JP2021532177A - セルライトの治療のための注射技術 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、セルライトの評価および治療の分野に関する。
セルライト(浮腫性線維硬化性脂肪組織症(edematous fibrosclerotic panniculopathy)(EFP)としても公知)は、皮下接合部での構造的特徴と生体力学的特性(すなわち繊細な包み込み(containment)と突き出し力)の間の不均衡として理解され得る美的状態である(Rudolph et al, 「Structural Gender Dimorphism and the Biomechanics of the Gluteal Subcutaneous Tissue: Implications for the Pathophysiology of Cellulite」, Plast. Reconstr. Surg. 2019;143(4):1077-1086)。したがって、セルライト治療の目標は、皮下界面を強化することおよび/または種々の種類のサブシジョン(subcision)により線維性中隔(fibrous septae)を解放することである(Rudolph et al., 上述)。線維性中隔は、セルライトの寄与的な(contributory)根源的な原因ならびに解剖学的および画像分析の試験によりセルライトについての治療の標的として認識されている(Hexsel et al, 「Side-by-side comparison of areas with and without cellulite depressions using magnetic resonance imaging」, Dermatol Surg. 2009;35(10):1471-1477; Hexsel et al. 「Magnetic Resonance Imaging of Cellulite Depressed Lesions Successfully Treated by Subcision」, Dermatol Surg. 2016;42(5):693-696; Mirrashed F, Sharp JC, Krause V, Morgan J, Tomanek B. 「Pilot study of dermal subcutaneous fat structures by MRI in individuals who differ in gender, BMI, and cellulite grading」, Skin Res Technol. 2004;10(3):161-168; Nuernberger and Mueller, 「So-called cellulite: an invented disease,」 J Dermatol Surg Oncol.1978;4(3):221-229; Piuerard et al, 「Cellulite: from standing fat herniation to hypodermal stretch marks」, Am J Dermatopath. 2000;22(1):34-37; Querleux et al, 「Anatomy and physiology of subcutaneous adipose tissue by in vivo magnetic resonance imaging and spectroscopy: relationships with sex and presence of cellulite」, Skin Res Technol. 2002;8(2):118-124)。セルライトを効果的に治療するために、治療的アプローチは、コラーゲンで構成され(図1)かつ多くの女性に対して厄介な皮膚のくぼみ(dimpling)を生じさせる皮膚中隔を溶解またはそうでなければ破壊することを必要とする。
本開示は、上述の必要性を満足し、コラゲナーゼの治療有効量(詳細な説明に定義される)の皮下注射によりヒト患者においてセルライトを治療する方法に関する。かかる方法は、種々の尺度を使用した患者のセルライトの重症度の治療前評価およびセルライト重症度の患者のベースラインを確立するための評価技術に関する。次いでこれは、コラゲナーゼの皮下注射によるセルライトの治療に続く。コラゲナーゼの投薬および投与は変化し得、コラゲナーゼは、コラゲナーゼおよび1つ以上の薬学的に許容され得る賦形剤を含む医薬組成物の形態であり得る。かかる賦形剤としては滅菌の注射用水、pH調整剤および安定化剤が挙げられ得る。治療後評価は、ベースラインと比較した治療の効力(efficiency)を確認するために行われる。本開示の治療方法は、セルライトの外観(appearance)の有意な低減を生じる。
1. 第1段階において、臨床医は、治療されるセルライトのくぼみの選択を行う。次いで、注射の前に評価を行い、例えば臨床医および/または患者は独立して、以下の尺度または他の評価方法の1つ以上(詳細な説明において定義される)を使用して治療前のセルライトの治療前重症度を評価する:
○Hexselセルライト重症度尺度(Hexsel CSS)
○Hexsel落ち込み深さスコア
○リカート尺度
○くぼみ分析
○臨床医が報告した写真数値セルライト重症度尺度(CR-PCSS)
○患者が報告した写真数値セルライト重症度尺度(PR-PCSS)
○調査者全体的美的向上尺度(I-GAIS)
○被験体全体的美的向上尺度(S-GAIS)
○患者が報告したセルライト影響尺度(PR-CIS)
○省略PR-CIS(PR-CIS Abbreviated)
○被験体自己評定尺度(SSRS)
○セルライト治療による被験体の満足(SSCT)
○セルライト重症度の臨床医の評価(写真または他の像)
○ボディ-Q(Body-Q)
○Fitzpatrick尺度
○大腿セルライト効力尺度(PR-TCES; CR-TCES)
○セルライト重症度、向上および/または患者満足を評価するために臨床医および/または患者により使用される任意の検証された写真数値または他の尺度(例えば、Hexsel-Merz尺度(American Academy of Dermatology meeting 2019でのポスター発表)。
さらに、臨床医および患者による治療前評価は、それぞれ異なるセルライト重症度評定またはレベルを有する、一連の3〜15の写真、イラスト、図、コンピューター画像、3Dモデル、MRI画像、サーモグラム、超音波記録、患者の口頭のフィードバック等を分析することにより実施され得る。
2. 治療の第2段階において、治療されるくぼみは、点または他の印付けにより臨床医により印をつけられる(図6)。印は典型的に、一番底(nadir)が存在する場合に、くぼみの一番底に配置される。より多くの写真が撮られ得、他の評価がなされ得る。
3. 治療の第3段階において、治療有効量のコラゲナーゼが、1つ以上の治療領域において単回用量または分割用量でくぼみ(1つまたは複数)に皮下注射される(詳細な説明において定義される)。用量および注射技術は異なる。例えば、方法は、以下の手順(図10に図示される(治療IV))に従って深いおよび浅い注射を含み得る:
・注射部位で皮膚表面に対して約30°の角度で配置され、被験体の頭部に方向づけられた針を用いて、針を全面的に(all the way)(1インチ)押し、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚表面に対する針の30°の角度を維持しながら針の約半分の長さ(1/2インチ)を穏やかに引き抜き、針を被験体の1つの側面に対して再度配置する(位置B)。シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより約0.3mLコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚表面に対して針の30°の角度を維持し、針を位置AとBの間の中ほどに再度配置し(位置C、被験体の肩に向かう)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより約0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚の表面に対して針の30°の角度を維持し、針を位置Bの正確に反対側に再度配置し(位置D)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより約0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚表面に対して針の30°の角度を維持し、針を位置AとDの中ほどに再度配置し(位置E、被験体の他方の肩に向かう)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより約0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・1.5mLのコラゲナーゼ組成物を有する3mLシリンジは1つの注射部位について充分である。
・それぞれの治療領域(それぞれの臀部またはそれぞれの大腿)において12の3mLシリンジを使用して、1.5mLの合計12回の注射(18.0mLの合計、それぞれ5アリコート0.3mL)を12の注射部位で投与する。
・それぞれの治療訪問で2治療領域(2の臀部または2の大腿)にわたり合計24の注射を投与する。
4. 治療の第4段階において、上述の尺度および他の評価方法(例えば内出血(bruising)分析)を使用して注射後評価を行う。特定のコラゲナーゼ治療の効力は、単一の臨床医評定もしくは患者評定に基づき得るかまたは同じ被験体についての両方の尺度において向上が示される臨床医評定および患者評定を含む複合終点(endpoint)に基づき得、すなわち特定される前の向上のレベルは臨床医と患者の両方の尺度において示される。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM
・約〜(about to)約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定される場合の少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(potency)(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
本明細書を使用する場合、関連する動力学パラメーターは、本明細書に記載されるように、キュベットアッセイまたはマイクロプレートアッセイ(例えばSRCキュベットアッセイ、SRCマイクロプレートアッセイ、GPAキュベットアッセイおよびGPAマイクロプレートアッセイ)を使用して測定され得る。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定される場合の少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有するコラゲナーゼ組成物に対するものである。
本特許または出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも1つの図を含む。カラー図(1つまたは複数)を有する本特許または特許出願公開公報のコピーは、請求および必要な料金の支払いに応じて官庁から提供される。
ここで種々の局面および態様が、本明細書において十分に説明される。しかしながら、これらの局面および態様は、多くの異なる形態で具現化され得、これらを限定として解釈されるべきではなく、これらの態様は、本開示が完璧かつ完全なものとなり、本発明の主題の範囲を当業者に対し十分に伝達するように提供される。前述または後述にかかわらず、本明細書で引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、それらの全体において参照により本明細書に援用される。
そうではないと定義されない限り、本明細書で使用される全ての用語および句は、反対のことが明らかに示されるか、または反対のことが該用語または句が使用される文脈から明らかに明白でない限り、該用語および句が当技術分野で獲得している意味を含む。本発明の実施または試験において、本明細書に記載の方法および材料と類似または同等の、任意の方法および材料を使用し得るが、ここでは特定の方法および材料を説明する。
・ΔL*(L*試料-L*標準)=明度と暗さの差(+=より明るい、-=より暗い);低い数(0〜50)は暗いことを示し、高い数(51〜100)は明るいことを示す
・Δa*(a*試料-a*標準)=赤色と緑色の差(+=より赤い、-=より緑色)
・Δb*(b*試料-b*標準)=黄色と青色の差(+=より黄色、-=より青色)
対象の色(この場合、被験体の治療された領域の画像中で捕捉された内出血)を完全に説明するために3つ全ての値が必要とされる。L*a*b*値におけるデータ出力によるコラゲナーゼで治療した領域の画像分析(プロトコルの特定の時点での治療前後の画像)のための客観的方法により、皮膚の色および該領域中の任意の変化の迅速、容易、正確、反復可能かつ偏らない定量が可能になる。この方法は、画像の従来の主観的な視覚的推定に関連する固有の変動性を除外する。ΔEは以下のように計算される:
ΔE(内出血 対 正常の間の色差)=SQRT [(L* B-L* N)2+(A* B-A* N)2+(B* B-B* N)2]、式中
L* B = 内出血した組織L*
L* N = 正常組織L*
A* B = 内出血した組織A*
A* N = 正常組織A*
B* B = 内出血した組織B*
B* N = 正常組織B*
である。図18(B)は、治療領域の内出血分析を図示する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)もしくは約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)もしくは約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ) のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)もしくは約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)もしくは約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)もしくは約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
の1つ以上を有するコラゲナーゼ;(v)Nordmark Arzneimittel GmbH & Co. KGに記載されるコラゲナーゼ;(w)株004由来のコラゲナーゼ;または(x)前述のいずれかの同等物もしくは混合物のいずれかを意味する。本明細書の開示において使用され得るコラゲナーゼの非限定的な例は、米国特許第7,811,560号;第9,757,435号;第9,744,138号およびWO2012/125948に記載される。
0=落ち込みなし
1=表面上の落ち込み
2=中程度の深さの落ち込み
3=深い落ち込み
質問1-治療のために選択された領域について考えて、セルライトの外観についてどのくらいうれしいか?
質問2-治療のために選択された領域について考えて、セルライトの外観によりどのくらい苦しいか?
質問3-治療のために選択された領域について考えて、セルライトの外観についてどのくらい自覚するか?
質問4-治療のために選択された領域について考えて、セルライトの外観についてどのくらい当惑するか?
質問5-治療のために選択された領域について考えて、セルライトのためにどのくらい年を取って見えるか?
質問6-治療のために選択された領域について考えて、セルライトのためにどのくらい太りすぎかまたは体調が悪く見えるか?
質問1-治療のために選択された領域について考えて、セルライトの外観についてどのくらいうれしいか?
質問2-治療のために選択された領域について考えて、セルライトの外観によりどのくらい苦しいか?
質問3-治療のために選択された領域について考えて、セルライトの外観についてどのくらい自覚するか?
質問4-治療のために選択された領域について考えて、セルライトの外観についてどのくらい当惑するか?
質問5-治療のために選択された領域について考えて、セルライトのためにどのくらい太りすぎかまたは体調が悪く見えるか?
省略PR-CIS合計スコアは、完全PR-CISからの5個の質問の他の組に由来し得る。
本開示は、下記の特定の注射技術の使用による、セルライトの外観を有する被験体への、1つ以上のコラゲナーゼの治療有効量の投与を含む、セルライトを治療する方法に関する。
本明細書に記載されるセルライトを治療する方法の第1段階において、臨床医は、以下の基準に基づいて、治療されるセルライトのくぼみの選択を行う:
・くぼみは十分に画定されるべきであり、写真で確認されるように、患者がリラックスした姿勢で立っている(臀筋がリラックスして立っている位置)場合に自然にはっきりとしているべきである
・選択されるくぼみは、それぞれの全体の臀部、大腿または他の患部の美的外観が向上される可能性が最も高いと臨床医が考えるものであるべきである
・患者がリラックスした姿勢で立っている場合、治療前に患部の写真を撮る
・注射の前に評価を行い、すなわち臨床医および/または患者は独立して以下の尺度または評価方法:
○Hexselセルライト重症度尺度(Hexsel CSS)
○Hexsel落ち込み深さスコア
○リカート尺度
○くぼみ分析
○臨床医が報告した写真数値セルライト重症度尺度(CR-PCSS)
○患者が報告した写真数値セルライト重症度尺度(PR-PCSS)
○調査者全体的美的向上尺度(I-GAIS)
○被験体全体的美的向上尺度(S-GAIS)
○患者が報告したセルライト影響尺度(PR-CIS)
○被験体自己評定尺度(SSRS)
○セルライト治療による被験体の満足(SSCT)
○大腿セルライト効力尺度(PR-TCES; CR-TCES)
○ボディ-Q
○Fitzpatrick尺度
○臨床医および/または患者がセルライト重症度、向上および/または患者の満足を評価するために使用する任意の検証された写真数値または他の尺度
の1つ以上を使用して結果の写真およびスコアを独立して評価する。
本明細書に記載される治療の第2段階において、治療されるくぼみは臨床医により点(1つまたは複数)により印をつけられ得る。より多くの写真が撮られ得る。
治療の第3段階において、臨床医はコラゲナーゼ注射により患者を治療する。
本開示に有用なコラゲナーゼとしては、上述のコラゲナーゼのいずれかが挙げられる。さらなる背景により、マトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)は、本明細書の定義に含まれるコラゲナーゼで構成され得る。例えば、MMP-1はコラゲナーゼ1を含み;MMP-8はコラゲナーゼ2/好中球コラゲナーゼを含み;MMP-13はコラゲナーゼ3を含み;MMP-18はコラゲナーゼ4を含む。さらに、カテプシンはコラゲナーゼとして分類され得る。
本開示に有用なコラゲナーゼはまた、その酵素動力学により特徴付けられ得る。ここで、セルライトを治療するために有効な1つ以上のコラゲナーゼの近似の動力学値は以下:
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
Vmax = 最大速度
KM = Vmaxの50%での[基質]
Kcat = 1秒あたりに切断される基質の分子
1/Kcat = 基質の分子を切断するのに必要なマイクロ秒
を含む。
これらの値は、以下に記載されるが基質および時間が異なるマイクロプレートアッセイを使用して実験的に決定され得る。他のアッセイおよびパラメーターを使用してもよい。
・AUX I
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・AUX II
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
仮定:
Kcat = Vmax/[AUX] = (nモル基質/nG AUX*分-1)/nG AUX
触媒効率(Kcat/KM)は一般的に、基質を生成物に変換する酵素の全体的な能力を表し、結合および触媒的事象の両方を反映する。別の態様において、AUX-IおよびAUX-IIは、以下の特性を含む。
コラゲナーゼの比活性(効力)を決定するためにアッセイを開発して使用する。かかるアッセイはサブセクションa.〜c.に記載され、所定の時間内に所定の酵素濃度でコラゲナーゼが基質を生成物に変換する能力によりコラゲナーゼを特徴づける。ある非限定的な態様において、これらのアッセイは、AUX-IおよびAUX-IIならびに合わされたCCH薬物製品(1:1比のAUX-IおよびAUX-II)のそれぞれの効力を決定するために使用される。SRCアッセイ(下記)は反応の基質としてコラーゲンを使用する。SRCアッセイは、基質として可溶性ラット(尾部)コラーゲン(SRC)を使用し、I型コラゲナーゼ活性を測定するために使用され、II型コラゲナーゼはコラゲナーゼの混合物の観察された活性の約20%に寄与する。SRCアッセイは蛍光測定的であり、SRCのI型消化により生成されるペプチドを検出するためにフルオレサミンを使用する。反応は、15mM二価カルシウムイオンを含む4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)バッファ中、25℃で2.5時間、pH7.2で試行される。
i. GPAアッセイ(キュベット)により測定されるコラゲナーゼ効力
GPAアッセイは、クラスIIコラゲナーゼの効力を測定するために主に使用される。該アッセイの第1の工程は、コラゲナーゼ試料による基質カルボベンゾキシ-グリシル-L-プロリル-グリシル-グリシル-プロリル-L-アラニン(zGPGGPA)の2つのペプチド:カルボベンゾキシ-グリシル-L-プロリル-グリシン(zGPG)およびグリシル-プロリル-L-アラニン(GPA)への消化を含む酵素反応を含む。第2の工程は、蛍光発生誘導体フルオレサミンによる遊離GPAのその後の測定を含む。アッセイは、以下の方法に続くが、当業者は、特定の改変(例えば希釈濃度および時間)をなし得るが、アッセイの目的が実行されることを理解する。
効力(f-GPA単位/mg) = (M試料/Mロイシン) x (DF / T)
のように効力単位を計算する。
式中:
M試料=コラゲナーゼ試料効力曲線の傾き
Mロイシン=ロイシン標準曲線の傾き
DF=希釈係数
T=反応時間
バッファおよび試薬
1. f-Appelバッファ、pH7.2(55mM HEPES、100mM酢酸カルシウム)
2. 1mMロイシン作業ストック溶液
3. 200mMホウ酸塩、pH9.0
4. アセトン中0.5mMフルオレサミン溶液
5. f-Appelバッファ中2mg/mL zGPGGPA基質
溶液は以下のように調製する:
f-Appelバッファ:13.0g HEPESおよび17.6g酢酸カルシウムを約800mLの水に溶解する。水酸化ナトリウムによりpHを7.2、および水によりQSを1Lに調整する。2〜8℃で貯蔵する。
10mMロイシンストック溶液:65.5mgのロイシンを50mLの水に溶解する。ロイシンは、秤上で100mL(または同等)ガラスビーカーに直接量り取らなければならない。約65mg(標的重量)のロイシンをビーカーに量り取る。計量したロイシンの重量に基づいて、以下の式を用いてビーカーに添加する水の量を計算する。計算した体積の水をビーカーに添加して、ロイシンが十分に溶解されることを確実にするように完全に混合する。1mLアリコートに分配する。20℃以下で貯蔵する。
C2=計量したロイシンの質量(mg)
V1=50(mLの水)
C1=65.5(mgのロイシン)
V2=10mMストック溶液を生成するために必要な水の体積(mL)
1mMロイシン作業ストック溶液:10mMロイシンストック溶液のバイアルを融解し、150μLと1350μLの水を合わせることにより1mMに希釈する。使用前に良く混合する。
0.5N HCl:水によりHClを0.5Nに希釈して十分に混合する。室温で貯蔵する。代替的に、市販の0.5N HClを使用してもよい。
200nMホウ酸塩、pH9.0:2.4gのホウ酸を約150MLの水に溶解する。水酸化ナトリウムを使用してpHを9.0に調整する。水によりQS〜200mLにし、十分に混合する。2〜8℃で貯蔵する。
0.5mMフルオレサミン溶液:15mgのフルオレサミンを100mLアセトンと混合して、渦を巻かせて(swir)溶解させる。遮光して2〜8℃で貯蔵する。
基質溶液(2mg/mL zGPGGPA):f-Appelバッファにより基質を2mg/mLで調製する。機械振盪器/回転器上で溶解させ完全な溶解に十分な時間(約15分)与える。
コラゲナーゼ試料を、f-Appelバッファにより2段階で0.01mg/mLに希釈し、穏やかにボルテックスにかけて混合する。以下は例示的希釈スキームである:
1. 100μL x 1.0mg/mL -→1000μL = 0.1mg/mL
2. 100μL x 0.1mg/mL -→1000μL = 0.01mg/mL
45μLの希釈された調製物を500μLの0.5N塩酸と合わせて酵素を不活性化することによりブランクを調製する。455μLのzGPGGPA基質溶液を添加してボルテックスにかけ、完全に混合する。100μLのそれぞれのブランクを、フルオレサミンと反応し得る不純物の検出のために別々のチューブに移す。
それぞれのコラゲナーゼ試料について一組の効力曲線を、以下のように作成する:
400μLの200mMホウ酸塩バッファおよび500μLの0.5mMフルオレサミン溶液を、100μLのそれぞれの調製物(ブランク、コラゲナーゼ試料効力曲線およびロイシン標準)を含む全ての検出チューブに添加する。完全にボルテックスにかけて混合する。チューブを室温で最低限10分間インキュベートする。
480nmでの蛍光応答(Y軸)に対してそれぞれのロイシン標準濃度(X軸)をプロットする。傾き(m)および測定の係数(R2)を決定する。それぞれの効力曲線調製物の平均蛍光を決定する。それぞれの調製物の濃度(X軸)を480nmでの平均蛍光応答(Y軸)に対してプロットすることによりコラゲナーゼ試料およびロイシン効力曲線を作成する。得られた線状曲線についての傾き(m)および測定の係数(R2)を決定する。
効力(f-GPA単位/mg)=(M試料/Mロイシン) x (DF / T)
式中:
M試料=コラゲナーゼ試料効力曲線の傾き
Mロイシン=ロイシン標準曲線の傾き
DF=希釈係数(1100μL/50μL=22)
T=反応時間(10分)
この方法は、マイクロプレート中で行う以外は上述のGPAアッセイと同様である。上述のアッセイと同様に、基質カルボベンゾキシ-グリシル-L-プロリル-グリシル-グリシル-L-プロリル-L-アラニン(zGPGGPA)(以降「基質」)の酵素切断において、マイクロプレートアッセイによりコラゲナーゼ試料のタンパク質溶解活性を測定する。アッセイは以下の方法に続くが、当業者は、特定の改変(例えば希釈濃度および時間)をなし得るが、アッセイの目的を実行し得ることを理解する。
1. ペプチド基質(zGPGGPA)(Bachem M1260または同等物)
2. トリペプチドGPA(Bachem H3615または同等物)
3. フルオレサミン(Acros 191675000または同等物)
4. 精製水(Milli-Q-Plus 18.2 MΩ系または同等物)
5. 1M HEPESバッファ(Gibco 15630-080または同等物)
6. Surfact-Amps 20TM (10% Tween溶液)(Pierceカタログ番号28320または同等物)
7. 1M酢酸カルシウム(Ca(C2H3O2)2)(Emerald Biosciences カタログ番号EBS-100-CAACまたは同等物)
8. ホウ酸(Sigma B7660または同等物)
9. 2.5N NaOH (J.T Baker 5666-02または同等物)
10. 0.5N塩酸(VWR 101223-134または同等物)
11. アセトン(Sigma 270725または同等物)
(i)アッセイバッファ(50mM HEPES、pH7.1/0.05% Tween 20/5mM(Ca(C2H3O2)2)の調製:50mLの量の1M HEPESを800mLのDI水にピペットで移す。5mLの1M (Ca(C2H3O2)2)および5mL Surfact-Amps (10% Tween 20)を添加する。pHをチェックして、必要な場合は7.1±0.05に調整する。十分な量の水を添加して、体積を1Lに調整して0.22ミクロンフィルターにより溶液を濾過する。このアッセイバッファは、室温で3ヶ月まで貯蔵し得る。
(ii)0.1N NaOHの調製:2mLの量の2.5N NaOHを48mLのDI水に添加する。この溶液は、室温で3ヶ月まで貯蔵し得る。
(iii)4mg/mLトリペプチドGPAストック溶液の調製:400mg(±1mg)の量のトリペプチドGPAを10mLの0.1N NaOHに溶解して完全に溶解するまでボルテックスにかける。十分な量のアッセイバッファを添加して、体積を100mLにし、溶液を0.5mLアリコートに分配し、-70℃で貯蔵する。4mg/mLトリペプチドGPAストックは-70℃で1年まで貯蔵し得る。
(iv)4mg/mL(6.8mM)ペプチド基質zGPGGPAの調製:400mg(+1mg)の量のペプチド基質zGPGGPAを10mLの0.1N NaOHに溶解して、完全に溶解するまでボルテックスにかける。十分な量のアッセイバッファを添加して体積を100mLにする。この溶液は、4℃で3ヶ月まで貯蔵し得る。
(v)120mMホウ酸pH9.0の調製;7.4g(±0.5g)の量のホウ酸を800mLのDI水に溶解する。溶液をNaOHでpH9.0まで滴定し、十分な量のDI水を添加して、体積を1リットルに調整する。この溶液は、室温で3ヶ月まで貯蔵し得る。
(vi)アセトン中1mMフルオレサミンの調製:28±2mgの量のフルオレサミンを100mLのアセトンに溶解する。この溶液は新たに調整し、光および湿度から防ぐ必要があった。
0.08mg/mL(329μM)トリペプチドGPA標準は、アッセイバッファ中4mg/mLトリペプチドGPAストックを50倍希釈することにより調製する(例えば、980μLアッセイバッファ中20μLの4mg/mLトリペプチドGPA)。アッセイプレート中、列A、200μLの329μMトリペプチドGPA標準を、AlおよびA7にピペッティングする。100μLの量のアッセイバッファをA2〜A6およびA8〜Al2にピペッティングする。
トリペプチドGPA標準連続希釈について、100μLの量をAlからA2に移して混合し、100μLの量をA2からA3に移し、A5まで反復する。100μLの量をA5から取出し、その最終体積は100μLである。A6ウェルはバッファのみを含む。
第2のトリペプチドGPA標準連続希釈について、100μLの量をA7からA8に移して混合し、100μLの量をA8からA9に移してウェル11まで反復する。100μLの量をA11から取出し、その最終体積は100μLである。A12ウェルはバッファのみを含む。
コラゲナーゼ試料(例えば凍結乾燥コラゲナーゼ薬物製品)について、試料を少なくとも10分間室温にし、再構成して500ng/mLストック溶液を形成する。異なる濃度を使用し得る。アッセイバッファで希釈することにより、ストック溶液から試験コラゲナーゼ試料(T1A)を調製する。3つの(triplicate)試験試料(T1A、T1B、T1C)を調製するために手順を反復する。
この方法において、50μLの増加濃度のコラゲナーゼ試験試料を、96ウェルプレート中、50μLの過剰基質(2.0mg/mL終濃度)と混合する。50μLの量のアッセイバッファを、U底、96ウェルポリプロピレン反応プレート中の列C〜Gに添加する。150μLのコラゲナーゼ試料を列Bにピペッティングする。次いで、100μLのコラゲナーゼ試料を列BからCに移して混合し、列Gに到達するまでプロセスを反復することにより、マルチチャンネルピペットを使用して1/1.5連続希釈を行う。100μLの量を除去して、列Gから廃棄する。表9は、50μLの基質を列Hから列Bに添加した後の最終コラゲナーゼ濃度を含む。
zGPGGPA基質は、クラスIIコラゲナーゼにより、室温で15分のインキュベーション時間の間にzGPGとGPAに切断される。インキュベーターおよび温度プローブはオンにされる(基質のプレートへの添加前に温度22±1℃)。列B〜Hのカラム1〜12に、50μLの4mg/mL(6.8mM)zGPGGPA基質をカラムごとに添加して、次いで混合する。基質を第1のカラムに添加した後に反応開始時間が始まる。プレートを覆い、合計反応時間15±1分の間22±1℃インキュベーターに配置する。
インキュベーション後、塩酸を添加して反応をクエンチし、ペプチドの遊離アミノ末端と蛍光発生試薬フルオレサミンを反応させた後に放出したGPAペプチドの量を定量する。反応をクエンチするために、100μLの0.5N HClを列Aから列Hのそれぞれのウェルに添加して、カラムごとに添加して次いで混合する。HClを第1のカラムに添加した後に反応時間は終了する。
195μLの量の120mMホウ酸塩pH9.0をMicroplate Greinerポリプロピレン黒色読み取りプレートのそれぞれのウェルに添加する。30μLのクエンチされた反応混合物を反応プレートから読み取りプレートの対応するウェルに移し、十分に混合する。次いで、75μLの1mMフルオレサミンを(フルオレサミン/アセトンを分配するためのポリプロピレントレイを使用して)読み取りプレートのそれぞれのウェルに添加して、全ての添加の直後に混合する。フルオレサミン添加後の15分以内に、Molecular Devices M2蛍光プレートリーダーにより以下の設定:励起380nm、放出473nm、カットオフ455nm、6読み取り/ウェル、PMT培地を使用して、プレートを読み取る。
コラゲナーゼ試料比活性は以下のように計算し得る:
GPAマイクロプレートアッセイ単位=((コラゲナーゼ試料の傾き)/(トリペプチドGPAの傾き x インキュベーション時間)) x 106。
コラゲナーゼ試験試料の比活性は、トリペプチドGPA標準の傾きから決定し、曲線適合プログラムにより計算する。マイクロプレート法を使用して、ミカエリス-メンテン(Michaelis-Menton)に従って酵素動力学を計算するために異なる濃度の基質および異なる時間を使用し得る。
本開示に有用なコラゲナーゼは、約100,000〜約300,000 GPA単位/mgまたは約175,000〜約300,000 f-GPA単位/mgの効力を有し得る。他の態様において、該効力は、約70,000〜約400,000 GPA単位/mgまたは約100,000〜約375,000 GPA単位/mgまたは約125,000〜約350,000 GPA単位/mgまたは約150,000〜約325,000 GPA単位/mgまたは約175,000〜約300,000 GPA単位/mgまたは約200,000〜約275,000 GPA単位/mgであり得る。代替的に、該効力は、約70,000〜約400,000 f-GPA単位/mgまたは約100,000〜約375,000 f-GPA単位/mgまたは約125,000〜約350,000 f-GPA単位/mgまたは約150,000〜約325,000 f-GPA単位/mgまたは約175,000〜約300,000 f-GPA単位/mgまたは約230,000〜約430,000 f-GPA単位/mgまたは約200,000〜約275,000 f-GPA単位/mgであり得る。コラゲナーゼはまた、約30,100〜87,100または約43,000〜67,000 GPAマイクロプレートアッセイ単位の効力を有し得る。上述のGPAアッセイは、任意のコラゲナーゼの比活性を分析するために使用され得る。
i. SRCアッセイ(キュベット)により測定する場合のコラゲナーゼ効力
SRCアッセイは主に、クラスIコラゲナーゼの効力を測定するために使用される。一般的な方法は以下のとおりである。ロイシン標準およびコラゲナーゼ試料溶液を調製する。アッセイの第1の工程は、コラゲナーゼによる可溶性ラット尾部腱コラーゲン(SRC)の消化を含む酵素反応を含む。第2の工程は、蛍光性誘導体フルオレサミンによる遊離ペプチド断片/アミノ酸のその後の測定を含む。アッセイは以下の方法に続くが、当業者は、特定の変更(例えば希釈濃度および時間)がなされ得るが、アッセイの目的が実行され得ることを理解する。
効力(f-SRC単位/mg)=(M試料/Mロイシン) x (DF/T) x CF
式中:
M試料=コラゲナーゼ試料効力曲線の傾き
Mロイシン=ロイシン標準曲線の傾き
DF=希釈係数(1500μL/100mL=15)
T=反応時間(2.5時間x60分/1時間=150分)
CF=変換係数(1000μg/1mg=1000)
1. F-TCアッセイバッファ、pH7.2 (22g HEPES [4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸]、4.4g酢酸カルシウム)
2. F-酵素バッファ、pH7.2
3. 200mMホウ酸塩、pH9.0
4. 10mMロイシンストック溶液
5. 1mMロイシン作業ストック溶液
6. アセトン中1mMフルオレサミン溶液
7. 0.02N酢酸中2mg/mLラット尾部コラーゲン
溶液は以下のように調製する:
C2=計量したロイシンの質量(mg)
V1=50(mLの水)
C1=65.5(mgのロイシン)
V2=10mMストック溶液を生成するのに必要とされる水の体積(mL)
試料をF-酵素バッファにより二段階で0.01mg/mLに希釈して、穏やかにボルテックスにかけて混合する。以下は例示的希釈スキームである:
1. 100μL x 1.0mg/mL→1000μL=0.1mg/mL
2. 100μL x 0.1mg/mL→1000μL=0.01mg/mL
希釈した試料を使用まで室温で保持する。
ロイシン標準は上述のように調製する。
それぞれのロイシン標準の濃度(X軸)を480nmでの蛍光応答(Y軸)に対してプロットする。傾き(m)および測定の係数(R2)を決定する。0を通ることは強制しない。それぞれの二重の調製物の平均蛍光を測定する。それぞれのコラゲナーゼ試料調製物の蛍光を計算する。
F(正味)=平均コラゲナーゼ試料(EM480)-ブランク(EM480)
コラゲナーゼ試料の効力の決定
効力(f-SRC単位/mg)=(M試料/Mロイシン) x (DF/T) x CF
式中:
M試料=コラゲナーゼ試料効力曲線の傾き
Mロイシン=ロイシン標準曲線の傾き
DF=希釈係数(1500μL/100mL=15)
T=反応時間(2.5時間x60分/1時間=150分)
CF=変換係数(1000μg/1mg=1000)
この方法は、マイクロプレート中で行う以外は上述のSRCアッセイと同様である。上述のSRCアッセイと同様に、マイクロプレートアッセイは、可溶性ラット尾部コラーゲン(SRC)基質(以降「基質」)に対するコラゲナーゼ活性を測定する。アッセイは以下の方法に続くが、当業者は、特定の変更がなされ得るが、アッセイの目的が実行され得ることを理解する。
1. 可溶性ラットコラーゲン基質(BD Biosciences 354236)
2. トリペプチドGPA(Bachem H3615または同等物)
3. フルオレサミン(Acros 191675000または同等物)
4. 精製水(Millipore, Milli-Q-Plus 18.2 MΩ系または同等物)
5. 1M HEPESバッファ(Gibco 15630-080または同等物)
6. 1M酢酸カルシウム(Ca(C2H3O2)2)(Emerald Biosciences EBS-100-CAACまたは同等物)
7. Surfact-Amps 20TM (10% Tween溶液)(Pierceカタログ番号28320または同等物)
8. 1.0N酢酸(Sigma 318590または同等物)
9. 0.5N塩酸(VWR 101223-134または同等物)
10. ホウ酸(Sigma B7660または同等物)
11. 2.5N水酸化ナトリウム(J.T Baker 5666-02または同等物)
12. アセトン(Sigma 270725または同等物)
(i)アッセイバッファ(50mM HEPES pH7.1/0.05% Tween 20/5mM (Ca(C2H3O2)2)の調製:50mLの量の1M HEPESを800mL DI水にピペッティングする。5mLの1M (Ca(C2H3O2)2)および5mLのSurfact-Amps(10% Tween 20)を添加する。pHをチェックして、必要な場合は7.1±0.1に調整する。十分な量の水を添加して体積を1Lに調整し、0.22ミクロンフィルターを通して溶液を濾過する。このアッセイバッファは室温で3ヶ月まで貯蔵し得る。
(ii)0.1N NaOHの調製:2mLの量の2.5N NaOHを48mL DI水に添加する。この溶液は室温で3ヶ月まで貯蔵し得る。
(iii)4mg/mLトリペプチドGPAストックの調製:400mg(±1mg)の量のGPAトリペプチドを10mLの0.1N NaOHに溶解して、全体的に溶解するまでボルテックスにかける。十分な量のアッセイバッファを添加して体積を100mLにし、溶液を0.5mLアリコートに分配して、-70℃で貯蔵する。4mg/mLのトリペプチドGPAストックは-70℃で1年まで貯蔵し得る。
(iv)0.02N酢酸の調製:1mLの量の1.0N酢酸を40mLの精製水に添加する。十分な量の精製水を添加して、体積を50mLに調整する。この溶液は室温で1年まで貯蔵し得る。
(v)2mg/mL SRC基質ストック溶液の調製:23.3mLの量の0.02N酢酸を、基質を供給するバイアルに直接添加する(非限定的な一例において、100mg SRCを3.75mg/mLで供給する)。他の濃度のSRC基質を使用してもよい。計算は以下のとおりである:
(vi)0.6mg/mL SRC基質作業用液の調製:4.2mLの量のアッセイバッファを15mLの円錐形チューブに添加する。次いで1.8mLの2mg/mL SRC基質ストック溶液を添加して、溶液を転倒により混合する。この溶液はプレートへの添加の直前に調製するべきである。
(vii)120mMホウ酸pH9.0の調製:7.4g(±0.5g)の量のホウ酸を800mL DI水に溶解する。溶液をNaOHでpH9.0まで滴定して、十分なDI水を添加して体積を1Lに調整する。この溶液は室温で3ヶ月まで貯蔵し得る。
(viii)アセトン中1mMフルオレサミンの調製:28±2mgの量のフルオレサミンを100mLのアセトンに溶解する。この溶液は新たに調製し、光および湿度から防がれる必要があった。
0.08mg/mL(329μM)トリペプチドGPA標準は、アッセイバッファ中4mg/mLトリペプチドGPAストックの50倍希釈を作製することにより調製される(例えば、980μLアッセイバッファ中20μLの4mg/mL GPA)アッセイプレート中、列A、200μLの329μMトリペプチドGPA標準をAlおよびA7にピペッティングする。100μLの量のアッセイバッファをA2〜A6およびA8〜Al2にピペッティングする。
コラゲナーゼ試料(例えば凍結乾燥コラゲナーゼ薬物製品)について、少なくとも10分間試料を室温にして、3.0μg/mLストック溶液を形成するように再構成する。異なる濃度を使用してもよい。試験コラゲナーゼ試料(T1A)は、アッセイバッファを用いて希釈することによりストック溶液から調製する。手順は、3重の試験試料(T1A、T1B、T1C)を調製するように反復する。
この方法において、96ウェルプレート中、50μLの増加濃度の試験コラゲナーゼ試料を、50μLの過剰な基質と混合する(0.2mg/mL終濃度)。50μLの量のアッセイバッファをU底96ウェルポリプロピレン反応プレートの列C〜Gに添加する。150μLのコラゲナーゼ試料を列Bにピペッティングする。次いで、マルチチャンネルピペットを使用して、100μLのコラゲナーゼ試料を列Bから列Cに移し、混合して、列Gに達するまでプロセスを反復することにより1/1.5連続希釈を行う。100μLの量を除去して列Gから廃棄する。50μLのアッセイバッファを列Hにピペッティングすることによりブランクを調製する。この列は酵素を含まない。表12は、50μLの基質の列B〜列Hへの添加後の最終コラゲナーゼ濃度を含む。
インキュベーターおよび温度プローブをオンにする(プレートへの基質の添加前、温度22±1℃)。50μLの量の0.6mg.mL SRC基質を列Bから列Hのそれぞれのウェルに添加して、カラムごとに添加して、次いで混合する。基質を第1のカラムに添加した後に反応開始時間は開始する。プレートを覆い、45±5分の合計反応時間の間、22±1℃インキュベーターに配置する。反応をクエンチするために、100μLの0.5N HClを希釈プレートのそれぞれのウェルにカラムごとに添加して、混合する。HClを第1のカラムに添加した後に反応時間は終了する。
195μLの量の120mMホウ酸塩pH9.0をMicroplate Greinerポリプロピレン黒色読み取りプレートのそれぞれのウェルに添加する。30μLのクエンチされた反応混合物を反応プレートから読み取りプレートの対応するウェルに移して十分に混合する。次いで、75μLの1mMフルオレサミンを(フルオレサミン/アセトンを分配するためのポリプロピレントレイを使用して)読み取りプレートのそれぞれのウェルに添加して、全ての添加の直後に混合する。フルオレサミン添加後15分以内に、Molecular Devices M2蛍光プレートリーダーにより、以下の設定:励起380nm、放出473nm、カットオフ455nm、6読み取り/ウェル、PMT培地を使用してプレートを読み取る。
コラゲナーゼ試料比活性は以下の通りに計算し得る:
SRCマイクロプレートアッセイ単位=((コラゲナーゼ試料の傾き)/(トリペプチドGPAの傾きxインキュベーション時間))x106
本開示に有用なコラゲナーゼは、約500〜約15,000 SRC単位/mgの効力を有し得る。ある態様において、該効力は、約500〜約12,500 SRC単位/mgまたは約700〜約10,000 SRC単位/mgまたは約1,000〜約7,500 SRC単位/mgまたは1,500〜約6,000 SRC単位/mgまたは約2,500〜約5,000 SRC単位/mgである。代替的に、該効力は、約5,000〜約35,000 f-SRC単位/mgまたは約10,000〜約30,000 f-SRC単位/mgまたは約13,000〜約23,000 f-SRC単位/mgまたは約15,000〜約25,000 f-SRC単位/mgであり得る。コラゲナーゼはまた、約980〜3,510または約1,400〜2,700 SRCマイクロプレートアッセイ単位の効力を有し得る。
コラゲナーゼについてのウシ腱コラーゲンアッセイは、Keller and Mandl (1963)により改変されるようなMandl et al. (1958)の手順に基づく。ウシ腱コラーゲンは不溶性基質であるので、十分に分割することが重要である。変性したコラーゲンまたは他のタンパク質不純物の存在を説明するために、トリプシンを対照として試行する。コラゲナーゼ活性に必要であるカルシウムイオンの存在下でアッセイを試行する。可溶化したペプチドの数は、ペプチドのN末端アミノ基とニンヒドリンを反応させて、形成された付属物の量を比色定量的に測定することにより決定する(Rosen 1957)。
1. コラーゲン基質(コラーゲン)
2. 脱イオン水(水)
3. Trisアッセイバッファ
4. トリプシンストック溶液
5. 0.5M HCl
6. ロイシン標準アッセイ溶液(1mMロイシン)
7. Rosenバッファ
8. 3%ニンヒドリン
9. 50%イソプロパノール
反応チューブの設定および標識は以下の通りである:トリプシン対照について3つのチューブ、参照溶液についての6つのチューブおよび試験下のそれぞれの試料についての6つのチューブ。それぞれのチューブを標識してキャップを外す。表13の順序で10±1mgのコラーゲンを計量して、計量したコラーゲンをそれぞれの反応チューブに入れる。
濾過チューブを標識してインキュベートしたそれぞれの反応チューブに対応させる。折り畳んだ濾紙を含む漏斗をそれぞれの標識した濾過チューブに配置する。インキュベーション期間の終了時に水槽から反応チューブを取り出す。終了した実際のインキュベーション時間を記録する。
煮沸チューブは以下のように設定して標識する:水およびロイシン対照について6つのチューブ(工程1)およびそれぞれの濾過チューブについての2つのチューブ(工程1)。以下の量の水およびロイシン標準アッセイ溶液を6つのロイシン対照チューブに入れる。
閉じ込めフードの下で作業しながらチューブの吸光度を読み取る。分光光度計をオンにして温める。分光光度計の波長を570nmに設定する。50%イソプロパノールに対して分光光度計を0にする。水、ロイシン、トリプシン対照および試験下試料の吸光度(A570)を読み取る。第1の試料を読んだ時間を時間で記録する。1000 X A570として読み取り値を記録して、最後の試料を読み取った時間を時間で記録する。全ての読み取りは1時間間隔内に行う。
読み取りの合計時間およびインキュベーションの合計時間を分で計算する。読み取りの合計時間は60分未満であるべきであり、インキュベーションの合計時間は1290〜1350分であるべきである。線状最少二乗法を使用して、ロイシン標準についての傾き「b」および相関係数「r」(x=nmolロイシン 対 y=A570読み取り)を計算する。「b」値についての単位はA570/nmolロイシンである。「b」値を小数点以下2桁まで記録する。ロイシンについてのb値は2.88〜3.33であるべきである。トリプシン対照(T)についての平均読み取りを計算する。トリプシン対照(T)についての平均読み取りは221〜338であるべきである。この平均を最も近い整数まで記録する(工程A)。それぞれの反応チューブについての二重試料A570読み取りを平均する。この数字を最も近い整数まで記録する。平均試料A570読み取りから平均トリプシンを引き(工程A)正味の試料読み取りを得る。
BTC単位=nmol leu eq/分の活性xコラーゲン補正係数。
ABC単位=BTC単位x1.09
である。
種々のコラゲナーゼ組成物を使用し得、ここでコラゲナーゼは、約5,000 BTC単位/mg〜約25,000 BTC単位/mgまたは約10,000 BTC単位/mg〜約25,000 BTC単位/mgまたは約15,000 BTC単位/mgまたは約17,500 BTC単位/mgまたは約20,000 BTC単位/mgまたは約22,500 BTC単位/mgまたは約9,175 BTC単位/0.58mgまたは15,817 BTC単位/mgの比活性を有し、ここで「mg」は、(賦形剤および他の構成物とは別の)組成物中に存在するコラゲナーゼ(1つまたは複数)の量をいう。
標識されたコラーゲンを使用するアッセイ法は、Gisslow et al., Anal. Biochem., 68: 70-78 (1975);Robertson et al., Clinica Chimica Acta, 42:43-45 (1972);Sakamoto et al., A New Method for the Assay of Tissue Collagenase (36297) (1972)により報告されている。1つの他のアッセイは、Worthington Biochemical Corp. Assay (http://www.worthington-biochem.com/CLS/assay.html)(2019年7月3日にアクセス)である。
本明細書で使用されるコラゲナーゼ用量に関して、本開示は、皮下注射時に中隔に結合および中隔を溶解し、治療前ベースラインと比較して減少したセルライトの外観を生じるの十分なコラゲナーゼの治療有効量を提供する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM
・約〜(about to)約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有するコラゲナーゼ組成物に対するものである。
CCHまたは他のコラゲナーゼは、CCHまたはコラゲナーゼおよび薬学的に許容され得る賦形剤を含む医薬製剤の形態であり得る。かかる賦形剤としては、注射のための滅菌水または塩化ナトリウム/塩化カルシウム、pH調整剤および安定化剤が挙げられ得る。
前述のコラゲナーゼ組成物は、ヒト被験体においてセルライトの重症度を治療または低減する方法に有用である。本開示は、少なくとも1つのコラゲナーゼを含む組成物を提供する工程;および該組成物の治療有効量を1つ以上のくぼみに注射する工程を含む、ヒト患者においてセルライトの重症度を低減する方法に関し、ここで患者は、重症度の治療前ベースラインレベルと比較して、セルライトの重症度の低減を示す。以下にさらに詳細に示すように、該組成物は種々の注射技術により投与され得、効力はいくつかの尺度および他の測定ツールにより測定され得る。
図7に図示されるように、この例(「治療I」)において、コラゲナーゼは、被験体がうつ伏せの姿勢で横たわりながら、くぼみの長軸に対して垂直に皮下注射される。それぞれの注射は、3つの0.1mLアリコート(0.3mLの合計注射体積について)としてコラゲナーゼの単一皮膚注射を含む。それぞれの治療訪問の間に、投薬のために8シリンジ(治療領域当たり4シリンジ)を調製する。それぞれのシリンジは0.9mLのコラゲナーゼ組成物を含む(それぞれのシリンジにおいて3注射)。被験体当たりの用量は、治療領域当たり約0.5mg〜約5mgコラゲナーゼの合計用量で変化し得る。
・皮膚表面に垂直かつくぼみが伸長する溝様のくぼみである場合はくぼみの長軸に対して垂直に配置される針を用いて(位置A)、針を全面的に押し(1/2インチ)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.1mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。ほとんどの場合、注射位置A、BおよびCを含む面は、被験体の体の長軸に平行である。
・針をわずかに引き抜き、針を皮膚表面に対して被験体の頭部に向かって約45°の角度で再度配置し(位置B)、針を全面的に押し、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.1mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。位置Bは好ましくは、被験体の頭部に向かう。
・針をわずかに引き抜き、針を皮膚表面に対して約45°の角度で被験体の足に向かって再度配置し(位置C)、針を全面的に押し、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.1mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。位置Cは好ましくは、被験体の足に向かう。
・注射部位から針を完全に引き抜き、次の注射部位に進む。
・0.9mLコラゲナーゼ組成物を有するシリンジは3注射部位に十分である。
・それぞれの治療領域(それぞれの臀部またはそれぞれの大腿)において4つの0.9mLシリンジを使用して、12注射部位で0.3mL(各0.1mLの3アリコート)の合計12注射を投与する。
・それぞれの治療訪問で2治療領域(2臀部または2大腿)にわたり合計24注射を投与する。
図8に図示されるように、この例(「治療II」)において、コラゲナーゼは、被験体がうつ伏せの姿勢である間皮下注射される。それぞれの注射は、0.3mLアリコートの単一の浅い注射としてコラゲナーゼの単一皮膚注射を含む。それぞれの治療訪問の間に、投薬のために8シリンジ(治療領域当たり4シリンジ)を調製する。それぞれのシリンジは、0.9mLのコラゲナーゼ(それぞれのシリンジ中3の注射)を含む。被験体当たりの用量は、それぞれの治療領域において、約0.5mg〜5mgのコラゲナーゼの合計用量で変化し得る。
・注射部位で皮膚表面に対して約30°で配置され、被験体の頭部に向かって方向づけられた針を用いて、針を全面的に押し(1/2インチ)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・注射部位から針を完全に引き抜き、次の注射部位に進む。
・0.9mLのコラゲナーゼ組成物を有するシリンジは3つの注射部位に十分である。
・それぞれの治療領域(それぞれの臀部またはそれぞれの大腿)について4つの0.9mLシリンジを使用して、12の注射部位で0.3mL(各0.1mLの3アリコート)の合計12の注射を投与する。
・それぞれの治療訪問で2治療領域(2臀部または2大腿)にわたり合計24の注射を投与する。
図9に図示されるように、この例(「治療III」)において、被験体がうつ伏せの姿勢である間、コラゲナーゼを皮下注射する。それぞれの注射は、0.3mLのコラゲナーゼ組成物アリコートの単一の深い注射としてのコラゲナーゼ組成物の単一の皮膚注射を含む。それぞれの治療訪問の間に、投薬のために8シリンジ(治療領域当たり4シリンジ)を調製する。それぞれのシリンジは、0.9mLのコラゲナーゼ(それぞれのシリンジ中3の注射)を含む。被験体当たりの用量は、治療領域当たり約0.5mg〜約5mgコラゲナーゼの合計用量で変化し得る。
・注射部位で皮膚表面に対して約30°の角度で配置され、被験体の頭部に方向づけられた針を用いて、針を全面的に押し(1インチ)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより単一アリコート0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・注射部位で皮膚表面に対して約30°の角度で配置され、被験体の頭部に方向づけられた針を用いて、針を全面的に押し(1インチ)シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより単一アリコート0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・0.9mLコラゲナーゼ組成物を有するシリンジは3つの注射部位に十分である。
・各治療領域(それぞれの臀部またはそれぞれの大腿)において4つの0.9mLシリンジを使用して、12の注射部位で0.3mL(単一0.3mLアリコート)の合計12の注射を投与する。
・使用した針およびシリンジを廃棄する。
・それぞれの治療訪問で2つの治療領域(2つの臀部または2つの大腿)にわたり合計24の注射を投与する。
図10に図示されるように、治療IVにおいて、被験体がうつ伏せの姿勢で横たわっている間コラゲナーゼを皮下注射する。それぞれの注射は、5つの0.3mL(1.5mLの合計注射体積について)としてコラゲナーゼの単一皮膚注射を含む。各治療訪問の間に、投薬のために24シリンジ(治療領域当たり12シリンジ)を調製する。各シリンジは、1.5mLのコラゲナーゼ(各シリンジ中、各注射について5アリコートの0.3mL)を含む。被験体当たりの用量は、治療領域当たり約0.5mg〜約5mgの合計用量で変化し得る。
・注射部位で皮膚表面に対して約30の角度で配置され、被験体の頭部に方向づけられた針を用いて、針を全面的に押し(1インチ)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・針の半分の長さ(1/2インチ)を穏やかに引き抜き、皮膚表面に対して30°の角度の針を維持し、被験体の一方の側面に対して針を再度配置する(位置B)。シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚表面に対して30°の角度の針を維持し、位置AとBの中ほどに針を再度配置し(位置C、被験体の肩に向かう)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚表面に対して30°の角度の針を維持し、位置Bの正確に反対側に針を再度配置し(位置D)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚表面に対して30°の角度の針を維持し、針を位置AとDの中ほどに再度配置し(位置E、被験体の他方の肩に向かう)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・1.5mLのコラゲナーゼ組成物を有する3mLのシリンジは1つの注射部位に十分である。
・各治療領域(それぞれの臀部またはそれぞれの大腿)において12の3mLシリンジを使用して、12の注射部位で1.5mLの合計12の注射(合計18.0mL、5アリコートでそれぞれ0.3mL)を投与する。
・それぞれの治療訪問で2つの治療領域(2つの臀部または2つの大腿)にわたり合計24の注射を投与する。
図11に図示されるように、この例(「治療V」)において、被験体がうつ伏せの姿勢で横たわっている間コラゲナーゼを皮下注射する。それぞれの被験体は、4つの0.3mLアリコート(1.2mLの合計注射体積について)としてコラゲナーゼの単一皮膚注射を受ける。それぞれの治療訪問の間に、投薬のために24シリンジ(治療領域当たり12シリンジ)を調製する。それぞれのシリンジは、1.2mLのコラゲナーゼ(それぞれ0.3mLの4アリコート)を含む。被験体当たりの用量は、治療領域当たり約0.5mg〜約5mgの合計用量で変化し得る。
・注射部位で皮膚表面に対して約30°の角度で配置され、被験体の一方の側面に方向づけられた針を用いて、針を全面的に押し(1/2インチ)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚表面に対して30°の角度の針を維持し、位置Aから約60°かつ被験体の肩に向かって針を再度配置し(位置B)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚表面に対して30°の角度の針を維持し、位置Bから約60°かつ被験体の他方の肩に向かって針を再度配置し(位置C)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・皮膚表面に対して30°の角度の針を維持し、位置Aの反対側で被験体の他の側面に向かって針を再度配置し(位置D)、シリンジプランジャーを穏やかに押すことにより0.3mLのコラゲナーゼ組成物を注射する。
・1.2mLのコラゲナーゼ組成物を有する3mLのシリンジは1つの注射部位に十分である。
・各治療領域(それぞれの臀部またはそれぞれの大腿)において12の3mLシリンジ(それぞれにおいて1.2mLのコラゲナーゼ組成物を有する)を使用して、12の注射部位でそれぞれ1.2mLの合計12の注射(合計14.4mLの、それぞれ0.3mLの4アリコート)を投与する。
・2つの治療領域にわたり合計24の注射を投与する。
a. 医師による使用の容易さ;
b. 治療のためのより短い時間;
c. 美的状態についての向上は得ることが困難であるという医師の一般的な見解に照らした予測されない効力;
d. ヒアルロニダーゼを使用する必要がないこと;
e. 熱を使用する必要がないこと;
f. レーザーを使用する必要がないこと;
g. サブシジョン(subscision)がないこと;
h. (内出血に関わらず)麻酔の必要がないこと;
i. 圧縮ガーメント(compressive garment)が必要ないこと;および
j. 真空を使用しないこと
の少なくとも1つを提供する。
本明細書に記載される治療は、以下に記載されるいくつかの測定により、セルライトの治療に有効である。本明細書で使用する場合、「日目」は試験日を意味するので、例えば22日目は、最初の注射の21日後等である。さらに一例において「日目」は+/-7日である。
任意の訪問での個々の患者についての向上は、ベースラインまたは任意の以前のスコアもしくは評定からの少なくとも1レベルもしくは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、ベースラインまたは任意の以前の平均スコアもしくは評定からの平均スコアもしくは評定における約0.1の向上である。応答体は、ベースラインから最大合計スコアまたは評定の少なくとも25%の向上を示す任意の患者である。ある態様において、上に詳細に示される治療方法は、CR-PCSSおよび/またはPR-PCSSにより測定される場合、以下の効力終点の1つ以上を生じる:
1. ベースラインに対してCR-PCSSおよび/またはPR-PCSS評定における少なくとも0.1の向上。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合のCR-PCSSにおける重症度の、ベースライン(治療前「1日目」)からの少なくとも2レベルの重症度の向上。
3. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合、PR-PCSSにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも2レベルの重症度の向上。
4. CR-PCSSにおける重症度のベースラインからの少なくとも2レベルの向上およびPR-PCSSにおける重症度のベースラインからの少なくとも2レベルの向上を有する被験体として定義される22、43、71、90、180、365または730日目の2レベルの複合応答により示される向上。
5. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合のCR-PCSSにおける重症度の、ベースラインからの少なくとも1レベルの重症度の向上。
6. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合のPR-PCSSにおける重症度の、ベースラインからの少なくとも1レベルの重症度の向上。
7. CR-PCSSにおける重症度のベースラインからの少なくとも1レベルの向上およびPR-PCSSにおける重症度のベースラインからの少なくとも1レベルの向上を有する被験体として定義される22、43、71、90、180、365または730日目の1レベルの複合応答により示される向上。
8. 全員が中程度または重度のCR-PCSS評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における向上は、プラシーボと比較して統計的に有意であり、ここで該向上は上述の1〜7の1つ以上である。
9. 治療は、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対して、患者の向上レベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年間かかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、治療前ベースラインに対して向上を示し、経時的に向上のさらなる増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月で向上のさらなる増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
10. 180日目に、ベースラインからのCR-PCSS評定において見られる向上は、右および左の大腿において一致した。
11. 全員が中程度または重度のCR-PCSS評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い2レベルのCR-PCSSおよび/またはPR-PCSS向上までのメジアンの時間は、約50日または60日または70日または80日または90日である。
12. 全員が中程度または重度のCR-PCSS評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルのCR-PCSSおよび/またはPR-PCSS向上までのメジアンの時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
13. 全員が中程度または重度のCR-PCSS評定を有する患者の集団において、平均被験体CR-PCSSおよび/またはPR-PCSSスコアは、第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後の治療の後に継続的で有意な向上を示す。
14. 全員が中程度または重度のCR-PCSS評定を有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域においてCR-PCSSおよび/またはPR-PCSSにより測定する場合の2レベルの複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
15. 全員が中程度または重度のCR-PCSS評定を有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域においてCR-PCSSおよび/またはPR-PCSSにより測定する場合の1レベル複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
16. 全員が中程度または重度のCR-PCSS評定を有する患者の集団において、1/3または1/2または2/3または3/4を超える患者は、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域において少なくとも1レベルのCR-PCSSおよび/または少なくとも1レベルのPR-PCSS応答を有し、ここでCR-PCSSの結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色とは独立する。
17. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらにI型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
Hexsel CSSにおいて、任意の訪問での個々の患者についての向上は、ベースラインまたは任意の以前のスコアからの少なくとも1レベルもしくは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、平均Hexsel CSSスコアもしくは評定または任意の以前の平均Hexsel CSSスコアもしくは評定におけるベースラインからの約0.1の向上である。応答体は、最大合計スコアもしくは評定のベースラインからの少なくとも25%の向上を示す任意の患者である。ある態様において、上に詳述される治療方法は、Hexsel CSSにより測定される場合に以下の効力終点の1つ以上を生じる:
1. 全員がベースライン1日目Hexsel CSS評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療訪問の間の少なくとも1つの治療領域へのコラゲナーゼの注射は、以下の効力終点:
・重度から中程度への(11〜15のスコアから6〜10への)シフト
・重度から軽度への(11〜15のスコアから1〜5への)シフト
・重度から0への(11〜15のスコアから0への)シフト
・中程度から軽度への(6〜10のスコアから1〜5への)シフト
・中程度から0への(6〜10のスコアから0への)シフト
・軽度から0への(1〜5のスコアから0への)シフト
の1つ以上を満たすかかる患者の統計的に有意な数を生じた。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合の、Hexsel CSSにおける重症度のベースライン(治療前「1日目」)からの、少なくとも2レベルの重症度の変化。
3. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合の、Hexsel CSSにおける重症度のベースライン(1日目)からの、少なくとも2レベルの重症度の変化。
4. 臨床医評価によるHexsel CSSにおけるベースラインからの少なくとも2レベルの重症度の向上および患者評価によるHexsel CSSにおけるベースラインから少なくとも2レベルの重症度の向上を有する被験体として定義される22、43、71、90、180、365または730日目での2レベルの複合応答により示される変化。
5. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合の、Hexsel CSSにおける重症度のベースライン(1日目)からの、少なくとも1レベルの重症度の変化。
6. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合の、Hexsel CSSにおける重症度のベースライン(1日目)からの少なくとも1レベルの重症度の変化。
7. 臨床医評価によるHexsel CSSにおける重症度のベースラインからの少なくとも1レベルの向上および患者評価によるHexsel CSSにおける重症度のベースラインからの少なくとも1レベルの向上を有する被験体として定義される、22、43、71、90、180、365または730日目での1レベルの複合応答により示される変化。
8. 全員が中程度または重度のHexsel CSS評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における向上は、プラシーボと比較して統計的に有意であり、ここで変化は上述の2〜7の1つ以上である。
9. 治療は、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年間かかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的に向上のさらなる増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月で向上のさらなる増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
10. 180日目に、Hexsel CSS評定において見られるベースラインからの向上は、右および左の大腿で一致した。
11. 全員が中程度または重度のHexsel CSS評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い2レベルのHexsel CSS向上までのメジアン時間は、約50日または60日または70日または80日または90日である。
12. 全員が中程度または重度のHexsel CSS評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルのHexsel CSS向上までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
13. 全員が中程度または重度のHexsel CSS評定を有する患者の集団において、平均被験体Hexsel CSSスコアは、第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後の治療後に継続的で有意な向上を示す。
14. 全員が中程度または重度のHexsel CSS評定を有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域においてHexsel CSSにより測定する場合の2レベル複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
15. 全員が中程度または重度のHexsel CSS評定を有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域においてHexsel CSSにより測定する場合の1レベルの複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
16. 全員が中程度または重度のHexsel CSS評定を有する患者の集団において、1/3または1/2または2/3または3/4を超える患者は、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域において少なくとも1レベルのHexsel CSS応答を有し、ここでHexsel CSS結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色とは独立する。
17. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後、約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax,分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
Hexsel落ち込み深さスコアにおいて、任意の訪問での個々の患者についての向上は、ベースラインまたは任意の以前のスコアからの少なくとも1レベルまたは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、ベースラインまたは任意の以前の平均Hexsel落ち込み深さスコアもしくは評定からの平均Hexsel落ち込み深さスコアまたは評定における約0.1の向上である。応答体は、ベースラインからの最大合計スコアまたは評定の少なくとも25%の向上を示す任意の患者である。ある態様において、上に詳述される治療方法は、Hexsel落ち込み深さスコアにより測定した場合に以下の効力終点の1つ以上を生じる:
1. 全員がベースライン1日目Hexsel落ち込み深さスコア評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療訪問の間の少なくとも1つの治療領域へのコラゲナーゼの注射は、以下の効力終点:
・深い落ち込み(3)から中程度の深さ(2)へのシフト
・深い落ち込み(3)から表面上の落ち込み(1)へのシフト
・深い落ち込み(3)から落ち込みなし(0)へのシフト
・中程度の深さ(2)から表面上の落ち込み(1)へのシフト
・中程度の深さ(2)から落ち込みなし(0)へのシフト
・表面上の落ち込み(1)から落ち込みなし(0)へのシフト
の1つ以上を満たすかかる患者の統計的に有意な数を生じた。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合のHexsel落ち込み深さスコアにおける重症度の、ベースライン(治療前「1日目」)からの、少なくとも2レベルの重症度の変化。
3. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合のHexsel落ち込み深さスコアにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの、少なくとも2レベルの重症度の変化。
4. 臨床医評価によるHexsel落ち込み深さスコアにおけるベースラインから少なくとも2レベルの重症度の向上および患者評価によるHexsel落ち込み深さスコアにおけるベースラインから少なくとも2レベルの重症度の向上を有する被験体として定義される22、43、71、90、180、365または730日目での、2レベルの複合応答により示される変化。
5. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合のHexsel落ち込み深さスコアにおける重症度のベースライン(1日目)からの、少なくとも1レベルの重症度の変化。
6. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合のHexsel落ち込み深さスコアにおける重症度のベースライン(1日目)からの、少なくとも1レベルの重症度の変化。
7. 臨床医評価によるHexsel落ち込み深さスコアにおける重症度のベースラインからの少なくとも1レベルの向上および患者評価によるHexsel落ち込み深さスコアにおける重症度のベースラインからの少なくとも1レベルの向上を有する被験体として定義される22、43、71、90、180、365または730日目での1レベルの複合応答により示される変化。
8. 全員が中程度または深い落ち込みのHexsel CSS評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における向上は、プラシーボと比較して統計的に有意であり、ここで該変化は上述の2〜7の1つ以上である。
9. 治療は、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する向上の患者のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年の間、かかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的に向上のさらなる増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月で、向上のさらなる増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
10. 180日目に、Hexsel落ち込み深さスコア評定において見られるベースラインからの向上は、右および左の大腿で一致した。
11. 全員が中程度または深い落ち込みのHexsel落ち込み深さスコア評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い2レベルのHexsel落ち込み深さスコア向上までのメジアン時間は、約50日または60日または70日または80日または90日である。
12. 全員が中程度または深い落ち込みのHexsel落ち込み深さスコア評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルのHexsel落ち込み深さスコア向上までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
13. 全員が中程度または深い落ち込みのHexsel落ち込み深さスコア評定を有する患者の集団において、平均被験体Hexsel落ち込み深さスコアは、第1の治療後21日目にプラシーボから離れ、その後の治療の後に継続的で有意な向上を示す。
14. 全員が中程度または深い落ち込みのHexsel落ち込み深さスコア評定を有する患者の集団において、71日目に、少なくとも1つの治療領域におけるHexsel落ち込み深さスコアにより測定される場合の2レベル複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
15. 全員が中程度または深い落ち込みのHexsel落ち込み深さスコア評定を有する患者の集団において、71日目に、少なくとも1つの治療領域におけるHexsel落ち込み深さスコアにより測定される場合の1レベル複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
16. 全員が中程度または深い落ち込みのHexsel落ち込み深さスコア評定を有する患者の集団において、1/3または1/2または2/3または3/4を超える患者は、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域において少なくとも1レベルのHexsel落ち込み深さスコア応答を有し、ここでHexsel落ち込み深さスコア結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色から独立する。
17. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後、約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
18. 1つ以上の治療領域における約-0.1〜約-2.0の71日目までのベースラインからのスコアの変化。
19. 統計的に有意な患者の集団において、最少二乗(LS)平均は、1つ以上の治療領域について約-0.1〜約-1.5である(95%信頼区間(CI))。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
リカート尺度において、任意の訪問での個々の患者についての向上は、治療前または任意の以前のスコアからの少なくとも1レベルまたは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、治療前または任意の以前の平均リカートスコアもしくは評定からの平均リカートスコアまたは評定における約0.1の向上である。ある態様において、上に詳述される治療方法は、リカート尺度スコアにより測定される場合、以下の効力終点の1つ以上を生じる:
1. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療訪問の間の少なくとも1つの治療領域へのコラゲナーゼの注射は、以下の効力終点:
・「向上した」のリカート尺度スコア(1)
・「大きく向上した」のリカート尺度スコア(2)
・「非常に大きく向上した」のリカート尺度スコア(3)
の1つ以上を満たすかかる患者の統計的に有意な数を生じた。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合のリカート尺度スコアにおける治療前からの、少なくとも2レベルの治療領域外観の向上。
3. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合のリカート尺度スコアにおける治療前からの、少なくとも2レベルの治療領域外観の向上。
4. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合のリカート尺度スコアにおける治療前からの、少なくとも1レベルの治療領域外観の向上。
5. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合のリカート尺度スコアにおける治療前からの、少なくとも1レベルの治療領域外観の向上。
6. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域におけるリカート尺度スコアの向上は、統計的に有意であり、ここで該向上は、上述の2〜7の1つ以上である。
7. 治療は、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後、少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年の間、かかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的にさらなる向上の増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後、1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月に、さらなる向上の増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
8. 180日目に、リカート尺度スコア評定において見られるベースラインからの向上は、右および左の大腿で一致した。
9. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い2レベルリカート尺度スコア向上までのメジアン時間は、約50日または60日または70日または80日または90日である。
10. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルリカート尺度スコア向上までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
11. セルライトを有する患者の集団において、平均被験体リカート尺度スコアは、第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後の治療の後に、継続的で有意な向上を示す。
12. セルライトを有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域におけるリカート尺度スコアにより測定される場合の2レベル応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
13. セルライトを有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域におけるリカート尺度スコアにより測定される場合の1レベルの応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
14. セルライトを有する患者の集団において、1/3または1/2または2/3または3/4を超える患者は、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域において少なくとも1レベルのリカート尺度スコア応答を有し、ここでリカート尺度スコアの結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色から独立する。
15. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後、約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
ある態様において、コラゲナーゼ(1つまたは複数)を用いたセルライトの治療は、以下:
・深さ:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%または20%または15%または10%または5%または2.5%または2%または1%だけ
・幅:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%または20%または15%または10%または5%または2.5%または2%または1%だけ
・長さ:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%または20%または15%または10%または5%または2.5%または2%または1%だけ
・全体体積:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%または20%または15%または10%または5%または2.5%または2%または1%だけ
・表面積:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%または20%または15%または10%または5%または2.5%または2%または1%だけ
のようにくぼみサイズパラメーターを減少する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
上に詳述される治療方法は、S-GAISおよびI-GAISにより測定される場合に向上された応答を生じる。2レベルのS-GAIS応答体は、評価の時点で少なくとも2(+2または+3)のS-GAIS評定を有する被験体である。1レベルS-GAIS応答体は、評価の時点で、少なくとも1(+1、+2または+3)のS-GAIS評定を有する被験体である。2レベルI-GAIS応答体は、評価の時点で、少なくとも2(+2または+3)のI-GAIS評定を有する被験体である。1レベルI-GAIS応答体は、評価の時点で、少なくとも1(+1、+2または+3)のI-GAIS評定を有する被験体である。任意の訪問での個々の患者についての向上は、ベースラインまたは任意の以前のスコアからの少なくとも1レベルまたは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、ベースラインまたは任意の以前の平均スコアもしくは評定からの平均スコアまたは評定における約0.1の向上である。
1. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療訪問の間の少なくとも1つの治療領域へのコラゲナーゼの注射は、以下の効力終点:
・「向上した」のS-GAISおよび/またはI-GAISスコア(+1)
・「大きく向上した」のS-GAISおよび/またはI-GAISスコア(+2)
・「非常に大きく向上した」のS-GAISおよび/またはI-GAISスコア(+3)
の1つ以上を満たすかかる患者の統計的に有意な数を生じる。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合のI-GAISにおける少なくとも2レベルの向上。
3. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合のS-GAISにおける少なくとも2レベルの向上。
4. 臨床医評価によるI-GAISにおける少なくとも2レベルの向上および患者評価によるS-GAISにおける少なくとも2レベルの向上を有する被験体として定義される、22、43、71、90、180、365または730日目での2レベル複合応答により示される向上。
5. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合のI-GAISにおける少なくとも1レベルの向上。
6. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合のS-GAISにおける少なくとも1レベルの向上。
7. 臨床医評価によるI-GAISにおける少なくとも1レベルの向上および患者評価によるS-GAISにおける少なくとも1レベルの向上を有する被験体として定義される、22、43、71、90、180、365または730日目での1レベルの複合応答により示される向上。
8. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域におけるI-GAISおよび/またはS-GAISにおける向上は、プラシーボと比較して統計的に有意であり、ここで該向上は、上述の2〜7の1つ以上である。
9. 治療は、開始用量後、少なくとも71日の間、患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後、少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年の間、かかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、向上を示し、経時的にさらなる向上の増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後、1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月で、さらなる向上の増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
10. 180日目に、I-GAISおよびS-GAIS評定において見られる向上は、右および左の大腿で一致した。
11. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い2レベルI-GAISおよび/またはS-GAIS向上までのメジアン時間は、約50日または60日または70日または80日または90日である。
12. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルI-GAISおよび/またはS-GAIS向上までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
13. セルライトを有する患者の集団において、平均被験体I-GAISおよび/またはS-GAISは、第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後に治療の後に、継続的で有意な向上を示す。
14. セルライトを有する患者の集団において、71日目の少なくとも1つの治療領域においてI-GAISおよび/またはS-GAISにより測定する場合の2レベルの複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
15. セルライトを有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域においてI-GAISおよび/またはS-GAISにより評価する場合に1レベルの複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
16. セルライトを有する患者の集団において、1/3または1/2または2/3または3/4を超える患者は、治療後71日目に少なくとも1つの治療領域において少なくとも1レベルのI-GAISおよび/またはS-GAIS応答を有し、ここでGAIS結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色から独立する。
17. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後、約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
上に詳述される治療方法は、PR-CISにより測定される場合、向上された応答を生じる。PR-CIS合計スコアは、尺度の6項目の合計である。セルライトの外観について被験体はどのくらいうれしいかと尋ねるPR-CISの項目#1は、10から被験体が報告した評価を引くことにより逆転される。PR-CIS合計スコアは0〜60の範囲であり得、高い数はセルライトからのよりマイナスの影響を反映する。PR-CIS合計スコアについて、応答体は、評価の時点で、ベースラインから少なくとも12のPR-CIS合計スコアの低減を有する被験体である。個々のPR-CIS影響スコアについて、応答は、それぞれの時点での少なくとも2スコア間隔のベースラインからの向上である。さらに、応答体は、ベースラインからの最大合計スコアの少なくとも20%の向上を示す任意の患者である。任意の訪問での個々の患者についての向上は、ベースラインまたは任意の以前のスコアからの少なくとも1レベルまたは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、ベースラインまたは任意の以前の平均スコアもしくは評定からの平均スコアまたは評定の約0.1の向上である。さらに、向上は、60のうち、少なくとも1レベルのベースラインからの変化である。
1. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療訪問の間の少なくとも1つの治療領域へのコラゲナーゼの注射は、以下の効力終点:
・PR-CISは、うれしさ、苦しさ、自覚、当惑、年を取って見えることおよび太りすぎ/体調が悪く見えることからなる群より選択される少なくとも1つ変域を通過する向上を示す
・1つ以上の評価時点でのベースラインからの少なくとも12のPR-CIS合計スコアの低減
・1つ以上の評価時点でのベースラインからの少なくとも2スコア間隔の向上を示すPR-CIS影響スコア
・向上は、60のうち少なくとも1レベルのベースラインからの変化である
の1つ以上を満たすかかる患者の統計的に有意な数を生じる。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿についてのPR-CISにおける少なくとも12ポイントのベースライン(治療前「1日目」)からの重症度の向上。
3. セルライトを有する患者の集団において、22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿についてのPR-CISにおける少なくとも12ポイントのベースライン(治療前、1日目)からの、プラシーボに対する統計的に有意な重症度の向上。
4. 治療は、開始用量後少なくとも71日の間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年の間かかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的にさらなる向上の増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月で、さらなる向上の増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
5. 180日目に、PR-CIS評定において見られるベースラインからの向上は、右および左の大腿で一致した。
6. セルライトを有する患者の集団において、1つ以上の評価の時点での少なくとも1つの治療領域についてのベースラインからの少なくとも12のPR-CIS合計スコアの低減までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
7. セルライトを有する患者の集団において、平均被験体PR-CISスコアは、第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後の治療の後に継続的で有意な向上を示す。
8. セルライトを有する患者の集団において、1/3を超えるまたは1/2を超えるまたは2/3を超えるまたは3/4を超える患者は、治療後の71日目までに少なくとも1つの治療領域における1つ以上の評価の時点で、ベースラインからの少なくとも12のPR-CIS合計スコアの低減を有し、ここでPR-CIS結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色から独立する。
9. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後の約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
上に詳述される治療方法は、省略PR-CISにより測定される場合に向上した応答を生じる。省略PR-CIS合計スコアは、尺度の5項目の合計である。被験体はセルライトの外観についてどのくらいうれしいかを尋ねるPR-CISの項目#1は、10から被験体の報告した評価を引くことにより逆転される。省略PR-CIS合計スコアは0〜50の範囲であり得、より高い数はセルライトからのよりマイナスな影響を反映する。省略PR-CIS合計スコアについて、応答体は、評価の時点でベースラインからの少なくとも10のPR-CIS合計スコアの低減を有する被験体である。個々の省略PR-CIS影響スコアについて、応答は、それぞれの時点での少なくとも2スコア間隔のベースラインからの向上である。さらに、応答体は、ベースラインからの最大合計スコアの少なくとも20%の向上を示す任意の患者である。任意の訪問での個々の患者についての向上は、ベースラインまたは任意の以前のスコアからの少なくとも1レベルまたは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、ベースラインまたは任意の以前の平均スコアもしくは評定からの平均スコアまたは評定における約0.1の向上である。さらに、向上は、50のうち少なくとも1レベルのベースラインからの変化である。
1. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療訪問の間の少なくとも1つの治療領域へのコラゲナーゼの注射は、以下の効力終点:
・省略PR-CISは、うれしさ、苦しさ、自覚、当惑、年を取って見えることおよび太りすぎ/体調が悪く見えることからなる群より選択される少なくとも1つ変域を通過する向上を示す
・1つ以上の評価の時点でのベースラインからの少なくとも10の省略PR-CIS合計スコアの低減
・1つ以上の評価の時点での少なくとも2スコア間隔のベースラインからの向上を示す省略PR-CIS影響スコア
・さらに、向上は、50のうち少なくとも1レベルのベースラインからの変化である
の1つ以上を満たすかかる患者の統計的に有意な数を生じる。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿についての省略PR-CISにおける少なくとも12ポイントのベースライン(治療前「1日目」)からの重症度の向上。
3. セルライトを有する患者の集団において、22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿についての省略PR-CISにおける少なくとも10ポイントのベースライン(治療前、1日目)からの、プラシーボに対する重症度の統計的に有意な向上。
4. 治療は、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年の間かかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的にさらなる向上の増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月で、さらなる向上の増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
5. 180日目に、省略PR-CIS評定において見られるベースラインからの向上は、右および左の大腿で一致した。
6. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域についての1つ以上の評価の時点でのベースラインからの少なくとも10の省略PR-CIS合計スコアの低減までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
7. セルライトを有する患者の集団において、平均被験体の省略PR-CISスコアは、第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後の治療の後に継続的で有意な向上を示す。
8. セルライトを有する患者の集団において、1/3を超えるまたは1/2を超えるまたは2/3を超えるまたは3/4を超える患者は、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域における1つ以上の評価の時点でベースラインからの少なくとも10の省略PR-CIS合計スコアを有し、ここでPR-CIS結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色から独立する。
9. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後、約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
上に詳述される治療方法は、SSRSにより測定される場合に向上を生じる。SSRS応答体は、71日目に大腿上のセルライトの外観に少なくともわずかに満足(わずかに満足[4]、非常に満足[5]または極度に満足[6])する被験体である。さらに、応答体は、ベースラインからの最大合計スコアの少なくとも17%の向上を示す任意の患者である。任意の訪問での個々の患者についての向上は、ベースラインまたは任意の以前のスコアからの少なくとも1レベルまたは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、ベースラインまたは任意の以前の平均スコアもしくは評定からの平均スコアまたは評定の約0.1の向上である。ある態様において、治療方法は、SSRS評定により測定される場合に以下の効力終点の1つ以上を生じる:
1. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療訪問の間の少なくとも1つの治療領域へのコラゲナーゼの注射は、以下の効力終点:
・「わずかに満足」のSSRS評定
・「満足」のSSRS評定
・「極度に満足」のSSRS評定
の1つ以上を満たすかかる患者の統計的に有意な数を生じた。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目の、標的大腿のSSRS評定における少なくとも2レベルのベースライン(治療前「1日目」)からの向上。
3. 22、43、71、90、180、365または730日目の標的大腿のSSRS評定における少なくとも1レベルのベースライン(1日目)からの向上。
4. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域におけるSSRS評定の向上は、プラシーボと比較して統計的に有意であり、ここで向上は、上述の2〜3の1つ以上である。
5. 治療は、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年の間、かかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的にさらなる向上の増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月でさらなる向上の増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
6. 第1の注射後180日目に、SSRS評定において見られるベースラインからの向上は、右および左の大腿で一致した。
7. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い2レベルのSSRS評定向上までのメジアン時間は、約50日または60日または70日または80日または90日である。
8. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルSSRS評定向上までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
9. セルライトを有する患者の集団において、平均被験体SSRS評定は、第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後の治療の後に継続的で有意な向上を示す。
10. セルライトを有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域においてSSRS評定により測定される場合に2レベル複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
11. セルライトを有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域においてSSRS評定により測定される場合に1レベルの複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
12. セルライトを有する患者の集団において、1/3または1/2または2/3または3/4を超える患者は、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域において少なくとも1レベルのSSRS評定応答を有し、ここでSSRS評定結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色から独立する。
13. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後、約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
上に詳述される治療方法は、SSCTにより測定される場合に向上を生じる。71日目のSSCT評価に対して「満足」または「非常に満足」の応答を有する被験体は、効力を示す応答体とみなされる。任意の訪問での個々の患者についての向上は、ベースラインまたは任意の以前のスコアもしくは評定からの少なくとも1レベルまたは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、ベースラインまたは任意の以前の平均スコアもしくは評定からの平均スコアまたは評定の約0.1の向上である。さらに、SSCTについて、向上は、プラシーボと比較して少なくとも0.1である。ある態様において、治療方法は、SSCT評定により測定される場合に以下の効力終点の1つ以上を生じる:
1. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療訪問の間の少なくとも1つの治療領域へのコラゲナーゼの注射は、以下の効力終点:
・「満足」のSSCT評定
・「非常に満足」のSSCT評定
の1つ以上を満たすかかる患者の統計的に有意な数を生じた。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目での標的大腿のSSCT評定の増加(例えば1〜2等)。
3. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域におけるSSCT評定の増加は、プラシーボと比較して統計的に有意であり、ここで向上は、標的大腿のSSCT評定における22、43、71、90、180、365または730日目のものである。
4. 治療は、開始用量後少なくとも71日の間に患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年の間にかかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、向上を示し、経時的にさらなる向上の増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月でさらなる向上の増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
5. 180日目に、SSCT評定において見られる向上は、右および左の大腿で一致する。
6. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早いSSCT評定向上までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
7. セルライトを有する患者の集団において、平均被験体SSCT評定は第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後の治療の後に継続的で有意な向上を示す。
8. セルライトを有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域において向上したSSCT評定を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
9. セルライトを有する患者の集団において、1/3または1/2または2/3または3/4を超える患者は、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域において向上したSSCT評定を有し、ここでSSCT評定結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色から独立する。
10. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後、約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
任意の訪問での個々の患者についての向上は、ベースラインまたは任意の以前のスコアもしくは評定からの少なくとも1レベルまたは1評定の向上である。任意の訪問での患者の群についての向上は、ベースラインまたは任意の以前の平均スコアもしくは評定からの平均スコアまたは評定の約0.1の向上である。応答体は、ベースラインからの最大合計スコアまたは評定の少なくとも20%向上を示す任意の患者である。ある態様において、上に詳述される治療方法は、CR-TCESおよび/またはPR-TCESにより測定される場合に以下の効力終点の1つ以上を生じる:
1. ベースラインに対するCR-TCESおよび/またはPR-TCES評定における少なくとも0.1の向上。
2. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合の、CR-TCESにおける重症度のベースライン(治療前「1日目」)からの、少なくとも2レベルの重症度の向上。
3. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合の、PR-TCESにおける重症度のベースライン(1日目)からの、少なくとも2レベルの重症度の向上。
4. CR-TCESにおける少なくとも2レベルの重症度のベースラインからの向上およびPR-TCESにおける少なくとも2レベルの重症度のベースラインからの向上を有する被験体として定義される、22、43、71、90、180、365または730日目での2レベル複合応答により示される向上。
5. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価された場合の、CR-TCESにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの、少なくとも1レベルの重症度の向上。
6. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価された場合の、PR-TCESにおける重症度のベースライン(1日目)からの、少なくとも1レベルの重症度の向上。
7. CR-TCESにおける少なくとも1レベルの重症度のベースラインからの向上およびPR-TCESにおける少なくとも1レベルの重症度のベースラインからの向上を有する被験体として定義される、22、43、71、90、180、365または730日目での、1レベル複合応答により示される向上。
8. 全員が中程度または重度のCR-TCES評定を有した患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における向上は、プラシーボと比較して統計的に有意であり、ここで該向上は上述の1〜7の1つ以上である。
9. 治療は、開始用量後少なくとも71日の間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後、少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年の間にかかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的にさらなる向上の増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月で、さらなる向上の増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
10. 180日目に、CR-TCESおよび/またはPR-TCES評定において見られるベースラインからの向上は、右および左の大腿で一致した。
11. 全員が中程度または重度のCR-TCES評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い2レベルのCR-TCESおよび/またはPR-TCES向上までのメジアン時間は、約50日または60日または70日または80日または90日である。
12. 全員が中程度または重度のCR-TCES評定を有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルのCR-TCESおよび/またはPR-TCES向上までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
13. 全員が中程度または重度のCR-TCES評定を有する患者の集団において、平均被験体CR-TCESおよび/またはPR-TCESスコアは、第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後の治療の後に継続的で有意な向上を示す。
14. 全員が中程度または重度のCR-TCES評定を有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域においてCR-TCESおよび/またはPR-TCESにより測定される場合に2レベルの複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
15. 全員が中程度または重度のCR-TCES評定を有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域においてCR-TCESおよび/またはPR-TCESにより測定される場合に1レベルの複合応答を有する被験体のパーセンテージは、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%または50%より高い。
16. 全員が中程度または重度のCR-TCES評定を有する患者の集団において、1/3または1/2または2/3または3/4を超える患者は、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域において少なくとも1レベルのCR-TCESおよび/または少なくとも1レベルのPR-TCES応答を有し、ここでCR-TCES結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色から独立する。
17. セルライトの重症度の低減は、第1の治療訪問後約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
上に詳述される治療方法は、ボディ-Qにより測定される場合に向上された応答を生じる。セルライトについて、過去1週間の時間枠にわたる「全くない」から「極度に苦しむ」までの範囲の患者応答選択肢を有し、フレッシュ-キンケイドグレード読み取りレベルを推定する16の尺度を持つ項目がある。スコアは、16(極度に苦しむ)から64(全くない)までの範囲である。ボディ-Q合計スコアについて、応答体は、評価の時点でベースラインからの少なくとも16のボディ-Q合計スコアの増加を有する被験体である。個々のボディ-Q影響スコアについて、応答は、それぞれの時点での少なくとも1スコア間隔のベースラインからの向上である。代替的な態様において、尺度を持つ項目は、16より多いかまたは少なくあり得、応答体は、ベースラインからの最大合計スコアの少なくとも25%の向上を示す任意の患者である。
1. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療訪問の間の少なくとも1つの治療領域へのコラゲナーゼの注射は、以下の効力終点:
・ボディ-Qは:
○1つ以上の評価の時点でのベースラインからの少なくとも16のボディ-Q合計スコアの増加;
○個々のボディ-Q影響スコアについて、それぞれの時点での少なくとも1スコア間隔のベースラインからの向上;および
○ベースラインからの最大合計スコアの少なくとも25%向上
からなる群より選択される少なくとも1つの変域を通過する向上を示す。
・1つ以上の評価の時点でのベースラインからの少なくとも16のボディ-Q合計スコアの向上
・1つ以上の評価の時点での少なくとも1スコア間隔のベースラインからの向上を示すボディ-Q影響スコア
・90日目および/または180日目でのセルライトのボディ-Q見積り(appraisal)におけるベースラインからの平均変化
の1つ以上を満たすかかる患者の統計的に有意な数を生じる
2. 22、43、71、90、180、365または730日目に、標的大腿についてのボディ-Qにおけるベースライン(治療前「1日目」)からの少なくとも16ポイントの増加の重症度の向上。
3. セルライトを有する患者の集団における、標的大腿についてのボディ-Qにおける少なくとも16ポイントの増加により示される、22、43、71、90、180、365または730日目でのベースライン(治療前、1日目)からのプラシーボに対する重症度の統計的に有意な向上。
4. 治療は、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じた。ある場合において、少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者は、開始用量後少なくとも6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または2年または3年または4年または5年の間、かかるレベルを維持した。他の場合において、治療は、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的にさらなる向上の増加を示す少なくとも5%の患者を生じた。いくつかの治療は、開始用量後1ヶ月または3ヶ月または6ヶ月または9ヶ月または12ヶ月または18ヶ月または24ヶ月でさらなる向上の増加に伴う向上を示す少なくとも10%または20%または30%または40%または50%の患者を生じた。
5. 第1の注射後180日目に、ボディ-Q評定において見られるベースラインからの向上は、右および肥大の大腿で一致した。
6. セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域についての1つ以上の評価時点でのベースラインからの少なくとも16のボディ-Q合計スコア増加までのメジアン時間は、約15日または20日または30日または40日または50日または60日または70日または80日または90日である。
7. セルライトを有する患者の集団において、平均被験体ボディ-Qスコアは、第1の治療の21日後にプラシーボから離れ、その後の治療の後に継続的で有意な向上を示す。
8. セルライトを有する患者の集団において、1/3を超えるまたは1/2を超えるまたは2/3を超えるまたは3/4を超える患者は、治療後71日目に少なくとも1つの治療領域において1つ以上の評価の時点で、ベースラインから少なくとも16のボディ-Q合計スコア増加を有し、ここでボディ-Q結果は、年齢、BMIまたは皮膚の色から独立する。
9. セルライトの重症度における低減は、第1の治療訪問後、約7または14または21または30または35または40または45または50日以内に迅速に起こる。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
・1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
・1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax (分-1)
・約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM (GPAアッセイ)のKM
・約〜約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat (秒-1)
・約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
・約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1
・約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量。
・逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定した場合に少なくとも80%の面積純度
・約500〜約30,000 SRC単位/mgの効力(すなわち比活性)
・約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力
・約100,000〜約400,000 GPA単位/mgの効力
・約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力
・約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力
1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物
1cfu/mL以下のバイオバーデン
の1つ以上を有する。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
・I型
○アッセイ:SRCマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.08〜7.70
○KM:約4.1〜410ナノモーラー
○Kcat、秒-1:約1.1〜107
○1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
・II型
○アッセイ:GPAマイクロプレート
○Vmax、分-1:約0.3〜30.5
○KM、mM:約0.03〜3.1
○Kcat、秒-1:約93〜9,179
○1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
○Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有する。
他の比(例えば0.1〜2:1または0.25〜2:1または0.5〜2:1または0.75〜2:1または1:0.1〜2または1:0.25〜2または1:0.5〜2または1:0.75〜2または1:0または0:1)を使用してもよい。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX-IおよびAUX-IIであり得る。
以下の実施例に記載されるように、治療効果の評価において、特にくぼみ分析について3D写真または他の像を使用し得る。3D像を使用するくぼみ分析(上に定義される)は、くぼみの体積、長さ、幅および面積の計算を含み得る。計算は、Eckhouse et al. WO 2018/116304およびWO 2018/116305、Cherry画像化に記載されるものならびにCanfield Scientific, Incから利用可能なものなどの種々の公知の方法により実施し得る。体積、長さ、幅および面積のかかる測定は、デジタル3Dグレースケール画像(XおよびY軸の回転特性を有する)およびデジタル3Dテクスチャードアンドリット画像(XおよびYの回転特性を有する)を、かかる画像を分析するコンピュータープログラムと一緒に使用して計算し得る。一態様において、臀部治療領域について、治療の前および後にそれぞれの患者について左の治療された臀部および/または右の治療された臀部の画像を撮り得る。別の態様において、大腿治療領域について、治療の前および後に、0°、45°および90°で大腿治療領域のそれぞれの画像を撮り得る。
本明細書に記載されるコラゲナーゼ治療は、本明細書に開示される尺度または評価方法のいずれかにより測定される場合に有効性において持続性を有する。かかる持続性は、約3ヶ月〜5年またはそれ以上の範囲であり得る。単一注射または連続注射は、長期間、例えば約6ヶ月、1年、2年、3年、4年もしくは5年もしくはそれ以上の間セルライトにおいて向上を維持し得るかまたはセルライトの外観を向上し続け得るかまたはセルライトの外観の重症度を低減し得る。
a. CR-PCSS評定の低下は、セルライト治療尺度による被験体の満足に対するスコアを伴って180日目まで維持され、治療領域当たり12の皮下注射(x2治療領域)として両側臀部または両側大腿のいずれかに投与されるCCH 0.84mgの3治療セッションの有効性を支持する。
b. 180日目に、ベースライン(スクリーニング訪問)からのCR-PCSS評定の低下は、右側および左側で一致する。
c. 少なくとも1つの治療領域におけるCR-PCSS評定の2レベル向上は、180日目に観察される。応答は、臀部領域および大腿領域ならびに左側および右側で同様である。
d. 少なくとも1領域におけるCR-PCSS評定の1レベル向上は、180日目に観察される。応答は、臀部領域および大腿領域ならびに左側および右側で同様である。
e. 少なくとも1領域における最も早い2レベルCR-PCSS応答までのメジアン時間は、83日で観察される。
f. 最も早い1レベルCR-PCSS応答までのメジアン時間は41日である。
g. 180日目に、半分より多くの患者は、治療に満足したかまたは非常に満足したかのいずれかであった。
h. 重度(11〜15)としてのベースライン分類と比較して、Hexsel CSSに対する患者のスコアが最初に中程度(6〜10)または軽度(1〜5)と分類され、中程度(6〜10)または軽度(1〜5)と分類され続ける期間。
i. 測定された向上の日にちから、セルライト重症度、向上および/または患者満足を評価するために臨床医および/または患者により使用されるCR-PCSS、PR-PCSS、Hexsel CSS、Hexsel落ち込み深さスコア、リカート尺度、くぼみ分析、I-GAIS、S-GAIS、PR-CIS、省略PR-CIS、SSRS、SSCT、CR-TCES、PR-TCES、ボディ-Q、写真もしくは他の像による評価または任意の他の検証された写真数値もしくは他の尺度の1つ以上により測定された場合に向上を示した後に患者がベースラインに戻るかまたは悪化する日にちまでに測定される期間。
j. 測定された向上の日にちから、セルライト重症度、向上および/または患者満足を評価するために臨床医および/または患者により使用されるCR-PCSS、PR-PCSS、Hexsel CSS、Hexsel落ち込み深さスコア、リカート尺度、くぼみ分析、I-GAIS、S-GAIS、PR-CIS、省略PR-CIS、SSRS、SSCT、CR-TCES、PR-TCES、ボディ-Q、写真もしくは他の像による評価または任意の他の検証された写真数値もしくは他の尺度の1つ以上により測定された場合に被験体が治療に対する観察可能な応答の欠損を有する日にちまでに測定される期間。
k. 治療に対する応答の参照時点から、被験体が応答の変化(治療に対する開始応答を超える向上を含む)を有する時点までに測定される期間。応答および/または向上の変化は、セルライト重症度、向上および/または患者満足を評価するために臨床医および/または患者により使用されるCR-PCSS、PR-PCSS、Hexsel CSS、Hexsel落ち込み深さスコア、リカート尺度、くぼみ分析、I-GAIS、S-GAIS、PR-CIS、省略PR-CIS、SSRS、SSCT、CR-TCES、PR-TCES、ボディ-Q、写真もしくは他の像による評価または任意の他の検証された写真数値もしくは他の尺度の1つ以上により測定され得る。いくつかの態様において、参照時点はベースライン(投与前、1日目)または治療後71日目である。
l. 被験体がCR-PCSSおよびPR-PCSSに従い2レベル複合応答体になった訪問日から、評価評定がベースライン評定に戻り、持続される2つの連続の訪問の最初の日までに測定される期間。
m. 被験体がCR-PCSSおよびPR-PCSSに従い1レベル複合応答体になった訪問日から、評価評定がベースライン評定に戻り、持続される2つの連続する訪問の最初の日までに測定される期間。
そのいくつかが以下の実施例において詳述される今日までになされた試験は、本明細書に記載される治療の安全性を確立する。例えば、これらの試験は、4治療領域における3.36mg CCHの同時の皮下投与に続くコラゲナーゼの全身暴露がないことを確認する。実際に、4治療領域における同時投与により、コラゲナーゼの安全性プロフィールにおいて新規の懸念は観察されなかった。一般的に報告される事象は、現在公知であるコラゲナーゼの有害事象プロフィールと一致した。
以下の実施例は、本開示の特定の態様を示すように含まれる。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、開示される特定の態様において変更がなされ得、さらに同様または類似の結果が得られることを理解する。したがって、記載される全ての事項は例示として解釈され、限定の意味にはない。例えば、CCHを使用する試験において、CCHと同等の活性および応答を生じるのに十分な量(治療有効量)で他のコラゲナーゼが使用され得る。以下に記載される臨床試験結果において、報告されるそれぞれの数値は、厳密な限定を意図しないことが理解される。本開示の範囲は、本明細書に記載される発明の事実および原理と一致するそれぞれの値の周辺の範囲を含む。したがって、それぞれの値は、約1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%または100%だけ上下に変動し得る。いくつかの例において、ならびに特定の値の文脈および状況と一致して、該数値は、約125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%または300%だけ上下に変動し得る。例えば、一態様において、治療後71日目の大腿におけるくぼみ体積のベースラインからの平均パーセント減少は10%である。しかしながら、かかる減少は30%であり得る。
オープンラベル複数施設試験を行って、軽度、中程度または重度のEFP(臨床医が報告した写真数値セルライト重症度尺度(CR-PCSS)を使用して調査者が評価した)を有する成人女性の治療のためにCCHを皮下投与した場合に、5つの異なる注射技術の安全性および有効性を評価した。
1. 画像(1つまたは複数)および画像の位置をパワーポイントにエクスポートした。
2. 現場に接触して、現場の調査者に、パワーポイント内の画像上で主要なくぼみにXの印をつけるように頼んだ。
3. 通信をセーブして、画像分析(IA)チームで共有した。
くぼみ分析は、1(印づけ前)、22、43および71日目に行った。
・1日目印づけ前画像は、VAMグリッドへの適切な登録のためにQC IATにより検討された。QC IATはまた、1日目(印づけ後)画像を参照して、主要なくぼみが、1日目(印づけ前)画像上で適切に識別され、トレースされることを確実にした。QC IATは、くぼみが凹面になる縁のすぐ外側にあるAOIの周を確認するために主要なくぼみのAOIを検討した。次いで、QC IATは、正常組織と内出血組織のAOIの両方の存在をチェックし、正常組織AOIが例示的なカラー試料であることを確実にした。QC IATは、必要な場合にのみ、なされた任意の変化に注意して、それぞれのAOIの周を調整した。AOIまたはランドマークの配置に対する変化がなされた場合、IATは、更新されたAOIを、適切なフォローアップ画像に移した。
・1日目印づけ後画像は、部位くぼみ印づけの外側の境界に沿って適切なトレースがなされることを確実にするために、QC IATにより検討され、不適切な選択がなされた場合にAOIを調整した。不適切な選択は、部位印づけの内側の境界上のトレースまたは主要なくぼみとして特定されないくぼみのトレースを含んだ。
・22日目、43日目および71日目の画像は、許容され得る追跡の質について、QC IATにより検討された。QC IATは、主要なくぼみのAOI内のQC画像上に穴がないことを確実にするために、QCフォローアップ画像を参照した。主要なくぼみのAOI内に穴がふくまれた場合、QC IATは、訪問について「不十分な追跡の質」の注意を追加した。主要なくぼみのAOIの大部分が表面追跡脱落からなる場合、QC IATは失敗に画像を推薦した。
・4日目、8日目および15日目のフォローアップ画像は、最初に適切な内出血輪郭描写のために検討された。元の周が内出血変色より多くを一貫して含んだ場合または周が内出血していない皮膚を含んだ場合、QC IATは、4日目の画像上で内出血AOIの周を調整した。QC IATは、内出血組織AOIについての任意の調整に注意し、また被験体を、内出血した皮膚と正常な皮膚の色の間に識別可能な境界がない内出血分析の失敗の場合に推薦した。次いで、QC IATは、正常組織AOIの存在についてチェックし、AOIの適切な命名を確実にし、正常組織AOIが一貫して例示的なカラー試料であることを確実にした。ベース皮膚AOI内の任意の異常な回避し得ない着色が、QC IATにより注意された。4日目の画像上の内出血組織または正常組織のAOIのいずれかについて任意の調整がなされた場合、IATは、調整されたトレースを、1日目印づけ前、8日目および15日目の画像に移した。最終的に、IATは、それぞれの画像上の白色参照標識がトレースされ、適切に「白色」と命名されることを確実にした。内出血組織内に参照標識が配置される場合、QC IATは、内出血組織AOIから標識が差し引かれることを確実にした。白色参照標識を有さない画像は、内出血分析について役に立たなかった。
第2aおよび2b相EFP試験からの効力および安全性の所見に基づいて、治療領域当たりCCH 0.84mg用量(2つの治療領域;臀部または大腿において1.68mg)により大腿におけるさらなる調査が正当化された。他の目的の中で、この試験において、治療後のくぼみ面積の変化を視覚化して、くぼみを生じる組織およびまたは中隔におけるCCHの効果を評価するための試みがなされる。これらのデータは、CCHの作用機構を理解することを試みるために、組織病理学およびMRIデータにより評価され、それらと比較される。したがって、この試験は、成人女性の大腿におけるEFPの治療におけるCCHの効力および安全性の第2a相オープンラベル試験である。
・スクリーニング段階:28日まで(-28〜-1日目)(持続時間は生体組織検査または投薬の前のMRI画像化の予定決定および実行を含む)
・滴定段階:N/A
・治療段階:71日
・長期間追跡:長期間効力評価について109日(72〜180日目)〜180日目(試験の終了)
のとおりである。
1. 効力:
a. それぞれの治療された領域の調査者全体的美的向上尺度(I-GAIS):(43、106、150および180日目に測定して)3(非常に大きく向上した)から-3(非常に大きく悪化)までの範囲の7レベル尺度
b. それぞれの治療された領域の被験体全体的美的向上尺度(S-GAIS):(43、106 150および180日目に測定して)3(非常に大きく向上した)から-3(非常に大きく悪化)までの範囲の7レベル尺度
c. ボディ-Qは106、150および180日目に評価される
d. Hexsel CSSは、スクリーニング時ならびに106、150および180日目に評価される
e. 組織病理学(皮膚生体組織検査による)は、ベースライン、71および180日目ならびにベースライン、150および180日目に評価される。
f. 磁気共鳴画像法(MRI)は、組織病理学についてと同じ被験体で、ベースライン、71および180日目に評価される。
2. 安全性は:
a. 有害事象(AE)(特別な関心(AESI)のものを含む;これは、内出血、斑状出血、血腫および薬物投与の部位から離れて生じる挫傷、またはアナフィラキシーを含む任意の過敏性反応などの有害事象である)
b. 生命徴候
c. 臨床的実験室試験
d. 免疫原性評価(すなわち結合および中和の抗AUX-Iおよび抗AUX-II抗体レベルの決定により評価される)
の記録により試験を通して評価される。
・22、43、64、85、106、150および180日目の治療された大腿のI-GAISのそれぞれのレベルでの被験体の割合
・22、43、64、85、106、150および180日目の治療された臀部のI-GAISのそれぞれのレベルでの被験体の割合
・22、43、64、85、106、150および180日目の治療された大腿のS-GAISのそれぞれのレベルでの被験体の割合
・22、43、64、85、106、150および180日目の治療された臀部のS-GAISのそれぞれのレベルでの被験体の割合
・22、43、64、85、106、150および180日目の少なくとも1つの大腿の1レベルI-GAIS応答体(I-GAIS評価において+1以上を有する被験体として定義される)の割合
・22、43、64、85、106、150および180日目の少なくとも1つの臀部の1レベルI-GAIS応答体(I-GAIS評価において+1以上を有する被験体として定義される)の割合
・22、43、64、85、106、150および180日目の少なくとも1つの大腿の2レベルS-GAIS応答体(S-GAIS評価において+2以上を有する被験体として定義される)の割合
・22、43、64、85、106、150および180日目の少なくとも1つの臀部の2レベルS-GAIS応答体(S-GAIS評価において+2以上を有する被験体として定義される)の割合
・22、43、64、85、106、150および180日目の少なくとも1つの大腿の1レベルS-GAIS応答体(S-GAIS評価において+1以上を有する被験体として定義される)の割合
・22、43、64、85、106、150および180日目の少なくとも1つの臀部の1レベルS-GAIS応答体(S-GAIS評価において+1以上を有する被験体として定義される)の割合
・大腿について22、43、64、85、106、150および180日目までのHexsel CSSの合計スコアにおけるベースラインからの変化
・大腿についての150および180日目のセルライトのボディ-Q見積
である。
これは、軽度および中程度のEFPを有する成人女性におけるCCHの安全性および効力を評価するための複数施設オープンラベル複数用量第3B相試験である。約150名の被験体を2つのコホートに登録するために約200名の被験体をスクリーニングする。全ての被験体は、所定の包含および除外基準、例えば大腿および臀部にEFPおよび18〜30kg/m2のボディマス指数を有する18〜60歳の非妊娠女性に基づいてスクリーニングされる。全ての被験体は、医学的経歴、身体検査およびスクリーニング時の実験室プロフィールに基づいて良好な健康状態であると判断される。
・90日目のI-GAISにおけるベースラインからの変化
・90日目に7ポイントI-GAIS尺度における向上(+1)またはそれ以上のスコアを有する被験体の割合による臀部または大腿における効力
・180日目に7ポイントI-GAIS尺度における向上(+1)またはそれ以上のスコアを有する被験体の割合による臀部または大腿における効力
・90日目のCR-PCSSにおけるベースラインからの平均変化による臀部における効力
・180日目のCR-PCSSにおけるベースラインからの平均変化による臀部における効力
・90日目のセルライトのボディQ見積りにおけるベースラインからの平均変化による臀部または大腿における患者満足
・180日目のセルライトのボディQ見積りにおけるベースラインからの平均変化による臀部または大腿における患者満足
・治療領域において完全/成功裡に治療されたくぼみの割合。
・治療訪問当たりのベースラインからのくぼみの合計数の平均減少
・治療訪問当たりのセルライトくぼみ当たりの平均用量
・CCH投与による調査者満足を評価するために
○投与の簡易さ(5pt.リカート尺度)
○セルライトの治療としての実施への組み込みの見込み(5pt.リカート尺度)
○全体的に、セルライトを有する患者の治療におけるCCHの使用の容易さの評定?(5pt.リカート尺度)
○同日手順としての他の美的治療(セルライト以外)への追加の容易さ(5pt.リカート尺度)
・皮膚の超音波画像化において観察される真皮(またはその個々の層)のエコー輝度(echogenicity)による治療領域の真皮の厚さを測定するために
○90日目までのCCHによるセルライトの治療後の真皮の厚さのベースラインからの平均変化
○180日目までのCCHによるセルライトの治療後の真皮の厚さのベースラインからの平均変化
・(Cherry画像化および3D写真撮影を使用して)治療領域の3D画像を評価するために
○90日目までのCCHによるセルライトの治療後のベースラインからの平均体積測定向上
○180日目までのCCHによるセルライトの治療後のベースラインからの平均体積測定向上
○90日目のCCHによる治療の前および後の皮膚粗さスコアの平均変化
○180日目のCCHによる治療の前および後の皮膚粗さスコアの平均変化
をまとめる。
以前の試験は、21日毎に単一の治療領域(例えば1つの臀部または1つの大腿)において0.84mgの用量で投与されたCCHを用いて3回皮下治療された被験体におけるセルライトの重症度の向上を示した。有害事象の大部分は注射の部位で起こり、性質において軽度〜中度であり、再発することなく数週間以内に解決された。
・調査者によりライブで評価された場合のCR-TCESにおける重症度の少なくとも2レベルのベースライン(1日目訪問)からの重症度の向上、および
・同じ大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価される場合のPR-TCESにおける重症度の少なくとも2レベルのベースラインからの重症度の向上
を有する少なくとも1つの大腿を有する被験体として定義される71日目の2レベル複合応答体の割合である。
・○標的大腿において調査者によりライブで評価される場合のCR-TCESにおける重症度の少なくとも2レベルのベースライン(1日目訪問)からの重症度の向上、および
○同じ大腿のデジタル画像を見ながら被験体により評価される場合のPR-TCESにおける重症度の少なくとも2レベルのベースラインからの重症度の向上
を有する被験体として定義される71日目の標的大腿における2レベル複合応答体の割合。
・1日目と比較して71日目に少なくとも1つの大腿のPR-TCES重症度評定における≧1レベルの向上を有する被験体として定義される1レベルPR-TCES応答体の割合
・1日目と比較して71日目に少なくとも1つの大腿のPR-TCES重症度評定における≧2レベルの向上を有する被験体として定義される2レベルPR-TCES応答体の割合
・71日目に少なくとも1つの大腿のS-GAIS評価における≧1レベルの向上(向上した、大きく向上したまたは非常に大きく向上した)または≧2レベルの向上(大きく向上したまたは非常に大きく向上した)を有する被験体として定義される1レベルまたは2レベルのS-GAIS応答体の割合
・71日目のPR-TCES、CR-TCES、SSRS、PR-CIS合計スコア、ボディQ-セルライト、くぼみのHexsel数、Hexsel落ち込み深さスコア、Hexsel合計スコアのベースラインからの変化
である。
以前の試験は、21日毎に単一の治療領域(例えば1つの臀部または1つの大腿)において0.84mgの用量で投与されたCCHを用いて3回皮下治療された被験体におけるセルライトの重症度の向上を示した。有害事象の大部分は、注射の部位で起こり、性質において軽度〜中程度であり、再発することなく数週間以内に消散した。1および2治療領域における皮下CCH治療を含む他の第1相薬物動態学的(PK)試験は、治療後に全身性の暴露がないことを示した。実際に、医師は、単一セッションの間に患者において2よりも多くの治療領域にCCHを投与することを希望し得る。そのため、かかるシナリオにおけるCCHの安全性プロフィールは重要である。
Claims (52)
- ヒト患者の大腿においてセルライトの重症度を低減する方法であって:
a. 以下の特性:
i. 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分-1);
ii. 約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM;
iii. 約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒-1);
iv. 約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒;
v. 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1;
vi. 約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量;
vii. 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定される場合に少なくとも80%の面積純度;
viii. 約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力;
ix. 約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力;
x. 約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力;
xi. 1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物;
xii. 1cfu/mL以下のバイオバーデン
の少なくとも2つを有するコラゲナーゼ組成物を提供する工程;ならびに
b. 治療I〜Vからなる群より選択される治療計画に従って、コラゲナーゼ組成物の治療有効量を注射する工程、ここでセルライトの外観の向上は、セルライト重症度、向上および/または患者満足を評価するために臨床医および/または患者により使用される、Hexselセルライト重症度尺度(Hexsel CSS)、Hexsel落ち込み深さスコア、リカート尺度、くぼみ分析、臨床医が報告した写真数値セルライト重症度尺度(CR-PCSS)、患者が報告した写真数値セルライト重症度尺度(PR-PCSS)、調査者全体的美的向上尺度(I-GAIS)、被験体全体的美的向上尺度(S-GAIS)、患者が報告したセルライト影響尺度(PR-CIS)、省略PR-CIS、被験体自己評定尺度(SSRS)、セルライト治療による被験体満足(SSCT)、セルライト重症度の臨床医評価(写真撮影または他の像)、ボディ-Q(Body-Q)、大腿セルライト効力尺度(PR-TCES; CR-TCES)および検証された写真数値または他の尺度からなる群より選択される尺度または他の測定ツールにより確立される、
を含む、方法。 - 治療IVに従ってコラゲナーゼが注射される、請求項1記載の方法。
- コラゲナーゼ組成物が、以下の特性:
a. AUX-I(SRCアッセイ):
i. Vmax、分-1:約0.08〜7.70
ii. KM:約4.1〜410ナノモーラー
iii. Kcat、秒-1:約1.1〜107
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
v. Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
b. AUX-II(GPAアッセイ)
i. Vmax、分-1:約0.3〜30.5
ii. KM、mM:約0.03〜3.1
iii. Kcat、秒-1:約93〜9,179
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
v. Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有するAUX-IおよびAUX-IIを含む、請求項1記載の方法。 - コラゲナーゼ組成物が、以下の特性:
a. AUX-I(SRCアッセイ):
i. Vmax、分-1:約3.8
ii. KM、mM:約2.07x10-4
iii. Kcat、秒-1:約53
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約18,799
v. kcat/KM、mM-1秒-1:約256,977
b. AUX II(GPAアッセイ):
i. Vmax、分-1:約15.4
ii. KM、mM:約1.6
iii. Kcat、秒-1:約4,636
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約216
v. kcat/KM、mM-1秒-1:約2,997
を有するAUX-IおよびAUX-IIを含む、請求項1記載の方法。 - 組成物が特性の少なくとも3つを含む、請求項1記載の方法。
- 組成物が特性の少なくとも4つを含む、請求項1記載の方法。
- 組成物が特性の少なくとも5つを含む、請求項1記載の方法。
- 組成物が約1mg〜20mgの1つ以上のコラゲナーゼを含む、請求項1記載の方法。
- 組成物がCCHを含む、請求項1記載の方法。
- 組成物が約10,000 ABC単位/0.58mgの効力を有し、治療有効量が約1mg〜20mgである、請求項1記載の方法。
- 組成物が約15,000 ABC単位/mg〜20,000 ABC単位/mgの効力を有し、治療有効量が約1mg〜20mgである、請求項1記載の方法。
- 治療有効量が約1mg〜10mgであり、組成物が約20,000〜約30,000 f-SRC単位/mgまたは約175,000〜約300,000 f-GPA単位/mgの効力を有する、請求項1記載の方法。
- 治療が患者の集団に投与される場合、治療が、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じる、請求項1記載の方法。
- 少なくとも10%の患者が、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する、請求項13記載の方法。
- 少なくとも20%の患者が、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する、請求項13記載の方法。
- 治療が患者の集団に投与される場合、治療が、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的に向上のさらなる増加を示す少なくとも5%の患者を生じる、請求項1記載の方法。
- CR-PCSSおよび/またはPR-PCSSにより測定される場合に、治療が、以下の効力終点:
a. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価される場合に、CR-PCSSにおける重症度の、ベースライン(治療前「1日目」)からの少なくとも2レベルの重症度の向上;
b. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら患者により評価される場合に、PR-PCSSにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも2レベルの重症度の向上;
c. CR-PCSSにおける重症度の少なくとも2レベルのベースラインからの向上およびPR-PCSSにおける重症度の少なくとも2レベルのベースラインからの向上を有する患者として定義される22、43、71、90、180または365日目での2レベルの複合応答により示される向上;
d. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価される場合に、CR-PCSSにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも1レベルの重症度の向上;
e. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら患者により評価される場合に、PR-PCSSにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも1レベルの重症度の向上;
f. CR-PCSSにおける重症度の少なくとも1レベルのベースラインからの向上およびPR-PCSSにおける重症度の少なくとも1レベルのベースラインからの向上を有する患者として定義される22、43、71、90、180または365日目での1レベルの複合応答により示される向上;ならびに
g. 全員が中程度または重度のCR-PCSS評定を有した患者の集団において、少なくとも1治療領域における向上はプラシーボと比較して統計的に有意であった、ここで該向上は上記a.〜f.の1つ以上である、
の少なくとも1つを生じる、請求項1記載の方法。 - Hexsel落ち込み深さスコアにより測定される場合に、治療が、以下の効力終点:
a. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価される場合に、Hexsel落ち込み深さスコアにおける重症度の、ベースライン(治療前「1日目」)からの少なくとも2レベルの重症度の向上;
b. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら患者により評価される場合に、Hexsel落ち込み深さスコアにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも2レベルの重症度の向上;
c. 臨床医評価によるHexsel落ち込み深さスコアにおける少なくとも2レベルの重症度のベースラインからの向上および患者評価によるHexsel落ち込み深さスコアにおける少なくとも2レベルの重症度のベースラインからの向上を有する患者として定義される22、43、71、90、180または365日目での2レベルの複合応答により示される向上;
d. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価される場合に、Hexsel落ち込み深さスコアにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも1レベルの重症度の向上;
e. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら患者により評価される場合に、Hexsel落ち込み深さスコアにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも1レベルの重症度の向上;
f. 臨床医評価によるHexsel落ち込み深さスコアにおける少なくとも1レベルの重症度のベースラインからの向上および患者評価によるHexsel 落ち込み深さスコアにおける少なくとも1レベルの重症度のベースラインからの向上を有する患者として定義される22、43、71、90、180または365日目での1レベルの複合応答により示される向上;ならびに
g. 全員が中程度または深い落ち込みのHexsel CSS評定を有した患者の集団において、少なくとも1治療領域における向上はプラシーボと比較して統計的に有意であった、ここで該向上は上記a.〜f.の1つ以上である、
の少なくとも1つを生じる、請求項1記載の方法。 - くぼみ分析により測定される場合に、治療が、以下の効力終点:
a. 少なくとも5%だけの深さの減少;
b. 少なくとも5%だけの幅の減少;
c. 少なくとも5%だけの長さの減少;
d. 少なくとも5%だけの全体積の減少;および
e. 少なくとも5%だけの表面積の減少
の少なくとも1つを生じる、請求項1記載の方法。 - ヒト患者の大腿においてセルライトの重症度を低減する方法であって:
a. 以下の特性:
i. 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分-1);
ii. 約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM;
iii. 約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒-1);
iv. 約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒;
v. 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1;
vi. 約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量;
vii. 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定される場合に、少なくとも80%の面積純度;
viii. 約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力;
ix. 約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力;
x. 約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力;
xi. 1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物;
xii. 1cfu/mL以下のバイオバーデン
の少なくとも2つを有するコラゲナーゼ組成物を提供する工程;ならびに
b. 治療I〜Vからなる群より選択される治療計画に従って、コラゲナーゼ組成物の治療有効量を注射する工程、ここで内出血(bruising)は、治療訪問後約3日〜20日の間に色強度を有意に減少または消散する、
を含む、方法。 - コラゲナーゼが治療IVに従って注射される、請求項20記載の方法。
- コラゲナーゼ組成物が、以下の特性:
a. AUX-I(SRCアッセイ):
i. Vmax、分-1:約0.08〜7.70
ii. KM:約4.1〜410ナノモーラー
iii. Kcat、秒-1:約1.1〜107
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
v. Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
b. AUX-II(GPAアッセイ)
i. Vmax、分-1:約0.3〜30.5
ii. KM、mM:約0.03〜3.1
iii. Kcat、秒-1:約93〜9,179
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
v. Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有するAUX-IおよびAUX-IIを含む、請求項20記載の方法。 - コラゲナーゼ組成物が、以下の特性:
a. AUX-I(SRCアッセイ):
i. Vmax、分-1:約3.8
ii. KM、mM:約2.07x10-4
iii. Kcat、秒-1:約53
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約18,799
v. kcat/KM、mM-1秒-1:約256,977
b. AUX II(GPAアッセイ):
i. Vmax、分-1:約15.4
ii. KM、mM:約1.6
iii. Kcat、秒-1:約4,636
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約216
v. kcat/KM、mM-1秒-1:約2,997
を有するAUX-IおよびAUX-IIを含む、請求項20記載の方法。 - 組成物が特性の少なくとも3つを含む、請求項20記載の方法。
- 組成物が特性の少なくとも4つを含む、請求項20記載の方法。
- 組成物が特性の少なくとも5つを含む、請求項20記載の方法。
- 組成物が約1mg〜20mgの1つ以上のコラゲナーゼを含む、請求項20記載の方法。
- 組成物がCCHを含む、請求項20記載の方法。
- 組成物が約10,000 ABC単位/0.58mgの効力を有し、治療有効量が約1mg〜20mgである、請求項20記載の方法。
- 組成物が約15,000 ABC単位/mg〜20,000 ABC単位/mgの効力を有し、治療有効量が約1mg〜20mgである、請求項20記載の方法。
- 治療有効量が約1mg〜10mgであり、組成物が約20,000〜約30,000 f-SRC単位/mgまたは約175,000〜約300,000 f-GPA単位/mgの効力を有する、請求項20記載の方法。
- 治療が患者の集団に投与される場合、治療が、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じる、請求項20記載の方法。
- 少なくとも10%の患者が、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する、請求項32記載の方法。
- 少なくとも20%の患者が、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する、請求項32記載の方法。
- 治療が患者の集団に投与される場合、治療が、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的に向上のさらなる増加を示す少なくとも5%の患者を生じる、請求項20記載の方法。
- ヒト患者の大腿においてセルライトの重症度を低減する方法であって:
a. 以下の特性:
i. 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分-1);
ii. 約4.1〜410ナノモーラー(SRCアッセイ)または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のKM;
iii. 約1.1〜107(SRCアッセイ)または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒-1);
iv. 約376〜37,222(SRCアッセイ)または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒;
v. 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/KM、mM-1秒-1;
vi. 約60kDa〜約130kDaまたは約70〜約130kDaまたは約80〜約120kDaまたは約90〜約120kDaまたは約100〜約110kDaの分子量;
vii. 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)により測定される場合に、少なくとも80%の面積純度;
viii. 約5,000〜約30,000 f-SRC単位/mgの効力;
ix. 約175,000〜約500,00 f-GPA単位/mgの効力;
x. 約5,000〜約25,000 ABC単位/mgの効力;
xi. 1面積%以下のクロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群より選択される不純物;
xii. 1cfu/mL以下のバイオバーデン
の少なくとも2つを有するコラゲナーゼ組成物を提供する工程;ならびに
b. 治療I〜Vからなる群より選択される治療計画に従って、コラゲナーゼ組成物の治療有効量を注射する工程、ここでセルライトの外観の向上は、大腿セルライト効力尺度(PR-TCESおよび/またはCR-TCES)により確立される、
の工程を含む、方法。 - コラゲナーゼが治療IVに従って注射される、請求項36記載の方法。
- コラゲナーゼ組成物が、以下の特性:
a. AUX-I(SRCアッセイ):
i. Vmax、分-1:約0.08〜7.70
ii. KM:約4.1〜410 ナノモーラー
iii. Kcat、秒-1:約1.1〜107
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
v. Kcat/KM、mM-1秒-1:約5,140〜508,814
b. AUX-II(GPAアッセイ)
i. Vmax、分-1:約0.3〜30.5
ii. KM、mM:約0.03〜3.1
iii. Kcat、秒-1:約93〜9,179
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
v. Kcat/KM、mM-1秒-1:約60〜5,934
を有するAUX-IおよびAUX-IIを含む、請求項36記載の方法。 - コラゲナーゼ組成物が、以下の特性:
a. AUX-I(SRCアッセイ):
i. Vmax、分-1:約3.8
ii. KM、mM:約2.07x10-4
iii. Kcat、秒-1:約53
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約18,799
v. kcat/KM、mM-1秒-1:約256,977
b. AUX II(GPAアッセイ):
i. Vmax、分-1:約15.4
ii. KM、mM:約1.6
iii. Kcat、秒-1:約4,636
iv. 1/Kcat、マイクロ秒:約216
v. kcat/KM、mM-1秒-1:約2,997
を有するAUX-IおよびAUX-IIを含む、請求項36記載の方法。 - 組成物が特性の少なくとも3つを含む、請求項36記載の方法。
- 組成物が特性の少なくとも4つを含む、請求項36記載の方法。
- 組成物が特性の少なくとも5つを含む、請求項36記載の方法。
- 組成物が約1mg〜20mgの1つ以上のコラゲナーゼを含む、請求項36記載の方法。
- 組成物がCCHを含む、請求項36記載の方法。
- 組成物が約10,000 ABC単位/0.58mgの効力を有し、治療有効量が約1mg〜20mgである、請求項36記載の方法。
- 組成物が約15,000 ABC単位/mg〜20,000 ABC単位/mgの効力を有し、治療有効量が約1mg〜20mgである、請求項36記載の方法。
- 治療有効量が約1mg〜10mgであり、組成物が約20,000〜約30,000 f-SRC単位/mgまたは約175,000〜約300,000 f-GPA単位/mgの効力を有する、請求項36記載の方法。
- 治療が患者の集団に投与される場合、治療が、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する少なくとも5%の患者を生じる、請求項36記載の方法。
- 少なくとも10%の患者が、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する、請求項48記載の方法。
- 少なくとも20%の患者が、開始用量後少なくとも71日間、治療前ベースラインに対する患者の向上のレベルを維持する、請求項48記載の方法。
- 治療が患者の集団に投与される場合、治療が、治療前ベースラインに対する向上を示し、経時的に向上のさらなる増加を示す少なくとも5%の患者を生じる、請求項48記載の方法。
- CR-TCESおよび/またはPR-TCESにより測定される場合に、治療が、以下の効力終点:
a. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価される場合に、CR-TCESにおける重症度の、ベースライン(治療前「1日目」)からの少なくとも2レベルの重症度の向上;
b. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら患者により評価される場合に、PR-TCESにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも2レベルの重症度の向上;
c. CR-TCESにおける重症度の少なくとも2レベルのベースラインからの向上およびPR-TCESにおける重症度の少なくとも2レベルのベースラインからの向上を有する患者として定義される22、43、71、90、180または365日目での2レベルの複合応答により示される向上;
d. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿が臨床医によりライブで評価される場合に、CR-TCESにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも1レベルの重症度の向上;
e. 22、43、71、90、180または365日目に、標的大腿のデジタル画像を見ながら患者により評価される場合に、PR-TCESにおける重症度の、ベースライン(1日目)からの少なくとも1レベルの重症度の向上;
f. CR-TCESにおける重症度の少なくとも1レベルのベースラインからの向上およびPR-TCESにおける重症度の少なくとも1レベルのベースラインからの向上を有する患者として定義される、22、43、71、90、180または365日目での1レベルの複合応答により示される向上;
g. 全員が中程度または重度のCR-TCES評定を有した患者の集団において、少なくとも1治療領域における向上はプラシーボと比較して統計的に有意であった、ここで該向上は、上記a.〜f.の1つ以上である、
の少なくとも1つを生じる、請求項36記載の方法。
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