KR20210041547A - 시스플라틴이 로딩된 피브린 글루 복합 시스템 병용 치료 시스템 - Google Patents

시스플라틴이 로딩된 피브린 글루 복합 시스템 병용 치료 시스템 Download PDF

Info

Publication number
KR20210041547A
KR20210041547A KR1020210039766A KR20210039766A KR20210041547A KR 20210041547 A KR20210041547 A KR 20210041547A KR 1020210039766 A KR1020210039766 A KR 1020210039766A KR 20210039766 A KR20210039766 A KR 20210039766A KR 20210041547 A KR20210041547 A KR 20210041547A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
solution
locally advanced
fibrin glue
cisplatin
tumor
Prior art date
Application number
KR1020210039766A
Other languages
English (en)
Inventor
시 양
Original Assignee
웨스트 차이나 호스피탈, 쓰촨 유니버시티
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 웨스트 차이나 호스피탈, 쓰촨 유니버시티 filed Critical 웨스트 차이나 호스피탈, 쓰촨 유니버시티
Publication of KR20210041547A publication Critical patent/KR20210041547A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A61N5/1001—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy using radiation sources introduced into or applied onto the body; brachytherapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/14—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for lactation disorders, e.g. galactorrhoea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 약물 패키지 및 방사선 치료 장치로 구성되고, 시스플라틴이 로딩된 피브린 글루 복합 시스템 병용 치료 시스템에 관한 것으로, 상기 약물 패키지는 시스플라틴 용액, 트롬빈 용액 및 피브리노겐 용액을 원료로 하여 제조된 시스플라틴/피브린 글루 복합 시스템을 포함하고, 상기 트롬빈 용액의 농도는 80~120unit/mL이고, 상기 피브리노겐 용액의 농도는 5~15mg/mL이다. 상기 병용 치료 시스템은 국소 진행성 유방암의 재발 억제에 시너지 효과가 있고, 유방암 세포 사멸을 보다 효과적으로 촉진할 수 있고, 수술 후 동시 화학방사선요법 치료를 실현하여, 국소 진행성 유방암의 재발을 효과적으로 억제함과 동시에 독성 부작용을 줄인다. 본 발명에서 제공하는 병용 치료 시스템은 종양(특히 국소 진행성 종양) 치료용 장비의 제조에 있어서 광범위한 응용 전망이 있다.

Description

시스플라틴이 로딩된 피브린 글루 복합 시스템 병용 치료 시스템{COMBINED TREATMENT SYSTEM FOR FIBRIN GEL COMPOSITE SYSTEM LOADED WITH CISPLATIN}
본 발명은 물질 약물 캐리어 분야에 속하며, 구체적으로 시스플라틴이 로딩된 피브린 글루 복합 시스템 병용 치료 시스템, 및 종양 치료용 장비의 제조에 있어서의 상기 병용 치료 시스템의 용도에 관한 것이다.
유방암은 여성의 가장 흔한 악성 종양 중 하나이고, 전세계적으로 악성 종양이 있는 여성 환자의 주요 사망원인이 되었으며, 매년 약 140만 명이 유방암 진단을 받고 있으며, 발병률은 해마다 증가하여 여성의 건강을 심각하게 위협하고 있다. 그 중, 국소 진행성 유방암은 상대적으로 이질적인 종양을 대표하며, 주로 5 cm이상의 원발성 병변으로, 유방에 광범위하게 침투되거나 피부 및 흉벽 유착이 고정되거나 및/또는 국소 림프절 전이가 있고, 임상 단계는 예후가 좋지 않은 III기 유방암이다. 최근 유방암의 임상 치료가 크게 발전하여, 수술, 화학 치료, 방사선 치료, 내분비 치료 및 표적 치료 등 주요 치료 방법이 있으나, 국소 진행성 유방암의 치료는 여전히 여러 가지 한계가 있다. 종양이 크고, 침투가 깊고 국소 림프절 전이되는 등 특징으로 인해, 국소 진행성 유방암 환자는 수술 치료 기회가 있으나, 변형된 근치유방절제술과 액와림프절 결합 청소를 통해서도, 종양이 완전히 제거될 수 있을지 보장하기 어렵고, 흉벽 및 쇄골 상부 및 하부 등 국소 부위에서 재발 및 전이의 위험이 높다. 화학 치료는 약물의 전신 부장용이 크고, 치료 주기가 길고 종양 내성 등 문제가 있으며 임상적 이점이 제한적이며, 환자의 삶의 질에도 영향을 미친다. 일반적인 분할 방사선 치료는 국소 진행성 유방암의 재발률을 낮추는데 도움이 될 수 있지만, 원거리에 있는 미세 전이에 대해 효과를 일으키기 어렵다. 또한, 내분비 및 표적 치료는 일부 국소 진행성 유방암 환자에게만 도움이 되고, 그 효능은 일반적으로 일정 기간 동안만 유지되며 종양은 결국 재발 및 전이된다. 국소 진행성 유방암의 임상 치료 전략을 제정할 때, 전문의는 종양 부피, 침투 깊이 및 국소 림프절 전이 등 상황에 따라 종합적인 치료 모드를 사용하지만, 그럼에도 불구하고 국소 진행성 유방암 환자의 90%이상의 사망은 여전히 종양의 재발 및 전이로 인한 것이다. 따라서, 국소 진행성 유방암의 재발 및 전이를 효과적으로 억제하고, 환자의 삶의 질을 향상시키는 것은 현재 임상의와 생명 의학 분야를 괴롭히는 핵심 과학 문제 중 하나이다.
국소 진행성 유방암 수술 치료의 임상 실천에서, 전문의는 종종 변형된 근치유방절제술(전체 유방 절제술과 액와림프절제술 결합)을 사용하지만, 그럼에도 불구하고 종양을 완전히 제거할 수 있을지 보장하기 어렵고, 재발과 전이 위험이 여전히 높다. 대부분은 젊은 여성 환자이므로, 환자의 수술 후 외관 및 삶의 질에 대한 요구가 크게 높아졌고, 기존의 근치유방절제술(종양 주변의 5cm의 연조직이 확장 제거됨)을 사용할 경우, 환자의 몸과 마음의 상처를 악화시키는 문제에 직면하게 된다. 종양을 최대 한도로 제거하고 정상 조직의 손상을 최대한 줄여 환자의 삶의 질을 향상시키는 것은 국소 진행성 유방암 치료의 발전 방향이다. 임상 방사선 치료에서는 일반적인 분할 방식을 자주 사용하는데, 종양의 국소 방제율을 높일 수 있지만 방사선 치료는 시간이 길고 환자의 순응도가 낮다. 방사선 치료 기술의 발달로, 정위 방사선 치료(RT)는 정위 기술을 통해 보다 정확하고, 보다 고용량의 종양 표적 부위 조사를 실현할 수 있고, 조기 폐암, 조기 유방암, 간암 및 부분 소수 전이적 재발(oligometastasis)치료에 널리 사용되어 왔으며, 폐암 및 췌장암과 같은 일부 국소 진행성 종양의 치료를 위해 시도되기 시작했고 좋은 치료 효과를 얻었고, 방사선 치료 관련 독성을 증가시키지 않았다. 따라서, 정위 방사선 치료를 국소 진행성 유방암 수술 후 치료에 사용할 경우, 종양 세포를 효과적으로 죽이고, 종양 국소 재발률을 줄이고, 전신 부작용을 거의 일으키지 않고, 방사선 치료의 시간을 단축하고, 환자 순응도를 높이는 장점이 있다.
동시에, 종양 치료의 심화와 종양 이질성 개념이 인증됨에 따라, 종양의 치료는 치료 효과를 극대화하기 위해 단일 치료에서 다양한 병용 치료로 점차 변경되었다. 현재 임상적으로 수술 후 화학 치료 및 방사선 치료의 병용하는 것은 국소 진행성 유방암을 치료하기 위해 일반적으로 사용되는 방법으로 되었다. 시스플라틴(cisplatin, CDDP)은 세포 비특이적 약물로, DNA와 결합하여 교차 연결을 일으킬 수 있어, DNA의 기능을 파괴하고, 세포 유사 분열을 억제하며, 두경부 종양, 난소암, 유방암 등에 자주 사용된다. 최근, 점점 더 많은 연구에서, CDDP가 방사선 종양 치료에 대해 민감도와 효과를 향상시키는 작용을 일으키는 것을 발견했다. 그러나, CDDP의 체내 분포는 비표적이므로(non-targeted), 부작용을 일으킬 수 있고, 가장 흔한 것은 신 독성, 신경 독성, 이 독성, 골수 억제이며, 이러한 시스템 투여 치료 모드는 여전히 잠재적인 안전 위험이 있다. 임상 연구에 따르면, CDDP 및 방사선 치료로 동시에 치료한 환자는 단독 치료 환자보다 더 심각한 독성 부작용을 일으키는 것을 발견했다.
따라서, 종양의 국소 재발률을 효과적으로 낮추고, 국소 진행성 유방암을 포함한 다양한 국소 진행성 종양의 치료 효과를 높이고, 동시에 국소 진행성 종양 환자의 예후를 개선하고, 환자에 대한 약물 부작용을 완화할 수 있는 치료 시스템을 개발하는 것은 매우 중요하다.
본 발명의 목적은 시스플라틴이 로딩된 피브린 글루 복합 시스템 병용 치료 시스템, 및 종양 치료용 장비의 제조에 있어서의 상기 병용 치료 시스템의 용도를 제공하는 것이다.
본 발명은 약물 패키지 및 방사선 치료 장치로 구성되고 상기 약물 패키지는 시스플라틴 용액, 트롬빈 용액 및 피브리노겐 용액을 원료로 하여 제조된 시스플라틴/피브린 글루 복합 시스템을 포함하고, 상기 트롬빈 용액의 농도는 80~120unit/mL이고, 상기 피브리노겐 용액의 농도는 5~15mg/mL인, 병용 치료 시스템을 제공한다.
추가적으로, 상기 방사선 치료 장치는 정위 방사선 치료 장치이다.
추가적으로, 상기 트롬빈 용액의 농도는 100unit/mL이고, 상기 피브리노겐 용액의 농도는 10mg/mL이고,
및/또는, 상기 트롬빈 용액 및 피브리노겐 용액의 부피비는 1:(1~9)이고, 바람직하게는 1:9이다.
추가적으로, 상기 트롬빈 용액은 트롬빈을 염화칼슘 수용액에 용해시켜 제조되고, 상기 피브리노겐 용액은 피브리노겐을 생리 식염수에 용해시켜 제조되고, 상기 염화칼슘 수용액의 농도는 바람직하게는 30~50mmol/L이고, 더 바람직하게는 40mmol/L이고, 상기 생리 식염수의 질량 분율은 바람직하게는 0.5~1.5%이고, 더 바람직하게는 0.9%이다.
추가적으로, 상기 시스플라틴 용액의 농도는 1~3mg/mL이고, 바람직하게는 2mg/mL이고,
및/또는, 상기 시스플라틴 용액과 트롬빈 용액의 부피비는 1:(0.5~2)이고, 바람직하게는 1:1이다.
추가적으로, 상기 시스플라틴 용액은 시스플라틴을 생리 식염수에 용해시켜 제조되고, 상기 생리 식염수의 질량 분율은 바람직하게는 0.5~1.5%이고, 더 바람직하게는 0.9%이다.
본 발명은 상기 병용 치료 시스템의 종양 치료용 장비의 제조에 있어서의 용도를 더 제공한다.
추가적으로, 상기 종양은 국소 진행성 종양이다.
추가적으로, 상기 국소 진행성 종양은 국소 진행성 유방암, 국소 진행성 골육종, 국소 진행성 미분화 갑상선암, 국소 진행성 폐암, 국소 진행성 흑색소류, 국소 진행성 피부 편평 세포암, 국소 진행성 폐암, 국소 진행성 식도암, 국소 진행성 간암 또는 국소 진행성 췌장암이고,
바람직하게는, 상기 국소 진행성 종양은 국소 진행성 유방암이다.
추가적으로, 상기 장비는 종양의 재발을 억제할 수 있다.
본 발명에서, 0.9%의 생리 식염수는 질량 분율이 0.9%인 생리 식염수를 가리킨다.
본 발명에서 제공하는 병용 치료 시스템은 국소 진행성 유방암의 재발 억제에 시너지 효과가 있고, 유방암 세포 사멸을 보다 효과적으로 촉진할 수 있고, 수술 후 동시 화학방사선 치료를 실현하여, 국소 진행성 유방암의 재발을 효과적으로 억제함과 동시에 독성 부작용을 줄인다. 본 발명에서 제공하는 병용 치료 시스템은 종양(특히 국소 진행성 종양)치료용 장비의 제조에 있어서 광범위한 응용 전망이 있다.
실험 결과, 상기 병용 치료 시스템에서 약물 패키지를 구성하는 CDDP/피브린 글루(Fibrin gel)복합 시스템의 경우, 본 발명의 특정 농도의 피브리노겐 용액 및 트롬빈 용액을, 특정 부피비(9:1)로 혼합하여 얻은 피브린 글루만이 우수한 겔화 조건을 가지며, 더 나아가 CDDP용액과 안정적인 CDDP/피브린 글루 복합 시스템을 형성할 수 있음을 더 보여줬다.
CDDP는 임상적으로 유방암, 골육종 및 미분화 갑상선암 및 폐암 등 종양의 치료에 적합한, 흔히 사용되는 효과적인 화학 치료 약물이다. 동시에, 정위 방사선 치료(RT)는 임상적으로 효과적이고, 비침습적(Non-invasive)이고, 독성 부작용이 적은 치료 수단으로, 표재성 종양(유방암, 흑색소류 및 피부 편평 세포암 등)에 적합할 뿐만 아니라, 심부 종양(폐암, 식도암, 간암 및 췌장암 등)에도 적합하고, 광범위한 응용 전망이 있다. 따라서, 본 발명은 CDDP/피브린 글루 복합 시스템 및 방사선 치료 장치로 구성된 병용 치료 시스템은 다양한 국소 진행성 종양의 치료에 모두 적용될 수 있고, 큰 임상 변형 잠재력을 가지고 있다.
분명한 것은, 본 발명의 상술한 내용은, 해당 분야의 일반적인 기술지식 및 통상적인 수단에 따라 본 발명의 상기 기본 기술사상을 벗어나지 않고 다양한 형태의 수정, 대체 및 변경을 더 진행할 수 있다.
이하에서는 실시예 형식의 구체적인 실시예를 통해 본 발명의 상술한 내용을 추가로 상세하게 설명한다. 그러나, 이는 본 발명의 주제의 범위가 다음의 실시 예에만 한정되는 것으로 이해해서는 안된다. 본 발명의 상술한 내용을 기반으로 구현된 모든 기술은 모두 본 발명의 범위에 속한다.
도 1은 실시예 1에 의해 제조된 피브린 글루(Fibrin gel)(A), 실시예 2에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템(B)의 사진이다.
도 2는 실시예 1에 의해 제조된 피브린 글루(A), 실시예 2에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템(B)의 SEM 형태 이미지이다.
도 3은 실시예 1에 의해 제조된 피브린 글루(A), 실시예 2에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템(B)의 유변학적 그래프(Rheogram)이다.
도 4는 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 유방암 세포에 대한 세포 독성이다.
도 5는 CDDP/피브린 글루 복합 시스템과 방사선 치료의 병용이 유방암 세포에 미치는 영향이다.
도 6은 피브린 글루 약물 담체 시스템을 국소적으로 주사한 후 다양한 시점에서의 마우스의 생체 이미지화 도면이다.
도 7에서 (A)는 국소 진행성 유방암 수술 후 재발 모델을 구축하는 과정이고, (B)는 수술 전 종양 부피이고, (C)는 수술로 절제된 종양의 무게이고, (D)수술로 절제된 종양 사진이고, 다음과 같이 그룹화되었다: (1)컨트롤(Control), (2)피브린 글루, (3)RT, (4)CDDP/피브린 글루, (5)CDDP (i.v.) +RT, (6)CDDP/피브린 글루+RT.
도 8에서 (A)는 치료 절차의 개략도이고, (B)는 각 그룹의 종양 부피의 변화 그래프이고, (C)는 각 그룹의 마우스의 체중 도면이고, (D)는 치료가 종료된 후 각 그룹의 종양 사진이고, (E)치료가 종료된 후 각 그룹의 평균 종양 무게이다.
도 9는 종양 조직Ki-67 및 TUNEL염색 도면이다.
도 10은 각 그룹의 마우스를 치료한 후의 장기 조직 H&E염색 병리학적 절편이다.
본 발명에서 사용되는 원료와 장비는 모두 기존 제품이고, 시판 제품을 구입하여 획득한다.
실시예 1: 피브린 글루(Fibrin gel)의 제조
1. 트롬빈 용액의 조제
트롬빈은 Dalian Meilun Biotech Co., Ltd에서 구입하였고, 제품 번호는 MB1368, 분자량은 37kD, CAS No. 9002-0404이다.
트롬빈을 40mmol/L의 염화칼슘 수용액에 넣어 용해시켜, 농도가 100unit/mL인 트롬빈 용액으로 조제하고, -20℃에서 보관한다.
2. 피브리노겐 용액의 조제
피브리노겐은 Dalian Meilun Biotech Co., Ltd에서 구입하였고, 제품 번호는 MB5809, 분자량은 340kDa, CAS No. 9001-32-5이다.
피브리노겐을 0.9%의 생리 식염수에 넣어 용해시켜, 농도가 10mg/mL인 피브리노겐 용액으로 조제하고, -20℃에서 보관한다.
3. 피브린 글루의 제조
상기 피브리노겐 용액 및 트롬빈 용액을 9:1의 부피비로 혼합하여, 피브린 글루를 형성한다.
실시예 2: 시스플라틴/피브린 글루(CDDP/Fibrin gel) 복합 시스템의 제조
1. 트롬빈 용액의 조제
실시예 1의 단계 1과 동일한 방법으로, 농도가 100unit/mL인 트롬빈 용액을 조제하고, -20℃에서 보관한다.
2. 피브리노겐 용액의 조제
실시예 1의 단계 2와 동일한 방법으로, 농도가 10mg/mL인 피브리노겐 용액을 조제하고, -20℃에서 보관한다.
3. CDDP용액의 조제
시스플라틴(cisplatin, CDDP)은 Dalian Meilun Biotech Co., Ltd에서 구입하였다.
CDDP을 0.9%의 생리 식염수에 넣어 용해시켜, 농도가 2mg/mL인 CDDP용액을 조제하고, -20℃에서 보관한다.
4. CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 제조
상기 피브리노겐 용액, 트롬빈 용액 및 CDDP용액을 부피비 9:1:1에 따라 혼합하여, CDDP/피브린 글루 복합 시스템을 얻는다.
실시예 3: 병용 치료 시스템의 제조
본 발명의 병용 치료 시스템은 (1)정위 방사선 치료 장치 및 (2)약물 패키지의 두 부분으로 구성된다. 그 중, 약물 패키지는 실시예 2에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템을 포함한다.
이하에서는 실험예를 통해 본 발명에 의해 제조된 유익한 효과를 증명한다.
실험예 1: 다양한 비율로 제조된 피브린 글루의 겔화 상황
1. 실험 방법
실시예 1의 단계 1, 단계 2와 동일한 방법으로 100unit/ml의 트롬빈 용액 및 10mg/ml의 피브리노겐 용액을 조제한 다음 피브리노겐 용액 및 트롬빈 용액을 표 1에 표시된 상이한 부피비로 혼합하여, 상이한 피브린 글루를 제조하고, 각 피브린 글루의 겔화 상황을 관찰한다.
2. 실험 결과
다양한 비율로 얻은 피브린 글루의 겔화 상태
번호 10mg/mL의 피브리노겐의 부피(mL) 100unit/mL의 트롬빈의 부피(mL) 피브리노겐 용액 및 트롬빈 용액의 부피비 겔화 상태
1 0.1 0.1 1:1 느슨함
2 0.14 0.07 2:1 느슨함
3 0.15 0.05 3:1 보통
4 0.175 0.035 5:1 보통
5 0.175 0.025 7:1 보통
6 0.18 0.02 9:1 양호
결과는 표 1에 표시된 바와 같다. 특정 농도의 피브리노겐 용액 및 트롬빈 용액을 특정한 부피비(9:1)로 혼합하여 얻은 피브린 글루만이 겔화 상황이 우수한 것을 알 수 있다.
실험예 2: 피브린 글루 및 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 겔 상태 관찰
실시예 1에 의해 제조된 피브린 글루, 실시예 2에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 상태를 관찰하였고, 결과는 도 1에 도시된 바와 같다.
알 수 있듯이, 실시예 1에 의해 제조된 피브린 글루는 흐르지 않는 투명 젤 상태(도 1a)이고, 실시예 2에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템은 흐르지 않는 투명 젤 상태이고, 시스템의 안정성이 양호하다(도 1b). 따라서, 본 발명에 의해 제조된 피브린 글루 및 CDDP/피브린 글루 복합 시스템은 모두 하이드로겔이다.
실험예 3: 피브린 글루 및 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 형태 관찰
1. 실험 방법
주사전자현미경으로 실시예 1에 의해 제조된 피브린 글루 및 실시예 2에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템 하이드로겔의 형태를 관찰한다.
2. 실험 결과
도 2a는 피브린 글루의 형태 이미지이고, 본 발명에 의해 제조된 피브린 글루는 높은 투과성, 다공성 및 상호 연결 특성을 가지고 있음을 알 수 있다. 도 2b는 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 형태 이미지이고, 상기 복합 시스템도 높은 침투성, 다공성을 가지고 있음을 알 수 있다.
실험예 4: 피브린 글루 및 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 유변학적 거동
1. 실험 방법
회전형 점도계로 실시예 1에 의해 제조된 피브린 글루 및 실시예 2에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 하이드로겔의 유변학적 거동을 연구하였다.
2. 실험 결과
결과는 도 3에 도시된 바와 같이, 탄성 계수(G’) 및 점성 계수(G’’)는 모두 안정적인 경향이 있고, G’는 G’’보다 높고, 피브린 글루 및 CDDP/피브린 글루 복합 시스템 겔화 과정이 완료되었음을 보여준다.
실험예 5：CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 유방암 세포에 대한 세포 독성
1. 실험 방법
MTT법으로 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 하이드로겔이 유방암 세포에 대한 체외 억제 효과를 측정한다. 유방암 세포(4T1)는 1640배지(10%의 소태아혈청, 페니실린 및 스트렙토마이신 각각 50U/mL를 함유함)에서 배양한다. 4T1세포를 3×103cells/well의 밀도로 96웰 플레이트에 접종하고 밤새(overnight) 배양하고, 100μL의 상이한 농도의 CDDP/피브린 글루 복합 시스템을 세포와 함께 48시간 동안 작용시킨 후, 각 웰에 20μL의 MTT(5mg/mL)를 첨가하고, 계속하여 이산화탄소 인큐베이터에서 4시간 동안 배양하고, 각 웰에 150μL의 디메틸설폭사이드를 첨가하고 용해시켜 보라색 물질을 생성하고, 마이크로플레이트 리더를 사용하여 570nm파장에서 흡광도를 측정하고, n=5이다. 데이터를 처리할 때, 블랭크 배지에서 배양한 세포의 생존율을 100%로 설정하고, 나머지 각 실험군의 흡광도 값과 대조군의 비율은 즉 각 군의 상대 생존율이고, 평균값±표준 편차로 데이터 처리 및 분석을 진행한다.
2. 실험 결과
결과는 도 4에 도시된 바와 같다. 알 수 있듯이, CDDP/피브린 글루 복합 시스템에서 CDDP농도가 증가함에 따라, 유방암 세포(4T1)의 세포 생존능에 대한 억제 효과가 점차 증가하고, IC50값은 0.513μg/mL이다.
실험예 6：CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 방사선 치료에 대한 증감(sensitization) 작용
1. 실험 방법
클론 형성 실험을 통해, 실시예 2에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 방사선 치료에 대한 증감 작용을 연구하였다. 상이한 농도의 4T1세포를 24웰 플레이트에 접종하고 밤새 배양하고, 상이한 방사선 치료 용량(0Gy, 2Gy, 4Gy 및 6Gy)을 조사한 후, 100μL의 CDDP/피브린 글루 복합 시스템이 로딩된 transwell챔버에서 세포에 대한 작용을 지속하고, 마지막으로 클론 4T1세포의 백분율을 계산하여 세포의 생존능력과 세포의 생존능을 표시하고, CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 방사선 치료에 대한 증감 작용을 테스트한다. 대조군으로서, 상이한 방사선 치료 용량(0Gy, 2Gy, 4Gy 및 6Gy)을 단독으로 사용하여 조사하였다.
2. 실험 결과
결과는 도 5에 도시된 바와 같다. 알 수 있듯이, CDDP/피브린 글루 복합 시스템(도 5에서 방사선 치료 용량이 0일 때의 데이터에 해당)을 단독으로 사용하거나 방사선 치료를 단독으로 사용하는 것과 비교하여, CDDP/피브린 글루 복합 시스템과 방사선 치료의 병용은 유방암 세포의 클론 형 성 능력에 대한 억제 효과가 현저히 증가하였고, 본 발명의 CDDP/피브린 글루 복합 시스템과와 방사선 치료의 병용은 유방암 세포의 클론형성능에 대한 억제 효과를 현저히 향상시킬 수 있음을 보여준다.
실험예 7: 피브린 글루 약물 담체 시스템의 체내 방출
1. 실험 방법
저분자 형광 프로브(Cy5.5 SE)를 모델 약물 패키지로 사용하여 실시예 1에 의해 제조된 피브린 글루에 로딩하고, 마우스 피하 주사 후 상이한 시점(t=6h, 24h, 48h, 120h, 168h)에서, 소형 동물 생체 이미징 기술을 사용하여 사진을 찍고, 피브린 글루의 체내 약물 방출조절 상황을 관찰하였다. 동일한 농도의 Cy5.5 SE 수용액을 대조군(유리 약물)으로 사용하였다.
2. 실험 결과
결과는 도 6에 도시된 바와 같이, 유리 약물 및 Cy5.5 SE로딩된 피브린 글루하이드로겔 형광은 피하 부위에 집중되어 있고 형광 강도가 매우 높고, 시간이 지남에 따라, 유리 약물 형광이 크게 감소한 반면, Cy5.5 SE로딩된 피브린 글루하이드로겔 형광은 느린 감소 추세를 보였고, 또한, 주사 후 제7일 째에는, Cy5.5 SE로딩된 피브린 글루하이드로겔은 여전히 피하 부위에서 고강도의 형광 신호가 관찰될 수 있었다. 상기 결과는 피브린 글루로딩된 약물 하이드로겔이 국소 투여된 후 체내에서 방출조절 효과가 있음을 보여준다.
실험예 8: CDDP/피브린 글루 복합 시스템과 정위 방사선 치료 병용이 마우스 유방암 재발 모델에서 일으키는 치료 효과에 대한 평가
1. 실험 방법
도 8a 도시된 절차에 따라 실험을 진행한다. 구체적인 단계는 다음과 같다:
(1)마우스 유방암 재발 모델을 구축하는 단계(도 7A): 실험 동물로는 BALB/c암컷 마우스를 사용하였고, 각 마우스의 오른쪽 등에 1×106개의 4T1세포를 접종하여, 유방암 피하 종양 모델을 구축하였고, 종양이 약 300mm3까지 자라면 수술하여 절제하고, 종양의 10%를 남겨 종양 재발을 시뮬레이션 하였다.
(2)실험 군 분류 단계:
생리 식염수군(컨트롤군), 200μL, 종양 층 주사;
피브린 글루군, 200μL, 종양 층 이식;
RT군, 방사선 치료 용량 6Gy;
CDDP/피브린 글루군, 200μl, CDDP(2mg/kg), 종양 층 이식;
CDDP (i.v.) +RT군, CDDP(2mg/kg) 정맥 투여, RT(방사선 치료 용량6Gy);
CDDP/피브린 글루+RT군, 200μl, CDDP(2mg/kg), RT(방사선 치료용량6Gy), 종양 층 이식.
여기서 CDDP/피브린 글루 복합 시스템을 함유한 투여 방식은 종양 층 이식이고, 24시간 내에 정위 방사선 치료를 진행하고, 수술 후 동시 화학방사선 치료를 실현한다.
(3)국소 진행성 유방암 모델링에 성공한 후, 상기 방법에 따라 각각 투여 및/또는 방사선 치료를 진행한다. 전체 치료 기간 동안 각 군의 마우스의 일반적인 상황(활동, 거동, 모발, 피부, 분비물 등) 및 사멸 상황을 관찰하고, 2d마다 종양의 부피(V=ab2/2; a 및 b는 각각 마우스 종양의 긴 지름 및 짧은 지름을 의미함) 및 마우스의 체중을 측정한다. 실험이 종료된 후, 주요 기관(심장, 간, 비장, 폐, 신장)을 채취하여 H&E염색을 하여 병용 치료의 안전성을 평가하였고, 조직 절편 및 면역 조직 화학적 염색 분석(Ki67 및 TUNEL)을 진행하여, 각 군의 마우스의 종양 재발 상황을 전체적으로 평가하였다.
2. 실험 결과
(1)마우스 유방암 재발 모델의 구축
도 7b 내지 도 7d에 도시된 바와 같이, 6개 군의 종양 보유 마우스 간에 수술 전 종양 부피 및 수술로 절제된 종양 무게에 현저한 차이가 없었다. 실험 결과는 국소 진행성 유방암의 재발 모델의 성공적인 구축을 증명하였을 뿐만 아니라, 재발 모델의 균일성을 설명해준다.
(2)CDDP/피브린 글루 복합 시스템과 방사선 치료 병용이 종양 재발을 예방하는 효과
도 8d는 치료가 종료된 후 각 군의 종양의 사진이고, 알 수 있듯이, 치료가 종료된 후, 컨트롤군, RT군 및 CDDP/피브린 글루군의 종양 재발률은 모두 100%인 반면, CDDP/피브린 글루+RT군 치료 후, 종양 재발률은 20%에 불과하다. 실험 결과는 본 발명의 CDDP/피브린 글루 복합 시스템과 방사선 치료의 병용은 유방암 재발 예방에 시너지 효과가 있다.
또한, 도 8c는 각 군의 마우스의 평균 체중 변화 곡선이고, 각 군의 체중 변화에 현저한 차이가 없음을 알 수 있다. 도 8b는 각 군의 마우스의 종양 부피 변화 곡선으로, 컨트롤군 및 피브린 글루군은 종양이 모두 재발하여 빠르게 성장하였으나, 피브린 글루군은 컨트롤군에 비해 약간 느린 것을 알 수 있고, 컨트롤군과 비교하여, CDDP/피브린 글루+RT군의 종양 성장은 현저히 느려졌고, 현저한 통계학적 차이(p=0.001)가 있고, CDDP(i.v.)+RT와 비교하여, CDDP/피브린 글루+RT군의 종양 성장은 현저히 느려 졌고, 컨트롤군과 비교하여, RT군 마우스 종양 부피는 50.5%감소하였고, CDDP/피브린 글루군 마우스 종양 부피는 80%감소하였고, CDDP/피브린 글루+RT군 마우스 종양 부피는 98.9%감소하였다. 도 8e는 치료가 종료된 후 각 군의 종양 무게의 평균 값이고, 알 수 있듯이, 치료가 종료된 후 나머지 각 군의 종양 무게는 모두 컨트롤군에 비해 낮고, 컨트롤군과 비교하여, CDDP/피브린 글루+RT군의 종양 무게는 현저히 감소하였고, 현저한 통계학적 차이(p<0.001)가 있고, CDDP (i.v.) +RT와 비교하여, CDDP/피브린 글루+RT군의 종양 무게는 현저히 감소하였고, 컨트롤군과 비교하여, RT군의 마우스 종양 무게는 80.8%감소하였고, CDDP/피브린 글루군의 마우스 종양 무게는 87%감소하였고, CDDP/피브린 글루+RT군의 마우스 종양 무게는 96.5%감소하였다.
(3)Ki67 및 TUNEL
Ki-67면역 조직 화학적 염색법을 사용하여 종양 세포 이식 상황을 평가하였고, 결과는 도 9에 도시된 바와 같고, 컨트롤군과 비교하여, CDDP/피브린 글루+RT군의 Ki-67LI는 현저히 감소하였다(p<0.001). 결과는 CDDP/피브린 글루 복합 시스템과 방사선 치료의 병용은 종양 세포의 증식을 효과적으로 억제할 수 있음을 보여준다. TUNEL염색을 통해 종양 조직 세포의 사멸 상황을 검출하였고, 도 9는 6군의 4T1종양 절편에서 사멸된 전형적인 이미지를 보여준다. 컨트롤군과 비교하여, CDDP/피브린 글루+RT군의 종양 절편에서 사멸된 양성 세포핵이 더 많은 것을 관찰할 수 있다(p=0.008). 실험 결과, CDDP/피브린 글루 복합 시스템과 방사선 치료의 병용은 4T1의 종양 세포 사멸을 현저하게 유도하고, 항 종양 효과를 현저하게 향상시킬 수 있음을 보여준다.
(4)H&E염색 절편
치료가 종료된 후의 종양 보유 마우스의 주요 장기(심장, 간, 비장, 폐 및 신장)의 H&E염색 절편에 대해 병리학적 관찰을 진행하였고, 결과는 도 10에 도시된 바와 같다. 비교 분석을 통해, 각 군의 마우스의 주요 장기의 병리학적 결과는 모두 컨트롤군의 마우스와 현저한 차이가 없고, 본 발명에 의해 제조된 CDDP/피브린 글루 복합 시스템의 국소 투여는 안전한 치료 모드이고, 유방암 재발 모델의 치료에서 현저한 독성 부작용이 없었다.
상기 실험 결과는, 본 발명에 의해 제공되는 CDDP/피브린 글루 복합 시스템은 유방암 수술 후 성장을 억제하는 효과가 있음을 보여줬다. 또한, 본 발명에 의해 제공되는 CDDP/피브린 글루 복합 시스템과 방사선 치료의 병용은 국소 진행성 유방암의 재발 억제에 시너지 효과가 있고, 국소 진행성 유방암에 대한 치료 효과를 현저히 향상시킬 수 있다.
결론적으로, 본 발명은 약물 패키지 및 방사선 치료 장치로 구성된 병용 치료 시스템을 제공한다. 상기 병용 치료 시스템은 국소 진행성 유방암의 재발 억제에 시너지 효과가 있고, 유방암 세포 사멸을 보다 효과적으로 촉진할 수 있고, 수술 후 동시 화학방사선 치료를 실현하여, 국소 진행성 유방암의 재발을 효과적으로 억제함과 동시에 독성 부작용을 줄인다. 본 발명에서 제공하는 병용 치료 시스템은 종양(특히 국소 진행성 종양)치료용 장비의 제조에 있어서 광범위한 응용 전망이 있다.

Claims (10)

  1. 약물 패키지 및 방사선 치료 장치로 구성되고, 상기 약물 패키지는 시스플라틴 용액, 트롬빈 용액 및 피브리노겐 용액을 원료로 하여 제조된 시스플라틴/피브린 글루 복합 시스템을 포함하고, 상기 트롬빈 용액의 농도는 80~120unit/mL이고, 상기 피브리노겐 용액의 농도는 5~15mg/mL인, 병용 치료 시스템.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 방사선 치료 장치는 정위 방사선 치료 장치인, 병용 치료 시스템.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 트롬빈 용액의 농도는 100unit/mL이고, 상기 피브리노겐 용액의 농도는 10mg/mL이고,
    및/또는, 상기 트롬빈 용액 및 피브리노겐 용액의 부피비는 1:(1~9)이고, 바람직하게는 1:9인, 병용 치료 시스템.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 트롬빈 용액은 트롬빈을 염화칼슘 수용액에 용해시켜 제조되고, 상기 피브리노겐 용액은 피브리노겐을 생리 식염수에 용해시켜 제조되고, 상기 염화칼슘 수용액의 농도는 바람직하게는 30~50mmol/L이고, 더 바람직하게는 40mmol/L이고, 상기 생리 식염수의 질량 분율은 바람직하게는 0.5~1.5%이고, 더 바람직하게는 0.9%인, 피브린 글루.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 시스플라틴 용액의 농도는 1~3mg/mL이고, 바람직하게는 2mg/mL이고,
    및/또는, 상기 시스플라틴 용액과 트롬빈 용액의 부피비는 1:(0.5~2)이고, 바람직하게는 1:1인, 시스플라틴/피브린 글루 복합 시스템.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 시스플라틴 용액은 시스플라틴을 생리 식염수에 용해시켜 제조되고, 상기 생리 식염수의 질량 분율은 바람직하게는 0.5~1.5%이고, 더 바람직하게는 0.9%인, 시스플라틴/피브린 글루 복합 시스템.
  7. 종양 치료용 장비의 제조에 있어서의 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 병용 치료 시스템의 용도.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 종양은 국소 진행성 종양인, 용도.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 국소 진행성 종양은 국소 진행성 유방암, 국소 진행성 골육종, 국소 진행성 미분화 갑상선암, 국소 진행성 폐암, 국소 진행성 흑색소류, 국소 진행성 피부 편평 세포암, 국소 진행성 폐암, 국소 진행성 식도암, 국소 진행성 간암 또는 국소 진행성 췌장암이고, 바람직하게는, 상기 국소 진행성 종양은 국소 진행성 유방암인, 용도.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 장비는 종양의 재발을 억제할 수 있는, 용도.
KR1020210039766A 2020-06-24 2021-03-26 시스플라틴이 로딩된 피브린 글루 복합 시스템 병용 치료 시스템 KR20210041547A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010588692.1 2020-06-24
CN202010588692 2020-06-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210041547A true KR20210041547A (ko) 2021-04-15

Family

ID=73224027

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020210039766A KR20210041547A (ko) 2020-06-24 2021-03-26 시스플라틴이 로딩된 피브린 글루 복합 시스템 병용 치료 시스템

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR20210041547A (ko)
CN (2) CN112043834B (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112043834B (zh) * 2020-06-24 2022-06-24 四川大学华西医院 一种负载顺铂的纤维蛋白胶复合体系
CN113509547A (zh) * 2020-12-09 2021-10-19 四川大学华西医院 凝血酶在预防或治疗癌症中的应用
CN114272248B (zh) * 2021-12-06 2023-08-01 上海市第十人民医院 一种化疗免疫凝胶及其制备方法与应用
CN114767620B (zh) * 2022-03-16 2023-06-27 四川省医学科学院·四川省人民医院 一种负载藤黄酸的多级响应可注射水凝胶及其用途

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1911440A (zh) * 2005-08-08 2007-02-14 上海莱士血制品有限公司 一种用于形成纤维蛋白膜的试剂盒及其应用
CN101797377B (zh) * 2009-02-11 2012-01-25 北京赛升药业股份有限公司 纤维蛋白封闭剂及其制备方法
DK3068449T3 (en) * 2013-11-11 2017-10-30 Georgia Tech Res Inst FUNCTIONALIZED MICROGULES WITH FIBRIN BINDING ELEMENTS
CN106974896A (zh) * 2016-05-10 2017-07-25 北京德立福瑞医药科技有限公司 一种含有疏水性化疗药物纳米颗粒和纤维蛋白胶的抗肿瘤剂
CN110393699A (zh) * 2019-08-27 2019-11-01 苏州大学 一种有效防治肿瘤术后复发和转移的抗癌组合物
CN112043834B (zh) * 2020-06-24 2022-06-24 四川大学华西医院 一种负载顺铂的纤维蛋白胶复合体系

Also Published As

Publication number Publication date
CN112043834A (zh) 2020-12-08
CN112043834B (zh) 2022-06-24
CN111888376A (zh) 2020-11-06
CN111888376B (zh) 2022-06-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20210041547A (ko) 시스플라틴이 로딩된 피브린 글루 복합 시스템 병용 치료 시스템
US10780045B2 (en) Nanoparticles for photodynamic therapy, X-ray induced photodynamic therapy, radiotherapy, chemotherapy, immunotherapy, and any combination thereof
Nakayama et al. Surgical treatment combined with preoperative concentrated irradiation
Shi et al. Late course accelerated hyperfractionated radiotherapy plus concurrent chemotherapy for squamous cell carcinoma of the esophagus: a phase III randomized study
JP5026408B2 (ja) 泌尿生殖器癌及びその転移の治療を意図した、亜ヒ酸、そのナトリウム塩、及びその誘導体を含む製薬組成物
Koyama et al. Intra‐arterial infusion chemotherapy as a preoperative treatment of locally advanced breast cancer
Papillon Radiotherapy and Chemotherapy for Colorectal Cancer [Abridged] Endocavity Irradiation of Early Rectal Cancers for Cure: A Series of 123 Cases
CN112972421B (zh) 基于多正电荷蛋白的纳米药物系统、其制备方法及应用
Di Legge et al. Phase 2 trial of nonpegylated doxorubicin (Myocet) as second-line treatment in advanced or recurrent endometrial cancer
CN111840549A (zh) 载铂类药物/光敏剂的蛋白纳米粒及其制备方法和应用
Steeves et al. Cosmesis and local control after irradiation in women treated conservatively for breast cancer
Shan et al. Clinical evaluation of oral Fructus bruceae oil combined with radiotherapy for the treatment of esophageal cancer
US20230364239A1 (en) Platinum-based drug-/photosensitizer-loaded protein nanoparticle, and preparation method therefor and application thereof
CN116726021A (zh) 一种drp1抑制剂和铁死亡诱导剂联合用药物及其抗肿瘤的用途
Glicksman et al. Concurrent platinum-based chemotherapy and hyperfractionated radiotherapy with late intensification in advanced head and neck cancer
CN111773388B (zh) A-失碳-5α雄甾烷化合物类药物与抗癌药物的联合应用
RU2682293C2 (ru) Способ лечения рака легкого
RU2375090C1 (ru) Способ подавления опухолевого роста
RU2372901C2 (ru) Способ комбинированного лечения местнораспространенного немелкоклеточного рака легкого
CN110420335A (zh) 一种基于多孔碳酸钙的纳米免疫制剂的制备及应用
CN110951072A (zh) 一种具有诱导细胞钙化能力的化合物、其制备方法和应用
Héry et al. Conservative treatment of breast cancer: A report on 108 patients
CN115317447B (zh) 一种共载吲哚菁绿和索拉非尼胶束及其制备方法与应用
CN115068615B (zh) 一种“开源节流”型逆转乏氧抗肿瘤药物组合物及其应用
RU2348440C2 (ru) Способ комбинированного лечения рака легкого iii стадии