JP6753600B2 - 吸収促進剤 - Google Patents

Description

本発明は、コメバツガザクラの抽出物を含有することを特徴とする吸収促進剤、エンドサイトーシス促進剤、受容体非依存性エンドサイトーシス促進剤及び該吸収促進剤を含む医薬組成物、化粧品、食品に関するものである。

細胞は、その内外を隔てている脂質二重膜構造である細胞膜を介して、栄養分を細胞内に吸収し、生命活動を維持している。

エンドサイトーシスは、細胞が細胞外の物質を取り込む細胞膜機能であり、取り込む物質の種類や大きさ、関与する生体分子の違い等により細かく分類されている。例えば、クラスリン依存性エンドサイトーシス、カベオラ依存性エンドサイトーシス、クラスリン非依存性エンドサイトーシス、ファゴサイトーシス（食作用）、ピノサイトーシス（飲作用）、マクロピノサイトーシス等が知られている。

これらを細胞膜に存在する受容体への刺激が必要か否かによって分けた場合、大きく受容体依存性エンドサイトーシスと受容体非依存性エンドサイトーシスに分類できる。受容体依存性エンドサイトーシスは、クラスリン依存性エンドサイトーシスやカベオラ依存性エンドサイトーシス等を含み、被覆小胞と呼ばれる構造を形成し、認識した特定の物質を選択的に取り込む仕組みである。一方、受容体非依存性エンドサイトーシスは、クラスリン非依存性エンドサイトーシス、ファゴサイトーシス（食作用）、ピノサイトーシス（飲作用）、マクロピノサイトーシス等を含み、被覆小胞を形成せず、細胞外の物質を非選択的に取り込む仕組みである（特許文献１、非特許文献１）。

この受容体非依存性エンドサイトーシスを利用して、細胞内に薬効成分を取り込ませる仕組みは、選択的抗癌剤（特許文献２）、トリアムシノロンアセトニド及びヒアルロン酸を含有する眼の局所治療用組成物（特許文献３）、生物可逆性基を有するポリヌクレオチド（特許文献４）等において既に知られている。又、ナノキャリアを工夫して、より選択的に薬効成分を細胞へと届ける仕組みも以前から試みられており、陽イオン性多糖類共重合体の抗癌剤デリバリーシステム（特許文献５）が例に挙げられる。

これらに加えて、細胞の受容体非依存性エンドサイトーシス活性を高めて、薬効成分の取り込みを更に増やす試みがある。遺伝子導入によるマクロピノサイトーシスの誘導が、抗癌剤の取り込みを促進させ、癌細胞の死滅を促進した（非特許文献２）ことが報告されている。従って、より薬効の高い剤を提供する為には、細胞の受容体非依存性エンドサイトーシスを促進する効果を有する物質の開発が望まれる。

コメバツガザクラ（学名：Ａｒｃｔｅｒｉｃａ ｎａｎａ）は、ツツジ科（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）コメバツガザクラ属（Ａｒｃｔｅｒｉｃａ）に属する植物であるが、これまで、皮膚外用剤（特許文献６）、テストステロン‐５α‐レダクターゼ阻害剤（特許文献７）、幹細胞の未分化維持剤及び増殖促進剤（特許文献８）があることが知られている。しかしながら、受容体非依存性エンドサイトーシス促進効果については、これまで何ら知られていない。

特開２０１３−１３９３９１ 特開平６−１５７３４６ 特開２０１２−１０２１４１ 特表２０１５−５２９０７３ 特開２０１４−００１１９８ 特開２０１１−０７９７４４ 特開２０１１−１６８５２２ 特開２０１１−２１１９５８

藤岡容一郎、生化学 第８７巻第１号、ｐｐ．９１−１００（２０１５） Ｉ．Ｎａｋａｓｅ ｅｔ．ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．，Ｊｕｎ ３，５，（２０１５）

本発明は、薬物や栄養成分の細胞への取り込みを高めることができる、吸収促進剤を提供することである。

本発明者らは、上記課題の解決に向け鋭意検討を行った結果、コメバツガザクラの抽出物が優れた吸収促進作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は、以下の発明を包含する。
（１）コメバツガザクラの抽出物を含有することを特徴とする吸収促進剤。
（２）コメバツガザクラの抽出物を含有することを特徴とするエンドサイトーシス促進剤。
（３）コメバツガザクラの抽出物を含有することを特徴とする受容体非依存性エンドサイトーシス促進剤。
（４）（１）〜（３）いずれか記載の剤を含む医薬組成物。
（５）（１）〜（３）いずれか記載の剤を含む化粧品。
（６）（１）〜（３）いずれか記載の剤を含む食品。

本発明の吸収促進剤は、コメバツガザクラの抽出物を有効成分とするものであり、他の薬物や栄養成分と併用して投与又は塗布することにより、細胞膜を介した同薬物や同栄養成分の細胞内への吸収効率を高める作用を有する。従って、この吸収促進剤は、細胞膜を介して機能する薬剤の細胞への取り込みを高め、その効果を増強する。又、本発明の吸収促進剤は、細胞の栄養成分の取り込みを高めることにより、皮膚を含む非病変組織の栄養状態を改善する効果も期待される。尚、本発明の吸収促進剤は、作用が緩和な植物の抽出物を有効成分とすることから、副作用がなく安全性が高い。よって、医薬品、化粧品又は食品に安心して使用できる。

本発明で用いられるコメバツガザクラの抽出物とは、ツツジ科コメバツガザクラ属の植物、コメバツガザクラ（学名：Ａｒｃｔｅｒｉｃａ ｎａｎａ）（別名：ハマザクラ）の花、花穂、茎、葉、枝、枝葉、根、種子等の植物体の一部又は全草から抽出したものである。その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。植物材料は、生のまま用いても乾燥して用いてもよい。細断することにより抽出効率を上げることができる。

抽出する溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール類（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。

上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。又、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良いし、カラム精製等を行い、有効成分を濃縮したり単離したりしてから用いても良い。本発明で用いるコメバツガザクラは、天然由来の植物であり、コメバツガザクラから抽出される成分は、多様な構造の化合物が多数同時に存在する混合物である。従って、含有する成分の構造又は特性をすべて明らかにすることは困難であり、抽出物として扱うことが好ましい。

本発明の医薬組成物や化粧品、食品は、コメバツガザクラの抽出物をそのまま使用しても良く、これらの効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬品又は食品等に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料等の成分を含有することもできる。

本発明は、医薬品、化粧品又は食品等に用いることができ、その剤型としては、例えば、散剤、丸剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、トローチ剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、注射剤、坐剤、乳剤、化粧水、クリーム、マッサージクリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、パン類、麺類、菓子類、乳製品、水産・畜産加工食品、油脂及び油脂加工食品、調味料、各種飲料（清涼飲料、炭酸飲料、美容ドリンク、栄養飲料、果実飲料、乳飲料等）等が挙げられる。

本発明に用いるコメバツガザクラの抽出物の含有量は、内用の場合、投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人１人当たりの１日の量としては、乾燥物に換算して、５ｍｇ以上が好ましく、１０ｍｇ〜５ｇがより好ましい。更に、１００ｍｇ〜１ｇが最も好ましい。一方、外用の場合、全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１〜１０重量％がより好ましい。更に、０．０１〜５重量％が最も好ましい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて含有した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。

次に、本発明を詳細に説明するため、具体的な実施例を挙げて説明する。これらの実施例は効果を具体的に説明するもので、発明の範囲を限定するものではない。実施例中の含有量は重量％である。

コメバツガザクラの抽出物を以下のとおり製造した。

製造例１ コメバツガザクラの熱水抽出物
コメバツガザクラ（Ａｒｃｔｅｒｉｃａ ｎａｎａ）の全草の乾燥物２０ｇに精製水４００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してコメバツガザクラの熱水抽出物を１．０ｇ得た。

製造例２ コメバツガザクラの５０％エタノール抽出物
コメバツガザクラ（Ａｒｃｔｅｒｉｃａ ｎａｎａ）の全草の乾燥物２０ｇに５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、コメバツガザクラの５０％エタノール抽出物を１．５ｇ得た。

製造例３ コメバツガザクラのエタノール抽出物
コメバツガザクラ（Ａｒｃｔｅｒｉｃａ ｎａｎａ）の全草の乾燥物５０ｇにエタノール１０００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、コメバツガザクラのエタノール抽出物を１．４ｇ得た。

製造例４ コメバツガザクラの５０％１，３−ブチレングリコール抽出物
コメバツガザクラ（Ａｒｃｔｅｒｉｃａ ｎａｎａ）の全草の乾燥物２０ｇに５０％１，３−ブチレングリコール水溶液４００ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、コメバツガザクラの５０％１，３‐ブチレングリコール抽出物を３８０ｇ得た。

コメバツガザクラの抽出物の効果の評価実験を次のとおり行った。

実験例１ 線維芽細胞における吸収促進効果の評価
実施例１で製造したコメバツガザクラの抽出物（製造例１〜４）の細胞膜を介した薬物や栄養成分の吸収に及ぼす影響を、ニュートラルレッドの細胞内取り込み量を指標に評価した。ニュートラルレッドは、細胞膜を介し生細胞に取り込まれる染色色素の１つである。具体的方法について以下に記載する。

ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり２×１０^３個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ_２条件下で４日間培養した。次に、試料（最終濃度５、２０μｇ／ｍＬ）を添加したＤＭＥＭ培養液にて、２４時間培養した後、５０μｇ／ｍＬのニュートラルレッドを添加したＤＭＥＭ培養液にて、更に２時間培養した。余分なニュートラルレッドをＰＢＳで洗った後、酢酸を１％含む５０％エタノールを１ｗｅｌｌ当たり１００μＬ加え、細胞が取り込んだニュートラルレッドを１５分間抽出した。ブランクを対照として、得られた抽出液の５４０ｎｍ吸光度を測定し、ニュートラルレッド値とした。一方、ニュートラルレッドを抽出した後の細胞を固定し、メチレンブルーを用いて染色後、０．１Ｎ塩酸で抽出した。ブランクを対照として、メチレンブルー抽出液の６５０ｎｍ吸光度を測定し、メチレンブルー値とした。メチレンブルー値は、細胞数を反映する値として、データの補正に用いた。即ち、ニュートラルレッド値をメチレンブルー値に対する割合として求め、一定細胞数当たりのニュートラルレッド取り込み量とした。ニュートラルレッド取り込み量は、コントロールのニュートラルレッド取り込み量に対する試料添加群のニュートラルレッド取り込み量の比率として算出した。尚、試料濃度は固形物に換算して設定した。

これらの試験結果を表１に示した。その結果、コメバツガザクラの抽出物（製造例１〜４）に、顕著な吸収促進効果が認められた。

製造例１〜４で製造したコメバツガザクラの抽出物を含有した製品の処方例を以下に示す。

処方例１ 錠剤
処方 含有量（重量％）
１．コメバツガザクラの抽出物 １．０
２．乾燥コーンスターチ ２５．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム ２４．０
４．微結晶セルロース ４０．０
５．ポリビニルピロリドン ７．０
６．タルク ３．０
［製造方法］成分１〜５を混合し、次いで１０％の水を結合剤として加えて、押出し造粒後乾燥する。成形した顆粒に成分６を加えて混合し打錠する。１錠０．５２ｇとする。

処方例２ カプセル剤
処方 含有量（重量％）
１．コメバツガザクラの抽出物 ５．０
２．微結晶セルロース ６０．０
３．トウモロコシデンプン １５．０
４．乳糖 １８．０
５．ポリビニルピロリドン ２．０
［製造方法］成分１〜５を混合して顆粒化した後、２号硬カプセルに２５０ｍｇ充填してカプセル剤を得る。

処方例３ 散剤
処方 含有量（重量％）
１．コメバツガザクラの抽出物 ５．０
２．微結晶セルロース ４０．０
３．トウモロコシデンプン ５５．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、常法により散剤を得る。

処方例４ クリーム
処方 含有量(重量％）
１．コメバツガザクラの抽出物 ０．１
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１２．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
１３．１，３−ブチレングリコール ８．５
１４．精製水 残量
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜1４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。次いで、油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

処方例５ 軟膏
処方 含有量(重量％）
１．コメバツガザクラの抽出物 ２．０
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン １０．０
４．流動パラフィン ５．０
５．セタノール ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
７．プロピレングリコール １０．０
８．精製水 残量
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例６ 錠菓
処方 含有量（重量％）
１．コメバツガザクラの抽出物 １．０
２．乾燥コーンスターチ ５０．０
３．エリスリトール ４０．０
４．クエン酸 ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル ３．０
６．香料 １．０
［製造方法］成分１〜４に精製水を適量加えて練和し、押出し造粒した後、乾燥して顆粒を得る。顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１錠１ｇとする。

処方例７ 飲料
処方 含有量（重量％）
１．コメバツガザクラの抽出物 ０．１
２．ステビア ０．０５
３．リンゴ酸 ５．０
４．アスコルビン酸ナトリウム １．０
５．香料 ０．１
６．精製水 残量
［製造方法］成分１〜５を成分６の一部の精製水に撹拌溶解する。次いで、成分６の残りの精製水を加えて混合し、９０℃に加熱して５０ｍＬのガラス瓶に充填する。

本発明に関わる、コメバツガザクラの抽出物を含有することを特徴とする吸収促進剤は、細胞膜を介して細胞に取り込まれて作用する薬剤の効果を増強する。従って、受容体非依存性エンドサイトーシスを利用した医薬組成物、例えば、抗癌剤やｓｉＲＮＡを用いた遺伝子治療剤等の効果を底上げし、より安全に効果を高めること等に利用できる。

Claims (2)

1. コメバツガザクラの抽出物を含有することを特徴とする線維芽細胞における受容体非依存性エンドサイトーシス促進作用による細胞内への薬効成分取り込み促進剤。
2. コメバツガザクラの抽出物と薬効成分を線維芽細胞に作用させることを特徴とする線維芽細胞における受容体非依存性エンドサイトーシス促進作用による細胞内への薬効成分取り込み促進方法（ヒトへの適用を除く）。