KR20200128385A - 재조합 인간 시알리다제, 시알리다제 융합 단백질, 및 이를 사용하는 방법 - Google Patents

재조합 인간 시알리다제, 시알리다제 융합 단백질, 및 이를 사용하는 방법 Download PDF

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KR20200128385A
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팔레온 파마슈티칼스 인크.
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Abstract

본 발명은 일반적으로 재조합 인간 시알리다제 및 재조합 시알리다제 융합 단백질에 관한 것이며, 여기서, 시알리다제는 임의로 야생형 인간 시알리다제에 비해 1개 이상의 돌연변이, 예를 들어, 적어도 1개의 아미노산의 치환, 결실, 또는 첨가를 함유한다. 본 발명은 또한 시알리다제 및 항체 또는 그의 부분을 포함하는 항체 접합체를 제공한다. 본 발명은 또한 암을 치료하기 위해 시알리다제 융합 단백질 또는 항체 접합체를 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

재조합 인간 시알리다제, 시알리다제 융합 단백질, 및 이를 사용하는 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
이 출원은 2018년 1월 3일에 출원된 미국 가특허 출원 일련 번호 62/613,363 및 2018년 11월 2일에 출원된 미국 가특허 출원 일련 번호 62/755,279의 이익 및 그에 대한 우선권을 주장하며, 이들의 각각의 전체 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 재조합 인간 시알리다제 및 재조합 시알리다제 융합 단백질, 및 암의 치료에 있어서의 그들의 용도에 관한 것이다.
증가 추세의 증거는 특히 종양 진행의 다양한 병리생리학적 단계에서 글리칸, 및 시알로글리칸에 대한 역할을 뒷받침한다. 글리칸은 종양 증식, 침습, 혈행성 전이 및 혈관신생을 조절한다 (Fuster et al. (2005) NAT. REV. CANCER 5(7): 526-42). 세포 표면 당접합체의 시알릴화는 암에서 빈번히 변경되어, 시알릴화된 종양-연관된 탄수화물 항원의 발현을 발생시킨다. 종양 세포에 의한 시알릴화된 글리칸의 발현은 종종 종양의 증가된 공격성 및 전이 잠재성과 연관된다.
최근, 시알산 결합 렉틴의 족인 시글렉 (Siglec) (시알산-결합 이뮤노글로불린-유사 렉틴)이 과시알릴화된 암 세포에 결합하고, 활성화 NK 세포 수용체로부터의 신호의 억제를 매개하고, 그에 의해 종양 세포의 NK 세포-매개된 살해를 억제함으로써 암 면역 억제에 있어서 역할을 함이 명백해졌다 (Jandus et al. (2014) J. CLIN. INVEST. 124: 1810-1820; Laeubli et al. (2014) PROC. NATL. ACAD. SCI. USA 111: 14211-14216; Hudak et al. (2014) NAT. CHEM. BIOL. 10: 69-75). 마찬가지로, 시알리다제로의 처리에 의한 시알산의 효소적 제거는 종양 세포의 NK 세포-매개된 살해를 향상시킬 수 있다 (Jandus, 상기 문헌; Hudak, 상기 문헌; Xiao et al. (2016) PROC. NATL. ACAD. SCI. USA 113(37): 10304-9.)
PD-1/PD-L1 경로를 차단하는 항체를 비롯한 면역 관문 억제제로의 암 면역요법은 많은 암 환자의 결과를 개선시켰다. 그러나, 지금까지 이루어진 진보에도 불구하고, 많은 환자는 현재 이용가능한 면역 관문 억제제에 반응하지 않는다. 따라서, 면역 억제성 종양 미세환경을 극복하는 유효한 개입을 위한 및 과시알릴화된 암 세포와 연관된 암을 치료하기 위한 필요가 여전히 있다.
발명의 요약
본 발명은 부분적으로 암 세포의 표면으로부터 시알산 및/또는 시알산 함유 분자를 제거하고/거나, 종양 미세환경으로부터 시알산 및/또는 시알산 함유 분자를 제거하고/거나, 종양 미세환경에서 시알산 및/또는 시알산 함유 분자의 농도를 감소시키는 데 있어서 유용한 적합한 기질 특이성 및 활성을 갖는 인간 시알리다제 효소의 재조합 돌연변이체 형태 및 이러한 효소를 함유하는 융합 단백질 및/또는 항체 접합체를 제조하는 것이 가능하다는 발견에 기초한다.
한 측면에서, 본 발명은 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환을 포함하며, 치환이 시알리다제의 (a) 발현, (b) 안정성, 및 (c) 활성 중 적어도 하나, 또는 (a) 및 (b)의 조합, (a) 및 (c)의 조합, (b) 및 (c)의 조합, 또는 (a), (b) 및 (c)의 조합을 증가시키는 것인 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제를 제공한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 N-말단 및 C-말단을 포함하며, (a) 적어도 1개의 야생형 시스테인 잔기의 치환; (b) 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환 - 여기서 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키고/거나, 시알리다제의 소수성을 감소시킴; (c) 시알리다제의 N-말단에 N-말단 아미노산과 공유적으로 회합된 적어도 2개 아미노산 잔기 길이의 펩티드; (d) 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환 - 여기서 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시킴; 또는 (e) 시알리다제의 N-말단에 N-말단 메티오닌의 치환 또는 결실; 또는 상기 중 임의의 것의 조합을 포함하는 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제 효소를 제공한다. 예를 들어, 재조합 돌연변이체 시알리다제 효소는 상기 확인된 특색, 즉, (a), (b), (c), (d), 및 (e)의 조합을 포함할 수 있으며, 예를 들어, (a) 및 (b); (a) 및 (c); (a) 및 (d); (a) 및 (e); (b) 및 (c); (b) 및 (d); (b) 및 (e); (c) 및 (d); (c) 및 (e); (d) 및 (e); (a) 및 (b) 및 (c); (b) 및 (c) 및 (d); (a) 및 (c) 및 (d); (a) 및 (b) 및 (d); (a) 및 (b) 및 (e); (a) 및 (c) 및 (e); (a) 및 (d) 및 (e); (b) 및 (c) 및 (e); (b) 및 (d) 및 (e); (c) 및 (d) 및 (e); (a) 및 (b) 및 (c) 및 (d); (a) 및 (b) 및 (c) 및 (e); (a) 및 (c) 및 (d) 및 (e); (b) 및 (c) 및 (d) 및 (e); 및 (a) 및 (b) 및 (c) 및 (d) 및 (e)로부터 선택되는 조합을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 Neu1, Neu2, Neu3, 및 Neu4로부터 선택되고, 예를 들어, 시알리다제는 Neu2이다.
특정 실시양태에서, 시알리다제는 적어도 1개의 야생형 시스테인 잔기, 예를 들어, 유리 시스테인 잔기의 치환을 포함한다. 시스테인 잔기는 예를 들어, 세린, 이소류신, 발린, 페닐알라닌, 류신, 또는 알라닌에 의해 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호 (SEQ ID NO): 1)의 위치 332에 상응하는 위치에서의 시스테인 잔기의 치환을 포함하며, 예를 들어, 야생형 인간 Neu2의 위치 332에 상응하는 위치에서의 시스테인 잔기는 알라닌에 의해 치환된다 (C332A). 특정 실시양태에서, 시알리다제는 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 352에 상응하는 위치에서의 시스테인 잔기의 치환을 포함하며, 예를 들어, 야생형 인간 Neu2의 위치 352에 상응하는 위치에서의 시스테인 잔기는 류신에 의해 치환된다 (C352L). 특정 실시양태에서, 시알리다제는 C332A 및 C352L 치환 둘 다를 포함한다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 전형적으로 인간 시알리다제, 예를 들어, Neu2 또는 Neu3에 존재하는 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 시스테인에서의 아미노산 치환을 함유한다.
특정 실시양태에서, 시알리다제는 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기, 예를 들어, 용매 노출된 야생형 아미노산 잔기의 치환을 포함하며, 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키고/거나, 시알리다제의 소수성을 감소시킨다. 특정 실시양태에서, 야생형 아미노산은 리신, 아르기닌, 또는 히스티딘에 의해 치환되며, 예를 들어, 야생형 아미노산은 리신에 의해 치환된다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 2에 상응하는 위치에서의 알라닌 잔기의 치환을 포함하며, 예를 들어, 야생형 인간 Neu2의 위치 2에 상응하는 위치에서의 알라닌 잔기는 리신에 의해 치환된다 (A2K).
특정 실시양태에서, 시알리다제는 시알리다제의 N-말단에 융합된, 예를 들어, 펩티드 결합에 의해, 예를 들어, 시알리다제의 N-말단 아미노산 잔기에 융합된 적어도 2개 아미노산 잔기 길이의 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 펩티드는 2개 아미노산 잔기 내지 20개 아미노산 잔기 길이이다. 특정 실시양태에서, 펩티드는 적어도 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 잔기 길이이다. 특정 실시양태에서, 펩티드는 야생형 마우스 흉선 Neu2 (서열식별번호: 2)로부터 유래된 아미노산 서열을 포함하며, 예를 들어, 특정 실시양태에서, 펩티드는 EDLRP (서열식별번호: 3) 또는 MEDLRP (서열식별번호: 4)를 포함한다.
특정 실시양태에서, 시알리다제는 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환을 포함하며, 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시킨다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 시알리다제는 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 6에 상응하는 위치에서의 발린 잔기의 치환을 포함하며, 예를 들어, 야생형 인간 Neu2의 위치 6에 상응하는 위치에서의 발린 잔기는 티로신에 의해 치환된다 (V6Y).
특정 실시양태에서, 시알리다제는 시알리다제의 N-말단에 N-말단 메티오닌의 치환 또는 결실을 포함한다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 시알리다제는 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 1에 상응하는 위치에서의 메티오닌 잔기의 치환을 포함하며, 예를 들어, 야생형 인간 Neu2의 위치 1에 상응하는 위치에서의 메티오닌은 알라닌 (M1A) 또는 아스파르트산 (M1D)에 의해 치환된다.
특정 실시양태에서, 시알리다제는 상응하는 야생형 시알리다제와는 상이한 기질 특이성을 갖는다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 시알리다제는 α2,3, α2,6, 및/또는 α2,8 연결을 절단할 수 있다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 α2,3 및 α2,8 연결을 절단할 수 있다.
특정 실시양태에서, 시알리다제는 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 72, 또는 서열식별번호: 73을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 (a) 시알리다제 효소; 및 (b) 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및/또는 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인을 포함하며; 시알리다제 및 Fc 도메인 및/또는 항원-결합 도메인이 펩티드 결합 또는 아미노산 링커에 의해 연결된 것인 융합 단백질을 제공한다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 인간 시알리다제, 예를 들어, 본원에 개시된 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제이다. 특정 실시양태에서, 융합 단백질은 시알리다제 효소 및 Fc 도메인 및/또는 항원-결합 도메인을 연결하는 링커, 예를 들어, 아미노산 링커를 더 포함한다. 특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인은 제2 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인과 회합되어 (예를 들어, 공유적으로 또는 비-공유적으로 회합되어) 항원-결합 부위를 생성한다.
특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE, 또는 IgM Fc 도메인으로부터 유래되고, 예를 들어, 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 Fc 도메인으로부터 유래되고, 예를 들어, 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 인간 IgG1 Fc 도메인으로부터 유래된다.
특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인은 트라스투주맙, 세툭시맙, 다라투무맙, 기렌툭시맙, 파니투무맙, 오파투무맙, 및 리툭시맙으로부터 선택되는 항체로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인은 트라스투주맙으로부터 유래된다.
특정 실시양태에서, 융합 단백질은 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 50, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 63, 서열식별번호: 74, 서열식별번호: 75, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 또는 서열식별번호: 79, 또는 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 50, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 63, 서열식별번호: 74, 서열식별번호: 75, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 또는 서열식별번호: 79와 적어도 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％ 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 상기 융합 단백질 중 임의의 것을 포함하는 항체 접합체를 제공한다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 단일 시알리다제를 포함한다. 다른 실시양태에서, 항체 접합체는 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 시알리다제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 2개의 동일한 시알리다제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 단일 항원-결합 부위를 포함한다. 다른 실시양태에서, 항체 접합체는 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 2개의 동일한 항원-결합 부위를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 약 135 kDa 내지 약 165 kDa의 분자량을 갖거나, 항체 접합체는 약 215 kDa 내지 약 245 kDa의 분자량을 갖는다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 (a) 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; (b) 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및 (c) 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및 시알리다제를 포함하는 제3 폴리펩티드를 포함하며; 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결되고, 제2 및 제3 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결되고, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 항원-결합 부위를 한정한다. 제3 폴리펩티드는 예를 들어, N- → C-말단 배향으로 시알리다제 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 제1 폴리펩티드는 예를 들어, 서열식별번호: 49를 포함할 수 있고/거나, 제2 폴리펩티드는 예를 들어, 서열식별번호: 50을 포함할 수 있고/거나, 제3 폴리펩티드는 예를 들어, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 또는 서열식별번호: 79를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 (a) 제1 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; (b) 제1 이뮤노글로불린 중쇄 및 제1 시알리다제를 포함하는 제2 폴리펩티드; (c) 제2 이뮤노글로불린 중쇄 및 제2 시알리다제를 포함하는 제3 폴리펩티드; 및 (d) 제2 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제4 폴리펩티드를 포함하며; 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결되고, 제3 및 제4 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결되고, 제2 및 제3 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결되고, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 제1 항원-결합 부위를 한정하고, 제3 폴리펩티드 및 제4 폴리펩티드는 함께 제2 항원-결합 부위를 한정한다. 제2 및 제3 폴리펩티드는 예를 들어, N- → C-말단 배향으로 각각 제1 및 제2 이뮤노글로불린 중쇄 및 제1 및 제2 시알리다제를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 (a) 제1 시알리다제, 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제1 단일 쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 (b) 제2 시알리다제, 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 임의적 제2 단일 쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하며; 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결되고, 제1 scFv는 제1 항원-결합 부위를 한정하고, 제2 scFv는 존재하는 경우 제2 항원-결합 부위를 한정한다. 제1 폴리펩티드는 예를 들어 N- → C-말단 배향으로 제1 시알리다제, 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제1 scFv를 포함할 수 있다. 제2 폴리펩티드는 예를 들어, N- → C-말단 배향으로 제2 시알리다제, 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 임의적 제2 scFv를 포함할 수 있다. 제1 폴리펩티드는 예를 들어, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75를 포함할 수 있고/거나, 제2 폴리펩티드는 예를 들어, 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75를 포함할 수 있다.
또다른 측면에서, 본 발명은 상기 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제 중 임의의 것, 상기 융합 단백질 중 임의의 것, 또는 상기 항체 접합체 중 임의의 것의 적어도 일부를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산을 제공한다. 또다른 측면에서, 본 발명은 상기 핵산 중 임의의 것을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 또다른 측면에서, 본 발명은 상기 발현 벡터 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 상기 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제 중 임의의 것, 상기 융합 단백질 중 임의의 것, 또는 상기 항체 접합체 중 임의의 것을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 상기 시알리다제 중 임의의 것, 상기 융합 단백질 중 임의의 것, 상기 항체 접합체 중 임의의 것, 또는 상기 제약 조성물 중 임의의 것의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 암은 상피암, 예를 들어, 자궁내막암, 난소암, 자궁경부암, 외음부암, 자궁암, 난관암, 유방암, 전립선암, 폐암, 췌장암, 요로암, 방광암, 두경부암, 구강암 및 간암이다.
또다른 측면에서, 본 발명은 세포 또는 조직에서 HLA-DR, CD86, CD83, IFNγ, IL-1b, IL-6, TNFα, IL-17A, IL-2, 또는 IL-6의 발현을 증가시키는 방법을 제공한다. 방법은 세포 또는 조직을 상기 시알리다제 중 임의의 것, 상기 융합 단백질 중 임의의 것, 상기 항체 접합체 중 임의의 것, 또는 상기 제약 조성물 중 임의의 것의 유효량과 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포는 수지상 세포 및 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 선택된다.
본 발명의 이들 및 다른 측면 및 특색은 하기 상세한 설명 및 청구범위에 기재된다.
본 발명은 하기 도면을 참조로 보다 완전하게 이해될 수 있다.
도 1은 비-환원 및 환원 조건 하에서의 재조합 인간 Neu1, Neu2, Neu3, 및 살모넬라 티피무리움 (Salmonella typhimurium) (St-시알리다제)을 나타내는 SDS-PAGE 겔을 나타낸다. 단량체 및 이량체 종이 지시된다.
도 2는 재조합 인간 Neu1, Neu2, 및 Neu3의 효소 활성을 나타내는 막대 그래프이다.
도 3은 지시된 pH에서의 재조합 인간 Neu2 및 Neu3에 대한 기질 농도의 함수로서의 효소 활성을 나타내는 선 그래프이다.
도 4a는 야생형 Neu2의 SEC-HPLC 트레이스이다. 도 4b는 Neu2-M38 (C332A 및 C352L 치환을 함유함)의 SEC-HPLC 트레이스이다. 단량체 및 응집체 종의 양이 지시된다.
도 5a는 야생형 Neu2의 SEC-HPLC 트레이스이고, 도 5b는 Neu2-M62 (A2K 치환을 함유함)의 SEC-HPLC 트레이스이고, 도 5c는 Neu2-M71 (A2K 및 V325 치환을 함유함)의 SEC-HPLC 트레이스이다. 단량체 및 응집체 종의 양이 지시된다.
도 6a는 야생형 Neu2의 SEC-HPLC 트레이스이고, 도 6b는 Neu2-M76 (N-말단에 삽입된 MEDLRP (서열식별번호: 4)를 포함하였음)의 SEC-HPLC 트레이스이다. 단량체 및 응집체 종의 양이 지시된다.
도 7a는 지시된 pH에서의 Neu2-M76에 대한 기질 농도의 함수로서의 효소 활성을 나타내는 선 그래프이다. 도 7b는 Neu2-M76에 의한 α2-3, α2-6, 또는 α2-8 기질의 절단을 나타낸다.
도 8a는 야생형 Neu2의 SEC-HPLC 트레이스이고, 도 8b는 Neu2-M79 (V6Y 치환을 함유함)의 SEC-HPLC 트레이스이다. 단량체 및 응집체 종의 양이 지시된다.
도 9a 내지 9i는 시알리다제 효소, 예를 들어, 인간 시알리다제 효소, 및 항원 결합 부위를 함유하는 특정 항체 접합체 구축물의 개략적 제시를 나타낸다. 1개 초과의 (예를 들어, 2개의) 시알리다제를 함유하는 각각의 항체 접합체 구축물에 대해, 각각의 시알리다제는 동일하거나 상이할 수 있다. 1개 초과의 (예를 들어, 2개의) 항원 결합 부위를 함유하는 각각의 항체 접합체 구축물에 대해, 각각의 항원 결합 부위는 동일하거나 상이할 수 있다.
도 10a 내지 c는 랩터 (Raptor) 항체 시알리다제 접합체 (도 10a), 야누스 (Janus) 항체 시알리다제 접합체 (도 10b), 및 로브스터 (Lobster) 항체 시알리다제 접합체 (도 10c)로 지칭되는 융합 단백질 접합체의 개략적 제시이다.
도 11a는 랩터 (좌측) 및 야누스 (우측) 형식의 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제) 및 트라스투주맙을 사용하여 제조된 항체-시알리다제 접합체 (ASC)를 나타내는 SDS-PAGE 겔이다. 도 11b는 트라스투주맙 (상부), 및 야누스 (중간) 및 랩터 (하부) 형식의 St-시알리다제 및 트라스투주맙을 사용하여 제조된 ASC의 SEC-HPLC 트레이스이다.
도 12a는 St-시알리다제 및 랩터 및 야누스 형식의 St-시알리다제 및 트라스투주맙을 사용하여 제조된 ASC에 대한 효소 활성을 나타내는 선 그래프 (상부) 및 막대 그래프 (하부)이다. 도 12b는 트라스투주맙 (상부), 및 랩터 (중간) 및 야누스 (하부) 형식의 St-시알리다제 및 트라스투주맙을 사용하여 제조된 ASC에 대한 포르테바이오 옥텟 (ForteBio Octet)에 의해 측정된 바와 같은 Her2에의 결합을 나타낸다.
도 13a 내지 c는 야누스 형식의 St-시알리다제 및 트라스투주맙을 사용하여 제조된 ASC를 나타내는 SDS-PAGE 겔 (도 13a), 야누스 형식의 Neu2-M76 (N-말단에 삽입된 MEDLRP (서열식별번호: 4)를 포함하였음) 및 트라스투주맙을 사용하여 제조된 ASC를 나타내는 SDS-PAGE 겔 (도 13b), 및 로브스터 형식의 Neu2-M85 (M1의 결실 및 V6Y 및 I187K 돌연변이를 포함하였음) 및 트라스투주맙으로부터 유래된 scFv를 사용하여 제조된 ASC를 나타내는 SDS-PAGE 겔 (도 13c)을 나타낸다.
도 14a 내지 c는 야누스 형식의 Neu2-M76 (N-말단에 삽입된 MEDLRP (서열식별번호: 4)를 포함하였음) 및 트라스투주맙을 사용하여 제조된 ASC (도 14a), 야생형 Neu2 (도 14b), 및 로브스터 형식의 Neu2-M85 (M1의 결실 및 V6Y 및 I187K 돌연변이를 포함하였음) 및 트라스투주맙으로부터 유래된 scFv를 사용하여 제조된 ASC (도 14c)에 대한 기질 농도의 함수로서의 효소 활성을 나타내는 선 그래프를 나타낸다.
도 15a 내지 d는 인간 Her2를 발현하도록 조작된 EMT6 마우스 유방암 세포를 이용한 마우스 동계 종양 모델에서의 항체 시알리다제 접합체의 다양한 형태의 시험을 나타낸다. 마우스를 흑색 삼각형으로 표시된 날에 10 mg/kg의 각각의 시험품의 복강내 주사를 통해 처리하고, 종양 부피 (mm3)를 기록한다. 각각의 선은 개별적 마우스를 나타낸다. 마우스를 트라스투주맙 (도 15a), 랩터 (도 15b), 야누스 (도 15c) 또는 로브스터 (도 15d) 중 어느 하나로 처리한다.
도 16a 내지 d는 인간 Her2를 발현하도록 조작된 EMT6 마우스 유방암 세포를 이용한 마우스 동계 종양 모델에서의 야누스 항체 시알리다제 접합체의 시험을 나타낸다. 마우스를 흑색 삼각형으로 표시된 날에 10 mg/kg의 야누스의 복강내 주사를 통해 처리하고, 종양 부피 (mm3)를 기록하였다. 마우스를 또한 야누스와 동일한 날에 항-마우스 NK1.1 (10 mg/kg)로 처리하여 자연 살해 세포를 고갈시키거나 (도 16a), 리포솜 클로드로네이트 (0.5 mg/ 마우스, 2주 동안 주 3회)로 처리하여 대식세포를 고갈시키거나 (도 16b), 항-마우스 CD8α (10 mg/kg)로 처리하여 CD8+ T 세포를 고갈시켰다 (도 16c). 각각의 선은 개별적 마우스를 나타낸다. 도 16d는 실시예 8로부터의 지시된 처리군의 오차 막대를 갖는 평균 종양 부피를 나타낸다.
도 17a 내지 b는 인간 Her2를 발현하도록 조작된 EMT6 마우스 유방암 세포의 제2 공급원을 이용한 마우스 동계 동소 종양 모델에서의 야누스 항체 시알리다제 접합체의 시험을 나타낸다. 마우스를 흑색 삼각형으로 표시된 날에 10 mg/kg의 각각의 시험품의 복강내 주사를 통해 처리하고, 종양 부피 (mm3)를 기록한다. 각각의 선은 개별적 마우스를 나타낸다. 마우스를 비히클, 트라스투주맙, 야누스 또는 야누스 기능 소실 중 어느 하나로 처리한다 (▼) (도 17a). 도 17b는 원래 EMT6-Her2 종양의 완전한 퇴행을 갖는 도 17a로부터의 야누스로 처리된 3마리의 마우스 (치유된 마우스) 또는 나이브 마우스 중 어느 하나의 재챌린지 실험을 나타낸다. 치유된 마우스를 좌측 및 우측 하부 옆구리 영역 상에 EMT6-Her2 세포 또는 모 EMT6 세포 중 어느 하나로 접종하였다. 나이브 마우스를 EMT6-Her2 세포로 접종하였다.
도 18a 내지 b는 항-마우스 PD1과 조합으로 마우스 동계 동소 종양 모델에서의 야누스 항체 시알리다제 접합체의 시험을 나타낸다. 마우스를 흑색 삼각형 (▼)으로 표시된 날에 10 mg/kg의 항-마우스 PD1 단독 (도 18a) 또는 야누스 및 항-마우스 PD1 (각각 10 mg/kg, 도 18b) 중 어느 하나의 복강내 주사를 통해 처리하고, 종양 부피 (mm3)를 기록한다. 각각의 선은 개별적 마우스를 나타낸다.
도 19는 인간 Her2를 발현하는 B16 흑색종 세포주로 주사된 마우스 동계 종양 모델에서의 다양한 시험품의 시험을 나타낸다. 마우스를 흑색 삼각형 (▼)으로 표시된 날에 10 mg/kg의 야누스, 트라스투주맙 또는 항-마우스 PD1 및 항-마우스 CTLA4의 조합 (각각 10 mg/kg) 중 어느 하나의 복강내 주사를 통해 처리하고, 종양 부피 (mm3)를 기록한다. 각각의 선은 개별적 마우스를 나타낸다.
도 20은 지시된 처리 후, FACS 염색에 의해 검정된 바와 같은, 종양 세포에의 MAL II 및 PNA 렉틴의 결합을 나타낸다. MAL II 및 PNA 염색은 종양 세포로부터의 말단 시알산의 절단을 지시하고, MAL II 염색은 세포 표면 시알산의 소실 시 감소될 것으로 예상되고, PNA 염색은 세포 표면 시알산의 소실로 증가할 것으로 예상된다.
도 21은 지시된 처리 후, 유동 세포계측법에 의해 검정된 바와 같은, 수지상 세포 (DC) 활성화 마커 HLA-DR, CD86 및 CD83의 세포 표면 발현을 나타낸다. A는 St-시알리다제 및 트라스투주맙으로 제조된 야누스 ASC를 지시하고, B는 St-시알리다제로 제조된 비-Her2 결합 야누스 ASC를 지시하고, C는 기능 소실 St-시알리다제 돌연변이체 및 트라스투주맙으로 제조된 야누스 ASC를 지시한다. * P ≤ 0.05, ** P ≤ 0.01, *** P ≤ 0.001, 및 **** P ≤ 0.0001.
도 22a 내지 d는 ΔM1, V6Y, I187K, 및 C332A 돌연변이를 갖는 인간 Neu2 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC로의 처리 후의 IFNγ (도 22a), IL-1b (도 22b), IL-6 (도 22c), 및 TNFα (도 22d) 방출을 나타낸다. 새롭게 단리된 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 지시된 농도 (μg/ml로 나타내어짐)에서 24시간 동안 야누스와 함께 인큐베이션하였다. IL-2 또는 LPS를 갖는 PHA-L을 시토카인 방출을 자극하기 위한 양성 대조군으로서 사용하였다. 트라스투주맙 (Tras)을 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 23a 내지 d는 ΔM1, V6Y, I187K, 및 C332A 돌연변이를 갖는 인간 Neu2 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC로의 처리 후의 IL-2 (도 23a), IL-4 (도 23b), IL-10 (도 23c), 및 IL-13 (도 23d) 방출을 나타낸다. 새롭게 단리된 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 지시된 농도 (μg/ml로 나타내어짐)에서 24시간 동안 야누스와 함께 인큐베이션하였다. IL-2 또는 LPS를 갖는 PHA-L을 시토카인 방출을 자극하기 위한 양성 대조군으로서 사용하였다. 트라스투주맙 (Tras)을 음성 대조군으로서 사용하였다.
도 24는 바이오맵 (BioMAP) VascHT29 공동-배양 종양 미세환경 모델에의 야누스 및 야누스 LOF의 첨가 후의 지시된 마커의 상대적 발현을 나타낸다. 비히클 반응의 기지의 범위는 제로 기준선을 따라 음영처리된 영역에 의해 나타내어진다. 각각의 측정에 대한 값은 시험품 대 비히클 대조군의 비의 로그에 의해 나타내어진다. 기지의 범위 위의 통계적으로 유의미한 값을 갖는 분석물은 주석표시된다.
도 25는 바이오맵 VascHT29 공동-배양 종양 미세환경 모델에의 야누스 및 펨브롤리주맙의 첨가 후의 지시된 마커의 상대적 발현을 나타낸다. 비히클 반응의 기지의 범위는 제로 기준선을 따라 음영처리된 영역에 의해 나타내어진다. 각각의 측정에 대한 값은 시험품 대 비히클 대조군의 비의 로그에 의해 나타내어진다. 기지의 범위 초과의 통계적으로 유의미한 값을 갖는 분석물은 주석표시된다.
도 26a 내지 b는 인간 Her2를 발현하도록 조작된 EMT6 마우스 유방암 세포를 이용한 마우스 동계 종양 모델에서의 야누스 항체 시알리다제 접합체의 시험을 나타낸다. 마우스를 흑색 삼각형 (▼)으로 표시된 날에 비히클 대비 10 mg/kg의 야누스, 트라스투주맙 또는 비-Her2 결합 야누스의 복강내 주사를 통해 처리하고, 종양 부피 (mm3)를 기록하였다. 도 26a는 각각의 처리군에 대한 평균 종양 부피를 나타낸다. 도 26b는 각각의 처리군에서의 개별적 마우스에 대한 종양 부피를 나타낸다. 완전한 반응 (CR, 연구 동안 임의의 시점에서의 촉진의 한계 미만의 퇴행으로서 정의됨)이 또한 나타내어진다.
도 27a 내지 d는 인간 Her2를 발현하도록 조작된 EMT6 마우스 유방암 세포를 이용한 마우스 동계 종양 모델에서의 인간 로브스터 항체 시알리다제 접합체의 시험을 나타낸다. 마우스를 흑색 삼각형 (▼)으로 표시된 날에 10 mg/kg의 트라스투주맙 (도 27b), 인간 로브스터 1 (도 27c), 인간 로브스터 2 (도 27d), 및 비히클 (도 27a)의 복강내 주사를 통해 처리하고, 종양 부피 (mm3)를 기록하였다. 그래프는 지시된 처리에 대한 개별적 마우스를 나타낸다. 완전한 반응 (CR, 연구 동안 임의의 시점에서의 촉진의 한계 미만의 퇴행으로서 정의됨)이 또한 나타내어진다.
상세한 설명
본 발명의 다양한 특색 및 측면은 하기에서 보다 상세하게 논의된다. 본 발명은 야생형 인간 시알리다제에 비해 적어도 1개의 돌연변이, 예를 들어, 적어도 1개의 아미노산의 치환, 결실, 또는 첨가 (삽입)를 포함하는 재조합 인간 시알리다제를 제공한다. 돌연변이, 또는 돌연변이의 조합은 시알리다제의 발현, 활성, 또는 발현 및 활성 둘 다를 개선시켜 암 진단 및/또는 치료에서의 그의 사용을 개선시킬 수 있다.
본 발명은 또한 시알리다제 효소 및 항체 또는 그의 부분, 예를 들어, 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및/또는 항원-결합 도메인을 포함하는 융합 단백질 및/또는 항체 접합체에 관한 것이다. 융합 단백질 및/또는 항체 접합체의 시알리다제 효소 부분은 야생형 인간 시알리다제에 비해 적어도 1개의 돌연변이를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 암, 예를 들어, 상피 세포 암을 치료하기 위한 제약 조성물 및 융합 단백질 및/또는 항체 접합체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
I. 재조합 인간 시알리다제
본원에 사용된 바와 같은 용어 "시알리다제"는 기질, 예를 들어, 당단백질 또는 당지질로부터 말단 시알산 잔기를 절단하는 임의의 효소, 또는 그의 기능적 단편을 지칭한다. 시알리다제라는 용어는 야생형 시알리다제 서열에 비해 1개 이상의 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 변이체, 및/또는 시알리다제를 포함하는 융합 단백질 또는 접합체를 포함한다. 시알리다제는 또한 뉴라미니다제로 지칭되며, 달리 지시되지 않는다면, 2가지 용어는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 시알리다제의 "기능적 단편"은 상응하는 전장, 천연 발생 시알리다제의 효소 활성의 예를 들어, 적어도 10％, 적어도 20％, 적어도 30％, 적어도 40％, 적어도 50％, 적어도 60％, 적어도 70％, 적어도 80％, 적어도 90％, 또는 100％를 보유하는 전장 시알리다제의 단편을 지칭한다. 시알리다제 효소 활성은 예를 들어, 형광발생 기질 4-메틸움벨리페릴-N-아세틸뉴라민산 (4MU-NeuAc)으로부터의 시알산의 방출을 측정하는 것에 의해서를 비롯한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 검정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 기능적 단편은 전장, 천연 발생 시알리다제에 존재하는 적어도 100, 150, 200, 250, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 또는 370개의 연속적 아미노산을 포함한다.
4가지 시알리다제는 인간 게놈에서 발견되었으며, Neu1, Neu2, Neu3 및 Neu4로 지칭된다.
인간 Neu1은 베타-갈락토시다제 및 카텝신 A와의 복합체에세 기능하는 리소좀 뉴라미니다제 효소이다. 인간 Neu1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 7에 표시되고, 인간 Neu1을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 23에 표시된다.
인간 Neu2는 시토졸 시알리다제 효소이다. 인간 Neu2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 1에 표시되고, 인간 Neu2를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 24에 표시된다.
인간 Neu3은 강글리오시드에 대해 특이적인 활성을 갖는 형질막 시알리다제이다. 인간 Neu3은 2가지 이소형을 갖는다: 이소형 1 및 이소형 2. 인간 Neu3, 이소형 1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 8에 표시되고, 인간 Neu3, 이소형 1을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 25에 표시된다. 인간 Neu3, 이소형 2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 9에 표시되고, 인간 Neu3, 이소형 2를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 34에 표시된다.
인간 Neu4는 2가지 이소형을 갖는다: 이소형 1은 표재성 막 단백질이고, 이소형 2는 리소좀 루멘에 국재한다. 인간 Neu4, 이소형 1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 10에 표시되고, 인간 Neu4, 이소형 1을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 26에 표시된다. 인간 Neu4, 이소형 2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 11에 표시되고, 인간 Neu4, 이소형 2를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 35에 표시된다.
4가지 시알리다제는 또한 마우스 게놈에서 발견되었으며, Neu1, Neu2, Neu3 및 Neu4로 지칭된다. 마우스 Neu1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 83에 표시되고, 마우스 Neu1을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 87에 표시된다. 마우스 Neu2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 84에 표시되고, 마우스 Neu2를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 88에 표시된다. 마우스 Neu3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 85에 표시되고, 마우스 Neu3을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 89에 표시된다. 마우스 Neu4의 아미노산 서열은 서열식별번호: 86에 표시되고, 마우스 Neu4를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 90에 표시된다.
예시적인 원핵생물 시알리다제로는 살모넬라 티피무리움 및 비브리오 콜레라 (Vibrio cholera)로부터의 시알리다제를 들 수 있다. 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제)의 아미노산 서열은 서열식별번호: 30에 표시되고, 살모넬라 티피무리움 시알리다제를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 80에 표시된다. 비브리오 콜레라 시알리다제의 아미노산 서열은 서열식별번호: 81에 표시되고, 비브리오 콜레라 시알리다제를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 82에 표시된다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 상응하는 (또는 주형) 야생형 인간 시알리다제의 효소 활성의 약 5％, 약 10％, 약 15％, 약 20％, 약 25％, 약 30％, 약 35％, 약 40％, 약 45％, 약 50％, 약 60％, 약 65％, 약 70％, 약 75％, 약 80％, 약 85％, 약 90％, 약 95％, 약 100％, 또는 100％ 초과를 갖는다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 상응하는 야생형 인간 시알리다제와 동일한 기질 특이성을 갖는다. 다른 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 상응하는 야생형 인간 시알리다제와는 상이한 기질 특이성을 갖는다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 α2,3, α2,6, 및/또는 α2,8 연결을 절단할 수 있다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 α2,3 및 α2,8 연결을 절단할 수 있다.
특정 실시양태에서, 포유동물 세포, 예를 들어, HEK293 세포, CHO 세포, 뮤린 골수종 세포 (NS0, Sp2/0), 또는 인간 섬유육종 세포 (HT-1080), 예를 들어, HEK293 세포에서의 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제의 발현 수율은 상응하는 야생형 인간 시알리다제의 발현 수율의 약 10％, 약 20％, 약 50％, 약 75％, 약 100％, 약 150％, 약 200％, 약 250％, 약 300％, 약 400％, 약 500％, 약 600％, 약 700％, 약 800％, 약 900％, 또는 약 1,000％ 초과이다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 상응하는 야생형 인간 시알리다제의 효소 활성의 약 5％, 약 10％, 약 15％, 약 20％, 약 25％, 약 30％, 약 35％, 약 40％, 약 45％, 약 50％, 약 60％, 약 65％, 약 70％, 약 75％, 약 80％, 약 85％, 약 90％, 약 95％, 약 100％, 또는 100％ 초과를 갖고, 포유동물 세포, 예를 들어, HEK293 세포에서의 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제의 발현 수율은 상응하는 야생형 인간 시알리다제의 발현 수율의 약 10％, 약 20％, 약 50％, 약 75％, 약 100％, 약 150％, 약 200％, 약 250％, 약 300％, 약 400％, 약 500％, 약 600％, 약 700％, 약 800％, 약 900％, 또는 약 1,000％ 초과이다.
a. 시스테인 잔기의 치환
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 적어도 1개의 시스테인 (cys, C) 잔기의 치환을 포함한다. 시알리다제에서의 특정 시스테인 잔기는 단백질 응집의 결과로서 기능적 단백질의 발현을 억제할 수 있음이 밝혀졌다. 따라서, 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 유리 시스테인의 적어도 1개의 돌연변이 (예를 들어, Neu1 (서열식별번호: 7)에 대해, C111, C117, C171, C183, C218, C240, C242, 및 C252; Neu2 (서열식별번호: 1)에 대해, C125, C196, C219, C272, C332, 및 C352; Neu3 (서열식별번호: 8)에 대해, C7, C90, C99, C106, C127, C136, C189, C194, C226, C242, C250, C273, C279, C295, C356, C365, C368, C384, C383, C394, 및 C415; 및 Neu4 (서열식별번호: 10)에 대해, C88, C125, C126, C186, C191, C211, C223, C239, C276, C437, C453, C480, 및 C481)를 함유한다. 유리 시스테인은 임의의 아미노산으로 치환될 수 있다. 특정 실시양태에서, 유리 시스테인은 세린 (ser, S), 이소류신 (iso, I), 발린 (val, V), 페닐알라닌 (phe, F), 류신 (leu, L), 또는 알라닌 (ala, A)으로 치환된다. Neu2에서의 예시적인 시스테인 치환으로는 C125A, C125I, C125S, C125V, C196A, C196L, C196V, C272S, C272V, C332A, C332S, C332V, C352L, 및 C352V를 들 수 있다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 2개 이상의 시스테인 치환을 포함한다. Neu2에서의 예시적인 이중 또는 삼중 치환으로는 C125S 및 C332S; C272V 및 C332A; C272V 및 C332S; C332A 및 C352L; C125S 및 C196L; C196L 및 C352L; C196L 및 C332A; C332A 및 C352L; 및 C196L, C332A 및 C352L을 들 수 있다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 Neu2 시알리다제이고, 치환 C322A 및 C352L (서열식별번호: 5)을 포함한다.
특정 실시양태에서, 시알리다제는 전형적으로 인간 시알리다제, 예를 들어, Neu2 또는 Neu3에 존재하는 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 시스테인에 아미노산 치환을 함유한다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 하기 본원의 표 2에 열거된 치환 또는 치환의 조합에 상응하는 치환 또는 치환의 조합을 포함한다.
b. pI를 증가시키고/거나, 소수성을 감소시키는 잔기의 치환
단백질의 등전점 (pI)은 순 전하가 0인 pH이다. pI는 또한 단백질을 발현하고 정제하는 능력에 영향을 미치는, 단백질이 최소로 가용성인 pH를 지시한다. 일반적으로, 단백질은 그의 pI가 용액의 pH 위로 2 단위 초과인 경우 양호한 용해도를 갖는다. 인간 Neu2는 7.5의 예측된 pI를 갖는다. 따라서, 인간 Neu2는 중성 pH 주위에서 최소로 가용성이며, 이는 발현 및 생리학적 계가 중성 pH에 있기 때문에 바람직하지 않다. 대조적으로, 양호한 용해도 및 재조합 발현을 나타내는 살모넬라 티피무리움으로부터의 시알리다제 (St-시알리다제)는 9.6의 pI를 갖는다. 따라서, 인간 Neu2 또는 다른 인간 시알리다제의 발현을 증가시키기 위해, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 1개 이상의 아미노산 치환(들)을 함유하도록 설계될 수 있으며, 치환(들)은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 pI를 증가시킨다. 추가적으로, 시알리다제의 표면 상의 소수성 아미노산의 수를 감소시키는 것은 예를 들어, 응집을 감소시킴으로써 시알리다제의 발현을 개선시킬 수 있다. 따라서, 인간 Neu2 또는 다른 인간 시알리다제의 발현을 증가시키기 위해, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 1개 이상의 아미노산 치환(들)을 함유하도록 설계될 수 있으며, 치환(들)은 치환(들)이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 표면의 소수성을 감소시킨다.
따라서, 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 적어도 1개의 아미노산 치환을 포함하며, 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키고/거나, 시알리다제의 소수성을 감소시킨다. 이는 1개 이상의 하전된 아미노산, 예를 들어, 양으로 또는 음으로 하전된 아미노산을 재조합 시알리다제 내로 도입함으로써 달성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 아미노산 치환은 하전된 아미노산, 예를 들어, 양으로 하전된 아미노산, 예컨대 리신 (lys, K), 히스티딘 (his, H), 또는 아르기닌 (arg, R), 또는 음으로 하전된 아미노산, 예컨대 아스파르트산 (asp, D) 또는 글루탐산 (glu, E)에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 아미노산 치환은 리신 잔기에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 치환은 시알리다제의 pI를 약 7.75, 약 8, 약 8.25, 약 8.5, 약 8.75, 약 9, 약 9.25, 약 9.5, 또는 약 9.75로 증가시킨다.
특정 실시양태에서, 아미노산 치환은 표면 노출된 D 또는 E 아미노산에서, 나선 또는 루프에서, 또는 St-시알리다제의 상응하는 위치에서의 K 또는 R을 갖는 위치에서 일어난다. 특정 실시양태에서, 아미노산 치환은 촉매 부위로부터 멀거나 다르게는 촉매작용에 관여하지 않는 아미노산, 다른 인간 Neu 단백질로 또는 St-시알리다제 또는 클로스트리디움 (Clostridium) NanH로 보존되지 않은 아미노산, 또는 기능에 중요한 도메인 (예를 들어, Asp-박스 또는 베타 가닥)에 위치하지 않은 아미노산에서 일어난다.
치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키고/거나, 시알리다제의 소수성을 감소시키는 Neu2에서의 예시적인 아미노산 치환으로는 A2E, A2K, D215K, V325E, V325K, E257K, 및 E319K를 들 수 있다. 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 예를 들어, A2K 및 V325E, A2K 및 V325K, E257K 및 V325K, A2K 및 E257K, 및 E257K 및 A2K 및 V325K를 비롯한 2개 이상의 아미노산 치환을 포함한다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 하기 본원의 표 3에 열거된 치환 또는 치환의 조합에 상응하는 치환 또는 치환의 조합을 포함한다.
c. N-말단 펩티드의 첨가 및 N- 또는 C-말단 치환
인간 시알리다제의 N-말단에의 2개 이상의 아미노산의 펩티드 서열의 첨가는 시알리다제의 발현 및/또는 활성을 개선시킬 수 있음이 밝혀졌다. 특정 실시양태에서, 펩티드는 적어도 2개 아미노산 길이, 예를 들어, 2 내지 20, 2 내지 10, 2 내지 5, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산 길이이다. 특정 실시양태에서, 펩티드는 α-나선을 형성할 수 있거나, 이를 형성하는 경향을 갖는다.
마우스에서, 흉선에서 발견되는 Neu2 이소형 (유형 B)은 골격근에서 발견되는 Neu2의 정준 이소형에는 존재하지 않는 6개의 아미노산을 함유한다. 본원의 특정 실시양태에서, 마우스 흉선 Neu2 이소형의 N-말단 6개의 아미노산, MEDLRP (서열식별번호: 4), 또는 그의 변이체는 인간 Neu, 예를 들어, 인간 Neu2 상으로 첨가될 수 있다. 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 시알리다제의 N-말단 아미노산과 공유적으로 회합된 적어도 2개 아미노산 잔기 길이의 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 시알리다제의 N-말단 아미노산과 공유적으로 회합된 펩티드 MEDLRP (서열식별번호: 4) 또는 EDLRP (서열식별번호: 3)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 펩티드, 예를 들어, MEDLRP (서열식별번호: 4) 또는 EDLRP (서열식별번호: 3), 및 시알리다제의 나머지 사이에 위치한 절단 부위, 예를 들어, 단백질분해적 절단 부위를 더 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 펩티드, 예를 들어, MEDLRP (서열식별번호: 4) 또는 EDLRP (서열식별번호: 3)는 시알리다제의 나머지로부터 번역후 절단될 수 있다.
N-말단 첨가에 대안적으로, 또는 그와 조합으로, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제의 12 아미노산 N-말단 영역의 1 내지 5개의 아미노산은 제거될 수 있으며, 예를 들어, N-말단 메티오닌은 제거될 수 있다. 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제가 Neu2인 경우, N-말단 메티오닌은 제거될 수 있거나, 최초 5개의 아미노산 (MASLP; 서열식별번호: 12)은 제거될 수 있거나, 제2 내지 제4 아미노산 (ASLP; 서열식별번호: 13)은 제거될 수 있다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제의 12 아미노산 N-말단 영역의 1 내지 5개의 아미노산은 MEDLRP (서열식별번호: 4), EDLRP (서열식별번호: 3), 또는 TVEKSVVF (서열식별번호: 14)로 치환된다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제가 Neu2인 경우, 아미노산 MASLP (서열식별번호: 12), ASLP (서열식별번호: 13) 또는 M은 MEDLRP (서열식별번호: 4), EDLRP (서열식별번호: 3) 또는 TVEKSVVF (서열식별번호: 14)로 치환된다.
인간 시알리다제는 중심 축 주위에 환상으로 배열된 6개의 블레이드-형상 β-시트를 특징으로 하는 β-프로펠러 구조를 갖는다. 일반적으로, N- 및 C-말단 블레이드 사이를 비롯한 β-프로펠러의 블레이드 사이의 소수성 상호작용은 안정성을 향상시킨다. 따라서, 인간 Neu2 또는 다른 인간 시알리다제의 발현을 증가시키기 위해, 시알리다제의 N- 및 C-말단 β-프로펠러 블레이드 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시키는 아미노산 치환을 포함하는 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제가 설계될 수 있다.
따라서, 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환을 포함하며, 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시킨다. 특정 실시양태에서, 야생형 아미노산은 아스파라긴 (asn, N), 리신 (lys, K), 티로신 (tyr, Y), 페닐알라닌 (phe, F), 또는 트립토판 (trp, W)으로 치환된다. N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시키는 Neu2에서의 예시적인 치환으로는 L4N, L4K, V6Y, L7N, L4N 및 L7N, L4N 및 V6Y 및 L7N, V12N, V12Y, V12L, V6Y, V6F, 또는 V6W를 들 수 있다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 V6Y 치환을 포함한다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 상기 치환의 조합을 포함한다. 예를 들어, 재조합 돌연변이체 인간 Neu2 시알리다제는 N-말단에 추가의 아미노산 MEDLRP (서열식별번호: 4), EDLRP (서열식별번호: 3), 또는 TVEKSVVF (서열식별번호: 14)를 포함할 수 있으며, 조합으로, 적어도 1개의 L4N, L4K, V6Y, L7N, L4N 및 L7N, L4N 및 V6Y 및 L7N, V12N, V12Y, V12L, V6Y, V6F, 또는 V6W 치환을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 Neu2 시알리다제는 아미노산 MASLP (서열식별번호: 12), ASLP (서열식별번호: 13) 또는 M은 MEDLRP (서열식별번호: 4), EDLRP (서열식별번호: 3) 또는 TVEKSVVF (서열식별번호: 14)로 대체되고, 재조합 돌연변이체 인간 Neu2 시알리다제는 또한 적어도 1개의 L4N, L4K, V6Y, L7N, L4N 및 L7N, L4N 및 V6Y 및 L7N, V12N, V12Y, V12L, V6Y, V6F, 또는 V6W 치환을 포함한다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 하기 본원의 표 4 또는 5에 열거된 치환 또는 치환의 조합에 상응하는 치환 또는 치환의 조합을 포함한다.
추가적으로, 특정 실시양태에서, 시알리다제는 시알리다제의 N-말단에 N-말단 메티오닌의 치환 또는 결실을 포함한다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 시알리다제는 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 1에 상응하는 위치에서의 메티오닌 잔기의 치환을 포함하며, 예를 들어, 야생형 인간 Neu2의 위치 1에 상응하는 위치에서의 메티오닌은 알라닌 (M1A) 또는 아스파르트산 (M1D)에 의해 치환된다. 다른 실시양태에서, 시알리다제는 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 1에 상응하는 위치에서의 메티오닌 잔기의 결실 (ΔM1)을 포함한다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 하기 본원의 표 6에 열거된 치환 또는 치환의 조합에 상응하는 치환 또는 치환의 조합을 포함한다.
d. 다른 치환 및 치환의 조합
본 발명은 또한 하기 치환 중 적어도 하나를 포함하는 재조합 돌연변이체 인간 Neu2 시알리다제를 제공한다: I187K, A328E, K370N, 또는 H210N. 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 Neu2는 아미노산 GDYDAPTHQVQW (서열식별번호: 15)의 아미노산 SMDQGSTW (서열식별번호: 16) 또는 STDGGKTW (서열식별번호: 17)로의 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 Neu2는 아미노산 PRPPAPEA (서열식별번호: 18)의 아미노산 QTPLEAAC (서열식별번호: 19)로의 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 Neu2는 아미노산 NPRPPAPEA (서열식별번호: 20)의 아미노산 SQNDGES (서열식별번호: 21)로의 치환을 포함한다.
본 발명은 또한 V212, A213, Q214, D215, T216, L217, E218, C219, Q220, V221, A222, E223, V224, E225, 또는 T225에 상응하는 위치에서의 적어도 1개의 치환을 포함하는 재조합 돌연변이체 인간 Neu2 시알리다제를 제공한다.
본 발명은 또한 본원에서 고려된 돌연변이 중 임의의 것의 조합을 포함하는 재조합 돌연변이체 인간 Neu2 시알리다제를 제공한다. 예를 들어, 재조합 돌연변이체 시알리다제 효소는 본원에서 고려되는 돌연변이 중 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 재조합 돌연변이체 시알리다제 효소는 M1 결실 (ΔM1), M1A 치환, M1D 치환, V6Y 치환, I187K 치환, C332A 치환, 또는 상기 중 임의의 것의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 재조합 돌연변이체 시알리다제 효소는 M1A 및 V6Y; M1A 및 I187K; M1A 및 C332A; M1D 및 V6Y; M1D 및 I187K; M1D 및 C332A; ΔM1 및 V6Y; ΔM1 및 I187K; ΔM1 및 C332A; V6Y 및 I187K; V6Y 및 C332A; I187K 및 C332A; M1A, V6Y, 및 I187K; M1A, V6Y, 및 C332A; M1A, I187K, 및 C332A; M1D, V6Y, 및 I187K; M1D, V6Y, 및 C332A; M1D, I187K, 및 C332A; ΔM1, V6Y, 및 I187K; ΔM1, V6Y, 및 C332A; ΔM1, I187K, 및 C332A; V6Y, I187K, 및 C332A; M1A, V6Y, I187K, 및 C332A; M1D, V6Y, I187K, 및 C332A; 및 ΔM1, V6Y, I187K, 및 C332A로부터 선택되는 돌연변이의 조합을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 하기 본원의 표 7에 열거된 치환 또는 치환의 조합에 상응하는 치환 또는 치환의 조합을 포함한다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 72, 또는 서열식별번호: 73의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 72, 또는 서열식별번호: 73과 적어도 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％ 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는
Figure pct00001
(서열식별번호: 100)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, X1은 Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Val, 또는 존재하지 않고, X2는 Ala 또는 Lys이고, X3은 Asn 또는 Leu이고, X4는 Phe, Trp, Tyr 또는 Val이고, X5는 Ala, Cys, Ile, Ser, 또는 Val이고, X6은 Arg, Ile, 또는 Lys이고, X7은 Ala, Cys, Leu, 또는 Val이고, X8은 Glu 또는 Lys이고, X9는 Cys 또는 Val이고, X10은 Lys 또는 Val이고, X11은 Ala, Cys, Ser, 또는 Val이고, X12는 Cys, Leu, 또는 Val이고, 시알리다제는 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)에 비해 적어도 1개의 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는
Figure pct00002
(서열식별번호: 91)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, X1은 Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Val, 또는 존재하지 않고, X2는 Phe, Trp, Tyr 또는 Val이고, X3은 Arg, Ile, 또는 Lys이고, X4는 Ala, Cys, Ser, 또는 Val이고, 시알리다제는 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)에 비해 적어도 1개의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, X1은 Ala, Asp, Met, 또는 존재하지 않고, X2는 Tyr 또는 Val이고, X3은 Ile 또는 Lys이고, X4는 Ala 또는 Cys이다.
특정 실시양태에서, 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제는 본원에 개시된 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제 서열에 비해 보존적 치환을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "보존적 치환"은 구조적으로 유사한 아미노산으로의 치환을 지칭한다. 예를 들어, 보존적 치환은 하기 군 내의 것들을 포함할 수 있다: Ser 및 Cys; Leu, Ile, 및 Val; Glu 및 Asp; Lys 및 Arg; Phe, Tyr, 및 Trp; 및 Gln, Asn, Glu, Asp, 및 His. 보존적 치환은 또한 BLAST (기본 국소 정렬 검색 도구 (Basic Local Alignment Search Tool)) 알고리듬, BLOSUM 치환 행렬 (예를 들어, BLOSUM 62 행렬), 또는 PAM 치환:p 행렬 (예를 들어, the PAM 250 행렬)에 의해 정의될 수 있다.
서열 동일성은 예를 들어, 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 멕얼라인 (Megalign) (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자의 기술 내인 다양한 방식으로 측정될 수 있다. 프로그램 blastp, blastn, blastx, tblastn 및 tblastx (Karlin et al., (1990) PROC. NATL. ACAD. SCI. USA 87:2264-2268; Altschul, (1993) J. MOL. EVOL. 36:290-300; Altschul et al., (1997) NUCLEIC ACIDS RES. 25:3389-3402, 본원에 참조로 포함됨)에 의해 채용되는 알고리듬을 사용한 BLAST (기본 국소 정렬 검색 도구) 분석은 서열 유사성 검색에 맞는다. 서열 데이터베이스를 검색하는 데 있어서 기본적 쟁점의 논의에 대해서는, 완전히 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Altschul et al., (1994) NATURE GENETICS 6:119-129]을 참조한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 비교되고 있는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리듬을 비롯한, 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 히스토그램, 설명, 정렬, 기대값 (즉, 데이터베이스 서열에 대한 매치를 보고하기 위한 통계적 유의성 역치), 컷오프, 행렬 및 필터에 대한 검색 파라미터는 디폴트 설정에 있다. blastp, blastx, tblastn, 및 tblastx에 의해 사용되는 디폴트 점수화 행렬은 BLOSUM62 행렬이다 (Henikoff et al., (1992) PROC. NATL. ACAD. SCI. USA 89:10915-10919, 완전히 본원에 참조로 포함됨). 4개의 blastn 파라미터는 하기와 같이 조정될 수 있다: Q=10 (갭 생성 페널티); R=10 (갭 연장 페널티); wink=1 (문의를 따라 모든 wink.sup.th 위치에서 워드 히트를 생성함); 및 gapw=16 (갭화된 정렬이 생성되는 창 폭을 설정함). 등가의 blastp 파라미터 설정은 Q=9; R=2; wink=1; 및 gapw=32일 수 있다. 검색은 또한 NCBI (미국 국립 생명공학 정보 센터 (National Center for Biotechnology Information)) BLAST 어드밴스드 옵션 (Advanced Option) 파라미터를 사용하여 수행될 수 있다 (예를 들어: -G, 갭을 열기 위한 비용 [정수]: 디폴트 = 뉴클레오티드에 대해 5/ 단백질에 대해 11; -E, 갭을 연장하기 위한 비용 [정수]: 디폴트 = 뉴클레오티드에 대해 2/ 단백질에 대해 1; -q, 뉴클레오티드 미스매치에 대한 페널티 [정수]: 디폴트 = -3; -r, 뉴클레오티드 매치에 대한 보상 [정수]: 디폴트 = 1; -e, 기대 값 [Real]: 디폴트 = 10; -W, 워드크기 [정수]: 디폴트 = 뉴클레오티드에 대해 11/ 메가블라스트에 대해 28/ 단백질에 대해 3; -y, 비트로 blast 연장에 대한 드롭오프 (Dropoff) (X): 디폴트 = blastn에 대해 20/ 기타에 대해 7; -X, 갭화된 정렬에 대한 X 드롭오프 값 (비트로): 디폴트 = 모든 프로그램에 대해 15, blastn에 대해 적용가능하지 않음; 및 -Z, 갭화된 정렬에 대한 최종 X 드롭오프 값 (비트로): blastn에 대해 50, 기타에 대해 25). 쌍별 단백질 정렬을 위한 클러스탈 (Clustal)W는 또한 사용될 수 있다 (디폴트 파라미터는 예를 들어, Blosum62 행렬 및 갭 개방 페널티 = 10 및 갭 연장 페널티 = 0.1을 포함할 수 있음). GCG 패키지 버전 10.0에서 이용가능한 서열 사이의 베스트핏 (Bestfit) 비교는 DNA 파라미터 GAP=50 (갭 생성 페널티) 및 LEN=3 (갭 연장 페널티)을 사용한다. 베스트핏 단백질 비교에서 등가의 설정은 GAP=8 및 LEN=2이다.
II. 융합 단백질/항체 접합체
과시알릴화된 암 세포 상의 및/또는 종양 미세환경에서의 시알산의 선택적 제거를 촉진시키기 위해, 본원에 기재된 바와 같은 시알리다제를 이러한 세포에 또는 이러한 종양 미세환경에 표적화하는 것이 도움이 될 수 있다. 추가적으로, 대상체에서 시알리다제에 의한 시알산의 제거를 촉진시키기 위해, 대상체에서 시알리다제의 혈장 반감기를 연장시키는 것이 도움이 될 수 있다. 이들은 융합 단백질 및/또는 항체 접합체 (예를 들어, 화학적으로 접합된 접합체)에 시알리다제를 포함시킴으로써 달성될 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 시알리다제 효소, 또는 그의 기능적 단편, 및 항체의 부분 또는 단편, 예컨대 이뮤노글로불린 Fc 도메인 (또한 본원에서 Fc 도메인으로 지칭됨), 또는 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인 (또한 본원에서 항원-결합 도메인으로 지칭됨)을 포함하는 융합 단백질을 제공한다. 특정 실시양태에서, 시알리다제 및 항체 또는 그의 부분 (예를 들어, 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 항원-결합 도메인)은 펩티드 결합 또는 아미노산 링커에 의해 연결된다.
달리 지시되지 않는다면, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "융합 단백질"은 2개의 아미노산 서열이 직접적으로 또는 개재하는 링커 서열을 통해, 예를 들어, 개재하는 아미노산 링커를 통해 함께 융합될 수 있는, 2개 이상의 별개의 단백질 또는 폴리펩티드 쇄에 기초한 아미노산 서열을 포함하는 단일 폴리펩티드 쇄를 지칭하는 것으로 이해된다. 융합 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 예를 들어, 통상적인 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성될 수 있다.
특정 실시양태에서, 융합 단백질은 태그, 예컨대 스트렙 (Strep) 태그 (예를 들어, 스트렙 II 태그), His 태그 (예를 들어, 10x His 태그), myc 태그, 또는 FLAG 태그를 포함한다. 태그는 융합 단백질의 C-말단 또는 N-말단 상에 위치할 수 있다. 특정 실시양태에서, 융합 단백질은 N- → C-말단 배향으로 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 폴리펩티드에 연결된 시알리다제 부분을 포함하며, 시알리다제 부분은 MEDLRP (서열식별번호: 4)의 N-말단 첨가를 포함하고, 스트렙 II 태그는 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 또는 시알리다제 부분의 N-말단 상에 위치한다.
a. 시알리다제 부분
본원에 기재된 융합 단백질의 시알리다제 부분은 임의의 시알리다제, 예를 들어, 진균, 박테리아, 비-인간 포유동물 또는 인간 시알리다제일 수 있다. 특정 실시양태에서, 시알리다제 부분은 야생형 인간 시알리다제에 비해 적어도 1개의 돌연변이, 예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 적어도 1개의 아미노산의 치환, 결실, 또는 첨가를 포함하는 재조합 인간 시알리다제이다.
특정 실시양태에서, 시알리다제는 본원에 개시된 임의의 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제, 또는 그의 기능적 단편이다.
특정 실시양태에서, 시알리다제 부분은 C332A 및 C352L 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 시알리다제는 MEDLRP (서열식별번호: 4) 또는 EDLRP (서열식별번호: 3)의 N-말단 첨가를 포함한다. 특정 실시양태에서, 시알리다제 부분은 N-말단 상에 LSHSLST (서열식별번호: 22) 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 시알리다제 부분은 MEDLRP (서열식별번호: 4)의 N-말단 첨가 및 A2K 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 시알리다제 부분은 MEDLRP (서열식별번호: 4)의 N-말단 첨가 및 C332A 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 시알리다제 부분은 MEDLRP (서열식별번호: 4)의 N-말단 첨가, C332A 치환, 및 C352L 치환을 포함한다.
특정 실시양태에서, 시알리다제 부분은 M1 결실 (ΔM1), M1A 치환, M1D 치환, V6Y 치환, I187K 치환, C332A 치환, 또는 상기 중 임의의 것의 조합을 포함한다. 예를 들어, 시알리다제 부분은 M1A 및 V6Y; M1A 및 I187K; M1A 및 C332A; M1D 및 V6Y; M1D 및 I187K; M1D 및 C332A; ΔM1 및 V6Y; ΔM1 및 I187K; ΔM1 및 C332A; V6Y 및 I187K; V6Y 및 C332A; I187K 및 C332A; M1A, V6Y, 및 I187K; M1A, V6Y, 및 C332A; M1A, I187K, 및 C332A; M1D, V6Y, 및 I187K; M1D, V6Y, 및 C332A; M1D, I187K, 및 C332A; ΔM1, V6Y, 및 I187K; ΔM1, V6Y, 및 C332A; ΔM1, I187K, 및 C332A; V6Y, I187K, 및 C332A; M1A, V6Y, I187K, 및 C332A; M1D, V6Y, I187K, 및 C332A; 및 ΔM1, V6Y, I187K, 및 C332A로부터 선택되는 돌연변이의 조합을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 시알리다제 부분은 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 72, 또는 서열식별번호: 73의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 72, 또는 서열식별번호: 73과 적어도 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％ 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
b. 항체 부분
달리 지시되지 않는다면, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 무손상 항체, 항원-결합 단편, 또는 변형되거나, 조작되거나, 화학적으로 접합된 Fc 단편을 비롯한, 무손상 항체 (예를 들어, 무손상 모노클로날 항체), 또는 그의 단편, 예컨대 항체의 Fc 단편 (예를 들어, 모노클로날 항체의 Fc 단편), 또는 항체의 항원-결합 단편 (예를 들어, 모노클로날 항체의 항원-결합 단편)을 의미하는 것으로 이해된다. 항원-결합 단편의 예로는 Fab, Fab', (Fab')2, Fv, 단일 쇄 항체 (예를 들어, scFv), 미니바디, 및 디아바디를 들 수 있다. 변형되거나 조작된 항체의 예로는 키메라 항체, 인간화 항체, 및 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체)를 들 수 있다. 화학적으로 접합된 항체의 예는 독소 모이어티에 접합된 항체이다.
특정 실시양태에서, 융합 단백질은 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함한다. 달리 지시되지 않는다면, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "이뮤노글로불린 Fc 도메인"은 단독으로 또는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인과 조합으로 Fc 수용체에 결합할 수 있는 이뮤노글로불린 중쇄 불변 영역의 단편을 지칭한다. 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 예를 들어, 이뮤노글로불린 CH2 및 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 예를 들어, 이뮤노글로불린 CH2 및 CH3 도메인 및 이뮤노글로불린 힌지 영역을 포함할 수 있다. 이뮤노글로불린 힌지 영역, CH2, 및 CH3 도메인 사이의 경계는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, PROSITE 데이터베이스 (월드 와이드 웹 상에서 prosite.expasy.org에서 이용가능함)에서 발견될 수 있다.
특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE, 및 IgM Fc 도메인으로부터 유래된다. 단일 아미노산 치환 (카바트 (Kabat) 넘버링에 따라 S228P; IgG4Pro로 지정됨)은 재조합 IgG4 항체에서 관찰되는 이질성을 없애기 위해 도입될 수 있다. 문헌 [Angal, S. et al. (1993) MOL. IMMUNOL. 30:105-108]을 참조한다.
특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 인간 IgG1 이소형 또는 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 매개 세포독성 (CDC)을 유발하는 또다른 이소형으로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 인간 IgG1 이소형 (예를 들어, 서열식별번호: 31 또는 서열식별번호: 69)으로부터 유래된다.
특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 인간 IgG4 이소형 또는 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 매개 세포독성 (CDC)을 거의 또는 전혀 유발하지 않는 또다른 이소형으로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 인간 IgG4 이소형으로부터 유래된다.
특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인은 제2 폴리펩티드와의 이종이량체화를 위한 "놉 (knob)" 돌연변이, 예를 들어, T366Y 또는 "홀 (hole)" 돌연변이, 예를 들어, Y407T 중 어느 하나를 포함한다 (EU 넘버링에 따른 잔기 번호, Kabat, E.A., et al. (1991) SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, FIFTH EDITION, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242).
특정 실시양태에서, 융합 단백질은 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인을 포함한다. 이러한 도메인의 포함은 시알릴화된 암 세포에의 및/또는 종양 미세환경에의 융합 단백질의 표적화를 개선시킬 수 있다. 달리 지시되지 않는다면, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "이뮤노글로불린 항원-결합 도메인"은 단독으로 또는 또다른 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인과 조합으로 항원-결합 부위를 한정하는 폴리펩티드를 지칭한다. 예시적인 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인은 예를 들어, 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역 및 이뮤노글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하며, 가변 영역은 함께 항원 결합 부위를 한정한다.
이뮤노글로불린 항원-결합 도메인 및/또는 항원 결합 부위는 예를 들어, 아데카투무맙, 아스크린바쿠맙, 식수투무맙, 코나투무맙, 다라투무맙, 드로지투맙, 둘리고투맙, 두르발루맙, 두시기투맙, 엔포르투맙, 에노티쿠맙, 에프라툭수맙, 피기투무맙, 가니투맙, 글렘바투무맙, 인테투무맙, 이필리무맙, 이라투무맙, 이크루쿠맙, 렉사투무맙, 루카투무맙, 마파투무맙, 나르나투맙, 네시투무맙, 네스바쿠맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 파니투무맙, 파트리투맙, 프리투무맙, 라드레투맙, 라무시루맙, 릴로투무맙, 로바투무맙, 세리반투맙, 타렉스투맙, 테프로투무맙, 토베투맙, 반틱투맙, 베센쿠맙, 보투무맙, 잘루투무맙, 플란보투맙, 알투모맙, 아나투모맙, 아르시투모맙, 벡투모맙, 블리나투모맙, 데투모맙, 이브리투모맙, 민레투모맙, 미투모맙, 목세투모맙, 나프투모맙, 노페투모맙, 펨투모맙, 핀투모맙, 라코투모맙, 사투모맙, 솔리토맙, 타플리투모맙, 테나투모맙, 토시투모맙, 트레멜리무맙, 아바고보맙, 아테졸리주맙, 두르발루맙, 아벨루맙, 이고보맙, 오레고보맙, 카프로맙, 에드레콜로맙, 나콜로맙, 아마툭시맙, 바비툭시맙, 브렌툭시맙, 세툭시맙, 데를로툭시맙, 디누툭시맙, 덴시툭시맙, 푸툭시맙, 기렌툭시맙, 인다툭시맙, 이사툭시맙, 마르게툭시맙, 리툭시맙, 실툭시맙, 우블리툭시맙, 에크로멕시맙, 아비투주맙, 알렘투주맙, 베바시주맙, 비바투주맙, 브론틱투주맙, 칸투주맙, 칸투주맙, 시타투주맙, 클리바투주맙, 다세투주맙, 뎀시주맙, 달로투주맙, 데닌투주맙, 엘로투주맙, 에막투주맙, 에미베투주맙, 에노블리투주맙, 에타라시주맙, 파를레투주맙, 피클라투주맙, 겜투주맙, 임가투주맙, 이노투주맙, 라베투주맙, 리파스투주맙, 린투주맙, 리릴루맙, 로르보투주맙, 룸레투주맙, 마투주맙, 밀라투주맙, 목세투모맙, 니모투주맙, 오비누투주맙, 오카라투주맙, 오틀레르투주맙, 오나르투주맙, 오포르투주맙, 파르사투주맙, 페르투주맙, 피딜리주맙, 피나투주맙, 폴라투주맙, 시브로투주맙, 심투주맙, 타카투주맙, 티가투주맙, 트라스투주맙, 투코투주맙, 우렐루맙, 반도르투주맙, 바누시주맙, 벨투주맙, 보르세투주맙, 소피투주맙, 카투막소맙, 에르투막소맙, 데파툭시주맙, 온툭시주맙, 블론투베트맙, 탐투베트맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 에프라투주맙, MEDI9447, 우렐루맙, 우토밀루맙, hu3F8, hu14.18-IL-2, 3F8/OKT3BsAb, 리릴루맙, BMS-986016, 피딜리주맙, AMP-224, AMP-514, BMS-936559, 아테졸리주맙, 및 아벨루맙으로부터 선택되는 항체로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인은 트라스투주맙, 세툭시맙, 다라투무맙, 기렌툭시맙, 파니투무맙, 오파투무맙, 및 리툭시맙으로부터 선택되는 항체로부터 유래될 수 있다.
특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인은 트라스투주맙으로부터 유래된다. 트라스투주맙 중쇄 아미노산 서열은 서열식별번호: 40에 표시되고, 트라스투주맙 경쇄 아미노산 서열은 서열식별번호: 41에 표시된다. 트라스투주맙으로부터 유래된 예시적인 scFv의 아미노산 서열은 서열식별번호: 42에 표시된다.
이뮤노글로불린 항원-결합 도메인 및/또는 항원 결합 부위는 예를 들어, 아데노신 A2a 수용체 (A2aR), A 키나제 앵커 단백질 4 (AKAP4), B 흑색종 항원 (BAGE), 각인된 부위의 조절제의 형제 (BORIS), 중단점 클러스터 영역 아벨슨 티로신 키나제 (BCR/ABL), CA125, CAIX, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD52, CD73, CD137, 암배아 항원 (CEA), CS1, 세포독성 T-림프구-연관된 항원 4 (CTLA-4), 에스트로겐 수용체 결합 부위 연관된 항원 9 (EBAG9), 표피 성장 인자 (EGF), 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), EGF-유사 모듈 수용체 2 (EMR2), 상피 세포 부착 분자 (EpCAM) (17-1A), FR-알파, G 항원 (GAGE), 디시알로강글리오시드 GD2 (GD2), 당단백질 100 (gp100), 인간 표피 성장 인자 수용체 2 (Her2), 간세포 성장 인자 (HGF), 인간 유두종바이러스 16 (HPV-16), 열-충격 단백질 105 (HSP105), 이소시트레이트 데히드로게나제 유형 1 (IDH1), 이디오타입 (NeuGcGM3), 인돌아민-2,3-디옥시게나제 1 (IDO1), IGF-1, IGF1R, IGG1K, 살해 세포 이뮤노글로불린-유사 수용체 (KIR), 림프구 활성화 유전자 3 (LAG-3), 림프구 항원 6 복합체 K (LY6K), 매트릭스-메탈로프로테이나제-16 (MMP16), 멜라노트랜스페린 (MFI2), 흑색종 항원 3 (MAGE-A3), 흑색종 항원 C2 (MAGE-C2), 흑색종 항원 D4 (MAGE-D4), T-세포 1에 의해 인식되는 흑색종 항원 (Melan-A/MART-1), N-메틸-N'-니트로소-구아니딘 인간 골육종 전환 유전자 (MET), 뮤신 1 (MUC1), 뮤신 4 (MUC4), 뮤신 16 (MUC16), 뉴욕 식도 편평 세포 암종 1 (NY-ESO-1), 전립선 산성 포스파타제 (PAP), 프로그램화된 세포 사멸 수용체 1 (PD-1), 프로그램화된 세포 사멸 수용체 리간드 1 (PD-L1), 포스파티딜세린, 흑색종의 우선적으로 발현된 항원 (PRAME), 전립선 특이적 항원 (PSA), 단백질 티로신 키나제 7 (PTK7, 또한 결장 암종 키나제 4 (CCK4)로 공지됨), 수용체 티로신 키나제 오르판 수용체 1 (ROR1), 산란 인자 수용체 키나제, 시알릴-Tn, 정자-연관된 항원 9 (SPAG-9), 윤활막 육종 X-염색체 중단점 1 (SSX1), 수르비빈, 텔로머라제, T-세포 이뮤노글로불린 도메인 및 뮤신 도메인-3 (TIM-3), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) (예를 들어, VEGF-A), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), T-세포 활성화의 V-도메인 이뮤노글로불린-함유 서프레서 (VISTA), 윌름스 종양-1 (WT1), X 염색체 항원 1b (XAGE-1b), 5T4, 메소텔린, 글리피칸 3 (GPC3), 폴레이트 수용체 α (FRα), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), cMET, CD38, B 세포 성숙 항원 (BCMA), CD123, CLDN6, CLDN9, LRRC15, PRLR (프로락틴 수용체), RING 핑거 단백질 43 (RNF43), 우로플라킨-1 B (UPK1 B), 종양 괴사 인자 상과 구성원 9 (TNFSF9), 종양 괴사 인자 수용체 상과 구성원 21 (TNFSRF21), 골 형태형성 단백질 수용체 유형-1B (BMPR1B), 크링글 도메인-함유 막횡단 단백질 2 (KREMEN2), 델타-유사 단백질 3 (DLL3), 시글렉7 및 시글렉9로부터 선택되는 암 항원에 결합하는 항체로부터 유래될 수 있다. 추가의 예시적인 암 항원으로는 암 줄기 세포 상에 발견되는 것들, 예를 들어, SSEA3, SSEA4, TRA-1-60, TRA-1-81, SSEA1, CD133 (AC133), CD90 (Thy-1), CD326 (EpCAM), 크립토-1 (TDGF1), PODXL-1 (포도칼릭신-유사 단백질 1), ABCG2, CD24, CD49f (인테그린 α6), Notch2, CD146 (MCAM), CD10 (네프릴리신), CD117 (c-KIT), CD26 (DPP-4), CXCR4, CD34, CD271, CD13 (알라닌 아미노펩티다제), CD56 (NCAM), CD105 (엔도글린), LGR5, CD114 (CSF3R), CD54 (ICAM-1), CXCR1, 2, TIM-3 (HAVCR2), CD55 (DAF), DLL4 (델타-유사 리간드 4), CD20 (MS4A1), 및 CD96을 들 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 개시된 융합 단백질 중 1종 이상을 함유하는 항체 접합체를 제공한다. 달리 지시되지 않는다면, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체 접합체"는 추가의 기능적 모이어티에 접합된 (예를 들어, 공유적으로 커플링된), 항원-결합 활성 및/또는 Fc 수용체-결합 활성을 포함하는 항체, 또는 그의 기능적 단편을 지칭하는 것으로 이해된다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 기능적 항체 단편은 시알리다제 효소, 예를 들어, 본원에 개시된 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제 효소에 접합된다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 단일 폴리펩티드 쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 공유적으로 또는 비-공유적으로 함께 회합되어 다량체성 복합체, 예를 들어, 이량체성, 삼량체성 또는 사량체성 복합체를 생성하는 2, 3, 4개 이상의 폴리펩티드 쇄를 포함한다.
표 1은 본 발명에 따라 사용하기에 적합한 항체 및 항체-약물 접합체, 항체 또는 항체-약물 접합체에 의해 결합된 항원, 및 특정 항체에 대해, 항체 또는 항체-약물 접합체에 의해 표적화되는 암의 유형을 나타낸다.
<표 1>
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
c. 링커
특정 실시양태에서, 융합 단백질의 시알리다제 부분은 융합 단백질의 항체 부분 (예를 들어, 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및/또는 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인)에 직접적으로 연결되거나 융합될 수 있다. 다른 실시양태에서, 시알리다제 부분은 링커에 의해 항체 부분에 공유적으로 결합될 수 있다.
링커는 1개 이상의 천연 아미노산, 시알리다제, 또는 그의 기능적 단편, 및 항체 부분 또는 단편과 커플링할 수 있으며, 여기서, 아미노산 (예를 들어, 시스테인 아미노산)은 부위-지정 돌연변이유발에 의해 도입될 수 있다. 링커는 1개 이상의 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 특정 상황에서, 예를 들어, 1개 이상의 술프히드릴 반응성 기 (예를 들어, 말레이미드)를 함유하는 링커는 천연 발생 시스테인 잔기이거나, 부위-특이적 돌연변이유발의 생성물인 시알리다제 부분 또는 항체 부분에서 시스테인을 공유적으로 연결할 수 있다.
링커는 절단가능한 링커 또는 비-절단가능한 링커일 수 있다. 임의로 또는 추가적으로, 링커는 가요성 링커 또는 비가요성 링커일 수 있다.
링커는 시알리다제 및 항체 부분이 서로로부터 입체 장해 없이 연결되는 것을 허용하도록 충분히 긴 길이 및 융합 단백질의 의도된 활성을 보유하도록 충분히 짧은 길이여야 한다. 링커는 바람직하게는 융합 단백질의 불안정성을 회피하거나 최소화하도록 충분히 친수성이다. 링커는 바람직하게는 융합 단백질의 불용성을 회피하거나 최소화하도록 충분히 친수성이다. 링커는 융합 단백질이 생체내에서 작동적인 것임을 허용하도록 생체내에서 충분히 안정해야 한다 (예를 들어, 이는 혈청, 효소 등에 의해 절단되지 않음).
링커는 약 1 옹스트롬 (Å) 내지 약 150 Å 길이, 또는 약 1 Å 내지 약 120 Å 길이, 또는 약 5 Å 내지 약 110 Å 길이, 또는 약 10 Å 내지 약 100 Å 길이일 수 있다. 링커는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 27, 30 또는 그 초과의 옹스트롬 길이 초과 및/또는 약 110, 100, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31 또는 그 미만의 Å 길이 미만일 수 있다. 더욱이, 링커는 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 및 120 Å 길이일 수 있다.
특정 실시양태에서, 링커는 융합 단백질의 시알리다제 부분을 융합 단백질의 항체 부분 (예를 들어, 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및/또는 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인)에 연결하거나 융합시키는 폴리펩티드 링커를 포함한다. 예를 들어, 항체 부분에 직접적으로 또는 간접적으로 (예를 들어, 아미노산 함유 링커를 통해) 연결된 시알리다제 부분을 코딩하는 유전자는 통상적인 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성되고 발현될 수 있음이 고려된다. 예를 들어, 시알리다제 부분의 아미노 말단은 항체 부분의 경쇄 또는 중쇄 중 어느 하나의 카르복시 말단에 연결될 수 있다. 예를 들어, Fab 단편에 대해, 시알리다제의 아미노 말단 또는 카르복시 말단은 항체 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)에 연결될 수 있다. 링커가 채용되는 경우, 링커는 친수성 아미노산 잔기, 예컨대 Gln, Ser, Gly, Glu, Pro, His 및 Arg를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 링커는 1 내지 25개의 아미노산 잔기, 1 내지 20개의 아미노산 잔기, 2 내지 15개의 아미노산 잔기, 3 내지 10개의 아미노산 잔기, 3 내지 7개의 아미노산 잔기, 4 내지 25개의 아미노산 잔기, 4 내지 20개의 아미노산 잔기, 4 내지 15개의 아미노산 잔기, 4 내지 10개의 아미노산 잔기, 5 내지 25개의 아미노산 잔기, 5 내지 20개의 아미노산 잔기, 5 내지 15개의 아미노산 잔기, 또는 5 내지 10개의 아미노산 잔기를 함유하는 펩티드이다. 예시적인 링커로는 글리신 및 세린-풍부 링커, 예를 들어, (GlyGlyPro)n, 또는 (GlyGlyGlyGlySer)n (여기서, n은 1 내지 5임)을 들 수 있다. 특정 실시양태에서, 링커는 (Gly4Ser)2이다. 추가의 예시적인 링커 서열은 예를 들어, 문헌 [George et al. (2003) PROTEIN ENGINEERING 15:871-879], 및 미국 특허 제5,482,858호 및 제5,525,491호에 개시되어 있다.
d. 항체 접합체
본 발명은 또한 본원에 개시된 융합 단백질을 포함하는 항체 접합체를 제공한다. 항체 접합체는 단일 폴리펩티드 쇄 (즉, 본원에 개시된 융합 단백질)를 포함할 수 있거나, 항체 접합체는 추가의 폴리펩티드 쇄 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 추가의 폴리펩티드 쇄)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 접합체는 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제 효소 및 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드 (융합 단백질), 및 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함할 수 있으며, 여기서, 예를 들어, 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄는 함께 단일 항원-결합 부위를 한정한다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 단일 시알리다제를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체 접합체는 1개 초과의 (예를 들어, 2개의) 시알리다제를 포함할 수 있다. 1개 초과의 시알리다제가 포함되는 경우, 시알리다제는 동일하거나 상이할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 단일 항원-결합 부위를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체 접합체는 1개 초과의 (예를 들어, 2개의) 항원-결합 부위를 포함할 수 있다. 2개의 항원-결합 부위가 사용되는 경우, 이들은 동일하거나 상이할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 이뮤노글로불린 Fc 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 1 또는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄, 또는 그의 기능적 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 1 또는 2개의 이뮤노글로불린 경쇄, 또는 그의 기능적 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 접합체는 이뮤노글로불린 중쇄 또는 이뮤노글로불린 경쇄의 N- 또는 C-말단에 융합된 시알리다제를 포함한다.
도 9는 1개 이상의 시알리다제 효소를 함유하는 예시적인 항체 접합체 구축물을 도시한다. 예를 들어, 도 9a에서, 제1 항원-결합 부위는 10으로 표시되고, 제2 항원-결합 부위는 20으로 표시되고, 시알리다제는 30으로 표시되고, Fab는 40으로 표시된다. 도 9a 내지 9i에 도시된 구축물의 각각에서, Fc는 임의로 예를 들어 도 9b에서 50에 의해 표시된 바와 같이, 예를 들어 놉-인투-홀 (Knobs-into-Holes) 유형 기술을 사용하여 일부 방식으로 변형될 수 있음이 이해된다. 도 9 전반에 걸쳐 유사한 구조는 유사한 개략적 제시에 의해 표시된다.
도 9a는 제1 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; 제1 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드; 제2 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제3 폴리펩티드; 및 제2 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제4 폴리펩티드를 포함하는 항체 접합체 구축물을 도시한다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제3 및 제4 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제2 및 제3 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 10으로 표시된 바와 같은 제1 항원-결합 부위를 한정하고, 제3 폴리펩티드 및 제4 폴리펩티드는 함께 20으로 표시된 바와 같은 제2 항원-결합 부위를 한정한다. 30으로 표시된 바와 같은 시알리다제 효소는 제1 및 제2 이뮤노글로불린 경쇄 또는 제1 및 제2 이뮤노글로불린 중쇄의 N- 또는 C-말단에 접합될 수 있다.
도 9b는 제1 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; 제1 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드; 제2 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제3 폴리펩티드; 및 제2 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제4 폴리펩티드를 포함하는 항체 접합체 구축물을 도시한다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제3 및 제4 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제2 및 제3 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 제1 항원-결합 부위를 한정하고, 제3 폴리펩티드 및 제4 폴리펩티드는 함께 제2 항원-결합 부위를 한정한다. 시알리다제 효소는 제1 이뮤노글로불린 경쇄 또는 제1 이뮤노글로불린 중쇄의 N- 또는 C-말단에 접합될 수 있다.
도 9c는 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 제3 폴리펩티드를 포함하는 항체 접합체 구축물을 도시한다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제2 및 제3 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 항원-결합 부위를 한정한다. 시알리다제 효소는 제1 이뮤노글로불린 경쇄 또는 제1 이뮤노글로불린 중쇄의 N- 또는 C-말단에 접합될 수 있다.
도 9d는 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및 제1 시알리다제 효소를 포함하는 제3 폴리펩티드를 포함하는 항체 접합체 구축물을 도시한다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제2 및 제3 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 제3 폴리펩티드는 N- → C-말단 배향으로 시알리다제 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 항원-결합 부위를 한정한다. 임의적 제2 시알리다제 효소는 제1 이뮤노글로불린 경쇄 또는 제1 이뮤노글로불린 중쇄의 N- 또는 C-말단에 접합될 수 있다.
도 9e는 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및 제1 시알리다제 효소를 포함하는 제3 폴리펩티드를 포함하는 항체 접합체 구축물을 도시한다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제2 및 제3 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 제3 폴리펩티드는 N- → C-말단 배향으로 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및 시알리다제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 항원-결합 부위를 한정한다. 임의적 제2 시알리다제 효소는 제1 이뮤노글로불린 경쇄 또는 제1 이뮤노글로불린 중쇄의 N- 또는 C-말단에 접합될 수 있다.
도 9f는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 제1 폴리펩티드, 및 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하는 항체 접합체 구축물을 도시한다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 시알리다제 효소는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 또는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 접합될 수 있다. 임의적 제2 시알리다제 효소는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 또는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 N- 또는 C-말단에 접합될 수 있다.
도 9g는 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하는 항체 접합체 구축물을 도시한다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 항원-결합 부위를 한정한다. 시알리다제 효소는 이뮤노글로불린 경쇄 또는 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역의 N- 또는 C-말단에 접합될 수 있다.
도 9h는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 제1 폴리펩티드, 및 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하는 항체 접합체 구축물을 도시한다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 시알리다제 효소는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 N-말단에 접합될 수 있다. 임의적 제2 시알리다제 효소는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 N-말단에 각각 접합될 수 있다. 단일 쇄 가변 단편 (scFv)은 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 C-말단에 접합될 수 있다. 임의적 제2 단일 쇄 가변 단편 (scFv)은 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 C-말단에 각각 접합될 수 있다.
도 9i는 각각의 scFv가 이뮤노글로불린 항원 결합 단편, 예를 들어, Fab로 대체된 것을 제외하고는 도 9h에 도시된 것들과 유사한 항체 접합체 구축물을 도시한다. 예를 들어, 도 9i는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 제1 폴리펩티드, 및 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함하는 항체 접합체 구축물을 도시한다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 시알리다제 효소는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 N-말단에 접합될 수 있다. 임의적 제2 시알리다제 효소는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 N-말단에 각각 접합될 수 있다. 항체 단편 (Fab)은 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 C-말단에 접합되거나 융합될 수 있다. 임의적 제2 항체 단편 (Fab)은 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인의 C-말단에 각각 접합되거나 융합될 수 있다. 융합물의 경우, Fc 도메인의 C 말단은 이뮤노글로불린 항원 결합 단편을 한정하는 제1 폴리펩티드 쇄에 (결합 또는 아미노산 링커에 의해) 연결된다. 단일 가변 영역에 의해 한정되는 항원 결합 부위를 갖는 항체의 경우, 이는 표적 항원에 대한 결합 친화도를 부여하는 데 충분할 수 있다. 다른 예에서, 예를 들어, 인간 항체의 경우, 이뮤노글로불린 항원 결합 단편을 한정하는 제1 폴리펩티드 쇄는 이뮤노글로불린 항원 결합 단편을 한정하는 제2 폴리펩티드 쇄에 접합될 (예를 들어, 디술피드 결합을 통해, 예를 들어, 공유적으로 접합될) 수 있으며, 거기서 2개의 항원 결합 단편은 함께 표적 항원을 결합시키기 위한 항원 결합 부위를 한정한다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 제1 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; 제1 이뮤노글로불린 중쇄 및 제1 시알리다제를 포함하는 제2 폴리펩티드; 제2 이뮤노글로불린 중쇄 및 제2 시알리다제를 포함하는 제3 폴리펩티드; 및 제2 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제4 폴리펩티드를 포함한다. 이 실시양태의 예는 도 10a에 나타내어진다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제3 및 제4 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제2 및 제3 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 제1 항원-결합 부위를 한정하고, 제3 폴리펩티드 및 제4 폴리펩티드는 함께 제2 항원-결합 부위를 한정한다. 특정 실시양태에서, 제2 및 제3 폴리펩티드는 N- → C-말단 배향으로 각각 제1 및 제2 이뮤노글로불린 중쇄 및 제1 및 제2 시알리다제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 및 제3 폴리펩티드는 N- → C-말단 배향으로 각각 제1 및 제2 시알리다제 및 제1 및 제2 이뮤노글로불린 중쇄를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드; 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및 시알리다제를 포함하는 제3 폴리펩티드를 포함한다. 이 실시양태의 예는 도 10b에 나타내어진다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있고, 제2 및 제3 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 함께 항원-결합 부위를 한정한다. 특정 실시양태에서, 제3 폴리펩티드는 N- → C-말단 배향으로 시알리다제 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인 또는 N- → C-말단 배향으로 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및 시알리다제를 포함한다.
특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 49와 적어도 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％ 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50의 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 50과 적어도 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％ 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 63, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 또는 서열식별번호: 79의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 63, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 또는 서열식별번호: 79와 적어도 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％ 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제3 폴리펩티드는
Figure pct00006
(서열식별번호: 101)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, X1은 Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Val, 또는 존재하지 않고, X2는 Ala 또는 Lys이고, X3은 Asn 또는 Leu이고, X4는 Phe, Trp, Tyr 또는 Val이고, X5는 Ala, Cys, Ile, Ser, 또는 Val이고, X6은 Arg, Ile, 또는 Lys이고, X7은 Ala, Cys, Leu, 또는 Val이고, X8은 Glu 또는 Lys이고, X9는 Cys 또는 Val이고, X10은 Lys 또는 Val이고, X11은 Ala, Cys, Ser, 또는 Val이고, X12는 Cys, Leu, 또는 Val이다.
특정 실시양태에서, 제3 폴리펩티드는
Figure pct00007
(서열식별번호: 92)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, X1은 Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Val, 또는 존재하지 않고, X2는 Phe, Trp, Tyr 또는 Val이고, X3은 Arg, Ile, 또는 Lys이고, X4는 Ala, Cys, Ser, 또는 Val이다. 특정 실시양태에서, X1은 Ala, Asp, Met, 또는 존재하지 않고, X2는 Tyr 또는 Val이고, X3은 Ile 또는 Lys이고, X4는 Ala 또는 Cys이다.
특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49를 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50을 포함하고, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 51을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49를 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50을 포함하고, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 52를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49를 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50을 포함하고, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 53을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49를 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50을 포함하고, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 54를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49를 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50을 포함하고, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 63을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49를 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50을 포함하고, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 76을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49를 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50을 포함하고, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 77을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49를 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50을 포함하고, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 78을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 49를 포함하고, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 50을 포함하고, 제3 폴리펩티드는 서열식별번호: 79를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 제1 시알리다제, 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제1 단일 쇄 가변 단편 (scFv) (또한, scFv는 이뮤노글로불린 항원 결합 단편, 예를 들어, Fab 단편의 제1 폴리펩티드 쇄에 의해 대체될 수 있음이 이해됨)을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및 제2 시알리다제, 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제2 단일 쇄 가변 단편 (scFv) (또한, scFv는 이뮤노글로불린 항원 결합 단편, 예를 들어, Fab 단편의 제2 폴리펩티드 쇄에 의해 대체될 수 있음이 이해됨)을 포함하는 제2 폴리펩티드를 포함한다. 이 실시양태의 예는 도 10c에 나타내어진다. 제1 및 제2 폴리펩티드는 함께 공유적으로 연결될 수 있다. 공유 연결은 디술피드 결합일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제1 scFv는 제1 항원-결합 부위를 한정하고, 제2 scFv는 제2 항원-결합 부위를 한정한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 N- → C-말단 배향으로 제1 시알리다제, 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제1 scFv를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 N- → C-말단 배향으로 제1 scFv, 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제1 시알리다제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 N- → C-말단 배향으로 제2 시알리다제, 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제2 scFv를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 N- → C-말단 배향으로 제2 scFv, 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제2 시알리다제를 포함한다.
특정 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75와 적어도 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％ 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75와 적어도 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％ 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 폴리펩티드는
Figure pct00008
(서열식별번호: 102)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, X1은 Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Val, 또는 존재하지 않고, X2는 Ala 또는 Lys이고, X3은 Asn 또는 Leu이고, X4는 Phe, Trp, Tyr 또는 Val이고, X5는 Ala, Cys, Ile, Ser, 또는 Val이고, X6은 Arg, Ile, 또는 Lys이고, X7은 Ala, Cys, Leu, 또는 Val이고, X8은 Glu 또는 Lys이고, X9는 Cys 또는 Val이고, X10은 Lys 또는 Val이고, X11은 Ala, Cys, Ser, 또는 Val이고, X12는 Cys, Leu, 또는 Val이다.
특정 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 폴리펩티드는
Figure pct00009
(서열식별번호: 93)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, X1은 Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Val, 또는 존재하지 않고, X2는 Phe, Trp, Tyr 또는 Val이고, X3은 Arg, Ile, 또는 Lys이고, X4는 Ala, Cys, Ser, 또는 Val이다. 특정 실시양태에서, X1은 Ala, Asp, Met, 또는 존재하지 않고, X2는 Tyr 또는 Val이고, X3은 Ile 또는 Lys이고, X4는 Ala 또는 Cys이다.
특정 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 43을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 44를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 45를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 46을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 47을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 48을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 74를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 75를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 약 135 kDa 내지 약 165 kDa, 예를 들어, 약 140 kDa의 분자량을 갖는다. 다른 실시양태에서, 항체 접합체는 약 215 kDa 내지 약 245 kDa, 예를 들어, 약 230 kDa의 분자량을 갖는다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체는 각각 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 2개의 폴리펩티드를 포함하고, 제1 폴리펩티드는 제2 폴리펩티드와의 이종이량체화를 위해 "놉" 돌연변이, 예를 들어, T366Y, 또는 "홀" 돌연변이, 예를 들어, Y407T 중 어느 하나를 갖고, 제2 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드와의 이종이량체화를 위해 각각 "놉" 돌연변이, 예를 들어, T366Y, 또는 "홀" 돌연변이, 예를 들어, Y407T 중 어느 하나를 갖는다 (EU 넘버링에 따른 잔기 번호, Kabat, E.A., et al. (1991) 상기 문헌). 예를 들어, 특정 실시양태에서, 항체는 각각 인간 IgG1 Fc 도메인으로부터 유래된 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 2개의 폴리펩티드를 포함하고, 제1 폴리펩티드는 Y407T 돌연변이를 포함하고 (예를 들어, 제1 폴리펩티드는 서열식별번호: 32를 포함함), 제2 폴리펩티드는 T366Y 돌연변이를 포함한다 (예를 들어, 제2 폴리펩티드는 서열식별번호: 33을 포함함).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "다중특이적 항체"는 적어도 2개의 상이한 항원에 특이적으로 결합하는 항체, 즉, 적어도 2개의 상이한 항원에 결합하는 적어도 2개의 항원-결합 부위를 포함하는 항체를 의미하는 것으로 이해된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "이중특이적 항체"는 2개의 상이한 항원에 특이적으로 결합하는 항체, 즉, 그의 각각이 분리되고 별개의 항원에 결합하는 2개의 항원-결합 부위를 포함하는 항체를 의미하는 것으로 이해된다. 다시 말해서, 제1 결합 부위는 제1 항원에 결합하고, 제2 결합 부위는 제2의 상이한 항원에 결합한다. 다중특이적 또는 이중특이적 항체는 예를 들어, 인간 또는 인간화 항체일 수 있고/거나, 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab')2 이중특이적 항체)일 수 있다.
본 발명은 전통적인 수단, 예컨대 효소적 소화에 의해, 또는 재조합 기법에 의해 생성될 수 있는 항체 단편을 포함하는 항체 접합체를 포괄한다. 특정 항체 단편의 검토를 위해서는, [Hudson et al. (2003)] 상기 문헌을 참조한다.
특정 실시양태에서, 항체 접합체 또는 융합 단백질은 생물학적 변형제와 공유적으로 또는 비-공유적으로 회합될 수 있으며, 생물학적 변형제는 항체의 용해도를 향상시키거나, 결합 특이성을 증가시키거나, 면역원성 또는 독성을 감소시키거나, 항체의 약동학적 프로파일을 변형시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 생물학적 변형제는 그의 순환 반감기를 증가시키기 위해 항체의 분자량을 증가시키는 데 사용될 수 있다.
항체 접합체 또는 융합 단백질은 선형 또는 분지형 중합체를 포함할 수 있는 1개 이상의 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10개 이상의) 생물학적 변형제에 공유적으로 결합될 수 있음이 고려된다. 예시적인 생물학적 변형제로는 예를 들어, 다양한 중합체, 예컨대 미국 특허 제7,842,789호에 기재된 것들을 들 수 있다. 특히 유용한 것은 폴리알킬렌 에테르, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 그의 유도체 (예를 들어, 알콕시 폴리에틸렌 글리콜, 예를 들어, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 에톡시폴리에틸렌 글리콜 등); 폴리옥시에틸렌 및 폴리옥시프로필렌의 블록 공중합체 (플루로닉 (Pluronic)); 폴리메타크릴레이트; 카르보머; 및 당류 단량체, 예컨대 D-만노스, D- 및 L-갈락토스, 푸코스, 프룩토스, D-크실로스, L-아라비노스, 및 D-글루쿠론산을 포함하는 분지형 또는 비분지형 다당류이다.
다른 실시양태에서, 생물학적 변형제는 친수성 폴리비닐 중합체, 예컨대 폴리비닐 알콜 및 폴리비닐피롤리돈 (PVP)-유형 중합체일 수 있다. 생물학적 변형제는 관능화된 폴리비닐피롤리돈, 예를 들어, 중합체의 한 (또는 둘 다의) 말단 상에서 카르복시 또는 아민 관능화될 수 있다 (폴리머소스 (PolymerSource)로부터 이용가능한 바와 같음). 대안적으로, 생물학적 변형제는 폴리 N-(2-히드록시프로필)메타크릴아미드 (HPMA), 또는 관능화된 HPMA (아민, 카르복시 등), 폴리(N-이소프로필아크릴아미드) 또는 관능화된 폴리(N-이소프로필아크릴아미드)를 포함할 수 있다. 대안적으로, 생물학적 변형제는 폴리 N-(2-히드록시프로필)메타크릴아미드 (HPMA), 또는 관능화된 HPMA (아민, 카르복시 등), 폴리(N-이소프로필아크릴아미드) 또는 관능화된 폴리(N-이소프로필아크릴아미드)를 포함할 수 있다. 접합 전의 변형제는 수용성일 필요는 없지만, 바람직하게는 수용성지만, 최종 접합체는 수용성이어야 한다.
일반적으로, 생물학적 변형제는 약 2 kDa 내지 약 5 kDa, 약 2 kDa 내지 약 10 kDa, 약 2 kDa 내지 약 20 kDa, 약 2 kDa 내지 약 30 kDa, 약 2 kDa 내지 약 40 kDa, 약 2 kDa 내지 약 50 kDa, 약 2 kDa 내지 약 60 kDa, 약 2 kDa 내지 약 70 kDa, 약 2 kDa 내지 약 80 kDa, 약 2 kDa 내지 약 90 kDa, 약 2 kDa 내지 약 100 kDa, 약 2 kDa 내지 약 150 kDa, 약 5 kDa 내지 약 10 kDa, 약 5 kDa 내지 약 20 kDa, 약 5 kDa 내지 약 30 kDa, 약 5 kDa 내지 약 40 kDa, 약 5 kDa 내지 약 50 kDa, 약 5 kDa 내지 약 60 kDa, 약 5 kDa 내지 약 70 kDa, 약 5 kDa 내지 약 80 kDa, 약 5 kDa 내지 약 90 kDa, 약 5 kDa 내지 약 100 kDa, 약 5 kDa 내지 약 150 kDa, 약 10 kDa 내지 약 20 kDa, 약 10 kDa 내지 약 30 kDa, 약 10 kDa 내지 약 40 kDa, 약 10 kDa 내지 약 50 kDa, 약 10 kDa 내지 약 60 kDa, 약 10 kDa 내지 약 70 kDa, 약 10 kDa 내지 약 80 kDa, 약 10 kDa 내지 약 90 kDa, 약 10 kDa 내지 약 100 kDa, 약 10 kDa 내지 약 150 kDa, 약 20 kDa 내지 약 30 kDa, 약 20 kDa 내지 약 40 kDa, 약 20 kDa 내지 약 50 kDa, 약 20 kDa 내지 약 60 kDa, 약 20 kDa 내지 약 70 kDa, 약 20 kDa 내지 약 80 kDa, 약 20 kDa 내지 약 90 kDa, 약 20 kDa 내지 약 100 kDa, 약 20 kDa 내지 약 150 kDa, 약 30 kDa 내지 약 40 kDa, 약 30 kDa 내지 약 50 kDa, 약 30 kDa 내지 약 60 kDa, 약 30 kDa 내지 약 70 kDa, 약 30 kDa 내지 약 80 kDa, 약 30 kDa 내지 약 90 kDa, 약 30 kDa 내지 약 100 kDa, 약 30 kDa 내지 약 150 kDa, 약 40 kDa 내지 약 50 kDa, 약 40 kDa 내지 약 60 kDa, 약 40 kDa 내지 약 70 kDa, 약 40 kDa 내지 약 80 kDa, 약 40 kDa 내지 약 90 kDa, 약 40 kDa 내지 약 100 kDa, 약 40 kDa 내지 약 150 kDa, 약 50 kDa 내지 약 60 kDa, 약 50 kDa 내지 약 70 kDa, 약 50 kDa 내지 약 80 kDa, 약 50 kDa 내지 약 90 kDa, 약 50 kDa 내지 약 100 kDa, 약 50 kDa 내지 약 150 kDa, 약 60 kDa 내지 약 70 kDa, 약 60 kDa 내지 약 80 kDa, 약 60 kDa 내지 약 90 kDa, 약 60 kDa 내지 약 100 kDa, 약 60 kDa 내지 약 150 kDa, 약 70 kDa 내지 약 80 kDa, 약 70 kDa 내지 약 90 kDa, 약 70 kDa 내지 약 100 kDa, 약 70 kDa 내지 약 150 kDa, 약 80 kDa 내지 약 90 kDa, 약 80 kDa 내지 약 100 kDa, 약 80 kDa 내지 약 150 kDa, 약 90 kDa 내지 약 100 kDa, 약 90 kDa 내지 약 150 kDa, 또는 약 100 kDa 내지 약 150 kDa의 분자량을 가질 수 있다.
항체 접합체 또는 융합 단백질은 약 10개 이하의 중합체 분자 (예를 들어, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개)에 부착되며, 각각의 중합체 분자는 적어도 약 20,000 D, 또는 적어도 약 30,000 D, 또는 적어도 약 40,000 D의 분자량을 가짐이 고려된다.
다양한 중합체는 생물학적 변형제로서 사용될 수 있지만, 본원에 기재된 항체 접합체 또는 융합 단백질은 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 중합체에 부착될 수 있음이 고려된다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 접합체 또는 융합 단백질은 적어도 약 20,000 D의 실제 MW를 갖는 적어도 1개의 PEG에 공유적으로 부착된다. 또다른 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 접합체 또는 융합 단백질은 적어도 약 30,000 D의 실제 MW를 갖는 적어도 1개의 PEG에 공유적으로 부착된다. 또다른 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 접합체 또는 융합 단백질은 적어도 약 40,000 D의 실제 MW를 갖는 적어도 1개의 PEG에 공유적으로 부착된다. 특정 실시양태에서, PEG는 메톡시PEG(5000)-숙신이미딜프로피오네이트 (mPEG-SPA), 메톡시PEG(5000)-숙신이미딜숙시네이트 (mPEG-SS)이다. 이러한 PEGS는 넥타 테라퓨틱스 (Nektar Therapeutics) 또는 선바이오웨스트 (SunBiowest)로부터 시판된다.
생물학적 변형제에 대한 항체 접합체 또는 융합 단백질 상의 부착 부위는 리신 잔기 상에 발견되는 N-말단 아미노 기 및 엡실론 아미노 기, 뿐만 아니라 다른 아미노, 이미노, 카르복실, 술프히드릴, 히드록실 또는 다른 친수성 기를 포함한다. 중합체는 화학을 사용하여 및 관련 기술분야에서 사용되는 다중기능적 (통상적으로 이중기능적) 가교제의 공지된 사용과 함께 또는 없이 항체 접합체 또는 융합 단백질에 직접적으로 공유적으로 결합될 수 있다. 예를 들어, 술프히드릴 기는 말레이미도-치환된 PEG (예를 들어 알콕시-PEG 아민 더하기 술포숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트, 또는 쉬어워터 폴리머스, 인크. (Shearwater Polymers, Inc.), 미국 알라바마주 헌츠빌로부터 시판되는 PEG-말레이미드)에 커플링시킴으로써 유도체화될 수 있다.
III. 재조합 인간 시알리다제, 융합 단백질, 또는 항체 접합체를 제조하는 방법
재조합 인간 시알리다제, 융합 단백질, 예를 들어, 본원에 개시된 것들, 항체, 또는 항체 접합체, 예를 들어, 본원에 개시된 것들을 제조하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 DNA 분자는 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법론에 의해 합성될 수 있다. 예를 들어, 항체의 서열은 적절한 합성 핵산 프라이머를 사용하여, 통상적인 혼성화 기법 또는 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 기법에 의해 하이브리도마로부터 클로닝될 수 있다. 관심의 가변 영역을 코딩하는 생성된 DNA 분자는 예를 들어, 불변 영역 코딩 서열, 및 발현 제어 서열을 비롯한 다른 적절한 뉴클레오티드 서열에 라이게이션되어, 바람직한 항체를 코딩하는 통상적인 유전자 발현 구축물 (즉, 발현 벡터)을 생성할 수 있다. 정의된 유전자 구축물의 제조는 관련 기술분야의 통상적인 기술 내이다.
바람직한 재조합 인간 시알리다제, 융합 단백질, 및/또는 항체 접합체를 코딩하는 핵산은 발현 벡터 내로 혼입될 (라이게이션될) 수 있으며, 이는 통상적인 형질감염 또는 형질전환 기법을 통해 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 예시적인 숙주 세포는 그렇지 않다면 IgG 단백질을 생산하지 않는 이. 콜라이 (E. coli) 세포, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 인간 배아 신장 293 (HEK 293) 세포, HeLa 세포, 아기 햄스터 신장 (BHK) 세포, 원숭이 신장 세포 (COS), 인간 간세포 암종 세포 (예를 들어, Hep G2), 및 골수종 세포이다. 형질전환된 숙주 세포는 숙주 세포가 이뮤노글로불린 경쇄 및/또는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 유전자를 발현하는 것을 허용하는 조건 하에서 성장될 수 있다.
구체적인 발현 및 정제 조건은 채용되는 발현 시스템에 따라 다양할 것이다. 예를 들어, 유전자가 이. 콜라이에서 발현되는 경우, 이는 먼저 조작된 유전자를 적합한 박테리아 프로모터, 예를 들어, Trp 또는 Tac, 및 원핵생물 신호 서열로부터 하류에 위치시킴으로써 발현 벡터 내로 클로닝된다. 발현된 단백질은 분비될 수 있다. 발현된 단백질은 굴절소체 또는 봉입체에 축적될 수 있으며, 이는 프렌치 프레스 또는 초음파처리에 의한 세포의 파괴 후에 수확될 수 있다. 그 후, 굴절소체는 가용화되고, 단백질은 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 재폴딩되고/거나 절단될 수 있다.
조작된 유전자가 진핵생물 숙주 세포, 예를 들어, CHO 세포에서 발현되는 경우, 이는 먼저 적합한 진핵생물 프로모터, 분비 신호, 폴리 A 서열, 및 정지 코돈을 함유하는 발현 벡터 내로 삽입된다. 임의로, 벡터 또는 유전자 구축물은 인핸서 및 인트론을 함유할 수 있다. 항체 또는 그의 부분을 포함하는 융합 단백질을 포함하는 실시양태에서, 발현 벡터는 임의로 중쇄 또는 경쇄의 전체 또는 일부가 발현되는 것을 가능하게 하는 불변 영역의 전부 또는 일부를 코딩하는 서열을 함유한다. 유전자 구축물은 통상적인 기법을 사용하여 진핵생물 숙주 세포 내로 도입될 수 있다.
숙주 세포는 시알리다제 및 VL 또는 VH 단편, VL-VH 이종이량체, VH-VL 또는 VL-VH 단일 쇄 폴리펩티드, 완전한 이뮤노글로불린 중쇄 또는 경쇄, 또는 그의 부분을 포함하는 재조합 인간 시알리다제 또는 융합 단백질 및/또는 항체 접합체를 발현하며, 이들의 각각은 또다른 기능 (예를 들어, 세포독성)을 갖는 모이어티에 부착될 수 있다. 융합 단백질 및/또는 항체 접합체를 포함하는 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 시알리다제 및 중쇄의 전체 또는 일부 (예를 들어, 중쇄 가변 영역) 또는 시알리다제 및 경쇄 (예를 들어, 경쇄 가변 영역)를 발현하는 폴리펩티드, 또는 중쇄 (예를 들어, 중쇄 가변 영역) 또는 경쇄 (예를 들어, 경쇄 가변 영역)의 전체 또는 일부를 발현하는 폴리펩티드를 발현하는 단일 벡터로 형질감염된다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 (a) 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드, 또는 (b) 전체 이뮤노글로불린 중쇄 및 전체 이뮤노글로불린 경쇄를 코딩하는 단일 벡터로 형질감염되며, 여기서, (a)에서 또는 (b)에서, 폴리펩티드는 또한 시알리다제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 1개 초과의 발현 벡터 (예를 들어, 임의로 그에 융합된 시알리다제를 포함하는 중쇄 또는 중쇄 가변 영역의 전체 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드를 발현하는 1개의 발현 벡터, 및 임의로 그에 융합된 시알리다제를 포함하는 경쇄 또는 경쇄 가변 영역의 전체 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드를 발현하는 또다른 발현 벡터)로 공동-형질감염된다.
시알리다제 또는 융합 단백질, 예를 들어, 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 융합 단백질을 포함하는 폴리펩티드는 폴리펩티드의 발현을 허용하는 조건 하에서 이러한 가변 영역을 코딩하는 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포를 성장시킴 (배양함)으로써 제조될 수 있다. 발현 후, 폴리펩티드는 수확되고, 관련 기술분야에 공지된 기법, 예를 들어, 친화성 태그, 예컨대 글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST) 또는 히스티딘 태그를 사용하여 정제되거나 단리될 수 있다.
융합 단백질 및/또는 항체 접합체가 제조되는 실시양태에서, 모노클로날 항체, Fc 도메인, 또는 항체의 항원-결합 도메인에 융합된 시알리다제는 (a) 완전한 또는 부분적 이뮤노글로불린 중쇄를 코딩하는 발현 벡터, 및 완전한 또는 부분적 이뮤노글로불린 경쇄를 코딩하는 별개의 발현 벡터; 또는 (b) 둘 다의 쇄 (예를 들어, 완전한 또는 부분적 중쇄 및 경쇄)를 코딩하는 단일 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포를 둘 다의 쇄의 발현을 허용하는 조건 하에서 성장시킴 (배양함)으로써 제조될 수 있다. 시알리다제는 쇄 중 1개 이상에 융합될 것이다. 무손상 융합 단백질 및/또는 항체 접합체는 수확되고, 관련 기술분야에 공지된 기법, 예를 들어, 단백질 A, 단백질 G, 친화성 태그, 예컨대 글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST) 또는 히스티딘 태그를 사용하여 정제되거나 단리될 수 있다. 단일 발현 벡터로부터 또는 2개의 별개의 발현 벡터로부터 중쇄 및 경쇄를 발현시키는 것은 관련 기술분야의 통상적인 기술 내이다.
특정 실시양태에서, 단백질, 예를 들어, 재조합 인간 시알리다제를 분비된 단백질로서 발현시키기 위해, 단백질의 천연 N-말단 신호 서열은 예를 들어, MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC (서열식별번호: 28)로 대체된다. 특정 실시양태에서, 단백질, 예를 들어, 재조합 인간 시알리다제를 분비된 단백질로서 발현시키기 위해, N-말단 신호 서열, 예를 들어, MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC (서열식별번호: 28)가 첨가된다. 추가의 예시적인 N-말단 신호 서열로는 인터류킨-2, CD-5, IgG 카파 경쇄, 트립시노겐, 혈청 알부민, 및 프로락틴으로부터의 신호 서열을 들 수 있다. 특정 실시양태에서, 단백질, 예를 들어, 재조합 인간 시알리다제를 분비된 단백질로서 발현시키기 위해, C 말단 리소좀 신호 모티프, 예를 들어, YGTL (서열식별번호: 29)이 제거된다.
항체 및 항체 단편의 항원성을 감소시키거나 제거하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 항체가 인간에게 투여되는 경우, 항체는 바람직하게는 인간에서 항원성을 감소시키거나 제거하기 위해 "인간화"된다. 바람직하게는, 각각의 인간화 항체는 그것이 유래된 비-인간화 마우스 항체와 항원에 대한 동일하거나 실질적으로 동일한 친화도를 갖는다.
한 인간화 접근법에서, 마우스 이뮤노글로불린 불변 영역이 인간 이뮤노글로불린 불변 영역으로 대체된 키메라 단백질이 생성된다. 예를 들어, 문헌 [Morrison et al.,1984, PROC. NAT. ACAD. SCI. 81:6851-6855], [Neuberger et al., 1984, NATURE 312:604-608]; 미국 특허 제6,893,625호 (로빈슨 (Robinson)); 제5,500,362호 (로빈슨); 및 제4,816,567호 (카빌리 (Cabilly))를 참조한다.
CDR 그래프팅으로 공지된 접근법에서, 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 CDR은 또다른 종으로부터의 프레임워크 내로 그래프팅된다. 예를 들어, 뮤린 CDR은 인간 FR 내로 그래프팅될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 CDR은 인간 FR 또는 컨센서스 인간 FR 내로 그래프팅된다. 컨센서스 인간 FR을 생성하기 위해, 몇몇 인간 중쇄 또는 경쇄 아미노산 서열로부터의 FR은 컨센서스 아미노산 서열을 확인하기 위해 정렬된다. CDR 그래프팅은 미국 특허 제7,022,500호 (퀸 (Queen)); 제6,982,321호 (윈터 (Winter)); 제6,180,370호 (퀸); 제6,054,297호 (카터 (Carter)); 제5,693,762호 (퀸); 제5,859,205호 (어데어 (Adair)); 제5,693,761호 (퀸); 제5,565,332호 (후겐붐 (Hoogenboom)); 제5,585,089호 (퀸); 제5,530,101호 (퀸); 문헌 [Jones et al. (1986) NATURE 321: 522-525]; [Riechmann et al. (1988) NATURE 332: 323-327]; [Verhoeyen et al. (1988) SCIENCE 239: 1534-1536]; 및 [Winter (1998) FEBS LETT 430: 92-94]에 기재되어 있다.
"초인간화 (SUPERHUAMANIZATION)™"로 지칭되는 접근법에서, 인간 CDR 서열은 인간화되는 마우스 항체의 그것에 대한 인간 CDR의 구조적 유사성에 기초하여, 인간 생식계열 유전자로부터 선택된다. 예를 들어, 미국 특허 제6,881,557호 (푸트 (Foote)); 및 문헌 [Tan et al., 2002, J. IMMUNOL. 169:1119-1125]을 참조한다.
면역원성을 감소시키는 다른 방법으로는 "재성형", "과키메라화", 및 "베니어링/재표면처리"를 들 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Vaswami et al., 1998, ANNALS OF ALLERGY, ASTHMA, & IMMUNOL. 81:105]; [Roguska et al., 1996, PROT. ENGINEER 9:895-904]; 및 미국 특허 제6,072,035호 (하드만 (Hardman))를 참조한다. 베니어링/재표면처리 접근법에서, 뮤린 항체에서의 표면 접근가능한 아미노산 잔기는 인간 항체에서 동일한 위치에서 보다 빈번히 발견되는 아미노산 잔기에 의해 대체된다. 이 유형의 항체 재표면처리는 예를 들어, 미국 특허 제5,639,641호 (페더슨 (Pedersen))에 기재되어 있다.
마우스 항체를 인간에서의 의학적 사용에 적합한 형태로 전환시키기 위한 또다른 접근법은 악티브맙 (ACTIVMAB)™ 기술 (백시넥스, 인크. (Vaccinex, Inc.), 미국 뉴욕주 로체스터)로 공지되어 있으며, 이는 포유동물 세포에서 항체를 발현시키는 우두 바이러스-기재 벡터를 포함한다. IgG 중쇄 및 경쇄의 높은 수준의 조합적 다양성이 생성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제6,706,477호 (조더러 (Zauderer)); 제6,800,442호 (조더러); 및 제6,872,518호 (조더러)를 참조한다. 마우스 항체를 인간에서의 사용에 적합한 형태로 전환시키기 위한 또다른 접근법은 칼로바이오스 파마슈티칼스, 인크. (KaloBios Pharmaceuticals, Inc.) (미국 캘리포니아주 팔로 알토)에 의해 상업적으로 실시되는 기술이다. 이 기술은 항체 선택을 위해 "에피토프 초점화된" 라이브러리를 생성하는 등록상표의 인간 "억셉터" 라이브러리의 사용을 포함한다. 마우스 항체를 인간에서의 사용에 적합한 형태로 변형시키기 위한 또다른 접근법은 휴먼 엔지니어링 (HUMAN ENGINEERING)™ 기술이며, 이는 소마 (유에스) 엘엘씨 (XOMA (US) LLC)에 의해 상업적으로 실시된다. 예를 들어, 국제 (PCT) 공개 제WO 93/11794호 및 미국 특허 제5,766,886호 (스투드니카 (Studnicka)); 제5,770,196호 (스투드니카); 제5,821,123호 (스투드니카); 및 제5,869,619호 (스투드니카)를 참조한다.
상기 접근법 중 임의의 것을 비롯한 임의의 적합한 접근법은 항체의 인간 면역원성을 감소시키거나 제거하는 데 사용될 수 있다.
또한, 마우스에서 완전 인간 항체를 생성하는 것이 가능하다. 임의의 비-인간 서열이 결여된 완전 인간 mAb는 예를 들어, 문헌 [Lonberg et al., NATURE 368:856-859, 1994]; [Fishwild et al., NATURE BIOTECHNOLOGY 14:845-851, 1996]; 및 [Mendez et al., NATURE GENETICS 15:146-156, 1997]에 언급된 기법에 의해 인간 이뮤노글로불린 트랜스제닉 마우스로부터 제조될 수 있다. 완전 인간 모노클로날 항체는 또한 예를 들어, 문헌 [Knappik et al., J. MOL. BIOL. 296:57-86, 2000]; 및 [Krebs et al., J. IMMUNOL. METH. 254:67-84 2001)에 언급된 기법에 의해 파지 제시 라이브러리로부터 제조되고 최적화될 수 있다.
본 발명은 전통적인 수단, 예컨대 효소적 소화에 의해, 또는 재조합 기법에 의해 생성될 수 있는 항체 단편을 포함하는 융합 단백질을 포괄한다. 특정 항체 단편의 검토를 위해서는, 문헌 [Hudson et al. (2003) NAT. MED. 9:129-134]을 참조한다.
항체 단편의 제조를 위한 다양한 기법이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질분해적 소화를 통해 유래되었다 (예를 들어, 문헌 [Morimoto et al. (1992) JOURNAL OF BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL METHODS 24:107-117]; 및 [Brennan et al. (1985) SCIENCE 229:81] 참조). 그러나, 이들 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해 직접적으로 제조될 수 있다. Fab, Fv 및 ScFv 항체 단편은 모두 이. 콜라이에서 발현되고, 그로부터 분비될 수 있으며, 따라서 다량의 이들 단편의 용이한 제조를 허용한다. 항체 단편은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 이. 콜라이로부터 직접적으로 회수되고, 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다 (Carter et al. (1992) BIO/TECHNOLOGY 10:163-167). 또다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접적으로 단리될 수 있다. 구제 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하는 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편은 미국 특허 제5,869,046호에 기재되어 있다. 항체 단편의 제조를 위한 다른 기법은 통상의 실시자에게 명백할 것이다. 특정 실시양태에서, 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다. 미국 특허 제5,571,894호 및 제5,587,458호를 참조한다.
이중특이적 항체를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 문헌 [Milstein and Cuello (1983) NATURE 305:537], 국제 (PCT) 공개 제WO93/08829호, 및 문헌 [Traunecker et al. (1991) EMBO J., 10:3655]을 참조한다. 이중특이적 항체를 생성하는 것의 추가의 상세사항에 대해서는, 예를 들어, 문헌 [Suresh et al. (1986) METHODS ENZYMOL. 121:210]을 참조한다. 이중특이적 항체는 가교된 또는 "이종접합체" 또는 "이종이량체" 항체를 포함한다. 예를 들어, 이종이량체에서 항체 중 하나는 아비딘에, 다른 것은 비오틴에 커플링될 수 있다. 이종이량체 항체는 임의의 편리한 가교 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 적합한 가교제는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 다수의 가교 기법과 함께, 미국 특허 제4,676,980호에 개시되어 있다.
이종이량체성 또는 비대칭 IgG-유사 분자의 예로는 하기 기술로 또는 하기 형식을 사용하여 얻어진 것들을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다: 트리오맙 (Triomab)/콰드로마 (Quadroma), 놉-인투-홀, 크로스맙스 (CrossMabs), 정전기적으로-매칭된 항체, LUZ-Y, 가닥 교환 조작된 도메인 (Strand Exchange Engineered Domain) 체, 비클로닉 (Biclonic) 및 듀오바디 (DuoBody).
항체 단편 (예를 들어, F(ab) 및 F(ab')2 단편)을 사용하는 것의 이점은 항체의 Fc 부분 및 세포 (예컨대 대식세포, 수지상 세포, 호중구, NK 세포 및 B 세포) 상의 Fc 수용체 사이의 비-특이적 결합의 제거를 포함한다. 또한, 이들은 그들의 보다 작은 크기로 인해 조직을 보다 효율적으로 통과할 수 있다.
이종이량체성 항체, 또는 비대칭 항체는 보다 큰 유연성 및 항체 아암에 다양한 약물을 부착시키기 위한 새로운 형식을 허용한다. 이종이량체성 항체를 생성하기 위한 일반적 형식 중 하나는 "놉-인투-홀" 형식이다. 이 형식은 항체에서 불변 영역의 중쇄 부분에 특이적이다. "놉" 부분은 작은 아미노산을 "홀" 내로 적합화되는 보다 큰 것으로 대체함으로써 조작되며, 이는 큰 아미노산을 보다 작은 것으로 대체함으로써 조작된다. "놉"을 "홀"에 연결시키는 것은 각각의 쇄 사이의 디술피드 결합이다. "놉-인투-홀" 형상은 항체 의존성 세포 매개 세포독성을 용이하게 한다. 단일 쇄 가변 단편 (scFv)은 짧은 링커 펩티드를 통해 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인에 연결된다. 링커는 그것에게 보다 유연성을 제공하는 글리신, 및 그것에게 특이성을 제공하는 세린/트레오닌이 풍부하다. 2개의 상이한 scFv 단편은 힌지 영역을 통해 중쇄의 불변 도메인 또는 경쇄의 불변 도메인에 함께 연결될 수 있다. 이는 항체에게 이중특이성을 제공하며, 이는 2개의 상이한 항원의 결합 특이성을 허용한다. "놉-인투-홀" 형식은 이종이량체 형성을 향상시키지만, 동종이량체 형성을 억제하지 않는다.
이종이량체화를 뒷받침하기 위한 몇몇 접근법은 예를 들어 국제 (PCT) 공개 제WO96/27011호, 제WO98/050431호, 제WO2007/110205호, 제WO2007/147901호, 제WO2009/089004호, 제WO2010/129304호, 제WO2011/90754호, 제WO2011/143545호, 제WO2012/058768호, 제WO2013/157954호, 및 제WO2013/096291호, 및 유럽 특허 공개 제EP1870459호에 기재되었다. 전형적으로, 관련 기술분야에 공지된 접근법에서, 제1 중쇄의 CH3 도메인 및 제2 중쇄의 CH3 도메인은 둘 다 하나의 조작된 CH3 도메인을 포함하는 중쇄가 동일한 구조의 또다른 중쇄와 더 이상 동종이량체화할 수 없도록 상보적 방식으로 조작된다 (예를 들어 CH3-조작된 제1 중쇄는 또다른 CH3-조작된 제1 중쇄와 더 이상 동종이량체화할 수 없고; CH3-조작된 제2 중쇄는 또다른 CH3-조작된 제2 중쇄와 더 이상 동종이량체화할 수 없음). 그에 의해 하나의 조작된 CH3 도메인을 포함하는 중쇄는 상보적 방식으로 조작된 CH3 도메인을 포함하는 또다른 중쇄와 이종이량체화하도록 강제된다. 그 결과, 제1 중쇄의 CH3 도메인 및 제2 중쇄의 CH3 도메인은, 제1 중쇄 및 제2 중쇄가 이종이량체화하도록 강제되는 반면, 제1 중쇄 및 제2 중쇄가 더 이상 동종이량체화할 수 없도록 (예를 들어, 입체적 이유로), 아미노산 치환에 의해 상보적 방식으로 조작된다.
IV. 제약 조성물
치료 용도를 위해, 재조합 인간 시알리다제 또는 그의 융합 단백질 및/또는 항체 접합체는 바람직하게는 제약상 허용되는 담체와 조합된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "제약상 허용되는"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 합당한 유익/위험 비와 어울리는, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "제약상 허용되는 담체"는 합당한 유익/위험 비와 어울리는, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 완충제, 담체, 및 부형제를 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 표준 제약 담체 중 임의의 것, 예컨대 포스페이트 완충 염수 용액, 물, 에멀젼 (예를 들어, 예컨대 유/수 또는 수/유 에멀젼), 및 다양한 유형의 습윤화제를 포함한다. 조성물은 또한 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있다. 담체, 안정화제 및 보조제의 예에 대해서는, 예를 들어, 문헌 [Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975]]을 참조한다. 제약상 허용되는 담체는 제약 투여와 혼화성인 완충제, 용매, 분산 매질, 코팅, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 제약 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제의 사용은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 예를 들어, 조성물의 pH, 삼투성, 점도, 투명성, 색상, 등장성, 냄새, 멸균성, 안정성, 용해 또는 방출의 속도, 흡착 또는 침투를 변형시키거나, 유지하거나, 보존하기 위한 제형화 물질을 함유할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 적합한 제형화 물질로는 아미노산 (예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신); 항미생물제; 항산화제 (예컨대 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 완충제 (예컨대 보레이트, 비카르보네이트, 트리스 (Tris)-HCl, 시트레이트, 포스페이트 또는 다른 유기산); 벌크화제 (예컨대 만니톨 또는 글리신); 킬레이트화제 (예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA)); 복합화제 (예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-시클로덱스트린 또는 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린); 충전제; 단당류; 이당류; 및 다른 탄수화물 (예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질 (예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린); 착색제, 향미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체 (예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩티드; 염-형성 반대이온 (예컨대 나트륨); 보존제 (예컨대 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알콜, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 과산화수소); 용매 (예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알콜 (예컨대 만니톨 또는 소르비톨); 현탁화제; 계면활성제 또는 습윤화제 (예컨대 플루로닉, PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 향상제 (예컨대 수크로스 또는 소르비톨); 긴장성 향상제 (예컨대 알칼리 금속 할라이드, 바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨, 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 제약 보조제를 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다 (문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing Company, 1990] 참조).
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 나노입자, 예를 들어, 중합체성 나노입자, 리포솜, 또는 미셀을 함유할 수 있다 (문헌 [Anselmo et al. (2016) BIOENG. TRANSL. MED. 1: 10-29] 참조).
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 지속된- 또는 제어된-전달 제형을 함유할 수 있다. 지속된- 또는 제어된-전달 수단, 예컨대 리포솜 담체, 생체-침식성 미세입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사를 제형화하기 위한 기법은 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 지속-방출 제제는 예를 들어, 성형품, 예를 들어, 필름, 또는 마이크로캡슐의 형태의 다공성 중합체성 미세입자 또는 반투과성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다. 지속 방출 매트릭스는 폴리에스테르, 히드로겔, 폴리락티드, L-글루탐산 및 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 폴리 (2-히드록시에틸-메타크릴레이트), 에틸렌 비닐 아세테이트, 또는 폴리-D(-)-3-히드록시부티르산을 포함할 수 있다. 지속 방출 조성물은 또한 관련 기술분야에 공지된 몇몇 방법 중 임의의 것에 의해 제조될 수 있는 리포솜을 포함할 수 있다.
본원에 개시된 재조합 인간 시알리다제, 재조합 인간 시알리다제 융합 단백질, 또는 항체 접합체를 함유하는 제약 조성물은 투여량 단위 형태로 제공될 수 있으며, 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 제약 조성물은 그의 의도된 투여 경로와 혼화성이도록 제형화되어야 한다. 투여 경로의 예는 정맥내 (IV), 진피내, 흡입, 경피, 국소, 경점막, 경막내 및 직장 투여이다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 재조합 인간 시알리다제, 재조합 인간 시알리다제 융합 단백질, 또는 항체 접합체는 IV 주입에 의해 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 재조합 인간 시알리다제, 재조합 인간 시알리다제 융합 단백질, 또는 항체 접합체는 종양내 주사에 의해 투여된다. 유용한 제형은 제약 기술분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing Company, 1990)]을 참조한다. 비경구 투여에 적합한 제형 성분은 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 염수 용액, 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항박테리아제, 예컨대 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트; 및 긴장성의 조정을 위한 작용제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스를 포함한다.
정맥내 투여를 위해, 적합한 담체는 생리 염수, 정균수, 크레모포르 (Cremophor) ELTM (바스프 (BASF), 미국 뉴저지주 파시파니) 또는 포스페이트 완충 염수 (PBS)를 포함한다. 담체는 제조 및 저장의 조건 하에서 안정해야 하며, 미생물에 대해 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다.
제약 제형은 바람직하게는 멸균성이다. 멸균은 임의의 적합한 방법, 예를 들어, 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 조성물이 동결건조되는 경우, 필터 멸균은 동결건조 및 재구성 전에 또는 후에 수행될 수 있다.
본원에 기재된 조성물은 국소적으로 또는 전신적으로 투여될 수 있다. 투여는 일반적으로 비경구 투여일 것이다. 바람직한 실시양태에서, 제약 조성물은 피하로 및 훨씬 더 바람직한 실시양태에서 정맥내로 투여된다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균 수성 또는 비-수성 용액, 현탁액, 및 에멀젼을 포함한다.
일반적으로, 활성 성분, 예를 들어, 재조합 인간 시알리다제 또는 그의 융합 단백질 및/또는 항체 접합체의 치료 유효량은 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg, 예를 들어, 1 mg/kg 내지 100 mg/kg, 1 mg/kg 내지 10 mg/kg의 범위이다. 투여되는 양은 치료되는 질환 또는 적응증의 유형 및 정도, 환자의 전체적인 건강, 항체의 생체내 효능, 제약 제형, 및 투여 경로와 같은 변수에 의존할 것이다. 초기 투여량은 바람직한 혈액-수준 또는 조직-수준을 급속하게 달성하기 위해 상한 수준 초과로 증가될 수 있다. 대안적으로, 초기 투여량은 최적보다 더 작을 수 있으며, 일일 투여량은 치료의 과정 동안 점진적으로 증가될 수 있다. 인간 투여량은 예를 들어, 0.5 mg/kg 내지 20 mg/kg으로 실행되도록 설계된 통상적인 I상 용량 상승 연구에서 최적화될 수 있다. 투여 빈도는 재조합 인간 시알리다제 또는 그의 융합 단백질 및/또는 항체 접합체의 투여 경로, 투여량, 혈청 반감기, 및 치료되는 질환과 같은 인자에 따라 다양할 수 있다. 예시적인 투여 빈도는 1일 당 1회, 1주 당 1회 및 2주마다 1회이다. 바람직한 투여 경로는 비경구, 예를 들어, 정맥내 주입이다. 특정 실시양태에서, 재조합 인간 시알리다제 또는 그의 융합 단백질 및/또는 항체 접합체는 동결건조되고, 그 후 투여 시에 완충 염수에서 재구성된다.
V. 치료 용도
본원에 개시된 조성물 및 방법은 대상체에서 다양한 형태의 암을 치료하거나 대상체에서 암 성장을 억제하는 데 사용될 수 있다. 본 발명은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 재조합 인간 시알리다제 또는 그의 융합 단백질 및/또는 항체 접합체, 예를 들어, 본원에 개시된 재조합 인간 시알리다제, 융합 단백질, 또는 항체 접합체의 유효량을 단독으로 또는 대상체에서 암을 치료하는 또다른 치료제와 조합으로 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "유효량"은 유익하거나 바람직한 결과를 실행하는 데 충분한 활성제 (예를 들어, 본 발명에 따른 재조합 인간 시알리다제 또는 그의 융합 단백질)의 양을 지칭한다. 유효량은 1개 이상의 투여, 적용 또는 투여량으로 투여될 수 있으며, 특정 제형 또는 투여 경로에 제한되는 것으로 의도되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 대상체에서의, 예를 들어, 인간에서의 질환의 치료를 의미한다. 이는 (a) 질환을 억제하는 것, 즉, 그의 발달을 정지시키는 것; 및 (b) 질환을 완화시키는 것, 즉, 질환 상태의 퇴행을 유발하는 것을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에 기재된 방법 및 조성물에 의해 치료되는 유기체를 지칭한다. 이러한 유기체는 바람직하게는 포유동물 (예를 들어, 쥐과, 원숭이, 말, 소, 돼지, 개, 고양이 등)을 포함하나, 이에 제한되지는 않으며, 보다 바람직하게는 인간을 포함한다.
암의 예로는 고형 종양, 연성 조직 종양, 조혈 종양 및 전이성 병변을 들 수 있다. 조혈 종양의 예로는 백혈병, 급성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), B-세포, T-세포 또는 FAB ALL, 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수구성 백혈병 (CML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 예를 들어, 전환성 CLL, 광범위 큰 B-세포 림프종 (DLBCL), 소포성 림프종, 털세포 백혈병, 골수형성이상 증후군 (MDS), 림프종, 호지킨병, 악성 림프종, 비-호지킨 림프종, 버킷 림프종, 다발 골수종, 또는 리히터 증후군 (리히터 전환)을 들 수 있다. 고형 종양의 예로는 예를 들어 다양한 기관계의 악성종양, 예를 들어, 육종, 선암종, 및 암종, 예컨대 두경부 (인두를 포함함), 갑상선, 폐 (소세포 또는 비-소세포 폐 암종 (NSCLC)), 유방, 림프, 위장관 (예를 들어, 구강, 식도, 위, 간, 췌장, 소장, 결장 및 직장, 항문관), 생식기 및 비뇨생식관 (예를 들어, 신장, 요로상피, 방광, 난소, 자궁, 자궁경부, 자궁내막, 전립선, 고환), CNS (예를 들어, 신경 또는 아교 세포, 예를 들어, 신경모세포종 또는 신경아교종), 또는 피부 (예를 들어, 흑색종)에 영향을 미치는 것들을 들 수 있다.
특정 실시양태에서, 암은 상피암, 예를 들어, 시알릴화된 글리칸의 발현을 상향조절하는 상피암이다. 예시적인 상피암으로는 자궁내막암, 결장암, 난소암, 자궁경부암, 외음부암, 자궁암 또는 난관암, 유방암, 전립선암, 폐암, 췌장암, 요로암, 방광암, 두경부암, 구강암 및 간암을 들 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 상피암은 또한 암종, 예를 들어, 세엽 암종, 선방상 암종, 선낭성 암종, 선낭 암종, 선종성 암종, 부신 피질의 암종, 폐포 암종, 폐포 세포 암종, 기저 세포 암종, 기저세포 암종, 기저양 암종, 기저 편평 세포 암종, 기관지폐포 암종, 세기관지 암종, 기관지원성 암종, 대뇌양 암종, 담관세포 암종, 융모막 암종, 콜로이드 암종, 면포 암종, 자궁체부 암종, 사상 암종, 흉갑 암종, 피부 암종, 원통 암종, 원통 세포 암종, 관암종, 경성 암종, 배아 암종, 뇌 암종, 표피모양 암종, 선 상피 암종, 외성장 암종, 궤양외 암종, 섬유 암종, 젤라틴양 암종, 젤라틴성 암종, 거대 세포 암종, 거대세포 암종, 선암종, 과립 세포 암종, 털-기질 암종, 혈액 암종, 간세포 암종, 휘르틀레 세포 암종, 유리질 암종, 신세포 암종, 영아 배아 암종, 상피내 암종, 표피내 암종, 상피내 암종, 크롬페허 암종, 쿨히츠키-세포 암종, 대세포 암종, 수정체 암종, 수정체 암종, 지방종성 암종, 림프상피 암종, 수질성 암종, 수질성 암종, 멜라닌성 암종, 연성 암종, 점액 암종, 점액 암종, 점액세포 암종, 점막표피양 암종, 점막 암종, 점막 암종, 점액종성 암종, 비인두 암종, 귀리 세포 암종, 골화 암종, 골암종, 유두상 암종, 문맥주위 암종, 전침습성 암종, 가시 세포 암종, 수질양 암종, 신장의 신세포 암종, 예비 세포 암종, 육종성 암종, 슈나이더 암종, 경화 암종, 음낭 암종, 인환 세포 암종, 단순 암종, 소세포 암종, 솔라노이드 암종, 구형 세포 암종, 방추 세포 암종, 해면질 암종, 편평 암종, 편평 세포 암종, 스트링 암종, 모세혈관확장성 암종, 모세혈관확장성 암종, 이행 세포 암종, 결절성 암종, 결절성 암종, 사마귀모양 암종, 및 융모 암종을 포함한다.
특정 실시양태에서, 암은 유방암이다. 특정 실시양태에서, 암은 선암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 전이성 암이다. 특정 실시양태에서, 암은 난치성 암이다.
특정 실시양태에서, 암은 항체, 예를 들어, ADCC 활성을 갖는 항체, 예를 들어, 트라스투주맙으로의 치료에 저항성 또는 비-반응성이다.
본원에 기재된 방법 및 조성물은 단독으로 또는 다른 치료제 및/또는 양상과 조합으로 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "조합으로" 투여되는 용어는 2종 (이상)의 상이한 치료가, 환자에 대한 치료의 효과가 시간의 시점에서 중첩되도록, 장애를 갖는 대상체의 고통의 과정 동안 대상체에게 전달되는 것을 의미하는 것으로 이해된다. 특정 실시양태에서, 하나의 치료의 전달은, 투여의 기간에서 중첩이 있도록, 제2의 것의 전달이 시작되는 경우 여전히 일어나고 있다. 이는 때때로 본원에서 "동시" 또는 "공동 전달"로 지칭된다. 다른 실시양태에서, 하나의 치료의 전달은 다른 치료의 전달이 시작되기 전에 종료된다. 어느 경우의 특정 실시양태에서, 치료는 조합된 투여 때문에 보다 효과적이다. 예를 들어, 제2 치료는 보다 효과적이며, 예를 들어, 등가의 치료는 제2 치료에 못지 않은 것으로 나타나거나, 제2 치료는 제2 치료가 제1 치료의 부재 하에서 투여된 경우에 나타날 것보다 더 큰 정도로 증상을 감소시키거나, 유사한 상황은 제1 치료로 나타난다. 특정 실시양태에서, 전달은 증상의 감소, 또는 장애와 관련된 다른 파라미터가 다른 것의 부재 하에서 전달되는 하나의 치료로 관찰될 것보다 더 크도록 하는 것이다. 2가지 치료의 효과는 부분적으로 상가적, 전체적으로 상가적, 또는 상가적 초과일 수 있다. 전달은 전달되는 제1 치료의 효과가 제2의 것이 전달되는 경우 여전히 검출가능하도록 하는 것일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 또는 조성물은 1종 이상의 추가의 요법, 예를 들어, 수술, 방사선 요법, 또는 또다른 치료 제제의 투여와 조합으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 추가의 요법은 화학요법, 예를 들어, 세포독성제를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 추가의 요법은 표적화된 요법, 예를 들어 티로신 키나제 억제제, 프로테아솜 억제제, 또는 프로테아제 억제제를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 추가의 요법은 항-염증성, 항-혈관신생, 항-섬유성, 또는 항-증식성 화합물, 예를 들어, 스테로이드, 생물학적 면역조정제, 모노클로날 항체, 항체 단편, 압타머, siRNA, 안티센스 분자, 융합 단백질, 시토카인, 시토카인 수용체, 기관지확장제, 스타틴, 항-염증제 (예를 들어 메토트렉세이트), 또는 NSAID를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 추가의 요법은 상이한 부류의 치료제의 조합을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 또는 조성물은 관문 억제제와 조합으로 투여된다. 관문 억제제는 예를 들어, PD-1 길항제, PD-L1 길항제, CTLA-4 길항제, 아데노신 A2A 수용체 길항제, B7-H3 길항제, B7-H4 길항제, BTLA 길항제, KIR 길항제, LAG3 길항제, TIM-3 길항제, VISTA 길항제 또는 TIGIT 길항제로부터 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, 관문 억제제는 PD-1 또는 PD-L1 억제제이다. PD-1은 과활성 면역 반응을 방지하기 위해 적절한 시간에 T-세포 활성을 억제하거나 다르게는 조정하는 면역계 관문으로서 기능하는 T-세포의 표면 상에 존재하는 수용체이다. 그러나, 암 세포는 T-세포 활성을 정지시키거나 조정하기 위해 T-세포의 표면 상의 PD-1과 상호작용하는 리간드, 예를 들어, PD-L1을 발현함으로써 이 관문을 이용할 수 있다. 예시적인 PD-1/PD-L1 기재 면역 관문 억제제로는 항체 기재 치료제를 들 수 있다. PD-1/PD-L1 기재 면역 관문 억제를 채용하는 예시적인 치료 방법은 미국 특허 제8,728,474호 및 제9,073,994호, 및 유럽 특허 제1537878B1호에 기재되어 있으며, 예를 들어, 항-PD-1 항체의 사용을 포함한다. 예시적인 항-PD-1 항체는 예를 들어, 미국 특허 제8,952,136호, 제8,779,105호, 제8,008,449호, 제8,741,295호, 제9,205,148호, 제9,181,342호, 제9,102,728호, 제9,102,727호, 제8,952,136호, 제8,927,697호, 제8,900,587호, 제8,735,553호, 및 제7,488,802호에 기재되어 있다. 예시적인 항-PD-1 항체로는 예를 들어, 니볼루맙 (옵디보 (Opdivo)®, 브리스톨-마이어스 스퀴브 컴퍼니 (Bristol-Myers Squibb Co.)), 펨브롤리주맙 (키트루다 (Keytruda)®, 머크 샤프 앤 돔 코포레이션 (Merck Sharp & Dohme Corp.)), PDR001 (노바티스 파마슈티칼스 (Novartis Pharmaceuticals)), 및 피딜리주맙 (CT-011, 큐어 테크 (Cure Tech))을 들 수 있다. 예시적인 항-PD-L1 항체는 예를 들어, 미국 특허 제9,273,135호, 제7,943,743호, 제9,175,082호, 제8,741,295호, 제8,552,154호, 및 제8,217,149호에 기재되어 있다. 예시적인 항-PD-L1 항체로는 예를 들어, 아테졸리주맙 (테센트릭 (Tecentriq)®, 제넨테크 (Genentech)), 두발루맙 (아스트라제네카 (AstraZeneca)), MEDI4736, 아벨루맙, 및 BMS 936559 (브리스톨 마이어스 스퀴브 컴퍼니)를 들 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 또는 조성물은 CTLA-4 억제제와 조합으로 투여된다. CTLA-4 경로에서, T-세포 상의 CTLA-4와 항원 제시 세포 (암 세포라기 보다는)의 표면 상의 그의 리간드 (예를 들어, 또한 B7-1로 공지된 CD80, 및 CD86)의 상호작용은 T-세포 억제를 발생시킨다. 예시적인 CTLA-4 기재 면역 관문 억제 방법은 미국 특허 제5,811,097호, 제5,855,887호, 제6,051,227호에 기재되어 있다. 예시적인 항-CTLA-4 항체는 미국 특허 제6,984,720호, 제6,682,736호, 제7,311,910호; 제7,307,064호, 제7,109,003호, 제7,132,281호, 제6,207,156호, 제7,807,797호, 제7,824,679호, 제8,143,379호, 제8,263,073호, 제8,318,916호, 제8,017,114호, 제8,784,815호, 및 제8,883,984호, 국제 (PCT) 공개 제WO98/42752호, 제WO00/37504호, 및 제WO01/14424호, 및 유럽 특허 제EP 1212422 B1호에 기재되어 있다. 예시적인 CTLA-4 항체로는 이필리무맙 또는 트레멜리무맙을 들 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 또는 조성물은 (i) PD-1 또는 PD-L1 억제제, 예를 들어, 본원에 개시된 PD-1 또는 PD-L1 억제제, 및 (ii) CTLA-4 억제제, 예를 들어, 본원에 개시된 CTLA-4 억제제와 조합으로 투여된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 또는 조성물은 IDO 억제제와 조합으로 투여된다. 예시적인 IDO 억제제로는 1-메틸-D-트립토판 (인독시모드로 공지됨), 에파카도스타트 (INCB24360), 나복시모드 (GDC-0919), 및 BMS-986205를 들 수 있다.
본원에 기재된 방법 또는 조성물과 조합으로 투여될 수 있는 예시적인 세포독성제로는 예를 들어, 항미세소관제, 토포이소머라제 억제제, 항대사물, 단백질 합성 및 분해 억제제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 백금화제, 핵산 합성의 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 (HDAC 억제제, 예를 들어, 보리노스타트 (SAHA, MK0683), 엔티노스타트 (MS-275), 파노비노스타트 (LBH589), 트리코스타틴 A (TSA), 모세티노스타트 (MGCD0103), 벨리노스타트 (PXD101), 로미뎁신 (FK228, 뎁시펩티드)), DNA 메틸트랜스퍼라제 억제제, 질소 머스타드, 니트로소우레아, 에틸렌이민, 알킬 술포네이트, 트리아젠, 폴레이트 유사체, 뉴클레오시드 유사체, 리보뉴클레오티드 리덕타제 억제제, 빈카 알칼로이드, 탁산, 에포틸론, 중격제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 세포자멸사 및 방사선을 촉진시키는 작용제, 또는 독성제를 전달하는 표면 단백질에 결합하는 항체 분자 접합체를 들 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 또는 조성물과 함께 투여될 수 있는 세포독성제는 백금-기재 작용제 (예컨대 시스플라틴), 시클로포스파미드, 다카르바진, 메토트렉세이트, 플루오로우라실, 겜시타빈, 카페시타빈, 히드록시우레아, 토포테칸, 이리노테칸, 아자시티딘, 보리노스타트, 익사베필론, 보르테조밉, 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 콜키신, 안트라시클린 (예를 들어, 독소루비신 또는 에피루비신), 다우노루비신, 디히드록시 안트라신 디온, 미토크산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 아드리아마이신, 1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 푸로마이신, 리신, 또는 메이탄시노이드이다.
본 발명은 또한 세포 또는 조직에서 HLA-DR, CD86, CD83, IFNγ, IL-1b, IL-6, TNFα, IL-17A, IL-2, 또는 IL-6의 발현을 증가시키는 방법을 제공한다. 방법은 세포 또는 조직을 재조합 인간 시알리다제 또는 그의 융합 단백질 및/또는 항체 접합체, 예를 들어, 본원에 개시된 재조합 인간 시알리다제, 융합 단백질, 또는 항체 접합체의 유효량과 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포는 수지상 세포 및 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 세포 또는 조직에서의 HLA-DR, CD86, CD83, IFNγ, IL-1b, IL-6, TNFα, IL-17A, IL-2, 또는 IL-6의 발현은 재조합 인간 시알리다제, 융합 단백질, 또는 항체 접합체와 접촉되지 않은 유사하거나 그렇지 않다면 동일한 세포 또는 조직에 비해 적어도 약 10％, 적어도 약 20％, 적어도 약 50％, 적어도 약 75％, 적어도 약 100％, 적어도 약 150％, 적어도 약 200％, 적어도 약 250％, 적어도 약 300％, 적어도 약 400％, 적어도 약 500％, 적어도 약 600％, 적어도 약 700％, 적어도 약 800％, 적어도 약 900％, 또는 적어도 약 1,000％ 증가된다. 유전자 발현은 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해, 예를 들어, ELISA에 의해, 또는 본원의 실시예 13에 기재된 바와 같이 루미넥스 (Luminex) 다중 검정에 의해 측정될 수 있다.
본 설명 전반에 걸쳐, 조성물이 구체적인 성분을 갖거나, 포함하거나 (including), 포함하는 (comprising) 경우, 또는 공정 및 방법이 구체적인 단계를 갖거나, 포함하거나 (including), 포함하는 (comprising) 경우, 추가적으로, 나열된 성분으로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진 본 발명의 조성물이 있고, 나열된 프로세싱 단계로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진 본 발명에 따른 공정 및 방법이 있음이 고려된다.
본 출원에서, 요소 또는 성분이 나열된 요소 또는 성분의 목록에 포함되고/거나 그로부터 선택되는 것으로 이야기되는 경우, 요소 또는 성분은 나열된 요소 또는 성분 중 어느 하나일 수 있거나, 요소 또는 성분은 나열된 요소 또는 성분 중 2개 이상으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있음이 이해되어야 한다.
또한, 본원에 기재된 조성물 또는 방법의 요소 및/또는 특색은 본원에서 명백하든지 암시적이든지 본 발명의 정신 및 범위로부터 벗어나지 않고 다양한 방식으로 조합될 수 있음이 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정 화합물에 대한 언급이 이루어지는 경우, 그 화합물은 맥락으로부터 달리 이해되지 않는다면, 본 발명의 조성물의 다양한 실시양태에 및/또는 본 발명의 방법에 사용될 수 있다. 다시 말해서, 이 출원 내에서, 실시양태는 명확하고 간결한 적용이 쓰여지고 도시되는 것을 가능하게 하는 방식으로 기재되고 도시되었지만, 실시양태는 본 교시내용 및 발명(들)으로부터 떼어놓지 않고 다양하게 조합되거나 분리될 수 있는 것으로 의도되고, 인식될 것이다. 예를 들어, 본원에 기재되고 도시된 모든 특색은 본원에 기재되고 도시된 본 발명(들)의 모든 측면에 적용가능할 수 있음이 인식될 것이다.
표현 "중 적어도 하나"는 맥락 및 용도로부터 달리 이해되지 않는다면 그 표현 뒤에 나열된 대상의 각각을 개별적으로 및 나열된 대상 중 2개 이상의 다양한 조합을 포함함이 이해되어야 한다. 3개 이상의 나열된 대상과 관련하여 표현 "및/또는"은 맥락으로부터 달리 이해되지 않는다면 동일한 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다.
그의 문법적 등가물을 비롯한 용어 "포함하다", "포함한다", 포함하는, "가지다", "갖는다", "갖는", "함유하다", "함유한다", "함유하는"의 사용은 일반적으로 개방-말단 및 비-제한적인 것으로, 예를 들어, 맥락으로부터 달리 구체적으로 언급되거나 이해되지 않는다면, 추가의 비나열된 요소 또는 단계를 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
용어 "약"의 사용이 정량적 값 앞에 있는 경우, 본 발명은 또한 달리 구체적으로 언급되지 않는다면, 구체적인 정량적 값 자체를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "약"은 달리 지시되거나 암시되지 않는다면 명목상 값으로부터 ±10％ 편차를 지칭한다.
단계의 순서 또는 특정 작용이 수행되는 순서는 본 발명이 작동가능한 한, 중요하지 않음이 이해되어야 한다. 더욱이, 2개 이상의 단계 또는 작용은 동시에 수행될 수 있다.
본원에서 임의의 및 모든 예, 또는 예시적인 언어, 예를 들어, "예컨대" 또는 "비롯한"의 사용은 단지 본 발명을 보다 잘 예시하기 위한 것으로 의도되며, 청구되지 않는다면 본 발명의 범위에 대한 제한을 제기하지 않는다. 명세서에서 어느 언어도 임의의 비-청구된 요소를 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 지시하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
실시예
하기 실시예는 단지 예시적이며, 본 발명의 범위 또는 내용을 어떤 식으로도 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예 1
이 실시예는 발현을 향상시키고/거나 응집을 감소시키는 시스테인 잔기의 치환을 갖는 재조합 인간 시알리다제 (Neu1, Neu2, 및 Neu3)의 구축을 기재한다.
인간 시알리다제 Neu1, Neu2, Neu3 (이소형 1), 및 Neu4 (이소형 1)를 10xHis 태그로 분비된 단백질로서 발현시켰다. Neu1을 분비된 단백질로서 발현시키기 위해, 천연 N 말단 신호 펩티드 (MTGERPSTALPDRRWGPRILGFWGGCRVWVFAAIFLLLSLAASWSKA; 서열식별번호: 27)를 MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC (서열식별번호: 28)에 의해 대체하고, C 말단 리소좀 신호 모티프 (YGTL; 서열식별번호: 29)를 제거하였다. Neu2, Neu3, 및 Neu4를 분비된 단백질로서 발현시키기 위해, N 말단 신호 펩티드 MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC (서열식별번호: 28)를 각각에 첨가하였다.
시알리다제를 N-말단 6xHis 태그를 갖는 pCEP4 포유동물 발현 벡터를 사용하여 24-웰 플레이트에서 HEK293F 인간 세포의 200 mL 형질감염에서 발현시켰다. 시알리다제를 Ni-NTA 컬럼을 사용하여 정제하고, UV-Vis 분광광도계 (나노드롭 (NanoDrop))로 정량화하고, 도 1에 나타내어진 바와 같이 SDS-PAGE에 의해 조사하였다. Neu1은 약 3 μg/ml의 수율로 양호하게 발현되었으며, 주로 단량체성 형태로 존재하였다. Neu2 및 Neu3 발현은 각각 약 0.15 μg/mL의 수율을 제공하였으며, 각각은 주로 이량체성 형태로 존재하였다. Neu4는 나노드롭에 의해 측정된 바와 같이 검출가능한 발현 수율을 갖지 않았다. 발현을 위한 양성 대조군으로서 사용된 살모넬라 티피무리움으로부터의 박테리아 시알리다제 (St-시알리다제; 서열식별번호: 30)는 Neu1에 필적하는 수율을 제공하였으며, 주로 단량체성 형태로 존재하였다.
재조합적으로 발현된 시알리다제의 활성을 형광발생 기질 4-메틸움벨리페릴-N-아세틸뉴라민산 (4MU-NeuAc)으로부터의 시알산의 방출을 측정함으로써 검정하였다. 도 2에 나타내어진 바와 같이, Neu1은 무-효소 대조군 초과의 검출가능한 활성을 갖지 않으며, 이는 Neu1이 그것이 베타-갈락토시다제 및 보호성 단백질/카텝신 A (PPCA)와의 복합체이지 않다면 불활성임을 지시하는 이전의 보고와 일치한다. Neu2 및 Neu3은 활성이었다. 효소 동역학 검정을 Neu2 및 Neu3으로 수행하였다. 1 nM에서의 고정된 농도의 효소를 4000 μM 내지 7.8 μM의 범위의 농도에서 형광발생 기질 4MU-NeuAc와 함께 인큐베이션하였다. 검정을 산성 (pH 5.6) 및 중성 (pH 7) 조건 둘 다에서 수행하였다. 도 3에 나타내어진 바와 같이, Neu2 및 Neu3 둘 다는 산성 및 중성 조건에서 활성이었으며, 이전에 보고된 것들에 필적하는 효소 동역학을 나타내었다.
대부분의 재조합적으로 발현된 시알리다제는 비-환원 SDS-PAGE 겔 상에서 응집체 또는 이량체로서 구동하였다. 환원제 디티오트레이톨 (DTT)로의 후속 처리는 환원 SDS-PAGE 겔 상에서 42kDa에서 구동하는 효소의 단량체성 형태를 발생시켰다 (도 1). 따라서, 시알리다제에서의 유리 시스테인 잔기는 응집, 이량체화, 및/또는 낮은 발현을 유발할 수 있다. 따라서, Neu2의 6개의 유리 시스테인 잔기 (125, 196, 219, 272, 332, 352)의 각각을 부위-지정 돌연변이유발을 사용하여 아미노산 S, I, V, F, L, 또는 A로 치환하였다. 생성된 돌연변이체 시알리다제를 24-웰 플레이트에서 pCEP4 포유동물 발현 벡터를 사용하여 Expi293F 세포에서 N-말단 인간 Fc 태그를 갖는 분비된 단백질로서 발현시켰다. 발현을 항-인간 Fc 센서를 갖는 포르테바이오 옥텟 및 웨스턴 블롯을 사용하여 검정하고, 효소 활성을 상기 기재된 바와 같은 형광발생 기질 4MU-NeuAc를 사용하여 검정하였다. 돌연변이체 시알리다제에 대한 발현 및 활성 수준을 표 2에 나타낸다.
표 2에서, 효소 활성은 야생형 Neu2에 필적하는 활성을 나타내는 "++", 야생형 Neu2보다 낮은 활성을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 활성을 나타내지 않는 "-"로서 지시되고, 발현은 야생형 Neu2보다 6배 초과 더 높은 발현을 나타내는 "+++", 야생형 Neu2보다 2 내지 5배 더 높은 발현을 나타내는 "++", 야생형 Neu2에 필적하는 발현을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 발현을 나타내지 않는 "-"로서 지시된다.
<표 2>
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
표 2에서 보여지는 바와 같이, 시스테인 219의 돌연변이는 발현을 크게 향상시키지만, 효소 활성에 부정적으로 영향을 미친다. 이는 촉매작용을 위한 친핵체를 작용하는 중요한 촉매 잔기인 것으로 믿어지는 이웃하는 아미노산 글루타메이트 218 상의 시스테인 219 돌연변이의 효과에 기인할 수 있다. 다른 5개의 시스테인 (125, 196, 272, 332, 및 352)의 개별적 돌연변이는 발현에 대한 최소 영향을 가졌다. 그러나, 광범위한 조합적 돌연변이유발을 통해, C332A 및 C352L 치환 둘 다를 갖는 돌연변이체 시알리다제 (Neu2-M38)는 개선된 발현을 가졌고, 효소 활성을 유지한 것으로 확인되었다 (야생형에 비해 감소된 효소 활성을 갖지만). 이들 결과를 확인하기 위해, Neu2-M38을 진탕 플라스크에서 100 mL 형질감염에서 발현시키고, 단백질 A 컬럼으로 정제하였다. Neu2-M38은 동일한 조건 하에서 야생형 Neu2보다 2배 더 높은 발현 및 SEC-HPLC에 의해 특징규명된 바와 같은 개선된 단량체 함량 (12％ 대 7％)을 가졌다 (도 4a 및 4b). 함께, 이들 결과는 인간 시알리다제에서 유리 시스테인 잔기를 돌연변이시키는 것이 분비된 재조합 인간 시알리다제를 제조하고, 재조합 인간 시알리다제의 발현을 개선시키기 위해 유리할 수 있음을 나타낸다.
실시예 2
이 실시예는 인간 시알리다제의 표면 노출된 잔기를 조작하는 것이 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키고/거나, 시알리다제 상의 표면의 소수성을 감소시켜 용해도를 개선시키고/거나, 단백질 응집을 감소시킴을 입증한다.
인간 Neu2는 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제)의 9.6의 pI에 비해 7.5의 예측된 pI를 갖는다. 추가적으로, 이용가능한 결정 구조를 사용한 Neu2의 표면 소수성의 분석은 주로 Neu2의 N-말단 아미노산, 예를 들어, A2, 뿐만 아니라 V325를 비롯한 Neu2의 표면 상의 큰 노출된 소수성 패치를 밝혀내었다. 이들 특색은 아마도 분자내 소수성 상호작용으로 인한 응집의 결과로서, 중성 수성 조건에서 단백질 안정성 및 용해도에 대한 준최적일 수 있다.
Neu2의 표면 잔기를 하기 기준에 따라 용해도 및/또는 발현을 증가시키는 치환을 위한 후보로서 선택하였다: 표면 노출된 D 또는 E 잔기; 표면 소수성 패치에 기여하는 소수성 잔기; 촉매작용에 관여하지 않는 잔기; 인간 Neu 1, 3, 4, St-시알리다제 사이에 양호하게 보존되지 않은 잔기; 및 다른 시알리다제에서 상동성 K 또는 R을 갖는 위치에서의 잔기. 이들 기준을 사용하여, Neu2에서의 산성 아미노산 E72, D215, 및 E257을 리신으로 돌연변이시켜 pI를 증가시키고, Neu2에서의 소수성 아미노산 A2 및 V325를 리신 또는 글루타메이트로 돌연변이시켜 예측된 Neu2 표면 소수성 패치의 소수성을 감소시켰다. 생성된 돌연변이체 시알리다제를 24-웰 플레이트에서 pCEP4 포유동물 발현 벡터를 사용하여 Expi293F 세포에서 인간 Fc 태그를 갖는 분비된 단백질로서 발현시키고, 실시예 1에 상기 기재된 바와 같이 발현 및 활성에 대해 검정하였다.
돌연변이체 시알리다제에 대한 발현 및 활성 수준을 표 3에 나타낸다. 표 3에서, 효소 활성은 야생형 Neu2에 필적하는 활성을 나타내는 "++", 야생형 Neu2보다 낮은 활성을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 활성을 나타내지 않는 "-"로서 지시되고, 발현은 야생형 Neu2보다 6배 초과 더 높은 발현을 나타내는 "+++", 야생형 Neu2보다 2 내지 5배 더 높은 발현을 나타내는 "++", 야생형 Neu2에 필적하는 발현을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 발현을 나타내지 않는 "-"로서 지시된다.
<표 3>
Figure pct00013
표 3에서 보여지는 바와 같이, Neu2-M62 (A2K), Neu2-M68 (A2K + E257K), 및 Neu2-M71 (A2K + V325K) 돌연변이체 시알리다제는 야생형 Neu2에 비해 개선된 발현 및 필적하거나 감소된 효소 활성을 나타내었다. 이들 결과를 확인하기 위해, Neu2-M62 및 Neu2-M71 돌연변이체 시알리다제를 진탕 플라스크에서 100 mL 형질감염에서 발현시키고, 단백질 A 컬럼으로 정제하였다. Neu2-M62는 SEC-HPLC에 의해 특징규명된 바와 같이 야생형 Neu2보다 약 4.4배 더 높은 발현 (4.4 μg/mL 대 1 μg/mL) 및 유사한 단량체 함량 (8％ 대 7％)을 가졌다 (도 5a 및 5b). Neu2-M71은 SEC-HPLC에 의해 특징규명된 바와 같이 야생형 Neu2보다 약 12배 더 높은 발현 (12 μg/mL 대 1 μg/mL) 및 개선된 단량체 함량 (17％ 대 7％)을 가졌지만 (도 5a 및 5c), 효소 활성을 갖지 않았다.
함께, 이들 결과는 인간 시알리다제에서 표면 노출된 잔기를 돌연변이시키는 것이 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키고/거나 시알리다제 상의 표면의 소수성을 감소시켜 재조합 인간 시알리다제의 용해도를 개선시키고/거나, 단백질 응집을 감소시키고/거나, 발현을 개선시킬 수 있음을 나타낸다.
실시예 3
이 실시예는 인간 시알리다제의 N-말단에의 짧은 펩티드의 첨가가 시알리다제의 발현 및/또는 활성을 증가시킬 수 있음을 입증한다.
상동성-기재 조작을 사용하여, 본 발명자들은 마우스 흉선 Neu2로부터의 N-말단 서열 (MEDLRP; 서열식별번호: 4)의 변이체를 중첩 PCR에 의해 인간 Neu2 상으로 그래프팅하였다. 생성된 돌연변이체 시알리다제를 24-웰 플레이트에서 pCEP4 포유동물 발현 벡터를 사용하여 Expi293F 세포에서 인간 Fc 태그를 갖는 분비된 단백질로서 발현시키고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 발현 및 활성에 대해 검정하였다.
돌연변이체 시알리다제에 대한 발현 및 활성 수준을 표 4에 나타낸다. 표 4에서, 효소 활성은 야생형 Neu2보다 더 큰 활성을 나타내는 "+++", 야생형 Neu2에 필적하는 활성을 나타내는 "++", 야생형 Neu2보다 낮은 활성을 나타내는 "+", 또는 활성을 나타내지 않는 "-"로서 지시되고, 발현은 야생형 Neu2보다 6배 초과 더 높은 발현을 나타내는 "+++", 야생형 Neu2보다 2 내지 5배 더 높은 발현을 나타내는 "++", 또는 야생형 Neu2에 필적하는 발현을 나타내는 "+"로서 지시된다.
<표 4>
Figure pct00014
표 4에 나타내어진 바와 같이, MEDLRP (서열식별번호: 4) N-말단 서열을 포함한 시험된 모든 변이체는 야생형 Neu2에 비해 증가된 발현 및 활성 둘 다를 가졌다.
이들 결과를 확인하기 위해, 돌연변이체 Neu2-M76 (N-말단에 삽입된 MEDLRP (서열식별번호: 4)를 포함하였음)을 진탕 플라스크에서 100 mL 형질감염에서 발현시키고, 단백질 A 컬럼으로 정제하였다. 24-웰 형식에 비해, Neu2-M76은 단지 SEC-HPLC에 의해 특징규명된 바와 같이 개선된 단량체 함량 (12.5％ 대 7％)과 함께 야생형 Neu2의 그것보다 약 1.5배 더 높은 (1.5 μg/mL 대 1 μg/mL) 발현의 보통의 개선을 나타내었다 (도 6a 및 6b).
효소 동역학 측정을 정제된 Neu2-M76으로 수행하였다. 100 nM에서의 고정된 농도의 Neu2-M76을 4000 μM 내지 7.8 μM의 범위의 농도에서의 형광발생 기질 4MU-NeuAc와 함께 인큐베이션하였다. 도 7a에 나타내어진 바와 같이, 이 변이체는 야생형 Neu2의 그것 (약 867 μM의 K M)보다 5배 더 강력한 약 175 μM의 K M을 가졌다. 추가적으로, 도 7b에 나타내어진 바와 같이, Neu2-M76은 또한 그것이 pH 5에서 α2,8 연결을 갖는 시알산 (콜로민산)을 절단한 바와 같이, 야생형 Neu2에 비해 변경된 기질 특이성을 가진 반면, 야생형 Neu2는 이러한 활성을 갖지 않았다.
함께, 이들 결과는 인간 시알리다제의 N-말단에의 짧은 펩티드의 첨가가 시알리다제의 발현을 증가시키고/거나, 활성을 증가시키고/거나, 기질 특이성을 변형시킬 수 있음을 나타낸다.
실시예 4
이 실시예는 인간 시알리다제의 N- 또는 C-말단에서의 잔기를 돌연변이시켜 N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시키는 것이 시알리다제의 안정성 및/또는 발현을 증가시킬 수 있음을 입증한다.
Neu2의 결정 구조에 기초하여, 잔기 L4, V6, L7, 및 L12를 Neu2의 N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 또는 수소 결합을 촉진시키도록 돌연변이시켰다. 생성된 돌연변이체 시알리다제를 24-웰 플레이트에서 pCEP4 포유동물 발현 벡터를 사용하여 Expi293F 세포에서 인간 Fc 태그를 갖는 분비된 단백질로서 발현시키고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 발현 및 활성에 대해 검정하였다.
돌연변이체 시알리다제에 대한 발현 및 활성 수준을 표 5에 나타낸다. 표 5에서, 효소 활성은 야생형 Neu2에 필적하는 활성을 나타내는 "++", 야생형 Neu2보다 낮은 활성을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 활성을 나타내지 않는 "-"로서 지시되고, 발현은 야생형 Neu2보다 6배 초과 더 높은 발현을 나타내는 "+++", 야생형 Neu2보다 2 내지 5배 더 높은 발현을 나타내는 "++", 야생형 Neu2에 필적하는 발현을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 발현을 나타내지 않는 "-"로서 지시된다.
<표 5>
Figure pct00015
표 5에 나타내어진 바와 같이, V6Y 치환 (Neu2-M79)은 야생형 Neu2에 비해 개선된 발현 및 효소 활성을 발생시켰다.
이들 결과를 확인하기 위해, Neu2-M79를 진탕 플라스크에서 100 mL 형질감염에서 발현시키고, 단백질 A 컬럼으로 정제하였다. Neu2-M79는 SEC-HPLC에 의해 특징규명된 바와 같이 야생형 Neu2보다 약 10배 더 높은 발현 (10 μg/mL 대 1 μg/mL), 실질적으로 개선된 단량체 함량 (78％ 대 7％)을 가졌으며 (도 8a 및 8b), 야생형 Neu2만큼 활성이었다.
함께, 이들 결과는 인간 시알리다제의 N- 또는 C-말단에서의 잔기를 돌연변이시켜 N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시키는 것이 시알리다제의 안정성 및/또는 발현을 증가시킬 수 있음을 나타낸다.
실시예 5
이 실시예는 인간 시알리다제의 N-말단 메티오닌을 돌연변이시키는 것이 시알리다제의 안정성 및/또는 발현을 증가시킬 수 있음을 입증한다.
인간 Neu2의 제1 잔기 (M1)를 결실시키거나, R, H, K, D, E, S, T, N, Q, G, P, A, V, L, F, 및 Y로 돌연변이시켰다. 모든 돌연변이를 V6Y 및 I187K 치환과 조합으로 시험하였다. 생성된 돌연변이체 시알리다제를 진탕 플라스크에서 pCEP4 포유동물 발현 벡터를 사용하여 Expi293F 세포에서 인간 Fc 태그를 갖는 분비된 단백질로서 발현시켰다. 단백질을 단백질 A 컬럼으로 정제하고, 나노드롭에 의해 정량화하고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 효소 활성에 대해 특징규명하였다.
돌연변이체 시알리다제에 대한 발현 및 활성 수준을 표 6에 나타낸다. 표 6에서, 효소 활성은 야생형 Neu2에 필적하는 활성을 나타내는 "++", 야생형 Neu2보다 낮은 활성을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 활성을 나타내지 않는 "-"로서 지시되고, 발현은 야생형 Neu2보다 6배 초과 더 높은 발현을 나타내는 "+++", 야생형 Neu2보다 2 내지 5배 더 높은 발현을 나타내는 "++", 야생형 Neu2에 필적하는 발현을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 발현을 나타내지 않는 "-"로서 지시된다.
<표 6>
Figure pct00016
표 6에 나타내어진 바와 같이, V6Y 및 I187K 치환과 조합으로, M1의 결실 또는 M1의 R, H, K, D, E, T, N, Q, G, A, V, L, 또는 F로의 돌연변이는 시알리다제의 발현을 증가시켰으며, M1H, M1D, M1L, 및 M1F 돌연변이는 증가된 발현 및 효소 활성을 발생시켰다. 함께, 이들 결과는 인간 시알리다제의 N-말단 메티오닌을 돌연변이시키는 것이 시알리다제의 안정성 및/또는 발현을 증가시킬 수 있음을 나타낸다.
실시예 6
이 실시예는 시알리다제의 안정성 및/또는 발현을 증가시킬 수 있는 돌연변이 및 돌연변이의 조합을 기재한다.
인간 Neu2를 표 7에 나타내어진 바와 같이 돌연변이시켰다. 생성된 돌연변이체 시알리다제를 진탕 플라스크에서 pCEP4 포유동물 발현 벡터를 사용하여 Expi293F 세포에서 인간 Fc 태그를 갖는 분비된 단백질로서 발현시켰다. 단백질을 단백질 A 컬럼으로 정제하고, 나노드롭에 의해 정량화하고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 효소 활성에 대해 특징규명하였다.
돌연변이체 시알리다제에 대한 발현 및 활성 수준을 표 7에 나타낸다. 표 7에서, 효소 활성은 야생형 Neu2에 필적하는 활성을 나타내는 "++", 야생형 Neu2보다 낮은 활성을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 활성을 나타내지 않는 "-"로서 지시되고, 발현은 야생형 Neu2보다 6배 초과 더 높은 발현을 나타내는 "+++", 야생형 Neu2보다 2 내지 5배 더 높은 발현을 나타내는 "++", 야생형 Neu2에 필적하는 발현을 나타내는 "+", 또는 검출가능한 발현을 나타내지 않는 "-"로서 지시된다.
<표 7>
Figure pct00017
실시예 7
이 실시예는 박테리아 및 돌연변이된 인간 시알리다제로의 항체-시알리다제 유전자 융합 단백질, 및 융합 단백질을 함유하는 항체 시알리다제 접합체 (ASC)의 구축 및 발현을 기재한다.
이 실시예에 사용된 3가지 유형의 ASC의 구성을 도 10에 도시한다. "랩터"로 지칭되는 제1 유형의 ASC는 항체의 각각의 중쇄의 C-말단에 융합된 시알리다제를 갖는 항체 (2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 가짐)를 포함한다. "야누스"로 지칭되는 제2 유형의 ASC는 1개의 항체 아암 (1개의 중쇄 및 1개의 경쇄를 가짐), 및 Fc의 N-말단에서 융합된 시알리다제를 갖는 1개의 시알리다제-Fc 융합물을 함유한다. 야누스 ASC에서의 각각의 Fc 도메인 폴리펩티드는 이종이량체화를 위한 "놉" (T366Y) 또는 "홀" (Y407T) 돌연변이 중 어느 하나를 함유한다 (EU 넘버링에 따른 잔기 번호, Kabat, E.A., et al. (1991) 상기 문헌). "로브스터"로 지칭되는 제3 유형의 ASC는 각각 Fc의 N-말단에서 융합된 시알리다제 및 Fc의 C-말단에서 융합된 scFv를 갖는 2개의 Fc 도메인 폴리펩티드를 함유한다.
하기 ASC를 발현시키고, SDS-PAGE 및 SEC-HPLC를 사용하여 순도에 대해 특징규명하고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 4MU-NeuAc를 사용하여 효소적에 대해 검정하였다: (i) 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제) 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); (ii) St-시알리다제 및 트라스투주맙을 포함하는 랩터 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 및 제4 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 60에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 59를 갖는 제2 및 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); 및 (iii) 2개의 기능 소실 돌연변이, 즉, D100V 및 G231V를 갖는 St-시알리다제, 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC ("야누스-LOF," 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 62에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 61을 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함).
ASC를 His-태그부착된 Her2의 계열 희석액 (1:2 희석에서 50 내지 0.78 nM) 내로 디핑하면서 항-Fc 센서 상에 포획된 ASC를 갖는 포르테바이오 옥텟을 사용함으로써 항원 (Her2) 결합에 대해 시험하였다. ASC는 30 μg/mL의 수율 및 높은 순도로 양호한 발현을 가졌고, 비접합된 St-시알리다제만큼 활성이었으며, 트라스투주맙에 필적하는 결합 친화도로 Her2에 결합하였다 (도 11 및 12). 야누스-LOF 돌연변이체는 예상된 바와 같이 시알리다제 활성을 없앴으며, 모 야누스 ASC와 유사한 생화학적 특징으로 양호하게 발현되었다.
야누스 ASC를 Neu2-M76 (N-말단에 삽입된 MEDLRP (서열식별번호: 4)를 포함하였음) 및 트라스투주맙을 사용하여 제조하였다. 이 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 64에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 63을 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함)를 발현시키고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 SDS-PAGE를 사용하여 순도 및 4MU-NeuAc를 사용하여 효소 활성에 대해 특징규명하였다. 야누스 ASC는 정제 후 양호한 순도로 약 5 μg/mL의 발현 수율을 가졌으며 (도 13), 야누스 ASC 야생형 접합된 Neu2에 비해 개선된 활성을 나타내었다 (도 14).
추가적으로 로브스터 ASC를 Neu2-M85 (M1의 결실 및 돌연변이 V6Y 및 I187K을 포함하였음) 및 트라스투주맙으로부터 유래된 scFv를 사용하여 제조하였다. 이 로브스터 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 66에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 65를 갖는 제1 및 제2 폴리펩티드 쇄를 포함함)를 발현시키고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 SDS-PAGE를 사용하여 순도 및 4MU-NeuAc를 사용하여 효소 활성에 대해 특징규명하였다. 로브스터 ASC는 정제 후 양호한 순도로 약 5 μg/mL의 발현 수율 (도 13), 및 172.6 μM의 Km (도 14)을 가졌다.
실시예 8
이 실시예는 박테리아 시알리다제를 함유하는 항체 시알리다제 접합체 (ASC)의 생체내 투여를 기재한다.
하기 ASC를 이 실시예에서 제조하고, 시험하였다: (i) 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제) 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); (ii) St-시알리다제 및 트라스투주맙을 포함하는 랩터 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 및 제4 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 60에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 59를 갖는 제2 및 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); 및 (iii) St-시알리다제 및 트라스투주맙으로부터 유래된 scFv를 포함하는 로브스터 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 104에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 103을 갖는 제1 및 제2 폴리펩티드 쇄를 포함함). ASC를 실시예 7에 기재된 바와 같이 제조하였다.
이들 ASC를 인간 Her2를 발현하는 뮤린 유방암 세포주 (EMT6-hHer2 세포)로 주사된 마우스 동계 종양 모델에서 트라스투주맙과 비교하였다. 6 내지 8주령의 암컷 BALB/c 마우스를 종양 발달을 위해 0.1 ml의 PBS 중 EMT6-Her2 종양 세포 (5 x 105개)로 우측 하부 옆구리 영역에서 피하로 접종하였다. 마우스를 종양이 50 내지 100 mm3, 평균 약 75 내지 100 mm3에 도달하였을 때 8개의 군으로 무작위로 할당하였다. 처리군은 무작위화 후 지시된 투여 스케줄과 함께 표 8에 기재된다. 항-마우스 NK1.1 (클론: PK136; 바이오엑스셀 (BioXcell), 621717N1), 항-마우스 CD8α (클론: 53-6.7; 바이오엑스셀, BE0004-1) 및 리포솜 클로드로네이트 (포뮤맥스 사이언티픽, 인크. (FormuMax Scientific, Inc.))는 지시된 바와 같이 처리군에 포함되었다.
<표 8>
Figure pct00018
트라스투주맙, 및 랩터, 야누스 및 로브스터 ASC로의 처리로부터의 결과를 각각 도 15a, 15b, 15c 및 15d에 나타낸다. 볼 수 있는 바와 같이, 트라스투주맙은 처리된 바와 같은 8마리의 개별적 마우스에서 완전한 반응 (연구의 기간 동안 임의의 시점에서 촉진의 제한 미만의 퇴행으로서 정의됨, 도 15a)을 발생시키지 않았다. 이는 8마리의 동물 중 2마리가 완전한 반응을 갖는 것으로 입증된 랩터 (도 15b), 8마리의 동물 중 3마리가 완전한 반응을 갖는 것으로 입증된 야누스 (도 15c) 및 8마리의 동물 중 2마리가 완전한 반응을 갖는 것으로 입증된 로브스터 (도 15d)와 대조적이다.
NK 고갈 (항-마우스 NK1.1), 대식세포 고갈 (리포솜 클로드로네이트) 및 CD8 T 세포 고갈 (항-마우스 CD8α)로의 야누스의 투여의 결과를 도 16에 나타낸다. 볼 수 있는 바와 같이, 8마리의 동물 중 3마리에서 완전한 반응이 있었던 야누스 처리 단독 (도 15c)에 비해, NK 고갈은 완전한 반응의 수를 8마리의 동물 중 1마리로 감소시켰다 (도 16a). 대식세포 고갈은 또한 완전한 반응의 수를 8마리의 동물 중 1마리로 감소시켰다 (도 16b). CD8 T 세포 고갈은 야누스의 효과를 완전히 반전시켰으며, 완전한 반응을 나타내는 동물이 없었다 (도 16c). 도 16d는 비히클, 야누스 단독, 트라스투주맙 단독 및 NK, 대식세포 및 CD8 T 세포 고갈을 갖는 야누스에 대한 평균 종양 부피를 나타낸다. 이들 결과는 선천 면역 (NK 및 대식세포 의존성) 뿐만 아니라 적응 면역 (CD8 T 세포)이 생체내 ASC 활성에 기여함을 입증한다.
실시예 9
이 실시예는 박테리아 시알리다제를 갖는 항체 시알리다제 접합체 (ASC)의 생체내 투여를 기재한다.
하기 ASC를 이 실시예에서 제조하고, 시험하였다: (i) 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제) 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); 및 (ii) 2개의 기능 소실 돌연변이, 즉, D100V 및 G231V를 갖는 St-시알리다제, 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC ("야누스-LOF", 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 62에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 61을 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함). ASC를 실시예 7에 기재된 바와 같이 제조하였다.
이들 ASC를 인간 Her2를 발현하는 독립적인 EMT6 세포주 (문헌 [D'Amico et al. (2016) ANNALS OF ONCOLOGY, Volume 27, Issue suppl_8, 41P]에 기재된 바와 같은 EMT6-hHer2 세포)로 주사된 마우스 동계 동소 종양 모델에서 시험하였다. 6 내지 8주령의 암컷 BALB/c 마우스를 EMT6-Her2 종양 세포 (5 x 106개)로의 유방내 이식을 통해 접종하였다. 마우스를 종양이 대략 250 mm3에 도달하였을 때 6개의 군으로 무작위로 할당하였다. 처리군은 무작위화 후 지시된 투여 스케줄과 함께 표 9에 기재된다. 항-마우스 PD1은 바이오엑스셀 (RMP1-14, 카탈로그 번호 665418F1)로부터 얻었다. 야누스 및 야누스 기능 소실 (야누스 LOF)은 실시예 7에 상기 기재되어 있다.
<표 9>
Figure pct00019
군 1 내지 4 (비히클, 트라스투주맙, 야누스 및 야누스 LOF)에 대한 결과를 도 17a에 나타낸다. 볼 수 있는 바와 같이, 야누스로 처리된 6마리의 동물 중 3마리가 종양 성장의 완전한 퇴행을 가졌다. 특히, 야누스 LOF 및 트라스투주맙은 둘 다 비히클 처리된 동물에 필적하였다.
완전한 퇴행을 갖는 3마리의 마우스 ("치유된 마우스")를 원래 사용된 동일한 EMT6-Her2 세포 또는 모 EMT6 세포 (조작된 인간 Her2 발현을 결여함) 중 어느 하나로 재챌린지하였다. EMT6 세포 및 EMT6-Her2 세포를 모든 3마리의 치유된 마우스의 종양 발달을 위해 0.1 ml의 PBS에서 각각 우측 또는 좌측 하부 옆구리 영역에 피하로 접종하였다 (5 x 105개). EMT6-Her2 세포를 또한 대조군으로서 나이브 마우스 내로 피하로 접종하였다. 도 17b에서 볼 수 있는 바와 같이, EMT6-Her2 세포도 모 EMT6 세포도 치유된 마우스에서 종양 성장을 발생시키지 않은 반면, EMT6-Her2 세포는 나이브 마우스에서 예상된 바와 같이 종양으로 발달하였다. 이들 결과는 본 발명의 항체 시알리다제 접합체가 종양에 대한 장기 기억을 유도할 수 있음을 시사한다. 또한, 장기 기억은 종양 세포에 대한 것이며, 원래 표적화된 암 항원 (이 경우 Her2)과 독립적이다.
군 1, 5 및 6 (비히클, 항-마우스 PD1 및 야누스와 조합된 항-마우스 PD1)에 대한 결과를 도 18a 및 도 18b에 나타낸다. 항-마우스 PD1은 6마리의 마우스 중 4마리가 완전한 퇴행을 입증하는 양호한 활성을 가진 반면 (6마리의 마우스 중 3마리가 완전한 퇴행을 입증하는 야누스 단독과 유사함, 도 17a 참조), 항-마우스 PD1과 야누스의 조합은 모든 6마리의 마우스에서 종양 성장의 완전한 퇴행을 입증하였다 (도 18b). 이 조합이 주어진 동물 중 어느 것에서도 체중 감소는 없었다.
실시예 10
이 실시예는 박테리아 시알리다제를 갖는 항체 시알리다제 접합체 (ASC)의 생체내 투여를 기재한다.
살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제) 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함)를 실시예 7에 기재된 바와 같이 제조하였다.
ASC를 인간 Her2를 발현하는 B16 흑색종 세포주 (B16D5-Her2, Surana et al. CANCER IMMUNOL RES, 2(11): 1103-1112)로 주사된 마우스 동계 종양 모델에서 시험하였다. 6 내지 8주령의 암컷 C57BL/6 마우스를 B16D5-Her2 종양 세포 (5 x 105개)로 우측 하부 옆구리 영역에 피하로 접종하였다. 마우스를 종양이 대략 50 내지 100 mm3에 도달하였을 때 3개의 군으로 무작위로 할당하였다. 처리군은 무작위화 후 지시된 투여 스케줄과 함께 표 10에 기재된다. 바이오엑스셀 (RMP1-14, 카탈로그 번호 665418F1)로부터 얻어진 항-마우스 PD1 및 바이오엑스셀 (9D9, 카탈로그 번호 BE0164)로부터 얻어진 항-마우스 CTLA4는 조합으로 사용되었다.
<표 10>
Figure pct00020
B16 흑색종 마우스 모델은 면역-종양학 접근법으로 치료하기 곤란한 종양 모델로 간주된다. 야누스 대 항-마우스 PD1 및 항-마우스 CTLA4의 조합의 비교를 수행하였다. 결과를 도 19에 나타낸다. 항-마우스 CTLA4와 조합된 항-마우스 PD1은 B16D5-Her2 종양 성장에 대한 영향을 가졌지만, 이 조합은 또한 처리된 동물에서 유의한 중량 감소를 입증하였다. 그에 비해, 야누스는 유의한 중량 감소를 갖지 않고 보다 왕성한 항-종양 활성을 입증하였다. 트라스투주맙 단독은 이 모델에서 미미한 활성을 입증하였다.
실시예 11
이 실시예는 항체 시알리다제 접합체 (ASC)에 의한 종양 세포로부터의 말단 시알산의 표적화된 절단을 기재한다.
하기 ASC를 이 실시예에서 제조하고, 시험하였다: (i) St-시알리다제 및 트라스투주맙을 포함하는 랩터 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 및 제4 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 60에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 59를 갖는 제2 및 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); (ii) 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제) 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); (iii) St-시알리다제 및 트라스투주맙으로부터 유래된 scFv를 포함하는 로브스터 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 104에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 103을 갖는 제1 및 제2 폴리펩티드 쇄를 포함함); (iv) 2개의 기능 소실 돌연변이, 즉, D100V 및 G231V를 갖는 St-시알리다제, 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC ("야누스-LOF", 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 62에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 61을 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); 및 (v) St-시알리다제 및 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질을 인식하는 항체를 포함하는 비-Her2 결합 야누스 ASC ("야누스 비-Her2"; 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 95에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 94를 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 97에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 96을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함). ASC를 실시예 7에 기재된 바와 같이 제조하였다.
SKBR-3 세포 (Her2 +++) 또는 BT-20 세포 (Her2 +)를 트라스투주맙 또는 지시된 ASC와 함께 인큐베이션하고, MAL II 및 PNA로의 FACS 염색을 사용하여 시알산 제거의 정도를 측정하였다 (도 20 참조). MAL II는 시알산에 대한 높은 친화도를 갖는 렉틴이며, 따라서 MAL II 염색은 ASC에 의한 절단 후 세포 표면 시알산의 소실 시 감소할 것으로 예상되었다. PNA는 말단 갈락토스 잔기에 대한 높은 친화도를 갖는 렉틴이며, 따라서 PNA 염색은 ASC에 의한 절단 후 세포 표면 갈락토스 커플링된 시알산의 소실로 증가할 것으로 예상되었다. 트라스투주맙에 비해, 야누스, 랩터 및 로브스터 ASC로의 처리는 Her2의 높거나 낮은 수준으로 암 세포 상의 시알산 수준을 감소시켰다 (각각 SKBR-3 및 BT-20 세포). 시알산 절단은 야누스 LOF 구축물에 대해 관찰되지 않았으며, 실질적으로 감소된 시알산 절단은 야누스 비-Her2 결합 구축물에 대해 관찰되었다.
실시예 12
이 실시예는 항체 시알리다제 접합체 (ASC)에 의한 수지상 세포 (DC) 활성화의 암-세포 매개된 억제의 감소를 기재한다.
DC는 면역 반응을 개시하고 지속하는 데 주요한 역할을 한다. 이들은 조직 (종양 부위를 포함함)에서 항원을 찾는다. DC가 항원을 만나면, 이들은 T 세포에의 프로세싱된 항원의 제시를 위해 배수 림프절을 성숙시키고, 활성화시키고, 그로 이동한다. DC 활성화의 이 프로세스는 DC의 표면 상에 시글렉을 갖는 암 세포 상의 과시알릴화된 단백질의 상호작용에 의해 억제될 수 있다. ASC에 의한 암 세포 상의 과시알릴화된 단백질의 탈시알릴화는 잠재적으로 이 억제를 감소시키고, DC의 증가된 활성화를 발생시킬 수 있다.
이를 시험하기 위해, SKBR-3 세포 (높은 수준의 Her2를 발현함)를 초기에 (i) 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제) 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); (ii) 2개의 기능 소실 돌연변이, 즉, D100V 및 G231V를 갖는 St-시알리다제, 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC ("야누스-LOF", 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 62에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 61을 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); 또는 (iii) St-시알리다제 및 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질을 인식하는 항체를 포함하는 비-Her2 결합 야누스 ASC ("야누스 비-Her2"; 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 95에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 94를 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 97에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 96을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함) 중 어느 하나와 함께 인큐베이션하였다. ASC를 실시예 7에 기재된 바와 같이 제조하였다. 그 후, 세포를 세척하고, 16시간 동안 지질다당류 (LPS; DC 활성화 신호)의 존재 또는 부재 하에서 DC와 공동-배양하였다. DC 표면 활성화 마커를 유동 세포계측법에 의해 검정하였다.
도 21에서 볼 수 있는 바와 같이, LPS와의 DC의 공동-배양은 표면 활성화 마커 HLA-DR, CD86 및 CD83의 수준을 증가시켰다. 그러나, 이 증가는 SKBR-3 암 세포의 존재 하에서 감소되었으며, 이는 암 세포의 DC 활성화의 억제를 반영한다. 야누스로의 SKBR-3 세포주의 처리는 DC 상의 HLA-DR, CD86 및 CD83의 증가된 세포 표면 발현에 의해 입증된 바와 같이, DC의 SKBR-3-매개된 억제를 차단하였다. 효과는 야누스 비-Her2에 대해 감소되었고, ASC의 야누스 LOF 버전에 대해 완전히 부재하였으며, 이는 ASC에서의 활성 및 표적화된 시알리다제 활성 둘 다가 최적 효과를 위해 요구됨을 지시한다.
이들 결과는 ASC에 의한 암 세포의 표적화된 탈시알릴화가 수지상 세포 (DC) 활성화의 암-세포 매개된 억제를 감소시킬 수 있음을 입증한다. 따라서, ASC로의 처리는 DC에 의한 그들의 제시를 향상시킴으로써 종양 항원의 면역원성을 향상시키기 위한 유효한 전략일 수 있다.
실시예 13
이 실시예는 인간 시알리다제를 갖는 항체 시알리다제 접합체 (ASC)에 의한 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에서의 전염증성 시토카인의 유도를 기재한다.
M1D, V6Y, I187K, 및 C332A 돌연변이를 갖는 Neu2 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 98에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 54를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함)를 구축하였다.
인간 PBMC를 새롭게 단리하고, 2회 세척하고, 웰 당 250,000 PBMC로 배양 배지 (RPMI 1640 + L-글루트, 10％ FBS, 1％ P/S)에 플레이팅하였다. PBMC를 100μg/ml의 최대 농도를 갖는 2.5X 계열 희석으로 야누스 ASC와 함께 4중으로 인큐베이션하였다. 37℃에서 24시간 후, 세포를 원심분리에 의해 제거하고, 상청액을 루미넥스 다중 검정을 제조업자의 지시서에 따라 사용한 시토카인 측정을 위해 수집하였다.
양성 대조군으로서, IL-2 (10U/mL) 또는 LPS (10ng/mL)를 갖는 피토헤마글루티닌-L (PHA-L; 5μg/mL)을 사용하여 시토카인 방출을 자극하였다. 음성 대조군으로서, 트라스투주맙 (10μg/mL)을 사용하였다. 도 22에서 보여지는 바와 같이, 인간 야누스 ASC는 PBMC에서 전염증성 시토카인 분비 (예를 들어, INFγ, IL-1b, IL-6 및 TNFα)를 유도하였다. 도 23은 전염증성 시토카인 IL-2, 항염증성 시토카인 IL-4 및 IL-10, 및 전- 및 항염증성 시토카인 IL-13의 PBMC 분비에 대한 인간 야누스 ASC의 효과를 도시한다.
이들 결과는 ASC가 PBMC에서 전염증성 시토카인의 분비를 유도할 수 있음을 입증한다.
실시예 14
이 실시예는 숙주-종양 미세환경 모델 계에의 항체 시알리다제 접합체 (ASC)의 첨가 후의 증가된 면역-관련된 활성을 기재한다.
바이오맵 온콜로지 패널 (BioMAP Oncology Panel) (유로핀스 (Eurofins), 미국 캘리포니아주 프레몬트)은 암-유도된 면역 억제를 모방하는 종양 세포주 및 초기 계대 1차 인간 세포 (내피 세포/섬유모세포 및 PBMC)의 복합 공동-배양물이다. 특정 상황에서, 바이오맵 결과는 임상적 결과와 상관되었다. 예를 들어, 펨브롤리주맙은 모델에서 면역 반응을 증가시키는 것으로 나타난 반면, IDO 억제제는 효과를 갖지 않았다.
하기 구축물을 바이오맵 VascHT29 공동-배양 시스템을 사용하여 맹검 연구에서 시험하였다: (i) 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제) 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); (ii) 2개의 기능 소실 돌연변이, 즉, D100V 및 G231V를 갖는 St-시알리다제, 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC ("야누스-LOF", 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 62에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 61을 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); (iii) 이소형 대조군; (iv) 트라스투주맙; 또는 (v) 펨브롤리주맙. 모든 ASC를 실시예 7에 기재된 바와 같이 제조하였다.
시험 시약을 다양한 농도 (50, 17, 5.6 및 1.9 μg/ml)에서 48시간 동안 시험하였다. 노출 후, 다수의 파리미터를 도 24 및 도 25에 나타내어진 바와 같이 분석하였다. 둘 다의 도면에서, 비히클 반응의 기지의 범위는 제로 기준선을 따라 음영처리된 영역에 의해 나타내어진다. 각각의 측정에 대한 값은 시험품 대 비히클 대조군의 비의 로그에 의해 나타내어진다. 기지의 범위 초과의 통계적으로 유의미한 값을 갖는 분석물은 주석표시된다.
도 24는 야누스가 이 연구에서 시험된 농도에서 세포독성이 아님을 입증한다. 야누스는 증가된 가용성 IL-17A, IL-6, IL-2, 및 IFNγ 뿐만 아니라 증가된 TNFα에 의해 보여지는 바와 같은 염증-관련된 활성을 비롯한 다수의 면역-관련된 활성의 용량 의존적 증가를 입증하였다. 야누스 LOF는 이 연구에서 시험된 농도에서 세포독성이 아니며, 증가된 IFNγ를 갖는 보통의 면역-관련된 활성 및 감소된 CEACAM5를 갖는 종양-관련된 활성을 입증하였다. 도 25는 야누스 대 펨브롤리주맙의 비교이다. 도 25에서 볼 수 있는 바와 같이, 야누스는 이 종양 미세환경 모델에서 펨브롤리주맙과 유사한 활성을 갖는다.
실시예 15
이 실시예는 박테리아 시알리다제를 함유하는 항체 시알리다제 접합체 (ASC)의 생체내 투여를 기재한다.
하기 ASC를 이 실시예에서 제조하고, 시험하였다: (i) 살모넬라 티피무리움 시알리다제 (St-시알리다제) 및 트라스투주맙을 포함하는 야누스 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 68에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 67을 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 58에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 57을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함); 및 (ii) St-시알리다제 및 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질을 인식하는 항체를 포함하는 비-Her2 결합 야누스 ASC ("야누스 비-Her2"; 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 95에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 94를 갖는 제1 폴리펩티드 쇄, 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 97에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 96을 갖는 제2 폴리펩티드 쇄, 및 뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 56에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 55를 갖는 제3 폴리펩티드 쇄를 포함함). ASC를 실시예 7에 기재된 바와 같이 제조하였다.
ASC를 마우스 동계 종양 모델에서 트라스투주맙과 비교하였다. 6 내지 8주령의 암컷 BALB/c 마우스를 종양 발달을 위해 0.1 ml의 PBS 중 인간 Her2를 발현하는 뮤린 유방암 세포주 (EMT6-hHer2 세포; 5 x 105개 세포)로 우측 하부 옆구리 영역에 피하로 접종하였다. 마우스를 종양이 50 내지 100 mm3, 평균 약 75 내지 100 mm3에 도달하였을 때 8마리의 동물의 4마리의 군으로 각각 무작위로 할당하였다.
마우스를 10 mg/kg의 야누스, 트라스투주맙 또는 비-Her2 결합 야누스의 복강내 주사를 통해 처리하고, 종양 부피 (mm3)를 기록하였다. 도 26a는 각각의 처리군에 대한 평균 종양 부피를 나타낸다. 도 26b는 각각의 처리군에서의 개별적 마우스에 대한 종양 부피를 나타낸다. 완전한 반응 (CR, 연구 동안 임의의 시점에서 촉진의 한계 미만의 퇴행으로서 정의됨)이 또한 나타내어진다. 트라스투주맙 및 비히클 대조군은 유사한 종양 성장 곡선 및 CR 없음을 입증하였다. 대조적으로, 야누스는 8마리의 마우스 중 3마리가 CR을 입증하는 비히클에 비해 감소된 종양 성장을 입증하였다. 비-Her2 결합 야누스는 8마리의 마우스 중 1마리가 CR을 입증하는 비히클에 비해 감소된 종양 성장을 입증하였다. 이들 결과는 ASC가 ASC에 의해 표적화된 종양 항원의 낮은 발현 수준으로 종양에 대해 활성일 수 있음을 나타낸다. 추가적으로, 이들 결과는 비-표적화된 ASC, 예를 들어, 시알리다제-Fc 융합 단백질이 특이적 종양-연관된 항원을 결여한 종양에 대해 활성일 수 있음을 시사한다.
실시예 16
이 실시예는 인간 시알리다제를 함유하는 항체 시알리다제 접합체 (ASC)의 생체내 투여를 기재한다.
하기 ASC를 이 실시예에서 제조하고, 시험하였다: (i) ΔM1, V6Y 및 I187K 돌연변이를 갖는 Neu2 및 트라스투주맙으로부터 유래된 scFv를 포함하는 로브스터 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 66에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 65를 갖는 제1 및 제2 폴리펩티드 쇄를 포함함, 및 이 실시예에서 "로브스터 1"로 지칭됨); 및 (ii) V6Y 및 I187K 돌연변이를 갖는 Neu2 및 트라스투주맙으로부터 유래된 scFv를 포함하는 로브스터 ASC (뉴클레오티드 서열 서열식별번호: 99에 의해 코딩되는 아미노산 서열 서열식별번호: 74를 갖는 제1 및 제2 폴리펩티드 쇄를 포함함, 및 이 실시예에서 "로브스터 2"로 지칭됨). ASC를 실시예 7에 기재된 바와 같이 제조하였다.
이들 ASC를 인간 Her2를 발현하는 뮤린 유방암 세포주 (EMT6-hHer2 세포)로 주사된 마우스 동계 종양 모델에서 트라스투주맙과 비교하였다. 6 내지 8주령의 암컷 BALB/c 마우스를 종양 발달을 위해 0.1 ml의 PBS 중 EMT6-Her2 종양 세포 (5 x 105개)로 우측 하부 옆구리 영역에 피하로 접종하였다. 마우스를 종양이 50 내지 100 mm3, 평균 약 75 내지 100 mm3에 도달하였을 때 5마리의 동물의 4개의 군으로 각각 무작위로 할당하였다.
마우스를 10 mg/kg의 인간 로브스터 1, 인간 로브스터 2, 또는 트라스투주맙 중 어느 하나의 복강내 주사를 통해 처리하고, 종양 부피 (mm3)를 기록하였다. 도 27a 내지 d는 지시된 처리에 대한 개별적 마우스에 대한 평균 종양 부피를 나타낸다. 완전한 반응 (CR, 연구 동안 임의의 시점에서 촉진의 한계 미만의 퇴행으로서 정의됨)이 나타내어진다. 트라스투주맙 및 비히클 대조군은 CR이 없음을 입증하였다. 대조적으로, 인간 로브스터 1 및 인간 로브스터 2 둘 다는 둘 다의 군에서 5마리의 마우스 중 1마리가 CR을 입증하는 비히클에 비해 감소된 종양 성장을 입증하였다. 이 실시예는 인간 시알리다제 기재 ASC가 생체내 종양 모델에서 효능을 입증함을 입증한다.
참조로 포함
본원에 언급된 특허 및 과학 문서의 각각의 전체 개시내용은 모든 목적을 위해 참조로 포함된다.
등가물
본 발명은 그의 정신 또는 본질적 특징으로부터 벗어나지 않고 다른 구체적인 형태로 구현될 수 있다. 따라서, 상기 실시양태는 본원에 기재된 본 발명에 대한 제한이라기 보다는 모든 관점에서 예시적인 것으로 간주되어야 한다. 따라서, 본 발명의 범위는 상기 설명에 의해서라기 보다는 첨부된 청구범위에 의해 지시되며, 청구범위의 등가성의 의미 및 범위 내인 모든 변화는 본원에 포함되는 것으로 의도된다.
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SEQUENCE LISTING <110> PALLEON PHARMACEUTICALS INC. <120> RECOMBINANT HUMAN SIALIDASES, SIALIDASE FUSION PROTEINS, AND METHODS OF USING THE SAME <130> PAL-009WO <140> PCT/US2019/012207 <141> 2019-01-03 <150> 62/755,279 <151> 2018-11-02 <150> 62/613,363 <151> 2018-01-03 <160> 109 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 380 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ala Ser Leu Pro Val Leu Gln Lys Glu Ser Val Phe Gln Ser Gly 1 5 10 15 Ala His Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Leu Leu Tyr Leu Pro Gly Gln Gln 20 25 30 Ser Leu Leu Ala Phe Ala Glu Gln Arg Ala Ser Lys Lys Asp Glu His 35 40 45 Ala Glu Leu Ile Val Leu Arg Arg Gly Asp Tyr Asp Ala Pro Thr His 50 55 60 Gln Val Gln Trp Gln Ala Gln Glu Val Val Ala Gln Ala Arg Leu Asp 65 70 75 80 Gly His Arg Ser Met Asn Pro Cys Pro Leu Tyr Asp Ala Gln Thr Gly 85 90 95 Thr Leu Phe Leu Phe Phe Ile Ala Ile Pro Gly Gln Val Thr Glu Gln 100 105 110 Gln Gln Leu Gln Thr Arg Ala Asn Val Thr Arg Leu Cys Gln Val Thr 115 120 125 Ser Thr Asp His Gly Arg Thr Trp Ser Ser Pro 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acagcgatct gcagtctatg 1020 ggcacaggcc ctgatggcag ccctctgttt ggctgtctgt acgaggccaa cgactacgaa 1080 gagatcgtgt tcctgatgtt caccctgaag caggcctttc cagccgagta cctgcctcaa 1140 <210> 25 <211> 1284 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 25 atggaggaag tgaccacctg tagcttcaac agccctctgt tccggcaaga ggacgaccgg 60 ggcatcacct acagaatccc tgctctgctg tacatccctc ctacacacac ctttctggcc 120 ttcgccgaga agcggagcac cagacgagat gaagatgccc tgcacctggt gctgagaaga 180 ggcctgagaa tcggacagct ggtgcagtgg ggacctctga agcctctgat ggaagccaca 240 ctgcccggcc acagaaccat gaatccttgt cctgtgtggg agcagaaaag cggctgcgtg 300 ttcctgttct tcatctgcgt gcggggccac gtgaccgaga gacagcaaat cgtgtccggc 360 agaaacgccg ccagactgtg cttcatctac agccaggatg ccggctgctc ttggagcgaa 420 gttcgggatc tgaccgaaga agtgatcggc agcgagctga agcactgggc cacatttgct 480 gttggccctg gccacggaat ccagctgcaa tctggcagac tggtcatccc cgcctacacc 540 tactatatcc ccagctggtt cttctgcttc caactgcctt gcaagacccg gcctcacagc 600 ctgatgatct acagcgacga tctgggcgtg acatggcacc acggcagact gatcagaccc 660 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180 ctggctggcg gctctgttag atggggagca ctgcatgtgc tgggcacagc tgctcttgcc 240 gagcacagat ccatgaatcc ctgtcctgtg cacgacgccg gaaccggcac agtgtttctg 300 ttctttatcg ccgtgctggg ccacacacct gaggccgttc aaattgccac cggcagaaat 360 gccgccagac tgtgttgtgt ggcctccaga gatgccggcc tgtcttgggg atctgccaga 420 gatctgaccg aggaagccat tggcggagcc gttcaggatt gggccacatt tgctgttgga 480 cctggacacg gcgtgcagct gccaagtggt agactgctgg tgcctgccta cacatacaga 540 gtggatcgga gagagtgctt cggaaagatc tgccggacaa gccctcacag cttcgccttc 600 tactccgacg atcacggccg gacttggaga tgtggtggcc tggtgcctaa tctgagaagc 660 ggcgaatgtc aactggccgc cgttgatggt ggacaggctg gcagcttcct gtactgcaac 720 gccagatctc ctctgggctc tagagtgcag gccctgtcta ccgatgaggg caccagtttt 780 ctgcccgccg aaagagttgc ctctctgcct gaaacagcct ggggctgtca gggctctatc 840 gtgggatttc ctgctcctgc tccaaacaga ccccgggacg attcttggag tgtcggccct 900 ggatctccac tgcagcctcc attgcttgga ccaggcgttc acgagccacc tgaagaggct 960 gccgttgatc ctagaggcgg acaagttcct ggcggccctt ttagcagact gcagccaaga 1020 ggcgacggcc 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accttgggga caagcctcgg gggtgctgct ggccctcc 1488 <210> 36 <211> 379 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 36 Ala Ser Leu Pro Tyr Leu Gln Lys Glu Ser Val Phe Gln Ser Gly Ala 1 5 10 15 His Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Leu Leu Tyr Leu Pro Gly Gln Gln Ser 20 25 30 Leu Leu Ala Phe Ala Glu Gln Arg Ala Ser Lys Lys Asp Glu His Ala 35 40 45 Glu Leu Ile Val Leu Arg Arg Gly Asp Tyr Asp Ala Pro Thr His Gln 50 55 60 Val Gln Trp Gln Ala Gln Glu Val Val Ala Gln Ala Arg Leu Asp Gly 65 70 75 80 His Arg Ser Met Asn Pro Cys Pro Leu Tyr Asp Ala Gln Thr Gly Thr 85 90 95 Leu Phe Leu Phe Phe Ile Ala Ile Pro Gly Gln Val Thr Glu Gln Gln 100 105 110 Gln Leu Gln Thr Arg Ala Asn Val Thr Arg Leu Cys Gln Val Thr Ser 115 120 125 Thr Asp His Gly Arg Thr Trp Ser Ser Pro Arg Asp Leu Thr Asp Ala 130 135 140 Ala Ile Gly Pro Ala Tyr Arg Glu Trp Ser Thr Phe Ala Val Gly Pro 145 150 155 160 Gly His Cys Leu Gln Leu His Asp Arg Ala Arg Ser Leu Val Val Pro 165 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Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 38 Ala Ala Ser Leu Pro Tyr Leu Gln Lys Glu Ser Val Phe Gln Ser Gly 1 5 10 15 Ala His Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Leu Leu Tyr Leu Pro Gly Gln Gln 20 25 30 Ser Leu Leu Ala Phe Ala Glu Gln Arg Ala Ser Lys Lys Asp Glu His 35 40 45 Ala Glu Leu Ile Val Leu Arg Arg Gly Asp Tyr Asp Ala Pro Thr His 50 55 60 Gln Val Gln Trp Gln Ala Gln Glu Val Val Ala Gln Ala Arg Leu Asp 65 70 75 80 Gly His Arg Ser Met Asn Pro Cys Pro Leu Tyr Asp Ala Gln Thr Gly 85 90 95 Thr Leu Phe Leu Phe Phe Ile Ala Ile Pro Gly Gln Val Thr Glu Gln 100 105 110 Gln Gln Leu Gln Thr Arg Ala Asn Val Thr Arg Leu Cys Gln Val Thr 115 120 125 Ser Thr Asp His Gly Arg Thr Trp Ser Ser Pro Arg Asp Leu Thr Asp 130 135 140 Ala Ala Ile Gly Pro Ala Tyr Arg Glu Trp Ser Thr Phe Ala Val Gly 145 150 155 160 Pro Gly His Cys Leu Gln Leu His Asp Arg Ala Arg Ser Leu Val Val 165 170 175 Pro Ala Tyr Ala Tyr Arg Lys Leu His Pro Lys Gln Arg Pro Ile Pro 180 185 190 Ser Ala Phe Cys Phe Leu Ser His Asp His Gly 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aaactggtgg ccgctcactc tagcgcccag 900 aacaagaaca acgattacac cagaagcgac atcagcctgt acgcccacaa cctgtactcc 960 ggcgaagtga agctgatcga cgacttctac cccaaagtgg gcaatgccag cggagccggc 1020 tacagctgtc tgagctaccg gaaaaatgtg gacaaagaaa ccctgtacgt ggtgtacgag 1080 gccaacggca gcatcgagtt tcaggacctg agcagacatc tgcccgtgat caagagctac 1140 aatggcggag gtggaagtgg cggaggcgga tccgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1200 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1260 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1320 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1380 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1440 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1500 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtctac 1560 accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1620 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1680 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct cactagcaag 1740 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1800 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 1854 <210> 63 <211> 386 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 63 Met Glu Asp Leu Arg Pro Met Ala Ser Leu Pro Val Leu Gln Lys Glu 1 5 10 15 Ser Val Phe Gln Ser Gly Ala His Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Leu Leu 20 25 30 Tyr Leu Pro Gly Gln Gln Ser Leu Leu Ala Phe Ala Glu Gln Arg Ala 35 40 45 Ser Lys Lys Asp Glu His Ala Glu Leu Ile Val Leu Arg Arg Gly Asp 50 55 60 Tyr Asp Ala Pro Thr His Gln Val Gln Trp Gln Ala Gln Glu Val Val 65 70 75 80 Ala Gln Ala Arg Leu Asp Gly His Arg Ser Met Asn Pro Cys Pro Leu 85 90 95 Tyr Asp Ala Gln Thr Gly Thr Leu Phe Leu Phe Phe Ile Ala Ile Pro 100 105 110 Gly Gln Val Thr Glu Gln Gln Gln Leu Gln Thr Arg Ala Asn Val Thr 115 120 125 Arg Leu Cys Gln Val Thr Ser Thr Asp His Gly Arg Thr Trp Ser Ser 130 135 140 Pro Arg Asp Leu Thr 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 66 gcatctctgc cttacctgca gaaagaaagc gtgttccagt ctggcgccca cgcctacaga 60 attcccgctc tgctgtatct gccaggccag cagtctctgc tggctttcgc tgaacagcgg 120 gccagcaaga aggatgagca cgccgaactg atcgtgctgc ggagaggcga ttacgacgcc 180 cctacacatc aggtgcagtg gcaggctcaa gaggtggtgg ctcaggctag actggacggc 240 cacagatcta tgaacccctg tcctctgtac gatgcccaga ccggcacact gtttctgttc 300 tttatcgcta tccccggcca agtgaccgag cagcagcagc tgcagacaag agccaacgtg 360 accagactgt gtcaagtgac ctccaccgac cacggcagaa cctggtctag ccctagagat 420 ctgaccgacg ccgccatcgg acctgcctat agagagtggt ccaccttcgc cgttggacct 480 ggacactgtc tccagctgca cgacagggct agatctctgg tggtgcctgc ctacgcctat 540 agaaagctgc accccaaaca gcggcctatt cctagcgcct tctgctttct gagccacgat 600 cacggcagga catgggccag aggacatttc gtggcccagg acacactgga atgccaggtg 660 gccgaagtgg aaaccggcga gcagagagtc gtgaccctga acgccagatc tcacctgaga 720 gccagagtgc aggcccagag cacaaacgac ggcctggatt tccaagagag ccagctggtc 780 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tttgcaagtg tcaaagatgg gggggcgtgt 2040 ttatatttta tatttctaag atggggtggc ataggaaata gggaacagat gtgtaaaacc 2100 agatgggaag gacagtctgt gagaaaggag caagcagttg ctgcaggtgt gggagagcaa 2160 agcccttctc cacgtggaaa gagcccagat ggacgctaag catgttgggc acctgtaacc 2220 ccgcactcgc tggactgacg gtgtagctca gtggtggagc tagtacttgg aacgcctaag 2280 actctgggtt cagtccttgg gggggggggt atgtgtttat tgagaggaag gtgtacgtac 2340 tgtaggtcag aggacagctt actggagttg tctctctcct tcacgctgtg agtcctgtgg 2400 aatgacctca ggtgtcagag ttgggggcag gtgcctttgc cagctgagcc atcttgctgt 2460 ctctgcttta atttaaaaaa aaaaaaaaaa aagaatatta aggtctgagg gattcgggct 2520 gcgttcattt caattagagg gtcatatttc ttttgacatt tcttctctaa gaaatgttaa 2580 gatcatttgt tctgtgtgat agaggtatag ctccattgta tgtcagcagt gagggatcct 2640 gtgcatttta tccagagttt gtacggtgtt ctaggggctg ctagtgcagc ccagtgctaa 2700 acacttcagc atgcacaagg cctcaatcag tgcatgcatg tgcacacaca cacagacaca 2760 cacgtacaca ctgacacagg tacacaaata cacactggcc cacatgtaca catcgactca 2820 caggtacaca gacccacttt gacacacata tacacagaca caaacgcact ggcacacaca 2880 tatacacagg cacacatgga tagatggaca cacgtgtaca catacacaca cacacagaaa 2940 tacaaatgtt caggttttct aaaaaaaaaa aaattagaga cgtgttgact tcatttttag 3000 caaaaatcct gtcatgtatc ttaaagtgga ttgaacccac tatgtagccc aggctggcct 3060 ccaaatgggc atccttctgc ctcagtctcc cgagggctag gataacagga gtatgccatc 3120 acacctggct aatagaaatt ttcaaaattg tttgtttgaa ggtgactctt actatattgc 3180 ctaactgatc tccagttcgt gaaatcctcc tgcctcagaa ccaggactgt caatataacc 3240 caccaagaca ggccaacatt cacaattgat tgttagtttg tggtctgaat caaggtctta 3300 tactgtagcc caggctagcc cggaatacac gatatctcca gtgcttcaga tcctcagttc 3360 taactaagca tggccacatc catgtttaac tgcaaatttg atgttaccat ggtttggttt 3420 ggtttggttt ggtttggttt ggtttggttt ggttttttgg ccattttttt tttctcatgc 3480 tgaggccttg tgctctcaag ttggggagac agcatggagg gtagctgcaa ctgtaacccc 3540 agttccaggg gacctgacac cctctggcct ccacaagtat taggcacatc tgtggtgcac 3600 agacatacaa tcaggcaaaa tattcataca cataaaataa aataatttaa aacaaaagca 3660 aaaatcagga cctaagaaaa aaatctattc ctgattcttt tatgttttgt ttgtatttta 3720 tcaagacagg gttgtttctc tgtatagccc tggctgtctt ggaattcact ctgtagacca 3780 ggctggcctc aaactcagaa atcctcctgc ctttgccttc caagtgctgg aattaaaggc 3840 atgcgccacc 3850 <210> 88 <211> 1722 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 88 gacatgaccc aaacggcccc tggctgcaag gtaatatcgg aagttgacta agaatggacg 60 ccccaccact gactgacccg ccccctgagt ctgagattgg acttgtctct ggatacagtc 120 atactttgag gtactacaag ttagaaactg ttaggttact cagttcagtc catgacagtc 180 caaccttctc catggttttc cgatctcagg cccatggcga cctgccctgt cctgcagaag 240 gagacactgt tccgcacagg cgtccatgct tacagaatcc ctgctctgct ctacctgaag 300 aagcagaaga ccctgctggc ctttgcggaa aagcgagcca gcaagacgga tgagcacgca 360 gagttgattg tcctgagaag aggaagctac aacgaagcca ccaaccgtgt caagtggcag 420 cctgaggaag tggtgaccca agcccagctg gaaggccacc gctccatgaa tccatgtccc 480 ttgtatgaca agcaaacaaa gaccctcttc cttttcttca tcgctgtccc tgggcgtgta 540 tcagaacatc atcagctcca cactaaggtt aatgtcacac ggctgtgctg tgtcagcagc 600 actgaccatg ggaggacctg gagccccatc caggacctca cagagaccac cattggcagc 660 actcatcagg aatgggccac atttgctgtg ggtcctgggc attgtctgca gctgcggaac 720 ccagctggga gcctgctggt acctgcttat gcctaccgga aactgcaccc tgctcagaag 780 cctaccccct ttgccttctg cttcatcagc cttgaccatg ggcacacatg gaaactaggc 840 aactttgtgg ctgaaaactc actggagtgc caggtggctg aggttggcac tggagctcag 900 aggatggtat atctcaatgc taggagcttc ctgggagcca gggtccaggc acaaagtcct 960 aatgatggtc tggatttcca ggacaaccgg gtagtgagta agcttgtaga gcccccccac 1020 gggtgtcatg gaagtgtggt tgccttccac aaccccatct ctaagccaca tgccttagac 1080 acatggcttc tttatacaca ccctacagac tccaggaata gaaccaacct gggtgtgtac 1140 ctaaaccaga tgccactaga tcccacagcc tggtcagagc ccaccctgct ggccatgggc 1200 atctgtgcct actcagactt acagaacatg gggcaaggcc ctgatggctc cccacagttt 1260 gggtgtctgt atgaatcagg taactatgaa gagatcattt tcctcatatt caccctgaag 1320 caagctttcc ccactgtatt tgatgcccag tgatctcagt gcacgtggcc caaagggctt 1380 ccttgtgctt caaaacaccc atctctcttt gcttccagca tcctctggac tcttgagtcc 1440 agctcttggg taacttcctc aggaggatgc agagaatttg gtctcttgac 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gtttttcatc tgtgtgcggg gccatgttac 600 tgagaggtgc cagattgtgt ggggcaaaaa tgccgcccgt ctctgcttcc tttgcagtga 660 agatgccggc tgctcttggg gtgaagtgaa agacttgacc gaggaggtca ttggctcaga 720 ggtgaagcgc tgggccacat ttgctgtggg cccaggtcat ggcatccagc tacactcggg 780 aaggctgatc atccccgcct atgcctacta tgtctcacgt tggtttctct gctttgcgtg 840 ttcagtcaag ccccattccc tgatgatcta cagtgatgac tttggagtca catggcacca 900 tggcaagttc attgagcccc aggtgacagg ggagtgccaa gtggccgaag tggctgggac 960 ggctggtaac cctgtgctca ctgcagtgcc cgaacaccaa gccgatttcg agcagaggct 1020 tttagtactg atagtggtgg ctgctttcag aagccaaccc tgaacccaca actccatgag 1080 cctcgaaccg gctgccaagg tagtgtagtg agcttccggc ctttgaagat gccaaatacc 1140 tatcaagact caattggcaa aggtgctccc gctactcaga agtgccctct gctggacagt 1200 cctctggagg tggagaaagg agctgaaaca ccatcagcaa catggctctt gtactcacat 1260 ccaactagca agaggaagag gattaaccta ggcatctact acaaccggaa ccccttggag 1320 gtgaactgct ggtcccgccc gtggatcttg aaccgtgggc ccagtggcta ctctgatctg 1380 gctgttgtgg aagaacagga cttggtggcg tgtttgtttg 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ttgactgggc ttatctatat 3120 gaaacttcat tgttaacttt tacacaagaa ttatggtttt taactttcag tgaacctgcg 3180 gagctagtga cagaagagaa atgtctagtt agataactac tcttaatgga aattcacata 3240 aacatctgtt gccatcttct ttttgaattt atgtttaaac ttgtgaatgt ttgaattaga 3300 cactacgcga gcacatagaa aataaagaac taagcgtgaa 3340 <210> 90 <211> 4608 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 90 ggacagtgtg catcacggag cttgtggccc agactgtgcc tggcagaccc agaggaccta 60 aggcttggct ctagtggtgg tcagcacagc cctcggtggt ctgcggagcc tgatattgct 120 ttacgtaagg gctgttctgc tgtgcatctc ctgtgtctga agctattcgc catggagact 180 gctggagctc ccttctgctt ccatgtggac tccctggtac cttgctccta ctggaaggtt 240 atggggccca cgcgtgttcc caggagaacg gtgctcttcc agagggaaag gacgggcctg 300 acctaccgtg tgcctgcgtt actctgtgtg cctcccaggc ctactctgct ggccttcgcg 360 gaacagcgac ttagccctga tgactcccat gcccaccgcc tggtgctacg gaggggcacg 420 ctgaccaggg gctcagtgcg gtggggcact ctgagtgtac tggagactgc agtactggag 480 gagcacaggt ctatgaaccc ttgcccggtg ctggatgagc actctggtac catcttcctc 540 ttcttcattg ccgtgctggg ccacacaccg gaggccgtgc aaatcgccac tggcaagaac 600 gctgctcgcc tctgctgtgt gaccagctgt gacgctggcc tcacctgggg cagtgttcga 660 gatctcactg aggaagccat tggtgctgca ttgcaggact gggccacctt tgctgtgggt 720 ccgggccatg gagttcagct gcgctcgggt cgcctgcttg ttcctgctta cacctatcat 780 gtggaccgac gggaatgttt tggcaagatc tgctggacca gtccccactc cttggcattc 840 tacagtgatg atcatgggat ctcctggcat tgtggaggcc ttgtgcccaa cctacgctct 900 ggagagtgcc aactggctgc ggtagatgga gactttctct actgtaatgc tcgaagccct 960 ctgggtaacc gtgtgcaggc actgagtgct gatgaaggca cgtccttcct accaggggag 1020 ctggtgccta cattggcaga gacggctcgt ggttgccagg gtagcattgt gggcttccta 1080 gctccaccct caatcgagcc tcaggatgac cggtggacag ggagtcctag gaacacccca 1140 cattccccat gcttcaatct cagagtacag gagtcttcgg gggaaggtgc cagaggtctt 1200 cttgaacgtt ggatgcccag gttgcctctc tgctacccac agtcccggag cccagagaat 1260 catggcctag agcctgggtc agatggagat aagacatcct ggactccgga atgtcctatg 1320 tcctctgatt ccatgcttca gagccccaca tggctactat attcccaccc agcagggcgt 1380 agagctcggc tccacatggg aatctacctg agccgatccc ccttggatcc ccacagctgg 1440 acagagccct gggtgatcta tgagggcccc agtggctact ctgaccttgc ctttcttggg 1500 cctatgcctg gggcatccct ggtttttgcc tgtctgtttg agagcgggac caggacttcc 1560 tatgaagaca tttctttttg cttgttctca ctggcggatg tcctggagaa tgtgcccact 1620 ggcttagaga tgctaagtct cagggataag gctcaggggc attgctggcc ctcttgatgg 1680 cctcaccctc tcgtagccgc ctggagagga agggtagact atatagagga ggttaggggt 1740 aggtcagcat gatgctagga tggagagagc tctgtcccct cgtggatggt ggtggtgact 1800 cacccggggg gccagctgct ttctgagtgc aaatgagaaa aataaagagc tgcgctgtga 1860 cttttctttc cacatcaaag cttgggtgtc agtgctttag cttgatgctc tgatcaccat 1920 gcaaatcttc caccggcgcc ttgctcagct ttcatatccc aagggtgcct gggaggaagg 1980 caacagggac agtggacatc actgcaccac tttccacgac cctgtgtgcc aacctcagcc 2040 actttgaaac atgctgatga ctgaggtctg ttcactttct taatttcaag caggagaagc 2100 aggttgggga gccagcctcc ccagctagag gggacagaac ttgacttgag caggggggta 2160 cctcctagga cctgctccat gtgcctactt ctttaccctt ctctagagag ggctcttgtc 2220 ctgtcagagc tgttttctcc cttctcttgt 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Xaa 340 345 350 Leu Tyr Glu Ala Asn Asp Tyr Glu Glu Ile Val Phe Leu Met Phe Thr 355 360 365 Leu Lys Gln Ala Phe Pro Ala Glu Tyr Leu Pro Gln Gly Gly Gly Gly 370 375 380 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 385 390 395 400 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 405 410 415 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 420 425 430 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 435 440 445 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 450 455 460 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 465 470 475 480 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 485 490 495 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 500 505 510 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 515 520 525 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 530 535 540 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 545 550 555 560 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 565 570 575 Thr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 580 585 590 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 595 600 605 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 610 615 <210> 102 <211> 874 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Val, or not present <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ala or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Asn or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Phe, Trp, Tyr or Val <220> <221> MOD_RES <222> (125)..(125) <223> Ala, Cys, Ile, Ser or Val <220> <221> MOD_RES <222> (187)..(187) <223> Arg, Ile or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (196)..(196) <223> Ala, Cys, Leu or Val <220> <221> MOD_RES <222> (257)..(257) <223> Glu or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (272)..(272) <223> Cys or Val <220> <221> MOD_RES <222> (325)..(325) <223> Lys or Val <220> <221> MOD_RES <222> (332)..(332) <223> Ala, Cys, Ser or Val <220> <221> MOD_RES <222> (352)..(352) <223> Cys, Leu or Val <400> 102 Xaa Xaa Ser Xaa Pro Xaa Leu Gln Lys Glu Ser Val Phe Gln Ser Gly 1 5 10 15 Ala His Ala Tyr Arg Ile Pro Ala Leu Leu Tyr Leu Pro Gly Gln Gln 20 25 30 Ser Leu Leu Ala Phe Ala Glu Gln Arg Ala Ser Lys Lys Asp Glu His 35 40 45 Ala Glu Leu Ile Val Leu Arg Arg Gly Asp Tyr Asp Ala Pro Thr His 50 55 60 Gln Val Gln Trp Gln Ala Gln Glu Val Val Ala Gln Ala Arg Leu Asp 65 70 75 80 Gly His Arg Ser Met Asn Pro Cys Pro Leu Tyr Asp Ala Gln Thr Gly 85 90 95 Thr Leu Phe Leu Phe Phe Ile Ala Ile Pro Gly Gln Val Thr Glu Gln 100 105 110 Gln Gln Leu Gln Thr Arg Ala Asn Val Thr Arg Leu Xaa Gln Val Thr 115 120 125 Ser Thr Asp His Gly Arg Thr Trp Ser Ser Pro Arg Asp Leu Thr Asp 130 135 140 Ala Ala Ile Gly Pro Ala Tyr Arg Glu Trp Ser Thr Phe Ala Val Gly 145 150 155 160 Pro Gly His Cys Leu Gln Leu His Asp Arg Ala Arg Ser Leu Val Val 165 170 175 Pro Ala Tyr Ala Tyr Arg Lys Leu His Pro Xaa Gln Arg Pro Ile Pro 180 185 190 Ser Ala Phe Xaa Phe Leu Ser His Asp His Gly Arg Thr Trp Ala Arg 195 200 205 Gly His Phe Val Ala Gln Asp Thr Leu Glu Cys Gln Val Ala Glu Val 210 215 220 Glu Thr Gly Glu Gln Arg Val Val Thr Leu Asn Ala Arg Ser His Leu 225 230 235 240 Arg Ala Arg Val Gln Ala Gln Ser Thr Asn Asp Gly Leu Asp Phe Gln 245 250 255 Xaa Ser Gln Leu Val Lys Lys Leu Val Glu Pro Pro Pro Gln Gly Xaa 260 265 270 Gln Gly Ser Val Ile Ser Phe Pro Ser Pro Arg Ser Gly Pro Gly Ser 275 280 285 Pro Ala Gln Trp Leu Leu Tyr Thr His Pro Thr His Ser Trp Gln Arg 290 295 300 Ala Asp Leu Gly Ala Tyr Leu Asn Pro Arg Pro Pro Ala Pro Glu Ala 305 310 315 320 Trp Ser Glu Pro Xaa Leu Leu Ala Lys Gly Ser Xaa Ala Tyr Ser Asp 325 330 335 Leu Gln Ser Met Gly Thr Gly Pro Asp Gly Ser Pro Leu Phe Gly Xaa 340 345 350 Leu Tyr Glu Ala Asn Asp Tyr Glu Glu Ile Val Phe Leu Met Phe Thr 355 360 365 Leu Lys Gln Ala Phe Pro Ala Glu Tyr Leu Pro Gln Gly Gly Gly Gly 370 375 380 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 385 390 395 400 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 405 410 415 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 420 425 430 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 435 440 445 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 450 455 460 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 465 470 475 480 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 485 490 495 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 500 505 510 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 515 520 525 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 530 535 540 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 545 550 555 560 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 565 570 575 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 580 585 590 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 595 600 605 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 610 615 620 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly 625 630 635 640 Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala 645 650 655 Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala 660 665 670 Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly 675 680 685 Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala 690 695 700 Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala 705 710 715 720 Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe 725 730 735 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 740 745 750 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp 755 760 765 Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 770 775 780 Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val 785 790 795 800 Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 805 810 815 Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 820 825 830 Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 835 840 845 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr 850 855 860 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 865 870 <210> 103 <211> 875 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 103 Thr Val Glu Lys Ser Val Val Phe Lys Ala Glu Gly Glu His Phe Thr 1 5 10 15 Asp Gln Lys Gly Asn Thr Ile Val Gly Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr 20 25 30 Lys Tyr Phe Arg Ile Pro Ala Met Cys Thr Thr Ser Lys Gly Thr Ile 35 40 45 Val Val Phe Ala Asp Ala Arg His Asn Thr Ala Ser Asp Gln Ser Phe 50 55 60 Ile Asp Thr Ala Ala Ala Arg Ser Thr Asp Gly Gly Lys Thr Trp Asn 65 70 75 80 Lys Lys Ile Ala Ile Tyr Asn Asp Arg Val Asn Ser Lys Leu Ser Arg 85 90 95 Val Met Asp Pro Thr Cys Ile Val Ala Asn Ile Gln Gly Arg Glu Thr 100 105 110 Ile Leu Val Met Val Gly Lys Trp Asn Asn Asn Asp Lys Thr Trp Gly 115 120 125 Ala Tyr Arg Asp Lys Ala Pro Asp Thr Asp Trp Asp Leu Val Leu Tyr 130 135 140 Lys Ser Thr Asp Asp Gly Val Thr Phe Ser Lys Val Glu Thr Asn Ile 145 150 155 160 His Asp Ile Val Thr Lys Asn Gly Thr Ile Ser Ala Met Leu Gly Gly 165 170 175 Val Gly Ser Gly Leu Gln Leu Asn Asp Gly Lys Leu Val Phe Pro Val 180 185 190 Gln Met Val Arg Thr Lys Asn Ile Thr Thr Val Leu Asn Thr Ser Phe 195 200 205 Ile Tyr Ser Thr Asp Gly Ile Thr Trp Ser Leu Pro Ser Gly Tyr Cys 210 215 220 Glu Gly Phe Gly Ser Glu Asn Asn Ile Ile Glu Phe Asn Ala Ser Leu 225 230 235 240 Val Asn Asn Ile Arg Asn Ser Gly Leu Arg Arg Ser Phe Glu Thr Lys 245 250 255 Asp Phe Gly Lys Thr Trp Thr Glu Phe Pro Pro Met Asp Lys Lys Val 260 265 270 Asp Asn Arg Asn His Gly Val Gln Gly Ser Thr Ile Thr Ile Pro Ser 275 280 285 Gly Asn Lys Leu Val Ala Ala His Ser Ser Ala Gln Asn Lys Asn Asn 290 295 300 Asp Tyr Thr Arg Ser Asp Ile Ser Leu Tyr Ala His Asn Leu Tyr Ser 305 310 315 320 Gly Glu Val Lys Leu Ile Asp Asp Phe Tyr Pro Lys Val Gly Asn Ala 325 330 335 Ser Gly Ala Gly Tyr Ser Cys Leu Ser Tyr Arg Lys Asn Val Asp Lys 340 345 350 Glu Thr Leu Tyr Val Val Tyr Glu Ala Asn Gly Ser Ile Glu Phe Gln 355 360 365 Asp Leu Ser Arg His Leu Pro Val Ile Lys Ser Tyr Asn Gly Gly Gly 370 375 380 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 385 390 395 400 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 405 410 415 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 420 425 430 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 435 440 445 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 450 455 460 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 465 470 475 480 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 485 490 495 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 500 505 510 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 515 520 525 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 530 535 540 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 545 550 555 560 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 565 570 575 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 580 585 590 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 595 600 605 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly 610 615 620 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser 625 630 635 640 Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala 645 650 655 Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln 660 665 670 Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn 675 680 685 Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser 690 695 700 Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg 705 710 715 720 Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly 725 730 735 Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 740 745 750 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 755 760 765 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 770 775 780 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 785 790 795 800 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 805 810 815 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 820 825 830 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 835 840 845 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 850 855 860 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 865 870 875 <210> 104 <211> 2625 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 104 acagtggaaa agtccgtggt gttcaaggcc gagggcgagc acttcaccga ccagaaaggc 60 aataccatcg tcggctctgg cagcggcggc accaccaagt actttagaat ccccgccatg 120 tgcaccacca gcaagggcac cattgtggtg ttcgccgacg ccagacacaa caccgccagc 180 gatcagagct tcatcgatac cgctgccgcc agatctaccg atggcggcaa gacctggaac 240 aagaagatcg ccatctacaa cgaccgcgtg aacagcaagc tgagcagagt gatggaccct 300 acctgcatcg tggccaacat ccagggcaga gaaaccatcc tggtcatggt cggaaagtgg 360 aacaacaacg ataagacctg gggcgcctac agagacaagg cccctgatac cgattgggac 420 ctcgtgctgt acaagagcac cgatgacggc gtgaccttca gcaaggtgga aacaaacatc 480 cacgacatcg tgaccaagaa cggcaccatc tctgccatgc tcggcggcgt tggatctggc 540 ctgcaactga atgatggcaa gctggtgttc cccgtgcaga tggtccgaac aaagaatatc 600 accaccgtgc tgaataccag cttcatctac agcaccgacg gcatcacatg gtccctgcct 660 agcggctact gtgaaggctt tggcagcgag aacaacatca tcgagttcaa cgccagcctg 720 gtcaacaaca tccggaacag cggcctgcgg agaagcttcg agacaaagga cttcggaaag 780 acgtggaccg agtttcctcc aatggacaag aaggtggaca accggaacca cggcgtgcag 840 ggcagcacaa tcacaatccc tagcggcaac aaactggtgg ccgctcactc tagcgcccag 900 aacaagaaca acgactacac cagaagcgac atcagcctgt acgcccacaa cctgtacagc 960 ggcgaagtga agctgatcga cgacttctac cccaaagtgg gcaatgccag cggagccggc 1020 tacagctgtc tgagctaccg gaaaaatgtg gacaaagaaa ccctgtacgt ggtgtacgag 1080 gccaacggca gcatcgagtt tcaggacctg agcagacatc tgcccgtgat caagagctac 1140 aacggcggag gtggaagtgg cggaggcgga tccgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1200 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1260 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1320 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1380 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1440 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1500 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtctac 1560 accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1620 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1680 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag 1740 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1800 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaaggaggc 1860 ggaggatctg gcggaggtgg aagtggcgga ggcggatctg aggtgcagct ggttgaatct 1920 ggcggaggac tggttcagcc tggcggatct ctgagactgt cttgtgccgc cagcggcttc 1980 aacatcaagg acacctacat ccactgggtc cgacaggccc ctggcaaagg acttgaatgg 2040 gtcgccagaa tctaccccac caacggctac accagatacg ccgactctgt gaagggcaga 2100 ttcaccatca gcgccgacac cagcaagaac accgcctacc tgcagatgaa cagcctgaga 2160 gccgaggaca ccgccgtgta ctactgttct agatggggag gcgacggctt ctacgccatg 2220 gattattggg gccagggcac cctggtcacc gtttcttctg gcggaggagg atctggcgga 2280 ggcggaagtg gcggaggcgg atctgacatc cagatgacac agagccctag cagcctgtct 2340 gccagcgtgg gagacagagt gaccatcacc tgtagagcca gccaggacgt gaacacagcc 2400 gtggcttggt atcagcagaa gcctggcaag gcccctaagc tgctgatcta cagcgccagc 2460 tttctgtact ccggcgtgcc cagcagattc agcggctcta gaagcggcac cgacttcacc 2520 ctgaccataa gcagtctgca gcccgaggac ttcgccacct actactgtca gcagcactac 2580 accacacctc caacctttgg ccagggcacc aaggtggaaa tcaag 2625 <210> 105 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 10xHis tag <400> 105 His His His His His His His His His His 1 5 10 <210> 106 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(15) <223> This sequence may encompass 1-5 "Gly Gly Pro" repeating units <400> 106 Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Gly Pro 1 5 10 15 <210> 107 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(25) <223> This sequence may encompass 1-5 "Gly Gly Gly Gly Ser" repeating units <400> 107 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 108 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 108 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 109 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 6xHis tag <400> 109 His His His His His His 1 5

Claims (89)

  1. N-말단 및 C-말단을 포함하며,
    (a) 적어도 1개의 야생형 시스테인 잔기의 치환;
    (b) 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환 - 여기서 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키고/거나, 시알리다제의 소수성을 감소시킴;
    (c) 시알리다제의 N-말단에 N-말단 아미노산과 공유적으로 회합된 적어도 2개 아미노산 잔기 길이의 펩티드;
    (d) 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환 - 여기서 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시킴; 및/또는
    (e) 시알리다제의 N-말단에 N-말단 메티오닌의 치환 또는 결실
    을 포함하는 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제 효소.
  2. N-말단 및 C-말단을 포함하며,
    (a) 적어도 1개의 야생형 시스테인 잔기의 치환;
    (b) 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환 - 여기서 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키고/거나, 시알리다제의 소수성을 감소시킴;
    (c) 시알리다제의 N-말단에 N-말단 아미노산과 공유적으로 회합된 적어도 2개 아미노산 잔기 길이의 펩티드; 및/또는
    (d) 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환 - 여기서 치환은 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시킴
    을 포함하는 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제 효소.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 시알리다제가 Neu1, Neu2, Neu3, 및 Neu4로부터 선택되는 것인 시알리다제.
  4. 제3항에 있어서, 시알리다제가 Neu2인 시알리다제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 시스테인 잔기의 치환을 포함하는 것인 시알리다제.
  6. 제5항에 있어서, 시스테인 잔기가 유리 시스테인 잔기인 시알리다제.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 시스테인 잔기가 세린, 이소류신, 발린, 페닐알라닌, 류신, 또는 알라닌에 의해 치환된 것인 시알리다제.
  8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호 (SEQ ID NO): 1)의 위치 332에 상응하는 위치에서의 시스테인 잔기의 치환을 포함하는 것인 시알리다제.
  9. 제8항에 있어서, 야생형 인간 Neu2의 위치 332에 상응하는 위치에서의 시스테인 잔기가 알라닌에 의해 치환된 것 (C332A)인 시알리다제.
  10. 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 352에 상응하는 위치에서의 시스테인 잔기의 치환을 포함하는 것인 시알리다제.
  11. 제10항에 있어서, 야생형 인간 Neu2의 위치 352에 상응하는 위치에서의 시스테인 잔기가 류신에 의해 치환된 것 (C352L)인 시알리다제.
  12. 제9항 또는 제11항에 있어서, 시알리다제가 C332A 및 C352L 치환을 포함하는 것인 시알리다제.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환을 포함하고, 치환이 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키고/거나, 시알리다제의 소수성을 감소시키는 것인 시알리다제.
  14. 제13항에 있어서, 시알리다제가 야생형 아미노산 잔기의 치환을 포함하고, 치환이 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 등전점 (pI)을 증가시키는 것인 시알리다제.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 시알리다제가 야생형 아미노산 잔기의 치환을 포함하고, 치환이 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 소수성을 감소시키는 것인 시알리다제.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 아미노산 잔기가 용매 접근가능한 아미노산 잔기인 시알리다제.
  17. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 아미노산이 리신, 아르기닌, 또는 히스티딘에 의해 치환된 것인 시알리다제.
  18. 제17항에 있어서, 야생형 아미노산이 리신에 의해 치환된 것인 시알리다제.
  19. 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 2에 상응하는 위치에서의 알라닌 잔기의 치환을 포함하는 것인 시알리다제.
  20. 제19항에 있어서, 야생형 인간 Neu2의 위치 2에 상응하는 위치에서의 알라닌 잔기가 리신에 의해 치환된 것 (A2K)인 시알리다제.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 시알리다제의 N-말단에 융합된 적어도 2개 아미노산 잔기 길이의 펩티드를 포함하는 것인 시알리다제.
  22. 제21항에 있어서, 펩티드가 시알리다제의 N-말단 아미노산 잔기에 융합된 것인 시알리다제.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 펩티드가 2개 아미노산 잔기 내지 20개 아미노산 잔기 길이인 시알리다제.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 적어도 5개 아미노산 잔기 길이인 시알리다제.
  25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 야생형 마우스 흉선 Neu2 (서열식별번호: 2)로부터 유래된 아미노산 서열을 포함하는 것인 시알리다제.
  26. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 EDLRP (서열식별번호: 3)를 포함하는 것인 시알리다제.
  27. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 MEDLRP (서열식별번호: 4)를 포함하는 것인 시알리다제.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 적어도 1개의 야생형 아미노산 잔기의 치환을 포함하고, 치환이 치환이 없는 시알리다제에 비해 시알리다제의 N- 및 C-말단 사이의 소수성 상호작용 및/또는 수소 결합을 증가시키는 것인 시알리다제.
  29. 제28항에 있어서, 시알리다제가 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 6에 상응하는 위치에서의 발린 잔기의 치환을 포함하는 것인 시알리다제.
  30. 제29항에 있어서, 야생형 인간 Neu2의 위치 6에 상응하는 위치에서의 발린 잔기가 티로신에 의해 치환된 것 (V6Y)인 시알리다제.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 시알리다제의 N-말단에 N-말단 메티오닌의 치환 또는 결실을 포함하는 것인 시알리다제.
  32. 제31항에 있어서, 시알리다제가 야생형 인간 Neu2 (서열식별번호: 1)의 위치 1에 상응하는 위치에서의 메티오닌 잔기의 치환을 포함하는 것인 시알리다제.
  33. 제32항에 있어서, 야생형 인간 Neu2의 위치 1에 상응하는 위치에서의 메티오닌 잔기가 알라닌에 의해 치환된 것 (M1A)인 시알리다제.
  34. 제32항에 있어서, 야생형 인간 Neu2의 위치 1에 상응하는 위치에서의 메티오닌 잔기가 아스파르트산에 의해 치환된 것 (M1D)인 시알리다제.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 상응하는 야생형 시알리다제와는 상이한 기질 특이성을 갖는 것인 시알리다제.
  36. 제35항에 있어서, 시알리다제가 α2,3, α2,6, 및/또는 α2,8 연결을 절단할 수 있는 것인 시알리다제.
  37. 제36항에 있어서, 시알리다제가 α2,3 및 α2,8 연결을 절단할 수 있는 것인 시알리다제.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 72, 또는 서열식별번호: 73을 포함하는 것인 시알리다제.
  39. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 또는 서열식별번호: 39를 포함하는 것인 시알리다제.
  40. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 서열식별번호: 39, 서열식별번호: 70, 서열식별번호: 71, 서열식별번호: 72, 또는 서열식별번호: 73을 포함하는 것인 시알리다제.
  41. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 서열식별번호: 36, 서열식별번호: 37, 서열식별번호: 38, 또는 서열식별번호: 39를 포함하는 것인 시알리다제.
  42. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 시알리다제가 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 6을 포함하는 것인 시알리다제.
  43. 표 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7 중 어느 하나에 제시된 시알리다제를 포함하는 돌연변이체 시알리다제 효소.
  44. (a) 시알리다제 효소; 및
    (b) 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및/또는 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인
    을 포함하며;
    시알리다제 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및/또는 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인이 펩티드 결합 또는 아미노산 링커에 의해 연결된 것인 융합 단백질.
  45. 제44항에 있어서, 시알리다제가 인간 시알리다제인 융합 단백질.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, 시알리다제가 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항의 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제인 융합 단백질.
  47. 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질이 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 것인 융합 단백질.
  48. 제47항에 있어서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인이 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE, 또는 IgM Fc 도메인으로부터 유래된 것인 융합 단백질.
  49. 제48항에 있어서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인이 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 Fc 도메인으로부터 유래된 것인 융합 단백질.
  50. 제49항에 있어서, 이뮤노글로불린 Fc 도메인이 인간 IgG1 Fc 도메인으로부터 유래된 것인 융합 단백질.
  51. 제44항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질이 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인을 포함하는 것인 융합 단백질.
  52. 제51항에 있어서, 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인이 제2 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인과 회합되어 항원-결합 부위를 생성하는 것인 융합 단백질.
  53. 제51항 또는 제52항에 있어서, 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인이 트라스투주맙, 세툭시맙, 다라투무맙, 기렌툭시맙, 파니투무맙, 오파투무맙, 및 리툭시맙으로부터 선택되는 항체로부터 유래된 것인 융합 단백질.
  54. 제53항에 있어서, 이뮤노글로불린 항원-결합 도메인이 트라스투주맙으로부터 유래된 것인 융합 단백질.
  55. 제44항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질이 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 50, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 63, 서열식별번호: 74, 서열식별번호: 75, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 또는 서열식별번호: 79를 포함하는 것인 융합 단백질.
  56. 제44항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질이 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 49, 서열식별번호: 50, 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 또는 서열식별번호: 54를 포함하는 것인 융합 단백질.
  57. 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항의 융합 단백질을 포함하는 항체 접합체.
  58. 제57항에 있어서, 항체 접합체가 단일 시알리다제를 포함하는 것인 항체 접합체.
  59. 제58항에 있어서, 항체 접합체가 2개의 시알리다제를 포함하는 것인 항체 접합체.
  60. 제59항에 있어서, 2개의 시알리다제가 동일한 것인 항체 접합체.
  61. 제57항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 접합체가 단일 항원-결합 부위를 포함하는 것인 항체 접합체.
  62. 제57항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 접합체가 2개의 항원-결합 부위를 포함하는 것인 항체 접합체.
  63. 제62항에 있어서, 2개의 항원-결합 부위가 동일한 것인 항체 접합체.
  64. 제57항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 접합체가 약 135 kDa 내지 약 165 kDa의 분자량을 갖는 것인 항체 접합체.
  65. 제57항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 접합체가 약 215 kDa 내지 약 245 kDa의 분자량을 갖는 것인 항체 접합체.
  66. 제57항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 접합체가
    (a) 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드;
    (b) 이뮤노글로불린 중쇄를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및
    (c) 이뮤노글로불린 Fc 도메인 및 시알리다제를 포함하는 제3 폴리펩티드
    를 포함하며;
    제1 및 제2 폴리펩티드가 함께 공유적으로 연결되고, 제2 및 제3 폴리펩티드가 함께 연결되고, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드가 함께 항원-결합 부위를 한정하는 것인 항체 접합체.
  67. 제66항에 있어서, 제3 폴리펩티드가 N- → C-말단 배향으로 시알리다제 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 것인 항체 접합체.
  68. 제66항 또는 제67항에 있어서, 제1 폴리펩티드가 서열식별번호: 49를 포함하는 것인 항체 접합체.
  69. 제66항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 폴리펩티드가 서열식별번호: 50을 포함하는 것인 항체 접합체.
  70. 제66항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 폴리펩티드가 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 서열식별번호: 54, 서열식별번호: 76, 서열식별번호: 77, 서열식별번호: 78, 또는 서열식별번호: 79를 포함하는 것인 항체 접합체.
  71. 제66항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 폴리펩티드가 서열식별번호: 51, 서열식별번호: 52, 서열식별번호: 53, 또는 서열식별번호: 54를 포함하는 것인 항체 접합체.
  72. 제57항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질이
    (a) 제1 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제1 폴리펩티드;
    (b) 제1 이뮤노글로불린 중쇄 및 제1 시알리다제를 포함하는 제2 폴리펩티드;
    (c) 제2 이뮤노글로불린 중쇄 및 제2 시알리다제를 포함하는 제3 폴리펩티드; 및
    (d) 제2 이뮤노글로불린 경쇄를 포함하는 제4 폴리펩티드
    를 포함하며;
    제1 및 제2 폴리펩티드가 함께 공유적으로 연결되고, 제3 및 제4 폴리펩티드가 함께 공유적으로 연결되고, 제2 및 제3 폴리펩티드가 함께 공유적으로 연결되고, 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드가 함께 제1 항원-결합 부위를 한정하고, 제3 폴리펩티드 및 제4 폴리펩티드가 함께 제2 항원-결합 부위를 한정하는 것인 항체 접합체.
  73. 제72항에 있어서, 제2 및 제3 폴리펩티드가 N- → C-말단 배향으로 각각 제1 및 제2 이뮤노글로불린 중쇄 및 제1 및 제2 시알리다제를 포함하는 것인 항체 접합체.
  74. 제57항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질이
    (a) 제1 시알리다제, 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제1 단일 쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 제1 폴리펩티드; 및
    (b) 제2 시알리다제, 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제2 단일 쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 제2 폴리펩티드
    를 포함하며;
    제1 및 제2 폴리펩티드가 함께 공유적으로 연결되고, 제1 scFv가 제1 항원-결합 부위를 한정하고, 제2 scFv가 제2 항원-결합 부위를 한정하는 것인 항체 접합체.
  75. 제74항에 있어서, 제1 폴리펩티드가 N- → C-말단 배향으로 제1 시알리다제, 제1 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제1 scFv를 포함하고, 제2 폴리펩티드가 N- → C-말단 배향으로 제2 시알리다제, 제2 이뮤노글로불린 Fc 도메인, 및 제2 scFv를 포함하는 것인 항체 접합체.
  76. 제74항 또는 제75항에 있어서, 제1 폴리펩티드가 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75를 포함하는 것인 항체 접합체.
  77. 제74항 또는 제75항에 있어서, 제1 폴리펩티드가 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 또는 서열식별번호: 48을 포함하는 것인 항체 접합체.
  78. 제74항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 폴리펩티드가 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 서열식별번호: 48, 서열식별번호: 74, 또는 서열식별번호: 75를 포함하는 것인 항체 접합체.
  79. 제74항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 폴리펩티드가 서열식별번호: 43, 서열식별번호: 44, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 46, 서열식별번호: 47, 또는 서열식별번호: 48을 포함하는 것인 항체 접합체.
  80. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항의 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제, 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항의 융합 단백질, 또는 제57항 내지 제79항 중 어느 한 항의 항체 접합체의 적어도 일부를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산.
  81. 제80항의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  82. 제81항의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  83. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항의 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제, 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항의 융합 단백질, 또는 제57항 내지 제79항 중 어느 한 항의 항체 접합체를 포함하는 제약 조성물.
  84. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항의 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제, 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항의 융합 단백질, 제57항 내지 제79항 중 어느 한 항의 항체 접합체, 또는 제83항의 제약 조성물의 유효량을 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  85. 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항의 융합 단백질, 제57항 내지 제79항 중 어느 한 항의 항체 접합체, 또는 제83항의 제약 조성물의 유효량을 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  86. 제85항에 있어서, 암이 상피암인 방법.
  87. 제86항에 있어서, 상피암이 자궁내막암, 난소암, 자궁경부암, 외음부암, 자궁암, 난관암, 유방암, 전립선암, 폐암, 췌장암, 요로암, 방광암, 두경부암, 구강암 및 간암으로부터 선택되는 것인 방법.
  88. 세포 또는 조직을 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항의 재조합 돌연변이체 인간 시알리다제, 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항의 융합 단백질, 제57항 내지 제79항 중 어느 한 항의 항체 접합체, 또는 제83항의 제약 조성물의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포 또는 조직에서 HLA-DR, CD86, CD83, IFNγ, IL-1b, IL-6, TNFα, IL-17A, IL-2, 또는 IL-6의 발현을 증가시키는 방법.
  89. 제88항에 있어서, 세포가 수지상 세포 및 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 선택되는 것인 방법.
KR1020207022113A 2018-01-03 2019-01-03 재조합 인간 시알리다제, 시알리다제 융합 단백질, 및 이를 사용하는 방법 KR20200128385A (ko)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220124864A (ko) * 2021-03-04 2022-09-14 한국생명공학연구원 지질 대사 기능 장애 동물 모델로서의 neu2 결손마우스 및 이의 용도

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20220105179A1 (en) * 2019-02-21 2022-04-07 The General Hospital Corporation Glycoengineering immunoglobulin e
WO2021003468A2 (en) * 2019-07-03 2021-01-07 Palleon Pharmaceuticals Inc. Recombinant sialidases and methods of using the same
EP3994180A4 (en) * 2019-07-03 2023-08-02 Palleon Pharmaceuticals Inc. SIALIDASE-HER2 ANTIBODY FUSION PROTEINS AND THEIR METHODS OF USE
BR112021026789A2 (pt) * 2019-07-03 2022-05-10 Palleon Pharmaceuticals Inc Sialidases humanas recombinantes, proteínas de fusão de sialidase e métodos de uso das mesmas
BR112022014568A2 (pt) * 2020-01-23 2022-09-27 Exuma Biotech Corp Receptores de antígeno quiméricos contra her2 e métodos de uso dos mesmos
IL299559A (en) * 2020-07-03 2023-02-01 Palleon Pharmaceuticals Inc Recombinant sialidases with reduced protease sensitivity, sialidase fusion proteins and methods of using them
WO2022150516A1 (en) * 2021-01-06 2022-07-14 Palleon Pharmaceuticals Inc. Sialidase-her2-antibody fusion proteins and methods of use thereof
WO2022150507A1 (en) * 2021-01-06 2022-07-14 Palleon Pharmaceuticals Inc. Sialidase-pd-1-antibody fusion proteins and methods of use thereof

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2620649C3 (de) 1976-05-11 1980-11-06 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Immunologisches Adjuvans
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US7060676B2 (en) 1999-12-20 2006-06-13 Trustees Of Tufts College T. cruzi-derived neurotrophic agents and methods of use therefor
AU5133601A (en) 2000-04-07 2001-10-23 Ellis L Kline Methods and compositions for treating neoplasms
FR2828386B1 (fr) 2001-08-10 2004-06-11 Jean Noel Acquaviva Ecran de vision coupe-vent
WO2003068821A2 (en) 2002-02-14 2003-08-21 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US8084036B2 (en) 2002-11-22 2011-12-27 Nexbio, Inc. Broad spectrum anti-viral therapeutics and prophylaxis
US7807174B2 (en) 2002-11-22 2010-10-05 Nexbio, Inc. Class of therapeutic protein based molecules
US8512710B2 (en) 2002-11-22 2013-08-20 Ansun Biopharma, Inc. Class of therapeutic protein based molecules
KR20110110825A (ko) 2003-11-10 2011-10-07 유에이비 리서치 파운데이션 세균의 운반 및 ｃｎｓ 침입을 감소시키기 위한 조성물 및 이를 이용한 방법
KR102109867B1 (ko) 2006-01-24 2020-05-13 안선 바이오파르마, 아이엔씨. 고분자 미소 구체들의 조제를 위한 기술
TWI421257B (zh) 2006-03-10 2014-01-01 Wyeth Corp 抗５ｔ４抗體及其用途
EP2389951A1 (en) 2006-03-23 2011-11-30 Novartis AG Anti-tumor cell antigen antibody therapeutics
CN100376689C (zh) 2006-03-28 2008-03-26 北京大学 一种预测达菲类药物用药安全性的方法
WO2008033520A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 The Regents Of The University Of California Bifidobacterial gene sequences and their use
EP1938835A1 (en) 2006-12-29 2008-07-02 Pevion Biotech AG Non-specific immunostimulating agents
CN101636489B (zh) 2007-02-20 2014-08-13 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 新颖的唾液酸酶
US8329195B2 (en) 2007-05-23 2012-12-11 The Uab Research Foundation Detoxified pneumococcal neuraminidase and uses thereof
US8187591B2 (en) 2007-10-11 2012-05-29 The Regents Of The University Of California Methods of treating coagulopathy
PT4209510T (pt) 2008-12-09 2024-04-02 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-pm-l1 e a sua utilização para a melhoria do funcionamento das células t
AU2010315024B2 (en) 2009-11-06 2015-02-12 Nexbio, Inc. Methods, compounds and compositions for treatment and prophylaxis in the respiratory tract
CN104254541A (zh) 2012-03-16 2014-12-31 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 改造的构象稳定蛋白质
CA2871706C (en) 2012-04-30 2019-12-03 Biocon Limited Targeted/immunomodulatory fusion proteins and methods for making same
KR20150023729A (ko) 2012-06-14 2015-03-05 암브룩스, 인코포레이티드 핵 수용체 리간드 폴리펩티드에 접합된 항-psma 항체
UA105278C2 (ru) 2012-09-06 2014-04-25 Інститут Біології Клітини Нан України Способ получения каталитически активных антител (абзимов) с сиалидазной активностью
AR093984A1 (es) 2012-12-21 2015-07-01 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos que se unen a ligando 1 de muerte programada (pd-l1) humano
EP2968622B1 (en) 2013-03-13 2021-05-12 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to cd8
KR102186997B1 (ko) 2013-03-15 2020-12-07 안선 바이오파르마, 아이엔씨. 단백질 정제의 신규한 방법
EP2984104B1 (en) 2013-04-12 2017-11-01 Danmarks Tekniske Universitet A mutant sialidase having trans-sialidase activity for use in production of sialylated glycans
WO2014201034A2 (en) 2013-06-10 2014-12-18 Ansun Biopharma, Inc. Treatment for polyomavirus infection
US20160120961A1 (en) 2013-06-10 2016-05-05 Ansun Biopharma, Inc. Treatment of merkel cell polyomavirus infection
US20160229882A1 (en) 2013-09-17 2016-08-11 The Regents Of The University Of California Non-enzymatic, salt-mediated synthesis of polynucleic acids
US20170165334A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 Tianxin Wang Methods to Treat Diseases with Protein, Peptide, Antigen Modification and Hemopurification
WO2015184356A1 (en) 2014-05-30 2015-12-03 Ansun Biopharma, Inc. Treatment of middle east respiratory syndrome coronavirus
WO2016038064A1 (en) 2014-09-10 2016-03-17 Innate Pharma Cross reactive siglec antibodies
US10328128B2 (en) 2014-09-17 2019-06-25 Ansun Biopharma, Inc. Treatment of infection by human enterovirus D68
US10138268B2 (en) 2014-10-10 2018-11-27 Enzypep B.V. Peptide fragment condensation and cyclisation using a subtilisin variant with improved synthesis over hydrolysis ratio
JP2018500934A (ja) * 2014-12-22 2018-01-18 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｃｍｐ依存性シアリダーゼ活性
BR112017019559B1 (pt) 2015-03-13 2020-08-04 Cytomx Therapeutics, Inc Anticorpos anti-pdl1, anticorpos anti-pdl1 ativáveis, e métodos de uso destes
US20180177852A1 (en) * 2015-06-08 2018-06-28 Ansun Biopharma, Inc. Treatment of human metapneumovirus
US10428318B2 (en) 2015-06-09 2019-10-01 Glycom A/S Mutated sialidases
EP3120856A1 (en) 2015-07-23 2017-01-25 imv Technologies Process and composition for low dose insemination
EP3402516A4 (en) 2016-01-12 2020-01-08 Palleon Pharmaceuticals Inc. USE OF ANTIBODIES DIRECTED AGAINST SIGLEC-7 OR SIGLEC-9 IN THE TREATMENT OF CANCER
AR107483A1 (es) 2016-01-29 2018-05-02 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugado de enzimas terapéuticas
GB201602105D0 (en) 2016-02-05 2016-03-23 Inst Of Food Res Intramolecular Trains- Sialidase
CN107216389B (zh) 2016-03-18 2022-03-29 和迈生物科技有限公司 抗pd-l1纳米抗体及其编码序列和用途
WO2017180587A2 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
US20180271997A1 (en) 2016-05-31 2018-09-27 Tianxin Wang Methods and Reagents to Treat Tumor and Cancer
US20190125859A1 (en) 2016-06-03 2019-05-02 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Influenza virus vaccination regimens
SG11201811719RA (en) 2016-07-01 2019-01-30 Univ Leland Stanford Junior Conjugates for targeted cell surface editing
GB201611535D0 (en) 2016-07-01 2016-08-17 King S College London Methods and compositions for treating cancer with siglec-9 activity modulators
EP3478315A4 (en) 2016-07-01 2020-03-25 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University METHODS AND COMPOSITIONS FOR INHIBITING THE INHIBITOR IMMUNE RECEPTOR
GB201616006D0 (en) 2016-09-20 2016-11-02 Univ Court Of The Univ Of St Andrews The Cell modulation
JP7042220B2 (ja) 2016-12-28 2022-03-25 Ｊｃｒファーマ株式会社 凍結乾燥製剤
CN106906236B (zh) 2017-04-10 2020-04-10 中国科学院深海科学与工程研究所 唾液酸酶基因重组表达载体及其构建方法，唾液酸酶及其制备方法
WO2018231661A1 (en) 2017-06-12 2018-12-20 Tianxin Wang Methods and reagents to treat tumor and cancer
GB201717945D0 (en) 2017-10-31 2017-12-13 Nat Univ Ireland Galway Method for treatment of cancer
EP3569618A1 (en) 2018-05-19 2019-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Antagonizing cd73 antibody
US20220370527A1 (en) 2018-07-20 2022-11-24 Ansun Biopharma, Inc. Delivery of sialidase to cancer cells, immune cells and the tumor microenvironment
EP3906096A4 (en) 2019-01-03 2023-03-01 Palleon Pharmaceuticals Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF CANCER WITH IMMUNE CELLS
US20220105179A1 (en) 2019-02-21 2022-04-07 The General Hospital Corporation Glycoengineering immunoglobulin e
KR20220045930A (ko) 2019-04-30 2022-04-13 마이얼로이드 테라퓨틱스, 인크. 조작된 키메라 융합 단백질 조성물 및 이의 사용 방법
WO2021003464A1 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Palleon Pharmaceuticals Inc. Sialidase-pd-l1-antibody fusion proteins and methods of use thereof
BR112021026789A2 (pt) 2019-07-03 2022-05-10 Palleon Pharmaceuticals Inc Sialidases humanas recombinantes, proteínas de fusão de sialidase e métodos de uso das mesmas
WO2021003468A2 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Palleon Pharmaceuticals Inc. Recombinant sialidases and methods of using the same
AU2020298628A1 (en) 2019-07-03 2022-02-03 Palleon Pharmaceuticals Inc. Sialidase-CD20-antibody fusion proteins and methods of use thereof
EP3994180A4 (en) 2019-07-03 2023-08-02 Palleon Pharmaceuticals Inc. SIALIDASE-HER2 ANTIBODY FUSION PROTEINS AND THEIR METHODS OF USE
IL299559A (en) 2020-07-03 2023-02-01 Palleon Pharmaceuticals Inc Recombinant sialidases with reduced protease sensitivity, sialidase fusion proteins and methods of using them
CN111763259B (zh) 2020-09-03 2020-12-15 北京百奥赛图基因生物技术有限公司 抗cd40抗体及其用途

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220124864A (ko) * 2021-03-04 2022-09-14 한국생명공학연구원 지질 대사 기능 장애 동물 모델로서의 neu2 결손마우스 및 이의 용도

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