KR20180098380A - 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스로부터 수득된 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획 - Google Patents

속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스로부터 수득된 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획 Download PDF

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Abstract

본 발명은 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 열분해 및 단백질분해에 의해 수득된 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획에 관한 것이다.

Description

속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스로부터 수득된 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획
본 발명은 화장 및/또는 피부과학의 분야에서 사용되도록 의도된 활성제에 관한 것이다.
보다 특히, 본 발명은 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 열분해 및 단백질분해에 의해 수득된 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획, 및 화장 및/또는 피부과학 활성제, 바람직하게는 항노화 활성제로서 이의 용도에 관한 것이다.
시간에 따라, 피부, 입술, 속눈썹, 눈썹, 손발톱 및 모발과 같은 케라틴 물질은 특히 이의 구조 및 이의 기능의 변형으로 반영되는 노화를 겪는 것으로 나타난다.
내인적으로, 케라틴 물질은 생리학적 세포 대사 과정 중 자연적으로 생성되는 수퍼옥시드 이온에 의해 공격을 받는다.
외인적으로, 케라틴 물질은 예를 들어 특히 자외선 방사를 통한 햇빛, 아니면 공해와 같은, 노화에 영향을 주는 환경적 인자에의 노출에 영향을 받기 쉽다.
환경에 의해 영향을 받은 피부의 외적 노화는 연령에 연관된 내적 노화를 보완하여, 문헌에 익히 기재되어 있는 특징적인 피부 손상 및 변화를 발생시킨다.
세포 및 분자의 관점에서, 피부 노화는 케라틴생성세포 및 섬유아세포 증식 능력의 손실; 예를 들어 트랜스글루타미나아제 (TGM), 특히 트랜스글루타미나아제 3 과 같은 분화 마커의 감소; 세포외 기질 및 조직 파괴의 약화에 유리하게 영향을 미치는 것을 야기하는, 예를 들어 콜라겐 및 피브릴린과 같은 진피의 구성성분의 생성 및 상이한 금속단백질분해효소 (MMP) 에 의한 이의 파괴 사이의 불균형; 진피표피 경계의 약화를 야기하는, 예를 들어 피브로넥틴 및 인테그린과 같은 진피에 표피를 고정시키는 것과 경계에 관여하는 기능을 갖는 분자의 손실로 반영된다.
육안으로 관찰할 때, 피부 노화는 주름 및 느슨함의 나타남에 따라 명백하다. 노화된 피부는 신생 피부보다 미세하고 손상되기 쉽다. 마지막으로, 노화된 피부는 이의 탄력, 외부 공격에 대한 이의 장벽 기능, 및 이의 회복 능력을 잃는 경향이 있다.
피부 노화 징후의 예방 및/또는 처리를 위한 여러 조성물 또는 방법이 선행 기술에 알려져 있다.
예를 들어, 비-광합성, 비-결과 (non-fruiting) 사상성 세균 추출물의 사용이 제안되어 왔다 (FR 2 719 768 및 FR 2 838 056). 이러한 경우, 피부 노화 징후의 예방 및/또는 처리는 수퍼옥시드 디스뮤타아제의 내인성 합성의 증가를 유도함으로써, 특히 지질다당류 함유 비트레오스실라 필리포르미스 (Vitreoscilla filiformis) 의 추출물에 의해 얻어진다 (FR 2 838 056).
나아가, 문헌 FR 2 762 782 에서, 하나 이상의 비-광합성 사상성 세균의 청징 및 안정화된 배양 배지가 피부 노화를 감소시키고/시키거나 지연시킨다는 관점에서 유리한 특성을 갖는다는 것이 기재되었다.
따라서, 피부 손상, 보다 특히 노화된 피부를 예방 및/또는 처리하기 위한 신규한 트리트먼트 또는 신규한 활성제에 대한 요구가 존재한다.
케라틴생성세포 증식을 유도함으로써 표피 재생을 재활성화할 수 있는 신규한 항노화 화장 트리트먼트에 대한 요구가 존재한다.
피부 병변을 회복함으로써 피부의 장벽 특성을 유지하거나 심지어 강화시킬 수 있는 신규한 항노화 화장 트리트먼트에 대한 요구가 존재한다.
제 1 양상에 있어서, 본 발명은 속 비트레오스실라종 (Vitreoscilla sp) 에 속하는 세균의 바이오매스의 열분해 및 단백질분해에 의해 수득된 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획에 관한 것이다.
또 다른 양상에 있어서, 본 발명은 생리학적 허용가능 배지에, 본 발명에 따른 탄수화물 분획을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 조성물은 유리하게는 화장 또는 피부과학 조성물이다.
또 다른 양상에 있어서, 본 발명은 화장 및/또는 피부과학 활성제, 바람직하게는 항노화 활성제로서, 본 발명에 따른 탄수화물 분획의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양상에 있어서, 본 발명은 본 발명에 따른 탄수화물 분획 또는 조성물의 국소 적용 단계를 포함하는, 케라틴 물질을 처리하기 위한 화장 방법에 관한 것이다.
또 다른 양상에 있어서, 본 발명은 본 발명에 따른 탄수화물 분획 또는 조성물의 국소 적용 단계를 포함하는, 피부 노화의 징후를 처리 및/또는 예방하기 위한 화장 방법에 관한 것이다.
또 다른 양상에 있어서, 본 발명은 하기로 이루어지는 단계를 포함하는, 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획을 제조하는 방법에 관한 것이다:
- 속 비트레오스실라종에 속하는 세균(들)의 바이오매스를 제공하는 단계;
- 용해물을 수득하기 위해, 상기 바이오매스를 열분해 및 단백질분해하는 단계;
- 청징된 용해물을 수득하기 위해, 용해물을 청징하는 단계;
- 청징된 용해물의 다당류를 정제하는 단계.
또 다른 양상에 있어서, 본 발명은 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획에 관한 것이고, 상기 탄수화물 분획은 하기 단계를 포함하는 방법으로 얻어진다:
- 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스를 제공하는 단계;
- 용해물을 수득하기 위해, 상기 바이오매스를 열분해 및 단백질분해하는 단계;
- 청징된 용해물을 수득하기 위해, 용해물을 청징하는 단계; 및
- 청징된 용해물의 다당류를 정제하는 단계.
놀랍게도, 본 발명자들은 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획이 피부, 점막, 두피 및/또는 케라틴 물질을 케어하는 관점에서 유리한 특성을 갖는다는 것을 관찰하였다.
실제로, 탄수화물 분획의 케라틴 물질로의 적용 후, 이는 케라틴 물질에서 화장적 이점을 갖는 침착물을 형성한다.
특히, 모발에 적용된 탄수화물 분획은 이에 매끄럽고 부드러운 느낌을 제공하고, 양호한 풀림 (disentangling) 을 제공한다.
표피 상에 적용된 경우, 탄수화물 분획은 트랜스글루타미나아제 3 을 인코딩하는 유전자 TGM3 의 발현을 자극한다.
"탄수화물 분획" 은 95% 이상의 단당류 및/또는 다당류, 바람직하게는 다당류로 이루어지는 분획을 의미한다.
따라서, 본 발명의 의미 내에서 탄수화물 분획은 0% 내지 최대 5% 아미노산, 펩티드, 단백질, 지방산, 지질, 뉴클레오티드, 뉴클레오시드, 핵산, 합성 중간체, 대사 중간체, 및 이의 혼합물을 포함한다.
선행 기술로부터, 두피의 비듬 상태와 관련되지 않은 하이퍼지루성 (hyperseborrheic) 상태를 예방 및/또는 처리하기 위한 활성제 (FR 2 988 607), 아니면 특히 두피 상의 병원성 미생물의 증식 및/또는 두피 에코플로라 (scalp ecoflora) 의 불균형과 관련된 두피의 비듬 상태를 예방 및/또는 처리하기 위한 활성제 (FR 2 973 700) 로서의, 완전 발효 배지 중 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 총 용해물의 용도가 알려져 있다는 것이 상기된다.
이러한 문헌에 기재된 용해물은 이에 따라 단백질, 지질 및 다당류 분획의 혼합물을 포함하며, 이는 피부 노화를 처리 및/또는 예방하기 위해 의도된 것이 아니다.
나아가, 본 발명에 따른 탄수화물 분획은, 문헌 FR 2 838 056 에 기재된 지질다당류 추출물로부터, 특히 대부분 독점적으로 다당류로 이루어지는 이의 조성에 의해 구별된다. FR 2 838 056 에 기재된 지질다당류는 지질 A, 중앙 (코어) 올리고다당류, 및 O 항원을 구성하는 당류 측쇄로 이루어지는 특징적인 삼원 구조를 갖는다는 것이 상기된다.
· 본 발명에 따른 단리된 탄수화물 분획
제 1 양상에 있어서, 본 발명은 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 열분해 및 단백질분해에 의해 수득된 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획에 관한 것이다.
"탄수화물 분획" 은 세균 용해물에 초기 함유된 다당류를 의미한다.
"다당류" 는 글리코시드 결합에 의해 서로 결합된 일련의 둘 이상의 단당류를 의미한다.
다당류는 선형 또는 분지형 구조를 가질 수 있다.
특히, 다당류는 만노오스, 람노오스, 글루코오스, 갈락토오스, 아라비노오스 및 프룩토오스를 포함하는 군으로부터 선택되는 하위단위와 같은, 탄소수 5 내지 6 의 하위단위를 포함한다.
다당류는 분자량이 5 kDa 내지 200 kDa 이다.
한 특정 구현예에서, 다당류는 분자량이 대략 10 kDa 내지 대략 150 kDa 이다.
특정 구현예에서, 탄수화물 분획은 상기 세균 용해물의 총 탄수화물 분획에 해당하고, 즉 세균 배양 배지, 즉 완전 발효 배지의 수성 분획에 용해된 세균 세포 막 다당류, 세포내 다당류, 및 다당류를 포함한다.
특정 구현예에서, 탄수화물 분획은 완전 발효 배지의 수성 분획에 용해된 세균 세포 막 다당류, 세포내 다당류 또는 다당류를 본질적으로 포함하거나, 대안적으로 독점적으로 이들만을 포함한다.
특정 구현예에서, 탄수화물 분획은 세균 세포 막 다당류 및 세포내 다당류의 혼합물을 본질적으로 포함하거나, 대안적으로 독점적으로 이들만을 포함한다.
특정 구현예에서, 탄수화물 분획은 완전 발효 배지의 수성 분획에 용해된 세균 세포 막 다당류 및 다당류의 혼합물에 해당한다.
특정 구현예에서, 탄수화물 분획은 완전 발효 배지의 수성 분획에 용해된 세포내 다당류 및 다당류의 혼합물을 본질적으로 포함하거나, 대안적으로 독점적으로 이들만을 포함한다.
한 특정 구현예에서, 탄수화물 분획은 완전 발효 배지에 용해된 다당류와 세포내 다당류 및 세균 세포 막 다당류의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택되는 다당류를 포함한다.
본 발명의 문맥 내에서, "단리된" 은 열분해 및 단백질분해 후 용해물에 함유된 기타 분획으로부터 본 발명의 의미 내의 탄수화물 분획의 물리적 분리의 결과, 즉 펩티드/단백질 분획, 지질 분획, 핵산 분획, 및 세포 대사 경로에서 사용된 합성 중간체 화합물과 소비되지 않은 아미노산과 같은 세균 배양물 유래 대사물질을 함유하는 분획을 포함하는 기타 분획의 물리적 분리의 결과를 의미한다.
한 특정 구현예에서, 탄수화물 분획은 아미노산, 펩티드, 단백질, 지방산, 지질, 뉴클레오티드, 뉴클레오시드, 핵산, 합성 중간체, 대사 중간체, 및 이의 혼합물을 갖지 않는다.
· 속 비트레오스실라종 (특히 종: 비트레오스실라 필리포르미스) 에 속하는 세균
상기 구체화된 바와 같이, 용해물 상태의 본 발명에 따라 고려된 미생물은 Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (Vol. 3, sections 22 and 23, 9th edition, 1989) 의 범주에 따라 정의된 바와 같은 비-광합성 사상성 세균이고, 속 비트레오스실라종 (특히 종: 비트레오스실라 필리포르미스) 에 속한다.
하기 제시된 실시예로부터 나타나는 것과 같이, 본 발명자들은 예상치 못하게 완전 발효 배지에 임의 제형화된 이와 같은 세균의 바이오매스의 용해물의 탄수화물 분획이 예상치 못한 화장학 및/또는 피부과학 특성을 갖는다는 것을 발견하였다.
보다 특히, 이는 속 베기아토아(Beggiatoa), 비트레오스실라(Vitreoscilla), 플렉시트릭스(Flexithrix) 또는 류코트릭스(Leucothrix) 에 속하는 세균이다.
본 발명의 바람직한 변형에 있어서, 이는 세균 비트레오스실라 필리포르미스이다.
한 특정 구현예에서, 세균은 비트레오스실라 필리포르미스 균주, 바람직하게는 비트레오스실라 필리포르미스 균주 ATCC 15551 이다.
· 완전 발효 배지
한 특정 구현예에서, 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 용해물은 또한 완전 발효 배지를 포함한다.
본 발명의 의미 내에서, 표현 "완전 발효 배지 중 용해물" 은, 배양 배지에 초기 존재하는 영양 기질의 사용을 유도하는 미생물 생장 단계 이후까지 세균이 배양되는 완전 배양 배지에서 용해물이 제형화되는 것을 의미한다.
본 발명의 의미 내에서, 표현 "완전 발효 배지" 는 미생물의 생장 및 세포 용해에 사용되었던 배양 방법으로부터 유래된 배지를 의미하고, 상기 배지는 나아가 이의 비-수성 구성성분의 전부 또는 일부를 분리 및/또는 제거하기 위한 임의의 부가적인 취급에 적용되지 않는다.
보다 특히, 본 발명에 따라 고려된 활성제는 미생물의 용해물의 탄수화물 분획과 상기 세균의 발효를 위해 사용되고, 이의 세포 용해가 연속적으로 수행되는 배양 배지 (즉, 완전 발효 배지) 의 전부 또는 일부 (양의 관점에서) 로 형성된다.
따라서, 본 발명에 따른 활성제, 즉 임의로 완전 발효 배지 중 속 비트레오스실라종 (특히 종: 비트레오스실라 필리포르미스) 에 속하는 세균의 용해물의 탄수화물 분획으로부터 수득된 활성제는 속 비트레오스실라종 (특히 종: 비트레오스실라 필리포르미스) 에 속하는 세균에 대한 발효 배지의 총 용해물 또는 상청액과 명확히 구별된다.
나아가, 본 발명에 따라 고려된 활성제는, 임의로 완전 발효 배지 중 속 비트레오스실라종 (특히 종: 비트레오스실라 필리포르미스) 에 속하는 세균의 바이오매스의 용해물로부터 수득되거나 단리될 수 있는, 펩티드/단백질 분획, 지질 분획, 핵산 분획, 및 이의 혼합물과 구별된다.
실제로, 탄수화물 분획 이외의 이러한 바이오매스 또는 바이오매스 분획, 탄수화물 분획 이외의 이러한 용해물 또는 용해물 분획에 반해, 본 발명에 따라 고려된 활성제는 유의한 양의 수용성 세포 다당류, 즉 상기 세균에 함유된 것, 또는 다당류가 상기 세균의 증식 동안 배양 배지 내로 자연적으로 방출되는 수용성 세포외 다당류를 함유한다.
따라서, 표현 "완전 배지" 는 또한, 연속적으로 해당 미생물의 배양 및 이의 세포 용해가 수행되는 발효 배지를 구성하는 물의 부분 증발 이후 수득된다는 점에 있어서, "농축된" 완전 배지의 형태까지 확장된다. 물론, 이러한 증발은 이러한 완전 배지를 형성하는 비-수성 구성성분의 완전성에 악영향을 주지 않도록 조정된 작동 조건 하 수행된다.
본 발명의 의미 내에서, 표현 "비-수성 구성성분" 은, 종래의 발효 배지에서 우세한 구성성분인 물이 본 발명에 따른 완전 배양 배지에서 그대로, 즉 동일한 양으로 유지되어야 하는 구성성분 중 하나가 아니라는 것을 내포한다.
· 발효 배지의 조성
정의에 따라, 발효 배지 아니면 배양 배지는 배양을 가능하게 하여, 경우에 따라, 세포, 세균 또는 효모의 생장을 가능하게 하는 지지체이다. 원칙적으로, 이러한 배지에서, 세포는 이의 다량의 급속 증식을 위한 필수 성분, 및 또한 때때로, 특정한 세균의 속 또는 바람직한 특정한 과, 이 경우 속 비트레오스실라종 (특히, 종: 비트레오스실라 필리포르미스) 에 속하는 세균의 생장을 가능하게 할 요소를 발견한다.
따라서, 이의 조성은 고려된 미생물의 증식에 필요한 영양적 요건을 만족시켜야 한다.
보다 특히, 이러한 배양 배지의 조성은 하기와 같아야 한다:
- 미네랄 이온 및 생장 인자에 대한 요건을 충족하고, 탄소 및 에너지의 공급원을 제공하고;
- 최적 pH 에 근접한 pH 를 갖고;
- 최적 이온 농도를 갖는다 (배지는 등장성일 수 있으나, 반드시 그런 것은 아님).
따라서, 본 발명에 적합한 발효 배지의 조성은 적어도 하기를 포함한다:
- 탄소 및 에너지의 공급원 (일반적으로 당, 유리하게는 글루코오스로 대표됨);
- 칼륨 및 인의 공급원, 예를 들어 K2HPO4;
- 질소 및 황의 공급원 (화합물 (NH4)2SO4 로 대표될 수 있음);
- 마그네슘의 공급원, 예를 들어 MgCl2;
- 칼슘의 공급원, 예를 들어 CaCl2;
- 철의 공급원, 보다 특히 시트르산철, (상기 시트레이트는 용액 중 철을 보유함);
- 미량 원소의 공급원, 특히 Cu, Zn, Co, Ni, B 또는 Ti 염으로부터 선택됨;
- 모든 생명체에 필수적인, 일반적으로 멸균수의 공급원; 및
- KH2PO4 로 대표될 수 있는 pH 완충액.
이러한 성분 중 하나가 존재하지 않는 경우, 세균은 그 자체로 이의 부재를 보충할 수 없기 때문에 생장하지 않는다.
본 발명에 따른 미생물의 생장에 적합한 발효 배지의 예로서, 특히 하기 실시예 1 에 제시된 배지가 언급될 수 있다.
유효량의 본 발명에 따라 고려된 미생물이 이에 도입되고, 모든 것은 이의 증식에 도움이 되는 조건 하에 놓여진다.
· 본 발명에 따른 활성제를 수득하기 위한 세균의 용해
용해물은 주로 고려된 생물학적 세포에 자연적으로 함유된 세포내 및 세포 생물학적 구성성분의 방출을 유발하는, "세포 용해" 의 현상을 통한 생물학적 세포 (바이오매스) 의 파괴 또는 용해 이후 수득되는 물질을 의미한다.
본 발명의 의미 내에서, 용어 "용해물" 은 논의되는 미생물 (바이오매스), 즉 속 비트레오스실라종 (특히 종: 비트레오스실라 필리포르미스) 에 속하는 세균의 용해에 의해 수득되는, 모든 세포내 및 세포외 물질을 의미한다.
다시 말해서, 사용된 용해물은 이에 따라 이의 세포 용해 동안 생성된 모든 이의 세포내 생물학적 구성성분, 특히 이의 대사물 및 세포벽 및 세포 막 구성성분으로부터 형성된다.
본 발명의 의미 내에서, 용어 "대사물" 은 본 발명에 따라 고려된 미생물의 대사로부터 유래된 임의의 물질을 의미한다.
따라서, 본 발명에 따라 고려된 용해물은 하기로 이루어지는 방법을 통해 수득될 수 있다:
- 속 비트레오스실라종 (특히 종: 비트레오스실라 필리포르미스) 에 속하는 세균의 증식에 도움이 되는 조건 하의 발효 배지에서, 상기 하나 이상의 세균의 배양 단계, 및
- 상기 발효 배지에서 상기 세균의 세포 용해 단계.
본 발명의 의미 내의 탄수화물 분획은 상기 바이오매스의 열분해 및 단백질분해 유래 다당류를 의미한다.
완전 발효 배지에서 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 용해물을 수득하기 위해, 상기 세균을 배양하는 단계를 포함하는 방법에 따라, 당업자는 특히 실시예 1 을 참조할 수 있다.
유리하게는, 완전 발효 배지에서 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 용해물을 수득하기 위해, 바이오매스 (이들이 배양된 배지에 존재하는, 생장 단계 후 세균 세포) 는 예를 들어 -20℃ 의 온도에서 사전 동결될 수 있고, 이후 바람직하게는 가열에 의해, 특히 100℃ 초과의 온도에서의 가열 단계에 사전 동결된 바이오매스를 적용시킴으로써 멸균된다. 예로서, 바이오매스의 멸균 단계는 예를 들어 121℃ 의 온도에서 오토클레이빙에 의해 수행될 수 있다.
선행 텍스트에서 나타나는 바와 같이, 상기 미생물의 이러한 배양 후, 이는 이의 배양에 사용된 발효 배지 내에서 바로 용해물 상태로 변형된다.
한 특정 구현예에서, 상기 용해물은 상기 바이오매스의 열분해 단계 및 단백질분해 단계에 의해 수득된다.
한 특정 구현예에서, 단백질분해는 열분해보다 선행된다.
바람직한 구현예에서, 열분해는 단백질분해보다 선행된다.
· 조성물
본 발명에 따른 탄수화물 분획은 화장 및/또는 피부과학에서 통상 사용된 하나 이상의 성분을 포함하는 조성물 내에서 제형화되기 용이하다.
이는 이것이 무향이고, 이에 따라 특히 불쾌한 향을 마스킹 (mask) 하기 위한 향료의 부수적인 공존을 요구하지 않기 때문이다.
나아가, 본 발명에 따른 탄수화물 분획은 무색이기 때문에, 화장 및/또는 피부과학 조성물로 도입되면 임의의 불시적 또는 목적되지 않은 착색을 야기하지 않는다.
따라서, 본 발명은 또한 생리학적 허용가능 배지에 본 발명에 기재된 바와 같은 탄수화물 분획을 포함하는 조성물, 특히 화장 및/또는 피부과학 조성물에 관한 것이다.
용어 "생리학적 허용가능 배지" 는 인간 케라틴 물질, 특히 피부 및 모발과 상용가능한 배지를 의미한다.
한 특정 구현예에서, 화장 및/또는 피부과학 조성물은 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 열분해 및 단백질분해에 의해 수득된 청징된 용해물 (용해물은 또한 완전 발효 배지를 포함함) 로부터 단리된 탄수화물 분획을 포함한다.
본 발명에 따른 활성제를 함유하는 조성물은 국소 적용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 이에 따라 순수하게 에스테틱 목적으로, 즉 피부, 점막, 두피, 및 케라틴 물질의 외관 및 질감을 향상시키기 위해 적용된다. 즉, 본 발명의 의미 내에서, 용어 "적용하다" 는 의학적 목적의 처리를 포함하지 않는다.
본 발명에 따른 조성물은 유리하게는 임의로 완전 발효 배지에서 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 열분해 및 단백질분해에 의해 수득된 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획을, 상기 조성물의 무수 추출물의 총 중량에 대해, 0.1 중량% 내지 10 중량% 범위의 양으로 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물은 유리하게는 탄수화물 분획을, 상기 조성물의 무수 추출물의 총 중량에 대해, 0.5 중량% 내지 5 중량% 범위의 양으로 포함한다.
다른 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물은 유리하게는 탄수화물 분획을, 상기 조성물의 무수 추출물의 총 중량에 대해, 1 중량% 내지 5 중량% 범위의 양으로 포함한다.
본 발명에 따른 조성물은 이에 따라 특정한 선택된 투여 방식에서 통상적으로 이용가능한 임의의 생약 형태일 수 있다.
지지체는 고려된 조성물의 유형에 따라 다양한 성질을 가질 수 있다.
보다 특히, 외부 국소 투여에 의도된 조성물에 관해, 이는 수성, 수성-알코올성 또는 오일성 용액, 로션 또는 세럼형의 용액 또는 분산액, 밀크형의 액체 또는 반-액체 점조도의 에멀젼 (수성상 (O/W) 또는 이의 반대 (W/0) 중 지방 상을 분산시켜 수득됨), 또는 크림형의 연질, 반-고체 또는 고체 점조도의 현탁액 또는 에멀젼, 이온성 및/또는 비이온성 유형의 수성 또는 무수 겔, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 마이크로입자 또는 소포성 분산액일 수 있다.
이러한 조성물은 통상의 방법에 따라 제조된다.
이러한 조성물은 특히 피부, 점막, 두피 및/또는 케라틴 물질을 케어하기 위한 클렌징, 보호제, 트리트먼트 또는 케어 크림, 로션, 겔, 또는 무스를 구성할 수 있다.
이는 용액, 크림, 겔, 에멀젼, 무스 아니면 에어로졸에서 사용하기 위해 적용된 조성물 (예를 들어, 또한 가압 추진체를 함유하는 것) 형태의, 피부, 점막, 두피 및/또는 케라틴 물질의 화장 및/또는 피부과학 트리트먼트에 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명에 따른 국소 조성물은 유리하게는 모발케어, 특히 모발 로션, 샴푸, 컨디셔너, 디탱글러 (detangler), 모발 크림 또는 겔, 스타일링 라커, 모발-고정 로션, 트리팅 로션 (treating lotion), 임의로 컬러링 샴푸 형태의 염색 조성물 (특히 산화 염색), 모발-복구 (hair-restructuring) 로션, 펌-웨이브 조성물, 탈모 방지용 로션 또는 겔, 항기생충 샴푸 또는 의약용 샴푸, 특히 항-지루 (anti-seborrhoea) 샴푸, 특히 진정 (anti-irritant), 항노화 또는 복구성이거나 혈액 순환을 활성화하는 두피 케어 제품에 적합한 임의의 생약 형태로 제형화될 수 있다.
알려진 방식에서, 국소 투여에 의도된 생약 형태는 또한 증점제, 오일, 왁스, 보존제, 항산화제, 용매, 향료, 필러, UV 차단제 및 염료와 같은 화장 및/또는 피부과학 분야에서 통상적인 아쥬반트를 함유할 수 있다.
이러한 다양한 아쥬반트의 양은 고려되는 분야에서 통상 사용되는 양, 예를 들어 조성물의 총 중량의 0.01% 내지 20% 이다. 이의 성질에 따라, 이러한 아쥬반트는 지방상 및/또는 수성상으로 도입될 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 유리하게는 물을 함유할 수 있다. 물은 특히 스프링 및/또는 미네랄 물일 수 있고, 특히 Vittel 물, Vichy basin 의 물 및 la Roche Posay 물로부터 선택된다.
물은 조성물의 총 중량에 대해 5 내지 99 중량% 범위, 바람직하게는 20 내지95 중량% 범위, 바람직하게는 40 내지 95 중량% 범위의 함량으로 존재할 수 있다.
· 용도 및 방법
나아가, 본 발명은 화장 및/또는 피부과학 활성제, 바람직하게는 항노화 활성제로서의, 본 발명의 방법에 의해 수득될 수 있는 탄수화물 분획의 용도에 관한 것이다.
"화장 및/또는 피부과학 활성제" 는 케라틴 물질에 대한 적용 후 유리한 특성을 갖는 활성제를 의미한다.
유리한 특성은, 예를 들어 트랜스글루타미나아제와 같은 신생 피부에 존재하고, 노화된 피부에서 감소된 발현을 갖는 단백질의 발현의 자극일 수 있다.
본 발명은 또한 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획, 또는 이와 같은 분획을 포함하는 조성물의 케라틴 물질로의 국소 적용 단계를 포함하는, 케라틴 물질을 처리하는 비-치료적 화장 방법에 관한 것으로서, 상기 탄수화물 분획은 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 열분해 및 단백질분해에 의해 수득된 용해물의 청징 후 수득되는 것으로 이해된다.
본 발명의 문맥 내에서, "케라틴 물질의 처리" 는 피부, 점막, 입술, 손발톱, 두피 및 모발을 케어하기 위한 본 발명에 따른 탄수화물 분획의 국소 적용을 의미한다.
또한, 본 발명은 속 비트레오스실라종에 속하는 세균(들)의 바이오매스의 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획, 또는 이와 같은 분획을 포함하는 조성물의 피부로의 국소 적용 단계를 포함하는, 피부 노화의 징후를 처리 및/또는 예방하기 위한 비-치료적 화장 방법에 관한 것으로서, 상기 탄수화물 분획은 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 열분해 및 단백질분해에 의해 수득된 용해물의 청징 후 수득되는 것으로 이해된다.
본 발명의 문맥 내에서, "피부 노화의 징후 처리" 는 주름, 미세 주름, 피부의 생기 손실 (withering), 피부 탄력 손실, 피부 긴장 손실, 진피의 얇아짐, 콜라겐 섬유의 약화, 피부 견고함 손실, 피부 건조의 감소 또는 완화를 의미한다.
본 발명의 문맥 내에서, "피부 노화의 징후 예방" 은 주름, 미세 주름, 피부의 생기 손실, 피부 탄력 손실, 피부 긴장 손실, 진피의 얇아짐, 콜라겐 섬유의 약화, 피부 견고함 손실, 피부 건조의 외관의 부재 또는 이의 지연을 의미한다.
한 특정 구현예에서, 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 용해물은 또한 완전 발효 배지를 포함한다.
본 발명은 또한 하기로 이루어지는 단계를 포함하는, 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획을 제조하는 방법에 관한 것이다:
- 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스를 제공하는 단계;
- 용해물을 수득하기 위해, 상기 바이오매스를 열분해 및 단백질분해하는 단계;
- 청징된 용해물을 수득하기 위해, 용해물을 청징하는 단계;
- 청징된 용해물의 다당류를 정제하는 단계.
"바이오매스" 는 완전화된 배양물 (즉, 초기 완전 발효 배지를 구성하는 영양 요소의 전부 또는 일부의 소멸 후) 에 함유된 살아있거나 죽은 유기체의 매스의 전부 또는 일부를 의미한다.
바람직한 구현예에서, 열분해는 단백질분해보다 선행된다.
한 특정 구현예에서, 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 용해물은 또한 완전 발효 배지를 포함한다.
한 특정 구현예에서, 열분해는 60℃ 내지 120℃ 의 온도, 바람직하게는 70℃ 내지 100℃ 의 온도, 바람직하게는 대략 80℃ 의 온도에서 수행될 수 있다.
대략 80℃ 는 80℃ ± 5℃ 의 온도를 의미한다.
한 특정 구현예에 있어서, 열분해는 30 min 내지 240 min 의 지속시간, 바람직하게는 45 min 내지 90 min 의 지속시간, 바람직하게는 대략 60 min 의 지속시간 동안 수행될 수 있다.
대략 60 min 은 60 min ± 5 min 의 지속시간을 의미한다.
한 특정 구현예에 있어서, 단백질분해는 선행 기술에서 알려진 임의의 단백질분해 효소에 의해 수행될 수 있고, 이 중에서 키모트립신, 트립신, 파파인, 펩신, 서브틸리신 및 이의 혼합물이 언급될 수 있다.
한 특정 구현예에서, 단백질분해는 알칼라아제 (alcalase), 특히 alcalase® 2.4 L FG (Novozyme® 사제 서브틸리신) 로 수행될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 단백질분해는 프로테이나아제 K 로 수행되지 않는다.
단백질분해가 시판 단백질분해 효소를 이용하여 수행되는 경우, 사용할 프로테아제의 양, 프로테아제와 용해물의 인큐베이션의 온도 및 지속시간 및 반응 배지의 pH 에 관한 제조사의 지침이 참조될 것이다.
"반응 배지" 는 임의로 완전 발효 배지에서 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 용해물, 프로테아제, 단백질분해에 임의로 필요한 임의의 기타 성분, 예를 들어 염의 농도 조정 및 pH 조정을 가능하게 하는 완충액을 포함하는 수용액을 의미한다.
임의로 완전 발효 배지에서 용해물의 단백질분해 수행을 위한 최적의 조건을 결정하는 것은 당업자의 능력 내에 있다.
일반적으로, 단백질분해는 반응 배지의 총 중량에 대해 0.005 중량% 내지 5 중량%, 바람직하게는 0.05 중량% 내지 1.5 중량% 의 반응 배지 중 효소의 양으로 수행될 수 있다.
나아가, 단백질분해의 지속시간은 초기 배지의 단백질 함량 및 사용된 프로테아제의 양의 함수로서, 30 min 내지 24 h 이다.
한 특정 구현예에서, 반응 배지는 20℃ 내지 80℃ 의 온도, 바람직하게는 30℃ 내지 60℃ 의 일정한 온도에서 유지된다.
한 특정 구현예에서, 반응 배지의 pH 는 3 내지 10, 바람직하게는 6 내지 9.5, 바람직하게는 약 8 이다.
한 특정 구현예에서, 단백질분해가 서브틸리신의 존재 하 수행되는 경우, 반응 배지의 pH 는 약 7.5 이다.
나아가, 문헌 FR 2 838 056 에 기재된 프로테이나아제 K 를 사용한 지질다당류의 제조 방법은, 열분해 단계 이후 원심분리 단계이고, 이때 상청액이 프로테이나아제 K 를 이용한 단백질분해 단계에 적용된다는 점에서, 본 발명에 기재된 탄수화물 분획의 제조 방법과 상이하다.
문헌 FR 2 838 056 에 기재된 방법과 달리, 용해물에 함유된 모든 탄수화물 분획을 보유하고, 동시에 다당류의 취급 작업의 수를 감소시켜 다양한 정제 단계 중 이의 손실을 제거하기 위해, 본 발명에 따라 수행된 열분해 및 단백질분해는 동일한 반응 배지에서 실시되는 것이 중요하다.
한 특정 구현예에 있어서, 단백질분해 이후 예를 들어 사용된 프로테아제의 저해제 또는 저해제의 혼합제를 이용한 단백질분해 불활성화 단계; 70℃ 내지 90℃ 의 온도, 예를 들어 대략 85℃ 의 온도에서 반응 배지의 인큐베이션; 반응 배지의 pH 에 대한 pH 의 변화가 수행될 수 있다.
어떠한 이론에 구속되지 않으면서, 본 발명자들은, 용해물의 열분해 및 단백질분해가, 피부 및 진피표피 경계의 응집력에 부정적인 영향을 줄 수 있는 세균 균주에 고유한 효소를 제거하는 것을 유도한다고 간주한다.
한 특정 구현예에서, 단백질분해 불활성화 단계는 수 분 내지 수 시간의 지속시간, 예를 들어 5 min 내지 2 h 의 지속시간, 바람직하게는 10 min 내지 30 min 범위의 지속시간 동안 수행된다.
단백질분해 불활성화 단계의 조건은 당업자에 의해 조정될 수 있다.
특정 구현예에서, 용해물은 변성제 및/또는 카오트로픽제 (chaotropic agent) 를 포함하지 않는다.
본 발명의 문맥 내에서, "변성제 및/또는 카오트로픽제" 는 표준 조건 하에서, 용해물에 함유된 단백질의 언폴딩 (unfolding) 을 가능하게 하는 작용제, 즉 특히 2차 또는 3차 구조의 전부 또는 일부를 제거하여, 언폴딩된 실질적으로 선형 단백질 구조를 유도하는 작용제를 의미한다.
한 특정 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 탄수화물 분획의 제조 방법은 또한 일반적으로 바이오매스의 열분해 및/또는 단백질분해 단계 후 배지의 산성화 단계를 포함할 수 있다. 이러한 단계에 적합한 임의의 산, 예를 들어 시트르산, 염산, 황산, 인산 및 이의 혼합물을 포함하는 군으로부터 선택되는 산이 사용될 수 있다.
한 특정 구현예에 있어서, 본 발명에 따른 탄수화물 분획의 제조 방법은 또한 예를 들어 적합한 필터, 예를 들어 대략 0.4 μm 내지 20 μm 의 직경을 갖는 포어를 갖는 필터 (대략 0.4-0.8 μm, 1-4 μm, 4-7 μm, 7-15 μm 및 8-20 μm 의 보유 범위를 갖는 필터 포함) 를 이용하는, 일련의 심층 여과에 의해, 임의로 산성화된 용해물의 청징 단계를 포함할 수 있다.
본 발명을 실행하는 것은 다당류 정제 단계를 포함하고, 이는 선행 기술에서 알려진 임의의 방법으로 수행될 수 있다 (Goncalves et al. 2007; Communicating Current Research and Educational Topics and Trends in Applied Microbiology; Mendez-Vilas Ed.).
예를 들어, 다당류는 특히 알코올 침전, 특히 에탄올 침전에 의해 정제될 수 있고; 보다 바람직하게는 막 여과에 의한 분리에 의해 정제될 수 있다.
한 특정 구현예에서, 본 발명에 따른 탄수화물 분획의 제조 방법은 또한 막 한외여과 이후 막 투석여과 (diafiltration) 로의 정제에 의한 다당류의 농축화 단계를 포함할 수 있다. 투석여과 부피가 목적하는 순도 등급을 결정하는 것이 선행 기술로부터 알려져 있다.
이러한 특정 구현예에서, 방법은 특히 적합한 컷-오프 (cut-off) 임계치를 갖는 필터를 이용한 막 한외여과 단계를 이용할 수 있다.
실제로, 적합한 필터는 예를 들어 30 000 Da, 10 000 Da 또는 1000 Da 의 임계치를 갖는 필터이다.
한 특정 구현예에서, 막 한외여과에 적합한 필터는 재생성된 히드록시에틸 셀룰로오스 및 폴리에테르 술폰을 기반으로 한다.
한 특정 구현예에서, 막 한외여과에 적합한 필터는 바람직하게는 30 000 Da 의 컷-오프 임계치를 갖고, 재생성된 히드록시에틸 셀룰로오스를 기반으로 한다.
이러한 특정 구현예에서, 최종 다당류 농도는 분획의 총 중량에 대해 0.1 중량% 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.5 중량% 내지 5 중량%, 바람직하게는 1 중량% 내지 2 중량% 일 수 있다.
한 특정 구현예에서, 화장 및/또는 피부과학의 분야에서 통상적으로 사용된 하나 이상의 화장 보존제(들), 예를 들어 페녹시에탄올은 저장 중 활성제의 안정성을 강화시키기 위해 첨가될 수 있다.
실시예
1- 본 발명의 의미 내의 탄수화물 분획의 제조
세균 균주 비트레오스실라 필리포르미스를 3000 리터 산업용 발효기에서 배양한다. 배양의 종료 시점에서, 자연발생 pH 는 6.2 이고, 고체 함량은 0.6% 이고, 자유 글루코오스 함량은 0.035% 이다.
균주 V. 필리포르미스를 이의 완전 배양 배지 (이의 조성은 하기 표 1 에 기재되어 있음) 에서 발효시킨다.
표 1: V. 필리포르미스의 배양을 위한 완전 영양 배지의 조성
Figure pct00001
본 발명에 따른 화장 활성제를 수득하기 위해, 하기 방법을 수행한다.
V. 필리포르미스의 초기 균주를 ATCC (균주 15551) 로부터 수득한다.
바이오매스를 3000 유효 리터의 산업용 생물반응기에서 발효에 의해 수득하고; 배양 배지의 조성은 상기 제시된다. 배양 중, pH 를 일정하게 유지하고 (7.00), 온도를 일정하게 유지하고 (26℃), 용존 산소를 일정하게 유지한다 (0.5). 고체 함량이 0.6% 에 도달하고, 글루코오스 함량이 0.035% 에 도달하면 배양을 중지한다.
배양물로부터 다당류의 추출을 위해, 먼저 열분해의 사이클을 80℃ 의 온도에서 15 분의 지속시간 동안 적용한다.
55℃ 의 온도로 배지를 냉각한 후, pH 를 조정하고 1 M 수용액의 수산화나트륨을 첨가하여 pH = 8 에서 유지한다. 이후, 바실러스 리세니포르미스 (Bacillus liceniformis) 로부터 단리된 0.1% (w/w) 의 프로테아제: Alcalase® 2.4 L FG (Novozyme® 사제) 를 첨가하여 단백질분해를 수행한다.
3 시간의 단백질분해의 종료 시점에서, 배지를 20 중량% 의 인산 수용액을 이용하여 pH 7 로 중화한다. 10 분 동안 90℃ 의 온도에서 배지를 가열함으로써 효소를 불활성화한다.
블록 (blockage) 을 방지하기 위해, K700, K100, EKS 및 0.45+0.2 μm 의 다공성을 갖는 재생성된 셀룰로오스 막 (Pall 사제) 에서 배지를 청징한다.
이후, 농축 단계를 30 kDa 의 컷-오프 임계치를 갖는 재생성된 셀룰로오스 카세트 (Pall 사제) 에서 수행한다.
마지막으로, 1.5% 페녹시에탄올을 농축 후 수득된 농축물에 첨가한다.
2- 관능성 관점에서 본 발명에 따른 탄수화물 분획의 활성
모발뭉치에서, 수 중 5% 활성제는 섬유의 관능성의 관점에서 긍정적인 활성을 보였다.
도시 용수에 실시예 1 에서 수득된 활성제를 희석함으로써, 20 ml 의 활성제 용액을 제조한다.
모발뭉치 제조
SA11.2 품질의 1 개의 표준 모발뭉치 2.7 g 을 0.9 g 의 당량의 3 개의 묶음으로 나눴다.
모발뭉치의 처리
대조 모발뭉치: 대조 모발뭉치를 10 ml 의 도시 용수에 5 min 동안 담궈두고, 400 rpm 의 속도로 자기 교반하였다. 이후, 도시 용수로 3 회의 연속 세척 작업을 수행하였고, 각 세척 작업 사이에서 수동으로 수분을 짜냈다. 마지막 세척 작업의 종료 시점에서, 모발뭉치를 모발드라이어로 건조하였다.
처리된 두 모발뭉치: 모발뭉치를 10 ml 의 활성제 용액에 5 min 동안 담궈두고, 400 rpm 의 속도로 자기 교반하였다. 이후, 활성제로 처리한 모발뭉치를 대조 모발뭉치에서와 동일한 방식으로 취급하였다 (세척 및 건조).
관능성 평가
4 명의 패널에 의해 관능성 평가를 수행하였다. 각 사람은 엄지 및 검지 사이에 모발뭉치를 슬라이딩시켜 이를 터치하였다.
결과
5% 의 활성제로 처리한 두 모발뭉치는, 도시 용수로 처리한 모발뭉치에 비해 훨씬 매끄럽고 부드러운 느낌을 가졌다. 나아가, 처리한 두 모발뭉치는 훨씬 더 용이하게 풀렸다.
3- 재건된 표피 모델에서, TCM3 유전자 (트랜스글루타민 3 을 코딩함) 의 발현을 유도하기 위한 본 발명에 따른 탄수화물 분획의 용도
생물학적 모델:
· 재건된 표피 모델은 17 일째의 SkinethicTM RHE (SkinethicTM laboratories (Lyon, France) 에서 제공됨) 이고; 이의 품질은 조직학적 대조에 의해 입증됨.
· 배양 조건: 모든 실험을 37℃ 의 습한 분위기, 5% CO2 에서 수행하였다.
샘플 제조:
· 미처리 대조군: 임의의 본 발명의 화합물 없이, 대조 배지에서 표피를 인큐베이팅한다.
· 시험군: 본 발명의 화합물로 표피를 인큐베이팅한다: 대조 배지에서 최종 농도가 0.001 mg/ml 및 0.0001 mg/ml 의 활성제인 용액을 제조하였다.
처리:
· 37℃, 5% CO2 에서 보존 배지에서 밤새 안정화시킨 후, 5% CO2 하 37℃ 에서 18 시간 동안, 초기 배지를 본 발명의 화합물 함유 또는 미함유 배양 배지로 대체한다.
· 3 개의 상이한 농도의 세포독성이 없는 화합물을 평가하였다. 각 용량을 2회 시험하였다.
· 본 발명의 화합물의 항노화 활성을 검출 및 입증하기 위해, 항노화 특성을 갖는 것으로 알려진 참조 화합물을 동일한 검정에서 평가하였다.
정량적 RT-PCR:
· 처리의 종료 시점에서, 배양 배지를 제거하고, 표피를 PBS 완충액에서 2 회 헹군 다음, RNAlater® 에서 -80℃ 에서 동결시켰다.
· Qiagen® Rneasy 96 Universal 조직 키트를 이용하여 추출 후, RNA 를 DNase 처리에 의해 정제하고, 90 ㎕ 의 RNase 가 없는 증류수에서 용해하였다.
· RNA 의 정량화를 260 nm 에서 분광계 검정으로 수행하였다 (NanoDrop® ND-1000, NanoDrop Technologies).
· 이후, Pico LabChip (Agilent Technologies) RNA 6000 키트를 사용하여, Agilent Bioanalyzer 2100 로 정제된 분획의 품질을 확인하였다 (비 A260 / A280).
RNA 의 역전사 및 증폭
· cDNA 에 대한 RNA 의 역전사를 High Capacity cDNA 역전사 R 키트 (Applied Biosystems) 를 사용하여 수행하였다. TaqMan® PreAmp Master Mix (Applied Biosystems) 에 의한 cDNA 의 증폭 단계를 PCR 전에 수행하였다.
실시간 PCR
· TaqMan 유전자 발현 검정 (Applied Biosystems) 을 사용하여 유전자 발현의 연구를 수행하였다.
· 표준화를 위해, 하기 하우스홀드 유전자를 사용하였다: TBP, RPL13A, B2M 및 ATP5B
결과
하기 표 2 는 활성제 중 농도 (mg / mL) 에 따른, 본 발명의 탄수화물 분획에 의한 트랜스글루타미나아제3 을 코딩하는 논의되는 TGM3 의 유전자 발현의 유도 지수를 요약한다.
Figure pct00002
표 2
2 이상의 유전자의 유도 지수는 유의한 효과를 나타내는 것으로 간주된다.
0.0001 mg/ml 의 활성제의 농도에서, 본 발명의 화합물은 논의되는 TGM3 의 유전자의 유도에서 유의한 효율을 나타낸다.
따라서, 본 발명의 화합물은 화장 및/또는 피부과학 작용제, 특히 항노화 활성제로서의 용도로 관심이 높다.

Claims (11)

  1. 속 비트레오스실라종 (Vitreoscilla sp) 에 속하는 세균의 바이오매스의 열분해 및 단백질분해에 의해 수득된 청징된 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획.
  2. 제 1 항에 있어서, 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 용해물이 또한 완전 발효 배지를 포함하는 탄수화물 분획.
  3. 제 2 항에 있어서, 완전 발효 배지에 용해된 다당류와 세포내 다당류 및 세균 세포 막 다당류의 혼합물을 포함하는 탄수화물 분획.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 속 비트레오스실라종에 속하는 상기 세균이 균주 V. 필리포르미스 (V. filiformis), 바람직하게는 균주 V. 필리포르미스 ATCC 15551 인 탄수화물 분획.
  5. 생리학적 허용가능 배지에, 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 따른 탄수화물 분획을 포함하는 조성물.
  6. 제 5 항에 있어서, 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 용해물이 또한 완전 발효 배지를 포함하는 조성물.
  7. 화장 및/또는 피부과학 활성제, 바람직하게는 항노화 활성제로서, 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 따른 탄수화물 분획의 용도.
  8. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 따른 탄수화물 분획 또는 제 5 항 또는 제 6 항에 따른 화장 및/또는 피부과학 조성물의 케라틴 물질로의 국소 적용 단계를 포함하는, 케라틴 물질을 처리하기 위한 화장 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 따른 탄수화물 분획 또는 제 5 항 또는 제 6 항에 따른 조성물의 피부로의 국소 적용 단계를 포함하는, 피부 노화의 징후를 처리 및/또는 예방하기 위한 화장 방법.
  10. 하기로 이루어지는 단계를 포함하는, 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스의 용해물로부터 단리된 탄수화물 분획의 제조 방법:
    - 속 비트레오스실라종에 속하는 세균의 바이오매스를 제공하는 단계;
    - 용해물을 수득하기 위해, 상기 바이오매스를 열분해 및 단백질분해하는 단계;
    - 청징된 용해물을 수득하기 위해, 용해물을 청징하는 단계;
    - 청징된 용해물의 다당류를 정제하는 단계.
  11. 제 10 항에 있어서, 열분해가 단백질분해보다 선행되는 제조 방법.
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CN111329830B (zh) * 2020-03-06 2022-08-30 重庆雅素生物科技有限公司 一种微球菌属细菌发酵溶胞液的获取方法及其在抗衰老中的应用
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1071022A (fr) * 1950-08-14 1954-08-24 Baxter Laboratories Inc Procédé perfectionné de production d'un complexe de polysaccharide à activité biologique
FR2719768B1 (fr) * 1994-05-10 1996-06-14 Oreal Utilisation d'extraits de bactéries filamenteuses comme agents cosmétiques contre le vieillissement cutané.
FR2838056B1 (fr) * 2002-04-08 2007-05-18 Oreal Utilisation d'un extrait de bacterie filamenteuse non photosynthetique non fructifiante en tant qu'agent augmentant la synthese endogene de superoxyde dismutase
US20030224077A1 (en) * 2002-04-08 2003-12-04 Societe L'oreal S.A. Administration of extracts of nonfruiting nonphotosynthetic filamentous bacteria for increasing the endogenous synthesis of superoxide dismutase
US20050129643A1 (en) * 2003-06-20 2005-06-16 Lepilleur Carole A. Hydrocolloids and process therefor
FR2973700B1 (fr) * 2011-04-05 2013-04-26 Oreal Nouvel actif derivant d'une bacterie appartenant au genre vitreoscilla sp. utile pour prevenir et/ou traiter les etats pelliculaires du cuir chevelu

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