KR20200140292A - Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주 및 이를 포함하는 백신 조성물 - Google Patents
Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주 및 이를 포함하는 백신 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20200140292A KR20200140292A KR1020207030059A KR20207030059A KR20200140292A KR 20200140292 A KR20200140292 A KR 20200140292A KR 1020207030059 A KR1020207030059 A KR 1020207030059A KR 20207030059 A KR20207030059 A KR 20207030059A KR 20200140292 A KR20200140292 A KR 20200140292A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- yellow fever
- fever virus
- seq
- strain
- herbal
- Prior art date
Links
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 title claims abstract description 293
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 title claims abstract description 289
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 title claims abstract description 144
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 109
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 176
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 74
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 claims abstract description 33
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 claims abstract description 33
- 241000710764 Yellow fever virus 17D Species 0.000 claims abstract description 19
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 120
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 120
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 118
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 89
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 79
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 59
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 58
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 58
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 58
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 58
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 57
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 claims description 53
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 claims description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 48
- 101710189818 Non-structural protein 2a Proteins 0.000 claims description 46
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 35
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 35
- 101710188652 Non-structural protein 4a Proteins 0.000 claims description 33
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 claims description 30
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 29
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 29
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 28
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 28
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 20
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 17
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 16
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 16
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 15
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 15
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 claims description 14
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 claims description 14
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 claims description 11
- 231100000111 LD50 Toxicity 0.000 claims description 10
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 9
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 8
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 5
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims description 5
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 claims description 5
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 claims description 5
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 claims description 5
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims description 5
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 claims 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 123
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 81
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 77
- 229940124928 YF-Vax Drugs 0.000 description 52
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 40
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical group C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 36
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 30
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 30
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 28
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 27
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 26
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 25
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 25
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 25
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine group Chemical group [C@@H]1([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)N1C=NC=2C(N)=NC=NC12 OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 24
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 23
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 21
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 21
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 21
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 20
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 19
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 18
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 18
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 18
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 17
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 16
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 15
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 15
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 14
- 229960001515 yellow fever vaccine Drugs 0.000 description 13
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 12
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 11
- 239000012297 crystallization seed Substances 0.000 description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 10
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 10
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 10
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 10
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 9
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 9
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 9
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 9
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 9
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 7
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 7
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 7
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 7
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 6
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 6
- 101710144111 Non-structural protein 3 Proteins 0.000 description 6
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000021670 response to stimulus Effects 0.000 description 6
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 6
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 5
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 5
- RNAMYOYQYRYFQY-UHFFFAOYSA-N 2-(4,4-difluoropiperidin-1-yl)-6-methoxy-n-(1-propan-2-ylpiperidin-4-yl)-7-(3-pyrrolidin-1-ylpropoxy)quinazolin-4-amine Chemical compound N1=C(N2CCC(F)(F)CC2)N=C2C=C(OCCCN3CCCC3)C(OC)=CC2=C1NC1CCN(C(C)C)CC1 RNAMYOYQYRYFQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 4
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 4
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101710128560 Initiator protein NS1 Proteins 0.000 description 4
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 4
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 4
- 101710144127 Non-structural protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 101710144121 Non-structural protein 5 Proteins 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 4
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 229960000974 live attenuated yellow fever Drugs 0.000 description 4
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 4
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 3
- MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N Ala-Leu-Thr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 3
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N adenyl group Chemical group N1=CN=C2N=CNC2=C1N GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 3
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000011553 hamster model Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- WFZFMHDDZRBTFH-CZEFNJPISA-N 2-[(e)-2-(5-carbamimidoyl-1-benzofuran-2-yl)ethenyl]-1-benzofuran-5-carboximidamide;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.NC(=N)C1=CC=C2OC(/C=C/C=3OC4=CC=C(C=C4C=3)C(=N)N)=CC2=C1 WFZFMHDDZRBTFH-CZEFNJPISA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 description 2
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000710844 Dengue virus 4 Species 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N Gly-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 2
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 101710145006 Lysis protein Proteins 0.000 description 2
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 2
- -1 NS2B Proteins 0.000 description 2
- 101800001019 Non-structural protein 4B Proteins 0.000 description 2
- 101710188653 Non-structural protein 4b Proteins 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 238000013381 RNA quantification Methods 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 101800001141 Serine protease subunit NS2B Proteins 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 description 2
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 2
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 2
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 2
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000003441 anti-flavivirus Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 2
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N 0.000 description 1
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKVRNHPCAOHRSI-KQYNXXCUSA-N 7-methyl-GTP Chemical compound C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O DKVRNHPCAOHRSI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 241000256111 Aedes <genus> Species 0.000 description 1
- VBDMWOKJZDCFJM-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N VBDMWOKJZDCFJM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WXERCAHAIKMTKX-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WXERCAHAIKMTKX-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BLGHHPHXVJWCNK-GUBZILKMSA-N Ala-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BLGHHPHXVJWCNK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UHMQKOBNPRAZGB-CIUDSAMLSA-N Ala-Glu-Met Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N UHMQKOBNPRAZGB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OMMDTNGURYRDAC-NRPADANISA-N Ala-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OMMDTNGURYRDAC-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- VGPWRRFOPXVGOH-BYPYZUCNSA-N Ala-Gly-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VGPWRRFOPXVGOH-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ANGAOPNEPIDLPO-XVYDVKMFSA-N Ala-His-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N ANGAOPNEPIDLPO-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- IFKQPMZRDQZSHI-GHCJXIJMSA-N Ala-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IFKQPMZRDQZSHI-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- HQJKCXHQNUCKMY-GHCJXIJMSA-N Ala-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N HQJKCXHQNUCKMY-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WUHJHHGYVVJMQE-BJDJZHNGSA-N Ala-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WUHJHHGYVVJMQE-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- BLTRAARCJYVJKV-QEJZJMRPSA-N Ala-Lys-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O BLTRAARCJYVJKV-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- XSTZMVAYYCJTNR-DCAQKATOSA-N Ala-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XSTZMVAYYCJTNR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FVNAUOZKIPAYNA-BPNCWPANSA-N Ala-Met-Tyr Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FVNAUOZKIPAYNA-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- DRARURMRLANNLS-GUBZILKMSA-N Ala-Met-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DRARURMRLANNLS-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N Ala-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N Ala-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C)N IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- FSXDWQGEWZQBPJ-HERUPUMHSA-N Ala-Trp-Asp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N FSXDWQGEWZQBPJ-HERUPUMHSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- YVTHEZNOKSAWRW-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YVTHEZNOKSAWRW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BSYKSCBTTQKOJG-GUBZILKMSA-N Arg-Pro-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BSYKSCBTTQKOJG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- RYQSYXFGFOTJDJ-RHYQMDGZSA-N Arg-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RYQSYXFGFOTJDJ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- QLSRIZIDQXDQHK-RCWTZXSCSA-N Arg-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QLSRIZIDQXDQHK-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- BRCVLJZIIFBSPF-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N BRCVLJZIIFBSPF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PIWWUBYJNONVTJ-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asp-Asn Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)C(=O)N PIWWUBYJNONVTJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- XVVOVPFMILMHPX-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XVVOVPFMILMHPX-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- QISZHYWZHJRDAO-CIUDSAMLSA-N Asn-Asp-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N QISZHYWZHJRDAO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NNMUHYLAYUSTTN-FXQIFTODSA-N Asn-Gln-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O NNMUHYLAYUSTTN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PLVAAIPKSGUXDV-WHFBIAKZSA-N Asn-Gly-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)C(=O)N PLVAAIPKSGUXDV-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NJSNXIOKBHPFMB-GMOBBJLQSA-N Asn-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC(=O)N)N NJSNXIOKBHPFMB-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- ULZOQOKFYMXHPZ-AQZXSJQPSA-N Asn-Trp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ULZOQOKFYMXHPZ-AQZXSJQPSA-N 0.000 description 1
- KLYPOCBLKMPBIQ-GHCJXIJMSA-N Asp-Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N KLYPOCBLKMPBIQ-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- ORRJQLIATJDMQM-HJGDQZAQSA-N Asp-Leu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O ORRJQLIATJDMQM-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- QJHOOKBAHRJPPX-QWRGUYRKSA-N Asp-Phe-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QJHOOKBAHRJPPX-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- PCJOFZYFFMBZKC-PCBIJLKTSA-N Asp-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PCJOFZYFFMBZKC-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 1
- ZBYLEBZCVKLPCY-FXQIFTODSA-N Asp-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O ZBYLEBZCVKLPCY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- LHLSSZYQFUNWRZ-NAKRPEOUSA-N Cys-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LHLSSZYQFUNWRZ-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- OXFOKRAFNYSREH-BJDJZHNGSA-N Cys-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N OXFOKRAFNYSREH-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- SWJYSDXMTPMBHO-FXQIFTODSA-N Cys-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SWJYSDXMTPMBHO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108010090461 DFG peptide Proteins 0.000 description 1
- 206010011906 Death Diseases 0.000 description 1
- 241000710815 Dengue virus 2 Species 0.000 description 1
- 239000001836 Dioctyl sodium sulphosuccinate Substances 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 208000004739 Egg Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 1
- CELXWPDNIGWCJN-WDCWCFNPSA-N Gln-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CELXWPDNIGWCJN-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- FALJZCPMTGJOHX-SRVKXCTJSA-N Gln-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FALJZCPMTGJOHX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- OSCLNNWLKKIQJM-WDSKDSINSA-N Gln-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O OSCLNNWLKKIQJM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OUBUHIODTNUUTC-WDCWCFNPSA-N Gln-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O OUBUHIODTNUUTC-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- FVEMBYKESRUFBG-SZMVWBNQSA-N Gln-Trp-His Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CN=CN3)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N FVEMBYKESRUFBG-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N Gln-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- MKRDNSWGJWTBKZ-GVXVVHGQSA-N Gln-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N MKRDNSWGJWTBKZ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N Glu-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CLROYXHHUZELFX-FXQIFTODSA-N Glu-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLROYXHHUZELFX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QQLBPVKLJBAXBS-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QQLBPVKLJBAXBS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- MTAOBYXRYJZRGQ-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MTAOBYXRYJZRGQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HILMIYALTUQTRC-XVKPBYJWSA-N Glu-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HILMIYALTUQTRC-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- QCMVGXDELYMZET-GLLZPBPUSA-N Glu-Thr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QCMVGXDELYMZET-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- MLILEEIVMRUYBX-NHCYSSNCSA-N Glu-Val-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O MLILEEIVMRUYBX-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- YPHPEHMXOYTEQG-LAEOZQHASA-N Glu-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YPHPEHMXOYTEQG-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- PHONXOACARQMPM-BQBZGAKWSA-N Gly-Ala-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PHONXOACARQMPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QXPRJQPCFXMCIY-NKWVEPMBSA-N Gly-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN QXPRJQPCFXMCIY-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N Gly-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- LCNXZQROPKFGQK-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LCNXZQROPKFGQK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- STVHDEHTKFXBJQ-LAEOZQHASA-N Gly-Glu-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O STVHDEHTKFXBJQ-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- UFPXDFOYHVEIPI-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O UFPXDFOYHVEIPI-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N Gly-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 1
- ADZGCWWDPFDHCY-ZETCQYMHSA-N Gly-His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CN=CN1 ADZGCWWDPFDHCY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- ALOBJFDJTMQQPW-ONGXEEELSA-N Gly-His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)CN ALOBJFDJTMQQPW-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- DGKBSGNCMCLDSL-BYULHYEWSA-N Gly-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN DGKBSGNCMCLDSL-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- DENRBIYENOKSEX-PEXQALLHSA-N Gly-Ile-His Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 DENRBIYENOKSEX-PEXQALLHSA-N 0.000 description 1
- TVUWMSBGMVAHSJ-KBPBESRZSA-N Gly-Leu-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 TVUWMSBGMVAHSJ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- GAAHQHNCMIAYEX-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GAAHQHNCMIAYEX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN WNGHUXFWEWTKAO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PYFIQROSWQERAS-LBPRGKRZSA-N Gly-Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 PYFIQROSWQERAS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N Gly-Val-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ZVXMEWXHFBYJPI-LSJOCFKGSA-N Gly-Val-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O ZVXMEWXHFBYJPI-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- BAYQNCWLXIDLHX-ONGXEEELSA-N Gly-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN BAYQNCWLXIDLHX-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- HXKZJLWGSWQKEA-LSJOCFKGSA-N His-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HXKZJLWGSWQKEA-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- VYMGAXSNYUFVCK-GUBZILKMSA-N His-Gln-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N VYMGAXSNYUFVCK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VYUXYMRNGALHEA-DLOVCJGASA-N His-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VYUXYMRNGALHEA-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- VUUFXXGKMPLKNH-BZSNNMDCSA-N His-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N VUUFXXGKMPLKNH-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 101000619564 Homo sapiens Putative testis-specific prion protein Proteins 0.000 description 1
- VAXBXNPRXPHGHG-BJDJZHNGSA-N Ile-Ala-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N VAXBXNPRXPHGHG-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- TZCGZYWNIDZZMR-UHFFFAOYSA-N Ile-Arg-Ala Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NC(C)C(O)=O)CCCN=C(N)N TZCGZYWNIDZZMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DMHGKBGOUAJRHU-UHFFFAOYSA-N Ile-Arg-Pro Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O DMHGKBGOUAJRHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTDRTKMNJRRYOJ-SIUGBPQLSA-N Ile-Gln-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HTDRTKMNJRRYOJ-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 1
- WUKLZPHVWAMZQV-UKJIMTQDSA-N Ile-Glu-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N WUKLZPHVWAMZQV-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- MQFGXJNSUJTXDT-QSFUFRPTSA-N Ile-Gly-Ile Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O MQFGXJNSUJTXDT-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- UAQSZXGJGLHMNV-XEGUGMAKSA-N Ile-Gly-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N UAQSZXGJGLHMNV-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- PMMMQRVUMVURGJ-XUXIUFHCSA-N Ile-Leu-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O PMMMQRVUMVURGJ-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- QGXQHJQPAPMACW-PPCPHDFISA-N Ile-Thr-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N QGXQHJQPAPMACW-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- YJRSIJZUIUANHO-NAKRPEOUSA-N Ile-Val-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N YJRSIJZUIUANHO-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010029660 Intrinsically Disordered Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940124956 Ixiaro Drugs 0.000 description 1
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 1
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N L-isoleucyl-L-alanine Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C)C(O)=O RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- USTCFDAQCLDPBD-XIRDDKMYSA-N Leu-Asn-Trp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N USTCFDAQCLDPBD-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IIKJNQWOQIWWMR-CIUDSAMLSA-N Leu-Cys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N IIKJNQWOQIWWMR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WMTOVWLLDGQGCV-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N WMTOVWLLDGQGCV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZFNLIDNJUWNIJL-WDCWCFNPSA-N Leu-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ZFNLIDNJUWNIJL-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CFZZDVMBRYFFNU-QWRGUYRKSA-N Leu-His-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(O)=O CFZZDVMBRYFFNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N Leu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- TVEOVCYCYGKVPP-HSCHXYMDSA-N Leu-Ile-Trp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N TVEOVCYCYGKVPP-HSCHXYMDSA-N 0.000 description 1
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- LVTJJOJKDCVZGP-QWRGUYRKSA-N Leu-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O LVTJJOJKDCVZGP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- CPONGMJGVIAWEH-DCAQKATOSA-N Leu-Met-Ala Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CPONGMJGVIAWEH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- INCJJHQRZGQLFC-KBPBESRZSA-N Leu-Phe-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(O)=O INCJJHQRZGQLFC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- JLYUZRKPDKHUTC-WDSOQIARSA-N Leu-Pro-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O JLYUZRKPDKHUTC-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N Leu-Ser-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C XOWMDXHFSBCAKQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N Leu-Thr-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZJZNLRVCZWUONM-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Gln Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- FGZVGOAAROXFAB-IXOXFDKPSA-N Leu-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O FGZVGOAAROXFAB-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- HGLKOTPFWOMPOB-MEYUZBJRSA-N Leu-Thr-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HGLKOTPFWOMPOB-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- ZGGVHTQAPHVMKM-IHPCNDPISA-N Leu-Trp-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZGGVHTQAPHVMKM-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- BTEMNFBEAAOGBR-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BTEMNFBEAAOGBR-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- VKVDRTGWLVZJOM-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VKVDRTGWLVZJOM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N Leu-Val-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 206010025327 Lymphopenia Diseases 0.000 description 1
- KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N Lys-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- NTEVEUCLFMWSND-SRVKXCTJSA-N Lys-Arg-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O NTEVEUCLFMWSND-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SWWCDAGDQHTKIE-RHYQMDGZSA-N Lys-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SWWCDAGDQHTKIE-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- NCTDKZKNBDZDOL-GARJFASQSA-N Lys-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O NCTDKZKNBDZDOL-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N Lys-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- OPTCSTACHGNULU-DCAQKATOSA-N Lys-Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN OPTCSTACHGNULU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HWMZUBUEOYAQSC-DCAQKATOSA-N Lys-Gln-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HWMZUBUEOYAQSC-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N Lys-Glu-Gly Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(=O)NCC([O-])=O GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- DTUZCYRNEJDKSR-NHCYSSNCSA-N Lys-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN DTUZCYRNEJDKSR-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- XDPLZVNMYQOFQZ-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N XDPLZVNMYQOFQZ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- DYJOORGDQIGZAS-DCAQKATOSA-N Lys-Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)N DYJOORGDQIGZAS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- QFSYGUMEANRNJE-DCAQKATOSA-N Lys-Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N QFSYGUMEANRNJE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- OOSPRDCGTLQLBP-NHCYSSNCSA-N Met-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OOSPRDCGTLQLBP-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- UZWMJZSOXGOVIN-LURJTMIESA-N Met-Gly-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O UZWMJZSOXGOVIN-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- RXWPLVRJQNWXRQ-IHRRRGAJSA-N Met-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 RXWPLVRJQNWXRQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- WPTDJKDGICUFCP-XUXIUFHCSA-N Met-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N WPTDJKDGICUFCP-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- AXHNAGAYRGCDLG-UWVGGRQHSA-N Met-Lys-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AXHNAGAYRGCDLG-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- LLKWSEXLNFBKIF-CYDGBPFRSA-N Met-Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CCSC LLKWSEXLNFBKIF-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- CNTNPWWHFWAZGA-JYJNAYRXSA-N Met-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 CNTNPWWHFWAZGA-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- KYJHWKAMFISDJE-RCWTZXSCSA-N Met-Thr-Met Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCSC KYJHWKAMFISDJE-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 101800001030 Non-structural protein 2A Proteins 0.000 description 1
- 101800001020 Non-structural protein 4A Proteins 0.000 description 1
- 101800000508 Non-structural protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011795 OF1 mouse Methods 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 102100035593 POU domain, class 2, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710084414 POU domain, class 2, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- LDSOBEJVGGVWGD-DLOVCJGASA-N Phe-Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 LDSOBEJVGGVWGD-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- LLGTYVHITPVGKR-RYUDHWBXSA-N Phe-Gln-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O LLGTYVHITPVGKR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- CSDMCMITJLKBAH-SOUVJXGZSA-N Phe-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O CSDMCMITJLKBAH-SOUVJXGZSA-N 0.000 description 1
- RFEXGCASCQGGHZ-STQMWFEESA-N Phe-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RFEXGCASCQGGHZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- APJPXSFJBMMOLW-KBPBESRZSA-N Phe-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 APJPXSFJBMMOLW-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- KXUZHWXENMYOHC-QEJZJMRPSA-N Phe-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KXUZHWXENMYOHC-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- OQTDZEJJWWAGJT-KKUMJFAQSA-N Phe-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OQTDZEJJWWAGJT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- PBWNICYZGJQKJV-BZSNNMDCSA-N Phe-Phe-Cys Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PBWNICYZGJQKJV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- MGLBSROLWAWCKN-FCLVOEFKSA-N Phe-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MGLBSROLWAWCKN-FCLVOEFKSA-N 0.000 description 1
- GRVMHFCZUIYNKQ-UFYCRDLUSA-N Phe-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GRVMHFCZUIYNKQ-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 1
- XKHCJJPNXFBADI-DCAQKATOSA-N Pro-Asp-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O XKHCJJPNXFBADI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- PEYNRYREGPAOAK-LSJOCFKGSA-N Pro-His-Ala Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C([O-])=O)NC(=O)[C@H]1[NH2+]CCC1)C1=CN=CN1 PEYNRYREGPAOAK-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AJBQTGZIZQXBLT-STQMWFEESA-N Pro-Phe-Gly Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 AJBQTGZIZQXBLT-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- NAIPAPCKKRCMBL-JYJNAYRXSA-N Pro-Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 NAIPAPCKKRCMBL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N Pro-Ser-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- OQSGBXGNAFQGGS-CYDGBPFRSA-N Pro-Val-Ile Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O OQSGBXGNAFQGGS-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- 102100022208 Putative testis-specific prion protein Human genes 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000521268 Sabethes Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- UGJRQLURDVGULT-LKXGYXEUSA-N Ser-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UGJRQLURDVGULT-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- CNIIKZQXBBQHCX-FXQIFTODSA-N Ser-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O CNIIKZQXBBQHCX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BLPYXIXXCFVIIF-FXQIFTODSA-N Ser-Cys-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N)CN=C(N)N BLPYXIXXCFVIIF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ZOHGLPQGEHSLPD-FXQIFTODSA-N Ser-Gln-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZOHGLPQGEHSLPD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- YIUWWXVTYLANCJ-NAKRPEOUSA-N Ser-Ile-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O YIUWWXVTYLANCJ-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VZQRNAYURWAEFE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- VIIJCAQMJBHSJH-FXQIFTODSA-N Ser-Met-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VIIJCAQMJBHSJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N Ser-Pro-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N Ser-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- ATEQEHCGZKBEMU-GQGQLFGLSA-N Ser-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CO)N ATEQEHCGZKBEMU-GQGQLFGLSA-N 0.000 description 1
- UBTNVMGPMYDYIU-HJPIBITLSA-N Ser-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O UBTNVMGPMYDYIU-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- JZRYFUGREMECBH-XPUUQOCRSA-N Ser-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O JZRYFUGREMECBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000519995 Stachys sylvatica Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- JMZKMSTYXHFYAK-VEVYYDQMSA-N Thr-Arg-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O JMZKMSTYXHFYAK-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- MQBTXMPQNCGSSZ-OSUNSFLBSA-N Thr-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)CCCN=C(N)N MQBTXMPQNCGSSZ-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- VXMHQKHDKCATDV-VEVYYDQMSA-N Thr-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O VXMHQKHDKCATDV-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- GKMYGVQDGVYCPC-IUKAMOBKSA-N Thr-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N GKMYGVQDGVYCPC-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- GNHRVXYZKWSJTF-HJGDQZAQSA-N Thr-Asp-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O GNHRVXYZKWSJTF-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N Thr-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- QWMPARMKIDVBLV-VZFHVOOUSA-N Thr-Cys-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O QWMPARMKIDVBLV-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- KGKWKSSSQGGYAU-SUSMZKCASA-N Thr-Gln-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KGKWKSSSQGGYAU-SUSMZKCASA-N 0.000 description 1
- AQAMPXBRJJWPNI-JHEQGTHGSA-N Thr-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AQAMPXBRJJWPNI-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- WPAKPLPGQNUXGN-OSUNSFLBSA-N Thr-Ile-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WPAKPLPGQNUXGN-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N Thr-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- XZUBGOYOGDRYFC-XGEHTFHBSA-N Thr-Ser-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O XZUBGOYOGDRYFC-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N Thr-Ser-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N Thr-Val-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- SPIFGZFZMVLPHN-UNQGMJICSA-N Thr-Val-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SPIFGZFZMVLPHN-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- WFZYXGSAPWKTHR-XEGUGMAKSA-N Trp-Ala-Gln Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N WFZYXGSAPWKTHR-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- HYNAKPYFEYJMAS-XIRDDKMYSA-N Trp-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HYNAKPYFEYJMAS-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- BABINGWMZBWXIX-BPUTZDHNSA-N Trp-Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N BABINGWMZBWXIX-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- DKKHULUSOSWGHS-UWJYBYFXSA-N Tyr-Asn-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N DKKHULUSOSWGHS-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- HHFMNAVFGBYSAT-IGISWZIWSA-N Tyr-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N HHFMNAVFGBYSAT-IGISWZIWSA-N 0.000 description 1
- MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- DWAMXBFJNZIHMC-KBPBESRZSA-N Tyr-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O DWAMXBFJNZIHMC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- AZSHAZJLOZQYAY-FXQIFTODSA-N Val-Ala-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZSHAZJLOZQYAY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BYOHPUZJVXWHAE-BYULHYEWSA-N Val-Asn-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N BYOHPUZJVXWHAE-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N Val-Asp-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- BRPKEERLGYNCNC-NHCYSSNCSA-N Val-Glu-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N BRPKEERLGYNCNC-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- FOADDSDHGRFUOC-DZKIICNBSA-N Val-Glu-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N FOADDSDHGRFUOC-DZKIICNBSA-N 0.000 description 1
- CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N Val-Gly-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- JTWIMNMUYLQNPI-WPRPVWTQSA-N Val-Gly-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N JTWIMNMUYLQNPI-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- BEGDZYNDCNEGJZ-XVKPBYJWSA-N Val-Gly-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O BEGDZYNDCNEGJZ-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- URIRWLJVWHYLET-ONGXEEELSA-N Val-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)C(C)C URIRWLJVWHYLET-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- KDKLLPMFFGYQJD-CYDGBPFRSA-N Val-Ile-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N KDKLLPMFFGYQJD-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- PYXQBKJPHNCTNW-CYDGBPFRSA-N Val-Ile-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N PYXQBKJPHNCTNW-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- OTJMMKPMLUNTQT-AVGNSLFASA-N Val-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N OTJMMKPMLUNTQT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- QRVPEKJBBRYISE-XUXIUFHCSA-N Val-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C(C)C)N QRVPEKJBBRYISE-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- ZRSZTKTVPNSUNA-IHRRRGAJSA-N Val-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O ZRSZTKTVPNSUNA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- MBGFDZDWMDLXHQ-GUBZILKMSA-N Val-Met-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](C(C)C)N MBGFDZDWMDLXHQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JVGHIFMSFBZDHH-WPRPVWTQSA-N Val-Met-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)O)N JVGHIFMSFBZDHH-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N Val-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VHIZXDZMTDVFGX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QTPQHINADBYBNA-DCAQKATOSA-N Val-Ser-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QTPQHINADBYBNA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(O)=O LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- USXYVSTVPHELAF-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O USXYVSTVPHELAF-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- WBPFYNYTYASCQP-CYDGBPFRSA-N Val-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N WBPFYNYTYASCQP-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 229940124926 Yellow fever virus vaccine Drugs 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002552 acute disseminated encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 108010076324 alanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000000776 antibody secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 1
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000010460 detection of virus Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 108010034892 glycyl-arginyl-glycyl-aspartyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010019832 glycyl-asparaginyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010077435 glycyl-phenylalanyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010082286 glycyl-seryl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 108010045126 glycyl-tyrosyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004726 long-term protective immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100001023 lymphopenia Toxicity 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 208000018299 prostration Diseases 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940069575 rompun Drugs 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000005477 standard model Effects 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 239000008181 tonicity modifier Substances 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 108010000998 wheylin-2 peptide Proteins 0.000 description 1
- QYEFBJRXKKSABU-UHFFFAOYSA-N xylazine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 QYEFBJRXKKSABU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
- C12N7/08—Inactivation or attenuation by serial passage of virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24161—Methods of inactivation or attenuation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24161—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2770/24164—Methods of inactivation or attenuation by serial passage
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
본 발명은, Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않은 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주로부터 Vero 세포에서 성장하도록 적응되고, 상기 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주보다 신경독성이 적은 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
Description
본 발명은 생약독화 황열병 바이러스(YFV) 균주 및 YFV 감염에 대한 백신 조성물의 제조를 위한 이의 용도에 관한 것이다.
특히, 생약독화 YFV 균주는 Vero 세포에서 성장하도록 적응된 것으로, Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않고 발육란에서 성장하도록 적응된 모체 생약독화 YFV 균주로부터 획득되었다. 생약독화 YFV 균주는 또한, 모체 생약독화 YFV 균주에 비해 감소된 신경독성을 특징으로 한다.
황열병은 아프리카, 중남미의 열대 지역의 50개국에 퍼져 있는 바이러스 매개성의 치명적인 질병이다.
황열병은 급성 바이러스 출혈성 질병으로, 일부 환자에서 황달이 발생하기 때문에 "황(yellow)"이라는 용어가 사용된다. 황열병의 특징적인 증상은 열, 두통, 황달, 근육통, 메스꺼움, 구토, 및 피로를 포함할 수 있다. 또한, 바이러스에 감염된 소수의 환자에서 심각한 증상이 나타나고, 이들 중 약 절반이 7~10일 내에 사망한다.
황열병 바이러스(YFV)는 플라비바이러스 계열에 속하며, 이 계열에 속하는 다른 바이러스로는 뎅기열 바이러스(DV), 일본 뇌염 바이러스(JEV), 진드기 매개 뇌염 바이러스(TBEV), 웨스트 나일 바이러스(WNV), 및 지카 바이러스(ZV)가 있다. YFV는 캡시드 단백질과 10862개 뉴클레오티드의 길이를 갖는 단일가닥 포지티브 센스 RNA로 구성된 뉴클레오캡시드를 둘러싸는 지단백질 외피로 이루어져 있다. 5' 비번역 영역(5' UTR)과 3' 비번역 영역(3' UTR) 사이에서, RNA는 5' 말단에서 3' 말단 방향으로, 3종의 구조 단백질, 즉 캡시드 단백질(C 단백질), 전막(premembrane)/막 단백질(prM/M 단백질), 및 외피 단백질(E 단백질), 그리고 8종의 비구조(NS) 단백질, 즉 NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, P2k 펩티드, NS4B, 및 NS5 단백질을 인코딩한다.
야생형 YFV는 주로 아프리카에서 Aedes 종 모기에 의해, 남아메리카에서 Haemogogus 및 Sabethes 종에 의해 벡터화되며, 지역에 따라 차이가 있는 비인간 영장류 숙주가 존재한다. YFV 전염은 주로 두 가지 전염 패턴, 즉 (1) 도시 패턴 및 (2) 삼림 패턴(정글 또는 숲 순환형으로도 알려짐)에 따라 이루어진다. 두 가지 전염 패턴에도 불구하고, 하나의 임상 관련 질병만 확인되었으며, 이는 동일한 바이러스가 관련되어 있음을 나타낸다. 미국 대륙에서, YFV는 오늘날 매년 최대 수백 건의 비면역 삼림 노동자 감염 보고를 발생시키는 풍토병 삼림 패턴에 의해 순환된다. 동시에, 이 바이러스는 아프리카에서 도시 패턴과 삼림 패턴 모두에 의해 순환되며, 주기적으로 풍토병 패턴에서 벗어나 주요 전염병 과정에서 많은 수의 비면역자를 감염시킨다.
현재, 황열병에 대한 항바이러스제는 없으며, 백신접종이 질병 예방에 매우 중요하다. 이와 관련하여, 일찍이 1930년대에, 두 종류의 생약독화 YFV 백신이 개발되었다.
첫 번째 백신은, 야생형 프렌치 내장친화성 바이러스(FVV, 1928년 세네갈에서 Mayali로부터 분리)로부터 제조되어 마우스 뇌에서 계대된 프렌치 신경친화성 백신(FNV)에 해당한다. 그러나, FNV는 신경독성이 너무 강해 소아에서 백신접종후 뇌염의 발병 상황이 악화되는 것으로 빠르게 입증되었고, 1980년대 초에 폐기되었다(Barrett, 2017).
두 번째 접근법은, 야생형 균주 Asibi(1927년에 가나에서 경미한 인간 사례("Mr. Asibi")로부터 분리)로부터 제조되어 마우스와 닭 조직에서 계대된 "17D" 균주에 해당한다. 백신 균주 17D는 내장친화성 및 신경독성을 모두 잃었다(Monath, 2005).
현재, 6개국, 즉 브라질(17DD 하위균주), 중국(17D-204 하위균주), 프랑스(17D-204 하위균주 Stamaril®), 러시아(17D-213 하위균주), 세네갈(17D-204 하위균주), 및 미국(17D-204 하위균주 YF-VAX®)에서, 17D 균주에서 유래된 하위균주로부터 생약독화 YFV 백신 조성물을 생산하고 있다(Barrett, 2017).
지금까지, 현재 상용화된 모든 백신은 과거에 안정성 문제로 인해 복잡했던 생산 공정인 암탉 발육란에서 생산되고 있다(Barrett, 2017). 특히, 제조 문제로 인해 종종 YFV 백신이 부족하다. 실제로, 앙골라와 콩고 민주공화국에서 2016년 전염병 기간 동안, 이용 가능한 백신 로트의 부족으로 인해 비상 상황 대응을 위한 분할 용량이 처음으로 필요해졌다(Barrett, 2017). 또한, 암탉 발육란에서 생산된 YFV 백신은 계란 알레르기가 있는 사람에게는 사용이 금지되어 있다.
발육란을 기반으로 한 백신 생산에 대한 대안은 바이러스 계대에 적합한 세포주, 예컨대 포유류 세포주를 사용하는 것이다. 포유류 세포주 중에서, Vero 세포주는 바이러스 수율의 품질과 양에 있어서 안정성 및 문서에 의해 충분히 입증된 성능을 제공하면서 가장 많이 연구된 것 중 하나이다. Vero 세포는 FDA 승인을 받았고 전 세계적으로 사용되고 있다. 예를 들어, Vero 세포는 일본 뇌염에 대한 백신(IXIARO® 브랜드로 상용화됨)과 인플루엔자 바이러스, 폴리오바이러스, 및 광견병에 대한 백신의 제조에 사용되어 왔다.
Vero 세포를 이용해 YFV 백신을 제조하는 전략이 과거와 현재에 등장했지만, 이들 전략은 단지 비활성화 바이러스를 기반으로 YFV 백신을 제조할 수 있는 가능성에 집중되어 있다는 점을 언급할 필요가 있다(Hayes, 2010; Beasley et al., 2013; Pereira et al., 2015). 그럼에도 불구하고, 황열병 비활성화 백신이 이론적으로 더 안전해 보일 수 있지만, 현재의 생약독화 황열병 백신의 단회 용량에 의해 제공되는 장기간의 보호와 완전히 일치할 가능성은 적다(Hayes, 2010). 또한, 최근의 황열 전염병과 관련하여, 생약독화 백신은 풍토병 지역의 황열병에 대한 장기간 방어 면역의 인구 범위를 증가시키는 데 더 적합해 보인다.
백신에 사용하기 위한 생약독화 바이러스의 구체적인 제한은, 해당 질병으로부터 환자를 보호할 수 있을 만큼 면역원성을 유지하면서 약독화를 유지하는 것, 즉 황열병 바이러스가 신경독성 및 내장친화성 측면에서 적어도 현재 시판되고 있는 생약독화 황열병 백신만큼 약화되는 것이다. 이와 관련하여, 예를 들어 문헌[Monath, 2005]에서 볼 수 있듯이, 주어진 황열병 균주에 대해 두 가지 특성, 즉 약독화 및 면역원성을 모두 달성하는 것은 쉽지 않다.
따라서, 암탉 발육란을 기반으로 한 생약독화 YFV 백신 생산과 관련된 여러 단점으로 인해, 생약독화 YFV 백신을 제공하기 위한 대안적 제조 방법이 여전히 필요하다.
일 양태에서, 본 발명은, Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않은 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주로부터 Vero 세포에서 성장하도록 적응되고, 상기 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주보다 신경독성이 적은 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
다른 양태에서, 본 발명은 또한, 하기 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 또는
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이.
본 발명의 다른 양태는 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 480번 위치의 돌연변이를 포함하는 외피 단백질을 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
본 발명의 다른 양태는 SEQ ID NO. 15의 480번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 류신 잔기를 포함하는 외피 단백질을 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
다른 양태에서, 본 발명은 또한, 하기 단백질을 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
(i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 480번 위치의 돌연변이를 포함하는 외피 단백질, 및
(ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 65번 위치의 돌연변이를 포함하는 NS2a 단백질.
본 발명의 다른 양태는 하기 단백질을 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
(i) SEQ ID NO. 15의 480번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 류신 잔기를 포함하는 외피 단백질, 및
(ii) SEQ ID NO. 16의 65번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 발린 잔기를 포함하는 NS2a 단백질.
본 발명의 다른 양태는 또한, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주 및 제약상 허용되는 비히클을 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 또한, Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주를 획득하는 방법으로서,
- a) Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않고, 선택적으로 계란에서 성장하도록 적응된 모체 생약독화 황열병 바이러스 균주의 바이러스 게놈 RNA를 정제하는 단계;
- b) 단계 a)에서 정제된 바이러스 게놈 RNA로 Vero 세포를 형질감염시켜 형질감염된 Vero 세포를 획득하는 단계;
- c) 단계 b)에서 획득한 형질감염된 Vero 세포를 배양 배지에서 성장시켜 제1 황열병 바이러스 개체군을 획득하고 추가로 회수하는 단계;
- d) 단계 c)의 마지막에 획득한 회수된 제1 황열병 바이러스 개체군을 새로운 Vero 세포에서 2회 이상 증폭하여 제2 황열병 바이러스 개체군을 획득하는 단계;
- e) 단계 d)에서 획득한 제2 황열병 바이러스 개체군을 Vero 세포에서 2회 이상의 연속 플라크 정제에 의해 클로닝하여 복수의 황열병 바이러스 클론을 획득하는 단계;
- f) 단계 e)의 마지막에 획득한 회수된 황열병 바이러스 클론 각각을 개별적으로 새로운 Vero 세포에서 2회 이상 증폭하여 복수의 황열병 바이러스 균주를 획득하는 단계; 및
- g) 단계 f)에서 회수된 상기 복수의 황열병 바이러스 균주로부터, 마우스 치사량 50(MLD50) 시험에서 모체 생약독화 황열병 바이러스 균주보다 신경독성이 적은 하나 이상의 생약독화 황열병 바이러스 균주를 선별하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 다른 양태는 또한, 본 발명에 따른 방법에 의해 획득 가능한 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
다른 양태에서, 본 발명은 또한, 백신의 제조에 사용하기 위한 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
본 발명의 다른 양태는 황열병 바이러스 감염의 예방에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주를 포함하는 백신에 관한 것이다.
도 1: 예비마스터 시드 로트(pMSL) 단계에서, Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스(vYF) 균주의 제조를 보여주는 다이어그램.
도 2: A129 마우스 모델에서의 내장친화성 검정을 보여주는 다이어그램.
도 3: PBS(흰색 바), Stamaril® 기준백신(흑색 바), Stamaril® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV2212, TV2232, 및 TV2241; 진회색 바), 또는 YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV3111, TV3112, 및 TV4221; 연회색 바)으로 D0에 면역화한 A129 마우스로부터 D4 및 D6에 채취된 혈청에서 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 바이러스혈증을 보여주는 플롯.
도 4: PBS(흰색 바), Stamaril® 기준백신(흑색 바), Stamaril® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV2212, TV2232, 및 TV2241; 진회색 바), 또는 YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV3111, TV3112, 및 TV4221; 연회색 바)으로 D0에 면역화한 A129 마우스로부터 D6 및 D11에 채취된 간 샘플에서 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 바이러스 수치(viral load)를 보여주는 플롯.
도 5: PBS(흰색 바), Stamaril® 기준백신(흑색 바), Stamaril® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV2212, TV2232, 및 TV2241; 진회색 바), 또는 YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV3111, TV3112, 및 TV4221; 연회색 바)으로 D0에 면역화한 A129 마우스로부터 D6 및 D11에 채취된 뇌 샘플에서 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 바이러스 수치를 보여주는 플롯.
도 6: PBS(흰색 바), Stamaril® 기준백신(흑색 바), Stamaril® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV2212, TV2232, 및 TV2241; 진회색 바), 또는 YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV3111, TV3112, 및 TV4221; 연회색 바)으로 D0에 면역화한 A129 마우스로부터 D6 및 D11에 채취된 비장 샘플에서 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 바이러스 수치를 보여주는 플롯.
도 7: Stamaril®, vYF 균주 TV221, TV2241, TV3111, TV3112, TV4221(점선), 또는 TV2232(실선)로 A129 마우스를 단회 면역화한 후의 카플란-마이어 생존 곡선을 보여주는 플롯.
도 8: 햄스터 모델에서의 면역원성 검정을 보여주는 다이어그램.
도 9: vYF 균주(TV2212, TV2232, TV2241, TV3111, TV3112, 및 TV4221) 또는 Stamaril® 기준백신의 용량당 2.5 또는 5.5 log10 CCID50으로 D0에 면역화한 햄스터로부터 D26에 채취된 혈청에서 Vero 세포에 대한 혈청중화 검정으로 측정된 생약독화 황열병 바이러스 균주에 특이적인 중화 항체 역가를 보여주는 플롯. 수평선은 응답체 임계치를 나타낸다.
도 10: vYF 균주(TV2212, TV2232, TV2241, TV3111, TV3112, 및 TV4221) 또는 Stamaril® 기준백신의 용량당 2.5 또는 5.5 log10 CCID50으로 D0 및 D26에 면역화한 햄스터로부터 D41에 채취된 혈청에서 Vero 세포에 대한 혈청중화 검정으로 측정된 생약독화 황열병 바이러스 균주에 특이적인 중화 항체 역가를 보여주는 플롯. 수평선은 응답체 임계치를 나타낸다.
도 11: 현재의 백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 비교하여, vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 중화 항체 반응을 보여주는 플롯. 수평선은 검출 한계를 나타낸다.
도 12: 현재의 기준백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 비교하여, 생약독화 vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 말초혈액에서 B 기억세포로부터의 YF-특이적 IgM 반응을 보여주는 플롯. 결과는 전체 IgM 개체군에서의 IgM 항체-분비 세포의 백분율로 표시된다.
도 13: 현재의 기준백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 비교하여, 생약독화 vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 말초혈액에서 B 기억세포로부터의 YF-특이적 IgG 반응을 보여주는 플롯. 결과는 전체 IgG 개체군에서의 IgG 항체-분비 세포의 백분율로 표시된다.
도 14: 현재의 백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 비교하여, 외피 단백질로 자극시(ENV; 좌측 패널) 또는 비구조 단백질 3으로 자극시(NS3; 우측 패널) vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 말초혈액에서의 IFN-γ(상단 패널) 및 IL-2(하단 패널) 특이적 T세포 반응을 보여주는 플롯.
도 15: 현재의 기준백신 Stamaril® 및 VAX®와 비교하여, 생약독화 vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 기관의 바이러스 수치를 보여주는 플롯. 연회색 바 및 원은 Stamaril®로 백신접종한 원숭이로부터의 결과를 나타내고, 중간회색 바 및 정사각형은 YF-VAX®로 백신접종한 원숭이로부터의 결과를 나타내고, 진회색 바 및 삼각형은 생약독화 vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이로부터의 결과를 나타낸다. 수평선은 검출 한계를 나타낸다.
도 2: A129 마우스 모델에서의 내장친화성 검정을 보여주는 다이어그램.
도 3: PBS(흰색 바), Stamaril® 기준백신(흑색 바), Stamaril® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV2212, TV2232, 및 TV2241; 진회색 바), 또는 YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV3111, TV3112, 및 TV4221; 연회색 바)으로 D0에 면역화한 A129 마우스로부터 D4 및 D6에 채취된 혈청에서 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 바이러스혈증을 보여주는 플롯.
도 4: PBS(흰색 바), Stamaril® 기준백신(흑색 바), Stamaril® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV2212, TV2232, 및 TV2241; 진회색 바), 또는 YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV3111, TV3112, 및 TV4221; 연회색 바)으로 D0에 면역화한 A129 마우스로부터 D6 및 D11에 채취된 간 샘플에서 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 바이러스 수치(viral load)를 보여주는 플롯.
도 5: PBS(흰색 바), Stamaril® 기준백신(흑색 바), Stamaril® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV2212, TV2232, 및 TV2241; 진회색 바), 또는 YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV3111, TV3112, 및 TV4221; 연회색 바)으로 D0에 면역화한 A129 마우스로부터 D6 및 D11에 채취된 뇌 샘플에서 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 바이러스 수치를 보여주는 플롯.
도 6: PBS(흰색 바), Stamaril® 기준백신(흑색 바), Stamaril® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV2212, TV2232, 및 TV2241; 진회색 바), 또는 YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신(TV3111, TV3112, 및 TV4221; 연회색 바)으로 D0에 면역화한 A129 마우스로부터 D6 및 D11에 채취된 비장 샘플에서 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 바이러스 수치를 보여주는 플롯.
도 7: Stamaril®, vYF 균주 TV221, TV2241, TV3111, TV3112, TV4221(점선), 또는 TV2232(실선)로 A129 마우스를 단회 면역화한 후의 카플란-마이어 생존 곡선을 보여주는 플롯.
도 8: 햄스터 모델에서의 면역원성 검정을 보여주는 다이어그램.
도 9: vYF 균주(TV2212, TV2232, TV2241, TV3111, TV3112, 및 TV4221) 또는 Stamaril® 기준백신의 용량당 2.5 또는 5.5 log10 CCID50으로 D0에 면역화한 햄스터로부터 D26에 채취된 혈청에서 Vero 세포에 대한 혈청중화 검정으로 측정된 생약독화 황열병 바이러스 균주에 특이적인 중화 항체 역가를 보여주는 플롯. 수평선은 응답체 임계치를 나타낸다.
도 10: vYF 균주(TV2212, TV2232, TV2241, TV3111, TV3112, 및 TV4221) 또는 Stamaril® 기준백신의 용량당 2.5 또는 5.5 log10 CCID50으로 D0 및 D26에 면역화한 햄스터로부터 D41에 채취된 혈청에서 Vero 세포에 대한 혈청중화 검정으로 측정된 생약독화 황열병 바이러스 균주에 특이적인 중화 항체 역가를 보여주는 플롯. 수평선은 응답체 임계치를 나타낸다.
도 11: 현재의 백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 비교하여, vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 중화 항체 반응을 보여주는 플롯. 수평선은 검출 한계를 나타낸다.
도 12: 현재의 기준백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 비교하여, 생약독화 vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 말초혈액에서 B 기억세포로부터의 YF-특이적 IgM 반응을 보여주는 플롯. 결과는 전체 IgM 개체군에서의 IgM 항체-분비 세포의 백분율로 표시된다.
도 13: 현재의 기준백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 비교하여, 생약독화 vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 말초혈액에서 B 기억세포로부터의 YF-특이적 IgG 반응을 보여주는 플롯. 결과는 전체 IgG 개체군에서의 IgG 항체-분비 세포의 백분율로 표시된다.
도 14: 현재의 백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 비교하여, 외피 단백질로 자극시(ENV; 좌측 패널) 또는 비구조 단백질 3으로 자극시(NS3; 우측 패널) vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 말초혈액에서의 IFN-γ(상단 패널) 및 IL-2(하단 패널) 특이적 T세포 반응을 보여주는 플롯.
도 15: 현재의 기준백신 Stamaril® 및 VAX®와 비교하여, 생약독화 vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이의 기관의 바이러스 수치를 보여주는 플롯. 연회색 바 및 원은 Stamaril®로 백신접종한 원숭이로부터의 결과를 나타내고, 중간회색 바 및 정사각형은 YF-VAX®로 백신접종한 원숭이로부터의 결과를 나타내고, 진회색 바 및 삼각형은 생약독화 vYF 균주 TV3112로 백신접종한 원숭이로부터의 결과를 나타낸다. 수평선은 검출 한계를 나타낸다.
본 발명은, 발육란에서 성장하도록 적응된 모체 생약독화 YFV 균주로부터 획득되어, Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 YFV 균주를 제공한다. 생약독화 YFV 균주는 모체 생약독화 YFV 균주와 비교하여, 마우스 LD50 시험(MLD50)에서의 감소된 신경독성을 위해 선별되었다.
본 발명에서 나타나는 바와 같이, Vero 세포에서 계대하여 YFV를 생산함으로써, 후속적으로 YF 감염에 대한 백신을 제조하는 데 적합한, 안정적이고, 재현성이 높고, 표준 품질이 높은 다량의 생약독화 YFV 균주를 제공할 수 있다.
*
기타 정의
본 발명의 범위 내에서, "YFV"는 황열병 바이러스와 관련이 있는 반면, 용어 "vYF"는 Vero 세포 적응 황열병 바이러스, 즉 Vero 세포에서 성장하도록 적응된 황열병 바이러스를 나타낸다.
따라서, 본 발명의 범위 내에서, "Vero 세포 적응 황열병 바이러스"(vYV)와 "Vero 세포에서 성장하도록 적응된 황열병 바이러스"는 상호교환 가능한 표현이다.
본 발명의 범위 내에서, Vero 세포에서 성장하도록 적응된 바이러스는 Vero 세포에서 최소 3회의 연속 계대를 거친 바이러스이다. 일부 구현예에서, 바이러스는 Vero 세포에서 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15회의 연속 계대를 거쳤다.
"계대"는 바이러스가 Vero 세포에서 적어도 한 번의 복제 주기를 거치는 임의의 단계, 특히 Vero 세포에서 바이러스를 형질감염시키거나, 증폭하거나, 클로닝하는 임의의 단계로 이해될 수 있다.
본원에 사용된 표현 "생약독화 황열병 바이러스"는 당업자에게 알려진 일반적인 의미를 갖는다. 일부 구현예에서, 이 표현은 약화된 신경독성 및/또는 약화된 내장친화성을 갖는 황열병 생바이러스를 의미한다.
본 발명의 범위 내에서, 용어 "신경독성"은, 혈뇌 장벽을 통과하고(신경 침습성), 뇌 조직에서 복제하고(신경친화성), 염증, 신경 손상, 및 뇌염을 유발하는(협의로는 신경독성) 바이러스의 능력을 의미하는 것이다.
본 발명의 범위 내에서, 용어 "내장친화성"은, 신경외 조직에서 복제하고, 바이러스혈증을 유발하고, 간을 포함한 중요한 기관을 손상시키는 바이러스의 능력을 의미한다(Monath, 2005).
일부 구현예에서, 상기 생약독화 황열병 바이러스는 적어도 현재 상용화된 생약독화 황열병 백신 균주(예를 들어, Stamaril® 또는 YF-VAX®) 중 하나만큼 약화된다.
일부 구현예에서, 상기 생약독화 황열병 바이러스는 적어도 현재 상용화된 생약독화 황열병 백신 균주(예를 들어, Stamaril® 또는 YF-VAX®) 중 하나만큼 약화된 신경독성을 갖는다.
일부 구현예에서, 상기 생약독화 황열병 바이러스는 적어도 현재 상용화된 생약독화 황열병 백신 균주(예를 들어, Stamaril® 또는 YF-VAX®) 중 하나만큼 약화된 내장친화성을 갖는다.
일부 구현예에서, 상기 생약독화 황열병 바이러스는 적어도 현재 상용화된 생약독화 황열병 백신 균주(예를 들어, Stamaril® 또는 YF-VAX®) 중 하나만큼 약화된 신경독성 및 내장친화성을 갖는다.
"포함하는"/"포함한다"/"포함된"이란 용어는 각각 "~로 이루어진"/"~로 이루어진다"/"~로 이루어진"을 포괄한다. 예를 들어, 성분 X를 "포함하는" 조성물은 성분 X로만 이루어지거나, 하나 이상의 추가 성분, 예를 들어 성분 X 및 성분 Y를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "CCID50"은 50% 세포 배양물 감염량, 즉 단층 세포 배양물에서 종점 희석 검정으로 측정시, 접종된 복제 세포 배양물의 50%에서 세포변성 효과를 유발하기에 충분한 바이러스의 양을 의미한다.
세계 보건 기구(WHO)의 표준 정의에 따라, 본 발명은 아래 정의를 참조한다(WHO Technical report series, No. 872, 1998).
본원에 사용된 "마스터 시드 로트"("MSL") 또는 "1차 시드 로트"는 단일 생산 과정으로 처리되어 균일한 조성을 갖는 바이러스 현탁액의 양을 의미한다.
본원에 사용된 "작업 시드 로트"("WSL") 또는 "2차 시드 로트"는 단일 생산 과정으로 처리되어, 조성물에 대해 균일하고, 완전히 특성화되고, MSL로부터 1회만 계대된 바이러스 현탁액의 양을 의미한다. 본 발명의 범위 내에서, WSL에서 추출한 물질이 백신의 제조에서 발육란 또는 적합한 세포주를 접종하는 데 사용된다.
본원에 사용된 "플라크 형성 단위"(PFU)는 단층 세포 배양물에서 플라크를 생성하는 최소량의 바이러스 현탁액을 의미한다.
본원에 사용된 "중위 마우스 치사량"(마우스 LD50 또는 MLD50)은 주사된 마우스의 50%를 사망시킬 바이러스 현탁액의 양을 의미한다.
*
Vero
세포에서 성장하도록 적응된
생약독화
YFV
(
Vero
세포 적응
YF
바이러스의 경우
"
vYF
바이러스"라고도 함)
일 양태에서, 본 발명은, Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않은 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주로부터 Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다. 다양한 구현예에서, 상기 생약독화 황열병 바이러스 균주는 상기 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주보다 신경독성이 적다.
일부 구현예에서, 모체 황열병 바이러스 균주는 계란에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주이다.
일부 구현예에서, 계란은 암탉 발육란이다.
"17D 하위균주"는 조상 17D 균주를 가진 황열병 균주이다.
"17D 균주"는 당업자에게 알려진 일반적인 의미를 갖는다. 일부 구현예에서, "17D 균주"는 문헌[Monath (2005)]에 기재된 바와 같이, 1927년 가나에서 경미한 인간 사례("Mr. Asibi")로부터 분리되어, 잘게 썬 쥣과 배아 조직에서 18회 계대된 후 잘게 썬 닭 배아 조직에서 58회 계대된 황열병 균주를 의미한다.
일부 구현예에서, 17D 하위균주는 문헌[Monath (2005)]에 기재된 바와 같은 17D-204 하위균주, 17DD 하위균주, 및/또는 17D-213 하위균주를 포괄한다. 예시적인 구현예에서, 1985년에 Rice 등에 의해 이전에 개시된 바와 같은 YFV 17D-204 균주(Genbank 등록 번호 X03700)의 RNA 서열은 RNA 서열 SEQ ID NO. 1로 표시될 수 있다.
일부 구현예에서, 모체 황열병 바이러스 균주는 황열병 바이러스 17D-204 하위균주이다.
일부 구현예에서, 모체 YFV 바이러스 균주는, 상용화된 백신 YF-VAX®에 사용되는 기준 YFV 균주인, YFV 17D-204 유래 YF-VAX® 균주이다.
예시적인 구현예에서, YFV 17D-204 유래 YF-VAX® 균주의 RNA 서열은 RNA 서열 SEQ ID NO. 2로 표시될 수 있다.
일부 구현예에서, 모체 YFV 바이러스 균주는, 상용화된 백신 Stamaril®에 사용되는 기준 YFV 균주인, YFV 17D-204 유래 Stamaril® 균주이다.
예시적인 구현예에서, YFV 17D-204 유래 Stamaril® 균주의 RNA 서열은 RNA 서열 SEQ ID NO. 3으로 표시될 수 있다.
예시적인 구현예에서, 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주는 SEQ ID NO. 2의 RNA 서열을 포함한다.
예시적인 구현예에서, 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주는 SEQ ID NO. 3의 RNA 서열을 포함한다.
예시적인 구현예에서, 1995년에 Dos Santos 등에 의해 이전에 개시된 바와 같은 YFV 17D-213 균주(Genbank 등록 번호 U17067)의 RNA 서열은 RNA 서열 SEQ ID NO. 4로 표시될 수 있고, 1995년에 Dos Santos 등에 의해 또한 이전에 개시된 바와 같은 YFV 17DD 균주(Genbank 등록 번호 U17066)의 RNA 서열은 RNA 서열 SEQ ID NO. 5로 표시될 수 있다.
예시적인 구현예에서, Asibi 균주(Genbank 등록 번호 KF769016)의 RNA 서열은 RNA 서열 SEQ ID NO. 6으로 표시될 수 있다.
일부 구현예에서, 생약독화 황열병 바이러스 균주는 마우스 치사량 50(MLD50) 시험에서 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주보다 신경독성이 적다.
일부 구현예에서, 적합한 마우스 치사량 50(MLD50) 시험은 (참조로 포함되는) WHO 기술 보고서 제872호(1998년)의 68 페이지에 개시된 프로토콜에 따라 수행된다.
본 발명의 범위 내에서, MLD50은 뇌내 접종된 마우스의 50%에서 치명적인 특정 뇌염을 일으키는 것으로 추정되는 바이러스 현탁액의 양이다.
일부 구현예에서, 재구성된 백신의 적절한 연속 희석은 인산염 버퍼, 0.75%의 혈청 알부민에서 수행된다.
예시적인 구현예에서, 4~6주령 마우스에게 즉석 백신 희석액을 마취하에 뇌내 주사한다. 최소 6마리 마우스로 구성된 그룹이 각각의 희석에 사용되고, 일련의 희석은 0~100% 범위에 걸친 접종 후 사망률을 초래할 것이다. 사망의 발생은 21일의 기간에 걸쳐 기록된다. 무관한 원인으로 사망하는 마우스는 사망률 계산의 분자와 분모 모두에서 제거된다. 21일차에 마비된 마우스는 살아있는 것으로 계산된다.
특정 구현예에서, 마우스 치사량 50(MLD50) 시험에서의 신경독성은 파라미터 log10 MLD50/mL로 측정될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주는 마우스 치사량 50(MLD50) 시험에서 4 이하, 3.5 이하, 3 이하, 또는 2.5 이하의 log10 MLD50/mL를 달성한다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주는 Vero 세포에서 성장하도록 적응되고, 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주보다 신경독성이 적고, 적어도 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주만큼 내장친화성이 약화된다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주는 Vero 세포에서 성장하도록 적응되고, 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주보다 신경독성이 적고, 적어도 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주만큼 내장친화성이 약화되고, 적어도 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주만큼 면역원성이 있다.
다양한 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 뉴클레오티드가 돌연변이된 RNA 서열 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5를 포함하는 생약독화 YFV 균주를 제공한다.
본 발명의 범위 내에서, 표현 "하나 이상의 뉴클레오티드"는 2, 3, 4, 5개 이상의 뉴클레오티드를 포괄하는 것이다.
다시 말해, 표현 "하나 이상의 뉴클레오티드"는 1개의 뉴클레오티드, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14개, 및 15개 이상의 뉴클레오티드를 포괄하는 것이다.
일부 구현예에서, 돌연변이는 뉴클레오티드 치환이다.
일부 다른 구현예에서, 돌연변이는 뉴클레오티드 삽입 및 뉴클레오티드 결실을 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 뉴클레오티드 치환은 침묵 치환이다. 대안적으로, 뉴클레오티드 치환은 아미노산 치환을 촉진할 수 있다.
일 구현예에서, RNA 서열 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5에서 2개의 뉴클레오티드가 돌연변이된다.
다른 구현예에서, RNA 서열 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5에서 3개의 뉴클레오티드가 돌연변이된다.
다른 구현예에서, RNA 서열 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5에서 4개의 뉴클레오티드가 돌연변이된다.
다른 구현예에서, RNA 서열 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5에서 5개의 뉴클레오티드가 돌연변이된다.
본 발명의 다른 양태는 또한, 적어도 2411번 위치, 3701번 위치, 또는 6496번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5로부터 선택되는 RNA 서열을 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 2411번 위치의 뉴클레오티드 및 3701번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5로부터 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 2411번 위치의 뉴클레오티드 및 6496번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5로부터 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 3701번 위치의 뉴클레오티드 및 6496번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5로부터 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 2411번 위치의 뉴클레오티드, 3701번 위치의 뉴클레오티드, 및 6496번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5로부터 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 2411번 위치의 뉴클레오티드 G(구아노신)가 뉴클레오티드 U(우리딘)로 치환된다.
특정 구현예에서, SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 3701번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환된다.
특정 구현예에서, SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 6496번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환된다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는 다음과 같은 특징을 갖는다.
- (i) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 2411번 위치의 뉴클레오티드 G(구아노신)가 뉴클레오티드 U(우리딘)로 치환되고,
- (ii) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 3701번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환됨.
일부 다른 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는 다음과 같은 특징을 갖는다.
- (i) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 2411번 위치의 뉴클레오티드 G(구아노신)가 뉴클레오티드 U(우리딘)로 치환되고,
- (ii) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 6496번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환됨.
일부 다른 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는 다음과 같은 특징을 갖는다.
- (i) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 3701번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환되고,
- (ii) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 6496번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환됨.
특정 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는 다음과 같은 특징을 갖는다.
- (i) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 2411번 위치의 뉴클레오티드 G(구아노신)가 뉴클레오티드 U(우리딘)로 치환되고,
- (ii) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 3701번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환되고,
- (iii) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 6496번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환됨.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 1408번 위치에 위치한 돌연변이를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 1408번 위치의 뉴클레오티드 및 2411번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5를 포함하는 군에서 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 1408번 위치의 뉴클레오티드 및 3701번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5를 포함하는 군에서 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 1408번 위치의 뉴클레오티드 및 6496번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5를 포함하는 군에서 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 1408번 위치의 뉴클레오티드, 2411번 위치의 뉴클레오티드, 및 3701번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5를 포함하는 군에서 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 1408번 위치의 뉴클레오티드, 2411번 위치의 뉴클레오티드, 및 6496번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5를 포함하는 군에서 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 1408번 위치의 뉴클레오티드, 3701번 위치의 뉴클레오티드, 및 6496번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5를 포함하는 군에서 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는, 적어도 1408번 위치의 뉴클레오티드, 2411번 위치의 뉴클레오티드, 3701번 위치의 뉴클레오티드, 및 6496번 위치의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5를 포함하는 군에서 선택되는 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 1408번 위치의 뉴클레오티드 A(아데닌)가 뉴클레오티드 U(우리딘)로 치환된다.
특정 구현예에서, 생약독화 YFV 균주는 다음과 같은 특징을 갖는다.
- (i) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 2411번 위치의 뉴클레오티드 G(구아노신)가 뉴클레오티드 U(우리딘)로 치환되고,
- (ii) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 3701번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환되고,
- (iii) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 6496번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신)가 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환되고,
- (iv) SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 1408번 위치의 뉴클레오티드 A(아데닌)가 뉴클레오티드 U(우리딘)로 치환됨.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주는 적어도 2411, 3701, 6496, 및 선택적으로 1408번 위치의 하나 이상의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 및 SEQ ID NO. 5로부터 선택되는 RNA 서열을 포함하고, 단 어떠한 뉴클레오티드도 (RNA 서열 SEQ ID NO. 6으로 표시될 수 있는) Asibi 유전자형으로 복귀되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다. 다시 말해, SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 뉴클레오티드가 Asibi 게놈(SEQ ID NO. 6)의 동일 위치의 뉴클레오티드와 다른 경우, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주의 RNA 서열의 이러한 뉴클레오티드가 Asibi 게놈(SEQ ID NO. 6)의 동일 위치의 뉴클레오티드가 되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다. Asibi 게놈의 동일 위치의 뉴클레오티드와는 다른 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 뉴클레오티드는 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5와 Asibi 서열(SEQ ID NO. 6) 간의 서열 정렬(Needleman and Wunsch, (1970))에 의해 쉽게 식별될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주는 적어도 2411, 3701, 6496, 및 선택적으로 1408번 위치의 하나 이상의 뉴클레오티드가 돌연변이된 SEQ ID NO. 2를 포함하는 RNA 서열을 포함하고, 단 SEQ ID NO. 2의 하기 위치의 뉴클레오티드가 Asibi 유전자형(SEQ ID NO. 6)으로 복귀되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다: 304, 370, 854, 883, 1127, 1140, 1431, 1482, 1491, 1572, 1750, 1819, 1870, 1887, 1946, 1965, 2112, 2193, 2219, 2356, 2687, 3371, 3613, 3817, 3860, 3925, 4007, 4013, 4022, 4054, 4056, 4289, 4387, 4505, 4507, 4612, 4864, 4873, 5153, 5194, 5362, 5431, 5473, 5926, 6023, 6448, 6876, 7171, 7496, 7571, 7580, 7642, 7701, 7945, 8008, 8629, 10142, 10285, 10312, 10338, 10367, 10418, 10550 및 10800.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주는 RNA 서열 SEQ ID NO. 7을 포함한다. 유리하게는, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주는 SEQ ID NO. 7과 제한된 수(예를 들어, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하)의 돌연변이가 상이한 RNA 서열을 포함한다. 유리하게는, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주는 SEQ ID NO. 7과 제한된 수(예를 들어, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하)의 돌연변이가 상이한 RNA 서열을 포함하고, 단 어떠한 뉴클레오티드도 Asibi 유전자형으로 복귀되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다. 예시적인 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주의 게놈 RNA 서열은 뉴클레오티드 서열 SEQ ID NO. 7로 이루어질 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주는 RNA 서열 SEQ ID NO. 8을 포함한다. 유리하게는, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주는 SEQ ID NO. 8과 제한된 수(예를 들어, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하)의 돌연변이가 상이한 RNA 서열을 포함한다. 유리하게는, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주는 SEQ ID NO. 8과 제한된 수(예를 들어, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하)의 돌연변이가 상이한 RNA 서열을 포함하고, 단 어떠한 뉴클레오티드도 Asibi 유전자형으로 복귀되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다. 예시적인 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주의 게놈 RNA 서열은 뉴클레오티드 서열 SEQ ID NO. 8로 이루어질 수 있다.
앞서 언급한 바와 같이, YFV 핵산은 다음과 같은 11종의 단백질을 인코딩한다.
- 전구체의 길이가 121 aa이고 성숙 단백질의 길이가 101 aa인 캡시드 단백질(C 단백질),
- 길이가 75 aa인 막 단백질(M 단백질)의 전구체인 164 aa 길이의 전막 단백질(prM 단백질),
- 493 aa 길이의 외피 단백질(E 단백질),
- 352 aa 길이의 비구조 단백질 1(NS1),
- 224 aa 길이의 비구조 단백질 2a(NS2a),
- 130 aa 길이의 비구조 단백질 2b(NS2b),
- 623 aa 길이의 비구조 단백질 3(NS3),
- 126 aa 길이의 비구조 단백질 4a(NS4a),
- 23 aa 길이의 비구조 펩티드 P2k,
- 250 aa 길이의 비구조 단백질 4b(NS4b),
- 905 aa 길이의 비구조 단백질 5(NS5).
일부 구현예에서, 생약독화 황열병 바이러스 균주는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 및/또는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 황열병 바이러스 균주는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이 및 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 황열병 바이러스 균주는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 및 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 황열병 바이러스 균주는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 및 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 황열병 바이러스 균주는 하기 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함한다.
i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 또는
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주는 하기 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함한다.
i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 및
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이.
일부 구현예에서, 핵산은 AAA에서 AAG로의 코돈 변화를 일으키는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이는 GUA에서 UUA, UUG, CUU, CUC, CUA, 또는 CUG로의 코돈 변화를 일으킨다. 일 구현예에서, 코돈 변화는 GUA에서 UUA로의 변화이다.
일부 구현예에서, 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이는 AUG에서 GUG, GUU, GUC, 또는 GUA로의 코돈 변화를 일으킨다. 일 구현예에서, 코돈 변화는 AUG에서 GUG로의 변화이다.
일부 구현예에서, 핵산은 GUA에서 GUU로의 코돈 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주는 하기 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함한다.
i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이;
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이; 및
iii) AAA에서 AAG로의 코돈 변화를 일으키는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주는 하기 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함한다.
i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이;
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이;
iii) AAA에서 AAG로의 코돈 변화를 일으키는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이; 및
iv) GUA에서 GUU로의 코돈 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이.
일부 구현예에서, 생약독화 황열병 바이러스 균주는 480번 위치에 돌연변이를 포함하는 외피 단백질을 포함한다. 특히, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주는 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 480번 위치의 돌연변이를 포함하는 외피 단백질을 포함한다.
일부 구현예에서, 생약독화 황열병 바이러스 균주는 SEQ ID NO. 15의 480번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 류신 잔기를 포함하는 외피 단백질을 포함한다. 특히, 상기 외피 단백질은 SEQ ID NO. 15의 서열과 적어도 90%, 95%, 98%, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
특히, 본 발명의 생약독화 황열병 바이러스 균주의 핵산에서, 어떠한 뉴클레오티드도 Asibi 유전자형(SEQ ID NO. 6)으로 복귀되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다. 예를 들어, 생약독화 황열병 바이러스 균주의 핵산에서, SEQ ID NO. 2의 하기 위치의 뉴클레오티드가 Asibi 유전자형(SEQ ID NO. 6)으로 복귀되는 방식의 돌연변이는 포함되지 않는다: 304, 370, 854, 883, 1127, 1140, 1431, 1482, 1491, 1572, 1750, 1819, 1870, 1887, 1946, 1965, 2112, 2193, 2219, 2356, 2687, 3371, 3613, 3817, 3860, 3925, 4007, 4013, 4022, 4054, 4056, 4289, 4387, 4505, 4507, 4612, 4864, 4873, 5153, 5194, 5362, 5431, 5473, 5926, 6023, 6448, 6876, 7171, 7496, 7571, 7580, 7642, 7701, 7945, 8008, 8629, 10142, 10285, 10312, 10338, 10367, 10418, 10550, 및 10800.
일부 구현예에서, 생약독화 황열병 바이러스 균주는 하기 단백질을 인코딩하는 핵산 분자를 포함한다.
(i) 480번 위치에 돌연변이를 포함하는 외피 단백질, 및
(ii) 65번 위치에 돌연변이를 포함하는 NS2a 단백질.
특히, 생약독화 황열병 바이러스 균주의 핵산 분자는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이 및/또는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주는 하기 단백질을 인코딩하는 핵산 분자를 포함한다.
(i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 480번 위치의 돌연변이를 포함하는 외피 단백질, 및
(ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 65번 위치의 돌연변이를 포함하는 NS2a 단백질.
특히, 핵산은 AAA에서 AAG로의 코돈 변화를 일으키는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이 및/또는 GUA에서 GUU로의 코돈 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함한다.
특히, 본 발명의 생약독화 황열병 바이러스 균주의 핵산에서, 어떠한 뉴클레오티드도 Asibi 유전자형(SEQ ID NO. 6)으로 복귀되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다. 예를 들어, 생약독화 황열병 바이러스 균주의 핵산에서, SEQ ID NO. 2의 하기 위치의 뉴클레오티드가 Asibi 유전자형(SEQ ID NO. 6)으로 복귀되는 방식의 돌연변이는 포함되지 않는다: 304, 370, 854, 883, 1127, 1140, 1431, 1482, 1491, 1572, 1750, 1819, 1870, 1887, 1946, 1965, 2112, 2193, 2219, 2356, 2687, 3371, 3613, 3817, 3860, 3925, 4007, 4013, 4022, 4054, 4056, 4289, 4387, 4505, 4507, 4612, 4864, 4873, 5153, 5194, 5362, 5431, 5473, 5926, 6023, 6448, 6876, 7171, 7496, 7571, 7580, 7642, 7701, 7945, 8008, 8629, 10142, 10285, 10312, 10338, 10367, 10418, 10550, 및 10800.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주는 하기 단백질을 인코딩하는 핵산 분자를 포함한다.
(i) SEQ ID NO. 15의 480번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 류신 잔기를 포함하는 외피 단백질, 및
(ii) SEQ ID NO. 16의 65번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 발린 잔기를 포함하는 NS2a 단백질.
특히, 상기 외피 단백질은 SEQ ID NO. 15의 서열과 적어도 90%, 95%, 98%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하고, 상기 NS2a 단백질은 SEQ ID NO. 16의 서열과 적어도 90%, 95%, 98%, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다.
본 발명의 생약독화 황열병 바이러스 균주의 핵산은 SEQ ID NO. 17의 57번 위치에 상응하는 비구조 단백질 4A(NS4a)를 코딩하는 핵산 내 위치의 G 뉴클레오티드 및/또는 SEQ ID NO. 18의 435번 위치에 상응하는 외피 단백질(E)을 코딩하는 핵산 내 위치의 U 뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 특히, 본 발명의 생약독화 황열병 바이러스 균주는 SEQ ID NO. 17의 서열과 적어도 90%, 95%, 98%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 비구조 단백질 4A(NS4a)를 코딩하는 핵산 및/또는 SEQ ID NO. 18의 서열과 적어도 90%, 95%, 98%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 외피 단백질(E)을 코딩하는 핵산을 포함하는 핵산 분자를 포함할 수 있다.
특히, 본 발명의 생약독화 황열병 바이러스 균주의 핵산에서, 어떠한 뉴클레오티드도 Asibi 유전자형(SEQ ID NO. 6)으로 복귀되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다. 예를 들어, 생약독화 황열병 바이러스 균주의 핵산에서, SEQ ID NO. 2의 하기 위치의 뉴클레오티드가 Asibi 유전자형(SEQ ID NO. 6)으로 복귀되는 방식의 돌연변이는 포함되지 않는다: 304, 370, 854, 883, 1127, 1140, 1431, 1482, 1491, 1572, 1750, 1819, 1870, 1887, 1946, 1965, 2112, 2193, 2219, 2356, 2687, 3371, 3613, 3817, 3860, 3925, 4007, 4013, 4022, 4054, 4056, 4289, 4387, 4505, 4507, 4612, 4864, 4873, 5153, 5194, 5362, 5431, 5473, 5926, 6023, 6448, 6876, 7171, 7496, 7571, 7580, 7642, 7701, 7945, 8008, 8629, 10142, 10285, 10312, 10338, 10367, 10418, 10550, 및 10800.
일부 구현예에서, 핵산은 전술한 바와 같은 본 발명에 따른 돌연변이를 포함하는, 17D 하위균주의 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 핵산은 전술한 바와 같은 본 발명에 따른 돌연변이를 포함하는, 17D-204 하위균주의 RNA 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 핵산은 전술한 바와 같은 본 발명에 따른 돌연변이를 포함하는 RNA 서열 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO.5를 포함한다.
예시적인 구현예에서, 핵산은 전술한 바와 같은 본 발명에 따른 돌연변이를 포함하는 RNA 서열 SEQ ID NO. 2를 포함한다.
아래의 실시예 섹션에서 나타나는 바와 같이, 상기 정의된 바와 같은 돌연변이를 이용함으로써, Vero 세포에서 성장하도록 적응되고, 모체 YFV 균주에 비해 약화된 독성, 예컨대 약화된 신경독성을 가지며, 백신으로서 또는 백신 조성물에 사용하기에 적합한 독성을 갖는 YFV 균주를 제공할 수 있다. 일 구현예에서, 상기 정의된 바와 같은 돌연변이를 이용함으로써, Vero 세포에서 성장하도록 적응되고, 모체 YFV 균주에 비해 신경독성이 적고, 적어도 모체 YFV 균주만큼 내장친화성이 약화된 YFV 균주를 제공할 수 있다. 일 구현예에서, 상기 정의된 바와 같은 돌연변이를 이용함으로써, Vero 세포에서 성장하도록 적응되고, 모체 YFV 균주에 비해 신경독성이 적고, 적어도 모체 YFV 균주만큼 내장친화성이 약화되고, 적어도 모체 YFV 균주만큼 면역원성이 있는 YFV 균주를 제공할 수 있다.
*
면역원성, 백신 및 제약 조성물
다른 양태에서, 본 발명은 또한, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 범위 내에서, 용어 "면역원성"은 항체-매개 및/또는 세포-매개 면역 및/또는 면역 기억을 촉진하는 조성물의 능력을 의미한다.
일부 구현예에서, 면역원성 조성물은 황열병 바이러스에 대한 중화 항체를 생성하기 위해 사용될 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 또한, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주 및 제약상 허용되는 비히클을 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 또한, 본 발명에 따른 생약독화 바이러스 균주를 포함하는 백신 조성물, 및/또는 본 발명에 따른 면역원성 조성물을 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 백신 조성물은 어떠한 애주번트도 포함하지 않을 수 있다.
본 발명의 범위 내에서, "애주번트"는 백신의 관련 면역 반응 및 후속 임상 효능을 향상시키기 위한 임의의 물질을 의미한다.
대안적으로, 백신 조성물은 하나 이상의 애주번트를 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 애주번트는 무기염, 에멀젼, 미생물 천연 또는 합성 유도체, 조합 애주번트, 사이토카인 유래 또는 보조 분자 유래의 애주번트, 미립자 제형 등을 포함할 수 있다. 애주번트의 제조 및 용도는 당업계에 잘 알려져 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 생약독화 YFV 균주 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 생약독화 YFV 균주 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 맥락에서, 표현 "제약상 허용되는 비히클"은, 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 생리학적 활성을 유지하면서 인간에게 투여하는 것이 생리학적으로 허용되는 비히클을 의미한다. 하나의 예시적인 제약상 허용되는 비히클은 생리식염수 버퍼이다. 기타 제약상 허용되는 비히클은 당업자에게 알려져 있으며, 예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (18th edition), ed. A. Gennaro, 1990, Mack Publishing Company, Easton, Pa]에 기재되어 있다. 본원에 기재된 바와 같은 면역원성 조성물은 생리학적 조건에 근접하는 데 필요한 제약상 허용되는 보조 물질, 예컨대 pH 조절제, 버퍼, 긴장성 조절제, 습윤제 등을 임의로 함유할 수 있다. 또한, 백신 조성물은, 예를 들어 희석제, 결합제, 안정화제, 및 보존제를 포함하는 제약상 허용되는 첨가제를 임의로 포함할 수 있다.
다양한 구현예에서, 면역원성 조성물의 pH는 5.5 내지 8, 예컨대 6.5 내지 7.5(예를 들어, 약 7)이다. 안정적인 pH는 버퍼를 사용하여 유지될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 면역원성 조성물은 버퍼를 포함한다. 면역원성 조성물은 인간에 대해 등장성일 수 있다. 면역원성 조성물은 또한, NaCl과 같은 하나 또는 여러 개의 추가 염을 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 담체의 제조 및 용도는 당업계에 잘 알려져 있다.
실제로, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주를 포함하는 면역원성 조성물 및/또는 백신 조성물 및/또는 제약 조성물은 해당 분야의 통상적이고 우수한 실시를 이용해 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 면역원성 조성물, 백신 조성물, 및/또는 제약 조성물은 하나 이상의 적합한 희석제 및/또는 부형제를 포함할 수 있다.
다양한 구현예에서, 제약 조성물, 면역원성 조성물, 및 백신 조성물은 통상적인 멸균 기술로 멸균될 수 있거나, 멸균 여과될 수 있다. 이렇게 생성된 수용액은 액체 형태로 포장 및 보관되거나 동결건조될 수 있으며, 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균 수성 담체와 함께 재구성된다. 예시적인 구현예에서, 제약 조성물, 면역원성 조성물, 및 백신 조성물은 WO 2009/109550에 기재된 바와 같은 프릴링(prilling) 공정을 통해 마이크로펠릿으로서 포장되고 보관된다. 일 구현예에서, 제약 조성물, 면역원성 조성물, 및/또는 백신 조성물은 동결건조되거나 분무동결 건조된다.
*
생약독화
YFV
균주를 획득하는 방법
본 발명의 다른 양태는 Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주를 획득하는 방법으로서,
- a) Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않고, 선택적으로 계란에서 성장하도록 적응된 모체 생약독화 황열병 바이러스 균주의 바이러스 게놈 RNA를 정제하는 단계;
- b) 단계 a)에서 정제된 바이러스 게놈 RNA로 Vero 세포를 형질감염시켜 형질감염된 Vero 세포를 획득하는 단계;
- c) 단계 b)에서 획득한 형질감염된 Vero 세포를 배양 배지에서 성장시켜 제1 황열병 바이러스 개체군을 획득하고 추가로 회수하는 단계;
- d) 단계 c)의 마지막에 획득한 회수된 제1 황열병 바이러스 개체군을 새로운 Vero 세포에서 2회 이상 증폭하여 제2 황열병 바이러스 개체군을 획득하는 단계;
- e) 단계 d)에서 획득한 제2 황열병 바이러스 개체군을 Vero 세포에서 2회 이상의 연속 플라크 정제에 의해 클로닝하여 복수의 황열병 바이러스 클론을 획득하는 단계;
- f) 단계 e)의 마지막에 획득한 회수된 황열병 바이러스 클론 각각을 개별적으로 새로운 Vero 세포에서 2회 이상 증폭하여 복수의 황열병 바이러스 균주를 획득하는 단계; 및
- g) 단계 f)에서 회수된 상기 복수의 황열병 바이러스 균주로부터, 마우스 치사량 50(MLD50) 시험에서 모체 생약독화 황열병 바이러스 균주보다 신경독성이 적은 하나 이상의 생약독화 황열병 바이러스 균주를 선별하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 상기 본 발명의 방법의 단계 d)는 2, 3, 4, 5, 6회 이상 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 본 발명의 방법의 단계 e)의 클로닝은 Vero 세포에서 2, 3, 4, 5, 6회 이상의 연속 플라크 정제에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 본 발명의 방법의 단계 f)는 2, 3, 4, 5, 6회 이상 수행된다.
본 발명의 다른 양태는 Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주를 획득하는 방법으로서,
- a) Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않고, 선택적으로 계란에서 성장하도록 적응된 모체 생약독화 황열병 바이러스 균주의 바이러스 게놈 RNA를 정제하는 단계;
- b) 단계 a)에서 정제된 바이러스 게놈 RNA로 Vero 세포를 형질감염시켜 형질감염된 Vero 세포를 획득하는 단계;
- c) 단계 b)에서 획득한 형질감염된 Vero 세포를 배양 배지에서 성장시켜 제1 황열병 바이러스 개체군을 획득하고 추가로 회수하는 단계;
- d) 단계 c)의 마지막에 획득한 회수된 제1 황열병 바이러스 개체군을 새로운 Vero 세포에서 2회 이상 증폭하여 제2 황열병 바이러스 개체군을 획득하는 단계;
- e) 단계 d)에서 획득한 제2 황열병 바이러스 개체군을 Vero 세포에서 2회 이상의 연속 플라크 정제에 의해 클로닝하여 복수의 황열병 바이러스 클론을 획득하는 단계;
- f) 단계 e)의 마지막에 획득한 회수된 황열병 바이러스 클론 각각을 개별적으로 새로운 Vero 세포에서 2회 이상 증폭하여 복수의 황열병 바이러스 균주를 획득하는 단계; 및
- g) 단계 f)에서 회수된 상기 복수의 황열병 바이러스 균주로부터,
i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 또는
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이
를 포함하는 핵산을 포함하는 하나 이상의 생약독화 황열병 바이러스 균주를 선별하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 이러한 선별은 당업계에 잘 알려진 시퀀싱 방법으로 용이하게 수행된다.
일부 구현예에서, 단계 g)는 하기 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함하는 하나 이상의 생약독화 황열병 바이러스 균주를 선별하는 단계를 포함할 수 있다.
i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 및
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이.
일부 구현예에서, 단계 g)는 AAA에서 AAG로의 코돈 변화를 일으키는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함하는 핵산을 포함하는 전술한 바와 같은 하나 이상의 생약독화 황열병 바이러스 균주를 선별하는 단계를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단계 g)는 GUA에서 GUU로의 코돈 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함하는 핵산을 포함하는 전술한 바와 같은 하나 이상의 생약독화 황열병 바이러스 균주를 선별하는 단계를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단계 g)는 하기 돌연변이를 포함하는 핵산을 포함하는 하나 이상의 생약독화 황열병 바이러스 균주를 선별하는 단계를 포함할 수 있다.
i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이,
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이,
iii) AAA에서 AAG로의 코돈 변화를 일으키는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 및/또는
iv) GUA에서 GUU로의 코돈 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이.
일 구현예에서, 단계 a)의 모체 생약독화 황열병 바이러스 균주는 황열병 17D-204 하위균주와 같은 황열병 17D 하위균주이다.
실제로, Vero 세포는 ATCC와 같은 세포 기탁기관에서 입수할 수 있다. 무혈청 배지를 사용하는 방법을 비롯하여, 시험관내 세포 배양에서 Vero 세포를 성장시키는 데 적합한 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다(Kolell K. et al. 2007). 일 구현예에서, Vero 세포는 바이러스 배양 전에 무혈청 배지에서 성장하도록 적응된다.
일부 구현예에서, Vero 세포를 성장시키는 데 사용되는 배지는 무혈청이고, 선택적으로 인간 또는 동물 유래 물질을 함유하지 않는다.
본 발명의 범위 내에서, "인간 또는 동물 유래 물질"이란 표현은 인간 또는 비인간 동물에서 유래하는 단백질, 지질, 당단백질, 지단백질, 당지질, 단당류, 또는 다당류와 같은 물질(예: 인간 또는 비인간 동물로부터 얻은(예를 들어, 추출된) 성장인자, 호르몬)을 의미한다. 재조합 분자는 인간 또는 동물 유래 물질로 간주되지 않는다. 이러한 무혈청 배지 및/또는 인간 또는 동물 유래 물질이 없는 배지는 공급업체 카탈로그(예를 들어, THERMOFISHER SCIENTIFIC® 카탈로그)에서 쉽게 찾을 수 있다.
일부 구현예에서, Vero 세포를 성장시키는 데 사용되는 배양 배지에는 항생제도 없다.
일부 구현예에서, Vero 세포를 성장시키는 데 사용되는 배양 배지는 박테리아, 효모, 및/또는 식물에서 유래하는 하나 이상의 추출물을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않은 모체 생약독화 황열병 바이러스 균주의 게놈은 게놈 RNA를 인코딩하는 cDNA의 형태일 수 있다.
특정 구현예에서, cDNA는, 예를 들어 플라스미드와 같은 적합한 벡터에 의해 운반된다.
일부 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 돌연변이(들)가 존재하는 RNA 서열 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5를 포함하는 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다.
일부 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 돌연변이(들)에 상응하는 돌연변이가 존재하는 서열 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5에 상응하는 cDNA 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다.
다른 양태에서, 본 발명에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주는 본 발명에 기재된 돌연변이를 황열병 바이러스의 게놈 서열에 도입하기 위해 상기 게놈 서열을 돌연변이시켜 획득된다. 일부 구현예에서, 황열병 17D 하위균주의 게놈 서열은 본 발명에 기재된 돌연변이를 상기 게놈 서열에 도입하기 위해 돌연변이될 수 있다. 일부 구현예에서, SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5의 RNA 서열 또는 상응하는 cDNA 서열을 포함하는 핵산은 본 발명에 기재된 돌연변이를 도입하기 위해 돌연변이될 수 있다. 돌연변이는, 임의의 적합한 유전자 편집 기술의 사용을 비롯해 당업자에게 잘 알려진 방법을 통한 부위-특이적 돌연변이 유발에 의해 게놈 서열에 도입될 수 있다. 본 발명에 기재된 돌연변이가 도입되는 게놈 서열은 황열병 바이러스의 게놈 RNA를 인코딩하는 cDNA, 예컨대 황열병 17D 하위균주의 게놈 RNA를 인코딩하는 cDNA, 예를 들어 SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, 또는 SEQ ID NO. 5를 인코딩하는 cDNA일 수 있다. 일부 구현예에서, cDNA는 적합한 플라스미드에 의해 운반된다. 황열병 바이러스의 게놈 서열에 도입될 수 있는 본 발명에 기재된 돌연변이는 게놈 서열의 2411번 위치, 3701번 위치, 또는 6496번 위치의 뉴클레오티드의 돌연변이, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 이러한 돌연변이는 뉴클레오티드 U(우리딘)로 치환되는 게놈 서열의 2411번 위치의 뉴클레오티드 G(구아노신), 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환되는 게놈 서열의 3701번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신), 또는 뉴클레오티드 G(구아노신)로 치환되는 게놈 서열의 6496번 위치의 뉴클레오티드 A(아데노신), 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 돌연변이가 게놈 서열의 1408번 위치에 도입된다. 일부 구현예에서, 이러한 추가 돌연변이는 뉴클레오티드 U(우리딘)로 치환되는 게놈 서열의 1408번 위치의 뉴클레오티드 A(아데닌)이다. 일부 구현예에서, 다른 돌연변이가 황열병 바이러스의 게놈 서열에 도입될 수 있고, 단 어떠한 뉴클레오티드도 Asibi 유전자형으로 복귀되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다. 다른 양태에서, 황열병 바이러스의 게놈 서열에 도입될 수 있는 본 발명에 기재된 돌연변이는, 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 또는 AAA에서 AAG로의 코돈 변화를 일으키는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이로부터 선택된다. 일부 구현예에서, GUA에서 GUU로의 코돈 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈에 추가 돌연변이가 도입된다. 일부 구현예에서, 다른 돌연변이가 황열병 바이러스의 게놈 서열에 도입될 수 있고, 단 어떠한 뉴클레오티드도 Asibi 유전자형으로 복귀되는 방식으로 돌연변이되지는 않는다. 특히, 황열병 바이러스의 게놈 서열에 도입될 수 있는 본 발명에 기재된 돌연변이는, 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 및 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이이다.
다른 양태에서, 본 발명은 또한, 본 발명에 따른 방법에 의해 획득 가능한 생약독화 황열병 바이러스 균주에 관한 것이다.
본 발명에 따른 방법에 의해 획득된 생약독화 황열병 바이러스 균주가 또한 본원에 개시된다.
*
기타 방법 및 용도
본 발명은 또한, YFV 감염에 대한 면역을 필요로 하는 개체를 면역화하는 방법으로서, 본 발명에 따른 백신 조성물을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 범위 내에서, "~을 필요로 하는 개체"란 표현은 YFV에 감염될 위험이 있는 개체를 의미하고자 하는 것이다.
본 발명의 다른 양태는 또한, 백신의 제조를 위한 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주의 용도에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 또한, 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주의 pMSL, MSL, 또는 WSL로서의 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 또한, 백신 제조 공정에 있어서 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주의 pMSL, MSL, 또는 WSL로서의 용도에 관한 것이다.
다른 양태에서, 본 발명은 백신의 제조에 사용하기 위한 본 발명에 따른 생약독화 YFV 균주에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 양태는 또한, YFV 감염의 예방에 사용하기 위한 본 발명에 따른 백신 조성물에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 개체의 YFV 감염을 예방하는 방법으로서, 본 발명에 따른 생약독화 YFV, 면역원성 조성물, 제약 조성물, 또는 백신 조성물의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 개체에서 황열병 바이러스에 대한 중화 항체를 생성하는 방법으로서, 본 발명에 따른 생약독화 YFV, 면역원성 조성물, 제약 조성물, 또는 백신 조성물의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 YFV 감염 예방용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 생약독화 바이러스의 용도에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 YFV 감염의 예방에 사용하기 위한 본 발명에 따른 생약독화 바이러스에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 YFV 감염 예방용 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 용도에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 YFV 감염 예방용 백신 조성물을 제조하기 위한 본 발명에 따른 면역원성 조성물의 용도에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 YFV 감염의 예방에 사용하기 위한 본 발명에 따른 면역원성 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 백신 조성물 및 면역원성 조성물은 이를 필요로 하는 개체에게 임의의 적합한 투여 경로로 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 면역원성 조성물 또는 백신은 임의의 적합한 경로를 통해, 예컨대 점막 투여(예: 비강내 또는 설하), 비경구 투여(예: 근육내, 피하, 경피, 또는 피내 경로), 또는 경구 투여에 의해 투여될 수 있다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 본 발명의 백신은 의도된 투여 경로에 적합하도록 적절히 제형화된다. 예시적인 구현예에서, 본 발명의 조성물은 근육내 또는 피하로 투여된다.
본 발명에 따른 백신은 다회 용량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 백신은 1회, 2회, 또는 3회 용량으로 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 백신은 단회 용량으로 투여된다.
본 발명에 따른 백신은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있는 양으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 백신 용량은 4~6 log10 CCID50이다.
실시예
실시예
1:
Vero
세포에서의 적응에 의한
생약독화
YFV
균주의 제조(예비마스터 시드 로트(pMSL))
1.1/ 방법의 선택 - 원칙
예비마스터 시드 로트(pMSL)에 대한 전반적인 전략은 도 1에 표시되어 있다.
YF-VAX® 및 Stamaril® 백신은 모두 비클로닝 YF17D-204 균주 제조로부터 개발되었고, 플라크 크기의 표현형으로 시각화시 바이러스의 이종 개체군을 포함한다. 또한, 두 백신은 모두 계란에서 생산되었다.
Vero 세포에서 성장하도록 적응된 균질의 잘 정의된 바이러스 균주를 생성하기 위해, 또한 최종 pMSL에서의 무균성 및 외래성 인자의 부재를 보장하기 위해:
- (1) YF-VAX® 및 Stamaril® 바이러스의 바이러스 게놈 RNA를 정제하고;
- (2) 이어서, Vero 세포에 형질감염시켜 황열병 바이러스를 회수한 후, 이 세포 기질에서 성장하도록 바이러스를 적응시키기 위해 Vero 세포에서 2회 증폭하고;
- (3) 이어서, 2회의 플라크 정제 사이클에 의해 바이러스를 클로닝하였다. 이를 위해, 바이러스 제제를 Vero 세포 감염을 위해 희석하고, 잘 분리된 바이러스 플라크를 얻기 위해 반고체 오버레이 아래에서 성장시켰다. 각각의 형질감염에 대해, 각각 단일 바이러스 개체군에 해당하는 2개의 개별 플라크를 오버레이를 통해 선택하여 희석하고 두 번째 플라크 정제 사이클에 사용하여 바이러스 클론을 생성하고;
- (4) 이어서, 이들 클론을 증폭하여 pMSL을 구성하기에 충분한 바이러스 원액을 획득하였다.
pMSL 제조에 사용된 모든 배지 및 용액에는 동물 성분 및 인간 성분이 없었다.
1.2/ 방법
1.2.1/ YF-VAX® 게놈 cDNA로부터의 시험관내 전사
YF-VAX®(WO 2014/016360에 개시된 바와 같은 플라스미드 pJSY2374.5)로부터의 YFV의 게놈 cDNA의 시험관내 전사를 공급업체의 권장 사항에 따라 mMessage mMachineTM SP6 키트(AMBION®, 참조 번호 AM1340)로 수행하였다. 플라스미드 pJSY2374.5로부터, 2세트의 시험관내 전사를 동시에 수행하였다.
간단히 말해서, 실온에서 해동한 후, 10 μg의 플라스미드를 제한 효소 NruI(30 U/10 μg)로 37 ± 2℃에서 2시간 동안 분해하여 선형화하였다. 이어서, 효소를 60℃에서 20분 동안 인큐베이팅하여 비활성화시켰다. 플라스미드의 선형화는 0.5%의 아가로스 겔에서 전기영동에 의해 확인되었다. 키트의 반응 버퍼, 리보뉴클레오티드(ATP, CTP, UTP, 및 GTP와 7-메틸-GTP의 혼합물), 효소, 및 1 μg의 플라스미드를 포함하는 40 μL의 반응 혼합물을 제조하였다. 생성된 혼합물을 37 ± 2℃에서 2시간 동안 인큐베이팅하였다.
1.2.2/ RNA 정제
a)
Stamaril
® 백신 작업 시드
로트로부터
2세트의 바이러스 RNA 정제를 동시에 수행하였다.
Stamaril® 백신(로트 # FA238667, 감염 역가 6.38 log10 PFU/바이알)의 작업 시드 로트의 4개의 바이알을 각각 RNeasy® 키트(QIAGEN®)의 용해 버퍼 200 μl에 현탁시킨 후 취합했다. 이어서, RNA를 페놀/클로로포름/이소아밀 알코올(125:24:1; pH 4.5)로 2회 연속 추출하여 정제하였다.
2 mL의 Phase Lock Gel Heavy 튜브(5PRIME®)를 11,000 x g로 30초 동안 원심분리하였다. 750 μL의 RNA/용해 버퍼 혼합물을 각각의 튜브에 도입하였다. 이어서 동일 부피(750 μl)의 페놀/클로로포름/IAA 용액을 각각의 튜브에 첨가하였다. 유기상과 수상을 격렬하게 혼합하여 균질한 일시적 현탁액을 형성한 후, 튜브를 11,000 x g로 5분 동안 원심분리하여 상들을 분리하였다. 이어서, 상층의 상(수상)을 회수하였다. 새로운 Phase Lock Gel 2 mL 튜브에서 작업을 다시 시작하였다. 이어서, 클로로포름과 이소아밀 알코올(24:1)의 혼합물로 작업을 다시 수행하여 미량의 페놀을 모두 제거하였다. 이어서, RNA를 농축시키고, 공급업체의 권장 사항에 따라 RNeasy® 키트(QIAGEN®)로 실리카 컬럼에서 정제하여 미량의 유기 용매를 모두 제거하였다. 이어서, 정제 RNA를 뉴클레아제가 없는 물에 용리시켰다.
b)
YF
-VAX® 게놈 cDNA의
시험관내
전사로부터
시험관내 전사(상기 참조)에 의해 얻은 RNA를 오염시키는 플라스미드 DNA를 37 ± 2℃에서 15분 동안 4 U의 DNase로 제거하였다. 이어서, SP6 중합효소를 70℃에서 10분 동안 인큐베이팅하여 비활성화시켰다.
시험관내 전사에 의해 얻은 RNA를, RNase가 없는 물 60 μl 및 RNeasy® 키트(QIAGEN®)의 용해 버퍼 350 μl와 혼합하였다. 이어서, RNA를 페놀/클로로포름/이소아밀 알코올(125:24:1; pH 4.5)로 2회 연속 추출하여 정제하였다. 이를 위해, Phase Lock Gel Heavy 1.5 mL 튜브를 11,000 x g로 30초 동안 원심분리하였다. 750 μL의 RNA/용해 버퍼 혼합물을 각각의 튜브에 도입하였다. 이어서 동일 부피(750 μl)의 페놀/클로로포름/이소아밀 알코올 용액을 각각의 튜브에 첨가하였다. 유기상과 수상을 격렬하게 혼합하여 균질한 일시적 현탁액을 형성한 후, 상들을 분리하기 위해 11,000 x g로 5분 동안 튜브를 원심분리하였다. 이어서, 상층의 상(수상)을 회수하였다. 새로운 Phase Lock Gel 1.5 mL 튜브에서 작업을 다시 시작하였다. 이어서, 클로로포름과 이소아밀 알코올(24:1)의 혼합물로 작업을 다시 수행하여 미량의 페놀을 모두 제거하였다. 이어서, RNA를 공급업체의 권장 사항에 따라 RNeasy® 키트(QIAGEN®)로 실리카 컬럼에서 정제하였다. 이어서, 정제 RNA를 뉴클레아제가 없는 물로 용리시켰다.
1.2.3/ 형질감염
각각의 RNA 정제에 대해 2세트의 형질감염을 수행하였다.
a) RNA/
Lipofectamine
TM
혼합물의 제조
10 또는 15 μL의 LipofectamineTM 2000 CD(LIFE TECHNOLOGIES®)를 1 mL의 OptiPro SFM 배지(LIFE TECHNOLOGIES®)와 혼합하고 실온에서 5분 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 약 10 log10 Geq(문헌[Mantel et al. (2008)]에 기재된 바와 같이 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 게놈 당량 역가)의 정제 RNA를 첨가하였다. 이들 혼합물을 실온에서 10분 동안 인큐베이팅하였다.
b)
Vero
세포 제조
형질감염 전에, 6-웰 플레이트(웰당 3 mL의 VP-SFM(THERMOFISHER SCIENTIFIC) 중의 9.105개 세포)에서 이전에 시딩된 Sanofi Pasteur GMP 은행의 무혈청 Vero 세포를 OptiPro SFM 배지의 웰당 2 mL로 세정하였다.
c) 형질감염 반응
6-웰 플레이트에서, 세포에서 세정 배지를 제거한 후, RNA를 함유한 형질감염 혼합물을 각각의 제제에 대해 2개의 웰(1 mL/웰)에 넣었다. 웰을 RNA를 함유하지 않은 OptiPro SFM/LipofectamineTM과 접촉시키고, 마지막 웰은 OptiPro SFM 배지에서만 세포 대조군으로서 보관하였다. 2개의 플레이트 즉, 10 μl의 LipofectamineTM을 함유한 혼합물이 있는 플레이트와 15 μl의 LipofectamineTM을 함유한 혼합물이 있는 플레이트를 동시에 준비하였다. LipofectamineTM과 RNA를 함유한 혼합물은 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 4시간 동안 Vero 세포와 접촉된 상태로 두었고, 이어서 2 mL의 예열된 VP-SFM 배지를 각각의 웰에 첨가하였다. 6-웰 플레이트를 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 16시간 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 배지를 교체하고 플레이트를 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 다시 인큐베이팅하였다. 세포변성 효과(세포 용해)가 나타날 때, 그리고 (문헌[Mantel et al. (2008)]에 기재된 바와 같이) 배양 상청액으로부터 YF-NS5 qRT-PCR로 측정된 게놈 역가가 8.0 log10 Geq/mL보다 클 때 형질감염 상청액을 회수하였다. D5 및 D8에, 회수 가능하려면 배양 시간이 더 필요한 경우, 배양 배지를 새로운 배지로 교체하였다. 회수된 상청액을 분액으로 나누었다.
1.2.4/ 바이러스의 증폭
a) 증폭
n°1
(바이러스
계대
n°2
)
바이러스 증폭 n°1의 2일 전에, 5 mL의 VP-SFM 배지가 들어있는 25 cm2의 플라스크에 2.105개의 Vero 세포를 시딩하였다. 이어서, 2의 게놈 다중도(m.o.g)(즉, qRT-PCR에 의해 얻은 RNA 농도로부터 추정된, 세포당 2 Geq)를 얻기 위해, 형질감염으로부터 얻은 바이러스 현탁액을 VP-SFM 배지에 희석하였다. 이전에 시딩된 Vero 세포의 배양 배지를 제거하고, 세포를 1 mL의 희석된 바이러스 현탁액 또는 1 mL의 VP-SFM 배지 단독(세포 대조군)과 접촉시켰다. 플라스크를 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 2시간 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 바이러스 접종물을 제거하고 10 mL의 VP-SFM 배지로 교체하고, 세포를 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 2일 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 배양 배지를 37 ± 2℃로 예열된 새로운 VP-SFM 배지로 교체하고, 플라스크를 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 2 내지 3일 동안 다시 인큐베이팅하였다. 총 4 내지 5일간의 인큐베이션 후, 바이러스를 함유한 배양 상청액을 회수하였다. 바이러스 현탁액을 4℃에서 1200 rpm으로 10분 동안 원심분리하여 맑게 한 후 분액으로 분배하였다. 이 바이러스 현탁액 140 μl를 사용하여 QiaAmp 바이러스 미니 키트(QIAGEN®; 공급업체의 프로토콜에 따름)로 전체 RNA를 추출하고, (문헌[Mantel et al. (2008)]에 기재된 바와 같이) YF-NS5 qRT-PCR로 바이러스 RNA를 정량화하였다.
두 번째 증폭 단계를 같은 날에 수행할 경우 이를 위해 바이러스 RNA 역가에 따라 하나 이상의 분액을 보관하고, 나머지는 10%의 최종 소르비톨의 존재하에 -70℃ 이하에서 동결시켰다.
b) 증폭
n°2
(바이러스
계대
n°3
)
바이러스 증폭 n°2의 2일 전에, 20 mL의 VP-SFM 배지가 들어있는 75 cm2의 플라스크에 5.105개의 Vero 세포를 시딩하였다. 이어서, 첫 번째 증폭으로부터 얻은 바이러스 현탁액을 VP-SFM 배지에 희석하여 2의 m.o.g 비(즉, qRT-PCR에 의해 얻은 RNA 농도로부터 추정된, 세포당 Geq)로 Vero 세포를 감염시켰다.
증폭 n°2의 다른 단계들을 증폭 n°1(상기 섹션 a) 참조)에 대해 상술된 바와 같이 수행하였다.
c) 바이러스
클로닝
- 플레이트 정제(바이러스
계대
4 및 5)
형질감염 및 증폭 후 얻은 바이러스 현탁액당 2개의 6-웰 플레이트가 필요했다.
증폭 n°2 후에 얻은 바이러스 현탁액의 분액을 희석하여 약 2.0 log10 PFU/mL의 현탁액 및 1.7 log10 PFU/mL의 현탁액을 얻었다. 세포의 무결성과 오염의 부재를 확인하기 위해, 6-웰 플레이트(웰당 3 mL의 VP-SFM 중의 9.105개 세포)에서 이전에 시딩된 Vero 세포를 관찰한 후, 배양 배지를 제거하였다. 각각의 희석에 대해, 플레이트의 5개 웰은 각각의 웰 내의 500 μL의 희석된 바이러스(2.0 log10 PFU/mL 또는 1.7 log10 PFU/mL 희석)로 감염되었고, 세포 대조군 웰은 500 μL의 VP-SFM만 포함하였다. 플레이트를 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 2시간 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 접종물을 제거하고 4 mL의 오버레이 혼합물, 즉 42℃로 예열된 VP-SFM 2X 용액으로 교체하고, 2%의 아가로스 용액과 부피 대 부피로 즉석 혼합하였다. 오버레이 혼합물의 고체화 후, 플레이트를 반대 위치로(덮개를 아래로 하여) 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 3 내지 6일 동안 인큐베이팅하였다. 플레이트는 매일 관찰되었다. 세포변성 효과가 나타나면, 첫 번째와 동일하지만 0.008%의 중성 레드를 추가로 함유한 두 번째 오버레이 혼합물을 각각의 웰에 첨가하고(2 mL), 플레이트를 반대 위치로 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 1 내지 2일 동안 인큐베이팅하였다.
바이러스 입자(클론)에 의한 세포의 감염은 바로 주변 세포에 국한된 이러한 조건에 남아 국소 용해를 일으켜, 다른 적색의 세포 단층 위에 바이러스가 풍부한 흰 반점(용해 플라크)을 생성하였다. 각각의 증폭된 바이러스 희석에 대해, 마이크로피펫과 1000 μL 콘을 이용하여 커버 배지를 통해 2종의 클론을 회수하였다. 이렇게 얻은 바이러스 클론을 1 mL의 VP-SFM 배지에 현탁시킨 후 격렬하게 혼합하였다.
이들 현탁액 각각을 1:2에서 1:200,000까지 연속 단계로 희석하여 두 번째 일련의 플레이트 정제를 수행하였다. 이 두 번째 클로닝 실행의 종료시, 플레이트당 2종의 클론을 다시 회수하였다. 계통당 최대 16종의 클론을 획득하였다(즉, Stamaril® 모균주로부터 16종의 클론 및 YF-VAX® 모균주로부터 16종의 클론).
d) 증폭
n°3
(바이러스
계대
n°6
)
각각의 클론(최대 32종)에 대해, 아가로스에 함유된 바이러스 물질의 재현탁에 의해 얻은 바이러스 현탁액을 VP-SFM에 (회수된 플라크의 크기에 따라) 1/4 또는 1/2로 희석하였다.
증폭 n°3을 증폭 n°1(상기 섹션 a) 참조)과 동일한 프로토콜에 따라 수행하였다. 증폭된 바이러스는, 세포변성 효과가 나타나고 qRT-PCR에서의 게놈 역가가 8.0 log10 Geq/mL를 초과할 때 회수되었다.
총 4 내지 5일간의 인큐베이션 후, 바이러스를 함유한 배양 상청액을 회수하고 분액으로 나누었다. 이 바이러스 현탁액 140 μL를 사용하여, 공급업체의 프로토콜에 따라 QiaAmp 바이러스 미니 키트(QIAGEN®)로 전체 RNA를 추출하고, (문헌[Mantel et al. (2008)]에 기재된 바와 같이) YF-NS5 qRT-PCR로 RNA를 정량화하였다. 바이러스 RNA 역가에 따라 하나 이상의 분액을 다음 단계의 증폭을 수행하기 위해 보관하고, 나머지는 10%의 최종 소르비톨의 존재하에 -70℃ 이하에서 동결시켰다.
e) 증폭
n°4
(바이러스
계대
n°7
)
증폭 n°3(상기 섹션 d) 참조)으로부터 얻은 바이러스 현탁액을 VP-SFM 배지에 희석하여, 2의 m.o.g 비로 이전에 시딩된 Vero 세포를 감염시키고, 증폭 n°2(상기 섹션 b) 참조)와 동일한 프로토콜에 따라 추가로 처리하였다.
증폭된 바이러스는, 세포변성 효과가 나타나고 qRT-PCR에서의 게놈 역가가 8.0 log10 Geq/mL를 초과할 때 회수되었다. 총 4 내지 5일간의 인큐베이션 후, 상청액을 회수하고, 바이러스 현탁액을 4℃에서 1200 rpm으로 10분 동안 원심분리하여 맑게 한 후, 10%의 최종 소르비톨의 존재하에 -70℃ 이하에서 동결 분액으로 나누었다.
이렇게 얻은 바이러스 현탁액을 사용하여 바이러스 게놈의 감염 적정 및 시퀀싱을 수행하였다.
이들 데이터로부터, 각각의 계통에서 3종의 균주(즉, Stamaril® 모균주로부터 3종의 TV2212, TV2232, 및 TV2241 균주, 및 YF-VAX® 모균주로부터 3종의 TV3111, TV3112, 및 TV4221 균주)를 다음 기준에 따라 선별하였다: 6 log10 CCID50/mL 이상의 감염 역가 및 원래의 Asibi 균주 서열로의 복귀를 나타내지 않는 게놈 서열.
바이러스 현탁액 감염 적정은 Vero 세포에서 CCID50 방법을 이용해 수행되었다. 간단히 말해서, 바이러스 현탁액을 96-딥 웰 플레이트에서 -4.6 log10에서 시작해서 -8 log10까지 IMDM(THERMOFISHER SCIENTIFIC) + 4% FCS에 연속적으로 4배 희석하였다. 대조군 바이러스(Vero 세포에서 한 번 증폭된 Stamaril® 바이러스, 배치 MLE-JPO-000089)는 각각의 시험에서 양성 기준으로서 포함되었다. 검정하기 3일 전에 바닥이 평평한 96-웰 플레이트에서 시딩된 Vero 세포가 들어있는 10개의 웰(8000개 세포/웰)에 각각의 바이러스 희석액 100 마이크로리터를 첨가하였다. +37℃, 5% CO2에서 4일간의 인큐베이션 후, 상청액을 버리고, 세포를 150 μL의 85% 아세톤으로 -20±3℃에서 15분 동안 고정시키고 나서, 2.5%의 밀크 PBS-Tween 버퍼 용액으로 포화시킨 후, 2 μg/mL(희석 1/2,000)의 팬-플라비바이러스 E-특이적 4G2 마우스 단클론 항체(RD BIOTECH®, 로트 #130726-4G2)로 면역염색하였다. 이어서, 4G2 항체로 염색된 감염 병소가, 1/1000으로 희석된 염소 항마우스 IgG 알칼리-포스파타제 접합 항체(CLINISCIENCES® SA, 참조 #1030-04, 로트 #A7013-Z145)와의 인큐베이션에 이어 알칼리-포스파타제 기질(BCIP/NBT, SIGMA-ALDRICH®, 참조 # B5655, 로트 #SLBN0689V 및 레바미졸, SIGMA-ALDRICH®, 참조 # L9756, 로트 #091M1227V)와의 인큐베이션 후 드러났다.
양성 웰, 즉 검은색으로 염색된 적어도 하나의 플라크를 포함하는 웰을 계수하고, 최소 제곱 회귀법을 이용해 최종 역가를 계산하였다.
f) 증폭
n°5
(바이러스
계대
n°8
) - 예비마스터
후보백신
(
pMSL
)
증폭 n°4(상기 섹션 e) 참조)로부터 선택된 6종의 균주 각각으로부터 얻은 바이러스 현탁액을 VP-SFM 배지에 희석하여 0.01의 m.o.i로 Vero 세포를 감염시켰다.
바이러스 증폭 n°5의 2일 전에, 30 mL의 VP-SFM 배지가 들어있는 175 cm2의 플라스크에 12.106개의 Vero 세포를 시딩하였다. 앞서 수행된 바와 같이, 배양 배지를 제거하고 12 mL의 희석된 바이러스 현탁액 또는 VP-SFM 단독(대조군 세포)으로 교체하였다. 플라스크를 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 2시간 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 바이러스 접종물을 제거하고 50 mL의 VP-SFM 배지로 교체하였다. 플라스크를 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 2일 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 배양 배지를 37 ± 2℃로 예열된 새로운 VP-SFM 배지로 교체하고, 플라스크를 37 ± 2℃, 5 ± 2% CO2에서 1 내지 3일 동안 다시 인큐베이팅하였다. 증폭된 바이러스는, 세포변성 효과가 나타나고 qRT-PCR에서의 게놈 역가가 8.0 log10 Geq/mL를 초과할 때 회수되었다.
총 3 내지 5일간의 인큐베이션 후, 상청액을 회수하고, 바이러스 현탁액을 4℃에서 1200 rpm으로 10분 동안 원심분리하여 맑게 한 후, 10%의 최종 소르비톨의 존재하에 -70℃ 이하에서 동결된 분액으로 분배하였다. 6종의 선별된 균주로부터 얻은 증폭된 바이러스는 6종의 후보백신 pMSL을 구성하였다.
실시예
2: 마우스 모델에서
후보백신의
신경독성
2.1/ 마우스 모델에서
pMSL
후보백신의
신경독성
WHO TRS 872 부록 2(1998)에 기재된 바와 같은 마우스 치사량 50%(MLD50)의 측정을 통해 vYF(Vero 세포 적응 황열병 바이러스) 예비마스터 시드 로트(pMSL) 후보백신의 신경독성을 평가하였다.
pMSL 후보백신의 신경독성 연구를 위해, 8마리 암컷 OF1 마우스(접종시 4주령)의 그룹에게 0.4% NaCl 2.5% 인간 혈청 알부민(HSA) 버퍼 중의 5 내지 7개 바이러스 희석액 30 μl를 뇌내 경로로 주사하였다. 4종의 vYF pMSL 후보백신 TV2212, TV3111, TV3112, 및 TV4221의 신경독성을 평가하고, Stamaril® 및 YF-VAX® 기준백신과 비교하였다. 마우스를 21일 동안 모니터링하고, 생존 마우스의 수를 21일차에 기록하였다. 샘플을 무작위로 분포시켜 3회의 독립적인 실험을 수행하였다. 각각의 실험에 대해 접종 당일에 CCID50 역적정으로 주사량을 확인하였다.
매일 생존율을 기록하기 위해 임상 모니터링은 매일 수행되었다. 최소 제곱 회귀법을 이용해 50%의 생존 마우스를 유도하는 용량으로서 MLD50을 계산하고 log10 MLD50/mL로 표시하였다. TV3111과 TV3112를 제외하고(이 경우, 최고 용량(30 μl의 0.7 log10 희석액)의 TV3111 및 TV3112 균주를 투여한 그룹에서도 100%의 생존 마우스가 기록되었기 때문에 MLD50을 계산할 수 없었음), 각각의 균주의 MLD50은 3회 측정의 가중 평균 및 95% 신뢰 구간으로서 결정되었다.
결과를 아래 표 2에 나타냈다.
Stamaril® 계통에서 유래된 vYF 균주 TV2212는 Stamaril® 기준백신과 비교하여 유사한 신경독성을 나타냈다.
YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF 균주 TV4221은 YF-VAX® 기준백신과 비교하여 유사한 신경독성을 나타냈다. 마지막으로, YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF 균주 TV3111 및 TV3112는 모두 YF-VAX® 기준백신과 비교하여 신경독성 효과를 나타내지 않았다. 이들 2종의 vYF 균주에 대한 MLD50 역가는 계산될 수 없다(최소 2.2 log10 MLD50/mL 미만).
그 결과, 2종의 vYF 균주 TV2212 및 TV4221은 각각의 모체 기준백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 유사한 신경독성 프로파일 및 MLD50 역가를 나타냈다. YF-VAX® 계통에서 유래된 2종의 다른 vYF 균주 TV3111 및 TV3112는 모두 YF-VAX® 모균주에 비해 현저하게 약화된 신경독성을 나타냈고, 이들의 MLD50 역가는 평가될 수 없었다.
2.2/ 마우스 모델에서 TV3112 균주 MSL 및 WSL의 신경독성
2.2.1/ TV3112 균주 MSL 및 WSL
MSL 및 WSL 제조에 사용된 모든 배지 및 용액에는 동물 성분 및 인간 성분이 없었다.
정적 조건에서의 Vero 세포 증폭 후, 세포를 생물 반응기에 시딩하였다. 생물 반응기에서 3일간의 세포 성장 후, 배지를 세포 성장 배지에서 바이러스 생성 배지로 변경하였다. 생물 반응기에 시드 로트(TV3112 MSL을 제조하기 위한 TV3112 pMSL 또는 TV3112 WSL을 제조하기 위한 TV3112 MSL)를 추가하여 바이러스를 접종하였다. 2일간의 바이러스 증식 후, 바이러스 생성 배지를 폐기하고, 동일 부피의 새로운 바이러스 생성 배지로 교체하였다. 바이러스 접종 4일 후, 생물 반응기의 내용물을 회수하고, 정화하고, 안정화하고, 충전하고, 동결 보관하였다.
2.2.2/ TV3112 균주 MSL 및 WSL의 신경독성
상기 실시예 2의 하위 섹션 2.1에 기재된 것과 동일한 프로토콜을 사용하였다.
TV3112 pMSL의 경우처럼, TV3112 MSL 및 TV3112 WSL은 신경독성 효과를 나타내지 않았다. TV3112 MSL 및 TV3112 WSL에 대한 MLD50 역가는 계산될 수 없다(최소 2.2 log10 MLD50/mL 미만).
TV3112 MSL 및 TV3112 WSL은 YF-VAX® 모균주에 비해 현저하게 약화된 신경독성을 나타냈고, 이들의 MLD50 역가는 평가될 수 없었다.
실시예 3: 마우스 모델에서 vYF 균주 후보백신의 내장친화성 및 신경친화성
병원성 백신 균주와 약독화 백신 균주를 차별화할 수 있도록 개발된 I형 IFN 수용체 결핍 마우스에 대한 접종을 기반으로 한 검정(Meier et al., 2009; Erickson and Pfeiffer, 2015)으로 6종의 vYF(Vero 세포 적응 황열병 바이러스) 예비마스터 시드 로트(pMSL) 후보백신의 내장친화성 및 신경친화성을 평가하였다. I형 IFN 수용체에 대한 A129 면역결핍 마우스 KO는 영장류 및 인간의 야생형 YF 바이러스 감염을 모방하는 것으로 설명된다(Meier et al., 2009). 따라서, 이러한 마우스 모델은 약독화되지 않은 황열병 바이러스로 인한 내장친화성 질병을 연구하는 데 적합한 것으로 여겨진다.
3.1/ 방법
3.1.1/ 그룹 정의
6마리의 4~8주령 암컷 A129 마우스의 15개 그룹(A 내지 O 그룹)에게 아래 표 4에 기재된 바와 같은 4 log10 CCIDCCID50/용량의 6종의 pMSL 후보백신 각각 또는 Stamaril® 기준백신을 투여하였다(애주번트 없음; 피하 투여 경로; D0에 200 μl).
3.1.2/ 연구 일정
연구 일정은 도 2에 설명되어 있다.
D6에 C, E, G, I, K, M, O 그룹의 6마리 마우스를 안락사시키고 이들의 기관을 샘플링하고, D11에 B, D, F, H, J, L, N 그룹의 6마리 마우스를 안락사시키고 이들의 기관을 샘플링하였다. D4에 A, B, D, F, H, J, L, 및 N 그룹에서 중간 혈액 샘플을 채취하였다. PBS 대조군의 경우, 6마리의 마우스만 포함되었고 D11에 샘플링되었다(A 그룹).
3.1.3/ 마우스 임상 관찰 및 채점
아래 표 5에 기재된 채점표에 따라, 접종 후 11일 동안 매일 동물을 관찰하였다. D3에서 실험 마지막 날인 D11까지 매일 체온을 모니터링하고 기록하였다.
실험 과정에서, 다음과 같은 사건이 발생할 경우 동물을 안락사시켰다.
- 고통의 징후(악액질, 약화, 움직이거나 먹기 어려움)
- 복합 독성(혹, 경련)
- 일반 양태 점수 = 3 + 자극에 대한 반응 = 3
- 20% 초과의 체중 감소
죽은 채 발견된 모든 동물은 부검되었다.
3.1.4/ 생물학적 샘플링
a) D4에, 턱밑 정맥에서 중간 혈액 샘플을 마취하에 채취하였다. 응고 활성화제 및 혈청 분리제가 들어있는 바이알(BD Microtainer SST)에 약 200 μL의 혈액을 수집하였다.
b) D6 및 D11에, 마취하에 모든 동물에서 경동맥 부위의 방혈 후 혈액 샘플을 채취하였다. 응고 활성화제 및 혈청 분리제가 들어있는 바이알(BD Vacutainer SST)에 약 1 mL의 혈액을 수집하였다.
c) 기관 채취는 멸균 조건에서 수행되었다. 동물의 해부에 사용된 기구는 RNaseZapTM 오염제거 용액으로 미리 세정하였다. 방혈 후 가능한 한 빨리 모든 마우스의 기관, 즉 뇌, 간, 및 비장을 모두 샘플링한 다음, 마취하에 경추 탈골로 동물을 안락사시켰다.
간의 경우, 1 mL의 RNA laterTM 용액이 들어있는 바이알에 바이러스 수치 검출 전용 직경 7 mm의 생검 펀치 2개를 넣었다.
뇌와 비장의 경우, 1 mL의 RNA laterTM 용액이 들어있는 바이알에 바이러스 수치 검출 전용 2개의 절반부를 넣었다.
3.1.7/ 분석 시험
a) 바이러스혈증
제조업체의 지침에 따라 Tecan Evoware 자동화 RNA 추출 워크스테이션에서 Macherey Nagel NucleoSpin® 96 바이러스 키트로 140 μL의 각각의 개별 혈청 샘플로부터 전체 게놈 RNA를 추출하고, 최종 부피 140 μL의 뉴클레아제가 없는 물에 두 단계로 용리시켰다.
추출 직후, (문헌[Mantel et al. (2008)]에 기재된 바와 같이) YF-NS5 qRT-PCR로 RNA 정량화를 수행하였다. qRT-PCR은 YF NS5 유전자의 보존 영역을 표적화하여 YF 바이러스 게놈의 존재를 검출한다.
b) 기관의 바이러스 수치
생검 펀치를 RNA laterTM 용액에서 -80℃로 동결시켰다. 해동시, 각각의 기관 샘플의 무게를 측정하였다.
공급업체의 권장 사항에 규정된 바와 같이 TrizolTM(Invitrogen®)/RNeasyTM(Qiagen®) 결합 방법을 이용해 기관 펀치로부터 전체 RNA를 추출하였다.
이어서, 정제 RNA 샘플에서의 바이러스 RNA의 존재를 문헌[Mantel et al. (2008)]에 기재된 바와 같이 YF-NS5 qRT-PCR 검정을 이용해 정량화하였다. qRT-PCR은 YF NS5 유전자의 보존 영역을 표적화하여 YF 바이러스 게놈의 존재를 검출한다.
각각의 qRT-PCR 실행은 2개의 비주형 대조군(음성 qRT-PCR 대조군) 및 CYD-3 바이러스 현탁액에 기반한 2개의 양성 대조군을 포함하였다.
실행을 검증하기 위해서는, 모든 음성 대조군이 검출 한계(LOD) 미만이어야 하고 양성 대조군은 대조군 차트에 포함되어야 했다.
희석 인자로 인해 100 mg의 기관 샘플에 대해, 검출 한계는 기관 1 mg당 1 Geq로 계산되었다.
3.2/ 결과
3.2.1/ 임상 징후
상기 표 5에 기재된 채점표에 따라, 접종 후 매일 모든 동물을 관찰하였다: A 내지 O 그룹의 모든 마우스는 3일차부터 6일차까지 매일 점수를 매기고, A, B, D, F, H, J, L, 및 N 그룹의 모든 마우스는 추가로 11일차까지 매일 점수를 매겼다.
각 시점에서 각 그룹에 대해 3일차부터 11일차까지 각각의 기준, 즉 일반 양태(GA), 자극에 대한 반응(RS), 신경학적 징후(NS), 및 호흡(B)에 대해 평균 점수를 계산하였다. 예상대로, 식염수 대조군(PBS, A 그룹)을 주사한 모든 A129 마우스의 경우, 모든 모니터링 기간 동안 어떤 동물에 대해서도 특이적 임상 점수는 기록되지 않았다.
Stamaril® 기준백신 또는 vYF pMSL 후보백신들 중 하나를 투여한 모든 A129 마우스의 경우, 시점 및 기준에 관계없이 각각의 기준에 대한 평균 점수가 1.5 미만으로 임상 징후는 경미하였다(GA < 1.5; RS, NS, 및 B <1).
3일, 4일, 및 5일차 동안 특이적 임상 점수는 기록되지 않았고, 이어서 6일 및 7일차까지 소수의 마우스에 대해 1/0/0/0 또는 2/0/0/0(GA/RS/NS/B)의 일부 점수가 기록되었다. 10일 및 11일차에, Stamaril® 기준백신 또는 vYF pMSL 후보백신들 중 하나를 투여한 모든 A129 마우스는 낮은 점수를 나타냈고(일부 마우스의 GA 점수 = 1 또는 2, RS, NS, 및 B 점수 = 1), 예외적으로 TV2232를 투여한 1마리의 마우스(F 그룹)가 10일차에 약간의 떨림 표현형, 운동 합병증, 부복, 및 호흡 곤란(점수 3/2/3/2)를 나타내어 윤리적 이유로 안락사시켰다.
3.2.2/ 체중 모니터링
0일, 3일, 4일, 5일, 및 6일차에 모든 마우스(A 내지 O 그룹)의 체중을 측정하고, 7일, 10일, 및 11일차에 나머지 그룹(A, B, D, F, H, J, L, 및 N)의 모든 마우스의 체중을 측정하였다. 각 시점에서 각각의 개별 마우스에 대해 0일차 대비 체중 감소 백분율을 계산하였다.
Stamaril® 기준백신으로 면역화한 후, 11일의 모니터링 기간 동안 약간의 체중 감소가 관찰되었다(D11에 5% 미만의 체중 감소를 의미).
Stamaril® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신으로 면역화한 후, Stamaril 대조군의 경우와 마찬가지로, 급격한 체중 감소는 관찰되지 않았고, 예외적으로 클론 TV2232로 면역화한 1마리의 마우스가 10일차에 20% 초과의 체중 감소를 나타냈다. 이 마우스는 윤리적 이유로 안락사되어야 했다(상기 3.2.1 참조).
YFVAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신인 TV3111, TV3112, 및 TV4221로 면역화한 후, 5일 내지 6일차까지 안정적인 체중이 관찰되고 기록되었고, 모니터링 기간이 끝날 때까지 약간의 체중 증가가 관찰되었다(D11에 5% 미만의 체중 증가를 의미).
3.2.3/ 혈청 및 기관의 바이러스 수치
a) 혈청에서 -
도 3
각각의 그룹 및 시점에 대해 계산된 개별 바이러스혈증뿐만 아니라 기하 평균 역가(GMT) 및 표준 편차가 도 3에 도시되어 있다.
예상대로, 0일차에 PBS를 투여한 A129 마우스에서는 4일차에 바이러스혈증이 검출되지 않은 반면(3 log10 Geq/mL의 LOD 미만), Stamaril® 기준백신을 투여한 A129 마우스에서는 4일 및 6일차에 4 내지 5 log10 Geq/mL의 기하 평균 바이러스혈증 역가가 검출되었다.
vYF pMSL 후보백신으로 면역화한 후, Stamaril® 대조군으로 면역화한 후 유도된 바이러스혈증에 비해 유의한 바이러스혈증의 우세는 관찰되지 않았고(시점에 관계없이 TV2212, TV2232, TV2241, TV3111, 및 TV3112에 대한 p-값은 모두 0.2 초과), 예외적으로 YF-VAX® 계통에서 유래된 TV4221이 주사 후 4일차에 Stamaril® 대조군보다 훨씬 더 높은 바이러스혈증을 유도했다(p-값 = 0.001).
b) 간에서 -
도 4
결과는 기관 1 mg당의 log10 Geq로 표시된다. 각각의 그룹 및 시점에 대해 계산된 개별 바이러스 수치뿐만 아니라 기하 평균 및 표준 편차가 도 4에 도시되어 있다.
예상대로, 0일차에 PBS를 투여한 A129 마우스에서는 11일차에 간 바이러스 수치가 검출되지 않았고(1 log10 Geq/mg의 LOD 미만), Stamaril® 기준백신을 투여한 A129 마우스에서는 유사하게 간 바이러스 수치가 검출되지 않거나 낮게 검출되었다(6일차에 GMT = 0.8, 11일차에는 LOD 미만).
vYF pMSL 후보백신으로 면역화한 후, Stamaril® 대조군으로 면역화한 후 유도된 간 바이러스 수치에 비해 유의한 간 바이러스 수치의 우세는 관찰되지 않았다(6일차에 TV2212, TV2232, TV2241, TV3111, TV3112, 및 TV4221에 대한 p-값은 모두 0.1 초과, 11일차에는 LOD 미만의 비응답체 수가 많기 때문에 통계 분석을 수행하지 않았음).
c) 뇌에서 -
도 5
결과는 기관 1 mg당의 log10 Geq로 표시된다. 각각의 그룹 및 시점에 대해 계산된 개별 바이러스 수치뿐만 아니라 기하 평균 역가 및 표준 편차가 도 5에 도시되어 있다.
예상대로, 0일차에 PBS를 투여한 A129 마우스에서는 11일차에 뇌 바이러스 수치가 검출되지 않은 반면(1 log10 Geq/mg의 LOD 미만), Stamaril® 기준백신을 투여한 A129 마우스에서는 뇌 바이러스 수치가 검출되었다(6일차에 GMT = 0.6, 11일차에는 3.7).
vYF pMSL 후보백신으로 면역화한 후, Stamaril® 대조군으로 면역화한 후 유도된 뇌 바이러스 수치에 비해 유의한 뇌 바이러스 수치의 우세는 관찰되지 않았다(TV2212 및 TV2232에 대한 p-값은 0.06 초과). 또한, TV2241, TV3111, TV3112, 및 TV4221은 Stamaril® 대조군보다 훨씬 더 낮은 뇌 바이러스 수치를 유도했다(p-값은 0.003 이하).
d) 비장에서 -
도 6
결과는 기관 1 mg당의 log10 Geq로 표시된다. 각각의 그룹 및 시점에 대해 계산된 개별 바이러스 수치뿐만 아니라 기하 평균 역가 및 표준 편차가 도 6에 도시되어 있다.
예상대로, 0일차에 PBS를 투여한 A129 마우스에서는 11일차에 비장 바이러스 수치가 검출되지 않은 반면(1 log10 Geq/mg의 LOD 미만), Stamaril® 기준백신을 투여한 A129 마우스에서는 비장 바이러스 수치가 검출되었다(6일차에 GMT = 4.1, 11일차에는 2).
vYF pMSL 후보백신으로 면역화한 후, Stamaril® 대조군으로 면역화한 후 유도된 비장 바이러스 수치에 비해 유의한 비장 바이러스 수치의 우세는 관찰되지 않았다(시점에 관계없이 TV2212, TV2232, TV2241, TV3111, TV3112, 및 TV4221에 대한 p-값은 모두 0.09 초과).
3.2.4/ 생존율
각 그룹(A, B, D, F, H, J, L, 및 N 그룹)에 대한 생존율을 계산하기 위해, 4 log10 CCID50/용량의 Stamaril® 또는 6종의 vYF pMSL 후보백신 중 하나로 피하 면역화한 후 생존 마우스의 수를 11일 동안 매일 기록하였다.
카플란-마이어 곡선으로 도시된 바와 같이(도 7), PBS 버퍼, Stamaril®, 또는 5종의 vYF 균주 TV2212, TV2241, TV3111, TV3112, 및 TV4221 중 하나를 투여한 경우, 연구 과정 내내 100%(6마리 마우스 중 6마리)의 마우스가 생존했다.
반대로, Stamaril® 계통에서 유래된 TV2232 균주를 투여한 F 그룹에서는 10일차에 1마리의 마우스가 윤리적 이유로 안락사되었으므로(상기 3.2.1 참조) 80%의 마우스만이 생존했다.
실시예 4 - 햄스터 모델에서 vYF 균주 후보백신의 면역원성
햄스터 모델에서의 6종의 vYF pMSL 후보백신의 면역원성을 평가하고 Stamaril® 기준백신과 비교하였다.
4.1/ 방법
4.1.1/ 그룹 정의
각 그룹에는 15마리의 5~6주령 암컷 골든 시리아 햄스터가 포함되었고, 6종의 pMSL 후보백신 각각에 대해 두 가지 용량, 즉 2.5 log10 CCID50/용량의 낮은 차선적 용량 및 5.5 log10 CCID50/용량의 고용량을 투여하였다.
Stamaril® 기준백신의 경우, 상기 두 가지 시험 용량에 대해 그룹당 10마리의 햄스터만 포함되었다.
총 200마리의 암컷 골든 시리아 햄스터를 아래 표 6에 기재된 14개의 하기 그룹(A 내지 N 그룹) 중 하나에 무작위로 할당하였다(애주번트 없음; 피하 투여 경로; D0 및 D26에 200 μl).
4.1.2/ 연구 일정
연구 일정은 도 8에 요약되어 있다.
중재 계획 및 중재 세부 사항은 아래 표 7에 기재되어 있다.
4.1.3/ 생물학적 샘플링 및 혈청중화 검정
a) 생물학적 샘플링
D0, D26, 및 D41에 모든 동물의 후안구동(ROS)에서 중간 혈액 샘플을 마취하에 채취하였다. 최종 혈액 샘플링은 심장내 천자를 통해 마취하에 수행되었다. 마취는 (150 mg/kg) 및 Rompun(10 mg/kg)을 복강내 경로로 200 μl의 양으로 투여하여 수행되었다.
응고 활성화제 및 혈청 분리제가 들어있는 바이알(BD Microtainer SST)에 혈액을 수집하였다. +4℃에서 하룻밤 또는 37℃에서 2시간 후, 혈액을 10분 동안 2000 x g로 원심분리하고, 혈청을 수집하여 분석할 때까지 -20℃에 보관하였다.
b) 혈청중화 검정
면역화한 동물의 혈청에 존재하는 기능적 중화 항체를 첫 번째 주사로부터 D0, D26, 및 D41에 적정하였다.
간단히 말해서, 열-비활성화된 혈청을 1:5부터 시작하여 IMDM + 4% 소태아 혈청에서 연속적으로 2배 희석하였다. IMDM 중의 4000 μPFU/mL를 얻기 위해, Vero 세포에서 성장한 YF-17D Stamaril® 바이러스를 희석하고, 2배 희석된 혈청 샘플(v/v)과 함께 90분 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 바이러스/혈청 혼합물을 96-웰 플레이트 내 Vero 세포에 첨가하고 45 +/- 2시간동안 인큐베이팅하였다. 인큐베이션 후, 면역염색 전에 세포를 85% 아세톤으로 고정시켰다. 플레이트를 PBS + 0.05% Tween 20 + 2.5% 탈지유로 차단하고, 먼저 항플라비바이러스 단클론 항체 4G2와 함께 인큐베이팅하고, 두 번째로 염소 항마우스 IgG-HRP 접합체와 함께 인큐베이팅하였다. 마지막으로, 플레이트를 TrueblueTM 발색 물질로 염색하였다. MicrovisionTM의 Viruscope 리더로 플라크를 계수하였다.
최종 혈청중화 항체 역가는 최소 제곱법을 이용해 계산되며, 바이러스 플라크의 50% 중화를 나타내는 희석의 역수에 해당한다. 검정의 LOD는 10이었고, 이는 최종 부피의 첫 번째 역 희석에 해당한다.
그룹당 평균을 계산하기 위해, 10 미만의 모든 역가에 임의의 역가 5(LOD의 절반)를 할당하였다.
4.2/ 결과 - 혈청중화
기준선(D0), 제1 면역화 4주 후(D26), 및 제2 면역화 2주 후(D41)에 모든 동물에서 채취한 개별 혈청 샘플을 혈청중화 검정하여 Vero 세포에서의 황열병 17D 백신 균주에 대한 중화 활성을 모니터링하였다. 기하 평균 역가(GMT) 뿐만 아니라 개별 중화 역가 및 95% 신뢰 구간(CI)이 도 9 및 도 10에 도시되어 있다.
예상대로, 기준선(D0)에 비투여 햄스터에서 중화 항체 역가는 검출되지 않거나 낮게 검출되었고(40 이하), pMSL vYF 후보백신 또는 Stamaril® 기준백신에 관계없이 그룹 GMT는 12 이하였다. D0에 얻은 모든 개별 데이터의 통계 분석에 의해 응답체 임계치는 20.87(1.32 log10)로 정의되었다(비율이 0.99이고 위험 알파가 5%인 우수한 허용 구간).
반응 역학과 관련하여, 제1 면역화 1개월 후(D26; 도 9), 면역화한 모든 그룹에서 현저하게 증가된 중화 반응이 관찰되었고, 중화 GMT의 증가는 D0 기준선에 비해 최소 10배 내지 850배였다. 제2 면역화 2주 후(D41; 도 10), 중화 GMT는 모든 그룹에서 더 증가했고, 중화 GMT의 증가는 D26에 비해 0.8배 내지 7.5배였다.
Stamaril® 기준백신에 의해 유도된 중화 항체 반응은 5.5 log10 CCID50 용량(GMT는 D26 및 D41에 각각 5061 및 11714)의 경우보다 2.5 log10 CCID50 용량(GMT는 D26 및 D41에 각각 281 및 544)의 경우 훨씬 더 낮았다(p-값은 D26 및 D41에 각각 0.007 및 0.023). 참고로, 5.5 log10 CCID50 용량을 투여한 그룹의 햄스터는 100%가 제1 면역화(D26)에 바로 응답체로 정의된 반면(20.87 임계치 초과), 2.5 log10 CCID50 용량을 투여한 그룹의 햄스터는 60% 및 70%만 각각 D26 및 D41에 응답체로 확인되었다.
Stamaril® 계통 TV2212, TV2232, 및 TV2241에서 유래된 vYF pMSL 후보백신의 경우, 5.5 log10 CCID50에 대한 GMT의 범위가 D26에 115 내지 373이고 D41에 465 내지 955인 것과 비교하여 2.5 log10 CCID50 용량에 대한 GMT의 범위는 D26에 144 내지 505이고 D41에 115 내지 1159로, 두 시험 용량 간에 유의한 차이는 관찰되지 않았다(vYF pMSL 후보백신 및 시점에 관계없이 p-값은 모두 0.07 초과). Stamaril® 계통에서 유래된 어떤 vYF pMSL 후보백신도 시험 용량 및 면역화 일정(제1 또는 제2 면역화 후)에 관계없이, 면역화한 모든 동물에서 지속적인 중화 항체 반응을 유도할 수 없었다. TV2212, TV2232, 및 TV2241로 면역화한 경우, 응답체 햄스터의 비율은 용량에 관계없이 1차 면역화 후 53% 내지 93%, 2차 면역화 후 43% 내지 93%의 범위로 확인되었다.
YF-VAX® 계통 TV3111, TV3112, 및 TV4221에서 유래된 vYF pMSL 후보백신의 경우, 두 시험 용량 간에 유의한 차이는 관찰되지 않았고(vYF 균주 및 시점에 관계없이 p-값은 모두 0.06 초과), 예외적으로 TV3111의 경우, 2.5 log10 CCID50 용량은 5.5 log10 CCID50보다 훨씬 더 높은 중화 항체 역가를 유도하였다(p-값은 D26 및 D41에 각각 0.04 및 0.003). 2.5 log10 CCID50 용량의 경우, 유도된 GMT는 높았고 D26에 3939 내지 8898, D41에 3771 내지 13674의 범위인 반면, 5.5 log10 CCID50 용량의 경우, GMT는 D26에 2071 내지 5145, D41에 1821 내지 6421의 범위였다. YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF pMSL 후보백신은 1차 면역화 후 면역화한 대부분의 동물에서 지속적인 중화 항체 반응을 유도할 수 있었다(2.5 log10 CCID50 용량의 TV3111의 경우 응답체의 93% 및 YF-VAX® 계통에서 유래된 다른 모든 vYF pMSL 후보백신의 경우 시험 용량에 관계없이 응답체의 100%). 2차 면역화 후, YF-VAX® 계통에서 유래된 모든 vYF pMSL 후보백신은 용량에 관계없이, 면역화한 햄스터의 100%에서 지속적인 중화 항체 반응을 유도할 수 있었다.
각각의 vYF pMSL 후보백신과 Stamaril® 기준백신의 비교와 관련하여, YF-VAX® 계통 TV3111, TV3112, 및 TV4221에서 유래된 vYF pMSL 후보백신 2.5 log10 CCID50 용량에 의해 유도된 중화 반응은 Stamaril® 기준백신으로 얻은 것보다 유의하게 비열등성이었다(p-값은 D26 및 D41에 각각 0.010 이하 및 0.047 이하). 유의한 비열등성은 Stamaril® 계통에서 유래된 vYF 균주에서도 나타나지 않았고(용량 및 시점에 관계없이 p-값은 모두 0.25 이상), 5.5 log10 CCID50으로 투여된 YF-VAX® 계통에서 유래된 vYF 균주에서도 나타나지 않았다(시점에 관계없이 p-값은 0.49 이상).
실시예 5 - 원숭이 모델에서 vYF TV3112 균주의 독성 및 면역원성
비인간 영장류(NHP)에서 예비 독성 연구 및 면역원성 연구를 수행하였다. 비인간 영장류, 특히 히말라야 원숭이 또는 사이노몰거스 원숭이는 바이러스혈증으로 측정되는 안전성과 감염성, 및 플라비바이러스(뎅기열, 황열병 등)에 대한 후보백신의 면역원성을 평가하는 데 통상적으로 사용된다. 황열병과 관련하여, 원숭이가 천연 숙주이고, 바이러스는 원숭이에서 처음 분리되었으며, 이 모델에서 백신 균주의 약독화가 평가되었다. 2000년대부터 "작은 동물" 모델이 설명되었으며, vYF pMSL 후보백신 선택을 위해 수행되는 후보백신의 특정 특성을 평가하는 데 사용될 수 있다. 그러나, 이 모델(햄스터, 마우스 A129)은 한계가 있으며, 원숭이는 오늘날까지 여전히 인간에 비해 가장 예측 가능한 최고의 표준 모델로서 문헌(예를 들어, Julander (2016), Mason et al. (1973), Monath et al. (2010), 및 Moulin et al. (2013))에 널리 설명되어 있다. 또한, 이 모델은 규제 지침에서 권장된다.
5.1/ 방법
5.1.1/ 그룹 정의 및 목적
모리셔스에서 수입한 9마리의 2년령 수컷 사이노몰거스 원숭이(Macaca fascicularis)의 3개 그룹을 500 μL의 Stamaril®(4.2 log10 CCID50/용량에 해당하는 1회 인간 용량), 1회 용량의 YF-VAX®(6.2 log10 CCID50), 또는 4.2 log10 CCID50의 vYF TV3112 WSL 후보백신으로 SC 경로를 통해 면역화하였다.
1차 판독값으로서, i) 백신 안전성, ii) YF-특이적 바이러스혈증 및 기관(간, 비장, 신장, 림프절, 및 뇌)의 바이러스 수치(문헌[Mantel et al. (2008)]에 기재된 바와 같이 YF-NS5 qRT-PCR에 의한 바이러스 RNA 정량화로 평가)를 유도하는 능력, 및 iii) 보호의 상관관계로서 정의된 황열병-특이적 혈청중화 항체 반응(μPRNT50 검정으로 평가)의 유도를 평가하기 위해 후보백신을 각각의 기준백신과 비교하였다.
2차 판독값으로서, 백신 성능의 다른 잠재적 바이오마커를 식별하기 위해, 다양한 파라미터를 모니터링하였다. 이러한 분석은 i) 항체 반응의 지속성, 및 ii) 기억 반응을 포함한 B세포 및 T세포 면역 반응을 다룬다.
5.1.2/ 마취
면역화를 위해 특정 경우(예를 들어, 적응 기간 중에 다른 조작과 결합된 혈액 샘플링의 경우 또는 마취 없이 원숭이 혈액을 샘플링하기 어려운 경우)에 가벼운 마취를 수행하였다. 10 mg/kg의 케타민(Imalgene 1000, MERIAL®)을 허벅지에 근육내 주사하였다.
5.1.3/ 모니터링
모든 동물은 D-29 및 D0에 체중이 측정되었고, D7까지 임상 징후에 대해 매일 관찰되었으며, D-17에 그리고 D0, D3, D4, D5, D6, 및 D7의 바이러스혈증 예상 기간 중에 개별 체온(트랜스폰더 시스템)이 기록되었다. D1, D3, 및 D7에 모든 원숭이에서 혈액분석, 생화학, 및 혈액 바이러스혈증을 평가하였다 이어서, 각 그룹의 3마리 원숭이를 안락사시키고, D7에 기관 평가에서의 조직병리학 및 바이러스 수치를 위해 기관을 샘플링하였다. 각 그룹의 남은 6마리 원숭이의 체중을 D27, D60, D90, D122, D153, 및 D181에 측정하고, D10 및 D14의 바이러스혈증 예상 기간 중에 개별 체온을 추가로 기록하였다. 각 그룹의 남은 6마리 원숭이는 또한, D221까지 임상 징후에 대해 매일 관찰되었다. D27, D60, D90, D122, D153, D181, 및 D221에 각 그룹의 남은 6마리 원숭이에서 혈청중화, T세포 및 기억 B세포 검정을 위한 혈액 샘플을 채취하였다.
5.1.4/ 시험 방법
Vero 세포에서 μPRNT50 방법을 이용해 YF-특이적 혈청중화 항체를 적정하였다. 간단히 말해서, 열-비활성화된 혈청을 1:5부터 시작하여 IMDM(THERMOFISHER SCIENTIFIC) + 4% FCS에서 연속적으로 2배 희석하였다. IMDM 중의 4000 μPFU/mL를 얻기 위해, Vero 세포에서 성장한 YF-17D Stamaril® 바이러스를 희석하고, 2배 희석된 혈청 샘플(v/v)과 함께 90분 동안 인큐베이팅하였다. 이어서, 바이러스/혈청 혼합물을 96-웰 플레이트 내 Vero 세포에 첨가하고 45 +/- 2시간동안 인큐베이팅하였다. 인큐베이션 후, 면역염색 전에 세포를 85% 아세톤으로 고정시켰다. 플레이트를 PBS + 0.05% Tween 20 + 2.5% 탈지유로 차단하고, 먼저 항플라비바이러스 단클론 항체 4G2와 함께 인큐베이팅하고, 두 번째로 염소 항마우스 IgG-HRP 접합체와 함께 인큐베이팅하였다. 마지막으로, 플레이트를 TrueblueTM 발색 물질로 염색하였다. MicrovisionTM의 Viruscope 리더로 플라크를 계수하였다. 최종 역가는 최소 제곱법을 이용해 계산되며, 플라크의 50% 중화를 나타내는 희석의 역수에 해당한다.
μPRNT50 검정의 LOD는 시험된 혈청의 첫 희석이 1:10이었을 때 약 20 μPRNT50이었다. 그룹당 평균을 계산하기 위해, LOD 미만의 모든 샘플에 LOD의 절반의 임의의 값(즉, 10 μPRNT50)을 할당하였다.
기억세포 반응은 ELISPOT로 측정되었다. 형광 결합 면역스팟(FLUOROSPOT)은 항원 특이성에 관계없이(총 IgM 또는 총 IgG) 항체를 분비하는 개별 기억 B세포를 검출하고 계수하는 데 사용된다.
D0에, 동결된 PBMC를 10% FBS 및 100 μg/mL의 DNase가 보충된 RPMI 배지(THERMOFISHER SCIENTIFIC®)에서 해동하고 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 인큐베이팅하였다. 1시간 후, 세포를 106개 세포/mL로 희석하고, rIL2(10 μg/mL)가 보충된 RPMI 10% FBS에서 37℃, 5% CO2로 4일 동안 인큐베이팅하여 자극하였다.
D3에, 저형광 PVDF 멤브레인(MERCK Millipore)이 장착된 96-웰 FluoroSpot 마이크로플레이트의 멤브레인을 35 μL의 35% 에탄올로 1분 동안 미리 습윤시켰다. 각각의 웰을 200 μL의 PBS 1X로 2회 세척하였다. 이어서, 마이크로플레이트를 1:80으로 희석된 YF-17D 감염 Vero 세포 용해물(SANOFI PASTEUR®) 또는 15 μg/mL로 희석된 원숭이 IgG 및 IgM에 특이적인 단클론 항체의 혼합물로 코팅하고, 4℃에서 밤새 인큐베이팅하였다.
D4에, 플레이트를 PBS로 세척한 후, RPMI 10% FBS로 37℃에서 2시간 이상 차단하였다. 플레이트 세척 후, 2x105 또는 4x105개의 자극된 PBMC를 YF-17D 감염 Vero 세포 용해물로 코팅된 웰에 첨가하였다. 다양한 범위로 희석된 자극된 세포(5x103 내지 6,2x102)를 항IgG 및 항IgM 항체로 코팅된 웰에 첨가하였다.
5시간 후, 플레이트를 PBS 1X로 3회 세척하고, 밤새 4℃에 보관하였다.
D7에, 플레이트를 PBS 1X-BSA 0.5%(150 μL/웰)로 6회 세척하였다. 세척 단계 후, 100 μL/웰의 항원숭이 IgM-FITC 및 IgG-CY3 항체를 각각 실온의 암실에서 2시간 동안 PBS1X-BSA 0.5%에 1/500의 희석으로 첨가하였다. 플레이트를 PBS 1X-BSA 0.5%(150 μL/웰)로 다시 6회 세척하였다. 판독할 때까지 플레이트를 암실에서 5℃±3℃에 보관하였다.
항체 분비 세포에 해당하는 각각의 스팟을 자동 FLUOROSPOT 플레이트 리더(MicrovisionTM)로 계수하였다. 결과를 106개 세포당 ACS 분비 세포의 수로 표시하였다.
T세포 반응은 분리된 PBMC에서 IFN-γ IL-2 반응 Dual FluoroSpot(Mabtech®의 FS-2122-10 원숭이 IFN-γ/IL-2 FluoroSpot 키트)으로 측정되었다.
간단히 말해서, FluoroSpot PVDF 멤브레인 장착 마이크로플레이트를 35% 에탄올로 전처리하고, 세척하고, 4℃에서 멸균 인산염 완충 식염수(PBS) 중의 15 μg/mL 농도의 원숭이 IFN-γ(클론 GZ-4, Mabtech®) 및 원숭이 IL-2(클론 IL2M-I/249, Mabtech®)에 대한 단클론 항체와 함께 인큐베이팅하여 밤새 코팅하였다. 플레이트를 PBS로 3회 세척한 후, 10% FCS가 보충된 RPMI 1640 배지(Gibco®)로 37℃에서 2시간 동안 인큐베이팅하여 차단하였다. PBMC(4 × 105)를 0.1 μg/mL의 단클론 항체 CD28-A(Mabtech®)와 함께 각각의 웰에 첨가하였다. YF-Env 및 YF-NS3 펩티드 풀(YF-Env 및 YF-NS3 아미노산 서열을 포함하는 15량체 중첩 펩티드)을 1 μg/mL의 배양 배지 중의 각 펩티드의 최종 농도로 첨가하였다. 항CD3 mAb(Mabtech®)를 2.5 μg/mL의 양성 대조군으로 사용하였다. 플레이트를 5% CO2를 함유한 분위기 중의 37℃에서 24시간 동안 인큐베이팅하였다. 인큐베이션 후, 플레이트를 PBS로 6회 세척하였다. FITC 항IFN-γ 항체(클론 7-B6-1-FS-FITC, Mabtech®) 및 비오틴화 항IL-2 항체(IL2-비오틴 MT8G10, Mabtech®)를 PBS 중의 0.5% BSA에 각각 1:200 및 1 μg/mL의 농도로 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 인큐베이팅하였다. PBS로 3회 세척한 후, PBS 중의 0.5% BSA에 희석된 항FITC-490(1:200, Mabtech®) 및 스트렙타비딘 SA-550(1:200, Mabtech®)과 함께 실온에서 1시간 동안 인큐베이션을 수행하고 PBS로 6회 세척하였다. 판독할 때까지 플레이트를 암실에서 5℃±3℃에 보관하였다. IFN-γ 또는 IL-2 분비 세포(IFN-γ SC 또는 IL5 SC)뿐만 아니라 IFN-γ 및 IL-2를 모두 분비하는 다기능 T세포에 해당하는 형광 스팟을 자동 FLUOROSPOT 플레이트 리더(MicrovisionTM)로 계수하였다. 결과를 106개 PBMC당 IFN-γ 또는 IL-2 분비 세포의 수로 표시하였다.
YF 백신 바이러스혈증 및 기관의 바이러스 수치를 (문헌[Mantel et al. (2008)]에 기재된 바와 같이) YF-NS5 qRT-PCR로 모니터링하였다.
5.2/ 결과
생약독화 황열병 백신에 대한 보호의 상관관계는 WHO TRS 978 부록 5에서, 이전에 혈청 음성이었던 개체에서 측정 가능한 중화 항체를 유도하는 것, 예를 들어 검출 한계보다 높은 PRNT 역가로서 정의된다. 미리 설정된 보호 임계치(LOD = 20)를 훨씬 초과하는 중화 항체가 D14에 최소 9개월 동안 모든 원숭이에서 검출되었다(도 11 참조). 중화 항체 역가는 현재 백신으로 면역화한 후 검출되는 역가와 크게 다르지 않았다.
이러한 오래 지속되는 중화 항체 반응은 vYF TV3112 백신접종 후 14일째부터 221일째까지 말초 혈액에서 모니터링된 지속적인 B 기억세포 빈도에 의해 또한 뒷받침되었다(도 12 및 도 13 참조). 이들 데이터는 IgM(도 12) 및 IgG(도 13) 기억 B세포 모두 백신접종 후 14일째에 발생하여 최소 221일의 연구 기간 동안 지속되었음을 보여준다. vYF TV3112와 관련하여, 유도된 기억 B세포의 역학 및 백분율은 기준백신 Stamaril® 및 YF-VAX®에 의해 유도된 기억 B세포의 프로파일과 유사했다.
또한, YF-ENV 및 YF-NS3에 특이적인 Th1 세포 반응(IFN-γ 및 IL-2 분비 세포)은 vYF TV3112 백신접종 후 유도되었으며, Stamaril® 또는 YF-VAX®로 백신접종한 후 관찰된 세포 반응과 유사했다(도 14 참조).
이 연구는 또한, 대조군 백신과 비교하여 vYF TV3112의 다음과 같은 보존된 안전성 프로파일을 보여주었다: 임상 징후 없음, 체중 감소 없음, 온도 변화 없음, 혈액학적(백혈구 및 적혈구, 호중구, 림프구, 단핵구, 호산구, 호염기구, 망상적혈구, 혈소판, 헤모글로빈, 헤마토크리트, 평균 적혈구 용적, 평균 적혈구 혈색소량) 또는 생화학적(알칼리 포스파타제, 알라닌 전이효소, 아스파르테이트 전이효소, 감마 글루타밀 전이효소, C-반응성 단백질, 담즙산, 총 빌리루빈, 알부민, 혈중 요소 질소, 크레아티닌) 장애 없음(PLS-DA 통계 분석을 통한 Stamaril® 및 YF-VAX®와 통계적 차이 없음), 바이러스혈증이 없거나 매우 낮음(9마리 원숭이 중 1마리에서 4 log10 Geq/mL 미만), 황열병 표적 기관에서 바이러스 RNA가 검출되지 않거나 매우 낮게 검출됨(야생형 Asibi 감염 후 관찰된 바이러스 수치보다 100 내지 10000배 낮음)(도 15 참조), 황열병 표적 기관에서 백신 관련 조직병리학적 소견 없음.
실시예
6 -
마카크
모델에서 치명적인 공격에 대해
vYV
TV3112 균주에 의해 유도된 보호
목적은 vYF TV3112 후보백신으로 면역화한 원숭이에서 황열병 바이러스 공격에 대한 보호를 평가하는 것이었다.
6.1/ 방법
6.1.1/ 동물
Stamaril®, YF-VAX®, 또는 vYF TV3112 후보백신으로 면역화한 지 9개월 후, 상기 실시예 5에서 연구된 3개의 동물 그룹 각각에서 D221에 남은 6마리 원숭이에게 황열병에 대해 Asibi 독성 균주를 접종하여 백신 효능을 평가하였다. 6마리의 비투여 대조군 원숭이의 다른 그룹에도 접종하였다.
6.1.2/ YFV 및 버퍼
접종은 Texas Medical Branch 대학(UTMB)의 황열병 바이러스 균주 Asibi(YFV)로 수행되었다. YFV(로트 19455, Vero 세포에서의 감염 역가 7.7 Log10 CCID50/mL)를 NaCl+HSA 버퍼(NaCl 0.4% + 인간 혈청 알부민(HSA) 2.5%)에 희석하였다. 각각의 동물에게 1 mL의 NaCl+HSA 버퍼 중의 103 CCID50의 YFV를 오른쪽 등 상부에 피하 접종하였다.
6.1.3/ 모니터링
Asibi 접종 후 28일 동안 동물을 추적하였다. 동물의 음식 소비와 행동을 매일 관찰하였다. 각각의 샘플링 시점에 직장 온도와 체중을 기록하였다. 혈액 샘플링은 아래 표 8에 기재된 바와 같이 수행되었다.
6.1.4/ 생활 관찰
주 7일 동물을 관찰하였다. 채혈할 때마다, 아래 표 9에 기재된 바와 같이 임상 검사를 수행하였다.
6.2/ 결과
백신접종한 모든 원숭이는 다음과 같은 공격 효과로부터 보호되었다: 바이러스혈증(낮은 바이러스혈증만, 즉 문헌[Mantel et al. (2008)]에 기재된 바와 같이 YF-NS5 qRT-PCR로 측정시, 단 하루 동안 2/6의 원숭이에서 3.6 log10 GEq/mL 미만), 혈액학적 장애, 혈액 생화학적 장애, 및 사망.
이 연구에서, 백신접종하지 않은 대조군의 6마리 NHP 중 3마리가 공격에 살아남았지만, 6마리의 대조군 NHP는 모두 바이러스혈증(8 log10 Geq/mL 초과), 림프구감소증, 혈소판감소증, 및 트랜스아미나제, CRP, 빌리루빈, 및 담즙산 수치가 크게 증가한 혈액 생화학적 장애를 나타냈다.
따라서, vYF TV3112 후보백신은 현재 이용 가능한 백신 Stamaril® 및 YF-VAX®와 마찬가지로, 황열병 백신에 대한 최고의 예측 동물 모델 중 하나인 사이노몰거스 원숭이를 야생형 Asibi 감염으로부터 보호할 수 있었다.
실시예 7 - 서열 분석
RNA 바이러스는 천연적으로 이러한 바이러스의 유사종 고유 특성에 따른 높은 유전적 다양성 수준을 나타낸다. 황열병 중합효소의 오류율이 RNA 바이러스에 대해 낮은 것으로 설명되지만, 중합효소 오류율은 감염 주기당 게놈당 약 10-6개의 치환이다.
잘 정의된 바이러스 생성 프로세스는 동일한 바이러스 성장 조건을 항상 유지함으로써 이 현상을 최소한으로 제한하도록 설정된다. 그러나 통계적으로, 바이러스가 세포에서 복제될 때마다 바이러스 유사종이 지속적으로 생성되며, 변종이 바이러스에 성장 이점을 가져올 때마다 장기적으로 보존되고 증폭되어 초기 개체군을 점진적으로 대체한다.
또한, 새로운 바이러스 성장 시스템이 계란에서 Vero 세포 배양물로 이동함에 따라, 일부 적응 돌연변이가 발생할 것으로 예상된다. 특히, NS4B의 여러 돌연변이가 Vero 세포에서 성장하기 위한 바이러스의 양성 적응으로서 다양한 플라비바이러스 모델에서 설명되었다(Blaney et al., 2003; Tang et al., 2005; Beasley et al. 2013).
또한, 현재의 시드는 클로닝되지 않았으므로, 현재의 백신 균주에는 유사종의 혼합물이 공존한다. YF-VAX® 및 Stamaril® 백신의 게놈의 고처리량 시퀀싱에 의해 기준 서열을 먼저 확립한 후, 새로운 pMSL 후보백신 게놈을 이들과 비교할 것이다.
새로운 pMSL 후보백신은 2개의 클로닝 단계 후에 얻어지므로, 이들은 균질의 바이러스 개체군을 나타낸다.
7.3/ 방법
7.3.1/ 원칙
황열병 바이러스의 시퀀싱은 바이러스 RNA의 추출 및 정제 후에 수행된다.
이어서, RNA는 상보적 DNA로 역전사된 후, 특정 프라이머를 사용해 PCR에 의해 게놈이 완전히 증폭된다. 이어서, PCR 생성물은 Nextera® XT DNA 샘플 제조 키트(Illumina, Inc.)를 이용해 라이브러리를 형성하는 데 사용된다. 라이브러리의 형성은 여러 단계로 이루어진다. 먼저, 등몰 방식으로 앰플리콘이 조립된다. 이어서, 이들은 트랜스포좀(Tagmentase)을 이용해 단편화된다. 트랜스포좀은 DNA를 절단하고 어댑터를 추가한다. 이어서, 어댑터에 상보적인 프라이머를 이용해 PCR에 의한 증폭 단계가 수행된다. 이 단계는 단편의 양측에 인덱스(샘플 태깅에 사용)를 추가시킬 수 있고, 단편을 시퀀싱 지원에 관여시킨다. 마지막으로, 라이브러리는 Agencourt® 비드(AMPure® XP, Beckman Coultern Genomics, Inc.)를 사용해 정제되고, MiSeq 시퀀서(Illumina®, Inc.)를 사용해 시퀀싱된다.
서열이 확보되면, 이어서 CLC Genomics Workbench 소프트웨어(QIAGEN®)의 분석 모듈 "품질 기반 변이 검출(레거시)"로 분석이 수행된다.
7.3.2) RNA 추출
공급업체의 권장 사항에 따라 Qiamp 바이러스 키트(QIAGEN®)로 최소 농도 108 Geq/mL(YF-NS5 qRT-PCR에 의한 정량화)의 바이러스 현탁액 140 μl에서 바이러스 RNA를 추출하였다. 정제된 바이러스 RNA를 뉴클레아제가 없는 물 140 μl에 용리시켰다.
7.3.3) RT-PCR
먼저, 황열병 바이러스의 게놈과 중첩되도록 의도된 3개의 안티센스 프라이머를 사용하여 RNA의 cDNA로의 특정 역전사(RT) 단계를 수행하였다. 이어서, 표 10에 기재된 3개의 프라이머 쌍을 사용해 PCR 증폭을 수행하였다.
3개의 안티센스 프라이머(SEQ ID NO. 10; SEQ ID NO. 12, 또는 SEQ ID NO. 14) 중 하나를 함유하는 3개의 믹스를 제조하였다(아래 표 11 참조).
+65℃에서 5분 동안 샘플을 열순환기에서 가열하고, 얼음에서 3분 동안 튜브를 인큐베이팅하여 열 충격을 즉시 수행하였다.
이어서, 아래 표 12에 기재된 바와 같이 믹스를 제조하였다.
3개의 RNA/프라이머 튜브 각각에 이 믹스 12 μl를 첨가하고, 다음 표 13에 기재된 바와 같이 역전사 실행을 수행하였다.
각각의 튜브에 1 μl의 RNAse H를 첨가하고, 튜브를 열순환기에서 37℃로 20분 동안 인큐베이팅하였다.
얻어진 cDNA로부터, PCR에 의해 3개의 앰플리콘으로 증폭하였다.
3개의 프라이머 쌍(SEQ ID NO. 9와 SEQ ID NO. 10; SEQ ID NO. 11과 SEQ ID NO. 12; SEQ ID NO. 13과 SEQ ID NO. 14) 중 하나를 함유하는 3개의 PCR 믹스를 아래 표 14에 기재된 바와 같이 제조하였다.
20 μl의 각각의 믹스를 5 μl의 해당 cDNA에 첨가하였다.
PCR 프로그램은 아래 표 15에 기재된 바와 같다.
7.3.5)
앰플리콘의
분석 및 정제
증폭 품질을 확인하기 위해 모든 앰플리콘을 1.2% 아가로스 겔에서 분석하였다. 공급업체의 권장 사항에 따라 QIAQuick® PCR 정제 키트(QIAGEN®)를 사용하여 수동으로 앰플리콘을 정제하였다.
7.3.6)
Nextera
®
XT
키트(Illumina, Inc.)를
이용한 라이브러리 형성
정제된 앰플리콘을 공급업체의 권장 사항에 따라 Qubit® dsDNA HS 검정 키트를 사용하여 Qubit® 2.0 형광계(LIFE TECHNOLOGIES®)로 정량화하였다.
검정 후, 0.2 ng/μL의 최종 농도를 얻기 위해 앰플리콘을 뉴클레아제가 없는 물에 연속 희석하였다. 이어서, 각 샘플에 대해, 3개의 앰플리콘을 혼합하여 0.6 ng/μL의 단일 농축 PCR 풀을 얻었다.
PCR 프로그램은 아래 표 16에 기재된 바와 같다.
공급업체의 권장 사항에 따라 Agencourt® AMPure® XP 키트(BECKMAN COULTER®)를 사용하여 앰플리콘을 정제 및 보정하였다. 라이브러리는 1주일 동안 -20℃에서 안정적이었다.
7.3.7) 라이브러리 분석
공급업체의 권장 사항에 따라 Qubit® dsDNA HS 검정 키트를 사용하여 Qubit® 2.0 형광계(LIFE TECHNOLOGIES®)로 라이브러리를 정량화하였다.
7.3.8) 라이브러리 시퀀싱
공급업체의 권장 사항에 따라 MiSeq 시스템(ILLUMINA®)으로 라이브러리를 시퀀싱하였다. 공급업체의 권장 사항에 따라 ILLUMINA® 시퀀싱 분석 뷰어(Illumina, Inc.)로 서열을 분석하였다.
생성된 서열의 분석을 공급업체의 권장 사항에 따라 CLC Genomics Workbenck 7.5.2 소프트웨어(QIAGEN®)로 수행하였다.
7.4/ 결과
7.4.1) YF-VAX® 및 Stamaril® 백신에 대한 기준 서열
YF-VAX® 백신의 기준 서열은 SEQ ID NO. 2로 표시되었다. Stamaril® 백신의 기준 서열은 SEQ ID NO. 3으로 확인되었다.
7.4.1.1) Stamaril® 유래 pMSL
pMSL 후보백신 게놈(계대 n°8)을 시퀀싱하고 모균주 게놈과 비교하였다. 아래 표 17은 Stamaril® 계통의 3종의 균주에 대한 고처리량 시퀀싱의 결과를 제공한다.
TV2241 및 TV2212는 기준백신으로 사용된 Stamaril® 모균주와 비교하여 단일 돌연변이를 나타낸다(NS1 코딩 영역에 위치한 뉴클레오티드 2524, 아미노산 수준에서 침묵) TV2232는 NS3 및 NS5에 모두 침묵인 5개의 돌연변이가 있는 상이한 프로파일을 보여준다.
7.4.1.2) YF-VAX® 유래 pMSL
아래 표 18은 YF-VAX® 계통의 3종의 pMSL 후보백신(계대 n°8)에 대한 고처리량 시퀀싱의 결과를 제공한다.
TV4221은 YF-VAX® 백신 균주의 기준 서열과 동일하다.
TV3111은 위치 2411(E-480, Val에서 Leu로), 3701(NS2a-65, Met에서 Val로), 및 6496(NS4a-19, 침묵)에 3개의 돌연변이를 갖는다.
TV3112는 TV3111과 동일한 돌연변이, 및 위치 1408에 하나의 추가 돌연변이(E-145, 침묵)를 갖는다.
TV3112 및 TV3111 균주는 SEQ ID NO 15로 표시되는 외피 단백질을 포함한다(위치 480에 류신 잔기를 가짐) SEQ ID NO 16(위치 65에 발린 잔기를 가짐)은 TV3112 및 TV3111 균주에서 유래된 NS2a 단백질의 서열이다. SEQ ID NO 17(위치 57에 G 뉴클레오티드를 가짐)은 TV3112 균주에서 유래된 NS4a 단백질을 코딩하는 RNA 서열이다. SEQ ID NO 18(위치 435에 U 뉴클레오티드를 가짐)은 TV3112 균주에서 유래된 외피 단백질을 코딩하는 RNA 서열이다.
게놈의 역할이 정보의 지원이라는 것과, 그 기능을 통해 단백질이 바이러스 표현형에서 역할을 한다는 것은 당업자에게 잘 알려져 있다. 침묵 돌연변이는 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는다. 따라서, TV3112 및 TV3111 균주는 하기 단백질을 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주로서 설명될 수 있다.
(i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 480번 위치의 돌연변이를 포함하는 외피 단백질, 및
(ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 65번 위치의 돌연변이를 포함하는 NS2a 단백질. 또는 TV3112 및 TV3111 균주는 하기 단백질을 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주로서 설명될 수 있다.
SEQ ID NO. 15의 480번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 류신 잔기를 포함하는 외피 단백질; 및
SEQ ID NO. 16의 65번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 발린 잔기를 포함하는 NS2a 단백질.
7.4.2) MSL 및 WSL 단계에서의 YF-VAX® 유래 TV3112 균주
TV3112 MSL의 공통 서열은 pMSL 모체(TV3112 pMSL)의 공통 서열과 동일하게 유지되었다. TV3112 WSL의 공통 서열은 MSL 모체(TV3112 MSL)와 동일하게 유지되었다. TV3112 균주는 유전적으로 안정적이며, pMSL에서 WSL 단계까지 뉴클레오티드 위치 1408, 2411, 3701, 및 6496의 돌연변이를 공통 서열에 유지한다.
참고문헌
[
비특허
문헌]
- Barrett ADT. Yellow fever live attenuated vaccine: A very successful live attenuated vaccine but still we have problems controlling the disease. Vaccine. 2017 Oct 20;35(44):5951-5955.
- Beasley DW, Morin M, Lamb AR, Hayman E, Watts DM, Lee CK, Trent DW, Monath TP. Adaptation of yellow fever virus 17D to Vero cells is associated with mutations in structural and non-structural protein genes. Virus Res. 2013 Sep;176(1-2):280-4.
- Blaney JE Jr , Manipon GG , Firestone CY, Johnson DH , Hanson CT, Murphy BR, Whitehead SS. Mutations which enhance the replication of dengue virus type 4 and an antigenic chimeric dengue virus type 2/4 vaccine candidate in Vero cells. Vaccine. 2003 Oct 1;21(27-30):4317-27.
- dos Santos CN , Post PR, Carvalho R, Ferreira II, Rice CM, Galler R. Complete nucleotide sequence of yellow fever virus vaccine strains 17DD and 17D-213. Virus Res. 1995 Jan;35(1):35-41.
- Dupuy A, Despres P, Cahour A, Girard M, Bouloy M. Nucleotide sequence comparison of the genome of two 17D-204 yellow fever vaccines. Nucleic Acids Res. 1989 May 25;17(10):3989.
- Erickson AK, Pfeiffer JK. Spectrum of disease outcomes in mice infected with YFV-17D. J Gen Virol. 2015 Jun; 96:1328-1339.
- Hayes EB. Is it time for a new yellow fever vaccine? Vaccine. 2010 Nov 29;28(51):8073-6.
- Julander JG. Animal models of yellow fever and their application in clinical research. Curr Opin Virol. 2016 Jun;18:64-9.
- Kolell K. et al. Virus Production in Vero Cells Using a Serum-free Medium. In: Smith R. (eds) Cell Technology for Cell Products (2007). Springer.
- Mantel N, Aguirre M, Gulia S, Girerd - Chambaz Y, Colombani S, Moste C, Barban V. Standardized quantitative RT-PCR assays for quantitation of yellow fever and chimeric yellow fever-dengue vaccines. J Virol Methods. 2008 Jul;151(1):40-6.
- Mason RA, Tauraso NM, Spertzel RO , Ginn RK . Yellow fever vaccine: direct challenge of monkeys given graded doses of 17D vaccine. Appl Microbiol. 1973 Apr;25(4):539-44.
- Meier KC , Gardner CL, Khoretonenko MV, Klimstra WB , Ryman KD. A mouse model for studying viscerotropic disease caused by yellow fever virus infection. PLoS Pathog. 2009 Oct;5(10).
- Monath TP. Yellow fever vaccine. Expert Rev Vaccines. 2005 Aug;4(4):553-74.
- Monath TP, Lee CK, Julander JG , Brown A, Beasley DW, Watts DM, Hayman E, Guertin P, Makowiecki J, Crowell J, Levesque P, Bowick GC , Morin M, Fowler E, Trent DW. Inactivated yellow fever 17D vaccine: development and nonclinical safety, immunogenicity and protective activity. Vaccine. 2010 May 14;28(22):3827-40.
- Moulin JC , Silvano J, Barban V, Riou P, Allain C. Yellow fever vaccine: comparison of the neurovirulence of new 17D-204 StamarilTM seed lots and RK 168-73 strain. Biologicals. 2013 Jul;41(4):238-46.
- Needleman SB , Wunsch CD. A general method applicable to the search for similarities in the amino acid sequence of two proteins. J Mol Biol. 1970 Mar;48(3):443-53.
- Pereira RC , Silva AN, Souza MC, Silva MV, Neves PP, Silva AA, Matos DD, Herrera MA, Yamamura AM, Freire MS, Gaspar LP, Caride E. An inactivated yellow fever 17DD vaccine cultivated in Vero cell cultures. Vaccine. 2015 Aug 20;33(35):4261-8.
- Remington's Pharmaceutical Sciences (18th edition), ed. A. Gennaro, 1990, Mack Publishing Company, Easton, Pa.
- Rice CM, Lenches EM , Eddy SR, Shin SJ , Sheets RL , Strauss JH. Nucleotide sequence of yellow fever virus: implications for flavivirus gene expression and evolution. Science. 1985 Aug 23;229(4715):726-33.
- Tang WF , Eshita Y, Tadano M, Morita K, Makino Y. Molecular basis for adaptation of a chimeric dengue type-4/Japanese encephalitis virus to Vero cells. Microbiol Immunol. 2005;49(3):285-94.
- World Health Organization. Requirements for yellow fever vaccine. WHO Technical report series, 1998, No. 872, Annex 2, 30-68.
- World Health Organization. Recommendations to assure the quality, safety and efficacy of live attenuated yellow fever vaccines. WHO Technical report series, 2010, No. 978, Annex 5, 241-314.
[특허 문헌]
- WO 2009/109550
- WO 2014/016360
SEQUENCE LISTING
<110> SANOFI PASTEUR
<120> LIVE-ATTENUATED YELLOW FEVER VIRUS STRAIN ADAPTED TO GROW ON VERO CELLS AND VACCINE COMPOSITION COMPRISING THE SAME
<130> PM1801-WO-PCT
<160> 18
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 10862
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA sequence of the YFV 17D204 strain
<400> 1
aguaaauccu gugugcuaau ugaggugcau uggucugcaa aucgaguugc uaggcaauaa 60
acacauuugg auuaauuuua aucguucguu gagcgauuag cagagaacug accagaacau 120
gucuggucgu aaagcucagg gaaaaacccu gggcgucaau augguacgac gaggaguucg 180
cuccuuguca aacaaaauaa aacaaaaaac aaaacaaauu ggaaacagac cuggaccuuc 240
aagagguguu caaggauuua ucuuuuucuu uuuguucaac auuuugacug gaaaaaagau 300
cacagcccac cuaaagaggu uguggaaaau gcuggaccca agacaaggcu uggcuguucu 360
aaggaaaguc aagagagugg uggccaguuu gaugagagga uuguccucaa ggaaacgccg 420
uucccaugau guucugacug ugcaauuccu aauuuuggga augcuguuga ugacgggugg 480
agugaccuug gugcggaaaa acagaugguu gcuccuaaau gugacaucug aggaccucgg 540
gaaaacauuc ucugugggca caggcaacug cacaacaaac auuuuggaag ccaaguacug 600
gugcccagac ucaauggaau acaacugucc caaucucagu ccaagagagg agccagauga 660
cauugauugc uggugcuaug ggguggaaaa cguuagaguc gcauauggua agugugacuc 720
agcaggcagg ucuaggaggu caagaagggc cauugacuug ccuacgcaug aaaaccaugg 780
uuugaagacc cggcaagaaa aauggaugac uggaagaaug ggugaaaggc aacuccaaaa 840
gauugagaga ugguucguga ggaaccccuu uuuugcagug acggcucuga ccauugccua 900
ccuuguggga agcaacauga cgcaacgagu cgugauugcc cuacuggucu uggcuguugg 960
uccggccuac ucagcucacu gcauuggaau uacugacagg gauuucauug agggggugca 1020
uggaggaacu uggguuucag cuacccugga gcaagacaag ugugucacug uuauggcccc 1080
ugacaagccu ucauuggaca ucucacuaga gacaguagcc auugauagac cugcugaggu 1140
gaggaaagug uguuacaaug caguucucac ucaugugaag auuaaugaca agugccccag 1200
cacuggagag gcccaccuag cugaagagaa cgaaggggac aaugcgugca agcgcacuua 1260
uucugauaga ggcuggggca auggcugugg ccuauuuggg aaagggagca uuguggcaug 1320
cgccaaauuc acuugugcca aauccaugag uuuguuugag guugaucaga ccaaaauuca 1380
guaugucauc agagcacaau ugcauguagg ggccaagcag gaaaauugga auaccgacau 1440
uaagacucuc aaguuugaug cccugucagg cucccaggaa gucgaguuca uuggguaugg 1500
aaaagcuaca cuggaaugcc aggugcaaac ugcgguggac uuugguaaca guuacaucgc 1560
ugagauggaa acagagagcu ggauagugga cagacagugg gcccaggacu ugacccugcc 1620
auggcagagu ggaaguggcg ggguguggag agagaugcau caucuugucg aauuugaacc 1680
uccgcaugcc gccacuauca gaguacuggc ccugggaaac caggaaggcu ccuugaaaac 1740
agcucuuacu ggcgcaauga ggguuacaaa ggacacaaau gacaacaacc uuuacaaacu 1800
acauggugga cauguuucuu gcagagugaa auugucagcu uugacacuca aggggacauc 1860
cuacaaaaua ugcacugaca aaauguuuuu ugucaagaac ccaacugaca cuggccaugg 1920
cacuguugug augcagguga aagugucaaa aggagccccc ugcaggauuc cagugauagu 1980
agcugaugau cuuacagcgg caaucaauaa aggcauuuug guuacaguua accccaucgc 2040
cucaaccaau gaugaugaag ugcugauuga ggugaaccca ccuuuuggag acagcuacau 2100
uaucguuggg agaggagauu cacgucucac uuaccagugg cacaaagagg gaagcucaau 2160
aggaaaguug uucacucaga ccaugaaagg cguggaacgc cuggccguca ugggagacac 2220
cgccugggau uucagcuccg cuggaggguu cuucacuucg guugggaaag gaauucauac 2280
gguguuuggc ucugccuuuc aggggcuauu uggcggcuug aacuggauaa caaaggucau 2340
caugggggcg guacuuauau ggguuggcau caacacaaga aacaugacaa uguccaugag 2400
caugaucuug guaggaguga ucaugauguu uuugucucua ggaguugggg cggaucaagg 2460
augcgccauc aacuuuggca agagagagcu caagugcgga gaugguaucu ucauauuuag 2520
agacucugau gacuggcuga acaaguacuc auacuaucca gaagauccug ugaagcuugc 2580
aucaauagug aaagccucuu uugaagaagg gaaguguggc cuaaauucag uugacucccu 2640
ugagcaugag auguggagaa gcagggcaga ugagaucaau gccauuuuug aggaaaacga 2700
gguggacauu ucuguugucg ugcaggaucc aaagaauguu uaccagagag gaacucaucc 2760
auuuuccaga auucgggaug gucugcagua ugguuggaag acuuggggua agaaccuugu 2820
guucucccca gggaggaaga auggaagcuu caucauagau ggaaagucca ggaaagaaug 2880
cccguuuuca aaccgggucu ggaauucuuu ccagauagag gaguuuggga cgggaguguu 2940
caccacacgc guguacaugg acgcagucuu ugaauacacc auagacugcg auggaucuau 3000
cuugggugca gcggugaacg gaaaaaagag ugcccauggc ucuccaacau uuuggauggg 3060
aagucaugaa guaaauggga cauggaugau ccacaccuug gaggcauuag auuacaagga 3120
gugugagugg ccacugacac auacgauugg aacaucaguu gaagagagug aaauguucau 3180
gccgagauca aucggaggcc caguuagcuc ucacaaucau aucccuggau acaagguuca 3240
gacgaacgga ccuuggaugc agguaccacu agaagugaag agagaagcuu gcccagggac 3300
uagcgugauc auugauggca acugugaugg acggggaaaa ucaaccagau ccaccacgga 3360
uagcgggaaa guuauuccug aaugguguug ccgcuccugc acaaugccgc cugugagcuu 3420
ccaugguagu gauggguguu gguaucccau ggaaauuagg ccaaggaaaa cgcaugaaag 3480
ccaucuggug cgcuccuggg uuacagcugg agaaauacau gcugucccuu uugguuuggu 3540
gagcaugaug auagcaaugg aagugguccu aaggaaaaga cagggaccaa agcaaauguu 3600
gguuggagga guagugcucu ugggagcaau gcuggucggg caaguaacuc uccuugauuu 3660
gcugaaacuc acaguggcug ugggauugca uuuccaugag augaacaaug gaggagacgc 3720
cauguauaug gcguugauug cugccuuuuc aaucagacca gggcugcuca ucggcuuugg 3780
gcucaggacc cuauggagcc cucgggaacg ccuugugcug acccuaggag cagccauggu 3840
ggagauugcc uuggguggcg ugaugggcgg ccuguggaag uaucuaaaug caguuucucu 3900
cugcauccug acaauaaaug cuguugcuuc uaggaaagca ucaaauacca ucuugccccu 3960
cauggcucug uugacaccug ucacuauggc ugaggugaga cuugccgcaa uguucuuuug 4020
ugccgugguu aucauagggg uccuucacca gaauuucaag gacaccucca ugcagaagac 4080
uauaccucug guggcccuca cacucacauc uuaccugggc uugacacaac cuuuuuuggg 4140
ccugugugca uuucuggcaa cccgcauauu ugggcgaagg aguaucccag ugaaugaggc 4200
acucgcagca gcuggucuag ugggagugcu ggcaggacug gcuuuucagg agauggagaa 4260
cuuccuuggu ccgauugcag uuggaggacu ccugaugaug cugguuagcg uggcugggag 4320
gguggauggg cuagagcuca agaagcuugg ugaaguuuca ugggaagagg aggcggagau 4380
cagcgggagu uccgcccgcu augauguggc acucagugaa caaggggagu ucaagcugcu 4440
uucugaagag aaagugccau gggaccaggu ugugaugacc ucgcuggccu ugguuggggc 4500
ugcccuccau ccauuugcuc uucugcuggu ccuugcuggg uggcuguuuc augucagggg 4560
agcuaggaga aguggggaug ucuuguggga uauucccacu ccuaagauca ucgaggaaug 4620
ugaacaucug gaggauggga uuuauggcau auuccaguca accuucuugg gggccuccca 4680
gcgaggagug ggaguggcac agggaggggu guuccacaca auguggcaug ucacaagagg 4740
agcuuuccuu gucaggaaug gcaagaaguu gauuccaucu ugggcuucag uaaaggaaga 4800
ccuugucgcc uaugguggcu cauggaaguu ggaaggcaga ugggauggag aggaagaggu 4860
ccaguugauc gcggcuguuc caggaaagaa cguggucaac guccagacaa aaccgagcuu 4920
guucaaagug aggaaugggg gagaaaucgg ggcugucgcu cuugacuauc cgaguggcac 4980
uucaggaucu ccuauuguua acaggaacgg agaggugauu gggcuguacg gcaauggcau 5040
ccuugucggu gacaacuccu ucguguccgc cauaucccag acugagguga aggaagaagg 5100
aaaggaggag cuccaagaga ucccgacaau gcuaaagaaa ggaaugacaa cuguccuuga 5160
uuuucauccu ggagcuggga agacaagacg uuuccuccca cagaucuugg ccgagugcgc 5220
acggagacgc uugcgcacuc uuguguuggc ccccaccagg guuguucuuu cugaaaugaa 5280
ggaggcuuuu cacggccugg acgugaaauu ccacacacag gcuuuuuccg cucacggcag 5340
cgggagagaa gucauugaug ccaugugcca ugccacccua acuuacagga uguuggaacc 5400
aacuaggguu guuaacuggg aagugaucau uauggaugaa gcccauuuuu uggauccagc 5460
uagcauagcc gcuagagguu gggcagcgca cagagcuagg gcaaaugaaa gugcaacaau 5520
cuugaugaca gccacaccgc cugggacuag ugaugaauuu ccacauucaa auggugaaau 5580
agaagauguu caaacggaca uacccaguga gcccuggaac acagggcaug acuggauccu 5640
agcugacaaa aggcccacgg caugguuccu uccauccauc agagcugcaa augucauggc 5700
ugccucuuug cguaaggcug gaaagagugu ggugguccug aacaggaaaa ccuuugagag 5760
agaauacccc acgauaaagc agaagaaacc ugacuuuaua uuggccacug acauagcuga 5820
aaugggagcc aaccuuugcg uggagcgagu gcuggauugc aggacggcuu uuaagccugu 5880
gcuuguggau gaagggagga agguggcaau aaaagggcca cuucguaucu ccgcauccuc 5940
ugcugcucaa aggagggggc gcauugggag aaaucccaac agagauggag acucauacua 6000
cuauucugag ccuacaagug aaaauaaugc ccaccacguc ugcugguugg aggccucaau 6060
gcucuuggac aacauggagg ugaggggugg aauggucgcc ccacucuaug gcguugaagg 6120
aacuaaaaca ccaguuuccc cuggugaaau gagacugagg gaugaccaga ggaaagucuu 6180
cagagaacua gugaggaauu gugaccugcc cguuuggcuu ucguggcaag uggccaaggc 6240
ugguuugaag acgaaugauc guaaguggug uuuugaaggc ccugaggaac augagaucuu 6300
gaaugacagc ggugaaacag ugaagugcag ggcuccugga ggagcaaaga agccucugcg 6360
cccaaggugg ugugaugaaa gggugucauc ugaccagagu gcgcugucug aauuuauuaa 6420
guuugcugaa gguaggaggg gagcugcuga agugcuaguu gugcugagug aacucccuga 6480
uuuccuggcu aaaaaaggug gagaggcaau ggauaccauc aguguguucc uccacucuga 6540
ggaaggcucu agggcuuacc gcaaugcacu aucaaugaug ccugaggcaa ugacaauagu 6600
caugcuguuu auacuggcug gacuacugac aucgggaaug gucaucuuuu ucaugucucc 6660
caaaggcauc aguagaaugu cuauggcgau gggcacaaug gccggcugug gauaucucau 6720
guuccuugga ggcgucaaac ccacucacau cuccuauguc augcucauau ucuuuguccu 6780
gauggugguu gugauccccg agccagggca acaaaggucc auccaagaca accaaguggc 6840
auaccucauu auuggcaucc ugacgcuggu uucagcggug gcagccaacg agcuaggcau 6900
gcuggagaaa accaaagagg accucuuugg gaagaagaac uuaauuccau cuagugcuuc 6960
acccuggagu uggccggauc uugaccugaa gccaggagcu gccuggacag uguacguugg 7020
cauuguuaca augcucucuc caauguugca ccacuggauc aaagucgaau auggcaaccu 7080
gucucugucu ggaauagccc agucagccuc aguccuuucu uucauggaca aggggauacc 7140
auucaugaag augaauaucu cggucauaau gcugcugguc aguggcugga auucaauaac 7200
agugaugccu cugcucugug gcauagggug cgccaugcuc cacuggucuc ucauuuuacc 7260
uggaaucaaa gcgcagcagu caaagcuugc acagagaagg guguuccaug gcguugccga 7320
gaacccugug guugauggga auccaacagu ugacauugag gaagcuccug aaaugccugc 7380
ccuuuaugag aagaaacugg cucuauaucu ccuucuugcu cucagccuag cuucuguugc 7440
caugugcaga acgcccuuuu cauuggcuga aggcauuguc cuagcaucag cugccuuagg 7500
gccgcucaua gagggaaaca ccagccuucu uuggaaugga cccauggcug ucuccaugac 7560
aggagucaug agggggaauc acuaugcuuu ugugggaguc auguacaauc uauggaagau 7620
gaaaacugga cgccggggga gcgcgaaugg aaaaacuuug ggugaagucu ggaagaggga 7680
acugaaucug uuggacaagc gacaguuuga guuguauaaa aggaccgaca uuguggaggu 7740
ggaucgugau acggcacgca ggcauuuggc cgaagggaag guggacaccg ggguggcggu 7800
cuccaggggg accgcaaagu uaaggugguu ccaugagcgu ggcuauguca agcuggaagg 7860
uagggugauu gaccuggggu guggccgcgg aggcuggugu uacuacgcug cugcgcaaaa 7920
ggaagugagu ggggucaaag gauuuacucu uggaagagac ggccaugaga aacccaugaa 7980
ugugcaaagu cugggaugga acaucaucac cuucaaggac aaaacugaua uccaccgccu 8040
agaaccagug aaaugugaca cccuuuugug ugacauugga gagucaucau cgucaucggu 8100
cacagagggg gaaaggaccg ugagaguucu ugauacugua gaaaaauggc uggcuugugg 8160
gguugacaac uucuguguga agguguuagc uccauacaug ccagauguuc ucgagaaacu 8220
ggaauugcuc caaaggaggu uuggcggaac agugaucagg aacccucucu ccaggaauuc 8280
cacucaugaa auguacuacg ugucuggagc ccgcagcaau gucacauuua cugugaacca 8340
aacaucccgc cuccugauga ggagaaugag gcguccaacu ggaaaaguga cccuggaggc 8400
ugacgucauc cucccaauug ggacacgcag uguugagaca gacaagggac cccuggacaa 8460
agaggccaua gaagaaaggg uugagaggau aaaaucugag uacaugaccu cuugguuuua 8520
ugacaaugac aaccccuaca ggaccuggca cuacuguggc uccuauguca caaaaaccuc 8580
aggaagugcg gcgagcaugg uaaauggugu uauuaaaauu cugacauauc caugggacag 8640
gauagaggag gucacaagaa uggcaaugac ugacacaacc ccuuuuggac agcaaagagu 8700
guuuaaagaa aaaguugaca ccagagcaaa ggauccacca gcgggaacua ggaagaucau 8760
gaaaguuguc aacagguggc uguuccgcca ccuggccaga gaaaagaacc ccagacugug 8820
cacaaaggaa gaauuuauug caaaaguccg aagucaugca gccauuggag cuuaccugga 8880
agaacaagaa caguggaaga cugccaauga ggcuguccaa gacccaaagu ucugggaacu 8940
gguggaugaa gaaaggaagc ugcaccaaca aggcaggugu cggacuugug uguacaacau 9000
gauggggaaa agagagaaga agcugucaga guuugggaaa gcaaagggaa gccgugccau 9060
augguauaug uggcugggag cgcgguaucu ugaguuugag gcccugggau uccugaauga 9120
ggaccauugg gcuuccaggg aaaacucagg aggaggagug gaaggcauug gcuuacaaua 9180
ccuaggauau gugaucagag accuggcugc aauggauggu gguggauucu acgcggauga 9240
caccgcugga ugggacacgc gcaucacaga ggcagaccuu gaugaugaac aggagaucuu 9300
gaacuacaug agcccacauc acaaaaaacu ggcacaagca gugauggaaa ugacauacaa 9360
gaacaaagug gugaaagugu ugagaccagc cccaggaggg aaagccuaca uggaugucau 9420
aagucgacga gaccagagag gauccgggca gguagugacu uaugcucuga acaccaucac 9480
caacuugaaa guccaauuga ucagaauggc agaagcagag auggugauac aucaccaaca 9540
uguucaagau ugugaugaau caguucugac caggcuggag gcauggcuca cugagcacgg 9600
augugacaga cugaagagga uggcggugag uggagacgac uguguggucc ggcccaucga 9660
ugacagguuc ggccuggccc ugucccaucu caacgccaug uccaagguua gaaaggacau 9720
aucugaaugg cagccaucaa aaggguggaa ugauugggag aaugugcccu ucuguuccca 9780
ccacuuccau gaacuacagc ugaaggaugg caggaggauu guggugccuu gccgagaaca 9840
ggacgagcuc auugggagag gaaggguguc uccaggaaac ggcuggauga ucaaggaaac 9900
agcuugccuc agcaaagccu augccaacau guggucacug auguauuuuc acaaaaggga 9960
caugaggcua cugucauugg cuguuuccuc agcuguuccc accucauggg uuccacaagg 10020
acgcacaaca uggucgauuc augggaaagg ggaguggaug accacggaag acaugcuuga 10080
gguguggaac agaguaugga uaaccaacaa cccacacaug caggacaaga caauggugaa 10140
aaaauggaga gaugucccuu aucuaaccaa gagacaagac aagcugugcg gaucacugau 10200
uggaaugacc aauagggcca ccugggccuc ccacauccau uuagucaucc aucguauccg 10260
aacgcugauu ggacaggaga aauacacuga cuaccuaaca gucauggaca gguauucugu 10320
ggaugcugac cugcaacugg gugagcuuau cugaaacacc aucuaacagg aauaaccggg 10380
auacaaacca cggguggaga accggacucc ccacaaccug aaaccgggau auaaaccacg 10440
gcuggagaac cgggcuccgc acuuaaaaug aaacagaaac cgggauaaaa acuacggaug 10500
gagaaccgga cuccacacau ugagacagaa gaaguuguca gcccagaacc ccacacgagu 10560
uuugccacug cuaagcugug aggcagugca ggcugggaca gccgaccucc agguugcgaa 10620
aaaccugguu ucugggaccu cccaccccag aguaaaaaga acggagccuc cgcuaccacc 10680
cucccacgug gugguagaaa gacggggucu agagguuaga ggagacccuc cagggaacaa 10740
auagugggac cauauugacg ccagggaaag accggagugg uucucugcuu uuccuccaga 10800
ggucugugag cacaguuugc ucaagaauaa gcagaccuuu ggaugacaaa cacaaaacca 10860
cu 10862
<210> 2
<211> 10862
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA sequence of the YFV YF-Vax? strain
<400> 2
aguaaauccu gugugcuaau ugaggugcau uggucugcaa aucgaguugc uaggcaauaa 60
acacauuugg auuaauuuua aucguucguu gagcgauuag cagagaacug accagaacau 120
gucuggucgu aaagcucagg gaaaaacccu gggcgucaau augguacgac gaggaguucg 180
cuccuuguca aacaaaauaa aacaaaaaac aaaacaaauu ggaaacagac cuggaccuuc 240
aagagguguu caaggauuua ucuuuuucuu uuuguucaac auuuugacug gaaaaaagau 300
cacagcccac cuaaagaggu uguggaaaau gcuggaccca agacaaggcu uggcuguucu 360
aaggaaaguc aagagagugg uggccaguuu gaugagagga uuguccucaa ggaaacgccg 420
uucccaugau guucugacug ugcaauuccu aauuuuggga augcuguuga ugacgggugg 480
agugaccuug gugcggaaaa acagaugguu gcuccuaaau gugacaucug aggaccucgg 540
gaaaacauuc ucugugggca caggcaacug cacaacaaac auuuuggaag ccaaguacug 600
gugcccagac ucaauggaau acaacugucc caaucucagu ccaagagagg agccagauga 660
cauugauugc uggugcuaug ggguggaaaa cguuagaguc gcauauggua agugugacuc 720
agcaggcagg ucuaggaggu caagaagggc cauugacuug ccuacgcaug aaaaccaugg 780
uuugaagacc cggcaagaaa aauggaugac uggaagaaug ggugaaaggc aacuccaaaa 840
gauugagaga ugguucguga ggaaccccuu uuuugcagug acggcucuga ccauugccua 900
ccuuguggga agcaacauga cgcaacgagu cgugauugcc cuacuggucu uggcuguugg 960
uccggccuac ucagcucacu gcauuggaau uacugacagg gauuucauug agggggugca 1020
uggaggaacu uggguuucag cuacccugga gcaagacaag ugugucacug uuauggcccc 1080
ugacaagccu ucauuggaca ucucacuaga gacaguagcc auugauagac cugcugaggu 1140
gaggaaagug uguuacaaug caguucucac ucaugugaag auuaaugaca agugccccag 1200
cacuggagag gcccaccuag cugaagagaa cgaaggggac aaugcgugca agcgcacuua 1260
uucugauaga ggcuggggca auggcugugg ccuauuuggg aaagggagca uuguggcaug 1320
cgccaaauuc acuugugcca aauccaugag uuuguuugag guugaucaga ccaaaauuca 1380
guaugucauc agagcacaau ugcauguagg ggccaagcag gaaaauugga cuaccgacau 1440
uaagacucuc aaguuugaug cccugucagg cucccaggaa gucgaguuca uuggguaugg 1500
aaaagcuaca cuggaaugcc aggugcaaac ugcgguggac uuugguaaca guuacaucgc 1560
ugagauggaa acagagagcu ggauagugga cagacagugg gcccaggacu ugacccugcc 1620
auggcagagu ggaaguggcg ggguguggag agagaugcau caucuugucg aauuugaacc 1680
uccgcaugcc gccacuauca gaguacuggc ccugggaaac caggaaggcu ccuugaaaac 1740
agcucuuacu ggcgcaauga ggguuacaaa ggacacaaau gacaacaacc uuuacaaacu 1800
acauggugga cauguuucuu gcagagugaa auugucagcu uugacacuca aggggacauc 1860
cuacaaaaua ugcacugaca aaauguuuuu ugucaagaac ccaacugaca cuggccaugg 1920
cacuguugug augcagguga aagugucaaa aggagccccc ugcaggauuc cagugauagu 1980
agcugaugau cuuacagcgg caaucaauaa aggcauuuug guuacaguua accccaucgc 2040
cucaaccaau gaugaugaag ugcugauuga ggugaaccca ccuuuuggag acagcuacau 2100
uaucguuggg agaggagauu cacgucucac uuaccagugg cacaaagagg gaagcucaau 2160
aggaaaguug uucacucaga ccaugaaagg cguggaacgc cuggccguca ugggagacac 2220
cgccugggau uucagcuccg cuggaggguu cuucacuucg guugggaaag gaauucauac 2280
gguguuuggc ucugccuuuc aggggcuauu uggcggcuug aacuggauaa caaaggucau 2340
caugggggcg guacuuauau ggguuggcau caacacaaga aacaugacaa uguccaugag 2400
caugaucuug guaggaguga ucaugauguu uuugucucua ggaguugggg cggaucaagg 2460
augcgccauc aacuuuggca agagagagcu caagugcgga gaugguaucu ucauauuuag 2520
agacucugau gacuggcuga acaaguacuc auacuaucca gaagauccug ugaagcuugc 2580
aucaauagug aaagccucuu uugaagaagg gaaguguggc cuaaauucag uugacucccu 2640
ugagcaugag auguggagaa gcagggcaga ugagaucaau gccauuuuug aggaaaacga 2700
gguggacauu ucuguugucg ugcaggaucc aaagaauguu uaccagagag gaacucaucc 2760
auuuuccaga auucgggaug gucugcagua ugguuggaag acuuggggua agaaccuugu 2820
guucucccca gggaggaaga auggaagcuu caucauagau ggaaagucca ggaaagaaug 2880
cccguuuuca aaccgggucu ggaauucuuu ccagauagag gaguuuggga cgggaguguu 2940
caccacacgc guguacaugg acgcagucuu ugaauacacc auagacugcg auggaucuau 3000
cuugggugca gcggugaacg gaaaaaagag ugcccauggc ucuccaacau uuuggauggg 3060
aagucaugaa guaaauggga cauggaugau ccacaccuug gaggcauuag auuacaagga 3120
gugugagugg ccacugacac auacgauugg aacaucaguu gaagagagug aaauguucau 3180
gccgagauca aucggaggcc caguuagcuc ucacaaucau aucccuggau acaagguuca 3240
gacgaacgga ccuuggaugc agguaccacu agaagugaag agagaagcuu gcccagggac 3300
uagcgugauc auugauggca acugugaugg acggggaaaa ucaaccagau ccaccacgga 3360
uagcgggaaa guuauuccug aaugguguug ccgcuccugc acaaugccgc cugugagcuu 3420
ccaugguagu gauggguguu gguaucccau ggaaauuagg ccaaggaaaa cgcaugaaag 3480
ccaucuggug cgcuccuggg uuacagcugg agaaauacau gcugucccuu uugguuuggu 3540
gagcaugaug auagcaaugg aagugguccu aaggaaaaga cagggaccaa agcaaauguu 3600
gguuggagga guagugcucu ugggagcaau gcuggucggg caaguaacuc uccuugauuu 3660
gcugaaacuc acaguggcug ugggauugca uuuccaugag augaacaaug gaggagacgc 3720
cauguauaug gcguugauug cugccuuuuc aaucagacca gggcugcuca ucggcuuugg 3780
gcucaggacc cuauggagcc cucgggaacg ccuugugcug acccuaggag cagccauggu 3840
ggagauugcc uuggguggcg ugaugggcgg ccuguggaag uaucuaaaug caguuucucu 3900
cugcauccug acaauaaaug cuguugcuuc uaggaaagca ucaaauacca ucuugccccu 3960
cauggcucug uugacaccug ucacuauggc ugaggugaga cuugccgcaa uguucuuuug 4020
ugccgugguu aucauagggg uccuucacca gaauuucaag gacaccucca ugcagaagac 4080
uauaccucug guggcccuca cacucacauc uuaccugggc uugacacaac cuuuuuuggg 4140
ccugugugca uuucuggcaa cccgcauauu ugggcgaagg aguaucccag ugaaugaggc 4200
acucgcagca gcuggucuag ugggagugcu ggcaggacug gcuuuucagg agauggagaa 4260
cuuccuuggu ccgauugcag uuggaggacu ccugaugaug cugguuagcg uggcugggag 4320
gguggauggg cuagagcuca agaagcuugg ugaaguuuca ugggaagagg aggcggagau 4380
cagcgggagu uccgcccgcu augauguggc acucagugaa caaggggagu ucaagcugcu 4440
uucugaagag aaagugccau gggaccaggu ugugaugacc ucgcuggccu ugguuggggc 4500
ugcccuccau ccauuugcuc uucugcuggu ccuugcuggg uggcuguuuc augucagggg 4560
agcuaggaga aguggggaug ucuuguggga uauucccacu ccuaagauca ucgaggaaug 4620
ugaacaucug gaggauggga uuuauggcau auuccaguca accuucuugg gggccuccca 4680
gcgaggagug ggaguggcac agggaggggu guuccacaca auguggcaug ucacaagagg 4740
agcuuuccuu gucaggaaug gcaagaaguu gauuccaucu ugggcuucag uaaaggaaga 4800
ccuugucgcc uaugguggcu cauggaaguu ggaaggcaga ugggauggag aggaagaggu 4860
ccaguugauc gcggcuguuc caggaaagaa cguggucaac guccagacaa aaccgagcuu 4920
guucaaagug aggaaugggg gagaaaucgg ggcugucgcu cuugacuauc cgaguggcac 4980
uucaggaucu ccuauuguua acaggaacgg agaggugauu gggcuguacg gcaauggcau 5040
ccuugucggu gacaacuccu ucguguccgc cauaucccag acugagguga aggaagaagg 5100
aaaggaggag cuccaagaga ucccgacaau gcuaaagaaa ggaaugacaa cuguccuuga 5160
uuuucauccu ggagcuggga agacaagacg uuuccuccca cagaucuugg ccgagugcgc 5220
acggagacgc uugcgcacuc uuguguuggc ccccaccagg guuguucuuu cugaaaugaa 5280
ggaggcuuuu cacggccugg acgugaaauu ccacacacag gcuuuuuccg cucacggcag 5340
cgggagagaa gucauugaug cuaugugcca ugccacccua acuuacagga uguuggaacc 5400
aacuaggguu guuaacuggg aagugaucau uauggaugaa gcccauuuuu uggauccagc 5460
uagcauagcc gcuagagguu gggcagcgca cagagcuagg gcaaaugaaa gugcaacaau 5520
cuugaugaca gccacaccgc cugggacuag ugaugaauuu ccacauucaa auggugaaau 5580
agaagauguu caaacggaca uacccaguga gcccuggaac acagggcaug acuggauccu 5640
ggcugacaaa aggcccacgg caugguuccu uccauccauc agagcugcaa augucauggc 5700
ugccucuuug cguaaggcug gaaagagugu ggugguccug aacaggaaaa ccuuugagag 5760
agaauacccc acgauaaagc agaagaaacc ugacuuuaua uuggccacug acauagcuga 5820
aaugggagcc aaccuuugcg uggagcgagu gcuggauugc aggacggcuu uuaagccugu 5880
gcuuguggau gaagggagga agguggcaau aaaagggcca cuucguaucu ccgcauccuc 5940
ugcugcucaa aggagggggc gcauugggag aaaucccaac agagauggag acucauacua 6000
cuauucugag ccuacaagug aaaauaaugc ccaccacguc ugcugguugg aggccucaau 6060
gcucuuggac aacauggagg ugaggggugg aauggucgcc ccacucuaug gcguugaagg 6120
aacuaaaaca ccaguuuccc cuggugaaau gagacugagg gaugaccaga ggaaagucuu 6180
cagagaacua gugaggaauu gugaccugcc cguuuggcuu ucguggcaag uggccaaggc 6240
ugguuugaag acgaaugauc guaaguggug uuuugaaggc ccugaggaac augagaucuu 6300
gaaugacagc ggugaaacag ugaagugcag ggcuccugga ggagcaaaga agccucugcg 6360
cccaaggugg ugugaugaaa gggugucauc ugaccagagu gcgcugucug aauuuauuaa 6420
guuugcugaa gguaggaggg gagcugcuga agugcuaguu gugcugagug aacucccuga 6480
uuuccuggcu aaaaaaggug gagaggcaau ggauaccauc aguguguuuc uccacucuga 6540
ggaaggcucu agggcuuacc gcaaugcacu aucaaugaug ccugaggcaa ugacaauagu 6600
caugcuguuu auacuggcug gacuacugac aucgggaaug gucaucuuuu ucaugucucc 6660
caaaggcauc aguagaaugu cuauggcgau gggcacaaug gccggcugug gauaucucau 6720
guuccuugga ggcgucaaac ccacucacau cuccuauauc augcucauau ucuuuguccu 6780
gauggugguu gugauccccg agccagggca acaaaggucc auccaagaca accaaguggc 6840
auaccucauu auuggcaucc ugacgcuggu uucagcggug gcagccaacg agcuaggcau 6900
gcuggagaaa accaaagagg accucuuugg gaagaagaac uuaauuccau cuagugcuuc 6960
acccuggagu uggccggauc uugaccugaa gccaggagcu gccuggacag uguacguugg 7020
cauuguuaca augcucucuc caauguugca ccacuggauc aaagucgaau auggcaaccu 7080
gucucugucu ggaauagccc agucagccuc aguccuuucu uucauggaca aggggauacc 7140
auucaugaag augaauaucu cggucauaau gcugcugguc aguggcugga auucaauaac 7200
agugaugccu cugcucugug gcauagggug cgccaugcuc cacuggucuc ucauuuuacc 7260
uggaaucaaa gcgcagcagu caaagcuugc acagagaagg guguuccaug gcguugccaa 7320
gaacccugug guugauggga auccaacagu ugacauugag gaagcuccug aaaugccugc 7380
ccuuuaugag aagaaacugg cucuauaucu ccuucuugcu cucagccuag cuucuguugc 7440
caugugcaga acgcccuuuu cauuggcuga aggcauuguc cuagcaucag cugcccuagg 7500
gccgcucaua gagggaaaca ccagccuucu uuggaaugga cccauggcug ucuccaugac 7560
aggagucaug agggggaauc acuaugcuuu ugugggaguc auguacaauc uauggaagau 7620
gaaaacugga cgccggggga gcgcgaaugg aaaaacuuug ggugaagucu ggaagaggga 7680
acugaaucug uuggacaagc gacaguuuga guuguauaaa aggaccgaca uuguggaggu 7740
ggaucgugau acggcacgca ggcauuuggc cgaagggaag guggacaccg ggguggcggu 7800
cuccaggggg accgcaaagu uaaggugguu ccaugagcgu ggcuauguca agcuggaagg 7860
uagggugauu gaccuggggu guggccgcgg aggcuggugu uacuacgcug cugcgcaaaa 7920
ggaagugagu ggggucaaag gauuuacucu uggaagagac ggccaugaga aacccaugaa 7980
ugugcaaagu cugggaugga acaucaucac cuucaaggac aaaacugaua uccaccgccu 8040
agaaccagug aaaugugaca cccuuuugug ugacauugga gagucaucau cgucaucggu 8100
cacagagggg gaaaggaccg ugagaguucu ugauacugua gaaaaauggc uggcuugugg 8160
gguugacaac uucuguguga agguguuagc uccauacaug ccagauguuc ucgagaaacu 8220
ggaauugcuc caaaggaggu uuggcggaac agugaucagg aacccucucu ccaggaauuc 8280
cacucaugaa auguacuacg ugucuggagc ccgcagcaau gucacauuua cugugaacca 8340
aacaucccgc cuccugauga ggagaaugag gcguccaacu ggaaaaguga cccuggaggc 8400
ugacgucauc cucccaauug ggacacgcag uguugagaca gacaagggac cccuggacaa 8460
agaggccaua gaagaaaggg uugagaggau aaaaucugag uacaugaccu cuugguuuua 8520
ugacaaugac aaccccuaca ggaccuggca cuacuguggc uccuauguca caaaaaccuc 8580
aggaagugcg gcgagcaugg uaaauggugu uauuaaaauu cugacauauc caugggacag 8640
gauagaggag gucacaagaa uggcaaugac ugacacaacc ccuuuuggac agcaaagagu 8700
guuuaaagaa aaaguugaca ccagagcaaa ggauccacca gcgggaacua ggaagaucau 8760
gaaaguuguc aacagguggc uguuccgcca ccuggccaga gaaaagaacc ccagacugug 8820
cacaaaggaa gaauuuauug caaaaguccg aagucaugca gccauuggag cuuaccugga 8880
agaacaagaa caguggaaga cugccaauga ggcuguccaa gacccaaagu ucugggaacu 8940
gguggaugaa gaaaggaagc ugcaccaaca aggcaggugu cggacuugug uguacaacau 9000
gauggggaaa agagagaaga agcugucaga guuugggaaa gcaaagggaa gccgugccau 9060
augguauaug uggcugggag cgcgguaucu ugaguuugag gcccugggau uccugaauga 9120
ggaccauugg gcuuccaggg aaaacucagg aggaggagug gaaggcauug gcuuacaaua 9180
ccuaggauau gugaucagag accuggcugc aauggauggu gguggauucu acgcggauga 9240
caccgcugga ugggacacgc gcaucacaga ggcagaccuu gaugaugaac aggagaucuu 9300
gaacuacaug agcccacauc acaaaaaacu ggcacaagca gugauggaaa ugacauacaa 9360
gaacaaagug gugaaagugu ugagaccagc cccaggaggg aaagccuaca uggaugucau 9420
aagucgacga gaccagagag gauccgggca gguagugacu uaugcucuga acaccaucac 9480
caacuugaaa guccaauuga ucagaauggc agaagcagag auggugauac aucaccaaca 9540
uguucaagau ugugaugaau caguucugac caggcuggag gcauggcuca cugagcacgg 9600
auguaacaga cugaagagga uggcggugag uggagacgac uguguggucc ggcccaucga 9660
ugacagguuc ggccuggccc ugucccaucu caacgccaug uccaagguua gaaaggacau 9720
aucugaaugg cagccaucaa aaggguggaa ugauugggag aaugugcccu ucuguuccca 9780
ccacuuccau gaacuacagc ugaaggaugg caggaggauu guggugccuu gccgagaaca 9840
ggacgagcuc auugggagag gaaggguguc uccaggaaac ggcuggauga ucaaggaaac 9900
agcuugccuc agcaaagccu augccaacau guggucacug auguauuuuc acaaaaggga 9960
caugaggcua cugucauugg cuguuuccuc agcuguuccc accucauggg uuccacaagg 10020
acgcacaaca uggucgauuc augggaaagg ggaguggaug accacggaag acaugcuuga 10080
gguguggaac agaguaugga uaaccaacaa cccacacaug caggacaaga caauggugaa 10140
aaaauggaga gaugucccuu aucuaaccaa gagacaagac aagcugugcg gaucacugau 10200
uggaaugacc aauagggcca ccugggccuc ccacauccau uuggucaucc aucguauccg 10260
aacgcugauu ggacaggaga aauacacuga cuaccuaaca gucauggaca gguauucugu 10320
ggaugcugac cugcaacugg gugagcuuau cugaaacacc aucuaacagg aauaaccggg 10380
auacaaacca cggguggaga accggacucc ccacaaccug aaaccgggau auaaaccacg 10440
gcuggagaac cggacuccgc acuuaaaaug aaacagaaac cgggauaaaa acuacggaug 10500
gagaaccgga cuccacacau ugagacagaa gaaguuguca gcccagaacc ccacacgagu 10560
uuugccacug cuaagcugug aggcagugca ggcugggaca gccgaccucc agguugcgaa 10620
aaaccugguu ucugggaccu cccaccccag aguaaaaaga acggagccuc cgcuaccacc 10680
cucccacgug gugguagaaa gacggggucu agagguuaga ggagacccuc cagggaacaa 10740
auagugggac cauauugacg ccagggaaag accggagugg uucucugcuu uuccuccaga 10800
ggucugugag cacaguuugc ucaagaauaa gcagaccuuu ggaugacaaa cacaaaacca 10860
cu 10862
<210> 3
<211> 10862
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA sequence of the YFV Stamaril? strain
<400> 3
aguaaauccu gugugcuaau ugaggugcau uggucugcaa aucgaguugc uaggcaauaa 60
acacauuugg auuaauuuua aucguucguu gagcgauuag cagagaacug accagaacau 120
gucuggucgu aaagcucagg gaaaaacccu gggcgucaau augguacgac gaggaguucg 180
cuccuuguca aacaaaauaa aacaaaaaac aaaacaaauu ggaaacagac cuggaccuuc 240
aagagguguu caaggauuua ucuuuuucuu uuuguucaac auuuugacug gaaaaaagau 300
cacagcccac cuaaagaggu uguggaaaau gcuggaccca agacaaggcu uggcuguucu 360
aaggaaaguc aagagagugg uggccaguuu gaugagagga uuguccucaa ggaaacgccg 420
uucccaugau guucugacug ugcaauuccu aauuuuggga augcuguuga ugacgggugg 480
agugaccuug gugcggaaaa acagaugguu gcuccuaaau gugacaucug aggaccucgg 540
gaaaacauuc ucugugggca caggcaacug cacaacaaac auuuuggaag ccaaguacug 600
gugcccagac ucaauggaau acaacugucc caaucucagu ccaagagagg agccagauga 660
cauugauugc uggugcuaug ggguggaaaa cguuagaguc gcauauggua agugugacuc 720
agcaggcagg ucuaggaggu caagaagggc cauugacuug ccuacgcaug aaaaccaugg 780
uuugaagacc cggcaagaaa aauggaugac uggaagaaug ggugaaaggc aacuccaaaa 840
gauugagaga ugguucguga ggaaccccuu uuuugcagug acggcucuga ccauugccua 900
ccuuguggga agcaacauga cgcaacgagu cgugauugcc cuacuggucu uggcuguugg 960
uccggccuac ucagcucacu gcauuggaau uacugacagg gauuucauug agggggugca 1020
uggaggaacu uggguuucag cuacccugga gcaagacaag ugugucacug uuauggcccc 1080
ugacaagccu ucauuggaca ucucacuaga gacaguagcc auugauagac cugcugaggu 1140
gaggaaagug uguuacaaug caguucucac ucaugugaag auuaaugaca agugccccag 1200
cacuggagag gcccaccuag cugaagagaa cgaaggggac aaugcgugca agcgcacuua 1260
uucugauaga ggcuggggca auggcugugg ccuauuuggg aaagggagca uuguggcaug 1320
cgccaaauuc acuugugcca aauccaugag uuuguuugag guugaucaga ccaaaauuca 1380
guaugucauc agagcacaau ugcauguagg ggccaagcag gaaaauugga auaccgacau 1440
uaagacucuc aaguuugaug cccugucagg cucccaggaa gucgaguuca uuggguaugg 1500
aaaagcuaca cuggaaugcc aggugcaaac ugcgguggac uuugguaaca guuacaucgc 1560
ugagauggaa acagagagcu ggauagugga cagacagugg gcccaggacu ugacccugcc 1620
auggcagagu ggaaguggcg ggguguggag agagaugcau caucuugucg aauuugaacc 1680
uccgcaugcc gccacuauca gaguacuggc ccugggaaac caggaaggcu ccuugaaaac 1740
agcucuuacu ggcgcaauga ggguuacaaa ggacacaaau gacaacaacc uuuacaaacu 1800
acauggugga cauguuucuu gcagagugaa auugucagcu uugacacuca aggggacauc 1860
cuacaaaaua ugcacugaca aaauguuuuu ugucaagaac ccaacugaca cuggccaugg 1920
cacuguugug augcagguga aagugucaaa aggagccccc ugcaggauuc cagugauagu 1980
agcugaugau cuuacagcgg caaucaauaa aggcauuuug guuacaguua accccaucgc 2040
cucaaccaau gaugaugaag ugcugauuga ggugaaccca ccuuuuggag acagcuacau 2100
uaucguuggg agaggagauu cacgucucac uuaccagugg cacaaagagg gaagcucaau 2160
aggaaaguug uucacucaga ccaugaaagg cguggaacgc cuggccguca ugggagacac 2220
cgccugggau uucagcuccg cuggaggguu cuucacuucg guugggaaag gaauucauac 2280
gguguuuggc ucugccuuuc aggggcuauu uggcggcuug aacuggauaa caaaggucau 2340
caugggggcg guacuuauau ggguuggcau caacacaaga aacaugacaa uguccaugag 2400
caugaucuug guaggaguga ucaugauguu uuugucucua ggaguugggg cggaucaagg 2460
augcgccauc aacuuuggca agagagagcu caagugcgga gaugguaucu ucauauuuag 2520
agacucugau gacuggcuga acaaguacuc auacuaucca gaagauccug ugaagcuugc 2580
aucaauagug aaagccucuu uugaagaagg gaaguguggc cuaaauucag uugacucccu 2640
ugagcaugag auguggagaa gcagggcaga ugagaucaau gccauuuuug aggaaaacga 2700
gguggacauu ucuguugucg ugcaggaucc aaagaauguu uaccagagag gaacucaucc 2760
auuuuccaga auucgggaug gucugcagua ugguuggaag acuuggggua agaaccuugu 2820
guucucccca gggaggaaga auggaagcuu caucauagau ggaaagucca ggaaagaaug 2880
cccguuuuca aaccgggucu ggaauucuuu ccagauagag gaguuuggga cgggaguguu 2940
caccacacgc guguacaugg acgcagucuu ugaauacacc auagacugcg auggaucuau 3000
cuugggugca gcggugaacg gaaaaaagag ugcccauggc ucuccaacau uuuggauggg 3060
aagucaugaa guaaauggga cauggaugau ccacaccuug gaggcauuag auuacaagga 3120
gugugagugg ccacugacac auacgauugg aacaucaguu gaagagagug aaauguucau 3180
gccgagauca aucggaggcc caguuagcuc ucacaaucau aucccuggau acaagguuca 3240
gacgaacgga ccuuggaugc agguaccacu agaagugaag agagaagcuu gcccagggac 3300
uagcgugauc auugauggca acugugaugg acggggaaaa ucaaccagau ccaccacgga 3360
uagcgggaaa guuauuccug aaugguguug ccgcuccugc acaaugccgc cugugagcuu 3420
ccaugguagu gauggguguu gguaucccau ggaaauuagg ccaaggaaaa cgcaugaaag 3480
ccaucuggug cgcuccuggg uuacagcugg agaaauacau gcugucccuu uugguuuggu 3540
gagcaugaug auagcaaugg aagugguccu aaggaaaaga cagggaccaa agcaaauguu 3600
gguuggagga guagugcucu ugggagcaau gcuggucggg caaguaacuc uccuugauuu 3660
gcugaaacuc acaguggcug ugggauugca uuuccaugag augaacaaug gaggagacgc 3720
cauguauaug gcguugauug cugccuuuuc aaucagacca gggcugcuca ucggcuuugg 3780
gcucaggacc cuauggagcc cucgggaacg ccuugugcug acccuaggag cagccauggu 3840
ggagauugcc uuggguggcg ugaugggcgg ccuguggaag uaucuaaaug caguuucucu 3900
cugcauccug acaauaaaug cuguugcuuc uaggaaagca ucaaauacca ucuugccccu 3960
cauggcucug uugacaccug ucacuauggc ugaggugaga cuugccgcaa uguucuuuug 4020
ugccgugguu aucauagggg uccuucacca gaacuucaag gacaccucca ugcagaagac 4080
uauaccucug guggcccuca cacucacauc uuaccugggc uugacacaac cuuuuuuggg 4140
ccugugugca uuucuggcaa cccgcauauu ugggcgaagg aguaucccag ugaaugaggc 4200
acucgcagca gcuggucuag ugggagugcu ggcaggacug gcuuuucagg agauggagaa 4260
cuuccuuggu ccgauugcag uuggaggacu ccugaugaug cugguuagcg uggcugggag 4320
gguggauggg cuagagcuca agaagcuugg ugaaguuuca ugggaagagg aggcggagau 4380
cagcgggagu uccgcccgcu augauguggc acucagugaa caaggggagu ucaagcugcu 4440
uucugaagag aaagugccau gggaccaggu ugugaugacc ucgcuggccu ugguuggggc 4500
ugcccuccau ccauuugcuc uucugcuggu ccuugcuggg uggcuguuuc augucagggg 4560
agcuaggaga aguggggaug ucuuguggga uauucccacu ccuaagauca ucgaggaaug 4620
ugaacaucug gaggauggga uuuauggcau auuccaguca accuucuugg gggccuccca 4680
gcgaggagug ggaguggcac agggaggggu guuccacaca auguggcaug ucacaagagg 4740
agcuuuccuu gucaggaaug gcaagaaguu gauuccaucu ugggcuucag uaaaggaaga 4800
ccuugucgcc uaugguggcu cauggaaguu ggaaggcaga ugggauggag aggaagaggu 4860
ccaguugauc gcggcuguuc caggaaagaa cguggucaac guccagacaa aaccgagcuu 4920
guucaaagug aggaaugggg gagaaaucgg ggcugucgcu cuugacuauc cgaguggcac 4980
uucaggaucu ccuauuguua acaggaacgg agaggugauu gggcuguacg gcaauggcau 5040
ccuugucggu gacaacuccu ucguguccgc cauaucccag acugagguga aggaagaagg 5100
aaaggaggag cuccaagaga ucccgacaau gcuaaagaaa ggaaugacaa cuguccuuga 5160
uuuucauccu ggagcuggga agacaagacg uuuccuccca cagaucuugg ccgagugcgc 5220
acggagacgc uugcgcacuc uuguguuggc ccccaccagg guuguucuuu cugaaaugaa 5280
ggaggcuuuu cacggccugg acgugaaauu ccacacacag gcuuuuuccg cucacggcag 5340
cgggagagaa gucauugaug ccaugugcca ugccacccua acuuacagga uguuggaacc 5400
aacuaggguu guuaacuggg aagugaucau uauggaugaa gcccauuuuu uggauccagc 5460
uagcauagcc gcuagagguu gggcagcgca cagagcuagg gcaaaugaaa gugcaacaau 5520
cuugaugaca gccacaccgc cugggacuag ugaugaauuu ccacauucaa auggugaaau 5580
agaagauguu caaacggaca uacccaguga gcccuggaac acagggcaug acuggauccu 5640
ggcugacaaa aggcccacgg caugguuccu uccauccauc agagcugcaa augucauggc 5700
ugccucuuug cguaaggcug gaaagagugu ggugguccug aacaggaaaa ccuuugagag 5760
agaauacccc acgauaaagc agaagaaacc ugacuuuaua uuggccacug acauagcuga 5820
aaugggagcc aaccuuugcg uggagcgagu gcuggauugc aggacggcuu uuaagccugu 5880
gcuuguggau gaagggagga agguggcaau aaaagggcca cuucguaucu ccgcauccuc 5940
ugcugcucaa aggagggggc gcauugggag aaaucccaac agagauggag acucauacua 6000
cuauucugag ccuacaagug aaaauaaugc ccaccacguc ugcugguugg aggccucaau 6060
gcucuuggac aacauggagg ugaggggugg aauggucgcc ccacucuaug gcguugaagg 6120
aacuaaaaca ccaguuuccc cuggugaaau gagacugagg gaugaccaga ggaaagucuu 6180
cagagaacua gugaggaauu gugaccugcc cguuuggcuu ucguggcaag uggccaaggc 6240
ugguuugaag acgaaugauc guaaguggug uuuugaaggc ccugaggaac augagaucuu 6300
gaaugacagc ggugaaacag ugaagugcag ggcuccugga ggagcaaaga agccucugcg 6360
cccaaggugg ugugaugaaa gggugucauc ugaccagagu gcgcugucug aauuuauuaa 6420
guuugcugaa gguaggaggg gagcugcuga agugcuaguu gugcugagug aacucccuga 6480
uuuccuggcu aaaaaaggug gagaggcaau ggauaccauc aguguguuuc uccacucuga 6540
ggaaggcucu agggcuuacc gcaaugcacu aucaaugaug ccugaggcaa ugacaauagu 6600
caugcuguuu auacuggcug gacuacugac aucgggaaug gucaucuuuu ucaugucucc 6660
caaaggcauc aguagaaugu cuauggcgau gggcacaaug gccggcugug gauaucucau 6720
guuccuugga ggcgucaaac ccacucacau cuccuauauc augcucauau ucuuuguccu 6780
gauggugguu gugauccccg agccagggca acaaaggucc auccaagaca accaaguggc 6840
auaccucauu auuggcaucc ugacgcuggu uucagcggug gcagccaacg agcuaggcau 6900
gcuggagaaa accaaagagg accucuuugg gaagaagaac uuaauuccau cuagugcuuc 6960
acccuggagu uggccggauc uugaccugaa gccaggagcu gccuggacag uguacguugg 7020
cauuguuaca augcucucuc caauguugca ccacuggauc aaagucgaau auggcaaccu 7080
gucucugucu ggaauagccc agucagccuc aguccuuucu uucauggaca aggggauacc 7140
auucaugaag augaauaucu cggucauaau gcugcugguc aguggcugga auucaauaac 7200
agugaugccu cugcucugug gcauagggug cgccaugcuc cacuggucuc ucauuuuacc 7260
uggaaucaaa gcgcagcagu caaagcuugc acagagaagg guguuccaug gcguugccaa 7320
gaacccugug guugauggga auccaacagu ugacauugag gaagcuccug aaaugccugc 7380
ccuuuaugag aagaaacugg cucuauaucu ccuucuugcu cucagccuag cuucuguugc 7440
caugugcaga acgcccuuuu cauuggcuga aggcauuguc cuagcaucag cugccuuagg 7500
gccgcucaua gagggaaaca ccagccuucu uuggaaugga cccauggcug ucuccaugac 7560
aggagucaug agggggaauc acuaugcuuu ugugggaguc auguacaauc uauggaagau 7620
gaaaacugga cgccggggga gcgcgaaugg aaaaacuuug ggugaagucu ggaagaggga 7680
acugaaucug uuggacaagc gacaguuuga guuguauaaa aggaccgaca uuguggaggu 7740
ggaucgugau acggcacgca ggcauuuggc cgaagggaag guggacaccg ggguggcggu 7800
cuccaggggg accgcaaagu uaaggugguu ccaugagcgu ggcuauguca agcuggaagg 7860
uagggugauu gaccuggggu guggccgcgg aggcuggugu uacuacgcug cugcgcaaaa 7920
ggaagugagu ggggucaaag gauuuacucu uggaagagac ggccaugaga aacccaugaa 7980
ugugcaaagu cugggaugga acaucaucac cuucaaggac aaaacugaua uccaccgccu 8040
agaaccagug aaaugugaca cccuuuugug ugacauugga gagucaucau cgucaucggu 8100
cacagagggg gaaaggaccg ugagaguucu ugauacugua gaaaaauggc uggcuugugg 8160
gguugacaac uucuguguga agguguuagc uccauacaug ccagauguuc ucgagaaacu 8220
ggaauugcuc caaaggaggu uuggcggaac agugaucagg aacccucucu ccaggaauuc 8280
cacucaugaa auguacuacg ugucuggagc ccgcagcaau gucacauuua cugugaacca 8340
aacaucccgc cuccugauga ggagaaugag gcguccaacu ggaaaaguga cccuggaggc 8400
ugacgucauc cucccaauug ggacacgcag uguugagaca gacaagggac cccuggacaa 8460
agaggccaua gaagaaaggg uugagaggau aaaaucugag uacaugaccu cuugguuuua 8520
ugacaaugac aaccccuaca ggaccuggca cuacuguggc uccuauguca caaaaaccuc 8580
aggaagugcg gcgagcaugg uaaauggugu uauuaaaauu cugacauauc caugggacag 8640
gauagaggag gucacaagaa uggcaaugac ugacacaacc ccuuuuggac agcaaagagu 8700
guuuaaagaa aaaguugaca ccagagcaaa ggauccacca gcgggaacua ggaagaucau 8760
gaaaguuguc aacagguggc uguuccgcca ccuggccaga gaaaagaacc ccagacugug 8820
cacaaaggaa gaauuuauug caaaaguccg aagucaugca gccauuggag cuuaccugga 8880
agaacaagaa caguggaaga cugccaauga ggcuguccaa gacccaaagu ucugggaacu 8940
gguggaugaa gaaaggaagc ugcaccaaca aggcaggugu cggacuugug uguacaacau 9000
gauggggaaa agagagaaga agcugucaga guuugggaaa gcaaagggaa gccgugccau 9060
augguauaug uggcugggag cgcgguaucu ugaguuugag gcccugggau uccugaauga 9120
ggaccauugg gcuuccaggg aaaacucagg aggaggagug gaaggcauug gcuuacaaua 9180
ccuaggauau gugaucagag accuggcugc aauggauggu gguggauucu acgcggauga 9240
caccgcugga ugggacacgc gcaucacaga ggcagaccuu gaugaugaac aggagaucuu 9300
gaacuacaug agcccacauc acaaaaaacu ggcacaagca gugauggaaa ugacauacaa 9360
gaacaaagug gugaaagugu ugagaccagc cccaggaggg aaagccuaca uggaugucau 9420
aagucgacga gaccagagag gauccgggca gguagugacu uaugcucuga acaccaucac 9480
caacuugaaa guccaauuga ucagaauggc agaagcagag auggugauac aucaccaaca 9540
uguucaagau ugugaugaau caguucugac caggcuggag gcauggcuca cugagcacgg 9600
auguaacaga cugaagagga uggcggugag uggagacgac uguguggucc ggcccaucga 9660
ugacagguuc ggccuggccc ugucccaucu caacgccaug uccaagguua gaaaggacau 9720
aucugaaugg cagccaucaa aaggguggaa ugauugggag aaugugcccu ucuguuccca 9780
ccacuuccau gaacuacagc ugaaggaugg caggaggauu guggugccuu gccgagaaca 9840
ggacgagcuc auugggagag gaaggguguc uccaggaaac ggcuggauga ucaaggaaac 9900
agcuugccuc agcaaagccu augccaacau guggucacug auguauuuuc acaaaaggga 9960
caugaggcua cugucauugg cuguuuccuc agcuguuccc accucauggg uuccacaagg 10020
acgcacaaca uggucgauuc augggaaagg ggaguggaug accacggaag acaugcuuga 10080
gguguggaac agaguaugga uaaccaacaa cccacacaug caggacaaga caauggugaa 10140
aaaauggaga gaugucccuu aucuaaccaa gagacaagac aagcugugcg gaucacugau 10200
uggaaugacc aauagggcca ccugggccuc ccacauccau uuggucaucc aucguauccg 10260
aacgcugauu ggacaggaga aauacacuga cuaccuaaca gucauggaca gguauucugu 10320
ggaugcugac cugcaacugg gugagcuuau cugaaacacc aucuaacagg aauaaccggg 10380
auacaaacca cggguggaga accggacucc ccacaaccug aaaccgggau auaaaccacg 10440
gcuggagaac cggacuccgc acuuaaaaug aaacagaaac cgggauaaaa acuacggaug 10500
gagaaccgga cuccacacau ugagacagaa gaaguuguca gcccagaacc ccacacgagu 10560
uuugccacug cuaagcugug aggcagugca ggcugggaca gccgaccucc agguugcgaa 10620
aaaccugguu ucugggaccu cccaccccag aguaaaaaga acggagccuc cgcuaccacc 10680
cucccacgug gugguagaaa gacggggucu agagguuaga ggagacccuc cagggaacaa 10740
auagugggac cauauugacg ccagggaaag accggagugg uucucugcuu uuccuccaga 10800
ggucugugag cacaguuugc ucaagaauaa gcagaccuuu ggaugacaaa cacaaaacca 10860
cu 10862
<210> 4
<211> 10862
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA sequence of the YFV 17D-213 strain
<400> 4
aguaaauccu gugugcuaau ugaggugcau uggucugcaa aucgaguugc uaggcaauaa 60
acacauuugg auuaauuuua aucguucguu gagcgauuag cagagaacug accagaacau 120
gucuggucgu aaagcucagg gaaaaacccu gggcgucaau augguacgac gaggaguucg 180
cuccuuguca aacaaaauaa aacaaaaaac aaaacaaauu ggaaacagac cuggaccuuc 240
aagagguguu caaggauuua ucuuuuucuu uuuguucaac auuuugacug gaaaaaagau 300
cacagcccac cuaaagaggu uguggaaaau gcuggaccca agacaaggcu uggcuguucu 360
aaggaaaguc aagagagugg uggccaguuu gaugagagga uuguccucaa ggaaacgccg 420
uucccaugau guucugacug ugcaauuccu aauuuuggga augcuguuga ugacgggugg 480
agugaccuug gugcggaaaa acagaugguu gcuccuaaau gugacaucug aggaccucgg 540
gaaaacauuc ucugugggca caggcaacug cacaacaaac auuuuggaag ccaaguacug 600
gugcccagac ucaauggaau acaacugucc caaucucagu ccaagagagg agccagauga 660
cauugauugc uggugcuaug ggguggaaaa cguuagaguc gcauauggua agugugacuc 720
agcaggcagg ucuaggaggu caagaagggc cauugacuug ccuacgcaug aaaaccaugg 780
uuugaagacc cggcaagaaa aauggaugac uggaagaaug ggugaaaggc aacuccaaaa 840
gauugagaga ugguucguga ggaaccccuu uuuugcagug acggcucuga ccauugccua 900
ccuuguggga agcaacauga cgcaacgagu cgugauugcc cuacuggucu uggcuguugg 960
uccggccuac ucagcucacu gcauuggaau uacugacagg gauuucauug agggggugca 1020
uggaggaacu uggguuucag cuacccugga gcaagacaag ugugucacug uuauggcccc 1080
ugacaagccu ucauuggaca ucucacuaga gacaguagcc auugauagac cugcugaggu 1140
gaggaaagug uguuacaaug caguucucac ucaugugaag auuaaugaca agugccccag 1200
cacuggagag gcccaccuag cugaagagaa cgaaggggac aaugcgugca agcgcacuua 1260
uucugauaga ggcuggggca auggcugugg ccuauuuggg aaagggagca uuguggcaug 1320
cgccaaauuc acuugugcca aauccaugag uuuguuugag guugaucaga ccaaaauuca 1380
guaugucauc agagcacaau ugcauguagg ggccaagcag gaaaauugga cuaccgacau 1440
uaagacucuc aaguuugaug cccugucagg cucccaggaa gucgaguuca uuggguaugg 1500
aaaagcuaca cuggaaugcc aggugcaaac ugcgguggac uuugguaaca guuacaucgc 1560
ugagauggaa acagagagcu ggauagugga cagacagugg gcccaggacu ugacccugcc 1620
auggcagagu ggaaguggcg ggguguggag agagaugcau caucuugucg aauuugaacc 1680
uccgcaugcc gccacuauca gaguacuggc ccugggaaac caggaaggcu ccuugaaaac 1740
agcucuuacu ggcgcaauga ggguuacaaa ggacacaaau gacaacaacc uuuacaaacu 1800
acauggugga cauguuucuu gcagagugaa auugucagcu uugacacuca aggggacauc 1860
cuacaaaaua ugcacugaca aaauguuuuu ugucaagaac ccaacugaca cuggccaugg 1920
cacuguugug augcagguga aagugucaaa aggagccccc ugcaggauuc cagugauagu 1980
agcugaugau cuuacagcgg caaucaauaa aggcauuuug guuacaguua accccaucgc 2040
cucaaccaau gaugaugaag ugcugauuga ggugaaccca ccuuuuggag acagcuacau 2100
uaucguuggg agaggagauu cacgucucac uuaccagugg cacaaagagg gaagcucaau 2160
aggaaaguug uucacucaga ccaugaaagg cguggaacgc cuggccguca ugggagacac 2220
cgccugggau uucagcuccg cuggaggguu cuucacuucg guugggaaag gaauucauac 2280
gguguuuggc ucugccuuuc aggggcuauu uggcggcuug aacuggauaa caaaggucau 2340
caugggggcg guacuuauau ggguuggcau caacacaaga aacaugacaa uguccaugag 2400
caugaucuug guaggaguga ucaugauguu uuugucucua ggaguugggg cggaucaagg 2460
augcgccauc aacuuuggca agagagagcu caagugcgga gaugguaucu ucauauuuag 2520
agacucugau gacuggcuga acaaguacuc auacuaucca gaagauccug ugaagcuugc 2580
aucaauagug aaagccucuu uugaagaagg gaaguguggc cuaaauucag uugacucccu 2640
ugagcaugag auguggagaa gcagggcaga ugagaucaau gccauuuuug aggaaaacga 2700
gguggacauu ucuguugucg ugcaggaucc aaagaauguu uaccagagag gaacucaucc 2760
auuuuccaga auucgggaug gucugcagua ugguuggaag acuuggggua agaaccuugu 2820
guucucccca gggaggaaga auggaagcuu caucauagau ggaaagucca ggaaagaaug 2880
cccguuuuca aaccgggucu ggaauucuuu ccagauagag gaguuuggga cgggaguguu 2940
caccacacgc guguacaugg acgcagucuu ugaauacacc auagacugcg auggaucuau 3000
cuugggugca gcggugaacg gaaaaaagag ugcccauggc ucuccaacau uuuggauggg 3060
aagucaugaa guaaauggga cauggaugau ccacaccuug gaggcauuag auuacaagga 3120
gugugagugg ccacugacac auacgauugg aacaucaguu gaagagagug aaauguucau 3180
gccgagauca aucggaggcc caguuagcuc ucacaaucau aucccuggau acaagguuca 3240
gacgaacgga ccuuggaugc agguaccacu agaagugaag agagaagcuu gcccagggac 3300
uagcgugauc auugauggca acugugaugg acggggaaaa ucaaccagau ccaccacgga 3360
uagcgggaaa guuauuccug aaugguguug ccgcuccugc acaaugccgc cugugagcuu 3420
ccaugguagu gauggguguu gguaucccau ggaaauuagg ccaaggaaaa cgcaugaaag 3480
ccaucuggug cgcuccuggg uuacagcugg agaaauacau gcugucccuu uugguuuggu 3540
gagcaugaug auagcaaugg aagugguccu aaggaaaaga cagggaccaa agcaaauguu 3600
gguuggagga guagugcucu ugggagcaau gcuggucggg caaguaacuc uccuugauuu 3660
gcugaaacuc acaguggcug ugggauugca uuuccaugag augaacaaug gaggagacgc 3720
cauguauaug gcguugauug cugccuuuuc aaucagacca gggcugcuca ucggcuuugg 3780
gcucaggacc cuauggagcc cucgggaacg ccuugugcug acccuaggag cagccauggu 3840
ggagauugcc uuggguggcg ugaugggcgg ccuguggaag uaucuaaaug caguuucucu 3900
cugcauccug acaauaaaug cuguugcuuc uaggaaagca ucaaauacca ucuugccccu 3960
cauggcucug uugacaccug ucacuauggc ugaggugaga cuugccgcaa uguucuuuug 4020
ugccgugguu aucauagggg uccuucacca gaauuucaag gacaccucca ugcagaagac 4080
uauaccucug guggcccuca cacucacauc uuaccugggc uugacacaac cuuuuuuggg 4140
ccugugugca uuucuggcaa cccgcauauu ugggcgaagg aguaucccag ugaaugaggc 4200
acucgcagca gcuggucuag ugggagugcu ggcaggacug gcuuuucagg agauggagaa 4260
cuuccuuggu ccgauugcag uuggaggacu ccugaugaug cugguuagcg uggcugggag 4320
gguggauggg cuagagcuca agaagcuugg ugaaguuuca ugggaagagg aggcggagau 4380
cagcgggagu uccgcccgcu augauguggc acucagugaa caaggggagu ucaagcugcu 4440
uucugaagag aaagugccau gggaccaggu ugugaugacc ucgcuggccu ugguuggggc 4500
ugcccuccau ccauuugcuc uucugcuggu ccuugcuggg uggcuguuuc augucagggg 4560
agcuaggaga aguggggaug ucuuguggga uauucccacu ccuaagauca ucgaggaaug 4620
ugaacaucug gaggauggga uuuauggcau auuccaguca accuucuugg gggccuccca 4680
gcgaggagug ggaguggcac agggaggggu guuccacaca auguggcaug ucacaagagg 4740
agcuuuccuu gucaggaaug gcaagaaguu gauuccaucu ugggcuucag uaaaggaaga 4800
ccuugucgcc uaugguggcu cauggaaguu ggaaggcaga ugggauggag aggaagaggu 4860
ccaguugauc gcggcuguuc caggaaagaa cguggucaac guccagacaa aaccgagcuu 4920
guucaaagug aggaaugggg gagaaaucgg ggcugucgcu cuugacuauc cgaguggcac 4980
uucaggaucu ccuauuguua acaggaacgg agaggugauu gggcuguacg gcaauggcau 5040
ccuugucggu gacaacuccu ucguguccgc cauaucccag acugagguga aggaagaagg 5100
aaaggaggag cuccaagaga ucccgacaau gcuaaagaaa ggaaugacaa cuguccuuga 5160
uuuucauccu ggagcuggga agacaagacg uuuccuccca cagaucuugg ccgagugcgc 5220
acggagacgc uugcgcacuc uuguguuggc ccccaccagg guuguucuuu cugaaaugaa 5280
ggaggcuuuu cacggccugg acgugaaauu ccacacacag gcuuuuuccg cucacggcag 5340
cgggagagaa gucauugaug cuaugugcca ugccacccua acuuacagga uguuggaacc 5400
aacuaggguu guuaacuggg aagugaucau uauggaugaa gcccauuuuu uggauccagc 5460
uagcauagcc gcuagagguu gggcagcgca cagagcuagg gcaaaugaaa gugcaacaau 5520
cuugaugaca gccacaccgc cugggacuag ugaugaauuu ccacauucaa auggugaaau 5580
agaagauguu caaacggaca uacccaguga gcccuggaac acagggcaug acuggauccu 5640
ggcugacaaa aggcccacgg caugguuccu uccauccauc agagcugcaa augucauggc 5700
ugccucuuug cguaaggcug gaaagagugu ggugguccug aacaggaaaa ccuuugagag 5760
agaauacccc acgauaaagc agaagaaacc ugacuuuaua uuggccacug acauagcuga 5820
aaugggagcc aaccuuugcg uggagcgagu gcuggauugc aggacggcuu uuaagccugu 5880
gcuuguggau gaagggagga agguggcaau aaaagggcca cuucguaucu ccgcauccuc 5940
ugcugcucaa aggagggggc gcauugggag aaaucccaac agagauggag acucauacua 6000
cuauucugag ccuacaagug aaaauaaugc ccaccacguc ugcugguugg aggccucaau 6060
gcucuuggac aacauggagg ugaggggugg aauggucgcc ccacucuaug gcguugaagg 6120
aacuaaaaca ccaguuuccc cuggugaaau gagacugagg gaugaccaga ggaaagucuu 6180
cagagaacua gugaggaauu gugaccugcc cguuuggcuu ucguggcaag uggccaaggc 6240
ugguuugaag acgaaugauc guaaguggug uuuugaaggc ccugaggaac augagaucuu 6300
gaaugacagc ggugaaacag ugaagugcag ggcuccugga ggagcaaaga agccucugcg 6360
cccaaggugg ugugaugaaa gggugucauc ugaccagagu gcgcugucug aauuuauuaa 6420
guuugcugaa gguaggaggg gagcugcuga agugcuaguu gugcugagug aacucccuga 6480
uuuccuggcu aaaaaaggug gagaggcaau ggauaccauc aguguguuuc uccacucuga 6540
ggaaggcucu agggcuuacc gcaaugcacu aucaaugaug ccugaggcaa ugacaauagu 6600
caugcuguuu auacuggcug gacuccugac aucgggaaug gucaucuuuu ucaugucucc 6660
caaaggcauc aguagaaugu cuauggcgau gggcacaaug gccggcugug gauaucucau 6720
guuccuugga ggcgucaaac ccacucacau cuccuauauc augcucauau ucuuuguccu 6780
gauggugguu gugauccccg agccagggca acaaaggucc auccaagaca accaaguggc 6840
auaccucauu auuggcaucc ugacgcuggu uucagcggug gcagccaacg agcuaggcau 6900
gcuggagaaa accaaagagg accucuuugg gaagaagaac uuaauuccau cuagugcuuc 6960
acccuggagu uggccggauc uugaccugaa gccaggagcu gccuggacag uguacguugg 7020
cauuguuaca augcucucuc caauguugca ccacuggauc aaagucgaau auggcaaccu 7080
gucucugucu ggaauagccc agucagccuc aguccuuucu uucauggaca aggggauacc 7140
auucaugaag augaauaucu cggucauaau gcugcugguc aguggcugga auucaauaac 7200
agugaugccu cugcucugug gcauagggug cgccaugcuc cacuggucuc ucauuuuacc 7260
uggaaucaaa gcgcagcagu caaagcuugc acagagaagg guguuccaug gcguugccaa 7320
gaacccugug guugauggga auccaacagu ugacauugag gaagcuccug aaaugccugc 7380
ccuuuaugag aagaaacugg cucuauaucu ccuucuugcu cucagccuag cuucuguugc 7440
caugugcaga acgcccuuuu cauuggcuga aggcauuguc cuagcaucag cugccucagg 7500
gccgcucaua gagggaaaca ccagccuucu uuggaaugga cccauggcug ucuccaugac 7560
aggagucaug agggggaauc acuaugcuuu ugugggaguc auguacaauc uauggaagau 7620
gaaaacugga cgccggggga gcgcgaaugg aaaaacuuug ggugaagucu ggaagaggga 7680
acugaaucug uuggacaagc gacaguuuga guuguauaaa aggaccgaca uuguggaggu 7740
ggaucgugau acggcacgca ggcauuuggc cgaagggaag guggacaccg ggguggcggu 7800
cuccaggggg accgcaaagu uaaggugguu ccaugagcgu ggcuauguca agcuggaagg 7860
uagggugauu gaccuggggu guggccgcgg aggcuggugu uacuacgcug cugcgcaaaa 7920
ggaagugagu ggggucaaag gauuuacucu uggaagagac ggccaugaga aacccaugaa 7980
ugugcaaagu cugggaugga acaucaucac cuucaaggac aaaacugaua uccaccgccu 8040
agaaccagug aaaugugaca cccuuuugug ugacauugga gagucaucau cgucaucggu 8100
cacagagggg gaaaggaccg ugagaguucu ugauacugua gaaaaauggc uggcuugugg 8160
gguugacaac uucuguguga agguguuagc uccauacaug ccagauguuc ucgagaaacu 8220
ggaauugcuc caaaggaggu uuggcggaac agugaucagg aacccucucu ccaggaauuc 8280
cacucaugaa auguacuacg ugucuggagc ccgcagcaau gucacauuua cugugaacca 8340
aacaucccgc cuccugauga ggagaaugag gcguccaacu ggaaaaguga cccuggaggc 8400
ugacgucauc cucccaauug ggacacgcag uguugagaca gacaagggac cccuggacaa 8460
agaggccaua gaagaaaggg uugagaggau aaaaucugag uacaugaccu cuugguuuua 8520
ugacaaugac aaccccuaca ggaccuggca cuacuguggc uccuauguca caaaaaccuc 8580
aggaagugcg gcgagcaugg uaaauggugu uauuaaaauu cugacauauc caugggacag 8640
gauagaggag gucacaagaa uggcaaugac ugacacaacc ccuuuuggac agcaaagagu 8700
guuuaaagaa aaaguugaca ccagagcaaa ggauccacca gcgggaacua ggaagaucau 8760
gaaaguuguc aacagguggc uguuccgcca ccuggccaga gaaaagaacc ccagacugug 8820
cacaaaggaa gaauuuauug caaaaguccg aagucaugca gccauuggag cuuaccugga 8880
agaacaagaa caguggaaga cugccaauga ggcuguccaa gacccaaagu ucugggaacu 8940
gguggaugaa gaaaggaagc ugcaccaaca aggcaggugu cggacuugug uguacaacau 9000
gauggggaaa agagagaaga agcugucaga guuugggaaa gcaaagggaa gccgugccau 9060
augguauaug uggcugggag cgcgguaucu ugaguuugag gcccugggau uccugaauga 9120
ggaccauugg gcuuccaggg aaaacucagg aggaggagug gaaggcauug gcuuacaaua 9180
ccuaggauau gugaucagag accuggcugc aauggauggu gguggauucu acgcggauga 9240
caccgcugga ugggacacgc gcaucacaga ggcagaccuu gaugaugaac aggagaucuu 9300
gaacuacaug agcccacauc acaaaaaacu ggcacaagca gugauggaaa ugacauacaa 9360
gaacaaagug gugaaagugu ugagaccagc cccaggaggg aaagccuaca uggaugucau 9420
aagucgacga gaccagagag gauccgggca gguagugacu uaugcucuga acaccaucac 9480
caacuugaaa guccaauuga ucagaauggc agaagcagag auggugauac aucaccaaca 9540
uguucaagau ugugaugaau caguucugac caggcuggag gcauggcuca cugagcacgg 9600
auguaacaga cugaagagga uggcggugag uggagacgac uguguggucc ggcccaucga 9660
ugacagguuc ggccuggccc ugucccaucu caacgccaug uccaagguua gaaaggacau 9720
aucugaaugg cagccaucaa aaggguggaa ugauugggag aaugugcccu ucuguuccca 9780
ccacuuccau gaacuacagc ugaaggaugg caggaggauu guggugccuu gccgagaaca 9840
ggacgagcuc auugggagag gaaggguguc uccaggaaac ggcuggauga ucaaggaaac 9900
agcuugccuc agcaaagccu augccaacau guggucacug auguauuuuc acaaaaggga 9960
caugaggcua cugucauugg cuguuuccuc agcuguuccc accucauggg uuccacaagg 10020
acgcacaaca uggucgauuc augggaaagg ggaguggaug accacggaag acaugcuuga 10080
gguguggaac agaguaugga uaaccaacaa cccacacaug caggacaaga caauggugaa 10140
aaaauggaga gaugucccuu aucuaaccaa gagacaagac aagcugugcg gaucacugau 10200
uggaaugacc aauagggcca ccugggccuc ccacauccau uuagucaucc aucguauccg 10260
aacgcugauu ggacaggaga aauacacuga cuaccuaaca gucauggaca gguauucugu 10320
ggaugcugac cugcaacugg gugagcuuau cugaaacacc aucuaacagg aauaaccggg 10380
auacaaacca cggguggaga accggacucc ccacaaccug aaaccgggau auaaaccacg 10440
gcuggagaac cggacuccgc acuuaaaaug aaacagaaac cgggauaaaa acuacggaug 10500
gagaaccgga cuccacacau ugagacagaa gaaguuguca gcccagaacc ccacacgagu 10560
uuugccacug cuaagcugug aggcagugca ggcugggaca gccgaccucc agguugcgaa 10620
aaaccugguu ucugggaccu cccaccccag aguaaaaaga acggagccuc cgcuaccacc 10680
cucccacgug gugguagaaa gacggggucu agagguuaga ggagacccuc cagggaacaa 10740
auagugggac cauauugacg ccagggaaag accggagugg uucucugcuu uuccuccaga 10800
ggucugugag cacaguuugc ucaagaauaa gcagaccuuu ggaugacaaa cacaaaacca 10860
cu 10862
<210> 5
<211> 10862
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA sequence of the YFV 17DD strain
<400> 5
aguaaauccu gugugcuaau ugaggugcau uggucugcaa aucgaguugc uaggcaauaa 60
acacauuugg auuaauuuua aucguucguu gagcgauuag cagagaacug accagaacau 120
gucuggucgu aaagcucagg gaaaaacccu gggcgucaau augguacgac gaggaguucg 180
cuccuuguca aacaaaauaa aacaaaaaac aaaacaaauu ggaaacagac cuggaccuuc 240
aagagguguu caaggauuua ucuuuuucuu uuuguucaac auuuugacug gaaaaaagau 300
cacagcccac cuaaagaggu uguggaaaau gcuggaccca agacaaggcu uggcuguucu 360
aaggaaaguu aagagagugg uggccaguuu gaugagagga uuguccucaa ggaaacgccg 420
uucccaugau guucugacug ugcaauuccu aauuuuggga augcuguuga ugacgggugg 480
agugaccuug gugcggaaaa acagaugguu gcuccuaaau gugacaucug aggaccucgg 540
gaaaacauuc ucugugggca caggcaacug cacaacaaac auuuuggaag ccaaguacug 600
gugcccagac ucaauggaau acaacugucc caaucucagu ccgagagagg agccagauga 660
cauugauugc uggugcuaug ggguggaaaa cguuagaguc gcauauggua agugugacuc 720
agcaggcagg ucuaggaggu caagaagggc cauugacuug ccuacgcaug aaaaccaugg 780
uuugaagacc cggcaagaaa aauggaugac uggaagaaug ggugaaaggc aacuccaaaa 840
gauugagaga ugguucguga ggaaccccuu uuuugcagug acagcucuga ccauugccua 900
ccuuguggga agcaacauga cgcaacgagu cgugauugcc cuacuggucu uggcuguugg 960
uccggccuac ucagcucacu gcauuggaau uacugacagg gauuucauug agggggugca 1020
uggaggaacu uggguuucag cuacccugga gcaagacaag ugugucacug uuauggcccc 1080
ugacaagccu ucauuggaca ucucacuaga gacaguagcc auugauagac cugcugaggc 1140
gaggaaagug uguuacaaug caguucucac ucaugugaag auuaaugaca agugccccag 1200
cacuggagag gcccaccuag cugaagagaa cgaaggggac aaugcgugca agcgcacuua 1260
uucugauaga ggcuggggca auggcugugg ccuauuuggg aaagggagca uuguggcaug 1320
cgccaaauuc acuugugcca aauccaugag uuuguuugag guugaucaga ccaaaauuca 1380
guaugucauc agagcacaau ugcauguagg ggccaagcag gaaaauugga auaccagcau 1440
uaagacucuc aaguuugaug cccugucagg cucccaggaa gucgaguuca uuggguaugg 1500
aaaagcuaca cuggaaugcc aggugcaaac ugcgguggac uuugguaaca guuacauagc 1560
ugagauggaa acagagagcu ggauagugga cagacagugg gcccaggacu ugacccugcc 1620
auggcagagu ggaaguggcg ggguguggag agagaugcau caucuugucg aauuugaacc 1680
uccgcaugcc gccacuauca gaguacuggc ccugggaaac caggaaggcu ccuugaaaac 1740
agcucuuacu ggcgcaauga ggguuacaaa ggacacaaau gacaacaacc uuuacaaacu 1800
acauggugga cauguuucuu gcagagugaa auugucagcu uugacacuca aggggacauc 1860
cuacaaaaua ugcacugaca aaauguuuuu ugucaagaac ccaacugaca cuggccaugg 1920
cacuguugug augcagguga aagugccaaa aggagccccc ugcaggauuc cagugauagu 1980
agcugaugau cuuacagcgg caaucaauaa aggcauuuug guuacaguua accccaucgc 2040
cucaaccaau gaugaugaag ugcugauuga ggugaaccca ccuuuuggag acagcuacau 2100
uaucguugga agaggagauu cacgucucac uuaccagugg cacaaagagg gaagcucaau 2160
aggaaaguug uucacucaga ccaugaaagg cguggaacgc cuggccguca ugggagacgu 2220
cgccugggau uucagcuccg cuggaggguu cuucacuucg guugggaaag gaauucauac 2280
gguguuuggc ucugccuuuc aggggcuauu uggcggcuug aacuggauaa caaaggucau 2340
caugggggcg guacuuauau ggguuggcau caacacaaga aacaugacaa uguccaugag 2400
caugaucuug guaggaguga ucaugauguu uuugucucua ggaguugggg cggaucaagg 2460
augcgccauc aacuuuggca agagagagcu caagugcgga gaugguaucu ucauauuuag 2520
agacucugau gacuggcuga acaaguacuc auacuaucca gaagauccug ugaagcuugc 2580
aucaauagug aaagccucuu uugaagaagg gaaguguggc cuaaauucag uugacucccu 2640
ugagcaugag auguggagaa gcagggcaga ugagaucaau gccauuuuug aggaaaacga 2700
gguggacauu ucuguugucg ugcaggaucc aaagaauguu uaccagagag gaacucaucc 2760
auuuuccaga auucgggaug gucugcagua ugguuggaag acuuggggua agaaccuugu 2820
guucucccca gggaggaaga auggaagcuu caucauagau ggaaagucca ggaaagaaug 2880
cccguuuuca aaccgggucu ggaauucuuu ccagauagag gaguuuggga cgggaguguu 2940
caccacacgc guguacaugg acgcagucuu ugaauacacc auagacugcg auggaucuau 3000
cuugggugca gcggugaacg gaaaaaagag ugcccauggc ucuccaacau uuuggauggg 3060
aagucaugaa guaaauggga cauggaugau ccacaccuug gaggcauuag auuacaagga 3120
gugugagugg ccacugacac auacgauugg aacaucaguu gaagagagug aaauguucau 3180
gccgagauca aucggaggcc caguuagcuc ucacaaucau aucccuggau acaagguuca 3240
gacgaacgga ccuuggaugc agguaccacu agaagugaag agagaagcuu gcccagggac 3300
uagcgugauc auugauggca acugugaugg acggggaaaa ucaaccagau ccaccacgga 3360
uagcgggaaa guuauuccug aaugguguug ccgcuccugc acaaugccgc cugugagcuu 3420
ccaugguagu gauggguguu gguaucccau ggaaauuagg ccaaggaaaa cgcaugaaag 3480
ccaucuggug cgcuccuggg uuacagcugg agaaauacau gcugucccuu uugguuuggu 3540
gagcaugaug auagcaaugg aagugguccu aaggaaaaga cagggaccaa agcaaaugcu 3600
gguuggagga guagugcucu ugggagcaau gcugguuggg caaguaacuc uccuugauuu 3660
gcugaaacuc acaguggcug ugggauugca uuuccaugag augaacaaug gaggagacgc 3720
cauguauaug gcguugauug cugccuuuuc aaucagacca gggcugcuca ucggcuuugg 3780
gcucaggacc cuauggagcc cucgggaacg ccuugugcug acccuaggag cagccauggu 3840
ggagauugcc uuggguggcg ugaugggcgg ccuguggaag uaucuaaaug caguuucucu 3900
cugcauccug acaauaaaug cuguugcuuc uaggaaagca ucaaauacca ucuugccccu 3960
cauggcucug uugacaccug ucacuauggc ugaggugaga cuugccgcaa ugcucuuuug 4020
ugccgugguu aucauagggg uccuucacca gaacuucaag gacaccucca ugcagaagac 4080
uauaccucug guggcccuca cacucacauc uuaccugggc uugacacaac cuuuuuuggg 4140
ccugugugca uuucuggcaa cccgcauauu ugggcgaagg aguaucccag ugaaugaggc 4200
acuugcagca gcuggucuag ugggagugcu ggcaggacug gcuuuucagg agauggagaa 4260
cuuccuuggu ccgauugcag uuggaggacu ccugaugaug cugguuagcg uggcugggag 4320
gguggauggg cuagagcuca agaagcuugg ugaaguuuca ugggaagagg aggcggagau 4380
cagcgggagu uccgcccgcu augauguggc acucagugaa caaggggagu ucaagcugcu 4440
uucugaagag aaagugccau gggaccaggu ugugaugacc ucgcuggccu ugguuggggc 4500
ugcccuccau ccauuugcuc uucugcuggu ccuugcuggg uggcuguuuc augucagggg 4560
agcuaggaga aguggggaug ucuuguggga uauucccacu ccuaagauca uugaggaaug 4620
ugaacaucug gaggauggga uuuauggcau auuccaguca accuucuugg gggccuccca 4680
gcgaggagug ggaguggcac agggaggggu guuccacaca auguggcaug ucacaagagg 4740
agcuuuccuu gucaggaaug gcaagaaguu gauuccaucu ugggcuucag uaaaggaaga 4800
ccuugucgcc uaugguggcu cauggaaguu ggaaggcaga ugggauggag aggaagaggu 4860
ccaguugauc gcugcuguuc caggaaagaa cguggucaac guccagacaa aaccgagcuu 4920
guucaaagug aggaaugggg gggaaaucgg ggcuguugcu cuugacuauc caaguggcac 4980
uucaggaucu ccuauuguua acaggaacgg agaggugauu gggcuguacg gcaauggcau 5040
ccuugucggu gacaacuccu ucguguccgc cauaucccag acugagguga aggaagaagg 5100
aaaggaggag cuccgagaga ucccgacaau gcuaaagaaa ggaaugacaa cuauccuuga 5160
uuuucauccu ggagcuggga agacaagacg uuuccuccca cagaucuugg ccgagugcgc 5220
acggcgacgc uugcgcacuc uuguguuggc ccccaccagg guuguucuuu cugaaaugaa 5280
ggaggcuuuu cacggccugg acgugaaauu ccacacacag gcuuuuuccg cucacggcag 5340
cgggagagaa gucauugaug caaugugcca ugccacccua acuuacagga uguuggaacc 5400
aacuaggguu guuaacuggg aagugaucau uauggaugaa gcccauuuuu uggauccagc 5460
uagcauagcc gcuagagguu gggcagcgca cagagcuagg gcaaaugaaa gugcaacaau 5520
cuugaugaca gccacaccgc cugggacuag ugaugaauuu ccacauucaa auggugaaau 5580
agaagauguu caaacggaca uacccaguga gcccuggaac acagggcaug acuggauccu 5640
ggcugacaaa aggcccacgg caugguuccu uccauccauc agagcugcaa augucauggc 5700
ugccucuuug cguaaggcug gaaagagugu ggugguccug aacaggaaaa ccuuugagag 5760
agaauacccc acgauaaagc agaagaaacc ugacuuuaua uuggccacug acauagcuga 5820
aaugggagcc aaccuuugcg uggagcgagu gcuggauugc aggacggcuu uuaagccugu 5880
gcuuguggau gaagggagga agguggcaau aaaagggcca cuucguaucu ccgcauccuc 5940
ugcugcucaa aggagggggc gcauugggag aaaucccaac agagauggag acucauacua 6000
cuauucugag ccuacaagug aaaauaaugc ccaccacguc ugcugguugg aggccucaau 6060
gcucuuggau aacauggagg ugaggggugg aauggucgcc ccacucuaug gcguugaagg 6120
aacuaaaaca ccaguuuccc cuggugaaau gagacugagg gaugaccaga ggaaagucuu 6180
cagagaacua gugaggaauu gugaccugcc cguuuggcuu ucguggcaag uggccaaggc 6240
ugguuugaag acgaaugauc guaaguggug uuuugaaggc ccugaggaac augagaucuu 6300
gaaugacagc ggugaaacag ugaagugcag ggcuccugga ggagcaaaga agccucugcg 6360
cccaaggugg ugugaugaaa gggugucauc ugaccagagu gcgcugucug aauuuauuaa 6420
guuugcugaa gguaggaggg gagcugcuga agugcuaguu gugcugagug aacucccuga 6480
uuuccuggcu aaaaaaggug gagaggcaau ggacaccauc aguguguuuc uccacucuga 6540
ggaaggcucu agggcuuacc gcaaugcacu aucaaugaug ccugaggcaa ugacaauagu 6600
caugcuguuu auacuggcug gacuccugac aucgggaaug gucaucuuuu ucaugucucc 6660
caaaggcauc aguagaaugu cuauggcgau gggcacaaug gccggcugug gauaucucau 6720
guuccuugga ggcgucaaac ccacucacau cuccuauauc augcucauau ucuuuguccu 6780
gauggugguu gugauccccg agccagggca acaaaggucc auccaagaca accaaguggc 6840
auaccucauu auuggcaucc ugacgcuggu uucagcggug gcagccaacg agcuaggcau 6900
gcuggagaaa accaaagagg accucuuugg gaagaagaac uuaauuccau cuagugcuuc 6960
acccuggagu uggccggauc uugaccugaa gccaggagcu gccuggacag uguacguugg 7020
cauuguuaca augcucucuc caauguugca ccacuggauc aaagucgaau auggcaaccu 7080
gucucugucu ggaauagccc agucagccuc aguccuuucu uucauggaca aggggauacc 7140
auucaugaag augaauaucu cggucauaau gcugcugguc aguggcugga auucaauaac 7200
agugaugccu cugcucugug gcauagggug cgccaugcuc cacuggucuc ucauuuuacc 7260
uggaaucaaa gcgcagcagu caaagcuugc acagagaagg guguuccaug gcguugccaa 7320
gaacccugug guugauggga auccaacagu ugacauugag gaagcuccug aaaugccugc 7380
ccuuuaugag aagaaacugg cucuauaucu ccuucuugcu cucagccuag cuucuguugc 7440
caugugcaga acgcccuuuu cauuggcuga aggcauuguc cuagcaucag cugccuuagg 7500
gccgcucaua gagggaaaca ccagccuucu uuggaaugga cccauggcug ucuccaugac 7560
aggagucaug cgggggaauc acuaugcuuu ugugggaguc auguacaauc uauggaagau 7620
gaaaacugga cgccggggga gcgcgaaugg aaaaacuuug ggugaagucu ggaagaggga 7680
acugaaucug uuggacaagc aacaguuuga guuguauaaa aggaccgaca uuguggaggu 7740
ggaucgugau acggcacgca ggcauuuggc cgaagggaag guggacaccg ggguggcggu 7800
cuccaggggg accgcaaagu uaaggugguu ccaugagcgu ggcuauguca agcuggaagg 7860
uagggugauu gaccuggggu guggccgcgg aggcuggugu uacuacgcug cugcgcaaaa 7920
ggaagugagu ggggucaaag gauuuacucu uggaagagac ggccaugaga aaccuaugaa 7980
ugugcaaagu cugggaugga acaucaucac cuucaaggac aaaacugaca uccaccgccu 8040
agaaccagug aaaugugaca cccuuuugug ugacauugga gagucaucau cgucaucggu 8100
cacagagggg gaaaggaccg ugagaguucu ugauacugua gaaaaauggc uggcuugugg 8160
gguugacaac uucuguguga agguguuagc uccauacaug ccagauguuc ucgagaaacu 8220
ggaauugcuc caaaggaggu uuggcggaac agugaucagg aacccucucu ccaggaauuc 8280
cacucaugaa auguacuacg ugucuggagc ccgcagcaau gucacauuua cugugaacca 8340
aacaucccgc cuccugauga ggagaaugag gcguccaacu ggaaaaguga cccuggaggc 8400
ugacgucauc cucccaauug ggacacgcag uguugagaca gacaagggac cccuggacaa 8460
agaggccaua gaagaaaggg uugagaggau aaaaucugag uacaugaccu cuugguuuua 8520
ugacaaugac aaccccuaca ggaccuggca cuacuguggc uccuauguca caaaaaccuc 8580
aggaagugcg gcgagcaugg uaaauggugu uauuaaaauu cugacauauc caugggacag 8640
gauagaggag gucacaagaa uggcaaugac ugacacaacc ccuuuuggac agcaaagagu 8700
guuuaaagaa aaaguugaca ccagagcaaa ggauccacca gcgggaacua ggaagaucau 8760
gaaaguuguc aacagguggc uguuccgcca ccuggccaga gaaaagagcc ccagacugug 8820
cacaaaggaa gaauuuauug caaaaguccg aagucaugca gccauuggag cuuaccugga 8880
agaacaagaa caguggaaga cugccaauga ggcuguccaa gacccaaagu ucugggaacu 8940
gguggaugaa gaaaggaagc ugcaccaaca aggcaggugu cggacuugug uguacaacau 9000
gauggggaaa agagagaaga agcugucaga guuugggaaa gcaaagggaa gccgugccau 9060
augguauaug uggcugggag cgcgguaucu ugaguuugag gcccugggau uccugaauga 9120
ggaccauugg gcuuccaggg aaaacucagg aggaggagug gaaggcauug gcuuacaaua 9180
ccuaggauau gugaucagag accuggcugc aauggauggu gguggauucu acgcggauga 9240
caccgcugga ugggacacgc gcaucacaga ggcagaccuu gaugaugaac aggagaucuu 9300
gaacuacaug agcccacauc acaaaaaacu ggcacaagca gugauggaaa ugacauacaa 9360
gaacaaagug gugaaagugu ugagaccagc cccagggggg aaagccuaca uggaugucau 9420
aagucgacga gaccagagag gauccgggca gguagugacu uaugcucuga acaccaucac 9480
caacuugaaa guccaauuga ucagaauggc agaagcagag auggugauac aucaccaaca 9540
uguucaagau ugugaugaau caguucugac caggcuggag gcauggcuca cugagcacgg 9600
auguaacaga cugaagagga uggcggugag uggagacgac uguguggucc ggcccaucga 9660
ugacagguuc ggccuggccc ugucccaucu caacgccaug uccaagguua gaaaggacau 9720
aucugaaugg cagccaucaa aaggguggaa ugauugggag aaugugcccu ucuguuccca 9780
ccacuuccau gaacuacagc ugaaggaugg caggaggauu guggugccuu gccgagaaca 9840
ggacgagcuc auugggagag gaaggguguc uccaggaaac ggcuggauga ucaaggaaac 9900
agcuugccuc agcaaagccu augccaacau guggucacug auguauuuuc acaaaaggga 9960
caugaggcua cugucauugg cuguuuccuc agcuguuccc accucauggg uuccacaagg 10020
acgcacaaca uggucgauuc augggaaagg ggaguggaug accacggaag acaugcuuga 10080
gguguggaac agaguaugga uaaccaacaa cccacacaug caggacaaga caauggugaa 10140
aaaauggaga gaugucccuu aucuaaccaa gagacaagac aagcugugcg gaucacugau 10200
uggaaugacc aauagggcca ccugggccuc ccacauccau uuagucaucc aucguauccg 10260
aacgcugauu ggacaggaga aauacacuga cuaccuaaca gucauggaca gguauucugu 10320
ggaugcugac cugcaacugg gugagcuuau cugaaacacc aucuaacagg aauaaccggg 10380
auacaaacca cggguggaga accggacucc ccacaaccug aaaccgggau auaaaccacg 10440
gcuggagaac cggacuccgc acuuaaaaug aaacagaaac cgggauaaaa acuacggaug 10500
gagaaccgga cuccacacau ugagacagaa gaaguuguca gcccagaacu ccacacgagu 10560
uuugccacug cuaagcugug aggcagugca ggcugggaca gccgaccucc agguugcgaa 10620
aaaccugguu ucugggaccu cccaccccag aguaaaaaga acggagccuc cgcuaccacc 10680
cucccacgug gugguagaaa gacggggucu agagguuaga ggagacccuc cagggaacaa 10740
auagugggac cauauugacg ccagggaaag accggagugg uucucugcuu uuccuccaga 10800
ggucugugag cacaguuugc ucaagaauaa gcagaccuuu ggaugacaaa cacaaaacca 10860
cu 10862
<210> 6
<211> 10833
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA sequence of the YFV Asibi strain
<400> 6
gugugcuaau ugaggugcau uggucugcaa aucgaguugc uaggcaauaa acacauuugg 60
auuaauuuua aucguucguu gagcgauuag cagagaacug accagaacau gucuggucgu 120
aaagcucagg gaaaaacccu gggcgucaau augguacgac gaggaguucg cuccuuguca 180
aacaaaauaa aacaaaaaac aaaacaaauu ggaaacagac cuggaccuuc aagagguguu 240
caaggauuua ucuuuuucuu uuuguucaac auuuugacug gaaaaaagau cacggcccac 300
cuaaagaggu uguggaaaau gcuggaccca agacaaggcu uggcuguucu aaggaaaguu 360
aagagagugg uggccaguuu gaugagagga uuguccucaa ggaaacgccg uucccaugau 420
guucugacug ugcaauuccu aauuuuggga augcuguuga ugacgggugg agugaccuug 480
gugcggaaaa acagaugguu gcuccuaaau gugacaucug aggaccucgg gaaaacauuc 540
ucugugggca caggcaacug cacaacaaac auuuuggaag ccaaguacug gugcccagac 600
ucaauggaau acaacugucc caaucucagu ccaagagagg agccagauga cauugauugc 660
uggugcuaug ggguggaaaa cguuagaguc gcauauggua agugugacuc agcaggcagg 720
ucuaggaggu caagaagggc cauugacuug ccuacgcaug aaaaccaugg uuugaagacc 780
cggcaagaaa aauggaugac uggaagaaug ggugaaaggc aacuccaaaa gauugagaga 840
uggcucguga ggaaccccuu uuuugcagug acagcucuga ccauugccua ccuuguggga 900
agcaacauga cgcaacgagu cgugauugcc cuacuggucu uggcuguugg uccggccuac 960
ucagcucacu gcauuggaau uacugacagg gauuucauug agggggugca uggaggaacu 1020
uggguuucag cuacccugga gcaagacaag ugugucacug uuauggcccc ugacaagccu 1080
ucauuggaca ucucacuaga gacaguagcc auugauggac cugcugaggc gaggaaagug 1140
uguuacaaug caguucucac ucaugugaag auuaaugaca agugccccag cacuggagag 1200
gcccaccuag cugaagagaa cgaaggggac aaugcgugca agcgcacuua uucugauaga 1260
ggcuggggca auggcugugg ccuauuuggg aaagggagca uuguggcaug cgccaaauuc 1320
acuugugcca aauccaugag uuuguuugag guugaucaga ccaaaauuca guaugucauc 1380
agagcacaau ugcauguagg ggccaagcag gaaaauugga auaccgacau uaagacucuc 1440
aaguuugaug cccugucagg cucccaggaa gccgaguuca cuggguaugg aaaagcuaca 1500
cuggaaugcc aggugcaaac ugcgguggac uuugguaaca guuacaucgc ugagauggaa 1560
aaagagagcu ggauagugga cagacagugg gcccaggacu ugacccugcc auggcagagu 1620
ggaaguggcg ggguguggag agagaugcau caucuugucg aauuugaacc uccgcaugcc 1680
gccacuauca gaguacuggc ccugggaaac caggaaggcu ccuugaaaac agcucuuacc 1740
ggcgcaauga ggguuacaaa ggacacaaau gacaacaacc uuuacaaacu acauggugga 1800
cauguuuccu gcagagugaa auugucagcu uugacacuca aggggacauc cuacaaaaug 1860
ugcacugaca aaaugucuuu ugucaagaac ccaacugaca cuggccaugg cacuguugug 1920
augcagguga aagugccaaa aggagccccc ugcaagauuc cagugauagu agcugaugau 1980
cuuacagcgg caaucaauaa aggcauuuug guuacaguua accccaucgc cucaaccaau 2040
gaugaugaag ugcugauuga ggugaaccca ccuuuuggag acagcuacau uaucguuggg 2100
acaggagauu cacgucucac uuaccagugg cacaaagagg gaagcucaau aggaaaguug 2160
uucacucaga ccaugaaagg cgcggaacgc cuggccguca ugggagacgc cgccugggau 2220
uucagcuccg cuggaggguu cuucacuucg guugggaaag gaauucauac gguguuuggc 2280
ucugccuuuc aggggcuauu uggcggcuug aacuggauaa caaaggucau caugggggcg 2340
guacucauau ggguuggcau caacacaaga aacaugacaa uguccaugag caugaucuug 2400
guaggaguga ucaugauguu uuugucucua ggaguugggg cggaucaagg augcgccauc 2460
aacuuuggca agagagagcu caagugcgga gaugguaucu ucauauuuag agacucugau 2520
gacuggcuga acaaguacuc auacuaucca gaagauccug ugaagcuugc aucaauagug 2580
aaagccucuu uugaagaagg gaaguguggc cuaaauucag uugacucccu ugagcaugag 2640
auguggagaa gcagggcaga ugagaucaau gccauucuug aggaaaacga gguggacauu 2700
ucuguugucg ugcaggaucc aaagaauguu uaccagagag gaacucaucc auuuuccaga 2760
auucgggaug gucugcagua ugguuggaag acuuggggua agaaccuugu guucucccca 2820
gggaggaaga auggaagcuu caucauagau ggaaagucca ggaaagaaug cccguuuuca 2880
aaccgggucu ggaauucuuu ccagauagag gaguuuggga cgggaguguu caccacacgc 2940
guguacaugg acgcagucuu ugaauacacc auagacugcg auggaucuau cuugggugca 3000
gcggugaacg gaaaaaagag ugcccauggc ucuccaacau uuuggauggg aagucaugaa 3060
guaaauggga cauggaugau ccacaccuug gaggcauuag auuacaagga gugugagugg 3120
ccacugacac auacgauugg aacaucaguu gaagagagug aaauguucau gccgagauca 3180
aucggaggcc caguuagcuc ucacaaucau aucccuggau acaagguuca gacgaacgga 3240
ccuuggaugc agguaccacu agaagugaag agagaagcuu gcccagggac uagcgugauc 3300
auugauggca acugugaugg acggggaaaa ucaaccagau ccaccacgga uagcgggaaa 3360
auuauuccug aaugguguug ccgcuccugc acaaugccgc cugugagcuu ccaugguagu 3420
gauggguguu gguaucccau ggaaauuagg ccaaggaaaa cgcaugaaag ccaucuggug 3480
cgcuccuggg uuacagcugg agaaauacau gcugucccuu uugguuuggu gagcaugaug 3540
auagcaaugg aagugguccu aaggaaaaga cagggaccaa agcaaauguu gguuggagga 3600
guggugcucu ugggagcaau gcuggucggg caaguaacuc uccuugauuu gcugaaacuc 3660
acaguggcug ugggauugca uuuccaugag augaacaaug gaggagacgc cauguauaug 3720
gcguugauug cugccuuuuc aaucagacca gggcugcuca ucggcuuugg gcucaggacc 3780
cuauggagcc cucgggaacg ccuuguacug acccuaggag cagccauggu ggagauugcc 3840
uuggguggca ugaugggcgg ccuguggaag uaucuaaaug caguuucucu cugcauccug 3900
acaauaaaug cuguagcuuc uaggaaagca ucaaauacca ucuugccccu cauggcucug 3960
uugacaccug ucacuauggc ugaggugaga cuugccacaa ugcucuuuug uaccgugguu 4020
aucauagggg uccuucacca gaacuccaag gacaccucca ugcagaagac uauaccucug 4080
guggcccuca cacucacauc uuaccugggc uugacacaac cuuuuuuggg ccugugugca 4140
uuucuggcaa cccgcauauu ugggcgaagg aguaucccag ugaaugaggc acucgcagca 4200
gcuggucuag ugggagugcu ggcaggacug gcuuuucagg agauggagaa cuuccuuggu 4260
ccgauugcag uuggaggaau ccugaugaug cugguuagcg uggcugggag gguggauggg 4320
cuagagcuca agaagcuugg ugaaguuuca ugggaagagg aggcggagau cagcggaagu 4380
uccgcccgcu augauguggc acucagugaa caaggggagu ucaagcugcu uucugaagag 4440
aaagugccau gggaccaggu ugugaugacc ucgcuggccu ugguuggggc ugccauucau 4500
ccauuugcuc uucugcuggu ccuugcuggg uggcuguuuc augucagggg agcuaggaga 4560
aguggggaug ucuuguggga uauucccacu ccuaagauca uugaggaaug ugaacaucug 4620
gaggauggga uuuauggcau auuccaguca accuucuugg gggccuccca gcgaggagug 4680
ggaguggcac agggaggggu guuccacaca auguggcaug ucacaagagg agcuuuccuu 4740
gucaggaaug gcaagaaguu gauuccaucu ugggcuucag uaaaggaaga ccuugucgcc 4800
uaugguggcu cauggaaguu ggaaggcaga ugggauggag aggaagaggu ccaauugauc 4860
gcugcuguuc caggaaagaa cguggucaac guccagacaa aaccgagcuu guucaaagug 4920
aggaaugggg gagaaaucgg ggcugucgcu cuugacuauc cgaguggcac uucaggaucu 4980
ccuauuguua acaggaacgg agaggugauu gggcuguacg gcaauggcau ccuugucggu 5040
gacaacuccu ucguguccgc cauaucccag acugagguga aggaagaagg aaaggaggag 5100
cuccaagaga ucccgacaau gcuaaagaaa ggaaugacaa cuauccuuga uuuucauccu 5160
ggagcuggga agacaagacg uuuucuccca cagaucuugg ccgagugcgc acggagacgc 5220
uugcgcacuc uuguguuggc ccccaccagg guuguucuuu cugaaaugaa ggaggcuuuu 5280
cacggccugg acgugaaauu ccacacacag gcuuuuuccg cucacggcag cgggagagaa 5340
gucauugaug ccaugugcca ugccacccua acuuacagga uguuggaacc aacuaggguu 5400
guuaacuggg aagugaucau cauggaugaa gcccauuuuu uggauccagc uagcauagcc 5460
gccagagguu gggcagcgca cagagcuagg gcaaaugaaa gugcaacaau cuugaugaca 5520
gccacaccgc cugggacuag ugaugaauuu ccacauucaa auggugaaau agaagauguu 5580
caaacggaca uacccaguga gcccuggaac acagggcaug acuggauccu ggcugacaaa 5640
aggcccacgg caugguuccu uccauccauc agagcugcaa augucauggc ugccucuuug 5700
cguaaggcug gaaagagugu ggugguccug aacaggaaaa ccuuugagag agaauacccc 5760
acgauaaagc agaagaaacc ugacuuuaua uuggccacug acauagcuga aaugggagcc 5820
aaccuuugcg uggagcgagu gcuggauugc aggacggcuu uuaagccugu gcuuguggau 5880
gaagggagga agguggcaau aaaagggcca cuucgcaucu ccgcauccuc ugcugcucaa 5940
aggagggggc gcauugggag aaaucccaac agagauggag acucauacua cuauucugag 6000
ccuacaagug aagauaaugc ccaccacguc ugcugguugg aggccucaau gcucuuggac 6060
aacauggagg ugaggggugg aauggucgcc ccacucuaug gcguugaagg aacuaaaaca 6120
ccaguuuccc cuggugaaau gagacugagg gaugaccaga ggaaagucuu cagagaacua 6180
gugaggaauu gugaccugcc cguuuggcuu ucguggcaag uggccaaggc ugguuugaag 6240
acgaaugauc guaaguggug uuuugaaggc ccugaggaac augagaucuu gaaugacagc 6300
ggugaaacag ugaagugcag ggcuccugga ggagcaaaga agccucugcg cccaaggugg 6360
ugugaugaaa gggugucauc ugaccagagu gcgcugucug aauuuauuaa guuugcugaa 6420
gguaggaggg gagcugcgga agugcuaguu gugcugagug aacucccuga uuuccuggcu 6480
aaaaaaggug gagaggcaau ggauaccauc aguguguuuc uccacucuga ggaaggcucu 6540
agggcuuacc gcaaugcacu aucaaugaug ccugaggcaa ugacaauagu caugcuguuu 6600
auacuggcug gacuacugac aucgggaaug gucaucuuuu ucaugucucc caaaggcauc 6660
aguagaaugu cuauggcgau gggcacaaug gccggcugug gauaucucau guuccuugga 6720
ggcgucaaac ccacucacau cuccuauauc augcucauau ucuuuguccu gauggugguu 6780
gugauccccg agccagggca acaaaggucc auccaagaca accaaguggc auaccucauu 6840
auuggcaucc ugacgcuggu uucaguggug gcagccaacg agcuaggcau gcuggagaaa 6900
accaaagagg accucuuugg gaagaagaac uuaauuccau cuagugcuuc acccuggagu 6960
uggccggauc uugaccugaa gccaggagcu gccuggacag uguacguugg cauuguuaca 7020
augcucucuc caauguugca ccacuggauc aaagucgaau auggcaaccu gucucugucu 7080
ggaauagccc agucagccuc aguccuuucu uucauggaca aggggauacc auucaugaag 7140
augaauaucu cggucauaau acugcugguc aguggcugga auucaauaac agugaugccu 7200
cugcucugug gcauagggug cgccaugcuc cacuggucuc ucauuuuacc uggaaucaaa 7260
gcgcagcagu caaagcuugc acagagaagg guguuccaug gcguugccaa gaacccugug 7320
guugauggga auccaacagu ugacauugag gaagcuccug aaaugccugc ccuuuaugag 7380
aagaaacugg cucuauaucu ccuucuugcu cucagccuag cuucuguugc caugugcaga 7440
acgcccuuuu cauuggcuga aggcauuguc cuagcaucag cugccuuagg gccgcucaua 7500
gagggaaaca ccagccuucu uuggaaugga cccauggcug ucuccaugac aggagucaug 7560
cgggggaauu acuaugcuuu ugugggaguc auguacaauc uauggaagau gaaaacugga 7620
cgccggggga gugcgaaugg aaaaacuuug ggugaagucu ggaagaggga acugaaucug 7680
uuggacaagc aacaguuuga guuguauaaa aggaccgaca uuguggaggu ggaucgugau 7740
acggcacgca ggcauuuggc cgaagggaag guggacaccg ggguggcggu cuccaggggg 7800
accgcaaagu uaaggugguu ccaugagcgu ggcuauguca agcuggaagg uagggugauu 7860
gaccuggggu guggccgcgg aggcuggugu uacuacgcug cugcgcaaaa ggaagugagu 7920
ggggucaaag gauucacucu uggaagagac ggccaugaga aacccaugaa ugugcaaagu 7980
cugggaugga acaucauuac cuucaaggac aaaacugaua uccaccgccu agaaccagug 8040
aaaugugaca cccuuuugug ugacauugga gagucaucau cgucaucggu cacagagggg 8100
gaaaggaccg ugagaguucu ugauacugua gaaaaauggc uggcuugugg gguugacaac 8160
uucuguguga agguguuagc uccauacaug ccagauguuc ucgagaaacu ggaauugcuc 8220
caaaggaggu uuggcggaac agugaucagg aacccucucu ccaggaauuc cacucaugaa 8280
auguacuacg ugucuggagc ccgcagcaau gucacauuua cugugaacca aacaucccgc 8340
cuccugauga ggagaaugag gcguccaacu ggaaaaguga cccuggaggc ugacgucauc 8400
cucccaauug ggacacgcag uguugagaca gacaagggac cccuggacaa agaggccaua 8460
gaagaaaggg uugagaggau aaaaucugag uacaugaccu cuugguuuua ugacaaugac 8520
aaccccuaca ggaccuggca cuacuguggc uccuauguca caaaaaccuc aggaagugcg 8580
gcgagcaugg uaaauggugu uauuaaaauu cugacauacc caugggacag gauagaggag 8640
gucacaagaa uggcaaugac ugacacaacc ccuuuuggac agcaaagagu guuuaaagaa 8700
aaaguugaca ccagagcaaa ggauccacca gcgggaacua ggaagaucau gaaaguuguc 8760
aacagguggc uguuccgcca ccuggccaga gaaaagaacc ccagacugug cacaaaggaa 8820
gaauuuauug caaaaguccg aagucaugca gccauuggag cuuaccugga agaacaagaa 8880
caguggaaga cugccaauga ggcuguccaa gacccaaagu ucugggaacu gguggaugaa 8940
gaaaggaagc ugcaccaaca aggcaggugu cggacuugug uguacaacau gauggggaaa 9000
agagagaaga agcugucaga guuugggaaa gcaaagggaa gccgugccau augguauaug 9060
uggcugggag cgcgguaucu ugaguuugag gcccugggau uccugaauga ggaccauugg 9120
gcuuccaggg aaaacucagg aggaggagug gaaggcauug gcuuacaaua ccuaggauau 9180
gugaucagag accuggcugc aauggauggu gguggauucu acgcggauga caccgcugga 9240
ugggacacgc gcaucacaga ggcagaccuu gaugaugaac aggagaucuu gaacuacaug 9300
agcccacauc acaaaaaacu ggcacaagca gugauggaaa ugacauacaa gaacaaagug 9360
gugaaagugu ugagaccagc cccaggaggg aaagccuaca uggaugucau aagucgacga 9420
gaccagagag gauccgggca gguagugacu uaugcucuga acaccaucac caacuugaaa 9480
guccaauuga ucagaauggc agaagcagag auggugauac aucaccaaca uguucaagau 9540
ugugaugaau caguucugac caggcuggag gcauggcuca cugagcacgg auguaacaga 9600
cugaagagga uggcggugag uggagacgac uguguggucc ggcccaucga ugacagguuc 9660
ggccuggccc ugucccaucu caacgccaug uccaagguua gaaaggacau aucugaaugg 9720
cagccaucaa aaggguggaa ugauugggag aaugugcccu ucuguuccca ccacuuccau 9780
gaacuacagc ugaaggaugg caggaggauu guggugccuu gccgagaaca ggacgagcuc 9840
auugggagag gaaggguguc uccaggaaac ggcuggauga ucaaggaaac agcuugccuc 9900
agcaaagccu augccaacau guggucacug auguauuuuc acaaaaggga caugaggcua 9960
cugucauugg cuguuuccuc agcuguuccc accucauggg uuccacaagg acgcacaaca 10020
uggucgauuc augggaaagg ggaguggaug accacggaag acaugcuuga gguguggaac 10080
agaguaugga uaaccaacaa cccacacaug caggacaaga caauggugaa agaauggaga 10140
gaugucccuu aucuaaccaa gagacaagac aagcugugcg gaucacugau uggaaugacc 10200
aauagggcca ccugggccuc ccacauccau uuggucaucc aucguauccg aacgcugauu 10260
ggacaggaga aauauacuga cuaccuaaca gucauggaca gauauucugu ggaugcugac 10320
cugcaaccgg gugagcuuau cugaaacacc aucuaauagg aauaaccggg auacaaacca 10380
cggguggaga accggacucc ccacaacuug aaaccgggau auaaaccacg gcuggagaac 10440
cggacuccgc acuuaaaaug aaacagaaac cgggauaaaa acuacggaug gagaaccgga 10500
cuccacacau ugagacagaa gaaguuguca gcccagaacu ccacacgagu uuugccacug 10560
cuaagcugug aggcagugca ggcugggaca gccgaccucc agguugcgaa aaaccugguu 10620
ucugggaccu cccaccccag aguaaaaaga acggagccuc cgcuaccacc cucccacgug 10680
gugguagaaa gacggggucu agagguuaga ggagacccuc cagggaacaa auagugggac 10740
cauauugacg ccagggaaag accggagugg uucucugcuu uuccuccagg ggucugugag 10800
cacaguuugc ucaagaauaa gcagaccuuu gga 10833
<210> 7
<211> 10862
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA sequence of the YFV TV3112 strain
<400> 7
aguaaauccu gugugcuaau ugaggugcau uggucugcaa aucgaguugc uaggcaauaa 60
acacauuugg auuaauuuua aucguucguu gagcgauuag cagagaacug accagaacau 120
gucuggucgu aaagcucagg gaaaaacccu gggcgucaau augguacgac gaggaguucg 180
cuccuuguca aacaaaauaa aacaaaaaac aaaacaaauu ggaaacagac cuggaccuuc 240
aagagguguu caaggauuua ucuuuuucuu uuuguucaac auuuugacug gaaaaaagau 300
cacagcccac cuaaagaggu uguggaaaau gcuggaccca agacaaggcu uggcuguucu 360
aaggaaaguc aagagagugg uggccaguuu gaugagagga uuguccucaa ggaaacgccg 420
uucccaugau guucugacug ugcaauuccu aauuuuggga augcuguuga ugacgggugg 480
agugaccuug gugcggaaaa acagaugguu gcuccuaaau gugacaucug aggaccucgg 540
gaaaacauuc ucugugggca caggcaacug cacaacaaac auuuuggaag ccaaguacug 600
gugcccagac ucaauggaau acaacugucc caaucucagu ccaagagagg agccagauga 660
cauugauugc uggugcuaug ggguggaaaa cguuagaguc gcauauggua agugugacuc 720
agcaggcagg ucuaggaggu caagaagggc cauugacuug ccuacgcaug aaaaccaugg 780
uuugaagacc cggcaagaaa aauggaugac uggaagaaug ggugaaaggc aacuccaaaa 840
gauugagaga ugguucguga ggaaccccuu uuuugcagug acggcucuga ccauugccua 900
ccuuguggga agcaacauga cgcaacgagu cgugauugcc cuacuggucu uggcuguugg 960
uccggccuac ucagcucacu gcauuggaau uacugacagg gauuucauug agggggugca 1020
uggaggaacu uggguuucag cuacccugga gcaagacaag ugugucacug uuauggcccc 1080
ugacaagccu ucauuggaca ucucacuaga gacaguagcc auugauagac cugcugaggu 1140
gaggaaagug uguuacaaug caguucucac ucaugugaag auuaaugaca agugccccag 1200
cacuggagag gcccaccuag cugaagagaa cgaaggggac aaugcgugca agcgcacuua 1260
uucugauaga ggcuggggca auggcugugg ccuauuuggg aaagggagca uuguggcaug 1320
cgccaaauuc acuugugcca aauccaugag uuuguuugag guugaucaga ccaaaauuca 1380
guaugucauc agagcacaau ugcauguugg ggccaagcag gaaaauugga cuaccgacau 1440
uaagacucuc aaguuugaug cccugucagg cucccaggaa gucgaguuca uuggguaugg 1500
aaaagcuaca cuggaaugcc aggugcaaac ugcgguggac uuugguaaca guuacaucgc 1560
ugagauggaa acagagagcu ggauagugga cagacagugg gcccaggacu ugacccugcc 1620
auggcagagu ggaaguggcg ggguguggag agagaugcau caucuugucg aauuugaacc 1680
uccgcaugcc gccacuauca gaguacuggc ccugggaaac caggaaggcu ccuugaaaac 1740
agcucuuacu ggcgcaauga ggguuacaaa ggacacaaau gacaacaacc uuuacaaacu 1800
acauggugga cauguuucuu gcagagugaa auugucagcu uugacacuca aggggacauc 1860
cuacaaaaua ugcacugaca aaauguuuuu ugucaagaac ccaacugaca cuggccaugg 1920
cacuguugug augcagguga aagugucaaa aggagccccc ugcaggauuc cagugauagu 1980
agcugaugau cuuacagcgg caaucaauaa aggcauuuug guuacaguua accccaucgc 2040
cucaaccaau gaugaugaag ugcugauuga ggugaaccca ccuuuuggag acagcuacau 2100
uaucguuggg agaggagauu cacgucucac uuaccagugg cacaaagagg gaagcucaau 2160
aggaaaguug uucacucaga ccaugaaagg cguggaacgc cuggccguca ugggagacac 2220
cgccugggau uucagcuccg cuggaggguu cuucacuucg guugggaaag gaauucauac 2280
gguguuuggc ucugccuuuc aggggcuauu uggcggcuug aacuggauaa caaaggucau 2340
caugggggcg guacuuauau ggguuggcau caacacaaga aacaugacaa uguccaugag 2400
caugaucuug uuaggaguga ucaugauguu uuugucucua ggaguugggg cggaucaagg 2460
augcgccauc aacuuuggca agagagagcu caagugcgga gaugguaucu ucauauuuag 2520
agacucugau gacuggcuga acaaguacuc auacuaucca gaagauccug ugaagcuugc 2580
aucaauagug aaagccucuu uugaagaagg gaaguguggc cuaaauucag uugacucccu 2640
ugagcaugag auguggagaa gcagggcaga ugagaucaau gccauuuuug aggaaaacga 2700
gguggacauu ucuguugucg ugcaggaucc aaagaauguu uaccagagag gaacucaucc 2760
auuuuccaga auucgggaug gucugcagua ugguuggaag acuuggggua agaaccuugu 2820
guucucccca gggaggaaga auggaagcuu caucauagau ggaaagucca ggaaagaaug 2880
cccguuuuca aaccgggucu ggaauucuuu ccagauagag gaguuuggga cgggaguguu 2940
caccacacgc guguacaugg acgcagucuu ugaauacacc auagacugcg auggaucuau 3000
cuugggugca gcggugaacg gaaaaaagag ugcccauggc ucuccaacau uuuggauggg 3060
aagucaugaa guaaauggga cauggaugau ccacaccuug gaggcauuag auuacaagga 3120
gugugagugg ccacugacac auacgauugg aacaucaguu gaagagagug aaauguucau 3180
gccgagauca aucggaggcc caguuagcuc ucacaaucau aucccuggau acaagguuca 3240
gacgaacgga ccuuggaugc agguaccacu agaagugaag agagaagcuu gcccagggac 3300
uagcgugauc auugauggca acugugaugg acggggaaaa ucaaccagau ccaccacgga 3360
uagcgggaaa guuauuccug aaugguguug ccgcuccugc acaaugccgc cugugagcuu 3420
ccaugguagu gauggguguu gguaucccau ggaaauuagg ccaaggaaaa cgcaugaaag 3480
ccaucuggug cgcuccuggg uuacagcugg agaaauacau gcugucccuu uugguuuggu 3540
gagcaugaug auagcaaugg aagugguccu aaggaaaaga cagggaccaa agcaaauguu 3600
gguuggagga guagugcucu ugggagcaau gcuggucggg caaguaacuc uccuugauuu 3660
gcugaaacuc acaguggcug ugggauugca uuuccaugag gugaacaaug gaggagacgc 3720
cauguauaug gcguugauug cugccuuuuc aaucagacca gggcugcuca ucggcuuugg 3780
gcucaggacc cuauggagcc cucgggaacg ccuugugcug acccuaggag cagccauggu 3840
ggagauugcc uuggguggcg ugaugggcgg ccuguggaag uaucuaaaug caguuucucu 3900
cugcauccug acaauaaaug cuguugcuuc uaggaaagca ucaaauacca ucuugccccu 3960
cauggcucug uugacaccug ucacuauggc ugaggugaga cuugccgcaa uguucuuuug 4020
ugccgugguu aucauagggg uccuucacca gaauuucaag gacaccucca ugcagaagac 4080
uauaccucug guggcccuca cacucacauc uuaccugggc uugacacaac cuuuuuuggg 4140
ccugugugca uuucuggcaa cccgcauauu ugggcgaagg aguaucccag ugaaugaggc 4200
acucgcagca gcuggucuag ugggagugcu ggcaggacug gcuuuucagg agauggagaa 4260
cuuccuuggu ccgauugcag uuggaggacu ccugaugaug cugguuagcg uggcugggag 4320
gguggauggg cuagagcuca agaagcuugg ugaaguuuca ugggaagagg aggcggagau 4380
cagcgggagu uccgcccgcu augauguggc acucagugaa caaggggagu ucaagcugcu 4440
uucugaagag aaagugccau gggaccaggu ugugaugacc ucgcuggccu ugguuggggc 4500
ugcccuccau ccauuugcuc uucugcuggu ccuugcuggg uggcuguuuc augucagggg 4560
agcuaggaga aguggggaug ucuuguggga uauucccacu ccuaagauca ucgaggaaug 4620
ugaacaucug gaggauggga uuuauggcau auuccaguca accuucuugg gggccuccca 4680
gcgaggagug ggaguggcac agggaggggu guuccacaca auguggcaug ucacaagagg 4740
agcuuuccuu gucaggaaug gcaagaaguu gauuccaucu ugggcuucag uaaaggaaga 4800
ccuugucgcc uaugguggcu cauggaaguu ggaaggcaga ugggauggag aggaagaggu 4860
ccaguugauc gcggcuguuc caggaaagaa cguggucaac guccagacaa aaccgagcuu 4920
guucaaagug aggaaugggg gagaaaucgg ggcugucgcu cuugacuauc cgaguggcac 4980
uucaggaucu ccuauuguua acaggaacgg agaggugauu gggcuguacg gcaauggcau 5040
ccuugucggu gacaacuccu ucguguccgc cauaucccag acugagguga aggaagaagg 5100
aaaggaggag cuccaagaga ucccgacaau gcuaaagaaa ggaaugacaa cuguccuuga 5160
uuuucauccu ggagcuggga agacaagacg uuuccuccca cagaucuugg ccgagugcgc 5220
acggagacgc uugcgcacuc uuguguuggc ccccaccagg guuguucuuu cugaaaugaa 5280
ggaggcuuuu cacggccugg acgugaaauu ccacacacag gcuuuuuccg cucacggcag 5340
cgggagagaa gucauugaug cuaugugcca ugccacccua acuuacagga uguuggaacc 5400
aacuaggguu guuaacuggg aagugaucau uauggaugaa gcccauuuuu uggauccagc 5460
uagcauagcc gcuagagguu gggcagcgca cagagcuagg gcaaaugaaa gugcaacaau 5520
cuugaugaca gccacaccgc cugggacuag ugaugaauuu ccacauucaa auggugaaau 5580
agaagauguu caaacggaca uacccaguga gcccuggaac acagggcaug acuggauccu 5640
ggcugacaaa aggcccacgg caugguuccu uccauccauc agagcugcaa augucauggc 5700
ugccucuuug cguaaggcug gaaagagugu ggugguccug aacaggaaaa ccuuugagag 5760
agaauacccc acgauaaagc agaagaaacc ugacuuuaua uuggccacug acauagcuga 5820
aaugggagcc aaccuuugcg uggagcgagu gcuggauugc aggacggcuu uuaagccugu 5880
gcuuguggau gaagggagga agguggcaau aaaagggcca cuucguaucu ccgcauccuc 5940
ugcugcucaa aggagggggc gcauugggag aaaucccaac agagauggag acucauacua 6000
cuauucugag ccuacaagug aaaauaaugc ccaccacguc ugcugguugg aggccucaau 6060
gcucuuggac aacauggagg ugaggggugg aauggucgcc ccacucuaug gcguugaagg 6120
aacuaaaaca ccaguuuccc cuggugaaau gagacugagg gaugaccaga ggaaagucuu 6180
cagagaacua gugaggaauu gugaccugcc cguuuggcuu ucguggcaag uggccaaggc 6240
ugguuugaag acgaaugauc guaaguggug uuuugaaggc ccugaggaac augagaucuu 6300
gaaugacagc ggugaaacag ugaagugcag ggcuccugga ggagcaaaga agccucugcg 6360
cccaaggugg ugugaugaaa gggugucauc ugaccagagu gcgcugucug aauuuauuaa 6420
guuugcugaa gguaggaggg gagcugcuga agugcuaguu gugcugagug aacucccuga 6480
uuuccuggcu aaaaagggug gagaggcaau ggauaccauc aguguguuuc uccacucuga 6540
ggaaggcucu agggcuuacc gcaaugcacu aucaaugaug ccugaggcaa ugacaauagu 6600
caugcuguuu auacuggcug gacuacugac aucgggaaug gucaucuuuu ucaugucucc 6660
caaaggcauc aguagaaugu cuauggcgau gggcacaaug gccggcugug gauaucucau 6720
guuccuugga ggcgucaaac ccacucacau cuccuauauc augcucauau ucuuuguccu 6780
gauggugguu gugauccccg agccagggca acaaaggucc auccaagaca accaaguggc 6840
auaccucauu auuggcaucc ugacgcuggu uucagcggug gcagccaacg agcuaggcau 6900
gcuggagaaa accaaagagg accucuuugg gaagaagaac uuaauuccau cuagugcuuc 6960
acccuggagu uggccggauc uugaccugaa gccaggagcu gccuggacag uguacguugg 7020
cauuguuaca augcucucuc caauguugca ccacuggauc aaagucgaau auggcaaccu 7080
gucucugucu ggaauagccc agucagccuc aguccuuucu uucauggaca aggggauacc 7140
auucaugaag augaauaucu cggucauaau gcugcugguc aguggcugga auucaauaac 7200
agugaugccu cugcucugug gcauagggug cgccaugcuc cacuggucuc ucauuuuacc 7260
uggaaucaaa gcgcagcagu caaagcuugc acagagaagg guguuccaug gcguugccaa 7320
gaacccugug guugauggga auccaacagu ugacauugag gaagcuccug aaaugccugc 7380
ccuuuaugag aagaaacugg cucuauaucu ccuucuugcu cucagccuag cuucuguugc 7440
caugugcaga acgcccuuuu cauuggcuga aggcauuguc cuagcaucag cugcccuagg 7500
gccgcucaua gagggaaaca ccagccuucu uuggaaugga cccauggcug ucuccaugac 7560
aggagucaug agggggaauc acuaugcuuu ugugggaguc auguacaauc uauggaagau 7620
gaaaacugga cgccggggga gcgcgaaugg aaaaacuuug ggugaagucu ggaagaggga 7680
acugaaucug uuggacaagc gacaguuuga guuguauaaa aggaccgaca uuguggaggu 7740
ggaucgugau acggcacgca ggcauuuggc cgaagggaag guggacaccg ggguggcggu 7800
cuccaggggg accgcaaagu uaaggugguu ccaugagcgu ggcuauguca agcuggaagg 7860
uagggugauu gaccuggggu guggccgcgg aggcuggugu uacuacgcug cugcgcaaaa 7920
ggaagugagu ggggucaaag gauuuacucu uggaagagac ggccaugaga aacccaugaa 7980
ugugcaaagu cugggaugga acaucaucac cuucaaggac aaaacugaua uccaccgccu 8040
agaaccagug aaaugugaca cccuuuugug ugacauugga gagucaucau cgucaucggu 8100
cacagagggg gaaaggaccg ugagaguucu ugauacugua gaaaaauggc uggcuugugg 8160
gguugacaac uucuguguga agguguuagc uccauacaug ccagauguuc ucgagaaacu 8220
ggaauugcuc caaaggaggu uuggcggaac agugaucagg aacccucucu ccaggaauuc 8280
cacucaugaa auguacuacg ugucuggagc ccgcagcaau gucacauuua cugugaacca 8340
aacaucccgc cuccugauga ggagaaugag gcguccaacu ggaaaaguga cccuggaggc 8400
ugacgucauc cucccaauug ggacacgcag uguugagaca gacaagggac cccuggacaa 8460
agaggccaua gaagaaaggg uugagaggau aaaaucugag uacaugaccu cuugguuuua 8520
ugacaaugac aaccccuaca ggaccuggca cuacuguggc uccuauguca caaaaaccuc 8580
aggaagugcg gcgagcaugg uaaauggugu uauuaaaauu cugacauauc caugggacag 8640
gauagaggag gucacaagaa uggcaaugac ugacacaacc ccuuuuggac agcaaagagu 8700
guuuaaagaa aaaguugaca ccagagcaaa ggauccacca gcgggaacua ggaagaucau 8760
gaaaguuguc aacagguggc uguuccgcca ccuggccaga gaaaagaacc ccagacugug 8820
cacaaaggaa gaauuuauug caaaaguccg aagucaugca gccauuggag cuuaccugga 8880
agaacaagaa caguggaaga cugccaauga ggcuguccaa gacccaaagu ucugggaacu 8940
gguggaugaa gaaaggaagc ugcaccaaca aggcaggugu cggacuugug uguacaacau 9000
gauggggaaa agagagaaga agcugucaga guuugggaaa gcaaagggaa gccgugccau 9060
augguauaug uggcugggag cgcgguaucu ugaguuugag gcccugggau uccugaauga 9120
ggaccauugg gcuuccaggg aaaacucagg aggaggagug gaaggcauug gcuuacaaua 9180
ccuaggauau gugaucagag accuggcugc aauggauggu gguggauucu acgcggauga 9240
caccgcugga ugggacacgc gcaucacaga ggcagaccuu gaugaugaac aggagaucuu 9300
gaacuacaug agcccacauc acaaaaaacu ggcacaagca gugauggaaa ugacauacaa 9360
gaacaaagug gugaaagugu ugagaccagc cccaggaggg aaagccuaca uggaugucau 9420
aagucgacga gaccagagag gauccgggca gguagugacu uaugcucuga acaccaucac 9480
caacuugaaa guccaauuga ucagaauggc agaagcagag auggugauac aucaccaaca 9540
uguucaagau ugugaugaau caguucugac caggcuggag gcauggcuca cugagcacgg 9600
auguaacaga cugaagagga uggcggugag uggagacgac uguguggucc ggcccaucga 9660
ugacagguuc ggccuggccc ugucccaucu caacgccaug uccaagguua gaaaggacau 9720
aucugaaugg cagccaucaa aaggguggaa ugauugggag aaugugcccu ucuguuccca 9780
ccacuuccau gaacuacagc ugaaggaugg caggaggauu guggugccuu gccgagaaca 9840
ggacgagcuc auugggagag gaaggguguc uccaggaaac ggcuggauga ucaaggaaac 9900
agcuugccuc agcaaagccu augccaacau guggucacug auguauuuuc acaaaaggga 9960
caugaggcua cugucauugg cuguuuccuc agcuguuccc accucauggg uuccacaagg 10020
acgcacaaca uggucgauuc augggaaagg ggaguggaug accacggaag acaugcuuga 10080
gguguggaac agaguaugga uaaccaacaa cccacacaug caggacaaga caauggugaa 10140
aaaauggaga gaugucccuu aucuaaccaa gagacaagac aagcugugcg gaucacugau 10200
uggaaugacc aauagggcca ccugggccuc ccacauccau uuggucaucc aucguauccg 10260
aacgcugauu ggacaggaga aauacacuga cuaccuaaca gucauggaca gguauucugu 10320
ggaugcugac cugcaacugg gugagcuuau cugaaacacc aucuaacagg aauaaccggg 10380
auacaaacca cggguggaga accggacucc ccacaaccug aaaccgggau auaaaccacg 10440
gcuggagaac cggacuccgc acuuaaaaug aaacagaaac cgggauaaaa acuacggaug 10500
gagaaccgga cuccacacau ugagacagaa gaaguuguca gcccagaacc ccacacgagu 10560
uuugccacug cuaagcugug aggcagugca ggcugggaca gccgaccucc agguugcgaa 10620
aaaccugguu ucugggaccu cccaccccag aguaaaaaga acggagccuc cgcuaccacc 10680
cucccacgug gugguagaaa gacggggucu agagguuaga ggagacccuc cagggaacaa 10740
auagugggac cauauugacg ccagggaaag accggagugg uucucugcuu uuccuccaga 10800
ggucugugag cacaguuugc ucaagaauaa gcagaccuuu ggaugacaaa cacaaaacca 10860
cu 10862
<210> 8
<211> 10862
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA sequence of the YFV TV3111 strain
<400> 8
aguaaauccu gugugcuaau ugaggugcau uggucugcaa aucgaguugc uaggcaauaa 60
acacauuugg auuaauuuua aucguucguu gagcgauuag cagagaacug accagaacau 120
gucuggucgu aaagcucagg gaaaaacccu gggcgucaau augguacgac gaggaguucg 180
cuccuuguca aacaaaauaa aacaaaaaac aaaacaaauu ggaaacagac cuggaccuuc 240
aagagguguu caaggauuua ucuuuuucuu uuuguucaac auuuugacug gaaaaaagau 300
cacagcccac cuaaagaggu uguggaaaau gcuggaccca agacaaggcu uggcuguucu 360
aaggaaaguc aagagagugg uggccaguuu gaugagagga uuguccucaa ggaaacgccg 420
uucccaugau guucugacug ugcaauuccu aauuuuggga augcuguuga ugacgggugg 480
agugaccuug gugcggaaaa acagaugguu gcuccuaaau gugacaucug aggaccucgg 540
gaaaacauuc ucugugggca caggcaacug cacaacaaac auuuuggaag ccaaguacug 600
gugcccagac ucaauggaau acaacugucc caaucucagu ccaagagagg agccagauga 660
cauugauugc uggugcuaug ggguggaaaa cguuagaguc gcauauggua agugugacuc 720
agcaggcagg ucuaggaggu caagaagggc cauugacuug ccuacgcaug aaaaccaugg 780
uuugaagacc cggcaagaaa aauggaugac uggaagaaug ggugaaaggc aacuccaaaa 840
gauugagaga ugguucguga ggaaccccuu uuuugcagug acggcucuga ccauugccua 900
ccuuguggga agcaacauga cgcaacgagu cgugauugcc cuacuggucu uggcuguugg 960
uccggccuac ucagcucacu gcauuggaau uacugacagg gauuucauug agggggugca 1020
uggaggaacu uggguuucag cuacccugga gcaagacaag ugugucacug uuauggcccc 1080
ugacaagccu ucauuggaca ucucacuaga gacaguagcc auugauagac cugcugaggu 1140
gaggaaagug uguuacaaug caguucucac ucaugugaag auuaaugaca agugccccag 1200
cacuggagag gcccaccuag cugaagagaa cgaaggggac aaugcgugca agcgcacuua 1260
uucugauaga ggcuggggca auggcugugg ccuauuuggg aaagggagca uuguggcaug 1320
cgccaaauuc acuugugcca aauccaugag uuuguuugag guugaucaga ccaaaauuca 1380
guaugucauc agagcacaau ugcauguagg ggccaagcag gaaaauugga cuaccgacau 1440
uaagacucuc aaguuugaug cccugucagg cucccaggaa gucgaguuca uuggguaugg 1500
aaaagcuaca cuggaaugcc aggugcaaac ugcgguggac uuugguaaca guuacaucgc 1560
ugagauggaa acagagagcu ggauagugga cagacagugg gcccaggacu ugacccugcc 1620
auggcagagu ggaaguggcg ggguguggag agagaugcau caucuugucg aauuugaacc 1680
uccgcaugcc gccacuauca gaguacuggc ccugggaaac caggaaggcu ccuugaaaac 1740
agcucuuacu ggcgcaauga ggguuacaaa ggacacaaau gacaacaacc uuuacaaacu 1800
acauggugga cauguuucuu gcagagugaa auugucagcu uugacacuca aggggacauc 1860
cuacaaaaua ugcacugaca aaauguuuuu ugucaagaac ccaacugaca cuggccaugg 1920
cacuguugug augcagguga aagugucaaa aggagccccc ugcaggauuc cagugauagu 1980
agcugaugau cuuacagcgg caaucaauaa aggcauuuug guuacaguua accccaucgc 2040
cucaaccaau gaugaugaag ugcugauuga ggugaaccca ccuuuuggag acagcuacau 2100
uaucguuggg agaggagauu cacgucucac uuaccagugg cacaaagagg gaagcucaau 2160
aggaaaguug uucacucaga ccaugaaagg cguggaacgc cuggccguca ugggagacac 2220
cgccugggau uucagcuccg cuggaggguu cuucacuucg guugggaaag gaauucauac 2280
gguguuuggc ucugccuuuc aggggcuauu uggcggcuug aacuggauaa caaaggucau 2340
caugggggcg guacuuauau ggguuggcau caacacaaga aacaugacaa uguccaugag 2400
caugaucuug uuaggaguga ucaugauguu uuugucucua ggaguugggg cggaucaagg 2460
augcgccauc aacuuuggca agagagagcu caagugcgga gaugguaucu ucauauuuag 2520
agacucugau gacuggcuga acaaguacuc auacuaucca gaagauccug ugaagcuugc 2580
aucaauagug aaagccucuu uugaagaagg gaaguguggc cuaaauucag uugacucccu 2640
ugagcaugag auguggagaa gcagggcaga ugagaucaau gccauuuuug aggaaaacga 2700
gguggacauu ucuguugucg ugcaggaucc aaagaauguu uaccagagag gaacucaucc 2760
auuuuccaga auucgggaug gucugcagua ugguuggaag acuuggggua agaaccuugu 2820
guucucccca gggaggaaga auggaagcuu caucauagau ggaaagucca ggaaagaaug 2880
cccguuuuca aaccgggucu ggaauucuuu ccagauagag gaguuuggga cgggaguguu 2940
caccacacgc guguacaugg acgcagucuu ugaauacacc auagacugcg auggaucuau 3000
cuugggugca gcggugaacg gaaaaaagag ugcccauggc ucuccaacau uuuggauggg 3060
aagucaugaa guaaauggga cauggaugau ccacaccuug gaggcauuag auuacaagga 3120
gugugagugg ccacugacac auacgauugg aacaucaguu gaagagagug aaauguucau 3180
gccgagauca aucggaggcc caguuagcuc ucacaaucau aucccuggau acaagguuca 3240
gacgaacgga ccuuggaugc agguaccacu agaagugaag agagaagcuu gcccagggac 3300
uagcgugauc auugauggca acugugaugg acggggaaaa ucaaccagau ccaccacgga 3360
uagcgggaaa guuauuccug aaugguguug ccgcuccugc acaaugccgc cugugagcuu 3420
ccaugguagu gauggguguu gguaucccau ggaaauuagg ccaaggaaaa cgcaugaaag 3480
ccaucuggug cgcuccuggg uuacagcugg agaaauacau gcugucccuu uugguuuggu 3540
gagcaugaug auagcaaugg aagugguccu aaggaaaaga cagggaccaa agcaaauguu 3600
gguuggagga guagugcucu ugggagcaau gcuggucggg caaguaacuc uccuugauuu 3660
gcugaaacuc acaguggcug ugggauugca uuuccaugag gugaacaaug gaggagacgc 3720
cauguauaug gcguugauug cugccuuuuc aaucagacca gggcugcuca ucggcuuugg 3780
gcucaggacc cuauggagcc cucgggaacg ccuugugcug acccuaggag cagccauggu 3840
ggagauugcc uuggguggcg ugaugggcgg ccuguggaag uaucuaaaug caguuucucu 3900
cugcauccug acaauaaaug cuguugcuuc uaggaaagca ucaaauacca ucuugccccu 3960
cauggcucug uugacaccug ucacuauggc ugaggugaga cuugccgcaa uguucuuuug 4020
ugccgugguu aucauagggg uccuucacca gaauuucaag gacaccucca ugcagaagac 4080
uauaccucug guggcccuca cacucacauc uuaccugggc uugacacaac cuuuuuuggg 4140
ccugugugca uuucuggcaa cccgcauauu ugggcgaagg aguaucccag ugaaugaggc 4200
acucgcagca gcuggucuag ugggagugcu ggcaggacug gcuuuucagg agauggagaa 4260
cuuccuuggu ccgauugcag uuggaggacu ccugaugaug cugguuagcg uggcugggag 4320
gguggauggg cuagagcuca agaagcuugg ugaaguuuca ugggaagagg aggcggagau 4380
cagcgggagu uccgcccgcu augauguggc acucagugaa caaggggagu ucaagcugcu 4440
uucugaagag aaagugccau gggaccaggu ugugaugacc ucgcuggccu ugguuggggc 4500
ugcccuccau ccauuugcuc uucugcuggu ccuugcuggg uggcuguuuc augucagggg 4560
agcuaggaga aguggggaug ucuuguggga uauucccacu ccuaagauca ucgaggaaug 4620
ugaacaucug gaggauggga uuuauggcau auuccaguca accuucuugg gggccuccca 4680
gcgaggagug ggaguggcac agggaggggu guuccacaca auguggcaug ucacaagagg 4740
agcuuuccuu gucaggaaug gcaagaaguu gauuccaucu ugggcuucag uaaaggaaga 4800
ccuugucgcc uaugguggcu cauggaaguu ggaaggcaga ugggauggag aggaagaggu 4860
ccaguugauc gcggcuguuc caggaaagaa cguggucaac guccagacaa aaccgagcuu 4920
guucaaagug aggaaugggg gagaaaucgg ggcugucgcu cuugacuauc cgaguggcac 4980
uucaggaucu ccuauuguua acaggaacgg agaggugauu gggcuguacg gcaauggcau 5040
ccuugucggu gacaacuccu ucguguccgc cauaucccag acugagguga aggaagaagg 5100
aaaggaggag cuccaagaga ucccgacaau gcuaaagaaa ggaaugacaa cuguccuuga 5160
uuuucauccu ggagcuggga agacaagacg uuuccuccca cagaucuugg ccgagugcgc 5220
acggagacgc uugcgcacuc uuguguuggc ccccaccagg guuguucuuu cugaaaugaa 5280
ggaggcuuuu cacggccugg acgugaaauu ccacacacag gcuuuuuccg cucacggcag 5340
cgggagagaa gucauugaug cuaugugcca ugccacccua acuuacagga uguuggaacc 5400
aacuaggguu guuaacuggg aagugaucau uauggaugaa gcccauuuuu uggauccagc 5460
uagcauagcc gcuagagguu gggcagcgca cagagcuagg gcaaaugaaa gugcaacaau 5520
cuugaugaca gccacaccgc cugggacuag ugaugaauuu ccacauucaa auggugaaau 5580
agaagauguu caaacggaca uacccaguga gcccuggaac acagggcaug acuggauccu 5640
ggcugacaaa aggcccacgg caugguuccu uccauccauc agagcugcaa augucauggc 5700
ugccucuuug cguaaggcug gaaagagugu ggugguccug aacaggaaaa ccuuugagag 5760
agaauacccc acgauaaagc agaagaaacc ugacuuuaua uuggccacug acauagcuga 5820
aaugggagcc aaccuuugcg uggagcgagu gcuggauugc aggacggcuu uuaagccugu 5880
gcuuguggau gaagggagga agguggcaau aaaagggcca cuucguaucu ccgcauccuc 5940
ugcugcucaa aggagggggc gcauugggag aaaucccaac agagauggag acucauacua 6000
cuauucugag ccuacaagug aaaauaaugc ccaccacguc ugcugguugg aggccucaau 6060
gcucuuggac aacauggagg ugaggggugg aauggucgcc ccacucuaug gcguugaagg 6120
aacuaaaaca ccaguuuccc cuggugaaau gagacugagg gaugaccaga ggaaagucuu 6180
cagagaacua gugaggaauu gugaccugcc cguuuggcuu ucguggcaag uggccaaggc 6240
ugguuugaag acgaaugauc guaaguggug uuuugaaggc ccugaggaac augagaucuu 6300
gaaugacagc ggugaaacag ugaagugcag ggcuccugga ggagcaaaga agccucugcg 6360
cccaaggugg ugugaugaaa gggugucauc ugaccagagu gcgcugucug aauuuauuaa 6420
guuugcugaa gguaggaggg gagcugcuga agugcuaguu gugcugagug aacucccuga 6480
uuuccuggcu aaaaagggug gagaggcaau ggauaccauc aguguguuuc uccacucuga 6540
ggaaggcucu agggcuuacc gcaaugcacu aucaaugaug ccugaggcaa ugacaauagu 6600
caugcuguuu auacuggcug gacuacugac aucgggaaug gucaucuuuu ucaugucucc 6660
caaaggcauc aguagaaugu cuauggcgau gggcacaaug gccggcugug gauaucucau 6720
guuccuugga ggcgucaaac ccacucacau cuccuauauc augcucauau ucuuuguccu 6780
gauggugguu gugauccccg agccagggca acaaaggucc auccaagaca accaaguggc 6840
auaccucauu auuggcaucc ugacgcuggu uucagcggug gcagccaacg agcuaggcau 6900
gcuggagaaa accaaagagg accucuuugg gaagaagaac uuaauuccau cuagugcuuc 6960
acccuggagu uggccggauc uugaccugaa gccaggagcu gccuggacag uguacguugg 7020
cauuguuaca augcucucuc caauguugca ccacuggauc aaagucgaau auggcaaccu 7080
gucucugucu ggaauagccc agucagccuc aguccuuucu uucauggaca aggggauacc 7140
auucaugaag augaauaucu cggucauaau gcugcugguc aguggcugga auucaauaac 7200
agugaugccu cugcucugug gcauagggug cgccaugcuc cacuggucuc ucauuuuacc 7260
uggaaucaaa gcgcagcagu caaagcuugc acagagaagg guguuccaug gcguugccaa 7320
gaacccugug guugauggga auccaacagu ugacauugag gaagcuccug aaaugccugc 7380
ccuuuaugag aagaaacugg cucuauaucu ccuucuugcu cucagccuag cuucuguugc 7440
caugugcaga acgcccuuuu cauuggcuga aggcauuguc cuagcaucag cugcccuagg 7500
gccgcucaua gagggaaaca ccagccuucu uuggaaugga cccauggcug ucuccaugac 7560
aggagucaug agggggaauc acuaugcuuu ugugggaguc auguacaauc uauggaagau 7620
gaaaacugga cgccggggga gcgcgaaugg aaaaacuuug ggugaagucu ggaagaggga 7680
acugaaucug uuggacaagc gacaguuuga guuguauaaa aggaccgaca uuguggaggu 7740
ggaucgugau acggcacgca ggcauuuggc cgaagggaag guggacaccg ggguggcggu 7800
cuccaggggg accgcaaagu uaaggugguu ccaugagcgu ggcuauguca agcuggaagg 7860
uagggugauu gaccuggggu guggccgcgg aggcuggugu uacuacgcug cugcgcaaaa 7920
ggaagugagu ggggucaaag gauuuacucu uggaagagac ggccaugaga aacccaugaa 7980
ugugcaaagu cugggaugga acaucaucac cuucaaggac aaaacugaua uccaccgccu 8040
agaaccagug aaaugugaca cccuuuugug ugacauugga gagucaucau cgucaucggu 8100
cacagagggg gaaaggaccg ugagaguucu ugauacugua gaaaaauggc uggcuugugg 8160
gguugacaac uucuguguga agguguuagc uccauacaug ccagauguuc ucgagaaacu 8220
ggaauugcuc caaaggaggu uuggcggaac agugaucagg aacccucucu ccaggaauuc 8280
cacucaugaa auguacuacg ugucuggagc ccgcagcaau gucacauuua cugugaacca 8340
aacaucccgc cuccugauga ggagaaugag gcguccaacu ggaaaaguga cccuggaggc 8400
ugacgucauc cucccaauug ggacacgcag uguugagaca gacaagggac cccuggacaa 8460
agaggccaua gaagaaaggg uugagaggau aaaaucugag uacaugaccu cuugguuuua 8520
ugacaaugac aaccccuaca ggaccuggca cuacuguggc uccuauguca caaaaaccuc 8580
aggaagugcg gcgagcaugg uaaauggugu uauuaaaauu cugacauauc caugggacag 8640
gauagaggag gucacaagaa uggcaaugac ugacacaacc ccuuuuggac agcaaagagu 8700
guuuaaagaa aaaguugaca ccagagcaaa ggauccacca gcgggaacua ggaagaucau 8760
gaaaguuguc aacagguggc uguuccgcca ccuggccaga gaaaagaacc ccagacugug 8820
cacaaaggaa gaauuuauug caaaaguccg aagucaugca gccauuggag cuuaccugga 8880
agaacaagaa caguggaaga cugccaauga ggcuguccaa gacccaaagu ucugggaacu 8940
gguggaugaa gaaaggaagc ugcaccaaca aggcaggugu cggacuugug uguacaacau 9000
gauggggaaa agagagaaga agcugucaga guuugggaaa gcaaagggaa gccgugccau 9060
augguauaug uggcugggag cgcgguaucu ugaguuugag gcccugggau uccugaauga 9120
ggaccauugg gcuuccaggg aaaacucagg aggaggagug gaaggcauug gcuuacaaua 9180
ccuaggauau gugaucagag accuggcugc aauggauggu gguggauucu acgcggauga 9240
caccgcugga ugggacacgc gcaucacaga ggcagaccuu gaugaugaac aggagaucuu 9300
gaacuacaug agcccacauc acaaaaaacu ggcacaagca gugauggaaa ugacauacaa 9360
gaacaaagug gugaaagugu ugagaccagc cccaggaggg aaagccuaca uggaugucau 9420
aagucgacga gaccagagag gauccgggca gguagugacu uaugcucuga acaccaucac 9480
caacuugaaa guccaauuga ucagaauggc agaagcagag auggugauac aucaccaaca 9540
uguucaagau ugugaugaau caguucugac caggcuggag gcauggcuca cugagcacgg 9600
auguaacaga cugaagagga uggcggugag uggagacgac uguguggucc ggcccaucga 9660
ugacagguuc ggccuggccc ugucccaucu caacgccaug uccaagguua gaaaggacau 9720
aucugaaugg cagccaucaa aaggguggaa ugauugggag aaugugcccu ucuguuccca 9780
ccacuuccau gaacuacagc ugaaggaugg caggaggauu guggugccuu gccgagaaca 9840
ggacgagcuc auugggagag gaaggguguc uccaggaaac ggcuggauga ucaaggaaac 9900
agcuugccuc agcaaagccu augccaacau guggucacug auguauuuuc acaaaaggga 9960
caugaggcua cugucauugg cuguuuccuc agcuguuccc accucauggg uuccacaagg 10020
acgcacaaca uggucgauuc augggaaagg ggaguggaug accacggaag acaugcuuga 10080
gguguggaac agaguaugga uaaccaacaa cccacacaug caggacaaga caauggugaa 10140
aaaauggaga gaugucccuu aucuaaccaa gagacaagac aagcugugcg gaucacugau 10200
uggaaugacc aauagggcca ccugggccuc ccacauccau uuggucaucc aucguauccg 10260
aacgcugauu ggacaggaga aauacacuga cuaccuaaca gucauggaca gguauucugu 10320
ggaugcugac cugcaacugg gugagcuuau cugaaacacc aucuaacagg aauaaccggg 10380
auacaaacca cggguggaga accggacucc ccacaaccug aaaccgggau auaaaccacg 10440
gcuggagaac cggacuccgc acuuaaaaug aaacagaaac cgggauaaaa acuacggaug 10500
gagaaccgga cuccacacau ugagacagaa gaaguuguca gcccagaacc ccacacgagu 10560
uuugccacug cuaagcugug aggcagugca ggcugggaca gccgaccucc agguugcgaa 10620
aaaccugguu ucugggaccu cccaccccag aguaaaaaga acggagccuc cgcuaccacc 10680
cucccacgug gugguagaaa gacggggucu agagguuaga ggagacccuc cagggaacaa 10740
auagugggac cauauugacg ccagggaaag accggagugg uucucugcuu uuccuccaga 10800
ggucugugag cacaguuugc ucaagaauaa gcagaccuuu ggaugacaaa cacaaaacca 10860
cu 10862
<210> 9
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA primer
<400> 9
gctaggcaat aaacacattt gga 23
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA primer
<400> 10
ttcactggga tactccttcg c 21
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA primer
<400> 11
atcaaatacc atcttgcccc tc 22
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA primer
<400> 12
agtaaatcct ttgaccccac t 21
<210> 13
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA primer
<400> 13
ggcttaccgc aatgcact 18
<210> 14
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA primer
<400> 14
cagagaacca ctccggtc 18
<210> 15
<211> 493
<212> PRT
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> Sequence of the envelope protein of the YFV TV3111 or TV3112
strains
<400> 15
Ala His Cys Ile Gly Ile Thr Asp Arg Asp Phe Ile Glu Gly Val His
1 5 10 15
Gly Gly Thr Trp Val Ser Ala Thr Leu Glu Gln Asp Lys Cys Val Thr
20 25 30
Val Met Ala Pro Asp Lys Pro Ser Leu Asp Ile Ser Leu Glu Thr Val
35 40 45
Ala Ile Asp Arg Pro Ala Glu Val Arg Lys Val Cys Tyr Asn Ala Val
50 55 60
Leu Thr His Val Lys Ile Asn Asp Lys Cys Pro Ser Thr Gly Glu Ala
65 70 75 80
His Leu Ala Glu Glu Asn Glu Gly Asp Asn Ala Cys Lys Arg Thr Tyr
85 90 95
Ser Asp Arg Gly Trp Gly Asn Gly Cys Gly Leu Phe Gly Lys Gly Ser
100 105 110
Ile Val Ala Cys Ala Lys Phe Thr Cys Ala Lys Ser Met Ser Leu Phe
115 120 125
Glu Val Asp Gln Thr Lys Ile Gln Tyr Val Ile Arg Ala Gln Leu His
130 135 140
Val Gly Ala Lys Gln Glu Asn Trp Thr Thr Asp Ile Lys Thr Leu Lys
145 150 155 160
Phe Asp Ala Leu Ser Gly Ser Gln Glu Val Glu Phe Ile Gly Tyr Gly
165 170 175
Lys Ala Thr Leu Glu Cys Gln Val Gln Thr Ala Val Asp Phe Gly Asn
180 185 190
Ser Tyr Ile Ala Glu Met Glu Thr Glu Ser Trp Ile Val Asp Arg Gln
195 200 205
Trp Ala Gln Asp Leu Thr Leu Pro Trp Gln Ser Gly Ser Gly Gly Val
210 215 220
Trp Arg Glu Met His His Leu Val Glu Phe Glu Pro Pro His Ala Ala
225 230 235 240
Thr Ile Arg Val Leu Ala Leu Gly Asn Gln Glu Gly Ser Leu Lys Thr
245 250 255
Ala Leu Thr Gly Ala Met Arg Val Thr Lys Asp Thr Asn Asp Asn Asn
260 265 270
Leu Tyr Lys Leu His Gly Gly His Val Ser Cys Arg Val Lys Leu Ser
275 280 285
Ala Leu Thr Leu Lys Gly Thr Ser Tyr Lys Ile Cys Thr Asp Lys Met
290 295 300
Phe Phe Val Lys Asn Pro Thr Asp Thr Gly His Gly Thr Val Val Met
305 310 315 320
Gln Val Lys Val Ser Lys Gly Ala Pro Cys Arg Ile Pro Val Ile Val
325 330 335
Ala Asp Asp Leu Thr Ala Ala Ile Asn Lys Gly Ile Leu Val Thr Val
340 345 350
Asn Pro Ile Ala Ser Thr Asn Asp Asp Glu Val Leu Ile Glu Val Asn
355 360 365
Pro Pro Phe Gly Asp Ser Tyr Ile Ile Val Gly Arg Gly Asp Ser Arg
370 375 380
Leu Thr Tyr Gln Trp His Lys Glu Gly Ser Ser Ile Gly Lys Leu Phe
385 390 395 400
Thr Gln Thr Met Lys Gly Val Glu Arg Leu Ala Val Met Gly Asp Thr
405 410 415
Ala Trp Asp Phe Ser Ser Ala Gly Gly Phe Phe Thr Ser Val Gly Lys
420 425 430
Gly Ile His Thr Val Phe Gly Ser Ala Phe Gln Gly Leu Phe Gly Gly
435 440 445
Leu Asn Trp Ile Thr Lys Val Ile Met Gly Ala Val Leu Ile Trp Val
450 455 460
Gly Ile Asn Thr Arg Asn Met Thr Met Ser Met Ser Met Ile Leu Leu
465 470 475 480
Gly Val Ile Met Met Phe Leu Ser Leu Gly Val Gly Ala
485 490
<210> 16
<211> 224
<212> PRT
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> Sequence of the NS2a protein of the YFV TV3111 or TV3112 strains
<400> 16
Gly Glu Ile His Ala Val Pro Phe Gly Leu Val Ser Met Met Ile Ala
1 5 10 15
Met Glu Val Val Leu Arg Lys Arg Gln Gly Pro Lys Gln Met Leu Val
20 25 30
Gly Gly Val Val Leu Leu Gly Ala Met Leu Val Gly Gln Val Thr Leu
35 40 45
Leu Asp Leu Leu Lys Leu Thr Val Ala Val Gly Leu His Phe His Glu
50 55 60
Val Asn Asn Gly Gly Asp Ala Met Tyr Met Ala Leu Ile Ala Ala Phe
65 70 75 80
Ser Ile Arg Pro Gly Leu Leu Ile Gly Phe Gly Leu Arg Thr Leu Trp
85 90 95
Ser Pro Arg Glu Arg Leu Val Leu Thr Leu Gly Ala Ala Met Val Glu
100 105 110
Ile Ala Leu Gly Gly Val Met Gly Gly Leu Trp Lys Tyr Leu Asn Ala
115 120 125
Val Ser Leu Cys Ile Leu Thr Ile Asn Ala Val Ala Ser Arg Lys Ala
130 135 140
Ser Asn Thr Ile Leu Pro Leu Met Ala Leu Leu Thr Pro Val Thr Met
145 150 155 160
Ala Glu Val Arg Leu Ala Ala Met Phe Phe Cys Ala Val Val Ile Ile
165 170 175
Gly Val Leu His Gln Asn Phe Lys Asp Thr Ser Met Gln Lys Thr Ile
180 185 190
Pro Leu Val Ala Leu Thr Leu Thr Ser Tyr Leu Gly Leu Thr Gln Pro
195 200 205
Phe Leu Gly Leu Cys Ala Phe Leu Ala Thr Arg Ile Phe Gly Arg Arg
210 215 220
<210> 17
<211> 378
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA Sequence coding for the NS4a protein of the YFV TV3112 strain
<400> 17
ggagcugcug aagugcuagu ugugcugagu gaacucccug auuuccuggc uaaaaagggu 60
ggagaggcaa uggauaccau caguguguuu cuccacucug aggaaggcuc uagggcuuac 120
cgcaaugcac uaucaaugau gccugaggca augacaauag ucaugcuguu uauacuggcu 180
ggacuacuga caucgggaau ggucaucuuu uucaugucuc ccaaaggcau caguagaaug 240
ucuauggcga ugggcacaau ggccggcugu ggauaucuca uguuccuugg aggcgucaaa 300
cccacucaca ucuccuauau caugcucaua uucuuugucc ugaugguggu ugugaucccc 360
gagccagggc aacaaagg 378
<210> 18
<211> 1479
<212> RNA
<213> Yellow fever virus
<220>
<223> RNA Sequence coding for the envelope protein of the YFV TV3112
strain
<400> 18
gcucacugca uuggaauuac ugacagggau uucauugagg gggugcaugg aggaacuugg 60
guuucagcua cccuggagca agacaagugu gucacuguua uggccccuga caagccuuca 120
uuggacaucu cacuagagac aguagccauu gauagaccug cugaggugag gaaagugugu 180
uacaaugcag uucucacuca ugugaagauu aaugacaagu gccccagcac uggagaggcc 240
caccuagcug aagagaacga aggggacaau gcgugcaagc gcacuuauuc ugauagaggc 300
uggggcaaug gcuguggccu auuugggaaa gggagcauug uggcaugcgc caaauucacu 360
ugugccaaau ccaugaguuu guuugagguu gaucagacca aaauucagua ugucaucaga 420
gcacaauugc auguuggggc caagcaggaa aauuggacua ccgacauuaa gacucucaag 480
uuugaugccc ugucaggcuc ccaggaaguc gaguucauug gguauggaaa agcuacacug 540
gaaugccagg ugcaaacugc gguggacuuu gguaacaguu acaucgcuga gauggaaaca 600
gagagcugga uaguggacag acagugggcc caggacuuga cccugccaug gcagagugga 660
aguggcgggg uguggagaga gaugcaucau cuugucgaau uugaaccucc gcaugccgcc 720
acuaucagag uacuggcccu gggaaaccag gaaggcuccu ugaaaacagc ucuuacuggc 780
gcaaugaggg uuacaaagga cacaaaugac aacaaccuuu acaaacuaca ugguggacau 840
guuucuugca gagugaaauu gucagcuuug acacucaagg ggacauccua caaaauaugc 900
acugacaaaa uguuuuuugu caagaaccca acugacacug gccauggcac uguugugaug 960
caggugaaag ugucaaaagg agcccccugc aggauuccag ugauaguagc ugaugaucuu 1020
acagcggcaa ucaauaaagg cauuuugguu acaguuaacc ccaucgccuc aaccaaugau 1080
gaugaagugc ugauugaggu gaacccaccu uuuggagaca gcuacauuau cguugggaga 1140
ggagauucac gucucacuua ccaguggcac aaagagggaa gcucaauagg aaaguuguuc 1200
acucagacca ugaaaggcgu ggaacgccug gccgucaugg gagacaccgc cugggauuuc 1260
agcuccgcug gaggguucuu cacuucgguu gggaaaggaa uucauacggu guuuggcucu 1320
gccuuucagg ggcuauuugg cggcuugaac uggauaacaa aggucaucau gggggcggua 1380
cuuauauggg uuggcaucaa cacaagaaac augacaaugu ccaugagcau gaucuuguua 1440
ggagugauca ugauguuuuu gucucuagga guuggggcg 1479
Claims (25)
- Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않은 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주로부터 Vero 세포에서 성장하도록 적응되고, 상기 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주보다 신경독성이 적은 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제1항에 있어서, 모체 황열병 바이러스 균주는 계란에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주인, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 모체 황열병 바이러스 균주는 황열병 바이러스 17D-204 하위균주인, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주는 SEQ ID NO. 2의 RNA 서열을 포함하는, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생약독화 황열병 바이러스 균주는 마우스 치사량 50(MLD50) 시험에서 모체 황열병 바이러스 17D 하위균주보다 신경독성이 적은, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 또는
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이
를 포함하는 핵산을 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주. - 제6항에 있어서,
i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 480번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이, 및
ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 비구조 단백질 2A(NS2a)의 65번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이
를 포함하는 핵산을 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주. - 제6항 또는 제7항에 있어서, 핵산은 AAA에서 AAG로의 코돈 변화를 일으키는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함하는, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산은 GUA에서 GUU로의 코돈 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함하는, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 480번 위치의 돌연변이를 포함하는 외피 단백질을 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- SEQ ID NO. 15의 480번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 류신 잔기를 포함하는 외피 단백질을 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제11항에 있어서, 상기 외피 단백질은 SEQ ID NO. 15의 서열과 적어도 90%, 95%, 98%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- (i) 발린에서 류신으로의 아미노산 변화를 일으키는 480번 위치의 돌연변이를 포함하는 외피 단백질, 및
(ii) 메티오닌에서 발린으로의 아미노산 변화를 일으키는 65번 위치의 돌연변이를 포함하는 NS2a 단백질
을 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주. - 제13항에 있어서, 핵산은 AAA에서 AAG로의 코돈 변화를 일으키는 비구조 단백질 4A(NS4a)의 19번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함하는, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제13항 또는 제14항에 있어서, 핵산은 GUA에서 GUU로의 코돈 변화를 일으키는 외피 단백질(E)의 145번 위치의 아미노산에 대한 코돈의 돌연변이를 추가로 포함하는, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- SEQ ID NO. 15의 480번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 류신 잔기를 포함하는 외피 단백질; 및
SEQ ID NO. 16의 65번 위치에 상응하는 단백질 내 위치에 발린 잔기를 포함하는 NS2a 단백질
을 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 생약독화 황열병 바이러스 균주. - 제16항에 있어서, 상기 외피 단백질은 SEQ ID NO. 15의 서열과 적어도 90%, 95%, 98%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하고, 상기 NS2a 단백질은 SEQ ID NO. 16의 서열과 적어도 90%, 95%, 98%, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제16항 또는 제17항에 있어서, 핵산은 SEQ ID NO. 17의 57번 위치에 상응하는 비구조 단백질 4A(NS4a)를 코딩하는 핵산 내 위치에 G 뉴클레오티드를 추가로 포함하는, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산은 SEQ ID NO. 18의 435번 위치에 상응하는 외피 단백질(E)을 코딩하는 핵산 내 위치에 U 뉴클레오티드를 추가로 포함하는, 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 생약독화 황열병 바이러스 균주 및 제약상 허용되는 비히클을 포함하는 면역원성 조성물.
- Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주를 획득하는 방법으로서,
- a) Vero 세포에서 성장하도록 적응되지 않고, 선택적으로 계란에서 성장하도록 적응된 모체 생약독화 황열병 바이러스 균주의 바이러스 게놈 RNA를 정제하는 단계;
- b) 단계 a)에서 정제된 바이러스 게놈 RNA로 Vero 세포를 형질감염시켜 형질감염된 Vero 세포를 획득하는 단계;
- c) 단계 b)에서 획득한 형질감염된 Vero 세포를 배양 배지에서 성장시켜 제1 황열병 바이러스 개체군을 획득하고 추가로 회수하는 단계;
- d) 단계 c)의 마지막에 획득한 회수된 제1 황열병 바이러스 개체군을 새로운 Vero 세포에서 2회 이상 증폭하여 제2 황열병 바이러스 개체군을 획득하는 단계;
- e) 단계 d)에서 획득한 제2 황열병 바이러스 개체군을 Vero 세포에서 2회 이상의 연속 플라크 정제에 의해 클로닝하여 복수의 황열병 바이러스 클론을 획득하는 단계;
- f) 단계 e)의 마지막에 획득한 회수된 황열병 바이러스 클론 각각을 개별적으로 새로운 Vero 세포에서 2회 이상 증폭하여 복수의 황열병 바이러스 균주를 획득하는 단계; 및
- g) 단계 f)에서 회수된 상기 복수의 황열병 바이러스 균주로부터, 마우스 치사량 50(MLD50) 시험에서 모체 생약독화 황열병 바이러스 균주보다 신경독성이 적은 하나 이상의 생약독화 황열병 바이러스 균주를 선별하는 단계를 포함하는 방법. - 제21항에 있어서, 상기 배양 배지는 무혈청이고, 선택적으로 인간 또는 동물 유래 물질을 함유하지 않는, 방법.
- 제21항 또는 제22항에 따른 방법에 의해 획득 가능한 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 백신의 제조에 사용하기 위한 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항 또는 제23항에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주.
- 황열병 바이러스 감염의 예방에 사용하기 위한, 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항 또는 제23항에 따른 생약독화 황열병 바이러스 균주를 포함하는 백신.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP18305405.5A EP3549603A1 (en) | 2018-04-06 | 2018-04-06 | Live-attenuated yellow fever virus strain adapted to grow on vero cells and vaccine composition comprising the same |
EP18305405.5 | 2018-04-06 | ||
PCT/EP2019/058268 WO2019192997A1 (en) | 2018-04-06 | 2019-04-02 | Live-attenuated yellow fever virus strain adapted to grow on vero cells and vaccine composition comprising the same |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20200140292A true KR20200140292A (ko) | 2020-12-15 |
Family
ID=62046805
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020207030059A KR20200140292A (ko) | 2018-04-06 | 2019-04-02 | Vero 세포에서 성장하도록 적응된 생약독화 황열병 바이러스 균주 및 이를 포함하는 백신 조성물 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11471521B2 (ko) |
EP (2) | EP3549603A1 (ko) |
JP (1) | JP7370338B2 (ko) |
KR (1) | KR20200140292A (ko) |
CN (1) | CN111918669A (ko) |
AR (1) | AR114471A1 (ko) |
AU (1) | AU2019249329A1 (ko) |
BR (1) | BR112020018879A2 (ko) |
CA (1) | CA3095438A1 (ko) |
CO (1) | CO2020011984A2 (ko) |
PE (1) | PE20210317A1 (ko) |
SG (1) | SG11202009439YA (ko) |
TW (1) | TWI835787B (ko) |
WO (1) | WO2019192997A1 (ko) |
ZA (1) | ZA202006280B (ko) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3549603A1 (en) | 2018-04-06 | 2019-10-09 | Sanofi Pasteur | Live-attenuated yellow fever virus strain adapted to grow on vero cells and vaccine composition comprising the same |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2716399C (en) | 2008-03-05 | 2020-07-21 | Pierre Chouvenc | Process for stabilizing an adjuvant containing vaccine composition |
ES2524975T3 (es) * | 2009-07-31 | 2014-12-16 | Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. | Cepa del virus de la fiebre amarilla de alto rendimiento con mayor propagación en células |
AR079970A1 (es) * | 2010-07-23 | 2012-02-29 | Xcellerex Inc | Cepas de alto rendimiento del virus de la fiebre amarilla con una propagacion incrementada en las celulas |
EP2877208B1 (en) | 2012-07-24 | 2021-05-12 | Sanofi Pasteur | Vaccine compositions for the prevention of dengue virus infection |
EP3549603A1 (en) * | 2018-04-06 | 2019-10-09 | Sanofi Pasteur | Live-attenuated yellow fever virus strain adapted to grow on vero cells and vaccine composition comprising the same |
-
2018
- 2018-04-06 EP EP18305405.5A patent/EP3549603A1/en not_active Withdrawn
-
2019
- 2019-04-02 EP EP19714666.5A patent/EP3773701A1/en active Pending
- 2019-04-02 BR BR112020018879-4A patent/BR112020018879A2/pt unknown
- 2019-04-02 JP JP2020554449A patent/JP7370338B2/ja active Active
- 2019-04-02 TW TW108111634A patent/TWI835787B/zh active
- 2019-04-02 CN CN201980023339.4A patent/CN111918669A/zh active Pending
- 2019-04-02 KR KR1020207030059A patent/KR20200140292A/ko not_active Application Discontinuation
- 2019-04-02 PE PE2020001491A patent/PE20210317A1/es unknown
- 2019-04-02 CA CA3095438A patent/CA3095438A1/en active Pending
- 2019-04-02 WO PCT/EP2019/058268 patent/WO2019192997A1/en unknown
- 2019-04-02 US US17/045,322 patent/US11471521B2/en active Active
- 2019-04-02 SG SG11202009439YA patent/SG11202009439YA/en unknown
- 2019-04-02 AU AU2019249329A patent/AU2019249329A1/en active Pending
- 2019-04-05 AR ARP190100906A patent/AR114471A1/es unknown
-
2020
- 2020-09-28 CO CONC2020/0011984A patent/CO2020011984A2/es unknown
- 2020-10-09 ZA ZA2020/06280A patent/ZA202006280B/en unknown
-
2021
- 2021-11-05 US US17/453,758 patent/US11452772B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US11452772B2 (en) | 2022-09-27 |
US11471521B2 (en) | 2022-10-18 |
CO2020011984A2 (es) | 2021-02-08 |
AU2019249329A1 (en) | 2020-12-03 |
CA3095438A1 (en) | 2019-10-10 |
JP7370338B2 (ja) | 2023-10-27 |
US20220047692A1 (en) | 2022-02-17 |
PE20210317A1 (es) | 2021-02-16 |
AR114471A1 (es) | 2020-09-09 |
EP3549603A1 (en) | 2019-10-09 |
TW202003028A (zh) | 2020-01-16 |
EP3773701A1 (en) | 2021-02-17 |
BR112020018879A2 (pt) | 2021-01-26 |
SG11202009439YA (en) | 2020-10-29 |
TWI835787B (zh) | 2024-03-21 |
RU2020136260A (ru) | 2022-05-06 |
WO2019192997A1 (en) | 2019-10-10 |
JP2021520384A (ja) | 2021-08-19 |
CN111918669A (zh) | 2020-11-10 |
ZA202006280B (en) | 2022-06-29 |
US20210154289A1 (en) | 2021-05-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5197362B2 (ja) | デング熱セロタイプ1弱毒株 | |
JP5075120B2 (ja) | デング熱セロタイプ2の弱毒化株 | |
AU2007311792B2 (en) | Immunisation method against the 4 dengue serotypes | |
US20130095136A1 (en) | Tetravalent Dengue Vaccines | |
US20100239612A1 (en) | Method of Immunization Against the 4 Serotypes of Dengue Fever | |
KR20090027759A (ko) | 뎅기열의 4 가지 혈청형에 대한 면역화 방법 | |
Pletnev | Infectious cDNA clone of attenuated Langat tick-borne flavivirus (strain E5) and a 3′ deletion mutant constructed from it exhibit decreased neuroinvasiveness in immunodeficient mice | |
US11452772B2 (en) | Live-attenuated yellow fever virus strain adapted to grow on Vero cells and vaccine composition comprising the same | |
RU2788130C2 (ru) | Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, адаптированный к росту в клетках vero, и вакцинная композиция, содержащая его | |
US8715999B2 (en) | Flaviviridae mutants comprising a deletion in the capsid protein for use as vaccines | |
RU2795800C1 (ru) | Иммунобиологическое средство для профилактики заболеваний, вызванных вирусом клещевого энцефалита на основе рекомбинантного вируса рода Flavivirus | |
Kuznetsova et al. | Development and Characterization of Yellow Fever Virus Vaccine Strain 17DD-Based Chimeric Tick-Borne Encephalitis Virus | |
CN111778263B (zh) | 用于疫苗中的登革热病毒嵌合式构建物的组合物及方法 | |
Luethy | Neuronal Dissemination Patterns of Three Distinct Viruses and Mechanisms Regulating Viral Retrograde Axonal Transport | |
CN111778263A (zh) | 用于疫苗中的登革热病毒嵌合式构建物的组合物及方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
E902 | Notification of reason for refusal |