 22일부터 71일까지 개선되는 경향이 있었다.

일반적으로, 왼쪽 및 오른쪽 허벅지에서는 모든 주사 유형에 대해 딤플 용적에서 기준선과 비슷한 LS평균 개선을 보였다. 71일째에, 왼쪽과 오른쪽 엉덩이를 평균화한 결과, 주사 유형 I, II, IV, 및 V에서는 기준선에 비해 딤플 용적이 개선되었다. 허벅지의 경우, 치료군 간의 딤플 용적의 차이가 매우 적었기 때문에 주사 유형별 비교가 이루어질 수 없었다. 일반적으로, 기준선과 비교하여 허벅지의 딤플 용적의 개선은 주사 유형 III을 제외하고 22일부터 43일까지 개선되는 경향이 있었다.

딤플 분석 파라미터, 최대 길이, 최대 너비, 표면적 및 딤플 기저부와 보간된 표면 사이의 용적에서 1일 표시 전 이미지로부터 관찰 및 변화는 기술 통계를 사용하여 22, 43 및 71일째에 치료 부위 및 주사 유형별로 요약되어 있다(도 19a 내지 19c). 또한, 선형 모델을 사용하여 용적을 분석했다. 딤플 분석 파라미터 목록이 제공된다.

결과 및 결론. 이 연구의 주요 목적은 EFP가 있는 피험자에게 상이한 주사 기법로 투여했을 때 CCH의 치료 효과를 평가하는 것이었다. 이 목적은 3-D 사진과 리커트 점수를 사용하여 각 치료의 미적 외관 개선을 평가하고, 3-D 사진을 사용하여 각 치료군에 대한 딤플 파라미터의 변화를 분석하고, 헥셀 CSS(B) 함몰부 깊이 척도와 함께 딤플 깊이 함몰부 점수의 변화를 평가함으로써 평가되었다.

효능/엉덩이: 71일(EOS)에, 5점 리커트 척도를 사용하여 미적 외관의 개선을 평가하고 왼쪽과 오른쪽 엉덩이를 평균화한 결과, 모든 치료에서 기준선에 비해 미적 외관이 개선되었고, 주사 유형 I, II, III 및 V에서는 상당한 개선이 있었다.

71일째에, 딤플 파라미터의 변화를 분석하고, 왼쪽과 오른쪽 엉덩이를 평균화한 결과, 모든 치료에서 기준선에 비해 딤플 용적이 개선되었고, 치료 II 및 V에서는 상당한 개선이 있었다. 또한, 엉덩이의 경우, 모든 주사 유형은 딤플 표면적에서 기준선 대비 평균 퍼센트 개선을 보였고, 주사 유형 5는 가장 큰 개선을 보였다.

71일째에, 헥셀 CSS(B) 함몰부 깊이 척도를 사용하여 딤플 함몰부 깊이의 변화를 평가하고, 왼쪽과 오른쪽 엉덩이를 평균화한 결과, 모든 치료에서 LS평균 함몰부 깊이가 개선되었다. 그러나, 주사 유형 I이 엉덩이에서 가장 큰 개선을 보였고(-1.17), 그 다음이 주사 유형 IV였으며(-0.83), 개선은 통계적으로 유의하였다. 종합하면, 엉덩이에서 주사 유형 I 및 V는 각각 2 이상의 효능 평가변수에서 가장 큰 이점을 가졌을 때 가장 효과적이었다. 즉, 주사 유형 I은 미적 외관(리커트 점수) 개선 및 딤플 함몰부 깊이(헥셀 CSS(B)) 개선에 따라 최고의 효능을 보였고, 주사 유형 V는 미적 외관(리커트 점수) 개선 및 딤플 파라미터 평가(표면적 및 용적)에 따라 최고의 효능을 보였다.

효능/허벅지: 71일(EOS)에, 5점 리커트 척도를 사용하여 미적 외관의 개선을 평가하고, 왼쪽과 오른쪽 허벅지를 평균화한 결과, 모든 주사 유형에서 기준선에 비해 미적 외관이 개선되었고, 주사 유형 I에서는 상당한 개선이 있었다. 그러나, 3쌍을 사용하여 1개의 전체 허벅지 점수를 생성하는 리커트 척도 방법에 결함이 있다는 가설을 세웠으므로 허벅지에 대한 리커트 점수를 맹검된 중앙 평가자가 재평가하여 이미지당 하나의 리커트 점수를 생성했다.

71일째에, 딤플 파라미터의 변화를 분석하고, 왼쪽과 오른쪽 허벅지를 평균화한 결과, 주사 유형 I, II, IV, 및 V에서는 기준선에 비해 딤플 용적이 개선되었다. 그러나, 치료군 간의 딤플 용적 차이가 매우 적었기 때문에 주사 유형별 비교가 이루어질 수 없었다.

71일째에, 헥셀 CSS(B)를 사용하여 딤플 함몰부 깊이의 변화를 평가하고, 왼쪽과 오른쪽 허벅지를 평균화한 결과, 모든 주사 유형에서 LS평균 함몰부 깊이가 개선되었다. 그러나, 주사 유형 IV가 허벅지에서 가장 큰 개선을 보였고(-1.40), 그 다음이 주사 유형 V였으며(-0.80), 개선은 통계적으로 유의하였다. 종합하면, 허벅지에서 주사 유형 I 및 V는 각각 2 이상의 효능 평가변수에서 가장 큰 이점을 가졌을 때 가장 효과적이었다. 즉, 주사 유형 I은 미적 외관(리커트 점수) 개선 및 딤플 함몰부 깊이(헥셀 CSS[B]) 개선에 따라 최고의 효능을 보였고, 주사 유형 V는 미적 외관(리커트 점수) 개선 및 딤플 파라미터 평가(표면적 및 용적)에 따라 최고의 효능을 보였다.

안전성: 이 연구의 2차 목적은 EFP가 있는 피험자에게 상이한 주사 기법을 사용하여 투여했을 때 CCH의 안전성을 평가하는 것이었다. 이 목적은 이상 사례, 주사 부위 반응/국소 내성, 활력 징후, ECG, 임상 실험실 파라미터(혈액학, 혈액 화학 및 소변 검사 포함), 멍, 면역원성(결합 항체 및 중화 항체)에 의해 달성되었다. 주사 유형을 안전한 것으로 간주하려면, 부위에 관계없이 전체 모집단에서 안전하고 잘 허용되어야 한다.

이상 사례 평가 결과, 주사 부위 결절은 주사 유형 II 및 III에서 가장 빈번하게 보고되었다(각각 10명[76.9%]의 피험자 및 39건 발생, 10명[83.3%]의 피험자 및 26건 발생). 주사 부위 변색은 주사 유형 II에서 가장 빈번하게 보고되었다(6명의 피험자[46.2%], 13건 발생). 주사 유형 III은 SOC 전신 장애 및 투여 부위 상태(SOC General Disorders and Administration Site Conditions)가 중증인 피험자의 비율이 가장 높았다. 구체적으로, 주사 유형 III은 심한 주사 부위 멍(6명의 피험자, 50%), 주사 부위 통증(4명의 피험자, 33.3%), 및 주사 부위 결절(3명의 피험자, 25.0%)이 있는 피험자의 비율이 가장 높았다. 주사 유형 II는 21일 넘게 지속되는 치료-관련 TEAE의 빈도가 가장 높았고(31건, 16.7%), 모든 치료-관련 TEAE의 지속기간 중앙값이 가장 높았다(12.5일, 범위: 1, 52).

엉덩이(왼쪽 및 오른쪽)의 경우, 멍은 주사 유형 I, III, IV 및 V에서 4일에 최고조에 달했고; 주입 유형 II에서 8일에 최고조에 달했다. 허벅지(왼쪽 및 오른쪽)의 경우, 멍은 모든 주사 유형에서 4일에 최고조에 달했다. 15일에 모든 주사 유형 및 부위에서 멍이 상당히 감소했다. 멍 분석(L^*A^*B^* 색상 측정) 결과의 신뢰도는 비교기(comparator)로서 정상 조직의 색 좌표 변화를 측정하여 평가했다. 정상 조직을 분석한 결과, 멍 측정에서 약간의 노이즈가 있었는데, 이는 기술 자체 또는 사진이 촬영된 환경 때문일 수 있다. 그러나, 치료받은 조직에서 멍의 개선은 시간이 지남에 따라 노이즈의 수준보다 훨씬 커졌다. 따라서 멍 분석은 의미 있는 데이터로 간주될 수 있다. 사망 또는 치료-관련 중단은 발생하지 않았다. 연구 동안 실험실 평가, 활력 징후, 신체적 소견 또는 기타 관측에서 관찰된 임상적으로 관련된 경향은 없었다. 연구 동안 실험실 평가, 활력 징후, 신체적 소견 또는 기타 관측에서 관찰된 임상적으로 관련된 경향은 없었다.

주사 유형 II 및 III이 대부분의 안전 문제와 관련이 있다는 점을 고려할 때, 이러한 얕은 및 깊은 볼루스 기술은 효능 성능에 관계없이 엉덩이 또는 허벅지에 권장되지 않는다. 함께 채택된 안전성 및 효능 데이터를 기반으로, 엉덩이는 주사 유형 I(3회 얕은 주사) 또는 기술 IV와 V의 조합(예를 들어, 4회 얕은 주사와 딤플 깊이에 따라 얕은 또는 깊은 주사인 5번째 주사)으로 치료하는 것이 권장된다. 허벅지는 딤플이 깊으면 주사 유형 IV(단일 깊은 주사 + 4회 얕은 주사)로, 딤플이 표면적/수평적이면 5회 얕은 주사로 치료해야 한다.

실시예 2―성인 여성에서 후외측 허벅지의 부종성 섬유경화성 지방층 병변의 치료에서 CCH의 2a상 공개 연구(연구 212)

2a상 및 2b상 EFP 연구로부터의 효능 및 안전성 소견에 기초하여, 치료 부위당 CCH 0.84mg 용량(2개의 치료 부위, 엉덩이 또는 허벅지에 1.68mg)은 허벅지에 대한 추가 조사를 필요로 했다. 다른 목적 중에서도 이 연구에서는 치료 후 딤플 부위의 변화를 시각화하여 조직 및/또는 딤플을 유발하는 격막에서 CCH의 효과를 평가하려고 시도할 것이다. 이 데이터는 CCH의 작용 메커니즘을 이해하려는 시도로 조직병리학 및 MRI 데이터와 평가 및 비교될 것이다. 따라서 본 연구는 성인 여성의 허벅지에서 EFP 치료에서 CCH의 효능과 안전성에 대한 2a상 공개 연구이다.

연구의 예상 기간은 다음과 같았다:

ㆍ 스크리닝 단계: 최대 28일(-28일 내지 -1일)(지속기간에는 생검 또는 투여 전 MRI 이미징 일정을 잡고 수행하는 것이 포함됨)

ㆍ 적정 단계: N/A

ㆍ 치료 단계: 71일

ㆍ 장기 추적조사: 180일(연구 종료)까지 장기 효능 평가를 위해 109일(72일 내지 180일)

모든 피험자는 예를 들어, 허벅지의 경우 EFP가 있고 체질량 지수가 20 내지 35kg/m²인 18세 이상의 임신하지 않은 여성과 같은 미리 결정된 포함 및 배제 기준에 기초하여 스크리닝될 것이다. 피험자는 선택된 각 치료 부위(각 허벅지)에 최소 두(2) 개의 뚜렷하게 윤곽을 드러내고, 격리된 딤플을 가져야 하며, 이 중 3개가 MRI 및 생검(조직병리학) 절차를 위해 선택될 것이다. 모든 피험자는 병력, 신체검사 및 스크리닝시 실험실 프로파일을 기반으로 건강 상태가 양호한 것으로 판단될 것이다.

피험자는 21일(즉, 1, 22 및 43일) 간격으로 최대 3회의 치료 방문(세션)으로 구성된 치료 과정을 겪을 것이다. 각 치료 방문시 주사의 용적 및 용량은 상기 설명된 치료 IV에 따를 것이다. 3회 치료 방문으로 총 5.04mg의 CCH가 투여되었다. CCH 제형은 상기 설명되어 있다.

치료할 딤플의 선택은 연구자의 재량에 따를 것이다. 효능 평가는 연구 방문 43, 106, 150 및 180일 동안 수행될 것이다. 바디-Q 평가는 기준선 및 71일, 120일 및 180일째에 수행될 것이다. MRI 및 조직병리학은 71일 평가 종료시 수행될 것이다.

각 치료 방문시, 각각의 선택된 피험자의 치료 부위(선택된 허벅지)는 피험자가 일관되고, 표준화된 이완된 서있는 자세로 있는 동안 딤플 및 주사 부위를 표시하기 전후에 촬영될 것이다. 연구자는 22,　43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 연구자의 전반적인 미적 개선 척도(I-GAIS) 및 헥셀 CSS를 사용하여 치료 부위를 평가할 것이다. 피험자의 치료 부위는 방문 1, 22, 43, 64, 85, 106, 150 및　180일째에 체리 이미징(www.cherryimaging.com)을 받게 될 것이다. 또한, 피험자는 22,　43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 피험자의 전반적인 미적 개선 척도(S-GAIS)를 사용하여 치료 부위를 평가할 것이다. 피험자 평가는 각 치료 방문시 연구자 평가 이전에 독립적으로 완료될 것이다. 또한, 효능 평가는 주사를 위한 딤플 표시 전에 수행될 것이다.

연구자는 CR-PCSS를 사용하여 치료된 허벅지의 실시간 평가를 수행할 것이다. 전체 평가 검사는 피험자(S-GAIS)와 연구자(I-GAIS) 모두에 의해 완료될 것이다. 보다 구체적으로, 평가 기준은 다음과 같다:

1. 효능:

a. 각 치료 부위에 대한 연구자의 전반적인 미적 개선 척도(I-GAIS): 3(매우 많이 개선됨)에서 -3(매우 많이 악화됨)까지 7-레벨 척도(43, 106, 150 및 180일째에 측정됨)

b. 각 치료 부위에 대한 피험자의 전반적인 미적 개선 척도(S-GAIS): 3(매우 많이 개선됨)에서 -3(매우 많이 악화됨)까지 7-레벨 척도(43, 106 150 및 180일째에 측정됨)

c. 바디-Q는 106, 150 및 180일째에 평가될 것이다.

d. 헥셀 CSS는 스크리닝시 및 106, 150 및 180일째에 평가될 것이다.

e. 조직병리학(피부 생검을 통해)은 기준선, 71일 및 180일 및 기준선, 150일 및 180일째에 평가될 것이다.

f. 자기 공명 영상(MRI)은 기준선, 71일 및 180일째에 조직병리학에 대해 동일한 피험자에서 평가될 것이다.

2. 안전성은 다음 기록을 통해 연구 내내 평가될 것이다:

a. 이상 사례(AE)(멍, 반상출혈, 혈종, 및 약물 투여 부위에서 멀리 떨어진 곳에서 발생하는 피멍(contusion), 또는 아나필락시스를 포함한 임의의 과민 반응인 특정 관심 이상 사례(AESI) 포함)

b. 활력 징후

c. 임상 실험실 검사

d. 면역원성 평가(즉, 결합 및 중화 항-AUX-I 및 항-AUX-II 항체 수준의 결정을 통해 평가됨)

연구의 1차 평가변수는 180일째에 적어도 한 허벅지에 대한 2-레벨 I-GAIS 반응자(연구자 GAIS 평가에서 +2 이상을 받은 피험자로 정의됨)의 비율이다. 연구의 1차 평가변수는 180일째에 적어도 한쪽 엉덩이에 대한 2-레벨 I-GAIS 반응자(연구자 GAIS 평가에서 +2 이상을 받은 피험자로 정의됨)의 비율이다.

2차 평가변수는 다음과 같다:

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 치료된 허벅지의 I-GAIS의 각 수준에서 피험자의 비율

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 치료된 엉덩이의 I-GAIS의 각 수준에서 피험자의 비율

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 치료된 허벅지의 S-GAIS의 각 수준에서 피험자의 비율

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 치료된 엉덩이의 S-GAIS의 각 수준에서 피험자의 비율

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 적어도 한 허벅지에 대한 1-레벨 I-GAIS 반응자(I-GAIS 평가에서 +1 이상을 받은 피험자로 정의됨)의 비율

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 적어도 한쪽 엉덩이에 대한 1-레벨 I-GAIS 반응자(I-GAIS 평가에서 +1 이상을 받은 피험자로 정의됨)의 비율

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 적어도 한 허벅지에 대한 2-레벨 S-GAIS 반응자(S-GAIS 평가에서 +2 이상을 받은 피험자로 정의됨)의 비율

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 적어도 한쪽 엉덩이에 대한 2-레벨 S-GAIS 반응자(S-GAIS 평가에서 +2 이상을 받은 피험자로 정의됨)의 비율

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 적어도 한 허벅지에 대한 1-레벨 S-GAIS 반응자(S-GAIS 평가에서 +1 이상을 받은 피험자로 정의됨)의 비율

ㆍ22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일째에 적어도 한쪽 엉덩이에 대한 1-레벨 S-GAIS 반응자(S-GAIS 평가에서 +1 이상을 받은 피험자로 정의됨)의 비율

ㆍ허벅지에 대해 22, 43, 64, 85, 106, 150 및 180일까지 헥셀 CSS의 총점에서 기준선 대비 변화

ㆍ허벅지에 대해 150일 및 180일째에 셀룰라이트의 바디-Q 평가

모든 평가변수는 시점 또는 다른 적절한 통계 패키지별로 적절한 기술 통계를 사용하여 요약될 것이다. 조직병리학(생검) 분석을 위해 병리학자는 기준선과의 임의의 조직 차이를 보고할 것이다. MRI 분석을 위해 이미지를 획득하고, 임의의 조직 변화 및 치료전 및 치료 후의 임의의 격막 형태 차이에 대해 시각화할 것이다.

출원인은 이 연구가 상기 설명된 평가변수에 따라 CCH의 효능 및 안전성을 확립할 것으로 예상한다.

실시예 3―경증 및 중등증 EFP가 있는 성인 여성에서 CCH의 안전성 및 효능을 평가하기 위한 다중심, 개방-표지, 다중 용량, 3b상 연구(연구 305)

이는 경증 및 중등증 EFP가 있는 성인 여성에서 CCH의 안전성 및 효능을 평가하기 위한 다중심, 개방-표지, 다중 용량, 3b상 연구이다. 2개의 코호트에 대략 150명의 피험자를 등록하기 위해 대략 200명의 피험자를 스크리닝할 것이다. 모든 피험자는, 예를 들어, 허벅지와 엉덩이에 EFP가 있고, 체질량 지수가 18 내지 30kg/m²인 18 내지 60세의 임신하지 않은 여성과 같은 미리 결정된 포함 및 배제 기준에 기초하여 스크리닝될 것이다. 모든 피험자는 병력, 신체검사 및 스크리닝시 실험실 프로파일을 기반으로 건강 상태가 양호한 것으로 판단될 것이다.

대략 14일의 스크리닝 기간 후, 자격을 갖춘 피험자는 2개 코호트 중 1개에 무작위로 배정될 것이다. 코호트 1에는 후외측 허벅지에 경증 또는 중등증 EFP가 있는 대략 80명의 피험자가 있을 것이다. 코호트 2에는 엉덩이에 경증 또는 중등증 EFP가 있는 대략 70명의 피험자가 있을 것이다.

모든 피험자는 3번의 치료 세션(1일, 22일(+7일), 43일(+14일)) 동안 치료 세션당 양쪽 엉덩이 또는 양쪽 허벅지에서 1.68mg의 총 용량에 대해 치료 부위(엉덩이 또는 허벅지)당 0.84mg의 CCH(상기 설명됨)를 받게 될 것이다. 피험자는 평가변수 및 기타 연구 평가 및 추적조사를 위해 90 및 180일째에 현장으로 복귀할 것이다.

각 엉덩이에 대해, 3.6mL로 0.84mg의 CCH 용량이 치료 I에 따라 12회 피하 주사(주사당 0.1mL 분취량 3개로 투여되는 0.3mL 주사)로 투여될 것이다.

각 허벅지에 대해, 치료 IV에 따라 각 허벅지에 18.0mL로 0.84mg의 CCH 용량을 12회 피하 주사(주사당 0.3mL 분취량 5개로 투여되는 1.5mL 주사)로 투여되지만, 의사가 중앙 분취량에 대해 ½인치 또는 1인치의 주입 깊이를 선택할 수 있도록 수정될 것이다. 각 허벅지에 대해 용적은 0.3mL CCH의 5회 분취량으로 주사당 1.5mL가 되고, 총 용적 18.0mL에서 총 0.84mg의 CCH에 대해 1회 주사당 0.07mg일 것이다. 두 허벅지 치료의 경우, 총 약물은 총 용적 36mL에서 1.68mg일 것이다. 3번의 치료 방문에서 총 용량은 5.04mg의 CCH이다. 연구자/의사는 중앙 분취량(도 10의 분취량 A)을 깊게(30도 각도에서 1인치 바늘) 또는 얕게(30도 각도에서 0.5인치 바늘) 투여해야 하는지 결정하기 위해 딤플 유형(깊이, 길이, 너비 등 기준)에 대한 임상적 판단을 사용하도록 권고될 것이다. 그 결정에 따라 연구자는 1인치 또는 0.5 바늘을 사용하여 허벅지 셀룰라이트 딤플에 5회 분할 주사 기법을 적용할 것이다.

대략 21 내지 30일의 간격으로 동일한 용량의 3회 치료 방문이 있을 것이다. 완료된 모든 피험자는 21 내지 30일 간격으로 3회의 치료 세션을 가질 것이다. 각 피험자의 총 연구 기간은 대략 208일이다.

다음의 임상 평가변수는 시점 및 코호트별로 적절한 기술 통계를 사용하여 요약될 것이다:

ㆍ 90일째에 I-GAIS의 기준선 대비 변화

ㆍ 90일째에 7점 I-GAIS 척도에서 개선된(+1) 또는 더 나은 점수를 받은 피험자의 비율을 통한 엉덩이 또는 허벅지에서의 효능

ㆍ 180일째에 7점 I-GAIS 척도에서 개선된(+1) 또는 더 나은 점수를 받은 피험자의 비율을 통한 엉덩이 또는 허벅지에서의 효능

ㆍ 90일째에 CR-PCSS에서 기준선 대비 평균 변화를 통한 엉덩이에서의 효능

ㆍ 180일째에 CR-PCSS에서 기준선 대비 평균 변화를 통한 엉덩이에서의 효능

ㆍ 90일째에 셀룰라이트의 바디 Q - 평가에서 기준선 대비 평균 변화를 통한 엉덩이 또는 허벅지에서의 환자 만족도

ㆍ 180일째에 셀룰라이트의 바디 Q - 평가에서 기준선 대비 평균 변화를 통한 엉덩이 또는 허벅지에서의 환자 만족도

ㆍ 치료 부위에서 완전히/성공적으로 치료된 딤플의 비율.

ㆍ 치료 방문당 기준선 대비 총 딤플 수의 평균 감소

ㆍ 치료 방문당 셀룰라이트 딤플당 평균 용량

ㆍ CCH 투여에 대한 연구자 만족도 평가를 위해

o 투여 용이성(5점 리커트 척도)

o 셀룰라이트용 치료제로서 실무에 통합될 가능성(5점 리커트 척도)

o 전반적으로, 셀룰라이트가 있는 환자를 치료할 때 CCH의 사용 용이성을 평가합니까?(5점 리커트 척도)

o 같은 날 시술로 다른 미적 치료(셀룰라이트 이외)에 추가 용이성(5점 리커트 척도)

ㆍ 피부의 초음파 영상에서 관찰된 진피(또는 이의 개별 층)의 에코발생을 통해 치료 부위의 진피 두께 측정을 위해

o 기준선부터 90일까지 CCH로 셀룰라이트 치료 후 진피 두께의 평균 변화

o 기준선부터 180일까지 CCH로 셀룰라이트 치료 후 진피 두께의 평균 변화

ㆍ 치료 부위의 3-D 이미지를 평가하기 위해(체리 이미징 및 3-D 사진 사용)

o 기준선부터 90일까지 CCH로 셀룰라이트 치료 후 평균 용적 개선

o 기준선부터 180일까지 CCH로 셀룰라이트 치료 후 평균 용적 개선

o 90일째에 CCH로 치료전후 피부 거칠기 점수의 평균 변화

o 180일째에 CCH로 치료전후 피부 거칠기 점수의 평균 변화

AE는 피험자가 각 사건을 보고한 비율에 의해 요약될 것이다. 활력 징후와 각 임상 실험실 검사 파라미터에 대해 각 방문시 실제 및 기준선 대비 변경에 대한 기술 통계가 제공될 것이다. 항-AUX-I 및 항-AUX-II 항체 수준은 방문시 실제 값에 대한 기술 통계를 사용하여 요약될 것이다.

CR-PCSS(엉덩이 단독), 셀룰라이트의 바디 Q-평가, I-GAIS, 5점 리커트 척도, 체리 이미징 피부 거칠기 척도, 신체 이상형태 설문지(참조: 예를 들어, Lifespan.org; bddfoundation.org), 및 피츠패트릭 피부 유형이 효능 평가에 사용될 것이다. CR-TCES 및 PR-TCES 척도는 또한 CR-PCSS 및 PR-PCSS 척도 대신 또는 함께 이 실시예에서 사용될 수 있다.

실시예 4 ― 허벅지의 부종성 섬유경화성 지방층 병변의 치료에서 CCH의 2b 상, 무작위, 이중- 맹검 , 위약-대조 연구(연구 211)

이전 연구에서는 21일마다 단일 치료 부위(예를 들어, 한 엉덩이 또는 한 허벅지)에서 0.84mg의 용량으로 투여되는 CCH로 3회 피하 치료된 피험자에서 셀룰라이트의 중증도가 개선된 것으로 나타났다. 주사 부위에서 발생한 이상 사례 대부분은 본질적으로 경증에서 중등증였으며, 재발 없이 몇 주 이내에 해결되었다.

이 실시예에서는 성인 여성의 허벅지에서 EFP의 치료에서 CCH의 효능 및 안정성에 대한 2상, 무작위, 이중-맹검, 위약-대조 연구가 수행될 것이다. 투여되는 CCH(1:1 비율의 AUX-I 및 AUX-II)는 상기 설명되어 있다. 피험자는 이 연구에 등록하기 전 14일 이내에 연구 적격성에 대해 스크리닝될 것이다. 모든 피험자는, 예를 들어, 허벅지에 EFP가 있고, 체질량 지수가 20 내지 35kg/m²인 18세 이상의 임신하지 않은 여성과 같은 미리 결정된 포함 및 배제 기준에 기초하여 스크리닝될 것이다. 모든 피험자는 병력, 신체검사 및 스크리닝시 실험실 프로파일을 기반으로 건강 상태가 양호한 것으로 판단될 것이다.

PR-TCES 척도를 사용하여 피험자에 의해 및 CR-TCES 척도를 사용하여 연구자에 의해 독립적으로 평가된 중등증 또는 중증 수준의 셀룰라이트가 있는 두 양측 왼쪽 및 오른쪽 후외측 허벅지를 갖고, 헥셀 셀룰라이트 중증도 척도(CSS)가 13 이하인 허벅지를 갖는 피험자가 적격일 것이며, 헥셀 CSS 함몰부 깊이 점수가 2 또는 3일 것이다. 허벅지의 적격성은 1일에 확인될 것이다.

배정된 허벅지의 적격성이 확인되면, 한쪽 허벅지를 대상 허벅지로 무작위로 배정할 것이며; 다른 허벅지는 비-대상 허벅지로 간주될 것이다. 피험자는 치료 그룹(허벅지당 CCH 0.84mg 또는 위약)에 무작위로 배정될 것이다. 피험자의 양쪽 허벅지 모두 CCH 치료 또는 위약 치료로 치료될 것이다. 각 피험자는 3개의 치료 세션(즉, 1, 22 및 43일)으로 구성된 치료 과정을 받게 될 것이다. 각 치료 세션은 총 용적 36mL(1.68mg)에 대해 각 허벅지에 12회 주사(1회 주사당 1.5mL의 CCH 0.07mg/주사 또는 위약)로 구성될 것이다. 배정된 허벅지에서 치료될 딤플을 선택하는 것은 연구자의 재량에 따를 것이다. 1차 평가변수 분석은 71일째 평가에 기반할 것이다. 120일째에 후속 방문이 있을 것이다. 피험자, 연구자, 현장 직원 및 후원자는 대상 허벅지의 식별 및 배정된 치료에 대해 맹검될 것이다. 연구 설계의 흐름도는 도 20에 예시되어 있다.

이 연구에서 사용될 주사 기법은 상기 설명된 치료 IV이다. 각 치료 세션과 71일 및 120일째에 피험자가 일관되고 이완된 서있는 자세로 있는 동안 딤플 표시 전후에 각 허벅지가 촬영될 것이다. 피험자는 PR-PCSS를 사용하여 배정된 각 허벅지의 디지털 사진 이미지(표시 전)를 평가하여 각 허벅지에서 EFP의 중증도를 결정할 것이다. 피험자는 피험자의 전반적인 미적 개선 척도(S-GAIS), 환자가 보고한 셀룰라이트 영향 척도(PR-CIS), 피험자 자가 평가 척도(SSRS), 셀룰라이트 치료에 대한 피험자 만족도(SCTA) 및 바디 Q - 셀룰라이트 평가를 사용하여 허벅지를 평가할 것이다. 그 후, 연구자는 CR-TCES를 사용하여 각 허벅지를 실시간으로 평가할 것이다. 피험자 평가는 각 치료 방문시 연구자 평가 이전에 독립적으로 완료될 것이다. 연구자는 연구자의 전반적인 미적 개선 척도(I-GAIS)를 사용하여 치료된 각 허벅지를 평가할 것이다. 방문할 때마다 딤플 표시 전에 모든 평가를 수행해야 한다. 71일 방문 평가를 완료한 후 120일 방문 이전에, 맹검된, 무작위로 선택된 피험자의 하위 집단에 대한 반-정성적 종료 인터뷰(semi-qualitative exit interview)를 수행하여 치료 효과, 치료 경험, 참여 경험 및 의도하지 않은 효과에 대한 피험자 평가를 평가할 것이다.

안전성은 멍, 반상출혈, 혈종, 및 약물 투여 부위에서 멀리 떨어진 곳에서 발생하는 피멍, 또는 아나필락시스를 포함한 임의의 과민 반응과 같은 모든 이상 사례를 포함하는, 특정 관심 이상 사례를 포함하여 연구 내내 평가될 것이며, 이 연구에서 중대성 및 중증도에 대해 기록되고 평가될 것이다. 또한, 급성(예를 들어, 홍반, 멍, 통증, 결절/종괴, 궤양, 수포, 소양증, 부종 및/또는 경화) 및/또는 만성(예를 들어, 피부 비후, 섬유경화증, 귤껍질모양(peau d'orange) 변화) 피부 이상 사례를 포함한 주사 부위와 관련된 국소 AE도 중대성 및 중증도(적절한 경우)에 대해 기록되고 평가될 것이다.

1차 평가변수는 적어도 한 허벅지에서 다음과 같은 개선을 보인 피험자로 정의된 71일째에 2-레벨 복합 반응자의 비율이다:

ㆍ 연구자가 실시간으로 평가한 CR-TCES의 중증도가 기준선(1일 방문) 대비 적어도 2 레벨 개선, 및

ㆍ 동일한 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 PR-TCES의 중증도가 기준선 대비 적어도 2 레벨 개선.

2차 평가변수는 다음과 같다:

ㆍ 다음과 같은 개선을 보인 피험자로서 정의된 71일째에 대상 허벅지에서 2-레벨 복합 반응자의 비율:

o 대상 허벅지에서 연구자가 실시간으로 평가한 CR-TCES의 중증도가 기준선(1일 방문) 대비 적어도 2 레벨 개선, 및

o 동일한 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 피험자가 평가한 PR-TCES의 중증도가 기준선 대비 적어도 2 레벨 개선.

ㆍ 1일에 비해 71일째에 적어도 한쪽 허벅지에 대한 PR-TCES 중증도 등급이 1-레벨 이상 개선된 피험자로 정의된 1-레벨 PR-TCES 반응자의 비율

ㆍ 1일에 비해 71일째에 적어도 한쪽 허벅지에 대한 PR-TCES 중증도 등급이 2-레벨 이상 개선된 피험자로 정의된 2-레벨 PR-TCES 반응자의 비율

ㆍ 71일째에 적어도 한쪽 허벅지에 대한 S-GAIS 평가에서 1-레벨 이상 개선되거나(개선됨, 많이 개선됨, 또는 매우 많이 개선됨) 또는 2-레벨 이상 개선된(많이 개선됨, 또는 매우 많이 개선됨) 피험자로 정의된 1-레벨 또는 2-레벨 S-GAIS 반응자의 비율

ㆍ 71일째에 PR-TCES, CR-TCES, SSRS, PR-CIS 총점, 바디 Q - 셀룰라이트, 헥셀 딤플 수, 헥셀 함몰부 깊이 척도, 헥셀 총점의 기준선 대비 변화

결과에 대해, 출원인은 모든 1차 및 2차 평가변수가 충족될 것이며, 환자가 예상치 못한 이상 사례를 경험하지 않았을 것으로 예상한다.

실시예 5― 부종성 섬유경화성 지방층 병변이 있는 피험자에서 CCH 단일 용량(3.36MG)의 안정성 및 약동학을 평가하기 위한 1상 공개 연구

이전 연구에서는 21일마다 단일 치료 부위(예를 들어, 한 엉덩이 또는 한 허벅지)에 0.84mg의 용량으로 투여되는 CCH로 3회 피하 치료된 피험자에서 셀룰라이트의 중증도가 개선된 것으로 나타났다. 주사 부위에서 발생한 이상 사례 대부분은 본질적으로 경증에서 중등증였으며, 재발 없이 몇 주 이내에 해결되었다. 1곳 및 2곳의 치료 부위에서 피하 CCH 치료를 포함하는 다른 1상 약동학(PK) 연구에서는 치료 후 전신 노출이 없었음을 보여주었다. 실제로 의사는 단일 세션 동안 환자의 두 곳 이상의 치료 부위에 CCH를 투여하기를 원할 수 있다. 따라서 이러한 시나리오에서 CCH 안전성 프로파일이 중요하다.

이 실시예에서는 피험자에게 단일 3.36mg 용량을 주사하고, 왼쪽 엉덩이, 오른쪽 엉덩이, 왼쪽 후외측 허벅지, 및 오른쪽 후외측 허벅지 각각(즉, 치료 부위당 CCH 0.84mg)에 12회 피하 주사로 투여되는, 1상, 개방-표지 PK 및 안전성 연구가 수행되었다.

21일의 스크리닝 기간 후, 12명의 피험자가 CCH 투여 전날(-1 일) 임상 연구소에 입소했다. 피험자에게 1일에 투약하였다. 2일에, 투여 24시간 후, 각 피험자로부터 PK 샘플을 획득하고, 피험자는 임상 연구소에서 퇴소하였다. 피험자는 외래 환자 후속 PK 및 안전성 평가를 위해 3, 8 및 22일(즉, 투여 후 48시간, 투여 후 168시간 및 투여 후 504시간)에 복귀했다. 모든 피험자는 4곳의 치료 부위에 EFP가 있고, 체질량 지수가 20 내지 35kg/m²인 18세 이상의 임신하지 않은 여성이었다. 모든 피험자는 병력, 신체검사 및 스크리닝시 실험실 프로파일을 기반으로 건강 상태가 양호한 것으로 판단되었다.

투여된 CCH는 상기 설명되어 있다. 각 주사 부위에는 주사당 0.3mL의 총 주사 용적에 대해 3개의 0.1mL 분취량, 치료 부위당 3.6mL의 주사 용적, 및 14.4mL의 총 주사 용적으로 투여되는 연구 약물의 단일 피부 주사가 제공되었다. 1일째 투여를 위해 16개의 주사기(치료 부위당 4개)를 준비했다. 각 주사기에는 연구 약물 0.9mL가 포함되어 있어 주사기당 3회 주사를 제공하였다.

다양한 PK 파라미터(예를 들어, AUC ₀ _-t , AUC ₀ _- _inf , C _max , T _max )를 얻기 위해 관련 기간에 각 피험자로부터 혈액 샘플을 채취했다. 한 피험자는 AUX-I ELISA에서 가능한 간섭과 일치하는, 모든 수집 시점에서 정량 한계(5ng/mL)보다 큰 AUX-I에 대한 유사한 투여 전 및 투여 후 혈장 값을 나타냈다. 다른 모든 피험자에서는, 3.36mg의 연구 약물 주사로 인해 투여 후 어느 시점에서도 혈장에서 정량 가능한 AUX-I 수준이 없었다. 또한, 3.36mg의 연구 약물 주사로 인해 투여 후 어느 시점에서도 혈장에서 정량 가능한 AUX-II 수준이 없었다. 따라서 PK 파라미터는 얻지 못했다. 이는 4곳의 치료 부위에서 CCH 3.36mg의 동시 피하 투여 후 CCH의 전신 노출이 없음을 입증한다.

12명의 여성 피험자 모두 1일에 CCH 3.36mg의 총 용량에 대해 치료 부위당 12회 주사로 48회 주사를 모두 받았다. 모든 피험자는 적어도 한 번의 치료로 인한 이상 사례를 경험했으며, 이 중 어느 것도 치료 중단 또는 사망으로 이어지지 않았다. 심각한 이상 사례는 없었다. 가장 빈번하게 보고된 이상 사례는 주사 부위 홍반(5명의 피험자, 41.7%), 주사 부위 멍(2명의 피험자, 16.7%), 주사 부위 결절(2명의 피험자, 16.7%)이었다. 결과적으로, 4곳의 치료 부위에 동시 투여시 CCH의 안전성 프로파일에 대한 새로운 우려는 관찰되지 않았다. 이 연구에서 흔히 보고된 사건은 현재 알려진 CCH의 이상 사례 프로파일과 일치한다.

이 연구가 평가변수로 효능을 결정하도록 설계되지 않았고, 피험자가 연구 약물의 단 1회 용량으로 치료되었음에도 불구하고, CCH는 표 28에 요약된 바와 같이 CR-PCSS 등급 점수의 개선을 기반으로 EFP의 개선을 입증했다. 연구 종료시와 스크리닝시 CR-PCSS 점수 사이의 음의 변화는 셀룰라이트 중증도의 개선을 반영한다. 표에서 볼 수 있듯이, 4곳의 치료 부위 모두에서 기준선 대비 음의 평균 변화로 나타난 바와 같이, 4곳의 치료 부위 모두에서 셀룰라이트 중증도의 개선이 관찰되었다. 한 피험자는 오른쪽 엉덩이와 왼쪽 허벅지 모두에서 셀룰라이트 중증도가 2점 감소했다. 많은 환자들이 4곳의 치료 부위에서 1점 개선을 경험했다. 한 피험자는 연구 종료시 CR-PCSS 점수가 누락되어 분석에서 제외되었다.

본원에 기재된 구현예는 단지 예시적인 것으로 의도된다. 당업자는 하기 청구범위에 포함된 본 발명의 범위를 벗어나지 않고 변경 및 수정이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다.

<110> Endo Global Aesthetics Limited <120> Injection techniques for the treatment of cellulite <130> P128192WO <140> PCT/IB2019/000777 <141> 2019-07-12 <150> 62/697,376 <151> 2018-07-12 <150> 62/733,046 <151> 2018-09-18 <150> PCT/IB2019/000767 <151> 2019-07-11 <160> 6 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <400> 1 000 <210> 2 <400> 2 000 <210> 3 <400> 3 000 <210> 4 <400> 4 000 <210> 5 <211> 1008 <212> PRT <213> Clostridium histolyticum <400> 5 Ile Ala Asn Thr Asn Ser Glu Lys Tyr Asp Phe Glu Tyr Leu Asn Gly 1 5 10 15 Leu Ser Tyr Thr Glu Leu Thr Asn Leu Ile Lys Asn Ile Lys Trp Asn 20 25 30 Gln Ile Asn Gly Leu Phe Asn Tyr Ser Thr Gly Ser Gln Lys Phe Phe 35 40 45 Gly Asp Lys Asn Arg Val Gln Ala Ile Ile Asn Ala Leu Gln Glu Ser 50 55 60 Gly Arg Thr Tyr Thr Ala Asn Asp Met Lys Gly Ile Glu Thr Phe Thr 65 70 75 80 Glu Val Leu Arg Ala Gly Phe Tyr Leu Gly Tyr Tyr Asn Asp Gly Leu 85 90 95 Ser Tyr Leu Asn Asp Arg Asn Phe Gln Asp Lys Cys Ile Pro Ala Met 100 105 110 Ile Ala Ile Gln Lys Asn Pro Asn Phe 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Ser Tyr Met Pro Tyr Arg Ile Asn Ile Glu Gly Ser Val Gly Arg 980 985 990

Claims

인간 환자의 허벅지에 있는 셀룰라이트의 중증도를 감소시키는 방법으로서,
a. 다음의 특성 중 적어도 2가지를 갖는 콜라게나아제 조성물을 제공하는 단계:
i. 약 0.08 내지 7.70(SRC 검정), 또는 약 0.3 내지 30.5(GPA 검정)의 V_max(분^-1);
ii. 약 4.1 내지 410 나노몰(SRC 검정), 또는 약 0.03 내지 3.1mM(GPA 검정)의 K_M;
iii. 약 1.1 내지 107(SRC 검정), 또는 약 93 내지 9,179(GPA 검정)의 K_cat(초^-1);
iv. 약 376 내지 37,222(SRC 검정), 또는 약 4 내지 428(GPA 검정)의 1/ K_cat (마이크로초);
v. 약 5,140 내지 508,814(SRC 검정), 또는 약 60 내지 5,934(GPA 검정)의 K_cat/K_M (mM^-1초^-1);
vi. 약 60kDa 내지 약 130kDa, 또는 약 70 내지 약 130kDa, 또는 약 80 내지 약 120kDa, 또는 약 90 내지 약 120kDa, 또는 약 100 내지 약 110kDa의 분자 질량;
vii. 역상 HPLC(고압 액체 크로마토그래피)로 측정시 적어도 80%의 면적 순도;
viii. 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능;
ix. 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능;
x. 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능;
xi. 클로스트리파인, 젤라티나아제, 및 류펩틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 불순물 면적이 1% 이하;
xii. 1 cfu/mL 이하의 생균수(bioburden); 및
b. 치료 I 내지 V로 이루어진 그룹으로부터 선택된 치료 요법에 따라 치료적 유효량의 콜라게나아제 조성물을 주사하는 단계로서, 셀룰라이트 외관의 개선은 헥셀 셀룰라이트 중증도 척도(Hexsel CSS), 헥셀 함몰부 깊이 척도, 리커트 척도, 딤플 분석, 임상의가 보고한 광수치 셀룰라이트 중증도 척도(CR-PCSS), 환자가 보고한 광수치 셀룰라이트 중증도 척도(PR-PCSS), 연구자의 전반적인 미적 개선 척도(I-GAIS), 피험자의 전반적인 미적 개선 척도(S-GAIS), 환자가 보고한 셀룰라이트 영향 척도(PR-CIS), 간이형 PR-CIS, 피험자 자가 평가 척도(SSRS), 셀룰라이트 치료에 대한 피험자 만족도(SSCT), 셀룰라이트 중증도에 대한 임상의 평가(사진 또는 기타 이미지), 바디-Q, 허벅지 셀룰라이트 효능 척도(PR-TCES; CR-TCES), 및 임상의 및/또는 환자가 셀룰라이트 중증도, 개선 및/또는 환자 만족도를 평가하기 위해 사용하는 검증된 광수치 또는 기타 척도로 이루어진 그룹으로부터 선택된 척도 또는 기타 측정 도구에 의해 확립되는, 단계
를 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 콜라게나아제는 치료 IV에 따라서 주사되는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 콜라게나아제 조성물은 다음의 특성을 갖는 AUX-I 및 AUX-II를 포함하는, 방법:
a. AUX-I(SRC 검정):
i. V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70
ii. K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰
iii. K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222
v. K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814
b. AUX-II(GPA 검정)
i. V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5
ii. K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1
iii. K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428
v. K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934
제1항에 있어서, 상기 콜라게나아제 조성물은 다음의 특성을 갖는 AUX-I 및 AUX-II를 포함하는, 방법:
a. AUX-I(SRC 검정):
i. V_max, 분^-1: 약 3.8
ii. K_M, mM: 약 2.07x10^-4
iii. Kcat, 초^-1: 약 53
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 18,799
v. k_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 256,977
b. AUX II(GPA 검정):
i. V_max, 분^-1: 약 15.4
ii. K_M, mM: 약 1.6
iii. Kcat, 초^-1: 약 4,636
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 216
v. k_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 2,997
제1항에 있어서, 상기 조성물은 상기 특성 중 적어도 3가지를 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 상기 특성 중 적어도 4가지를 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 상기 특성 중 적어도 5가지를 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 하나 이상의 콜라게나아제 약 1 mg 내지 20 mg을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 CCH를 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 효능이 약 10,000 ABC 단위/0.58mg이고, 상기 치료적 유효량은 약 1mg 내지 20mg인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 효능이 약 15,000 ABC 단위/mg 내지 20,000 ABC 단위/mg이고, 상기 치료적 유효량은 약 1mg 내지 20mg인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 치료적 유효량은 약 1mg 내지 10mg이고, 상기 조성물은 효능이 약 20,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg 또는 약 175,000 내지 약 300,000 f-GPA 단위/mg인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 치료가 환자 집단에서 시행될 때, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지하는, 방법.
제13항에 있어서, 환자의 적어도 10%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지하는, 방법.
제13항에 있어서, 환자의 적어도 20%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 치료가 환자 집단에서 시행될 때, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 치료전 기준선 대비 개선을 나타내고, 시간이 지남에 따라 개선이 추가로 증가하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 치료가 CR-PCSS 및/또는 PR-PCSS로 측정시 다음의 효능 평가변수 중 적어도 하나를 유도하는, 방법:
a. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 CR-PCSS의 중증도가 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 2 레벨 개선.
b. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 환자가 평가한 PR-PCSS의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 2 레벨 개선.
c. CR-PCSS의 중증도가 기준선으로부터 적어도 2 레벨 개선되고, PR-PCSS의 중증도가 기준선으로부터 적어도 2 레벨 개선된 환자로 정의되는 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 2-레벨 복합 반응으로 입증된 개선;
d. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 CR-PCSS의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 1 레벨 개선;
e. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 환자가 평가한 PR-PCSS의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 1 레벨 개선;
f. CR-PCSS의 중증도가 기준선으로부터 적어도 1 레벨 개선되고, PR-PCSS의 중증도가 기준선으로부터 적어도 1 레벨 개선된 환자로 정의되는 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 1-레벨 복합 반응으로 입증된 개선; 및
g. 모두 중등증 또는 중증의 CR-PCSS 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서의 상기 a. 내지 f. 중 하나 이상의 개선이 위약과 비교하여 통계적으로 유의했음.
제1항에 있어서, 상기 치료가 헥셀 함몰부 깊이 척도로 측정시 다음의 효능 평가변수 중 적어도 하나를 유도하는, 방법:
a. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 2 레벨 개선;
b. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 환자가 평가한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 2 레벨 개선;
c. 임상의 평가에 의한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선으로부터 적어도 2 레벨 개선되고, 환자 평가에 의한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선으로부터 적어도 2 레벨 개선된 환자로 정의되는 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 2-레벨 복합 반응으로 입증된 개선;
d. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 1 레벨 개선;
e. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 환자가 평가한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 1 레벨 개선;
f. 임상의 평가에 의한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선으로부터 적어도 1 레벨 개선되고, 환자 평가에 의한 헥셀 함몰부 깊이 척도의 중증도가 기준선으로부터 적어도 1 레벨 개선된 환자로 정의되는 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 1-레벨 복합 반응으로 입증된 개선; 및
g. 모두 중간 또는 깊은 함몰부의 헥셀 CSS 등급을 받은 환자의 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서의 상기 a. 내지 f. 중 하나 이상의 개선이 위약과 비교하여 통계적으로 유의했음.
제1항에 있어서, 상기 치료가 딤플 분석으로 측정된 다음의 효능 평가변수 중 적어도 하나를 유도하는, 방법:
a. 깊이가 적어도 5% 감소함;
b. 너비가 적어도 5% 감소함;
c. 길이가 적어도 5% 감소함;
d. 전체 용적이 적어도 5% 감소함; 및
e. 표면적이 적어도 5% 감소함.
인간 환자의 허벅지에 있는 셀룰라이트의 중증도를 감소시키는 방법으로서,
a. 다음의 특성 중 적어도 2가지를 갖는 콜라게나아제 조성물을 제공하는 단계:
i. 약 0.08 내지 7.70(SRC 검정), 또는 약 0.3 내지 30.5(GPA 검정)의 V_max(분^-1);
ii. 약 4.1 내지 410 나노몰(SRC 검정), 또는 약 0.03 내지 3.1mM(GPA 검정)의 K_M;
iii. 약 1.1 내지 107(SRC 검정), 또는 약 93 내지 9,179(GPA 검정)의 K_cat(초^-1);
iv. 약 376 내지 37,222(SRC 검정), 또는 약 4 내지 428(GPA 검정)의 1/ K_cat (마이크로초);
v. 약 5,140 내지 508,814(SRC 검정), 또는 약 60 내지 5,934(GPA 검정)의 K_cat/K_M (mM^-1초^-1);
vi. 약 60kDa 내지 약 130kDa, 또는 약 70 내지 약 130kDa, 또는 약 80 내지 약 120kDa, 또는 약 90 내지 약 120kDa, 또는 약 100 내지 약 110kDa의 분자 질량;
vii. 역상 HPLC(고압 액체 크로마토그래피)로 측정시 적어도 80%의 면적 순도;
viii. 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능;
ix. 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능;
x. 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능;
xi. 클로스트리파인, 젤라티나아제, 및 류펩틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 불순물 면적이 1% 이하;
xii. 1 cfu/mL 이하의 생균수; 및
b. 치료 I 내지 V로 이루어진 그룹으로부터 선택된 치료 요법에 따라 치료적 유효량의 콜라게나아제 조성물을 주사하는 단계로서, 멍은 치료 방문 후 약 3일에서 20일 사이에 색 강도가 현저하게 감소하거나 해결되는, 단계
를 포함하는, 방법.
제20항에 있어서, 상기 콜라게나아제는 치료 IV에 따라서 주사되는, 방법.
제20항에 있어서, 상기 콜라게나아제 조성물은 다음의 특성을 갖는 AUX-I 및 AUX-II를 포함하는, 방법:
a. AUX-I(SRC 검정):
i. V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70
ii. K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰
iii. K_cat, 초^-1: 약 1.1 내지 107
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222
v. K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814
b. AUX-II(GPA 검정)
i. V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5
ii. K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1
iii. K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428
v. K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934
제20항에 있어서, 상기 콜라게나아제 조성물은 다음의 특성을 갖는 AUX-I 및 AUX-II를 포함하는, 방법:
a. AUX-I(SRC 검정):
i. V_max, 분^-1: 약 3.8
ii. K_M, mM: 약 2.07x10^-4
iii. Kcat, 초^-1: 약 53
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 18,799
v. k_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 256,977
b. AUX II(GPA 검정):
i. V_max, 분^-1: 약 15.4
ii. K_M, mM: 약 1.6
iii. Kcat, 초^-1: 약 4,636
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 216
v. k_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 2,997
제20항에 있어서, 상기 조성물은 상기 특성 중 적어도 3가지를 포함하는, 방법.
제20항에 있어서, 상기 조성물은 상기 특성 중 적어도 4가지를 포함하는, 방법.
제20항에 있어서, 상기 조성물은 상기 특성 중 적어도 5가지를 포함하는, 방법.
제20항에 있어서, 상기 조성물은 하나 이상의 콜라게나아제 약 1 mg 내지 20 mg을 포함하는, 방법.
제20항에 있어서, 상기 조성물은 CCH를 포함하는, 방법.
제20항에 있어서, 상기 조성물은 효능이 약 10,000 ABC 단위/0.58mg이고, 상기 치료적 유효량은 약 1mg 내지 20mg인, 방법.
제20항에 있어서, 상기 조성물은 효능이 약 15,000 ABC 단위/mg 내지 20,000 ABC 단위/mg이고, 상기 치료적 유효량은 약 1mg 내지 20mg인, 방법.
제20항에 있어서, 상기 치료적 유효량은 약 1mg 내지 10mg이고, 상기 조성물은 효능이 약 20,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg 또는 약 175,000 내지 약 300,000 f-GPA 단위/mg인, 방법.
제20항에 있어서, 상기 치료가 환자 집단에서 시행될 때, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지하는, 방법.
제32항에 있어서, 환자의 적어도 10%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지하는, 방법.
제32항에 있어서, 환자의 적어도 20%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지하는, 방법.
제20항에 있어서, 상기 치료가 환자 집단에서 시행될 때, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 치료전 기준선 대비 개선을 나타내고, 시간이 지남에 따라 개선이 추가로 증가하는, 방법.
인간 환자의 허벅지에 있는 셀룰라이트의 중증도를 감소시키는 방법으로서,
a. 다음의 특성 중 적어도 2가지를 갖는 콜라게나아제 조성물을 제공하는 단계:
i. 약 0.08 내지 7.70(SRC 검정), 또는 약 0.3 내지 30.5(GPA 검정)의 V_max(분^-1);
ii. 약 4.1 내지 410 나노몰(SRC 검정), 또는 약 0.03 내지 3.1mM(GPA 검정)의 K_M;
iii. 약 1.1 내지 107(SRC 검정), 또는 약 93 내지 9,179(GPA 검정)의 K_cat(초^-1);
iv. 약 376 내지 37,222(SRC 검정), 또는 약 4 내지 428(GPA 검정)의 1/ K_cat (마이크로초);
v. 약 5,140 내지 508,814(SRC 검정), 또는 약 60 내지 5,934(GPA 검정)의 K_cat/K_M (mM^-1초^-1);
vi. 약 60kDa 내지 약 130kDa, 또는 약 70 내지 약 130kDa, 또는 약 80 내지 약 120kDa, 또는 약 90 내지 약 120kDa, 또는 약 100 내지 약 110kDa의 분자 질량:
vii. 역상 HPLC(고압 액체 크로마토그래피)로 측정시 적어도 80%의 면적 순도;
viii. 약 5,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg의 효능;
ix. 약 175,000 내지 약 500,000 f-GPA 단위/mg의 효능;
x. 약 5,000 내지 약 25,000 ABC 단위/mg의 효능;
xi. 클로스트리파인, 젤라티나아제, 및 류펩틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 불순물 면적이 1% 이하;
xii. 1 cfu/mL 이하의 생균수; 및
b. 치료 I 내지 V로 이루어진 그룹으로부터 선택된 치료 요법에 따라 치료적 유효량의 콜라게나아제 조성물을 주사하는 단계로서, 셀룰라이트 외관의 개선은 허벅지 셀룰라이트 효능 척도(PR-TCES 및/또는 CR-TCES)에 의해 확립되는, 단계
를 포함하는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 콜라게나아제는 치료 IV에 따라서 주사되는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 콜라게나아제 조성물은 다음의 특성을 갖는 AUX-I 및 AUX-II를 포함하는, 방법:
a. AUX-I(SRC 검정):
i. V_max, 분^-1: 약 0.08 내지 7.70
ii. K_M: 약 4.1 내지 410 나노몰
iii. K_cat, 초^-1 : 약 1.1 내지 107
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 376 내지 37,222
v. K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 5,140 내지 508,814
b. AUX-II(GPA 검정)
i. V_max, 분^-1: 약 0.3 내지 30.5
ii. K_M, mM: 약 0.03 내지 3.1
iii. K_cat, 초^-1: 약 93 내지 9,179
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 4 내지 428
v. K_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 60 내지 5,934
제36항에 있어서, 상기 콜라게나아제 조성물은 다음의 특성을 갖는 AUX-I 및 AUX-II를 포함하는, 방법:
a. AUX-I(SRC 검정):
i. V_max, 분^-1: 약 3.8
ii. K_M, mM: 약 2.07x10^-4
iii. Kcat, 초^-1: 약 53
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 18,799
v. k_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 256,977
b. AUX II(GPA 검정):
i. V_max, 분^-1: 약 15.4
ii. K_M, mM: 약 1.6
iii. Kcat, 초^-1: 약 4,636
iv. 1/K_cat, 마이크로초: 약 216
v. k_cat/K_M, mM^-1초^-1: 약 2,997
제36항에 있어서, 상기 조성물은 상기 특성 중 적어도 3가지를 포함하는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 조성물은 상기 특성 중 적어도 4가지를 포함하는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 조성물은 상기 특성 중 적어도 5가지를 포함하는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 조성물은 하나 이상의 콜라게나아제 약 1 mg 내지 20 mg을 포함하는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 조성물은 CCH를 포함하는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 조성물은 효능이 약 10,000 ABC 단위/0.58mg이고, 상기 치료적 유효량은 약 1mg 내지 20mg인, 방법.
제36항에 있어서, 상기 조성물은 효능이 약 15,000 ABC 단위/mg 내지 20,000 ABC 단위/mg이고, 상기 치료적 유효량은 약 1mg 내지 20mg인, 방법.
제36항에 있어서, 상기 치료적 유효량은 약 1mg 내지 10mg이고, 상기 조성물은 효능이 약 20,000 내지 약 30,000 f-SRC 단위/mg 또는 약 175,000 내지 약 300,000 f-GPA 단위/mg인, 방법.
제36항에 있어서, 상기 치료가 환자 집단에서 시행될 때, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지하는, 방법.
제48항에 있어서, 환자의 적어도 10%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지하는, 방법.
제48항에 있어서, 환자의 적어도 20%가 초기 투여 후 적어도 71일 동안 치료전 기준선 대비 개선 수준을 유지하는, 방법.
제48항에 있어서, 상기 치료가 환자 집단에서 시행될 때, 치료 결과 환자의 적어도 5%가 치료전 기준선 대비 개선을 나타내고, 시간이 지남에 따라 개선이 추가로 증가하는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 치료는 CR-TCES 및/또는 PR-TCES로 측정시 다음의 효능 평가변수 중 적어도 하나를 유도하는, 방법:
a. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 CR-TCES의 중증도가 기준선(치료전 "1일")으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 2 레벨 개선;
b. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 환자가 평가한 PR-TCES의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 2 레벨 개선;
c. CR-TCES의 중증도가 기준선으로부터 적어도 2 레벨 개선되고, PR-TCES의 중증도가 기준선으로부터 적어도 2 레벨 개선된 환자로 정의되는 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 2-레벨 복합 반응으로 입증된 개선;
d. 임상의가 실시간으로 평가한 대상 허벅지의 CR-TCES의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 1 레벨 개선.
e. 대상 허벅지의 디지털 이미지를 보면서 환자가 평가한 PR-TCES의 중증도가 기준선(1일)으로부터 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 적어도 1 레벨 개선.
f. CR-TCES의 중증도가 기준선으로부터 적어도 1 레벨 개선되고, PR-TCES의 중증도가 기준선으로부터 적어도 1 레벨 개선된 환자로 정의되는 22, 43, 71, 90, 180 또는 365일째에 1-레벨 복합 반응으로 입증된 개선.
g. 모두 중등증 또는 중증의 CR-TCES 등급을 받은 환자 집단에서, 적어도 하나의 치료 부위에서의 상기 a. 내지 f. 중 하나 이상의 개선이 위약과 비교하여 통계적으로 유의했음.