KR20210005046A - T-세포 유도 백신 조성물의 조합물 및 이의 용도 - Google Patents

T-세포 유도 백신 조성물의 조합물 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20210005046A
KR20210005046A KR1020207031886A KR20207031886A KR20210005046A KR 20210005046 A KR20210005046 A KR 20210005046A KR 1020207031886 A KR1020207031886 A KR 1020207031886A KR 20207031886 A KR20207031886 A KR 20207031886A KR 20210005046 A KR20210005046 A KR 20210005046A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
composition
antigen
peptide
fluorocarbon
cancer
Prior art date
Application number
KR1020207031886A
Other languages
English (en)
Inventor
베르트랑 조르주
스캇 로버츠
Original Assignee
알티뮨 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 알티뮨 인크. filed Critical 알티뮨 인크.
Publication of KR20210005046A publication Critical patent/KR20210005046A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/5555—Muramyl dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
    • C12N2740/13034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

본원에서는 필요한 개체에서 항원 특이적 T 세포 유도 반응을 향상시키기 위한 백신 조합물 및 방법이 제공된다. 상기 방법은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물; 및/또는 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하여 항원 특이적 CD8+ T 세포를 유도하는, 제2 조성물; 및 선택적으로 면역 조절제 조성물을 포함하는 제3 조성물를 이용한 전신적 백신을 조합한다.

Description

T-세포 유도 백신 조성물의 조합물 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
이 출원은 2018년 4월 4일에 출원된 미국 가출원번호 제62/652,478호 및 2018년 4월 4일에 출원된 미국 가출원번호 제62/652,484호의 이익을 주장하며, 그 내용은 그 전체가 각각 본원에 참조로 포함된다.
기술분야
본 출원은 일반적으로 프라임 투여량(prime dose) 및/또는 이종의(heterologous) 부스트 투여량(boost dose), 및 선택적으로 면역억제제 투여량을 포함하는 백신 조합물, 및 항원 특이적 CD8+ T 세포 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다.
백신은 세포내 병원체에 의해 유발된 질병 및 암에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 강력한(robust) CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 반응을 촉진하는 능력이 제한적이다. 결핵에 대한 BCG 백신은 유일한 예외로, 주로 T 세포의 유도를 통해 보호하는 것으로 보인다.
감염된 세포 또는 종양 세포의 제거에 직접적으로 기여하는데 충분한 크기와 이펙터 기능의 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 유도하도록 설계된 T 세포 유도 백신의 제조를 위해 상당한 노력이 이루어져 왔다. 전달 시스템 또는 재조합 바이러스 벡터와 결합된 합성 펩티드 또는 DNA를 사용하는 백신은, 항원을 세포내로 전달하거나 발현하는 능력을 제공함으로써 세포-매개성 면역을 유도하는 데 특히 중요하다. 그러나 항원/면역원/펩티드의 프라임 투여량 및 부스트 투여량이 동일한 전달 담체 및/또는 벡터를 통해 면역계에 제공되는, 동종의(homologous) 프라임-부스트 요법은 견고하고 내구성 있는 항-바이러스 및 항-종양 T 세포 면역의 생성 능력이 제한되어 있어 유의적인 임상 효능을 입증할 수 없었다.
상이한 전달 담체 및/또는 벡터를 사용하는 이종의(heterologous) 프라임-부스트 백신 접종은 다음과 같은 이유로 T 세포 면역 유도에 대한 동종의 프라임-부스팅과 비교하여 유망한 전략을 나타낸다: i) 백신-항체 면역 복합체를 통한 백신의 제거를 통해 표적 항원에 대한 면역을 방해하는 것으로 알려진 항-바이러스 벡터 항체 반응의 감소; 및 ii) 면역 반응을 다르게 자극하고 시너지 효과를 발휘할 수 있는 다양한 백신 기술의 잠재력. 이종의 프라임-부스트 접근법은 다양한 조성의 백신들에 대해 검토되었지만, 최근에는 임상 개발을 위한 DNA/바이러스 벡터 또는 바이러스 벡터/ 바이러스 벡터 조합에 주로 초점을 맞추고 있다. 강력하고 내구성이 강한 T 세포 면역을 자극할 것으로 전망됨에 따라, 이종의 프라임/부스트 백신 전략은 급성 및 만성 바이러스 감염, 암, 알레르기 및 자가면역에서 특히 관심사이다.
암 또는 만성 바이러스 감염에 대한 백신은 다른 치료법에 비해 높은 특이성, 유리한 안전성 프로파일, 기성품(off-the-shelf) 적용가능성, 및 평생 항-종양 면역의 가능성을 제공하는 매력적인 접근 방식을 나타낸다. T 세포 백신은 전반적으로 크게 개선되어 왔지만, 진행된 암이나 만성 바이러스 감염을 가진 환자에게는 단일 요법으로서의 임상적 이점을 제공하지 못한다.
암 및 만성 바이러스 감염의 맥락에서, 면역억제 메커니즘은 백신 면역요법으로 인한 항원-특이적 T 세포의 이펙터 활성을 방해하거나 감소시킨다. 이러한 면역억제 메커니즘은 억제성 골수 세포(suppressive myeloid cell), 종양-관련 대식세포, T 조절 세포, 및/또는 T 세포에서 발현되는 억제 수용체에 의해 직접 또는 간접적으로 발휘될 수 있다. 결과적으로, 항-면역억제제, 예를 들어 체크포인트 차단 억제제, 억제성 골수 세포 억제제, 또는 억제성 골수 세포의 재프로그래밍 또는 재분극에 관여하는 화합물은, 백신 면역요법으로 인한 항원-특이적 T 세포의 유도 및 이의 항바이러스 또는 항종양 기능을 향상시킬 수 있는 잠재력을 가진 치료 약물 부류를 나타낸다. 또한, 면역활성제, 예를 들어 T 세포에 의해 발현되는 공동-자극 수용체를 표적으로 하는 제제, 사이토카인 또는 면역 자극제도, 백신 면역요법으로 인한 항원-특이적 T 세포의 유도 및 이의 항바이러스 또는 항종양 기능을 개선하기 위해 사용될 수 있다.
따라서, 특히 암 및 만성 감염의 맥락에서, 세포 매개성 면역 반응을 유도하는 보다 강력한 백신 조성물이 필요하다.
발명의 요지
본 명세서에서 제공된 일부 구체예는 이종의(heterologous) 프라임 부스트 투여요법(prime boost dosing regimen)을 투여하기 위한 백신 조합물 및 방법을 포함하며, 프라임 투여량(prime dose)의 백신 조성물은 부스트 투여량(boost dose)의 백신 조성물과 다르되, 각 투여량은 동일한 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 포함한다. 다시 말해서, 백신 조성물들은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 공통으로 가진 폴리펩티드를 포함한다. 본원의 백신 조성물들은 T 세포 유도 백신 조성물들이고; 백신들은 보호 항체 반응을 유도하는 B 세포의 경우 CD4+ T 세포 도움만 있는 것과 비교하여, 세포-매개성 이펙터 메커니즘을 통해 병원체 또는 종양 제거에 직접 기여하는 충분한 크기와 필요한 표현형 또는 이펙터 기능의 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 유도하도록 설계된다.
특정 구체예에서, a) 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터(non-replicating viral vector)를 포함하는 제1 조성물; 및, b) 플루오로카본-연결된 펩티드(fluorocarbon-linked peptide)를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는, 제2 조성물을 포함하는 백신 조합물이 제공된다. 실시예 1 참조. 제1 또는 제2 조성물 중 하나는 프라임 조성물 또는 부스트 조성물일 수 있다. 특정 구체예에서, 백신 조합물은 항-면역억제제 또는 면역활성제를 포함하는 면역조절제를 추가로 포함할 수 있다.
구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 홍역 바이러스(measles virus) 벡터, 폭스바이러스(poxviruse) 벡터 또는 수포성구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus) 벡터이다. 특정 구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 E1 및 E3이 결실된 아데노바이러스 벡터이다.
예시적 구체예에서, 백신 조합물은 (예방적 또는 치료적) 암 백신 또는 만성 감염 백신으로서 면역 반응을 유도하는 방법에 사용된다. 암 백신의 경우, (여전히 중요하긴 하지만) 환자 특이적 항원을 찾는 것이 아니라 필요한 면역 반응을 유도하는 면역원성 방법을 더 많이 개발하는 것이 과제인데, 이를 위해서는 자가-항원에 대한 면역학적 관용을 깨야 한다. 본 출원인은 고도의 면역원성 투여요법을 제공하며, 이종의(heterologous) 투여요법은 본원에서 시험된 쥐 종양 모델에서의 동종의(homologous) 투여량과 비교하여 상승 작용적이다. 실시예 3 및 도 1-2 참조.
따라서, 본원에서는 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물을 투여하는 단계; 및 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 필요한 개체에서 면역 반응(예를 들어, 항원 CD8+ T 세포 반응)을 유도하는 방법이 제공되며, 상기 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유한다. 제1 및 제2 조성물이 모두 투여되는 경우, 제1 조성물 또는 제2 조성물 중 하나는 프라임 투여량으로 투여되고, 제1 조성물 또는 제2 조성물 중 나머지 하나는 부스트 투여량으로 투여된다.
본원에서 제공되는 추가 구체예는 백신 조합물 및 백신 조합물의 이러한 조성물들을 투여하기 위한 방법을 포함하며, 상기 조합물은 T 세포 유도 백신 조성물, 및 면역 체크포인트 억제제 또는 골수-유래 억제자 세포(MDSC) 억제제로부터 선택된 면역억제제를 포함하는 조성물을 포함한다. T 세포 유도 백신 조성물은, 보호 항체 반응을 유도하는 B 세포의 경우 CD4+ T 세포 도움만 있는 것과 비교하여, 세포-매개성 이펙터 메커니즘을 통해 병원체 또는 종양 제거에 직접 기여하는 충분한 크기와 필요한 표현형 또는 이펙터 기능의 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 유도하도록 설계된다. 구체예에서, 백신 조성물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 구체예에서, 본원의 T 세포 유도 백신 조성물은 비-복제 바이러스 벡터 또는 플루오로카본 연결된 펩티드(들)를 포함한다.
특정 구체예에서, a) 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물; 또는 b) 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는, 제2 조성물; 및 c) 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물을 포함하는, 백신 조합물이 제공된다.
구체예에서, 항-면역억제제는 PD1, PDL1, PDL2, CD28, CD80, CD86, CTLA4, B7RP1, ICOS, B7RPI, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, KIR, TCR, LAG3, CD 137, CD137L, OX40, OX40L, CD27, CD70, CD40, CD40L, TIM3, GAL1, GAL3, GAL9, ADORA, CD276, VTCN1, IDO1, KIR3DL1, HAVCR2, VISTA, CD244, ADAM17, COX2, PGE-2, iNOS2, PDE5, c-kit, ARG1, PI3K, CSF-1R, 카스파제-8, CCL2, RON, ROS, 또는 S100A8/A9을 표적으로 한다. 구체예에서, 항-면역억제제는 펨브롤리주맙 (KEYTRUDA), 니볼루맙 (OPDIVO), 세미플리맙 (LIBTAYO), 아테졸리주맙 (TECENTRIQ), 아벨루맙 (BAVENCIO), 두르발루맙 (IMFINZI) 이필리무맙 (YERVOY), REGN2810, BMS-936558 KN035, IBI308, PDR001, BGB-A317, BCD-100 또는 JS001이다.
다른 특정 구체예에서, 항-면역억제제는 PGE-2, COX2, NOS2, ARG1, PI3K, CSF-1R, 카스파제-8, CCL2, RON, ROSS100A8/A9 또는 간-X 핵 수용체를 표적으로하는, MDSC 억제제이다. 구체예에서, MDSC 억제제는 PF-5480090, INCB7839, 니트로-아스피린, SC58236, 셀레콕십, IPI-549, PLX3397, BLZ945, GW2580, RG7155, IMC-CS4, AMG-820, ARRY-382, 실데나필, 타다라필, 바르데나필, N-하이드록시-노르-L-Arg, 이마티닙, z-IETD-FMK, 트라벡테딘, 엠리카산, 항-CCL2 항체 (카를루맙 또는 ABN912), 타스퀴니모드, ASLAN002, IMC-RON8 또는 GW3965이다.
특정 구체예에서, 면역활성제는 톨-유사 수용체 (TLR) 3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, NOD1, NOD2, STING, cGAS, IFR3, IL-2 수용체, IL12 수용체 또는 IFN- 알파 수용체를 표적으로 한다. 특정 구체예에서, 면역활성제는 IMO-2125, SD-101, DV281, ADZ1419, PF-3512676 (아가톨리모드), CMP-001, 레피토리모드, IC31, MEDI9197, RO6864018, RO7020531, GS-9620, AZD8848, LFX453, CV8102, Motolimod (VTX-2337), BDB001, HILTONOL, KIN131A, MK-4621 (RGT100), 이나리기비르 (SB9200), MIW815 (ADU-S100), MK-1454, BMS-986301, SB 11285, IL-2, IL-12, 또는 IFN-α이다.
구현예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 홍역 바이러스(measles virus) 벡터, 폭스바이러스 벡터 또는 수포성구내염 바이러스 벡터이다. 특정 구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 E1 및 E3이 결실된 아데노바이러스 벡터이다.
본원에 제공된 특정 구체예에서, 백신 조합물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원의 펩티드를 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물; 및 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물을 포함한다. 본원에 제공된 다른 특정 구체예에서, 백신 조성물은 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는 i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 항원 또는 면역원의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 제2 조성물; 및 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물을 포함한다.
예시적 구현예에서, 백신 조합물은 (예방적 또는 치료적) 암 백신 또는 만성 감염 백신으로서 면역 반응을 유도하는 방법에 사용된다. 본원의 출원인은 고도의 면역원성 투여요법을 제공하며, 여기서 T 세포 유도 백신은, 본원에서 테스트된 쥐 종양 모델에서, 면역조절제 또는 T 세포 유도 백신 조성물 단독에 비해, 면역 체크포인트 억제제 또는 골수-유래 억제 세포 (myeloid-derived suppressor cell: MDSC) 억제제로부터 선택된 면역조절제와 상승 작용을 한다. 실시예 5 및 7 참조.
따라서, 본원에서는 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원의 펩티드를 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 조성물을 투여하거나, 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 조성물로서, 상기 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 항원 또는 면역원의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 조성물을 투여하는 단계; 및 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 조성물을 별도로 투여하는 단계를 포함하는, 필요한 개체에서 면역 반응(예를 들어, 항원 CD8+ T 세포 반응)을 유도하는 방법이 제공된다.
본 명세서에 통합되고 그 일부를 구성하는 첨부된 도면은, 본 발명의 하나 이상의 구현예를 예시하고, 상세한 설명 및 실시예 항목과 함께, 본 발명의 원리와 구현을 설명하는 역할을 한다.
도 1은 프라임 투여량 투여 후 24 일째에 각 그룹에 대해 계산된, 비장세포 백만 개당 IFN-γ 생산 세포 (스팟 형성 세포, SFC)의 수로 표현된 4개의 펩티드에 대한 누적 IFN-γ ELISpot 반응을 보여준다. 그룹 5 (프라임 투여량으로서 AdGP70 및 부스트 투여량으로서 PepGP70) 및 그룹 6 (프라임 투여량으로서 PepGP70 및 부스트 투여량으로서 AdGP70)은 동종(homologous) 프라임 부스트 그룹(그룹 1 내지 4)과 비교하여 상승 효과를 나타내는 이종(heterologous) 프라임 부스트 투여요법 그룹이다. 실시예 1 및 3 참조.
도 2는 프라임 투여량 투여 후 24 일째에 덱스트라머(dextramer) 염색에 대해 양성인 CD8+ T 세포의 백분율을 보여준다. 그룹 1 내지 4의 동물은 동종의 프라임 부스트 요법 (AdGP70 또는 PepGP70)를 투여받고, 그룹 4 및 5의 동물은 이종의 프라임 부스트 요법을 투여받았다; 프라임 투여량으로서 AdGP70 및 부스트 투여량으로서 PepGP70 (그룹 5) 또는 프라임 투여량으로서 PepGP70 및 부스트 투여량으로서 AdGP70 (그룹 6). 실시예 3 참조.
도 3은 항원-특이적 CD8+ T 세포는 6일째(D6) 및 20일째(D20)에 측정한 것으로, 개별적으로 또는 프라임-부스트 조합으로 시험된, 백신 조성물 PepGP70 및 AdGP70이, 항-종양 면역 반응을 촉진하는 능력에서 항-PD1 치료와 상승 작용을 나타냄을 보여준다. 그룹 1은 (프라임 및 부스트 투여량으로서) PepGP70 + 항-PD1이 투여되었고; 그룹 2는 (프라임 및 부스트 투여량으로서) AdGP70 + 항-PD1이 투여되었고; 그룹 3은 프라임 투여량으로서 AdGP70 및 부스트 투여량으로서 PepGP70 + 항-PD1이 투여되었고; 그룹 4는 프라임 투여량으로서 PepGP70 및 부스트 투여량으로서 AdGP70 + 항-PD1 이 투여되었고; 그룹 5에는 항-PD1 (대조군) 만 투여되었고; 그룹 6은 아무것도 투여되지 않았다 (대조군). AH1 펩티드는 GP70-472 및 GP70-CM에 존재하는, T 세포 에피토프 SPSYVYHQF (서열번호 72)이다. 실시예 1, 2 및 5 참조.
도 4A 및 4B는 부형제 그룹과 비교한, FP-OVA 백신에 대한 IFN-γ ELISpot 반응과 (도 4A), 및 E.G7-OVA 종양 모델에 대한 부형제와 비교한, FP-OVA 백신의 전체 생존 측면에서 항-종양 활성을 보여준다 (도 4B). 도 4B의 동물은 24 일째에 E.G7-OVA 세포로 유도되었으며, 이전에 투여된 백신 조성물은 종양 성장으로 인한 사망에 대한 보호를 제공했다. 실시예 6 참조.
도 5A 및 5B는 E.G7-OVA 종양 모델에 대해, 부형제 (도 5A)와 비교하여 FP-OVA 백신 (도 5B)의 종양 성장 방해 측면에서 항-종양 활성을 보여준다. 도 5B의 동물은 24 일째에 E.G7-OVA 세포로 유도되었고, 이전에 0 일째 및 14 일째에 투여된 백신 조성물은 종양 성장에 대한 보호를 제공했다. 실시예 6 참조.
도 6은 E.G7-OVA 종양 모델에 대해, 부형제 (그룹 3)와 비교하여 FP-OVA 백신 (그룹 1 및 2)의 전체 생존 측면에서 항-종양 활성을 보여주며, 동물들을 E.G7-OVA 세포로 유도한 후 동물들에 백신 조성물을 투여하여 백신 조성물의 치료 효과를 입증하였다.
도 7은 개별적으로 또는 항-PD1과 조합하여 시험된, 백신 조성물 PepGP70 또는 AdGP70이, 항-종양 면역 반응을 촉진하는 능력에서 항-PD1 치료와 상승 작용을 하는 것을 보여주며, 여기서 종양 크기는 수일에 걸쳐 측정되었다. 종양이 없는(tumor free) 동물이 단지 43% 인 그룹 1 (AdGP70)에 비해, 그룹 2 (AdGP70 + 항-PD1)는 종양이 없는 동물 79% 를 제공했고; 종양이 없는 동물이 단지 15% 인 그룹 3 (PepGP70)에 비해, 그룹 4 (PepGP70 + 항-PD1)는 종양이 없는 동물 62%을 제공했다. 항-PD1 단독은 종양이 없는 동물을 단지 29% 제공하였다. 실시예 7 참조.
도 8A 및 8B는 각 그룹에 대한 전체 생존을 보여준다; 면역 체크포인트 억제제 항-PD1의 존재 또는 부재 하의, 아데노바이러스 벡터 GP70 (도 8A) 및 플루오로카본에 연결된 GP70 펩티드 (도 8B). 실시예 7 참조.
도입
본 발명은 강화된 T 세포 반응을 유도하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 구체적으로, 본원의 백신 조합물은 지속적인 바이러스 감염 및 암을 제어함에 있어서 예방적 또는 치료적 T-세포 매개성 면역을 유도한다. 제공되는 방법 및 조성물은 T 세포 반응의 유도를 야기하는 이종의(heterologous) 백신 프라임 투여량 및 부스트 투여량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 "이종"은 부스트 투여량과 다른 프라임 투여량을 의미하되, 두 투여량 모두 하나 이상의 동일한 T 세포 에피토프를 포함한다. 특정 구체예에서, 이는, 항원/면역원/펩티드가 상이한 전달 담체 및/또는 벡터를 통해 면역계에 제공되는, 프라임 투여량 및 부스트 투여량을 의미한다. 본 출원인은 상이한 T 세포 유도 백신 (예를 들어, 항원을 코딩하는 바이러스 벡터, 및 상기 바이러스 벡터 발현 항원과 공통적인 T 세포 에피토프를 포함하는 펩티드를 함유하는 미셀)을 투여하는 것이 상승적으로 항원 특이적 T 세포 반응을 유도한다는 것을 발견했다. 실시예 3 참조. 구체예에서, 프라임 투여량 및 부스트 투여량은 하나 이상의 동일한 CD8+ T 세포 에피토프를 포함한다. 특정 구체예에서, 프라임 투여량 및/또는 부스트 투여량의 폴리펩티드는 또한 하나 이상의 CD4+ T 세포 에피토프를 포함한다.
항원/면역원의 서열은 동일하지 않을 수 있지만, 프라임 및 부스트 투여량에서 적어도 하나 이상의 T 세포 에피토프가 중복(overlap)되어야 한다 (예를 들어, 하나는 전장이고, 다른 하나는 전장 항원에서 유래된 짧은 펩티드로서 예컨대 키메라 펩티드일 수 있다). 이러한 T 세포 에피토프는 당업계 공지된 기술들을 사용하여 항원 또는 면역원에서 식별될 수 있으며, 이러한 공지된 기술들은 공개된 문헌들, 예를 들어 공개된 보고들에 따라 클래스 I 및/또는 클래스 II MHC 분자들에 결합하는 것으로 알려진 펩티드 서열들을 포함하는 데이터베이스 또는 웹사이트(예를 들어 SYFPEITHI 웹 사이트), 또는 인공 신경망 (ANN) 또는 안정화된 매트릭스 방법 (SMM)과 같은 알고리즘 (예를 들어, Immune Epitope Database 및 Analysis Resource 웹사이트를 사용함)를 포함한다. 실시예 1 참조. 구체예에서, 프라임 및 부스트 투여량은 하나 이상의 공통되는 CD8+ T 세포 에피토프를 포함한다.
본원에 제공된 특정 구체예에서, 백신 조합물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물; 및 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는, 제2 조성물을 포함한다. 특정 구체예에서, 제1 조성물은 프라임 투여량이고 제2 조성물은 부스트 투여량이다. 다른 특정 구체예에서, 제1 조성물은 부스트 투여량이고 제2 조성물은 프라임 투여량이다.
본원에 사용된 "이종의 투여요법(heterologous dosing regimen)"은 항원/면역원/펩티드가 상이한 전달 담체 및/또는 벡터를 통해 면역계에 제공되는, 프라임 투여량 및 부스트 투여량을 의미한다. 예를 들어, 본 발명에서 (프라임 투여량 또는 부스트 투여량으로서) 제1 조성물은 바이러스 벡터에 포함된 항원 또는 면역원을 포함하고, (프라임 투여량 또는 부스트 투여량으로서) 제2 조성물은 플루오로카본-결합된 펩티드를 포함하며, 상기 펩티드는 바이러스 벡터에 포함된 항원 또는 면역원과 공통인, 하나 이상의 T 세포 에피토프를 포함한다. 즉, 특정 구체예에서, 본원의 백신 조합물은 2개의 상이한 T 세포 유도 백신 조성물이고, 상기 각 조성물은 동일한 항원에 대해 항원 특이적 CD8+ T 세포를 유도한다.
본 출원인은 아데노바이러스 벡터에 포함된 항원 및 플루오로카본-결합된 펩티드를 사용한 이종의 투여요법 (하나 이상의 프라임 투여량 및 하나 이상의 부스트 투여량이 투여됨)이, 아데노바이러스 벡터에 포함된 항원 또는 플루오로카본-결합된 펩티드를 사용한 동종의 투여요법과 비교하여, 면역 반응 유도에 상승 효과를 제공함을 발견했다. 실시예 3, 도 1 및 2 참조. 도 1 및 2의 그룹 5 및 6은 이종의 투여요법이 투여된 동물을 나타내는 것으로, 동종의 투여요법으로 투여된 동물을 나타내는 그룹 1 내지 4와 대비된다. 이종의 프라임 투여량 및 부스트 투여량의 투여는, 도 1 및 2에서 입증된 바와 같이, 항원 특이적 CD8+ T 세포 반응을 유도한다.
특정 구체예에서, 본원의 백신 조합물은 종양을 치료하기 위한 치료제 및/또는 암을 예방하기 위한 예방제로서 사용된다. 본원의 백신 조합물의 상승적 효과는 특정 종양들을 치료하는 데 사용될 수 있다. 실시예 4 참조. 특정 다른 구체예에서, 본원의 백신 조합물은 만성 감염을 치료하기 위한 치료제로 사용된다.
특정 구체예에서, 본 백신 조합물은 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제 조성물을 포함하는 제3 조성물을 추가로 포함한다. T 세포의 PD1 및 종양 세포의 PD-L1과 같은 특정 면역 체크포인트 단백질은, 이러한 종양들에 대한 면역 반응을 약화시키는데, PD1이 PD-L1에 결합되면 이 상호작용은 T 세포가 종양 세포를 죽이는 것을 억제한다. 따라서 특정 면역 체크포인트 단백질과 항-면역억제제의 상호작용을 차단하면 T 세포가 이들 종양 세포를 죽일 수 있다. 본 발명은 암 또는 바이러스 항원과 같은, 종양 또는 암 유형 (예를 들어, 흑색종, 림프종, 폐암 등)에 특이적인 항원 특이적 CD8+ T 세포를 유도하는 이종의 투여요법의 상승 효과와, 암 세포를 죽이도록 T 세포에 비특이적으로 신호를 보내는 면역 체크포인트 억제제와 같은, 항-면역억제제를 조합한다.
구체예에서, 항-면역억제제는 MDSC 억제제이다. 골수 유래 억제 세포 (MDSC)는 골수 계통에서 유래된 이종 면역세포 그룹으로 만성 감염 및 암과 같은 특정 병리학적 상태에서 확장되며; 이들은 또한 특정 자가면역질환에서 역할을 할 수 있다. MDSC는 면역자극 특성보다는 강력한 면역억제 활성을 가지며, T 세포 및 특정 항원제시세포 (APC)와 상호 작용하여 이들의 기능을 조절한다. MDSC는 T 세포 (CD8+ 및 CD4+ T 세포 모두)의 공지된 억제자이며 자가면역질환 및 암에서 내성 유도를 매개한다. 따라서 MDSC 활성의 억제제는 특정 질병 상태에서 내성을 깨는 데 도움이 될 수 있다. 본 발명은 암 또는 바이러스 항원과 같은, 종양 또는 암 유형 (예를 들어, 흑색종, 림프종, 폐암 등)에 특이적인 항원 특이적 CD8+ T 세포를 유도하는 이종 투여요법의 상승 효과와, 관용성 MSDC를 억제하고 유도된 CD8+ T 세포에 의해 보다 강력한 면역 반응을 허용함으로써 내성 파괴를 돕는 MDSC 억제제를 조합한다.
본 출원인은 제2 조성물 (플루오로카본 연결된 펩티드)이 프라임 투여량으로 투여되고 제1 조성물 (비-복제 바이러스 벡터에 포함된 항원 또는 면역원)이 부스트 투여량으로 투여되는 경우, 면역 체크포인트 억제제와 조합된 본원의 이종 투여요법의 상승 효과를 발견하였다. 실시예 5 및 도 3 참조. 특정 구체예에서, 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀로서, 상기 플루오로카본에 연결된 각 펩티드가: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 부스트 투여량의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 부스트 투여량의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 미셀이 프라임 투여량으로서 투여되고(예를 들어, PepGP70), 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터가 부스트 투여량으로서 투여되며(예를 들어, AdGP70), 이들은 면역 체크포인트 억제제 항-PD1 의 투여와 조합된다. 플루오로카본 연결된 펩티드는 양친매성이며 특정 용매에서 자발적으로 미셀을 형성하며, 동물 또는 인간에게 투여될 때 이러한 미셀은 항원제시세포 (APC)에 우선적으로 흡수되어 프로세싱된다. 미국 특허번호 제7,687,455호 및 제9,119,811호 참조; 각각의 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.
본 출원인은 제3 조성물인 면역 체크포인트 억제제와 조합하여 제1 또는 제2 백신 조성물을 투여하는 것이, 이들 조성물의 단독 투여에 비해 유도된 면역 반응의 상승 효과를 제공한다는 것을 발견했다. 실시예 7 및 도 7, 8A 및 8B 참조. 도 7의 그룹 2 및 4는 백신 조합물이 투여된 동물을 나타내며, 2개의 T 세포 유도 백신 조성물 중 하나만 투여된 동물을 나타내는 그룹 1 및 3과 대비된다. 백신 조합물의 투여는 또한, 도 8A 및 8B에서 입증된 바와 같이, 단일 치료제를 투여한 동물과 비교하여 동물의 전체 생존을 증가시켰다.
본원에 제공된 특정 구체예에서, 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물; 및 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물을 포함하는 백신 조합물이 제공된다. 다른 특정 구체예에서, 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 상기 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는 i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 항원 또는 면역원의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는, 제2 조성물; 및 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물의 백신 조합물을 제공한다.
구체예에서, 제1 조성물은 아데노바이러스 벡터와 같은 비-복제 바이러스 벡터를 포함한다. 사용가능한 모든 복제-결핍 바이러스 벡터 중에서, 아데노바이러스는 재조합 항원에 대한 T 세포 반응을 프라이밍하는 데 가장 강력하다. 구체예에서, 제2 조성물은 플루오로카본 연결된 펩티드를 포함한다.
정의
본원에 사용된 용어 "a"또는 "an"은, 특허 문헌들에서 공통적으로 사용되는 바와 같이, 하나 또는 하나 이상을 포함하며, "적어도 하나" 또는 "하나 이상"의 임의의 다른 예시 또는 용법과 독립적이다.
본원에 사용된 용어 "또는"은 비배타적임을 나타내기 위해 사용되거나, 달리 명시되지 않는 한 "A 또는 B"는 "A이지만 B는 아님", "B이지만 A는 아님" 및 "A 및 B"를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "약"은 대략적으로, 거의, 또는 언급된 양과 같거나 그 부근에 있는 양을 나타내며, 예를 들어 언급된 양의 플러스/마이너스 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2% 또는 약 1%를 말한다.
본원에 사용된 용어 "면역보조제(adjuvant)"는 항원에 대한 신체의 면역 반응을 강화시키는 물질을 의미하며, 본 발명에서 면역보조제는 제1 조성물, 제2 조성물 및/또는 제3 조성물의 조합에 의해 유도된 세포 매개성 면역 반응을 강화시킨다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 면역보조제는 제1 조성물, 제2 조성물 및/또는 제3 조성물 중 임의의 것 또는 전부에 조합된다. 면역보조제는 본 발명의 제3 조성물과 구별된다. 세포 매개성 면역 반응을 강화시키기 위해 사용될 수 있는 면역보조제의 예는 톨-유사 수용체 (TLR) 작용제: 예를 들어 TLR2, TLR3, TLR7, TLR8 또는 TLR9의 작용제; 또는 STING, cGAS, IFR3, NOD1 또는 NOD2의 작용제를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
"투여"는 백신 조성물 또는 본원의 조합물을 개체에게 도입하는 것을 의미하고; 이는 또한 (예를 들어, 처방에 의해) 개체에게 본원의 조성물을 제공하는 행위를 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "치료적학적 유효량"은 세포 매개성 면역 반응을 유도할, 투여되는 화합물의 양을 지칭한다. 이 용어는 또한 치료될 병태의 하나 이상의 증상을 어느 정도 완화하거나 예방할, 본원의 조성물 또는 조합물의 양을 지칭한다. 본원의 조성물로 직접 치료할 수 있는 병태/질환과 관련하여, 치료학적 유효량은, 질병에 걸리기 쉽지만 병태/질환의 증상을 아직 경험하거나 나타내지 않은 동물에 있어서 병태/질환의 발생을 예방 (예방적 치료), 병태/질환의 증상 완화, 병태/질환의 정도 감소, 병태/질환의 안정화(예를 들어, 악화되지 않음), 병태/질환의 확산 방지, 병태/질환 진행의 지연 또는 늦추기, 병태/질환의 개선 또는 완화의 효과 및 이들의 조합을 나타내는 양을 지칭한다. 용어 "유효량"은 화합물의 부재하에 일어날 수 있는 반응과 구별되는 반응을 생성할, 투여되는 화합물의 양을 지칭한다. 면역요법 화합물을 포함하는 본원의 구체예와 관련하여, "유효량"은 화합물의 투여가 없는 경우에 예상되는 반응에 비해 수용자에서 면역학적 반응을 증가시키는 양이다.
용어 "동물"은 포유동물 개체, 예를 들어 인간, 말, 개, 고양이, 돼지, 가축 및 새와 같은 임의의 다른 포유류를 포함한다. 본원에서 언급되는 용어 "동물"은 또한 신생아, 배아 및 태아 단계를 포함한 모든 발달 단계의 개별 동물을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "숙주"또는 "유기체"는 인간, 포유동물 (예를 들어, 고양이, 개, 말 등), 곤충, 살아있는 세포 및 기타 살아있는 유기체를 포함한다. 살아있는 유기체는, 예를 들어 단일 진핵 세포처럼 단순할 수도 있고 포유류처럼 복잡할 수도 있다. 본원의 구체예가 관련된 전형적인 숙주는, 포유동물, 특히 영장류, 특히 인간일 것이다. 수의학 적용을 위해, 예를 들어 소(cattle), 양, 염소, 소(cow), 돼지 등과 같은 가축(livestock); 닭, 오리, 거위, 칠면조 등과 같은 가금류; 및 가축(domesticated animal), 특히 개와 고양이와 같은 애완 동물과 같은 다양한 개체들이 적합할 것이다. 연구 응용을 위해, 설치류 (예를 들어, 생쥐, 쥐, 햄스터), 토끼, 영장류, 그리고 근친 교배 돼지 등과 같은 돼지를 포함한 다양한 포유류가 적합한 대상이 될 것이다. 추가적으로, 시험관내 연구 응용과 같은 시험관내 응용의 경우, 포유동물 (특히 인간과 같은 영장류)의 혈액, 소변 또는 조직 샘플, 또는 수의학 용도로 언급된 동물의 혈액, 소변 또는 조직 샘플과 같은 상기 개체의 체액 및 세포 샘플이 적합할 것이다. 병태(들)에 "걸리기 쉬운" 숙주는, 하나 이상의 이들 병태 중 명백한 증상을 나타내지 않지만 유전적으로, 생리학적으로, 또는 다른 방법으로 이러한 병태들 중 하나 이상이 발병할 위험이 있는 숙주로 정의될 수 있다.
용어 "단백질", "폴리펩티드" 및 "펩티드"는 본원에서 상호교환적으로 지칭될 수 있다. 다만, 이들 용어는 다음과 같이 구분될 수 있다. "단백질"은 전형적으로 세포내에서 전사, 번역 및 번역 후 변형의 최종 생성물을 의미한다. 본원에 사용된 "폴리펩티드"는 "단백질" 또는 "펩티드"를 지칭할수 있다. "단백질"과 달리 "펩티드"는 전형적으로 길이가 100 개 이하의 아미노산인, 짧은 아미노산 중합체이다.
본 발명의 조성물, 제형 및 방법은 본 발명의 구성요소 및 성분 뿐만 아니라 본원에 기재된 다른 성분을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 구성될 수 있다. 본원에 사용된 "본질적으로 구성되는(consisting essentially of)"은 조성물, 제형 및 방법이 추가적인 단계, 구성요소 또는 성분을 포함할 수 있지만, 추가적인 단계, 구성요소 또는 성분이 청구항의 조성물, 제형 및 방법의 기본적이고 신규한 특성을 실질적으로 변경하지 않는 경우만을 의미한다.
또한, 본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 용어 "구성된(configured)"은 특정 작업을 수행하거나 특정 구성을 채택하도록 구성되거나 구축된 시스템, 장치 또는 기타 구조물을 설명한다는 점에 유의해야 한다. 용어 " 구성된(configured)"은 배열된 및 구성된, 구성된 및 배열된, 개조된 및 구성된, 개조된, 구성된, 제조된 및 배열된 등과 같은 다른 유사한 문구와 상호교환적으로 사용될수 있다.
본원에 사용된 용어 "인간 아데노바이러스"는 매스트아데노바이러스(Mastadenovirus) 속의 구성원을 포함하는, 아데노비리데 과(Adenoviridae family) 의 모든 인간 아데노바이러스를 포괄하는 것으로 의도된다. 지금까지 51개 이상의 인간 혈청형 아데노바이러스가 확인되었다 (예를 들어, Fields et al., Virology 2, Ch. 67 (3d ed., Lippincott-Raven Publishers) 참조). 아데노바이러스는 혈청군 A, B, C, D, E 또는 F 일 수 있다. 인간 아데노바이러스는 혈청형 1 (Ad 1), 혈청형 2 (Ad2), 혈청형 3 (Ad3), 혈청형 4 (Ad4), 혈청형 5 (Ad5), 혈청형 6 (Ad6), 혈청형 7 (Ad7), 혈청형 8 (Ad8), 혈청형 9 (Ad9), 혈청형 10 (Ad10), 혈청형 11 (Ad11), 혈청형 12 (Ad12), 혈청형 13 (Ad13), 혈청형 14 (Ad14), 혈청형 15 (Ad15), 혈청형 16 (Ad16), 혈청형 17 (Ad17), 혈청형 18 (Ad18), 혈청형 19 (Ad19), 혈청형 19a (Ad19a), 혈청형 19p (Ad19p), 혈청형 20 (Ad20), 혈청형 21 (Ad21), 혈청형 22 (Ad22), 혈청형 23 (Ad23), 혈청형 24 (Ad24), 혈청형 25 (Ad25), 혈청형 26 (Ad26), 혈청형 27 (Ad27), 혈청형 28 (Ad28), 혈청형 29 (Ad29), 혈청형 30 (Ad30), 혈청형 31 (Ad31), 혈청형 32 (Ad32), 혈청형 33 (Ad33), 혈청형 34 (Ad34), 혈청형 35 (Ad35), 혈청형 36 (Ad36), 혈청형 37 (Ad37), 혈청형 38 (Ad38), 혈청형 39 (Ad39), 혈청형 40 (Ad40), 혈청형 41 (Ad41), 혈청형 42 (Ad42), 혈청형 43 (Ad43), 혈청형 44 (Ad44), 혈청형 45 (Ad45), 혈청형 46 (Ad46), 혈청형 47 (Ad47) , 혈청형 48 (Ad48), 혈청형 49 (Ad49), 혈청형 50 (Ad50), 혈청형 51 (Ad51) 또는 이들의 조합일 수 있지만, 이들 예에 제한되지는 않다. 특정 구체예에서, 아데노바이러스는 혈청형 5 (Ad5)이다.
본원에서 사용되는 "면역조절제"는 환자의 면역체계를 이용하여 면역 제어, 안정화 및 질병의 잠재적 근절을 달성하는 것을 목표로 하는 다양한 치료제를 의미한다. 예를 들어, 면역조절제는 (예를 들어, 만성 감염 또는 특정 자가면역질환에 존재할 수 있는) 내성을 깨는데 사용되는 물질; 외부 또는 자기 (예를 들어, 암) 항원에 대한 숙주의 세포성 매개 면역 반응을 유도하거나 강화시키기 위해 면역 억제자 세포를 비활성화시키는 데 사용되는 물질; 또는 외부 또는 자기 (예를 들어, 암) 항원에 대한 숙주의 세포 매개성 면역 반응을 유도하거나 강화시키는 데에도 사용되는 면역 자극성 물질일 수 있다. 구체예에서, 면역조절제는 T-세포 경로를 조절하고 항종양 또는 항바이러스 면역 반응을 재활성화할 잠재력을 갖는 물질을 포함한다.
"약학 조성물"은 본원에 기재된 하나 이상의 백신 화합물, 이의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 다른 화학적 성분, 예컨대 약학적으로 허용되는 담체 및 부형제의 혼합물을 지칭한다. 약학 조성물의 한 가지 목적은 유기체에 대한 화합물의 투여를 용이하게 하는 것이다.
본원에 사용된 "약학적으로 허용되는 담체"는 유기체에 심각한 자극을 일으키지 않고, 투여된 백신 조성물의 생물학적 활성 및 특성을 제거하지 않는, 담체 또는 희석제를 의미한다.
용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 유익하거나 원하는 임상 결과를 얻기 위한 접근법이다. 구체적으로, 유익하거나 원하는 임상 결과는, 증상 완화, 질병 정도의 감소, 질병 안정화 (예를 들어, 악화되지 않음), 질병 진행 지연 또는 늦추기, 질병 확산의 실질적인 방지, 질병 상태의 개선 또는 완화, 및 검출되거나 검출되지 않는 관해 (부분적인 또는 전체)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 또한, "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 치료를 받지 않은 경우에 예상되는 생존과 비교하여 생존을 연장하는 것을 의미할 수 있고, 및/또는 질병 및/또는 질병으로 인한 부작용에 대한 부분적 또는 완전한 치료 측면에서 치료적일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "예방적 치료"또는 "예방적으로 치료하는"은 숙주에서 질병/병태 또는 이의 하나 이상의 증상을 완전히, 실질적으로 또는 부분적으로 예방하는 것을 의미한다. 유사하게, "병태의 개시 지연"은 또한 "예방적 치료"에 포함될 수 있고, 병태에 걸리기 쉬운 환자에서 병태의 실제 발병 전에 시간을 증가시키는 행위를 지칭한다.
본원에서 언급된 바와 같이, "백신"은 항원 또는 벡터를 포함할 수 있으며, 예를 들어 면역보조제, 서방성 화합물, 용매 등을 포함하는 백신 제제의 다른 성분을 함께 포함할 수 있다. 백신은 전통적으로 감염성 질환을 예방하거나 치료하는 데 사용되지만, 백신은 신호 펩티드 또는 단백질 또는 이들의 수용체를 결합하고 특정 비정상 세포 유형 (예를 들어, 종양)에 고유한 항원을 차단함으로써, 대사산물들의 기능을 변경할 수도 있다. 따라서, 본 발명의 일 실시예는, 암에 대한 면역과 같이 건강을 개선하는데 바람직한 생리적 기능을 변경하는 항원을 포함하여, 항원 공급원 또는 그 기능에 관계없이 임의의 항원에 대한 면역 반응을 개선하는 백신을 제공한다.
본원에서 언급되는 바와 같이, "벡터"는 항원에 대한 유전 코드 또는 이의 일부를 전달하지만 항원 자체는 아니다. 예시적인 측면에서, 벡터는 바이러스 벡터 또는 박테리아 벡터를 포함할 수 있다. 본원에서 언급되는 "항원"은 인간 및/또는 동물을 포함하는 개체에서 특정 면역 반응을 유도하는 물질을 의미한다. 항원은 사멸, 약독화 또는 살아있는 전체 유기체; 유기체의 서브유닛 또는 일부; 면역원성 특성을 갖는 삽입물을 포함하는 재조합 벡터; 숙주 동물에게 제시될 때 면역 반응을 유도할 수 있는 DNA 조각 또는 단편; 폴리펩티드, 에피토프, 합텐 또는 이들의 임의의 조합물을 포함할 수 있다. 다양한 측면에서, 항원은 바이러스, 박테리아, 유기체의 서브유닛, 자가-항원 또는 암 항원이다.
백신 조합물
본원에서는 제1 조성물 및 제2 조성물을 포함하는 백신 조합물이 제공되며, 이들 조성물은 T-세포 매개성 면역을 유도하기 위한 이종의 프라임 투여량 및 부스트 투여량으로 제공된다. 제1 조성물 및 제2 조성물은 동일한 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 포함한다. 특정 구체예에서, 제1 또는 제2 조성물은 전장 항원 또는 면역원, 또는 이의 단편을 포함할 수 있으며, 이들 각각은 본원에서 "폴리펩티드"로도 지칭된다. 특정 구체예에서, (제1 또는 제2 조성물로서) 프라임 투여량은 전장 항원 또는 면역원을 포함하고, (제1 또는 제2 조성물로서) 부스트 투여량은 키메라를 포함하는 펩티드와 같은 그의 단편을 포함한다. 다른 특정 구체예에서, (제1 또는 제2 조성물로서) 프라임 투여량은 키메라 펩티드를 포함하는 펩티드와 같은, 항원 또는 면역원의 단편을 포함하고, (제1 또는 제2 조성물로서) 부스트 투여량은 전장 항원 또는 면역원을 포함한다. 특정 다른 구체예에서, (제1 또는 제2 조성물로서) 프라임 투여량은 키메라 펩티드를 포함하는 펩티드와 같은, 항원 또는 면역원의 단편을 포함하고, (제1 또는 제2 조성물로서) 부스트 투여량은 키메라 펩티드를 포함하는 펩티드와 같은, 항원 또는 면역원의 단편을 포함한다. 본원에 사용된, 이종은, 항원 또는 면역원을 지칭하는 것이 아니라, 항원 또는 면역원에 연결된 전달 벡터 또는 담체를 지칭한다.
구체예에서, 제1 및 제2 조성물은 전달 벡터 또는 담체를 포함하며, 이들은 펩티드, 친유성 사슬, 또는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 발현 벡터를 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 담체는 하나 이상의 할로겐 원자로 임의로 치환된, 탄화수소 사슬일 수 있다. 특정 구체예에서, 담체는 플루오로카본 사슬일 수 있다. 특정 구체예에서, 전달 벡터는 아데노바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 홍역 바이러스(measles virus) 벡터, 폭스바이러스 벡터 또는 수포성구내염 바이러스 벡터로부터 선택된 것과 같은, 비-복제 바이러스 벡터일 수 있다. 특정 구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 E1 및/또는 E3이 결실된 아데노바이러스 벡터이다. 특정 구체예에서, 비-복제 아데노바이러스 벡터는 인간 아데노바이러스 벡터이다.
본원에는 제1 조성물 및 제2 조성물을 포함하는 백신 조합물이 제공되며, 상기 제1 조성물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하고, 제2 조성물은 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하며, 상기 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는 i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유한다. 제1 또는 제2 조성물은 프라임 또는 부스트 투여량일 수 있다. 이종의 투여요법을 제공하기 위해, 각각의 제1 및 제2 조성물은 이를 필요로 하는 동물에게 하나는 프라임 투여량으로, 다른 하나는 부스트 투여량으로 투여해야 한다.
본원에 제공된 추가 구체예는 제1 조성물 또는 제2 조성물 및 제3 조성물을 포함하는 백신 조합물이며, 상기 제1 또는 제2 조성물은 T 세포 면역을 유도하고 제3 조성물은 조합시 항원 특이적 T 세포 반응을 강화시키는 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제이다. 제1 조성물 및 제2 조성물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 포함한다. 특정 구체예에서, 제1 또는 제2 조성물은 전장 항원 또는 면역원, 또는 이의 단편을 포함 할 수 있으며, 이들 각각은 본원에서 "폴리펩티드"로도 지칭된다. 특정 구체예에서, 제1 조성물은 전장 항원 또는 면역원을 포함한다. 다른 특정 구체예에서, 제1 조성물은 키메라 펩티드를 포함하는 펩티드와 같은 항원의 단편을 포함한다. 특정 구체예에서, 제2 조성물은 전장 항원 또는 면역원을 포함한다. 다른 특정 구체예에서, 제2 조성물은 키메라 펩티드를 포함하는 펩티드와 같은 항원 또는 면역원의 단편을 포함한다.
본원에서는 제1 조성물 또는 제2 조성물 및 제3 조성물을 포함하는 백신 조합물이 제공되며, 상기 제1 조성물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하고; 제2 조성물은 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하며, 상기 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는 i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하고; 제3 조성물은 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함한다.
항원 및 면역원
항원 또는 면역원 (본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있음)의 선택은, 인간 또는 동물 모델에서 항원에 대한 T 세포 반응이 보호적 및/또는 치료적인 것으로 밝혀졌는지, 또는 보호적 및/또는 치료적일 것으로 예상되는지에 따라 결정된다. 서로 다른 항원 분리물 사이에서 발견되는 다형성의 정도, 고도로 보존된 항원, HLA 분자의 다형성, 또는 항원내 고도로 보존된 에피토프 역시 항원 선택의 요소이다. 고도로 보존된 항원 T 세포 에피토프 및 상이한 집단 및/또는 인종 집단에 걸친 HLA 분자의 다형성에 기초한 T 세포 백신 조성물에 대한 미국 특허번호 제8,642,531호 및 미국 특허공개번호 제2016/0106830호 참조 (이의 내용은 본원에 참조로 포함됨). 또한, 미국 특허공개번호 제2016/0199469호의 단락 [0121] 내지 [0134] 참조 (이의 내용은 본원에 참조로 포함됨). 특정 구체예에서, 항원은 또한 합성 백신 항원을 제조하기 위한 하나 이상의 항원으로부터 보존된 영역들 또는 보존된 에피토프들의 조합에서 선택될 수 있다 [Goodman AL, et al. New candidate vaccines against blood-stage Plasmodium falciparum malaria: prime-boost immunization regimens incorporating human and simian adenoviral vectors and poxviral vectors expressing an optimized antigen based on merozoite surface protein 1. Infection and Immunity 2010;78(11):4601-12; Letourneau S, et al Design and pre-clinical evaluation of a universal HIV-1 vaccine. PLoS ONE 2007;2(10):e984]. 특정 구체예에서, 조합물은 제1 또는 제2 백신 조성물에서 펩티드 또는 폴리펩티드의 풀(pool) 형태, 또는 제1 또는 제2 백신 조성물에서 키메라 펩티드 또는 폴리펩티드로서 존재할 수 있다. 특정 구체예에서, 제1 및 제2 백신 조성물은 면역 회피(immune escape) 가능성을 감소시키기 위해 하나 이상의 항원을 포함한다. 2 개 이상의 항원을 포함하는 T 세포 종양 백신에 대한 미국 특허공개번호 제2016/0199469호 참조 (이의 내용은 본원에 참조로 포함됨).
항원 내의 T 세포 에피토프는, 생물정보학 예측 및 실험적 확인에 의해, 또는 완전한 항원 서열을 포괄하는 펩티드 라이브러리를 사용한 경험적 접근법을 취함으로써 식별될 수 있다. T 세포 에피토프 (CD8+ 및 CD4+ 둘 다)의 식별에 대한 자세한 내용은 실시예 1 참조. 그러나 일반적인 HLA 유형으로 제시된 에피토프에 대한 지식이, 임상 연구 및 백신 개발에서 T 세포 반응에 대한 상세한 표현형 연구를 수행하는 데 도움이 될 수 있지만, 항원에 포함된 모든 가능한 에피토프에 대한 완전한 지식은 필요하지 않다. 본원의 백신 조성물, 제1 및/또는 제2 조성물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 포함한다. 특정 구체예에서, 제1 및 제2 조성물은 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상 또는 6개 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 포함한다. 다른 특정 구체예에서, 제1 및/또는 제2 백신 조성물은 하나 이상의 CD4+ T 세포 에피토프를 추가로 포함한다. 백신 조성물에서 폴리펩티드 형태의 항원은, 식별에 이용가능한 도구를 사용하여 식별되지 않은 하나 이상의 T 세포 에피토프를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
구체예에서, 항원/면역원은, 서열 보존 및/또는 CD8+ 및 CD4+ T 세포 에피토프의 존재에 기초하여 선택될 수 있는 전장 항원 서열로부터 유래된 더 작은 부분 또는 폴리펩티드에 상응할 수 있다. CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 에피토프는 HLA 클래스 I 및/또는 HLA 클래스 II 결합 서열을 식별하는 생물정보학 도구, 인간 PBMC 샘플을 사용한 시험관내 분석, 또는 시험관내 HLA 클래스 I 및/또는 HLA 클래스 II 결합 분석을 사용하여 식별할 수 있다. 면역원은 동일한 병원체로부터의 단일 또는 다중 항원 서열로부터 유래된 더 작은 서열 부분 또는 폴리펩티드의 인공적인 연결(concatenation)에 의해 생성될수 있다. 연결된 서열(concatenate sequence)은 합성 펩티드 면역원의 생성에 사용될 수 있거나 상응하는 DNA 서열이 아데노바이러스 벡터에 통합될 수 있다.
특정 구체예에서, 항원 또는 면역원은 병원체, 암 항원 또는 자가-항원 유래이다. 특정 구체예에서, 항원 또는 면역원은 신생항원(neoantigen)이다. 본원에 사용된, "신생항원"은 숙주 면역계가 외래로 인식할 수 있도록 하는 야생형과 비교하여 하나 이상의 아미노산 변화를 갖는 공지된 숙주 단백질을 지칭한다. 신생항원은 각 환자에게 고유할 수 있으며, 따라서 본원에서 사용되는 바와 같이 개별 환자로부터 식별된 임상적 변이체를 포함하는 단백질 변이체라고 할 수 있다. 인간의 임상적 변이체는 인간 변이와 표현형 간의 관계에 대한 보고서들의 공적 아카이브를 제공하는 공지된 데이터베이스를 사용하여 식별할 수 있다. Landrum MJ, et al. ClinVar: public archive of interpretations of clinically relevant variants. Nucleic Acids Res. 2016 Jan 4;44(D1):D862-8. 이러한 신생항원 또는 임상적 변이체는 CD8+ T 세포 에피토프에 대해 맵핑되어 본원의 백신 조합물의 개발을 가능하게 한다. 항원 또는 면역원의 T 세포 에피토프를 맵핑하기 위한 공지된 도구를 사용하는 것에 대한 내용은 실시예 1에 제공된다.
특정 구체예에서, 항원 또는 면역원은 암 발생을 유도하는 것으로 알려진 것을 포함하는 병원체로부터 유래된다 (따라서 암세포 표면에서 발현될 수 있음). 구체예에서, 병원체는 바이러스, 진균, 기생충 또는 박테리아이다. 특정 구체예에서, 항원 또는 면역원은 EBV, HPV, HTLV-1, MCPvV, KSHV 또는 HERV로부터 선택된 바이러스로부터 유래된다. 이들 각각의 바이러스는 암 또는 종양 성장을 유도하는 것으로 알려져 있다. 특정 구체예에서, 항원 또는 면역원은 HCV (C 형 간염 바이러스) 또는 HBV (B 형 간염 바이러스)의 바이러스로부터 유래한다.
특정 구체예에서, 항원 또는 면역원은 다음 중 임의의 하나 이상일 수 있다: EBV (EBNA1, LMP1, LMP2 및 BARF1), HPV (E1 내지 E7), HTLV-1 (tax), MCPyV (large T, small T), KSHV (Orf73, Orf57, K10.5, 및 K12), CMV (glycoprotein B 및 phosphoprotein 65), BKV (large T, small T), JCV (large T, small T), SV40 (large T, small T), HERV (Env, Gag, Pol), HMTV (Env, Gag, Pol), HIV-1 (Env, Gag, Pol, Nef, Tat, Vif), HCV (Core, NS3, NS4, NS5), HBV (Core, Pol, Env and X), 인플루엔자 (HA, NP, NA, M1, PB1, PB2, PA), HRV (VP1-4, 2A-C, 3A-D), 마이코박테리움 튜버큘로시스 (Ag85A, ASAT-6, RpfE, CFP-10) 및 플라스모듐 팔시파럼 (MSP-1, AMA-1, RTS,S, Pfs25).
구체예에서, 항원은, 예를 들어 바이러스를 포함하는 병원체에 대한 면역 반응을 유도한다. 예시적인 바이러스는 오르토믹소바이러스(orthomyxovirus), 파라믹소바이러스(paramyxovirus), 라이노바이러스(rhinovirus), 코로나바이러스(coronavirus), 인플루엔자 바이러스(influenza virus), 호흡기 세포융합 바이러스 (respiratory syncytial virus, RSV), 감기 바이러스(common cold virus) 또는 홍역 바이러스(measles virus), 헤르페스바이러스(herpes virus), 광견병 바이러스(rabies virus), 수두(varicella), 인간 유두종 바이러스 (human papilloma virus, HPV), 간염 바이러스(hepatitis virus), 또는 다른 알려진 바이러스 병원체를 포함한다.
구체예에서, 항원은 박테리아 병원체에 대한 면역 반응을 유도한다. 예시적인 박테리아는 바실러스, 마이코박테리움, 스타필로코커스, 스트렙토코커스, 슈도모나스, 클렙시엘라, 헤모필루스, 마이코플라스마 및/또는 바실러스 안트라시스를 포함한다. 특정 구체예에서, 항원은 진균성 병원체에 대한 면역 반응을 유도한다. 구체예에서, 진균은 아스퍼질러스(Aspergillus), 칸디다(Candida), 크립토코커스(Cryptococcus), 히스토플라스마(Histoplasma), 뉴모시스티스(Pneumocystis) 및/또는 스타키보트리스(Stachybotrys)를 포함한다.
구체예에서, 항원은 알레르겐 또는 종양 관련 항원을 포함할 수 있다. 추가적인 측면에서, 항원은 질병과 관련된 단백질의 하나 이상의 에피토프를 포함하는 폴리펩티드, 펩티드 또는 이의 패널을 포함할 수 있다. 예를 들어, 적합한 폴리펩티드, 펩티드 또는 이의 패널은 병원체와 관련된 단백질의 하나 이상의 에피토프를 포함할 수 있다. 적합한 폴리펩티드는 병원체의 상응하는 단백질의 전장 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함할 수 있다.
백신 조합물의 제1 조성물
구체예에서, 제1 조성물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함한다. 특정 구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 홍역 바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터 또는 수포성구내염 바이러스 벡터이다. 예시적 구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터이다. E1 및/또는 E3 서열의 결실 또는 파괴는 비-복제 아데노바이러스 벡터를 생성한다.
구체예에서, 조성물 및 제형은 벡터, 즉 바이러스 벡터를 포함한다. 본원에서 언급된 바와 같이, "바이러스 벡터"는 항원에 대한 유전자를 통합하고 발현하는 조작된 바이러스이다. 바이러스 벡터는 복제되지 않을 수 있으며 숙주와 환경에 안전한다. 임의의 바이러스 벡터가 본 발명의 조성물, 제형 및 방법에 혼입되어 세포로의 전달을 수행 할 수 있음을 이해해야 한다.
예시적인 바이러스 벡터는 아데노바이러스, 레트로바이러스, 렌티바이러스, 헤르페스바이러스, 폭스바이러스, 알파바이러스, 아데노-관련 바이러스를 포함한다. 이러한 많은 바이러스 벡터가 당업계에서 이용 가능하다. 본원에 기재된 벡터는 당업자에게 널리 이용가능한 표준 재조합 기술을 사용하여 구축될수 있다. 이러한 기술은 Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, et ah, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press), Gene Expression Technology (Methods in Enzymology, Vol. 185, edited by D. Goeddel, 1991. Academic Press, San Diego, Calif.), and PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innls, et al. 1990. Academic Press, San Diego, Calif.)와 같은 일반적인 분자생물학 문헌에서 찾아볼 수 있다.
특정 구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 아데노바이러스이며, 예를 들어 아데노바이러스는 소 아데노바이러스, 개 아데노바이러스, 비인간 영장류 아데노바이러스, 닭 아데노바이러스, 또는 돼지 또는 스와인 아데노바이러스를 포함한다. 특정 구체예에서, 비-복제 바이러스 벡터는 인간 아데노바이러스이다.
구체예에서, 비-복제 아데노바이러스 벡터는 진핵 세포로의 유전자 전달 및 백신 개발 및 동물 모델에 특히 유용하다.
구체예에서, 항원 또는 면역원을 포함하고 발현 할 수 있으며, 당업자에게 공지되고 포유동물에 투여하기 위해 제조된 임의의 아데노바이러스 벡터 (Ad-벡터)가, 본 출원의 조성물 및 방법에 사용될수 있다. 이러한 Ad-벡터는 미국 특허번호 제6,706,693호; 제6,716,823호; 제6,348,450호; 또는 미국 특허공개번호 제2003/0045492호; 제2004/0009936호; 제2005/0271689호; 제2007/0178115호; 제2012/0276138호에 기재된 임의의 Ad-벡터를 포함한다.
특정 구체예에서, 재조합 아데노바이러스 벡터는 복제를 위해 보완 E1 활성을 필요로 하는 비-복제성 또는 복제-결핍성일 수 있다. 구체예에서 재조합 아데노바이러스 벡터는 E1-결함, E3-결함 및/또는 E4-결함 아데노바이러스 벡터, 또는 바이러스 유전자가 결실된 "거트리스(gutless)" 아데노바이러스 벡터를 포함할 수 있다. E1 결함이 있는 아데노바이러스 돌연변이는 비-허용 세포(non-permissive cell)에서 복제능력이 없기 때문에, E1 돌연변이는 벡터의 안전 한계를 높인다. E3 돌연변이는 아데노바이러스가 MHC 클래스 I 분자를 하향 조절하는 메커니즘을 파괴함으로써 항원의 면역원성을 향상시킨다. E4 돌연변이는 후기 유전자 발현을 억제하여 아데노바이러스 벡터의 면역원성을 감소시키므로, 동일한 벡터를 이용한 반복적인, 재-백신화 (re-vaccination)을 허용할 수 있다. 구체예에서, 재조합 아데노바이러스 벡터는 E1 및/또는 E3 결함 벡터이다.
"거트리스(gutless)" 아데노바이러스 벡터 복제에는 자연 환경에 존재하지 않는 조건인, E1a와 Cre 둘 다를 발현하는 특별한 인간 293 세포주 및 헬퍼 바이러스가 필요하다; 이 벡터에는 바이러스 유전자가 없으므로, 백신 운반체로서의 벡터는 비-면역원성이며 재-백신화(re-vaccination)을 위해 여러 번 접종 될 수 있다. "거틀리스" 아데노바이러스 벡터는 또한 전이유전자(transgene)를 수용하기 위한 36kb 의 공간을 포함하므로 많은 수의 항원 유전자들을 세포로 공동-전달할 수 있다. RGD 모티프와 같은 특정 서열 모티프를 아데노바이러스 벡터의 H-1 루프에 삽입하여 감염성을 향상시킬 수 있다. 아데노바이러스 재조합체는 특정 전이유전자 또는 전이유전자의 단편을, 예를 들어 아래에 설명된 것과 같은 아데노바이러스 벡터에 클로닝함으로써 구축될 수 있다. 아데노바이러스 재조합 벡터는 면역화제로서 사용하기 위해 비-침습적 방식으로 척추동물의 표피 세포에 형질도입하는데 사용된다. 아데노바이러스 벡터는 또한 정맥 내, 근육 내 또는 피하 주사와 같은 침습적 투여 방법에 사용될 수 있다.
구체예에서, 관심있는 백신 조합물의 항원 또는 면역원을 발현하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물은 포유 동물에게 투여하기 위해 제형화될 수 있다. 투여량, 투여 경로, 제형, 면역보조제 및 재조합 바이러스 및 그로부터의 발현 생성물에 대한 용도와 관련하여, 본 발명의 조성물은 비경구 또는 점막 투여, 바람직하게는 피내, 피하, 비강 내 또는 근육 내 경로에 사용될 수 있다. 점막 투여시 경구, 안구 또는 비강 경로를 사용할 수 있다.
관심 아데노바이러스 벡터를 포함할 수 있는 제형은, 제약 또는 수의학 분야의 당업자에게 잘 알려진 표준 기술에 따라 제조될 수 있다. 이러한 제형은 연령, 성별, 체중 및 투여 경로와 같은 인자를 고려하여 임상 분야의 당업자에게 잘 알려진 기술 및 투여량으로 투여될수 있다. 제형은 단독으로 투여되거나, 조성물, 예를 들어 "다른" 면역학적 조성물, 또는 약독화, 불활성화, 재조합 백신 또는 치료학적 조성물과 함께 공동-투여되거나 순차적으로 투여되어, 본 발명의 다가 또는 "칵테일" 또는 조합 조성물 및 이를 사용하는 방법을 제공할 수 있다. 구체예에서, 제형은 동결보호제로서 수크로스 및 비이온성 계면활성제로서 폴리소르베이트-80을 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 제형은 자유 라디칼 산화 억제제 에탄올 및 히스티딘, 금속 이온 킬레이터 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 또는 유사한 활성(예를 들어, 금속 이온 촉매된 자유 라디칼 산화를 차단 또는 방지)을 갖는 다른 제제를 추가로 포함한다.
제형은 점막 투여, 예를 들어, 경구, 비강, 안구 등의 투여를 위한 액체 제제, 비경구, 피하, 피내, 근육 내, 정맥 내 (예를 들어, 주사 가능한 투여) 투여를 위한 현탁액과 같은 제형 및 제제, 예를 들어 멸균 현탁액 또는 유제에 존재할 수 있다. 이러한 제형에서 아데노바이러스 벡터는 멸균수, 생리식염수 등과 같은 적합한 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합 될 수 있다. 제형은 또한 동결건조되거나 동결될수 있다. 제형은 투여 경로 및 원하는 제제에 따라 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 보조제, 보존제 등과 같은 보조 물질을 포함 할 수 있다. 제형은 하나 이상의 면역보조제 화합물을 함유할 수 있다.
"REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE", 17th edition, 1985와 같은 표준 교과서가, 과도한 실험없이 적절한 제제를 준비하기 위해 참조될 수 있다.
백신 조합물의 제2 조성물
구체예에서, 제2 조성물은 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하며, 여기서 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는 i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; 및 iii) 상기 항원 또는 면역원의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유한다.
구체예에서, 펩티드는 20 내지 60 개 아미노산 길이, 예컨대 25 내지 50 개 아미노산 길이, 30 내지 40 개 아미노산 길이, 예를 들어 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 또는 45 개의 아미노산 길이를 가진다. 특정 구체예에서, 펩티드는 추가적인 짧은 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 추가적인 서열은 펩티드의 제조 또는 제형화를 촉진하거나 펩티드의 안정성을 향상시킬 수 있다. 예를 들어, 펩티드는 펩티드의 순 양전하를 강화 및/또는 펩티드의 소수성을 감소시키기 위해, 전형적으로 N-말단 및/또는 C-말단에 하나 이상의 추가적인 아미노산을 포함할 수 있다. 순 양전하는 펩티드가 7 이상의 등전점을 갖도록 증가될 수 있다.
특정 구체예에서, 하나 이상의, 예를 들어 2개 또는 3개의 양으로 하전된 아미노산 (아르기닌 및/또는 리신)이 조성물내 하나 이상의 펩티드의 N- 및/또는 C- 말단에 첨가된다. 예를 들어, 3개의 라이신 잔기 (KKK)가 하나 이상의 펩티드의 N- 및/또는 C- 말단에 첨가될 수 있다. 표 2 참조. 양성 아미노산은 일반적으로 65 % 이상의 전체 소수성, 0 미만의 순전하 및/또는 소수성 아미노산의 클러스터를 포함하는 펩티드의 말단(들)에 추가된다.
펩티드가 플루오로카본에 연결되는 구체예에서, 펩티드의 말단, 예를 들어 플루오로카본에 접합되지 않은 말단, 또는 다른 부착물은, 예를 들어 미셀 형성을 통해 플루오르카본-펩티드 구조물의 용해도를 촉진하기 위해 변경될 수 있다. 구축물의 대규모 합성을 용이하게 하기 위해 펩티드의 N- 또는 C- 말단 아미노산 잔기를 변형할 수 있다. 원하는 펩티드가 펩티다제에 의한 절단에 특히 민감한 경우, 정상 펩티드 결합은 절단-불가능한 펩티드 모방체로 대체될 수 있다. 이러한 결합 및 합성 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
펩티드는 천연 펩티드일 수 있다. 천연 펩티드는 자유 또는 변형된 말단(extremities)들을 가질 수 있다. 펩티드는 생체 내 펩티드의 투여 부위에서의 반감기 또는 지속성과 같은 수명을 증가시키거나 펩티드를 항원제시세포로 유도하도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 면역원성 펩티드는 인접한 아미노산을 공유적으로 연결하기 위해 하나 이상의 비-천연 발생 아미노산 및/또는 비-천연 발생 공유결합을 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, HLA 분자와 상호 작용하고 천연 서열을 인식하는 T 세포와 교차 반응을 유지하는 펩티드의 능력을 방해하지 않는다면, 비-표준, 비-천연 발생 아미노산이 또한 면역원성 펩티드에 포함될 수 있다. 비-천연 아미노산은 프로테아제 또는 화학적 안정성에 대한 펩티드 내성을 개선하는데 사용할 수 있다. 비-천연 아미노산의 예에는 D-아미노산 및 시스테인 변형이 포함된다.
구체예에서, 제2 조성물은 플루오로카본 사슬에 연결된 다중 펩티드를 포함할 수 있다. 따라서, 조성물은 적어도 2개, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14개 또는 그 이상의 펩티드를 포함할 수 있다. 예시적인 구체예에서, 제2 조성물은 각각 플루오로카본 사슬에 연결된 4개의 펩티드를 포함한다. 실시예 1 참조.
펩티드가 암 환자, 만성 감염 환자 또는 건강한 개체의 T 세포에서 펩티드 특이적 반응을 유도할 수 있는지 여부는, 임의의 적합한 수단에 의해, 일반적으로는 적합한 분석법에서 상기 환자 또는 개체에서 취한 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플을 검사함으로써 결정할 수 있다. 따라서 T 세포 반응은 샘플에서 시험관내에서 검출된다. 적합한 분석법은 테스트 펩티드와 함께 배양한 후 T 세포의 활성화를 측정하거나 검출할 수 있다. T 세포의 활성화는 전형적으로 IFN-감마와 같은 사이토카인의 분비에 의해 나타날 수 있으며, 이는 임의의 적합한 분석법, 전형적으로 ELISA 또는 ELISpot과 같은 면역분석에서 검출될 수 있다. 환자 또는 개체의 T 세포 반응의 크기는, 예를 들어 샘플에서 전체적으로 방출된 사이토카인의 양을 정량화함에 의해, 또는 테스트 펩티드와 함께 배양한 후 샘플의 특정 세포에 의해, 동일한 분석법에서 결정될 수 있다. 적합한 분석은 하기 및 실시예에서 추가로 설명된다.
특정 구체예에서, 본 발명의 제2 조성물은 건강한 개체 및/또는 암 환자의 20% 이상에서 특이적 CD8+ T 세포 반응을 유도하는 펩티드 또는 펩티드들을 포함한다. 건강한 개체 또는 암 환자의 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에서 펩티드-특이적 T 세포 반응을 측정하기 위한 면역학적 분석은, IFN-γ ELISpot 분석법 또는 유세포 분석을 사용한 세포내 사이토카인 염색과 같은 사이토카인 ELISpot을 통해 수행할 수 있다. 분석은 신선하거나 냉동된 PBMC에서 수행할 수 있다. 분석은 생체외에서 수행하거나, 또는 단일 펩티드 또는 여러 항원성 펩티드를 포함하는 조성물과 함께 배양된 PBMC의 단기 시험관내 배양 후에 수행할 수 있다. 단기 시험관내 배양에서 펩티드(들)의 양은 펩티드 당 0.001μg 내지 100μg/펩티드까지 다양할 수 있다. 단기 시험관내 배양을 위한 배양 시간은 5 내지 15 일 사이, 예를 들어 7 내지 13 일 또는 9 내지 11 일일 수 있다. 단기 시험관내 배양은 IL-2, IL-15 및 IL-7 중 하나 이상, 바람직하게는 IL-2 및 IL-15와 같은 사이토카인의 존재하에 수행될 수 있다. T 조절 세포 및/또는 NK 세포의 고갈 후 단기 시험관내 배양을 수행 할 수 있다. 이러한 세포의 고갈은 PBMC가 암 환자의 것일 때 특히 바람직할 수 있다. IL-10 중화 항체, 항-PD1 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-OX-40 항체, 항-GITR 항체, 데닐류킨, 디프티톡스, 키나제 억제제, 및/또는 TLR2, TLR3, TLR7, TLR8 및 TLR9의 작용제를 포함하는 톨 수용체 작용제의 존재하에 단기 시험관내 배양을 수행할 수 있다.
특정 구체예에서, 담체는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 탄화수소 사슬이다. 구체예에서, 담체는 하나 이상의 불소 원자로 치환된 탄화수소 사슬이며, 본 명세서에서는 "플루오로카본 사슬"이라고 지칭한다.
플루오로카본은 퍼플루오로카본(perfluorocarbon)으로부터 유래되거나 플루오로카본/탄화수소 라디칼과 혼합된 하나 또는 그 이상의 사슬을 포함하며 각 사슬은 3 내지 30개 원자를 갖는 포화되거나 불포화된 사슬일 수 있다. 따라서, 플루오로카본 부착물(attachment)의 사슬은 전형적으로 포화 또는 불포화되고, 바람직하게는 포화된다. 플루오로카본 부착물의 사슬은 선형 또는 분지형일 수 있으나, 바람직하게는 선형이다. 각 사슬이 일반적으로 3 내지 30개의 탄소 원자, 5 내지 25개의 탄소 원자, 또는 8 내지 20개의 탄소 원자를 갖는다. 펩티드에 플루오로카본 벡터를 공유적으로 연결시키기 위하여, 반응기, 또는 리간드, 예를 들면 -CO-, -NH-, S, O 또는 기타 적합한 기(group)가 벡터에 포함된다. 공유 결합을 달성하기 위한 그와 같은 리간드의 사용이 기술분야에 잘 알려져 있다. 반응기가 플루오로카본 벡터의 임의의 위치에 위치할 수 있다
플루오로카본 벡터의 펩티드에의 결합이 펩티드의 임의의 부위에 자연적으로 존재하거나 그에 도입되는 -OH, -SH, -COOH 및 -NH2와 같은 작용기를 통해 달성될 수 있다. 그와 같은 연결의 예는 아미드, 히드라존, 디술피드, 티오에테르 및 옥심(oxime) 결합을 포함한다.
선택적으로, 스페이스 요소 (펩티드성 또는 비-펩티드성)가 포함되어 항원-제시 세포 내에서의 가공을 위해 플루오로카본 요소로부터 펩티드의 절단을 허용하고 펩티드의 입체 프레젠테이션(steric presentation)을 최적화할 수 있다. 또한, 스페이서가 포함되어 분자의 합성을 보조하고 그의 안정성 및/또는 가용성을 개선시킬 수 있다. 스페이서의 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 단백질 가수분해 효소에 의해 절단될 수 있는 라이신 또는 아르기닌과 같은 아미노산을 포함한다.
일 구체예에서, 플루오로카본-연결된 펩티드가 화학적 구조 CmFn-CyHx-(Sp)-R 또는 그의 유도체를 가질 수 있고, 식 중에서 m은 3 내지 30, n은 2m +1 이하, y는 0 내지 15, x는 2y 이하, (m + y)는 3 내지 30 (m = 3 내지 30, n ≤ 2m + 1, y = 0 내지 15, x ≤ 2y, (m + y) = 3 내지 30)이고, Sp가 선택적인 화학적 스페이스 모이어티이며 R이 면역원성 펩티드이다. 일반적으로, m 및 n이 관계식 2m-1 ≤n≤2m + 1 를 만족하고, 바람직하게는 n = 2m + 1을 만족한다. 일반적으로, x 및 y가 관계식 2y-2 ≤x≤2y 를 만족하고, 바람직하게는 x = 2y를 만족한다. 바람직하게는 CmFn-CyHx 모이어티가 선형이다.
구체예에서, m은 5 내지 15, 더욱 바람직하게는 8 내지 12이다. 다른 구체 예에서, y는 0 내지 8, 보다 바람직하게는 0 내지 6 또는 0 내지 4이다. 구체예에서, CmFn-CyHx 모이어티가 포화되고 (즉, n=2m + 1 및 x = 2y) 선형인 것, 및 m = 8 내지 12이고 y = 0 내지 6 또는 0 내지 4인 것이 바람직하다.
특정 구체예에서, 플루오로카본 벡터가 하기 식 중 2H, 2H, 3H, 3H-퍼플루오로언데카노익산(perfluoroundecanoic acid)으로부터 유래된다:
Figure pct00001
구체예에서, 플루오로카본 부착물이 C8F17(CH2)2COOH로부터 유래된 선형의 포화 모이어티 C8F17(CH2)2- 이다 특정 구체예에서, 플루오로카본 부착물은 다음 화학식을 갖는다: C6F13(CH2)2―, C7F15(CH2)2―, C9F19(CH2)2―, C10F21(CH2)2―, C5F11(CH2)3―, C6F13(CH2)3―, C7F15(CH2)3―, C8F17(CH2)3― 및 C9F19(CH2)3―로서, 각각 C6F13(CH2)2COOH, C7F15(CH2)2COOH, C9F19(CH2)2COOH, C10F21(CH2)2COOH, C5F11(CH2)3COOH, C6F13(CH2)3COOH, C7F15(CH2)3COOH, C8F17(CH2)3COOH 및 C9F19(CH2)3COOH 에서 유래된다.
구체예에서, 플루오로카본 벡터-항원 구조체에 적합한 구조의 예는 다음 화학식을 갖는다:
Figure pct00002
식 중에서 Sp 및 R은 상기 정의된 바와 같다. 특정한 구체예에서, Sp는 라이신 잔기로부터 유래되고 화학식 -CONH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-을 갖는다. 구체예에서, R은 15 내지 75 개 아미노산 잔기 길이를 갖는 펩티드이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유한다.
특정 구체예에서, 플루오로카본 부착물이 변형되어, 결과로 얻은 화합물이 여전히 항원 제시 세포에 펩티드를 운반할 수 있다. 따라서, 예를 들면 여러 불소 원자가 염소, 브롬 또는 요오드와 같은 기타 할로겐 원자로 치환될 수 있다. 또한, 여러 불소 원자를 메틸기 또는 수소로 치환하고 여전히 본 명세서에 기술된 분자의 특성을 보유하는 것이 가능하다.
구체예에서, 펩티드가 스페이서 모이어티를 통해 플루오로카본 벡터에 연결될 수 있다. 일 구체예에서 스페이서 모이어티는 라이신 잔기이다. 이 스페이서 잔기가 전술된 바와 같은 말단 라이신 잔기 외에 존재하여, 펩티드가, 예를 들면, 총 4개의 N-말단 라이신 잔기를 가질 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 발명의 제2 조성물은 펩티드가 C-말단 또는 N-말단 라이신 잔기, 바람직하게는 N-말단 라이신 잔기를 갖는 플루오로카본-연결 펩티드를 포함할 수 있다. 구체예에서, 펩티드의 말단 라이신이 바람직하게는 화학식 C8F17 (CH2)2COOH를 갖는 플루오로카본에 연결된다. 구체예에서, 플루오로카본이 바람직하게는 N-말단 라이신 잔기의 엡실론 사슬에 결합된다.
구체예에서, 제2 조성물은 자신의 플루오로카본 벡터에 연결된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 또는 그보다 많은 면역원성 펩티드를 포함한다.
백신 조합물의 제3 조성물
구체예에서, 제3 조성물은 면역조절제를 포함한다. 면역조절제는 환자의 면역체계를 이용하여 면역 제어, 안정화 및 질병의 잠재적 근절을 달성하는 것을 목표로 하는 다양한 치료제 (예를 들어, 물질 또는 화합물)을 포함한다.
구체예에서, 면역조절제는 T-세포 경로를 조절하고 항종양 또는 항바이러스 면역 반응을 재활성화 할 잠재력을 갖는 면역 체크포인트-차단 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 면역 체크포인트 억제제는, 세포독성 T-림프구 항원 4 (CTLA-4)라고 불리는 체크포인트 분자를 차단하는 전이성 흑색종의 치료를 위해 허가된 최초의 FDA 승인된 면역 체크포인트 항체인, 이필리무맙과, CTLA-4, PD-1, Lag-3, Tim-3, TIGIT 및/또는 Vista와 같은 공동-억제 수용체를 표적으로하는 다른 화합물들 (예를 들어, 항체)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
구체예에서, 면역조절제는 T 세포에 의해 발현되는 공동-자극 수용체를 표적으로 하는 물질, 예를 들어 글루코코르티코이드-유도된 TNFR (GITR; CD357)를 포함하나 이에 제한되지 않는 종양 괴사 인자 수용체 (TNFR), CD27, OX40 (CD134), ICOS (CD278) 또는 4-1BB (CD137)로부터 선택되는 물질을 포함하며, 이들 당단백질과 작용제 항체의 연결(ligation)은 활성화 신호를 림프구에 능동적으로 전달한다.
특정 구체예에서, 면역조절제는 억제성 골수 세포의 억제제, 예를 들어 PDL1, PDL2, VISTA, B7-1, CD47, CD200, GLA1, GAL3, CLECG4 또는 SIRPa를 포함한다. 구체예에서, 면역조절제는 작용제 종류 뿐만 아니라 길항제 분자에 대한 표적을 나타내는 다양한 톨-유사 수용체 (TLR) 및 NOD-유사 수용체 (NLR)를 표적으로 하는 화합물을 포함한다. 추가 구체예에서, 면역조절제는 T 세포 반응을 조절하는 것으로 알려진 사이토카인, 예컨대 과립구 콜로니-자극 인자 (G-CSF), 인터페론, IL-2, IL-7 또는 IL-12를 포함한다.
구체예에서, 제3 조성물은 PD1, PDL1, PDL2, CD28, CD80, CD86, CTLA4, B7RP1, ICOS, B7RPI, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, KIR, TCR, LAG3, CD 137, CD137L, OX40, OX40L, CD27, CD70, CD40, CD40L, TIM3, GAL9, ADORA, CD276, VTCN1, IDO1, KIR3DL1, HAVCR2, VISTA 또는 CD244을 표적으로하는 면역 체크포인트 억제제를 포함한다. 예를 들어, PD1을 표적화하는 방법을 제공하는 실시예 5 참조.
구체예에서, 제3 조성물은 이필리무맙(Ipilimumab), 니볼루맙(Nivolumab), 펨브롤리주맙(Pembrolizumab), 아테졸리주맙(Atezolizumab), 아벨루맙(Avelumab), 두르발루맙(Durvalumab), 세미플리맙(Cemiplimab), REGN2810, BMS-936558, SHR1210, KN035, IBI308, PDR001, BGB-A317, BCD-100, 또는 JS001을 포함한다.
다른 구체예에서, 제3 조성물은 ADAM17, PEG-2, PDE5, COX2, iNOS2, PDE5, c-kit, ARG1, PI3K, CSF-1R, Caspase-8, CCL2, RON, ROS, S100A8/A9 또는 간-X 핵 수용체(or liver-X nuclear receptor)를 표적으로하는 MDSC 억제제를 포함한다.
구체예에서, MDSC 억제제는 PF-5480090, INCB7839, 니트로-아스피린 (nitro-aspirine), SC58236, 셀레콕십(Celecoxib), IPI-549, PLX3397, BLZ945, GW2580, RG7155, IMC-CS4, AMG-820, ARRY-382, 실데나필(sildenafil), 타다라필 (tadalafil), 바르데나필(vardenafil), N-하이드록시-노르-L-아르기닌 (N-hydroxy-nor-L-Arg), 이마티닙(imatinib), z-IETD-FMK, 트라벡테딘(trabectedin), 엠리카산(Emricasan), 항-CCL2 항체 (카르루맙(carlumab), 또는 ABN912), 타스퀴니모드(tasquinimod), ASLAN002, IMC-RON8, 또는 GW3965 이다. 예를 들어, Fleming et al." Targeting Myeloid-Derived Suppressor Cells to Bypass Tumor-Induced Immunosuppression" Front Immunol. 2018; 9: 398 참조.
구체예에서, 면역억제제는 투여를 위한 적절한 수용액으로 제형화되며, 제3 조성물은 제1 또는 제2 백신 조성물과는 별개의 조성물로 투여된다. 구체예에서, 면역억제제 조성물은 제1 및/또는 제2 백신 조성물과 상이한 시간 및 날짜에 투여된다.
사용 방법
본원에 구체예는 백신 조성물의 이종의 프라임 및 부스트 투여량의 투여를 통해 항원 CD8+ T 세포 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 특정 구체예에서, 이러한 방법은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물을 투여하는 단계; 및 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물을 투여하는 단계로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 것인, 단계를 포함하고, 제1 및 제2 조성물이 모두 투여되는 경우 상기 제1 조성물 또는 제2 조성물 중 하나는 프라임 투여량으로 투여되고, 제1 조성물 또는 제2 조성물 중 다른 하나는 부스트 투여량으로 투여된다.
구체예에서, 프라임 및 부스트 투여량은 적어도 7 일 간격, 적어도 14 일 간격 또는 그 이상의 간격으로 투여된다. 구체예에서, 프라임 투여량 및 부스트 투여량은 약 7 일 간격, 약 14 일 간격, 약 20 일 간격, 약 25 일 간격, 약 30 일 간격, 약 35 일 간격, 약 40 일 간격, 약 45 일 간격, 약 50 일 간격, 약 55 일 간격, 약 60 일 간격 또는 약 65 일 간격으로 투여된다. 유리하게는, 투여량은 약 40 일 간격, 약 41 일 간격, 약 42 일 간격, 약 43 일 간격, 약 44 일 간격, 약 45 일 간격, 약 46 일 간격, 약 47 일 간격, 약 48 일 간격, 약 49 일 간격 또는 약 50 일 간격으로 투여된다. 특정 구체예에서, 프라임 투여량 및 부스트 투여량은 약 1 주 간격, 약 2 주 간격, 약 3 주 간격, 약 4 주 간격, 약 5 주 간격, 약 6 주 간격, 약 7 주 간격, 약 8 주 간격, 약 9 주 간격, 약 10 주 간격, 약 11 주 간격 또는 약 12 주 간격으로 투여된다. 다른 특정 구체예에서, 프라임 투여량 및 부스트 투여량은 약 1 개월 간격, 약 2 개월 간격, 약 3 개월 간격, 약 4 개월 간격, 약 5 개월 간격, 약 6 개월 간격, 약 7 개월 간격, 약 8 개월 간격, 약 9 개월 간격, 약 10 개월 간격, 약 11 개월 간격 또는 약 12 개월 간격으로 투여된다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물을 투여하는 단계; 또는, 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물을 투여하는 단계로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 항원 또는 면역원의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 것인, 단계, 및 면역조절제를 포함하는 제3 조성물을 별도로 투여하는 단계를 포함한다. 구체예에서, 면역조절제는 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된다. 면역조절제는 제1 및/또는 제2 조성물에 의해 유도된 세포 매개성 면역 반응을 강화시킨다.
구체예에서, 제1 또는 제2 백신 조성물은 적어도 7 일 간격, 적어도 14 일 간격 또는 그 이상의 간격으로 투여되는 프라임 및 부스트 투여량으로 투여된다. 구체예에서, 프라임 투여량 및 부스트 투여량은 약 7 일 간격, 약 14 일 간격, 약 20 일 간격, 약 25 일 간격, 약 30 일 간격, 약 35 일 간격, 약 40 일 간격, 약 45 일 간격, 약 50 일 간격, 약 55 일 간격, 약 60 일 간격 또는 약 65 일 간격으로 투여된다. 유리하게는, 투여량은 약 40 일 간격, 약 41 일 간격, 약 42 일 간격, 약 43 일 간격, 약 44 일 간격, 약 45 일 간격, 약 46 일 간격, 약 47 일 간격, 약 48 일, 약 49 일 간격 또는 약 50 일 간격으로 투여된다. 특정 구체예에서, 프라임 투여량 및 부스트 투여량은 약 1 주 간격, 약 2 주 간격, 약 3 주 간격, 약 4 주 간격, 약 5 주 간격, 약 6 주 간격, 약 7 주 간격, 약 8 주 간격, 약 9 주 간격, 약 10 주 간격, 약 11 주 간격 또는 약 12 주 간격으로 투여된다. 다른 특정 구체예에서, 프라임 투여량 및 부스트 투여량은 약 1 개월 간격, 약 2 개월 간격, 약 3 개월 간격, 약 4 개월 간격, 약 5 개월 간격, 약 6 개월 간격, 약 7 개월 간격, 약 8 개월 간격, 약 9 개월 간격, 약 10 개월 간격, 약 11 개월 간격 또는 약 12 개월 간격으로 투여된다.
구체예에서, 제3 조성물인, 면역조절제는 제1 또는 제2 백신 조성물과 동일한 날에 투여된다. 구체예에서, 제3 조성물은 수일, 2 일 이상, 3 일 이상, 4 일 이상, 5 일 이상 또는 6 일 이상 투여된다. 구체예에서, 제3 조성물은 제1 또는 제2 백신 조성물의 프라임 및 부스트 투여량 사이에 1회 이상, 및 제1 또는 제2 백신 조합물의 부스트 투여량 후에 1회 이상 투여된다. 예시적인 구체예에서, 제3 조성물은 제1 또는 제2 백신 조성물의 프라임 투여량 투여 후 4, 7, 11, 15, 18 및 22 일째에 투여된다.
구체예에서, 백신 조합물은 이를 필요로 하는 개체에게 투여된다. 구체예에서, 이를 필요로 하는 개체는 포유동물, 새, 파충류, 양서류 또는 어류와 같은 척추동물이다. 특정 구체예에서, 개체는 인간, 반려동물 또는 가축(domesticated animal) 또는 식품-생산 또는 사료-생산 동물 또는 가축(livestock) 또는 게임 또는 경주 또는 스포츠 동물, 예컨대 소, 개, 고양이, 염소, 양 또는 돼지 또는 말, 또는 칠면조, 오리 또는 닭과 같은 가금류이다. 특정 구체 예에서, 척추동물은 인간이다.
본원에 사용된 바와 같이, 면역학적 유효량은 이를 필요로 하는 개체에게 투여시 전달된 항원에 대한 면역 반응을 생성하는 백신 조합물의 조성물들의 양 또는 농도이다. 특정 구체예에서, 백신 조합물 또는 백신 조성물의 면역학적 유효량은 항원 특이적 CD8+ T 세포 반응을 생성한다.
본 발명의 방법은 예방적 백신(prophylactic vaccination)로서 질병을 예방하거나 치료적 백신(therapeutic vaccination)으로서 질병을 치료하는데 적절하게 적용될 수 있다. 본 발명의 백신 조합물은 프라임 투여량 및 부스트 투여량으로서 단독으로 또는 면역억제제 조성물과 조합하여 이를 필요로 하는 개체에게 투여될수 있다. 추가로, 본 발명의 백신 조합물은 면역억제제 조성물과 조합하여 프라임 투여량 또는 부스트 투여량으로서 이를 필요로 하는 개체에게 투여될 수 있다. 면역조절제 조성물은 백신 조합물의 제3의 별개의 조성물이며, 제1 백신 조성물 및/또는 제2 백신 조성물과 같은 날 및 시간에, 또는 다른 날 투여될 수 있다. 예시적인 구체예에서, 면역조절제 조성물은 제1 백신 조성물 후에 투여된다.
특정 구체예에서, 백신 조합물은 암 치료 또는 예방에 사용하기 위해 이를 필요로 하는 개체에게 투여된다. 구체예에서, 백신 조합물은 비-소세포성 폐암, 유방암, 간암, 뇌암, 위암, 췌장암, 신장암, 난소암, 골수종 암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 두경부암, 결장직장암, 신암, 식도암, 흑색종 피부암 및/또는 전립선암 환자에 대한 치료제 또는 예방제로 사용된다. 이러한 암 세포는 신생항원 또는 바이러스 항원을 발현할 수 있고, 백신 조성물은 특정 암/종양의 생물학에 따라 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 포함하는 적절한 폴리펩티드를 포함할 것이다.
특정 구체예에서, 백신 조합물은 만성 감염을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위해 이를 필요로 하는 개체에게 투여된다. 구체예에서, 백신 조합물은 만성 감염을 가진 개인 또는 만성 감염을 유발하는 병원체에 노출될 위험이 있는 개인을 위한 치료제 또는 예방제로 사용된다. 이러한 병원체는 HIV, B형 및 D형 간염 바이러스, 헤르페스바이러스, 엡스타인-바 (Epstein-Barr) 바이러스, 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus) 및 인간 T-림프영양성 바이러스 III형 (T-lymphotropic virus type III)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
백신 조합물은 다양한 공지된 경로 및 기술을 사용하여 생체 내에서 인간 또는 동물 개체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 백신 조합물의 조성물들은 주사가능한 용액, 현탁액 또는 유제로 제공될 수 있고, 통상적인 바늘과 주사기를 사용하거나 액체 제트 분사 시스템을 사용하여 비경구, 피하, 경구, 표피, 피내, 근육 내, 동맥 내, 복강 내, 정맥 내 주사를 통해 투여될 수 있다. 백신 조합물의 조성물들은 피부 또는 점막 조직, 예를 들어 비강, 기관 내, 장, 설하, 직장 또는 질에 국소 투여되거나, 호흡 또는 폐 투여에 적합한 미스트와 같은 미분된 스프레이로 제공될수 있다. 특정 구체예에서, 백신 조성물은 근육 내로 투여된다.
백신 조합물의 조성물들은 예방적으로 및/또는 치료적으로 효과적일, 투여 조성물과 호환가능한 양으로 개체에게 투여될수 있다. 본 발명의 조성물의 투여는 "예방적" 또는 "치료적" 목적을 위한 것일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "치료적"또는 "치료"는 다음 중 임의의 하나 이상을 포함한다: 감염 예방; 만성 감염 치료; 종양발생/발암 예방; 증상의 감소 또는 제거; 및/또는 종양 또는 암의 감소 또는 완전한 제거.
구체예에서, 백신 조합물은 암 항원 또는 암과 관련된 바이러스 항원을 포함하며, 여기서 치료는 예방적 (암의 확진 전) 또는 치료적 (암 진단 후)일 수 있다. 치료적 처치는 I 기, II 기, III 기 또는 IV 기 암에, 외과수술 전후에 제공될 수 있다. 치료는 수술 후 유지 치료 또는 무진행 생존 또는 전체 생존 및/또는 질병 제거를 개선하기 위한 장기적 치료일 수 있다.
필요한 경우, 담체의 선택은 종종 조성물의 전달 경로의 기능이다. 본 발명 내에서, 조성물은 임의의 적합한 경로 및 투여 수단을 위해 제형화될 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제는 경구, 안구, 직장, 비강, 국소 (구강 및 설하 포함), 질 또는 비경구 (피하, 근육 내, 정맥 내, 피내, 경피 포함) 투여에 적합한 조성물에 사용되는 것들을 포함한다.
조성물은 임의의 적합한 형태, 예를 들어 액체, 고체 또는 에어로졸로 투여될 수 있다. 예를 들어, 경구 제형은 유제, 시럽 또는 용액 또는 정제 또는 캡슐의 형태를 취할 수 있으며, 이는 활성 성분이 위에서 분해되지 않도록 보호하기 위해 장용 코팅될 수 있다. 비강 제형은 스프레이, 미스트 또는 용액일 수 있다. 경피 제형은 특정 전달 시스템에 맞게 조정될 수 있으며 패치를 포함할 수 있다. 주사용 제형은 증류수 또는 다른 약학적으로 허용되는 용매 또는 현탁제 중의 용액 또는 현탁액일 수 있다.
환자에게 투여할 예방 또는 치료 백신의 적절한 투여량 임상에서 결정된다. 면역학적 또는 임상적 효과를 얻기 위해 원래의 프라임 및 부스트 투여량을 초과하는 다중 투여량이 필요할 수 있으며, 필요한 경우 일반적으로 1 내지 12 주 간격으로 투여된다다. 장기간에 걸쳐 면역 반응을 강화해야 하는 경우 1 개월에서 5 년 간격으로 반복 투여할 수 있다.
실시예
다음의 실시예는 본원에 제공된 구체예를 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 당업자에게 제공하기 위해 제시되며, 본원의 범위를 제한하려는 의도가 아니고, 아래의 실시예가 수행된 모든 실험 또는 유일한 실험임을 나타내려는 의도가 아니다. 사용된 숫자 (예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력했지만 일부 실험적 오차 및 편차를 고려해야 한다. 달리 명시되지 않는 한, 배합비는 부피 단위이며, 온도는 섭씨이다. 실시예가 예시하고자 하는 근본적인 측면을 변경하지 않은채 설명된 방법의 변형이 이루어질 수 있음을 이해해야 한다.
실시예 1: 이종의 프라임 및 부스트 투여량 조합을 포함하는 백신 조합물의 제조: 제1 조성물 (비-복제 바이러스 벡터 조성물); 및 제2 조성물 (플루오로카본-연결된 펩티드 조성물)
비-복제 바이러스 벡터 조성물
AdGP70은 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터 하에서, E1 및 E3의 결실(ΔE1E3)에 의한 복제 결함이 있고 GP70 (쥐 백혈병 바이러스의 외피 (Env) 단백질 - MuLV - GenBank 등록번호 ABC94931.1)의 발현을 허용하는 재조합 아데노바이러스 혈청형 5 벡터로 설계되었다. 먼저, 포유류 세포에서 발현하기 위해 화학적으로 합성된 코돈 최적화 GP70 유전자를 Genscript (Piscataway, NJ)의 pAdHighγ 셔틀 벡터 (Altimmune Inc)의 HindIII/XbaI 제한 부위로 클로닝하여 셔틀 플라스미드를 수득하였다. 전이유전자-함유 pAdHighγ 셔틀 벡터와 pAdEasy-1 아데노바이러스 5 백본 플라스미드 사이의 재조합은, 게놈 플라스미드 pAdGP70 생성을 위해 카나마이신 선별 하에 E. coli 균주 BJ5183에서 수행하였다. pAdEasy-1 플라스미드는 뉴클레오티드 1-3,533 (E1 유전자 포함) 및 뉴클레오티드 28,130-30,820 (E3 포함)을 제외한 모든 Ad5 서열을 포함한다. 선별된 게놈 플라스미드 pAdGP70을 콜로니 분리를 통한 카나마이신 선별 하에 E. coli 균주 DH10B 세포에 재-형질전환시켰다. 선별된 pAdGP70 콜로니를 증폭하고 정제했다. AdGP70 재조합 아데노바이러스 벡터 시드는 PacI 선형화된 정제된 pAdGP70 게놈 플라스미드를 아데노바이러스 패키징 세포주 HEK293에 형질감염시킴으로써 생성했다. AdGP70 벡터를 HEK293 세포에서 증식시키고 염화세슘 구배를 통한 초원심분리에 의해 정제하였다. 정제된 Ad5 벡터는 0.22μm 기공 크기의 여과로 멸균하고 A195 아데노바이러스 저장 버퍼에 -80 ℃로 보관하였다. AdGP70 역가 (4x1011 ifu/ml)는 HEK293 세포에서 Adeno-X 신속 역가 키트 (Clontech, Mountain View, CA)를 사용하여 결정하였다. 생체 내 투여 전에 AdGP70을 PBS에서 4x1010 ifu/ml로 추가 희석했다.
서열번호 1 : 쥐 백혈병 바이러스 GP70 단백질 서열- 등록번호 ABC94931.1
MDTRRPRQGSDHTPDKTIMESTTLSKPFKNQVNPWGPLIVLLILGGVNPVALGNSPHQVFNLSWEVTNGDRETVWAITGNHPLWTWWPDLTPDLCMLALHGPFSPPPGPPCCSGSSDSTPGCSRDCEEPLTSYTPRCNTAWNRLKLSKVTHAHNEGFYVCPGPHRPRWARSCGGPESFYCASWGCETTGRASWKPSSSWDYITVSNNLTSDQATPVCKGNEWCNSLTIRFTSFGKQATSWVTGHWWGLRLYVSGHDPGLIFGIRLKITDSGPRVPIGPNPVLSDRRPPSRPRPTRSPPPSNSTPTETPLTLPEPPPAGVENRLLNLVKGAYQALNLTSPDKTQECWLCLVSGPPYYEGVAVLGTYSNHTSAPANCSVASQHKLTLSEVTGQGLCIGAVPKTHQVLCNTTQKTSDGSYYLAAPTGTTWACSTGLTPCISTTILDLTTDYCVLVELWPRVTYHSPSYVYHQFERRAKYKREPVSLTLALLLGGLTMGGIAAGVGTGTTALVATQQFQQLQAAMHDDLKEVEKSITNLEKSLTSLSEVVLQNRRGLDLLFLKEGGLCAALKEECCFYADHTGLVRDSMAKLRERLSQRQKLFESQQGWFEGLFNKSPWFTTLISTIMGPLIILLLILLFGPCILNRLVQFIKDRISVVQALVLTQQYHQLKTIGDCKSRE
항원에 존재하는 T- 세포 에피토프는 다양한 방법을 사용하여 식별할 수 있는데, 이러한 방법은 공개된 에피토프들, 인공 신경망 (ANN) 또는 안정화된 매트릭스 방법 (SMM) (Immune Epitope Database 및 Analysis Resource 웹사이트를 사용함) 또는 공개된 보고들에 따라 클래스 I 및/또는 클래스 II MHC 분자들에 결합하는 7000개 이상의 펩티드 서열을 포함하는 데이터베이스인 SYFPEITHI 웹 사이트를 포함한다. GP70의 T 세포 에피토프는, <50nM 의 예측 IC50 컷오프를 사용한 인공 신경망 (ANN) 및 안정화된 매트릭스 방법(SMM) 및 >20의 임계값을 사용한 SYFPEITHI (http://www.syfpeithi.de/)를 사용하여 쥐의 클래스 I 및 클래스 II MHC 분자 (H-2Kd, H-2Dd, H-2Ld, IAd 및 IEd)에 대한 고 친화성 결합 펩티드를 예측함으로써 식별하였다. 표 1은 이러한 방법의 조합을 사용하여 식별된 GP70 단백질 서열의 T 세포 에피토프를 제공한다.
표 1: GP70의 T 세포 에피토프
서열 N-말단 위치 C-말단 위치 방법 MHC 제한 (CD4/CD8) 대립유전자 결합 친화도 (nM) 또는 점수
VNPWGPLIVLLILGG서열번호 2 32 46 SYFPEITHI CD4 IAd 23
NPWGPLIVL
서열번호 3 		33 41 SYFPEITHI CD8 Ld 22
PWGPLIVLLILGGVN
서열번호 4 		34 48 SYFPEITHI CD4 IAd 20
GPLIVLLIL
서열번호 5 		36 44 SYFPEITHI CD8 Ld 22
GPLIVLLILGGVNPV
서열번호 6 		36 50 SYFPEITHI CD4 IAd 21
LGGVNPVALGNSPHQ
서열번호 7 		44 58 SYFPEITHI CD4 IAd 27
NSPHQVFNL
서열번호 8 		54 62 SYFPEITHI CD8 Ld 22
NLSWEVTNGDRETVW
서열번호 9 		61 75 SYFPEITHI CD4 IEd 20
NGDRETVWAITGNHP
서열번호 10 		68 82 SYFPEITHI CD4 IAd 24
TPDLCMLAL
서열번호 11 		91 99 SYFPEITHI CD8 Ld 22
SYWGLEYRA
서열번호 12 		103 111 SYFPEITHI CD8 Kd 22
SYTPRCNTA
서열번호 13 		142 150 ANN CD8 Kd 25.22nM GP70-142
SYTPRCNTA
서열번호 13 		142 150 SYFPEITHI CD8 Kd 22
RCNTAWNRLKLSKVT
서열번호 14 		146 160 SYFPEITHI CD4 IAd 20
NTAWNRLKLSKVTHA
서열번호 15 		148 162 SYFPEITHI CD4 IAd 21
NTAWNRLKLSKVTHA
서열번호 15 		148 162 SYFPEITHI CD4 IEd 20
WNRLKLSKVTHAHNE
서열번호 16 		151 165 SYFPEITHI CD4 IAd 20
NEGFYVCPGPHRPRW
서열번호 17 		164 178 SYFPEITHI CD4 IEd 20
RSCGGPESF
서열번호 18 		180 188 SYFPEITHI CD8 Ld 21
CETTGRASWKPSSSW
서열번호 19 		196 210 SYFPEITHI CD4 IAd 22 GP70-196
KPSSSWDYI
서열번호 20 		204 212 SYFPEITHI CD8 Ld 20
DYITVSNNL
서열번호 21 		210 218 ANN CD8 Kd 33.91mM
DYITVSNNL
서열번호 21 		210 218 SMM CD8 Kd 46.55nM
DYITVSNNL
서열번호 21 		210 218 SYFPEITHI CD8 Kd 24
ITVSNNLTSDQATPV
서열번호 22 		212 226 SYFPEITHI CD4 IAd 22
TGHWWGLRLYVSGHD
서열번호 23 		252 266 SYFPEITHI CD4 IAd 25
LYVSGHDPG
서열번호 24 		260 268 SYFPEITHI CD8 Kd 22
VPIGPNPVL
서열번호 25 		284 292 ANN CD8 Ld 38.04nM
VPIGPNPVL
서열번호 25 		284 292 SYFPEITHI CD8 Ld 21
NPVLSDRRPPSRPRP
서열번호 26 		289 303 SYFPEITHI CD4 IEd 20
NSTPTETPL
서열번호 27 		311 319 SYFPEITHI CD8 Ld 21
TPTETPLTL
서열번호 28 		313 321 SYFPEITHI CD8 Ld 21
PPAGVENRL
서열번호 29 		325 333 SYFPEITHI CD8 Ld 21
KTQECWLCLVSGPPY
서열번호 30 		351 366 SYFPEITHI CD4 IAd 23
PPYYEGVAVLGTYSN
서열번호 31 		363 377 SYFPEITHI CD4 IAd 22
PYYEGVAVL
서열번호 32 		364 372 SYFPEITHI CD8 Kd 21
YSNHTSAPANCSVAS
서열번호 33 		375 389 SYFPEITHI CD4 IAd 29
NHTSAPANCSVASQH
서열번호 34 		377 391 SYFPEITHI CD4 IAd 22
CSVASQHKL
서열번호 35 		385 393 SYFPEITHI CD8 Ld 21
VASQHKLTLSEVTGQ
서열번호 36 		387 401 SYFPEITHI CD4 IAd 20
SDGSYYLAAPTGTTW
서열번호 37 		422 436 SYFPEITHI CD4 IAd 28
WACSTGLTPCISTTI
서열번호 38 		437 451 SYFPEITHI CD4 IAd 22
TPCISTTIL
서열번호 39 		444 452 SYFPEITHI CD8 Ld 22
SPSYVYHQF
서열번호 40 		472 480 ANN CD8 Ld 30.26nM GP70-472
SPSYVYHQF
서열번호 40 		472 480 SYFPEITHI CD8 Ld 22
SPSYVYHQFERRAKY
서열번호 41 		472 486 SYFPEITHI CD4 IEd 26
YHQFERRAKYKREPV
서열번호 42 		477 491 SYFPEITHI CD4 IEd 32
KYKREPVSL
서열번호 43 		485 493 SYFPEITHI CD8 Kd 25
KYKREPVSLTLALLL
서열번호 44 		485 499 SYFPEITHI CD4 IAd 24
EPVSLTLAL
서열번호 45 		489 497 SYFPEITHI CD8 Ld 21
EPVSLTLALLLGGLT
서열번호 46 		489 503 SYFPEITHI CD4 IAd 24
PVSLTLALLLGGLTM
서열번호 47 		490 504 SYFPEITHI CD4 IAd 22
VSLTLALLLGGLTMG
서열번호 48 		491 505 SYFPEITHI CD4 IAd 24
GLTMGGIAAGVGTGT
서열번호 49 		501 515 SYFPEITHI CD4 IAd 26
GTGTTALVATQQFQQ
서열번호 50 		512 526 SYFPEITHI CD4 IAd 22
TNLEKSLTS
서열번호 51 		543 551 SYFPEITHI CD8 Kd 21
RRGLDLLFLKEGGLC
서열번호 52 		560 574 SYFPEITHI CD4 IAd 22
LKEECCLYADHTGLV
서열번호 53 		577 591 SYFPEITHI CD4 IAd 21
CCLYADHTGLVRDSM
서열번호 54 		581 595 SYFPEITHI CD4 IEd 20
LYADHTGLV
서열번호 55 		583 591 SYFPEITHI CD8 Kd 21
ADHTGLVRDSMAKLR
서열번호 56 		585 599 SYFPEITHI CD4 IAd 24
RDSMAKLRERLSQRQ
서열번호 57 		592 606 SYFPEITHI CD4 IAd 20
MAKLRERLSQRQKLF
서열번호 58 		595 609 SYFPEITHI CD4 IEd 20
ERLSQRQKLFESQQG
서열번호 59 		600 614 SYFPEITHI CD4 IAd 20
WFTTLISTI
서열번호 60 		625 633 ANN CD8 Kd 6.17nM
WFTTLISTI
서열번호 60 		625 633 SMM CD8 Kd 44.68nM
WFTTLISTI
서열번호 60 		625 633 SYFPEITHI CD8 Kd 21
MGPLIILLLILLFGP
서열번호 61 		634 648 SYFPEITHI CD4 IAd 22
PLIILLLILLFGPCI
서열번호 62 		636 650 SYFPEITHI CD4 IAd 21
ILLFGPCILNRLVQF
서열번호 63 		643 657 SYFPEITHI CD4 IEd 20
LVQFIKDRISVVQA
서열번호 64 		654 667 Casares N. et al * CD4 H2d class II N.A.
QFIKDRISVVQALVL
서열번호 65 		656 670 SYFPEITHI CD4 IAd 24
KDRISVVQALVLTQQ
서열번호 66 		659 673 SYFPEITHI CD4 IAd 27
ISVVQALVL
서열번호 67 		662 670 SYFPEITHI CD8 Ld 20
N Casares; J J Lasarte; A L de Cerio; P Sarobe; M Ruiz; I Melero; J Prieto; F Borrαs-Cuesta. Immunization with a tumor-associated CTL epitope plus a tumor-related or unrelated Th1 helper peptide elicits protective CTL immunity. 2001. Eur J Immunol. 31: 1780-9.
플루오로카본-연결된 펩티드 조성물
플루오로카본-연결된 펩티드 조성물 (PepGP70)은 GP70에서 유래한 4개의 플루오로카본-변형된 펩티드 (GP70-142, GP70-196, GP70-472, GP70-CM), 외피 (Env) 단백질 쥐 백혈병 바이러스 (MuLV)를 포함한다. GP-70-142, GP70-196, GP70-472, GP70-CM의 서열은 표 1과 표 2에 나타나 있다. 4개의 펩티드는, <50nM 의 예측 IC50 컷오프(www.iedb.org/) 를 사용한 인공 신경망 (ANN) 및 안정화된 매트릭스 방법(SMM) 및 >20의 임계값 및 공개된 정보를 사용한 SYFPEITHI (http://www.syfpeithi.de/)를 사용하여 쥐의 클래스 I 및 클래스 II MHC 분자 (H-2Kd, H-2Dd, H-2Ld, IAd 및 IEd)에 대한 고 친화성 결합 펩티드를 예측함으로써 선별하였다. GP70-142, GP70-196, GP70-472, GP70-CM은 고체상 펩티드 합성 (SPPS)에 의해 수득하였다. 모든 펩티드는 표준 9-플루오레닌에톡시카르보닐(fluorenyhnethoxycarbonyl; Fmoc) 화학을 사용하여 수지 상에 펩티드를 구축하는 American Peptide Company (Sunnyvale, CA)에서 합성하였다. 선택적으로 탈보호된 C- 또는 N- 말단 추가 라이신의 엡실론-사슬에 2H, 2H, 3H, 3H-퍼플루오로운데칸산 플루오로카본 사슬 (C8F17(CH2)2COOH)을 혼입하여 플루오로카본-변형된 펩티드를 유도하였다. 측쇄 보호기의 절단 및 제거 후, 조펩티드를 냉 에테르로부터 침전시키고 여과하여 수집하였다. 순도는 RP-HPLC에 의해 평가하였으며 순도는 모든 펩티드에서 90%보다 높았다. 동결-건조 된 플루오로카본 연결 펩티드를 -20 ℃에서 보관하였다. PepGP70은 펩티드 GP-70-142, GP70-196, GP70-472, GP70-CM의 가용화, 블렌딩, 만니톨/물 용액의 첨가, 0.22μm 필터를 사용한 여과 및 동결 건조 후에 수득하여, 펩티드당 1400μg을 포함하는 개별 바이알을 생성하였다. 동결-건조된 PepGP70은 -20 ℃에서 보관하였다. 생체 내 투여 전에, 동결-건조 된 PepGP70 바이알을 ODN1585 (TLR 9 작용제; Invivogen, Toulouse, France)를 함유하는 1.4ml의 28mM L-히스티딘으로 재구성하여 100μg/ODN1585/ml 및 1000μg/펩티드/ml의 강도를 얻었다.
표 2: PepGP70 조성물의 4가지 펩티드
이름 서열
GP70-142 SYTPRCNTAWNRLKLSKVTHAHNE(K)FA1 (서열번호 68)
GP70-196 FA1(K)ETTGRASWKPSSSWDYITVSNNLTSDQATPVKKK (서열번호 69)
GP70-472 SPSYVYHQFERRAKYKREPVSLTLALLLGGLTMGKKK(K)FA1 (서열번호 70)
GP70-CM SPSYVYHQFKKKLVQFIKDRISVVQA(K)FA1 (서열번호 71)
FA1=C8F17(CH2)2-CO-GP70 단백질 서열로부터 유래된 상기 펩티드들은 표 1에서 식별된 상기 단백질 및 T 세포 에피토프의 전장 서열(서열번호 1) 내에 밑줄로 표시하였다 GP70-472 및 GP70-CM은 세포독성 T 림프구 (CTL) 에피토프 SPSYVYHQF (서열번호 72) (덱스트라머에서 AH1이라고도 함)를 포함한다. KKK는 링커이며 전장 GP70 단백질 서열내에 존재하지 않는다. GP70-CM은 CTL 에피토프 (CD8+ 에피토프), KKK 링커 및 T- 헬퍼 림프구 (HTL) 에피토프를 포함하는 키메라 펩티드이다.
따라서, 본원에서는 이종의 프라임 부스트 투여요법을 위한 백신 조합물이 제공되며, 상기 조합물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물; 및 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는, 제2 조성물을 포함하고; 상기 제1 또는 제2 조성물은 프라임 조성물 또는 부스트 조성물이다.
실시예 2 : T 세포 백신 조성물 및 면역조절제 조성물 조합을 포함하는 백신 조합물의 제조: 제1 조성물 (비-복제 바이러스 벡터 조성물); 또는 제2 조성물 (플루오로카본-연결된 펩티드 조성물); 및 제3 조성물 (면역조절제 조성물)
비-복제 바이러스 벡터 조성물 (제1 조성물) 및 플루오로카본-연결된 펩티드 조성물 (제2 조성물)을 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조하였다.
면역조절제 조성물
면역조절제 조성물은 본원에 개시되고 적절한 수용액으로 제공되는 임의의 것일 수 있다. 본 실시예에서, 항-PD-1이 PBS 중에 제공되었고, 아래에 개시된 바와 같이, 상기 기재된 제1 또는 제2 백신 조성물과는 다른 시점에 별도 투여되었다.
따라서, 본원에서는 CD8+ T 세포 반응을 유도하고 종양 크기를 감소시키는데 사용하기 위한 백신 조합물을 제공하며, 상기 조합물은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물; 또는, 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는, 제2 조성물; 및 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물을 포함한다. 제1 또는 제2 조성물은 제3 조성물과 별도로 투여된다.
특정 구체예에서, a) 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물; b) 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는, 제2 조성물; 및 c) 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물을 포함하는 백신 조성물을 제공하며, 상기 제1 조성물 및 제2 조성물이 선택될 때, 제1 또는 제2 조성물은 프라임 조성물 또는 부스트 조성물이다.
실시예 3: 이종의 백신 조합물; 비-복제 바이러스 벡터 조성물 및 플루오로카본-연결된 펩티드 조성물을 사용한 항원 특이적 CD8+ T 세포 반응 유도
AdGP70 (비-바이러스 벡터 조성물) 및 PepGP70 (플루오로카본-연결된 펩티드 조성물)의 제조는 실시예 1에 기재되어 있으며, AdGP70은 GP70 (서열번호 1)을 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터이고, PepGP70은 4개의 펩티드(서열번호 68 내지 71) 각각이 플루오로카본 사슬에 부착된 조합물이고 미셀내 존재한다.
AdGP70 및 PepGP70 조성물의 동종의 프라임/부스트 투여 및 이종의 프라임/부스트 투여의 비교를 수행하였으며, BALB/c 마우스에서 1회 또는 2회 투여 후 AdGP70 및 PepGP70 조성물들의 면역원성을 AdGP70 및 PepGP70의 이종의 프라임/부스트 조합과 비교하였다. 마우스를 프라임 투여량의 투여와 부스트 투여량의 투여 사이에 14일 간격으로 피하 경로를 사용하여 면역화하였다. 그룹 1 (n=8)은 0 일째 50μl의 PepGP70 (50ug/펩티드)을 피하로 투여하였다. 그룹 2 (n=8)는 0 일째 50μl의 AdGP70 (2x109 ifu)을 피하로 투여하였다. 그룹 3 (n=8)은 0 일 및 14 일째에 50μl의 PepGP70 (50ug/펩티드) 을 피하로 투여하였다. 그룹 4 (n=8)는 0 일과 14 일째에 50μl의 PepGP70 (50ug/펩티드)을 피하로 투여하였다. 그룹 5 (n=8)는 0 일 및 14 일째에 각각 50μl의 AdGP70 (2x109 ifu) 및 PepGP70 (50ug/펩티드)을 피하로 투여하였다. 그룹 6 (n=8)은 1 일 및 14 일째에 각각 50μl의 PepGP70 (50ug/펩티드) 및 AdGP70 (2x109 ifu)을 피하로 투여하였다. 최종 투여 10 일 후 (24 일째에 측정), 각 동물의 비장세포를 분리하고 두 가지 종류의 면역분석을 통해 처리했다: (1) 시험관내 IFN-γ ELISpot 분석을 통해 개별 동물에서 GP70-특이 T 세포의 빈도를 평가 (도 1) 및 (2) gp70 (AH1 펩티드, 서열 SPSYVYHQF (서열번호 72))에서 유래된 H-2Ld-제한 에피토프에 특이적인 CD8+ T 세포의 빈도를 측정하기 위한 유세포 분석법에 의한 덱스트라머-염색 분석. 도 1 및 도 2 참조.
임상 시험은 여러 질환에 대한 T 세포 유도 백신의 효능을 입증했으며, 보호 T 세포 반응을 평가하기 위한 많은 접근 방식을 취할 수 있지만, ELISpot 분석은 백신 면역원성을 결정하는 가장 적합한 수단으로 확립되어 있다. Slota M. et al., ELISpot for measuring human immune responses to vaccines. Expert Rev Vaccines 2011;10(3):299-306. IFN-γ ELISpot 분석의 경우, ELISpot 플레이트 (MSIPS4510 Merck Millipore)를 무균 조건 하에서 PBS에 5μg/ml (마우스 IFNg ELISPOT 쌍, BD, ref 551881)로 희석한 포획 IFN-γ 항체 100μl/웰로 사전 코팅하고, 4℃에서 밤새 배양했다. 코팅 항체를 제거하고 플레이트를 세척한 다음, 10 % 우태아혈청 (GIBCO, ref 10270-098) 및 1 % 페니실린-스트렙토마이신 용액 (GIBCO, ref 11548876) 이 보충된 RPMI Glutamax 1640 (GIBCO, ref 11548876)으로 구성된 완전 배양 배지 200μL/웰을 사용하여 실온에서 2 시간 동안 배양했다. 배지를 제거한 후, 완전 배양 배지 내 비장 세포 현탁액을, 각 개별 펩티드 (GP-70-142, GP70-196, GP70-472, GP70-CM) 또는 4 개의 펩티드 혼합물의 존재하에서 사전 코팅된 ELISpot 플레이트에 웰당 5x105 세포의 농도로 첨가하고, 양성 대조군으로서 콘카나발린 A(eBiosciences, ref 00-4978-03)을 웰당 200μl 부피로 사용하였다. 음성 대조군으로서 배지만 사용하였다. 각 테스트 조건은 중복으로 달성하였다. 플레이트는 가습 환경에서 37 ℃, 5 % CO2에서 18 시간 동안 배양하였다. 세포를 완전히 제거하기 위해 탈이온수 (DI)로 두 번 세척한 후, 플레이트를 ELISpot 세척 완충액 (1X Dulbecco 's PBS, Gibco, Fisher Cat# 11540486), 0.05% Tween®20 (Fisher cat # 10113103)으로 광범위하게 세척했다. 그런 다음, ELISpot 플레이트를 2ug/ml의 10 % 우태아혈청이 보충된 PBS에 희석된 100μl/웰의 항-IFN-g 검출 항체 (Mouse IFNg ELISPOT pair, BD, ref 551881)와 함께 실온에서 2 시간 동안 배양했다. 검출 항체 용액을 버리고 플레이트를 ELISpot 세척 버퍼로 세척한 후 실온에서 1 시간 동안 100μL/웰 희석된 스트렙타비딘-HRP (BD ™ ELISPOT Streptavidin-HRP, Cat. No. 557630)로 인큐베이션하였다. 스트렙타비딘-HRP 용액을 제거하고 플레이트를 ELISpot 세척 완충액으로 세척했다. 100μL의 최종 기질 용액 (AEC)을 각 웰에 첨가했다. 스팟 형성을 15-20 분에서 모니터링하고 DI 물로 웰을 세척하여 기질 반응을 중지시켰다. 그런 다음 플레이트를 어둠 속에서 실온에서 밤새 공기 건조시켰다. ELISPOT 분석기: ImmunoSpot® ELISpot 플레이트 판독기 (CTL-Europe GmbH, 독일)를 사용하여 스팟을 계수하였다. 스팟 형성 세포, SFC/웰은, 특정 자극에 반응하여 IFN-γ를 생산하는 세포의 수를 정량화하기 위해 계수하였다.
프라임 투여량 투여 후 24 일째에 각 그룹에 대해 계산된, 비장 세포 백만 개당 IFN-γ 생산 세포 (스팟 형성 세포, SFC)의 수로 표현된 4개의 펩티드에 대한 누적 IFN-γ ELISpot 반응을 보여주는, 도 1 참조. 그룹 5 및 6은 동종의 프라임 부스트 그룹과 비교하여 시너지 효과를 나타내는 이종의 프라임 부스트 그룹이다.
덱스트라머 분석을 위해, 쥐 비장 세포를 AH1 펩티드 (GP70에서 유래된 CD8+ T 세포 에피토프, 서열: SPSYVYHQF (서열번호 73))를 이용하여 제조된 H-2 Ld 덱스트라머, 또는 NP118-126 펩티드 (LCMV의 핵 단백질로부터 유래된 CD8+ T 세포 에피토프, 서열: RPQASGVYM (서열번호: 74))를 이용하여 제조된 무관한 대조군 H-2 Ld 덱스트라머로로 염색하였으며, 둘다 피코에리트린(Phycoerythrin, PE)으로 표지하였다. 덱스트라머 시약은 최적화된 수의 MHC-펩티드 복합체 및 형광색소를 운반하는 덱스트란 폴리머 백본으로 구성되어, 덱스트란 폴리머가 운반하는 MHC/펩티드 복합체를 구체적으로 인식하는 T 세포 수용체를 사용하여 항원-특이적 T 세포를 검출할 수 있는 능력을 제공한다. 유세포 분석을 위한 세포 염색 과정은 다음과 같다. 그룹 1 내지 6 동물 (1x106 세포)의 개별 비장 세포를 96웰 플레이트내에서 10 % 우태아혈청 (GIBCO, ref 10270-098) 및 1 % 페니실린-스트렙토마이신 용액 (GIBCO, ref 11548876)이 보충된 RPMI Glutamax 1640 (GIBCO, ref 11548876) 으로 구성된 200μL/웰의 완전 배양 배지에서 배양하였다. 플레이트는 가습 환경에서 37℃, 5 % CO2에서 밤새 배양하였다. 인큐베이션 후, 개별 마우스의 비장 세포를 그룹별로 모으고 1300 rpm, 4℃에서 6 분 동안 원심분리하여 염색 완충액 (5 % 우태아혈청, 2mM EDTA 및 1 % 페니실린-스트렙토마이신 용액으로 보충된 DPBS1X)으로 세척했다. 1:200으로 희석된 항-마우스 CD16/32 항체를 함유하는 25ul의 저온 염색 완충액으로 4℃에서 10 분 동안 비장 세포를 인큐베이션함으로써, Fc 수용체를 차단하였다. 그런 다음, 세포를 관련 AH-1/H-2 Ld 덱스트라머 (Immudex, ref JG3294-OPT) 또는 관련없는 NP118-126/H-2 Ld 덱스트라머 (Immudex, ref JG2750-OPT)로 염색했다. 4℃에서 30 분 동안 인큐베이션하여 염색 완충액 중 1:2.5의 적절한 사전-희석된 덱스트라머 25ul를 Fc 수용체 차단 세포에 첨가하였다. 인큐베이션 후, 항-마우스 CD4+ Pe-Cy7 (Ozyme, ref BLE100422), 항-마우스 CD8a BV510 (Ozyme, ref BLE100752), 항-마우스 CD44 BV650 (Ozyme, ref BLE103049), 항-마우스 CD62L BV711 (Ozyme, ref BLE104445), 항-마우스 CD45 APC (Ozyme, ref BLE103112), 항-마우스 PD1 PERCP-Cy5.5 (Ozyme, ref BLE109119), 항-마우스 CD69 APC-eFluor780 (eBioscience, ref 47-0691 -80) 및 Viability Dye eFluor ™ 520 (eBioscience, ref 65-0867-14)을 포함하는 2X 항체 칵테일을 염색 완충액 내에 준비했다. 50ul의 항체 칵테일을 덱스트라머 염색된 세포에 첨가하고 4℃에서 20 분 동안 인큐베이션하였다. 염색 단계 후, 세포를 1300 rpm 4℃에서 6 분 동안 원심분리하여 염색 완충액으로 2 회 세척하고, 유세포 분석 획득 및 분석 전에 200ul의 염색 완충액에 재현탁시켰다. 이벤트는 살아있는 CD45 CD8 세포에서 게이트되었다. 도 2는 덱스트라머 염색에 양성인 CD8+ T 세포의 백분율을 보여준다.
프라임 투여량의 투여 후 24 일째에 덱스트라머 염색에 양성인 CD8+ T 세포의 백분율을 보여주는 도 2 참조. 그룹 5 및 6은 상동의 프라임 부스트 그룹과 비교하여 시너지 효과를 나타내는 이종의 프라임 부스트 그룹이다.
ELISpot 분석 결과는 PepGP70 또는 AdGP70의 단일 투여 대 2 회 투여와 비교하여 IFN- 감마 생성 비장 세포의 수가 증가했음을 보여준다. 놀랍게도, 이종의 프라임-부스트 투여량 투여 (AdGP70 다음에 PepGP70, 또는 그 반대)는 AgGP70 또는 PepGP70을 사용한 동종의 프라임-부스트 투여량 투여에 비해 더 강한 말초 면역 반응을 유도했다. 도 1 및 도 2 참조. 이 데이터는 이종의 프라임-부스트 투여량 투여에서 조합시 CD8+ T 세포 반응을 포함하여 보다 강력한 T 세포 반응을 촉진하는 능력에서 두 가지 상이한 유형의 면역원 사이의 예상치 못한 상승 작용을 보여준다. 결과는 또한 PepGP70을 먼저 사용한 후 AdGP70 투여를 사용한 이종의 프라임-부스트 요법이 덱스트라머 면역 분석에 의해 밝혀진 바와 같이 항원-CD8+ T 세포의 유도에 더 유리한 조건을 나타낸다는 것을 보여준다. 도 2 참조.
따라서, 본원은 이종의 투여요법을 사용하여 이를 필요로 하는 개체에서 면역 반응을 유도하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 포함하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물을 투여하는 단계; 및 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래되고; iii) 바이러스 벡터의 항원 또는 면역원 내에 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 포함하며는 제2 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 항원 특이적 CD8+ T 세포 반응이 유도되는 방법이다. 제1 조성물 또는 제2 조성물이 모두 투여되는 경우, 제1 조성물 또는 제2 조성물은 프라임 투여량으로 투여되고, 제1 조성물 또는 제2 조성물 중 하나는 부스트 투여량으로 투여된다.
실시예 4 : 이종 투여요법에서 비-복제 바이러스 벡터 조성물 및 플루오로카본-연결된 펩티드 조성물의 사용
AdGP70과 PepGP70 사이의 상승 작용을 CT26 종양 세포로 챌린지된 BALB/c 마우스에서 항종양 활성을 평가함으로써 조사하였다. 6-8 주령 암컷 BALB/c 마우스를 실험에 사용하였다. 0 일째에 100ul PBS 중 2x104 CT26 세포를 마우스 옆구리에 피하 주사하였다. AdGP70 및 PepGP70의 백신 조성물은 실시예 1에 따라 제조되며, 상기 제제화 된 백신은 50ul의 주사 용액으로 제조된다. 조성물은 프라임 투여량의 투여와 부스트 투여량의 투여 사이의 14 일 동안 프라임/부스트 스케줄에 따라 피하 투여된다.
그룹 1은 1 일과 14 일째에 각각 50μl의 PepGP70 (50μg/펩티드)을 피하로 투여 받았다. 그룹 2는 7 일 및 14 일째에 각각 50μl의 AdGP70 (2x109 ifu)을 피하로 투여 받았다. 그룹 3은 7 일 및 14 일째에 각각 50μl의 AdGP70 (2x109 ifu) 및 PepGP70 (50μg/펩티드)의 백신만을 피하로 투여받았다. 그룹 4는 1 일과 14 일째에 각각 50μl의 PepGP70 (50ug/펩티드) 및 50μl의 AdGP70 (2x109 ifu)을 피하로 투여 받았다. 그룹 5는 치료를받지 않았다.
두 백신 PepGP70 및 AdGP70은 개별적으로 또는 항-종양 반응을 촉진하기 위한 프라임-부스트 조합으로서 테스트하였다. 프라임/부스트 조합으로 구성된 백신 요법은 개별적으로 테스트된 PepGP70 및 AdGP70에 비해 더 나은 항종양 반응을 촉진한다.
실시예 5 : 면역 체크포인트 억제제 (항-PD1)와 조합된 이종의 투여요법에서 비-복제 바이러스 벡터 조성물 및 플루오로카본-연결된 펩티드 조성물의 사용
AdGP70 (비-바이러스 벡터 조성물) 및 PepGP70 (플루오로카본-연결된 펩티드 조성물)의 제조는 실시예 1에 기재되어 있으며, AdGP70은 GP70 (서열번호 1)을 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터이고, PepGP70은 4개의 펩티드(서열번호 68 내지 71) 각각이 플루오로카본 사슬에 부착된 조합물이고 미셀내 존재한다. 면역 체크포인트 억제제 조성물의 제조는 실시예 2에 기재되어있다.
항-PD1 처리와 조합된 AdGP70 및 PepGP70 간의 상승 작용을 CT26 종양 세포로 챌린지된 BALB/c 마우스에서 백신 유도된 면역 반응을 평가함으로써 조사하였다. 6-8 주령 암컷 BALB/c 마우스 (그룹당 n=12)를 실험에 사용했다. 동물을 케타민-도미터의 혼합물(0.7/80mg/kg)로 마취하여 종양 세포 접종 부위에서 동물을 면도하고 항세단 주사 (2mg/kg)로 각성을 유발했다. 0 일째, 100ul PBS 중의 2x104 CT26 세포를 마우스 옆구리에 피하 주사하였다.
AdGP70 및 PepGP70의 백신 조성물은 실시예 1에 따라 제조하였으며, 제형화 된 백신은 50ul의 주사가능한 용액으로 제조하였다. 조성물은 프라임/부스트 스케쥴에 따라 프라임 투여량과 부스트 투여량의 투여 사이에 7 일 동안 피하로 투여하였다. 이 종양 실험 모델에서는 종양에 대한 면역 반응의 효과를 감지하기 위해 강력한 면역 반응이 탑재되도록 하기 위해 일반적인 14 일 대신 7 일 후에 부스트 투여량을 투여한다. 면역-체크포인트 억제제 조성물인, 항-PD1 (항-CD279 - 클론 RMP1-14, InVivoPlus, Euromedex, ref BP0146-100mg; GoInVivo, Ozyme, ref BLE114115)의 6 회 주사를 복강 내 경로로 투여했다.
그룹 1 (n=12)은 7 일과 14 일째에 각각 50μl의 PepGP70 (50μg/펩티드)을 피하로 투여받고, 7, 11, 14, 18, 22 및 25 일째에 100μl 중의 항-마우스 PD1 200μg를 복강 내로 투여받았다. 그룹 2 (n=12)는 7 일과 14 일째에 각각 50μl의 AdGP70 (2x109 ifu)을 피하로 투여받고, 7, 11, 14, 18, 22 및 25 일째에 100μl 중의 항-마우스 PD1 200μg을 복강 내로 투여받았다. 그룹 3 (n=12)은 7 일과 14 일째에 각각 AdGP70 (2x109 ifu) 및 PepGP70 (50μg/펩티드) 50μl의 백신을 각각 피하로 투여받고, 7, 11, 14, 18, 22 및 25 일째에 100μl 중의 항-마우스 PD1 200μg을 복강 내로 투여받았다. 그룹 4 (n=12)는 7 일 및 14 일째에 각각 PepGP70 (50ug/펩티드) 50μl 및 AdGP70 (2x109 ifu) 50μl를 피하로 투여받고, 7, 11, 14, 18, 22 및 25 일째에 100μl 중의 항-마우스 PD1 200μg을 복강 내로 투여받았다. 그룹 5는 7, 11, 14, 18, 22 및 25 일째에 100μl 중의 항-마우스 PD1 200μg을 복강 내로 투여받았다. 그룹 6 (n=12)은 치료를 받지 않았다.
덱스트라머 분석을 위해, 6 일 (D6) 또는 20 일 (D20)에 수집된 PBMC를 AH1 펩티드 (GP70에서 유래된 CD8+ T 세포 에피토프, 서열: SPSYVYHQF (서열번호 73)) 를 이용하여 제조된 H-2 Ld 덱스트라머로 염색하였으며, 피코에리트린(Phycoerythrin, PE)으로 표지하였다. 유세포 분석을 위한 세포 염색 과정은 다음과 같다. 그룹 1 내지 6 동물의 전혈 샘플 200μl를 후안와 출혈(retro-orbital bleeding) 기술을 통해 EDTA 코팅된 튜브에 수집하고 응고를 방지하기 위해 여러 번 뒤집었다. 제조업체 권장사항 (eBiosciences, ref 00-4300-54)에 따라 다종 RBC 용해 완충액을 사용하여 적혈구를 용해했다. 그룹 1 내지 6 동물의 개별 PBMC 샘플을 96웰 플레이트내에서 10 % 우태아혈청 (GIBCO, ref 10270-098)이 보충된 RPMI Glutamax 1640 (GIBCO, ref 11548876) 및 1 % 페니실린-스트렙토마이신 용액 (GIBCO, ref 11548876)으로 구성된 200μL/웰의 완전 배양 배지에서 배양하였다. 플레이트는 가습 환경에서 37℃, 5 % CO2에서 밤새 배양하였다. 적혈구 용해, 인큐베이션 완료 후, 개별 마우스의 PBMC를 실온에서 1300rpm에서 6 분 동안 원심 분리하여 염색 완충액 (5 % 우태아혈청, 2mM EDTA 및 1 % 페니실린-스트렙토마이신 용액으로 보충된 DPBS1X)으로 세척했다. 1:200으로 희석된 항-마우스 CD16/32 항체를 함유하는 25ul의 저온 염색 완충액으로 4℃에서 10 분 동안 비장 세포를 인큐베이션함으로써, Fc 수용체를 차단하였다. 그런 다음, 세포를 관련 AH-1/H-2 Ld 덱스트라머 (Immudex, ref JG3294-OPT) 또는 관련없는 NP118-126/H-2 Ld 덱스트라머 (Immudex, ref JG2750-OPT)로 염색했다. 4℃에서 30 분 동안 인큐베이션하여 염색 완충액 중 1:2.5의 적절한 사전-희석된 덱스트라머 25ul를 Fc 수용체 차단 세포에 첨가하였다. 인큐베이션 후, 항-마우스 CD4+ Pe-Cy7 (Ozyme, ref BLE100422), 항-마우스 CD8a BV510 (Ozyme, ref BLE100752), 항-마우스 CD44 VioBlue 항-마우스 (Miltenyi, ref 130-102-443), 항-마우스 PD1 PERCP-Cy5.5 (Ozyme, ref BLE109119), CD25 PEeFluor 610 (eBioscience, ref 61-0251-82), CD11b Alexa 700 (eBioscience, ref 56-0112-82) 및 Viability Dye eFluor ™ 520 (eBioscience, ref 65-0867-14)을 포함하는 2X 항체 칵테일을 염색 완충액 내에 준비했다. 50ul의 항체 칵테일을 덱스트라머 염색된 세포에 첨가하고 4℃에서 20 분 동안 인큐베이션하였다. 염색 단계 후, 세포를 1300 rpm 4℃에서 6 분 동안 원심분리하여 염색 완충액으로 2 회 세척하였다. 표면 염색된 세포를 제조업체 권장사항 (고정/투과 및 투과 완충액 세트 키트, eBioscience, ref 00-5523-00)에 따라 제조한 고정/투과 작업 용액 200μl에 재현탁하고 4℃에서 25 분 동안 배양했다. 세포를 1300rpm 4℃에서 6 분 동안 원심 분리하여 1X 투과 완충액으로 세척한 후 항-마우스 퍼포린 APC (eBioscience, ref 17-9392-80)로 염색했다. 미리 희석 된 퍼포린 APC 50μl를 덱스트라머 염색된 세포에 첨가 한 후 4℃에서 20 분 동안 배양했다. 세포를 1300 rpm 4℃에서 6 분 동안 원심 분리하여 1X 투과 완충액으로 2 회 세척한 다음 유세포 분석 수집 및 분석 전에 염색 완충액에 재현탁했다. 이벤트는 살아있는 덱스트라머 CD8+ 세포에서 게이트되었다. 도 3은 6 일 (D6) 및 20 일 (D20)에 각 그룹에 대해 중앙값으로 표현된 덱스트라머 염색에 양성인 CD8+ T 세포의 백분율을 보여준다.
개별적으로 또는 프라임-부스트 조합으로 시험된, 백신 조성물 PepGP70 및 AdGP70은 둘다, 도 3에 제시된 바와 같이, 항-종양 면역 반응을 촉진하는 능력에서 항-PD1 치료와 상승 작용을 나타내며, 여기서 항원-특이적 CD8+ T 세포는 6일째(D6) 및 20일째(D20)에 측정되었다. PepGP70을 사용한 프라임과 AdGP70을 사용한 부스트로 구성된 백신 조합물을 항-PD1 치료와 함께 사용한 경우 다른 백신 요법에 비해 훨씬 더 높은 반응을 촉진한다. 모든 백신 투여요법 (그룹 1 내지 4)은 항-PD1과 시너지 효과를 나타내지만, PepGP70을 프라임 투여량으로, AdGP70을 부스트 투여량으로 사용한 투여요법 (그룹 4)은 동종의 투여요법 백신 (그룹 1 및 2)과 비교하여 시너지 효과를 나타냈다. .
실시예 6: 항원 특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응 및 항종양 활성을 유도하기 위한, 동종의 투여요법에서 플루오로카본-연결된 펩티드 조성물의 사용
플루오르카본-연결된 펩티드 (FP-OVA) 조성물은 GP70 펩티드 대신 OVA 펩티드를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1의 개시에 따라 제조하였다. FP-OVA는 CD4+ T 세포 에피토프 (Ova 323-339, 서열 ISQAVHAAHAEINEAGR (서열번호 76)) 및 CD8+ T 세포 에피토프 (아미노산 위치 257-264, 서열 SIINFEKL (서열번호 77))을 포함하는 오브알부민-유래 펩티드 (서열 ISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT (서열번호 75))로 구성된다.
이 실험에서 암컷 C57BL/6 마우스 (n=15/그룹)는 0 일 및 14 일째에 100ul의 FP-OVA 백신 200ug (그룹 1) 또는 100ul의 부형제 용액 (그룹 2) 으로 피하 접종했다. 24 일째에, ELISpot 분석을 통해 면역 반응을 측정하기 위해 5 마리의 마우스를 각 그룹에서 희생시켰다. IFNγ ELISpot 분석에서 백신 조성물에 대한 면역 반응을 다음과 같이 측정했다: 비장을 수확하고, 1ng/ml OVA-CTL 에피토프 (Ova 257-264, 서열 SIINFEKL(서열번호 77)(CD8+ T 세포 에피토프)) 또는 10μg/mL OVA-HTL (Ova 323-339, 서열 ISQAVHAAHAEINEAGR (서열번호 76) (CD4+ T 세포 에피토프))로 세포를 자극하였다. IFNγ 스팟 형성 세포 (SFC)의 수를 세었다. 도 4A는 대조군 웰 값을 감산 한 후 개별 마우스에 대해 OVA-CTL 또는 OVA-HTL에 대한 반응으로 생성된 IFNγ 스팟 형성 세포 (SFC)/106 비장세포의 수를 보여준다 (선은 중간 반응 값을 나타냄). 데이터는 Kolmogorov-Smirnov 정규성 테스트를 사용하여 매개 변수로 정의하였고 통계 분석은 Student's t 테스트를 사용하여 수행하였다. P<0.001 = ***.
24 일째에, 각 그룹의 나머지 10 마리 마우스는 2x106 E.G7-OVA 세포의 피하 주사를 투여받았다; 마우스 흉선종 EL4 세포는 닭 오브알부민 (OVA)의 상보적 DNA로 안정적으로 형질감염되어 OVA 에피토프를 고유의 항원으로 발현한다. 종양 크기가 150mm2에 도달하면 챌린지된 마우스를 도태하였다. 도 4B는 두 개의 다른 그룹에서 시간에 따라 측정된 전체 생존을 보여준다. 도 5는 부형제 그룹 (도 5A)과 백신 그룹 (도 5B)에서 시간에 따라 측정된 종양 성장을 보여준다. 도 4와 5는 펩티드가 고유한 암 항원인 플루오로카본-연결된 펩티드의 암에 대한 예방제로서의 효과를 보여준다.
두 번째 실험에서, 암컷 C57BL/6 마우스 (n=10/그룹)는 0 일째에 한쪽 옆구리에 2x106 E.G7-OVA 세포를 피하 주사를 투여받고, 50일째 살아있는 동물의 반대쪽 옆구리에 2x106 E.G7-OVA 세포를 두 번째 투여했다. 그룹 1은 1 일과 8 일째에 100ul의 FP-OVA 백신 200ug를 피하 투여받았다. 그룹 2는 3 일째 (적어도 한 마리의 동물에서 감지할 수있는 종양이 검출된 날에 해당)와 10 일째에 100ul의 FP-OVA 백신 200ug을 피하로 투여받았다. 그룹 3은 1 일 및 8 일째에 100ul의 부형제를 피하로 투여받았다. 종양 크기가 150mm2에 도달하면 챌린지된 마우스를 도태하였다. 도 6은 서로 다른 그룹에서 시간이 지남에 따라 측정된 전체 생존율을 보여준다. 그룹 1과 2는 각각 60 % 이상의 생존율을 보였는데, 이는 펩티드가 고유한 암 항원인 플루오로카본-연결된 펩티드의 암 치료제로서의 효과를 입증한다.
실시예 7: 면역 체크포인트 억제제 (항-PD1)와 조합된 비-복제 바이러스 벡터 조성물 또는 플루오로카본-연결된 펩티드 조성물의 사용
AdGP70 (비-바이러스 벡터 조성물) 및 PepGP70 (플루오로카본-연결된 펩티드 조성물)의 제조는 실시예 1에 기재되어 있으며, AdGP70은 GP70 (서열번호 1)을 발현하는 복제 결핍 아데노바이러스 벡터이고, PepGP70은 4개의 펩티드(서열번호 68 내지 71) 각각이 플루오로카본 사슬에 부착된 조합물이고 미셀내 존재한다. 면역 체크포인트 억제제 조성물의 제조는 실시예 2에 기재되어있다.
BALB/c 마우스에서 CT26 결장암종 종양에 대한 각각의 항종양 활성을 평가함으로써 AdGP70 또는 PepGP70을 항-PD1 치료와 조합시의 상승 작용을 조사 하였다. 6-8 주 암컷 BALB/c 마우스 (그룹당 n=12) 를 실험에 사용했다. 동물을 케타민-도미터의 혼합물(0.7/80mg/kg)로 마취하여 종양 세포 접종 부위에서 동물을 면도하고 항세단 주사 (2mg/kg)로 각성을 유발했다. 0 일째, 100ul PBS 중 2x104 CT26 세포를 마우스 옆구리에 주사하였다. 종양 촉진을 주 5 회 수행하여 첫 번째 양성 종양 검출 날짜를 결정하였다. 고형 종양이 검출되면 주 3 회씩 크기를 측정했다. 종양 크기는 다음 공식에 따라 결정된 2차원 및 부피에서 캘리퍼를 이용하여 측정하였다: L*l^2/2; (L = 긴 축 및 l = 짧은 축). 동물은 다음과 같은 인도적 종말점에 따라 희생하였다: 종양부피 ≥ 2000 mm3, 괴사성 또는 궤양성 종양의 존재, 일시적인 엎드림 또는 구부러진 자세를 포함한 이동성 장애, 호흡을 포함한 중요한 생리적 기능에 대한 방해, 상당한 복부 팽창 또는 1주일 내에 20% 초과의 체중 감소.
제형화된 백신 조성물들은 50ul의 주사가능한 용액으로서 실시예 1 및 2에 따라 제조하였고, 프라임 투여량과 부스트 투여량 투여 사이에 14일 동안 프라임/부스트 스케줄에 따라 피하 투여하였다. 면역-체크포인트, 항-PD1 (항-CD279-클론 RMP1-14, InVivoPlus, Euromedex, ref BP0146-100mg; GoInVivo, Ozyme, ref BLE114115)의 6회 주사를, 종양 개시 후 3 일 또는 4 일마다 복강 내 경로로 투여했다.
그룹 1 (n=15)은 1 일과 15 일째에 각각 50μl의 PepGP70 (50ug/펩티드) 백신 조성물 제제만을 투여 받았다. 그룹 2 (n=14)는 1 일 및 15 일째에 각각 50μl의 PepGP70 (50ug/펩티드)을 투여받고, 4, 7, 11, 15, 18 및 22 일째에 100ul 전달 용량 (항-CD279-클론 RMP1-14)으로 항-마우스 PD1 200μg을 투여받았다. 그룹 3 (n=14)은 0 일과 14 일째에 각각 50μl의 AdGP70 (2x109 ifu) 백신 제제만을 투여받았다. 그룹 4 (n=15)는 0 일 및 14 일째에 각각 50μl의 AdGP70 (2x109 ifu)을 투여받고, 4, 7, 11, 15, 18 및 22 일째에 100ul 전달 용량 (항-CD279-클론 RMP1-14)으로 항-마우스 PD1 200μg을 투여 받았다. 그룹 5 (n=15)는 각각 1 일 및 15 일째에 TLR9 작용제만을 함유하는 50μl의 백신 제제를 투여받고, 4, 7, 11, 15, 18 및 22일째에 100ul 전달 용량 (항-CD279-클론 RMP1-14)으로 항-마우스 PD1 200μg을 투여받았다. 그룹 6 (n=12)은 치료를 받지 않았다. 결과는 도 7 (개별 동물에서 종양 부피) 및 도 8A 및 8B (각 그룹의 전체 생존율)에 나타내었다.
두 조성물 PepGP70 및 AgGP70 모두, 각각 도 7, 도 8A 및 8B에 제시된 바와 같이, 지연된 종양 성장 및 개선된 전체 생존으로 항-종양 활성을 촉진한다. 또한, 두 백신 조성물 모두, 백신 조성물 또는 항-PD1 치료만을 받은 동물에 비해, 항-PD1와의 병용 치료로 인해 우수한 전체 생존 및 지연된 종양 성장 프로파일을 나타내는 이익을 얻는다.
실시예 8 : 골수성-유래 억제 세포 (MDSC) 억제제 조성물과 조합된 비-복제 바이러스 벡터 조성물 또는 플루오로카본-연결된 펩티드 조성물의 사용
MDSC 억제제와 조합된 AdGP70 또는 PepGP70은 CT26 종양 세포로 챌린지된 BALB/c 마우스에서 항-종양 활성을 평가함으로써 조사하였다. 6-8 주령 암컷 BALB/c 마우스를 실험에 사용했다. 0 일째, 100ul PBS 중의 2x104 CT26 세포를 마우스 옆구리에 피하 주사하였다. AdGP70 및 PepGP70의 백신 조성물은 실시예 1에 따라 제조하였으며, 제형화 된 백신은 50ul의 주사가능한 용액으로 제조하였다. 조성물은 AdGP70의 투여량 또는 PepGP70의 투여량을 투여받는 개별 동물에 대해 프라임 투여량과 부스트 투여량의 투여 사이에 14 일 동안 프라임/부스트 스케줄에 따라 피하 투여하였다.
그룹 1은 1 일 및 14 일째에 50μl의 PepGP70 (50μg/펩티드)을 피하 투여받고 MDSC 억제제를 매일 복강 내 투여받는다. 그룹 2는 1 일 및 14 일째에 50μl의 AdGP70 (2x109 ifu)을 피하 투여받는다. 그룹 3은 MDSC 억제제를 매일 복강 내 투여받는다. 그룹 4는 치료를 받지 않는다.
SEQUENCE LISTING <110> Altimmune inc. Georges, Bertrand Roberts, Scot <120> T-CELL INDUCING VACCINE COMPOSITION COMBINATIONS AND USES THEREOF <130> IPF08-9.PCT <150> 62/652,478 <151> 2018-04-04 <150> 62/652,484 <151> 2018-04-04 <160> 77 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 677 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 1 Met Asp Thr Arg Arg Pro Arg Gln Gly Ser Asp His Thr Pro Asp Lys 1 5 10 15 Thr Ile Met Glu Ser Thr Thr Leu Ser Lys Pro Phe Lys Asn Gln Val 20 25 30 Asn Pro Trp Gly Pro Leu Ile Val Leu Leu Ile Leu Gly Gly Val Asn 35 40 45 Pro Val Ala Leu Gly Asn Ser Pro His Gln Val Phe Asn Leu Ser Trp 50 55 60 Glu Val Thr Asn Gly Asp Arg Glu Thr Val Trp Ala Ile Thr Gly Asn 65 70 75 80 His Pro Leu Trp Thr Trp Trp Pro Asp Leu Thr Pro Asp Leu Cys Met 85 90 95 Leu Ala Leu His Gly Pro Phe Ser Pro Pro Pro Gly Pro Pro Cys Cys 100 105 110 Ser Gly Ser Ser Asp Ser Thr Pro Gly Cys Ser Arg Asp Cys Glu Glu 115 120 125 Pro Leu Thr Ser Tyr Thr Pro Arg Cys Asn Thr Ala Trp Asn Arg Leu 130 135 140 Lys Leu Ser Lys Val Thr His Ala His Asn Glu Gly Phe Tyr Val Cys 145 150 155 160 Pro Gly Pro His Arg Pro Arg Trp Ala Arg Ser Cys Gly Gly Pro Glu 165 170 175 Ser Phe Tyr Cys Ala Ser Trp Gly Cys Glu Thr Thr Gly Arg Ala Ser 180 185 190 Trp Lys Pro Ser Ser Ser Trp Asp Tyr Ile Thr Val Ser Asn Asn Leu 195 200 205 Thr Ser Asp Gln Ala Thr Pro Val Cys Lys Gly Asn Glu Trp Cys Asn 210 215 220 Ser Leu Thr Ile Arg Phe Thr Ser Phe Gly Lys Gln Ala Thr Ser Trp 225 230 235 240 Val Thr Gly His Trp Trp Gly Leu Arg Leu Tyr Val Ser Gly His Asp 245 250 255 Pro Gly Leu Ile Phe Gly Ile Arg Leu Lys Ile Thr Asp Ser Gly Pro 260 265 270 Arg Val Pro Ile Gly Pro Asn Pro Val Leu Ser Asp Arg Arg Pro Pro 275 280 285 Ser Arg Pro Arg Pro Thr Arg Ser Pro Pro Pro Ser Asn Ser Thr Pro 290 295 300 Thr Glu Thr Pro Leu Thr Leu Pro Glu Pro Pro Pro Ala Gly Val Glu 305 310 315 320 Asn Arg Leu Leu Asn Leu Val Lys Gly Ala Tyr Gln Ala Leu Asn Leu 325 330 335 Thr Ser Pro Asp Lys Thr Gln Glu Cys Trp Leu Cys Leu Val Ser Gly 340 345 350 Pro Pro Tyr Tyr Glu Gly Val Ala Val Leu Gly Thr Tyr Ser Asn His 355 360 365 Thr Ser Ala Pro Ala Asn Cys Ser Val Ala Ser Gln His Lys Leu Thr 370 375 380 Leu Ser Glu Val Thr Gly Gln Gly Leu Cys Ile Gly Ala Val Pro Lys 385 390 395 400 Thr His Gln Val Leu Cys Asn Thr Thr Gln Lys Thr Ser Asp Gly Ser 405 410 415 Tyr Tyr Leu Ala Ala Pro Thr Gly Thr Thr Trp Ala Cys Ser Thr Gly 420 425 430 Leu Thr Pro Cys Ile Ser Thr Thr Ile Leu Asp Leu Thr Thr Asp Tyr 435 440 445 Cys Val Leu Val Glu Leu Trp Pro Arg Val Thr Tyr His Ser Pro Ser 450 455 460 Tyr Val Tyr His Gln Phe Glu Arg Arg Ala Lys Tyr Lys Arg Glu Pro 465 470 475 480 Val Ser Leu Thr Leu Ala Leu Leu Leu Gly Gly Leu Thr Met Gly Gly 485 490 495 Ile Ala Ala Gly Val Gly Thr Gly Thr Thr Ala Leu Val Ala Thr Gln 500 505 510 Gln Phe Gln Gln Leu Gln Ala Ala Met His Asp Asp Leu Lys Glu Val 515 520 525 Glu Lys Ser Ile Thr Asn Leu Glu Lys Ser Leu Thr Ser Leu Ser Glu 530 535 540 Val Val Leu Gln Asn Arg Arg Gly Leu Asp Leu Leu Phe Leu Lys Glu 545 550 555 560 Gly Gly Leu Cys Ala Ala Leu Lys Glu Glu Cys Cys Phe Tyr Ala Asp 565 570 575 His Thr Gly Leu Val Arg Asp Ser Met Ala Lys Leu Arg Glu Arg Leu 580 585 590 Ser Gln Arg Gln Lys Leu Phe Glu Ser Gln Gln Gly Trp Phe Glu Gly 595 600 605 Leu Phe Asn Lys Ser Pro Trp Phe Thr Thr Leu Ile Ser Thr Ile Met 610 615 620 Gly Pro Leu Ile Ile Leu Leu Leu Ile Leu Leu Phe Gly Pro Cys Ile 625 630 635 640 Leu Asn Arg Leu Val Gln Phe Ile Lys Asp Arg Ile Ser Val Val Gln 645 650 655 Ala Leu Val Leu Thr Gln Gln Tyr His Gln Leu Lys Thr Ile Gly Asp 660 665 670 Cys Lys Ser Arg Glu 675 <210> 2 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 2 Val Asn Pro Trp Gly Pro Leu Ile Val Leu Leu Ile Leu Gly Gly 1 5 10 15 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia vius GP70 <400> 3 Asn Pro Trp Gly Pro Leu Ile Val Leu 1 5 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 4 Pro Trp Gly Pro Leu Ile Val Leu Leu Ile Leu Gly Gly Val Asn 1 5 10 15 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 5 Gly Pro Leu Ile Val Leu Leu Ile Leu 1 5 <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 6 Gly Pro Leu Ile Val Leu Leu Ile Leu Gly Gly Val Asn Pro Val 1 5 10 15 <210> 7 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 7 Leu Gly Gly Val Asn Pro Val Ala Leu Gly Asn Ser Pro His Gln 1 5 10 15 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 8 Asn Ser Pro His Gln Val Phe Asn Leu 1 5 <210> 9 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 9 Asn Leu Ser Trp Glu Val Thr Asn Gly Asp Arg Glu Thr Val Trp 1 5 10 15 <210> 10 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 10 Asn Gly Asp Arg Glu Thr Val Trp Ala Ile Thr Gly Asn His Pro 1 5 10 15 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 11 Thr Pro Asp Leu Cys Met Leu Ala Leu 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 12 Ser Tyr Trp Gly Leu Glu Tyr Arg Ala 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 13 Ser Tyr Thr Pro Arg Cys Asn Thr Ala 1 5 <210> 14 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 14 Arg Cys Asn Thr Ala Trp Asn Arg Leu Lys Leu Ser Lys Val Thr 1 5 10 15 <210> 15 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 15 Asn Thr Ala Trp Asn Arg Leu Lys Leu Ser Lys Val Thr His Ala 1 5 10 15 <210> 16 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 16 Trp Asn Arg Leu Lys Leu Ser Lys Val Thr His Ala His Asn Glu 1 5 10 15 <210> 17 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 17 Asn Glu Gly Phe Tyr Val Cys Pro Gly Pro His Arg Pro Arg Trp 1 5 10 15 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 18 Arg Ser Cys Gly Gly Pro Glu Ser Phe 1 5 <210> 19 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 19 Cys Glu Thr Thr Gly Arg Ala Ser Trp Lys Pro Ser Ser Ser Trp 1 5 10 15 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 20 Lys Pro Ser Ser Ser Trp Asp Tyr Ile 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 21 Asp Tyr Ile Thr Val Ser Asn Asn Leu 1 5 <210> 22 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 22 Ile Thr Val Ser Asn Asn Leu Thr Ser Asp Gln Ala Thr Pro Val 1 5 10 15 <210> 23 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP <400> 23 Thr Gly His Trp Trp Gly Leu Arg Leu Tyr Val Ser Gly His Asp 1 5 10 15 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 24 Leu Tyr Val Ser Gly His Asp Pro Gly 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 25 Val Pro Ile Gly Pro Asn Pro Val Leu 1 5 <210> 26 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 26 Asn Pro Val Leu Ser Asp Arg Arg Pro Pro Ser Arg Pro Arg Pro 1 5 10 15 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 27 Asn Ser Thr Pro Thr Glu Thr Pro Leu 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 28 Thr Pro Thr Glu Thr Pro Leu Thr Leu 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 29 Pro Pro Ala Gly Val Glu Asn Arg Leu 1 5 <210> 30 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 30 Lys Thr Gln Glu Cys Trp Leu Cys Leu Val Ser Gly Pro Pro Tyr 1 5 10 15 <210> 31 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 31 Pro Pro Tyr Tyr Glu Gly Val Ala Val Leu Gly Thr Tyr Ser Asn 1 5 10 15 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 32 Pro Tyr Tyr Glu Gly Val Ala Val Leu 1 5 <210> 33 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 33 Tyr Ser Asn His Thr Ser Ala Pro Ala Asn Cys Ser Val Ala Ser 1 5 10 15 <210> 34 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 34 Asn His Thr Ser Ala Pro Ala Asn Cys Ser Val Ala Ser Gln His 1 5 10 15 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 35 Cys Ser Val Ala Ser Gln His Lys Leu 1 5 <210> 36 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 36 Val Ala Ser Gln His Lys Leu Thr Leu Ser Glu Val Thr Gly Gln 1 5 10 15 <210> 37 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 37 Ser Asp Gly Ser Tyr Tyr Leu Ala Ala Pro Thr Gly Thr Thr Trp 1 5 10 15 <210> 38 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 38 Trp Ala Cys Ser Thr Gly Leu Thr Pro Cys Ile Ser Thr Thr Ile 1 5 10 15 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 39 Thr Pro Cys Ile Ser Thr Thr Ile Leu 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 40 Ser Pro Ser Tyr Val Tyr His Gln Phe 1 5 <210> 41 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 41 Ser Pro Ser Tyr Val Tyr His Gln Phe Glu Arg Arg Ala Lys Tyr 1 5 10 15 <210> 42 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 42 Tyr His Gln Phe Glu Arg Arg Ala Lys Tyr Lys Arg Glu Pro Val 1 5 10 15 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 43 Lys Tyr Lys Arg Glu Pro Val Ser Leu 1 5 <210> 44 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 44 Lys Tyr Lys Arg Glu Pro Val Ser Leu Thr Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 45 Glu Pro Val Ser Leu Thr Leu Ala Leu 1 5 <210> 46 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 46 Glu Pro Val Ser Leu Thr Leu Ala Leu Leu Leu Gly Gly Leu Thr 1 5 10 15 <210> 47 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 47 Pro Val Ser Leu Thr Leu Ala Leu Leu Leu Gly Gly Leu Thr Met 1 5 10 15 <210> 48 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 48 Val Ser Leu Thr Leu Ala Leu Leu Leu Gly Gly Leu Thr Met Gly 1 5 10 15 <210> 49 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 49 Gly Leu Thr Met Gly Gly Ile Ala Ala Gly Val Gly Thr Gly Thr 1 5 10 15 <210> 50 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 50 Gly Thr Gly Thr Thr Ala Leu Val Ala Thr Gln Gln Phe Gln Gln 1 5 10 15 <210> 51 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 51 Thr Asn Leu Glu Lys Ser Leu Thr Ser 1 5 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 52 Arg Arg Gly Leu Asp Leu Leu Phe Leu Lys Glu Gly Gly Leu Cys 1 5 10 15 <210> 53 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 53 Leu Lys Glu Glu Cys Cys Leu Tyr Ala Asp His Thr Gly Leu Val 1 5 10 15 <210> 54 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 54 Cys Cys Leu Tyr Ala Asp His Thr Gly Leu Val Arg Asp Ser Met 1 5 10 15 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 55 Leu Tyr Ala Asp His Thr Gly Leu Val 1 5 <210> 56 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 56 Ala Asp His Thr Gly Leu Val Arg Asp Ser Met Ala Lys Leu Arg 1 5 10 15 <210> 57 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 57 Arg Asp Ser Met Ala Lys Leu Arg Glu Arg Leu Ser Gln Arg Gln 1 5 10 15 <210> 58 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 58 Met Ala Lys Leu Arg Glu Arg Leu Ser Gln Arg Gln Lys Leu Phe 1 5 10 15 <210> 59 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 59 Glu Arg Leu Ser Gln Arg Gln Lys Leu Phe Glu Ser Gln Gln Gly 1 5 10 15 <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 60 Trp Phe Thr Thr Leu Ile Ser Thr Ile 1 5 <210> 61 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 61 Met Gly Pro Leu Ile Ile Leu Leu Leu Ile Leu Leu Phe Gly Pro 1 5 10 15 <210> 62 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 62 Pro Leu Ile Ile Leu Leu Leu Ile Leu Leu Phe Gly Pro Cys Ile 1 5 10 15 <210> 63 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 63 Ile Leu Leu Phe Gly Pro Cys Ile Leu Asn Arg Leu Val Gln Phe 1 5 10 15 <210> 64 <211> 14 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 64 Leu Val Gln Phe Ile Lys Asp Arg Ile Ser Val Val Gln Ala 1 5 10 <210> 65 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 65 Gln Phe Ile Lys Asp Arg Ile Ser Val Val Gln Ala Leu Val Leu 1 5 10 15 <210> 66 <211> 15 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 66 Lys Asp Arg Ile Ser Val Val Gln Ala Leu Val Leu Thr Gln Gln 1 5 10 15 <210> 67 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 67 Ile Ser Val Val Gln Ala Leu Val Leu 1 5 <210> 68 <211> 27 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 68 Ser Tyr Thr Pro Arg Cys Asn Thr Ala Trp Asn Arg Leu Lys Leu Ser 1 5 10 15 Lys Val Thr His Ala His Asn Glu Lys Phe Ala 20 25 <210> 69 <211> 37 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 69 Phe Ala Lys Glu Thr Thr Gly Arg Ala Ser Trp Lys Pro Ser Ser Ser 1 5 10 15 Trp Asp Tyr Ile Thr Val Ser Asn Asn Leu Thr Ser Asp Gln Ala Thr 20 25 30 Pro Val Lys Lys Lys 35 <210> 70 <211> 40 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 70 Ser Pro Ser Tyr Val Tyr His Gln Phe Glu Arg Arg Ala Lys Tyr Lys 1 5 10 15 Arg Glu Pro Val Ser Leu Thr Leu Ala Leu Leu Leu Gly Gly Leu Thr 20 25 30 Met Gly Lys Lys Lys Lys Phe Ala 35 40 <210> 71 <211> 29 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 71 Ser Pro Ser Tyr Val Tyr His Gln Phe Lys Lys Lys Leu Val Gln Phe 1 5 10 15 Ile Lys Asp Arg Ile Ser Val Val Gln Ala Lys Phe Ala 20 25 <210> 72 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 72 Ser Pro Ser Tyr Val Tyr His Gln Phe 1 5 <210> 73 <211> 9 <212> PRT <213> murine leukemia virus GP70 <400> 73 Ser Pro Ser Tyr Val Tyr His Gln Phe 1 5 <210> 74 <211> 9 <212> PRT <213> artificial peptide <220> <223> peptide <400> 74 Arg Pro Gln Ala Ser Gly Val Tyr Met 1 5 <210> 75 <211> 30 <212> PRT <213> chicken ovalbumin <400> 75 Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly 1 5 10 15 Arg Glu Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr 20 25 30 <210> 76 <211> 17 <212> PRT <213> chicken ovalbumin <400> 76 Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly 1 5 10 15 Arg <210> 77 <211> 8 <212> PRT <213> chicken ovalbumin <400> 77 Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu 1 5

Claims (72)

  1. 다음으로부터 선택된 2 내지 3개의 조성물을 포함하는 백신 조합물로서:
    a) 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물;
    b) 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는, 제2 조성물; 및
    c) 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물,
    상기 제1 조성물 및 제2 조성물이 선택될 때, 제1 또는 제2 조성물 중 하나는 프라임 조성물 또는 부스트 조성물인, 백신 조합물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항-면역억제제가 PD1, PDL1, PDL2, CD28, CD80, CD86, CTLA4, B7RP1, ICOS, B7RPI, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, KIR, TCR, LAG3, CD 137, CD137L, OX40, OX40L, CD27, CD70, CD40, CD40L, TIM3, GAL1, GAL3, GAL9, ADORA, CD276, VTCN1, IDO1, KIR3DL1, HAVCR2, VISTA, CD244, ADAM17, COX2, PGE-2, iNOS2, PDE5, c-kit, ARG1, PI3K, CSF-1R, 카스파제-8, CCL2, RON, ROS, 또는 S100A8/A9을 표적으로 하는, 백신 조합물.
  3. 제2항에 있어서, 항-면역억제제가 PD1 또는 PDL1을 표적으로 하는, 백신 조합물.
  4. 제2항에 있어서, 항-면역억제제가 항-PD1 또는 항-PDL1 항체인, 백신 조합물.
  5. 제1항에 있어서, 면역활성제가 톨-유사 수용체 (TLR) 3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, NOD1, NOD2, STING, cGAS, IFR3, IL-2 수용체, IL12 수용체 또는 IFN- 알파 수용체를 표적으로 하는, 백신 조합물.
  6. 제1항에 있어서, 비-복제 바이러스 벡터가 아데노바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 홍역 바이러스(measles virus) 벡터, 폭스바이러스 벡터 또는 수포성구내염 바이러스 벡터인, 백신 조합물.
  7. 제6항에 있어서, 비-복제 바이러스 벡터가 E1 및 E3이 결실된 아데노바이러스 벡터인, 백신 조합물.
  8. 제1항에 있어서, 제1, 제2 또는 제3 조성물이 비경구, 경구, 안구, 직장, 비강, 경피, 국소 또는 질 투여용으로 제형화된, 백신 조합물.
  9. 제1항에 있어서, 항원 또는 면역원이 병원체로부터 유래된, 백신 조합물.
  10. 제 9항에 있어서, 병원체가 바이러스, 진균, 기생충 또는 박테리아인, 백신 조합물.
  11. 제10항에 있어서, 바이러스가 EBV, HPV, HTLV-1, MCPvV, KSHV, HERV, HCV 또는 HBV인, 백신 조합물.
  12. 제1항에 있어서, 항원 또는 면역원이 암 항원인, 백신 조합물.
  13. 제1항에 있어서, 제1 조성물이 프라임 조성물이고 제2 조성물이 부스트 조성물인, 백신 조합물.
  14. 제1항에 있어서, 제2 조성물이 프라임 조성물이고 제1 조성물이 부스트 조성물인, 백신 조합물.
  15. 제1항에 있어서, 플루오로카본-연결된 펩티드의 플루오로카본 부분이 3 내지 30 개의 탄소 원자의 플루오로카본 사슬인, 백신 조합물.
  16. 제15항에 있어서, 플루오로카본 사슬의 하나 이상의 불소 모이어티가 염소, 브롬, 요오드, 수소 또는 메틸기로 치환된, 백신 조합물.
  17. 제1항에 있어서, 플루오로카본-연결된 펩티드의 구조식이 CmFn―CyHx-(Sp)-R 이고, 상기 식에서 m은 3 내지 30, n은 2m +1 이하, y는 0 내지 15, x는 2y 이하, (m + y)는 3 내지 30이고, Sp는 선택적 화학 스페이서 모이어티이고, R은 펩티드인, 백신 조합물.
  18. 제1항에 있어서, 플루오로카본 연결 펩티드가 하기 구조식에 따르는, 백신 조합물:
    Figure pct00003

    상기 식에서 Sp는 선택적 화학 스페이서 모이어티이고 R은 펩티드이다.
  19. 제1항에 있어서, 제2 조성물의 플루오로카본 연결된 펩티드가 하나 이상의 MHC 클래스 II 결합 에피토프 및 하나 이상의 MHC 클래스 I 결합 에피토프를 포함하는, 백신 조합물.
  20. 제1항에 있어서, 제1, 제2 또는 제3 조성물 각각이 독립적으로 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 면역보조제를 더욱 포함하는, 백신 조합물.
  21. 제20항에 있어서, 면역보조제가 TLR2, TLR3, TLR7, TLR8 또는 TLR9, STING, cGAS, IFR3, NOD1 또는 NOD2의 작용제인, 백신 조합물.
  22. 제1항에 있어서, 제1, 제2 또는 제3 조성물이 액체, 유제, 고체, 에어로졸, 미스트 또는 기체의 형태인, 백신 조합물.
  23. 제1항에 있어서, 제1 조성물 및 제2 조성물이 선택되는, 백신 조합물.
  24. 제1항에 있어서, 제1 조성물 또는 제2 조성물 중 하나가 선택되고, 제3 조성물이 선택되는, 백신 조합물.
  25. 다음을 포함하는, 필요한 개체에서 면역 반응을 유도하는 방법으로서:
    a) 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 항원 또는 면역원을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물을 투여하는 단계; 및
    b) 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물을 투여하는 단계로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는: i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고; ii) 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터 유래하고; iii) 상기 제1 조성물의 항원 또는 면역원으로부터의 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는 것인, 단계,
    제1 조성물 또는 제2 조성물 중 하나는 프라임 투여량으로 투여되고, 제1 조성물 또는 제2 조성물 중 하나는 부스트 투여량으로 투여되고, 단, 제1 및 제2 조성물이 모두 투여되며,
    이로써 항원 특이적 CD8+ T 세포 반응이 유도되는 것인, 방법.
  26. 제25항에 있어서, 프라임 투여량 및 부스트 투여량이 적어도 14일 간격으로 투여되는 방법.
  27. 제25항에 있어서, 제2 조성물이 프라임 투여량이고 제1 조성물이 부스트 투여량인, 방법.
  28. 제25항에 있어서, 제1 조성물이 프라임 투여량이고 제2 조성물이 부스트 투여량인, 방법.
  29. 제25항에 있어서, 개체가 포유동물, 새, 파충류, 양서류 또는 어류인, 방법.
  30. 제2항에 있어서, 개체가 인간, 소, 개, 고양이, 염소, 양, 돼지, 말, 칠면조, 오리 또는 닭인, 방법.
  31. 제25항에 있어서, 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물을 투여하는 단계를 더욱 포함하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 항-면역억제제가 PD1, PDL1, PDL2, CD28, CD80, CD86, CTLA4, B7RP1, ICOS, B7RPI, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, KIR, TCR, LAG3, CD 137, CD137L, OX40, OX40L, CD27, CD70, CD40, CD40L, TIM3, GAL1, GAL3, GAL9, ADORA, CD276, VTCN1, IDO1, KIR3DL1, HAVCR2, VISTA, CD244, ADAM17, COX2, PGE-2, iNOS2, PDE5, c-kit, ARG1, PI3K, CSF-1R, 카스파제-8, CCL2, RON, ROS 또는 S100A8/A9 을 표적으로 하는, 방법.
  33. 제31항에 있어서, 항-면역억제제가 PD1 또는 PDL1을 표적으로 하는, 방법.
  34. 제31항에 있어서, 항-면역억제제가 항-PD1 또는 항-PDL1 항체인, 방법.
  35. 제31항에 있어서, 면역활성제가 톨-유사 수용체 (TLR) 3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, NOD1, NOD2, STING, cGAS, IFR3, IL-2 수용체, IL12 수용체 또는 IFN- 알파 수용체를 표적으로 하는, 방법.
  36. 제31항에 있어서, 제3 조성물을 투여하는 단계가 제1 조성물의 투여 후에 수행되는 방법.
  37. 제25항에 있어서, 항원 또는 면역원이 병원체로부터 유래된 것인, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 병원체가 바이러스, 진균, 기생충 또는 박테리아인, 방법.
  39. 제38항에 있어서, 바이러스가 EBV, HPV, HTLV-1, MCPvV, KSHV, HERV, HCV 또는 HBV인, 방법.
  40. 제25항에 있어서, 항원 또는 면역원이 암 항원인, 방법.
  41. 제25항에 있어서, 유도된 면역 반응이 비-소세포성 폐암, 유방암, 간암, 뇌암, 위암, 췌장암, 신장암, 난소암, 골수종 암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 두경부암, 결장직장암, 신암, 식도암, 흑색종 피부암 및/또는 전립선암 환자에 대한 치료적 또는 예방적 처치인, 방법.
  42. 제25항에 있어서, 유도된 면역 반응이 만성 감염을 가진 개체 또는 만성 감염을 유발하는 병원체에 노출될 위험이 있는 개체에 대한 치료적 또는 예방적 처치이고, 상기 병원체가 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), B형 간염 바이러스, D형 간염 바이러스, 헤르페스바이러스, 엡스타인-바 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 인간 유두종 바이러스, 또는 인간 T-림프영양성 바이러스 III형 (T-lymphotropic virus type III)에서 선택되는 것인, 방법.
  43. 제26항에 있어서, 제1 및/또는 제2 조성물의 투여 경로가 비경구, 피하, 경구, 표피, 피내, 근육 내, 동맥 내, 복강 내, 정맥 내, 비강, 기관 내, 장내, 설하, 직장 또는 질에서 선택되는 것인, 방법.
  44. 제25항에 있어서, 비-복제 바이러스 벡터가 아데노바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 홍역 바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터 또는 수포성구내염 바이러스 벡터인, 방법.
  45. 제44항에 있어서, 비-복제 바이러스 벡터가 E1 및/또는 E3이 결실된 아데노바이러스 벡터인, 방법.
  46. 제25항에 있어서, 플루오로카본-연결된 펩티드의 플루오로카본 부분이 3 내지 30 개의 탄소 원자의 플루오로카본 사슬인, 방법.
  47. 제46항에 있어서, 플루오로카본 사슬의 하나 이상의 불소 모이어티가 염소, 브롬, 요오드, 수소 또는 메틸기로 치환된, 방법.
  48. 제25항에 있어서, 플루오로카본-연결된 펩티드의 구조식이 CmFn―CyHx-(Sp)-R 이고, 상기 식에서 m은 3 내지 30, n은 2m +1 이하, y는 0 내지 15, x는 2y 이하, (m + y)는 3 내지 30이고, Sp는 선택적 화학 스페이서 모이어티이며, R은 펩티드인, 방법.
  49. 제25항에 있어서, 플루오로카본 연결 펩티드가 하기 구조식에 따르는, 방법:
    Figure pct00004

    상기 식에서 Sp는 선택적 화학 스페이서 모이어티이고 R은 펩티드이다.
  50. 제25항에 있어서, 제2 조성물의 플루오로카본 연결된 펩티드가 하나 이상의 MHC 클래스 II 결합 에피토프 및 하나 이상의 MHC 클래스 I 결합 에피토프를 포함하는, 방법.
  51. 다음을 포함하는, 필요한 개체에서 면역 반응을 유도하는 방법으로서:
    a) 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 함유하는, 항원 또는 면역원, 또는 이의 단편을 코딩하는 비-복제 바이러스 벡터를 포함하는 제1 조성물을 투여하는 단계; 또는,
    b) 플루오로카본-연결된 펩티드를 함유하는 미셀을 포함하는 제2 조성물을 투여하는 단계로서, 플루오로카본에 연결된 각 펩티드는:
    i) 15 내지 75 개의 아미노산 잔기 길이이고;
    ii) 항원 또는 면역원에서 유래하고; 및,
    iii) 하나 이상의 CD8+ T 세포 에피토프를 포함하고; 및
    c) 항-면역억제제 또는 면역활성제로부터 선택된 면역조절제를 포함하는 제3 조성물을 별도로 투여하는 단계,
    이로써 항원특이적 CD8+ T 세포 반응이 유도되는 것인, 방법.
  52. 제51항에 있어서, 개체가 포유동물, 새, 파충류, 양서류 또는 어류인, 방법.
  53. 제51항에 있어서, 개체가 인간, 소, 개, 고양이, 염소, 양, 돼지, 말, 칠면조, 오리 또는 닭인, 방법.
  54. 제51항에 있어서, 상기 항-면역억제제가 PD1, PDL1, PDL2, CD28, CD80, CD86, CTLA4, B7RP1, ICOS, B7RPI, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, KIR, TCR, LAG3, CD 137, CD137L, OX40, OX40L, CD27, CD70, CD40, CD40L, TIM3, GAL1, GAL3, GAL9, ADORA, CD276, VTCN1, IDO1, KIR3DL1, HAVCR2, VISTA, CD244, ADAM17, COX2, PGE-2, iNOS2, PDE5, c-kit, ARG1, PI3K, CSF-1R, 카스파제-8, CCL2, RON, ROS 또는 S100A8/A9 을 표적으로 하는, 방법.
  55. 제51항에 있어서, 항-면역억제제가 PD1 또는 PDL1을 표적으로 하는, 방법.
  56. 제51항에 있어서, 항-면역억제제가 항-PD1 또는 항-PDL1 항체인, 방법.
  57. 제51항에 있어서, 면역활성제가 톨-유사 수용체 (TLR) 3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, TLR9, NOD1, NOD2, STING, cGAS, IFR3, IL-2 수용체, IL12 수용체 또는 IFN- 알파 수용체를 표적으로 하는, 방법.
  58. 제51항에 있어서, 제3 조성물을 투여하는 단계가 제1 또는 제2 조성물의 투여 후에 수행되는 방법.
  59. 제51항에 있어서, 항원 또는 면역원이 병원체로부터 유래된 것인, 방법.
  60. 제59항에 있어서, 병원체가 바이러스, 진균, 기생충 또는 박테리아인, 방법.
  61. 제60항에 있어서, 바이러스가 EBV, HPV, HTLV-1, MCPvV, KSHV, HERV, HCV 또는 HBV인, 방법.
  62. 제51항에 있어서, 항원 또는 면역원이 암 항원인, 방법.
  63. 제51항에 있어서, 유도된 면역 반응이 비-소세포성 폐암, 유방암, 간암, 뇌암, 위암, 췌장암, 신장암, 난소암, 골수종 암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 두경부암, 결장직장암, 신암, 식도암, 흑색종 피부암 및/또는 전립선암 환자에 대한 치료적 또는 예방적 처치인, 방법.
  64. 제51항에 있어서, 유도된 면역 반응이 만성 감염을 가진 개체 또는 만성 감염을 유발하는 병원체에 노출될 위험이 있는 개체에 대한 치료적 또는 예방적 처치이고, 상기 병원체가 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), B형 간염 바이러스, D형 간염 바이러스, 헤르페스바이러스, 엡스타인-바 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 인간 유두종 바이러스, 또는 인간 T-림프영양성 바이러스 III형 (T-lymphotropic virus type III)에서 선택되는 것인, 방법.
  65. 제51항에 있어서, 제1 또는 제2 조성물 및 제3 조성물의 투여 경로가 독립적으로 비경구, 피하, 경구, 표피, 피내, 근육 내, 동맥 내, 복강 내, 정맥 내, 비강, 기관 내, 장내, 설하, 직장 또는 질에서 선택되는 것인, 방법.
  66. 제51항에 있어서, 비-복제 바이러스 벡터가 아데노바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 헤르페스바이러스 벡터, 홍역 바이러스 벡터, 폭스바이러스 벡터 또는 수포성구내염 바이러스 벡터인, 방법.
  67. 제66항에 있어서, 비-복제 바이러스 벡터가 E1 및/또는 E3이 결실된 아데노바이러스 벡터인, 방법.
  68. 제51항에 있어서, 플루오로카본-연결된 펩티드의 플루오로카본 부분이 3 내지 30 개의 탄소 원자의 플루오로카본 사슬인, 방법.
  69. 제68항에 있어서, 플루오로카본 사슬의 하나 이상의 불소 모이어티가 염소, 브롬, 요오드, 수소 또는 메틸기로 치환된, 방법.
  70. 제51항에 있어서, 플루오로카본-연결된 펩티드의 구조식이 CmFn―CyHx-(Sp)-R 이고, 상기 식에서 m은 3 내지 30, n은 2m +1 이하, y는 0 내지 15, x는 2y 이하, (m + y)는 3 내지 30이고, Sp는 선택적 화학 스페이서 모이어티이며, R은 펩티드인, 방법.
  71. 제51항에 있어서, 플루오로카본 연결 펩티드가 하기 구조식에 따르는, 방법:
    Figure pct00005

    상기 식에서 Sp는 선택적 화학 스페이서 모이어티이고 R은 펩티드이다.
  72. 제51항에 있어서, 제2 조성물의 플루오로카본 연결된 펩티드가 하나 이상의 MHC 클래스 II 결합 에피토프 및 하나 이상의 MHC 클래스 I 결합 에피토프를 포함하는, 방법.
KR1020207031886A 2018-04-04 2019-04-04 T-세포 유도 백신 조성물의 조합물 및 이의 용도 KR20210005046A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862652484P 2018-04-04 2018-04-04
US201862652478P 2018-04-04 2018-04-04
US62/652,484 2018-04-04
US62/652,478 2018-04-04
PCT/US2019/025902 WO2019195626A1 (en) 2018-04-04 2019-04-04 T-cell inducing vaccine composition combinations and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210005046A true KR20210005046A (ko) 2021-01-13

Family

ID=68101347

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207031886A KR20210005046A (ko) 2018-04-04 2019-04-04 T-세포 유도 백신 조성물의 조합물 및 이의 용도

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20210236623A1 (ko)
EP (1) EP3773710A4 (ko)
JP (1) JP2021520414A (ko)
KR (1) KR20210005046A (ko)
CN (1) CN112638410A (ko)
AU (1) AU2019249232A1 (ko)
BR (1) BR112020020323A2 (ko)
CA (1) CA3096056A1 (ko)
IL (1) IL277719A (ko)
MX (1) MX2020010421A (ko)
WO (1) WO2019195626A1 (ko)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0408164D0 (en) * 2004-04-13 2004-05-19 Immune Targeting Systems Ltd Antigen delivery vectors and constructs
US10183069B2 (en) 2011-03-21 2019-01-22 Altimmune Inc. Rapid and prolonged immunologic-therapeutic
CN107106280A (zh) 2014-12-23 2017-08-29 奥特梅德私人有限公司 输送设备、系统及相关联的方法
EP3953457A4 (en) * 2019-04-06 2023-01-11 Altimmune Inc BROAD AND LONG-TERM FLU VACCINE
CN111041003A (zh) * 2019-12-20 2020-04-21 畜科生物工程有限公司 一种重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用
US11957542B2 (en) * 2020-04-30 2024-04-16 Automed Patent Holdco, Llc Sensing complete injection for animal injection device
WO2022015662A1 (en) * 2020-07-12 2022-01-20 Altimmune, Inc Coronavirus immunogenic t cell epitope compositions and uses thereof
CN111979211B (zh) * 2020-07-29 2021-11-30 扬州大学 一种能诱导抗鸡cGAS蛋白抗体的多肽及其应用
JP2024517181A (ja) 2021-04-28 2024-04-19 ウエヌイグレックオ・ファーマ 組合せ治療としてｆｘｒアゴニストを使用するｔｌｒ３アゴニストの効果の強い増強
CN114028552A (zh) * 2021-10-27 2022-02-11 保定诺未科技有限公司 一种单核细胞负载lmp1蛋白的疫苗组合物及其制备方法与应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL354286A1 (en) * 1999-08-23 2003-12-29 Dana-Farber Cancer Institutedana-Farber Cancer Institute Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
GB0408164D0 (en) * 2004-04-13 2004-05-19 Immune Targeting Systems Ltd Antigen delivery vectors and constructs
GB0716992D0 (en) * 2007-08-31 2007-10-10 Immune Targeting Systems Its L Influenza antigen delivery vectors and constructs
CA2675257A1 (en) * 2007-01-12 2008-08-21 The University Of Western Ontario Hiv combination vaccine and prime boost method
EP2318002A4 (en) * 2008-08-05 2012-11-28 Univ Emory USE OF MTOR-INHIBITORS FOR GAINING T-CELL IMMUNE REACTIONS
US8613936B2 (en) * 2009-03-13 2013-12-24 Bavarian Nordic A/S Replication deficient recombinant viruses expressing antigens regulated by transcriptional control elements comprising multiple elements
WO2012083297A2 (en) * 2010-12-17 2012-06-21 Genvec, Inc. Adenoviral vectors with modified hexon regions
GB201223386D0 (en) * 2012-12-24 2013-02-06 Immune Targeting Systems Its Ltd Vaccine
GB201315946D0 (en) * 2013-09-06 2013-10-23 Immune Targeting Systems Its Ltd Oncology vaccine
CN113456812A (zh) * 2015-01-09 2021-10-01 埃图比克斯公司 用于联合免疫治疗的方法和组合物

Also Published As

Publication number Publication date
BR112020020323A2 (pt) 2021-01-05
US20210236623A1 (en) 2021-08-05
AU2019249232A1 (en) 2020-10-22
EP3773710A4 (en) 2022-03-16
CA3096056A1 (en) 2019-10-10
IL277719A (en) 2020-11-30
EP3773710A1 (en) 2021-02-17
JP2021520414A (ja) 2021-08-19
CN112638410A (zh) 2021-04-09
WO2019195626A1 (en) 2019-10-10
MX2020010421A (es) 2021-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20210005046A (ko) T-세포 유도 백신 조성물의 조합물 및 이의 용도
EP2019857B1 (en) Cd40 agonist antibody/type1 interferon synergistic adjuvant combination, conjugates containing and use thereof as a therapeutic to enhance cellular immunity
KR20220154121A (ko) 코로나바이러스 면역원성 조성물 및 이의 용도
ES2638577T3 (es) Vectores adenovirales que codifican un patógeno o antígeno tumoral
US20220111030A1 (en) Antigen specific multi epitope-based anti-infective vaccines
CA2293805C (en) Use of mhc class ii ligands as adjuvant for vaccination and of lag-3 in cancer treatment
US20210283242A1 (en) Immune-mediated coronavirus treatments
Wells et al. Combined triggering of dendritic cell receptors results in synergistic activation and potent cytotoxic immunity
CN111094553A (zh) 用于癌症治疗的改良同种异体树突状细胞
US20040223977A1 (en) Fusion peptide HIV vaccines
US7976850B2 (en) Pox viridae treatment
EP2563387B1 (en) Medical use of adenovirus vaccine vectors
EP1613731A2 (en) Modified adenoviral e1a constructs and methods of use thereof
CA2682774C (en) Ig-pconsensus gene vaccination protects from antibody-dependent immune pathology in autoimmune disease
US11857620B2 (en) Method of inducing immunity against SARS-CoV-2 using spike (s) and nucleocapsid (N)-ETSD immunogens delivered by a replication-defective adenovirus
US20160361410A1 (en) MHC Class I Associated Peptides for Prevention and Treatment of Hepatitis B Virus Infection