KR20210013569A - 자기 비드-핵산 앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법 및 키트 - Google Patents

자기 비드-핵산 앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법 및 키트 Download PDF

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Abstract

본 발명은 분자 생물학 분야에 관한 것으로, 자기 분리 및 정제와 결합된 표적 분자 리간드와 핵산 리간드의 분자 식별을 기반으로 질량분석에 의한 분자 정성·정량분석을 통해 다중 분자 그룹 검출 및 다기능 그룹 정보의 통합을 구현함으로써, 유기체 또는 조직의 분자 그룹과 기능 그룹 간의 상관관계를 검출할 수 있다. 본 발명은 자기 분리를 이용해 표적 분자 그룹의 분리를 간단히 완료하고, 앱타머의 특이성과 높은 친화성을 이용해 표적 분자 그룹을 효과적으로 획득한다. 본 발명은 질량분석을 기반으로 다중 분자의 정성·정량분석을 효과적으로 진행해 2차 분자 검출을 구현하고, 검출 정확도를 향상시킨다. 다중 분자의 통일된 정성 및 정량은 분자 간의 상호관계를 보다 현실적으로 반영하는 동시에 유기체 기능의 상호관계를 드러낼 수 있어, 단백질체학 및 유전체학 연구와 임상 분자 검출에 유익하다.

Description

자기 비드-핵산 앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법 및 키트
본 발명은 자기 비드-핵산 앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법 및 키트에 관한 것으로, 특히 다중 분자 표본의 마커 핵산 앱타머 그룹을 통해 표본 내의 마커 분자를 포획하고 레이저 탈착 비행 질량분석을 이용해 검출 마커에 대해 정성 및 정량적 분석을 진행한 후, 데이터 플랫폼의 분석 처리를 이용해 표본 종합 체계의 검출 분석 결과를 얻는 방법에 관한 것이다. 구체적으로는, 표본 전체 특징에 대한 분자 검출 및 종합 체계 분석에 관한 것이다.
조기 단백질 검출은 항체와 검출할 특정 단백질의 낮은 해리 상수 및 일정한 특이성을 기반으로 하며, 항체 포획 방법은 간단하고 편리한 스크리닝 방법이다. 항체 포획 방법에서, 항원이 고상 지지물로 코팅된 후 항체를 이용해 항원에 결합시키고, 플레이트를 세척해 결합되지 않은 항체를 제거한다. 마지막으로, 결합 항체를 분명히 식별할 수 있는 마커 분자를 이용해 결합 항체를 검출한다. 항체 포획법은 흔히 간접법을 이용해 항체를 검출한다. 예를 들어, 검출항체는 마우스 항체이고, 검출 분자는 검출 마커가 있는 토끼 항 마우스 항체일 수 있다. 종래의 검출 마커는 방사성 동위원소, 염료, 및 기질에 작용해 색원체와 같은 검출 가능한 분자를 생성하는 효소를 포함한다.
항원 포획 검출법은 검출 표본 내에 항원이 있는지 여부를 검출하는 것이다. 먼저 항체가 지지물 상에 결합되고, 항원이 첨가된 후 항체와 반응해 복합물을 형성하며, 마지막으로 복합물을 검출한다. 또는, 항원과 항체가 먼저 반응해 복합물을 형성하고 나서 고상 지지물에 결합된 후 복합물을 검출하는 것도 가능하다.
ELISA는 널리 알려진 면역 검출법으로, 1971년에 출시되자마자 진단방법에 혁명을 일으켰다. 종래의 ELISA 기술은 "샌드위치와 같은" 방법, 즉 두 개의 항체가 특정 항원에 함께 결합하는 방법이었다. 포획항체가 표본 내의 항원과 결합하면, 항원과 결합된 결합 효소의 검출항체를 첨가해 포획항체-항원-검출항체의 "샌드위치" 복합물을 형성하고, 마지막으로 결합 효소 활성을 측정해 검출 결과를 표시한다.
항체 검출법은 응용 가치가 크지만 검출 범위는 포획항체와 항원 간의 반응값인 Kd값에 의해 제한된다. 실제로, 검출 한계는 Kd값의 약 1%이다. 분석물의 농도가 이 검출 한계까지 낮아지면, 분석물을 포획하는 항체의 백분율은 신호-소음 비율에 대한 검출 가능 신호를 생성하기에 불충분하다. 그러므로, 형광 또는 화학발광 검출 시스템을 이용한 항체 검출법의 검출 한계는 약 1 pg/ml이다(평균 분자량이 50,000 돌턴인 단백질의 경우 10-4M).
핵산과 단백질 간의 상호작용은 세포 내에서 흔히 발생하는 현상이다. 핵산은 접혀서 2차 및 3 차 구조를 형성할 수 있으며, 이는 단백질과의 상호작용에 매우 중요하다. 뉴클레오타이드 서열을 다양화함으로써 체외에서 핵산과 단백질의 상호작용을 검출하는 방법이 발전했다. SELEX 기술은 선택된 표적의 뉴클레오티드 앱타머를 분리하는 데 사용된다. 이러한 앱타머는 리간드라고도 불리며, 이는 핵산이 일정한 구조를 형성해 표적 분자의 포켓에 맞게 들어갈 수 있음을 의미한다. SELEX 기술은 바로 이 원리를 이용해 표적 분자 리간드를 스크리닝하는 방법이다.
Gold 등은 1995년(Gold L, et al.Annu Rev Biochem, 64:763-797) SELEX를 응용해 전신 홍반성 낭창의 특정 항체의 RNA 및 ssDNA 리간드를 선별했고, 이를 통해 전신 홍반성 낭창을 진단했을 뿐만 아니라 질병 모니터링 및 효능 검사도 진행했다. Gold 등은 또한 1999년(Gold L, et al.Diagn Dec; 4(4):381-8) 리간드 마이크로어레이의 분자 진단 응용연구에서 리간드 마이크로어레이의 분해율에 대해 연구했는데, 이들 모두 핵산 앱타머 검출의 응용 전망이 대단히 밝다는 것을 보여주었다. 현재의 리간드 검출 방법은 직접 리간드 PCR 증폭에 대해 검출하는 방법인데, 이 방법은 조작이 복잡하고 앱타머와 리간드를 분리해야 하며, 민감도가 낮고(앱타머와 리간드를 분리한 후, 리간드의 순도 및 남은 앱타머와 리간드의 재결합이 DNA 복제를 차단하므로) 정확도가 떨어진다.
SELEX 기술을 시작으로 많은 표적의 뉴클레오티드 리간드가 선별되었다. 특히, 핵산과 결합할 수 있는 알려진 여러 단백질, 예를 들면 T4DNA 폴리메라아제, 박테리오파지 R17 튜니클 단백질, 대장균 rho 인자, 대장균 리보솜 단백질 S1, 페닐알라닌-tRNA 합성효소, RNA를 식별하는 자기면역항체, E2F 전사조절인자, 서로 다른 HIV 관련 단백질이 SELEX 기술의 적합한 표적으로 사용될 수 있다.
SELEX 기술이 서로 다른 여러 단백질 리간드를 선별하는 데 활용될 수 있다는 사실은 리간드 응용의 확장을 야기했다. 리간드는 단일클론항체 및 다클론항체 제품의 대체품으로서 진단 및 치료에 응용될 수 있기에 리간드의 가치를 드러내보였다. DNA 폴리메라아제의 리간드는 웜 부트 PCR에 활용되어 낮은 카피의 레플리콘을 진단해, PCR 민감도 및 정확도를 향상시켰다. 리간드는 실험 방법을 촉진하는 데에도 사용되었다. 중성 엘라스타아제의 앱타머는 형광 표시 후 엘라스타아제의 농도를 검출하는 유동 세포 분석법에 사용될 수 있다. 중성 엘라스타제의 리간드는 쥐 폐렴 모델의 체내 진단에도 사용되었다.
효소결합 올리고뉴클레오티드 방법(ELDNA)에서, 하나 또는 복수의 항체는 고유의 높은 친화력 및 높은 특이성에 대항하는 리간드에 의해 대체된다. 이러한 리간드는 SELEX 기술을 통해 체외 선별로 얻을 수 있다. 미국 특허 WO96/40991 및 WD97/38134에서는 뉴클레오티드 리간드를 사용해 샌드위치 분석법 중 검출항체 또는 포획항체를 대체하는 효소결합 올리고뉴클레오티드 방법을 공개했다. 일반적으로 샌드위치 분석법은 종래의 효소결합 검출항체를 사용해 포획 분자-항원 복합물을 검출하지만, 리포터 효소 분자를 사용해 올리고뉴클레오티드를 표기하는 데 화학적 합성 단계와 추가 노동이 필요하다. 또한, 항체 시약을 사용하는 상기 방법에도 어려움이 있다.
상기 두 특허에서도 포획 분자-표적 분자-검출 분자 복합물 중 앱타머에 대한 PCR 증폭 검출 시스템을 언급했다. 이는 효소, 비오틴 등 일반적으로 사용되는 리포터 분자의 PCR 프라이머를 이용해 앰플리콘을 증폭하는 것인데, 이렇게 하면 앱타머 수가 증가하지만 다음과 같은 단점도 있다. 증폭된 리간드를 불순한 뉴클레오티드 프라이머 다이머로부터 추가적으로 분리해야 한다. 또한, 종래의 젤 분리에는 많은 수작업이 필요하다. DNA와 RNA 리간드 모두 이러한 문제가 있다. 게다가, 표시한 프라이머의 사용은 불순 및 프라이머 다이머 증폭 문제를 해결할 수 없으므로, 정량화 할 수가 없다.
상술한 바와 같이 현저한 진보에도 불구하고, 진단 방법은 표본 내의 표적 유무를 신속하게 분석하고 표적을 정량화하기 위해 민감도를 향상하고, 수작업을 줄이고, 동적 모니터링을 개선할 필요가 있다.
MALDI-TOF MS는 최근에 개발된 새로운 유형의 부드러운 이온화 유기 질량분석법으로, 폴리펩티드, 단백질, 다당류, 뉴클레오티드, 당단백질, 폴리머 및 다양한 합성 폴리머의 검출 및 식별을 위한 강력한 도구가 되었다. 원리는 다음과 같다. 일정한 강도의 레이저로 표본과 기질에 의해 형성된 공 결정 박막을 조사하면, 기질이 레이저로부터 에너지를 흡수하고 이로 인해 기질과 표본 사이에 전하 이동이 발생해 표본 분자를 이온화한다. 이온화된 표본은 전기장의 작용 하에 비행 튜브를 관통하도록 가속화되며, 검출기에 도달하기까지의 비행 시간에 따라 서로 다르게 검출된다. 즉, 이온 측정의 질량 전하 비율은 검출할 이온의 비행 시간에 비례한다. MALDI-TOF-MS의 핵심 기술은 표본의 질량 전하 비율(m/z) 차이를 기반으로 검출을 수행해 표본 분자의 분자량을 측정하는 것이다.
MALDI-TOF MS의 원리에 따르면, MALDI-TOF MS는 민감도, 정확도 및 해상도가 높고, 스펙트럼이 간결하고 선명하며, 질량 범위가 넓고 속도가 빠르다는 특징이 있다. 또한, 조작 시 표본 준비가 쉽고 표본의 소형화, 대규모, 병렬화 및 고도의 자동화 처리가 가능하다. 이 분석법은 생체거대분자 및 합성 고분자 응용 방면에서도 특수한 이점이 있다. 이에, 폴리펩티드, 단백질, 다당류, 뉴클레오티드, 당단백질, 폴리머 및 다양한 합성 폴리머의 검출 및 식별을 위한 강력한 도구가 되었다. 예를 들면, MALDI-TOF MS를 응용해 단백질 가수분해의 펩티드 질량 지문(PMF) 및 이온화 붕괴(PSD) 조각 이온 스펙트럼을 측정하고, 질량분석 네트워크 데이터베이스 검색과 결합해 펩티드 및 단백질 서열을 얻을 수 있다. MALDI-TOF MS를 응용해 게놈 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNPs)을 분석하고 검출하면, 상대 분자량이 약 7,000(20개 이상의 염기 포함)이고 염기가 1개만 차이나는 서로 다른 DNA를 구별 및 식별할 수 있다. 특별히 언급할 만한 것은, MALDI-TOF MS는 이미 생명과학 분야의 단백질체학 연구에서 없어서는 안 될 중요한 핵심 기술 중 하나가 되었다는 점이다.
과학기술의 신속한 발전, 특히 빅데이터 처리 기술의 발전으로 인해, 충분한 데이터 정보만 있으면 유사한 인체 분자 기능 메커니즘에 대한 심층적 이해와 응용을 촉진할 수 있다.
혈청 종양 마커의 검출은 종양 진단에 중요한 작용을 하는 비침습적 진단 방법으로 사용될 수 있다. 그러므로, 혈청 종양 마커 그룹에 대한 간단하고 신속하며 민감하고 동적인 진단 방법을 확립하는 것은 종양 조기 진단 및 예방의 핵심이다. 본 발명의 목적은, 앱타머 그룹을 이용해 검출 용액 내의 마커 그룹을 포획하고 마커 그룹을 분리해 얻은 후, MALDI-TOF MS 및 생물정보학 등을 통해 마커 그룹에 대해 정성 및 정량분석을 진행하는 수행함으로써 혈청, 체액 등 복합 표본 검출에 사용되는 방안을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 한 방안은 이하 기술방안을 통해 구현된다. 다중 마커를 동시에 검출 및 분석하기 위한, 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법으로서, 상기 방법은 다음과 같은 단계를 포함한다.
(1) 인큐베이션: 자기 비드-앱타머와 표본을 함께 인큐베이팅해 자기 비드-앱타머-표적 분자 복합물을 형성하는 단계;
(2) 산 용출: 용출 완충액을 넣고 흔든 후 용출액을 수집하고, 표적 분자를 검출하는 표준 펩티드가 함유된 TrisHCL을 즉시 첨가해 중화시키는 단계;
(3) 정성·정량분석에서 지정된 표적 분자를 질량분석하는 단계;
(4) 데이터 플랫폼 분석 시스템을 통해 분석을 진행하는 단계이다.
바람직하게는, 단계(1)에 따른 표본은 혈청, 소변, 체액, 세포 및 조직 현탁액 중 적어도 하나를 포함한다.
바람직하게는, 단계(1)에 따른 앱타머는 상기 표본을 대상으로 SELEX를 이용해 스크리닝한 특이적인 앱타머 그룹이다.
바람직하게는, 단계(2)에서 앱타머와 표적 분자를 분리하기 위한 산 용출의 용출 효율은 98% 이상이다.
바람직하게는, 단계(2)에서 상기 표준 펩티드는 지정된 펩티드에 대해 정확하게 정성·정량분석을 진행하기 위해 질량분석 표본에 도입된 참조 표준 펩티드를 의미한다.
바람직하게는, 단계(3)에 따른 표적 분자는 실험 스크리닝을 통해 얻은 특이적인 마커를 갖는 표적 분자이다.
바람직하게는, 단계(4)는 지정된 단백질의 검출된 용량영향관계에 따라 기능적 메커니즘을 추론하고 분석 보고서를 작성한다.
바람직하게는, 단계(1)에 따른 상기 표본은 이하 방법을 통해 제조된다.
정맥 천자법에 따라 필요한 혈액량을 취하고, 즉시 바늘을 떼어내고, 항응고제가 들어있는 시험관에 혈액을 주입하고, 즉시 부드럽게 흔들어 혈액과 항응고제를 균일하게 혼합함으로써 혈액 응고를 방지하고, 3,000-6000 rpm에서 원심 분리해 혈청을 얻는다.
바람직하게는, 단계(1)에서 상기 자기 비드-앱타머-표적 분자 복합물은 이하 방법으로 형성된다. 상기 표본 100μL과 상기 자기 비드-앱타머 50μL를 37 ℃에서 30분간 인큐베이팅한다. 3xSSC로 1회 세척하고, 20배 부피의 0.4mM Binding Buffer로 3회 세척한 후 자기 분리를 거쳐 얻는다.
바람직하게는, 단계(2)는 이하 단계를 포함한다. 단계(1)에서 언급한 자기 비드-앱타머-표적 분자 복합물에 0.5ml의 용출 완충액을 첨가하고 1분 동안 흔들어 용출액을 수집한다; 즉시 pH가 8.0인 1M TrisHCL 250μL를 첨가해 중화한다; 용출을 3회 반복한다; 용출 중화액을 3회 혼합해 질량분석을 위한 표적 분자 검출액을 얻는다.
본 발명에 따른 또 다른 방안은 이하 기술방안을 통해 구현된다. 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시 검출하는 키트로서, 상기 키트는 다음을 포함한다.
시약 1: 5-10mL, pH값이 7.4인 0.01-0.1M 인산염 완충제, 입자 크기가 5-50nm인 50%의 스트렙타비딘 한천 자기 비드 함유;
시약 2: 5-10mL, pH값이 7.4인 0.4mM 1×Binding Buffer 완충액, 0.003-0.3ug/L의 특이적인 비오티닐레이트 앱타머 함유;
시약 3: 용출 완충액.
바람직하게는, 상기 용출 완충액은 글리신, 염화나트륨 및 Tween20을 포함한다.
본 발명에 따른 또 다른 방안은 이하 기술방안을 통해 구현된다. 자기 비드-앱타머-질량분석 다중 분자를 검출하는 분석 시스템으로서,
표면에 특이적인 앱타머 그룹을 갖는 자기 비드 분리 담체를 포함하는 적어도 하나의 제1 시약;
분자 용출액을 포함하는 적어도 하나의 제2 시약;
질량분석기를 포함하는 적어도 하나의 기기 검출 플랫폼; 및
데이터 분석 기기 및 상응하는 소프트웨어를 포함하는 적어도 하나의 데이터 플랫폼을 포함하고;
여기에서, 상기 특이적인 앱타머 그룹은 복합물 표본의 특이적인 분자를 대상으로 스크리닝한 특이적인 앱타머 그룹이고, 상기 자기 비드 분리 담체는 상기 특이적인 앱타머 그룹을 자기 비드에 코팅하도록 형성되어 마커를 특이적으로 결합할 수 있다.
상기 기기 감지 플랫폼은 결합된 자기 비드의 중화액을 세척하고 레이저 탈착 비행 질량분석을 통해 표본 내의 특정 분자 함량을 검출하는 데 사용된다.
상기 데이터 분석 소프트웨어는 질량분석에 의해 검출된 특정 표적 분자의 용량영향관계를 분석해 분자의 상호관계 및 기능적 관련성을 결정하는 데 사용된다.
바람직하게는, 상기 특이적인 앱타머 그룹은 SELEX에 의해 스크리닝된다.
바람직하게는, 상기 질량분석기는 상기 특이적인 앱타머 그룹에 의해 결합된 다중 표적 분자에 대해 정성·정량 검출을 진행하는 데 사용된다.
바람직하게는, 상기 데이터 분석 소프트웨어는 특정 질병 검출물 내의 발병 분자 기능 메커니즘과 특정 마커의 성질 및 함량을 대상으로, 데이터 분석 소프트웨어를 통해 발병 확률과 발병 메커니즘의 참고 결과를 분석하고 판단한다.
다중 마커를 동시에 검출하고 결과를 분석하는 상기 방법은 이하 유익한 효과가 있다.
자기 비드를 담체로 이용해 특이적인 앱타머를 통해 표적 분자(비핵산 분자)와 결합한 후, 질량분석을 통해 정성·정량분석 및 데이터 유도 분석을 진행함으로써 오믹 분석 결과를 얻으므로, 다양한 비핵산 리간드의 신호에 대해 검출 및/또는 생물정보학 분석을 진행할 수 있다. 게다가, 상기 방법은 신속함, 높은 민감도, 강한 특이성, 완전한 다중 리간드 그룹 마이크로 어레이 검출, 유도 분석 및 간단한 인공조작, 전 과정 기계화 완성 가능 등의 특징이 있다.
자기 비드(한천 자기 비드 등)를 담체로 이용해 표적 분자를 부착하고, 검출 분자에 대해 자기 분리, 기계적 로딩, 분리, 용출, 인큐베이션 등을 진행한 후, 질량분석에 의한 정성·정량분석을 거쳐 관련 분자의 특정 스펙트럼을 얻고, 데이터 플랫폼의 처리 및 분석을 이용해 상응하는 결과를 제공한다.
한천 자기 비드는 비용이 저렴하고 생물 호환성이 우수하며 결합 분자의 공간 구조를 유지할 수 있다는 특성이 있다. 한천 자기 비드의 구조는, 상자성 자석(사산화철)이 한천으로 코팅되어 있고 탈지분유로 밀봉되어 있으며, 카르복실기, 에폭시기 및 아미노기와 같은 활성 그룹이 더해져, 생체분자를 결합하는 능력이 우수하다.
본 발명에 따른 특이적인 앱타머는 필요에 따라 SELEX기술을 이용해 서로 다른 표본을 스크리닝해 얻은 특이적인 앱타머 분자로서, 상기 앱타머는 표본 내의 특이적인 분자를 결합할 수 있으며, 상기 분자는 표본을 수집하는 생물체의 비정상적인 기능에 의해 형성된다. 그러므로, 상기 분자에 대한 정성·정량분석을 통해 생물이 생성하는 비정상적인 기능(즉, 발병 메커니즘)을 간접적으로 판단할 수 있다.
강력한 이온산 용출액(0.1M 글리신, 0.5M 염화나트륨, pH3.0, 0.05% Tween20)인 용출액으로 세척하고, 자기 결합을 이용해 1분 동안 흔들어 용출액을 수집한다. 즉시 1M TrisHCL 250μL(pH 8.0)를 첨가해 중화하고, 3회 반복해 질량분석을 위해 혼합한다. 특정 단백질의 정성·정량분석을 위해, 산성 중화액에 특정 펩티드가 포함된 표준 표본을 첨가한다.
질량분석기와 표준 펩티드를 이용해 특정 단백질에 대해 정성·정량분석을 진행한다. 특정 데이터 분석 플랫폼을 이용해 데이터 처리 및 분석을 진행하고, 참조 결과를 제공한다. 데이터 플랫폼은 SELEX로 스크리닝해 얻은 특이적인 앱타머로 특이적인 분자를 추출하고, 연구를 거쳐 질병 등의 발병 메커니즘 기능을 획득한 후 기능 내의 특정 마커 단백질 그룹을 선택한다. 마커 단백질 그룹의 단백질 성질과 수량을 통해 발병 및/또는 생리적 메커니즘을 판단할 수 있다. 데이터 플랫폼은 질량분석에 의해 측정된 각 분자의 특성과 양, 발병 및/또는 생리학적 메커니즘 간의 관계를 기반으로 구축된 분석 플랫폼이다.
사용되는 검출기기는 자동 표본 로딩, 인큐베이션, 세척, 질량분석기에 의한 상대적 정성·정량분석, 데이터 플랫폼을 이용한 데이터 처리 및 보고를 포함한 모든 검출 과정을 기계적으로 완료할 수 있다. 시약 로딩, 시약 첨가, 세척, 질량분석 검출 및 다중 분자 데이터 처리 및 결과 분석 등의 절차를 고도의 기계화로 완전히 기계화할 수 있다. 표본의 다중 분자 검출을 통해 많은 양의 정보를 저장할 수 있으며, 이는 유기체의 전반적인 상태와 기본적인 기능 메커니즘을 보다 포괄적으로 반영할 수 있다.
본 발명에 따른 특이적인 핵산 앱타머는 필요에 따라 SELEX기술을 이용해 서로 다른 표본을 스크리닝해 얻은 특이적인 핵산 앱타머 분자로서, 상기 핵산 앱타머는 표본 내의 특이적인 분자를 결합할 수 있으며 상기 분자는 표본을 수집하는 생물체의 비정상적인 기능에 의해 형성된다. 그러므로, 상기 분자에 대한 정성·정량분석을 통해 생물이 생성하는 비정상적인 기능(예: 발병 메커니즘)을 간접적으로 판단할 수 있다. 질량분석 검출은 매우 우수한 다중 분자 검출 기술로서, 앱타머가 포획한 표본의 특정 표적 분자를 체계적으로 검출하고 분자 간의 용량영향관계를 유지할 수 있어, 생물 유기체의 기능을 포괄적으로 이해하는 데 매우 큰 도움이 된다.
본 발명은 민감도가 높고 특이성이 강하며, 앱타머와 리간드의 특이적 결합을 이용해 검출의 특이성을 향상시킨다. 질량분석 검출은 많은 양의 데이터를 수집하며, 정확한 정보 수집 및 처리 시스템을 갖추고 있다. 본 발명에 따른 기기의 정보 수집 및 처리 시스템은 질량분석 검출에 의해 완성되므로 정확한 데이터 보고를 내보낼 수 있다.
검출에는 단일 기구가 사용되고, 조작 과정이 간단하며, 데이터 수집 및 처리는 완전히 밀폐된 상태에서 완료될 수 있기에 환경의 안전과 청결을 효과적으로 보장한다. 반응 시에는 앱타머와 리간드를 실온에서 45분 동안 인큐베이팅하기만 하면 앱타머와 리간드의 결합 반응을 완성할 수 있으므로, 조작이 간편하고 일반 실험실 또는 임상 실험실에 보급, 응용하기에 편리하다. 본 발명에서 조립된 검출 키트 또는 구축된 바이오칩은 기초 연구 및 임상 검출에 널리 사용될 수 있으며, 일정한 경제적, 사회적 효익을 가져올 수 있다.
요약하면, 본 발명에 따른 자기 비드-핵산 앱타머-다중 분자 질량분석 검출 방법을 이용해 단백질(비핵산 표적 분자 등) 및 유전자를 동시에 검출하는 키트는 앱타머 비콘 분자(이 분자는 《신형 리간드 검출 방법》 이라는 CN1521272 특허로 출원되었음)의 리간드를 이용해 단백질 리간드와 결합함으로써 리간드-앱타머 비콘 분자 복합물을 형성한다. 이로써 표적 분자의 리간드 정보를 핵산 비콘 정보로 변환해 표적 분자의 정보와 핵산 유전자 정보를 통합하고, 실시간 정량 PCR을 이용해 표적 분자와 핵산 유전자를 동시에 검출한다. 본 발명의 키트는 특이적인 앱타머 그룹과 자기 분리 기술을 적용해 표적 분자를 추출하고 분리한다. 차이점은, 질량분석을 적용해 다중 표적 분자 정보를 수집하고 복합 표본에 대해 다중 분자 정보를 수집함으로써 다중 표적 분자의 정성·정량분석을 구현하므로, 생물학적 기능을 이해하기 위해 완전한 데이터 정보를 제공할 수 있다는 점이다. 상기 키트는 조작 방법이 간단하고 비용이 저렴할 뿐만 아니라, 검출 기술의 신속함, 높은 민감도, 강한 특이성, 다량의 분자 정보 및 기계화 완성 등의 특징을 가지고 있다. 병원체, 유전자 및 단백질체학에 대한 연구는 매우 중요한 의의가 있다.
이하, 첨부도면 및 구체적인 실시예를 조합해 본 발명에 대해 보다 상세히 설명한다.
도 1은 본 발명 실시예 1의 모식도이다.
도 2는 본 발명 실시예 2의 모식도이다.
도 3은 본 발명 실시예 3의 모식도이다
본 발명에 따른 일 실시예에서, 다중 마커를 동시에 검출하는 방법은 이하 단계를 포함한다.
(1) 검출할 표본을 탈지하고, 4 ℃까지 온도를 내린 후 3000rpm에서 20분 동안 원심 분리하고, 상층 유지를 폐기한다.
(2) 특이적인 핵산 앱타머 그룹 자기 비드를 가진 0.4mM의 Binding Buffer 완충액에 처리된 표본을 첨가해 결합시킨다.
(3) 결합된 자기 비드를 PH 7.4의 3×SSC 완충액으로 1회 세척한 후, 10배 부피의 BB로 3회 세척한다.
(4) 알칼리성 완충액으로 특이적인 마커 결합 자기 비드를 용출하고, 1/2 부피의 산성 완충액을 첨가해 중화시켜 표적 분자 추출액을 형성한다.
(이상의 (2)-(4)단계는 자기 비드 세척 추출기 등으로 단번에 완료할 수 있다.)
(5) 레이저 탈착 비행 질량분석을 통해 표적 분자 추출액을 분석해, 표본 내의 특정 단백질 분자의 함량을 검출한다.
(6) 검출된 특정 단백질 분자의 함량을 데이터 플랫폼을 통해 분석, 처리해 질병의 발병 메커니즘을 파악하고 치료 방안을 추천한다.
일 실시예에서, 키트는 이하 시약을 포함한다.
시약 1: 5-10mL, pH값이 7.4인 0.01-0.1M 인산염 완충제, 입자 크기가 5-50nm인 50%의 스트렙타비딘 한천 자기 비드 함유;
시약 2: 5-10mL, pH값이 7.4인 0.4mM 1x Binding Buffer 완충액, 0.003-0.3ug/L의 특이적인 비오티닐레이트 핵산 앱타머 함유;
시약 3: 용출 완충액.
구체적으로, 한천 자기 비드는 카르복실기(또는 에폭시기)를 통해 스트렙타비딘과 연결된 후, 비오틴화된 앱타머에 의해 형성된 표적 분자와 연결되어 담체(0.01 %의 아지드화 나트륨을 방부제로 함유)를 결합한다.
pH값이 7.4인 0.4mM Binding Buffer는 앱타머와 표적 분자를 결합하는 완충액(0.01 %의 아지드화 나트륨을 방부제로 함유)이다(1L 1×BB의 제조: 138mmol/L NaCl, 2.7mmol/L KCl, 8.1mmol/L Na2HPO4, 1.1mmol/L KH2PO4, 1mmol/L MgCl2, HCl로 용액의 pH를 7.4로 조절하고, 1L까지 물로 희석한다. 20분 동안 고압 증기로 살균하고 실온에서 보관한다).
pH 7.4의 3×SSC 완충액으로 세척한다.
염기성 용출액을 2배 면적의 용출 완충액에 첨가하고(0.1M 글리신, 0.5M 염화나트륨, pH3.0, 0.05% Tween20), 1분 동안 흔들어 용출액을 수집한다.
산성 중화액(표준 펩티드 시약 포함)을 1/2 부피의 산성 중화액(250μL 1M TrisHCL (pH 8.0))에 첨가해 중화시킨다.
다른 실시예에서, 본 실시예에 따른 자기 비드-핵산 앱타머-질량분석 다중 분자 검출 방법은 특이적인 앱타머가 코팅된 자기 비드를 이용해 표적 분자 그룹을 분리 및 추출하고, 질량분석에 의한 정성·정량분석 및 데이터 플랫폼 분석을 통해 검출 결과를 제공한다. 상기 방법은 다음과 같은 단계를 포함한다.
1. 표본 제조: 정맥 천자법에 따라 필요한 혈액량을 취한다; 즉시 바늘을 떼어내고 항응고제가 들어있는 시험관에 혈액을 주입한다; 즉시 부드럽게 흔들어 혈액과 항응고제를 균일하게 혼합함으로써 혈액 응고를 방지한다; 3,000-6000 rpm에서 원심 분리해 혈청을 분리한 것이 표본이다.
2. 자기 비드-앱타머-표적 분자 복합물 형성: 표본 100μL과 자기 비드-앱타머 50μL를 37 ℃에서 30분간 인큐베이팅한다. 3×SSC로 1회 세척하고, 20배 부피의 0.4mM Binding Buffer로 3회 세척한 후 자기 분리를 거쳐 자기 비드-앱타머-표적 분자 복합물을 얻는다.
3. 표적 분자 표본 제조: 자기 분리된 자기 비드-앱타머-표적 분자 복합물에 용출 완충액 0.5mL를 첨가하고(0.1M 글리신, 0.5M 염화나트륨, pH3.0, 0.05% Tween20) 1분 동안 흔들어 용출액을 수집한다. 즉시 1M TrisHCL 250μL(pH 8.0)를 첨가해 중화하고(정성·정량분석을 위한 표준 펩티드 분자 함유) 용출을 3회 반복한다. 용출 중화액을 3회 혼합하면 질량분석을 위한 표적 분자 검출액이 된다.
4. 질량분석 검출: 질량분석을 통해 표적 분자에 대해 정성·정량분석을 진행해 표적 분자에 대한 정보를 얻는다.
5. 데이터 플랫폼으로 데이터를 분석하고 분석 보고를 얻는다.
이하 구체적인 실시방식을 조합해 본 발명에 대해 추가적으로 설명한다.
실시예 1: 다중 단백질 및 유전자의 동시 검출에 의한 잠복기 단축 방법
도 1을 참조하면, 단백질에 대한 정성·정량분석과 유전자에 대한 정성·정량분석을 통해, 잠복기, 무증상기 및 발병기와 같은 에이즈 감염 상태를 알아낸다.
(혈청) 표본 제조
먼저 준비물을 준비하고 라벨을 붙인 후, 착오가 없는지 확인하고 정맥 천자법에 따라 필요한 혈액량을 채취한다. 즉시 바늘을 떼어내고 항응고제가 들어있는 시험관에 혈액을 주입한다. 즉시 부드럽게 흔들어 혈액과 항응고제를 균일하게 혼합함으로써 혈액 응고를 방지한다. 3000-6000 rpm에서 원심 분리해 혈청을 표본으로 분리하고, 4 ℃에서 보관한다.
P24 항원, P24 항체, CD4 및 바이러스막 항체 앱타머의 제조
P24 항원, P24 항체, CD4 및 바이러스막 항체를 각각 표적 분자로 하여, SELEX를 이용해 특이적인 핵산 앱타머를 스크리닝한다.
자기 비드-앱타머-다중 단백질(P24 항원, P24 항체, CD4 및 바이러스막 항체 등) "샌드위치" 복합물 형성
먼저 스트렙타비딘 자기 비드를 취한다. 비오틴화된 앱타머(P24 항원, P24 항체, CD4 및 바이러스막 항체의 앱타머 포함)를 첨가하고 30분 동안 인큐베이팅한다. 0.05% Tween20이 함유된 PBS를 사용해 3회, 회당 3분 동안 세척하면 자기 비드-앱타머 복합물이 형성된다. 10-100μL의 상기 한천 자기 비드 복합물을 100-1000μL의 혈청 표본에 첨가하고 30분 동안 인큐베이팅한 후 결합해 자기 비드-앱타머-다중 단백질 복합물을 형성한다. 전자극을 이용해 자기 비드 흡착하고, 결합되지 않은 혈청을 분리해 제거한다. 혈청을 흡입한 후, Tween20 0.01-0.1M 400μL가 함유된 0.01-0.1M PBS 세척액으로 3-12회, 3-6분 세척한다.
질량분석 검출액 제조
산 용출: 0.5ml의 용출 완충액을 첨가하고(0.1M 글리신, 0.5M 염화나트륨, pH 3.0, 0.05% Tween20) 1분 동안 흔든다. 용출액을 수집한 후, 즉시 1M TrisHCL 250μL(pH 8.0)를 첨가해 중화한다. 용출을 3회 반복해 각각 용출액을 수집한다.
질량분석 검출: 질량분석기로 다중 단백질에 대해 정성·정량분석 검출을 진행한다(P24 항원, P24 항체, CD4 및 바이러스막 항체).
유전자 검출: 핵산 추출 자기 비드에 혈청을 첨가하고 분해액으로 분해한다. 자기 비드를 세척, 용출하고 역전사-PCR 증폭을 진행한다.
데이터를 수집, 처리 및 분석한다.
검출 보고서를 인쇄한다.
상기 검출 방법은 RNA, p120 및 p24 항원, CD4, 막 단백질 항체 및 항원 분자를 동시에 검출, 분석할 수 있으며, 환자의 상태를 전반적으로 이해하고 환자에게 합리적인 치료 방안을 제공할 수 있다.
실시예 2: 다중 종양 마커에 대한 분자 검출 방법
도 2를 참조하면, 펩티드의 용량영향관계를 통해 종양의 발생 및 암 유형(위암, 폐암 및 간암)을 결정한다.
(혈청)표본 제조
먼저 준비물을 준비하고 라벨을 붙인 후, 착오가 없는지 확인하고 정맥 천자법에 따라 필요한 혈액량을 채취한다. 즉시 바늘을 떼어내고 항응고제가 들어있는 시험관에 혈액을 주입한다. 즉시 부드럽게 흔들어 혈액과 항응고제를 균일하게 혼합함으로써 혈액 응고를 방지한다. 3000 rpm에서 원심 분리해 혈청을 표본으로 분리하고, 4 ℃에서 보관한다.
종양 마커 앱타머 제조
위암, 간암 및 폐암 혈청을 각각 복합 표적 분자로 하여(비위암혈청은 대조군), SELEX를 이용해 앱타머를 스크리닝하고, 3가지 종양의 동일한 앱타머를 종양 마커 앱타머로 취한다.
자기 비드-종양 마커 앱타머 복합물의 제조
스트렙타비딘 자기 비드를 취해 비오틴화된 종양 마커 앱타머에 첨가하고, 30분 동안 인큐베이팅한다. 0.05%의 Tween20이 함유된 PBS를 사용해 3회, 회당 3분 동안 세척하면 자기 비드-앱타머 복합물이 형성된다.
자기 비드-앱타머-다중 종양 마커 "샌드위치" 복합물 제조
10-100μL의 상기 한천 자기 비드-종양 마커 앱타머 복합물을 100-1000μL의 혈청 표본에 첨가하고 30분 동안 인큐베이팅한 후, 결합해 자기 비드-앱타머-다중 단백질 복합물을 형성한다. 전자극을 이용해 자기 비드를 흡착하고, 결합되지 않은 혈청을 분리해 제거한다. 혈청을 흡입한 후, Tween20 0.01-0.1M 400μL가 함유된 0.01-0.1M PBS 세척액으로 3-12회, 3-6분 세척한다.
다중 종양 마커 제조
산 용출: 0.5ml의 용출 완충액을 첨가하고(0.1M 글리신, 0.5M 염화나트륨, pH 3.0, 0.05% Tween20) 1분 동안 흔든다. 용출액을 수집한 후, 즉시 1M TrisHCL 250μL(pH 8.0)(표적 분자 검출을 위한 표준 펩티드 함유)를 첨가해 중화한다. 용출을 3회 반복해, 용출액을 다중 종양 마커 혼합액으로 수집한다.
질량분석 검출: 질량분석기 및 검출액 내의 표준 펩티드 분자를 이용해 다중 표적 분자에 대한 정성·정량분석 검출을 진행한다.
데이터를 수집, 처리 및 분석한다. 3가지 종양 앱타머에서 추출된 마커 표적 분자가 질량분석을 통해 종양 마커인 공통된 마커로 확인된 경우, 종양이 발생한 것으로 확인되었다. 3가지 종양이 지닌 특수 마커 분자는 종양 분류 마커이다.
검출 보고서를 인쇄한다.
실시예 3: 위암 발병 메커니즘 관련 다중 마커 분자의 검출 방법
도 3을 참조하면, 펩티드의 용량영향관계를 통해 위암의 발병 메커니즘을 결정한다.
(혈청) 표본 제조
먼저 준비물을 준비하고 라벨을 붙인 후, 착오가 없는지 확인하고 정맥 천자법에 따라 필요한 혈액량을 채취한다. 즉시 바늘을 떼어내고 항응고제가 들어있는 시험관에 혈액을 주입한다. 즉시 부드럽게 흔들어 혈액과 항응고제를 균일하게 혼합함으로써 혈액 응고를 방지한다. 3000 rpm에서 원심 분리해 혈청을 표본으로 분리하고, 4 ℃에서 보관한다.
위암 발병 메커니즘 관련 다중 마커 분자 앱타머의 제조
위암 혈청(비위암혈청은 대조군)을 복합 표적 분자로 하여, SELEX를 이용해 앱타머를 스크리닝하고 위암 마커 앱타머를 얻는다.
자기 비드-위암 마커 앱타머 복합물의 제조
스트렙타비딘 자기 비드를 취해 비오틴화된 위암 마커 앱타머에 첨가하고, 30분 동안 인큐베이팅한다. 0.05%의 Tween20이 함유된 PBS를 사용해 3회, 회당 3분 동안 세척하면 자기 비드-앱타머 복합물이 형성된다.
자기 비드-앱타머-위암 마커 "샌드위치" 복합물 제조
10-100μL의 상기 한천 자기 비드-위암 마커 앱타머 복합물을 100-1000μL의 혈청 표본에 첨가하고 30분 동안 인큐베이팅한 후, 결합해 자기 비드-앱타머-위암 마커 복합물을 형성한다. 전자극을 이용해 자기 비드 흡착하고, 결합되지 않은 혈청을 분리해 제거한다. 혈청을 흡입한 후, Tween20 0.01-0.1M 400μL가 함유된 0.01-0.1M PBS 세척액으로 3-12회, 3-6분 세척한다.
다중 위암 마커의 제조
산 용출: 0.5ml의 용출 완충액을 첨가하고(0.1M 글리신, 0.5M 염화나트륨, pH 3.0, 0.05% Tween20) 1분 동안 흔든다. 용출액을 수집한 후, 즉시 1M TrisHCL 250μL(pH 8.0)(표적 분자 검출을 위한 표준 펩티드 함유)를 첨가해 중화한다. 용출을 3회 반복해, 용출액을 다중 종양 마커 혼합액으로 수집한다.
질량분석 검출: 질량분석기 및 검출액 내의 표준 펩티드 분자를 이용해 다중 표적 분자에 대한 정성·정량분석 검출을 진행한다.
데이터를 수집, 처리 및 분석한다. 이는 위암 발병 메커니즘 관련 마커 표적 분자를 위암 앱타머를 통해 추출한 것을 기준으로 하며, 질량분석을 거쳐 확인, 분석한 후 위암의 발병 메커니즘을 요약한다.
검출 보고서를 인쇄한다.
본 발명은 분자 생물학 분야에 관한 것으로, 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법 및 키트를 제공한다. 상기 방법은, 특이적인 핵산 앱타머를 스크리닝하는 단계, 질량분석을 통해 표적 분자 그룹을 정성 및 정량적으로 검출하는 단계, 및 데이터 플랫폼을 통해 데이터를 처리하고 분석 보고를 제공함으로써 관련 다중 표적 분자 그룹의 검출을 구현하는 단계를 포함한다. 다중 표적 분자의 데이터 분석을 통해, 유기체 또는 특정 기능의 전반적인 상황을 보다 명확히 반영할 수 있다. 본 발명의 장점은, 특이적인 앱타머를 이용해 관련된 표적 분자 그룹을 포획하고, 질량분석에 의한 정성·정량분석을 통해 유기체 또는 조직의 기능 변화를 상대적으로 완전히 반영할 수 있으며, 데이터량이 많아 오믹 분석의 정확성을 크게 향상시켰다. 그러므로, 본 발명은 단백질체학 및 유전체학 연구 및 임상 분자 검출에 대해 중요한 의의를 갖는다.
당업자는 상술한 설명에 기초해 개선 또는 변경을 실시할 수 있으며, 이러한 모든 개선 및 변경은 본 발명에 첨부된 청구항의 보호범위 내에 속함을 이해해야 한다.
이상 본 발명에 대해 예시를 들어 설명했으나, 본 발명의 구현은 상술한 방식에 한정되지 않는다. 본 발명의 사상 및 기술방안에 의해 실시된 다양한 개선이나, 개선하지 않고 본 발명의 사상 및 기술방안을 직접 기타 상황에 응용한 경우 모두 본 발명의 보호범위 내에 속한다.

Claims (16)

  1. 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법에 있어서,
    상기 방법은 이하의 단계,
    (1) 인큐베이션: 자기 비드-앱타머와 표본을 함께 인큐베이팅해 자기 비드-앱타머-표적 분자 복합물을 형성하는 단계;
    (2) 산 용출: 용출 완충액을 넣고 흔든 후 용출액을 수집하고, 표적 분자를 검출하는 표준 펩티드가 함유된 TrisHCL을 즉시 첨가해 중화시키는 단계;
    (3) 정성·정량분석에서 지정된 표적 분자를 질량분석하는 단계;
    (4) 데이터 플랫폼 분석 시스템을 통해 분석을 진행하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    단계(1)에 따른 표본은 혈청, 소변, 체액, 세포 및 조직 현탁액 중 적어도 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    단계(1)에 따른 앱타머는 상기 표본을 대상으로 SELEX를 이용해 스크리닝한 특이적인 앱타머 그룹인 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    단계(2)에서 앱타머와 표적 분자를 분리하기 위한 산 용출의 용출 효율은 98% 이상인 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    단계(2)에서 상기 표준 펩티드는 지정된 펩티드에 대해 정확하게 정성·정량분석을 진행하기 위해 질량분석 표본에 도입된 참조 표준 펩티드를 의미하는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    단계(3)에 따른 표적 분자는 실험 스크리닝을 통해 얻은 특이적인 마커를 갖는 표적 분자인 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  7. 제1항에 있어서,
    단계(4)는 지정된 단백질의 검출된 용량영향관계에 따라 기능적 메커니즘을 추론하고, 분석 보고서를 작성하는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  8. 제1항에 있어서,
    단계(1)에 따른 상기 표본은 이하의 방법에 따라 제조되는데,
    정맥 천자법에 따라 필요한 혈액량을 취하고, 즉시 바늘을 떼어내고, 항응고제가 들어있는 시험관에 혈액을 주입하고, 즉시 부드럽게 흔들어 혈액과 항응고제를 균일하게 혼합함으로써 혈액 응고를 방지하고, 그런 다음 3,000-6000 rpm에서 원심 분리해 혈청을 얻는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  9. 제1항에 있어서,
    단계(1)에서, 상기 자기 비드-앱타머-표적 분자 복합물은 이하 방법으로 형성되는데,
    상기 표본 100μL과 상기 자기 비드-앱타머 50μL를 37 ℃에서 30분간 인큐베이팅하고, 3xSSC로 1회 세척하고, 20배 부피의 0.4mM Binding Buffer로 3회 세척한 후 자기 분리를 거쳐 얻는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  10. 제1항에 있어서,
    단계(2)는,
    단계(1)에서 언급한 자기 비드-앱타머-표적 분자 복합물에 0.5ml의 용출 완충액을 첨가하고, 1분 동안 흔들어 용출액을 수집하고, 즉시 pH가 8.0인 1M TrisHCL 250μL를 첨가해 중화하고, 용출을 3회 반복하고, 용출 중화액을 3회 혼합해 질량분석을 위한 표적 분자 검출액을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시에 검출하는 방법.
  11. 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시 검출하는 키트에 있어서,
    시약 1: 5-10mL, pH값이 7.4인 0.01-0.1M 인산염 완충제, 입자 크기가 5-50nm인 50%의 스트렙타비딘 한천 자기 비드 함유;
    시약 2: 5-10mL, pH값이 7.4인 0.4mM 1×Binding Buffer 완충액, 0.003-0.3ug/L의 특이적인 비오티닐레이트 앱타머 함유;
    시약 3: 용출 완충액;을 포함하는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시 검출하는 키트.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 용출 완충액은 글리신, 염화나트륨 및 Tween20을 포함하는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-다중 표적 분자를 동시 검출하는 키트.
  13. 자기 비드-앱타머-질량분석 다중 분자를 검출하는 분석 시스템에 있어서,
    표면에 특이적인 앱타머 그룹을 갖는 자기 비드 분리 담체를 포함하는 적어도 하나의 제1 시약;
    분자 용출액을 포함하는 적어도 하나의 제2 시약;
    질량분석기를 포함하는 적어도 하나의 기기 검출 플랫폼; 및
    데이터 분석 기기 및 상응하는 소프트웨어를 포함하는 적어도 하나의 데이터 플랫폼을 포함하고;
    여기에서, 상기 특이적인 앱타머 그룹은 복합물 표본의 특이적인 분자를 대상으로 스크리닝한 특이적인 앱타머 그룹이고, 상기 자기 비드 분리 담체는 상기 특이적인 앱타머 그룹을 자기 비드에 코팅하도록 형성되어 마커를 특이적으로 결합하고;
    상기 기기 감지 플랫폼은 결합된 자기 비드의 중화액을 세척하고, 레이저 탈착 비행 질량분석을 통해 표본 내의 특정 분자 함량을 검출하는 데 사용되고;
    상기 데이터 분석 소프트웨어는 질량분석에 의해 검출된 특정 표적 분자의 용량영향관계를 분석해, 분자의 상호관계 및 기능적 관련성을 결정하는 데 사용되는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-질량분석 다중 분자를 검출하는 분석 시스템.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 특이적인 앱타머 그룹은 SELEX에 의해 스크리닝되는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-질량분석 다중 분자를 검출하는 분석 시스템.
  15. 제13항에 있어서,
    상기 질량분석기는 상기 특이적인 앱타머 그룹에 의해 결합된 다중 표적 분자에 대해 정성·정량 검출을 진행하는 데 사용되는 것을 특징으로 하는 자기 비드-앱타머-질량분석 다중 분자를 검출하는 분석 시스템.
  16. 제13항에 있어서,
    상기 검출 분석 시스템은 특이적인 분자의 정성·정량 검출의 용량영향관계에 따라 특정 질병 및 생물학적 기능에 대해 자동 분석 시스템을 통해 제공하는 분석 보고 체계에 사용되는 것을 특징으로 하는 자기 비드-핵산 앱타머-질량분석 다중 분자의 검출 분석 시스템.
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