KR20200089666A

KR20200089666A - Alk7 결합 단백질 및 그의 용도

Info

Publication number: KR20200089666A
Application number: KR1020207013832A
Authority: KR
Inventors: 라빈드라 쿠마; 로즐린 캐스톤과이; 다이엔 사코; 조나단 벨크; 나단 제이. 샤키
Original assignee: 악셀레론 파마 인코포레이티드; 아디맵 엘엘씨
Priority date: 2017-10-25
Filing date: 2018-10-25
Publication date: 2020-07-27
Also published as: EP3700571A4; JP2021500895A; EP3700571A1; JP7433222B2; BR112020007751A2; CN111836642A; US20200392233A1; AU2018354295A1; CA3079963A1; WO2019084249A1; JP2024023278A

Abstract

본 발명은 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체, 조성물, 및 ALK7-결합 단백질 제조 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 활성을 저해하거나 또는 길항한다. 또한, 본 발명은 과체중, 비만, 당뇨병, 과체중, 비만, 2형 당뇨병 및 이들의 연관된 질환; 대사 장애, 및 ALK7을 표적화함으로써 치료되거나, 예방되거나, 개선될 수 있는 다른 질환 또는 병태를 진단하고 치료하기 위한 조성물과 방법을 제공한다.

Description

ALK7 결합 단백질 및 이의 용도

관련 출원

본 특허 출원은 2017년 10월 25일에 출원된 미국 가특허 출원 제62/577,038호를 우선권으로 주장하며, 상기 특허는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 언급

본 출원과 함께 제출된 ASCII 텍스트 파일 APH-00625_SL (크기: 227,501 바이트; 및 작성 일자: 2018년 10월 24일)로 전자적으로 제출된 서열 목록의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

과체중과 비만은 모든 연령, 인종 및 민족, 그리고 남녀 모두에서 증가하면서 미국과 전 세계 많은 나라에서 급속한 확산 비율에 도달했다. 과체중과 비만은 또한, 일상 활동 및 라이프스타일을 파괴하는 다른 질환 또는 병태와 연관된다. 비만은 다른 질환과 병태, 예컨대 2형 당뇨병, 염증, 및 심혈관 질환, 폐 질환, 지방간 질환, 신경학적 질환, 간 질환, 및 신장 질환에 대한 심각한 위험 요인으로서 인식된다.

2형 당뇨병은 마찬가지로 급속한 확산 수준에 도달한 만성, 진행성 질환이다. II형 당뇨병에 대한 확립된 치유법은 없지만, 상기 질환의 불가피한 결과를 지연시키거나 완화시키려는 다양한 인식된 치료법이 있다. 2형 당뇨병은 초기에 식이 및 운동 조절에 의해, 그리고 체중 감량에 의해 치료되는데, 특히 비만 대상체에서 그러하다. 임상상 (clinical picture)을 향상시키는 체중 감량은 때때로 미미하다 (예를 들어, 4.4 내지 11 lbs.); 이것은 아마도, 불량하게 이해된 지방 조직 활성의 양상, 예를 들어, 화학적 신호전달 (특히, 복부 장기 내부 및 주변의 내장 지방 조직에서)에 기인한다.

전술한 관점에서, 과체중, 비만 및 2형 당뇨병 급속한 확산을 제어하고 치료하기 위한 새로운 치료법이 필요하다. 본 발명의 목적은 ALK7-결합 단백질을 제공하고, 과체중, 비만, 2형 당뇨병 및 이들의 연관된 병태; 대사 장애, 및 ALK7을 표적화함으로써 치료되거나, 예방되거나, 개선될 수 있는 다른 질환 또는 병태의 진단과 치료, 예방 및/또는 개선에서 이들의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명은 ALK7-결합 단백질 및 ALK7-결합 단백질을 사용하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 하나 이상의 동족 ALK7 리간드 및/또는 하나 이상의 동족 ActRI 수용체에 ALK7의 결합을 저해하거나 차단할 수 있다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 및 ActRII 수용체 (ActRIIA 또는 ActRIIB) 및 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B, 또는 Nodal의 다량체화를 저해하거나 차단할 수 있다. 본 발명은 또한, ALK7 발현 및/또는 상승된 ALK7-매개된 신호전달과 연관된 질환 또는 병태의 진단, 또는 치료, 예방 및/또는 개선을 위해 ALK7-결합 단백질을 사용하는 방법을 제공한다. 이러한 질환 또는 병태는 과체중, 비만 (예를 들어, 복부 비만); 인슐린 저항성; 대사 증후군 및 다른 대사 질환 또는 병태; 지질 장애, 예컨대 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 고지혈증, 고중성지질혈증 또는 이상지질혈증; 지질단백질 이상; 감소된 트리글리세리드; 염증 (예를 들어, 간 염증 및/또는 지방 조직의 염증), 지방간 질환; 비알코올성 지방간 질환; 고혈당증; 내당능 장애 (IGT); 고인슐린혈증; 높은 콜레스테롤 (예를 들어, 높은 LDL 수준 및 고콜레스테롤혈증); 심혈관 질환, 예컨대 관상동맥 심장 질환을 포함하는 심장병, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 불규칙한 피브린용해, 죽상동맥경화증; 동맥경화증 및 고혈압; X 증후군; 혈관 재협착증; 신경병증; 망막병증; 신경퇴행성 질환; 내피 기능장애, 호흡기 기능장애, 신장 질환 (예를 들어, 신병증); 췌장염; 다낭성 난소 증후군; 상승된 요산 수준; 혈색소증 (철분 과부하); 흑색극세포증 (피부 상에서 어두운 패치); 및 암 (예를 들어, 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 또는 결장 암); 및 상기 질환 또는 병태 중 하나 이상, 또는 과도한 체중 (예를 들어, 체질량 지수 (BMI) ≥ 25 kg/m²), 또는 너무 많은 체지방과 연관된 다른 장애/병태를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본 발명은 또한, 제한 없이, 길항제 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항체를 사용하여, 체중을 감량시키기 위한 (예를 들어, 체중 감량을 촉진시키기 위한) 방법, 및 체중 증가를 감소시키기 위한 (예를 들어, 체중 증가를 예방하기 위한) 방법을 제공한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합한다. 추가 구현예에서, 제공된 ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택되는 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 ActRIIA 또는 ActRIIB와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7 결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 기재된 ALK7 단백질의 적어도 하나의 1차 에피토프에 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 적어도 하나의 1차 에피토프는 서열번호 310, 313, 및 317로부터 선택된 에피토프와 동일하거나 이와 본질적으로 동일할 수 있다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 기재된 ALK7 단백질의 적어도 하나의 2차 또는 입체형태적 에피토프에 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 적어도 하나의 입체형태적 에피토프는 서열번호 311, 312, 314, 315, 316, 318, 및 319로부터 선택된 에피토프와 동일하거나 이와 본질적으로 동일할 수 있다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 기재된 ALK7 단백질의 적어도 하나의 1차 에피토프 및 적어도 하나의 2차 또는 입체형태적 에피토프에 특이적으로 결합한다.

용어 "본질적으로 동일하다"는 서열번호 310-319에 반영된 것들과 같이 본원에 기재된 에티토프에 대해 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 동일한 아미노산 잔기를 갖는 1차 및/또는 입체형태적 에피토프를 지칭한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 상의 적어도 하나의 중첩 에피토프에 특이적으로 결합하며, 여기서 적어도 하나의 중첩 에피토프는 서열번호 310-319에 반영된 것들과 같은 본원에 기재된 1차 또는 입체형태적 에피토프와 중첩된다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 상의 중첩 에피토프에 특이적으로 결합하며, 여기서 중첩 에피토프는 서열번호 310-319에 제시된 에피토프와 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 동일한 아미노산 잔기를 공유한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 본질적으로 동일한 또는 중첩 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 적어도 하나의 본질적으로 동일한 또는 중첩 에피토프는 ALK7-결합 단백질과 ALK7로의 결합을 교차-차단하고/하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상보성 결정 영역 (CDR) 세트: 중쇄 가변 영역 (VH)-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, 경쇄 가변 영역 (VL)-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR은 표 1A에 개시된 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL) 쌍 내에 존재한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (a) 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열; (b) 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열; (c) 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열; 및 (d) 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열로부터 선택된 VH 및 VL 쌍 내에 존재하는 CDR 세트를 포함한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상보성 결정 영역 (CDR) 세트: 중쇄 가변 영역 (VH)-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, 경쇄 가변 영역 (VL)-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR은 표 1B 또는 표 3에 개시된 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL) 쌍 내에 존재한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (a) 서열번호 152의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열; (b) 서열번호 159의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열; 및 (c) 서열번호 165의 VH 서열 및 서열번호 171의 VL 서열로부터 선택된 VH 및 VL 쌍 내에 존재하는 CDR 세트를 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (a) 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열; (b) 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열; (c) 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열; (d) 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열; 및 (e) 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열로부터 선택된 VH 및 VL 쌍 내에 존재하는 CDR 세트를 포함한다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (d)(i) VH-CDR1은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하고; (d)(i) VH-CDR1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (e)(i) VH-CDR1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트를 포함하고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (d)(i) VH-CDR1은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트를 포함하고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하고; (d)(i) VH-CDR1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (e)(i) VH-CDR1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 4와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 13과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (b)(i) 서열번호 22 또는 132와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 31과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (c)(i) 서열번호 40과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 49와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 및 (d)(i) 서열번호 58과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 67과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 91과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 98과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (b)(i) 서열번호 105 또는 132와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 110과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (c)(i) 서열번호 117과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 124와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (d)(i) 서열번호 128과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 135와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 및 (e)(i) 서열번호 140과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 148과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 40 또는 58의 VH 서열 및 서열번호 49 또는 67의 VL 서열을 함유하는 VH 및 VL을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 또 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열을 포함하는 VH 및 VL 쌍을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열을 포함하는 VH 및 VL 쌍을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열을 포함하는 VH 및 VL 쌍을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열을 포함하는 VH 및 VL 쌍을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열을 포함하는 VH 및 VL 쌍을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열을 포함하는 VH 및 VL 쌍을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열을 포함하는 VH 및 VL 쌍을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열을 포함하는 VH 및 VL 쌍을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열을 포함하는 VH 및 VL 쌍을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 4로부터 선택된 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 13의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (b)(i) 서열번호 22의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 31의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (c)(i) 서열번호 40의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 49의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 및 (d)(i) 서열번호 58의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 67의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 91로부터 선택된 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 98의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (b)(i) 서열번호 105의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 110의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (c)(i) 서열번호 117의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 124의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (d)(i) 서열번호 128의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 135의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 및 (e)(i) 서열번호 140의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 148의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 기재된 1차 또는 입체형태적 에피토프와 동일하거나 본질적으로 동일한 또는 중첩되는 에피토프에 특이적으로 결합하지만, 본원에 개시된 상응하는 서열로부터의 적어도 하나의 상이한 CDR 서열, 프레임워크 서열, 가변 영역 서열, 불변 영역 서열, 및/또는 중쇄/경쇄 서열을 포함한다. 예를 들어, ALK7-결합 단백질은 이의 중쇄 불변 영역에서 적어도 하나의 돌연변이, 치환, 결실, 또는 변형, 예컨대 이들 돌연변이, 치환, 결실, 또는 변형을 포함하여 항체 독성 및/또는 숙주 면역원성을 감소시키고/시키거나 항체 안정성/반감기를 증가시킬 수 있다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 중쇄 (HC) 및 경쇄 (LC) 쌍을 포함하고:

(a) (i) 서열번호 190 또는 320과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및

(ii) 서열번호 191 또는 322와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 LC; 및

(b) (i) 서열번호 192 또는 324와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및

(ii) 서열번호 193 또는 326과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 LC,

상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 이의 중쇄 불변 영역에서 LALA 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택되는 HC 및 LC 쌍을 포함하고:

(a) (i) 서열번호 194 또는 328과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및

(b) (i) 서열번호 195 또는 330과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및

상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 이의 중쇄 불변 영역에서 LALA-PG 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택되는 HC 및 LC 쌍을 포함하고:

(a) (i) 서열번호 196 또는 332와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및

(b) (i) 서열번호 197 또는 334와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및

상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하는 항체이다. 추가 구현예에서, 항체는 단일클론 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 이중특이적 항체, 또는 다중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7-결합 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 디아바디, DART 및 단일 사슬 항체 분자 (예를 들어, BiTE)로부터 선택된 항체 단편이다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 20-113 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 20-113 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고, 하나 이상의 ALK 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal)가 ALK7에 결합하는 것을 저해한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 20-113 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산에 접촉한다: (a) 서열번호 85의 위치 21에서 Glu; (b) 서열번호 85의 위치 22에서 Leu; (c) 서열번호 85의 위치 23에서 Ser; (d) 서열번호 85의 위치 24에서 Pro; (e) 서열번호 85의 위치 25에서 Gly; (f) 서열번호 85의 위치 26에서 Leu; (g) 서열번호 85의 위치 27에서 Lys; (h) 서열번호 85의 위치 28에서 Cys; (i) 서열번호 85의 위치 29에서 Val; (j) 서열번호 85의 위치 30에서 Cys; (k) 서열번호 85의 위치 31에서 Leu; (l) 서열번호 85의 위치 32에서 Leu; (m) 서열번호 85의 위치 33에서 Cys; (n) 서열번호 85의 위치 34에서 Asp; (o) 서열번호 85의 위치 35에서 Ser; (p) 서열번호 85의 위치 36에서 Ser; (q) 서열번호 85의 위치 37에서 Asn; (r) 서열번호 85의 위치 38에서 Phe; (s) 서열번호 85의 위치 39에서 Thr; (t) 서열번호 85의 위치 40에서 Cys; (u) 서열번호 85의 위치 41에서 Gln; (v) 서열번호 85의 위치 42에서 Thr; (w) 서열번호 85의 위치 43에서 Glu; (x) 서열번호 85의 위치 44에서 Gly; (y) 서열번호 85의 위치 45에서 Ala; (z) 서열번호 85의 위치 46에서 Cys; (aa) 서열번호 85의 위치 47에서 Trp; (ab) 서열번호 85의 위치 48에서 Ala; (ac) 서열번호 85의 위치 49에서 Ser; (ad) 서열번호 85의 위치 50에서 Val; (ae) 서열번호 85의 위치 51에서 Met; (af) 서열번호 85의 위치 52에서 Leu; (ag) 서열번호 85의 위치 53에서 Thr; (ah) 서열번호 85의 위치 54에서 Asn; (ai) 서열번호 85의 위치 55에서 Gly; (aj) 서열번호 85의 위치 56에서 Lys; (ak) 서열번호 85의 위치 57에서 Glu; (al) 서열번호 85의 위치 58에서 Gln; (am) 서열번호 85의 위치 59에서 Val; (an) 서열번호 85의 위치 60에서 Ile; (ao) 서열번호 85의 위치 61에서 Lys; (ap) 서열번호 85의 위치 62에서 Ser; (aq) 서열번호 85의 위치 63에서 Cys; (ar) 서열번호 85의 위치 64에서 Val; (as) 서열번호 85의 위치 65에서 Ser; (at) 서열번호 85의 위치 66에서 Leu; (au) 서열번호 85의 위치 67에서 Pro; (av) 서열번호 85의 위치 68에서 Glu; (aw) 서열번호 85의 위치 69에서 Leu; (ax) 서열번호 85의 위치 70에서 Asn; (ay) 서열번호 85의 위치 71에서 Ala; (az) 서열번호 85의 위치 72에서 Gln; (ba) 서열번호 85의 위치 73에서 Val; (bb) 서열번호 85의 위치 74에서 Phe; (bc) 서열번호 85의 위치 75에서 Cys; (bd) 서열번호 85의 위치 76에서 His; (be) 서열번호 85의 위치 77에서 Ser; (bf) 서열번호 85의 위치 78에서 Ser; (bg) 서열번호 85의 위치 79에서 Asn; (bh) 서열번호 85의 위치 80에서 Asn; (bi) 서열번호 85의 위치 81에서 Val; (bj) 서열번호 85의 위치 82에서 Thr; (bk) 서열번호 85의 위치 83에서 Lys; (bl) 서열번호 85의 위치 84에서 Thr; (bm) 서열번호 85의 위치 85에서 Glu; (bn) 서열번호 85의 위치 86에서 Cys; (bo) 서열번호 85의 위치 87에서 Cys; (bp) 서열번호 85의 위치 88에서 Phe; (bq) 서열번호 85의 위치 89에서 Thr; (br) 서열번호 85의 위치 90에서 Asp; (bs) 서열번호 85의 위치 91에서 Phe; (bt) 서열번호 85의 위치 92에서 Cys; (bu) 서열번호 85의 위치 93에서 Asn; (bv) 서열번호 85의 위치 94에서 Asn; (bw) 서열번호 85의 위치 95에서 Ile; (bx) 서열번호 85의 위치 96에서 Thr; (by) 서열번호 85의 위치 97에서 Leu; (bz) 서열번호 85의 위치 98에서 His; (ca) 서열번호 85의 위치 99에서 Leu; (cb) 서열번호 85의 위치 100에서 Pro; (cc) 서열번호 85의 위치 101에서 Thr; (cd) 서열번호 85의 위치 102에서 Ala; (ce) 서열번호 85의 위치 103에서 Ser; (cf) 서열번호 85의 위치 104에서 Pro; (cg) 서열번호 85의 위치 105에서 Asn; (ch) 서열번호 85의 위치 106에서 Ala; (ci) 서열번호 85의 위치 107에서 Pro; (cj) 서열번호 85의 위치 108에서 Lys; (ck) 서열번호 85의 위치 109에서 Leu; (cl) 서열번호 85의 위치 110에서 Gly; (cm) 서열번호 85의 위치 111에서 Pro; (cn) 서열번호 85의 위치 112에서 Met; 및 (co) 서열번호 85의 위치 113에서 Glu.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 20-113 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산에 접촉하고: (a) 서열번호 85의 위치 21에서 Glu; (b) 서열번호 85의 위치 22에서 Leu; (c) 서열번호 85의 위치 23에서 Ser; (d) 서열번호 85의 위치 24에서 Pro; (e) 서열번호 85의 위치 25에서 Gly; (f) 서열번호 85의 위치 26에서 Leu; (g) 서열번호 85의 위치 27에서 Lys; (h) 서열번호 85의 위치 28에서 Cys; (i) 서열번호 85의 위치 29에서 Val; (j) 서열번호 85의 위치 30에서 Cys; (k) 서열번호 85의 위치 31에서 Leu; (l) 서열번호 85의 위치 32에서 Leu; (m) 서열번호 85의 위치 33에서 Cys; (n) 서열번호 85의 위치 34에서 Asp; (o) 서열번호 85의 위치 35에서 Ser; (p) 서열번호 85의 위치 36에서 Ser; (q) 서열번호 85의 위치 37에서 Asn; (r) 서열번호 85의 위치 38에서 Phe; (s) 서열번호 85의 위치 39에서 Thr; (t) 서열번호 85의 위치 40에서 Cys; (u) 서열번호 85의 위치 41에서 Gln; (v) 서열번호 85의 위치 42에서 Thr; (w) 서열번호 85의 위치 43에서 Glu; (x) 서열번호 85의 위치 44에서 Gly; (y) 서열번호 85의 위치 45에서 Ala; (z) 서열번호 85의 위치 46에서 Cys; (aa) 서열번호 85의 위치 47에서 Trp; (ab) 서열번호 85의 위치 48에서 Ala; (ac) 서열번호 85의 위치 49에서 Ser; (ad) 서열번호 85의 위치 50에서 Val; (ae) 서열번호 85의 위치 51에서 Met; (af) 서열번호 85의 위치 52에서 Leu; (ag) 서열번호 85의 위치 53에서 Thr; (ah) 서열번호 85의 위치 54에서 Asn; (ai) 서열번호 85의 위치 55에서 Gly; (aj) 서열번호 85의 위치 56에서 Lys; (ak) 서열번호 85의 위치 57에서 Glu; (al) 서열번호 85의 위치 58에서 Gln; (am) 서열번호 85의 위치 59에서 Val; (an) 서열번호 85의 위치 60에서 Ile; (ao) 서열번호 85의 위치 61에서 Lys; (ap) 서열번호 85의 위치 62에서 Ser; (aq) 서열번호 85의 위치 63에서 Cys; (ar) 서열번호 85의 위치 64에서 Val; (as) 서열번호 85의 위치 65에서 Ser; (at) 서열번호 85의 위치 66에서 Leu; (au) 서열번호 85의 위치 67에서 Pro; (av) 서열번호 85의 위치 68에서 Glu; (aw) 서열번호 85의 위치 69에서 Leu; (ax) 서열번호 85의 위치 70에서 Asn; (ay) 서열번호 85의 위치 71에서 Ala; (az) 서열번호 85의 위치 72에서 Gln; (ba) 서열번호 85의 위치 73에서 Val; (bb) 서열번호 85의 위치 74에서 Phe; (bc) 서열번호 85의 위치 75에서 Cys; (bd) 서열번호 85의 위치 76에서 His; (be) 서열번호 85의 위치 77에서 Ser; (bf) 서열번호 85의 위치 78에서 Ser; (bg) 서열번호 85의 위치 79에서 Asn; (bh) 서열번호 85의 위치 80에서 Asn; (bi) 서열번호 85의 위치 81에서 Val; (bj) 서열번호 85의 위치 82에서 Thr; (bk) 서열번호 85의 위치 83에서 Lys; (bl) 서열번호 85의 위치 84에서 Thr; (bm) 서열번호 85의 위치 85에서 Glu; (bn) 서열번호 85의 위치 86에서 Cys; (bo) 서열번호 85의 위치 87에서 Cys; (bp) 서열번호 85의 위치 88에서 Phe; (bq) 서열번호 85의 위치 89에서 Thr; (br) 서열번호 85의 위치 90에서 Asp; (bs) 서열번호 85의 위치 91에서 Phe; (bt) 서열번호 85의 위치 92에서 Cys; (bu) 서열번호 85의 위치 93에서 Asn; (bv) 서열번호 85의 위치 94에서 Asn; (bw) 서열번호 85의 위치 95에서 Ile; (bx) 서열번호 85의 위치 96에서 Thr; (by) 서열번호 85의 위치 97에서 Leu; (bz) 서열번호 85의 위치 98에서 His; (ca) 서열번호 85의 위치 99에서 Leu; (cb) 서열번호 85의 위치 100에서 Pro; (cc) 서열번호 85의 위치 101에서 Thr; (cd) 서열번호 85의 위치 102에서 Ala; (ce) 서열번호 85의 위치 103에서 Ser; (cf) 서열번호 85의 위치 104에서 Pro; (cg) 서열번호 85의 위치 105에서 Asn; (ch) 서열번호 85의 위치 106에서 Ala; (ci) 서열번호 85의 위치 107에서 Pro; (cj) 서열번호 85의 위치 108에서 Lys; (ck) 서열번호 85의 위치 109에서 Leu; (cl) 서열번호 85의 위치 110에서 Gly; (cm) 서열번호 85의 위치 111에서 Pro; (cn) 서열번호 85의 위치 112에서 Met; 및 (co) 서열번호 85의 위치 113에서 Glu; 하나 이상의 ALK7 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal)가 ALK7에 결합하는 것을 저해한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 20-113 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고 지방분해 (예를 들어, 백색 지방 세포 및/또는 갈색 지방 세포의 지방분해)를 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 20-113 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산에 접촉하고: (a) 서열번호 85의 위치 21에서 Glu; (b) 서열번호 85의 위치 22에서 Leu; (c) 서열번호 85의 위치 23에서 Ser; (d) 서열번호 85의 위치 24에서 Pro; (e)서열번호 85의 위치 25에서 Gly; (f) 서열번호 85의 위치 26에서 Leu; (g) 서열번호 85의 위치 27에서 Lys; (h) 서열번호 85의 위치 28에서 Cys; (i) 서열번호 85의 위치 29에서 Val; (j) 서열번호 85의 위치 30에서 Cys; (k) 서열번호 85의 위치 31에서 Leu; (l) 서열번호 85의 위치 32에서 Leu; (m) 서열번호 85의 위치 33에서 Cys; (n) 서열번호 85의 위치 34에서 Asp; (o) 서열번호 85의 위치 35에서 Ser; (p) 서열번호 85의 위치 36에서 Ser; (q) 서열번호 85의 위치 37에서 Asn; (r) 서열번호 85의 위치 38에서 Phe; (s) 서열번호 85의 위치 39에서 Thr; (t) 서열번호 85의 위치 40에서 Cys; (u) 서열번호 85의 위치 41에서 Gln; (v) 서열번호 85의 위치 42에서 Thr; (w) 서열번호 85의 위치 43에서 Glu; (x) 서열번호 85의 위치 44에서 Gly; (y) 서열번호 85의 위치 45에서 Ala; (z) 서열번호 85의 위치 46에서 Cys; (aa) 서열번호 85의 위치 47에서 Trp; (ab) 서열번호 85의 위치 48에서 Ala; (ac) 서열번호 85의 위치 49에서 Ser; (ad) 서열번호 85의 위치 50에서 Val; (ae) 서열번호 85의 위치 51에서 Met; (af) 서열번호 85의 위치 52에서 Leu; (ag) 서열번호 85의 위치 53에서 Thr; (ah) 서열번호 85의 위치 54에서 Asn; (ai) 서열번호 85의 위치 55에서 Gly; (aj) 서열번호 85의 위치 56에서 Lys; (ak) 서열번호 85의 위치 57에서 Glu; (al) 서열번호 85의 위치 58에서 Gln; (am) 서열번호 85의 위치 59에서 Val; (an) 서열번호 85의 위치 60에서 Ile; (ao) 서열번호 85의 위치 61에서 Lys; (ap) 서열번호 85의 위치 62에서 Ser; (aq) 서열번호 85의 위치 63에서 Cys; (ar) 서열번호 85의 위치 64에서 Val; (as) 서열번호 85의 위치 65에서 Ser; (at) 서열번호 85의 위치 66에서 Leu; (au) 서열번호 85의 위치 67에서 Pro; (av) 서열번호 85의 위치 68에서 Glu; (aw) 서열번호 85의 위치 69에서 Leu; (ax) 서열번호 85의 위치 70에서 Asn; (ay) 서열번호 85의 위치 71에서 Ala; (az) 서열번호 85의 위치 72에서 Gln; (ba) 서열번호 85의 위치 73에서 Val; (bb) 서열번호 85의 위치 74에서 Phe; (bc) 서열번호 85의 위치 75에서 Cys; (bd) 서열번호 85의 위치 76에서 His; (be) 서열번호 85의 위치 77에서 Ser; (bf) 서열번호 85의 위치 78에서 Ser; (bg) 서열번호 85의 위치 79에서 Asn; (bh) 서열번호 85의 위치 80에서 Asn; (bi) 서열번호 85의 위치 81에서 Val; (bj) 서열번호 85의 위치 82에서 Thr; (bk) 서열번호 85의 위치 83에서 Lys; (bl) 서열번호 85의 위치 84에서 Thr; (bm) 서열번호 85의 위치 85에서 Glu; (bn) 서열번호 85의 위치 86에서 Cys; (bo) 서열번호 85의 위치 87에서 Cys; (bp) 서열번호 85의 위치 88에서 Phe; (bq) 서열번호 85의 위치 89에서 Thr; (br) 서열번호 85의 위치 90에서 Asp; (bs) 서열번호 85의 위치 91에서 Phe; (bt) 서열번호 85의 위치 92에서 Cys; (bu) 서열번호 85의 위치 93에서 Asn; (bv) 서열번호 85의 위치 94에서 Asn; (bw) 서열번호 85의 위치 95에서 Ile; (bx) 서열번호 85의 위치 96에서 Thr; (by) 서열번호 85의 위치 97에서 Leu; (bz) 서열번호 85의 위치 98에서 His; (ca) 서열번호 85의 위치 99에서 Leu; (cb) 서열번호 85의 위치 100에서 Pro; (cc) 서열번호 85의 위치 101에서 Thr; (cd) 서열번호 85의 위치 102에서 Ala; (ce) 서열번호 85의 위치 103에서 Ser; (cf) 서열번호 85의 위치 104에서 Pro; (cg) 서열번호 85의 위치 105에서 Asn; (ch) 서열번호 85의 위치 106에서 Ala; (ci) 서열번호 85의 위치 107에서 Pro; (cj) 서열번호 85의 위치 108에서 Lys; (ck) 서열번호 85의 위치 109에서 Leu; (cl) 서열번호 85의 위치 110에서 Gly; (cm) 서열번호 85의 위치 111에서 Pro; (cn) 서열번호 85의 위치 112에서 Met; 및 (co) 서열번호 85의 위치 113에서 Glu; 지방분해 (예를 들어, 백색 지방 세포 및/또는 갈색 지방 세포의 지방분해)를 증가시킨다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 28-92 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 28-92 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고, 하나 이상의 ALK7 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal)가 ALK7에 결합하는 것을 저해한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 28-92 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산에 접촉한다: (a) 서열번호 85의 위치 28에서 Cys; (b) 서열번호 85의 위치 29에서 Val; (c) 서열번호 85의 위치 30에서 Cys; (d) 서열번호 85의 위치 31에서 Leu; (e) 서열번호 85의 위치 32에서 Leu; (f) 서열번호 85의 위치 33에서 Cys; (g) 서열번호 85의 위치 34에서 Asp; (h) 서열번호 85의 위치 35에서 Ser; (i) 서열번호 85의 위치 36에서 Ser; (j) 서열번호 85의 위치 37에서 Asn; (k) 서열번호 85의 위치 38에서 Phe; (l) 서열번호 85의 위치 39에서 Thr; (m) 서열번호 85의 위치 40에서 Cys; (n) 서열번호 85의 위치 41에서 Gln; (o) 서열번호 85의 위치 42에서 Thr; (p) 서열번호 85의 위치 43에서 Glu; (q) 서열번호 85의 위치 44에서 Gly; (r) 서열번호 85의 위치 45에서 Ala; (s) 서열번호 85의 위치 46에서 Cys; (t) 서열번호 85의 위치 47에서 Trp; (u) 서열번호 85의 위치 48에서 Ala; (v) 서열번호 85의 위치 49에서 Ser; (w) 서열번호 85의 위치 50에서 Val; (x) 서열번호 85의 위치 51에서 Met; (y) 서열번호 85의 위치 52에서 Leu; (z) 서열번호 85의 위치 53에서 Thr; (aa) 서열번호 85의 위치 54에서 Asn; (ab) 서열번호 85의 위치 55에서 Gly; (ac) 서열번호 85의 위치 56에서 Lys; (ad) 서열번호 85의 위치 57에서 Glu; (ae) 서열번호 85의 위치 58에서 Gln; (af) 서열번호 85의 위치 59에서 Val; (ag) 서열번호 85의 위치 60에서 Ile; (ah) 서열번호 85의 위치 61에서 Lys; (ai) 서열번호 85의 위치 62에서 Ser; (aj) 서열번호 85의 위치 63에서 Cys; (ak) 서열번호 85의 위치 64에서 Val; (al) 서열번호 85의 위치 65에서 Ser; (am) 서열번호 85의 위치 66에서 Leu; (an) 서열번호 85의 위치 67에서 Pro; (ao) 서열번호 85의 위치 68에서 Glu; (ap) 서열번호 85의 위치 69에서 Leu; (aq) 서열번호 85의 위치 70에서 Asn; (ar) 서열번호 85의 위치 71에서 Ala; (as) 서열번호 85의 위치 72에서 Gln; (at) 서열번호 85의 위치 73에서 Val; (au) 서열번호 85의 위치 74에서 Phe; (av) 서열번호 85의 위치 75에서 Cys; (aw) 서열번호 85의 위치 76에서 His; (ax) 서열번호 85의 위치 77에서 Ser; (ay) 서열번호 85의 위치 78에서 Ser; (az) 서열번호 85의 위치 79에서 Asn; (ba) 서열번호 85의 위치 80에서 Asn; (bb) 서열번호 85의 위치 81에서 Val; (bc) 서열번호 85의 위치 82에서 Thr; (bd) 서열번호 85의 위치 83에서 Lys; (be) 서열번호 85의 위치 84에서 Thr; (bf) 서열번호 85의 위치 85에서 Glu; (bg) 서열번호 85의 위치 86에서 Cys; (bh) 서열번호 85의 위치 87에서 Cys; (bi) 서열번호 85의 위치 88에서 Phe; (bj) 서열번호 85의 위치 89에서 Thr; (bk) 서열번호 85의 위치 90에서 Asp; (bl) 서열번호 85의 위치 91에서 Phe; 및 (bm) 서열번호 85의 위치 92에서 Cys. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 28-92 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산에 접촉하고: (a) 서열번호 85의 위치 28에서 Cys; (b) 서열번호 85의 위치 29에서 Val; (c) 서열번호 85의 위치 30에서 Cys; (d) 서열번호 85의 위치 31에서 Leu; (e) 서열번호 85의 위치 32에서 Leu; (f) 서열번호 85의 위치 33에서 Cys; (g) 서열번호 85의 위치 34에서 Asp; (h) 서열번호 85의 위치 35에서 Ser; (i) 서열번호 85의 위치 36에서 Ser; (j) 서열번호 85의 위치 37에서 Asn; (k) 서열번호 85의 위치 38에서 Phe; (l) 서열번호 85의 위치 39에서 Thr; (m) 서열번호 85의 위치 40에서 Cys; (n) 서열번호 85의 위치 41에서 Gln; (o) 서열번호 85의 위치 42에서 Thr; (p) 서열번호 85의 위치 43에서 Glu; (q) 서열번호 85의 위치 44에서 Gly; (r) 서열번호 85의 위치 45에서 Ala; (s) 서열번호 85의 위치 46에서 Cys; (t) 서열번호 85의 위치 47에서 Trp; (u) 서열번호 85의 위치 48에서 Ala; (v) 서열번호 85의 위치 49에서 Ser; (w) 서열번호 85의 위치 50에서 Val; (x) 서열번호 85의 위치 51에서 Met; (y) 서열번호 85의 위치 52에서 Leu; (z) 서열번호 85의 위치 53에서 Thr; (aa) 서열번호 85의 위치 54에서 Asn; (ab) 서열번호 85의 위치 55에서 Gly; (ac) 서열번호 85의 위치 56에서 Lys; (ad) 서열번호 85의 위치 57에서 Glu; (ae) 서열번호 85의 위치 58에서 Gln; (af) 서열번호 85의 위치 59에서 Val; (ag) 서열번호 85의 위치 60에서 Ile; (ah) 서열번호 85의 위치 61에서 Lys; (ai) 서열번호 85의 위치 62에서 Ser; (aj) 서열번호 85의 위치 63에서 Cys; (ak) 서열번호 85의 위치 64에서 Val; (al) 서열번호 85의 위치 65에서 Ser; (am) 서열번호 85의 위치 66에서 Leu; (an) 서열번호 85의 위치 67에서 Pro; (ao) 서열번호 85의 위치 68에서 Glu; (ap) 서열번호 85의 위치 69에서 Leu; (aq) 서열번호 85의 위치 70에서 Asn; (ar) 서열번호 85의 위치 71에서 Ala; (as) 서열번호 85의 위치 72에서 Gln; (at) 서열번호 85의 위치 73에서 Val; (au) 서열번호 85의 위치 74에서 Phe; (av) 서열번호 85의 위치 75에서 Cys; (aw) 서열번호 85의 위치 76에서 His; (ax) 서열번호 85의 위치 77에서 Ser; (ay) 서열번호 85의 위치 78에서 Ser; (az) 서열번호 85의 위치 79에서 Asn; (ba) 서열번호 85의 위치 80에서 Asn; (bb) 서열번호 85의 위치 81에서 Val; (bc) 서열번호 85의 위치 82에서 Thr; (bd) 서열번호 85의 위치 83에서 Lys; (be) 서열번호 85의 위치 84에서 Thr; (bf) 서열번호 85의 위치 85에서 Glu; (bg) 서열번호 85의 위치 86에서 Cys; (bh) 서열번호 85의 위치 87에서 Cys; (bi) 서열번호 85의 위치 88에서 Phe; (bj) 서열번호 85의 위치 89에서 Thr; (bk) 서열번호 85의 위치 90에서 Asp; (bl) 서열번호 85의 위치 91에서 Phe; 및 (bm) 서열번호 85의 위치 92에서 Cys; 하나 이상의 ALK7 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal)가 ALK7에 결합하는 것을 저해한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 28-92 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고, 지방분해 (예를 들어, 백색 지방 세포 및/또는 갈색 지방 세포의 지방분해)를 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 28-92 사이에서 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산에 접촉하고: (a) 서열번호 85의 위치 28에서 Cys; (b) 서열번호 85의 위치 29에서 Val; (c) 서열번호 85의 위치 30에서 Cys; (d) 서열번호 85의 위치 31에서 Leu; (e) 서열번호 85의 위치 32에서 Leu; (f) 서열번호 85의 위치 33에서 Cys; (g) 서열번호 85의 위치 34에서 Asp; (h) 서열번호 85의 위치 35에서 Ser; (i) 서열번호 85의 위치 36에서 Ser; (j) 서열번호 85의 위치 37에서 Asn; (k) 서열번호 85의 위치 38에서 Phe; (l) 서열번호 85의 위치 39에서 Thr; (m) 서열번호 85의 위치 40에서 Cys; (n) 서열번호 85의 위치 41에서 Gln; (o) 서열번호 85의 위치 42에서 Thr; (p) 서열번호 85의 위치 43에서 Glu; (q) 서열번호 85의 위치 44에서 Gly; (r) 서열번호 85의 위치 45에서 Ala; (s) 서열번호 85의 위치 46에서 Cys; (t) 서열번호 85의 위치 47에서 Trp; (u) 서열번호 85의 위치 48에서 Ala; (v) 서열번호 85의 위치 49에서 Ser; (w) 서열번호 85의 위치 50에서 Val; (x) 서열번호 85의 위치 51에서 Met; (y) 서열번호 85의 위치 52에서 Leu; (z) 서열번호 85의 위치 53에서 Thr; (aa) 서열번호 85의 위치 54에서 Asn; (ab) 서열번호 85의 위치 55에서 Gly; (ac) 서열번호 85의 위치 56에서 Lys; (ad) 서열번호 85의 위치 57에서 Glu; (ae) 서열번호 85의 위치 58에서 Gln; (af) 서열번호 85의 위치 59에서 Val; (ag) 서열번호 85의 위치 60에서 Ile; (ah) 서열번호 85의 위치 61에서 Lys; (ai) 서열번호 85의 위치 62에서 Ser; (aj) 서열번호 85의 위치 63에서 Cys; (ak) 서열번호 85의 위치 64에서 Val; (al) 서열번호 85의 위치 65에서 Ser; (am) 서열번호 85의 위치 66에서 Leu; (an) 서열번호 85의 위치 67에서 Pro; (ao) 서열번호 85의 위치 68에서 Glu; (ap) 서열번호 85의 위치 69에서 Leu; (aq) 서열번호 85의 위치 70에서 Asn; (ar) 서열번호 85의 위치 71에서 Ala; (as) 서열번호 85의 위치 72에서 Gln; (at) 서열번호 85의 위치 73에서 Val; (au) 서열번호 85의 위치 74에서 Phe; (av) 서열번호 85의 위치 75에서 Cys; (aw) 서열번호 85의 위치 76에서 His; (ax) 서열번호 85의 위치 77에서 Ser; (ay) 서열번호 85의 위치 78에서 Ser; (az) 서열번호 85의 위치 79에서 Asn; (ba) 서열번호 85의 위치 80에서 Asn; (bb) 서열번호 85의 위치 81에서 Val; (bc) 서열번호 85의 위치 82에서 Thr; (bd) 서열번호 85의 위치 83에서 Lys; (be) 서열번호 85의 위치 84에서 Thr; (bf) 서열번호 85의 위치 85에서 Glu; (bg) 서열번호 85의 위치 86에서 Cys; (bh) 서열번호 85의 위치 87에서 Cys; (bi) 서열번호 85의 위치 88에서 Phe; (bj) 서열번호 85의 위치 89에서 Thr; (bk) 서열번호 85의 위치 90에서 Asp; (bl) 서열번호 85의 위치 91에서 Phe; 및 (bm) 서열번호 85의 위치 92에서 Cys; 지방분해 (예를 들어, 백색 지방 세포 및/또는 갈색 지방 세포의 지방분해)를 증가시킨다.

ALK7-결합 단백질을 인코딩하는 핵산 및 핵산의 세트 또한 제공된다. 핵산 및 핵산의 세트를 함유하는 벡터 및 벡터의 세트, 및 핵산과 벡터로 형질전환된 숙주 세포가 추가로 제공된다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 하이브리도마 또는 포유동물 숙주 세포, 예컨대 NS0 뮤린 골수종 세포, PER.C6® 인간 세포, 또는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포이다. ALK7-결합 단백질을 생산하는 포유동물 숙주 세포 및 하이브리도마를 포함하는 숙주 세포 또한 제공된다.

ALK7-결합 단백질을 만들기 위한 방법 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 ALK7-결합 단백질을 발현하는데 적합한 조건하에 상기 단백질을 발현할 수 있는 숙주 세포를 항온처리하는 단계 및 임의로, 발현된 ALK7-결합 단백질을 단리하는 단계를 포함한다. 본원에 개시된 또는 만약 그렇지 않으면 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조된 및/또는 단리된 ALK7-결합 단백질 또한 제공된다.

ALK7-결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 추가로 제공된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 상승된 ALK7 발현 또는 ALK7-매개된 신호전달과 연관되거나, 또는 감소된 ALK7 신호전달에 의해 치료되고/되거나 개선될 수 있는 병태를 치료하고/하거나 개선하기 위한 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 개체에서 ALK7-매개된 신호전달을 감소시킨다.

제공된 방법을 사용하여 대상체에서 치료되고/되거나 개선될 수 있는 병태는 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 비만 (예를 들어, 복부 비만); 과체중; 인슐린 저항성; 대사 증후군 및 다른 대사 질환 또는 병태; 지질 장애, 예컨대 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 고지혈증, 고중성지질혈증 또는 이상지질혈증; 지질단백질 이상; 감소된 트리글리세리드; 염증 (예를 들어, 간 염증 및/또는 지방 조직의 염증), 지방간 질환; 비알코올성 지방간 질환; 고혈당증; 내당능 장애 (IGT); 고인슐린혈증; 높은 콜레스테롤 (예를 들어, 높은 LDL 수준 및 고콜레스테롤혈증); 심혈관 질환, 예컨대 관상동맥 심장 질환을 포함하는 심장병, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 불규칙한 피브린용해, 죽상동맥경화증; 동맥경화증 및 고혈압; X 증후군; 혈관 재협착증; 신경병증; 망막병증; 신경퇴행성 질환; 내피 기능장애, 호흡기 기능장애, 신장 질환 (예를 들어, 신병증); 췌장염; 다낭성 난소 증후군; 상승된 요산 수준; 혈색소증 (철분 과부하); 흑색극세포증 (피부 상에서 어두운 패치); 및 암 (예를 들어, 골수종 (다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 및/또는 결장 암); 및 상기 질환 또는 병태 중 하나 이상, 또는 과체중 (예를 들어, BMI ≥ 25 kg/m²), 또는 너무 많은 체지방과 연관된 다른 장애/병태.

일부 구현예에서, 개시된 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 ALK7 결합 단백질, 예컨대 길항제 항-ALK7 항체)을 포함하는 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 단독으로 투여된다. 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 복합 요법으로서 투여된다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표준 케어 치료/요법에 대한 복합 요법으로서 투여된다.

ALK7 활성 (예를 들어, 리간드 결합 및/또는 신호전달)을 차단하거나 감소시키는 방법 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 ALK7-결합 단백질 및 ALK7을 발현하는 세포 (예를 들어, 분화된 백색 또는 갈색 지방 세포)를 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 경우에, 상기 방법은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에, ALK7-결합 단백질 및 ALK7을 발현하는 세포를 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 생체내에서 수행된다. 다른 구현예에서, 상기 방법은 시험관내에서 수행된다. 일부 구현예에서, 차단된 또는 감소된 ALK7 활성은 ALK7의 인산화이다. 추가 구현예에서, 차단된 또는 감소된 ALK7 활성은 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 개체에서 ALK7 활성을 차단하거나 감소시키는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

ALK7 발현 및/또는 ALK7 신호전달과 연관된 병리학적 병태에서, 또는 ALK7-리간드의 활성을 감소시키거나 저해함으로써 치료되고/되거나 개선될 수 있는 병리학적 병태에서 ALK7 활성을 차단하거나 감소시키는 방법 또한 제공된다. 일부 경우에, 상기 방법은 ALK7 또는 ALK7-리간드의 증가된 발현을 갖는 대상체에게 ALK7-결합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 병리학적 병태는 비만, 당뇨병, 대사 질환, 이상지질혈증; 심혈관 질환, 2형 당뇨병, 염증, 또는 폐 질환, 지방간 질환, 신경학적 질환, 간 질환, 또는 신장 질환이다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 과체중 또는 과체중과 연관된 병태를 치료하거나 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 ALK7 결합 단백질, 예컨대 길항제 항-ALK7 항체)을 과체중 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 비만이다. 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 이상지질혈증, 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 낮은 HDL 혈청 수준, 높은 LDL 혈청 수준 (예를 들어, LDL-C ≥ 100 mg/dL, ≥ 130 mg/dL, ≥ 160 mg/dL), 및 고중성지질혈증 (예를 들어, TG ≥ 150 mg/dL, ≥ 160 mg/dL, ≥ 170 mg/dL)으로부터 선택된 구성원이다. 또 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 고혈압이다. 추가 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 당뇨병이다. 이러한 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제, 예컨대 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 이러한 특정 구현예에서, 투여되는 길항제 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 특정 다른 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 또 다른 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A, 표 1B, 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A, 표 1B, 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 비만 또는 비만과 연관된 병태를 치료하거나 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 ALK7 결합 단백질, 예컨대 길항제 항-ALK7 항체)을 비만 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 고혈압, 이상지질혈증 (예를 들어, 높은 총콜레스테롤 또는 높은 수준의 트리글리세리드), 2형 당뇨병, 관상동맥 심장 질환, 뇌졸중, 담낭 질환, 골관절염, 수면 장애, 호흡기 질환, 암 (예를 들어, 골수종 (다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 및/또는 결장 암), 비만 연관된 담낭 질환, 비만 연관된 염증, 비만 유도된 수면 무호흡증, 지방증 (지방간), 글루카곤종, 동맥경화증 또는 심부전이다. 일부 구현예에서, ALK7 결합 단백질이 투여되는 대상체는 고혈압, 이상지질혈증 (예를 들어, 높은 총콜레스테롤 또는 높은 수준의 트리글리세리드), 2형 당뇨병, 관상동맥 심장 질환, 뇌졸중, 담낭 질환, 골관절염, 수면 장애, 호흡기 질환, 암 (예를 들어, 골수종 (다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 또는 결장 암), 비만 연관된 담낭 질환, 비만 연관된 염증, 비만 유도된 수면 무호흡증, 지방증, 글루카곤종, 동맥경화증 또는 심부전이 발병할 위험에 처해있다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제, 예컨대 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 투여되는 길항제 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A, 표 1B, 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A, 표 1B, 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 II형 당뇨병 또는 II형 당뇨병과 연관된 병태를 치료하거나 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 ALK7 결합 단백질, 예컨대 길항제 항-ALK7 항체)을 당뇨병성 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 관련된 구현예에서, 본 발명은 II형 당뇨병과 연관된 병태, 예컨대 눈 병태 (예를 들어, 녹내장, 백내장 및 망막병증), 심혈관 질환 (예를 들어, 고혈압, 죽상동맥경화증, 심근 경색 및 뇌졸중), 고혈당증, 말초 신경병증, 및 신장 질환 (예를 들어, 신병증)을 치료하거나 개선하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 대상체는 II형 당뇨병 또는 II형 당뇨병과 연관된 병태, 예컨대 눈 병태 (예를 들어, 녹내장, 백내장 및 망막병증), 심혈관 질환 (예를 들어, 고혈압, 죽상동맥경화증, 심근 경색, 불규칙한 피브린용해 및 뇌졸중), 고혈당증, 말초 신경병증, 또는 신장 질환 (예를 들어, 신병증)이 발병할 위험에 처해있다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제, 예컨대 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 이러한 특정 구현예에서, 투여되는 길항제 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 다른 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A, 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 대사 질환 또는 장애, 또는 대사 질환 또는 장애와 연관된 병태를 치료하거나 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 ALK7 결합 단백질, 예컨대 길항제 항-ALK7 항체)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 지질, 지질단백질 또는 아포지질단백질 대사의 변경이다. 다른 이러한 구현예에서, 대사 병태는 높은 혈장 트리글리세리드 수준, 고혈압, 이상지질혈증 높은 공복 혈당, 낮은 HDL 콜레스테롤 수준이다. 또 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 또는 내피 기능장애이다. 또 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 만성 염증이다. 추가 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 비알코올성 지방간 질환 (예를 들어, 지방간 및/또는 NASH)이다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제, 예컨대 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 이러한 특정 구현예에서, 투여되는 길항제 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 인슐린 저항성 또는 인슐린 저항성과 연관된 병태를 치료하거나 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 ALK7 결합 단백질, 예컨대 길항제 항-ALK7 항체)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 내당능 장애 또는 고혈당증과 연관된다. 이러한 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 고혈압 또는 죽상동맥경화증과 연관된다. 또 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 다음으로부터 선택된 구성원이다: 이상지질혈증, 고지혈증, 고콜레스테롤혈증, 낮은 HDL 혈청 수준, 높은 LDL 혈청 수준 (예를 들어, LDL-C ≥ 100 mg/dL, ≥ 130 mg/dL, ≥ 160 mg/dL), 및 고중성지질혈증 (예를 들어, TG ≥ 150 mg/dL, ≥ 160 mg/dL, ≥ 170 mg/dL). 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제, 예컨대 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 이러한 특정 구현예에서, 투여되는 길항제 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 다른 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 눈, 신경계, 신장, 폐 및/또는 간의 질환 또는 장애, 또는 연관된 병태를 치료하거나 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 ALK7 결합 단백질, 예컨대 길항제 항-ALK7 항체)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 염증이다. 이러한 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 신병증 (예를 들어, 당뇨병성 신장병증), 신장 동맥의 동맥경화증, 또는 신부전이다. 또 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 만성 염증이다. 또 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 지방 조직의 염증이다. 추가 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 간의 염증이다. 추가 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 NAFLD (예를 들어, 지방간 및/또는 NASH)이다. 일부 구현예에서, ALK7 결합 단백질이 투여되는 대상체는 신장, 폐 또는 간의 질환 또는 장애가 발병할 위험에 처해있다. 일부 구현예에서, ALK7 결합 단백질이 투여되는 대상체는 신병증이 발병할 위험에 처해있다. 일부 구현예에서, ALK7 결합 단백질이 투여되는 대상체는 신병증이 발병할 위험에 처해있다. 특정 구현예에서, 대상체는 만성 염증이 발병할 위험에 처해있다. 다른 구현예에서, 대상체는 지방 조직의 염증이 발병할 위험에 처해있다. 또 다른 구현예에서, 대상체는 간의 염증이 발병할 위험에 처해있다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제, 예컨대 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 이러한 특정 구현예에서, 투여되는 길항제 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 심혈관 질환 또는 장애, 또는 심혈관 질환 또는 장애와 연관된 병태를 치료하거나 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 ALK7 결합 단백질, 예컨대 길항제 항-ALK7 항체)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 이러한 특정 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 관상동맥 심장 질환, 울혈성 심부전, 혈관 재협착증, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 미세혈관 질환, 불규칙한 피브린용해, 또는 동맥경화증이다. 다른 구현예에서, ALK7 결합 단백질이 투여되는 대상체는 관상동맥 심장 질환, 울혈성 심부전, 혈관 재협착증, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 미세혈관 질환, 또는 동맥경화증이 발병할 위험에 처해있다. 특정 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 고혈압 (예를 들어, 안정 상태에서 혈압 >130/80 mmHg)이다. 특정 구현예에서, ALK7 결합 단백질이 투여되는 대상체는 고혈압이 발병할 위험에 처해있다. 다른 구현예에서, 치료되거나 개선되는 병태는 죽상동맥경화증이다. 특정 구현예에서, ALK7 결합 단백질이 투여되는 대상체는 죽상동맥경화증이 발병할 위험에 처해있다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제, 예컨대 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 이러한 특정 구현예에서, 투여되는 길항제 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 특정 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 관련된 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다.

도 1a-1c는 mAb J02, mAb G05, 및 mAb C03에 대한 인간 ALK7 상의 에피토프를 나타낸다. 도 1a는 1차 에피토프 (서열번호 208)를 나타내고, 도 1b는 mAb J02, mAb G05, 및 mAb C03에 대한 인간 ALK7 상의 2차 에피토프 (서열번호 208)를 나타낸다. 도 1c는 이들 3개의 예시적인 항체에 대한 모든 1차 및 2차 에피토프 (서열번호 208)를 요약한다.
도 2는 ALK7 상의 에피토프에 결합하기 위한 3-D 구조적 모델링을 위해 사용된 ALK7 (서열번호 337), ALK6 (서열번호 338), ALK5 (서열번호 339), ALK3 (서열번호 340), 및 ALK1 (서열번호 341)의 잔기 4-84의 1차 서열 비교를 나타낸다.
도 3a-3c는 ALK6, ALK5, ALK3, 및 ALK1의 이용 가능한 구조적 데이터에 기초한 인간 ALK7 세포외 도메인의 구조적 모델을 나타낸다. 잔기 4-84 (도 3a) 또는 4-92 (도 3b 및 3c)를 나타내는 구조는 예시적인 항체 mAb J02, mAb G05, 및 mAb C03에 대한 1차 및 2차 에피토프를 예시한다.
도 4는 TBS 및 ALK7 mAb 처리된 고지방 식이 (HFD) 마우스에서 지방 변화량을 나타낸다. 지방량의 변화는 ALK7 Ab 또는 TBS 처리 전 기준선에 상대적이다. ALK7 mAbs (즉, J02, K02, G05, C03, 및 L02)로 처리하면 HFD 마우스에서 지방 질량을 유의하게 감소시켰다. *는 HFD+TBS와 대비하여 p > 0.001을 나타낸다.
도 5는 TBS 및 ALK7 mAb 처리된 고지방 식이 (HFD) 마우스에서 제지방 체질량의 변화량을 나타낸다. 제지방량의 양에서의 변화는 ALK7 Ab 또는 TBS 처리 전 기준선에 상대적이다. ALK7 mAbs (즉, J02, K02, G05, C03, 및 L02)를 사용한 처리는 HFD 마우스에서 제지방 체질량을 변화시키지 않았다.
도 6은 표준 일반 식이 (SD)를 제공받은 마우스 대 고지방 식이 (HFD)를 제공받은 마우스의 기준선 체중의 비교를 나타낸다.
도 7은 표준 일반 식이 (SD) 또는 고지방 식이 (HFD)를 제공받고 대조군 (TBS) 또는 상이한 용량의 ALK7 항체로 처리한 마우스의 1일 체중의 비교를 나타낸다.
도 8은 표준 일반 식이 (SD) 또는 고지방 식이 (HFD)를 제공받고 대조군 (TBS) 또는 상이한 용량의 ALK7 항체로 처리한 마우스 중에서 기준선 체중과 대비하여 1일 체중 변화의 비를 비교를 나타낸다.
도 9는 표준 일반 식이 (SD) 또는 고지방 식이 (HFD)를 제공받고 상이한 시점에서 대조군 (TBS) 또는 상이한 용량의 ALK7 항체로 처리한 마우스 중에서 체중과 대비하여 체지방량의 비의 비교를 나타낸다.
도 10은 표준 일반 식이 (SD) 또는 고지방 식이 (HFD)를 제공받고 상이한 시점에서 대조군 (TBS) 또는 상이한 용량의 ALK7 항체로 처리한 마우스 중에서 체중과 대비하여 제지방량의 비의 비교를 나타낸다.
도 11은 표준 일반 식이 (SD) 또는 고지방 식이 (HFD)를 제공받고 상이한 시점에서 대조군 (TBS) 또는 상이한 용량의 ALK7 항체로 처리한 마우스 중에서 지방 또는 제지방량의 비교를 나타낸다.

본 발명은 단리된 및/또는 재조합 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 기재된 적어도 하나의 ALK7 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 이러한 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 이중특이적 항체)은 본원에 기재된 적어도 하나의 에피토프 및 본원에 기재된 또는 공지된 또는 본원에 기재된 방법 및/또는 당업계의 일반적인 지식을 사용하여 발견 가능한 적어도 또 다른 에피토프에 결합한다. 이러한 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항-ALK7 항체 (예를 들어, 표 및 실시예, 예컨대 표 1A, 1B, 및 3에 기재된 항체) 및 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 대안적으로, 이러한 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시되어 있지 않지만 본원에 기재된 적어도 하나의 ALK7 에피토프에 결합하는 항-ALK7 항체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 이러한 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체와 상이한 적어도 하나의 CDR, 프레임워크, CDR/프레임워크 조합, 가변, 불변, 또는 가변/불변 조합 서열을 포함하는 항-ALK7 항체를 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 본원에 기재된 적어도 하나의 ALK7 에피토프에 결합하는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)을 포함한다. 이러한 단백질은 본원에 기재된 것과 정확히 동일한 1차 및/또는 2차/입체형태적 에피토프와 상호작용할 수 있거나, 본원에 기재된 적어도 하나의 에피토프와 중첩되는 (예를 들어, 본질적으로 동일한) 상이한 1차 및/또는 2차/입체형태적 에피토프와 상호작용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한, 특정 ALK7 결합 단백질 (예를 들어, 본원에 기재된 항-ALK7 항체)과 ALK7 결합에서 결쟁하거나 상기 결합을 차단하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 이러한 ALK7-결합 단백질은 특정 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 본원에 기재된 항-ALK7 항체)의 ALK7로의 결합을 감소시킬 수 있거나, 이러한 결합에 영향을 미치지 않거나, 다른 상황에서 이러한 ALK7-결합 단백질의 결합을 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 결합은 특정 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 본원에 기재된 항-ALK7 항체)의 ALK7로의 결합을 방지하거나 저해한다. 다른 구현예에서, 이러한 결합은 특정 ALK7 결합 단백질 (예를 들어, 본원에 기재된 항-ALK7 항체)의 ALK7로의 결합을 용이하게 하거나 촉진한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 ALK7-결합 단백질은 표 1A, 1B, 또는 3에 기재된 항-ALK7 항체 (즉, G04, C02, D04, H03, J01, K01, C01, J02, K02, G05, C03, 및 C02) 또는 이의 항원-결합 단편을 배제한다.

ALK7-결합 단백질을 인코딩하는 핵산, 이들 핵산을 함유하는 벡터 및 숙주 세포, 및 ALK7-결합 단백질을 제조하고 사용하는 방법 또한 제공된다. 제공된 ALK7-결합 단백질은 증가된 ALK7 발현 및/또는 신호전달과 연관된 질환 및 병태를 진단, 치료 및/또는 개선하는데 용도를 갖는다. 이러한 용도는 비만 (예를 들어, 복부 비만); 과체중; 인슐린 저항성; 대사 증후군 및 다른 대사 질환 또는 병태; 지질 장애, 예컨대, 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 고지혈증, 고중성지질혈증 또는 이상지질혈증; 지질단백질 이상; 감소된 트리글리세리드; 염증 (예를 들어, 간 염증 및/또는 지방 조직의 염증), 지방간 질환; 비알코올성 지방간 질환; 고혈당증; 내당능 장애 (IGT); 고인슐린혈증; 높은 콜레스테롤 (예를 들어, 높은 LDL 수준 및 고콜레스테롤혈증); 심혈관 질환, 예컨대 관상동맥 심장 질환을 포함하는 심장병, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 죽상동맥경화증; 동맥경화증 및 고혈압; X 증후군; 혈관 재협착증; 신경병증; 망막병증; 신경퇴행성 질환; 내피 기능장애, 호흡기 기능장애, 신장 질환 (예를 들어, 신병증); 췌장염; 다낭성 난소 증후군; 상승된 요산 수준; 혈색소증 (철분 과부하); 흑색극세포증 (피부 상에서 어두운 패치); 및 암 (예를 들어, 골수종 (다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 및/또는 결장 암); 및 상기 질환 또는 병태 중 하나 이상, 또는 과체중 (예를 들어, 25 kg/m²의 BMI), 또는 너무 많은 체지방과 연관된 다른 장애/병태를 예방하고/하거나 개선하는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 관련된 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌 (the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press)은 당업자에게 본 발명에서 사용된 많은 용어의 일반적인 사전을 제공한다. 본원에 제공된 표제는 다양한 구현예의 제한이 아니며, 이들은 전체로서 본 명세서에 참조될 수 있다. 게다가, 바로 아래에 정의된 용어는 그 전체가 본 명세서를 참조하여 더 완전히 정의된다.

용어 "a", "an" 및 "the"는 용어가 사용되는 문맥에서 달리 명백하게 지시되지 않는 한, 복수의 지시대상을 포함한다. 용어 "a" (또는 "an")뿐만 아니라 용어 "하나 이상" 및 "적어도 하나"는 본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있다. 게다가, "및/또는"은 본원에서 사용되는 경우에, 다른 특성 또는 구성요소의 유무에 무관하게 2개 이상의 특정된 특성 또는 구성요소 각각의 특정 개시로서 간주된다. 따라서, 구에 사용된 용어 "및/또는", 예컨대 본원의 "A 및/또는 B"는 "A와 B," "A 또는 B," "A" (단독), 및 "B" (단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, 구에 사용된 용어 "및/또는", 예컨대 "A, B 및/또는 C"는 다음의 구현예 각각을 포괄하는 것으로 의도된다: A, B와 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A와 C; A와 B; B와 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).

용어 "포함한다"는 일반적으로, 포함한다라는 의미로 사용되는데, 즉, 하나 이상의 특성 또는 구성요소의 존재를 허용한다. 구현예가 본원에 "포함하는"이라는 언어로 기술될 때는 언제나, "구성되는" 및/또는 "본질적으로 구성되는"의 관점에서 기술된 다른 유사한 구현예 또한 제공된다.

명세서 및 청구범위 전반에서 수치와 관련하여 사용된 바와 같이 용어 "약" 및 "대략"은 당업자에게 친숙하고 허용되는 정확도 구간을 나타낸다. 일반적으로, 이러한 정확도 구간은 ± 10%이다. 대안적으로, 그리고 특히 생물학적 시스템에서, 용어 "약" 및 "대략"는 소정의 값의 1 크기 자릿수, 바람직하게는 ≤ 5-배 및 더욱 바람직하게는 ≤ 2-배 내의 값을 의미할 수 있다.

수치 범위는 범위를 규정하는 숫자를 포괄한다.

ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하는, 바람직하게는 ALK7의 세포외 도메인에 결합하는 단백질을 지칭한다.

용어 "ALK7" 및 "ALK7 수용체"는 상호교환적으로 사용되고, ALK7을 지칭한다 (문헌에서 ACVRLK7, 액티빈 A 수용체, 유형 IC, ACVR-1C, 액티빈 수용체-유사 키나아제 7 및 EC 2.7.11로도 지칭됨). 인간 ALK7에 대한 참조 서열은 NCBI 참조 서열 NP_001104501.1에서 제공된다. 제공된 ALK7-결합 단백질은 서열번호 85의 아미노산 서열에 상응하는 인간 ALK7의 세포외 도메인에 결합한다. 래트 ALK7에 대한 참조 서열은 NCBI 참조 서열 P70539에서 제공된다. 일부 구현예에서, 제공된 ALK7-결합 단백질은 서열번호 86의 아미노산 서열에 상응하는 래트 ALK7의 세포외 도메인에 결합한다.

ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 중화 항체)과 관련하여 사용될 때 용어 "경쟁한다 (compete)" 또는 "경쟁한다 (competes)"는 시험 중인 항원 결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편)이 공통 항원 (예를 들어, ALK7 세포외 도메인 또는 이의 단편)에 대한 참조 항원 결합 단백질 (예를 들어, 리간드, 또는 참조 항체)의 특이적 결합을 예방하거나 저해하는 검정에 의해 결정될 때, 항원 결합 단백질 사이의 경쟁을 의미한다. 다양한 유형의 경쟁적 결합 검정, 예를 들어, 고체상 직접 또는 간접 방사면역검정 (RIA) (참조: 예를 들어, Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77-82 (1990) 및 Morel et al., Molec. Immunol. 25:7-15 (1988)), 고체상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 고체상 직접 비오틴-아비딘 EIA (참조: 예를 들어, Cheung, et al., Virology 176:546-552 (1990) 및 Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614-3619 (1986)) 및 샌드위치 경쟁 검정 (참조: 예를 들어, Stahli et al., Methods in Enzymology 92:242-253 (1983))이 사용될 수 있다. 전형적으로, 이러한 검정은 표지화되지 않은 시험 항원 결합 단백질 및 표지화된 참조 항원 결합 단백질 중 어느 하나를 보유하는 고체 표면 또는 세포에 결합된 정제된 항원의 사용을 수반한다.

경쟁적 저해는 시험 항원 결합 단백질의 존재하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정될 수 있다. 일반적으로, 시험 항원 결합 단백질은 과량으로 존재한다. 경쟁 검정에 의해 동정된 항원 결합 단백질 (경쟁하는 항원 결합 단백질)은 참조 ALK7-결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합하는 ALK7-결합 단백질뿐만 아니라 참조 ALK7-결합 단백질에 의해 결합된 에피토프에 충분히 근접한 인접한 에피토프에 결합하여 입체 장해가 발생하는 ALK7-결합 단백질을 포함한다. 일반적으로, 경쟁하는 ALK7 결합 단백질이 과량으로 존재할 때, 이것은 ALK7에 대한 참조 ALK7-결합 단백질의 특이적 결합을 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75% 저해할 것이다. 일부 경우에, 경쟁하는 항원 결합 단백질은 참조 ALK7-결합 단백질의 특이적 결합을 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 98%, 또는 99% 저해한다.

ALK7 단백질과 관련하여 사용될 때 용어 "에피토프"는 본 발명의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항체)에 결합할 수 있는 ALK7 (예를 들어, 인간 ALK7 또는 뮤린 ALK7) 단백질 결정인자를 지칭한다. 에피토프는 일반적으로, 분자, 예컨대 아미노산 또는 당 측쇄의 화학적으로 활성 표면 그룹화로 구성되고, 일반적으로, 특정 3차원 구조적 특징뿐만 아니라 특정 전하 특징을 갖는다. 입체형태적 및 비입체형태적 에피토프는 변성 용매의 존재하에 전자에는 결합하지만 후자에 대한 결합은 상실된다는 점에서 구별된다. ALK7-결합 단백질에 의해 결합된 ALK7 에피토프는 당업계에 공지된 기술을 사용하여 쉽게 결정될 수 있다.

용어 "선형 에피토프" 또는 "1차 에피토프"는 (연속) ALK7 단백질의 1차 아미노산 서열을 따라 선형으로 발생하는 ALK7 단백질과 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질 (예컨대 항체 또는 이의 항원-결합 단편) 사이의 모든 상호작용 지점을 포함하는 에피토프를 지칭한다. 항원 상의 원하는 에피토프가 결정되면, 예를 들어, 본원에 기재되고 당업계에 공지된 기술을 사용하여 그 에피토프에 대한 항체를 생성할 수 있다. 대안적으로, 발견 과정 동안, 항체 또는 이의 단편의 생성 및 특징 분석은 원하는 에피토프에 대한 정보를 설명할 수 있다. 이 정보로부터, 이어서 동일한 에피토프에 결합하기 위해 항체를 경쟁적으로 스크리닝하는 것이 가능하다. 이를 달성하기 위한 접근법은, 항체가 항원으로서 ALK7 단백질에 결합하기 위해 경쟁하는 것과 같이, 서로 경쟁적으로 결합하는 항체를 찾기 위해 교차-경쟁 연구를 수행하는 것이다. 이들의 교차-경쟁에 기초한 "비닝" 항체에 대한 높은 처리량 공정은 국제 특허 출원 제WO2003/4873호에 기재되어 있다.

용어 "입체형태적 에피토프" 또는 "구조적 에피토프"는 ALK7 단백질의 불연속 아미노산 잔기가 ALK7-결합 단백질과의 상호작용 지점을 포함하는 3차원 형상으로 합쳐지는 에피토프를 지칭한다. 입체형태적 에피토프에서, 상호작용 지점은 적어도 하나의 아미노산 잔기 (불연속적)에 의해 서로 분리된 아미노산 잔기에 걸쳐 발생하는데, 즉, 접촉 지점은 ALK7 단백질의 별개의 분리된 영역, 예컨대 ALK7의 세포외 도메인에서 발생한다. 예시를 위한 목적으로만, 입체형태적 에피토프는 또한, ALK7의 분리된 별개의 영역 상의 연속 접촉, 예를 들어, ALK7의 한 영역에서 적어도 2개의 아미노산, 예컨대 이의 세포외 도메인과의 연속 접촉을 포함할 수 있다.

일반적으로, 특정 표적 항원에 특이적인 항체는 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물에서 표적 항원 상의 에피토프를 우선적으로 인식할 것이다.

에포토프를 포함하는 소정의 폴리펩티드 (예를 들어, ALK7 단백질)의 영역은 본원에 기재되거나 당업계에 익히 공지된 것들과 같은 임의의 수의 에피토프 맵핑 기술을 사용하여 동정될 수 있다. (참조: 예를 들어, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E.Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey). 예를 들어, 선형 에피토프는, 예를 들어, 고체 지지체 상의 다수의 펩티드 (상기 펩티드는 단백질 분자의 일부에 상응한다)를 동시에 합성하고, 펩티드가 여전히 지지체에 부착되어 있는 동안 펩티드를 항체와 반응시킴으로써 결정될 수 있다. 이러한 기술은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌 (U.S. Patent No. 4,708,871; Geysen et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:3998-4002; Geysen et al., (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:78-182; Geysen et al., (1986) Mol. Immunol. 23:709-715)에 기재되어 있다. 유사하게, 입체형태적 에피토프는, 예를 들어, 수소/중수소 교환, X-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명에 의해 아미노산의 공간 입체형태를 결정하여 쉽게 동정된다. 예를 들어, 상기 에피토프 맵핑 프로토콜을 참조한다. 단백질의 항원 영역은 또한, 예를 들어, 옥스포드 몰레큘라 그룹 (Oxford Molecular Group)으로부터 입수 가능한 Omiga 버전 1.0 소프트웨어 프로그램을 사용하여 계산된 것들과 같은 표준 항원성 및 수치법 플롯 (hydropathy plot)을 사용하여 동정될 수 있다. 이 컴퓨터 프로그램은 수치법 플롯을 위해 호프/우드 방법 (Hopp/Woods method) (참조: Hopp et al., (1981) Proc. Natl. Acad. Sci USA 78:3824-3828; for determining antigenicity profiles, and the Kyte-Doolittle technique, Kyte et al., (1982) J. Mol. Biol. 157:105-132)을 사용한다.

본원에 사용된 용어 "파라토프"는 ALK7 단백질 상의 에피토프로의 결합을 결정하는 결합 영역의 일반적인 구조를 지칭한다. 이 구조는 결합 영역이 에피토프에 결합할 수 있는지 여부와 결합 방식에 영향을 미친다. 용어 "파라토프"는 ALK7 단백질 상의 항원 결정기에 결합하는 항체 또는 이의 단편을 담당하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 항원 부위를 지칭할 수 있다. 파라토프는 또한, 항체의 이디오타입 및 에피토프에 결합하는 상보성 결정 영역 (CDR)을 지칭한다.

선형 에피토프 맵핑 또는 불연속 에피토프 맵핑을 사용하여 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 단일클론 항체)에 의해 인식된 ALK7 상의 에피토프를 맵핑할 수 있다. 중첩 합성 펩티드의 라이브러리를 사용하여 선형 에피토프를 맵핑하는 개념은, 예를 들어, 문헌 (Geysen et al. (1984) PNAS 81:3998-4002)에서 발견할 수 있다. 상기 기술은, 예를 들어, 특정 하이드로겔 제형으로 덮인 고체 지지체 상의 선형 펩티드의 직접 합성 라이브러리를 포함하는데, 이는 생체분자와의 작업을 가능하게 하며 큰 샘플 세트를 프로파일링하기 위해 쉽게 재생될 수 있다. 선형 모방체의 라이브러리를 생성하기 위해, 면역원 (또는 표적 단백질)의 정확한 아미노산 서열은 중첩 단편인 실리코에서 분할된 다음, 고체 지지체 ("미니-카드")에서 합성된다. 이러한 면역원 (또는 표적 단백질)로의 항체의 결합은 자동화된 ELISA-유형 판독을 사용하여 정량화될 수 있다. 정확한 입체형태로 올바른 아미노산 서열을 함유하는 작제물이 항체에 가장 잘 결합한다.

불연속 에피토프를 모방하기 위해, CLIPS^TM (Chemically Linked Peptides on Scaffolds) 기술은 펩티드를 명시된 3D 구조로 구조적으로 고정한다. 이러한 기술은 CLIPS 스캐폴드의 브로모 기와 시스테인 작제물의 티올 측쇄 사이의 반응을 사용하여 고유 단백질 서열을 다양한 구조를 갖는 CLIPS 작제물로 변형시킨다. CLIPS^TM 기술은 현재 펩티드 라이브러리를 단일, 이중 또는 삼중 루프 구조 및 시트- 및 나선형 접힘으로 형성하는데 정해진 대로 사용되어 입체형태적 및 불연속 결합 부위를 모방할 수 있도록 한다.

2차 구조 모방체는 열역학적으로 선호되는 펩티드 입체형태를 선택할 수 있도록 하는 CLIPS 스캐폴드를 적용하여 안정화될 수 있다. 조합 스크리닝은 표적 단백질을 최대 10,000개 중첩 펩티드 작제물의 라이브러리로 전환시키는 것으로 시작된다. 정확한 입체형태로 불연속 에피토프의 두 부분을 나타내는 이들 작제물은 증가된 친화성으로 항체에 결합한다. 불완전한 에피토프를 나타내는 작제물은 낮은 친화성을 갖는 항체에 결합할 수 있는 반면, 에피토프를 포함하지 않는 작제물은 전혀 결합하지 않는다.

본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은 ALK7 (예를 들어, 인간 ALK7) 상의 적어도 하나의 에피토프에 결합할 수 잇다. 일부 구현예에서, 이러한 ALK7 결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 ALK7 상의 적어도 하나의 선형 에피토프에 결합한다. 다른 구현예에서, 이러한 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 ALK7 상의 적어도 하나의 불연속 또는 입체형태적 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 이러한 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 ALK7 상의 적어도 하나의 선형 및 적어도 하나의 불연속 또는 입체형태적 에피토프에 결합한다. 이러한 선형, 불연속 또는 입체형태적 에피토프는 ALK7의 상이한 도메인 또는 모티프 상에 위치할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질에 의해 결합된 적어도 하나의 에피토프는 ALK7의 세포외 도메인에 위치한다. 다른 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질에 의해 결합된 적어도 하나의 에피토프는 ALK7의 세포외 도메인 외부에 위치한다. 또 다른 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질에 의해 결합된 적어도 하나의 에피토프는 ALK7의 세포외 도메인의 내부 또는 외부의 경계에 위치한다.

본원에 기재된 ALK7-결합 단백질에 의해 결합된 예시적인 에피토프는 펩티드 라이브러리 스크리닝에 의해 분리되었으며 본 명세서, 예컨대 실시예에 개시되어 있다. 실시예에서 분리된 펩티드 스트레치 (stretch)는 ALK7 상의 선형, 불연속 또는 입체형태적 에피토프의 중요한 분율 (아마도 단지 1의 분율)을 나타낸다. 본원에 기재된 특정 ALK7-결합 단백질은 실시예에서 개시된 펩티드 스트레치에 나타낸 ALK7 상의 에피토프에 결합한다. 당업자는 실시예에서 개시된 펩티드 스트레치 서열을 갖는 에피토프 구조를 당업계의 일반적인 지식과 함께 이해할 것이다. 당업자는 또한, 기재된 에피토프를 통해 본원에 기재된 ALK7 결합 단백질의 ALK7로의 결합이 당업계의 일반적인 지식에 의해 이해되는 바와 같이 높은, 중간 및/또는 낮은 엄격성 조건하에 발생할 수 있음을 쉽게 이해할 것이다.

기재된 에피토프를 통해 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질의 ALK7로의 결합은 ALK7의 구조 및/또는 기능을 변화시키거나 변화시키지 않을 수 있다. 예를 들어, 이러한 결합은 ALK7의 생물학적 활성 및/또는 ALK7이 적어도 하나의 다른 ALK7-결합 단백질과 상호작용하는 능력을 감소시키거나 제거할 수 있다. 일부 구현예에서, 기재된 에피토프 중 적어도 하나를 통해 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질의 ALK7로의 결합은 ALK7과 적어도 하나의 ALK7 리간드 사이의 상호작용을 감소시키거나 제거한다. 다른 구현예에서, 이러한 결합은 ALK7과 적어도 하나의 ALK7 리간드 사이의 상호작용에 유의하게 영향을 미치지 않는다. 또 다른 구현예에서, 이러한 결합은 ALK7과 적어도 하나의 ALK7 리간드 사이의 상호작용을 유의하게 증가시키거나 향상시킨다. 게다가, 이러한 결합은 ALK7의 안정성 및/또는 반감기를 향상시키거나, ALK7의 안정성 및/또는 반감기를 감소시킬 수 있다 (예를 들어, ALK7의 분해 및/또는 제거를 저해하거나 촉진시킴으로써).

일부 구현예에서, 기재된 에피토프를 통해 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질의 ALK7로의 결합은 ALK7과 또 다른 ALK7-결합 단백질 사이의 결합을 감소시키거나 저해한다. 예를 들어, 하나의 이러한 ALK7-결합 단백질은 ALK7로의 결합에 대해 또 다른 항-ALK7 항체 (예를 들어, 상업적으로 입수 가능한 항-ALK7 항체)와 경쟁할 수 있다. 일부 구현예에서, 기재된 에피토프를 통해 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질의 ALK7로의 결합은 ALK7이 또 다른 항-ALK7 항체 (예를 들어, 또 다른 상업적으로 입수 가능하거나 공지된 항-ALK7 항체)에 결합하는 것을 방지한다. 다른 구현예에서, 이러한 결합은 또 다른 항-ALK7 항체 (예를 들어, ALK7로의 또 다른 상업적으로 입수 가능하거나 공지된 항-ALK7 항체 결합)로의 결합을 방해하지 않는다.

본 발명은 ALK7 결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체 또는 이의 단편)에 의해 결합된 ALK7 상의 다수의 1차 및 입체형태적 에피토프에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 연속 및/또는 불연속 아미노산 잔기를 포함하는 ALK7 상의 적어도 하나의 1차 에피토프 및/또는 적어도 하나의 입체형태적 에피토프를 인식하는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체 또는 이의 항원-결합 단편)에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 이러한 연속 및/또는 불연속 아미노산 잔기는 ALK7의 세포외 도메인에 위치한다. 특정 구현예에서, 이러한 1차 또는 입체형태적 에피토프는 본원에 (예를 들어, 실시예에) 기재된 1차 또는 입체형태적 에피토프, 또는 본원에 (예를 들어, 실시예에) 기재된 1차 또는 입체형태적 에피토프와 중첩되는 (예를 들어, 본질적으로 동일한) 상이한 에피토프를 포함한다.

일 양상에서, 본 발명은 ALK7에서 다수의 별개의 1차 및 입체형태적 에피토프의 동정에 관한 것이다. ALK7의 세포외 도메인 (잔기 4-84)의 주요 부분의 3차원 구조는 관련된 ALK 단백질의 공지된 구조로 모델링되었다. 본 발명은 또한, 도 1 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 다수의 항-ALK7 항체와 상호작용하는 ALK7 세포외 도메인 내에 다수의 1차 및 입체형태적 에피토프가 존재함을 처음으로 나타낸다.

본 발명은 상이한 부류의 항-ALK7 항체 또는 이의 단편이 결합하는 ALK7 세포외 도메인에 다수의 별개의 1차 및 입체형태적 에피토프가 존재함을 나타낸다. 본원에 기재된 제1 부류의 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체 (예를 들어, mAb C03)는 1차 에피토프, 예컨대 ₆₉DFCNNITLHLP₇₉ (서열번호 317)에 단독으로 또는 적어도 또 다른 1차 에피토프 또는 하나의 입체형태적 에피토프, 예컨대 ₁LSPGLKCVCLL₁₁ (서열번호 318) 및/또는 ₅₁QVFCHSSNN₅₉ (서열번호 319)와 함께 결합하고; 본원에 기재된 제2 부류의 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체 (예를 들어, mAb J02)는 제2의 1차 에피토프, 예컨대 ₄₅LPELNAQVFCHSSNNVTK₆₂ (서열번호 310)에 단독으로 또는 적어도 또 다른 1차 에피토프 또는 하나의 입체형태 에피토프, 예컨대 ₂₆WASVMLTNGKEQ₃₇ (서열번호 311) 및/또는 ₇₈LPTASPNAPK₈₇ (서열번호 312)와 함께 결합하고; 제3 부류의 항체는 제3 1차 에피토프, 예컨대 ₄₂VSLPELNAQVFCHSSNNVTK₆₃ (서열번호 313)에 단독으로 또는 적어도 또 다른 1차 에피토프 또는 하나의 입체형태 에피토프, 예컨대 ₆KCVCLLCDSS₁₅ (서열번호 314), ₂₃GACWASVMLT₃₂ (서열번호 315), 및/또는 ₇₁CNNITLHLPT₈₀ (서열번호 316)과 함께 결합한다. 일부 구현예에서, 제1, 제2 및 제3 입체형태적 에피토프는 중첩되지 않으며; 제1, 제2 및 제3 부류의 항체는 ALK7 단백질의 별개의 영역에 결합한다. 특정 구현예에서, 제1 및 제2 입체형태적 에피토프는 중첩되지 않고; 제1 및 제2 부류의 항체는 ALK7 단백질의 별개의 영역에 결합한다. 특정 구현예에서, 제1 및 제3 입체형태적 에피토프는 중첩되지 않고, 제1 및 제3 부류의 항체는 ALK7 단백질의 별개의 영역에 결합한다. 특정 구현예에서, 제2 및 제3 입체형태적 에피토프는 중첩되지 않고, 제2 및 제3 부류의 항체는 ALK7 단백질의 별개의 영역에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7 단백질 상의 제1, 제2, 및 제3 입체형태적 에피토프는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개의 아미노산 잔기에 의해 서로 중첩되고; 제1, 제2, 및 제3 부류의 항체는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 중첩 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 입체형태적 에피토프는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 아미노산 잔기에 의해 서로 중첩되고; 제1 및 제2 부류의 항체는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 중첩 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제3 입체형태적 에피토프는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 아미노산 잔기에 의해 서로 중첩되고; 제1 및 제3 부류의 항체는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 제2 및 제3 입체형태적 에피토프는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 아미노산 잔기에 서로 중첩되고; 제2 및 제3 부류의 항체는 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 중첩 아미노산 잔기에 결합된다.

다른 구현예에서, 3가지 부류의 항체는 본원에 기재된 바와 같이 중첩 에피토프에 결합될 수 있다. 이러한 중첩 에피토프는 기재된 1차 및/또는 입체형태적 에피토프와 본질적으로 동일하거나 기재된 에피토프와 어느 정도 상이할 수 있다. 중첩 에피토프와 본원에 기재된 것들 사이의 이러한 본질적인 동일성은 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 아미노산 잔기에 의한 중첩을 수반할 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 3가지 부류의 항체는 ALK7 단백질로의 결합에서 실시예 (예를 들어, 표 1A, 1B, 및 3)에 기재된 참조 항-ALK7 항체와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 3가지 부류의 항체는 실시예에 (예를 들어, 표 1A, 1B, 및 3에) 기재된 참조 항-ALK7 항체가 ALK7 단백질에 결합하는 것을 다양한 정도로 저해한다. 예를 들어, 3가지 부류의 항체는 본원에 기재된 참조 항-ALK7 항체에 의해 ALK7로의 특이적 결합을 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 저해할 수 있다.

본원에 개시된 항원 결합 단백질, 예컨대 항-ALK7-결합 항체 및 ALK7-결합 단편, 변이체, 또는 이들의 유도체는 항원, 예를 들어, 이들이 인식하거나 특이적으로 결합하는 표적 폴리펩티드의 에피토프(들) 또는 부분(들)의 관점에서 기재되거나 특정될 수 있다. 예를 들어, 본원에 개시된 ALK7-결합 단백질의 항원 결합 도메인과 특이적으로 상호작용하는 ALK7의 부분은 "에피토프"이다. 에피토프는 단백질의 삼차 접힘에 의해 병치된 인접한 아미노산 및 비인접한 아미노산 둘 모두로부터 형성될 수 있다. 인접한 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로, 변성 용매에 노출 시에 유지되고, 반면 삼차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로, 변성 용매로 처리 시에 상실된다. 에피토프 결정인자는 분자, 예컨대 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 설포닐 기의 화학적으로 활성 표면 그룹화를 포함할 수 있고, 특정한 3차원 구조적 특징 및/또는 특정 전하 특징을 가질 수 있다. 에피토프는 전형적으로, 독특한 공간적 입체형태 내에 적어도 3개, 4개, 5개, 6개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 25개, 30개, 35개의 아미노산을 포함한다. 에피토프는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 정해진 대로 결정될 수 있다.

용어 "저해한다," "차단한다," "감소시킨다," "축소시킨다," "억제한다," "길항한다" 및 "중화시킨다"는 상호교환적으로 사용되고, 활성의 완전 차단을 포함하여, 활성 (예를 들어, ALK7 리간드 결합 및/또는 ALK7 신호전달)에서 임의의 통계학적으로 유의한 감소를 지칭한다. 예를 들어, "저해," "억제," 또는 "길항"은 대조군과 비교하여 활성에서 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%의 감소를 지칭할 수 있다.

일부 구현예에서, 용어 "감소시킨다," "저해한다" 또는 "길항한다"는 ALK7-결합 단백질과 접촉되지 않을 때 세포에서 Smad 인산화 정도에 비하여, ALK7 및 ActrIIA/B를 발현하는 세포를 ALK7 리간드, 예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal과 접촉시킴으로써 유도된 하나 이상의 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 통계학적으로 유의하게 (예를 들어, 0.05 이하의 p 값으로) 감소시키는, ALK7-결합 단백질, 예를 들어, 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편의 능력을 지칭할 수 있다. ALK7을 발현하는 세포는 자연발생 세포 또는 세포주일 수 있거나, ALK7을 인코딩하는 핵산을 숙주 세포 내로 도입함으로써 재조합적으로 생산될 수 있다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질, 예를 들어, ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편은, 예를 들어, 웨스턴 블롯팅, 그 이후에 항-포스포티로신 항체로 탐침에 의해, 또는 ELISA (예를 들어, P-Smad ELISA) 또는 본원에 기재된 또는 만약 그렇지 않으면 당업계에 공지된 기술을 사용한 Smad 의존성 리포터 유전자 검정에 의해 결정될 때, 하나 이상의 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 ALK7 리간드 매개된 인산화를 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 또는 약 100% 길항한다 (감소시킨다). 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 길항한다 (감소시킨다). 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제이고, 지방분해 검정에서 결정될 때, 백색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 길항한다. 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 백색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 또는 약 100% 감소시키거나 축소시킨다. 일부 구현예에서, 지방분해 검정은 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제이고, 지방분해 검정에서 결정될 때, 백색 및/또는 갈색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 길항한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 백색 및/또는 갈색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 또는 약 100% 감소시키거나 축소시킨다. 일부 구현예에서, 지방분해 검정은 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다.

용어 "증가시킨다," "촉진한다" 및 "효능작용한다"는 상호교환적으로 사용되고, 활성 (예를 들어, ALK7 리간드 결합 및/또는 ALK7 신호전달)에서의 임의의 통계학적으로 유의한 증가를 지칭한다. 예를 들어, "증가시킨다" 또는 "촉진한다"는 대조군과 비교하여 활성의 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 증가를 지칭할 수 있다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 세포에서 지방분해를 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 세포에서 지방분해를 적어도 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 지방 세포에서 지방분해를 적어도 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킨다. 일부 구현예에서, 지방분해 검정은 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 백색 지방 세포 또는 갈색 지방 세포에서 지방분해를 증가시킨다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 백색 지방 세포에서 지방분해를 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 백색 지방 세포에서 지방분해를 적어도 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킨다. 일부 구현예에서, 지방분해 검정은 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 갈색 지방 세포에서 지방분해를 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 갈색 지방 세포에서 지방분해를 적어도 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킨다. 일부 구현예에서, 지방분해 검정은 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 백색 및 갈색 지방 세포에서 지방분해를 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 백색 및 갈색 지방 세포에서 지방분해를 적어도 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킨다. 일부 구현예에서, 지방분해 검정은 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (예를 들어, 본원 실시예에 기재된 바와 같이) 액티빈 B (50 ng/ml)의 존재하에 수행된 지방분해 검정에서 표준 기술과 조건을 사용하여 결정될 때, 백색 지방 세포에서 지방분해를 적어도 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킨다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 저해 검정에서 표준 기술과 조건을 사용하여 결정될 때, 백색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 또는 약 100% 감소시키거나 축소시킨다. 이러한 특정 구현예에서, 상기 지방분해 검정은 (예를 들어, 본원 실시예에 기재된 바와 같이) 액티빈 B (50 ng/ml)의 존재하에 수행된다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (예를 들어, 본원 실시예에 기재된 바와 같이), 액티빈 B (50 ng/ml)의 존재하에 수행된 지방분해 검정에서 표준 기술과 조건을 사용하여 결정될 때, 백색 및/또는 갈색 지방 세포에서 지방분해를 적어도 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킨다. 추가의 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 저해 검정에서 표준 기술과 조건을 사용하여 결정될 때, 백색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 또는 약 100% 감소시키거나 축소시킨다. 이러한 특정 구현예에서, 상기 지방분해 검정은 (예를 들어, 본원 실시예에 기재된 바와 같이) 액티빈 B (50 ng/ml)의 존재하에 수행된다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 글리세롤 생산을 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 지방 세포에서 글리세롤 생산을 적어도 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킨다. 일부 구현예에서, 지방분해 검정은 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 백색 지방 세포 또는 갈색 지방 세포에서 글리세롤 생산을 증가시킨다.

용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 전체 (전장) 항체 및 이의 항원 결합 단편 또는 단일 사슬을 포함한다. 전형적인 항체는 이황화 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)를 포함한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로서 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CHI, CH2 및 CH3으로 구성된다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로서 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FW)으로 명명된 더욱 보존되는 영역이 산재된, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 명명된 초가변성의 영역으로 더욱 세분될 수 있다. 각 VH 및 VL은 아미노-말단으로부터 카복시-말단으로 다음의 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FW로 구성된다: FW1, CDR1, FW2, CDR2, FW3, CDR3, FW4. 중쇄와 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 고전적 보체계의 첫 번째 성분 (Clq)을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 예시적인 항체는 전형적인 항체, scFvs, 및, 예를 들어, scFv가 전형적인 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 N 또는 C-말단에 공유 연결되거나 (예를 들어, 펩티드 결합을 통해 또는 화학적 링커를 통해), 또는 전형적인 항체의 중쇄 및/또는 경쇄에서 개재되는 이의 조합을 포함한다.

용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 무손상 다중클론 항체, 무손상 단일클론 항체, 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편), 단일 사슬 Fv (scFv) 유도체 및 돌연변이체, 다중특이적 항체, 예컨대 이중특이적 항체, 키메라 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 항체의 항원 결정 부분을 포함하는 융합 단백질, 그리고 항체가 원하는 결합 활성을 나타내기만 하면, 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 면역글로불린 분자를 포괄한다. 항체는 각각, 알파, 델타, 엡실론, 감마, 및 뮤로서 지칭되는 그들의 중쇄 불변 도메인의 정체에 기초하여, 면역글로불린의 5가지 주요 부류 중 하나일 수 있다: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM, 또는 이들의 하위부류 (아이소타입) (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2). 상이한 부류의 면역글로불린은 상이하고 널리 공지된 아단위 구조와 3차원 형상을 갖는다. 항체는 나신이거나 또는 다른 분자, 예를 들어, 독소, 방사성동위원소 등에 접합될 수 있다. 용어 "IgG"는 인식된 면역글로불린 감마 유전자에 의해 실질적으로 인코딩되는 항체의 부류에 속하는 폴리펩티드를 지칭한다. 인간에서, 이러한 부류는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다. 마우스에서, 이러한 부류는 IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3을 포함한다.

용어 "ALK7 항체," "ALK7에 결합하는 항체" 또는 "항-ALK7 항체"는 항체가 각각, ALK7을 표적으로 하는데 있어서 치료제 및/또는 진단적 시약으로서 유용할 만큼 충분한 친화성으로 ALK7에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다.

ALK7 단백질과 관련하여 사용될 때 "특이적으로 결합한다"는 결합 단백질이 관련 없는 대조군 단백질에 결합하는 친화성보다 더욱 큰 친화성으로, ALK7 (예를 들어, 인간 ALK7, 바람직하게는 ALK7의 세포외 도메인)에 결합하는 결합 단백질, 예컨대 항체의 능력인 것으로 일반적으로 의미된다. 일부 구현예에서, 대조군 단백질은 달걀 백색 라이소자임이다. 바람직하게는, 결합 단백질은 대조군 단백질에 대한 친화성보다 적어도 100, 500, 또는 1000배 큰 친화성으로 ALK7에 결합한다. 바람직하게는, 결합 단백질은 당업계에 공지된 결합 검정을 사용하여 측정될 때, 인간 ALK7에 대한 ≤ 1 X 10^-7 M 또는 ≤ 1 X 10^-8의 결합 친화성을 갖는다. 일부 구현예에서, 결합 친화성은 방사면역검정 (RIA) 또는 BIACORE® (예를 들어, 피분석물로서 ALK7 및 리간드로서 ALK7-결합 단백질을 사용, 또는 그 반대로)를 사용하여 측정된다.

일부 구현예에서, 관련 없는, 비-ALK7 단백질에 대한 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)의 결합 정도는, 예를 들어, 방사면역검정 (RIA), BIACORE® (피분석물로서 재조합 ALK7 및 리간드로서 ALK7-결합 단백질을 사용, 또는 그 반대로), 역학적 배제 검정 (KINEXA®), 또는 당업계에 공지된 다른 결합 검정에 의해 측정될 때, ALK7에 대한 ALK7-결합 단백질의 결합의 약 10%보다 적다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤10 pM, ≤1 pM, 또는 ≤0.1 pM의 해리 상수 (K_D)를 갖는 전장 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다.

용어 "항원-결합 항체 단편" (예를 들어, "ALK7-결합 항체 단편")은 무손상 항체의 항원 결합 가변 영역 (예를 들어, CDR3)의 전부 또는 일부를 함유하는 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 알려져 있다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, 선형 항체, 단일 사슬 항체, 및 하나 이상의 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 ALK7-결합 항체 단편을 제공하는데, 상기 항체 단편은 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 디아바디, 또는 단일 사슬 항체 분자이다.

Fc 영역은 첫 번째 불변 영역 면역글로불린 도메인을 배제하고, 항체의 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서, Fc는 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, IgE 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 이들 도메인의 N-말단에 유연한 힌지를 지칭한다. IgA 및 IgM의 경우에, Fc는 J 사슬을 포함할 수 있다. IgG의 경우에, Fc는 면역글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3, 및 Cγl 및 Cγ2 사이에 힌지를 포함한다. 비록 Fc 영역의 경계가 변할 수 있긴 하지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 카복실-말단에 잔기 C226 또는 P230을 포함하는 것으로 규정되는데, 여기서 넘버링은 Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NIH, Bethesda, Md. (1991))에서 제시된 바와 같이 EU 색인에 따른다. Fc는 단리 상태에서 이러한 영역, 또는 전체 항체, 항체 단편 또는 Fc 융합 단백질의 배경에서 이러한 영역을 지칭할 수 있다. 다형성은 EU 색인에 의해 넘버링될 때 위치 270, 272, 312, 315, 356 및 358을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다수의 상이한 Fc 위치에서 관찰되었고, 따라서 현재의 서열 및 선행 기술에서의 서열 사이에 약간의 차이가 존재할 수 있다.

"단일클론 항체"는 단일 항원 결정인자 또는 에피토프의 고도로 특이적 인식과 결합에 관련된 균질한 항체 개체군을 지칭한다. 이것은 상이한 항원 결정인자에 대해 지향된 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다중클론 항체와 대조적이다. 용어 "단일클론 항체"는 무손상과 전장 단일클론 항체 둘 모두뿐만 아니라 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv), 단일 사슬 (scFv) 돌연변이체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 면역글로불린 분자를 포괄한다. 단일클론 항체는 하이브리도마, 파지 선별, 재조합 발현, 및 유전자도입 동물을 포함하지만 이에 제한되지 않는 수많은 방식으로 만들어질 수 있다.

용어 "키메라 항체"는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열이 2개 이상 종으로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 전형적으로, 경쇄와 중쇄 둘 모두의 가변 영역은 원하는 항원-결합 특이성, 친화성 및/또는 수용력을 갖는 포유동물의 한 가지 종 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 등)으로부터 유래된 항체의 가변 영역에 상응하고, 반면 불변 영역은 상기 종에서 면역 반응을 이끌어내는 것을 방지하는 또 다른 종 (일반적으로 인간)으로부터 유래된 항체에서 서열에 상동하다.

용어 "인간 항체"는 더욱 적은, 바람직하게는 최소한의 비인간 (예를 들어, 뮤린) 서열을 함유하도록 가공된, 비인간 (예를 들어, 뮤린) 면역글로불린으로부터 유래된 항체를 지칭한다. 전형적으로, 인간화 항체는 CDR로부터 잔기가 원하는 항원-결합 특이성, 친화성 및/또는 수용력을 갖는 비-인간 종 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 또는 햄스터)의 CDR로부터 잔기에 의해 대체되는 인간 면역글로불린이다 (Jones, Nature 321:522-525 (1986); Riechmann, Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen, Science 239:1534-1536 (1988)). 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역 (FW) 잔기는 원하는 항원-결합 특이성, 친화성 및/또는 수용력을 갖는 비-인간 종으로부터 항체에서 상응하는 잔기로 대체된다. 인간 항체는 항체 특이성, 친화성 및/또는 수용력을 정밀화하고 최적화하기 위해, Fv 프레임워크 영역에서 및/또는 대체된 비-인간 잔기 내에서 추가 잔기의 치환에 의해 추가로 변형될 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비-인간 면역글로불린에 상응하는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역을 함유하는 적어도 하나, 그리고 전형적으로 2개 또는 3개 가변 도메인 중에서 실질적으로 모두를 포함할 것이고, 반면 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 것들이다. 인간 항체는 또한, 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인 (Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인 (Fc) 중에서 적어도 일부를 포함할 수 있다. 인간화 항체를 생성하는데 사용된 방법의 예는 미국 특허 번호 제5,225,539호 및 제5,639,641호에서 기재되어 있다.

용어 "인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체 또는 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 만들어진 인간에 의해 생산된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 지칭한다. 용어 "인간 항체"는 무손상 (전장) 항체, 이의 단편 및/또는 적어도 하나의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체, 예컨대 뮤린 경쇄와 인간 중쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다.

"길항제," "차단" 또는 "중화" 결합 단백질은 이것이 결합하는 항원, 예컨대 ALK7의 활성을 저해하거나 감소시키는 것이다. 일부 구현예에서, 길항제 ALK7-결합 단백질은 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 다량체화를 감소시키거나 저해한다. 특정 구현예에서, 길항제 ALK7-결합 단백질은 ALK7의 활성을 실질적으로 또는 완전하게 저해한다. 일부 구현예에서, ALK7 활성은 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 100% 감소된다. 특정 구현예에서, 길항제 ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다. 추가 구현예에서, 길항제 항-ALK7 항체는 ALK7의 활성을 적어도 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 심지어 100% 저해하거나 감소시킨다.

"결합 친화성"은 일반적으로, 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위 및 이의 결합 상대 (예를 들어, 항원) 사이에 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, "결합 친화성"은 결합 쌍 (예를 들어, 항체 및 항원)의 구성원 사이에 1:1 상호작용을 반영하는 내재성 결합 친화성을 지칭한다. 상대 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로, 해리 상수 (K_D)로 표현될 수 있다. 친화성은 본원에 기재된 것들을 포함하여 당업계에 공지된 통상적인 방법에 의해 측정될 수 있고, 본 발명의 목적으로 사용될 수 있다.

"효능"은 소정의 강도의 효과를 산출하는데 필요한 화합물의 양의 관점에서 표현된 화합물의 약리학적 활성의 척도이다. 이것은 규정된 생물학적 효과를 달성하는데 필요한 화합물의 양을 지칭한다; 필요한 용량이 더욱 적을수록, 약물은 더욱 강력하다. 효능은, 달리 명시되지 않는 한, nM로 IC₅₀ 값으로서 일반적으로 표현된다. IC₅₀은 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)의 중앙 저해 농도이다. 기능적 검정에서, IC₅₀은 생물학적 반응을 이의 최대의 50%로 감소시키는 농도이다. 리간드-수용체 결합 연구에서, IC₅₀은 리간드-수용체 결합을 최대 특이적 결합 수준의 50%로 감소시키는 농도이다. IC₅₀은 당업계에 공지된 수많은 수단에 의해 계산될 수 있다. 참조 항-ALK7 항체 또는 다른 ALK7-결합 단백질과 비교하여 본원에 제공된 항체 또는 다른 결합 단백질에 대한 효능에서 배수적 향상은 적어도 2-배, 4-배, 6-배, 8-배, 10-배, 20-배, 30-배, 40-배, 50-배, 60-배, 70-배, 80-배, 90-배, 100-배, 110-배, 120-배, 130-배, 140-배, 150-배, 160-배, 170-배, 또는 적어도 180-배일 수 있다.

"항체 의존성 세포-매개된 세포독성" 또는 "ADCC"는 일정한 세포독성 세포 (예를 들어, 자연 킬러 (NK) 세포, 호중구 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체 (FcRs) 위에 결합된 분비된 Ig가 이들 세포독성 이펙터 세포가 항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합하고, 이어서 표적 세포를 세포독소로 사멸시킬 수 있게 하는 세포독성의 형태를 지칭한다. 표적 세포의 표면에 지향된 특정한 높은 친화성 IgG 항체는 세포독성 세포를 "무장시키고", 이런 사멸을 위해 절대적으로 필요하다. 표적 세포의 용해는 세포외이고, 직접적인 세포-대-세포 접촉을 필요로 하고, 보체를 수반하지 않는다. 항체 이외에, ALK7-보유 표적 세포에 특이적으로 결합하는 능력을 갖는, Fc 영역을 포함하는 다른 단백질, 특히 Fc 융합 단백질은 세포-매개 세포독성을 달성할 수 있을 것으로 예기된다. 단순함을 위해, Fc 융합 단백질의 활성으로부터 발생하는 세포-매개 세포독성은 본원에서 ADCC 활성으로서 또한 지칭된다.

"단리된" ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7 항체뿐만 아니라 ALK7-결합 단편, 이들의 변이체 및 유도체), 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포, 또는 조성물은 자연에서 발견되지 않는 형태인 단백질 (예를 들어, 항체), 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포, 또는 조성물이다. 단리된 단백질, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물은 그들이 더 이상 자연에서 발견되는 형태에 있지 않는 정도까지 정제된 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, 단리된 단백질, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물은 실질적으로 순수하다. 단리된 단백질 및 단리된 핵산은 그들이 자연적으로 연관되는 물질, 예컨대 그들의 자연 환경에서 또는 이러한 제제가 시험관내 또는 생체내에서 실시된 재조합 DNA 기술에 의할 때 그들이 제조되는 환경 (예를 들어, 세포 배양액)에서 그들과 함께 발견되는 다른 폴리펩티드 또는 핵산이 없거나, 또는 실질적으로 없을 것이다. 단백질 및 핵산은 희석제 또는 애쥬번트로 제형화되고 여전히 실질적인 목적으로 단리될 수 있다 - 예를 들어, 단백질은 면역검정에서 사용을 위해 미량역가 플레이트를 코팅하는데 사용되면 일반적으로 젤라틴 또는 다른 담체와 혼합될 것이거나, 진단 또는 요법에서 사용될 때 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 혼합될 것이다.

용어 "대상체", "개체", "동물", "환자" 및 "포유동물"은 진단, 예후 또는 요법이 요망되는 임의의 대상체, 특히 포유동물 대상체를 지칭한다. 포유동물 대상체는 특정 치료의 수용자인 인간, 비인간 영장류, 가축, 경작용 동물, 설치류 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

용어 "약제학적 조성물"은 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 허용하고, 이러한 조성물이 투여될 대상체에 받아들이기 어려울 정도로 독성인 농도에서 추가 성분을 함유하지 않는 형태의 제조물을 지칭한다. 이러한 조성물은 무균일 수 있다.

본원에 개시된 바와 같은 폴리펩티드, 예를 들어, 항체를 포함하는 항원 결합 단백질의 "유효량"은 구체적으로 언급된 목적을 실행하는데 충분한 양이다. "유효량"은 언급된 목적에 관계하여, 경험적으로 및 일과적인 방식으로 결정될 수 있다. 용어 "치료학적 유효량"은 대상체 (예를 들어, 포유동물, 예컨대 인간)에서 질환 또는 병태를 "치료"하는데 효과적인 폴리펩티드, 예를 들어, 항체를 포함하는 항원 결합 단백질, 또는 다른 약물의 양을 지칭하고, 질환 또는 병태를 앓는 대상체에게 일부 향상 또는 유익성을 제공한다. 따라서, "치료학적으로 유효한" 양은 ALK7-매개된 질환 또는 병태의 적어도 하나의 임상적 증상에서 일부 경감, 완화 및/또는 감소를 제공하는 양이다. 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 질환 또는 병태와 연관된 임상적 증상은 널리 알려져 있다. 게다가, 치료 효과는 일부 유익성이 대상체에게 제공되기만 하면, 완전하거나 또는 치유적일 필요는 없다. 일부 구현예에서, 용어 "치료학적으로 효과적인"은 이를 필요로 하는 대상체에서 ALK7 활성을 감소시킬 수 있는 치료제의 양을 지칭한다. 투여된 실제량 및 투여의 속도와 시간-경과는 치료되는 질환의 성격 및 중증도에 의존할 것이다. 치료의 처방, 예를 들어, 용량의 결정 등은 일반의 및 기타 의사의 책임의 범위 안에 있다. 항체 및 이의 항원 결합 단편의 적절한 용량은 일반적으로 알려져 있다 (참조: Ledermann et al., Int. J. Cancer 47:659-664 (1991); Bagshawe et al., Ant. Immun. and Radiopharm. 4:915-922 (1991)).

ALK7-매개된 질환 또는 병태를 앓는 대상체에서 "충분한 양" 또는 특정 결과를 달성"하는데 충분한 양"은 임의로 치료 효과 (즉, 치료학적 유효량의 투여에 의한)인 원하는 효과를 산출하는데 효과적인 치료제 (예를 들어, 본원에 개시된 바와 같은, 항체를 포함하는 항원 결합 단백질)의 양을 지칭한다. 일부 구현예에서, 이러한 특정 결과는 이를 필요로 하는 대상체에서 ALK7 활성이 감소된다.

용어 "표지"는 "표지화된" 모이어티를 생성하기 위해 모이어티, 예를 들어, 항-ALK7 항체에 직접적으로 또는 간접적으로 접합되는 검출 가능한 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 표지는 그 자체로 검출 가능할 수 있거나 (예를 들어, 방사성 동위원소 표지 또는 형광 표지), 또는 효소적 표지의 경우에, 검출 가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매작용할 수 있다.

용어, 예컨대 "치료하는" 또는 "치료", "치료하기 위한" 또는 "개선하는" 및 "개선하기 위한"은 (a) 진단된 병리학적 병태 또는 장애를 치유하고, 이의 속도를 늦추고, 이의 증상을 줄이고/줄이거나 이의 진행을 중단시키는 치료적 조치, 및 (b) 표적화된 질환 또는 병태를 예방하고/하거나 이의 발병을 늦추는 예방적 또는 방지적 조치 둘 모두를 지칭한다. 따라서, 치료를 필요로 하는 대상체는 이미 질환 또는 병태를 앓고 있는 대상체; 질환 또는 병태가 발병할 위험에 처해있는 대상체; 및 질환 또는 병태가 예방되어야 하는 대상체를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는, 대상체가, 예를 들어, 질환 또는 병태와 연관된 증상의 전반적인, 부분적인 또는 일시적인 개선 또는 제거를 보여주면, 본원에 제공된 방법에 따라 성공적으로 "치료된다". 일부 구현예에서, 본 발명은 비만 (예를 들어, 복부 비만); 인슐린 저항성; 대사 증후군 및 다른 대사 질환 또는 병태; 지질 장애, 예컨대 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 고지혈증, 고중성지질혈증 또는 이상지질혈증; 지질단백질 이상; 감소된 트리글리세리드; 염증 (예를 들어, 간 염증 및/또는 지방 조직의 염증), 지방간 질환; 비알코올성 지방간 질환; 고혈당증; 내당능 장애 (IGT); 고인슐린혈증; 높은 콜레스테롤 (예를 들어, 높은 LDL 수준 및 고콜레스테롤혈증); 심혈관 질환, 예컨대 관상동맥 심장 질환을 포함하는 심장병, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 죽상동맥경화증; 동맥경화증 및 고혈압; X 증후군; 혈관 재협착증; 신경병증; 망막병증; 신경퇴행성 질환; 내피 기능장애, 호흡기 기능장애, 신장 질환 (예를 들어, 신병증); 췌장염; 다낭성 난소 증후군; 상승된 요산 수준; 혈색소증 (철분 과부하); 흑색극세포증 (피부 상에서 어두운 패치); 및 암 (예를 들어, 골수종 (다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소 (예를 들어, 상피 난소), 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁, 또는 결장 암); 및 상기 질환 또는 병태 중 하나 이상, 또는 과체중 (예를 들어, 25 kg/m²의 BMI), 또는 너무 많은 체지방과 연관된 다른 장애/병태로부터 선택되는 질환, 장애 또는 병태를 치료하기 위한 방법을 제공한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "와 조합으로" 또는 "복합 요법"은 추가 요법 (예를 들어, 두 번째, 세 번째, 네 번째 등)이 체내에서 여전히 효과적이도록 (예를 들어, 복수 화합물이 대상체에서 이들 화합물의 상승 효과를 포함할 수 있는 동시에 효과적이도록) 하는 임의의 투여 형태를 지칭한다. 유용성은 혈액, 혈청, 또는 혈장 내에 제제의 측정 가능한 농도와 상관하지 않을 수도 있다. 예를 들어, 상이한 치료적 화합물은 동일한 제형에서 또는 별개의 제형에서, 부수적으로 또는 순차적으로, 그리고 상이한 일정에서 투여될 수 있다. 따라서, 이러한 치료를 제공받는 대상체는 상이한 요법의 병용 효과로부터 이익을 얻을 수 있다. 본원에 제공된 하나 이상의 ALK7-결합 단백질은 하나 이상의 다른 추가 제제 및/또는 지지 요법과 동시에, 이들에 앞서, 또는 이들 다음에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각 치료제는 이러한 특정 제제에 대해 결정된 용량에서 및/또는 시간 일정에서 투여될 것이다. 용법에서 사용되는 특정 조합은 본 발명의 길항제 및 요법 및/또는 원하는 결과의 양립성을 고려할 것이다.

본 발명의 방법과 기술은 일반적으로, 공지된 전통적인 방법에 따라서, 그리고 달리 나타내지 않는 한, 본 발명 전반에 걸쳐 인용되고 논의된 다양한 일반적인 참조 문헌 및 더욱 특정한 참조 문헌에서 설명된 바와 같이 수행된다. 예를 들어, 문헌 (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001) and Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992), and Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990))을 참조하는데 이들 모두는 본원에 참조로 포함된다.

용어 "암", "종양", "암성" 및 "악성"은 전형적으로, 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는, 포유동물에서 생리학적 병태를 지칭하거나 또는 설명한다. 암의 예는 선암종, 림프종, 모세포종, 흑색종, 육종 및 백혈병을 포함하여 암종을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 암의 더욱 특정한 예는 편평상피 세포 암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 위장관암, 호지킨 및 비호지킨 림프종, 췌장암, 교모세포종, 신경교종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 예컨대 간 암종 및 간암, 방광암, 유방암 (호르몬 매개된 유방암 포함, 예를 들어, 문헌 (Innes et al., Br. J. Cancer 94:1057-1065 (2006) 참조), 결장암, 결장직장암, 자궁내막 암종, 골수종 (예컨대 다발성 골수종), 타액선 암종, 신장암, 예컨대 신장 세포 암종 및 윌름 종양, 기저 세포 암종, 흑색종, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 고환암, 식도암, 다양한 유형의 두경부암 및 점액 기원의 암, 예컨대 점액 난소암, 담관암종 (간) 및 신장 유두 암종을 포함한다. 특정 구현예에서, 암은 유방, 자궁내막 또는 자궁 암이다. 다른 구현예에서, 암은 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 및 골수외 골수종), 또는 자궁내막, 위, 간, 결장, 신장 또는 췌장 암이다.

용어 "폴리뉴클레오티드" 및 "핵산"은 상호교환적으로 사용되고, 단수 핵산뿐만 아니라 복수 핵산을 포괄하는 것으로 의도되고, 단리된 핵산 분자 또는 작제물, 예를 들어, 전령 RNA (mRNA), 상보성 DNA (cDNA) 또는 플라스미드 DNA (pDNA)를 지칭한다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 전통적인 포스포디에스테르 결합 또는 비-전통적인 결합 (예를 들어, 펩티드 핵산 (PNA)에서 발견되는 것과 같은 아미드 결합)을 포함한다. 용어 "핵산"은 폴리뉴클레오티드 내에 존재하는 한 가지 이상의 핵산 분절, 예를 들어, DNA, cDNA 또는 RNA 단편을 지칭한다. 핵산 또는 폴리뉴클레오티드에 적용될 때, 용어 "단리된"은 고유 환경으로부터 제거된 핵산 분자, DNA 또는 RNA를 지칭하는데, 예를 들어, 벡터에 함유된 항원 결합 단백질을 인코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 목적을 위해 단리된 것으로 고려된다. 단리된 폴리뉴클레오티드의 추가 예는 이종성 숙주 세포 내에 유지된 또는 용액에서 다른 폴리뉴클레오티드로부터 정제된 (부분적으로 또는 실질적으로) 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 단리된 RNA 분자는 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 생체내 또는 시험관내 RNA 전사체를 포함한다. 본 발명에 따른 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은 합성적으로 생산된 이러한 분자를 추가로 포함한다. 또한, 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은 조절 요소, 예컨대 프로모터, 인핸서, 리보솜 결합 부위, 또는 전사 종결 신호를 포함할 수 있다.

용어 "벡터"는 숙주 세포에서 관심있는 하나 이상의 유전자(들) 또는 서열(들)을 전달하고, 일부 구현예에서, 발현할 수 있는 작제물을 의미한다. 벡터의 예는 바이러스 벡터, 나신 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 플라스미드, 코스미드 또는 파지 벡터, 양이온성 축합제와 연관된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포솜 내에 캡슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 및 일정한 진핵 세포, 예컨대 생산자 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

용어 "숙주 세포"는 재조합 핵산을 품거나 또는 품을 수 있는 세포 또는 세포 개체군을 지칭한다. 숙주 세포는 원핵 (예를 들어, 대장균 (E. coli)), 또는 진핵일 수 있다. 숙주 세포는 효모, 예컨대 사카로미세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae), 피치아 파스토리스 (Pichia pastoris), 또는 쉬조사카로미세스 폼베 (Schizosaccharomyces pombe)를 포함하는 진균 세포일 수 있다. 숙주 세포는 또한, 다양한 동물 세포, 예컨대 곤충 세포 (예를 들어, Sf-9) 또는 포유동물 세포 (예를 들어, HEK293F, CHO, COS-7, NIH-3T3, NS0, PER.C6® 및 하이브리도마) 중 어느 하나일 수 있다. 추가 구현예에서, 숙주 세포는 CHO-K, CHO-0 CHO-Lec10, CHO-Lec13, CHO-Lec1, CHO Pro^-5 및 CHO dhfr^-로부터 선택되는 CHO 세포이다. 특정 구현예에서, 숙주 세포는 하이브리도마이다.

용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환적으로 사용되어 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭한다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 비-아미노산이 끼어들 수 있다. 이들 용어는 또한, 자연적으로 또는 개입에 의해; 예를 들어, 이황화 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예를 들어, 표지화 성분과의 접합에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포괄한다. 또한, 상기 정의 내에는, 예를 들어, 아미노산의 하나 이상의 유사체 (예를 들어, 비자연적인 아미노산 등 포함)뿐만 아니라 당업계에 공지된 다른 변형을 포함하는 폴리펩티드가 포함된다. 일부 구현예에서, 제공된 ALK7-결합 단백질이 항체에 근거되기 때문에, 이들 ALK7-결합 단백질은 단일 사슬 또는 연관된 사슬로서 발생할 수 있는 것으로 이해된다.

"재조합" 폴리펩티드, 단백질 또는 항체는 재조합 DNA 기술을 통해 생산된 폴리펩티드, 단백질 또는 항체를 지칭한다. 숙주 세포에서 발현된 재조합적으로 생산된 폴리펩티드, 단백질 및 항체는 임의의 적절한 기술에 의해 분리되거나, 분획되거나, 또는 부분적으로 또는 실질적으로 정제된 고유 또는 재조합 폴리펩티드가 그러한 것처럼, 본 발명의 목적을 위해 단리된 것으로 고려된다.

폴리펩티드의 단편, 변이체 또는 유도체, 그리고 이들의 임의의 조합 또한 본 발명에 포함된다. 폴리펩티드 및 단백질을 지칭할 때 용어 "단편"은 참조 폴리펩티드 또는 단백질의 성질 중에서 적어도 일부를 유지하는 임의의 폴리펩티드 또는 단백질을 포함한다. 폴리펩티드의 단편은 단백질분해 단편뿐만 아니라 결실 단편을 포함한다.

용어 "변이체"는 적어도 하나의 아미노산 변형에 의해서 모 항체 또는 폴리펩티드 서열과 상이한 항체 또는 폴리펩티드 서열을 지칭한다. 항체 또는 폴리펩티드의 변이체는 단편을 포함하고, 또한, 아미노산 치환, 결실 또는 삽입으로 인해 변경된 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 폴리펩티드를 포함한다. 변이체는 자연발생 또는 비자연발생일 수 있다. 비자연발생 변이체는 임의의 적합한 돌연변이유발 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 변이체 폴리펩티드는 보존성 또는 비보존성 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함할 수 있다.

항체 또는 폴리펩티드에 적용될 때 용어 "유도체"는 고유 항체 또는 폴리펩티드에서 발견되지 않는 추가 특성을 나타내기 위해 변경된 항체 또는 폴리펩티드를 지칭한다. "유도체" 항체의 예는 두 번째 폴리펩티드 또는 또 다른 분자 (예를 들어, 중합체, 예컨대 PEG, 발색단 또는 형광단) 또는 원자 (예를 들어, 방사성 동위원소)와의 융합체 또는 접합체이다.

용어 "아미노산 치환"은 부모 서열에서 존재하는 아미노산 잔기를 다른 아미노산 잔기로 대체하는 것을 지칭한다. 아미노산은 부모 서열에서, 예를 들어, 화학적 펩티드 합성을 통해 또는 공지된 재조합 방법을 통해 치환될 수 있다. 따라서, "위치 X에서 치환" 또는 "위치 X에서 치환"에 대한 언급은 위치 X에서 존재하는 아미노산 잔기의 대안 아미노산 잔기로의 치환을 지칭한다. 일부 구현예에서, 치환 패턴은 개요 AXY에 따라서 기술될 수 있는데, 여기서 A는 위치 X에서 자연적으로 존재하는 아미노산 잔기에 상응하는 1 문자 코드이고, Y는 치환 아미노산 잔기이다. 다른 구현예에서, 치환 패턴은 개요 XY에 따라서 기술될 수 있는데, 여기서 Y는 위치 X에서 자연적으로 존재하는 아미노산 잔기를 치환하는 아미노산 잔기에 상응하는 1 문자 코드이다.

"보존성 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 염기성 측쇄 (예를 들어, Lys, Arg, His), 산성 측쇄 (예를 들어, Asp, Glu), 하전되지 않은 극성 측쇄 (예를 들어, Gly, Asp, Gln, Ser, Thr, Tyr, Cys), 비극성 측쇄 (예를 들어, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Phe, Met, Trp), 베타-분지된 측쇄 (예를 들어, Thr, Val, Ile) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, Tyr, Phe, Trp, His)를 포함하여, 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 이전에 규정되었다. 따라서, 폴리펩티드에서 아미노산 잔기가 동일한 측쇄 패밀리로부터 또 다른 아미노산 잔기로 대체되면, 치환은 보존성인 것으로 고려된다. 대안적으로, 아미노산 잔기의 스트링은 측쇄 패밀리 구성원의 순서 및/또는 조성에서 상이한 구조적으로 유사한 스트링으로 보존성으로 대체될 수 있다.

비보존성 치환은 (a) 양전기성 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Arg, His 또는 Lys)가 음전기성 잔기 (예를 들어, Glu 또는 Asp)를 대체하거나, 또는 이것에 의해 대체되는 것들, (b) 친수성 잔기 (예를 들어, Ser 또는 Thr)가 소수성 잔기 (예를 들어, Ala, Leu, Ile, Phe 또는 Val)를 대체하거나, 또는 이것에 의해 대체되는 것들, (c) Cys 또는 Pro가 임의의 다른 잔기를 대체하거나, 또는 이것에 의해 대체되는 것들, 또는 (d) 벌키한 소수성 또는 방향족 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Val, His, Ile 또는 Trp)가 더 작은 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Ala 또는 Ser) 또는 측쇄가 없는 잔기 (예를 들어, Gly)를 대체하거나, 또는 이것에 의해 대체되는 것들을 포함한다.

다른 치환은 쉽게 동정될 수 있다. 예를 들어, 아미노산 알라닌의 경우에, 치환은 D-Ala, Gly, 베타-Ala, L-Cys 및 D-Cys 중 어느 하나로부터 취해질 수 있다. 리신의 경우에, 대체는 D-Lys, Arg, D-Arg, 호모-Arg, Met, D-Met, 오르니틴, 또는 D-오르니틴 중 어느 하나일 수 있다. 일반적으로, 단리된 폴리펩티드의 성질에서 변화를 유도하는 것으로 예상될 수 있는 기능적으로 중요한 영역에서의 치환은 (a) 극성 잔기 (예를 들어, Ser 또는 Thr)가 소수성 잔기 (예를 들어, Leu, Ile, Phe 또는 Ala)를 대체하는 (또는 이것에 의해 대체되는) 것들; (b) Cys 잔기가 임의의 다른 잔기를 대체하는 (또는 이것에 의해 대체되는) 것들; (c) 양전기성 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Lys, Arg 또는 His)가 음전기성 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Glu 또는 Asp)를 대체하는 (또는 이것에 의해 대체되는) 것들; 또는 (d) 벌키한 측쇄를 갖는 잔기 (예를 들어, Phe)가 이러한 측쇄를 갖지 않는 잔기 (예를 들어, Gly)를 대체하는 (또는 이것에 의해 대체되는) 것들이다. 전술한 비보존성 치환 중 하나가 단백질의 기능적 성질을 변경할 가능성 또한 단백질의 기능적으로 중요한 영역에 대하여 치환 위치에 상관된다: 일부 비보존성 치환은 따라서, 생물학적 성질에 대한 효과가 거의 또는 전혀 없을 수 있다.

용어 "아미노산 삽입"은 부모 서열에서 존재하는 2개의 아미노산 잔기 사이에 새로운 아미노산 잔기를 도입하는 것을 지칭한다. 아미노산 잔기는, 예를 들어, 화학적 펩티드 합성을 통해 또는 당업계에 공지된 재조합 방법을 통해 부모 서열에 삽입될 수 있다. 따라서, 구 "위치 X 및 Y 사이에 삽입" 또는 "Kabat 위치 X 및 Y 사이에 삽입" (여기서 X 및 Y는 아미노산 잔기 위치에 상응한다) (예를 들어, 위치 239 및 240 사이에 시스테인 아미노산 잔기 삽입)은 X 위치와 Y 위치 사이에 아미노산 잔기의 삽입, 그리고 또한, 위치 X 및 Y에서 아미노산 잔기를 인코딩하는 코돈 사이에 아미노산 잔기를 인코딩하는 코돈의 핵산 서열의 삽입을 지칭한다.

2개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열 사이에 용어 "서열 동일성 퍼센트" 또는 "동일성 퍼센트"는 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 부가 또는 결실 (즉, 갭)을 고려하여, 비교 윈도우 위에서 서열에 의해 공유된 동일한 정합된 위치의 숫자를 지칭한다. 정합된 위치는 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산이 표적 및 참조 서열 둘 모두에서 제시되는 임의의 위치이다. 표적 서열에서 제시된 갭은 계수되지 않는데, 그 이유는 갭은 뉴클레오티드 또는 아미노산이 아니기 때문이다. 마찬가지로, 참조 서열에서 제시된 갭은 계수되지 않는데, 그 이유는 표적 서열 뉴클레오티드 또는 아미노산이 계수되고, 참조 서열로부터 뉴클레오티드 또는 아미노산은 계수되지 않기 때문이다. 서열 동일성의 백분율은 동일한 아미노산 잔기 또는 핵산 염기가 양쪽 서열에서 발생하는 위치의 숫자를 결정하여 정합된 위치의 숫자를 계산하고, 정합된 위치의 숫자를 비교 윈도우 내에 위치의 총수로 나누고, 결과에 100을 곱셈하여 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산된다. 두 서열 사이에 서열의 비교 및 서열 동일성 퍼센트의 결정은 쉽게 가용한 소프트웨어 프로그램을 사용하여 달성될 수 있다. 적합한 소프트웨어 프로그램은 다양한 공급원으로부터, 그리고 단백질 및 뉴클레오티드 서열 둘 모두의 정렬에 가용하다. 서열 동일성 퍼센트를 결정하는데 적합한 한 가지 프로그램은 U.S. 정부의 미국 국립 생물공학 정보 센터 BLAST 웹사이트 (blast.ncbi.nlm.nih.gov)로부터 가용한 BLAST 프로그램의 조의 일부인 bl2seq이다. Bl2seq는 BLASTN 또는 BLASTP 알고리즘을 사용하여 두 서열 사이에 비교를 수행한다. BLASTN은 핵산 서열을 비교하는데 사용되고, 반면 BLASTP는 아미노산 서열을 비교하는데 사용된다. 다른 적합한 프로그램은, 예를 들어, 생물정보학 프로그램의 EMBOSS 세트의 일부이고, 또한, www.ebi.ac.uk/Tools/psa에서 유럽 생물정보학 연구소 (EBI)로부터 가용한 Needle, Stretcher, Water 또는 Matcher이다.

CDR 또는 CDR 세트를 보유하기 위한 구조는 일반적으로, 항체 중쇄 또는 경쇄 서열 또는 이의 실제적인 부분일 것인데, 상기 CDR 또는 CDR 세트는 재배열된 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩된 자연발생 VH 및 VL 항체 가변 도메인의 CDR 또는 CDR 세트에 상응하는 위치에서 위치된다. 면역글로불린 가변 도메인 및 이들의 CDR의 구조와 위치는 프로그램 및 공지된 가변 도메인 잔기 넘버링 시스템, 예를 들어, Chothia, Chothia+ 및 Kabat를 사용하여 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있고, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. 4th Edition. U.S. DHHS. 1987), 및 인터넷에서 가용한 도구 (예를 들어, bioinf.org.uk/abysis/sequence_input/key_ annotation/key_annotation. html; 및 immuno.bme.nwu.edu)에서)를 참고하여 정해진 대로 결정될 수 있다.

CDR은 또한, 다른 스캐폴드, 예컨대 섬유결합소, 시토크롬 B, 알부민 (예를 들어, ALBUdAb (Domantis/GSK) 및 ALB-Kunitz (Dyax)), 3 또는 6개 아미노산의 비구조화된 반복 서열 (예를 들어, PASylation® 기술 및 XTEN® 기술), 및 엘라스틴-유사 반복 도메인을 함유하는 서열 (참조: 예를 들어, 미국 특허 출원 번호 제61/442,106호, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)에 의해 보유될 수 있다.

본원에 명시된 바와 실질적으로 동일한 CDR 아미노산 서열은 인간 가변 도메인 또는 이의 실제적인 부분에서 CDR로서 보유될 수 있다. 본원에 명시된 바와 실질적으로 동일한 HCDR3 서열은 본 발명의 구현예를 대표하고, 이들 각각은 인간 중쇄 가변 도메인 또는 이의 실제적인 부분에서 HCDR3으로서 보유될 수 있다.

본 발명에서 사용된 가변 도메인은 임의의 생식계열 또는 재배열된 인간 가변 도메인으로부터 획득될 수 있거나, 공지된 인간 가변 도메인의 컨센선스 서열에 근거한 합성 가변 도메인일 수 있다. CDR 서열 (예를 들어, CDR3)은 재조합 DNA 기술을 사용하여, CDR (예를 들어, CDR3)이 부재하는 가변 도메인의 레퍼토리 내로 도입될 수 있다.

예를 들어, 문헌 (Marks et al., (Bio/Technology 10:779-783 (1992); 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)은 가변 도메인 영역의 5' 단부에서 또는 여기에 인접하게 지향된 컨센서스 프라이머가 인간 VH 유전자의 세 번째 프레임워크 영역에 대한 컨센서스 프라이머와 함께 사용되어, CDR3이 부재하는 VH 가변 도메인의 레퍼토리를 제공하는 항체 가변 도메인의 레퍼토리를 생산하는 방법을 제공한다. Marks 등은 이러한 레퍼토리가 특정 항체의 CDR3과 어떻게 조합될 수 있는 지를 추가로 설명한다. 유사한 기술을 사용하여, 본 발명의 CDR3-유래된 서열은 CDR3이 부재하는 VH 또는 VL 도메인의 레퍼토리와 뒤섞일 수 있고, 뒤섞인 완전한 VH 또는 VL 도메인은 동족 VL 또는 VH 도메인과 조합되어 항원 결합 단백질을 제공할 수 있다. 이어서, 레퍼토리는 적합한 항원 결합 단백질이 선별될 수 있도록, 적합한 숙주 시스템, 예컨대 국제 출원 공개 번호 WO92/01047의 파지 디스플레이 시스템, 또는 문헌 (Kay et al., (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, San Diego: Academic Press)을 포함하여 문헌의 후속적 많은 본문 중 임의의 하나에서 나타낼 수 있다. 레퍼토리는 104 개별 구성원으로부터 상향, 예를 들어, 10⁶ 내지 10⁸, 또는 10¹⁰ 구성원으로부터 무언가로 구성될 수 있다. 다른 적합한 숙주 시스템은 효모 디스플레이, 세균 디스플레이, T7 디스플레이 및 리보솜 디스플레이를 포함한다. 리보솜 디스플레이의 리뷰를 위해, 문헌 (Lowe et al., Curr. Pharm. Biotech. 517-527 (2004) 및 국제 출원 공개 번호 WO92/01047)을 참조하는데, 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 유사한 뒤섞음 또는 조합 기술이 또한, 문헌 (Stemmer (Nature 370:389-391 (1994), 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)에 의해 개시되는데, 이것은 β-락타마아제 유전자에 관계하여 기술을 기술하지만, 항체의 생성을 위해 접근법이 사용될 수 있다는 것을 관찰한다.

ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 이것이 ALK7에 대한 참고 분자의 결합을 상당한 수준까지 차단하는 정도까지 ALK7에 결합하면, ALK7로의 결합에 대해 참고 분자와 "경쟁"하는 것으로 일컬어진다. ALK7로의 결합에 대해 경쟁하고, 따라서, ALK7에 대한 또 다른 것의 결합을 간섭하거나, 차단하거나 또는 "교차-차단"하는 단백질의 능력은, 예를 들어, 경쟁 ELISA 검정을 포함하여 당업계에 공지된 임의의 표준 경쟁적 결합 검정에 의해, 표면 플라스몬 공명 (SPR; BIACORE®, Biosensor, Piscataway, N.J.)에 의해, 또는 문헌 (Scatchard et al. (Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660-672 (1949))에 의해 설명된 방법에 따라서 결정될 수 있다. ALK7-결합 단백질은 ALK7에 참고 분자의 결합을, 예를 들어, 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50% 경쟁적으로 저해하는 것으로 일컬어질 수 있다. 일부 구현예에 따르면, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 참고 분자의 결합을 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50% 경쟁적으로 저해한다. 다른 구현예에 따르면, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 참고 분자의 결합을 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50% 경쟁적으로 저해한다.

ALK7-결합 단백질

ALK7에 특이적으로 결합하는 단백질이 제공된다. 일부 구현예에서, 길항제 ALK7-결합 단백질이 제공된다. 일부 구현예에서, ALK7 결합 단백질은 항체이다. 추가 구현예에서, 항체는 길항제 항-ALK7 항체이다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "ALK7"은 임의의 종으로부터 액티빈 수용체-유사 키나아제-7 단백질의 패밀리, 그리고 돌연변이유발 또는 다른 변형에 의해 이러한 ALK7 단백질로부터 유래된 변이체를 지칭한다. 본원에서 ALK7에 대한 참조는 현재 확인된 형태 중 임의의 하나에 대한 참조인 것으로 이해된다. ALK7 패밀리의 구성원은 일반적으로, 시스테인-풍부한 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막경유 도메인, 및 예측된 세린/트레오닌 키나아제 활성을 갖는 세포질 도메인으로 구성된 막경유 단백질이다. 인간 ALK7의 다양한 자연발생 이소형이 있다. 표준 인간 (canonical human) ALK7 이소형 1 전구체 단백질 (NCBI 참조 서열 NP_660302.2)의 서열은 다음과 같다:

신호 펩티드는 단일 밑줄로 표시되고, 세포외 도메인은 굵은 글꼴로 표시된다.

표준 래트 ALK7 전구체 단백질 (NCBI 참조 서열 P70539.1)의 서열은 다음과 같다:

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 TGF-베타 수용체 패밀리 구성원이 아닌 대조군 단백질에 대한 ALK7-결합 단백질의 친화성보다 적어도 100, 500 또는 1000배 큰 친화성으로 ALK7에 결합한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 결합하고, <1 μΜ, <100 nM, <10 nM, <1 nM, <0.1 nM, <10 pM, <1 pM, 또는 <0.1 pM의 해리 상수 (K_D)를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ≤1 μM 및 ≥0.1 pM, ≤100 μM 및 ≥0.1 pM, 또는 ≤100 μM 및 ≥1 pM의 범위 내에서 인간 ALK7에 대한 K_D를 갖는다.

일부 구현예에서, BIACORE® 분석은 참조 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)과 ALK7 단백질로의 결합에 대해 경쟁하거나/상기 결합을 차단하는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)의 능력을 결정하는데 사용된다. BIACORE® 기기 (예를 들어, BIACORE® 3000)가 제조업체의 권고에 따라서 작동되는 추가 구현예에서, ALK7-Fc 융합 단백질은 ALK7-코팅된 표면을 생성하기 위해, 미리 부착된 항-niFc IgG에 의해 CM5 BIACORE® 칩에서 포획된다. 전형적으로, 200-800 공명 단위의 ALK7-Fc (이량체)가 칩에 연결될 것이다 (결합의 쉽게 측정 가능한 수준을 제공하지만, 사용되는 시험 시약의 농도에 의해 쉽게 가포화되는 양).

서로 경쟁하거나/차단하는 능력에 대해 사정되는 2가지 ALK7-결합 단백질 (A^* 및 B^*로 명명됨)은 시험 혼합물을 생성하기 위해 적합한 완충액에서 결합 부위의 1 대 1 몰 비율에서 혼합된다. 결합 부위 기초에서 농도를 계산할 때, ALK7-결합 단백질의 분자량은 ALK7-결합 단백질 상에서 ALK7-결합 부위의 숫자로 나눈 ALK7-결합 단백질의 전체 분자량인 것으로 가정된다. 시험 혼합물 내에 각 ALK7-결합 단백질 (즉, A^* 및 B^*)의 농도는 BIACORE® 칩에서 포획된 ALK7-Fc 분자 상에서 그러한 ALK7-결합 단백질에 대한 결합 부위를 쉽게 포화시킬 만큼 높아야 한다. 혼합물 내에 A^* 및 B^* ALK7-결합 단백질은 동일한 몰 농도에 있고 (결합 기초에서), 그리고 그러한 농도는 전형적으로, 1.00 및 1.5 마이크로몰 사이일 것이다 (결합 부위 기초에서). ALK7-결합 단백질 A^* 단독 및 ALK7-결합 단백질 B^* 단독을 함유하는 별개의 용액이 또한 제조된다. 이들 용액에서 ALK7-결합 단백질 A^* 및 ALK7-결합 단백질 B^*는 시험 혼합물에서와 동일한 완충액 내에서 그리고 동일한 농도에서 있어야 한다. 시험 혼합물은 ALK7-Fc-코팅된 BIACORE® 칩 위에 통과되고, 결합의 총량이 기록된다. 이어서, 칩은 칩-결합된 ALK7-Fc를 손상시키지 않으면서, 결합된 ALK7-결합 단백질을 제거하는 방식으로 처리된다. 전형적으로, 이것은 칩을 30 mM HCl로 60 초 동안 처리함으로써 수행된다. 이어서, ALK7-결합 단백질 A^* 단독의 용액이 ALK7-Fc-코팅된 표면 위에 통과되고, 결합의 양이 기록된다. 칩은 칩-결합된 ALK7-Fc를 손상시키지 않으면서, 결합된 항체를 제거하기 위해 다시 한 번 처리된다. 이어서, ALK7-결합 단백질 B^*단독의 용액이 ALK7-Fc-코팅된 표면 위에 통과되고, 결합의 양이 기록된다. ALK7-결합 단백질 A^*와 ALK7-결합 단백질 B^*의 혼합물의 최대 이론적 결합이 그 다음 계산되고, ALK7 표면 단독 위에 통과될 때 각 ALK7-결합 단백질의 결합의 합계가 계산된다. 혼합물의 실제 기록된 결합이 이러한 이론적 최대보다 적으면, 이들 2개의 ALK7-결합 단백질은 서로 경쟁하거나/차단한다. 따라서, 일반적으로, 차단 ALK7-결합 단백질은 상기 BIACORE® 차단 검정 동안 그리고 두 번째 ALK7-결합 단백질의 존재하에, 기록된 결합이 조합으로 2개의 ALK7-결합 단백질의 최대 이론적 결합의 80%와 0.1% 사이 (예를 들어, 80% > 내지 4%), 특정하게는 최대 이론적 결합의 75%와 0.1 % 사이 (예를 들어, 75% 내지 4%), 더욱 특정하게는 최대 이론적 결합 (상기 규정된 바와 같은)의 70%와 0.1% 사이 (예를 들어, 70% 내지 4%)이도록, 상기 검정에서 ALK7에 결합할 것이다.

상기 기재된 BIACORE® 검정은 2개의 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체와 ALK7로의 결합에 대해 서로 경쟁하거나/상기 결합을 차단하는 지를 결정하는데 사용되는 예시적인 검정이다. 드문 경우에, 특정 ALK7-결합 단백질은 항-Fc IgG를 통해 CM5 BIACORE® 칩에 연결된 ALK7-Fc에 결합할 수 없다 (이것은 ALK7 상에서 관련 결합 부위가 Fc에 ALK7 연결에 의해 차폐되거나 또는 파괴될 때 발생할 지도 모른다). 이러한 경우에, 차단은 ALK7의 태깅된 버전, 예를 들어, C-말단 His-태깅된 ALK7을 사용하여 결정될 수 있다. 이러한 특정 형식에서, 항-His 항체가 BIACORE® 칩에 연결될 것이고, 이어서, His-태깅된 ALK7이 칩의 표면 위에 통과되고 항-His 항체에 의해 포획될 것이다. 교차-차단 분석은 각 칩 재생 주기 후, 새로운 His-태깅된 ALK7이 항-His 항체로 코팅된 표면 위에 되돌려 부하될 것이라는 점을 제외하고, 상기 기재된 바와 본질적으로 동일하게 실행될 것이다. 게다가, 다양한 다른 공지된 태그 및 태그 결합 단백질 조합이 이런 차단 분석에 사용될 수 있다 (예를 들어, 항-HA 항체와 함께 HA 태그; 항-FLAG 항체와 함께 FLAG 태그; 스트렙타비딘과 함께 비오틴 태그). 다음은 ALK7-결합 단백질이 ALK7에 참조 ALK7-결합 단백질의 결합을 차단하거나 또는 차단할 수 있는 지를 결정하기 위한 ELISA 검정을 일반적으로 설명한다.

일부 구현예에서, ALK7로의 결합에 대해 참조 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체 또는 ALK7 리간드)와 경쟁하는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)의 능력을 결정하는데 ELISA가 사용된다. 이러한 검정의 일반적인 원리는 참조 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)을 ELISA 플레이트의 웰 위에 코팅하는 것이다. 과잉 양의 두 번째 잠재적으로 차단, 시험 ALK7-결합 단백질이 용해 상태에서 첨가된다 (즉, ELISA 플레이트에 결합되지 않음). 이어서, 한정된 양의 ALK7 (또는 대안적으로 ALK7-Fc)이 웰에 첨가된다. 코팅된 참조 ALK7-결합 단백질 및 시험 ALK7-결합 단백질은 용해 상태에서, 한정된 숫자의 ALK7 (또는 ALK7-Fc) 분자의 결합에 대해 경쟁한다. 플레이트는 코팅된 참조 ALK7-결합 단백질에 의해 결합되지 않은 ALK7을 제거하고, 또한, 시험 용액-상 ALK7-결합 단백질뿐만 아니라 시험 용액 상 ALK7-결합 단백질과 ALK7 사이에 형성된 임의의 복합체를 제거하기 위해 세척된다. 이어서, 결합된 ALK7의 양은 적절한 ALK7 검출 시약을 사용하여 측정된다. ALK7에 코팅된 참조 ALK7-결합 단백질의 결합을 차단할 수 있는 용해 상태에서 시험 ALK7-결합 단백질은, 코팅된 참조 ALK7-결합 단백질이 두 번째, 용액-상 시험 ALK7-결합 단백질의 부재에서 결합할 수 있는 ALK7 분자의 숫자에 비하여, 코팅된 참조 ALK7-결합 단백질이 결합할 수 있는 ALK7 분자의 숫자에서 감소를 유발할 수 있을 것이다. 검정에 대한 배경 신호는 코팅된 참조 ALK7-결합 단백질, 용액-상 시험 ALK7-결합 단백질, ALK7 완충액 단독 (즉, ALK7 없음) 및 ALK7 검출 시약을 포함하는 웰에서 획득된 신호로서 규정된다. 검정에 대한 양성 대조군 신호는 코팅된 참조 ALK7-결합 단백질, 용액-상 시험 ALK7-결합 단백질 완충액 단독 (즉, 용액-상 시험 ALK7-결합 단백질 없음), ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB) 검출 시약을 포함하는 웰에서 획득된 신호로서 규정된다. ELISA 검정은 배경 신호의 적어도 3배의 양성 대조군 신호를 갖는 방식으로 실행된다. 방법론적 인공물에 대한 대조로서, 교차-차단 검정이 상기 기재된 형식으로 실행되고, 또한, 코팅된 항체로서 시험 ALK7-결합 단백질 및 용액-상 항체로서 참조 ALK7-결합 단백질로 반전될 수 있다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 TGF-베타 수용체 패밀리 구성원이 아닌 대조군 단백질에 대한 ALK7-결합 단백질의 친화성보다 적어도 100, 500 또는 1000배 큰 친화성으로 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 TGF-베타 수용체 패밀리 구성원이 아닌 대조군 단백질에 대한 ALK7-결합 단백질의 친화성보다 적어도 100, 500, 또는 1000배 큰 친화성으로 ALK7에 결합한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 결합하고, <1 μΜ, <100 nM, <10 nM, <1 nM, <0.1 nM, <10 pM, <1 pM, 또는 <0.1 pM의 해리 상수 (K_D)를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ≤1 μM 및 ≥0.1 pM, ≤100 μM 및 ≥ 0.1 pM, 또는 ≤100 μM 및 ≥1 pM의 범위 내에서 인간 ALK7에 대한 K_D를 갖는다.

일부 구현예에서, 세포-기반 지방분해 저해 검정이 포유동물 백색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 감소시키는 (저해하는) ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항-ALK7 항체)의 능력을 결정하는데 사용된다. 일부 구현예에서, 지방분해 저해 검정은 ALK7 활성을 감소시키는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)의 능력을 결정하기 위해 성숙 백색 지방 세포 (예를 들어, 인간, 마우스, 또는 래트)를 사용하여 수행된다. 지방분해 검정을 수행하기 위한 키트, 시약 및 방법은 상업적으로 입수 가능하고 당업계에 공지되어 있다. 특정 구현예에서, 지방분해 저해 검정은 본원 실시예에서 제공된 바와 같이 수행된다. 다른 구현예에서, 상기 검정은 상업적으로 입수 가능한 지방분해 검정 키트 (예를 들어, BioAssay Systems, EnzyChrom™ 지방용해 검정 키트, 카탈로그 번호 EAPL-200; Abcam 카탈로그 번호 ab185433; Zen-Bio, 카탈로그 번호 LIP-1-NCL1; BioVision, 카탈로그 번호 K577-100; Sigma-Aldrich, 카탈로그 번호 MAK211; 및 AdipoLyze™ 지방분해 검출 검정, Lonza, 카탈로그 번호 193339)에서 제공된 바와 같은 사용 지침 및 시약에 따라서 수행된다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제이고, 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (예를 들어, 본원 실시예에 기재된 바와 같이) 액티빈 B (50 ng/ml)의 존재하에 수행된 지방분해 저해 검정에서 표준 기술과 조건을 사용하여 결정될 때, 성숙 백색 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 65%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킨다. 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (예를 들어, 본원 실시예에 기재된 바와 같이) 액티빈 B (50 ng/ml)의 존재하에 수행된 지방분해 저해 검정에서 표준 기술과 조건을 사용하여 결정될 때, 성숙 백색 지방 세포에서 지방분해를 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 또는 약 100% 증가시킨다.

ALK7 신호전달에 의존하는 약력학적 파라미터는 ALK7을 중화시키고 치료적 유익성을 제공할 수 있는 결합 단백질을 확인하기 위한, ALK7-결합 단백질의 생체내 시험에 대한 종결점으로서 측정될 수 있다. ALK7 중화 결합 제제는 이런 약력학적 파라미터에서, 비히클-처리된 동물과 비교하여 통계학적으로 유의한 변화를 유발할 수 있는 것으로서 규정된다. 이런 생체내 시험은 임의의 적합한 포유동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 또는 원숭이)에서 수행될 수 있다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하는 항체이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 전장 항-ALK7 항체이다. 추가 구현예에서, 항체는 단일클론 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 이중특이적 항체, 다중특이적 항체, 또는 이들의 ALK7-결합 항체 단편이다.

일부 구현예에서, 항-ALK7 항체는 ALK7-결합 항체 단편이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 디아바디, 또는 단일 사슬 항체 분자이다. 추가 구현예에서, ALK7-항체는 Fd, 단일 사슬 Fv(scFv), 이황화 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgG△CH2, 미니바디, F(ab')₃, 테트라바디, 트리아바디, 디아바디, 단일-도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb², (scFv)₂, scFv-Fc 또는 비스-scFv이다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL을 포함하는 항체이다. 일부 구현예에서, 항-ALK7 항체는 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 다음으로부터 선택되는 중쇄 면역글로불린 불변 영역을 포함한다: (a) 인간 IgA 불변 영역, 또는 이의 단편; (b) 인간 IgD 불변 영역, 또는 이의 단편; (c) 인간 IgE 불변 도메인, 또는 이의 단편; (d) 인간 IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편; (e) 인간 IgG2 불변 영역, 또는 이의 단편; (f) 인간 IgG3 불변 영역, 또는 이의 단편; (g) 인간 IgG4 불변 영역, 또는 이의 단편; 및 (h) 인간 IgM 불변 영역, 또는 이의 단편. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편, 예를 들어, 인간 IgG 불변 영역 또는 이의 단편을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 변경된 이펙터 기능 및/또는 반감기를 갖거나, 또는 갖도록 돌연변이된 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 이펙터 기능을 감소시키는 돌연변이를 함유하는 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체이다 (참조: 예를 들어, Idusogie et al., J. Immunol. 166:2571-2575 (2001); Sazinsky et al., PNAS USA 105:20167-20172 (2008); Davis et al., J. Rheumatol. 34:2204-2210 (2007); Bolt et al., Eur. J. Immunol. 23:403-411 (1993); Alegre et al., Transplantation 57:1537-1543 (1994); Xu et al., Cell Immunol. 200:16-26 (2000); Cole et al., Transplantation 68:563-571 (1999); Hutchins et al., PNAS USA 92:11980-11984 (1995); Reddy et al., J. Immunol. 164:1925-1933 (2000); WO97/11971 및 WO07/106585; U.S. Appl. Publ. 2007/0148167A1; McEarchern et al., Blood 109:1185-1192 (2007); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); 및 Kumagai et al., J. Clin. Pharmacol. 47:1489-1497 (2007), 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).

일부 구현예에서, 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편은 야생형 IgG 불변 도메인에 비하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는데, 여기서 변형된 IgG는 야생형 IgG 불변 도메인을 갖는 IgG의 반감기와 비교하여 감소된 ADCC를 갖는다. ADCC를 감소시키는 제공된 항체에 함유된 Fc 서열 가공 변형의 예는 다음에 상응하는 하나 이상의 변형을 포함한다: IgG1-K326W, E333S; IgG2-E333S; IgG1-N297A; IgG1-L234A, L235A; IgG2-V234A, G237A; IgG4-L235A, G237A, E318A; IgG4-S228P, L236E; IgG2-EU 서열 118-260; IgG4-EU 서열 261-447; IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgG1-C220S, C226S, C229S, P238S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; 및 IgG1-L234F, L235E, P331S, 여기서 위치 넘버링은 Kabat에서와 같은 EU 색인에 따른다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 감소된 CDC 활성을 갖거나 또는 갖도록 돌연변이된 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDC 활성을 감소시키는 돌연변이를 함유하는 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체이다 (참조: 예를 들어, WO97/11971 및 WO07/106585; 미국 출원 공개 제2007/0148167A1호; McEarchern et al., Blood 109:1185-1192 (2007); Hayden-Ledbetter et al., Clin. Cancer 15:2739-2746 (2009); Lazar et al., PNAS USA 103:4005-4010 (2006); Bruckheimer et al., Neoplasia 11:509-517 (2009); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685691 (2009); 및 Sazinsky et al., PNAS USA 105:20167-20172 (2008); 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). CDC를 감소시키는 항-ALK7 항체에 함유된 Fc 서열 가공 변형의 예는 다음에 상응하는 하나 이상의 변형을 포함한다: IgG1-S239D, A330L, I332E; IgG2 EU 서열 118-260; IgG4-EU 서열 261-447; IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; IgG1-L234F, L235E, P331S; 및 IgG1-C226S, P230S.

추가 구현예에서, 중쇄 불변 영역 또는 이의 단편은 야생형 IgG 불변 도메인에 비하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 여기서 변형된 IgG는 야생형 IgG 불변 도메인을 갖는 IgG의 반감기와 비교하여 증가된 반감기를 갖는다. 예를 들어, IgG 불변 도메인은 위치 251-257, 285-290, 308-314, 385-389 및 428-436에서 아미노산 잔기의 하나 이상의 아미노산 치환을 함유할 수 있고, 여기서 아미노산 위치 넘버링은 Kabat에서 제시된 바와 같은 EU 색인에 따른다. 특정 구현예에서, IgG 불변 도메인은 Kabat 위치 252에서 아미노산의 Tyr, Phe, Trp 또는 Thr로 치환; Kabat 위치 254에서 아미노산의 Thr로 치환; Kabat 위치 256에서 아미노산의 Ser, Arg, Gln, Glu, Asp 또는 Thr로 치환; Kabat 위치 257에서 아미노산의 Leu로 치환; Kabat 위치 309에서 아미노산의 Pro로 치환; Kabat 위치 311에서 아미노산의 Ser로 치환; Kabat 위치 428에서 아미노산의 Thr, Leu, Phe 또는 Ser로 치환; Kabat 위치 433에서 아미노산의 Arg, Ser, Iso, Pro 또는 Gln으로 치환; 또는 Kabat 위치 434에서 아미노산의 Trp, Met, Ser, His, Phe 또는 Tyr로 치환 중 하나 이상을 함유할 수 있다. 더욱 특정하게는, IgG 불변 도메인은 Kabat 위치 252에서 아미노산의 Tyr로 치환, Kabat 위치 254에서 아미노산의 Thr로 치환, 및 Kabat 위치 256에서 아미노산의 Glu로 치환을 포함하여, 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 비하여 아미노산 치환을 포함할 수 있다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 경쇄 면역글로불린 불변 영역을 포함하는 항체이다. 추가 구현예에서, 항체는 인간 Ig 카파 불변 영역 또는 인간 Ig 람다 불변 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍 내에 존재한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트를 포함하고, 상기 CDR은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍 내에 존재하고: (a) 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열; (b) 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열; (c) 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열; 및 (d) 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR은 표 1B에 개시된 VH 및 VL 쌍 내에 존재한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트를 포함하고, 상기 CDR은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍 내에 존재하고: (a) 서열번호 152의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열; (b) 서열번호 159의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열; 및 (c) 서열번호 165의 VH 서열 및 서열번호 171의 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR은 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍 내에 존재한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트를 포함하고, 상기 CDR은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍 내에 존재하고: (a) 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열; (b) 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열; (c) 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열; (d) 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열; 및 (e) 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트: (a) VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3, 또는 (b) VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 본원에 개시된 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트를 포함하고, 상기 CDR 세트는 표 1A에 개시된 VH 또는 VL 서열에서 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트: (a) VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3, 또는 (b) VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 본원에 개시된 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트를 포함하고, 상기 CDR 세트는 표 1B에 개시된 VH 또는 VL 서열에서 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 본원에 개시된 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 CDR 세트를 포함하고, 상기 CDR 세트는 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍에서 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (d)(i) VH-CDR1은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 184의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 169의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하고; (d)(i) VH-CDR1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (e)(i) VH-CDR1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (d)(i) VH-CDR1은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 1164의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 169의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; (b)(i) VH-CDR1은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고; (c)(i) VH-CDR1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하고; (d)(i) VH-CDR1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (e)(i) VH-CDR1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 CDR 세트를 포함하고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 액티빈 B를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 ActRIIA 또는 ActRIIB와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 CDR 세트를 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 액티빈 B를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 CDR 세트를 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 CDR 세트를 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 CDR 세트를 포함하고, 여기서: (a)(i) VH-CDR1은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 액티빈 B를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 ActRIIA 또는 ActRIIB와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 CDR 세트를 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 액티빈 B를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 CDR 세트를 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 CDR 세트를 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 CDR 세트를 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) VL-CDR1은 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하고; (v) VL-CDR2는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) VL-CDR3은 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39 또는 57의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VH-CDR1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2 및 VH-CDR3을 포함하고, 여기서 (i) VH-CDR1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VH-CDR2는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VH-CDR3은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3를 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3를 포함하고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3를 포함하고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 CDR의 참조 세트와 동일하거나, 또는 상기 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 또는 10개 미만의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, CDR 세트: VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 여기서: (i) VL-CDR1은 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL-CDR2는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) VL-CDR3은 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 VH-CDR3 또는 VL-CDR3 서열을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1B에 개시된 VH-CDR3 또는 VL-CDR3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 VH-CDR3 및 VL-CDR3 서열을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH-CDR3 및 VL-CDR3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1B에 개시된 VH-CDR3 또는 VL-CDR3 서열을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1B에 개시된 VH-CDR3 및 VL-CDR3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 VH-CDR3 또는 VL-CDR3 서열을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 VH-CDR3 및 VL-CDR3 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 발명은 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, 본 발명은 서열번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 21의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 20의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 19의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 39의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 57의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 56의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 55의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 3 또는 21의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2 및 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 및 서열번호 3 또는 21의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 39 또는 57의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2 및 서열번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 서열번호 37의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 및 서열번호 39 또는 57의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 발명은 서열번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, 본 발명은 서열번호 104의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 104의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 103의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 104의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 103의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 102의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 116의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 116의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 115의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 116의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 115의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 127의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 127의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 127의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 126의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, 본 발명은 서열번호 164의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 164의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 138 또는 163의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 164의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 103의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 1 또는 137의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 139의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 139의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 139의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3, 서열번호 138의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 137의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 서열번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2 및 서열번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 89의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 서열번호 88의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 및 서열번호 90의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 102의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 102의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1 및 서열번호 103의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 102의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 서열번호 103의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 103의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 103의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2 및 서열번호 102의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 103의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 서열번호 102의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 및 서열번호 104의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 114의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 114의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1 및 서열번호 115의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 114의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 서열번호 115의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 115의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 115의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 115의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 서열번호 114의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 125의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 125의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 125의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 서열번호 126의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 126의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 126의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 126의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 서열번호 125의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 137의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 137의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 137의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 서열번호 138의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 138의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2를 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 138의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2 및 서열번호 137의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 138의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR2, 서열번호 137의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR1, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 갖는 VH-CDR3을 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 12의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 30의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열번호 29의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 48의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열번호 47의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열번호 46의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 66의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 66의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 66의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열번호 65의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열번호 64의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 97의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열번호 96의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열번호 95의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 109의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 109의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 109의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열번호 108의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열번호 122의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 123의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열번호 122의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 134의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 134의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열번호 133의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 134의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열번호 133의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 147의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 147의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3 및 서열번호 146의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 147의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR3, 서열번호 146의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR2, 및 서열번호 145의 아미노산 서열을 갖는 VL-CDR1을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, 본 발명은 서열번호 75, 78, 81 또는 84의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 3 (ABD3)을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3 및 서열번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 2 (VH-ABD2)를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3, 서열번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD2, 및 서열번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 1 (VH-ABD1)을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3 및 서열번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 2 (VH-ABD2)를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 75의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3, 서열번호 74의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD2, 및 서열번호 73의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 1 (VH-ABD1)을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3 및 서열번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 2 (VH-ABD2)를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 78의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3, 서열번호 77의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD2, 및 서열번호 76의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 1 (VH-ABD1)을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3 및 서열번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 2 (VH-ABD2)를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 81의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3, 서열번호 80의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD2, 및 서열번호 79의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 1 (VH-ABD1)을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3 및 서열번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 2 (VH-ABD2)를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 84의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD3, 서열번호 83의 아미노산 서열을 갖는 VH-ABD2, 및 서열번호 82의 아미노산 서열을 갖는 VH-항원 결합 도메인 1 (VH-ABD1)을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 참조 VH 또는 VL과 비교하여 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1A 또는 표 1B에 개시된 참조 VH 또는 VL과 비교하여 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 참조 VH 및 VL 쌍과 비교하여 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 및 VL 쌍을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1A 또는 표 1B에 개시된 참조 VH 및 VL 쌍과 비교하여 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 및 VL 쌍을 포함한다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 참조 VH 또는 VL과 비교하여 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 참조 VH 및 VL 쌍과 비교하여 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 및 VL 쌍을 포함한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 4로부터 선택된 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 13의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (b)(i) 서열번호 22의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 31의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (c)(i) 서열번호 40, 170 또는 171의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 49의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 및 (d)(i) 서열번호 58의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 67의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 91로부터 선택된 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 98의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (b)(i) 서열번호 105의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 110의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (c)(i) 서열번호 117의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 124의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (d)(i) 서열번호 128의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 135의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 및 (e)(i) 서열번호 140의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 148의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 152로부터 선택된 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 98의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; (b)(i) 서열번호 159의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 110의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 및 (c)(i) 서열번호 165의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열 및 (ii) 서열번호 171의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL 쌍을 포함하고, 여기서 VH 서열은 서열번호 4의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; VL 서열은 서열번호 13의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL 쌍을 포함하고, 여기서 VH 서열은 서열번호 22의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; VL 서열은 서열번호 31의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL 쌍을 포함하고, 여기서 VH 서열은 서열번호 40의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; VL 서열은 서열번호 49의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL 쌍을 포함하고, 여기서 VH 서열은 서열번호 58의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; VL 서열은 서열번호 67의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL 쌍을 포함하고, 여기서 VH 서열은 서열번호 91의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; VL 서열은 서열번호 98의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL 쌍을 포함하고, 여기서 VH 서열은 서열번호 105의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; VL 서열은 서열번호 110의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL 쌍을 포함하고, 여기서 VH 서열은 서열번호 117의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; VL 서열은 서열번호 124의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL 쌍을 포함하고, 여기서 VH 서열은 서열번호 128의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; VL 서열은 서열번호 135의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VH 및 VL 쌍을 포함하고, 여기서 VH 서열은 서열번호 140의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; VL 서열은 서열번호 148의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (a) 서열번호 4, (b) 서열번호 22, (c) 서열번호 40 및 (d) 서열번호 58로부터 선택된 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (a) 서열번호 91, (b) 서열번호 105, (c) 서열번호 117, (d) 서열번호 128 및 (e) 서열번호 140으로부터 선택된 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (a) 서열번호 13; (b) 서열번호 31; (c) 서열번호 49; 및 (d) 서열번호 67의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (a) 서열번호 98; (b) 서열번호 110; (c) 서열번호 124; (d) 서열번호 135 및 (e) 서열번호 148의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 참조 VH 또는 VL와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 참조 VH 또는 VL와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1B에 개시된 참조 VH 또는 VL와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 참조 VH 또는 VL와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 또는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 참조 VH 및 VL와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 참조 VH 및 VL와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1B에 개시된 참조 VH 및 VL와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 참조 VH 및 VL와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, (a) 서열번호 4와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; (b) 서열번호 22와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; (c) 서열번호 40과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH; 및 (d) 서열번호 58과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH를 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, (a) 서열번호 91과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; (b) 서열번호 105와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; (c) 서열번호 117과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH; (d) 서열번호 128과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH; 및 (e) 서열번호 140과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH를 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, (a) 서열번호 13과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; (b) 서열번호 31과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; (c) 서열번호 49와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; 및 (d) 서열번호 67과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, (a) 서열번호 98과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; (b) 서열번호 110과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; (c) 서열번호 124와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; (d) 서열번호 135와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성; 및 (e) 서열번호 148과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함하고; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 4와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 13과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (b)(i) 서열번호 22와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 31과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (c)(i) 서열번호 40과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 49와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 및 (d)(i) 서열번호 58과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 67과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 152와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 98과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (b)(i) 서열번호 159와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 110과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 및 (c)(i) 서열번호 165와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 171와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a)(i) 서열번호 91과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 98과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (b)(i) 서열번호 105와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 110과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (c)(i) 서열번호 117과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 124와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; (d)(i) 서열번호 128과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 135와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 및 (e)(i) 서열번호 140과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 (ii) 서열번호 148과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 4와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열번호 13과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 4의 VH 및 서열번호 13의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 22와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열번호 31과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 22의 VH 및 서열번호 31의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 40과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열번호 49와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 40의 VH 및 서열번호 49의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 58과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열번호 67과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 58의 VH 및 서열번호 67의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 91과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열번호 98과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 91의 VH 및 서열번호 98의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 105와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열번호 110과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 105의 VH 및 서열번호 110의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 117과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열번호 124와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 117의 VH 및 서열번호 124의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 128과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열번호 135와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 128의 VH 및 서열번호 135의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 140과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 및 서열번호 148과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 140의 VH 및 서열번호 148의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a) 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열; (b) 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열; (c) 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열; 및 (d) 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRIIA/B를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고: (a) 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열; (b) 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열; (c) 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열; (d) 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열; 및 (e) 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열; 상기 단백질은 ALK7에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및/또는 Nodal의 존재하에 ALK7 및 ActRIIA/B를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 4, 22, 40 또는 58의 VH를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 13, 31, 49 또는 67의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 4, 22, 40 또는 58의 VH; 및 서열번호 13, 31, 49 또는 67의 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 ALK7-결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합한다. 참조 ALK7-결합 단백질과 동일한 ALK7 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나 상기 에피토프에 결합하는 ALK7-결합 단백질의 능력은 본원에서 개시되거나 또는 만약 그렇지 않으면, 당업계에 공지된 기술을 사용하여 쉽게 결정될 수 있다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1B에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 152, 159 또는 166의 VH를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 98, 110 또는 171의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 152, 159 또는 166의 VH; 및 서열번호 98, 110 또는 171의 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 1A에 개시된 ALK7-결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합한다. 참조 ALK7-결합 단백질과 동일한 ALK7 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나 상기 에피토프에 결합하는 ALK7-결합 단백질의 능력은 본원에서 개시되거나 또는 만약 그렇지 않으면, 당업계에 공지된 기술을 사용하여 쉽게 결정될 수 있다.

추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 VH 및 VL 서열 쌍을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 91, 105, 117, 128 또는 140의 VH를 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 98, 110, 124, 135 또는 148의 VL을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 서열번호 91, 105, 117, 128 또는 140의 VH; 및 서열번호 98, 110, 124, 135 또는 148의 VL을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 표 3에 개시된 ALK7-결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합한다. 참조 ALK7-결합 단백질과 동일한 ALK7 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/하거나 상기 에피토프에 결합하는 ALK7-결합 단백질의 능력은 본원에서 개시되거나 또는 만약 그렇지 않으면, 당업계에 공지된 기술을 사용하여 쉽게 결정될 수 있다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 J01의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 152의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 152의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 152의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 J02의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 K01의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 159의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 159의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 159의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 K02의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 G04의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 G05의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 C02의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 C03의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 L01의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 165의 VH 서열 및 서열번호 171의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 165의 VH 서열 및 서열번호 171의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 165의 VH 서열 및 서열번호 171의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체 L02의 VH 및 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열을 포함하는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 190 또는 320과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 (HC) 및/또는 서열번호 191 또는 322와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 (LC)를 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 190 또는 320의 HC 서열 및 서열번호 191 또는 322의 LC 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 190 또는 320의 HC 서열 및 서열번호 191 또는 322의 LC 서열을 포함하는 항체로서 ALK7의 적어도 하나의 에피토프 또는 하나의 본질적으로 동일한 에피토프에 결합한다.

신호 펩티드를 갖는 mAb C03 HC: 아미노산 서열 (VH FR1: 아미노산 20-44; VH CDR1: 아미노산 45-53; VH FR2: 아미노산 54-70; VH CDR2: 아미노산 71-86; VH FR3: 아미노산 87-118; VH CDR3: 아미노산 119-135; 및 VH FR4: 아미노산 136-146).

참고: 신호 펩티드는 단일 밑줄로 표시되고, 가변 영역은 굵은 글꼴로 표시된다.

mAb C03 HC 성숙 펩티드: 아미노산 서열

신호 펩티드를 갖는 mAb C03 HC: 코딩 핵산 서열

mAb C03 HC 성숙 펩티드: 코딩 핵산 서열 (5'-말단 ATG가 개시 코돈으로 추가됨)

신호 펩티드를 갖는 mAb C03 LC: 아미노산 서열 (VL FR1: 아미노산 20-42; VL CDR1: 아미노산 43-54; VL FR2: 아미노산 55-69; VL CDR2: 아미노산 70-76; VL FR3: 아미노산 77-108; VL CDR3: 아미노산 109-117; 및 VL FR4: 아미노산 118-127).

mAb C03 LC 성숙 펩티드: 아미노산 서열

신호 펩티드를 갖는 mAb C03 LC: 코딩 핵산 서열

mAb C03 LC 성숙 펩티드: 코딩 핵산 서열 (5'-말단 ATG가 개시 코돈으로 추가됨)

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 192 또는 324와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 (HC) 및/또는 서열번호 193 또는 326과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 (LC)를 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 192 또는 324의 HC 서열 및 서열번호 193 또는 326의 LC 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 192 또는 324의 HC 서열 및 서열번호 193 또는 326의 LC 서열을 포함하는 항체로서 ALK7의 적어도 하나의 에피토프 또는 하나의 본질적으로 동일한 에피토프에 결합한다.

신호 펩티드를 갖는 mAb G05 HC: 아미노산 서열 (VH FR1: 아미노산 20-49; VH CDR1: 아미노산 50-54; VH FR2: 아미노산 55-68; VH CDR2: 아미노산 69-85; VH FR3: 아미노산 86-117; VH CDR3: 아미노산 118-129; 및 VH FR4: 아미노산 130-139).

참고: 신호 펩티드는 단일 밑줄에 의해 표시되고, 가변 영역은 굵은 글꼴로 표시된다.

mAb G05 HC 성숙 펩티드: 아미노산 서열

신호 펩티드를 갖는 mAb G05 HC: 코딩 핵산 서열

mAb G05 HC 성숙 펩티드: 코딩 핵산 서열 (5'-말단 ATG가 개시 코돈으로서 첨가됨)

신호 펩티드를 갖는 mAb G05 LC: 아미노산 서열 (VL FR1: 아미노산 20-42; VL CDR1: 아미노산 43-53; VL FR2: 아미노산 54-68; VL CDR2: 아미노산 69-75; VL FR3: 아미노산 76-107; VL CDR3: 아미노산 108-116; 및 VL FR4: 아미노산 117-126).

mAb G05 LC 성숙 펩티드: 아미노산 서열

신호 펩티드를 갖는 mAb G05 LC: 코딩 핵산 서열

mAb G05 LC 성숙 펩티드: 코딩 핵산 서열 (5'-말단 ATG가 개시 코돈으로 추가됨)

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 적어도 하나의 돌연변이, 변형 및/또는 치환, 예를 들어, Fc 또는 Fab 영역에서의 돌연변이를 포함한다. 이러한 돌연변이 및/또는 치환은, 예를 들어, ALK7-결합 단백질 발현 수준, 번역 후 변형, 안정성/반감기 및/또는 활성을 증가시키거나 개선시킬 수 있다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 이의 Fc 영역에서 적어도 하나의 돌연변이, 변형 및/또는 치환을 포함하여, 예를 들어, 숙주에서 이펙터 활성 및/또는 독성을 감소시키고/시키거나 보체 결합 및 고정을 감소시키고, Fc-g 의존성 항체-의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC)을 감소시키고, 보체-의존성 세포독성 (CDC)을 감소시키고/시키거나, 생체이용률 및/또는 안정성/반감기를 개선시킨다.

제공된 항체에 하나 이상이 포함될 수 있는 ADCC를 감소시키는 Fc 서열 가공 변형의 예는 다음에 상응하는 변형을 포함한다: IgG1-K326W, E333S; IgG2-E333S; IgG1-N297A; IgG1-L234A, L235A; IgG2-V234A, G237A; IgG4-L235A, G237A, E318A; IgG4-S228P, L236E; IgG2-EU 서열 118-260; IgG4-EU 서열 261-447; IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgG1-C220S, C226S, C229S, P238S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; 및 IgG1-L234F, L235E, P331S, 여기서 위치 넘버링은 Kabat에서와 같은 EU 색인에 따른다.

제공된 항체에 하나 이상이 포함될 수 있는 CDC 활성을 감소시키는 Fc 서열 가공 변형의 예는, 예를 들어, 문헌 (WO97/11971 및 WO07/106585; U.S. Appl. Publ. 2007/0148167A1; McEarchern et al., Blood 109:1185-1192 (2007); Hayden-Ledbetter et al., Clin. Cancer 15:2739-2746 (2009); Lazar et al., PNAS USA 103:4005-4010 (2006); Bruckheimer et al., Neoplasia 11:509-517 (2009); Strohl, Curr. Op. Biotechnol. 20:685-691 (2009); 및 Sazinsky et al., PNAS USA 105:20167-20172 (2008), 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)에 기재된 하나 이상의 변형을 포함한다. 특히 이러한 변형은 다음에 상응하는 변형을 포함한다: IgG1-S239D, A330L, I332E; IgG2 EU 서열 118-260; IgG4-EU 서열 261-447; IgG2-H268Q, V309L, A330S, A331S; IgG1-C226S, C229S, E233P, L234V, L235A; IgG1-L234F, L235E, P331S; 및 IgG1- C226S, P230S.

제공된 항체에 하나 이상이 포함될 수 있는 반감기를 개선시키는 Fc 서열 가공 변형의 예는 위치 251-257, 285-290, 308-314, 385-389, 및 428-436에서 아미노산 잔기의 치환을 포함하며, 여기서 아미노산 위치 넘버링은 Kabat에 기재된 바와 같은 EU 색인에 따른다. 특정 구현예에서, IgG 불변 도메인은 하기 중 하나 이상을 함유한다: Kabat 위치 252에서 아미노산의 Tyr, Phe, Trp 또는 Thr로 치환; Kabat 위치 254에서 아미노산의 Thr로 치환; Kabat 위치 256에서 아미노산의 Ser, Arg, Gln, Glu, Asp 또는 Thr로 치환; Kabat 위치 257에서 아미노산의 Leu로 치환; Kabat 위치 309에서 아미노산의 Pro로 치환; Kabat 위치 311에서 아미노산의 Ser로 치환; Kabat 위치 428에서 아미노산의 Thr, Leu, Phe 또는 Ser로 치환; Kabat 위치 433에서 아미노산의 Arg, Ser, Iso, Pro 또는 Gln으로 치환; 또는 Kabat 위치 434에서 아미노산의 Trp, Met, Ser, His, Phe 또는 Tyr로 치환. 보다 구체적으로, IgG 불변 도메인은 Kabat 위치 252에서 아미노산의 Tyr로 치환, Kabat 위치 254에서 아미노산의 Thr로 치환, 및 Kabat 위치 256에서 아미노산의 Glu로 치환을 포함하여, 야생형 인간 IgG 불변 도메인에 비하여 하나 이상의 아미노산 치환을 함유할 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은 ADCC 및/또는 CDC 효과를 감소시키고/시키거나 반감기를 개선시키기 위해 적어도 하나의 돌연변이, 변형 및/또는 치환, 예를 들어, 본원에 개시된 Fc 또는 Fab 영역에서의 돌연변이를 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 이상의 치환, 예를 들어, 본원에 개시된 Fc 또는 Fab 영역에서의 돌연변이를 포함한다.

일부 특이적 돌연변이(들), 변형(들) 및/또는 치환(들)은 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질에 단독으로 또는 상기 기재된 적어도 하나의 돌연변이, 변형 및/또는 치환과 조합하여 도입될 수 있다. 예를 들어, 항체 세포독성을 감소시키기 위해, 잔기 N₂₉₇에서의 N-연결된 글리코실화는 N₂₉₇을 알라닌, 글리신, 또는 아스파르트산으로 치환함으로써 제거될 수 있다 (Tao and Morrison (1989) J Immunol 143:2595-2601; Hristodorov et al. (2013) Mol Biotechnol 54:1056-1068). 유사하게, 위치 299에서 세린/트레오닌 잔기는 변형될 수 있다 (Sazinsky et al. (2008) Proc Natl Acad Sci U S A 105:20167-20172). N₂₉₇에서의 돌연변이는 D₂₆₅A 돌연변이, 예컨대 DANA (D₂₆₅A, N₂₉₇A) 또는 DANG (D₂₆₅A, N₂₉₇G)로 지정된 2개의 일반적으로 사용되는 아미노산 변화 쌍과 추가로 조합될 수 있다 (Lund et al. (1996) J Immunol 157:4963-4969). 항체 이펙터 기능을 완화시키기 위한 대안적인 돌연변이는 L₂₃₄A 및 L₂₃₅A (LALA, Kabat 위치)와 같은 항체 하부 힌지에서 잔기의 치환을 포함한다 (Chappel et al. (1991) Proc Natl Acad Sci U S A 88:9036-9040). 이들 잔기는 CH2 도메인 상의 Fc-γ 수용체 결합 부위의 일부를 형성하고, 크거나 작은 이펙터 기능을 갖는 항체 아이소타입 사이에 이들 잔기의 교환은 ADCC에서 이들의 중요성을 동정하였다. 이들 부위에서의 알라닌 치환은 인간 및 뮤린 항체 둘 모두에서 ADCC를 감소시키는데 효과적이지만, 이러한 치환은 CDC 활성을 감소시키는데 덜 효과적이다. Fc의 C1q 결합 부위를 맵핑하기 위한 무작위 돌연변이 접근법에 의해 동정된 또 다른 단일 변이체 P₃₂₉A는, ADCC 활성을 유지하면서 CDC 활성을 감소시키는데 매우 효과적이다. L₂₃₄A, L₂₃₅A, 및 P₃₂₉A (LALA-PG, Kabat 위치) 치환의 조합은 인간 IgG1 항체의 이펙터 기능을 효과적으로 침묵시키는 것으로 나타났다. LALA, LALA-PG, 및 기타 돌연변이에 대한 상세한 논의에 대해 문헌 (Lo et al. (2017) J. Biol. Chem. 292:3900-3908, 이의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)을 참조한다. 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은 본원에 기재된 적어도 1개, 2개, 3개 이상의 돌연변이를 가질 수 있다.

특정 바람직한 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 중쇄의 Fc 영역 (LALA HC)에서 L₂₃₄A 및 L₂₃₅A 돌연변이 (LALA, Kabat 위치)를 포함한다. 다른 바람직한 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 중쇄의 Fc 영역에서 L₂₃₄A, L₂₃₅A, 및 P₃₂₉G 돌연변이 (LALA-PG; Kabat 위치)를 포함한다.

특정 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은, 예를 들어, mAb C03의 중쇄에서 LALA 돌연변이를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 194 또는 328과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 (HC) 및/또는 서열번호 191 또는 322와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 (LC)를 포함한다. 관련 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 194 또는 328의 HC 서열 및 서열번호 191 또는 322의 LC 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 194 또는 328의 HC 서열 및 서열번호 191 또는 322의 LC 서열을 포함하는 항체가 결합하는 ALK7 에피토프와 동일하거나 본질적으로 동일한 적어도 하나의 에피토프에 결합한다. 아래에 예시된 바와 같이, LALA 돌연변이는 서열번호 194의 L₂₆₃ 및 L₂₆₄에 위치한다

신호 펩티드를 갖는 mAb C03 LALA HC: 아미노산 서열 돌연변이는 밑줄 그어져 있다. (VH FR1: 아미노산 20-44; VH CDR1: 아미노산 45-53; VH FR2: 아미노산 54-70; VH CDR2: 아미노산 71-86; VH FR3: 아미노산 87-118; VH CDR3: 아미노산 119-135; VH FR4: 아미노산 136-146, LALA 돌연변이: 아미노산 263-264).

참고: 신호 펩티드는 단일 밑줄로 표시되고; 가변 영역은 굵은 글꼴로 표시되고; LALA 돌연변이는 이중 밑줄로 표시된다.

mAb C03 LALA HC 성숙 펩티드: 아미노산 서열

신호 펩티드를 갖는 mAb C03 LALA HC: 코딩 핵산 서열; LALA 돌연변이는 밑줄 그어져 있다.

mAb C03 LALA HC 성숙 펩티드: 코딩 핵산 서열; (5'-말단 ATG가 개시 코돈으로 추가됨) LALA 돌연변이는 밑줄 그어져 있다.

특정 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은, 예를 들어, mAb G05의 중쇄에서 LALA 돌연변이를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 195 또는 330과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 (HC) 및/또는 서열번호 193 또는 326과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 (LC)를 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 195 또는 330의 HC 서열 및 서열번호 193 또는 326의 LC 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 195 또는 330의 HC 서열 및 서열번호 193 또는 326의 LC 서열을 포함하는 항체가 결합하는 ALK7 항체와 동일하거나 본질적으로 동일한 적어도 하나의 에피토프에 결합한다. 아래에 예시된 바와 같이, LALA 돌연변이는 서열번호 195의 L₂₅₇ 및 L₂₅₈에 위치한다.

신호 펩티드를 갖는 mAB G05 LALA HC: 아미노산 서열 (VH FR1: 아미노산 20-49; VH CDR1: 아미노산 50-54; VH FR2: 아미노산 55-68; VH CDR2: 아미노산 69-85; VH FR3: 아미노산 86-117; VH CDR3: 아미노산 118-129; VH FR4: 아미노산 130-139, 및 LALA 돌연변이: 아미노산 257-258).

mAB G05 LALA HC 성숙 펩티드: 아미노산 서열

신호 펩티드를 갖는 mAB G05 LALA HC: 코딩 핵산 서열 (LALA 돌연변이는 밑줄 그어져 있다)

mAB G05 LALA HC 성숙 펩티드: 코딩 핵산 서열 (5'-말단 ATG가 개시 코돈으로 추가됨) LALA 돌연변이는 밑줄 그어져 있다.

특정 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은, 예를 들어, mAb C03의 중쇄에서 LALA-PG 돌연변이를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 196 또는 332와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 (HC) 및/또는 서열번호 191 또는 322와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 (LC)를 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 196 또는 332의 HC 서열 및 서열번호 191 또는 322의 LC 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 196 또는 332의 HC 서열 및 서열번호 191 또는 322의 LC 서열을 포함하는 항체가 결합하는 ALK7 에피토프와 동일하거나 본질적으로 동일한 적어도 하나의 에피토프에 결합한다. 아래에 예시된 바와 같이, LALA-PG 돌연변이는 서열번호 196에서 L₂₆₃A, L₂₆₄A, 및 P₃₅₈G를 포함한다.

신호 펩티드를 갖는 mAb C03 LALA-PG HC: 아미노산 서열 (VH FR1: 아미노산 20-44; VH CDR1: 아미노산 45-53; VH FR2: 아미노산 54-70; VH CDR2: 아미노산 71-86; VH FR3: 아미노산 87-118; VH CDR3: 아미노산 119-135; VH FR4: 아미노산 136-146, LALA-PG 돌연변이: 아미노산 263, 264, 및 358).

참고: 신호 펩티드는 단일 밑줄로 표시되고; 가변 영역은 굵은 글꼴로 표시되고; LALA-PG 돌연변이는 이중 밑줄로 표시된다.

mAb C03 LALA-PG HC 성숙 펩티드: 아미노산 서열

신호 펩티드를 갖는 예시적인 mAbC03 LALA-PG HC: 코딩 핵산 서열 변이체 1: 돌연변이는 밑줄 그어져 있다.

mAbC03 LALA-PG HC 성숙 펩티드: 코딩 핵산 서열 변이체 1 (5'-말단 ATG가 개시 코돈으로 추가됨) 돌연변이는 밑줄 그어져 있다.

특정 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은, 예를 들어, mAb G05의 중쇄에서 LALA-PG 돌연변이를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 197 또는 334와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 (HC) 및/또는 서열번호 193 또는 326과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 (LC)를 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 197 또는 334의 HC 서열 및 서열번호 193 또는 326의 LC 서열을 포함하는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 197 또는 334의 HC 서열 및 서열번호 193 또는 326의 LC 서열을 포함하는 항체가 결합하는 ALK7 에피토프와 동일하거나 본질적으로 동일한 적어도 하나의 에피토프에 결합한다. 아래에 예시된 바와 같이, LALA-PG 돌연변이는 서열번호 197에서 L₂₅₇A, L₂₅₈A, 및 P₃₅₂G 돌연변이를 포함한다.

신호 펩티드를 갖는 mAb G05 LALA-PG HC: 아미노산 서열: (VH FR1: 아미노산 20-49; VH CDR1: 아미노산 50-54; VH FR2: 아미노산 55-68; VH CDR2: 아미노산 69-85; VH FR3: 아미노산 86-117; VH CDR3: 아미노산 118-129; VH FR4: 아미노산 130-139, 및 LALA-PG 돌연변이: 아미노산 257-258).

mAb G05 LALA-PG HC 성숙 펩티드: 아미노산 서열:

신호 펩티드를 갖는 예시적인 mAb G05 LALA-PG HC: 코딩 핵산 서열 변이체 1: 돌연변이는 밑줄 그어져 있다.

예시적인 mAb G05 LALA-PG HC 성숙 펩티드: 코딩 핵산 서열 변이체 1 (5'-말단 ATG가 개시 코돈으로 추가됨) 돌연변이는 밑줄 그어져 있다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 항-ALK7 항체는 뮤린 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단일클론 항체, 다중클론 항체, 재조합 항체, 다중특이적 항체, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 구현예에서, 항-ALK7 항체는 Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, dsFv 단편, scFv 단편, 또는 sc(Fv)₂ 단편이다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, ALK7-리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B, 또는 Nodal)의 활성을 차단한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 공동수용체 (예를 들어, 크립토)의 활성을 차단한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, ALK7 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B, 또는 Nodal)의 활성과 연관된 지방 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하고, 과잉 체중, 비만 또는 대사 장애와 연관된 하나 이상의 질환 또는 병태를 치료하거나 또는 개선한다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 II형 당뇨병이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 고혈압이다. 일부 구현예에서, 대사 장애는 이상지질혈증, 인슐린 저항성, 고인슐린혈증 또는 고혈당증이다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 ALK7-매개된 Smad 신호전달을 감소시킨다. 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 백색 및/또는 갈색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 길항한다. 또 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 결정될 때, 백색 및/또는 갈색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 또는 약 100% 감소시키거나 추소시킨다. 일부 구현예에서, 지방분해 검정은 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 결합하고, 과체중, 비만, 인슐린 저항성, 당뇨병, 죽상동맥경화증, 고혈압, 염증 및/또는 NAFLD (예를 들어, 지방간 및/또는 NASH)와 연관된 하나 이상의 병태를 저해하거나 감소시킨다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 ALK7-매개된 Smad 신호전달을 감소시킨다. 또 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (예를 들어, 본원 실시예에 기재된 바와 같이) 액티빈 B (50 ng/ml)의 존재하에 수행된 지방분해 저해 검정에서 표준 기술과 조건을 사용하여 결정될 때, 백색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 저해한다. 또 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 (예를 들어, 본원 실시예에 기재된 바와 같이) 액티빈 B (50 ng/ml)의 존재하에 수행된 지방분해 저해 검정에서 표준 기술과 조건을 사용하여 결정될 때, 백색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 또는 약 100% 감소시키거나 축소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7에 결합하고, 과체중, 비만, 인슐린 저항성, 당뇨병, 죽상동맥경화증, 고혈압, 염증 및/또는 NAFLD (예를 들어, 지방간 및/또는 NASH)와 연관된 하나 이상의 병태를 저해하거나 감소시킨다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)에 의한 ALK7 활성의 차단은 과잉 체중, 인슐린 저항성, 비만 또는 당뇨병과 연관된 하나 이상의 병태, 예컨대 고혈압, 암, 및 신경병증, 망막병증 및 심혈관, 폐 및 신장 질환을 저해하거나 감소시킨다. 추가 구현예에서, ALK7의 차단은 대사 질환과 연관된 하나 이상의 병태를 저해하거나 감소시킨다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 액티빈 B, GDF8 또는 Nodal에 의한 ALK7에 결합을 저해하거나 감소시킨다. 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 Smad-의존성 경로에 의한 지방분해의 저해를 저해하거나 감소시킨다.

상기 나타낸 바와 같이, 일부 구현예에서, ALK7에 결합하는 VH 및/또는 VL 아미노산 서열을 함유하는 항-ALK7 항체 (예를 들어, 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)는 본원에 제시된 서열에 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 99% 또는 100%의 서열 동일성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, ALK7에 결합하는 VH 및/또는 VL 아미노산 서열(들)은 본원에 제시된 서열에 비해 8개, 7개, 6개, 5개, 4개, 3개, 2개, 1개의 아미노산 부가, 치환 (예를 들어, 보존성 치환) 또는 결실을 포함한다. 추가 구현예에서, ALK7에 결합하는 VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 본원에 제시된 서열에 비해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 이상의 아미노산 부가, 치환 (예를 들어, 보존성 치환) 또는 결실을 포함한다. VH 영역 또는 VL 영역에 일정한 유사성 퍼센트를 갖는, 또는 하나 이상의 치환, 결실 및/또는 삽입 (예를 들어, 보존성 치환)을 갖는 VH 및 VL 영역을 함유하는 항-ALK7 항체는 본원에 기재된 VH 및/또는 VL 영역을 인코딩하는 핵산 분자의 돌연변이유발 (예를 들어, 부위-지향된 또는 PCR-매개된 돌연변이유발), 그 이후에 ALK7로의 결합에 대해 인코딩된 변경된 항체의 시험, 및 임의로, 본원에 기재된 기능적 검정, 또는 유지된 기능을 시험하기 위해 정해진 대로 변형될 수 있는 당업계에 공지된 검정을 사용하여, 유지된 기능에 대한 시험에 의해 획득될 수 있다.

hALK7 또는 murALK7에 대한 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체 (예를 들어, 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)의 친화성 또는 결합능은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법, 예를 들어, 유세포분석법, 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA), 또는 방사면역검정 (RIA), 또는 동역학 (예를 들어, BIACORE® 또는 KINEXA® 분석)을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 직접적인 결합 검정 및 경쟁적 결합 검정 형식이 쉽게 사용될 수 있다. (참조: 예를 들어, Berzofsky et al., "Antibody-Antigen Interactions", In Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, N.Y. (1984); Kuby, Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, N.Y. (1992); 및 본원에 기재된 방법). 특정 항체-항원 상호작용의 측정된 친화성은 상이한 조건 (예를 들어, 염 농도, pH, 온도) 하에 측정되면 변할 수 있다. 따라서, 친화성 및 다른 ALK7-결합 파라미터 (예를 들어, K_D 또는 Kd, K_온, K_오프)의 측정은 ALK7-결합 단백질 및 ALK7의 표준화 용액으로 만들어지고, 상기 측정은 본원에 기재되거나 또는 만약 그렇지 않으면 당업계에 공지된 바와 같은 표준화 조건과 방법을 사용하여 수행된다.

본 발명은 ALK7-결합 단백질, 예컨대 본원에 기재된 바와 같은 항-ALK7 항체를 추가로 제공하는데, 여기서 ALK7-결합 단백질은 이종성 제제에 접합된다. 특정 구현예에서, 이종성 제제는 항균제, 치료제, 전구약물, 펩티드, 단백질, 효소, 지질, 생물학적 반응 조절제, 약제학적 제제, 림포카인, 이종성 항체 또는 항체 단편, 검출 가능한 표지, 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이다. 헤테로접합체 ALK7-결합 단백질은 본원의 다른 곳에서 더욱 상세하게 논의된다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체가 아니다. 단백질 표적에 높은 친화성으로 결합하는 비항체 폴리펩티드를 동정하고 생산하기 위한 다양한 방법이 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 문헌 (Skerra, Curr. Opin. Biotech. 18:295-304 (2007); Hosse et al., Protein Science 15:14-27 (2006); Gill et al., Curr. Opin. Biotechnol. 17:653-658 (2006); Nygren, FEBS J. 275:2668-2676 (2008); 및 Skerra, FEBS J. 275:2677-2683 (2008))을 참조하고, 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 파지 디스플레이 기술이 ALK7-결합 단백질을 확인하거나/생산하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 VASP 폴리펩티드, 조류 췌장 폴리펩티드 (aPP), 테트라넥틴 (CTLD3에 기반함), 아필린 (γB-크리스탈린/유비퀴틴에 기반함), 크노틴, SH3 도메인, PDZ 도메인, 텐다미스탯, 트랜스페린, 안키린 컨센서스 반복 도메인 (예를 들어, DARPins), 리포칼린 단백질 폴드 (예를 들어, 안티칼린 및 듀오칼린), 단백질 에피토프 모방체 (PEM), 맥시바디/아비머, 도메인 항체 섬유결합소 도메인 (예를 들어, 10 Fn3, 참조: 예를 들어, U.S. 출원 공개 번호 2003/0170753 및 20090155275, 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다), 단백질 A의 도메인 (예를 들어, 어피바디), 및 티오레독신으로부터 선택되는 유형에 기반한 단백질 스캐폴드를 포함한다.

일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-ALK7 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁하는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 항-ALK7 항체 및 ALK7-결합 항체 단편)을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질과 동일한 ALK7 에피토프에 결합하는 ALK7-결합 단백질을 제공한다. ALK7에, 예를 들어, 참조 결합 단백질, 예컨대 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열, 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열, 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열, 또는 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열을 포함하는 항체의 결합을 저해하는 시험 ALK7-결합 단백질의 능력은, 상기 시험 ALK7-결합 단백질이 ALK7로의 결합에 대해 상기 참조 항체와 경쟁할 수 있다는 것을 증명한다. 이러한 ALK7-결합 단백질은 무제한적 이론에 따라서, 경쟁하는 ALK7-참조 항체와 ALK7 상에서 동일한 또는 관련된 (예를 들어, 구조적으로 유사한 또는 공간적으로 근위의) 에피토프에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열, 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열, 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열, 또는 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열을 각각 포함하는 항체와 ALK7 상에서 동일한 에피토프에 결합한다.

유사하게, ALK7에, 예를 들어, 참조 결합 단백질, 예컨대 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열, 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열, 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열, 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열, 또는 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열을 포함하는 항체의 결합을 저해하는 시험 ALK7-결합 단백질의 능력은, 상기 시험 ALK7-결합 단백질이 ALK7로의 결합에 대해 상기 참조 항체와 경쟁할 수 있다는 것을 증명한다. 이러한 ALK7-결합 단백질은 무제한적 이론에 따라서, 경쟁하는 ALK7-참조 항체와 ALK7 상에서 동일한 또는 관련된 (예를 들어, 구조적으로 유사한 또는 공간적으로 근위의) 에피토프에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열, 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열, 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열, 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열, 또는 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열을 각각 포함하는 항체와 ALK7 상에서 동일한 에피토프에 결합한다.

일반적으로, 1형 TGF-베타 수용체 패밀리 구성원, 예컨대 ALK7은 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및 ActRIIB)에 의해 인산화되고 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 통해 신호하는 것으로 알려져 있다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 ALK7 및 II형 수용체-발현 세포 (예를 들어, 지방 세포)에서 하나 이상의 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)에 의한 ALK7의 인산화를 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 ALK7 및 II형 수용체-발현 세포 (예를 들어, 지방 세포)에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 ALK7-매개된 인산화를 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, ALK7 수용체 발현 세포는 뮤린이다. 일부 구현예에서, ALK7 수용체 발현 세포는 인간이다. 일부 구현예에서, ALK7 수용체 발현 세포는 지방 세포이다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택되는 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다.

일부 구현예에서, ALK7-결합은 ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 세포-기반 검정을 사용하여 측정될 때 Smad의 인산화를 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 세포-기반 검정을 사용하여 측정될 때, 500 pM 미만, 350 pM 미만, 250 pM 미만, 150 pM 미만, 100 pM 미만, 75 pM 미만, 60 pM 미만, 50 pM 미만, 40 pM 미만, 30 pM 미만, 20 pM 미만, 15 pM 미만, 10 pM 미만, 또는 5 pM 미만의 IC₅₀으로 ALK7-매개된 인산화를 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합한다 (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때). 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편이다.

상기 기술된 구조적 및/또는 기능적 특징 중 적어도 하나를 갖는 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은 ALK7의 특정 아미노산에 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 이러한 ALK7-결합 단백질은 ALK7의 항원 결정인자로도 공지된 적어도 하나의 에피토프에 결합할 수 있다. 에피토프는 일반적으로 비-자기 단백질이지만, 에피토프는 항체 (또는 다른 결합 단백질)가 결합하는 항원의 특정 부분이다. 에피토프에 결합하는 항체의 부분을 파라토프라 부른다. 에피토프는 이들의 구조 및 파라토프와의 상호작용에 기반하여 입체형태적 에피토프와 선형 에피토프로 나눌 수 있다. 입체형태적 에피토프는 항원의 아미노산 서열의 불연속 부분으로 구성된다. 이들 에피토프는 3-D 표면 특성 및 항원의 형상 또는 3차 구조에 기반하여 파라토프와 상호작용한다. 선형 에피토프는 이들의 1차 구조에 기반하여 파라토프와 상호작용한다. 선형 에피토프는 항원으로부터 연속적인 아미노산 서열에 의해 형성된다. 에피토프는 단백질 마이크로어레이, ELISPOT 또는 ELISA 기술을 사용하여, 또는 높은-처리량 돌연변이유발을 수반하여 맵핑될 수 있다.

ALK7-결합 단백질의 제조

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7의 세포외 도메인에 결합한다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체이다.

ALK7-결합 단백질은 공지된 기술을 사용하여 쉽게 제조될 수 있다. 단일클론 항-ALK7 항체는 하이브리도마 방법, 예컨대 문헌 (Kohler and Milstein, Nature 256:495-497 (1975))에 의해 기술된 것들을 포함하여, 당업계에 공지된 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 하이브리도마 방법을 사용하여, 마우스, 햄스터, 또는 다른 적절한 숙주 동물은 면역화 항원에 특이적으로 결합할 항체의 림프구에 의한 생산을 이끌어내기 위해 상기 기재된 바와 같이 면역화된다. 림프구는 또한, 시험관내에서 면역화될 수 있다. 면역화 이후에, 림프구는 단리되고, 적합한 골수종 세포주와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성하고, 이들은 이후, 융합되지 않은 림프구 및 골수종 세포로부터 선별될 수 있다. 이어서, 면역침전, 면역블롯팅, 또는 시험관내 결합 검정 (예를 들어, 방사면역검정 (RIA); 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA))에 의해 결정될 때 ALK7, 예컨대 hALK7에 대하여 특이적으로 지향된 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마는 표준 방법 (참조: 예를 들어, Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, 1986)을 사용하여 시험관내 배양액으로서 또는 동물에서 생체내 복수 종양으로서 증식될 수 있다. 이어서, 단일클론 항체는 상기 다중클론 항체에 대해 기재된 바와 같이 배양 배지 또는 복수액으로부터 정제될 수 있다.

제공된 단일클론 항체는 또한, 미국 특허 번호 제4,816,567호에 설명된 바와 같은 재조합 DNA 방법을 사용하여 만들어질 수 있는데, 여기서 단일클론 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 예컨대 이러한 항체의 중쇄와 경쇄를 인코딩하는 유전자를 특이적으로 증폭하는 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 RT-PCR에 의해 성숙 B-세포 또는 하이브리도마 세포로부터 단리되고, 그들의 서열은 공지된 절차를 사용하여 결정된다. 이어서, 중쇄와 경쇄를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드는 적합한 발현 벡터 내로 클로닝되고, 이들은 숙주 세포, 예컨대 대장균 (E. coli) 세포, 유인원 COS 세포, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, Per.C6 세포, 또는 만약 그렇지 않으면, 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포 (예를 들어, NS0 세포) 내로 형질감염될 때, 단일클론 항체가 숙주 세포에 의해 생성된다. 재조합 항-ALK7 단일클론 항체는 또한, 공지된 기술을 사용하여, 원하는 종의 CDR을 발현하는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 쉽게 단리될 수 있다 (참조: 예를 들어, McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990); Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991); 및 Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)).

항-ALK7 항체는 임의로, ALK7 항원에 대한 높은 친화성 및 다른 우호적인 생물학적 성질을 나타내도록 인간화되고, 표면치환되고 (resurface), 가공될 수 있다. 예를 들어, 인간화 (또는 인간) 항-ALK7 항체는 일반적으로 가용한 3차원 면역글로불린 모델화 및 원하는 항체 특징, 예컨대 ALK7에 대한 증가된 친화성을 제공하는 프레임워크 (FW) 잔기, 컨센서스 서열 및 생식계열 서열을 선별하기 위한 공지된 절차를 사용하여 쉽게 설계되고 제조될 수 있다.

친화성 성숙 전략 및 사슬 뒤섞음 전략은 당업계에 공지되고, 높은 친화성 항-ALK7 항체뿐만 아니라 본원에 개시된 ALK7-결합 단백질의 유도체 및 변이체를 생성하는데 사용될 수 있다 (참조: 예를 들어, Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992), 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). 높은 친화성 항-ALK7 항체뿐만 아니라 본원에 개시된 ALK7-결합 단백질의 유도체 및 변이체를 생성하기 위한 추가 전략은 전체 가변 도메인 내에서 돌연변이를 생성하는 하나 이상의 선별된 VH 및/또는 VL 유전자의 무작위 돌연변이유발을 사용하여, 본 발명의 CDR-유래된 서열을 보유하는 신규한 VH 또는 VL 영역을 생성하는 것이다. 오류 가능성 PCR을 사용하는 이런 기술은 문헌 (Gram et al. (PNAS USA 89:3576-3580 (1992)))에 의해 기술된다. 일부 구현예에서, 1개 또는 2개의 아미노산 치환이 VH CDR 및/또는 VL CDR 세트 내에서 만들어진다. 추가 전략은 본원에 개시된 항-ALK7 항체를 인코딩하는 VH 또는 VL 유전자의 CDR 영역에 직접적인 돌연변이유발을 사용하였다. 이러한 기술의 예는 문헌 (Barbas et al. (PNAS USA 91:3809-3813 (1994)) 및 Schier et al. (J. Mol. Biol. 263:551-567 (1996)))에 의해 개시된다.

본 발명의 항-ALK7 항체의 인간화, 표면치환 또는 가공은 문헌 (Jones et al., Nature 321:522 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988)), Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901 (1987), Carter et al., PNAS USA 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993), 미국 특허 제5,639,641호, 제5,723,323호; 제5,976,862호; 제5,824,514호; 제5,817,483호; 제5,814,476호; 제5,763,192호; 제5,723,323호; 제5,766,886호; 제5,714,352호; 제6,204,023호; 제6,180,370호; 제5,693,762호; 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,225,539호; 제4,816,567호, 제7,557,189호; 제7,538,195; 및 제7,342,110호; 국제 출원 제PCT/US98/16280호; 제PCT/US96/18978; 제PCT/US91/09630; 제PCT/US91/05939; 제PCT/US94/01234; 제PCT/GB89/01334호; 제PCT/GB91/01134호; 제PCT/GB92/01755호; 국제 출원 공개 번호 제WO90/14443호; 제WO90/14424호; 제WO90/14430호; 및 EP 특허 공개 제EP 229246호)에서 기술된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있으며; 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 마찬가지로, 공지된 검정이 바람직한 특성을 나타내는 항-ALK7-항체를 쉽게 선별하는데 가용하다 (예를 들어, ALK7에 대한 결합 친화성을 결정하기 위한 검정; 교차-차단 검정, 예컨대 본원에 기재된 BIACORE®-기반 인간 ALK7-결합 단백질 경쟁 결합 검정).

비인간 또는 인간 항체를 가공하거나, 인간화하거나 또는 표면치환하기 위한 방법 또한 사용될 수 있고 당업계에 공지되어 있다. 인간화된, 표면치환된 또는 유사하게 가공된 항체는 비인간인 공급원, 예를 들어, 그러나 이에 제한 없이, 마우스, 래트, 토끼, 비인간 영장류 또는 다른 포유동물로부터 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 이들 비인간 아미노산 잔기는 "이입" 잔기로서 종종 지칭되는 잔기에 의해 대체되는데, 이들은 전형적으로, 공지된 인간 서열의 "이입" 가변, 불변 또는 다른 도메인으로부터 획득된다. 이러한 이입된 서열은 당업계에 공지된 바와 같이, 면역원성을 감소시키거나, 또는 결합, 친화성, 온-레이트, 오프-레이트, 결합능, 특이성, 반감기, 또는 임의의 다른 적합한 특징을 감소시키거나, 증강하거나 또는 변형하는데 사용될 수 있다. 바람직하게는, 비인간 또는 인간 CDR 서열의 일부 또는 전부가 유지되고, 반면 가변과 불변 영역의 비인간 서열은 인간 또는 다른 아미노산으로 대체될 수 있다.

ALK7-결합 단백질, 예컨대 전장 항-ALK7 항체를 인코딩하는 핵산(들)은 대안적 항체를 생성하기 위해 재조합 DNA 기술을 사용한 다수의 상이한 방식으로 추가로 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 마우스 단일클론 항체의 경쇄와 중쇄의 불변 도메인을 인코딩하는 핵산(들)은 (a) 예를 들어, 키메라 항체를 생성하기 위해 인간 항체의 이들 코딩 영역에 대해, 또는 (b) 융합 항체를 생성하기 위해 비면역글로불린 인코딩 핵산(들)에 대해 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, 불변 영역은 단일클론 항체의 원하는 항체 단편을 생성하기 위해 절두되거나 또는 제거된다. 가변 영역 코딩 서열의 부위-지향된 또는 고밀도 돌연변이유발이 단일클론 항체의 특이성, 친화성 등을 최적화하는데 사용될 수 있다.

항-ALK7 인간 항체는 당업계에 공지된 임의의 다양한 기술을 사용하여 직접적으로 제조될 수 있다. (참조: 예를 들어, Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boemer et al., J. Immunol. 147(1):86-95 (1991); 및 미국 특허 제5,750,373호). 유사하게, 인간 항-ALK7 항체는 시험관내에서 면역화된 영속화된 인간 B 림프구로부터 쉽게 획득되거나, ALK7을 향해 지향된 항체를 생산하는 면역화된 개체로부터 단리될 수 있다.

인간 항-ALK7 항체는 또한, 파지 라이브러리로부터 선택될 수 있는데, 상기 파지 라이브러리는, 예를 들어, 문헌 (Vaughan et al., Nat. Biotech. 14:309-314 (1996), Sheets et al., PNAS 95:6157-6162 (1998), Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227:381 (1991), 및 Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581 (1991))에 기재된 바와 같이 인간 항체를 발현한다. 항체 파지 라이브러리의 생성과 스크리닝를 위한 기술 또한 문헌 (미국 특허 제5,969,108호; 제6,172,197호; 제5,885,793호; 제6,521,404호; 제6,544,731호; 제6,555,313호; 제6,582,915호; 제6,593,081호; 제6,300,064호; 제6,653,068호; 제6,706,484호; 및 제7,264,963호; 및 Rothe et al., J. Mol. Biol. 376(4):1182-1200 (2008))에 기술되어 있다 (이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).

인간 항-ALK7 항체는 또한, 내인성 면역글로불린 생산의 부재에서 인간 항체를 면역화 시에 생산할 수 있는 인간 면역글로불린 좌위를 함유하는 유전자도입 마우스에서 만들어질 수 있다. 이러한 접근법은, 예를 들어, 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 및 제5,661,016호에 기술되어 있다.

인간 항-ALK7 항체는 또한, 예를 들어, 제WO012/009568호; 제WO09/036379호; 제WO10/105256호; 제WO03/074679호 및 미국 출원 공개 제US2002/0177170호에 개시된 바와 같이, 효모-기반 항체 표현 라이브러리로부터 선별되고/되거나 단리될 수 있는데, 상기 특허 각각의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 이러한 라이브러리는 인간 면역전 레퍼토리에 의해 제공된 다양성을 반영하기 위해 인실리코 설계된다.

대안적으로, 항-ALK7 항체는 효모-디스플레이 항체 라이브러리로부터 선택될 수 있다 (참조: 예를 들어: Blaise et al., Gene 342(2):211-218 (2004); Boder et al., Nat Biotechnol. 15(6):553-557 (1997); Kuroda et al., Biotechnol. Lett. 33(1):1-9 (2011). Review; Lauer et al., J. Pharm. Sci. 101(1):102-15 (2012); Orcutt K.D. and Wittrup K.D. Antibody Engineering, yeast display and selection (2010), 207-233; Rakestraw et al., Protein Eng. Des. Sel. 24(6):525-30 (2011); 및 미국 특허 제6,423,538호; 제6,696,251호; 및 제6,699,658호).

항원-결합 항체 단편의 생산을 위한 다양한 기술이 알려져 있다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질분해 소화를 통해 유래된다 (참조: 예를 들어, Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Meth. 24:107-117 (1993); 및 Brennan et al., Science 229:81 (1985)). 특정 구현예에서, ALK7-결합 항체 단편은 재조합적으로 생산된다. Fab, Fv 및 scFv 항체 단편은 모두 대장균 (E. coli) 또는 다른 숙주 세포에서 발현되고 이들로부터 분비될 수 있고, 따라서 이들 단편의 대량 생산을 허용한다. 이러한 ALK7-결합 항체 단편은 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 부가적으로 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 항체 단편은 미국 특허 번호 제5,641,870호에서 기술된 바와 같은 선형 항체이다. 항원-결합 항체 단편의 생산을 위한 다른 기술은 당업계에 공지된다.

공지된 기술은 ALK7에 결합하는 단일-사슬 항체의 생산을 위해 쉽게 개작될 수 있다 (참조: 예를 들어, 미국 특허 제4,946,778호). 또한, 공지된 방법은 ALK7에 대한 원하는 특이성을 갖는 단일클론 Fab 단편의 신속하고 효과적인 확인을 허용하기 위해 Fab 발현 라이브러리의 작제를 위해 정해진 대로 개작될 수 있다 (참조: 예를 들어, Huse et al., Science 246:1275-1281 (1989)). ALK7-결합 항체 단편은 (a) 항체의 펩신 소화에 의해 생산된 F(ab')2 단편; (b) F(ab')2 단편의 이황화 다리를 환원시킴으로써 산출된 Fab 단편, (c) 파파인 및 환원제로 항-ALK7 항체의 처리에 의해 생성된 Fab 단편, 및 (d) Fv 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 기술에 의해 생산될 수 있다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)은 혈청 반감기를 증가시키기 위해 변형될 수 있다. 이것은, 예를 들어, ALK7-결합 단백질 내에 적절한 영역의 돌연변이에 의해 ALK7-결합 단백질 내로 구제 수용체 결합 에피토프의 통합에 의해, 또는 어느 한쪽 단부에서 또는 중간에서 ALK7-결합 단백질에 이후 융합되는 (예를 들어, DNA 또는 펩티드 합성에 의해) 펩티드 태그 내로 구제 수용체 에피토프를 통합함으로써 달성될 수 있다. ALK7-결합 단백질의 혈청 반감기를 증가시키는 다른 방법, 예를 들어, 이종성 분자, 예컨대 PEG에 접합은 당업계에 공지되어 있다.

헤테로접합체 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 항-ALK7 항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체) 또한 본 발명의 범위 내에 있다. 헤테로접합체 ALK7-결합 단백질은 2개의 공유적으로 결합된 단백질로 구성된다. 헤테로접합체 ALK7-결합 단백질은 가교결합제를 수반하는 것들을 포함하여, 합성 단백질 화학에서 공지된 방법을 사용하여 시험관내에서 제조될 수 있는 것으로 예기된다. 예를 들어, 면역독소는 이황화물 교환 반응을 사용하여 또는 티오에테르 결합을 형성함으로써 작제될 수 있다. 이러한 목적으로 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토부티르이미데이트를 포함한다.

ALK7-결합 단백질은 ALK7과 상기 항체의 연관을 제공하는 임의의 유형의 가변 영역을 포함할 수 있다. 이러한 가변 영역은 체액 반응이 증가하고 ALK7 항원에 대한 면역글로불린이 생성되도록 유도될 수 있는 임의의 포유동물을 포함하거나 또는 이로부터 유래될 수 있다. 항-ALK7 항체의 가변 영역은, 예를 들어, 인간, 뮤린, 비인간 영장류 (예를 들어, 시노몰구스 원숭이, 마카크 등) 또는 루핀 기원일 수 있다. 일부 구현예에서, 변형된 항-ALK7 항체의 가변 영역과 불변 영역 둘 모두 인간이다. 다른 구현예에서, 양립성 항체의 가변 영역 (일반적으로, 비인간 공급원으로부터 유래됨)은 결합 성질을 향상시키거나 또는 분자의 면역원성을 감소시키기 위해 가공되거나 또는 특이적으로 맞춤될 수 있다. 이점에 관하여, 본 발명에 따라서 유용한 가변 영역은 인간화되거나, 또는 만약 그렇지 않으면, 친화성 성숙, 돌연변이유발 절차, 사슬 뒤섞음 전략 및/또는 본원에 기재된 또는 만약 그렇지 않으면, 당업계에 공지된 다른 방법을 사용하여 이입된 아미노산 서열의 포함을 통해 변경될 수 있다.

특정 구현예에서, 항-ALK7 항체의 중쇄와 경쇄 둘 모두에서 가변 도메인은 하나 이상의 CDR의 적어도 일부 대체에 의해 및/또는 부분적인 프레임워크 영역 대체 및 서열 변화에 의해 변경된다. 비록 CDR이 프레임워크 영역이 유래되는 항체와 동일한 부류 또는 심지어 하위부류의 항체로부터 유래될 수 있긴 하지만, 이들 CDR은 상이한 부류의 항체로부터 및 특정 구현예에서, 상이한 종으로부터 항체로부터 유래될 것으로 구상된다. 한 가변 도메인의 항원-결합 능력을 다른 가변 도메인에 전달하기 위해 모든 CDR을 공여자 가변 영역으로부터 완전한 CDR로 대체하는 것이 반드시 필요한 것은 아니다. 오히려, 항원-결합 부위의 활성을 유지하는데 필요한 잔기를 전달하는 것만이 필요하다. 감소된 면역원성을 갖는 기능적 항체를 정해진 대로 획득하는 것은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,585,089호, 제5,693,761호 및 제5,693,762호를 참조한다.

가변 영역에 변경에도 불구하고, 당업자는 본 발명의 변형된 항-ALK7 항체가 고유 또는 변경되지 않은 불변 영역을 포함하는 거의 동일한 면역원성의 항체와 비교할 때 원하는 생화학적 특징, 예컨대 감소된 ADCC 또는 증가된 혈청 반감기를 제공하기 위해, 불변 영역 도메인 중 하나 이상의 적어도 일부가 결실되거나 또는 만약 그렇지 않으면 변경된 항체를 포함할 것이라는 것을 인지할 것이다. 일부 구현예에서, 변형된 항-ALK7 항체의 불변 영역은 인간 불변 영역을 포함한다. 불변 영역에 변형은 하나 이상의 도메인에서 하나 이상의 아미노산의 부가, 결실 또는 치환을 포함할 수 있다. 본원에 개시된 변형된 항-ALK7 항체는 3개의 중쇄 불변 도메인 (CH1, CH2, 또는 CH3) 중 하나 이상에 및/또는 경쇄 불변 도메인 (CL)에 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 도메인이 부분적으로 또는 완전하게 결실되는 불변 영역을 포함하는 변형된 항-ALK7 항체가 예기된다. 일부 구현예에서, 변형된 항-ALK7 항체는 전체 CH2 도메인이 제거된 도메인 결실된 작제물 또는 변이체를 포함한다 (ΔCH2 작제물). 일부 구현예에서, 제외된 불변 영역 도메인은 부재하는 불변 영역에 의해 전형적으로 부여되는 분자 유연성 중에서 일부를 제공하는 짧은 아미노산 스페이서 (예를 들어, 10개 잔기)에 의해 대체될 수 있다.

불변 영역은 여러 이펙터 기능을 매개하는 것으로 일반적으로 이해된다. 예를 들어, 항체에 보체의 C1 성분의 결합은 보체계를 활성화시킨다. 보체의 활성화는 세포 병원체의 옵소닌화 및 용해에서 중요하다. 보체의 활성화는 또한, 염증 반응을 자극하고, 또한, 자가면역 과민성에 관련될 수 있다. 게다가, 항체는 Fc 영역을 통해 세포에 결합하는데, 항체 Fc 영역 상에서 Fc 수용체 부위가 세포 상에서 Fc 수용체 (FcR)에 결합한다. IgG (감마 수용체), IgE (에타 수용체), IgA (알파 수용체) 및 IgM (뮤 수용체)을 포함하여, 상이한 부류의 항체에 특이적인 다수의 Fc 수용체가 있다. 세포 표면 상에서 Fc 수용체에 항체의 결합은 항체-코팅된 입자의 식균작용 및 파괴, 면역 복합체의 소실, 킬러 세포에 의한 항체-코팅된 표적 세포의 용해 (항체-의존성 세포-매개된 세포독성 또는 ADCC로 불린다), 염증성 매개인자의 방출, 태반 전달, 및 면역글로불린 생산의 제어를 포함하는 다수의 중요하고 다양한 생물학적 반응을 촉발한다.

특정 구현예에서, 항-ALK7 항체는 변경된 이펙터 기능을 갖고, 상기 기능은 차례로, 투여된 항-ALK7 항체의 생물학적 프로파일에 영향을 준다. 예를 들어, 불변 영역 도메인의 결실 또는 비활성화 (점 돌연변이 또는 다른 수단을 통해)는 순환하는 변형된 항체의 Fc 수용체 결합을 감소시킬 수 있다. 다른 경우에, 불변 영역 변형은 보체 결합을 누그러뜨리고, 따라서, 접합된 세포독소의 혈청 반감기 및 비특이적 연관을 감소시킬 수 있다. 불변 영역의 또 다른 변형은 증가된 항원 특이성 또는 항체 유연성에 기인한 증강된 국부화를 허용하는 이황화 연결 또는 올리고당류 모이어티를 제거하는데 사용될 수 있다. 유사하게, 본 발명에 따른 불변 영역에 변형은 당업자에게 공지된 생화학적 또는 분자 가공 기술을 사용하여 쉽게 만들어질 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질은 하나 이상의 이펙터 기능을 갖지 않는 ALK7 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항-ALK7 항체는 항체-의존성 세포 세포독성 (ADCC) 활성이 없고/없거나 보체-의존성 세포독성 (CDC) 활성이 없다. 특정 구현예에서, 항-ALK7 항체는 Fc 수용체 및/또는 보체 인자에 결합하지 않는다. 특정 구현예에서, 항-ALK7 항체는 이펙터 기능이 없다. ADCC 및/또는 CDC 활성 및 Fc 수용체 및/또는 보체 인자 결합을 감소시키거나 제거하는 Fc 서열 가공 변형의 예는 본원에 기재되거나 또는 만약 그렇지 않으면, 당업계에 공지되고, 이것을 시험하기 위한 검정 및 절차 또한 그러하다.

일부 구현예에서, 항-ALK7 항체는 CH3 도메인을 개별 변형된 항체의 힌지 영역에 직접적으로 융합하도록 가공된다. 다른 작제물에서, 힌지 영역 및 변형된 CH2 및/또는 CH3 도메인 사이에 펩티드 스페이서가 삽입된다. 예를 들어, CH2 도메인이 결실되고, 나머지 CH3 도메인 (변형된 또는 변형되지 않은)이 5-20개 아미노산 스페이서로 힌지 영역에 연결되는 양립성 작제물이 발현될 수 있다. 이런 스페이서는, 예를 들어, 불변 도메인의 조절 요소가 자유롭고 접근가능한 상태로 남아있거나, 힌지 영역이 유연한 상태로 남아있도록 보장하기 위해 부가될 수 있다. 아미노산 스페이서는, 일부 경우에, 면역원성인 것으로 입증되고 작제물에 대한 원치 않는 면역 반응을 이끌어낼 수 있다. 따라서, 특정 구현예에서, 작제물에 부가된 임의의 스페이서는 변형된 항-ALK7 항체의 원하는 생화학적 품질을 유지하기 위해, 상대적으로 비면역원성이거나, 또는 심지어 완전히 제외될 수 있다.

추가 구현예에서, 항-ALK7 항체는 불변 영역 내에 소수의 또는 심지어 단일 아미노산의 부분적인 결실 또는 치환에 의해 변형된다. 예를 들어, CH2 도메인의 선별된 구역에서 단일 아미노산의 돌연변이는 Fc 결합을 실질적으로 감소시키는데 충분할 수 있다. 유사하게, 이펙터 기능 (예를 들어, 보체 C1Q 결합)을 제어하는 하나 이상의 불변 영역 도메인이 완전하게 또는 부분적으로 결실될 수 있다. 불변 영역의 이런 부분적인 결실은 상응하는 불변 영역 도메인과 연관된 다른 바람직한 기능을 무손상 상태로 남겨두면서, 항-ALK7 항체의 선별된 특징 (예를 들어, 혈청 반감기)을 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 항-ALK7 항체의 불변 영역은 결과의 작제물의 프로파일을 증강하는 하나 이상의 아미노산의 돌연변이 또는 치환을 통해 변형된다. 이점에 관하여, 변형된 항-ALK7 항체의 형상 및 면역원성 프로파일을 실질적으로 유지하면서, 보존된 결합 부위 (예를 들어, Fc 결합)에 의해 제공되는 활성을 방해하는 것이 가능하다. 본 발명은 또한, 바람직한 특징을 증강시키기 위해, 예컨대 이펙터 기능을 감소시키거나 또는 증가시키거나, 하나 이상의 세포독소, 표지화 또는 탄수화물 모이어티에 대한 부착 부위를 제공하기 위해 불변 영역에 하나 이상의 아미노산의 부가를 함유하는 항-ALK7 항체를 제공한다. 이러한 구현예에서, 선별된 불변 영역 도메인으로부터 유래된 특정한 서열을 삽입하거나 또는 복제하는 것이 바람직할 수 있다.

본 발명은 또한, 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 뮤린, 키메라, 인간화 및 인간 ALK7-결합 단백질)에 대한 변이체인 ALK7-결합 단백질을 제공한다. 특정 구현예에서, 변이체 ALK7-결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

제공된 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체는, 예를 들어, ALK7-결합 단백질의 용해도, 생물학적 반감기, 생체이용률을 향상시키기 위해, 그리고 만약 그렇지 않으면, 안정성, 제형 및/또는 치료적 성질을 향상시키기 위해 당업계에 공지된 추가 화학적 모이어티를 함유하도록 유도체화될 수 있다. 이러한 모이어티에 대한 비-전면적인 개요는 예를 들어, 문헌 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (2000))에서 발견될 수 있다.

ALK7-결합 단백질을 인코딩하는 핵산 및 이들의 발현

ALK7-결합 단백질을 인코딩하는 핵산 분자 및 핵산 분자의 조합 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 항-ALK7 항체 및 ALK7-결합 항체 단편을 인코딩한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 본원에 제공된 전장 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편의 변이체 또는 유도체를 인코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

본원에 개시된 핵산 분자는 RNA의 형태이거나 또는 DNA의 형태일 수 있다. DNA는 cDNA, 유전체 DNA 및 합성 DNA를 포함하고; 이중 가닥 또는 단일 가닥일 수 있고, 단일 가닥이면, 코딩 가닥/또는 비코딩 (안티센스) 가닥일 수 있다. 특정 구현예에서, 핵산 분자는 단리된다. 추가 구현예에서, 핵산 분자는 실질적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 핵산은 cDNA이거나 또는 cDNA로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 핵산은 재조합적으로 생산된다.

일부 구현예에서, 핵산 분자는 숙주 세포에서 또는 시험관내에서 코딩 서열의 발현을 제어하는 제어 서열에 작동 가능하게 연결된 ALK7-결합 단백질 코딩 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 코딩 서열은 cDNA이다. 본 발명은 또한, 숙주 세포에서 또는 시험관내에서 코딩 서열의 발현을 제어하는 제어 서열에 작동 가능하게 연결된 ALK7-결합 단백질 코딩 서열을 포함하는 핵산 분자를 함유하는 벡터에 관한 것이다.

일부 구현예에서, 핵산 분자는 동일한 판독 프레임에서 이종성 폴리뉴클레오티드 서열에 융합되는 성숙 ALK7-결합 단백질에 대한 코딩 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 이종성 폴리뉴클레오티드 서열은 ALK7-결합 단백질 인코딩 핵산 분자(들)로 형질전환된 숙주 세포로부터 발현된 단백질의 분비를 용이하게 하는 리더 펩티드 서열을 인코딩한다. 리더 서열을 함유하는 단백질은 전구단백질로서 지칭되고, 상기 리더 서열이 숙주 세포에 의해 개열되어 ALK7-결합 단백질의 성숙 형태가 형성될 수 있다. 이러한 리더 펩티드 서열 및 숙주 세포에서 재조합 단백질의 분비를 용이하게 하는 이들의 용도는 당해 분야에서 전반적으로 공지되어 있다. 추가 구현예에서, 이종성 폴리뉴클레오티드 서열은, 예를 들어, 재조합적으로 발현된 ALK7-결합 단백질의 정제를 용이하게 하고, 이의 단백질 안정성 및/또는 치료적 또는 진단적 성질을 추가하거나 또는 향상시키는데 기능할 수 있는 추가 5' 아미노산 잔기를 인코딩한다.

일부 구현예에서, 본 발명은 혼성화 프로브, PCR 프라이머 또는 서열결정 프라이머로서 사용에 충분한, 단리된 핵산, 예컨대 ALK7-결합 단백질 인코딩 cDNA 단편을 제공한다.

일부 구현예에서, 핵산 분자는 다음으로부터 선택되는 적어도 하나의 특징을 갖는 ALK7-결합 단백질을 인코딩한다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 인코딩된 ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, 인코딩된 ALK7-결합 단백질은 ALK7을 발현하는 지방 세포에서 지방분해를 증가시킨다. 일부 구현예에서, 인코딩된 ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, 인코딩된 ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, 인코딩된 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 ALK7-결합 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, 인코딩된 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 인코딩된 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 ALK7-결합 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 추가 구현예에서, 인코딩된 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 추가 구현예에서, 핵산 분자는 ALK7에 특이적으로 결합하고, VH 및 VL을 포함하는 ALK7-결합 단백질을 인코딩한다.

일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질을 인코딩하는 핵산 및 핵산의 세트를 함유하는 벡터 및 벡터의 세트를 제공한다. 이들 핵산, 핵산의 세트, 벡터, 및 벡터의 세트로 형질전환된 숙주 세포 또한 제공되고, ALK7-결합 단백질을 사용하는 방법 또한 제공된다.

일부 구현예에서, 본 발명은 상기 제공된 바와 같은 핵산 분자 또는 핵산 분자의 조합 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공하고, 상기 숙주 세포는 일부 경우에, ALK7에 특이적으로 결합하는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편)을 발현할 수 있다. 추가 구현예에서, 본 발명은 상기 제공된 바와 같은 핵산 분자 또는 핵산 분자의 조합 또는 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공하는데, 상기 숙주 세포는 일부 경우에, ALK7에 특이적으로 결합하는 ALK7-결합 단백질을 발현할 수 있다. 이런 숙주 세포는 본원에 제공된 바와 같은 ALK7-결합 단백질을 만드는 방법에서 활용될 수 있는데, 상기 방법은 (a) 숙주 세포를 항온처리하는 단계 및 (b) 숙주 세포로부터 발현된 ALK7-결합 단백질을 단리하는 단계를 포함한다.

본 발명은 또한, ALK7-결합 단백질을 발현할 수 있는 숙주 세포 (예를 들어, 하이브리도마 또는 형질전환된 포유동물 숙주 세포)를 적합한 조건하에 항온처리하는 것을 포함하여, ALK7-결합 단백질을 만들기 위한 방법을 제공하고, 임의로, 숙주 세포로부터 분비된 ALK7-결합 단백질을 단리하기 위한 방법을 제공한다. 그리고, 본 발명은 개시된 방법을 사용하여 단리된 ALK7-결합 단백질을 부가적으로 제공한다.

특정 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어, 인코딩된 폴리펩티드의 정제를 허용하는 마커 서열에 동일한 판독 프레임에서 융합된 성숙 ALK7-결합 단백질(들) (예를 들어, ALK7-항체, 예컨대 전장 항체 및 ALK7-결합 항체 단편)에 대한 코딩 서열(들)을 포함한다. 예를 들어, 마커 서열은 세균 숙주의 경우에 상기 마커에 융합된 성숙 폴리펩티드의 정제를 제공하기 위한 pQE-9 벡터에 의해 공급된 헥사-히스티딘 태그 (서열번호 336)일 수 있거나, 또는 마커 서열은 포유동물 숙주 (예를 들어, COS-7 세포)가 사용될 때 인플루엔자 적혈구응집소 단백질로부터 유래된 적혈구응집소 (HA) 태그일 수 있다.

ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체 및 ALK7-결합 항체 단편을 인코딩하는 핵산 변이체 또한 제공된다. 핵산 변이체는 코딩 영역, 비코딩 영역, 또는 둘 모두에서 변경을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산 변이체는 침묵 치환, 부가 또는 결실을 산출하지만, 인코딩된 폴리펩티드의 성질 또는 활성을 변경하지 않는 변경을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 변이체는 유전자 코드의 축중성에 기인한 침묵 치환에 의해 생산된다. 핵산 변이체는 다양한 이유로, 예를 들어, 특정 숙주에 대한 코돈 발현을 최적화하기 위해 (인간 mRNA에서 코돈을 세균 숙주, 예컨대 대장균 (E. coli)에 의해 선호되는 것들로 변화시키기 위해) 생산될 수 있다. 본원에 기재된 핵산을 포함하는 벡터 및 세포 또한 제공된다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 항체 및 ALK7-결합 항체 단편)을 인코딩하는 핵산 서열은 올리고뉴클레오티드 합성장치를 사용한 화학적 합성에 의해 작제된다. 이러한 올리고뉴클레오티드는 원하는 폴리펩티드의 아미노산 서열에 근거하여 설계되고 숙주 세포 선호에 근거하여 코돈 최적화될 수 있다. 표준 방법이 ALK7-결합 단백질을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 합성하는데 정해진 대로 적용될 수 있다.

일단 조립되면 (합성, 부위-지향된 돌연변이유발 또는 또 다른 방법에 의해), ALK7-결합 단백질을 인코딩하는 핵산 서열은 원하는 숙주에서 ALK7-결합 단백질의 발현에 적절한 제어 서열에 정해진 대로 작동 가능하게 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질을 인코딩하는 핵산 서열(들)은 하나 이상의 발현 벡터 내로 삽입되고, 원하는 숙주에서 상기 단백질의 발현에 적절한 제어 서열(들)에 작동 가능하게 연결된다. 숙주에서 형질감염된 코딩 서열의 높은 발현 수준을 획득하기 위해, 상기 코딩 서열은 선택된 발현 숙주에서 기능적인 전사와 번역 발현 제어 서열에 작동 가능하게 연결되거나 또는 이들 서열과 연관될 수 있다.

특정 구현예에서, 재조합 발현 벡터가 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체 또는 ALK7-결합 항체 단편을 인코딩하는 DNA를 증폭하고 발현하는데 사용된다. 재조합 발현 벡터는 포유동물, 미생물, 바이러스 또는 곤충 유전자로부터 유래된 적합한 전사 또는 번역 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 ALK7-결합 단백질의 폴리펩티드 사슬을 인코딩하는 합성 또는 cDNA-유래된 DNA 단편을 갖는 복제가능한 DNA 작제물이다. 전사 단위는 일반적으로, (1) 유전자 발현에서 조절 역할을 갖는 유전자 요소 또는 요소들, 예를 들어, 전사 프로모터 또는 인핸서, (2) mRNA로 전사되고 단백질로 번역되는 구조적 또는 코딩 서열, 및 (3) 아래에 상세하게 설명된 바와 같이, 적절한 전사와 번역 개시와 종결 서열의 어셈블리를 포함한다. 이런 조절 요소는 전사를 제어하는 오퍼레이터 서열을 포함할 수 있다. 숙주에서 복제하는 능력은 일반적으로 복제 기점에 의해 부여되고, 형질전환체의 인식을 용이하게 하는 선별 유전자가 부가적으로 통합될 수 있다. DNA 영역은 그들이 서로에 기능적으로 관련될 때 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 신호 펩티드 (분비성 리더)에 대한 DNA가 폴리펩티드의 분비에 참여하는 전구체로서 발현되면, 이것은 폴리펩티드에 대한 DNA에 작동 가능하게 연결된다; 프로모터가 서열의 전사를 제어하면, 이것은 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다; 또는 리보솜 결합 부위가 번역을 허용하기 위해 배치되면, 이것은 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다. 효모 발현 시스템에서 사용에 의도된 구조적 원소는 숙주 세포에 의한 번역된 단백질의 세포외 분비를 실시 가능하게 하는 리더 서열을 포함한다. 대안적으로, 재조합 단백질이 리더 또는 운반 서열 없이 발현되는 경우에, 상기 단백질은 N-말단 메티오닌 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 잔기는 임의로, 최종 단백질을 제공하기 위해, 발현된 재조합 단백질로부터 이후에 개열될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명은 상기에서 또는 본원의 다른 곳에서 설명된 바와 같은 핵산 또는 벡터를 포함하고, 임의로 하나 이상의 담체, 희석제, 부형제 또는 다른 첨가제를 추가로 포함하는 조성물, 예를 들어, 약제학적 조성물을 제공한다.

본원에 개시된 핵산 분자 또는 cDNA 분자 및/또는 벡터로 형질전환된 숙주 세포 또한 제공된다. 본 발명은 또한, 제어 서열에 작동 가능하게 연결되고, 임의로 벡터 내로 삽입된 개시된 핵산 분자 또는 분자들로 형질전환된 숙주 세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포이다. 추가 구현예에서, 포유동물 숙주 세포는 NS0 뮤린 골수종 세포, PER.C6® 인간 세포, 또는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포이다. 다른 구현예에서, 숙주 세포는 하이브리도마이다.

추가 구현예에서, 본 발명은 ALK7-결합 단백질을 제조하는데 적합한 조건하에 본원에 개시된 형질전환된 숙주 세포 또는 하이브리도마를 항온처리하는 것을 포함하여, 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)을 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명은 임의로, 숙주 세포로부터 분비된 ALK7-결합 단백질을 단리하는 것을 제공한다. 본 발명은 또한, 임의로 이러한 방법을 사용하여 제조된 ALK7-결합 단백질, 및 ALK7-결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

발현 제어 서열과 발현 벡터의 선택은 숙주의 선택에 의존할 것이다. 매우 다양한 발현 숙주/벡터 조합이 사용될 수 있다. 진핵 숙주에 유용한 발현 벡터는, 예를 들어, SV40, 소 유두종 바이러스, 아데노바이러스 및 시토메갈로바이러스로부터 발현 제어 서열을 포함하는 벡터를 포함한다. 세균 숙주에 유용한 발현 벡터는 pCR1, pBR322, pMB9 및 이들의 유도체를 포함하는 공지된 세균 플라스미드, 예컨대 대장균 (E. coli)으로부터 플라스미드, 및 또한, 더욱 넓은 숙주 범위 플라스미드, 예컨대 M13과 실모양 단일 가닥 DNA 파지를 포함한다.

ALK7-결합 단백질의 발현에 적합한 숙주 세포는 적절한 프로모터의 제어하에 원핵생물, 효모, 곤충 또는 고등 진핵 세포를 포함한다. 원핵생물은 그람 음성 또는 그람 양성 생물체, 예를 들어, 대장균 (E. coli) 또는 바실루스를 포함한다. 고등 진핵 세포는 아래에 기술된 바와 같이 포유동물 기원의 확립 세포주를 포함한다. 무세포 번역 시스템 또한 사용될 수 있었다. 항체 생산을 포함하여, 단백질 생산의 방법에 관한 추가 정보는, 예를 들어, 미국 특허 공개 제2008/0187954호, 미국 특허 제6,413,746호 및 제6,660,501호, 및 국제 출원 공개 제WO 04/009823호에서 발견될 수 있고, 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

다양한 포유동물 또는 곤충 세포 배양 시스템이 또한, 재조합 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)을 발현하는데 유리하게 사용될 수 있다. 포유동물 세포에서 재조합 ALK7-결합 단백질의 발현이 수행될 수 있는데, 그 이유는 이러한 단백질이 일반적으로 정확하게 폴딩되고, 적절하게 변형되고, 완전하게 기능적이기 때문이다. 적합한 포유동물 숙주 세포주의 예는 HEK-293 및 HEK-293T, Gluzman (Cell 23:175 (1981))에 의해 기술된 원숭이 신장 세포의 COS-7 라인, 그리고, 예를 들어, L 세포, C127, 3T3, 중국 햄스터 난소 (CHO), HeLa 및 BHK 세포주를 포함하는 다른 세포주를 포함한다. 포유동물 발현 벡터는 비전사된 요소, 예컨대 복제 기점, 발현되는 유전자에 연결된 적합한 프로모터와 인핸서, 및 다른 5' 또는 3' 측면에 접하는 비전사된 서열, 및 5' 또는 3' 비번역된 서열, 예컨대 필요한 리보솜 결합 부위, 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 공여자와 수용자 부위, 및 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 곤충 세포에서 이종성 단백질의 생산을 위한 배큘로바이러스 시스템은 문헌 (Luckow and Summers, BioTechnology 6:47 (1988))에 의해 리뷰된다.

형질전환된 숙주 또는 하이브리도마에 의해 생산된 ALK7-결합 단백질은 임의의 적절한 방법에 따라 정제될 수 있다. 이런 표준 방법은 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환, 친화성 및 사이징 컬럼 크로마토그래피), 원심분리, 차등 용해도, 또는 단백질 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술을 포함한다. 친화성 태그, 예컨대 헥사히스티딘 (서열번호 336), 말토오스 결합 도메인, 인플루엔자 코트 서열 및 글루타티온-S-트랜스퍼라제가 단백질에 부착되어 적절한 친화성 컬럼 위를 통과하여 쉬운 정제를 허용하도록 한다. ALK7-결합 단백질은 또한, 단백질분해, 핵 자기 공명 및 x-선 결정학과 같은 기술을 사용하여 물리적으로 특징 분석될 수 있다.

예를 들어, 재조합 ALK7-결합 단백질을 배양 배지 내로 분비하는 시스템으로부터 상층액은 먼저, 상업적으로 입수 가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어, Amicon 또는 Millipore Pellicon 한외여과 장치를 사용하여 농축될 수 있다. 농축 단계 이후에, 농축물은 적합한 정제 매트릭스에 적용될 수 있다. 대안적으로, 음이온 교환 수지, 예를 들어, 펜던트 디에틸아미노에틸 (DEAE) 기를 갖는 매트릭스 또는 기질이 사용될 수 있다. 매트릭스는 아크릴아미드, 아가로오스, 덱스트란, 셀룰로오스 또는 단백질 정제에서 일반적으로 사용되는 다른 유형일 수 있다. 대안적으로, 양이온 교환 단계가 사용될 수 있다. 적합한 양이온 교환체는 설포프로필 또는 카복시메틸 기를 포함하는 다양한 불용성 매트릭스를 포함한다. 최종적으로, 소수성 RP-HPLC 매체, 예를 들어, 펜던트 메틸 또는 다른 지방족 기를 갖는 실리카 겔을 사용한 하나 이상의 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC) 단계가 ALK7-결합 단백질을 추가로 정제하는데 사용될 수 있다. 다양한 조합에서 전술한 정제 단계의 일부 또는 전부가 균질한 재조합 ALK7-결합 단백질을 제공하는데 또한 정해진 대로 사용될 수 있다.

세균 배양에서 생산된 재조합 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)은, 예를 들어, 세포 펠렛으로부터 초기 추출, 그 후 하나 이상의 농축, 염석, 수성 이온 교환 또는 크기 배제 크로마토그래피 단계에 의해 단리될 수 있다. 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)가 최종 정제 단계를 위해 사용될 수 있다. 재조합 단백질의 발현에서 사용된 미생물 세포는 동결-해동 사이클링, 초음파처리, 기계적 교란, 또는 세포 용해제의 사용을 포함하는 임의의 편리한 방법에 의해 교란될 수 있다.

표적 결합 단백질, 예컨대 전장 항체 및 항원-결합 항체 단편을 정제하기 위한 당업계에 공지된 방법은, 예를 들어, 미국 출원 공개 제2008/0312425호, 제2008/0177048호 및 제2009/0187005호에서 기재된 것들을 또한 포함하는데, 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항체가 아니다. 단백질 표적에 높은 친화성으로 결합하는 비항체 폴리펩티드를 동정하고 생산하기 위한 다양한 방법이 공지되어 있다 (참조: 예를 들어, Skerra, Curr. Opin. Biotechnol. 18:295-304 (2007), Hosse et al., Protein Science 15:14-27 (2006), Gill et al., Curr. Opin. Biotechnol. 17:653-658 (2006), Nygren, FEBS J. 275:2668-2676 (2008), 및 Skerra, FEBS J. 275:2677-2683 (2008), 이들은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). 특정 구현예에서, 파지 디스프레이 기술이 ALK7-결합 단백질을 동정하거나/생산하는데 사용된다. 특정 구현예에서, 폴리펩티드는 단백질 A, 리포칼린, 섬유결합소 도메인 (예를 들어, 섬유결합소 유형 III (Fn3)), 안키린 컨센서스 반복 도메인 및 티오레독신으로부터 선택되는 유형의 단백질 스캐폴드를 포함한다.

사용 방법 및 약제학적 조성물

제공된 ALK7-결합 단백질 (항체, 면역접합체 및 폴리펩티드 포함)은 진단 방법 및 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체)로 다양한 질환과 병태를 치료 및/또는 개선하는 방법을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 적용에서 유용하다. ALK7 신호전달과 연관된, 변경된 ALK7 발현과 연관된 및/또는 감소된 ALK7 신호전달에 의해 개선될 수 있는 질환 또는 병태를 앓는 대상체를 치료하기 위해 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 ALK7에 특이적으로 결합하는 전장 항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)의 사용을 위한 방법이 제공된다. 추가 구현예에서, 본 발명은 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 약제로서 사용을 위해, 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한, ALK7 신호전달과 연관된, 변경된 ALK7 발현과 연관된 및/또는 감소된 ALK7 신호전달에 의해 개선될 수 있는 질환 또는 병태를 치료하고/하거나 개선하기 위한 본원에 개시된 약제학적 조성물의 용도를 제공한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물을 사용하여 치료되는 질환 또는 병태는 비만 (예를 들어, 복부 비만); 과체중; 인슐린 저항성; 대사 증후군 및 다른 대사 질환 또는 병태; 지질 장애, 예컨대 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 고지혈증, 고중성지질혈증 또는 이상지질혈증; 지질단백질 이상; 감소된 트리글리세리드; 염증 (예를 들어, 간 염증 및/또는 지방 조직의 염증), 지방간 질환; 비알코올성 지방간 질환; 고혈당증; 내당능 장애 (IGT); 고인슐린혈증; 높은 콜레스테롤 (예를 들어, 높은 LDL 수준 및 고콜레스테롤혈증); 심혈관 질환, 예컨대 관상동맥 심장 질환을 포함하는 심장병, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 죽상동맥경화증; 동맥경화증 및 고혈압; X 증후군; 혈관 재협착증; 신경병증; 망막병증; 신경퇴행성 질환; 내피 기능장애, 호흡기 기능장애, 신장 질환 (예를 들어, 신병증); 췌장염; 다낭성 난소 증후군; 상승된 요산 수준; 혈색소증 (철분 과부하); 흑색극세포증 (피부 상에서 어두운 패치); 또는 암, 예컨대 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 및 골수외 골수종), 난소, 유방, 자궁내막 및 결장 암); 또는 상기 질환 또는 병태 중 하나 이상과 연관된 또 다른 장애/병태이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물을 사용하여 치료되는 질환 또는 병태는 과체중 (예를 들어, ≥25 kg/m²의 BMI), 또는 너무 많은 체지방과 연관된다.

일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 길항제 항체) 및 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하고, ALK7 결합 단백질은 표지화 기 또는 이펙터 기를 추가로 포함한다. "표지"는 스크리닝시 검출을 할 수 있게 하기 위해 부착된 하나 이상의 요소, 동위원소 또는 화학적 화합물을 지칭한다. 표지는 일반적으로, 3가지 부류에 속한다: (a) 동위원소 표지 (이것은 방사성 또는 무거운 동위원소일 수 있다), (b) 소분자 표지 (이것은 형광 및 비색 염료, 또는 다른 표지화 방법을 할 수 있게 하는 분자, 예컨대 비오틴을 포함할 수 있다) 및 (c) 면역 표지 (이것은 항체에 의해 인식되는 융합 상대로서 통합된 에피토프일 수 있다). "표지화 기"는 임의의 검출 가능한 표지를 지칭한다. 일부 구현예에서, 표지화 기는 잠재적 입체 장해를 감소시키기 위해 스페이서 (예를 들어, 펩티드 스페이서)를 통해 ALK7-결합 단백질에 연결된다. 표지는 임의의 위치에서 화합물 내로 통합될 수 있고, 단백질 발현 동안 시험관내에서 또는 생체내에서 통합될 수 있다. 단백질을 표지화하기 위한 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있고, 제시된 방법을 수행하는데 사용될 수 있다. 추가 구현예에서, 표지화 기는 다음으로부터 선택된다: 동위원소 표지, 자성 표지, 산화환원 활성 모이어티, 광학적 염료, 비오틴화된 기 및 두 번째 리포터에 의해 인식된 폴리펩티드 에피토프. 일부 구현예에서, 표지화 기는 형광 단백질, 예컨대 녹색 형광 단백질 또는 이의 유도체 (예를 들어, 증강된 GFP, 청색 형광 단백질 또는 이의 유도체 (예를 들어, EBFP (증강된 청색 형광 단백질), EBFP2, 아주리트, mKalama1, 시안색 형광 단백질 또는 이의 유도체 (예를 들어, ECFP (증강된 시안색 형광 단백질), 세루리안, CyPet), 황색 형광 단백질 또는 이의 유도체 (예를 들어, YFP, 시트린 (Citrine), 비너스, YPet)이다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드 에피토프는 비오틴 신호전달 펩티드, 히스티딘 펩티드 (his), 적혈구응집소 (HA), Flag, 금 결합 펩티드로부터 선택되는 구성원이다. 추가 구현예에서, 이펙터 기는 방사성 동위원소, 방사성뉴클레오티드, 독소, 치료제 및 화학요법제로부터 선택된다.

본 발명의 ALK7-결합 단백질은 시험관내와 생체내 진단적 및 치료적 유용성에서 적용을 갖는다. 예를 들어, ALK7-결합 단백질은, 예를 들어, 다양한 질환 또는 병태를 치료하거나, 예방하거나, 진단하기 위해, 시험관내에서 또는 생체내에서 배양 중인 세포에, 또는 대상체에서 세포에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 인간 항체, 뮤린 항체, 또는 인간화 항체이다.

ALK7 활성을 차단하는 방법 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 ALK7을 길항제 ALK7-결합 단백질과 접촉시키는 것을 포함한다. 추가 구현예에서, 길항제 ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체이다. 일부 경우에, 상기 방법은 생체내에서 수행된다. 다른 경우에, 상기 방법은 시험관내에서 수행된다. 일부 구현예에서, 차단된 ALK7 활성은 다음으로부터 선택된다: (a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고; (b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고; (c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고; (d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고; (e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재하에 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고; (f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고, (g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 (예를 들어, 중화하는 항-ALK7 항체)이다. 추가 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포 (예를 들어, 백색 지방 세포)를 사용한 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 2개, 3개, 또는 4개를 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 상기 특징 중 적어도 2개, 적어도 3개, 또는 적어도 4개를 갖는다.

특정 구현예에서, 본 발명은 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 길항제 항체)을 ALK7 신호전달과 연관된, 변경된 ALK7 발현과 연관된 그리고/또는 감소된 ALK7 신호전달에 의해 개선될 수 있는 질환 또는 병태를 갖거나, 또는 이러한 질환 또는 병태가 발병할 위험에 처해있는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 병태의 치료, 예방 및/또는 개선을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 치료는 대상체로부터 단리된 조직 또는 세포에 ALK7-결합 단백질의 투여를 포함하는데, 상기 대상체는 ALK7 발현 또는 ALK7 신호전달과 연관된 질환 또는 병태를 갖거나, 또는 이러한 질환 또는 병태가 발병할 위험에 처해있다.

본 발명은 ALK7-결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 대상체에서 ALK7-매개된 활성과 연관된 병태를 치료하고/하거나 개선하기 위한 방법 또한 제공되는데, 상기 방법은 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질을 포함하는 유효량의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 단독으로 투여된다. 다른 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 복합 요법으로서 투여된다. 유효량의 ALK7-결합 단백질을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하여, 대상체에서 ALK7 활성을 감소시키는 방법 또한 제공된다.

본원에 제공된 바와 같이, 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)은 체중을 감량시키고 (예를 들어, 체중 감소를 증진하고), 체중 증가를 감소시키고 (예를 들어, 체중 증가를 예방하고) 및/또는 비만을 치료하기 위해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 투여되는 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 특정 사례에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다.

특정 구현예에서, 본 발명은 체중을 감량시키기 원하거나, 또는 치료가 필요한 대상체에게 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 투여하는 것을 포함하여, 체중을 감량시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 대상체는 과체중 (예를 들어, 전비만)이다. 일부 구현예에서, 대상체는 25 kg/m² 이상의 체질량 지수 (BMI)를 갖는다. 추가 구현예에서, 대상체는 25 kg/m² 내지 29.9 kg/m², 30 kg/m² 내지 39.9 mkg/m², 25 kg/m² 내지 39.9 kg/m², 또는 25 kg/m² 내지 50 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 비만하다. 일부 구현예에서, 대상체는 30 kg/m² 이상 (예를 들어, 30 내지 39.9 kg/m² 또는 30 kg/m² 내지 50 kg/m²)의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 병적으로 비만하다. 일부 구현예에서, 대상체는 40 kg/m² 이상의 BMI를 갖는다. 추가 구현예에서, 대상체는 40 kg/m² 내지 45 kg/m², 또는 40 kg/m² 내지 50 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 내장 비만 (예를 들어, 복부 지방 및/또는 내장 지방을 포함하여, 복부에서 과잉 지방과다)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 0.85 이상의 허리/엉덩이 둘레 비율 (WHR)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 말초성 비만 (예를 들어, 엉덩이에서 과잉 지방과다)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다. ALK7-결합 단백질은 단독으로 또는 복합 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다.

특정 구현예에서, 본 발명은 체중 증가를 감소시키기 원하거나, 또는 치료가 필요한 대상체에게 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 투여하는 것을 포함하여, 체중 증가를 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 대상체는 과체중 (예를 들어, 전비만)이다. 일부 구현예에서, 대상체는 25 kg/m² 이상의 BMI를 갖는다. 추가 구현예에서, 대상체는 25 kg/m² 내지 29.9 kg/m², 30 kg/m² 내지 39.9 mkg/m², 25 kg/m² 내지 39.9 kg/m², 또는 25 kg/m² 내지 50 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 비만하다. 일부 구현예에서, 대상체는 30 kg/m² 이상 (예를 들어, 30 내지 39.9 kg/m² 또는 30 kg/m² 내지 50 kg/m²)의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 병적으로 비만하다. 일부 구현예에서, 대상체는 40 kg/m² 이상의 BMI를 갖는다. 추가 구현예에서, 대상체는 40 kg/m² 내지 45 kg/m², 또는 40 kg/m² 내지 50 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다.

치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 투여하는 것을 포함하여, 과잉 체중과 연관된 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는 방법 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 비만이다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 인슐린 저항성이다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 이상지질혈증, 고지혈증 (총 콜레스테롤 수준 >240 mg/dL), 고콜레스테롤혈증 (예를 들어, >200 mg/dL, >220 mg/dL, >240 mg/dL, >250 mg/dL, 또는 >275 mg/dL의 총 콜레스테롤 수준), 낮은 HDL 혈청 수준 (예를 들어, <40mg/dL, <45 mg/dL, 또는 <50 mg/dL), 높은 LDL 혈청 수준 (예를 들어, ≥ 100 mg/dL, ≥ 130 mg/dL, ≥ 160 mg/dL, 또는 ≥ 190 mg/dL), 및 고중성지질혈증 (예를 들어, ≥ 150 mg/dL, ≥ 175 mg/dL, ≥ 200 mg/dL, ≥ 300 mg/dL, ≥ 400 mg/dL, 또는 ≥ 499 mg/dL의 공복 TG 수준). 특정 사례에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 과체중인 대상체에서 체중을 감량시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 과체중 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 대상체는 25 kg/m² 이상의 체질량 지수 (BMI)를 갖는다. 추가 구현예에서, 대상체는 25 kg/m² 내지 29.9 kg/m², 30 kg/m² 내지 39.9 mkg/m², 25 kg/m² 내지 39.9 kg/m², 또는 25 kg/m² 내지 50 kg/m², 또는 27 내지 40 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 비만하다. 일부 구현예에서, 대상체는 30 kg/m² 이상 (예를 들어, 30 내지 39.9 kg/m² 또는 30 kg/m² 내지 50 kg/m²)의 BMI를 갖는다. ALK7-결합 단백질은 단독으로 또는 복합 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다.

특정 구현예에서, 본 발명은 비만 대상체에서 체중을 감량시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 대상체는 30 kg/m² 이상 (예를 들어, 30 내지 39.9 kg/m² 또는 30 kg/m² 내지 50 kg/m²)의 BMI를 갖는다.일부 구현예에서, 대상체는 40 kg/m² 이상의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 내장 비만 (예를 들어, 복부 지방 및/또는 내장 지방을 포함하여, 복부에서 과잉 지방과다)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 0.85 이상의 허리/엉덩이 둘레 비율 (WHR)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 말초성 비만 (예를 들어, 엉덩이에서 과잉 지방과다)을 갖는다. ALK7-결합 단백질은 단독으로 또는 복합 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 비만 또는 비만과 연관된 질환 또는 병태를 치료 및/또는 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 비만 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 대상체는 30 kg/m² 이상의 BMI를 갖는다. 추가 구현예에서, 대상체는 30 내지 39.9 kg/m², 또는 30 kg/m² 내지 50 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 병적으로 비만하다. 일부 구현예에서, 대상체는 40 kg/m² 이상의 신체 BMI를 갖는다. 추가 구현예에서, 대상체는 40 kg/m² 내지 45 kg/m², 또는 40 kg/m² 내지 50 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 30 kg/m² 이상 (예를 들어, 30 내지 39.9 kg/m²)의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 40 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 내장 비만 (예를 들어, 복부 지방 및/또는 내장 지방을 포함하여, 복부에서 과잉 지방과다)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 0.85 이상의 허리/엉덩이 둘레 비율 (WHR)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 말초성 비만 (예를 들어, 엉덩이에서 과잉 지방과다)을 갖는다. ALK7-결합 단백질은 단독으로 또는 복합 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다.

치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 투여하는 것을 포함하여, 비만과 연관된 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하는 방법 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 이상지질혈증, 고지혈증 (총 콜레스테롤 수준 >240 mg/dL), 고콜레스테롤혈증 (예를 들어, >200 mg/dL, >220 mg/dL, >240 mg/dL, >250 mg/dL, 또는 >275 mg/dL의 총 콜레스테롤 수준), 낮은 HDL 혈청 수준 (예를 들어, <40mg/dL, <45 mg/dL, 또는 <50 mg/dL), 높은 LDL 혈청 수준 (예를 들어, ≥ 100 mg/dL, ≥ 130 mg/dL, ≥ 160 mg/dL, 또는 ≥ 190 mg/dL), 및 고중성지질혈증 (예를 들어, ≥ 150 mg/dL, ≥ 175 mg/dL, ≥ 200 mg/dL, ≥ 300 mg/dL, ≥ 400 mg/dL, 또는 ≥ 499 mg/dL의 공복 TG 수준). 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 심혈관 질환이다. 추가 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 고혈압 (높은 혈압), 심근 경색, 뇌졸중, 말초 동맥 질환, 혈관조절 기능장애, 동맥경화증 울혈성 심부전, 죽상동맥경화증, 관상동맥 심장 질환, 또는 미세혈관 질환이다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 염증이다. 다른 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 다음의 군으로부터 선택되는 구성원이다: 망막병증, 장 질환, 궤양성 대장염, 및 천식, 염증 (예를 들어, 간의 염증 및/또는 지방 조직의 염증)이다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 간 질환이다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 간 질환 또는 병태는 NAFLD이다. 특정 구현예에서, 간 질환은 지방간이다. 특정 구현예에서, 간 질환은 NASH이다. 또 다른 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 다음의 군으로부터 선택되는 구성원이다: 지방간염, 지방증, 섬유증 및/또는 간경변. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 백내장, 황반 변성, 폐쇄성 수면 무호흡증, 정맥염, 통풍, 골관절염, 담낭 질환, 신장 질환, 폐 질환 (예를 들어, 천식, 저환기 증후군, 또는 호흡기 기능장애) 및/또는 암 (예를 들어, 난소, 유방, 자궁내막, 간, 신장 및/또는 결장 암 및/또는 암 전이 (예를 들어, 림프성 전이, 혈류 전이 및/또는 종양 성장과 침습). 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 감염이다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 느린 치유 또는 비치유 상처이다. 특정 사례에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다.

특정 구현예에서, 본 발명은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하여, 간 지방을 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 대상체는 과체중 (예를 들어, 전비만)이다. 일부 구현예에서, 대상체는 25 kg/m² 이상의 체질량 지수 (BMI)를 갖는다. 추가 구현예에서, 대상체는 25 kg/m² 내지 29.9 kg/m², 30 kg/m² 내지 39.9 mkg/m², 25 kg/m² 내지 39.9 kg/m², 또는 25 kg/m² 내지 50 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 비만하다. 일부 구현예에서, 대상체는 30 kg/m² 이상 (예를 들어, 30 내지 39.9 kg/m² 또는 30 kg/m² 내지 50 kg/m²)의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 병적으로 비만하다. 일부 구현예에서, 대상체는 40 kg/m² 이상의 BMI를 갖는다. 추가 구현예에서, 대상체는 40 kg/m² 내지 45 kg/m², 또는 40 kg/m² 내지 50 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 내장 비만 (예를 들어, 복부 지방 및/또는 내장 지방을 포함하여, 복부에서 과잉 지방과다)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 0.85 이상의 허리/엉덩이 둘레 비율 (WHR)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 말초성 비만 (예를 들어, 엉덩이에서 과잉 지방과다)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다. ALK7-결합 단백질은 단독으로 또는 복합 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 2형 당뇨병 또는 당뇨병과 연관된 질환 또는 병태를 치료하는, 개선하는 및/또는 예방하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 2형 당뇨병을 갖거나, 또는 2형 당뇨병이 발병할 위험에 처해있는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 대상체는 30 kg/m² 이상 (예를 들어, 30 내지 39.9 kg/m²)의 체질량 지수 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 40 kg/m²의 BMI를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 내장 비만 (예를 들어, 복부 지방 및/또는 내장 지방을 포함하여, 복부에서 과잉 지방과다)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 0.85 이상의 WHR을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 말초성 비만 (예를 들어, 엉덩이에서 과잉 지방과다)을 갖는다. ALK7-결합 단백질은 단독으로 또는 복합 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다.

당뇨병과 연관된 질환 또는 병태를 치료하는, 개선하는 또는 예방하는 방법 또한 제공되는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 당뇨병을 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 길항제 항체)은 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 이상지질혈증, 고지혈증 (총 콜레스테롤 수준 >240 mg/dL), 고콜레스테롤혈증 (예를 들어, >200 mg/dL, >220 mg/dL, >240 mg/dL, >250 mg/dL, 또는 >275 mg/dL의 총 콜레스테롤 수준), 낮은 HDL 혈청 수준 (예를 들어, <40mg/dL, <45 mg/dL, 또는 <50 mg/dL), 높은 LDL 혈청 수준 (예를 들어, ≥ 100 mg/dL, ≥ 130 mg/dL, ≥ 160 mg/dL, 또는 ≥ 190 mg/dL), 및 고중성지질혈증 (예를 들어, ≥ 150 mg/dL, ≥ 175 mg/dL, ≥ 200 mg/dL, ≥ 300 mg/dL, ≥ 400 mg/dL, 또는 ≥ 499 mg/dL의 공복 TG 수준). 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 심혈관 질환이다. 추가 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 고혈압 (높은 혈압), 심근 경색, 뇌졸중, 말초 동맥 질환, 혈관조절 기능장애, 또는 동맥경화증이다. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 염증 (예를 들어, 전신 염증, 간의 염증 및 지방 조직의 염증)이다. 다른 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 다음의 군에서 선택되는 구성원이다: 죽상동맥경화증, 망막병증, 장 질환, 궤양성 대장염, 천식, 간의 염증 및/또는 지방 조직의 염증). 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 간 질환이다. 다른 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 다음의 군에서 선택되는 구성원이다: 지방간 질환, 지방간염, 지방증 및/또는 간경변. 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 백내장, 황반 변성, 폐쇄성 수면 무호흡증, 정맥염, 통풍, 골관절염, 담낭 질환, 높은 콜레스테롤, 폐 질환 (예를 들어, 천식 및/또는 저환기 증후군), 신경병증, 망막병증, 혈관병증 미세혈관병증, 신병증, 신부전 및/또는 암 (예를 들어, 난소, 유방, 자궁내막, 간, 신장, 췌장 및/또는 결장 암) 및 암 전이 (예를 들어, 림프성 전이, 혈류 전이 및/또는 종양 성장과 침습). 특정 구현예에서, 치료되거나 예방되는 질환 또는 병태는 감염 또는 비치유 상처이다. 특정 사례에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다.

본 발명은 또한, 개체에서 혈액-지질 프로파일을 향상시키기 위한 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 (중화) 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이러한 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 항체이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 ALK7 길항제 항체이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 LDL 콜레스테롤의 수준을 감소시키거나 또는 HDL-콜레스테롤의 수준을 증가시키기 위한 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 대상체는 이상지질혈증을 갖는다. 또 다른 구현예에서, 대상체는 상승된 혈청 지질 (예를 들어, 콜레스테롤 (고콜레스테롤혈증) 및/또는 트리글리세리드 (예를 들어, 고중성지질혈증)을 갖는다. 특정 구현예에서, 대상체는 LDL-C가 ≥ 100 mg/dL, ≥ 130 mg/dL, 또는 ≥ 160 mg/dL이다. 특정 구현예에서, 대상체는 TG ≥ 150 mg/dL, ≥ 160 mg/dL, ≥ 170 mg/dL)을 갖는다. 특정 구현예에서, 대상체는 상승된 혈장 인슐린 수준을 갖는다 (고인슐린혈증; 예를 들어, >20 ug/ml의 공복 인슐린 수준은 100을 초과할 수 있다). 일부 구현예에서, 대상체는 II형 당뇨병을 갖는다.

특정 구현예에 따르면, 본 발명은 대사 질환 또는 장애, 또는 대사 질환 또는 장애와 연관된 병태를 치료하거나 예방하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 치료되는 대사 질환, 장애 또는 병태는 고혈당증 (예를 들어, 경구 내당성 검사 동안 공복 상태에서 또는 글루코오스 투여 후에 > 130 mg/dL)이다. 특정 구현예에서, 치료되는 대사 질환, 장애 또는 병태는 지질 대사 질환, 장애 또는 병태이다. 특정 구현예에서, 치료되는 대사 질환, 장애 또는 병태는 이상지질혈증이다. 추가 구현예에서, 지질 대사 질환, 장애 또는 병태는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 높은 트리글리세리드 수준, 고지혈증 및 지질단백질 이상. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 >200 mg/dL, >220 mg/dL, >240 mg/dL, >250 mg/dL, 또는 >275 mg/dL의 총 콜레스테롤 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 <40mg/dL, <45 mg/dL, 또는 <50 mg/dL의 HDL 혈청 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 ≥ 100 mg/dL, ≥ 130 mg/dL, ≥ 160 mg/dL, 또는 ≥ 190 mg/dL의 LDL 혈청 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 ≥ 150 mg/dL, ≥ 175 mg/dL, ≥ 200 mg/dL, ≥ 300 mg/dL, ≥ 400 mg/dL, 또는 ≥ 499 mg/dL의 공복 TG 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, 치료되는 대사 질환, 장애 또는 병태는 글루코오스 대사 질환, 장애 또는 병태이다. 추가 구현예에서, 글루코오스 대사 질환, 장애 또는 병태는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 글루코오스 불내성, 인슐린 저항성, 내당능 장애 (IGT), 손상된 공복 글루코오스 (IFG). 특정 구현예에서, 치료되는 대사 질환, 장애 또는 병태는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 높은 요산 수준, NAFLD, 지방간, NASH 및 다낭성 난소 증후군. 특정 구현예에서, 치료되는 대상체는 고인슐린혈증을 갖는다. 특정 구현예에서, 치료되는 대상체는 비만하다 (예를 들어, 대상체는 내장 또는 복부 비만을 갖는다). 다른 구현예에서, 치료되는 대상체는 II형 당뇨병을 갖는다.

대사 증후군은 심장병의 위험을 증강하는 한 세트의 장애를 수반하는 병태이다. 대사 증후군의 주요 구성요소는 과잉 체중, 심혈관 파라미터 (높은 혈압, 이상지질혈증, 높은 수준의 트리글리세리드 및/또는 혈액 내에 낮은 수준의 HDL), 죽상동맥경화증, 당뇨병 및/또는 인슐린 저항성이다. 이들 구성요소 중에서 몇 가지, 즉, 대사 증후군을 갖는 대상체는 비록 각 구성요소가 위험 요인이긴 하지만, 심장병에 걸리기 매우 쉽다. 본 발명은 또한, 대사 증후군의 상기 구성요소 중에서 1개, 2개, 3개 이상을 치료하거나 예방하기 위한 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명은 또한, 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체)을 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하여, 대상체에서 프라더-윌리 증후군 또는 프라더-윌리 증후군과 연관된 병태를 치료, 예방 또는 개선하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 프라더-윌리 증후군, 즉, 래브하트-윌리 증후군, 프라더 증후군, 프라더-래브하트-윌리-판코니 증후군은 신체의 많은 부분에 영향을 미치는 복합한 유전 병태이다. 유아기의 경우, 이 병태는 약한 근육 긴장도 (근긴장저하), 수유 어려움, 불량한 성장 및 지연된 발달을 특징으로 한다. 유아기부터, 영향을 받은 개체는 만족할 줄 모르는 식욕을 키워 만성 과식 (과식증)과 비만을 초래한다. 프라더-윌리 증후군을 가진 일부 사람, 특히 비만을 가진 사람들은 또한 2형 당뇨병 (가장 흔한 형태의 당뇨병)이 발병한다. 프라더-윌리 증후군을 가진 사람들은 전형적으로 경미 내지 중간 정도의 지적 장애 및 학습 장애를 갖는다. 분노 폭발 (temper outbursts), 완고함, 및 강박 행동, 예컨대 피부 뜯기 (picking at the skin)를 포함하는 행동 문제가 흔하다. 수면 이상도 발생할 수 있다. 이 병태의 추가 특성은 독특한 얼굴 특징, 예컨대 좁은 이마, 아몬드-형상 눈 및 삼각형 입; 단신; 및 작은 손과 발을 포함한다. 프라더-윌리 증후군을 가진 일부 사람들은 비정상적으로 흰 피부 (fair skin)와 밝은 색 모발을 가지고 있다. 영향을 받은 남성과 영향을 받은 여성 둘 모두 생식기 발육이 불충분하다. 사춘기가 지연되거나 불완전하며, 대부분의 영향을 받은 개체는 자녀를 가질 수 없다 (불임). 다른 관련 증상은 유아기 동안 불량한 근육 긴장도로부터 초기 유아기의 행동 문제 및 유아기 동안 증상, 예컨대 아몬드-형상 눈으로 태어나는 눈 조정력 부족, (불량한 근육 긴강도로 인한) 강한 빨기 반사력, 약한 울음, 잠에서 깨기 어려움, 윗 입술이 얇아지는 것 등에 이르기까지 다양할 수 있다. 성인기 증상은, 예를 들어, 불임, 생식선 기능 저하증, 드문 음모, 비만, 근긴장저하 (낮은 근육 긴장도), 학습 장애/경계선 지적 기능, 진성 당뇨병 경향, 극도의 유연성 등을 포함한다. 현재, 임상 시험뿐만 아니라 유전자 검사 (부계 PWS/AS 영역의 상실에 대한)를 통해 진단된다.

프라더-윌리 증후군은 일반적으로 (약 70%의 환자에 대해) 부계 염색체 15의 세그먼트를 손실하거나 (모계 단친성 이염색체; 약 25%의 환자에 대해) 모체 염색체 15의 2개 카피를 가짐으로써 초래된다. 드물게, 프라더-윌리 증후군은 또한, 전좌로 불리는 염색체 재배열에 의해, 또는 부계 염색체 15에서 유전자를 비정상적으로 불활성화 (turns off) (비활성화)시키는 돌연변이 또는 기타 결함에 의해 초래될 수 있다. 영역 15q11-13 (소위 PWS/AS 영역)에서 프라더-윌리 증후군을 담당하는 염색체 15 상의 분절은 적어도, 소 핵소체 RNA (snoRNA), 예컨대 SNORD64, SNORD107, SNORD108 및 SNORD109의 2개의 카피, SNORD116 (HBII-85)의 29개의 카피 및 SNORD115 (HBII-52)의 48개의 카피의 클러스터와 함께 소 핵 리보핵단백질-연관된 단백질 N (SNRPN) 및 넥딘 (NDN)을 포함하는 유전자를 포함한다. 모계 염색체에서 동일한 영역을 삭제하면 엔젤만 증후군 (AS)이 초래된다. PWS 및 AS는 인간에서 최초로 보고된 각인 장애의 사례를 나타낸다.

프라더-윌리 증후군은 치료법이 없다. 그러나, 병태의 증상을 감소시키기 위한 몇 가지 치료법이 있다. 유아기 동안, 대상체는 근력을 향상시키기 위한 요법, 예컨대 성장 호르몬 (GH) 요법 (예를 들어, 매일 GH 주사)을 받아야 한다. 언어와 작업 요법 또한 표시된다. 심각한 비만으로 인한 폐쇄성 수면 무호흡증에 대해서는 양성 기도압 장치가 종종 필요하다. 일부 경우에 수술 절차가 사용될 수 있다. 세로토닌 제제는 분노 발작을 줄이고 강박증을 개선하는데 가장 효과적이었다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 ALK7-결합 단백질은 프라더-윌리 증후군 또는 프라더-윌리 증후군과 연관된 병태를 치료, 예방 또는 개선하는데 사용된다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 ?첫溶?, 예컨대 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편, 예를 들어, 본원에 개시된 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다.

심혈관 질환 또는 병태를 치료하거나, 예방하거나, 개선하는 방법이 추가적으로 제공되는데, 상기 방법은 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 치료되거나, 예방되거나, 개선되는 심혈관 질환 또는 병태는 죽상동맥경화증이다. 특정 구현예에서, 치료되거나, 예방되거나, 개선되는 심혈관 질환 또는 병태는 고혈압 (예를 들어, 안정 상태에서 혈압 >130/80 mmHg 또는 >140/90 mmHg)이다. 특정 구현예에서, 심혈관 질환 또는 병태는 말초 혈관 질환, 미세혈관 또는 미세혈관 합병증, 뇌졸중 및/또는 망막병증이다. 특정 구현예에서, 심혈관 질환은 죽상동맥경화증 (관상동맥 심장 질환)이다.

특정 구현예에서, 본 발명은 염증성 질환 또는 병태를 치료하고/하거나 개선하기 위한 방법을 제공하는데, 상기 방법은 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 염증성 질환 또는 병태는 만성 염증이다. 또 다른 구현예에서, 염증성 질환 또는 병태는 지방 조직의 염증이다. 또 다른 구현예에서, 질환 또는 병태는 간의 염증이다. 특정 구현예에서, 질환 또는 병태는 NAFLD이다. 추가 구현예에서, 질환 또는 병태는 지방간이다. 추가 구현예에서, 질환 또는 병태는 지방증 (예를 들어, 비알코올성 지방간염 (NASH)이다.

본 발명은 또한, 혈당 제어를 향상시키는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 >130, >135, >140, >145, 또는 >150 mg/dL의 공복 혈당 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 식사 2시간 후에 >180, >185, >190, >195, 또는 >200 mg/dL의 식후 혈당 수준을 갖는다. 특정 사례에서, 투여는 식이 및/또는 운동에 대한 보조이다. 투여는 또한, 체중을 감량시키거나 또는 비만을 치료할 수 있다. 특정 사례에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다. 특정 사례에서, 대상체는 27 내지 40 kg/m2의 BMI를 갖는다. 특정 사례에서, 대상체는 30 내지 39.9 kg/m2의 BMI를 갖는다. 특정 사례에서, 대상체는 적어도 40의 BMI를 갖는다. 특정 사례에서, 대상체는 과체중이다. 특정 사례에서, 대상체는 비만하다. 혈당 제어에서 향상은 당업계에 공지된 기술, 예컨대 혼합 식이 검사를 사용하여 사정될 수 있다.

본 발명은 또한, 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이러한 치료가 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 고혈당증 또는 고혈당증과 연관된 병태를 치료하거나, 예방하거나, 개선하기 위한 조성물과 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 >130, >135, >140, >145, 또는 >150 mg/dL의 공복 혈당 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 식사 2시간 후에 >180, >185, >190, >195, 또는 >200 mg/dL의 식후 혈당 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, 치료, 예방 또는 개선의 결과는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 치료에 앞서 대상체에서 혈청 수준과 비교하여, 글루코오스의 혈청 수준에서의 감소, 트리글리세리드의 혈청 수준에서의 감소, 인슐린의 혈청 수준에서의 감소 및/또는 비-에스테르화된 지방산의 혈청 수준에서의 감소. 특정 구현예에서, 치료, 예방 또는 개선의 결과는 치료에 앞서 대상체의 체온과 비교하여 체온 약 0.4℃ 내지 1℃의 증가이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 단백질이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여는 또한, 개체의 체중을 감량시킨다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 개체에서 혈장 인슐린 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이러한 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 >130, >135, >140, >145, 또는 >150 mg/dL의 공복 혈당 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 식사 2시간 후에 >180, >185, >190, >195, 또는 >200 mg/dL의 식후 혈당 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, 대상체는 과체중이다. 특정 구현예에서, 대상체는 비만하다. 다른 구현예에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 단백질이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

본 발명은 또한, 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이러한 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함하여, 개체에서 고혈당증 또는 고혈당증과 연관된 병태를 치료하거나, 예방하거나, 개선하기 위한 조성물과 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 >130, >135, >140, >145, 또는 >150 mg/dL의 공복 혈당 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 식사 2시간 후에 >180, >185, >190, >195, 또는 >200 mg/dL의 식후 혈당 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, 치료, 예방 또는 개선의 결과는 다음으로부터 선택되는 구성원이다: 치료에 앞서 대상체에서 혈청 수준과 비교하여, 글루코오스의 혈청 수준에서의 감소, 트리글리세리드의 혈청 수준에서의 감소, 인슐린의 혈청 수준에서의 감소 및/또는 비-에스테르화된 지방산의 혈청 수준에서의 감소. 특정 구현예에서, 치료, 예방 또는 개선의 결과는 치료에 앞서 대상체의 체온과 비교하여 체온 약 0.4℃ 내지 1℃의 증가이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 단백질이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여는 또한, 대상체의 체중을 감량시킨다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 혈장 인슐린 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 이러한 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 >130, >135, >140, >145, 또는 >150 mg/dL의 공복 혈당 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, ALK7-결합 단백질이 투여되는 대상체는 식사 2시간 후에 >180, >185, >190, >195, 또는 >200 mg/dL의 식후 혈당 수준을 갖는다. 특정 구현예에서, 대상체는 과체중이다. 특정 구현예에서, 대상체는 비만하다. 또 다른 구현예에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 단백질이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 간 질환을 치료하거나, 예방하거나, 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 간 질환을 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 간의 염증을 갖는다. 특정 구현예에서, 대상체는 NAFLD를 갖는다. 특정 구현예에서, 대상체는 지방간을 갖는다. 다른 구현예에서, 대상체는 NASH를 갖는다. 특정 구현예에서, 치료되거나, 예방되거나, 개선되는 간 질환은 섬유증, 흉터형성, 간경변, 또는 간부전이다. 또 다른 구현예에서, 치료되거나, 예방되거나, 개선되는 간 질환은 간암이다. 특정 구현예에서, 대상체는 과체중이다. 또 다른 구현예에서, 대상체는 비만하다. 다른 구현예에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 단백질이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 본원에 개시된 길항제 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다.

추가 구현예에서, 본 발명은 암 또는 암과 연관된 병태를 치료하고/하거나 개선하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편)을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 항-ALK7 항체 또는 이의 ALK7-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 대상체는 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 또는 결장 암으로부터 선택된 암을 갖는다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 림프성 전이, 혈류 전이, 종양 성장, 또는 종양 침습을 치료하거나 예방하기 위해 투여된다.

특정 구현예에서, 본 발명은 암을 치료하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 ALK7을 발현하는 암 세포, 종양 연관된-간질 세포 또는 내피 세포를 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)과 접촉시키는 것을 포함한다. 추가 구현예에서, 암 세포는 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 및/또는 결장 암 세포이다. 일부 구현예에서, 접촉된 세포는 암 라인으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 암 세포는 생체내에서 접촉된다.

특정 구현예에서, 본 발명은 지방분해를 증가시키기 위한 방법을 제공하는데, 상기 방법은 백색 지방 세포 또는 지방 조직을 길항제 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 지방분해 검정에서 지방분해를 5% 내지 100%, 10% 내지 80%, 또는 10% 내지 60% 증가시킨다. 추가 구현예에서, 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행된다. 일부 구현예에서, 길항제 ALK7 결합 단백질은 항체이다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 본원에 제공된 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 시험관내에서 접촉된다. 일부 구현예에서, 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 생체내에서 접촉된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 생체내에서, 예를 들어, 포유동물 대상체 (예를 들어, 동물 모델)에서 실행된다. 추가 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 증가된 글리세롤 생산을 야기한다. 추가 구현예에서, 상기 방법은 지방 세포 배양액에서 증가된 글리세롤 및/또는 유리 지방산을 야기한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 지방 세포 또는 조직에서 감소된 트리글리세리드 (TG) 함량을 야기한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체에서 감소된 혈장 TG 수준을 야기한다.

다른 구현예에서, 본 발명은 지방 세포 또는 조직에서 아드레날린 수용체-β (ADRB) 신호전달을 증가시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직을 ADRB 신호전달을 증가시키는데 충분한 양으로 길항제 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 ALK7 결합 단백질은 항체이다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 본원에 제공된 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 시험관내에서 접촉된다. 일부 구현예에서, 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 생체내에서 접촉된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 생체내에서, 예를 들어, 포유동물 대상체 (예를 들어, 동물 모델)에서 실행된다. 추가 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 증가된 글리세롤 생산을 야기한다. 추가 구현예에서, 상기 방법은 지방 세포 배양액에서 증가된 글리세롤 및/또는 유리 지방산을 야기한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 지방 세포 또는 조직에서 감소된 TG 함량을 야기한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체에서 감소된 혈장 TG 수준을 야기한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 영양소 과부하 동안 지방 세포 또는 지방 조직에서 증가된 ADRB 신호전달을 야기한다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 지방 세포 또는 지방 조직 (예를 들어, 분화된 백색 지방 세포)에서 과산화소체 증식체-활성화된 수용체-감마 (PPAR 감마) 신호전달을 감소시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직을 PPAR 감마 활성을 감소시키는데 효과적인 양으로 길항제 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 ALK7 결합 단백질은 항체이다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 본원에 제공된 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 시험관내에서 접촉된다. 일부 구현예에서, 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 생체내에서 접촉된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 생체내에서, 예를 들어, 포유동물 대상체 (예를 들어, 동물 모델)에서 실행된다. 추가 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 증가된 글리세롤 생산을 야기한다. 추가 구현예에서, 상기 방법은 지방 세포 배양액에서 증가된 글리세롤 및/또는 유리 지방산을 야기한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 지방 세포 또는 조직에서 감소된 TG 함량을 야기한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체에서 감소된 혈장 TG 수준을 야기한다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 지방 세포 또는 지방 조직 (예를 들어, 분화된 백색 지방 세포)에서 인슐린 저항성을 감소시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 지방 세포 또는 지방 조직을 인슐린 저항성을 감소시키는데 효과적인 양으로 길항제 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 ALK7 결합 단백질은 항체이다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 본원에 제공된 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 시험관내에서 접촉된다. 일부 구현예에서, 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 생체내에서 접촉된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 생체내에서, 예를 들어, 포유동물 대상체 (예를 들어, 동물 모델)에서 실행된다. 추가 구현예에서, 대상체는 인간이다.

또 다른 구현예에서, 본 발명은 지방 세포 또는 조직의 대사율을 증가시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 지방 세포 또는 지방 조직을 지방 세포 또는 조직의 대사를 증가시키는데 효과적인 양으로 길항제 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 ALK7 결합 단백질은 항체이다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 본원에 제공된 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 길항제 항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 길항제 항-ALK7-항체는 표 1A에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 투여되는 길항제 항-ALK7-항체는 표 1B 또는 표 3에 개시된 VH 및 VL 쌍을 갖는 항체와 동일한 ALK7 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 시험관내에서 접촉된다. 일부 구현예에서, 분화된 백색 지방 세포 또는 지방 조직은 생체내에서 접촉된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 생체내에서, 예를 들어, 포유동물 대상체 (예를 들어, 동물 모델)에서 실행된다. 추가 구현예에서, 대상체는 인간이다.

본 발명은 ALK7-매개된 질환 및/또는 병태, 예컨대 비만 (예를 들어, 복부 또는 내장 비만); 과체중; 인슐린 저항성; 대사 증후군 및 다른 대사 질환 또는 병태; 지질 장애, 예컨대 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 고지혈증, 고중성지질혈증 또는 이상지질혈증; 지질단백질 이상; 감소된 트리글리세리드; 염증 (예를 들어, 간 염증 및/또는 지방 조직의 염증), 지방간 질환; 비알코올성 지방간 질환; 고혈당증; 내당능 장애 (IGT); 고인슐린혈증; 높은 콜레스테롤 (예를 들어, 높은 LDL 수준 및/또는 고콜레스테롤혈증); 심혈관 질환, 예컨대 관상동맥 심장 질환을 포함하는 심장병, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 죽상동맥경화증; 동맥경화증 및/또는 고혈압; X 증후군; 혈관 재협착증; 신경병증; 망막병증; 신경퇴행성 질환; 내피 기능장애, 호흡기 기능장애, 신장 질환 (예를 들어, 신병증); 췌장염; 다낭성 난소 증후군; 상승된 요산 수준; 혈색소증 (철분 과부하); 흑색극세포증 (피부 상에서 어두운 패치); 및/또는 암 (예를 들어, 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 또는 결장 암); 및/또는 상기 질환 또는 병태 중 하나 이상 및/또는 과체중 (예를 들어, ≥25 kg/m²의 BMI), 또는 너무 많은 체지방과 연관된 다른 장애/병태를 갖거나, 또는 이것이 발병할 위험에 처해있는 대상체에게 단독으로, 또는 하나 이상의 추가 요법 (예를 들어, 하나 이상의 추가 치료제)와 조합으로 치료학적 유효량의 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 길항제 항-ALK7 항체 또는 길항제 ALK7-결합 항체 단편)을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

임상적 시험 절차의 일부로서, 예를 들어, 소정의 치료 용법의 효력을 결정하기 위해 혈액 또는 조직에서 단백질 수준 (예를 들어, ALK7 수준)의 진단적 모니터링을 위한 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질의 용도 또한 제공된다. 예를 들어, 검출은 ALK7-결합 단백질을 검출 가능한 물질에 연결시킴으로써 용이해질 수 있다. 검출 가능한 물질의 예는 다양한 효소, 보결 원자단 (prosthetic group), 형광 물질, 발광 물질, 생물발광 물질 및/또는 방사성 물질을 포함한다. 적합한 효소의 예는 양고추냉이 과산화효소, 알칼리성 포스파타아제, β-갈락토시다아제, 또는 아세틸콜린에스테라아제를 포함한다; 적합한 보결 원자단 복합체의 예는 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함한다; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함한다; 발광 물질의 예는 루미놀을 포함한다; 생물발광 물질의 예는 루시페라아제, 루시페린 및 에쿼린을 포함하고; 적합한 방사성 물질의 예는 ¹²⁵I, ¹³¹I, ³⁵S, 또는 ³H를 포함한다.

약제학적 조성물 및 투여 방법

ALK7-결합 단백질을 제조하고 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 방법은 당업자에게 알려져 있거나 또는 당업자에 의해 쉽게 결정된다. ALK7-결합 단백질의 투여 경로는, 예를 들어, 경구, 비경구, 흡입에 의해 또는 국소일 수 있다. 용어 비경구는, 예를 들어, 정맥내, 동맥내, 복막내, 근육내, 안구내, 피하, 직장, 또는 질 투여를 포함한다. 이들 모든 투여 형태가 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 명확하게 예기되긴 하지만, 투여를 위한 형태의 다른 예는 특히, 정맥내 또는 동맥내 주사 또는 드립을 위한 주사용 용액일 것이다. 일반적으로, 적합한 약제학적 조성물은 완충액 (예를 들어, 아세테이트, 포스페이트 또는 시트레이트 완충액), 계면활성제 (예를 들어, 폴리소르베이트), 임의로 안정화제 (예를 들어, 인간 알부민) 등을 포함할 수 있다. 본원에서 교시와 양립하는 다른 방법에서, 본원에 제공된 바와 같은 ALK7-결합 단백질은 섬유증 또는 종양의 장기 및/또는 부위에 직접적으로 전달되고, 따라서 병든 조직의 치료제로의 노출을 증가시킬 수 있다. 특정 구현예에서, 투여는, 예를 들어, 흡입 또는 비내 투여에 의해 기도에 직접적으로 이루어진다.

본원에서 논의된 바와 같이, ALK7-결합 단백질은 ALK7-매개된 질환 및 병태, 예컨대 비만, 당뇨병, 대사 질환, 이상지질혈증; 심혈관 질환, 2형 당뇨병, 염증, 또는 심혈관, 폐, 지방간 질환, 신경학적 질환, 간 질환, 신장 질환, 및 암의 생체내 치료를 위한 약제학적 유효량으로 투여될 수 있다. 이와 관련하여, 개시된 ALK7-결합 단백질은 활성제의 투여를 용이하게 하고 이의 안정성을 증진하기 위해 제형화될 수 있는 것으로 인지될 것이다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는, 비독성, 무균 담체, 예컨대 생리 식염수, 비독성 완충액, 보존제 등을 포함할 수 있다. 본 출원의 목적을 위해 약제학적 유효량의 접합된 또는 접합되지 않은 ALK7-결합 단백질은 ALK7에 효과적인 결합을 달성하고 유익성을 달성하는데, 예를 들어, 질환 또는 병태의 증상을 개선하거나 또는 물질 또는 세포를 검출하는데 충분한 양을 의미한다. 본원에 개시된 치료 방법에서 사용을 위한 적합한 제형은 문헌 (Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.) 16th ed. (1980))에서 기술되어 있다.

본원에 제공된 특정 약제학적 조성물은, 예를 들어, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 용액을 포함하여 허용되는 투여 형태로 경구 투여될 수 있다. 특정 약제학적 조성물은 또한, 코 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 벤질 알코올 또는 다른 적합한 보존제, 생체이용률을 증강하기 위한 흡수 증진제 및/또는 다른 전통적인 가용화제 또는 분산제를 사용하여, 식염수에서 용액으로서 제조될 수 있다.

단일 투여형을 생산하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 항체)의 양은 치료되는 대상체 및 특정 투여 방식에 따라 변할 것이다. 조성물은 단일 용량으로서, 복수 용량으로서 또는 주입시 확립된 기간에 걸쳐 투여될 수 있다. 투여 용법은 또한, 최적의 원하는 반응 (예를 들어, 치료적 또는 예방적 반응)을 제공하기 위해 조정될 수 있다.

본원에 제공된 ALK7-결합 단백질은 상기 언급된 치료 방법에 따라서, 치료 효과를 산출하는데 충분한 양으로 인간 또는 다른 대상체에게 투여될 수 있다. 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질은 공지된 기술에 따라서, ALK7-결합 단백질을 전통적인 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 조합함으로써 제조된 전통적인 투여 형태로 이러한 인간 또는 다른 동물에게 투여될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제의 형태 및 특징은 이것이 조합될 활성 성분의 양, 투여 경로 및 다른 널리 공지된 변수에 의해 영향을 받을 수 있다. 하나 이상의 상이한 ALK7-결합 단백질을 포함하는 칵테일 또한 사용될 수 있다.

ALK7-매개된 질환 또는 병태, 예컨대 비만, 당뇨병, 대사 질환, 이상지질혈증; 심혈관 질환, 2형 당뇨병, 염증, 또는 심혈관, 폐, 지방간 질환, 신경학적 질환, 간 질환, 또는 신장 질환 및/또는 암의 치료를 위한 ALK7-결합 조성물의 치료학적 유효 용량은 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 병태, 대상체가 인간 또는 동물인지의 여부, 투여된 다른 약제, 그리고 치료가 예방적 또는 치료적인 지의 여부를 포함하는 많은 상이한 인자에 좌우된다. 일반적으로, 대상체는 인간이지만, 유전자도입 포유동물을 포함하여 비인간 포유동물 또한 치료될 수 있다. 치료 용량은 안전성 및 효력을 최적화하기 위한 당업자에게 공지된 일과적인 방법을 사용하여 적정될 수 있다.

ALK7-결합 단백질의 투여에 의해 특정 질환 또는 병태의 증상을 개선하는 것은 ALK7-결합의 투여에 기인하거나 또는 이것과 연관될 수 있는 임의의 축소 (영구적인 또는 일시적인, 지속적인 또는 일시적인 지에 상관없이)를 지칭한다.

본 발명은 또한, 예를 들어, 비만, 당뇨병, 대사 질환, 이상지질혈증; 심혈관 질환, 2형 당뇨병, 염증, 또는 심혈관, 폐, 지방간 질환, 신경학적 질환, 간 질환, 또는 신장 질환 및/또는 암을 치료하거나, 예방하거나, 개선하기 위한 약제의 제조에서 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체의 용도를 제공한다.

복합 요법

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 또는 이들의 변이체 또는 유도체)은 하나 이상의 다른 요법과 조합으로 투여된다. 이러한 요법은 추가 치료제뿐만 아니라 다른 의학적 개입을 포함한다. 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질과 조합으로 투여될 수 있는 예시적인 치료제는 항-SDI-섬유증제, 코르티코스테로이드, 항염증제, 앤지오텐신 전환 효소 저해제, 안지오텐신 수용체 차단제, 이뇨제, 항당뇨병제, 면역 억제제, 화학요법제, 대사길항물질 및/또는 면역조절제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다양한 구현예에서, ALK7-결합 단백질은 외과 절제술/제거 시술 이전, 동안 및/또는 이후에 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, ALK7-결합 단백질 (예를 들어, 항-ALK7 항체, 예컨대 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 또는 이들의 변이체 또는 유도체)은 (a) 비구아니드 (예를 들어, 부포르민, 메트포르민, 펜포르민), (b) 인슐린, (c) 소마토스타틴, (d) 알파-글루코시다아제 저해제 (예를 들어, 보글리보스, 미글리톨, 아카보스), (e) DPP-IV 저해제, 예컨대 시타글립틴, 빌다글립틴, 알로글립틴, 삭사글립틴 (예를 들어, 미국 특허 제6,699,871B1호에 개시된 바와 같이) (f) LXR 조절인자, (g) 인슐린 분비촉진제 (예를 들어, 아세토헥사미드, 카르부타미드, 클로르프로파미드, 글리보르누리드, 글리클라지드, 글리머피리드, 글리피지드, 글리퀴딘, 글리속세피드, 글리부리드, 글리헤사미드, 글리피나미드, 펜부타미드, 톨라자미드, 톨부타미드, 톨시클라미드, 나테글리니드 및/또는 레파글리니드), (k) CB1 저해제, 예컨대 리모나반트, 타라나반트, 및 국제 출원 공개 제WO03/077847A2호와 제WO05/000809 A1호에 개시된 화합물, 또는 (i) 시부트라민, 토피라메이트, 오를리스탯, 큐넥사, 메바스타틴, 심바스타틴, 에제티미브, 아토르바스타틴, 날트렉손, 부프로피온, 펜테르민, 히드로클로로티아지드, 또는 로사르탄 중 하나 이상과 조합으로 투여된다.

진단

본 발명은 또한, ALK7-매개된 질환 및 병태 (예컨대 비만 (예를 들어, 복부 또는 내장 비만); 과체중; 인슐린 저항성; 대사 증후군 및/또는 다른 대사 질환 또는 병태; 지질 장애, 예컨대 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 고지혈증, 고중성지질혈증 또는 이상지질혈증; 지질단백질 이상; 감소된 트리글리세리드; 염증 (예를 들어, 간 염증 및/또는 지방 조직의 염증), 지방간 질환; 비알코올성 지방간 질환; 고혈당증; 내당능 장애 (IGT); 고인슐린혈증; 높은 콜레스테롤 (예를 들어, 높은 LDL 수준 및/또는 고콜레스테롤혈증); 심혈관 질환, 예컨대 관상동맥 심장 질환을 포함하는 심장병, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 죽상동맥경화증; 동맥경화증 및/또는 고혈압; X 증후군; 혈관 재협착증; 신경병증; 망막병증; 신경퇴행성 질환; 내피 기능장애, 호흡기 기능장애, 신장 질환 (예를 들어, 신병증); 췌장염; 다낭성 난소 증후군; 상승된 요산 수준; 혈색소증 (철분 과부하); 흑색극세포증 (피부 상에서 어두운 패치); 및/또는 암 (예를 들어, 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 또는 결장 암); 및/또는 상기 질환 또는 병태 중 하나 이상, 또는 너무 많은 체지방과 연관된 다른 장애/병태)의 진단 동안 유용한 진단 방법을 제공하는데, 이것은 개체로부터 ALK7 단백질 조직 또는 체액의 발현 수준을 측정하고 측정된 발현 수준을 정상적인 조직 또는 체액에서 표준 ALK7 발현 수준과 비교하는 것을 수반하여, 표준과 비교하여 ALK7 발현 수준에서 증가는 장애가 본원에 제공된 ALK7-결합 단백질, 예컨대 본원에 제공된 바와 같은 전장 항-ALK7 항체 및 ALK7-결합 항체 단편에 의해 치료 가능하다는 것을 지시한다.

본원에 제공된 ALK7-결합 단백질, 예컨대 항-ALK7 항체 (예를 들어, 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체)는 당업자에게 공지된 고전적인 면역조직학적 방법을 사용하여 생물학적 샘플에서 ALK7 수준을 검정하는데 사용될 수 있다 (참조: 예를 들어, Jalkanen, et al., J. Cell. Biol. 101:976-985 (1985); Jalkanen et al., J. Cell Biol. 105:3087-3096 (1987)). ALK7 단백질 발현을 검출하는데 유용한 다른 항체-기반 방법은 면역검정, 예를 들어, 효소 연결된 면역 흡착 검정 (ELISA), 면역침전, 또는 웨스턴 블롯팅을 포함한다.

"ALK7 단백질의 발현 수준을 검정하는"은 첫 번째 생물학적 샘플에서 ALK7 단백질의 수준을 직접적으로 (예를 들어, 절대적 단백질 수준을 결정하거나 또는 추정함으로써) 또는 상대적으로 (예를 들어, 두 번째 생물학적 샘플에서 질환 연관된 폴리펩티드 수준과 비교함으로써) 정성적으로 또는 정량적으로 측정하거나 추정하는 것으로 의도된다. 첫 번째 생물학적 샘플에서 ALK7 단백질 발현 수준은 측정되거나 추정되고 표준 ALK7 단백질 수준과 비교될 수 있는데, 상기 표준은 장애를 갖지 않는 개체로부터 수득된 두 번째 생물학적 샘플로부터 취해지거나 또는 장애를 갖지 않는 개체의 개체군으로부터 수준을 평균화함으로써 결정된다. 당해 분야에서 인지되는 바와 같이, 일단 "표준" ALK7 단백질 수준이 알려지면, 이것은 비교를 위한 기준으로서 반복적으로 사용될 수 있다.

"생물학적 샘플"은 개체, 세포주, 조직 배양액, 또는 ALK7을 잠재적으로 발현하는 세포의 다른 공급원으로부터 수득된 임의의 생물학적 샘플인 것으로 의도된다. 포유동물로부터 조직 생검 및 체액을 수득하기 위한 방법은 당업계에 공지되어 있다.

ALK7-결합 단백질을 포함하는 키트

본 발명은 적합한 패키징에서 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 항체, 예컨대 전장 ALK7-항체 및 ALK7-결합 항체 단편, 및 이들의 변이체 및 유도체), 및 본원에 기재된 방법을 수행하는데 사용될 수 있는 서면 자료를 포함하는 키트를 추가로 제공한다. 서면 자료는 다음의 정보 중 어느 하나를 포함할 수 있다: 사용 지침, 임상 연구의 논의, 부작용 목록, 과학 문헌 참조 문헌, 패키지 삽입 재료, 임상 시험 결과 및/또는 이들의 요약 등. 서면 자료는 조성물의 활성 및/또는 이점을 나타내거나 확립할 수 있고/있거나 투약, 투여, 부작용, 약물 상호작용, 또는 건강 관리 제공자에게 유용한 다른 정보를 기술할 수 있다. 이러한 정보는 다양한 연구, 예를 들어, 생체내 모델을 수반하는 실험 동물을 사용한 연구 및/또는 인간 임상 시험에 기반한 연구의 결과에 기초할 수 있다. 키트는 또 다른 요법 (예를 들어, 또 다른 제제) 및/또는 서면 자료, 예컨대 다른 요법 (예를 들어, 다른 제제)에 관한 정보를 제공하는 역할을 하는 상기 기재된 것을 추가로 포함할 수 있다.

특정 구현예에서, 키트는 하나 이상의 용기에서 적어도 하나의 정제된 ALK7-결합 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 모든 대조군, 검정 수행 방향 및/또는 결과의 분석 및 제시를 위한 임의의 필요한 소프트웨어를 포함하여, 검출 검정을 수행하는데 필요한 및/또는 충분한 모든 구성요소를 포함한다.

면역검정

ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 항체 및 ALK7에 특이적으로 결합하는 항체의 ACTRIIA/B-결합 단편, 및 이들의 변이체 또는 유도체)은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 면역특이적 결합에 대해 검정될 수 있다. 사용될 수 있는 면역검정은 웨스턴 블롯, 방사면역검정 (REA), ELISA (효소 연결된 면역 흡착 검정), "샌드위치" 면역검정, 면역침전 검정, 침전소 반응, 겔 확산 침전 반응, 면역확산 검정, 응집 검정, 보체-고정 검정, 면역방사 검정, 형광 면역검정, 또는 단백질 A 면역검정과 같은 기술을 사용한 경쟁적 및 비경쟁적 검정 시스템을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 검정은 일과적이고 당업계에 공지되어 있다 (참조: 예를 들어, Ausubel et al., eds, (1994) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, Inc., NY) Vol. 1, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).

본원에 제공된 ALK7-결합 단백질 (예를 들어, ALK7에 특이적으로 결합하는 항체 및 ALK7에 특이적으로 결합하는 항체의 ActRII 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)-결합 단편, 및 이의 변이체 또는 유도체)은 ALK7 또는 이의 보존된 변이체 또는 펩티드 단편의 동일 반응계 검출을 위해, 면역형광, 면역전자 현미경검사 또는 비-면역학적 검정에서와 같이 조직학적으로 사용될 수 있다. 동일 반응계 검출은 당업계에 공지된 방법에 따라서 달성될 수 있다. 당업자는 일과적인 실험을 사용함으로써, 각 결정을 위한 작업 조건 및 최적 검정 조건을 결정할 수 있을 것이다. ALK7-결합 단백질의 결합 특징의 결정에 적합한 방법은 본원에 기재되거나 또는 만약 그렇지 않으면, 당업계에 공지되어 있다. 이러한 활동적 분석을 위해 설계된 설비 및 소프트웨어는 상업적으로 입수 가능하다 (예를 들어, BIACORE®, BIAevaluation® 소프트웨어, GE Healthcare; KINEXA® 소프트웨어, Sapidyne Instruments).

달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 실시는 당해 분야의 지식 범위 안에 있는, 세포생물학, 세포 배양, 분자 생물학, 유전자도입 생물학, 미생물학, 재조합 DNA 및 면역학의 전통적인 기술을 사용한다.

다음 실시예는 제한이 아닌 예시의 방식에 의하여 제공된다.

실시예

* * *

특정 구현예의 전술한 설명은, 당해 분야의 기술 내에 지식을 적용함으로써, 과도한 실험 없이, 본 발명의 일반적인 개념으로부터 벗어나지 않으면서, 이런 특정한 구현예를 다양한 적용을 위해 쉽게 변형하고/하거나 적합하게 할 수 있을 만큼 본 발명의 전반적인 성격을 충분히 드러낼 것이다. 따라서, 이러한 적응과 변형은 본원에 제시된 교시 및 지침에 기초하여, 개시된 구현예의 등가물의 의미와 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 본원에서 문구 또는 용어는 제한이 아닌 설명을 목적으로 하며, 따라서 본 명세서의 용어 또는 문구는 교시와 보도에 비추어 당업자에 의해 해석되어야 하는 것으로 이해된다.

본 발명의 범위와 범주는 상기 기재된 예시적인 구현예 중 어느 하나에 의해 제한되지 않아야 하고, 아래 청구범위 및 이들의 등가물에 따라서만 규정되어야 한다.

본 출원에서 인용된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 및/또는 다른 문서는 각각의 개별 간행물, 특허, 특허 출원 및/또는 다른 문서가 모든 목적을 위해 참조로 포함된 것으로 개별적으로 지시되는 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 전체적으로 참조로 포함된다.

실시예 1. ALK7-결합 항체의 선별, 특징 분석 및 생산

다중-라운드 선별 절차가 아래에 상술되는, 높은 친화성으로 ALK7에 결합하는 인간 IgG 항체를 선별하는데 사용되었다.

재료와 방법

인간 ALK7-Fc 포함 단백질은 Pierce로부터 EZ-Link 설포-NHS-비오티닐화 키트를 사용하여 비오틴화되었다. 염소 항인간 F(ab')2 카파-FITC (LC-FITC), 엑스트라비딘-PE (EA-PE) 및 스트렙타비딘-633 (SA-633)은 각각, Southern Biotech, Sigma 및 Molecular Probes로부터 획득되었다. 스트렙타비딘 마이크로비드 및 MACS LC 분리 컬럼은 Miltenyi Biotec로부터 구입되었다.

실험은 25℃ 및 37℃에서 Biacore T100/T200 바이오센서 (Biacore/GE Healthcare)를 사용하여 수행되었다. ALK7 항체는 맞춤 제작된 FAB 칩에서 포획되었다. ALK7-Fc 포함 단백질의 농도 시리즈가 50 μl/ml의 유속으로 유동 셀 위에 주입되었다. 동력학 속도 상수를 획득하기 위해, 보정된 데이터는 BiaEvaluation 소프트웨어 (GE Healthcare)를 사용하여 1:1 상호작용 모델에 적합하였다. 평형 결합 상수 KD는 결합 속도 상수 kd/ka의 비율에 의해 결정되었다.

각각 ~10⁹ 다양성의 8가지 고유 인간 합성 효모 라이브러리가 전술한 바와 같이 증식되었다 (참조: 예를 들어, WO09/036379; WO10/105256; WO12/009568). 첫 2 라운드의 선별의 경우에, Miltenyi MACs 시스템을 활용한 자성 비드 분류 기술이 기재된 바와 같이 수행되었다 (참조: 예를 들어, Siegel et al., J. Immunol. Meth. 286(1-2):141-153 (2004)). 간단히 말하면, 효모 세포 (~10¹⁰ 세포/라이브러리)는 실온에서 15분 동안 FACS 세척 완충액 (인산염 완충된 식염수 (PBS)/0.1% 소 혈청 알부민 (BSA))에서 3 ml의 10 nM 비오틴화된 ALK7-Fc 포함 단백질과 함께 항온처리하였다. 50 ml 얼음같이 차가운 세척 완충액으로 1회 세척한 후, 세포 펠렛을 40 mL 세척 완충액에서 재현탁시키고, 스트렙타비딘 마이크로비드 (500 μl)를 효모에 첨가하고, 4℃에서 15분 동안 항온처리하였다. 그 다음, 효모를 펠렛화하고, 5 mL 세척 완충액에서 재현탁시키고, Miltenyi LS 컬럼 위에 부하시켰다. 5 mL를 부하시킨 후, 컬럼을 3 ml FACS 세척 완충액으로 3회 세척하였다. 이어서, 컬럼을 자기장으로부터 제거하고, 효모를 5 mL의 성장 배지로 용리시키고, 이후 밤새 성장시켰다. 다음 라운드의 분류가 유세포분석법을 사용하여 수행되었다. 대략 1x10⁸ 효모를 펠렛화하고, 세척 완충액으로 3회 세척하고, 실온에서 평형 조건하에 감소하는 농도의 비오틴화된 ALK7-Fc 포함 단백질 (100 내지 1 nM)과 함께 항온처리하였다. 이어서, 효모를 2회 세척하고, 4℃에서 15분 동안 LC-FITC (1:100 희석됨) 및 SA-633 (1:500 희석됨) 또는 EA-PE (1:50 희석됨) 이차 시약으로 염색시켰다. 얼음같이 차가운 세척 완충액으로 2회 세척한 후, 세포 펠렛을 0.4 mL 세척 완충액에서 재현탁시키고, 여과기-캡핑된 분류 튜브로 옮겼다. 분류는 FACS ARIA 분류기 (BD Biosciences)를 사용하여 수행되었고, 배경 대조에 비하여 특정한 결합제를 선별하기 위해 분류 게이트가 배정되었다. CHO 세포로부터 가용성 막 단백질을 활용하여 비특이적 시약 결합제의 숫자를 감소시키기 위해 (참조: 예를 들어, WO14/179363 및 Xu et al., Protein Eng. Des. Sel. 26(10):663-670 (2013)), 그리고 ALK7-Fc 포함 단백질을 사용하여 ALK7에 향상된 친화성을 갖는 결합제를 확인하기 위해 차후 라운드의 선별이 사용되었다. 최종 라운드의 분류 후, 효모를 도말하고, 특징 분석을 위한 및 친화성 성숙에 대한 클론의 지명을 위한 개별 집락이 선발되었다.

항체 생산 및 정제

추가 특징 분석을 위한 충분한 양의 선별된 항체를 생산하기 위해, 효모 클론은 포화까지 성장시키고, 이후, 진탕하면서 30℃에서 48시간 동안 유도되었다. 유도 후, 효모 세포를 펠렛화하였고, 정제를 위해 상층액을 수확하였다. IgG는 단백질 A 컬럼을 사용하여 정제하였고, 아세트산, pH 2.0으로 용리시켰다. Fab 단편은 파파인 소화에 의해 생성되었고 KappaSelect (GE Healthcare LifeSciences) 상에서 정제되었다.

ForteBio K _D 측정

선별된 항체의 ForteBio 친화성 측정은 일반적으로 전술한 바와 같이 수행되었다 (참조: 예를 들어, Estep et al., Mabs, 5(2):270-278 (2013)). 간단히 말하면, ForteBio 친화성 측정은 IgG를 AHQ 센서 위에 온라인 부하함으로써 수행되었다. 센서는 30분 동안 검정 완충액에서 오프라인 평형화되고, 이후, 기준선 확립을 위해 60초 동안 온라인 모니터링되었다. 부하된 IgG를 포함하는 센서는 5분 동안 100 nM 항원에 노출되었고, 그 후 이들은 오프 레이트 측정을 위해 5분 동안 검정 완충액으로 옮겼다. 동역학은 1:1 결합 모델을 사용하여 분석되었다.

Octet Red384 에피토프 비닝/리간드 차단

선별된 항체의 에피토프 비닝/리간드 차단은 표준 샌드위치 형식 교차-차단 검정을 사용하여 수행되었다. 대조군 항-표적 IgG가 AHQ 센서 위에 부하되었고, 상기 센서 상에서 비점유된 Fc-결합 부위는 무관한 인간 IgG1 항체로 차단되었다. 이어서, 이들 센서는 100 nM 표적 항원, 그 이후에 두 번째 항-표적 항체 또는 리간드에 노출되었다. 데이터는 ForteBio의 데이터 분석 소프트웨어 7.0을 사용하여 처리되었다. 항원 연관 후 두 번째 항체 또는 리간드에 의한 추가 결합은 비점유된 에피토프 (비-경쟁자)를 지시하고, 반면 결합 없음은 에피토프 차단 (경쟁자 또는 리간드 차단)을 지시한다.

크기 배제 크로마토그래피

TSKgel SuperSW mAb HTP 컬럼 (22855)이 6분/실행의 주기 시간으로 0.4 mL/분에서 효모-생산된 mAbs의 빠른 SEC 분석에 사용되었다. 200 mM 인산나트륨 및 250 mM 염화나트륨이 이동상으로서 사용되었다.

역동적 스캐닝 형광측정법

10 uL의 20x 시프로 오렌지가 20 uL의 0.2-1 mg/mL mAb 또는 Fab 용액에 첨가되었다. RT-PCR 기기 (BioRad CFX96 RT PCR)가 0.5℃ 증분 및 각 온도에서 2분 평형화로, 40℃에서 95℃로 샘플 플레이트 온도에 사면을 만드는데 사용되었다. 미가공 데이터에 대한 일차 도함수의 음성이 Tm을 도출하는데 사용되었다.

실시예 2. ALK7-결합 항체의 특징 분석

이전 실시예에 따라서 생성된 예시적인 ALK7-결합 단백질은 서열, SPR 및 세포-기반 지방분해 저해 검정 분석에 의해 추가로 특징 분석되었다.

실시예 1에 기재된 방법에 따라 생성된 예시적인 ALK7-결합 항체의 서열은 표 1A 및 표 1B에 제시된다 (예시적인 CDR 서열은 밑줄 그어짐).

표 1A: 예시적인 ALK7-결합 단백질

표 1B: 추가 예시적인 ALK7-결합 단백질

SPR (BIACORE™-기반 분석) 및 세포-기반 지방분해 저해 검정을 사용하여 표 1A, 표 1B, 또는 표 3에 기재된 ALK7-결합 단백질의 예시적인 세트를 더욱 충분히 특징 분석하고 예시하였다.

표면 플라스몬 공명 분석

실험은 25 및 37℃에서 Biacore T100/T200 바이오센서 (Biacore/GE Healthcare)를 사용하여 수행되었다. ALK7 항체는 맞춤 제작된 FAB 칩에서 포획되었다. ALK7-Fc 포함 단백질의 농도 시리즈가 50 μl/ml의 유속으로 유동 셀 위에 주입되었다. 동력학 속도 상수를 획득하기 위해, 보정된 데이터는 BiaEvaluation 소프트웨어 (GE Healthcare)를 사용하여 1:1 상호작용 모델에 적합하였다. 평형 결합 상수 KD는 결합 속도 상수 kd/ka의 비율에 의해 결정되었다.

지방분해 저해 검정

지방분해는 세포 내 트리글리세리드의 글리세롤 및 유리 지방산으로의 가수분해이다. 이어서, 글리세롤 및 유리 지방산은 혈류 또는 배양 배지 내로 방출된다. 지방분해가 본질적으로 모든 세포에서 일어나긴 하지만, 이것은 백색 및 갈색 지방 세포에서 가장 풍부하다. 3T3-L1 세포 (ATCC에 의해 공급됨; ATCC® CL-173™)는 컨플루언시에 도달할 때까지, 10% 소 혈청 (Life Technologies; 16170-060)을 함유하는 둘베코의 변형된 이글 배지 (ATCC; ATCC® 30-2002™)에서 성장되었다. 분화를 유도하기 위해, 컨플루언시 후 2일 째에 배지가 2주 동안, 10% 소 태아 혈청 (Life Technologies; 10082147), 덱사메타손 (Sigma, D8893), IBMX (Sigma, I7018) 및 인슐린 (Sigma, I0516)을 함유하는 신선한 둘베코의 변형된 이글 배지 (ATCC; ATCC® 30-2002™)에 의해 대체되었다. 현미경검사에 의해 결정될 때, 세포 상에서 지질 비말의 축적이 성숙 지방 세포로의 완전한 분화를 확증하는데 사용되었다. 지방 세포는 밤새 비히클 (PBS)로 처리되거나, 액티빈 B (50 ng/ml)로 처리되거나, 또는 액티빈 B (50 ng/ml) 및 ALK7 항체 (5 μg/ml)로 동시처리되었다. 세포는 PBS로 2회 세척되고 지방분해 검정 완충액 (Abcam에 의해 공급됨; ab185433)과 함께 항온처리하였다. 지방분해 검정 완충액은 3시간 후 수집되었고, 글리세롤 수준이 제조업체의 사용 지침 (Abcam; ab185433)에 따라서 측정되었다.

예시적인 ALK7-결합 단백질에 대한 SPR의 결과는 표 2A와 2B에서 제시되고, 세포-기반 지방분해 저해 검정의 결과는 표 2A에 제시된다.

예시적인 ALK7-결합 단백질에 대한 SPR 및 세포-기반 지방분해 저해 검정의 결과는 표 3에 제시된다.

표 2A: 예시적인 ALK7-결합 단백질의 결합 특징 분석 및 활성

표 2B: 예시적인 ALK7-결합 단백질의 결합 특징 분석

ALK7 신호전달은 지방분해를 억제하고, 결과적으로, 지방 세포 및 지방 조직에서 지방 축적을 야기하는 것으로 생각된다. 지방분해의 ALK7-매개된 저해를 간섭하는 항체 H03, D04, C02 및 G04의 능력이 세포-기반 지방분해 저해 검정에서 평가되었다. 항체 H03, D04, C02 및 G04는 지방분해 활성을 각각 91.8%, 109.2%, 55.8% 및 45.8% 증가시켰다. 따라서, 이들 데이터는 ALK7 항체가 지방분해의 ALK7-매개된 억제를 길항하고, 따라서, 지방 세포에서 지방산 파괴를 증가시키는데 사용될 수 있다는 것을 나타낸다. 종합하면, 이들 데이터는 ALK7 항체가, 예를 들어, 비만, 당뇨병, 인슐린 저항성; 대사 증후군 지방간 질환 및 다른 대사 질환 또는 병태를 포함하여, 세포에서, 특히 지방 세포 (지방 세포)에서 낮은 지방분해 활성 및/또는 과도한 지방산 축적과 연관된 다양한 장애 또는 병태를 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 나타낸다.

인간 ALK7의 세포외 도메인 (서열번호 85) 및 래트 ALK7의 세포외 도메인 (서열번호 86)은 97%의 서열 동일성을 공유한다. 인간 ALK7 및 래트 ALK7에 항체 H03, G04, C02 및 D04의 결합은 SPR을 사용하여 결정되었다. 항체 H03, D04, K01 및 L01은 인간 ALK7 및 래트 ALK7 둘 모두에 결합한다. F03 및 C02는 단지 인간 ALK7에만 결합하였다. J01은 단지 래트 ALK7에만 결합하였다.

실시예 3. ALK7 항체의 결합 최적화

나이브 클론의 결합 최적화는 3가지 성숙 전략을 활용하여 실행되었다: 경쇄 다양화; CDRH 및/CDRH2의 다각화; 및 순차적 VH 및 VL 돌연변이유발 수행.

경쇄 다양화: 중쇄 플라스미드는 나이브 출력 (앞서 설명됨)으로부터 추출되고, 1 x 10⁶의 다양성을 갖는 경쇄 라이브러리 내로 형질전환되었다. 선별은 10 nM 또는 1 nM 비오틴화된 ALK7-Fc 항원 (개별 라운드의 경우에)을 사용하여 1 라운드의 MACS 분류 및 2 라운드의 FACS 분류로 상기 기재된 바와 같이 수행되었다.

CDRH1 및 CDRH2 선별: 경쇄 다양화 절차로부터 선택되는 클론으로부터 CDRH3은 1 x 10⁸의 다양성의 CDRH1 및 CDRH2 변이체와 함께 미리 만들어진 라이브러리로 재조합되었고, 선별은 상기 기재된 바와 같이, ALK7을 사용하여 수행되었다. 친화성 압력은 가장 높은 친화성 항체를 선별하기 위해, 비오틴화된 항원 항체 효모 복합체를 상이한 양의 시간 동안, 비오틴화되지 않은 항원과 함께 항온처리함으로써 적용되었다.

VHmut/VKmut 선별: CDRH1 및 CDRH2 선별 절차로부터 획득된 클론은 중쇄 및/또는 경쇄의 오류 가능성 PCR-기반 돌연변이유발을 통한 추가 라운드의 친화성 성숙에 종속되었다. 선별은 모든 선별 라운드에 대해 FACS 분류를 사용하는 것이 추가된 점을 제외하고, 상기 실시예 2에 전반적으로 기재된 바와 같이, ALK7을 항원으로서 사용하여 수행되었다. 최적 친화성을 더욱 압박하기 위해, 항원 농도가 감소되었고 차가운 항원 경쟁 횟수가 증가되었다.

예시적인 최적화된 ALK7 항체의 서열은 표 3에 제공된다.

표 3: 예시적인 친화성 성숙된 ALK7-결합 단백질

SPR (BIACORE™-기반 분석)이 표 3에 기재된 친화성 성숙된 ALK7 항체를 더욱 충분히 특징 분석하는데 사용되었다.

표면 플라스몬 공명 분석

상기 기재된 바와 같이 수행된 SPR의 결과는 표 4에 제시된다.

표 4: 예시적인 친화성 성숙된 ALK7 항체의 결합 특징 분석

실시예 4. 항-ALK7 항체 변이체

본 실시예는 이전 실시예에 논의된 항-ALK7 항체와 동일한 에피토프(들)에서 ALK7에 특이적으로 결합하는 2세대 항-ALK7 단일클론 항체를 생성하는 예시적인 절차를 예시한다. 이들 2세대 항체는 중쇄의 불변 영역 (예를 들어, Fc 도메인)에 돌연변이를 함유하여 항체 독성 및/또는 면역원성을 감소시키고/시키거나 숙주에서 항체 안정성/반감기를 개선시킨다.

mAb C03 또는 mAb G05 서열에 기초한 예시적인 2세대 항체를 생성하기 위해, 문헌 (Persic et al. (1997), Gene 187:9-18)에 기초한 인간 IgG 중쇄 및 경쇄의 발현을 위해 벡터가 작제되었다. 인간 중쇄 벡터는 5' 말단에서 VH를 클로닝하기 위한 독특한 제한 부위 (BssHII)를 함유하고, BstEII 부위를 함유하는 인접한 VH 링커를 포함하며 이는 3' 말단에서 VH를 클로닝하기 위해 모든 VH 서브그룹에 걸쳐 보존된다. 따라서, C03 또는 mAb G05 항체 (각각 서열번호 129 또는 118)로부터의 VH는 DNA 합성에 의해 생성되고, BssHII 및 BstEII로 분해되고, 분해된 pAID4 인간 IgG1 중쇄 벡터 (5'BssHII 및 3'BstEII)에 별도로 삽입되었다. 인간 카파 경쇄는 mAb C03 또는 mAb G05 항체 VL 서열 (각각 서열번호 136 또는 125)의 삽입으로 개별적으로 설계되었고 합성되었다 (인트론 없음). 완성된 작제물은 확인 서열분석하였으며 CHO 세포로 공동형질감염되었다. CHO 조건화 배지는 웨스턴 블롯으로 분석하여 항체 크기를 확인하고 인간 Fc 도메인에 대한 ELISA로 항체 농도를 결정하였다. CHO 세포 조건화 배지로부터의 항체 단백질의 정제는 단백질 A 크로마토그래피 (예를 들어, MabSelect SuRe^TM, General Electric, Piscataway, NJ), 투석, 바이러스 여과, 및 완충액 교환에 의해 달성되었다.

인간 중쇄 벡터의 변이체는 이펙터 기능의 감소를 보조하기 위해 CH2 도메인에서 돌연변이 L₂₃₄A 및 L₂₃₅A (LALA, Kabat 위치)를 함유한다. 인간 IgG 중쇄에서 VH 영역의 독특한 내부 AgeI 제한 부위 하류를 이용하여, 5' AgeI로부터 3' 정지 코돈까지의 영역은 돌연변이를 포함하는 중첩 PCR 전략 및 프라이머를 사용함으로써 생성되었다. PCR 반응을 위한 3' 프라이머는 또한 정지 코돈 이후에 BamHI 제한 부위로 설계되었으며 이는 플라스미드에서 클로닝 부위로서 사용되었다. 이 생성물은 분해된 pAID4 인간 IgG1 중쇄 벡터 (5'AgeI 및 3'BamHI)에 삽입되었다. mAb C03 또는 mAb G05로부터의 VH는 상기 기재된 바와 같이 이 중쇄 변이체로 삽입되었다. 생성된 mAb C03 LALA 항체는 서열번호 194 또는 328의 중쇄 서열 및 서열번호 191 또는 322의 경쇄 서열을 갖는다. 상기 예시된 바와 같이, LALA 돌연변이는 서열번호 194의 L₂₆₃ 및 L₂₆₄에 위치한다. 생성된 mAb G05LALA 항체는 서열번호 195 또는 330의 중쇄 서열 및 서열번호 193 또는 326의 경쇄 서열을 갖는다. 상기 예시된 바와 같이, LALA 돌연변이는 서열번호 195의 L₂₅₇ 및 L₂₅₈에 위치한다.

유사하게, LALA-PG 돌연변이체는 mAb C03 또는 mAb G05의 중쇄 서열에 L₂₃₄A, L₂₃₅A, 및 P₃₂₉G (LALA-PG, Kabat 위치) 돌연변이를 도입함으로써 제조될 수 있다. 생성된 mAb C03 LALA-PG 항체는 서열번호 196 또는 332의 중쇄 서열 및 서열번호 191 또는 322의 경쇄 서열을 갖는다. 상기 예시된 바와 같이, LALA-PG 돌연변이는 서열번호 196에서 L₂₆₃A, L₂₆₄A, 및 P₃₅₈G 돌연변이를 포함한다. 생성된 mAb G05 LALA-PG 항체는 서열번호 197 또는 334의 중쇄 서열 및 서열번호 193 또는 326의 경쇄 서열을 갖는다. 상기 예시된 바와 같이, LALA-PG 돌연변이는 서열번호 197에서 L₂₅₇A, L₂₅₈A, 및 P₃₅₂G 돌연변이를 포함한다.

실시예 5. ALK7 mAbs의 에피토프 맵핑

ALK7 상의 선형 에피토프와 불연속 에피토프 둘 모두는 표 3에 기재된 바와 같이 예시적인 항-ALK7-결합 단백질, mAbs C03, G05, 및 J02에 대해 맵핑되었다. 디설파이드 브릿지 모방체의 조합 라이브러리를 포함하는 완전한 불연속 에피토프 맵핑 접근법은 Pepscan Presto BV. (Lelystad, The Netherlands)의 CLIPS^TM 기술로 수행되었다.

실험 방법

펩티드 라이브러리에 대한 표적 ALK7 서열

인간 ALK7의 세포외 도메인은 에피토프 맵핑을 위한 일반적인 펩티드 라이브러리에 대한 예로서 사용되었다. 이러한 세포외 도메인의 아미노산 서열은 다음과 같다:

1 LSPGLKCVCL LCDSSNFTCQ TEGACWASVM LTNGKEQVIK SCVSLPELNA 50

51 QVFCHSSNNV TKTECCFTDF CNNITLHLPT ASPNAPKLGP ME 92 (서열번호 208).

디설파이드 브릿징에 대한 지식이 없으면, 상기 서열에서 Cys 잔기에 대한 모든 가능한 조합이 모방되었다.

펩티드 합성

예시적인 인간 ALK7 세포외 도메인의 에피토프를 재구성하기 위해, 펩티드 기반 에피토프 모방체의 라이브러리를 고체-상 Fmoc 합성을 사용하여 합성하였다. 아미노 관능화된 폴리프로필렌 지지체는 독점적인 친수성 중합체 제형으로 그라프팅한 후, 디사이클로헥실카보디이미드 (DCC)를 사용하여 t-부틸옥시카보닐-헥사메틸렌디아민 (BocHMDA)와 N-하이드록시벤조트리아졸 (HOBt)과의 반응 및 트리플루오로아세트산 (TFA)을 사용하여 Boc-기의 후속적 절단에 의해 수득되었다. 표준 Fmoc-펩티드 합성을 사용하여 맞춤 변형된 JANUS^® 액체 취급 스테이션 (Perkin Elmer, Boston, MA)에 의해 아미노-관능화된 고체 지지체 상의 펩티드를 합성하였다.

구조 모방체의 합성은 펩칸의 독점적인 CLIPS (Chemically Linked Peptides on Scaffolds) 기술을 사용하여 수행되었다. CLIPS 기술은 펩티드를 단일 루프, 이중-루프, 삼중 루프, 시트형 접힘, 나선형 접힘 및 이들의 조합으로 구성할 수 있다. CLIPS 주형은 시스테인 잔기에 결합된다. 펩티드에서 다수의 시스테인의 측쇄는 1개 또는 2개의 CLIPS 템플릿에 연결된다. 예를 들어, P2 CLIPS (2,6-비스(브로모메틸)피리딘)의 0.5 mM 용액을 중탄산암모늄 (20 mM, pH 7.8)/아세토니트릴 (1:3(v/v))에 용해시킨다. 이 용액은 펩티드 어레이에 첨가된다. CLIPS 주형은 펩티드-어레이 (3 μl 웰을 갖는 455 웰 플레이트)의 고체-상 결합 펩티드에 존재하는 2개의 시스테인의 측쇄에 결합할 것이다. 펩티드 어레이는 용액으로 완전히 덮으면서 용액 중에서 30 내지 60분 동안 부드럽게 진탕시켰다. 마지막으로, 펩티드 어레이는 과량의 H₂O로 광범위하게 세척하고, 70℃에서 30분 동안 PBS (pH 7.2) 중 1% SDS/0.1% 베타-머캅토에탄올을 함유하는 파괴-완충액에서 초음파처리한 후, 추가의 45분 동안 H₂O에서 초음파처리하였다. T3 CLIPS 보유 펩티드는 유사한 방식으로 제조되었지만 이제 3개의 시스테인으로 제조되었다.

ELISA 스크리닝

각각의 합성된 펩티드로의 항체의 결합은 펩스칸-기반 ELISA에서 시험되었다. 펩티드 어레이는 1차 항체 용액과 함께 항온처리하였다 (4℃에서 밤새). 세척 후, 펩티드 어레이는 25℃에서 1시간 동안 항체 퍼옥시다제 접합체 (예를 들어, Southern Biotech (Cat. No. 6175-05, Birminghan, AL)로부터의 토끼 항-마우스 IgG(H+L) HRP 접합체)의 1/1000 희석과 함께 항온처리하였다. 세척 후, 퍼옥시다제 기질 2,2'-아지노-디-3-에틸벤즈티아졸린 설포네이트 (ABTS) 및 20 μl/ml의 3% H₂O₂가 첨가되었다. 1시간 후, 발색이 측정되었다. 발색 현상은 CCD (charge coupled device) - 카메라 및 이미지 처리 시스템으로 정량화되었다.

데이터 처리

CCD 카메라로부터 얻은 값은 표준 96-웰 플레이트 ELISA-리더와 유사하게, 0 내지 3000 mAU의 범위이다. 결과를 정량화하여 Peplab 데이터베이스에 저장한다. 가끔, 웰에 기포가 함유되어 가양성 값을 초래되고 카드를 수동으로 검사하여 기포로 인한 임의의 값을 0으로 평가한다.

합성 품질 관리

합성된 펩티드의 품질을 확인하기 위해, 별도의 양성 및 음성 대조군 펩티드 세트가 병렬로 합성되었다. 이들은 상업적인 항체 3C9 및 57.9로 스크리닝되었다 (참조: Posthumus et al. (1990) J. Virol. 64:3304-3309).

문헌 참조

Timmerman et al. (2007). J. Mol. Recognit. 20:283-299;

Langedijk et al. (2011). Anal. Biochem. 417: 149-155.

데이터 분석 및 핵석

박스플롯 분석

박스-앤-위스커 플롯은 1970대 John Tukey가 발명한 일련의 데이터를 표시 할 수 있는 탐색 도구이다. 박스 플롯은 소정의 데이터 세트의 데이터 분포에 대한 첫번째 인상을 제공한다. 각 박스 플롯은 데이터 세트 극단 (최대 및 최소), 상한 및 하한 사분위수, 미디어 및 극단치를 표시한다 (flowingdata.com의 월드 와이드 웹 사이트에서 박스 플롯 도식을 참조한다). 이 박스플롯의 주요 애플리케이션은 기준 수준을 찾고 모든 w 데이타 품질 평가에 대한 노이즈에 대한 신호를 추정하는 것이다.

선형 강도 프로파일

선형 강도 프로파일은 소정의 샘플에 대해 기록된 강도 프로파일의 그래픽 표현을 도시한다. 종종 상이한 펩티드 세트 상에 기록된 강도 프로파일의 오버레이는, 상이한 유형의 에피토프 모방체에 대한 소정의 항체의 반응 사이의 직접적인 비교를 허용하기 위해 하나의 그래프에 플롯팅된다.

히트 맵 (heat map) 분석

히트 맵은 2차원 맵에서 변수에 의해 취해진 값이 색상으로 표시되는 데이터의 그래픽 표현이다. 히트 맵은 펩티드 세트(들) 상의 샘플(들)에 대해 기록된 ELISA 강도의 표현 또는 비교 및/또는 소정의 샘플에 대한 불연속 펩티드 라이브러리에 기록된 데이터의 시각화를 위해 사용될 수 있다.

1. 단순 강도 프로파일의 히트 맵 분석

(예를 들어, 중첩 펩티드의 라이브러리에 기록된 다중클론 샘플로부터) 반응의 크기는 색상으로 암호화되고 키는 플롯에 포함된다. 응답은 히스토그램 또는 히트 맵과 같이 두 가지 보완적이 방식으로 표시된다. 단일 샘플의 경우 히스토그램을 쉽게 파악할 수 있지만 히트맵에서 분석하는 경우 많은 샘플로부터의 응답의 비교가 더 쉬우며, 여기서 각각의 샘플은 행 (또는 열)으로 그리고 각각의 펩티드는 열 (또는 행)으로 플롯팅된다.

2. 불연속 펩티드 라이브러리를 재구성하는 해트 맵 매트릭스

히트 맵은 2차원 맵에서 변수에 의해 취해진 값이 색상으로 표시되는 데이터의 그래픽 표현이다. 이중-루프 CLIPS 펩티드의 경우, 이러한 2차원 맵은 제1 및 제2 루프의 독립적인 서열로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 16개 CLIPS 펩티드의 서열은 루프 1에서 4개의 독특한 서브-서열 및 경로 2에서 4개의 독특한 서브-서열의 효과적인 순열이다. 따라서, 관찰된 ELISA 데이터는 4x4 매트릭스로 플롯팅될 수 있으며, 여기서 각각의 X 좌표는 제1 루프의 서열에 상응하고, 각각의 Y 좌표는 제2 루프의 서열에 상응한다. CLIPS 펩티드에 대해 관찰된 ELISA 값은 펩티드가 갖는 특정 루프 1/루프 2 서열을 함유하는 행과 열이 교차하는 정사각형에서 확인할 수 있다.

시각화를 더욱 용이하게 하기 위해, ELISA 값은 연속 그라디언트로부터 색상으로 대체될 수 있다. 예시적인 경우에, 매우 낮은 값은 녹색으로 착색되고, 매우 높은 값은 적색으로 착색되고, 평균 값은 검은색으로 착색된다.

펩티드 설계

상이한 펩티드 세트는 하기 설계에 따라 합성되었다. 일부 미니 카드에서 펩티드의 실제 순서는 무작위였다. 모든 실험 데이터세트가 최적의 결과를 산출하지는 않았다. 최적의 결과를 가진 것만이 본 실시예에서 논의된다.

SET 1 펩티드 (모방체 유형: 선형; 표지: LIN)는 하나의 잔기의 오프셋을 갖는 인간 ALK7 세포외 도메인으로부터 유래된 15-aa 길이의 선형 펩티드를 함유한다. SET 1에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

LSPGLKCVCLLCDSS (서열번호 209)

SPGLKCVCLLCDSSN (서열번호 210)

PGLKCVCLLCDSSNF (서열번호 211)

GLKCVCLLCDSSNFT (서열번호 212)

LKCVCLLCDSSNFTC (서열번호 213)

KCVCLLCDSSNFTCQ (서열번호 214)

CVCLLCDSSNFTCQT (서열번호 215)

VCLLCDSSNFTCQTE (서열번호 216)

CLLCDSSNFTCQTEG (서열번호 217) 및

LLCDSSNFTCQTEGA (서열번호 218)

SET 2 (모방체 유형: 선형; 표지: AA)는 SET 1의 펩티드를 함유하지만, 위치 10 및 11에서 잔기는 알라닌으로 대체되었다. 고유 알라닌은 어느 위치에서나 발생했을 때, 이는 글리신으로 대체되었다. SET 2에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

SNNVTKTECAATDFC (서열번호 219)

AQVFCHSSNAATKTE (서열번호 220)

TLHLPTASPAGPKLG (서열번호 221)

MLTNGKEQVAASCVS (서열번호 222)

LKCVCLLCDAANFTC (서열번호 223)

WASVMLTNGAAQVIK (서열번호 224)

LLCDSSNFTAATEGA (서열번호 225)

TEGACWASVAATNGK (서열번호 226)

EQVIKSCVSAAELNA (서열번호 227) 및

CDSSNFTCQAAGACW (서열번호 228)

SET 3 (모방체 유형: 선형; 표지: LIN.2)은 SET 1의 펩티드를 함유하지만, 시스테인 잔기는 Cys-아세트아미도메틸 (acm; "X"로 나타냄)로 대체되었다. SET 3에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

SXVSLPELNAQVFXH (서열번호 229)

SSNFTXQTEGAXWAS (서열번호 230)

DSSNFTXQTEGAXWA (서열번호 231)

ELNAQVFXHSSNNVT (서열번호 232)

KTEXXFTDFXNNITL (서열번호 233)

HSSNNVTKTEXXFTD (서열번호 234)

SLPELNAQVFXHSSN (서열번호 235)

TEXXFTDFXNNITLH (서열번호 236)

AXWASVMLTNGKEQV (서열번호 237) 및

AQVFXHSSNNVTKTE (서열번호 238), 여기서 X = Cys-아세트아미도메틸 (acm).

SET 4 (모방체 유형: 단일 루프, mP2; 표지: LOOP17)는 17-aa 길이의 단일 루프 펩티드를 함유한다. 위치 2-16은 하나의 잔기의 오프셋을 갖는 인간 ALK7의 표적 서열로부터 유래된 15-mer 펩티드를 함유한다. 위치 1 및 17에서 시스테인은 mP2 CLIPS를 사용하여 루프 모방체를 생성하는데 사용되었다. 고유 시스테인은 Cys-acm (acm; 상기와 같이 "X"로 표시됨)으로 대체되었다. SET 4에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

CLSPGLKXVXLLXDSSC (서열번호 239)

CSPGLKXVXLLXDSSNC (서열번호 240)

CPGLKXVXLLXDSSNFC (서열번호 241)

CGLKXVXLLXDSSNFTC (서열번호 242)

CLKXVXLLXDSSNFTXC (서열번호 243)

CKXVXLLXDSSNFTXQC (서열번호 244)

CXVXLLXDSSNFTXQTC (서열번호 245)

CVXLLXDSSNFTXQTEC (서열번호 246)

CXLLXDSSNFTXQTEGC (서열번호 247) 및

CLLXDSSNFTXQTEGAC (서열번호 248), 여기서 X = Cys-아세트아미도메틸 (acm).

SET 5 (모방체 유형: 단일 루프, mP2; 표지: LOOP20)는 20-aa 길이의 단일 루프 펩티드를 함유한다. 위치 2-19는 하나의 잔기의 오프셋으로 인간 ALK7의 표적 서열로부터 유래된 18-mer 펩티드를 함유한다. 위치 1 및 20에서 시스테인은 mP2 CLIPS를 사용하여 루프 모방체를 생성하는데 사용되었다. 고유 시스테인은 Cys-acm (acm; 상기와 같이 "X"로 표시됨)으로 대체되었다. SET 5에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

CLSPGLKXVXLLXDSSNFTC (서열번호 249)

CSPGLKXVXLLXDSSNFTXC (서열번호 250)

CPGLKXVXLLXDSSNFTXQC (서열번호 251)

CGLKXVXLLXDSSNFTXQTC (서열번호 252)

CLKXVXLLXDSSNFTXQTEC (서열번호 253)

CKXVXLLXDSSNFTXQTEGC (서열번호 254)

CXVXLLXDSSNFTXQTEGAC (서열번호 255)

CVXLLXDSSNFTXQTEGAXC (서열번호 256)

CXLLXDSSNFTXQTEGAXWC (서열번호 257) 및

CLLXDSSNFTXQTEGAXWAC (서열번호 258), 여기서 X = Cys-아세트아미도메틸 (acm).

SET 6 (모방체 유형: α-나선형, mP2; 표지: HEL)은 하나의 잔기의 오프셋을 갖는 인간 ALK7의 표적 서열로부터 유래된 22-aa 길이의 α-나선형 모방체를 함유한다. 위치 1 및 5에서 잔기는 mP2 CLIPS를 사용하여 α-나선현 회전을 유도하기 위해 시스테인으로 대체되었다. 고유 시스테인은 Cys-acm (acm; 상기와 같이 "X"로 표시됨)으로 대체되었다. SET 6에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

CTKTCXXFTDFXNNITLHLPTA (서열번호 259)

CXWACVMLTNGKEQVIKSXVSL (서열번호 260)

CQVFCHSSNNVTKTEXXFTDFX (서열번호 261)

CLSPCLKXVXLLXDSSNFTXQT (서열번호 262)

CNAQCFXHSSNNVTKTEXXFTD (서열번호 263)

CSVMCTNGKEQVIKSXVSLPEL (서열번호 264)

CXFTCFXNNITLHLPTASPNAP (서열번호 265)

CVMLCNGKEQVIKSXVSLPELN (서열번호 266)

CEQVCKSXVSLPELNAQVFXHS (서열번호 267) 및

CTNGCEQVIKSXVSLPELNAQV (서열번호 268), 여기서 X = Cys-아세트아미도메틸 (acm).

SET 7 (모방체 유형: β-회전, mP2; 표지: BET)은 하나의 잔기의 오프셋을 갖는 인간 ALK7의 표적 서열로부터 유래된 22-aa 길이의 β-회전 모방체를 함유한다. 위치 11 및 12에서 잔기는 β-회전 핵화를 위해 "PG" 모티프로 대체되었다. 위치 1 및 22에서 시스테인 잔기는 mP2 CLIPS를 사용하여 결합되었다. 고유 시스테인은 Cys-acm (acm; 상기와 같이 "X"로 표시됨)으로 대체되었다. SET 7에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

CLSPGLKXVXPGXDSSNFTXQC (서열번호 269)

CSPGLKXVXLPGDSSNFTXQTC (서열번호 270)

CPGLKXVXLLPGSSNFTXQTEC (서열번호 271)

CGLKXVXLLXPGSNFTXQTEGC (서열번호 272)

CLKXVXLLXDPGNFTXQTEGAC (서열번호 273)

CKXVXLLXDSPGFTXQTEGAXC (서열번호 274)

CXVXLLXDSSPGTXQTEGAXWC (서열번호 275)

CVXLLXDSSNPGXQTEGAXWAC (서열번호 276)

CXLLXDSSNFPGQTEGAXWASC (서열번호 277) 및

CLLXDSSNFTPGTEGAXWASVC (서열번호 278), 여기서 X = Cys-아세트아미도메틸 (acm).

SET 8 (모방체 유형: 디설파이드 브릿지; 표지: CYS.25)은 인간 ALK7의 표적 서열로부터 유래된 25-aa 길이의 펩티드를 함유한다. 각각의 25-mer은 디설파이드 결합을 형성하는 2개의 시스테인 잔기를 함유한다. 다른 시스테인은 Cys-acm (acm; 상기와 같이 "X"로 표시됨)으로 대체되었다. SET 8에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

LSPGLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAX (서열번호 279)

SPGLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXW (서열번호 280)

PGLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWA (서열번호 281)

GLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWAS (서열번호 282)

LKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWASV (서열번호 283)

KCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWASVM (서열번호 284)

CVCLLXDSSNFTXQTEGAXWASVML (서열번호 285)

LSPGLKCVXLLCDSSNFTXQTEGAX (서열번호 286)

SPGLKCVXLLCDSSNFTXQTEGAXW (서열번호 287) 및

PGLKCVXLLCDSSNFTXQTEGAXWA (서열번호 288), 여기서 X = Cys-아세트아미도메틸 (acm).

SET 9 (모방체 유형: 디설파이드 브릿지; 표지: CYS.27)는 27-aa 길이의 펩티드를 함유한다. 위치 1-11 및 17-27에는 "GGSGG" (서열번호 289) 링커에 의해 연결된 인간 ALK7의 표적 서열로부터 유래된 11-mer 펩티드가 있다. 11-mers 둘 다는 디설파이드 결합을 형성하는 시스테인 잔기를 함유한다. 다른 시스테인은 Cys-acm (acm; 상기와 같이 "X"로 표시됨)으로 대체되었다. SET 9에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

LSPGLKCVXLLGGSGGNGKEQVIKSCV (서열번호 290)

PGLKCVXLLXGGSGGNGKEQVIKSCV (서열번호 291)

LKCVXLLXDSSGGSGGNGKEQVIKSCV (서열번호 292)

CVXLLXDSSNFGGSGGNGKEQVIKSCV (서열번호 293)

LSPGLKCVXLLGGSGGKEQVIKSCVSL (서열번호 294)

PGLKCVXLLXDGGSGGKEQVIKSCVSL (서열번호 295)

LKCVXLLXDSSGGSGGKEQVIKSCVSL (서열번호 296)

CVXLLXDSSNFGGSGGKEQVIKSCVSL (서열번호 297)

LSPGLKCVXLLGGSGGQVIKSCVSLPE (서열번호 298) 및

PGLKCVXLLXDGGSGGQVIKSCVSLPE (서열번호 299), 여기서 X = Cys-아세트아미도메틸 (acm).

SET 10 (모방체 유형: 불연속 에피토프 모방체, T3 CLIPS; 표지: MAT (MAT27 + MAT33))은 27-aa (MAT27) 또는 33-aa (MAT33) 길이의 조합 펩티드를 함유한다. 위치 2-16 및 18-32에서 MAT33의 경우, 표적 서열로부터 유래된 15-mer 펩티드가 있다. 시스테인 잔기는 위치 1, 17 및 33에 있고 불연속 에피토프 모방체를 생성하기 위해 T3 CLIPS에 의해 결합된다. 위치 2-13 및 15-26에서 MAT27의 경우, 표적 서열로부터 유래된 12-mer 펩티드가 있다. 시스테인 잔기는 위치 1, 14 및 27에 있고 불연속 에피토프 모방체를 생성하기 위해 T3 CLIPS에 의해 결합된다. MAT27 및 MAT33에서 고유 시스테인은 Cys-acm (acm; 상기와 같이 "X"로 표시됨)으로 대체되었다. SET 10에서 처음 10개 서열은 다음과 같다:

CLXDSSNFTXQTEGAXCTDFXNNITLHLPTASC (서열번호 300)

CTEGAXWASVMLTNGKCNGKEQVIKSXVSLPEC (서열번호 301)

CTKTEXXFTDFXNNITCNGKEQVIKSXVSLPEC (서열번호 302)

CNFTXQTEGAXWASVMCPGLKXVXLLXDSSNFC (서열번호 303)

CXFTDFXNNITLHCNNVTKTEXXFTDC (서열번호 304)

CLHLPTASPNAPKCEQVIKSXVSLPEC (서열번호 305)

CLPTASPNAPKLGCASPNAPKLGPMEC (서열번호 306)

CLSPGLKXVXLLXCXNNITLHLPTASC (서열번호 307)

CTEXXFTDFXNNITLHCXNNITLHLPTASPNAC (서열번호 308) 및

CXNNITLHLPTASPNACGAXWASVMLTNGKEQC (서열번호 309), 여기서 X = Cys-아세트아미도메틸 (acm).

스크리닝 세부사항

항체 결합은 항체 농도 및 ELISA 완충액에서 경쟁 단백질의 양 및 성질을 포함하여 요인의 조합에 의존한다. 또한, 예비-코트 조건 (실험 샘플과 함께 항온처리하기 전에 펩티드 어레이의 특정 처리)은 결합에 영향을 미친다. 예시적인 mAb J02의 경우, 희석액은 샘플 완충액과 전처리 완충액으로서 25% Pepscan 완충액 및 전처리 (SQ)와 함께 1 μg/ml의 항체를 함유한다. 예시적인 mAb G05의 경우, 희석액은 샘플 완충액과 전처리 완충액으로서 10% Pepscan 완충액 및 전처리 (SQ)와 함께 1 μg/ml의 항체를 함유한다. 예시적인 mAb C03의 경우, 희석액은 샘플 완충액으로 0.1% Pepscan 완충액 및 전처리 (SQ) 및 전처리 완충액으로 1% SQ와 함께 5 μg/ml의 항체를 함유한다.

스크리닝 결과

항체 mAb J02는 높은 엄격성 조건하에 시험되었고 입체형태적 에피토프 모방체와의 결합을 산출하였다. 선형 펩티드와의 결합은 검출되지 않았다. 항체는 코어 서열 ₄₅LPELNAQVFCHSSNNVTK₆₂ (서열번호 310)를 갖는 단일 루프 및 α-나선형 에피토프 모방체에 결합하였다.

불연속 에피토프 모방체로 기록된 결합 프로파일의 분석은 펩티드 스트레치 ₂₆WASVMLTNGKEQ₃₇ (서열번호 311) 및 ₇₈LPTASPNAPK₈₇ (서열번호 312)가 또한 mAb J02에 의해 인식되지만, ₄₅LPELNAQVFCHSSNNVTK₆₂ (서열번호 310) 내 영역과의 조합에서만 인식됨을 시사하였다.

항체 mAb G05는 적당한 엄격성 조건 및 약하게 결합된 입체형태적 에피토프 모방체하에 시험되었다. 선형 펩티드와의 결합은 검출되지 않았다. 항체는 코어 서열 ₄₃VSLPELNAQVFCHSSNNVTK₆₂ (서열번호 313)를 갖는 단일 루프 및 α-나선형 에피토프 모방체에 매우 약하게 결합하였다.

불연속 에피토프 모방체로 기록된 결합 프로파일의 분석은 펩티드 스트레치 ₆KCVCLLCDSS₁₅ (서열번호 314), ₂₃GACWASVMLT₃₂ (서열번호 315) 및 ₇₁CNNITLHLPT₈₀ (서열번호 316)이 또한 항체 G05에 의해 인식되지만, ₄₃VSLPELNAQVFCHSSNNVTK₆₂ (서열번호 313) 내 영역과의 조합에서만 인식됨을 시사하였다.

항체 mAb C03은 높고 중간 정도의 엄격성 조건하에 시험되었고 어레이 상에 존재하는 임의의 펩티드에 결합하지 않았다. 따라서, 항체는 낮은 엄격성 조건 및 어레이 상에 존재하는 모든 세트로부터 체계적으로 결합된 펩티드하에 재시험되었다. 주목할 만한 것은, 기록된 강도 프로파일은 적은 양의 경쟁 단백질로 인해 상승된 배경을 나타냈다.

항체 C03은 부분 에피토프일 수 있는 코어 서열 ₆₉DFCNNITLHLP₇₉ (서열번호 317)를 함유하는 선형 및 단순 입체형태적 에피토프 모방체와 동일하게 잘 결합하였다.

불연속 및 디설파이드 브릿지 에피토프 모방체로 기록된 결합 프로파일의 부석은 펩티드 스트레치 ₁LSPGLKCVCLL₁₁ (서열번호 318) 및 ₅₁QVFCHSSNN₅₉ (서열번호 319)가 일반적으로 ₆₉DFCNNITLHLP₇₉ (서열번호 317)를 함유하는 모방체에 의한 결합을 증가시킬 수 있음을 시사하였다.

결론

3개의 단일클론 항체는 선형 및 다양한 입체형태적 에피토프 모방체를 함유하는 Pepscan을 사용하여 시험되었고 결과는 에피토프 후보물을 시사함을 허용하였다.

Pepscan 데이터는 3개 항체 모두가 인간 ALK7의 1차 구조에 인접하지 않은 3개 이상의 펩티드 스트레치로 구성된 입체형태적 에피토프를 인식한다는 것을 나타낸다. 그러나, 단일 피크를 갖는 강도 프로파일이 단순한 입체형태적 또는 선형 에피토프 모방체로 기록되었기 때문에 3개 항체 모두에 대해 코어 에피토프 영역을 유도할 수 있었다.

주목할 만한 것은, CLIPS 기반 에피토프 모방체와의 검출 가능한 결합이 관찰되었지만, mAb J02 및 mAb G05도 선형 펩티드와의 어떠한 반응성도 나타내지 않았다. 이 관찰은 구조화 요소의 존재가 mAb J02 및 mAb G05의 결합에 중요하다는 것을 나타낸다.

불연속 에피토프 모방체로 기록된 데이터의 분석은 추가의 펩티드가 모든 항체에 대한 결합을 증가시킨다는 것을 나타낸다. 현재 발견의 요약은 표 5에 있다.

표 5. 동정된 에피토프 후보물 목록

^*): 우세하게 인식되는 영역

항체 mAb J02 및 mAb G05에 대해 동정된 코어 에피토프 영역은 대부분은 중첩된다. 그럼에도 불구하고, 이들의 불연속 에피토프의 전체 구성은 상이하다. 대조적으로, mAb C03에 대해 동정된 코어 에피토프는 mAb J02 및 mAb G05의 것들과 상이하지만, mAb G05의 부분 에피토프와 부분적으로 중첩된다.

3D 구조적 모델 상의 에피토프 맵핑

상기 기재된 바와 같이, 항-ALK7 항체에 대한 ALK7 상의 에피토프는 적어도 1차 에피토프 및 2차 에피토프를 포함한다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 1차 에피토프는 적어도 mAb J02의 경우 ₄₅LPELNAQVFCHSSNNVTK₆₂ (서열번호 310). mAb G05의 경우 ₄₂VSLPELNAQVFCHSSNNVTK₆₃ (서열번호 313)그리고 mAb C03의 경우 ₆₉DFCNNITLHLP₇₉ (서열번호 317)를 포함한다 (도 1a). 인간 ALK7 상의 2차 에피토프는 적어도 mAb J02의 경우 ₂₆WASVMLTNGKEQ₃₇ (서열번호 311) 및 ₇₈LPTASPNAPK₈₇ (서열번호 312), mAb G05의 경우 ₆KCVCLLCDSS₁₅ (서열번호 314), ₂₃GACWASVMLT₃₂ (서열번호 315), 및 ₇₁CNNITLHLPT₈₀ (서열번호 316) 그리고 mAb C03의 경우 ₁LSPGLKCVCLL₁₁ (서열번호 318) 및 ₅₁QVFCHSSNN₅₉ (서열번호 319)를 포함한다 (도 1b). 이들 에피토프 중에서, 1차 에피토프는 각각의 시험된 mAb에 대해 우세하게 인식되는 영역이다. 2차 에피토프 중 적어도 하나는 상응하는 mAb에 의해 추가로 인식될 수 있다.

Alk7의 상동성 기반 구조적 모델은 4개의 Activin 타입 I 수용체 (즉, ALK1 (PDB ID: 4FAO), ALK3 (PDB ID: 2GOO), ALK5 (PDB ID: 2PJY), 및 ALK6 (PDB ID:3EVS))의 공지된 결정 구조로부터 유도된 복합 주형에 기반하여 생성되었다. 주형 구조가 ALK7의 잔기 4-84에 대해서만 존재하기 때문에, 이들 잔기만이 모델링되었다 (모델링을 위해 이들 ALK 단백질 사이의 1차 서열 비교를 위해, 도 2 참조). 최종 3-D 모델은 더욱 최적화되고 에너지는 최소화되었다 (도 3). ALK-1/3/5/6 보고된 구조에 기반한 어떠한 주형 구조도 존재하지 않기 때문에 인간 ALK7의 잔기 85-92는 구조화되지 않았다 (도 3b). 상기 논의된 바와 같이, 항체 mAb J02 및 mAb G05에 대해 동정된 1차 에피토프 영역은 대부분은 중첩된다 (도 3a 및 3b). 그럼에도 불구하고, 이들의 불연속 에피토프의 전체 조성은 상이하다 (도 3c). 대조적으로, mAb C03에 대해 동정된 1차 에피토프는 mAb J02 및 mAb G05의 것들과 상이하지만 (도 3a), mAb G05의 부분 에피토프와 부분적으로 중첩된다 (도 3b).

실시예 6. 비만 마우스에서 지방과다 및 제지방 체질량에 대한 ALK7 Ab의 효과

출원인은 식이-유도된 비만의 뮤린 모델에서 지방 및 제지방 조직량에 대한 여러 인간 단일클론 ALK7 항체 (ALK7 mAb)의 효과를 조사하였다.

수컷 마우스 (군마다 n=8)는 NMR을 사용하여, 기준선에서 지방 및 제지방 근육량에 대해 평가되었다. 이어서, 마우스는 상이한 처리군으로 나누었다: 1) 표준 사료 식이 (SD)가 공급되고 TBS 비히클로 주당 2회 피하 처리된 마우스; 2) 고지방 식이 (HFD)가 공급되고 TBS 비히클로 주당 2회 피하 처리된 마우스; 3) 10 mg/kg의 ALK7 mAb J02로 주당 2회 피하 처리된 HDF 마우스; 4) 10 mg/kg의 ALK7 mAb K02로 주당 2회 피하 처리된 HDF 마우스; 5) 10 mg/kg의 ALK7 mAb G05로 주당 2회 피하 처리된 HDF 마우스; 6) 10 mg/kg의 ALK7 mAb C03으로 주당 2회 피하 처리된 HDF 마우스; 및 7) 10 mg/kg의 ALK7 mAb L02로 주당 2회 피하 처리된 HDF 마우스. 3주 후, 지방 및 제지방 조직량을 평가하기 위해 마우스를 다시 한번 전신 NMR 스캔에 적용하였고, 이들 측정치는 지방 및 제지방 근육의 기준선 양과 비교되었다.

TBS 처리된 HFD 마우스는 TBS 처리된 SD 마우스와 비교하여 훨씬 높은 양의 지방 조직을 나타내었다 (도 4). 평균적으로, 각 ALK7 mAb로 처리는 TBS 처리된 HFD 마우스와 비교하여 HFD 마우스에서 훨씬 적은 지방 조직 축적을 유발하였다 (대략 -30% 적음) (도 4). 대조적으로, 모든 마우스가 기준선으로부터 근육량에서 증가를 나타내긴 하지만, 처리군 사이에서 어떤 유의한 차이도 없었다 (도 5).

종합하면, 이들 데이터는 ALK7 mAb가 생체내에서 지방 수준을 감소시키는데 사용될 수 있다는 것을 증명한다. 따라서, 상기 데이터는 ALK7 항체가 특히 비만한 환자에서 바람직하지 않게 높은 지방 수준과 연관된 다양한 장애와 합병증을 치료하는데 유용할 수 있다는 것을 나타낸다. 게다가, 상기 데이터는 지방 감소가 제지방 체질량을 동시에 증가시키지 않으면서 달성될 수 있다는 것을 보여주는데, 이것은 ALK7 Ab가 근육량을 또한 증가시키지 않으면서 체지방 함량을 감소시키는 것이 바람직한 환자를 치료하는데 특히 유용할 수 있다는 것을 나타낸다.

실시예 7. 확립되 비만을 갖는 마우스에 대한 ALK7 Abs의 효과

본 실시예는 비만이 확립된 마우스에서 체중, 지방 및 제지방 조직량 분포에 대한 인간 단일클론 ALK7 항체 (ALK7 mAb)의 치료 잠재력에 대한 조사를 기술한다. ALK7 항체의 잠재력을 시험하기 위해, 마우스 (C57BL/6 균주)는 체중을 기준으로 무작위화하고 연구 기준선에서 각 마우스의 체중이 대략 35 그램에 도달할 때까지 고지방 식이 (HFD)를 공급하였다. 대조군 마우스 (n=5)에 표준 일반 식이 (SD)를 공급하였다. 이어서, 마우스 (그룹 당 n=5-9)는 상이한 처리군으로 나누었다: 1) TBS 비히클로 주당 2회 피하 처리된 SD 마우스 (즉, SD가 공급된 마우스); 2) TBS 비히클로 주당 2회 피하 처리된 HFD 마우스 (즉, HFD가 공급된 마우스); 3) 1 mg/kg의 ALK7 mAb C03으로 주당 2회 피하 처리된 HDF 마우스; 4) 3 mg/kg의 ALK7 mAb C03으로 주당 2회 피하 처리된 HDF 마우스; 및 5) 10 mg/kg의 ALK7 mAb C03으로 주당 2회 피하 처리된 HDF 마우스. TBS 또는 ALK7 mAb C03을 사용한 처리는 6주 동안 수행되었다. 기준선, 3주 및 6주 시점에서 지방 및 제지방 조직량을 평가하기 위해 마우스를 전신 NMR 스캔에 적용하였다. 연구 기간 동안 1주에 2회 체중 저울을 사용하여 체중을 기록하였다.

연구 기준선에서, HFD를 공급받은 모든 마우스는 SD를 공급받은 마우스와 비교하여 체중에서 평균 26.2% (P<0.001)의 증가를 나타냈다 (도 6). HFD를 6주 동안 계속 공급받고 TBS로 처리한 마우스는 기준값에 비해 체중이 더 증가하였다 (평균 ~22%, P<0.001) (도 7 및 도 8). 대조적으로, HFD + ALK7 항체 (1, 3 또는 10 mg/kg) 처리군은 이 6주 기간 동안 이들 각각의 기준선 체중과 비교하여 체중의 유의한 증가를 나타내지 않았다 (도 7 및 도 8). 평균적으로, ALK7 mAb (1, 3 또는 10 mg/kg) 처리된 HFD 마우스는 6주 연구 종료시 TBS로 처리된 마우스와 비교하여 체중이 각각 -6% (P<0.05), -7% (P<0.001) 및 -9% (P<0.001) 현저히 덜 증가했다 (도 8).

체중 증가와 일치하게, 모든 처리군 (TBS 또는 ALK7 mAb)에서 기준선에 있는 모든 HFD 마우스는 TBS로 처리된 SD를 공급받은 마우스에 비해 (NMR에 의해 결정된 바와 같이) 증가된 지방량 (도 9) 및 비례적으로 감소된 제지방량 (도 10)을 나타내며, 이는 연구 개시시 비만을 나타냈다. HFD를 6주 동안 계속 공급받고 TBS로 처리된 마우스는 이들의 기준선과 비교하여 3주 및 6주 시점 둘 모두에서 NMR에 의해 결정된 바와 같이 지방량이 추가 증가되고 (도 9) 제지방량이 감소되었다 (도 10). HFD+ALK7 항체 (1, 3 또는 10 mg/kg) 처리군은 유의하게 감소된 지방량을 나타내었지만 (도 9) 3주 및 6주 시점 둘 모두에서 각각의 기준값과 비교하여 제지방량에서의 유의한 차이를 나타내지 않았다 (도 10).

연구 종료 전 6주 시점에서, HFD 마우스는 SD를 공급받은 TBS 처리된 마우스와 비교하여 지방량에서 ~154.5% (P<0.001) 평균 증가하였고, 제지방량에서만 최소 증가 (~15.9%, P<0.01)하였다 (도 11). HFD+ALK7 항체 처리군 (1, 3 또는 10 mg/kg mAb로)은 TBS로 처리된 HFD 마우스와 비교하여 각각 -29.4% (P<0.001), -35.9% (P<0.001) 및 -29.3% (P<0.001)의 유의하게 감소된 지방량을 나타내었고 제질량에서의 유의한 변화가 없었다 (도 11). 그러나, TBS+HFD 마우스와 비교하여 ALK7 mAb 처리군 (1, 3 또는 10 mg/kg) 중 어느 것에서도 제지방량에서의 유의한 차이가 없었다 (도 11).

종합하면, 이들 데이터는 ALK7 mAb가 생체내에서 지방 수준을 감소시키는데 사용될 수 있다는 것을 증명한다. 따라서, 상기 데이터는 ALK7 항체가 특히 비만한 환자에서 바람직하지 않게 높은 지방 수준과 연관된 다양한 장애와 합병증을 치료하는데 유용할 수 있다는 것을 나타낸다. 게다가, 상기 데이터는 지방 감소가 제지방 체중을 동시에 증가시키지 않으면서 달성될 수 있다는 것을 보여주는데, 이것은 ALK7 항체가 근육량을 또한 증가시키지 않으면서 체지방 함량을 감소시키는 것이 바람직한 환자를 치료하는데 특히 유용할 수 있다는 것을 나타낸다.

SEQUENCE LISTING <110> ACCELERON PHARMA INC. ADIMAB, LLC <120> ALK7 BINDING PROTEINS AND USES THEREOF <130> APH-00625 <140> <141> <150> 62/577,038 <151> 2017-10-25 <160> 341 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val 1 5 10 <210> 4 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln 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ggaaggggct ggagtggatt gggaacatct attatagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300 ggcagatacc aaagcgccac agccgattac tattacggta tggatgtctg gggccaggga 360 acaactgtca ccgtctcctc a 381 <210> 24 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 24 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser 20 25 30 <210> 25 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 25 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 26 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 26 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp 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<400> 33 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 34 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 34 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 35 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 35 Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 37 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 38 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 39 Arg Tyr Arg Gly Val Ser Phe Asp Ile 1 5 <210> 40 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 40 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Tyr Arg Gly Val Ser Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 41 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 41 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caggagatac 300 agaggagtgt cattcgacat atggggtcgg ggtacaatgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 42 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 42 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 <210> 43 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 43 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser 1 5 10 <210> 44 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 44 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 45 Trp Gly Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 46 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 46 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 47 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 47 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 48 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 48 Gln Gln Asp Ser Ile Asp Ile Thr 1 5 <210> 49 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 49 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Ser Ile Asp Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 50 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 50 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag caggactcca tcgacatcac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 51 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 51 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 52 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 53 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 53 Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 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ggtgccatcc 180 cgcttctcag ggagcggtag cgggaccgat ttcaccctca ctatcagcag cctgcagcct 240 gaagactttg ctacctacta ctgccagcaa gccgcttctt atcctctgac tttcggtggg 300 ggtactaaag tggagattaa a 321 <210> 71 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 71 gatattcaga tgacacagtc acctagcagt ctgagcgcat cagtgggtga tcgagtgaca 60 atcacttgta gagcttccca gtctattagc tcatacctga actggtatca gcaaaagcct 120 gggaaggctc ctaagctgtt gatctatgga gcatctagcc tgcagtccgg cgtgccatcc 180 cgcttcagcg ggagcggctc cgggaccgat tttaccctga caatctctag cctgcagcct 240 gaagattttg caacctacta ctgccagcag gcatacagct tcccctggac attcggaggt 300 ggcataaaag ttgaaatcaa a 321 <210> 72 <400> 72 000 <210> 73 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 73 Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 74 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 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<210> 85 <211> 493 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Met Thr Arg Ala Leu Cys Ser Ala Leu Arg Gln Ala Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Ala Ala Ala Ala Glu Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu 20 25 30 Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala 35 40 45 Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val 50 55 60 Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn 65 70 75 80 Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr 85 90 95 Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met 100 105 110 Glu Leu Ala Ile Ile Ile Thr Val Pro Val Cys Leu Leu Ser Ile Ala 115 120 125 Ala Met Leu Thr Val Trp Ala Cys Gln Gly Arg Gln Cys Ser Tyr Arg 130 135 140 Lys Lys Lys Arg Pro Asn Val Glu Glu Pro Leu Ser Glu Cys Asn Leu 145 150 155 160 Val Asn Ala Gly Lys Thr Leu Lys Asp Leu Ile Tyr Asp Val Thr Ala 165 170 175 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Leu Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala 180 185 190 Arg Thr Ile Val Leu Gln Glu Ile Val Gly 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Val Glu Glu Tyr Gln Leu 405 410 415 Pro Tyr Tyr Asp Met Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu Glu Met Arg 420 425 430 Lys Val Val Cys Asp Gln Lys Phe Arg Pro Ser Ile Pro Asn Gln Trp 435 440 445 Gln Ser Cys Glu Ala Leu Arg Val Met Gly Arg Ile Met Arg Glu Cys 450 455 460 Trp Tyr Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys 465 470 475 480 Thr Ile Ser Gln Leu Cys Val Lys Glu Asp Cys Lys Ala 485 490 <210> 86 <211> 493 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 86 Met Thr Pro Ala Arg Arg Ser Ala Leu Ser Leu Ala Leu Leu Leu Val 1 5 10 15 Ala Leu Ala Ser Asp Leu Ala Ala Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu 20 25 30 Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala 35 40 45 Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ser Lys Ser Cys Val 50 55 60 Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn 65 70 75 80 Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr 85 90 95 Gln His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asp Ala Pro Arg Leu Gly Pro Thr 100 105 110 Glu Leu Thr Val Val Ile Thr Val Pro Val Cys Leu Leu Ser Ile Ala 115 120 125 Ala Met Leu Thr Ile Trp Ala Cys Gln Asp Arg Gln Cys Thr Tyr Arg 130 135 140 Lys Thr Lys Arg His Asn Val Glu Glu Pro Leu Ala Glu Tyr Ser Leu 145 150 155 160 Val Asn Ala Gly Lys Thr Leu Lys Asp Leu Ile Tyr Asp Ala Thr Ala 165 170 175 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala 180 185 190 Arg Thr Ile Val Leu Gln Glu Ile Val Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu 195 200 205 Val Trp His Gly Arg Trp Cys Gly Glu Asp Val Ala Val Lys Ile Phe 210 215 220 Ser Ser Arg Asp Glu Arg Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln 225 230 235 240 Thr Val Met Leu Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp 245 250 255 Asn Lys Asp Asn Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Glu Tyr 260 265 270 His Glu Gln Gly Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Asn Arg Asn Ile Val Thr 275 280 285 Val Ala Gly Met Val Lys Leu Ala Leu Ser Ile Ala Ser Gly Leu Ala 290 295 300 His Leu His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala 305 310 315 320 His Arg Asp Ile 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17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 89 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 90 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 90 Pro Ser Tyr Gln Pro Ile Tyr 1 5 <210> 91 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 91 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Val Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Ser Tyr Gln Pro Ile Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 92 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 92 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttttcg gtgtatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggaa gtggtgatag cacagtgtac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caagccttct 300 taccaaccaa tatactgggg acagggtaca ttggtcaccg tctcctca 348 <210> 93 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 93 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 20 25 30 <210> 94 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 94 Trp Gly Gln Gly Thr Leu 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Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 101 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 102 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 102 Ser Ser Ala Ile Gly 1 5 <210> 103 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 103 Gly Ile Trp Pro Ile Phe Gly Thr Ala Leu Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 104 Asp Pro Arg Glu Tyr Ile His Val Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 105 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 105 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly 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<210> 107 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 107 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 108 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 108 Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 109 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 109 Gln Gln Ala Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 110 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 110 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 113 Phe Gly Gly Gly Ile Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 114 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 114 Gly Gln Ala Ile Ser 1 5 <210> 115 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 115 Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 116 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 116 Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val 1 5 10 <210> 117 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 117 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Gln 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln 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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 119 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 120 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 120 Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 121 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 121 Gln Ala Ser His Asp Ile Asp Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 122 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 122 Tyr Ala Ser Asn Leu Lys Thr 1 5 <210> 123 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 123 Gln Gln Ser Arg Ala Ser Pro Pro Thr 1 5 <210> 124 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 124 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser His Asp Ile Asp Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Lys Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Ala Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 125 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 125 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ala Tyr 1 5 <210> 126 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 126 Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 127 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 127 Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp 1 5 10 15 Val <210> 128 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 128 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 129 <211> 381 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 129 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtgctt actactgggc gtggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct atttgagtgg gagcaccact 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300 ggcagatacc aaagcaggtc gccggattac tattacggta tggatgtctg gggccaggga 360 acaacggtca ccgtctcctc a 381 <210> 130 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 130 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser 20 25 <210> 131 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 131 Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 1 5 10 15 Gly <210> 132 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 132 Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 133 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 133 Gly Ala Phe Ser Arg Ala Asn 1 5 <210> 134 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 134 Gln Gln Leu Val Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 135 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 135 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Asn Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Val Ser Tyr Pro 85 90 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Synthetic peptide <400> 139 Asp Pro Val Gly Ala Arg Tyr Glu Val Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 140 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 140 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Gly Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Asn Ser Gly Trp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Val Ser Ala Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Pro Val Gly Ala Arg Tyr Glu Val Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 141 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 141 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcgct ggctacaata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg ggtgggaatt atcaacccta acagtggttg gacaaactat 180 gcacagaagt tccagggcag ggtcacgatg accagggaca cgtccgtcag cgcagcctac 240 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagaccct 300 gtcggagcaa gatacgaggt tttcgattac tggggacagg gtacattggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 142 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 142 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala 20 25 30 <210> 143 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 143 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val Gly Ile Ile 1 5 10 15 <210> 144 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 144 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 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Sequence: Synthetic polypeptide <400> 151 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 152 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 152 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Ser Tyr Gln Pro Ile Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 153 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 153 Phe Thr 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Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 172 Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 173 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 173 Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 174 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 174 Ala Arg Asp Pro Val Gly Ala Arg Tyr Glu Val Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 175 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 175 Phe Thr Phe Ser Val Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 176 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 176 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 177 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 177 Ala Lys Pro Ser Tyr Gln Pro Ile Tyr 1 5 <210> 178 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 178 Gly Thr Phe Ser Ser Ser Ala Ile Gly 1 5 <210> 179 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 179 Gly Ile Trp Pro Ile Phe Gly Thr Ala Leu Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 180 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 180 Ala Arg Asp Pro Arg Glu Tyr Ile His Val Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 181 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 181 Gly Thr Phe Ser Gly Gln Ala Ile Ser 1 5 <210> 182 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 182 Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 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ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caagccttct 300 taccaaccaa tatactgggg acagggtaca ttggtcaccg tctcctca 348 <210> 200 <211> 1431 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 200 atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60 ctgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120 tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt agtgcttact actgggcgtg gatccgccag 180 cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatt tgagtgggag caccacttac 240 aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tccgtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 300 ctgaagctga gttctgtgac cgccgcagac acggcggtgt actactgcgc cagagacggc 360 agataccaaa gcaggtcgcc ggattactat tacggtatgg atgtctgggg ccagggaaca 420 actgtcaccg tctcctcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 480 tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 540 gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 600 gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tcgtgaccgt gccctccagc 660 agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 720 gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 780 cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 840 atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 900 gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 960 cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1020 gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 1080 atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1140 cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 1200 ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1260 aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctatag caagctcacc 1320 gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1380 ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtccc cgggtaaatg a 1431 <210> 201 <211> 705 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 201 atgggttggt cttgcatcat gctgtttctg gcagccaccg caaccggagc tcactctgag 60 atcgtactca cacaaagccc tggaactctc agcctgagtc ctggcgagag agccacactg 120 tcctgcaaag ctagtcagtc tgtgtcatct tcatacctcg cctggtatca gcagaagccc 180 ggccaggccc cccgattgct gatctacggc gctttttccc gggctaatgg catccctgac 240 aggttttccg gttctgggtc tggtaccgat ttcaccctca caatctcccg gctggagcca 300 gaagatttcg cagtgtatta ttgtcagcag ctggtgagtt acccatttac ctttggaggc 360 ggtaccaagg tagaaatcaa gcgtactgtg gccgcacctt ctgtttttat tttcccccca 420 agtgatgaac agctgaaaag tgggactgcc tcagtggtgt gtcttctgaa taatttctac 480 cccagggagg ctaaagtgca atggaaggtg gacaacgctt tgcagtctgg aaactcacag 540 gagagtgtta ccgagcagga ttccaaggac tcaacatata gtctttccag cactcttaca 600 ctgtctaagg ccgactatga aaaacacaag gtctacgcct gcgaggtgac tcaccagggc 660 ctgtcctccc 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tggacaagag agttgagccc 720 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 780 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 900 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 960 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1020 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1200 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260 ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa tga 1413 <210> 203 <211> 702 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 203 atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactccgac 60 atccagatga cacagtcccc tagcagcttg tcagcctcag tgggcgatag agtgaccatc 120 acctgtcaag ccagccatga tatagacaac tatctcaatt ggtaccagca gaaaccaggc 180 aaggcaccaa agctcctgat ctattacgcc tcaaacctta agaccggcgt cccaagccgg 240 ttttcaggca gcggcagcgg gacagatttc accttcacaa tttcatcact gcaacctgag 300 gatatagcca cttactattg tcagcagagc agagccagcc cccctacctt cggcggcggt 360 accaaagttg aaatcaagag ggcagatgcc gcccccacag tgtctatttt tcctccatct 420 agcgaacagt tgacttccgg tggagcatcc gtggtgtgtt ttttgaacaa tttttaccct 480 aaggacatta atgtcaaatg gaaaatagac gggtcagaac ggcagaacgg cgtgctgaac 540 agttggaccg atcaggactc aaaggactct acctactcaa tgagctccac actgaccttg 600 accaaagacg agtacgaacg acataacagc tatacatgtg aggctaccca taagacatcc 660 acttccccca tcgtgaaatc cttcaaccgt aacgagtgct ga 702 <210> 204 <211> 1431 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 204 atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60 ctgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120 tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt agtgcttact actgggcgtg gatccgccag 180 cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatt tgagtgggag caccacttac 240 aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tccgtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 300 ctgaagctga gttctgtgac cgccgcagac acggcggtgt actactgcgc cagagacggc 360 agataccaaa gcaggtcgcc ggattactat tacggtatgg atgtctgggg ccagggaaca 420 acggtcaccg tctcctcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 480 tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 540 gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 600 gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tcgtgaccgt gccctccagc 660 agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 720 gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 780 cctgaagccg ctgggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 840 atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 900 gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 960 cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1020 gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 1080 atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1140 cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 1200 ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1260 aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctatag caagctcacc 1320 gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1380 ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtccc cgggtaaatg a 1431 <210> 205 <211> 1413 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 205 atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc 120 tgcaaggctt ctggaggcac cttcagcggt caggctatca gctgggtgcg acaggcccct 180 ggacaagggc ttgagtggat gggagggatc atcccttcgt ttggtacagc acggtacgca 240 cagaagttcc agggcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300 gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gcggtgtact actgcgccag aactccttac 360 tacgacagca gcggatacct agacgtatgg ggtcagggta caatggtcac cgtctcctca 420 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 480 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 600 ggactctact ccctcagcag cgtcgtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 660 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 720 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgctggggga 780 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 900 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 960 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1020 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1200 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260 ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380 cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa tga 1413 <210> 206 <211> 1431 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 206 atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60 ctgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120 tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt agtgcttact actgggcgtg gatccgccag 180 cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatt tgagtgggag caccacttac 240 aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tccgtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 300 ctgaagctga gttctgtgac cgccgcagac acggcggtgt actactgcgc cagagacggc 360 agataccaaa gcaggtcgcc ggattactat tacggtatgg atgtctgggg ccagggaaca 420 acggtcaccg tctcctcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 480 tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 540 gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 600 gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tcgtgaccgt gccctccagc 660 agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 720 gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 780 cctgaagccg ctgggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 840 atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 900 gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 960 cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1020 gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cggagccccc 1080 atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1140 cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 1200 ttctatccca 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232 Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr 1 5 10 15 <210> 233 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(5) <223> Cys-acetamidomethyl <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Cys-acetamidomethyl <400> 233 Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu 1 5 10 15 <210> 234 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(12) <223> Cys-acetamidomethyl <400> 234 His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp 1 5 10 15 <210> 235 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Cys-acetamidomethyl <400> 235 Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn 1 5 10 15 <210> 236 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(4) <223> Cys-acetamidomethyl <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Cys-acetamidomethyl <400> 236 Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His 1 5 10 15 <210> 237 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Cys-acetamidomethyl <400> 237 Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val 1 5 10 15 <210> 238 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Cys-acetamidomethyl <400> 238 Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu 1 5 10 15 <210> 239 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Cys-acetamidomethyl <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) 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Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 289 Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 <210> 290 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Cys-acetamidomethyl <400> 290 Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 10 15 Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val 20 25 <210> 291 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Cys-acetamidomethyl <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Cys-acetamidomethyl <400> 291 Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Gly Gly Ser Gly Gly Asn 1 5 10 15 Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val 20 25 <210> 292 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Cys-acetamidomethyl <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> 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agcagtagtg cttactactg ggcgtggatc 120 cgccagcccc cagggaaggg gctggagtgg attgggagta tctatttgag tgggagcacc 180 acttacaacc cgtccctcaa gagtcgagtc accatatccg tagacacgtc caagaaccag 240 ttctccctga agctgagttc tgtgaccgcc gcagacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300 gacggcagat accaaagcag gtcgccggat tactattacg gtatggatgt ctggggccag 360 ggaacaacgg tcaccgtctc ctcagcctcc accaagggcc catcggtctt ccccctggca 420 ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt caaggactac 480 ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc 540 ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtcgt gaccgtgccc 600 tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc 660 aaggtggaca agagagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 720 ccagcacctg aagccgctgg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 780 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 840 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 900 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 960 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1020 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1080 accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1140 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1200 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag 1260 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1320 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtccccggg taaatga 1377 <210> 330 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 330 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Gln 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser 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Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 331 <211> 1359 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 331 atgcaggtgc agctggtgca gtctggggct gaggtgaaga agcctgggtc ctcggtgaag 60 gtctcctgca aggcttctgg aggcaccttc agcggtcagg ctatcagctg ggtgcgacag 120 gcccctggac aagggcttga gtggatggga gggatcatcc cttcgtttgg tacagcacgg 180 tacgcacaga agttccaggg cagagtcacg attaccgcgg acgaatccac gagcacagcc 240 tacatggagc tgagcagcct gagatctgag gacacggcgg tgtactactg cgccagaact 300 ccttactacg acagcagcgg atacctagac gtatggggtc agggtacaat ggtcaccgtc 360 tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtc gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgct 720 gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900 tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080 gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagca agctcaccgt ggacaagagc 1260 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320 tacacgcaga agagcctctc cctgtccccg ggtaaatga 1359 <210> 332 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 332 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile 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atgcagctgc agctgcagga gtcgggccca ggactggtga agccttcgga gaccctgtcc 60 ctcacctgca ctgtctctgg tggctccatc agcagtagtg cttactactg ggcgtggatc 120 cgccagcccc cagggaaggg gctggagtgg attgggagta tctatttgag tgggagcacc 180 acttacaacc cgtccctcaa gagtcgagtc accatatccg tagacacgtc caagaaccag 240 ttctccctga agctgagttc tgtgaccgcc gcagacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300 gacggcagat accaaagcag gtcgccggat tactattacg gtatggatgt ctggggccag 360 ggaacaacgg tcaccgtctc ctcagcctcc accaagggcc catcggtctt ccccctggca 420 ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt caaggactac 480 ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc 540 ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtcgt gaccgtgccc 600 tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc 660 aaggtggaca agagagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 720 ccagcacctg aagccgctgg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 780 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 840 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 900 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 960 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctcgga 1020 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1080 accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1140 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1200 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag 1260 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1320 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtccccggg taaatga 1377 <210> 334 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 334 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Gln 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 335 <211> 1359 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 335 atgcaggtgc agctggtgca gtctggggct gaggtgaaga agcctgggtc ctcggtgaag 60 gtctcctgca aggcttctgg aggcaccttc agcggtcagg ctatcagctg ggtgcgacag 120 gcccctggac aagggcttga gtggatggga gggatcatcc cttcgtttgg tacagcacgg 180 tacgcacaga agttccaggg cagagtcacg attaccgcgg acgaatccac gagcacagcc 240 tacatggagc tgagcagcct gagatctgag gacacggcgg tgtactactg cgccagaact 300 ccttactacg acagcagcgg atacctagac gtatggggtc agggtacaat ggtcaccgtc 360 tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420 tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtc gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600 cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660 gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgct 720 gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780 acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900 tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcg gagcccccat cgagaaaacc 1020 atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080 gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagca agctcaccgt ggacaagagc 1260 aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320 tacacgcaga agagcctctc cctgtccccg ggtaaatga 1359 <210> 336 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 6xHis tag <400> 336 His His His His His His 1 5 <210> 337 <211> 89 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 337 Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys 1 5 10 15 Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys 20 25 30 Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln 35 40 45 Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe 50 55 60 Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro 65 70 75 80 Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met Glu 85 <210> 338 <211> 85 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Description of Unknown: ALK6 sequence <400> 338 Ile Leu Arg Cys Lys Cys His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val Asn 1 5 10 15 Asn Ile Cys Ser Thr Asp Gly Tyr Cys Phe Thr Met Ile Glu Glu Asp 20 25 30 Asp Ser Gly Met Pro Val Val Thr Ser Gly Cys Leu Gly Leu Glu Gly 35 40 45 Ser Asp Phe Gln Cys Arg Asp Thr Pro Ile Pro His Gln Arg Arg Ser 50 55 60 Ile Glu Cys Cys Thr Glu Arg Asn Glu Cys Asn Lys Asp Leu His Pro 65 70 75 80 Thr Leu Pro Pro Leu 85 <210> 339 <211> 79 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 339 Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys 1 5 10 15 Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys 20 25 30 Val Ile His Asn Ser Ser Cys Ile Ala Glu Ile 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Ser His 50 55 60 Leu Cys Asn His Asn Val Ser Leu Val Leu Glu 65 70 75

Claims

ALK7 단백질의 적어도 하나의 1차 에피토프에 특이적으로 결합하는 액티빈 수용체-유사 키나아제 7 (ALK7)-결합 단백질로서, 상기 적어도 하나의 1차 에피토프는 서열번호 310, 313, 및 317로부터 선택된 에피토프와 본질적으로 동일한, ALK7-결합 단백질.
청구항 1에 있어서, ALK7 단백질의 적어도 하나의 입체형태적 에피토프에 추가로 특이적으로 결합하고, 상기 적어도 하나의 입체형태적 에피토프는 서열번호 311, 312, 314, 315, 316, 318, 및 319로부터 선택된 에피토프와 본질적으로 동일한, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 적어도 하나의 1차 또는 입체형태적 에피토프는 서열번호 310-319와 동일한 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 아미노산 잔기를 공유하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR은 다음으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL) 쌍으로부터 유래되고:
(a) (i) 서열번호 105의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 110의 VL 서열;
(b) (i) 서열번호 117의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 124의 VL 서열;
(c) (i) 서열번호 128의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 135의 VL 서열;
(d) (i) 서열번호 140의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 148의 VL 서열;
(e) (i) 서열번호 91의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 98의 VL 서열;
(f) (i) 서열번호 4의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 13의 VL 서열;
(g) (i) 서열번호 152의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 98의 VL 서열;
(h) (i) 서열번호 159의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 110의 VL 서열;
(i) (i) 서열번호 165의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 171의 VL 서열;
(j) (i) 서열번호 22의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 31의 VL 서열;
(k) (i) 서열번호 40의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 49의 VL 서열; 및
(l) (i) 서열번호 58의 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 67의 VL 서열;
상기 단백질은 ALK7에 결합하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, CDR 세트: VH-CDR1, VH-CDR2, VH-CDR3, VL-CDR1, VL-CDR2 및 VL-CDR3을 포함하고, 상기 CDR 세트는 다음의 CDR의 참조 세트로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 10개 미만, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고:
(a) (i) VH-CDR1은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나;
(b) (i) VH-CDR1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하거나;
(c) (i) VH-CDR1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나;
(d) (i) VH-CDR1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하거나;
(e) (i) VH-CDR1은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하거나;
(f) (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하거나;
(g) (i) VH-CDR1은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나;
(h) (i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 169의 아미노산 서열을 포함하거나;
(i) (i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하거나;
(j) (i) VH-CDR1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하거나;
(k) (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(l) (i) VH-CDR1은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하며;
상기 단백질은 ALK7에 결합하는, ALK7-결합 단백질,
청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 다음의 CDR 세트를 포함하고. 여기서:
(a) (i) VH-CDR1은 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나;
(b) (i) VH-CDR1은 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하거나;
(c) (i) VH-CDR1은 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하거나;
(d) (i) VH-CDR1은 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하거나;
(e) (i) VH-CDR1은 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고;
(vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하거나;
(g) (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 95의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 96의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하거나;
(h) (i) VH-CDR1은 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하고;
(vi) VL-CDR3은 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나;
(h) (i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 169의 아미노산 서열을 포함하거나;
(i) (i) VH-CDR1은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함하거나;
(j) (i) VH-CDR1은 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하거나;
(k) (i) VH-CDR1은 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 46의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 47의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하거나;
(l) (i) VH-CDR1은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하고;
(ii) VH-CDR2는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하고;
(iii) VH-CDR3은 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하고;
(iv) VL-CDR1은 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하고;
(v) VL-CDR2는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
(vi) VL-CDR3은 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하며;
상기 단백질은 ALK7에 결합하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고:
(a) (i) 서열번호 105와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 110과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(b) (i) 서열번호 117과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 124와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(c) (i) 서열번호 128과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 135와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(d) (i) 서열번호 140과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 148과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(e) (i) 서열번호 91과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 98과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(f) (i) 서열번호 152와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 98과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(g) (i) 서열번호 159와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 110과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(h) (i) 서열번호 165와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 171과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(i) (i) 서열번호 4와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 13과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(j) (i) 서열번호 22와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 31과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
(k) (i) 서열번호 40과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 49와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL; 및
(l) (i) 서열번호 58과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH, 및
(ii) 서열번호 67과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL;
상기 단백질은 ALK7에 결합하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 7에 있어서, 상기 VH 및 VL 쌍은 다음으로부터 선택되고:
(a) 서열번호 105의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열;
(b) 서열번호 117의 VH 서열 및 서열번호 124의 VL 서열;
(c) 서열번호 128의 VH 서열 및 서열번호 135의 VL 서열;
(d) 서열번호 140의 VH 서열 및 서열번호 148의 VL 서열;
(e) 서열번호 91의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열;
(f) 서열번호 152의 VH 서열 및 서열번호 98의 VL 서열;
(g) 서열번호 159의 VH 서열 및 서열번호 110의 VL 서열;
(h) 서열번호 165의 VH 서열 및 서열번호 171의 VL 서열;
(i) 서열번호 4의 VH 서열 및 서열번호 13의 VL 서열;
(j) 서열번호 22의 VH 서열 및 서열번호 31의 VL 서열;
(k) 서열번호 40의 VH 서열 및 서열번호 49의 VL 서열; 및
(l) 서열번호 58의 VH 서열 및 서열번호 67의 VL 서열;
상기 단백질은 ALK7에 결합하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 다음으로부터 선택된 VH 및 VL 쌍을 포함하고:
(a) (i) 서열번호 105의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 110의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(b) (i) 서열번호 117의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 124의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(c) (i) 서열번호 128의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 135의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(d) (i) 서열번호 140의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 148의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(e) (i) 서열번호 91의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 98의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(f) (i) 서열번호 152의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 98의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(g) (i) 서열번호 159의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 110의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(h) (i) 서열번호 165의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 171의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(i) (i) 서열번호 4의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 13의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(j) (i) 서열번호 22의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 31의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
(k) (i) 서열번호 40의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 49의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열; 및
(l) (i) 서열번호 58의 참조 VH 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VH 서열, 및
(ii) 서열번호 67의 참조 VL 서열로부터 총 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개보다 적은, 또는 0개의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는 VL 서열;
상기 단백질은 ALK7에 결합하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 다음으로부터 선택되는 HC 및 LC 쌍을 포함하고:
(a) (i) 서열번호 190 또는 320과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및
(ii) 서열번호 191 또는 322와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 LC; 및
(b) (i) 서열번호 192 또는 324와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및
(ii) 서열번호 193 또는 326과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 LC;
상기 단백질은 ALK7에 결합하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 다음으로부터 선택되는 HC 및 LC 쌍을 포함하고:
(a) (i) 서열번호 194 또는 328과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및
(ii) 서열번호 191 또는 322와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 LC; 및
(b) (i) 서열번호 195 또는 330과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및
(ii) 서열번호 193 또는 326과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 LC;
여기서 단백질은 ALK7에 결합하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 다음으로부터 선택되는 HC 및 LC 쌍을 포함하고:
(a) (i) 서열번호 196 또는 332와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및
(ii) 서열번호 191 또는 322와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 LC; 및
(b) (i) 서열번호 197 또는 334와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 HC, 및
(ii) 서열번호 193 또는 326과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 LC;
상기 단백질은 ALK7에 결합하는, ALK7-결합 단백질.
ALK7 상의 중첩 에피토프에 결합하는 ALK7-결합 단백질로서, 상기 중첩 에피토프는 서열번호 310-319에 제시된 에피토프와 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개 이상의 동일한 아미노산 잔기를 공유하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 따른 ALK7-결합 단백질과 ALK7로의 결합을 교차-차단하거나 상기 결합에 대해 경쟁하는 ALK7-결합 단백질.
청구항 13 또는 14에 있어서,
i) 청구항 5 또는 6의 CDR 서열과 상이한 적어도 하나의 CDR 서열;
ii) 청구항 4 또는 7-9의 가변 서열과 상이한 적어도 하나의 가변 영역 서열; 및/또는
iii) 청구항 10의 서열과 상이한 적어도 하나의 서열
을 포함하며, 바람직하게는, 서열번호 190, 320, 192 또는 324의 불변 영역에서 적어도 하나의 치환, 결실 및/또는 삽입을 추가로 포함하는, ALK7-결합 단백질:
청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, ALK7 활성을 길항할 수 있는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, 지방 세포에서 지방분해를 증가시킬 수 있는, ALK7-결합 단백질.
청구항 17에 있어서, 백색 또는 갈색 지방 세포에서 지방분해를 증가시킬 수 있는, ALK7-결합 단백질.
청구항 13 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 지방 세포에서 지방분해의 ALK7 매개 억제를 길항할 수 있는, ALK7-결합 단백질.
청구항 13 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 백색 또는 갈색 지방 세포에서 지방분해의 ALK7 매개 억제를 길항할 수 있는, ALK7-결합 단백질.
청구항 17 또는 18에 있어서, 지방 세포에서 지방분해를 적어도 5% 내지 100%, 10% 내지 95%, 10 내지 90%, 10 내지 85%, 10 내지 80%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 75%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 55%, 10 내지 50%, 또는 10 내지 45% 증가시킬 수 있는, ALK7-결합 단백질.
청구항 17 또는 18에 있어서, 지방분해 검정에서 결정된 지방분해는 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행되는 것인, ALK7-결합 단백질.
청구항 17 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방분해 검정은 GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 A/B 및 Nodal로부터 선택된 하나 이상의 ALK7 리간드의 존재하에 수행되는 것인, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 다음으로부터 선택된 적어도 하나의 특징을 갖는, ALK7-결합 단백질:
(a) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드의 존재하에 ALK7 및 ActRII 수용체를 발현하는 세포의 표면 상에 ALK7, 유형 II 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시키고;
(b) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 II형 수용체와 경쟁하고;
(c) ALK7로의 결합에 대해 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, 액티빈 B, 액티빈 AB, Nodal, GDF1, GDF3 및/또는 GDF8)와 경쟁하고;
(d) 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재에서 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 ALK7의 인산화를 감소시키고;
(e) 하나 이상의 TGF-베타 리간드 (예를 들어, GDF1, GDF3, GDF8, 액티빈 B, 액티빈 AB 및/또는 Nodal)의 존재에서 ALK7 및 II형 수용체 (예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB)를 발현하는 세포에서 Smad (예를 들어, Smad2 및/또는 Smad3)의 인산화를 감소시키고;
(f) (예를 들어, BIACORE® 분석에 의해 결정될 때) ≤1 nM 및 ≥1 pM의 K_D로 ALK7에 결합하고; 그리고
(g) ALK7, 공동수용체 (예를 들어, 크립토 및/또는 크립틱), 및 하나 이상의 TGF-베타 슈퍼패밀리 리간드 (예를 들어, Nodal)를 함유하는 복합체의 형성을 감소시킴.
청구항 1 내지 24 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ALK7-결합 단백질은 지방 세포에서 글리세롤 생산을 증가시키는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ALK7-결합 단백질은 ALK7에 특이적으로 결합하는 항체인, ALK7-결합 단백질.
청구항 26에 있어서, 이의 중쇄 불변 영역에서 LALA 또는 LALA-PG 돌연변이를 추가로 포함하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 26 또는 27에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 이중특이적 항체, 다중특이적 항체, 또는 ALK7-결합 항체 단편인, ALK7-결합 단백질.
청구항 28에 있어서, 상기 ALK7-결합 항체 단편은 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 디아바디, 또는 단일 사슬 항체 분자인, ALK7-결합 단백질.
청구항 26 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 다음으로부터 선택된 중쇄 면역글로불린 불변 도메인을 추가로 포함하는, ALK7-결합 단백질:
(a) 인간 IgA 불변 도메인;
(b) 인간 IgD 불변 도메인;
(c) 인간 IgE 불변 도메인;
(d) 인간 IgG1 불변 도메인;
(e) 인간 IgG2 불변 도메인;
(f) 인간 IgG3 불변 도메인;
(g) 인간 IgG4 불변 도메인; 및
(h) 인간 IgM 불변 도메인.
청구항 26 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 다음으로부터 선택된 경쇄 면역글로불린 불변 도메인을 추가로 포함하는, ALK7-결합 단백질:
(a) 인간 Ig 카파 불변 도메인; 및
(b) 인간 Ig 람다 불변 도메인.
청구항 26 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 및 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 추가로 포함하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 26 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 이의 중쇄 불변 도메인에서 돌연변이, 치환, 또는 변형을 추가로 포함하는, ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 33 중 어느 한 항에 따른 ALK7-결합 단백질을 인코딩하는 핵산 분자 또는 핵산 분자 세트.
청구항 34에 있어서, cDNA인 핵산 분자 또는 핵산 분자 세트.
청구항 34 또는 35의 핵산 분자 또는 핵산 분자 세트의 단편 또는 이의 상보체인 혼성화 프로브, PCR 프라이머 또는 서열분석 프라이머로서 사용하기에 충분한 폴리뉴클레오티드 또는 cDNA 분자.
청구항 34 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 분자는 제어 서열에 작동 가능하게 연결되는, 핵산 분자 또는 cDNA 분자.
청구항 34 내지 37 중 어느 한 항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
청구항 34 내지 37 중 어느 한 항의 핵산 분자 또는 청구항 38의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
청구항 39에 있어서, 상기 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포인, 숙주 세포.
청구항 39에 있어서, 상기 숙주 세포는 NS0 뮤린 골수중 세포, PER.C6® 인간 세포, 또는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포인, 숙주 세포.
청구항 1 내지 33 중 어느 한 항의 ALK7-결합 단백질의 제조 방법으로서, ALK7-결합 단백질을 생성하기에 적합한 조건하에 청구항 39 내지 41 중 어느 한 항에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법.
청구항 42에 있어서, 상기 숙주 세포로부터 선택된 ALK7-결합 단백질을 단리시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
청구항 42 또는 43의 방법을 사용하여 생성된 ALK7-결합 단백질.
청구항 1 내지 33 중 어느 한 항에 따른 ALK7-결합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
청구항 45에 있어서, 약제로서 사용하기 위한 약제학적 조성물.
ALK7 발현 또는 ALK7 신호전달과 연관된 질환 또는 병태를 치료 및/또는 개선하기 위한 청구항 46의 약제학적 조성물의 용도.
청구항 47에 있어서, 상기 질환 또는 병태는 비만 (예를 들어, 복부 또는 내장 비만); 과체중; 인슐린 저항성; 대사 증후군 및 다른 대사 질환 또는 병태; 지질 장애, 예컨대 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 고지혈증, 고중성지질혈증 또는 이상지질혈증; 지질단백질 이상; 감소된 트리글리세리드; 염증 (예를 들어, 간 염증 및/또는 지방 조직의 염증), 지방간 질환; 비알코올성 지방간 질환; 고혈당증; 내당능 장애 (IGT); 고인슐린혈증; 높은 콜레스테롤 (예를 들어, 높은 LDL 수준 및 고콜레스테롤혈증); 심혈관 질환, 예컨대 관상동맥 심장 질환을 포함하는 심장병, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 죽상동맥경화증; 동맥경화증 및 고혈압; X 증후군; 혈관 재협착증; 신경병증; 망막병증; 신경퇴행성 질환; 내피 기능장애, 호흡기 기능장애, 신장 질환 (예를 들어, 신병증); 췌장염; 다낭성 난소 증후군; 상승된 요산 수준; 혈색소증 (철분 과부하); 흑색극세포증 (피부 상에서 어두운 패치); 및 암 (예를 들어, 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 또는 결장 암); 및/또는 상기 질환 또는 병태 중 하나 이상 또는 너무 많은 체지방과 연관된 다른 장애/병태로부터 선택된 구성원인, 용도.
청구항 45 또는 46에 있어서, 상기 ALK7-결합 단백질은 표지화 기 또는 이펙터 기를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
청구항 49에 있어서, 상기 이펙터 기는 방사성 동위원소, 방사성 핵종, 독소, 치료제 및 화학요법제로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
유효량의 청구항 1 내지 33 중 어느 한 항의 ALK7-결합 단백질을 포함하는 조성물, 또는 청구항 45, 46, 49, 또는 50의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하여, 대상체에서 ALK7 발현 또는 상승된 ALK7-매개된 신호전달과 연관된 질환 또는 병태를 치료 및/또는 개선하는 방법.
청구항 51에 있어서, 상기 질환 또는 병태는 비만 (예를 들어, 복부 비만); 과체중; 인슐린 저항성; 대사 증후군 및 다른 대사 질환 또는 병태; 지질 장애, 예컨대, 낮은 HDL 수준, 높은 LDL 수준, 고지혈증, 고중성지질혈증 또는 이상지질혈증; 지질단백질 이상; 감소된 트리글리세리드; 염증 (예를 들어, 간 염증 및/또는 지방 조직의 염증), 지방간 질환; 비알코올성 지방간 질환; 고혈당증; 내당능 장애 (IGT); 고인슐린혈증; 높은 콜레스테롤 (예를 들어, 높은 LDL 수준 및 고콜레스테롤혈증); 심혈관 질환. 예컨대 관상동맥 심장 질환을 포함하는 심장병, 울혈성 심부전, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 죽상동맥경화증; 동맥경화증 및 고혈압; X 증후군; 혈관 재협착증; 신경병증; 망막병증; 신경퇴행성 질환; 내피 기능장애, 호흡기 기능장애, 신장 질환 (예를 들어, 신병증); 췌장염; 다낭성 난소 증후군; 상승된 요산 수준; 혈색소증 (철분 과부하); 흑색극세포증 (피부 상에서 어두운 패치); 및 암 (예를 들어, 골수종 (예를 들어, 다발성 골수종, 형질세포종, 국소 골수종 또는 골수외 골수종), 또는 난소, 유방, 결장, 자궁내막, 간, 신장, 췌장, 위, 자궁 또는 결장 암); 및/또는 상기 질환 또는 병태 중 하나 이상 또는 너무 많은 체지방과 연관된 다른 장애/병태로부터 선택된 구성원인 용도.
청구항 51 또는 52에 있어서, 상기 ALK7-결합 단백질 또는 약제학적 조성물은 단독으로 또는 복합 요법으로 투여되는 것인 방법.
유효량의 청구항 1 내지 33 중 어느 한 항에 따른 ALK7-결합 단백질, 또는 청구항 45, 46, 49, 또는 50의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 ALK7 활성을 감소시키는 방법.
유효량의 청구항 1 내지 33 중 어느 한 항의 ALK7-결합 단백질을 포함하는 조성물, 또는 청구항 45, 46, 49, 또는 50의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에 투여함을 포함하여, 프라더-윌리 증후군을 치료 및/또는 개선하는 방법.