KR20190037879A - Composition comprising Hibiscus syriacus L. extract for inhibiting antimicrobial peptides - Google Patents

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Abstract

Disclosed in the present specification is a composition comprising a Hibiscus syriacus extract as an active ingredient. The composition for inhibiting antibacterial peptides regulates the expression level of S100A7 (NM_002963), an antibacterial peptide, to a normal level. By using the composition for inhibiting antibacterial peptides, the increased expression level of the antibacterial peptides due to various causes can return to a normal level.

Description

무궁화 추출물을 포함하는 항균성 펩티드 저해용 조성물{Composition comprising Hibiscus syriacus L. extract for inhibiting antimicrobial peptides}Composition comprising Hibiscus syriacus L. extract for inhibiting antimicrobial peptides,

본 명세서에는 항균성 펩티드를 저해하는 조성물이 개시된다. 보다 상세하게, 다양한 원인에 의하여 정상 상태의 피부 세포에 비하여 발현 정도가 변화되는 항균성 펩티드의 발현 정도를 유의미하게 변화시키는, 무궁화 추출물을 포함하는 조성물이 개시된다.Disclosed herein are compositions that inhibit antimicrobial peptides. More particularly, the present invention discloses a composition comprising an extract of Mugunghwa, which significantly changes the expression level of an antimicrobial peptide whose expression level is changed compared to normal skin cells by various causes.

항균성 펩티드는 항생제와 그 기능적인 면에서 유사하고 면역 증강에 효과가 밝혀진 물질로서 최근 관심이 대두되고 있다.Antimicrobial peptides are similar in function to antibiotics and have been shown to be effective in enhancing immune responses.

항균 펩티드는 미생물, 식물, 곤충, 양서류, 포유류의 외부로부터의 미생물 침입에 대하여 비 특이적으로 갖는 면역 방어 체계의 일종이다. 구조적으로는 서열 내에 양전하를 갖는 다수의 아미노산을 포함하며, Gram 양성군, Gram 음성균과 곰팡이, 및 암세포에 이르기까지 폭넓은 항균 활성을 나타낸다. Antimicrobial peptides are a type of immunosuppressive system that nonspecifically binds to microbial invasion from the outside of microorganisms, plants, insects, amphibians, and mammals. Structurally, it contains a large number of amino acids with positive charge in the sequence and exhibits a wide range of antibacterial activity ranging from Gram positive group, Gram negative bacteria, fungi, and cancer cells.

이들 펩티드가 세포막에 결합하면 세포막에 ion channel을 형성하여 미생물의 에너지 생성을 저해하거나, 세포막에 큰 구멍을 만들게 되고 결과적으로 세포를 사멸시킨다. 이와 같이 짧은 시간 내에 비 특이적이면서 효과적인 물리적 방법으로 세포막을 파괴하는 작용 기작을 가지고 있는 특징이 있다.When these peptides bind to the cell membrane, they form an ion channel in the cell membrane, which inhibits the energy production of the microorganism, or makes a large hole in the cell membrane, and eventually kills the cell. In this short period of time, there is a characteristic that it has a mechanism of destroying the cell membrane by a non-specific and effective physical method.

그러나, 항균성 펩티드가 과다하면 오히려 유해한 영향을 미칠 수 있다. 예컨대, S100 단백질 군의 멤버인 S100A7은 항균성 펩티드라는 사실이 잘 알려져 있다. 정확한 기작이 알려진 것은 아니나, 재조합 S100A7 펩티드 처리시에 표피 분화에 손상을 입는다는 점, 및 항균성 단백질 S100A7이 아토피 피부염(AD) 및 건선(psoriasis lesions)이 있는 피부 세포에서와 같이 과다하게 존재하는 경우에 표피 분화에서 음성 조절자(negative regulator)로 작용한다는 사실이 알려져 있다(비특허문헌 1 참조).However, excessive antimicrobial peptides can have rather detrimental effects. For example, it is well known that S100A7, a member of the S100 protein family, is an antimicrobial peptide. Although the exact mechanism is not known, the fact that the epidermal differentiation is damaged during the treatment of the recombinant S100A7 peptide and that the antimicrobial protein S100A7 is present in excess as in skin cells with atopic dermatitis (AD) and psoriasis lesions (Negative regulator) in epidermal differentiation (see Non-Patent Document 1).

따라서, 피부 세포 손상을 치료하기 위한 일 수단으로 피부 세포에서 항균성 펩티드를 저해할 필요성이 있다.Therefore, there is a need to inhibit antimicrobial peptides in skin cells as a means for treating skin cell damage.

Son et al., "S100A7(psoriasin) inhibits human epidermal differentiation by enhanced IL-6 secretionh through IκB/NF-κB signalling", Experimental Dermatology. 2016 Aug; 25(8):636-41.Son et al., "S100A7 (psoriasis) inhibits human epidermal differentiation by enhanced IL-6 secretion through IκB / NF-κB signaling ", Experimental Dermatology. 2016 Aug; 25 (8): 636-41. Kim, H.J., et al, "Transcriptome analysis of airborne PM2.5-induced detrimental effects on human keratinocytes", Toxicology Letters 273, 26-35, 2017.Kim, H.J., et al., "Transcriptome analysis of airborne PM2.5-induced detrimental effects on human keratinocytes ", Toxicology Letters 273, 26-35,

일 측면에서 본 발명은 항균성 펩티드 저해용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.In one aspect, the present invention provides a composition for inhibiting antimicrobial peptides.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 일 측면에서, 본 발명은 무궁화 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 항균 펩티드인 S100A7(NM_002963)의 발현량을 정상 수준으로 조절하는 항균성 펩티드 저해용 조성물을 제공한다.In order to accomplish the above object, in one aspect, the present invention provides a composition for inhibiting antimicrobial peptides that regulates the expression level of S100A7 (NM_002963), which is an antibacterial peptide, to a normal level, .

일 측면에서, 본 발명에 의해 제공되는 항균성 펩티드 저해용 조성물을 이용함으로써, 다양한 원인에 의하여 증가한 항균성 펩티드의 발현량을 정상 수준으로 되돌릴 수 있다.In one aspect, by using the composition for inhibiting antimicrobial peptides provided by the present invention, the expression level of the antimicrobial peptide increased by various causes can be returned to a normal level.

도 1은 미세먼지 추출액의 처리에 의한 세포생존율을 나타낸 것이며, 여기에서 ADSP는 아시아 먼지 바람 입자(Asian dust storm particle)로서 황사를 나타내고, PM10(Particulate matter 10)은 입자크기가 10㎛인 미세먼지를 나타내며, PM2.5(Particulate matter 2.5)는 입자크기가 2.5㎛인 미세먼지를 나타낸다.
도 2는 PM2.5 미세먼지에 의해 자극된 피부 세포 내에서 S100A7 유전자의 mRNA 발현량이 증가하였고, 무궁화 추출물 처리에 의해 정상 수준으로 되돌아감을 나타낸 것이다.
1 shows the cell survival rate by treatment with a fine dust extract, wherein ADSP represents Asian dust-storm particles, and PM10 (Particulate matter 10) represents fine dust particles having a particle size of 10 μm And PM2.5 (Particulate matter 2.5) represents fine dust having a particle size of 2.5 mu m.
FIG. 2 shows an increase in mRNA expression of S100A7 gene in skin cells stimulated by PM2.5 microparticles, and a return to a normal level by treatment with hibiscus extract.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 일 측면에서, 상기 항균성 펩티드 저해용 조성물은 무궁화 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.In one aspect of the present invention, the composition for inhibiting antimicrobial peptides may include an extract of hibiscus as an active ingredient.

무궁화(Hibiscus  syriacus L.)는 쌍떡잎식물 아욱목 아욱과의 낙엽관목에 속한다. 높이는 3-4m에 달하며, 어린 가지에는 털이 많으나 점차 없어진다. 무궁화는 정원에서 재배가 쉽고 씨로 번식이 가능하지만 꺽꽂이로 번식되므로 형질을 변형시키지 않고 유지하는 것이 쉽다. 잎은 어긋나며 달걀모양이고 대개 3개로 갈라지고 가장자리에는 톱니가 있다. 무궁화의 겉껍질은 벗겨서 종이의 원료로 사용하며 말려서 약으로도 사용한다. 어린잎은 식용하며 꽃과 잎은 차로 마실 수도 있다. Hibiscus syriacus L. belongs to the deciduous shrub of the dicotyledonous plant, The height is 3-4 meters, and the young branches have many hairs but gradually disappear. Mugunghwa is easy to cultivate in the garden and it can reproduce with seeds, but it is easy to keep the traits without deforming because it grows with the knife. Leaves are alternate phyllotaxis, usually divided into three, with sawtooth on edge. The husk of Mugunghwa is stripped and used as a raw material for paper, dried and used as a medicine. Young leaves are edible, flowers and leaves can be drunk.

무궁화는 항산화물질이며 거담효능을 갖는 사포나린(Saponarin)을 주성분으로 한다. 무궁화의 뿌리와 껍질은 탄닌산(Tannic acid)를, 꽃과 잎은 사포나린을, 종과 자는 말발산(Malvalic acid), 스테르쿨산(Sterculic acid) 등을 포함하는 것으로 알려져 있다. Mugunghwa is an antioxidant and its main component is saponarin which has germane effect. It is known that roots and bark of Hibiscus roots contain tannic acid, flowers and leaves contain saponin, and malvalic acid and sterolic acid.

동의보감과 본초강목은 뿌리와 껍질은 달이거나 우려내어 바르거나 찜질하여 무좀, 치질 진통에 사용하고, 꽃과 잎은 말려 가루낸 뒤 온수와 함께 복용하면 거담, 갈증해소, 구토, 식욕 회복 등에 효능이 있고, 종과 자는 이를 태운 연기로 환부를 훈영하여 두통, 편두통제, 농창치료제로 사용할 수 있음을 기록하고 있다. 기타 효능으로는 사혈(瀉血)을 멎게 하고, 해열·해독·소종(消腫) 면유도, 부인병, 옴병치료, 진통 및 진경효과, 육모 및 탈모방지, 기관지염, 인루염, 장염, 이질, 탈항증, 살충효과 등을 들 수 있다.Dongbok-bop and basal gangmok are used for athlete's foot and hemorrhoid pain, roots and shells are moon or worry, and they are used for athlete's foot and hemorrhoid pain. When you take flowers and leaves together with hot water after taking them with hot water, they are effective to relieve thirst, thirst, vomiting and appetite. , And the slave and the fox are fuming the affected part with the smoke burning it, and it can be used as a headache, migraine treatment, and antibiotic treatment. Other efficacies include stopping the blood (泻 血), inducing the fever, detoxification, extinction, gynecological diseases, vomiting, pain and swelling, preventing hair loss and hair loss, bronchitis, inflammation, enteritis, Insecticidal effects and the like.

과거 우리나라에서 무궁화는 구황작물로서 익힌 잎 사용하였다. 무궁화 꽃잎은 떡과 차를 만드는데, 어린무궁화 잎은 나물, 된장국을 만드는데 사용되으며, 뿌리로는 술을 담구었다. 유럽 및 중국에서는 잎과 꽃을 허브차로 이용하며, 궁중요리의 향신료로 익힌 꽃봉오리 사용하였다. 또한 무궁화의 수피에서 섬유를 얻어 제지원료로 사용한다.In the past, Mugunghwa was used as a horticultural crop in Korea. The rosemary petals make rice cakes and tea. Young rosemary leaves are used to make herbs and miso soup. In Europe and China, leaves and flowers are used as herbal tea and buds cooked as spices for court cuisine are used. In addition, fibers are obtained from the bark of Mugunghwa and used as papermaking materials.

일 측면에서, 본 발명의 조성물은 무궁화의 잎, 줄기, 껍질, 뿌리, 과실, 꽃 또는 꽃봉오리, 및 씨앗 등을 이용할 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 조성물은 무궁화의 잎, 줄기, 껍질, 뿌리, 과실, 꽃 또는 꽃봉오리, 및 씨앗 등의 추출물을 이용할 수 있으며, 일 실시예에서, 본 발명의 조성물은 무궁화나무 껍질 추출물(Hibiscus syriacus BARK EXTRACT)을 이용한다.In one aspect, the composition of the present invention can utilize leaves, stems, husks, roots, fruits, flowers or buds of hibiscus, seeds and the like. Specifically, the composition of the present invention may be used as an extract of leaves, stems, husks, roots, fruits, flowers or buds, and seeds of hibiscus. In one embodiment, the composition of the present invention may be selected from the group consisting of Hibiscus bark extract Hibiscus syriacus BARK EXTRACT).

본 발명의 일 측면에서, 상기 무궁화는 특정 추출용매로 추출되어 무궁화 추출물을 형성할 수 있다.In one aspect of the invention, the hibiscus can be extracted with a particular extraction solvent to form a hibiscus extract.

본 발명의 일 측면인, 상기 무궁화 추출물은 무궁화를 물 또는 유기용매로 추출하여 제조될 수 있다. 구체적으로, 무궁화를 물, C1 - C6의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매로 추출하여 제조될 수 있다. In one aspect of the present invention, the above-mentioned hibiscus extract may be prepared by extracting Hibiscus with water or an organic solvent. Specifically, it is preferable that the hibiscus is extracted with at least one selected from the group consisting of water, C 1 -C 6 anhydrous or lower alcohol, acetone, butylene glycol, ethyl acetate, diethyl acetate, diethyl ether, benzene, chloroform and hexane Followed by extraction with a solvent.

일 측면에서, 상기 무궁화 추출물은 상온 추출된 것일 수 있다.In one aspect, the above-mentioned hibiscus extract may be extracted at room temperature.

일 측면에서, 상기 무궁화 추출물은 상기 추출용매로 추출된 이후에, 증발, 여과, 농축, 분리 또는 건조 과정 중 하나 이상을 추가적으로 거쳐서 얻어진 것일 수 있다. 특히, 상기 무궁화 추출물은 1회 이상의 여과 과정을 거친 것일 수 있으며, 일 실시예에서 2회의 여과 과정을 거친다.In one aspect, the hibiscus extract may be one obtained by further extracting one or more of evaporation, filtration, concentration, separation or drying after extraction with the extraction solvent. In particular, the above-mentioned hibiscus extract may be subjected to one or more filtration processes, and in one embodiment, it is subjected to two filtration processes.

일 실시예에서 상기 분리 과정은 원심분리 과정을 포함할 수 있다.In one embodiment, the separation process may include a centrifugation process.

구체적으로, 상기 추출은 물, C1 - C6의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤 및 부틸렌글리콜을 포함하는 극성 용매 및 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산을 포함하는 저극성 용매 중 어느 하나 이상을 용매로 사용하는 것일 수 있다. Specifically, the extraction can be carried out in the presence of water, a C 1 -C 6 anhydrous or a lower alcohol, a polar solvent comprising acetone and butylene glycol, and a polar solvent including ethyl acetate, diethyl acetate, diethyl ether, benzene, chloroform and hexane And a low polarity solvent may be used as a solvent.

더 구체적으로, 상기 용매는 50 - 90%의 에탄올 수용액일 수 있으며, 60 - 80% 또는 65 - 75%의 에탄올 수용액일 수 있다. 상기 용매가 50 - 90%의 에탄올 수용액인 경우, 무궁화에서 유효성분을 효과적으로 추출할 수 있다. 일 실시예에서, 상기 용매는 약 70%의 에탄올 수용액일 수 있다.More specifically, the solvent may be 50-90% ethanol aqueous solution, and may be 60-80% ethanol or 65-75% ethanol aqueous solution. When the solvent is an aqueous 50 to 90% ethanol solution, the active ingredient can be effectively extracted from the hibiscus. In one embodiment, the solvent may be about 70% aqueous ethanol solution.

일 측면에서, 상기 추출물은 추출 후 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치에서 적정 온도로 감압 농축될 수 있다.In one aspect, the extract may be concentrated under reduced pressure to an appropriate temperature in a distillation apparatus equipped with a cooling condenser after extraction.

다만, 본 발명에 따른 무궁화 추출물은 당해 기술 분야의 통상적인 방법으로 추출하여 얻을 수 있으며, 전술한 방법에 의하여 한정되는 것은 아니다.However, the extract of Mugungwha according to the present invention can be extracted by a conventional method in the art, and is not limited by the above-mentioned method.

본 발명의 일 관점인, 조성물에 있어서, 상기 조성물은 무궁화 추출물을, 조성물 총 중량을 기준으로 0.000001 내지 30중량%로 포함할 수 있다. 그 함량이 0.000001 내지 30중량%인 경우, 무궁화 추출물에 의한 미세먼지에 의한 피부 손상 케어 효과가 우수하였다.In one aspect of the present invention, the composition may comprise from 0.000001 to 30% by weight of the hibiscus oil extract, based on the total weight of the composition. When the content thereof is 0.000001 to 30% by weight, the skin care effect by fine dust caused by the hibiscus extract is excellent.

구체적으로, 0.0000001 중량% 이상, 0.0000005 중량% 이상, 0.0000007 중량% 이상, 0.0000009 중량% 이상, 0.000001 중량% 이상, 0.000002 중량% 이상, 0.000004 중량% 이상, 0.000006 중량% 이상, 0.000008 중량% 이상, 0.00001 중량% 이상, 0.00003 중량% 이상, 0.00005 중량% 이상, 0.00007 중량% 이상, 0.00009 중량% 이상, 0.0001 중량% 이상, 0.0003 중량% 이상, 0.0005 중량% 이상, 0.0007 중량% 이상, 0.0009 중량% 이상, 0.001 중량% 이상, 0.01 중량% 이상, 0.1 중량% 이상, 1 중량% 이상, 3 중량% 이상, 5 중량% 이상, 7 중량% 이상, 9 중량% 이상, 10 중량% 이상, 13 중량% 이상, 15 중량% 이상, 17 중량% 이상, 19 중량% 이상, 21 중량% 이상, 23 중량% 이상, 25 중량% 이상, 27 중량% 이상, 29 중량% 이상, 30 중량% 이상, 31 중량% 이상일 수 있고, 32 중량% 이하, 31 중량% 이하, 30 중량% 이하, 29 중량% 이하, 28 중량% 이하, 26 중량% 이하, 24 중량% 이하, 22 중량% 이하, 20 중량% 이하, 18 중량% 이하, 16 중량% 이하, 14 중량% 이하, 12 중량% 이하, 10 중량% 이하, 9 중량% 이하, 8 중량% 이하, 6 중량% 이하, 4 중량% 이하, 2 중량% 이하, 1 중량% 이하, 0.1 중량% 이하, 0.09 중량% 이하, 0.04 중량% 이하, 0.01 중량% 이하, 0.006 중량% 이하, 0.001 중량% 이하, 0.0009 중량% 이하, 0.0007 중량% 이하, 0.00005 중량% 이하, 0.00003 중량% 이하, 0.00001 중량% 이하, 0.000009 중량% 이하, 0.000007 중량% 이하, 0.000005 중량% 이하, 0.000003 중량% 이하, 0.000001 중량% 이하, 0.0000009 중량% 이하, 0.0000007 중량% 이하, 0.0000005 중량% 이하, 0.0000003 중량% 이하, 0.0000002 중량% 이하, 0.0000001 중량% 이하, 0.00000009 중량% 이하일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.More specifically, 0.0000001 wt% or more, 0.0000005 wt% or more, 0.0000007 wt% or more, 0.0000009 wt% or more, 0.0000009 wt% or more, 0.000001 wt% or more, 0.000002 wt% or more, 0.000004 wt% or more, 0.000006 wt% or more, 0.000008 wt. At least 0.00003% by weight, at least 0.00005% by weight, at least 0.00007% by weight, at least 0.00009% by weight, at least 0.00009% by weight, at least 0.0001% by weight, at least 0.0003% by weight, at least 0.0005% by weight, at least 0.0007% by weight, % Or more, 0.01 wt% or more, 0.1 wt% or more, 1 wt% or more, 3 wt% or more, 5 wt% or more, 7 wt% or more, 9 wt% or more, 10 wt% or more, 13 wt% or more, Or more, 17 wt% or more, 19 wt% or more, 21 wt% or more, 23 wt% or more, 25 wt% or more, 27 wt% or more, 29 wt% or more, 30 wt% or more, 31 wt% 32 weight% or less, 31 weight% or less, 30 weight% or less, 29 weight% or less, 28 weight% or less, 26 weight% or less, 24 weight % Or less, 22 wt% or less, 20 wt% or less, 18 wt% or less, 16 wt% or less, 14 wt% or less, 12 wt% or less, 10 wt% or less, 9 wt% or less, 8 wt% % Or less, 4 wt% or less, 2 wt% or less, 1 wt% or less, 0.1 wt% or less, 0.09 wt% or less, 0.04 wt% or less, 0.01 wt% or less, 0.006 wt% or less, 0.001 wt% 0.000003 wt.% Or less, 0.00003 wt.% Or less, 0.00001 wt.% Or less, 0.00001 wt.% Or less, 0.000009 wt.% Or less, 0.000007 wt.% Or less, 0.000005 wt. %, 0.0000007 wt% or less, 0.0000005 wt% or less, 0.0000003 wt% or less, 0.0000002 wt% or less, 0.0000001 wt% or less, or 0.00000009 wt% or less.

본 발명의 다른 측면은, 상기 조성물의 항균성 펩티드 저해 용도를 포함한다.Another aspect of the invention includes the use of the composition for inhibiting antimicrobial peptides.

본 명세서에서 사용되는 "미세먼지"라 함은, 우리 눈에 보이지 않는 아주 작은 물질로 대기 중에 오랫동안 떠다니거나 흩날리는 입자상의 물질로서, 입경 10μm 이하의 물질을 말한다. 특히 입경이 2.5μm 이하인 입자상의 물질은 "초미세먼지"라 하는데, 본원발명에서 "미세먼지"는 "초미세먼지"도 포함하는 것으로 의도된다.As used herein, the term "fine dust" refers to a particulate matter that is a very small material that is invisible to the naked eye and that floats or drifts in the air for a long time. Particularly, particulate matter having a particle size of 2.5 μm or less is called "ultrafine dust". In the present invention, "fine dust" is also intended to include "ultrafine dust".

일 측면에서, 본 발명은 피부 세포에서 특정 유전자의 발현량을 정상 수준으로 조절함으로써, 항균성 펩티드를 저해하는 조성물을 제공한다.In one aspect, the present invention provides a composition for inhibiting an antimicrobial peptide by controlling the expression level of a specific gene in a skin cell to a normal level.

구체적으로, 본 발명에서 다양한 원인에 의하여 항균성 펩티드인 S100A7(NM_002963)의 발현량이 영향을 받을 수 있으며, 이러한 원인에 의하여 상기 항균성 펩티드인 S100A7(NM_002963)의 발현량이 증가하는 경우, 상기 조성물을 이용하여 이들 유전자의 발현량을 억제하여 정상 수준으로 조절함으로써 항균성 펩티드를 저해할 수 있다.Specifically, in the present invention, the expression amount of S100A7 (NM_002963), which is an antimicrobial peptide, may be affected by various causes. When the expression amount of the antibacterial peptide S100A7 (NM_002963) is increased due to such a cause, By inhibiting the expression levels of these genes and regulating them to normal levels, antimicrobial peptides can be inhibited.

본 발명에서 사용되는, 다양한 원인에 의해 발현량이 증가되는 유전자는 [표 1]에 제시되어 있다. [표 1]은 발현량이 증가되는 항균성 펩티드인 유전자를 나타내는 것이며, 이들 표에서 Name은 NCBI의 genebank accession ID를 의미하는 것이고, Gene Symbol은 공식 유전자 심볼을 의미하며, Gene title은 각 유전자의 이름을 의미한다. 이러한 내용은 비특허문헌 2의 기재를 통하여 확인할 수 있다.The genes whose expression levels are increased by various causes, which are used in the present invention, are shown in [Table 1]. [Table 1] shows genes that are antimicrobial peptides with increased expression levels. In these tables, Name means the genebank accession ID of NCBI, Gene Symbol means the official gene symbol, and Gene title means the name of each gene it means. This content can be confirmed through the description of Non-Patent Document 2.

증가유전자Increase gene NameName Gene
Symbol
Gene
Symbol
Gene titleGene title
NM_002963NM_002963 S100A7S100A7 S100 calcium binding protein A7S100 calcium binding protein A7

상기 유전자 또는 단백질의 발현량 분석은 마이크로어레이, PCR, NGS(Nest Generation Sequencing; 차세대 염기서열분석), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA, 방사선 면역 분석, 방사 면역 확산법, 조직면역 염색, 면역침전 분석법 등 당업계에 공지된 다양한 분석 방법을 이용하여 분석될 수 있다.Analysis of the expression level of the gene or protein can be performed using a microarray, PCR, NGS (Nest Generation Sequencing), Western blot, northern blot, ELISA, radioimmunoassay, radioimmunoassay, tissue immuno staining, Can be analyzed using a variety of analytical methods known in the art.

본 발명의 일 관점인, 상기 조성물은, 화장료 조성물일 수 있고, 약학적 조성물일 수 있으며, 건강기능식품 조성물일 수 있다. In one aspect of the present invention, the composition may be a cosmetic composition, a pharmaceutical composition, or a health functional food composition.

상기 화장료 조성물은, 예컨대, 각종 크림, 로션 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품 류와 클렌징, 세안제, 비누, 미용액 등이 있다.Examples of the cosmetic composition include cosmetics such as various creams, lotion creams, lotions, skins, and the like, and cleansing, cleansing agents, soaps, and essences.

일 측면에서, 본 발명의 상기 무궁화 추출물을 함유하는 조성물이 첨가된 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.In one aspect, the cosmetic composition to which the composition containing the hibiscus extract of the present invention is added may take the form of a solution, an emulsion, a viscous mixture or the like.

즉, 일 측면에서 본 발명의 화장료는 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 메이크업 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 패취, 미용액, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징워터, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 샴푸, 린스, 바디세정제, 비누, 염모제, 분무제 등과 같은 제형을 들 수 있다.That is, in one aspect, the cosmetic of the present invention is not particularly limited in its formulation, and examples thereof include an emulsion, cream, lotion, essence, pack, gel, powder, makeup base, foundation, lotion, ointment, patch, Formulations such as foam, cleansing cream, cleansing water, body lotion, body cream, body oil, body essence, shampoo, rinse, body cleanser, soap, hair dye, spray and the like.

각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기 무궁화 추출물 이외에 다른 성분들은 기타 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.In the cosmetic composition of each formulation, the components other than the above-mentioned Hibiscus extract may be mixed and selected without difficulty by those skilled in the art depending on the formulations of the other cosmetic preparations or the purpose of use.

또한, 일 측면에서 본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다.In addition, in one aspect, the cosmetic of the present invention may comprise a composition selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, high molecular weight peptides, polymeric polysaccharides, sphingolipids and seaweed extracts.

일 측면에서, 본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.In one aspect, the cosmetic composition of the present invention may contain, in addition to the above essential ingredients, other ingredients usually added to cosmetics, if necessary.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.Examples of the compounding ingredients that may be added include organic solvents such as a preservative component, a moisturizer, an emollient, a surfactant, an organic and inorganic pigment, an organic powder, an ultraviolet absorbent, a preservative, a bactericide, an antioxidant, a plant extract, a pH adjuster, A blood circulation accelerator, a cold agent, an antiperspirant agent, and purified water.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.The components to be added in addition to these components are not limited thereto, and any of the above components can be compounded within a range that does not impair the objects and effects of the present invention.

일 측면에서, 본 발명의 무궁화 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.In one aspect, the pharmaceutical composition comprising the hibiscus extract of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents conventionally used in the production of pharmaceutical compositions.

그 제형으로는, 상기 무궁화 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 정제, 캡슐, 산제 또는 시럽 등의 경구제, 또는 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제 등의 외용제 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용할 수 있다.As the formulation, the pharmaceutical composition containing the hibiscus extract may be administered orally, such as tablets, capsules, powders or syrups, or external preparations such as ointments, gels, creams, patches or sprays, And may be formulated and used in any form suitable for a clinical formulation.

일반적으로 상기 약학적 조성물에 의해 투여되는 유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 일반적으로 유효성분의 투여량은 0.0001mg/kg/일 내지 3000mg/kg/일, 예를 들어 10 mg/kg/일 내지 500mg/kg/일 일 수 있다.In general, it is to be understood that the actual dosage of the active ingredient administered by the pharmaceutical composition should be determined in light of various relevant factors such as the severity of the symptoms, the route of administration selected, the age, sex, weight and health status of the subject. In general, the dosage of the active ingredient may be from 0.0001 mg / kg / day to 3000 mg / kg / day, for example from 10 mg / kg / day to 500 mg / kg / day.

본 발명의 일 관점인 건강 기능식품 조성물에서, 건강식품은, 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분(기능성원료)을 사용하여 제조한 것으로, 인체의 정상적인 기능을 유지하거나 생리기능 활성화를 통하여 건강을 유지하고 개선하는 식품을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 건강식품은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조, 가공될 수 있으나, 이에 한정되지 않으며 법률에 따라 어떤 형태로든지 제조, 가공될 수 있다.In the health functional food composition as one aspect of the present invention, the health food is produced by using a raw material or a component (functional raw material) having a function useful for a nutrient or a human body which is likely to be deficient in a daily meal, Or to maintain or improve health through the activation of physiological functions. However, the present invention is not limited thereto. The health food may be manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, and circles, but is not limited thereto and may be manufactured and processed in any form according to the law.

구체적으로, 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드 폴리사카라이드, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.Specifically, the health beverage composition has no particular limitation on the other ingredients other than the above-mentioned compounds as essential ingredients in the indicated ratios, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients such as ordinary beverages. Examples of natural carbohydrates are conventional sugars such as monosaccharide polysaccharides, cyclodextrins and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Natural flavors (tau martin, stevia extract (e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavors (saccharin, aspartame, etc.) can be used as flavorings other than those described above.

일반적으로 상기 건강 기능식품 조성물에 의해 투여되는 유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 일반적으로 유효성분의 투여량은 0.0001mg/kg/일 내지 1000mg/kg/일, 예를 들어 0.02 mg/kg/일 내지 6mg/kg/일 일 수 있다.In general, it should be understood that the actual dosage of the active ingredient administered by the health functional food composition should be determined in light of various relevant factors such as the severity of the symptoms, the selected route of administration, the age, sex, weight and health status of the subject . In general, the dosage of the active ingredient may be from 0.0001 mg / kg / day to 1000 mg / kg / day, for example from 0.02 mg / kg / day to 6 mg / kg / day.

이하, 실시예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration and effects of the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, these examples are provided for illustrative purposes only in order to facilitate understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited by the following examples.

[실시예 1] 무궁화 추출물 제조[Example 1] Preparation of hibiscus oil extract

무궁화(Hibiscus syriacus)는 경상북도에서 재배된 것으로, 모아캠 社로부터 입수한 것을 사용하였다. 입수한 무궁화나무의 껍질을 정제수와 에탄올을 3:7의 비율로 혼합한 추출용매, 즉 70% 에탄올을 추출용매로 하여 상온 추출하고 알코올을 증발시켰다. 상온 추출 후 1차 여과를 하여 추출물에 포함된 고형상의 재료를 제거하였고, 그런 뒤 추출물을 농축하여 에탄올을 제거한 후 이를 분리 및 정제하였다. 그리고 원심분리 및 2차 여과 후 건조하여 무궁화 추출물을 얻었다. Hibiscus syriacus was cultivated in Gyeongsangbuk - do, and the one obtained from Moa - Cam was used. The obtained shells were extracted with an extraction solvent mixture of purified water and ethanol at a ratio of 3: 7, that is, 70% ethanol as an extraction solvent, and the alcohol was evaporated. After extracting at room temperature, primary filtration was performed to remove the solid material contained in the extract. Then, the extract was concentrated to remove ethanol, and then it was separated and purified. After centrifugation, secondary filtration and drying, the extracts were obtained.

[실시예 2] 미세먼지 포집 및 추출[Example 2] Fine dust collection and extraction

미세먼지의 포집은 로우 볼륨 에어 샘플러(Sensidyne, Gillian, Low Volume Air Sampler, FL, U.S.A.)를 이용하였고, Filter pack은 매 측정일 오전 10시 전후에 필터와 디누더를 교체하여 약 24시간 동안 시료를 채취하였다. 28일간 서울의 풍하지역(경기도 용인시 처인구 소재, 한국외국어대학교 외국학 종합연구센터 생활관 6층 옥상)에서 매일 미세먼지를 포집하였으며, 측정시간은 진공펌프를 켜면서 타이머를 작동시키고 진공펌프를 끌 때 타이머의 시간을 기록하였다. 채취 유량은 16.7L/min으로 하여 측정 시작시 유량계(Model 4143, TSI Inc.)로 유량을 측정하고 측정이 끝날 때 다시 유량을 측정하였다. 필터팩(filter pack)에 들어가는 Teflon 필터는 시료 채취 전과 후에 무게를 측정하였다. Teflon 필터의 무게를 측정하기 전 24 시간 동안 상대습도 40%의 데시케이터(NIKKO, Japan)에 항량시킨 후 소수점 5자리가 표시되는 전자저울(DVG215CD, Ohaus)에 무게를 두 번 측정하여 평균값을 기록하였다. 시료를 채취한 후에도 무게를 측정하기 전에 데시케이터에서 24시간 항량시킨 후 무게를 두 번 측정하여 채취 전에 측정한 무게와 비교하여 질량농도를 산출하였다. 미세먼지의 추출은 Teflon 필터를 1mL의 에탄올에 적신 후 14mL의 DW를 넣어 필터의 에어로졸 포집면이 수면에 닿도록 한 상태에서 뚜껑을 닫은 후 초음파 세척기로 30분간 초음파를 주어 실행하였다. 여과단계에서 수분에 의한 오차를 최소화하기 위하여 건조기(decicator)에서 48시간 동안 필터의 수분을 완전히 제거한 후, 0.1mg까지 측정할 수 있는 초정밀저울계(Mettler Toledo Company 社)를 이용하여 필터의 무게를 칭량하여 필터의 추출 전, 후 무게를 칭량하였다.The filter pack was used for about 24 hours by replacing the filter and denuder at around 10:00 am on each measurement day. The filter pack and the denuder were replaced by a low volume air sampler (Sensidyne, Gillian, Low Volume Air Sampler, FL, USA) Respectively. For 28 days, fine dust was collected daily from the windy area of Seoul (Gyeonggi-do, Korea), and the measurement time was measured by turning on the timer while turning on the vacuum pump and turning off the timer Time was recorded. The flow rate was measured with a flow meter (Model 4143, TSI Inc.) at the start of the measurement at a flow rate of 16.7 L / min, and the flow rate was measured again at the end of the measurement. The Teflon filter in the filter pack weighed before and after sampling. Before measuring the weight of the Teflon filter, the sample was weighed into a desiccator (NIKKO, Japan) with a relative humidity of 40% for 24 hours and then weighed twice on an electronic balance (DVG215CD, Ohaus) . After the sample was collected, the sample was weighed in a desiccator for 24 hours before measuring the weight, and then the weight was measured twice, and the mass concentration was calculated by comparing with the weight measured before the sampling. The extraction of fine dust was carried out by wetting the Teflon filter with 1 mL of ethanol, placing the filter with 14 mL of DW, closing the lid with the filter surface of the filter touching the water surface, and ultrasonically applying the filter with the ultrasonic cleaner for 30 minutes. In order to minimize the error caused by moisture in the filtration step, the water content of the filter was completely removed for 48 hours in a decicator, and then the weight of the filter was measured using a super-precision scale system (Mettler Toledo Company) Weighed and weighed before and after filter extraction.

[실시예 3] (정상사람)각질형성세포주의 배양[Example 3] Culture of keratinocyte (normal human) cell line

(정상사람)각질형성세포주(Human normal epidermal keratinocytes)는 론자 社(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자 社의 지침서에 따랐다. 500ml의 KBM-2(KBMTM-2, CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트 CC-4152(KGM TM-2 Bullet kit, CC-4152)(성분: BPE(Bovine pituitary extract)), 인간표피 성장인자(human epidermal growth factor, hEGF), 인슐린(Insulin), 하이드로코티손(Hydrocortisone), 트랜스페린(Transferrin), 에피네프린(Epinephrine), 및 젠타마이신 설페이트 + 암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000))를 첨가한 KGM-2 불렛키트 CC-3107(KGM TM-2 Bullet Kit, CC-3107)을 사용하였다.Human normal epidermal keratinocytes were purchased from Lonza, Inc. (Walkersville, Maryland, USA), subcultured and cultured in a CO 2 incubator at 37 ° C under 5% CO 2 Lt; / RTI > The cell culture was in accordance with Lonza's guidelines. (KGM-2 Bullet kit, CC-4152) (ingredient: BPE (bovine pituitary extract)), human epidermal growths (KBM- (Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA), human epidermal growth factor (hEGF), insulin, Hydrocortisone, Transferrin, Epinephrine and gentamycin sulfate (KGM-2 Bullet Kit, CC-3107) was added to the reaction mixture.

[실시예 4] (정상사람)각질형성세포주에 미세먼지의 처리 및 세포독성 측정[Example 4] (normal human) Treatment of fine dust and cytotoxicity measurement on keratinocyte cell line

미세먼지 처리를 통한 세포독성 여부 확인을 위하여, Mossman 등(J.Immunol. Methods, 65, 55-63, 1983)의 방법으로 (정상사람)각질형성세포주를 이용한 MTT 실험을 수행하였다. MTT experiments were carried out using keratinocyte lines (normal human) by the method of Mossman et al. (J. Immunol. Methods, 65, 55-63, 1983) in order to confirm cytotoxicity through fine dusting.

구체적으로, 24-웰 플레이트를 사용하고 상기 실시예 3의 채취하여 얻은 직경이 2.5㎛인 미세먼지를 정제수에 분산시켜서 미세먼지 분산액을 제조한 다음, 실시예 4의 세포배양조건으로 2.5 × 105 웰 세포수인 조건에서 배양한 세포에 상기 미세먼지 분산액을 처리하여 24시간 동안 배양한 후, MTT(3-4,5-dimethylthiazol-2,5-diphenyltetra zolium bromide) 5㎎/㎖을 혼합하여 37℃에서 3시간 동안 추가 배양하였다. 이 후 배지를 제거하고 형성된 포르마잔 크리스탈(formazan crystal)을 DMSO 500㎕에 용해하였다. 그 용해물을 96-웰 플레이트로 옮겨 분주(aliquot)하고 흡광도 540nm에서 OD값을 측정하였다. 측정 결과는 도 1에 나타내었다.Specifically, using a 24-well plate, and the cell culture conditions of Example 3 taken to prepare a dispersion of fine particles by dispersing the fine particles in the obtained diameter 2.5㎛ in purified water in the following Example 4 2.5 × 10 5 Cells cultured under the conditions of the number of well cells were treated with the fine dust dispersion and cultured for 24 hours. Then, 5 mg / ml of MTT (3-4,5-dimethylthiazol-2,5-diphenyltetra zolium bromide) Lt; 0 > C for 3 hours. The medium was then removed and the formazan crystal formed was dissolved in 500 占 퐇 of DMSO. The lysate was transferred to a 96-well plate and aliquoted and the OD value measured at 540 nm absorbance. The measurement results are shown in Fig.

도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 세포주에서 2.5 마이크로미터 이하 미세먼지를 분산시킨 분산액에 의한 세포독성에 대하여 80% 생존율을 보이는 농도(IC20)값은 2.5 마이크로미터 이하 미세먼지 수용성 추출액의 경우 12.5㎍/㎖ 이었다.As shown in FIG. 1, the concentration (IC20) showing an 80% survival rate with respect to cytotoxicity by a dispersion in which fine particles of 2.5 micrometer or less were dispersed in the cell line was 12.5 g / Ml.

[실시예 5] 차세대 염기서열분석(Next Generation Sequencing)을 통한 미세먼지의 세포 유전자 변화 확인[Example 5] Confirmation of cellular genetic change of fine dust through next generation sequencing

RNA-염기서열 데이터 처리 및 분석을 위해, Trapnell et al.(2012)에 의해 개발된 일반적인 분석 단계를 참조하였다. FastQC(http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/)를 사용하여 RNA-seq 데이터 품질을 확인하였고, FASTX(http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/)를 사용하여, 정확도가 떨어지는 베이스 및 어탭터 서열을 제거하였다. 이후 Tophat(Trapnell et al., 2009)과 인간 유전체(hg19)를 사용하여 얼라인먼트를 수행하였고, 각 샘플의 데이터량을 RSeQC로 재명명된 EVER-seq을 사용하여 확인하였다(Wang et al., 2012). 또한, Cufflinks를 사용하여 전사체(transcript)의 발현 수준을 정량하였고, 미세먼지 분산액 처리 샘플과 정상 샘플의 사이에서 전사 수준을 비교하였다(Trapnell et al., 2010). FDR adjusted p-value<0.05로, ≥2.0 fold-change의 엄격한 컷오프를 적용하여, 직경이 2.5㎛인 미세먼지의 분산액의 처리시 유의미한 발현 차이를 나타내는 유전자를 결정하였다. 측정 결과는 하기 [표 2] 및 [도 2]에 나타나 있다.For RNA-base sequence data processing and analysis, reference was made to the general analysis step developed by Trapnell et al. (2012). We confirmed the RNA-seq data quality using FastQC (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/) and used FASTX (http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/) , Thereby removing the base and the adder sequences with low accuracy. Afterwards, alignment was performed using Tophat (Trapnell et al., 2009) and human genome (hg19), and the amount of data for each sample was confirmed using EVER-seq renamed RSeQC (Wang et al., 2012 ). In addition, the level of expression of transcripts was quantified using Cufflinks, and transcription levels were compared between the fine dust dispersion treated and normal samples (Trapnell et al., 2010). A stringent cutoff of ≥2.0 fold-change was applied to the FDR adjusted p-value <0.05 to determine the gene that showed significant expression differences in the treatment of the dispersion of fine dust with a diameter of 2.5 μm. The measurement results are shown in the following [Table 2] and [Figure 2].

증가유전자Increase gene NameName Gene
Symbol
Gene
Symbol
배수 변화량Drainage variation
NM_002963NM_002963 S100A7S100A7 23.823.8

[실시예 6] 실시간 RT-PCR 정량[Example 6] Real-time RT-PCR quantitation

실시예 2에서 추출한 직경이 2.5㎛인 미세먼지를 실시예 3에서 배양한 인간정상각질피부세포에 세포배양배지 1ml에 12.5㎍의 양으로 처리하고, 하기 표 3에 나타낸 유전자의 프라미어(applied biosystems TaqMan® Primers)로 상대적 mRNA 발현양을 측정하였다. 무궁화 추출물은 실시예 1에서 제조한 것을 사용하였다. Human microkeratin skin cells cultured in Example 3 in the amount of fine particles having a diameter of 2.5 占 퐉 extracted in Example 2 were treated in an amount of 12.5 占 퐇 in 1 ml of the cell culture medium and applied to the applied biosystems TaqMan® Primers) to determine the relative mRNA expression levels. The extract of Mugunghwa was the one prepared in Example 1.

증가유전자Increase gene NameName Gene
Symbol
Gene
Symbol
TaqMan® 프라이머TaqMan® primer
NM_002963NM_002963 S100A7S100A7 Hs00161488_m1Hs00161488_m1

배지에 무궁화 추출물을 20 ppm의 농도로 처리하고 24시간 경과 후, 배양액을 제거하고, 2ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트 社의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 상기 [표 3]의 프라이머를 이용한 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(Q-RT-PCR: real time-reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 정량적으로 분석하였다. 유전자의 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템사의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 세포의 유전자 변화를 실시간 PCR로 평가하였으며, 그 결과를 [도 2]에 나타내었다. 이용한 Q-RT-PCR과 실시간 PCR은 모두 라이프테크놀로지에서 배포하는 표준 프로토콜에 따라서 실행하였으며, 구체적으로 95℃에서 20초 동안 처리한 후, 95℃에서 3초 및 60℃에서 30초를 처리하는 공정을 40주기 진행하였다.After 24 hours, the culture solution was removed, and the cells were washed with 2 ml of phosphate buffered saline (PBS). Then, Trizol reagent (Invitrogen, Carlsbad , CA, USA). The separated RNA was further purified with an RNA kit (QIAGEN RNeasykt, QIAGEN, Valencia, Calif.) From Agilent Technologies, Inc., Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, ) Was used to confirm the quality of the RNA. CDNA was synthesized from the above RNA using a reverse transcription kit (Invitrogen, Carlsbad, Calif.) Of Invitrogen, and the cDNA was synthesized using the primers in the real time reverse transcription polymerase chain reaction (Q -RT-PCR: real-time reverse transcription polymerase chain reaction). The gene expression patterns of the cells were evaluated by real-time PCR using a TaqMan gene expression assay kit (Applied Biosystems, Foster City, Calif.) Of Applied Biosystems. Respectively. Both Q-RT-PCR and real-time PCR were performed according to the standard protocols distributed by Life Technologies. Specifically, the Q-RT-PCR was performed at 95 ° C for 20 seconds, followed by 95 ° C for 3 seconds and 60 ° C for 30 seconds For 40 cycles.

[도 2]에 나타낸 바와 같이, 미세먼지에 의해 자극된 피부 세포에서 발현량이 증가하는 유전자가 존재하며, 무궁화 추출물의 처리에 의하여 S100 칼슘 바인딩 프로틴 A7(S100A7) 유전자의 발현량이 감소됨을 확인할 수 있었다.As shown in FIG. 2, there is a gene whose expression level increases in skin cells stimulated by fine dust, and it was confirmed that the expression amount of S100 calcium binding protein A7 (S100A7) gene was decreased by treatment with the extract of Mugunghwa extract .

따라서, 무궁화 추출물은 항균성 펩티드에 의한 자극으로부터 피부 세포를 효과적으로 보호하고, 상기 자극에 의하여 전술한 특정 유전자의 발현량이 변화하는 것을 억제 또는 방지하여, 정상 수준의 발현량을 갖도록 할 수 있음을 알 수 있다.Thus, it can be seen that the hibiscus extract effectively protects the skin cells from stimulation by the antimicrobial peptide, and inhibits or prevents the change in the expression level of the specific gene described above by the stimulation, so that the expression level of the normal level can be obtained have.

이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강 기능식품 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Hereinafter, formulation examples of the composition according to the present invention will be described. However, the cosmetic composition, the pharmaceutical composition and the health functional food composition can be applied to various formulations, and the present invention is not limited thereto .

[제형예 1] 정제 [Formulation Example 1] Tablets

본 발명 실시예에 따른 무궁화 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.The tablets were prepared by mixing 100 mg of the extract of Hibiscus rosea, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch and 2 mg of magnesium stearate according to the present invention, followed by tableting according to a conventional method for preparing tablets.

배합성분Compounding ingredient 함량(mg)Content (mg) 무궁화 추출물Mugunghwa extract 100100 락토오스Lactose 400400 옥수수 전분Corn starch 400400 스테아린산 마그네슘Magnesium stearate 22

[제형예 2] 캡슐제[Formulation Example 2]

본 발명 실시예에 따른 무궁화 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조 방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.100 mg of Hibiscus L. extract according to the present invention, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch and 2 mg of magnesium stearate were mixed and filled in gelatin capsules according to the conventional preparation method of capsules to prepare capsules.

배합성분Compounding ingredient 함량(mg)Content (mg) 무궁화 추출물Mugunghwa extract 100100 락토오스Lactose 400400 옥수수 전분Corn starch 400400 스테아린산 마그네슘Magnesium stearate 22

[제형예 3] 과립제[Formulation Example 3]

본 발명 실시예에 따른 무궁화 추출물 50mg, 무수결정 포도당 250mg 및 전분 550mg을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하였다.50 mg of Hibiscus rosea extract, 250 mg of anhydrous crystalline glucose, and 550 mg of starch were mixed and granulated into granules using a fluidized bed granulator.

배합성분Compounding ingredient 함량(mg)Content (mg) 무궁화 추출물Mugunghwa extract 5050 무수결정 포도당Anhydrous crystalline glucose 250250 전분Starch 550550

[제형예 4] 비누 [Formulation Example 4] Soap

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 무궁화 추출물Mugunghwa extract 5.005.00 유지maintain 적량Suitable amount 수산화나트륨Sodium hydroxide 적량Suitable amount 염화나트륨Sodium chloride 적량Suitable amount 향료Spices 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 5] 로션 [Formulation Example 5] Lotion

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 무궁화 추출물Mugunghwa extract 5.005.00 L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염L-ascorbic acid-2-phosphate magnesium salt 1.001.00 수용성 콜라겐 (1 % 수용액)Water soluble collagen (1% aqueous solution) 1.001.00 시트르산나트륨Sodium citrate 0.100.10 시트르산Citric acid 0.050.05 감초 엑기스Licorice extract 0.200.20 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.003.00 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 6] 크림[Formulation Example 6] Cream

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 무궁화 추출물Mugunghwa extract 3.003.00 폴리에틸렌글리콜모노스테알레이트Polyethylene glycol monostearate 2.002.00 자기유화형모노스테아르산글리세린Self emulsifying monostearic acid glycerin 5.005.00 세틸알코올Cetyl alcohol 4.004.00 스쿠알렌Squalene 6.006.00 트리2-에틸헥산산글리세릴Tri-2-ethylhexanoic acid glyceryl 6.006.00 스핑고당지질Sphingoglycolipids 1.001.00 1.3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 7.007.00 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 7] 연고[Formulation Example 7] ointment

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 무궁화 추출물Mugunghwa extract 5.005.00 폴리비닐알코올Polyvinyl alcohol 13.0013.00 L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염L-ascorbic acid-2-phosphate magnesium salt 1.001.00 라우로일히드록시프롤린Lauroylhydroxyproline 1.001.00 수용성 콜라겐 (1 % 수용액)Water soluble collagen (1% aqueous solution) 2.002.00 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.003.00 에탄올ethanol 5.005.00 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 8] 미용액 제조 [Formulation Example 8] Preparation of serum

배합성분Compounding ingredient 함량(%)content(%) 무궁화 추출물Mugunghwa extract 3.003.00 히드록시에틸렌셀룰로오스(2 % 수용액)Hydroxyethylene cellulose (2% aqueous solution) 12.0012.00 크산탄검(2 % 수용액)Xanthan gum (2% aqueous solution) 2.002.00 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 6.006.00 진한 글리세린Concentrated glycerin 4.004.00 히알루론산나트륨 (1 % 수용액)Sodium hyaluronate (1% aqueous solution) 2.002.00 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 9] 건강식품[Formulation Example 9] Health food

배합 성분Compounding ingredient 함량content 무궁화 추출물Mugunghwa extract 2mg2 mg 비타민 A 아세테이트Vitamin A acetate 70μg70 μg 비타민 EVitamin E 1.0mg1.0 mg 비타민 B1Vitamin B1 0.13mg0.13 mg 비타민 B2Vitamin B2 0.15mg0.15 mg 비타민 B6Vitamin B6 0.5mg0.5 mg 비타민 B12Vitamin B12 0.2μg0.2 μg 비타민 CVitamin C 10mg10 mg 비오틴Biotin 10μg10 μg 니코틴산아미드Nicotinic acid amide 1.7mg1.7 mg 엽산Folic acid 50μg50 μg 판토텐산 칼슘Calcium pantothenate 0.5mg0.5 mg 황산 제1철Ferrous sulfate 1.75mg1.75 mg 산화아연Zinc oxide 0.82mg0.82 mg 탄산마그네슘Magnesium carbonate 25.3mg25.3 mg 제1인산칼륨Potassium monophosphate 15mg15 mg 제2인산칼슘Dicalcium phosphate 55mg55 mg 구연산칼륨Potassium citrate 90mg90 mg 탄산칼슘Calcium carbonate 100mg100 mg 염화마그네슘Magnesium chloride 24.8mg24.8 mg

[제형예 10] 건강음료[Formulation Example 10] Health drinks

배합성분Compounding ingredient 함량content 무궁화 추출물Mugunghwa extract 50mg50 mg 구연산Citric acid 1000mg1000 mg 올리고당oligosaccharide 100 g100 g 타우린Taurine 1g1g 정제수Purified water 잔량Balance

Claims (10)

무궁화 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항균성 펩티드 저해용 조성물.A composition for inhibiting antimicrobial peptides, comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient. 제 1 항에 있어서,
상기 무궁화 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.000001 내지 30중량%로 포함된, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein said hibiscus extract is included in an amount of 0.000001 to 30% by weight based on the total weight of the composition.
제 1 항에 있어서,
상기 무궁화 추출물은 물, C1 - C6의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매로 추출된 것인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the extract is selected from the group consisting of water, C 1 -C 6 anhydrous or lower alcohol, acetone, butylene glycol, ethyl acetate, diethyl acetate, diethyl ether, benzene, chloroform and hexane . &Lt; / RTI &gt;
제 1 항에 있어서,
상기 무궁화 추출물은 무궁화나무의 껍질에서 추출된 것인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein said hibiscus extract is extracted from the bark of the cow.
제 1 항에 있어서,
상기 항균성 펩티드는 S100A7(NM_002963)을 포함하는, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the antimicrobial peptide comprises S100A7 (NM_002963).
제 5 항에 있어서,
상기 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 적용되는, 조성물.
6. The method of claim 5,
Wherein the composition is applied to keratinocytes.
제 1 항에 있어서,
상기 무궁화 추출물은 10 내지 500 mg/kg/일의 투여량으로 투여되는, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein said hibiscus extract is administered at a dose of 10 to 500 mg / kg / day.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition is a cosmetic composition.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 약학적 조성물인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition is a pharmaceutical composition.
제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 건강 기능식품 조성물인, 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition is a health functional food composition.
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050048299A (en) * 2003-11-19 2005-05-24 대한민국(광주.전남지방중소기업청) Dye having antivirus efficacy and dyeing tissue thereof
KR20100080164A (en) * 2008-12-31 2010-07-08 한국생명공학연구원 A pharmaceutical composition comprising (-)-aptosimon for prevention and treatment of inflammatory diseases
KR100985719B1 (en) * 2009-09-15 2010-10-06 (주)지에프씨 Cosmetic composition comprising catalpa ovata and hibiscus syriacus extracts as an effective component

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050048299A (en) * 2003-11-19 2005-05-24 대한민국(광주.전남지방중소기업청) Dye having antivirus efficacy and dyeing tissue thereof
KR20100080164A (en) * 2008-12-31 2010-07-08 한국생명공학연구원 A pharmaceutical composition comprising (-)-aptosimon for prevention and treatment of inflammatory diseases
KR100985719B1 (en) * 2009-09-15 2010-10-06 (주)지에프씨 Cosmetic composition comprising catalpa ovata and hibiscus syriacus extracts as an effective component

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Kim, H.J., et al, "Transcriptome analysis of airborne PM2.5-induced detrimental effects on human keratinocytes", Toxicology Letters 273, 26-35, 2017.
Son et al., "S100A7(psoriasin) inhibits human epidermal differentiation by enhanced IL-6 secretionh through IκB/NF-κB signalling", Experimental Dermatology. 2016 Aug; 25(8):636-41.
네이버 블로그, 무궁화 꽃 화장품 마몽드 <무궁화 보습 장벽 크림>.., [Online], (2016.10.9.), 인터넷 <URL:https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=izziy&logNo=220831807334&proxyReferer=https%3A%2F%2Fwww.google.co.kr%2F> 1부.* *

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