KR20180111014A - 청유자 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 - Google Patents
청유자 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 청유자 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 인간 모유두 세포(human dermal papilla cell, hDPC)에 처리하였을 때, 모발성장인자인 IGF-1 및 VEGR의 발현이 증가하고, 항산화 활성 및 모발성장 신호전달과정인 Wnt/β-catenin 신호전달이 활성화 되었으며, INF-γ를 처리하여 확립한 모유두 탈모 세포 모델의 HO-1의 발현을 증가시키는 효과가 있으므로, 탈모예방 또는 개선을 위한 화장품 또는 건강기능식품, 탈모예방 또는 치료를 위한 피부외용제로 사용할 수 있다.
Description
본 발명은 청유자 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물에 관한 것이다.
인체의 모발은 약 10만~15만 개 정도이며, 각각의 모발은 서로 다른 모주기를 가지고 성장기(anagen), 퇴행기(catagen) 및 휴지기(telogen)를 반복하며 생성, 성장 및 탈락하는데, 그 결과 전체 모발의 약 15％에 해당하는 모발이 휴지기와 퇴행기에 놓여 있어 일일 평균 50∼100개의 모발이 정상적으로 탈락하고 재생산된다. 이러한 모발의 생장주기는 약 3∼6년을 사이클로 반복한다. 일반적으로, 탈모증이라 함은 모발주기의 성장기(anagen)에 해당하는 기간이 여러 원인으로 인해 짧아져 퇴행기와 휴지기 모발의 비율이 상대적으로 많아져 모발이 탈락하는 수가 평균치보다 많아지는 것을 말하며, 원인으로는 유전적 안드로겐 호르몬의 작용, 국소혈류 장애에 의한 영양 장애, 자율신경계 장애, 자가면역질환, 내분비 장애가 있으나 현재까지 탈모에 관한 명확한 원인은 밝혀지지 않은 상태이며, 전술한 원인이 복합적으로 작용하여 발생하는 것으로 알려져 있다.
모발이 자라는 모근의 뿌리부분은 모구(hair bulb)라고 하고, 그 아랫부분의 움푹 들어간 부분을 모유두라고 한다. 모유두는 모발의 발생에 있어 가장 중요한 부분으로, 모유두에는 혈관이나 신경이 있고, 바로 그 위에 있는 모모세포에 영양분을 공급하여 모발의 성장을 촉진하게 된다. 이러한 모유두의 수는 태어날 때 결정되는데, 모유두가 없어지고 그 수가 감소할수록 모발의 수도 감소하게 된다.
최근 식생활의 변화, 생활습관의 변화, 사회 환경에 의한 과한 스트레스의 증가 등으로 비정상적인 탈모를 유발하고 있는 인구가 점차 증가하는 추세이며, 특히 청년 및 장년과 여성 탈모 인구가 증가하고 있는 상황이다. 한편, 머리카락이나 털이 어떤 원인에 의하여 정상보다 적거나 없는 상태를 의미하는 탈모는 모발이 휴지기 상태에서 빠지는 일반적인 탈모 현상(휴지기 탈모, telogen effluvium)과 비정상적인 탈모 현상인 성장기 탈모 현상(anagen effluvium)으로 구별할 수 있는 데, 일반적으로 탈모증이라 함은 후자를 일컫는다. 탈모증의 형태에는 원형 탈모증(alopecia areata), 조기 탈모증, 여성 탈모증(androgen alopecia in women), 매독성 탈모증, 장년성 탈모증(male pattern baldness) 등이 있다.
탈모를 위해 개발된 가장 대표적인 탈모방지제로서 피나스테라이드(finasteride)를 들 수 있는데, 이는 직접적인 탈모 원인 물질인 디하이드로테스토스테론을 생성하는 5-α환원효소의 활성을 저해하는 약물이다. 그러나 피나스테라이드 제제의 경우는 임산부에게는 태아의 기형을 유발할 수 있으며, 장기간 투여시 성욕감퇴, 발기부전, 사정장애 등의 부작용이 보고되어 있어 복용에 주의해야 하는 단점이 있다. 이 외에 널리 사용되고 있는 미녹시딜(minoxidil) 함유 발모제 또한 FDA에서 일반의약품으로 승인을 받은 제제이지만, 여성에게는 투여할 수 없고 피부자극, 가려움, 홍조, 탈모의 악화 등의 부작용이 있는 단점이 있다. 따라서, 남녀 모두에게 안전하고 부작용이 없으면서 탈모방지 및 발모 효과가 있는 물질을 개발할 필요성이 있다.
한편, 유자는 유자나무의 열매로 껍질이 울퉁불퉁하고 신맛이 특징이다. 주요성분으로 비타민 C가 레몬보다 3배나 많이 들어있어 감기와 피부미용에 좋고, 노화와 피로를 방지하는 유기산이 많이 들어있다. 그밖에 비타민 B와 당질·단백질 등이 다른 감귤류 과일보다 많고 모세혈관을 보호하는 헤스페리딘이 들어있어 뇌혈관 장애와 풍을 막아준다. 또 배농 및 배설작용을 해서 몸 안에 쌓여 있는 노폐물을 밖으로 내보낸다.
청유자는 미성숙과로 수확기의 유자보다 총 폴리페놀의 함량을 더 높은 수준으로 유지하고 있다. 항산화 활성 또한 청유자와 성숙과의 차이가 크지 않다. 따라서 유자는 미성숙과에서도 식물체에 존재하는 많은 페놀성 물질과 플라보노이드 성분을 다량 함유하며, 강한 항산화 효과가 있어 다양한 생리활성을 기대할 수 있어, 여러분야로 사용 가능하다.
유자씨는 유자 중량의 10 내지 20 중량%를 차지하며, 바이오플라보노이드, 리모노이드 등의 유효성분이 풍부하고, 항산화성을 가진 물질도 함유하고 있어 다양한 기능성 소재 개발이 가능하다. 그러나 유자씨의 플라보노이드는 다량의 지질과 혼재되어 있을 뿐만 아니라 플라보노이드가 배당체 형태로 존재하여 특유의 쓴맛을 나타내어 식품에 사용하기는 어려운 점이 있어, 유자차 제조시 부산물로 대부분 사용되지 못하고 폐기되는 실정이다.
한편, 한국공개특허 제2015-0096874호에는 유자씨 오일, 유자 에센셜오일 및 유자씨 추출물을 함유하는 세정용 조성물에 관하여 개시하고 있고, 한국공개특허 제2016-0121758호에는 유자씨 유래 비당체 플라보노이드 함유 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관하여 개시되어 있으나, 본 발명의 청유자 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물에 관하여 아직까지 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 인간 모유두 세포(human dermal papilla cell, hDPC)에 처리했을 때, 모발성장인자인 IGF-1 및 VEGF의 발현이 증가하고, 항산화 및 모발성장관련 신호전달과정인 Wnt/β-catenin 신호전달이 활성화 되며, INF-γ를 처리한 모유두 탈모 세포 모델에서 탈모환자에서 감소하는 것으로 알려진 HO-1의 발현이 오일 처리시 다시 증가하는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 피부외용제를 제공한다.
또한, 본 발명은 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 청유자 오일 및 유자씨 오일을 모유두 세포에 처리하였을 때, 모발성장인자의 발현을 증가시키고, 항산화 활성 및 모발성장관련 신호전달을 활성화하며, 탈모 세포 모델에서 HO-1의 발현을 증가시키는 효과가 있으므로, 탈모예방 또는 탈모개선을 위한 화장료 또는 건강기능식품 조성물 또는 탈모예방 또는 탈모치료를 위한 피부외용제로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 인간 모유두 세포에 대한 오일의 세포 독성을 확인한 결과이다.
도 2는 인간 모유두 세포에 오일 처리시 모발성장인자의 발현을 확인한 결과이다.
도 3은 인간 모유두 세포에 오일 처리시 모발성장관련 신호전달과정인 Wnt/β-catenin의 활성화를 루시퍼레이즈(luciferase) 분석법으로 확인한 결과이다. 대조군은 아무것도 처리하지 않은 음성대조군이고, 미녹시딜은 양성대조군이다.
도 4는 오일의 ROS 제거능을 DCFDA 분석법을 이용하여 형광활성화세포분류기(fluorescence activated cell sorter, FACS)로 확인한 결과이다. Control은 아무것도 처리하지 않은 음성대조군이고, UVB는 자외선을 조사하여 ROS 생성을 유도한 군이다.
도 5는 인간 모유두 세포에 오일 처리시 항산화효소의 발현을 확인한 결과이다.
도 6은 오일 처리에 따른 Nrf-2 발현을 인간 모유두 세포에서 확인한 결과이다.
도 7은 인간 모유두 세포에 자외선 조사 후 오일 처리에 따른 Nrf-2 발현을 면역세포화학염색법(Immunocytochemistry, ICC)을 이용하여 확인한 결과이다. DAPI는 파란색으로 핵을 염색한 것이고, Nrf-2는 녹색으로 Nrf-2를 염색한 것이며, A는 아무것도 처리하지 않은 음성대조군, B는 자외선 조사군, C는 라벤다 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, D는 레몬그라스 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, E는 로즈마리 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, F는 캐모마일 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, G는 페파민트 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, H는 청유자 오일 처리 후 자외선을 조사한 군 및 I는 유자씨 오일 처리 후 자외선을 조사한 군이다.
도 8은 모유두 탈모 세포 모델에서 HO-1의 발현을 확인한 결과이다. 대조군은 아무것도 처리하지 않은 음성대조군이고, INF-γ는 탈모를 유도한 대조군이다.
도 2는 인간 모유두 세포에 오일 처리시 모발성장인자의 발현을 확인한 결과이다.
도 3은 인간 모유두 세포에 오일 처리시 모발성장관련 신호전달과정인 Wnt/β-catenin의 활성화를 루시퍼레이즈(luciferase) 분석법으로 확인한 결과이다. 대조군은 아무것도 처리하지 않은 음성대조군이고, 미녹시딜은 양성대조군이다.
도 4는 오일의 ROS 제거능을 DCFDA 분석법을 이용하여 형광활성화세포분류기(fluorescence activated cell sorter, FACS)로 확인한 결과이다. Control은 아무것도 처리하지 않은 음성대조군이고, UVB는 자외선을 조사하여 ROS 생성을 유도한 군이다.
도 5는 인간 모유두 세포에 오일 처리시 항산화효소의 발현을 확인한 결과이다.
도 6은 오일 처리에 따른 Nrf-2 발현을 인간 모유두 세포에서 확인한 결과이다.
도 7은 인간 모유두 세포에 자외선 조사 후 오일 처리에 따른 Nrf-2 발현을 면역세포화학염색법(Immunocytochemistry, ICC)을 이용하여 확인한 결과이다. DAPI는 파란색으로 핵을 염색한 것이고, Nrf-2는 녹색으로 Nrf-2를 염색한 것이며, A는 아무것도 처리하지 않은 음성대조군, B는 자외선 조사군, C는 라벤다 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, D는 레몬그라스 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, E는 로즈마리 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, F는 캐모마일 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, G는 페파민트 오일 처리 후 자외선을 조사한 군, H는 청유자 오일 처리 후 자외선을 조사한 군 및 I는 유자씨 오일 처리 후 자외선을 조사한 군이다.
도 8은 모유두 탈모 세포 모델에서 HO-1의 발현을 확인한 결과이다. 대조군은 아무것도 처리하지 않은 음성대조군이고, INF-γ는 탈모를 유도한 대조군이다.
본 발명은 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 청유자 오일 또는 유자씨 오일은 모유두 세포의 성장을 촉진하는 것일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 화장료 조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 제형으로 제조되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 청유자 오일 또는 유자씨 오일에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 피부외용제에 관한 것이다.
본 발명의 탈모방지 또는 발모촉진용 피부외용제는 크림, 젤, 패취, 연고, 경고제, 로션제, 액제, 유탁액, 파우더제 또는 스프레이의 제형으로 제조되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 제형이 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 액제 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산에스테르가 있다.
또한, 본 발명은 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 식품, 특히 기능성 식품으로 제조될 수 있다. 본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
제조예
1. 오일의 제조
라벤다, 레몬그라스, 로즈마리, 캐모마일 및 페파민트 오일을 제조하기 위하여 라벤다, 레몬그라스, 로즈마리, 캐모마일 및 페파민트를 세척하여 물기를 제거하고, 상업용 오일 추출기 탱크에 원료를 각각 투입하고 추출기를 3시간 30분 동안 가동하여 오일 추출물을 제조하였다. 보다 구체적으로 원료를 추출기 탱크에 250㎏ 넣고, 스팀 보일러 가동으로 정제된 스팀 수증기를 추출 탱크에 흡입시키며, 1시간 동안 예열 가동한다. 이때 감압을 걸어서 원료를 열 수증기와 압력으로 자동 분류되도록 한다. 추출 탱크 온도가 100℃에 이르면 증기 배출 밸브를 열어서 1차 혼합 증기를 약 3분 정도 밖으로 배출시켜 추출기 안의 증기를 순화시키고, 다시 감압을 걸어서 압력을 높인 후 추출 탱크의 온도가 110℃에 이르고 압력이 1.5kgf 걸렸을 때, 증기 추출 밸브와 냉각수 밸브를 열어서 정유 분리 작업을 시작한다. 정유 분리 작업은 2시간 30분 동안 수행되며, 분류 탱크에서 오일과 하이드로졸이 분리되면 약 3회에 걸쳐 하이드로졸을 받고, 최종 오일을 함유한 하이드로졸 잔류물을 받아서 분리기를 통해 하이드로졸과 오일을 분리한다. 분리된 오일층에서 순수 오일을 취득하기 위해서 1차 분리된 오일을 냉동실에 1일 동안 보관해서 얼지 않은 오일만 채취한다.
청유자 오일을 추출하기 위해 청유자를 세척한 후 내부의 씨 및 유자과즙을 제거하고 건조한다. 그 후 열을 가하지 않은 상태에서 압착을 진행하고, 착유한 청유자 오일을 여과하여 고순도 청유자 오일만 추출한다.
유자씨 오일을 추출하기 위해 유자씨를 선별하여 이물 제거 후, 세척을 통해 산 및 점액질을 제거한다. 그 후 유자씨를 수분 함량 14% 이하로 건조하고, 건조된 유자씨를 저온상태로 스크류 압착식 방법을 통해 착유한다. 착유된 유자씨 오일은 여과기를 통과시켜 고순도 유자씨 오일을 추출한다.
실시예
1. 세포생존율 측정
모발 성장에 중요한 인간 모유두 세포(human dermal papilla cell, hDPC)에 제조예 1의 오일 추출물을 처리하였을 때 나타나는 세포 독성을 MTT 분석법을 통하여 확인하였다. 그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 레몬그라스 오일은 0.005 중량% 이하 농도에서, 청유자 오일 및 라벤다 오일은 0.01 중량% 이하 농도에서, 로즈마리 오일 및 페파민트 오일은 0.02 중량% 이하 농도에서, 캐모마일 오일은 0.04 중량% 이하 농도에서, 유자씨 오일은 0.25 중량% 이하 농도에서 각각 세포 독성을 나타내지 않음을 확인하였으며, 이하 실시예에서 각각의 농도 이하로 처리하여 실험을 진행하였다.
실시예
2. 모발성장인자 발현 변화 측정
모유두 세포에 제조예 1의 오일을 처리하여 모발 성장인자인 TGF-β, IGF-1 및 VEGF의 발현을 RT-PCR을 통하여 분석하였다. 오일의 농도는 실시예 1의 MTT 분석법을 참고하여 설정하였다. 그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 TGF-β는 오일 무처리군과 비교하여 발현의 변화가 거의 나타나지 않았지만, IGF-1의 발현은 모든 오일 처리군에서 증가하였으며, VEGF의 발현은 레몬그라스 오일 0.0025 중량% 및 로즈마리 오일 0.005 중량%를 제외한 처리군에서 증가하였다. 따라서 라벤다 오일, 레몬그라스 오일, 로즈마리 오일, 캐모마일 오일, 페파민트 오일, 청유자 오일 또는 유자씨 오일은 모발 성장인자인 IGF-1 및 VEGF의 발현을 증가시킴으로써 모발의 성장에 긍정적 효과를 가져 올 수 있다.
실시예
3.
Wnt
/β-
catenin
신호전달의 활성화 측정
모발성장 관련 Wnt/β-catenin 신호전달의 활성화 정도를 확인하기 위하여, TOP-Flash 플라스미드 벡터(plasmid vector)를 형질주입시킨 모유두 세포에 제조예 1의 오일을 처리한 후, 루시퍼레이즈 분석법으로 발광 정도를 비교분석하였다. 양성 대조군으로는 현재 시판중인 미녹시딜을 2 중량% 처리하였다. 그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 모든 오일 처리군에서 아무것도 처리하지 않은 대조군에 비하여 신호전달이 활성화 하는 것을 확인하였으며, 특히 라벤다 오일, 로즈마리 오일, 페파민트 오일, 청유자 오일 및 유자씨 오일은 양성대조군인 미녹시딜에 비해서 높은 Wnt/β-catenin 신호전달의 활성화 정도를 나타냄을 확인할 수 있었다. 이를 통해 제조예 1의 오일 추출물들은 Wnt/β-catenin 신호전달의 활성화를 통하여 모발성장에 관여함을 알 수 있다.
실시예
4.
ROS
제거능
평가
제조예 1의 오일의 ROS 제거 효능을 평가하기 위해 모유두 세포에 제조예 1의 오일을 처리한 후, 자외선(UVB)을 조사하여 ROS 제거 효능을 DCFDA 분석법을 이용하여 형광활성화세포분류기(fluorescence activated cell sorter, FACS)로 확인하였다. 그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 자외선을 조사한 UVB군에서는 아무것도 처리하지 않은 음성대조군인 Control 군에 비해 370%의 ROS가 발생하였으며, 제조예 1의 오일을 처리한 경우, UVB에 의한 ROS 생성을 저해하는 효과를 확인하였다. 그 중, 청유자 오일 및 유자씨 오일에서는 음성대조군에 비해 186% 및 172%의 ROS가 발생하여 각각 49.7% 및 53.3%의 ROS 제거능이 있는 것을 확인하였다. 따라서 자외선에 의해 발생된 ROS를 라벤다 오일, 레몬그라스 오일, 로즈마리 오일, 캐모마일 오일, 페파민트 오일, 청유자 오일 또는 유자씨 오일이 제거함을 확인함으로써 자외선에 대한 오일의 세포 보호 효과를 검증하였다.
실시예
5. 항산화 효소 발현 확인
모유두 세포에 제조예 1의 오일을 처리하여 항산화 효소(HO-1, NQO-1, GSTpi, GSTA4 및 GCLM)의 발현 변화를 RT-PCR을 통하여 확인하였다. 그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이 오일 처리시 특정 농도에 따라 항산화 효소의 발현이 증가하는 것을 확인하였으며, 청유자 오일 및 유자씨 오일은 각각 모든 처리 농도에서 음성대조군에 비하여 항산화 효소 HO-1, NQO-1, GSTpi, GSTA4 및 GCLM의 발현이 현저히 증가하였다.
실시예
6. 항산화 효소 발현 기전 확인
제조예 1의 오일을 처리하였을 때 항산화 효소의 발현을 증가시키는 기전을 확인하기 위하여 항산화를 유도하는 핵심 전사인자인 Nrf-2의 발현을 확인하였다. 그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이 모유두 세포에 제조예 1의 오일을 처리하였을 경우, 로즈마리 오일 0.005 중량% 처리군을 제외한 모든 처리군에서 음성대조군에 비하여 Nrf-2의 발현이 증가하며 청유자 오일 또는 유자씨 오일 처리시 그 발현이 더욱 현저히 증가하는 것을 확인하였다. 또한, 이는 세포에서 ROS의 생성과 상관없이 오일 처리에 따라 항산화 효소인 Nrf-2의 발현이 증가함을 의미한다. 이를 통해 청유자 오일 및 유자씨 오일은 ROS와 무관하게 Nfr-2의 발현을 증가시키고, 증가된 Nrf-2의 발현을 통하여 항산화 효소의 발현이 조절됨으로써 항산화 작용이 일어남을 알 수 있다.
실시예
7.
Nrf
-2 단백질 발현 확인
모유두 세포에 제조예 1의 오일을 처리한 후 자외선을 조사하여 나타나는 Nrf-2의 활성 변화를 면역화학염색법을 이용하여 공초점현미경(confocal microscope)을 통해 분석하였다. 그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이 음성대조군(A)에서는 Nrf-2의 발현이 확인되지 않는 반면 자외선을 조사하였을 때(B)는 항산화를 유도하는 전사인자인 Nrf-2의 발현이 증가됨을 확인하였고, 청유자 오일 및 유자씨 오일을 처리하였을 경우(H 및 I) Nrf-2는 활성화 되어 핵내로의 이동이 더욱 증진됨을 확인할 수 있었다.
실시예
8.
모유두
탈모 세포 모델에서
HO
-1의 발현변화 확인
모유두 세포에 INF-γ를 처리하여 탈모 세포 모델을 만든 후, 제조예 1의 오일을 처리하여 HO-1의 발현을 확인하였다. HO-1은 정상인에 비해 탈모환자에서 발현이 감소하는 유전자다. 그 결과, 도 8에 나타난 바와 같이 모유두 세포에 INF-γ를 처리하면 HO-1 유전자의 발현이 감소하고, 제조예 1의 오일을 처리하였을 경우 감소한 HO-1 유전자의 발현이 다시 증가하는 것을 확인하였다. 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 처리하였을 경우, INF-γ 처리에 의해 감소된 HO-1의 발현이 현저히 증가하였으며, 이는 아무것도 처리하지 않은 대조군에 비해서도 더욱 증가하는 결과를 나타냈다. 따라서 청유자 오일 또는 유자씨 오일은 탈모방지에 이용할 수 있다.
Claims (6)
- 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 청유자 오일 또는 유자씨 오일은 모유두 세포의 성장을 촉진하는 것을 특징으로 하는 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 탈모방지 또는 발모촉진용 화장료 조성물.
- 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 피부외용제.
- 제4항에 있어서, 상기 피부외용제는 크림, 젤, 패취, 연고, 경고제, 로션제, 액제, 유탁액, 파우더제 또는 스프레이의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 탈모방지 또는 발모촉진용 피부외용제.
- 청유자 오일 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 건강기능식품 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170041327A KR20180111014A (ko) | 2017-03-31 | 2017-03-31 | 청유자 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020170041327A KR20180111014A (ko) | 2017-03-31 | 2017-03-31 | 청유자 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20180111014A true KR20180111014A (ko) | 2018-10-11 |
Family
ID=63865310
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| KR1020170041327A KR20180111014A (ko) | 2017-03-31 | 2017-03-31 | 청유자 또는 유자씨 오일을 유효성분으로 함유하는 탈모방지 또는 발모촉진용 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20180111014A (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190087081A (ko) * | 2018-01-16 | 2019-07-24 | 인제대학교 산학협력단 | 유자씨 오일을 함유하는 탈모 예방 또는 발모 촉진용 조성물 |
-
2017
- 2017-03-31 KR KR1020170041327A patent/KR20180111014A/ko not_active Application Discontinuation
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|---|---|---|---|---|
| KR20190087081A (ko) * | 2018-01-16 | 2019-07-24 | 인제대학교 산학협력단 | 유자씨 오일을 함유하는 탈모 예방 또는 발모 촉진용 조성물 |
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