CN111836642A - Alk7结合蛋白及其用途 - Google Patents

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CN111836642A CN201880083063.4A CN201880083063A CN111836642A CN 111836642 A CN111836642 A CN 111836642A CN 201880083063 A CN201880083063 A CN 201880083063A CN 111836642 A CN111836642 A CN 111836642A
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Abstract

本公开提供了ALK7结合蛋白，诸如抗ALK7抗体，以及用于制备所述ALK7结合蛋白的组合物和方法。在某些实施方案中，所述ALK7结合蛋白抑制或拮抗ALK7活性。此外，本发明还提供了用于诊断和治疗超重、肥胖、糖尿病、超重、肥胖、2型糖尿病及其相关疾患；代谢紊乱；以及可以通过靶向ALK7来治疗、预防或改善的其他疾病或疾患的组合物和方法。

Description

ALK7结合蛋白及其用途
相关申请
本申请要求2017年10月25日提交的美国临时专利申请号62/577,038的优先权，所述申请据此以引用的方式整体并入。
以电子方式提交的序列表的引用
在与本申请一起提交的ASCII文本文件APH-00625_SL(大小：227,501字节；和创建日期：2018年10月24日)中以电子方式提交的序列表的内容以引用的方式整体并入本文。
背景技术
在美国和世界上很多国家/地区，超重和肥胖已达到流行病的比例，在所有年龄、种族和族群以及男性和女性中都有所增加。超重和肥胖还与破坏生命活动和生活方式的其他疾病或疾患有关。肥胖被认为是其他疾病和疾患(诸如2型糖尿病、炎症以及心血管疾病、肺部疾病、脂肪肝病、神经疾病、和肝脏疾病和肾脏疾病)的严重风险因素。
2型糖尿病是一种同样已达到流行病比例的慢性、进行性疾病。目前对于II型糖尿病尚无确定的治愈方法，但是有很多公认的试图延缓或减轻这种疾病的不可避免的后果的治疗。最初通过饮食和运动的调整以及通过减肥来治疗2型糖尿病，最尤其是在肥胖受试者中。改善临床表现的减肥量有时不大(例如，4.4至11磅)；这可能是由于对脂肪组织活性的某些方面，例如化学信号传导(尤其是在腹部器官内和周围的内脏脂肪组织中)的理解不足。
鉴于上文，需要用于控制和治疗超重、肥胖和2型糖尿病流行病的新治疗。本公开的目的是提供ALK7结合蛋白及其在超重、肥胖、2型糖尿病及其相关疾患；代谢紊乱、以及可以通过靶向ALK7来治疗、预防或改善的其他疾病或疾患的诊断和治疗、预防和/或改善中的用途。
发明内容
本公开提供了ALK7结合蛋白以及使用ALK7结合蛋白的方法。在特定实施方案中，ALK7结合蛋白能够抑制或阻断ALK7与一种或多种同源ALK7配体和/或一种或多种同源ActRI受体的结合。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白能够抑制或阻断ALK7和ActRII受体(ActRIIA或ActRIIB)和GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B或Nodal的多聚化。本公开还提供了使用ALK7结合蛋白来诊断、或治疗、预防和/或改善与ALK7表达和/或升高的ALK7介导的信号传导相关的疾病或疾患的方法。此类疾病或疾患包括但不限于超重、肥胖(例如，腹部肥胖)；胰岛素抗性；代谢综合征和其他代谢疾病或疾患；脂质紊乱，诸如低HDL水平、高LDL水平、高脂血症、高甘油三酯血症或血脂异常；脂蛋白异常；甘油三酯减少；炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)、脂肪肝疾病；非酒精性脂肪肝疾病；高血糖；葡萄糖耐量降低(IGT)；高胰岛素血症；高胆固醇(例如，高LDL水平和高胆固醇血症)；心血管疾病，诸如心脏病，包括冠心病、充血性心力衰竭、中风、周围血管疾病、纤维蛋白溶解紊乱、动脉粥样硬化；动脉硬化和高血压；X综合征；血管再狭窄；神经病变；视网膜病变；神经退行性疾病；内皮功能障碍、呼吸功能障碍、肾脏疾病(例如，肾病)；胰腺炎；多囊卵巢综合征；尿酸水平升高；血色素沉着症(铁过载)；黑棘皮症(皮肤上的黑斑)；和癌症(例如，骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌或结肠癌)；以及与上述疾病或疾患中的一者或多者、或者与体重过重(例如，体质指数(BMI)≥25kg/m2)、或身体脂肪过多相关的其他病症/疾患。本公开还提供了但不限于使用拮抗剂ALK7结合蛋白(诸如抗体)来减轻体重(例如，促进体重减轻)的方法，和减少体重增加(例如，防止体重增加)的方法。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7。在另外的实施方案中，所提供的ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且具有至少一种选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与ActRIIA或ActRIIB竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000031
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定法中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与具有本文公开的ALK7结合性VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合至本文所述的ALK7蛋白的至少一个主要表位。例如，至少一个主要表位可以与选自SEQ ID NO：310、313和317的表位相同或基本上相同。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合至本文所述的ALK7蛋白的至少一个次要或构象表位。例如，至少一个构象表位可以与选自SEQ ID NO：311、312、314、315、316、318和319的表位相同或基本上相同。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合本文所述的ALK7蛋白的至少一个主要表位和至少一个次要或构象表位。
术语“基本上相同”是指主要和/或构象表位具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个与本文所述的表位相同的氨基酸残基，诸如SEQ ID NO：310-319中反映的那些氨基酸残基。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7上的至少一个重叠表位，其中所述至少一个重叠表位与本文所述的主要或构象表位(诸如SEQ ID NO：310-319中反映的那些)重叠。在特定实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7上的重叠表位，其中所述重叠表位与SEQ ID NO：310-319所示的表位共有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个相同的氨基酸残基。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合至少一个如本文所述的基本上相同的或重叠表位。在特定实施方案中，至少一个基本上相同的或重叠表位与ALK7结合蛋白交叉阻断和/或竞争与ALK7的结合。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组互补决定区(CDR)：重链可变区(VH)-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、轻链可变区(VL)-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述CDR存在于表1A中公开的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)对中。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含存在于VH和VL对中的一组CDR，所述VH和VL对选自：(a)SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ IDNO：13的VL序列；(b)SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列；(c)SEQ ID NO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列；以及(d)SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组互补决定区(CDR)：重链可变区(VH)-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、轻链可变区(VL)-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述存在于表1B或表3中公开的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)对中。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含存在于VH和VL对中的一组CDR，所述VH和VL对选自：(a)SEQ ID NO：152的VH序列和SEQID NO：98的VL序列；(b)SEQ ID NO：159的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列；以及(c)SEQID NO：165的VH序列和SEQ ID NO：171的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含存在于VH和VL对中的一组CDR，所述VH和VL对选自：(a)SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列；(b)SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列；(c)SEQ ID NO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列；(d)SEQ ID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列；以及(e)SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQID NO：19的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列；(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列；或者(d)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：56的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQID NO：121的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列；(d)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列；或者(e)(i)VH-CDR1包含SEQID NO：137的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ IDNO：28的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列；(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列；或者(d)(i)VH-CDR1包含SEQ IDNO：55的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQID NO：57的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ IDNO：103的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列；(d)(i)VH-CDR1包含SEQID NO：125的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列；或者(e)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQID NO：145的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)与SEQ ID NO：4具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：13具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(b)(i)与SEQ ID NO：22或132具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：31具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(c)(i)与SEQ ID NO：40具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：49具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；以及(d)(i)与SEQ ID NO：58具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：67具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)与SEQ ID NO：91具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：98具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(b)(i)与SEQ ID NO：105或132具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：110具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(c)(i)与SEQ ID NO：117具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：124具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(d)(i)与SEQ ID NO：128具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：135具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；以及(e)(i)与SEQ ID NO：140具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：148具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含含有SEQ ID NO：40或58的VH序列和SEQ IDNO：49或67的VL序列的VH和VL；并且所述蛋白结合ALK7。在其他实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。在另外其他实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，所述VH和VL对包含SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ ID NO：13的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，所述VH和VL对包含SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，所述VH和VL对包含SEQ ID NO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，所述VH和VL对包含SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，所述VH和VL对包含SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，所述VH和VL对包含SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，所述VH和VL对包含SEQ ID NO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，所述VH和VL对包含SEQ ID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，所述VH和VL对包含SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列，并且所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自选自SEQID NO：4的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：13的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(b)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：22的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：31的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(c)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：40的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：49的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；以及(d)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：58的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：67的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自选自SEQID NO：91的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：98的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(b)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：105的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：110的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(c)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：117的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：124的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(d)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：128的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：135的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；以及(e)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：140的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQID NO：148的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合与本文所述的主要或构象表位相同的或基本上相同的或重叠表位，但是包含至少一个不同的CDR序列、框架序列、可变区序列、恒定区序列和/或来自本文公开的对应序列的重链/轻链序列。例如，ALK7结合蛋白可以在其重链恒定区中含有至少一个突变、取代、缺失或修饰，诸如导致抗体毒性和/或宿主免疫原性降低和/或抗体稳定性/半衰期增加的那些突变、取代、缺失或修饰。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的重链(HC)和轻链(LC)对：
(a)(i)与SEQ ID NO：190或320具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：191或322具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC；以及
(b)(i)与SEQ ID NO：192或324具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：193或326具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC，
其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白在其重链恒定区中包含LALA突变。在特定实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的HC和LC对：
(a)(i)与SEQ ID NO：194或328具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：191或322具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC；以及
(b)(i)与SEQ ID NO：195或330具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：193或326具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC，
其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白在其重链恒定区中包含LALA-PG突变。在特定实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的HC和LC对：
(a)(i)与SEQ ID NO：196或332具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：191或322具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC；以及
(b)(i)与SEQ ID NO：197或334具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：193或326具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC，
其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是特异性结合ALK7的抗体。在另外的实施方案中，抗体是单克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7结合抗体片段。在一些实施方案中，抗体是选自Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、双体抗体、DART和单链抗体分子(例如，BiTE)的抗体片段。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合至SEQ ID NO：85的氨基酸20-113之间的ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合至SEQ ID NO：85的氨基酸20-113之间的ALK7，并且抑制一种或多种ALK配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和/或Nodal)与ALK7的结合。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合至SEQ ID NO：85的氨基酸20-113之间的ALK7，并且接触一个或多个选自以下的氨基酸：(a)SEQ ID NO：85的第21位处的Glu；(b)SEQ ID NO：85的第22位处的Leu；(c)SEQ ID NO：85的第23位处的Ser；(d)SEQ ID NO：85的第24位处的Pro；(e)SEQ ID NO：85的第25位处的Gly；(f)SEQ ID NO：85的第26位处的Leu；(g)SEQ ID NO：85的第27位处的Lys；(h)SEQ ID NO：85的第28位处的Cys；(i)SEQ ID NO：85的第29位处的Val；(j)SEQ ID NO：85的第30位处的Cys；(k)SEQ ID NO：85的第31位处的Leu；(l)SEQ ID NO：85的第32位处的Leu；(m)SEQ ID NO：85的第33位处的Cys；(n)SEQ ID NO：85的第34位处的Asp；(o)SEQ ID NO：85的第35位处的Ser；(p)SEQ IDNO：85的第36位处的Ser；(q)SEQ ID NO：85的第37位处的Asn；(r)SEQ ID NO：85的第38位处的Phe；(s)SEQ ID NO：85的第39位处的Thr；(t)SEQ ID NO：85的第40位处的Cys；(u)SEQ IDNO：85的第41位处的Gln；(v)SEQ ID NO：85的第42位处的Thr；(w)SEQ ID NO：85的第43位处的Glu；(x)SEQ ID NO：85的第44位处的Gly；(y)SEQ ID NO：85的第45位处的Ala；(z)SEQ IDNO：85的第46位处的Cys；(aa)SEQ ID NO：85的第47位处的T印；(ab)SEQ ID NO：85的第48位处的Ala；(ac)SEQ ID NO：85的第49位处的Ser；(ad)SEQ ID NO：85的第50位处的Val；(ae)SEQ ID NO：85的第51位处的Met；(af)SEQ ID NO：85的第52位处的Leu；(ag)SEQ ID NO：85的第53位处的Thr；(ah)SEQ ID NO：85的第54位处的Asn；(ai)SEQ ID NO：85的第55位处的Gly；(aj)SEQ ID NO：85的第56位处的Lys；(ak)SEQ ID NO：85的第57位处的Glu；(al)SEQID NO：85的第58位处的Gln；(am)SEQ ID NO：85的第59位处的Val；(an)SEQ ID NO：85的第60位处的Ile；(ao)SEQ ID NO：85的第61位处的Lys；(印)SEQ ID NO：85的第62位处的Ser；(aq)SEQ ID NO：85的第63位处的Cys；(ar)SEQ ID NO：85的第64位处的Val；(as)SEQ IDNO：85的第65位处的Ser；(at)SEQ ID NO：85的第66位处的Leu；(au)SEQ ID NO：85的第67位处的Pro；(av)SEQ ID NO：85的第68位处的Glu；(aw)SEQ ID NO：85的第69位处的Leu；(aX)SEQ ID NO：85的第70位处的Asn；(ay)SEQ ID NO：85的第71位处的Ala；(az)SEQ ID NO：85的第72位处的Gln；(ba)SEQ ID NO：85的第73位处的Val；(bb)SEQ ID NO：85的第74位处的Phe；(bc)SEQ ID NO：85的第75位处的Cys；(bd)SEQ ID NO：85的第76位处的His；(be)SEQID NO：85的第77位处的Ser；(bf)SEQ ID NO：85的第78位处的Ser；(bg)SEQ ID NO：85的第79位处的Asn；(bh)SEQ ID NO：85的第80位处的Asn；(bi)SEQ ID NO：85的第81位处的Val；(bj)SEQ ID NO：85的第82位处的Thr；(bk)SEQ ID NO：85的第83位处的Lys；(bl)SEQ IDNO：85的第84位处的Thr；(bm)SEQ ID NO：85的第85位处的Glu；(bn)SEQ ID NO：85的第86位处的Cys；(bo)SEQ ID 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NO：85的第112位处的Met；和(co)SEQ ID NO：85的第113位处的Glu；并且增加脂解(例如，白色脂肪细胞和/或褐色脂肪细胞的脂解)。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合至SEQ ID NO：85的氨基酸28-92之间的ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合至SEQ ID NO：85的氨基酸28-92之间的ALK7，并且抑制一种或多种ALK7配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和/或Nodal)与ALK7的结合。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合至SEQ ID NO：85的氨基酸28-92之间的ALK7，并且接触一个或多个选自以下的氨基酸：(a)SEQ ID NO：85的第28位处的Cys；(b)SEQ ID NO：85的第29位处的Val；(c)SEQ ID NO：85的第30位处的Cys；(d)SEQ ID NO：85的第31位处的Leu；(e)SEQ ID NO：85的第32位处的Leu；(f)SEQ ID NO：85的第33位处的Cys；(g)SEQ ID NO：85的第34位处的Asp；(h)SEQ ID NO：85的第35位处的Ser；(i)SEQ ID NO：85的第36位处的Ser；(j)SEQ ID NO：85的第37位处的Asn；(k)SEQ ID NO：85的第38位处的Phe；(l)SEQ ID NO：85的第39位处的Thr；(m)SEQ ID NO：85的第40位处的Cys；(n)SEQ ID NO：85的第41位处的Gln；(o)SEQ ID NO：85的第42位处的Thr；(p)SEQ IDNO：85的第43位处的Glu；(q)SEQ ID NO：85的第44位处的Gly；(r)SEQ ID NO：85的第45位处的Ala；(s)SEQ ID NO：85的第46位处的Cys；(t)SEQ ID NO：85的第47位处的Trp；(u)SEQ IDNO：85的第48位处的Ala；(v)SEQ ID NO：85的第49位处的Ser；(w)SEQ ID NO：85的第50位处的Val；(x)SEQ ID NO：85的第51位处的Met；(y)SEQ ID NO：85的第52位处的Leu；(z)SEQ IDNO：85的第53位处的Thr；(aa)SEQ ID NO：85的第54位处的Asn；(ab)SEQ ID NO：85的第55位处的Gly；(ac)SEQ ID NO：85的第56位处的Lys；(ad)SEQ 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NO：85的氨基酸28-92之间的ALK7，并且接触一个或多个选自以下的氨基酸：(a)SEQ ID NO：85的第28位处的Cys；(b)SEQ ID NO：85的第29位处的Val；(c)SEQ ID NO：85的第30位处的Cys；(d)SEQ ID NO：85的第31位处的Leu；(e)SEQ ID NO：85的第32位处的Leu；(f)SEQ ID NO：85的第33位处的Cys；(g)SEQ ID NO：85的第34位处的Asp；(h)SEQ ID NO：85的第35位处的Ser；(i)SEQ ID NO：85的第36位处的Ser；(j)SEQ IDNO：85的第37位处的Asn；(k)SEQ ID NO：85的第38位处的Phe；(l)SEQ ID NO：85的第39位处的Thr；(m)SEQ ID NO：85的第40位处的Cys；(n)SEQ ID NO：85的第41位处的Gln；(o)SEQ IDNO：85的第42位处的Thr；(p)SEQ ID NO：85的第43位处的Glu；(q)SEQ ID NO：85的第44位处的Gly；(r)SEQ ID NO：85的第45位处的Ala；(s)SEQ ID NO：85的第46位处的Cys；(t)SEQ IDNO：85的第47位处的Trp；(u)SEQ ID NO：85的第48位处的Ala；(v)SEQ ID NO：85的第49位处的Ser；(w)SEQ ID NO：85的第50位处的Val；(x)SEQ ID NO：85的第51位处的Met；(y)SEQ IDNO：85的第52位处的Leu；(z)SEQ ID NO：85的第53位处的Thr；(aa)SEQ ID NO：85的第54位处的Asn；(ab)SEQ ID NO：85的第55位处的Gly；(ac)SEQ ID NO：85的第56位处的Lys；(ad)SEQ ID NO：85的第57位处的Glu；(ae)SEQ ID NO：85的第58位处的Gln；(af)SEQ ID NO：85的第59位处的Val；(ag)SEQ ID NO：85的第60位处的Ile；(ah)SEQ ID NO：85的第61位处的Lys；(ai)SEQ ID NO：85的第62位处的Ser；(aj)SEQ ID NO：85的第63位处的Cys；(ak)SEQID 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NO：85的第28位处的Cys；(b)SEQ IDNO：85的第29位处的Val；(c)SEQ ID NO：85的第30位处的Cys；(d)SEQ ID NO：85的第31位处的Leu；(e)SEQ ID NO：85的第32位处的Leu；(f)SEQ ID NO：85的第33位处的Cys；(g)SEQ IDNO：85的第34位处的Asp；(h)SEQ ID NO：85的第35位处的Ser；(i)SEQ ID NO：85的第36位处的Ser；(j)SEQ ID NO：85的第37位处的Asn；(k)SEQ ID NO：85的第38位处的Phe；(1)SEQ IDNO：85的第39位处的Thr；(m)SEQ ID NO：85的第40位处的Cys；(n)SEQ ID NO：85的第41位处的Gln；(o)SEQ ID NO：85的第42位处的Thr；(p)SEQ ID NO：85的第43位处的Glu；(q)SEQ IDNO：85的第44位处的Gly；(r)SEQ ID NO：85的第45位处的Ala；(s)SEQ ID NO：85的第46位处的Cys；(t)SEQ ID NO：85的第47位处的Trp；(u)SEQ ID NO：85的第48位处的Ala；(v)SEQ IDNO：85的第49位处的Ser；(w)SEQ ID NO：85的第50位处的Val；(x)SEQ ID NO：85的第51位处的Met；(y)SEQ ID NO：85的第52位处的Leu；(z)SEQ ID NO：85的第53位处的Thr；(aa)SEQID NO：85的第54位处的Asn；(ab)SEQ ID NO：85的第55位处的Gly；(ac)SEQ ID NO：85的第56位处的Lys；(ad)SEQ ID NO：85的第57位处的Glu；(ae)SEQ ID NO：85的第58位处的Gln；(af)SEQ ID NO：85的第59位处的Val；(ag)SEQ ID NO：85的第60位处的Ile；(ah)SEQ IDNO：85的第61位处的Lys；(ai)SEQ ID NO：85的第62位处的Ser；(aj)SEQ ID NO：85的第63位处的Cys；(ak)SEQ ID NO：85的第64位处的Val；(al)SEQ ID NO：85的第65位处的Ser；(am)SEQ ID 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还提供了编码ALK7结合蛋白的核酸和核酸组。还提供了包含核酸和核酸组的载体和载体组，以及用所述核酸和载体转化的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是杂交瘤或哺乳动物宿主细胞，诸如NS0鼠骨髓瘤细胞、PER.
Figure BDA0002550251300000261
人细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。还提供了宿主细胞，包括产生ALK7结合蛋白的哺乳动物宿主细胞和杂交瘤。
还提供了用于制备ALK7结合蛋白的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在适合于表达蛋白和任选地分离所表达的ALK7结合蛋白的条件下，培养能够表达ALK7结合蛋白的宿主细胞。还提供了使用本文公开的或者本领域已知的方法制备和/或分离的ALK7结合蛋白。
还提供了包含ALK7结合蛋白和药学上可接受的载剂的药物组合物。在一些实施方案中，本公开提供了用于治疗和/或改善受试者中的与ALK7表达升高或ALK7介导的信号传导相关的或者可以通过减少ALK7信号传导来治疗和/或改善的疾患的方法。在一些实施方案中，所述方法减少了受试者中的ALK7介导的信号传导。
可以使用所提供的方法来治疗和/或改善的受试者中的疾患包括但不限于：肥胖(例如，腹部肥胖)；超重；胰岛素抗性；代谢综合征和其他代谢疾病或疾患；脂质紊乱，诸如低HDL水平、高LDL水平、高脂血症、高甘油三酯血症或血脂异常；脂蛋白异常；甘油三酯减少；炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)、脂肪肝疾病；非酒精性脂肪肝疾病；高血糖；葡萄糖耐量降低(IGT)；高胰岛素血症；高胆固醇(例如，高LDL水平和高胆固醇血症)；心血管疾病，诸如心脏病，包括冠心病、充血性心力衰竭、中风、周围血管疾病、纤维蛋白溶解紊乱、动脉粥样硬化；动脉硬化和高血压；X综合征；血管再狭窄；神经病变；视网膜病变；神经退行性疾病；内皮功能障碍、呼吸功能障碍、肾脏疾病(例如，肾病)；胰腺炎；多囊卵巢综合征；尿酸水平升高；血色素沉着症(铁过载)；黑棘皮症(皮肤上的黑斑)；和癌症(例如，骨髓瘤(多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌和/或结肠癌)；以及与上述疾病或疾患中的一者或多者、或者与超重(例如，BMI≥25kg/m2)、或身体脂肪过多相关的其他病症/疾患。
在一些实施方案中，所公开的方法包括将包含有效量的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂ALK7结合蛋白，诸如拮抗剂抗ALK7抗体)的药物组合物施用于有需要的受试者。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白单独施用。在其他实施方案中，ALK7结合蛋白作为组合疗法施用。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白作为与护理治疗/疗法的标准的组合疗法施用。
还提供了阻断或降低ALK7活性(例如，配体结合和/或信号传导)的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使ALK7结合蛋白和表达ALK7的细胞(例如，分化的白色或褐色脂肪细胞)接触。在一些情况下，所述方法包括在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和/或Nodal的情况下，使ALK7结合蛋白和表达ALK7的细胞接触。在一些实施方案中，所述方法在体内进行。在其他实施方案中，所述方法在体外进行。在一些实施方案中，阻断或降低的ALK7活性是ALK7的磷酸化。在另外的实施方案中，阻断或降低的ALK7活性是Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化。在一些实施方案中，本公开提供了一种阻断或降低受试者中的ALK7活性的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白施用于有需要的受试者。
还提供了一种阻断或降低与ALK7表达和/或ALK7信号传导相关的病理状况下或者可以通过降低或抑制ALK7配体的活性来治疗和/或改善的病理状况下的ALK7活性的方法。在一些情况下，所述方法包括将ALK7结合蛋白施用于ALK7或ALK7配体的表达增加的受试者。在一些实施方案中，病理状况是肥胖、糖尿病、代谢疾病、血脂异常；心血管疾病、2型糖尿病、炎症、或肺部疾病、脂肪肝疾病、神经疾病、肝脏疾病或肾脏疾病。
在另一个方面，本公开提供了一种治疗或改善超重或与超重相关的疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂ALK7结合蛋白，诸如拮抗剂抗ALK7抗体)施用于超重受试者。在某些实施方案中，治疗或改善的疾患是肥胖。在其他实施方案中，治疗或改善的疾患是选自血脂异常、高脂血症、高胆固醇血症、低HDL血清水平、高LDL血清水平(例如，LDL-C≥100mg/dL、≥130mg/dL、≥160mg/dL)和高甘油三酯血症(例如，TG≥150mg/dL、≥160mg/dL、≥170mg/dL)的成员。在另外其他实施方案中，治疗或改善的疾患是高血压。在另外的实施方案中，治疗或改善的疾患是糖尿病。在某些此类实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，诸如抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些此类实施方案中，所施用的拮抗剂ALK7结合蛋白是本文公开的抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1A中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1A中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在某些其他实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1B或表3中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1B或表3中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外其他实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1A、表1B或表3中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1A、表1B或表3中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。
在另一个方面，本公开提供了一种治疗或改善肥胖或与肥胖相关的疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂ALK7结合蛋白，诸如拮抗剂抗ALK7抗体)施用于肥胖受试者。在某些此类实施方案中，治疗或改善的疾患是高血压、血脂异常(例如，高总胆固醇或高水平的甘油三酯)、2型糖尿病、冠心病、中风、胆囊疾病、骨关节炎、睡眠障碍、呼吸问题、癌症(例如，骨髓瘤(多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌和/或结肠癌)、肥胖相关胆囊疾病、肥胖相关炎症、肥胖诱导的睡眠呼吸暂停、脂肪变性(脂肪肝)、胰高血糖素瘤、动脉硬化或心力衰竭。在一些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者具有患上高血压、血脂异常(例如，高总胆固醇或高水平的甘油三酯)、2型糖尿病、冠心病、中风、胆囊疾病、骨关节炎、睡眠障碍、呼吸问题、癌症(例如，骨髓瘤(多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌或结肠癌)、肥胖相关胆囊疾病、肥胖相关炎症、肥胖诱导的睡眠呼吸暂停、脂肪变性、胰高血糖素瘤、动脉硬化或心力衰竭的风险。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，诸如抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些此类实施方案中，所施用的拮抗剂ALK7结合蛋白是本文公开的抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1A、表1B或表3中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1A、表1B或表3中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。
在另一个方面，本公开提供了一种治疗或改善II型糖尿病或与II型糖尿病相关的疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂ALK7结合蛋白，诸如拮抗剂抗ALK7抗体)施用于糖尿病受试者。在相关的实施方案中，本公开提供了一种治疗或改善与II型糖尿病相关的疾患的方法，所述与II型糖尿病相关的疾患诸如：眼部疾患(例如，青光眼、白内障和视网膜病变)、心血管疾病(例如，高血压、动脉粥样硬化、心肌梗塞和中风)、高血糖、周围神经病变和肾脏疾病(例如，肾病)。在某些实施方案中，受试者具有患上II型糖尿病或与II型糖尿病相关的疾患的风险，所述与II型糖尿病相关的疾患诸如：眼部疾患(例如，青光眼、白内障和视网膜病变)、心血管疾病(例如，高血压、动脉粥样硬化、心肌梗塞、纤维蛋白溶解紊乱和中风)、高血糖、周围神经病变或肾脏疾病(例如，肾病)。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，诸如抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些此类实施方案中，所施用的拮抗剂ALK7结合蛋白是本文公开的抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1A中公开的VH和VL对。在其他实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1B或3中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1A、1B或3中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。
在另一个方面，本公开提供了一种治疗或改善代谢疾病或紊乱或者与代谢疾病或紊乱相关的疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂ALK7结合蛋白，诸如拮抗剂抗ALK7抗体)施用于有需要的受试者。在某些此类实施方案中，治疗或改善的疾患是脂质、脂蛋白或载脂蛋白代谢的改变。在其他此类实施方案中，所述实施方案，代谢疾患是高血浆甘油三酯水平、高血压、血脂异常、高空腹血糖、低HDL胆固醇水平。在另外其他实施方案中，治疗或改善的疾患是动脉粥样硬化、动脉硬化或内皮功能障碍。在另外其他实施方案中，治疗或改善的疾患是慢性炎症。在另外的实施方案中，治疗或改善的疾患是非酒精性脂肪肝疾病(例如，脂肪肝和/或NASH)。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，诸如抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些此类实施方案中，所施用的拮抗剂ALK7结合蛋白是本文公开的抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1A中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1A中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1B或表3中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1B或表3中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。
在又一个方面，本公开提供了一种治疗或改善胰岛素抗性或与胰岛素抗性相关的疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂ALK7结合蛋白，诸如拮抗剂抗ALK7抗体)施用于有需要的受试者。在某些此类实施方案中，治疗或改善的疾患与葡萄糖耐量降低或高血糖相关。在其他此类实施方案中，治疗或改善的疾患与高血压或动脉粥样硬化相关。在其他实施方案中，治疗或改善的疾患是选自：血脂异常、高脂血症、高胆固醇血症、低HDL血清水平、高LDL血清水平(例如，LDL-C≥100mg/dL、≥130mg/dL、≥160mg/dL)和高甘油三酯血症(例如，TG≥150mg/dL、≥160mg/dL、≥170mg/dL)的成员。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，诸如抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些此类实施方案中，所施用的拮抗剂ALK7结合蛋白是本文公开的抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1A中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1A中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在其他实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1B或表3中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1B或表3中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。
在又一个方面，本公开提供了一种治疗或改善眼部、神经系统、肾脏、肺和/或肝脏的疾病或病症或者相关疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂ALK7结合蛋白，诸如拮抗剂抗ALK7抗体)施用于有需要的受试者。在某些此类实施方案中，治疗或改善的疾患是炎症。在其他此类实施方案中，治疗或改善的疾患是肾病(例如，糖尿病肾病)、肾动脉硬化或肾衰竭。在另外其他实施方案中，治疗或改善的疾患是慢性炎症。在另外其他实施方案中，治疗或改善的疾患是脂肪组织炎症。在另外的实施方案中，治疗或改善的疾患是肝脏炎症。在另外其他实施方案中，治疗或改善的疾患是NAFLD(例如，脂肪肝和/或NASH)。在一些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者具有患上肾脏、肺或肝脏的疾病或病症的风险。在一些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者具有患上肾病的风险。在一些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者具有患上肾病的风险。在某些实施方案中，受试者具有患上慢性炎症的风险。在其他实施方案中，受试者具有患上脂肪组织炎症的风险。在另外其他实施方案中，受试者具有患上肝脏炎症的风险。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，诸如抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些此类实施方案中，所施用的拮抗剂ALK7结合蛋白是本文公开的抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1A中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1A中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1B或表3中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1B或表3中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。
在另一个方面，本公开提供了一种治疗或改善心血管疾病或病症或者与心血管疾病或病症相关的疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂ALK7结合蛋白，诸如拮抗剂抗ALK7抗体)施用于有需要的受试者。在某些此类实施方案中，治疗或改善的疾患是冠心病、充血性心力衰竭、血管再狭窄、中风、周围血管疾病、微血管疾病、纤维蛋白溶解紊乱或动脉硬化。在其他实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者具有患上冠心病、充血性心力衰竭、血管再狭窄、中风、周围血管疾病、微血管疾病或动脉硬化的风险。在某些实施方案中，治疗或改善的疾患是高血压(例如，在静息状态下的血压＞130/80mmHg)。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者具有患上高血压的风险。在其他实施方案中，治疗或改善的疾患是动脉粥样硬化。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者具有患上动脉粥样硬化的风险。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，诸如抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些此类实施方案中，所施用的拮抗剂ALK7结合蛋白是本文公开的抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1A中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1A中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表1B中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表1B中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在某些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白包含表3中公开的VH和VL对。在相关的实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白与包含表3中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。
附图说明
图1A-1C示出了人ALK7上的针对mAb J02、mAb G05和mAb C03的表位。图1A示出了人ALK7上的针对mAb J02、mAb G05和mAb C03的主要表位(SEQ ID NO：208)，图1B则示出了次要表位(SEQ ID NO：208)。图1C汇总了针对这三种示例性抗体的所有主要和次要表位(SEQ ID NO：208)。
图2示出了用于针对ALK7上的表位结合的3维结构建模的ALK7(SEQ ID NO：337)、ALK6(SEQ ID NO：338)、ALK5(SEQ ID NO：339)、ALK3(SEQ ID NO：340)和ALK1(SEQ ID NO：341)的残基4-84的一级序列比较。
图3A-3C示出了基于ALK6、ALK5、ALK3和ALK1的可用结构数据的人ALK7胞外结构域的结构模型。表示残基4-84(图3A)或4-92(图3B和3C)的结构展示了针对示例性抗体mAbJ02、mAb G05和mAb C03的主要和次要表位。
图4示出了TBS和ALK7 mAb治疗的高脂肪饮食(HFD)小鼠的脂肪变化量。脂肪量的变化是相对于ALK7 Ab或TBS治疗之前的基线而言的。使用ALK7 mAb(即，J02、K02、G05、C03和L02)的治疗显著减少了HFD小鼠的脂肪质量。*表示相对于HFD+TBS，p＞0.001。
图5示出了TBS和ALK7 mAb治疗的高脂肪饮食(HFD)小鼠的瘦体质变化量。瘦肉质量的变化量是相对于ALK7 Ab或TBS治疗之前的基线而言的。使用ALK7 mAb(即，J02、K02、G05、C03和L02)的治疗不会改变HFD小鼠的瘦体质。
图6示出了接受标准饲料饮食(SD)的小鼠与接受高脂肪饮食(HFD)的小鼠的基线体重的比较。
图7示出了接受标准饲料饮食(SD)或高脂肪饮食(HFD)以及用对照(TBS)或不同剂量的ALK7抗体治疗的小鼠的每日体重比较。
图8示出了接受标准饲料饮食(SD)或高脂肪饮食(HFD)以及用对照(TBS)或不同剂量的ALK7抗体治疗的小鼠之间的相对于基线体重的每日体重变化的比率的比较。
图9示出了在不同的时间点接受标准饲料饮食(SD)或高脂肪饮食(HFD)以及用对照(TBS)或不同剂量的ALK7抗体治疗的小鼠之间的脂肪质量与体重的比率的比较。
图10示出了在不同的时间点接受标准饲料饮食(SD)或高脂肪饮食(HFD)以及用对照(TBS)或不同剂量的ALK7抗体治疗的小鼠之间的瘦肉质量与体重的比率的比较。
图11示出了在不同的时间点接受标准饲料饮食(SD)或高脂肪饮食(HFD)以及用对照(TBS)或不同剂量的ALK7抗体治疗的小鼠之间的脂体重或瘦体重的比较。
具体实施方式
本公开提供了分离的和/或重组的ALK7结合蛋白。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白结合本文所述的至少一个ALK7表位。在特定实施方案中，此类ALK7结合蛋白(例如，双特异性抗体)结合至本文所述的至少一个表位和本文所述的或可使用本文所述的方法和/或本领域的普遍知识了解或发现的至少另一个表位。此类ALK7结合蛋白可以包括本文公开的抗ALK7抗体(例如，表和实施例(诸如表1A、1B和3)中所述的抗体)和其抗原结合片段。或者，此类ALK7结合蛋白可以包括本文未公开但结合至本文所述的至少一个ALK7表位的抗ALK7抗体。例如，此类ALK7结合蛋白可以包括抗ALK7抗体，所述抗ALK7抗体包含不同于本文公开的抗体的至少一个CDR、框架、CDR/框架组合、可变、恒定或可变/恒定组合序列。因此，本发明的ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)包括结合至如本文所述的至少一个ALK7表位的ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)。此类蛋白可以与如本文所述的完全相同的主要和/或次要/构象表位相互作用，或者与不同的主要和/或次要/构象表位(与如本文所述的至少一个表位重叠(例如，与它们基本上相同))相互作用。因此，本发明还提供了与某些ALK7结合蛋白(例如，本文所述的抗ALK7抗体)竞争ALK7结合，或阻断某些ALK7结合蛋白的结合的ALK7结合蛋白。此类ALK7结合蛋白可以减少某些ALK7结合蛋白(例如，本文所述的抗ALK7抗体)与ALK7的结合，对这种结合无影响，或者在其他情况下改善此类ALK7结合蛋白的结合。在一些实施方案中，这种结合防止或抑制某些ALK7结合蛋白(例如，本文所述的抗ALK7抗体)与ALK7的结合。在其他实施方案中，这种结合有利于或促进某些ALK7结合蛋白(例如，本文所述的抗ALK7抗体)与ALK7的结合。在某些实施方案中，本发明的ALK7结合蛋白不包括表1A、1B或3中所述的抗ALK7抗体(即，G04、C02、D04、H03、J01、K01、C01、J02、K02、G05、C03和C02)或其抗原结合片段。
还提供了编码ALK7结合蛋白的核酸、含有所述核酸的载体和宿主细胞、以及制备和使用ALK7结合蛋白的方法。所提供的ALK7结合蛋白可用于诊断、治疗和/或改善与ALK7表达和/或信号传导增加相关的疾病和疾患。此类用途包括但不限于预防和/或改善肥胖(例如，腹部肥胖)；超重；胰岛素抗性；代谢综合征和其他代谢疾病或疾患；脂质紊乱，诸如低HDL水平、高LDL水平、高脂血症、高甘油三酯血症或血脂异常；脂蛋白异常；甘油三酯减少；炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)、脂肪肝疾病；非酒精性脂肪肝疾病；高血糖；葡萄糖耐量降低(IGT)；高胰岛素血症；高胆固醇(例如，高LDL水平和高胆固醇血症)；心血管疾病，诸如心脏病，包括冠心病、充血性心力衰竭、中风、周围血管疾病、动脉粥样硬化；动脉硬化和高血压；X综合征；血管再狭窄；神经病变；视网膜病变；神经退行性疾病；内皮功能障碍、呼吸功能障碍、肾脏疾病(例如，肾病)；胰腺炎；多囊卵巢综合征；尿酸水平升高；血色素沉着症(铁过载)；黑棘皮症(皮肤上的黑斑)；和癌症(例如，骨髓瘤(多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌和/或结肠癌)；以及与上述疾病或疾患中的一者或多者、或者与超重(例如，BMI为25kg/m2)、或身体脂肪过多相关的其他病症/疾患。
定义
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本公开相关领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。例如，The Concise Dictionary of Biomedicineand Molecular Biology，Juo，Pei-Show，第2版，2002，CRC Press；The Dictionary ofCell and Molecular Biology，第3版，1999，Academic Press；和The Oxford DictionaryOf Biochemistry And Molecular Biology，修订版，2000，Oxford University Press为技术人员提供了本公开中所用的很多术语的通用词典。本文提供的标题不是对可以通过引用整个说明书来获得的多个实施方案的限制。此外，通过引用整个说明书更完整地定义了下文直接定义的术语。
术语“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代物，除非使用该术语的语境另外明确指明。术语“一个”(或“一种”)以及术语“一个或多个”和“至少一个”在本文中可以互换使用。此外，本文使用的“和/或”应被视为两个或更多个指定的特征或组分中的每个具有或不具有另一个的具体公开。因此，如本文在诸如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样，在诸如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下实施方案中的每个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
术语“包含”通常在包括的意义上使用，也就是说，允许存在一个或多个特征或组分。在本文中用语言“包含”描述实施方案的任何地方，都另外提供了以“由......组成”和/或“基本上由......组成”描述的其他类似的实施方案。
在整个说明书和权利要求书中结合数值使用的术语“约”和“大约”表示本领域的技术人员熟悉和可接受的准确率区间。通常，这种准确率区间为±10％。或者，并且特别是在生物系统中，术语“约”和“大约”可以意指在给定值的数量级内的值，优选地≤5倍，更优选地≤2倍。
数字范围包括定义范围的数字。
ALK7结合蛋白是指特异性结合至ALK7，优选地结合至ALK7的胞外结构域的蛋白。
术语“ALK7”和“ALK7受体”可互换使用，是指ALK7(在文献中也称为ACVRLK7、活化素A受体、IC型、ACVR-1C、活化素受体样激酶7和EC 2.7.11)。NCBI参考序列NP_001104501.1中提供了人ALK7的参考序列。所提供的ALK7结合蛋白结合对应于SEQ ID NO：85的氨基酸序列的人ALK7的胞外结构域。大鼠ALK7的参考序列提供于NCBI参考序列P70539中。在一些实施方案中，所提供的ALK7结合蛋白结合对应于SEQ ID NO：86的氨基酸序列的大鼠ALK7的胞外结构域。
当在ALK7结合蛋白(例如，中和抗体)的语境中使用时，术语“竞争(compete或competes)”意指抗原结合蛋白之间的竞争，如通过测试中的抗原结合蛋白(例如，抗ALK7抗体或其ALK7结合片段)防止或抑制参考抗原结合蛋白(例如，配体或参考抗体)与共同抗原(例如，ALK7胞外结构域或其片段)的特异性结合的测定法所确定。可以使用多种类型的竞争性结合测定法，例如：固相直接或间接放射免疫测定法(RIA)(参见例如，Moldenhauer等人，Scand.J.Immunol.32：77-82(1990)和Morel等人，Molec.Immunol.25：7-15(1988))、固相直接或间接酶免疫测定法(EIA)、固相直接生物素-亲和素EIA(参见例如，Cheung等人，Virology 176：546-552(1990)和Kirkland等人，J.Immunol.137：3614-3619(1986))和夹心竞争测定法(参见例如，Stahli等人，Methods in Enzymology 92：242-253(1983))。通常，这种测定法涉及使用结合至固体表面或携带这些未标记的测试抗原结合蛋白和标记的参考抗原结合蛋白中的任一者的细胞的纯化的抗原。
竞争性抑制可以通过在存在测试抗原结合蛋白的情况下测定结合至固体表面或细胞的标记的量来测量。通常，测试抗原结合蛋白过量存在。通过竞争测定法鉴定的抗原结合蛋白(竞争性抗原结合蛋白)包括结合至与参考ALK7结合蛋白相同的表位的ALK7结合蛋白，以及结合至邻近表位的ALK7结合蛋白，所述邻近表位充分接近参考ALK7结合蛋白结合的表位从而产生空间位阻。通常，当竞争性ALK7结合蛋白过量存在时，它将抑制参考ALK7结合蛋白与ALK7的特异性结合至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％。在一些情况下，竞争性抗原结合蛋白抑制参考ALK7结合蛋白的特异性结合至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。
当在ALK7蛋白的语境中使用时，术语“表位”是指能够结合至本公开的ALK7结合蛋白(例如，抗体)的ALK7(例如，人ALK7或鼠ALK7)蛋白决定簇。表位通常由分子的化学活性表面基团组成，诸如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象和非构象表位的区别在于在存在变性溶剂的情况下与前者而非后者的结合丧失。可以使用本领域已知的技术容易地确定ALK7结合蛋白结合的ALK7表位。
术语“线性表位”或“主要表位”是指包含ALK7蛋白和沿着ALK7蛋白的主要氨基酸序列(连续)线性出现的本文所述的ALK7结合蛋白(诸如抗体或其抗原结合片段)之间的所有相互作用点的表位。一旦确定了抗原上的所需的表位，就可以例如使用本文所述的和本领域已知的技术来产生该表位的抗体。或者，在发现过程中，抗体或其片段的产生和表征可以阐明关于所需的表位的信息。然后，从该信息，可以竞争性地筛选结合相同的表位的抗体。实现此目的的一种方法是进行交叉竞争研究，以发现彼此竞争性结合的抗体，例如，所述抗体竞争与作为抗原的ALK7蛋白的结合。国际专利申请号WO2003/4873中描述了基于抗体的交叉竞争的“淘选”抗体的高通量方法。
术语“构象表位”或“结构表位”是指ALK7蛋白的非连续氨基酸残基以三维形状聚集在一起的表位，所述三维形状包含与ALK7结合蛋白的相互作用点。在构象表位中，相互作用点跨越被至少一个氨基酸残基(非连续)彼此分开的氨基酸残基，即，接触点出现在ALK7蛋白的独特和单独的区域，诸如ALK7的胞外结构域上。仅出于说明目的，构象表位还可以包含在ALK7的单独和独特的区域上的连续接触点，例如与ALK7的一个区域(诸如它的胞外结构域)中的至少两个氨基酸的连续接触点。
通常，对特定靶抗原具有特异性的抗体将优先识别蛋白和/或大分子的复杂混合物中的靶抗原上的表位。
可以使用多种表位作图技术来鉴定包含表位的给定多肽(例如，ALK7蛋白)的区域，诸如本文所述的或本领域熟知的那些。参见例如Epitope Mapping Protocols inMethods in Molecular Biology，第66卷(Glenn E.Morris编，1996年)Humana Press，Totowa，New Jersey。例如，线性表位可以通过以下步骤来确定：例如在固体支持物上同步合成大量肽(所述肽对应于蛋白分子的部分)，并且在肽仍然附接至支持物的情况下使肽与抗体反应。此类技术是本领域已知的，并且在例如美国专利号4,708,871；Geysen等人，(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8：3998-4002；Geysen等人，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：78-182；Geysen等人，(1986)Mol.Immunol.23：709-715中有所描述。类似地，通过确定氨基酸的空间构象(诸如通过例如氢/氘交换、X射线晶体学和二维核磁共振)可以容易地鉴定构象表位。参见例如，Epitope Mapping Protocols，出处同上。还可以使用标准抗原性和亲水性图(诸如使用Omiga 1.0版软件程序(可从OxfordMolecular Group获得)来计算的那些)来鉴定蛋白的抗原区域。该计算机程序采用Hopp/Woods法，Hopp等人，(1981)Proc.Natl.Acad.Sci USA 78：3824-3828来确定抗原性谱，以及Kyte-Doolittle技术，Kyte等人，(1982)J.Mol.Biol.157：105-132来确定亲水性图。
如本文所用，术语“互补位”是指决定与ALK7蛋白上的表位的结合的结合区的一般结构。该结构影响结合区是否结合以及以何种方式结合表位。术语“互补位”可以指抗体或其抗原结合片段的抗原位点，所述抗原部位负责抗体或其片段与ALK7蛋白上的抗原决定簇的结合。互补位还指抗体的独特位，以及结合至表位的互补决定区(CDR)区域。
线性表位作图或非连续表位作图均可用于对被本文所述的ALK7结合蛋白(例如，单克隆抗体)识别的ALK7上的表位进行作图。使用重叠合成肽的文库对线性表位进行作图的概念可见于例如Geysen等人(1984)PNAS 81：3998-4002。该技术包括例如，在覆盖有特定水凝胶制剂的固体支持物上直接合成线性肽的文库，所述水凝胶制剂允许与生物分子协同工作，并且可以容易地再生以对大样品集进行谱分析。为了产生线性模拟物的文库，将免疫原(或靶蛋白)的正确氨基酸序列在计算机上分割成重叠片段，然后在固体支持物(“微型卡”)上合成所述重叠片段。可以使用自动化ELISA型读取来对抗体与这种免疫原(或被靶向的蛋白)的结合进行定量。含有正确构象的正确氨基酸序列的构造可以最佳地结合抗体。
为了模拟非连续表位，支架上的化学连接肽(CLIPSTM)技术可将肽在结构上固定至所定义的3D结构。此类技术采用CLIPS支架的溴基团和半胱氨酸构造的硫醇侧链之间的反应，将天然蛋白序列转化为具有一系列结构的CLIPS构造。现在，常规使用CLIPSTM技术来将肽文库成型为单环、双环或三环结构以及片状和螺旋状折叠，所述折叠允许模拟构象和非连续结合位点。
二级结构模拟物可以通过CLIPS支架的使用来稳定，所述CLIPS支架允许选择热力学上有利的肽构象。组合筛选从靶蛋白至最多10,000个重叠肽构造的文库的转化开始。那些表示处于正确构象的非连续表位的两个部分的构造以增加的亲和力结合抗体。呈现不完整表位的构造可以以较低的亲和力结合抗体，而不含表位的构造根本不结合抗体。
本文所述的ALK7结合蛋白能够结合至ALK7(例如，人ALK7)上的至少一个表位。在一些实施方案中，此类ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)结合至ALK7上的至少一个线性表位。在其他实施方案中，此类ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)结合至ALK7上的至少一个非连续或构象表位。在一些实施方案中，此类ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)结合至ALK7上的至少一个线性和至少一个非连续或构象表位。此类线性、非连续或构象表位可以定位于ALK7的不同结构域或基序上。在一些实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白结合的至少一个表位定位于ALK7的胞外结构域之中。在其他实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白结合的至少一个表位定位于ALK7的胞外结构域之外。在另外其他实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白结合的至少一个表位定位于ALK7的胞外结构域内部或外部的边界。
本文所述的ALK7结合蛋白结合的示例性表位通过肽文库筛选来解析，并且在本说明书中(诸如在实施例中)有所公开。实施例中解析的肽链段表示ALK7上的线性、非连续或构象表位的重要部分(尽管可能只有一个部分)。本文所述的某些ALK7结合蛋白结合至实施例中公开的肽链段中表示的ALK7上的表位。技术人员将结合实施例中公开的肽链段的序列，并且结合本领域的普遍知识来理解表位结构。技术人员还容易理解，如通过本领域的普遍知识所理解的那样，本文所述的ALK7结合蛋白通过所述表位与ALK7的结合可以在高、中和/或低严格性条件下发生。
本文所述的ALK7结合蛋白通过所述表位与ALK7的结合可以改变或可以不改变ALK7的结构和/或功能。例如，这种结合可以减少或消除ALK7的生物学活性和/或ALK7与至少一种其他ALK7结合蛋白相互作用的能力。在一些实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白通过至少一个所述表位与ALK7的结合减少或消除了ALK7和至少一种ALK7配体之间的相互作用。在其他实施方案中，这种结合不会显著影响ALK7和至少一种ALK7配体之间的相互作用。在另外其他实施方案中，这种结合显著增加或改善了ALK7和至少一种ALK7配体之间的相互作用。此外，这种结合可以改善ALK7的稳定性和/或半衰期或者降低ALK7的稳定性和/或半衰期(通过例如抑制或促进ALK7的降解和/或除去)。
在一些实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白通过所述表位与ALK7的结合减少或抑制了ALK7和另一种ALK7结合蛋白之间的结合。例如，一种这样的ALK7结合蛋白可以与另一种抗ALK7抗体(例如，可商购获得的抗ALK7抗体)竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白通过所述表位与ALK7的结合防止了ALK7与另一种抗ALK7抗体(例如，另一种可商购获得的或已知的抗ALK7抗体)的结合。在其他实施方案中，这种结合不干扰与另一种抗ALK7抗体的结合(例如，另一种可商购获得的或已知的抗ALK7抗体与ALK7的结合)。
本公开涉及ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体或其片段)结合的ALK7上的多个主要和构象表位。本发明还涉及识别包含连续和/或非连续氨基酸残基的ALK7上的至少一个主要表位和/或至少一个构象表位的ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体或其抗原结合片段)。在特定实施方案中，此类连续和/或非连续氨基酸残基定位于ALK7的胞外结构域之中。在某些实施方案中，此类主要或构象表位包括本文(例如，在实施例中)所述的主要或构象表位，或者与本文(例如，在实施例中)所述的主要或构象表位重叠的不同的(例如，基本上相同的)表位。
在一个方面，本公开涉及ALK7中的多种不同的主要和构象表位的鉴定。已经使用相关ALK蛋白的已知结构对ALK7的胞外结构域的主要部分(残基4-84)的三维结构进行了建模。本公开还首次显示，在ALK7胞外结构域内存在多个与多个抗ALK7抗体相互作用的主要和构象表位，如图1和图3所示。
本文的公开内容显示，在ALK7胞外结构域中存在多个不同的主要和构象表位，其中不同类别的抗ALK7抗体或其片段结合至所述ALK7胞外结构域。本文所述的第一类ALK7结合蛋白(诸如抗ALK7抗体(例如，mAb C03))单独或与至少另一个主要表位或一个构象表位(诸如1LSPGLKCVCLL11(SEQ ID NO：318)和/或51QVFCHSSNN59(SEQ ID NO：319))一起结合至主要表位(诸如69DFCNNITLHLP79(SEQ ID NO：317))；本文所述的第二类ALK7结合蛋白(诸如抗ALK7抗体(例如，mAb J02))单独或与至少另一个主要表位或一个构象表位(诸如26WASVMLTNGKEQ37(SEQ ID NO：311)和/或78LPTASPNAPK87(SEQ ID NO：312))组合结合至第二主要表位(诸如45LPELNAQVFCHSSNNVTK62(SEQ ID NO：310))；并且第三类抗体单独或与至少另一个主要表位或一个构象表位(诸如6KCVCLLCDSS15(SEQ ID NO：314)、23GACWASVMLT32(SEQ ID NO：315)和/或71CNNITLHLPT80(SEQ ID NO：316))组合结合至第三主要表位(诸如42VSLPELNAQVFCHSSNNVTK63(SEQ ID NO：313))。在一些实施方案中，第一构象表位、第二构象表位和第三构象表位不重叠；并且第一类抗体、第二类抗体和第三类抗体结合至ALK7蛋白的不同区域。在某些实施方案中，第一构象表位和第二构象表位不重叠；并且第一类抗体和第二类抗体结合至ALK7蛋白的不同区域。在某些实施方案中，第一构象表位和第三构象表位不重叠；并且第一类抗体和第三类抗体结合至ALK7蛋白的不同区域。在某些实施方案中，第二构象表位和第三构象表位不重叠；并且第二类抗体和第三类抗体结合至ALK7蛋白的不同区域。
在一些实施方案中，ALK7蛋白上的第一构象表位、第二构象表位和第三构象表位彼此重叠至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个氨基酸残基；并且第一类抗体、第二类抗体和第三类抗体结合至至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个重叠氨基酸残基。在一些实施方案中，第一构象表位和第二构象表位彼此重叠至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个氨基酸残基；并且第一类抗体和第二类抗体结合至至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个重叠氨基酸残基。在一些实施方案中，第一构象表位和第三构象表位彼此重叠至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个氨基酸残基；并且第一类抗体和第三类抗体结合至至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个重叠氨基酸残基。在一些实施方案中，第二构象表位和第三构象表位彼此重叠至少一个、两个、三个、四个、或五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个氨基酸残基；并且第二类抗体和第三类抗体结合至至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个重叠氨基酸残基。
在其他实施方案中，三类抗体可以结合至如本文所述的重叠表位。此类重叠表位可以与所描述的主要和/或构象表位基本上相同或者在不同程度上与所描述的表位不同。重叠表位和本文所述的那些表位之间的这种基本上相同性可以涉及重叠至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个氨基酸残基。
在一些实施方案中，本发明的三类抗体与实施例(例如，表1A、1B和3)中所述的参考抗ALK7抗体竞争与ALK7蛋白的结合。在一些实施方案中，本发明的三类抗体抑制如实施例(例如，表1A、1B和3)中所述的参考抗ALK7抗体与ALK7蛋白的不同程度的结合。例如，三类抗体可以通过本文所述的参考抗ALK7抗体来抑制与ALK7的特异性结合至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多。
抗原结合蛋白(诸如本文公开的抗ALK7结合抗体及其ALK7结合片段、变体或衍生物)可以按照抗原的表位或部分(例如，它们识别或特异性结合的靶多肽)来描述或指定。例如，与本文公开的ALK7结合蛋白的抗原结合结构域特异性相互作用的ALK7的部分是“表位”。表位可由通过蛋白的三级折叠并置的连续氨基酸或非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时得以保持，而由三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丧失。表位决定簇可以包括分子的化学活性表面分组，诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基基团，并且可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。表位通常包括至少3个、4个、5个、6个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、25个、30个、35个具有独特空间构象的氨基酸。表位可以常规地使用本领域已知的方法来确定。
术语“抑制”、“阻断”、“减少”、“降低”、“阻抑”、“拮抗”和“中和”可互换使用，是指任何统计学上显著的活性(例如，ALK7配体结合和/或ALK7信号传导)的减少，包括所述活性的完全阻断。例如，“抑制”、“阻抑”或“拮抗”可以指与对照相比，约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的活性减少。
在一些实施方案中，术语“降低”、“抑制”或“拮抗”可以指与未与ALK7结合蛋白接触时细胞中的Smad磷酸化的程度相比，ALK7结合蛋白(诸如抗体或其ALK7结合片段)在统计学上显著地(例如，p值小于或等于0.05)降低一种或多种Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化(通过使表达ALK7和ActrIIA/B的细胞与ALK7配体(诸如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和/或Nodal)接触来诱导)。表达ALK7的细胞可以是天然存在的细胞或细胞系，或者可以通过将编码ALK7的核酸引入宿主细胞来重组产生。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，ALK7抗体或其ALK7结合片段)拮抗(降低)ALK7配体介导的一种或多种Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％或约100％，如例如通过使用本文所述或本领域已知的技术进行的蛋白印迹，然后通过用抗磷酸酪氨酸抗体进行的探测或通过ELISA(例如，P-Smad ELISA)或Smad依赖性报告基因测定法所测定。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白拮抗(降低)脂肪细胞中的ALK7介导的脂解的抑制。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，并且拮抗ALK7介导的白色脂肪细胞中的脂解的抑制5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如脂解测定法所测定。在其他实施方案中，ALK7结合蛋白减少或降低白色脂肪细胞中的ALK7介导的脂解的抑制至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％或约100％，如脂解测定法所测定。在一些实施方案中，在存在一种或多种ALK7配体的情况下进行脂解测定法。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，并且拮抗ALK7介导的白色和/或褐色脂肪细胞中的脂解的抑制5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如脂解测定法所测定。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白减少或降低白色和/或褐色脂肪细胞中的ALK7介导的脂解的抑制至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％或约100％，如脂解测定法所测定。在一些实施方案中，在存在一种或多种ALK7配体的情况下进行脂解测定法。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。
术语“增加”、“促进”和“激动”可互换使用，是指任何统计学上显著的活性(例如，ALK7配体结合和/或ALK7信号传导)的增加。例如，“增加”或“促进”可以指与对照相比，约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的活性增加。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白增加细胞中的脂解。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使细胞中的脂解增加至少5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如脂解测定法所测定。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白增加脂肪细胞中的脂解。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加至少5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如脂解测定法所测定。在一些实施方案中，在存在一种或多种ALK7配体的情况下进行脂解测定法。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白增加白色脂肪细胞或褐色脂肪细胞中的脂解。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白增加白色脂肪细胞中的脂解。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使白色脂肪细胞中的脂解增加至少5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如脂解测定法所测定。在一些实施方案中，在存在一种或多种ALK7配体的情况下进行脂解测定法。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白增加褐色脂肪细胞中的脂解。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使褐色脂肪细胞中的脂解增加至少5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如脂解测定法所测定。在一些实施方案中，在存在一种或多种ALK7配体的情况下进行脂解测定法。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白增加白色和褐色脂肪细胞中的脂解。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使白色和褐色脂肪细胞中的脂解增加至少5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如脂解测定法所测定。在一些实施方案中，在存在一种或多种ALK7配体的情况下进行脂解测定法。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使白色脂肪细胞中的脂解增加至少5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如在存在活化素B(50ng/ml)的情况下进行的脂解测定法中使用标准技术和条件所测定(例如，如本文的实施例所述)。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白减少或降低白色脂肪细胞中的ALK7介导的脂解的抑制至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％或约100％，如在脂解抑制测定法中使用标准技术和条件所测定。在某些此类实施方案中，在存在活化素B(50ng/ml)的情况下进行脂解测定法(例如，如本文的实施例所述)。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使白色和/或褐色脂肪细胞中的脂解增加至少5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如在存在活化素B(50ng/ml)的情况下进行的脂解测定法中使用标准技术和条件所测定(例如，如本文的实施例所述)。在另外其他实施方案中，ALK7结合蛋白减少或降低白色脂肪细胞中的ALK7介导的脂解的抑制至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％或约100％，如在脂解抑制测定法中使用标准技术和条件所测定。在某些此类实施方案中，在存在活化素B(50ng/ml)的情况下进行脂解测定法(例如，如本文的实施例所述)。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白增加脂肪细胞中的甘油产生。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的甘油产生增加至少5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如脂解测定法所测定。在一些实施方案中，在存在一种或多种ALK7配体的情况下进行脂解测定法。在一些实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白增加白色脂肪细胞或褐色脂肪细胞中的甘油产生。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”在本文可互换使用，并且包括完全(全长)抗体及其抗原结合片段或单链。典型的抗体包含通过二硫键互连的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链由重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CHI、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可以进一步细分为高变区(称为互补决定区(CDR))，所述高变区之间散布有更保守的区(称为框架区(FW))。每个VH和VL由三个CDR和四个FW组成，按照以下顺序从氨基末端至羧基末端排列：FW1、CDR1、FW2、CDR2、FW3、CDR3、FW4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。示例性抗体包括典型抗体scFv及其组合，其中例如scFv共价连接(例如，经由肽键或经由化学接头)至典型抗体的重链和/或轻链的N-末端或C-末端，或者插入典型抗体的重链和/或轻链中。
术语“抗体”和“免疫球蛋白”涵盖完整的多克隆抗体、完整的单克隆抗体、抗体片段(例如Fab、Fab'、F(ab′)2和Fv片段)、单链Fv(scFv)衍生物和突变体、多特异性抗体(诸如双特异性抗体)、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原决定部分的融合蛋白、以及包含抗原识别位点的任何其他经修饰的免疫球蛋白分子(只要抗体表现出所期望的结合活性即可)。根据抗体的重链恒定结构域的身份(分别称为α、δ、ε、γ和μ)，抗体可以是以下免疫球蛋白的五种主要类别中的任一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其亚类(同种型)(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。不同类别的免疫球蛋白具有不同和熟知的亚基结构和三维构型。抗体可以是裸的或缀合至其他分子(诸如毒素、放射性同位素等)。术语“IgG”是指属于基本上由熟知的免疫球蛋白γ基因编码的抗体类别的多肽。在人类中，该类别包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在小鼠中，该类别包括IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3。
术语“ALK7抗体”、“结合至ALK7的抗体”或“抗ALK7抗体”是指能够以足够的亲和力结合ALK7的抗体，以使得所述抗体可用作分别靶向ALK7的治疗剂或诊断试剂。
当在ALK7蛋白的语境中使用时，所谓“特异性结合”通常意指与结合蛋白与无关的对照蛋白的结合相比，所述结合蛋白(诸如抗体)以更大的亲和力与ALK7(例如，人ALK7，优选地ALK7的胞外结构域)结合的能力。在一些实施方案中，对照蛋白是鸡蛋清溶菌酶。优选地，结合蛋白以比对照蛋白的亲和力大至少100倍、500倍或1000倍的亲和力结合ALK7。优选地，如使用本领域已知的结合测定法所测量，结合蛋白对人ALK7的结合亲和力≤1×10-7M或≤1×10-8。在一些实施方案中，使用放射免疫测定法(RIA)或
Figure BDA0002550251300000511
(例如，使用ALK7作为分析物，并且使用ALK7结合蛋白作为配体，或反之亦然)来测量结合亲和力。
在一些实施方案中，如例如通过放射免疫测定法(RIA)、
Figure BDA0002550251300000521
(使用重组ALK7作为分析物，并且使用ALK7结合蛋白作为配体，或反之亦然)、动力学排除测定法
Figure BDA0002550251300000522
或本领域已知的其他结合测定法所测量，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)与无关的非ALK7蛋白的结合程度小于ALK7结合蛋白与ALK7的结合的约10％。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白是具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤10pM、≤1pM或≤0.1pM的解离常数KD)的全长抗体或ALK7结合抗体片段。
术语“抗原结合抗体片段”(例如，“ALK7结合抗体片段”)是指含有完整抗体的抗原结合可变区(例如，CDR3)的全部或一部分的片段。已知抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab′)2和Fv片段、线性抗体、单链抗体以及由一个或多个抗体片段形成的多特异性抗体。在一些实施方案中，本公开提供了ALK7结合抗体片段，其中所述抗体片段是Fab片段、Fab'片段、F(ab′)2片段、Fv片段、双体抗体或单链抗体分子。
Fc区包含含有除第一恒定区免疫球蛋白结构域之外的抗体恒定区的多肽。因此，Fc是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，以及IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，以及这些结构域的N-末端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc可以包含J链。对于IgG，Fc包含免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3以及Cγ1和Cγ2之间的铰链。虽然Fc区的边界可能有所不同，但是人IgG重链Fc区通常被定义为包含在羧基末端的残基C226或P230，其中编号根据Kabat所示的EU索引进行(Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service，NIH，Bethesda，Md.(1991))。Fc可以单独指该区域，或者在完全抗体、抗体片段或Fc融合蛋白的语境中指该区域。已经在许多不同的Fc位置观察到多态性，包括但不限于以EU索引编号的第270、272、312、315、356和358位，因此所呈现的序列和现有技术的序列之间可以存在细微差异。
“单克隆抗体”是指涉及单个抗原决定簇或表位的高度特异性识别和结合的同质抗体群体。这与多克隆抗体相反，多克隆抗体通常包括针对不同抗原决定簇的不同的抗体。术语“单克隆抗体”涵盖完整和全长单克隆抗体二者，以及包含抗体部分的抗体片段(诸如Fab、Fab'、F(ab′)2和Fv、单链(scFv)突变体和融合蛋白)，和包含抗原识别位点的任何其他经修饰的免疫球蛋白分子。单克隆抗体可以以多种方式制备，包括但不限于通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达和转基因动物来制备。
术语“嵌合抗体”是指免疫球蛋白分子的氨基酸序列来源于两个或更多个物种的抗体。通常，轻链和重链的可变区均对应于来源于具有所期望的抗原结合特异性、亲和力和/或能力的一个哺乳动物物种(例如，小鼠、大鼠、兔等)的抗体的可变区，而恒定区与来源于另一个物种(通常是人)的抗体中的序列同源，以避免在该物种中引发免疫应答。
术语“人源化抗体”是指来源于非人(例如，鼠)免疫球蛋白的抗体，所述抗体已被工程化为含有较少的，优选地最少的非人(例如，鼠)序列。通常，人源化抗体是人免疫球蛋白，其中来自CDR的残基被具有所期望的抗原结合特异性、亲和力和/或能力的来自非人物种(例如，小鼠、大鼠、兔或仓鼠)的CDR的残基替换(Jones，Nature 321：522-525(1986)；Riechmann，Nature 332：323-327(1988)；Verhoeyen，Science 239：1534-1536(1988))。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架区(FW)残基被替换为具有所期望的抗原结合特异性、亲和力和/或能力的来自非人物种的抗体中的对应的残基。可以通过Fv构架区中和/或所替换的非人残基内的另外的残基的取代来进一步修饰人源化抗体，以改善和优化抗体特异性、亲和力和/或能力。通常，人源化抗体将包含至少一个、通常两个或三个可变结构域的基本上全部，所述可变结构域含有对应于非人免疫球蛋白的全部或基本上全部CDR区，而全部或基本上全部FR区是人类免疫球蛋白共有序列的那些FR区。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白(通常人类免疫球蛋白)恒定区或恒定结构域(Fc)的至少一部分。用于产生人源化抗体的方法的实例在美国专利号5,225,539和5,639,641中有所描述。
术语“人抗体”是指人产生的抗体或具有使用本领域已知的任何技术制备的人产生的抗体对应的氨基酸序列的抗体。术语“人抗体”包括完整(全长)抗体、其片段和/或包含至少一个人重链和/或轻链多肽的抗体，诸如包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。
“拮抗”、“阻断”或“中和”结合蛋白是抑制或降低所结合的抗原(诸如ALK7)的活性的蛋白。在一些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白减少或抑制ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)、GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和/或Nodal的多聚化。在某些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白基本或完全抑制ALK7的活性。在一些实施方案中，ALK7活性降低10％、20％、30％、50％、70％、80％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体，诸如全长抗体或ALK7结合抗体片段。在另外的实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体抑制或降低ALK7的活性至少10％、20％、30％、50％、70％、80％、90％、95％或甚至100％。
“结合亲和力”通常是指分子的单个结合位点(例如，抗体)及其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指明，否则“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1∶1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力可以通常以解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常见方法(包括本文所述的那些方法)来测量并且可以用于本公开的目的。
“效力”是化合物的药理学活性的度量，以产生给定强度的效果所需的化合物的量表示。它是指实现所定义的生物学效果所需的化合物数量；所需的剂量越小，药物的效力越强。除非另外说明，否则效力通常以IC50值(单位为nM)表示。IC50是ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)的中位数抑制浓度。在功能测定法中，IC50是使生物反应降低最大量的50％的浓度。在配体-受体结合研究中，IC50是使配体-受体结合降低最大特异性结合水平的50％的浓度。IC50可以通过本领域已知的多种手段来计算。与参考抗ALK7抗体或其他ALK7结合蛋白相比，本文提供的抗体或其他结合蛋白的效力的提高倍数可以为至少2倍、4倍、6倍、8倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、110倍、120倍、130倍、140倍、150倍、160倍、170倍或至少180倍。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指结合至Fc受体(FcR)上的分泌Ig存在于某些细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)上，以使这些细胞毒性效应细胞特异性结合至携带抗原的靶细胞，随后用细胞毒素杀死靶细胞的细胞毒性形式。针对靶细胞表面的特定高亲和力IgG抗体“武装”了细胞毒性细胞，并且对于这种杀死是绝对必需的。靶细胞的裂解在细胞外，需要直接的细胞与细胞接触，并且不涉及补体。可以设想，除抗体之外，其他包含Fc区、具有特异性结合携带ALK7的靶细胞的能力的蛋白(特别是Fc融合蛋白)，也能够实现细胞介导的细胞毒性。为简洁起见，Fc融合蛋白的活性产生的细胞介导的细胞毒性在本文中也称为ADCC活性。
“分离的”ALK7结合蛋白(例如，ALK7抗体，包括ALK7结合片段、其变体和衍生物)、多核苷酸、载体、细胞或组合物是自然界中不存在的形式的蛋白(例如，抗体)、多核苷酸、载体、细胞或组合物。分离的蛋白、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括已经纯化至不再是它们在自然界中存在的形式的程度的那些。在一些实施方案中，分离的蛋白、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本上纯的。分离的蛋白和分离的核酸将不含或基本上不含与它们天然缔合的物质，诸如在天然环境或制备环境(例如，细胞培养物)(当这种制备通过在体外或体内实践的重组DNA技术进行时)中存在的其他多肽或核酸。可以使用稀释剂或佐剂来配制蛋白和核酸，但是出于实用目的仍然被视为分离的-例如，如果蛋白被用于包被用于免疫测定法的微量滴定板，则它们通常与明胶或其他载剂混合，或者当蛋白被用于诊断或疗法时，它们将与药学上可接受的载剂或稀释剂混合。
术语“受试者”、“个体”、“动物”、“患者”和“哺乳动物”是指期望接受诊断、预后或治疗的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括但不限于人、非人灵长类动物、家畜、农场动物、啮齿动物等等，它们将是特定治疗的接受者。
术语“药物组合物”是指处于诸如允许活性成分的生物学活性有效的形式，并且不含有浓度对组合物将施用的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分的制备物。这种组合物可以是无菌的。
如本文公开的多肽(例如，抗原结合蛋白(包括抗体))的“有效量”是足以实现特定目的的量。相对于所述目的，可以凭经验和以常规方式确定“有效量”。术语“治疗有效量”是指能够有效“治疗”受试者(例如，哺乳动物，诸如人)中的疾病或疾患的多肽(例如，抗原结合蛋白(包括抗体)或其他药物)的量，并且为患有所述疾病或疾患的受试者提供了一些改善或有益效果。因此，“治疗有效”量是提供一定程度的ALK7介导的疾病或疾患的至少一种临床症状的减轻、缓和和/或减少的量。与可以通过本公开的方法治疗的疾病或疾患相关的临床症状是熟知的。此外，治疗效果就不必是完全的或治愈的，只要为受试者提供一些有益效果即可。在一些实施方案中，术语“治疗有效”是指能够减少有需要的受试者中的ALK7活性的治疗剂的量。实际施用量以及施用的速率和时间过程将取决于所治疗的疾病的性质和严重度。治疗的处方(例如，剂量的确定等)属于全科医生和其他医生的责任。抗体及其抗原结合片段的适当剂量通常是已知的；参见Ledermann等人，Int.J.Cancer 47：659-664(1991)；Bagshawe等人，Ant.Immun.and Radiopharm.4：915-922(1991)。
在患有ALK7介导的疾病或疾患的受试者中，“足够量”或“足以”实现特定结果的量是指能够有效产生所期望的效果(任选地是治疗效果(即，通过施用治疗有效量))的治疗剂(例如，如本文公开的抗原结合蛋白(包括抗体))的量。在一些实施方案中，这种特定结果是有需要的受试者中的ALK7活性的减少。
术语“标记”是指直接或间接缀合至部分(诸如抗ALK7抗体)以产生“标记的”部分的可检测的化合物或组合物。标记本身可以是可检测的(例如，放射性同位素标记或荧光标记)，或者就酶学标记而言，可以催化可检测的底物化合物或组合物的化学改变。
诸如“治疗”或者“改善”之类的术语是指(a)治愈、减慢、减轻所诊断的病理状况或病症的症状和/或中止它们的进展的治疗措施，以及(b)预防和/或减慢目标疾病或疾患的发展的预防性或防止性措施。因此，需要治疗的受试者包括已经患有疾病或疾患的那些受试者；具有患上疾病或疾患的风险的那些受试者；以及要预防疾病或疾患的那些受试者。在某些实施方案中，如果受试者显示出例如与疾病或疾患相关的症状的全部、部分或暂时改善或消除，则根据本文提供的方法成功“治疗”了受试者。在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗选自以下的疾病、病症或疾患的方法：肥胖(例如，腹部肥胖)；胰岛素抗性；代谢综合征和其他代谢疾病或疾患；脂质紊乱，诸如低HDL水平、高LDL水平、高脂血症、高甘油三酯血症或血脂异常；脂蛋白异常；甘油三酯减少；炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)、脂肪肝疾病；非酒精性脂肪肝疾病；高血糖；葡萄糖耐量降低(IGT)；高胰岛素血症；高胆固醇(例如，高LDL水平和高胆固醇血症)；心血管疾病，诸如心脏病，包括冠心病、充血性心力衰竭、中风、周围血管疾病、动脉粥样硬化；动脉硬化和高血压；X综合征；血管再狭窄；神经病变；视网膜病变；神经退行性疾病；内皮功能障碍、呼吸功能障碍、肾脏疾病(例如，肾病)；胰腺炎；多囊卵巢综合征；尿酸水平升高；血色素沉着症(铁过载)；黑棘皮症(皮肤上的黑斑)；和癌症(例如，骨髓瘤(多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌(例如，上皮卵巢癌)、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌或结肠癌)；以及与上述疾病或疾患中的一者或多者、或者与超重(例如，BMI为25kg/m2)、或身体脂肪过多相关的其他病症/疾患。
如本文所用，“与......组合”或“组合疗法”是指使得另外的疗法(例如，第二疗法、第三疗法、第四疗法等)在体内仍然有效(例如，多种化合物在受试者中同时有效)的任何给药形式，它可以包括那些化合物的协同效应。有效性可以与试剂在血液、血清或血浆中的可测量浓度无关。例如，不同的治疗化合物可以在相同的制剂中或在分开的制剂中伴随地或按顺序以及以不同的时间表施用。因此，接受这种治疗的受试者可以受益于不同疗法的组合效应。本文提供的一种或多种ALK7结合蛋白可以与一种或多种其他另外的试剂和/或支持性疗法同步、在一种或多种其他另外的试剂和/或支持性疗法之前或者之后施用。一般而言，每种治疗剂将以针对该特定药剂所确定的剂量和/或时间排程施用。在方案中采用的特定组合将考虑本公开的拮抗剂与疗法和/或所期望的结局的相容性。
除非另外指明，否则本公开的方法和技术通常根据已知的常规方法进行，并且如整个本公开中引用和讨论的各种一般和更具体的参考文献所述。参见例如，Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第3版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，N.Y.(2001)和Ausubel等人，Current Protocols inMolecular Biology，Greene Publishing Associates(1992)，以及Harlow和LaneAntibodies：A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，N.Y.(1990)，所有这些文献均以引用的方式并入本文。
术语“癌症”、“肿瘤”、“癌性”和“恶性”是指或描述哺乳动物中的生理学疾患，所述疾患的特征通常为细胞生长不受调控。癌症的实例包括但不限于癌，包括腺癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、黑素瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠道癌、霍奇金(Hodgkin)淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、胶质母细胞瘤、胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(诸如肝脏癌和肝脏癌症)、膀胱癌、乳腺癌(包括激素介导的乳腺癌，参见例如Innes等人，Br.J.Cancer 94：1057-1065(2006))、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、骨髓瘤(诸如多发性骨髓瘤)、唾液腺癌、肾癌(诸如肾细胞癌和威尔姆斯(Wilms)瘤)、基底细胞癌、黑素瘤、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、食道癌、各种类型的头颈癌以及粘液来源的癌症(诸如粘液性卵巢癌、胆管癌(肝脏)和肾乳头状癌)。在特定实施方案中，癌症是乳腺癌、子宫内膜癌或子宫癌。在其他实施方案中，癌症是骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤和髓外骨髓瘤)、或子宫内膜癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌或胰腺癌。
术语“多核苷酸”和“核酸”可互换使用，旨在涵盖单个核酸以及多个核酸，是指分离的核酸分子或构建体，例如信使RNA(mRNA)、互补DNA(cDNA)或质粒DNA(pDNA)。在某些实施方案中，多核苷酸包含常规的磷酸二酯键或非常规键(例如，酰胺键，诸如可见于肽核酸(PNA)中的酰胺键)。术语“核酸”是指存在于多核苷酸中的任何一个或多个核酸区段，例如DNA、cDNA或RNA片段。当应用于核酸或多核苷酸时，术语“分离的”是指已经从天然环境中除去的核酸分子、DNA或RNA，例如出于本公开的目的，编码载体中含有的抗原结合蛋白的重组多核苷酸被认为是分离的。分离的多核苷酸的另外的实例包括维持在异源性宿主细胞中或者从溶于溶液的其他多核苷酸纯化(部分或基本上)的重组多核苷酸。分离的RNA分子包括本公开的多核苷酸的体内或体外RNA转录物。根据本公开的分离的多核苷酸或核酸还包括此类合成产生的分子。此外，多核苷酸或核酸可以包含调控元件，诸如启动子、增强子、核糖体结合位点或转录终止信号。
术语“载体”意指能够在宿主细胞中递送以及在一些实施方案中表达一个或多个所关注的基因或序列的构建体。载体的实例包括但不限于病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂缔合的DNA或RNA表达载体、包封在脂质体中的DNA或RNA表达载体，以及某些真核细胞(诸如生产细胞)。
术语“宿主细胞”是指具有或能够具有重组核酸的细胞或细胞群。宿主细胞可以是原核细胞(例如，大肠杆菌(E.coli))或真核细胞。宿主细胞可以是真菌细胞，包括酵母，诸如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)或粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)。宿主细胞还可以是各种动物细胞中的任何一种，诸如昆虫细胞(例如，Sf-9)或哺乳动物细胞(例如，HEK293F、CHO、COS-7、NIH-3T3、NS0、PER.
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和杂交瘤)。在另外的实施方案中，宿主细胞是选自以下的CHO细胞：CHO-K、CHO-0、CHO-Lec10、CHO-Lec13、CHO-Lec1、CHO Pro-5和CHOdhfr-。在特定实施方案中，宿主细胞是杂交瘤。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白”在本文中可互换使用，是指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是直链的或支链的，它可以包含经修饰的氨基酸，并且它可以被非氨基酸中断。该术语还涵盖经天然修饰或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键的形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操纵或修饰，诸如与标记组分的缀合。该定义中还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)的多肽，以及本领域已知的其他修饰。应当理解，因为在一些实施方案中，所提供的ALK7结合蛋白是基于抗体的，所以ALK7结合蛋白可以以单链或缔合链存在。
“重组”多肽、蛋白或抗体是指经由重组DNA技术产生的多肽、蛋白或抗体。出于本公开的目的，在宿主细胞中表达的重组产生的多肽、蛋白和抗体被认为是分离的，正如已经通过任何合适的技术分离、分馏或者部分或基本上纯化的天然或重组多肽那样。
本公开还包括多肽的片段、变体或衍生物，及其任何组合。当涉及多肽和蛋白时，术语“片段”包括保留参考多肽或蛋白的至少一些性质的任何多肽或蛋白。多肽的片段包括蛋白水解片段以及缺失片段。
术语“变体”是指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本抗体或多肽序列的抗体或多肽序列。抗体或多肽的变体包括片段，还包括由于氨基酸取代、缺失或插入而具有改变的氨基酸序列的抗体或多肽。变体可以是天然存在的或非天然存在的。可以使用任何合适的诱变技术来产生非天然存在的变体。变体多肽可以包含保守或非保守氨基酸取代、缺失或添加。
应用于抗体或多肽的术语“衍生物”是指已经被改变以表现出天然抗体或多肽上不存在的另外的特征的抗体或多肽。“衍生物”抗体的实例是与第二多肽或另一种分子(例如，聚合物(诸如PEG)、发色团或荧光团)或原子(例如，放射性同位素)的融合体或缀合物。
术语“氨基酸取代”是指将亲本序列中存在的一种氨基酸残基替换为另一种氨基酸残基。可以例如经由化学肽合成或通过已知的重组方法在亲本序列中对氨基酸进行取代。因此，提及“在第X位处的取代”或“在位置X处的取代”是指用替代性氨基酸残基取代在第X位处存在的氨基酸残基。在一些实施方案中，可以根据图式AXY来描述取代模式，其中A是天然存在于第X位的氨基酸残基对应的单字母代码，Y是取代的氨基酸残基。在其他实施方案中，可以根据图式XY来描述取代模式，其中Y是取代天然存在于第X位的氨基酸残基的氨基酸残基对应的单字母代码。
“保守氨基酸取代”是氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基替换的氨基酸取代。具有类似侧链的氨基酸残基家族此前已有所定义，包括碱性侧链(例如，Lys、Arg、His)、酸性侧链(例如，Asp、Glu)、不带电的极性侧链(例如，Gly、Asp、Gln、Ser、Thr、Tyr、Cys)、非极性侧链(例如，Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe、Met、Trp)、β支链侧链(例如，Thr、Val、Ile)和芳族侧链(例如，Tyr、Phe、Trp、His)。因此，如果多肽中的氨基酸残基被来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替换，则所述取代被认为是保守的。或者，可以用侧链家族成员的顺序和/或组成不同的在结构上相似的串来保守地替换氨基酸残基串。
非保守取代包括：(a)具有正电侧链的残基(例如，Arg、His或Lys)取代负电残基(例如，Glu或Asp)或者被负电残基取代，(b)亲水性残基(例如，Ser或Thr)取代疏水性残基(例如，Ala、Leu、Ile、Phe或Val)或者被疏水性残基取代，(c)Cys或Pro取代任何其他残基或者被任何其他残基取代，或者(d)具有大体积疏水性或芳族侧链的残基(例如，Val、His、Ile或Trp)取代具有较小侧链的残基(例如，Ala或Ser)或无侧链的残基(例如，Gly)或者被具有较小侧链的残基或无侧链的残基取代。
可以容易地鉴定其他取代。例如，对于氨基酸丙氨酸，取代可以选自D-Ala、Gly、β-Ala、L-Cys和D-Cys中的任一者。对于赖氨酸，替代可以是D-Lys、Arg、D-Arg、高精氨酸、Met、D-Met、鸟氨酸或D-鸟氨酸中的任一者。通常，可以预期诱导分离的多肽的性质变化的功能重要区域中的取代是：(a)极性残基(例如，Ser或Thr)取代疏水性残基(例如，Leu、Ile、Phe或Ala)(或者被疏水性残基取代)；(b)Cys残基取代任何其他残基(或者被任何其他残基取代)；(c)具有正电侧链的残基(例如，Lys、Arg或His)取代具有负电侧链的残基(例如，Glu或Asp)(或者被具有负电侧链的残基取代)；或者(d)具有大体积侧链的残基(例如，Phe)取代不具有这种侧链的残基(例如，Gly)(或者被不具有这种侧链的残基取代)。前述非保守取代之一可以改变蛋白的功能性质的可能性也与所述取代相对于蛋白的功能重要区域的位置相关联：因此一些非保守取代对生物学性质的影响很小或没有影响。
术语“氨基酸插入”是指在亲本序列中存在的两个氨基酸残基之间引入新的氨基酸残基。可以例如经由化学肽合成或通过本领域已知的重组方法来将氨基酸残基插入亲本序列中。因此，短语“第X位和第Y位之间的插入”或“Kabat第X位和第Y位之间的插入”，其中X和Y对应于氨基酸残基位置(例如，在第239位和第240位之间的半胱氨酸氨基酸残基插入)，是指在第X位和第Y位之间的氨基酸残基插入，并且还指在第X位和第Y位处的编码氨基酸残基的密码子之间的编码氨基酸残基的密码子的核酸序列中的插入。
术语两个多核苷酸或多肽序列之间的“序列同一性百分比”或“同一性百分比”是指考虑到必须引入以便进行两个序列的最佳比对的添加或缺失(即，缺口)，在比较窗口中序列共有的相同匹配位置数。匹配位置是在靶序列和参考序列中都存在的相同的核苷酸或氨基酸的任何位置。由于缺口不是核苷酸或氨基酸，因此不计算靶序列中存在的缺口。同样，由于计数了靶序列核苷酸或氨基酸，而未计算来自参考序列的核苷酸或氨基酸，因此不计算参考序列中存在的缺口。序列同一性百分比通过以下方法计算：确定两个序列中出现相同的氨基酸残基或核酸碱基的位置数得到匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗口中的位置总数，并将结果乘以100得到序列同一性百分比。两个序列之间的序列比较和序列同一性百分比的确定可以使用容易获得的软件程序来完成。合适的软件程序可以从各种来源获得，并且可用于蛋白和核苷酸序列二者的比对。确定序列同一性百分比的一种合适的程序是b12seq，它是BLAST程序套件的一部分，可从美国政府的国家生物技术信息中心BLAST网站(blast.ncbi.nlm.nih.gov)获得。B12seq使用BLASTN或BLASTP算法在两个序列之间进行比较。BLASTN用于比较核酸序列，而BLASTP用于比较氨基酸序列。其他合适的程序为例如Needle、Stretcher、Water或Matcher，它们是EMBOSS生物信息学程序套件的一部分，也可以从欧洲生物信息学研究所(EBI)(网址：www.ebi.ac.uk/Tools/psa)获得。
用于携带CDR或一组CDR的结构通常将是抗体重链或轻链序列或其实质部分，其中CDR或一组CDR定位于由重排的免疫球蛋白基因编码的天然存在的VH和VL抗体可变结构域的CDR或一组CDR对应的位置。免疫球蛋白可变结构域及其CDR的结构和位置可以由本领域的技术人员使用程序容易地确定，并且已知的可变结构域残基编号系统(例如Chothia、Chothia+和Kabat)可以常规地通过参考Kabat来确定(Kabat等人，Sequences of Proteinsof Immunological Interest.第4版.U.S.DHHS.1987，和互联网上可用的工具(例如，网址：bioinf.org.uk/abysis/sequence_input/key_annotation/key_annotation.html；和immuno.bme.nwu.edu))，这些文献以引用的方式整体并入本文。
CDR也可以被其他支架携带，诸如纤连蛋白、细胞色素B、白蛋白(例如，ALBUdAb(Domantis/GSK)和ALB-Kunitz(Dyax))、3个或6个氨基酸的非结构化重复序列(例如，
Figure BDA0002550251300000641
技术和
Figure BDA0002550251300000642
技术)以及含有弹性蛋白样重复结构域的序列(参见例如美国专利申请号61/442,106，该专利申请以引用的方式整体并入本文)。
基本上如本文所述的CDR氨基酸序列可以作为CDR携带在人可变结构域或其实质部分中。基本上如本文所述的HCDR3序列代表本公开的实施方案，并且这些序列中的每个都可以作为HCDR3携带在人重链可变结构域或其实质部分中。
本公开中采用的可变结构域可以从任何种系或重排的人可变结构域获得，或者可以是基于已知的人可变结构域的共有序列的合成可变结构域。可以使用重组DNA技术来将CDR序列(例如，CDR3)引入缺乏CDR(例如，CDR3)的可变结构域库中。
例如，Marks等人(Bio/Technology 10：779-783(1992)；该文献以引用的方式整体并入本文)提供了产生抗体可变结构域库的方法，其中针对或邻近可变结构域区域的5′末端的共有引物与人VH基因的第三框架区共有引物组合使用，以提供缺乏CDR3的VH可变结构域库。Marks等人进一步描述了如何将该库与特定抗体的CDR3进行组合。使用类似的技术，可以用缺乏CDR3的VH或VL结构域库来改组本发明的CDR3来源序列，并且将改组的完整VH或VL结构域与同源的VL或VH结构域组合，以提供抗原结合蛋白。然后可以在合适的宿主系统(诸如国际申请公开号WO92/01047或任何后续大量文献，包括Kay等人，(1996)PhageDisplay of Peptides and Proteins：A Laboratory Manual，San Diego：Academic Press的噬菌体展示系统)中显示库，以便可以选择合适的抗原结合蛋白。库可以由104个以上的单独成员，例如106个至108个或1010个成员组成。其他合适的宿主系统包括酵母展示、细菌展示、T7展示和核糖体展示。关于核糖体展示的综述，参见Lowe等人，Curr.Pharm.Biotech.517-527(2004)和国际申请公开号WO92/01047，这些文献中的每个均以引用的方式整体并入本文。Stemmer(Nature 370：389-391(1994)，该文献以引用的方式整体并入本文)也公开了类似的改组或组合技术，Stemmer描述了与β-内酰胺酶基因相关的技术，但是观察到该方法可以用于产生抗体。
如果ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)与ALK7结合，达到在某种程度上阻断参考分子与ALK7的结合的程度，则认为ALK7结合蛋白与参考分子“竞争”ALK7的结合。蛋白竞争与ALK7的结合，从而干扰、阻断或“交叉阻断”彼此与ALK7的结合的能力可以通过本领域已知的任何标准竞争性结合测定法(包括例如竞争ELISA测定法、表面等离振子共振(SPR；
Figure BDA0002550251300000651
Biosensor，Piscataway，N.J.))或根据Scatchard等人所述的方法(Ann.N.Y.Acad.Sci.51：660-672(1949))来确定。ALK7结合蛋白可以被认为竞争性抑制参考分子与ALK7的结合，例如抑制至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。根据一些实施方案，ALK7结合蛋白竞争性抑制参考分子与ALK7的结合至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。根据其他实施方案，ALK7结合蛋白竞争性抑制参考分子与ALK7的结合至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。
ALK7结合蛋白
提供了特异性结合ALK7的蛋白。在一些实施方案中，提供了拮抗剂ALK7结合蛋白。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是抗体。在另外的实施方案中，抗体是拮抗剂抗ALK7抗体。
如本文所用，术语“ALK7”是指通过诱变或其他修饰而来源于此类ALK7蛋白的任何物种和变体的活化素受体样激酶-7蛋白家族。本文中对ALK7的提及应理解为对目前鉴定的形式中的任一种的提及。ALK7家族的成员通常是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸的区域的配体结合胞外结构域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质结构域组成。存在多种天然存在的人ALK7的同种型。规范的人ALK7同种型1前体蛋白的序列(NCBI参考序列NP_660302.2)如下：
Figure BDA0002550251300000661
481 TISQLCVKED CKA(SEQ ID NO：85)信号肽以单下划线表示，胞外结构域以粗体表示。
规范的大鼠ALK7前体蛋白的序列(NCBI参考序列P70539.1)如下：
Figure BDA0002550251300000671
481 TISQLCVKED CKA(SEQ ID NO：86)信号肽以单下划线表示，胞外结构域以粗体表示。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7的亲和力比ALK7结合蛋白结合对照蛋白(非TGF-β受体家族成员)的亲和力大至少100倍、500倍或1000倍。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7，并且具有＜1μM、＜100nM、＜10nM、＜1nM、＜0.1nM、＜10pM、＜1pM或＜0.1pM的解离常数(KD)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白对人ALK7的KD在≤1μM和≥0.1pM、≤100μM和≥0.1pM、或≤100μM和≥1pM的范围内。
在一些实施方案中，
Figure BDA0002550251300000681
分析用于确定ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)与参考ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)竞争/阻断ALK7蛋白的结合的能力。在根据制造商的建议操作
Figure BDA0002550251300000682
仪器(例如
Figure BDA0002550251300000683
3000)的另一个实施方案中，通过此前附接的抗niFc IgG将ALK7-Fc融合蛋白捕获在CM5
Figure BDA0002550251300000684
芯片上，以产生ALK7包被的表面。通常，ALK7-Fc(二聚体)的200-800个共振单元将被偶联至芯片(容易产生可测量的结合水平，但是容易因所用的测试试剂的浓度而饱和的量)。
将要评估彼此竞争/阻断能力的两种ALK7结合蛋白(称为A*和B*)在合适的缓冲液中以一对一的结合位点摩尔比混合，以产生测试混合物。当基于结合位点计算浓度时，假设ALK7结合蛋白的分子量为ALK7结合蛋白的总分子量除以该ALK7结合蛋白上的ALK7结合位点的数量。测试混合物中的每种ALK7结合蛋白(即，A*和B*)的浓度应足够高，以使得
Figure BDA0002550251300000685
芯片上捕获的ALK7-Fc分子上的该ALK7结合蛋白的结合位点容易地饱和。混合物中的A*和B*ALK7结合蛋白的体积摩尔浓度相同(基于结合)，该浓度通常在1.00微摩尔/升和1.5微摩尔/升之间(基于结合位点)。还制备了含有单独的ALK7结合蛋白A*和单独的ALK7结合蛋白B*的单独溶液。这些溶液中的ALK7结合蛋白A*和ALK7结合蛋白B*应与测试混合物处于相同的缓冲液中，并且浓度与测试混合物相同。使测试混合物通过ALK7-Fc包被的
Figure BDA0002550251300000686
芯片，并且记录结合的总量。然后以这种方式处理芯片，从而在不破坏芯片结合的ALK7-Fc的情况下除去结合的ALK7结合蛋白。通常，这可以通过用30mM HC1处理芯片60秒来进行。然后使单独的ALK7结合蛋白A*的溶液通过ALK7-Fc包被的表面，并且记录结合的量。再次处理芯片，从而在不破坏芯片结合的ALK7-Fc的情况下除去结合的抗体。然后使单独的ALK7结合蛋白B*的溶液通过ALK7-Fc包被的表面，并且记录结合的量。接下来计算ALK7结合蛋白A*和ALK7结合蛋白B*的混合物的最大理论结合，所述最大理论结合是每种ALK7结合蛋白单独通过ALK7表面时的结合的总和。如果混合物的实际记录结合小于该理论最大值，则两种ALK7结合蛋白彼此竞争/阻断。因此，一般而言，阻断性ALK7结合蛋白是在上述
Figure BDA0002550251300000691
阻断测定法中结合至ALK7的蛋白，以使得在该测定法的过程中，在存在第二ALK7结合蛋白的情况下，记录的结合在组合中的两种ALK7结合蛋白的最大理论结合的80％和0.1％之间(例如，80％＞至4％)，特别地在最大理论结合的75％和0.1％之间(例如，75％至4％)，更特别地在最大理论结合的70％和0.1％之间(例如，70％至4％)(如上文所定义)。
上文所述的
Figure BDA0002550251300000692
测定法是用于确定两种ALK7结合蛋白(诸如抗ALK7抗体)是否彼此竞争/阻断ALK7的结合的示例性测定法。在极少数情况下，特定的ALK7结合蛋白可以不结合至经由抗Fc IgG偶联至CM5
Figure BDA0002550251300000693
芯片的ALK7-Fc(当ALK7上的相关结合位点被ALK7与Fc的连接掩蔽或破坏时，这可能会发生)。在这种情况下，可以使用ALK7的标记型式(例如C-末端His标记的ALK7)来确定阻断。在这种特定形式下，抗His抗体将偶联至
Figure BDA0002550251300000694
芯片，然后His标记的ALK7将通过芯片的表面并且被抗His抗体捕获。交叉阻断分析将基本上如上文所述进行，但是在每个芯片再生循环之后，将新的His-标记的ALK7添加回包被有抗His抗体的表面上除外。此外，各种其他已知的标签和标签结合蛋白组合可以用于这种阻断分析(例如，具有抗HA抗体的HA标签；具有抗FLAG抗体的FLAG标签；具有链霉亲和素的生物素标签)。下文一般描述了用于确定ALK7结合蛋白是否阻断或能够阻断参考ALK7结合蛋白与ALK7的结合的ELISA测定法。
在一些实施方案中，ELISA用于确定ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)与参考ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体或ALK7配体)竞争与ALK7的结合的能力。这种测定法的一般原理是将参考ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)包被到ELISA板的孔上。在溶液中添加过量的第二潜在阻断性测试ALK7结合蛋白(即，未结合至ELISA板)。然后将有限量的ALK7(或者ALK7-Fc)添加至孔中。溶液中的包被的参考ALK7结合蛋白和测试ALK7结合蛋白竞争有限量的ALK7(或ALK7-Fc)分子的结合。洗涤平板，以除去未被包被的参考ALK7结合蛋白结合的ALK7，并且除去测试溶液相ALK7结合蛋白以及在测试溶液相ALK7结合蛋白和ALK7之间形成的任何复合物。然后使用适当的ALK7检测试剂来测量结合的ALK7的量。能够阻断包被的参考ALK7结合蛋白与ALK7的结合的溶液中的测试ALK7结合蛋白将能够引起包被的参考ALK7结合蛋白可以结合的ALK7分子的数量相对于在不存在第二溶液相测试ALK7结合蛋白的情况下包被的参考ALK7结合蛋白可以结合的ALK7分子的数量的减少。针对测定法的本底信号的定义为在具有包被的参考ALK7结合蛋白、溶液相测试ALK7结合蛋白、仅ALK7缓冲液(即，无ALK7)和ALK7检测试剂的孔中获得的信号。针对测定法的阳性对照信号的定义为在具有包被的参考ALK7结合蛋白、仅溶液相测试ALK7结合蛋白缓冲液(即，无溶液相测试ALK7结合蛋白)、ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)检测试剂的孔中获得的信号。ELISA测定法以使阳性对照信号为本底信号的至少3倍的方式运行。作为方法学假象的对照，交叉阻断测定法可以以刚才描述的形式运行，也可以颠倒过来，将测试ALK7结合蛋白作为包被的抗体，将参考ALK7结合蛋白作为溶液相抗体。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7的亲和力比ALK7结合蛋白结合对照蛋白(非TGF-β受体家族成员)的亲和力大至少100倍、500倍或1000倍。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7的亲和力比ALK7结合蛋白结合对照蛋白(非TGF-β受体家族成员)的亲和力大至少100倍、500倍或1000倍。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7，并且具有＜1μM、＜100nM、＜10nM、＜1nM、＜0.1nM、＜10pM、＜1pM或＜0.1pM的解离常数(KD)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白对人ALK7的KD在≤1μM和≥0.1pM、≤100μM和≥0.1pM、或≤100μM和≥1pM的范围内。
在一些实施方案中，基于细胞的脂解抑制测定法用于确定ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗ALK7抗体)减少(抑制)哺乳动物白色脂肪细胞中的ALK7介导的脂解抑制的能力。在一些实施方案中，使用成熟的白色脂肪细胞(例如，人、小鼠或大鼠)来进行脂解抑制测定法，以确定ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)减少ALK7活性的能力。用于进行脂解测定法的试剂盒、试剂和方法是可商购获得的并且是本领域已知的。在特定实施方案中，如本文实施例中所提供进行脂解抑制测定法。在其他实施方案中，根据商购获得的脂解测定法试剂盒提供的说明和试剂(例如，BioAssay Systems，EnzyChromTM脂肪水解测定法试剂盒，产品目录号EAPL-200；Abcam产品目录号ab185433；Zen-Bio，产品目录号LIP-1-NCL1；BioVision，产品目录号K577-100；Sigma-Aldrich，产品目录号MAK211；和AdipoLyzeTM脂解检测测定法，Lonza，产品目录号193339)进行测定法。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白、ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂，并且使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使成熟的白色脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％、95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至65％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如在存在活化素B(50ng/m1)的情况下进行的脂解抑制测定法中使用标准技术和条件所测定(例如，如本文的实施例所述)。在其他实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使成熟的白色脂肪细胞中的脂解增加至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％或约100％，如在存在活化素B(50ng/ml)的情况下进行的脂解抑制测定法中使用标准技术和条件所测定(例如，如本文的实施例所述)。
可以测量依赖于ALK7信号传导的药效动力学参数，作为ALK7结合蛋白的体内测试的终点，以鉴定能够中和ALK7并且提供治疗有益效果的那些结合蛋白。ALK7中和结合剂的定义为在这种药效动力学参数中，与媒介物处理的动物相比，能够引起统计学上显著的变化的结合剂。这种体内测试可以在任何合适的哺乳动物(例如，小鼠、大鼠或猴子)中进行
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是特异性结合ALK7的抗体。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是全长抗ALK7抗体。在另外的实施方案中，抗体是单克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、多特异性抗体或其ALK7结合抗体片段。
在一些实施方案中，抗ALK7抗体是ALK7结合抗体片段。在一些实施方案中，ALK7结合抗体片段是：Fab、Fab'、F(ab′)2、Fv片段、双体抗体或单链抗体分子。在另外的实施方案中，ALK7抗体是Fd、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、胞内抗体，IgGΔCH2、微体、F(ab′)3、四体、三体、双体抗体、单域抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2、scFv-Fc或双scFv。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是包含VH和VL的抗体。在一些实施方案中，抗ALK7抗体还包含重链恒定区或其片段。在一些实施方案中，抗体包含选自以下的重链免疫球蛋白恒定区：(a)人IgA恒定区或其片段；(b)人IgD恒定区或其片段；(c)人IgE恒定结构域或其片段；(d)人IgG1恒定区或其片段；(e)人IgG2恒定区或其片段；(f)人IgG3恒定区或其片段；(g)人IgG4恒定区或其片段；以及(h)人IgM恒定区或其片段。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含重链恒定区或其片段，例如人IgG恒定区或其片段。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含突变为或已经突变为具有改变的效应子功能和/或半衰期的重链免疫球蛋白恒定结构域。
在特定实施方案中，ALK7结合蛋白是包含IgG1重链恒定区的抗体，所述IgG1重链恒定区含有减少效应子功能的突变(参见例如，Idusogie等人，J.Immunol.166：2571-2575(2001)；Sazinsky等人，PNAS USA 105：20167-20172(2008)；Davis等人，J.Rheumatol.34：2204-2210(2007)；Bolt等人，Eur.J.Immunol.23：403-411(1993)；Alegre等人，Transplantation 57：1537-1543(1994)；Xu等人，Cell Immunol.200：16-26(2000)；Cole等人，Transplantation 68：563-571(1999)；Hutchins等人，PNAS USA 92：11980-11984(1995)；Reddy等人，J.Immunol.164：1925-1933(2000)；WO97/11971和WO07/106585；美国申请Publ.2007/0148167A1；McEarchem等人，Blood 109：1185-1192(2007)；Strohl，Curr.Op.Biotechnol.20：685-691(2009)；和Kumagai等人，J.Clin.Pharmacol.47：1489-1497(2007)，这些文献中的每个均以引用的方式整体并入本文)。
在一些实施方案中，重链恒定区或其片段包含相对于野生型IgG恒定结构域的一个或多个氨基酸取代，其中与具有野生型IgG恒定结构域的IgG的半衰期相比，经修饰的IgG具有减少的ADCC。减少ADCC的所提供的抗体中含有的Fc序列工程化修饰的实例包括一个或多个对应于以下的修饰：IgG1-K326W、E333S；IgG2-E333S；IgG1-N297A；IgG1-L234A、L235A；IgG2-V234A、G237A；IgG4-L235A、G237A、E318A；IgG4-S228P、L236E；IgG2-EU序列118-260；IgG4-EU序列261-447；IgG2-H268Q、V309L、A330S、A331S；IgG1-C220S、C226S、C229S、P238S；IgG1-C226S、C229S、E233P、L234V、L235A；和IgG1-L234F、L235E、P331S，其中位置编号根据Kabat中的EU索引进行。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含重链免疫球蛋白恒定结构域，所述重链免疫球蛋白恒定结构域突变为或已经突变为具有减少的CDC活性。在特定实施方案中，ALK7结合蛋白是包含IgG1重链恒定区的抗体，所述IgG1重链恒定区含有减少CDC活性的突变(参见例如，WO97/11971和WO07/106585；美国申请公开2007/0148167A1；McEarchern等人，Blood109：1185-1192(2007)；Hayden-Ledbetter等人，Clin.Cancer 15：2739-2746(2009)；Lazar等人，PNAS USA 103：4005-4010(2006)；Bruckheimet等人，Neoplasia 11：509-517(2009)；Strohl，Curr.Op.Biotechnol.20：685-691(2009)；和Sazinsky等人，PNAS USA 105：20167-20172(2008)；这些文献中的每个均以引用的方式整体并入本文)。减少CDC的抗ALK7抗体中含有的Fc序列工程化修饰的实例包括一个或多个对应于以下的修饰：IgG1-S239D、A330L、I332E；IgG2 EU序列118-260；IgG4-EU序列261-447；IgG2-H268Q、V309L、A330S、A331S；IgG1-C226S、C229S、E233P、L234V、L235A；IgG1-L234F、L235E、P331S；和IgG1-C226S、P230S。
在另外的实施方案中，重链恒定区或其片段包含相对于野生型IgG恒定结构域的一个或多个氨基酸取代，其中与具有野生型IgG恒定结构域的IgG的半衰期相比，经修饰的IgG具有增加的半衰期。例如，IgG恒定结构域可以含有第251-257、285-290、308-314、385-389和428-436位处的氨基酸残基的一个或多个氨基酸取代，其中氨基酸位置编号根据Kabat所示的EU索引进行。在某些实施方案中，IgG恒定结构域可以含有以下取代中的一者或多者：Kabat第252位处的氨基酸被Tyr、Phe、Trp或Thr取代；Kabat第254位处的氨基酸被Thr取代；Kabat第256位处的氨基酸被Ser、Arg、Gln、Glu、Asp或Thr取代；Kabat第257位处的氨基酸被Leu取代；Kabat第309位处的氨基酸被Pro取代；Kabat第311位处的氨基酸被Ser取代；Kabat第428位处的氨基酸被Thr、Leu、Phe或Ser取代；Kabat第433位处的氨基酸被Arg、Ser、Iso、Pro或Gln取代；或者Kabat第434位处的氨基酸被Trp、Met、Ser、His、Phe或Tyr取代。更具体而言，相对于野生型人IgG恒定结构域，IgG恒定结构域可以含有氨基酸取代，包括Kabat第252位处的氨基酸被Tyr取代、Kabat第254位处的氨基酸被Thr取代以及Kabat第256位处的氨基酸被Glu取代。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是包含轻链免疫球蛋白恒定区的抗体。在另外的实施方案中，抗体包含人Igκ恒定区或人Igλ恒定区。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中CDR存在于表1A中公开的VH和VL中。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR，其中所述CDR存在于选自以下的VH和VL对中：(a)SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ ID NO：13的VL序列；(b)SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列；(c)SEQ ID NO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列；以及(d)SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中CDR存在于表1B中公开的VH和VL中。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR，其中所述CDR存在于选自以下的VH和VL对中：(a)SEQ ID NO：152的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列；(b)SEQ ID NO：159的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列；(c)SEQ ID NO：165的VH序列和SEQ ID NO：171的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中CDR存在于表3中公开的VH和VL中。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR，其中所述CDR存在于选自以下的VH和VL对中：(a)SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列；(b)SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列；(c)SEQ ID NO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列；(d)SEQ ID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列；以及(d)SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR：(a)VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，或(b)VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与本文公开的一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR，其中所述一组CDR与表1A中公开的VH或VL序列中的一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR：(a)VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，或(b)VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与本文公开的一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR，其中所述一组CDR与表1B中公开的VH或VL序列中的一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与本文公开的一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含一组CDR，其中所述一组CDR与表3中公开的VH和VL序列对中的一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQID NO：19的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列；(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列；或者(d)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：56的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合至ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和II型受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000781
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：156的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：157的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：184的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；以及(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ IDNO：163的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：164的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：167的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：168的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：169的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合至ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和II型受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000801
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQID NO：121的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列；(d)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列；或者(e)(i)VH-CDR1包含SEQID NO：137的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合至ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和II型受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000821
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列；(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列；或者(d)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ IDNO：96的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：156的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：157的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；以及(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ IDNO：163的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：1164的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：168的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：169的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ IDNO：96的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQID NO：121的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列；(d)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列；或者(e)(i)VH-CDR1包含SEQID NO：137的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，所述一组CDR具有来自一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和活化素B的复合物的形成；(b)与ActRIIA或ActRIIB竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000851
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，所述一组CDR具有来自一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和活化素B的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000861
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，所述一组CDR具有来自一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000871
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，所述一组CDR具有来自一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；(ii)VH.CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000891
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，所述一组CDR具有来自一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO89的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ IDNO：90的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQID NO：96的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和活化素B的复合物的形成；(b)与ActRIIA或ActRIIB竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000901
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，所述一组CDR具有来自一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ IDNO：104的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQID NO：108的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和活化素B的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000911
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，所述一组CDR具有来自一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ IDNO：116的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQID NO：122的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000921
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，所述一组CDR具有来自一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ IDNO：127的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQID NO：133的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000941
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR，所述一组CDR具有来自一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；(iii)VH-CDR3包含SEQ IDNO：139的氨基酸序列；(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列；(v)VL-CDR2包含SEQID NO：146的氨基酸序列；以及(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000951
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：38的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39或57的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQID NO：57的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000971
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：2的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000981
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：20的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300000991
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：38的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001011
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：56的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001021
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：89的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001031
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：103的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001051
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：115的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII-受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001061
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：126的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001071
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQID NO：138的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3，其中(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列；(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；以及(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列；并且所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001091
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQID NO：11的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001101
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQID NO：29的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001111
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQID NO：47的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001131
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQID NO：65的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001141
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQID NO：96的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001151
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQID NO：108的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001171
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQID NO：122的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDFl、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001181
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQID NO：133的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001191
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR与一参考组CDR相同，或者具有来自所述一参考组CDR的总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或少于十个氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQID NO：146的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含一组CDR：VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中：(i)VL-CDR1包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列；(ii)VL-CDR2包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；以及(iii)VL-CDR3包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001211
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含本文公开的VH-CDR3或VL-CDR3序列。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含表1A中公开的VH-CDR3或VL-CDR3序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含本文公开的VH-CDR3和VL-CDR3序列。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含表1A中公开的VH-CDR3和VL-CDR3序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含表1B中公开的VH-CDR3或VL-CDR3序列。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含表1B中公开的VH-CDR3和VL-CDR3序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含表3中公开的VH-CDR3或VL-CDR3序列。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含表3中公开的VH-CDR3和VL-CDR3序列。
在一些实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001221
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001231
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：39的氨基酸序列的VH-CDR3。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：39的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：39的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001251
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：57的氨基酸序列的VH-CDR3。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：57的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：56的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：57的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：56的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：55的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001261
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的VH-CDR1的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的VH-CDR1、具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：3或21的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的VH-CDR2、具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：3或21的氨基酸序列的VH-CDR3。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的VH-CDR1的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的VH-CDR1、具有SEQ IDNO：38的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：39或57的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的VH-CDR2、具有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：39或57的氨基酸序列的VH-CDR3。
在一些实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：90的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：90的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：89的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：90的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：89的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：88的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001281
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：103的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：103的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：102的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001291
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：116的氨基酸序列的VH-CDR3。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：116的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：115的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：116的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：115的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：114的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001301
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：127的氨基酸序列的VH-CDR3。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：127的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：126的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：127的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：126的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：125的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001321
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：164的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：164的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：138或163的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：164的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：103的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：1或137的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001331
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：139的氨基酸序列的VH-CDR3。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：139的氨基酸序列的VH-CDR3和具有SEQ ID NO：138的氨基酸序列的VH-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：139的氨基酸序列的VH-CDR3、具有SEQ ID NO：138的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001341
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：88的氨基酸序列的VH-CDR1的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：88的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：89的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：88的氨基酸序列的VH-CDR1、具有SEQ IDNO：89的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：90的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：89的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：89的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：88的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：89的氨基酸序列的VH-CDR2、具有SEQ ID NO：88的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：90的氨基酸序列的VH-CDR3。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：102的氨基酸序列的VH-CDR1的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：102的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：103的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：102的氨基酸序列的VH-CDR1、具有SEQID NO：103的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：103的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：103的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：102的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：103的氨基酸序列的VH-CDR2、具有SEQ ID NO：102的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：104的氨基酸序列的VH-CDR3。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：114的氨基酸序列的VH-CDR1的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：114的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：115的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：114的氨基酸序列的VH-CDR1、具有SEQID NO：115的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：116的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：115的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：115的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：114的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：115的氨基酸序列的VH-CDR2、具有SEQ ID NO：114的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：116的氨基酸序列的VH-CDR3。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：125的氨基酸序列的VH-CDR1的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：125的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：126的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：125的氨基酸序列的VH-CDR1、具有SEQID NO：126的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：127的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：126的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：126的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：125的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：126的氨基酸序列的VH-CDR2、具有SEQ ID NO：125的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：127的氨基酸序列的VH-CDR3。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH-CDR1的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：138的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH-CDR1、具有SEQID NO：138的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：139的氨基酸序列的VH-CDR3的ALK7结合蛋白。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：138的氨基酸序列的VH-CDR2的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：138的氨基酸序列的VH-CDR2和具有SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：138的氨基酸序列的VH-CDR2、具有SEQ ID NO：137的氨基酸序列的VH-CDR1和具有SEQ ID NO：139的氨基酸序列的VH-CDR3。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VL-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VL-CDR3和具有SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VL-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VL-CDR3、具有SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VL-CDR2和具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的VL-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001381
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VL-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VL-CDR3和具有SEQ ID NO：29的氨基酸序列的VL-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VL-CDR3、具有SEQ ID NO：29的氨基酸序列的VL-CDR2和具有SEQ ID NO：28的氨基酸序列的VL-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001391
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：48的氨基酸序列的VL-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：48的氨基酸序列的VL-CDR3和具有SEQ ID NO：47的氨基酸序列的VL-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：48的氨基酸序列的VL-CDR3、具有SEQ ID NO：47的氨基酸序列的VL-CDR2和具有SEQ ID NO：46的氨基酸序列的VL-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001401
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的VL-CDR3。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的VL-CDR3和具有SEQ ID NO：65的氨基酸序列的VL-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的VL-CDR3、具有SEQ ID NO：65的氨基酸序列的VL-CDR2和具有SEQ ID NO：64的氨基酸序列的VL-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001411
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：97的氨基酸序列的VL-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：97的氨基酸序列的VL-CDR3和具有SEQ ID NO：96的氨基酸序列的VL-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：97的氨基酸序列的VL-CDR3、具有SEQ ID NO：96的氨基酸序列的VL-CDR2和具有SEQ ID NO：95的氨基酸序列的VL-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001421
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：109的氨基酸序列的VL-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：109的氨基酸序列的VL-CDR3和具有SEQ ID NO：108的氨基酸序列的VL-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：109的氨基酸序列的VL-CDR3、具有SEQ ID NO：108的氨基酸序列的VL-CDR2和具有SEQ ID NO：107的氨基酸序列的VL-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDFl、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001441
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：123的氨基酸序列的VL-CDR3的ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：123的氨基酸序列的VL-CDR3和具有SEQ ID NO：122的氨基酸序列的VL-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：123的氨基酸序列的VL-CDR3、具有SEQ ID NO：122的氨基酸序列的VL-CDR2和具有SEQ ID NO：121的氨基酸序列的VL-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001451
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL-CDR3。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL-CDR3和具有SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VL-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：134的氨基酸序列的VL-CDR3、具有SEQ ID NO：133的氨基酸序列的VL-CDR2和具有SEQ ID NO：132的氨基酸序列的VL-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001461
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：147的氨基酸序列的VL-CDR3。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：147的氨基酸序列的VL-CDR3和具有SEQ ID NO：146的氨基酸序列的VL-CDR2。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：147的氨基酸序列的VL-CDR3、具有SEQ ID NO：146的氨基酸序列的VL-CDR2和具有SEQ ID NO：145的氨基酸序列的VL-CDR1。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDFl、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001471
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，本公开提供了包含具有SEQ ID NO：75、78、81或84的氨基酸序列的VH抗原结合结构域3(ABD3)的ALK7结合蛋白。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：75的氨基酸序列的VH-ABD3。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：75的氨基酸序列的VH-ABD3和具有SEQ ID NO：74的氨基酸序列的VH抗原结合结构域2(VH-ABD2)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：75的氨基酸序列的VH-ABD3、具有SEQ ID NO：74的氨基酸序列的VH-ABD2和具有SEQ ID NO：73的氨基酸序列的VH抗原结合结构域1(VH-ABD1)。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ IDNO：75的氨基酸序列的VH-ABD3。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：75的氨基酸序列的VH-ABD3和具有SEQ ID NO：74的氨基酸序列的VH抗原结合结构域2(VH-ABD2)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：75的氨基酸序列的VH-ABD3、具有SEQ ID NO：74的氨基酸序列的VH-ABD2和具有SEQ ID NO：73的氨基酸序列的VH抗原结合结构域1(VH-ABD1)。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：78的氨基酸序列的VH-ABD3。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：78的氨基酸序列的VH-ABD3和具有SEQ ID NO：77的氨基酸序列的VH抗原结合结构域2(VH-ABD2)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：78的氨基酸序列的VH-ABD3、具有SEQID NO：77的氨基酸序列的VH-ABD2和具有SEQ ID NO：76的氨基酸序列的VH抗原结合结构域1(VH-ABD1)。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：81的氨基酸序列的VH-ABD3。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：81的氨基酸序列的VH-ABD3和具有SEQ ID NO：80的氨基酸序列的VH抗原结合结构域2(VH-ABD2)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：81的氨基酸序列的VH-ABD3、具有SEQ ID NO：80的氨基酸序列的VH-ABD2和具有SEQ ID NO：79的氨基酸序列的VH抗原结合结构域1(VH-ABD1)。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：84的氨基酸序列的VH-ABD3。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：84的氨基酸序列的VH-ABD3和具有SEQ IDNO：83的氨基酸序列的VH抗原结合结构域2(VH-ABD2)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含具有SEQ ID NO：84的氨基酸序列的VH-ABD3、具有SEQ ID NO：83的氨基酸序列的VH-ABD2和具有SEQ ID NO：82的氨基酸序列的VH抗原结合结构域1(VH-ABD1)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001491
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，与本文公开的参考VH或VL相比，ALK7结合蛋白包含具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入的VH或VL。在另外的实施方案中，与表1A或1B中公开的参考VH或VL相比，ALK7结合蛋白包含具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入的VH或VL。在一些实施方案中，与本文公开的参考VH和VL对相比，ALK7结合蛋白包含具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入的VH和VL对。在另外的实施方案中，与表1A或1B中公开的参考VH和VL对相比，ALK7结合蛋白包含具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入的VH和VL对。
在另外的实施方案中，与表3公开的参考VH或VL相比，ALK7结合蛋白包含具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入的VH或VL。在另外的实施方案中，与表3公开的参考VH和VL对相比，ALK7结合蛋白包含具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个氨基酸取代、缺失和/或插入的VH和VL对。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自选自SEQID NO：4的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：13的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(b)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：22的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：31的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(c)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：40、170或171的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：49的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；以及(d)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：58的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：67的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001521
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自选自SEQID NO：91的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：98的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(b)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：105的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：110的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(c)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：117的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：124的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(d)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：128的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：135的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；以及(e)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：140的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQID NO：148的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001541
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自选自SEQID NO：152的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：98的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；(b)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：159的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：110的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；以及(c)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：165的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，和(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：171的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001551
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，其中VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：4的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：13的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001561
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，其中VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：22的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：31的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001581
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，其中VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：40的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：49的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001591
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，其中VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：58的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：67的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001601
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，其中VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：91的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：98的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001611
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，其中VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：105的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：110的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001621
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，其中VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：117的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：124的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001631
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，其中VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：128的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：135的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001651
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH和VL对，其中VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：140的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：148的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001661
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH序列，所述VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自选自以下的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入：(a)SEQ ID NO：4、(b)SEQ ID NO：22、(c)SEQ ID NO：40和(d)SEQ ID NO：58；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001671
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VH序列，所述VH序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自选自以下的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入：(a)SEQ ID NO：91、(b)SEQ ID NO：105、(c)SEQ ID NO：117、(d)SEQ ID NO：128和(e)SEQ ID NO：140；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001681
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VL序列，所述VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自以下的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入：(a)SEQ ID NO：13；(b)SEQ ID NO：31；(c)SEQ ID NO：49；和(d)SEQ ID NO：67；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001691
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含VL序列，所述VL序列具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自以下的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入：(a)SEQ ID NO：98；(b)SEQ ID NO：110；(c)SEQ ID NO：124；(d)SEQ ID NO：135；和(e)SEQ ID NO：148；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001701
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含与本文公开的参考VH或VL具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH或VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含与表1A中公开的参考VH或VL具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH或VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含与表1B中公开的参考VH或VL具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH或VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含与表3中公开的参考VH或VL具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH或VL。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含与本文公开的参考VH和VL具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH和VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含与表1A中公开的参考VH和VL具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH和VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含与表1B中公开的参考VH和VL具有至少90％。95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH和VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白包含与表3中公开的参考VH和VL具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH和VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001721
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含(a)与SEQ ID NO：4具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH；(b)与SEQ ID NO：22具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH；(c)与SEQ ID NO：40具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH；以及(d)与SEQ IDNO：58具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001731
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含(a)与SEQ ID NO：91具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH；(b)与SEQ ID NO：105具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH；(c)与SEQ ID NO：117具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH；(d)与SEQ ID NO：128具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH；以及(e)与SEQ IDNO：140具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDFl、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001741
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含(a)与SEQ ID NO：13具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(b)与SEQ ID NO：31具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(c)与SEQ ID NO：49具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；以及(d)与SEQ IDNO：67具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001751
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含(a)与SEQ ID NO：98具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(b)与SEQ ID NO：110具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(c)与SEQ ID NO：124具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(d)与SEQ ID NO：135具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；以及(e)与SEQ IDNO：148具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001771
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)与SEQ ID NO：4具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：13具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(b)(i)与SEQ ID NO：22具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：31具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(c)(i)与SEQ ID NO：40具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：49具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；以及(d)(i)与SEQ ID NO：58具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：67具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001781
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)与SEQ ID NO：152具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：98具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(b)(i)与SEQ ID NO：159具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：110具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；以及(c)(i)与SEQ ID NO：165具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：171具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001791
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7并且包含选自以下的VH和VL对：(a)(i)与SEQ ID NO：91具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：98具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(b)(i)与SEQ ID NO：105具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：110具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(c)(i)与SEQ ID NO：117具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：124具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；(d)(i)与SEQ ID NO：128具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：135具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；以及(e)(i)与SEQ ID NO：140具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和(ii)与SEQ ID NO：148具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001811
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含与SEQ ID NO：4具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和与SEQ ID NO：13具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：4的VH和SEQ ID NO：13的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001821
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含与SEQ ID SEQ IDNO：22具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和与SEQ IDNO：31具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID SEQ ID NO：22的VH和SEQ ID NO：31的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001831
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含与SEQ ID NO：40具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和与SEQ ID NO：49具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：40的VH和SEQ ID NO：49的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001841
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含与SEQ ID NO：58具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和与SEQ ID NO：67具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：58的VH和SEQ ID NO：67的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001851
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含与SEQ ID NO：91具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和与SEQ ID NO：98具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：91的VH和SEQ ID NO：98的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001861
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Noda1)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含与SEQ ID SEQ IDNO：105具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和与SEQ IDNO：110具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID SEQ ID NO：105的VH和SEQ ID NO：110的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDFl、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001881
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含与SEQ ID NO：117具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和与SEQ ID NO：124具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：117的VH和SEQ ID NO：124的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001891
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含与SEQ ID NO：128具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和与SEQ ID NO：135具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：128的VH和SEQ ID NO：135的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001901
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含与SEQ ID NO：140具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和与SEQ ID NO：148具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：140的VH和SEQ ID NO：148的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001911
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的VH和VL对：(a)SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ ID NO：13的VL序列；(b)SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列；(c)SEQ ID NO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列；以及(d)SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRIIA/B的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001921
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白包含选自以下的VH和VL对：(a)SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列；(b)SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列；(c)SEQ ID NO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列；(d)SEQ ID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列；以及(e)SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列；并且其中所述蛋白结合ALK7。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和/或Nodal的情况下，减少表达ALK7和ActRIIA/B的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300001931
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与包含本文公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与包含表1A中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：4、22、40或58的VH。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：13、31、49或67的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：4、22、40或58的VH；和SEQ ID NO：13、31、49或67的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白结合至与本文公开的ALK7结合蛋白相同的表位。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合至与表1A中公开的ALK7结合蛋白相同的表位。使用本文公开的或者本领域已知的技术，可以容易地确定ALK7结合蛋白与参考ALK7结合蛋白竞争结合和/或结合与参考ALK7结合蛋白相同的ALK7的表位的能力。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与包含表1B中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：152、159或166的VH。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：98、110或171的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：152、159或166的VH；和SEQ ID NO：98、110或171的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白结合至与本文公开的ALK7结合蛋白相同的表位。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合至与表1B中公开的ALK7结合蛋白相同的表位。使用本文公开的或者本领域已知的技术，可以容易地确定ALK7结合蛋白与参考ALK7结合蛋白竞争结合和/或结合与参考ALK7结合蛋白相同的ALK7的表位的能力。
在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与包含表3中公开的VH和VL序列对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：91、105、117、128或140的VH。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：98、110、124、135或148的VL。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含SEQ ID NO：91、105、117、128或140的VH；和SEQ ID NO：98、110、124、135或148的VL。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白结合至与本文公开的ALK7结合蛋白相同的表位。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合至与表3中公开的ALK7结合蛋白相同的表位。使用本文公开的或者本领域已知的技术，可以容易地确定ALK7结合蛋白与参考ALK7结合蛋白竞争结合和/或结合与参考ALK7结合蛋白相同的ALK7的表位的能力。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体J01的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：152的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：152的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：152的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体J02的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体K01的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：159的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：159的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：159的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体K02的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体G04的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ ID NO：13的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ ID NO：13的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ ID NO：13的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体G05的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体C02的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体C03的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体L01的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：165的VH序列和SEQ ID NO：171的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：165的VH序列和SEQ ID NO：171的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ m NO：165的VH序列和SEQ ID NO：171的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含抗体L02的VH和VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与包含SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列的抗体相同的ALK7的表位。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含与SEQ ID NO：190或320具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链(HC)，和/或与SEQ ID NO：191或322具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链(LC)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：190或320的HC序列和SEQ ID NO：191或322的LC序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7的至少一个表位或一个与包含SEQ ID NO：190或320的HC序列和SEQ ID NO：191或322的LC序列的抗体基本上相同的表位。
具有信号肽的mAb C03 HC：氨基酸序列(VH FR1：氨基酸20-44；VHCDR1：氨基酸45-53；VH FR2：氨基酸54-70；VH CDR2：氨基酸71-86；VH FR3：氨基酸87-118；VHCDR3：氨基酸119-135；和VH FR4：氨基酸136-146)。
Figure BDA0002550251300001981
Figure BDA0002550251300001991
注意：信号肽以单下划线表示，可变区以粗体表示。
mAb C03 HC成熟肽：氨基酸序列
Figure BDA0002550251300001992
Figure BDA0002550251300002001
具有信号肽的mAb C03 HC：编码核酸序列
Figure BDA0002550251300002002
Figure BDA0002550251300002011
Figure BDA0002550251300002021
Figure BDA0002550251300002031
mAb C03 HC成熟肽：编码核酸序列(5′-末端添加有起始密码子ATG)
Figure BDA0002550251300002032
Figure BDA0002550251300002041
Figure BDA0002550251300002051
具有信号肽的mAb C03 LC：氨基酸序列(VL FR1：氨基酸20-42；VL CDR1：氨基酸43-54；VL FR2：氨基酸55-69；VL CDR2：氨基酸70-76；VL FR3：氨基酸77-108；VL CDR3：氨基酸109-117；和VL FR4：氨基酸118-127)。
Figure BDA0002550251300002061
注意：信号肽以单下划线表示，可变区以粗体表示。
mAb C03 LC成熟肽：氨基酸序列
Figure BDA0002550251300002062
具有信号肽的mAb C03 LC：编码核酸序列
Figure BDA0002550251300002071
Figure BDA0002550251300002081
mAb C03 LC成熟肽：编码核酸序列(5′-末端添加有起始密码子ATG)
Figure BDA0002550251300002082
Figure BDA0002550251300002091
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含与SEQ ID NO：192或324具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链(HC)，和/或与SEQ ID NO：193或326具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链(LC)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：192或324的HC序列和SEQ ID NO：193或326的LC序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7的至少一个表位或一个与包含SEQ ID NO：192或324的HC序列和SEQ ID NO：193或326的LC序列的抗体基本上相同的表位。
具有信号肽的mAb G05 HC：氨基酸序列(VH FR1：氨基酸20-49；VH CDR1：氨基酸50-54；VH FR2：氨基酸55-68；VH CDR2：氨基酸69-85；VH FR3：氨基酸86-117；VH CDR3：氨基酸118-129；和VH FR4：氨基酸130-139)。
Figure BDA0002550251300002101
注意：信号肽以单下划线表示，可变区以粗体表示。
mAb G05 HC成熟肽：氨基酸序列
Figure BDA0002550251300002102
Figure BDA0002550251300002111
具有信号肽的mAb G05 HC：编码核酸序列
Figure BDA0002550251300002112
Figure BDA0002550251300002121
Figure BDA0002550251300002131
Figure BDA0002550251300002141
mAb G05 HC成熟肽：编码核酸序列(5′-末端添加有起始密码子ATG)
Figure BDA0002550251300002142
Figure BDA0002550251300002151
Figure BDA0002550251300002161
具有信号肽的mAb G05 LC：氨基酸序列(VL FR1：氨基酸20-42；VL CDR1：氨基酸43-53；VL FR2：氨基酸54-68；VL CDR2：氨基酸69-75；VL FR3：氨基酸76-107；VL CDR3：氨基酸108-116；和VL FR4：氨基酸117-126)。
Figure BDA0002550251300002162
Figure BDA0002550251300002171
注意：信号肽以单下划线表示，可变区以粗体表示。
mAb G05 LC成熟肽：氨基酸序列
Figure BDA0002550251300002172
具有信号肽的mAb G05 LC：编码核酸序列
Figure BDA0002550251300002173
Figure BDA0002550251300002181
Figure BDA0002550251300002191
mAb G05 LC成熟肽：编码核酸序列(5′-末端添加有起始密码子ATG)
Figure BDA0002550251300002192
Figure BDA0002550251300002201
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白在Fc或Fab区中包含至少一个突变、修饰和/或取代，例如突变。此类突变和/或取代可以例如增加或改善ALK7结合蛋白的表达水平、翻译后修饰、稳定性/半衰期和/或活性。在特定实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)在其Fc区中包含至少一个突变、修饰和/或取代，从而例如降低效应子活性和/或毒性，和/或减少补体结合和固定、减少Fc-g依赖性抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、减少补体依赖性细胞毒性(CDC)，和/或改善宿主中的生物利用率和/或稳定性/半衰期。
减少ADCC的Fc序列工程化修饰的实例(它们中的一者或多者可以包含在所提供的抗体中)包括对应于以下的修饰：IgG1-K326W、E333S；IgG2-E333S；IgG1-N297A；IgG1-L234A、L235A；IgG2-V234A、G237A；IgG4-L235A、G237A、E318A；IgG4-S228P、L236E；IgG2-EU序列118-260；IgG4-EU序列261-447；IgG2-H268Q、V309L、A330S、A331S；IgG1-C220S、C226S、C229S、P238S；IgG1-C226S、C229S、E233P、L234V、L235A；和IgG1-L234F、L235E、P331S，其中位置编号根据Kabat中的EU索引进行。
减少CDC活性的Fc序列工程化修饰的实例(它们中的一者或多者可以包含在所提供的抗体中)包括例如WO97/11971和WO07/106585；美国专利公开2007/0148167A1；McEarchem等人，Blood 109：1185-1192(2007)；Hayden-Ledbetter等人，Clin.Cancer 15：2739-2746(2009)；Lazar等人，PNAS USA 103：4005-4010(2006)；Bruckheimer等人，Neoplasia 11：509-517(2009)；Strohl，Curr.Op.Biotechnol.20：685-691(2009)；和Sazinsky等人，PNAS USA 105：20167-20172(2008)中所述的一个或多个修饰，这些文献中的每个均以引用的方式整体并入本文)。特别的此类修改包括对应于以下的修饰：IgG1-S239D、A330L、I332E；IgG2 EU序列118-260；IgG4-EU序列261-447；IgG2-H268Q、V309L、A330S、A331S；IgG1-C226S、C229S、E233P、L234V、L235A；IgG1-L234F、L235E、P331S；和IgG1-C226S、P230S。
改善半衰期的Fc序列工程化修饰的实例(它们中的一者或多者可以包含在所提供的抗体中)包括第251-257、285-290、308-314、385-389和428-436位处的氨基酸残基的取代，其中氨基酸位置编号根据Kabat所示的EU索引进行。在某些实施方案中，IgG恒定结构域含有以下取代中的一者或多者：Kabat第252位处的氨基酸被Tyr、Phe、Trp或Thr取代；Kabat第254位处的氨基酸被Thr取代；Kabat第256位处的氨基酸被Ser、Arg、Gln、Glu、Asp或Thr取代；Kabat第257位处的氨基酸被Leu取代；Kabat第309位处的氨基酸被Pro取代；Kabat第311位处的氨基酸被Ser取代；Kabat第428位处的氨基酸被Thr、Leu、Phe或Ser取代；Kabat第433位处的氨基酸被Arg、Ser、Iso、Pro或Gln取代；或者Kabat第434位处的氨基酸被Trp、Met、Ser、His、Phe或Tyr取代。更具体而言，相对于野生型人IgG恒定结构域，IgG恒定结构域可以含有一个或多个氨基酸取代，包括Kabat第252位处的氨基酸被Tyr取代、Kabat第254位处的氨基酸被Thr取代以及Kabat第256位处的氨基酸被Glu取代。
在一些实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白包含至少一个突变、修饰和/或取代，例如减少ADCC和/或CDC效应和/或改善半衰期的本文公开的Fc或Fab区中的突变。在其他实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个取代，例如本文公开的Fc或Fab区中的突变。
可以将一些特定的突变、修饰和/或取代单独或与上文所述的至少一个突变、修饰和/或取代组合引入本文所述的ALK7结合蛋白中。例如，为了降低抗体细胞毒性，可以通过用丙氨酸、甘氨酸或天冬氨酸取代N297来消除残基N297处的N-连接的糖基化(Tao和Morrison(1989)J Immunol 143：2595-2601；Hristodorov等人，(2013)Mol Biotechnol 54：1056-1068)。类似地，可以修饰第299位处的丝氨酸/苏氨酸残基(Sazinsky等人，(2008)ProcNatl Acad Sci U S A 105：20167-20172)。可以将N297处的突变与D265A突变进一步组合(Lund等人，(1996)J Immunol 157：4963-4969)，诸如两个常用的氨基酸变化对(称为DANA(D265A、N297A)或DANG(D265A、N297G))。减轻抗体效应子功能的替代性突变包括抗体下铰链中的残基的取代，诸如L234A和L235A(LALA，Kabat位置)(Chappel等人，(1991)Proc Natl AcadSci U S A 88：9036-9040)。这些残基形成CH2结构域上的Fc-γ受体结合位点的一部分，并且抗体同种型与不同效应子功能之间的这些残基的交换确定了它们在ADCC中的重要性。虽然这些位点处的丙氨酸取代可有效减少人抗体和鼠抗体二者中的ADCC，但是这些取代不能有效减少CDC活性。为了绘制Fc的Clq结合位点而通过随机诱变方法鉴定的另一个单一变体P329A在减少CDC活性同时保持ADCC活性方面非常有效。L234A、L235A和P329A(LALA-PG，Kabat位置)取代的组合已显示出可有效沉默人IgG1抗体的效应子功能。关于LALA、LALA-PG和其他突变的详细讨论，参见Lo等人，(2017)J.Biol.Chem.292：3900-3908，该文献的内容据此以引用的方式整体并入本文。本文所述的ALK7结合蛋白可以具有本文所述的至少一个、两个、三个或更多个突变。
在某些优选的实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)在重链(LALA HC)的Fc区中包含L234A和L235A突变(LALA，Kabat位置)。在其他优选的实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)在重链的Fc区中包含L234A、L235A和P329G突变(LALA-PG；Kabat位置)。
在某些优选的实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白例如在mAb C03的重链中包含LALA突变。在一些此类实施方案中，ALK7结合蛋白包含与SEQ ID NO：194或328具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链(HC)，和/或与SEQ ID NO：191或322具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链(LC)。在相关的实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：194或328的HC序列和SEQ ID NO：191或322的LC序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与ALK7表位相同的或基本上相同的至少一个表位，包含SEQ ID NO：194或328的HC序列和SEQ ID NO：191或322的LC序列的抗体结合所述ALK7表位。如下文所述，LALA突变定位于SEQID NO：194的L263和L264。
具有信号肽的mAb C03 LALA HC：氨基酸序列突变以下划线表示。(VH FR1：氨基酸20-44；VH CDR1：氨基酸45-53；VH FR2：氨基酸54-70；VH CDR2：氨基酸71-86；VH FR3：氨基酸87-118；VH CDR3：氨基酸119-135；VH FR4：氨基酸136-146，LALA突变：氨基酸263-264)。
Figure BDA0002550251300002231
Figure BDA0002550251300002241
注意：信号肽以单下划线表示；可变区以粗体表示；LALA突变以
Figure BDA0002550251300002242
表示。
mAb C03 LALA HC成熟肽：氨基酸序列
Figure BDA0002550251300002243
Figure BDA0002550251300002251
具有信号肽的mAb C03 LALA HC：编码核酸序列；LALA突变以下划线表示。
Figure BDA0002550251300002252
Figure BDA0002550251300002261
Figure BDA0002550251300002271
Figure BDA0002550251300002281
mAb C03 LALA HC成熟肽：编码核酸序列；(5′-末端添加有起始密码子ATG)LALA突变以下划线表示。
Figure BDA0002550251300002282
Figure BDA0002550251300002291
Figure BDA0002550251300002301
在某些优选的实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白例如在mAb G05的重链中包含LALA突变。在一些此类实施方案中，ALK7结合蛋白包含与SEQ ID NO：195或330具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链(HC)，和/或与SEQ ID NO：193或326具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链(LC)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：195或330的HC序列和SEQ ID NO：193或326的LC序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与ALK7抗体相同的或基本上相同的至少一个表位，包含SEQ ID NO：195或330的HC序列和SEQID NO：193或326的LC序列的抗体结合所述ALK7抗体。如下文所述，LALA突变定位于SEQ IDNO：195的L257和L258。
具有信号肽的mAB G05 LALA HC：氨基酸序列(VH FR1：氨基酸20-49；VH CDR1：氨基酸50-54；VH FR2：氨基酸55-68；VH CDR2：氨基酸69-85；VH FR3：氨基酸86-117；VH CDR3：氨基酸118-129；VH FR4：氨基酸130-139，以及LALA突变：氨基酸257-258)。
Figure BDA0002550251300002311
SKITVDKSRW QQGNVFSCSV
451 MHEALHNHYT QKSLSLSPGK(SEQ ID NO：195)
注意：信号肽以单下划线表示；可变区以粗体表示；LALA突变以
Figure BDA0002550251300002321
表示。
mAB G05 LALA Hc成熟肽：氨基酸序列
Figure BDA0002550251300002322
Figure BDA0002550251300002331
具有信号肽的mAB G05 LALA HC：编码核酸序列(LALA突变以下划线表示)
Figure BDA0002550251300002332
Figure BDA0002550251300002341
Figure BDA0002550251300002351
mAB G05 LALA HC成熟肽：编码核酸序列(5′-末端添加有起始密码子ATG)LALA突变以下划线表示。
Figure BDA0002550251300002352
Figure BDA0002550251300002361
Figure BDA0002550251300002371
Figure BDA0002550251300002381
在某些优选的实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白例如在mAb C03的重链中包含LALA-PG突变。在一些此类实施方案中，ALK7结合蛋白包含与SEQ ID NO：196或332具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链(HC)，和/或与SEQ ID NO：191或322具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链(LC)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：196或332的HC序列和SEQ ID NO：191或322的LC序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与ALK7表位相同的或基本上相同的至少一个表位，包含SEQ ID NO：196或332的HC序列和SEQ ID NO：191或322的LC序列的抗体结合所述ALK7表位。如下文所述，LALA-PG突变包含SEQ ID NO：196中的L263A、L264A和P358G。
具有信号肽的mAb C03 LALA-PG HC：氨基酸序列(VH FR1：氨基酸20-44；VH CDR1：氨基酸45-53；VH FR2：氨基酸54-70；VH CDR2：氨基酸71-86；VH FR3：氨基酸87-118；VHCDR3：氨基酸119-135；VH FR4：氨基酸136-146，LALA-PG突变：氨基酸263、264和358)。
Figure BDA0002550251300002382
Figure BDA0002550251300002391
注意：信号肽以单下划线表示；可变区以粗体表示；LALA-PG突变以
Figure BDA0002550251300002392
表示。
mAb C03 LALA-PG HC成熟肽：氨基酸序列
Figure BDA0002550251300002393
Figure BDA0002550251300002401
具有信号肽的示例性mAbC03 LALA-PG HC：编码核酸序列变体1：突变以下划线表示。
Figure BDA0002550251300002402
Figure BDA0002550251300002411
Figure BDA0002550251300002421
Figure BDA0002550251300002431
mAbC03 LALA-PG HC成熟肽：编码核酸序列变体1(5′-末端添加有起始密码子ATG)突变以下划线表示。
Figure BDA0002550251300002432
Figure BDA0002550251300002441
Figure BDA0002550251300002451
在某些优选的实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白例如在mAb G05的重链中包含LALA-PG突变。在一些此类实施方案中，ALK7结合蛋白包含与SEQ ID NO：197或334具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重链(HC)，和/或与SEQ ID NO：193或326具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的轻链(LC)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白与包含SEQ ID NO：197或334的HC序列和SEQ ID NO：193或326的LC序列的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白结合与ALK7表位相同的或基本上相同的至少一个表位，包含SEQ ID NO：197或334的HC序列和SEQ ID NO：193或326的LC序列的抗体结合所述ALK7表位。如下文所述，LALA-PG突变包含SEQ ID NO：197中的L257A、L258A和P352G突变。
具有信号肽的mAb G05 LALA-PG HC：氨基酸序列：(VH FR1：氨基酸20-49；VHCDR1：氨基酸50-54；VH FR2：氨基酸55-68；VH CDR2：氨基酸69-85；VH FR3：氨基酸86-117；VH CDR3：氨基酸118-129；VH FR4：氨基酸130-139，以及LALA-PG突变：氨基酸257-258)。
Figure BDA0002550251300002461
注意：信号肽以单下划线表示；可变区以粗体表示；LALA-PG突变以
Figure BDA0002550251300002471
表示。
mAb G05 LALA-PG HC成熟肽：氨基酸序列：
Figure BDA0002550251300002472
具有信号肽的示例性mAb G05 LALA-PG HC：编码核酸序列变体1：突变以下划线表示。
Figure BDA0002550251300002481
Figure BDA0002550251300002491
Figure BDA0002550251300002501
示例性mAb G05 LALA-PG HC成熟肽：编码核酸序列变体1(5′-末端添加有起始密码子ATG)突变以下划线表示。
Figure BDA0002550251300002502
Figure BDA0002550251300002511
Figure BDA0002550251300002521
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是特异性结合ALK7的抗体。在一些实施方案中，抗ALK7抗体是鼠抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、多特异性抗体或它们的任何组合。在一些实施方案中，抗ALK7抗体是Fv片段、Fab片段、F(ab')2片段、Fab'片段、dsFv片段、scFv片段或sc(Fv)2片段。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且阻断ALK7配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B或Nodal)的活性。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且阻断协同受体(例如，加密)的活性。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且减少与ALK7配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B或Nodal)的活性相关的脂肪形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且治疗或改善一种或多种与过重、肥胖或代谢紊乱相关的疾病或疾患。在一些实施方案中，疾病或疾患是II型糖尿病。在一些实施方案中，疾病或疾患是高血压。在一些实施方案中，代谢紊乱是血脂异常、胰岛素抗性、高胰岛素血症或高血糖。
在特定实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)减少ALK7介导的Smad信号传导。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白拮抗ALK7介导的白色和/或褐色脂肪细胞中的脂解的抑制5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如脂解测定法所测定。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白减少或降低白色和/或褐色脂肪细胞中的ALK7介导的脂解的抑制至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％或约100％，如脂解测定法所测定。在一些实施方案中，在存在一种或多种ALK7配体的情况下进行脂解测定法。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7，并且抑制或减少一种或多种与超重、肥胖、胰岛素抗性、糖尿病、动脉粥样硬化、高血压、炎症和/或NAFLD(例如，脂肪肝和/或NASH)相关的疾患。
在特定实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)减少ALK7介导的Smad信号传导。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白抑制白色脂肪细胞中的ALK7介导的脂解的抑制5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％，如在存在活化素B(50ng/ml)的情况下进行的脂解抑制测定法中使用标准技术和条件所测定(例如，如本文的实施例所述)。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白减少或降低白色脂肪细胞中的ALK7介导的脂解的抑制至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％或约100％，如在存在活化素B(50ng/ml)的情况下进行的脂解抑制测定法中使用标准技术和条件所测定(例如，如本文的实施例所述)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7，并且抑制或减少一种或多种与超重、肥胖、胰岛素抗性、糖尿病、动脉粥样硬化、高血压、炎症和/或NAFLD(例如，脂肪肝和/或NASH)相关的疾患。
在某些实施方案中，通过本文所述的ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)进行的ALK7活性的阻断，抑制或减少一种或多种与体重过重、胰岛素抗性，肥胖或糖尿病相关的疾患，诸如高血压、癌症和神经病变、视网膜病变以及心血管疾病、肺部疾病和肾脏疾病。在另外的实施方案中，ALK7的阻断抑制或减少一种或多种与代谢疾病相关的疾患。在特定实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)抑制或减少活化素B、GDF8或Nodal与ALK7的结合。在另一个实施方案中，ALK7结合蛋白通过Smad依赖性通路抑制或减少脂解的抑制。
如上所述，在一些实施方案中，抗ALK7抗体(例如，全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段，及其变体和衍生物)(含有结合ALK7的VH和/或VL氨基酸序列)可以与本文所示的序列具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施方案中，结合ALK7的VH和/或VL氨基酸序列相对于本文所示的序列包含8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个、1个氨基酸添加、取代(例如，保守取代)或缺失。在另外的实施方案中，结合ALK7的VH和/或VL氨基酸序列相对于本文所示的序列包含1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸添加、取代(例如，保守取代)或缺失。可以通过以下步骤来获得含有VH和VL区的抗ALK7抗体，所述VH和VL区与VH区或VL区具有一定的相似性百分比，或具有一个或多个取代、缺失和/或插入(例如，保守取代)：诱变(例如，定点诱变或PCR介导的诱变)编码本文所述的VH和/或VL区的核酸分子，然后测试编码的改变的抗体与ALK7的结合，任选地使用本文所述的功能测定法或本领域已知的测定法(可以常规修改以测试保留功能)来测试保留功能。
ALK7结合蛋白(诸如抗ALK7抗体(例如，全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段、及其变体和衍生物))与hALK7或murALK7的亲和力或亲合力可以使用本领域已知的任何合适的方法(例如，流式细胞术、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、或放射免疫测定法(RIA)、或动力学(例如，
Figure BDA0002550251300002551
或
Figure BDA0002550251300002552
分析))通过实验进行确定。直接结合测定法和竞争性结合测定法形式可以容易地采用。(参见例如，Berzofsky等人，″Antibody-AntigenInteractions”，载于Fundamental Immunology，Paul，W.E.编，Raven Press：New York，N.Y.(1984)；Kuby，Immunology，W.H.Freeman and Company：New York，N.Y.(1992)；以及本文所述的方法。)如果在不同条件(例如，盐浓度、pH、温度)下进行测量，则所测量的特定抗体-抗原相互作用的亲和力可以变化。因此，亲和力和其他ALK7结合参数(例如，KD或Kd、K缔合、K解离)的测量使用ALK7结合蛋白和ALK7的标准化溶液来进行，并且所述测量使用如本文所述的或者本领域已知的标准化条件和方法来进行。
本公开还提供了ALK7结合蛋白，诸如如本文所述的抗ALK7抗体，其中所述ALK7结合蛋白缀合至异源剂。在某些实施方案中，异源剂是抗微生物剂、治疗剂、前药、肽、蛋白、酶、脂质、生物反应调节剂、药剂、淋巴因子、异源性抗体或抗体片段、可检测标记或聚乙二醇(PEG)。异源缀合物ALK7结合蛋白在本文别处更详细地讨论。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白不是抗ALK7抗体。用于鉴定和产生以高亲和力结合至蛋白靶标的非抗体多肽的多种方法是本领域已知的。参见例如，Skerra，Curr.Opin.Biotech.18：295-304(2007)；Hosse等人，Protein Science 15：14-27(2006)；Gill等人，Curr.Opin.Biotechnol.17：653-658(2006)；Nygren，FEBSJ.275：2668-2676(2008)；和Skerra，FEBS J.275：2677-2683(2008)，这些文献中的每个均以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，噬菌体展示技术可以用于鉴定/产生ALK7结合蛋白。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白包含基于选自以下的类型的蛋白支架：VASP多肽、禽胰多肽(aPP)、四连接素(基于CTLD3)、affilin(基于γB-晶体蛋白/泛素)、结蛋白、SH3结构域、PDZ结构域、淀粉酶抑肽、运铁蛋白、锚蛋白共有重复序列结构域(例如，DARPin)、脂钙蛋白折叠蛋白(例如，anticalin和Duocalin)、蛋白表位模拟物(PEM)、maxybody/avimer、结构域抗体纤连蛋白结构域(例如，10Fn3，参见例如美国申请公开号2003/0170753和20090155275，这些专利中的每个以引用的方式整体并入本文)、蛋白A的结构域(例如，亲和体)和硫氧还蛋白。
在一些实施方案中，本公开提供了与本文提供的抗ALK7抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合的ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如全长抗ALK7抗体和ALK7结合抗体片段)。在一些实施方案中，本公开提供了结合至与本文提供的ALK7结合蛋白相同的ALK7的表位的ALK7结合蛋白。测试ALK7结合蛋白抑制例如参考结合蛋白(诸如包含SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ ID NO：13的VL序列、SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列、SEQ IDNO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列、或者SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列的抗体)与ALK7的结合的能力表明，测试ALK7结合蛋白可以与参照抗体竞争与ALK7的结合。根据非限制性理论，这种ALK7结合蛋白可以结合至与ALK7参考抗体(与ALK7结合蛋白竞争)相同的或相关的(例如，在结构上相似的或在空间上相近的)ALK7上的表位。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白结合至与抗体(分别包含SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ ID NO：13的VL序列、SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列、SEQ ID NO：40的VH序列和SEQID NO：49的VL序列、或SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列)相同的ALK7上的表位。
同样，测试ALK7结合蛋白抑制例如参考结合蛋白(诸如包含SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列、SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列、SEQ IDNO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列、SEQ ID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列、或者SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列的抗体)与ALK7的结合的能力表明，测试ALK7结合蛋白可以与参照抗体竞争与ALK7的结合。根据非限制性理论，这种ALK7结合蛋白可以结合至与ALK7参考抗体(与ALK7结合蛋白竞争)相同的或相关的(例如，在结构上相似的或在空间上相近的)ALK7上的表位。在某些实施方案中，ALK7结合蛋白结合至与抗体(分别包含SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列、SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列、SEQ ID NO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列、SEQID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列、或SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列)相同的ALK7上的表位。
通常，已知1型TGF-β受体家族成员(诸如，ALK7)被II型受体(例如，ActRIIA和ActRIIB)磷酸化，并且通过Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化进行信号传导。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)可以通过ALK7和II型受体表达细胞(例如，脂肪细胞)中的一种或多种II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)来减少ALK7的磷酸化。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)可以减少ALK7和II型受体表达细胞(例如，脂肪细胞)中的ALK7介导的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化。在一些实施方案中，ALK7受体表达细胞是鼠的。在一些实施方案中，ALK7受体表达细胞是人的。在一些实施方案中，ALK7受体表达细胞是脂肪细胞。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
Figure BDA0002550251300002581
分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与具有本文公开的ALK7结合性VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。
在一些实施方案中，在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，ALK7结合蛋白减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与具有本文公开的ALK7结合性VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。
在一些实施方案中，ALK7结合与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与具有本文公开的ALK7结合性VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。
在一些实施方案中，在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化。在一些实施方案中，如使用基于细胞的测定法所测量，ALK7结合蛋白减少Smad的磷酸化。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白减少ALK7介导的磷酸化，如使用基于细胞的测定法所测量，IC50小于500pM、小于350pM、小于250pM、小于150pM、小于100pM、小于75pM、小于60pM、小于50pM、小于40pM、小于30pM、小于20pM、小于15pM、小于10pM或小于5pM。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与具有本文公开的ALK7结合性VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白结合至ALK7，KD≤1nM且≥1pM(例如，如通过
Figure BDA0002550251300002611
分析所测定)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与具有本文公开的ALK7结合性VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白与具有本文公开的ALK7结合性VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。
本文所述的ALK7结合蛋白具有至少一种上述结构和/或功能特征，特异性结合至ALK7的某些氨基酸。例如，这种ALK7结合蛋白可以结合至ALK7的至少一个表位(也称为抗原决定簇)。表位是抗体(或其他结合蛋白)结合的抗原特定片段，即使表位通常是非自身蛋白。结合至表位的抗体的部分称为互补位。根据表位的结构及其与互补位的相互作用，表位可以分为构象表位和线性表位。构象表位由抗原的氨基酸序列的非连续部分组成。这些表位根据抗原的3-D表面特征和形状或三级结构与互补位相互作用。线性表位根据它们的初级结构与互补位相互作用。线性表位由抗原的连续氨基酸序列形成。可以使用蛋白微阵列、ELISPOT或ELISA技术或涉及高通量诱变来绘制表位。
ALK7结合蛋白的制备
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白结合ALK7的胞外结构域。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体，诸如全长抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段、及其变体和衍生物。
可以使用已知的技术容易地制备ALK7结合蛋白。可以使用本领域已知的技术(包括杂交瘤方法，诸如Kohler和Milstein，Nature 256：495-497(1975)描述的那些方法)来制备单克隆抗ALK7抗体。使用杂交瘤方法，如上文所述免疫小鼠、仓鼠或其他适当的宿主动物，以引发淋巴细胞产生特异性结合至免疫抗原的抗体。淋巴细胞也可以在体外免疫。在免疫后，分离淋巴细胞并且将所述淋巴细胞与合适的骨髓瘤细胞系融合，以形成杂交瘤细胞，然后可以从未融合的淋巴细胞和骨髓瘤细胞中选择杂交瘤细胞。然后，如通过免疫沉淀、免疫印迹或通过体外结合测定法(例如，放射免疫测定法(RIA)；酶联免疫吸附测定法(ELISA))所测定，可以使用标准方法(参见例如，Goding，Monoclonal Antibodies：Principles and Practice，Academic Press，1986)在体外培养物中或在体内作为动物中的腹水肿瘤复制产生特异性针对ALK7(诸如hALK7)的单克隆抗体的杂交瘤。然后可以如上文针对多克隆抗体所述从培养基或腹水中纯化单克隆抗体。
所提供的单克隆抗体也可以使用如美国专利号4,816,567所述的重组DNA方法来制备，其中编码单克隆抗体的多核苷酸诸如使用寡核苷酸引物(特异性扩增编码抗体的重链和轻链的基因)通过RT-PCR从成熟B细胞或杂交瘤细胞中分离，并且它们的序列使用已知的程序来确定。然后将编码重链和轻链的分离的多核苷酸克隆至合适的表达载体中，当将表达载体转染至不另外产生免疫球蛋白的宿主细胞(诸如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、Per.C6细胞或骨髓瘤细胞(例如，NS0细胞))中时，所述宿主细胞产生单克隆抗体。重组抗ALK7单克隆抗体也可以容易地使用已知的技术从表达所期望的物种的CDR的噬菌体展示文库分离(参见例如，McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；Clackson等人，Nature 352：624-628(1991)；和Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-597(1991))。
可以任选地使抗ALK7抗体人源化、表面重整和工程化，以显示出对ALK7抗原的高亲和力和其他有利的生物学性质。例如，可以使用常用的三维免疫球蛋白建模以及用于选择构架(FW)残基、共有序列和种系序列的已知程序来容易地设计和制备人源化(或人)抗ALK7抗体，以提供所期望的抗体特征，诸如增加的对ALK7的亲和力。
亲和力成熟策略和链改组策略是本领域已知的，并且可以用于产生高亲和力抗ALK7抗体以及本文公开的ALK7结合蛋白的衍生物和变体。参见例如，Marks等人，Bio/Technology 10：779-783(1992)，该文献以引用的方式整体并入本文。用于产生高亲和力抗ALK7抗体以及本文公开的ALK7结合蛋白的衍生物和变体的另一种策略是使用一个或多个选定的VH和/或VL基因的随机诱变(以在整个可变结构域内产生突变)来产生携带本公开的CDR源性序列的新型VH或VL区。Gram等人(PNAS USA 89：3576-3580(1992))描述了这种使用易错PCR的技术。在一些实施方案中，在一组VH CDR和/或VL CDR内进行一个或两个氨基酸取代。另外的策略使用直接诱变来产生编码本文公开的抗ALK7抗体的VH或VL基因的CDR区。Barbas等人(PNAS USA 91：3809-3813(1994))和Schier等人(J.Mol.Biol.263：551-567(1996))公开了此类技术的实例。
本公开的抗ALK7抗体的人源化、表面重整或工程化可以使用任何已知的方法来进行，所述方法包括但不限于Jones等人，Nature 321：522(1986)；Riechmann等人，Nature332：323(1988)；Verhoeyen等人，Science 239：1534(1988))，Sims等人，J.Immunol.151：2296(1993)；Chothia等人，J.Mol.Biol.196：901(1987)，Carter等人，PNAS USA 89：4285(1992)；Presta等人，J.Immunol.151：2623(1993)，美国专利号5,639,641、5,723,323、5,976,862、5,824,514、5,817,483、5,814,476、5,763,192、5,723,323、5,766,886、5,714,352、6,204,023、6，180,370、5,693,762、5,530,101、5,585,089、5,225,539、4,816,567、7,557,189、7,538,195和7,342,110；国际申请号PCT/US98/16280、PCT/US96/18978、PCT/US91/09630、PCT/US91/05939、PCT/US94/01234、PCT/GB89/01334、PCT/GB91/01134、PCT/GB92/01755；国际申请公开号WO90/14443、WO90/14424、WO90/14430；和欧洲专利公开号EP229246中描述的那些；这些文献以引用的方式整体并入本文。同样，已知的测定法可用于容易地选择显示出所期望的特征的抗ALK7抗体(例如，用于测定与ALK7的结合亲和力的测定法；交叉阻断测定法，诸如本文所述的基于
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的人ALK7结合蛋白竞争结合测定法)。
还可以使用用于对非人或人抗体进行工程化、人源化或表面重整的方法，这些方法是本领域已知的。人源化、表面重整或类似地工程化的抗体可以具有来自非人来源(例如但不限于小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物或其他哺乳动物)的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基被通常称为“导入”残基的残基替换，所述“导入”残基通常从已知的人序列的“导入”可变、恒定或其他结构域获得。这些导入的序列可以用于减少免疫原性或减少、增强或改变结合、亲和力、缔合速率、解离速率、亲合力、特异性、半衰期或任何其他合适的特征，如本领域已知的那样。优选地，部分或全部非人或人CDR序列得以维持，而可变区和恒定区的非人序列可以被人或其他氨基酸替换。
可以使用重组DNA技术以多种不同的方式进一步修饰一种或多种编码ALK7结合蛋白的核酸(诸如全长抗ALK7抗体)以产生替代性抗体。在一些实施方案中，可以将一种或多种编码例如小鼠单克隆抗体的轻链和重链的恒定结构域的核酸取代为(a)例如人抗体的那些编码区，以产生嵌合抗体，或者(b)一种或多种非免疫球蛋白编码核酸，以产生融合抗体。在一些实施方案中，恒定区被截短或除去，以产生所期望的单克隆抗体的抗体片段。可变区编码序列的定点或高密度诱变可以用于优化单克隆抗体的特异性、亲和力等。
可以使用本领域已知的任何多种技术来直接制备抗ALK7人抗体。(参见例如，Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，第77页(1985)；Boemer等人，J.Immunol.147(1)：86-95(1991)；和美国专利号5,750,373)。类似地，可以容易地从体外免疫的永生化人B淋巴细胞获得，或从产生针对ALK7的抗体的免疫个体分离人抗ALK7抗体。
人抗ALK7抗体也可以选自表达人抗体的噬菌体文库，如例如Vaughan等人，Nat.Biotech.14：309-314(1996)，Sheets等人，PNAS 95：6157-6162(1998)，Hoogenboom和Winter，J.Mol.Biol.227：381(1991)，和Marks等人，J.Mol.Biol.222：581(1991)所述。用于产生和筛选抗体噬菌体文库的技术还在美国专利号5,969,108、6,172,197、5,885,793、6,521,404、6,544,731、6,555,313、6,582,915、6,593,081、6,300,064、6,653,068、6,706,484和7,264,963；以及Rothe等人，J.Mol.Biol.376(4)：1182-1200(2008)中有所描述(这些文献中的每个均以引用的方式整体并入本文)。
还可以在含有人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中制备人抗ALK7抗体，所述转基因小鼠在免疫时能够在不产生内源性免疫球蛋白的情况下产生人抗体。这种方法例如在美国专利号5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425和5,661,016中有所描述。
还可以从基于酵母的抗体呈递文库中选择和/或分离人抗ALK7抗体，如例如WO012/009568、WO09/036379、WO10/105256、WO03/074679和美国申请公开号US2002/0177170中所公开，这些专利中的每个的内容均以引用的方式整体并入本文。此类文库是在计算机上设计的，反映了人免疫前谱库所提供的多样性。
或者，可以从酵母展示抗体文库选择抗ALK7抗体，参见例如：B1aise等人，Gene342(2)：211-218(2004)；Boder等人，Nat Biotechnol.15(6)：553-557(1997)；Kuroda等人，Biotechnol.Lett.33(1)：1-9(2011).Review；Lauer等人，J.Pharm.Sci.101(1)：102-15(2012)；Orcutt K.D.和Wittmp K.D.Antibody Engineering，yeast display andselection(2010)，207-233；Rakestraw等人，Protein Eng.Des.Sel.24(6)：525-30(2011)；和美国专利号6,423,538、6,696,251和6,699,658。
用于产生抗原结合抗体片段的各种技术是已知的。在传统上，这些片段来源于完整抗体的蛋白水解消化(参见例如，Morimoto等人，J.Biochem.Biophys.Meth.24：107-117(1993)；和Brennan等人，Science 229：81(1985))。在某些实施方案中，重组产生ALK7结合抗体片段。Fab、Fv和scFv抗体片段均可以在大肠杆菌或其他宿主细胞中表达以及从大肠杆菌或其他宿主细胞分泌，从而允许产生大量这些片段。这些ALK7结合抗体片段可以另外从上文讨论的抗体噬菌体文库分离。在一些实施方案中，ALK7结合抗体片段是美国专利号5,641,870中所述的线性抗体。用于产生抗原结合抗体片段的其他技术是本领域已知的。
已知的技术可以容易地适用于产生结合ALK7的单链抗体(参见例如，美国专利号4,946,778)。此外，已知的方法可以常规地适用于构建Fab表达文库(参见例如，Huse等人，Science 246：1275-1281(1989))，以允许快速和有效地鉴定具有所期望的针对ALK7的特异性的单克隆Fab片段。ALK7结合抗体片段可以通过本领域已知的技术来产生，所述片段包括但不限于：(a)通过抗体的胃蛋白酶消化产生的F(ab′)2片段；(b)通过还原F(ab′)2片段的二硫桥产生的Fab片段，(c)通过用木瓜蛋白酶和还原剂处理抗ALK7抗体产生的Fab片段，以及(d)Fv片段。
在某些实施方案中，可以修饰ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)以增加其血清半衰期。这可以例如通过将补救受体结合表位添加至ALK7结合蛋白中、通过ALK7结合蛋白中的适当区域的突变、或通过将补救受体表位添加至肽标签(然后所述肽标签在末端或中间融合至ALK7结合蛋白)中(例如，通过DNA或肽合成)来实现。其他增加ALK7结合蛋白的血清半衰期的方法(例如，与异源性分子(诸如PEG)的缀合)是本领域已知的。
异源缀合物ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如全长抗ALK7抗体和ALK7结合抗体片段、及其变体和衍生物)也在本公开的范围内。异源缀合物ALK7结合蛋白由两个共价连接的蛋白组成。可以设想的是，可以使用合成蛋白化学中的已知方法(包括涉及交联剂的那些方法)在体外制备异源缀合物ALK7结合蛋白。例如，免疫毒素可以使用二硫键交换反应或通过形成硫醚键来构建。用于此目的的合适试剂的实例包括亚氨基硫醇盐和4-巯基丁酰亚氨酸甲酯。
ALK7结合蛋白可以包含任何类型的可变区，所述可变区提供了抗体与ALK7的缔合。这种可变区可以包含或来源于任何哺乳动物，所述哺乳动物可以被诱导而引起体液应答以及产生针对ALK7抗原的免疫球蛋白。抗ALK7抗体的可变区可以是例如人、鼠、非人灵长类(例如，食蟹猕猴、猕猴等)或羽扇豆来源的。在一些实施方案中，经修饰的抗ALK7抗体的可变区和恒定区二者都是人的。在其他实施方案中，可以对相容的抗体(通常来源于非人来源)的可变区进行工程化或特别改造，以改善结合性质或减少分子的免疫原性。在这个方面，可以使用亲和力成熟、诱变程序、链改组策略和/或本文所述的或者本领域已知的其他方法，通过导入的氨基酸序列的纳入来对根据本发明使用的可变区进行人源化或者改变。
在某些实施方案中，通过一个或多个CDR的至少部分替换和/或通过部分框架区域替换和序列变化来改变抗ALK7抗体的重链和轻链二者中的可变结构域。虽然CDR可以衍生自与衍生框架区的抗体相同种类或甚至亚类的抗体，但是可以设想CDR将衍生自不同种类的抗体，在某些实施方案中来自不同物种的抗体。将一个可变域的抗原结合能力转移至另一个，不一定需要使用来自供体可变区的完整CDR替换所有CDR。相反，只需要转移维持抗原结合位点活性必需的那些残基。常规获得具有减少的免疫原性的功能性抗体完全在本领域的普通技术人员的能力范围内。参见例如，美国专利号5,585,089、5,693,761和5,693,762。
虽然存在可变区的改变，但是本领域的普通技术人员将理解，本公开的经修饰的抗ALK7抗体将包括一个或多个恒定区结构域的至少一部分已经缺失或者改变的抗体，从而提供所期望的生物化学特征，诸如与包含天然的或未改变的恒定区的具有大致相同的免疫原性的抗体相比，减少的ADCC或增加的血清半衰期。在一些实施方案中，经修饰的抗ALK7抗体的恒定区包括人恒定区。恒定区的修饰可以包括一个或多个结构域中的一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。本文公开的经修饰的抗ALK7抗体可以包含三个重链恒定结构域(CH1、CH2或CH3)中的一个或多个和/或轻链恒定结构域(CL)的改变或修饰。在一些实施方案中，设想了经修饰的抗ALK7抗体包含恒定区，其中一个或多个结构域部分或完全缺失。在一些实施方案中，经修饰的抗ALK7抗体包含结构域缺失的构建体或变体，其中整个CH2结构域已经被移除(ΔCH2构建体)。在一些实施方案中，可以用短氨基酸间隔物(例如，10个残基)来替换省略的恒定区结构域，所述短氨基酸间隔物提供了通常由缺乏的恒定区赋予的一些分子柔性。
通常应当理解，恒定区介导若干效应子功能。例如，补体的C1组分与抗体的结合活化了补体系统。补体的活化在细胞病原体的调理和裂解中是重要的。补体的活化还刺激了炎性反应，也可以涉及自身免疫超敏反应。另外，抗体经由Fc区结合细胞，抗体Fc区上的Fc受体位点结合至细胞上的Fc受体(FcR)。存在多种对不同类别的抗体(包括IgG(γ受体)、IgE(η受体)、IgA(α受体)和IgM(μ受体))具有特异性的Fc受体。抗体与细胞表面上的Fc受体的结合可触发多种重要的生物反应，包括抗体包被的颗粒的吞噬和破坏、免疫复合物的清除、由杀伤细胞进行的抗体包被的靶细胞的裂解(称为抗体依赖性细胞介导的细胞毒性或ADCC)、炎性介质的释放、胎盘转移和免疫球蛋白产生的控制。
在某些实施方案中，抗ALK7抗体具有改变的效应子功能，继而影响所施用的抗ALK7抗体的生物学特征。例如，恒定区结构域的缺失或失活(通过点突变或其他手段)可以减少循环的经修饰的抗体的Fc受体结合。在其他情况下，恒定区修饰可以调节补体结合，从而减少血清半衰期和缀合的细胞毒素的非特异性缔合。恒定区的另外其他修饰可以用于除去二硫键或寡糖部分，从而允许由于增加的抗原特异性或抗体柔性而产生增强的定位。类似地，可以容易地使用本领域的普通技术人员已知的生物化学或分子工程化技术对根据本公开的恒定区进行修饰。
在一些实施方案中，本文提供的ALK7结合蛋白是不具有一种或多种效应子功能的ALK7抗体。例如，在一些实施方案中，抗ALK7抗体不具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性和/或不具有补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。在某些实施方案中，抗ALK7抗体不结合至Fc受体和/或补体因子。在某些实施方案中，抗ALK7抗体不具有效应子功能。减少或消除ADCC和/或CDC活性以及Fc受体和/或补体因子结合的Fc序列工程化修饰的实例是本文所述的或者本领域已知的，正如用于测试它们的测定法和程序那样。
在一些实施方案中，对抗ALK7抗体进行工程化，从而使CH3结构域直接融合至各自的经修饰的抗体的铰链区。在其他构建体中，将肽间隔物插入铰链区和经修饰的CH2和/或CH3结构域之间。例如，可以表达相容的构建体，在所述构建体中CH2结构域已缺失，并且其余的CH3结构域(经修饰的或未经修饰的)通过5-20个氨基酸间隔物连接至铰链区。例如，可以添加这种间隔物，以确保恒定结构域的调控元件保持游离和可接近，或者确保铰链区保持柔性。在一些情况下，可以证明氨基酸间隔物具有免疫原性，并且引发针对构建体的不期望的免疫应答。因此，在某些实施方案中，添加至构建体的任何间隔物可以是相对非免疫原性的，或者甚至可以是可完全省略的，以维持经修饰的抗ALK7抗体的所期望的生物化学质量。
在另外的实施方案中，通过恒定区中的几个或甚至单个氨基酸的部分缺失或取代来修饰抗ALK7抗体。例如，CH2结构域的选定区域中的单个氨基酸的突变足以基本上减少Fc结合并因而。类似地，可以完全或部分缺失控制效应子功能(例如，补体C1Q结合)的一个或多个恒定区结构域。恒定区的这种部分缺失可以改善抗ALK7抗体的选定特征(例如，血清半衰期)，同时保持与对应的恒定区结构域相关的其他所期望的功能的完整。在一些实施方案中，通过一个或多个氨基酸的突变或取代来修饰抗ALK7抗体的恒定区，所述突变或取代增强了所得的构建体的特征。在这个方面，可以破坏保守结合位点所提供的活性(例如，Fc结合)，同时基本上维持经修饰的抗ALK7抗体的构型和免疫原性特征。本公开还提供了一种抗ALK7抗体，所述抗ALK7抗体含有一个或多个氨基酸至恒定区的添加，以增强所期望的特性，诸如减少或增加效应子功能或者提供一种或多种细胞毒素、标记或碳水化合物部分的附接位点。在这些实施方案中，可以期望插入或复制来源于选定的恒定区结构域的特定序列。
本公开还提供了一种ALK7结合蛋白，所述ALK7结合蛋白是本文提供的ALK7结合蛋白的变体(例如，鼠、嵌合、人源化和人ALK7结合蛋白)。在特定实施方案中，变体ALK7结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
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分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
所提供的ALK7结合蛋白(诸如抗ALK7抗体)可以衍生化为含有本领域已知的另外的化学部分，以改善例如溶解度、生物半衰期、生物利用率，并且另外改善ALK7结合蛋白的稳定性、制剂和/或治疗性质。这些部分的不完全概述可见于例如Remington'sPharmaceutical Sciences，第20版，Mack Publishing Co.，Easton，PA(2000)。
编码ALK7结合蛋白的核酸及其表达
还提供了编码ALK7结合蛋白的核酸分子和核酸分子的组合。在一些实施方案中，核酸分子编码抗ALK7抗体，诸如全长抗ALK7抗体和ALK7结合抗体片段。在另外的实施方案中，本公开提供了编码本文提供的全长抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段的变体或衍生物的核酸分子。
本文公开的核酸分子可以是RNA形式或DNA形式。DNA包括cDNA、基因组DNA和合成DNA；并且可以是双链的或单链的，如果是单链的，则可以是编码链/或非编码(反义)链。在某些实施方案中，核酸分子是分离的。在另外的实施方案中，核酸分子是基本上纯的。在一些实施方案中，核酸是cDNA或来源于cDNA。在一些实施方案中，核酸是重组产生的。
在一些实施方案中，核酸分子包含可操作地连接至控制序列的ALK7结合蛋白编码序列，所述控制序列控制编码序列在宿主细胞中或在体外的表达。在特定实施方案中，编码序列是cDNA。本公开还涉及含有核酸分子的载体，所述核酸分子包含可操作地连接至控制序列的ALK7结合蛋白编码序列，所述控制序列控制编码序列在宿主细胞中或在体外的表达。
在一些实施方案中，核酸分子包含成熟ALK7结合蛋白的编码序列，所述编码序列在相同的阅读框中融合至异源性多核苷酸序列。在一些实施方案中，异源性多核苷酸序列编码前导肽序列，所述前导肽序列有利于表达的蛋白从宿主细胞(用编码ALK7结合蛋白的核酸分子转化)中分泌。含有前导序列的蛋白称为前蛋白，并且可以具有被宿主细胞切割以形成ALK7结合蛋白的成熟形式的前导序列。此类前导肽序列及其有利于宿主细胞中的重组蛋白分泌的用途通常是本领域已知的。在另外的实施方案中，异源性多核苷酸序列编码另外的5′氨基酸残基，所述氨基酸残基可以发挥例如有利于重组表达的ALK7结合蛋白的纯化、添加或改善蛋白稳定性和/或治疗或诊断性质的功能。
在一些实施方案中，本公开提供了足以用作杂交探针、PCR引物或测序引物的分离的核酸，诸如编码cDNA片段的ALK7结合蛋白。
在一些实施方案中，核酸分子编码具有至少一个选自以下的特征的ALK7结合蛋白：(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
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分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，编码的ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，编码的ALK7结合蛋白增加表达ALK7的脂肪细胞中的脂解。在一些实施方案中，编码的ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，编码的ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。在一些实施方案中，编码的ALK7结合蛋白与具有本文公开的ALK7结合性VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，编码的ALK7结合蛋白结合至与本文公开的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，编码的ALK7结合蛋白与具有本文公开的VH和VL对的ALK7结合抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在另外的实施方案中，编码的ALK7结合蛋白结合至与本文公开的抗体相同的ALK7的表位。在另外的实施方案中，核酸分子编码ALK7结合蛋白，所述ALK7结合蛋白特异性结合ALK7，并且包含VH和VL
在一些实施方案中，本公开提供了载体和载体组，所述载体和载体组含有编码本文提供的ALK7结合蛋白的核酸和核酸组。还提供了用这些核酸、核酸组、载体和载体组转化的宿主细胞，以及使用ALK7结合蛋白的制备方法。
在一些实施方案中，本公开提供了包含如上文提供的核酸分子或核酸分子的组合或载体的宿主细胞，其中所述宿主细胞在一些情况下可以表达特异性结合至ALK7的ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段)。在另外的实施方案中，本公开提供了用如上文提供的核酸分子或核酸分子的组合或载体转化的宿主细胞，其中所述宿主细胞在一些情况下可以表达特异性结合至ALK7的ALK7结合蛋白。此类宿主细胞可以用于如本文提供的制备ALK7结合蛋白的方法，其中所述方法包括(a)培养宿主细胞以及(b)从宿主细胞分离所表达的ALK7结合蛋白。
本公开还提供了一种用于制备ALK7结合蛋白的方法，所述方法包括在合适的条件下培养能够表达ALK7结合蛋白的宿主细胞(例如，杂交瘤或转化的哺乳动物宿主细胞)，并且任选地提供了一种用于分离从宿主细胞分泌的ALK7结合蛋白的方法。并且本公开另外提供了使用所公开的方法分离的ALK7结合蛋白。
在某些实施方案中，多核苷酸包含针对一种或多种成熟ALK7结合蛋白的一种或多种编码序列(例如，ALK7抗体，诸如全长抗体和ALK7结合抗体片段)，所述编码序列在相同的阅读框中融合至标记序列，所述标记序列允许例如纯化编码的多肽。例如，标记序列可以是pQE-9载体提供的六组氨酸标签(SEQ ID NO：336)，以在细菌宿主的情况下提供融合至标记的成熟多肽的纯化，或当使用哺乳动物宿主(例如，COS-7细胞)时，标记序列可以是来源于流感血球凝集素蛋白的血球凝集素(HA)标签。
还提供了编码ALK7结合蛋白的核酸变体，诸如抗ALK7抗体和ALK7结合抗体片段。核酸变体可以在编码区、非编码区或它们二者中含有改变。在一些实施方案中，核酸变体含有产生沉默取代、添加或缺失但是不改变编码多肽的性质或活性的改变。在一些实施方案中，由于遗传密码的简并性，通过沉默取代来产生核酸变体。可以出于多个原因来产生核酸变体，例如以优化特定宿主的密码子表达(人mRNA中的密码子至细菌宿主(诸如大肠杆菌)优选的那些密码子的改变)。还提供了包含本文所述的核酸的载体和细胞。
在一些实施方案中，使用寡核苷酸合成仪通过化学合成来构建编码ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如全长抗体和ALK7结合抗体片段)的核酸序列。可以根据所期望的多肽的氨基酸序列来设计此类寡核苷酸，并且根据宿主细胞偏爱性来设计密码子优化。可以常规地使用标准方法来合成编码ALK7结合蛋白的分离的多核苷酸序列。
一旦组装(通过合成、定点诱变或另一种方法)，编码ALK7结合蛋白的核酸序列即可常规地可操作地连接至适合于在所期望的宿主中表达ALK7结合蛋白的控制序列。在一些实施方案中，一个或多个编码ALK7结合蛋白的核酸序列被插入一个或多个表达载体中，并且可操作地连接至适合于在所期望的宿主中表达所述蛋白的一个或多个控制序列。为了在宿主中获得转染的编码序列的高表达水平，可以将编码序列可操作地连接或缔合至在选定的表达宿主中发挥功能的转录和翻译表达控制序列。
在某些实施方案中，重组表达载体用于扩增和表达编码ALK7结合蛋白的DNA，诸如抗ALK7抗体或ALK7结合抗体片段。重组表达载体是可复制DNA构建体，所述DNA构建体具有编码ALK7结合蛋白的多肽链的合成或cDNA源性DNA片段，所述DNA片段可操作地连接至来源于哺乳动物、微生物、病毒或昆虫基因的合适的转录或翻译调控元件。转录单位通常包含以下各项的组合：(1)在基因表达中具有调控作用的一个或多个遗传元件，例如转录启动子或增强子，(2)被转录成mRNA并翻译成蛋白的结构或编码序列，(3)适当的转录和翻译起始和终止序列，如下文详细地描述。此类调控元件可以包括控制转录的操纵子序列。可以另外添加通常由复制起点赋予的在宿主中复制的能力，以及有利于转化子的识别的选择基因。当DNA区域在功能上彼此相关时，它们是可操作地连接的。例如，如果信号肽(分泌前导序列)的DNA表达为参与多肽分泌的前体，则所述DNA可操作地连接至多肽的DNA；如果启动子控制序列的转录，则所述启动子可操作地连接至编码序列；或者如果核糖体结合位点被定位为允许翻译，则所述核糖体结合位点可操作地连接至编码序列。旨在用于酵母表达系统的结构元件包括前导序列，所述前导序列使宿主细胞能够胞外分泌所翻译的蛋白。或者，就无前导序列或转运序列的重组蛋白的表达而言，所述蛋白可以包含N-末端甲硫氨酸残基。随后可以任选地从表达的重组蛋白切割该残基以提供最终蛋白。在某些实施方案中，本公开提供了一种组合物，例如药物组合物，所述组合物包含如上文或本文别处所述的核酸或载体，任选地还包含一种或多种载剂、稀释剂、赋形剂或其他添加剂。
还提供了用本文公开的核酸分子或cDNA分子和/或载体转化的宿主细胞。本公开还提供了用所公开的核酸分子或可操作地连接至控制序列和任选地插入载体中的分子转化的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是哺乳动物宿主细胞。在另外的实施方案中，哺乳动物宿主细胞是NS0鼠骨髓瘤细胞、PER.
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人细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在其他实施方案中，宿主细胞是杂交瘤。
在另外的实施方案中，本公开提供了一种制备本文提供的ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段、及其变体和衍生物)的方法，所述方法包括在合适的条件下培养本文公开的转化的宿主细胞或杂交瘤，以产生ALK7结合蛋白。本公开任选地提供了从宿主细胞分泌的ALK7结合蛋白的分离。本公开还任选地提供了使用该方法产生的ALK7结合蛋白以及包含ALK7结合蛋白和药学上可接受的载剂的药物组合物。
表达控制序列和表达载体的选择将取决于宿主的选择。可以采用多种表达宿主/载体组合。用于真核宿主的表达载体包括例如包含表达控制序列的载体，所述表达控制序列来自SV40、牛乳头瘤病毒、腺病毒和巨细胞病毒。用于细菌宿主的表达载体包括已知的细菌质粒，诸如来自大肠杆菌的质粒，包括pCR1、pBR322、pMB9及其衍生物，以及更广泛的宿主范围质粒，诸如M13和丝状单链DNA噬菌体。
用于表达ALK7结合蛋白的合适的宿主细胞包括在适当的启动子控制下的原核生物、酵母、昆虫或高等真核细胞。原核生物包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物，例如大肠杆菌或芽孢杆菌。高等真核细胞包括如下文所述的已建立的哺乳动物来源的细胞系。还可以采用无细胞翻译系统。关于蛋白产生(包括抗体产生)方法的另外的信息可见于例如美国申请公开号2008/0187954、美国专利号6,413,746和6,660,501、以及国际申请公开号WO04/009823，这些专利中的每个均以引用的方式整体并入本文。
还可以有利地采用各种哺乳动物或昆虫细胞培养系统来表达重组ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段、及其变体和衍生物)。可以进行重组ALK7结合蛋白在哺乳动物细胞中的表达，因为这些蛋白通常是正确折叠、适当修饰和完全有功能的。合适的哺乳动物宿主细胞系的实例包括HEK-293和HEK-293T、Gluzman(Cell 23：175(1981))描述的猴肾细胞的COS-7品系以及其他细胞系(包括例如L细胞、C127、3T3、中国仓鼠卵巢(CHO)、HeLa和BHK细胞系)。哺乳动物表达载体可以包含非转录元件，诸如复制起点、连接至要表达的基因的合适的启动子和增强子、以及其他5′或3′侧接非转录序列和5′或3′非翻译序列(诸如必要的核糖体结合位点、多腺苷酸化位点、剪接供体和接受体位点、以及转录终止序列)。Luckow和Summers，BioTechnology 6：47(1988)综述了用于在昆虫细胞中产生异源性蛋白的杆状病毒系统。
可以根据任何合适的方法来纯化由转化的宿主细胞或杂交瘤产生的ALK7结合蛋白。此类标准方法包括色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法和尺寸柱色谱法)、离心法、差示溶解度法或任何其他标准蛋白纯化技术。亲和标签(诸如六组氨酸(SEQ ID NO：336)、麦芽糖结合结构域、流感病毒外壳序列和谷胱甘肽-S-转移酶)可以附接至蛋白，以允许容易地通过适当的亲和柱来纯化。还可以使用诸如蛋白水解、核磁共振和x射线晶体学的技术对ALK7结合蛋白进行物理表征。
例如，可以首先使用商购获得的蛋白浓缩过滤器(例如，Amicon或MilliporePellicon超滤单元)来浓缩使重组ALK7结合蛋白分泌至培养基的体系的上清液。在浓缩步骤后，可以将浓缩物施加至合适的纯化基质。或者，可以采用阴离子交换树脂，例如具有二乙氨基乙基(DEAE)侧基基团的基质或基材。基质可以是丙烯酰胺、琼脂糖、葡聚糖、纤维素或蛋白纯化中常用的其他类型。或者，可以采用阳离子交换步骤。合适的阳离子交换剂包括包含磺丙基或羧甲基基团的各种不溶性基质。最后，可以采用一个或多个反相高效液相色谱(RP-HPLC)步骤(采用疏水性RP-HPLC介质，例如具有甲基或其他脂族侧基基团的硅胶)来进一步纯化ALK7结合蛋白。前述纯化步骤中的一些或全部也可以以各种组合常规地用于提供均质的重组ALK7结合蛋白。
细菌培养物中产生的重组ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段及其变体和衍生物)可以例如通过以下步骤来分离：从细胞沉淀初步提取，然后进行一个或多个浓缩、盐析、水性离子交换或尺寸排阻色谱步骤。高效液相色谱(HPLC)可以用于最终纯化步骤。可以通过任何方便的方法来破坏用于表达重组蛋白的微生物细胞，包括冻融循环、超声、机械破坏或使用细胞裂解剂。
还包括本领域已知的用于纯化靶结合蛋白(诸如全长抗体和抗原结合抗体片段)的方法，例如美国申请公开号2008/0312425、2008/0177048和2009/0187005中描述的那些，这些专利中的每个均以引用的方式整体并入本文。
在某些实施方案中，ALK7结合蛋白不是抗体。用于鉴定和产生以高亲和力结合至蛋白靶标的非抗体多肽的多种方法是已知的。参见例如，Skerra，Curr.Opin.Biotechnol.18：295-304(2007)，Hosse等人，Protein Science 15：14-27(2006)，Gill等人，Curr.Opin.Biotechnol.17：653-658(2006)，Nygren，FEBS J.275：2668-2676(2008)，和Skerra，FEBS J.275：2677-2683(2008)，这些文献中的每个均以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，噬菌体展示技术用于鉴定/产生ALK7结合蛋白。在某些实施方案中，多肽包含选自以下类型的蛋白支架：蛋白A、脂钙蛋白、纤连蛋白结构域(例如，纤连蛋白III型(Fn3))、锚蛋白共有重复序列结构域和硫氧还蛋白。
使用方法和药物组合物
所提供的ALK7结合蛋白(包括抗体、免疫缀合物和多肽)可用于多种应用，包括但不限于诊断方法以及用ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体)来治疗和/或改善各种疾病和疾患的方法。提供了使用ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如特异性结合ALK7的全长抗体和ALK7结合抗体片段、及其变体和衍生物)来治疗患有以下疾病或疾患的受试者的方法：与ALK7信号传导、ALK7表达的改变相关、和/或可以通过ALK7信号传导的减少来改善的疾病或疾患。在另外的实施方案中，本公开提供了一种含有本文提供的ALK7结合蛋白和药学上可接受的载剂的药物组合物。在一些实施方案中，本公开提供了一种用作药物的药物组合物，所述药物组合物含有本文提供的ALK7结合蛋白和药学上可接受的载剂。本公开还提供了本文公开的药物组合物用于治疗和/或改善与ALK7信号传导、ALK7表达的改变相关、和/或可以通过ALK7信号传导的减少来改善的疾病或疾患的用途。在一些实施方案中，使用本文提供的药物组合物来治疗的疾病或疾患是肥胖(例如，腹部肥胖)；超重；胰岛素抗性；代谢综合征和其他代谢疾病或疾患；脂质紊乱，诸如低HDL水平、高LDL水平、高脂血症、高甘油三酯血症或血脂异常；脂蛋白异常；甘油三酯减少；炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)、脂肪肝疾病；非酒精性脂肪肝疾病；高血糖；葡萄糖耐量降低(IGT)；高胰岛素血症；高胆固醇(例如，高LDL水平和高胆固醇血症)；心血管疾病，诸如心脏病，包括冠心病、充血性心力衰竭、中风、周围血管疾病、动脉粥样硬化；动脉硬化和高血压；X综合征；血管再狭窄；神经病变；视网膜病变；神经退行性疾病；内皮功能障碍、呼吸功能障碍、肾脏疾病(例如，肾病)；胰腺炎；多囊卵巢综合征；尿酸水平升高；血色素沉着症(铁过载)；黑棘皮症(皮肤上的黑斑)；或癌症，诸如骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤和髓外骨髓瘤)、卵巢癌症、乳腺癌、子宫内膜癌、和结肠癌)；或者与上述疾病或疾患中的一者或多者相关的另一种病症/疾患。在一些实施方案中，使用本文提供的药物组合物来治疗的疾病或疾患与超重(例如，BMI≥25kg/m2)或身体脂肪过多相关。
在一些实施方案中，药物组合物包含ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7拮抗剂抗体)和药学上可接受的载剂，并且ALK7结合蛋白还包含标记基团或效应基团。“标记”是指可以在筛选中检测到的一种或多种附接的元素、同位素或化合物。标记通常分为三类：(a)同位素标记，它可以是放射性同位素或重同位素；(b)小分子标记，它可以包括荧光和比色染料，或可以采用其他标记方法的分子，诸如生物素，以及(c)免疫标记，它可以是作为被抗体识别的融合配偶体而掺入的表位，“标记基团”是指任何可检测的标记。在一些实施方案中，标记基团经由间隔物(例如，肽间隔物)偶联至ALK7结合蛋白，以减少潜在的空间位阻。标记可以掺入化合物的任何位置，并且可以在蛋白表达期间在体外或在体内掺入。用于标记蛋白的各种方法是本领域已知的，并且可以用于进行所提供的方法。在另外的实施方案中，标记基团选自：同位素标记、磁性标记、氧化还原活性部分、光学染料、生物素酰化的基团和被二级报告分子识别的多肽表位。在一些实施方案中，标记基团是荧光蛋白，诸如绿色荧光蛋白或其衍生物(例如，增强型GFP、蓝色荧光蛋白或其衍生物(例如，EBFP(增强型蓝色荧光蛋白)、EBFP2、Azurite、mKalamal、青色荧光蛋白或其衍生物(例如，ECFP(增强型青色荧光蛋白)、Cerulean、CyPet)、黄色荧光蛋白或其衍生物(例如，YFP、Citrine、Venus、YPet)。在一些实施方案中，多肽表位是选自以下的成员：生物素信号传导肽、组氨酸肽(his)、血球凝集素(HA)、Flag、金结合肽。在另外的实施方案中，效应基团选自放射性同位素、放射性核苷酸、毒素、治疗剂和化疗剂。
本公开的ALK7结合蛋白可用于体外和体内诊断和治疗用途。例如，可以将ALK7结合蛋白施用于培养(例如体外或体内)中的细胞或者受试者中，以治疗、预防或诊断多种疾病或疾患。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是人抗体、鼠抗体或人源化抗体。
还提供了阻断ALK7活性的方法。在一些实施方案中，方法包括使ALK7接触拮抗剂ALK7结合蛋白。在另外的实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体。在一些情况下，方法在体内进行。在其他情况下，方法在体外进行。在一些实施方案中，阻断的ALK7活性选自(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；(b)与一种或多种II型受体竞争与ALK7的结合；(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争与ALK7的结合；(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，通过
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分析来确定)结合至ALK7，以及(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂(例如，中和性抗ALK7抗体)。在另外的实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，在使用脂肪细胞(例如，白色脂肪细胞)的脂解测定中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有2种、3种或4种上述特征。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白具有至少2种、至少3种或至少4种上述特征。
在某些实施方案中，本公开提供了疾病或疾患的治疗、预防和/或改善，包括将ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7拮抗剂抗体)施用于患有与ALK7信号传导、ALK7表达的改变相关、和/或可以通过ALK7信号传导的减少来改善的疾病或疾患、或具有患上这些疾病或疾患的风险的受试者。在另一个实施方案中，治疗包括将ALK7结合蛋白施用于从受试者分离的组织或细胞，其中所述受试者患有与ALK7表达或ALK7信号传导相关的疾病或疾患，或者具有患上这些疾病或疾患的风险。
本公开提供了包含ALK7结合蛋白和药学上可接受的载剂的药物组合物。还提供了治疗和/或改善受试者中的与ALK7介导的活性相关的疾患的方法，所述方法包括将有效量的包含本文提供的ALK7结合蛋白的药物组合物施用于有需要的受试者。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白单独施用。在其他实施方案中，ALK7结合蛋白作为组合疗法施用。还提供了降低受试者中的ALK7活性的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白施用于有需要的受试者。
如本文所提供，可以施用有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)，以减轻体重(例如，促进体重减轻)、减少体重增加(例如，防止体重增加)和/或治疗肥胖。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所施用的抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的抗ALK7抗体结合至与具有表1B或表3中公开的VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在某些情况下，受试者患有2型糖尿病。
在某些实施方案中，本公开提供了一种减轻体重的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于期望减轻体重或有需要的受试者。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，受试者是超重的(例如，肥胖前期)。在一些实施方案中，受试者的体质指数(BMI)为25kg/m2或更大。在另外的实施方案中，受试者的BMI为25kg/m2至29.9kg/m2、30kg/m2至39.9mkg/m2、25kg/m2至39.9kg/m2、或25kg/m2至50kg/m2。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在一些实施方案中，受试者的BMI为30kg/m2或更大(例如，30至39.9kg/m2或30kg/m2至50kg/m2)。在一些实施方案中，受试者是病态肥胖的。在一些实施方案中，受试者的BMI为40kg/m2或更大。在另外的实施方案中，受试者的BMI为40kg/m2至45kg/m2、或40kg/m2至50kg/m2。在一些实施方案中，受试者患有中央型肥胖(例如，腹部区域中的脂肪(包括腹部脂肪和/或内脏脂肪)过量)。在一些实施方案中，受试者的腰围/臀围比(WHR)为0.85或更大。在一些实施方案中，受试者患有周围型肥胖(例如，臀部上的脂肪过量)。在一些实施方案中，受试者患有2型糖尿病。ALK7结合蛋白单独或作为组合疗法施用。在一些实施方案中，施用是饮食和/或锻炼的辅助。
在某些实施方案中，本公开提供了一种减少体重增加方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于期望减少体重增加或有需要的受试者。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，受试者是超重的(例如，肥胖前期)。在一些实施方案中，受试者的BMI为25kg/m2或更大。在另外的实施方案中，受试者的BMI为25kg/m2至29.9kg/m2、30kg/m2至39.9mkg/m2、25kg/m2至39.9kg/m2、或25kg/m2至50kg/m2。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在一些实施方案中，受试者的BMI为30kg/m2或更大(例如，30至39.9kg/m2或30kg/m2至50kg/m2)。在一些实施方案中，受试者是病态肥胖的。在一些实施方案中，受试者的BMI为40kg/m2或更大。在另外的实施方案中，受试者的BMI为40kg/m2至45kg/m2、或40kg/m2至50kg/m2。在一些实施方案中，受试者患有2型糖尿病。
还提供了一种治疗或预防与体重过重相关的疾病或疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要治疗或预防的受试者。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是肥胖。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是胰岛素抗性。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是选自以下的成员：血脂异常、高脂血症(总胆固醇水平＞240mg/dL)、高胆固醇血症(例如，总胆固醇水平＞200mg/dL、＞220mg/dL、＞240mg/dL、＞250mg/dL、或＞275mg/dL)、低HDL血清水平(例如，＜40mg/dL、＜45mg/dL、或＜50mg/dL)、高LDL血清水平(例如，≥100mg/dL、≥130mg/dL、≥160mg/dL、或≥190mg/dL)和高甘油三酯血症(例如，空腹TG水平≥150mg/dL、≥175mg/dL、≥200mg/dL、≥300mg/dL、≥400mg/dL、或≥499mg/dL)。在某些情况下，施用是饮食和/或锻炼的辅助。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种减轻超重受试者的体重的方法。所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于超重受试者。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，受试者的体质指数(BMI)为25kg/m2或更大。在另外的实施方案中，受试者的BMI为25kg/m2至29.9kg/m2、30kg/m2至39.9mkg/m2、25kg/m2至39.9kg/m2、或25kg/m2至50kg/m2、或27至40kg/m2。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在一些实施方案中，受试者的BMI为30kg/m2或更大(例如，30至39.9kg/m2或30kg/m2至50kg/m2)。ALK7结合蛋白单独或作为组合疗法施用。在一些实施方案中，施用是饮食和/或锻炼的辅助。
在某些实施方案中，本公开提供了一种减轻肥胖受试者的体重的方法。所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于受试者。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，受试者的BMI为30kg/m2或更大(例如，30至39.9kg/m2或30kg/m2至50kg/m2·在一些实施方案中，受试者的BMI为40kg/m2或更大。在一些实施方案中，受试者患有中央型肥胖(例如，腹部区域中的脂肪(包括腹部脂肪和/或内脏脂肪)过量)。在一些实施方案中，受试者的腰围/臀围比(WHR)为0.85或更大。在一些实施方案中，受试者患有周围型肥胖(例如，臀部上的脂肪过量)。ALK7结合蛋白单独或作为组合疗法施用。在一些实施方案中，施用是饮食和/或锻炼的辅助。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种治疗和/或改善肥胖或与肥胖相关的疾病或疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于肥胖受试者。在一些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白是本文公开的抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，受试者的BMI为30kg/m2或更大。在另外的实施方案中，受试者的BMI为30至39.9kg/m2、或30kg/m2至50kg/m2。在一些实施方案中，受试者是病态肥胖的。在一些实施方案中，受试者的身体BMI为40kg/m2或更大。在另外的实施方案中，受试者的BMI为40kg/m2至45kg/m2、或40kg/m2至50kg/m2。在一些实施方案中，受试者患有2型糖尿病。在一些实施方案中，受试者的BMI为30kg/m2或更大(例如，30至39.9kg/m2)。在一些实施方案中，受试者的BMI为至少40kg/m2。在一些实施方案中，受试者患有中央型肥胖(例如，腹部区域中的脂肪(包括腹部脂肪和/或内脏脂肪)过量)。在一些实施方案中，受试者的腰围/臀围比(WHR)为0.85或更大。在一些实施方案中，受试者患有周围型肥胖(例如，臀部上的脂肪过量)。ALK7结合蛋白单独或作为组合疗法施用。在一些实施方案中，施用是饮食和/或锻炼的辅助。
还提供了一种治疗或预防与肥胖相关的疾病或疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要治疗或预防的受试者。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是选自以下的成员：血脂异常、高脂血症(总胆固醇水平＞240mg/dL)、高胆固醇血症(例如，总胆固醇水平＞200mg/dL、＞220mg/dL、＞240mg/dL、＞250mg/dL、或＞275mg/dL)、低HDL血清水平(例如，＜40mg/dL、＜45mg/dL、或＜50mg/dL)、高LDL血清水平(例如，≥100mg/dL、≥130mg/dL、≥160mg/dL、或≥190mg/dL)和高甘油三酯血症(例如，空腹TG水平≥150mg/dL、≥175mg/dL、≥200mg/dL、≥300mg/dL、≥400mg/dL、或≥499mg/dL)。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是心血管疾病。在另一个实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是高血压(血压升高)、心肌梗塞、中风、周边动脉疾病、血压调节功能障碍、动脉硬化充血性心力衰竭、动脉粥样硬化、冠心病或微血管疾病。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是炎症。在另一个实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是选自以下各项组成的组的成员：视网膜病变、肠病、溃疡性结肠炎和哮喘、炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是肝脏疾病。在某些实施方案中，治疗或预防的肝脏疾病或疾患是NAFLD。在某些实施方案中，肝脏疾病是脂肪肝。在某些实施方案中，肝脏疾病是NASH。在另一个实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是选自以下各项组成的组的成员：脂肪性肝炎、脂肪变性、纤维化和/或肝硬化。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是选自以下的成员：白内障、黄斑变性、阻塞性睡眠呼吸暂停、静脉炎、痛风、骨关节炎、胆囊疾病、肾脏疾病、肺部疾病(例如，哮喘、低通气综合征或呼吸功能障碍)和/或癌症(例如，卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌和/或结肠癌)和/或癌症转移(例如，淋巴转移、血流转移和/或肿瘤生长和侵袭)。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是感染。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是伤口愈合缓慢或伤口不愈合。在某些情况下，施用是饮食和/或锻炼的辅助。
在某些实施方案中，本公开提供了一种减少肝脏脂肪的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于有需要的受试者。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，受试者是超重的(例如，肥胖前期)。在一些实施方案中，受试者的体质指数(BMI)为25kg/m2或更大。在另外的实施方案中，受试者的BMI为25kg/m2至29.9kg/m2、30kg/m2至39.9kg/m2、25kg/m2至39.9kg/m2、或25kg/m2至50kg/m2。在一些实施方案中，受试者是肥胖的。在一些实施方案中，受试者的BMI为30kg/m2或更大(例如，30至39.9kg/m2或30kg/m2至50kg/m2)。在一些实施方案中，受试者是病态肥胖的。在一些实施方案中，受试者的BMI为40kg/m2或更大。在另外的实施方案中，受试者的BMI为40kg/m2至45kg/m2、或40kg/m2至50kg/m2。在一些实施方案中，受试者患有中央型肥胖(例如，腹部区域中的脂肪(包括腹部脂肪和/或内脏脂肪)过量)。在一些实施方案中，受试者的腰围/臀围比(WHR)为0.85或更大。在一些实施方案中，受试者患有周围型肥胖(例如，臀部上的脂肪过量)。在一些实施方案中，受试者患有2型糖尿病。ALK7结合蛋白单独或作为组合疗法施用。在一些实施方案中，施用是饮食和/或锻炼的辅助。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种治疗、改善和/或预防2型糖尿病或与糖尿病相关的疾病或疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于患有2型糖尿病或具有患上2型糖尿病的风险的受试者。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，受试者的体质指数BMI为30kg/m2或更大(例如，30至39.9kg/m2)。在一些实施方案中，受试者的BMI为至少40kg/m2。在一些实施方案中，受试者患有中央型肥胖(例如，腹部区域中的脂肪(包括腹部脂肪和/或内脏脂肪)过量)。在一些实施方案中，受试者的WHR为0.85或更大。在一些实施方案中，受试者患有周围型肥胖(例如，臀部上的脂肪过量)。ALK7结合蛋白单独或作为组合疗法施用。在一些实施方案中，施用是饮食和/或锻炼的辅助。
还提供了一种治疗、改善或预防与糖尿病相关的疾病或疾患的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于患有糖尿病的受试者。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的ALK7结合蛋白(例如，拮抗剂抗体)结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是选自以下的成员：血脂异常、高脂血症(总胆固醇水平＞240mg/dL)、高胆固醇血症(例如，总胆固醇水平＞200mg/dL、＞220mg/dL、＞240mg/dL、＞250mg/dL、或＞275mg/dL)、低HDL血清水平(例如，＜40mg/dL、＜45mg/dL、或＜50mg/dL)、高LDL血清水平(例如，≥100mg/dL、≥130mg/dL、≥160mg/dL、或≥190mg/dL)和高甘油三酯血症(例如，空腹TG水平≥150mg/dL、≥175mg/dL、≥200mg/dL、≥300mg/dL、≥400mg/dL、或≥499mg/dL)。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是心血管疾病。在另一个实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是高血压(血压升高)、心肌梗塞、中风、周边动脉疾病、血压调节功能障碍或动脉硬化。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是炎症(例如，全身性炎症、肝脏炎症和脂肪组织炎症)。在另一个实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是选自以下各项组成的组的成员：动脉粥样硬化、视网膜病变、肠病、溃疡性结肠炎、哮喘、肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是肝脏疾病。在另一个实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是选自以下各项组成的组的成员：脂肪肝疾病、脂肪性肝炎、脂肪变性和/或肝硬化。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是选自以下的成员：白内障、黄斑变性、阻塞性睡眠呼吸暂停、静脉炎、痛风、骨关节炎、胆囊疾病、高胆固醇、肺部疾病(例如，哮喘和/或低通气综合征)、神经病变、视网膜病变、血管病变、微血管病变、肾病、肾衰竭和/或癌症(例如，卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌和/或结肠癌)和癌症转移(例如，淋巴转移、血流转移和/或肿瘤生长和侵袭)。在某些实施方案中，治疗或预防的疾病或疾患是伤口感染或伤口不愈合。在某些情况下，施用是饮食和/或锻炼的辅助。
本公开还提供了一种用于改善受试者中的血脂谱的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂(中和)抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要这种治疗的受试者。在一些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白是本文公开的抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的抗体。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是ALK7拮抗剂抗体。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，本公开提供了一种用于降低LDL胆固醇水平或增加HDL-胆固醇水平的方法。在某些实施方案中，受试者患有血脂异常。在另一个实施方案中，受试者具有升高的血清脂质(例如，胆固醇(高胆固醇血症)和/或甘油三酯(例如，高甘油三酯血症))。在某些实施方案中，受试者的LDL-C≥100mg/dL、≥130mg/dL或≥160mg/dL)。在某些实施方案中，受试者的TG≥150mg/dL、≥160mg/dL、≥170mg/dL)。在某些实施方案中，受试者具有升高的血浆胰岛素水平(高胰岛素血症；例如，＞20ug/ml的空腹胰岛素水平可以超过100)。在一些实施方案中，受试者患有II型糖尿病。
根据某些实施方案，本公开提供了一种治疗或预防代谢疾病或紊乱或与代谢疾病或紊乱相关的疾患的方法，所述方法包括将ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于有需要的受试者。在某些实施方案中，治疗的代谢疾病、紊乱或疾患是高血糖(例如，在空腹状态下或在口服葡萄糖耐量测试期间葡萄糖施用后＞130mg/dL)。在某些实施方案中，治疗的代谢疾病、紊乱或疾患是脂质代谢疾病、紊乱或疾患。在某些实施方案中，治疗的代谢疾病、紊乱或疾患是血脂异常。在另一个实施方案中，脂质代谢疾病、紊乱或疾患是选自以下的成员：低HDL水平、高LDL水平、高甘油三酯水平、高脂血症和脂蛋白异常。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者的总胆固醇水平＞200mg/dL、＞220mg/dL、＞240mg/dL、＞250mg/dL、或＞275mg/dL。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者的HDL血清水平＜40mg/dL、＜45mg/dL、或＜50mg/dL)。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者的LDL血清水平≥100mg/dL、≥130mg/dL、≥160mg/dL、或≥190mg/dL。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者的空腹TG水平≥150mg/dL、≥175mg/dL、≥200mg/dL、≥300mg/dL、≥400mg/dL、或≥499mg/dL。在某些实施方案中，治疗的代谢疾病、紊乱或疾患是葡萄糖代谢疾病、紊乱或疾患。在另一个实施方案中，葡萄糖代谢疾病、紊乱或疾患是选自以下的成员：葡萄糖耐受不良、胰岛素抗性、葡萄糖耐量降低(IGT)、空腹葡萄糖受损(IFG)。在某些实施方案中，治疗的代谢疾病、紊乱或疾患是选自以下的成员：高尿酸水平、NAFLD、脂肪肝、NASH和多囊卵巢综合征。在某些实施方案中，治疗的受试者患有高胰岛素血症。在某些实施方案中，治疗的受试者是肥胖的(例如，受试者患有内脏或腹部肥胖)。在另一个实施方案中，治疗的受试者患有II型糖尿病。
代谢综合征是一种涉及一系列紊乱的疾患，所述紊乱会增加患上心脏病的风险。代谢综合征的主要要素是体重过重、心血管参数(高血压、血脂异常、血液中的甘油三酯水平高和/或HDL水平低)、动脉粥样硬化、糖尿病和/或胰岛素抗性。具有若干这些要素(即，代谢综合征)的受试者很容易患上心脏病，即使每个要素都是风险因素。本公开还提供了一种用于治疗或预防代谢综合征的上述要素中的1种、2种、3种或更多种的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要治疗的受试者。
本公开还提供了用于治疗、预防或改善受试者中的普拉德-威利(Prader-Willi)综合征或与普拉德-威利综合征相关的疾患的组合物和方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要这种治疗的受试者。普拉德-威利综合征，也称为拉巴特-威利(Labhart-Willi)综合征、普拉德综合征、普拉德-拉巴特-威利-范科尼(Prader-Labhart-Willi-Fanconi)综合征，是一种影响人体的多个部位的复杂遗传病。在婴儿期，这种疾病的特征是肌张力弱(张力减退)、进食困难、生长不良和发育延迟。从儿童期开始，受影响的个体会产生无法满足的食欲，从而导致慢性嗜食(食欲过盛)和肥胖。一些患有普拉德-威利综合征的人，特别是肥胖者，还会患上2型糖尿病(最常见的糖尿病)。患有普拉德-威利综合征的人通常具有轻度至中度智力障碍和学习障碍。行为问题很常见，包括脾气爆发、固执和强迫行为(诸如在皮肤上搔抓)。睡眠异常也可能发生。该疾患的另外特征包括独特的面部特征，诸如额头狭窄、杏仁眼和三角嘴；身材矮小和手脚小。一些患有普拉德-威利综合征的人的皮肤异常白皙、头发浅色。受影响的男性和受影响的女性的生殖器都不发达。青春期延迟或不完全，大多数受影响的个体无法生育孩子(不育)。其他相关症状可以从婴儿期的肌张力差到儿童早期的行为问题和婴儿期的症状，诸如眼睛协调性不足、天生杏仁眼、强烈的吮吸反射(由于肌张力差)、哭声微弱、醒来困难、上唇薄弱等。成年期症状包括例如不育、性腺功能低下、阴毛稀疏、肥胖、张力减退(肌张力低下)、学习障碍/边缘智力功能、易患糖尿病、灵活性极高等。目前，可以通过遗传测试(父亲PWS/AS区域的缺失)以及临床表现来诊断。
普拉德-威利综合征通常是由父亲15号染色体的区段丢失(约70％的患者)或具有母亲15号染色体的两份拷贝(母亲单亲二体；约25％的患者)导致的。罕见地，普拉德-威利综合征还可能是由染色体重排(称为易位)，或由使父亲15号染色体上的基因异常关闭(失活)的突变或其他缺陷导致的。在15q11-13区域(所谓的PWS/AS区域)中，负责普拉德-威利综合征的15号染色体上的区段，包含至少含有小核核糖核蛋白相关蛋白N(SNRPN)和抑蛋白(NDN)、以及小核仁RNA(snoRNA)簇(诸如SNORD64、SNORD107、SNORD108和两份拷贝的SNORD109、29份拷贝的SNORD116(HBII-85)和48份拷贝的SNORD115(HBII-52))的基因。母体染色体上的相同区域的缺失会导致安格曼(Angelman)综合征(AS)。PWS和AS表示第一个报道的人类印记疾病的例子。
普拉德-威利综合征无法治愈。然而，已经采取了若干治疗措施来减轻该疾患的症状。在婴儿期，受试者应接受疗法以改善肌肉力量，诸如生长激素(GH)疗法(例如，每日注射GH)。还报道了言语和职业疗法。由于严重肥胖，阻塞性睡眠呼吸暂停通常需要气道正压呼吸机。在一些情况下可以使用手术程序。5-羟色胺激动剂在减轻脾气爆发和改善强迫性方面最有效。
在一些实施方案中，本文所述的ALK7结合蛋白用于治疗、预防或改善普拉德-威利综合征或与普拉德-威利综合征相关的疾患。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7蛋白，诸如拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段，例如本文公开的拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。
另外提供了一种治疗、预防或改善心血管疾病或疾患的方法，所述方法包括将ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于有需要的受试者。在某些实施方案中，治疗、预防或改善的心血管疾病或疾患是动脉粥样硬化。在某些实施方案中，治疗、预防或改善的心血管疾病或疾患是高血压(例如，在静息状态下的血压＞130/80mmHg或＞140/90mmHg)。在某些实施方案中，心血管疾病或疾患是周围血管疾病、微血管或微血管并发症、中风和/或视网膜病变。在某些实施方案中，心血管疾病是动脉粥样硬化(冠心病)。
在某些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗和/或改善炎性疾病或疾患的方法，所述方法包括将ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于有需要的受试者。在某些实施方案中，炎性疾病或疾患是慢性炎症。在另一个实施方案中，炎性疾病或疾患是脂肪组织炎症。在另一个实施方案中，疾病或疾患是肝脏炎症。在某些实施方案中，疾病或疾患是NAFLD。在另一个实施方案中，疾病或疾患是脂肪肝。在另一个实施方案中，疾病或疾患是脂肪变性(例如，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。
本公开还提供了一种改善血糖控制的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要治疗的受试者。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者的空腹血糖水平＞130、＞135、＞140、＞145或＞150mg/dL。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者在进食后2小时的餐后血糖水平＞180、＞185、＞190、＞195或＞200mg/dL。在某些情况下，施用是饮食和/或锻炼的辅助。施用还可以减轻体重或治疗肥胖。在某些情况下，受试者患有2型糖尿病。在某些情况下，受试者的BMI为27至40kg/m2。在某些情况下，受试者的BMI为30至39.9kg/m2。在某些情况下，受试者的BMI为至少40。在某些情况下，受试者是超重的。在某些情况下，受试者是肥胖的。可以使用本领域已知的技术(诸如混合餐食测试)来评估血糖控制的改善。
本公开还提供了用于治疗、预防或改善受试者中的高血糖或与高血糖相关的疾患的组合物和方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要这种治疗的受试者。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者的空腹血糖水平＞130、＞135、＞140、＞145或＞150mg/dL。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者在进食后2小时的餐后血糖水平＞180、＞185、＞190、＞195或＞200mg/dL。在某些实施方案中，治疗、预防或改善的结果是选自以下的成员：与治疗前受试者中的血清水平相比，葡萄糖的血清水平降低、甘油三酯的血清水平降低、胰岛素的血清水平降低、和/或非酯化脂肪酸的血清水平降低。在某些实施方案中，治疗、预防或改善的结果是与治疗前受试者的体温相比，体温升高约0.4℃至1℃。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7蛋白。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，施用还减轻了受试者的体重。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种降低受试者中的血浆胰岛素水平的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要这种治疗的受试者。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者的空腹血糖水平＞130、＞135、＞140、＞145或＞150mg/dL。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者在进食后2小时的餐后血糖水平＞180、＞185、＞190、＞195或＞200mg/dL。在某些实施方案中，受试者是超重的。在某些实施方案中，受试者是肥胖的。在另一个实施方案中，受试者患有2型糖尿病。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7蛋白。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位
本公开还提供了用于治疗、预防或改善受试者中的高血糖或与高血糖相关的疾患的组合物和方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要这种治疗的受试者。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者的空腹血糖水平＞130、＞135、＞140、＞145或＞150mg/dL。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者在进食后2小时的餐后血糖水平＞180、＞185、＞190、＞195或＞200mg/dL。在某些实施方案中，治疗、预防或改善的结果是选自以下的成员：与治疗前受试者中的血清水平相比，葡萄糖的血清水平降低、甘油三酯的血清水平降低、胰岛素的血清水平降低、和/或非酯化脂肪酸的血清水平降低。在某些实施方案中，治疗、预防或改善的结果是与治疗前受试者的体温相比，体温升高约0.4℃至1℃。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7蛋白。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，施用还减轻了受试者的体重。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种降低受试者中的血浆胰岛素水平的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于需要这种治疗的受试者。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者的空腹血糖水平＞130、＞135、＞140、＞145或＞150mg/dL。在某些实施方案中，被施用ALK7结合蛋白的受试者在进食后2小时的餐后血糖水平＞180、＞185、＞190、＞195或＞200mg/dL。在某些实施方案中，受试者是超重的。在某些实施方案中，受试者是肥胖的。在另一个实施方案中，受试者患有2型糖尿病。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7蛋白。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种治疗、预防或改善受试者中的肝脏疾病的方法，所述方法包括将有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)施用于患有肝脏疾病的受试者。在某些实施方案中，受试者患有肝脏炎症。在某些实施方案中，受试者患有NAFLD。在一个实施方案中，受试者患有脂肪肝。在另一个实施方案中，受试者患有NASH。在某些实施方案中，治疗、预防或改善的肝脏疾病是纤维化、瘢痕、肝硬化或肝衰竭。在另一个实施方案中，治疗、预防或改善的肝脏疾病是肝癌。在某些实施方案中，受试者是超重的。在另一个实施方案中，受试者是肥胖的。在另一个实施方案中，受试者患有2型糖尿病。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7蛋白。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是本文公开的拮抗剂抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。
在另外的实施方案中，本公开提供了治疗和/或改善癌症或与癌症相关的疾患的方法，所述方法包括将ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体或其ALK7结合片段)施用于有需要的受试者。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白是抗ALK7抗体或其ALK7结合片段。在一些实施方案中，受试者患有选自以下的癌症：骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌或结肠癌。在一些实施方案中，施用ALK7结合蛋白以治疗或预防淋巴转移、血流转移、肿瘤生长或肿瘤侵袭。
在某些实施方案中，本公开提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括使表达ALK7的癌细胞、肿瘤相关基质细胞或内皮细胞接触ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)。在另外的实施方案中，癌细胞是骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌和/或结肠癌细胞。在一些实施方案中，接触的细胞来自癌细胞系。在一些实施方案中，癌细胞在体内接触。
在某些实施方案中，本公开提供了一种用于增加脂解的方法，所述方法包括使白色脂肪细胞或脂肪组织接触拮抗剂ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂肪细胞中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在一些实施方案中，ALK7结合蛋白使脂解测定法中的脂解增加5％至100％、10％至80％或10％至60％。在另外的实施方案中，在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行脂解测定法：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。在一些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白是抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体包括本文提供的抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，白色脂肪细胞或脂肪组织在体外接触。在一些实施方案中，分化的白色脂肪细胞或脂肪组织在体内接触。在某些实施方案中，方法例如在哺乳动物受试者(例如，动物模型)中在体内进行。在另一个实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，方法导致甘油产生增加。在另外的实施方案中，方法导致脂肪细胞培养物中的甘油和/或游离脂肪酸增加。在一些实施方案中，方法导致脂肪细胞或组织中的甘油三酯(TG)含量减少。在一些实施方案中，方法导致受试者中的血浆TG水平降低。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种增加脂肪细胞或组织中的肾上腺素能受体-β(ADRB)信号传导的方法。所述方法包括使分化的白色脂肪细胞或脂肪组织接触足以增加ADRB信号传导的量的拮抗剂ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)。在一些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白是抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体包括本文提供的抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，分化的白色脂肪细胞或脂肪组织在体外接触。在一些实施方案中，分化的白色脂肪细胞或脂肪组织在体内接触。在某些实施方案中，方法例如在哺乳动物受试者(例如，动物模型)中在体内进行。在另一个实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，方法导致甘油产生增加。在另外的实施方案中，方法导致脂肪细胞培养物中的甘油和/或游离脂肪酸增加。在一些实施方案中，方法导致脂肪细胞或组织中的TG含量减少。在一些实施方案中，方法导致受试者中的血浆TG水平降低。在一些实施方案中，方法导致在营养物过载期间脂肪细胞或脂肪组织中的ADRB信号传导增加。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种减少脂肪细胞或脂肪组织(例如，分化的白色脂肪细胞)中的过氧化物酶体增殖物活化受体-γ(PPARγ)信号传导的方法。所述方法包括使分化的白色脂肪细胞或脂肪组织接触有效降低PPARγ活性的量的拮抗剂ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)。在一些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白是抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体包括本文提供的抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，分化的白色脂肪细胞或脂肪组织在体外接触。在一些实施方案中，分化的白色脂肪细胞或脂肪组织在体内接触。在某些实施方案中，方法例如在哺乳动物受试者(例如，动物模型)中在体内进行。在另一个实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，方法导致甘油产生增加。在另外的实施方案中，方法导致脂肪细胞培养物中的甘油和/或游离脂肪酸增加。在一些实施方案中，方法导致脂肪细胞或组织中的TG含量减少。在一些实施方案中，方法导致受试者中的血浆TG水平降低。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种减少脂肪细胞或脂肪组织(例如，分化的白色脂肪细胞)中的胰岛素抗性的方法。所述方法包括使脂肪细胞或脂肪组织接触有效减少胰岛素抗性的量的拮抗剂ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)。在一些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白是抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体包括本文提供的抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，分化的白色脂肪细胞或脂肪组织在体外接触。在一些实施方案中，分化的白色脂肪细胞或脂肪组织在体内接触。在某些实施方案中，方法例如在哺乳动物受试者(例如，动物模型)中在体内进行。在另一个实施方案中，受试者是人。
在另一个实施方案中，本公开提供了一种增加脂肪细胞或组织的代谢速率的方法。所述方法包括使脂肪细胞或脂肪组织接触有效增加脂肪细胞或组织的代谢的量的拮抗剂ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)。在一些实施方案中，拮抗剂ALK7结合蛋白是抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体包括本文提供的抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗体与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1A中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体交叉阻断或竞争与ALK7的结合。在一些实施方案中，所施用的拮抗剂抗ALK7抗体结合至与表1B或表3中公开的具有VH和VL对的抗体相同的ALK7的表位。在一些实施方案中，分化的白色脂肪细胞或脂肪组织在体外接触。在一些实施方案中，分化的白色脂肪细胞或脂肪组织在体内接触。在某些实施方案中，方法例如在哺乳动物受试者(例如，动物模型)中在体内进行。在另一个实施方案中，受试者是人。
本公开提供了方法，所述方法包括将治疗有效量的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的拮抗剂抗ALK7抗体或拮抗剂ALK7结合抗体片段)单独或与一种或多种另外的疗法(例如，一种或多种另外的治疗剂)组合施用于患有ALK7介导的疾病和/或疾患或具有患上ALK7介导的疾病和/或疾患的风险的受试者，所述ALK7介导的疾病和/或疾患诸如肥胖(例如，内脏或腹部肥胖)；超重；胰岛素抗性；代谢综合征和其他代谢疾病或疾患；脂质紊乱，诸如低HDL水平、高LDL水平、高脂血症、高甘油三酯血症或血脂异常；脂蛋白异常；甘油三酯减少；炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)、脂肪肝疾病；非酒精性脂肪肝疾病；高血糖；葡萄糖耐量降低(IGT)；高胰岛素血症；高胆固醇(例如，高LDL水平和/或高胆固醇血症)；心血管疾病，诸如心脏病，包括冠心病、充血性心力衰竭、中风、周围血管疾病、动脉粥样硬化；动脉硬化和/或高血压；X综合征；血管再狭窄；神经病变；视网膜病变；神经退行性疾病；内皮功能障碍、呼吸功能障碍、肾脏疾病(例如，肾病)；胰腺炎；多囊卵巢综合征；尿酸水平升高；血色素沉着症(铁过载)；黑棘皮症(皮肤上的黑斑)；和/或癌症(例如，骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、卵巢癌症、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌或结肠癌)；和/或与上述疾病或疾患中的一者或多者、和/或超重(例如，BMI≥25kg/m2)、或身体脂肪过多相关的其他病症/疾患。
还提供了本文提供的ALK7结合蛋白用于血液或组织中的蛋白水平(例如，ALK7水平)的诊断性监测的用途，所述诊断性监测作为临床测试程序的一部分，例如以确定给定治疗方案的功效。例如，可以通过将ALK7结合蛋白偶联至可检测物质来促进检测。可检测物质的实例包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料和/或放射性材料。合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合物的实例包括链亲和素/生物素和亲和素/生物素；合适的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素酯、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例包括鲁米诺；生物发光材料的实例包括荧光素酶、荧光素和水母素；并且合适的放射性材料的实例包括125I、131I、35S或3H。
药物组合物和施用方法
制备ALK7结合蛋白并将其施用于有需要的受试者的方法是本领域的普通技术人员已知的或容易确定的。ALK7结合蛋白的给药途径可以是例如口服、肠胃外、通过吸入或局部给药。术语肠胃外包括例如静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、直肠或阴道施用。虽然所有这些给药形式被明确地设想为在本公开的范围内，但是给药形式的另一个实例将是用于注射，特别是用于静脉内或动脉内注射或滴注的溶液。通常，合适的药物组合物可以包含缓冲液(例如，乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲液)、表面活性剂(例如，聚山梨酸酯)、任选地稳定剂(例如，人白蛋白)等。在与本文的教导相容的其他方法中，如本文提供的ALK7结合蛋白可以直接递送至纤维化或肿瘤的器官和/或部位，从而增加患病组织对治疗剂的暴露。在某些实施方案中，例如通过吸入或鼻内施用直接施用于气道。
如本文所讨论，ALK7结合蛋白可以以药学有效量施用，以用于ALK7介导的疾病和疾患(诸如肥胖、糖尿病、代谢疾病、血脂异常；心血管疾病、2型糖尿病、炎症或心血管疾病、肺部疾病、脂肪肝疾病、神经疾病、肝脏疾病或肾脏疾病和癌症)的体内治疗。就此而言，将会理解，可以配制所公开的ALK7结合蛋白，以便有利于施用和促进活性剂的稳定性。根据本公开的药物组合物可以包含药学上可接受的、无毒的、无菌载剂，诸如生理盐水、无毒缓冲液、防腐剂等等。出于本申请的目的，药物有效量的缀合的或未缀合的ALK7结合蛋白意指足以实现与ALK7的有效结合和实现有益效果(例如，改善疾病或疾患的症状或检测物质或细胞)的量。用于本文公开的治疗方法的合适制剂在Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.)第16版(1980)中有所描述。
本文提供的某些药物组合物可以以可接受的剂型(包括例如，胶囊剂、片剂、水性悬浮剂或溶液剂)口服施用。某些药物组合物也可以以鼻腔气雾剂或吸入剂施用。可以采用苄醇或其他合适的防腐剂、增加生物利用率的吸收促进剂和/或其他常规增溶剂或分散剂来将此类组合物制备为溶于盐水的溶液。
可以与载剂材料组合以产生单一剂型的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的抗体)的量将根据所治疗的受试者和特定的施用方式而变化。组合物可以以单剂量、多剂量或甚至在输注中确立的时间期内施用。还可以调整剂量方案以提供最佳期望反应(例如，治疗或预防反应)。
本文提供的ALK7结合蛋白可以根据前述治疗方法以足以产生治疗效果的量施用于人或其他受试者。可以根据已知的技术通过将ALK7结合蛋白与常规的药学上可接受的载剂或稀释剂组合，将本文提供的ALK7结合蛋白以常规的制备剂型施用于这样的人或其他动物。药学上可接受的载剂或稀释剂的形式和特性由与所述载剂或稀释剂组合的活性成分的量、给药途径和其他熟知的变量规定。还可以使用包含一种或多种不同的ALK7结合蛋白的混合物。
用于治疗ALK7介导的疾病或疾患(诸如肥胖、糖尿病、代谢疾病、血脂异常；心血管疾病、2型糖尿病、炎症或心血管疾病、肺部疾病、脂肪肝疾病、神经疾病、和肝脏疾病、或肾脏疾病和/或癌症)的ALK7结合组合物的治疗有效剂量，根据多种不同因素而变化，所述因素包括施用手段、靶标部位、受试者(无论受试者是人还是动物)的生理状态、所施用的其他药物以及治疗是预防性的还是治疗性的。通常，受试者是人，但是也可以治疗非人哺乳动物(包括转基因哺乳动物)。治疗剂量可以使用本领域的普通技术人员已知的常规方法滴定，以优化安全性和功效。
通过施用ALK7结合蛋白来改善特定疾病或疾患的症状是指可归因于或与ALK7结合的施用相关的任何减轻(无论是永久的还是暂时的、持久的还是短暂的)。
本公开还提供了ALK7结合蛋白(诸如抗ALK7抗体)在药物制造中的用途，例如用于治疗、预防或改善肥胖、糖尿病、代谢疾病、血脂异常；心血管疾病、2型糖尿病、炎症或心血管疾病、肺部疾病、脂肪肝疾病、神经疾病、和肝脏疾病、或肾脏疾病和/或癌症。
组合疗法
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段、或其变体或衍生物)与一种或多种其他疗法组合施用。此类疗法包括另外的治疗剂以及其他医学干预。可以与本文提供的ALK7结合蛋白组合施用的示例性治疗剂包括但不限于抗SDI纤维蛋白、皮质类固醇、抗炎剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、利尿剂、抗糖尿病药、免疫抑制剂、化学治疗剂、抗代谢物和/或免疫调节剂。在多个实施方案中，在手术切除/除去程序之前、期间和/或之后，将ALK7结合蛋白施用于受试者。
在一些实施方案中，ALK7结合蛋白(例如，抗ALK7抗体，诸如全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段、或其变体或衍生物)与以下各项中的一者或多者组合施用：(a)双胍类(例如，丁福明(buformin)、甲福明(metformin)、苯乙福明(phenformin))，(b)胰岛素，(c)生长抑素，(d)α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如，伏格列波糖(voglibose)、米格列醇(miglitol)、阿卡波糖(acarbose))，(e)DPP-IV抑制剂，诸如西他列汀(sitagliptin)、维达列汀(vildagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、沙格列汀(saxagliptin)(例如，如美国专利号6,699,871B1中所公开)，(f)LXR调节剂，(g)胰岛素促分泌剂(例如，醋酸己脲(acetohexamide)、氨磺丁脲(carbutamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、格列波脲(glibomuride)、格列齐特(gliclazide)、gliquidine、格列美脲(glimerpiride)、格列吡嗪(glipizide)、格列派特(glisoxepid)、格列本脲(glyburide)、格列己脲(glyhexamide)、格列平脲(glypinamide)、苯磺丁脲(phenbutamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、甲磺丁脲(tolbutamide)、甲磺环已脲(tolcyclamide)、那格列奈(nateglinide)和/或瑞格列奈(repaglinide))，(k)CB1抑制剂，诸如利莫那班(rimonabant)、泰伦那班(taranabant)和国际申请公开号WO03/077847A2和WO05/000809 A1中公开的化合物，或(i)西布曲明(sibutramine)、托吡酯(topiramate)、奥利司他(orlistat)、坤尼沙(Qnexa)、美伐他汀(mevastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、依泽替米贝(ezetimibe)、阿托伐他汀(atorvastatin)、纳曲酮(naltrexone)、安非他酮(bupriopion)、芬特明(phentermine)、氢氯噻嗪(hydrochlorothiazide)或氯沙坦(losartan)。
诊断
本公开还提供一种在ALK7介导的疾病和疾患(诸如，肥胖(例如，内脏或腹部肥胖)；超重；胰岛素抗性；代谢综合征和/或其他代谢疾病或疾患；脂质紊乱，诸如低HDL水平、高LDL水平、高脂血症、高甘油三酯血症或血脂异常；脂蛋白异常；甘油三酯减少；炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)、脂肪肝疾病；非酒精性脂肪肝疾病；高血糖；葡萄糖耐量降低(IGT)；高胰岛素血症；高胆固醇(例如，高LDL水平和/或高胆固醇血症)；心血管疾病，诸如心脏病，包括冠心病、充血性心力衰竭、中风、周围血管疾病、动脉粥样硬化；动脉硬化和/或高血压；X综合征；血管再狭窄；神经病变；视网膜病变；神经退行性疾病；内皮功能障碍、呼吸功能障碍、肾脏疾病(例如，肾病)；胰腺炎；多囊卵巢综合征；尿酸水平升高；血色素沉着症(铁过载)；黑棘皮症(皮肤上的黑斑)；和/或癌症(例如，骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌或结肠癌)；和/或与上述疾病或疾患中的一者或多者、或身体脂肪过多相关的其他病症/疾患。)的诊断期间使用的诊断方法，所述方法涉及测量来自个体的组织或体液的ALK7蛋白的表达水平，以及将所测量的表达水平与正常组织或体液中的标准ALK7表达水平进行比较，据此与标准相比，ALK7表达水平的增加表示可通过本文提供的ALK7结合蛋白(诸如如本文提供的全长抗ALK7抗体和ALK7结合抗体片段)治疗的病症。
本文提供的ALK7结合蛋白(诸如，抗ALK7抗体(例如，全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段、及其变体和衍生物))可以用于使用本领域的技术人员已知的经典免疫组织学方法的生物学样品中的ALK7水平的测定(参见例如，Jalkanen等人，J.Cell.Biol.101：976-985(1985)；Jalkanen等人，J.Cell Biol.105：3087-3096(1987))。可用于检测ALK7蛋白表达的其他基于抗体的方法包括免疫测定法，诸如酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫沉淀或蛋白印迹。
所谓“测定ALK7蛋白的表达水平”意指定性或定量测量或估计第一生物学样品中的ALK7蛋白的水平，所述测量或估计直接(例如，通过测定或估计绝对蛋白水平)或相对(例如，通过与第二生物学样品中的疾病相关多肽水平进行比较)进行。可以测量或估计第一生物学样品中的ALK7蛋白表达水平，并且将所述表达水平与标准ALK7蛋白水平进行比较，所述标准取自从不患有病症的个体获得的第二生物学样品，或者通过不患有病症的个体的群体平均水平来确定。如本领域所理解，一旦已知“标准”ALK7蛋白水平，即可将所述水平重复地用作比较的标准。
所谓“生物学样品”意指从个体、细胞系、组织培养物或潜在表达ALK7的其他细胞来源获得的任何生物学样品。用于从哺乳动物获得组织活检和体液的方法是本领域已知的。
包括ALK7结合蛋白的试剂盒
本公开还提供了在合适的包装中包括ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的抗体，诸如全长ALK7抗体和ALK7结合抗体片段、及其变体和衍生物)和书面材料的试剂盒，所述试剂盒可用于进行本文所述的方法。书面材料可以包括以下任何信息：使用说明、临床研究讨论、副作用列表、科学文献参考、包装插页材料、临床试验结果和/或这些内容的汇总等等。书面材料可以指示或确立组合物的活性和/或优点，和/或描述剂量、施用、副作用、药物相互作用或对医疗保健提供者有用的其他信息。这些信息可以基于各种研究的结果，例如，使用涉及体内模型的实验动物的研究和/或基于人类临床试验的研究。试剂盒还可以含有另一种疗法(例如，另一种药剂)和/或书面材料，诸如上文所述的用于提供关于另一种疗法(例如，另一种药剂)的信息的书面材料。
在某些实施方案中，试剂盒在一个或多个容器中包含至少一种纯化的ALK7结合蛋白。在一些实施方案中，试剂盒含有所有进行检测测定法的必要和/或充分部件，包括所有对照、进行测定法的指导、和/或用于分析和结果呈现的任何必要软件。
免疫测定法
可以通过本领域已知的任何方法来测定ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的抗体和特异性结合ALK7的抗体的ACTRIIA/B结合片段、其变体或衍生物)的免疫特异性结合。可以使用的免疫测定法包括但不限于使用诸如蛋白印迹、放射免疫测定法(REA)、ELISA(酶联免疫吸附测定法)、“夹心”免疫测定法、免疫沉淀测定法、沉淀素反应、凝胶扩散沉淀素反应、免疫扩散测定法、凝集测定法、补体固定测定法、免疫放射测定法、荧光免疫测定法、或蛋白A免疫测定法的技术的竞争性和非竞争性测定系统。此类测定法是常规的和本领域已知的(参见例如，Ausubel等人编，(1994)Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley&Sons，Inc.，NY)第1卷，该文献以引用的方式整体并入本文)。
本文提供的ALK7结合蛋白(例如，特异性结合ALK7的抗体和特异性结合ALK7的抗体的ActRII受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)结合片段、及其变体或衍生物)可以在组织学上用于免疫荧光、免疫电子显微镜检查或非免疫测定法，从而用于ALK7或其保守变体或肽片段的原位检测。可以根据本领域已知的方法来进行原位检测。本领域的普通技术人员将能够通过采用常规实验来确定每个测定的操作和最佳测定条件。适用于确定ALK7结合蛋白的结合特征的方法是本文所述的或者本领域已知的。针对这些动力学分析而设计的设备和软件是可商购获得的(例如，
Figure BDA0002550251300003121
软件，GE Healthcare；
Figure BDA0002550251300003122
软件，Sapidyne Instruments)。
除非另外指明，否则本公开的实践采用细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术，这些技术在本领域技术的范围内。
以下实施例以说明方式而不是限制方式提供。
实施例
***
特定实施方案的前述描述将如此充分地揭示本公开的一般性质，以至于在不脱离本公开的一般概念的情况下，其他人可以通过应用本领域的技术人员的知识而容易地修改和/或改编此类特定实施方案的各种应用，而无需过度实验。因此，基于本文提供的教导和指导，这些改编和修改旨在在所公开的实施方案的等同形式的含义和范围内。应当理解，本文中的措辞或术语是出于描述而非限制目的，以使得本说明书的术语或措辞将由技术人员根据教导和指导来解释。
本公开的广度和范围不应由任何上述示例性实施方案限制，而应仅根据以下权利要求及其等同形式来限定。
本申请中引用的所有出版物、专利、专利申请、和/或其他文档以引用的方式整体并入用于所有目的，以达到正如单独指示每个单独的出版物、专利、专利申请、和/或其他文档以引用的方式并入用于所有目的的程度。
实施例1.ALK7结合抗体的选择、表征和产生
使用多轮选择程序来选择以高亲和力结合ALK7的人IgG抗体，下文将对此进行详细描述。
材料和方法
使用来自Pierce的EZ-Link磺基-NHS-生物素酰化试剂盒对包含人ALK7-Fc的蛋白进行生物素酰化。山羊抗人F(ab′)2κ-FITC(LC-FITC)、Extravidin-PE(EA-PE)和链霉亲和素-633(SA-633)分别从Southern Biotech、Sigma和Molecular Probes获得。链霉亲和素微珠和MACS LC分离柱购自Miltenyi Biotec。
使用Biacore T100/T200生物传感器(Biacore/GE Healthcare)在25℃和37℃下进行实验。在定制的FAB芯片上捕获ALK7抗体。将一系列浓度的包含ALK7-Fc的蛋白以50gl/ml的流速注入流动池上。为了获得动力学速率常数，使用BiaEvaluation软件(GEHealthcare)将校正的数据拟合至1∶1相互作用模型。平衡结合常数KD通过结合速率常数的比率kd/ka来确定。
如上文所述，使八个初始人合成酵母文库(每个具有～109的多样性)繁殖(参见例如，WO09/036379；WO10/105256；WO12/009568)。对于前两轮选择，如本文所述，采用Miltenyi MAC系统进行磁珠分选技术(参见例如，Siegel等人，J.Immunol.Meth.286(1-2)：141-153(2004))。简而言之，将酵母细胞(～1010个细胞/文库)与3ml 10nM包含生物素酰化的ALK7-Fc的蛋白一起在室温下在FACS洗涤缓冲液(磷酸盐缓冲盐水(PBS)/0.1％牛血清白蛋白(BSA))中温育15分钟。在用50ml冰冷的洗涤缓冲液洗涤一次后，将细胞沉淀重悬于40mL洗涤缓冲液中，并且将链霉亲和素微珠(500μl)添加至酵母，并且在4℃下温育15分钟。接下来，将酵母沉淀，重悬于5mL洗涤缓冲液中，并且上样到Miltenyi LS柱上。在上样5mL后，将柱用3ml FACS洗涤缓冲液洗涤3次。然后将柱从磁场中移出，并且用5mL生长培养基洗脱酵母，然后使酵母生长过夜。使用流式细胞术进行以下几轮分选。使大约1×108个酵母沉淀，用洗涤缓冲液洗涤3次，并且在室温下在平衡条件下与浓度逐渐降低的包含生物素酰化的ALK7-Fc的蛋白(100至1nM)一起温育。然后将酵母洗涤两次，并且在4℃下用LC-FITC(1∶100稀释)和SA-633(1∶500稀释)或EA-PE(1∶50稀释)二级试剂染色15分钟。在用冰冷的洗涤缓冲液洗涤两次后，将细胞沉淀重悬于0.4mL洗涤缓冲液中，并且转移至带滤网盖的分选管。使用FACS ARIA分选仪(BD Biosciences)进行分选，并且分配分选门以选择相对于本底对照的特定结合物。为了减少利用来自CHO细胞的可溶性膜蛋白的非特异性试剂结合物的数量，采用后续选择轮次(参见例如，WO14/179363和Xu等人，Protein Eng.Des.Sel.26(10)：663-670(2013))，并且使用包含ALK7-Fc的蛋白来鉴定具有改善的对ALK7的亲和力的结合物。在最后一轮分选后，将酵母涂铺并且挑取单个菌落，以进行表征和对亲和力成熟的克隆提名。
抗体生产和纯化
为了产生足够数量的用于进一步表征的选定抗体，使酵母克隆生长至饱和，然后在30℃振荡下诱导48小时。在诱导后，使酵母细胞沉淀，并且收获上清液以用于纯化。将IgG使用蛋白A柱来纯化，并且用pH2.0的乙酸洗脱。Fab片段通过木瓜蛋白酶消化来产生，并且在KappaSelect(GE Healthcare LifeSciences)上纯化。
ForteBio KD测量
通常如上文所述进行选定抗体的ForteBio亲和力测量(参见例如，Estep等人，Mabs，5(2)：270-278(2013))。简而言之，通过将IgG在线上样到AHQ传感器上来进行ForteBio亲和力测量。在测定缓冲液中离线平衡传感器30分钟，然后在线监测60秒以建立基线。使具有上样IgG的传感器暴露于100nM抗原中5分钟，然后将它们转移至测定缓冲液5分钟以进行解离速率测量。使用1∶1结合模型来分析动力学。
Octet Red384表位淘选/配体阻断
使用标准夹心形式交叉阻断测定法来进行选定抗体的表位淘选/配体阻断。将对照抗靶标IgG上样到AHQ传感器上，并且用不相关的人IgG1抗体来阻断传感器上未占用的Fc结合位点。然后将传感器暴露于100nM靶抗原，然后暴露于第二抗靶标抗体或配体。使用ForteBio数据分析软件7.0来处理数据。在抗原缔合后第二抗体或配体的其他结合表示未占用的表位(非竞争剂)，而未结合表示表位阻断(竞争剂或配体阻断)。
尺寸排阻色谱
使用TSKgel SuperSW mAb HTP柱(22855)以0.4毫升/分钟进行酵母产生的mAb的快速SEC分析，循环时间为6分钟/运行。使用200mM磷酸钠和250mM氯化钠作为流动相。
动态扫描荧光测量
将10uL 20×Sypro Orange添加至20uL 0.2-1mg/mL mAb或Fab溶液。使用RT-PCR仪(BioRad CFX96 RT PCR)将样品板温度以0.5℃的增量从40℃跃升至95℃，在每个温度下平衡2分钟。原始数据的一阶导数的负数用于推导Tm。
实施例2.ALK7结合抗体的表征
通过序列、SPR和基于细胞的脂解抑制测定分析对根据此前的实施例生成的示例性ALK7结合蛋白进一步表征。
表1A和表1B中提供了根据实施例1描述的方法生成的示例性ALK7结合抗体的序列(示例性CDR序列以下划线表示)。
表1A：示例性ALK7结合蛋白
G04
Figure BDA0002550251300003161
Figure BDA0002550251300003171
C02
Figure BDA0002550251300003172
Figure BDA0002550251300003181
D04
Figure BDA0002550251300003182
Figure BDA0002550251300003191
Figure BDA0002550251300003201
H03
Figure BDA0002550251300003202
Figure BDA0002550251300003211
表1B：另外的示例性ALK7结合蛋白
J01
Figure BDA0002550251300003213
Figure BDA0002550251300003212
Figure BDA0002550251300003221
KO1
Figure BDA0002550251300003222
Figure BDA0002550251300003231
L0
1
Figure BDA0002550251300003232
Figure BDA0002550251300003241
Figure BDA0002550251300003251
使用SPR(基于BIACORETM的分析)和基于细胞的脂解抑制测定法来更全面地表征和示例表1A、表1B或表3中描述的ALK7结合蛋白组。
表面等离子共振分析-
使用Biacore T100/T200生物传感器(Biacore/GE Healthcare)在25和37℃下进行实验。在定制的FAB芯片上捕获ALK7抗体。将一系列浓度的包含ALK7-Fc的蛋白以50μl/ml的流速注入流动池上。为了获得动力学速率常数，使用BiaEvaluation软件(GEHealthcare)将校正的数据拟合至1∶1相互作用模型。平衡结合常数KD通过结合速率常数的比率kd/ka来确定。
脂解抑制测定
脂解是细胞内的甘油三酯水解为甘油和游离脂肪酸。然后，甘油和游离脂肪酸释放至血流或培养基中。虽然脂解出现在基本上所有细胞中，但是在白色和褐色脂肪细胞中最丰富。使3T3-L1细胞(由ATCC提供；
Figure BDA0002550251300003252
CL-173TM)在含有10％牛血清(LifeTechnologies；16170-060)的杜尔贝科氏改良的伊戈尔培养基(ATCC；
Figure BDA0002550251300003253
30-2002TM)中生长直到达到汇合。为了诱导分化，在汇合后2天，将培养基更换为新鲜的含有10％胎牛血清(Life Technologies；10082147)、地塞米松(Sigma，D8893)、IBMX(Sigma，I7018)和胰岛素(Sigma，I0516)的杜尔贝科氏改良的伊戈尔培养基(ATCC；
Figure BDA0002550251300003254
30-2002TM)2周。如通过显微镜检查所确定，脂质滴在细胞上的积聚用于确认完全分化为成熟的脂肪细胞。脂肪细胞用媒介物(PBS)、活化素B(50ng/ml)处理过夜，或与活化素B(50ng/ml)和ALK7抗体(5μg/ml)一起共处理。细胞用PBS洗涤两次，并且与脂解测定缓冲液(由Abcam提供；ab185433)一起温育。在3小时后收集脂解测定缓冲液，并且根据制造商的说明(Abcam；ab185433)来测量甘油水平。
表2A和2B呈现了SPR的结果，并且表2A呈现了示例性ALK7结合蛋白的基于细胞的脂解抑制测定。
表3呈现了SPR的结果和示例性ALK7结合蛋白的基于细胞的脂解抑制测定。
表2A：示例性ALK7结合蛋白的结合表征和活性
Figure BDA0002550251300003261
表2B：示例性ALK7结合蛋白的结合表征
Figure BDA0002550251300003262
据认为ALK7信号传导抑制脂解，并因此导致脂肪在脂肪细胞和脂肪组织中积聚。在基于细胞的脂解抑制测定中评估抗体H03、D04、C02和G04干扰ALK7介导的脂解抑制的能力。抗体H03、D04、C02和G04分别使脂解活性增加91.8％、109.2％、55.8％和45.8％。因此，这些数据表明，ALK7抗体可以用于拮抗ALK7介导的脂解抑制，并从而增加脂肪细胞中的脂肪酸分解。总之，这些数据表明，ALK7抗体可以用于治疗与脂解活性低和/或细胞(特别是脂肪细胞(adipocytes)(脂肪细胞(adipose cells)))中的脂肪酸积聚过多相关的多种病症或疾患，包括例如肥胖、糖尿病、胰岛素抗性；代谢综合征脂肪肝疾病和其他代谢疾病或疾患。
人ALK7(SEQ ID NO：85)和大鼠ALK7(SEQ ID NO：86)的胞外结构域共有97％的序列同一性。使用SPR来确定抗体H03、G04、C02和D04与人ALK7和大鼠ALK7的结合。抗体H03、D04、K01和L01结合至人ALK7和大鼠ALK7二者。F03和C02仅结合人ALK7。J01仅结合大鼠ALK7。
实施例3.ALK7抗体的结合优化
采用三种成熟策略来进行初始克隆的结合优化：轻链多样化；CDRH和/CDRH2的多样化；并且进行顺序VH和VL诱变。
轻链多样化：从初始输出提取重链质粒(如上文所述)，并且转化至具有1×106的多样性的轻链文库中。如上文所述进行选择，使用10nM或1nM生物素酰化的ALK7-Fc抗原进行一轮MACS分选和两轮FACS分选(对于各轮。
CDRH1和CDRH2选择：将选自轻链多样化程序的克隆的CDRH3重组至多样性为1×108的含CDRH1和CDRH2变体的预制文库中，并且使用ALK7进行选择，如上文所述。通过将生物素酰化的抗原-抗体酵母复合物与未生物素酰化的抗原一起温育不同的时间来施加亲和力压力，以选择最高亲和力的抗体。
VHmut/VKmut选择：使从CDRH1和CDRH2选择程序获得的克隆进行经由基于易错PCR的重链和/或轻链诱变的另外几轮的亲和力成熟。通常如上文实施例2所述使用ALK7作为抗原来进行选择，但是对于所有选择轮次，添加采用FACS分选。抗原浓度降低，并冷抗原竞争时间增加，从而进一步加压达到最佳亲和力。
表3提供了示例性优化的ALK7抗体的序列。
表3：示例性亲和力成熟的ALK7结合蛋白
J02
Figure BDA0002550251300003281
Figure BDA0002550251300003291
KO2
Figure BDA0002550251300003292
Figure BDA0002550251300003301
Figure BDA0002550251300003311
G05
Figure BDA0002550251300003312
Figure BDA0002550251300003321
CO3
Figure BDA0002550251300003322
Figure BDA0002550251300003331
Figure BDA0002550251300003341
L02
Figure BDA0002550251300003342
Figure BDA0002550251300003351
SPR(基于BIACORETM的分析)用于更全面地表征表3中所述的亲和力成熟的ALK7抗体。
表面等离子共振分析-
使用Biacore T100/T200生物传感器(Biacore/GE Healthcare)在25和37℃下进行实验。在定制的FAB芯片上捕获ALK7抗体。将一系列浓度的包含ALK7-Fc的蛋白以50μl/ml的流速注入流动池上。为了获得动力学速率常数，使用BiaEvaluation软件(GEHealthcare)将校正的数据拟合至1∶1相互作用模型。平衡结合常数KD通过结合速率常数的比率kd/ka来确定。
表4提供了如上文所述进行的SPR的结果。
表4：示例性亲和力成熟的ALK7抗体的结合表征
Figure BDA0002550251300003361
实施例4.抗ALK7抗体变体
本实施例展示了产生第二代抗ALK7单克隆抗体的示例性方法，所述第二代抗ALK7单克隆抗体在一个或多个与此前实施例中讨论的抗ALK7抗体相同的表位处特异性结合至ALK7。这些第二代抗体在重链的恒定区(例如，Fc结构域)中含有突变，以减少抗体毒性和/或免疫原性，和/或改善抗体在宿主中的稳定性/半衰期。
为了产生基于mAb C03或mAb G05序列的示例性第二代抗体，根据Persic等人(1997)，Gene 187：9-18构建了用于表达人IgG重链和轻链的载体。两种载体都使用IgG分泌前导序列。人重链载体含有一个独特的限制性位点(BssHII)，用于在5′末端克隆VH，并且掺入一个邻近的含有BstEII位点(在所有VH子组中是保守的)的VH接头，用于在3′末端克隆VH。因此，来自mAb C03或mAb G05抗体的VH(分别为SEQ ID NO：129或118)通过DNA合成产生，用BssHII和BstEII消化，并且分别插入消化的pAID4人IgG1重链载体(5′BssHII和3′BstEII)中。设计人κ轻链为分别插入有mAb C03或mAb G05抗体VL序列(分别为SEQ ID NO：136或125)并且将其合成(无内含子)。完成的构建体经过验证性测序，并且共转染至CHO细胞中。通过蛋白印迹来分析CHO条件培养基，以确认抗体大小，并且通过ELISA分析人Fc结构域以确定抗体浓度。通过以下方法从CHO细胞条件培养基中纯化抗体蛋白：蛋白A色谱法(例如，MabSelect SuReTM，General Electric，Piscataway，NJ)、透析、病毒过滤和缓冲液交换。
人重链载体的变体在CH2结构域中含有突变L234A和L235A(LALA，Kabat位置)，以帮助减少效应子功能。利用人IgG重链中VH区下游的独特的内部AgeI限制性位点，通过使用重叠PCR策略和掺入突变的引物产生了从5′AgeI到3′终止密码子的区域。还将用于PCR反应的3′引物设计为具有在终止密码子之后的BamHI限制性位点，该限制性位点用作质粒中的克隆位点。将该产物插入消化的pAID4人IgG1重链载体(5′AgeI和3′BamHI)中。如上文所述，将来自mAb C03或mAb G05的VH插入该重链变体中。所得的mAb C03LALA抗体具有SEQ ID NO：194或328的重链序列和SEQ ID NO：191或322的轻链序列。如上文所述，LALA突变定位于SEQID NO：194的L263和L264处。所得的mAb G05 LALA抗体具有SEQ ID NO：195或330的重链序列和SEQ ID NO：193或326的轻链序列。如上文所述，LALA突变定位于SEQ ID NO：195的L257和L258处。
类似地，可以通过将L234A、L235A和P329G(LALA-PG，Kabat位置)突变引入mAb C03或mAb G05的重链序列来制备LALA-PG突变体。所得的mAb C03 LALA-PG抗体具有SEQ ID NO：196或332的重链序列和SEQ ID NO：191或322的轻链序列。如上文所述，LALA-PG突变包含SEQ ID NO：196中的L263A、L264A和P358G突变。所得的mAb G05 LALA-PG抗体具有SEQ ID NO：197或334的重链序列和SEQ ID NO：193或326的轻链序列。如上文所述，LALA-PG突变包含SEQ ID NO：197中的L257A、L258A和P352G突变。
实施例5.ALK7 mAb的表位作图
如表3所述，将ALK7上的线性表位和非连续表位针对示例性抗ALK7结合蛋白mAbC03、G05和J02作图。使用CLIPSTM技术在P印scan Presto BV(Lelystad，The Netherlands)进行完全非连续表位作图方法(包括二硫桥模拟物的组合文库)。
实验方法
肽文库的靶标ALK7序列
人ALK7的胞外结构域用作表位作图的通用肽文库的实例。此类胞外结构域的氨基酸序列如下给出：
1 LSPGLKCVCL LCDSSNFTCQ TEGACWASVM LTNGKEQVIK SCVSLPELNA 50
51 QVFCHSSNNV TKTECCFTDF CNNITLHLPT ASPNAPKLGPME 92(SEQ ID NO：208)。
在不存在关于二硫化物桥接的知识的情况下，模拟了上述序列中的Cys残基的所有可能组合。
肽的合成
为了重建示例性人ALK7胞外结构域的表位，使用固相Fmoc合成法合成了基于肽的表位模拟物的文库。氨基官能化的聚丙烯支持物通过以下获得：接枝专有的亲水性聚合物制剂，然后使用二环己基碳二亚胺(DCC)与N-羟基苯并三唑(HOBt)与叔丁氧羰基-六亚甲基二胺(BocHMDA)反应，随后使用三氟乙酸(TFA)切割Boc-基团。通过定制的改性
Figure BDA0002550251300003381
液体处理站(Perkin Elmer，Boston，MA)在氨基官能化的固体支持物上使用标准Fmoc肽合成来合成肽。
使用P印scan专有的支架上的化学连接肽(CLIPS)技术完成结构模拟物的合成。CLIPS技术允许将肽结构化为单环、双环、三环、片状折叠、螺旋状折叠及其组合。CLIPS模板与半胱氨酸残基偶联。肽中的多个半胱氨酸的侧链与一个或两个CLIPS模板偶联。例如，将0.5mM的P2 CLIPS(2，6-双(溴甲基)吡啶)溶液溶解在碳酸氢铵(20mM，pH7.8)/乙腈(1∶3(v/v))中。将该溶液添加到肽阵列上。CLIPS模板将结合至肽阵列(455孔板，具有3μl孔)的固相结合肽中存在的两个半胱氨酸的侧链。在完全覆盖于溶液中的同时，将肽阵列在溶液中轻轻摇动30至60分钟。最后，将肽阵列用过量的H2O充分洗涤，并在70℃的含1％SDS/0.1％β-巯基乙醇(溶于PBS中(pH 7.2))的破坏缓冲液中超声处理30分钟，然后在H2O中再次超声处理45分钟。携带T3CLIPS的肽以类似的方式制备，但现在具有三个半胱氨酸。
ELISA筛选
在基于pepscan的ELISA中测试了抗体与每种合成肽的结合。将肽阵列与一抗溶液温育(在4℃过夜)。洗涤后，将肽阵列与1/1000稀释的抗体过氧化物酶缀合物(例如，兔抗小鼠IgG(H+L)HRP缀合物，来自Southern Biotech(产品目录号6175-05，Birminghan，AL))在25℃下温育一小时。洗涤后，加入过氧化物酶底物2，2′-叠氮基--二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐(ABTS)和20μl/ml的3％H2O2。一小时后，测量显色。用电荷耦合器件(CCD)-照相机和图像处理系统对显色进行定量。
数据处理
从CCD相机获得的值范围是0到3000mAU，类似于标准96孔板ELISA读数器。将结果定量并存储到Peplab数据库中。孔中会偶尔含有气泡，从而产生假阳性值，需要对卡进行人工检查，并将气泡引起的任何值均评分为0。
合成质量控制
为了验证合成肽的质量，平行合成了一组独立的阳性和阴性对照肽。用市售的抗体3C9和57.9对这些进行筛选(参见Posthumus等人(1990)J.Virol.64：3304-3309)。
文献参考
Timmerman et al.(2007).J.Mol.Recognit.20：283-299；
Langedijk et al.(2011).Anal.Biochem.417：149-155.
数据分析和解析
箱线图分析
箱线图是一种探索性工具，允许显示一批数据，由约翰·图基(JohnTukey)在20世纪70年代发明。箱线图为给定数据集的数据分布提供了第一印象。每个箱形图均显示数据集的极限值(最大值和最小值)、上下四分位数、中值和异常值(参见www.flowingdata.com的箱形图示意图)。该箱线图的主要应用是寻找基线水平并估算所有w数据质量评估的信噪比
线性强度谱
线性强度谱描绘了给定样品记录的强度谱的图形表示。通常，将记录在不同肽集合上的强度谱叠加图绘制在一张图中，以便直接比较给定抗体对不同类型的表位模拟物的响应。
热图分析
热图是数据的图形表示，其中二维图中变量所取的值以颜色表示。热图可用于表示或比较在一个或多个肽集合上的一个或多个样品所记录的ELISA强度，和/或用于可视化记录在给定样品的非连续肽文库上的数据。
1.简单强度谱的热图分析
响应的大小(例如，来自记录在重叠肽文库中的多克隆样品)以颜色进行编码，并且图中包括图例。响应以两种互补的方式显示：直方图或热图。虽然对于单个样品而言，直方图很容易掌握，但在热图中进行分析时，比较多个样品的响应变得更加容易，在该图中，每个样品绘制为一行(或一列)，并且每个肽绘制为一列(或一行)。
2.热图矩阵重建非连续的肽文库
热图是数据的图形表示，其中二维图中变量所取的值以颜色表示。对于双环CLIPS肽，可以从第一环和第二环的独立序列中获得这样的二维图。例如，16个CLIPS肽的序列实际上是环1中4个独特子序列和环2中4个独特子序列的排列。因此，可以将观察到的ELISA数据作图在4×4矩阵中，其中每个X坐标对应于第一环的序列，并且每个Y坐标对应于第二环的序列。CLIPS肽的观察到的ELISA值可在含有该肽具有的特定环1/环2序列的行与列交叉处的正方形中找到。
为了进一步促进可视化，可用来自连续梯度的颜色替换ELISA值。在示例性情况下，极低值用绿色着色，极高值用红色着色，并且平均值用黑色着色。
肽的设计
根据以下设计合成不同的肽集合。将某些小型卡上肽段的实际顺序随机化。并非所有实验数据集都能产生最佳结果。在本实施例中仅讨论具有最佳结果的那些。
SET 1肽(模拟物类型：线性；标记：LIN)含有长度为15-aa的线性肽，该肽来源于人ALK7胞外结构域，具有一个残基的偏移。SET1中的前10条序列为：
LSPGLKCVCLLCDSS(SEQ ID NO：209)
SPGLKCVCLLCDSSN(SEQ ID NO：210)
PGLKCVCLLCDSSNF(SEQ ID NO：211)
GLKCVCLLCDSSNFT(SEQ ID NO：212)
LKCVCLLCDSSNFTC(SEQ ID NO：213)
KCVCLLCDSSNFTCQ(SEQ ID NO：214)
CVCLLCDSSNFTCQT(SEQ ID NO：215)
VCLLCDSSNFTCQTE(SEQ ID NO：216)
CLLCDSSNFTCQTEG(SEQ ID NO：217)和
LLCDSSNFTCQTEGA(SEQ ID NO：218)
SET 2(模拟物类型：线性；标记：AA)含有SET 1的肽，但是第10和11位上的残基被丙氨酸替代。当天然丙氨酸出现在任一位置上时，都将其替换为甘氨酸。SET 2中的前10条序列为：
SNNVTKTECAATDFC(SEQ ID NO：219)
AQVFCHSSNAATKTE(SEQ ID NO：220)
TLHLPTASPAGPKLG(SEQ ID NO：221)
MLTNGKEQVAASCVS(SEQ ID NO：222)
LKCVCLLCDAANFTC(SEQ ID NO：223)
WASVMLTNGAAQVIK(SEQ ID NO：224)
LLCDSSNFTAATEGA(SEQ ID NO：225)
TEGACWASVAATNGK(SEQ ID NO：226)
EQVIKSCVSAAELNA(SEQ ID NO：227)和
CDSSNFTCQAAGACW(SEQ ID NO：228)
SET 3(模拟物类型：线性；标记：LIN.2)含有SET 1的肽，但半胱氨酸残基被Cys-乙酰氨基甲基(acm；表示为“X”)替代。SET 3中的前10条序列为：
SXVSLPELNAQVFXH(SEQ ID NO：229)
SSNFTXQTEGAXWAS(SEQ ID NO：230)
DSSNFTXQTEGAXWA(SEQ ID NO：231)
ELNAQVFXHSSNNVT(SEQ ID NO：232)
KTEXXFTDFXNNITL(SEQ ID NO：233)
HSSNNVTKTEXXFTD(SEQ ID NO：234)
SLPELNAQVFXHSSN(SEQ ID NO：235)
TEXXFTDFXNNITLH(SEQ ID NO：236)
AXWASVMLTNGKEQV(SEQ ID NO：237)和
AQVFXHSSNNVTKTE(SEQ ID NO：238)，其中X＝Cys-乙酰氨基甲基(acm)。
SET 4(模拟物类型：单环，mP2；标签：LOOP17)含有长度为17-aa的单环肽。第2-16位含有来源于人Alk7靶序列的15聚体肽，具有一个残基的偏移。第1和17位上的半胱氨酸用于使用mP2 CLIPS来产生环模拟物。天然半胱氨酸被Cys-acm(acm；如上表示为“X”)替换。SET 4中的前10条序列为：
CLSPGLKXVXLLXDSSC(SEQ ID NO：239)
CSPGLKXVXLLXDSSNC(SEQ ID NO：240)
CPGLKXVXLLXDSSNFC(SEQ ID NO：241)
CGLKXVXLLXDSSNFTC(SEQ ID NO：242)
CLKXVXLLXDSSNFTXC(SEQ ID NO：243)
CKXVXLLXDSSNFTXQC(SEQ ID NO：244)
CXVXLLXDSSNFTXQTC(SEQ ID NO：245)
CVXLLXDSSNFTXQTEC(SEQ ID NO：246)
CXLLXDSSNFTXQTEGC(SEQ ID NO：247)和
CLLXDSSNFTXQTEGAC(SEQ ID NO：248)，其中X＝Cys-乙酰氨基甲基(acm)。
SET 5(模拟类型：单环，mP2；标签：LOOP20)含有长度为20-aa的单环肽。第2-19位含有来源于人Alk7靶序列的18聚体肽，具有一个残基的偏移。第1和20位上的半胱氨酸用于使用mP2 CLIPS来产生环模拟物。天然半胱氨酸被Cys-acm(acm；如上表示为“X”)替换。SET5中的前10条序列为：
CLSPGLKXVXLLXDSSNFTC(SEQ ID NO：249)
CSPGLKXVXLLXDSSNFTXC(SEQ ID NO：250)
CPGLKXVXLLXDSSNFTXQC(SEQ ID NO：251)
CGLKXVXLLXDSSNFTXQTC(SEQ ID NO：252)
CLKXVXLLXDSSNFTXQTEC(SEQ ID NO：253)
CKXVXLLXDSSNFTXQTEGC(SEQ ID NO：254)
CXVXLLXDSSNFTXQTEGAC(SEQ ID NO：255)
CVXLLXDSSNFTXQTEGAXC(SEQ ID NO：256)
CXLLXDSSNFTXQTEGAXWC(SEQ ID NO：257)和
CLLXDSSNFTXQTEGAXWAC(SEQ ID NO：258)，其中X＝Cys-乙酰氨基甲基(acm)。
SET 6(模拟物类型：α-螺旋，mP2；标签：HEL)含有长度为22-aa的α-螺旋模拟物，该肽来源于人Alk7的靶序列，但有一个残基的偏移。半胱氨酸取代第1和5位上的残基，以使用mP2 CLIPS诱导α螺旋转角。天然半胱氨酸被Cys-acm(acm；如上表示为“X”)替换。SET 6中的前10条序列为：
CTKTCXXFTDFXNNITLHLPTA(SEQ ID NO：259)
CXWACVMLTNGKEQVIKSXVSL(SEQ ID NO：260)
CQVFCHSSNNVTKTEXXFTDFX(SEQ ID NO：261)
CLSPCLKXVXLLXDSSNFTXQT(SEQ ID NO：262)
CNAQCFXHSSNNVTKTEXXFTD(SEQ ID NO：263)
CSVMCTNGKEQVIKSXVSLPEL(SEQ ID NO：264)
CXFTCFXNNITLHLPTASPNAP(SEQ ID NO：265)
CVMLCNGKEQVIKSXVSLPELN(SEQ ID NO：266)
CEQVCKSXVSLPELNAQVFXHS(SEQ ID NO：267)和
CTNGCEQVIKSXVSLPELNAQV(SEQ ID NO：268)，其中X＝Cys-乙酰氨基甲基(acm)。
SET 7(模拟物类型：β转角，mP2；标签：BET)含有长度为22-aa的β-转角模拟物，该模拟物来源于人Alk7的靶序列，但有一个残基的偏移。第11和12位上的残基被“PG”基序取代，以成核β-转角。使用mP2 CLIPS连接第1和22位上的半胱氨酸残基。天然半胱氨酸被Cys-acm(acm；如上表示为“X”)替换。SET 7中的前10条序列为：
CLSPGLKXVXPGXDSSNFTXQC(SEQ ID NO：269)
CSPGLKXVXLPGDSSNFTXQTC(SEQ ID NO：270)
CPGLKXVXLLPGSSNFTXQTEC(SEQ ID NO：271)
CGLKXVXLLXPGSNFTXQTEGC(SEQ ID NO：272)
CLKXVXLLXDPGNFTXQTEGAC(SEQ ID NO：273)
CKXVXLLXDSPGFTXQTEGAXC(SEQ ID NO：274)
CXVXLLXDSSPGTXQTEGAXWC(SEQ ID NO：275)
CVXLLXDSSNPGXQTEGAXWAC(SEQ ID NO：276)
CXLLXDSSNFPGQTEGAXWASC(SEQ ID NO：277)和
CLLXDSSNFTPGTEGAXWASVC(SEQ ID NO：278)，其中X＝Cys-乙酰氨基甲基(acm)。
SET 8(模拟物类型：二硫桥；标记：CYS.25)含有含长度为25-aa的肽，这些肽来源于人Alk7的靶序列。每个25聚体含有两个形成二硫键的半胱氨酸残基。其他半胱氨酸被Cys-acm(acm；如上表示为“X”)替换。SET 8中的前10条序列为：
LSPGLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAX(SEQ ID NO：279)
SPGLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXW(SEQ ID NO：280)
PGLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWA(SEQ ID NO：281)
GLKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWAS(SEQ ID NO：282)
LKCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWASV(SEQ ID NO：283)
KCVCLLXDSSNFTXQTEGAXWASVM(SEQ ID NO：284)
CVCLLXDSSNFTXQTEGAXWASVML(SEQ ID NO：285)
LSPGLKCVXLLCDSSNFTXQTEGAX(SEQ ID NO：286)
SPGLKCVXLLCDSSNFTXQTEGAXW(SEQ ID NO：287)和
PGLKCVXLLCDSSNFTXQTEGAXWA(SEQ ID NO：288)，其中X＝Cys-乙酰氨基甲基(acm)。
SET 9(模拟物类型：二硫桥；标记：CYS.27)含有长度为27-aa的肽。在第1-11和17-27位上是来源于人Alk7的靶序列的11聚体肽，其通过“GGSGG”(SEQ ID NO：289)接头连接。两个11聚体均含有形成二硫键的半胱氨酸残基。其他半胱氨酸被Cys-acm(acm；如上表示为“X”)替换。SET 9中的前10条序列为：
LSPGLKCVXLLGGSGGNGKEQVIKSCV(SEQ ID NO：290)
PGLKCVXLLXGGSGGNGKEQVIKSCV(SEQ ID NO：291)
LKCVXLLXDSSGGSGGNGKEQVIKSCV(SEQ ID NO：292)
CVXLLXDSSNFGGSGGNGKEQVIKSCV(SEQ ID NO：293)
LSPGLKCVXLLGGSGGKEQVIKSCVSL(SEQ ID NO：294)
PGLKCVXLLXDGGSGGKEQVIKSCVSL(SEQ ID NO：295)
LKCVXLLXDSSGGSGGKEQVIKSCVSL(SEQ ID NO：296)
CVXLLXDSSNFGGSGGKEQVIKSCVSL(SEQ ID NO：297)
LSPGLKCVXLLGGSGGQVIKSCVSLPE(SEQ ID NO：298)和
PGLKCVXLLXDGGSGGQVIKSCVSLPE(SEQ ID NO：299)，其中X＝Cys-乙酰氨基甲基(acm)。
SET 10(模拟物类型：非连续表位模拟物，T3 CLIPS；标签：MAT(MAT27+MAT33))含有长度为27-aa(MAT27)或33-aa(MAT33)的组合肽。在MAT33的情况下，在第2-16和18-32位是来源于靶序列的15聚体肽。半胱氨酸残基位于第1、17和33位，并通过T3 CLIPS连接以产生非连续表位模拟物。在MAT27的情况下，在第2-13和15-26位是来源于靶序列的12聚体肽。半胱氨酸残基位于第1、14和27位，并通过T3 CLIPS连接以产生非连续表位模拟物。在MAT27和MAT33中，天然半胱氨酸被Cys-acm(acm；如上表示为“X”)替换。SET 10中的前10条序列为：
CLXDSSNFTXQTEGAXCTDFXNNITLHLPTASC(SEQ ID NO：300)
CTEGAXWASVMLTNGKCNGKEQVIKSXVSLPEC(SEQ ID NO：301)
CTKTEXXFTDFXNNITCNGKEQVIKSXVSLPEC(SEQ ID NO：302)
CNFTXQTEGAXWASVMCPGLKXVXLLXDSSNFC(SEQ ID NO：303)
CXFTDFXNNITLHCNNVTKTEXXFTDC(SEQ ID NO：304)
CLHLPTASPNAPKCEQVIKSXVSLPEC(SEQ ID NO：305)
CLPTASPNAPKLGCASPNAPKLGPMEC(SEQ ID NO：306)
CLSPGLKXVXLLXCXNNITLHLPTASC(SEQ ID NO：307)
CTEXXFTDFXNNITLHCXNNITLHLPTASPNAC(SEQ ID NO：308)和
CXNNITLHLPTASPNACGAXWASVMLTNGKEQC(SEQ ID NO：309)，其中X＝Cys-乙酰氨基甲基(acm)。
筛选细节
抗体结合取决于多种因素的组合，包括抗体的浓度以及ELISA缓冲液中竞争性蛋白的数量和性质。同样，包被前条件(与实验样品一起温育之前对肽阵列的特殊处理)也会影响结合。对于示例性mAb J02，稀释液含有1μg/ml抗体，其中25％的Pepscan缓冲液和预处理(SQ)作为样品缓冲液和预处理缓冲液。对于示例性mAb G05，稀释液含有1μg/ml抗体，其中10％的Pepscan缓冲液和预处理(SQ)作为样品缓冲液和预处理缓冲液。对于示例性mAbC03，稀释液含有5μg/ml抗体，其中0.1％的Pepscan缓冲液和预处理(SQ)作为样品缓冲液和1％SQ预处理缓冲液。
筛选结果
在高严格条件下测试了抗体mAb J02，并产生了与构象表位模拟物的结合。用线性肽未检测到结合。抗体结合具有核心序列45LPELNAQVFCHSSNNVTK62(SEQ ID NO：310)的单环和α-螺旋表位模拟物。
对用非连续表位模拟物记录的结合谱进行分析表明，mAb J02也可识别肽链段26WASVMLTNGKEQ37(SEQ ID NO：311)和78LPTASPNAPK87(SEQ ID NO：312)，虽然仅与45LPELNAQVFCHSSNNVTK62(SEQ ID NO：310)内的区域组合。
在中等严格条件和弱结合构象表位模拟物下测试了抗体mAb G05。用线性肽未检测到结合。该抗体非常弱地结合具有核心序列43VSLPELNAQVFCHSSNNVTK62(SEQ ID NO：313)的单环和α-螺旋表位。
分析用非连续表位模拟物记录的结合谱表明，肽链段6KCVCLLCDSS15(SEQ ID NO：314)、23GACWASVMLT32(SEQ ID NO：315)和71CNNITLHLPT80(SEQ ID NO：316)也被抗体G05识别，虽然仅与43VSLPELNAQVFCHSSNNVTK62(SEQ ID NO：313)内的区域组合。
抗体mAb C03在高和中等严格条件下测试了，并且不结合阵列上存在的任何肽。因此，在低严格条件下对抗体进行了重新测试，并且所述抗体系统地结合从阵列上存在的所有组中的肽。值得注意的是，记录的强度谱显示出本底升高，可能是由于竞争蛋白含量低。
抗体C03同样良好地结合含有核心序列69DFCNNITLHLP79(SEQ ID NO：317)的线性和简单构象表位模拟物，所述序列可以是部分表位。
对用非连续和二硫桥表位模拟物记录的结合谱进行分析表明，肽链段1LSPGLKCVCLL11(SEQ ID NO：318)和51QVFCHSSNN59(SEQ ID NO：319)可以被通常含有69DFCNNITLHLP79(SEQ ID NO：317)的模拟物增强结合。
结论
使用含有线性和各种构象表位模拟物的Pepscan肽阵列测试了三种单克隆抗体，并且结果运行表明候选表位。
Pepscan数据表明，所有三种抗体均识别由三个或更多个肽链段组成的构象表位，这些肽链段在人ALK7的一级结构中不相邻。然而，有可能导出所有三种抗体的核心表位区域，因为用简单的构象或线性表位模拟物记录了具有单峰的强度谱。
值得注意的是，虽然已观察到与基于CLIPS的表位模拟物可检测的结合，但mAbJ02和mAb G05均未显示与线性肽的任何反应性。该观察结果表明结构要素的存在对于mAbJ02和mAb G05的结合至关重要。
对用非连续的表位模拟物记录的数据进行的分析表明，其他肽链段增强了对所有抗体的结合。表5汇总了目前的发现。
表5.已鉴定的表位候选物列表
Figure BDA0002550251300003511
*)：主要识别的区域
为抗体mAb J02和mAb G05鉴定的核心表位区域大部分重叠。然而，它们的非连续表位的整体组成是不同的。相反，针对mAb C03鉴定的核心表位与mAb J02和mAb G05的这些不同，但与mAb G05的部分表位重叠。
3D结构模型上的表位作图
如上文所述，ALK7上的针对抗ALK7抗体的表位至少包括主要表位和次要表位。如图1所示，主要表位包括至少针对mAb J02的45LPELNAQVFCHSSNNVTK62(SEQ ID NO：310)、针对mAb G05的42VSLPELNAQVFCHSSNNVTK63(SEQ ID NO：313)和针对mAb C03的69DFCNNITLHLP79(SEQ ID NO：317)(图1A)。人ALK7上的次要表位包括至少26WASVMLTNGKEQ37(SEQ ID NO：311)和78LPTASPNAPK87(SEQ ID NO：312)(针对mAb J02)，6KCVCLLCDSS15(SEQ ID NO：314)、23GACWASVMLT32(SEQ ID NO：315)和71CNNITLHLPT80(SEQ ID NO：316)和1LSPGLKCVCLL11(SEQID NO：318)(针对mAb G05)以及51QVFCHSSNN59(SEQ ID NO：319)(针对mAb C03)(图1B)。在这些表位中，主要表位是每个测试mAb的主要识别区域。次要表位中的至少一个可以被相应的mAb进一步识别。
A1k7基于同源性的结构模型是基于复合模板生成的，该复合模板来源于四个I型活化素受体的已知晶体结构(即，ALK1(PDB ID：4FAO)、ALK3(PDB ID：2GOO)、ALK5(PDB ID：2PJY)和ALK6(PDB ID：3EVS))。由于仅存在ALK7残基4-84的模板结构，因此仅对这些残基进行了建模(对于用于建模的这些ALK蛋白之间的一级序列比较，参见图2)。最终3-D模型得到了进一步优化和能量最小化(图3)。基于ALK-1/3/5/6报告的结构，人ALK7的残基85-92没有结构化，因为它们不存在模板结构(图3B)。如上所讨论，针对抗体mAb J02和mAb G05鉴定的主要表位区域在很大程度上重叠(图3A和3B)。然而，它们的非连续表位的整体组成是不同的(图3C)。相反，针对mAb C03鉴定的主要表位与mAb J02和mAb G05的那些不同(图3A)，但与mAb G05的部分表位重叠(图3B)。
实施例6.ALK7抗体对肥胖小鼠的肥胖体质和瘦体质的影响
申请人研究了在饮食诱导的肥胖的鼠模型中几种人单克隆ALK7抗体(ALK7 mAb)对脂肪和瘦组织质量的影响。
使用NMR在基线评估雄性小鼠(每组n＝8)的脂肪和瘦肌肉量。然后将小鼠分为不同的处理组：1)喂食标准饲料饮食(SD)并且每周用TBS媒介物皮下治疗两次的小鼠；2)喂食高脂肪饮食(HFD)并且每周用TBS媒介物皮下治疗两次的小鼠；3)每周两次用10mg/kg的ALK7 mAb J02皮下处理的HDF小鼠；4)每周两次用10mg/kg的ALK7 mAb K02皮下处理的HDF小鼠；5)每周两次用10mg/kg的ALK7 mAb G05皮下处理的HDF小鼠；6)每周两次用10mg/kg的ALK7 mAb C03皮下处理的HDF小鼠；和7)每周两次用10mg/kg的ALK7 mAb L02皮下处理的HDF小鼠。三周后，再次对小鼠进行全身NMR扫描以评估脂肪和瘦组织质量量，并将这些测量值与脂肪和瘦肌肉的基线量进行比较。
与TBS处理的SD小鼠相比，TBS处理的HFD小鼠显示出明显更高的脂肪组织量(图4)。平均而言，与TBS处理的HFD小鼠相比，每种ALK7 mAb的治疗导致HFD小鼠中脂肪组织的积聚明显减少(减少约-30％)(图4)。相反，虽然所有小鼠均显示出从基线开始的肌肉质量增加，但是在处理组之间没有显著差异(图5)。
总之，这些数据表明ALK7 mAb可用于降低体内脂肪水平。因此，数据表明ALK7抗体可用于治疗与不期望的高脂肪水平相关的各种病症和并发症，特别是在肥胖患者中。此外，还表明可以在不同时增加瘦体质的情况下实现脂肪减少，这表明ALK7 Ab在治疗希望减少身体脂肪含量而又不增加肌肉质量的患者中特别有用。
实施例7.ALK7 Ab对已确立的肥胖小鼠的影响
本实施例描述了人单克隆ALK7抗体(ALK7 mAb)对以确立的肥胖小鼠的体重、脂肪和瘦组织质量分布的治疗潜力的研究。为了测试ALK7抗体的潜力，根据体重将小鼠(C57BL/6品系)随机分组，并喂以高脂肪饮食(HFD)，直到每只小鼠的体重在研究基线处达到约35克。对照小鼠(n＝5)被喂以标准饲料饮食(SD)。然后将小鼠(每组n＝5-9)分为不同的处理组：1)每周用TBS媒介物皮下处理两次的SD小鼠(即，用SD喂养的小鼠)；2)每周用TBS媒介物皮下处理两次的HFD小鼠(即，用HFD喂养的小鼠)；3)每周用1mg/kg的ALK7 mAb C03皮下处理两次的HDF小鼠；4)每周用3mg/kg的ALK7 mAb C03皮下处理两次的HDF小鼠；和5)每周用10mg/kg的ALK7 mAb C03皮下处理两次的HDF小鼠。用TBS或ALK7 mAb C03进行的处理持续了6周。对小鼠进行全身NMR扫描，以评估在基线、3周和6周时间点的脂肪和瘦组织质量量。在研究持续期间，每周两次使用天平记录体重。
在研究基线处，与服用SD的小鼠相比，所有服用HFD的小鼠均表现出体重平均增加26.2％(P＜0.001)(图6)。与基线值相比，小鼠继续服用HFD 6周，并用TBS处理，使得体重进一步增加(平均～22％，P＜0.001)(图7和图8)。相比之下，HFD+ALK7抗体(1、3或10mg/kg)处理组在这6周的时间内与其各自的基线体重相比并未显示出明显的体重增加(图7和图8)。平均而言，分别与在6周研究结束时用TBS处理的小鼠相比，ALK7 mAb(1、3或10mg/kg)处理的HFD小鼠分别导致体重增加显著减少-6％(P＜0.05)、-7％(P＜0.001)和-9％(P＜0.001)(图8)。
与体重增加一致，与服用SD的用TBS处理的小鼠相比(通过NMR测定)，所有处理组(TBS或ALK7 mAb)中基线处的所有HFD小鼠均显示脂肪质量增加(图9)和瘦肉质量成比例地减少(图10)，表明研究开始时肥胖。与基线相比，通过NMR所测定，在3周和6周的时间点时，用TBS处理的小鼠继续服用HFD治疗6周，使得脂肪质量进一步增加(图9)，并且瘦肉质量减少(图10)。HFD+ALK7抗体(1、3或10mg/kg)处理组在3周和6周时间点时与各自的基线值相比，脂肪质量显著减少(图9)，但在瘦肉质量上没有显著差异(图10)。
在研究终止前的6周时间点，与服用SD的经TBS处理的小鼠相比，用TBS处理的HFD小鼠的脂肪质量平均增加了～154.5％(P＜0.001)，而瘦肉质量却仅有最小的增加(～15.9％，P＜0.01)(图11)。与用TBS处理的HFD小鼠相比，HFD+ALK7抗体处理组(1、3或10mg/kg mAb)显示出脂肪质量分别显著降低-29.4％(P＜0.001)、-35.9％(P＜0.001)和-29.3％(P＜0.001)，且瘦肉质量无明显变化(图11)。然而，与TBS+HFD小鼠相比，任何ALK7 mAb处理组(1、3或10mg/kg)的瘦体质均无显著差异(图11)。
总之，这些数据表明ALK7 mAb可用于降低体内脂肪水平。因此，数据表明ALK7抗体可用于治疗与不期望的高脂肪水平相关的各种病症和并发症，特别是在肥胖患者中。此外，还表明可以在不同时增加瘦体质的情况下实现脂肪减少，这表明ALK7抗体在治疗希望减少身体脂肪含量而又不增加肌肉质量的患者中特别有用。
序列表
<110> 阿塞勒隆制药公司(ACCELERON PHARMA INC.)
阿迪迈博有限责任公司(ADIMAB, LLC)
<120> ALK7结合蛋白及其用途
<130> APH-00625
<140>
<141>
<150> 62/577,038
<151> 2017-10-25
<160> 341
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 1
Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 2
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 3
Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val
1 5 10
<210> 4
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 5
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 5
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaactcct 300
tactacgaca gcagcggata cctagacgta tggggtcagg gtacaatggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 6
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 7
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 7
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 8
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 8
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 9
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 10
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 11
Asp Ala Ser Asn Leu Ala Thr
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 12
Gln Gln Ser Leu Asp Leu Pro Pro Thr
1 5
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 13
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Ala Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Asp Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 14
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 14
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc aggcgagtca ggacattagc aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctacgat gcatccaatt tggcaacagg ggtcccatca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatattg caacatatta ctgtcagcag tccctcgacc tccctcctac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 15
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 15
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 16
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 16
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 17
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 17
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 18
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 19
Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly
1 5
<210> 20
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 20
Asn Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 21
Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
Val
<210> 22
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 22
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 23
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 23
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggaacatct attatagtgg gagcacctac 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300
ggcagatacc aaagcgccac agccgattac tattacggta tggatgtctg gggccaggga 360
acaactgtca ccgtctcctc a 381
<210> 24
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 24
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser
20 25 30
<210> 25
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 25
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 26
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 26
Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 27
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 28
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 29
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 30
Gln Gln Val Phe Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 31
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 31
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Phe Ser Tyr Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 32
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 32
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag caggtcttca gttacccttt cacttttggc 300
ggagggacca aggttgagat caaa 324
<210> 33
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 33
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 34
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 34
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 35
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 35
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 36
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 37
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 38
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 39
Arg Tyr Arg Gly Val Ser Phe Asp Ile
1 5
<210> 40
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 40
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Arg Tyr Arg Gly Val Ser Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 41
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 41
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caggagatac 300
agaggagtgt cattcgacat atggggtcgg ggtacaatgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 42
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 42
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 43
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 43
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 44
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 44
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 45
Trp Gly Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 46
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 46
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 47
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 47
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 48
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 48
Gln Gln Asp Ser Ile Asp Ile Thr
1 5
<210> 49
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 49
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Ser Ile Asp Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 50
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 50
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag caggactcca tcgacatcac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 51
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 51
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 52
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 53
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 53
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 54
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 55
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 55
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 56
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 57
Pro Tyr Gln Ala Arg Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 58
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 58
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Tyr Gln Ala Arg Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 59
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 59
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaccttac 300
caagccagag cctttgatat ttggggtcag ggtacaatgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 60
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 60
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 61
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 61
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 62
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 62
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 63
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 64
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 64
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala
1 5 10
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 65
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 66
Gln Gln Tyr Val Val Ala Pro Ile Thr
1 5
<210> 67
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 67
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Val Val Ala Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 68
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 68
gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagcttct tagcctggta ccagcagaaa 120
cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180
gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240
cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtacgtcg tcgcccctat cacttttggc 300
ggagggacca aggttgagat caaa 324
<210> 69
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 69
Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp
1 5 10 15
Thr Ser Val Ser Ala Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp
20 25 30
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35 40
<210> 70
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 70
gacatccaga tgacccaaag ccctagttcc gtctctgcaa gcgtgggaga tagggtcaca 60
atcacatgta gagcttctca ggggatctct agctggctgg cttggtatca gcagaagccc 120
ggtaaggccc caaagctctt gatatacgcc gcctcttctc ttcaatctgg ggtgccatcc 180
cgcttctcag ggagcggtag cgggaccgat ttcaccctca ctatcagcag cctgcagcct 240
gaagactttg ctacctacta ctgccagcaa gccgcttctt atcctctgac tttcggtggg 300
ggtactaaag tggagattaa a 321
<210> 71
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 71
gatattcaga tgacacagtc acctagcagt ctgagcgcat cagtgggtga tcgagtgaca 60
atcacttgta gagcttccca gtctattagc tcatacctga actggtatca gcaaaagcct 120
gggaaggctc ctaagctgtt gatctatgga gcatctagcc tgcagtccgg cgtgccatcc 180
cgcttcagcg ggagcggctc cgggaccgat tttaccctga caatctctag cctgcagcct 240
gaagattttg caacctacta ctgccagcag gcatacagct tcccctggac attcggaggt 300
ggcataaaag ttgaaatcaa a 321
<210> 72
<400> 72
000
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 73
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 74
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 74
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 75
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 75
Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val
1 5 10
<210> 76
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 76
Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly
1 5 10
<210> 77
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 77
Asn Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 78
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 78
Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 79
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 80
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 80
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 81
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 81
Ala Arg Arg Tyr Arg Gly Val Ser Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 82
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 82
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 83
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 83
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 84
Ala Arg Pro Tyr Gln Ala Arg Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 85
<211> 493
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 85
Met Thr Arg Ala Leu Cys Ser Ala Leu Arg Gln Ala Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ala Glu Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
20 25 30
Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
35 40 45
Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
50 55 60
Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn
65 70 75 80
Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
85 90 95
Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met
100 105 110
Glu Leu Ala Ile Ile Ile Thr Val Pro Val Cys Leu Leu Ser Ile Ala
115 120 125
Ala Met Leu Thr Val Trp Ala Cys Gln Gly Arg Gln Cys Ser Tyr Arg
130 135 140
Lys Lys Lys Arg Pro Asn Val Glu Glu Pro Leu Ser Glu Cys Asn Leu
145 150 155 160
Val Asn Ala Gly Lys Thr Leu Lys Asp Leu Ile Tyr Asp Val Thr Ala
165 170 175
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Leu Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala
180 185 190
Arg Thr Ile Val Leu Gln Glu Ile Val Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu
195 200 205
Val Trp His Gly Arg Trp Cys Gly Glu Asp Val Ala Val Lys Ile Phe
210 215 220
Ser Ser Arg Asp Glu Arg Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln
225 230 235 240
Thr Val Met Leu Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp
245 250 255
Asn Lys Asp Asn Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Glu Tyr
260 265 270
His Glu Gln Gly Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Asn Arg Asn Ile Val Thr
275 280 285
Val Ala Gly Met Ile Lys Leu Ala Leu Ser Ile Ala Ser Gly Leu Ala
290 295 300
His Leu His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala
305 310 315 320
His Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Cys Glu Thr
325 330 335
Cys Ala Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Lys His Asp Ser Ile Leu
340 345 350
Asn Thr Ile Asp Ile Pro Gln Asn Pro Lys Val Gly Thr Lys Arg Tyr
355 360 365
Met Ala Pro Glu Met Leu Asp Asp Thr Met Asn Val Asn Ile Phe Glu
370 375 380
Ser Phe Lys Arg Ala Asp Ile Tyr Ser Val Gly Leu Val Tyr Trp Glu
385 390 395 400
Ile Ala Arg Arg Cys Ser Val Gly Gly Ile Val Glu Glu Tyr Gln Leu
405 410 415
Pro Tyr Tyr Asp Met Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu Glu Met Arg
420 425 430
Lys Val Val Cys Asp Gln Lys Phe Arg Pro Ser Ile Pro Asn Gln Trp
435 440 445
Gln Ser Cys Glu Ala Leu Arg Val Met Gly Arg Ile Met Arg Glu Cys
450 455 460
Trp Tyr Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys
465 470 475 480
Thr Ile Ser Gln Leu Cys Val Lys Glu Asp Cys Lys Ala
485 490
<210> 86
<211> 493
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 86
Met Thr Pro Ala Arg Arg Ser Ala Leu Ser Leu Ala Leu Leu Leu Val
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ser Asp Leu Ala Ala Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
20 25 30
Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
35 40 45
Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ser Lys Ser Cys Val
50 55 60
Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn
65 70 75 80
Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
85 90 95
Gln His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asp Ala Pro Arg Leu Gly Pro Thr
100 105 110
Glu Leu Thr Val Val Ile Thr Val Pro Val Cys Leu Leu Ser Ile Ala
115 120 125
Ala Met Leu Thr Ile Trp Ala Cys Gln Asp Arg Gln Cys Thr Tyr Arg
130 135 140
Lys Thr Lys Arg His Asn Val Glu Glu Pro Leu Ala Glu Tyr Ser Leu
145 150 155 160
Val Asn Ala Gly Lys Thr Leu Lys Asp Leu Ile Tyr Asp Ala Thr Ala
165 170 175
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Pro Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala
180 185 190
Arg Thr Ile Val Leu Gln Glu Ile Val Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu
195 200 205
Val Trp His Gly Arg Trp Cys Gly Glu Asp Val Ala Val Lys Ile Phe
210 215 220
Ser Ser Arg Asp Glu Arg Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln
225 230 235 240
Thr Val Met Leu Arg His Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp
245 250 255
Asn Lys Asp Asn Gly Thr Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Glu Tyr
260 265 270
His Glu Gln Gly Ser Leu Tyr Asp Tyr Leu Asn Arg Asn Ile Val Thr
275 280 285
Val Ala Gly Met Val Lys Leu Ala Leu Ser Ile Ala Ser Gly Leu Ala
290 295 300
His Leu His Met Glu Ile Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala
305 310 315 320
His Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Cys Asp Thr
325 330 335
Cys Ala Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala Val Lys His Asp Ser Ile Met
340 345 350
Asn Thr Ile Asp Ile Pro Gln Asn Pro Lys Val Gly Thr Lys Arg Tyr
355 360 365
Met Ala Pro Glu Met Leu Asp Asp Thr Met Asn Val Asn Ile Phe Glu
370 375 380
Ser Phe Lys Arg Ala Asp Ile Tyr Ser Val Gly Leu Val Tyr Trp Glu
385 390 395 400
Ile Ala Arg Arg Cys Ser Val Gly Gly Leu Val Glu Glu Tyr Gln Leu
405 410 415
Pro Tyr Tyr Asp Met Val Pro Ser Asp Pro Ser Ile Glu Glu Met Arg
420 425 430
Lys Val Val Cys Asp Gln Lys Leu Arg Pro Asn Leu Pro Asn Gln Trp
435 440 445
Gln Ser Cys Glu Ala Leu Arg Val Met Gly Arg Ile Met Arg Glu Cys
450 455 460
Trp Tyr Ala Asn Gly Ala Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Val Lys Lys
465 470 475 480
Thr Ile Ser Gln Leu Cys Val Lys Glu Asp Cys Lys Ala
485 490
<210> 87
<400> 87
000
<210> 88
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 88
Val Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 89
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 89
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 90
Pro Ser Tyr Gln Pro Ile Tyr
1 5
<210> 91
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 91
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Val Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Pro Ser Tyr Gln Pro Ile Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 92
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 92
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttttcg gtgtatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggaa gtggtgatag cacagtgtac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caagccttct 300
taccaaccaa tatactgggg acagggtaca ttggtcaccg tctcctca 348
<210> 93
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 93
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
20 25 30
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 94
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 95
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 96
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 97
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 97
Gln Gln Ala Ala Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 98
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 98
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Ala Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 99
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 99
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gcagccagtt accctctcac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 100
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 100
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 101
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 101
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 102
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 102
Ser Ser Ala Ile Gly
1 5
<210> 103
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 103
Gly Ile Trp Pro Ile Phe Gly Thr Ala Leu Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 104
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 104
Asp Pro Arg Glu Tyr Ile His Val Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 105
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 105
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Trp Pro Ile Phe Gly Thr Ala Leu Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Arg Glu Tyr Ile His Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 106
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 106
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agcagtgcta tcgggtgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctggccta tctttggtac agcactttac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatcca 300
agagaatata tccacgtatt cgacatatgg ggtcagggta caatggtcac cgtctcctca 360
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 107
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 108
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 108
Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 109
Gln Gln Ala Tyr Ser Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 110
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 110
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Tyr Ser Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Ile Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 111
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 111
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatggt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcagcaa gcatacagtt tcccttggac ttttggcgga 300
gggatcaagg ttgagatcaa a 321
<210> 112
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 112
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 113
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 113
Phe Gly Gly Gly Ile Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 114
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 114
Gly Gln Ala Ile Ser
1 5
<210> 115
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 115
Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 116
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 116
Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val
1 5 10
<210> 117
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 117
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Gln
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 118
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 118
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc ggtcaggcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctt cgtttggtac agcacggtac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaactcct 300
tactacgaca gcagcggata cctagacgta tggggtcagg gtacaatggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 119
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 119
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 120
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 120
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 121
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 121
Gln Ala Ser His Asp Ile Asp Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 122
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 122
Tyr Ala Ser Asn Leu Lys Thr
1 5
<210> 123
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 123
Gln Gln Ser Arg Ala Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 124
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 124
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser His Asp Ile Asp Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Lys Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Ala Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 125
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ala Tyr
1 5
<210> 126
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 126
Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 127
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 127
Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
Val
<210> 128
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 128
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ala Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 129
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 129
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtgctt actactgggc gtggatccgc 120
cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct atttgagtgg gagcaccact 180
tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300
ggcagatacc aaagcaggtc gccggattac tattacggta tggatgtctg gggccaggga 360
acaacggtca ccgtctcctc a 381
<210> 130
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 130
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser
20 25
<210> 131
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 131
Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
1 5 10 15
Gly
<210> 132
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 132
Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 133
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 133
Gly Ala Phe Ser Arg Ala Asn
1 5
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 134
Gln Gln Leu Val Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 135
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 135
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Asn Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Val Ser Tyr Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 136
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 136
gagatagtct tgacccagtc accaggcacc cttagcttgt ctcccgggga acgcgccaca 60
ctcagctgta aagcctctca gtcagtttct agttcctacc tcgcttggta tcaacaaaag 120
cccggacaag caccaaggct gttgatctac ggagctttca gtcgcgcaaa tggcattccc 180
gaccgattct ctggcagtgg tagtggcacc gacttcactc tcacaatttc taggttggaa 240
cctgaggact ttgctgtgta ctactgtcaa caactggttt cttatccctt tacattcggt 300
ggcggcacaa aagtcgagat taaa 324
<210> 137
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 137
Gly Tyr Asn Met His
1 5
<210> 138
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 138
Asn Pro Asn Ser Gly Trp
1 5
<210> 139
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 139
Asp Pro Val Gly Ala Arg Tyr Glu Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 140
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala Gly Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Asn Ser Gly Trp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Val Ser Ala Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Val Gly Ala Arg Tyr Glu Val Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 141
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 141
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcgct ggctacaata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg ggtgggaatt atcaacccta acagtggttg gacaaactat 180
gcacagaagt tccagggcag ggtcacgatg accagggaca cgtccgtcag cgcagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagaccct 300
gtcggagcaa gatacgaggt tttcgattac tggggacagg gtacattggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 142
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 142
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ala
20 25 30
<210> 143
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 143
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val Gly Ile Ile
1 5 10 15
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 144
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 145
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 145
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 146
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 146
Ser Ala Phe Thr Arg Ala Ser
1 5
<210> 147
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 147
Gln Gln Ala Trp Ala Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 148
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 148
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Phe Thr Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Trp Ala Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 149
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 149
gaaatcgtga tgacccaatc acctgccact ctgtctgtta gccctgggga acgggccacc 60
ctcagttgta gggccagtca gagtgttagt tcagctttgg cttggtatca gcagaagccc 120
ggacaggccc caaggctgct gatctactct gctttcaccc gcgcaagcgg catccccgca 180
cgctttagcg gctccggaag cggcaccgag tttactctta ctatttcttc tttgcagagt 240
gaggattttg ccgtgtacta ctgccagcag gcctgggcat ttccactcac tttcgggggc 300
gggaccaagg tcgaaatcaa g 321
<210> 150
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 150
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 151
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 151
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 152
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 152
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Pro Ser Tyr Gln Pro Ile Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 153
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 153
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 154
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 154
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 155
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 155
Ala Lys Pro Ser Tyr Gln Pro Ile Tyr
1 5
<210> 156
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 156
Asn Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 157
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 157
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 158
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 158
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc aactatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatcca 300
agagaatata tccacgtatt cgacatatgg ggtcagggta caatggtcac cgtctcctca 360
<210> 159
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 159
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Arg Glu Tyr Ile His Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 160
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 160
Gly Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 161
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 161
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 162
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 162
Ala Arg Asp Pro Arg Glu Tyr Ile His Val Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 163
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 163
Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 164
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 164
Asp Pro Val Gly Ala Arg Tyr Glu Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 165
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 165
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagc atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagaccct 300
gtcggagcaa gatacgaggt tttcgattac tggggacagg gtacattggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 166
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 166
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Val Gly Ala Arg Tyr Glu Val Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 167
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 167
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 168
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 168
Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 169
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 169
Gln Gln Ala Asn Thr Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 170
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 170
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatagc gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag gccaatacct tccctctcac ttttggcgga 300
gggaccaagg ttgagatcaa a 321
<210> 171
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 171
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Thr Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 172
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 172
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 173
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 173
Ser Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 174
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 174
Ala Arg Asp Pro Val Gly Ala Arg Tyr Glu Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 175
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 175
Phe Thr Phe Ser Val Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 176
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 176
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 177
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 177
Ala Lys Pro Ser Tyr Gln Pro Ile Tyr
1 5
<210> 178
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 178
Gly Thr Phe Ser Ser Ser Ala Ile Gly
1 5
<210> 179
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 179
Gly Ile Trp Pro Ile Phe Gly Thr Ala Leu Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 180
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 180
Ala Arg Asp Pro Arg Glu Tyr Ile His Val Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 181
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 181
Gly Thr Phe Ser Gly Gln Ala Ile Ser
1 5
<210> 182
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 182
Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 183
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 183
Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val
1 5 10
<210> 184
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 184
Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ala Tyr Tyr Trp Ala
1 5 10
<210> 185
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 185
Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 186
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 186
Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 187
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 187
Tyr Thr Phe Ala Gly Tyr Asn Met His
1 5
<210> 188
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 188
Ile Ile Asn Pro Asn Ser Gly Trp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 189
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 189
Ala Arg Asp Pro Val Gly Ala Arg Tyr Glu Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 190
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 190
Met Gly Trp Ser Cys Ile Met Leu Phe Leu Ala Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile
35 40 45
Ser Ser Ser Ala Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys
85 90 95
Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp
115 120 125
Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
370 375 380
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 191
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 191
Met Gly Trp Ser Cys Ile Met Leu Phe Leu Ala Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu
20 25 30
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val
35 40 45
Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Asn Gly Ile Pro Asp
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Val
100 105 110
Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 192
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 192
Met Gly Trp Ser Cys Ile Met Leu Phe Leu Ala Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe
35 40 45
Ser Gly Gln Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala
65 70 75 80
Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp
115 120 125
Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 193
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 193
Met Gly Trp Ser Cys Ile Met Leu Phe Leu Ala Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
20 25 30
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser His Asp Ile
35 40 45
Asp Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
50 55 60
Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Lys Thr Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Ala
100 105 110
Ser Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
115 120 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
130 135 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145 150 155 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
195 200 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
210 215 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 194
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 194
Met Gly Trp Ser Cys Ile Met Leu Phe Leu Ala Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile
35 40 45
Ser Ser Ser Ala Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys
85 90 95
Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp
115 120 125
Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
370 375 380
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 195
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 195
Met Gly Trp Ser Cys Ile Met Leu Phe Leu Ala Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe
35 40 45
Ser Gly Gln Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala
65 70 75 80
Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp
115 120 125
Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 196
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 196
Met Gly Trp Ser Cys Ile Met Leu Phe Leu Ala Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile
35 40 45
Ser Ser Ser Ala Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys
85 90 95
Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp
115 120 125
Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
370 375 380
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 197
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 197
Met Gly Trp Ser Cys Ile Met Leu Phe Leu Ala Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe
35 40 45
Ser Gly Gln Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala
65 70 75 80
Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp
115 120 125
Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 198
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 198
gacatccaga tgacacagtc ccctagcagc ttgtcagcct cagtgggcga tagagtgacc 60
atcacctgtc aagccagcca tgatatagac aactatctca attggtacca gcagaaacca 120
ggcaaggcac caaagctcct gatctattac gcctcaaacc ttaagaccgg cgtcccaagc 180
cggttttcag gcagcggcag cgggacagat ttcaccttca caatttcatc actgcaacct 240
gaggatatag ccacttacta ttgtcagcag agcagagcca gcccccctac cttcggcggc 300
ggtaccaaag ttgaaatcaa g 321
<210> 199
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 199
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc caagccttct 300
taccaaccaa tatactgggg acagggtaca ttggtcaccg tctcctca 348
<210> 200
<211> 1431
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 200
atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60
ctgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120
tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt agtgcttact actgggcgtg gatccgccag 180
cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatt tgagtgggag caccacttac 240
aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tccgtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 300
ctgaagctga gttctgtgac cgccgcagac acggcggtgt actactgcgc cagagacggc 360
agataccaaa gcaggtcgcc ggattactat tacggtatgg atgtctgggg ccagggaaca 420
actgtcaccg tctcctcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 480
tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 540
gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 600
gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tcgtgaccgt gccctccagc 660
agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 720
gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 780
cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 840
atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 900
gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 960
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1020
gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 1080
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1140
cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 1200
ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1260
aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctatag caagctcacc 1320
gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1380
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtccc cgggtaaatg a 1431
<210> 201
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 201
atgggttggt cttgcatcat gctgtttctg gcagccaccg caaccggagc tcactctgag 60
atcgtactca cacaaagccc tggaactctc agcctgagtc ctggcgagag agccacactg 120
tcctgcaaag ctagtcagtc tgtgtcatct tcatacctcg cctggtatca gcagaagccc 180
ggccaggccc cccgattgct gatctacggc gctttttccc gggctaatgg catccctgac 240
aggttttccg gttctgggtc tggtaccgat ttcaccctca caatctcccg gctggagcca 300
gaagatttcg cagtgtatta ttgtcagcag ctggtgagtt acccatttac ctttggaggc 360
ggtaccaagg tagaaatcaa gcgtactgtg gccgcacctt ctgtttttat tttcccccca 420
agtgatgaac agctgaaaag tgggactgcc tcagtggtgt gtcttctgaa taatttctac 480
cccagggagg ctaaagtgca atggaaggtg gacaacgctt tgcagtctgg aaactcacag 540
gagagtgtta ccgagcagga ttccaaggac tcaacatata gtctttccag cactcttaca 600
ctgtctaagg ccgactatga aaaacacaag gtctacgcct gcgaggtgac tcaccagggc 660
ctgtcctccc ccgtgaccaa atcttttaac cgtggcgagt gttga 705
<210> 202
<211> 1413
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 202
atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc 120
tgcaaggctt ctggaggcac cttcagcggt caggctatca gctgggtgcg acaggcccct 180
ggacaagggc ttgagtggat gggagggatc atcccttcgt ttggtacagc acggtacgca 240
cagaagttcc agggcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300
gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gcggtgtact actgcgccag aactccttac 360
tacgacagca gcggatacct agacgtatgg ggtcagggta caatggtcac cgtctcctca 420
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 480
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 600
ggactctact ccctcagcag cgtcgtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 660
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 720
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 780
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 900
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 960
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1020
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1200
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380
cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa tga 1413
<210> 203
<211> 702
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 203
atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactccgac 60
atccagatga cacagtcccc tagcagcttg tcagcctcag tgggcgatag agtgaccatc 120
acctgtcaag ccagccatga tatagacaac tatctcaatt ggtaccagca gaaaccaggc 180
aaggcaccaa agctcctgat ctattacgcc tcaaacctta agaccggcgt cccaagccgg 240
ttttcaggca gcggcagcgg gacagatttc accttcacaa tttcatcact gcaacctgag 300
gatatagcca cttactattg tcagcagagc agagccagcc cccctacctt cggcggcggt 360
accaaagttg aaatcaagag ggcagatgcc gcccccacag tgtctatttt tcctccatct 420
agcgaacagt tgacttccgg tggagcatcc gtggtgtgtt ttttgaacaa tttttaccct 480
aaggacatta atgtcaaatg gaaaatagac gggtcagaac ggcagaacgg cgtgctgaac 540
agttggaccg atcaggactc aaaggactct acctactcaa tgagctccac actgaccttg 600
accaaagacg agtacgaacg acataacagc tatacatgtg aggctaccca taagacatcc 660
acttccccca tcgtgaaatc cttcaaccgt aacgagtgct ga 702
<210> 204
<211> 1431
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 204
atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60
ctgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120
tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt agtgcttact actgggcgtg gatccgccag 180
cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatt tgagtgggag caccacttac 240
aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tccgtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 300
ctgaagctga gttctgtgac cgccgcagac acggcggtgt actactgcgc cagagacggc 360
agataccaaa gcaggtcgcc ggattactat tacggtatgg atgtctgggg ccagggaaca 420
acggtcaccg tctcctcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 480
tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 540
gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 600
gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tcgtgaccgt gccctccagc 660
agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 720
gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 780
cctgaagccg ctgggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 840
atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 900
gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 960
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1020
gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 1080
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1140
cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 1200
ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1260
aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctatag caagctcacc 1320
gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1380
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtccc cgggtaaatg a 1431
<210> 205
<211> 1413
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 205
atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc 120
tgcaaggctt ctggaggcac cttcagcggt caggctatca gctgggtgcg acaggcccct 180
ggacaagggc ttgagtggat gggagggatc atcccttcgt ttggtacagc acggtacgca 240
cagaagttcc agggcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300
gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gcggtgtact actgcgccag aactccttac 360
tacgacagca gcggatacct agacgtatgg ggtcagggta caatggtcac cgtctcctca 420
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 480
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 600
ggactctact ccctcagcag cgtcgtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 660
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 720
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgctggggga 780
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 900
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 960
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1020
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1200
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380
cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa tga 1413
<210> 206
<211> 1431
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 206
atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60
ctgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120
tgcactgtct ctggtggctc catcagcagt agtgcttact actgggcgtg gatccgccag 180
cccccaggga aggggctgga gtggattggg agtatctatt tgagtgggag caccacttac 240
aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tccgtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 300
ctgaagctga gttctgtgac cgccgcagac acggcggtgt actactgcgc cagagacggc 360
agataccaaa gcaggtcgcc ggattactat tacggtatgg atgtctgggg ccagggaaca 420
acggtcaccg tctcctcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 480
tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 540
gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 600
gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tcgtgaccgt gccctccagc 660
agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 720
gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 780
cctgaagccg ctgggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 840
atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 900
gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 960
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1020
gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cggagccccc 1080
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1140
cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 1200
ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1260
aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctatag caagctcacc 1320
gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1380
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtccc cgggtaaatg a 1431
<210> 207
<211> 1413
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 207
atgggatgga gctgtatcat gctcttcttg gcagcaacag ctacaggcgc gcactcccag 60
gtgcagctgg tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg ggtcctcggt gaaggtctcc 120
tgcaaggctt ctggaggcac cttcagcggt caggctatca gctgggtgcg acaggcccct 180
ggacaagggc ttgagtggat gggagggatc atcccttcgt ttggtacagc acggtacgca 240
cagaagttcc agggcagagt cacgattacc gcggacgaat ccacgagcac agcctacatg 300
gagctgagca gcctgagatc tgaggacacg gcggtgtact actgcgccag aactccttac 360
tacgacagca gcggatacct agacgtatgg ggtcagggta caatggtcac cgtctcctca 420
gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 480
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 600
ggactctact ccctcagcag cgtcgtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 660
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 720
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgctggggga 780
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 900
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 960
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1020
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcggagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1140
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1200
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380
cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa tga 1413
<210> 208
<211> 92
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 208
Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn
1 5 10 15
Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr
20 25 30
Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Leu
35 40 45
Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu
50 55 60
Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr
65 70 75 80
Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met Glu
85 90
<210> 209
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 209
Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser
1 5 10 15
<210> 210
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 210
Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn
1 5 10 15
<210> 211
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 211
Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe
1 5 10 15
<210> 212
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 212
Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr
1 5 10 15
<210> 213
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 213
Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
<210> 214
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 214
Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln
1 5 10 15
<210> 215
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 215
Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr
1 5 10 15
<210> 216
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 216
Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu
1 5 10 15
<210> 217
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 217
Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly
1 5 10 15
<210> 218
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 218
Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala
1 5 10 15
<210> 219
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 219
Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys Ala Ala Thr Asp Phe Cys
1 5 10 15
<210> 220
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 220
Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Ala Ala Thr Lys Thr Glu
1 5 10 15
<210> 221
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 221
Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Ala Gly Pro Lys Leu Gly
1 5 10 15
<210> 222
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 222
Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ala Ala Ser Cys Val Ser
1 5 10 15
<210> 223
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 223
Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ala Ala Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
<210> 224
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 224
Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Ala Ala Gln Val Ile Lys
1 5 10 15
<210> 225
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 225
Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Ala Ala Thr Glu Gly Ala
1 5 10 15
<210> 226
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 226
Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Ala Ala Thr Asn Gly Lys
1 5 10 15
<210> 227
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 227
Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Ala Ala Glu Leu Asn Ala
1 5 10 15
<210> 228
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 228
Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Ala Ala Gly Ala Cys Trp
1 5 10 15
<210> 229
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 229
Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His
1 5 10 15
<210> 230
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 230
Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser
1 5 10 15
<210> 231
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 231
Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
1 5 10 15
<210> 232
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 232
Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr
1 5 10 15
<210> 233
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 233
Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu
1 5 10 15
<210> 234
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 234
His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp
1 5 10 15
<210> 235
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 235
Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn
1 5 10 15
<210> 236
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 236
Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His
1 5 10 15
<210> 237
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 237
Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val
1 5 10 15
<210> 238
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 238
Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu
1 5 10 15
<210> 239
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 239
Cys Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser
1 5 10 15
Cys
<210> 240
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 240
Cys Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn
1 5 10 15
Cys
<210> 241
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 241
Cys Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe
1 5 10 15
Cys
<210> 242
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 242
Cys Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr
1 5 10 15
Cys
<210> 243
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 243
Cys Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Cys
<210> 244
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 244
Cys Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln
1 5 10 15
Cys
<210> 245
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 245
Cys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr
1 5 10 15
Cys
<210> 246
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 246
Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu
1 5 10 15
Cys
<210> 247
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 247
Cys Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly
1 5 10 15
Cys
<210> 248
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 248
Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala
1 5 10 15
Cys
<210> 249
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 249
Cys Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser
1 5 10 15
Asn Phe Thr Cys
20
<210> 250
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (19)..(19)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 250
Cys Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn
1 5 10 15
Phe Thr Cys Cys
20
<210> 251
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)..(18)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 251
Cys Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe
1 5 10 15
Thr Cys Gln Cys
20
<210> 252
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 252
Cys Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr
1 5 10 15
Cys Gln Thr Cys
20
<210> 253
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 253
Cys Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Gln Thr Glu Cys
20
<210> 254
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 254
Cys Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln
1 5 10 15
Thr Glu Gly Cys
20
<210> 255
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 255
Cys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr
1 5 10 15
Glu Gly Ala Cys
20
<210> 256
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (19)..(19)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 256
Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu
1 5 10 15
Gly Ala Cys Cys
20
<210> 257
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)..(18)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 257
Cys Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly
1 5 10 15
Ala Cys Trp Cys
20
<210> 258
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 258
Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala
1 5 10 15
Cys Trp Ala Cys
20
<210> 259
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 259
Cys Thr Lys Thr Cys Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Thr Ala
20
<210> 260
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (19)..(19)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 260
Cys Cys Trp Ala Cys Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile
1 5 10 15
Lys Ser Cys Val Ser Leu
20
<210> 261
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(17)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)..(22)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 261
Cys Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys
1 5 10 15
Cys Phe Thr Asp Phe Cys
20
<210> 262
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 262
Cys Leu Ser Pro Cys Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser
1 5 10 15
Asn Phe Thr Cys Gln Thr
20
<210> 263
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)..(19)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 263
Cys Asn Ala Gln Cys Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr
1 5 10 15
Glu Cys Cys Phe Thr Asp
20
<210> 264
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 264
Cys Ser Val Met Cys Thr Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys
1 5 10 15
Val Ser Leu Pro Glu Leu
20
<210> 265
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 265
Cys Cys Phe Thr Cys Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr
1 5 10 15
Ala Ser Pro Asn Ala Pro
20
<210> 266
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 266
Cys Val Met Leu Cys Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
1 5 10 15
Ser Leu Pro Glu Leu Asn
20
<210> 267
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 267
Cys Glu Gln Val Cys Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala
1 5 10 15
Gln Val Phe Cys His Ser
20
<210> 268
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 268
Cys Thr Asn Gly Cys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro
1 5 10 15
Glu Leu Asn Ala Gln Val
20
<210> 269
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 269
Cys Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Pro Gly Cys Asp Ser Ser
1 5 10 15
Asn Phe Thr Cys Gln Cys
20
<210> 270
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (19)..(19)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 270
Cys Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Pro Gly Asp Ser Ser Asn
1 5 10 15
Phe Thr Cys Gln Thr Cys
20
<210> 271
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)..(18)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 271
Cys Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Pro Gly Ser Ser Asn Phe
1 5 10 15
Thr Cys Gln Thr Glu Cys
20
<210> 272
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 272
Cys Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Pro Gly Ser Asn Phe Thr
1 5 10 15
Cys Gln Thr Glu Gly Cys
20
<210> 273
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 273
Cys Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Pro Gly Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Gln Thr Glu Gly Ala Cys
20
<210> 274
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 274
Cys Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Pro Gly Phe Thr Cys Gln
1 5 10 15
Thr Glu Gly Ala Cys Cys
20
<210> 275
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 275
Cys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Pro Gly Thr Cys Gln Thr
1 5 10 15
Glu Gly Ala Cys Trp Cys
20
<210> 276
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (19)..(19)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 276
Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Pro Gly Cys Gln Thr Glu
1 5 10 15
Gly Ala Cys Trp Ala Cys
20
<210> 277
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)..(18)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 277
Cys Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Pro Gly Gln Thr Glu Gly
1 5 10 15
Ala Cys Trp Ala Ser Cys
20
<210> 278
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 278
Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Pro Gly Thr Glu Gly Ala
1 5 10 15
Cys Trp Ala Ser Val Cys
20
<210> 279
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (19)..(19)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (25)..(25)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 279
Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn
1 5 10 15
Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys
20 25
<210> 280
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)..(18)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 280
Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe
1 5 10 15
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp
20 25
<210> 281
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (23)..(23)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 281
Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr
1 5 10 15
Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
20 25
<210> 282
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)..(22)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 282
Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser
20 25
<210> 283
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 283
Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln
1 5 10 15
Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val
20 25
<210> 284
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (14)..(14)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 284
Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr
1 5 10 15
Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met
20 25
<210> 285
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (19)..(19)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 285
Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu
1 5 10 15
Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu
20 25
<210> 286
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (19)..(19)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (25)..(25)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 286
Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn
1 5 10 15
Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys
20 25
<210> 287
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)..(18)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 287
Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe
1 5 10 15
Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp
20 25
<210> 288
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (23)..(23)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 288
Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr
1 5 10 15
Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala
20 25
<210> 289
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 289
Gly Gly Ser Gly Gly
1 5
<210> 290
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 290
Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
20 25
<210> 291
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 291
Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Gly Gly Ser Gly Gly Asn
1 5 10 15
Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
20 25
<210> 292
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 292
Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
20 25
<210> 293
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 293
Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val
20 25
<210> 294
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 294
Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu
20 25
<210> 295
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 295
Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu
20 25
<210> 296
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 296
Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu
20 25
<210> 297
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 297
Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu
20 25
<210> 298
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 298
Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu
20 25
<210> 299
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 299
Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Gly Gly Ser Gly Gly
1 5 10 15
Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu
20 25
<210> 300
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 300
Cys Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys
1 5 10 15
Cys Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser
20 25 30
Cys
<210> 301
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 301
Cys Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys
1 5 10 15
Cys Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu
20 25 30
Cys
<210> 302
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 302
Cys Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr
1 5 10 15
Cys Asn Gly Lys Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu
20 25 30
Cys
<210> 303
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)..(22)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 303
Cys Asn Phe Thr Cys Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met
1 5 10 15
Cys Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe
20 25 30
Cys
<210> 304
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)..(23)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 304
Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Cys Asn Asn
1 5 10 15
Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Cys
20 25
<210> 305
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 305
Cys Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Cys Glu Gln
1 5 10 15
Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Cys
20 25
<210> 306
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 306
Cys Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Cys Ala Ser
1 5 10 15
Pro Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met Glu Cys
20 25
<210> 307
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 307
Cys Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Cys Cys Asn
1 5 10 15
Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Cys
20 25
<210> 308
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(5)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (18)..(18)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 308
Cys Thr Glu Cys Cys Phe Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His
1 5 10 15
Cys Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala
20 25 30
Cys
<210> 309
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> Cys-乙酰氨基甲基
<400> 309
Cys Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala
1 5 10 15
Cys Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln
20 25 30
Cys
<210> 310
<211> 18
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 310
Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val
1 5 10 15
Thr Lys
<210> 311
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 311
Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys Glu Gln
1 5 10
<210> 312
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 312
Leu Pro Thr Ala Ser Pro Asn Ala Pro Lys
1 5 10
<210> 313
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 313
Val Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn
1 5 10 15
Asn Val Thr Lys
20
<210> 314
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 314
Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser
1 5 10
<210> 315
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 315
Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr
1 5 10
<210> 316
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 316
Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr
1 5 10
<210> 317
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 317
Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro
1 5 10
<210> 318
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 318
Leu Ser Pro Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu
1 5 10
<210> 319
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 319
Gln Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn
1 5
<210> 320
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 320
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ala Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 321
<211> 1377
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 321
atgcagctgc agctgcagga gtcgggccca ggactggtga agccttcgga gaccctgtcc 60
ctcacctgca ctgtctctgg tggctccatc agcagtagtg cttactactg ggcgtggatc 120
cgccagcccc cagggaaggg gctggagtgg attgggagta tctatttgag tgggagcacc 180
acttacaacc cgtccctcaa gagtcgagtc accatatccg tagacacgtc caagaaccag 240
ttctccctga agctgagttc tgtgaccgcc gcagacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300
gacggcagat accaaagcag gtcgccggat tactattacg gtatggatgt ctggggccag 360
ggaacaactg tcaccgtctc ctcagcctcc accaagggcc catcggtctt ccccctggca 420
ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt caaggactac 480
ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc 540
ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtcgt gaccgtgccc 600
tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc 660
aaggtggaca agagagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 720
ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 780
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 840
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 900
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 960
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1020
gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1080
accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1140
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1200
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag 1260
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1320
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtccccggg taaatga 1377
<210> 322
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 322
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Asn Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Val Ser Tyr Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 323
<211> 651
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 323
atggagatcg tactcacaca aagccctgga actctcagcc tgagtcctgg cgagagagcc 60
acactgtcct gcaaagctag tcagtctgtg tcatcttcat acctcgcctg gtatcagcag 120
aagcccggcc aggccccccg attgctgatc tacggcgctt tttcccgggc taatggcatc 180
cctgacaggt tttccggttc tgggtctggt accgatttca ccctcacaat ctcccggctg 240
gagccagaag atttcgcagt gtattattgt cagcagctgg tgagttaccc atttaccttt 300
ggaggcggta ccaaggtaga aatcaagcgt actgtggccg caccttctgt ttttattttc 360
cccccaagtg atgaacagct gaaaagtggg actgcctcag tggtgtgtct tctgaataat 420
ttctacccca gggaggctaa agtgcaatgg aaggtggaca acgctttgca gtctggaaac 480
tcacaggaga gtgttaccga gcaggattcc aaggactcaa catatagtct ttccagcact 540
cttacactgt ctaaggccga ctatgaaaaa cacaaggtct acgcctgcga ggtgactcac 600
cagggcctgt cctcccccgt gaccaaatct tttaaccgtg gcgagtgttg a 651
<210> 324
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 324
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Gln
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 325
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 325
atgcaggtgc agctggtgca gtctggggct gaggtgaaga agcctgggtc ctcggtgaag 60
gtctcctgca aggcttctgg aggcaccttc agcggtcagg ctatcagctg ggtgcgacag 120
gcccctggac aagggcttga gtggatggga gggatcatcc cttcgtttgg tacagcacgg 180
tacgcacaga agttccaggg cagagtcacg attaccgcgg acgaatccac gagcacagcc 240
tacatggagc tgagcagcct gagatctgag gacacggcgg tgtactactg cgccagaact 300
ccttactacg acagcagcgg atacctagac gtatggggtc agggtacaat ggtcaccgtc 360
tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtc gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtccccg ggtaaatga 1359
<210> 326
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 326
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser His Asp Ile Asp Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Lys Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Ala Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 327
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 327
atggacatcc agatgacaca gtcccctagc agcttgtcag cctcagtggg cgatagagtg 60
accatcacct gtcaagccag ccatgatata gacaactatc tcaattggta ccagcagaaa 120
ccaggcaagg caccaaagct cctgatctat tacgcctcaa accttaagac cggcgtccca 180
agccggtttt caggcagcgg cagcgggaca gatttcacct tcacaatttc atcactgcaa 240
cctgaggata tagccactta ctattgtcag cagagcagag ccagcccccc taccttcggc 300
ggcggtacca aagttgaaat caagagggca gatgccgccc ccacagtgtc tatttttcct 360
ccatctagcg aacagttgac ttccggtgga gcatccgtgg tgtgtttttt gaacaatttt 420
taccctaagg acattaatgt caaatggaaa atagacgggt cagaacggca gaacggcgtg 480
ctgaacagtt ggaccgatca ggactcaaag gactctacct actcaatgag ctccacactg 540
accttgacca aagacgagta cgaacgacat aacagctata catgtgaggc tacccataag 600
acatccactt cccccatcgt gaaatccttc aaccgtaacg agtgctga 648
<210> 328
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 328
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ala Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 329
<211> 1377
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 329
atgcagctgc agctgcagga gtcgggccca ggactggtga agccttcgga gaccctgtcc 60
ctcacctgca ctgtctctgg tggctccatc agcagtagtg cttactactg ggcgtggatc 120
cgccagcccc cagggaaggg gctggagtgg attgggagta tctatttgag tgggagcacc 180
acttacaacc cgtccctcaa gagtcgagtc accatatccg tagacacgtc caagaaccag 240
ttctccctga agctgagttc tgtgaccgcc gcagacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300
gacggcagat accaaagcag gtcgccggat tactattacg gtatggatgt ctggggccag 360
ggaacaacgg tcaccgtctc ctcagcctcc accaagggcc catcggtctt ccccctggca 420
ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt caaggactac 480
ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc 540
ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtcgt gaccgtgccc 600
tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc 660
aaggtggaca agagagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 720
ccagcacctg aagccgctgg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 780
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 840
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 900
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 960
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1020
gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1080
accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1140
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1200
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag 1260
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1320
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtccccggg taaatga 1377
<210> 330
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 330
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Gln
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 331
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 331
atgcaggtgc agctggtgca gtctggggct gaggtgaaga agcctgggtc ctcggtgaag 60
gtctcctgca aggcttctgg aggcaccttc agcggtcagg ctatcagctg ggtgcgacag 120
gcccctggac aagggcttga gtggatggga gggatcatcc cttcgtttgg tacagcacgg 180
tacgcacaga agttccaggg cagagtcacg attaccgcgg acgaatccac gagcacagcc 240
tacatggagc tgagcagcct gagatctgag gacacggcgg tgtactactg cgccagaact 300
ccttactacg acagcagcgg atacctagac gtatggggtc agggtacaat ggtcaccgtc 360
tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtc gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgct 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtccccg ggtaaatga 1359
<210> 332
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 332
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ala Tyr Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Leu Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Gly Arg Tyr Gln Ser Arg Ser Pro Asp Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 333
<211> 1377
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 333
atgcagctgc agctgcagga gtcgggccca ggactggtga agccttcgga gaccctgtcc 60
ctcacctgca ctgtctctgg tggctccatc agcagtagtg cttactactg ggcgtggatc 120
cgccagcccc cagggaaggg gctggagtgg attgggagta tctatttgag tgggagcacc 180
acttacaacc cgtccctcaa gagtcgagtc accatatccg tagacacgtc caagaaccag 240
ttctccctga agctgagttc tgtgaccgcc gcagacacgg cggtgtacta ctgcgccaga 300
gacggcagat accaaagcag gtcgccggat tactattacg gtatggatgt ctggggccag 360
ggaacaacgg tcaccgtctc ctcagcctcc accaagggcc catcggtctt ccccctggca 420
ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca gcggccctgg gctgcctggt caaggactac 480
ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc 540
ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc tactccctca gcagcgtcgt gaccgtgccc 600
tccagcagct tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc 660
aaggtggaca agagagttga gcccaaatct tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 720
ccagcacctg aagccgctgg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 780
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 840
gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 900
aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 960
caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctcgga 1020
gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1080
accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1140
aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1200
aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctatagcaag 1260
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1320
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtccccggg taaatga 1377
<210> 334
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 334
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Gln
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ser Phe Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 335
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<400> 335
atgcaggtgc agctggtgca gtctggggct gaggtgaaga agcctgggtc ctcggtgaag 60
gtctcctgca aggcttctgg aggcaccttc agcggtcagg ctatcagctg ggtgcgacag 120
gcccctggac aagggcttga gtggatggga gggatcatcc cttcgtttgg tacagcacgg 180
tacgcacaga agttccaggg cagagtcacg attaccgcgg acgaatccac gagcacagcc 240
tacatggagc tgagcagcct gagatctgag gacacggcgg tgtactactg cgccagaact 300
ccttactacg acagcagcgg atacctagac gtatggggtc agggtacaat ggtcaccgtc 360
tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtc gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgct 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcg gagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctatagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtccccg ggtaaatga 1359
<210> 336
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
6xHis tag
<400> 336
His His His His His His
1 5
<210> 337
<211> 89
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 337
Gly Leu Lys Cys Val Cys Leu Leu Cys Asp Ser Ser Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Gln Thr Glu Gly Ala Cys Trp Ala Ser Val Met Leu Thr Asn Gly Lys
20 25 30
Glu Gln Val Ile Lys Ser Cys Val Ser Leu Pro Glu Leu Asn Ala Gln
35 40 45
Val Phe Cys His Ser Ser Asn Asn Val Thr Lys Thr Glu Cys Cys Phe
50 55 60
Thr Asp Phe Cys Asn Asn Ile Thr Leu His Leu Pro Thr Ala Ser Pro
65 70 75 80
Asn Ala Pro Lys Leu Gly Pro Met Glu
85
<210> 338
<211> 85
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述：
ALK6序列
<400> 338
Ile Leu Arg Cys Lys Cys His His His Cys Pro Glu Asp Ser Val Asn
1 5 10 15
Asn Ile Cys Ser Thr Asp Gly Tyr Cys Phe Thr Met Ile Glu Glu Asp
20 25 30
Asp Ser Gly Met Pro Val Val Thr Ser Gly Cys Leu Gly Leu Glu Gly
35 40 45
Ser Asp Phe Gln Cys Arg Asp Thr Pro Ile Pro His Gln Arg Arg Ser
50 55 60
Ile Glu Cys Cys Thr Glu Arg Asn Glu Cys Asn Lys Asp Leu His Pro
65 70 75 80
Thr Leu Pro Pro Leu
85
<210> 339
<211> 79
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 339
Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys
1 5 10 15
Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys
20 25 30
Val Ile His Asn Ser Ser Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg
35 40 45
Asp Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr
50 55 60
Thr Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu
65 70 75
<210> 340
<211> 85
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述：
ALK3序列
<400> 340
Pro Phe Leu Lys Cys Tyr Cys Ser Gly His Cys Pro Asp Asp Ala Ile
1 5 10 15
Asn Asn Thr Cys Ile Thr Asn Gly His Cys Phe Ala Ile Ile Glu Glu
20 25 30
Asp Asp Gln Gly Glu Thr Thr Leu Ala Ser Gly Cys Met Lys Tyr Glu
35 40 45
Gly Ser Asp Phe Gln Cys Lys Asp Ser Pro Lys Ala Gln Leu Arg Arg
50 55 60
Thr Ile Glu Cys Cys Arg Thr Asn Leu Cys Asn Gln Tyr Leu Gln Pro
65 70 75 80
Thr Leu Pro Pro Val
85
<210> 341
<211> 75
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 341
Pro Leu Val Thr Cys Thr Cys Glu Ser Pro His Cys Lys Gly Pro Thr
1 5 10 15
Cys Arg Gly Ala Trp Cys Thr Val Val Leu Val Arg Glu Glu Gly Arg
20 25 30
His Pro Gln Glu His Arg Gly Cys Gly Asn Leu His Arg Glu Leu Cys
35 40 45
Arg Gly Arg Pro Thr Glu Phe Val Asn His Tyr Cys Cys Asp Ser His
50 55 60
Leu Cys Asn His Asn Val Ser Leu Val Leu Glu
65 70 75

Claims (55)

1.一种活化素受体样激酶7(ALK7)结合蛋白，其特异性结合ALK7蛋白的至少一个主要表位，其中所述至少一个主要表位与选自SEQ ID NO：310、313和317的表位基本上相同。
2.根据权利要求1所述的ALK7结合蛋白，其还特异性结合ALK7蛋白的至少一个构象表位，其中所述至少一个构象表位与选自SEQ ID NO：311、312、314、315、316、318和319的表位基本上相同。
3.根据权利要求1或2所述的ALK7结合蛋白，其中所述至少一个主要或构象表位与SEQID NO：310-319共有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个氨基酸残基。
4.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述CDR来自重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)对，所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)对选自：
(a)(i)SEQ ID NO：105的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：110的VL序列；
(b)(i)SEQ ID NO：117的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：124的VL序列；
(c)(i)SEQ ID NO：128的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：135的VL序列；
(d)(i)SEQ ID NO：140的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：148的VL序列；
(e)(i)SEQ ID NO：91的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：98的VL序列；
(f)(i)SEQ ID NO：4的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：13的VL序列；
(g)(i)SEQ ID NO：152的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：98的VL序列；
(h)(i)SEQ ID NO：159的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：110的VL序列；
(i)(i)SEQ ID NO：165的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：171的VL序列；
(j)(i)SEQ ID NO：22的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：31的VL序列；
(k)(i)SEQ ID NO：40的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：49的VL序列；和
(1)(i)SEQ ID NO：58的VH序列，和
(ii)SEQ ID NO：67的VL序列，
其中所述蛋白结合至ALK7。
5.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其包含一组CDR：VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CDR3、VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3，其中所述一组CDR具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十个或零个来自一参考组CDR的氨基酸取代、缺失和/或插入，其中：
(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；
(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列；
(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列；
(d)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列；
(e)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；
(f)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：42的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：93的氨基酸序列；
(g)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：156的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：157的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；
(h)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：163的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：164的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：168的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：169的氨基酸序列；
(i)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；
(j)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列；
(k)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列；或
(1)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列；
其中所述蛋白结合ALK7。
6.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其包含一组CDR，其中：
(a)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：102的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；
(b)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列；
(c)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列；
(d)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：137的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：138的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：139的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：145的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：146的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：147的氨基酸序列；
(e)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：89的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；
(g)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：97的氨基酸序列；
(h)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：156的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：157的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列；
(h)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：163的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：164的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：167的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：168的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：169的氨基酸序列；
(i)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；
(j)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：28的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：30的氨基酸序列；
(k)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：46的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：48的氨基酸序列；或
(1)(i)VH-CDR1包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；
(ii)VH-CDR2包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；
(iii)VH-CDR3包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；
(iv)VL-CDR1包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列；
(v)VL-CDR2包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列；以及
(vi)VL-CDR3包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列；
其中所述蛋白结合ALK7。
7.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其包含选自以下的VH和VL对：
(a)(i)与SEQ ID NO：105具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：110具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(b)(i)与SEQ ID NO：117具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：124具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(c)(i)与SEQ ID NO：128具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：135具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(d)(i)与SEQ ID NO：140具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：148具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(e)(i)与SEQ ID NO：91具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：98具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(f)(i)与SEQ ID NO：152具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：98具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(g)(i)与SEQ ID NO：159具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：110具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(h)(i)与SEQ ID NO：165具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：171具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(i)(i)与SEQ ID NO：4具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：13具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(j)(i)与SEQ ID NO：22具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：31具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；
(k)(i)与SEQ ID NO：40具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：49具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL；以及
(1)(i)与SEQ ID NO：58具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VH，和
(ii)与SEQ ID NO：67具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的VL，
其中所述蛋白结合ALK7。
8.根据权利要求7所述的ALK7结合蛋白，其中所述VH和VL对选自：
(a)SEQ ID NO：105的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列；
(b)SEQ ID NO：117的VH序列和SEQ ID NO：124的VL序列；
(c)SEQ ID NO：128的VH序列和SEQ ID NO：135的VL序列；
(d)SEQ ID NO：140的VH序列和SEQ ID NO：148的VL序列；
(e)SEQ ID NO：91的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列；
(f)SEQ ID NO：152的VH序列和SEQ ID NO：98的VL序列；
(g)SEQ ID NO：159的VH序列和SEQ ID NO：110的VL序列；
(h)SEQ ID NO：165的VH序列和SEQ ID NO：171的VL序列；
(i)SEQ ID NO：4的VH序列和SEQ ID NO：13的VL序列；
(j)SEQ ID NO：22的VH序列和SEQ ID NO：31的VL序列；
(k)SEQ ID NO：40的VH序列和SEQ ID NO：49的VL序列；以及
(l)SEQ ID NO：58的VH序列和SEQ ID NO：67的VL序列，
其中所述蛋白结合ALK7。
9.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其包含选自以下的VH和VL对：
(a)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：105的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：110的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(b)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：117的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：124的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(c)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：128的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：135的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(d)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：140的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：148的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(e)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：91的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：98的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(f)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：152的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：98的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(g)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：159的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：110的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(h)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：165的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：171的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(i)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：4的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：13的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(j)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：22的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：31的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；
(k)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：40的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：49的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列；以及
(1)(i)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：58的参考VH序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VH序列，以及
(ii)具有总共一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、少于十五个或零个来自SEQ ID NO：67的参考VL序列的氨基酸取代、缺失和/或插入的VL序列，
其中所述蛋白结合ALK7。
10.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其包含选自以下的HC和LC对：
(a)(i)与SEQ ID NO：190或320具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：191或322具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC；以及
(b)(i)与SEQ ID NO：192或324具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：193或326具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC，
其中所述蛋白结合ALK7。
11.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其包含选自以下的HC和LC对：
(a)(i)与SEQ ID NO：194或328具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：191或322具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC；以及
(b)(i)与SEQ ID NO：195或330具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：193或326具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC，
其中所述蛋白结合ALK7。
12.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其包含选自以下的HC和LC对：
(a)(i)与SEQ ID NO：196或332具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：191或322具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC；以及
(b)(i)与SEQ ID NO：197或334具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的HC，和
(ii)与SEQ ID NO：193或326具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的LC，
其中所述蛋白结合ALK7。
13.一种结合ALK7上的重叠表位的ALK7结合蛋白，其中所述重叠表位与SEQ ID NO：310-319所示的表位共有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个或更多个相同的氨基酸残基。
14.一种ALK7结合蛋白，其与根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白交叉阻断或竞争结合至ALK7。
15.根据权利要求13或14所述的ALK7结合蛋白，其包含：
i)至少一条与权利要求5或6中的CDR序列不同的CDR序列；
ii)至少一条与权利要求4或7-9中的可变序列不同的可变区序列；和/或
iii)至少一条与权利要求10中的序列不同的序列，
优选地还包含SEQ ID NO：190、320、192或324的恒定区中的至少一个取代、缺失和/或插入。
16.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其能够拮抗ALK7活性。
17.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其能够增加脂肪细胞中的脂解。
18.根据权利要求17所述的ALK7结合蛋白，其能够增加白色或褐色脂肪细胞中的脂解。
19.根据权利要求13-18中任一项所述的ALK7结合蛋白，其能够拮抗脂肪细胞中的ALK7介导的脂解抑制。
20.根据权利要求13-19中任一项所述的ALK7结合蛋白，其能够拮抗白色或褐色脂肪细胞中的ALK7介导的脂解抑制。
21.根据权利要求17-18中任一项所述的ALK7结合蛋白，其能够使脂肪细胞中的脂解增加至少5％至100％、10％至95％、10％至90％、10％至85％、10％至80％、10％至75％、10％至70％、10％至75％、10％至70％、10％至60％、10％至55％、10％至50％或10％至45％。
22.根据权利要求17-18中任一项所述的ALK7结合蛋白，其中在存在一种或多种ALK7配体的情况下进行的脂解测定法中测定脂解。
23.根据权利要求17-22中任一项所述的ALK7结合蛋白，其中所述脂解测定法在存在一种或多种选自以下的ALK7配体的情况下进行：GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素A/B和Nodal。
24.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其中所述结合蛋白具有至少一个选自以下的特征：
(a)在存在一种或多种TGF-β超家族配体的情况下，减少表达ALK7和ActRII受体的细胞表面上的含有ALK7、II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)和所述一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)的复合物的形成；
(b)与一种或多种II型受体竞争结合至ALK7；
(c)与一种或多种TGF-β超家族配体(例如，活化素B、活化素AB、Nodal、GDF1、GDF3和/或GDF8)竞争结合至ALK7；
(d)在存在一种或多种TGF-β超家族配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA或ActRIIB)的细胞中的ALK7的磷酸化；
(e)在存在一种或多种TGF-β配体(例如，GDF1、GDF3、GDF8、活化素B、活化素AB和/或Nodal)的情况下，减少表达ALK7和II型受体(例如，ActRIIA和/或ActRIIB)的细胞中的Smad(例如，Smad2和/或Smad3)的磷酸化；
(f)以KD≤1nM且≥1pM(例如，如通过
Figure FDA0002550251290000201
分析来确定)结合至ALK7，以及
(g)减少含有ALK7、协同受体(例如，加密和/或隐性)和一种或多种TGF-β超家族配体(例如，Nodal)的复合物的形成。
25.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其中所述ALK7结合蛋白增加脂肪细胞中的甘油产生。
26.根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白，其中所述ALK7结合蛋白是特异性结合ALK7的抗体。
27.根据权利要求26所述的ALK7结合蛋白，其还包含其重链恒定区中的LALA或LALA-PG突变。
28.根据权利要求26或27所述的ALK7结合蛋白，其中所述抗体是单克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、多特异性抗体或ALK7结合抗体片段。
29.根据权利要求28所述的ALK7结合蛋白，其中所述ALK7结合抗体片段是Fab片段、Fab'片段、F(ab′)2片段、Fv片段、双体抗体或单链抗体分子。
30.根据权利要求26-29中任一项所述的ALK7结合蛋白，其中所述抗体还包含选自以下的重链免疫球蛋白恒定结构域：
(a)人IgA恒定结构域；
(b)人IgD恒定结构域；
(c)人IgE恒定结构域；
(d)人IgG1恒定结构域；
(e)人IgG2恒定结构域；
(f)人IgG3恒定结构域；
(g)人IgG4恒定结构域；和
(h)人IgM恒定结构域。
31.根据权利要求26-30中任一项所述的ALK7结合蛋白，其中所述抗体还包含选自以下的轻链免疫球蛋白恒定结构域：
(a)人Igκ恒定结构域；和
(b)人Igλ恒定结构域。
32.根据权利要求26-31中任一项所述的ALK7结合蛋白，其中所述抗体还包含人IgG1重链恒定结构域和人κ轻链恒定结构域。
33.根据权利要求26-32中任一项所述的ALK7结合蛋白，其中所述抗体还包含其重链恒定结构域中的突变、取代或修饰。
34.一种核酸分子或核酸分子组，其编码根据任一项前述权利要求所述的ALK7结合蛋白。
35.根据权利要求34所述的核酸分子或核酸分子组，其为cDNA。
36.一种足以用作杂交探针、PCR引物或测序引物的多核苷酸或cDNA分子，所述多核苷酸或cDNA分子是根据权利要求34或35所述的核酸分子或核酸分子组的片段或其互补序列。
37.根据权利要求34-36中任一项所述的核酸分子或cDNA分子，其中所述核酸分子可操作地连接至控制序列。
38.一种载体，其包含根据权利要求34-37中任一项所述的核酸分子。
39.一种宿主细胞，其包含根据权利要求34-37中任一项所述的核酸分子或根据权利要求38所述的载体。
40.根据权利要求39所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物宿主细胞。
41.根据权利要求39所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是NS0鼠骨髓瘤细胞、
Figure FDA0002550251290000221
人细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
42.一种制备根据权利要求1-33中任一项所述的ALK7结合蛋白的方法，其包括在适合于产生所述ALK7结合蛋白的条件下培养根据权利要求39-41中任一项所述的宿主细胞。
43.根据权利要求42所述的方法，其还包括分离从所述宿主细胞分泌的ALK7结合蛋白。
44.一种ALK7结合蛋白，其使用根据权利要求42或43所述的方法产生。
45.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-33中任一项所述的ALK7结合蛋白和药学上可接受的载剂。
46.根据权利要求45所述的药物组合物，其用作药物。
47.根据权利要求46所述的药物组合物用于治疗和/或改善与ALK7表达或ALK7信号传导相关的疾病或疾患的用途。
48.根据权利要求47所述的用途，其中所述疾病或疾患是选自以下的成员：肥胖(例如，内脏或腹部肥胖)；超重；胰岛素抗性；代谢综合征和其他代谢疾病或疾患；脂质紊乱，诸如低HDL水平、高LDL水平、高脂血症、高甘油三酯血症或血脂异常；脂蛋白异常；甘油三酯减少；炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)、脂肪肝疾病；非酒精性脂肪肝疾病；高血糖；葡萄糖耐量降低(IGT)；高胰岛素血症；高胆固醇(例如，高LDL水平和高胆固醇血症)；心血管疾病，诸如心脏病，包括冠心病、充血性心力衰竭、中风、周围血管疾病、动脉粥样硬化；动脉硬化和高血压；X综合征；血管再狭窄；神经病变；视网膜病变；神经退行性疾病；内皮功能病症、呼吸功能病症、肾脏疾病(例如，肾病)；胰腺炎；多囊卵巢综合征；尿酸水平升高；血色素沉着症(铁过载)；黑棘皮症(皮肤上的黑斑)；和癌症(例如，骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌或结肠癌)；和/或与上述疾病或疾患中的一者或多者、或身体脂肪过多相关的其他病症/疾患。
49.根据权利要求45或46所述的药物组合物，其中所述ALK7结合蛋白还包含标记基团或效应基团。
50.根据权利要求49所述的药物组合物，其中所述效应基团选自放射性同位素、放射性核素、毒素、治疗剂和化学治疗剂。
51.一种用于治疗和/或改善受试者中的与ALK7表达或升高的ALK7介导的信号传导相关的疾病或疾患的方法，其包括将有效量的包含根据权利要求1-33中任一项所述的ALK7结合蛋白的组合物或根据权利要求45、46、49或50所述的药物组合物施用于有需要的受试者。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述疾病或疾患是选自以下的成员：肥胖(例如，腹部肥胖)；超重；胰岛素抗性；代谢综合征和其他代谢疾病或疾患；脂质紊乱，诸如低HDL水平、高LDL水平、高脂血症、高甘油三酯血症或血脂异常；脂蛋白异常；甘油三酯减少；炎症(例如，肝脏炎症和/或脂肪组织炎症)、脂肪肝疾病；非酒精性脂肪肝疾病；高血糖；葡萄糖耐量降低(IGT)；高胰岛素血症；高胆固醇(例如，高LDL水平和高胆固醇血症)；心血管疾病，诸如心脏病，包括冠心病、充血性心力衰竭、中风、周围血管疾病、动脉粥样硬化；动脉硬化和高血压；X综合征；血管再狭窄；神经病变；视网膜病变；神经退行性疾病；内皮功能病症、呼吸功能病症、肾脏疾病(例如，肾病)；胰腺炎；多囊卵巢综合征；尿酸水平升高；血色素沉着症(铁过载)；黑棘皮症(皮肤上的黑斑)；和癌症(例如，骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、局部性骨髓瘤或髓外骨髓瘤)、或卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、肝癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌或结肠癌)；和/或与上述疾病或疾患中的一者或多者、或身体脂肪过多相关的其他病症/疾患。
53.根据权利要求51或52所述的方法，其中所述ALK7结合蛋白或药物组合物单独或作为组合疗法施用。
54.一种降低受试者中的ALK7活性的方法，其包括施用有效量的根据权利要求1-33中任一项所述的ALK7结合蛋白或者根据权利要求45、46、49或50所述的药物组合物。
55.一种用于治疗和/或改善普拉德-威利综合征的方法，其包括将有效量的包含根据权利要求1-33中任一项所述的ALK7结合蛋白的组合物或者根据权利要求45、46、49或50所述的药物组合物施用于有需要的受试者。
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