KR20190051956A - 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드 및 이의 사용 방법 - Google Patents

단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드 및 이의 사용 방법 Download PDF

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웬델 에이. 림
콜 티. 로이발
제스퍼 제트. 윌리엄스
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더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아
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Abstract

본원의 개시내용은 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원과 이의 결합 파트너와의 결합시 유도되는 절단 반응 후 다양한 세포 공정을 조절하는 키메라 폴리펩타이드를 제공한다. 예를 들어, 유전자 발현의 유도를 포함하는 세포 기능을 조절하기 위해 키메라 폴리펩타이드를 사용하는 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 및 관련 발현 카세트 및 벡터 및 상기 핵산 및/또는 발현 카세트 및 벡터를 함유하는 세포가 제공된다. 또한, 기재된 성분 및 방법, 및 본 발명의 방법을 수행하기 위한 키트를 사용하여 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.

Description

단백질 가수분해에 의해 분열 가능한 키메라 폴리펩타이드 및 그 사용 방법
상호-참조
본 출원은 하기 미국 출원의 우선권을 주장한다: 가특허 출원 번호 제62/378,614호(2016년 8월 23일자로 출원됨), 이 출원은 전문이 본원에 참조로 인용됨.
연방 후원 연구에 관한 진술서
본 발명은 국립보건원에 의해 부여된 승인 번호 R01 CA196277 하의 정부 지원으로 만들어 졌다. 정부는 본 발명에서 특정 권리를 갖는다.
텍스트 파일로서 제공된 서열목록이 참조로 인용됨
이와 함께 서열 목록이 2017년 8월 22일자로 작성되고 365KB의 크기를 갖는, "UCSF- 544WO_SeqList_ST25.txt" 텍스트 파일로서 이에 의해 제공된다. 상기 텍스트 파일의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다.
통상적으로, 발현되는 경우 세포 거동 및/또는 활성을 변화시키는 단백질의 발현을 구동하는 유도성 발현 작제물의 사용을 통해 성취되었다. 연구 세팅에서, 유도성 발현 시스템은 세포 생물학, 분자 생물학, 유전학, 생화학 등을 포함하는 생활 과학의 많은 영역에 대한 본 발명자의 이해를 크게 진전시켰다. 잘 연구된 유도성 세포 시스템 (예를 들어, 화학적 유도성, 임의로 유도성 등)은 일반적으로 범용적으로 세포 거동 및 활성에 영향을 미치고/미치거나 활성에서의 변화를 집단의 특정 세포로 제한하거나 상기 시스템을 제어하기 위해, 예를 들어, 시스템을 “가동” 또는 “중단”시키기 위해 사용자-제공된 인풋을 요구한다. 세포 가공은 최근에 예를 들어, 이웃하는 세포에 의해 제공된 바와 같이 이들의 환경에서 신호를 검출하고 자체적으로 상기 신호 전달 인풋을 목적하는 거동 또는 활성 아웃풋으로 전달하기 위해 세포를 재프로그램화 하고자 하는 능력을 제공하였다.
본원의 개시내용은 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원과 이의 결합 파트너와의 결합시 유도되는 절단 반응 후 다양한 세포 공정을 조절하는 키메라 폴리펩타이드를 제공한다. 예를 들어, 유전자 발현의 유도를 포함하는 세포 기능을 조절하기 위해 키메라 폴리펩타이드를 사용하는 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 및 관련 발현 카세트 및 벡터 및 상기 핵산 및/또는 발현 카세트 및 벡터를 함유하는 세포가 제공된다. 또한, 기재된 성분 및 방법, 및 본 발명의 방법을 수행하기 위한 키트를 사용하여 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
본원의 개시내용의 양상은 N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 a) 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인; b) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및 c) 전사 활성화인자 또는 리프레서를 포함하는 세포내 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서, 펩타이드-MHC로의 특이적 결합 구성원의 결합은 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도함으로써 세포내 도메인을 방출한다.
일부 구현예에서, 특이적 결합 구성원은 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체는 나노항체, 디아바디, 트리아바디, 또는 미니바디, F(ab’)2 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편 (scFv) 또는 단일 도메인 항체(sdAb)이다.
일부 구현예에서, 특이적 결합 구성원은 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 세포내 암 항원 펩타이드는 WT1 펩타이드 또는 NY-ESO 펩타이드이다.
일부 구현예에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 이의 N-말단에 하나 이상의 상피 성장 인자 (EGF) 반복체를 포함한다. 일부 구현예에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 이의 N-말단에 2 내지 11개 EGF 반복체를 포함한다. 일부 구현예에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 합성 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 하나 이상의 EGF 반복체와 하나 이상의 단백질용해 절단 부위 사이에 합성 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 50개 아미노산 내지 1000개 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 300개 아미노산 내지 400개 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 단백질용해 절단 부위는 S2 단백질용해 절단 부위, S3 단백질용해 절단 부위 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 단백질용해 절단 부위는 예를 들어, Ala-Val 디펩타이드 서열을 포함하는 ADAM-17-형 프로테아제 절단 부위와 같은 ADAM 패밀리형 프로테아제 절단 부위인 S2 단백질용해 절단 부위를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 단백질용해 절단 부위는 Gly-Val 디펩타이드 서열을 포함하는 감마-세크레타제 (γ-세크레타제) 절단 부위인 S3 단백질용해 절단 부위를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 단백질용해 절단 부위는 S1 단백질용해 절단 부위를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, S1 단백질용해 절단 부위는 아미노산 서열 Arg-X-(Arg/Lys)-Arg (서열번호: 130) (여기서, X는 임의의 아미노산이다)을 포함하는 푸린형 프로테아제 절단 부위이다. 일부 구현예에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 S1 단백질용해 절단 부위가 부재이다. 일부 구현예에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 31a-32b에 제공된 서열과 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 31a에 제공된 서열 또는 도 31b에 제공된 서열과 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
본원의 개시내용의 양상은 상기된 임의의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함한다.
일부 구현예에서, 핵산은 목적하는 폴리펩타이드 (POI)를 암호화하는 핵산 서열에 작동적으로 연결된 전사 활성화인자 또는 리프레서에 응답하는 전사 조절 요소를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, POI는 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR) 및 선천성-면역 반응 유도제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 이종성 폴리펩타이드이다.
본원의 개시내용의 양상은 상기된 임의의 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터를 포함한다.
본원의 개시내용의 양상은 세포에서 이종성 폴리펩타이드의 발현을 유도하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 세포와 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)와 접촉시키는 단계로서, 여기서, 상기 세포는 상기된 임의의 키메라 폴리펩타이드를 발현하고 상기 키메라 폴리펩타이드의 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 이종성 폴리펩타이드를 암호화하는 서열을 포함하는 단계 및 이로써 상기 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인을 방출시키는 단계 및 상기 이종성 폴리펩타이드의 발현을 유도하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 이종성 폴리펩타이드는 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR) 및 선천성-면역 반응 유도제이다.
본원의 개시내용의 양상은 다음을 포함하는 숙주 세포를 포함한다: a) 제1 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)에 특이적으로 결합하는 상기된 임의의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산; 및 b) 목적하는 폴리펩타이드 (POI)를 암호화하는 핵산에 작동적으로 연결된, 키메라 폴리펩타이드의 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소.
일부 구현예에서, 숙주 세포는 유전학적으로 변형되고 핵산 및 전사 조절 요소는 숙주 세포의 게놈 내에 존재한다. 일부 구현예에서, 핵산 및 전사 조절 요소는 숙주 세포 내 염색체 외부에 존재한다. 일부 구현예에서, POI는 이종성 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 이종성 폴리펩타이드는 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR) 및 선천성-면역 반응 유도제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 이종성 폴리펩타이드는 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 CAR이다. 일부 구현예에서, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 제1 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하고 상기 CAR은 제2 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 세포내 암 항원 펩타이드는 WT1 펩타이드이고 제2 세포내 암 항원 펩타이드는 NY-ESO 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 제1 세포내 암 항원 펩타이드는 NY- ESO 펩타이드이고 제2 세포내 암 항원 펩타이드는 WT1 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 이종성 폴리펩타이드는 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 가공된 TCR이다. 일부 구현예에서, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 제1 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하고 상기 가공된 TCR은 제2 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 세포내 암 항원 펩타이드는 WT1 펩타이드이고 제2 세포내 암 항원 펩타이드는 NY-ESO 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 제1 세포내 암 항원 펩타이드는 NY- ESO 펩타이드이고 제2 세포내 암 항원 펩타이드는 WT1 펩타이드이다.
본원의 개시내용의 양상은 a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 포함한다: i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인; ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및 iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인; b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 키메라 이중특이적 결합 구성원을 암호화하는 핵산, 여기서, 상기 특이적 결합 구성원의 상기 표적 분자로의 결합은 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하고 이로써 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 발현되도록 한다.
일부 구현예에서, 키메라 이중특이적 결합 구성원은 암 항원에 특이적인 결합 도메인 및 면역 세포의 표면 상에서 발현되는 단백질에 특이적인 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 이중특이적 결합 구성원은 적어도 하나의 항체 유래된 항원-결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 이중특이적 결합 구성원은 이중특이적 항체 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, 키메라 이중특이적 결합 구성원은 리간드-수용체 결합 쌍의 적어도 하나의 수용체, 또는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 이중특이적 결합 구성원은 적어도 하나의 항체 유래된 항원-결합 도메인 및 리간드-수용체 결합 쌍의 적어도 하나의 수용체 또는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 세포의 표면 상에서 발현된 단백질은 CD3이다. 일부 구현예에서, 면역 세포의 표면 상에서 발현된 단백질은 천연 킬러 그룹 2D (NKG2D) 수용체이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 암 항원이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 조직 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 기관 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 세포 유형 특이적 분자이다.
본원의 개시내용의 양상은 상기된 것들 중 어느 하나에 따른 유효량의 숙주 세포를 대상체에게 투여함을 포함하는, 신생물에 대해 대상체를 치료하는 방법을 포함하고, 여기서, 상기 신생물은 표적 분자 및 암 항원을 발현한다.
본원의 개시내용의 양상은 a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 포함한다: i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인; ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및 iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인; b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 항-Fc 키메라 항원 수용체 (CAR)를 암호화하는 핵산, 여기서, 상기 특이적 결합 구성원의 상기 표적 분자로의 결합은 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하고 이로써 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 항-Fc CAR이 발현되도록 한다.
일부 구현예에서, 표적 분자는 암 항원이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 조직 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 기관 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 세포 유형 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 추가로 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 특이적이고 항-Fc CAR에 의해 결합된 Fc 영역을 포함하는 항체를 암호화하는 핵산을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체를 암호화하는 핵산은 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된다.
본원의 개시내용의 양상은 상기된 임의의 숙주 세포의 유효량을 대상체에게 투여함을 포함하는, 신생물에 대해 대상체를 치료하는 방법을 포함하고, 여기서, 상기 신생물은 표적 분자를 발현한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 특이적이고 항-Fc CAR에 의해 결합된 Fc 영역을 포함하는 항체를 대상체에게 투여함을 포함한다.
본원의 개시내용의 양상은 a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 포함한다: i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인; ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및 iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인; b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 선천성-면역 반응 유도제를 암호화하는 핵산, 여기서, 상기 특이적 결합 구성원의 상기 표적 분자로의 결합은 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하고 이로써 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 선천성 면역 반응 유도제가 발현되도록 한다.
일부 구현예에서, 표적 분자는 조직 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 기관 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 세포 유형 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 암 항원이다. 일부 구현예에서, 선천성-면역 반응 유도제는 세균 단백질 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, 선천성-면역 반응 유도제는 바이러스 단백질 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, 선천성-면역 반응 유도제는 진균류 단백질 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, 선천성-면역 반응 유도제는 포유동물 기생충에 의해 발현되는 단백질 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, 포유동물 기생충은 사람 기생충이다.
본원의 개시내용의 양상은 상기된 임의의 숙주 세포의 유효량을 대상체에게 투여함을 포함하는, 대상체의 특정 영역에 선천성 면역 반응을 유도하는 방법을 포함하고, 여기서, 상기 영역은 표적 분자를 발현한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체의 영역은 신생물을 포함한다.
본원의 개시내용의 양상은 a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인; ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및 iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산; b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 면역 억제 인자를 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 포함하고, 여기서, 상기 특이적 결합 구성원의 상기 표적 분자로의 결합은 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하고 이로써 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 면역 억제 인자가 발현되도록 한다.
일부 구현예에서, 표적 분자는 조직 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 기관 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 세포 유형 특이적 분자이다. 일부 구현예에서, 표적 분자는 자가항원이다. 일부 구현예에서, 면역 억제 인자는 면역억제 사이토킨이다. 일부 구현예에서, 면역억제성 사이토킨은 IL-10이다. 일부 구현예에서, 면역 억제 인자는 세포 대 세포 신호전달 면역억제성 리간드이다. 일부 구현예에서, 세포 대 세포 신호전달 면역억제성 리간드는 PD-L1이다.
본원의 개시내용의 양상은 대상체에서 면역 반응을 억제하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 상기된 임의의 숙주 세포의 유효량을 대상체에게 투여함을 포함하고, 상기 대상체는 표적 분자를 발현한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 자가면역 질환을 갖는다.
본원의 개시내용의 양상은 이종성 종양을 사멸시키는 방법을 포함하고, 상기 방법은: 사멸 항원을 발현하는 제1 세포, 및 사멸 항원 및 프라이밍 항원을 발현하는 제2 세포를, 프라이밍 항원에 특이적으로 결합하는 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드, 사멸 항원에 특이적으로 결합하는 치료학적 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열; 및 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드에 응답하는 핵산에 작동적으로 연결된 전사 조절 요소를 포함하는 가공된 면역 세포와 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서, 상기 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 프라이밍 항원으로의 결합이 전사 조절 요소를 활성화시켜 상기 사멸 항원에 결합되는 경우, 상기 이종성 종양의 제1 및 제2 세포를 사멸시키는 치료학적 폴리펩타이드의 발현을 유도한다.
일부 구현예에서, 치료학적 폴리펩타이드는 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 일부 구현예에서, 치료학적 폴리펩타이드는 T 세포 수용체(TCR)이다. 일부 구현예에서, 치료학적 폴리펩타이드는 치료학적 항체이다. 일부 구현예에서, 치료학적 폴리펩타이드는 키메라 이중특이적 결합 구성원이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 항원 또는 사멸 항원의 적어도 하나는 MHC와 관련하여 제공되는 세포내 항원이다. 일부 구현예에서, 프라이밍 항원 또는 사멸 항원 둘 다는 MHC와 관련하여 제공되는 세포내 항원이다.
도 1은 수용자 세포에서 유전자 또는 암호화 서열 (“X”)의 발현을 유도하기 위한 공여자 세포의 주요 조직적합성 복합체 (MHC)-제공된 항원과 일 구현예의 수용자 세포 상에 발현된 단백질용해 검출가능한 키메라 폴리펩타이드 (synNotch)의 특이적 결합을 도식적으로 도시한다.
도 2는 MHC-제공된 WT1 항원에 특이적인, 도 1에 일반적으로 도시된 바와 같이 본원에 기재된 하나의 구현예에 따라 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 수용자 세포에서 청색 혈광성 단백질 (BFP) 리포터의 특이적 발현을 입증한다. 상기 리포터는 수용자 세포가 MHC-제공된 WT1 항원을 발현하는 공여자 세포와 접촉되는 경우 발현되지만 상기 항원을 발현하지 않는 공여자 세포와 접촉되는 경우에는 발현되지 않는다.
도 3은 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 WT1 세포내 항원 의존성 활성화를 보여주는 도 2와 관련된 정량화를 제공한다.
도 4는 본원에 기재된 하나의 구현예에 따른 항-MHC-제공된 WT1 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 민감성 및 항원 농도 의존성 리포터 활성화를 입증한다.
도 5는 하나의 구현예에 따른, CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포에서 항-MHC-제공된 WT1 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 민감성 및 항원 농도 의존성 리포터 활성화를 입증한다.
도 6은 MHC-제공된 NY-ESO1 항원에 특이적인 T 세포 수용체 (TCR)의 발현을 구동하는 MHC-제공된 WT1 특이적 키메라 폴리펩타이드를 사용한 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 회로를 도식적으로 도시한다. 도시된 구현예에서, T 세포는 WT1과 NY-ESO1 세포내 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포와 접촉되는 경우에만 활성화된다.
도 7은 도 6에 도시된 시스템에 따라, WT1 및 NY-ESO1 세포내 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포와 접촉하는 경우만의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 T 세포 활성화 (CD69 활성화 마커 발현에 의해 나타낸 바와 같이)를 도시한다.
도 8은 도 6에 도시된 시스템에 따라, 가공된 T 세포가 WT1 및 NY-ESO1 세포내 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포와 접촉하게 되는 경우만의 유의적 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 표적 세포사멸을 도시한다.
도 9는 MHC-제공된 NY-ESO1 항원에 특이적인 T 세포 수용체 (TCR)의 발현을 구동하는 항-GFP 특이적 키메라 폴리펩타이드를 사용한 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 회로를 도식적으로 도시한다.
도 10은 표면-GFP 및 NY-ESO1 세포내 항원 둘 다를 발현하는 표적과 접촉되는 경우의 도 9에 도시된 T 세포의 활성화를 도식적으로 도시한다.
도 11은 도 9에 도시된 시스템에 따라, 표면-GFP 및 NY-ESO1 세포내 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포와 접촉하는 경우만의 유의적 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 T 세포 활성화 (CD69 활성화 마커 발현에 의해 나타낸 바와 같이)를 도시한다.
도 12는 도 9에 도시된 시스템에 따라, 표면-GFP 및 NY-ESO1 세포내 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포와 접촉하는 경우에만의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 T 세포 증식을 도시한다.
도 13은 도 9 및 도 10에 도시된 시스템에 따라, 표면-GFP 및 NY-ESO1 세포내 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포와 접촉되는 경우만의 유의적 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 T2 표적 세포 사멸을 도시한다.
도 14는 도 9 및 도 10에 도시된 시스템에 따라, 표면-GFP 및 NY-ESO1 세포내 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포와 접촉되는 경우만의 유의적 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 A375 표적 세포 사멸을 도시한다. 항-NY-ESO1 TCR을 항상성으로 발현하는 CD8 T 세포에 의한 표적 세포 사멸과의 비교는 게이팅된 TCR 발현과의 증진된 특이성을 입증하는 것으로 나타난다.
도 15는 제2 세포내 항원 (“항원 B”)에 특이적인 TCR의 발현을 구동시키기 위해 제1 세포내 항원 (“항원 A”)에 특이적인 하나의 구현예의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드 (synNotch)를 사용하는 이원-세포내-항원 회로의 일반 도식을 제공한다.
도 16은 CD19+ 종양으로 T 세포를 재표적화시키는 α-CD19/CD3 이-특이적 항체인 블리나투모맙의 발현을 조절하는 α-GFP synNotch 수용체로 가공된 CD4+ T 세포를 도시한다.
FIG. 17은 도 16과 관련된 히스토그램 데이터를 제공하고, 이는 표면 GFP+ 단독, CD19+ 단독, 또는 표면 GFP/CD19+ K562과의 동시-배양 후 synNotch T 세포 상에 CD69 (활성화 마커) 발현을 보여준다. T 세포는 표면 GFP/CD19 K562의 존재하에 강하게 활성화하고 T 세포의 작은 퍼센트는 블리나투맙 발현의 낮은 수준의 기본 누출로 인해 CD19+ 단독 K562와 함께 배양되는 경우 활성화한다.
도 18은 각각 좌측 및 우측 옆구리에 CD19-비-표적 K562와 표적 CD19+로 피하 주사된 NSG 마우스를 도시한다. 블리나투모맙 (α-CD19/CD3 BiTE) 발현 조절에서 α-GFP synNotch T 세포는 종양 이식 후 4일째에 마우스로 정맥내 주사하였다. 종양은 25일 동안에 걸쳐 캘리퍼로 측정하였다.
도 19는 블리나투모맙 (α-CD19/CD3 BiTE) 발현 (도 18에 도시된 바와 같이)을 조절하는 α-GFP synNotch 수용체로 가공된 CD4+ 및 CD8+ T 세포로 처리된 마우스에서 양쪽 CD19+ 및 GFP/CD19+ K562 종양 성장 곡선을 제공한다. 이원 항원 GFP/CD19+ 종양은 선택적으로 제거된다(n=5 마우스, 오류 = SEM, 스튜던트의 t-시험 에 의해 결정된 유의성 ** p≤0.01).
도 20은 플라겔린의 발현을 조절하는 α-GFP synNotch 수용체로 가공된 CD4+ T 세포를 도시한다. 리포터 검정에서, 상등액은 표면 GFP+ 또는 GFP- K562와 공동-배양 후 T 세포로부터 수거하고 hTLR5 HEK-블루 분비된 알칼린 포스파타제 (SEAP) 리포터 세포로 첨가하였다. 24시간 후,SEAP 활성을 모니터링하고 상등액 중 플라겔린의 수준을 측정하였다.
도 21은 도 20에 도시된 유도된 선천성 면역 매개체 리포터 검정의 정량화를 제공한다.
도 22는 본원에 기재된 구현예에 따라 이종성 종양을 인지하고 치료하기 위해 T 세포를 프로그래밍함을 도식적으로 도시한다.
도 23은 본원에 기재된 구현예에 따른 GFP “프라이밍” 항원 및 CD19 “사멸” 항원을 발현하는 이종성 종양을 인지하고 치료하기 위한 T 세포 프로그래밍을 입증하기 위해 디자인된 모델 시스템을 도식적으로 도시한다.
도 24는 도 23에 따른 시험관내 모델화된 이원-항원 이종성 종양(“이종성 혼합체”)의 효과적인 표적화 및 사멸을 입증한다.
도 25는 다양한 비율의 프라이밍 항원-발현 세포 및 사멸 항원-발현 세포의 모델 종양을 사용하여 도 23에 도시된 이종성 종양 사멸 모델의 추가의 정량화를 제공한다. “CD19+ 표적” 막대는 상부에 있고 “GFP/CD19+ 표적” 막대는 하부에 있다.
도 26은 1:3 비율의 프라이밍 항원-발현 세포 대 사멸 항원-발현 세포를 갖는 종양에 대해 도 23에 도시된 모델 시스템에 따른 이종성 종양 사멸의 시간 과정을 제공한다.
도 27은 1:19 비율의 프라이밍 항원-발현 세포 대 사멸 항원-발현 세포를 갖는 종양에 대해 도 23에 도시된 모델 시스템에 따른 이종성 종양 사멸의 시간 과정을 제공한다.
도 28은 면역억제성 제제 PD-L1 및 IL-10의 발현을 조절하는 α-CD19 synNotch 수용체로 가공된 CD4+ T 세포를 도식적으로 도시한다.
도 29는 도 28에 도시된 바와 같이 24시간 동안 CD19+ 또는 CD19- K562와의 동시 배양 후 PD-L1 및 세포내 IL-10을 발현하는 synNotch T 세포의 퍼센트의 정량화를 제공한다. 상등액 중에 IL-10의 양은 또한 ELISA로 결정되었다.
도 30a-30g는 본원의 개시내용의 예시적 노치 수용체 폴리펩타이드의 도식을 제공한다.
도 31a-31g는 다양한 종의 노치 수용체 폴리펩타이드의 아미노산 서열(서열번호: 1 내지 7)을 제공한다.
도 32a-32b는 노치 수용체 폴리펩타이드 노치 조절 영역 및 거기에 성분 (서열번호: 16-17)들의 예를 도시한다.
도 33은 야생형 친화성 또는 증진된 친화성 TCR의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 회로를 도식적으로 도시한다.
도 34는 도 33에 도시된 시스템에 따른 이원-항원 게이팅된 사이토킨 분비를 도시한다.
도 35는 가공된 CD4 T 세포에서 TCR의 발현을 구동하는 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드 게이팅된 회로를 도식적으로 도시한다.
도 36은 도 35에 도시된 시스템에 따라 표적화된 이원-항원을 발현하는 표적 세포에 응답하는 고수준의 사이토킨 분비를 도시한다.
도 37은 가공된 CD4 또는 CD8 T 세포를 사용하여 임상적 관련 항원 쌍을 표적화하는 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드 게이팅된 회로를 도식적으로 도시한다.
도 38은 도 37에 도시된 시스템에 따른 가공된 CD8 및 CD4 T 세포 둘 다에 의한 임상적으로 관련된 항원 쌍을 발현하는 표적 세포의 특이적 사멸을 도시한다.
도 39는 HLA-A2/Mart1에 특이적인 TCR의 발현을 구동하는 항-GFP 특이적 키메라 폴리펩타이드를 사용한 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 회로를 도식적으로 도시한다.
도 40은 표면 GFP 및 HLA-A2/Mart1 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포의 존재하에서만 도 39에 도식적으로 도시된 회로를 발현하는 T 세포의 특이적 활성화를 도시한다.
도 41은 항-HER2 CAR의 발현을 구동하는 항- HLA-A2/WT1 특이적 키메라 폴리펩타이드를 사용한 내부-외부 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드-게이팅된 회로를 도식적으로 도시한다.
도 42는 내부 항원 (HLA-A2/WT1) 및 외부 항원 (HER2) 둘 다를 발현하는 표적 세포의 존재하에서만 도 41에 도식적으로 도시된 회로를 발현하는 T 세포의 특이적 활성화를 도시한다.
정의
본원에 상호교환적으로 사용되는 용어 “폴리뉴클레오타이드” 및 “핵산”은 임의의 길이의 뉴클레오타이드의 중합체 형태인 리보뉴클레오타이드 또는 데옥시리보뉴클레오타이드를 언급한다. 따라서, 상기 용어는 단일-, 이중-, 또는 다중-가닥 DNA 또는 RNA, 게놈 DNA, cDNA, DNA-RNA 하이브리드, 또는 푸린 및 피리미딘 염기 또는 다른 천연, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형된, 비-천연, 또는 유도체화된 뉴클레오타이드 염기를 포함하는 중합체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"작동적으로 연결된"은 그와 같이 기재된 성분들이, 이들이 이들의 의도된 방식으로 기능하도록 하는 관계에 있는 병렬을 언급한다. 예를 들어, 프로모터는 상기 프로모터가 이의 전사 또는 발현에 영향을 주는 경우 암호화 서열에 작동적으로 연결되어 있다. 그러나 작동적으로 연결된 핵산 서열은 필연적으로 인접해 있을 필요는 없을 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에 프로모터에 작동적으로 연결된 암호화 서열은 프로모터에 인접해 있을 수 있다. 일부 경우에, 프로모터에 작동적으로 연결된 암호화 서열은 암호화 및 비-암호화 서열을 포함하는 하나 이상의 중재 서열에 의해 분리될 수 있다. 또한, 일부 경우에, 2개 초과의 암호화 서열이 작동적으로 연결될 수 있고, 이는 2개 이상의 암호화 서열이 단일 프로모터에 작동적으로 연결되어 있는 경우를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"벡터" 또는 "발현 벡터"는 또 다른 DNA 분절, 즉, “삽입체”가 세포에서 부착된 분절을 복제하도록 부착될 수 있는 플라스미드, 파아지, 바이러스 또는 코스미드와 같은 레플리콘이다.
본원에 사용된 바와 같은 "이종성"은 각각 천연 (예를 들어, 천연적으로-존재하는) 핵산 또는 단백질에서 발견되지 않는 뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열을 의미한다. 이종성 핵산 또는 폴리펩타이드는 여기에서 핵산 또는 폴리펩타이드가 존재하거나 발현되는 유기체 또는 세포로서 상이한 종으로부터 유래할 수 있다. 따라서, 이종성 핵산 또는 폴리펩타이드는 일반적으로 이것이 존재하는 세포 또는 유기체와 비교하여 유사하지 않은 진화 기원을 갖는다.
용어 "항체" 및 “면역글로불린”은 임의의 이소형의 항체 또는 면역글로불린, 항원으로의 특이적 결합을 보유하는 항체의 단편을 포함하고, 이는 Fab, Fv, scFv, 및 Fd 단편, 키메라 항체, 인간화된 항체, 단일쇄 항체 (scAb), 단일 도메인 항체(dAb), 단일 도메인 중쇄 항체, 단일 도메인 경쇄 항체, 나노바디, 이중특이적 항체, 다중-특이적 항체, 및 항체 및 비-항체 단백질의 항원-결합 (또한 본원에서 항원 결합으로서 언급됨)을 포함하는 융합 단백질을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 항체는 예를 들어, 방사능동위원소, 검출가능한 생성물을 생성하는 효소, 형광성 단백질 등으로 검출가능하게 표지될 수 있다. 항체는 특이적 결합 쌍의 구성원, 예를 들어, 비오틴(비오틴-아비딘 특이적 결합 쌍의 구성원) 등과 같은 다른 모이어티에 추가로 접합될 수 있다. 항체는 또한 폴리스티렌 플레이트 또는 비드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 고형 지지체에 결합될 수 있다. 또한 상기 용어에 의해 포함되는 것은 Fab’, Fv, F(ab’)2, 및 또는 항원으로의 특이적 결합을 보유하는 다른 항체 단편 및 모노클로날 항체이다. 본원에 사용된 바와 같은 모노클로날 항체는 동일한 세포 그룹에 의해 생성되는 항체이고, 이 모두는 반복적인 세포 복제에 의해 단일 세포로부터 생성되었다. 즉, 세포 클론만이 단일 항체 종을 생성한다. 모노클로날 항체는 하이브리도마 생성 기술을 사용하여 생성될 수 있지만, 당업자에게 공지된 다른 생성 방법이 또한 사용될 수 있다(예를 들어, 항체는 항체 파아지 디스플레이 라이브러리로부터 유래한다).항체는 1가 또는 2가일 수 있다. 항체는 4개의 폴리펩타이드 쇄: 디설파이드 결합에 의해 연결된 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄로 이루어진 “Y-형”인 Ig 단량체일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인간화된 면역글로불린"은 상이한 기원의 면역글로불린 부분을 포함하는 면역글로불린을 언급하고, 여기서, 적어도 하나의 부분은 인간 기원의 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 인간화된 항체는 마우스와 같은, 요구되는 특이성을 갖는 비인간 기원의 면역글로불린으로부터, 및 통상적인 기술 (예를 들어, 합성)에 의해 화학적으로 함께 연결되거나 유전학적 가공 기술을 사용하여 연속 폴리펩타이드로서 제조되는 (예를 들어, 키메라 항체의 단백질 부분을 암호화하는 DNA는 연속 폴리펩타이드 쇄를 생성하도록 발현될 수 있다) 인간 기원의 면역글로불린 서열 (예를 들어, 키메라 서열)로부터 유래된 부분을 포함할 수 있다. 인간화된 면역글로불린의 또 다른 예는 비인간 기원의 항체로부터 유래된 상보성-결정 영역 (CDR) 및 인간 기원의 경쇄 및/또는 중쇄로부터 유래된 골격 영역을 포함하는 하나 이상의 면역글로불린 쇄를 함유하는 면역글로불린 (예를 들어, 골격 변화가 있거나 없는 CDR-접목된 항체)이다. 키메라 또는 CDR-접목된 단일쇄 항체는 또한 용어 인간화된 면역글로불린에 의해 포함된다. 예를 들어, 하기 문헌을 참조한다: Cabilly 외, 미국특허 번호 제4,816,567호; Cabilly 외, 유럽 특허 번호 제0,125,023 B1호; Boss 외, 미국특허 번호 제4,816,397호; Cabilly 외, 유럽 특허 번호 제0,120,694 B1호; Neuberger, M.S. 외, WO 86/01533; Neuberger, M.S. 외, 유럽 특허 번호 제0,194,276 B1호; Winter, 미국특허 번호 제5,225,539호; Winter, 유럽 특허 번호 제0,239,400 B1호; Padlan, E.A. 외, 유럽 특허 출원 번호 제0,519,596 A1호.예를 들어 또한 하기 문헌을 참조한다: Ladner 외, 미국특허 번호 제4,946,778호; Huston, 미국특허 번호 제5,476,786호; 및 Bird, R.E. 외, Science, 242:423-426 (1988)), 단일쇄 항체에 관하여.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "나노바디" (Nb)는 천연적으로 존재하는 중쇄 항체로부터 유래된 최소 항원 결합 단편 또는 단일 가변 도메인 (VHH)을 언급하고 당업자에게 공지되어 있다. 이들은 낙타과에서 발견되는 중쇄 만의 항체로부터 유래한다(문헌참조: Hamers-Casterman 외, 1993; Desmyter 외, 1996).경쇄 폴리펩타이드가 없는 “낙타과” 면역글로불린 패밀리가 발견된다. "낙타과"는 구시대 낙타과(카멜루스 박트리아누스(Camelus bactrianus) 및 카멜루스 드로메다리우스(Camelus dromedarius)) 및 신시대 낙타과 (예를 들어, 를라마 파코스(Llama paccos), 를라마 글라마(Llama glama), 를라마 구아니코(Llama guanicoe) 및 를라마 비쿠그나(Llama vicugna))를 포함한다. 단일 가변 도메인 중쇄 항체는 본원에서 나노바디 또는 VHH 항체로서 언급된다.
"항체 단편"은 온전한 항체 부분, 예를 들어, 온전한 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형구조 항체를 포함한다 (Zapata 외, Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); 도메인 항체(dAb; Holt 외 (2003) Trends Biotechnol.21:484); 단일쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중-특이적 항체.항체의 파파인 분해는 소위 “Fab” 단편으로 불리우는 2개의 동일한 항원-결합 단편을 생성하고, 각각은 단일 항원-결합 부위, 및 용이하게 결정화하는 능력을 반영하는 부위로서 나머지 “Fc” 단편을 갖는다. 펩신 처리는 2개의 항원 결합 부위를 갖고 여전히 항원과 가교-결합할 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다.
"Fv"는 완전한 항원-인지 및 -결합 부위를 함유하는 소형 항체 단편이다. 상기 항원은 단단히 비-공유 연합된 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 상기 형태에서 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR은 VH-VL 이량체의 표면 상에 항원-결합 부위를 한정하기 위해 상호작용한다. 총체적으로, 6개 CDR은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)은 항원을 인지하고 결합하는 능력을 갖지만 전체 결합 부위 보다는 낮은 친화성이다.
“Fab” 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에 수개의 잔기 첨가되어 있어 Fab’ 단편과는 상이하다. Fab'-SH는 본원에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리된 티올 그룹을 함유하는 Fab’에 대한 표시이다. F(ab')2 항체 단편은 본래에 이들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab’ 단편의 쌍으로서 제조되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
임의의 척추 동물로부터의 항체 (면역글로불린)의 "경쇄"는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파와 람다로 불리는 2개의 명백한 특유의 유형 중 하나에 할당될 수 있다. 이들의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 의존하여, 면역글로불린은 상이한 부류로 할당될 수 있다. 5개 주요 부류의 면역글로불린이 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 및 이들 부류 중 여러 개는 추가로 아부류 (이소형), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 분류될 수 있다. 상기 아부류는 유형들, 예를 들어, IgG2a 및 IgG2b로 추가로 분류될 수 있다.
"단일쇄 Fv" 또는 "sFv" 또는 “scFv” 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하고, 여기서, 이들 도메인은 단일 폴리펩타이드 쇄로 존재한다. 일부 구현예에서, Fv 폴리펩타이드는 VH와 VL 도메인 사이에 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함하고, 이것은 sFv가 항원 결합을 위해 요구되는 구조를 형성하도록 할 수 있다. sFv의 검토를 위해, 문헌(Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg 및 Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994))을 참조한다.
용어 "디아바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 언급하고, 상기 단편은 동일한 폴리펩타이드 쇄 (VH-VL) 중에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다.동일한 쇄 상에서 2개의 도메인 간 쌍 형성을 허용하기에는 너무 짧은 링커를 사용함에 의해, 도메인은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 형성하여 2개의 항원-결합 부위를 생성하도록 강제된다. 디아바디는 예를 들어, 하기 문헌에 보다 상세히 기재되어 있다: EP 404,097; WO 93/11161; 및 Hollinger 외 (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "친화성"은 2개의 제제 (예를 들어, 항체 및 항원)의 가역적 결합을 위한 평형 상수를 언급하고 해리 상수 (KD)로서 표현된다. 친화성은 관련 없는 아미노산 서열에 대한 항체의 친화성 보다 적어도 1-배 초과, 적어도 2-배 초과, 적어도 3-배 초과, 적어도 4-배 초과, 적어도 5-배 초과, 적어도 6-배 초과, 적어도 7-배 초과, 적어도 8-배 초과, 적어도 9-배 초과, 적어도 10-배 초과, 적어도 20-배 초과, 적어도 30-배 초과, 적어도 40-배 초과, 적어도 50-배 초과, 적어도 60-배 초과, 적어도 70-배 초과, 적어도 80-배 초과, 적어도 90-배 초과, 적어도 100-배 초과, 또는 적어도 1,000-배 초과 또는, 그 이상일 수 있다. 표적 단백질에 대한 항체의 친화성은 예를 들어, 약 100 나노몰 (nM) 내지 약 0.1 nM, 약 100 nM 내지 약 1 피코몰 (pM), 또는 약 100 nM 내지 약 1 펨토몰 (fM) 또는 그 이상일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “결합가 (avidity)”는 2개 이상의 제제의 복합체가 희석 후 해리하는 내성을 언급한다. 용어 “면역반응성” 및 “우선적으로 결합한다”는 항체 및/또는 항원-결합 단편과 관련하여 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
용어 “결합”은 염 브릿지 및 물 브릿지와 같은 상호작용을 포함하는, 예를 들어 공유, 정전기, 소수성, 및 이온성 및/또는 수소-결합 상호작용으로 인한 2개의 분자 간의 직접적인 연합을 언급한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 존재하는 특이적 결합 구성원은 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)에 특이적으로 결합한다. “특이적 결합”은 적어도 약 10-7 M 이상, 예를 들어, 5x 10-7 M, 10-8 M, 5 x 10-8 M, 및 그 이상의 친화성으로의 결합을 언급한다. “비-특이적 결합”은 약 10-7 M 미만의 친화성으로의 결합, 예를 들어, 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M, 등의 친화성으로의 결합을 언급한다.
본원에 상호교환적으로 사용되는 용어 “폴리펩타이드,” “펩타이드,” 및 “단백질”은 임의의 길이의 아미노산의 중합체 형태를 언급하고 이들은 유전학적으로 암호화되고 비-유전학적으로 암호화된 아미노산, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형되거나 유도체화된 아미노산 및 변형된 펩타이드 골격을 갖는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 상기 용어는 이종성 아미노산 서열을 갖는 융합 단백질, 이종성 및 상동성 리더 서열을 갖는 융합체, N-말단 메티오닌 잔기가 존재하거나 부재인 융합체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 융합 단백질; 면역학적으로 태그된 단백질 등을 포함한다.
"단리된" 폴리펩타이드는 이의 천연 환경의 성분으로부터 동정되고 분리되고/되거나 회수된 것이다. 이의 천연 환경의 오염 성분들은 폴리펩타이드에 대해 진단학적 또는 치료학적 사용을 전형적으로 방해하는 물질이고 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드는 (1) 로우리 (Lowry) 방법에 의해 결정된 바와 같이 90중량% 초과, 95중량% 초과, 또는 98 중량% 초과, 예를 들어, 99중량% 초과, (2) 회전 컵 서열결정 장치(spinning cup sequenator)를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도로, 또는 (3) 환원 또는 비환원 조건하에서 쿠마시 블루 또는 실버 염색을 사용한 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)에 의한 균질성으로 정제된다. 단리된 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않기 때문에 재조합 세포내 동일계 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 폴리펩타이드는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조된다.
본원에 상호교환적으로 사용되는 용어 “키메라 항원 수용체” 및 “CAR”은 전적으로는 아니지만 일반적으로 세포외 도메인 (예를 들어, 리간드/항원 결합 도메인), 막관통 도메인 및 하나 이상의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 면역 세포의 활성화를 유발하거나 억제할 수 있는 인공 다중-모듈 분자를 언급한다. 용어 CAR은 구체적으로 CAR 분자에 제한되지 않고 CAR 변이체를 포함한다. CAR 변이체는 스플릿 CAR을 포함하고, 여기서, CAR의 상기 세포외 부분 (예를 들어, 리간드 결합 부분) 및 세포내 부분 (예를 들어, 세포내 신호전달 부분)은 2개의 별도의 분자 상에 존재한다. CAR 변이체는 또한 온-스위치(ON-switch) CAR을 포함하고 이는 조건적으로 활성화될 수 있는 CAR이고, 예를 들어, 스플릿 CAR을 포함하고, 여기서, 스플릿 CAR의 2개 부분의 조건적 헤테로-이량체화는 약리학적으로 조절된다 (예를 들어, 문헌(참조: PCT 공보 번호 WO 2014/127261 A1 및 미국 특허 출원 번호 제2015/0368342 A1호, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용된다)에 기재된 바와 같음).CAR 변이체는 또한 이중특이적 CAR을 포함하고, 이는 1차 CAR의 활성을 증폭시키거나 억제할 수 있는 2차 CAR 결합 도메인을 포함한다. CAR 변이체는 또한 저해성 키메라 항원 수용체 (ICRA)를 포함하고 이는 예를 들어, 이중특이적 CAR 시스템의 성분으로서 사용될 수 있고, 여기서, 2차 CAR 결합 도메인의 결합은 1차 CAR 활성화를 억제를 유도한다. CAR 분자 및 이의 유도체 (즉, CAR 변이체)는 예를 들어, 하기 문헌에 기재되어 있다: PCT 출원 번호 US2014/016527; Fedorov 외 Sci Transl Med (2013) ;5(215): 215ra172; Glienke 외 Front Pharmacol (2015) 6:21; Kakarla & Gottschalk 52 Cancer J (2014) 20(2): 151-5; Riddell 외 Cancer J (2014) 20(2): 141-4; Pegram 외 Cancer J (2014) 20(2): 127-33; Cheadle 외 Immunol Rev (2014) 257(1): 91-106; Barrett 외 Annu Rev Med (2014) 65:333-47; Sadelain 외 Cancer Discov (2013) 3(4): 388-98; Cartellieri 외, J Biomed Biotechnol (2010) 956304; 이의 개시내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨.유용한 CAR은 또한 제조원(Novartis (Basel, Switzerland))에 의해 시판되는 바와 같이 렌티바이러스 로딩된 CTL019 (티사겐렉류셀-T) CAR-T 세포에 의해 발현되는 항-CD19―4-1BB―CD3ζ CAR을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료", "치료하는", “치료한다” 등은 목적하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 수득함을 언급한다. 상기 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다는 측면에서 예방적일 수 있고/있거나 질환 및/또는 상기 질환에 기인한 부작용에 대한 부분적 또는 완전한 치유 측면에서 치료적일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "치료"는 포유동물, 특히, 인간에서 임의의 질환 치료를 포함하고 이는 다음 단계를 포함한다: (a) 질환에 걸릴 수 있지만 아직 질환을 갖는 것으로서 진단되지 않은 대상체에서 질환의 발병을 예방하는 단계; (b) 질환을 저해하고, 즉 이의 발병을 억제하는 단계; 및 (c) 질환을 경감시키는, 즉 질환의 퇴행을 유발하는 단계.
“치료학적 유효량” 또는 “유효량”은 질환을 치료하기 위해 포유동물 또는 다른 대상체에게 투여되는 경우, 질환에 대한 상기 치료에 유효하기에 충분한 제제의 양 또는 2개 제제의 조합된 양을 언급한다. “치료학적 유효량”은 제제(들), 질환 및 이의 중증도, 및 치료받을 대상체의 연령, 체중 등에 따라 다양하다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 “개체”, “대상체”, “숙주” 및 “환자”는 뮤린 (예를 들어, 래트, 마우스), 비-인간 영장류, 인간, 개, 고양이, 유제류 (예를 들어, 말, 소, 양, 돼지, 염소), 토끼목 포유동물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 포유동물을 언급한다. 일부 경우에, 개체는 인간이다. 일부 경우에, 개체는 비-인간 영장류이다. 일부 경우에, 개체는 설치류, 예를 들어, 래트 또는 마우스이다. 일부 경우에, 개체는 토끼목 포유동물, 예를 들어, 토끼이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “면역 세포”는 일반적으로 골수로에서 생성되는 조혈 줄기 세포 (HSC)로부터 유래된 백혈구 세포 (백혈구)를 포함한다. “면역 세포”는 예를 들어, 림프구(T 세포, B 세포, 천연 킬러 (NK) 세포) 및 골수-유래 세포 (호중구, 호산구, 호염구, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포)를 포함한다.
“T 세포”는 T-헬퍼 세포 (CD4+ 세포), 세포독성 T-세포(CD8+ 세포), T-조절 세포 (Treg) 및 감마-델타 T 세포를 포함하는 CD3을 발현하는 모든 유형의 면역 세포를 포함한다.
“세포독성 세포”는 CD8+ T 세포, 천연-킬러 (NK) 세포, 및 호중구를 포함하고, 상기 세포는 세포독성 반응을 매개할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “합성”은 일반적으로 천연적으로 존재하지 않는 인공적으로 유래된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 암호화 핵산을 언급한다. 상기 합성 폴리펩타이드 및/또는 핵산은 예를 들어, 단일 아미노산, 단일 뉴클레오타이드 등을 포함하는 기본 서브유니트로부터 드 노보 어셈블리될 수 있거나 천연적으로 또는 인공적으로 유래되든 상관없이 예를 들어, 재조합 방법을 통해 기존의 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드로부터 유래할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "재조합체"는 핵산 분자, 예를 들어, 천연적으로 연합된 폴리뉴클레오타이드 서열 모두 또는 일부와 연합되지 않은, 이의 기원 또는 조작에 의한 게놈, cDNA, 바이러스, 반합성, 및/또는 합성 기원의 폴리뉴클레오타이드를 지적한다. 단백질 또는 폴리펩타이드와 관련하여 사용되는 바와 같은 용어 재조합체는 재조합 폴리뉴클레오타이드로부터 발현에 의해 생산되는 폴리펩타이드를 의미한다. 숙주 세포 또는 바이러스와 관련하여 사용되는 바와 같은 용어 재조합체는 재조합 폴리뉴클레오타이드가 도입된 숙주 세포 또는 바이러스를 의미한다. 재조합체는 또한 본원에서 물질 (예를 들어, 세포, 핵산, 단백질 또는 벡터)와 관련하여 물질이 이종성 물질 (예를 들어, 세포, 핵산, 단백질 또는 벡터)의 도입에 의해 변형되었음을 언급하기 위해 사용된다.
본 발명을 추가로 기재하기 전에, 본 발명은 이와 같이 기재된 특정 구현예에 제한되지 않고 물론 다양할 수 있는 것으로 이해되어야만 한다. 또한, 본원에 사용된 용어는 단지 특정 구현예를 기재할 목적을 위한 것이고 본 발명의 범위가 첨부된 청구항에 의해 제한되기 때문에, 제한하는 것으로 의도되지 않는 것으로 이해되어야 한다.
값의 범위가 제공되는 경우, 다르게 명백히 진술되지 않는 경우 상기 범위의 상한치와 하한치 사이에서 하한치 단위의 10분 1로 각각의 사이 값 및 상기 진술된 범위에서 임의의 다른 진술된 값 또는 사이 값이 본 발명에 포함되는 것으로 이해된다. 이들 보다 작은 범위의 상한치 및 하한치는 독립적으로 보다 작은 범위에 포함될 수 있고, 또한 상기 진술된 범위에서 임의의 구체적으로 배제된 치수에 적용되는 본 발명 내에 포함된다. 상기된 범위가 한계치 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 이들 포함된 한계치 중 하나 또는 둘 다를 배제하는 범위가 또한 본 발명에 포함된다.
달리 정의되지 않는 경우, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질은 본 발명의 수행 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 지금 기재된다. 본원에 언급된 모든 공보는 공보가 인용하는 것과 관련된 방법 및/또는 물질을 개시하고 기재하기 위해 본원에 참조로 인용된다.
본원 및 첨부된 청구항에서 사용되는 바와 같은 단수 형태 "a", "an” 및 "the"는 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는다면, 복수형 지시대상을 포함하는 것으로 주지되어야 한다. 따라서, 예를 들어, “세포”에 대한 언급은 복수의 그러한 세포를 포함하고 “세포”에 대한 언급은 하나 이상의 세포 및 당업자에게 공지된 이의 등가물 등에 대한 언급을 포함한다. 추가로, 청구항은 임의의 선택적 요소를 배제하기 위해 드래프트될 수 있는 것으로 주지된다. 이와 같이, 상기 진술은 청구항 요소의 인용 또는 ”음성” 제한의 사용과 연계하여 “유일하게”, “단지” 등과 같은 그러한 배타적 용어의 사용을 위한 선행 기초로서 작용하는 것으로 의도된다.
명료하게 하기 위해 별도의 구현예와 관련하여 기재된, 본 발명의 특정 구성은 또한 단일 구현예에서 조합으로 제공될 수 있는 것으로 이해된다. 역으로, 간략하게 하기 위해 단일 구현예와 관련하여 기재된, 본 발명의 다양한 특성은 또한 별도로 또는 임의의 적합한-서브-조합으로 제공될 수 있다. 본 발명에 속하는 구현예의 모든 조합은 구체적으로 본 발명에 의해 포함되고 각각 및 모든 조합이 개별적으로 및 명백하게 기재된 바와 같이 본원에 기재된다. 추가로, 다양한 구현예 및 이의 요소의 모든 서브-조합은 또한 구체적으로 본 발명에 의해 포함되고 각각 및 모든 그러한 서브-조합이 본원에 개별적으로 및 명시적으로 기재된 바와 같이 본원에 기재된다.
본원에서 논의된 공보는 본원의 출원일 전 이들의 개시내용을 위해서만 제공된다. 본원에서 어떠한 것도 본 발명이 선행 발명으로 상기 공보 보다 선행하지 않음을 인정하는 것으로서 해석되지 말아야 한다. 추가로, 제공된 공보의 날짜는 독립적으로 확인될 필요가 있을 수 있는 실제 공보 날짜와는 상이할 수 있다.
발명의 상세한 설명
본원의 개시내용은 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원과 이의 결합 파트너와의 결합시 유도되는 절단 반응 후 다양한 세포 공정을 조절하는 키메라 폴리펩타이드를 제공한다. 예를 들어, 유전자 발현의 유도를 포함하는 세포 기능을 조절하기 위해 키메라 폴리펩타이드를 사용하는 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 및 관련 발현 카세트 및 벡터 및 상기 핵산 및/또는 발현 카세트 및 벡터를 함유하는 세포가 제공된다. 또한, 기재된 성분 및 방법, 및 본 발명의 방법을 수행하기 위한 키트를 사용하여 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
방법
방법은 키메라 폴리펩타이드로부터 세포내 도메인을 방출하기 위해 결합-유도된 절단 반응을 진행하는 키메라 폴리펩타이드를 사용한 하나 이상의 세포 공정 및/또는 활성 및/또는 기능을 조절하기 위해 제공된다. 하기에서 보다 상세하게 기재된 바와 같이, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 일반적으로 다음을 포함할 수 있다: a) 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인; b) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및 c) 세포내 도메인.본원의 개시내용의 방법은 특이적 결합 구성원의 이의 결합 파트너로의 결합 시 하나 이상의 세포 공정 및/또는 활성 및/또는 기능을 조절하기 위해 상기 키메라 폴리펩타이드를 사용함을 포함한다.
본원에 기재된 방법에 따라, 일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드는 세포내에 있거나 세포내로 도입된 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산으로부터 발현된다. 이와 같이, 일부 경우에, 본 발명의 방법은 세포를 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산과 접촉시킴을 포함할 수 있고, 이때, 상기 접촉은 핵산을 세포로 도입하기에 충분하다. 핵산을 세포로 도입하기 위한 임의의 간편한 방법은 본원에서 유용할 수 있고, 이는 바이러스 형질감염, 전기천공, 지질감염, 충격 (bombardment), 화학적 형질전환, 형질도입될 수 있는 캐리어의 사용 (예를 들어, 형질도입될 수 있는 캐리어 단백질) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
도입된 핵산은 세포 내에 유지될 수 있거나 일시적으로 존재할 수 있다. 이와 같이, 일부 경우에, 도입된 핵산은 세포내에 유지될 수 있고, 예를 들어, 게놈에 통합될 수 있다. 임의의 간편한 핵산 통합 방법은 본원의 방법에서 유용할 수 있고, 이는 예를 들어, 바이러스-기반 통합, 트랜스포존-기반 통합, 상동성 재조합-기반 통합 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 도입된 핵산은 일시적으로 존재할 수 있고, 예를 들어, 세포내에서 염색체외적으로 존재할 수 있다. 일시적으로 존재하는 핵산은 예를 들어, 임의의 간편한 일시적으로 형질감염된 벡터의 일부로서 지속할 수 있다.
본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 도입된 핵산은 키메라 폴리펩타이드의 발현을 구동하는 프로모터에 작동적으로 연결되는 방식으로 도입될 수 있다. 상기 프로모터의 공급원은 다양할 수 있고, 예를 들어, 상기 프로모터가 예를 들어, 발현 작제물의 일부로서 핵산과 함께 도입되는 경우 또는 상기 프로모터가 핵산을 도입하기 전 세포에 존재하거나 상기 핵산 후 도입되는 경우를 포함할 수 있다. 본원에서 보다 상세히 기재된 바와 같이, 유용한 프로모터는 내인성 프로모터 및 이종성 프로모터를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 핵산은 핵산에 작동적으로 연결된 이종성 프로모터를 함유하는 발현 작제물의 일부로서 도입될 수 있다. 일부 경우에, 핵산은 핵산이 도입되는 세포에 내인성인 프로모터 카피를 함유하는 발현 작제물의 일부로서 도입될 수 있다. 일부 경우에, 핵산은 프로모터 없이 도입될 수 있고 세포의 게놈으로 통합시 핵산은 세포에 이미 존재하는 내인성 프로모터에 작동적으로 연결될 수 있다. 사용되는 형태 및/또는 프로모터에 의존하여, 핵산으로부터 키메라 폴리펩타이드의 발현은 이의 조합을 포함하는 항상성, 유도성, 조직-특이적, 세포-유형 특이적 등인 것으로 구성될 수 있다.
도입 방법과는 상관없이 세포내 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 일반적으로 혈장막에 잔존하고 상기 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원이 이의 결합 파트너에 결합되지 않는 경우 불활성인 상태로 남아있다. 본원에 사용된 바와 같이, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드와 관련하여, “불활성”이란 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인이 절단가능한 폴리펩타이드 (예를 들어, 절단가능한 노치 폴리펩타이드)에 연결된 상태로 남아 있어 세포내 도메인이 격리되어 있고 세포내 기능 및/또는 세포 활성을 조절할 수 없도록 함을 의미한다. 특이적 결합 구성원의 이의 결합 파트너로의 결합시, 키메라 폴리펩타이드는 활성이 되는 것으로 일컬어지고, 여기서, 용어 “활성”은 일반적으로 결합에 의해 유발되는 절단 반응에 의해 키메라 폴리펩타이드로부터 세포내 도메인이 방출되어 세포내 도메인이 유리되고 세포내 기능 및/또는 세포 활성에 영향을 미칠 수 있음을 언급한다.
본원의 방법에 따라 조절될 수 있는 세포 공정 및/또는 활성 및/또는 기능은 다양할 수 있고 유전자 또는 다른 암호화 서열의 발현을 조절하고, 예를 들어, 유전자 또는 암호화 서열의 발현을 유도하고, 유전자 또는 암호화 서열 등의 발현을 억제함을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 따라서, 일부 경우에, 본원의 방법에 사용되는 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 예를 들어, 전사 활성화인자 또는 전사 억제인자를 포함하는 전사 조절인자를 포함할 수 있다.
일부 경우에, 조절될 수 있는 세포 공정 및/또는 활성 및/또는 기능은 예를 들어, 세포의 유전자 생성물의 발현, 세포의 증식, 세포의 아폽토시스, 세포의 비-아폽토시스 사멸, 세포의 분화, 세포의 탈분화, 세포의 이동, 세포로부터 분자의 분비 (예를 들어, 치료학적 폴리펩타이드의 분비, 사이토킨의 분비 등), 세포의 세포 접착, 면역 세포 활성화 (예를 들어, T 세포 활성화 등), 이펙터 분자의 제조 (예를 들어, 사이토킨, 항체, 성장 인자 등), 표적 핵산의 전사, 표적 mRNA의 해독, 기관 활성, 세포내 트래픽킹 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 사이토킨의 발현 및/또는 분비는 조절될 수 있다. 이의 발현/분비가 조절될 수 있는 사이토킨의 비제한적인 예는 예를 들어, 다음을포함하지만 이에 제한되지 않는 다음을 포함한다: 인터류킨 및 관련된 것 (예를 들어, IL-1-유사, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-18, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-13, IL-15, IL-3, IL-5, GM-CSF, IL-6-유사, IL-6, IL-11, G-CSF, IL-12, LIF, OSM, IL-10-유사, IL-10, IL-20, IL-14, IL-16, IL-17, 등),인터페론(예를 들어, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, 등),TNF 패밀리 (예를 들어, CD154, LT-β, TNF-α, TNF-β, 4-1BBL, APRIL, CD70, CD153, CD178, GITRL, LIGHT, OX40L, TALL-1, TRAIL, TWEAK, TRANCE, 등),TGF-β 패밀리 (예를 들어, TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, 등) 등.일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드 또는 이의 복수의 폴리펩타이드를 통한 세포의 활성화는 키메라 폴리펩타이드가 존재하지 않거나 달리 불활성인 경우 상응하는 세포의 것과 상대적으로 사이토킨 발현 및/또는 분비에서의 증가를 유도할 수 있다. 증가 양은 다양할 수 있고 10% 이상의 증가 범위일 수 있고, 예를 들어, 10% 이상, 25% 이상, 50% 이상, 75% 이상, 100% 이상, 150% 이상, 200% 이상, 250% 이상, 300% 이상, 350% 이상, 400% 이상 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 하기에 보다 상세하게 기재된, 이원-항원 인지가 사용되는 경우, 표적 세포의 항원 둘 다의 결합에 의해 활성화되는 세포는 단지 하나의 항원에 결합된 상응하는 세포와 비교하여 사이토킨의 세포 활성화 또는 발현/분비에서의 증가를 나타낼 수 있다. 일부 경우에, 상기 증가는 10% 이상의 증가 범위일 수 있고, 예를 들어, 10% 이상, 25% 이상, 50% 이상, 75% 이상, 100% 이상, 150% 이상, 200% 이상, 250% 이상, 300% 이상, 350% 이상, 400% 이상 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 본원에 기재된 방법은 세포를 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원의 결합 파트너와 접촉시킴에 의해 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포에서 폴리펩타이드의 발현을 유도하는 방법을 포함한다. 특정 구성에 의존하여, 상기 방법은 내인성 유전자 또는 암호화 서열 또는 이종성 유전자 또는 암호화 서열의 발현을 유도함을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원의 결합 파트너는 세포의 표면 상에 존재할 수 있다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원의 결합 파트너는 세포의 표면 상에 존재할 수 없고 예를 들어, 기질 (예를 들어, 플레이트 또는 비드의 표면과 같은 고형 지지체)에 결합될 수 있거나 미결합되거나 자유롭게 확산되는 등일 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 방법이 세포를 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원과 접촉시킴을 포함하는 경우, 그러한 접촉은 예를 들어, 자유롭게 확산될 수 있는 결합 파트너와의 접촉, 이들의 표면 상에서 결합 파트너를 발현하는 세포와의 접촉, 접착된 결팝 파트너를 갖는 기질과의 접촉 등을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 미결합되거나 자유롭게 확산가능한 특이적 결합 구성원은 일부 경우에, 가용성 어댑터 분자로서 기능하고, 예를 들어, 앵커 세포와 수용자 세포 간의 결합을 촉진시켜 본원의 절단 가능한 키메라 폴리펩타이드를 활성화시키고 이는 예를 들어, 하기 문헌에 기재되어 있다: PCT 출원 번호 제US2016/019188호 (공개번호 제 WO 2016/138034호), 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.일부 경우에, 미결합되거나 자유롭게 확산가능한 결합 파트너는 후속적으로 임의의 다른 간편한 수단에 의해 포획되거나 고정될 수 있고, 이는 예를 들어, 미결합되거나 자유롭게 확산가능한 결합 파트너에 특이적으로 결합하고 기질 또는 세포의 표면에 결합되거나 이와 연합되는 추가의 결합 파트너의 도입을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원의 방법에서, 특이적 결합 구성원과 결합 파트너의 임의의 간편한 쌍이 사용될 수 있고, 단, 상기 쌍은 키메라 폴리펩타이드를 활성화시키기에 충분히 서로 특이적으로 결합한다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원과 결합 파트너의 유용한 쌍은 항원-항체 쌍을 포함할 수 있고, 여기서, 예를 들어, 상기 항체는 특이적 결합 구성원으로서 사용되고 이의 결합 파트너로서는 항원이거나 상기 항원은 특이적 결합 구성원으로서 사용되고 결합 파트너로서 항체이다.
일부 경우에, 본원에 기재된 방법은 펩타이드-MHC가 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원과 결합하기에 충분한 조건하에서 세포를 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)와 접촉시킴에 의해 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포의 세포 활성을 조절하는 방법을 포함한다. 일부 경우에, 펩타이드-MHC의 키메라 폴리펩타이드로의 결합은 세포내 도메인을 방출시키고 세포내에서 폴리펩타이드의 발현을 유도하는 키메라 폴리펩타이드를 활성화시킨다.
본원의 개시내용의 방법이 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포와 결합 파트너를 접촉시켜 유전자 또는 암호화 서열의 발현을 유도함을 포함하는 경우, 필수적으로 임의의 폴리펩타이드, 천연물 또는 재조합체가 발현되도록 유도될 수 있다. 일부 경우에, 발현된 폴리펩타이드는 목적하는 폴리펩타이드 (POI)로서 언급될 수 있다. POI는 필수적으로 임의의 폴리펩타이드일 수 있고, 연구 목적의 폴리펩타이드(예를 들어, 리포터 폴리펩타이드, 돌연변이된 폴리펩타이드, 신규한 합성 폴리펩타이드 등), 치료학적 목적의 폴리펩타이드(예를 들어, 천연적으로 존재하는 치료학적 단백질, 재조합 치료학적 폴리펩타이드 등), 산업 목적의 폴리펩타이드(예를 들어, 제조와 같은 산업적 응용에 사용되는 폴리펩타이드) 등을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 발현되도록 유도된 폴리펩타이드는 예를 들어, 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR), 선천성 면역 반응 유도제 등을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
본원 방법의 “접촉”은 내용에 따라 다양할 수 있고 시험관내 접촉, 생체외 접촉 및 생체내 접촉을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 예를 들어, 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포가 시험관내 배양되는 경우, 상기 접촉은 결합 파트너 또는 결합 파트너 또는 결합 파트너가 접착된 기질을 발현하는 세포를 시험관내 배양물에 첨가함을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 예를 들어, 생체내 개체에 존재하는 세포 상에 존재함을 포함하여, 예를 들어, 결합 파트너가 생체내 개체에 존재하는 경우, 접촉은 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포를 개체에 투여함을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 예를 들어, 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포가 생체내 개체에 존재하는 경우, 상기 접촉은 결합 파트너를 개체에 투여하고, 개체로부터 세포를 제거하고 세포를 생체외에서 결합 파트너와 접촉시키고, 키메라 폴리펩타이드와 결합 파트너 둘 다가 생체내에서 동시에 발현되도록 유발하거나 가능하게 하는 등을 포함할 수 있다.
세포의 활성을 조절하기 위한 본원의 개시내용의 방법은 단일 세포에서 또는 다세포 환경 (예를 들어, 천연적으로 존재하는 조직; 인공 조직 등)에서 수행될 수 있다. 세포의 활성을 조절하기 위한 본원의 개시내용의 방법은 병행하여 또는 연속으로 수행될 수 있다.
본원의 개시내용의 방법은 추가로 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포를 배양함을 포함하고, 이는 예를 들어, 세포와 결합 파트너를 접촉시키기 전에 세포를 배양하고, 세포와 결합 파트너를 접촉시키면서 세포를 배양하고, 세포를 결합 파트너와 접촉시킨 후 세포를 배양함을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 세포 배양의 임의의 간편한 방법이 사용될 수 있는 반면, 상기 방법은 예를 들어, 배양되는 세포 유형, 세포의 의도된 용도 (예를 들어, 세포가 연구 또는 치료학적 목적을 위해 배양되는지의 여부) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 인자를 기준으로 다양하다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 방법은 추가로 예를 들어, 세포 배양물을 씨딩하고, 세포 배양물을 공급하고, 세포 배양물을 계대하고, 세포 배양물을 스플릿팅하고, 세포 배양물을 분석하고, 세포 배양물을 약물로 처리하고, 세포 배양물을 수거하는 것 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 세포 배양물의 통상의 공정을 포함할 수 있다.
본원의 개시내용의 방법은 일부 경우에 본원의 방법에 사용되는 세포를 수용하고/하거나 수거함을 추가로 포함한다. 일부 경우에, 세포는 대상체로부터 수거된다. 대상체로부터 세포의 수거는 대상체로부터 조직 샘플을 수득하고, 조직 샘플 기원의 세포를 농축, 단리 및/또는 증식시킴을 포함할 수 있다. 세포의 단리 및/또는 집적은 예를 들어, 배양에 의한 단리/집적 (예를 들어, 부착 배양, 부유 배양 등), 세포 분류 (예를 들어, FACS) 등을 포함하는 임의의 간편한 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 세포는 예를 들어, 혈액 (예를 들어, 말초 혈액, 제대혈 등), 골수, 생검, 피부 샘플, 볼 표본 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 간편한 세포 조직 샘플로부터 수거될 수 있다. 일부 경우에, 세포는 예를 들어, 혈액 은행, 조직 은행 등을 포함하는 공급원으로부터 수용된다. 수용된 세포는 이전에 단리될 수 있거나 조직 샘플의 일부로서 수용될 수 있고 따라서, 단리/집적은 세포를 수용한 후 및 사용 전에 수행될 수 있다. 특정 경우에, 수용된 세포는 예를 들어, 배양된 세포주의 세포를 포함하는 비-주요 세포일 수 있다. 본원에 기재된 방법에 사용하기 위해 적합한 세포는 본원에서 추가로 상세히 기재된다.
치료 방법
본원의 개시내용의 방법은 대상체를 본원에 기재된 바와 같이 하나 이상의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드를 사용하여 대상체를 치료하는 방법을 포함한다. 키메라 폴리펩타이드를 전달하는 임의의 간편한 방법은 본원의 방법에 유용할 수 있다. 일부 경우에, 본원의 키메라 폴리펩타이드는 대상체에 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포를 투여함에 의해 전달될 수 있다. 일부 경우에, 본원의 키메라 폴리펩타이드는 대상체에 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 투여함에 의해 전달될 수 있다. 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산의 대상체로의 투여는 핵산을 함유하는 세포를 대상체에 투여함을 포함할 수 있고, 여기서, 상기 핵산은 발현되거나 아직 발현되지 않을 수 있다. 일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산의 대상체로의 투여는 핵산을 세포에 전달하도록 디자인된 벡터를 대상체에 투여함을 포함할 수 있다.
따라서, 본원의 치료 방법에서, 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산이 시험관내, 생체외또는 생체내 투여될 수 있다. 일부 경우에, 세포는 대상체로부터 수거될 수 있고 핵산으로 형질감염될 수 있고 형질감염된 세포는 예를 들어, 시험관내 확장을 포함하지만 이에 제한되지 않는 추가 조작의 존재 또는 부재하에 대상체에 투여될 수 있다. 일부 경우에, 예를 들어, 전달 벡터의 존재 또는 부재하의 핵산은 대상체에 직접 투여될 수 있다.
세포 활성의 다양성이 본원의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 사용을 통해 조절될 수 있다면, 본원의 치료 방법은 다양한 응용을 위해 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본원의 방법은 예를 들어, 아칸타모에바(Acanthamoeba) 감염, 악시네노박터(Acinetobacter) 감염, 아데노바이러스(Adenovirus) 감염, ADHD (주의력 결핍/과민성 장애), AIDS (후천성 면역 결핍 증후군), ALS (근위축성 축삭 경화증), 알츠하이머 질환, 아메바증, 장 감염 (아메바 이질 감염(Entamoeba histolytica infection)), 아나플라스마증(Anaplasmosis), 인간, 빈혈증, 안지오스트롱길러스(Angiostrongylus) 감염, 동물-관련 질환, 아니사키스 감염 (아니사키아시스), 탄저병, 대동맥류, 대동맥 박리, 아레나바이러스 감염(Arenavirus Infection), 관절염(예를 들어, 소아 관절염, 섬유근육통, 통풍, 루푸스 (SLE) (전신 홍반성 루푸스), 골관절염, 류마티스 관절염 등)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 질환에 대한 치료에 유용할 수 있다: 아스카리스 감염 (아스카리아시스), 아스퍼질러스(Aspergillus) 감염 (아스퍼질로시스), 천식, 주의력 결핍/과잉행동 장애, 자폐증, 조류 독감, B형 바이러스 감염 (B형 헤르페스 바이러스), 비. 세파시아 감염 (B. cepacia infection) (부르콜데리아 카파시아 감염(Burkholderia cepacia Infection)), 바베시오시스(Babesiosis) (바베시아 감염(Babesia Infection)), 세균성 수막염, 세균성 질염(BV), 발라무티아 감염(Balamuthia infection) (발라무티아 만드릴라리스 감염(Balamuthia mandrillaris infection)), 발라무티아 만트릴라리스 감염(Balamuthia mandrillaris infection), 발란티디아시스(Balantidiasis), 발란티디움 감염(Balantidium Infection) (발란티디아시스(Balantidiasis)), 바일리사스카리스 감염(Baylisascaris Infection), 빌하르지아(Bilharzia), 선천성 결손, 검은 폐 (석탄 근로자의 진폐증), 불라스토시스티스 호미니스 감염(Blastocystis hominis Infection), 블라스토시스티스 감염(Blastocystis Infection), 블라스토마이코시스(Blastomycosis), 출혈 장애, 혈액 장애, 몸니(Body Lice) (페디쿨루스 후마누스 코포리스(Pediculus humanus corporis)), 보렐리아 부르그도르페리 감염(Borrelia burgdorferi Infection), 보툴리눔 중독(Botulism) (클로스트리디움 보툴리님(Clostridium botulinim)), 소의 해면성뇌증(Bovine Spongiform Encephalopathy) (BSE), 브레이너드 설사(Brainerd Diarrhea), 유방암, 모세기관지염(Bronchiolitis), 기관지염, 브루셀라 감염(Brucella Infection) (브루셀로시스(Brucellosis)), 브루셀로시스(Brucellosis), 부르콜데리아 세파시아 감염(Burkholderia cepacia Infection) (비. 카파시아 감염(B. cepacia infection)), 부르콜데리아 말레이(Burkholderia mallei), 부르콜데리아 슈도말레이 감염(Burkholderia pseudomallei Infection), 캄필로박터 감염(Campylobacter Infection) (캄필로박테리오시스(Campylobacteriosis)), 캄필로박테리오시스(Campylobacteriosis), 암 (예를 들어, 결장직장 (결장) 암, 부인과함, 폐암, 전립선암, 피부암 등),캔디다 감염(Candida Infection) (캔디디아시스(Candidiasis)), 캔디디아시스(Candidiasis), 개 독감(Canine Flu), 카필라리아 감염(Capillaria Infection) (카필라리아시스(Capillariasis)), 카필라리아시스(Capillariasis), 카바페넴 내성 크렙시엘라 뉴모니아(Carbapenem resistant Klebsiella pneumonia) (CRKP), 고양이벼룩 촌충(Cat Flea Tapeworm), 세르카리아 피부염(Cercarial Dermatitis), 뇌성마비(Cerebral Palsy), 자궁경부암, 샤가스병(트리파노소마 크루지 감염(Trypanosoma cruzi Infection), 수두(Chickenpox) (바리셀라 질환(Varicella Disease)), 치쿤구니아 열(Chikungunya Fever) (CHIKV), 소아 관절염, 독일 홍역(German Measles) (루벨라 바이러스(Rubella Virus)), 홍역, 볼거리(Mumps), 로타바이러스 감염(Rotavirus Infection), 클라미디아(Chlamydia) (클라미디아 트라코마티스 질환(Chlamydia trachomatis Disease)), 클라미디아 뉴모니아 감염(Chlamydia pneumoniae Infection), 클라미디아 트라코마티스 질환(Chlamydia trachomatis Disease), 콜레라 (비브리오 콜레라 감염(Vibrio cholerae Infection)), 만성 피로 증후군(CFS), 만성 폐색성 폐 질환(COPD), 시구아테라 어류 중독(Ciguatera Fish Poisoning), 시구아톡신(Ciguatoxin), 전형적 크루츠펠트-자콥 질환(Classic Creutzfeldt-Jakob Disease), 클로노르키아시스(Clonorchiasis), 클로노르키스 감염(Clonorchis Infection) (클로노르키아시스(Clonorchiasis)), 클로스트리디움 보툴리님(Clostridium botulinim), 클로스트리디움 디피실 감염(Clostridium difficile Infection), 클로스트리디움 퍼프린겐스 감염(Clostridium perfringens infection), 클로스트리디움 테타니 감염(Clostridium tetani Infection), 응고 장애(Clotting Disorders), CMV (사이토메갈로바이러스 감염(Cytomegalovirus Infection)), 석탄 로자 진폐증(Coal Workers' Pneumoconioses), 코씨디오이도마이코시스(Coccidioidomycosis), 결장직장 (결장) 암, 일반 감기, 결막염, 쿨리 빈혈증(Cooleys Anemia), COPD (만성 폐색성 폐 질환), 코리네박테리움 디프테리아 감염(Corynebacterium diphtheriae Infection), 콕시엘라 부르네티 감염(Coxiella burnetii Infection), 크루츠펠트-자콥 질환(Creutzfeldt-Jakob Disease), CRKP (카바페넴 내성 클렙시엘라 뉴모니아(Carbapenem resistant Klebsiella pneumonia)), 크론 질환, 크립토코코시스(Cryptococcosis), 크립토스포리디오시스(Cryptosporidiosis), 크립토스포리디움 감염(Cryptosporidium Infection) (크립토스포리디오시스(Cryptosporidiosis)), 사이클로스포라 감염(Cyclospora Infection) (사이클로스포리아시스(Cyclosporiasis)), 사이클로스포리아시스(Cyclosporiasis), 시스티세르코시스(Cysticercosis), 시스토이소스포라 감염(Cystoisospora Infection) (시스토이소스포라이아시스(Cystoisosporaiasis)), 시스토이소스포라이아시스(Cystoisosporaiasis), 시토메갈로바이러스 감염(Cytomegalovirus Infection) (CMV), 뎅기열(Dengue Fever) (DF), 뎅기-출혈열 (DHF), 더마토피테스(Dermatophytes), 피부병증, 당뇨병, 다이아몬드 블랙팬 빈혈증(DBA), 디엔타모에바 플라길리스 감염(Dientamoeba fragilis Infection), 디프테리아(Diphtheria) (코리네박테리움 디프테리아 감염(Corynebacterium diphtheriae Infection)), 디필로보트리아시스(Diphyllobothriasis), 디필로보트리움 감염(Diphyllobothrium Infection) (디필로보트리아시스(Diphyllobothriasis)), 디필리디움 감염(Dipylidium Infection), 개 벼룩 촌충(Dog Flea Tapeworm), 다운 증후군(Down Syndrome) (삼중염색체(Trisomy) 21), 드라쿤쿨리아시스(Dracunculiasis), 소형조충(Dwarf Tapeworm) (히메노레피스 감염(Hymenolepis Infection)), 이. 콜라이 감염(E. coli Infection) (에스케리치아 콜라이 감염(Escherichia coli Infection)), 귀 감염 (중이염(Otitis Media)), 동부 말 뇌염(Eastern Equine Encephalitis) (EEE), 에볼라 출혈 열, 에키노코코시스(Echinococcosis), 에를리키오시스(Ehrlichiosis), 엘레판티아시스(Elephantiasis), 뇌염(모기 매개 및 진드기 매개), 엔타모에바 히스톨리티카 감염(Entamoeba histolytica infection), 엔테로비우스 베르미쿨라리스 감염(Enterobius vermicularis Infection), 엔테로바이러스 감염(Enterovirus Infection) (비=폴리오(Non-Polio)), 발진 티푸스(Epidemic Typhus), 뇌전증(Epilepsy), 엡슈타인-바르 바이러스 감염(Epstein-Barr Virus Infection) (EBV 감염), 에스케리치아 콜라이 감염(Escherichia coli Infection), 광범위 약물-내성 TB (XDR TB), 파스시올라 감염(Fasciola Infection) (파시올리아시스(Fascioliasis)), 파스시올로프시스 감염(Fasciolopsis Infection) (파스시올로프시아시스(Fasciolopsiasis)), 피브로마알기아(Fibromyalgia), 피프쓰 질환(Fifth Disease) (파르보바이러스 B 19 감염(Parvovirus B19 Infection)), 플라보링스 관련 폐 질환(Flavorings-Related Lung Disease), 폴리쿨리티스(Folliculitis), 식품-관련 질환, 클로스트리디움 퍼프린겐스(Clostridium perfringens infection), 취약 X 증후군(Fragile X Syndrome), 프란시스셀라 툴라렌시스 감염(Francisella tularensis Infection), 생식기 캔디디아시스(Genital Candidiasis) (벌보바기날 캔디디아시스(Vulvovaginal Candidiasis) (VVC)), 생식기 헤르페스(Genital Herpes) (헤르페스 심플렉스 바이러스 감염(Herpes Simplex Virus Infection)), 생식기 무사마귀, 독열 홍역(루벨라 바이러스), 기아르디아 감염(Giardia Infection) (기아르디아시스(Giardiasis)), 글란더(Glanders) (부르콜데리아 말레이(Burkholderia mallei)), 그나토스토마 감염(Gnathostoma Infection), 그나토스토미아시스(Gnathostomiasis) (그나토스토마 감염(Gnathostoma Infection)), 고노레아(Gonorrhea) (나이세리아 고노로에아 감염(Neisseria gonorrhoeae Infection)), 통풍, 육아종 아메바성 뇌염(Granulomatous amebic encephalitis) (GAE), 그룹 A 스트렙 감염(Group A Strep Infection) (GAS) (그룹 A 스트렙토코커스성 감염(Group A Streptococcal Infection)), 그룹 B 스트레프 감염(Strep Infection) (GBS) (그룹 B 스트렙토코커스성 감염(Streptococcal Infection)), 기니아 충 질환(Guinea Worm Disease) (드라쿤쿨리아시스(Dracunculiasis)), 부인과암(예를 들어, 자궁경부암, 난소암, 자궁암, 질 및 음경암 등),H1N1 Flu, 해모필러스 인플루엔자 감염(Haemophilus influenzae Infection) (Hib 감염), 수족구 질환(H및, Foot, 및 Mouth Disease)(HFMD), 한센 질환(Hansen's Disease), 한타바이러스 폐 증후군(Hantavirus Pulmonary Syndrome) (HPS), 머릿니(Head Lice)(페디쿨러스 후마누스 카피티스(Pediculus humanus capitis)), 심장 질환 (심혈관 건강(Cardiovascular Health)), 열 스트레스(Heat Stress), 헤모크로마토시스(Hemochromatosis), 혈우병, 헨드라 바이러스 감염(Hendra Virus Infection), B형 헤르페스 바이러스(Herpes B virus), 헤르페스 심플렉스 바이러스 감염(Herpes Simplex Virus Infection), 헤테로피에스 감염(Heterophyes Infection) (헤테로피아시스(Heterophyiasis)), Hib 감염 (해모필러스 인플루엔자 감염(Haemophilus influenzae Infection)), 고혈압, 히스토플라스마 카프술라툼 질환(Histoplasma capsulatum Disease), 히스토플라스모시스(Histoplasmosis) (히스토플라스마 카프술라툼 질환(Histoplasma capsulatum Disease)), 핫 터브 래쉬(Hot Tub Rash) (슈도모나스 피부염 감염(Pseudomonas dermatitis Infection)), HPV 감염 (사람 파필로마바이러스 감염(Human Papillomavirus Infection)), 사람 에를리키오시스(Human Ehrlichiosis), 사람 면역결핍 바이러스, 사람 파필로마바이러스 감염(HPV 감염), 히메노레피스 감염(Hymenolepis Infection), 고혈압, 열사병(Hyperthermia), 저체온증(Hypothermia), 농가진(Impetigo), 감염성 모노누클레오시스(Infectious Mononucleosis), 염증성 장 질환(IBD), 인플루엔자, 조류 독감(Avian Influenza), H1N1 Flu, 유행성(Pandemic Flu), 계절성 (Seasonal Flu), 돼지 인플루엔자(Swine Influenza), 공격적 캔디디아시스(Invasive Candidiasis), 철 과부하(Iron Overload) (헤모크로마토시스(Hemochromatosis)), 이소스포라 감염(Isospora Infection) (이소스포리아시스(Isosporiasis)), 일본 뇌염, 황달, 케이. 뉴모니아(K. pneumoniae) (클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae)), 칼라-아자르(Kala-Azar), 가와사키 증후군(Kawasaki Syndrome) (KS), 케르니크테루스(Kernicterus), 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae) (케이. 뉴모니아(K. pneumoniae)), 라 크로스 뇌염(La Crosse Encephalitis) (LAC), 라 크로스 뇌염 바이러스(La Crosse Encephalitis virus) (LACV), 라사 열(Lassa Fever), 라텍스 알레르기(Latex Allergies), 납 중독(Lead Poisoning), 레지오나이레 질환(Legionnaires' Disease) (레지오넬로시스(Legionellosis)), 레이슈마니아 감염(Leishmania Infection) (레이슈마니아시스(Leishmaniasis)), 나병(Leprosy), 렙토스피라 감염(Leptospira Infection) (렙토스피로시스(Leptospirosis)), 렙토스피로시스(Leptospirosis), 백혈병, 라이스(Lice), 리스테리아 감염(Listeria Infection) (리스테리오시스(Listeriosis)), 리스테리오시스(Listeriosis), 간 질환 및 간염(Liver Disease 및 Hepatitis), 로아 로아 감염(Loa loa Infection), 파상풍(Lockjaw), 로우 게리그 질환(Lou Gehrig's Disease), 폐암, 루프스(Lupus) (SLE) (전신 홍반성 루프스(Systemic lupus erythematosus)), 라임 질환(Lyme Disease) (보렐리아 부르그도페리 감염(Borrelia burgdorferi Infection)), 림프사상충증(Lymphatic Filariasis), 림페데마(Lymphedema), 림프구 맥락수막염 (LCMV), 성병성림프육아종 감염(Lymphogranuloma venereum Infection) (LGV), 말라리아, 마르부르크 출혈혈(Marburg Hemorrhagic Fever), 홍역, 멜리오이도시스(Melioidosis) (부르콜데리아 슈도말레이 감염(Burkholderia pseudomallei Infection)), 수막염(Meningitis) (메닌고코커스성 질환(Meningococcal Disease)), 메닌고코커스성 질환(Meningococcal Disease), 메티실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(Methicillin Resistant Staphylococcus aureus) (MRSA), 미세영양물 영양실조(Micronutrient Malnutrition), 마이크로스포리디아 감염(Microsporidia Infection), 몰루스쿰 콘타지오섬(Molluscum Contagiosum), 몽키 B 바이러스(Monkey B virus), 몽키폭스(Monkeypox), 모르겔론(Morgellons), 모기 매개 질환, 무코르마이코시스(Mucormycosis), 다중약물-내성 TB (MDR TB), 멈프(Mump), 마이코박테리움 아브세서스 감염(Mycobacterium abscessus Infection), 마이코박테리움 아비움(Mycobacterium avium) 합병증 (MAC), 마이코플라스마 뉴모니아 감염, 구더기증(Myiasis), 나에글레리아 감염(Naegleria Infection) (주요 아메바 수막내염(Primary Amebic Meningoencephalitis) (PAM)), 괴사성 근막염(Necrotizing Fasciitis), 방치된 열대병(Neglected Tropical Diseases) (NTD), 나이세리아 고노로에아 감염(Neisseria gonorrhoeae Infection), 신경낭미충증(Neurocysticercosis), 새로운 변이체 크루츠펠트-자콥 질환(New Variant Creutzfeldt-Jakob Disease), 신생아 황달 (케르니크테루스(Kernicterus)), 니파 바이러스 뇌염(Nipah Virus Encephalitis), 노카디오시스(Nocardiosis), 비-폴리오 엔테로바이러스 감염(Non-Polio Enterovirus Infection), 비병원성 (무해) 장 원생동물, 노로바이러스 감염(Norovirus Infection), 노르워크 유사 바이러스(Norwalk-like Viruses) (NLV), 신규 H1N1 Flu, 온코세르시아시스(Onchocerciasis), 오피스토르키스 감염(Opisthorchis Infection), 경구암(Oral Cancer), 오르프 바이러스( Orf Virus), 구강인두 캔디디아시스(Oropharyngeal Candidiasis) (OPC), 골관절염(Osteoarthritis) (OA), 골다공증, 중이염(Otitis Media), 난소암, 유행성 Flu, 파라고니미아시스(Paragonimiasis), 파라고니무스 감염(Paragonimus Infection) (파라고니미아시스(Paragonimiasis)), 기생충 질환, 파르보바이러스 B19 감염, 페디쿨러스 후마누스 카피티스(Pediculus humanus capitis), 페디쿨러스 후마누스 코르포리스(Pediculus humanus corporis), 골반 염증 질환(Pelvic Inflammatory Disease) (PID), 말초 동맥 질환(PAD), 백일해(Pertussis), 프티리아시스(Phthiriasis), 핑크 아이(Pink Eye) (결막염(Conjunctivitis)), 요충 감염(Pinworm Infection) (엔테로비우스 베르미쿨라리스 감염(Enterobius vermicularis Infection)), 플라그(Plague) (예르시니아 페스티스 감염(Yersinia pestis Infection)), 뉴모시스티스 지로베시 뉴모니아(Pneumocystis jirovecii Pneumonia), 뉴모니아(Pneumonia), 폴리오 감염(Polio Infection) (폴리오미엘리티스 감염(Poliomyelitis Infection)), 폰티악 열(Pontiac Fever), 프리온 질환(Prion Diseases) (전염성 해면뇌병증(spongiform encephalopathie) (TSE)), 전립선암, 슈도모나스 피부염 감염, 프시타코시스(Psittacosis), 사면발니(Pubic Lice) (프티리아시스(Phthiriasis)), 폐 고혈압, Q 열 (콕시엘라 부르네티 감염(Coxiella burnetii Infection)), 광견병(Rabie), 래쿤 회충 감염(Raccoon Roundworm Infection) (바일리사스카리스 감염(Baylisascaris Infection)), 래트-물림 열 (RBF) (스트렙토바이러스 모닐리포르미스 감염(Streptobacillus moniliformis Infection)), 물놀이병(Recreational Water Illness) (RWI), 재귀열(Relapsing Fever), 호흡기 신시티알 바이러스 감염 (Respiratory Syncytial Virus Infection) (RSV), 류마티스 관절염(RA), 리케치아 리케치 감염(Rickettsia rickettsii Infection), 리프트 발리 열(Rift Valley Fever) (RVF), 백선 (피부사상균(Dermatophytes)), 동물 내 백선, 사상충증(River Blindness) (온코세르시아시스(Onchocerciasis)), 록키산 반점 열(Rocky Mountain Spotted Fever) (RMSF) (리케치아 리케치 감염(Rickettsia rickettsii Infection)), 로타바이러스 감염(Rotavirus Infection), RVF (리프트 발리 열(Rift Valley Fever)), RWI (물놀이병), 살모넬라 감염(살모넬로시스(Salmonellosis)), 스카비에스(Scabies), 스카렛 열(Scarlet Fever), 주혈흡충증(Schistosomiasis) (쉬스토소마 감염(Schistosoma Infection)), 계절 Flu, 중증 급성 호흡기 증후군, 성 전염 질환(STD) (예를 들어, 세균성 질염 (BV), 클라미디아(Chlamydia), 생식기 헤르페스(Genital Herpes), 고노레아(Gonorrhea), 사람 파필로마바이러스 감염(Human Papillomavirus Infection), 골반 염증 질환, 매독, 트리코모니아시스(Trichomoniasis), HIV/AIDS, 등),쉬겔라 감염(Shigella Infection) (쉬겔로시스(Shigellosis)), 쉰글스(Shingles) (바리셀라 조스터 바이러스(Varicella Zoster Virus) (VZV)), 겸상 세포 질환(Sickle Cell Disease), 단일 유전자 장애(Single Gene Disorders), 시누스 감염(Sinus Infection) (시누시투스Sinusitus)), 피부암, 수면병(아프리카 트리파노소미아시스(Trypanosomiasis)), 천연두(Smallpox) (바리올라 메이져 및 바리올라 마이너(Variola Major 및 Variola Minor)), 전염성 농창(Sore Mouth Infection) (오르프 바이러스(Orf Virus)), 남부 진드기-관련 발진 병(Southern Tick-Associated Rash Illness) (STARI), 스피나 비피다(Spina Bifida) (마이엘로메닌고셀레(Myelomeningocele)), 스포로트리코시스(Sporotrichosis), 반점 열 그룹 리케차(Spotted Fever Group Rickettsia) (SFGR), 세인트 루이스 뇌염(St. Louis Encephalitis), 스타필로코커스 아우레우스 감염(Staphylococcus aureus Infection), 스트렙토바실러스 모닐리포르미스 감염(Streptobacillus moniliformis Infection), 스트렙토코커스성 질환(Streptococcal Diseases), 스트렙토코커스 뉴모니아 감염(Streptococcus pneumoniae Infection), 뇌졸중, 스트론길로이데스 감염(Strongyloides Infection) (스트론길로이디아시스(Strongyloidiasis)), 급성 어린이 사망 증후군(Sudden Infant Death Syndrome) (SIDS), 유충형주혈흡충(Swimmer's Itch) (세르카리알 피부염(Cercarial Dermatitis)), 돼지 인플루엔자, 매독(Syphilis) (트레포네마 팔리둠 감염(Treponema pallidum Infection)), 전신 홍반성 루프스(Systemic lupus erythematosus), 촌충 감염(Tapeworm Infection) (타에니아 감염(Taenia Infection)), 고환암(Testicular Cancer), 파상풍 질환(Tetanus Disease) (클로스트리디움 테타니 감염(Clostridium tetani Infection)), 아구창(Thrush) (구강인두 캔디디아시스(Oropharyngeal Candidiasis) (OPC)), 진드기 매개 재귀열, 진드기 매개 질환(예를 들어, 아나플라스모시스(Anaplasmosis), 바베시오시스(Babesiosis), 에를리키오시스(Ehrlichiosis), 라임 질환(Lyme Disease), 투렛 증후군(Tourette Syndrome) (TS), 독성 쇼크 증후군(Toxic Shock Syndrome) (TSS), 톡소카리아시스(Toxocariasis) (톡소카라 감염(Toxocara Infection)), 톡소플라스모시스(Toxoplasmosis) (톡소플라스마 감염(Toxoplasma Infection)), 트라코마 감염(Trachoma Infection), 전염성 해면 뇌병증(Transmissible spongiform encephalopathies) (TSE), 외상 뇌 손상(Traumatic Brain Injury) (TBI), 선모충증 (트리키노시스(Trichinosis)), 트리코모니아시스(Trichomoniasis) (트리코모나스 감염(Trichomonas Infection)), 결핵 (TB) (마이코박테리움 튜버쿨로시스 감염(Mycobacterium tuberculosis Infection)), 야토병(Tularemia) (프란시셀라 툴라렌시스 감염(Francisella tularensis Infection)), 장티푸스(Typhoid Fever) (살모넬라 티피 감염(Salmonella typhi Infection)), 자궁암, 질 및 음경 암(Vaginal 및 Vulvar Cancers), 반코마이신-중간체/내성 스타필로코커스 아우레우스 감염(Resistant Staphylococcus aureus Infections) (VISA/VRSA), 반코마이신-내성 엔테로코시 감염(VRE), 변이체 크루츠펠트-자콥 질환 (vCJD), 바리셀라-조스터 바이러스 감염(Varicella-Zoster Virus Infection), 바리올라 메이져 및 바리올라 마이너(Variola Major 및 Variola Minor), 비브리오 콜레라 감염(Vibrio cholerae Infection), 비브리오 파라해모리티쿠스 감염(Vibrio parahaemolyticus Infection), 비브리오 불니피쿠스 감염(Vibrio vulnificus Infection), 바이러스 위장염(Viral Gastroenteritis), 바이러스 출혈열 (VHF), 바이러스 간염, 바이러스 수막염(무균성 수막염), 본 빌레브란트 질환, 음경질 캔디디아시스(Vulvovaginal Candidiasis) (VVC), 웨스트 나일 바이러스 감염(West Nile Virus Infection), 서부 말 뇌염 감염, 편충 감염(Whipworm Infection) (트리쿠리아시스(Trichuriasis)), 휘트모어 질환(Whitmore's Disease), 백일해(Whooping Cough), 제노트로픽 쥐과 백혈병 바이러스-관련 바이러스 감염, 황열, 예르시니아 페스티스 감염(Yersinia pestis Infection), 예르시니오시스(Yersiniosis) (예르시니아 엔테로콜리티카 감염(Yersinia enterocolitica Infection)), 주노틱 후크웜(Zoonotic Hookworm), 자이고마이코시스(Zygomycosis) 등.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 하나 이상의 단백질용해 절단가능한 폴리펩타이드를 사용하는 치료 방법은 암을 치료하는데 유용할 수 있다. 이의 치료가 본원의 개시내용의 하나 이상의 단백질용해 절단가능한 폴리펩타이드의 용도를 포함할 수 있는 암은 다양할 수 있고 예를 들어, 급성 림프아구성 백혈병 (ALL), 급성 골수 백혈병 (AML), 부신피질 암종, AIDS-관련 암 (예를 들어, 카포시 육종, 림프종 등)을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다: 항문 암, 맹장 암, 성상 세포종, 비전형적 기형/횡문양 종양, 기저 세포 암종, 담관암 (간외), 방광암, 골암 (예를 들어, 어윙 육종, 골육종 및 악성 섬유 조직구종 등),뇌 줄기 신경교종, 뇌 종양 (예를 들어, 성상 세포종, 중추 신경계 배아 종양, 중추 신경계 생식 세포 종양, 두개인두종, 뇌실막세포종 등),유방암 (예를 들어, 여성 유방암, 남성 유방암, 어린이 유방암 등),기관지 종양, 버킷 림프종, 카르시노이드 종양 (예를 들어, 어린이, 위장 등),비공지된 주요 암종, 심장 (심장) 종양(Cardiac (Heart) Tumors), 중추 신경계 (예를 들어, 비전형적 기형/횡문양 종양, 배아 종양, 생식 세포 종양, 림프종 등),자궁경부암, 어린이암, 척색종, 만성 림프구 백혈병(CLL), 만성 골수 백혈병(CML), 만성 골수증식성 신생물, 결장암, 결장직장암, 두개인두종, 피부 T-세포 림프종, 관암 (예를 들어, 담관암, 간외 등),동일계 관암종(DCIS), 배아 종양, 자궁내막암, 뇌실막세포종, 식도암, 감각신경모세포종, 어윙 육종, 두개내외 생식 세포 종양, 성선외 생식 세포 종양, 간외 담관암, 눈 암 (예를 들어, 안내 흑색종, 망막모세포종 등),골의 섬유성 조직구종 (예를 들어, 악성 종양, 골육종 등),담낭암, 위(위장) 암, 위장 카르시노이드 종양, 위장 위장관 기질 종양(GIST), 생식 세포 종양 (예를 들어, 두개내외, 담낭외, 난소, 고환 등),임신융모질환(Gestational Trophoblastic Disease), 신경교종, 모발 세포 백혈병, 두경부암, 심장암, 간세포 (간) 암, 조직구증(예를 들어, 랑게르한스 세포 등),호지킨 림프종, 하인두암, 안내 흑색종, 섬 세포 종양 (예를 들어, 췌장 신경내분비 종양 등),카포시 육종, 신장암 (예를 들어, 신장 세포, 빌름스 종양, 어린이 신장 종양 등),랑게르한스 세포 조직구증, 후두암, 백혈병 (예를 들어, 급성 림프모구성 (ALL), 급성 골수(AML), 만성 림프구 (CLL), 만성 골수성 (CML), 모발 세포 등),입술 및 구강암, 간암(주요), 동일계 소엽 암종 (LCIS), 폐암 (예를 들어, 비-소 세포, 소세포 등),림프종 (예를 들어, AIDS-관련, 버킷, 피부 T-세포, 호지킨, 비-호지킨, 주요 중추 신경계(CNS) 등),마크로글로불린혈증(예를 들어, 발덴스트롬 등),남성 유방암, 골의 악성 섬유성 조직구종 및 골육종, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 중피종, 주요 잠재성을 갖는 전이성 편평상피 목암, NUT 유전자를 포함하는 중앙 관 암종, 입암, 다발성 내분비 신생물 증후군, 다발성 골수종/혈장 세포 신생물, 균상식육종, 골수이형성 증후군, 골수이형성/골수증식성 신생물, 골수성 백혈병 (예를 들어, 만성 (CML), 등),골수성 백혈병(예를 들어, 급성 (AML) 등),골수증식성 신생물(예를 들어, 만성 등),비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 비-소세포 폐암, 경구암, 구강암(예를 들어, 입술 등),구인두암, 골육종 및 골의 악성 섬유성 조직구종, 난소암 (예를 들어, 상피, 생식 세포 종양, 낮은 악성 잠재적 종양 등),췌장암, 췌장 신경내분비 종양 (섬 세포 종양), 유두종증, 부신결정종, 부비동 및 비강암, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 크롬친화성세포종, 뇌하수체 종양, 흉막과 폐의 모세포종, 주요 중추신경계(CNS) 림프종, 전립선암, 직장암, 신장 세포(콩팥) 암, 신우뇨관, 이행 세포 암, 망막모세포종, 횡문근육종, 침샘암, 육종 (예를 들어, 어윙, 카포시, 골육종, 횡문근육종, 연질 조직, 자궁 등),세자리 증후군, 피부암 (예를 들어, 어린이, 흑색종, 메르켈 세포 암종, 비흑색종 등),소세포 폐암, 소장암, 연질 조직 육종, 편평상피 세포 암종, 편평상피 목암 (예를 들어, 주요 잠재력을 갖는, 전이성 등),위(위장) 암, T-세포 림프종, 고환암, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 신우뇨관의 이행 세포 암, 신우 뇨관암, 요도암 (예를 들어, 자궁내막 등),자궁 육종, 질암, 음경암, 발덴스트롬 매크로글로불린혈증, 빌름스 종양 등.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 방법은 신생물을 갖는 대상체에 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포 또는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 대상체에 투여함에 의해 신생물을 치료함을 포함한다. 일부 경우에, 상기 방법은 추가로 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인에 의해 조절되는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 핵산을 대상체에게 투여함을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “신생물”은 일반적으로 조직의 비정상적 성장 또는 비정상적으로 증식하는 세포 또는 세포 집단을 언급하고, 이는 고형 종양, 혈액암 등을 포함하지만 이에 제한되지 않고, 예를 들어, 본원에 열거된 암을 포함하는 예를 들어 임의의 암을 포함한다. 신생물은 양성 또는 악성일 수 있다.
일부 경우에, 본원의 방법은 이종성 종양의 치료에 적용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “이종성 종양”은 일반적으로 적어도 하나의 항원을 차등적으로 발현하는 적어도 2개의 상이한 유형의 종양 세포를 갖는 종양을 언급한다. 예를 들어, 이종성 종양은 제1 항원을 발현하는 종양 세포의 하나의 유형 및 항원을 발현하지 않는 종양 세포의 제2 유형을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 이종성 종양은 제1 항원을 고도로 발현하는 종양 세포의 하나의 유형 및 항원의 낮은 발현을 갖는 종양 세포의 제2 유형을 포함할 수 있다. “낮은 발현”이란 항원이 치료 불가능한 항원을 직접적으로 표적화하는 수준으로 발현되는 것을 의미한다. 본원에 기재된 바와 같은 이종성 종양을 표적화하는 방법은 일반적으로 예를 들어, 항원을 차등적으로 발현하는 2개의 세포 유형을 포함하는 종양의 적어도 2개의 상이한 세포 유형을 치료학적으로 표적화함을 포함한다. 따라서, 이종성 종양을 표적화하는 본원에 기재된 방법은 상기 방법에서 표적화된 세포 유형의 항원을 발현하지 않거나 이의 낮은 발현을 보여주는 종양의 세포 유형에 대해 치료학적 효과를 가능하게 할 수 있다.
이종성 종양을 치료하는 방법에 유용한 차등적으로 발현된 항원은 필수적으로 본원에 기재된 바와 같은 특이적 결합 구성원으로 표적화될 수 있는 임의의 항원을 포함할 수 있고, 이는 예를 들어, 암 세포 항원(예를 들어, 표면 발현된 암 항원, 세포내 암 항원 등), 조직 특이적 항원, 세포 유형 특이적 항원 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 항원은 세포에 대해 내인성으로 발현된다. 일부 경우에, 항원은 이로부터 발현되는 세포에 이종성일 수 있고, 예를 들어, 발현된 이종성 단백질이 항원으로서 작용하는 경우를 포함한다.
일부 경우에, 이종성 종양을 치료하는 방법은 상기 종양을, 프라이밍 항원에 대해 특이적인 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드를 발현하도록 가공된 면역 세포와 접촉시킴을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “프라이머 항원”은 일반적으로 이종성 종양에 인접해 있는 키메라 폴리펩타이드를 활성화시키기에 충분한 항원을 언급한다. 일부 경우에, 프라이밍 항원은 예를 들어, 이종성 종양의 일부 세포 상에 존재하지만 이종성 종양의 모든 세포에 존재하지 않는, 이종성 종양의 세포의 서브세트에 존재하는 항원일 수 있다. 일부 경우에, 프라이밍 항원에 의한 키메라 폴리펩타이드의 활성화 시, 키메라 폴리펩타이드의 유리된 세포내 도메인은 제2 항원-특이적 폴리펩타이드의 발현을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 제2 항원-특이적 폴리펩타이드의 항원은 본원에서 “치료학적 항원” 또는 “사멸 항원”으로서 언급될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “치료학적 항원”은 일반적으로 치료학적 작제물이 지시되는 항원, 예를 들어, 항체, CAR, TCR, 키메라 이중특이적 결합 구성원 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 치료학적 작제물에 의해 직접적으로 표적화된 항원을 언급할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “사멸 항원”은 일반적으로 사멸을 위해 세포를 표적화하도록 디자인된 작제물이 지시되는 항원, 예를 들어, 항체, CAR, TCR, 키메라 이중특이적 결합 구성원 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 면역 세포에 의한 사멸 항원을 발현하는 세포의 사멸을 유도하는 작제물에 의해 표적화된 항원을 언급할 수 있다. 일부 경우에, 제2 항원-특이적 폴리펩타이드는 이종성 종양의 모든 또는 거의 모든 또는 대부분의 세포에 존재하는 치료학적 항원으로 지시될 수 있다.
일부 경우에, 본원에 기재된 방법은 대상체에서 선천성 면역 반응을 유도함을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 발현되는 경우 대상체에서 선천성 면역 반응을 유도하는 폴리펩타이드의 발현을 유도할 수 있다. 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 특이적 항원의 결합에 반응하여 키메라 폴리펩타이드를 활성화시키도록 가공될 수 있기 때문에, 일부 경우에, 선천성 면역 반응은 특정 항원의 존재에 응답하여 유도될 수 있다. 키메라 폴리펩타이드는 예를 들어, 암 항원, 세포 유형 특이적 항원, 조직 특이적 항원, 감염성 질환 항원 (예를 들어, 세균 항원, 바이러스 항원, 진균류 항원, 병원성 항원 등) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 간편하고 적당한 항원에 의해 활성화되도록 가공될 수 있다. 일부 경우에, 선천성 면역 반응은 예를 들어, 항원, 예를 들어, 종양에 국소적으로 존재하는 항원, 종양 미세환경에 국소적으로 존재하는 항원, 감염된 영역 또는 조직에 국소적으로 존재하는 항원 등의 국소적 존재를 기준으로 국소적으로 활성화될 수 있다
일부 경우에, 본원에 기재된 방법은 대상체에서 하나 이상의 면역 억제 인자의 발현을 조절함을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 발현되는 경우 대상체에서 면역 억제를 유도하는 폴리펩타이드의 발현을 유도할 수 있다. 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 특이적 항원의 결합에 반응하여 키메라 폴리펩타이드를 활성화시키도록 가공될 수 있기 때문에, 일부 경우에, 면역억제 반응은 특정 항원의 존재에 응답하여 유도될 수 있다. 키메라 폴리펩타이드는 예를 들어, 자가항원(예를 들어, 자가면역 반응을 유도하는 자가-항원), 세포 유형 특이적 항원, 조직 특이적 항원 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 간편하고 적당한 항원에 의해 활성화되도록 가공될 수 있다. 일부 경우에, 면역억제는 항원, 예를 들어, 조직에 국소적으로 존재하는 항원, 기관에 국소적으로 존재하는 항원 등의 국소적 존재를 기준으로 국소적으로 활성화될 수 있다. 일부 경우에, 면역억제는 예를 들어 본원 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 활성화시키기 위해 범용적으로 존재하는 항원을 사용함으로써 범용적으로 수행될 수 있다. 일부 경우에, 본원에 기재된 방법에 따라 면역억제를 필요로 하는 대상체는 자가면역 질환을 갖는 대상체일 수 있다.
용이하게 이해되는 바와 같이, 본원에 기재된 것을 치료하는 방법은 일부 경우에 하나 이상의 통상적 치료와 조합될 수 있다. 예를 들어, 암학의 경우에, 본원에 기재된 방법은 일부 경우에 통상적인 암 치료요법과 조합될 수 있고, 이는 일부 경우에 예를 들어, 통상적인 화학치료요법, 통상적인 방사선 치료요법, 통상적인 면역치료요법, 수술 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 본원에 기재된 방법은 통상적인 치료요법 전 또는 후에 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 방법은 예를 들어, 대상체가 통상적인 치료요법으로부터의 개선을 나타낸 후 보조 치료요법으로서 사용될 수 있거나, 대상체가 통상적인 치료요법에 응답하지 않는 경우 사용될 수 있다. 일부 경우에, 본원에 기재된 방법은 예를 들어, 추가의 치료요법, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 통상의 치료요법을 위한 대상을 준비하기 위해 추가의 치료요법 전에 사용될 수 있다.
통상적인 암 치료요법은 또한 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는 암을 위한 표적화된 치료요법을 포함한다: 예를 들어, HER2 (ERBB2/neu)를 표적화하는 아도-트라스투주맙 엠탄신 (Kadcyla) (유방암에 사용하기 위해 승인된); EGFR (HER1/ERBB1), HER2 (ERBB2/neu)를 표적화하는 아파티닙 (Gilotrif) (비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); 표적화하는 알데슬레우킨 (Proleukin) (신장 세포 암종, 흑색종에 사용하기 위해 승인된); ALK를 표적화하는 알레크티닙 (Alecensa) (비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); CD52를 표적화하는 알렘투주맙 (Campath) (B-세포 만성 림프성 백혈병에 사용하기 위해 승인됨); PD-L1을 표적화하는 아테졸리주맙 (Tecentriq) (요로상피 세포암종, 비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); PD-L1을 표적화하는 아벨루맙 (Bavencio) (메르켈 세포 암종에 사용하기 위해 승인된); KIT, PDGFRβ, VEGFR1/2/3을 표적화하는 악시티닙 (Inlyta) (신장 세포 암종에 사용하기 위해 승인된); BAFF를 표적화하는 벨리무맙 (Benlysta) (홍반성 루푸스에 사용하기 위해 승인된); HDAC를 표적화하는 벨리노스타트 (Beleodaq) (말초 T-세포 림프종에 사용하기 위해 승인된); VEGF 리간드를 표적화하는 베바시주맙 (Avastin) (자궁경부암, 결장직장암, 난관암, 신경모세포종, 비-소세포 폐암, 난소암, 복막암, 신장 세포 암종에 사용하기 위해 승인된); CD19/CD3을 표적화하는 블리나투모맙 (Blincyto) (급성 림프아구성 백혈병 (전구체 B-세포)에 사용하기 위해 승인된); 프로테아좀을 표적화하는 보르테조밉 (Velcade) (다발성 골수종, 맨틀 세포 림프종에 사용하기 위해 승인된); ABL을 표적화하는 보수티닙 (Bosulif) (만성 골수 백혈병에 사용하기 위해 승인된); CD30을 표적화하는 브렌툭시맙 베도틴 (Adcetris) (호지킨 림프종, 역형성 대세포 림프종에 사용하기 위해 승인된); ALK를 표적화하는 브리가티닙 (Alunbrig) (비-소세포 폐암 (ALK+)에 사용하기 위해 승인된); FLT3, KIT, MET, RET, VEGFR2를 표적화하는 카보잔티닙 (Cabometyx, Cometriq) (갑상선 수질암, 신장 세포 암종에 사용하기 위해 승인된); 프로테아좀을 표적화하는 카르필조밉 (Kyprolis) (다발성 골수종에 사용하기 위해 승인된); ALK를 표적화하는 세리티닙 (Zykadia) (비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); EGFR (HER1/ERBB1)을 표적화하는 세툭시맙 (Erbitux) (결장직장암, 두경부의 편평상피 세포 암에 사용하기 위해 승인된); MEK를 표적화하는 코비메티닙 (Cotellic) (흑색종에 사용하기 위해 승인된); ALK, MET, ROS1을 표적화하는 크리조티닙 (Xalkori) (비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); BRAF를 표적화하는 다브라페닙 (Tafinlar) (흑색종, 비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); CD38을 표적화하는 다라투무맙 (Darzalex) (다발성 골수종에 사용하기 위해 승인된); ABL을 표적화하는 다사티닙 (Sprycel) (만성 골수 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병에 사용하기 위해 승인된); RANKL을 표적화하는 데노수맙 (Xgeva) (골의 거대 세포 종양에 사용하기 위해 승인된); B4GALNT1 (GD2)을 표적화하는 디누툭시맙 (Unituxin) (소아 신경모세포종에 사용하기 위해 승인된); PD-L1을 표적화하는 두르발루맙 (Imfinzi) (요로상피 암종에 사용하기 위해 승인된); SLAMF7을 표적화하는 엘로투주맙 (Empliciti) (CS1/CD319/CRACC) (다발성 골수종에 사용하기 위해 승인된); IDH2를 표적화하는 에나시데닙 (Idhifa) (급성 골수성 백혈병에 사용하기 위해 승인된); EGFR (HER1/ERBB1)을 표적화하는 에를로티닙 (Tarceva) (비-소세포 폐암, 췌장암에 사용하기 위해 승인된); mTOR을 표적화하는 에베롤리무스 (Afinitor (췌장, 위장관 또는 폐 기원 신경내분비 종양, 신장 세포 암종, 절제 불가능한 뇌실막하 거대 세포 성상세포종, 유방암에 사용하기 위해 승인된); EGFR (HER1/ERBB1)을 표적화하는 게피티닙 (Iressa) (비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); CD20을 표적화하는 이브리투모맙 티욱세탄 (Zevalin) (비-호지킨 림프종에 사용하기 위해 승인된); BTK를 표적화하는 이브루티닙 (Imbruvica) (맨틀 세포 림프종, 만성 림프구 백혈병, 발덴스트롬 마크로불린혈증 에 사용하기 위해 승인된); PI3Kδ를 표적화하는 이델라리시브 (Zydelig) (만성 림프구 백혈병, 소포성 B-세포 비-호지킨 림프종, 소 림프구 림프종에 사용하기 위해 승인된); KIT, PDGFR, ABL을 표적화하는 이마티닙 (Gleevec) (GI 기질 종양 (KIT+), 융기성 피부섬유육종, 다중 혈액 종양에 사용하기 위해 승인된); CTLA-4를 표적화하는 이필리무맙 (Yervoy) (흑색종에 사용하기 위해 승인된); 프로테아좀을 표적화하는 익사조밉 (Ninlaro) (다발성 골수종에 사용하기 위해 승인된); HER2 (ERBB2/neu), EGFR (HER1/ERBB1)을 표적화하는 라파티닙 (Tykerb) (유방암 (HER2+)에 사용하기 위해 승인된); VEGFR2를 표적화하는 렌바티닙 (Lenvima) (신장 세포 암종, 갑상선암에 사용하기 위해 승인된); FLT3을 표적화하는 미도스타우린 (Rydapt) (급성 골수성 백혈병 (FLT3+)에 사용하기 위해 승인된); EGFR (HER1/ERBB1)을 표적화하는 넥시투무맙 (Portrazza) (편평상피 비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); HER2 (ERBB2/neu)를 표적화하는 네라티닙 (Nerlynx) (유방암에 사용하기 위해 승인된); ABL을 표적화하는 닐로티닙 (Tasigna) (만성 골수 백혈병에 사용하기 위해 승인된); PARP를 표적화하는 니라파립 (Zejula) (난소암, 난관암, 복막암에 사용하기 위해 승인된); PD-1을 표적화는 니볼루맙 (Opdivo) (결장직장암, 두경부 편평상피 세포 암종, 호지킨 림프종, 흑색종 비-소세포 폐암, 신장 세포 암종, 요로상피 암종에 사용하기 위해 승인된); CD20을 표적화하는 오비누투주맙 (Gazyva) (만성 림프구 백혈병, 소포성 림프종에 사용하기 위해 승인된); CD20을 표적화하는 오파투무맙 (Arzerra, HuMax-CD20) (만성 림프구 백혈병에 사용하기 위해 승인된); PARP를 표적화하는 올라파립 (Lynparza) (난소암에 사용하기 위해 승인된); PDGFRα를 표적화하는 올라라투맙 (Lartruvo) (연조직 육종에 사용하기 위해 승인된); EGFR을 표적화하는 오시메르티닙 (Tagrisso) (비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); CDK4, CDK6을 표적화하는 팔보시클립 (Ibrance) (유방암에 사용하기 위해 승인된); EGFR (HER1/ERBB1)을 표적화하는 파니투무맙 (Vectibix) (결장직장암에 사용하기 위해 승인된); HDAC를 표적화하는 파노비노스타트 (Farydak) (다발성 골수종에 사용하기 위해 승인된); VEGFR, PDGFR, KIT를 표적화하는 파조파닙 (Votrient) (신장 세포 암종에 사용하기 위해 승인된); PD-1을 표적화하는 펨브롤리주맙 (Keytruda) (고전적인 호지킨 림프종, 흑색종, 비-소세포 폐암 (PD-L1+), 두경부 편평상피 세포 암종, 고형 종양 (MSI-H)에 사용하기 위해 승인된); HER2 (ERBB2/neu)를 표적화하는 페르투주맙 (Perjeta) (유방암 (HER2+)에 사용하기 위해 승인된); ABL, FGFR1-3, FLT3, VEGFR2를 표적화하는 포나티닙 (Iclusig) (만성 골수 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병에 사용하기 위해 승인된); VEGFR2를 표적화하는 라무시루맙 (Cyramza) (결장직장암, 위암 또는 위식도 역류 (GEJ) 선암종, 비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); KIT, PDGFRβ, RAF, RET, VEGFR1/2/3을 표적화하는 레고라페닙 (Stivarga) (결장직장암, 위장관 기질 종양, 간세포 암종에 사용하기 위해 승인된); CDK4, CDK6을 표적화하는 리보시클립 (Kisqali) (유방암 (HR+, HER2-)에 사용하기 위해 승인된); CD20을 표적화하는 리툭시맙 (Rituxan, Mabthera) (비-호지킨 림프종, 만성 림프구 백혈병, 류마티스 관절염, 다발혈관염 이있는 육아종증에 사용하기 위해 승인된); CD20을 표적화하는 리툭시맙/히알루로니다제 인간 (만성 림프구 백혈병, 확산성 대형 B-세포 림프종, 소포성 림프종에 사용하기 위해 승인된); HDAC를 표적화하는 리미뎁신 (Istodax) (피부 T-세포 림프종, 말초 T-세포 림프종에 사용하기 위해 승인된); PARP를 표적화하는 루카파립 (Rubraca) (난소암에 사용하기 위해 승인된); JAK1/2를 표적화하는 룩솔리티닙 (Jakafi) (골수섬유증에 사용하기 위해 승인된); IL-6을 표적화하는 실툭시맙 (Sylvant) (다중심 캐슬만씨병에 사용하기 위해 승인된); 표적화하는 시푸류셀-T (Provenge) (전립선암에 사용하기 위해 승인된); 평활화를 표적화하는 소니데깁 (Odomzo) (기저 세포암에 사용하기 위해 승인된); VEGFR, PDGFR, KIT, RAF를 표적화하는 소라페닙 (Nexavar) (간세포 암종, 신장 세포 암종, 갑상선 암종에 사용하기 위해 승인된); mTOR을 표적화하는 템시롤리무스 (Torisel) (신장 세포 암종에 사용하기 위해 승인된); CD20을 표적화하는 토시투모맙 (Bexxar) (비-호지킨 림프종에 사용하기 위해 승인된); MEK를 표적화하는 트라메티닙 (Mekinist) (흑색종, 비-소세포 폐암에 사용하기 위해 승인된); HER2 (ERBB2/neu)를 표적화하는 트라스투주맙 (Herceptin) (유방암 (HER2+), 위암 (HER2+)에 사용하기 위해 승인된); EGFR (HER1/ERBB1), RET, VEGFR2를 표적화하는 반데타닙 (Caprelsa) (갑상선 수질암에 사용하기 위해 승인된); BRAF를 표적화하는 베무라페닙 (Zelboraf) (흑색종에 사용하기 위해 승인된); BCL2를 표적화하는 베네토클락 (Venclexta) (만성 림프구 백혈병에 사용하기 위해 승인된); 평활화된 PTCH를 표적화한 비스모데깁 (Erivedge) (기저 세포암에 사용하기 위해 승인된); HDAC를 표적화하는 보리노스타트 (Zolinza) (피부 T-세포 림프종에 사용하기 위해 승인된); PIGF, VEGFA/B를 표적화하는 지브-아플리베르셉트 (Zaltrap) (결장직장암에 사용하기 위해 승인된); 등.
일부 경우에, 예를 들어, 본원에 기재된 방법이 대상체를 치료하기 위해 사용되는 유일한 방법인 경우를 포함하는 본원의 개시내용의 방법은, 임의의 추가의 통상적인 치료요법 없이 사용될 수 있다. 예를 들어, 암학의 경우에, 본원에 기재된 방법은 일부 경우에 암에 대해 대상체를 치료하기 위해 사용되는 유일한 방법일 수 있다.
키메라 폴리펩타이드
본원의 개시내용은 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드를 제공한다. 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 일반적으로 다음을 포함할 수 있다: a) 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인; b) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및 c) 세포내 도메인.이의 결합 파트너에 의한 특이적 결합 구성원의 결합은 일반적으로 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 단백질용해 절단가능한 노치 수용체의 절단을 유도하여, 세포내 도메인을 방출한다. 세포내 도메인의 방출은 세포의 활성을 조절할 수 있거나 일반적으로 세포내 함유되거나, 세포 표면 상에 발현되거나 분비되는 페이로드의 생성을 유발할 수 있다. 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 일반적으로 노치 수용체 폴리펩타이드에 이종성인 (즉, 노치 수용체로부터 유래되지 않은) 적어도 하나의 서열을 포함하고, 예를 들어, 이는 세포외 도메인이 노치 수용체 폴리펩타이드에 이종성인 경우, 상기 세포내 도메인이 노치 수용체 폴리펩타이드에 이종성인 경우, 세포외 도메인 및 세포내 도메인 둘 다가 노치 수용체 폴리펩타이드에 이종성인 경우 등을 포함한다.
도메인, 예를 들어, 세포외 도메인, 노치 수용체 폴리펩타이드 조절 도메인, 세포내 도메인 등은 직접적으로, 즉, 어떠한 중재 아미노산 잔기없이 연결될 수 있거나 2개의 도메인을 연결하는 펩타이드 링커를 포함할 수 있다. 펩타이드 링커는 합성일 수 있거나 천연적으로 유래될 수 있고, 이는 예를 들어, 천연적으로 존재하는 폴리펩타이드의 단편을 포함한다.
펩타이드 링커는 약 3개 아미노산(aa) 이하 내지 약 200개 aa 이상의 길이로 다양할 수 있고, 이는 예를 들어, 3개 aa 내지 10개 aa, 5개 aa 내지 15개 aa, 10개 aa 내지 25개 aa, 25개 aa 내지 50개 aa, 50개 aa 내지 75개 aa, 75개 aa 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 125개 aa, 125개 aa 내지 150개 aa, 150개 aa 내지 175개 aa, 또는 175개 aa 내지 200개 aa를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 펩타이드 링커는 3개 aa 내지 30개 aa, 예를 들어, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 aa의 길이를 가질 수 있다. 펩타이드 링커는 5개 aa 내지 50개 aa, 예를 들어, 5개 aa 내지 40개 aa, 5개 aa 내지 35개 aa, 5개 aa 내지 30개 aa, 5개 aa 내지 25개 aa, 5개 aa 내지 20개 aa, 5개 aa 내지 15개 aa 또는 5개 aa 내지 10개 aa의 길이를 가질 수 있다.
세포외 도메인
본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드는 일반적으로 특이적 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인을 포함한다. 특이적 결합 구성원의 이의 특이적 결합 파트너의 결합은 노치 수용체 폴리펩타이드의 단백질용해 절단을 유발하여 키메라 폴리펩타이드를 발현하는 세포의 활성을 조절하는 세포내 도메인을 방출시킨다.
세포외 도메인의 특이적 결합 구성원은 일반적으로 키메라 폴리펩타이드의 특이성을 결정한다. 일부 경우에, 이의 특이적 결합 구성원을 기준으로 결정된 바와 같은 특이성에 따라 키메라 폴리펩타이드가 언급될 수 있다. 예를 들어, 결합 파트너 “X”를 갖는 특이적 결합 구성원은 X 키메라 폴리펩타이드 또는 항-X 키메라 폴리펩타이드로서 언급될 수 있다.
임의의 간편한 특이적 결합 쌍, 즉, 특이적 결합 구성원 및 특이적 결합 파트너 쌍은 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 유용할 수 있고, 예를 들어, 항원-항체 쌍, 리간드 수용체 쌍, 스캐폴드 단백질 쌍 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원은 항체일 수 있고 이의 결합 파트너는 항체가 특이적으로 결합하는 항원일 수 있다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원은 수용체일 수 있고 이의 결합 파트너는 수용체가 특이적으로 결합하는 리간드일 수 있다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원은 스캐폴드 단백질일 수 있고 이의 결합 파트너는 상기 스캐폴드 단백질이 특이적으로 결합하는 단백질일 수 있다.
일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 항체이다. 항체는 임의의 항원-결합 항체-기반 폴리펩타이드일 수 있고, 이의 다양한 폴리펩타이드는 당업계에 공지되어 있다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원은 모노클로날 항체, 단일쇄 Fv (scFv), Fab 등이거나 이를 포함한다. 다른 항체 기반 인지 도메인(cAb VHH (낙타과 항체 가변 도메인) 및 인간화된 버젼, IgNAR VH (상어 항체 가변 도메인) 및 인간화된 버젼, sdAb VH (단일 도메인 항체 가변 도메인) 및 “낙타화된” 항체 가변 도메인이 사용을 위해 적합하다. 일부 경우에, T-세포 수용체(TCR) 기반 인지 도메인, 예를 들어, 단일쇄 TCR (scTv, VαVβ를 포함하는 단일쇄 2개-도메인 TCR)은 또한 사용을 위해 적합하다.
본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원이 항체-기반 결합 구성원인 경우, 키메라 폴리펩타이드는 예를 들어, 항체-기반 결합 구성원에 의해 특이적으로 결합된 항원을 포함하는, 항체-기반 결합 구성원에 대한 결합 파트너의 존재하에 활성화될 수 있다. 일부 경우에, 항체-기반 결합 구성원은 예를 들어, 항체-기반 결합 구성원이 “항-” 항원 항체, 예를 들어, 항-CD19 항체로서 기재되는 경우를 포함하는, 항체-기반 결합 구성원에 의해 결합된 항원을 기준으로 관련 기술 분야에서 통상적으로 수행되는 바와 같이 한정될 수 있다. 따라서, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 포함시키기 위해 적합한 항체-기반 결합 구성원은 다양한 항원-결합 특이성을 가질 수 있다.
일부 경우에, 항원-결합 도메인은 암 항원, 즉, 신생물 또는 암 세포에 의해 발현되는 (이에 의해 합성되는) 항원, 즉, 암 세포 연합된 항원 또는 암 (또는 종양) 특이적 항원에 특이적이다.
암 세포 관련 항원은 예를 들어, 유방암 세포, B 세포 림프종, 췌장암, 호지킨 림프종 세포, 난소암 세포, 전립선 암 세포, 중피종, 폐암 세포(예를 들어, 소세포 폐암 세포), 비-호지킨 B-세포 림프종(B-NHL) 세포, 난소암 세포, 전립선 암 세포, 중피종 세포, 폐암 세포(예를 들어, 소세포 폐암 세포), 흑색종 세포, 만성 림프구 백혈병 세포, 급성 림프구 백혈병 세포, 신경모세포종 세포, 신경교종, 신경모세포종, 수모세포종, 결장직장 암 세포 등과 관련된 항원일 수 있다. 암 세포 관련 항원은 또한 비-암성 세포에 의해 발현될 수 있다.
암 세포 특이적 항원은 암에 특이적인 항원 및/또는 특정 유형의 암 또는 예를 들어, 유방암 세포, B 세포 림프종, 췌장암, 호지킨 림프종 세포, 난소암 세포, 전립선 암 세포, 중피종, 폐암 세포(예를 들어, 소세포 폐암 세포), 비-호지킨 B-세포 림프종(B-NHL) 세포, 난소암 세포, 전립선 암 세포, 중피종 세포, 폐암 세포(예를 들어, 소세포 폐암 세포), 흑색종 세포, 만성 림프구 백혈병 세포, 급성 림프구 백혈병 세포, 신경모세포종 세포, 신경교종, 신경모세포종, 수모세포종, 결장직장 암 세포 등을 포함하는 암 세포에 특이적인 항원일 수 있다. 암 (또는 종양) 특이적 항원은 일반적으로 비-암성 세포(또는 비-종양 세포)에 의해 발현되지 않는다. 일부 경우에, 암 (또는 종양) 특이적 항원은 하나 이상의 비-암성 세포 유형 (또는 비-종양 세포 유형)에 의해 최소로 발현될 수 있다. “최소로 발현되는”이란 세포당 발현 수준 또는 최소로, 비유의적으로 또는 비검출가능하게 발현하는 세포의 수의 측면에서 발현 수준이 상기 항원을 발현하는 비-암성 세포로의 특이적 결합 구성원의 결합을 유도함을 의미한다.
일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자와 결합된 단백질의 단편 (예를 들어, 펩타이드)을 포함하는 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. MHC 분자가 세포내 발현되고 세포외 발현되는 단백질 둘 다의 펩타이드 단편을 제공하기 때문에, MHC-펩타이드 복합체에 지시된 특이적 결합 구성원은 세포외 발현된 항원뿐만 아니라 세포내 항원의 표적화를 가능하게 한다.
세포내 발현된 표적 단백질 (예를 들어, 세포질적으로 발현된 (즉, 세포질 단백질), 핵적으로 발현되는 (즉, 핵 단백질) 등)은 세포내 항원 (예를 들어, 세포질 항원, 핵 항원 등)으로서 언급될 수 있다. 따라서, 본원의 개시내용의 특이적 결합 구성원은 또한 일부 경우에 인간 백혈구 항원 (HLA)-펩타이드 복합체로서 기재된, MHC와 복합체화된, 예를 들어, 펩타이드-MHC 복합체의 세포내 항원 단편에 특이적일 수 있다.
모든 내인성 세포성 단백질(숙주 또는 병원체)은 HLA 분자와 연합된 세포 표면에 디스플레이하기 위해 짧은 펩타이드로 가공된다. 세포 표면 상에 디스플레이된 펩타이드-HLA 부류 I 복합체는 T-세포 매개 면역 반응에서 중요한 역할을 수행한다. 대략적으로 9-잔기 길이의 펩타이드는 세포 내부에서 프로테아좀에 의해 분해된 단백질로부터 기원한다. T-세포 수용체가 자가로서 비-자가로서 펩타이드를 인지하는지에 의존하여, 면역 반응이 개시될 수 있다. 암 세포의 표면 상에 특이적으로 디스플레이된 펩타이드-HLA 복합체는 가공된 T-세포 또는 “TCR-유사” 항체를 포함하는, 표적화된 암 치료제를 개발하기 위해 우수한 기회를 제공한다. 예를 들어, MHC 기반 사량체 기술을 포함하는 다양한 기술의 도래는 TCR-유사 항-HLA/펩타이드 특이적 항체를 개발할 능력을 향상시켰다.
일부 경우에, 본원의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원의 결합 파트너는 펩타이드-MHC 또는 HLA/펩타이드 복합체를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 본원의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 예를 들어, HLA-A/펩타이드 복합체, HLA-B/펩타이드 복합체 또는 HLA-C/펩타이드 복합체를 포함하는 MHC 부류 I MHC-펩타이드 복합체에 특이적이다. 일부 경우에, 본원의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 예를 들어, HLA-DPA1/펩타이드 복합체, HLA-DPB1/펩타이드 복합체, HLA-DQA1/펩타이드 복합체, HLA-DQB1/펩타이드 복합체, HLA-DRA/펩타이드 복합체 또는 HLA-DRB1/펩타이드 복합체를 포함하는 MHC 부류 II MHC-펩타이드 복합체에 특이적이다. 일부 경우에, 본원의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 MHC 부류 III MHC-펩타이드 복합체에 특이적이다.
펩타이드-MHC 결합 파트너는 일반적으로 MHC와 관련하여 제공되는 표적 단백질 단편 펩타이드를 포함한다. 상기 펩타이드는 예를 들어, 이들이 결합된 MHC 분자의 부류를 포함하는 다수의 인자들에 의존하여 크기가 다양하다. 예를 들어, 부류 I MHC 관련된 펩타이드는 일반적으로 9개 aa 길이이지만 크기가 다양할 수 있고 이는 약 9개 aa 미만 또는 약 9개 aa 초과를 포함하고 예를 들어, 8개 aa 또는 10개 aa를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 반면, 부류 II MHC 관련된 펩타이드는 또한 약 13개 aa 내지 약 25개 aa의 크기로 다양할 수 있고, 이는 예를 들어, 13개 aa, 14개 aa, 15개 aa, 16개 aa, 17개 aa, 18개 aa, 19개 aa, 20개 aa, 21개 aa, 22개 aa, 23개 aa, 24개 aa 또는 25개 aa를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
펩타이드-MHC 복합체를 표적화하는 특이적 결합 구성원이 지시될 수 있는 예시적 단백질 표적, 및 각각의 단백질 표적에 대해 MHC와 관련된 예시적 펩타이드는 하기 표 1에 제공된다.
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Figure pct00002
일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 표 1의 세포내 암 항원 펩타이드를 갖는 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 WT1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 NY-ESO-1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합한다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 표 1의 세포내 암 항원 펩타이드를 갖는 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, scFv)이다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 WT1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, scFv)이다.
일부 경우에서, WT1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체는 하기의 중쇄 (VH) CDR 서열 중 하나 이상 또는 전부를 포함한다: SYAMS (서열번호: 61), QIDPWGQETLYADSVKG (서열번호: 62) 및 LTGRFDY (서열번호: 63).
일부 경우에서, WT1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체는 하기의 경쇄 (VL) CDR 서열 중 하나 이상 또는 전부를 포함한다: RASQSISSYLN (서열번호: 64), SASQLQS (서열번호: 65) 및 QQGPGTPNT (서열번호: 66).
일부 경우에서, WT1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 scFv이다:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSQIDPWGQETLYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKLTGRFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSTDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYSASQLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGPGTPNTFGQGTKVEIKRA (서열번호: 67).
일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 NY-ESO-1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, scFv)이다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 KRAS-G12V 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, scFv) (예를 들어, 항-HLA-A2/KRAS-G12V scFv)이다.
일부 경우에서, KRAS-G12V 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 scFv이다:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYYYPPTFGQGTKVEIKRTGGGSGGGGSGGGASEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNINGSYIHWVRQAPGKGLEWVAYIDPETGYSRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRDSASDAMD VWGQGTLVTVSS (서열번호: 68).
일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 KRAS-G12V/C 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, scFv) (예를 들어, 항-HLA-A2/KRAS-G12V/C scFv)이다.
일부 경우에서, KRAS-G12V/C 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 scFv이다:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTIACRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYYYPPTFGQGTKVEIKRTGGGSGGGGSGGGASEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFHINGSYIHWVRQAPGKGLKWVAYIDPETGYSRYADSVKGRFAISADMSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRDSASDAM DVWGQGTLVTVSS (서열번호: 69).
일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 EGFR-L858R 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어, scFv) (예를 들어, 항-HLA-A3/EGFR-L858R/C scFv)이다.
일부 경우에서, EGFR-L858R 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 scFv이다:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYSYPPTFGQGTKVEIKRTGGGSGGGGSGGGASEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNITSSYIHWVRQAPGKGLEWVAYISPEDGYARHADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRDDTYYYSA MDVWGQGTLVTVSS (서열번호: 70).
일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원 (예를 들어, 항체, scFv 등)은 전문이 본원에 참조로 인용되는 문헌(참조: Dhanik 외 BMC Bioinformatics (2016) 17:286)에 기재된 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하고, 이는 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 예를 들어, NLRP4 펩타이드 (예를 들어, HLSPIDCEV (서열번호: 71))-MHC 복합체, UMODL1 펩타이드 (예를 들어, LTSMWSPAV (서열번호: 72))-MHC 복합체, NLRP4 펩타이드 (예를 들어, HLDHPHPAV (서열번호: 73))-MHC 복합체, MAGEC2 펩타이드 (예를 들어, SLSVMSSNV (서열번호: 74))-MHC 복합체, NLRP4 펩타이드 (예를 들어, MMAWSDNKI (서열번호: 75))-MHC 복합체, COX7B2 펩타이드 (예를 들어, TQIGIEWNL (서열번호: 76))-MHC 복합체, NLRP4 펩타이드 (예를 들어, CLFEMQDPA (서열번호: 77))-MHC 복합체, UMODL1 펩타이드 (예를 들어, YLSHPSCNV (서열번호: 78))-MHC 복합체, COX7B2 펩타이드 (예를 들어, GIEWNLSPV (서열번호: 79))-MHC 복합체, MAGEA11 펩타이드 (예를 들어, GLGCSPASI (서열번호: 80))-MHC 복합체, RPE65 펩타이드 (예를 들어, RQAFEFPQI (서열번호: 81))-MHC 복합체, NLRP4 펩타이드 (예를 들어, GMWTDTFEF (서열번호: 82))-MHC 복합체, TRIM51 펩타이드 (예를 들어, YLNWQDTAV (서열번호: 83))-MHC 복합체, MAGEA11 펩타이드 (예를 들어, VLWGPITQI (서열번호: 84))-MHC 복합체, NLRP4 펩타이드 (예를 들어, TLDHTGVVV (서열번호: 85))-MHC 복합체, RPE65 펩타이드 (예를 들어, TMGVWLHIA (서열번호: 86))-MHC 복합체, MAGEC2 펩타이드 (예를 들어, KVWVQGHYL (서열번호: 87))-MHC 복합체, UMODL1 펩타이드 (예를 들어, KINCNNFRL (서열번호: 88))-MHC 복합체 등
임의의 적합한 항-펩타이드-MHC 특이적 결합 구성원(예를 들어, 항-펩타이드-MHC 항체)은 본원에 기재된 바와 같은 본원의 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인의 특이적 결합 구성원으로서 유용할 수 있고, 예를 들어, 이는 예를 들어, 하기에 기재된 이들 적합한 에피토프에 대한 항체뿐만 아니라 이들 적합한 항-펩타이드-MHC 결합 구성원 및 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 미국특허 번호:6,042,831; 6,252,052; 6,291,430; 6,602,510; 7,157,091; 7,622,569; 7,632,923; 7,638,124; 7,718,777; 8,119,139; 8,647,629; 8,815,528; 8,961,985; 9,023,348; 9,040,669; 9,074,000; 9,095,533; 9,334,317; 미국특허 출원 공개번호:20070092530; 20090042285; 20090226474; 20090304679; 20100062001; 20100111957; 20100158927; 20100158931; 20110020357; 20110033473; 20110293623; 20110318369; 20120141517; 20120294874; 20130101594; 20140024809; 20140065708; 20140271644; 20140294841; 20140296492; 20140363440; 20150125477; 20150125478; 20150259436; 20150320848; 20150322154; 20150368298; 20160017031; 20160168200; PCT 공개번호:WO2002014870; WO2003068201; WO2005120166; WO2007030451; WO2007143104; WO2008120202; WO2008120203; WO2009108372; WO2009125394; WO2009125395; WO2009138236; WO2010037514; WO2010106431; WO2011062560; WO2012007950; WO2012007951; WO2012017003; WO2012109659; WO2012135854; WO2014011489; WO2014143835; WO2015018805; WO2015063302; WO2015070061; WO2015070078; WO2015090229; WO2015130766; WO2015142675; WO2015169945; WO2015193359; WO2015199617; WO2016102272; 등, 이들은 전문이 본원에 참조로 인용된다.
일부 경우에, 항-펩타이드-MHC 특이적 결합 구성원 (예를 들어, 항-펩타이드-MHC 항체)은 본원에 기재된 바와 같은 본원의 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인의 특이적 결합 구성원으로서 유용할 수 있고, 예를 들어, 이는 예를 들어, 하기 문헌에 기재된 저들 적합한 에피토프에 대한 항체뿐만 아니라 이들 적합한 항-펩타이드-MHC 결합 구성원 및 항체를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다: T Cells Expressing Cars Directed Against HLA-0201 eRmf WT-1 Peptide Complex Can Effectively Eradicate WT1+ A0201+ Tumor Cells in-Vitro. (2014) Biol Blood Marrow Transplant; A novel TCR-like CAR with specificity for PR1/HLA-A2 effectively targets myeloid leukemia in vitro when expressed in human adult peripheral blood 및 cord blood T cells. (2016) Cytotherapy; Functional Comparison of Engineered T Cells Carrying a Native TCR versus TCR-like AntibodyBased Chimeric Antigen Receptors Indicates Affinity/Avidity Thresholds. (2014) Journal of Immunology; Affinity maturation of T-cell receptor-like antibodies for Wilms tumor 1 peptide greatly enhances therapeutic potential. (2015) Leukemia; Construction 및 molecular characterization of a T-cell receptor-like antibody 및 CAR-T cells specific for minor histocompatibility antigen HA-1H. (2014) Gene Therapy; Targeting the Intracellular WT1 Oncogene Product with a Therapeutic Human Antibody. (2013) Science Translational Medicine; A phage display selected Fab fragment with MHC class I-restricted specificity for MAGE-A1 allows for retargeting of primary human T lymphocytes. (2001) Gene Therapy; Therapeutic bispecific T-cell engager antibody targeting the intracellular oncoprotein WT1. (2015) Nature Biotechnology; Generation of MANAbodies specific to HLA-restricted epitopes encoded by somatically mutated genes. (2015) PNAS; Antitumor Activity of a Monoclonal Antibody targeting Major Histocompatibility complex class i-Her2 Peptide complexes. (2013) Journal of the National Cancer Institute; Anti-melanoma activity of T cells redirected with a TCR-like chimeric antigen receptor. (2014) Scientific Reports 등.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 예를 들어, 하기 문헌에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는 T-세포 수용체-유사 항-펩타이드-MHC 항체를 포함할 수 있다: Dahan & Reiter.Expert Rev Mol Med. (2012) 14:e6 및/또는 Cohen & Reiter.Antibodies (2013), 2:517-534, 이는 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨, 이들은 예를 들어, 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: HLA-A2/gp100-154를 표적화하는 클론 G2D12; HLA-A2/gp100-209를 표적화하는 클론 1A7; HLA-A2/gp100-209를 표적화하는 클론 G1; HLA-A2/gp100-280을 표적화하는 클론 2F1; HLA-A2/티로시나제-369를 표적화하는 클론 TA2 ; HLA-A2/MART-1-26을 표적화하는 클론 CAG10, CLA12; HLA-A1/MAGE-A1을 표적화하는 클론 Fab-G8; HLA-A1/MAGE-A1을 표적화하는 클론 Fab-Hyb3; HLA-A2/MAGE3-271을 표적화하는 클론 7D4 ; HLA-A2/p68 RNA 헬리카제-128을 표적화하는 클론 RL6A; HLA-A2/NYESO-1-157을 표적화하는 클론 3M4E5, 3M4F4; HLA-A2/NYESO-1-157을 표적화하는 클론 T1; HLA-A2/TARP-29를 표적화하는 클론 D2; HLA-A2/hCGβ-47을 표적화하는 클론 RL4B, 1B10; HLA-A2/hCGβ-40을 표적화하는 클론 3F9 ; HLA-A2/Her2-369를 표적화하는 클론 1B8 ; HLA-A2/PR1을 표적화하는 클론 8F4; HLA-A2/WT1-db126을 표적화하는 클론 F2; HLA-A2/MUC-1-D6-13을 표적화하는 클론 M3A1, M3B8; HLA-A2/텔로머라제-540을 표적화하는 클론 4A9, 4G9; HLA-A2/텔로머라제-865를 표적화하는 클론 3G3, 3H2; HLA-A2/TAX-11을 표적화하는 클론 T3A4, T3D4, T3E3, T3F2, T3D3, T2H9; HLA-A2/M1-58을 표적화하는 클론 M1-D1, M1-G8, M1-D12, M1-A2; HLA-A2/ENV-183을 표적화하는 클론; HLA-C7/Nef-105를 표적화하는 클론 C3; HLA-A2/eIF4G-720을 표적화하는 클론 4F7; HLA-A24/Nef-138을 표적화하는 클론 scFv#3, scFv#27; HLA-A2/pp65-495를 표적화하는 클론 H9 등.
본원에 기재된 펩타이드-MHC 결합 파트너에 추가로 또는 이를 대신하여, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 일부 경우에 표면 발현된 항원을 표적화할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “표면 발현된 항원”은 일반적으로 적어도 부분적으로 세포외로 발현되어 단백질의 적어도 일부가 세포외부에 노출되도록 하고 결합 파트너와의 결합을 위해 가용한 항원성 단백질을 언급한다. 필수적으로 임의의 표면 발현된 단백질은 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 표적으로 유용할 수 있다. 표면 발현된 항원의 비제한적인 예는 예를 들어, CD19, CD20, CD30, CD38, Her2/neu, ERBB2, CA125, MUC-1, 전립선-특이적 막 항원 (PSMA), CD44 표면 접착 분자, 메소텔린, 카르시노배아 항원 (CEA), 상피 성장 인자 수용체 (EGFR), EGFRvIII, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2 (VEGFR2), 고분자량 흑색종 관련 항원(HMW-MAA), IL-13R-a2, GD2 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 표적화될 수 있는 표면 발현된 항원은 또한 예를 들어, 본원에 기재된 표적화된 암 치료제의 이들 표적을 포함하는 통상적인 암 치료요법에서 특이적으로 표적화된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 암-관련 항원을 표적화할 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 특이적 결합 구성원은 암 관련 항원에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 암 관련 항원의 비제한적인 예는 예를 들어, CD19, CD20, CD38, CD30, Her2/neu, ERBB2, CA125, MUC-1, 전립선-특이적 막 항원 (PSMA), CD44 표면 접착 분자, 메소텔린, 카르시노배아 항원 (CEA), 상피 성장 인자 수용체 (EGFR), EGFRvIII, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2 (VEGFR2), 고분자량의 흑색종 관련 항원 (HMW-MAA), MAGE-A1, IL-13R-a2, GD2 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 암-관련 항원은 또한 예를 들어, 4-1BB, 5T4, 선암종 항원, 알파-페토단백질, BAFF, B-림프종 세포, C242 항원, CA-125, 카보닉 언하이드라제 9 (CA-IX), C-MET, CCR4, CD152, CD19, CD20, CD200, CD22, CD221, CD23 (IgE 수용체), CD28, CD30 (TNFRSF8), CD33, CD4, CD40, CD44 v6, CD51, CD52, CD56, CD74, CD80, CEA, CNTO888, CTLA-4, DRS, EGFR, EpCAM, CD3, FAP, 피브로넥틴 추가 도메인-B, 폴레이트 수용체 1, GD2, GD3 강글리오사이드, 당단백질 75, GPNMB, HER2/neu, HGF, 인간 산란 인자수용체 키나제, IGF-1 수용체, IGF-I, IgG1, L1-CAM, IL-13, IL-6, 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체, 인테그린 α5β1, 인테그린 αvβ3, MORAb-009, MS4A1, MUC1, 뮤신 CanAg, N-글리콜릴뉴라민산, NPC-1C, PDGF-R α, PDL192, 포스파티딜세린, 전립선 암종 세포, RANKL, RON, ROR1, SCH 900105, SDC1, SLAMF7, TAG-72, 테나신 C, TGF 베타 2, TGF-β, TRAIL-R1, TRAIL-R2, 종양 항원 CTAA16.88, VEGF-A, VEGFR-1, VEGFR2, 및 비멘틴을 포함한다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원은 재생 간 3의 포스파타제 (PRL-3, 또한 PTP4A3으로서 공지된)를 표적화하는 항체, 예를 들어, 하기에 기재된 바와 같은 PRL3-주맙의 전부 또는 일부를 표적화할 수 있거나 포함할 수 있다: Thura 외 (JCI Insight.2016; 1(9): e87607); 이는 전문이 본원에 참조로 인용된다.
일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인은 단지 하나의 특이적 결합 구성원을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인은 단일-특이적일 수 있다.
일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인은 예를 들어, 이중특이적을 포함하는 다중-특이적일 수 있다. 일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드의 이중특이적 세포외 도메인은 예를 들어, 이중특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 예를 들어, 본원에 기재된 것들을 포함하는 이중특이적 키메라 결합 구성원 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 이중특이적 세포외 도메인은 예를 들어, 서로 직접 연결되거나 링커를 통해 연결됨을 포함하는, 연결된 2개의 특이적 결합 도메인을 포함할 수 있다.
일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인은 하나 초과의 특이적 결합 구성원을 포함할 수 있고, 이는 2개의 이상의 특이적 결합 구성원을 포함하고, 여기서, 2개 이상의 특이적 결합 구성원은 서로 (직접적으로 또는 간접적으로 예를 들어, 링커의 사용을 통해) 연결될 수 있거나 이들은 각각 키메라 폴리펩타이드의 또 다른 성분에 (직접적으로 또는 간접적으로, 예를 들어, 링커의 사용을 통해) 연결될 수 있다.
다중-특이적 세포외 도메인은 임의의 조합의 결합 파트너를 인지하거나 이에 결합할 수 있고 따라서 예를 들어, 본원에 기재된 이들 결합 파트너 및 표적을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 조합의 표적을 표적화할 수 있다. 따라서, 예를 들어, 이중특이적 세포외 도메인은 2개의 상이한 항원을 표적화할 수 있고, 이는 예를 들어, 2개의 상이한 세포내 항원, 2개의 상이한 세포외(예를 들어, 표면 발현된) 항원 또는 세포내 항원 및 세포외 (예를 들어, 표면 발현된) 항원을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 이중특이적 세포외 도메인은 2개의 특이적 결합 구성원을 포함할 수 있고, 이는 예를 들어, 본원에 기재된 항원을 포함하는 항원에 각각 결합하는 본원에 기재된 2개의 특이적 결합 구성원을 포함하는 2개의 특이적 결합 구성원을 포함할 수 있다.
다중 특이적 세포외 도메인의 특이적 결합 도메인은 각각 이들이 이의 일부인 키메라 폴리펩타이드를 활성화시킬 수 있다. 이중특이적 세포외 도메인의 특이적 결합 도메인은 각각 이들이 이의 일부인 키메라 폴리펩타이드를 활성화시킬 수 있다. 일부 경우에, 다중 특이적 또는 이중특이적 결합 도메인은 예를 들어, 본원에 기재된 회로의 OR-게이트로서 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 분자 회로의 일부로서 유용할 수 있다.
일부 경우에, 특이적 결합 도메인에 의해 결합된 결합 파트너는 야생형 결합 파트너와 비교하여 돌연변이될 수 있다. 일부 경우에, 돌연변이된 결합 파트너를 인지하는 특이적 결합 도메인은 야생형 결합 파트너에 특이적으로 결합할 수 없다. 일부 경우에, 돌연변이된 결합 파트너를 인지하는 특이적 결합 도메인은 돌연변이된 결합 파트너와의 이의 결합 친화성과 비교하여, 보다 낮은 친화성으로 야생형 결합 파트너에 결합할 수 있다.
예를 들어, 본원에 기재된 것들을 포함하는 임의의 결합 파트너는 돌연변이될 수 있거나 돌연변이된 결합 파트너일 수 있다. 따라서, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 돌연변이된 (즉, 비-야생형) 결팝 파트너에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함할 수 있다. 돌연변이된 결합 파트너의 비제한적인 예는 예를 들어, 돌연변이된 항원, 돌연변이된 암 항원, 돌연변이된 자가-항원, 돌연변이된 세포외 항원, 돌연변이된 세포외 암 항원, 돌연변이된 세포외 자가-항원, 돌연변이된 표면 항원, 돌연변이된 표면 암 항원, 돌연변이된 표면 자가-항원, 돌연변이된 항원 펩타이드를 제공하는 펩타이드-MHC 복합체, 돌연변이된 암 항원 펩타이드를 제공하는 펩타이드-MHC 복합체, 돌연변이된 자가-항원 펩타이드를 제공하는 펩타이드-MHC 복합체 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
암은 통상적으로 질환과 관련된 돌연변이된 단백질을 포함한다. 암에서 통상적으로 돌연변이된 유전자는 예를 들어, ABI1, ABL1, ABL2, ACKR3, ACSL3, ACSL6, AFF1, AFF3, AFF4, AKAP9, AKT1, AKT2, ALDH2, ALK, AMER1, APC, ARHGAP26, ARHGEF12, ARID1A, ARID2, ARNT, ASPSCR1, ASXL1, ATF1, ATIC, ATM, ATP1A1, ATP2B3, ATRX, AXIN1, BAP1, BCL10, BCL11A, BCL11B, BCL2, BCL3, BCL6, BCL7A, BCL9, BCOR, BCR, BIRC3, BLM, BMPR1A, BRAF, BRCA1, BRCA2, BRD3, BRD4, BRIP1, BTG1, BUB1B, C15orf65, C2orf44, CACNA1D, CALR, CAMTA1, CANT1, CARD11, CARS, CASC5, CASP8, CBFA2T3, CBFB, CBL, CBLB, CBLC, CCDC6, CCNB1IP1, CCND1, CCND2, CCND3, CCNE1, CD274, CD74, CD79A, CD79B, CDC73, CDH1, CDH11, CDK12, CDK4, CDK6, CDKN2A, CDKN2C, CDX2, CEBPA, CEP89, CHCHD7, CHEK2, CHIC2, CHN1, CIC, CIITA, CLIP1, CLP1, CLTC, CLTCL1, CNBP, CNOT3, CNTRL, COL1A1, COL2A1, COX6C, CREB1, CREB3L1, CREB3L2, CREBBP, CRLF2, CRTC1, CRTC3, CSF3R, CTNNB1, CUX1, CYLD, DAXX, DCTN1, DDB2, DDIT3, DDX10, DDX5, DDX6, DEK, DICER1, DNM2, DNMT3A, EBF1, ECT2L, EGFR, EIF3E, EIF4A2, ELF4, ELK4, ELL, ELN, EML4, EP300, EPS15, ERBB2, ERC1, ERCC2, ERCC3, ERCC4, ERCC5, ERG, ETV1, ETV4, ETV5, ETV6, EWSR1, EXT1, EXT2, EZH2, EZR, FAM46C, FANCA, FANCC, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, FAS, FBXO11, FBXW7, FCGR2B, FCRL4, FEV, FGFR1, FGFR1OP, FGFR2, FGFR3, FH, FHIT, FIP1L1, FLCN, FLI1, FLT3, FNBP1, FOXA1, FOXL2, FOXO1, FOXO3, FOXO4, FOXP1, FSTL3, FUBP1, FUS, GAS7, GATA1, GATA2, GATA3, GMPS, GNA11, GNAQ, GNAS, GOLGA5, GOPC, GPC3, GPHN, H3F3A, H3F3B, HERPUD1, HEY1, HIP1, HIST1H4I, HLA-A, HLF, HMGA1, HMGA2, HNF1A, HNRNPA2B1, HOOK3, HOXA11, HOXA13, HOXA9, HOXC11, HOXC13, HOXD11, HOXD13, HRAS, HSP90AA1, HSP90AB1, IDH1, IDH2, IKZF1, IL2, IL21R, IL6ST, IL7R, IRF4, ITK, JAK1, JAK2, JAK3, JAZF1, JUN, KAT6A, KAT6B, KCNJ5, KDM5A, KDM5C, KDM6A, KDR, KDSR, KIAA1549, KIAA1598, KIF5B, KIT, KLF4, KLF6, KLK2, KMT2A, KMT2C, KMT2D, KRAS, KTN1, LASP1, LCK, LCP1, LHFP, LIFR, LMNA, LMO1, LMO2, LPP, LRIG3, LSM14A, LYL1, MAF, MAFB, MALT1, MAML2, MAP2K1, MAP2K2, MAP2K4, MAX, MDM2, MDM4, MECOM, MED12, MEN1, MET, MITF, MKL1, MLF1, MLH1, MLLT1, MLLT10, MLLT11, MLLT3, MLLT4, MLLT6, MN1, MNX1, MPL, MSH2, MSH6, MSI2, MSN, MTCP1, MUC1, MUTYH, MYB, MYC, MYCL, MYCN, MYD88, MYH11, MYH9, MYO5A, NAB2, NACA, NBN, NCKIPSD, NCOA1, NCOA2, NCOA4, NDRG1, NF1, NF2, NFATC2, NFE2L2, NFIB, NFKB2, NIN, NKX2-1, NONO, NOTCH1, NOTCH2, NPM1, NR4A3, NRAS, NRG1, NSD1, NT5C2, NTRK1, NTRK3, NUMA1, NUP214, NUP98, NUTM1, NUTM2A, NUTM2B, OLIG2, OMD, P2RY8, PAFAH1B2, PALB2, PATZ1, PAX3, PAX5, PAX7, PAX8, PBRM1, PBX1, PCM1, PCSK7, PDCD1LG2, PDE4DIP, PDGFB, PDGFRA, PDGFRB, PER1, PHF6, PHOX2B, PICALM, PIK3CA, PIK3R1, PIM1, PLAG1, PLCG1, PML, PMS1, PMS2, POT1, POU2AF1, POU5F1, PPARG, PPFIBP1, PPP2R1A, PRCC, PRDM1, PRDM16, PRF1, PRKAR1A, PRRX1, PSIP1, PTCH1, PTEN, PTPN11, PTPRB, PTPRC, PTPRK, PWWP2A, RABEP1, RAC1, RAD21, RAD51B, RAF1, RALGDS, RANBP17, RAP1GDS1, RARA, RB1, RBM15, RECQL4, REL, RET, RHOH, RMI2, RNF213, RNF43, ROS1, RPL10, RPL22, RPL5, RPN1, RSPO2, RSPO3, RUNX1, RUNX1T1, SBDS, SDC4, SDHAF2, SDHB, SDHC, SDHD, SEPT5, SEPT6, SEPT9, SET, SETBP1, SETD2, SF3B1, SFPQ, SH2B3, SH3GL1, SLC34A2, SLC45A3, SMAD4, SMARCA4, SMARCB1, SMARCE1, SMO, SOCS1, SOX2, SPECC1, SRGAP3, SRSF2, SRSF3, SS18, SS18L1, SSX1, SSX2, SSX2B, SSX4, SSX4B, STAG2, STAT3, STAT5B, STAT6, STIL, STK11, SUFU, SUZ12, SYK, TAF15, TAL1, TAL2, TBL1XR1, TCEA1, TCF12, TCF3, TCF7L2, TCL1A, TERT, TET1, TET2, TFE3, TFEB, TFG, TFPT, TFRC, THRAP3, TLX1, TLX3, TMPRSS2, TNFAIP3, TNFRSF14, TNFRSF17, TOP1, TP53, TPM3, TPM4, TPR, TRAF7, TRIM24, TRIM27, TRIM33, TRIP11, TRRAP, TSC1, TSC2, TSHR, TTL, U2AF1, UBR5, USP6, VHL, VTI1A, WAS, WHSC1, WHSC1L1, WIF1, WRN, WT1, WWTR1, XPA, XPC, XPO1, YWHAE, ZBTB16, ZCCHC8, ZMYM2, ZNF331, ZNF384, ZNF521 및 ZRSR2를 포함한다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원은 예를 들어 상기된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 암에서 통상적으로 돌연변이된 유전자의 돌연변이된 버전에 결합한다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원은 예를 들어 상기된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 암에서 통상적으로 돌연변이된 유전자의 돌연변이된 버전으로부터 유래하는 돌연변이된 암 항원 펩타이드를 제공하는 펩타이드-MHC 복합체에 결합한다. 일부 경우에, 특이적 결합 구성원은 돌연변이체 KRAS 펩타이드를 제공하는 펩타이드-MHC 복합체에 결합한다.
일부 경우에, 결합 파트너/특이적 결합 구성원 쌍은 직교화될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, “직교화된”이란 이들의 본래의 또는 야생형으로부터 변형되어 상기 직교 쌍이 서로 특이적으로 결합하지만 상기 쌍의 비-변형된 또는 야생형 성분들에 특이적으로 또는 실질적으로 결합하지 않도록 하는 것을 의미한다. 임의의 결합 파트너/특이적 결합 쌍은 직교화될 수 있고, 이는 예를 들어, 본원에 기재된 이들 결합 파트너/특이적 결합 쌍을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에 기재된 키메라 폴리펩타이드 및 방법 및 회로에 사용하기 위해 채택될 수 있는 특정 세포외 도메인 및 이의 성분은 예를 들어, PCT 출원 번호 US2016/019188에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다(공개번호 제 WO 2016/138034호), 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
노치 수용체 폴리펩타이드
상기된 바와 같이, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 노치 수용체 폴리펩타이드를 포함한다. 본원의 키메라 폴리펩타이드의 노치 수용체 폴리펩타이드는 다양하고 약 50개 아미노산 이하 내지 약 1000개 이상의 아미노산 길이의 범위이고 일반적으로 하나 이상의 리간드-유도성 단백질용해 절단 부위를 포함한다. 노치 수용체 폴리펩타이드는 노치 조절 영역 또는 이의 변형된 형태를 함유하는 합성 수용체를 포함한다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 50개 아미노산 (aa) 내지 1000개 aa, 예를 들어, 50개 aa 내지 75개 aa, 75개 aa 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 150개 aa, 150개 aa 내지 200개 aa, 200개 aa 내지 250개 aa, 250개 aa 내지 300개 aa, 300개 aa 내지 350개 aa, 350개 aa 내지 400개 aa, 400개 aa 내지 450개 aa, 450개 aa 내지 500개 aa, 500개 aa 내지 550개 aa, 550개 aa 내지 600개 aa, 600개 aa 내지 650개 aa, 650개 aa 내지 700개 aa, 700개 aa 내지 750개 aa, 750개 aa 내지 800개 aa, 800개 aa 내지 850개 aa, 850개 aa 내지 900개 aa 또는 950개 aa 내지 1000개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 300개 aa 내지 400개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 300개 aa 내지 350개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 300개 aa 내지 325개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 350개 aa 내지 400개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 750개 aa 내지 850개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 50개 aa 내지 75개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 310개 aa 내지 320개 aa, 예를 들어, 310개 aa, 311개 aa, 312개 aa, 313개 aa, 314개 aa, 315개 aa, 316개 aa, 317개 aa, 318개 aa, 319개 aa, 또는 320개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 315개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 360개 aa 내지 370개 aa, 예를 들어, 360개 aa, 361개 aa, 362개 aa, 363개 aa, 364개 aa, 365개 aa, 366개 aa, 367개 aa, 368개 aa, 369개 aa, 또는 370개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 367개 aa의 길이를 갖는다.
일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 예를 들어, 하기의 서열번호: 중 하나를 포함하는 노치 수용체의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다: 1, 2 및 5-15.일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드의 노치 조절 영역은 포유동물 노치 조절 영역이고, 이는 예를 들어, 마우스 노치 (예를 들어, 마우스 노치1, 마우스 노치2, 마우스 노치3 또는 마우스 노치4) 조절 영역, 래트 노치 조절 영역 (예를 들어, 래트 노치1, 래트 노치2 또는 래트 노치3), 인간 노치 조절 영역 (예를 들어, 인간 노치1, 인간 노치2, 인간 노치3 또는 인간 노치4) 등 또는 포유동물 노치 조절 영역으로부터 유래되고, 예를 들어, 하기 서열번호: 중 하나를 포함하는 포유동물 노치 수용체 아미노산 서열의 포유동물 노치 조절 영역의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 노치 조절 영역을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 1, 2 및 5-15.
본원의 노치 조절 영역은 이의 다양한 성분들 (예를 들어, 도메인. 절단 부위 등)을 포함할 수 있거나 배제할 수 있다. 적절하게 전체 또는 부분적으로 존재할 수 있거나 부재일 수 있는 노치 조절 영역의 상기 성분들의 예는 예를 들어, 하나 이상의 EGF-유사 반복 도메인, 하나 이상의 Lin12/노치 반복 도메인, 하나 이상의 헤테로이량체화 도메인 (예를 들어, HD-N 또는 HD-C), 막관통 도메인, 하나 이상의 단백질용해 절단 부위 (예를 들어, 푸린 유사 프로테아제 부위 (예를 들어, S1 부위), ADAM-패밀리 프로테아제 부위 (예를 들어, S2 부위) 및/또는 감마-세크레타제 부위 (예를 들어, S3 부위) 등을 포함한다. 노치 수용체 폴리펩타이드는 일부 경우에 예를 들어, 델타-결합 도메인과 같은 노치-리간드 결합 도메인을 포함하는, 하나 이상의 노치 세포외 도메인 전부 또는 일부를 배제할 수 있다. 노치 수용체 폴리펩타이드는 일부 경우에 예를 들어, 델타-결합 도메인과 같은 노치-리간드 결합 도메인을 포함하는, 하나 이상의 노치 세포외 도메인의 하나 이상의 비기능성 버전을 포함할 수 있다. 노치 수용체 폴리펩타이드는 일부 경우에 하나 이상의 노치 세포내 도메인의 전부 또는 일부를 배제할 수 있고, 이는 예를 들어, 노치 Rbp-관련 분자 도메인(즉, RAM 도메인), 노치 앙키린 반복 도메인, 노치 트랜스활성화 도메인, 노치 PEST 도메인 등을 포함한다. 노치 수용체 폴리펩타이드는 일부 경우에 하나 이상의 노치 세포내 도메인의 하나 이상의 비기능성 버전을 포함하고 이는 예를 들어, 비기능성 노치 Rbp-관련 분자 도메인 (즉, RAM 도메인), 비기능성 노치 앙키린 반복 도메인, 비기능성 노치 트랜스활성화 도메인, 비기능성 노치 PEST 도메인 등을 포함한다.
TM 도메인을 포함하는 노치 수용체 폴리펩타이드
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다: IPYKIEAVKSEPVEPPLPSQLHLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLSRKRRRQLCIQKL (서열번호: 89); 여기서, 상기 TM 도메인은 밑줄쳐져 있고; 여기서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 S2 단백질용해 절단 부위 및 S3 단백질용해 절단 부위를 포함하고; 여기서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 50개 아미노산 (aa) 내지 65개 aa, 예를 들어, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 또는 65개 aa의 길이를 갖는다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다: IPYKIEAVKSEPVEPPLPSQLHLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLSRKRRRQLCIQKL (서열번호: 89); 여기서, 상기 TM 도메인은 밑줄쳐져 있고; 여기서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 S2 단백질용해 절단 부위 및 S3 단백질용해 절단 부위를 포함하고; 여기서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 56개 아미노산의 길이를 갖는다.
LNR 분절, HD-N 분절, HD-C 분절 및 TM 도메인을 포함하는 노치 수용체 폴리펩타이드
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) LNR-A 분절; ii) LNR-B 분절; iii) LNR-C 분절; iv) HD-N 분절, v) HD-C 분절; 및 vi) TM 도메인.LNR-A 분절, LNR-B 분절, 및 LNR-C 분절은 총체적으로 “LNR 분절”로서 언급될 수 있다. 상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 30a에 도식적으로 도시한다.
LNR 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1442-1562와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 90개 아미노산 내지 150개 아미노산, 예를 들어, 90개 아미노산 (aa) 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 110개 aa, 110개 aa 내지 120개 aa, 120개 aa 내지 130개 aa, 130개 aa 내지 140개 aa, 또는 140개 aa 내지 150개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, LNR 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1442-1562와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 115개 aa 내지 125개 aa, 예를 들어, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 125개 aa의 길이를 갖는다.
LNR 분절은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: PPQIEEACELPECQVDAGNKVCNLQCNNHACGWDGGDCSLNFNDPWKNCTQSLQCWKYFSDGHCDSQCNSAGCLFDGFDCQLTEGQCNPLYDQYCKDHFSDGHCDQGCNSAECEWDGLDC (서열번호: 90); 및 118 내지 122개 아미노산 (예를 들어, 118, 119, 120, 121, 또는 122개 아미노산)의 길이를 가질 수 있다.
HD-N 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1563-1664와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 90개 아미노산(aa) 내지 110개 aa, 예를 들어, 90개 aa 내지 95개 aa, 95개 aa 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 105개 aa, 또는 105개 aa 내지 110개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, HD-N 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1563-1664와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 95개 aa 내지 105개 aa, 예를 들어, 95, 96, 98, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 또는 105개 aa의 길이를 갖는다.
HD-C 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665-1733과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 60개 아미노산(aa) 내지 80개 aa, 예를 들어, 60개 aa 내지 65개 aa, 65개 aa 내지 70개 aa, 70개 aa 내지 75개 aa, 또는 75개 aa 내지 80개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, HD-C 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665-1733과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 65개 아미노산 내지 75개 아미노산, 예를 들어, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 또는 75개 아미노산의 길이를 갖는다.
HD 분절 (HD-N + HD-C)은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: AAGTLVLVVLLPPDQLRNNSFHFLRELSHVLHTNVVFKRDAQGQQMIFPYYGHEEELRKHPIKRSTVGWATSSLLPGTSGGRQRRELDPMDIRGSIVYLEIDNRQCVQSSSQCFQSATDVAAFLGALASLGSLNIPYKIEAVKSEPVEPPLP (서열번호: 91); 및 150, 151, 152, 153, 또는 154개 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
막관통 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1736 내지 1756과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 15개 아미노산(aa) 내지 25개 아미노산, 예를 들어, 15, 16, 17, 18, 29, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
막관통 분절은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: HLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLS (서열번호: 92); 및 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 가질 수 있다.
일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 약 310개 아미노산 (aa) 내지 약 320개 aa (예를 들어, 310개 aa, 311개 aa, 312개 aa, 313개 aa, 314개 aa, 315개 aa, 316개 aa, 317개 aa, 318개 aa, 319개 aa, 또는 320개 aa)의 길이를 갖고, 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1442-1756과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시한다)을 포함한다.
일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 하기의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다: PPQIEEACELPECQVDAGNKVCNLQCNNHACGWDGGDCSLNFNDPWKNCTQSLQCWKYFSDGHCDSQCNSAGCLFDGFDCQLTEGQCNPLYDQYCKDHFSDGHCDQGCNSAECEWDGLDCAEHVPERLAAGTLVLVVLLPPDQLRNNSFHFLRELSHVLHTNVVFKRDAQGQQMIFPYYGHEEELRKHPIKRSTVGWATSSLLPGTSGGRQRRELDPMDIRGSIVYLEIDNRQCVQSSSQCFQSATDVAAFLGALASLGSLNIPYKIEAVKSEPVEPPLPSQLHLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLS (서열번호: 93); 및 300개 아미노산 내지 310개 아미노산(예를 들어, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 또는 310개 아미노산)의 길이를 갖는다.
일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 하기의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다: PCVGSNPCYNQGTCEPTSENPFYRCLCPAKFNGLLCHILDYSFTGGAGRDIPPPQIEEACELPECQVDAGNKVCNLQCNNHACGWDGGDCSLNFNDPWKNCTQSLQCWKYFSDGHCDSQCNSAGCLFDGFDCQLTEGQCNPLYDQYCKDHFSDGHCDQGCNSAECEWDGLDCAEHVPERLAAGTLVLVVLLPPDQLRNNSFHFLRELSHVLHTNVVFKRDAQGQQMIFPYYGHEEELRKHPIKRSTVGWATSSLLPGTSGGRQRRELDPMDIRGSIVYLEIDNRQCVQSSSQCFQSATDVAAFLGALASLGSLNIPYKIEAVKSEPVEPPLPSQLHLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLS (서열번호: 94); 및 350개 아미노산 내지 370개 아미노산(예를 들어, 350 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 또는 370개 아미노산)의 길이를 갖는다.
단일 EGF 반복체, LNR 분절, HD-N 분절, HD-C 분절 및 TM 도메인을 포함하는 노치 수용체 폴리펩타이드
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 단일 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 30b에 도식적으로 도시한다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1390 내지 1430과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 35개 아미노산(aa) 내지 45개 aa(예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 또는 45개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: PCVGSNPCYNQGTCEPTSENPFYRCLCPAKFNGLLCH (서열번호: 95); 및 35개 아미노산 내지 40개 아미노산 (예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 아미노산)의 길이를 가질 수 있다.
LNR 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1442-1562와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 90개 아미노산 내지 150개 아미노산, 예를 들어, 90개 아미노산 (aa) 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 110개 aa, 110개 aa 내지 120개 aa, 120개 aa 내지 130개 aa, 130개 aa 내지 140개 aa, 또는 140개 aa 내지 150개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, LNR 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1442-1562와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 115개 aa 내지 125개 aa, 예를 들어, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 125개 aa의 길이를 갖는다.
LNR 분절은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: PPQIEEACELPECQVDAGNKVCNLQCNNHACGWDGGDCSLNFNDPWKNCTQSLQCWKYFSDGHCDSQCNSAGCLFDGFDCQLTEGQCNPLYDQYCKDHFSDGHCDQGCNSAECEWDGLDC (서열번호: 90); 및 118 내지 122개 아미노산 (예를 들어, 118, 119, 120, 121, 또는 122개 아미노산)의 길이를 가질 수 있다.
HD-N 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1563-1664와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 90개 아미노산(aa) 내지 110개 aa, 예를 들어, 90개 aa 내지 95개 aa, 95개 aa 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 105개 aa, 또는 105개 aa 내지 110개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, HD-N 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1563-1664와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 95개 aa 내지 105개 aa, 예를 들어, 95, 96, 98, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 또는 105개 aa의 길이를 갖는다.
HD-C 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665-1733과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 60개 아미노산(aa) 내지 80개 aa, 예를 들어, 60개 aa 내지 65개 aa, 65개 aa 내지 70개 aa, 70개 aa 내지 75개 aa, 또는 75개 aa 내지 80개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, HD-C 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665-1733과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 65개 아미노산 내지 75개 아미노산, 예를 들어, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 또는 75개 아미노산의 길이를 갖는다.
HD 분절 (HD-N + HD-C)은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: AAGTLVLVVLLPPDQLRNNSFHFLRELSHVLHTNVVFKRDAQGQQMIFPYYGHEEELRKHPIKRSTVGWATSSLLPGTSGGRQRRELDPMDIRGSIVYLEIDNRQCVQSSSQCFQSATDVAAFLGALASLGSLNIPYKIEAVKSEPVEPPLP (서열번호: 91); 및 150, 151, 152, 153, 또는 154개 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
막관통 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1736 내지 1756과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 15개 아미노산(aa) 내지 25개 아미노산, 예를 들어, 15, 16, 17, 18, 29, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
막관통 분절은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: HLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLS (서열번호: 92); 및 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 가질 수 있다.
일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 약 360개 아미노산 (aa) 내지 약 375개 aa (예를 들어, 360개 aa, 361개 aa, 362개 aa, 363개 aa, 364개 aa, 365개 aa, 366개 aa, 367개 aa, 368개 aa, 369개 aa, 또는 370개 aa, 371개 aa, 372개 aa, 373개 aa, 374개 aa 또는 375개 aa)의 길이를 갖고, 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1390-1756과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시한다)을 포함한다.
일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 합성 링커를 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 합성 링커; ii) EGF 반복체; iii) LNR 분절; iv) HD-N 분절, v) HD-C 분절; 및 vi) TM 도메인.상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 30c에 도식적으로 도시한다.
합성 링커는 약 10개 아미노산 (aa) 내지 약 200개 aa, 예를 들어, 10개 aa 내지 25개 aa, 25개 aa 내지 50개 aa, 50개 aa 내지 75개 aa, 75개 aa 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 125개 aa, 125개 aa 내지 150개 aa, 150개 aa 내지 175개 aa 또는 175개 aa 내지 200개 aa의 길이를 가질 수 있다. 합성 링커는 10개 aa 내지 30개 aa, 예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 aa의 길이를 가질 수 있다. 합성 링커는 30개 aa 내지 50개 aa, 예를 들어, 30개 aa 내지 35개 aa, 35개 aa 내지 40개 aa, 40개 aa 내지 45개 aa, 또는 45개 aa 내지 50개 aa의 길이를 가질 수 있다.
일부 경우에, 본원에 기재된 바와 같은 합성 링커는 세포외 단백질 구조적 도메인 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 합성 링커로서 사용하기 위해 적합한 세포외 단백질 구조적 도메인은 예를 들어, Ig-유사 세포외 구조적 도메인, Fc 세포외 구조적 도메인, 피브로넥틴 세포외 구조적 도메인 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 합성 링커는 다수의 세포외 단백질 구조적 도메인을 포함할 수 있고, 여기서, 상기 다수의 도메인은 다수의 동일한 도메인 또는 다수의 상이한 도메인을 포함할 수 있다.
2-11 EGF 반복체, LNR 분절, HD-N 분절, HD-C 분절 및 TM 도메인을 포함하는 노치 수용체 폴리펩타이드
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 2 내지 11개 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 30d에 도식적으로 도시한다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 2개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 3개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 4개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 5개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 6개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 7개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 8개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 9개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 10개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 11개의 EGF 반복체; ii) LNR 분절; iii) HD-N 분절; iv) HD-C 분절, 및 v) TM 도메인을 포함한다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1390 내지 1430과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 35개 아미노산(aa) 내지 45개 aa(예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 또는 45개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 869-905(dinecvlspcrhgascqnthggyrchcqagysgrnce; 서열번호: 96)와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산(aa)(예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 907-943(diddcrpnpchnggsctdgintafcdclpgfrgtfce; 서열번호: 97)과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산(aa)(예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 945-981(dinecasdpcrnganctdcvdsytctcpagfsgihce; 서열번호: 98)과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산(aa)(예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 988-1019(tesscfnggtcvdginsftclcppgftgsycq; 서열번호: 99)와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 30개 아미노산 내지 약 35개 아미노산(aa)(예를 들어, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1021-1057(dvnecdsqpclhggtcqdgcgsyrctcpqgytgpncq; 서열번호: 100)과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산(aa)(예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1064-1090(dsspcknggkcwqthtqyrcecpsgwt; 서열번호: 101)과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 25개 아미노산 내지 약 30개 아미노산(aa)(예를 들어, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1146-1180(lvdecspspcqngatctdylggysckcvagyhgvnc; 서열번호: 102)과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산(aa)(예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1184-1219(ideclshpcqnggtcldlpntykcscprgtqgvhce; 서열번호: 103)와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산(aa)(예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1238-1265(cfnngtcvdqvggysctcppgfvgerce; 서열번호: 104)와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 25개 아미노산 내지 약 30개 아미노산(aa)(예를 들어, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 아미노산 서열 1267-1305 (dvneclsnpcdargtqncvqrvndfhcecraghtgrrce; (서열번호: 와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: 도 31a아미노산 서열의 105), 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절(여기서, 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다); 및 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산 (aa) (예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 aa)의 길이를 가질 수 있다.
EGF 반복체는 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: PCVGSNPCYNQGTCEPTSENPFYRCLCPAKFNGLLCH (서열번호: 95); 및 35개 아미노산 내지 40개 아미노산 (예를 들어, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개 아미노산)의 길이를 가질 수 있다.
LNR 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1442-1562와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 90개 아미노산 내지 150개 아미노산, 예를 들어, 90개 아미노산 (aa) 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 110개 aa, 110개 aa 내지 120개 aa, 120개 aa 내지 130개 aa, 130개 aa 내지 140개 aa, 또는 140개 aa 내지 150개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, LNR 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1442-1562와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 115개 aa 내지 125개 aa, 예를 들어, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 125개 aa의 길이를 갖는다.
LNR 분절은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: PPQIEEACELPECQVDAGNKVCNLQCNNHACGWDGGDCSLNFNDPWKNCTQSLQCWKYFSDGHCDSQCNSAGCLFDGFDCQLTEGQCNPLYDQYCKDHFSDGHCDQGCNSAECEWDGLDC (서열번호: 90); 및 118 내지 122개 아미노산 (예를 들어, 118, 119, 120, 121, 또는 122개 아미노산)의 길이를 가질 수 있다.
HD-N 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1563-1664와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 90개 아미노산(aa) 내지 110개 aa, 예를 들어, 90개 aa 내지 95개 aa, 95개 aa 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 105개 aa, 또는 105개 aa 내지 110개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, HD-N 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1563-1664와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 95개 aa 내지 105개 aa, 예를 들어, 95, 96, 98, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 또는 105개 aa의 길이를 갖는다.
HD-C 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665-1733과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 60개 아미노산(aa) 내지 80개 aa, 예를 들어, 60개 aa 내지 65개 aa, 65개 aa 내지 70개 aa, 70개 aa 내지 75개 aa, 또는 75개 aa 내지 80개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, HD-C 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665-1733과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 65개 아미노산 내지 75개 아미노산, 예를 들어, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 또는 75개 아미노산의 길이를 갖는다.
HD 분절 (HD-N + HD-C)은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: AAGTLVLVVLLPPDQLRNNSFHFLRELSHVLHTNVVFKRDAQGQQMIFPYYGHEEELRKHPIKRSTVGWATSSLLPGTSGGRQRRELDPMDIRGSIVYLEIDNRQCVQSSSQCFQSATDVAAFLGALASLGSLNIPYKIEAVKSEPVEPPLP (서열번호: 91); 및 150, 151, 152, 153, 또는 154개 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
막관통 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1736 내지 1756과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 15개 아미노산(aa) 내지 25개 아미노산, 예를 들어, 15, 16, 17, 18, 29, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
막관통 분절은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: HLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLS (서열번호: 92); 및 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 가질 수 있다.
일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 약 490개 아미노산 (aa) 내지 약 900개 aa의 길이를 갖고 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 i) 아미노산 1267-1756; ii) 1238-1756; iii) 1184-1756; iv) 1146-1756; v) 1064-1756; vi) 1021-1756; vii) 988-1756; viii) 945-1756; ix) 907-1756; 또는 x) 869-1756과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절을 포함하고, 여기서, 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다.
일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 합성 링커를 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 다음을 포함한다: i) 2 내지 11개 EGF 합성 링커; ii) 합성 링커; iii) LNR 분절; iv) HD-N 분절, v) HD-C 분절; 및 vi) TM 도메인.상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 30e에 도식적으로 도시한다.
합성 링커는 약 10개 아미노산 (aa) 내지 약 200개 aa, 예를 들어, 10개 aa 내지 25개 aa, 25개 aa 내지 50개 aa, 50개 aa 내지 75개 aa, 75개 aa 내지 100개 aa, 100개 aa 내지 125개 aa, 125개 aa 내지 150개 aa, 150개 aa 내지 175개 aa 또는 175개 aa 내지 200개 aa의 길이를 가질 수 있다. 합성 링커는 10개 aa 내지 30개 aa, 예를 들어, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 aa의 길이를 가질 수 있다. 합성 링커는 30개 aa 내지 50개 aa, 예를 들어, 30개 aa 내지 35개 aa, 35개 aa 내지 40개 aa, 40개 aa 내지 45개 aa, 또는 45개 aa 내지 50개 aa의 길이를 가질 수 있다.
HD-C 분절 및 TM 도메인을 포함하는 노치 수용체 폴리펩타이드
일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 N-말단에서 C-말단으로의 순서로 i) HD-C 분절; 및 ii) TM 도메인을 포함하고, 여기서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 LNR 분절을 포함하지 않는다. 일부 경우에, LNR 분절은 이종성 폴리펩타이드로 대체된다. 상기 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 30f에 도식적으로 도시한다.
HD-C 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665-1733과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 60개 아미노산(aa) 내지 80개 aa, 예를 들어, 60개 aa 내지 65개 aa, 65개 aa 내지 70개 aa, 70개 aa 내지 75개 aa, 또는 75개 aa 내지 80개 aa의 길이를 가질 수 있다. 일부 경우에, HD-C 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665-1733과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 65개 아미노산 내지 75개 아미노산, 예를 들어, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 또는 75개 아미노산의 길이를 갖는다.
막관통 분절은 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1736 내지 1756과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 15개 아미노산(aa) 내지 25개 아미노산, 예를 들어, 15, 16, 17, 18, 29, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산의 길이를 가질 수 있다.
막관통 분절은 하기의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다: HLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLS (서열번호: 92); 및 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 가질 수 있다.
일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665 내지 1756과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함할 수 있고; 85개 아미노산 aa 내지 95개 aa(예를 들어, 85, 86, 98, 98, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 또는 95개 aa)의 길이를 갖는다.
일부 경우에, 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 31a에 도시된 아미노산 서열의 아미노산 1665 내지 1756과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 또 다른 노치 수용체 폴리펩타이드의 상응하는 분절 (여기서, 상기 상응하는 분절의 예는 도 31b-31g에 도시되어 있다)을 포함하고; 노치 수용체 폴리펩타이드의 N-말단에서 인-프레임으로 융합된 이종성 폴리펩타이드를 포함한다.
단백질용해 절단 부위
상기 주지된 바와 같이, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 예를 들어, 50개 아미노산 내지 1000개 아미노산의 길이를 갖고 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 갖는, 노치 수용체 폴리펩타이드를 포함한다.
일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 단지 하나의 단백질용해 절단 부위를 포함한다. 일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 2개의 단백질용해 절단 부위를 포함한다. 일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 3개의 단백질용해 절단 부위를 포함한다. 단순하게 하기 위해, 절단 부위는 본원에서 “S1,” “S2,” 및 “S3” 단백질용해 절단 부위로서 언급될 것이다.
일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 S1 단백질용해 절단 부위를 포함한다. S1 단백질용해 절단 부위는 HD-N 분절과 HD-C 분절 사이에 위치할 수 있다. 일부 경우에, S1 단백질용해 절단 부위는 푸린-유사 프로테아제 절단 부위이다. 푸린-유사 프로테아제 절단 부위는 캐노니컬 서열 Arg-X-(Arg/Lys)-Arg (서열번호: 130)을 가질 수 있고, 여기서, X는 임의의 아미노산이고; 상기 프로테아제는 캐노니컬 서열에 바로 인접한 C-말단을 절단한다. 예를 들어, 일부 경우에, S1 단백질용해 절단 부위를 포함하는 아미노산 서열은 아미노산 서열 GRRRRELDPM (서열번호: 106)을 가질 수 있고, 여기서, 절단은 “RE” 서열 사이에서 일어난다. 또 다른 예로서, S1 단백질용해 절단 부위를 포함하는 아미노산 서열은 아미노산 서열 RQRRELDPM(서열번호: 107)을 가질 수 있고, 여기서, 절단은 “RE” 서열 사이에서 일어난다.
일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 S2 단백질용해 절단 부위를 포함한다. S2 단백질용해 절단 부위는 HD-C 분절 내에 위치할 수 있다. 일부 경우에, S2 단백질용해 절단 부위는 예를 들어, ADAM-17-유형 프로테아제 절단 부위와 같은 ADAM 패밀리 유형 프로테아제 절단 부위이다. ADAM-17-유형의 프로테아제 절단 부위는 Ala-Val 디펩타이드 서열을 포함할 수 있고, 여기서, 상기 효소는 Ala와 Val 사이를 절단한다. 예를 들어, 일부 경우에, S2 단백질용해 절단 부위를 포함하는 아미노산 서열은 아미노산 서열 KIEAVKSE (서열번호: 108)를 가질 수 있고, 여기서, 절단은 “AV” 서열 사이에서 일어난다. 또 다른 예로서, S2 단백질용해 절단 부위를 포함하는 아미노산 서열은 아미노산 서열 KIEAVQSE(서열번호: 109)를 가질 수 있고, 여기서, 절단은 “AV” 서열 사이에서 일어난다.
일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 S3 단백질용해 절단 부위를 포함한다. S3 단백질용해 절단 부위는 TM 도메인 내에 위치할 수 있다. 일부 경우에, S3 단백질용해 절단 부위는 감마-세크레타제 (γ-세크레타제) 절단 부위이다. γ -세크레타제 절단 부위는 Gly-Val 디펩타이드 서열을 포함할 수 있고, 여기서, 상기 효소는 Gly와 Val 사이를 절단한다. 예를 들어, 일부 경우에, S3 단백질용해 절단 부위는 아미노산 서열은 아미노산 서열 VGCGVLLS (서열번호: 110)를 갖고, 여기서, 절단은 “GV” 서열 사이에서 일어난다. 일부 경우에서, S3 단백질용해 절단 부위는 아미노산 서열 GCGVLLS (서열번호: 111)를 포함한다.
일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 S1 단백질용해 절단 부위가 없다. 일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 S2 단백질용해 절단 부위가 없다. 일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 S3 단백질용해 절단 부위가 없다. 일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 S1 단백질용해 절단 부위와 S2 단백질용해 절단 부위 둘 다가 없다. 일부 경우에서, 노치 수용체 폴리펩타이드는 S3 단백질용해 절단 부위를 포함하고; S1 단백질용해 절단 부위와 S2 단백질용해 절단 부위 둘 다가 없다. 이의 예는 도 30g에 도식적으로 도시한다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 노치 수용체 폴리펩타이드는 도 32a-32b의 노치 수용체 폴리펩타이드일 수 있거나 도 32a-32b에 존재하는 노치 수용체 폴리펩타이드의 전부를 포함하거나 전혀 포함하지 않거나 보다 많은 부분을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 키메라 폴리펩타이드 및 방법 및 회로에 사용하기 위해 채택될 수 있는 특정 노치 수용체 폴리펩타이드 및 이의 성분은 예를 들어, PCT 출원 번호 US2016/019188에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다(공개번호 제 WO 2016/138034호), 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
세포내 도메인
상기 주지된 바와 같이, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 키메라 폴리펩타이드의 세포외 특이적 결합 구성원의 결합 파트너로의 결합 후 방출되는 세포내 도메인을 포함하고, 여기서, 그러한 결합은 상기 언급된 단백질용해 절단 부위의 절단을 유도한다.
세포내 도메인은 노치 수용체 폴리펩타이드에 이종성인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 말로, 세포내 도메인은 노치 수용체 폴리펩타이드에 천연적으로 존재하지 않는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 경우에서, 키메라 폴리펩타이드로부터 방출되는 경우 세포내 도메인은 세포내에서 전사 반응을 유도하거나 다르게는 전사를 조절한다. 예를 들어, 일부 경우에서, 세포내 도메인은 세포 내 전사를 활성화시키고 따라서 전사 활성화인자로서 작용하고 전사 활성화 도메인을 함유할 수 있다.
세포내 도메인은 필수적으로 발현된 펩타이드 또는 단백질에 기인할 수 있는 임의의 이펙터 기능을 제공할 수 있고, 여기서, 그러한 이펙터 기능은 예를 들어, 세포에 의한 하나 이상의 사이토킨의 증가된 생성; 세포에 의한 호르몬의 증가되거나 감소된 생성; 세포에 의한 항체의 생성; 기관 활성에서의 변화; 세포 내 폴리펩타이드의 트래픽킹에서의 변화; 표적 유전자의 전사에서의 변화; 단백질 활성에서의 변화; 세포 활성, 예를 들어, 세포 사멸에서의 변화; 세포 증식; 세포 분화에 대한 효과; 세포 생존에 대한 효과; 세포 신호전달 반응의 조절 등을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 세포내 도메인은 키메라 폴리펩타이드로부터 방출되는 경우 표적 유전자의 전사에서의 변화를 제공한다. 일부 경우에서, 키메라 폴리펩타이드로부터 방출되는 경우 세포내 도메인은 표적 유전자의 전사에서의 증가를 제공한다. 일부 경우에서, 키메라 폴리펩타이드로부터 방출되는 경우 세포내 도메인은 표적 유전자의 발현에서의 감소를 제공한다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 전사 활성화 인자를 포함한다. 임의의 간편한 전사 활성화인자는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인에 유용할 수 있다. 세포 또는 시스템내에서, 전사 활성화인자는 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소와 쌍을 이루어, 예를 들어, 상기 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 목적하는 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산의 발현을 구동시킨다. 유용한 전사 활성화인자, 전사 조절 요소, 활성화인자/조절 요소 쌍 및 상기 시스템의 성분들은 예를 들어, 하기 문헌에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는 유도성 발현 시스템에 사용되는 것들을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다: Goverdhana 외 Mol Ther. (2005) 12(2): 189-211; 미국특허 출원 공개번호 20160152701, 20150376627, 20130212722, 20070077642, 20050164237, 20050066376, 20040235169, 20040038249, 20030220286, 20030199022, 20020106720; 이의 개시내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
일부 경우에, 유용한 전사 활성화인자는 포유동물 전사 인자 또는 이의 가공되거나 돌연변이된 형태를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 유용한 전사 활성화인자는 인간 전사 인자 또는 이의 가공되거나 돌연변이된 형태를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 유용한 전사 활성화인자는 마우스 전사 인자 또는 이의 가공되거나 돌연변이된 형태를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 유용한 전사 활성화인자는 래트 전사 인자 또는 이의 가공되거나 돌연변이된 형태를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 유용한 전사 활성화인자는 소 전사 인자 또는 이의 가공되거나 돌연변이된 형태를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 유용한 전사 활성화인자는 돼지 전사 인자 또는 이의 가공되거나 돌연변이된 형태를 포함할 수 있다.
일부 경우에, 포유동물 전사 인자의 사용은 상기 전사 인자가 포유동물에서 면역 반응을 유도할 기회를 감소시킬 수 있다. 일부 경우에, 예를 들어, 돌연변이되거나 가공된 포유동물 전사 인자를 포함하는 가공되거나 돌연변이된 전사의 사용은 상기 전사 인자가 포유동물에서 면역 반응을 유도할 기회를 감소시킬 수 있다. 유용한 포유동물 전사 인자는 예를 들어, 아연 핑거 (ZnF) 단백질을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 세포내 도메인은 전사 활성화인자이다. 일부 경우에, 세포내 도메인은 하기의 테트라사이클린-조절된 전사 활성화인자 (tTA) 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다: MSRLDKSKVINSALELLNEVGIEGLTTRKLAQKLGVEQPTLYWHVKNKRALLDALAIEMLDRHHTHFCPLEGESWQDFLRNNAKSFRCALLSHRDGAKVHLGTRPTEKQYETLENQLAFLCQQGFSLENALYALSAVGHFTLGCVLEDQEHQVAKEERETPTTDSMPPLLRQAIELFDHQGAEPAFLFGLELIICGLEKQLKCESGGPADALDDFDLDMLPADALDDFDLDMLPADALDDFDLDMLPG (서열번호: 112); 및 약 245개 아미노산 내지 252개 아미노산 (예를 들어, 248, 249, 250, 251, 또는 252개 아미노산)의 길이를 갖는다.
일부 구현예에서, 세포내 도메인은 전사 활성화인자를 포함한다. 일부 경우에, 전사 활성화인자는 GAL4-VP16이다. 일부 경우에, 전사 활성화인자는 VP64 Zip(+)이다. 일부 경우에, 전사 활성화인자는 가공된 단백질, 예를 들어, VP64와 같은 이펙터 도메인에 융합된 아연 핑거 또는 TALE 기반 DNA 결합 도메인이다. 당업계에 공지된 다양한 다른 전사 활성화인자가 사용에 적합하다.
일부 경우에, 세포내 도메인은 하기의 GAL4-VP64 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다: MKLLSSIEQACDICRLKKLKCSKEKPKCAKCLKNNWECRYSPKTKRSPLTRAHLTEVESRLERLEQLFLLIFPREDLDMILKMDSLQDIKALLTGLFVQDNVNKDAVTDRLASVETDMPLTLRQHRISATSSSEESSNKGQRQLTVSAAAGGSGGSGGSDALDDFDLDMLGSDALDDFDLDMLGSDALDDFDLDMLGSDALDDFDLDMLGS (서열번호: 113); 및 208 내지 214개 아미노산(예를 들어, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 또는 214개 아미노산)의 길이를 갖는다.
일부 경우에, 세포내 도메인은 하기의 VP64 Zip(+) 전사 활성화인자 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다: PKKKRKVDALDDFDLDMLGSDALDDFDLDMLGSDALDDFDLDMLGSDALDDFDLDMLGSGGSGGSGGSLEIEAAFLERENTALETRVAELRQRVQRLRNRVSQYRTRYGPLGGGK (서열번호: 114); 및 105 내지 115개 아미노산(예를 들어, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114 또는 115개 아미노산)의 길이를 갖는다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 키메라 폴리펩타이드의 활성화 시, POI의 발현을 유도한다. POI는 필수적으로 임의의 폴리펩타이드일 수 있고, 연구 목적의 폴리펩타이드(예를 들어, 리포터 폴리펩타이드, 돌연변이된 폴리펩타이드, 신규한 합성 폴리펩타이드 등), 치료학적 목적의 폴리펩타이드(예를 들어, 천연적으로 존재하는 치료학적 단백질, 재조합 치료학적 폴리펩타이드 등), 산업 목적의 폴리펩타이드(예를 들어, 제조와 같은 산업적 응용에 사용되는 폴리펩타이드) 등을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, POI는 예를 들어, 종양, 암 등과 같은 신생물을 치료하기 위한 치료학적 폴리펩타이드를 포함하지만 이에 제한되지 않는 치료학적 폴리펩타이드일 수 있다. 일부 경우에, 신생물을 치료하기 위한 치료학적 POI는 암에 대한 면역치료요법에 사용되는 POI일 수 있다. 일부 경우에서, 치료학적 POI는 CAR일 수 있다. 일부 경우에서, 치료학적 POI는 TCR일 수 있다. 일부 경우에서, 치료학적 POI는 항체일 수 있다. 일부 경우에서, 치료학적 POI는 키메라 이중특이적 결합 구성원일 수 있다. 일부 경우에서, 치료학적 POI는 선천적 면역 반응 유도제일 수 있다. 일부 경우에서, 치료학적 POI는 면역 억제 인자일 수 있다.
본원의 개시내용의 POI는 직교화된 POI를 포함한다. 직교화된 POI는 이들의 본래 또는 야생형 형태로부터 변형되어 상기 직교 POI가 특이적 직교화된 파트너와 상호작용하거나 결합하지만 비변형되거나 야생형 파트너와 특이적으로 또는 실질적으로 반응하지 않는 상기 POI를 포함한다. 임의의 POI는 직교화될 수 있고 예를 들어, 본원에 기재된 상기 POI를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에서, 치료학적 POI는 항-Fc CAR일 수 있다. 항-Fc CAR은 일반적으로 Fc 수용체의 세포외 도메인, 세포내 신호전달 도메인 및 임의로 동시-자극 도메인을 포함한다. 치료학적 내용에 의존하여, 항-Fc CAR은 예를 들어, Fc-감마 수용체 (예를 들어, FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIB (CD32), FcγRIIIA (CD16a), FcγRIIIB (CD16b)), Fc-알파 수용체 (예를 들어, FcαRI (CD89)) 또는 Fc-엡실론 수용체(예를 들어, FcεRI, FcεRII (Cd23))를 포함하는 임의의 Fc 수용체의 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에서, 항-Fc CAR은 CD16 Fc 수용체의 세포외 도메인을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 항-Fc CAR은 CD16Fc 수용체의 세포외 도메인, CD3-제타 세포내 신호전달 도메인 및 4-1BB 동시-자극 도메인을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 항-Fc CAR은 항체-커플링된 T-세포 수용체 (ACTR)일 수 있고, 예를 들어, 하기 제조원으로부터 시판되는 것들이다(제조원: Unum Therapeutics Inc.;Cambridge, MA).
일부 경우에, 항-Fc CAR의 하나 이상의 도메인은 상기 도메인이 예를 들어, 세포 내 신호전달 성질을 조절하기 위해(예를 들어, 신호전달을 증가시키거나 신호전달을 감소시키기 위해), 결합 파트너에 대한 친화성을 조절하도록 (예를 들어, 친화성을 증가시키거나 친화성을 감소시키기 위해) 돌연변이된 경우 등을 포함하는 돌연변이된 도메인일 수 있다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 세포 내 핵산 서열로부터 항-Fc CAR의 전사를 유도할 수 있다. 일부 경우에, 항-Fc CAR 및 종양 항원에 결합하는 항체는 상기 대상체에 투여될 수 있고, 또한 상기 세포가 투여된다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 항-FcCAR, 및 항-Fc CAR 및 세포 내 하나 이상의 핵산 서열로부터 종양 항원을 결합하는 항체의 전사를 유도할 수 있다.
일부 경우에서, 치료학적 POI는 키메라 이중특이적 결합 구성원일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, “키메라 이중특이적 결합 구성원”이란 2개의 상이한 결합 파트너 (예를 들어, 2개의 상이한 항원)에 대해 이원 특이성을 갖는 키메라 폴리펩타이드를 의미한다. 키메라 이중특이적 결합 구성원의 비제한적인 예는 이중특이적 항체, 이중특이적 접합된 모노클로날 항체(mab)2, 이중특이적 항체 단편(예를 들어, F(ab)2, 이중특이적 scFv, 이중특이적 디아바디, 단일쇄 이중특이적 디아바디, 등), 이중특이적 T 세포 인게이져 (BiTE), 이중특이적 접합된 단일 도메인 항체, 미카바디 및 이의 돌연변이체 등을 포함한다. 키메라 이중특이적 결합 구성원의 비제한적인 예는 또한 하기 문헌에 기재된 상기 키메라 이중특이적 제제를 포함한다. MAbs. (2012) 4(2): 182-197; Stamova 외 Antibodies 2012, 1(2), 172-198; Farhadfar 외 Leuk Res. (2016) 49:13-21; Benjamin 외 Ther Adv Hematol. (2016) 7(3): 142-56; Kiefer 외 Immunol Rev. (2016) 270(1): 178-92; Fan 외 J Hematol Oncol. (2015) 8:130; May 외 Am J Health Syst Pharm. (2016) 73(1): e6-e13; 이의 개시내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
일부 경우에, 키메라 이중특이적 결합 구성원은 이중특이적 항체일 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 활성에 응답하여 발현될 수 있는 이중특이적 항체는 예를 들어, 본원에 기재된 적어도 하나(예를 들어, 2개를 포함하는)의 암 항원을 포함하지만 이에 제한되지 않는 적어도 하나의 암 항원 (예를 들어, 2개의 암 항원을 포함하는)을 표적화하는 이중특이적 항체일 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 활성화에 응답하여 발현될 수 있는 이중특이적 항체는 예를 들어 본원에 기재된 암 항원 및 본원에 기재된 면역 항원을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나의 암 항원 및 하나의 면역 세포 항원을 표적화하는 이중특이적 항체일 수 있다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 활성화에 응답하여 발현될 수 있는 이중특이적 항체는 예를 들어, bsAb MDX-210 (Her2 및 CD64를 표적화하는), MDX-H210 (Her2 및 CD64를 표적화하는), MDX-447 (EGFR 및 CD64를 표적화하는), HRS-3/A9 (CD30 항원 및 수용체 FcγRIII (CD16)를 표적화하는 이중특이적 F(ab')2 항체), 항-CD3 × 항-EpCAM TriomAb/bsAb, 카투막소맙, 에르투막소맙, Bi20 (림포문(Lymphomun) 또는 fBTA05), 항-CD19 × CD3 디아바디, 항-CD19 × CD16 디아바디, 항-EGFR × CD3 디아바디, 항-PSMA × CD3 디아바디, rM28 및 NG2를 표적화하는 디아바디, 항-CD28 × CD20 이중특이적 탠덤 scFv 등일 수 있다.
일부 경우에, 키메라 이중특이적 결합 구성원은 이중특이적 T 세포 인게이져(BiTE)일 수 있다. BiTE는 일반적으로 면역 세포 항원과 결합하는 특이적 결합 구성원 (예를 들어, scFv)을 암 항원 (예를 들어, 종양 관련 항원, 종양 특이적 항원 등)에 결합하는 특이적 결합 구성원 (예를 들어, scFv)에 융합시킴에 의해 제조된다. 예를 들어, 예시적 BiTE는 짭은 펩타이드 링커 (예를 들어, 5개 아미노산 링커, 예를 들어, GGGGS (서열번호: 115))를 통해 항-종양 관련 항원 (예를 들어, EpCAM, CD19 등)에 융합된 항-CD3 scFv를 포함한다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 활성화에 응답하여 발현될 수 있는 BiTE는 예를 들어 본원에 기재된 암 항원을 포함하지만 이에 제한되지 않는 적어도 하나의 암 항원을 표적화하는 BiTE일 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 활성화에 응답하여 발현될 수 있는 BiTE는 예를 들어 본원에 기재된 암 항원 및 본원에 기재된 면역 항원을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나의 암 항원 및 하나의 면역 세포 항원을 표적화하는 BiTE일 수 있다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 세포 내 핵산 서열로부터 BiTE의 전사를 유도할 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 펩타이드-MHC 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 BiTE의 전사를 유도할 수 있다. 일부 경우에, 본원에 기재된 바와 같이 사용하기에 적합한 BiTE는 예를 들어, 항-CD3 × 항-CD19 BiTE (예를 들어, 블리나투모맙), 항-EpCAM × 항i-CD3 BiTE (예를 들어, MT110), 항-CEA × 항-CD3 BiTE (예를 들어, MT111/MEDI-565), 항-CD33 × 항-CD3 BiTE, 항-HER2 BiTE, 항-EGFR BiTE, 항-IgE BiTE 등을 포함한다.
일부 경우에, 키메라 이중특이적 결합 구성원은 미카바디(Micabody) 또는 이의 돌연변이체일 수 있다. 미카바디는 일반적으로 NKG2D 수용체에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 도메인에 연결된 항원-특이적 결합 부분을 포함한다. 일부 경우에, 미카바디 또는 이의 돌연변이체는 NKG2D 수용체에 특이적으로 결합하는 가공된 MICA α1-α2 도메인을 포함한다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 활성화에 응답하여 발현될 수 있는 미카바디 또는 이의 돌연변이체는 예를 들어 본원에 기재된 암 항원을 포함하지만 이에 제한되지 않는 적어도 하나의 암 항원을 표적화하는 미카바디 또는 이의 돌연변이체일 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 활성화에 응답하여 발현될 수 있는 미카바디 또는 이의 돌연변이체는 HER2를 표적화하는 미카바디 또는 이의 돌연변이체(예를 들어, 항-HER2 미카바디 또는 이의 돌연변이체)일 수 있다. 미카바디 및 관련 성분들 및 작동 원리의 비제한적인 예는 예를 들어, 다음 문헌에 기재되어 있다: Cho 외, Cancer Res. (2010) 70(24): 10121-30; Bauer 외 Science. (1999) 285(5428): 727-9; Morvan 외 Nat Rev Cancer. (2016) 16(1): 7-19; 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 세포 내 핵산 서열로부터 미카바디 또는 이의 돌연변이체의 전사를 유도할 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 펩타이드-MHC 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 미카바디 또는 이의 돌연변이체의 전사를 유도할 수 있다. 미카바디 및 이의 돌연변이체는 제조원 (AvidBiotics (South San Francisco, CA))에 의해 개발된 것들 및 온라인(avidbiotics(dot)com)에 기재된 것들을 포함한다.
일부 경우에, 키메라 이중특이적 결합 구성원은 CAR T 세포 어댑터 일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, “CAR T 세포 어댑터”는 CAR의 항원 인지 도메인에 결합하고 상기 CAR을 제2 항원으로 재지시하는 발현된 이중특이적 폴리펩타이드를 의미한다. 일반적으로, CAR T 세포 어댑터는 결합 영역을 갖고, 하나는 이것이 지시되는 CAR 상의 에피토프 및 결합되는 경우, CAR을 활성화하는 결합 신호를 전달하는 결합 파트너에 지시된 제2 에피토프에 특이적이다. 유용한 CAR T 세포 어댑터는 예를 들어, 하기 문헌에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: Kim 외 J Am Chem Soc. (2015) 137(8): 2832-5; Ma 외 Proc Natl Acad Sci U S A. (2016) 113(4): E450-8 및 Cao 외 Angew Chem Int Ed Engl. (2016) 55(26): 7520-4; 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 의해 유도된 치료학적 POI는 항체이다. 적합한 항체는, 예를 들어, α4β1 및 α4β7 인테그린의 α4 서브유니트를 표적화하는 나탈리주맙 (Tysabri; Biogen Idec/Elan) (MS 및 크론 질환의 치료에 사용된 바와 같이); α4β7 인테그린을 표적화하는 베돌리주맙 (MLN2; Millennium Pharmaceuticals/Takeda) (UC 및 크론 질환의 치료에 사용된 바와 같이); BAFF를 표적화하는 벨리무맙 (Benlysta; Human Genome Sciences/ GlaxoSmithKline) (SLE의 치료에 사용된 바와 같이); BAFF 및 APRIL을 표적화하는 아탁시셉트 (TACI-Ig; Merck/Serono) (SLE의 치료에 사용된 바와 같이); CD2를 표적화하는 알레파셉트 (Amevive; Astellas) (판상형 건선증, GVHD의 치료에 사용된 바와 같이); CD3을 표적화하는 오텔릭시주맙 (TRX4; Tolerx/GlaxoSmithKline) (T1D의 치료에 사용된 바와 같이); CD3을 표적화하는 테플리주맙 (MGA031; MacroGenics/Eli Lilly) (T1D의 치료에 사용된 바와 같이); CD20을 표적화하는 리툭시맙 (Rituxan/Mabthera; Genentech/Roche/Biogen Idec) (비-호지킨 림프종, RA (TNF 차단에 대한 부적절한 반응을 보이는 환자) 및 CLL의 치료에 사용된 바와 같이); CD20을 표적화하는 오파투무맙 (Arzerra; Genmab/GlaxoSmithKline) (CLL, RA의 치료에 사용된 바와 같이); CD20을 표적화하는 오크렐리주맙 (2H7; Genentech/Roche/Biogen Idec) (RA 및 SLE의 치료에 사용된 바와 같이); CD22를 표적화하는 에프라투주맙 (hLL2; Immunomedics/UCB) (SLE 및 비-호지킨 림프종의 치료에 사용된 바와 같이); CD52를 표적화하는 알렘투주맙 (Campath/MabCampath; Genzyme/Bayer) (CLL, MS의 치료에 사용된 바와 같이); CD80 및 CD86을 표적화하는 아바타셉트 (Orencia; Bristol-Myers Squibb) (RA 및 JIA, UC 및 크론 질환, SLE의 치료에 사용된 바와 같이); C5 보체 단백질을 표적화하는 에쿨리주맙 (Soliris; Alexion pharmaceuticals) (발작성 야행성 혈색소증의 치료에 사용된 바와 같이); IgE를 표적화하는 오말리주맙 (Xolair; Genentech/Roche/Novartis) (중등도-중증 지속성 알레르기성 천식 치료에 사용된 바와 같이); IL-1β를 표적화하는 카나키누맙 (Ilaris; Novartis) (크리오피린-관련된 주기적 증후군, 전신 JIA, 신생아-발현 다발성 염증 질환 및 급성 통풍의 치료에 사용된 바와 같이); IL-5를 표적화하는 메폴리주맙 (Bosatria; GlaxoSmithKline) (과다호산구 증후군의 치료에 사용된 바와 같이); IL-5를 표적화하는 레슬리주맙 (SCH55700; Ception Therapeutics) (호산구 식도염의 치료에 사용된 바와 같이); IL-6R을 표적화하는 토실리주맙 (Actemra/RoActemra; Chugai/Roche) (RA, JIA의 치료에 사용된 바와 같이); IL-12 및 IL-23을 표적화하는 우스테키누맙 (Stelara; Centocor) (판상형 건선증, 건선 관절염, 크론 질환의 치료에 사용된 바와 같이); IL-12 및 IL-23을 표적화하는 브리아키누맙 (ABT-874; Abbott) (건선증 및 판상형 건선증의 치료에 사용된 바와 같이); TNF를 표적화하는 에타네르셉트 (Enbrel; Amgen/Pfizer) (RA, JIA, 건선 관절염, AS 및 판상형 건선증의 치료에 사용된 바와 같이); TNF를 표적화하는 인플릭시맙 (Remicade; Centocor/Merck) (크론 질환, RA, 건선 관절염, UC, AS 및 판상형 건선증의 치료에 사용된 바와 같이); TNF를 표적화하는 아달리무맙 (Humira/Trudexa; Abbott) (RA, JIA, 건선 관절염, 크론 질환, AS 및 판상형 건선증의 치료에 사용된 바와 같이); TNF를 표적화하는 세르톨리주맙 페골(Cimzia; UCB) (크론 질환 및 RA의 치료에 사용된 바와 같이); TNF를 표적화하는 골리무맙 (Simponi; Centocor) (RA, 건선 관절염 및 AS의 치료에 사용된 바와 같이); 등을 포함한다.
일부 경우에, 이의 생산이 유도되는 항체는 암의 치료를 위한 치료학적 항체이다. 그러한 항체는, 예를 들어 CTLA-4를 표적화하는 이필리무맙 (흑색종, 전립선암, RCC의 치료에 사용된 바와 같이); CTLA-4를 표적화하는 트레멜리무맙 (CRC, 위, 흑색종, NSCLC의 치료에 사용된 바와 같이); PD-1을 표적화하는 니볼루맙 (흑색종, NSCLC, RCC의 치료에 사용된 바와 같이); PD-1을 표적화하는 MK-3475 (흑색종의 치료에 사용된 바와 같이); PD-1을 표적화하는 피딜리주맙 (혈액학 악성종양의 치료에 사용된 바와 같이); PD-L1을 표적화하는 BMS-936559 (흑색종, NSCLC, 난소, RCC의 치료에 사용된 바와 같이); PD-L1을 표적화하는 MEDI4736; PD-L1을 표적화하는 MPDL33280A (흑색종의 치료에 사용된 바와 같이); CD20을 표적화하는 리툭시맙 (비-호지킨 림프종의 치료에 사용된 바와 같이); 이브리투모맙 티욱세탄 및 토시투모맙 (림프종의 치료에 사용된 바와 같이); 브렌툭시맙 베도틴 타르게팅 CD30 (호지킨 림프종의 치료에 사용된 바와 같이); CD33을 표적화하는 겜투주맙 오조가미신 (급성 골수 백혈병의 치료에 사용된 바와 같이); CD52를 표적화하는 알렘투주맙 (만성 림프구 백혈병의 치료에 사용된 바와 같이); EpCAM을 표적화하는 IGN101 및 아데카투무맙 (상피 종양 (유방, 결장 및 폐)의 치료에 사용된 바와 같이); CEA를 표적화하는 라베투주맙 (유방, 결장 및 폐 종양의 치료에 사용된 바와 같이); gpA33을 표적화하는 huA33 (결장직장 암종의 치료에 사용된 바와 같이); 뮤신을 표적화하는 펨투모맙 및 오레고보맙 (유방, 결장, 폐 및 난소암의 치료에 사용된 바와 같이); TAG-72를 표적화하는 CC49 (민레투모맙) (유방, 결장 및 폐 종양의 치료에 사용된 바와 같이); CAIX를 표적화하는 cG250 (신장 세포 암종의 치료에 사용된 바와 같이); PSMA를 표적화하는 J591 (전립선 암종의 치료에 사용된 바와 같이); 엽산-결합 단백질을 표적화하는 MOv18 및 MORAb-003 (farletuzumab) (난소암의 치료에 사용된 바와 같이); 강글리오시드를 표적화하는 3F8, ch14.18 및 KW-2871 (예를 들어, GD2, GD3 및 GM2) (신경외배엽 종양 및 일부 상피 종양의 치료에 사용된 바와 같이); Le y를 표적화하는 hu3S193 및 IgN311 (유방, 결장, 폐 및 전립선 종양의 치료에 사용된 바와 같이); VEGF를 표적화하는 베바시주맙 (종양 혈관계의 치료에 사용된 바와 같이); VEGFR을 표적화하는 IM-2C6 및 CDP791 (상피-유래 고형 종양의 치료에 사용된 바와 같이); 인테그린 _V_3을 표적화하는 에타라시주맙 (혈관계의 치료에 사용된 바와 같이); 인테그린 _5_1을 표적화하는 볼복시맙 (종양 혈관계의 치료에 사용된 바와 같이); EGFR을 표적화하는 세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙 및 806 (신경교종, 폐, 유방, 결장, 및 두경부 종양의 치료에 사용된 바와 같이); ERBB2를 표적화하는 트라스투주맙 및 페르투주맙 (유방, 결장, 폐, 난소 및 전립선 종양의 치료에 사용된 바와 같이); ERBB3을 표적화하는 MM-121 (유방, 결장, 폐, 난소 및 전립선 종양의 치료에 사용된 바와 같이); MET를 표적화하는 AMG 102, METMAB 및 SCH 900105 (유방, 난소 및 폐 종양의 치료에 사용된 바와 같이); IGF1R을 표적화하는 AVE1642, IMC-A12, MK-0646, R1507 및 CP 751871 (신경교종, 폐, 유방, 두경부, 전립성 및 갑상선암의 치료에 사용된 바와 같이); EPHA3을 표적화하는 KB004 및 IIIA4 (폐, 신장 및 결장 종양, 흑색종, 신경교종 및 혈액학적 악성 종양의 치료에 사용된 바와 같이); TRAILR1을 표적화하는 마파투무맙 (HGS-ETR1) (결장, 폐 및 췌장 종양 및 혈액학적 악성종양의 치료에 사용된 바와 같이); TRAILR2를 표적화하는 HGS-ETR2 및 CS-1008; RANKL을 표적화하는 데노수맙 (전립선암 및 골 전이의 치료에 사용된 바와 같이); FAP를 표적화하는 시브로투주맙 및 F19 (결장, 유방, 폐, 췌장, 및 두경부 종양의 치료에 사용된 바와 같이); 테나신을 표적화하는 81C6 (신경교종, 유방 및 전립선 종양의 치료에 사용된 바와 같은); CD3을 표적화하는 블리나투모맙 (Blincyto; Amgen) (ALL의 치료에 사용된 바와 같은); 암 면역요법에 사용된 바와 같이 PD-1을 표적화하는 펨브롤리주맙; c-Myc를 표적화하는 9E10 항체; 등을 포함한다.
일부 경우에, 발현이 본 발명의 키메라 폴리펩타이드에 의해 유도될 수 있는 유용한 항체는 8H9, 아바고보맙, 압식시맙, 아비투주맙, 아브릴루맙, 악톡주맙, 아두카누맙, 아펠리모맙, 아푸투주맙, 알라시주맙 페골, ALD518, 알리로쿠맙, 알투모맙 펜테테이트, 아마툭시맙, 아나투모맙 마페나톡스, 아네투맙 라브탄신, 아니프롤루맙, 안루킨주맙, 아폴리주맙, 아르시투모맙, 아스크린바쿠맙, 아셀리주맙, 아테졸리주맙, 아티누맙, 아틀리주맙/토실리주맙, 아조롤리무맙, 바피네우주맙, 바실릭시맙, 바비툭시맙, 벡투모맙, 베겔로맙, 벤랄리주맙, 베르틸리무맙, 베실레소맙, 베바시주맙/라니비주맙, 베즐로톡수맙, 비시로맙, 비마그루맙, 비메키주맙, 비바투주맙 메르탄신, 블로소주맙, 보코시주맙, 브렌툭시맙베도틴, 브로달루맙, 브롤루시주맙, 브론틱투주맙, 칸투주맙 메르탄신, 칸투주맙 라브탄신, 카플라시주맙, 카프로맙 펜데티드, 카를루맙, 카투막소맙, cBR96-독소루비신 임무노콘주게이트, 세델리주맙, Ch.14.18, 시타투주맙 보가톡스, 식수투무맙, 클라자키주맙, 클레놀릭시맙, 클리바투주맙 테트락세탄, 코드리투주맙, 콜툭시맙 라브탄신, 코나투무맙, 콘시주맙, CR6261, 크레네주맙, 다세투주맙, 다클리주맙, 달로투주맙, 다피롤리주맙 페골, 다라투무맙, 덱트레쿠맙, 뎀시주맙, 데닌투주맙 마포도틴, 데를로툭시맙 비오틴, 데투모맙, 디누툭시맙, 디리다부맙, 도를리모맙 아리톡스, 드로지투맙, 둘리고투맙, 두필루맙, 두르발루맙, 두시기투맙, 에크로멥시맙, 에도바코맙, 에드레콜로맙, 에팔리주맙, 에푼구맙, 엘델루맙, 엘겜투맙, 엘로투주맙, 엘시리리모맙, 에막투주맙, 에미베주투맙, 에나바투주맙, 엔포르투맙 베도틴, 엔리모맙 페골, 에노블리투주맙, 에노키주맙, 에노티쿠맙, 엔시툭시맙, 에피투모맙 시툭세탄, 에르리주맙, 에르투막소맙, 에트롤리주맙, 에비나쿠맙, 에볼로쿠맙, 엑비비르맙, 파놀레소맙, 파랄리모맙, 파를레투주맙, 피시누맙, FBTA05, 펠비주맙, 페자키누맙, 피클라투주맙, 피기투무맙, 피리부맙, 플란모투맙, 플레티쿠맙, 폰톨리주맙, 포랄루맙, 포라비루맙, 프레솔리무맙, 풀라누맙, 푸툭시맙, 갈릭시맙, 가니투맙, 간테네루맙, 가빌리모맙, 게보키주맙, 기렌툭시맙, 글렘바투무맙 베도틴, 고밀릭시맙, 구셀쿠맙, 이발리주맙, 이발리주맙, 이크루쿠맙, 이다루시주맙, 이고보맙, IMAB362, 이말루맙, 임시로맙, 임가투주맙, 인클라쿠맙, 인다툭시맙 라브탄신, 인두사투맙 베도틴, 이놀리모맙, 이노투주맙 오조가미신, 인테투무맙, 이라투무맙, 이사툭시맙, 이톨리주맙, 익세키주맙, 켈릭시맙, 람브롤리주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 레말레소맙, 렌질루맙, 레르델리무맙, 렉사투무맙, 리비리루맙, 리파스투주맙 베도틴, 리겔리주맙, 릴로토맙 사테트락세탄, 린투주맙, 리릴루맙, 로델시주맙, 로키베트맙, 로르보투주맙 메르탄신, 루카투무맙, 룰리주맙 페골, 루밀릭시맙, 룸레투주맙, 마르게툭시맙, 마슬리모맙, 마투주맙, 마브릴리무맙, 메텔리무맙, 밀라투주맙, 민레투모맙, 미르베툭시맙 소라브탄신, 미투모맙, 모가물리주맙, 모롤리무맙, 모롤리무맙 면역, 모타비주맙, 목세투모맙 파수도톡스, 무로모납-CD3, 나콜로맙 타페나톡스, 나밀루맙, 나프투모맙 에스타페나톡스, 나르나투맙, 네바쿠맙, 넥시투무맙, 네몰리주맙, 네렐리모맙, 네스바쿠맙, 노페투모맙 메르펜탄, 오빌톡삭시맙, 오비누투주맙, 오카라투주맙, 오둘리모맙, 오랄라투맙, 올로키주맙, 오나르투주맙, 온툭시주맙, 오피시누맙, 오포르투주맙 모나톡스, 오르티쿠맙, 오틀레르투주맙, 옥셀루맙, 오자네주맙, 오조랄리주맙, 파기박시맙, 팔리비주맙, 판코맙, 파노바쿠맙, 파르사주투맙, 파스콜리주맙, 파소툭시맙, 파텔리주맙, 파트리투맙, 페라키주맙, 펙셀리주맙, 피나투주맙 베도틴, 핀투모맙, 플라쿨루맙, 폴라주투맙 베도틴, 포네주맙, 플릭시맙, 프리톡삭시맙, 프리투무맙, PRO 140, 퀼리주맙, 라코투모맙, 라드레투맙, 라피비루맙, 랄판시주맙, 라무시루맙, 라니비주맙, 락시바쿠맙, 레파네주맙, 레게비루맙, 릴로투무맙, 리누쿠맙, 로바투무맙, 롤레두맙, 로모소주맙, 론탈리주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 사시투주맙 고비테칸, 사말리주맙, 사릴루맙, 사무모맙 펜데타이드, 세쿠키누맙, 세리반투맙, 세톡삭시맙, 세비루맙, SGN-CD19A, SGN-CD33A, 시팔리무맙, 실툭시맙, 심투주맙, 시플리주맙, 시루쿠맙, 소피투주맙 베도틴, 솔란주맙, 솔리토맙, 소넵시주맙, 손투주맙, 스타물루맙, 술레소맙, 수비주맙, 타발루맙, 타카투주맙 ?락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 타네주맙, 타플리투모맙 팝톡스, 타렉투맙, 테피바주맙, 텔리모맙 아리톡스, 테나투모맙, 테넬릭시맙, 테프로투무맙, 테시돌루맙, 테툴로맙, TGN1412, 티실리무맙/트레멜리무맙, 티가투주맙, 틸드라키주맙, TNX-650, 토랄리주맙, 토사톡수맙, 토베투맙, 트랄로키누맙, TRBS07, 트레갈리주맙, 트레보그루맙, 투코투주맙 셀몰류킨, 투미루맙, 우블리툭시맙, 울로쿠플루맙, 우렐루맙, 우르톡사주맙, 반도르투주맙 베도틴, 반틱투맙, 바누시주맙, 바팔릭시맙, 바를리루맙, 바텔리주맙, 벨투주맙, 베팔리모맙, 베센쿠맙, 비실리주맙, 보르세투주맙 마포도틴, 보투무맙, 잘루투무맙, 자놀리무맙, 자툭시맙, 지랄리무맙, 졸리모맙 아리톡스 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 본원의 기재내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드는 세포 내 T-세포 수용체 (TCR)의 발현을 유도할 수 있다. 임의의 TCR은 본원의 개시내용의 방법을 사용하여 키메라 폴리펩타이드에 의해 유도될 수 있고, 이는 예를 들어, 암 세포의 표면 상에 발현된 에피토프, 암 세포의 표면 상의 펩타이드-MHC 복합체 등을 포함하는 임의의 다양한 에피토프에 특이적인 TCR을 포함한다. TCR은 일반적으로 알파쇄 및 베타쇄를 포함하고 주요 조직적합성 복합체에 의해 제공되는 경우 항원을 인지한다. 일부 경우에, TCR은 가공된 TCR이다.
면역 세포 활성화 기능을 갖는 임의의 가공된 TCR은 본원의 개시내용의 방법을 사용하여 유도될 수 있다. 상기 TCR은 예를 들어, 항원-특이적 TCR, 모노클로날 TCR (MTCR), 단일쇄 MTCR, 고친화성 CDR2 돌연변이체 TCR, CD1-결합 MTCR, 고친화성 NY-ESO TCR, VYG HLA-A24 텔로머라제 TCR을 포함하고, 예를 들어, 하기 문헌에 기재된 것들을 포함한다: PCT Pub Nos. WO 2003/020763, WO 2004/033685, WO 2004/044004, WO 2005/114215, WO 2006/000830, WO 2008/038002, WO 2008/039818, WO 2004/074322, WO 2005/113595, WO 2006/125962; Strommes 외 Immunol Rev.2014; 257(1): 145-64; Schmitt 외 Blood.2013; 122(3): 348-56; Chapuls 외 Sci Transl Med. 2013; 5(174): 174ra27; Thaxton 외 Hum Vaccin Immunother.2014; 10(11): 3313-21 (PMID:25483644); Gschweng 외 Immunol Rev.2014; 257(1): 237-49 (PMID:24329801); Hinrichs 외 Immunol Rev.2014; 257(1): 56-71 (PMID:24329789); Zoete 외 Front Immunol. 2013; 4:268 (PMID:24062738); Marr 외 Clin Exp Immunol. 2012; 167(2): 216-25 (PMID:22235997); Zhang 외 Adv Drug Deliv Rev.2012; 64(8): 756-62 (PMID:22178904); Chhabra 외 Scientific World Journal.2011; 11:121-9 (PMID:21218269); Boulter 외 Clin Exp Immunol. 2005; 142(3): 454-60 (PMID:16297157); Sami 외 Protein Eng Des Sel.2007; 20(8): 397-403; Boulter 외 Protein Eng. 2003; 16(9): 707-11; Ashfield 외 IDrugs.2006; 9(8): 554-9; Li 외 Nat Biotechnol.2005; 23(3): 349-54; Dunn 외 Protein Sci. 2006; 15(4): 710-21; Liddy 외 Mol Biotechnol.2010; 45(2); Liddy 외 Nat Med. 2012; 18(6): 980-7; Oates, 외 Oncoimmunology.2013; 2(2): e22891; McCormack, 외 Cancer Immunol Immunother.2013 Apr;62(4): 773-85; Bossi 외 Cancer Immunol Immunother.2014; 63(5): 437-48 및 Oates, 외 Mol Immunol. 2015 Oct;67(2 Pt A): 67-74; 이의개시내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 예를 들어, 세포내 암 항원을 포함하는 암 항원을 표적화하는 가공된 TCR의 발현을 유도한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 의해 발현되도록 유도된 가공된 TCR은 하기 표 2에 열거된 항원 표적을 표적화하는 가공된 TCR이다.
Figure pct00003
일부 경우에, 특정 항원을 표적화하는 발현된 TCR은 항-[항원] TCR로서 기재될 수 있다. 따라서, 일부 경우에, 본원의 키메라 폴리펩타이드에 의해 발현되도록 유도될 수 있는 예시적 TCR은 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 예를 들어, 항-NY-ESO-1 TCR; 항-MART-1 TCR; 항-MAGE-A3 TCR; 항-MAGE-A3 TCR; 항-CEA TCR; 항-gp100 TCR; 항-WT1 TCR; 항-HBV TCR; 항-gag (WT 및/또는r α/6) TCR; 항-P53 TCR; DR4 TCR에 결합된 항-TRAIL; 항-HPV-16 (E6 및/또는 E7) TCR; 항-서바이빈 TCR; 항-KRAS 돌연변이체 TCR; 항-SSX2 TCR; 항-MAGE-A10 TCR; 항-MAGE-A4 TCR; 항-AFP TCR; 등.
일부 경우에, TCR은 항-NY-ESO1 TCR (예를 들어, 항i-HLA-A2/NY-ESO1 scTv)이다. 일부 경우에, 항-NY-ESO1 TCR은 하기의 서열을 갖는다:
METLLGLLILWLQLQWVSSKQEVTQIPAALSVPEGENLVLNCSFTDSAIYNLQWFRQDPGKGLTSLLLIQSSQREQTSGRLNASLDKSSGRSTLYIAASQPGDSATYLCAVRPLLDGTYIPTFGRGTSLIVHPGSADDAKKDAAKKDGKSMSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYRQDPGMGLRLIHYSVGAGTTDRGEVPNGYNVSRSTIEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASSYVGDTGELFFGEGSRLTVL (서열번호: 116).
유용한 TCR은 이들 각각의 항원에 대해 증진된 친화성을 갖는 것들뿐만 아니라 이들 각각의 항원에 대해 야생형 친화성을 갖는 것들을 포함한다. 이들 각각의 항원에 대해 증진된 친화성을 갖는 TCR은 “친화성 증진된” 또는 “증진된 친화성” TCR로서 언급될 수 있다. TCR의 친화성은 결합-부위 가공 (즉, 이상적 디자인), 스크리닝 (예를 들어, TCR 디스플레이) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 간편한 수단에 의해 증진될 수 있다. 친화성 증진된 TCR 및 증진된 친화성 TCR을 생성시키는 방법의 비제한적인 예는 예를 들어 하기 문헌에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: PCT 공개번호 20150118208, 2013256159, 20160083449; 20140349855, 20100113300, 20140371085, 20060127377, 20080292549, 20160280756, 20140065111, 20130058908, 20110038842, 20110014169, 2003276403 등; 이의 개시내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다.
유용한 TCR은 일부 경우에 또한 하나 이상의 시스테인 변형을 포함하는 변형된 TCR 쇄를 포함한다. 상기 시스테인 변형은 2개의 변형된 TCR 쇄 사이에서 쌍을 형성할 수 있다. 2개의 TCR 쇄 사이에서 쌍을 형성하는 경우, 상응하는 변형은 쌍을 형성한 쇄 간에 재조합 디설파이드 결합을 유도할 수 있다.
일부 구현예에서, TCR은 알파 쇄에서 제1 시스테인 변형 및 베타 쇄에서 제2 시스테인 변형을 포함할 수 있고, 여기서, 상기 제1 및 제2 시스테인 변형은 쇄 둘 다가 세포 내 존재하는 경우, 상기 알파 쇄와 상기 베타 쇄 간에 재조합 디설파이드 결합을 형성한다. 재조합 디설파이드 결합을 형성하는 상기 시스테인 변형은 “상응하는 시스테인 변형”으로서 언급될 수 있다.
일부 경우에, 변형된 TCR 알파 쇄는 잔기의 시스테인으로의 치환을 포함할 수 있고 이는 재조합 디설파이드 결합을 생성하기에 충분한 시스테인 변형을 유도한다. 시스테인으로 돌연변이되는 경우 재조합 디설파이드 결합을 유도하는 TCR 베타 쇄에 상응하는 잔기를 갖는 TCR 알파 쇄의 임의의 적당한 잔기는 시스테인 변형된 알파 쇄를 생성하는데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 치환된 잔기는 TCR 알파 불변 쇄에 존재하는 잔기이다. 일부 경우에, 상기 치환은 티로신의 시스테인으로의 치환이다. 일부 경우에, 상기 치환은 T48C 치환 또는 하기의 인간 TCR 알파 쇄 불변 영역 서열에 존재하는 T48C 치환과 같은 상응하는 돌연변이이다: PNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKCVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS (서열번호: 131).일부 경우에, 상기 치환은 T84C 치환 또는 하기의 마우스 TCR 알파 쇄 불변 영역 서열에 존재하는 T84C 치환과 같은 상응하는 돌연변이이다: PYIQNPEPAVYQLKDPRSQDSTLCLFTDFDSQINVPKTMESGTFITDKTVLDMKAMDSKSNGAIAWSNQTSFTCQDIFKETNACYPSSDVPCDATLTEKSFETDMNLNFQNLSVMGLRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS (서열번호: 132).
일부 경우에, 본원의 TCR 알파 쇄 또는 이의 상응하는 도메인 (예를 들어, 알파 가변 도메인, 알파 불변 도메인, 알파 막관통 도메인, 알파 연결 펩타이드 도메인 등)은 예를 들어, T48C 또는 T84C 함유 TCR 알파 서열과 같은 시스테인 변형된 알파 쇄와 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 가질 수 있다.
일부 경우에, 변형된 TCR 베타 쇄는 잔기의 시스테인으로의 치환을 포함할 수 있고 이는 재조합 디설파이드 결합을 생성하기에 충분한 시스테인 변형을 유도한다. 시스테인으로 돌연변이되는 경우 재조합 디설파이드 결합을 유도하는 TCR 베타 쇄에 상응하는 잔기를 갖는 TCR 베타 쇄의 임의의 적당한 잔기는 시스테인 변형된 베타 쇄를 생성하는데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 치환된 잔기는 TCR 베타 불변 쇄에 존재하는 잔기이다. 일부 경우에, 상기 치환은 세린의 시스테인으로의 치환이다. 일부 경우에, 상기 치환은 S58C 치환 또는 하기의 인간 TCR 베타 쇄 불변 영역 서열에 존재하는 S58C 치환과 같은 상응하는 돌연변이이다: EDLNKVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVCTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF (서열번호: 133).일부 경우에, 상기 치환은 S79C 치환 또는 하기의 마우스 TCR 베타 쇄 불변 영역 서열에 존재하는 S79C 치환과 같은 상응하는 돌연변이이다: EDLRNVTPPKVSLFEPSKAEIANKQKATLVCLARGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQAYKESNYSYCLSSRLRVCATFWHNPRNHFRCQVQFHGLSEEDKWPEGSPKPVTQNISAEAWGRADCGITSASYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSTLVVMAMVKRKNS (서열번호: 134).
일부 경우에, 본원의 TCR 베타 쇄 또는 이의 상응하는 도메인 (예를 들어, 베타 가변 도메인, 베타 불변 도메인, 베타 막관통 도메인, 베타 연결 펩타이드 도메인 등)은 예를 들어, 상기 제공된 S58C 또는 S79C 함유 TCR 베타 서열과 같은 시스테인 변형된 베타 쇄와 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 또는 100% 아미노산 서열 동일성을 가질 수 있다.
일부 경우에서, 치료학적 POI는 선천적 면역 반응 유도제일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, “천연적-면역 반응 유도제”는 포유동물 내 발현되는 경우 선천성 면역 반응을 유도하는 임의의 단백질을 의미한다. 선천성 면역 유도제는 예를 들어, 세균으로부터 유래된 단백질 또는 이의 단편, 바이러스로부터 유래된 단백질 또는 이의 단편, 진균류로부터 유래된 단백질 또는 이의 단편, 예를 들어, 인간 기생충을 포함하는 포유동물 기생충으로부터 유래된 단백질 또는 이의 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 포유동물 세포에 의해 발현되는 경우 선천성 면역 반응을 유도하는 임의의 단백질은 본원의 개시내용의 선천성-면역 유도제로서 유용할 수 있다. 일부 경우에, 선천성 면역 반응 유도제는 플라겔린 단백질일 수 있다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 세포 내 핵산 서열로부터 항-면역 반응 유도제의 전사를 유도할 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 펩타이드-MHC 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 선천성-면역 반응 유도제의 전사를 유도할 수 있다.
일부 경우에서, 치료학적 POI는 면역 억제 인자일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, “면역 억제 인자”는 포유동물 내 발현되는 경우 면역 반응을 억제하는 임의의 단백질을 의미한다. 면역 억제 인자는 예를 들어, 면역억제 사이토킨(예를 들어, IL-10), 면역억제 세포-대-세포 신호전달 리간드(예를 들어, PD-L1), 면역억제 분비된 단백질(예를 들어, TGF-베타), 면역억제 항체(예를 들어, 항-CD3 항체(예를 들어, 오르토클론 OKT3 (또한 무로모납-CD3) 등), 항-CD25 항체, (예를 들어, 바실릭시맙, 다클리주맙 등) 항-CD52 항체(예를 들어, 캄파트-1H (또한 알렘투주맙으로서 공지된) 등) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 포유동물 세포에 의해 발현되는 경우 면역 반응을 억제하는 임의의 단백질은 본원의 개시내용의 면역 억제 인자로서 유용할 수 있다. 일부 경우에, 면역 억제 인자는 IL-10일 수 있다. 일부 경우에, 면역 억제 인자는 PD-L1일 수 있다. 일부 경우에, 면역 억제 인자는 TGF-베타일 수 있다. 일부 경우에, 면역 억제 인자는 면역억제 항체(예를 들어, (예를 들어, 항-CD3 항체 (예를 들어, 오르토클론 OKT3 (또한 무로모납-CD3) 등으로서 공지된), 항-CD25 항체, (예를 들어, 바실릭시맙, 다클리주맙 등), 항-CD52 항체(예를 들어, 캄파트-1H (또한 알렘투주맙으로서 공지된) 등)일 수 있다.
일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드는 예를 들어, 면역억제 사이토킨 및 면역억제 세포-대-세포 신호전달 리간드, 2개 이상의 면역억제 사이토킨, 2개 이상의 면역억제 세포-대-세포 신호전달 리간드 등을 포함하는 2개 이상의 면역 억제 인자의 발현을 구동할 수 있다. 일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드는 IL-10 및 PD-L1의 발현을 구동할 수 있다. 일부 경우에, 키메라 폴리펩타이드는 3개 이상의 면역 억제 인자의 발현을 구동할 수 있다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 세포 내 핵산 서열로부터 면역 억제 인자의 전사를 유도할 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 세포 상에서 발현되어, 펩타이드-MHC 특이적 결합 파트너에 결합 시, 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 면역 억제 인자의 전사를 유도할 수 있다.
일부 경우에, 치료학적 POI는 케모킨일 수 있다. 발현된 케모킨은 세포 이동을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 세포 거동에 영향을 미칠 수 있다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 수용체 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 케모킨의 발현을 유도할 수 있다. 적합한 케모킨의 예는 예를 들어, MIP-1, MIP-1β, MCP-1, RANTES, IP10 등을 포함한다. 적합한 케모킨의 추가의 예는 케모킨 (C-C 모티프) 리간드-2 (CCL2; 또한 단핵구 화학주성 단백질-1 또는 MCP1로서 언급됨); 케모킨 (C-C 모티프) 리간드-3 (CCL3; 또한 대식세포 염증 단백질-1A 또는 MIP1A로서 공지된); 케모킨 (C-C 모티프) 리간드-5 (CCL5; 또한 RANTES로서 공지된); 케모킨 (C-C 모티프) 리간드-17 (CCL17; 또한 흉선 및 활성화 조절된 케모킨 또는 TARC로서 공지된); 케모킨 (C-C 모티프) 리간드-19 (CCL19; 또한, EBI1 리간드 케모킨 또는 ELC로서 공지된); 케모킨 (C-C 모티프) 리간드-21 (CCL21; 또한 6Ckine으로서 공지된); C-C 케모킨 수용체 7형 (CCR7); 케모킨 (C-X-C 모티프) 리간드 9 (CXCL9; 또한 감마 인터페론 또는 MIG에 의해 유도된 모노킨으로서 공지된); 케모킨 (C-X-C 모티프) 리간드 10 (CXCL10; 또한 인터페론 감마-유도된 단백질 10 또는 IP-10으로서 공지된); 케모킨 (C-X-C 모티프) 리간드 11 (CXCL11; 또한 인터페론-유도성 T-세포 알파 화학유인제 또는 I-TAC); 케모킨 (C-X-C 모티프) 리간드 16 (CXCL16; 케모킨 (C 모티프) 리간드 (XCL1; 또한 림포택틴으로서 공지된); 및 대식세포 콜로니-자극 인자 (MCSF)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에 기재된 키메라 폴리펩타이드 및 방법 및 회로에 사용하기 위해 채택될 수 있는 특정 세포내 도메인 및 이의 성분은 예를 들어, PCT 출원 번호 US2016/019188에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다(공개번호 제 WO 2016/138034호), 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
추가의 폴리펩타이드
본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드는 하나 이상의 추가의 폴리펩타이드를 추가로 포함할 수 있고, 여기서, 적합한 추가의 폴리펩타이드는 신호 서열; 에피토프 태그; 친화성 도메인; 핵 국소화 신호 (NLS); 및 검출가능한 신호를 생성하는 폴리펩타이드를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 하나 이상의 추가의 서열은 적당한 경우, 예를 들어, N-말단에서, C-말단에서, 2개의 도메인 사이에서 (예를 들어, 세포외 도메인과 막관통 도메인 사이에서, 세포외 도메인과 노치 수용체 폴리펩타이드 사이에서, 노치 수용체 폴리펩타이드와 세포내 신호전달 서열 사이에서 등)을 포함하는, 필수적으로 임의의 위치에서 키메라 폴리펩타이드에 부착될 수 있다. 추가의 서열은 독립적으로 다른 도메인의 키메라 폴리펩타이드와 기능할 수 있거나 키메라 폴리펩타이드의 임의의 도메인과 연합될 수 있고 함께 기능할 수 있다.
본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 사용하기에 적합한 신호 서열은 천연적으로 존재하는 신호 서열, 합성 (예를 들어, 인조) 신호 서열 등을 포함하는, 임의의 진핵 세포 신호 서열을 포함한다.
적합한 에피토프 태그는 헤마글루티닌 (HA; 예를 들어, YPYDVPDYA (서열번호: 117); FLAG (예를 들어, DYKDDDDK (서열번호: 118); c-myc (예를 들어, EQKLISEEDL; 서열번호: 119) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
친화성 도메인은 예를 들어, 동정 또는 정제를 위해 유용한, 고체 지지체 상에 고정화된 것과 같은 결합 파트너와 상호작용할 수 있는 펩타이드 서열을 포함한다. 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드와 융합되는 경우 다중 연속 단일 아미노산, 예를 들어, 히스티딘은 니켈 세파로스와 같은 수지 칼럼으로의 고친화성 결합에 의해 재조합 키메라 폴리펩타이드의 1-단계 정제를 위해 사용될 수 있다. 예시적 친화성 도메인은 His5 (HHHHH) (서열번호: 120), HisX6 (HHHHHH) (서열번호: 121), C-myc (EQKLISEEDL) (서열번호: 119), Flag (DYKDDDDK) (서열번호: 118), Strep 태그 (WSHPQFEK) (서열번호: 122), 헤마글리티닌, 예를 들어, HA 태그(YPYDVPDYA) (서열번호: 117), GST, 티오레독신, 셀룰로스 결합 도메인, RYIRS (서열번호: 123), Phe-His-His-Thr (서열번호124), 키틴 결합 도메인, S-펩타이드, T7 펩타이드, SH2 도메인, C-말단 RNA 태그, WEAAAREACCRECCARA (서열번호: 125), 금속 결합 도메인, 예를 들어, 아연 결합 도메인 또는 칼슘 결합 도메인, 예를 들어, 칼슘-결합 단백질로부터의 것들, 예를 들어, 칼모듈린, 트로포닌 C, 칼시뉴린 B, 미오신 경쇄, 레코베린, S-모듈린, 비시닌, VILIP, 뉴로칼신, 히포칼신, 프레쿠에닌, 칼트락틴, 칼파인 대형-서브유니트, S100 단백질, 파르브알부민, 칼빈딘 D9K, 칼빈딘 D28K, 및 칼레티닌, 인테인, 비오틴, 스트렙타비딘, MyoD, Id, 류신 지퍼 서열, 및 말토스 결합 단백질을 포함한다.
적합한 핵 국소화 신호 (“NLS”; 또한 본원에서 “핵 국소화 서열”로서 언급됨) 예를 들어, PKKKRKV (서열번호: 126); KRPAATKKAGQAKKKK (서열번호: 127); MVPKKKRK (서열번호: 128); MAPKKKRKVGIHGVPAA (서열번호: 129) 등을 포함한다. NLS는 본원의 키메라 폴리펩타이드의 N-말단에; 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 N-말단 근처에 (예를 들어, N-말단의 5개 아미노산 내, 10개 아미노산 내, 또는 20개 아미노산 내); 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 C-말단에; 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 C-말단 근처에 (예를 들어, C-말단의 5개 아미노산 내, 10개 아미노산 내, 또는 20개 아미노산 내); 또는 내부적으로 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드 내에 존재할 수 있다.
적합한 검출가능한 신호-생성 단백질은 예를 들어, 형광성 단백질; 생성물로서 검출가능한 신호를 생성하는 반응을 촉매하는 효소 등을 포함한다.
적합한 형광성 단백질은 녹색 형광성 단백질 (GFP) 또는 이의 변이체, GFP의 청색 형광성 변이체(BFP), GFP의 시안 형광성 변이체(CFP), GFP의 황색 형광성 변이체(YFP), 증진된 GFP (EGFP), 증진된 CFP (ECFP), 증진된 YFP (EYFP), GFPS65T, 에메랄드, Topaz (TYFP), 비너스(Venus), 시트린(Citrine), m시트린, GFPuv, 탈안정화된 EGFP (dEGFP), 탈안정화된 ECFP (dECFP), 탈안정화된 EYFP (dEYFP), mCFPm, 세룰레안, T-사피르, CyPet, YPet, mKO, HcRed, t-HcRed, DsRed, DsRed2, DsRed-단량체, J-Red, 이량체2, t-이량체2(12), mRFP1, 포실로포린, 레닐라 GFP, 몬스터 GFP, paGFP, 카에데(Kaede) 단백질 및 킨들링(kindling) 단백질, 피코빌리단백질 및 B-피코에리트린, R-피코에리트린 및 알로피코시아닌을 포함하는 피코빌리단백질 접합체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 형광성 단백질의 다른 예는 mHoneydew, mBanana, mOrange, dTomato, tdTomato, mTangerine, mStrawberry, mCherry, mGrape1, mRaspberry, mGrape2, mPlum (Shaner 외 (2005) Nat. Methods 2:905-909) 등을 포함한다. 다음 문헌에 기재된 바와 같이 안토조안 종 (Anthozoan species)으로부터 임의의 다양한 형광성 및 착색된 단백질(문헌참조: 예를 들어, Matz 외 (1999) Nature Biotechnol.17:969-973)은 사용에 적합하다.
적합한 효소는 말 서양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP), 알칼린 포스파타제 (AP), 베타-갈락토시다제 (GAL), 글루코스-6-포스페이트 데하이드로게나제, 베타-N-아세틸글루코사미니다제, β-글루쿠로니다제, 인버타제, 크산틴 옥시다제, 반딧불이 루시퍼라제, 글루코스 옥시다제 (GO) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에 기재된 키메라 폴리펩타이드 및 방법 및 회로에 사용하기 위해 채택될 수 있는 특정 추가의 수용체 폴리펩타이드 및 이의 성분은 예를 들어, PCT 출원 번호 US2016/019188에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다(공개번호 제 WO 2016/138034호), 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
핵산
본원의 개시내용은 본원의 개시내용의 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산은 발현 벡터 내에 함유된다. 따라서, 본원의 개시내용은 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 전사 조절 요소 (예를 들어, 프로모터, 인핸서 등)에 작동적으로 연결된다).일부 경우에, 전사 조절 요소는 유도성이다. 일부 경우에, 전사 조절 요소는 항상성이다. 일부 경우에, 프로모터는 진핵 세포에서 기능성이다. 일부 경우에, 프로모터는 세포 유형-특이적 프로모터이다. 일부 경우에, 프로모터는 조직-특이적 프로모터이다.
사용되는 숙주/벡터 시스템에 의존하여, 항상성 및 유도성 프로모터, 전사 인핸서 요소, 전사 종결인자 등을 포함하는, 임의의 다수의 적합한 전사 및 해독 조절 요소들은 발현 벡터에 사용될 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Bitter 외 (1987) Methods in Enzymology, 153:516-544).
프로모터는 항상성 활성 프로모터 (즉, 활성/”ON” 상태에서 항상성인 프로모터)일 수 있고, 이것은 유도성 프로모터(즉, 이의 상태로서 활성/”ON” 또는 불활성/”OFF” 상태가 외부 자극에 의해, 예를 들어, 특정 온도, 화합물 또는 단백질의 존재에 의해 조절되는 프로모터)일 수 있고, 이것은 공간적으로 제한된 프로모터 (즉, 전사 조절 요소, 인핸서 등) (예를 들어, 조직 특이적 프로모터, 세포 유형 특이적 프로모터 등)일 수 있고, 이것은 일시적으로 제한된 프로모터 (즉, 배아 발육의 특이적 단계 동안에 또는 생물학적 공정, 예를 들어, 마우스에서 모발 모낭 사이클의 특이적 단계 동안에 “ON” 상태 또는 “OFF” 상태인 프로모터)일 수 있다.
적합한 프로모터 및 증진제 요소들은 당업계에 공지되어 있다. 세균 세포에서 발현을 위해, 적합한 프로모터는 lacI, lacZ, T3, T7, gpt, 람다 P 및 trc를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 진핵 세포에서 발현하기 위해, 적합한 프로모터는 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린 유전자 프로모터 및 인핸서 요소; 사이토메갈로바이러스 이메디에이트 어얼리 프로모터; 헤르페스 심플렉스 바이러스 티미딘 키나제 프로모터; 어얼리 및 레이트 SV40 프로모터; 레트로바이러스 기원의 긴 말단 반복체에 존재하는 프로모터; 마우스 메탈로티오네인-I 프로모터; 및 다양한 당업계 공지된 조직 특이적 프로모터를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 본원에 기재된 핵산의 전사 조절 요소는 시스-작용 조절 서열을 포함할 수 있다. 임의의 적합한 시스-작용 조절 서열은 본원에 기재된 핵산에 유용할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 시스-작용 조절 서열은 업스트림 활성화 서열 또는 업스트림 활성화 서열 (UAS)일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 본원에 기재된 핵산의 UAS는 Gal4 반응성 UAS일 수 있다.
가역적 유도성 프로모터를 포함하는 적합한 가역적 프로모터는 당업계에 공지되어 있다. 상기 가역적 프로모터는 많은 유기체, 예를 들어, 진핵 세포 및 원핵 세포로부터 단리될 수 있고 이로부터 유래될 수 있다. 제2 유기체에 사용하기 위한 제1 유기체, 예를 들어 제1 진핵 세포 및 제2 진핵 세포, 제1 진핵 세포 및 제2 원핵 세포 등으로부터 유래된 가역적 프로모터의 변형은 당업계에 널리 공지되어 있다. 상기 가역적 프로모터, 및 상기 가역적 프로모터를 기반으로 하지만 또한 추가의 조절 단백질을 포함하는 시스템은 알콜 조절된 프로모터 (예를 들어, 알콜 데하이드로게나제 I (alcA) 유전자 프로모터, 알콜 트랜스활성화 단백질 (AIcR)에 반응하는 프로모터 등)), 테트라사이클린 조절된 프로모터, (예를 들어, Tet활성화인자, TetON, TetOFF 등을 포함하는 프로모터 시스템), 스테로이드 조절된 프로모터 (예를 들어, 래트 글루코코르티코이드 수용체 프로모터 시스템, 인간 에스트로겐 수용체 프로모터 시스템, 레티노이드 프로모터 시스템, 갑상선 프로모터 시스템, 엑디손(ecdysone) 프로모터 시스템, 미페프리스톤(mifepristone) 프로모터 시스템등), 금속 조절된 프로모터 (예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터 시스템 등), 발병-관련된 조절된 프로모터 (예를 들어, 살리실산 조절된 프로모터, 에틸렌 조절된 프로모터, 벤조티아디아졸 조절된 프로모터 등), 온도 조절된 프로모터 (예를 들어, 열 쇼크 유도성 프로모터(예를 들어, HSP-70, HSP-90, 대두 열 쇼크 프로모터 등), 경쇄 조절된 프로모터, 합성 유도성 프로모터 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
사용에 적합한 유도성 프로모터는 본원에 기재되거나 당업자에게 공지된 임의의 유도성 프로모터를 포함한다. 유도성 프로모터의 예는 제한 없이 화학적/생화학적 조절되고 물리적으로 조절된 프로모터, 예를 들어, 알콜-조절된 프로모터, 테트라사이클린-조절된 프로모터(예를 들어, 언하이드로테트라사이클린 (aTc)-반응성 프로모터 및 다른 테트라사이클린-반응성 프로모터 시스템을 포함하고, 이는 테트라사이클린 리프레서 단백질 (tetR), 테트라사이클린 작동인자 서열(tetO) 및 테트라사이클린 트랜스활성화인자 융합 단백질 (tTA)), 스테로이드-조절된 프로모터(예를 들어, 래트 글루코코르티코이드 수용체, 인간 에스트로겐 수용체, 모트엑디손 수용체 기반이 되는 프로모터, 및 스테로이드/레티노이드/티로이드 수용체 슈퍼패밀리로부터의 프로모터), 금속-조절된 프로모터(예를 들어, 호모, 마우스 및 인간으로부터 메탈로티오네인 (금속 이온을 결합하고 격리시키는 단백질) 유전자 로부터 유래하는 프로모터), 발병-조절된 프로모터 (예를 들어, 살리실산, 에틸렌 또는 벤조티아디아졸(BTH)에 의해 유도된), 온도/열-유도성 프로모터(예를 들어, 열 쇼크 프로모터), 및 광-조절된 프로모터(예를 들어, 식물 세포로부터 광 반응성 프로모터)를 포함한다.
일부 경우에, 프로모터는 CD8 세포-특이적 프로모터, CD4 세포-특이적 프로모터, 호중구-특이적 프로모터, 또는 NK-특이적 프로모터이다. 예를 들어, CD4 유전자 프로모터가 사용될 수 있고 예를 들어, 하기 문헌을 참조한다: Salmon 외 (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:7739; 및 Marodon 외 (2003) Blood 101:3416.또 다른 예로서, CD8 유전자 프로모터가 사용될 수 있다. NK 세포-특이적 발현은 Ncr1 (p46) 프로모터를 사용함에 의해 성취될 수 있고; 예를 들어, 하기 문헌을 참조한다: Eckelhart 외 (2011) Blood 117:1565.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산은 재조합 발현 벡터이거나 재조합 발현 벡터 내에 포함된다. 일부 구현예에서, 재조합 발현 벡터는 바이러스 작제물, 예를 들어, 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV) 작제물, 재조합 아데노바이러스 작제물, 재조합 렌티바이러스 작제물, 재조합 레트로바이러스 작제물 등이다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산은 재조합 렌티바이러스 벡터이다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산은 재조합 AAV 벡터이다.
적합한 발현 벡터는 바이러스 벡터 (예를 들어. 백시니아 바이러스 기반의 바이러스 벡터; 폴리오바이러스; 아데노바이러스(문헌참조: 예를 들어, Li 외, Invest Opthalmol Vis Sci 35:2543 2549, 1994; Borras 외, Gene Ther 6:515 524, 1999; Li 및 Davidson, PNAS 92:7700 7704, 1995; Sakamoto 외, Hum Gene Ther 5:1088 1097, 1999; WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 및 WO 95/00655); 아데노-관련 바이러스(문헌참조: 예를 들어, Ali 외, Hum Gene Ther 9:81 86, 1998, Flannery 외, PNAS 94:6916 6921, 1997; Bennett 외, Invest Opthalmol Vis Sci 38:2857 2863, 1997; Jomary 외, Gene Ther 4:683 690, 1997, Rolling 외, Hum Gene Ther 10:641 648, 1999; Ali 외, Hum Mol Genet 5:591 594, 1996; Srivastava in WO 93/09239, Samulski 외, J. Vir. (1989) 63:3822-3828; Mendelson 외, Virol. (1988) 166:154-165; 및 Flotte 외, PNAS (1993) 90:10613-10617); SV40; 헤르페스 심플렉스 바이러스; 사람 면역결핍 바이러스 (문헌참조: 예를 들어, Miyoshi 외, PNAS 94:10319 23, 1997; Takahashi 외, J Virol 73:7812 7816, 1999); 레트로바이러스 벡터(예를 들어, 뮤린 백혈병 바이러스, 비장 괴사 바이러스, 및 라우스 사코마 바이러스(Rous Sarcoma Virus), 하베이 사코마 바이러스, 아비안 류코시스 바이러스(avian leukosis virus), 렌티바이러스, 인간 면역결핍 바이러스, 골수증식성 사코마 바이러스(myeloproliferative sarcoma virus), 및 포유동물 종양 바이러스)와 같은 레트로바이러스로부터 유래된 벡터 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 상기 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 또한, 트랜스포존-매개된 벡터, 예를 들어, 피기백 (piggyback) 및 슬리핑 뷰티 벡터가 적합하다.
본원의 개시내용의 핵산은 목적하는 폴리펩타이드 (POI)를 암호화하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. POI는 필수적으로 임의의 폴리펩타이드일 수 있고, 연구 목적의 폴리펩타이드(예를 들어, 리포터 폴리펩타이드, 돌연변이된 폴리펩타이드, 신규한 합성 폴리펩타이드 등), 치료학적 목적의 폴리펩타이드(예를 들어, 천연적으로 존재하는 치료학적 단백질, 재조합 치료학적 폴리펩타이드 등), 산업 목적의 폴리펩타이드(예를 들어, 제조와 같은 산업적 응용에 사용되는 폴리펩타이드) 등을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에서, POI는 전사 활성화인자일 수 있다. 일부 경우에서, POI는 CAR일 수 있다. 일부 경우에서, POI는 TCR일 수 있다. 일부 경우에서, POI는 항체일 수 있다. 일부 경우에서, POI는 키메라 이중특이적 결합 구성원일 수 있다. 일부 경우에서, POI는 선천성-면역 반응 유도제일 수 있다. 일부 경우에서, POI는 면역 억제 인자일 수 있다. 일부 경우에서, POI는 본원에 기재된 바와 같은, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 다중-성분 회로에 사용된 바와 같은 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드일 수 있다.
본원에 기재된 키메라 폴리펩타이드 및 방법 및 회로에 사용하기 위해 채택될 수 있는 특정 핵산 및 성분은 예를 들어, PCT 출원 번호 US2016/019188에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다(공개번호 제 WO 2016/138034호), 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
세포
본원의 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 키메라 폴리펩타이드를 발현하도록 가공된 세포를 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 세포는 본원에 기재된 바와 같은 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함한다. 일부 경우에, 본원의 개시내용의 세포는 전사 조절 요소, 예를 들어, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 유리된 세포내 도메인에 반응하여 키메라 폴리펩타이드의 활성화시 핵산의 발현을 유도하는 전사 활성화인자에 작동적으로 연결된 핵산을 포함한다. 목적하는 임의의 폴리펩타이드는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드에 반응하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 세포 내 핵산으로부터 암호화될 수 있다.
본원의 개시내용의 방법은 임의의 진핵 세포의 활성을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 일부 경우에, 상기 세포는 생체내이다. 일부 경우에, 상기 세포는 생체외이다. 일부 경우에, 상기 세포는 시험관내이다. 일부 경우에, 상기 세포는 포유동물 세포이다. 일부 경우에, 세포는 인간 세포이다. 일부 경우에, 세포는 비-인간 영장류 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 설치류 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 마우스 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 래트 세포이다.
적합한 세포는 신경 세포; 간 세포; 신장 세포; 면역 세포; 심장 세포; 골격근 세포; 평활근 세포; 폐 세포 등을 포함한다.
적합한 세포는 줄기 세포(예를 들어. 배아성 줄기(ES) 세포, 유도된 다능성 시스템(iPS) 세포; 생식 세포 (예를 들어, 난모세포, 정자, 난원세포, 정원 세포 등); 체세포, 예를 들어. 섬유아세포, 희소돌기신경교, 신경교세포, 조혈 세포, 뉴런, 근육 세포, 골 세포, 간세포, 췌장 세포 등을 포함한다.
적합한 세포는 인간 배아 줄기 세포, 태아 심근세포, 근섬유아세포, 간엽 줄기 세포, 자가이식된 확장된 심근세포, 지방세포, 전능 세포, 다능성 세포, 혈액 줄기 세포, 근원세포, 성인 줄기 세포, 골수 세포, 간엽 세포, 배아성 줄기 세포, 조직질실 세포, 상피 세포, 내피 세포, 중피 세포, 섬유아세포, 골아세포, 연골세포, 외인성 세포, 내인성 세포, 줄기 세포, 조혈 줄기 세포, 골수 유래된 선조체 세포, 심근 세포, 골격 세포, 태아 세포, 미분화 세포, 다분화능 선조체 세포, 단일분화능 선조체 세포, 단핵구, 심장 근아세포 근원세포, 골격 근원세포, 대식세포, 모세관 내피 세포, 이종 세포, 동종 세포, 및 생후 줄기 세포를 포함한다.
일부 경우에, 세포는 면역 세포, 뉴런, 상피 세포 및 내피 세포 또는 줄기 세포이다. 일부 경우에, 면역 세포는 T 세포, B 세포, 단핵구, 천연 킬러 세포, 수지상 세포,또는 대식세포이다. 일부 경우에, 상기 면역 세포는 세포독성 T 세포이다. 일부 경우에, 상기 면역 세포는 헬퍼 T 세포이다. 일부 경우에, 상기 면역 세포는 조절 T 세포(Treg)이다.
일부 경우에, 상기 세포는 줄기 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 유도된 다능성 줄기 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 간엽 줄기 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 조혈 줄기 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 성인 줄기 세포이다.
적합한 세포는 기관지폐포 줄기 세포 (BASCs), 벌즈 (bulge) 상피 줄기 세포(bESC), 각막 상피 줄기 세포(CESC), 심장 줄기 세포 (CSC), 상피 신경관 줄기 세포 (eNCSC), 배아성 줄기 세포(ESC), 내피 선조체 세포 (EPC), 간 난원형 세포 (HOC), 조혈 줄기 세포 (HSC), 케라티노사이트 줄기 세포 (keratinocyte stem cell) (KSC), 간엽 줄기 세포 (MSC), 신경 줄기 세포 (NSC), 췌장 줄기 세포 (PSC), 망막 줄기 세포 (RSC), 및 피부-유래된 전구체 (SKP)를 포함한다.
일부 경우에, 줄기 세포는 조혈 줄기 세포 (HSC)이고, 전사 인자는 HSC를 적혈구 세포, 혈소판, 림프구, 단핵구, 호중구, 호염구 또는 호산구로 분화시키기 위한 분화를 유도한다. 일부 경우에, 줄기 세포는 간엽 줄기 세포(MSC)이고, 전사 인자는 MSC의 연결 조직 세포, 예를 들어, 골 세포, 연골, 평활근, 건, 인대, 간질, 골수, 피부 또는 지방으로의 분화를 유도한다.
본원의 개시내용의 세포는 유전학적으로 변형된, 예를 들어, 본원의 개시내용의 핵산으로 변형된 숙주 세포, 즉, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산으로 유전학적으로 변형된 숙주 세포일 수 있다. 하나의 구현예에서, 본원의 개시내용은 세포, 예를 들어, 본원의 개시내용의 핵산을 함유하도록 유전학적으로 변형된 숙주 세포에서 이종성 폴리펩타이드의 발현을 유도하는 방법을 제공한다. 방법은 일반적으로 세포를 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원의 결합 파트너와 접촉시킴을 포함한다. 상기 결합은 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도함으로써 세포내 도메인을 방출시킨다. 세포내 도메인의 방출은 세포의 활성을 조절할 수 있고, 예를 들어, 이종성 유전자 또는 암호화서열의 발현을 유도할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본원의 개시내용의 방법은 일반적으로 세포를, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 특이적 결합 구성원과 결합하는 펩타이드-MHC와 접촉시킴을 포함한다. 상기 결합은 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도함으로써 세포내 도메인을 방출시킨다. 세포내 도메인의 방출은 세포의 활성을 조절할 수 있고, 예를 들어, 이종성 유전자 또는 암호화서열의 발현을 유도할 수 있다.
일부 경우에, 세포는 진핵 세포이다. 일부 경우에, 세포는 포유동물 세포, 양서류 세포, 파충류 세포, 조류 세포 또는 식물 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 식물 세포이다.
일부 경우에, 상기 세포는 포유동물 세포이다. 일부 경우에, 세포는 인간 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 마우스 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 래트 세포이다. 일부 경우에, 세포는 비-인간 영장류 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 토끼목 포유동물 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 유제류 세포이다.
일부 경우에, 상기 세포는 면역 세포, 예를 들어, T 세포, B 세포, 대식세포, 수지상 세포l, 천연 킬러 세포, 단핵구 등이다. 일부 경우에, 상기 세포는 T 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 세포독성 T 세포 (예를 들어, CD8+ T 세포)이다. 일부 경우에, 상기 세포는 헬퍼 T 세포 (예를 들어, CD4+ T 세포)이다. 일부 경우에, 상기 세포는 조절 T 세포(“Treg”)이다. 일부 경우에, 상기 세포는 B 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 대식세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 수지상 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 말초 혈액 단핵 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 단핵구이다. 일부 경우에, 세포는 천연 킬러 (NK) 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 CD4+, FOXP3+ Treg 세포이다. 일부 경우에, 상기 세포는 CD4+, FOXP3- Treg 세포이다.
일부 경우에, 상기 세포는 개체로부터 수득된다. 예를 들어, 일부 경우에, 상기 세포는 1차 세포이다. 또 다른 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 줄기 세포 또는 선조체 세포이다.
하나의 비제한적인 예로서, 일부 경우에, 상기 세포는 개체로부터 수득된 면역 세포이다. 하나의 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 T 림프구일 수 있다. 또 다른 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 세포독성 세포 (예를 들어, 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포 등)이다. 또 다른 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 헬퍼 T 세포일 수 있다. 또 다른 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 조절 T 세포일 수 있다. 또 다른 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 NK 세포일 수 있다. 또 다른 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 대식세포일 수 있다. 또 다른 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 수지상 세포일 수 있다. 또 다른 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 B 세포일 수 있다. 또 다른 예로서, 상기 세포는 개체로부터 수득된 말초 혈액 단핵 세포일 수 있다.
일부 경우에, 숙주 세포는 체세포, 예를 들어, 섬유아세포, 조혈 세포, 뉴런, 췌장 세포, 근육 세포, 골 세포, 간 세포, 췌장 세포, 상피 세포, 내피 세포, 심근세포, T 세포, B 세포, 골 세포 등이다.
일부 경우에, 세포는 예를 들어, 본원의 개시내용의 2개의 상이한 키메라 폴리펩타이드, 본원의 개시내용의 3개의 상이한 키메라 폴리펩타이드, 본원의 개시내용의 4개의 상이한 키메라 폴리펩타이드, 본원의 개시내용의 5개의 상이한 키메라 폴리펩타이드를 포함하지만 이에 제한되지 않는 본원의 개시내용의 2개 이상의 상이한 키메라 폴리펩타이드를 발현하도록 유전학적으로 변형된다.
본원에 기재된 키메라 폴리펩타이드에 사용하기 위해 채택될 수 있고/있거나 방법 및 회로에 조절될 수 있는 특정 세포 및 성분들 및 이의 활성은 예를 들어, 하기 문헌에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: PCT 출원 번호 US2016/019188(공개에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 번호 제 WO 2016/138034호), 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
회로
본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인은 세포외 도메인의 특이적 결합 구성원으로의 결합 파트너의 결합 시 방출되는 경우 본원에 기재된 바와 같은 다양한 폴리펩타이드의 발현을 유도할 수 있다. 일부 경우에, 2개 이상의 폴리펩타이드의 유도된 발현은 논리적 게이트된 회로를 생성할 수 있다. 상기 논리적 게이트된 회로는 예를 들어, “및 게이트”, “OR 게이트”, “NOT 게이트” 및 이의 조합을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않고, 이는 예를 들어, 보다 높은 정도의 게이트를 포함하고, 이는 예를 들어, 보다 높은 정도의 및 게이트, 보다 높은 정도의 OR 게이트, 보다 높은 정도의 NOT 게이트, 보다 높은 정도의 조합된 게이트(즉, 및, OR 및/또는 NOT 게이트의 일부 조합을 사용한 게이트)를 포함한다.
본원의 개시내용의 “및” 게이트는 2개 이상의 인풋이 신호의 전파를 위해 요구되는 경우를 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에, 및 게이트는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드 및 2차 결합-의존성 분자를 통한 신호전달을 허용한다. 및 게이트에서, 2개의 인풋, 예를 들어, 2개의 항원은 회로를 통한 신호 전달을 위해 요구된다.
본원의 개시내용의 “OR” 게이트는 2개 이상의 인풋 중 어느 하나가 신호의 전파를 허용할 수 있는 경우를 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에, OR 게이트는 본원의 개시내용의 2개의 상이한 키메라 폴리펩타이드 중 어느 하나를 통한 신호전달을 허용한다. OR 게이트에서, 임의의 하나의 인풋, 예를 들어, 2개의 항원 중 어느 하나는 회로의 신호전달 아웃풋을 유도할 수 있다. 하나의 구현예에서, OR 게이트는 2개의 별도의 분자 또는 작제물의 사용을 통해 성취될 수 있다. 또 다른 구현예에서, OR 게이트는 예를 들어, 각각 상이한 결합 파트너에 결합하지만 이중 하나가 키메라 폴리펩타이드를 활성화시킬 수 있는 2개의 상이한 특이적 결합 구성원을 갖는 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드를 포함하는, 2개의 항원을 인지하는 단일 작제물의 사용을 통해 성취될 수 있다. 일부 경우에, OR 게이트는 예를 들어, 각각 상이한 항원에 결합하지만 이중 하나의 항원이 키메라 폴리펩타이드를 활성화시킬 수 있는 2개의 상이한 특이적 결합 구성원을 갖는 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드를 포함하는, 2개의 항원을 인지하는 단일 작제물의 사용을 통해 성취될 수 있다.
본원의 개시내용의 “NOT” 게이트는 인풋이 신호의 전파를 차단할 수 있는 경우를 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에, NOT 게이트는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 통한 신호 전달을 저해한다. 하나의 구현예에서, NOT 게이트는 결합 상호작용의 저해를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원의 개시내용의 스플릿 키메라 폴리펩타이드의 일부의 결합을 차단하는 경쟁적 저해제는 회로를 통한 신호전달을 차단하는 NOT 게이트로서 작용할 수 있다. 또 다른 구현예에서, NOT 게이트는 회로의 요소의 기능적 저해를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 통한 신호전달 또는 회로를 통한 신호전달 결과를 기능적으로 차단하는 저해제는 NOT 게이트로서 작용할 수 있다.
일부 경우에, 면역억제제 (예를 들어, 면역 억제 인자)의 생성은 본원에 기재된 다중-인풋 회로에서 NOT 게이트 기능성을 제공할 수 있다.
다중-인풋 게이트는 NOT 게이트를 활성화시키는 신호 (예를 들어, 특정 음성 항원)이 존재할 때 및/또는 존재하는 경우에 회로의 일부 다른 성분을 통한 신호전달을 차단하거나 세포 반응을 중단시키기 위해 다양한 상이한 방식으로 NOT 게이트를 사용할 수 있다. 예를 들어, 및+NOT 게이트는 제1 항원의 존재에서 특정 세포 활성에 양성으로 영향을 미치는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드 및 제2 항원의 존재에서 세포 활성에 음성으로 영향을 미치는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.
일부 경우에, 본원의 개시내용의 회로는 세포내 항원의 펩타이드를 나타내는 펩타이드-MHC 복합체에 특이적인 특이적 결합 구성원에 의해 제공되는 세포내 항원의 인지를 사용할 수 있다. 세포내 항원 인지를 사용하는 회로는 일부 경우에 세포내 항원 인지와 제2 항원의 인지를 커플링시킬 수 있고, 여기서, 상기 제2 항원은 또한 세포내 항원일 수 있거나 세포외 (예를 들어, 표면 발현된) 항원일 수 있다. 따라서, 일부 경우에, 회로는 “내부-내부(inside-inside)” 회로일 수 있고 여기서, 상기 회로는 2개의 세포내 항원의 인지에 의존한다. 일부 경우에, 회로는 “내부-외부(inside-outside)” 회로일 수 있고, 여기서, 상기 회로는 세포내 항원의 제1 인지 및 세포외 항원의 제2 인지에 의존한다. 일부 경우에, 회로는 “외부-내부(outside-inside)” 회로일 수 있고, 여기서, 상기 회로는 세포외 항원의 제1 인지 및 세포내 항원의 제2 인지에 의존한다. 일부 경우에, 회로는 “외부-외부(outside-outside)” 회로일 수 있고 여기서, 상기 회로는 2개의 세포외 항원의 인지에 의존한다. 상기 회로는 2개의 항원으로 제한되지 않고, 일부 경우에, 예를 들어, 내부-내부-내부 항원 회로, 내부-내부-외부 항원 회로, 내부-외부-내부 항원 회로, 외부-내부-내부 항원 회로, 내부-외부-외부 항원 회로 등을 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, “내부-내부” 회로는 펩타이드-MHC와 관련하여 제1 세포내 항원과 결합시 예를 들어, TCR, CAR, 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원 등을 포함하는, 펩타이드-MHC와 관련하여 제2 세포내 항원을 인지하는 치료제의 발현을 유도하는 제1 키메라 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, “내부-내부” 회로는 MHC와 관련하여 WT1 세포내 항원과 결합시 예를 들어, TCR, CAR, 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원 등을 포함하는, 펩타이드-MHC와 관련하여 제2 세포내 항원을 인지하는 치료제의 발현을 유도하는 제1 키메라 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, “내부-내부” 회로는 MHC와 관련하여 NY-ESO1 세포내 항원과 결합시 예를 들어, TCR, CAR, 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원 등을 포함하는, 펩타이드-MHC와 관련하여 제2 세포내 항원을 인지하는 치료제의 발현을 유도하는 제1 키메라 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, “내부-외부” 회로는 펩타이드-MHC와 관련하여 세포내 항원과 결합시 예를 들어, TCR, CAR, 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원 등을 포함하는, 세포외 항원을 인지하는 치료제의 발현을 유도하는 키메라 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, “내부-외부” 회로는 MHC와 관련하여 WT1 세포내 항원과 결합시 예를 들어, TCR, CAR, 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원 등을 포함하는, 세포외 항원을 인지하는 치료제의 발현을 유도하는 키메라 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, “내부-외부” 회로는 MHC와 관련하여 NY-ESO1 세포내 항원과 결합시 예를 들어, TCR, CAR, 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원 등을 포함하는, 세포외 항원 인지하는 치료제의 발현을 유도하는 키메라 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.
본원의 개시내용의 다중-인풋 회로 및 논리적 게이트된 시스템이 구체적으로 기재된 것들에 제한되지 않고 기재된 것들과 비교하여 또 다른 형태 및/또는 보다 높은 정도의 게이트를 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 본원의 개시내용의 논리적 게이트된 시스템은 2개 인풋 게이트, 3개 인풋 게이트, 4개 인풋 게이트, 5개 인풋 게이트, 6개 인풋 게이트, 7개 인풋 게이트, 8개 인풋 게이트, 9개 인풋 게이트, 10개 인풋 게이트 이상일 수 있다. 예를 들어, 키메라 폴리펩타이드, CAR, TCR, 키메라 이중특이적 결합 구성원을 포함하는 본원에 기재된 임의의 작제물은 예를 들어, 키메라 폴리펩타이드, CAR, TCR, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 제2 키메라 폴리펩타이드, 제2 CAR, 제2 TCR, 제2 키메라 이중특이적 결합 구성원 등을 포함하는 본원에 기재된 임의의 다른 작제물과 연계된 회로에 유용할 수 있다.
본원에 기재된 키메라 폴리펩타이드 및 방법과 함께 사용하도록 조정될 수 있는 특정 회로 및 그 구성요소는 예를 들어, PCT 출원 번호 US2016/019188에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는다(공개번호 제 WO 2016/138034호), 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨.
키트
본원의 개시내용은 본원에 기재된 방법을 수행하고/하거나 하나 이상의 키메라 폴리펩타이드, 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산, 이의 성분 등을 작제하기 위한 키트를 제공한다.
일부 경우에, 본원의 키트는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 하나 이상의 부분을 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 일부 경우에, 본원의 키트는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 포함한다.
일부 경우에, 본원의 키트는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산으로 유전학적으로 변형되거나 변형되어야만 하는 세포, 예를 들어, 숙주 세포 또는 숙주 세포주를 포함한다. 일부 경우에, 본원의 키트는 본원의 개시내용의 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 재조합 발현 벡터로 유전학적으로 변형되거나 변형되어야만 하는 세포, 예를 들어, 숙주 세포를 포함한다. 키트 성분들은 동일한 컨테이너 또는 별도의 컨테이너에 있을 수 있다.
상기된 임의의 키트는 추가로 하나 이상의 추가의 시약을 포함할 수 있고, 여기서, 상기 추가의 시약은 하기로부터 선택될 수 있다: 희석 완충액; 재구성 용액; 세척 완충액; 조절 시약; 조절 발현 벡터; 음성 조절 폴리펩타이드 (예를 들어, 하나 이상의 단백질용해 절단 부위가 부재여서, 결합시, 세포내 도메인이 방출되지 않는 키메라 폴리펩타이드); 양성 조절 폴리펩타이드; 키메라 폴리펩타이드의 시험관내 생산을 위한 시약 등.
상기 언급된 성분들에 추가로, 본원의 키트는 본원의 방법을 수행하기 위해 키트의 성분들을 사용하기 위한 지침서를 추가로 포함할 수 있다. 본원의 방법을 수행하기 위한 지침서는 일반적으로 적합한 판독 매체 상에 기록한다. 예를 들어, 지침서는 기재, 예를 들어, 종이 또는 플라스틱 등 상에 인쇄될 수 있다. 이와 같이, 상기 지침서는 키트 또는 이의 성분 등의 컨테이너의 라벨링 (즉, 팩키징 또는 서브팩키징과 관련된)에서 팩키지 삽입물로서 키트에 존재할 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 지침서는 적합한 컴퓨터 판독 저장 매체, 예를 들어, CD-ROM, 디스켓, 플래시 드라이브 등 상에 존재하는 전자 저장 데이터 파일로서 존재한다. 여전히 다른 구현예에서, 실제 지침서는 키트에 존재하지 않지만, 예를 들어, 인터넷을 통한 원거리 공급원으로부터의 지침서를 수득하기 위한 수단이 제공된다. 구현예의 하나의 예는 지침서가 검토될 수 있고/있거나 지침서가 다운로드될 수 있는 웹 주소를 포함하는 키트이다. 지침서에 관하여, 지침서를 수득하기 위한 상기 수단은 적합한 기재 상에 기록한다.
개시내용의 비제한적인 양상의 예
상기된 본원의 주요 요지의 구현예를 포함하는 양상은 단독으로 또는 하나 이상의 다른 양상 또는 구현예와 조합하여 이로울 수 있다. 이전의 기재를 제한하는 것 없이, 하기 번호의 개시내용의 특정 비제한적인 양상이 제공된다. 본 개시내용 판독시에 당업자에게 자명해지는 바와 같이, 개별적으로 번호를 매긴 양상의 각각이 사용될 수 있거나 이전에 또는 하기의 개별적으로 번호를 매긴 임의의 양상과 조합될 수 있다. 이것은 모든 상기 양상의 조합을 위한 지지를 제공하는 것으로 의도되고 하기에 명백하게 제공된 양상의 조합으로 제한되지 않는다:
1. N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드:
a) 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
b) 하나 이상의 단백질 용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
c) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인을 포함하고, 여기서 상기 특이적 결합 구성원의 펩타이드-MHC로의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시킨다.
2. 양상 1에 있어서, 상기 특이적 결합 구성원이 항체를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
3. 양상 2에 있어서, 상기 항체가 나노항체, 디아바디, 트리아바디, 또는 미니바디, F(ab’)2 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편 (scFv) 또는 단일 도메인 항체(sdAb)인, 키메라 폴리펩타이드.
4. 양상 1 내지 3 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 특이적 결합 구성원이 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는, 키메라 폴리펩타이드.
5. 양상 4에 있어서, 상기 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드 또는 NY-ESO 펩타이드인, 키메라 폴리펩타이드.
6. 양상 1 내지 5 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 이의 N-말단에 하나 이상의 상피 성장 인자 (EGF) 반복체를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
7. 양상 6에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 이의 N-말단에 2 내지 11개 EGF 반복체를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
8. 양상 1 내지 7 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 합성 링커를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
9. 양상 8에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 상기 하나 이상의 EGF 반복체와 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위 사이에 합성 링커를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
10. 양상 1 내지 9 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 50개 아미노산 내지 1000개 아미노산의 길이를 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
11 양상 10에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 300개 아미노산 내지 400개 아미노산의 길이를 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
12. 양상 1 내지 11 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위가 S2 단백질용해 절단 부위, S3 단백질용해 절단 부위 또는 이의 조합을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
13. 양상 12에 있어서, 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위가 Ala-Val 디펩타이드 서열을 포함하는 ADAM-17-유형의 프로테아제 절단 부위인 S2 단백질용해 절단 부위를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
14. 양상 1 내지 13 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위가 Gly-Val 디펩타이드 서열을 포함하는 감마-세크레타제 (γ-세크레타제) 절단 부위인 S3 단백질용해 절단 부위를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
15. 양상 1 내지 14 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위가 S1 단백질용해 절단 부위를 추가로 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
16. 양상 15에 있어서, 상기 S1 단백질용해 절단 부위가 아미노산 서열 Arg-X-(Arg/Lys)-Arg (서열번호: 130) (여기서, X는 임의의 아미노산이다)을 포함하는 푸린형 프로테아제 절단 부위인, 키메라 폴리펩타이드.
17. 양상 1 내지 16 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 S1 단백질용해 절단 부위가 부재인, 키메라 폴리펩타이드.
18. 양상 1 내지 17 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 도 31a-32b에 제공된 서열과 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
19. 양상 18에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 도 31a에 제공된 서열 또는 도 31b에 제공된 서열과 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
20. 양상 1 내지 19 중 어느 한 양상에 따른 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산.
21. 양상 20에 있어서, 상기 핵산이 목적하는 폴리펩타이드 (POI)를 암호화하는 핵산 서열에 작동적으로 연결된 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소를 추가로 포함하는, 핵산.
22. 양상 21에 있어서, 상기 POI가 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR) 및 선천성-면역 반응 유도제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 이종성 폴리펩타이드인, 핵산.
23. 양상 20 내지 22 중 어느 한 양상에 따른 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터.
24.세포에서 이종성 폴리펩타이드의 발현을 유도하는 방법으로서, 상기 방법이:
세포와 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)를 접촉시키는 단계로서, 여기서, 상기 세포는 양상 1 내지 19 중 어느 한 양상에 따른 키메라 폴리펩타이드를 발현하고 상기 키메라 폴리펩타이드의 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 이종성 폴리펩타이드를 암호화하는 서열을 포함하여 상기 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인을 방출시키고 상기 이종성 폴리펩타이드의 발현을 유도하는 단계를 포함하는, 방법.
25. 양상 24에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드가 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR) 및 선천성-면역 반응 유도제인, 방법.
26. 다음을 포함하는 숙주 세포:
a) 제1 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)에 특이적으로 결합하는 양상 20 내지 22 중 어느 한 양상에 따른 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산; 및
b) 목적하는 폴리펩타이드 (POI)를 암호화하는 핵산에 작동적으로 연결된 키메라 폴리펩타이드의 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소.
27. 양상 26에 있어서, 상기 숙주 세포가 유전학적으로 변형되고 상기 핵산 및 상기 전사 조절 요소가 상기 숙주 세포의 게놈 내에 존재하는, 숙주 세포.
28. 양상 26에 있어서, 상기 핵산 및 상기 전사 조절 요소가 상기 숙주 세포 내 염색체 외부에 존재하는, 숙주 세포.
29. 양상 26 내지 28 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 POI가 이종성 폴리펩타이드인, 숙주 세포.
30. 양상 29에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드가 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR) 및 선천성-면역 반응 유도제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 숙주 세포.
31. 양상 30에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드가 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 CAR인, 숙주 세포.
32. 양상 31에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드의 상기 특이적 결합 구성원이 제1 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하고 상기 CAR이 제2 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는, 숙주 세포.
33. 양상 32에 있어서, 상기 제1 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드이고 상기 제2 세포내 암 항원 펩타이드가 NY-ESO 펩타이드인, 숙주 세포.
34. 양상 32에 있어서, 상기 제1 세포내 암 항원 펩타이드가 NY- ESO 펩타이드이고 상기 제2 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드인, 숙주 세포.
35. 양상 30에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드가 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 가공된 TCR인, 숙주 세포.
36. 양상 35에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드의 상기 특이적 결합 구성원이 제1 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하고 상기 가공된 TCR이 제2 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는, 숙주 세포.
37. 양상 36에 있어서, 상기 제1 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드이고 상기 제2 세포내 암 항원 펩타이드가 NY-ESO 펩타이드인, 숙주 세포.
38. 양상 36에 있어서, 상기 제1 세포내 암 항원 펩타이드가 NY- ESO 펩타이드이고 상기 제2 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드인, 숙주 세포.
39. 다음을 포함하는 숙주 세포:
a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산:
i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인;
b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 키메라 이중특이적 결합 구성원을 암호화하는 핵산으로서, 상기 표적 분자로의 특이적 결합 구성원의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 상기 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 발현되도록 하는, 핵산.
40. 양상 39에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 암 항원에 특이적인 결합 도메인 및 면역 세포의 표면상에서 발현되는 단백질에 특이적인 결합 도메인을 포함하는, 숙주 세포.
41. 양상 39 또는 40에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 적어도 하나의 항체 유래된 항원-결합 도메인을 포함하는, 숙주 세포.
42. 양상 41에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 이중특이적 항체 또는 이의 단편인, 숙주 세포.
43. 양상 39 내지 41 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 리간드-수용체 결합 쌍의 적어도 하나의 수용체 또는 리간드 결합 도메인을 포함하는, 숙주 세포.
44. 양상 39 내지 43 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 적어도 하나의 항체 유래된 항원-결합 도메인 및 리간드-수용체 결합 쌍의 적어도 하나의 수용체 또는 리간드 결합 도메인을 포함하는, 숙주 세포.
45. 양상 40 내지 44 중 어느 한 양상에 있어서, 면역 세포의 표면 상에 발현되는 상기 단백질이 CD3인, 숙주 세포.
46. 양상 40 내지 44 중 어느 한 양상에 있어서, 면역 세포의 표면 상에서 발현된 상기 단백질이 천연 킬러 그룹 2D (NKG2D) 수용체인, 숙주 세포.
47. 양상 39 내지 46 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 표적 분자가 암 항원인, 숙주 세포.
48. 양상 39 내지 46 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 표적 분자가 조직 특이적 분자인, 숙주 세포.
49 양상 39 내지 46 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 표적 분자가 기관 특이적 분자인, 숙주 세포.
50. 양상 39 내지 46 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 표적 분자가 세포 유형 특이적 분자인, 숙주 세포.
51. 양상 39 내지 50 중 어느 한 양상에 따른 유효량의 숙주 세포를 대상체에게 투여함을 포함하는, 신생물에 대해 대상체를 치료하는 방법으로서, 여기서, 상기 신생물은 표적 분자 및 암 항원을 발현하는, 방법.
52. 다음을 포함하는 숙주 세포:
a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산:
i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인;
b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 항-Fc 키메라 항원 수용체 (CAR)를 암호화하는 핵산으로서, 상기 표적 분자로의 특이적 결합 구성원의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 상기 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 항-Fc CAR이 발현되도록 하는, 핵산.
53. 양상 52에 있어서, 상기 표적 분자가 암 항원인, 숙주 세포.
54. 양상 52에 있어서, 상기 표적 분자가 조직 특이적 분자인, 숙주 세포.
55. 양상 52에 있어서, 상기 표적 분자가 기관 특이적 분자인, 숙주 세포.
56. 양상 52에 있어서, 상기 표적 분자가 세포 특이적 분자인, 숙주 세포.
57. 양상 52 내지 56 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 숙주 세포가 추가로 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 특이적이고 항-Fc CAR에 의해 결합된 Fc 영역을 포함하는 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는, 숙주 세포.
58. 양상 57에 있어서, 상기 항체를 암호화하는 핵산이 상기 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된, 숙주 세포.
59. 양상 52 내지 58 중 어느 한 양상에 따른 유효량의 숙주 세포를 대상체에게 투여함을 포함하는, 신생물에 대해 대상체를 치료하는 방법으로서, 여기서, 상기 신생물은 상기 표적 분자를 발현하는, 방법.
60. 양상 59에 있어서, 상기 방법이 추가로 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 특이적이고 항-Fc CAR에 의해 결합된 Fc 영역을 포함하는 항체를 대상체에게 투여함을 포함하는, 방법.
61. 다음을 포함하는 숙주 세포:
a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산:
i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인;
b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 선천성 면역 반응 유도제를 암호화하는 핵산으로서, 상기 표적 분자로의 상기 특이적 결합 구성원의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 상기 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 선천성 면역 반응 유도제가 발현되도록 하는, 핵산.
62. 양상 61에 있어서, 상기 표적 분자가 조직 특이적 분자인, 방법.
63. 양상 61에 있어서, 상기 표적 분자가 기관 특이적 분자인 방법.
64. 양상 61에 있어서, 상기 표적 분자가 세포 유형 특이적 분자인, 방법.
65. 양상 61에 있어서, 상기 표적 분자가 암 항원인 방법.
66. 양상 61 내지 65 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 선천성 면역 반응 유도제가 세균 단백질 또는 이의 단편인, 방법.
67. 양상 61 내지 65 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 선천성 면역 반응 유도제가 바이러스 단백질 또는 이의 단편인, 방법.
68. 양상 61 내지 65 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 선천성 면역 반응 유도제가 진균류 단백질 또는 이의 단편인, 방법.
69. 양상 61 내지 68 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 선천성 면역 반응 유도제가 포유동물 기생충에 의해 발현되는 단백질 또는 이의 단편인, 방법.
70. 양상 69에 있어서, 상기 포유동물 기생충이 인간 기생충인, 방법.
71. 양상 61 내지 70 중 어느 한 양상에 따른 유효량의 숙주 세포를 대상체에게 투여함을 포함하는, 상기 대상체 영역에서 국소 선천성 면역 반응을 유도하는 방법으로서, 상기 영역이 상기 표적 분자를 발현하는, 방법.
72. 양상 71에 있어서, 상기 대상체의 영역이 신생물을 포함하는, 방법.
73. 다음을 포함하는 숙주 세포:
a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산:
i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인;
b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 면역 억제 인자를 암호화하는 핵산으로서, 상기 표적 분자로의 특이적 결합 구성원의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 상기 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 면역 억제 인자가 발현되도록 하는, 핵산.
74. 양상 73에 있어서, 상기 표적 분자가 조직 특이적 분자인, 방법.
75. 양상 73에 있어서, 상기 표적 분자가 기관 특이적 분자인, 방법.
76. 양상 73에 있어서, 상기 표적 분자가 세포 유형 특이적 분자인, 방법.
77. 양상 73에 있어서, 상기 표적 분자가 자가항원인, 방법.
78. 양상 73 내지 77 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 면역 억제 인자가 면역억제성 사이토킨인, 방법.
79. 양상 78에 있어서, 상기 면역억제성 사이토킨이 IL-10인 방법.
80. 양상 73 내지 77 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 면역 억제 인자가 세포-대-세포 신호전달 면역억제성 리간드인, 방법.
81. 양상 80에 있어서, 상기 세포-대-세포 신호전달 면역억제성 리간드가 PD-L1인 방법.
82. 양상 73 내지 81 중 어느 한 양상에 따른 유효량의 숙주 세포를 대상체에게 투여함을 포함하는, 상기 대상체에서 면역 반응을 억제하는 방법으로서, 상기 대상체가 상기 표적 분자를 발현하는, 방법.
83. 양상 82에 있어서, 상기 대상체가 자가면역 질환을 갖는, 방법.
84.이종성 종양을 사멸시키는 방법으로서, 상기 방법이:
사멸 항원을 발현하는 제1 세포 및 상기 사멸 항원 및 프라이밍 항원을 발현하는 제2 세포를 포함하는 이종성 종양을:
상기 프라이밍 항원에 특이적으로 결합하는 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드;
상기 사멸 항원에 특이적으로 결합하는 치료학적 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열; 및
단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드에 응답하는 상기 핵산에 작동적으로 연결된 전사 조절 요소를 포함하는 가공된 면역 세포와 접촉시키는 단계를 포함하며,
여기서, 상기 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 상기 프라이밍 항원으로의 결합이 상기 전사 조절 요소를 활성화시켜 상기 사멸 항원에 결합되는 경우, 상기 이종성 종양의 제1 및 제2 세포를 사멸시키는 치료학적 폴리펩타이드의 발현을 유도하는, 방법.
85. 양상 84에 있어서, 상기 치료학적 폴리펩타이드가 키메라 항원 수용체 (CAR)인, 방법.
86. 양상 84에 있어서, 상기 치료학적 폴리펩타이드가 조직 T 세포 수용체 (TCR)인, 방법.
87. 양상 84에 있어서, 상기 치료학적 폴리펩타이드가 치료학적 항체인, 방법.
88. 양상 84에 있어서, 상기 치료학적 폴리펩타이드가 키메라 이중특이적 결합 구성원인, 방법.
89. 양상 84 내지 88 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 프라이밍 항원 또는 상기 사멸 항원 중 적어도 하나가 MHC와 관련하여 제공되는 세포내 항원인, 방법.
90. 양상 84 내지 89 중 어느 한 양상에 있어서, 상기 프라이밍 항원 및 상기 사멸 항원 둘 다가 MHC와 관련하여 제공되는 세포내 항원인, 방법.
실시예
하기의 실시예는 본 발명을 수행하고 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 기재를 당업자에게 제공하기 위해 제시되고 본원 발명자가 이들의 발명으로서 간주하는 것의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않고 이들은 하기 실험이 모두 또는 수행된 실험 만을 나타내는 것으로 의도되지 않는다. 사용된 수치 (예를 들어, 양, 온도 등)와 관련된 정확도를 확실히 하기 위해 노력했지만 일부 실험 오류 및 편차가 고려되어야만 한다. 달리 지시되지 않는 경우, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이고, 온도는 섭씨 온도이고 압력은 대기압 또는 이의 주변 기압이다. 표준 약어가 하기와 같이 사용될 수 있다: 예를 들어, bp, 염기쌍(들); kb, 킬로베이스(들); pl, 피코리터(들)(picoliter(s)); s 또는 sec, 초(들); min, 분(들); h 또는 hr, 시간(들); aa, 아미노산(들); kb, 킬로베이스(들); bp, 염기쌍(들); nt, 뉴클레오타이드(들); i.m., 근육내(로); i.p., 복막내(로); s.c., 피하(로) 등.
실시예 1: 펩타이드 -주요 조직적합성 복합체 ( 펩타이드 - MHC ) 유도된 신호전달.
절단가능한 키메라 노치 폴리펩타이드에 의한 펩타이드-MHC의 인지를 통해 세포 신호전달에 영향을 미치는 능력을 연구하였다. 도 1에 다이아그램된 바와 같이, “공여자(sender) 세포”의 세포내 항원의 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인에 연결된 절단가능한 노치 폴리펩타이드를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 디자인하였다. “수용자 세포”에 의해 발현되는 키메라 폴리펩타이드의 세포외 도메인은 “공여자 세포”의 펩타이드-MHC에 결합한다. 상기 결합 시, 상기 절단가능한 노치 폴리펩타이드는 절단되어 예를 들어, 유리된 세포내 도메인에 응답하는 프로모터에 작동적으로 연결된 전이유전자(예를 들어, 도 1에서 “X”)의 발현을 포함하는 세포내 공정에 영향을 미칠 수 있는 세포내 부분을 방출시킨다.
대표적인 예로서, 키메라 폴리펩타이드는 빌름스 종양 단백질(Wilms Tumor Protein) 1 (WT1) 펩타이드-MHC에 결합하는 세포외 도메인 및 유리된 경우, 청색 형광성 단백질 (BFP)에 작동적으로 연결된 업스트림 활성화 서열 (UAS)에 결합하여 상기 시스템이 CD8 수용자 세포로 가공된 경우 활성화 리포터로서 작용하는 GAL4 전사 활성화인자 세포내 도메인을 사용하여 디자인하였다. 도 2는 펩타이드-MHC 음성(WT1) 또는 양성 (WT1+) T2 공여자 세포와 접촉되는 경우 BFP 리포터를 발현하는 수용자 세포의 상대적 수준을 입증한다. 도 3은 표적 WT1 세포내 항원 발현의 존재 또는 부재와 함께 HLA-A2를 발현하는 T2 세포의 존재하에 검정된 수용자 CD8 T 세포 반응의 정량화를 제공한다. 도 2 및 도 3에서 알 수 있는 바와 같이, T 세포 반응은 제공된 세포내 항원에 고도로 특이적이고 이의 존재에 의존한다.
도 4에서 입증된 바와 같이, 수용자 세포 반응은 또한 제공된 세포내 항원의 양에 의존한다. T2 공여자 세포는 WT1 펩타이드-MHC의 상이한 양 (10 μM, 1 μM 및 100 nM)을 발현하도록 가공되고 수용자 세포 반응은 각각의 집단과 함께 검정하였다. 리포터 발현은 WT1 펩타이드-MHC 발현 수준과 상호관련이 있는 것으로 나타났고 이는 용량 의존성 활성화를 지적한다.
추가로, 관련 없는 세포내 항원 펩타이드-MHC (NY-ESO1 펩타이드) 발현 T2 세포의 존재하에 검정되는 경우, 리포터 활성화는 음성 대조군 (DMSO)과 유사하였고, 이는 추가로 활성화가 항원-특이적임을 지적한다. 표적 세포내 항원 WT1 펩타이드-MHC 또는 관련 없는 세포내 항원 NY-ESO1 펩타이드-MHC의 3개의 상이한 농도에 걸쳐, 항원 농도 의존성 리포터 활성화는 수용자 세포에서 WT1에 응답하는 것으로 나타나지만 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 둘 다에서 NY-ESO1에는 응답하지 않는 것으로 나타났다(도 5).
실시예 2: 이원 세포내 항원 의존성 T 세포 활성화.
이원 세포내 항원 및-게이트는 가공된 T 세포 활성화가 표적 세포 상의 2개의 세포내 항원의 제공에 의존하도록 디자인하였다. 구체적으로, 도 6에 제공된 바와 같은 대표적인 예로서, 시스템은 T 세포로 디자인되고 가공되고, 여기서, 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR의 발현은 항-HLA-A2/WT1 scFv synNotch의 유리된 세포내 도메인에 의해 유도된다. 단지 NY-ESO1을 발현하는 T2 표적 세포와 함께 제공되는 경우, 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR의 발현은 유도되지 않고 어떠한 T 세포 활성화도 일어나지 않는다. 그러나, NY-ESO1 및 WT1 둘 다를 발현하는 T2 표적 세포와 함께 제공되는 경우, WT1 펩타이드-MHC의 항-HLA-A2/WT1 scFV synNotch로의 결합은 노치 폴리펩타이드의 절단을 유도하여, 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR의 발현을 구동하는 UAS에 결합하는 GAL4 전사 활성화인자를 방출한다. 발현된 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR의 표적 세포 상의 NY-ESO1 펩타이드-MHC로의 결합은 예를 들어, CD69 및/또는 세포독성 검정을 사용하여 검출되는 바와 같이 T 세포의 활성화를 유도한다.
상기 시스템에서 T 세포 활성화는 항원 또는 둘 다를 발현하는 T2 표적 세포를 사용하여 시험하였다. 도 7에서 알 수 있는 바와 같이, CD69 발현을 사용한 측정시 강한 활성화는 가공된 T 세포가 이원 항원(HLA-A2/NY-ESO1 및 HLA-A2/WT1) T2 표적 세포와 접촉되는 경우 나타났다. 그러나, 음성 대조군(DMSO)과 유사한 활성화의 부재는 가공된 T 세포가 2개의 세포내 항원 (HLA-A2/NY-ESO1 또는 HLA-A2/WT1) 중 단지 하나를 발현하는 T2 세포와 접촉되는 경우 나타났다. T2 세포 사멸에 대한 상응하는 결과는 가공된 T 세포가 이원- 또는 단일-항원 발현 T2 표적 세포와 함께 제공되는 경우 나타났다(도 8).이들 결과는 이원-세포내 항원 및-게이트의 기능성 및 표적 세포내 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포에만 응답하는 가공된 T 세포를 활성화시키는데 있어서의 상기 특이성을 입증한다.
상기 접근법의 다능성을 추가로 입증하기 위해, 표면 표적 항원 및 세포내 표적 항원 둘 다를 발현하는 세포를 표적화하는 추가의 이원-항원 및-게이트를 디자인하고 시험하였다. 구체적으로, 도 9 및 FIG. 10에 제공된 바와 같은 대표적인 예로서, 시스템은 T 세포로 디자인되고 가공되고, 여기서, 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR의 발현은 항-표면-발현된- GFP synNotch의 유리된 세포내 도메인에 의해 유도된다. 단지 NY-ESO1을 발현하는 T2 표적 세포와 함께 제공되는 경우, 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR의 발현은 유도되지 않고 어떠한 T 세포 활성화도 일어나지 않는다. 그러나, NY-ESO1 및 GFP 둘 다를 발현하는 T2 표적 세포와 함께 제공되는 경우, 항-GFP synNotch로의 표면-발현된 GFP의 결합은 노치 폴리펩타이드의 절단을 유도하여, 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR의 발현을 구동하는 UAS에 결합하는 GAL4 전사 활성화인자를 방출한다. 발현된 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR의 표적 세포 상의 NY-ESO1 펩타이드-MHC로의 결합은 T 세포의 활성화를 유발한다.
이원-항원 회로를 발현하는 가공된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 활성화는 CD69 발현 (도 11), T 세포 증식(도 12), T2 표적 세포 사멸(도 13) 및 A375 표적 세포 사멸(도 14)을 사용하여 검정하였다. 각각의 검정에서, T 세포 활성화 및 다운스트림 효과, 예를 들어, 표적 세포 사멸은 표적 세포에 의한 표적 항원 둘 다의 발현에 의존하였고, 이는 세포내 항원의 조합이 사용되든 (예를 들어, 일반적으로 도 15에 다이아그램된 바와 같이) 또는 표면 발현된 항원 반응성 성분이 하나 이상의 세포내 항원 인지 요소와 조합되든 상관 없이 이원-항원 synNotch 및-게이트의 강한 특이성을 입증한다.
상기 접근법의 다능성을 추가로 입증하기 위해, 표면 표적 항원 및 NY-ESO1 이외의 다른 세포내 표적 항원 둘 다를 발현하는 세포를 표적화하는 추가의 이원-항원 및-게이트를 디자인하고 시험하였다. 구체적으로, 도 39에 도식적으로 도시된 바와 같이, 시스템은 T 세포로 디자인되고 가공되고, 여기서, 항-HLA-A2/Mart1의 발현은 항-표면-발현된 GFP synNotch의 유리된 세포내 도메인에 의해 유도된다. 단지 Mart1 단독을 발현하는 T2 표적 세포와 함께 제공되는 경우, 항-HLA-A2/Mart1 TCR의 발현은 유도되지 않고 어떠한 T 세포 활성화도 일어나지 않는다. 그러나, Mart1과 GFP 둘 다를 발현하는 T2 표적 세포와 함께 제공되는 경우, 항-GFP synNotch로의 표면-발현된 GFP의 결합은 노치 폴리펩타이드의 절단을 유도하여, 항-HLA-A2/Mart1 TCR의 발현을 구동하는 UAS에 결합하는 GAL4 전사 활성화인자를 방출한다. 발현된 항-HLA-A2/Mart1 TCR의 표적 세포 상의 Mart1 펩타이드-MHC로의 결합은 T 세포의 활성화를 유발한다. 주르캣(Jurkat) T 세포주는 상기 이원-항원 회로를 발현하도록 가공하였고, T 세포의 활성화는 CD69 발현을 사용하여 검정하였다. 도 40에 제공된 바와 같이, 상기 검정 결과는 CD69 상향조절에 의한 측정시 T 세포 활성화가 표적 세포에 의한 표적 항원 둘 다의 발현에 의존함에 따라서 pMHC 항원을 표적화하는 이원-항원 synNotch 및-게이트의 강한 특이성을 추가로 입증함을 보여주었다.
실시예 3: 키메라 이중특이적 결합 구성원의 특이적 국소 전달.
키메라 이중특이적 결합 구성원의 특이적 국소 발현을 유도하기 위한 synNotch의 용도는 대표적인 2개의 성분 시스템을 사용하여 검정하였다. 구체적으로, 도 16에 도시된 바와 같이, 항-GFP synNotch를 사용하여 가공된 T 세포에서 항-CD19/항-CD3 이중특이적 T-세포 인게이져 (BiTE)(블리나투모맙)의 발현을 구동하였다. 유도제 표적 세포의 표면 상에 발현된 GFP에 결합시, 항-GFP synNotch는 항-CD19/항-CD3 BiTE를 암호화하는 서열에 작동적으로 연결된 UAS에 결합하는 GAL4 전사 활성화인자를 방출한다. BiTE의 발현은 표적 세포 발현된 CD19 및 T 세포 발현된 CD3의 이원-결합 및 T 세포 활성화를 유도한다.
CD4+ T 세포 활성화는 CD69 발현을 사용하여 검정하였다. 항-GFP-GAL4 synNotch를 발현하고 GAL4 반응성 UAS에 작동적으로 연결된 항-CD19/항-CD3 BiTE를 암호화하는 서열을 갖는 CD4+ T 세포는 CD19 단독, GFP 단독 또는 CD19 및 GFP 둘 다를 발현하는 유도제 세포와 접촉시켰다. 유의적 T 세포 활성화는 단지 CD19 및 GFP 둘 다를 발현하는 유도제 세포가 사용된 경우에 나타났다(도 17).이들 시험관내 결과는 키메라 이중특이적 결합 구성원 페이로드가 synNotch 게이트된 회로를 사용하여 효과적으로 및 특이적으로 발현될 수 있고, 예를 들어, T 세포 활성화와 같은 세포 반응을 조절하기 위해 사용될 수 있음을 입증한다.
키메라 이중특이적 결합 구성원의 synNotch 게이트된 발현의 사용은 대표적인 예로서 종양-국소화된 α-CD19/α-CD3 BiTE 생산 모델을 사용하여 생체내에서 추가로 연구하였다(도18).마우스에, 좌측 옆구리에 프라이밍 항원 음성(GFP) 표적 항원 양성(CD19+) 종양 세포 및 우측 옆구리에 이원 양성(GFP+/CD19+) 종양 세포를 피하 주사하였다. α-CD19/α-CD3 이중특이적 T 세포 인게이져 (BiTE) 발현의 조절에서 α-GFP synNotch T 세포 (CD4+ 및 CD8+)는 종양이 확립된 후 마우스에 주사하였다. 종양은 캘리퍼 측정에 의한 종양 부하를 분석하기 위해 지정된 시점에서 수거하였다.
α-CD19/α-CD3의 상기된 모델 종양-국소화된 생산에서, BiTE는 프라이밍 항원-의존성 방식에서 종양 부하를 효과적으로 감소시키는 것으로 나타났다(도 19).종양 용적은 도 18과 관련하여 상기된 바와 같은 좌측 옆구리와 우측 옆구리에 대해 측정하였다. 치료 과정 동안에, 종양 용적은 프라이밍 항원 (GFP) 및 BiTE 표적화된 항원 (CD19) 둘 다를 발현하는 종양(GFP+/CD19+ 종양)에서 감소하였다. 대조적으로, 종양 용적은 BiTE 표적화된 항원을 발현하지만 프라이밍 항원은 발현하지 않는 우측 옆구리 종양(CD19+ 종양)에서 감소하지 않았다. 이들 결과는 생체내 종양 용적을 효과적으로 감소시키는 BiTE 페이로드의 공간적 특이적 표적화를 구동하기 위한 2개의 항원 T 세포 및-게이트의 효과적인 용도를 입증한다. α-GFP synNotch는 조직 특이적, 기관 특이적 또는 세포 유형 특이적 T 세포 프라이밍을 위해, 내인성으로 또는 이종성으로 발현되는 임의의 다른 항원을 효과적으로 표적화하는 임의의 다른 SynNotch로 대체될 수 있다.
실시예 4: 선천성 면역 반응의 특이적 유도
선천성 면역 반응을 특이적으로 및/또는 국소적으로 유도하기 위한 synNotch의 용도는 대표적인 모델 시스템을 사용하여 연구하였다. 구체적으로, 도 20에 도시된 바와 같이, 시스템은 가공된 T 세포에서 플라겔린 (FliC)을 암호화하는 핵산 서열에 작동적으로 연결된 리포터의 발현을 구동시키기 위해 표면 발현된 GFP에 특이적인 synNotch를 사용하여 고안하였다. T 세포로부터 플라겔린 페이로드의 분비는 유도제 세포의 표면 상에 존재하는 synNotch 결합 GFP에 의존한다. 선천성 면역 반응 유도를 검출하고 측정하기 위해, 분비된 알칼린 포스파타제(SEAP) 리포터를 사용하였고, 여기서, 플라겔린의 TLR5 리포터 세포 상의 톨형 수용체 5 (TLR5)로의 결합은 선천성 면역 반응 활성의 정량화를 가능하게 하는 SEAP의 발현을 구동한다.
상기된 시스템으로 가공된 T 세포는 TLR5 리포터 세포의 존재하에 배양하였다. TLR 리포터 세포 SEAP 활성은 표면-발현 GFP+ 유도제 세포를 사용한 GFP의 자극의 존재 또는 부재하에 650 nm에서의 흡광도로 측정하였다. 도 21에 제공된 상기 검정 결과는 상기 선천성 면역 반응이 GFP 의존성 방식으로 특이적으로 활성화됨을 보여주었다. 상기 예는 항원 의존성 synNotch 폴리펩타이드를 사용하여 폴리펩타이드를 유동하는 선천성 면역 반응 유도 폴리펩타이드의 발현을 구동시킴에 의해 선천성 면역 반응을 특이적으로 및/또는 국소적으로 유도하기 위해 synNotch가 사용될 수 있음을 입증한다.
실시예 5: 이종성 종양의 치료.
다중-성분 전략은 이종성 종양을 인지하도록 T 세포를 프로그램화하기 위해 도 22에 도시된 바와 같이 개발하였다. T 세포는 (1) 종양에 특이적이지만 모든 종양 세포에 존재하지 않는 종양 특이적항원을 사용하여 이종성 종양에 존재하는 프라이밍 세포를 인지하고, (2) 모든 종양 세포에 존재하지만 종양 특이적이지 않은 종양 관련 항원을 사용하여 이종성 종양의 인접 세포를 사멸시키도록 프로그램화된다.
이종성 종양을 치료하기 위한 synNotch 시스템의 용도는 대표적인 모델 시스템을 사용하여 연구하였다. 구체적으로, 도 23에 도시된 바와 같이, T 세포는 GFP 프라이밍 항원에 특이적인 “프라이밍” synNotch 수용체 및 CD19에 특이적인 “사멸” CAR을 생성하도록 가공하였다. 상기 시스템은 상기 synNotch 프라이밍 수용체가 GFP 프라이밍 항원에 결합하는 경우, synNotch의 유리된 세포내 도메인이 CD19가 존재하는 경우, 세포 사멸을 유도하는 CD19-특이적 사멸 CAR의 발현을 구동하도록 디자인하였다.
도 24에 도시된 바와 같이, CD19를 발현하지만 GFP 프라이밍 항원을 발현하는 표적 세포의 집단이 가공된 T 세포로 처리되는 경우, 표적 세포의 어떠한 사멸도 관찰되지 않았다. CD19+/GFP- 표적 세포뿐만 아니라 이원-발현 CD19+/GFP+ 표적 세포를 포함하는 이종성 세포 집단이 가공된 T 세포로 처리된 경우, CD19+/GFP+ 표적 세포 및 CD19+/GFP- 표적 세포 둘 다의 사멸이 관찰되었다. 상기 결과는 이종성 집단에서 GFP 항원의 존재가 일반적으로 CD19-특이적 사멸을 위해 가공된 T 세포를 프라이밍하고 가공된 T 세포에 의한 세포 사멸이 상기 프라이밍 항원을 발현하는 상기 세포에 제한되지 않음을 입증하였다.
이종성 종양 세포 사멸의 상기 효과는 GFP/CD19+ 표적 세포 대 CD19+ 단독 표적 세포의 다양한 비율을 갖는 집단을 사용하여 추가로 정량하였다. 상기 이종성 집단은 항-GFP synNotch → 항-CD19 CAR T 세포 또는 형질도입되지 않은 음성 조절 T 세포로 처리하고 시점은 24시간 및 72시간에 취하였다(도 25).어떠한 세포 사멸도 형질도입되지 않은 세포로 처리되는 경우 임의의 집단에서 관찰되지 않았다. 그러나, 24시간에, 실질적 세포 사멸은 항-GFP synNotch → 항-CD19 CAR T 세포로 처리 후 모든 집단에서 관찰되었고 72시간까지 모든 표적 세포는 제거되었다.
이들 결과는 종양 이종성의 정도 또는 프라이밍 항원의 상대적 풍부함/결핍에 상관없이, 이종성 종양의 특이적이고 효과적인 종양 세포 사멸이 상기 프라이밍 → 사멸 synNotch 게이트된 시스템을 사용하여 성취됨을 입증한다. 다른 말로 하면, 기재된 시스템은 이종성 종양이 높거나 낮은 퍼센트의 프라이밍 항원 발현 세포를 함유하는지를 판단하는데 효과적이고 특이적이다.
1:3의 프라이밍 대 표적 이종성 혼합물 중 프라이밍 및 비-프라이밍 (“표적”) 집단에 대한 시스템의 사멸 효과의 보다 높은 일시적 해상도가 도 26에 제공된다. 상기된 바와 같이, 집단 둘 다의 모든 세포는 처리 후 72시간까지 제거된다.
도 27에서 알 수 있는 바와 같이, 프라이밍 세포 대 비-프라이밍 표적 세포가 1:19의 비율로 낮은 경우라도, CD19+ 비-프라이밍 항원 표적 세포는 도 26에서의 것과 유사한 일시적 역학으로 효과적으로 사멸된다. 72시간까지 표적 세포의 본래의 집단의 10% 미만이 잔류한다. 총체적으로, 이들 결과는 synNotch 게이트된 종양 세포 사멸 시스템이 종양 내에 synNotch 프라이밍 항원을 발현하는 세포의 상대적 제공과는 상관없이 이종성 종양을 특이적으로 치료하는데 효과적임을 입증한다.
실시예 6: 면역 억제제의 조절된 발현.
암 면역치료요법에서 면역 반응을 유도하는 것에 추가로, 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드는 또한 암 치료요법에 외에 유용한 기능에 대해 연구되었다. 예시적 synNotch를 사용하여 연구된 하나의 적용은 예를 들어, 자가면역 세팅에서 면역 억제였다. 세포-대-접촉 억제를 구동하는, 사이토킨, IL-10 및 T 세포 저해 리간드, PD-L1과 같은 근거리분비 저해 신호의 자발적 생성을 구동하는 SynNotch T 세포가 가공되었다(도 28).
CD19 자극을 사용하여 검정된 바와 같이, 항-CD19 synNotch 수용체는 CD19+ K562s를 사용한 자극에 응답하여 억제제 (PD-L1 및 IL-10) 둘 다를 구동시킬 수 있었다(도 29).비-천연 합성 T 세포 반응을 조절하는 synNotch 수용체 T 세포의 다른 예뿐만 아닐 상기 예는 치료학적 세포의 효과를 증진시킬 수 있거나, 항상성 및 천연 기능을 복구하기 위해 조직 또는 질환 환경을 재프로그램할 수 있는 광범위한 치료학적 제제를 생성하기 위한 synNotch 가공된 세포의 광범위하게 다양한 적용을 강조한다.
실시예 7: 야생형 친화성 및 증진된 친화성 TCR을 사용한 이원-항원 게이트된 사이 토킨 분비.
추가의 이원-항원 및-게이트는 표적 표면 항원(표면-발현된 GFP) 및 세포내 표적 항원(NY-ESO) 둘 다를 발현하는 표적화 세포에 응답하는 CD8 T 세포 사이토킨 분비를 시험하기 위해 표면 항원 게이트된 TCR 발현용으로 디자인하였다. 구체적으로, 도 33에 도식적으로 제공된 바와 같이, CD8 T 세포는 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR의 발현을 조절하는 항-GFP synNotch로 가공하여 사이토킨 인터페론의 방출이 표면-발현된-GFP 및 HLA-A2/NY-ESO1 둘 다를 발현하는 T2 표적 세포에 응답하여 일어나도록 한다. 상기 시스템은 야생형 친화성 및 친화성 증진된 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR 둘 다와 함께 시험하였다.
도 34에 나타낸 바와 같이, TCR 중 어느 하나의 항-GFP synNotch 게이트된 발현을 갖는 CD8 T 세포를 활성화시키고 이원-항원 GFP+/HLA-A2/NY-ESO1+ T2 표적 세포의 존재하에서만 IFNγ을 분비하였다. 추가로, CD8 T 세포 활성화의 수준 (IFNγ 방출에 의한 측정시)은 친화성이 표적 세포 관여 시, 야생형 친화성 TCR 세포와 비교하여, 많은 IFNγ의 거의 2배로 생성된 TCR 세포를 증진시킴으로서 이의 표적 항원에 대한 TCR의 친화성에 의존하였다.
이들 결과는 야생형 친화성 및 증진된 친화성 TCR을 사용한 이원-항원(표면 항원 및 세포내 항원) 게이트된 사이토킨 분비를 입증한다. 상기 데이터는 또한 T 세포 활성화 및 사이토킨 분비의 수준이 이들의 표적 항원에 대해 상이한 친화성을 갖는 TCR의 게이트된 발현을 통해 조절될 수 있음을 보여준다.
실시예 8: 이원-항원 게이트된 CD4 T 세포 사이토킨 분비.
CD4 T 세포 활성화 및 사이토킨 분비는 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR을 조절하는 항-HLA-A2/WT1 synNotch로 가공된 CD4 T 세포에서 시험하였다(도 35에 도시된 바와 같이).도 36에 제공된 데이터에 의해 나타낸 바와 같이, 항-HLA-A2/WT1 synNotch 및 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR 발현 세포는 HLA-A2/WT1 및 HLA-A2/NY-ESO1 항원 둘 다를 발현하는 T2 표적 세포에 특이적으로 응답하여 고수준의 IFNγ 항원을 방출한다. 사이토킨 분비의 일부 낮은 수준은 항-HLA-A2/WT1 synNotch에 의한 HLA-A2 단독의 부분적 인지로 인해 HLA-A2/NY-ESO1만을 발현하는 T2 표적 세포에 응답하여 나타났다. synNotch 수용체에서 다중 상이한 항-HLA-A2/WT1 scFv의 시험은 표적화된 특이적 WT1 펩타이드에 상관없이 단독의 항-HLA-A2의 낮은 수준의 측정가능한 인지를 밝혔다. 그러나, 항원 둘 다를 발현하는 표적 세포에 응답하여 세포 활성화 및 사이토킨 방출의 고수준의 증가는 상기 배경 HLA-A2 부분적 인지가 적당히 이원-항원 표적화 및 특이성을 영향을 주지 않음을 지적한다.
실시예 9: 임상적 관련 이원-항원 표적화 .
임상적으로 관련된 항원 쌍을 사용한 기재된 표면 항원/pMHC 항원 및-게이팅 전략의 다능성을 추가로 입증하기 위해, CD8 및 CD4 T 세포 둘 다는 항-HLA-A2/NY-ESO1 TCR을 조절하는 항-HER2 synNotch로 가공하였다. Her2 및 HLA-A2/NY-ESO1은 유방암 및 신경교종을 포함하는 다양한 암에서 동시 발현되는 것으로 밝혀졌다. 상기 게이팅/표적화 전략을 도시하는 도식은 도 37에 제공된다.
도 38에 제공된 결과에서 보여지는 바와 같이, 가공된 CD8 및 CD4 T 세포 둘 다는 표적 항원 둘 다(HER2 및 HLA-A2/NY-ESO1)를 발현하는 표적 T2 세포를 특이적으로 사멸시켰다. 2개의 항원 중 하나만을 발현하는 대조군 세포는 영향받지 않았다. 주지할 만하게, 가공된 CD4 세포에 의한 이원-항원 표적 세포의 특이적 사멸은 표면 항원/pMHC 항원 인지 회로가 CD8-독립적 방식으로 표적 사멸을 유도할 수 있음을 입증하였다.
총체적으로, 상기 실시예의 결과는 적어도 하나의 세포내 항원을 표적화하는 것들을 포함하는, 임상적으로 관련된 항원 쌍을 발현하는 세포가 가공된 이원-항원 게이트된 CD8 T 세포 및/또는 이원-항원 게이트된 CD4 T 세포를 사용하여 효과적으로 표적화되고 사멸될 수 있음을 입증한다.
실시예 10: CAR 발현을 조절하는 pMHC -감지 synNotch를 사용한 이원-항원 표적화 .
상기 접근법의 다능성을 추가로 입증하기 위해, 표면 표적 항원 및 세포내 표적 항원 둘 다를 발현하는 세포를 표적화하는 CAR을 함유하는 추가의 이원-항원 및-게이트를 디자인하고 시험하였다. 예시적 시스템은 도 41에 도시하고, 여기서, T 세포로 디자인되고 가공된 바와 같이, 항-Her2 CAR의 발현은 항-HLA-A2/WT1 synNotch의 유리된 세포내 도메인에 의해 유도된다. 상기 회로는 표면 항원-특이적 CAR의 발현을 조절하는 pMHC-특이적 synNotch 수용체의 예로서 작용한다. 단지 Her2를 발현하는 T2 표적 세포와 함께 제공되는 경우, 항-Her2 CAR의 발현은 유도되지 않고 어떠한 T 세포 활성화도 일어나지 않는다. 그러나, WT1 및 Her2 둘 다를 발현하는 T2 표적 세포와 함께 제공되는 경우, 항-HLA-A2/WT1 synNotch로의 표면-HLA-A2/WT1의 결합은 노치 폴리펩타이드의 절단을 유도하여, 항-Her2 CAR의 발현을 구동하는 UAS에 결합하는 GAL4 전사 활성화인자를 방출한다. 발현된 항-Her2 CAR의 표적 세포 상의 Her2로의 결합은 T 세포의 활성화를 유발한다. 상기 이원-항원 회로를 발현하도록 가공된 주르캣 T 세포주의 CD69 발현을 사용하여 측정된 바와 같은 수득한 활성화는 도 42에 제공된다. 상기 검정 결과는 T 세포 활성화(즉, CD69 상향조절)가 표적 세포에 의한 표적 항원 둘 다의 발현에 의존하였고, 이는 다시 이원-항원 synNotch 및-게이트의 강한 특이성을 추가로 입증함을 보여주었다. 본 실시예는 또한 표면 항원-특이적 CAR의 발현을 조절하는 pMHC-특이적 synNotch 수용체와 함께 이원-항원 synNotch 및-게이트에 사용될 수 있는 광범위한 항원 조합을 보여준다.
본 발명은 이의 특이적 구현예를 참조로 기재되었지만, 이것은 다양한 변화가 만들어질 수 있고 등가물이 본 발명의 취지 및 범위를 벗어나는 것 없이 대체될 수 있는 것으로 이해되어야만 한다. 추가로, 많은 변형은 특정 상황, 재료, 물질의 조성, 공정 단계 또는 단계들이 본 발명의 목적, 취지 및 범위에 적응되도록 만들어질 수 있다. 상기 변형은 첨부된 청구항의 범위내에 있는 것으로 의도된다.
<110> Lim, Wendell A. Roybal, Kole T. Williams, Jasper Z. <120> Proteolytically Cleavable Chimeric Polypeptides and Methods of Use Thereof <130> UCSF-544WO <150> US 62/378,614 <151> 2016-08-23 <160> 134 <170> KoPatentIn version 3.0 <210> 1 <211> 2555 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Pro Pro Leu Leu Ala Pro Leu Leu Cys Leu Ala Leu Leu Pro Ala 1 5 10 15 Leu Ala Ala Arg Gly Pro Arg Cys Ser Gln Pro Gly Glu Thr Cys Leu 20 25 30 Asn Gly Gly Lys Cys Glu Ala Ala Asn Gly Thr Glu Ala Cys Val Cys 35 40 45 Gly Gly Ala Phe Val Gly Pro Arg Cys Gln Asp Pro Asn Pro Cys Leu 50 55 60 Ser Thr Pro Cys Lys Asn Ala Gly Thr Cys His Val Val Asp Arg Arg 65 70 75 80 Gly Val Ala Asp Tyr Ala Cys Ser Cys Ala Leu Gly Phe Ser Gly Pro 85 90 95 Leu Cys Leu Thr Pro Leu Asp Asn Ala Cys Leu Thr Asn Pro Cys Arg 100 105 110 Asn Gly Gly Thr Cys Asp Leu Leu Thr Leu Thr Glu Tyr Lys Cys Arg 115 120 125 Cys Pro Pro Gly Trp Ser Gly Lys Ser Cys Gln Gln Ala Asp Pro Cys 130 135 140 Ala Ser Asn Pro Cys Ala Asn Gly Gly Gln Cys Leu Pro Phe Glu Ala 145 150 155 160 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Leu Leu Ser 1 5 <210> 111 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 111 Gly Cys Gly Val Leu Leu Ser 1 5 <210> 112 <211> 248 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 112 Met Ser Arg Leu Asp Lys Ser Lys Val Ile Asn Ser Ala Leu Glu Leu 1 5 10 15 Leu Asn Glu Val Gly Ile Glu Gly Leu Thr Thr Arg Lys Leu Ala Gln 20 25 30 Lys Leu Gly Val Glu Gln Pro Thr Leu Tyr Trp His Val Lys Asn Lys 35 40 45 Arg Ala Leu Leu Asp Ala Leu Ala Ile Glu Met Leu Asp Arg His His 50 55 60 Thr His Phe Cys Pro Leu Glu Gly Glu Ser Trp Gln Asp Phe Leu Arg 65 70 75 80 Asn Asn Ala Lys Ser Phe Arg Cys Ala Leu Leu Ser His Arg Asp Gly 85 90 95 Ala Lys Val His Leu Gly Thr Arg Pro Thr Glu Lys Gln Tyr Glu Thr 100 105 110 Leu Glu Asn Gln Leu Ala Phe Leu Cys Gln Gln Gly Phe Ser Leu Glu 115 120 125 Asn Ala Leu Tyr Ala Leu Ser Ala Val Gly His Phe Thr Leu Gly Cys 130 135 140 Val Leu Glu Asp Gln Glu His Gln Val Ala Lys Glu Glu Arg Glu Thr 145 150 155 160 Pro Thr Thr Asp Ser Met Pro Pro Leu Leu Arg Gln Ala Ile Glu Leu 165 170 175 Phe Asp His Gln Gly Ala Glu Pro Ala Phe Leu Phe Gly Leu Glu Leu 180 185 190 Ile Ile Cys Gly Leu Glu Lys Gln Leu Lys Cys Glu Ser Gly Gly Pro 195 200 205 Ala Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Pro Ala Asp Ala 210 215 220 Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Pro Ala Asp Ala Leu Asp Asp 225 230 235 240 Phe Asp Leu Asp Met Leu Pro Gly 245 <210> 113 <211> 211 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 113 Met Lys Leu Leu Ser Ser Ile Glu Gln Ala Cys Asp Ile Cys Arg Leu 1 5 10 15 Lys Lys Leu Lys Cys Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Ala Lys Cys Leu 20 25 30 Lys Asn Asn Trp Glu Cys Arg Tyr Ser Pro Lys Thr Lys Arg Ser Pro 35 40 45 Leu Thr Arg Ala His Leu Thr Glu Val Glu Ser Arg Leu Glu Arg Leu 50 55 60 Glu Gln Leu Phe Leu Leu Ile Phe Pro Arg Glu Asp Leu Asp Met Ile 65 70 75 80 Leu Lys Met Asp Ser Leu Gln Asp Ile Lys Ala Leu Leu Thr Gly Leu 85 90 95 Phe Val Gln Asp Asn Val Asn Lys Asp Ala Val Thr Asp Arg Leu Ala 100 105 110 Ser Val Glu Thr Asp Met Pro Leu Thr Leu Arg Gln His Arg Ile Ser 115 120 125 Ala Thr Ser Ser Ser Glu Glu Ser Ser Asn Lys Gly Gln Arg Gln Leu 130 135 140 Thr Val Ser Ala Ala Ala Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp 145 150 155 160 Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Ser Asp Ala Leu Asp 165 170 175 Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Ser Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp 180 185 190 Leu Asp Met Leu Gly Ser Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met 195 200 205 Leu Gly Ser 210 <210> 114 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 114 Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp 1 5 10 15 Met Leu Gly Ser Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly 20 25 30 Ser Asp Ala Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Ser Asp Ala 35 40 45 Leu Asp Asp Phe Asp Leu Asp Met Leu Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly 50 55 60 Ser Gly Gly Ser Leu Glu Ile Glu Ala Ala Phe Leu Glu Arg Glu Asn 65 70 75 80 Thr Ala Leu Glu Thr Arg Val Ala Glu Leu Arg Gln Arg Val Gln Arg 85 90 95 Leu Arg Asn Arg Val Ser Gln Tyr Arg Thr Arg Tyr Gly Pro Leu Gly 100 105 110 Gly Gly Lys 115 <210> 115 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 115 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 116 <211> 282 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 116 Met Glu Thr Leu Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp 1 5 10 15 Val Ser Ser Lys Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val 20 25 30 Pro Glu Gly Glu Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala 35 40 45 Ile Tyr Asn Leu Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr 50 55 60 Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg 65 70 75 80 Leu Asn Ala Ser Leu Asp Lys Ser Ser Gly Arg Ser Thr Leu Tyr Ile 85 90 95 Ala Ala Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg 100 105 110 Pro Leu Leu Asp Gly Thr Tyr Ile Pro Thr Phe Gly Arg Gly Thr Ser 115 120 125 Leu Ile Val His Pro Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala 130 135 140 Lys Lys Asp Gly Lys Ser Met Ser Ile Gly Leu Leu Cys Cys Ala Ala 145 150 155 160 Leu Ser Leu Leu Trp Ala Gly Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr 165 170 175 Pro Lys Phe Gln Val Leu Lys Thr Gly Gln Ser Met Thr Leu Gln Cys 180 185 190 Ala Gln Asp Met Asn His Glu Tyr Met Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro 195 200 205 Gly Met Gly Leu Arg Leu Ile His Tyr Ser Val Gly Ala Gly Thr Thr 210 215 220 Asp Arg Gly Glu Val Pro Asn Gly Tyr Asn Val Ser Arg Ser Thr Ile 225 230 235 240 Glu Asp Phe Pro Leu Arg Leu Leu Ser Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser 245 250 255 Val Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Tyr Val Gly Asp Thr Gly Glu Leu Phe 260 265 270 Phe Gly Glu Gly Ser Arg Leu Thr Val Leu 275 280 <210> 117 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 117 Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala 1 5 <210> 118 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 118 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 119 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 119 Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu 1 5 10 <210> 120 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 120 His His His His His 1 5 <210> 121 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 121 His His His His His His 1 5 <210> 122 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 122 Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys 1 5 <210> 123 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 123 Arg Tyr Ile Arg Ser 1 5 <210> 124 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 124 Phe His His Thr 1 <210> 125 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 125 Trp Glu Ala Ala Ala Arg Glu Ala Cys Cys Arg Glu Cys Cys Ala Arg 1 5 10 15 Ala <210> 126 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 126 Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val 1 5 <210> 127 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 127 Lys Arg Pro Ala Ala Thr Lys Lys Ala Gly Gln Ala Lys Lys Lys Lys 1 5 10 15 <210> 128 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 128 Met Val Pro Lys Lys Lys Arg Lys 1 5 <210> 129 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 129 Met Ala Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Gly Ile His Gly Val Pro Ala 1 5 10 15 Ala <210> 130 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> The residue at this position may be any amino acid. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> The residue at this position may be an Arg or Lys. <400> 130 Arg Xaa Xaa Arg 1 <210> 131 <211> 142 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 131 Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser 1 5 10 15 Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln 20 25 30 Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys 35 40 45 Cys Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val 50 55 60 Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn 65 70 75 80 Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys 85 90 95 Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn 100 105 110 Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val 115 120 125 Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 140 <210> 132 <211> 138 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 132 Pro Tyr Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro 1 5 10 15 Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln 20 25 30 Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys 35 40 45 Thr Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile 50 55 60 Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu 65 70 75 80 Thr Asn Ala Cys Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu 85 90 95 Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu 100 105 110 Ser Val Met Gly Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn 115 120 125 Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 <210> 133 <211> 177 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 133 Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys 50 55 60 Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu 65 70 75 80 Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys 85 90 95 Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp 100 105 110 Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg 115 120 125 Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser 130 135 140 Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala 145 150 155 160 Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp 165 170 175 Phe <210> 134 <211> 173 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic amino acid sequence <400> 134 Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Ser Leu Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys 50 55 60 Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Cys Ala 65 70 75 80 Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe 85 90 95 His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro 100 105 110 Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly 115 120 125 Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu 130 135 140 Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser 145 150 155 160 Thr Leu Val Val Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asn Ser 165 170

Claims (90)

  1. N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드:
    a) 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
    b) 하나 이상의 단백질 용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
    c) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인을 포함하고, 여기서 상기 특이적 결합 구성원의 펩타이드-MHC로의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시킨다.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 특이적 결합 구성원이 항체를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 항체가 나노항체, 디아바디, 트리아바디, 또는 미니바디, F(ab')2 단편, Fab 단편, 단일쇄 가변 단편 (scFv) 또는 단일 도메인 항체(sdAb)인, 키메라 폴리펩타이드.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 특이적 결합 구성원이 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는, 키메라 폴리펩타이드.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드 또는 NY-ESO 펩타이드인, 키메라 폴리펩타이드.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 이의 N-말단에 하나 이상의 상피 성장 인자 (EGF) 반복체를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 이의 N-말단에 2 내지 11개 EGF 반복체를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 합성 링커를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
  9. 청구항 8에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 상기 하나 이상의 EGF 반복체와 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위 사이에 합성 링커를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 50개 아미노산 내지 1000개 아미노산의 길이를 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 300개 아미노산 내지 400개 아미노산의 길이를 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
  12. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위가 S2 단백질용해 절단 부위, S3 단백질용해 절단 부위 또는 이의 조합을 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위가 Ala-Val 디펩타이드 서열을 포함하는 ADAM-17-유형의 프로테아제 절단 부위인 S2 단백질용해 절단 부위를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위가 Gly-Val 디펩타이드 서열을 포함하는 감마-세크레타제 (γ-세크레타제) 절단 부위인 S3 단백질용해 절단 부위를 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위가 S1 단백질용해 절단 부위를 추가로 포함하는, 키메라 폴리펩타이드.
  16. 청구항 15에 있어서, 상기 S1 단백질용해 절단 부위가 아미노산 서열 Arg-X-(Arg/Lys)-Arg (서열번호 130)(여기서, X는 임의의 아미노산이다)을 포함하는 푸린형 프로테아제 절단 부위인, 키메라 폴리펩타이드.
  17. 청구항 1 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 S1 단백질용해 절단 부위가 부재인, 키메라 폴리펩타이드.
  18. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 도 31a-32b에 제공된 서열과 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 노치 수용체 폴리펩타이드가 도 31a에 제공된 서열 또는 도 31b에 제공된 서열과 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 갖는, 키메라 폴리펩타이드.
  20. 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산.
  21. 청구항 20에 있어서, 상기 핵산이 목적하는 폴리펩타이드 (POI)를 암호화하는 핵산 서열에 작동적으로 연결된 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소를 추가로 포함하는, 핵산.
  22. 청구항 21에 있어서, 상기 POI가 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR) 및 선천성-면역 반응 유도제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 이종성 폴리펩타이드인, 핵산.
  23. 청구항 20 내지 22 중 어느 한 항에 따른 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터.
  24. 세포에서 이종성 폴리펩타이드의 발현을 유도하는 방법으로서, 상기 방법이:
    세포와 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)를 접촉시키는 단계로서, 상기 세포는 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 폴리펩타이드를 발현하고 상기 키메라 폴리펩타이드의 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 이종성 폴리펩타이드를 암호화하는 서열을 포함하여 상기 키메라 폴리펩타이드의 세포내 도메인을 방출시키고 상기 이종성 폴리펩타이드의 발현을 유도하는 단계를 포함하는, 방법.
  25. 청구항 24에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드가 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR) 및 선천성-면역 반응 유도제인, 방법.
  26. 다음을 포함하는 숙주 세포:
    a) 제1 펩타이드-주요 조직적합성 복합체 (펩타이드-MHC)에 특이적으로 결합하는 청구항 20 내지 22 중 어느 한 항에 따른 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산; 및
    b) 목적하는 폴리펩타이드 (POI)를 암호화하는 핵산에 작동적으로 연결된 키메라 폴리펩타이드의 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소.
  27. 청구항 26에 있어서, 상기 숙주 세포가 유전학적으로 변형되고 상기 핵산 및 상기 전사 조절 요소가 상기 숙주 세포의 게놈 내에 존재하는, 숙주 세포.
  28. 청구항 26에 있어서, 상기 핵산 및 상기 전사 조절 요소가 상기 숙주 세포 내 염색체 외부에 존재하는, 숙주 세포.
  29. 청구항 26 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 POI가 이종성 폴리펩타이드인, 숙주 세포.
  30. 청구항 29에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드가 리포터 단백질, 키메라 항원 수용체 (CAR), 항체, 키메라 이중특이적 결합 구성원, 가공된 T 세포 수용체 (TCR) 및 선천성-면역 반응 유도제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 숙주 세포.
  31. 청구항 30에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드가 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 CAR인, 숙주 세포.
  32. 청구항 31에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드의 상기 특이적 결합 구성원이 제1 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하고 상기 CAR이 제2 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는, 숙주 세포.
  33. 청구항 32에 있어서, 상기 제1 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드이고 상기 제2 세포내 암 항원 펩타이드가 NY-ESO 펩타이드인, 숙주 세포.
  34. 청구항 32에 있어서, 상기 제1 세포내 암 항원 펩타이드가 NY- ESO 펩타이드이고 상기 제2 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드인, 숙주 세포.
  35. 청구항 30에 있어서, 상기 이종성 폴리펩타이드가 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는 가공된 TCR인, 숙주 세포.
  36. 청구항 35에 있어서, 상기 키메라 폴리펩타이드의 상기 특이적 결합 구성원이 제1 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제1 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하고 상기 가공된 TCR이 제2 세포내 암 항원 펩타이드를 포함하는 제2 펩타이드-MHC에 특이적으로 결합하는, 숙주 세포.
  37. 청구항 36에 있어서, 상기 제1 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드이고 상기 제2 세포내 암 항원 펩타이드가 NY-ESO 펩타이드인, 숙주 세포.
  38. 청구항 36에 있어서, 상기 제1 세포내 암 항원 펩타이드가 NY- ESO 펩타이드이고 상기 제2 세포내 암 항원 펩타이드가 WT1 펩타이드인, 숙주 세포.
  39. 다음을 포함하는 숙주 세포:
    a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산:
    i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
    ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
    iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인;
    b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 키메라 이중특이적 결합 구성원을 암호화하는 핵산으로서, 상기 표적 분자로의 특이적 결합 구성원의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 상기 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 발현되도록 하는, 핵산.
  40. 청구항 39에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 암 항원에 특이적인 결합 도메인 및 면역 세포의 표면상에서 발현되는 단백질에 특이적인 결합 도메인을 포함하는, 숙주 세포.
  41. 청구항 39 또는 40에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 적어도 하나의 항체 유래된 항원-결합 도메인을 포함하는, 숙주 세포.
  42. 청구항 41에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 이중특이적 항체 또는 이의 단편인, 숙주 세포.
  43. 청구항 39 내지 41 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 리간드-수용체 결합 쌍의 적어도 하나의 수용체 또는 리간드 결합 도메인을 포함하는, 숙주 세포.
  44. 청구항 39 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키메라 이중특이적 결합 구성원이 적어도 하나의 항체 유래된 항원-결합 도메인 및 리간드-수용체 결합 쌍의 적어도 하나의 수용체 또는 리간드 결합 도메인을 포함하는, 숙주 세포.
  45. 청구항 40 내지 44 중 어느 한 항에 있어서, 면역 세포의 표면 상에 발현되는 상기 단백질이 CD3인, 숙주 세포.
  46. 청구항 40 내지 44 중 어느 한 항에 있어서, 면역 세포의 표면 상에서 발현된 상기 단백질이 천연 킬러 그룹 2D (NKG2D) 수용체인, 숙주 세포.
  47. 청구항 39 내지 46 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 분자가 암 항원인, 숙주 세포.
  48. 청구항 39 내지 46 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 분자가 조직 특이적 분자인, 숙주 세포.
  49. 청구항 39 내지 46 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 분자가 기관 특이적 분자인, 숙주 세포.
  50. 청구항 39 내지 46 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 분자가 세포 유형 특이적 분자인, 숙주 세포.
  51. 청구항 39 내지 50 중 어느 한 항에 따른 유효량의 숙주 세포를 대상체에게 투여함을 포함하는, 신생물에 대해 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 신생물은 표적 분자 및 암 항원을 발현하는, 방법.
  52. 다음을 포함하는 숙주 세포:
    a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산:
    i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
    ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
    iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인;
    b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 항-Fc 키메라 항원 수용체 (CAR)를 암호화하는 핵산으로서, 상기 표적 분자로의 특이적 결합 구성원의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 상기 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 항-Fc CAR이 발현되도록 하는, 핵산.
  53. 청구항 52에 있어서, 상기 표적 분자가 암 항원인, 숙주 세포.
  54. 청구항 52에 있어서, 상기 표적 분자가 조직 특이적 분자인, 숙주 세포.
  55. 청구항 52에 있어서, 상기 표적 분자가 기관 특이적 분자인, 숙주 세포.
  56. 청구항 52에 있어서, 상기 표적 분자가 세포 유형 특이적 분자인, 숙주 세포.
  57. 청구항 52 내지 56 중 어느 한 항에 있어서, 상기 숙주 세포가 추가로 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 특이적이고 항-Fc CAR에 의해 결합된 Fc 영역을 포함하는 항체를 암호화하는 핵산을 포함하는, 숙주 세포.
  58. 청구항 57에 있어서, 상기 항체를 암호화하는 핵산이 상기 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된, 숙주 세포.
  59. 청구항 52 내지 58 중 어느 한 항에 따른 유효량의 숙주 세포를 대상체에게 투여함을 포함하는, 신생물에 대해 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 신생물은 상기 표적 분자를 발현하는, 방법.
  60. 청구항 59에 있어서, 상기 방법이 추가로 암 세포의 표면 상에 존재하는 암 항원에 특이적이고 항-Fc CAR에 의해 결합된 Fc 영역을 포함하는 항체를 대상체에게 투여함을 포함하는, 방법.
  61. 다음을 포함하는 숙주 세포:
    a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산:
    i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
    ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
    iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인;
    b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 선천성 면역 반응 유도제를 암호화하는 핵산으로서, 상기 표적 분자로의 상기 특이적 결합 구성원의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 상기 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 선천성 면역 반응 유도제가 발현되도록 하는, 핵산.
  62. 청구항 61에 있어서, 상기 표적 분자가 조직 특이적 분자인, 방법.
  63. 청구항 61에 있어서, 상기 표적 분자가 기관 특이적 분자인, 방법.
  64. 청구항 61에 있어서, 상기 표적 분자가 세포 유형 특이적 분자인, 방법.
  65. 청구항 61에 있어서, 상기 표적 분자가 암 항원인, 방법.
  66. 청구항 61 내지 65 중 어느 한 항에 있어서, 상기 선천성 면역 반응 유도제가 세균 단백질 또는 이의 단편인, 방법.
  67. 청구항 61 내지 65 중 어느 한 항에 있어서, 상기 선천성 면역 반응 유도제가 바이러스 단백질 또는 이의 단편인, 방법.
  68. 청구항 61 내지 65 중 어느 한 항에 있어서, 상기 선천성 면역 반응 유도제가 진균류 단백질 또는 이의 단편인, 방법.
  69. 청구항 61 내지 68 중 어느 한 항에 있어서, 상기 선천성 면역 반응 유도제가 포유동물 기생충에 의해 발현되는 단백질 또는 이의 단편인, 방법.
  70. 청구항 69에 있어서, 상기 포유동물 기생충이 인간 기생충인, 방법.
  71. 청구항 61 내지 70 중 어느 한 항에 따른 유효량의 숙주 세포를 대상체에게 투여함을 포함하는, 상기 대상체 영역에서 국소 선천성 면역 반응을 유도하는 방법으로서, 상기 영역이 상기 표적 분자를 발현하는, 방법.
  72. 청구항 71에 있어서, 상기 대상체의 영역이 신생물을 포함하는, 방법.
  73. 다음을 포함하는 숙주 세포:
    a) N-말단에서 C-말단으로 및 공유 결합으로 하기를 포함하는 키메라 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산:
    i) 암 세포의 표면 상에 존재하는 표적 분자에 특이적으로 결합하는 특이적 결합 구성원을 포함하는 세포외 도메인;
    ii) 하나 이상의 단백질용해 절단 부위를 포함하는 단백질용해 절단가능한 노치 수용체 폴리펩타이드; 및
    iii) 전사 활성화인자를 포함하는 세포내 도메인;
    b) 상기 전사 활성화인자에 응답하는 전사 조절 요소에 작동적으로 연결된 면역 억제 인자를 암호화하는 핵산으로서, 상기 표적 분자로의 특이적 결합 구성원의 결합이 상기 하나 이상의 단백질용해 절단 부위에서 상기 노치 수용체 폴리펩타이드의 절단을 유도하여 세포내 도메인을 방출시키고, 상기 전사 조절 요소를 활성화시키고 상기 면역 억제 인자가 발현되도록 하는, 핵산.
  74. 청구항 73에 있어서, 상기 표적 분자가 조직 특이적 분자인, 방법.
  75. 청구항 73에 있어서, 상기 표적 분자가 기관 특이적 분자인, 방법.
  76. 청구항 73에 있어서, 상기 표적 분자가 세포 유형 특이적 분자인, 방법.
  77. 청구항 73에 있어서, 상기 표적 분자가 자가항원인, 방법.
  78. 청구항 73 내지 77 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 억제 인자가 면역억제성 사이토킨인, 방법.
  79. 청구항 78에 있어서, 상기 면역억제성 사이토킨이 IL-10인, 방법.
  80. 청구항 73 내지 77 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 억제 인자가 세포-대-세포 신호전달 면역억제성 리간드인, 방법.
  81. 청구항 80에 있어서, 상기 세포-대-세포 신호전달 면역억제성 리간드가 PD-L1인, 방법.
  82. 청구항 73 내지 81 중 어느 한 항에 따른 유효량의 숙주 세포를 대상체에게 투여함을 포함하는, 상기 대상체에서 면역 반응을 억제하는 방법으로서, 상기 대상체가 상기 표적 분자를 발현하는, 방법.
  83. 청구항 82에 있어서, 상기 대상체가 자가면역 질환을 갖는, 방법.
  84. 이종성 종양을 사멸시키는 방법으로서, 상기 방법이:
    사멸 항원을 발현하는 제1 세포 및 상기 사멸 항원 및 프라이밍 항원을 발현하는 제2 세포를 포함하는 이종성 종양을:
    상기 프라이밍 항원에 특이적으로 결합하는 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드;
    상기 사멸 항원에 특이적으로 결합하는 치료학적 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열; 및
    단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드에 응답하는 상기 핵산에 작동적으로 연결된 전사 조절 요소를 포함하는 가공된 면역 세포와 접촉시키는 단계를 포함하며,
    상기 단백질용해 절단가능한 키메라 폴리펩타이드의 상기 프라이밍 항원으로의 결합이 상기 전사 조절 요소를 활성화시켜 상기 사멸 항원에 결합되는 경우, 상기 이종성 종양의 제1 및 제2 세포를 사멸시키는 치료학적 폴리펩타이드의 발현을 유도하는, 방법.
  85. 청구항 84에 있어서, 상기 치료학적 폴리펩타이드가 키메라 항원 수용체(CAR)인, 방법.
  86. 청구항 84에 있어서, 상기 치료학적 폴리펩타이드가 T 세포 수용체(TCR)인, 방법.
  87. 청구항 84에 있어서, 상기 치료학적 폴리펩타이드가 치료학적 항체인, 방법.
  88. 청구항 84에 있어서, 상기 치료학적 폴리펩타이드가 키메라 이중특이적 결합 구성원인, 방법.
  89. 청구항 84 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프라이밍 항원 또는 상기 사멸 항원 중 적어도 하나가 MHC와 관련하여 제공되는 세포내 항원인, 방법.
  90. 청구항 84 내지 89 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프라이밍 항원 및 상기 사멸 항원 둘 다가 MHC와 관련하여 제공되는 세포내 항원인, 방법.
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Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4079292A1 (en) 2010-09-24 2022-10-26 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Nanostructured gels capable of controlled release of encapsulated agents
JP2018510623A (ja) 2015-02-20 2018-04-19 オハイオ・ステイト・イノベーション・ファウンデーション Ｎｋｇ２ｄ及び腫瘍関連抗原に対する二価抗体
EP3280437A4 (en) 2015-04-06 2018-09-12 Jianhua Yu Egfr-directed car therapy for glioblastoma
WO2018050225A1 (en) * 2016-09-15 2018-03-22 Yu Di T-cell immunotherapy
US11020410B2 (en) 2017-02-03 2021-06-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Self-assembled gels formed with anti-retroviral drugs, prodrugs thereof, and pharmaceutical uses thereof
US11325957B2 (en) * 2017-06-19 2022-05-10 Cell Design Labs, Inc. Methods and compositions for reducing the immunogenicity of chimeric notch receptors
GB201804291D0 (en) * 2018-03-16 2018-05-02 Evox Therapeutics Ltd Cell-mediated exosome delivery
CN112118850A (zh) * 2018-03-16 2020-12-22 赛通免疫治疗公司 双特异性抗体car细胞免疫疗法
JP2021520352A (ja) 2018-04-04 2021-08-19 アリヴィオ セラピューティクス， インコーポレイテッド 生物製剤の制御送達用の自己組織化ゲルおよびその製造方法
WO2019195576A1 (en) * 2018-04-06 2019-10-10 The Regents Of The University Of California Trans-antigen targeting in heterogeneous cancers and methods of use thereof
CA3096812A1 (en) * 2018-04-10 2019-10-17 Stichting Sanquin Bloedvoorziening Chimeric notch receptors
EP3847650A1 (en) 2018-09-06 2021-07-14 The Broad Institute, Inc. Nucleic acid assemblies for use in targeted delivery
EP3891286A4 (en) * 2018-12-06 2022-10-19 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University REGULABLE CELL SURFACE RECEPTORS AND RELATED COMPOSITIONS AND METHODS
CN113164578B (zh) * 2019-01-03 2024-04-30 南京传奇生物科技有限公司 表达鞭毛蛋白多肽的经修饰的免疫细胞
CN114585645A (zh) * 2019-08-09 2022-06-03 A2生物治疗公司 对杂合性丧失作出响应的细胞表面受体
JP2022548796A (ja) * 2019-09-24 2022-11-21 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア ヒンジドメインを有するノッチ受容体
US20220348677A1 (en) * 2019-09-24 2022-11-03 The Regents Of The University Of California Receptors with heterologous transmembrane domain
CN114729025A (zh) * 2019-09-24 2022-07-08 加利福尼亚大学董事会 用于配体依赖性转录调控的新型受体
WO2021061791A1 (en) * 2019-09-24 2021-04-01 The Regents Of The University Of California Notch receptors with zinc finger-containing transcriptional effector
CN110716044B (zh) * 2019-10-23 2023-04-18 郑州大学 一种用于食管鳞癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物、试剂盒及检测方法
CN110970090B (zh) * 2019-11-18 2021-06-29 华中科技大学 一种用于判断待处理多肽与阳性数据集肽段相似度的方法
WO2021131944A1 (ja) * 2019-12-27 2021-07-01 国立大学法人神戸大学 癌遺伝子治療薬
WO2021257989A2 (en) * 2020-06-18 2021-12-23 Flagship Pioneering, Inc. Methods and compositions for modulating cells and cellular membranes
AU2021329375A1 (en) 2020-08-20 2023-04-20 A2 Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating ceacam positive cancers
JP2023538114A (ja) 2020-08-20 2023-09-06 エー２ バイオセラピューティクス， インコーポレイテッド メソテリン陽性がんを治療するための組成物及び方法
US11661459B2 (en) 2020-12-03 2023-05-30 Century Therapeutics, Inc. Artificial cell death polypeptide for chimeric antigen receptor and uses thereof
EP4263600A1 (en) 2020-12-18 2023-10-25 Century Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptor systems with adaptable receptor specificity
WO2022183056A1 (en) * 2021-02-26 2022-09-01 Salk Institute For Biological Studies Modulating regulatory t cell function in autoimmune disease and cancer
CA3213044A1 (en) * 2021-03-23 2022-09-29 Kole T. ROYBAL Synthetic intermembrane proteolysis receptors for custom antigen-induced transcriptional regulation
WO2022204326A1 (en) * 2021-03-24 2022-09-29 The Regents Of The University Of California Humanized synthetic notch receptors with augmented transactivation domains and uses thereof
CN114736308B (zh) * 2022-03-15 2022-12-27 四川宜美康科技有限公司 球虫抗原肽/il5的融合蛋白基因工程菌的制备及用途

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5780300A (en) 1995-09-29 1998-07-14 Yale University Manipulation of non-terminally differentiated cells using the notch pathway
GB0112818D0 (en) * 2001-05-25 2001-07-18 Lorantis Ltd Conjugate
GB0220658D0 (en) 2002-09-05 2002-10-16 Lorantis Ltd Immunotherapy
CA2664738C (en) 2006-09-29 2017-03-07 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for diagnosing and treating cancer
WO2009040782A2 (en) 2007-09-28 2009-04-02 Royal College Of Surgeons In Ireland A method of assessing colorectal cancer status in an individual
NZ590131A (en) 2008-07-08 2012-10-26 Oncomed Pharm Inc Notch-binding agents and antagonists and methods of use thereof
WO2011130624A2 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Immune Disease Institute, Inc. Sustained polypeptide expression from synthetic, modified rnas and uses thereof
WO2014055668A1 (en) 2012-10-02 2014-04-10 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Compositions and methods for immunotherapy
US10117896B2 (en) 2012-10-05 2018-11-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of a trans-signaling approach in chimeric antigen receptors
GB201306536D0 (en) 2013-04-10 2013-05-22 Gt Biolog Ltd Polypeptide and immune modulation
MX2016005689A (es) 2013-10-31 2016-08-08 Hutchinson Fred Cancer Res Celulas no t efectoras y madre/progenitoras hematopoyeticas modificadas y usos de estas.
US9730935B2 (en) 2013-12-13 2017-08-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Targeting a non-canonical notch signaling pathway for cancer treatment
CN106456748A (zh) 2014-01-08 2017-02-22 小利兰·斯坦福大学托管委员会 小细胞肺癌的靶向疗法
DK3105335T3 (da) 2014-02-14 2020-01-13 Univ Texas Kimære antigenreceptorer og fremgangsmåder til fremstilling heraf
JP6665102B2 (ja) 2014-02-21 2020-03-13 セレクティスＣｅｌｌｅｃｔｉｓ 制御性ｔ細胞をインサイチューで阻害するための方法
EP3174546B1 (en) * 2014-07-31 2019-10-30 Novartis AG Subset-optimized chimeric antigen receptor-containing t-cells
EP3186284B1 (en) 2014-08-28 2022-04-06 BioAtla, Inc. Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
US20160081314A1 (en) * 2014-09-19 2016-03-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Chimeric Antigen Receptors
WO2016093243A1 (ja) 2014-12-09 2016-06-16 北海道公立大学法人札幌医科大学 腫瘍抗原ペプチド
MX2017010721A (es) 2015-02-24 2018-08-28 Univ California Interruptores transcripcionales activados mediante unión y métodos para su uso.

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