KR20190103792A - Il-7을 포함하는 돼지열병바이러스의 치료 및 예방용 조성물 - Google Patents

Abstract

본원 발명은 IL-7을 유효성분으로 포함하는 돼지열병바이러스 치료 또는 예방용 약학적 조성물에 대한 것으로서, 상기 융합 단백질을 이용할 경우, 돼지열병바이러스를 효과적으로 치료할 수 있다. 따라서, 농가에서 유용하게 활용할 수 있으므로, 산업적 이용 가능성이 높다.

Description

IL-7을 포함하는 돼지열병바이러스의 치료 및 예방용 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING CLASSICAL SWINE FEVER COMPRISING IL-7 PROTEIN}

본 발명은 돼지열병바이러스의 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다.

돼지열병바이러스(Classical Swine Fever Virus: CSFV)는 크기가 약 40~50nm 정도인 RNA 바이러스로 Flaviviridae family에 속하는 Pestivirus genus의 (Classical swine fever)의 일종으로 positive sense single strand RNA 구성된 12.3kb 유전자와 약 3900 아미노산으로 합성된 단백질로 구성된다. 돼지열병바이러스에 감염된 돼지는 돼지의 감수성, 연령 및 바이러스의 종류에 따라 증상은 다양하나, 일반적인 증상은 고열과 함께 식욕부진, 설사나 변비, 피부청색증 및 뒷다리를 잘못 쓰거나 비틀거리는 증상 등을 나타내며 전염성이 매우 강하여 감염된 돼지는 연령에 상관없이 거의 폐사되기 때문에 가축전염병예방법 및 세계동물보건기구(OIE)에서도 돼지열병을 제1종 가축전염병으로 규정하고 있다.

돼지열병바이러스는 감염돼지의 분변, 오줌, 눈물, 콧물에 배출되어 감염되나 사람의 신발, 의복 및 기구 같은 매개체로도 감염된다. 주로 소화기와 호흡기를 통해 침입한 바이러스는 편도, 림프절, 실질장기의 세포에서 증식하여 독혈증을 일으키고 감염 시 급성일 경우 고열, 피부 발적, 식욕결핍, 변비, 설사, 백혈구 감소, 후구 마비, 폐사 등의 증상이 나타나다. 또한, 임신한 돼지에 감염될 경우 바이러스는 태반을 통과하여 태아에 감염하여 태아의 일령에 따라 재흡수, 유산, 사산 및 허약자돈 분만 등의 증상이 나타날 수 있다. 또한, 병든 돼지의 분변으로 많은 양의 바이러스가 배출되어 2차 감염이 발생하기도 하며, 잠복기는 주로 6~11일이나 20~30일의 잠복기를 거치기도 하므로 임상증상이 나타나기 전 이동 시 확산의 위험이 크므로 조기에 진단하여 확산을 방지하는 것이 중요하다.

종래 기술(대한민국 등록특허 제 10-1612397 호)은 CYYR1 유전자를 이용하여 돼지열병바이러스의 감염여부를 효과적으로 판별할 수 있음을 개시하고 있다. 그러나 바이러스에 감염된 돼지를 치료하기 위한 적합한 예방 또는 치료제는 아직 개발되지 못하였다.

한편, 인터루킨-7은 T-세포, B-세포 및 기타 면역 세포의 생존 및 증식을 촉진하는 사이토카인으로, 바이러스 감염, 암 치료, 면역계 손상 치료 등 다양한 질환에 적용 가능한, 뛰어난 면역치료제 후보 물질이다. 최근에는 다양한 악성종양(malignancies)과 사람면역결핍바이러스 감염(HIV infection)에 대한 임상이 진행되었으며, 이를 통해 IL-7에 의한 인체 면역 증가효과가 보고된 바 있다(Fry TJ et al, 2002, Blood 99 (11): 3892-904; MueggeK et al., 1993, Science 261 (5117): 93-5; Rosenberg SA et al., J. Immunother. 29 (3): 313-9). 또한 IL-7은 동종줄기세포(allogenic stem cell) 이식 후 면역회복에도 도움이 되는 것으로 보고 되었으며(Snyder KM, 2006, Leuk. Lymphoma 47 (7): 1222-8), 림프구감소증(lymphopenia) 치료에도 활용되고 있다.

대한민국 등록특허 제 10-1612397 호

Fry TJ et al, 2002, Blood 99 (11): 3892-904 MueggeK et al., 1993, Science 261 (5117): 93-5; Rosenberg SA et al., J. Immunother. 29 (3): 313-9 Snyder KM, 2006, Leuk. Lymphoma 47 (7): 1222-8

본원 발명의 목적은 돼지열병바이러스 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 본원 발명의 또 다른 목적은 돼지열병바이러스 치료 또는 예방 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본원 발명은 IL-7을 포함하는 돼지열병바이러스 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다. 또한, 본원 발명은 IL-7 을 포함하는 약학적 조성물을 돼지에 투여하는 단계를 포함하는 돼지열병바이러스 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

본원 발명의 IL-7 을 포함하는 약학적 조성물은 돼지열병바이러스에 치료 또는 예방 효과가 우수하다. 따라서, 제1종 가축전염병으로 규정된 돼지열병바이러스를 효과적으로 치료할 수 있어, 가축의 폐사를 예방하여 수의학 분야에서 널리 활용할 수 있다.

도 1은 CYYR1 동물 접종을 위한 Multiple Antigen Peptide(MAP)의 구조이다.
도 2는 MAP CYYR1을 마우스에 일주일 단위로 투여한 뒤 각각 채혈한 혈청에서의 항체 형성을 확인한 결과이다.
도 3은 MAP CYYR1으로 유도된 마우스 혈청과 재조합 아데노바이러스 접종으로 유도된 마우스 혈청에서의 항체형성 정도를 titration한 결과이다.
도 4 및 도 5는 IL-7-mFc 및 IL-7을 각각 용량을 달리하여 비강 내 투여한 경우, 감염 이후 시간의 경과에 따른 BALB/c 마우스들의 초기 체중에 대한 무게변화율 및 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 6 및 도 7은 각각 1㎍의 IL-7-mFc 및 Fc-단편을 투여한 경우, 감염 이후 시간의 경과에 따른 BALB/c 마우스들의 초기 체중에 대한 무게변화율 및 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 8 및 도 9는 1㎍의 IL-7-mFc 비강 내 투여 이후, 0일, 3일, 5일, 7일, 14일, 21일 또는 35일째에 BALB/c 마우스들을 감염시키고, 시간의 경과에 따른 무게변화율 및 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 10 내지 도 15는 IL-7-mFc를 비강 내 투여 이후 14일이 지난 때에, A/PR/8/34 H1N1, A/California/04/09 H1N1 또는 A/Philippines/2/82 H3N2의 치사량에 감염시킨 경우, 시간의 경과에 따른 BALB/c 마우스들의 초기 체중에 대한 무게변화율 및 생존율을 나타낸 그래프이다.

본원 발명의 일 측면은 IL-7을 포함하는 융합단백질을 유효성분으로 포함하는 돼지열병바이러스 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용된 용어 "IL-7 또는 이와 유사한 활성을 갖는 폴리펩티드"는 IL-7과 동일하거나 유사한 서열 및 활성을 갖는 폴리펩티드 또는 단백질을 의미한다. 상기 IL-7은 서열번호 1 내지 6 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩티드를 포함한다. 또한, 상기 IL-7은 서열번호 1 내지 6의 서열과 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 것일 수 있다.

상기 IL-7은 IL-7 단백질 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 이때, IL-7은 인간, 흰쥐, 생쥐, 원숭이, 소 또는 양에서 유래된 것일 수 있으며, 바람직하게는 돼지에서 유래한 단백질일 수 있다.

구체적으로, 인간 IL-7은 서열번호 1(Genbank Accession No. P13232)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 흰쥐(rat) IL-7은 서열번호 2(Genbank Accession No. P56478)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있으며; 생쥐(mouse) IL-7은 서열번호 3(Genbank Accession No. P10168)으로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 원숭이 IL-7은 서열번호 4(Genbank Accession No. NP_001279008)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있으며; 소 IL-7은 서열번호 5(Genbank Accession No. P26895)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 양 IL-7은 서열번호 6(Genbank Accession No. Q28540)으로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 또한, 돼지 IL-7은 서열번호 41의 아미노산 서열을 가질 수 있다.

본원 발명의 IL-7 단백질은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 환자에게 전달하기에 적절한 비-독성 물질이면 어떠한 담체라도 가능하다. 상기 담체는 증류수, 알코올, 지방, 왁스 또는 비활성 고체일 수 있다. 또한, 약물학적으로 허용되는 애쥬번트(완충제, 분산제)도 포함될 수 있다.

또한, 본 발명의 인터루킨-7을 포함하는 약물학적 조성물은 다양한 방법으로 대상에게 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물은 비경구적으로 투여될 수 있고, 그 예로는 피하, 근육 내 또는 정맥 내가 있다. 이러한 조성물은 통상적인 멸균 기술에 따라 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절과 같은 생리적 조건을 조절하기 위하여 요구되는 약물학적으로 허용가능한 보조 물질 및 보조제, 독성 조절 제제 및 이의 유사체를 포함할 수 있다. 이의 구체적인 예로는 아세트산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 젖산 나트륨 등이 있다. 이러한 제형에 포함되는 융합 단백질 농도는 매우 다양할 수 있다. 예를 들면 상기 융합 단백질의 농도는 무게에 따라 약 0.5% 이하일 수 있고, 일반적으로 또는 적어도 약 1% 내지 15% 또는 20%까지 일 수 있다. 상기 농도는 선택된 특정 투여 방법, 체액 부피, 점성도 등에 기초하여 선택될 수 있다.

또 다른 측면에서, 본원 발명은 상기 IL-7 을 돼지에 투여하는 단계를 포함하는 돼지열병바이러스 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 이때, 상기 돼지는 CYYR1 양성인 것일 수 있다.

이러한 방법은 목적 질환과 직접적으로 관련되거나 관련되지 않은 건강 상태를 가진 개체에 본 발명의 인터루킨-7의 치료학적 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 상기 개체는 포유류일 수 있고, 바람직하게는 돼지일 수 있다.

본 발명의 조성물은 어떠한 경로로도 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 직접적으로(예, 조직 부위에 주입, 이식 또는 국부적으로 투여함으로써, 국소적으로) 또는 시스템적으로(예, 비경구 또는 경구로) 임의의 적절한 수단에 의하여 동물에게 제공될 수 있다. 본 발명의 조성물이 정맥 내, 피하, 눈, 복강 내, 근육 내, 구강, 직장, 안와 내, 뇌 내, 두개 내(intracranial), 척추 내, 뇌실 내, 수막강 내, 조 내(intracistenal), 캡슐 내(intracapsular), 비 내 또는 에어로졸 투여와 같이 비경구적으로 제공되는 경우, 조성물은 수성이거나 생리학적으로 적용가능한 체액 현탁액 또는 용액의 부분을 포함하는 것이 바람직하다. 이에 따라, 생리학적으로 허용가능한 담체 또는 운반체가 조성물에 첨가되어 환자에게 전달될 수 있고, 이는 환자의 전해질 및/또는 부피 수가(balance)에 악영향을 끼치지 않는다. 따라서, 상기 생리학적으로 허용가능한 담체 또는 운반체는 생리식염수일 수 있다.

본 발명은 원하는 단백질의 기능을 재구성하거나 보충하기 위하여, 특정 세포에 융합 단백질을 발현시키는 발현 벡터를 임의의 생물학적 유효 담체와 함께 투여할 수 있다. 이는 생체 내 세포에 원하는 단백질을 코딩하는 유전자 또는 이의 융합 단백질을 효율적으로 운반할 수 있는 임의의 제형 또는 조성물일 수 있다.

본 발명의 변형된 인터루킨-7의 단위 투여량은 돼지에 있어서 0.001 mg/kg 내지 10 mg/kg이다. 일 구체예로서, 상기 변형된 인터루킨-7의 단위 투여량은 돼지에 있어서 0.01 mg/kg 내지 2 mg/kg이다. 또 다른 구체예로서, 단백질의 단위 투여량은 돼지에 있어서 0.02 mg/kg 내지 1 mg/kg이다. 단위 투여량은 치료대상 질환 및 부작용의 유무에 따라 달라질 수 있다. 인터루킨-7 단백질의 투여는 주기적인 볼루스 주입(periodic bolus injections)이나, 외측 공급원(external reservoir)(예, 정맥주사 보유주머니(intravenous bag) 또는 내측(예, 생체부식성 임플란트)으로부터의 지속적인 정맥 내, 피하 또는 복막 내 투여에 의할 수 있다.

본 발명의 변형된 인터루킨-7은 예방 또는 치료하고자 하는 질환에 대하여 예방 또는 치료 효과를 갖는, 다른 약물 혹은 생리학적 활성물질과 병용하여 투여되거나, 다른 약물과의 조합 제제 형태로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 조혈 세포 성장 인자, 사이토카인, 항원, 보조제와 같은 면역자극제와 함께 병용될 수 있다. 상기 조혈 세포 성장 인자는 SCF(Stem Cell Factor), G-CSF, GM-CSF 또는 Flt-3 ligand일 수 있다. 상기 사이토카인은 감마 인터페론(γ interferon), IL-2, IL-15, IL-21, IL-12, RANTES 또는 B7-1일 수 있다.

본 발명의 인터루킨-7 단백질, 혹은 이를 포함하는 조성물을 이용하여 질환을 예방 또는 치료하는 방법은, 본 발명의 단백질 혹은 조성물과 상기 서술한 바와 같은 다른 약물 혹은 생리학적 활성물질과 병용하는 것도 포함할 수 있는데, 병용 투여의 경로, 투여시기, 및 투여용량은 질병의 종류, 환자의 질병 상태, 치료 또는 예방의 목적, 및 병용되는 다른 약물 혹은 생리학적 활성물질에 따라 결정될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. IL-7에 면역글로불린 Fc가 결합된 융합 단백질의 제조

IL-7의 C-말단에 면역글로불린 Fc가 결합된 융합 단백질을 제조하였다. IL-7은 인간 IL-7(서열번호 1)의 서열을 사용하였다. 올리고펩티드에 융합되는 IL-7은 서열번호 28의 핵산서열을 사용하였다. 올리고펩티드와 IL-7이 융합된 형태의 전체 핵산서열을 합성을 통하여 수득한 후 발현벡터에 삽입하였다. 상기 A - IL-7의 유전자를 포함하는 발현 벡터를 HEK293 세포에 형질주입하였다.

300 ml 현탁배양을 기준으로 하였을 때, 208.3 ug의 DNA와 416.6 ug(ul) 폴리에틸렌이민(PEI;polyethylenimine)을 사용(w/w)하여 polyplex를 만들어 HEK293F 세포에 형질주입하였다. 형질주입 6일 이후, 세포 배양액을 확보하고, 웨스턴 블롯 (western blot)을 수행하여 목적 단백질의 발현율을 확인하였다. 이후 배양액을 8,000 rpm에서 30분간 원심분리하여 배양 불순물(debris)을 제거하고 0.22 um pore size의 bottle top filter를 이용하여 필터링 하였다. 그 결과, IL-7가 포함된 배양액을 수득하였다.

제조예 2. IL-7의 C-말단에 Fc 영역이 결합된 인터루킨-7 융합 단백질의 제조

인터루킨-7의 C-말단에 이종의 아미노산 서열로 구성된 폴리펩티드가 추가로 결합된, 인터루킨-7 융합 단백질을 제조하였다. Fc 영역의 서열(서열번호 9 또는 14)을 이용하였다. 이때 하이브리드 Fc는 미국 특허 7,867,491호에서 개시된 hFc(하이브리드 Fc)를 사용하였다. 이는 생리 활성 단백질과 결합하여 기존의 변형된 면역글로불린의 Fc 영역에 비해 우수한 체내 반감기 증가를 나타낼 수 있다.

상기 제조예 1과 동일한 방법으로 유전자 발현 벡터를 제작하고 형질주입한 후 세포를 배양하여 다양한 형태의 인터루킨-7 융합 단백질을 포함한 배양액을 제조하였다.

제조예 3. 인터루킨-7 및 인터루킨-7 융합 단백질의 생산 및 정제

상기 실시예들로부터 생산된 인터루킨-7 단백질 및 인터루킨-7 융합 단백질의 생산량을 비교하였다. 각 융합단백질에 대하여, 배양액 내 단백질의 양 및 세포 내에 잔존중인 단백질의 양의 농도를 측정하였다. 세포 외로 분비된 단백질은 세포 배양액을 수득하여 농도를 측정하였으며, 세포 내 단백질의 양은 원심분리를 통하여 수득한 세포를 파쇄한 후, ELISA 방법으로 농도를 측정하였다. 1차 항체는 인간 IL-7 특이적인 항체(Southern Biotech, Cat# 10122-01)를 사용하였고, 2차 항체는 Biotin(BD, Cat# 554494) 및 Streptavidin-HRP(BD, Cat# 554066)를 사용하였다.

제조예 4. 감별 마커에 대한 시스템 적합성 확인

본 발명은 감별 마커 백신이 적용 가능한 단백질 후보 물질을 선정하기 위해 돼지 혈청에서 후보 마커에 대한 항체가 없으면서 면역반응이 잘 일어나서 항체 형성이 잘되고, 후보 마커에 대한 부작용, 알러지, 자가면역반응이 없는 1Kb 미만 크기의 항원을 대상으로 본 발명 팀이 보유하고 있는 인간 막단백질 후보 물질로 대상으로 하여 CYYR1을 마커백신의 양성마커로 선정하였다.

선정된 양성마커에 대해서는 항원과 1차 항체가 먼저 결합하면 동일한 항원과 결합할 수 있는 또 다른 검출 항체와의 결합을 방해하는 원리를 이용한 경쟁적 방법 (competitive method)으로 양성 마커에 대한 분석법을 확인하였다.

(1.1) CYYR1 peptide(Santa Cruz, Cat#sc-83237) 200 ug/mL을 coating buffer(0.1Msodium phosphate)로 200배 희석하여 1 ug/mL이 되도록 조제한 후 상온(25)에서 2시간 방치하여 플레이트에 코팅하였다. 플레이트 세척 후 1% BSA/PBS buffer로 코팅 플레이트의 background 감소를 위해 상온(25)에서 1시간 방치하여 blocking을 진행하였다.

(1.2) Blocking 세척 후 공동 돼지 공혈청(pooled porcine serum)을 PBS로 10배 희석하여 10% 공동돼지 공혈청을 준비하였다. 혈청에 대한 간섭 조건을 최소화 하기 위해 10배 희석을 진행하였다.

(1.3) CYYR1 peptide 코팅플레이트에 준비한 10% 공동 돼지 공혈청과 PBS를 분주한 뒤 그 위에 Rabbit anti-CYYR1 antibody 100 ug/mL을 1% BSA/PBS로 100배 희석하여 1 ug/mL으로 조제된 antibody를 추가로 분주하였다. 플레이트에 두 용액이 충분히 섞이도록 37도에서 1시간 방치하였다. 플레이트 세척 후 결합된 rabbit CYYR1 antibody의 검출을 위해 anti-rabbit IgG-HRP를 20000배 희석하여 37도에서 30분 방치하였다.

(1.4) 플레이트 세척 후 결과 확인을 위해 TMB substrate를 반응 플레이트에 분주하여 OD값을 확인하였다.

(1.5) 공동 돼지 공혈청과 PBS 간의 측정된 OD값은 아래와 같은 공식을 통해 PI를 산출했으며, 이때 PI는 32%로 산출되었다.

Percent inhibition(PI) 산출공식 = 100 X [1 - OD test serum/OD control]

OD control: antibody alone

제조예 5. CYYR1 카세트를 발현하는 재조합 아데노바이러스의 생성

서열번호 42의 핵산서열을 가지는 돼지열병 바이러스 E1, E1와 감별 마커 CYYR1의 유전자를 융합유전자 형태로 화학적으로 합성하였다. 벡터에 삽입을 용이하게 하기 위해 5'말단에 Kpn I, 3' 말단에 Xba I 제한효소 사이트를 첨가하였다. 합성된 DNA를 아데노바이러스 전달 벡터인 pShuttle.tet10 벡터에 삽입시켜 pShuttle.tet10/tPA-CSFV E1-CYYR1-CSFV E2 벡터를 구축하였다.

pShuttle.tet10/tPA-CSFV E1-CYYR1-CSFV E2 벡터를 Pme I 제한효소로 절단 후, 복제 불가능한 pAd Easy 벡터와 상동 재조합(homologous recombination) 보정 기작이 없는 대장균 종인 BJ5183 대장균 세포에서 상동 재조합 반응을 수행하였다. 이 후 카나마이신(Kanamycin) 항생제를 이용하여 CYYR1 카세트가 내제된 pAd/CSFV E1-CYYR1-CSFV E2(이후 pAd/E1-CYYR1-E2로 명명)를 콜로니를 선별하였다. 그리고, pAd/CSFV E1-CYYR1-CSFV E2를 생산 세포주 293R에 형질 전환시켜 CYYR1 카세트를 발현하는 재조합 아데노바이러스 rAd/E1-CYYR1-E2를 얻었다.

제조예 6. 마커에 대한 면역원성 확인

CYYR1에 대한 동물에서 면역원성을 우선적으로 확인하기 위해 Multiple antigen peptide system (MAP)을 이용한 CYYR1을 마우스에 접종하여 면역원성을 확인하고자 하였다. MAP system은 lysine을 이용하여 peptide를 반복적으로 붙여 만든 구조체로 MAP을 이용하여 원하는 peptide의 항체 반응을 유도하고 T cell 반응을 유도하여 다양한 암이나 질병을 억제할 수 있다. 또한, MAP 구조체의 c-terminal 부분에 lipopetide, Tuftsin, Flagellin 등을 융합하여 항체반응이나 T cell 반응을 더욱 향상시킬 수 있음도 증명되었기에 먼저 MAP 구조체를 통해 CYYR1에 대한 항체 반응이 유도되는지를 확인하였다. Balb/C 5주령 마우스를 구입하여 MAP-CYYR1을 1 ug씩 1 주간격으로 주사하였고 2주째부터 1주 간격으로 채혈하여 면역원성을 확인하였다.

면역반응이 확인된 마우스에 돼지 열병 바이러스 E1, E2 항원과 CYYR1을 발현하는 재조합 아데노바이러스를 상기에서 확립된 공정을 바탕으로 생산, 정제하여 마우스당 10⁷ PFU씩 주사한 후 MAP-CYYR1으로 유도된 면역반응에 부스팅하여 면역원성을 확인하였다(도 1).

실시예 1. 바이러스 감염에 대한 IL-7- mFc의 유효 투여량 및 IL-7의 Fc 융합의 기능 확인

BALB/c 마우스(그룹당, n은 6)는 IL-7-mFc 0.04 ㎍부터 10 ㎍까지, 재조합 인간 IL-7(rhIL-7)을 1 ㎍ 부터 10 ㎍까지 여러 범위의 투여량으로 처리하였고, 14일 후 H5N2를 3 LD50로 감염시켰다.

그 결과, 도 4 및 도 5에 나타난 바와 같이, IL-7-mFc 0.04 ㎍으로 치료한 마우스에서는 바이러스 감염에 대한 보호를 관찰하지 못했다. IL-7-mFc 0.2 ㎍으로 치료한 마우스에서는 50%의 생존율을 보이며 바이러스에 대해 부분적인 보호를 관찰했다. 1 ㎍, 3 ㎍, 10 ㎍ 즉, 1 ㎍ 이상의 IL-7-mFc 투여량으로 처리한 쥐에서는 100%의 생존율을 보였으며, 바이러스에 대한 완벽한 보호가 관찰되었다. 반면, Fc가 융합되지 않은 rhIL-7은 1 ㎍ 이상 투여하여도 (1 ㎍, 3 ㎍ 및 10 ㎍), 돼지열병바이러스에 대한 어떠한 보호기능도 관찰되지 않았다.

또한, BALB/c 마우스 (그룹당, n은 6-8)는 바이러스에 감염되기 14일 전에, 1 ㎍의 IL-7-mFc와 이에 대한 비교대상으로 1 ㎍의 Fc 단편을 각각 처리하였다. H5N2의 3 LD50의 용량으로 감염된 이후, 마우스의 초기체중에 대한 무게변화와 생존율을 20일간 관찰하였다.

그 결과, 도 6 및 도 7에 나타난 바와 같이, 1 ㎍의 IL-7-mFc에서는 도 2a 및 도 2b의 결과처럼 100%의 생존율을 보인 반면, 1 ㎍의 Fc 단편으로 처리된 마우스에서는 돼지열병바이러스 감염에 대한 보호가 관찰되지 않았다. 이러한 결과들을 통해, 생쥐에서 바이러스 감염으로부터 완벽한 보호기능을 위한 IL-7-mFc의 유효 투여량은 1 ㎍ 이상임을 확인할 수 있었다. 또한, Fc 단편만으로는 돼지열병바이러스 감염에 대한 보호 기능이 없음을 알 수 있었다.

실시예 2. 바이러스 감염에 대한 IL-7- Fc 융합단백질의 장기적 보호기능 평가

BALB/c 마우스(그룹당 n은 11)는 1 ㎍의 IL-7-mFc 비강 내 투여 이후, 0일, 3일, 7일, 14일, 21일 또는 35일째에 H5N2의 3 LD50 에 감염시켰다.

그 결과, 도 8 및 도 9에 나타난 바와 같이, 바이러스 감염에 대한 IL-7-mFc의 보호 효과는 IL-7-mFc 치료한 지 5일 이후에 나타나기 시작하였다. 0일에서 3일까지는 관찰되지 않았다. 바이러스 감염에 대한 완전한 보호 효과는 IL-7-mFc를 처리한 지 7일, 심지어 14일 되는 날에도 나타났다. 이 보호 효과는 시간이 지날수록 점차 감소되었지만, IL-7-mFc를 처리 한지 21일, 35일 되는 날에 각각 63%와 36%의 쥐 생존율을 보였다.

이러한 결과를 통해, 바이러스 감염에 대한 IL-7-mFc의 보호 효과는 IL-7-mFc 치료한 지 5일부터 35일 되는 날까지 지속되는 것을 알 수 있었다.

실시예 3. 변종 바이러스에 대한 IL-7-Fc 융합단백질의 보호 효과 확인

BALB/c 마우스 (그룹당, n은 6)는 IL-7-mFc 비강 투여 후 14일 째 되는 날에, 바이러스 변종으로써 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34 and A/California/04/09) 및 H3N2 (A/Philippines/2/82)을 치사량으로 감염시켰다. 평균 체중 손실량은 감염시점에 초기무게의 백분율로 보였으며 (mean ± SEM), 생존율은 Kaplan-Meier method에 의해 분석하였다. H1N1 (A/Puerto Rico/8/34), H1N1 (A/California/04/09) 및 H3N2 (A/Philippines/2/82)의 감염에 대한 IL-7-mFc의 보호 효과를 도 5a 내지 도 5f에 나타내었다.

도 10 내지 도 15에 나타난 바와 같이, H1N1 (A/Puerto Rico/8/34), H1N1 (A/California/04/09) 및 H3N2 (A/Philippines/2/82)에 감염되기 14일 전에 IL-7-mFc에 의해 전처리된 쥐들은 모두 바이러스 감염에 대한 보호 효과를 나타냈다. 이러한 결과들을 통해, IL-7-Fc 융합단백질은 바이러스의 변이와 관계없이 효과적으로 국소면역반응을 유도하여 생존률을 향상시킴을 알 수 있었다. 돼지열병바이러스 또한 국소면역반응을 유도하여 생존률을 향상시킬 수 있다.

<110> Genexine, Inc. REPUBLIC OF KOREA(Animal and Plant Quarantine Agency) <120> PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING CLASSICAL SWINE FEVER COMPRISING IL-7 PROTEIN <130> FPD/201802-0115 <160> 42 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 177 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of human IL-7 (Accession number : P13232) <400> 1 Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile 1 5 10 15 Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu 35 40 45 Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe 50 55 60 Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe 65 70 75 80 Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser 85 90 95 Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr 100 105 110 Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala 115 120 125 Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys 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IL-7(MM) <400> 16 Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser 1 5 10 15 Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile 20 25 30 Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile 35 40 45 Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys 50 55 60 Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His 65 70 75 80 Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly 85 90 95 Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr 100 105 110 Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn 115 120 125 Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp 130 135 140 Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His 145 150 <210> 17 <211> 155 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of modified IL-7(MMM) <400> 17 Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu 1 5 10 15 Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu 20 25 30 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c 531 <210> 29 <211> 534 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(M) <400> 29 atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60 cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc 120 gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc 180 ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg 240 ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac 300 ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc 360 caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag 420 gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg 480 ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcac 534 <210> 30 <211> 537 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(MM) <400> 30 atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60 cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag 120 agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac 180 tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc 240 atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc 300 gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc 360 ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg 420 gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga 480 ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcac 537 <210> 31 <211> 540 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(MMM) <400> 31 atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60 cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120 gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180 aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240 ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300 ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360 accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420 ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480 agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540 540 <210> 32 <211> 540 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(MGM) <400> 32 atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60 cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac 120 gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt 180 aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag 240 ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc 300 ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc 360 actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca 420 ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa 480 cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac caaggagcac 540 540 <210> 33 <211> 540 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(DDD) <400> 33 atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60 cccgtggcca gcagcgacga tgacgactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120 gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180 aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240 ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300 ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360 accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420 ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480 agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540 540 <210> 34 <211> 543 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(MMMM) <400> 34 atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60 cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag 120 tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc 180 agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag 240 gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc 300 accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac 360 tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag 420 agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg 480 aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag 540 cac 543 <210> 35 <211> 1284 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(M) fused hyFc <400> 35 atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60 cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc 120 gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc 180 ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg 240 ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac 300 ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc 360 caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag 420 gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg 480 ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcacaggaac 540 acaggcagag gcggcgagga gaagaagaag gagaaggaga aggaggagca ggaggaaaga 600 gagaccaaga cccccgagtg ccccagccac acccagcccc tgggcgtgtt cctgttccct 660 cccaagccca aggacaccct gatgatcagc agaacccccg aggtgacctg cgtggtcgtg 720 gatgtgagcc aggaagatcc cgaagtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaagtg 780 cacaacgcca agaccaagcc cagagaagag cagttcaact ccacctacag agtggtgagc 840 gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtgtcc 900 aacaaaggcc tgcccagctc catcgagaag accatcagca aagccaaagg ccagcccaga 960 gaaccccagg tgtacaccct gcctcccagc caggaagaga tgaccaagaa ccaggtgtcc 1020 ctgacctgcc tggtgaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggaaagcaac 1080 ggccagcccg agaacaatta caagacaacc cctcccgtgc tggatagcga tggcagcttc 1140 tttctgtaca gcagactgac cgtggacaag agcagatggc aggaaggcaa cgtgttcagc 1200 tgcagcgtga tgcacgaagc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gtccctgagc 1260 ctgggcaagt gactcgagtc taga 1284 <210> 36 <211> 1272 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(MM) fused hyFc <400> 36 atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60 cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag 120 agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac 180 tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc 240 atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc 300 gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc 360 ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg 420 gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga 480 ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcacagg 540 aacacaggca gaggcggcga ggagaagaag aaggagaagg agaaggagga gcaggaggaa 600 agagagacca agacccccga gtgccccagc cacacccagc ccctgggcgt gttcctgttc 660 cctcccaagc ccaaggacac cctgatgatc agcagaaccc ccgaggtgac ctgcgtggtc 720 gtggatgtga gccaggaaga tcccgaagtg cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggaa 780 gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagaa gagcagttca actccaccta cagagtggtg 840 agcgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg 900 tccaacaaag gcctgcccag ctccatcgag aagaccatca gcaaagccaa aggccagccc 960 agagaacccc aggtgtacac cctgcctccc agccaggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1020 tccctgacct gcctggtgaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggaaagc 1080 aacggccagc ccgagaacaa ttacaagaca acccctcccg tgctggatag cgatggcagc 1140 ttctttctgt acagcagact gaccgtggac aagagcagat ggcaggaagg caacgtgttc 1200 agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgtccctg 1260 agcctgggca ag 1272 <210> 37 <211> 1275 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(MMM) fused hyFc <400> 37 atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60 cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120 gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180 aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240 ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300 ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360 accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420 ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480 agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540 aggaacacag gcagaggcgg cgaggagaag aagaaggaga aggagaagga ggagcaggag 600 gaaagagaga ccaagacccc cgagtgcccc agccacaccc agcccctggg cgtgttcctg 660 ttccctccca agcccaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgcgtg 720 gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg 780 gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg 840 gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 900 gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag 960 cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag 1020 gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 1080 agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc 1140 agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg 1200 ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc 1260 ctgagcctgg gcaag 1275 <210> 38 <211> 1275 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(MGM) fused hyFc <400> 38 atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60 cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac 120 gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt 180 aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag 240 ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc 300 ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc 360 actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca 420 ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa 480 cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac aaaggaacac 540 cgcaatactg ggcggggcgg ggaggaaaag aaaaaggaga aggaaaagga ggaacaggag 600 gaaagagaga ctaagacccc agaatgtccc agccatactc agcccctggg ggtgttcctg 660 tttcccccta aacctaagga taccctgatg atcagcagga cacccgaggt gacctgcgtg 720 gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg 780 gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg 840 gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 900 gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag 960 cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag 1020 gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 1080 agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc 1140 agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg 1200 ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc 1260 ctgagcctgg gcaag 1275 <210> 39 <211> 1278 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of modified IL-7(MMMM) fused hyFc <400> 39 atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60 cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag 120 tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc 180 agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag 240 gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc 300 accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac 360 tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag 420 agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg 480 aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag 540 cacaggaaca caggcagagg cggcgaggag aagaagaagg agaaggagaa ggaggagcag 600 gaggaaagag agaccaagac ccccgagtgc cccagccaca cccagcccct gggcgtgttc 660 ctgttccctc ccaagcccaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgc 720 gtggtcgtgg atgtgagcca ggaagatccc gaagtgcagt tcaactggta cgtggatggc 780 gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaagagc agttcaactc cacctacaga 840 gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 900 aaggtgtcca acaaaggcct gcccagctcc atcgagaaga ccatcagcaa agccaaaggc 960 cagcccagag aaccccaggt gtacaccctg cctcccagcc aggaagagat gaccaagaac 1020 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1080 gaaagcaacg gccagcccga gaacaattac aagacaaccc ctcccgtgct ggatagcgat 1140 ggcagcttct ttctgtacag cagactgacc gtggacaaga gcagatggca ggaaggcaac 1200 gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaagcc ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg 1260 tccctgagcc tgggcaag 1278 <210> 40 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> oligopeptides conjugated with IL-7 <400> 40 Met Met Met Met 1 <210> 41 <211> 176 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IL-7 of Sus scrofa <400> 41 Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile 1 5 10 15 Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys 20 25 30 Asp Gly Gly Val Tyr Gln Asn Val Leu Met Val Ser Ile Asp Asp Leu 35 40 45 Asp Arg Met Ile Asp Phe Asp Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Pro Asn 50 55 60 Phe Leu Lys Lys His Ser Cys Asp Asp Asn Lys Glu Ala Ser Phe Leu 65 70 75 80 Tyr Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Ile Lys Met Asn Ile Ser 85 90 95 Glu Glu Phe Asn His His Leu Ser Thr Val Ser Gln Gly Thr Leu Thr 100 105 110 Leu Phe Asn Cys Thr Ser Lys Val Lys Gly Arg Lys Pro Pro Ser Leu 115 120 125 Gly Glu Ala Gln Leu Thr Lys Asn Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys 130 135 140 Glu Gln Lys Arg Gln Gly Asp Leu Cys Phe Leu Lys Ile Leu Leu Gln 145 150 155 160 Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Arg Gly Ala Lys Glu Tyr 165 170 175 <210> 42 <211> 1673 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CYYR1 gene fused with E1 gene of CLASSICAL SWINE FEVER virus <400> 42 atgggcggcc acctatcaga atttctgctg ctctctctgg ttgttctgtc tgacttcgcc 60 cctgaaacag ccagcgcgtt atacctcatt ttgcactacg tgattcctca atcccaagaa 120 gaacctgaag gctgtgacac aaaccagctg aatctaacag tggaactcag gactgaagac 180 gtaataccgt catcagtctg gaatgttggc aaatatgtgt gtgttagacc agactggtgg 240 catatgaaac caaggtggct ctgttatttg aagaggcagg acaggtcgta aagttagcct 300 tacgggcgct gagggattta atcagggtct ggaatagcgc atcaaccacg gcattcctca 360 tctgcttgat aaaagtatta aggggacaga tcgtgcaagg tgtgatatgg ctgctactag 420 taactggggc acaaggcgcg gccgcccagt gcggaaagga ttgcaaaagc tactgctgcg 480 acggcaccac accttactgc tgcagctact atgcttacat cggaaacatt ctgagcggca 540 cagccctcga gcggctagcc tgcaaggaag attacaggta cgcactatca tcaaccaatg 600 agatagggct actcggggcc ggaggtctca ccaccacctg ggaagaatac aaccacgatt 660 tgcaactgaa tgacgggacc gttaaggcca tttgcgtggc aggttccttt aaaatcacgg 720 cacttaatgt ggtcagtagg aggtatttgg catcattgca taaggaggct ttacccactt 780 ctgtgacatt cgagctcctg ttcgacggga ccaacccatc aactgaggaa atgggagatg 840 acttcgggtt cgggctgtgc ccgtttgata cgagtcctgt tgtcaaggga aagtacaata 900 caaccttgtt gaacggtagt gctttctatc ttgtctgtcc aatagggtgg acgggtgtta 960 tagagtgcac atcatttaat atggacactc tgagaacaga agtggtaaag accttcagga 1020 gggacaagcc ctttccgcac agaatggatt gtgtgaccac aacagtggaa aatgaagatt 1080 tattctactg taattggggg ggcaactgga catgtgtgaa aggtgaacca gtggtctacg 1140 cgggggggct agtaaaacaa tgcagatggt gtggctttga cttcaatgag cctgacggac 1200 tcccacacta ccccataggt aagtgcattt tggcaaatga gacaggttac agaatagtgg 1260 attcaacaga ctgtaacaga gatggtgttg taatcagcac agaggggagt catgagtgct 1320 tgatcggtaa cacaaccgtc aaggtgcatg catcagatga aagactgggc cccatgccat 1380 gcagacctaa agagaccgtc tctagtgaag gacctgtaag gaaaacttcc tgtacattca 1440 actacgcaaa aactttgaag aacaagtact atgagcccag ggacagctat ttccagcaat 1500 atatgcttaa gggcgagtat cagtactggt ttgacctgga cgtgactgac cgccactcag 1560 attacttcgc agaatttgtt gtcttggtgg tggtagcact gttaggagga agatatgtcc 1620 tgtggttaat agtgacctac atagttttaa cagaacaacc cgccgctggt taa 1673

Claims (5)

1. IL-7 단백질을 유효성분으로 포함하는 돼지열병바이러스 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
2. 제 1항에 있어서,
   상기 IL-7은 돼지 유래인 것인, 돼지열병바이러스 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
3. 제 2항에 있어서,
   상기 IL-7은 서열번호 2인 것인, 돼지열병바이러스 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
4. 제1항의 조성물을 돼지에 투여하는 단계를 포함하는 돼지열병바이러스 치료 또는 예방 방법.
5. 제 4항에 있어서,
   상기 돼지는 CYYR1 양성인 것인, 돼지열병바이러스 치료 또는 예방 방법.

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