KR20190044587A - 합성 말라리아 면역원, 이의 조합, 및 말라리아 감염을 예방하고 치료하기 위한 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
플라스모듐 종의 간 단계(liver stage) 방출된 단백질의 서열, 뿐만 아니라 상기 서열을 발현하는 발현 작제물이 본원에 제공된다. 또한, 본원에 제공된 발현 작제물을 사용하여 말라리아에 대한 면역 반응을 생성시키기 위한 방법이 본원에 제공된다.
Description
관련
출원에 대한 상호참조
본 출원은 2016년 5월 19일 목요일자로 출원된 미국 가출원 번호 제62/338,841호에 대한 우선권을 주장하고 이의 전문은 본원에 참조로서 편입된다.
발명의 분야
본 발명은 항원성 말라리아 단백질 및 이를 암호화하는 핵산 분자; 상기 단백질 및/또는 핵산 분자를 포함하는 증진된 말라리아 백신; 및 말라리아 항원에 대하여 면역 반응을 유도하기 위한 백신을 사용하는 방법 및 말라리아 감염을 예방하고/하거나 말라리아로 감염된 개체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
발명의 배경
말라리아는 플라스모듐 속 (genus Plasmodium)의 진핵 원생동물에 의해 유발되는 모기-매개 감염성 질환이다. 아메리카(22개 국가), 아시아 및 아프리카의 일부를 포함하는 열대 및 아열대 지역에 널리 퍼져 있다. 매년, 2억 5천만 초과 건수의 말라리아가 있고 100만 내지 3백만 사람들이 사망하고 있고 이중 대다수는 사하라 이남 아프리카의 어린 아이들이다. 전염을 감소시키고 치료를 증가시키기 위한 노력에도 불구하고, 1992년 이래 상기 질환의 위험에 처한 지역에는 거의 변화가 없었다. 실제로, 말라리아의 유병률이 이의 현재의 상승 과정에 있게 되는 경우 사망률은 다음 20년 안에 2배가 될 수 있다. 많은 사례가 사람들이 병원을 이용하지 못하거나 건강 관리를 받을 만한 수단이 없는 시골 지역에서 발생하기 때문에 정확한 통계는 알려지지 않았다. 결과로서, 대다수의 사례는 기록되지 않는다.
플라스모듐 기생동물의 5개 종은 인간을 감염시킬 수 있다: 가장 심각한 형태의 질환은 플라스모듐 팔시파룸 (Plasmodium falciparum) (또한 본원에서 P. 팔시파룸(P. falciparum) P.f. 및 PF로서 언급됨)에 의해 유발된다. P. 팔시파룸은 원생동물 기생동물이고 인간에서 말라리아를 발병시키는 플라스모듐 종들 중 하나이다. 이것은 암컷 아노펠레스(Anopheles) 모기에 의해 전염된다. P. 팔시파룸은 P. 팔시파룸 (또는 악성) 말라리아가 최고의 합병증 발생율 및 사망율을 갖기 때문에 이들 감염 중 가장 위험하다. 2006년 현재, 이것은 모든 2억 4700만명의 인간 말라리아 감염의 91% (아프리카에서는 98%) 및 사망의 90%를 차지하였다.
다양한 항말라리아 약물이 말라리아를 치료하기 위해 가용하다. 지난 5년 동안, 풍토병 국가들에서 P. 팔시파룸 감염의 치료는 아르테미시닌 유도체를 함유하는 약물들의 조합 사용하에 의해 변형되었다. 중증 말라리아는 정맥내 또는 근육내 퀴닌 또는 점점 증가 추세의 아르테미시닌 유도체 아르테수네이트(artesunate)로 치료된다. 여러 약물들이 또한 말라리아-풍토병 국가로의 여행자에서의 말라리아를 예방 (프로필락시스)하기 위해 가용하다. 여러 항말라리아 약물, 가장 현저하게 클로로퀸(chloroquine)에 대한 내성이 나타났다.
말라리아를 위한 백신이 개발 중에 있으며 아직 완전히 효과적인 백신은 이용 가능하지 않다. 말라리아 백신에 대한 잠재력을 입증하는 제1의 전망 있는 연구는 마우스를 생 방사선-약독화된 포자소체로 면역화시킴에 의해 1967년에 수행되었고 이는 정상의 생존 포자소체에 의한 후속적 감염시 마우스의 약 60%에 보호를 제공한다. 1970년 이후, 인간 내에서 유사한 백신 접종 전략을 개발하기 위한 상당한 노력이 있어 왔다. 그러나, 현재 가장 진전된 말라리아 백신 후보물은 임상 질환에 대해 단지 부분적 보호를 부여한다. 플라스모듐 전구-적혈구 단계에 대한 하부단위 및 DNA 백신은 실질적으로 CSP와 같은 표적화 표면 포자소체 항원에 의존하지만 이들은 제한적 성공을 충족하였다.
따라서, 당업계에서는 말라리아 감염으로부터 보호하고/하거나 감염된 피험체를 치료하는 신규한 면역원성 조성물이 요구된다.
일 구현예에서, 본 발명은 적어도 하나의 공통 플라스모듐 종의 간 단계 (LS) 면역원을 암호화하는 적어도 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산 분자를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.
일 구현예에서, 적어도 하나의 LS 면역원은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 EXP1 및 EXP2를 암호화한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 1, 서열 번호 17, 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 1의 적어도 90%, 서열 번호 17의 적어도 90%, 또는 서열 번호 32의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 1에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 17에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 32에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 하기의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다: 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 18, 서열 번호 19, 서열 번호 33 또는 서열 번호 34. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 2의 적어도 90%, 서열 번호 3의 적어도 90%, 서열 번호 18의 적어도 90%, 서열 번호 19의 적어도 90%, 서열 번호 33의 적어도 90% 또는 서열 번호 34의 적어도 90%를 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 2의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 3의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 18의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 19의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 33의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 34의 적어도 90% 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 EXP23을 암호화한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 4, 서열 번호 20 또는 서열 번호 35를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 4의 적어도 90%, 서열 번호 20의 적어도 90%, 또는 서열 번호 35의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 4에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 20에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 35에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 21, 서열 번호 22, 서열 번호 36 또는 서열 번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 5의 적어도 90%, 서열 번호 6의 적어도 90%, 서열 번호 21의 적어도 90%, 서열 번호 22의 적어도 90%, 서열 번호 36의 적어도 90%, 또는 서열 번호 37의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 5의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 6의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 21의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 22의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 36의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 37의 적어도 90% 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 ICP를 암호화한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 7, 서열 번호 23, 또는 서열 번호 38의 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 7의 적어도 90%, 서열 번호 23의 적어도 90%, 또는 서열 번호 38의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 7에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 23에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 38에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 39 또는 서열 번호 40의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 8의 적어도 90%, 서열 번호 9의 적어도 90%, 서열 번호 24의 적어도 90%, 서열 번호 25의 적어도 90%, 서열 번호 39의 적어도 90% 또는 서열 번호 40의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 8의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 9의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 24의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 25의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 39의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 40의 적어도 90% 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 TMP21을 암호화한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 10, 서열 번호 26 또는 서열 번호 41를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 10의 적어도 90%, 서열 번호 26의 적어도 90%, 또는 서열 번호 41의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 10에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 26에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 41에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 27, 서열 번호 28, 서열 번호 42 또는 서열 번호 43의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 11의 적어도 90%, 서열 번호 12의 적어도 90%, 서열 번호 27의 적어도 90%, 서열 번호 28의 적어도 90%, 서열 번호 42의 적어도 90% 또는 서열 번호 43의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 11의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 12의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 27의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 28의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 42의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 43의 적어도 90% 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 UIS3을 암호화한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 13, 서열 번호 29, 또는 서열 번호 44의 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 13의 적어도 90%, 서열 번호 29의 적어도 90%, 또는 서열 번호 44의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 13에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 29에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 44에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 30, 서열 번호 31, 서열 번호 45 또는 서열 번호 46의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 14의 적어도 90%, 서열 번호 15의 적어도 90%, 서열 번호 30의 적어도 90%, 서열 번호 31의 적어도 90%, 서열 번호 45의 적어도 90% 또는 서열 번호 46의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 14의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 15의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 30의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 31의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 45의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 46의 적어도 90% 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 UIS10을 암호화한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 47을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 47의 적어도 90%을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열, 또는 서열 번호 47에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 48 또는 서열 번호 49의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 48의 적어도 90%, 또는 서열 번호 49의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 48에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 49에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 SPECT1 및 SPECT2를 암호화한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 50을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 50의 적어도 90%을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열, 또는 서열 번호 50에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 51 또는 서열 번호 52의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 51의 적어도 90%, 또는 서열 번호 52의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 51에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 52에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 RON2를 암호화한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 서열 번호 53을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 53의 적어도 90%을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열, 또는 서열 번호 53에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 54 또는 서열 번호 55의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 54의 적어도 90%, 또는 서열 번호 55의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 54에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 또는, 또는 서열 번호 55에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 16의 IgE 리더 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 HA 태그를 암호화하는 핵산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 하기 중 하나 이상을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 추가로 포함한다: CSP, LSA1, TRAP, CelTOS 및 Ama1. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 또는 서열 번호 65의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 66 또는 서열 번호 67의 핵산 서열을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 IL-12, IL-15, IL-28B, IL-33 또는 RANTES를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열은 하나 이상의 플라스미드에 혼입된다.
일 구현예에서, 본 발명은 말라리아에 대하여 포유동물을 면역화하는 방법에 관한 것이며, 이는 포유동물의 조직에, 적어도 하나의 공통 플라스모듐 종의 간 단계 (LS) 면역원을 암호화하는 적어도 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산 분자를 포함하는 면역원성 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 방법은 a) 면역원성 조성물을 포유동물의 조직에 투여하는 단계, 및 b) 조직의 세포를, 핵산 분자의 세포로의 진입을 허용하기에 효과적인 정전류에서 에너지 펄스로 전기천공하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은 근육내 또는 피내 주사에 의해 투여된다.
일 구현예에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 공통 플라스모듐 종 LS 면역원을 암호화하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자에 관한 것이다: EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2.
일 구현예에서, 핵산 분자는 EXP1 및 EXP2를 암호화한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 1, 서열 번호 17, 또는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 1의 적어도 90%, 서열 번호 17의 적어도 90%, 또는 서열 번호 32의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 1에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 17에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 32에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 하기의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다: 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 18, 서열 번호 19, 서열 번호 33 또는 서열 번호 34. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 2의 적어도 90%, 서열 번호 3의 적어도 90%, 서열 번호 18의 적어도 90%, 서열 번호 19의 적어도 90%, 서열 번호 33의 적어도 90% 또는 서열 번호 34의 적어도 90%를 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 2의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 3의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 18의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 19의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 33의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 34의 적어도 90% 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 핵산 분자는 EXP23을 암호화한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 4, 서열 번호 20 또는 서열 번호 35를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 4의 적어도 90%, 서열 번호 20의 적어도 90%, 또는 서열 번호 35의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 4에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 20에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 35에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 21, 서열 번호 22, 서열 번호 36 또는 서열 번호 37의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 5의 적어도 90%, 서열 번호 6의 적어도 90%, 서열 번호 21의 적어도 90%, 서열 번호 22의 적어도 90%, 서열 번호 36의 적어도 90%, 또는 서열 번호 37의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 5의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 6의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 21의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 22의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 36의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 37의 적어도 90% 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 핵산 분자는 ICP를 암호화한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 7, 서열 번호 23, 또는 서열 번호 38의 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 7의 적어도 90%, 서열 번호 23의 적어도 90%, 또는 서열 번호 38의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 7에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 23에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 38에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 39 또는 서열 번호 40의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 8의 적어도 90%, 서열 번호 9의 적어도 90%, 서열 번호 24의 적어도 90%, 서열 번호 25의 적어도 90%, 서열 번호 39의 적어도 90% 또는 서열 번호 40의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 8의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 9의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 24의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 25의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 39의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 40의 적어도 90% 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 핵산 분자는 TMP21을 암호화한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 10, 서열 번호 26 또는 서열 번호 41를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 10의 적어도 90%, 서열 번호 26의 적어도 90%, 또는 서열 번호 41의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 10에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 26에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 41에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 27, 서열 번호 28, 서열 번호 42 또는 서열 번호 43의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 11의 적어도 90%, 서열 번호 12의 적어도 90%, 서열 번호 27의 적어도 90%, 서열 번호 28의 적어도 90%, 서열 번호 42의 적어도 90% 또는 서열 번호 43의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 11의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 12의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 27의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 28의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 42의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 43의 적어도 90% 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 핵산 분자는 UIS3을 암호화한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 13, 서열 번호 29, 또는 서열 번호 44의 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 13의 적어도 90%, 서열 번호 29의 적어도 90%, 또는 서열 번호 44의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 13에 대한 적어도 90%의 상동성, 서열 번호 29에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 44에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 30, 서열 번호 31, 서열 번호 45 또는 서열 번호 46의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 14의 적어도 90%, 서열 번호 15의 적어도 90%, 서열 번호 30의 적어도 90%, 서열 번호 31의 적어도 90%, 서열 번호 45의 적어도 90% 또는 서열 번호 46의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 14의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 15의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 30의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 31의 적어도 90% 상동성, 서열 번호 45의 적어도 90% 상동성 또는 서열 번호 46의 적어도 90% 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 핵산 분자는 UIS10을 암호화한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 47을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 47의 적어도 90%을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열, 또는 서열 번호 47에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 48 또는 서열 번호 49의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 48의 적어도 90%, 또는 서열 번호 49의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 48에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 49에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 핵산 분자는 SPECT1 및 SPECT2를 암호화한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 50을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 50의 적어도 90%을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열, 또는 서열 번호 50에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 51 또는 서열 번호 52의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 51의 적어도 90%, 또는 서열 번호 52의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 51에 대한 적어도 90%의 상동성, 또는 서열 번호 52에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 핵산 분자는 RON2를 암호화한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는, 서열 번호 53을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 53의 적어도 90%을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열, 또는 서열 번호 53에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 54 또는 서열 번호 55의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 54의 적어도 90%, 또는 서열 번호 55의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 54에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 또는, 또는 서열 번호 55에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 16의 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 상기 핵산 분자는 플라스미드이다.
일 구현예에서, 본 발명은 하기 중 하나 이상을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자에 관한 것이다: CSP, LSA1, TRAP, CelTOS 및 Ama1. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 또는 서열 번호 65의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 66 또는 서열 번호 67의 핵산 서열을 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 핵산 분자는 서열 번호 16의 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 상기 핵산 분자는 플라스미드이다.
도 1은 P. 팔시파룸 감염의 포자소체 및 간 단계의 도해를 도시한다. 간 단계 (LS)는 단백질을 기생동물의 액포막 (PVM)을 횡단하여 방출시켰다.
도 2는 단백질을 암호화하는 핵산 서열의 길이, 플라스모듐 종에서 이들의 보존성, 및 이들이 식별되는 단계(들) [간 단계 (LS), 혈액 단계 (BS) 또는 포자소체 단계]를 포함하는 LS 유출 단백질의 목록을 도시한다.
도 3a 내지 도 3d를 포함하는 도 3은 대조군 마우스와 비교하여 EXP1 및 EXP2로 면역화된 마우스에서 증가된 생존률을 도시한다. 도 3a는 면역화, 유발 및 관찰 시간 과정의 다이아그램을 도시한다. 도 3b는 실험 결과를 보여주는 표를 도시한다. EXP1_EXP2로 면역화된 마우스는 혈액 단계 질환의 발병 지연을 보여주었다. 도 3c는 유발 후 8일 경과 동안의 프리-페이턴시(pre-patency)를 나타내는 마우스의 백분율을 나타낸다. 도 3d는 유발 후 8일 경과 동안의 페이턴시(patency)를 나타내는 마우스의 백분율을 나타낸다.
도 4a 내지 도 4d를 포함하는 도 4는 대조군 마우스와 비교하여 EXP1 및 EXP2로 면역화된 마우스에서 혈액 단계 질환으로부터의 보호 및 증가된 생존률을 도시한다. 도 4a는 면역화, 유발 및 관찰 시간 과정의 다이아그램을 도시한다. 도 4b는 실험 결과를 보여주는 표를 도시한다. IL-12 또는 IL33의 등의 존재 및 부재 하에서 EXP1_EXP2로 면역화된 마우스는 혈액 단계 질환의 발병으로부터의 보호를 보여주었다. 도 4c는 유발 후 10일 경과 동안의 프리-페이턴시를 나타내는 마우스의 백분율을 나타낸다. 도 3d는 유발 후 10일 경과 동안의 페이턴시를 나타내는 마우스의 백분율을 나타낸다.
도 5는 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 및 부재 하에서 EXP1_EXP2로 면역화된 마우스가 제1 면역화한지 14주 후에 대조군 벡터 (pVax)로 처리된 마우스와 비교하여 면역 반응의 증가를 보여주는 IFNγ ELISPOT 검정 결과를 도시한다.
도 6은 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 및 부재 하에서 EXP1_EXP2로 면역화된 마우스가 대조군 벡터 (pVax)로 처리된 마우스와 비교하여 면역 반응의 증가를 보여주는, 도 5로부터의 IFNγ ELISPOT 검정 결과의 평균을 도시한다.
도 7a 내지 도 7b를 포함하는 도 7은, 대조군 마우스와 비교하여, 다양한 조합의 LS 면역원으로 면역화된 마우스 내 BS 질환으로부터의 보호 및 증가된 생존율을 도시한다. 도 7a는 면역화, 유발 및 관찰 시간 과정의 다이아그램을 도시한다. 도 7b는 실험 결과를 보여주는 표를 도시한다. IL-12 또는 IL33의 등의 존재 또는 부재 하에서의, LS 면역원의 조합을 포함하는 표지된 작제물로 면역화된 마우스는 BS 질환의 발병으로부터의 보호를 도시하였다.
도 8은 EXP_1 및 EXP2 항원, EXP23 및 ICP 항원 또는 pVAX 단독 또는 등 (IL-12 또는 IL-33)와의 조합으로 면역화된 마우스 유래의 혈액의 대표적 이미지를 도시한다. 적색 화살표는 BS 질환의 발병을 표지한다.
도 9는, TMP21 및 UIS3 항원, 또는 EXP1_EXP2, EXP23, ICP, TMP21 및 UIS3 항원 또는 pVAX을 단독으로 포함하거나, 또는 등 (IL-12 또는 IL-33)와 병용하여 포함하는 조합 면역원성 조성물 (콤보(combo))로 면역화된 마우스 유래의 혈액의 대표 이미지를 도시한다. 적색 화살표는 BS 질환의 발병을 표지한다.
도 10은 유발 후 10일의 경과 과정 동안 보조 치료요법 (IL-12 또는 IL-33)의 존재 또는 부재 하에서, EXP1_EXP2 (상부 패널) 또는 EXP23 + ICP (하부 패널)로 면역화되는 경우 프리-페이턴시 및 페이턴시를 갖는 마우스의 백분율을 도시한다.
도 11은 유발 후 10일의 경과 과정 동안 보조 치료(adjuvant therapy) (IL-12 또는 IL-33)의 존재 또는 부재 하에서, TMP21 및 UIS3 항원 (상부 패널), 또는 EXP1_EXP2, EXP23, ICP, TMP21 및 UIS3 항원을 포함하는 조합 면역원성 조성물(콤보) (하부 패널)로 면역화되는 경우 프리-페이턴시 및 페이턴시를 갖는 마우스의 백분율을 도시한다.
도 12는 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 및 부재 하에서 LS 면역원의 조합로 면역화된 마우스가 제1 면역화 후 18주에 대조군 벡터 (pVax)로 처리된 마우스와 비교하여 면역 반응의 증가를 보여주는 IFNγ ELISPOT 검정 결과를 도시한다.
도 13은 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 및 부재 하에서 LS 면역원의 조합로 면역화된 마우스가 대조군 벡터 (pVax)로 처리된 마우스와 비교하여 면역 반응의 증가를 보여주는, 도 12로부터의 IFNγ ELISPOT 검정 결과의 평균을 도시한다.
도 14는 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 또는 부재 하에서, EXP1_EXP2을 단독으로 또는 추가의 말라리아 면역원 CelTOS_TRAP와 조합하여 면역화한 마우스에서 BS 질환으로부터의 증가된 생존율 및 보호를 입증하는 실험 결과를 도시한다.
도 15는 유발 후 수일의 과정에 걸쳐, EXP1_EXP2, 및 CelTOS_TRAP, CelTOS_TRAP, UIS10_PL, 또는 SPECT1/SPECT2와 병용하여 EXP1_EXP2로 면역화될 경우, 프리-페이턴시 및 페이턴시를 갖는 마우스의 백분율을 예증하는 실험 결과를 도시한다.
도 16은 EXP1_EXP2, CelTOS_TRAP와 조합된 EXP1_EXP2, CelTOS_TRAP, UIS10_PL, 또는 SPECT1/SPECT2를 사용한 면역화 후 포자소체가 유발된 마우스에 대한 프리-페이턴시의 일수를 입증하는 예시적 실험 결과를 도시한다.
도 17은 UIS10_PL10이 UIS10_PL10 항원으로 면역화된 마우스 기원의 혈청 중에서 검출됨을 입증하는 예시적 실험 결과를 도시한다.
도 18은 도 16 및 도 17에 제공된 예시적 실험 데이터의 결과를 요약하는 표를 도시한다.
도 19는 Pvivax 및 Pcynomolgi 작제물의 발현을 입증하는 예시적 실험 결과를 도시한다.
도 2는 단백질을 암호화하는 핵산 서열의 길이, 플라스모듐 종에서 이들의 보존성, 및 이들이 식별되는 단계(들) [간 단계 (LS), 혈액 단계 (BS) 또는 포자소체 단계]를 포함하는 LS 유출 단백질의 목록을 도시한다.
도 3a 내지 도 3d를 포함하는 도 3은 대조군 마우스와 비교하여 EXP1 및 EXP2로 면역화된 마우스에서 증가된 생존률을 도시한다. 도 3a는 면역화, 유발 및 관찰 시간 과정의 다이아그램을 도시한다. 도 3b는 실험 결과를 보여주는 표를 도시한다. EXP1_EXP2로 면역화된 마우스는 혈액 단계 질환의 발병 지연을 보여주었다. 도 3c는 유발 후 8일 경과 동안의 프리-페이턴시(pre-patency)를 나타내는 마우스의 백분율을 나타낸다. 도 3d는 유발 후 8일 경과 동안의 페이턴시(patency)를 나타내는 마우스의 백분율을 나타낸다.
도 4a 내지 도 4d를 포함하는 도 4는 대조군 마우스와 비교하여 EXP1 및 EXP2로 면역화된 마우스에서 혈액 단계 질환으로부터의 보호 및 증가된 생존률을 도시한다. 도 4a는 면역화, 유발 및 관찰 시간 과정의 다이아그램을 도시한다. 도 4b는 실험 결과를 보여주는 표를 도시한다. IL-12 또는 IL33의 등의 존재 및 부재 하에서 EXP1_EXP2로 면역화된 마우스는 혈액 단계 질환의 발병으로부터의 보호를 보여주었다. 도 4c는 유발 후 10일 경과 동안의 프리-페이턴시를 나타내는 마우스의 백분율을 나타낸다. 도 3d는 유발 후 10일 경과 동안의 페이턴시를 나타내는 마우스의 백분율을 나타낸다.
도 5는 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 및 부재 하에서 EXP1_EXP2로 면역화된 마우스가 제1 면역화한지 14주 후에 대조군 벡터 (pVax)로 처리된 마우스와 비교하여 면역 반응의 증가를 보여주는 IFNγ ELISPOT 검정 결과를 도시한다.
도 6은 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 및 부재 하에서 EXP1_EXP2로 면역화된 마우스가 대조군 벡터 (pVax)로 처리된 마우스와 비교하여 면역 반응의 증가를 보여주는, 도 5로부터의 IFNγ ELISPOT 검정 결과의 평균을 도시한다.
도 7a 내지 도 7b를 포함하는 도 7은, 대조군 마우스와 비교하여, 다양한 조합의 LS 면역원으로 면역화된 마우스 내 BS 질환으로부터의 보호 및 증가된 생존율을 도시한다. 도 7a는 면역화, 유발 및 관찰 시간 과정의 다이아그램을 도시한다. 도 7b는 실험 결과를 보여주는 표를 도시한다. IL-12 또는 IL33의 등의 존재 또는 부재 하에서의, LS 면역원의 조합을 포함하는 표지된 작제물로 면역화된 마우스는 BS 질환의 발병으로부터의 보호를 도시하였다.
도 8은 EXP_1 및 EXP2 항원, EXP23 및 ICP 항원 또는 pVAX 단독 또는 등 (IL-12 또는 IL-33)와의 조합으로 면역화된 마우스 유래의 혈액의 대표적 이미지를 도시한다. 적색 화살표는 BS 질환의 발병을 표지한다.
도 9는, TMP21 및 UIS3 항원, 또는 EXP1_EXP2, EXP23, ICP, TMP21 및 UIS3 항원 또는 pVAX을 단독으로 포함하거나, 또는 등 (IL-12 또는 IL-33)와 병용하여 포함하는 조합 면역원성 조성물 (콤보(combo))로 면역화된 마우스 유래의 혈액의 대표 이미지를 도시한다. 적색 화살표는 BS 질환의 발병을 표지한다.
도 10은 유발 후 10일의 경과 과정 동안 보조 치료요법 (IL-12 또는 IL-33)의 존재 또는 부재 하에서, EXP1_EXP2 (상부 패널) 또는 EXP23 + ICP (하부 패널)로 면역화되는 경우 프리-페이턴시 및 페이턴시를 갖는 마우스의 백분율을 도시한다.
도 11은 유발 후 10일의 경과 과정 동안 보조 치료(adjuvant therapy) (IL-12 또는 IL-33)의 존재 또는 부재 하에서, TMP21 및 UIS3 항원 (상부 패널), 또는 EXP1_EXP2, EXP23, ICP, TMP21 및 UIS3 항원을 포함하는 조합 면역원성 조성물(콤보) (하부 패널)로 면역화되는 경우 프리-페이턴시 및 페이턴시를 갖는 마우스의 백분율을 도시한다.
도 12는 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 및 부재 하에서 LS 면역원의 조합로 면역화된 마우스가 제1 면역화 후 18주에 대조군 벡터 (pVax)로 처리된 마우스와 비교하여 면역 반응의 증가를 보여주는 IFNγ ELISPOT 검정 결과를 도시한다.
도 13은 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 및 부재 하에서 LS 면역원의 조합로 면역화된 마우스가 대조군 벡터 (pVax)로 처리된 마우스와 비교하여 면역 반응의 증가를 보여주는, 도 12로부터의 IFNγ ELISPOT 검정 결과의 평균을 도시한다.
도 14는 IL-12 또는 IL-33을 사용한 보조 치료의 존재 또는 부재 하에서, EXP1_EXP2을 단독으로 또는 추가의 말라리아 면역원 CelTOS_TRAP와 조합하여 면역화한 마우스에서 BS 질환으로부터의 증가된 생존율 및 보호를 입증하는 실험 결과를 도시한다.
도 15는 유발 후 수일의 과정에 걸쳐, EXP1_EXP2, 및 CelTOS_TRAP, CelTOS_TRAP, UIS10_PL, 또는 SPECT1/SPECT2와 병용하여 EXP1_EXP2로 면역화될 경우, 프리-페이턴시 및 페이턴시를 갖는 마우스의 백분율을 예증하는 실험 결과를 도시한다.
도 16은 EXP1_EXP2, CelTOS_TRAP와 조합된 EXP1_EXP2, CelTOS_TRAP, UIS10_PL, 또는 SPECT1/SPECT2를 사용한 면역화 후 포자소체가 유발된 마우스에 대한 프리-페이턴시의 일수를 입증하는 예시적 실험 결과를 도시한다.
도 17은 UIS10_PL10이 UIS10_PL10 항원으로 면역화된 마우스 기원의 혈청 중에서 검출됨을 입증하는 예시적 실험 결과를 도시한다.
도 18은 도 16 및 도 17에 제공된 예시적 실험 데이터의 결과를 요약하는 표를 도시한다.
도 19는 Pvivax 및 Pcynomolgi 작제물의 발현을 입증하는 예시적 실험 결과를 도시한다.
일 양태에서, 본 발명은 간 단계 (LS) 방출된 단백질에 대한 핵산 및 아미노산 서열을 포함하는 조성물 및 플라스모듐 종의 면역원성 조성물로서 이들의 사용 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 LS 유출 단백질을 암호화하는 핵산 서열이다. 일 구현예에서, 조성물은 다중 LS 유출 단백질을 암호화하는 다중 핵산을 포함한다. 일 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 LS 유출 단백질을 암호화하는 플라스미드이다. 일 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 LS 유출 단백질을 암호화하는 다중 플라스미드를 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명은 인간 세포에서 발현을 위해 최적화된 서열을 제공한다. 상기 최적화된 DNA 서열은 인간 피험체를 치료하기 위해 바람직할 수 있다.
정의
달리 정의되지 않으면, 본원에서 이용된 모든 기술 용어와 과학 용어는 당해 분야의 평균적 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 충돌하는 경우에, 정의를 비롯한 본 문서가 우선할 것이다. 비록 본원에서 설명된 것들과 유사하거나 균등한 임의의 방법과 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 이용될 수 있지만, 예시적 방법과 재료가 하기에 설명된다. 본 명세서에 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허, 및 다른 참조는 그 전문이 참조로 편입된다. 본원에 개시된 재료, 방법, 및 실시예는 단지 예시적인 것이며 제한하려는 것이 아니다. 본 출원에서 사용되는 용어는 단지 특정한 예시적인 예들을 설명하기 위함이고 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "포함한다", "포함된다", "갖는", "갖는다", "수 있다", "함유한다" 및 이들의 변형은 추가적인 행위 또는 구조의 가능성을 배제하지 않는 개방형 전이 어구, 용어 또는 단어로 의도된다. 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥에서 달리 지시되지 않으면, 복수 지시대상을 포함한다. 본 발명은 또한, 명시적으로 진술되는 지의 여부에 상관없이, 본원에서 제공된 구현예 또는 원소를 "포함하고," 이들로 "구성되고", 그리고 이들로 "본질적으로 구성되는" 다른 구현예를 고려한다.
본원에서 수치 범위의 언급에 있어서, 동일한 정도의 정밀도를 갖는 그 사이의 각각의 개입 숫자가 명시적으로 고려된다. 예를 들면, 6-9 범위의 경우, 6과 9에 추가하여 숫자 7과 8이 고려되며, 그리고 6.0-7.0 범위의 경우, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 및 7.0 숫자들이 명시적으로 고려된다.
본원에서 사용된 "등"는 DNA 플라스미드에 의하여 암호화되고 이후 기술된 핵산 서열을 암호화하는 하나 또는 그 이상의 항원의 면역원성을 증진하는 본원에 기술된 DNA 플라스미드 백신에 부가된 임의의 분자를 의미한다.
"항체"는 Fab, F(ab')2, Fd, 및 단쇄 항체, 디아바디, 이중특이적 항체, 이작용기 항체 및 이의 유도체를 포함하는, 부류 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE, 또는 단편의 항체, 이의 단편 또는 유도체를 의미한다. 항체는 원하는 에피토프 또는 이로부터 유래된 서열에 충분한 결합 특이성을 나타내는 포유동물 혈청 표본에서 단리된, 항체, 다클론성 항체, 친화도 정제된 항체, 또는 이의 혼합물일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이 "암호화 서열" 또는 "암호화 핵산"은 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 (RNA 또는 DNA 분자)을 지칭하는 것을 의미한다. 암호화 서열에는 핵산이 투여되는 개체 또는 포유동물의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 프로모터 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 개시 및 종결 신호가 추가로 포함될 수 있다.
본원에서 이용되는 "상보체" 또는 "상보적인"은 핵산이 핵산 분자의 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유사체 간 왓슨-크릭(예로, A-T/U 및 C-G) 또는 후그스틴(Hoogsteen) 염기쌍 형성을 의미할 수 있음을 의미한다.
본원에 사용된 "공통" 또는 "공통 서열"은 상이한 유기체 유래의 상동한 유전자에 대한 다중 서열의 배열의 분석에 기반하여 구성된, 폴리펩타이드 서열을 의미한다. 공통 폴리펩타이드 서열을 암호화하는 핵산 서열이 제조될 수 있다. 그러한 단백질을 암호화하는 공통 서열 및/또는 핵산 분자를 포함하는 단백질을 포함하는 백신은 항원에 대하여 광범위한 면역성을 유도하는데 사용될 수 있다.
본원에서 상호 교환적으로 이용되는 "전기천공", "전기-투과화", 또는 "전기-역학 증진"("EP")은 생체막에서 미시적 경로(공극)을 유도하기 위한 막투과성 전기장 자극의 이용을 나타낼 수 있다; 이들의 존재는 생체분자, 예컨대 플라스미드, 올리고뉴클레오타이드, siRNA, 약물, 이온, 및 물이 세포막의 한 쪽에서 다른 쪽으로 이동할 수 있게 한다.
본원에서 핵산 서열에 대해 사용된 바와 같은 "단편"은 본원에 개시된 항원과 교차 반응하는 포유동물에서 면역 반응을 일으킬 수 있는 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열 또는 이의 부분을 의미한다. 단편은 아래에 명시된 단백질 단편을 암호화하는 다양한 뉴클레오타이드 서열 중 적어도 하나로부터 선택된 DNA 단편일 수 있다. 단편은 아래 제시된 핵산 서열의 하나 이상의 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단편은 본원에 개시된 핵산 서열 중 적어도 하나의 적어도 20개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 30개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 40개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 50개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 60개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 70개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 80개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 90개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 100개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 150개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 200개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 250개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 300개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 350개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 400개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 450개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 500개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 550개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 600개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 650개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 700개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 750개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 800개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 850개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 900개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 950개 이상의 뉴클레오타이드, 또는 적어도 1000개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
본원에서 폴리펩타이드 서열에 대해 사용된 바와 같은 "단편" 또는 "면역원성 단편"은 본원에 개시된 항원과 교차 반응하는 포유동물에서 면역 반응을 일으킬 수 있는 폴리펩타이드를 의미한다. 상기 단편은 하기 제시된 다양한 아미노산 서열 중 적어도 하나로부터 선택된 폴리펩타이드 단편일 수 있다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 공통 단백질의 단편은 본원에 개시된 단백질 서열의 적어도 20개 이상의 아미노산, 적어도 30개 이상의 아미노산, 적어도 40개 이상의 아미노산, 적어도 50개 이상의 아미노산, 적어도 60개 이상의 아미노산, 적어도 70개 이상의 아미노산, 적어도 80개 이상의 아미노산, 적어도 90개 이상의 아미노산, 적어도 100개 이상의 아미노산, 적어도 110개 이상의 아미노산, 적어도 120개 이상의 아미노산, 적어도 130개 이상의 아미노산, 적어도 140개 이상의 아미노산, 적어도 150개 이상의 아미노산, 적어도 160개 이상의 아미노산, 적어도 170개 이상의 아미노산, 적어도 180개 이상의 아미노산, 적어도 210개 이상의 아미노산, 적어도 240개 이상의 아미노산, 적어도 270개 이상의 아미노산, 적어도 300개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다.
본원에서 이용되는 "유전적 작제물"은 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 DNA 또는 RNA 분자를 나타낸다. 암호화 서열에는 핵산 분자가 투여되는 개체의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 프로모터 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 개시 및 종결 신호가 포함된다. 본원에서 이용되는 용어 "발현 가능한 형태"는 개체의 세포에 존재하는 경우, 암호화 서열이 발현되도록 단백질을 암호화하는 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된 필요한 조절 요소를 함유하는 유전자 작제물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "상동성"은 상보성의 정도를 나타낸다. 부분적 상동성 또는 완전 상동성 (즉, 동일성)이 있을 수 있다. 표적 핵산에 하이브리드화함으로부터 완전 상보적 서열을 적어도 부분적으로 억제하는 부분적으로 상보적인 서열은 기능 용어 "실질적으로 상동한"을 사용하는 것으로 지칭된다. cDNA 또는 게놈 클론과 같은 이중-가닥 핵산 서열을 참고하여 사용될 때, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "실질적으로 상동한"은 낮은 엄격함의 상태 하에서 이중-가닥 핵산 서열의 가닥에 하이브리드화될 수 있는 프로브를 지칭한다. 단일-가닥 핵산 서열을 참고하여 사용될 때, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "실질적으로 상동한"은 낮은 엄격함의 상태 하에서 단일-가닥 핵산 주형 서열(즉, 이의 상보체인)에 하이브리드화될 수 있는 프로브를 지칭한다.
둘 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열의 맥락에서 본원에서 이용되는 "동일한" 또는 "동일성"은 서열이 명시된 영역에 걸쳐 동일한 명시된 잔기 백분율을 가짐을 의미한다. 백분율은 두 서열을 최적 정렬하고, 명시된 영역에 걸쳐 두 서열을 비교하고, 두 서열에서 동일한 잔기가 나오는 위치의 수를 계측하여 매칭된 위치의 수를 산출하고, 매칭된 위치의 수를 명시된 영역에서 위치의 총 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱해서 서열 동일성 백분율을 산출함으로써 산출될 수 있다. 두 서열이 상이한 길이이거나 정렬로 하나 이상의 엇갈린 말단이 생성되고 명시된 비교 영역에 하나의 서열만 포함되는 경우, 단일 서열의 잔기는 산출의 분모에는 포함되지만 분자에는 포함되지 않는다. DNA와 RNA를 비교할 때, 티민 (T)과 우라실 (U)은 동등하게 고려될 수 있다. 동일성은 수동으로 또는 BLAST 또는 BLAST 2.0과 같은 컴퓨터 서열 알고리즘을 이용하여 수행될 수 있다.
"면역 반응"은 본원에서 이용된 바와 같이, 항원의 도입에 응하여, 숙주의 면역계, 예를 들면, 포유동물의 면역계의 활성화를 의미한다. 상기 면역 반응은 세포성 또는 체액성 반응, 또는 둘 모두의 형태일 수 있다.
본원에서 이용되는 "핵산" 또는 "올리고뉴클레오타이드" 또는 "폴리뉴클레오타이드"는 서로 공유 연결된 적어도 2개의 뉴클레오타이드를 의미한다. 단일 가닥의 묘사는 또한, 상보성 가닥의 서열을 규정한다. 따라서 핵산은 또한 도시된 단일 가닥의 상보 가닥을 포괄한다. 핵산의 많은 변이체가 소정의 핵산으로서 동일한 목적을 위해 이용될 수 있다. 따라서, 핵산은 또한, 실제적으로 동일한 핵산 및 이들의 보체를 포괄한다. 단일 가닥은 엄격한 하이브리드화 조건 하에 표적 서열에 하이브리드화할 수 있는 프로브를 제공한다. 따라서, 핵산은 또한, 엄격한 하이브리드화 조건 하에 하이브리드화하는 프로브를 포괄한다.
핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있거나, 또는 이중 가닥과 단일 가닥 서열 둘 모두의 부분을 내포할 수 있다. 핵산은 DNA (유전체와 cDNA 둘 모두), RNA, 또는 하이브리드일 수 있고, 여기서 상기 핵산은 데옥시리보-와 리보뉴클레오타이드의 조합, 그리고 우라실, 아데닌, 티민, 시토신, 구아닌, 이노신, 크산틴 하이포크산틴, 이소시토신 및 이소구아닌을 비롯한 염기의 조합을 내포할 수 있다. 핵산은 화학적 합성 방법에 의해 또는 재조합 방법에 의해 획득될 수 있다.
"작동가능하게 연결된"은 본원에서 이용된 바와 같이, 유전자의 발현이 상기 유전자가 공간적으로 연결되는 프로모터의 조절 하에 있다는 것을 의미한다. 프로모터는 이의 조절 하에서의 유전자의 5'(상류) 또는 3'(하류)에 배치될 수 있다. 프로모터와 유전자 사이에 거리는 프로모터 및 상기 프로모터가 유래되는 유전자에서 이것이 조절하는 유전자 사이에 거리와 대략 동일할 수 있다. 당분야에 공지된 바와 같이, 상기 거리의 변동은 프로모터 작용의 손실 없이 수용될 수 있다.
본원에서 이용되는 "펩타이드", "단백질", 또는 "폴리펩타이드"는 아미노산의 연결된 서열을 의미할 수 있고, 천연, 합성, 또는 천연 및 합성의 변형물 또는 조합일 수 있다.
"프로모터"는 본원에서 이용된 바와 같이, 세포에서 핵산의 발현을 부여하거나, 활성화하거나 또는 증진할 수 있는 합성 또는 자연적으로-유래된 분자를 의미한다. 프로모터는 발현을 더욱 증진하고 및/또는 이의 공간 발현 및/또는 시간 발현을 변경하기 위해 하나 또는 그 이상의 특정한 전사 조절 서열을 포함할 수 있다. 프로모터는 또한, 원위 인핸서 또는 억제인자 원소를 포함할 수 있고, 이것은 전사의 출발 부위로부터 많게는 수천 개의 염기쌍으로서 위치될 수 있다. 프로모터는 바이러스, 박테리아, 진균, 식물, 곤충, 그리고 동물을 비롯한 공급원으로부터 유래될 수 있다. 프로모터는 발현이 일어나는 세포, 조직 또는 장기와 관련하여, 또는 발현이 일어나는 발달 단계와 관련하여, 또는 생리적 스트레스, 병원체, 금속 이온, 또는 유도제와 같은 외부 자극에 대한 반응으로, 항시적으로, 또는 차별적으로 유전자 구성요소의 발현을 조절할 수 있다. 프로모터의 대표적인 예는 박테리오파아지 T7 프로모터, 박테리오파아지 T3 프로모터, SP6 프로모터, lac 오퍼레이터-프로모터, tac 프로모터, SV40 후기 프로모터, SV40 초기 프로모터, RSV-LTR 프로모터, CMV IE 프로모터, SV40 초기 프로모터 또는 SV40 후기 프로모터 및 CMV IE 프로모터를 포함한다.
"신호 펩타이드" 및 "리더 서열"은 본원에서 상호 교환적으로 이용되며, 본원에 나타낸 단백질의 아미노 말단에 연결될 수 있는 아미노산 서열을 지칭한다. 신호 펩타이드/리더 서열은 전형적으로 단백질의 위치선정을 지시한다. 본원에서 이용된 신호 펩타이드/리더 서열은 바람직하게는 이것이 생산되는 세포로부터 단백질의 분비를 촉진한다. 신호 펩타이드/리더 서열은 종종 세포로부터의 분비 시, 종종 성숙 단백질로 불리는 단백질의 나머지로부터 절단된다. 신호 펩타이드/리더 서열은 단백질의 N 말단에 연결된다.
본원에서 이용되는 "엄격한 하이브리드화 조건"은 제1 핵산 서열(예로, 탐침)이 제2 핵산 서열(예로, 표적)에, 예컨대 핵산의 복합 혼합물로 하이브리드화할 조건을 의미한다. 엄격한 조건은 서열 의존적이며, 상이한 상황에서 상이할 것이다. 엄격한 조건은 규정된 이온 강도 pH에서 특정 서열에 대한 열 용융점 (Tm)보다 약 5-10°C 더 낮도록 선택될 수 있다. Tm은 표적에 상보적인 프로브의 50%가 평형에서 표적 서열에 하이브리드화하는 온도 (규정된 이온 강도, pH, 그리고 핵 농도 하에)일 수 있다 (표적 서열이 Tm에서 과잉으로 존재할 때, 프로브 중에서 50%가 평형에서 점유된다). 엄격한 조건은 염 농도가 약 1.0M 나트륨 이온 미만, 예컨대 pH 7.0 내지 8.3에서 약 0.01-1.0M 나트륨 이온 농도(또는 다른 염)이고 온도가 짧은 탐침(예로 약 10-50개 뉴클레오타이드)에 대해 적어도 약 30℃이고 긴 탐침(예로 약 50개 초과 뉴클레오타이드)에 대해 적어도 약 60℃인 것들일 수 있다. 엄격한 조건은 또한 탈안정화 제제, 예컨대 포름아미드의 첨가로 달성될 수 있다. 선택적 또는 특이적 하이브리드화를 위해, 양성 신호는 백그라운드 하이브리드화의 적어도 2 내지 10배일 수 있다. 예시적인 엄중 하이브리드화 조건은 하기를 포함한다: 50% 포름아미드, 5x SSC, 및 1% SDS, 42℃에서 항온처리, 또는 5x SSC, 1% SDS, 65℃에서 항온처리, 65℃에서 0.2x SSC, 및 0.1% SDS에서 세척.
"피험체"는 본원에서 이용된 바와 같이, 본원에 기술된 백신으로 면역화되는 것이 요망되거나 또는 이를 필요로 하는 포유동물을 의미할 수 있다. 포유동물은 인간, 침팬지, 개, 고양이, 말, 소, 마우스, 또는 랫트일 수 있다.
본원에서 이용되는 "실질적으로 상보적인"은 제1 서열이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540개 또는 그 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 영역에 걸쳐 제2 서열의 상보체에 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일함을, 또는 두 서열이 엄격한 하이브리드화 조건 하에 하이브리드화함을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이 "실질적으로 동일한"은, 만약 제1 서열이 제2 서열의 보체에 실질적으로 상보적이면, 제1 및 제2 서열이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540개 또는 그 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 영역에 대해 또는 핵산에 대해, 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하다는 것을 의미한다.
본원에서 이용되는 "치료" 또는 "치료하는"은 질환의 예방, 억제, 진압 또는 완전 제거 수단을 통한 동물의 질환으로부터의 보호를 의미할 수 있다. 질환을 예방하는 것은 질환의 시작에 앞서, 본 발명의 백신을 동물에 투여하는 것을 수반한다. 질환을 억제하는 것은 질환의 유도 후, 하지만 이의 임상적 출현 이전에 본 발명의 백신을 동물에 투여하는 것을 수반한다. 질환을 억압하는 것은 질환의 임상적 출현 후, 본 발명의 백신을 동물에 투여하는 것을 수반한다.
"변이체"는 핵산에 대하여 본원에서 이용된 바와 같이, (i) 참조된 뉴클레오타이드 서열의 부분 또는 단편; (ii) 참조된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 부분의 보체; (iii) 참조된 핵산 또는 이의 보체와 실제적으로 동일한 핵산; 또는 (iv) 참조된 핵산, 이의 보체, 또는 이와 실제적으로 동일한 서열에 엄격한 조건 하에 하이브리드화하는 핵산을 의미한다.
펩타이드 또는 폴리펩타이드에 대한 "변이체"는 아미노산의 삽입, 결실, 또는 보존적 치환에 의해 아미노산 서열이 상이하지만, 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지한다. 변이체는 또한, 최소한 하나의 생물학적 활성을 유지하는 아미노산 서열을 갖는 참조된 단백질과 실제적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질을 의미할 수 있다. 아미노산의 보존적 치환, 즉, 아미노산을 유사한 특성(예를 들면, 친수성, 전하를 띠는 영역의 정도 및 분포)의 상이한 아미노산으로 치환하는 것은 전형적으로 사소한 변화를 수반하는 것으로 당해 기술분야에서 인식된다. 이러한 작은 변화는, 부분적으로 당분야에 이해되는 바와 같이 아미노산의 수치 지수를 고려하여 확인될 수 있다. Kyte 등, J. Mol. Biol. 157:105-132 (1982). 아미노산의 수치 지수는 그 소수성 및 전하의 고려에 기반한다. 유사한 수치요법 지수의 아미노산이 치환될 수 있고 여전히 단백질 기능을 보유한다는 것이 당해기술분야에 공지되어 있다. 일 양태에서, ±2의 수치요법 지수를 갖는 아미노산이 치환된다. 아미노산의 친수성은 또한 생물학적 기능을 보유하는 단백질을 야기할 치환을 밝히는데 사용될 수 있다. 펩타이드의 맥락에서 아미노산의 친수성 고려는 항원성 및 면역원성과 잘 연관되는 것으로 보고된 유용한 척도인 해당 펩타이드의 가장 큰 국소 평균 친수성 산출을 허용한다. 미국 특허 번호 4,554,101 (이는 전체가 본원에 참조로 포함되어 있음). 당분야에서 이해되는 바와 같은, 유사한 친수성값을 갖는 아미노산의 치환은 생물학적 활성, 예를 들어 면역원성을 보유하는 펩타이드를 생성할 수 있다. 치환은 서로 ±2 이내에 친수성 값을 갖는 아미노산으로 수행될 수 있다. 아미노산의 소수성 지수 및 친수성 값은 상기 아미노산의 특정한 측쇄에 의해 영향을 받는다. 상기 관찰과 일치하게도, 생물학적 기능과 혼화성인 아미노산 치환은 아미노산의 상대적 유사성, 및 특히 소수성, 친수성, 전하, 크기, 및 다른 특성에 의해 밝혀진 바와 같이, 상기 아미노산의 측쇄에 좌우되는 것으로 이해된다.
변이체는 전체 유전자 서열의 전장 또는 이의 단편에 걸쳐 실질적으로 동일한 핵산 서열일 수 있다. 핵산 서열은 유전자 서열의 전장 또는 이의 단편에 걸쳐 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일할 수 있다. 변이체는 아미노산 서열의 전장 또는 이의 단편에 걸쳐 실질적으로 동일한 아미노산 서열일 수 있다. 아미노산 서열은 아미노산 서열의 전장 또는 이의 단편에 걸쳐 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 상동할 수 있다.
"벡터"는 본원에서 이용된 바와 같이, 복제 기점을 내포하는 핵산 서열을 의미한다. 벡터는 바이러스 벡터, 박테리오파지, 박테리아 인공 염색체 또는 효모 인공 염색체일 수 있다. 벡터는 DNA 또는 RNA 벡터일 수 있다. 벡터는 자기 복제 염색체외 벡터일 수 있고, 그리고 바람직하게는, DNA 플라스미드이다. 벡터는 하나 또는 그 이상의 이종성 핵산 서열을 함유 또는 포함할 수 있다.
1. 면역원성 조성물
본 발명은 플라스모듐 아종에 대한 면역 반응을 유발하는데 사용하기 위한 면역원성 조성물에 관한 것이다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물을 적어도 하나의 플라스모듐 아종 간 단계 (LS) 항원을 포함한다. 일 구현예에서, LS 항원은 다중 플라스모듐 아종 LS 항원 서열로부터 생성된 공통 LS 항원이다. 일 구현예에서, 공통 LS 항원은 다중 플라스모듐 아종에 대하여 폭넓은 면역 반응을 유도할 수 있다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 면역화되지 않은 피험체에서 프리-페이턴시 기간에 상대적으로 적어도 1%, 5%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 또는 45% 초과까지 프리-페이턴시의 기간을 증가시킬 수 있다. 일 구현예에서, 면역원성 조성물은, 면역화되지 않은 피험체와 비교하여, 면역화 후 적어도 1%, 5%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60% 또는 60% 초과 만큼 페이턴시를 감소시킬 수 있다.
일 구현예에서, 면역원성 조성물은 면역화되지 않은 집단에 대한 보호와 비교하여 적어도 1%, 5%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 또는 45% 초과까지 플라스모듐 아종으로부터의 보호를 증가시킬 수 있다.
면역원성 조성물은 플라스모듐 아종 유발에 응답하여 면역원성 조성물을 투여받은 피험체에서 세포 면역 반응을, 면역원성 조성물을 투여받지 않은 피험체에서 세포 면역 반응과 비교하여 약 2배 내지 약 6000배, 약 3배 내지 약 6000배, 약 4배 내지 약 6000배, 약 5배 내지 약 6000배, 약 6배 내지 약 6000배, 약 7배 내지 약 6000배, 약 8배 내지 약 6000배, 약 9배 내지 약 6000배, 약 10배 내지 약 6000배, 약 15배 내지 약 6000배, 약 10배 내지 약 6000배, 약 25배 내지 약 6000배, 약 30배 내지 약 6000배, 약 35배 내지 약 6000배, 약 40배 내지 약 6000배, 약 45배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 6000배, 약 2배 내지 약 5500배, 약 2배 내지 약 5000배, 약 2배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배 만큼 증가시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 면역원성 조성물은, 상기 면역원성 조성물이 투여되지 않은 피험체에서의 세포성 면역 반응과 비교하여, 약 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 35배, 40배, 45배, 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배 만큼 플라스모듐 아종 유발에 반응하여 면역원성 조성물이 투여되는 피험체에서의 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다.
면역원성 조성물은 플라스모듐 아종 유발에 응답하여 면역원성 조성물을 투여받은 피험체에서의 인터페론 감마 (IFN-γ) 수준을, 면역원성 조성물을 투여받지 않은 피험체에서의 인터페론 감마 (IFN-γ) 수준과 비교하여 약 2배 내지 약 6000배, 약 3배 내지 약 6000배, 약 4배 내지 약 6000배, 약 5배 내지 약 6000배, 약 6배 내지 약 6000배, 약 7배 내지 약 6000배, 약 8배 내지 약 6000배, 약 9배 내지 약 6000배, 약 10배 내지 약 6000배, 약 15배 내지 약 6000배, 약 10배 내지 약 6000배, 약 25배 내지 약 6000배, 약 30배 내지 약 6000배, 약 35배 내지 약 6000배, 약 40배 내지 약 6000배, 약 45배 내지 약 6000배, 50배 내지 약 6000배, 약 2배 내지 약 5500배, 약 2배 내지 약 5000배, 약 2배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배 만큼 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 면역원성 조성물은, 상기 면역원성 조성물이 투여되지 않은 피험체에서의 IFN-γ 수준과 비교하여, 약 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 35배, 40배, 45배, 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배 만큼 플라스모듐 아종 유발에 반응하여 면역원성 조성물이 투여되는 피험체에서의 IFN-γ 수준을 증가시킬 수 있다.
면역원성 조성물은 DNA 백신일 수 있다. DNA 백신은 미국 특허 번호 5,593,972, 5,739,118, 5,817,637, 5,830,876, 5,962,428, 5,981,505, 5,580,859, 5,703,055, 및 5,676,594에 개시되며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함되어 있다. DNA 백신은 염색체로 통합되는 것을 억제하는 요소 또는 시약을 추가로 포함할 수 있다.
면역원성 조성물은 적어도 하나의 플라스모듐 아종 LS 항원의 RNA일 수 있다. RNA 백신은 세포내로 도입될 수 있다.
면역원성 조성물은 하기일 수 있다: 약화된 생백신, 항원을 전달하기 위한 재조합 벡터를 사용한 백신, 하부단위 백신, 및 당단백질 백신 (비제한적으로 하기에서 기술된 백신을 포함함: 미국 특허 번호: 4,510,245; 4,797,368; 4,722,848; 4,790,987; 4,920,209; 5,017,487; 5,077,044; 5,110,587; 5,112,749; 5,174,993; 5,223,424; 5,225,336; 5,240,703; 5,242,829; 5,294,441; 5,294,548; 5,310,668; 5,387,744; 5,389,368; 5,424,065; 5,451,499; 5,453,3 64; 5,462,734; 5,470,734; 5,474,935; 5,482,713; 5,591,439; 5,643,579; 5,650,309; 5,698,202; 5,955,088; 6,034,298; 6,042,836; 6,156,319 및 6,589,529 (이들 각각은 본 명세서에 참조로 편입되어 있음)).
본 발명의 면역원성 조성물은 조성물이 질병 또는 사망을 유도하지 않으므로 안전하고; 질병에 대해 보호하며; 중화 항체를 유도하고; 보호성 T 세포 반응을 유도하고; 그리고 투여 용이성, 적은 부작용, 생물학적 안정성 및 낮은 용량 별 비용을 제공하는 것과 같이 효과적인 조성물에 요구되는 특징을 가질 수 있다. 백신은 하기에 검토된 적어도 하나의 플라스모듐 아종 LS 항원을 함유함에 의해 이들 특징의 일부 또는 전부를 달성할 수 있다.
2.
플라스모듐
아종
LS
항원
합성 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 핵산 서열, 아미노산 서열, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 DNA, RNA, cDNA, 이들의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 또한 펩타이드 결합에 의해 항원에 연결되는 태그 서열 또는 링커를 암호화하는 부가적 서열을 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 단백질, 펩타이드, 이들의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 재조합 항원일 수 있다. 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 2 이상의 공통 플라스모듐 아종 LS 단백질 또는 펩타이드에 대한 서열을 포함하는 융합 항원일 수 있다.
일 구현예에서, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 단백질 중 적어도 하나로부터 유래한다. 일 구현예에서, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 상응하는 본래의 LS 항원과 적어도 85% 및 최대 99%의 아미노산 서열 동일성; 적어도 90% 및 최대 99%의 서열 동일성; 적어도 93% 및 최대 98%의 서열 동일성; 또는 적어도 95% 및 최대 99%의 서열 동일성을 갖는다. 일부 경우에서, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 천연 공통 플라스모듐 아종 LS 항원에 상응하여 최대 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.5% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 플라스모듐 아종 LS 항원에 따라서, 플라스모듐 아종 LS 항원의 공통 서열은 플라스모듐 아종에 걸치거나, 또는 플라스모듐 아종 내 다중 균주 또는 혈청형에 걸쳐서 존재할 수 있다.
공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 플라스모듐 아종 LS 항원의 전장 아미노산 서열, 이의 단편, 이의 상동 변이체 아미노산 서열, 또는 상동 변이체 아미노산 서열의 단편을 포함할 수 있다. 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 면역글로불린 신호 펩타이드 (예를 들어, IgE 또는 IgG 신호 펩타이드)와 같은 신호 펩타이드에 작동가능하게 연결될 수 있다. 일 구현예에서, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원 서열의 N 말단 메티오닌이 제거되며, 그리고 신호 펩타이드는 공통 플라스모듐 아종 LS 항원의 아미노산 서열에 N-말단으로 연결된다. 일부 구현예에서, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 또 다른 아미노산 서열 예컨대 HA 태그에 작동가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 증가된 발현을 위하여 최적화된다. 일 구현예에서, 본 발명의 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은 표적 종에서의 증가된 발현을 위하여 최적화된 코돈 및 RNA 중 하나 이상을 포함한다. 일 구현예에서, 표적 종은 인간, 비-인간 영장류 또는 마우스이다.
일 구현예에서, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은, 서열 번호 1, 서열 번호 4, 서열 번호 7, 서열 번호 10, 서열 번호 13, 서열 번호 17, 서열 번호 20, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 29, 서열 번호 32, 서열 번호 35, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 44, 서열 번호 47, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 68, 서열 번호 70, 서열 번호 72, 서열 번호 74, 서열 번호 76, 서열 번호 78, 서열 번호 80, 및 서열 번호 82에서 명시된 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 암호화 핵산 서열은 리보핵산 (RNA) 서열이다.
일 구현예에서, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 18, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 31, 서열 번호 33, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 45, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 69, 서열 번호 71, 서열 번호 73, 서열 번호 75, 서열 번호 77, 서열 번호 79, 서열 번호 81, 및 서열 번호 83에서 명시된 핵산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은, 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 18, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 31, 서열 번호 33, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 45, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 69, 서열 번호 71, 서열 번호 73, 서열 번호 75, 서열 번호 77, 서열 번호 79, 서열 번호 81, 및 서열 번호 83에서 명시된 핵산 서열의 전사물에 대한 리보핵산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 리보핵산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원은, 서열 번호 1, 서열 번호 4, 서열 번호 7, 서열 번호 10, 서열 번호 13, 서열 번호 17, 서열 번호 20, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 29, 서열 번호 32, 서열 번호 35, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 44, 서열 번호 47, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 68, 서열 번호 70, 서열 번호 72, 서열 번호 74, 서열 번호 76, 서열 번호 78, 서열 번호 80, 및 서열 번호 82에서 명시된 아미노산 서열의 전체 길이에 걸쳐 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예는, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원의 면역원성 단편에 상동한 단백질, 및 상동 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 본원에 기재된 서열과 적어도 95% 상동성, 서열과 적어도 96% 상동성, 서열과 적어도 97% 상동성, 서열과 적어도 98% 상동성 및 서열과 적어도 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 상기 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본원에 명시된 면역원성 단편 및 본원에 개시된 단백질과 상동한 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
일부 구현예는 본원에서 핵산 암호화 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 일부 구현예는 본원에서 핵산 암호화 서열과 적어도 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 일부 구현예는 본원에서 핵산 암호화 서열과 적어도 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 일부 구현예는 본원에서 핵산 암호화 서열과 적어도 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 일부 구현예는 본원에서 핵산 암호화 서열과 적어도 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 상동한 본원에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본원에 개시된 상동한 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 말단에 결합된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
일부 구현예는, 전장 공통 플라스모듐 아종 LS 항원, 공통 플라스모듐 아종 LS 항원의 면역원성 단편에 특정 퍼센트의 동일성을 갖는 단백질, 및 공통 플라스 모듐 아종 LS 항원에 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 본원에 기재된 전장 공통 플라스모듐 아종 LS 항원과 적어도 80% 동일성, 전장 서열과 적어도 85% 동일성, 전장 서열과 적어도 90% 동일성, 전장 서열과 적어도 91% 동일성, 전장 서열과 적어도 92% 동일성, 전장 서열과 적어도 93% 동일성, 전장 서열과 적어도 94% 동일성, 전장 서열과 적어도 95% 동일성, 전장 서열과 적어도 96% 동일성, 전장 서열과 적어도 97% 동일성, 전장 서열과 적어도 98% 동일성, 및 전장 서열과 적어도 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 상기 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본원에 명시된 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열 및 본원에 명시된 공통 플라스모듐 아종 LS 항원에 상기 지시된 바와 같이 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 핵산 서열은 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 일부 구현예에서, 핵산 서열은 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
일부 구현예는 공통 플라스모듐 아종 LS 항원의 단편에 관한 것이다. 단편은 본원에 개시된 전장 서열의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25% 적어도 30% 적어도 35% 적어도 40% 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 본원에 개시된 전장 서열의 단편에 대하여 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동할 수 있다. 단편은 본원에 개시된 전장 서열의 단편에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 일부 구현예에서, 단편은 예를 들어 IgE 리더와 같은 면역글로불린 리더와 같은 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 단편은 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 일부 구현예에서, 단편은 리더 서열, 예를 들어 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
1. EXP1 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 EXP1 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 공통 EXP1 항원을 암호화하는 핵산 서열은 인간에서의 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 68에 명시된 EXP1 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 68에 명시된 EXP1 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 69에 명시된다. 일 구현예에서, 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더를 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결되어 있다.
일 구현예에서, EXP1 항원은 비-인간 영장류에서의 발현을 위하여 설계된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 72에 명시된 EXP1 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 73에 명시된다. 일 구현예에서, 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더를 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결되어 있다.
일 구현예에서, EXP1 항원은 마우스에서 발현을 위해 설계된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 76에 명시된 EXP1 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 77에 명시된다. 일 구현예에서, 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더를 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결되어 있다.
일 구현예에서, 공통 EXP1 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 EXP1 항원을 암호화한다.
2. EXP2 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 EXP2 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 공통 EXP2 항원을 암호화하는 핵산 서열은 인간에서의 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 70에 명시된 EXP2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 70에 명시된 EXP2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 71에 명시된다. 일 구현예에서, 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더를 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결되어 있다.
일 구현예에서, EXP2 항원은 비-인간 영장류에서의 발현을 위하여 설계된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 74에 명시된 EXP2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 75에 명시된다. 일 구현예에서, 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더를 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결되어 있다.
일 구현예에서, EXP2 항원은 마우스에서 발현을 위해 설계된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 78에 명시된 EXP2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 79에 명시된다. 일 구현예에서, 공통 EXP1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더를 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결되어 있다.
일 구현예에서, 공통 EXP2 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 EXP2 항원을 암호화한다.
3. EXP23 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 EXP23 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 공통 EXP23 항원을 암호화하는 핵산 서열은 인간에서의 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 4에 명시된 EXP23 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 4에 명시된 EXP23 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 EXP23 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 5에 명시된다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 공통 EXP23 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 6에 명시된다.
일 구현예에서, EXP23 항원은 비-인간 영장류에서의 발현을 위하여 설계된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 EXP23 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 20에 명시된 EXP23 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 EXP23 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 21에 명시된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 EXP23 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 22에 명시된다.
일 구현예에서, EXP23 항원은 마우스에서 발현을 위해 설계된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 EXP23 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 35에 명시된 EXP23 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 EXP23 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 36에 명시된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 EXP23 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 37에 명시된다.
일 구현예에서, 공통 EXP23 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 EXP23 항원을 암호화한다.
4. ICP 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 ICP 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 공통 ICP 항원을 암호화하는 핵산 서열은 인간에서의 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 7에 명시된 ICP 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 7에 명시된 ICP 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 ICP 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 8에 명시된다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 공통 ICP 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 9에 명시된다.
일 구현예에서, ICP 항원은 비-인간 영장류에서의 발현을 위하여 설계된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 ICP 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 23에 명시된 ICP 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 ICP 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 24에 명시된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 ICP 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 25에 명시된다.
일 구현예에서, ICP 항원은 마우스에서 발현을 위해 설계된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 ICP 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 38에 명시된 ICP 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 ICP 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 39에 명시된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 ICP 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 40에 명시된다.
일 구현예에서, 공통 ICP 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 ICP 항원을 암호화한다.
5. TMP21 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 TMP21 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 공통 TMP21 항원을 암호화하는 핵산 서열은 인간에서의 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 10에 명시된 TMP21 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 10에 명시된 TMP21 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 TMP21 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 11에 명시된다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 공통 TMP21 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 12에 명시된다.
일 구현예에서, TMP21 항원은 비-인간 영장류에서의 발현을 위하여 설계된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 TMP21 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 26에 명시된 TMP21 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 TMP21 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 27에 명시된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 TMP21 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 28에 명시된다.
일 구현예에서, TMP21 항원은 마우스에서 발현을 위해 설계된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 TMP21 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 41에 명시된 TMP21 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 TMP21 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 42에 명시된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 TMP21 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 43에 명시된다.
일 구현예에서, 공통 TMP21 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 TMP21 항원을 암호화한다.
6. UIS3 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 UIS3 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 공통 UIS3 항원을 암호화하는 핵산 서열은 인간에서의 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 13에 명시된 UIS3 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 13에 명시된 UIS3 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 UIS3 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 14에 명시된다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 공통 UIS3 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 15에 명시된다.
일 구현예에서, UIS3 항원은 비-인간 영장류에서의 발현을 위하여 설계된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 UIS3 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 29에 명시된 UIS3 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 UIS3 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 30에 명시된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 UIS3 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 31에 명시된다.
일 구현예에서, UIS3 항원은 마우스에서 발현을 위해 설계된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 UIS3 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 44에 명시된 UIS3 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 UIS3 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 45에 명시된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 UIS3 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 46에 명시된다.
일 구현예에서, 공통 UIS3 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 UIS3 항원을 암호화한다.
7. UIS10 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 UIS10 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 공통 UIS10 항원을 암호화하는 핵산은 인간, 비-인간 영장류 또는 마우스에서 발현을 위해 최적화된 코돈 및 RNA일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 47에 명시된 UIS10 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 47에 명시된 UIS10 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 UIS10 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 48에 명시된다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 공통 UIS10 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 49에 명시된다.
일 구현예에서, 공통 UIS10 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 UIS10 항원을 암호화한다.
8. SPECT1 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 SPECT1 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 공통 SPECT1 항원을 암호화하는 핵산은 인간, 비-인간 영장류 또는 마우스에서 발현을 위해 최적화된 코돈 및 RNA일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 80에 명시된 SPECT1 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 80에 명시된 SPECT1 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 SPECT1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 81에 명시된다. 일 구현예에서, 공통 SPECT1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결되어 있다.
일 구현예에서, 공통 SPECT1 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 SPECT1 항원을 암호화한다.
9. SPECT2 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 SPECT2 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 공통 SPECT2 항원을 암호화하는 핵산은 인간, 비-인간 영장류 또는 마우스에서 발현을 위해 최적화된 코돈 및 RNA일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 82에 명시된 SPECT2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 82에 명시된 SPECT2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 SPECT2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 83에 명시된다. 일 구현예에서, 공통 SPECT2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결되어 있다.
일 구현예에서, 공통 SPECT2 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 SPECT2 항원을 암호화한다.
10. RON2 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 RON2 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 공통 RON2 항원을 암호화하는 핵산은 인간, 비-인간 영장류 또는 마우스에서 발현을 위해 최적화된 코돈 및 RNA일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 53에 명시된 RON2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 53에 명시된 RON2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 RON2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 54에 명시된다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 공통 RON2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 55에 명시된다.
일 구현예에서, 공통 RON2 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 RON2 항원을 암호화한다.
11. 융합 항원
일부 구현예에서, 본원에 명시된 LS 단백질의 적어도 하나와 적어도 하나의 다른 아미노산 서열의 조합를 포함하는 융합 단백질이 제공된다. 일 구현예에서, 융합 단백질은 또 다른 아미노산 서열에 인접하게 직접적으로 연결된 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 중 하나를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 융합 단백질은, 서로 직접적으로 인접하여 연결되거나, 또는 스페이서 또는 하나 이상의 아미노산 사이에 연결된 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 중 2개 이상을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 융합 단백질은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 10개 초과의 LS 면역원을 포함한다. 2개 LS 면역원을 갖는 비제한적, 예시적 융합 단백질은 하기를 포함할 수 있다: EXP1 및 EXP2; EXP1 및 EXP23; EXP1 및 ICP; EXP1 및 TMP21; EXP1 및 UIS3; EXP2 및 EXP23; EXP2 및 ICP; EXP2 및 TMP21; EXP2 및 UIS3; EXP23 및 ICP; EXP23 및 TMP21; EXP23 및 UIS3; ICP 및 TMP21; ICP 및 UIS3; 또는 TMP21 및 UIS3. 3개 LS 면역원을 갖는 비제한적, 예시적 융합 단백질은 하기를 포함할 수 있다: EXP1, EXP2 및 EXP23; EXP1, EXP2 및 ICP; EXP1, EXP2 및 TMP21; EXP1, EXP2 및 UIS3; EXP1, EXP23 및 ICP; EXP1, EXP23 및 TMP21; EXP1, EXP23 및 UIS3; EXP1, ICP 및 TMP21; EXP1, ICP 및 UIS3; EXP1, TMP21 및 UIS3; EXP2, EXP23 및 ICP; EXP2, EXP23 및 TMP21; EXP2, EXP23 및 UIS3; EXP2, ICP 및 TMP21; EXP2, ICP 및 UIS3; EXP2, TMP21 및 UIS3; EXP23, ICP 및 TMP21; EXP23, ICP 및 UIS3; EXP23, TMP21 및 UIS3; 또는 ICP, TMP21 및 UIS3.
일부 구현예에서, 융합 단백질은 서열 번호 1, 서열 번호 4, 서열 번호 7, 서열 번호 10, 서열 번호 13, 서열 번호 17, 서열 번호 20, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 29, 서열 번호 32, 서열 번호 35, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 44, 서열 번호 47, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 68, 서열 번호 70, 서열 번호 72, 서열 번호 74, 서열 번호 76, 서열 번호 78, 서열 번호 80, 서열 번호 82로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열 또는 동족체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 융합 단백질은 서열 번호 1, 서열 번호 4, 서열 번호 7, 서열 번호 10, 서열 번호 13, 서열 번호 17, 서열 번호 20, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 29, 서열 번호 32, 서열 번호 35, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 44, 서열 번호 47, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 68, 서열 번호 70, 서열 번호 72, 서열 번호 74, 서열 번호 76, 서열 번호 78, 서열 번호 80, 서열 번호 82로부터 선택된 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 10개 초과의 서열 또는 동족체 또는 이의 단편을 포함한다.
일 구현예에서, 융합 단백질은 하기로부터 선택되는 하나 이상의 LS 면역원을 암호화하는 하나 이상의 아미노산 서열을 포함할 수 있다: EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 (또 다른 플라스모듐 종 항원과 융합됨). 본 발명의 말라리아 LS 면역원을 갖는 융합물에 적절한 플라스모듐 종 항원은 PCT 출원 번호 PCT/US2011/53541 및 상응하는 US 출원 일련 번호 13/876,148 (이의 전체 내용이 참조로 편입됨)에 제공된다. 따라서, 일 구현예에서, 본 발명의 융합 단백질은 하기를 포함할 수 있다: EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2로부터 선택되는 하나 이상의 LS 면역원을 암호화하는 하나 이상의 아미노산 서열 및 CSP, LSA1, TRAP, CelTOS 및 Ama1로부터 선택되는 하나 이상의 P.f. 면역원을 암호화하는 하나 이상의 아미노산 서열. 일 구현예에서, 본 발명의 융합 단백질은 하기를 포함할 수 있다: EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2로부터 선택되는 하나 이상의 LS 면역원의 단편을 암호화하는 하나 이상의 아미노산 서열 및 CSP, LSA1, TRAP, CelTOS 및 Ama1로부터 선택되는 하나 이상의 P.f. 면역원을 암호화하는 하나 이상의 아미노산 서열. 일 구현예에서, 본 발명의 융합 단백질은 하기를 포함할 수 있다: EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2로부터 선택되는 하나 이상의 LS 면역원에 98% 초과로, 또는 99% 초과로 상동한 단백질을 암호화하는 하나 이상의 아미노산 서열, 및 CSP, LSA1, TRAP, CelTOS 및 Ama1로부터 선택되는 하나 이상의 P.f. 면역원에 98% 초과 또는 99% 초과 상동한 단백질을 암호화하는 하나 이상의 아미노산 서열.
일부 구현예에서, 융합 단백질은 N 말단에 연결된 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질은 각 LS 면역원의 N 말단에 연결된 다중 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질의 LS 면역원 사이에 스페이서가 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 융합 단백질의 LS 면역원 사이의 스페이서는 단백질 분해의 절단 부위일 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서는 면역원성 조성물이 투여되거나 및/또는 섭취되도록 의도된 세포에서 발견된 프로테아제에 의해 인지된 단백질 분해의 절단 부위일 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서는 융합 단백질의 LS 면역원 사이에 포함될 수 있고, 여기서 스페이서는 면역원성 조성물이 투여되고 및/또는 흡수되는 것으로 의도되는 세포에서 발견되는 프로테아제에 의해 인식된 단백분해 개열 부위이고, 그리고 융합 단백질은 개열 시에, 각 LS 면역원의 신호 펩타이드가 면역원을 세포 외측으로 전위시키도록, LS 면역원의 N 말단에 연결된 복수의 신호 펩타이드를 포함한다.
a. EXP1_EXP2 융합 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 융합 EXP1_EXP2 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화하는 핵산 서열은 인간에서의 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 1에 명시된 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 1에 명시된 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 2에 명시된다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 3에 명시된다.
일 구현예에서, 융합 EXP1_EXP2 항원은 비-인간 영장류에서의 발현을 위하여 설계된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 17에 명시된 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 18에 명시된다. 일 구현예에서, 비-인간 영장류에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 19에 명시된다.
일 구현예에서, 융합 EXP1_EXP2 항원은 마우스에서 발현을 위해 설계된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 32에 명시된 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 서열은 서열 번호 16에 명시된 아미노산 서열을 갖는 리더 서열에 작동가능하게 연결된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 33에 명시된다. 일 구현예에서, 마우스에서의 발현을 위한 리더 서열에 작동가능하게 연결된 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 34에 명시된다.
일 구현예에서, 공통 융합 EXP1_EXP2 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 융합 EXP1_EXP2 항원을 암호화한다.
b. SPECT1_SPECT2 융합 항원
일 구현예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 SPECT1_SPECT2 융합 항원, 이의 단편, 이의 변이체 또는 이의 조합를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 공통 SPECT1_SPECT2 융합 항원을 암호화하는 핵산은 인간, 비-인간 영장류 또는 마우스에서 발현을 위해 최적화된 코돈 및 RNA일 수 있다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 50에 명시된 SPECT1_SPECT2 융합 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열은 IgE 리더 서열에 작동가능하게 연결된 서열 번호 50에 명시된 SPECT1_SPECT2 융합 항원을 암호화한다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열은 서열 번호 16에서 명시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 공통 SPECT1_SPECT2 융합 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 51에 명시된다. 일 구현예에서, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 공통 SPECT1_SPECT2 융합 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 52에 명시된다.
일 구현예에서, 공통 SPECT1_SPECT2 융합 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결되어 있다. 일 구현예에서, 핵산 서열은 HA 태그에 작동가능하게 연결된 공통 SPECT1_SPECT2 융합 항원을 암호화한다.
3. 단백질 암호화 서열
LS 면역원을 암호화하는 핵산 서열이 본원에 제공된다. 세포에 의해 취득되고 발현되는 경우 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자의 투여는 플라스모듐 종에 대해 광범위한 면역 반응을 유도한다. LS 단백질에 대한 암호화 서열은, 본원에 기술된 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2, 이의 융합물, 이의 단편, 또는 이의 동족체, 본원에 기술된 상동 변이체 아미노산 서열, 또는 상동 변이체 아미노산 서열의 단편을 암호화할 수 있다. 일부 구현예에서, EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2를 암호화하는 암호화 서열은 DNA 서열일 수 있다. 일부 구현예에서, EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2를 암호화하는 암호화 서열은 RNA 서열일 수 있다. 일 구현예에서, 암호화 서열은 서열 번호 1, 서열 번호 4, 서열 번호 7, 서열 번호 10, 서열 번호 13, 서열 번호 17, 서열 번호 20, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 29, 서열 번호 32, 서열 번호 35, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 44, 서열 번호 47, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 68, 서열 번호 70, 서열 번호 72, 서열 번호 74, 서열 번호 76, 서열 번호 78, 서열 번호 80, 서열 번호 82로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열 또는 동족체 또는 이의 단편을 암호화하는 DNA 또는 RNA 분자일 수 있다. 일 구현예에서, 암호화 서열은 서열 번호 16에 명시된 IgE 리더 서열을 추가로 암호화한다. 일 구현예에서, 암호화 서열은 HA 태그를 추가로 암호화한다.
4. 플라스미드
포유동물에서 면역 반응을 야기하기에 효과적인 양으로 포유동물의 세포에서 LS 면역원 또는 이의 단편을 발현할 수 있는 벡터가 본원에 제공된다. 벡터는 LS 면역원 또는 이의 단편을 암호화하는 이종성 핵산을 포함할 수 있다. 벡터는 플라스미드일 수 있다. 상기 플라스미드는 LS 면역원 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산으로 세포를 형질감염시키는데 유용할 수 있으며, 상기 형질전환된 숙주세포는 LS 면역원 또는 이의 단편의 발현이 일어나는 조건 하에서 배양되고 유지된다.
플라스미드는 본원에 기재된 바와 같은 LS 면역원을 암호화하는 하나 이상의 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 LS 면역원을 암호화하는 암호화 서열은 조절 요소들과 작동가능하게 연결되어 있는 것이 바람직할 수 있다.
일부 구현예에서, 플라스미드는 적어도 하나의 LS 면역원, 즉 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 중 하나에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 갖는다.
일부 구현예에서, 플라스미드는 다중 LS 면역원에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 갖는다. 일부 구현예에서, 다중 LS 면역원에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 갖는 플라스미드에 대해, 작제물은 별도의 발현 카세트일 수 있고, 여기서, 각각의 LS 면역원은 별도의 조절 요소의 세트를 포함하거나 2개 이상의 암호화 서열은 단일 발현 카세트에 혼입될 수 있고, 여기서 암호화 서열은 IRES 서열에 의해 분리되어 있다.
일부 구현예에서, 플라스미드는 2개 LS 면역원에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 갖는다. 상기 플라스미드는 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 중 적어도 2개에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 플라스미드는 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 중 적어도 3개에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 갖는다. 일부 구현예에서, 플라스미드는 3개 초과의 LS 면역원에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 갖는다. 일부 구현예에서, 플라스미드는 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 10개 초과의 LS 면역원에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 갖는다. 일부 구현예에서, 플라스미드는 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 중 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 갖는다.
일부 구현예에서, 하나 이상 LS 면역원, 즉 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 중 하나 이상에 대한 암호화 서열을 포함하는 DNA 작제물을 갖는 플라스미드는 하나 이상의 추가 플라스모듐 종 항원에 대한 암호화 서열을 추가로 포함한다. 본 발명의 플라스미드 상에 암호화될 수 있는 예시적 플라스모듐 종 항원은 PCT 출원 번호 PCT/US2011/53541 및 상응하는 미국 출원 번호 13/876,148에 기재된 바와 같은 CSP, LSA1, TRAP, CelTOS 및 Ama1, 또는 이의 단편 또는 동족체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
플라스미드는 이의 N-말단에 Ig 신호 펩타이드 서열에 연결된 LS 면역원 또는 이의 단편을 포함하는 단백질을 암호화하는 핵산을 포함할 수 있다. 상기 플라스미드는 암호화 서열의 상류에 있을 수 있는 개시 코돈, 및 암호화 서열의 다운스트림에 있을 수 있는 정지 코돈을 추가로 포함할 수 있다. 상기 개시 및 종료 코돈은 암호화 서열와 틀이 맞을 수 있다.
플라스미드는 암호화 서열과 작동가능하게 연결된 프로모터를 또한 포함할 수 있다. 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된 프로모터는 원숭이 바이러스 40(SV40)에서 유래된 프로모터, 마우스 유방암 바이러스(MMTV) 프로모터, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 프로모터, 예컨대 소 면역결핍 바이러스(BIV) 긴 말단 반복서열(LTR) 프로모터, 몰로니 바이러스 프로모터, 조류 백혈증 바이러스(ALV) 프로모터, 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, 예컨대 CMV 최조기 프로모터, 엡스타인 바 바이러스(EBV) 프로모터, 또는 라우스 육종 바이러스(RSV) 프로모터일 수 있다. 상기 프로모터는 인간 유전자, 예컨대 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴, 또는 인간 메탈로티오네인 유래의 프로모터일 수 있다. 프로모터는 또한 천연 또는 합성의 조직 특이적 프로모터, 예컨대 근육 또는 피부 특이적 프로모터일 수 있다. 이러한 프로모터의 예는 미국 특허 출원 공개 번호 US20040175727에 기재되며, 그 내용은 전문이 본원에 도입된다.
상기 플라스미드는 또한 암호화 서열의 다운스트림에 있을 수 있는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. 폴리아데닐화 신호는 SV40 폴리아데닐화 신호, LTR 폴리아데닐화 신호, 소 성장 호르몬(bGH) 폴리아데닐화 신호, 인간 성장 호르몬(hGH) 폴리아데닐화 신호, 또는 인간 β-글로빈 폴리아데닐화 신호일 수 있다. SV40 폴리아데닐화 신호는 pCEP4 플라스미드(Invitrogen, San Diego, CA)로부터의 폴리아데닐화 신호일 수 있다.
플라스미드는 또한 암호화 서열의 업스트림에 인핸서를 포함할 수 있다. 인핸서는 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 또는 바이러스 인핸서, 예컨대 CMV, FMDV, RSV 또는 EBV 유래의 인핸서일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 기능 증진은 미국 특허 번호 5,593,972, 5,962,428, 및 WO94/016737에 기재되며, 각각의 내용은 전체가 참조로 도입된다.
플라스미드는 또한 염색체외로 플라스미드를 유지하고 세포에서 복수의 플라스미드 사본을 생산하기 위해 포유동물 복제 기원을 포함할 수 있다. 상기 플라스미드는 Invitrogen (San Diego, CA)사의 pVAX1, pCEP4 또는 pREP4일 수 있으며, 이는 엡슈타인 바르 바이러스 복제 기점 및 핵 항원 EBNA-1 암호화 영역을 포함할 수 있고, 이는 통합 없이 높은 사본 에피솜 복제를 생산할 수 있다. 플라스미드의 골격은 pAV0242일 수 있다. 플라스미드는 복제 결함 아데노바이러스 유형 5(Ad5) 플라스미드일 수 있다.
플라스미드는 또한 조절 서열을 포함할 수 있고, 이는 플라스미드가 투여되는 세포에서 유전자 발현에 매우 적합할 수 있다. 상기 암호화 서열은 숙주세포에서 암호화 서열의 보다 효율적인 전사를 가능하게 할 수 있는 코돈을 포함할 수 있다.
암호화 서열은 또한 Ig 신호 펩타이드 서열을 포함할 수 있다. 신호 펩타이드 서열의 암호화 서열은 암호화 서열의 5’에 있을 수 있다. 상기 서열에 의해 암호화된 항원은 N-말단 Ig 신호 펩타이드에 이어서 항원 단백질을 포함할 수 있다. N-말단 Ig 신호 펩타이드는 IgE 또는 IgG일 수 있다. 본원에 참조로 인용된 미국 특허 제6,733,994호는 최적화된 RNA 서열 및 IgE 신호 펩타이드 서열을 포함하는 작제물을 기재한다. 둘 다 본원에서 참조로 인용되는 PCT 출원 번호 PCT/US04/18962 및 상응하는 US 출원 일련 번호 10/560,650은 또한 IgE 신호 펩타이드 서열을 포함하는 작제물을 기재한다.
플라스미드는 pSE420(Invitrogen, San Diego, Calif.)일 수 있고, 이는 에스케리치아 콜라이(E.coli)에서 단백질 생산을 위해 이용될 수 있다. 상기 플라스미드는 또한 효모의 사카로마이세스 세레비시애 균주에서의 단백질 생산에 사용될 수 있는, pYES2 (Invitrogen, San Diego, Calif.)일 수 있다. 플라스미드는 또한 MAXBAC™ 완전 배큘로바이러스 발현 시스템(Invitrogen, San Diego, Calif.)일 수 있고, 이는 곤충 세포에서 단백질 생산을 위해 이용될 수 있다. 상기 플라스미드는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포와 같은 포유동물 세포에서의 단백질 생산에 사용될 수 있는, pcDNA I 또는 pcDNA3 (Invitrogen, San Diego, Calif.)일 수 있다.
플라스미드를 포함하는 조성물이 제공된다. 조성물은 단일 핵산 분자의 복수의 사본, 예컨대 단일 플라스미드, 2 이상의 상이한 핵산 분자의 복수의 사본, 예컨대 2 이상의 상이한 플라스미드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이상의 상이한 핵산 분자의 복수개를 포함할 수 있다. 상기 조성물은 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이상의 상이한 플라스미드의 복수개를 포함할 수 있다. 조성물은 EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2 중 하나 이상에 대한 암호화 서열을 포함할 수 있다. 조성물은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개, 또는 10개 초과의 LS 면역원에 대한 암호화 서열, 2개의 LS 면역원에 대한 암호화 서열을 총체적으로 함유하는 플라스미드와 같은 핵산 분자를 포함할 수 있다. 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 10개 초과의 LS 면역원에 대한 암호화 서열을 포함하는 조성물은 단일 플라스미드와 같은 단일 핵산 분자상에 있을 수 있거나 상기 조성물은 2개 이상의 상이한 핵산 분자를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 10개 초과의 상이한 LS 면역원에 대한 암호화 서열을 총체적으로 포함하는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 10개 초과의 플라스미드와 같은 복수개의 상이한 핵산 분자를 포함한다. 일 구현예에서, 하나 이상의 핵산 분자는 DNA 분자이다. 일 구현예에서, 하나 이상의 핵산 분자는 RNA 분자이다.
일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 추가의 플라스모듐 종 항원에 대한 암호화 서열을 포함하는 하나 이상의 플라스미드를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 단일 플라스미드는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 10개 초과의 LS 면역원을 암호화하고 하나 이상의 추가의 항원을 추가로 암호화한다. 일 구현예에서, 하나 이상의 추가의 항원은 CSP, LSA1, TRAP, CelTOS 및 Ama1, 또는 이의 단편 또는 이의 동족체로부터 선택된다.
일 구현예에서, TRAP을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 56, 서열 번호 59 또는 서열 번호 65에 명시된 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, CSP를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 62에 명시된 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, CelTOS를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 56에 명시된 아미노산 서열을 포함한다.
일 구현예에서, TRAP을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 66 또는 서열 번호 67에 명시된다. 일 구현예에서, CSP를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 63 또는 서열 번호 64를 포함한다. 일 구현예에서, CelTOS를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 57 또는 서열 번호 58를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 등에 대한 암호화 서열을 추가로 포함한다. 아쥬반트는 IL-12, IL-15, IL-28B, IL-33 및 RANTES를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. IL-12, IL-15, IL-28B, IL-33 및/또는 RANTES에 대한 암호화 서열은 하나 이상의 LS 면역원에 대한 암호화 서열을 포함하는 하나 이상의 핵산 분자 상에서 포함될 수 있다. IL-12, IL-15, IL-28B, IL-33 및/또는 RANTES에 대한 암호화 서열은 개별 핵산 분자, 예컨대 개별 플라스미드 상에서 포함될 수 있다.
5. 면역원성 조성물 제형
본원에 제공된 것은 포유동물에서 플라스모듐 종에 대해서, 및 바람직하게 말라리아에 대한 면역 반응을 생성시킬 수 있는 면역원성 조성물이다. 면역원성 조성물은 상기 논의된 바와 같은 하나 이상의 플라스미드를 포함할 수 있다. 면역원성 조성물은 복수의 플라스미드, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 면역원성 조성물은 플라스모듐 종에 대한 치료학적 또는 예방학적 면역 반응을 유도하기 위해 제공될 수 있다.
면역원성 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 부형제는 비히클, 아쥬반트, 담체, 또는 희석제로서의 작용성 분자일 수 있다. 상기 약제학적으로 허용가능한 부형제는 형질감염 촉진제일 수 있으며, 이는 계면 활성제, 예컨대 면역-자극 복합체 (ISCOMS), 프로인트 불완전한 아쥬반트, 모노포스포릴 지질 A를 포함하는 LPS 유사체, 뮤라밀 펩타이드, 퀴논 유사체, 소포 예컨대 스쿠알렌 및 스쿠알렌, 히알루론산, 지질, 리포좀, 칼슘 이온, 바이러스 단백질, 폴리음이온, 폴리양이온, 또는 나노입자, 또는 다른 공지된 형질감염 촉진제를 포함할 수 있다.
형질감염 촉진제는 폴리음이온, 폴리-L-글루타메이트 (LGS)를 포함하는 폴리양이온, 또는 지질이다. 형질감염 촉진 제제는 폴리-L-글루타메이트이고, 폴리-L-글루타메이트는 6mg/㎖ 미만의 농도로 면역원성 조성물에 존재할 수 있다. 상기 형질감염 촉진 물질은 표면 활성 물질, 이를 테면 면역-자극 복합체 (ISCOMS), 프로인트(Freunds) 불완전 어쥬번트, 모노포스포릴 지질 A가 포함된 LPS 유사체, 뮤라밀 펩타이드, 퀴논 유사체들 및 소낭 이를 테면 스쿠알렌 및 스쿠알렌을 또한 포함할 수 있으며, 그리고 히알루론산은 이 유전자 작제물와 병용하여 또한 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, DNA 플라스미드 면역원성 조성물은 또한 형질감염 촉진제, 예컨대 지질, DNA-리포좀 혼합물 (예를 들면 W09324640 참고)로서 레시틴 리포좀 또는 본 기술분야에 공지된 다른 리포좀을 포함하는 리포좀, 칼슘 이온, 바이러스 단백질, 다중음이온, 폴리양이온, 또는 나노입자, 또는 다른 공지된 형질감염 촉진제를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기 형질감염 촉진제는 폴리음이온, 폴리-L-글루타메이트 (LGS)를 포함하는 폴리양이온, 또는 지질이다. 면역원성 조성물 내 상기 형질감염 물질의 농도는 4 mg/㎖ 미만, 2 mg/㎖ 미만, 1 mg/㎖ 미만, 0.750 mg/㎖ 미만, 0.500 mg/㎖ 미만, 0.250 mg/㎖ 미만, 0.100 mg/㎖ 미만, 0.050 mg/㎖ 미만, 또는 0.010 mg/㎖ 미만이다.
약제학적으로 허용가능한 부형제는 하나 이상의 아쥬반트일 수 있다. 아쥬반트는 동일한 플라스미드 또는 대안적인 플라스미드로부터 발현되거나, 면역원성 조성물 내의 상기 플라스미드와 조합된 단백질로서 전달되는 다른 유전자일 수 있다. 하나 이상의 아쥬반트는 단백질이고/이거나 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질을 암호화하는 핵산 분자일 수 있다: α-인터페론 (IFN-α), β-인터페론 (IFN-β), γ-인터페론, 혈소판 유도된 성장 인자 (PDGF), TNFα, TNFβ, GM-CSF, 표피 성장 인자 (EGF), 피부 T 세포-유인 케모카인 (CTACK), 상피 흉선-발현된 케모카인 (TECK), 점막-연관된 상피 케모카인 (MEC), IL-12, 신호 서열 또는 결실된 신호 서열을 암호화하는 암호화 서열을 갖고 선택적으로 IgE 유래의 것과 같은 상이한 신호 펩타이드 또는 IgE 유래의 것과 같은 상이한 신호 펩타이드를 암호화하는 암호화 서열을 포함하는 IL-15를 포함하는 IL-15, IL-28, MHC, CD80, CD86, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-18, MCP-1, MIP-lα, MIP-1β, IL-8, L-셀렉틴, P-셀렉틴, E-셀렉틴, CD34, GlyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, IL-18의 돌연변이체 형태, CD40, CD40L, 혈관 성장 인자, 섬유아세포 성장 인자, IL-7, 신경 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자, Fas, TNF 수용체, Flt, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, 카스파제 ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, 불활성 NIK, SAP K, SAP-1, JNK, 인터페론 반응 유전자, NFkB, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, RANK 리간드, Ox40, Ox40 리간드, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAP1, TAP2 및 이의 작용성 단편 또는 이들의 조합. 일부 구현예에서, 아쥬반트는 하나 이상의 단백질 및/또는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질을 암호화하는 핵산 분자일 수 있다: IL-12, IL-15, IL-28, IL-33 CTACK, TECK, MEC 또는 RANTES. IL-12 작제물 및 서열의 예시는 PCT 출원 번호 PCT/US1997/019502 및 상응하는 미국 출원 일련 번호 08/956,865에 개시되며, 이들 각각은 참조로 본원에 포함되어 있다. IL-15 작제물 및 서열의 예시는 PCT 출원 번호 PCT/US04/18962 및 상응하는 미국 출원 일련 번호 10/560,650 및 PCT 출원 번호 PCT/US07/00886 및 상응하는 미국 출원 일련 번호 12/160,766, 및 PCT 출원 번호 PCT/US10/048827에 개시되며, 이들 각각은 참조로 본원에 포함되어 있다. IL-28 작제물 및 서열의 예시는 PCT 출원 번호 PCT/US09/039648 및 상응하는 미국 출원 번호 12/936,192에 개시되며, 이들 각각은 참조로 본원에 포함되어 있다. IL-33 작제물 및 서열의 예시는 PCT 출원 번호 PCT/US14/58727 및 상응하는 미국 출원 번호 15/026,162에 개시되며, 이들 각각은 참조로 본원에 포함되어 있다. RANTES 및 다른 작제물 및 서열의 예시는 PCT 출원 번호 PCT/US1999/004332 및 상응하는 미국 출원 번호 09/622452에 개시되며, 이들 각각은 참조로 본원에 포함되어 있다. RANTES 작제물 및 서열의 다른 예시는 PCT 출원 PCT/US11/024098에 개시되어 있으며, 이는 본원에 참조로 포함되어 있다. RANTES 및 다른 작제물 및 서열의 예시는 PCT 출원 번호 PCT/US1999/004332 및 상응하는 미국 출원 번호 09/622452에 개시되며, 이들 각각은 참조로 본원에 포함되어 있다. RANTES 작제물 및 서열의 다른 예시는 PCT 출원 PCT/US11/024098에 개시되어 있으며, 이는 본원에 참조로 포함되어 있다. 케모카인, CTACK, TECK 및 MEC 작제물 및 서열의 예시는 PCT 출원 번호 PCT/US2005/042231 및 상응하는 미국 출원 번호 11/719,646에 개시되며, 이들 각각은 참조로 본원에 포함되어 있다. OX40 및 다른 면역조절물질의 예시는 미국 출원 일련 번호 10/560,653에 개시되며, 이들은 참조로 본원에 포함되어 있다. DR5 및 다른 면역조절물질의 예시는 미국 출원 일련 번호 09/622452에 개시되며, 이들은 참조로 본원에 포함되어 있다.
면역원성 조성물은 전문이 참조로 도입되는 1994년 4월 1일에 출원된 미국 일련 번호 021,579에 기재된 바와 같은 유전적 면역원성 조성물 촉진제를 추가로 포함할 수 있다.
면역원성 조성물은 약 1 나노그램 내지 100 밀리그램; 약 1 마이크로그램 내지 약 10 밀리그램; 또는 바람직하게는 약 0.1 마이크로그램 내지 약 10 밀리그램; 또는 더 바람직하게는 약 1 밀리그램 내지 약 2 밀리그램의 양의 항원 및 플라스미드를 포함할 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약 5 나노그램 내지 약 1000 마이크로그램의 DNA를 포함한다. 일부 바람직한 구현예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10 나노그램 내지 약 800 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부 바람직한 구현예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 0.1 내지 약 500 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부 바람직한 구현예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 1 내지 약 350 마이크로그램의 DNA를 함유한다. 일부 바람직한 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 25 내지 약 250마이크로그램, 약 100 내지 약 200마이크로그램, 약 1나노그램 내지 100밀리그램; 약 1마이크로그램 내지 약 10밀리그램; 약 0.1마이크로그램 내지 약 10밀리그램; 약 1밀리그램 내지 약 2밀리그램, 약 5나노그램 내지 약 1000마이크로그램, 약 10나노그램 내지 약 800마이크로그램, 약 0.1 내지 약 500마이크로그램, 약 1 내지 약 350마이크로그램, 약 25 내지 약 250마이크로그램, 약 100 내지 약 200마이크로그램의 항원 또는 플라스미드를 함유한다.
면역원성 조성물은 사용될 투여 경로에 따라 제형화될 수 있다. 주사가능한 면역원성 조성물 약제학적 조성물은 멸균되고, 발열물질이 없고 미립자가 없을 수 있다. 등장성 제형 또는 용액이 사용될 수 있다. 등장성을 위한 첨가제는 염화나트륨, 덱스트로오스, 만니톨, 소르비톨, 및 락토오스를 포함할 수 있다. 면역원성 조성물은 혈관수축 제제를 포함할 수 있다. 등장성 용액은 인산완충염수를 포함할 수 있다. 면역원성 조성물은 젤라틴 및 알부민을 포함하는 안정화제를 추가로 포함할 수 있다. LGS 또는 폴리양이온 또는 폴리음이온과 같은 안정화제는 면역원성 조성물 제형에 대해 연장된 기간 동안 상온 또는 주위 온도에서 제형을 안정화시킬 수 있다.
DNA 면역원성 조성물과 같은 유전학적 면역원성 조성물을 사용하는 것에 추가로, 암호화 서열 및 또는 단백질이 약독화된 생 면역원성 조성물, 재조합 벡터 또는 하부단위 면역원성 조성물에 혼입될 수 있다. 약화된 생 면역원성 조성물 및 외래 항원을 전달하기 위한 재조합 벡터를 사용한 것들의 예시는 하기에 기술된다: 미국 특허 번호 4,722,848; 5,017,487; 5,077,044; 5,110,587; 5,112,749; 5,174,993; 5,223,424; 5,225,336; 5,240,703; 5,242,829; 5,294,441; 5,294,548; 5,310,668; 5,387,744; 5,389,368; 5,424,065; 5,451,499; 5,453,364; 5,462,734; 5,470,734; 및 5,482,713 (이들 각각은 본원에 참조로 편입됨).
6. 면역원성 조성물의 전달 방법
면역 반응이 유도될 수 있는 특정 말라리아 면역원에 대해 특히 효과적이도록 만들 수 있는 에피토프를 포함하는 항원의 유전적 작제물 및 단백질을 제공하기 위한 면역원성 조성물을 전달하기 위한 방법이 본원에 제공된다. 면역원성 조성물을 전달하는 방법 또는 백신접종은 치료적 및 예방적 면역 반응을 유도하기 위해 제공될 수 있다. 백신접종 공정은 포유동물에서 말라리아에 대한 면역 반응을 생성할 수 있다. 면역원성 조성물은 포유동물의 면역계의 활성을 조절하고 면역 반응을 증진시키기 위해 개체에게 전달될 수 있다. 면역원성 조성물의 전달은, 세포에서 발현되고, 면역계가 인식하는 세포의 표면으로 전달되고, 그리고 세포성, 체액성, 또는 세포성 및 체액성 반응을 유도하는 핵산 분자로서의, 항원의 형질감염일 수 있다. 면역원성 조성물의 전달은 상기에서 논의된 바와 같은 면역원성 조성물을 포유동물에게 투여함으로써 말라리아에 대해 포유동물에서 면역 반응을 유도하거나 유발하는데 사용될 수 있다.
면역원성 조성물 및 플라스미드를 포유동물의 세포 내로 전달할 때, 형질감염된 세포는 면역원성 조성물로부터 주입된 플라스미드 각각에 대해 항원을 발현하고 분비할 것이다. 이들 단백질은 면역계에 의해 외래의 것으로 인식될 것이고, 항체가 이들에 대해 만들어질 것이다. 이들 항체는 면역계에 의해 유지될 것이고 차후의 말라리아 감염에 대해 효과적인 반응을 허용할 것이다.
면역원성 조성물은 포유동물에게 투여되어 포유동물에서 면역 반응을 유발할 수 있다. 상기 포유동물은 인간, 영장류, 비-인간 영장류, 젖소, 소, 양, 염소, 영양, 들소, 물소, 들소, 소과, 사슴, 헤지혹, 코끼리, 라마, 알파카, 마우스, 랫트, 및 닭일 수 있다.
a. 병용 치료
면역원성 조성물은 알파-인터페론, 감마-인터페론, 혈청 유래 성장 인자 (PDGF), TNFα, TNFβ, GM-CSF, 표피 성장 인자 (EGF), 피부 T 세포-유인 케모카인 (CTACK), 상피 흉선-발현된 케모카인 (TECK), 점막-연관된 상피 케모카인 (MEC), IL-12, IL-15 (신호 서열이 결실되고 선택적으로 IgE 유래의 신호 펩타이드를 포함하는 IL-15를 포함함), MHC, CD80, CD86, IL-28, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-18, IL-33, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, IL-8, RANTES, L-셀렉틴, P-셀렉틴, E-셀렉틴, CD34, GlyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, p150.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, IL-18의 돌연변이체 형태, CD40, CD40L, 혈관 성장 인자, 섬유아세포 성장 인자, IL-7, 신경 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자, Fas, TNF 수용체, Flt, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, 카스파제 ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, 불활성 NIK, SAP K, SAP-1, JNK, 인터페론 반응 유전자, NFkB, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, RANK 리간드, Ox40, Ox40 리간드, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAP1, TAP2 및 이의 작용성 단편 또는 이의 조합을 암호화하는 다른 단백질 및/또는 유전자와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역원성 조성물은 하기 핵산 분자 및/또는 단백질 중 하나 이상과 병용하여 투여된다: IL-12, IL-15, IL-28, IL-33, CTACK, TECK, MEC 및 RANTES 중 하나 이상을 암호화하는 암호화 서열을 포함하는 핵산 분자로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 분자, 또는 이의 작용성 단편, 및 IL-12 단백질, IL-15 단백질, IL-28 단백질, IL-33 단백질, CTACK 단백질, TECK 단백질, MEC 단백질 또는 RANTES 단백질 또는 이의 작용성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질.
면역원성 조성물은 경구, 비경구, 설하, 경피, 직장, 경점막, 국소, 흡입을 통해, 협측 투여를 통해, 흉막내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 피하, 근육내, 비강내 경막내, 및 관절내 또는 이들의 조합을 포함하는 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다. 수의학적 용도를 위해, 상기 조성물은 일반적인 수의학적 관례에 따라 적합하게 허용가능한 제형으로서 투여될 수 있다. 수의사는 특정 동물에 가장 적절한 투여 방식 및 투여 경로를 쉽게 결정할 수 있다. 면역원성 조성물은 전통적인 주사기, 무바늘 주사 장치, "마이크로돌출형 폭탄 곤 건", 또는 다른 물리적 방법, 예컨대 전기천공("EP"), "수력학적 방법", 또는 초음파에 의해 투여될 수 있다.
면역원성 조성물의 플라스미드는 생체내 전기천공을 이용하여 그리고 이를 이용하지 않고 DNA 주사 (또한 DNA 백신접종으로도 불림), 리포좀 매개된, 나노입자 촉진된, 재조합 벡터, 예컨대 재조합 아데노바이러스, 재조합 아데노바이러스 연관된 바이러스 및 재조합 우두를 포함하는 널리 공지된 몇 가지 기술에 의해 포유동물에게 전달될 수 있다. 항원은 DNA 주사를 통해 그리고 생체내 전기천공과 함께 전달될 수 있다.
b. 전기천공
면역원성 조성물의 플라스미드의 전기천공을 통한 면역원성 조성물의 투여는 가역적 기공이 세포막에 형성되게 하는데 효과적인 에너지의 펄스를 포유동물의 원하는 조직에 전달하도록 구성될 수 있는 전기천공 장치를 이용하여 달성될 수 있고, 바람직한 에너지의 펄스는 사용자에 의해 입력된 미리 조정된 전류와 유사한 정전류이다. 전기천공 장치는 전기천공 성분 및 전극 어셈블리 또는 핸들 어셈블리를 포함한다. 전기천공 성분에는 하기를 포함하는 전기천공 장치의 다양한 요소의 하나 이상이 포함되고 도입될 수 있다: 컨트롤러, 전류 파형 생성기, 임피던스 평가기, 파형 로거, 입력 요소, 상태 보고 요소, 통신 포트, 메모리 성분, 전원 및 전력 스위치. 전기천공은 플라스미드에 의한 세포의 전달감염을 촉진하기 위해, 생체내 전기천공 장치, 예를 들어 CELLECTRA EP 시스템(VGX Pharmaceuticals, Blue Bell, Pa.) 또는 Elgen 전기천공기(Genetronics, San Diego, Calif.)를 이용해서 달성될 수 있다.
전기천공 구성 요소는 전기천공 장치의 하나의 요소로 기능할 수 있고, 다른 요소가 전기천공 요소와 통신하는 별도의 요소(또는 성분)이다. 상기 전기천공 구성요소는 전기천공 장치의 하나를 초과하는 요소로서 기능할 수 있고, 이는 상기 전기천공 구성요소와 구별되는 전기천공 장치의 또 다른 요소와 통신할 수 있다. 하나의 전기기계적 또는 기계적 장치의 일부로 존재하는 전기천공 장치의 요소는 요소가 하나의 장치로 또는 서로 통신하는 별도 요소로서 기능할 수 있는 것으로 제한되지 않을 수 있다. 상기 전기천공 구성요소는 원하는 조직에서 정전류를 생산하는 에너지의 펄스를 전달할 수 있으며, 피드백 기전을 포함한다. 전극 어셈블리는 공간 배열 내에 복수의 전극을 갖는 전극 어레이를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 전극 어셈블리는 전기천공 구성요소로부터 에너지의 펄스를 받고 전극을 통해 원하는 조직에 이를 전달한다. 복수의 전극 중 적어도 하나는 에너지의 펄스가 전달되는 동안 중성이고, 원하는 조직에서 임피던스를 측정하고 전기천공 구성요소에 임피던스를 전달한다. 상기 피드백 기전은 측정된 임피던스를 받을 수 있고 전기천공 구성요소에 의해 전달된 에너지의 펄스가 정전류를 유지하도록 조절할 수 있다.
복수의 전극은 분산된 패턴으로 에너지의 펄스를 전달할 수 있다. 복수의 전극은 프로그램된 순서 하에 전극의 조절를 통해 분산된 패턴으로 에너지의 펄스를 전달할 수 있고, 상기 프로그램된 순서는 사용자에 의해 전기천공 구성요소에 입력된다. 상기 프로그램된 순서는 순서로 전달된 복수의 펄스를 포함할 수 있으며, 여기서 복수의 펄스 중 각각의 펄스는 임피던스를 측정하는 하나의 중성 전극을 갖는 적어도 2개의 활성 전극에 의해 전달되고, 여기서 복수의 펄스 중 차후의 펄스는 임피던스를 측정하는 하나의 중성 전극을 갖는 적어도 2개의 활성 전국 중 상이한 하나에 의해 전달된다.
상기 피드백 기전은 하드웨어 또는 소프트웨어 중 하나에 의해 수행될 수 있다. 피드백 기전은 아날로그 폐쇄-루프 회로에 의해 수행될 수 있다. 피드백은 50㎲, 20㎲, 10㎲ 또는 1㎲마다 일어나지만, 바람직하게는 실시간 피드백이거나 순간적이다(즉, 반응 시간을 계측하기 위해 이용 가능한 기법에 의해 계측되는 바에 따라 실질적으로 순간적임). 중성 전극은 원하는 조직에서 임피던스를 측정하고 피드백 기전으로 임피던스를 통신할 수 있고, 피드백 기전은 임피던스에 반응하여 정전류를 사전 설정된 전류와 유사한 값으로 유지하기 위해 에너지 자극을 조정한다. 피드백 기전은 에너지 자극의 전달 동안 연속적으로 및 순간적으로 정전류를 유지할 수 있다.
본 발명의 DNA 면역원성 조성물의 전달을 촉진할 수 있는 전기천공 장치 및 전기천공 방법의 예는, 미국 특허 번호 7,245,963 (Draghia-Akli 등), 미국 특허 공보 제2005/0052630호 (Smith, 등에 의해 제출됨)에 기술된 것을 포함하며, 이들의 내용은 그 전체가 참조로써 본원에 통합되어 있다. DNA 면역원성 조성물의 전달을 촉진시키기 위해 사용될 수 있는 다른 전기천공 장치 및 전기천공 방법은 공계류중이고 동시 소유권의 2007년 10월 17일자로 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 11/874,072에 제공된 것들을 포함하고, 상기 출원은 35 USC 119(e)하에 2006년 10월 17일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 60/852,149, 및 2007년 10월 10일자로 출원된 미국 가출원 60/978,982에 대한 우선권을 주장하고, 이 모두는 전문이 본원에 참조로 인용된다.
미국 특허 제7,245,963호(Draghia-Akli 등)는 몸체 또는 식물에서 선택된 조직의 세포 내로 생체분자의 도입을 용이하게 하기 위한 모듈식 전극 시스템 및 이의 용도를 기술하고 있다. 상기 모듈식 전극 시스템은 복수의 니들 전극; 피하 주사침; 프로그램가능한 정전류 펄스 컨트롤러로부터 복수의 니들 전극까지 전도성 연결을 제공하는 전기적 커넥터; 및 전원 공급원을 포함할 수 있다. 오퍼레이터는 지지 구조 상에 실장된 복수의 바늘 전극을 쥐고 이들을 체내 또는 식물에서 선택된 조직 내로 단단히 삽입할 수 있다. 이어서 생체분자는 피하 바늘을 통해 선택된 조직 내로 전달된다. 프로그래밍 가능한 정전류 자극 컨트롤러가 활성화되며 정전류 전기 자극이 복수의 바늘 전극에 적용된다. 적용된 정전류 전기 자극은 복수의 전극 간에서 세포 내로 생체분자의 도입을 촉진한다. 미국 특허 제7,245,963호의 전체 내용이 본원에 참조로 편입된다.
미국 특허 공보 제2005/0052630호(Smith, et al에 의해 출원됨)는 몸체 또는 식물에서 선택된 조직의 세포 내로 생체분자의 도입을 효과적으로 촉진하는데 사용될 수 있는 전기천공 장치를 기술한다. 상기 전기천공 장치는 작업이 소프트웨어 또는 펌웨어에 의해 지정되는 전기-동력학 장치 ("EKD 장치")를 포함한다. EKD 장치는 사용자 조절 및 펄스 파라미터의 입력에 기초한 어레이 내의 전극 사이에 일련의 프로그램가능한 정전류 펄스 패턴을 생산하고, 전류 파형 데이터의 저장 및 취득을 허용한다. 전기천공 장치는 또한 바늘 전극, 주사 바늘용 중심 주사 통로, 및 제거가능한 가이드 디스크의 어레이를 갖는 교체가능한 전극 디스크를 포함한다. 미국 특허 공보 제2005/0052630호의 내용은 참조로 본원에 통합되어 있다.
미국 특허 번호 7,245,963 및 미국 특허 공보 2005/0052630에 기재된 전극 어레이 및 방법은 근육과 같은 조직 뿐만 아니라 다른 조직 또는 기관 내로 깊이 침투시키는데 조정될 수 있다. 전극 어레이의 형상 때문에, 주사 바늘 (선택되는 생체분자를 전달하기 위한) 또한, 표적 장기 내로 완전하게 삽입되고, 그리고 주사는 전극에 의해 미리 묘사되는 구역 내에 표적 조직에 수직으로 투여된다. 미국 특허 번호 7,245,963 및 미국 특허 공보 2005/005263에 기술된 전극은 바람직하게는 20 mm 길이 및 21 게이지이다.
부가적으로, 전기천공 장치 및 이의 용도를 포함하는 일부 구현예에서, 미국 특허 번호 5,273,525 (1993년 12월 28일 발행됨), 미국 특허 번호 6,110,161 (2000년 8월 29일 발행됨), 6,261,281 (2001년 7월 17일 발행됨), 및 6,958,060 (2005년 10월 25일 발행됨), 및 미국 특허 번호 6,939,862 (2005년 9월 6일 발행됨)에 기재된 전기천공 장치가 고려된다. 더욱이, 미국 특허 번호 6,697,669 (2004년 2월 24일 발행됨) (다양한 장치 중 임의의 것을 사용한 DNA의 전달에 관함), 및 미국 특허 번호 7,328,064 (2008년 2월 5일) (DNA를 주입하는 방법에 관함)에 제공되는 본 발명을 망라하는 특허가 본원에 고려된다. 상기 특허는 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.
c. 단백질
부스트
일부 구현예에서, 하나 이상의 LS 면역원은 면역원성 조성물 프로토콜의 일부로서 단백질로서 전달될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 플라스미드 DNA 조성물이 투여되는 초기 면역화 백신 접종에 이어서 단백질 면역원이 부스트로서 전달된다. 일부 구현예에서, 부스트는 플라스미드 DNA 면역원성 조성물 및 단백질의 조합이다. 일부 구현예에서, 다회 부스트가 투여된다. 일부 구현예에서, 다중 부스트가 투여되고, 여기서, 하나 이상의 부스트는 단백질 투여이고 하나 이상의 부스트는 DNA 면역원성 조성물 투여이다. 바이러스 벡터 및/또는 사멸되거나 약독화된 병원체를 사용하는 부스트가 또한 사용될 수 있다. 하나 이상의 백신 접종은 초기 또는 가장 최근 이의 모든 시점과 독립적으로, 하루 이내, 1주, 2주, 3주, 4주, 6주, 8주, 12주, 6개월, 1년 간격으로 시행될 수 있다.
단백질 부스트에 사용되는 단백질은 본원에 기재된 정보를 사용한 통상의 방법 및 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 단백질에 대한 암호화 서열을 포함하는 재조합 벡터는 대용량의 단백질을 생성하기 위해 제조되고 사용될 수 있다. 본 발명의 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 재조합 발현 벡터는 통상적으로 제조될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "재조합 발현 벡터"는 플라스미드, 파아지, 바이러스 입자 또는 적당한 숙주로 도입되는 경우 암호화 서열의 발현을 지시하기 위해 필요한 유전학적 요소들을 함유하는 다른 벡터를 언급하는 것으로 의미된다. 통상의 기술자는 본 발명의 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 단리하거나 합성할 수 있고 이를 표준 기술 및 용이하게 가용한 출발 물질을 사용하여 발현 벡터에 삽입할 수 있다. 암호화 서열은 필요한 조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 발현 벡터는 널리 공지되어 있고 용이하게 가용하다. 발현 벡터의 예는 플라스미드, 파아지, 바이러스 벡터 및 숙주 세포를 형질전환시키고 암호화 서열의 발현을 용이하게 하기 위해 유용한 비히클을 함유하는 다른 핵산 분자들 또는 핵산 분자를 포함한다. 본 발명의 재조합 발현 벡터는 숙주를 형질전환시키기 위해 유용하다. 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포는 단백질을 제조하기 위해 사용될 수 있다.
단백질의 제조를 위한 널리 공지된 재조합 발현 시스템에 사용하기 위한 숙주 세포는 널리 공지되어 있고 용이하게 가용하다. 숙주 세포의 예는 이. 콜라이 (E. Coli)와 같은 박테리아 세포, 에스. 세레비지애 (S. Cerevisiae)와 같은 효모 세포, 에스. 프루기페르다 (S. Frugiperda)와 같은 곤충 세포, 비-인간 포유동물의 조직 배양 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 및 HeLa 세포와 같은 인간 조직 배양 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예로서 당업자는 널리 공지된 기술을 이용하여, DNA 분자를 널리 공지된 발현 시스템에서 이용을 위한 상업적으로 가용한 발현 벡터 내로 삽입할 수 있다. 예를 들어, 상업적으로 가용한 플라스미드 pSE420 (Invitrogen, San Diego, Calif.)은 이. 콜라이에서의 단백질의 생산에 이용될 수 있다. 상업적으로 가용한 플라스미드 pYES2 (Invitrogen, San Diego, Calif.)는 예로서, S. 세레비지애 (S. cerevisiae) 효모 균주에서 생산에 이용될 수 있다. 상업적으로 가용한 MAXBAC™ 완전한 배큘로바이러스 발현 시스템 (Invitrogen, San Diego, Calif.)은 예로서, 곤충 세포에서 생산에 이용될 수 있다. 상업적으로 가용한 플라스미드 pcDNA 또는 pcDNA3 I (Invitrogen, San Diego, Calif.)은 예로서, 포유동물 세포, 예를 들면, 차이니즈 햄스터 난소 세포에서 생산에 이용될 수 있다. 당업자는 이들 상업적인 발현 벡터와 시스템 또는 다른 것들을 이용하여, 본 발명의 단백질을 일과적인 기술 및 쉽게 가용한 개시 물질을 사용하여 생산할 수 있다. (참고: 예컨대, Sambrook et al., Molecular Cloning a Laboratory Manual, 2판 Cold Spring Harbor Press (1989) (본원에 참조로 편입됨)). 따라서, 목적 단백질은 원핵 시스템 및 진핵 시스템 둘 모두에서 제조되어, 상기 단백질의 처리된 형태의 스펙트럼이 산출될 수 있다.
당업자는 다른 상업적으로 가용한 발현 벡터와 시스템을 이용하거나, 또는 널리 공지된 방법 및 쉽게 가용한 개시 물질을 이용하여 벡터를 생산할 수 있다. 필수적인 조절 서열, 예를 들면, 프로모터 및 폴리아데닐화 신호, 그리고 바람직하게는 인핸서를 내포하는 발현 시스템은 쉽게 가용하고 다양한 숙주에 대해 당해 분야에서 공지된다. 하기를 참고한다: 예컨대, Sambrook 등, Molecular Cloning a Laboratory Manual, 2판 Cold Spring Harbor Press (1989).
상기 단백질을 암호화하는 DNA를 포함하는 발현 벡터는 양립성 숙주를 형질전환하는데 이용되고, 상기 숙주는 이후, 외래 DNA의 발현이 일어나는 조건 하에 배양되고 유지된다. 이에 따라 생산된 본 발명의 단백질은 당업자에게 공지된 바와 같이, 세포를 용해시킴으로써 배양액으로부터, 또는 적당할 경우 배양 배지로부터 회수된다. 통상의 기술자는 상기 발현 시스템을 사용하여 생산되는 본 발명의 단백질을 널리 공지된 기술을 사용하여 단리할 수 있다. 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 사용하여 천연 공급원으로부터 상기 본 발명의 단백질을 정제하기 위한 방법은 상기 항체를 생성하는 방법과 같이 통상적이다 (참고: Harlow, E. 및 Lane, E., Antibodies: A Laboratory Manual, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press (본원에 참조로 편입됨)). 상기 항체를 사용하여 재조합 DNA 방법 또는 천연 공급원에 의해 생산되는 단백질을 정제할 수 있다.
유전학적 작제물의 예는 본 발명의 단백질을 암호화하고 작제물이 형질감염된 세포주에서 기능하는 프로모터에 작동가능하게 연결된 암호화 서열을 포함한다. 항상성 프로모터의 예는 사이토메갈로바이러스 또는 SV40으로부터의 프로모터를 포함한다. 유도성 프로모터의 실례는 생쥐 유방 백혈병 바이러스 또는 메탈로티오네인 프로모터를 포함한다. 당업자는 쉽게 가용한 개시 물질로부터 본 발명의 단백질을 암호화하는 DNA로 세포를 형질감염시키는데 유용한 유전자 작제물을 쉽게 생산할 수 있다. 상기 유전자 작제물은 본 발명의 단백질의 생산을 위해 유용하다.
재조합 기술에 의해 본 발명의 단백질을 생산하는 것에 더하여, 본 발명의 단백질을 생산하기 위해 자동화된 펩타이드 합성장치가 또한 이용될 수 있다. 이런 기술은 당업자에게 널리 알려져 있고, 그리고 치환을 갖는 유도체가 DNA-암호화된 단백질 생산에서 제공되지 않는 경우에 유용하다. 예를 들어, 본 발명의 단백질은 하기의 공지된 임의의 기술에 의해 제조될 수 있다. 편리하게, 본 발명의 단백질은 하기에 초기에 기술된 바와 같이 고체-상 합성 기술을 사용하여 제조될 수 있다: Merrifield, in J. Am. Chem. Soc., 15:2149-2154 (1963) (본원에 참조로 편입됨). 기타 단백질 합성 기술은 하기에서 발견될 수 있다: 예를 들어, M. Bodanszky 등, (1976) Peptide Synthesis, John Wiley & Sons, 2판 (본원에 참조로 편입됨); Kent and Clark-Lewis in Synthetic Peptides in Biology and Medicine, p. 295-358, eds. Alitalo, K. 등. Science Publishers, (Amsterdam, 1985) (본원에 참조로 편입됨); 뿐만 아니라 본 분야의 숙련가에게 공지된 기타 참고 문헌. 합성 기술의 요약은 하기에 발견될 수 있다: J. Stuart and J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthelia, Pierce Chemical Company, Rockford, Ill. (1984) (본원에 참조로 편입됨). 용액법에 의한 합성이 The Proteins, Vol. II, 3판, p. 105-237, Neurath, H. 등, Eds., Academic Press, New York, N.Y. (1976) (본원에 참조로 편입됨)에 기술된 바와 같이 또한 사용될 수 있다. 상기 합성에 사용되기 위한 적절한 보호기는 상기 텍스트, 뿐만 아니라 하기에 기술된 문헌에서 발견될 것이다: J. F. W. McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, New York, N.Y. (1973) (본원에 참조로 편입됨). 일반적으로, 이들 합성 방법은 하나 이상의 아미노산 잔기 또는 적합하게 보호된 아미노산 잔기를 연장하는 펩타이드 쇄에 순차적으로 첨가함을 포함한다. 정상적으로, 제1 아미노산 잔기의 아미노 또는 카복실 그룹은 적합한, 선택적으로 제거가능한 보호 그룹에 의해 보호된다. 상이한, 선택적으로 제거가능한 보호 그룹은 라이신과 같은 반응성 측쇄 그룹을 함유하는 아미노산에 대해 사용된다.
단백질은 용이하게 가용한 물질을 사용하여 널리 공지된 방법에 의해 포유동물 투여용으로 제형화될 수 있다. 당업자는 본 발명에 사용될 수 있는 다수의 약제학적으로 허용되는 배지를 용이하게 이해할 것이다. 적합한 약제학적 담체는 당해 분야의 표준 참조 텍스트인 문헌(Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol)에 기재되어 있고 이는 본원에 참조로 인용된다. 국소 투여를 위한 제형은 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 겔, 점적액, 좌제, 스프레이, 액체 또는 분말을 포함할 수 있다. 종래의 약제학적 담체, 수성, 분말 또는 오일성 베이스, 증점제 등이 필수적이거나 바람직할 수 있다. 경구 투여를 위한 조성물은 분말 또는 과립, 물 또는 비 수성 매질 중의 현탁액 또는 용액, 캡슐, 샤세트 또는 정제를 포함한다. 증점제, 착향제, 희석제, 유화제, 분산 아쥬반트 또는 결합제가 바람직할 수 있다. 비경구, 정맥내, 척추강내, 또는 심실내 투여를 위한 조성물은 멸균 수용액을 포함할 수 있고, 이는 또한 완충제, 희석제 및 다른 적합한 첨가제를 함유할 수 있고 바람직하게 멸균성이고 발열원이 없다. 본 발명에 따른 정맥내 투여용으로 적합한 약제학적 조성물은 멸균성이고 발열원이 없다. 비경구 투여를 위해, 본 발명의 펩타이드는 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 비경구 비히클과 함께 용액, 현탁액, 에멀젼 또는 동결건조된 분말로서 제형화될 수 있다. 상기 비히클의 예는 물, 식염수, 링거 용액, 덱스트로스 용액 및 5% 혈청 알부민이다. 리포좀 및 비수성 비히클, 예컨대 고정 오일이 또한 사용될 수 있다. 비히클 또는 동결건조된 분말은 등장성을 유지하는 첨가제 (예를 들어, 염화나트륨, 만니톨) 및 화학적 안정성을 유지하는 첨가제 (예를 들어, 완충제 및 보존제)를 함유할 수 있다. 제형은 통상적으로 사용되는 기술에 의해 안정화된다. 예를 들어, 주사에 의한 투여를 위해 적합한 비경구 조성물은 1.5중량%의 활성 성분을 0.9% 염화나트륨 용액 중에 용해시킴에 의해 제조한다.
본 발명에 따른 단백질을 포함하는 약제학적 조성물은 단일 용량으로서 또는 다중 용량으로서 투여될 수 있다. 용량은 특정 제제의 약력학적 특징과 같은 공지된 인자들, 및 이의 투여 방식 및 경로; 수용자의 연령, 건강 및 체중; 증상의 특성 및 정도, 동시 치료 유형, 치료 횟수 및 목적하는 효과에 따라 다양하다. 치료 조성물의 제형 및 이의 차후의 투약은 당해 기술의 숙련가의 기술 내에 있는 것으로 여겨진다. 일반적으로, 펩타이드의 용량은 약 1 마이크로그램 내지 1000 밀리그램 또는 그 이상; 10 마이크로그램 내지 1000 밀리그램; 바람직하게 50 마이크로그램 내지 500 밀리그램; 보다 바람직하게 100 마이크로그램 내지 400 밀리그램일 수 있다. 일부 구현예에서, 용량은 10-250 마이크로그램 범위이다. 일부 구현예에서, 투여량은 하기와 같이 보다 높다: 예를 들어 250 마이크로그램-1 밀리그램, 또는 예컨대 1-50 밀리그램. 일부 구현예에서, 용량은 여전히 보다 높게, 예를 들어, 50-500 밀리그램이다.
d. DNA 플라스미드를 제조하는 방법
본원에 검토된 DNA 면역원성 조성물을 포함하는 DNA 플라스미드를 제조하는 방법이 본원에 제공된다. 상기 DNA 플라스미드는, 포유동물 발현 플라스미드 내로의 최종 서브클로닝 단계 후, 본 기술분야에 공지된 방법을 이용하여, 대규모 발효 탱크 내에서 세포 배양물을 접종하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 EP 장치를 사용하기 위한 DNA 플라스미드는 공지된 장치 및 기술의 조합을 이용하여 제형화되거나 제조될 수 있지만, 바람직하게는 이들은 하기에 기재된 최적화된 플라스미드 제조 기술을 이용하여 제조된다: 라이센스된, 공동계류중인 미국 일련 번호 60/939,792 (2007년 5월 23일에 출원됨). 일부 예에서, 이들 연구에 사용된 DNA 플라스미드는 10 mg/㎖ 이상의 농도로 제형화될 수 있다. 제조 기법에는 또한 미국 일련 번호 60/939,792 (허여된 특허, 미국 특허 번호 7,238,522 (2007년 7월 3일에 발행됨)에 기술된 것들을 포함함)에 기술된 것에 더하여, 당업자에게 통상적으로 공지된 다양한 장치 및 프로토콜이 포함되거나 도입된다. 상기-참고된 출원 및 특허, 미국 일련 번호 60/939,792 및 미국 특허 번호 7,238,522, 각각은 이들 전체가 본원에 참조로 편입된다.
실시예
본 발명은 하기 실시예에 더 예시된다. 이들 실시예는, 본 발명의 바람직한 구현예를 나타내긴 하지만, 단지 예시를 위해 제공되는 것으로 이해되어야 한다. 상기 논의 및 이들 실시예로부터, 당해분야의 숙련가는 본 발명의 본질적인 특징을 확인할 수 있고, 이의 정신 및 범주로부터 벗어나지 않고, 그것을 다양한 용법 및 조건에 맞추기 위해 본 발명을 다양하게 변화 및 변형시킬 수 있다. 따라서, 본원에 제시되고 기술된 것 이외에 본 발명의 다양한 변형들은 전술한 설명으로부터 당해분야의 숙련가에게 자명할 것이다. 그러한 변형은 또한 첨부된 청구항의 범주 내에 속하는 것으로 의도된다.
실시예
1: 유망한 신규 말라리아 DNA 면역원성 조성물로서의 간 단계 유출된 소형 단백질
지금까지 인간 및 동물 모델에서 멸균 보호를 요구했던 말라리아 백신은 약독화된 생 포자소체이다. 상기 멸균 보호는 주로 성장-정지된 간 단계 (LS) 체로 감염된 간세포로의 CD8+ CTL에 의해 매개된다. 본 발명은 기생동물-숙주 계면에서 기생동물의 액포막 또는 이를 넘어 방출되는 단백질이 감염된 간세포의 표면 상의 MHC I 분자 상에 제시될 수 있다는 발견을 토대로 한다(도 1).
재료와 방법이 지금부터 설명된다.
최적화된
LS
면역원의
작제
및 설계
EXP1 및 EXP2, EXP23, ICP, TMP21 및 UIS3을 발현하는 한 패널의 플라스미드는 pVAX1 골격을 사용하여 작제하였다(Invitogen). 모든 서열은 GenBank로부터 입수하였다. 삽입체는 RNA이고 증가된 발현에 최적화된 코돈이며, BamHI/XhoI 또는 BamHI/EcoRI를 사용하여 pVAX1에 클로닝하였다.
백신 접종된 마우스에서 면역 반응
세포 면역원성 연구를 위해, 30㎍의 각각의 항원-암호화 플라스미드를 근육내 주사, 및 이어서 CELLECTRA™ 적응성 정전류 전기천공 장치에 의해 (Inovio Pharmaceuticals, Blue Bell Pa.)에 의해 Balb/c 마우스의 전경골근으로 전달하였다. IL-12가 아쥬반트로서 제공되는 모든 연구에서, 11㎍의 IL-12 암호화 플라스미드를 동시 전달하였다. IL-33이 아쥬반트로서 제공되는 모든 연구에서, 25㎍의 IL-33 암호화 플라스미드를 동시 전달하였다. 초기 연구를 위해, 마우스에 제0, 4 및 8주에 3회 면역화하였다. 세포 및 반응은 마지막 면역화 후 6주 (14주)에 평가하였다(도 3a). 2차 연구를 위해, 마우스에 제0, 3, 6 및 9주에 4회 면역화하였다. 세포 반응을 최종 면역화 (제14주)로부터 6주 후 ELISpot에 의하여 평가하였고, 그리고 마우스를 제18주차에 포자소체로 유발하고, 이후 BS 질환의 징후에 대하여 10일 동안 매일 모니터링하였다 (도 4a). 3차 연구를 위해, 마우스에 제0, 3, 6 및 9주에 4회 면역화하였다. 세포 반응을 마우스의 일 그룹 상에서 ELISpot를 통하여 최종 면역화 (제18주)로부터 9주 후에 평가하였고, 그리고 병행 그룹을 포자소체로 유발하였고, 이후 BS 질환의 징후에 대하여 추가로 10일 동안 모니터링하였다 (도 7a). 96-웰 플레이트(밀리포어 사)를 사용하여 제조업체의 지시(R & D 시스템즈)에 따라 ELISpot을 행하였다. 각각의 면역화된 마우스 유래의 2×105 비장 세포를 플레이트의 각 웰에 첨가하고, R10(음성 대조군), 콘카나발린 A(양성 대조군), 또는 각 항원에 특이적인 펩타이드 풀(Peptide pool)의 존재 하에 37℃, 5% CO2에서 밤새 자극하였다. 펩타이드 풀은, 11개의 아미노산이 중복되는, 전체 단백질에 걸쳐 15량체 펩타이드들로 구성된다.
생체내
전기천공을
통해
전달되는 다중-항원
pDNA
면역원성 조성물을 사용하는 마우스 연구
다중-항원 면역원성 조성물 접근법을 통한 말라리아에 대한 증진된 DNA 면역원성 조성물은 연구 대상이다. 다중-항원 DNA 면역원성 조성물 후보물은 근육내 주사 (i.m.) 및 전기천공 (EP)에 의해 전달되었고, 이는 플라스모듐 종 감염의 간-단계를 표적화하는데, 감염은 초기 마우스 연구에서 평가하였다. 면역원성 조성물 후보물은 하기 6개의 중요한 말라리아 LS 항원이 혼입되어 있다: EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21 및 UIS3. 면역원성 조성물 항원은 플라스모듐 요엘리(Plasmodium yoelii) 서열을 기반으로 하여 설계되었으며, 이는 코돈 및 RNA 최적화를 포함하는 발현을 증진시키기 위한 여러 변형을 포함하며, 고도로 효율적인 IgE 리더 서열이 부가되었다.
Balb/c 마우스에서 면역원성 연구 전에, 항원 발현은 시험관내 해독, 웨스턴 블롯팅 및 면역조직화학에 의해 확인하였다. 마우스에서, 면역원성 조성물은 강한 항원-특이적 세포성 및 체액성 반응을 유발하고, 이는 다른 벡터 시스템에 의해 유발된것들과 유사하거나 이를 능가하였다. 구체적으로, 106개 비장 세포 당 인터페론-감마 (IFNγ) 스팟 형성 세포 (SFU)가 ELISpot에 의해 정량화하였다.
현재 증거는 다중 간-단계 항원에 대한 강한 체액성 및 세포성 반응을 모두 유발하는 말라리아 면역원성 조성물 후보물이 말라리아에 보호를 부여할 수 있음을 뒷받침한다. 따라서, 상기 면역원성 조성물 접근법의 최종 목표는 다중 간-단계 항원에 대해 세포성 및 체액성 반응을 동시에 유도하는 것이다. 면역원성 조성물 설계 및 전달을 추가로 최적화하고 면역원성 조성물-유도된 면역 반응을 추가로 특성화하기 위한 여러 연구가 상기 모델에서 수행되었다.
결과가 본원에 기재된다.
모든 플라스모듐 종에서 보존된 소형 LS 유출 단백질을 선택하고 (도 2), DNA 면역원성 조성물로서 상이한 조합으로 사용하였다(도 3b, 4b 및 7b). 첫번째로, BALB/c 마우스 그룹은 6개 상이한 소형 LS 유출 단백질 (EXP1, EXP2, EXP23, UIS3, TLP21 및 ICP)을 암호화하는 합성 DNA 면역원성 조성물 작제물로 근육내 주사에 의해 면역화시켰다. 핵산 분자는 아쥬반트로서 상이한 사이토카인들의 존재 또는 부재 하에서 전기 천공을 통해 도입하였다. 포자소체 유발에 대한 멸균 보호는 면역 반응을 Th1 쪽으로 편중시키는 사이토카인 및 상이한 LS 유출된 항원들의 조합을 사용한 대부분의 면역화 그룹에서 관찰되었다. 총체적으로, 본원의 데이터는 말라리아 기생동물 감염에 대한 DNA 면역원성 조성물에서 소형 LS 유출 단백질의 상이한 조합을 사용하는 가능성을 입증한다.
항원의 세포 면역원성은 INF-γ ELISpot 세포성 면역원성 분석에 의해 계측하였다. LS 항원의 세포성 면역원성은 도 3 내지 11에 나타낸다. 모든 면역원성 조성물은 ELISpot에 의해 계측 시 강한 IFN-γ 반응을 유도하였다 (도 5, 6, 12 및 13). 항원, 아쥬반트 또는 이의 조합 각각은 수력학적 꼬리 정맥 주사로 주사하여 간에서 과발현되도록 하였다. 마우스로부터의 혈액은 혈액 단계 감염의 발병에 대한 징후에 대해 분석하였다(도 8 및 9).
EXP1_EXP2와 공통 P.f. 면역원 TRAP 및 CelTOS의 동시 투여는 EXP1_EXP2와 유사하게 혈액 단계 질환으로부터의 보호를 보여주었고 (도 14), 이는 면역원성 조성물과 다른 P.f. 면역원의 동시 투여가 상당한 교차-반응성을 유도하지 않았음을 표지한다.
실시예
2:
LS
공통 항원으로 면역화된 비-인간 영장류는 강력한 세포성 및
체액성
반응을 유도한다.
레서스 T 세포 면역력은 면역치료학적 백신 개발을 위해 매우 적절한 모델로서 작용하는 인간 T 세포 면역력과 보다 유사하였다. 따라서, 붉은털 원숭이 (Rhesus macaque)는 사람 면역 반응에 대한 LS 항원 백신의 잠재적 효과를 평가하기 위한 모델로서 작용할 수 있다.
비-인간 영장류 (NHP) 모델에서 공통 LS 항원의 면역원성을 입증하기 위해, 붉은털 원숭이 (RhM)는 pGX7039, pGX7040, pGX7041, pGX7042, 및 pGX7043 중 하나 이상으로 면역화시킨다. 공통 LS 항원을 사용한 백신 접종은 붉은털 원숭이에서 강력한 LS 항원-특이적 CTL을 생성할 수 있다. 비-인간 영장류 (NHP)에 단독으로 또는 아쥬반트와 함께 제형화된 LS 항원을 투여하였고, ID에 이어서 전기천공에 의해 전달하였다.
표 1: 예시적 NHP 연구 설계
간략하게, 붉은털 원숭이에 LS 항원을 근육내 주입, 및 이어서 CELLECTRA® 적응성 정전류 EP 장치 (0.5 Amp 정전류, 3 펄스, 52 msec 펄스 폭, 펄스 사이 0.2 초)를 사용한 EP에 의해 6주 간격으로 2 mg/DNA/각 면역화에서 4회 백신 접종하였다. 각각의 면역화 후 2주째에 혈액을 수집하고, PBMC는 표준 Ficoll-Hypaque 밀도 구배 원심분리에 의해 단리하였다. 원숭이 예비-코팅된 IFNγ ELISpot 키트 (Mabtech)를 사용하여, 각 면역화 2주 후에 LS 항원-특이적 세포성 반응을 평가한다. 간략하게, 플레이트는 PBS로 세척하고 실온에서 2시간 동안 R10 (10% FBS 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 RPMI 1640)으로 블로킹하였다. 원숭이 PBMC는 R10 중에 재현탁된 웰 당 2 × 105 세포의 투입 세포수로 3회 부가한다. 전체 LS 항원을 나타내는 펩타이드 세트 (예를 들어, 각각 8개 아미노산이 중복되는 15개 아미노산 잔기들을 함유함)를 GenScript 사로부터 합성하였다. 이러한 펩타이드 세트는 다중 펩타이드 풀에 부었다. 2.5 ㎍/㎖의 콘카발린 A를 양성 대조군으로서 사용하고, R10 배지를 음성 대조군으로 사용한다. 플레이트는 5% CO2 분위기 항온처리기에서 37℃에서 24시간 동안 항온처리한다. 이어서 비오티닐화된 IFN-γ 검출 항체를 첨가하고 플레이트는 실온에서 2시간 동안 항온처리한다. 플레이트를 세척하고, 제조업자의 지침에 따라 발색시켰다. 플레이트 상의 스팟은 자동화 ELISPOT 판독기 (Cellular Technology, Shaker Heights, OH)를 사용하여 계수한다. 항원-특이적 반응은 펩타이드를 함유하는 웰로부터 음성 대조군 웰 중 스팟의 수를 공제함에 의해 계측한다. 음성 대조군을 공제한 후, 백신 접종 후 수집된 PBMC을 갖는 웰 중 평균 값은 50 SFU/106 PBMC를 초과해야만 하고, 양성 반응으로서 고려되는 백신 접종 전 반응성 보다 적어도 4배 높아야 한다. 예비-채혈된 혈액 샘플을 연구하여, 상기 연구에서 각각의 개별 동물의 면역 반응의 백그라운드 수준을 확립하였다.
특정 이론에 의해 구애받는 것 없이, 상기 결과는 LS 항원-면역화된 원숭이들이 각각의 면역화 후 백신-유도된 반응에서 급격한 증가를 갖는 면역 반응의 백그라운드 수준이 매우 낮고, 제1, 제2, 제3 및 제4 면역화 후 증가하는 IFN-γ 생산 세포의 평균 수가 증가한 것으로 나타날 것이라고 예상된다. 이들 결과는 LS 항원 중 하나 또는 조합을 사용한 면역화가 강한 LS 항원-특이적 세포 반응을 유발할 수 있음을 입증한다. 에피토프 맵핑(epitope mapping)은 또한 붉은털 원숭이에서 관찰된 면역 반응의 다양성을 조사하기 위해서도 수행될 수 있다.
임의의 CTL-매개된 숙주 독성이 있는지를 조사하기 위해, 다수의 생리학적 파라미터를 면역화된 원숭이에서 평가한다. 간략하게, 체중을 모니터링하고 동물을 마취 하에 둔다. 혈액 화학 및 CBC 패널은 백신접종된 동물에 대해서 이들의 최종 면역화 2주 후에 개시하고, IDEXX 연구소에 의한 백신 접종 프로모콜의 완료 후 3개월까지 수행 완료하면서 수행한다.
특정 이론에 의해 구애받는 것 없이, 널리 관용적인 백신은 어떠한 상당한 체중 손실이 관찰되지 않고도 WBC 계수가 정상 범위 내에서 유지되는 것이다. 알칼린 포스파타제 (ALK P), 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT), 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) 및 총 빌리루빈 (TBIL)의 상승 부재는 LS 항원-특이적 면역 반응의 유도가 간에 상당한 손상을 유발하지 않았음을 표지한다. 특정 이론에 의해 구애받는 것 없이, 널리 관용성 백신은 어떠한 손상된 신장 기능의 증거가 나타나지 않고도 혈액 우레아 질소 (BUN)가 정상 한계치 내에서 유지되는 것이다. 특정 이론에 의해 구애받는 것 없이, 널리 관용성 백신은 CPK에서 어떠한 상당한 변화도 백신 접종 과정 후 검출되지 않는 것이다.
실시예
3: 인간 세포에서 공통
LS
항원의 발현
이를 위해 최적화된 공통 LS 항원은 인간 및 비-인간 영장류에 사용하기 위해 개발되었다. 도 19는 최적화된 공통 LS 항원이 인간 세포주에서 발현할 수 있음을 확인시켜주는 실험 결과를 보여준다. 293T 세포는 지정된 작제물로 형질감염시켰다. 세포 용해물은 Bis-Tris 겔 상에 전개하고 니트로셀룰로스 막으로 이전시켰다. 막은 항-HA 1차 항체 및 IRDye 680RD 2차 항체로 탐지하고 오딧세이 판독기 상에서 이미지화하였다.
실시예 4: 서열 정보:
표 2. 인간에서의 발현을 위한 최적화된 공통 플라스모듐 종 LS 항원 서열
<110> Weiner, David
Reuschel, Emma
Ferraro, Bernadette
Aly, Ahmed S.I.
<120> SYNTHETIC MALARIA IMMUNOGENS, COMBINATIONS THEREOF, AND THEIR USE
TO PREVENT AND TREAT MALARIA INFECTIONS
<130> MPI18-014
<150> US 62/338,841
<151> 2016-05-19
<160> 83
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 326
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7034/pGX7029 Pvivax EXP1-EXP2
<400> 1
Lys Leu Leu Ala Ala Val Phe Leu Leu Phe Cys Ala Ile Leu Cys Asn
1 5 10 15
His Ala Leu Gly Asp Asn Val Asn Gly Leu Gly Ala Gly Asn Pro Lys
20 25 30
Lys Lys Ser Pro Lys Ser Lys Ser Pro Glu Pro Leu Ile Asp Val His
35 40 45
Glu Leu Ile Ser Glu Ile Val Arg Lys Glu Glu Glu Leu Val Asn Met
50 55 60
Thr Lys Lys Lys Ser Asn Tyr Lys Leu Ala Thr Thr Val Leu Ala Ser
65 70 75 80
Ala Leu Gly Val Val Ser Ala Val Leu Leu Gly Gly Ala Gly Leu Val
85 90 95
Phe Tyr Asn Ala Gly Asn Gly Arg His Pro Phe Ser Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Lys Gly Gly Asp Ala Ala Pro Thr Glu Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ala
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Gly Leu Asn Asp Asp Gly Ser Ser Ser Gly Thr Glu
130 135 140
Ser Thr Ser Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Ala Glu Glu Glu Tyr Ser
145 150 155 160
Trp Asp Ser Tyr Leu Asn Asp Arg Leu Leu Ala Thr Asn Gln Val Ser
165 170 175
Ala Ala Gly Leu Ala Ser Glu Glu Asp Gly Val Val Tyr Ala Cys Val
180 185 190
Ala Gln Ala Asp Glu Asn Asp Ala Glu Phe Asp Lys Trp Thr Leu Phe
195 200 205
Tyr Lys Glu Asp Tyr Glu Ile Glu Val Glu Asp Glu Asn Gly Asn Lys
210 215 220
Ser Gln Lys Thr Ile Asn Glu Gly Gln Thr Leu Leu Thr Val Phe Lys
225 230 235 240
Glu Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Val Trp Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Gln
245 250 255
Phe Ile Asn Ile Glu Arg Asp Leu Glu Phe Glu Gly Tyr Thr Phe Asp
260 265 270
Val Ala Thr Cys Ala Lys Leu Lys Gly Gly Leu His Leu Ile Lys Val
275 280 285
Pro Gly Gly Asn Ile Leu Val Val Leu Tyr Asp Glu Glu Lys Glu His
290 295 300
Asp Arg Gly Asn Ser Lys Ile Ala Ala Leu Thr Phe Ser Lys Glu Leu
305 310 315 320
Ala Glu Ser Gly Gly Gln
325
<210> 2
<211> 978
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7034/pGX7029 Pvivax EXP1-EXP2
<400> 2
aagctgctgg ccgccgtgtt cctgctgttt tgcgcaatcc tgtgcaacca cgcactgggc 60
gacaacgtga atggcctggg agcaggcaat cccaagaaga agagccccaa gagcaagtcc 120
cccgagcctc tgatcgatgt gcacgagctg atctccgaga tcgtgcggaa ggaggaggag 180
ctggtgaaca tgaccaagaa gaagagcaat tacaagctgg ccaccacagt gctggccagc 240
gccctgggcg tggtgtccgc cgtgctgctg ggcggcgccg gcctggtgtt ctataacgcc 300
ggcaatggcc gccacccctt tagcctgggc ggcggcaagg gcggcgacgc agcacctacc 360
gagccaacac ccgcccctac cgcaccatcc gccacaggcc tgaacgacga tggcagctcc 420
tctggcaccg agtctacaag ccggggcagg aagaggagat ctgccgagga ggagtactcc 480
tgggactctt atctgaacga taggctgctg gccaccaatc aggtgtctgc cgcaggcctg 540
gcaagcgagg aggacggagt ggtgtacgca tgcgtggcac aggccgacga gaatgatgcc 600
gagttcgata agtggaccct gttttacaag gaggactatg agatcgaggt ggaggatgag 660
aacggcaata agtcccagaa gacaatcaac gagggccaga ccctgctgac agtgttcaag 720
gagggctacg caccagatgg cgtgtggctg ggcggcacca agtatcagtt tatcaatatc 780
gagagggacc tggagttcga gggctacacc tttgatgtgg ccacatgtgc caagctgaag 840
ggcggcctgc acctgatcaa ggtgcctggc ggcaacatcc tggtggtgct gtatgacgag 900
gagaaggagc acgatagagg caattccaag atcgccgccc tgacattttc caaggagctg 960
gccgagtctg gcggccag 978
<210> 3
<211> 1032
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7034/pGX7029 Pvivax EXP1-EXP2 operably linked to IgE leader
sequence
<400> 3
atggactgga cctggattct gttcctggtg gcagcagcaa caagggtgca cagcaagctg 60
ctggccgccg tgttcctgct gttttgcgca atcctgtgca accacgcact gggcgacaac 120
gtgaatggcc tgggagcagg caatcccaag aagaagagcc ccaagagcaa gtcccccgag 180
cctctgatcg atgtgcacga gctgatctcc gagatcgtgc ggaaggagga ggagctggtg 240
aacatgacca agaagaagag caattacaag ctggccacca cagtgctggc cagcgccctg 300
ggcgtggtgt ccgccgtgct gctgggcggc gccggcctgg tgttctataa cgccggcaat 360
ggccgccacc cctttagcct gggcggcggc aagggcggcg acgcagcacc taccgagcca 420
acacccgccc ctaccgcacc atccgccaca ggcctgaacg acgatggcag ctcctctggc 480
accgagtcta caagccgggg caggaagagg agatctgccg aggaggagta ctcctgggac 540
tcttatctga acgataggct gctggccacc aatcaggtgt ctgccgcagg cctggcaagc 600
gaggaggacg gagtggtgta cgcatgcgtg gcacaggccg acgagaatga tgccgagttc 660
gataagtgga ccctgtttta caaggaggac tatgagatcg aggtggagga tgagaacggc 720
aataagtccc agaagacaat caacgagggc cagaccctgc tgacagtgtt caaggagggc 780
tacgcaccag atggcgtgtg gctgggcggc accaagtatc agtttatcaa tatcgagagg 840
gacctggagt tcgagggcta cacctttgat gtggccacat gtgccaagct gaagggcggc 900
ctgcacctga tcaaggtgcc tggcggcaac atcctggtgg tgctgtatga cgaggagaag 960
gagcacgata gaggcaattc caagatcgcc gccctgacat tttccaagga gctggccgag 1020
tctggcggcc ag 1032
<210> 4
<211> 272
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7035/pGX7030 Pvivax EXP23
<400> 4
Lys Val Ser Tyr Ile Leu Ser Leu Phe Phe Phe Leu Ile Ile Tyr Lys
1 5 10 15
Asn Thr Thr Thr Asn Val Val Glu Cys Gly Gly Tyr Ser Asp Leu Ala
20 25 30
Ala Thr Ser Ala Leu Thr Thr Ile Val Lys Asp Pro Ile Ser Leu Thr
35 40 45
Ile Lys Asp Leu Tyr Glu His Gly Val Lys Asp Pro Ile Thr Lys Leu
50 55 60
Ile His Lys Ile Lys Lys Val Val Arg Tyr Arg Lys Val Leu Arg Trp
65 70 75 80
Ser Arg Ile Trp Trp Val Leu Leu Val Arg Glu Ile Val Gly Asp Asn
85 90 95
Ala Ile Glu Arg Lys Thr Glu Lys Ala Leu Arg Glu Ile Trp Asp Gln
100 105 110
Cys Thr Ile Ala Val Tyr Asn Asn Thr Leu Tyr Ala Ile Glu Ser Lys
115 120 125
Pro Leu Leu Phe Leu His Gly Ile Leu Asn Glu Cys Lys Asn Asn Phe
130 135 140
Ser Thr Lys Leu Arg Gln Asp Pro Gly Leu Ile Val Ala Lys Ile Asp
145 150 155 160
Gln Ile Leu Lys Ser Gln Ile Tyr Arg Phe Trp Val Ser Glu Pro Tyr
165 170 175
Leu Lys Ile Gly Lys Ser Ser Ile Phe Tyr Thr Arg Ile Asn Ser Lys
180 185 190
Asn Val Pro Pro Leu Pro Lys Glu Cys Thr Leu Lys His Leu Ser Ser
195 200 205
Tyr Met Glu Glu Lys Leu Lys Ser Met Glu Ser Lys Lys Asn Ile Glu
210 215 220
Ser Gly Lys Tyr Glu Phe Asp Val Glu Ser Thr Lys Ser Thr Thr Asp
225 230 235 240
Asp Gly Gln Ala Asp Asp Glu Asp Asp Asp Glu Asn Glu Glu Asp Ala
245 250 255
Phe Glu Glu Glu Thr Phe Glu Glu Lys Lys Ser Glu Glu Lys Lys Asp
260 265 270
<210> 5
<211> 816
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7035/pGX7030 Pvivax EXP23
<400> 5
aaggtgtctt acatcctgtc tctgttcttt ttcctgatca tctataagaa caccacaacc 60
aatgtggtgg agtgcggcgg atactccgat ctggccgcca catctgccct gacaaccatc 120
gtgaaggacc ccatcagcct gaccatcaag gacctgtacg agcacggcgt gaaggacccc 180
atcacaaagc tgatccacaa gatcaagaag gtggtgaggt atagaaaggt gctgcggtgg 240
tcccgcatct ggtgggtgct gctggtgagg gagatcgtgg gcgacaacgc catcgagagg 300
aagaccgaga aggccctgag agagatctgg gatcagtgca caatcgccgt gtacaacaat 360
accctgtatg ccatcgagtc taagcctctg ctgtttctgc acggcatcct gaatgagtgt 420
aagaacaatt tcagcaccaa gctgaggcag gacccaggcc tgatcgtggc caagatcgat 480
cagatcctga agagccagat ctaccggttt tgggtgtccg agccctatct gaagatcggc 540
aagagctcca tcttctatac ccgcatcaac tccaagaatg tgccccctct gcctaaggag 600
tgtacactga agcacctgtc tagctacatg gaggagaagc tgaagagcat ggagtccaag 660
aagaacatcg agtctggcaa gtatgagttc gacgtggagt ctaccaagag cacaaccgac 720
gatggccagg ccgacgatga ggacgatgac gagaatgagg aggacgcctt tgaggaggag 780
acattcgagg agaagaagtc cgaggagaag aaggat 816
<210> 6
<211> 870
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7035/pGX7030 Pvivax EXP23 operably linked to IgE leader
sequence
<400> 6
atggactgga catggattct gttcctggtg gcagcagcaa ccagagtgca ctccaaggtg 60
tcttacatcc tgtctctgtt ctttttcctg atcatctata agaacaccac aaccaatgtg 120
gtggagtgcg gcggatactc cgatctggcc gccacatctg ccctgacaac catcgtgaag 180
gaccccatca gcctgaccat caaggacctg tacgagcacg gcgtgaagga ccccatcaca 240
aagctgatcc acaagatcaa gaaggtggtg aggtatagaa aggtgctgcg gtggtcccgc 300
atctggtggg tgctgctggt gagggagatc gtgggcgaca acgccatcga gaggaagacc 360
gagaaggccc tgagagagat ctgggatcag tgcacaatcg ccgtgtacaa caataccctg 420
tatgccatcg agtctaagcc tctgctgttt ctgcacggca tcctgaatga gtgtaagaac 480
aatttcagca ccaagctgag gcaggaccca ggcctgatcg tggccaagat cgatcagatc 540
ctgaagagcc agatctaccg gttttgggtg tccgagccct atctgaagat cggcaagagc 600
tccatcttct atacccgcat caactccaag aatgtgcccc ctctgcctaa ggagtgtaca 660
ctgaagcacc tgtctagcta catggaggag aagctgaaga gcatggagtc caagaagaac 720
atcgagtctg gcaagtatga gttcgacgtg gagtctacca agagcacaac cgacgatggc 780
caggccgacg atgaggacga tgacgagaat gaggaggacg cctttgagga ggagacattc 840
gaggagaaga agtccgagga gaagaaggat 870
<210> 7
<211> 363
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7036/pGX7031 Pvivax ICP
<400> 7
Lys Leu Ser Ser Leu Phe Cys Leu Val Val Cys Ser Ser Val Ala His
1 5 10 15
Leu Ser Ser Cys Ser Asp Gln Asn Thr Tyr Ser Phe Asp Ile Val Asn
20 25 30
Arg Asn Thr Trp Tyr Ser Ile Ala Lys Lys Ile Phe Gln Gly Thr Thr
35 40 45
Pro Cys Asn Phe Thr Val Ile Pro Ser Ser Tyr Val Asn Asn Ser Asp
50 55 60
Gly Val Ser Thr Ser Asp Asp Ser Val Leu Leu Ile Arg Lys Lys Leu
65 70 75 80
Lys Asp Pro Ser Glu Ala Gly Leu Asp Gly Ser Ser Val Ser Gly Ser
85 90 95
Ser Ser Ser Gly Asn Ser His Ser Gly Ser Ala Pro Cys Cys Asp Lys
100 105 110
Gly Thr Pro Ala Lys Glu Ala Glu Leu Lys Phe Ser Thr Lys Phe Glu
115 120 125
Gly Asp Asp Tyr Ala Lys Leu Arg Asp Ser Leu Ser Leu Ile Asp Lys
130 135 140
Ser Leu Arg Glu Glu Ser Ser Ser Glu Glu Asp Ser Lys Met Glu Asp
145 150 155 160
Ser Gln Val Gly Glu Val Thr His Glu Glu Thr Ile Thr Tyr Asn Met
165 170 175
Pro Glu Glu Tyr Met Pro Gln Asn Ile Ser Glu Val Leu Ile Gly Ala
180 185 190
Ala Glu Glu Asp Arg Thr Tyr Ala Leu Lys Gly Asp Glu Pro Cys Asp
195 200 205
Val Tyr Leu Lys Leu Gly Glu Ile Ile Asn Gly Thr Asn Glu Lys Thr
210 215 220
Ile Glu Tyr Ser Leu Gln Lys Asn Lys Ile Leu Cys Val Gln Leu Glu
225 230 235 240
Ala Ile Gly Gly Asn Gly Tyr Leu Trp Ala Leu Leu Gly Val His Lys
245 250 255
Glu Lys Pro Gln Ile Asn Pro Glu Glu Phe Pro Arg Lys Lys Ile Thr
260 265 270
Lys Ser Phe Phe Thr Asn Glu Ile Ser Val Thr Gln Pro Lys Ala Val
275 280 285
Gln Lys Asn Lys Ser Asn Asn Gly Gly Glu Ser Ser Ser Asn Ser Pro
290 295 300
Gly Tyr Gly Lys Pro Pro Ala Ser Glu Gln Leu Gly Gly Phe Val Gly
305 310 315 320
Gly Thr Ser Met Leu Gln Ser Ile Val Lys Ala His Lys Glu Gly Thr
325 330 335
Phe Phe Val Val Tyr Ser Tyr Tyr Arg Pro Phe Asp Pro Thr Ala Asn
340 345 350
Ala Asn Thr Lys Ile Leu Lys Leu Thr Val Ser
355 360
<210> 8
<211> 1089
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7036/pGX7031 Pvivax ICP
<400> 8
aagctgagct ccctgttttg cctggtggtg tgcagcagcg tggcacacct gtcctcttgc 60
tccgaccaga acacctactc tttcgatatc gtgaaccgca atacatggta tagcatcgcc 120
aagaagatct tccagggcac cacaccctgt aacttcaccg tgatccctag ctcctacgtg 180
aacaattctg acggcgtgtc tacaagcgac gatagcgtgc tgctgatccg gaagaagctg 240
aaggacccca gcgaggcagg cctggatggc tctagcgtgt ccggctcctc tagctccgga 300
aactcccact ctggcagcgc cccatgctgt gataagggaa ccccagcaaa ggaggcagag 360
ctgaagttct ctacaaagtt tgagggcgac gattatgcca agctgaggga ctccctgtct 420
ctgatcgata agagcctgag agaggagtct agctccgagg aggactctaa gatggaggat 480
agccaagtgg gcgaggtgac ccacgaggag acaatcacat acaacatgcc tgaggagtat 540
atgccacaga atatctccga ggtgctgatc ggagcagcag aggaggacag gacatacgcc 600
ctgaagggcg acgagccttg cgacgtgtac ctgaagctgg gcgagatcat caacggcacc 660
aatgagaaga caatcgagta cagcctgcag aagaacaaga tcctgtgcgt gcagctggag 720
gcaatcggcg gaaatggcta tctgtgggcc ctgctgggcg tgcacaagga gaagcctcag 780
atcaacccag aggagtttcc cagaaagaag atcaccaaga gcttctttac aaatgagatc 840
tccgtgaccc agcctaaggc cgtgcagaag aacaagagca acaatggcgg cgagtctagc 900
tccaattccc caggatacgg caagccccct gcatctgagc agctgggcgg cttcgtgggc 960
ggcaccagca tgctgcagtc catcgtgaag gcccacaagg agggcacatt ctttgtggtg 1020
tattcctact atcgcccatt tgatcccacc gccaacgcca atacaaagat cctgaagctg 1080
accgtgtct 1089
<210> 9
<211> 1143
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7036/pGX7031 Pvivax ICP operably linked to IgE leader sequence
<400> 9
atggactgga cctggattct gttcctggtg gcagcagcaa cacgggtgca ctccaagctg 60
agctccctgt tttgcctggt ggtgtgcagc agcgtggcac acctgtcctc ttgctccgac 120
cagaacacct actctttcga tatcgtgaac cgcaatacat ggtatagcat cgccaagaag 180
atcttccagg gcaccacacc ctgtaacttc accgtgatcc ctagctccta cgtgaacaat 240
tctgacggcg tgtctacaag cgacgatagc gtgctgctga tccggaagaa gctgaaggac 300
cccagcgagg caggcctgga tggctctagc gtgtccggct cctctagctc cggaaactcc 360
cactctggca gcgccccatg ctgtgataag ggaaccccag caaaggaggc agagctgaag 420
ttctctacaa agtttgaggg cgacgattat gccaagctga gggactccct gtctctgatc 480
gataagagcc tgagagagga gtctagctcc gaggaggact ctaagatgga ggatagccaa 540
gtgggcgagg tgacccacga ggagacaatc acatacaaca tgcctgagga gtatatgcca 600
cagaatatct ccgaggtgct gatcggagca gcagaggagg acaggacata cgccctgaag 660
ggcgacgagc cttgcgacgt gtacctgaag ctgggcgaga tcatcaacgg caccaatgag 720
aagacaatcg agtacagcct gcagaagaac aagatcctgt gcgtgcagct ggaggcaatc 780
ggcggaaatg gctatctgtg ggccctgctg ggcgtgcaca aggagaagcc tcagatcaac 840
ccagaggagt ttcccagaaa gaagatcacc aagagcttct ttacaaatga gatctccgtg 900
acccagccta aggccgtgca gaagaacaag agcaacaatg gcggcgagtc tagctccaat 960
tccccaggat acggcaagcc ccctgcatct gagcagctgg gcggcttcgt gggcggcacc 1020
agcatgctgc agtccatcgt gaaggcccac aaggagggca cattctttgt ggtgtattcc 1080
tactatcgcc catttgatcc caccgccaac gccaatacaa agatcctgaa gctgaccgtg 1140
tct 1143
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<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7037/pGX7032 Pvivax TMP21
<400> 10
Gly Arg Leu Ala Arg Leu Ala Ala Leu Leu Val Val Leu Thr Leu Gln
1 5 10 15
Cys Leu Arg Thr Gly Ala Ile Glu Val Tyr Val Thr Val Arg Pro Asn
20 25 30
Lys Ile Lys Cys Leu Lys Glu Arg Ile Asn Lys Asp Thr Leu Val Val
35 40 45
Gly Lys Phe Lys Thr Asp Ser Lys Asn Ser Pro Ile Ser Ile Phe Ile
50 55 60
Tyr Asp Ala Asp Val Asn Glu Arg Thr Phe Asn Phe Gln Lys Lys Leu
65 70 75 80
Pro Ile Phe Glu Thr Ile Asn Glu His Asp Ile Lys Thr Ala Phe Thr
85 90 95
Thr Phe Tyr Ser Thr Ser Tyr Ser Phe Cys Ala Tyr Asn Ser Thr Asn
100 105 110
Lys Ile Leu Asp Val Phe Phe Glu Ile Lys His Gly Thr Glu Ala Arg
115 120 125
Asp Tyr Ala Gln Ile Ala Lys Ser Glu His Leu Asn Glu Ala Thr Met
130 135 140
Tyr Leu Asn Gln Ile Leu Asp Gln Met Asn Asn Phe His Leu Asn Leu
145 150 155 160
Lys Arg Ile Lys Ala Ser Glu Glu Asn Glu Lys Lys Ser Ser Asp Lys
165 170 175
Leu Asn Asp Thr Leu Met Trp Phe Ser Leu Met Asn Ile Leu Ile Ile
180 185 190
Ile Val Ala Ala Ile Ile Gln Asp Phe Tyr Phe Lys Arg Phe Phe Thr
195 200 205
Ser Lys Lys Ile Ile
210
<210> 11
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7037/pGX7032 Pvivax TMP21
<400> 11
ggcaggctgg caagactggc cgccctgctg gtggtgctga ccctgcagtg cctgagaaca 60
ggcgccatcg aggtgtacgt gacagtgcgg cccaacaaga tcaagtgtct gaaggagcgc 120
atcaataagg acaccctggt ggtgggcaag ttcaagacag attctaagaa cagccccatc 180
tccatcttta tctatgacgc cgatgtgaac gagaggacct tcaattttca gaagaagctg 240
cctatcttcg agacaatcaa cgagcacgat atcaagacag ccttcaccac cttctactct 300
accagctatt ccttttgcgc ctacaactcc acaaataaga tcctggacgt gttctttgag 360
atcaagcacg gaaccgaggc ccgggattac gcacagatcg ccaagtctga gcacctgaac 420
gaggccacca tgtatctgaa tcagatcctg gaccagatga acaatttcca cctgaacctg 480
aagcgcatca aggcctctga ggagaacgag aagaagagct ccgacaagct gaatgataca 540
ctgatgtggt ttagcctgat gaatatcctg atcatcatcg tggccgccat catccaggac 600
ttctacttca agaggttctt cacctccaag aagatcatc 639
<210> 12
<211> 693
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7037/pGX7032 Pvivax TMP21 operably linked to IgE leader
sequence
<400> 12
atggactgga catggattct gttcctggtg gcagcagcaa ccagggtgca cagcggcagg 60
ctggcaagac tggccgccct gctggtggtg ctgaccctgc agtgcctgag aacaggcgcc 120
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aaggacaccc tggtggtggg caagttcaag acagattcta agaacagccc catctccatc 240
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tattcctttt gcgcctacaa ctccacaaat aagatcctgg acgtgttctt tgagatcaag 420
cacggaaccg aggcccggga ttacgcacag atcgccaagt ctgagcacct gaacgaggcc 480
accatgtatc tgaatcagat cctggaccag atgaacaatt tccacctgaa cctgaagcgc 540
atcaaggcct ctgaggagaa cgagaagaag agctccgaca agctgaatga tacactgatg 600
tggtttagcc tgatgaatat cctgatcatc atcgtggccg ccatcatcca ggacttctac 660
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<211> 212
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7038/pGX7033 Pvivax UIS3
<400> 13
Asn Ile Ser Lys Ile Phe Ala Phe Phe Phe Leu Leu Cys Ala Thr Glu
1 5 10 15
Lys Leu Leu Ile Val Cys Ala Ser Arg Ile Leu Ser Ser Ile Glu Lys
20 25 30
Asp Leu Ala Pro Leu Lys Asn Ile Asp Asp Thr Leu Ala Glu Lys Asn
35 40 45
Arg Lys Lys Lys Ile Tyr Tyr Ser Leu Ile Ser Ser Gly Ile Phe Val
50 55 60
Phe Val Ala Ile Ala Leu Gly Ile Gly Phe Tyr Ile Asn Glu Lys Glu
65 70 75 80
Glu Glu Tyr Tyr Phe Lys Lys Tyr Ala Leu Phe Arg Asp Lys Arg Phe
85 90 95
Gln Phe Glu Asn Pro Arg Asp Gly Gln Val Pro Ser Thr Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Val Glu Pro Pro Gly Ile Asn Lys Val Asn Ile Lys Gly Pro Leu
115 120 125
Val Glu Asn Thr Asn Glu Asn Asp Val Pro Ile Lys Lys Phe Asn Ile
130 135 140
Phe Leu Asp Asn Ala Arg Ile Ala Met Arg His His Phe Ser Asn Leu
145 150 155 160
Ser Gln Pro Gln Gln Glu Tyr Tyr Leu Asn Asp Arg Asp Tyr Ile Arg
165 170 175
Lys Val Val Gln Ser Leu Glu Glu Arg Arg Asn Val His Leu Ser Arg
180 185 190
Met Gln Glu Asp Met Ala Val Leu Asn Met Glu Asp Phe Leu Gln Lys
195 200 205
Ile Ser Lys Glu
210
<210> 14
<211> 636
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7038/pGX7033 Pvivax UIS3
<400> 14
aatatctcca agatcttcgc cttctttttc ctgctgtgcg ccaccgagaa gctgctgatc 60
gtgtgcgcca gcagaatcct gagcagcatc gagaaggatc tggcccctct gaagaatatc 120
gacgatacac tggccgagaa gaacaggaag aagaagatct actattccct gatctctagc 180
ggcatcttcg tgttcgtggc catcgccctg ggcatcggct tttacatcaa tgagaaggag 240
gaggagtact acttcaagaa gtatgccctg ttccgggaca agaggttcca gttcgagaac 300
ccaagggatg gccaggtgcc ctccacctct agagagtacg tggagccccc tggcatcaat 360
aaggtgaaca tcaagggccc tctggtggag aacacaaatg agaacgacgt gccaatcaag 420
aagtttaata tcttcctgga taacgccagg atcgccatga gacaccactt ttctaatctg 480
agccagcctc agcaggagta ctatctgaac gaccgggatt atatccgcaa ggtggtgcag 540
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aacatggagg atttcctgca gaagatctct aaggag 636
<210> 15
<211> 690
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7038/pGX7033 Pvivax UIS3 operably linked to IgE leader
sequence
<400> 15
atggactgga cctggattct gttcctggtg gcagcagcaa caagggtgca cagcaatatc 60
tccaagatct tcgccttctt tttcctgctg tgcgccaccg agaagctgct gatcgtgtgc 120
gccagcagaa tcctgagcag catcgagaag gatctggccc ctctgaagaa tatcgacgat 180
acactggccg agaagaacag gaagaagaag atctactatt ccctgatctc tagcggcatc 240
ttcgtgttcg tggccatcgc cctgggcatc ggcttttaca tcaatgagaa ggaggaggag 300
tactacttca agaagtatgc cctgttccgg gacaagaggt tccagttcga gaacccaagg 360
gatggccagg tgccctccac ctctagagag tacgtggagc cccctggcat caataaggtg 420
aacatcaagg gccctctggt ggagaacaca aatgagaacg acgtgccaat caagaagttt 480
aatatcttcc tggataacgc caggatcgcc atgagacacc acttttctaa tctgagccag 540
cctcagcagg agtactatct gaacgaccgg gattatatcc gcaaggtggt gcagtccctg 600
gaggagagga gaaatgtgca cctgtctaga atgcaggagg acatggccgt gctgaacatg 660
gaggatttcc tgcagaagat ctctaaggag 690
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<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IgE leader sequence
<400> 16
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser
<210> 17
<211> 311
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7039 Pcynomolgi EXP1-EXP2
<400> 17
Lys Leu Leu Thr Ala Val Phe Leu Leu Phe Cys Ala Ile Leu Cys Asp
1 5 10 15
Pro Ala Leu Gly Asp Asn Val Asn Gly Leu Gly Gly Pro Pro Ser Lys
20 25 30
Lys Lys Thr Pro Lys Ser Lys Ser Pro Glu Pro Leu Ile Asp Val His
35 40 45
Glu Leu Ile Gly Glu Met Val Arg Lys Glu Glu Glu Leu Ile Asn Ala
50 55 60
Asn Lys Lys Lys Ser Lys Tyr Lys Leu Ala Thr Thr Ile Leu Ala Ser
65 70 75 80
Ala Leu Gly Val Val Ser Ala Val Leu Leu Gly Gly Ala Gly Leu Val
85 90 95
Phe Tyr Asn Ala Gly Asn Gly Arg His Pro Phe Ser Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Lys Gly Gly Asp Ala Thr Pro Ser Glu Pro Ala Pro Ala Ala Gly Glu
115 120 125
Pro Val Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Ala Glu Glu Glu Tyr
130 135 140
Ser Trp Asp Ser Tyr Leu Asn Asp Arg Leu Leu Ala Thr Asn Gln Val
145 150 155 160
Ser Ala Ala Gly Leu Ala Ser Glu Glu Asp Gly Val Val Tyr Ala Cys
165 170 175
Val Ala Gln Ala Asp Glu Asn Asn Pro Glu Phe Asp Lys Trp Ser Leu
180 185 190
Phe Tyr Lys Glu Asp Phe Glu Ile Glu Val Glu Asp Glu Asn Gly Asn
195 200 205
Lys Ser Lys Lys Thr Ile Asn Glu Gly Gln Thr Leu Leu Thr Val Phe
210 215 220
Lys Glu Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Val Trp Leu Gly Gly Thr Lys Tyr
225 230 235 240
Gln Phe Ile Asn Ile Glu Arg Asp Leu Glu Phe Glu Gly Tyr Thr Phe
245 250 255
Asp Val Ala Thr Cys Ala Lys Leu Lys Gly Gly Leu His Leu Ile Lys
260 265 270
Val Pro Gly Gly Asn Ile Leu Val Val Leu Tyr Asp Glu Glu Lys Glu
275 280 285
His Asp Arg Gly Asn Ser Lys Val Ala Ala Leu Thr Phe Ser Lys Glu
290 295 300
Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gln
305 310
<210> 18
<211> 933
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7039 Pcynomolgi EXP1-EXP2
<400> 18
aagctgctga cagccgtgtt cctgctgttt tgcgcaatcc tgtgcgaccc tgccctgggc 60
gataacgtga atggcctggg cggccctccc agcaagaaga agaccccaaa gagcaagtcc 120
ccagagcccc tgatcgatgt gcacgagctg atcggcgaga tggtgcggaa ggaggaggag 180
ctgatcaacg ccaacaagaa gaagagcaag tacaagctgg caaccacaat cctggcatcc 240
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ggcaatggcc gccacccatt ttccctgggc ggcggcaagg gcggcgacgc aaccccatct 360
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gaggaggagt actcttggga cagctatctg aacgataggc tgctggccac aaatcaggtg 480
agcgccgcag gcctggcatc cgaggaggat ggagtggtgt acgcatgcgt ggcacaggca 540
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gtgctgtatg acgaggagaa ggagcacgat agaggcaata gcaaggtggc cgccctgacc 900
ttttctaagg agctggcaga gagcggcggc cag 933
<210> 19
<211> 987
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7039 Pcynomolgi EXP1-EXP2 operably linked to IgE leader
sequence
<400> 19
atggactgga cctggattct gttcctggtg gcagcagcaa ccagggtgca ctctaagctg 60
ctgacagccg tgttcctgct gttttgcgca atcctgtgcg accctgccct gggcgataac 120
gtgaatggcc tgggcggccc tcccagcaag aagaagaccc caaagagcaa gtccccagag 180
cccctgatcg atgtgcacga gctgatcggc gagatggtgc ggaaggagga ggagctgatc 240
aacgccaaca agaagaagag caagtacaag ctggcaacca caatcctggc atccgccctg 300
ggagtggtgt ctgccgtgct gctgggcggc gccggcctgg tgttctataa cgccggcaat 360
ggccgccacc cattttccct gggcggcggc aagggcggcg acgcaacccc atctgagcct 420
gcaccagcag caggagagcc agtgggcaag cggggccgca agaggagatc tgccgaggag 480
gagtactctt gggacagcta tctgaacgat aggctgctgg ccacaaatca ggtgagcgcc 540
gcaggcctgg catccgagga ggatggagtg gtgtacgcat gcgtggcaca ggcagacgag 600
aacaatcccg agttcgataa gtggagcctg ttctataagg aggactttga gatcgaggtg 660
gaggatgaga acggcaataa gtccaagaag accatcaacg agggccagac cctgctgaca 720
gtgttcaagg agggctacgc accagacggc gtgtggctgg gcggcacaaa gtatcagttt 780
atcaatatcg agagggacct ggagttcgag ggctacacct ttgatgtggc cacatgtgcc 840
aagctgaagg gcggcctgca cctgatcaag gtgcctggcg gcaacatcct ggtggtgctg 900
tatgacgagg agaaggagca cgatagaggc aatagcaagg tggccgccct gaccttttct 960
aaggagctgg cagagagcgg cggccag 987
<210> 20
<211> 305
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7040 Pcynomolgi EXP23
<400> 20
Lys Val Ser Tyr Ile Phe Ser Leu Leu Phe Phe Leu Ile Ile Tyr Lys
1 5 10 15
Asn Thr Thr Thr Asn Val Val His Cys Gly Gly Tyr Ser Asp Leu Ala
20 25 30
Ala Thr Ser Ala Leu Thr Thr Ile Val Lys Asp Pro Ile Arg Leu Thr
35 40 45
Ile Lys Asp Leu Tyr Glu His Gly Val Lys Asp Pro Ile Thr Lys Leu
50 55 60
Ile His Lys Ile Lys Lys Val Val Arg Tyr Arg Lys Val Leu Arg Trp
65 70 75 80
Ser Arg Ile Trp Trp Val Leu Leu Val Arg Glu Ile Val Gly Asp Asn
85 90 95
Ala Ile Glu Arg Lys Thr Glu Lys Ala Leu Arg Glu Ile Trp Asp Gln
100 105 110
Cys Thr Ile Ala Val Tyr Asn Asn Thr Leu Tyr Ala Ile Glu Ser Lys
115 120 125
Pro Leu Leu Phe Leu His Gly Ile Leu Asn Glu Cys Lys Asn Asn Phe
130 135 140
Ser Thr Lys Leu Arg Gln Asp Pro Gly Leu Ile Val Ala Lys Ile Asp
145 150 155 160
Gln Ile Leu Lys Ser Gln Ile Tyr Arg Phe Trp Val Ser Glu Pro Tyr
165 170 175
Leu Lys Ile Gly Lys Ser Ser Ile Phe Tyr Thr Arg Ile Asn Ser Asn
180 185 190
Asn Val Pro Pro Leu Pro Lys Glu Cys Thr Leu Lys His Leu Ser Ser
195 200 205
Tyr Met Glu Glu Lys Leu Lys Ser Met Glu Ser Lys Lys Asn Ile Glu
210 215 220
Ser Gly Lys Tyr Glu Phe Asp Val Glu Ser Thr Lys Asn Thr Thr Asp
225 230 235 240
Asp Ser Gln Ala Asp Glu Glu Asp Asp Asp Glu Asn Glu Glu Asp Ala
245 250 255
Phe Glu Glu Glu Ser Phe Glu Glu Lys Lys Ser Glu Glu Lys Lys Asp
260 265 270
Asp Asp Gly Gln Ala Asp Asp Glu Asp Asp Asp Glu Asn Glu Glu Asp
275 280 285
Ala Phe Glu Glu Glu Thr Phe Glu Glu Lys Lys Ser Glu Glu Lys Lys
290 295 300
Asp
305
<210> 21
<211> 915
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7040 Pcynomolgi EXP23
<400> 21
aaggtgtctt acatcttttc tctgctgttc tttctgatca tctataagaa caccacaacc 60
aatgtggtgc actgcggcgg atactctgat ctggccgcca caagcgccct gacaaccatc 120
gtgaaggacc ccatcaggct gaccatcaag gacctgtacg agcacggcgt gaaggacccc 180
atcacaaagc tgatccacaa gatcaagaag gtggtgaggt atagaaaggt gctgcggtgg 240
tcccgcatct ggtgggtgct gctggtgaga gagatcgtgg gcgacaatgc catcgagagg 300
aagaccgaga aggccctgag agagatctgg gatcagtgca caatcgccgt gtacaacaat 360
accctgtatg ccatcgagtc caagcccctg ctgttcctgc acggcatcct gaacgagtgt 420
aagaacaatt tttctacaaa gctgaggcag gaccctggcc tgatcgtggc caagatcgat 480
cagatcctga agagccagat ctaccggttc tgggtgtccg agccatatct gaagatcggc 540
aagagctcca tcttttacac ccgcatcaat agcaacaatg tgccccctct gcccaaggag 600
tgtacactga agcacctgtc tagctacatg gaggagaagc tgaagagcat ggagtccaag 660
aagaacatcg agtccggcaa gtatgagttc gacgtggagt ctaccaagaa tacaaccgac 720
gatagccagg ccgacgagga ggacgatgac gagaacgagg aggatgcctt cgaggaggag 780
tcctttgagg agaagaagtc tgaggagaag aaggatgacg atggccaggc cgacgatgaa 840
gatgacgatg agaacgagga ggacgccttc gaggaggaga cattcgagga gaagaagagc 900
gaggagaaga aggat 915
<210> 22
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7040 Pcynomolgi EXP23 operably linked to IgE leader sequence
<400> 22
atggactgga catggattct gttcctggtg gcagcagcaa cccgggtgca ctccaaggtg 60
tcttacatct tttctctgct gttctttctg atcatctata agaacaccac aaccaatgtg 120
gtgcactgcg gcggatactc tgatctggcc gccacaagcg ccctgacaac catcgtgaag 180
gaccccatca ggctgaccat caaggacctg tacgagcacg gcgtgaagga ccccatcaca 240
aagctgatcc acaagatcaa gaaggtggtg aggtatagaa aggtgctgcg gtggtcccgc 300
atctggtggg tgctgctggt gagagagatc gtgggcgaca atgccatcga gaggaagacc 360
gagaaggccc tgagagagat ctgggatcag tgcacaatcg ccgtgtacaa caataccctg 420
tatgccatcg agtccaagcc cctgctgttc ctgcacggca tcctgaacga gtgtaagaac 480
aatttttcta caaagctgag gcaggaccct ggcctgatcg tggccaagat cgatcagatc 540
ctgaagagcc agatctaccg gttctgggtg tccgagccat atctgaagat cggcaagagc 600
tccatctttt acacccgcat caatagcaac aatgtgcccc ctctgcccaa ggagtgtaca 660
ctgaagcacc tgtctagcta catggaggag aagctgaaga gcatggagtc caagaagaac 720
atcgagtccg gcaagtatga gttcgacgtg gagtctacca agaatacaac cgacgatagc 780
caggccgacg aggaggacga tgacgagaac gaggaggatg ccttcgagga ggagtccttt 840
gaggagaaga agtctgagga gaagaaggat gacgatggcc aggccgacga tgaagatgac 900
gatgagaacg aggaggacgc cttcgaggag gagacattcg aggagaagaa gagcgaggag 960
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> pGX7041 Pcynomolgi ICP
<400> 23
Lys Val Ser Ser Leu Phe Cys Leu Ile Val Cys Ser Ser Val Ala His
1 5 10 15
Val Ser Trp Cys Ser Asp Gln Asn Thr Tyr Ser Phe Asp Ile Val Asn
20 25 30
Lys Asn Thr Trp Tyr Ser Ile Ala Lys Lys Ile Phe Glu Ser Thr Thr
35 40 45
Pro Cys Asn Phe Thr Val Ile Pro Ser Ser Tyr Val Asn Asn Ser Asp
50 55 60
Glu Val Ser Ser Gly Asp Asp Ser Val Leu Leu Ile Arg Lys Lys Leu
65 70 75 80
Lys Asp Pro Ser Glu Ala Gly Val Glu Gly Ile Gly Glu Gly Ser Ile
85 90 95
Lys Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ser Gly Lys Glu Thr Leu Glu Lys
100 105 110
Glu Ala Gln Leu Asn Phe Ser Thr Asn Phe Glu Gly Asp Asp Tyr Ala
115 120 125
Lys Leu Gln Asn Ser Leu Ser Leu Ile Asp Lys Ser Leu Arg Glu Glu
130 135 140
Ser Ala Ser Asn Glu Asn Thr Lys Met Glu Asp Gly Lys Val Gly Asp
145 150 155 160
Val Asn Asn Glu Glu Thr Ile Thr Met Asn Met Pro Glu Glu Tyr Met
165 170 175
Pro Gln Asn Ile Ser Glu Ile Leu Met Gly Ala Ala Glu Glu Asp Arg
180 185 190
Thr Tyr Ala Leu Lys Asp Asp Glu Pro Cys Asp Thr Tyr Leu Lys Leu
195 200 205
Gly Asp Ile Ile Asn Gly Thr Asn Glu Lys Thr Ile Glu Phe Ser Leu
210 215 220
Gln Lys Asn Lys Val Leu Cys Val Gln Leu Glu Ala Ile Gly Gly Asn
225 230 235 240
Gly Tyr Leu Trp Thr Leu Leu Gly Val His Lys Gln Lys Pro Gln Ile
245 250 255
Asn Pro Glu Glu Phe Pro Arg Lys Lys Ile Thr Lys Ser Phe Phe Thr
260 265 270
Tyr Glu Ile Ser Val Thr Gln Pro Lys Ala Ile Gln Lys Asn Lys Val
275 280 285
Asn Asn Gly Asn Glu Leu Ser Ser Asn Ser Leu Gly Tyr Gly Lys Pro
290 295 300
Gln Ala Arg Glu His Leu Gly Gly Phe Val Gly Gly Thr Ser Thr Leu
305 310 315 320
Gln Ser Leu Val Lys Ala Arg Lys Ala Gly Thr Phe Phe Ile Val Tyr
325 330 335
Ser Tyr Tyr Arg Pro Phe Asp Pro Thr Ala Asn Ser Asn Thr Lys Ile
340 345 350
Leu Lys Leu Thr Val Ser
355
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> pGX7041 Pcynomolgi ICP
<400> 24
aaggtgagct ccctgttttg cctgatcgtg tgcagcagcg tggcccacgt gtcctggtgc 60
tctgaccaga acacctacag cttcgatatc gtgaacaaga atacatggta ttccatcgcc 120
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aaggacccct ccgaggcagg agtggaggga atcggcgagg gctctatcaa gggctctagc 300
tcctctagcg ccagcggcaa ggagacactg gagaaggagg cccagctgaa cttcagcaca 360
aattttgagg gcgacgatta cgccaagctg cagaacagcc tgtccctgat cgacaagtcc 420
ctgagggagg agtctgccag caacgagaat accaagatgg aggacggcaa ggtcggcgat 480
gtgaacaatg aggagacaat cacaatgaac atgcctgagg agtatatgcc acagaatatc 540
tccgagatcc tgatgggagc agcagaggag gatagaacct acgccctgaa ggacgatgag 600
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tttcctcgga agaagatcac caagtctttc tttacatacg agatcagcgt gacacagcca 840
aaggccatcc agaagaataa ggtgaacaat ggcaacgagc tgtcctctaa ttccctggga 900
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cagtccctgg tgaaggccag gaaggccggc accttcttta tcgtgtactc ttactataga 1020
ccctttgatc ctaccgccaa ctccaataca aagatcctga agctgacagt gtct 1074
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<211> 1128
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7041 Pcynomolgi ICP operably linked to IgE leader sequence
<400> 25
atggactgga cctggattct gttcctggtg gcagcagcaa cacgggtgca ctctaaggtg 60
agctccctgt tttgcctgat cgtgtgcagc agcgtggccc acgtgtcctg gtgctctgac 120
cagaacacct acagcttcga tatcgtgaac aagaatacat ggtattccat cgccaagaag 180
atcttcgagt ctaccacacc ctgtaacttc accgtgatcc cttcctctta cgtgaacaat 240
agcgacgagg tgagctccgg cgacgattcc gtgctgctga tcaggaagaa gctgaaggac 300
ccctccgagg caggagtgga gggaatcggc gagggctcta tcaagggctc tagctcctct 360
agcgccagcg gcaaggagac actggagaag gaggcccagc tgaacttcag cacaaatttt 420
gagggcgacg attacgccaa gctgcagaac agcctgtccc tgatcgacaa gtccctgagg 480
gaggagtctg ccagcaacga gaataccaag atggaggacg gcaaggtcgg cgatgtgaac 540
aatgaggaga caatcacaat gaacatgcct gaggagtata tgccacagaa tatctccgag 600
atcctgatgg gagcagcaga ggaggataga acctacgccc tgaaggacga tgagccctgc 660
gacacatatc tgaagctggg cgatatcatc aacggcacca atgagaagac aatcgagttc 720
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ctgtggaccc tgctgggcgt gcacaagcag aagccacaga tcaaccccga ggagtttcct 840
cggaagaaga tcaccaagtc tttctttaca tacgagatca gcgtgacaca gccaaaggcc 900
atccagaaga ataaggtgaa caatggcaac gagctgtcct ctaattccct gggatatggc 960
aagccacagg cccgcgagca cctgggcggc ttcgtgggcg gcaccagcac actgcagtcc 1020
ctggtgaagg ccaggaaggc cggcaccttc tttatcgtgt actcttacta tagacccttt 1080
gatcctaccg ccaactccaa tacaaagatc ctgaagctga cagtgtct 1128
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<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> pGX7042 Pcynomolgi TMP21
<400> 26
Val Gly Arg Leu Ala Gln Leu Ala Ala Leu Leu Ile Val Leu Thr Leu
1 5 10 15
Gln Cys Leu Arg Thr Gly Ala Ile Glu Val Tyr Ile Thr Val Arg Pro
20 25 30
Asn Lys Ile Lys Cys Leu Lys Glu Arg Ile Asn Lys Asp Thr Leu Val
35 40 45
Val Gly Lys Phe Lys Thr Asn Asn Lys Asn Ser Pro Ile Ser Ile Phe
50 55 60
Ile Tyr Asp Thr Asp Ile Asn Glu Arg Thr Phe Asn Phe Lys Lys Lys
65 70 75 80
Leu Pro Ile Phe Glu Thr Ile Asn Asp His Asp Ile Lys Thr Ala Phe
85 90 95
Thr Thr Phe Tyr Ser Thr Ser Tyr Ser Phe Cys Ala Tyr Asn Ser Thr
100 105 110
Asn Lys Val Leu Glu Val Phe Phe Glu Ile Lys His Gly Thr Glu Ala
115 120 125
Arg Asp Tyr Thr Gln Ile Ala Lys Ser Glu His Leu Asn Glu Ala Thr
130 135 140
Ile Tyr Leu Lys Gln Ile Val Asp Gln Met Asn Asn Phe His Leu Asn
145 150 155 160
Leu Lys Arg Ile Lys Ala Ser Glu Glu Asn Glu Lys Lys Ser Ser Asp
165 170 175
Lys Leu Asn Asp Thr Leu Met Trp Phe Ser Leu Met Asn Ile Phe Ile
180 185 190
Ile Ile Val Ala Ala Ile Ile Gln Asp Phe Tyr Phe Lys Arg Phe Phe
195 200 205
Thr Ser Lys Lys Ile Ile
210
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<212> DNA
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gtgggcagac tggcacagct ggccgccctg ctgatcgtgc tgaccctgca gtgcctgagg 60
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7042 Pcynomolgi TMP21 operably linked to IgE leader sequence
<400> 28
atggactgga catggattct gttcctggtg gcagcagcaa ccagggtgca ctctgtgggc 60
agactggcac agctggccgc cctgctgatc gtgctgaccc tgcagtgcct gaggacagga 120
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atctttatct atgacaccga tatcaacgag aggaccttca acttcaagaa gaagctgccc 300
atcttcgaga caatcaacga ccacgatatc aagacagcct tcaccacctt ctactctacc 360
agctattcct tttgcgccta caacagcaca aataaggtgc tggaggtgtt ctttgagatc 420
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Asn Ile Ser Lys Ile Phe Thr Phe Phe Phe Leu Leu Cys Ala Thr Glu
1 5 10 15
Lys Leu Leu Ile Leu Cys Ala Ser Arg Ile Leu Ser Ser Thr Glu Lys
20 25 30
Asp Leu Ala Pro Leu Lys Asn Ile Asp Asp Thr Leu Ala Ala Lys Asn
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Arg Lys Lys Lys Ile Tyr Tyr Ser Leu Ile Ser Ser Ser Ile Phe Val
50 55 60
Phe Val Ala Ile Ala Leu Gly Ile Gly Phe Tyr Ile Asn Glu Lys Glu
65 70 75 80
Lys Glu Tyr Tyr Phe Gln Lys Tyr Thr Leu Val Lys Asp Lys Arg Phe
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Gln Phe Glu Asn Pro Arg Asp Gly Gln Met Pro Ser Thr Ser Arg Glu
100 105 110
Tyr Val Glu Pro Pro Gly Ile Asn Lys Val Asn Ile Lys Gly Pro Leu
115 120 125
Val Glu Asn Thr Asn Glu Asn Asp Val Pro Leu Lys Lys Phe Asn Ile
130 135 140
Phe Leu Asp Asn Ala Arg Ile Ala Met Arg His His Phe Ser Asn Leu
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Ser Thr Pro Gln Gln Glu Tyr Tyr Val Lys Asp Arg Asp Tyr Ile Arg
165 170 175
Lys Ile Val Gln Ser Val Glu Glu Arg Arg Asn Ile Gln Leu Ser Arg
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Met Gln Glu Asp Leu Ala Val Leu Asn Met Glu Glu Phe Leu Gln Lys
195 200 205
Ile Ser Lys Glu
210
<210> 30
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7043 Pcynomolgi UIS3
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ctgtgcgcca gcagaatcct gagcagcacc gagaaggatc tggccccact gaagaatatc 120
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7043 Pcynomolgi UIS3 operably linked to IgE leader sequence
<400> 31
atggactgga cctggattct gttcctggtg gcagcagcaa caagggtgca ctccaatatc 60
tctaagatct tcaccttctt tttcctgctg tgcgccacag agaagctgct gatcctgtgc 120
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Lys Ile Asn Ile Ala Ser Ile Ile Phe Ile Ile Phe Ser Leu Cys Leu
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Val Asn Asp Ala Tyr Gly Lys Asn Lys Tyr Gly Lys Asn Gly Lys Tyr
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Gly Ser Gln Asn Val Ile Lys Lys His Gly Glu Pro Val Ile Asn Val
35 40 45
Gln Asp Leu Ile Ser Asp Met Val Arg Lys Glu Glu Glu Ile Val Lys
50 55 60
Leu Thr Lys Asn Lys Lys Ser Leu Arg Lys Ile Asn Val Ala Leu Ala
65 70 75 80
Thr Ala Leu Ser Val Val Ser Ala Ile Leu Leu Gly Gly Ala Gly Leu
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Val Met Tyr Asn Thr Glu Lys Gly Arg Arg Pro Phe Gln Ile Gly Lys
100 105 110
Ser Lys Lys Gly Gly Ser Ala Met Ala Arg Asp Ser Ser Phe Pro Met
115 120 125
Asn Glu Glu Ser Pro Leu Gly Phe Ser Pro Glu Glu Met Glu Ala Val
130 135 140
Ala Ser Lys Phe Arg Glu Ser Met Leu Lys Asp Gly Val Pro Ala Pro
145 150 155 160
Ser Asn Thr Pro Asn Val Gln Asn Arg Val Arg Arg Ala Lys Arg Glu
165 170 175
Glu Tyr Ser Trp Glu Asn Phe Leu Asn Asp Lys Leu Leu Ala Thr Asn
180 185 190
Gln Val Ser Ala Ala Gly Leu Ala Ser Glu Glu Asp Gly Val Val Tyr
195 200 205
Glu Cys Val Ala Thr Pro Asp Glu Asn Asn Pro Asp Phe Asp Lys Trp
210 215 220
Ser Leu Phe Tyr Lys Glu Asp Tyr Asp Ile Glu Ile Glu Asp Glu Asn
225 230 235 240
Gly Asn Lys Thr Thr Lys Thr Ile Thr Glu Gly Gln Thr Ile Leu Thr
245 250 255
Met Phe Asn Glu Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Ile Trp Leu Gly Gly Thr
260 265 270
Lys Tyr Gln Phe Ile Asn Met Glu Lys Gly Leu Glu Tyr Glu Gly Tyr
275 280 285
Ser Phe Asp Val Ala Thr Cys Ala Lys Leu Lys Gly Gly Met His Ile
290 295 300
Ile Lys Val Gly Gly Gly His Ile Leu Ile Val Leu Tyr Asp Glu Glu
305 310 315 320
Lys Glu Gln Asp Arg Gly Asn Ser Lys Asn Ala Ala Leu Ala Phe Ser
325 330 335
Lys Glu Leu Ala Glu Ser Thr Asp Ala Gly Ala Ala
340 345
<210> 33
<211> 1044
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7021 Py EXP1-EXP2
<400> 33
aagatcaata tcgcctcaat catttttatc atcttcagtc tgtgcctcgt gaacgacgcc 60
tacggcaaga acaagtatgg caagaacggc aaatacggaa gccagaatgt gatcaagaaa 120
cacggagagc ccgtgatcaa cgtccaggac ctgatttcag atatggtgag aaaggaggaa 180
gagatcgtca agctgaccaa aaataagaaa agcctccgga agattaacgt ggccctggct 240
acagcactct ctgtggtcag tgcaatcctg ctcggaggag caggactggt catgtataat 300
accgagaaag ggaggagacc ctttcagatc ggcaagtcaa agaaaggggg tagcgccatg 360
gctcgcgata gctccttccc tatgaacgaa gagtccccac tgggattttc tcccgaagag 420
atggaggcag tggccagtaa gttccgagaa tcaatgctga aagacggcgt ccccgctcct 480
tccaacacac caaatgtgca gaaccgagtc cggcgcgcca agagggaaga gtactcttgg 540
gagaattttc tcaacgataa gctgctcgct actaaccagg tgagcgcagc tggactggca 600
tccgaagagg acggagtggt ctatgagtgc gtcgctaccc ctgatgaaaa caatccagac 660
ttcgataagt ggtctctgtt ttacaaggag gactacgata tcgaaatcga ggacgaaaac 720
gggaataaga ccacaaaaac tatcaccgag ggtcagacaa ttctgactat gttcaatgaa 780
ggatacgcac cagacggtat ctggctcgga ggaacaaagt atcagttcat taacatggag 840
aaaggcctgg agtacgaagg atatagcttt gatgtggcta cttgtgcaaa gctgaaaggg 900
ggtatgcaca tcattaaggt cggcggaggg catatcctga ttgtcctcta cgacgaagag 960
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gaaagtaccg acgctggcgc tgca 1044
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<211> 1098
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7021 Py EXP1-EXP2 operably linked to IgE leader sequence
<400> 34
atggactgga cctggattct gttcctggtg gctgccgcaa ctagagtgca ttcaaagatc 60
aatatcgcct caatcatttt tatcatcttc agtctgtgcc tcgtgaacga cgcctacggc 120
aagaacaagt atggcaagaa cggcaaatac ggaagccaga atgtgatcaa gaaacacgga 180
gagcccgtga tcaacgtcca ggacctgatt tcagatatgg tgagaaagga ggaagagatc 240
gtcaagctga ccaaaaataa gaaaagcctc cggaagatta acgtggccct ggctacagca 300
ctctctgtgg tcagtgcaat cctgctcgga ggagcaggac tggtcatgta taataccgag 360
aaagggagga gaccctttca gatcggcaag tcaaagaaag ggggtagcgc catggctcgc 420
gatagctcct tccctatgaa cgaagagtcc ccactgggat tttctcccga agagatggag 480
gcagtggcca gtaagttccg agaatcaatg ctgaaagacg gcgtccccgc tccttccaac 540
acaccaaatg tgcagaaccg agtccggcgc gccaagaggg aagagtactc ttgggagaat 600
tttctcaacg ataagctgct cgctactaac caggtgagcg cagctggact ggcatccgaa 660
gaggacggag tggtctatga gtgcgtcgct acccctgatg aaaacaatcc agacttcgat 720
aagtggtctc tgttttacaa ggaggactac gatatcgaaa tcgaggacga aaacgggaat 780
aagaccacaa aaactatcac cgagggtcag acaattctga ctatgttcaa tgaaggatac 840
gcaccagacg gtatctggct cggaggaaca aagtatcagt tcattaacat ggagaaaggc 900
ctggagtacg aaggatatag ctttgatgtg gctacttgtg caaagctgaa agggggtatg 960
cacatcatta aggtcggcgg agggcatatc ctgattgtcc tctacgacga agagaaggag 1020
caggatcggg ggaattccaa aaacgcagcc ctggcctttt ctaaggagct cgccgaaagt 1080
accgacgctg gcgctgca 1098
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<211> 268
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7024 Py EXP23
<400> 35
Lys Ile Arg Tyr Phe Leu Ser Leu Phe Leu Phe Tyr Ala Thr Tyr Lys
1 5 10 15
His Thr Thr Asn Ile Val Lys Cys Asp Ala Tyr Ser Asp Leu Ala Ala
20 25 30
Thr Thr Ala Leu Ser Thr Val Ile Arg Asp Pro Leu Ser Met Ser Leu
35 40 45
Lys Asp Leu Tyr Asp His Gly Val Lys Val Pro Ile Thr Asp Ile Ile
50 55 60
Asn Lys Leu Lys Lys Ala Val Arg Tyr Lys Lys Ile Leu Arg Trp Ser
65 70 75 80
Arg Ile Trp Trp Val Leu Leu Val Arg Glu Ile Val Gly Asn Asn Lys
85 90 95
Val Glu Glu Ala Thr Glu Cys Ile Leu Arg Asp Ile Trp Asp Gln Cys
100 105 110
Thr Ile Ser Ile Tyr Asn Asn Thr Leu Tyr Ser Val Glu Ser Lys Pro
115 120 125
Ile Leu Phe Leu His Gly Ile Leu Asn Glu Cys Lys Asn Ser Phe Ser
130 135 140
Thr Lys Leu Arg His Asp Pro Gly Leu Ile Val Ser Lys Ile Asp Gln
145 150 155 160
Ile Leu Lys Ser Gln Ile Tyr Arg Phe Trp Val Ser Glu Pro Tyr Leu
165 170 175
Lys Leu Gly Arg Ser Asn Thr Phe Tyr Ala Asn Ile Thr Gln Lys Asn
180 185 190
Val Pro Leu Leu Pro Lys Glu Cys Thr Leu Lys His Leu Ser Ser Tyr
195 200 205
Met Glu Glu Lys Leu Lys Ser Met Glu Ser Lys Lys Asn Ile Glu Ser
210 215 220
Gly Lys Tyr Glu Phe Asp Val Asp Ser Glu Ser Ala Pro Asn Asp Ala
225 230 235 240
Tyr Thr Glu Tyr Glu Asp Asp Gln Ser Glu Glu Ile Leu Asn Asp Gln
245 250 255
Leu Phe Glu Asp Gln Glu Thr Asp Ala Asn Gly Ala
260 265
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7024 Py EXP23
<400> 36
aagattagat actttctgag cctgtttctg ttctacgcca cttataagca caccacaaat 60
atcgtgaaat gcgacgccta cagcgatctg gccgctacta ccgctctctc cacagtcatt 120
cgggaccctc tgtctatgag tctgaaggac ctctacgatc atggggtgaa agtcccaatc 180
actgacatca ttaacaagct gaagaaagca gtgcgatata agaaaatcct gaggtggagc 240
agaatttggt gggtgctgct cgtcagggag atcgtgggta acaataaggt cgaggaagcc 300
accgaatgca tcctgagaga catttgggat cagtgtacca tcagcatcta caacaataca 360
ctgtatagtg tggagtcaaa gcccatcctg ttcctccacg gcattctgaa cgaatgcaag 420
aatagcttca gcacaaaact gaggcatgac cctggactca tcgtgtctaa gatcgatcag 480
attctgaaaa gtcagatcta ccggttctgg gtctcagagc catatctgaa gctcggccgc 540
tccaacacat tttacgctaa tatcactcag aaaaacgtgc ccctgctccc taaggagtgt 600
acactgaaac acctcagctc ctacatggag gaaaagctga aaagcatgga gtccaagaaa 660
aatatcgagt ctggcaagta tgaattcgac gtcgattccg aatctgctcc caacgacgca 720
tacactgagt atgaagacga tcagagtgag gaaattctga atgatcagct ctttgaggac 780
caggaaaccg atgcaaacgg agcc 804
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> pGX7024 Py EXP23 operably linked to IgE leader sequence
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atggactgga cctggattct gttcctcgtc gccgccgcca caagagtgca tagcaagatt 60
agatactttc tgagcctgtt tctgttctac gccacttata agcacaccac aaatatcgtg 120
aaatgcgacg cctacagcga tctggccgct actaccgctc tctccacagt cattcgggac 180
cctctgtcta tgagtctgaa ggacctctac gatcatgggg tgaaagtccc aatcactgac 240
atcattaaca agctgaagaa agcagtgcga tataagaaaa tcctgaggtg gagcagaatt 300
tggtgggtgc tgctcgtcag ggagatcgtg ggtaacaata aggtcgagga agccaccgaa 360
tgcatcctga gagacatttg ggatcagtgt accatcagca tctacaacaa tacactgtat 420
agtgtggagt caaagcccat cctgttcctc cacggcattc tgaacgaatg caagaatagc 480
ttcagcacaa aactgaggca tgaccctgga ctcatcgtgt ctaagatcga tcagattctg 540
aaaagtcaga tctaccggtt ctgggtctca gagccatatc tgaagctcgg ccgctccaac 600
acattttacg ctaatatcac tcagaaaaac gtgcccctgc tccctaagga gtgtacactg 660
aaacacctca gctcctacat ggaggaaaag ctgaaaagca tggagtccaa gaaaaatatc 720
gagtctggca agtatgaatt cgacgtcgat tccgaatctg ctcccaacga cgcatacact 780
gagtatgaag acgatcagag tgaggaaatt ctgaatgatc agctctttga ggaccaggaa 840
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Lys Ser Ile Thr Phe Phe Val Phe Asn Ile Cys Ser Ile Leu Ala Leu
1 5 10 15
Leu Ser His Cys Glu Asp Arg Asp Leu Tyr Ser Phe Asp Ile Val Asn
20 25 30
Glu Thr Ser Trp Leu Lys Ile Ala Lys Lys Ile Phe Lys Gly Lys Ser
35 40 45
Pro Ser Asn Phe Thr Ile Ile Pro Phe Asn Asn Thr Gly Ser Ser Asp
50 55 60
Asn Asn Glu Gly Asp Lys Glu Glu Ser Val Leu Leu Ile Arg Lys Lys
65 70 75 80
Ile Lys Ser Asn Thr Lys His Gly Ser Asn Ile Ile Ser Asp Asp Ser
85 90 95
Val Asn Asp Asp Ile Ser Asn Leu Ser Leu Asn Ser Thr Ala Ser Asn
100 105 110
Phe Ser Asp Asn Asn Glu Glu Ile Glu Asp Asn Gln Lys Tyr Pro Thr
115 120 125
Thr Ser Tyr Asn Ser Phe Asn Asp Pro Asn Ser Asn Ile Ser Phe Asn
130 135 140
Glu Glu Ser Glu Phe Ser Glu Ile Asp Ser Glu Ser Asn Leu Glu Asn
145 150 155 160
Asn Ile Lys Asp Ile Asn Ile Lys Asn Asn Leu Glu Glu Asn Asn Thr
165 170 175
Met Asn Glu Ile Asp Asn Lys Val Asp Ser Lys Tyr Glu Leu Thr Gly
180 185 190
Asp Glu Lys Cys Gly Asn Ser Leu Lys Leu Gly Asn Ile Ser Asn Gln
195 200 205
Thr Ser Gln Glu Thr Ile Asn Gln Ser Leu Ser Val Gly Glu Thr Phe
210 215 220
Cys Ile Asp Phe Glu Ala Asn Ala Gly Thr Gly Tyr Ile Trp Ala Leu
225 230 235 240
Leu Gly Val His Lys Asn Glu Pro Ile Ile Asn Pro Glu Asn Phe Pro
245 250 255
Thr Lys Leu Thr Lys Lys Pro Tyr Phe Ser Glu Glu Ile Ser Val Thr
260 265 270
Gln Pro Lys Arg Tyr Lys Ile Asp Glu His Asp Ser Ser Lys Asn Val
275 280 285
Asp Lys Glu Asn Glu Ser Gln Asp Gln Lys Glu Ser Asp Ser Lys Pro
290 295 300
Lys Lys Pro Gln Met His Leu Leu Gly Gly Pro Asp Asn Met Arg Ser
305 310 315 320
Val Ile Lys Gly His Lys Ala Gly Lys Tyr Tyr Ile Val Tyr Ser Tyr
325 330 335
Tyr Arg Pro Phe Ser Pro Thr Ser Gly Ala Asn Thr Lys Ile Leu Tyr
340 345 350
Val Thr Val Gln Pro
355
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<211> 1071
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> pGX7027 Py ICP
<400> 39
aaaagcatta ccttcttcgt cttcaacatc tgttccatcc tggctctgct ctctcactgc 60
gaggaccggg atctctacag cttcgacatt gtgaacgaaa ccagctggct gaagatcgca 120
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atcaagagta acactaagca tggatctaat atcatttctg acgatagtgt caacgacgat 300
atctcaaacc tgagcctcaa ttccaccgcc tctaacttca gtgacaacaa tgaggaaatc 360
gaggataatc agaagtaccc aaccacatca tataacagct ttaatgaccc caactccaat 420
atctctttca acgaagagag tgagttttca gaaatcgact ccgagtctaa cctggaaaac 480
aacatcaagg atatcaacat taagaacaac ctggaggaaa acaataccat gaacgagatc 540
gacaacaagg tggattccaa gtacgagctg acaggggacg aaaaatgcgg taactctctg 600
aagctcggga acatctctaa tcagacaagt caggagacta ttaatcagag tctgtcagtg 660
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ctcggggtcc acaagaatga gcccatcatt aaccctgaaa atttcccaac taagctgacc 780
aagaaacctt acttttcaga ggaaatcagc gtgacacagc caaagaggta caagatcgac 840
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agcccaacct ccggagccaa cacaaagatc ctgtacgtga ctgtccagcc c 1071
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<211> 1125
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> pGX7027 Py ICP operably linked to IgE leader sequence
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atggactgga cttggattct cttcctcgtc gctgccgcaa ctcgcgtgca tagcaaaagc 60
attaccttct tcgtcttcaa catctgttcc atcctggctc tgctctctca ctgcgaggac 120
cgggatctct acagcttcga cattgtgaac gaaaccagct ggctgaagat cgcaaagaaa 180
atttttaagg gcaaatcacc cagcaacttc actatcattc cttttaacaa taccggcagc 240
tccgacaaca atgagggaga taaggaggaa agcgtgctgc tcatcaggaa gaagatcaag 300
agtaacacta agcatggatc taatatcatt tctgacgata gtgtcaacga cgatatctca 360
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ttcaacgaag agagtgagtt ttcagaaatc gactccgagt ctaacctgga aaacaacatc 540
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gtccacaaga atgagcccat cattaaccct gaaaatttcc caactaagct gaccaagaaa 840
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acctccggag ccaacacaaa gatcctgtac gtgactgtcc agccc 1125
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<223> pGX7025 Py TMP21
<400> 41
Ala Lys Ile Ser Lys Leu Leu Thr Phe Phe Ile Ala Phe Ile Phe Gln
1 5 10 15
Ala Ser Ile Ile Asn Ser Leu Gln Ile Tyr Leu Ser Leu Lys Pro Asn
20 25 30
Leu Pro Lys Cys Ile Lys Glu Arg Ile Ser Lys Asp Thr Leu Val Val
35 40 45
Gly Lys Phe Lys Thr His Glu Lys Glu Ser Val Val Ser Ile Phe Ile
50 55 60
Tyr Asp Ile Asp Val Asn Glu Lys Lys Ile Asn Ser Leu Asp Lys Leu
65 70 75 80
Pro Ile Phe Glu Ala Ile Asp Glu His Asp Ile Lys Thr Ala Phe Thr
85 90 95
Thr Phe Tyr Ser Gly Ser Tyr Ser Phe Cys Ala Tyr Asn Lys Ser Asn
100 105 110
Lys Val Val Asp Ile Tyr Phe Glu Ile Lys His Gly Val Glu Ala Arg
115 120 125
Asp Tyr Thr Lys Ile Ala Lys Ala Asp His Leu Asn Glu Ala Thr Ile
130 135 140
Phe Leu Lys Gln Ile Leu Asn Ser Met Lys Thr Phe Gln Ser Asn Leu
145 150 155 160
Lys Arg Ile Lys Ile Ser Glu Glu Lys Glu Lys Lys Ser Ser Glu Lys
165 170 175
Leu Asn Asp Thr Leu Met Trp Phe Ser Ile Leu Thr Ile Ile Ile Ile
180 185 190
Ile Ile Ala Ala Leu Thr Gln Asp Phe Tyr Tyr Lys Arg Phe Phe Thr
195 200 205
Ser Lys Lys Ile Ile
210
<210> 42
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> pGX7025 Py TMP21
<400> 42
gccaaaatta gcaagctcct gacattcttt attgctttca tctttcaggc atctatcatt 60
aacagtctgc agatctacct gtccctcaag cccaatctcc ctaagtgcat caaagagcgg 120
atttctaaag acactctggt ggtcgggaag ttcaaaaccc acgagaagga aagcgtggtc 180
tccatcttca tctacgacat cgatgtgaac gaaaagaaaa ttaatagcct ggataagctc 240
cccatcttcg aggccattga cgaacatgat atcaagaccg ctttcaccac attttactct 300
ggcagttatt cattctgtgc ttacaacaag tccaacaagg tggtcgacat ctattttgag 360
attaagcacg gagtcgaagc aagggactac actaagatcg caaaagccga tcatctgaac 420
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aagagaatca aaattagtga ggaaaaggag aagaaaagct ccgaaaaact gaatgacaca 540
ctcatgtggt tctctatcct gactatcatc atcatcatca tcgccgctct cacccaggat 600
ttctactaca agaggttctt tacaagcaag aaaatcatc 639
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<211> 693
<212> DNA
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<223> pGX7025 Py TMP21 operably linked to IgE leader sequence
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atggactgga cctggattct gttcctcgtc gcagcagcaa ctagagtgca ttccgccaaa 60
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Asn Thr Leu Lys Val Phe Phe Val Phe Tyr Val Leu Tyr Ile Thr Thr
1 5 10 15
Phe Phe Phe Asn Pro Cys Phe Cys Glu Asp Ala Asp Tyr Tyr Ser Glu
20 25 30
Ile Asp Asp Gly Ala Leu Asp Ser Ile Asp Thr Ala Ile Lys Lys Lys
35 40 45
Lys Lys Arg Lys Ser Val Ala Ile Ala Leu Leu Ser Ser Gly Leu Val
50 55 60
Ala Ser Val Ile Gly Val Leu Tyr Tyr Met Tyr Lys Ser His Asn Lys
65 70 75 80
Gly Arg His Asp Trp Asn Lys Gly Phe Asn Phe Phe Pro Phe Asn Lys
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Gln Thr Glu Tyr Lys Gln Pro Asp Gly Glu Lys Pro Ser Thr Ser Thr
100 105 110
Lys Tyr Glu Glu Pro Leu Gly Val Asn Lys Val Asn Ile Lys Gly Lys
115 120 125
Leu Lys Glu Asn Asn Asn Asp Ile Asp Val Pro Leu Lys Arg Phe Asn
130 135 140
Thr Phe Met Asp Asn Val Lys Leu Ala Ala Lys His His Phe Ser Asn
145 150 155 160
Leu Ser Asn Glu Gln Gln Lys Tyr Leu Ile Lys Asp Tyr Asp Tyr Leu
165 170 175
Arg Lys Ile Val Gln Thr Leu Asp Glu Asn Lys Asp Val Asn Ile Ser
180 185 190
Arg Ala Gln Glu Asp Ile Ala Val Leu Gly Val Glu His Phe Leu Lys
195 200 205
Glu Gln Tyr Gln Pro Lys
210
<210> 45
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<400> 45
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atcgataccg ctattaagaa aaagaaaaag cggaagagcg tggcaatcgc cctgctcagc 180
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aataaggtga acatcaaagg aaagctgaaa gagaacaata acgacattga tgtccccctc 420
aagaggttta atacattcat ggacaacgtg aagctcgccg ctaaacacca tttctcaaat 480
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Py UIS3 operably linked to IgE leader sequence
<400> 46
atggactgga cttggattct gtttctggtc gccgcagcaa ctagagtgca tagcaatacc 60
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accgctatta agaaaaagaa aaagcggaag agcgtggcaa tcgccctgct cagctccgga 240
ctcgtggcta gtgtcattgg agtgctgtac tatatgtata agtcccacaa caaggggcgc 300
catgactgga ataagggttt taactttttc ccattcaaca agcagacaga gtacaaacag 360
cccgatggtg aaaagccttc tactagtacc aaatatgagg aaccactcgg cgtcaataag 420
gtgaacatca aaggaaagct gaaagagaac aataacgaca ttgatgtccc cctcaagagg 480
tttaatacat tcatggacaa cgtgaagctc gccgctaaac accatttctc aaatctgagc 540
aacgaacagc agaagtacct gatcaaagac tacgattatc tcaggaagat tgtccagact 600
ctggacgaga acaaggatgt gaacatctct agagctcagg aagatattgc agtcctgggg 660
gtggaacact ttctcaagga acagtaccag cctaaa 696
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7022 Py UIS10 PL
<400> 47
Gln Val Phe Leu Phe Ile Ile Ile Leu Tyr Asn Cys Ile Cys Leu Thr
1 5 10 15
Leu Ile Tyr Ser Phe Asn Pro Ser Ile Gly Ser Ile Ile Asn Val Leu
20 25 30
Ile Lys Thr Pro Tyr Lys Leu Ser Phe Gly Glu Ser Asn Lys Asn Ser
35 40 45
Glu Ile Ala Asn Leu Glu Gly Thr Gly Asn Phe Leu Asn Glu Thr Asn
50 55 60
Thr Glu Glu Thr Glu Gln Thr Val Glu Phe Glu Ser Lys Glu Ser Lys
65 70 75 80
Asn Asp Asp Gln Asn Val Leu Asn Ile Glu Ser Thr Pro Glu Ala Val
85 90 95
Val Glu Tyr Glu Val Ala Asp Thr Lys Glu Ala Ile Val Glu Glu Ala
100 105 110
Ser Ile Asp Lys Glu Thr Val Ile Glu Glu Thr Ala Asp Lys Asp Asp
115 120 125
Pro Ser Val Glu Ile Lys Arg Val Lys Glu Val Thr Ala Glu Glu Ile
130 135 140
Glu Lys Val Lys Glu Ser Ala Glu Lys Glu Ile Lys Lys Ile Lys Glu
145 150 155 160
Thr Ala Ala Glu Glu Val Glu Lys Ile Lys Glu Thr Val Ala Glu Glu
165 170 175
Ile Glu Ile Ala Lys Glu Ile Ile Ala Gly Ala Val Leu Glu Gln Lys
180 185 190
Gln Lys Glu Lys Glu Tyr Val Ser Glu His Thr Glu Glu Asn Glu Glu
195 200 205
Lys Lys Ile Glu Ser Glu Tyr Thr Glu Glu Asn Glu Glu Lys Glu Ile
210 215 220
Glu Ser Lys Tyr Thr Glu Glu Asn Glu Glu Lys Lys Asn Glu Ser Glu
225 230 235 240
Tyr Thr Glu Glu Asn Glu Glu Asp Thr Val Lys Glu Ile Glu Val Ser
245 250 255
Lys Asn Val Asn Ile Glu Asn Glu Thr Ile Met Glu Glu Ile Asp Asn
260 265 270
Ser Asp Val Glu Lys Leu Ser Glu Thr Glu Lys Glu Leu Lys Thr Asn
275 280 285
Glu Met Ile Gln Glu Lys Tyr Gly Glu Phe Lys Arg Ala Glu Asp Ser
290 295 300
Tyr Tyr Trp Glu Ser Lys Ser Thr Asp Val Glu Asp Gly Val Asp Asp
305 310 315 320
Asp Val Asp Asp Asp Glu Ile Val Gly Leu Pro Lys Lys Ser Asn Asn
325 330 335
Thr Ile Ile Asp Asn Thr Pro Lys Ser Ser Val Tyr Leu Val Pro Gly
340 345 350
Leu Gly Gly Ser Thr Leu Ile Ala Glu Tyr Asn His Ala Gln Ile Asp
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Ser Leu Ser Arg Leu Phe Ser Ile Arg Ser Asn Val Tyr Cys Leu Phe
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Ser Ile Lys Ala Ile Arg Ala Leu Leu Tyr Ser Ser Lys Asp Tyr Thr
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Leu Phe Lys Leu Arg Asn Ile Leu Lys Val Ser Ile Ser Gly Ser Leu
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Met Lys Ala Ile Ser His Asn Met Gly Ser Pro Phe Asp Leu Ile Pro
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gacgataaaa acaccgaaat caaggacgag gaacagaatg agcatattga caagacagat 1200
cagaaaaagg ataagaaggg aactttttct atcaaaaagc aggaggaaga gattaacgaa 1260
aacaagaaca ggaccgagaa gttctttaag aagtacaagt tcaatgacgc tgataacgaa 1320
ggcggagacg atgaatccga gaccgacgat gagaatctgg acaacagcac acagaactcc 1380
cacgcagaaa acaagaaccc cgagtcagtc atcgacaagc atatgagcgt gtttcctggc 1440
ctgtacttcg tcgggattgg ttatgatatc ctgtttggga acccactcgg tgaaacagac 1500
tctctgagtg atcccggata cagagcacag atctatctgc tcaattggga gttctccaac 1560
cacgggattg ccaatgatct ccatactctg cagcccatta acgcatggat cagaaaggaa 1620
aatgcctgct ctcgggtgga aagtatcaac gagtgttcta gtgtctccga gtacacaaag 1680
aatctgtctg tggacgtctc agtgagcggc agctacatgg gctttggatc tttcagtgcc 1740
tcaactgggt acaagaagtt tattaacgag atctcaaagc ggaccagcaa gacatacttc 1800
atcaaaagca actgtattaa gtacactatc ggcctgcccc cttatgtgcc ttgggaacag 1860
actaccgcat atatgaacgc cgtcgacatc ctgccacgcg agttcactgg actcgacgaa 1920
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ggaagcacct ccgtgtcaag cgataattcc tctaagaacg acaacagttc atacgatatg 2220
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ctgtacgagt ggagcaagac agtcagctcc aaccctatgc caatccacat caagctgctc 2340
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gctgagtgcc cccataatca ggtggtcctg tttggctacg tgctcaaaca gaatttctgg 2580
gacaacacat cacgcctgaa ggggtatgat atcgaaattt gcgagtccgg tctcaactct 2640
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<213> Artificial Sequence
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<223> pGX7026 Py RON2
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Leu Lys Ala Thr Ile Gly Ile Ile Leu Phe Ile Cys Val Asn Ile Asp
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Ile Ile Arg Thr Thr Ser Arg Asp Asn Val Val Asn Thr Lys Phe Val
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Phe Tyr Met Pro Glu His Lys Asp Glu Ile His Arg Ala Asn Asn Lys
50 55 60
Ser Ala Asn Ile Asn Leu Lys Asn Asn Pro Pro Arg Asn Ile Asn Ile
65 70 75 80
Gly Tyr Asn Thr Ala Pro Gly Val Asn His Gly Phe Gly Gln Phe Ser
85 90 95
Gly Lys Ser Ser Asn Met Asn Asn Gly Ile Asn Thr Tyr Lys Asn Gln
100 105 110
Pro Lys His Phe Gln Ser Met Asn Tyr Gln Lys Asn Gly Pro Phe Gly
115 120 125
Asn Lys Leu Glu Gln Met Asn Ile Pro Ala Asn Leu Tyr Asn Asn Lys
130 135 140
Asn Asn Ser Tyr Tyr Ser Gly Ser Asn Asn Gly Asn Asn Asn Ser Tyr
145 150 155 160
Gly Leu His Gly Asn Ile Tyr Asp Lys Ile Asn Ser Ser Val Tyr Asn
165 170 175
Asn Ser Lys Tyr Asn Asn Ser Asn Phe Asn Thr Asp Lys Asn Asn Asn
180 185 190
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210 215 220
Leu Ile Ser His Phe Asn Asn Pro Asn Gln Lys Leu Glu Phe Leu His
225 230 235 240
Gly Phe Asp Gly Leu Phe Asn Gln Asn Ile Pro Gly Met Asn His Lys
245 250 255
Gly Asn Tyr Gly Phe Asn Gly Val Asn Ile Lys Gly Gln Gly Lys Asn
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Glu Lys Phe Asp Asn Tyr Gly Gln Asn Leu Gly Leu Asn Lys Thr Asn
275 280 285
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Leu Ala Lys Met Val Phe Gly Glu Met Gln Leu Pro His Leu Ser His
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Gln Lys Glu Arg Gln Gln Gly Arg Leu Lys Glu Ile Leu Gly Ala Met
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tttatgtaca acgagatgtg caacgtgtac tatcggccaa acaagtcctt caaaaaggac 3600
ctgactttta tcccaattga gctcagaccc ggtcggtata ctacctacgt gggcgaacgc 3660
aagatcattt gtaacaccct ggagctgatc ctcaatgcta tctctctgat caacatcaac 3720
gaaatctaca acgtgttcca caagaacaat gtctacggct atgagaatag cgtgagcttc 3780
agcaacaatg ccatccgcgt gttcagccag gtctgcccac gaaacatgga aaagaatatc 3840
attaactgtt cattcgagaa aagcaccctg tataaggcaa acgcccccga agatacaaac 3900
cagaatgagt accagagaca gaatcagatt aagaaccaga atgagctgaa aaaggccttc 3960
gacctcctga acacattttc cgaaatcgag tccttctcta acaacaacta ccagaactct 4020
tactacatca agctgattat ggagcagaat ctctataccg acttttacaa atatctcttc 4080
tggtacgata accgagaact gatcaagaca cacgagatta atggaaaaaa gaacactaaa 4140
aagaccagca actacatcta tgaccagtat attaagacca atagactcct ggagaaaaag 4200
tttaatgtgc tgtcaaagca taacctcaaa agcaagggcc tcctggcttt tcactccctg 4260
attgaccggt actctgagtt cgtgaaaaac aagaagatcc gcaacctgta tctcaagttc 4320
gtctcctacg cacgacactt cctgtttatg aataacacaa tgaagtccct gaacaaatct 4380
gatctcgact ttatgaagat gatcttcgaa gagctgcaga acgagactaa ggtgcctctg 4440
aaactcattg tcaggggcaa ttatatgaag tctatgaacg acatcgctaa aaaggagaat 4500
ctgttcttta tcaacctctt tattctgagt ctcttctcaa acaagaaccc cgtgaagaac 4560
ttctacaacg gcaaaagaga aatgctgaag gccagtctct cagagaaatt tgctactagc 4620
acctccgcat tcatccctca taagctgagg agaattgtgg tcggtatgaa aaagggcttc 4680
ctcaaaagga agctcctgaa gaccctgatg aaaaacagac tcctgcagca catcccaatt 4740
gacctcctgg aaaacatcat gacaactttc aggtttacca cacatgctat cgcaactagt 4800
gagctggcac agaacgccca cagaacctca aagtacctca atagtaataa cacctcaaaa 4860
ctggagtttg caaagacaat cttctccaaa ggcggatttc cccagtatgc cgataagctg 4920
atggaaaaat ggttttctaa gggcttcgaa gagtacaaaa aggagaagat cgacaaccag 4980
aatatggaaa acgaggtgga caaggaactg gatcagatca aagagatgtt cattcctggg 5040
agtaacggca agcacaactc aaatacacca ccccatctca tcgagaacat taatactgat 5100
gtgaataaca gcctggataa tcaggacaag tatgataaca ccctcggaaa gcagagggtc 5160
gacaaactga tctacaacga gcacgacaag tgggatcatt atatcaacaa ggaatacgtg 5220
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cacaaactca tccggcatga agacgagagc tggctgatta acgaagcttt catcgagatt 5580
gtcgatcaca tcattgcaat cagtacaccc tcctctatta gttcacgcgc cggttatctg 5640
agcaaccctg gcatgttcca catcaatcca ttttaccatc gactgagcaa cgaagagagg 5700
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tccacatttg ccctgcacca tctcaagaac ccagactctc tgcagactta cgaggataaa 5820
ttcagcaaga attccctggg caacaaaatg accgataagg actttgtgaa taacttcaag 5880
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aaaaaggagc tcaaaagcat gaagtacgga gtgtctctga gcttcagctt cagcctgaag 6000
ctcgctaaga tggtctttgg ggagatgcag ctgccacacc tctcccatat gttctatgcc 6060
caggctccct acttcggaca ttttattggg aaatggcaga aggaaaggca gcagggcaga 6120
ctgaaggaga tcctcggagc catgacactg gggactctca gcacatatac tgtgctgtcc 6180
gctatggaca tcacccagca cgcaacagat attgggatgg gtccctccac ttcttgctac 6240
acctccctcc tgcctccacc caagtctatc tgtattcagc agaccgtgaa aacagtcctg 6300
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acaccttaca tgtttgcccc aatggctggc ctggcagtgt ggtctgtcct caaaagtcag 6420
ttcaaggtgg tcaaccggat tgacatggcc ctgaaaggag ctctcaagaa tatgtggaac 6480
aagtttatga gcctgaaagg catcaggcgc ctcaagaacg tgttcaaaaa gatcaaaacc 6540
atcaagaaga agatgattca gaaaactgaa aagaacctgg ccgagatcca gcagaatcct 6600
gaagctgagc agaaccacaa ggccgctgtg aatgagatcc ataataacac ccgcggcaac 6660
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<211> 6747
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7026 Py RON2 operably linked to IgE leader sequence
<400> 55
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gcaactattg gtattattct gttcatctgc gtgaacatcg acatcattcg caccacatcc 120
cgagataacg tggtcaatac taaatttgtg aggcagaagt ctcctaccta tgacccaaac 180
aagaaaggcg atgtcatctt ctacatgcct gaacacaagg acgagattca tcgggcaaac 240
aataagagcg ccaatatcaa cctgaaaaac aatccccctc gcaatatcaa cattggttac 300
aataccgctc ctggcgtgaa ccatggcttc ggacagttta gcggaaagag ctccaacatg 360
aacaacggga tcaatacata caagaaccag ccaaagcact ttcagtccat gaattaccag 420
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aataagaaca actcttacta ctctggcagt aacaatggaa acaataacag ttatgggctg 540
cacggtaata tctacgacaa gattaactct agtgtgtaca acaactcaaa gtacaacaac 600
agcaatttca acaccgataa gaataacaat gataacgaga acaacaagac atacaagtcc 660
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gggcacctga tctctcattt caacaatcct aaccagaagc tggagttcct ccatggtttt 780
gacggcctgt tcaatcagaa cattccaggc atgaatcaca aaggaaacta tgggtttaac 840
ggtgtgaata tcaaggggca gggtaaaaac gaaaagttcg ataattatgg gcagaacctc 900
ggtctgaaca agaccaatga gtaccagcag atgattaacg gcaacaatat gggaagtgac 960
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gagtatcaga ggctggtcaa tggcaacaat atgggaagcg accacatcta cgaatccccc 1080
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aatatgggtt ccgataatgc aggcgagtct cctaagctgg tcaacggtaa caacatggga 1260
agtgacaatg ccggagaatc acagcggctg gtgaacggca acaacatggg tagcgataat 1320
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35 40 45
Ser Leu Ser Ser Phe Ile Ser Glu Ser Ala Ser Leu Asp Asp Ile Gly
50 55 60
Asn Gly Leu Ala Glu Thr Ile Thr Asn Glu Ile Phe Ser Ala Phe Gln
65 70 75 80
Gln Asp Ser Ser Ser Phe Leu Gln Thr Gln Phe Asp Ile Lys Lys His
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Ile Lys Glu Asn Ala Lys Lys Val Leu Ile Glu Ala Ile Arg Leu Gly
100 105 110
Leu Glu Pro Val Glu Lys Ile Val Ala Lys Ser Ile Gln Pro Pro Lys
115 120 125
Val Asn Arg His Thr Tyr Ser Leu Val Ser Pro Ile Val Lys Ala Leu
130 135 140
Phe Asn Lys Ile Glu Asp Ala Val His Lys Pro Val Asn Asp Asn Ile
145 150 155 160
Trp Glu Tyr Glu Gly Gly Asp Glu Glu Tyr Asp Glu Asn Glu Glu Glu
165 170 175
Asn Phe Asp Asn Asp Phe Phe Asn Arg Val Arg Arg Ala Lys Arg Lys
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Glu Glu Val Cys Thr Glu Gln Ile Asp Ile His Ile Leu Leu Asp Gly
225 230 235 240
Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ser Asn Trp Lys Ala His Val Ile Pro Met
245 250 255
Leu Asn Thr Leu Val Asp Asn Leu Asn Ile Ser Asn Asp Glu Ile Asn
260 265 270
Val Ser Leu Thr Leu Phe Ser Thr Asn Ser Arg Glu Leu Ile Lys Leu
275 280 285
Lys Gly Tyr Gly Ser Thr Ser Lys Asp Ser Leu Arg Phe Ile Leu Ala
290 295 300
His Leu Gln Asn Asn Tyr Ser Pro Asn Gly Asn Thr Asn Leu Thr Ser
305 310 315 320
Ala Leu Leu Val Val Asp Thr Leu Ile Asn Glu Arg Met Tyr Arg Pro
325 330 335
Asp Ala Ile Gln Leu Ala Ile Ile Leu Thr Asp Gly Ile Pro Asn Asp
340 345 350
Leu Pro Arg Ser Thr Ala Val Val His Gln Leu Lys Arg Lys His Val
355 360 365
Asn Val Ala Ile Ile Gly Val Gly Ala Gly Val Asn Asn Glu Tyr Asn
370 375 380
Arg Ile Leu Val Gly Cys Asp Arg Tyr Ala Pro Cys Pro Tyr Tyr Ser
385 390 395 400
Ser Gly Ser Trp Asn Glu Ala Gln Asn Met Ile Lys Pro Phe Leu Thr
405 410 415
Lys Val Cys Gln Glu Val Glu Arg Ile Ala His Cys Gly Lys Trp Glu
420 425 430
Glu Trp Ser Glu Cys Ser Thr Thr Cys Asp Glu Gly Arg Lys Ile Arg
435 440 445
Arg Arg Gln Ile Leu His Pro Gly Cys Val Ser Glu Met Thr Thr Pro
450 455 460
Cys Lys Val Arg Asp Cys Pro Gln Ile Pro Ile Pro Pro Val Ile Pro
465 470 475 480
Asn Lys Ile Pro Glu Lys Pro Ser Asn Pro Glu Glu Pro Val Asn Pro
485 490 495
Asn Asp Pro Asn Asp Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn
500 505 510
Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn
515 520 525
Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro
530 535 540
Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn
545 550 555 560
Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asn Pro Asn Asp Pro Ser Asn
565 570 575
Pro Asn Asn Pro Asn Pro Lys Lys Arg Asn Pro Lys Arg Arg Asn Pro
580 585 590
Asn Lys Pro Lys Pro Asn Lys Pro Asn Pro Asn Lys Pro Asn Pro Asn
595 600 605
Glu Pro Ser Asn Pro Asn Lys Pro Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro
610 615 620
Asn Lys Pro Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn Lys Pro Asn Pro
625 630 635 640
Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn Lys Pro Asn Pro Asn Glu Pro Leu Asn
645 650 655
Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn Ala Pro
660 665 670
Ser Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn
675 680 685
Glu Pro Ser Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn
690 695 700
Pro Lys Lys Pro Ser Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn Glu Pro
705 710 715 720
Leu Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Asn
725 730 735
Glu Pro Ser Asn Pro Glu Glu Pro Ser Asn Pro Lys Glu Pro Ser Asn
740 745 750
Pro Asn Glu Pro Ser Asn Pro Glu Glu Pro Asn Pro Glu Glu Pro Ser
755 760 765
Asn Pro Lys Glu Pro Ser Asn Pro Glu Glu Pro Ile Asn Pro Glu Glu
770 775 780
Leu Asn Pro Lys Glu Pro Ser Asn Pro Glu Glu Ser Asn Pro Lys Glu
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Pro Ile Asn Pro Glu Glu Ser Asn Pro Lys Glu Pro Ile Asn Pro Glu
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820 825 830
Asn Asp Ser Asn Val Ile Pro Ile Leu Pro Ile Ile Pro Gln Lys Gly
835 840 845
Asn Asn Ile Pro Ser Asn Leu Pro Glu Asn Pro Ser Asp Ser Glu Val
850 855 860
Glu Tyr Pro Arg Pro Asn Asp Asn Gly Glu Asn Ser Asn Asn Thr Met
865 870 875 880
Lys Ser Lys Lys Asn Ile Pro Asn Glu Pro Ile Pro Ser Pro Gly Asp
885 890 895
Asn Pro Tyr Lys Gly His Glu Glu Arg Ile Pro Lys Pro His Arg Ser
900 905 910
Asn Asp Asp Tyr Val Tyr Asp Asn Asn Val Asn Lys Asn Asn Lys Asp
915 920 925
Glu Pro Glu Ile Pro Asn Asn Glu Tyr Glu Glu Asp Lys Asn Lys Asn
930 935 940
Gln Ser Lys Ser Asn Asn Gly Tyr Lys Ile Ala Gly Gly Ile Ile Gly
945 950 955 960
Gly Leu Ala Ile Leu Gly Cys Ala Gly Val Gly Tyr Asn Phe Ile Ala
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Gly Ser Ser Ala Ala Gly Leu Ala Gly Ala Glu Pro Ala Pro Phe Glu
980 985 990
Asp Val Ile Pro Asp Asp Asp Lys Asp Ile Val Glu Asn Glu Gln Phe
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Lys Leu Pro Glu Asp Asn Asp Trp Asn
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tgggaatacg aggggggcga cgaggaatat gacgagaacg aggaagagaa tttcgataac 540
gacttcttta accgagtgag gagagcaaag aggaaactgc tcggtaacag caagtatatt 600
ttcgtggtcc tgctcctgtg catctccgtg tttctcaacg ggcaggaaac cctggatgag 660
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cccaataatc caaataatcc caacaacccc aataacccta ataaccccaa taaccctaac 1680
aacccaaata atcccaataa tcccaacaat cctaatgacc caagcaatcc aaacaatccc 1740
aatcctaaga aaagaaaccc aaagagaaga aatcccaaca agccaaaacc caacaagcca 1800
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Asn Asp Asn Ala Ile His Leu Tyr Ala Ser Val Phe Ser Asn Asn Ala
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ggacacaata tgccaaacga ccccaatagg aacgtcgatg agaatgccaa cgctaatagt 900
gccgtgaaga acaataacaa tgaggaaccc tctgataagc atatcaaaga gtacctgaac 960
aagattcaga actcactgag caccgaatgg tccccctgct ctgtcacatg tggcaacggc 1020
atccaggtgc ggatcaagcc tggctccgcc aacaagccaa aagacgaact ggattatgcc 1080
aacgacatcg agaagaaaat ttgcaagatg gaaaagtgta gttcagtgtt taatgtggtc 1140
aacagctcca tcgggctgat tatggtcctg tccttcctgt tcctgaat 1188
<210> 64
<211> 1242
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7010 Pf CSP 3D7 operably linked to IgE leader sequence
<400> 64
atggactgga cctggattct gttcctggtc gccgccgcaa ctagagtgca ttcaatgaga 60
aaactggcaa tcctgagcgt gtcatcattc ctgtttgtcg aggccctgtt ccaggaatac 120
cagtgctatg gcagctcctc taacacccgg gtgctgaacg agctgaatta cgataacgcc 180
gggaccaatc tgtataacga gctggaaatg aattactatg gaaagcagga gaactggtac 240
agcctgaaga aaaattctcg gagtctggga gaaaacgacg atggcaacaa tgaggacaac 300
gaaaagctga gaaagcccaa acacaagaaa ctgaaacagc ctgctgacgg caaccccgat 360
cctaacgcca atcctaacgt ggacccaaat gctaacccca atgtcgatcc taatgctaat 420
ccaaacgtgg accccaatgc aaaccctaat gccaatccta atgctaatcc taacgccaac 480
cctaatgcca atcccaatgc taatcctaac gctaacccta atgccaatcc aaacgctaat 540
cctaacgcaa atcctaatgc caatccaaat gccaatccta acgcaaaccc aaatgccaat 600
ccaaatgcaa atcctaacgc aaaccccaat gccaacccaa acgtggaccc caacgccaac 660
cctaacgcaa atccaaacgc caatcccaac gccaatccaa acgccaaccc taacgccaat 720
cccaacgcaa acccaaatgc taacccaaac gctaacccca acgccaatcc taatgcaaac 780
cctaacgcta accccaacgc aaacccaaac gccaacccca atgctaatcc caacgccaat 840
cctaacgcca atccaaatgc taatcccaac aagaacaatc agggcaacgg gcagggacac 900
aatatgccaa acgaccccaa taggaacgtc gatgagaatg ccaacgctaa tagtgccgtg 960
aagaacaata acaatgagga accctctgat aagcatatca aagagtacct gaacaagatt 1020
cagaactcac tgagcaccga atggtccccc tgctctgtca catgtggcaa cggcatccag 1080
gtgcggatca agcctggctc cgccaacaag ccaaaagacg aactggatta tgccaacgac 1140
atcgagaaga aaatttgcaa gatggaaaag tgtagttcag tgtttaatgt ggtcaacagc 1200
tccatcgggc tgattatggt cctgtccttc ctgttcctga at 1242
<210> 65
<211> 573
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7014 3D7TRAP-6
<400> 65
Asn His Leu Gly Asn Val Lys Tyr Leu Val Ile Val Phe Leu Ile Phe
1 5 10 15
Phe Asp Leu Phe Leu Val Asn Gly Arg Asp Val Gln Asn Asn Ile Val
20 25 30
Asp Glu Ile Lys Tyr Arg Glu Glu Val Cys Asn Asp Glu Val Asp Leu
35 40 45
Tyr Leu Leu Met Asp Cys Ser Gly Ser Ile Arg Arg His Asn Trp Val
50 55 60
Asn His Ala Val Pro Leu Ala Met Lys Leu Ile Gln Gln Leu Asn Leu
65 70 75 80
Asn Asp Asn Ala Ile His Leu Tyr Ala Ser Val Phe Ser Asn Asn Ala
85 90 95
Arg Glu Ile Ile Arg Leu His Ser Asp Ala Ser Lys Asn Lys Glu Lys
100 105 110
Ala Leu Ile Ile Ile Lys Ser Leu Leu Ser Thr Asn Leu Pro Tyr Gly
115 120 125
Lys Thr Asn Leu Thr Asp Ala Leu Leu Gln Val Arg Lys His Leu Asn
130 135 140
Asp Arg Ile Asn Arg Glu Asn Ala Asn Gln Leu Val Val Ile Leu Thr
145 150 155 160
Asp Gly Ile Pro Asp Ser Ile Gln Asp Ser Leu Lys Glu Ser Arg Lys
165 170 175
Leu Ser Asp Arg Gly Val Lys Ile Ala Val Phe Gly Ile Gly Gln Gly
180 185 190
Ile Asn Val Ala Phe Asn Arg Phe Leu Val Gly Cys His Pro Ser Asp
195 200 205
Gly Lys Cys Asn Leu Tyr Ala Asp Ser Ala Trp Glu Asn Val Lys Asn
210 215 220
Val Ile Gly Pro Phe Met Lys Ala Val Cys Val Glu Val Glu Lys Thr
225 230 235 240
Ala Ser Cys Gly Val Trp Asp Glu Trp Ser Pro Cys Ser Val Thr Cys
245 250 255
Gly Lys Gly Thr Arg Ser Arg Lys Arg Glu Ile Leu His Glu Gly Cys
260 265 270
Thr Ser Glu Leu Gln Glu Gln Cys Glu Glu Glu Arg Cys Leu Pro Lys
275 280 285
Arg Glu Pro Leu Asp Val Pro Asp Glu Pro Glu Asp Asp Gln Pro Arg
290 295 300
Pro Arg Gly Asp Asn Phe Ala Val Glu Lys Pro Asn Glu Asn Ile Ile
305 310 315 320
Asp Asn Asn Pro Gln Glu Pro Ser Pro Asn Pro Glu Glu Gly Lys Gly
325 330 335
Glu Asn Pro Asn Gly Phe Asp Leu Asp Glu Asn Pro Glu Asn Pro Pro
340 345 350
Asn Pro Pro Asn Pro Pro Asn Pro Pro Asn Pro Pro Asn Pro Pro Asn
355 360 365
Pro Asp Ile Pro Glu Gln Glu Pro Asn Ile Pro Glu Asp Ser Glu Lys
370 375 380
Glu Val Pro Ser Asp Val Pro Lys Asn Pro Glu Asp Asp Arg Glu Glu
385 390 395 400
Asn Phe Asp Ile Pro Lys Lys Pro Glu Asn Lys His Asp Asn Gln Asn
405 410 415
Asn Leu Pro Asn Asp Lys Ser Asp Arg Tyr Ile Pro Tyr Ser Pro Leu
420 425 430
Ser Pro Lys Val Leu Asp Asn Glu Arg Lys Gln Ser Asp Pro Gln Ser
435 440 445
Gln Asp Asn Asn Gly Asn Arg His Val Pro Asn Ser Glu Asp Arg Glu
450 455 460
Thr Arg Pro His Gly Arg Asn Asn Glu Asn Arg Ser Tyr Asn Arg Lys
465 470 475 480
His Asn Asn Thr Pro Lys His Pro Glu Arg Glu Glu His Glu Lys Pro
485 490 495
Asp Asn Asn Lys Lys Lys Ala Gly Ser Asp Asn Lys Tyr Lys Ile Ala
500 505 510
Gly Gly Ile Ala Gly Gly Leu Ala Leu Leu Ala Cys Ala Gly Leu Ala
515 520 525
Tyr Lys Phe Val Val Pro Gly Ala Ala Thr Pro Tyr Ala Gly Glu Pro
530 535 540
Ala Pro Phe Asp Glu Thr Leu Gly Glu Glu Asp Lys Asp Leu Asp Glu
545 550 555 560
Pro Glu Gln Phe Arg Leu Pro Glu Glu Asn Glu Trp Asn
565 570
<210> 66
<211> 1719
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7014 3D7TRAP-6
<400> 66
aaccacctgg gcaacgtgaa gtacctcgtg atcgtgttcc tgatcttctt cgacctgttt 60
ctcgtgaacg gccgggacgt gcagaacaac atcgtggacg agatcaagta ccgcgaggaa 120
gtgtgcaacg acgaggtgga cctgtacctg ctgatggact gcagcggcag catccggcgg 180
cacaactggg tcaaccatgc cgtgcctctg gccatgaagc tgatccagca gctgaacctg 240
aacgacaacg ccatccacct gtacgccagc gtgttcagca acaacgccag agagatcatc 300
agactgcaca gcgacgccag caagaacaaa gagaaggccc tgatcatcat caagagcctg 360
ctgagcacca acctgcccta cggcaagacc aacctgaccg acgctctgct gcaagtgcgg 420
aagcacctga atgaccggat caacagagag aacgccaatc agctggtcgt gatcctgacc 480
gatggcatcc ccgacagcat ccaggacagc ctgaaagaga gccggaagct gagcgaccgg 540
ggcgtgaaga tcgccgtgtt tggcatcggc cagggcatca acgtggcctt caaccggttt 600
ctcgtgggct gccaccctag cgacggcaag tgcaatctgt acgccgacag cgcctgggag 660
aacgtgaaga atgtgatcgg ccctttcatg aaggccgtgt gcgtggaagt ggaaaagacc 720
gccagctgcg gcgtgtggga tgagtggtcc ccttgcagcg tgacctgcgg caagggcacc 780
agaagccgga agagagagat cctgcacgag ggctgcacca gcgagctgca ggaacagtgc 840
gaagaggaac ggtgcctgcc caagagggaa cccctggatg tgcccgacga gcccgaggac 900
gatcagccta gacccagagg cgacaacttc gccgtggaaa agcccaacga gaacatcatc 960
gacaacaacc cccaggaacc cagccccaac cccgaagagg gaaagggcga gaaccccaac 1020
ggcttcgatc tggacgagaa ccctgagaac ccccccaacc ctcccaatcc ccctaacccc 1080
ccaaatccac caaatcctcc caaccctgac atccccgagc aggaacctaa catccctgag 1140
gacagcgaga aagaggtgcc cagcgacgtg cccaagaacc ccgaggatga ccgggaagag 1200
aacttcgaca tccccaagaa gccagagaac aagcacgaca accagaacaa cctgcctaac 1260
gacaagtccg accggtacat cccctacagc cccctgagcc ccaaggtgct ggacaacgag 1320
agaaagcaga gcgaccccca gagccaggac aacaacggca acagacacgt gccaaacagc 1380
gaggacagag agacacggcc ccacggccgg aacaacgaga atcggagcta caaccggaag 1440
cacaacaaca cccccaagca ccctgagcgg gaagaacacg agaagcccga taacaacaag 1500
aagaaggccg gcagcgacaa caagtacaag attgccggcg gaatcgctgg cggcctggca 1560
ctgctggctt gtgccggact ggcctacaag ttcgtggtgc ctggcgccgc tacaccttat 1620
gccggcgaac ctgccccctt cgacgagaca ctgggcgagg aagataagga cctggacgag 1680
cctgagcagt tccggctgcc cgaagagaac gagtggaac 1719
<210> 67
<211> 1773
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGX7014 3D7TRAP-6 operably linked to IgE leader sequence
<400> 67
atggactgga cctggattct gttcctggtg gccgctgcca cacgggtgca ctctaaccac 60
ctgggcaacg tgaagtacct cgtgatcgtg ttcctgatct tcttcgacct gtttctcgtg 120
aacggccggg acgtgcagaa caacatcgtg gacgagatca agtaccgcga ggaagtgtgc 180
aacgacgagg tggacctgta cctgctgatg gactgcagcg gcagcatccg gcggcacaac 240
tgggtcaacc atgccgtgcc tctggccatg aagctgatcc agcagctgaa cctgaacgac 300
aacgccatcc acctgtacgc cagcgtgttc agcaacaacg ccagagagat catcagactg 360
cacagcgacg ccagcaagaa caaagagaag gccctgatca tcatcaagag cctgctgagc 420
accaacctgc cctacggcaa gaccaacctg accgacgctc tgctgcaagt gcggaagcac 480
ctgaatgacc ggatcaacag agagaacgcc aatcagctgg tcgtgatcct gaccgatggc 540
atccccgaca gcatccagga cagcctgaaa gagagccgga agctgagcga ccggggcgtg 600
aagatcgccg tgtttggcat cggccagggc atcaacgtgg ccttcaaccg gtttctcgtg 660
ggctgccacc ctagcgacgg caagtgcaat ctgtacgccg acagcgcctg ggagaacgtg 720
aagaatgtga tcggcccttt catgaaggcc gtgtgcgtgg aagtggaaaa gaccgccagc 780
tgcggcgtgt gggatgagtg gtccccttgc agcgtgacct gcggcaaggg caccagaagc 840
cggaagagag agatcctgca cgagggctgc accagcgagc tgcaggaaca gtgcgaagag 900
gaacggtgcc tgcccaagag ggaacccctg gatgtgcccg acgagcccga ggacgatcag 960
cctagaccca gaggcgacaa cttcgccgtg gaaaagccca acgagaacat catcgacaac 1020
aacccccagg aacccagccc caaccccgaa gagggaaagg gcgagaaccc caacggcttc 1080
gatctggacg agaaccctga gaaccccccc aaccctccca atccccctaa ccccccaaat 1140
ccaccaaatc ctcccaaccc tgacatcccc gagcaggaac ctaacatccc tgaggacagc 1200
gagaaagagg tgcccagcga cgtgcccaag aaccccgagg atgaccggga agagaacttc 1260
gacatcccca agaagccaga gaacaagcac gacaaccaga acaacctgcc taacgacaag 1320
tccgaccggt acatccccta cagccccctg agccccaagg tgctggacaa cgagagaaag 1380
cagagcgacc cccagagcca ggacaacaac ggcaacagac acgtgccaaa cagcgaggac 1440
agagagacac ggccccacgg ccggaacaac gagaatcgga gctacaaccg gaagcacaac 1500
aacaccccca agcaccctga gcgggaagaa cacgagaagc ccgataacaa caagaagaag 1560
gccggcagcg acaacaagta caagattgcc ggcggaatcg ctggcggcct ggcactgctg 1620
gcttgtgccg gactggccta caagttcgtg gtgcctggcg ccgctacacc ttatgccggc 1680
gaacctgccc ccttcgacga gacactgggc gaggaagata aggacctgga cgagcctgag 1740
cagttccggc tgcccgaaga gaacgagtgg aac 1773
<210> 68
<211> 147
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pvivax EXP1
<400> 68
Lys Leu Leu Ala Ala Val Phe Leu Leu Phe Cys Ala Ile Leu Cys Asn
1 5 10 15
His Ala Leu Gly Asp Asn Val Asn Gly Leu Gly Ala Gly Asn Pro Lys
20 25 30
Lys Lys Ser Pro Lys Ser Lys Ser Pro Glu Pro Leu Ile Asp Val His
35 40 45
Glu Leu Ile Ser Glu Ile Val Arg Lys Glu Glu Glu Leu Val Asn Met
50 55 60
Thr Lys Lys Lys Ser Asn Tyr Lys Leu Ala Thr Thr Val Leu Ala Ser
65 70 75 80
Ala Leu Gly Val Val Ser Ala Val Leu Leu Gly Gly Ala Gly Leu Val
85 90 95
Phe Tyr Asn Ala Gly Asn Gly Arg His Pro Phe Ser Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Lys Gly Gly Asp Ala Ala Pro Thr Glu Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ala
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Gly Leu Asn Asp Asp Gly Ser Ser Ser Gly Thr Glu
130 135 140
Ser Thr Ser
145
<210> 69
<211> 441
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pvivax EXP1
<400> 69
aagctgctgg ccgccgtgtt cctgctgttt tgcgcaatcc tgtgcaacca cgcactgggc 60
gacaacgtga atggcctggg agcaggcaat cccaagaaga agagccccaa gagcaagtcc 120
cccgagcctc tgatcgatgt gcacgagctg atctccgaga tcgtgcggaa ggaggaggag 180
ctggtgaaca tgaccaagaa gaagagcaat tacaagctgg ccaccacagt gctggccagc 240
gccctgggcg tggtgtccgc cgtgctgctg ggcggcgccg gcctggtgtt ctataacgcc 300
ggcaatggcc gccacccctt tagcctgggc ggcggcaagg gcggcgacgc agcacctacc 360
gagccaacac ccgcccctac cgcaccatcc gccacaggcc tgaacgacga tggcagctcc 420
tctggcaccg agtctacaag c 441
<210> 70
<211> 173
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pvivax EXP2
<400> 70
Ser Ala Glu Glu Glu Tyr Ser Trp Asp Ser Tyr Leu Asn Asp Arg Leu
1 5 10 15
Leu Ala Thr Asn Gln Val Ser Ala Ala Gly Leu Ala Ser Glu Glu Asp
20 25 30
Gly Val Val Tyr Ala Cys Val Ala Gln Ala Asp Glu Asn Asp Ala Glu
35 40 45
Phe Asp Lys Trp Thr Leu Phe Tyr Lys Glu Asp Tyr Glu Ile Glu Val
50 55 60
Glu Asp Glu Asn Gly Asn Lys Ser Gln Lys Thr Ile Asn Glu Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Thr Val Phe Lys Glu Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Val Trp
85 90 95
Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Gln Phe Ile Asn Ile Glu Arg Asp Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Gly Tyr Thr Phe Asp Val Ala Thr Cys Ala Lys Leu Lys Gly
115 120 125
Gly Leu His Leu Ile Lys Val Pro Gly Gly Asn Ile Leu Val Val Leu
130 135 140
Tyr Asp Glu Glu Lys Glu His Asp Arg Gly Asn Ser Lys Ile Ala Ala
145 150 155 160
Leu Thr Phe Ser Lys Glu Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gln
165 170
<210> 71
<211> 519
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pvivax EXP2
<400> 71
tctgccgagg aggagtactc ctgggactct tatctgaacg ataggctgct ggccaccaat 60
caggtgtctg ccgcaggcct ggcaagcgag gaggacggag tggtgtacgc atgcgtggca 120
caggccgacg agaatgatgc cgagttcgat aagtggaccc tgttttacaa ggaggactat 180
gagatcgagg tggaggatga gaacggcaat aagtcccaga agacaatcaa cgagggccag 240
accctgctga cagtgttcaa ggagggctac gcaccagatg gcgtgtggct gggcggcacc 300
aagtatcagt ttatcaatat cgagagggac ctggagttcg agggctacac ctttgatgtg 360
gccacatgtg ccaagctgaa gggcggcctg cacctgatca aggtgcctgg cggcaacatc 420
ctggtggtgc tgtatgacga ggagaaggag cacgatagag gcaattccaa gatcgccgcc 480
ctgacatttt ccaaggagct ggccgagtct ggcggccag 519
<210> 72
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pcynomolgi EXP1
<400> 72
Lys Leu Leu Thr Ala Val Phe Leu Leu Phe Cys Ala Ile Leu Cys Asp
1 5 10 15
Pro Ala Leu Gly Asp Asn Val Asn Gly Leu Gly Gly Pro Pro Ser Lys
20 25 30
Lys Lys Thr Pro Lys Ser Lys Ser Pro Glu Pro Leu Ile Asp Val His
35 40 45
Glu Leu Ile Gly Glu Met Val Arg Lys Glu Glu Glu Leu Ile Asn Ala
50 55 60
Asn Lys Lys Lys Ser Lys Tyr Lys Leu Ala Thr Thr Ile Leu Ala Ser
65 70 75 80
Ala Leu Gly Val Val Ser Ala Val Leu Leu Gly Gly Ala Gly Leu Val
85 90 95
Phe Tyr Asn Ala Gly Asn Gly Arg His Pro Phe Ser Leu Gly Gly Gly
100 105 110
Lys Gly Gly Asp Ala Thr Pro Ser Glu Pro Ala Pro Ala Ala Gly Glu
115 120 125
Pro Val Gly Lys
130
<210> 73
<211> 396
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pcynomolgi EXP1
<400> 73
aagctgctga cagccgtgtt cctgctgttt tgcgcaatcc tgtgcgaccc tgccctgggc 60
gataacgtga atggcctggg cggccctccc agcaagaaga agaccccaaa gagcaagtcc 120
ccagagcccc tgatcgatgt gcacgagctg atcggcgaga tggtgcggaa ggaggaggag 180
ctgatcaacg ccaacaagaa gaagagcaag tacaagctgg caaccacaat cctggcatcc 240
gccctgggag tggtgtctgc cgtgctgctg ggcggcgccg gcctggtgtt ctataacgcc 300
ggcaatggcc gccacccatt ttccctgggc ggcggcaagg gcggcgacgc aaccccatct 360
gagcctgcac cagcagcagg agagccagtg ggcaag 396
<210> 74
<211> 173
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pcynomolgi EXP2
<400> 74
Ser Ala Glu Glu Glu Tyr Ser Trp Asp Ser Tyr Leu Asn Asp Arg Leu
1 5 10 15
Leu Ala Thr Asn Gln Val Ser Ala Ala Gly Leu Ala Ser Glu Glu Asp
20 25 30
Gly Val Val Tyr Ala Cys Val Ala Gln Ala Asp Glu Asn Asn Pro Glu
35 40 45
Phe Asp Lys Trp Ser Leu Phe Tyr Lys Glu Asp Phe Glu Ile Glu Val
50 55 60
Glu Asp Glu Asn Gly Asn Lys Ser Lys Lys Thr Ile Asn Glu Gly Gln
65 70 75 80
Thr Leu Leu Thr Val Phe Lys Glu Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Val Trp
85 90 95
Leu Gly Gly Thr Lys Tyr Gln Phe Ile Asn Ile Glu Arg Asp Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Gly Tyr Thr Phe Asp Val Ala Thr Cys Ala Lys Leu Lys Gly
115 120 125
Gly Leu His Leu Ile Lys Val Pro Gly Gly Asn Ile Leu Val Val Leu
130 135 140
Tyr Asp Glu Glu Lys Glu His Asp Arg Gly Asn Ser Lys Val Ala Ala
145 150 155 160
Leu Thr Phe Ser Lys Glu Leu Ala Glu Ser Gly Gly Gln
165 170
<210> 75
<211> 519
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pcynomolgi EXP2
<400> 75
tctgccgagg aggagtactc ttgggacagc tatctgaacg ataggctgct ggccacaaat 60
caggtgagcg ccgcaggcct ggcatccgag gaggatggag tggtgtacgc atgcgtggca 120
caggcagacg agaacaatcc cgagttcgat aagtggagcc tgttctataa ggaggacttt 180
gagatcgagg tggaggatga gaacggcaat aagtccaaga agaccatcaa cgagggccag 240
accctgctga cagtgttcaa ggagggctac gcaccagacg gcgtgtggct gggcggcaca 300
aagtatcagt ttatcaatat cgagagggac ctggagttcg agggctacac ctttgatgtg 360
gccacatgtg ccaagctgaa gggcggcctg cacctgatca aggtgcctgg cggcaacatc 420
ctggtggtgc tgtatgacga ggagaaggag cacgatagag gcaatagcaa ggtggccgcc 480
ctgacctttt ctaaggagct ggcagagagc ggcggccag 519
<210> 76
<211> 168
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Py EXP1
<400> 76
Lys Ile Asn Ile Ala Ser Ile Ile Phe Ile Ile Phe Ser Leu Cys Leu
1 5 10 15
Val Asn Asp Ala Tyr Gly Lys Asn Lys Tyr Gly Lys Asn Gly Lys Tyr
20 25 30
Gly Ser Gln Asn Val Ile Lys Lys His Gly Glu Pro Val Ile Asn Val
35 40 45
Gln Asp Leu Ile Ser Asp Met Val Arg Lys Glu Glu Glu Ile Val Lys
50 55 60
Leu Thr Lys Asn Lys Lys Ser Leu Arg Lys Ile Asn Val Ala Leu Ala
65 70 75 80
Thr Ala Leu Ser Val Val Ser Ala Ile Leu Leu Gly Gly Ala Gly Leu
85 90 95
Val Met Tyr Asn Thr Glu Lys Gly Arg Arg Pro Phe Gln Ile Gly Lys
100 105 110
Ser Lys Lys Gly Gly Ser Ala Met Ala Arg Asp Ser Ser Phe Pro Met
115 120 125
Asn Glu Glu Ser Pro Leu Gly Phe Ser Pro Glu Glu Met Glu Ala Val
130 135 140
Ala Ser Lys Phe Arg Glu Ser Met Leu Lys Asp Gly Val Pro Ala Pro
145 150 155 160
Ser Asn Thr Pro Asn Val Gln Asn
165
<210> 77
<211> 504
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Py EXP1
<400> 77
aagatcaata tcgcctcaat catttttatc atcttcagtc tgtgcctcgt gaacgacgcc 60
tacggcaaga acaagtatgg caagaacggc aaatacggaa gccagaatgt gatcaagaaa 120
cacggagagc ccgtgatcaa cgtccaggac ctgatttcag atatggtgag aaaggaggaa 180
gagatcgtca agctgaccaa aaataagaaa agcctccgga agattaacgt ggccctggct 240
acagcactct ctgtggtcag tgcaatcctg ctcggaggag caggactggt catgtataat 300
accgagaaag ggaggagacc ctttcagatc ggcaagtcaa agaaaggggg tagcgccatg 360
gctcgcgata gctccttccc tatgaacgaa gagtccccac tgggattttc tcccgaagag 420
atggaggcag tggccagtaa gttccgagaa tcaatgctga aagacggcgt ccccgctcct 480
tccaacacac caaatgtgca gaac 504
<210> 78
<211> 173
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Py EXP2
<400> 78
Glu Glu Tyr Ser Trp Glu Asn Phe Leu Asn Asp Lys Leu Leu Ala Thr
1 5 10 15
Asn Gln Val Ser Ala Ala Gly Leu Ala Ser Glu Glu Asp Gly Val Val
20 25 30
Tyr Glu Cys Val Ala Thr Pro Asp Glu Asn Asn Pro Asp Phe Asp Lys
35 40 45
Trp Ser Leu Phe Tyr Lys Glu Asp Tyr Asp Ile Glu Ile Glu Asp Glu
50 55 60
Asn Gly Asn Lys Thr Thr Lys Thr Ile Thr Glu Gly Gln Thr Ile Leu
65 70 75 80
Thr Met Phe Asn Glu Gly Tyr Ala Pro Asp Gly Ile Trp Leu Gly Gly
85 90 95
Thr Lys Tyr Gln Phe Ile Asn Met Glu Lys Gly Leu Glu Tyr Glu Gly
100 105 110
Tyr Ser Phe Asp Val Ala Thr Cys Ala Lys Leu Lys Gly Gly Met His
115 120 125
Ile Ile Lys Val Gly Gly Gly His Ile Leu Ile Val Leu Tyr Asp Glu
130 135 140
Glu Lys Glu Gln Asp Arg Gly Asn Ser Lys Asn Ala Ala Leu Ala Phe
145 150 155 160
Ser Lys Glu Leu Ala Glu Ser Thr Asp Ala Gly Ala Ala
165 170
<210> 79
<211> 519
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Py EXP2
<400> 79
gaagagtact cttgggagaa ttttctcaac gataagctgc tcgctactaa ccaggtgagc 60
gcagctggac tggcatccga agaggacgga gtggtctatg agtgcgtcgc tacccctgat 120
gaaaacaatc cagacttcga taagtggtct ctgttttaca aggaggacta cgatatcgaa 180
atcgaggacg aaaacgggaa taagaccaca aaaactatca ccgagggtca gacaattctg 240
actatgttca atgaaggata cgcaccagac ggtatctggc tcggaggaac aaagtatcag 300
ttcattaaca tggagaaagg cctggagtac gaaggatata gctttgatgt ggctacttgt 360
gcaaagctga aagggggtat gcacatcatt aaggtcggcg gagggcatat cctgattgtc 420
ctctacgacg aagagaagga gcaggatcgg gggaattcca aaaacgcagc cctggccttt 480
tctaaggagc tcgccgaaag taccgacgct ggcgctgca 519
<210> 80
<211> 240
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Py SPECT1
<400> 80
Lys Ile Ser Ile Thr Ile Leu Val Leu Phe Ile Ile Leu Lys Cys Val
1 5 10 15
Leu Ser Phe Asn Leu Ser Ile Glu Pro Lys Gly Asn Asn Ile Thr Leu
20 25 30
Asp Lys His Ile Lys Lys Glu Ser Asn Ile Asp His Ser Lys Asn Gln
35 40 45
Ile Ile Glu Glu Phe Asp Lys Ile Ser Asp Asp Phe Ser Asp Asp Ile
50 55 60
Asn Thr Thr Lys Gln Thr Ile Lys Asp Leu Phe Leu Asp Ile Glu Gly
65 70 75 80
Ser Phe Glu Asp Thr Ser Asp Asp Val Val Lys Leu Leu Ser Lys Tyr
85 90 95
Ser Phe Val Pro Glu Glu Lys Leu Asn Ile Ile Asp Gly Ile Leu Arg
100 105 110
Ser Phe Ile Glu Asn Asn Lys Thr His Val Ile Asn Ser Ser Asn Ala
115 120 125
Tyr Met Tyr Met Gln Lys Glu Lys Ile Lys Asn Val Cys Asp Phe Ile
130 135 140
Leu Lys Lys Leu Asn Ser Leu Ile Gln Ile Asn Glu Leu Asn Lys Asn
145 150 155 160
His Ile Ile Leu Lys Tyr Gly Lys Gly Glu Ala Lys Lys Gly Val Leu
165 170 175
Glu Ser Ile Lys Asn Asn Asp Asn Ile Ser Lys Asn Leu Lys Ser Glu
180 185 190
Leu Leu Lys Tyr Glu Asn Val Ser Asn Gln Asn Ile Arg Val Ser Glu
195 200 205
Leu Ile Asn Phe Ile Thr Pro Ile Tyr Asp Asp Phe Ile Lys Lys Leu
210 215 220
Ser Asp Leu Ile Asn Asp Leu Gln Ile Lys Leu Asn Asn Ile Ser Lys
225 230 235 240
<210> 81
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Py SPECT1
<400> 81
aaaatctcaa tcacaattct ggtgctgttc attatcctca agtgcgtgct gagtttcaac 60
ctctcaattg aacctaaagg aaacaatatc accctggaca agcacattaa gaaagagtca 120
aacatcgatc atagcaaaaa tcagatcatt gaggaatttg acaagatcag cgacgatttc 180
tccgacgata ttaacaccac aaaacagact atcaaggacc tgtttctcga tattgaaggg 240
tccttcgagg acacctctga cgatgtggtc aaactgctct ccaagtactc ttttgtgcca 300
gaggaaaagc tgaacatcat tgatggcatt ctccggagct tcatcgaaaa caataagaca 360
cacgtgatca atagctccaa cgcctacatg tatatgcaga aagagaagat caaaaacgtg 420
tgcgatttca ttctgaagaa actcaactcc ctgatccaga ttaatgagct gaacaagaac 480
catatcattc tcaagtatgg caaaggagaa gctaagaaag gcgtgctgga gtctattaag 540
aacaacgaca acatcagtaa gaacctgaaa tcagaactgc tcaagtacga gaacgtctct 600
aaccagaata tcagggtgag tgagctgatc aattttatta ccccaatcta tgacgatttc 660
attaagaaac tctccgacct gattaacgat ctgcagatca aactcaacaa tatttctaag 720
720
<210> 82
<211> 814
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Py SPECT2
<400> 82
Lys Met Arg Asn Ile Lys Lys Ser Leu Pro Val Leu Phe Ile Leu Leu
1 5 10 15
Cys Ile Tyr Gln Gln Ser Phe Ile Asn Ser Leu Arg Ile Ser Val Arg
20 25 30
Asn Asn Lys Asn His Arg Asp Gly Asn Asn Glu Asn Lys Phe Asn Lys
35 40 45
Asn Val Glu Leu Gly Thr Met Glu Lys Pro Ile Asn Ile Leu Cys Asn
50 55 60
Asp Ile Ser Cys Asn Pro Gly Asn Asn Ile Ser Phe Val Asn Gln Lys
65 70 75 80
Lys Lys Glu Ile Asp Ser Asp Asp Asp Leu Tyr Asp Met Leu Asp Asp
85 90 95
Asp Ala Ser Thr Ser Ala Gly Asp Asp Glu Asp Glu Asp Asp Tyr Asp
100 105 110
Asp Tyr Thr Asp Asp Lys Asn Thr Glu Ile Lys Asp Glu Glu Gln Asn
115 120 125
Glu His Ile Asp Lys Thr Asp Gln Lys Lys Asp Lys Lys Gly Thr Phe
130 135 140
Ser Ile Lys Lys Gln Glu Glu Glu Ile Asn Glu Asn Lys Asn Arg Thr
145 150 155 160
Glu Lys Phe Phe Lys Lys Tyr Lys Phe Asn Asp Ala Asp Asn Glu Gly
165 170 175
Gly Asp Asp Glu Ser Glu Thr Asp Asp Glu Asn Leu Asp Asn Ser Thr
180 185 190
Gln Asn Ser His Ala Glu Asn Lys Asn Pro Glu Ser Val Ile Asp Lys
195 200 205
His Met Ser Val Phe Pro Gly Leu Tyr Phe Val Gly Ile Gly Tyr Asp
210 215 220
Ile Leu Phe Gly Asn Pro Leu Gly Glu Thr Asp Ser Leu Ser Asp Pro
225 230 235 240
Gly Tyr Arg Ala Gln Ile Tyr Leu Leu Asn Trp Glu Phe Ser Asn His
245 250 255
Gly Ile Ala Asn Asp Leu His Thr Leu Gln Pro Ile Asn Ala Trp Ile
260 265 270
Arg Lys Glu Asn Ala Cys Ser Arg Val Glu Ser Ile Asn Glu Cys Ser
275 280 285
Ser Val Ser Glu Tyr Thr Lys Asn Leu Ser Val Asp Val Ser Val Ser
290 295 300
Gly Ser Tyr Met Gly Phe Gly Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly Tyr Lys
305 310 315 320
Lys Phe Ile Asn Glu Ile Ser Lys Arg Thr Ser Lys Thr Tyr Phe Ile
325 330 335
Lys Ser Asn Cys Ile Lys Tyr Thr Ile Gly Leu Pro Pro Tyr Val Pro
340 345 350
Trp Glu Gln Thr Thr Ala Tyr Met Asn Ala Val Asp Ile Leu Pro Arg
355 360 365
Glu Phe Thr Gly Leu Asp Glu Asp Ser Glu Cys Thr Pro Asp Val Tyr
370 375 380
Glu Gln Lys Lys Met Thr Lys Glu Cys Arg Asn Val Gln Leu Trp Ile
385 390 395 400
Gln Phe Phe Lys Thr Tyr Gly Thr His Ile Ile Val Glu Ala Gln Leu
405 410 415
Gly Gly Lys Ile Thr Lys Ile Ile Asn Val Ser Asn Thr Ser Val Asn
420 425 430
Gln Met Lys Lys Asp Gly Val Ser Val Lys Ala Gln Ile Gln Ala Gln
435 440 445
Phe Gly Phe Ala Ser Val Gly Gly Ser Thr Ser Val Ser Ser Asp Asn
450 455 460
Ser Ser Lys Asn Asp Asn Ser Ser Tyr Asp Met Ser Glu Lys Leu Val
465 470 475 480
Val Ile Gly Gly Asn Pro Ile Lys Asp Val Thr Lys Glu Glu Asn Leu
485 490 495
Tyr Glu Trp Ser Lys Thr Val Ser Ser Asn Pro Met Pro Ile His Ile
500 505 510
Lys Leu Leu Pro Ile Tyr Lys Ser Phe Asp Ser Glu Glu Leu Lys Glu
515 520 525
Ser Tyr Glu Lys Ala Leu Leu Tyr Tyr Thr Arg Leu Tyr Gly Ser Ser
530 535 540
Pro His Gly Thr Ile Gln Lys Asp Glu Asn Asp Ile Ile Lys Ile Leu
545 550 555 560
Thr Ala Ser Thr Thr Ile Thr Lys Ile Gly Ala Pro Pro Ile Thr Ala
565 570 575
Glu Cys Pro His Asn Gln Val Val Leu Phe Gly Tyr Val Leu Lys Gln
580 585 590
Asn Phe Trp Asp Asn Thr Ser Arg Leu Lys Gly Tyr Asp Ile Glu Ile
595 600 605
Cys Glu Ser Gly Leu Asn Ser Cys Thr Ser Lys Gln Gly Ser Thr Asn
610 615 620
Lys Tyr Asp Val Ser Tyr Leu Tyr Ile Glu Cys Gly Thr Gln Ala Met
625 630 635 640
Pro Phe Ser Asp Gln Val Ile Thr Ser Thr Asn Ala Thr Tyr Asn Thr
645 650 655
Ile Lys Cys Pro Asn Asp Tyr Thr Ile Ile Phe Gly Phe Gly Phe Ser
660 665 670
Ser Ser Ser Gly Lys Gly Val Ser Ala Met His Ser His Ile Thr Ser
675 680 685
Cys Arg Pro Gly Met Lys Ser Cys Ser Leu Asn Met Gly Asn Ser Asn
690 695 700
Asp Lys Asn Tyr Met Tyr Leu Val Cys Val Asp Ala Thr Ile Trp Ser
705 710 715 720
Gly Ile Asn Glu Leu Thr Thr Val Ala Lys Asp Asp Phe His Gly Ala
725 730 735
Val Asn Arg Ser Lys Gln Phe Asn Asp Gly Gln Leu Val Leu Asn Cys
740 745 750
Gln Glu Asn Gly Thr Ile Leu Thr Gly Phe Ala Gly Glu Thr His Thr
755 760 765
Ser Ser Pro Tyr Val Lys Ser Pro Phe Ser Lys Cys Leu Lys Asn Leu
770 775 780
Lys Ser Cys Ser Val His Gly Ser Gly Gln Ser Ile Gly Tyr Thr Asn
785 790 795 800
Tyr Lys Ser Leu Phe Ala Ile Ile Leu Cys Lys Asn Ser Glu
805 810
<210> 83
<211> 2442
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Py SPECT2
<400> 83
aaaatgcgca acatcaagaa aagcctcccc gtcctgttta ttctgctctg tatctaccag 60
cagtctttca tcaatagtct gcgaatttca gtgaggaaca ataagaacca ccgcgacggt 120
aacaacgaga ataagtttaa caaaaacgtg gaactgggca ccatggagaa gcctatcaat 180
attctctgca acgatatcag ctgtaaccca ggaaacaata tttccttcgt gaatcagaag 240
aaaaaggaga tcgactccga cgatgacctg tatgatatgc tcgatgacga tgccagcaca 300
tccgctgggg acgatgaaga cgaggacgat tacgacgatt atactgacga taaaaacacc 360
gaaatcaagg acgaggaaca gaatgagcat attgacaaga cagatcagaa aaaggataag 420
aagggaactt tttctatcaa aaagcaggag gaagagatta acgaaaacaa gaacaggacc 480
gagaagttct ttaagaagta caagttcaat gacgctgata acgaaggcgg agacgatgaa 540
tccgagaccg acgatgagaa tctggacaac agcacacaga actcccacgc agaaaacaag 600
aaccccgagt cagtcatcga caagcatatg agcgtgtttc ctggcctgta cttcgtcggg 660
attggttatg atatcctgtt tgggaaccca ctcggtgaaa cagactctct gagtgatccc 720
ggatacagag cacagatcta tctgctcaat tgggagttct ccaaccacgg gattgccaat 780
gatctccata ctctgcagcc cattaacgca tggatcagaa aggaaaatgc ctgctctcgg 840
gtggaaagta tcaacgagtg ttctagtgtc tccgagtaca caaagaatct gtctgtggac 900
gtctcagtga gcggcagcta catgggcttt ggatctttca gtgcctcaac tgggtacaag 960
aagtttatta acgagatctc aaagcggacc agcaagacat acttcatcaa aagcaactgt 1020
attaagtaca ctatcggcct gcccccttat gtgccttggg aacagactac cgcatatatg 1080
aacgccgtcg acatcctgcc acgcgagttc actggactcg acgaagattc cgagtgcacc 1140
cccgatgtgt acgaacagaa aaagatgaca aaggagtgtc gaaacgtcca gctgtggatt 1200
cagttcttta agacttatgg cacccacatc attgtggagg ctcagctggg gggcaagatc 1260
actaagatca ttaatgtcag taacacctca gtgaaccaga tgaaaaagga cggagtctct 1320
gtgaaggctc agatccaggc acagttcggg tttgcaagtg tcggcggaag cacctccgtg 1380
tcaagcgata attcctctaa gaacgacaac agttcatacg atatgtctga aaagctggtg 1440
gtcatcgggg gtaaccccat caaggacgtg accaaggaag agaatctgta cgagtggagc 1500
aagacagtca gctccaaccc tatgccaatc cacatcaagc tgctccccat ctataagagc 1560
tttgactccg aagagctgaa agaaagctac gagaaggccc tgctctacta tacacgactg 1620
tatggctcta gtcctcacgg aactatccag aaagacgaga acgatatcat taagattctg 1680
acagcttcca caactattac taagatcggt gcaccaccaa tcaccgctga gtgcccccat 1740
aatcaggtgg tcctgtttgg ctacgtgctc aaacagaatt tctgggacaa cacatcacgc 1800
ctgaaggggt atgatatcga aatttgcgag tccggtctca actcttgtac cagtaaacag 1860
ggcagtacaa ataagtacga cgtgtcatac ctgtatatcg agtgcggcac ccaggccatg 1920
cctttcagcg atcaggtcat cacttccacc aatgctacat acaacactat taagtgtcca 1980
aacgactata ctatcatttt cgggtttggt ttctcaagct cctctggcaa gggagtgtcc 2040
gcaatgcact ctcatatcac cagttgccgg cccggaatga agtcttgtag tctgaacatg 2100
gggaatagca acgacaagaa ttacatgtat ctggtctgcg tggatgccac aatttggtcc 2160
ggtatcaacg agctgaccac agtggctaaa gacgattttc acggcgcagt caaccgcagc 2220
aagcagttca atgacggtca gctggtgctc aattgtcagg aaaacggcac catcctgaca 2280
ggctttgccg gagagacaca cactagttca ccctacgtga agtcaccttt cagcaagtgc 2340
ctcaaaaacc tgaagtcatg tagcgtccat gggtccggcc agtctatcgg ctacaccaac 2400
tataaatctc tgttcgctat cattctctgt aagaatagtg ag 2442
Claims (48)
- 적어도 하나의 공통 플라스모듐 종의 간 단계(liver stage; LS) 면역원을 암호화하는 적어도 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 적어도 하나의 핵산 분자를 포함하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 적어도 하나의 LS 면역원은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역원성 조성물: EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2.
- 청구항 2에 있어서, EXP1 및 EXP2를 암호화하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 3에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역원성 조성물:
a) 서열 번호 1, 서열 번호 17, 및 서열 번호 32로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 1의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 17의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 32의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 1에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 17에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 32에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 18, 서열 번호 19, 서열 번호 33 및 서열 번호 34로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 2의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 3의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 18의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 19의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 33의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 34의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 2에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 3에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 18에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 19에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 33에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 34에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 2에 있어서, EXP23을 암호화하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 5에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역원성 조성물:
a) 서열 번호 4, 서열 번호 20, 및 서열 번호 35로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 4의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 20의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 35의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 4에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 20에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 35에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 21, 서열 번호 22, 서열 번호 36 및 서열 번호 37로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 5의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 6의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 21의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 22의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 36의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 37의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 5에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 6에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 21에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 22에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 36에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 37에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 2에 있어서, ICP를 암호화하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 7에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역원성 조성물:
a) 서열 번호 7, 서열 번호 23, 및 서열 번호 38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 7의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 23의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 38의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 7에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 23에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 38에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 39 및 서열 번호 40로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 8의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 9의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 24의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 25의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 39의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 40의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 8에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 9에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 24에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 25에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 39에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 40에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 2에 있어서, TMP21을 암호화하는 면역원성 조성물.
- 청구항 9에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역원성 조성물:
a) 서열 번호 10, 서열 번호 26, 및 서열 번호 41로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 10의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 26의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 41의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 10에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 26에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 41에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 27, 서열 번호 28, 서열 번호 42 및 서열 번호 43로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 11의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 12의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 27의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 28의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 42의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 43의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 11에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 12에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 27에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 28에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 42에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 43에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 2에 있어서, UIS3을 암호화하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 11에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역원성 조성물:
a) 서열 번호 13, 서열 번호 29, 및 서열 번호 44로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 13의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 29의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 44의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 13에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 29에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 44에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 30, 서열 번호 31, 서열 번호 45 및 서열 번호 46으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 14의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 15의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 30의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 31의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 45의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 46의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 14에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 15에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 30에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 31에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 45에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 46에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 2에 있어서, UIS10을 암호화하는 면역원성 조성물.
- 청구항 13에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역원성 조성물:
a) 서열 번호 47을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 47의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 47에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 48 및 서열 번호 49로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 48의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 49의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 48에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 49에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 2에 있어서, SPECT1 및 SPECT2를 암호화하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 15에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역원성 조성물:
a) 서열 번호 50을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 50의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열; 및
c) 서열 번호 50에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 51 및 서열 번호 52로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 51의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 52의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 51에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 52에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 2에 있어서, RON2를 암호화하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 17에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 면역원성 조성물:
a) 서열 번호 53을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 53의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열; 및
c) 서열 번호 53에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 54 및 서열 번호 55로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 54의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 55의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 54에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 55에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 서열이 서열 번호 16의 IgE 리더 서열을 암호화하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 서열이 HA 태그를 암호화하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, CSP, LSA1, TRAP, CelTOS, 및 Ama1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 말라리아 항원을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 추가로 포함하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 1 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62, 및 서열 번호 65로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열; 또는 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 66 및 서열 번호 67로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 추가로 포함하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, IL-12, IL-15, IL-28B, IL-33 또는 RANTES를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 추가로 포함하는, 면역원성 조성물.
- 청구항 1 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 뉴클레오타이드 서열은 하나 이상의 플라스미드로 편입되는, 면역원성 조성물.
- 청구항 1 내지 24 중 어느 한 항의 면역원성 조성물을 포유동물의 조직으로 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물을 말라리아에 대해 면역화시키는 방법.
- 청구항 25에 있어서, a) 상기 면역원성 조성물을 상기 포유동물의 조직에 투여하는 단계, 및 b) 상기 조직의 세포를, 상기 핵산 분자의 상기 세포로의 진입을 허용하기에 효과적인 정전류에서의 에너지 펄스로 전기천공하는 단계를 포함하는, 방법.
- 청구항 25에 있어서, 상기 면역원성 조성물이 근육내 또는 피내 주사에 의해 투여되는, 방법.
- EXP1, EXP2, EXP23, ICP, TMP21, UIS3, UIS10, SPECT1, SPECT2 및 RON2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 공통 플라스모듐 종 LS 면역원을 암호화하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함하는, 핵산 분자.
- 청구항 28에 있어서, EXP1 및 EXP2를 암호화하는, 핵산 분자.
- 청구항 29에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 핵산 분자:
a) 서열 번호 1, 서열 번호 17, 및 서열 번호 32로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 1의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 17의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 32의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 1에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 17에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 32에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 2, 서열 번호 3, 서열 번호 18, 서열 번호 19, 서열 번호 33 및 서열 번호 34로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 2의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 3의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 18의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 19의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 33의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 34의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 2에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 3에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 18에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 19에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 33에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 34에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 28에 있어서, EXP23을 암호화하는, 핵산 분자.
- 청구항 31에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 핵산 분자:
a) 서열 번호 4, 서열 번호 20, 및 서열 번호 35로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 4의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 20의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 35의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 4에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 20에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 35에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 5, 서열 번호 6, 서열 번호 21, 서열 번호 22, 서열 번호 36 및 서열 번호 37로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 5의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 6의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 21의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 22의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 36의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 37의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 5에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 6에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 21에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 22에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 36에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 37에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 28에 있어서, ICP를 암호화하는, 핵산 분자.
- 청구항 33에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 핵산 분자:
a) 서열 번호 7, 서열 번호 23, 및 서열 번호 38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 7의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 23의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 38의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 7에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 23에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 38에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 39 및 서열 번호 40로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 8의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 9의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 24의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 25의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 39의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 40의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 8에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 9에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 24에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 25에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 39에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 40에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 28에 있어서, TMP21을 암호화하는, 핵산 분자.
- 청구항 35에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 핵산 분자:
a) 서열 번호 10, 서열 번호 26, 및 서열 번호 41로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 10의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 26의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 41의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 10에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 26에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 41에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 27, 서열 번호 28, 서열 번호 42 및 서열 번호 43로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 11의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 12의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 27의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 28의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 42의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 43의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 11에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 12에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 27에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 28에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 42에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 43에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 28에 있어서, UIS3을 암호화하는, 핵산 분자.
- 청구항 37에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 핵산 분자:
a) 서열 번호 13, 서열 번호 29, 및 서열 번호 44로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 13의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 29의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 44의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 13에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 서열 번호 29에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열, 및 서열 번호 44에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 14, 서열 번호 15, 서열 번호 30, 서열 번호 31, 서열 번호 45 및 서열 번호 46으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 14의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 15의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 30의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 31의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 45의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 46의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 14에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 15에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 30에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 31에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 서열 번호 45에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 번호 46에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 28에 있어서, UIS10을 암호화하는, 핵산 분자.
- 청구항 39에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 핵산 분자:
a) 서열 번호 47을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 47의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
c) 서열 번호 47에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 48 및 서열 번호 49로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 48의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 49의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 48에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 49에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 28에 있어서, SPECT1 및 SPECT2를 암호화하는, 핵산 분자.
- 청구항 41에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 핵산 분자:
a) 서열 번호 50을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 50의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열; 및
c) 서열 번호 50에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 51 및 서열 번호 52로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 51의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 52의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 51에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 52에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 28에 있어서, RON2을 암호화하는, 핵산 분자.
- 청구항 43에 있어서, 상기 핵산 서열이 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 핵산 분자:
a) 서열 번호 53을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열 번호 53의 적어도 90%를 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열; 및
c) 서열 번호 53에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열;
d) 서열 번호 54 및 서열 번호 55로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
e) 서열 번호 54의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 55의 적어도 90%를 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; 및
f) 서열 번호 54에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 서열 번호 55에 대한 적어도 90%의 상동성을 포함하는 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열. - 청구항 28 내지 44 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 서열이 서열 번호 16의 IgE 리더 서열을 암호화하는, 핵산 분자.
- 청구항 28에 있어서, 상기 핵산 분자는 플라스미드인, 핵산 분자.
- CSP, LSA1, TRAP, CelTOS, 및 Ama1로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 말라리아 항원을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 핵산 분자.
- 청구항 47에 있어서, 상기 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62, 및 서열 번호 65로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열; 및 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 서열 번호 66 및 서열 번호 67로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는, 핵산 분자.
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