KR20200011791A

KR20200011791A - 모과 추출물을 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 조성물 및 그의 용도

Info

Publication number: KR20200011791A
Application number: KR1020180086686A
Authority: KR
Inventors: 구성민; 장미희; 정대화
Original assignee: (주)옥천당; 장미희; 정대화; 구성민
Priority date: 2018-07-25
Filing date: 2018-07-25
Publication date: 2020-02-04

Abstract

본 발명은 모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환의 예방 또는 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 모과 추출물은 근육 질환의 예방 또는 개선에 대한 효과가 탁월하므로 약학 조성물, 건강기능식품, 화장료 조성물 또는 피부 외용제 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

모과 추출물을 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 조성물 및 그의 용도 {COMPOSITION FOR PREVENTION OR IMPROVEMENT OF MUSCULAR FUCTIONS COMPRISING EXTRACT OF CHAENOMELIS AND USE THEROF}

본 발명은 모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 조성물 및 그 용도에 관한 것이다.

젖산은 운동에 의한 신체 변화의 주요 변수 중 하나로 운동의 강도와 유형 및 지속 시간에 높은 연관성을 나타내며 젖산의 축적은 근피로도에 기여한다. 그리고 운동의 강도가 증가하면 체내에서 근육의 글루코겐 분해(glycogenolysis)와 해당작용(glycolysis)이 빨라지고 결국에는 혈액 내 젖산과 젖산탈수소효소(lactate dehydrogenase, LDH)의 농도가 증가하게 된다. 또한, 젖산은 운동 후 근통증 및 피로를 유발하는 물질로 젖산탈수소효소에 의해 피루브산(pyruvic acid)으로 전환되며, 젖산탈수소효소는 대부분의 조직이나 장기에 많이 분포하는데 그 중 특히, 산소 소모가 많은 근육에서 많이 분포 되어 있고, 운동 강도에 비례하여 젖산탈수소효소의 농도는 증가한다.

마이오카인(myokine)은 근 수축 시 골격근에서 발현되는 활성인자들로 대표적으로 마이오스타틴(myostatin, Mstn), 인터루킨-6(interleukin-6, IL-6), 아이리신(irisin) 등이 있는데, 마이오스타틴은 형질전환 생장 인자 베타(transforming growth factor beta, TGF-β군에 속하는 유전자로 근세포에 직접적으로 작용하여 근육생성 및 근세포 분화를 억제하며, 운동시 마이오스타틴의 발현량이 감소함에 따라 근육의 크기가 증가한다. 여러 선행연구를 통해 운동 강도에 따라 다양한 기전에 의해 마이오카인의 발현량이 증가하고, 이는 고강도 유산소 운동시 급격히 증가하는 젖산 또한 마이오카인 발현량과 관련이 있음을 나타낸다.

따라서, 이러한 근육 관련 질환을 개선하고자 천연물질의 탐구가 진행되고 있다.

근육 질환을 개선할 수 있는 천연물질의 일 예가 하기 특허문헌 1에 개시되어 있다.

즉, 하기 특허문헌 1은 길경 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물에 대해 개시한다.

하기 특허문헌 2는 퓨코스테롤, 모자반, 모자반 분쇄물, 모자반 추출물, 톳, 톳 분쇄물 또는 톳 추출물을 포함하는 근육 질환 예방 또는 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물에 대해 개시한다.

그러나, 아직까지 모과 추출물에 대한 근육 질환 예방 및 개선 효과에 대한 연구나 발명에 대한 보고는 전무한 실정이다.

대한민국 공개특허 제2016-0138927호 대한민국 공개특허 제2016-0138926호

본 발명은 모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환 예방 또는 개선용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 모과 추출물을 포함하는 근육 기능 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.

발명의 목적은 이상에서 언급한 목적으로 제한되지 않는다. 본 발명의 목적은 이하의 설명으로 보다 분명해 질 것이며, 특허청구범위에 기재된 수단 및 그 조합으로 실현될 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해 본 발명의 일 실시예에 따른 근육질환의 예방 또는 개선용 조성물은 모과 추출물을 유효성분으로 포함한다.

상기 모과 추출물은 모과를 흐르는 물에 세척하고 씨를 제거하여 준비하는 단계, 상기 준비된 모과의 부피에 대하여, 5~15배의 용매를 첨가한 후, 여과하여 모과 여과액을 수득하는 단계, 상기 모과 여과액을 동결 건조하는 단계를 포함할 수 있다.

상기 용매는 물, C1 내지 C4의 저급 알콜 및 이들의 혼합용매로부터 선택될 수 있다.

상기 근육질환은 긴장감퇴증, 근위축증, 근이영양증, 근육퇴화, 근경직증, 근디스트로피, 근위축성 축삭경화증, 근무력증, 악액질 및 근육감소증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.

본 발명의 다른 실시예에 따른 근육 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 모과 추출물을 유효성분으로 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시예에 따른 근육 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품은 모과 추출물을 유효성분으로 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시예에 따른 근육 질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물은 모과 추출물을 유효성분으로 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시예에 따른 근육 질환 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물은 모과 추출물을 유효성분으로 포함한다.

상기 피부 외용제는 크림, 연고, 젤 및 첩부제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 형태일 수 있다.

본 발명의 모과 추출물은 마이오스타틴의 발현량 감소 또는 젖산의 축적을 억제함으로써 근육 질환을 예방 또는 개선할 수 있다.

도 1은 CFE-1 내지 CFE-3의 세포 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 CFE-1 내지 CFE-3의 형태를 광학 현미경으로 캡쳐한 사진이다.
도 3은 LDH 분석결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 웨스턴블롯팅 결과를 나타낸 사진이다.
도 5a 및 도 5b는 젖산 농도 및 시간에 따른 LDH 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 CFE-1 및 CFE-2의 농도에 따른 LDH 분석 결과를 나타낸 도이다.

이하에서 본 발명에 대하여 첨부된 도면에 도시된 실시 예에 따라 구체적으로 설명하기는 하나, 본 발명이 도시된 실시 예만으로 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 및 그 밖에 목적과 새로운 특징은 본 명세서의 기술 및 첨부 도면에 의해 더욱 명확하게 될 것이다.

본 발명은 근육 질환 예방 또는 개선을 위해 사용되는 조성물로 모과 추출물을 포함한다.

이하, 본 발명의 조성물인 모과 및 모과 추출물을 수득하는 방법에 대하여 상세하게 설명한다.

모과는 장미과의 모과나무(Chaenomeles sinensis Koehne)의 열매를 건조한 것으로 주요 약리 작용으로는 부종억제, 항암작용 및 풍습성 사지마비동통, 하체마비경련, 각기병 또는 근육이 굴신되지 않거나 근육이 당겨 목이 돌아가지 않을 때에 쓰인다.

이러한 모과 추출물은 일 예로, 모과의 총 부피의 5배 내지 15배(V/W), 바람직하게는 10배(V/W) 부피의 물, C1 내지 C4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매, 더욱 바람직하게는 물을 50~150℃바람직하게는 100℃의 온도에서 1시간~4시간, 바람직하게는 2시간~3시간 동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 가열추출, 바람직하게는 열수추출방법으로 수득될 수 있다.

다른 예로, 모과의 총 중량의 5배 내지 15배(V/W), 바람직하게는 10배(V/W) 부피의 물, C1 내지 C4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매, 더욱 바람직하게는 에탄올 또는 70% 에탄올을 실온(20~30℃)에서 36시간~60시간, 바람직하게는 48시간 동안 침지, 냉침추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 바람직하게는 침지방법으로 수득될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "추출물"은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획한 분획물도 포함할 수 있다. 즉, 모과 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 수득된 것뿐만 아니라 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 수득되는 것도 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 수득된 분획, 다양한 크로마토그래피에 의한 분리 등 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 수득된 분획도 본 발명의 모과 추출물에 포함될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 모과 추출물은 감압 증류, 농축, 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 명세서에서 "유효성분으로 포함하는"이란 하기 후술할 모과 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 천연식물재료인 모과로부터 추출한 조성물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 모과 추출물이 본 발명의 조성물에 포함된 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기한 모과 추출물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 근육 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물로 제조될 수 있다. 상기한 약학 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형 및 멸균 조사용액의 형태로 제제화될 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만나톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 실리케이트, 칼슘 포스페이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한다.

경구용 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등을 포함하며, 물, 리퀴드 파라핀 등의 희석제, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.

비경구용 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제를 포함하며, 비수용성 용제 또는 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르류 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여, 모과 추출물을 0.01중량% 내지 99.9중량%로 포함할 수 있으며, 근육 질환의 예방 또는 치료용 조성물의 사용방법 및 사용목적에 따라 유효성분의 함량을 적절히 조절할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여, 예를 들면, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하게 적용될 수 있다. 본 발명의 모과 추출물의 일일 투여량은 약 0.1mg/kg 내지 1000mg/kg일 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 근육 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로 또는 수술, 호르몬 치료, 약물치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명은 근육 질환 완화, 예방 또는 치료를 요하는 인간을 포함하는 포유류에 본 발명의 약학 조성물을 투여함으로서 근육 질환을 완화, 예방 또는 치료하는 방법을 제공할 수 있다.

본 발명의 조성물은 근육 질환의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품으로 제공될 수 있다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 건강기능식품으로는, 예를 들어, 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 건강기능식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 액체의 형태일 수 있으며, 이들의 형태는 약학 조성물의 제조방법과 동일하거나, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 제조될 수 있다.

예를 들면, 모과 추출물이 근육 질환의 예방 및 개선을 목적으로 건강기능식품으로 사용될 경우, 상기 추출물의 양은 일반적으로 건강기능식품 총 중량에 대하여, 0.01 내지 99.9중량%으로 가할 수 있다.

다른 예로, 모과 추출물이 근육 질환의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 경우, 상기 추출물의 양은 일반적으로 식품 총 중량에 대하여, 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 음료는 100ml를 기준으로 0.02 내지 10g으로 가할 수 있다.

본 발명의 음료는 모과 추출물을 필수 성분으로 포함하는 것뿐만 아니라 음료 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 천연 탄수화물 또는 여러 가지 향미제를 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 및 폴리사카라이드, 예를 들어 텍스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 향미제로는 타우마린, 스테비아 등의 천연 향미제 및 사카린, 아스파르탐 등의 합성 향미제를 사용할 수 있다.

상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 10ml당 일반적으로 1 내지 20g, 바람직하게는 5 내지 12g일 수 있다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 도 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 본 발명의 작용 효과를 방해하지 않는 범위 내에서 적절하게 첨가될 수 있다.

본 발명의 조성물은 근육 질환의 예방 또는 개선을 위한 피부 외용제로 제공될 수 있다. 피부 외용제 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있으며, 예를 들면, 화장수, 에센스, 에멀젼, 로션, 크림, 연고, 용액, 현탁액, 무수생성물, 젤, 마스크, 첩부제, 팩, 분말, 젤라틴 등의 피막이 있는 캅셀 제형 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.

본 발명에 있어서 피부는 신체 부위를 총칭하며, 상세하게는 얼굴, 두피, 전신을 포함하는 개념일 수 있다.

본 발명의 조성물은 근육 질환의 개선을 위한 화장료 조성물으로 제공될 수 있다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 화장료 조성물으로는, 예를 들어, 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 보디 오일 등의 기초 화장품, 화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등의 색조 화장품, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤 등의 두발 제품 및 비누 등이 있을 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 모과 추출물을 필수 성분으로 포함하는 것뿐만 아니라 화장품 제조 시에 첨가되는 피부학적으로 허용 가능한 부형제 성분을 포함하며, 이러한 부형제로는 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다.

본 발명에서 정의되는 근육 질환은 근육 소모 또는 근육 퇴화는 유전적 요인, 후천적 요인, 노화 등을 원인으로 발생될 수 있으며, 근육 소모는 근육량의 점진적 손실, 근육, 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행 등을 포함할 수 있다. 이와 관련된 질환의 예로는 긴장감퇴증, 근위축증, 근이영양증, 근육퇴화, 근무력증, 악액질 및 근육감소증 등이 있을 수 있다. 또한, 본 발명에서 근은 심줄, 근육, 건을 포괄적으로 지칭하고, 근 기능은 근육의 수축에 의해 힘을 발휘하는 능력을 의미하며, 근육이 저항을 이겨내기 위하여 최대한으로 수축력을 발휘할 수 있는 능력인 근력, 근육이 주어진 중량에 대해 얼마나 오랫동안 또는 얼마나 여러 번 수축과 이완을 반복할 수 있는지를 나타내는 능력인 근 지구력, 단시간 내에 강한 힘을 발휘할 수 있는 능력인 순발력을 포함할 수 있다. 이러한 근 기능은 근육량에 비례하며, 근 기능 개선이라 함은 근 기능을 향상시키는 것을 말할 수 있다.

참고예 1. 재료 준비

Anti-GDF8 myostatin antibody (Mstn)는 Abcam (Cambridge, USA)에서 구입하였고, horseradish per-oxidase-conjugated goat anti-mouse IgG는 Cell Signaling Technology (Beverly, MA)에서 구입하였다. 그 외 anti-β항체 등 다른 시약들은 Sigma (St. Louis, MO)에서 구입하였으며, 골격근 세포주인 C2C12는 American Type Culture Collection (ATCC; CRL-1772, Manassas, VA, USA)에서 구입하였다.

참고예 2. LDH 측정

200 mM Tris (pH8) buffer와 50 mM Li-Lactate reagent 및 NAD/PMS/INT solution을 각각 plate에 넣고 마지막으로 cell lysates를 넣은 후 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.

참고예 3. 통계 처리

본 연구의 각 실험군은 one-way analysis of variance (ANOVA)를 사용하여 각 군의 통계적 유의성을 평가하였다(p<0.05 or p<0.01). 데이터는 산술평균 ± S.D.로 표시 하였다.

실시예 1. 모과 추출물 제조

모과((주)옥천당, Korea) 100g에 10배의 부피비로 증류수를 투입한 후 100℃에서 2시간 30분 동안 열수추출한 다음 300mm의 Advantec Filter paper NO.2(Toyo Roshi Kaisha Ltd, Japan)을 이용하여 여과하였다. 그리고, 여과액을 회전증발농축기(Buchl, Swiss)로 농축한 다음 Ultra-low temperature freezer(Operon, Korea)에 동결한 후, Freeze Dryer(Operon, Korea)으로 건조하여 모과 추출물(이하, "CFE-1"이라 함)을 제조하였다.

실시예 2. 모과 추출물 제조

모과((주)옥천당, Korea) 100g에 10배의 부피비로 70% 에탄올을 투입한 후 실온에서 48시간 동안 침지시킨 다음 Advantec Filter paper NO.2(Toyo Roshi Kaisha Ltd, Japan)을 이용하여 여과하였다. 그리고, 여과액을 회전증발농축기(Buchl, Swiss)로 농축한 다음 Ultra-low temperature freezer(Operon, Korea)에 동결한 후, Freeze Dryer(Operon, Korea)으로 건조하여 모과 추출물(이하, "CFE-2"이라 함)을 제조하였다.

실시예 3. 모과 추출물 제조

모과((주)옥천당, Korea) 100g에 10배의 부피비로 에탄올을 투입한 후 실온에서 48시간 동안 침지시킨 다음 Advantec Filter paper NO.2(Toyo Roshi Kaisha Ltd, Japan)을 이용하여 여과하였다. 그리고, 여과액을 회전증발농축기(Buchl, Swiss)로 농축한 다음 Ultra-low temperature freezer(Operon, Korea)에 동결한 후, Freeze Dryer(Operon, Korea)으로 건조하여 모과 추출물(이하, "CFE-3"이라 함)을 제조하였다.

실험예 1. 세포 독성 평가

본 발명의 모과 추출물의 세포 생존율을 측정하기 위하여 하기와 같이 세포 독성 평가를 실시하였다.

C2C12 cell을 24well plate에 1×10⁵cells/well 농도로 0.5mL/well로 분주한 뒤 24시간 동안 배양하였고, 최종농도(0, 10, 30, 100, 300μg/mL)의 CFE를 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후, 3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) (0.5mg/mL)를 300μL씩 각 well에 처리하고 37℃에서 2시간 동안 반응시켜, 환원된 formazan이 떨어져나가지 않도록 배지를 조심스럽게 제거하고 dimethylsulfoxide를 처리하여 용해시킨 후, 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

도 1은 CFE-1 내지 CFE-3의 세포 생존율을 나타낸 그래프이다.

그 결과, 도 1을 참조하면, CFE-2 및 CFE-3에서 300ug/mL의 농도일 때 감소하기는 하나 대체적으로 추출 용매에 관계 없이 세포 독성이 나타나지 않음을 확인할 수 있었다.

실험예 2. 근육 분화 억제 특성

본 발명의 모과 추출물의 근육 분화 억제 효과를 관찰하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다.

C2C12는 37℃5% CO₂ 조건에서 배양하였고, 분화 전 세포증식기에는 열처리한 10% fetal bovine serum(FBS)과 100units/mL penicillin, 100μg/mL streptomycin을 혼합한 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM) 배지를 사용하여 T-75 Flask에 60% confluence에 도달하도록 1 : 4 비율로 3~4일 간 계대 배양하였다. 계대 배양 후, myoblast가 90% confluence에 도달하면 FBS를 2% Horse serum(HS)으로 변경하여 6일 간 배양액을 교체하며 분화를 유도하였다. 이후 24시간 동안 0, 10, 30, 50, 100μg/mL으로 농도를 달리하여 처치하였다.

도 2는 본 발명의 CFE-1 내지 CFE-3의 형태를 광학 현미경으로 캡쳐한 사진이고, 도 3은 LDH 분석결과를 나타낸 그래프이다.

그 결과, 도 2를 참조하면, CFE-1 내지 CFE-3은 추출 용매에 상관 없이 대조군에 비해 분화가 억제되었으며, 특히 CFE-2가 CFE-1 및 CFE-3에 비해 분화 억제 양상이 크다는 것을 확인할 수 있다.

도 3을 참조하면, 분화를 유도하였을 때 대조군에 비해 CFE-1 내지 CFE-3 모두 농도 의존적으로 LDH(젖산탈수소효소)를 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 혈액 내 젖산 축적이 감소될 수 있음을 미루어 짐작할 수 있었다.

실험예 3. Mstn 발현량 측정

본 발명의 모과 추출물의 농도에 따른 Mstn의 발현량을 확인하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다.

C2C12 cell을 phosphate buffered saline(PBS)로 washing한 다음, radio-immnoprecipitation buffer와 Halt Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail(Thermo, Rockford, IL, USA)을 lysis buffer로 용해하여 4℃에서 15,000×g로 30분 동안 원심 분리한 후, 상층액을 취하여 whole cell lysates로 사용하였다. 이 whole cell lysates의 단백질 함량은 BCA protein assay(Thermo, Rockford, 1L, USA)에 따라 정량 하였다. 그리고, 기전확인을 위해 정량한 단백질을 SDS-PAGE에 전기영동한 후, membrane에 단백질을 전이하여 1차 항체와 2차 항체를 반응시켰다. 항체와 반응시킨 membrane에 ECL detection reagent(Amersham, Buckinghamshire, UK)를 사용하여 감광하였다.

도 4는 웨스턴블롯팅 결과를 나타낸 사진이다.

그 결과, 도 4를 참조하면, CFE-1 및 CFE-3 모두 농도에서 Mstn의 발현량이 감소함을 확인할 수 있었고, CFE-1의 경우 낮은 농도에서 Mstn의 발현량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, CFE-2를 이용하여 실험을 진행하였을 때 특정 농도 군에서 Mstn의 발현량의 감소가 보다 안정적이며 높은 양상을 나타냄을 알 수 있었다.

실험예 4. 젖산 축적 억제 특성

본 발명의 모과 추출물의 젖산 축적 억제 효과를 관찰하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다.

C2C12 cell을 4mM 또는 20mM 농도의 젖산으로 처리한 후, 10분, 30분, 1시간, 3시간, 6시간 동안 젖산이 가장 높게 증가하는 시간을 확인하였다. 그리고, CFE-1을 각각 10, 30, 100ug/mL의 농도로 전처리한 후 LDH를 분석하였다.

도 5a 및 도 5b는 젖산 농도 및 시간에 따른 LDH 분석 결과를 나타낸 도이고, 도 6은 CFE-1 및 CFE-2의 농도에 따른 LDH 분석 결과를 나타낸 도이다.

그 결과, 도 5a, 도 5b를 참조하면, 4mM의 경우 30분에서 20mM의 경우 10분에서 가장 높은 LDH 값을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 도 6을 참조하면, 농도 의존적으로 젖산 축적 억제 효과가 비교적 높게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.

이상 본 발명자에 의하여 이루어진 발명을 상기 실시 예에 따라 구체적으로 설명하였지만, 본 발명은 상기 실시 예에 한정되는 것은 아니고 그 요지를 이탈하지 않는 범위에서 여러 가지로 변경 가능한 것은 물론이다.

Claims

모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환의 예방 또는 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 모과 추출물은
모과를 흐르는 물에 세척하고 씨를 제거하여 준비하는 단계;
상기 준비된 모과의 부피에 대하여, 5~15배의 용매를 첨가한 후, 여과하여 모과 여과액을 수득하는 단계; 및
상기 모과 여과액을 동결 건조하는 단계를 포함하여 제조된 것인 근육 질환의 예방 또는 개선용 조성물.
제2항에 있어서,
상기 용매는 물, C1 내지 C4의 저급 알콜 및 이들의 혼합용매로부터 선택되는 근육 질환의 예방 또는 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 근육 질환은 긴장감퇴증, 근위축증, 근이영양증, 근육퇴화, 근경직증, 근디스트로피, 근위축성 축삭경화증, 근무력증, 악액질 및 근육감소증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 근육 질환 예방 또는 개선용 조성물.
모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
모과 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 질환의 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물.
제8항에 있어서,
상기 피부 외용제는 크림, 연고, 젤 및 첩부제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 형태인 근육 질환의 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물.