KR20090027759A

KR20090027759A - 뎅기열의 4 가지 혈청형에 대한 면역화 방법

Info

Publication number: KR20090027759A
Application number: KR1020097002307A
Authority: KR
Inventors: 브루노 가이; 베로니크 바르반; 레미 포라트; 쟝 랑
Original assignee: 사노피 파스퇴르
Priority date: 2006-07-12
Filing date: 2007-07-11
Publication date: 2009-03-17
Also published as: MX2009000369A; US20100221285A1; EP2043680A1; CN101489585A; JP5295956B2; BRPI0712878A2; ZA200900155B; AR061887A1; FR2903605A1; AU2007274100B2; TWI400333B; MY169275A; WO2008007021A1; TW200813228A; CA2656349A1; US20080014219A1; IL196331A0; AU2007274100A1; CN101489585B; JP2009542783A

Abstract

본 발명은 뎅기열 환자에게 (i) 일정 용량의 제 1 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 2 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스, 및 (ii) 일정 용량의 제 3 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 4 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스를 연속 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 상기 4 가지 뎅기열 혈청형에 대해 동종 보호를 유도하는 방법에 관한 것으로서, 이때 상기 백신 뎅기열 바이러스(ii)를 상기 백신 뎅기열 바이러스(i)의 투여 후 30일 이상 1 년 이내에 투여한다.

뎅기열, 백신, 혈청

Description

뎅기열의 4 가지 혈청형에 대한 면역화 방법{METHOD OF IMMUNISATION AGAINST THE FOUR SEROTYPES OF DENGUE}

뎅기열 질병은, 유사하지만 항원의 관점에서는 상이한 혈청 유형을 갖는, 플라비바이러스 속의 4 가지 바이러스에 의해 유발된다(Gubler et al., 1988 In: 절지동물 매개 바이러스 질병의 역학. Monath TPM, editor, Boca Raton(FL): CRC Press: 223-60; Kautner et al., 1997, J. of Pediatrics, 131:516-524; Rigau-Perez et al., 1998, Lancet; 352:971-977; Vaughn et al., 1997, J Infect Dis; 176:322-30). 뎅기열 혈청형에 의한 감염은 비특이적 바이러스 증후군에서부터 치 명적인 중증 출혈성 질병에 이르는 임상 질병 범위를 발생시킬 수 있다. 모기에 물린 후 뎅기열의 배양 기간은 대략 4일(3 내지 14일의 범위)이다. 뎅기열은 2상성 발열, 두통, 신체의 다양한 부분의 통증, 쇠약, 발진, 림프절 장애 및 백혈구 감소증을 특징으로 한다(Kautner et al., 1997, J. of Pediatrics, 131:516-524; Rigau-Perez et al., 1998, Lancet; 352:971-977). 바이러스혈 기간은 열병의 경우와 동일하다(Vaughn et al., 1997, J. Infect. Dis.; 176:322-30). 뎅기열로부터의 회복은 7 내지 10일 후에 일어나지만, 대개는 무력증이 연장된다. 백혈구 및 혈소판 수의 감소가 통상적이다.

출혈성 뎅기열은 항상성의 이상 및 혈관 투과성의 증가[종종 중증 내부 출혈로 악화되는 혈량저하증 및 저혈압(쇼크 증후군을 갖는 뎅기열)을 발생시킬 수 있다]를 특징으로 하는 중증 열병이다. 충혈성 뎅기열의 사망률은 치료 부재 하에서 10%이하일 수 있으나, 치료 경험이 있는 대부분의 센터에서는 1%이다(WHO technical Guide, 1986. 뎅기열 출혈성 발열: 진단, 치료 및 억제, p1-2. World Health Organization, Geneva, Switzerland).

뎅기열의 통상적인 실험실 진단은 상기 바이러스의 단리 및/또는 상기 뎅기열 바이러스에 특이적인 항체의 검출을 근거로 한다.

뎅기열은 말라리아 이후 두 번째로 가장 흔한 열대성 감염성 질병으로, 세계 인구의 절반(25억) 이상이 유행성 전염의 위험이 존재하는 지역에 살고 있다. 매년, 뎅기열의 사례는 5천만 내지 1억 건으로 추정되며, 출혈성 뎅기열로 입원하는 환자의 사례는 500 000 건, 사망자수는 25 000 건으로 추정된다. 뎅기열은 아시 아, 태평양 지역, 아프리카, 라틴 아메리카, 및 카리브해 지역의 풍토병이다. 100 개가 넘는 열대 국가들에서 뎅기열 바이러스 감염은 풍토병이며 출혈성 뎅기열은 이들 국가 중 60 개 국에서 보도되었다(Gubler, 2002, TRENDS in Microbiology. 10:100-103; Monath, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci.; 91:2395-2400). 몇몇 수의 잘 묘사된 인자들, 즉 인구 성장; 계획되지 않고 통제되지 않은 도시화, 특히 빈곤이 병행된 경우; 비행기 여행의 증가; 모기의 유효한 통제의 결여 및 위생적인 기간 시설 및 공중 보건의 저하가 뎅기열에 영향을 끼치는 것으로 보인다(Gubler, 2002, TRENDS in Microbiology. 10:100-103). 여행 및 국외이주하는 개인들은 뎅기열에 대해 점점 더 많은 경고를 받고 있다(Shirtcliffe et al., 1998, J. Roy. Coll. Phys. Lond.;32:235-237). 뎅기열은 뎅기열이 풍토병인 열대 지역에 배치 중에 있는 미군 군대에서 열병의 주요 원인 중 하나를 구성하여 왔다(DeFraites et al., 1994, MMWR 1994;43:845-848).

상기 바이러스는 인간, 및 당일 동안 물고 인간을 먹이로 하는 것을 좋아하는 가축 모기인 아에데스 아에지프티(Aedes aegypti)를 수반하는 주기로 유지된다. 인간의 감염은 감염된 아에데스 아에지프티가 인간의 피를 먹고 있는 동안 상기 바이러스의 주입에 의해 개시된다. 침속의 바이러스는 주로 혈관 외 조직에 부착한다. 접종 후 감염된 세포의 첫 번째 범주는 수지상 세포이며, 이어서 상기 세포는 림프절로 이동한다(Wu et al., 2000, Nature Med.;7:816-820). 피부 및 림프절에서의 초기 복제 후, 상기 바이러스는 급성 열성 기 동안, 일반적으로 3 내지 5일간 혈액 중에 존재한다.

단핵구 및 대식세포는 수지상 세포와 함께 상기 뎅기열 바이러스의 첫 번째 표적들이다. 동형 재감염에 대한 보호는 완벽하며 추정 상 일생동안 지속되지만, 다양한 뎅기열 유형들 간의 교차보호는 수주 내지 수 개월 미만으로 지속된다(Sabin, 1952, Am. J. Trop. Med. Hyg.; 1:30-50). 결과적으로, 개개인은 상이한 혈청형에 의한 감염을 경험할 수 있다. 뎅기열에 의한 2차 감염은 이론상 중증 뎅기열 발병에 위험 인자이다. 그러나, 출혈성 뎅기열은 다인성이다, 즉 상기 인자는 관련된 바이러스의 균주, 및 또한 환자의 연령, 면역 상태 및 유전적 소인을 포함한다. 2 가지 인자, 즉 고 바이러스혈증에 의한 빠른 바이러스 복제(상기 질병의 중증도는 바이러스혈증의 수준과 관련된다; Vaughn et al., 2000, J. Inf. Dis.; 181:2-9) 및 높은 수준의 염증성 매개 인자의 방출에 대한 실질적인 염증 반응(Rothman and Ennis, 1999, Virology; 257:1-6)은 출혈성 뎅기열의 발생에 중요한 역할을 한다. 뎅기열에 특이적인 치료는 없다. 뎅기열의 치료는 침상에 눕기, 해열 진통제에 의한 발열 및 통증 조절, 및 적절한 수액 흡입에 의한 징후적인 것이다. 출혈성 뎅기열의 치료는 체액 손실의 평형, 응고 인자의 보충 및 헤파린 주입을 요한다.

예방 수단은 현재 상기 매개 동물의 억제 및 개인적인 보호 단계의 수행을 기본으로 하나, 이는 실행이 어렵고 비용이 비싸다. 이 당시 뎅기열에 대한 백신은 승인되지 않았다. 상기 4 가지 뎅기열 혈청형이 세계에 유포되고 따라서 상기 혈청형들이 뎅기열 출혈성 발열의 사례에서 관련이 있는 것으로 보고되었다면, 백신화는 이상적으로는 상기 뎅기열 바이러스의 4 가지 혈청형에 대해 보호를 부여해 야 한다.

연속적인 면역화 전략은 다양한 뎅기열 혈청형들 사이에 이종 보호를 유도할 목적으로 앞서 실행되었다.

따라서 프라이스(Price)(1968, Am. J. Epid., 88:392-397)는 뎅기열 혈청형 1 및 이어서 뎅기열 혈청형 2(이들은 뎅기열 혈청형 3 또는 4를 사용한 접종 시험에서 보호를 부여하였다)에 의한 일련의 2 가지 감염을 포함하는, 뎅기열에 대한 연속적인 면역화 방법을 개시하였다.

화이트헤드 등(Whitehead et al.)(1970, Am. J. Trop. Med. Hyg., 19:94-102)은 부여된 이종 면역성에 대한, 상기 4 가지 뎅기열 혈청형 중 2 또는 3 개에 의한 연속적인 1가 감염의 영향을 측정하고자 하였다. 따라서 긴팔 원숭이를 처음에 뎅기열 바이러스 혈청형 1, 2, 3 또는 4로 감염시켰다. 이종 혈청형에 의한 2 차 감염에 이어서, 감염 순서 및 특히 상기 1차 감염에 사용된 혈청형에 따라 변하는 바이러스혈증이 검출되었다. 보다 구체적으로, 혈청형 2, 3 또는 4로 초기 감염시키고 이어서 혈청형 1, 2 또는 4를 접종한 긴팔 원숭이에서 2 차 바이러스혈증이 나타났다.

쉐러(Scherer) 등(1972, Am. J. Epid. 95:67-79)은 상기 4 가지 뎅기열 혈청형 중 하나에 의한 1 차 감염, 이어서 동종 또는 이종 혈청형에 의한 2 차 감염 또는 심지어 3 차 감염을 포함하는 연속적인 1가 감염을 개시하였다. 제안된 안은 이종 혈청형에 의한 접종에 대해 만족할만한 보호를 획득할 수 있게 하지 못했다.

할스테드(Halstead) 등(1973, Am. J. Trop. Med. Hyg. 22:365-374)은 원숭이 에서 이종 뎅기열 혈청형 1 내지 4에 의한 일련의 2, 3 또는 4 회의 1 가 감염을 포함하는 뎅기열에 대한 연속적인 면역화 방법을 평가하였다. 저자들은 후속 감염에 대한 보호가 혈청형 1, 2 이어서 4, 이어서 혈청형 3에 의한 접종으로 이루어진 면역화 순서에 의해 획득될 수 있다고 결론지었다. 2가 면역화는 개시되지도 제시되지도 않았다. 더욱 또한, 저자들은 고된 특성 및 생성된 결과의 무작위 특성으로 인한 연속적인 면역화에 대해 충고하고 있다.

할스테드 등(1973, Am. J. Trop. Med. Hyg., 22:375-381)은 또한 2 가지 이종 뎅기열 혈청형에 의한 2가 면역화가 제 3 뎅기열 혈청형에 의한 감염을 보호하지 못하거나 또는 단지 부분적으로만 보호함을 발견하였다.

본 발명과 관련하여, 목적은 상기 4 가지 뎅기열 혈청형에 대해 동종 보호를 유도하는 것이다. 발명자들은 상기 4 가지 혈청형을 연속적으로 쌍으로 투여하는 경우 상기 혈청형들을 중화하는 항체를 포함하는 면역 반응을 생성시킬 수 있음을 입증하였다.

발명자들은 특히 DEN-1,2 2가 면역화에 이어서 2 개월 후에 DEN-3,4에 의한 2가 면역화가 면역된 모든 원숭이에서 상기 4 가지 혈청형에 대해 높은 반응을 유도함을 입증하였다. 상기와 같이 생성된 면역 반응은 정량적으로 및 정성적으로 보다 크다(상기 혈청형들을 모두 포함한다).

첫 번째 주제에 따라서, 본 발명은 (i) 일정 용량의 제 1 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 2 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스, 및 (ii) 일정 용량의 제 3 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 4 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스를, 연속 투여를 위한 뎅기열에 대한 복합 백신 조성물로서 포함하는 백신 조성물에 관한 것으로서, 이때 상기 백신 뎅기열 바이러스(ii)를 상기 백신 뎅기열 바이러스(i)의 투여 후 30일 이상 1 년 이내에 투여한다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 하나의 실시태양에 따라, 상기 백신 바이러스(ii)를 상기 백신 바이러스(i)의 투여 후 30일 내지 3 개월째에 투여한다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 바이러스(ii)를 상기 백신 바이러스(i)의 투여 후 30일째에 투여한다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스(i)를 2가 백신 조성물의 형태로 투여한다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스(ii)를 2가 백신 조성물의 형태로 투여한다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 하나의 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1을 VDV1 균주 및 키메리백스(ChimeriVax)^TM DEN-1로 이루어진 그룹 중에서 선택한다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2를 VDV2 균주 및 키메리백스^TM DEN-2로 이루어진 그룹 중에서 선택한다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1은 VDV1 균주이고 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2는 VDV2 균주이다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1은 키메리백스^TM DEN-1이고 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2는 키메리백스^TM DEN-2이다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 3은 키메리백스^TM DEN-3이다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 4는 키메리백스^TM DEN-4이다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 제 1 및 제 2 혈청형들은 각각 CYD DEN1 및 CYD DEN2이고, 상기 제 3 및 제 4 혈청형들은 각각 CYD DEN3 및 CYD DEN4이다.

본 발명에 따른 백신 조성물의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1, 2, 3 및 4의 용량은 각각 10³ 내지 10⁵ CCID₅₀의 범위 내에 있다.

본 발명의 주제는 또한 일정 용량의 제 1 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 2 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스를 30일 이상 1 년 이내에 사전에 제공받은 환자에게 투여하도록 되어 있는 뎅기열 백신의 제조를 위한, 제 3 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 제 4 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스의 용도이다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 제 3 및 제 4 혈청형을 2가 백신 조성물의 형태로 투여한다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 제 1 및 제 2 혈청형을 2가 백신 조성물의 형태로 투여한다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1을 VDV1 균주 및 키메리백스^TM DEN-1로 이루어진 그룹 중에서 선택한다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2를 VDV2 균주 및 키메리백스^TM DEN-2로 이루어진 그룹 중에서 선택한다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1은 VDV1 균주이고 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2는 VDV2 균주이다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1은 키메리백스^TM DEN-1이고 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2는 키메리백스^TM DEN-2이다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 3은 키메리백스^TM DEN-3이다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 4는 키메리백스^TM DEN-4이다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 제 1 및 제 2 혈청형들은 각각 CYD DEN1 및 CYD DEN2이고, 제 3 및 제 4 혈청형들은 각각 CYD DEN3 및 CYD DEN4이다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 제 3 및 제 4 혈청형을 상기 제 1 및 제 2 혈청형의 투여 후 30일 내지 3 개월째에 투여한다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 제 3 및 제 4 혈청형을 상기 제 1 및 제 2 혈청형의 투여 후 30일째에 투여한다.

본 발명에 따른 용도의 또 다른 특정 실시태양에 따라, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1, 2, 3 및 4의 용량은 각각 10³ 내지 10⁵ CCID₅₀의 범위 내에 있다.

본 발명을 하기의 설명에서 더욱 상세히 개시할 것이다.

정의

"뎅기열 바이러스" 또는 "DEN"은 플라비비리다에 과의 플라비바이러스 속에 속하는 양성의 단일 가닥 RNA 바이러스이다. 게놈 RNA는 5' 단부에 I형 캡을 함유하지만 3' 단부에는 폴리-A 꼬리가 없다. 상기 게놈 유기체는 하기의 요소들, 즉 5' 비 암호화 부위(NCR), 구조 단백질(캡시드(C), 전막/막(prM/M), 외막(E)) 및 비구조 단백질(NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5), 및 3' NCR로 이루어진다. 상기 게놈 바이러스 RNA는 캡시드 단백질과 회합하여 뉴클레오캡시드를 형성한다. 다른 플라비바이러스들의 경우, 상기 DEN 바이러스 게놈은 중단되지 않은 암호화 부위를 암호화하며 상기 부위는 단일 폴리단백질로 번역된다.

"VDV" 또는 "베로 뎅기열 백신"은 베로 세포에 순응되고 영장류 및 특히 인간에서 중화 항체의 유도를 포함한 특이적인 체액 반응을 유도할 수 있는 감독된 생 뎅기열 바이러스 균주를 나타낸다.

"VDV-1"은, PDK 세포 상에서 11 회 계대배양시키고(DEN-1 16007/PDK 11) 이어서 32 ℃에서 베로 세포 상에서 증폭시키고 그의 RNA를 정제하여 베로 세포에 형질감염시킨 야생형 균주 DEN-1 16007로부터 획득한 균주이다. 상기 VDV-1 균주는 백신 균주 DEN-1 16007/PDK13(PDK-1차 개 신장-세포 상에서 13 회 계대배양한 것)에 비해 14 개의 추가적인 돌연변이를 갖는다. 상기 DEN-1 16007/PDK13 균주(또한 "LAV1"이라 칭함)는 마히돌(Mahidol) 대학 이름의 특허 출원 EP1159968에 개시되어 있으며 국립 미생물 배양 콜렉션(the Collection Nationale de Cultures de Microorganismes(CNCM))에 I-2480 번으로 기탁되어 있다. 상기 VDV-1 균주의 완전한 서열을 서열식별번호: 1로 제공한다. 상기 균주를 상기 서열로부터 쉽게 재현할 수 있다. 상기 VDV-1 균주의 제조 방법 및 특성화는 사노피 파스퇴르 및 질병 관리 예방 센터의 이름으로 출원된 국제 특허 출원 PCT/IB2006/001313에 개시되어 있다.

"VDV-2"는, PDK 세포 상에서 50 회 계대배양시키고(DEN-2 16681/PDK50), 플라크-정제하고, 그의 RNA를 추출하고 정제시켜 베로 세포에 형질감염시킨 야생형 균주 DEN-2 16681로부터 획득한 균주이다. 이어서 상기 VDV-2 균주를 플라크 정제 및 베로 세포 상에서의 증폭에 의해 획득하였다. 상기 VDV-2 균주는 백신 균주 DEN-2 16681/PDK53(PDK 세포 상에서 53 회 계대배양한 것)에 비해 10 개의 추가적인 돌연변이를 가지며, 이중 4 개의 돌연변이는 침묵 돌연변이이다. 상기 DEN-2 16681/PDK53 균주(또한 "LAV2"라 칭함)는 마히돌 대학 이름의 특허 출원 EP1159968에 개시되어 있으며 국립 미생물 배양 콜렉션(CNCM)에 I-2481 번으로 기탁되어 있다. 상기 VDV-2 균주의 완전한 서열을 서열식별번호: 2로 제공한다. 상기 VDV-2 균주를 상기 서열로부터 쉽게 재현할 수 있다. 상기 VDV-2 균주의 제조 방법 및 특성화는 사노피 파스퇴르 및 질병 관리 예방 센터의 이름으로 출원된 국제 특허 출원 PCT/IB2006/001513에 개시되어 있다.

"키메리백스^TM 뎅기열" 또는 "CYD"란 용어는 전막 및 외막 단백질을 암호화하는 서열이 DEN 바이러스의 서열로 치환된 YF 바이러스의 주쇄를 포함하는 키메릭 황색열(YF) 바이러스를 나타낸다. 따라서 "CYD-1 또는 CYD DEN1"이란 용어를 사용하여 뎅기열 혈청형 1 균주(DEN-1)의 prM 및 E 서열을 함유하는 키메릭 YF 바이러스를 개시한다. "CYD-2 또는 CYD DEN2"란 용어는 DEN-2 균주의 prM 및 E 서열을 함유하는 키메릭 YF 바이러스를 개시하는데 사용된다. "CYD-3 또는 CYD DEN3"이란 용어는 DEN-3 균주의 prM 및 E 서열을 함유하는 키메릭 YF 바이러스를 개시하는데 사용된다. "CYD-4 또는 CYD DEN4"란 용어는 DEN-4 균주의 prM 및 E 서열을 함유하는 키메릭 YF 바이러스를 개시하는데 사용된다. 이들 키메리백스^TM 뎅기열의 제조는 국제 특허 출원 WO 98/37911 및 WO 03/101397에 상세히 개시되어 있으며, 상기의 제조 방법에 대한 정확한 설명에 대해 상기 출원을 참조할 수 있다. 실시예에 개시된 키메라들을 DEN1 PUO359, DEN2 PR 159, DEN3 PaH881 및 DEN4 TVP 980 균주로부터 유래한 prM 및 E 서열을 사용하여 생성시켰다. 상기 뎅기열 바이러스의 임의의 균주를 상기 키메라들의 제작을 위해 본 발명과 관련하여 사용할 수 있었다.

바람직하게는, 상기 키메릭 YF 바이러스는 감독된 황색열 균주 YF17D의 주쇄(Theiler M, and Smith HH (1937) J Exp. Med 65, p767-786.) (YF17D/DEN-1, YF17D/DEN-2, YF17D/DEN-3, YF17D/DEN-4 바이러스)를 포함한다. 사용될 수 있는 YF17D 균주의 예로는 YF17D204 (YF-Vax(등록상표), Sanofi Pasteur, Swifwater, PA, USA; Stamaril(등록상표) Sanofi Pasteur, Marcy I'Etoile, France; ARILVAX^TM Chiron, Speke, Liverpool, UK; FLAVIMUN(등록상표) Berna Biotech, Bern, Switzerland); YF17D-204 France (X15067,X15062); YF17D-204,234 US (Rice et al., 1985, Science, 229:726-733), 또는 그 밖의 관련 균주 YF17DD (Genbank 수탁 번호 U17066), YF17D-213 (Genbank 수탁 번호 U17067) 및 문헌[Galler et al., 1998, Vaccines 16(9/10):1024-1028]에 개시된 YF17DD 균주가 있다. 인간에 사용하기 위해 충분히 감독시킨 임의의 다른 황색열 바이러스 균주를 사용할 수 있다.

"1가" 백신은 단일 뎅기열 바이러스 혈청형을 함유한다. "2가" 백신은 2 개의 상이한 뎅기열 바이러스 혈청형들을 함유한다. "3가" 백신은 3 개의 상이한 뎅기열 바이러스 혈청형들을 함유한다. "4가" 백신은 4 개의 상이한 뎅기열 바이러스 혈청형들을 함유한다.

"환자"란 용어는 뎅기열로 감염될 수 있는 개인(아동 또는 성인), 특히 감염 위험이 있는 개인, 예를 들어 뎅기열이 존재하는 지역을 여행하는 개인 또는 상기 지역의 거주자를 나타낸다.

연속적인 면역화

발명자들은 2 회의 연속적인 2가 투여 형태로 상기 4 개의 혈청형을 투여하는 것이 상기 4 개 혈청형에 대한 유효한 동종 보호를 획득할 수 있게 함을 입증하였다. 따라서 본 발명에 따른 방법은 뎅기열에 대한 면역화 전략과 관련하여 특별히 가장 귀중하다.

따라서 발명자들은 뎅기열 환자에게 (i) 일정 용량의 제 1 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 2 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스, 및 (ii) 일정 용량의 제 3 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 4 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스를 연속 투여함을 포함하는, 상기 환자에서 상기 4 가지 뎅기열 혈청형에 대해 동종 보호를 유도하는 방법을 제안하며, 이때 상기 백신 뎅기열 바이러스(ii)를 상기 백신 뎅기열 바이러스(i)의 투여 후 30일 이상 1 년 이내에 투여한다.

본 발명과 관련하여, "백신 뎅기열 바이러스"란 용어는 특이적인 동종 반응을 유도할 수 있는 뎅기열 바이러스의 임의의 바이러스 형태를 의미하고자 한다. 상기 백신 뎅기열 바이러스를 바람직하게는 뎅기열 바이러스에 의한 감염에 대한 인간의 면역화 프로그램과 관련하여 사용할 수 있다.

따라서 "백신 뎅기열 바이러스"란 용어는 불활성화된 바이러스, 감독된 바이러스, 및 또한 재조합 단백질, 예를 들어 상기 뎅기열 바이러스의 외막 단백질을 의미하고자 한다. 백신 바이러스는 상기 바이러스가 허용 세포 상에서 더 이상 복제할 수 없는 경우 "불활성화된다". 백신 바이러스는 Huh-7, VERO 및/또는 C6/C36 세포 상에서 37 ℃ 또는 39 ℃에서 생육 후 동일한 배양 조건 하에 동일한 적정 방법을 사용하여 측정 시 상기와 같은 바이러스가 야생형의 최대 역가보다 10 배 이상 낮은 역가를 갖는 경우 "감독된다".

상기 나타낸 이들 3 가지 세포 유형 중 하나 이상에서 감소된 생육을 나타내는 백신 바이러스를 본 발명과 관련하여 감독된 것으로 간주한다.

인간에 사용될 수 있는 백신 바이러스는 양의 이익/위험 비를 가지며, 상기 비는 시장에 나와있는 조절 요건들을 만족한다. 본 발명과 관련하여 사용되는 백신 뎅기열 바이러스는 바람직하게는 상기 바이러스가 인간에서 상기 질병을 유도하지 않도록 감독된다. 상기 유형의 백신 바이러스는 유리하게는 대다수의 백신 접종한 개인에서 중화 항체를 포함한 동종 반응을 유도하는 그의 능력을 유지하는 동시에, 기껏해야 온화한 강도(즉 중간 내지 낮거나, 혹은 심지어 0)의 부작용만을 생성시킨다.

본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 백신 뎅기열 바이러스의 비 제한적인 예로서, 불활성화된 뎅기열 바이러스, 감독된 뎅기열 바이러스, 예를 들어 감독된 균주 VDV-1 및 VDV-2, 예를 들어 출원 WO 02/66621, WO 00/57904, WO 00/57908, WO 00/507909, WO 00/57910 및 WO 02/0950075에 개시된 균주들, 및 또한 키메라를 언급할 수 있다. 상기 키메릭 바이러스는 상기 정의한 바와 같은 감독된 바이러스의 특징들을 나타낸다.

뎅기열 바이러스의 외막 단백질을 발현하고 상기 단백질이 유도되는 혈청형을 중화하는 항체를 포함하는 면역 반응을 유도하는 임의의 키메릭 바이러스를 본 발명과 관련하여 사용할 수 있다. 비 제한적인 예로서, 예를 들어 WO 98/37911에 개시된 바와 같은 키메리백스^TM 뎅기열, 및 또한 예를 들어 특허 출원 WO 96/40933 및 WO 01/60847에 개시된 바와 같은 뎅기열/뎅기열 키메라를 언급할 수 있다.

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1은 예를 들어 백신 균주 VDV1 또는 키메리백스^TM DEN-1, 특히 YF17D/DEN-1 바이러스, 또는 그 밖의 DEN-1 16007/PDK13 균주일 수 있다. 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2는 예를 들어 백신 균주 VDV2 또는 키메리백스^TM DEN-2, 특히 YF17D/DEN-2 바이러스, 또는 그 밖의 DEN-2 16681/PDK53 바이러스일 수 있다. 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 3은 키메리백스^TM DEN-3, 특히 YF17D/DEN-3 바이러스일 수 있다. 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 4는 키메리백스^TM DEN-4, 특히 YF17D/DEN-4 바이러스일 수 있다. 상기는 또한 "LAV4" 또는 "DEN-4 1036/PDK48" 균주, 즉 PDK 세포 상에서 48 회 계대배양에 의해 감독된 DEN-4 1036 균주일 수 있다. 상기 균주는 마히돌 대학 이름의 특허 출원 EP1159968에 개시되어 있으며 I-2483이란 번호로 국립 미생물 배양 콜렉션(CNCM)에 기탁되었다.

각각의 키메리백스^TM 1가 백신 뎅기열 바이러스(혈청형 1, 2, 3 및 4)를 베로 세포 상에서 각각의 혈청형을 증폭시켜 제조하였다. 보다 구체적으로, 상기 4 개의 바이러스를 무 혈청 배지에서 부착 베로 세포 상에 별도로 생성시킨다. 이어서, 여과에 의해 세포 찌꺼기를 제거하여 정제한, 상기 바이러스 수확물을 농축시키고 상기 숙주 세포의 DNA를 제거하기 위해서 한외여과 및 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 안정제를 첨가한 후에, 상기 백신 균주를 사용 전에 동결 또는 동결건조된 형태로 보관하고, 이어서 즉석에서 재조성한다. 동일한 방법을 상기 4 개의 키메라들에 적용한다.

VDV1 및 2 균주를 베로 세포 상에서의 증폭에 의해 제조한다. 상기 생성된 바이러스를 수확하고 여과에 의해 세포 찌꺼기를 제거하여 정제한다. DNA를 효소 처리에 의해 절단한다. 불순물을 한외여과에 의해 제거한다. 농축 방법에 의해 감염 역가를 증가시킬 수 있다. 안정제를 첨가한 후에, 상기 균주들을 사용 전에 동결 또는 동결건조된 형태로 보관하고, 이어서 즉석에서 재조성한다.

상기 다가 조성물을 상기 1가 조성물들의 단순한 혼합에 의해 수득한다.

본 발명에 따라, 상기 4 개의 뎅기열 혈청형을 임의의 순서로 투여할 수 있으나, 단 상기를 30일 내지 1 년의 기간, 예를 들어 30일, 45일, 60일, 3개월, 6개월, 9개월 및 1 년 내에 연속적으로 쌍으로 투여하며, 유리하게는 2 회의 일련의 투여 사이에 30일 내지 3개월의 기간, 특히 1 내지 2개월의 기간을 준수한다.

따라서 본 발명에 따른 방법을 하기 개시하는 실시태양으로 실행할 수 있다:

-(i) 혈청형 1 및 2; (ii) 혈청형 3 및 4; 또는

-(i) 혈청형 1 및 3; (ii) 혈청형 2 및 4; 또는

-(i) 혈청형 1 및 4; (ii) 혈청형 2 및 3; 또는

-(i) 혈청형 2 및 3; (ii) 혈청형 1 및 4; 또는

-(i) 혈청형 2 및 4; (ii) 혈청형 1 및 3; 또는

-(i) 혈청형 3 및 4; (ii) 혈청형 1 및 2.

따라서 본 발명은 특정 실시태양에 따라 하기의 안을 포함한다:

-(i) CYD DEN-1 및 CYD DEN-2; (ii) CYD DEN-3 및 CYD DEN-4

-(i) CYD DEN-1 및 CYD DEN-3; (ii) CYD DEN-2 및 CYD DEN-4

-(i) CYD DEN-1 및 CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-2 및 CYD DEN-3

-(i) CYD DEN-2 및 CYD DEN-3; (ii) CYD DEN-1 및 CYD DEN-4

-(i) CYD DEN-2 및 CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-1 및 CYD DEN-3

-(i) CYD DEN-3 및 CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-1 및 CYD DEN-2

-(i) VDV-1 및 CYD DEN-2; (ii) CYD DEN-3 및 CYD DEN-4

-(i) VDV-1 및 CYD DEN-3; (ii) CYD DEN-2 및 CYD DEN-4

-(i) VDV-1 및 CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-2 및 CYD DEN-3

-(i) CYD DEN-2 및 CYD DEN-3; (ii) VDV-1 및 CYD DEN-4

-(i) CYD DEN-2 및 CYD DEN-4; (ii) VDV-1 및 CYD DEN-3

-(i) CYD DEN-3 및 CYD DEN-4; (ii) VDV-1 및 CYD DEN-2

-(i) CYD DEN-1 및 VDV-2 ; (ii) CYD DEN-3 및 CYD DEN-4

-(i) CYD DEN-1 및 CYD DEN-3; (ii) VDV-2 및 CYD DEN-4

-(i) CYD DEN-1 및 CYD DEN-4; (ii) VDV-2 및 CYD DEN-3

-(i) VDV-2 및 CYD DEN-3; (ii) CYD DEN-1 및 CYD DEN-4

-(i) VDV-2 및 CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-1 및 CYD DEN-3

-(i) CYD DEN-3 및 CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-1 및 VDV-2

-(i) VDV-1 및 VDV-2; (ii) CYD DEN-3 및 CYD DEN-4

-(i) VDV-1 및 CYD DEN-3; (ii) VDV-2 및 CYD DEN-4

-(i) VDV-1 및 CYD DEN-4; (ii) VDV-2 및 CYD DEN-3

-(i) VDV-2 및 CYD DEN-3; (ii) VDV-1 및 CYD DEN-4

-(i) VDV-2 및 CYD DEN-4; (ii) VDV-1 및 CYD DEN-2, 및

-(i) CYD DEN-3 및 CYD DEN-4; (ii) VDV-1 및 VDV-2.

본 발명과 관련하여, "백신 바이러스의 용량"이란 용어는 상기 백신 바이러스의 "면역유효량", 즉 동종 중화 항체 반응을 유도하기에 충분한 바이러스의 양(이는 예를 들어 하기 실시예 1에 개시하는 바와 같은 혈청중화 시험에 의해 입증될 수 있다)을 포함하는 조성물을 의미하고자 한다. 혈청은 상기와 같이 측정된 중화 항체 역가가 1:10 이상인 경우 중화 항체의 존재에 대해 양성인 것으로 간주된다.

백신 균주량을 통상적으로는 바이러스 플라크-형성 단위(PFU) 또는 50% 조직 배양물 감염 용량(TCID₅₀), 또는 그 밖의 50% 세포 배양물 감염 용량(CCID₅₀)의 항으로 나타낸다. 예를 들어, 본 발명에 따른 조성물은 1가 또는 2가 조성물의 경우 10 내지 10⁶ CCID₅₀, 특히 10³ 내지 10⁵ CCID₅₀의 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1, 2, 3 또는 4를 함유할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물 또는 용도에서, 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1, 2, 3 및 4의 용량은 각각 바람직하게는 10 내지 10⁶ CCID₅₀, 예를 들어 10, 10¹, 10², 10³, 10⁴, 10⁵ 또는 10⁶ CCID₅₀의 범위, 특히 10³ 내지 10⁵ CCID₅₀의 범위 내에 있다. 상기 백신 바이러스를 동일하거나 상이한 용량으로 사용할 수 있으며, 상기 용량을 사용되는 백신 바이러스의 성질 및 획득된 면역 반응의 강도에 따라 조절할 수 있다.

바람직하게는, 상기 동종 중화 항체 반응은 오래 지속된다, 즉 상기 반응을 뎅기열 혈청형(ii)의 투여 후 적어도 6개월째에 혈청 중에서 검출할 수 있다.

본 발명에 따른 연속적인 투여에서, 제 3 및 제 4 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스를 상기 제 1 및 제 2 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 투여 후 30일 이상 12 개월 이하로 투여한다.

본 발명과 관련하여, 상기 제 3 및 제 4 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스를 예를 들어 상기 제 1 및 제 2 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 투여 후 30일 내지 1년, 예를 들어 30일, 45일, 60일, 3개월, 6개월, 9개월 또는 1 년째에, 유리하게는 30일 내지 3개월째에, 특히 1 내지 2개월째에 투여할 수 있다.

제 1 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스의 용량 및 제 2 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스의 용량을 2 개의 1가 조성물의 형태로, 또는 단일의 2가 조성물의 형태로 동시에 투여한다.

유사하게, 제 3 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스의 용량 및 제 4 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스의 용량을 동시에 투여한다. 예를 들어, 상기 제 3 및 제 4 혈청형을 2 개의 1가 백신 조성물의 형태로, 또는 단일의 2가 백신 조성물의 형태로 투여할 수 있다.

상기 백신 바이러스들을 당해 분야의 숙련가들에게 공지된 임의의 방법에 따라 제조할 수 있는 백신 조성물의 형태로 투여한다. 대개, 일반적으로는 동결건조된 형태의 상기 바이러스를 약학적으로 허용 가능한 부형제, 예를 들어 물 또는 인산염 완충 염수 용액, 습윤제 또는 안정제와 혼합한다. "약학적으로 허용 가능한 부형제"란 용어는 인간 또는 동물에서 부반응, 예를 들어 알러지 반응을 생성시키지 않는 임의의 용매, 분산 매질, 충전제 등을 의미하고자 한다. 상기 부형제를 선택되는 약제 형태, 및 투여 방법 및 경로에 따라 선택한다. 적합한 부형제 및 또한 약학 제형에 관한 요건들은 당해 분야의 참고 논문을 대표하는 문헌[Remington: The Science & Practice of Pharmacy]에 개시되어 있다.

바람직하게는, 상기 백신 조성물을 주사가능한 형태로 제조하며 상기 조성물은 액체 용액, 현탁액 또는 유화액에 상응할 수 있다. 상기 조성물은 특히 대략 6 내지 9의 pH(주변 온도에서 pH 계기로 측정 시)를 유지하도록 완충된 수성 용액을 포함할 수 있다.

항원 보강제를 첨가할 필요는 없지만, 그럼에도 불구하고 상기 조성물은 상기와 같은 물질, 즉 상기 동시에 투여된 백신 균주에 의해 유도되는 세포 또는 체액 면역 반응을 증가, 자극 또는 강화하는 물질을 포함할 수 있다. 당해 분야의 숙련가들은 백신 분야에 통상적으로 사용되는 항원보강제들로부터 본 발명과 관련하여 적합할 수 있는 항원보강제를 선택할 수 있다.

본 발명에 따른 백신 조성물을 면역화에 통상적으로 사용되는 임의의 경로에 따라, 예를 들어 비 경구로(특히 피 내, 피하 또는 근육 내에 의해) 투여할 수 있다. 바람직하게는, 상기 백신 조성물은 삼각근 부위에 피하로 투여되는 주사가능한 조성물이다.

상기 투여되는 조성물의 부피는 투여 경로에 따라 변한다. 피하 주사의 경우, 상기 부피는 일반적으로는 0.1 내지 1.0 ㎖, 바람직하게는 대략적으로 0.5 ㎖이다.

상기 제 1 및 제 2 혈청형, 또는 바람직하게는 상기 혈청형 1 내지 4 모두의 투여에 최적인 기간은 상기 뎅기열 바이러스에 노출되기 대략 1 내지 3개월 전이다. 상기 백신을 성인 및 아동에서 뎅기열 바이러스에 의한 감염의 예방 치료로서 투여할 수 있다. 따라서 표적 집단은 뎅기열 바이러스에 대해 경험이 없거나(즉 앞서 면역화되지 않았거나) 또는 경험이 있을 수도 있는 개인을 포함한다.

백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1 내지 4의 추가투여를 또한 예를 들어 상기 제 3 및 제 4 혈청형 투여 후 6개월 내지 10년, 예를 들어 6개월, 1년, 3년, 5년 또는 10년째에 투여할 수 있다.

본 발명은 또한 4 개의 상이한 혈청형의 4 개의 백신 뎅기열 바이러스를 포함하는 면역화 키트를 제공하며, 이때 각각의 혈청형은 백신 용량의 형태로 존재하거나 2 개 이상, 또는 심지어 4 개의 혈청형이 2가 조성물의 형태로 존재한다.

상기 백신 용량 또는 1가 또는 2가 조성물 및 바람직한 실시태양들에 대한 설명을 위해서, 본 발명에 따른 면역화 방법과 관련된 설명의 단락들을 참조할 수 있다.

본 발명을 하기의 실시예들에 의해 예시한다.

실시예 1: 원숭이에서 연속적인 면역화

따라서 바이러스혈증 및 면역원성을 원숭이 모델에서 시험하였다. 특히 상기 바이러스혈증은 인간에서 상기 질병의 독성 및 중증도와 관련된 인자들 중 하나로서 인지되었으며 따라서 고려되는 중요한 매개변수를 구성한다. 상기 면역원성은 그 자체로서, 부여된 보호의 평가와 관련하여 중요 매개변수이다.

1.1 물질 및 방법:

상기 원숭이에서의 실험을 동물 실험에 관한 유럽의 지령에 따라 수행하였다. 상기 면역화를 모리타니 기원의 키노몰구스 원숭이(Macaca fascicularis)에서 수행하였다. 상기 원숭이를 면역화 전에 6 주간 격리시켜 두었다.

상기 원숭이의 팔(들)에 백신 조성물 0.5 ㎖을 피하로 주입하여 상기 원숭이를 면역화하였다. 케타민(Imalgene, Merial)으로 가볍게 마취시킨 후에, 서혜부 또는 복재 정맥으로부터 천자에 의해 채혈하였다. 0 및 28일째에 항체 반응을 평 가하기 위해 혈액 5 ㎖을 샘플링한 반면, 2 내지 10일째에는 바이러스혈증을 평가하기 위해서 혈액 1 ㎖을 샘플링하였다. 상기 혈액을 얼음 상에 모으고 혈청이 분리될 때까지 얼음 상에서 보관하였다. 이렇게 하기 위해서, 상기 혈액을 4 ℃에서 20 분간 원심분리하고 수거된 혈청을 시험시까지 -80 ℃에서 보관하였다.

바이러스혈증의 측정

백신 후 바이러스혈증을 정량적인 실시간 RT-PCR(qRT-PCR)에 의해 모니터하였다. 상기 DEN1 및 DEN2 균주의 NS5 유전자에 위치한 2 세트의 프라이머 및 탐침을 사용하여 각각 VDV-1 RNA 및 VDV-2 RNA를 정량분석하였다. 상기 YF 바이러스의 NS5 유전자에 위치한 프라이머 및 탐침의 세 번째 세트를 사용하여 상기 CYD RNA를 정량분석하였다. 최종적으로, E(DEN)/NS1 (YF) 유전자의 연접부에 위치한, 상기 다양한 혈청형들에 특이적인 4 세트의 프라이머 및 탐침을 사용하여 상기 YF NS5 RNA에 대해 양성인 샘플에서 상기 혈청형을 동정하였다(또한 표 I 참조). T7 프로모터의 조절 하에서 각각의 PCR에 의해 표적화된 부위를 함유하는 7 개의 플라스미드를 시험관 내에서 전사하여 일련의 합성 RNA를 생성시키고, 이를 각각의 RT-PCR 분석에 내부 기준으로서 포함시켰다. 상기 합성 RNA를 분광광도측정에 의해 분석하였으며, 수득된 RNA의 양을 RNA 사본 수로 전환하고 GEQ(게놈 당량)로서 나타낸다.

0.140 ㎖의 원숭이 혈청을 제조사의 지시에 따라, 마체레이 나젤(Macherey Nagel) "뉴클레오스핀(Nucleospin) 96 바이러스^TM" RNA 추출 키트를 사용하여 추출 하고, 이어서 상기 정제된 RNA를 RNase가 없는 물 0.140 ㎖(0.090 ㎖, 이어서 0.05 ㎖)로 용출시켰다. 반복된 동결/해동 주기를 피하기 위해서, 상기 추출 후 바로 상기 RNA 제제 5 ㎕ 상에서 첫 번째 정량분석을 수행하였다. 나머지 분량은 70 ℃에서 동결시켰다.

상기 반응 혼합물은 "퀴아겐 콴티텍트(Qiagen Qauntitect)^TM 탐침" RT-PCR 정량분석 키트(Qiagen)의 성분 이외에, 10 피코몰의 각 프라이머, 4 피코몰의 각 탐침 및 5 ㎕의 RNA를 총 25 ㎕의 부피로 함유하였다. 시험하려는 상기 RNA의 경우에, 상기 정제된 제제 5 ㎕를 임의의 선행 희석 단계 없이 반응 혼합물에 직접 도입시켰다. 합성 RNA를 RNase가 없는 물에서 1/10으로 희석하고, 대략 10 내지 10⁶ GEQ를 5 ㎕ 중에 함유하는 7 개의 희석물을 표준 곡선의 생성을 위해 나란히 정량분석하였다.

상기 정량분석 반응을 하기의 프로그램을 사용하여 어플라이드 바이오시스템(Applied Biosystem) ABIPrism 700^TM 장치상에서 수행하였다: 50 ℃/30 분, 95 ℃/15 분, 이어서 40 주기의 95 ℃/15 초-60 ℃/60 초.

상기 시험에서 바이러스 RNA의 정량분석 한계는 PCR 표적에 따라, 2.9 내지 3.3 log₁₀GEG/㎖(800 내지2000 GEQ/㎖; 4 내지 10 GEQ/반응)(표준 편차: +/-0.3 log₁₀)이다.

상기 감염 역가와 바이러스 RNA 정량화 간의 상관성을, 상기 면역화에 사용 된 바이러스(CYD 또는 VDV)의 기지량의 감염성 입자가 첨가된 음성 원숭이 혈청 샘플(DO) 0.140 ㎖의 분석에 의해, 상기 분석에 대해 나란히 확립시켰다. 상기 대조용 혈청을 5 ㎕ 중에 대략 1 PFU 및 대략 100 PFU(각각 2.3 및 4.3 log₁₀PFU/㎖)를 함유하는 2 개의 희석물로 제조하였다.

사용된 프라이머 및 탐침을 하기 표 1에 제공하며, 표에서 각각의 분석에 대해 센스 및 안티센스 프라이머 및 탐침을 순서대로 나타낸다.

중화 항체의 측정(혈청중화 시험)(SN50)

통상적으로, 상기 뎅기열 항체 측정은 PRNT50(50% PFU 수 감소 중화 시험) 시험을 사용하여 확립된다. 상기 시험은 고되며 다량의 물질을 다 써버리므로, 우리는 CCID₅₀ 시험에서 측정된 단위수의 50% 감소를 기본으로 하는 SN50 시험을 개발하였다. 96-웰 플레이트에서, 0.120 ㎖의 각각의 상보성 해제된 혈청을 웰당 0.480 ㎖의 희석제(ISCOVE 4% FCS)에 가한다. 6 배의 일련의 희석물을 희석제 0.450 ㎖에 혈청 0.150 ㎖을 전달하여 제조한다. 2.7 log₁₀ CCID₅₀/㎖의 바이러스 희석물 450 ㎕를 25 CCID₅₀/웰이 수득되도록 각 웰에 가한다. 상기 플레이트를 37 ℃에서 1 시간 동안 배양한다. 이어서 각 희석물 100 ㎕를 96-웰 플레이트의 6 개의 웰에 분배하며, 상기 플레이트에는 실험 시작 3일 전에 4% FCS를 함유하는 ISCOVE 배지 100 ㎕ 중에 8000 세포/웰의 밀도로 VERO 세포가 시딩되었다. 37 ℃에서 6일간 배양 후에, 5% CO₂의 존재 하에서 상기 세포를 4 ℃에서 15 분간 에탄올/아세톤(70/30) 혼합물로 고정시키고, 이어서 PBS로 3 회 세척하고 항-플라비바이러스 단클론 항체(mAb 4G2)의 1/2000 희석액 50 ㎕의 존재 하에 37 ℃에서 1 시간 동안 배양한다. 이어서 상기 플레이트를 2 회 세척하고 알칼리성 포스파타제-접합된 항-마우스 IgG의 1/1000 희석액 50 ㎕의 존재 하에 37 ℃에서 1 시간 동안 배양한다. 상기 용해 플라크를 착색된 기질: BCIP/NBT 50 ㎕의 첨가에 의해 가시화한다. 상기 중화 항체 역가를 하기 정의된 바와 같은 카버(Karber) 공식을 사용하여 계산한다:

log₁₀SN50 = d + f/N (X + N/2)

상기 식에서,

d는 100% 중화를 생성시키는 희석물(즉 6 개의 음성 복제물, 즉 감염 징후를 나타내지 않는 복제물)을 나타내고

f는 로그 10의 희석인자(예를 들어 1:4의 희석인자, f=0.6)를 나타내고,

N은 복제물/희석물의 수(N=6)를 나타내고,

X는 희석물 d를 제외하고, 감염의 징후를 나타내지 않는 웰의 총수를 나타낸다.

바이러스 검출의 한계는 10 SN50(즉 1.0 log₁₀SN50)이다.

중화에 사용된 바이러스 균주는 DEN1 16007, DEN2 16681, DEN3 16562 또는 DEN4 1036 균주이다.

대조용을 위해서, 초기 바이러스 희석물을 재 적정하였다.

상기 SN50 시험에서 측정된 중화 역가와 PRNT50 시험에서 통상적으로 측정된 중화 역가 간의 상관성은 log₁₀PRNT50 = log₁₀SN50 + 0.2이다.

평균 역가(GMT)를 1차 값으로서 나타낸 역가들의 기하 평균을 계산하여 설정하고; 상기 역가가 검출 한계 미만인 샘플들을 규약에 의해 상기 한계의 절반과 같은 값으로 할당한다.

1.2 연속적인 면역화의 평가

같은 연령 및 중량의 4 마리 원숭이 3 그룹을 면역화하였다(표 2 참조).

상기 면역화를 CYD DEN1 내지 4 백신에 대한 각각의 혈청형에 대해 10⁵ CCID₅₀의 용량으로, 23G1 바늘을 사용하여, 팔에 피하로 수행하였다. VDV-1 및 VDV-2를 각각 3.96 log₁₀ 및 4.84 log₁₀의 용량으로 주입하였다.

그룹의 조성 및 면역화 프로토콜

그룹	원숭이 번호	면역화
		D0	D56
1	AM633	VDV-1,2 (2가 조성물)	CYD-3,4 (2가 조성물)
	AM634
	AM941
	AN045
2	AM637	CYD-1,2 (2가 조성물)	CYD-3,4 (2가 조성물)
	AN002
	AN013
	AN073
3	AM496	CYD-1,2,3,4 (4가 조성물)	CYD-1,2,3,4 (4가 조성물)
	AM645
	AM766
	AM813

1 회 면역화(D28) 및 2 회 면역화(D84) 후에 획득된 면역원성 결과를 표 3에 제공한다.

바이러스 혈증 결과를 표 4에 제공한다.

GEQ와 PFU 간의 상관성

YF 또는 CYD에 대해서 양성인 혈청의 경우 2.7 log₁₀의 GEQ/PFU 비(즉 1 PFU = 500 GEQ)

VDV1 또는 VDV2에 대해서 양성인 혈청의 경우 2.5 log₁₀의 GEQ/PFU 비(즉 1 PFU = 320 GEQ)

정량분석 한계:

YF 및 CYD에 대해서 qRT-PCR의 경우 <3.3 log₁₀ GEQ/㎖(즉 <4 PFU/㎖)

VDV1 및 VDV2에 대해서 qRT-PCR의 경우 <2.9 log₁₀ GEQ/㎖(즉 <2.5 PFU/㎖)

간단히, 상기 결과를 하기와 같이 요약할 수 있다:

-본 발명에 따른 투여 안은 4가 면역화에 의해 수득되는 동종 중화 항체 반응을 정성적으로 및 정량적으로 증가할 수 있게 한다.

-2가 면역화 CYD-1,2에 이어서 2 개월 후에 면역화 CYD-3,4는 상기 모든 원숭이에서 4 개의 혈청형에 대해 높은 동종 반응을 유도한다. 유사하게, 동일한 양호한 반응이 VDV-1,2에 이어서 CYD-3,4의 투여 후에 관찰된다.

-주목할만한 결과는 1차 면역화 후에 CYD-1,2에 의해 유도된 반응에 대한 CYD-3,4 혈청형의 강한 자극 효과이다. 동종의, 그러나 또한 이종의 중화 항체 반응의 증가가 주목될 수 있다. 이러한 현상은 면역우세 없이 항-E 반응에 대한 항-NS-황색열 반응의 양성 헬퍼 효과에 의해 설명될 수 있었다. 교차 반응성을 갖는 E 에피토프가 또한 한 역할을 할 수 있다. 역설적으로, 이러한 자극 효과는 4가 추가투여 후 관찰되지 않으며, 오직 우세한 E 반응만이 1차 면역화(여기에서, 3)를 촉진한 후에 유도된다.

-상기 바이러스혈증(표 4)은 CYD 백신의 경우에 CYD-4에 의해 우세하게 야기되며 2 회의 연속적인 2가 투여 및 하나의 4가 투여(그룹 2 대 그룹 3) 간에 차이는 관찰되지 않는다. 따라서, 2 회의 2가 면역화 또는 1 회의 4가 면역화 후에 안전성에 관하여 차이가 예상되지 않는다. 보다 낮은 바이러스혈증에 대한 경향은 오히려 본 발명에 따른 백신 안에 의해 관찰되며; 예를 들어 그룹 3과 비교된 그룹 2를 참조하시오.

실시예 2 : 1 개월 간격으로 수행된 원숭이에서의 연속적인 면역화. CYD -1,2에 이은 CYD -3,4 대 CYD -2,3에 이은 CYD -1,4 안의 비교

바이러스혈증 및 면역원성을 선행 실시예에서와 같이 원숭이 모델에서 시험하였다. 본 실시예에서는 선행 실시예의 2 개월에 비해, 1 개월 간격을 2 회의 면역화 사이에 사용하였다. 원숭이에서 적어도 면역원성인 2 개의 백신 바이러스(CYD-2,3)에 의해 수행된 1차 면역화에 이어서 2 개의 면역우세 백신 바이러스(CYD-1,4)를 투여한다.

2.1 물질 및 방법: 실시예 1과 동일함

2.2 1개월 간격의 연속적인 면역화의 평가

같은 연령 및 중량의 4 마리 원숭이 3 그룹을 면역화하였다(표 5 참조).

상기 면역화를 상기와 같이 CYD DEN1 내지 4 백신 바이러스에 대한 각각의 혈청형에 대해 10⁵ CCID₅₀의 용량으로, 23G1 바늘을 사용하여, 팔에 피하로 수행하였다.

그룹의 조성 및 면역화 프로토콜
그룹	면역화
그룹	D0	D28
1	CYD 4가(5555)	CYD 4가(5555)
2	CYD 2가 1-2(55)	CYD 2가 3-4(55)
3	CYD 2가 2-3(55)	CYD 2가 1-4(55)

1 회 면역화(D28) 및 2 회 면역화(D56) 후에 획득된 면역원성 결과를 표 6에 제공한다.

바이러스 혈증 결과는 실시예 1에 제공된 경우와 유사하며, 이는 CYD4에 의해 유도된 약한 바이러스혈증 및 다양한 그룹들 간의 현저한 차이의 부재를 나타낸다.

간단히, 상기 결과는 실시예 1에서 획득된 결과를 보충하며 하기와 같이 요약할 수 있다:

-본 발명에 따른 투여 안은 2 회 면역화를 1개월 간격으로 수행하는 경우 4가 면역화에 의해 획득되는 동종 중화 항체 반응을 정성적으로 및 정량적으로 증가할 수 있게 한다.

-2가 면역화 CYD-1,2에 이어서 1 개월 후에 면역화 CYD-3,4(그룹 2)는 상기 모든 원숭이에서 4 개의 혈청형에 대해 높은 동종 반응을 유도하며, 이때 혈청형 1 및 4가 우세하다.

-이 그룹에서, 혈청형 1 및 2에 대한 추가 투여 효과는 두 번째 투여를 실시예 1에서와 같이 2개월 후에 수행한 경우보다 1개월 후에 수행한 경우 덜 현저하다.

-상기 면역화를 덜 면역원성인 혈청형(CYD-2,3)으로 시작하고 추가 투여를 가장강한 혈청형(CYD-1,4)으로 제공하는 경우, 획득되는 반응은 보다 양호하게 균형을 이루며, 이때 혈청형 1 및 4가 덜 우세하다(그룹 3).

-이러한 결과는 2 개의 2가에 의해 연속적으로 수행된 면역화가 모든 동물에서 모든 혈청형들에 대한 반응을 유도하는데 유효함을 보이는, 실시예 1에서 획득된 결과를 입증하며, 이는 심지어 상기 추가 투여를 1차 면역화 후 단지 1개월째에 제공한 경우이다.

SEQUENCE LISTING <110> Sanofi Pasteur <120> Method of immunization against the four serotypes of dengue <130> PM 0606 <160> 2 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 10735 <212> DNA <213> Dengue virus <400> 1 agttgttagt ctacgtggac cgacaagaac agtttcgaat cggaagcttg cttaacgtag 60 ttctaacagt tttttattag agagcagatc tctgatgatc aaccaacgaa aaaagacggg 120 tcgaccgtct ttcaatatgc tgaaacgcgc gagaaaccgc gtgtcaactg tttcacagtt 180 ggcgaagaga ttctcaaaag gattgctctc aggccaagga cccatgaaat tggtgatggc 240 tttcatagca ttcttaagat ttctagccat acccccaaca gcaggaattt tggctagatg 300 gggctcattc aagaagaatg gagcgattaa agtgttacgg ggtttcaaga gagaaatctc 360 aaacatgcta aacataatga acaggaggaa aagatccgtg accatgctcc ttatgctgct 420 gcccacagcc ctggcgttcc atctgacgac acgaggggga gagccgcata tgatagttag 480 caagcaggaa agaggaaagt cacttttgtt caagacctct gcaggtgtca acatgtgcac 540 cctcattgcg atggatttgg gagagttgtg tgaggacacg atgacctaca aatgcccccg 600 gatcactgag gcggaaccag atgacgttga ctgttggtgc aatgccacgg acacatgggt 660 gacctatgga acgtgctctc aaactggcga acaccgacga gacaaacgtt ccgtcgcatt 720 ggccccacac gtggggcttg gcctagaaac aagagccgaa acgtggatgt cctctgaagg 780 tgcttggaaa cagatacaaa aagtagagac ttgggctctg agacatccag gattcacggt 840 gatagccctt tttctagcac atgccatagg aacatccatc acccagaaag ggatcatttt 900 cattttgctg atgctggtaa caccatctat ggccatgcga tgcgtgggaa taggcaacag 960 agacttcgtg gaaggactgt caggagcaac atgggtggat gtggtactgg agcatggaag 1020 ttgcgtcacc accatggcaa aaaacaaacc aacactggac attgaactct tgaagacgga 1080 ggtcacaaac cctgcagttc tgcgtaaatt gtgcattgaa gctaaaatat caaacaccac 1140 caccgattcg agatgtccaa cacaaggaga agccacactg gtggaagaac aagacgcgaa 1200 ctttgtgtgc cgacgaacgt tcgtggacag aggctggggc aatggctgtg ggctattcgg 1260 aaaaggtagt ctaataacgt gtgccaagtt taagtgtgtg acaaaactag aaggaaagat 1320 agctcaatat gaaaacctaa aatattcagt gatagtcacc gtccacactg gagatcagca 1380 ccaggtggga aatgagacta cagaacatgg aacaactgca accataacac ctcaagctcc 1440 tacgtcggaa atacagctga ccgactacgg aacccttaca ttagattgtt cacctaggac 1500 agggctagat tttaacgaga tggtgttgct gacaatgaaa aagaaatcat ggcttgtcca 1560 caaacagtgg tttctagact taccactgcc ttggacctct ggggctttaa catcccaaga 1620 gacttggaac agacaagatt tactggtcac atttaagaca gctcatgcaa agaagcagga 1680 agtagtcgta ctaggatcac aagaaggagc aatgcacact gcgctgactg gagcgacaga 1740 aatccaaacg tcaggaacga caacaatttt cgcaggacac ctaaaatgca gactaaaaat 1800 ggacaaacta actttaaaag ggatgtcata tgtgatgtgc acaggctcat tcaagttaga 1860 gaaagaagtg gctgagaccc agcatggaac tgttctggtg caggttaaat atgaaggaac 1920 agacgcacca tgcaagattc ccttttcgac ccaagatgag aaaggagcaa cccagaatgg 1980 gagattaata acagccaacc ccatagtcac tgacaaagaa aaaccagtca atattgaggc 2040 agaaccaccc tttggtgaga gctacatcgt ggtaggagca ggtgaaaaag ctttgaaact 2100 aagctggttc aagaaaggaa gcagcatagg gaaaatgttt gaagcaactg cccgaggagc 2160 acgaaggatg gccattctgg gagacaccgc atgggacttc ggttctatag gaggagtgtt 2220 cacgtctatg ggaaaactgg tacaccaggt ttttggaact gcatatggag ttttgtttag 2280 cggagtttct tggaccatga aaataggaat agggattctg ctgacatggc taggattaaa 2340 ttcaaggaac acgtcccttt cggtgatgtg catcgcagtt ggcatggtca cactgtacct 2400 aggagtcatg gttcaggcag attcgggatg tgtaatcaac tggaaaggca gagaacttaa 2460 atgtggaagc ggcatttttg tcactaatga agttcacact tggacagagc aatacaaatt 2520 ccaggctgac tcccccaaga gactatcagc agccattggg aaggcatggg aggagggtgt 2580 gtgtggaatc cgatcagcca ctcgtctcga gaacatcatg tggaaacaaa tatcaaatga 2640 attgaaccac atcctacttg aaaatgacat gaaatttaca gtggtcgtgg gagacgttag 2700 tggaatcttg gcccaaggaa aaaaaatgat taggccacaa cccatggaac acaaatactc 2760 gtggaaaagc tggggaaaag ctaaaatcat aggagcggat gtacagaaca ccaccttcat 2820 catcgacggc ccaaacaccc cagaatgccc tgacaatcaa agagcatgga atatttggga 2880 agtagaggac tatggatttg ggattttcac gacaaacata tggttgaaat tgcgtgactc 2940 ctacacccaa gtatgtgacc accggctgat gtcagctgcc attaaggaca gcaaggcagt 3000 ccatgctgac atggggtact ggatagaaag tgaaaagaac gagacatgga agttggcgag 3060 agcctccttt atagaagtta agacatgcat ctggccaaaa tcccacactc tatggagcaa 3120 tggagttctg gaaagtgaaa tgataattcc aaagatatat ggaggaccaa tatctcagca 3180 caactacaga ccaggatatt tcacacaaac agcagggccg tggcacctag gcaagttgga 3240 actagatttc gatttttgtg aaggtaccac agttgttgtg gatgaacatt gtggaaatcg 3300 aggaccatct ctcagaacca caacagtcac aggaaagata atccatgaat ggtgctgcag 3360 atcttgtacg ctaccccccc tacgtttcaa aggggaagac gggtgttggt acggcatgga 3420 aatcagacca gtgaaggaca aggaagagaa cctggtcaag tcaatggtct ctgcagggtc 3480 aggagaagtg gacagctttt cactaggact gctatgcata tcaataatga ttgaagaagt 3540 gatgagatcc agatggagca aaaaaatgct gatgactgga acactggctg tgttcctcct 3600 tcttataatg ggacaattga catggagtga tctgatcagg ttatgtatta tggttggagc 3660 caacgcttca gacaagatgg ggatgggaac aacgtaccta gctttaatgg ccactttcaa 3720 aatgagacca atgttcgccg tcgggctatt atttcgcaga ctaacatcta gagaagttct 3780 tcttcttaca attggcttga gcctggtggc atccgtggag ctaccaagtt ccctagagga 3840 gctgggggat ggacttgcaa taggcatcat gatgttgaaa ttattgactg attttcagtc 3900 acaccagcta tgggctactc tgctatcctt gacatttatt aaaacaactt tttcattgca 3960 ctatgcatgg aagacaatgg ctatggtact gtcaattgta tctctcttcc ctttatgcct 4020 gtccacgacc tctcaaaaaa caacatggct tccggtgctg ttgggatctc ttggatgcaa 4080 accactaccc atgtttctta taacagaaaa caaaatctgg ggaaggaaga gttggcccct 4140 caatgaagga attatggctg ttggaatagt tagtattcta ctaagttcac ttttaaaaaa 4200 tgatgtgccg ctagccggcc cattaatagc tggaggcatg ctaatagcat gttatgtcat 4260 atccggaagc tcagctgatt tatcactgga gaaagcggct gaggtctcct gggaggaaga 4320 agcagaacac tcaggcgcct cacacaacat actagtagag gttcaagatg atggaaccat 4380 gaagataaaa gatgaagaga gagatgacac gctcaccatt ctccttaaag caactctgct 4440 ggcagtctca ggggtgtacc caatgtcaat accagcgacc ctttttgtgt ggtatttttg 4500 gcagaaaaag aaacagagat caggagtgct atgggacaca cccagccccc cagaagtgga 4560 aagagcagtt cttgatgatg gcatctatag aattttgcaa agaggactgt tgggcaggtc 4620 ccaagtagga gtaggagttt tccaagaagg cgtgttccac acaatgtggc acgtcactag 4680 gggagctgtc ctcatgtatc aaggaaaaag gctggaacca agctgggcca gtgtcaaaaa 4740 agacttgatc tcatatggag gaggttggag gtttcaagga tcctggaaca cgggagaaga 4800 agtacaggtg attgctgttg aaccgggaaa aaaccccaaa aatgtacaaa caacgccggg 4860 taccttcaag acccctgaag gcgaagttgg agccatagcc ttagacttta aacctggcac 4920 atctggatct cccatcgtaa acagagaggg aaaaatagta ggtctttatg gaaatggagt 4980 ggtgacaaca agcggaactt acgttagtgc catagctcaa gctaaggcat cacaagaagg 5040 gcctctacca gagattgagg acaaggtgtt taggaaaaga aacttaacaa taatggacct 5100 acatccagga tcgggaaaaa caagaagata ccttccagcc atagtccgtg aggccataaa 5160 aaggaagctg cgcacgctaa tcctagctcc cacaagagtt gtcgcttctg aaatggcaga 5220 ggcactcaag ggagtgccaa taaggtatca gacaacagca gtgaagagtg aacacacagg 5280 aaaggagata gttgacctta tgtgccacgc cactttcacc atgcgcctcc tgtctcccgt 5340 gagagttccc aattataaca tgattatcat ggatgaagca cacttcaccg atccagccag 5400 catagcagcc agagggtaca tctcaacccg agtgggtatg ggtgaagcag ctgcgatctt 5460 tatgacagcc actcccccag gatcggtgga ggcctttcca cagagcaatg caattatcca 5520 agatgaggaa agagacattc ctgagagatc atggaactca ggctatgact ggatcactga 5580 ttttccaggt aaaacagtct ggtttgttcc aagcatcaaa tcaggaaatg acattgccaa 5640 ctgtttaaga aaaaacggga aacgggtgat ccaattgagc agaaaaacct ttgacactga 5700 gtaccagaaa acaaaaaaca acgactggga ctatgtcgtc acaacagaca tttccgaaat 5760 gggagcaaat ttccgggccg acagggtaat agacccaagg cggtgtctga aaccggtaat 5820 actaaaagat ggtccagagc gcgtcattct agccggaccg atgccagtga ctgtggccag 5880 tgccgcccag aggagaggaa gaattggaag gaaccaaaac aaggaaggtg atcagtatat 5940 ttacatggga cagcctttaa aaaatgatga ggaccacgct cattggacag aagcaaagat 6000 gctccttgac aatataaaca caccagaagg gattatccca gccctctttg agccggagag 6060 agaaaagagt gcagctatag acggggaata cagactgcgg ggtgaagcaa ggaaaacgtt 6120 cgtggagctc atgagaagag gggatctacc agtctggcta tcctacaaag ttgcctcaga 6180 aggcttccag tactccgaca gaaggtggtg cttcgatggg gaaaggaaca accaggtgtt 6240 ggaggagaac atggacgtgg agatctggac aaaagaagga gaaagaaaga aactacgacc 6300 tcgctggttg gacgccagaa catactctga cccactggct ctgcgcgagt ttaaagagtt 6360 tgcagcagga agaagaagcg tctcaggtga cctaatatta gaaataggga aacttccaca 6420 acatttgacg caaagggccc agaatgcttt ggacaacttg gtcatgttgc acaattccga 6480 acaaggagga aaagcctata gacatgctat ggaagaactg ccagacacaa tagaaacgtt 6540 gatgctccta gccttgatag ctgtgttgac tggtggagtg acgctgttct tcctatcagg 6600 aagaggtcta ggaaaaacat ctatcggctt actctgcgtg atggcctcaa gcgcactgtt 6660 atggatggcc agtgtggagc cccattggat agcggcctcc atcatactgg agttctttct 6720 gatggtactg cttattccag agccagacag acagcgcact ccacaggaca accagctagc 6780 atatgtggtg ataggtctgt tattcgtgat attgacagtg gcagccaatg agatgggatt 6840 attggaaacc acaaagaaag acctggggat tggccatgta gctgctgaaa accaccacca 6900 tgctacaatg ctggacgtag acctacatcc agcttcagcc tggaccctct atgcagtggc 6960 cacaacaatc atcactccta tgatgagaca cacaattgaa aacacaacgg caaatatttc 7020 cctgacagcc atcgcaaacc aagcagctat attgatggga cttgacaagg gatggccaat 7080 atcgaagatg gacataggag ttccacttct cgccttgggg tgctattccc aagtgaatcc 7140 gctgacactg atagcggcag tattgatgct agtagctcat tacgccataa ttggacctgg 7200 actgcaagca aaagctacta gagaagctca aaaaagaaca gcggctggaa taatgaaaaa 7260 tccaactgtc gacgggattg ttgcaataga cttagatccc gtggtttacg atgcaaaatt 7320 tgaaaaacag ctaggccaaa taatgttgtt gatactttgc acatcacaga ttcttttgat 7380 gcggactaca tgggccttgt gtgaatccat cacattggct actggacctc tgaccactct 7440 ttgggaggga tctccaggaa aattctggaa caccacaata gcggtatcca tggcaaacat 7500 tttcaggggg agttatctag caggagcagg tctggccttc tcattaatga aatctctagg 7560 aggaggtagg agaggcacgg gagcccaagg ggaaacactg ggagaaaaat ggaaaagaca 7620 actaaaccaa ctgagcaagt cagaattcaa tacttacaag aggagtggga ttatggaggt 7680 ggatagatcc gaagccaaag agggactgaa aagaggagaa acaaccaaac acgcagtatc 7740 gagaggaacg gccaaactga ggtggttcgt ggagaggaac cttgtgaaac cagaagggaa 7800 agtcatagac ctcggttgtg gaagaggtgg ctggtcatat tattgcgctg ggctgaagaa 7860 agtcacagaa gtgaaaggat acacaaaagg aggacctgga catgaggaac caatcccaat 7920 ggcgacctat ggatggaacc tagtaaggct gcactccgga aaagatgtat tttttatacc 7980 acctgagaaa tgtgacaccc ttttgtgtga tattggtgag tcctctccga acccaactat 8040 agaggaagga agaacgttac gtgttctgaa aatggtggaa ccatggctca gaggaaacca 8100 attttgcata aaaattctaa atccctatat gccgagcgtg gtagaaactc tggaacaaat 8160 gcaaagaaaa catggaggaa tgctagtgcg aaacccactc tcaagaaatt ccacccatga 8220 aatgtactgg gtttcatgtg gaacaggaaa cattgtgtca gcagtaaaca tgacatctag 8280 aatgttgcta aatcggttca caatggctca caggaagcca acatatgaaa gagacgtgga 8340 cttaggcgct ggaacaagac atgtggcagt agaaccagag gtagccaacc tagatatcat 8400 tggccagagg atagagaata taaaaaatga acataagtca acatggcatt atgatgagga 8460 caatccatac aaaacatggg cctatcatgg atcatatgag gttaagccat caggatcggc 8520 ctcatccatg gtcaatggcg tggtgagatt gctcaccaaa ccatgggatg ttatccccat 8580 ggtcacacaa atagccatga ctgataccac accctttgga caacagaggg tgtttaaaga 8640 gaaagttgac acgcgcacac caaaagcaaa acgtggcaca gcacaaatta tggaagtgac 8700 agccaggtgg ttatggggtt tcctttctag aaacaaaaaa cccagaattt gcacaagaga 8760 ggagtttaca agaaaagtta ggtcaaacgc agctattgga gcagtgttcg ttgatgaaaa 8820 tcaatggaac tcggcaaaag aagcagtgga agacgaacgg ttctgggaac ttgtccacag 8880 agagagggag cttcataaac aggggaaatg tgccacgtgt gtctacaata tgatggggaa 8940 gagagagaaa aaattaggag agttcggaaa ggcaaaagga agtcgtgcaa tatggtacat 9000 gtggttggga gcacgcttcc tagagtttga agcccttggt ttcatgaatg aagatcactg 9060 gttcagtaga gagaattcac tcagtggagt ggaaggagaa ggactccaca aacttggata 9120 catactcaga gacatatcaa ggattccagg ggggaacatg tatgcagatg acacagccgg 9180 atgggacaca agaataacag aggatgatct ccagaatgag gctaaaatca ctgacatcat 9240 ggagcccgaa catgccctgc tggctacgtc aatctttaag ctgacctacc aaaataaggt 9300 ggtaagggtg cagagaccag caaaaaatgg aaccgtgatg gatgttatat ccagacgtga 9360 ccagagaggc agtggacagg ttggaactta tggcttaaac actttcacca acatggaggc 9420 ccaactgata agacaaatgg agtctgaggg aatcttttta cccagcgaat tggaaacccc 9480 aaatctagcc ggaagagttc tcgactggtt ggaaaaatat ggtgtcgaaa ggctgaaaag 9540 aatggcaatc agcggagatg actgtgtggt gaaaccaatt gatgacaggt tcgcaacagc 9600 cttaacagct ttgaatgaca tgggaaaagt aagaaaagac ataccacaat gggaaccttc 9660 aaaaggatgg aatgattggc aacaagtgcc tttctgttca caccacttcc accagctaat 9720 tatgaaggat gggagggaga tagtggtgcc atgccgcaac caagatgaac ttgtggggag 9780 ggccagagta tcacaaggcg ccggatggag cctgagagaa accgcatgcc taggcaagtc 9840 atatgcacaa atgtggcagc tgatgtattt ccacaggaga gacctgagac tggcggctaa 9900 cgctatttgt tcagccgttc cagttgattg ggtcccaacc agccgcacca cctggtcgat 9960 ccatgcccat caccaatgga tgacaacaga agacatgtta tcagtatgga atagggtctg 10020 gatagaggaa aacccatgga tggaggataa gactcatgtg tccagttggg aagaagttcc 10080 atacctagga aagagggaag atcagtggtg tggatccctg ataggcttaa cagcaagggc 10140 cacctgggcc actaatatac aagtggccat aaaccaagtg agaaggctca ttgggaatga 10200 gaattatcta gattacatga catcaatgaa gagattcaag aatgagagtg atcccgaagg 10260 ggcactctgg taagtcaaca cattcacaaa ataaaggaaa ataaaaaatc aaatgaggca 10320 agaagtcagg ccagattaag ccatagtacg gtaagagcta tgctgcctgt gagccccgtc 10380 caaggacgta aaatgaagtc aggccgaaag ccacggtttg agcaagccgt gctgcctgtg 10440 gctccatcgt ggggatgtaa aaacccggga ggctgcaacc catggaagct gtacgcatgg 10500 ggtagcagac tagtggttag aggagacccc tcccaagaca caacgcagca gcggggccca 10560 acaccagggg aagctgtacc ctggtggtaa ggactagagg ttagaggaga ccccccgcgt 10620 aacaataaac agcatattga cgctgggaga gaccagagat cctgctgtct ctacagcatc 10680 attccaggca cagaacgcca gaaaatggaa tggtgctgtt gaatcaacag gttct 10735 <210> 2 <211> 10723 <212> DNA <213> Dengue virus <400> 2 agttgttagt ctacgtggac cgacaaagac agattctttg agggagctaa gctcaatgta 60 gttctaacag ttttttaatt agagagcaga tctctgatga ataaccaacg gaaaaaggcg 120 aaaaacacgc ctttcaatat gctgaaacgc gagagaaacc gcgtgtcgac tgtgcaacag 180 ctgacaaaga gattctcact tggaatgctg cagggacgag gaccattaaa actgttcatg 240 gccctggtgg cgttccttcg tttcctaaca atcccaccaa cagcagggat attgaagaga 300 tggggaacaa ttaaaaaatc aaaagctatt aatgttttga gagggttcag gaaagagatt 360 ggaaggatgc tgaacatctt gaataggaga cgcagatctg caggcatgat cattatgctg 420 attccaacag tgatggcgtt ccatttaacc acacgtaacg gagaaccaca catgatcgtc 480 agcagacaag agaaagggaa aagtcttctg tttaaaacag aggttggcgt gaacatgtgt 540 accctcatgg ccatggacct tggtgaattg tgtgaagaca caatcacgta caagtgtccc 600 cttctcaggc agaatgagcc agaagacata gactgttggt gcaactctac gtccacgtgg 660 gtaacttatg ggacgtgtac caccatggga gaacatagaa gagaaaaaag atcagtggca 720 ctcgttccac atgtgcgaat gggactggag acacgaactg aaacatggat gtcatcagaa 780 ggggcctgga aacatgtcca gagaattgaa acttggatct tgagacatcc aggcttcacc 840 atgatggcag caatcctggc atacaccata ggaacgacac atttccaaag agccctgatt 900 ttcatcttac tgacagctgt cactccttca atgacaatgc gttgcatagg aatgtcaaat 960 agagactttg tggaaggggt ttcaggagga agctgggttg acatagtctt agaacatgga 1020 agctgtgtga cgacgatggc aaaaaacaaa ccaacattgg attttgaact gataaaaaca 1080 gaagccaaac agcctgccac cctaaggaag tactgtatag aggcaaagct aaccaacaca 1140 acaacagaat ctcgctgccc aacacaaggg gaacccagcc taaatgaaga gcaggacaaa 1200 aggttcgtct gcaaacactc catggtagac agaggatggg gaaatggatg tggactattt 1260 ggaaagggag gcattgtgac ctgtgctatg ttcagatgca aaaagaacat ggaaggaaaa 1320 gttgtgcaac cagaaaactt ggaatacacc attgtgataa cacctcactc aggggaagag 1380 catgcagtcg gaaatgacac aggaaaacat ggcaaggaaa tcaaaataac accacagagt 1440 tccatcacag aagcagaatt gacaggttat ggcactgtca caatggagtg ctctccaaga 1500 acgggcctcg acttcaatga gatggtgttg ctgcagatgg aaaataaagc ttggctggtg 1560 cacaggcaat ggttcctaga cctgccgtta ccatggttgc ccggagcgga cacacaagag 1620 tcaaattgga tacagaagga gacattggtc actttcaaaa atccccatgc gaagaaacag 1680 gatgttgttg ttttaggatc ccaagaaggg gccatgcaca cagcacttac aggggccaca 1740 gaaatccaaa tgtcatcagg aaacttactc ttcacaggac atctcaagtg caggctgaga 1800 atggacaagc tacagctcaa aggaatgtca tactctatgt gcacaggaaa gtttaaagtt 1860 gtgaaggaaa tagcagaaac acaacatgga acaatagtta tcagagtgca atatgaaggg 1920 gacggctctc catgcaagat cccttttgag ataatggatt tggaaaaaag acatgtctta 1980 ggtcgcctga ttacagtcaa cccaattgtg acagaaaaag atagcccagt caacatagaa 2040 gcagaacctc catttggaga cagctacatc atcataggag tagagccggg acaactgaag 2100 ctcaactggt ttaagaaagg aagttctatc ggccaaatgt ttgagacaac aatgaggggg 2160 gcgaagagaa tggccatttt aggtgacaca gcctgggatt ttggatcctt gggaggagtg 2220 tttacatcta taggaaaggc tctccaccaa gtctttggag caatctatgg agctgccttc 2280 agtggggttt catggactat gaaaatcctc ataggagtca ttatcacatg gataggaatg 2340 aattcacgca gcacctcact gtctgtgaca ctagtattgg tgggaattgt gacactgtat 2400 ttgggagtca tggtgcaggc cgatagtggt tgcgttgtga gctggaaaaa caaagaactg 2460 aaatgtggca gtgggatttt catcacagac aacgtgcaca catggacaga acaatacaaa 2520 ttccaaccag aatccccttc aaaactagct tcagctatcc agaaagccca tgaagaggac 2580 atttgtggaa tccgctcagt aacaagactg gagaatctga tgtggaaaca aataacacca 2640 gaattgaatc acattctatc agaaaatgag gtgaagttaa ctattatgac aggagacatc 2700 aaaggaatca tgcaggcagg aaaacgatct ctgcggcctc agcccactga gctgaagtat 2760 tcatggaaaa catggggcaa agcaaaaatg ctctctacag agtctcataa ccagaccttt 2820 ctcattgatg gccccgaaac agcagaatgc cccaacacaa atagagcttg gaattcgttg 2880 gaagttgaag actatggctt tggagtattc accaccaata tatggctaaa attgaaagaa 2940 aaacaggatg tattctgcga ctcaaaactc atgtcagcgg ccataaaaga caacagagcc 3000 gtccatgccg atatgggtta ttggatagaa agtgcactca atgacacatg gaagatagag 3060 aaagcctctt tcattgaagt taaaaactgc cactggccaa aatcacacac cctctggagc 3120 aatggagtgc tagaaagtga gatgataatt ccaaagaatc tcgctggacc agtgtctcaa 3180 cacaactata gaccaggcta ccatacacaa ataacaggac catggcatct aggtaagctt 3240 gagatggact ttgatttctg tgatggaaca acagtggtag tgactgagga ctgcggaaat 3300 agaggaccct ctttgagaac aaccactgcc tctggaaaac tcataacaga 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tctcctaaaa 4200 aatgatattc ccatgacagg accattagtg gctggagggc tcctcactgt gtgctacgtg 4260 ctcactggac gatcggccga tttggaactg gagagagcag ccgatgtcaa atgggaagac 4320 caggcagaga tatcaggaag cagtccaatc ctgtcaataa caatatcaga agatggtagc 4380 atgtcgataa aaaatgaaga ggaagaacaa acactgacca tactcattag aacaggattg 4440 ctggtgatct caggactttt tcctgtatca ataccaatca cggcagcagc atggtacctg 4500 tgggaagtga agaaacaacg ggccggagta ttgtgggatg ttccttcacc cccacccatg 4560 ggaaaggctg aactggaaga tggagcctat agaattaagc aaaaagggat tcttggatat 4620 tcccagatcg gagccggagt ttacaaagaa ggaacattcc atacaatgtg gcatgtcaca 4680 cgtggcgctg ttctaatgca taaaggaaag aggattgaac caacatgggc ggacgtcaag 4740 aaagacctaa tatcatatgg aggaggctgg aagttagaag gagaatggaa ggaaggagaa 4800 gaagtccagg tattggcact ggagcctgga aaaaatccaa gagccgtcca aacgaaacct 4860 ggtcttttca aaaccaacgc cggaacaata ggtgctgtat ctctggactt ttctcctgga 4920 acgtcaggat ctccaattat cgacaaaaaa ggaaaagttg tgggtcttta tggtaatggt 4980 gttgttacaa ggagtggagc atatgtgagt gctatagccc agactgaaaa aagcattgaa 5040 gacaacccag agatcgaaga tcacattttc cgaaagagaa gactgaccat catggacctc 5100 cacccaggag cgggaaagac gaagagatac cttccggcca tagtcagaga agctataaaa 5160 cggggtttga gaacattaat cttggccccc actagagttg tggcagctga aatggaggaa 5220 gcccttagag gacttccaat aagataccag accccagcca tcagagctga gcacaccggg 5280 cgggagattg tggacctaat gtgtcatgcc acatttacca tgaggctgct atcaccagtt 5340 agagtgccaa actacaacct gattatcatg gacgaagccc atttcacaga cccagcaagt 5400 atagcagcta gaggatacat ctcaactcga gtggagatgg gtgaggcagc tgggattttt 5460 atgacagcca ctcccccggg aagcagagac ccatttcctc agagcaatgc accaatcata 5520 gatgaagaaa gagaaatccc tgaacgctcg tggaattccg gacatgaatg ggtcacggat 5580 tttaaaggga agactgtttg gttcgttcca agtataaaag caggaaatga tatagcagct 5640 tgcctgagga aaaatggaaa gaaagtgata caactcagta ggaagacctt tgattctgag 5700 tatgtcaaga ctagaaccaa tgattgggac ttcgtggtta caactgacat ttcagaaatg 5760 ggtgccaatt tcaaggctga gagggttata gaccccagac gctgcatgaa accagtcata 5820 ctaacagatg gtgaagagcg ggtgattctg gcaggaccta tgccagtgac ccactctagt 5880 gcagcacaaa gaagagggag aataggaaga aatccaaaaa atgagaatga ccagtacata 5940 tacatggggg aacctctgga aaatgatgaa gactgtgcac actggaaaga agctaaaatg 6000 ctcctagata acatcaacac gccagaagga atcattccta gcatgttcga accagagcgt 6060 gaaaaggtgg atgccattga tggcgaatac cgcttgagag gagaagcaag gaaaaccttt 6120 gtagacttaa tgagaagagg agacctacca gtctggttgg cctacagagt ggcagctgaa 6180 ggcatcaact acgcagacag aaggtggtgt tttgatggag tcaagaacaa ccaaatccta 6240 gaagaaaacg tggaagttga aatctggaca aaagaagggg aaaggaagaa attgaaaccc 6300 agatggttgg atgctaggat ctattctgac ccactggcgc taaaagaatt taaggaattt 6360 gcagccggaa gaaagtctct gaccctgaac ctaatcacag aaatgggtag gctcccaacc 6420 ttcatgactc agaaggcaag agacgcactg gacaacttag cagtgctgca cacggctgag 6480 gcaggtggaa gggcgtacaa ccatgctctc agtgaactgc cggagaccct ggagacattg 6540 cttttactga cacttctggc tacagtcacg ggagggatct ttttattctt gatgagcgca 6600 aggggcatag ggaagatgac cctgggaatg tgctgcataa tcacggctag catcctccta 6660 tggtacgcac aaatacagcc acactggata gcagcttcaa taatactgga gttttttctc 6720 atagttttgc ttattccaga acctgaaaaa cagagaacac cccaagacaa ccaactgacc 6780 tacgttgtca tagccatcct cacagtggtg gccgcaacca tggcaaacga gatgggtttc 6840 ctagaaaaaa cgaagaaaga tctcggattg ggaagcattg caacccagca acccgagagc 6900 aacatcctgg acatagatct acgtcctgca tcagcatgga cgctgtatgc cgtggccaca 6960 acatttgtta caccaatgtt gagacatagc attgaaaatt cctcagtgaa tgtgtcccta 7020 acagctatag ccaaccaagc cacagtgtta atgggtctcg ggaaaggatg gccattgtca 7080 aagatggaca tcggagttcc ccttctcgcc attggatgct actcacaagt caaccccata 7140 actctcacag cagctctttt cttattggta gcacattatg ccatcatagg gccaggactc 7200 caagcaaaag caaccagaga agctcagaaa agagcagcgg cgggcatcat gaaaaaccca 7260 actgtcgatg gaataacagt gattgaccta gatccaatac cttatgatcc aaagtttgaa 7320 aagcagttgg gacaagtaat gctcctagtc ctctgcgtga ctcaagtatt gatgatgagg 7380 actacatggg ctctgtgtga ggctttaacc ttagctaccg ggcccatctc cacattgtgg 7440 gaaggaaatc cagggaggtt ttggaacact accattgcgg tgtcaatggc taacattttt 7500 agagggagtt acttggccgg agctggactt ctcttttcta ttatgaagaa cacaaccaac 7560 acaagaaggg gaactggcaa cataggagag acgcttggag agaaatggaa aagccgattg 7620 aacgcattgg gaaaaagtga attccagatc tacaagaaaa gtggaatcca ggaagtggat 7680 agaaccttag caaaagaagg cattaaaaga ggagaaacgg accatcacgc tgtgtcgcga 7740 ggctcagcaa aactgagatg gttcgttgag agaaacatgg tcacaccaga agggaaagta 7800 gtggacctcg gttgtggcag aggaggctgg tcatactatt gtggaggact aaagaatgta 7860 agagaagtca aaggcctaac aaaaggagga ccaggacacg aagaacccat ccccatgtca 7920 acatatgggt ggaatctagt gcgtcttcaa agtggagttg acgttttctt catcccgcca 7980 gaaaagtgtg acacattatt gtgtgacata ggggagtcat caccaaatcc cacagtggaa 8040 gcaggacgaa cactcagagt ccttaactta gtagaaaatt ggttgaacaa caacactcaa 8100 ttttgcataa aggttctcaa cccatatatg ccctcagtca tagaaaaaat ggaagcacta 8160 caaaggaaat atggaggagc cttagtgagg aatccactct cacgaaactc cacacatgag 8220 atgtactggg tatccaatgc ttccgggaac atagtgtcat cagtgaacat gatttcaagg 8280 atgttgatca acagatttac aatgagatac aagaaagcca cttacgagcc ggatgttgac 8340 ctcggaagcg gaacccgtaa catcgggatt gaaagtgaga taccaaacct agatataatt 8400 gggaaaagaa tagaaaaaat aaagcaagag catgaaacat catggcacta tgaccaagac 8460 cacccataca aaacgtgggc ataccatggt agctatgaaa caaaacagac tggatcagca 8520 tcatccatgg tcaacggagt ggtcaggctg ctgacaaaac cttgggacgt tgtccccatg 8580 gtgacacaga tggcaatgac agacacgact ccatttggac aacagcgcgt ttttaaagag 8640 aaagtggaca cgagaaccca agaaccgaaa gaaggcacga agaaactaat gaaaataaca 8700 gcagagtggc tttggaaaga attagggaag aaaaagacac ccaggatgtg caccagagaa 8760 gaattcacaa gaaaggtgag aagcaatgca gccttggggg ccatattcac tgatgagaac 8820 aagtggaagt cggcacgtga ggctgttgaa gatagtaggt tttgggagct ggttgacaag 8880 gaaaggaatc tccatcttga aggaaagtgt gaaacatgtg tgtacaacat gatgggaaaa 8940 agagagaaga agctagggga attcggcaag gcaaaaggca gcagagccat atggtacatg 9000 tggcttggag cacgcttctt agagtttgaa gccctaggat tcttaaatga agatcactgg 9060 ttctccagag agaactccct gagtggagtg gaaggagaag ggctgcacaa gctaggttac 9120 attctaagag acgtgagcaa gaaagaggga ggagcaatgt atgccgatga caccgcagga 9180 tgggatacaa aaatcacact agaagaccta aaaaatgaag agatggtaac aaaccacatg 9240 gaaggagaac acaagaaact agccgaggcc attttcaaac taacgtacca aaacaaggtg 9300 gtgcgtgtgc aaagaccaac accaagaggc acagtaatgg acatcatatc gagaagagac 9360 caaagaggta gtggacaagt tggcacctat ggactcaata ctttcaccaa tatggaagcc 9420 caactaatca gacagatgga gggagaagga gtctttaaaa gcattcagca cctaacaatc 9480 acagaagaaa tcgctgtgca aaactggtta gcaagagtgg ggcgcgaaag gttatcaaga 9540 atggccatca gtggagatga ttgtgttgtg aaacctttag atgacaggtt cgcaagcgct 9600 ttaacagctc taaatgacat gggaaagatt aggaaagaca tacaacaatg ggaaccttca 9660 agaggatgga atgattggac acaagtgccc ttctgttcac accatttcca tgagttaatc 9720 atgaaagacg gtcgcgtact cgttgttcca tgtagaaacc aagatgaact gattggcaga 9780 gcccgaatct cccaaggagc agggtggtct ttgcgggaga cggcctgttt ggggaagtct 9840 tacgcccaaa tgtggagctt gatgtacttc cacagacgcg acctcaggct ggcggcaaat 9900 gctatttgct cggcagtacc atcacattgg gttccaacaa gtcgaacaac ctggtccata 9960 catgctaaac atgaatggat gacaacggaa gacatgctga cagtctggaa cagggtgtgg 10020 attcaagaaa acccatggat ggaagacaaa actccagtgg aaacatggga ggaaatccca 10080 tacttgggga aaagagaaga ccaatggtgc ggctcattga ttgggttaac aagcagggcc 10140 acctgggcaa agaacatcca agcagcaata aatcaagtta gatcccttat aggcaatgaa 10200 gaatacacag attacatgcc atccatgaaa agattcagaa gagaagagga agaagcagga 10260 gttctgtggt agaaagcaaa actaacatga aacaaggcta gaagtcaggt cggattaagc 10320 catagtacgg aaaaaactat gctacctgtg agccccgtcc aaggacgtta aaagaagtca 10380 ggccatcata aatgccatag cttgagtaaa ctatgcagcc tgtagctcca cctgagaagg 10440 tgtaaaaaat ccgggaggcc acaaaccatg gaagctgtac gcatggcgta gtggactagc 10500 ggttagggga gacccctccc ttacaaatcg cagcaacaat gggggcccaa ggcgagatga 10560 agctgtagtc tcgctggaag gactagaggt tagaggagac ccccccgaaa caaaaaacag 10620 catattgacg ctgggaaaga ccagagatcc tgctgtctcc tcagcatcat tccaggcaca 10680 gaacgccaga aaatggaatg gtgctgttga atcaacaggt tct 10723

Claims

(i) 일정 용량의 제 1 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 2 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스, 및 (ii) 일정 용량의 제 3 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 4 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스를, 연속 투여를 위한 뎅기열에 대한 복합 백신 조성물로서 포함하는 백신 조성물로서, 이때 상기 백신 뎅기열 바이러스(ii)가 상기 백신 뎅기열 바이러스(i)의 투여 후 30일 이상 1 년 이내에 투여되는 백신 조성물.
제 1 항에 있어서,

상기 백신 바이러스(ii)가 상기 백신 바이러스(i)의 투여 후 30일 내지 3 개월째에 투여되는 백신 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스(i)이 2가 백신 조성물의 형태로 투여되는 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스(ii)가 2가 백신 조성물의 형태로 투여되는 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1이 VDV1 균주 및 키메리백스(ChimeriVax)^TM DEN-1로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2가 VDV2 균주 및 키메리백스^TM DEN-2로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1이 VDV1 균주이고 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2가 VDV2 균주인 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1이 키메리백스^TM DEN-1이고 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2가 키메리백스^TM DEN-2인 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 3이 키메리백스^TM DEN-3인 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 4가 키메리백스^TM DEN-4인 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 및 제 8 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 제 1 및 제 2 혈청형들이 각각 CYD DEN1 및 CYD DEN2이고, 상기 제 3 및 제 4 혈청형들이 각각 CYD DEN3 및 CYD DEN4인 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 바이러스(ii)가 상기 백신 바이러스(i)의 투여 후 30일째에 투여되는 백신 조성물.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1, 2, 3 및 4의 용량이 각각 10³ 내지 10⁵ CCID₅₀의 범위 내에 있는 백신 조성물.
일정 용량의 제 1 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 일정 용량의 제 2 혈청 형의 백신 뎅기열 바이러스를 30일 이상 1 년 이내에 사전에 제공받은 환자에게 투여하도록 되어 있는 뎅기열 백신의 제조를 위한, 제 3 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스 및 제 4 혈청형의 백신 뎅기열 바이러스의 용도.
제 14 항에 있어서,

상기 제 3 및 제 4 혈청형을 2가 백신 조성물의 형태로 투여하는 용도.
제 14 항 또는 제 15 항에 있어서,

상기 제 1 및 제 2 혈청형을 2가 백신 조성물의 형태로 투여하는 용도.
제 14 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1을 VDV1 균주 및 키메리백스^TM DEN-1로 이루어진 그룹 중에서 선택하는 용도.
제 14 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2를 VDV2 균주 및 키메리백스^TM DEN-2로 이루어진 그룹 중에서 선택하는 용도.
제 14 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1이 VDV1 균주이고 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2가 VDV2 균주인 용도.
제 14 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1이 키메리백스^TM DEN-1이고 상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 2가 키메리백스^TM DEN-2인 용도.
제 14 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 3이 키메리백스^TM DEN-3인 용도.
제 14 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 4가 키메리백스^TM DEN-4인 용도.
제 14 항 내지 제 18 항 및 제 20 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 제 1 및 제 2 혈청형들이 각각 CYD DEN1 및 CYD DEN2이고, 제 3 및 제 4 혈청형들이 각각 CYD DEN3 및 CYD DEN4인 용도.
제 14 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 제 3 및 제 4 혈청형을 상기 제 1 및 제 2 혈청형의 투여 후 30일 내지 3 개월째에 투여하는 용도.
제 24 항에 있어서,

상기 제 3 및 제 4 혈청형을 상기 제 1 및 제 2 혈청형의 투여 후 30일째에 투여하는 용도.
제 14 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 백신 뎅기열 바이러스 혈청형 1, 2, 3 및 4의 용량이 각각 10³ 내지 10⁵ CCID₅₀의 범위 내에 있는 용도.