KR20210000246A - 줄기세포 생착 증진용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 줄기세포 생착 증진용 조성물에 관한 것으로 줄기세포의 생체 내 이식 시 혈관 신생 및 확장에 효과적이며, 우수한 효율로 생착이 이루어지도록 할 수 있다.

Description

줄기세포 생착 증진용 조성물{Composition for improving of engraftment of stem cell}
본 발명은 줄기세포 생착 증진용 조성물에 관한 것이다.
일반적으로 화학이나 단백질 의약품의 역할은 발병의 결과인 증상을 완화시키는데 초점이 맞추어져 있으나 줄기세포를 중심으로 하는 세포치료제의 원리는 질환의 근본적인 원인을 치료하는데 있다. 줄기세포는 자기복제능력 (Self-renewal) 과 분화능력(Cell differentiation)의 두 가지 특징을 지니고 있으며 혈액, 신경, 지방, 골, 근육 세포 등 다양한 세포로 분화가 가능하여 다양한 임상실험을 통해 세포치료제로서의 가능성이 연구되고 있다. 대사성 질환, 퇴행성 질환 및 염증성 질환 손상된 조직의 복구 등 광범위한 분야들에 걸쳐 질병 치료 목적으로 이용될 수 있는 잠재력을 가지고 있으며 특히 성체줄기세포(Adult stem cells)가 줄기세포 치료제의 개발 목적을 위해 활발하게 연구되고 있다. 그러나 줄기세포의 생체투여 후의 세포 생착율은 10 % 미만인 것으로 보고되고 있으며 유효 용량의 줄기세포를 생체 내 적용하기 위해서는 다량의 세포를 반복투여 하여야 하는 단점이 있다. 그렇기 때문에 보조제를 사용하여 줄기세포 이식율을 증가시킬 수 있다면 생체 내로 투여할 줄기세포의 배양 시간 및 고가의 재료비를 절감할 수 있다.
이에, 줄기세포 이식술에 임상적으로 적용되어 이식된 줄기세포의 생존률을 높임으로써 생착률을 증진시킬 수 있는 새로운 조성물의 개발이 지속적으로 요구된다.
한국등록특허 제1534276호
본 발명은 미녹시딜, 나토키나아제 및 항산화제를 포함하는 줄기세포 생착 증진용 약학 조성물을 제공한다.
1. 미녹시딜(Minoxidil), 나토키나아제(Nattokinase) 및 항산화제를 포함하는 줄기세포 생착 증진용 약학 조성물.
2. 위 1에 있어서, 상기 항산화제는 글루타치온(Glutathione), 셀레늄(selenium), 카테킨(catechin) 및 아연으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인, 줄기세포 생착 증진용 약학 조성물.
3. 위 1에 있어서, 미녹시딜 2~5 중량%, 나토키나아제 15~30 중량% 및 항산화제 6~10 중량%를 포함하는, 조성물.
4. 위 3에 있어서, 상기 미녹시딜과 나토키나아제는 1:5 내지 1:10 의 중량비로 포함되는, 조성물.
5. 위 1에 있어서, 스트렙토키나아제(streptokinase) 또는 우로키나아제(Urokinse)를 더 포함하는, 조성물.
6. 위 5에 있어서, 미녹시딜 0.5~5 중량%, 나토키나아제 10~15 중량%, 스트렙토키나아제 2~5 중량%, 우로키나아제 2~5 중량% 및 항산화제 5~10 중량%를 포함하는, 조성물.
7. 위 1에 있어서, 상기 줄기세포는 지방 유래 중간엽 줄기세포인, 조성물.
8. 위 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 줄기세포의 지방 조직으로의 생착 증진용인, 조성물.
본 발명은 줄기세포 생착 증진용 조성물에 관한 것으로 줄기세포의 생체 내 이식 시 혈관 신생 및 확장에 효과적이며, 우수한 효율로 생착이 이루어지도록 할 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 조성물의 처리에 따른 지방 유래 줄기세포의 세포독성 실험 결과이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 미녹시딜(Minoxidil), 나토키나아제(Nattokinase) 및 항산화제를 포함하는 줄기세포 생착 증진용 약학 조성물을 제공한다.
용어 '생착'은 이식된 세포나 조직이 생존하여 이식된 부위에 정착하여 이식된 장기, 조직, 세포가 목표 부위에서 그 기능이 정상적으로 발휘하는 상태를 의미한다.
상기 줄기세포는 이식의 대상이 될 수 있는 당업계에 주지된 줄기세포라면 제한되지 않으며, 배아 줄기세포, 성체 줄기세포, 만능유도줄기세포, 직접교차분화줄기세포 또는 중간엽 줄기세포일 수 있으나, 바람직하게는 지방 유래 중간엽 줄기세포일 수 있다.
본 발명에서 지방 유래 중간엽 줄기세포는 이에 한정되지는 않으나, 주로 인간의 피하지방조직에서부터 지방흡입(liposuction) 방법으로 수득할 수 있으며, 바람직하게는 자신의 피하지방 조직에서 수득한 자가 지방 유래 중간엽 줄기세포일 수 있다.
미녹시딜은 일차적으로 경구형 혈관 확장약으로 말초동맥의 평활근을 직접 이완시킴으로써 혈압을 강하시키는 항고혈압제로 개발되었다. 그러나 본 발명에서는 미녹시딜을 포함하는 상기 조성물을 줄기세포 이식 시 처리하는 경우 줄기세포의 증식 및 혈관 신생 등을 향상시켜 줄기세포 생착이 증진됨을 확인하였다.
나토키나아제는 콩을 발효시킬 때 낫토균(Bacillus natto)이 콩의 영양성분을 섭취 및 생육하면서 생성하는 혈전용해효소로서, 심혈관계 질환 치료제로 알려져 있다. 상기 조성물이 미녹시딜과 나토키나아제를 함께 포함하는 경우, 줄기세포의 생착을 효과적으로 증진시킬 수 있다.
상기 항산화제는 글루타치온(Glutathione), 셀레늄(selenium), 카테킨(catechin) 및 아연으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
글루타치온은 생체 내에 존재하는 항산화제로 아스코르빈산(비타민 C), 토코페롤(비타민 E)등과 같은 생체 내 다른 항산화제와 가역적으로 반응하면서 생체 내에 존재하는 활성산소를 효과적으로 제거할 수 있다.
셀레늄은 항산화효소(glutathione peroxidase)의 구성 성분으로 산화적 손상을 방지하여 지방의 과산화로 생긴 자유기(free radical)로부터 세포와 세포막을 보호하고, 대부분의 세포가 이 효소를 포함하고 있어 세포 내 항산화에 매우 중요한 요소이다.
카테킨은 폴리페놀의 일종으로 녹차, 칡 등에 많이 함유된 것으로 혈관 기능 개선 및 심장질환에 효과적인 성분이다.
아연은 인체의 대사과정에 연관되는 20종 이상의 효소의 필수 성분이며, 항산화 효소인 SOD(superoxide dismutase)의 성분이다.
본 발명의 일 실시예에서 상기 항산화제는 글루타치온, 셀레늄, 카테킨 및 아연을 포함할 수 있고, 조성비는 특별히 제한되지 않고 다양한 비율로 배합될 수 있다.
또한, 상기 조성물은 상기 외에도 과산화 억제효소(SOD), 퍼옥시다아제(peroxidase), 카탈라아제(catalase), 캠프페롤(kaempferal), 제니스테인(genistein), 비타민 E, 비타민 C 및 베타카로틴 등의 공지된 항산화제를 더 포함할 수 있다.
상기 조성물은 총 중량 중 미녹시딜을 2~5 중량%, 바람직하게는 3~4 중량%로 포함하고, 나토키나아제는 15~30%, 바람직하게는 20~25중량% 포함하며, 항산화제는 6~10 중량%, 바람직하게는 7~9중량% 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물이 각 성분을 상기 범위 내의 함량으로 포함하는 경우, 줄기세포 생착능을 극대화할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 미녹시딜과 나토키나아제는 1:5 내지 1:10의 중량비로 포함될 수 있고, 바람직하게는 1:6 내지 1:9, 더욱 바람직하게는 1:7 내지 1:8의 중량비로 포함될 수 있다.
상기 조성물은 스트렙토키나아제 또는 우로키나아제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분을 더 포함하는 경우, 미녹시딜과 나토키나아제의 병용투여 효과를 향상시켜 미녹시딜과 나토키나아제가 소량으로 포함되어도 줄기세포 생착 증진 효능을 확인할 수 있다.
상기 스트렙토키나아제를 더 포함하는 경우 조성물 총 중량 중 1~6 중량%, 바람직하게는 2~5 중량% 포함할 수 있다. 스트렙토키나아제의 함량이 상기 범위 내인 경우, 그 외 성분들의 함량이 저하되는 것은 막으면서 줄기세포 생착 증진 효능을 더욱 개선할 수 있다.
상기 우로키나아제를 더 포함하는 경우, 조성물 총 중량 중 1~6 중량%, 바람직하게는 2~5 중량% 포함할 수 있다. 상기 범위 내로 포함되는 경우, 그 외 성분들의 함량이 저하되는 것은 막으면서 줄기세포 생착 증진 효능을 더욱 개선할 수 있다.
상기 조성물이 상기 각 성분을 모두 포함하는 경우, 총 중량 중 미녹시딜 0.5~5 중량%, 나토키나아제 10~15 중량%, 스트렙토키나아제 2~5 중량%, 우로키나아제 2~5 중량% 및 항산화제 5~10 중량%를 포함할 수 있다. 바람직하게는 미녹시딜 0.8~2 중량%, 나토키나아제 12~14 중량%, 스트렙토키나아제 3~4 중량%, 우로키나아제 3~4 중량% 및 항산화제 7~9 중량% 포함할 수 있다.
상기 조성물은 줄기세포의 지방 조직으로의 이식 시 생착 증진을 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 환자의 지방 조직에서 재생이 필요한 부위에 지방 유래 줄기세포를 이식하는 경우, 줄기세포는 이식 후 수일 내로 생존성을 잃거나 지방 조직으로 흡수되어 잔여량이 감소하게 되는데, 상기 조성물을 함께 투여하는 경우, 이식된 줄기세포를 활성화하여 지방 재생을 향상시키고, 지방 조직으로 흡수되는 것을 방지하여 높은 생착률을 유지할 수 있다.
본 발명의 조성물은 상술한 줄기세포를 더 포함할 수 있는데, 이러한 경우 생체 내에 줄기세포와 함께 이식됨으로써, 이식 대상 부위에 혈관 신생 촉진 등의 상술한 우수효과를 직접적으로 거둘 수 있는 장점이 존재한다.
본 발명의 조성물이 상술한 줄기세포를 더 포함하는 경우, 줄기세포의 이식을 통한 질환의 예방 또는 치료 용도의 조성물로서 사용이 가능하고, 상기 질환은 어떠한 줄기세포를 선택하느냐에 따라 대응되어 다양화될 수 있음은 통상의 기술자에게 명확한 것이다.
본 발명의 약학적 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다. 상기에서 '약학적으로 허용되는'이란 생리학적으로 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다.
상기 조성물은 경구 투여, 비경구 투여, 국소 투여 또는 변형 방출 등의 방식에 의해 전달될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않고, 본 발명의 조성물을 줄기세포 생착 증진 대상 부위에 효과적으로 전달할 수 있는 방법이라면 어떠한 방식이든 선택될 수 있다.
본 발명의 조성물은 구체적으로, 경피 흡수 방식에 의해 전달될 수 있고, 예를 들면, 카타플라스마제 또는 첩부제의 부착, 플라스터의 부착, 마이크로니들 패치 부착, 경피 주사제 주입, 연고 또는 크림을 포함하는 에멀젼 형태나 산제 형태의 피부 도포, 스프레이(에어로졸 형태를 포함) 분사 등의 방식에 의해 경피 흡수 경로로 줄기세포 생착 증진 대상 부위에 전달될 수 있으나 특별히 이에 제한되지 아니하며, 이러한 경우 대상 부위에 보다 직접적으로 본 발명의 조성물을 전달할 수 있어 전달 과정에서의 변성을 막아 효율적인 전달이 가능하고, 타 방법에 비해 전달 속도가 상대적으로 우수할 수 있다.
상기 경구 투여에 있어서, 본 발명의 조성물은 경구 투여를 위한 고체, 반고체 또는 액체 투여형으로 제공될 수 있다. 상기 경구 투여는 또한 협측, 설하 및 설하 투여를 포함한다. 적합한 경구 투여형은 정제, 패스트멜트(급속용해정제), 추어블 정제, 캡슐, 환제, 스트립, 트로키제, 함당정제, 파스틸, 카시에제, 펠릿, 약용 츄잉 껌, 벌크 분말, 발포성 또는 비발포성 분말 또는 과립, 구강 미스트, 용액, 에멀젼, 현탁액, 웨이퍼, 스프린클, 엘릭서(elixir) 및 시럽을 포함하나 이에 한정되지는 않는다. 활성 성분(들) 이외에, 본 발명의 조성물은 결합제, 충전 제, 희석제, 붕해제, 습윤제, 윤활제, 활택제, 착색제, 염료-이동 저해제, 감미료, 향료, 유화제, 현탁 및 분산제, 방부제, 용제, 비수성 액체, 유기산 및 이산화탄소 공급원을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 부형제를 포함할 수 있다.
상기　조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 질병 증상의 정도, 투여 시간, 투여 경로 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 줄기세포의 생착을 증진하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병용하여 투여할 수 있다. 상기 공지의 화합물은 상기 효과를 가지는 것이라면 제한 없이 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.
실험재료-세포배양
인간 지방 유래 중간엽 세포(Adipose-derived mesenchymal stem cells)인 PCS-500-011(ATCC, USA) 세포주를 10% FBS(Gibco-BRL, Grand Island, NY), 100 U/ml 페니실린 및 100 ㎍/ml 스트렙토마이신이 함유된 DMEM(Gibco-BRL, Grand Island, NY) 배지에서 배양하였다.
실시예 및 비교예
실시예 및 비교예는 하기 표 1 및 표 2에 기재된 성분들을 해당 함량(중량%)으로 첨가하여 제조하였다. 대조군은 무처리군이다.
실시예 및 비교예는 하기 성분 외에 이성화당 15%, 만니톨 3%를 포함하고, 잔량은 정제수이며, 각 성분을 정제수에 가하여 용해시켜 액제로 제조하였다.
구분 실시예1 실시예2 실시예3 실시예4 실시예5 실시예6 실시예7 실시예8
미녹시딜 3 1 1 1 3 3 3 3
나토키나아제 24 13 13 11 24 24 24 24
스트렙토키나아제 - 3 - 3 - - - -
우로키나아제 - - 3 3 - - - -
글루타치온 2 2 2 2 8 - - -
카테킨 2 2 2 2 - 8 - -
셀레늄 2 2 2 2 - - 8 -
아연 2 2 2 2 - - - 8
구분 실시예9 실시예10 실시예11 실시예12 비교예1 비교예2 비교예3 비교예4 비교예5
미녹시딜 1 12 0.3 0.3 30 - 3 4 -
나토키나아제 35 12 5 13 - 24 - 28 28
스트렙토키나아제 - - 15 10 - - 12 - 5
우로키나아제 - - - - - - 12 - -
글루타치온 2 2 2 2 2 2 2 - 10
카테킨 2 2 2 2 2 2 2 - -
셀레늄 2 2 2 2 2 2 2 - -
아연 2 2 2 2 2 2 2 - -
보툴리늄 톡신
(botulinum toxin)		 - - - - - 5 - - 10
실험방법 및 결과
1. 세포독성 실험
인간 지방 유래 중간엽 세포(Adipose-derived mesenchymal stem cells)인 PCS-500-011(ATCC, USA) 세포주를 75㎠ T-flask에 계대배양(passage)하여, CO2 배양기에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양을 하였다. 통상적으로 두 번째 또는 세 번째에서의 세포의 계대배양을 진행하였다.
상기 실시예 1 내지 4의 조성물을 0.1, 1, 5, 10%의 농도가 되도록 70% 에탄올로 희석하여 상기 지방유래 중간엽세포에 처리하고, 세포독성 정도를 CCK-8(Dojindo)를 이용하여 확인하였다.
그 결과를 도 1에 나타내었으며, 각 조성물의 0.1, 1, 5, 10% 농도에서 세포독성이 없거나 미미함을 확인할 수 있었다.
2. 세포의 증식 확인
상기 세포주를 5x103 cells/well 밀도로 24시간 동안 배양한 48-웰 플레이트에 실시예 및 비교예의 조성물을 48시간 처리한 후 셀 카운팅 키트-8 (cell counting kit-8)을 이용하여 증식된 세포 수를 측정하였다.
그 결과는 표 3과와 같다. 표 3을 참조하면, 실시예의 경우, 세포의 증식률이 무처리 대조군에 비해 최대 약 18배 증가하였다. 미녹시딜이 아닌 생착 증진용 조성물로 흔히 사용되는 보툴리늄 톡신을 포함하는 경우(비교예 2 및 5)에 비해서는 약 2배 증가하였다. 또한, 미녹시딜과 나토키나아제를 병용 투여하는 경우에 세포 증식능이 향상되고 미녹시딜의 함량이 2% 미만에서는 나토키나아제의 함량을 증가시켜도 효과가 미미함을 알 수 있었다. (모든 결과값은 십의 자리에서 반올림하여 표시하였다.)
세포수(개)
대조군(무처리) 500
실시예 1 8300
실시예 2 9200
실시예 3 9500
실시예 4 9800
실시예 5 8000
실시예 6 8200
실시예 7 8500
실시예 8 8300
실시예 9 6800
실시예10 6900
실시예11 6700
실시예12 6500
비교예 1 3800
비교예 2 2200
비교예 3 5800
비교예 4 6300
비교예 5 2500
3. 지방 축적률 측정
완전 배지를 포함하는 12-웰 플레이트에서 상기 세포주를 4x104 cells/well 밀도로 12시간 동안 배양하였고, 융합(confluent) 이후에 지방세포 유도 배지로 대체되었다. 그 다음 실시예 및 비교예의 조성물을 첨가한 후 2주 동안 배양하였고, 분화된 지방세포를 관찰하기 위해 오일 레드 O 용액을 2시간 동안 처리한 후, 세척하였다. 마지막으로 염색된 지방세포는 30분 동안 이소프로판올(isopropanol)을 처리하여 배양하였다. 이 후, 마이크로 플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 492nm에서 염색된 세포를 관찰하였고, 지방 축적률을 측정하였다.
그 결과는 표 4와 같다. 표 4를 참조하면, 실시예의 경우, 지방 축적률이 무처리 대조군에 비해 최대 약 7.3배 높았다. 또한, 보툴리늄 독소 첨가군(비교예 2 및 5)에 비해 약 2.2배 더 높았다.
이로써, 미녹시딜, 나토키나아제를 병용 투여하는 경우 지방세포로의 분화를 촉진함으로써, 생체 내 생착률을 효과적으로 높일 수 있음을 알 수 있다.
지방축적률(대조군 대비 %)
대조군(무처리) 10
실시예 1 65
실시예 2 68
실시예 3 70
실시예 4 73
실시예 5 60
실시예 6 63
실시예 7 62
실시예 8 62
실시예 9 55
실시예10 56
실시예11 53
실시예12 55
비교예 1 32
비교예 2 30
비교예 3 42
비교예 4 52
비교예 5 29
4. 혈관 신생 효능 확인
상기 세포주를 5x103 cells/well 밀도로 24시간 동안 배양한 48-웰 플레이트에서 실시예 및 비교예의 조성물을 처리 후 72시간 동안 배양한 세포 배양액에서, 세포를 제외한 세포 배양 상등액을 회수하여 분비된 인간 혈관 내피세포 성장인자 A(Vascular endothelial growth factor A, VEGF A)의 양을 측정하였다.
이를 위해, ELISA KIT(R&Ds system)을 이용하였으며, 구체적인 방법은 하기와 같다. 각각의 배지에서 얻어진 세포 배양 상등액과 성장인자의 표준용액을 성장인자에 대한 항체(R&D system)가 코팅되어 있는 웰에 100㎕씩 넣고 상온에서 2시간 방치하였다. 항원-항체 결합 반응이 끝난 뒤 웰을 세척액으로 4회 세척하고 성장인자의 이차 항체(R&D system)가 결합된 200㎕를 넣어준 뒤 상온에서 2시간 방치하였다. 이차 항체 결합반응이 끝난 뒤 웰을 세척액으로 4회 세척하고 발색시약 200㎕(R&D system)를 넣은 다음 450nm에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하였다.
그 결과는 표 5와 같다. 표 5를 참조하면, 실시예의 경우, 무처리 대조군에 비해 hVEGF A 양이 최대 약 8배 더 많이 분비되고, 미녹시딜 단독 처리군(비교예 1)에 비해 최대 약 2.1배, 보툴리늄 톡신 처리군(비교예 2 및 5)에 비해 약 2.8배 더 많이 분비되는 것이 관찰되었다. (모든 결과값은 일의 자리에서 반올림하여 표시하였다.)
VEGF(pg/ml)
대조군(무처리) 150
실시예 1 920
실시예 2 990
실시예 3 980
실시예 4 1180
실시예 5 850
실시예 6 880
실시예 7 870
실시예 8 900
실시예 9 720
실시예10 750
실시예11 700
실시예12 750
비교예 1 480
비교예 2 350
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Claims (8)

  1. 미녹시딜(Minoxidil), 나토키나아제(Nattokinase) 및 항산화제를 포함하는 줄기세포 생착 증진용 약학 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 항산화제는 글루타치온(Glutathione), 셀레늄(selenium), 카테킨(catechin) 및 아연으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인, 줄기세포 생착 증진용 약학 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 미녹시딜 2~5 중량%, 나토키나아제 15~30 중량% 및 항산화제 6~10 중량%를 포함하는, 조성물.
  4. 청구항 3에 있어서, 상기 미녹시딜과 나토키나아제는 1:5 내지 1:10 의 중량비로 포함되는, 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서, 스트렙토키나아제(streptokinase) 또는 우로키나아제(Urokinse)를 더 포함하는, 조성물.
  6. 청구항 5에 있어서, 미녹시딜 0.5~5 중량%, 나토키나아제 10~15 중량%, 스트렙토키나아제 2~5 중량%, 우로키나아제 2~5 중량% 및 항산화제 5~10 중량%를 포함하는, 조성물.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 줄기세포는 지방 유래 중간엽 줄기세포인, 조성물.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 줄기세포의 지방 조직으로의 생착 증진용인, 조성물.
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JP2011153093A (ja) * 2010-01-27 2011-08-11 Shiseido Co Ltd 脂肪前駆細胞分化促進剤
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011153093A (ja) * 2010-01-27 2011-08-11 Shiseido Co Ltd 脂肪前駆細胞分化促進剤
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