KR20210024730A - 백미 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents
백미 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 백미(Cynanchi atrati Radix) 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로, 한약재료로 인체에 무해하며 멜라닌 생성과 티로시나아제 활성을 효과적으로 억제하여 피부 미백 기능, 또는 기미, 주근깨 등의 과다색소침착 질환의 예방 또는 치료에 우수한 효과를 나타낼 수 있다.
Description
본 발명은 백미(Cynanchi atrati Radix) 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 멜라닌 생성 및 티로시나아제 활성을 억제함으로써 피부 미백에 효능이 있는 피부 미백용 화장료 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부의 색은 사람의 피부 내 멜라닌(melanin)의 농도와 분포에 따라 유전적으로 결정되나, 태양 자외선이나 피로, 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)에 티로시나아제(tyrosinase)라는 효소가 작용하여 도파(DOPA), 도파퀴논(dopaquinone)으로 바뀐 후, 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 이와 같이 멜라닌이 만들어지는 경로는 알려져 있으나, 티로시나아제가 작용하는 이전 단계인 멜라닌 합성을 유도하는 메커니즘이 무엇인지에 대해서는 아직도 자세히 밝혀지지 않고 있다.
한편, 일반적인 알려진 미백 성분으로서, 코지산(kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나아제 효소활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민-C(L-Ascorbic acid) 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물 등이 있다. 이들은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써, 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백을 실현할 수 있을 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착증의 개선의 효과가 있다고 알려져 있다.
그러나 종래 미백성분은 피부 적용 시, 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적인 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있다.
따라서 피부에 직접 적용하거나 섭취하거나 인체에 투여하는 경우에도 부작용이 거의 발생하지 않으면서도 멜라닌 생성을 억제하는 효과가 매우 높은 미백성분의 개발이 필요한 실정이다.
본 발명의 목적은 한약재인 백미(Cynanchi atrati Radix)의 미생물 발효물을 재료로 하여 인체에 무해하면서도 낮은 농도로 효과적으로 멜라닌 생성 억제 및 티로시나아제 활성을 억제함으로써 우수한 피부 미백 효능을 나타낼 수 있는 백미 발효물을 유효성분을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 한약재인 백미(Cynanchi atrati Radix)의 미생물 발효물을 재료로 하여 인체에 무해하면서도 낮은 농도로 효과적으로 멜라닌 생성 억제 및 티로시나아제 활성을 억제함으로써 피부 미백용 식품 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 하나의 측면에 따르면,
백미(Cynanchi atrati Radix) 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물이 제공된다.
상기 백미 발효물은 유산균 발효물일 수 있다.
상기 유산균은 락토바실러스속, 비피도박테리움속, 류코노스톡속, 페디오코커스속, 및 엔테로코커스속 유산균 중에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
상기 유산균은 락토바실러스속이고, 상기 락토바실러스속 유산균은 락토바실러스 카제이, 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 불가리쿠스, 락토바실러스 컨푸수스, 및 락토바실러스 루테리 중에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 다른 하나의 측면에 따르면,
백미(Cynanchi atrati Radix) 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 식품 조성물이 제공된다.
본 발명의 백미 발효물을 유효성분을 포함하는 피부 미백용 조성물은 한약재인 백미(Cynanchi atrati Radix)의 미생물 발효물을 재료로 하여 인체에 무해하면서도 낮은 농도로도 효과적으로 멜라닌 생성 억제 및 티로시나아제 활성을 억제함으로써 우수한 피부 미백 효능을 나타낼 수 있다.
도 1은 실험예 1의 세포독성검사 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 실험예 1의 세포독성검사 결과를 나타낸 사진이다.
도 3은 실험예 2의 멜라닌 함량 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 실험예 2의 멜라닌 함량 측정 결과를 나타낸 사진이다.
도 5는 실험예 3의 티로시나아제 활성 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 실험예 1의 세포독성검사 결과를 나타낸 사진이다.
도 3은 실험예 2의 멜라닌 함량 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 실험예 2의 멜라닌 함량 측정 결과를 나타낸 사진이다.
도 5는 실험예 3의 티로시나아제 활성 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명에서의 '백미(白薇, Cynanchi atrati Radix)'는 박주가리과의 백미꽃(Cynanchum atratum Bunge) 또는 동속식물의 뿌리로 만든 약재를 의미한다. 중국에서는 백미를 비롯해서 만생백미(Cynanchum versicolor Bunge.:蔓生白薇)의 뿌리를 사용한다. 이 약은 특이한 냄새가 있으며 맛은 쓰고 짜며 성질은 차다. 백미는 혈분의 열을 식혀 온열병 후기나 산후에 인체의 기혈과 진액을 소모하여 내부에 미열이 가시지 않고 몸이 노곤한 증상을 치유하며 발열, 폐열로 인한 해수, 이뇨, 종기, 악창, 인후염, 뱀에 불린 상처에 사용하였다고 전해진다. 생김새는 엷은 황갈색의 가늘고 긴 뿌리가 짧은 뿌리줄기에 모여 붙어 말고리 모양을 이루고 있으며 부스러지기 쉽고 꺾은 면은 백색이며 피부와 목부의 구별이 된다.
본 명세서에서 백미를 언급하면서 사용되는 용어 '추출물'은 추출용매를 처리하여 얻은 조추출물뿐만 아니라 백미 추출물의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 백미 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 명세서에서 백미를 언급하면서 사용되는 용어 '발효물' 은 미생물 특히, 유산균에 의해 발효된 발효물, 그로부터 추출된 발효 추출물 또는 그의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 백미 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다..
또한, 본 발명의 백미 추출물은 광의로는 백미를 동물에게 투여할 수 있도록 제형화된 백미 가공물, 예컨대, 백미 분말도 포함하는 의미를 갖는다. 비록 본 발명에서 백미로 실험을 진행하긴 하였으나, 백미 가공물과 같은 형태로도 목적하는 효과를 달성할 수 있음은 당업자라면 예상 가능할 것이다.
한편, 본 명세서에서 용어 '유효성분으로 포함하는'이란 백미 발효물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 일예로, 상기 백미 발효물은 10 내지 1500 ㎍/㎖, 바람직하게는 100 내지 1000 ㎍/㎖의 농도로 사용된다. 백미 발효물은 백미 발효물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 백미 발효물의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명은 백미(Cynanchi atrati Radix) 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 백미 발효물은 유산균 발효물인 것이 바람직하다.
상기 유산균은 상기 유산균은 락토바실러스속(Bacillus), 비피도박테리움속(Bifidobaterium), 류코노스톡속(Leuconostoc), 페디오코커스속(Pediococcus), 및 엔테로코커스속(enterococcus) 유산균 중에서 선택된 어느 하나인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 락토바실러스속 유산균일 수 있다.
상기 락토바실러스속 유산균은 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 컨푸수스(Lactobacillus confusus), 및 락토바실러스 루테리(Lactobacillus luteri) 중에서 선택된 어느 하나일 수 있고, 가장 바람직하게는 상기 락토바실러스속 유산균은 락토바실러스 카제이 일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예를 들어서 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담제를 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 증으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는 세안용 클렌징, 로션, 크림, 마사지 크림, 아이크림, 에센스, 젤, 팩, 스프레이, 파우더, 선크림 등의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 식물성유, 왁스, 전분, 셀룰로오스, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 산화아연 등이 이용될 수 있고, 제형이 파우더 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실리케이트 등의 파우더가 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 글리세린, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 프로필렌글라이콜, 부틸렌글라이콜, 1,2-헥산디올, 글리세롤 지방족 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 프로필렌글라이콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록사이드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다. 또한 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세치오네이트, 메칠타우레이트, 사르코시네이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세라이드, 식물성유 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명은 백미 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 하기 약학 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 알코올 음료류, 과자류, 다이어트바, 유제품, 육류, 초코렛, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있다.
본 발명의 식품 조성물은 유효성분으로서 백미 발효물 뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)] 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제와 음료류로 제조되는 경우에는 본 발명의 백미 발효물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 및 각종 식물 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명은 상기 백미 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 건강기능식품이란, 백미 발효물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 건강기능식품은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 매우 유용하다. 이와 같은 건강기능식품에 있어서의 백미 발효물의 첨가량은, 대상인 건강기능식품의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 식품 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상 식품에 대하여 통상 0.01 내지 50 중량%, 바람직하기로는 0.1 내지 20 중량%의 범위이다. 또한, 환제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태의 건강기능식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량% 바람직하기로는 0.5 내지 80 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 한 구체예에서, 본 발명의 건강기능식품은 환제, 정제, 캡슐제 또는 음료의 형태일 수 있다.
또한, 본 발명은 백미(Cynanchi atrati Radix) 발효물을 유효성분으로 포함하는 과다색소침착(hyperpigmentation) 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
상기 과다색소침착 질환이란 멜라닌의 과도한 증가에 의해 다른 부위에 비해 검게 또는 어둡게 되는 것을 의미하는 것으로, 기미, 주근깨, 노인성 색소반, 또는 일광 흑색증(solarlentigines) 등이 포함되나, 본 발명의 범위가 여기에 한정되지 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 상기 유효 성분 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약학 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약학 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약학 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다.
액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여이다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약학 조성물의 1일 투여량은 0.001-10 g/㎏이다.
본 발명의 약학 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 과다색소침착 질환 치료용 의약 또는 피부 미백용 식품의 제조를 위한 백미 발효물의 용도를 제공한다. 상기한 바와 같이 백미 발효물은 과다색소침착 질환 예방 또는 치료용, 또는 피부 미백용 용도로 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 포유동물에게 유효량의 백미 발효물을 투여하는 것을 포함하는 과대색소침착 질환의 개선, 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
여기에서 사용된 용어 "포유동물"은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.
여기에서 사용된 용어 "유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 해당 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 유효량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 수 있다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 예방, 치료 또는 개선 방법에 있어서, 성인의 경우, 추출물을 1일 1회 내지 수회 투여시, 0.001 g/kg 내지 10 g/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 치료방법에서 백미 발효물을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 경구, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 경피, 국소, 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.
[
실시예
]
실시예
1: 백미 발효추출물 제조
1) 배지 제조
MRS 액체배지 200㎖에 백미 분말 100g을 첨가하여 121℃, 15기압으로 30분간 멸균하여 배지를 제조하였다.
2) 유산균 배양
1차 배양: 단일 군집의 Lactobacillus casei(KCTC 13086) 를 멸균된 MRS 배지에 접종한 후 30℃에서 200rpm 으로 1일 배양하였다.
2차 배양: 1차 배양액을 멸균된 MRS 배지 200㎖에 1wt%로 접종한 후 30℃에서 200rpm으로 1일 배양하였다.
3) 백미 발효추출물 제조
멸균된 1)의 배지에 2차 배양액을 전체를 그대로 접종한 후 30℃에서 5일 동안 정치 배양하였다. 배양 후 배양액에서 고체 발효물 분말을 수득하고, 고체 발효물 분말 100 g에 증류수 700 ㎖를 넣어 현탁한 후, 헥산(hexane) 700 ㎖로 추출하였다. 위 과정을 5회 이상 반복하여 추출물을 수득하고, 37℃에서 헥산을 증발시켜 제거하고 백미 발효추출물을 수득하였다.
비교예
1: 백미 추출물 제조
백미(Cynanchi atrati Radix) 분말 50g을 메탄올 용매 1400㎖로 추출하여 추출액을 여과하고, 메탄올 용매를 37℃에서 증발시켜 제거함으로써 조추출물을 수득하고, 조추출물에 물 200㎖를 넣은 후 헥산(hexane) 200㎖로 추출하여 분획물을 수득하고, 37℃에서 헥산을 증발시켜 제거하고 백미 추출물을 수득하였다.
[
실험예
]
실험예
1: 세포독성검사
10% FBS, 1% penicillin을 함유한 DMEM 배지에 B16F10 melanoma 세포를 96-well plate에 2 x 103 cells/well 농도로 분주하고 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서 실시예 1의 백미 발효추출물과 비교예 1의 백미 추출물을 농도별로 48시간 동안 처리하여 비교 분석하고, 이후 WST-assay를 이용하여 세포독성검사를 실시하여 그 결과를 도 1에 나타내었고, 48시간 후의 대조군, 비교예 1 및 실시예 1 처리군의 세포사진을 도 2에 나타내었다.
이에 따르면, 비교예 1의 백미 추출물의 경우 1 ㎍/㎖ 농도에서는 세포독성을 나타내지 않았지만 2.5 ㎍/㎖ 농도부터는 상당한 세포독성을 나타냈다. 반면에 실시예 1의 백미 발효추출물은 5 ㎍/㎖ 농도까지 세포독성을 나타내지 않았다.
실험예
2: 멜라닌 함량 측정
B16F10 melanoma 세포를 활성모델인 α-MSH(and α-Melanocyte stimulating hormone)로 자극하여 멜라닌 생성에 대한 효과를 평가했다. 먼저, 6 well plate에 B16F10 melanoma 세포를 1 x 105 cells/well 농도로 분주하고 24시간 동안 배양하였다. 이어서 배지를 phenol red를 포함하지 않는 DMEM 배지로 교체하고 α-MSH(100nM)와 실시예 1의 백미 발효추출물을 농도별로 48시간 동안 처리하였다. 이후 세포를 수확하여 lysis buffer(5mM EDTA, 0.1M Sodium phosphate buffer(pH 6.5), 0.1mM PMSF, 1%(v/v) Triton X-100)를 첨가해 얼음에 두고 10분마다 vortex하면서 30분간 반응시켰다. 반응액을 14000rpm, 4℃, 30분간 원심분리하고 펠렛(pellet)을 멜라닌 함량 측정 시료로 사용하였다. 펠렛에 1N NaOH(10% DMSO 포함) 500㎕를 넣고 90℃에서 1시간 동안 반응시킨 다음 405 nm에서 측정하여 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다.
도 3은 비교예 1의 백미 추출물, 실시예 1의 백미 발효추출물 및 기존 미백소재인 코직산(kojic acid)의 멜라닌 생성 억제 효과를 측정 결과이고, 도 4의 (a)는 비교예 1의 백미 추출물, (b)는 실시예 1의 백미 발효추출물의 멜라닌 생성 억제 실험 결과에 대한 사진이다.
이에 따르면, 비교예 1의 백미 추출물은 1 ㎍/㎖ 농도에서 멜라닌 생성억제 효과가 나타나기 시작하였으며, 세포독성이 높은 2.5 ㎍/㎖ 농도에 이르러서야 1 ㎍/㎖ 농도에서의 효과에 비해 유의차 있는 멜라닌 생성 억제 효과가 나타났다. 이에 반해, 실시예 1의 백미 발효추출물은 0.5 ㎍/㎖ 농도부터 비교예 1의 2.5 ㎍/㎖ 농도와 유사 수준의 높은 멜라닌 생성 억제 효과를 보였으며, 2.5 ㎍/㎖까지 멜라닌 생성 억제 효과가 높게 나타났으며, 이는 세포독성이 없는 5 ㎍/㎖ 이하의 농도에서도 우수한 멜라닌 생성 억제 효과를 나타냄을 알 수 있었다. 한편, 코직산의 경우 2.5 ㎍/㎖ 농도에서 약학 멜라닌 생성 억제 효과를 나타내었으나, 동일한 농도에서의 실시예 1의 백미 발효추출물이 코직산보다 효과가 더 우수함을 확인할 수 있었다.
따라서, 실시예 1의 백미 발효추출물은 세포 독성을 나타내지 않는 농도에서 효과적으로 멜라닌 생성을 억제하는 점에서 비교예 1의 백미 추출물과 비교하여 안전하고 낮은 농도에서도 멜라닌 생성을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인할 수 있었다.
실험예
3: 티로시나아제(
Tyrosinase
) 활성 측정
티로시나아제(Tyrosinase)는 멜라닌합성에 가장 핵심적인 역할을 하는 단백질로 알려져 있으며 멜라닌 생성의 출발 물질인 티로신(Tyrosine)을 DOPAquinone으로 전환시킨다. B16F10 melanoma 세포를 활성모델인 α-MSH(and α-Melanocyte stimulating hormone)로 자극하여 티로시나아제 활성을 측정하였다.
먼저, 6 well plate에 B16F10 세포를 1 x 105 cells/well 농도로 분주하고 24시간 동안 배양하였다. 이어서 배지를 phenol red를 포함하지 않는 DMEM 배지로 교체하고 α-MSH(100nM)와 실시예 1의 백미 발효추출물을 농도별로 48시간 동안 처리하였다. 이후 세포를 수확하여 lysis buffer(5mM EDTA, 0.1M Sodium phosphate buffer(pH 6.5), 0.1mM PMSF, 1%(v/v) Triton X-100를 첨가해 얼음에 두고 10분마다 vortex하면서 30분간 반응시켰다. 반응액을 14000rpm, 4℃, 30분간 원심분리하고 상층액을 티로시나아제 활성 측정 시료로 사용하였다. 상층액 80㎕를 취하여 96 well plate에 넣고 10mM L-DOPA 20㎕를 가하여 37, 405 nm에서 2시간 동안 10분 간격으로 측정하여 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5의 비교예 1의 백미 추출물, 실시예 1의 백미 발효추출물 및 코직산의 티로시나아제 활성을 측정한 결과이다.
이에 따르면, 비교예 1의 백미 추출물의 경우 1 ㎍/㎖ 농도까지 티로시나아제 활성을 억제하지 못하는 것으로 나타났고, 세포 독성이 있는 2.5 ㎍/㎖ 농도에서 티로시나아제 활성을 억제하는 것으로 나타났다. 이에 반해, 실시예 1의 백미 발효추출물의 경우 0.5 ㎍/㎖ 농도부터 비교예 1의 백미 추출물의 2.5 ㎍/㎖ 농도 처리군 보다 더 높은 티로시나아제 활성 억제 효과를 나타내었으며, 2.5 ㎍/㎖ 농도에서는 활성모델을 처리하지 않은 음성대조군의 값과도 큰 차이가 없는 효과를 나타내었다. 한편, 종래 미백물질로 알려진 코직산의 경우 2.5 ㎍/㎖ 농도에서 실시예 1의 0.1㎍/㎖ 농도 수준의 약한 티로시나아제 활성 억제 효과를 나타내었다.
따라서, 실시예 1의 백미 발효추출물은 세포 독성을 나타내지 않는 낮은 농도에서 효과적으로 티로시나아제 활성을 억제하는 점에서 비교예 1의 백미 추출물이나 종래 코직산과 비교하여 안전하고 낮은 농도에서 티로시나아제 활성을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인할 수 있었다.
이상, 본 발명의 실시예들에 대하여 설명하였으나, 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서, 구성 요소의 부가, 변경, 삭제 또는 추가 등에 의해 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있을 것이며, 이 또한 본 발명의 권리범위 내에 포함된다고 할 것이다.
Claims (5)
- 백미(Cynanchi atrati Radix) 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 백미 발효물은 유산균 발효물인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 유산균은 락토바실러스속, 비피도박테리움속, 류코노스톡속, 페디오코커스속, 및 엔테로코커스속 유산균 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물. - 제3항에 있어서,
상기 유산균은 락토바실러스속이고, 상기 락토바실러스속 유산균은 락토바실러스 카제이, 락토바실러스 애시도필러스, 락토바실러스 불가리쿠스, 락토바실러스 컨푸수스, 및 락토바실러스 루테리 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물. - 백미(Cynanchi atrati Radix) 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 식품 조성물.
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