KR20190132419A - 폐암을 검출하기 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 폐암의 시험관내 진단을 위한 조성물 및 방법에 관한 것이고, 여기서 상기 조성물은 프로가스트린에 결합하는 항체를 포함하고, 상기 방법은 프로가스트린에 결합하는 항체의 사용을 포함한다.

Description

폐암을 검출하기 위한 조성물 및 방법
본 발명은 암의 시험관내 진단에 관한 것이고, 보다 구체적으로 본 발명은 폐암의 시험관내 진단을 위한 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르는 조성물은 프로가스트린-결합 분자, 특히 항-hPG 항체를 포함하고, 본 발명에 따르는 방법은 프로가스트린-결합 분자, 및 특히 항-hPG 항체의 사용을 포함한다.
폐암은 세계에서 가장 치명적인 악성종양으로 남아 있다. 외과적 치료, 전신 치료, 및 방사선 치료에서의 개선에도 불구하고, 폐암으로 진단된 모든 환자의 5년 생존율은 15 내지 20%의 사이에 남아 있다.
폐암은, 2개의 주요 타입, 즉 소세포 폐암(SCLC) 및 비소세포 폐암(NSCLC)을 포함한다. NSCLC는 모든 폐암의 15 내지 18%를 나타내고, NSCLC는 폐암의 약 80% 내지 85%를 점유한다. 아데노이드 낭포성 암종, 림프종 및 육종 등의 폐암의 다른 타입, 뿐만 아니라 과오종 등의 양성 폐 종양은 희귀하다.
소세포 및 비소세포 폐암은 상이하게 치료된다. 특히, SCLC는 폐암의 다른 세포형보다 화학요법 및 방사선 요법에 더욱 반응성이다. 그러나, SCLC는 진단시에 광범위하게 보급되는 경향이 크기 때문에, 치유를 달성하는 것은 곤란하다. 현재까지, 폐암의 광범위한 임상 실시로 해석되고 있는 분자 바이오마커는 없다. 치료는 암의 발생에 의존하고, 가능하게는 방사선 요법과 조합하여, 작은-국재화 종양 또는 화학요법을 위한 수술을 통상 포함한다.
따라서, 폐암의 신속한, 신뢰성이 높은 및 비용 효과적인 진단을 가능하게 하는 방법이 여전히 필요하다.
이것이 본 발명의 목적이다.
본 발명은, 여기서, 폐암의 시험관내 진단을 위한 방법을 제공하고, 상기 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 검출을 포함한다. 바람직하게는, 상기 샘플 중의 프로가스트린의 양이 측정되고, 따라서 프로가스트린의 정량화가 가능해진다.
인간 프리-프로가스트린, 101 아미노산 펩티드(아미노산 서열 참조: AAB19304.1)는 가스트린 유전자의 일차 번역 산물이다. 프로가스트린은, 프리가스트린으로부터 최초 21 아미노산(신호 펩티드)의 절단에 의해 형성된다. 프로가스트린의 80 아미노산 쇄는 절단에 의해, 및 몇몇 생물학적 활성 가스트린 호르몬 형태: 프로가스트린의 아미노산 38-71을 포함하는 가스트린 34(G34) 및 글리신-신장 가스트린 34(G34-Gly), 및 프로가스트린의 아미노산 55 내지 71을 포함하는 가스트린 17(G17) 및 글리신-신장 가스트린 17(G17-Gly)로 효소를 변형시킴으로써 추가로 처리된다.
항-인간 프로가스트린(항-hPG) 모노클로날 항체 및 치료를 위한 이의 사용은 하기 문헌에 기재되어 있다: 결직장암에 대해서는 WO 2011/083 088, 유방암에 대해서는 WO 2011/083 090, 췌장암에 대해서는 WO 2011/083 091, 결직장암 및 위장암에 대해서는 WO 2011/116 954, 및 간장 병리에 대해서는 WO 2012/013 609 및 WO 2011/083089.
본 발명은 본원에 제공된 상세한 설명 및 첨부의 도면으로부터 보다 완전하게 이해될 것이고, 이들 도면은 예시로서만 제공되며, 본 발명의 의도된 범위를 한정하지 않는다.
제1 양태에서, 본 발명은, 폐암의 존재 위험의 시험관내 평가를 위한 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 프로가스트린을 검출하는 단계를 포함한다. 샘플 중의 프로가스트린의 존재는 폐암의 존재 위험이 있는 것을 나타낸다.
따라서, 제1 실시형태에서, 본 발명은, 대상체에서 폐암의 존재 위험을 평가하는 시험관내 방법으로서,
a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
b) 상기 샘플 중의 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합이 폐암의 존재 위험을 나타내는 단계를 포함하는, 방법에 관한 것이다.
프로가스트린-결합 분자의 결합은 당업자가 이용가능한 다양한 검정에 의해 검출할 수 있다. 검정을 실시하기 위한 임의의 적절한 수단이 본 발명에 포함되지만, 특히 FACS, ELISA, RIA, 웨스턴-블롯 및 IHC를 언급할 수 있다.
바람직한 실시형태에서, 대상체에서 폐암의 존재 위험의 시험관내 평가를 위한 본 발명에 따르는 방법은
a) 상기 대상체로부터의 상기 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
b) 상기 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 측정하는 단계로서, 상기 생물학적 샘플 중의 적어도 10pM의 프로가스트린의 농도가 폐암의 존재 위험을 나타내는 단계를 포함한다.
샘플 중에 존재하는 프로가스트린의 농도가 측정되면, 그 결과는 시험 샘플과 유사한 방식으로 수득되지만 폐암을 앓고 있지 않는 것으로 공지된 개체(들)로부터 수득되는 대조군 샘플(들)의 결과와 비교할 수 있다. 시험 샘플에서 프로가스트린의 농도가 유의적으로 보다 상승되는 경우, 이들이 유래하는 대상체가 폐암을 가질 가능성이 높은 것으로 결론지을 수 있다.
따라서, 보다 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 방법은
c) 참조 샘플 중의 프로가스트린의 참조 농도를 측정하는 단계,
d) 상기 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참조 농도와 비교하는 단계,
e) 단계 d)의 비교로부터 폐암의 존재 위험을 평가하는 단계를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 대상체에서 폐암을 진단하기 위한 시험관내 방법에 관한 것이고, 상기 방법은
a) 상기 대상체로부터의 상기 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
b) 상기 샘플 중의 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합이 상기 대상체에서 폐암의 존재를 나타내는 단계를 포함한다.
바람직한 실시형태에서, 본 발명은 대상체에서 폐암의 시험관내 진단을 위한 방법으로서,
a) 상기 대상체로부터의 상기 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
b) 상기 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 측정하는 단계로서, 상기 생물학적 샘플 중의 적어도 10pM의 프로가스트린의 농도가 상기 대상체에서 폐암의 존재를 나타내는 단계를 포함하는, 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르는 방법의 보다 특정 실시형태에서, 상기 생물학적 샘플 중의 적어도 10pM, 적어도 20pM, 적어도 30pM의 프로가스트린의 농도는 상기 대상체에서 폐암의 존재를 나타낸다.
보다 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 방법은
a) 참조 샘플 중의 프로가스트린의 참조 농도를 측정하는 단계,
b) 상기 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참조 수준 또는 농도와 비교하는 단계,
c) 단계 d)의 비교로부터 폐암의 존재를 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 대상체에서 전이된 폐암을 진단하기 위한 시험관내 방법으로서,
a) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계, 및
b) 상기 샘플 중의 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합이 상기 대상체에서 전이된 폐암의 존재를 나타내는 단계를 포함하는, 시험관내 방법에 관한 것이다.
바람직한 실시형태에서, 본 발명은 상기 대상체의 생물학적 샘플로부터 대상체의 전이된 폐암의 시험관내 진단을 위한 방법으로서,
a) 상기 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
b) 상기 생물학적 샘플 중의 프로가스트린 수준 또는 농도를 생화학적 검정에 의해 측정하는 단계로서, 상기 생물학적 샘플 중의 적어도 10pM 이상의 프로가스트린의 농도가 상기 대상체에서 전이된 폐암의 존재를 나타내는 단계를 포함하는, 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르는 방법의 보다 특정 실시형태에서, 상기 생물학적 샘플 중의 적어도 10pM, 적어도 20pM, 적어도 30pM, 적어도 40pM 또는 적어도 50pM의 프로가스트린의 농도는 상기 대상체에서 전이된 폐암의 존재를 나타낸다.
보다 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 방법은
a) 참조 샘플 중의 프로가스트린의 참조 농도를 측정하는 단계,
b) 상기 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참조 농도와 비교하는 단계,
c) 단계 d)의 비교로부터 전이된 폐암의 존재를 진단하는 단계를 추가로 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은, 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 측정하고 수득된 상기 값을 참조 샘플 중의 프로가스트린의 농도와 비교하는 것을 포함하는, 대상체에서 폐암의 시험관내 진단을 위한 방법에 관한 것이다.
보다 특정 실시형태에서, 본 발명에 따르는 폐암의 진단을 위한 방법에서, 상기 대상체의 생물학적 샘플은 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉되고, 상기 프로가스트린-결합 분자는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
표현 "대상체에서 폐암의 존재 위험의 평가"는, 참조 대상체 또는 값과 비교하는 경우, 폐암을 앓고 있는 소정 대상체에 대한 상대적 확률의 측정을 나타낸다. 본 발명에 따르는 방법은, 폐암의 공지된 바이오마커 수준의 임상적 검사, 생검 및 측정 등의 다른 방법 또는 지표와 조합하여, 상기 위험의 평가에서 툴을 나타낸다.
표현 "시험관내 진단"은, 대상체가 특정 질병을 앓고 있는지를 측정하는 것을 의미한다. 폐암의 진단은, 예를 들면, 저용량 헬리칼 컴퓨터 단층촬영(CT) 스캐닝 등의 상기 대상체 증상의 임상적 관찰을 적어도 수반하는 것으로 공지되어 있다. 몇몇 바이오마커가 발견 단계에서 동정되었지만, 이는 여전히, 주로 체계적 평가 프로세스의 부족으로 인해, 임상에서 이들을 전송하는 주요 과제이다[참조: Li et al, Neoplasma. 2012, 59(5): 500-507].
따라서, 본 발명에 따르는 폐암의 시험관내 진단을 위한 방법은 진단 프로세스 내의 툴로 간주될 수 있다.
표현 "폐암"은, 통상 공기 통로의 내측을 덮는 세포에서, 폐의 조직에서 유래하는 암을 지칭한다. 본원에서 사용되는 "폐암"은 특히 소세포 암종 및 조합된 소세포 암종을 포함하는 소세포 폐암(SCLC), 및 편평 세포 암종, 대세포 암종 및 선암을 포함하는 비소세포 폐암(NSCLC)을 포함한다. 과오종 등의 양성 폐 종양 뿐만 아니라, 아데노이드 낭포성 암종, 림프종 및 육종 등의 다른 타입의 폐암도 본원에서 사용되는 폐암에 또한 포함된다.
용어 "프로가스트린"은 포유동물 프로가스트린 펩티드 및 특히 인간 프로가스트린을 지칭한다. 오해를 피하기 위해, 어떠한 명세 없이, 표현 "인간 프로가스트린"은 서열 서열번호 1의 인간 PG를 지칭한다. 인간 프로가스트린은 특히 상기 언급된 생물학적 활성 가스트린 호르몬 형태로 존재하지 않는 N-말단 및 C-말단 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 상기 N-말단 도메인의 서열은 서열번호 2에 의헤 제시되어 있다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 상기 C-말단 도메인의 서열은 서열번호 3에 의해 제시되어 있다.
본 발명에 따르는 방법에서, 프로가스트린의 농도의 측정은 생화학 분야의 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 실시된다.
바람직하게는, 샘플 중의 프로가스트린 수준의 측정은 상기 샘플을 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키고 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 측정하는 것을 포함한다.
발현 수준이 단백질 수준에서 측정되는 경우, 이는 특히 항체 등의 특정 프로가스트린-결합 분자를 사용하여, 특히 비오티닐화 또는 기타 동등한 기술을 사용한 세포 막 염색 등의 공지된 기술을 사용하여, 이어서 특정 항체에 의한 면역침강, 웨스턴 블롯, ELISA 또는 ELISPOT, 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 방사선면역검정(RIA), 면역조직화학(IHC), 면역형광(IF), 항체 마이크로어레이, 또는 면역조직화학과 결합된 조직 마이크로어레이에 의해 수행할 수 있다. 다른 적합한 기술은 FRET 또는 BRET, 단일 또는 복수의 여기 파장을 사용하는 단세포 현미경법 또는 조직화학법, 및 전기화학법(전압전류 및 전류측정 기술), 원자간력 현미경법, 라디오 주파수법 등의 임의의 적응 광학 방법, 예를 들면, 다중극 공명 분광법, 공초점 및 비공초점, 형광, 발광, 화학발광, 흡광도, 반사율, 투과율, 및 복굴절 또는 굴절율의 검출(예: 표면 플라스몬 공명, 엘립소메트리, 공명 미러 방법, 격자 커플러 도파로법 또는 간섭법), 세포 ELISA, 유세포 분석, 방사성동위체, 자기 공명 화상법, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 의한 분석; HPLC-질량 분석법; 액체 크로마토그래피/질량 분석/질량 분석(LC-MS/MS)을 포함한다. 이들 모든 기술은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 여기에서 추가로 상세하게 설명할 필요는 없다. 이들 상이한 기술을 사용하여 프로가스트린 수준을 측정할 수 있다.
상기 방법은, 특히, 면역-검출에 기초하는 방법, 웨스턴 블롯에 기초하는 방법, 질량 분석에 기초하는 방법, 크로마토그래피에 기초하는 방법 및 유세포 분석에 기초하는 방법 중에서 선택할 수 있다. 검정을 실시하기 위한 임의의 적합한 수단이 본 발명에 포함되지만, FACS, ELISA, RIA, 웨스턴-블롯 및 IHC 등의 방법이 본 발명의 방법을 실시하기 위해 특히 유용하다.
보다 특정 실시형태에서, 본 발명에 따르는 폐암의 시험관내 진단을 위한 방법은 바람직하게는 RIA 및 ELISA 중에서 선택된 기술에 기초하는 면역효소 검정을 사용하여 대상체로부터의 생물학적 샘플을 프로가스트린 결합 분자와 접촉시키는 것을 포함한다.
본원에서 사용되는 "생물학적 샘플"은, 예를 들면, 폐암 단백질, 폴리뉴클레오티드 또는 전사물의 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하는 생물학적 조직 또는 체액의 샘플이다. 이러한 샘플은 프로가스트린의 발현 수준의 측정을 가능하게 해야 한다. 프로가스트린은 분비 단백질인 것으로 공지되어 있다. 따라서, 프로가스트린 단백질의 수준을 측정하기 위한 바람직한 생물학적 샘플은 생물학적 체액을 포함한다. 본원에서 사용되는 "생물학적 체액"은 생물학적 기원의 재료를 포함하는 임의의 체액을 의미한다. 본 발명에서 사용하기 위한 바람직한 생물학적 체액은 동물, 예를 들면, 포유동물, 바람직하게는 인간 대상체의 체액을 포함한다. 체액은, 혈액, 혈장, 혈청, 림프액, 뇌척수액(CSF), 타액, 땀 및 뇨를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는 임의의 체액일 수 있다. 바람직하게는, 상기 바람직한 액체 생물학적 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플 또는 혈청 샘플 등의 샘플을 포함한다. 보다 바람직하게는, 생물학적 샘플은 혈액 샘플이다. 실제로, 이러한 혈액 샘플은 환자로부터 완전히 무해한 채혈에 의해 수득될 수 있고, 따라서 대상체가 종양을 발증하는 위험의 비-침습적 평가를 가능하게 한다.
본원에서 사용되는 "생물학적 샘플"은, 암이 고형 종양인 경우, 시험되는 환자의 고형암 샘플을 또한 포함한다. 이러한 고형암 샘플에 의해, 당업자는, 본 발명의 바이오마커의 수준의 임의 유형의 측정을 실시할 수 있다. 일부 경우에, 본 발명에 따르는 방법은, 환자로부터 고형암 샘플을 채취하는 예비 단계를 추가로 포함할 수 있다. "고형암 샘플"이란, 종양 조직 샘플을 지칭한다. 암 환자에서도, 종양 부위인 조직은 여전히 비-종양 건강한 조직을 여전히 포함한다. 따라서, "암 샘플"은 환자로부터 채취한 종양 조직으로 한정될 필요가 있다. 상기 "암 샘플"은 생검 샘플 또는 외과적 절제 요법으로부터 채취한 샘플일 수 있다.
생물학적 샘플은 전형적으로 진핵생물 생물, 가장 바람직하게는 포유동물, 또는 조류, 파충류 또는 어류로부터 수득된다. 실제로, 본원에 기재된 방법에 제공될 수 있는 "대상체"는 인간, 개, 고양이, 소, 염소, 돼지(pig), 돼지(swine), 양 및 원숭이를 포함하는 임의의 포유동물; 또는 조류; 파충류; 또는 어류일 수 있다. 바람직하게는, 대상체는 인간이고; 인간 대상체는 "환자"로서 공지될 수 있다.
"생물학적 샘플을 수득한다"란, 본원에서, 본 발명에 기재된 방법에 사용하는 생물학적 샘플을 수득하는 것을 의미한다. 종종, 이는 동물로부터 세포의 샘플을 제거함으로써 수행될 수 있지만, 사전 단리된 세포(예: 또 다른 인간, 또 다른 시간 및/또는 또 다른 목적을 위해 단리된)를 사용하거나 본 발명의 방법을 생체내에서 실시함으로써 또한 달성할 수 있다. 치료 또는 치료 이력을 갖는 아카이브 조직이 특히 유용하다.
이러한 샘플은, 당업자에게 공지된 방법에 따라 수득하고 필요에 따라 제조할 수 있다. 특히, 샘플은 공복 대상체로부터 채취되어야 하는 것이 당해 기술분야에 공지되어 있다.
프로가스트린의 농도의 측정은 샘플의 공지된 용적에서 프로가스트린의 양의 측정에 관한 것이다. 프로가스트린의 농도는, 예를 들면, 비율 또는 퍼센트로서 참조 샘플에 대해 상대적으로 표시될 수 있다. 농도는, 상기 농도의 측정에 사용된 방법에 따라, 신호의 강도 또는 국재화로서 또한 표시될 수 있다. 바람직하게는, 샘플 중의 화합물의 농도는, 상기 샘플 중의 관련 화합물의 총 농도의 정규화 후에 표시되고, 예를 들면, 단백질의 수준 또는 농도는 샘플 중의 단백질의 총 농도의 정규화 후에 표시된다.
바람직하게는, 상기 대상체가 폐암을 앓고 있는 위험은 상기 생물학적 샘플에서 측정된 프로가스트린 수준을 참조 수준과 비교함으로써 측정된다.
본원에서 사용되는 용어 "참조 수준"은 참조 샘플 중의 검토 중의 폐암 마커, 즉 프로가스트린의 발현 수준을 지칭한다. 본원에서 사용되는 "참조 샘플"은, 질환을 갖지 않는 것으로 공지되어 있거나, 달리는, 일반 모집단으로부터 대상체, 바람직하게는 2명 이상의 대상체로부터 수득한 샘플을 의미한다. 프로가스트린의 적합한 참조 발현 수준은 몇몇 적합한 대상체의 상기 마커의 발현 수준을 측정함으로써 측정할 수 있고, 이러한 참조 수준은 특정 대상체 모집단으로 조정할 수 있다. 참조 값 또는 참조 수준은 절대 값; 상대 값; 상한 또는 하한을 갖는 값; 소정 범위의 값; 평균 값; 중앙 값, 평균 값, 또는 특정 대조군 또는 기준선 값과 비교한 값일 수 있다. 참조 값은, 예를 들면, 시험 중의 대상체의 샘플로부터 수득한 값 등의 개개 샘플 값에 기초할 수 있지만, 각각은 이전 시점의 것일 수 있다. 참조 값은, 연령이 일치하는 시계열 그룹의 대상체의 모집단 등의 다수의 샘플, 또는 시험 중의 샘플을 포함하거나 포함하지 않는 샘플의 풀에 기초할 수 있다.
유리하게는, "참조 수준"은, 암과 관련하여 공지된 특정 상태를 갖는 대상체로부터의 생물학적 샘플로부터 수득한 소정 프로가스트린 수준이다. 특정 실시형태에서, 단계 (b)에서 시험 샘플과 비교하기 위해 사용되는 참조 수준은 건강한 대상체의 생물학적 샘플로부터, 또는 암을 앓고 있는 대상체의 생물학적 샘플로부터 수득할 수 있고; 참조 발현 프로파일은 또한 건강한 대상체의 생물학적 샘플의 풀로부터, 또는 암을 갖는 대상체의 샘플의 풀로부터 수득할 수 있다.
본 발명의 방법의 특정 실시형태에서, 참조 샘플은 임의의 암으로부터 면제된 대상체로부터, 및 바람직하게는 임의의 병리학으로부터 수집된다. 환자로부터 수집된 생물학적 샘플의 성질에 따라, 참조 샘플은 상기 생물학적 샘플과 동일한 성질의 생물학적 샘플일 수 있음을 이해해야 한다.
프로가스트린의 수준은, 본 방법에서, 프로가스트린-결합 분자, 바람직하게는 프로가스트린을 인식하는 항체에 의해 결합되는 프로가스트린의 양을 측정함으로써 측정된다.
"프로가스트린-결합 분자"란, 본원에서는, 프로가스트린에 결합하지만, 가스트린-17(G17), 가스트린-34(G34), 글리신-신장 가스트린-17(G17-Gly), 또는 글리신-신장 가스트린-34(G34-Gly)에 결합하지 않는 임의의 분자를 지칭한다. 본 발명의 프로가스트린-결합 분자는, 예를 들면, 항체 분자 또는 수용체 분자 등의 임의의 프로가스트린-결합 분자일 수 있다. 바람직하게는, 프로가스트린-결합 분자는 항-프로가스트린 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
특정 실시형태에 따르면, 본 발명은, 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 측정하는 것을 포함하는 폐암의 시험관내 진단 방법에 관한 것이고, 상기 대상체는 폐암의 적어도 하나의 임상 증상을 나타낸다.
또 다른 특정 실시형태에 따르면, 본 발명은 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 측정하는 것을 포함하는 폐암의 시험관내 진단 방법에 관한 것이고, 상기 대상체는 암 및/또는 전이의 적어도 하나의 임상 증상을 나타낸다.
"결합", "결합하다" 등이란, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이, 생리학적 조건하에서 비교적 안정한 항원과 복합체를 형성하는 것으로 의도된다. 2개 분자가 결합하는지를 측정하는 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들면, 평형 투석, 표면 플라스몬 공명 등을 포함한다. 특정 실시형태에서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, BSA 또는 카세인 등의 비-특이적 분자에 결합하는 이의 친화성보다 적어도 2배 큰 친화성으로 프로가스트린에 결합한다. 보다 특정 실시형태에서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 프로가스트린에만 결합한다.
특정 실시형태에서, 본 발명에 따르는 폐암의 진단을 위한 방법에서, 대상체로부터의 생물학적 샘플은 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키고, 프로가스트린에 대한 상기 분자의 친화성은, 상기 기재된 바와 같은 방법에 의해 측정할 때, 적어도 100nM, 적어도 90nM, 적어도 80nM, 적어도 70nM, 적어도 60nM, 적어도 50nM, 적어도 40nM, 적어도 30nM, 적어도 20nM, 적어도 10nM, 적어도 5nM, 적어도 1nM, 적어도 100pM, 적어도 10pM 또는 적어도 1pM이다.
특정 실시형태에서, 본 발명은, 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도의 검출을 포함하는 폐암의 진단 방법에 관한 것이고, 여기서 상기 생물학적 샘플은 항-hPG 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 항체(또는 "면역글로불린")는, 디설파이드 결합에 의해 상호 접속된 적어도 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄를 포함하는 당단백질로 이루어진다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역(또는 도메인)(본원에서 HCVR 또는 VH로서 약칭함) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 VL로서 약칭함) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, CL을 포함한다. VH 및 VL 영역은, "상보성 결정 영역"(CDR) 또는 "초가변 영역"으로 불리우는 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있고, 이는 항원의 에피토프의 결합에 주로 관여하고, 프레임워크 영역(FR)으로 불리우는 보다 많이 보존되어 있는 영역이 산재되어 있다. 항체의 경쇄 및 중쇄 내의 CDR을 동정하고 이들의 서열을 결정하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 오해를 피하기 위해, 본문에서 반대의 지시가 없는 경우, 표현 CDR은 IMGT에 의해 정의된 항체의 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역을 의미하고, 여기서 IMGT 고유 번호는 프레임워크 영역 및 상보성 결정 영역의 표준화 구분, CDR1-IMGT: 27~38, CDR2를 제공한다.
IMGT 고유 번호는 항원 수용체, 쇄 유형 또는 종류와 관계 없이 가변 도메인을 비교하기 위해 정의되어 있다[참조: Lefranc M.-P., Immunology Today 18, 509 (1997)/Lefranc M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999)/Lefranc, M.-P., Pommie, C., Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V. and Lefranc, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)]. IMGT 고유 번호에서, 보존된 아미노산은 항상 동일한 위치, 예를 들면, 시스테인 23(1st-CYS), 트립토판 41(CONSERVED-TRP), 소수성 아미노산 89, 시스테인 104(2nd-CYS), 페닐알라닌 또는 트립토판 118(J-PHE 또는 J-TRP)을 갖는다. IMGT 고유 번호는 프레임워크 영역(FR1-IMGT: 위치 1 내지 26, FR2-IMGT: 39 내지 55, FR3-IMGT: 66 내지 104 및 FR4-IMGT: 118 내지 128) 및 상보성 결정 영역: CDR1-IMGT: 27 내지 38, CDR2-IMGT: 56 내지 65 및 CDR3-IMGT: 105 내지 117의 표준화 구분을 제공한다. 갭은 빈 위치를 나타내기 때문에, CDR-IMGT 길이(괄호로 제시되고 점선으로 분리됨, 예를 들면, [8.8.13])는 중요한 정보로 된다. IMGT 고유 번호는, IMGT Colliers de Perles로서 지정된 2D 그래픽 표시[참조: Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-883 (2002)/Kaas, Q. and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)], 및 IMGT/3Dstructure-DB의 3D 구조[참조: Kaas, Q., Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structural data. Nucl. Acids. Res., 32, D208-D210 (2004)]에서 사용된다.
각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되고, 아미노-말단으로부터 카복실-말단까지 하기 순서로 배치되어 있다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예: 이펙터 세포) 및 고전적 상보 시스템의 최초 성분(Clq)을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 항체는 상이한 이소형(즉, IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM)의 것일 수 있다.
특정 실시형태에서, 상기 프로가스트린-결합 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 키메라 항체, 단일 쇄 항체, 낙타 항체, IgA1 항체, IgA2 항체, IgD 항체, IgE 항체, IgG1 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, IgG4 항체 및 IgM 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
"폴리클로날 항체"는, 하나 이상의 다른 비-동일한 항체 중에서 또는 이의 존재하에 생성될 수 있는 항체이다. 일반적으로, 폴리클로날 항체는 비-동일한 항체를 생성하는 몇몇 다른 B-림프구의 존재하에 B-림프구로부터 생성된다. 통상적으로, 폴리클로날 항체는 면역화 동물로부터 직접 수득된다.
용어 "모노클로날 항체"는 거의 균일한 항체 모집단으로부터 생성되는 항체를 지칭하고, 여기서 모집단은, 최소한의 비율로 발견될 수 있는 소수의 가능한 자연-발생 돌연변이를 제외한 동일한 항체를 포함한다. 모노클로날 항체는 하이브리도마 등의 단일 세포 클론의 성장으로부터 생성되고, 하나의 클라스 및 서브클라스의 중쇄 및 한 유형의 경쇄를 특징으로 한다.
표현 항체의 "항원-결합 단편"은, 상기 항체의 표적(또한 일반적으로 항원으로 지칭됨), 일반적으로 동일한 에피토프에 결합하는 능력을 보유하고, 상기 항체의 아미노산 서열의 적어도 5개 연속 아미노산 잔기, 적어도 10개 연속 아미노산 잔기, 적어도 15개 연속 아미노산 잔기, 적어도 20개 연속 아미노산 잔기, 적어도 25개 연속 아미노산 잔기, 적어도 40개 연속 아미노산 잔기, 적어도 50개 연속 아미노산 잔기, 적어도 60개 연속 아미노산 잔기, 적어도 70개 연속 아미노산 잔기, 적어도 80개 연속 아미노산 잔기, 적어도 90개 연속 아미노산 잔기, 적어도 100개 연속 아미노산 잔기, 적어도 125개 연속 아미노산 잔기, 적어도 150개 연속 아미노산 잔기, 적어도 175개 연속 아미노산 잔기, 또는 적어도 200개 연속 아미노산 잔기를 포함하는 임의의 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질을 나타내는 것으로 의도된다.
특정 실시형태에서, 상기 항원-결합 단편은 이것이 유래하는 항체의 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 여전히 바람직한 실시형태에서, 상기 항원 결합 단편은 이것이 유래하는 항체의 2, 3, 4 또는 5개 CDR, 보다 바람직하게는 6개 CDR을 포함한다.
"항원-결합 단편"은, 제한 없이, Fv, scFv(일본 쇄의 sc), Fab, F(ab')2, Fab', scFv-Fc 단편 또는 디아바디, 또는 XTEN(신장된 재조합 폴리펩티드) 또는 PAS 모티브 등의 무질서 펩티드, 또는 폴리(에틸렌) 글리콜 등의 폴리(알킬렌) 글리콜의 부가("PEGylation") 등의 화학적 변형(Fv-PEG, scFv-PEG, Fab-PEG, F(ab')2-PEG 또는 Fab'-PEG으로 불리우는 페길화된 단편)(폴리(에틸렌) 글리콜의 "PEG") 또는 리포좀 중의 도입에 의해 반감기가 증가될 수 있는 임의의 단편과의 융합 단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있고, 상기 단편은 본 발명에 따르는 항체의 특징적 CDR의 적어도 하나를 갖는다. 바람직하게는, 상기 "항원-결합 단편"은 이들이 유래하는 항체의 가변 중쇄 또는 경쇄의 부분 서열을 구성하거나 이들을 포함할 수 있고, 상기 부분 서열은 이것이 하강하는 항체와 동일한 결합 특이성, 및 표적에 대하여, 이것이 하강하는 항체의 충분한 친화성, 바람직하게는 항체 친화성의 적어도 1/100, 바람직한 방식에서 적어도 1/10까지 친화성을 보유하기에 충분하다.
또 다른 특정 실시형태에서, 본 발명에 따르는 폐암의 진단 방법에서, 대상체로부터의 생물학적 샘플은 프로가스트린에 결합하는 항체와 접촉되고, 상기 항체는 당업자에게 공지된 면역화 방법에 의해 수득되고, 면역원으로서, 아미노산 서열이 프로가스트린의 아미노산 서열의 전체 또는 일부를 포함하는 펩티드를 사용한다. 보다 상세하게는, 상기 면역원은 하기 중에서 선택된 펩티드를 포함한다:
· 아미노산 서열이 전장 프로가스트린, 및 특히 서열번호 1의 전장 인간 프로가스트린의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 이루어지는 펩티드,
· 아미노산 서열이 프로가스트린, 및 특히 서열번호 1의 전장 인간 프로가스트린의 아미노산 서열의 일부에 상응하는 펩티드,
· 아미노산 서열이 프로가스트린의 N-말단 부분의 일부 또는 전체 아미노산 서열에 상응하는 펩티드, 및 특히 아미노산 서열: SWKPRSQQPDAPLG(서열번호 2)을 포함하거나 이들로 이루어지는 펩티드, 및
· 아미노산 서열이 프로가스트린의 C-말단 부분의 일부 또는 전체 아미노산 서열에 상응하는 펩티드, 및 특히 아미노산 서열: QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN(서열번호 3)을 포함하거나 이들로 이루어지는 펩티드,
· 아미노산 서열이 프로가스트린의 C-말단 부분의 아미노산 서열의 일부에 상응하는 펩티드, 및 특히 프로가스트린의 아미노산 71-80에 상응하는 아미노산 서열 FGRRSAEDEN(서열번호 40)을 포함하는 펩티드.
당업자는, 이러한 면역화를 사용하여, 필요에 따라 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 생성할 수 있음을 이해한다. 이들 유형의 항체를 각각 수득하는 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다. 따라서, 당업자는 임의의 소정 항원에 대한 폴리클로날 및/또는 모노클로날 항체를 생성하는 방법을 용이하게 선택 및 실시할 수 있다.
인간 프로가스트린의 아미노산 서열 1-14에 상응하는 아미노산 서열 "SWKPRSQQPDAPLG"을 포함하는 면역원을 사용하여 생성된 모노클로날 항체의 예(N-말단)는 하기 표 1 내지 표 4에 기재된 바와 같이 mAb3, mAb4, mAb16, 및 mAb19 및 mAb20로서 지정된 모노클로날 항체를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 다른 모노클로날 항체는, 이들 항체가 실제로 프로가스트린에 결합하는지는 명백하지 않지만, 기재되어 있다(WO 2006/032980). 에피토프 맵핑의 실험 결과는 mAb3, mAb4, mAb16, 및 mAb19 및 mAb20가 상기 hPG N-말단 아미노산 서열 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 나타낸다. 서열번호 2에 의해 제시된 프로가스트린의 N-말단 내의 에피토프를 특이적으로 인식하는 폴리클로날 항체는 당해 기술분야에 기재되어 있다(WO　2011/083088 참조).
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인간 프로가스트린의 아미노산 서열 55-80에 상응하는 아미노산 서열 "QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN"(프로가스트린의 C-말단 부분)을 포함하는 면역원을 사용하여 생성될 수 있는 모노클로날 항체의 예는 하기 표 5 및 6에서 mAb8 및 mAb13으로 지정된 항체를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 에피토프 맵핑의 실험 결과는 mAb13이 상기 hPG C-말단 아미노산 서열 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 나타낸다. 따라서, 이에 의해 생성될 수 있는 모노클로날 항체의 또 다른 예는 WO 2011/083088에 기재된 하이브리도마 2H9F4B7에 의해 생성된 항체 Mab14이다. 하이브리도마 2H9F4B7은 프랑스, 75724 파리 세덱스 15, 뤼 뒤 독퇴르 뢰(rue du Docteur Roux) 25-28에 소재하는 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르(Institut Pasteur)에 2016년 12월 27일자로 참조 I-5158하에 부다페스트 조약하에 기탁되었다(WO 2017/114973 참조).
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다른 예는 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 면역원을 사용하여 생성된 항-hPG 모노클로날 및/또는 폴리클로날 항체를 포함한다.
보다 특정 실시형태에서, 본 발명에 따르는 방법에서, 상기 생물학적 샘플은 항-hPG 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉되고, 상기 항-hPG 항체는 N-말단 항-hPG 항체 및 C-말단 항-hPG 항체 중에서 선택된다.
용어 "N-말단 항-hPG 항체" 및 "C-말단 항-hPG 항체"는, hPG의 N-말단 부분에 위치하는 아미노산을 포함하는 에피토프, 또는 hPG의 C-말단 부분에 위치하는 아미노산을 포함하는 에피토프에 각각 결합하는 항체를 나타낸다. 바람직하게는, 용어 "N-말단 항-hPG 항체"는 프로가스트린의 도메인에 위치하는 에피토프에 결합하는 항체를 지칭하고, 이의 서열은 서열번호 2에 제시되어 있다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 용어 "C-말단 항-hPG 항체"는 프로가스트린의 도메인에 위치하는 에피토프에 결합하는 항체를 지칭하고, 이의 서열은 서열번호 3에 제시되어 있다.
용어 "에피토프"는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역을 지칭한다. 에피토프는 구조적 또는 기능적으로 정의될 수 있다. 기능적 에피토프는 일반적으로 구조 에피토프의 서브세트이고, 상호작용의 친화성에 직접 기여하는 아미노산을 갖는다. 에피토프는 또한 입체구조적일 수 있다. 특정 실시형태에서, 에피토프는, 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 그룹 또는 설포닐 그룹 등의 분자의 화학적 활성 표면 그룹인 결정기를 포함할 수 있고, 특정 실시형태에서, 특정 3차원 구조 특성 및/또는 특정 전하 특징을 가질 수 있다. 항체에 의해 결합된 에피토프의 결정은 당업자에게 공지된 임의의 에피토프 맵핑 기술에 의해 실시할 수 있다. 에피토프는 단백질의 아미노산 서열 내에 연속하여 위치하는 상이한 아미노산을 포함할 수 있다. 에피토프는 단백질의 아미노산 서열 내에 연속하여 위치하지 않는 아미노산을 또한 포함할 수 있다.
특정 실시형태에서, 상기 항체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 모노클로날 항체이다:
· 아미노산 서열 서열번호 4, 5 및 6의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 4, 5 및 6의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 7, 8 및 9의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 7, 8 및 9의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
· 아미노산 서열 서열번호 10, 11 및 12의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 10, 11 및 12의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 13, 14 및 15의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 13, 14 및 15의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
· 아미노산 서열 서열번호 16, 17 및 18의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 16, 17 및 18의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 19, 20 및 21의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 19, 20 및 21의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
· 아미노산 서열 서열번호 22, 23 및 24의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 22, 23 및 24의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 25, 26 및 27의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 25, 26 및 27의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
· 아미노산 서열 서열번호 28, 29 및 30의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 28, 29 및 30의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 31, 32 및 33의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 31, 32 및 33의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체, 및
· 아미노산 서열 서열번호 34, 35 및 36의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 34, 35 및 36의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 37, 38 및 39의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 37, 38 및 39의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체.
또 다른 실시형태에서, 항체는 프랑스, 75724 파리 세덱스 15, 뤼 뒤 독퇴르 뢰 25-28에 소재하는 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르에 2016년 12월 27일자로 참조 I-5158하에 부다페스트 조약하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 모노클로날 항체이다(WO 2017/114973 참조).
본 발명의 의미에서, 핵산 또는 아미노산의 2개 서열 사이의 "퍼센트 동일성" 또는 "% 동일성"은, 최적 정렬 후에 수득되는, 비교되는 2개 서열 사이의 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 비율을 의미하고, 이 비율은 순수하게 통계학적이고 2개 서열 사이의 차이는 이들의 길이를 따라 랜덤하게 분산된다. 2개 핵산 또는 아미노산의 비교는 이들을 최적으로 정렬시킨 후에 서열을 비교함으로써 전통적으로 수행되고, 상기 비교는 세그먼트에 의해, 또는 "정렬 윈도우"를 사용함으로써 실시할 수 있다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 손에 의한 비교에 추가하여, 당업자에게 공지되어 있는 방법에 의해 실행할 수 있다.
참조 아미노산 서열과 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 나타내는 아미노산 서열에 대해, 바람직한 예는 참조 서열, 특정 변형, 특히 적어도 하나의 아미노산의 결실, 부가 또는 치환, 절단 또는 신장을 포함한다. 하나 이상의 연속적 또는 비-연속적 아미노산의 치환의 경우, 치환된 아미노산이 "동등한" 아미노산으로 치환되는 치환이 바람직하다. 여기서, 표현 "동등한 아미노산"은, 대응하는 항체 및 하기 정의된 특정 예의 생물학적 활성을 변경시키지 않고서, 구조 아미노산 중의 하나로 치환될 가능성이 있는 임의의 아미노산을 나타내는 것을 의미한다.
동등한 아미노산은, 치환되는 아미노산과의 구조적 상동성, 또는 생성될 가능성이 있는 다양한 항체 사이의 생물학적 활성의 비교 시험의 결과에 따라 결정될 수 있다.
보다 특정 실시형태에서, 상기 항체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 모노클로날 항체이다:
· 아미노산 서열 서열번호 41의 중쇄 및 아미노산 서열 서열번호 42의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체;
· 아미노산 서열 서열번호 43의 중쇄 및 아미노산 서열 서열번호 44의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체;
· 아미노산 서열 서열번호 45의 중쇄 및 아미노산 서열 서열번호 46의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체;
· 아미노산 서열 서열번호 47의 중쇄 및 아미노산 서열 서열번호 48의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체;
· 아미노산 서열 서열번호 49의 중쇄 및 아미노산 서열 서열번호 50의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체; 및
· 아미노산 서열 서열번호 51의 중쇄 및 아미노산 서열 서열번호 52의 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체.
또 다른 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법에 사용된 항체는 인간화 항체이다.
본원에 사용된 바와 같이, 표현 "인간화 항체"는 비인간 기원의 항체로부터 유래하는 CDR 영역을 함유하는 항체를 의미하고, 항체 분자의 다른 부분은 하나 또는 수개의 인간 항체로부터 유래한다. 또한, 당업자에게 공지된 기술에 따라, 골격 세그먼트 잔기의 일부(프레임워크에서는 FR로서 불리움)를 변형시켜 결합 친화성을 유지할 수 있다[참조: Jones et al., Nature, 321:522-525, 1986]. 인간화의 목표는, 항체의 완전한 항원 결합 친화성 및 특이성을 유지하면서, 인간으로의 도입을 위한 뮤린 항체 등의 이종 항체의 면역원성의 저하이다.
본 발명의 인간화 항체 또는 이의 단편은, 당업자에게 공지된 기술(예를 들면, 문헌[참조: Singer et al., J. Immun., 150:2844-2857, 1992]에 기재된 것들)에 의해 제조할 수 있다. 이러한 인간화 항체는, 시험관내 진단 또는 생체내 예방적 및/또는 치료적 처치를 수반하는 방법에서의 사용에 바람직하다. 기타 인간화 기술은 또한 당업자에게 공지되어 있다. 실제로, CDR-그래프트(EP 0　451　261; EP 0　682　040; EP 0　939　127; EP 0　566　647; US 5,530,101; US 6,180,370; US 5,585,089; US 5,693,761; US 5,639,641; US 6,054,297; US 5,886,152; 및 US 5,877,293), 베니어링 또는 재표면화(EP 0 592 106; EP 0 519 596; Padlan E. A., 1991, Molecular Immunology 28(4/5): 489-498; Studnicka G. M. et al., 1994, Protein Engineering 7(6): 805-814; Roguska M.A. et al., 1994, Proc. Natl. Acad. ScL U.S.A., 91:969-973), 및 쇄 셔플링(U.S. Pat. No. 5,565,332)를 포함하는 다양한 기술을 사용하여 항체를 인간화시킬 수 있다. 인간 항체는 파지 디스플레이 방법을 포함하는 당해 기술분야에 공지된 다양한 방법에 의해 제조할 수 있다. 미국 특허 4,444,887, 4,716,111, 5,545,806 및 5,814,318; 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735, 및 WO 91/10741 참조.
보다 특정 실시형태에서, 상기 항체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 인간화 항체이다:
· 아미노산 서열 서열번호 4, 5 및 6의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 4, 5 및 6의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 7, 8 및 9의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 7, 8 및 9의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항체,
· 아미노산 서열 서열번호 10, 11 및 12의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 10, 11 및 12의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 13, 14 및 15의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 13, 14 및 15의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항체,
· 아미노산 서열 서열번호 16, 17 및 18의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 16, 17 및 18의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 19, 20 및 21의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 19, 20 및 21의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항체,
· 아미노산 서열 서열번호 22, 23 및 24의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 22, 23 및 24의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 25, 26 및 27의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 25, 26 및 27의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항체,
· 아미노산 서열 서열번호 28, 29 및 30의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 28, 29 및 30의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 31, 32 및 33의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 31, 32 및 33의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항체, 및
· 아미노산 서열 서열번호 34, 35 및 36의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 34, 35 및 36의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 37, 38 및 39의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하거나, 서열번호 37, 38 및 39의 서열과 최적 정렬후 적어도 80%, 바람직하게는 85%, 90%, 95% 및 98% 동일성을 갖는 서열을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 인간화 항체,
여기서, 상기 항체는 또한 인간 항체로부터 유래하는 경쇄 및 중쇄의 불변 영역을 포함한다.
또 다른 보다 특정 실시형태에서, 상기 항체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 인간화 항체이다:
· 아미노산 서열 서열번호 53의 중쇄 가변 영역 및 아미노산 서열 서열번호 54의 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간화 항체;
· 아미노산 서열 서열번호 55의 중쇄 가변 영역 및 아미노산 서열 서열번호 56의 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간화 항체;
· 서열번호 57, 58 및 59로부터 선택된 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 60, 61 및 62로부터 선택된 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간화 항체;
· 서열번호 63, 64 및 65로부터 선택된 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 66, 67 및 68로부터 선택된 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간화 항체;
· 서열번호 69 및 71로부터 선택된 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 70 및 72로부터 선택된 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간화 항체; 및
· 서열번호 75 및 76으로부터 선택된 아미노산 서열의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 77 및 78로부터 선택된 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간화 항체;
여기서, 상기 항체는 인간 항체로부터 유래하는 경쇄 및 중쇄의 불변 영역을 또한 포함한다.
제1 실시형태에서, 본 발명에 따르는 방법은 생물학적 샘플을 hPG의 에피토프에 결합하는 항-hPG 항체와 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 에피토프는 hPG의 C-말단 부분 내에 위치하거나 hPG의 N-말단 부분 내에 위치한다.
보다 특정 실시형태에서, 본 발명에 따르는 방법은 생물학적 샘플을 hPG의 에피토프에 결합하는 항-hPG 항체와 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 에피토프는 hPG의 아미노산 10 내지 14, hPG의 아미노산 9 내지 14, hPG의 아미노산 4 내지 10, hPG의 아미노산 2 내지 10 및 hPG의 아미노산 2 내지 14에 상응하는 아미노산 서열 중에서 선택된 프로가스트린의 N-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하고, hPG의 아미노산 서열은 서열번호 1이다.
보다 특정 실시형태에서, 본 발명에 따르는 방법은 생물학적 샘플을 hPG의 에피토프에 결합하는 항-hPG 항체와 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 에피토프는 hPG의 아미노산 71 내지 74, hPG의 아미노산 69 내지 73, hPG의 아미노산 71 내지 80(서열번호 40), hPG의 아미노산 76 내지 80, 및 hPG의 아미노산 67 내지 74에 상응하는 아미노산 서열 중에서 선택된 프로가스트린의 C-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하고, hPG의 상기 아미노산 서열은 서열번호 1이다.
제1 실시형태에서, 본 발명에 따르는 조성물은 프로가스트린의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 에피토프를 인식하는 항체를 포함한다.
보다 구체적 실시형태에서, 본 발명에 따르는 조성물은 프로가스트린의 에피토프를 인식하는 항체를 포함하고, 상기 에피토프는 프로가스트린의 N-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노산 서열은 hPG의 잔기 10 내지 14, hPG의 잔기 9 내지 14, hPG의 잔기 4 내지 10, hPG의 잔기 2 내지 10 또는 hPG의 잔기 2 내지 14를 포함할 수 있고, hPG의 상기 아미노산 서열은 서열번호 1이다.
보다 구체적 실시형태에서, 본 발명에 따르는 조성물은 프로가스트린의 에피토프를 인식하는 항체를 포함하고, 상기 에피토프는 프로가스트린의 C-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노산 서열은 hPG의 잔기 71 내지 74, hPG의 잔기 69 내지 73, hPG의 잔기 71 내지 80(서열번호 40), hPG의 잔기 76 내지 80, 또는 hPG의 잔기 67 내지 74를 포함할 수 있고, hPG의 상기 아미노산 서열은 서열번호 1이다.
본 발명에 따르는 폐암의 시험관내 진단 방법의 특정 실시형태에서, 상기 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플을 프로가스트린의 제1 부분에 결합하는 제1 분자 및 프로가스트린의 제2 부분에 결합하는 제2 분자와 접촉시키는 것을 포함한다. 보다 특정 실시형태에서, 상기 프로가스트린-결합 분자는 항체이고, 대상체로부터의 생물학적 샘플은 프로가스트린의 제1 에피토프에 결합하는 항체 및 프로가스트린의 제2 에피토프에 결합하는 제2 항체와 접촉된다.
본 발명의 방법의 특정 실시형태에서, 상기 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플을 프로가스트린의 제1 부분에 결합하는 제1 약제 및 프로가스트린의 제2 부분에 결합하는 제2 약제와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 특정 실시형태에서, 상기 프로가스트린-결합 분자는 항체이고, 대상체로부터의 생물학적 샘플은 프로가스트린의 제1 에피토프에 결합하는 항체 및 프로가스트린의 제2 에피토프에 결합하는 제2 항체와 접촉된다.
바람직한 실시형태에 따르면, 상기 제1 항체는 불용성 또는 부분적 가용성의 담체에 결합된다. 상기 제1 항체에 의한 프로가스트린의 결합은 상기 생물학적 샘플로부터 프로가스트린의 포획을 야기한다. 바람직하게는, 상기 제1 항체는 hPG의 에피토프에 결합하는 항체이고, 상기 에피토프는 상기 기재된 바와 같이 프로가스트린의 C-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 제1 항체는 WO 2011/083088에 기재된 하이브리도마 2H9F4B7에 의해 생성된 모노클로날 항체 Mab14이다. 하이브리도마 2H9F4B7은 프랑스, 75724 파리 세덱스 15, 뤼 뒤 독퇴르 뢰 25-28에 소재하는 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르에 2016년 12월 27일자로 참조 I-5158하에 부다페스트 조약하에 기탁되었다(WO 2017/114973 참조).
또 다른 바람직한 실시형태에 따르면, 상기 제2 항체는 하기 기재된 바와 같이 검출가능한 모이어티로 표지된다. 제2 항체에 의한 프로가스트린의 결합은, 생물학적 샘플에 존재하는 프로가스트린 분자의 검출을 가능하게 한다. 추가로, 제2 항체에 의한 프로가스트린의 결합은 생물학적 샘플에 존재하는 프로가스트린 분자의 정량화를 가능하게 한다. 바람직하게는, 상기 제2 항체는 hPG의 에피토프에 결합하는 항체이고, 상기 에피토프는 상기 기재된 바와 같은 프로가스트린의 N-말단 부분의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 N-말단 항체는 상기 기재된 바와 같은 폴리클로날 항체이다. 또는, 예를 들면, 상기 기재된 N-말단 모노클로날 항체, 특히 아미노산 서열 서열번호 16, 17 및 18의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 19, 20 및 21의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체 등의 프로가스트린의 N-말단 내의 에피토프에 결합하는 모노클로날 항체를 또한 사용할 수 있다.
특히 바람직한 실시형태에서, 제1 항체는 불용성 또는 부분 가용성 담체에 결합하고, 제2 항체는 검출가능한 모이어티로 표지된다.
바람직한 실시형태에서, 폐암의 진단을 위한 본 발명의 방법은 인간 대상체의 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 검출을 포함한다.
보다 바람직한 실시형태에서, 폐암의 진단을 위한 본 발명의 방법은 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도의 측정을 포함한다.
또 다른 특정 실시형태에서, 폐암의 진단을 위한 본 발명의 방법은 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도의 검출을 포함하고, 상기 생물학적 샘플은 혈액, 혈청 및 혈장으로부터 선택된다.
추가의 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 방법은 상기 대상체로부터의 샘플을 상기 기재된 바와 같은 항-hPG 항체와 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 샘플 중의 항-hPG 항체의 결합은 상기 대상체에서 폐암의 존재를 나타낸다.
보다 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법은 상기 대상체로부터의 샘플을 상기 기재된 바와 같은 항-hPG 항체와 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 혈장 중의 10pM 초과의 프로가스트린의 농도는 상기 대상체에서 폐암의 존재를 나타낸다.
보다 바람직하게는, 본 발명의 방법은 상기 대상체로부터의 샘플을 상기 기재된 항-hPG 항체와 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 샘플 중의 10pM, 20pM, 30pM 또는 40pM 초과의 프로가스트린의 농도는 상기 대상체에서 폐암의 존재를 나타낸다.
여전히 보다 바람직하게는, 본 발명의 방법은 상기 대상체로부터의 샘플을 상기 기재된 항-hPG 항체와 접촉시키는 것을 포함하고, 상기 샘플 중의 10pM, 바람직하게는 20pM, 보다 바람직하게는 30pM, 여전히 보다 바람직하게는 40pM, 보다 더 바람직하게는 50pM 초과의 프로가스트린의 농도는 상기 대상체에서 전이된 폐암의 존재를 나타낸다.
본 발명은 또한, 체액, 또는 폐암의 치료 전에 환자로부터 수득된 폐암의 생검 등의 제1 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 측정하고, 이어서 제1 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 치료 후에 동일한 환자로부터 수득한 제2 샘플 중의 프로가스트린의 농도와 비교함으로써 화학요법, 생물학적 요법, 면역요법 또는 항체 요법 등의 환자의 폐암의 치료 유효성을 모니터링하는 방법에 관한 것이고, 상기 제1 샘플과 비교하여 상기 제2 샘플 중의 프로가스트린의 농도의 감소는 치료가 효과적인 것을 나타낸다.
특정 실시형태에서, 본 발명에 따르는 방법은 환자로부터 수득된 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 샘플 중의 프로가스트린의 농도의 소정 값과 비교하는 것을 포함하고, 보다 특정 실시형태에서, 상기 소정 값은, 폐암을 갖지 않는 모집단에서 해당 값의 평균 또는 평균치, 측정에 기초한 샘플 값의 평균 또는 평균치 중에서 선택되고, 프로가스트린의 농도 값은 환자가 폐암을 갖지 않는 것으로 공지되어 있는 경우에 수득된다.
특정 실시형태에서, 폐암의 시험관내 진단을 위한 본 발명에 따르는 방법은 상기 환자로부터 샘플 중의 프로가스트린의 농도의 측정 및 폐암의 제2 진단 시험을 포함한다. 보다 특정 실시형태에서, 폐암의 시험관내 진단을 위한 본 발명에 따르는 방법은 상기 환자로부터 샘플 중의 프로가스트린의 농도의 측정 및 폐암의 제2 진단 시험을 포함하고, 상기 제2 진단 시험은, 독립적으로 또는 조합하여, 암배아성 항원(CEA), 뉴런-특이적 에놀라제(NSE), 사이토케라틴 19(CYFRA-21-1), 알파-페토단백질, 탄수화물 항원 125(CA-125), 탄수화물 항원-19.9(CA-19.9) 및 페리틴 중에서 선택된 특정 바이오마커의 검출을 포함한다[참조: Li et al, 2012].
본 발명의 특정 실시형태에서, 본 발명에 따르는 방법은 폐암의 치료를 받았거나 치료되고 있는 환자로부터 샘플 중의 경시적 프로가스트린 수준의 측정을 포함한다.
본 발명의 실시형태의 특징은 하기 실시예의 하기 상세한 설명으로부터 추가로 명백해질 것이다.
도 1
프로가스트린의 농도는 ELISA 키트 DECODE Lab(포획 항체: Mab14, 검출 항체: 항-hPG 폴리클로날)을 사용하여 폐암 환자로부터 40개 혈장 샘플 및 건강한 공여체로부터 119개 혈장 샘플에서 측정했다.
실시예
실시예 1: 폴리클로날 항체를 사용한 혈장 프로가스트린의 농도의 검출
혈장 프로가스트린 수준은 2개의 특이적 항-프로가스트린 항체의 사용을 통해 ELISA에 의해 정량화했고: 포획 항체는 플레이트의 웰에 코팅하고, 계시 항체를 사용하여 프로가스트린을 검출하고 신호의 계시를 매개한다.
본 실시예에서, 정량화는 ELISA 방법에 기초하고, 이는, 반응이 광을 방사하는 기질의 사용에 의해, 포획 항체에 의해 유지된 항원에 결합된 항체의 발광 양과 비례하는 값을 할당하는 것을 가능하게 한다.
재료
시약 및 장치는 표 7에 수록되어 있다:
Figure pct00013
폴리클로날 항체는 표준 프로토콜에 따라 래빗을 N-말단 프로가스트린(서열번호 2) 또는 hPG의 아미노산 71 내지 80에 상응하고 서열 FGRRSAEDEN(서열번호 40)을 갖는 C-말단 프로가스트린으로 면역화시킴으로써 수득했다.
이 검정에 사용된 프로가스트린에 대한 폴리클로날 항체의 결합 특징은 하기: G34-Gly, G34, G17-Gly, G17에 대한 결합의 부재, 전장 프로가스트린에 대한 결합이다.
96 웰 플레이트는, 1개 캡슐의 내용물을 100ml MilliQ 물에 용해시켜 탄산염-중탄산나트륨(50mM pH 9.6)의 용액을 제조함으로써 코팅한다. 프로가스트린 FGRRSAEDEN(서열번호 40)의 C-말단을 사용하여 수득한 폴리클로날 항체에 상응하는 포획 항체(3㎍/ml)의 용액을 포획 완충제에서 제조한다. 100㎕의 항체 용액을 각 웰에 첨가하고, 4℃에서 16시간(1박) 동안 인큐베이팅한다. 이어서, 플레이트를, 항체 용액을 제거하여 차단시키고, 300㎕×PBS/0.1% Tween-20으로 3회 세척한 다음, 웰당 200㎕의 차단 완충제(1× PBS/0.1% Tween-20/0.1% BSA)를 첨가하고, 22℃에서 2시간 인큐베이팅한다. 이어서, 차단 완충제를 제거하고, 웰을 300㎕ 1× PBS/0.1% Tween-20으로 3회 세척한다.
혈장 희석은 다음과 같이 실행한다: 혈장은 순수하게, 1/2, 1/5 및 1/10으로 희석시켜 사용한다. 희석액은 1× PBS/0.1% Tween 20/0.1% BSA 중의 순수 혈장으로부터 제조한다.
대조군 시험, 공지된 농도의 프로가스트린의 존재하의 ELISA를 위해, 프로가스트린 희석액은 다음과 같이 제조한다: 스톡 재조합 PG(이. 콜라이(E. coli)에서 생성되고, 글루타티온 아가로즈/Tag 제거(Tev)/IMAC 카운터 정제/투석으로 친화성 정제된 전장 인간 프로가스트린, 인스티튜트 파스퇴르, 파리, 프랑스)은 0.45mg/ml(45μM)의 농도로 3회 제조한다. 프로가스트린의 농도의 범위는 다음과 같이 제조한다:
- 용액 A: 사전-희석 1/10, 2㎕의 스톡 + 18㎕의 완충제
- 용액 B: 사전-희석 1/100, 10㎕의 A + 90㎕의 완충제
- 용액 C: 사전-희석 1/1000, 10㎕의 B + 90㎕의 완충제
- 용액 D: 500pM, 5,55㎕의 C + 494.5㎕의 희석액
- 용액 E: 250pM, 250㎕의 D + 250㎕의 희석액
- 용액 F: 100pM, 200㎕의 E + 300㎕의 희석액
- 용액 G: 50pM, 250㎕의 F + 250㎕의 희석액
- 용액 H: 25pM, 200㎕의 G + 200㎕의 희석액
- 용액 I: 10pM, 100㎕의 H + 150㎕의 희석액
재조합 PG의 범위는 선형이고, 따라서 사용된 항체에 따라 다소 광범위할 수 있다.
시험 샘플의 제조를 위해, 대략 500㎕의 각 샘플을 확보하고, 결과의 분석(및 필요에 따라 확인)까지 저장한다. 100㎕의 각 포인트 범위 및/또는 혈장을 순수하게, 1/2, 1/5 및 1/10으로 희석하게 검정하고, 플레이트에서 22℃로 2시간 동안 인큐베이팅한다.
시험의 계시를 위해, 플레이트를 300㎕ 1× PBS/0.1% Tween-20으로 3회 세척한다. 항체가 면역원으로서 프로가스트린의 N-말단 부분을 사용하여 수득되고 비오틴에 0.5㎍/ml로 커플링된 폴리클로날 래빗 항-프로가스트린 항체의 용액을 1× PBS/0.1% Tween-20/0.1% BSA에서 희석에 의해 제조한다. 100㎕의 이 용액을 각 웰에 첨가한다. 인큐베이션은 1시간 동안 22℃에서 수행한다. 스트렙트아비딘-HRP에 의한 계시는 검출 항체를 제거하여 수행하고, 300㎕ 1× PBS/0.1% Tween-20으로 3회 세척한 다음, 1× PBS/0.1% Tween-20/0.1% BSA로 희석된 20ng/ml의 스트렙트아비딘-HRP의 용액을 제조하고, 여기서 100 첨가 100㎕의 이 용액은 1시간 동안 22℃에서 인큐베이션하기 전에 각 웰에 첨가한다.
검출은 스트렙트아비딘-HRP의 제거 및 300㎕ 1× PBS/0.1% Tween-20을 사용한 3회 세척으로 이루어지고, 웰당 100㎕의 화학발광 기질 용액을 첨가한다. 기질 용액은 동일한 용적의 2개 용액 SuperSignal ELISA 펨토 키트, 20ml + 20ml를 사용 30분 전에 혼합하여 제조하고, 암 상태로 실온에서 저장한다. 발광은 암 상태로 실온에서 5분간 인큐베이션 후에 판독한다.
각 조건에 대해, 시험은 3회 수행하고, 범위의 결과는 프로가스트린의 농도에 따라 발광 변화를 나타내는 그래프로 제시한다. 각 혈장 희석에 대해, 프로가스트린의 농도는 상응하는 범위(1/10으로 희석한 샘플에서는 1/10의 범위)의 선형 회귀의 방정식을 사용하여 측정한다.
방법 및 결과
프로가스트린의 평균 혈장 농도는 대조군 환자(n=103)에서 0pM인 반면, 폐암을 갖는 환자에서는 프로가스트린의 유의한 혈장 농도를 검출할 수 있다. 따라서, 폐암을 갖는 환자는 건강한 대조군 개체와 비교하여 이들의 혈장 중의 보다 높은 수준의 프로가스트린을 갖는다.
실시예 2: 모노클로날 항-프로가스트린 항체를 사용한 프로가스트린의 농도의 검출
Nunc MaxiSORP 96-웰 플레이트의 웰을 다음과 같이 제1 프로가스트린-특이적 항체로 코팅한다. 프로가스트린의 카복시-말단 영역에 특이적인 항-프로가스트린 모노클로날 항체를 MilliQ 물 중의 50mM, pH 9.6 탄산나트륨/중탄산염 완충제의 용액 중의 3㎍/ml의 농도로 희석시킨다.
이어서, 항체 용액 총 100㎕를 96-웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 밤새 4℃에서 인큐베이팅한다. 결합 후, 항체 용액을 웰로부터 제거하고, 이어서 100㎕의 세척 완충제(1× PBS/0.1% Tween-20)로 3회 세척한다. 이어서, 총 100㎕의 차단 완충제(1× PBS/0.1% Tween-20/0.1% BSA)를 각 웰에 첨가하고, 2시간 동안 22℃에서 인큐베이팅한다. 이어서, 차단 완충제를 제거하고, 웰을 세척 완충제로 3회 세척한다. 이어서, 환자로부터 단리된 혈장 또는 혈청을 희석 시리즈, 전형적으로 1:1, 1:2, 1:5 및 1:10 희석물 중의 100㎕의 용적으로 웰에 첨가한 다음, 2시간 동안 22℃에서 인큐베이팅한다. 혈장 또는 혈청 샘플은 이중으로 분석한다.
검정은 또한 2개 표준 곡선을 포함한다. 제1 표준 곡선은 웰당 1ng, 0.5ng, 0.25ng, 0.1ng, 0.05ng, 0.01ng 및 0ng의 최종 양으로 재조합 프로가스트린의 희석액을 사용하여 작성한다. 음성 대조군으로 사용되는 제2 표준 곡선은 시험 샘플로서 동일한 희석액에서 차단 완충제로 희석된, 즉 1:1, 1:2, 1:5 및 1:10으로 희석된 프로가스트린-음성 인간 혈청으로부터 작성한다. 또는, 혈장 샘플이 검정되는 경우, 음성 대조군으로 사용되는 제2 표준 곡선은 시험 샘플로서 동일한 희석액에서 차단 완충제로 희석된, 즉 1:1, 1:2, 1:5 및 1:10으로 희석된 프로가스트린-음성 인간 혈장으로부터 작성한다.
혈장 또는 혈청 샘플과의 인큐베이션이 완료된 후, 웰 내용물을 제거하고, 웰을 세척 완충제(100㎕/웰)로 3회 세척하고, 이어서 제1 항체에 결합된 프로가스트린은 다음과 같이 프로가스트린에 특이적인 제2 항체를 사용하여 검출한다.
프로가스트린의 아미노-말단 영역에 특이적인 비오틴-커플링된 항-프로가스트린 모노클로날 항체를 항체에 따라 차단 완충제에서 0.1 내지 10㎕ g/ml의 농도로 희석시킨다. 이어서, 총 100㎕의 항체 용액을 각 웰에 첨가하고, 1시간 동안 22℃에서 인큐베이팅한다.
제2 항체 결합이 완료된 후, 플레이트를 세척 완충제(100㎕/웰)로 3회 세척하고, 이어서 100㎕의 스트렙트아비딘-HRP 용액(차단 완충제 중의 25ng/ml)을 각 웰에 첨가하고, 1시간 동안 22℃에서 인큐베이팅한다. 스트렙트아비딘-HRP 용액과의 인큐베이션이 완료된 후, 플레이트를 세척 완충제(100㎕/웰)로 3회 세척한다. 이어서, 피어스 슈퍼시그날(Pierce Supersignal) ELISA 펨토 최대 감도 화학발광 기질 키트를 사용하여 제조한 100㎕의 화학발광 기질을 웰에 첨가하고, 암 상태로 실온에서 5분 동안 인큐베이팅한 다음, 루미노미터로 판독한다.
루미노미터 판독치에 기초하여, 선형 회귀 분석을 사용하여 표준 곡선 데이터에 상응하는 직선의 방정식을 도출한다. 이어서, 이 방정식을 사용하여, 다양한 환자 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 계산한다.
프로가스트린의 평균 혈장 농도는 폐암을 갖는 환자에서 계산하고, 대조군 환자의 혈장 중의 프로가스트린의 평균 혈장 농도와 비교한다. 이들 데이터는 폐암 환자가 건강한 대조군 개체와 비교하여 이들의 혈장 중의 상승된 수준의 프로가스트린을 갖는 것을 입증한다.
실시예 3: 폴리클로날 항체 및 모노클로날 항체의 조합을 사용한 혈장 프로가스트린의 농도의 검출
본 실시예에서, 혈장 프로가스트린의 수준은 96-웰 플레이트 상에 사전-코팅된 인간 프로가스트린(hPG)에 특이적인 항체의 사용을 통해 ELISA에 의해 정량화한다. 표준 및 샘플을 웰에 첨가하고, 존재하는 임의의 hPG는 고정된 포획 항체에 결합한다. 웰을 세척하고, 항-hPG 검출 항체 호세라디쉬 퍼옥시다제(HRP) 접합체를 첨가하여 항체-항원-항체 "샌드위치"를 생성한다. 제2 세척 후, TMB 기질 용액을 첨가하고, 이는 최초 샘플에 존재하는 hPG의 양에 정비례하여 청색을 생성한다. 정지 용액은 색을 청색으로부터 황색으로 변화시키고, 웰은 마이크로플레이트 판독기로 450nm에서 판독한다.
폴리클로날 항체는 래빗을 표준 프로토콜에 따라 N-말단 프로가스트린(서열번호 2), 또는 hPG의 아미노산 71 내지 80에 상응하고 서열 FGRRSAEDEN(서열번호 40)을 갖는 C-말단 프로가스트린으로 면역화시킴으로써 수득한다.
모노클로날 항체는 표준 프로토콜에 따라 N-말단 프로가스트린(서열번호 2), 또는 hPG의 아미노산 71 내지 80에 상응하고 서열 FGRRSAEDEN(서열번호 40)을 갖는 C-말단 프로가스트린에 대한 하이브리도마 생성 항체를 사용함으로써 수득한다.
본 검정에 사용된 프로가스트린에 대한 폴리클로날 및 모노클로날 항체의 결합 특징은 다음과 같다: G34-Gly, G34, G17-Gly, G17에 대한 결합의 부재, 전장 프로가스트린에 대한 결합.
대조군 시험, 공지된 농도의 프로가스트린의 존재하의 ELISA에서, 프로가스트린 희석액은 다음과 같이 제조한다: 스톡 재조합 PG(이. 콜라이에서 생성되고 글루타티온 아가로즈/Tag 제거(Tev)/IMAC 카운터 정제/투석으로 친화성 정제된 전장 인간 프로가스트린, 인스티튜트 파스퇴르, 파리, 프랑스)은 0.45mg/ml(45μM)의 농도로 3회 제조한다. 프로가스트린의 농도의 범위는 다음과 같이 제조한다:
· 용액 A: 사전-희석 1/10, 2㎕의 스톡 + 18㎕의 완충제
· 용액 B: 사전-희석 1/100, 10㎕의 A + 90㎕의 완충제
· 용액 C: 사전-희석 1/1000, 10㎕의 B + 90㎕의 완충제
· 용액 D: 500pM, 5,55㎕의 C + 494.5㎕의 희석액
· 용액 E: 250pM, 250㎕의 D + 250㎕의 희석액
· 용액 F: 100pM, 200㎕의 E + 300㎕의 희석액
· 용액 G: 50pM, 250㎕의 F + 250㎕의 희석액
· 용액 H: 25pM, 200㎕의 G + 200㎕의 희석액
· 용액 I: 10pM, 100㎕의 H + 150㎕의 희석액
재조합 PG의 범위는 선형이고, 따라서 사용된 항체에 따라 다소 광범위할 수 있다.
방법 및 결과
프로가스트린 수준은 이후 폐암을 발증할 것으로 공지되어 있는 대상체의 혈장 샘플에서 측정한다. 프로가스트린은 WO 2011/083088에 기재된 하이브리도마 2H9F4B7에 의해 생성된 C-말단 모노클로날 항체 mAb 14로 포획한다(하이브리도마 2H9F4B7은 프랑스, 75724 파리 세덱스 15, 뤼 뒤 독퇴르 뢰 25-28에 소재하는 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르에 2016년 12월 27일자로 참조 I-5158하에 부다페스트 조약하에 기탁되어 있다). 검출은 N-말단에 특이적인 표지된 폴리클로날 항체로 수행한다.
대조군은 일반 모집단의 혈장 샘플에 의해 구성된다.
데이터는 폐암 환자가 이들의 혈장 중에 검출가능한 수준의 프로가스트린을 갖는 반면, 건강한 대조군 개체는 갖지 않는 것을 입증한다.
실시예 4: DECODE Lab 키트를 사용한 혈장 프로가스트린의 농도의 검출
시험은 ELISA에 의해 혈장 EDTA 중의 hPG의 측정을 가능하게 한다.
키트는 96-웰 플레이트 상에 사전-코팅된 hPG에 특이적인 포획 항체를 이용한다. 웰에 첨가된 표준 및 샘플에 존재하는 hPG는 고정된 포획 항체에 의해 결합되었다. 웰을 세척하고, 항-hPG 검출 항체 호세라디쉬 퍼옥시다제(HRP) 접합체를 첨가하여, 항체-항원-항체 복합체를 제공한다. 제2 세척 후, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB) 기질 용액을 웰에 첨가하여, 최초 샘플에 존재하는 hPG의 양에 정비례하여 청색을 생성한다. 정지 용액의 색은 청색으로부터 황색으로 변화했고, 웰은 마이크로플레이트 판독기로 450nm에서 판독했다.
방법 및 결과
폐암 환자로부터의 40개 혈장 샘플 및 건강한 공여체로부터의 119개 혈장 샘플을 사용하여, 제조업자의 권고에 따라, ELISA 키트 DECODE Lab(포획 항체: Mab14, 검출 항체: 항-hPG 폴리클로날)을 사용한 프로가스트린의 농도를 측정했다.
요약하면:
1. 1× 접합체를 제외한 이전 섹션에서 검출된 모든 시약, 대조군 및 샘플을 준비한다.
2. 과량의 스트립을 미세역가 플레이트 프레임으로부터 제거하고, 이들을 플레이트 패킷으로 반송하고, 2-8℃에서 저장한다.
3. 샘플 및 대조군은 중복하여 시험되어야 한다. 96-웰 DeepWell 폴리프로필렌 마이크로플레이트의 웰에 65㎕/복제를 첨가하여 대조군 및 샘플의 사전-로딩을 준비한다.
4. 50㎕의 샘플 희석 완충제를, 키트에 포함된 96 사전-코팅된 웰 플레이트로부터 사용되는 모든 웰에 첨가한다.
5. 50㎕의 대조군 및 샘플을 다중-채널 피펫(8 채널)으로 사전-로딩 96-웰 DeepWell 폴리프로필렌 마이크로플레이트로부터 키트에 포함된 96 사전-코팅된 웰 플레이트로 이송한다. 로딩 시간은 10분을 초과하지 않아야 한다.
6. 플레이트를 플라스틱 파라핀으로 덮고, 3h±5분 동안 37℃(±2℃)에서 인큐베이팅한다.
7. 섹션 10.2에 기재된 바와 같이 1× 접합체를 준비한다.
8. 인큐베이션 단계의 종료 후, 플레이트를 반전시켜 웰로부터 모든 액체를 버린다. 웰당 300㎕의 1× 세척 용액을 첨가하여 전체 세척 단계를 진행시킨다. 플레이트를 반전시켜 1× 세척 용액을 버리고, 미세역가 플레이트 프레임을 흡습지 상에서 상하로 가볍게 두드려 건조시킨다. 세척 단계를 6회 반복한다. 세척 단계의 종료시에, 웰로부터 액체의 완전한 제거를 보장하고: 페이퍼 타월에 액체의 징후가 잔존하지 않는 경우, 모든 액체가 성공적으로 제거된 것이다. 세척 절차는 중요하다. 불충분한 세척은 불량한 정확도 및 허위 상승된 흡광도 판독치를 가져올 수 있다.
9. 100㎕의 1× 접합체를 각 웰에 첨가한다.
10. 플레이트를 플라스틱 파라핀으로 덮고, 30분±3분간 21℃(±5℃)에서 인큐베이팅한다.
11. 인큐베이션 단계의 종료시에, 플레이트를 반전시켜 웰로부터 모든 액체를 버린다. 웰당 300㎕의 1× 세척 용액을 첨가하여 철저한 세척 단계를 진행시킨다. 플레이트를 반전시켜 1× 세척 용액을 버리고, 미세역가 플레이트 프레임을 흡습지 상에서 상하로 가볍게 두드려 건조시킨다. 세척 단계를 6회 반복한다. 세척 단계의 종료시에, 웰로부터 액체의 완전한 제거를 보장하고: 페이퍼 타월에 액체의 징후가 잔존하지 않는 경우, 모든 액체가 성공적으로 제거된 것이다. 세척 절차는 중요하다. 불충분한 세척은 불량한 정확도 및 허위 상승된 흡광도 판독치를 가져올 수 있다.
12. 100㎕의 기질 용액을 각 웰에 첨가한다. 기질 용액을 첨가하면, 양성 대조군 1 및 양성 대조군 2 웰의 내용물은 청색으로 되어야 한다.
13. 15분±2분간 21℃(±5℃)에서 암 상태로 인큐베이팅한다.
14. 웰의 내용물을 제거하지 않고서, 100㎕의 정지 용액을 각 웰에 첨가하여 반응을 정지시킨다. 정지 용액을 첨가하면, 양성 대조군 1 및 양성 대조군 2 웰의 내용물은 황색으로 되어야 한다.
15. 450nm에서 O.D를 판독하고 기록한다.
도 1에 제시된 바와 같이, 대조군 환자(n=119)에서 측정한 프로가스트린의 평균 혈장 농도는 0pM인 반면, 폐암을 갖는 환자(n=40)에서는 프로가스트린의 유의한 혈장 농도가 검출되었다. 따라서, 폐암 환자는 건강한 대조군 개체보다 이들의 혈장 중의 보다 높은 수준의 프로가스트린을 갖는다.
참조 문헌
Figure pct00014
국립 미생물 배양 콜렉션 CNCMI-5158 20161227
SEQUENCE LISTING <110> ECS-Progastrin SA <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR DETECTING LUNG CANCER <130> IPA191254-FR <150> EP 17305382.8 <151> 2017-03-30 <160> 78 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 80 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly Thr Gly 1 5 10 15 Ala Asn Arg Asp Leu Glu Leu Pro Trp Leu Glu Gln Gln Gly Pro Ala 20 25 30 Ser His His Arg Arg Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val 35 40 45 Ala Asp Pro Ser Lys Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu 50 55 60 Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn 65 70 75 80 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Amino acids 1-14 N-terminal extremity of human progastrin <400> 2 Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly 1 5 10 <210> 3 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Amino acids 55-80 C-terminal extremity of human progastrin <400> 3 Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp 1 5 10 15 Phe 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Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 55 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 55 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Ser 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asp Gly Asn Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 56 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 56 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Ser Gly Val Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 57 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 57 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 58 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 58 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 59 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 59 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn 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Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 62 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 62 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr 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110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 66 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 66 Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr 20 25 30 Ile Glu Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met 35 40 45 Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp 85 90 95 Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105 110 Glu Ile Lys 115 <210> 67 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 67 Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr 20 25 30 Ile Ala Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met 35 40 45 Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp 85 90 95 Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105 110 Glu Ile Lys 115 <210> 68 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 68 Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr 20 25 30 Ile Glu Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met 35 40 45 Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp 85 90 95 Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val 100 105 110 Glu Ile Lys 115 <210> 69 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 69 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 70 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 70 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr 20 25 30 Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 71 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 71 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 72 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 72 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr 20 25 30 Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 73 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 73 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 74 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 74 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr 20 25 30 Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 75 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 75 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 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<400> 77 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 78 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 78 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (16)

  1. 대상체에서 폐암의 시험관내 진단을 위한 방법으로서,
    a) 상기 대상체로부터의 상기 생물학적 샘플을 적어도 하나의 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 단계,
    b) 상기 샘플 중의 프로가스트린에 대한 상기 프로가스트린-결합 분자의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 결합이 상기 대상체에서 폐암의 존재를 나타내는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 단계 b)가 프로가스트린의 농도를 측정하는 것을 추가로 포함하고, 상기 생물학적 샘플 중의 적어도 10pM의 프로가스트린의 농도가 상기 대상체에서 폐암의 존재를 나타내는, 방법.
  3. 제2항에 있어서,
    c) 참조 샘플 중의 프로가스트린의 참조 농도를 측정하는 단계,
    d) 상기 생물학적 샘플 중의 프로가스트린의 농도를 프로가스트린의 상기 참조 농도와 비교하는 단계,
    e) 단계 d)의 비교로부터 폐암의 존재를 측정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 프로가스트린-결합 분자가 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 N-말단 항-프로가스트린 모노클로날 항체 및 C-말단 항-프로가스트린 모노클로날 항체 중에서 선택되는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서, 프로가스트린에 결합하는 상기 항체가
    - 아미노산 서열 서열번호 4, 5 및 6의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 7, 8 및 9의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 아미노산 서열 서열번호 10, 11 및 12의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 13, 14 및 15의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 아미노산 서열 서열번호 16, 17 및 18의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 19, 20 및 21의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 아미노산 서열 서열번호 22, 23 및 24의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 25, 26 및 27의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 아미노산 서열 서열번호 28, 29 및 30의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 31, 32 및 33의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체,
    - 아미노산 서열 서열번호 34, 35 및 36의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 중쇄, 및 아미노산 서열 서열번호 37, 38 및 39의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 적어도 하나, 우선적으로 적어도 2개, 우선적으로 3개 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체, 및
    - 프랑스, 75724 파리 세덱스 15, 뤼 뒤 독퇴르 뢰(rue du Docteur Roux) 25-28에 소재하는 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르(Institut Pasteur)에 2016년 12월 27일자로 참조 I-5158하에 부다페스트 조약하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 모노클로날 항체
    로 이루어진 그룹으로부터 선택된 모노클로날 항체인, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, 단계 a)의 측정이
    (i) 상기 샘플을 프로가스트린의 제1 부분에 결합하는 제1 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키고,
    (ii) 상기 샘플을 프로가스트린의 제2 부분에 결합하는 제2 프로가스트린-결합 분자와 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 제1 프로가스트린-결합 분자가 프로가스트린의 C-말단 내의 에피토프에 결합하는, 방법.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 상기 프로가스트린-결합 분자가 프랑스, 75724 파리 세덱스 15, 뤼 뒤 독퇴르 뢰 25-28에 소재하는 CNCM, 인스티튜트 파스퇴르에 2016년 12월 27일자로 참조 I-5158하에 부다페스트 조약하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 모노클로날 항체인, 방법.
  10. 제7항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 프로가스트린-결합 분자가 프로가스트린의 N-말단 내의 에피토프에 결합하는, 방법.
  11. 제7항 내지 제10항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 프로가스트린-결합 분자가 프로가스트린의 N-말단 내의 에피토프에 결합하는 폴리클로날 항체, 또는 하기 3개 CDR, 아미노산 서열 서열번호 16, 17 및 18의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 포함하는 중쇄, 및 하기 3개 CDR, 아미노산 서열 서열번호 19, 20 및 21의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체인, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중의 어느 한 항에 있어서, 프로가스트린의 상기 수준이 단계 a)에서 ELISA로 측정되는, 방법.
  13. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이, 프로가스트린의 제1 부분에 결합하는 제1 분자, 및 프로가스트린의 제2 부분에 결합하는 제2 분자와 접촉되는, 방법.
  14. 제1항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 생물학적 샘플이 혈액, 혈청 및 혈장 중에서 선택되는, 방법.
  15. 제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이 혈장이고, 적어도 10pM의 프로가스트린의 농도가 상기 대상체에서 폐암의 존재를 나타내는, 방법.
  16. 폐암의 시험관내 진단을 위한, 제10항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 기재된 프로가스트린-결합 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용도.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI763956B (zh) * 2017-12-05 2022-05-11 盧森堡商前胃泌激素及癌症有限公司 治療癌症的抗前胃泌激素抗體與免疫療法之組合療法
WO2019110845A1 (en) 2017-12-08 2019-06-13 Ecs-Biotracker Sàrl Radiolabeled progastrin in cancer diagnosis
TW201940881A (zh) 2018-01-26 2019-10-16 瑞士商Ｅｃｓ前胃泌激素公司 在癌症診斷中結合前胃泌激素檢測與其他癌症生物標記的技術
CA3092414A1 (en) 2018-02-27 2019-09-06 Ecs-Progastrin Sa Progastrin as a biomarker for immunotherapy

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030232399A1 (en) * 2000-06-14 2003-12-18 Robertson John Forsyth Russell Cancer detection methods and reagents
JP2008513536A (ja) * 2004-09-22 2008-05-01 レセプター バイオロジックス インコーポレイテッド プロガストリンに対するモノクローナル抗体
WO2008076454A1 (en) * 2006-12-19 2008-06-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Immunogenic compositions comprising progastrin and uses thereof
US20110229488A1 (en) * 2010-01-08 2011-09-22 Floch Jean-Francois Progastrin and liver pathologies
JP2013516438A (ja) * 2010-01-08 2013-05-13 ビオレアリテ 乳癌を処置するための方法
KR101576174B1 (ko) * 2010-07-26 2015-12-09 르 라보레또레 쎄르비에르 간암 요법을 위한 방법 및 조성물

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
GB8924581D0 (en) 1989-11-01 1989-12-20 Pa Consulting Services Bleaching of hair
DK0463151T3 (da) 1990-01-12 1996-07-01 Cell Genesys Inc Frembringelse af xenogene antistoffer
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
ES2091684T3 (es) 1992-11-13 1996-11-01 Idec Pharma Corp Aplicacion terapeutica de anticuerpos quimericos y radiomarcados contra el antigeno de diferenciacion restringida de los linfocitos b humanos para el tratamiento del linfoma de las celulas b.
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
ES2301183T3 (es) 1996-12-03 2008-06-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpo completamente humano que se une al receptor del egfr.
RU2224766C2 (ru) 1997-04-14 2004-02-27 Микромет Аг Способ получения рецепторов для человеческих антигенов и их применение
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
WO2000076454A2 (fr) 1999-06-14 2000-12-21 Advanced Medicine Research Institute Compositions therapeutiques a usage ophtalmique et compositions therapeutiques destinees au traitement des lesions cerebrales centrales
EP1416964A4 (en) 2001-07-09 2005-10-12 Aphton Corp TREATMENT AND PREVENTION OF CANCER AND PRECANCEROUS DISEASES OF THE LIVER, LUNG AND ESOPHAGUS
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US8136651B2 (en) * 2007-12-14 2012-03-20 The Procter & Gamble Company Method and apparatus for orienting articles
AR078659A1 (es) * 2009-10-16 2011-11-23 Biorealites S A Anticuerpos monoclonales contra progastrina humana y sus usos
US9217032B2 (en) 2010-01-08 2015-12-22 Les Laboratoires Servier Methods for treating colorectal cancer
KR101570404B1 (ko) 2010-03-24 2015-11-20 르 라보레또레 쎄르비에르 결장직장암 및 위창자암의 예방
US9753043B2 (en) * 2011-12-18 2017-09-05 20/20 Genesystems, Inc. Methods and algorithms for aiding in the detection of cancer
US20140271453A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-18 Abbott Laboratories Methods for the early detection of lung cancer
CN103439511B (zh) * 2013-07-10 2015-11-04 浙江省医学科学院 一种检测肺癌的液相芯片试剂盒
WO2016066671A1 (en) * 2014-10-29 2016-05-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating resistant cancers using progastrin inhibitors
CN114705858A (zh) 2015-12-31 2022-07-05 Syncerus有限责任公司 用于评估癌症发生的风险的组合物和方法
CN105727320B (zh) * 2016-01-30 2018-10-19 山西大学 检测小细胞肺癌的靶向纳米微泡及其制备方法和应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030232399A1 (en) * 2000-06-14 2003-12-18 Robertson John Forsyth Russell Cancer detection methods and reagents
JP2008513536A (ja) * 2004-09-22 2008-05-01 レセプター バイオロジックス インコーポレイテッド プロガストリンに対するモノクローナル抗体
WO2008076454A1 (en) * 2006-12-19 2008-06-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Immunogenic compositions comprising progastrin and uses thereof
US20110229488A1 (en) * 2010-01-08 2011-09-22 Floch Jean-Francois Progastrin and liver pathologies
JP2013516438A (ja) * 2010-01-08 2013-05-13 ビオレアリテ 乳癌を処置するための方法
KR101576174B1 (ko) * 2010-07-26 2015-12-09 르 라보레또레 쎄르비에르 간암 요법을 위한 방법 및 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Jens F Rehfeld et al, Cancer Research (1989), vol 49, pp 2840-2843. *

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