KR102429851B1 - Composition comprising camellia sinensis L. root extract for anti-aging or anti-inflammation - Google Patents

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Abstract

본 명세서에는 차나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 염증 또는 노화를 일으키는 자극원에 의해 발현량이 영향을 받는 피부 세포 내 유전자인 XDH(NM_000379)의 발현량을 정상 수준으로 조절하는 항노화 조성물 및 항염 조성물이 개시된다.Herein, as a composition comprising a tea tree root extract as an active ingredient, an anti-aging composition that regulates the expression level of XDH (NM_000379), a gene in skin cells affected by stimuli that causes inflammation or aging, to a normal level and anti-inflammatory compositions.

Description

차나무 뿌리 추출물을 포함하는 항노화 또는 항염 조성물{Composition comprising camellia sinensis L. root extract for anti-aging or anti-inflammation}Anti-aging or anti-inflammatory composition comprising a tea tree root extract {Composition comprising camellia sinensis L. root extract for anti-aging or anti-inflammation}

본 명세서에는 항노화 및 항염 조성물이 개시된다. 보다 상세하게, 정상 상태의 피부 세포와 비교하여 노화 및 염증에 의해 발현 정도가 변화되는 피부 세포 유전자인 바이오마커 등을 유의미하게 변화시켜서 피부 세포의 노화 및 염증을 저하시키는, 차나무 뿌리 추출물을 포함하는 조성물이 개시된다.Disclosed herein are anti-aging and anti-inflammatory compositions. More specifically, compared to normal skin cells, the biomarker, which is a skin cell gene whose expression level is changed by aging and inflammation, is significantly changed to reduce aging and inflammation of skin cells. A composition is disclosed.

요즘과 같이 환경의 변화나 생활 패턴의 변화에 따른 냉/난방의 인위적인 온도 조절, 사회 생활에서 발생되는 각종 스트레스와 환경 오염으로 인한 피부 스트레스, 화장 습관에 따른 잦은 세안 및 연령 증가에 따른 자연적인 피부염증 및 피부 노화 등이 발생하고 있다.As in these days, artificial temperature control of cooling/heating according to changes in the environment or life patterns, skin stress due to various stresses and environmental pollution occurring in social life, frequent washing due to makeup habits, and natural skin due to increasing age Inflammation and skin aging are occurring.

또한, 외부로부터 받는 과도한 물리적, 화학적 자극, 자외선 및 스트레스 등은 피부의 정상기능을 저하시키고 탄력손실, 각질화, 주름생성, 염증 등의 현상을 촉진시키게 되는데, 특히 자외선, 황사 또는 먼지가 산화의 자극원, 노화의 자극원 또는 염증의 자극원이 되고 있다.In addition, excessive physical and chemical stimuli, ultraviolet rays and stress from the outside reduce the normal function of the skin and promote phenomena such as loss of elasticity, keratinization, wrinkle formation, and inflammation. It is becoming a source of irritation, a source of aging, or a source of inflammation.

현재 미세먼지로 인한 다양한 피부질환에 관하여 연구되고 있으나, 이러한 피부 손상을 완화시키는 효능이 밝혀진 천연 추출물은 많지 않다.Currently, various skin diseases caused by fine dust are being studied, but there are not many natural extracts that have been shown to be effective in alleviating such skin damage.

XDH는 자극원에 장기간 노출된 경우에 유발된 산화 스트레스(oxidative stress)를 나타내고, 그 결과 외인성 피부노화를 나타내는 지표라는 사실이 현재 알려졌다(비특허문헌 1 참조).It is currently known that XDH represents oxidative stress induced by prolonged exposure to an irritant, and as a result is an indicator of extrinsic skin aging (see Non-Patent Document 1).

Kim, H.J., et al, "Transcriptome analysis of airborne PM2.5-induced detrimental effects on human keratinocytes", Toxicology Letters 273, 26-35, 2017. Kim, H.J., et al, "Transcriptome analysis of airborne PM2.5-induced detrimental effects on human keratinocytes", Toxicology Letters 273, 26-35, 2017.

이에 본 발명자는 염증 또는 노화를 일으키는 자극원이 피부에 유해한 영향을 미치며, 이러한 영향에 의하여 피부 세포 유전자의 발현에 영향을 미침으로써 피부 세포 노화 및 염증 등과 같은 증상이 나타나게 되는데 본원의 발명에 따른 조성물이 항노화 및 항염 효능을 갖는다는 것을 발견하다.Accordingly, the present inventors have determined that the irritant causing inflammation or aging has a detrimental effect on the skin, and by this effect, symptoms such as skin cell aging and inflammation appear by affecting the expression of skin cell genes. The composition according to the present invention found to have anti-aging and anti-inflammatory properties.

따라서, 일 측면에서 본 발명은 항노화 조성물 및 항염 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Accordingly, in one aspect, the present invention aims to provide an anti-aging composition and an anti-inflammatory composition.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 일 측면에서, 본 발명은 차나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물로서, 염증 또는 노화를 일으키는 자극원에 의해 발현량이 영향을 받는 피부 세포 내 유전자인 XDH(NM_000379) 의 발현량을 정상 수준으로 조절하는 항노화 조성물 및 항염 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, in one aspect, the present invention provides a composition comprising a tea tree root extract as an active ingredient, XDH (NM_000379), which is a gene in skin cells whose expression level is affected by stimulants that cause inflammation or aging It provides an anti-aging composition and an anti-inflammatory composition for regulating the expression level to a normal level.

일 측면에서, 본 발명에 의해 제공되는 항노화 조성물 및 항염 조성물을 이용함으로써, 염증 또는 노화 자극에 의해 변화되는 유전자 발현량을 정상 수준으로 되돌려 피부 세포의 손상을 저하시킬 수 있다.In one aspect, by using the anti-aging composition and the anti-inflammatory composition provided by the present invention, it is possible to reduce the damage to skin cells by returning the gene expression level changed by inflammation or aging stimulation to a normal level.

도 1은 자극원 처리에 의한 세포생존율을 나타낸 것이며, 여기에서 ADSP는 아시아 먼지 바람 입자(Asian dust storm particle)로서 황사를 나타내고, PM10(Particulate matter 10)은 입자크기가 10㎛인 미세먼지를 나타내며, PM2.5(Particulate matter 2.5)는 입자크기가 2.5㎛인 미세먼지를 나타낸다.
도 2는 염증 또는 노화를 일으키는 자극이 가해진 피부 세포 내에서 XDH 유전자의 mRNA 발현량이 증가하였고, 차나무 뿌리 추출물의 처리에 의해 정상 수준으로 되돌아감을 나타낸 것이다.
도면에서, "녹뿌1"은 차나무 뿌리 에탄올 추출물(실시예 1)을 1 ppm 처리한 것, "녹뿌5"는 차나무 뿌리 에탄올 추출물(실시예 1)을 5 ppm 처리한 것, "녹사1"은 차나무 뿌리 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(실시예 2)을 1 ppm 처리한 것, "녹사5"는 차나무 뿌리 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(실시예 2)을 5 ppm 처리한 것, "NT"는 미세먼지 처리하지 않은 것, "cont1" 및 "cont2"는 각각의 대조군을 의미한다.
1 shows the cell viability by treatment with an irritant, where ADSP represents yellow dust as Asian dust storm particles, and PM10 (Particulate matter 10) represents fine dust with a particle size of 10 μm. , PM2.5 (Particulate matter 2.5) represents fine dust with a particle size of 2.5㎛.
FIG. 2 shows that the mRNA expression level of the XDH gene was increased in skin cells subjected to inflammation or aging stimuli, and returned to a normal level by treatment with a tea tree root extract.
In the drawings, "Nokpu 1" is 1 ppm of tea root ethanol extract (Example 1), "Nokpu 5" is 5 ppm of tea root ethanol extract (Example 1), and "Noxa 1" is 1 ppm of the butanol fraction of the tea root ethanol extract (Example 2) was treated (Example 2), "Noxa 5" was treated with 5 ppm of the butanol fraction of the tea root ethanol extract (Example 2), and "NT" was treated with fine dust Without, “cont1” and “cont2” refer to the respective controls.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 일 측면에서, 상기 조성물은 차나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.In one aspect of the present invention, the composition may include a tea tree root extract as an active ingredient.

차나무(Camellia sinensis)는 차나무과(theaceae)에 속하는 다년생 상록식물로서 열대, 아열대, 온대지방에 분포되고 차나무의 주요성분으로는 카테킨, 사포닌, 카페인, 아미노산, 비타민 및 무기질 등이 있으며, 이들 화학성분들은 여러 가지 생리활성과 약리효과를 나타내는 것으로 보고되고 있다. 오늘날 건강에 기여하는 생리활성물질로서 활발한 연구가 되고 있다. Camellia sinensis is a perennial evergreen plant belonging to theaceae, distributed in tropical, subtropical, and temperate regions. The main components of tea tree include catechin, saponin, caffeine, amino acids, vitamins and minerals, It has been reported to exhibit various physiological activities and pharmacological effects. Today, active research is being conducted as a bioactive substance that contributes to health.

일 측면에서, 상기 차나무 뿌리 추출물은 사포닌을 포함하는 추출물일 수 있다.In one aspect, the tea tree root extract may be an extract containing saponins.

일 측면에서, 상기 차나무 뿌리 추출물은 상기 추출물 총 중량에 대하여 사포닌을 30 내지 70 중량%로 포함할 수 있다. 바람직하게, 상기 차나무 뿌리 추출물은 상기 추출물 총 중량에 대하여 사포닌을 50 내지 60 중량%로 포함할 수 있다. 사포닌이 상기 함량 범위인 경우, 차나무 뿌리 추출물에 의한 항노화 및 항염 효과가 우수하였다.In one aspect, the tea tree root extract may contain 30 to 70% by weight of saponins based on the total weight of the extract. Preferably, the tea tree root extract may contain 50 to 60% by weight of saponins based on the total weight of the extract. When the saponin was in the above content range, the anti-aging and anti-inflammatory effects of the tea tree root extract were excellent.

구체적으로, 30 중량% 이상, 31 중량% 이상, 32 중량% 이상, 33 중량% 이상, 34 중량% 이상, 35 중량% 이상, 36 중량% 이상, 37 중량% 이상, 38 중량% 이상, 39 중량% 이상, 40 중량% 이상, 41 중량% 이상, 42 중량% 이상, 43 중량% 이상, 44 중량% 이상, 45 중량% 이상, 46 중량% 이상, 47 중량% 이상, 48 중량% 이상, 49 중량% 이상, 50 중량% 이상, 51 중량% 이상, 52 중량% 이상, 53 중량% 이상, 54 중량% 이상, 또는 55 중량% 이상일 수 있고, 70 중량% 이하, 69 중량% 이하, 68 중량% 이하, 67 중량% 이하, 66 중량% 이하, 65 중량% 이하, 64 중량% 이하, 63 중량% 이하, 62 중량% 이하, 61 중량% 이하, 60 중량% 이하, 59 중량% 이하, 58 중량% 이하, 57 중량% 이하, 56 중량% 이하, 또는 55 중량% 이하일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Specifically, 30% by weight or more, 31% by weight or more, 32% by weight or more, 33% by weight or more, 34% by weight or more, 35% by weight or more, 36% by weight or more, 37% by weight or more, 38% by weight or more, 39% by weight or more % or more, 40% or more, 41% or more, 42% or more, 43% or more, 44% or more, 45% or more, 46% or more, 47% or more, 48% or more, 49% or more % or more, 50 wt% or more, 51 wt% or more, 52 wt% or more, 53 wt% or more, 54 wt% or more, or 55 wt% or more, and 70 wt% or less, 69 wt% or less, 68 wt% or less , 67 wt% or less, 66 wt% or less, 65 wt% or less, 64 wt% or less, 63 wt% or less, 62 wt% or less, 61 wt% or less, 60 wt% or less, 59 wt% or less, 58 wt% or less , 57 wt% or less, 56 wt% or less, or 55 wt% or less, but is not limited thereto.

본 발명의 일 측면에서, 상기 차나무 뿌리는 특정 추출용매로 추출되어 차나무 뿌리 추출물을 형성할 수 있다.In one aspect of the present invention, the tea tree root may be extracted with a specific extraction solvent to form a tea tree root extract.

본 발명의 일 측면인, 상기 차나무 뿌리 추출물은 차나무 뿌리를 물 또는 유기용매인 1차 추출용매로 추출하여 제조될 수 있다. 구체적으로, 상기 1차 추출용매는 물, C1 -C6의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매일 수 있다. 더 구체적으로, 상기 추출은 물, C1 - C6의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤 및 부틸렌글리콜을 포함하는 극성 용매 및 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산을 포함하는 저극성 용매 중 어느 하나 이상을 용매로 사용하는 것일 수 있다. 더 구체적으로, 상기 용매는 50 - 90%의 에탄올 수용액일 수 있으며, 60 - 80% 또는 65 - 75%의 에탄올 수용액일 수 있다. 상기 용매가 50 - 90%의 에탄올 수용액인 경우, 차나무 뿌리에서 유효성분을 효과적으로 추출할 수 있다. 일 실시예에서, 상기 용매는 약 70%의 에탄올 수용액일 수 있다.According to one aspect of the present invention, the tea tree root extract may be prepared by extracting the tea tree root with water or an organic solvent, which is a primary extraction solvent. Specifically, the primary extraction solvent is water, C 1 -C 6 Anhydrous or hydrous lower alcohol, acetone, butylene glycol, ethyl acetate, diethyl acetate, diethyl ether, benzene, chloroform and selected from the group consisting of hexane It may be any one or more extraction solvents. More specifically, the extraction includes water, a C 1 - C 6 anhydrous or hydrous lower alcohol, a polar solvent including acetone and butylene glycol, and ethyl acetate, diethyl acetate, diethyl ether, benzene, chloroform and hexane. It may be to use any one or more of the low-polarity solvent as a solvent. More specifically, the solvent may be 50 - 90% ethanol aqueous solution, 60 - 80% or 65 - 75% ethanol aqueous solution. When the solvent is an aqueous solution of 50 to 90% ethanol, the active ingredient can be effectively extracted from the root of the tea tree. In one embodiment, the solvent may be about 70% ethanol aqueous solution.

일 측면에서, 상기 차나무 뿌리 추출물은 상기 1차 추출용매로 추출하고, 2차 추출용매로 분획하여 제조될 수 있다. 구체적으로 상기 2차 추출용매는 무수 또는 함수 부탄올 일 수 있다. 상기 분획을 통하여 추출물에 포함된 특정 성분의 함량을 더 증가시킬 수 있으며, 구체적으로 상기 차나무 뿌리 추출물에 포함된 사포닌의 함량을 더 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 1차 추출용매로 추출한 차나무 뿌리 추출물보다 상기 차나무 뿌리 추출물을 2차 추출용매로 분획한 추출물의 사포닌 함량은 전체 추출물의 중량에 대하여 예를 들어, 5 중량% 이상, 6 중량% 이상, 7 중량% 이상, 8 중량% 이상, 9 중량% 이상, 10 중량% 이상, 11 중량% 이상, 12 중량% 이상, 13 중량% 이상, 14 중량% 이상, 또는 15 중량% 이상 더 증가된 것일 수 있고, 5-15 중량% 더 증가된 것일 수 있다.In one aspect, the tea tree root extract may be prepared by extraction with the primary extraction solvent and fractionation with the secondary extraction solvent. Specifically, the secondary extraction solvent may be anhydrous or hydrous butanol. Through the fractionation, the content of a specific component included in the extract can be further increased, and specifically, the content of saponins included in the tea tree root extract can be further increased. For example, the saponin content of the extract obtained by fractionating the tea tree root extract with the secondary extraction solvent than the tea tree root extract extracted with the primary extraction solvent is, for example, 5% by weight or more, 6% by weight or more based on the weight of the total extract , 7% by weight or more, 8% by weight or more, 9% by weight or more, 10% by weight or more, 11% by weight or more, 12% by weight or more, 13% by weight or more, 14% by weight or more, or 15% by weight or more and may be further increased by 5-15% by weight.

일 실시예에서, 상기 차나무 뿌리 추출물은 70% 에탄올을 1차 추출용매로 추출하고 부탄올을 2차 추출용매로 분획된 것이다. 예를 들어, 상기 70% 에탄올을 1차 추출 용매로 하여 추출한 차나무 뿌리 추출물의 사포닌 함량은 전체 추출물 중량에 대하여 약 55.8 중량%일 수 있고, 상기 차나무 뿌리 추출물을 부탄올을 2차 추출 용매로 하여 분획한 추출물의 사포닌 함량은 전체 추출물 중량에 대하여 약 67.6 중량%일 수 있다. 따라서, 상기 분획을 통하여 추출물의 사포닌 함량은 약 11.8 중량%가 증가될 수 있다.In one embodiment, the tea tree root extract is fractionated with 70% ethanol as the primary extraction solvent and butanol as the secondary extraction solvent. For example, the saponin content of the tea tree root extract extracted using 70% ethanol as the primary extraction solvent may be about 55.8% by weight based on the total weight of the extract, and the tea tree root extract is fractionated using butanol as the secondary extraction solvent The saponin content of one extract may be about 67.6% by weight based on the total weight of the extract. Accordingly, the saponin content of the extract through the fraction can be increased by about 11.8% by weight.

일 측면에서, 상기 차나무 뿌리 추출물은 상기 추출용매로 추출된 이후에, 여과, 농축, 분리 또는 건조 과정 중 하나 이상을 추가적으로 거쳐서 얻어진 것일 수 있다. 특히, 상기 차나무 뿌리 추출물은 1회 이상의 여과 과정을 거친 것일 수 있다.In one aspect, the tea tree root extract may be obtained by additionally passing through one or more of filtration, concentration, separation or drying processes after extraction with the extraction solvent. In particular, the tea root extract may be one that has undergone one or more filtration processes.

일 측면에서, 상기 추출물은 추출 후 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치에서 적정 온도로, 구체적으로 약 50 ℃의 온도로 감압 농축될 수 있다.In one aspect, the extract may be concentrated under reduced pressure at an appropriate temperature in a distillation apparatus equipped with a cooling condenser after extraction, specifically at a temperature of about 50 °C.

다만, 본 발명에 따른 차나무 뿌리 추출물은 당해 기술 분야의 통상적인 방법으로 추출하여 얻을 수 있으며, 전술한 방법에 의하여 한정되는 것은 아니다.However, the tea root extract according to the present invention can be obtained by extraction by a conventional method in the art, and is not limited by the above-described method.

본 발명의 일 관점인, 조성물에 있어서, 상기 조성물은 차나무 뿌리 추출물을, 조성물 총 중량을 기준으로 0.000001 내지 40중량%로 포함할 수 있다. 상기 추출물의 함량이 0.000001 내지 40중량%인 경우, 차나무 뿌리 추출물을 포함하는 조성물에 의한 항노화 및 항염 효과가 우수하였다.According to one aspect of the present invention, in the composition, the composition may include a tea tree root extract in an amount of 0.000001 to 40% by weight based on the total weight of the composition. When the content of the extract was 0.000001 to 40% by weight, the anti-aging and anti-inflammatory effects of the composition including the tea tree root extract were excellent.

구체적으로, 0.0000001 중량% 이상, 0.0000005 중량% 이상, 0.0000007 중량% 이상, 0.0000009 중량% 이상, 0.000001 중량% 이상, 0.000002 중량% 이상, 0.000004 중량% 이상, 0.000006 중량% 이상, 0.000008 중량% 이상, 0.00001 중량% 이상, 0.00003 중량% 이상, 0.00005 중량% 이상, 0.00007 중량% 이상, 0.00009 중량% 이상, 0.0001 중량% 이상, 0.0003 중량% 이상, 0.0005 중량% 이상, 0.0007 중량% 이상, 0.0009 중량% 이상, 0.001 중량% 이상, 0.01 중량% 이상, 0.1 중량% 이상, 1 중량% 이상, 3 중량% 이상, 5 중량% 이상, 7 중량% 이상, 9 중량% 이상, 10 중량% 이상, 13 중량% 이상, 15 중량% 이상, 17 중량% 이상, 19 중량% 이상, 21 중량% 이상, 23 중량% 이상, 25 중량% 이상, 27 중량% 이상, 29 중량% 이상, 30 중량% 이상, 31 중량% 이상, 32 중량% 이상, 33 중량% 이상, 34 중량% 이상, 35 중량% 이상, 36 중량% 이상, 37 중량% 이상, 38 중량% 이상, 또는 39 중량% 이상일 수 있고, 40 중량% 이하, 39 중량% 이하, 38 중량% 이하, 37 중량% 이하, 36 중량% 이하, 35 중량% 이하, 34 중량% 이하, 33 중량% 이하, 32 중량% 이하, 31 중량% 이하, 30 중량% 이하, 29 중량% 이하, 28 중량% 이하, 26 중량% 이하, 24 중량% 이하, 22 중량% 이하, 20 중량% 이하, 18 중량% 이하, 16 중량% 이하, 14 중량% 이하, 12 중량% 이하, 10 중량% 이하, 9 중량% 이하, 8 중량% 이하, 6 중량% 이하, 4 중량% 이하, 2 중량% 이하, 1 중량% 이하, 0.1 중량% 이하, 0.09 중량% 이하, 0.04 중량% 이하, 0.01 중량% 이하, 0.006 중량% 이하, 0.001 중량% 이하, 0.0009 중량% 이하, 0.0007 중량% 이하, 0.00005 중량% 이하, 0.00003 중량% 이하, 0.00001 중량% 이하, 0.000009 중량% 이하, 0.000007 중량% 이하, 0.000005 중량% 이하, 0.000003 중량% 이하, 0.000001 중량% 이하, 0.0000009 중량% 이하, 0.0000007 중량% 이하, 0.0000005 중량% 이하, 0.0000003 중량% 이하, 0.0000002 중량% 이하, 0.0000001 중량% 이하, 또는 0.00000009 중량% 이하일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Specifically, at least 0.0000001 wt%, at least 0.0000005 wt%, at least 0.0000007 wt%, at least 0.0000009 wt%, at least 0.000001 wt%, at least 0.000002 wt%, at least 0.000004 wt%, at least 0.000006 wt%, at least 0.000008 wt%, at least 0.00001 wt% % or more, 0.00003 wt% or more, 0.00005 wt% or more, 0.00007 wt% or more, 0.00009 wt% or more, 0.0001 wt% or more, 0.0003 wt% or more, 0.0005 wt% or more, 0.0007 wt% or more, 0.0009 wt% or more, 0.001 wt% % or more, 0.01% or more, 0.1% or more, 1% or more, 3% or more, 5% or more, 7% or more, 9% or more, 10% or more, 13% or more, 15% or more % or more, 17% or more, 19% or more, 21% or more, 23% or more, 25% or more, 27% or more, 29% or more, 30% or more, 31% or more, 32% or more % or more, 33 wt% or more, 34 wt% or more, 35 wt% or more, 36 wt% or more, 37 wt% or more, 38 wt% or more, or 39 wt% or more, and 40 wt% or less, 39 wt% or less , 38 wt% or less, 37 wt% or less, 36 wt% or less, 35 wt% or less, 34 wt% or less, 33 wt% or less, 32 wt% or less, 31 wt% or less, 30 wt% or less, 29 wt% or less , 28 wt% or less, 26 wt% or less, 24 wt% or less, 22 wt% or less, 20 wt% or less, 18 wt% or less, 16 wt% or less, 14 wt% or less, 12 wt% or less, 10 wt% or less , 9 wt% or less, 8 wt% or less, 6 wt% or less, 4 wt% or less, 2 wt% or less, 1 wt% or less, 0.1 wt% or less, 0.09 wt% or less, 0.04 wt% or less, 0.01 wt% or less , 0.006 wt% or less, 0.001 wt% or less, 0.0009 wt% or less, 0.0007 wt% or less, 0.00005 wt% or less, 0.00003 wt% or less, 0.00001 wt% or less, 0.000009 wt% or less, 0.000007 wt% or less, 0.000005 wt% or less, 0.000003 wt% or less, 0.000001 wt% or less, 0.0000009 wt% or less, 0.0000007 wt% or less, 0.0000005 wt% or less, 0.0000003 wt% or less, 0.0000002 wt% or less, 0.0000001 wt% or less, or 0.00000009 wt% or less .

본 발명의 다른 측면은, 본 발명의 조성물의 항노화 용도 또는 항염 용도를 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 조성물은 차나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화 조성물일 수 있고, 차나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물일 수 있다.Another aspect of the present invention may include an anti-aging or anti-inflammatory use of the composition of the present invention. Specifically, the composition may be an anti-aging composition comprising a tea tree root extract as an active ingredient, or an anti-inflammatory composition comprising a tea tree root extract as an active ingredient.

일 측면에서, 본 발명은 염증 또는 노화 자극에 의해 손상된 피부 세포에서 특정 유전자의 발현량을 정상 수준으로 조절함으로써, 염증 또는 노화를 억제하는 조성물을 제공한다.In one aspect, the present invention provides a composition for inhibiting inflammation or aging by regulating the expression level of a specific gene in skin cells damaged by inflammation or aging stimulation to a normal level.

일 측면에서, 상기 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 적용될 수 있다.In one aspect, the composition may be applied to keratinocytes.

일 측면에서 구체적으로, 본 발명에서 염증 또는 노화 자극에 의해 발현량이 영향을 받는 피부 세포 내 유전자는 XDH(NM_000379)을 포함할 수 있다. 상기 XDH(NM_000379)는 염증 또는 노화 자극에 의해 발현량이 증가하는 유전자이므로, 이들 유전자의 발현량을 억제하여 정상 수준으로 조절함으로써 피부 세포의 염증 또는 노화를 억제한다.In one aspect, specifically, in the present invention, the gene in the skin cell whose expression level is affected by the stimulation of inflammation or aging may include XDH (NM_000379). Since the XDH (NM_000379) is a gene whose expression level is increased by stimulation of inflammation or aging, it suppresses the expression level of these genes and regulates the expression level to a normal level, thereby suppressing inflammation or aging of skin cells.

일 측면에서, 본 발명에서 사용되는 염증 또는 노화 자극에 의해 발현량이 증가되는 유전자는 [표 1]에 제시되어 있다. 표에서 Name은 NCBI의 genebank accession ID를 의미하는 것이고, Gene Symbol은 공식 유전자 심볼을 의미하며, Gene title은 유전자의 이름을 의미한다. In one aspect, genes whose expression level is increased by stimulation of inflammation or aging used in the present invention are presented in [Table 1]. In the table, Name means genebank accession ID of NCBI, Gene Symbol means official gene symbol, and Gene title means gene name.

증가유전자increase gene NameName Gene
Symbol
Gene
Symbol
Gene titleGene title
NM_000379NM_000379 XDHXDH xanthine dehydrogenasexanthine dehydrogenase

상기 유전자 또는 단백질의 발현량 분석은 마이크로어레이, PCR, NGS(Nest Generation Sequencing; 차세대 염기서열분석), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA, 방사선 면역 분석, 방사 면역 확산법, 조직면역 염색, 면역침전 분석법 등 당업계에 공지된 다양한 분석 방법을 이용하여 분석될 수 있다.The expression level of the gene or protein may be analyzed by microarray, PCR, NGS (Nest Generation Sequencing), Western blot, Northern blot, ELISA, radioimmunoassay, radioimmunodiffusion method, tissue immunostaining, immunoprecipitation assay, etc. It can be analyzed using a variety of analytical methods known in the art.

본 발명의 일 관점인, 상기 조성물은, 화장료 조성물일 수 있고, 약학적 조성물일 수 있으며, 건강기능식품 조성물일 수 있다. In one aspect of the present invention, the composition may be a cosmetic composition, a pharmaceutical composition, or a health functional food composition.

상기 화장료 조성물은, 예컨대, 각종 크림, 로션 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품 류와 클렌징, 세안제, 비누, 미용액 등이 있다.The cosmetic composition includes, for example, various creams, lotions, various creams, lotions, and cosmetics such as skins and cleansing agents, face washes, soaps, and liquid cosmetics.

일 측면에서, 본 발명의 상기 차나무 뿌리 추출물을 함유하는 조성물이 첨가된 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.In one aspect, the cosmetic to which the composition containing the tea tree root extract of the present invention is added may take the form of a solution, an emulsion, a viscous mixture, or the like.

즉, 본 발명의 일 측면인 화장료는 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 메이크업 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 패취, 미용액, 클렌징폼, 클렌징크림, 클렌징워터, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 샴푸, 린스, 바디세정제, 비누, 염모제, 분무제 등과 같은 제형을 들 수 있다.That is, the cosmetic, which is an aspect of the present invention, is not particularly limited in its formulation, and for example, emulsion, cream, lotion, essence, pack, gel, powder, makeup base, foundation, lotion, ointment, patch, serum, cleansing Formulations such as foam, cleansing cream, cleansing water, body lotion, body cream, body oil, body essence, shampoo, conditioner, body wash, soap, hair dye, spray, and the like may be mentioned.

각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기 차나무 뿌리 추출물 이외에 다른 성분들은 기타 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.In the cosmetic composition of each formulation, other ingredients other than the tea tree root extract can be appropriately selected and formulated by those skilled in the art without difficulty depending on the formulation or purpose of use of other cosmetics.

또한, 본 발명의 일 측면인 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다.In addition, the cosmetic according to an aspect of the present invention may include a composition selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides, sphingolipids, and seaweed extract.

일 측면에서, 본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.In one aspect, in the cosmetic of the present invention, in addition to the above essential ingredients, other ingredients commonly formulated in cosmetics may be blended as needed.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.Other ingredients that may be added include oils and fats, moisturizers, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, UV absorbers, preservatives, disinfectants, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, colorants, fragrances, A blood circulation promoter, a cooling agent, an anti-inflammatory agent, purified water, etc. are mentioned.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.In addition, the mixing|blending component which may be added other than this is not limited to this, Moreover, any said component can be mix|blended within the range which does not impair the objective and effect of this invention.

일 측면에서, 본 발명의 차나무 뿌리 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.In one aspect, the pharmaceutical composition comprising the tea tree root extract of the present invention may further include suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions.

그 제형으로는, 상기 차나무 뿌리 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 정제, 캡슐, 산제 또는 시럽 등의 경구제, 또는 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제 등의 외용제 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용할 수 있다.As for the formulation, the pharmaceutical composition containing the tea tree root extract is prepared according to a conventional method, including oral preparations such as tablets, capsules, powders or syrups, or external preparations such as ointments, gels, creams, patches or sprays, etc. It can be formulated and used in any form suitable for pharmaceutical preparations.

일반적으로 상기 약학적 조성물에 의해 투여되는 유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 일반적으로 유효성분의 투여량은 0.0001mg/kg/일 내지 3000mg/kg/일, 예를 들어 10 mg/kg/일 내지 500mg/kg/일 일 수 있다.In general, it should be understood that the actual dosage of the active ingredient administered by the pharmaceutical composition should be determined in light of several related factors such as the severity of symptoms, the route of administration selected, the age, sex, weight and health status of the subject. In general, the dosage of the active ingredient may be 0.0001 mg/kg/day to 3000 mg/kg/day, for example, 10 mg/kg/day to 500 mg/kg/day.

본 발명의 일 관점인 건강 기능식품 조성물에서, 건강식품은, 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분(기능성원료)을 사용하여 제조한 것으로, 인체의 정상적인 기능을 유지하거나 생리기능 활성화를 통하여 건강을 유지하고 개선하는 식품을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 건강식품은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조, 가공될 수 있으나, 이에 한정되지 않으며 법률에 따라 어떤 형태로든지 제조, 가공될 수 있다.In the health functional food composition of one aspect of the present invention, the health food is manufactured using nutrients or ingredients (functional raw materials) that are easily deficient in daily meals or have useful functions in the human body, and maintain normal functions of the human body. Or it may mean a food that maintains and improves health through physiological function activation, but is not limited thereto. The health food may be manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, pills, etc., but is not limited thereto and may be manufactured and processed in any form according to the law.

구체적으로, 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드 폴리사카라이드, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.Specifically, the health beverage composition is not particularly limited in other ingredients except for containing the compound as an essential ingredient in the indicated ratio, and may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients like a conventional beverage. Examples of natural carbohydrates are conventional sugars such as monosaccharide polysaccharides, cyclodextrins, and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, erythritol and the like. As flavoring agents other than those described above, natural flavoring agents (taumatin, stevia extract (eg, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be used.

일반적으로 상기 건강 기능식품 조성물에 의해 투여되는 유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 일반적으로 유효성분의 투여량은 0.0001mg/kg/일 내지 1000mg/kg/일, 예를 들어 0.02 mg/kg/일 내지 6mg/kg/일 일 수 있다.In general, it should be understood that the actual dosage of the active ingredient administered by the health functional food composition should be determined in light of several related factors such as the severity of symptoms, the route of administration selected, the age, sex, weight and health status of the subject. . In general, the dosage of the active ingredient may be 0.0001 mg/kg/day to 1000 mg/kg/day, for example, 0.02 mg/kg/day to 6 mg/kg/day.

이하, 실시예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration and effect of the present invention will be described in more detail by way of examples. However, these examples are provided for the purpose of illustration only to help the understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited by the following examples.

[실시예 1] 차나무 뿌리 에탄올 추출물의 제조[Example 1] Preparation of ethanol extract of tea tree root

제주 오설록 목장에서 입수한 차나무(Camellia sinensis L.) 뿌리를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 세말화하여 얻어진 차나무 뿌리 가루 100g을 70% 에탄올 수용액 1L에 넣고 상온에서 12시간 이상 교반하여 추출한 후, 와트만 2번 여과지로 여과시켰다. 이렇게 얻어진 추출액을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치를 이용하여 50℃로 감압 농축하고 건조하여 차나무 뿌리 70% 에탄올 추출물(건조중량 21.05g)을 얻었다. 상기 과정으로 얻은 차뿌리 70% 에탄올 추출물의 사포닌 함량은 추출물 전체 중량에 대하여 약 55.8 중량% 였다.After washing and drying the roots of tea tree ( Camellia sinensis L. ) obtained from Jeju Osulloc Ranch with purified water and drying them, 100 g of tea tree root powder obtained by sieving is added to 1 L of 70% ethanol aqueous solution, and extracted by stirring at room temperature for more than 12 hours. Filtered with filter paper twice. The extract thus obtained was concentrated under reduced pressure at 50° C. using a distillation apparatus equipped with a cooling condenser and dried to obtain a 70% ethanol extract of tea tree root (dry weight 21.05 g). The saponin content of the 70% ethanol extract of tea root obtained by the above process was about 55.8% by weight based on the total weight of the extract.

[실시예 2] 차나무 뿌리 에탄올 추출물의 부탄올 분획물 제조[Example 2] Preparation of butanol fraction of ethanol extract of tea tree root

실시예 1에서 얻어진 추출물 10g을 증류수 200mL에 녹여 1L들이 분액 깔대기에 넣은 후, 부탄올 200mL를 가하고 흔들어서 잘 섞어준 다음 두 층으로 완전히 분리되면 상층(부탄올 층)을 취하였다. 하층(물 층)은 분액 깔대기를 이용하여 상기와 같은 과정을 두 번 더 반복하여 추출한다. 각각의 추출 과정에서 분리된 상층을 모두 합한 뒤, 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 50℃로 감압 농축하고 건조하여 차나무 뿌리 에탄올 추출물의 부탄올 분획물(건조중량 4.83g)을 얻었다. 상기 과정으로 얻은 차나무 뿌리 에탄올 추출물의 부탄올 분획물의 사포닌 함량은 추출물 전체 중량에 대하여 약 67.6 중량% 였다.Dissolve 10 g of the extract obtained in Example 1 in 200 mL of distilled water, put it in a 1 L separatory funnel, add 200 mL of butanol, shake well, mix well, and when completely separated into two layers, the upper layer (butanol layer) was taken. The lower layer (water layer) is extracted by repeating the above process twice more using a separatory funnel. The upper layers separated in each extraction process were combined, concentrated under reduced pressure at 50° C. using a distillation apparatus equipped with a cooling condenser, and dried to obtain a butanol fraction (dry weight 4.83 g) of the ethanol extract of tea tree root. The saponin content of the butanol fraction of the ethanol extract of tea tree root obtained by the above process was about 67.6% by weight based on the total weight of the extract.

[실시예 3] 노화 및 항염 자극원의 준비[Example 3] Preparation of aging and anti-inflammatory stimulants

노화 및 항염 자극원인 미세먼지의 포집은 로우 볼륨 에어 샘플러(Sensidyne, Gillian, Low Volume Air Sampler, FL, U.S.A.)를 이용하였고, Filter pack은 매 측정일 오전 10시 전후에 필터와 디누더를 교체하여 약 24시간 동안 시료를 채취하였다. 28일간 서울의 풍하지역(경기도 용인시 처인구 소재, 한국외국어대학교 외국학 종합연구센터 생활관 6층 옥상)에서 매일 미세먼지를 포집하였으며, 측정시간은 진공펌프를 켜면서 타이머를 작동시키고 진공펌프를 끌 때 타이머의 시간을 기록하였다. 채취 유량은 16.7L/min으로 하여 측정 시작시 유량계(Model 4143, TSI Inc.)로 유량을 측정하고 측정이 끝날 때 다시 유량을 측정하였다. 필터팩(filter pack)에 들어가는 Teflon 필터는 시료 채취 전과 후에 무게를 측정하였다. Teflon 필터의 무게를 측정하기 전 24 시간 동안 상대습도 40%의 데시케이터(NIKKO, Japan)에 항량시킨 후 소수점 5자리가 표시되는 전자저울(DVG215CD, Ohaus)에 무게를 두 번 측정하여 평균값을 기록하였다. 시료를 채취한 후에도 무게를 측정하기 전에 데시케이터에서 24시간 항량시킨 후 무게를 두 번 측정하여 채취 전에 측정한 무게와 비교하여 질량농도를 산출하였다. 미세먼지의 추출은 Teflon 필터를 1mL의 에탄올에 적신 후 14mL의 DW를 넣어 필터의 에어로졸 포집면이 수면에 닿도록 한 상태에서 뚜껑을 닫은 후 초음파 세척기로 30분간 초음파를 주어 실행하였다. 여과단계에서 수분에 의한 오차를 최소화하기 위하여 건조기(decicator)에서 48시간 동안 필터의 수분을 완전히 제거한 후, 0.1mg까지 측정할 수 있는 초정밀저울계(Mettler Toledo Company 社)를 이용하여 필터의 무게를 칭량하여 필터의 추출 전, 후 무게를 칭량하였다.A low-volume air sampler (Sensidyne, Gillian, Low Volume Air Sampler, FL, U.S.A.) was used to collect fine dust, which is an aging and anti-inflammatory stimulant, and the filter pack was replaced by replacing the filter and denuder around 10 am on every measurement day. Samples were taken for about 24 hours. Every day, fine dust was collected in the Punghae area of Seoul (located in Cheoin-gu, Yongin-si, Gyeonggi-do, on the 6th floor of the dormitory building, Hankuk University of Foreign Studies, Yongin-si, Gyeonggi-do) for 28 days. time was recorded. The sampling flow rate was 16.7L/min, and the flow rate was measured with a flow meter (Model 4143, TSI Inc.) at the start of the measurement, and the flow rate was measured again when the measurement was finished. Teflon filters in the filter pack were weighed before and after sample collection. After weighing the Teflon filter in a desiccator (NIKKO, Japan) with a relative humidity of 40% for 24 hours, the weight was measured twice on an electronic scale (DVG215CD, Ohaus) that displays 5 decimal places and the average value was calculated. recorded. After the sample was collected, the weight was measured twice in a desiccator before measuring the weight, and then the weight was measured twice, and the mass concentration was calculated by comparing it with the weight measured before collection. Extraction of fine dust was carried out by soaking the Teflon filter in 1 mL of ethanol, adding 14 mL of DW, closing the lid with the aerosol collecting surface of the filter in contact with the water surface, and applying ultrasonic waves for 30 minutes with an ultrasonic cleaner. In order to minimize the error caused by moisture in the filtration step, after completely removing the moisture from the filter in a decicator for 48 hours, weigh the filter using an ultra-precision scale (Mettler Toledo Company) that can measure up to 0.1 mg. Weighed and weighed before and after extraction of the filter.

[실시예 4] (정상사람)각질형성세포주의 배양[Example 4] Culture of (normal human) keratinocyte line

(정상사람)각질형성세포주(Human normal epidermal keratinocytes)는 론자 社(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자 社의 지침서에 따랐다. 500ml의 KBM-2(KBMTM-2, CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트 CC-4152(KGM TM-2 Bullet kit, CC-4152)(성분: BPE(Bovine pituitary extract)), 인간표피 성장인자(human epidermal growth factor, hEGF), 인슐린(Insulin), 하이드로코티손(Hydrocortisone), 트랜스페린(Transferrin), 에피네프린(Epinephrine), 및 젠타마이신 설페이트 + 암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000))를 첨가한 KGM-2 불렛키트 CC-3107(KGM TM-2 Bullet Kit, CC-3107)을 사용하였다.(Normal) Human normal epidermal keratinocytes were purchased from Lonza, Inc. (Walkersville, MD, USA) and subcultured in a CO2 incubator at 37°C and 5% CO2 condition. cultured. The cell culture medium was according to Lonza's instructions. KGM-2 Bullet kit CC-4152 (KGM TM-2 Bullet kit, CC-4152) (ingredient: Bovine pituitary extract (BPE)), human epidermal growth in 500 ml of KBM-2 (KBMTM-2, CC-3103) medium Human epidermal growth factor (hEGF), Insulin, Hydrocortisone, Transferrin, Epinephrine, and Gentamycin Suflate + Amphofericin-B (Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA) -1000)) added KGM-2 Bullet Kit CC-3107 (KGM TM-2 Bullet Kit, CC-3107) was used.

[실시예 5] (정상사람)각질형성세포주에 자극원의 처리 및 세포독성 측정[Example 5] (Normal human) Keratinocyte treatment and cytotoxicity measurement in keratinocytes

자극원 처리를 통한 세포독성 여부 확인을 위하여, Mossman 등(J.Immunol. Methods, 65, 55-63, 1983)의 방법으로 (정상사람)각질형성세포주를 이용한 MTT 실험을 수행하였다. In order to confirm the cytotoxicity through treatment with a stimulus, an MTT experiment using a (normal human) keratinocyte line was performed by the method of Mossman et al. (J. Immunol. Methods, 65, 55-63, 1983).

구체적으로, 24-웰 플레이트를 사용하고 상기 실시예 4의 채취하여 얻은 직경이 2.5㎛인 미세먼지를 정제수에 분산시켜서 미세먼지 분산액을 제조한 다음, 실시예 5의 세포배양조건으로 2.5 × 105 웰 세포수인 조건에서 배양한 세포에 상기 미세먼지 분산액을 처리하여 24시간 동안 배양한 후, MTT(3-4,5-dimethylthiazol-2,5-diphenyltetra zolium bromide) 5㎎/㎖을 혼합하여 37℃에서 3시간 동안 추가 배양하였다. 이 후 배지를 제거하고 형성된 포르마잔 크리스탈(formazan crystal)을 DMSO 500㎕에 용해하였다. 그 용해물을 96-웰 플레이트로 옮겨 분주(aliquot)하고 흡광도 540nm에서 OD값을 측정하였다. 측정 결과는 도 1에 나타내었다.Specifically, a fine dust dispersion was prepared by using a 24-well plate and dispersing the fine dust having a diameter of 2.5 μm obtained by collecting of Example 4 in purified water, and then using the cell culture conditions of Example 5 to prepare a fine dust dispersion of 2.5 × 10 5 Cells cultured under the condition of the number of well cells were treated with the fine dust dispersion and cultured for 24 hours, and then mixed with 5 mg/ml of MTT (3-4,5-dimethylthiazol-2,5-diphenyltetra zolium bromide) to 37 It was further incubated at ℃ for 3 hours. Thereafter, the medium was removed and the formed formazan crystal was dissolved in 500 μl of DMSO. The lysate was transferred to a 96-well plate and aliquoted, and the OD value was measured at an absorbance of 540 nm. The measurement results are shown in FIG. 1 .

도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 세포주에서 2.5 마이크로미터 이하 미세먼지를 분산시킨 분산액에 의한 세포독성에 대하여 80% 생존율을 보이는 농도(IC20)값은 2.5 마이크로미터 이하 미세먼지 수용성 추출액의 경우 12.5㎍/㎖ 이었다.As shown in Fig. 1, the concentration (IC20) value showing 80% viability against cytotoxicity by the dispersion in which fine dust of 2.5 micrometers or less is dispersed in the cell line is 12.5 μg / in the case of an aqueous extract of 2.5 micrometers or less. ml.

[실시예 6] 차세대 염기서열분석(Next Generation Sequencing)을 통한 미세먼지의 세포 유전자 변화 확인[Example 6] Confirmation of cell genetic changes in fine dust through Next Generation Sequencing

RNA-염기서열 데이터 처리 및 분석을 위해, Trapnell et al.(2012)에 의해 개발된 일반적인 분석 단계를 참조하였다. FastQC(http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/)를 사용하여 RNA-seq 데이터 품질을 확인하였고, FASTX(http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/)를 사용하여, 정확도가 떨어지는 베이스 및 어탭터 서열을 제거하였다. 이후 Tophat(Trapnell et al., 2009)과 인간 유전체(hg19)를 사용하여 얼라인먼트를 수행하였고, 각 샘플의 데이터량을 RSeQC로 재명명된 EVER-seq을 사용하여 확인하였다(Wang et al., 2012). 또한, Cufflinks를 사용하여 전사체(transcript)의 발현 수준을 정량하였고, 미세먼지 분산액 처리 샘플과 정상 샘플의 사이에서 전사 수준을 비교하였다(Trapnell et al., 2010). FDR adjusted p-value<0.05로, ≥2.0 fold-change의 엄격한 컷오프를 적용하여, 직경이 2.5㎛인 미세먼지의 분산액의 처리시 유의미한 발현 차이를 나타내는 유전자를 결정하였다. 측정 결과는 [도 2]에 나타나 있다.For RNA-sequence data processing and analysis, reference was made to the general analysis steps developed by Trapnell et al. (2012). RNA-seq data quality was confirmed using FastQC (http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/), and FASTX (http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/) was used. Thus, base and adapter sequences with poor accuracy were removed. Then, alignment was performed using Tophat (Trapnell et al., 2009) and human genome (hg19), and the amount of data of each sample was confirmed using EVER-seq renamed RSeQC (Wang et al., 2012). ). In addition, the expression level of the transcript was quantified using Cufflinks, and the transcription level was compared between the fine dust dispersion treated sample and the normal sample (Trapnell et al., 2010). With an FDR adjusted p-value <0.05, a strict cutoff of ≥2.0 fold-change was applied to determine genes showing a significant difference in expression during treatment of a dispersion of fine dust with a diameter of 2.5 μm. The measurement results are shown in FIG. 2 .

[실시예 7] 실시간 RT-PCR 정량[Example 7] Real-time RT-PCR Quantification

실시예 3에서 추출한 직경이 2.5㎛인 미세먼지를 실시예 4에서 배양한 인간정상각질피부세포에 세포배양배지 1ml에 12.5㎍의 양으로 처리하고, 하기 표 2에 나타낸 유전자의 프라미어(applied biosystems TaqMan® Primers)로 상대적 mRNA 발현양을 측정하였다. 차나무 뿌리 추출물 및 부탄올 분획물은 실시예 1 및 2에서 제조한 것을 사용하였다. The fine dust having a diameter of 2.5 μm extracted in Example 3 was treated in an amount of 12.5 μg in 1 ml of cell culture medium to human normal keratinocytes cultured in Example 4, and primers of the genes shown in Table 2 (applied biosystems) TaqMan® Primers) was used to measure the relative mRNA expression level. The tea root extract and the butanol fraction prepared in Examples 1 and 2 were used.

증가유전자increase gene NameName Gene
Symbol
Gene
Symbol
TaqMan® 프라이머TaqMan® Primer
NM_000379NM_000379 XDHXDH Hs00166010_m1Hs00166010_m1

배지에 차나무 뿌리 추출물 및 부탄올 분획물을 각각 1 ppm 및 5 ppm의 농도로 처리하고 24시간 경과 후, 배양액을 제거하고, 2ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트 社의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 상기 [표 3]의 프라이머를 이용한 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(Q-RT-PCR: real time-reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 정량적으로 분석하였다. 유전자의 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템사의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 세포의 유전자 변화를 실시간 PCR로 평가하였으며, 그 결과를 [도 2]에 나타내었다. 이용한 Q-RT-PCR과 실시간 PCR은 모두 라이프테크놀로지에서 배포하는 표준 프로토콜에 따라서 실행하였으며, 구체적으로 95℃에서 20초 동안 처리한 후, 95℃에서 3초 및 60℃에서 30초를 처리하는 공정을 40주기 진행하였다.The medium was treated with the tea root extract and the butanol fraction at concentrations of 1 ppm and 5 ppm, respectively, and after 24 hours, the culture medium was removed, the cells were washed with 2 ml of Phosphate Buffered Saline (PBS), and then trizol RNA was isolated from cells using a reagent (Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). The isolated RNA was purified once more with Qiagen's RNA kit (QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA), and then the Agilent's Bioanalyzer 2100 model instrument (Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) ) was used to confirm the quality of RNA. cDNA was synthesized from the RNA using Invitrogen's Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA). -RT-PCR: quantitative analysis was performed through real time-reverse transcription polymerase chain reaction). The change in the expression pattern of the gene was evaluated by real-time PCR using the TaqMan gene expression assay kit (TaqMan gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA) of Applied Biosystems, and the result is [Fig. 2] shown in Both Q-RT-PCR and real-time PCR used were performed according to the standard protocol distributed by Life Technology, and specifically, a process of processing at 95°C for 20 seconds, then processing at 95°C for 3 seconds and at 60°C for 30 seconds. was carried out for 40 cycles.

[도 2]에 나타낸 바와 같이, 미세먼지에 의해 자극된 피부 세포에서 발현량이 증가 또는 감소하는 유전자가 존재하며, 차나무 뿌리 추출물의 처리에 의하여 잔틴 탈수소효소(XDH) 유전자의 발현량이 감소됨을 확인할 수 있었다.As shown in [Fig. 2], there is a gene whose expression level increases or decreases in the skin cells stimulated by fine dust, and it can be confirmed that the expression level of the xanthine dehydrogenase (XDH) gene is reduced by the treatment of the tea tree root extract. there was.

따라서, 차나무 뿌리 추출물은 염증 또는 노화 자극으로 인한 피부 세포 손상으로부터 피부 세포를 효과적으로 보호하고, 상기 염증 또는 노화 자극에 의하여 전술한 특정 유전자의 발현량이 변화하는 것을 억제 또는 방지하여, 정상 수준의 발현량을 갖도록 할 수 있음을 알 수 있다.Therefore, the tea root extract effectively protects skin cells from damage to skin cells due to inflammation or aging stimulation, and inhibits or prevents the change in the expression level of the above-mentioned specific gene by the inflammation or aging stimulation, thereby providing a normal level of expression level It can be seen that it is possible to have

이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강 기능식품 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Hereinafter, formulation examples of the composition according to the present invention will be described, but the cosmetic composition, pharmaceutical composition and health functional food composition can be applied in various formulations, which is not intended to limit the present invention, but only to describe in detail. .

[제형예 1] 정제[Formulation Example 1] Tablet

본 발명 실시예에 따른 차나무 뿌리 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.100 mg of tea tree root extract, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch, and 2 mg of magnesium stearate according to the example of the present invention were mixed, and then tableted according to a conventional tablet manufacturing method to prepare tablets.

배합성분Ingredients 함량(mg)Content (mg) 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 100100 락토오스lactose 400400 옥수수 전분corn starch 400400 스테아린산 마그네슘magnesium stearate 22

[제형예 2] 캡슐제[Formulation Example 2] Capsules

본 발명 실시예에 따른 차나무 뿌리 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조 방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.100 mg of tea tree root extract, 400 mg of lactose, 400 mg of corn starch, and 2 mg of magnesium stearate according to an embodiment of the present invention were mixed, and then filled into gelatin capsules according to a conventional capsule preparation method to prepare capsules.

배합성분Ingredients 함량(mg)Content (mg) 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 100100 락토오스lactose 400400 옥수수 전분corn starch 400400 스테아린산 마그네슘magnesium stearate 22

[제형예 3] 과립제[Formulation Example 3] Granules

본 발명 실시예에 따른 차나무 뿌리 추출물 50mg, 무수결정 포도당 250mg 및 전분 550mg을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하였다.50 mg of tea tree root extract according to an embodiment of the present invention, 250 mg of anhydrous crystalline glucose, and 550 mg of starch were mixed, formed into granules using a fluidized bed granulator, and then filled in a bag.

배합성분Ingredients 함량(mg)Content (mg) 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 5050 무수결정 포도당anhydrous crystalline glucose 250250 전분starch 550550

[제형예 4] 비누 [Formulation Example 4] Soap

배합성분Ingredients 함량(%)content(%) 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 5.005.00 유지maintain 적량appropriate amount 수산화나트륨sodium hydroxide 적량appropriate amount 염화나트륨sodium chloride 적량appropriate amount 향료Spices 적량appropriate amount 정제수Purified water 잔량remaining amount

[제형예 5] 로션 [Formulation Example 5] Lotion

배합성분Ingredients 함량(%)content(%) 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 5.005.00 L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염L-ascorbic acid-2-magnesium phosphate salt 1.001.00 수용성 콜라겐 (1 % 수용액)Water-soluble collagen (1% aqueous solution) 1.001.00 시트르산나트륨sodium citrate 0.100.10 시트르산citric acid 0.050.05 감초 엑기스Licorice Extract 0.200.20 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.003.00 정제수Purified water 잔량remaining amount

[제형예 6] 크림[Formulation Example 6] Cream

배합성분Ingredients 함량(%)content(%) 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 3.003.00 폴리에틸렌글리콜모노스테알레이트Polyethylene glycol monostearate 2.002.00 자기유화형모노스테아르산글리세린Self-emulsifying monostearate glycerin 5.005.00 세틸알코올cetyl alcohol 4.004.00 스쿠알렌squalene 6.006.00 트리2-에틸헥산산글리세릴Glyceryl 2-ethylhexanoate 6.006.00 스핑고당지질sphingoglycolipids 1.001.00 1.3-부틸렌글리콜1.3-Butylene Glycol 7.007.00 정제수Purified water 잔량remaining amount

[제형예 7] 연고[Formulation Example 7] Ointment

배합성분Ingredients 함량(%)content(%) 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 5.005.00 폴리비닐알코올polyvinyl alcohol 13.0013.00 L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염L-ascorbic acid-2-magnesium phosphate salt 1.001.00 라우로일히드록시프롤린Lauroylhydroxyproline 1.001.00 수용성 콜라겐 (1 % 수용액)Water-soluble collagen (1% aqueous solution) 2.002.00 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 3.003.00 에탄올ethanol 5.005.00 정제수Purified water 잔량remaining amount

[제형예 8] 미용액 제조 [Formulation Example 8] Preparation of cosmetic solution

배합성분Ingredients 함량(%)content(%) 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 3.003.00 히드록시에틸렌셀룰로오스(2 % 수용액)Hydroxyethylene cellulose (2% aqueous solution) 12.0012.00 크산탄검(2 % 수용액)Xanthan Gum (2% aqueous solution) 2.002.00 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 6.006.00 진한 글리세린concentrated glycerin 4.004.00 히알루론산나트륨 (1 % 수용액)Sodium hyaluronate (1% aqueous solution) 2.002.00 정제수Purified water 잔량remaining amount

[제형예 9] 건강식품[Formulation Example 9] Health food

배합 성분compounding ingredients 함량content 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 2mg2mg 비타민 A 아세테이트vitamin A acetate 70μg70μg 비타민 Evitamin E 1.0mg1.0mg 비타민 B1vitamin B1 0.13mg0.13mg 비타민 B2vitamin B2 0.15mg0.15mg 비타민 B6vitamin B6 0.5mg0.5mg 비타민 B12vitamin B12 0.2μg0.2μg 비타민 Cvitamin C 10mg10mg 비오틴biotin 10μg10 μg 니코틴산아미드nicotinic acid amide 1.7mg1.7mg 엽산folic acid 50μg50 μg 판토텐산 칼슘Calcium Pantothenate 0.5mg0.5mg 황산 제1철ferrous sulfate 1.75mg1.75mg 산화아연zinc oxide 0.82mg0.82mg 탄산마그네슘magnesium carbonate 25.3mg25.3mg 제1인산칼륨monobasic potassium phosphate 15mg15mg 제2인산칼슘dicalcium phosphate 55mg55mg 구연산칼륨Potassium Citrate 90mg90mg 탄산칼슘calcium carbonate 100mg100mg 염화마그네슘magnesium chloride 24.8mg24.8mg

[제형예 10] 건강음료[Formulation Example 10] Health drink

배합성분Ingredients 함량content 차나무 뿌리 추출물Tea Tree Root Extract 50mg50mg 구연산citric acid 1000mg1000mg 올리고당oligosaccharide 100 g100 g 타우린Taurine 1g1 g 정제수Purified water 잔량remaining amount

Claims (13)

차나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하고,
XDH(NM_000379)의 발현을 억제하는, 항노화 조성물.
Contains tea tree root extract as an active ingredient,
An anti-aging composition that inhibits the expression of XDH (NM_000379).
차나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하고,
XDH(NM_000379)의 발현을 억제하는, 항염 조성물.
Contains tea tree root extract as an active ingredient,
An anti-inflammatory composition that inhibits the expression of XDH (NM_000379).
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 차나무 뿌리 추출물은 사포닌을 포함하는 추출물인, 조성물.
3. The method of claim 1 or 2,
The tea tree root extract is an extract containing saponin, composition.
제 3 항에 있어서,
상기 차나무 뿌리 추출물은 상기 추출물 총 중량에 대하여 사포닌을 30 내지 70 중량%로 포함하는, 조성물.
4. The method of claim 3,
The composition of the tea tree root extract comprising 30 to 70% by weight of saponins based on the total weight of the extract.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 차나무 뿌리 추출물은 물, C1 - C6의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 디에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 1차 추출용매로 추출되고, 무수 또는 함수 부탄올인 2차 추출용매로 분획된 것인, 조성물.
3. The method of claim 1 or 2,
The tea tree root extract is one or more selected from the group consisting of water, C 1 - C 6 anhydrous or hydrous lower alcohol, acetone, butylene glycol, ethyl acetate, diethyl acetate, diethyl ether, benzene, chloroform and hexane. The composition is extracted with a tea extraction solvent and fractionated with a secondary extraction solvent that is anhydrous or hydrous butanol.
제 5 항에 있어서,
상기 차나무 뿌리 추출물은 무수 또는 함수 에탄올로 1차 추출되고, 무수 또는 함수 부탄올로 2차 분획된 것인, 조성물.
6. The method of claim 5,
The composition of claim 1, wherein the tea root extract is first extracted with anhydrous or hydrous ethanol, and secondarily fractionated with anhydrous or hydrous butanol.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 차나무 뿌리 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.000001 내지 40중량%로 포함된, 조성물.
3. The method of claim 1 or 2,
The composition, wherein the tea root extract is included in an amount of 0.000001 to 40% by weight based on the total weight of the composition.
삭제delete 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 조성물은 각질형성세포(keratinocyte)에 적용되는, 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
The composition is applied to keratinocytes, the composition.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 차나무 뿌리 추출물은 10 내지 500 mg/kg/일의 투여량으로 투여되는, 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
The composition, wherein the tea tree root extract is administered at a dose of 10 to 500 mg/kg/day.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인, 조성물.
3. The method of claim 1 or 2,
The composition is a cosmetic composition, composition.
제 2 항에 있어서,
상기 조성물은 약학적 조성물인, 조성물.
3. The method of claim 2,
The composition is a pharmaceutical composition.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 조성물은 건강 기능식품 조성물인, 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
The composition is a health functional food composition, composition.
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