FR3046181A1

FR3046181A1 - Fraction glucidique isolee a partir d'un lysat clarifie obtenu a partir d'une biomasse de bacterie(s) appartenant au genre vitreoscilla sp.

Info

Publication number: FR3046181A1
Application number: FR1563389A
Authority: FR
Inventors: Peiyan Yu; Lucie Tournier-Couturier; Romain Garcon
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2015-12-28
Filing date: 2015-12-28
Publication date: 2017-06-30
Also published as: EP3397240A1; KR20180098380A; CN108697633A; WO2017114783A1; US20210205204A1

Abstract

La présente invention concerne une fraction glucidique isolée à partir d'un lysat clarifié obtenu par thermolyse et protéolyse d'une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp.

Description

Domaine de l’invention

La présente invention se rapporte aux actifs destinés à être utilisés dans le domaine de la cosmétique et/ou de la dermatologie.

Plus particulièrement, l’invention se rapporte à une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat clarifié obtenu par thermolyse et protéolyse d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp., et son utilisation à titre d’actif cosmétique et/ou dermatologique, de préférence à titre d’actif anti-âge.

Arrière-plan technologique i Au cours du temps, il apparaît que les matières kératiniques, telles que la peau, les lèvres, les cils, les sourcils, les ongles, les cheveux sont sujettes à un vieillissement, se traduisant notamment par une modification de leurs structures et de leurs fonctions.

De manière endogène, les matières kératiniques subissent les attaques des ions superoxydes, naturellement produits lors des processus métaboliques cellulaires physiologiques.

De manière exogène, les matières kératiniques sont exposées, en première ligne, aux facteurs environnementaux qui participent à leur vieillissement, tels que par exemple la lumière du soleil, notamment via les rayonnements ultraviolets, ou encore la pollution. i Le vieillissement extrinsèque de la peau influencé par l’environnement s’additionne au vieillissement intrinsèque lié à l’âge, donnant lieu à des changements et des dommages cutanés caractéristiques, bien décrits dans la littérature. D’un point de vue cellulaire et moléculaire, le vieillissement de la peau se traduit par une perte de la capacité de prolifération des kératinocytes et des fibroblastes ; une diminution des marqueurs de différenciation, comme par exemple les transglutaminases (TGM) ; un déséquilibre entre la production des constituants du derme, comme par exemple le collagène et la fibrilline, et leur destruction par les différentes métalloprotéases (MMP), faisant pencher la balance en faveur de la dégradation de la matrice extracellulaire et la destruction tissulaire ; la perte des molécules ayant pour i fonction de participer aux jonctions et à l’ancrage de l’épiderme au derme, comme par exemple la fibronectine et l’intégrine, ce qui conduit à fragiliser la jonction dermo-épidermique. D’un point de vu macroscopique, le vieillissement de la peau se manifeste en plus de l’apparition de rides et de laxité La peau âgée est plus fine et plus fragile qu’une peau jeune. Enfin, la peau âgée a tendance à perdre son élasticité, sa fonction de barrière contre les agressions externes, et sa capacité de réparation.

Il est connu dans l’état de l’art plusieurs compositions ou méthode pour prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané.

Par exemple, il a été proposé une utilisation d’un extrait de bactérie filamenteuse non photosynthétique non fructifiante (FR 2 719 768 et FR 2 838 056). Dans ce cas, la prévention et/ou le traitement des signes du vieillissement cutané est/sont notamment obtenu(s) avec un extrait de Vitreoscilla flliformis contenant des lipopolysaccharides, par l’induction d’une augmentation de la synthèse endogène de superoxyde dismutase (FR 2 838 056).

Par ailleurs, il a été décrit dans le document FR 2 762 782 qu’un milieu de culture clarifié et stabilisé d’au moins une bactérie filamenteuse non photosynthétique possède des propriétés intéressantes d’un point de vue de la diminution et/ou du retardement du vieillissement cutané.

Il existe donc un besoin de disposer de nouveaux actifs ou de nouveaux traitements pour prévenir et/ou réparer les dommages cutanés, et plus particulièrement chez une peau âgée.

Il existe un besoin de disposer de nouveaux traitements cosmétiques en antiâge capable de réactiver la régénération épidermique, en induisant la prolifération des kératinocytes.

Il existe un besoin de disposer de nouveaux traitements cosmétiques en antiâge apte à maintenir, voire renforcer les propriétés barrières de la peau, en réparant les lésions cutanés. Résumé de Γinvention

Selon un premier aspect, l’invention se rapporte à une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat clarifié obtenu par thermolyse et protéolyse d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp.

Selon un autre aspect, l’invention se rapporte à une composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, une fraction glucidique selon l’invention. La composition est avantageusement une composition cosmétique ou dermatologique.

Selon un autre aspect, l’invention se rapporte à une utilisation d’une fraction glucidique selon l’invention, à titre d’actif cosmétique et/ou dermatologique, de préférence à titre d’actif anti-âge.

Selon un autre aspect, l’invention se rapporte à un procédé cosmétique pour traiter une matière kératinique, comprenant une étape d’application topique d’une fraction glucidique ou d’une composition selon l’invention.

Selon un autre aspect, l’invention se rapporte à un procédé cosmétique pour le traitement et/ou la prévention des signes du vieillissement de la peau, comprenant une étape d’application topique d’une fraction glucidique ou d’une composition selon l’invention.

Selon un autre aspect, l’invention se rapporte à un procédé de préparation d’une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitre oscilla sp., comprenant les étapes consistant à : - fournir une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre

Vitreoscilla sp. ; - thermolyser et protéolyser ladite biomasse, afin d’obtenir un lysat ; - clarifier le lysat, afin d’obtenir un lysat clarifié ; - purifier les polysaccharides du lysat clarifié.

Description détaillée de l’invention

Les inventeurs ont observé de manière surprenante qu’une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. possède des propriétés intéressantes du point de vue du soin de la peau, des muqueuses, du cuir chevelu et/ou des matières kératiniques.

En effet, après application de la fraction glucidique sur les matières kératiniques, celle-ci forme un dépôt sur les matières kératiniques ayant des bénéfices cosmétiques.

En particulier, la fraction glucidique appliquée sur les cheveux leur confère un toucher doux et lisse et un bon démêlage.

Par « fraction glucidique », on entend une fraction constituée d’au moins 95 % de monosaccharides et/ou de polysaccharides, de préférence de polysaccharides.

Ainsi, une fraction glucidique, au sens de l’invention, comprend entre 0 % et au maximum 5 % d’acides aminés, de peptides, de protéines, d’acides gras, de lipides, de nucléotides, nucléosides, acides nucléiques, intermédiaires de synthèse, intermédiaires métaboliques, et leur mélange.

On rappelle qu’est connue de l’état de la technique l’utilisation d’un lysat total de bactéries appartenant au genre Vitreoscilla sp., dans un milieu de fermentation complet, à titre d’actif pour prévenir et/ou traiter les états hyperséborrhéiques non associés à un état pelliculaire du cuir chevelu (FR 2 988 607) ou encore, à titre d’actif pour prévenir et/ou traiter les états pelliculaires du cuir chevelu notamment associés à une prolifération de microorganismes pathogènes sur le cuir chevelu et/ou un déséquilibre de l’écoflore du cuir chevelu (FR 2 973 700).

Les lysats décrits dans ces documents comprennent ainsi un mélange des fractions protéiques, lipidiques et polysaccharidiques et ne sont pas destinés au traitement et/ou la prévention du vieillissement de la peau.

Par ailleurs, la fraction glucidique selon l’invention se distingue de l’extrait lipopolysaccharidique décrit par le document FR 2 838 056, notamment par sa composition, presqu’exclusivement constituée de polysaccharides. Il est rappelée que le lipopolysaccharide décrit par FR 2 838 056 possède une structure ternaire caractéristique, constituée d’un lipide A, d’un oligosaccharide central (core) et de chaînes latérales osidiques, ces dernières constituant l’antigène O. • Fraction glucidique isolée selon l’invention

Selon un premier aspect, l’invention se rapporte à une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat clarifié obtenu par thermolyse et protéolyse d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp..

Par « fraction glucidique », on entend les polysaccharides initialement contenu dans le lysat de bactérie.

Par « polysaccharide », on entend un enchaînement d’au moins deux monosaccharides liés entre eux par des liaisons osidiques.

Les polysaccharides peuvent être de structure linéaire ou ramifiée.

Les polysaccharides comprennent notamment des sous-unités comprenant entre 5 et 6 atomes de carbone, tels que des sous-unités choisies dans un groupe comprenant le mannose, le rhamnose, le glucose, le galactose, l’arabinose et le fructose.

Les polysaccharides ont un poids moléculaire compris entre 5 kDa et 200 kDa.

Dans un mode de réalisation particulier, les polysaccharides ont un poids moléculaire compris environ 10 kDa et environ 150 kDa.

Dans certains modes de réalisation, la fraction glucidique correspond à la fraction glucidique totale dudit lysat de bactérie, c’est-à-dire comprend les polysaccharides de la membrane bactérienne, les polysaccharides intracellulaires et les polysaccharides dissous dans la fraction aqueuse du milieu de culture bactérien, à savoir le milieu de fermentation complet.

Dans certains modes de réalisation, la fraction glucidique comprend essentiellement, ou alternativement comprend exclusivement, les polysaccharides de la membrane bactérienne, les polysaccharides intracellulaires ou les polysaccharides dissous dans la fraction aqueuse du milieu de fermentation complet.

Dans certains modes de réalisation, la fraction glucidique comprend essentiellement, ou alternativement comprend exclusivement, un mélange de polysaccharides de la membrane bactérienne et de polysaccharides intracellulaires.

Dans certains modes de réalisation, la fraction glucidique correspond à un mélange de polysaccharides de la membrane bactérienne et de polysaccharides dissous dans la fraction aqueuse du milieu de fermentation complet.

Dans certains modes de réalisation, la fraction glucidique comprend essentiellement, ou alternativement comprend exclusivement, un mélange de polysaccharides intracellulaires et de polysaccharides dissous dans la fraction aqueuse du milieu de fermentation complet.

Dans un mode de réalisation particulier, la fraction glucidique comprend des polysaccharides choisis dans un groupe comprenant des polysaccharides dissous dans le milieu de fermentation complet et un mélange de polysaccharides intracellulaires et de polysaccharides de la membrane bactérienne.

Dans le cadre de l’invention, on entend par « isolé », le résultat de la séparation physique de la fraction glucidique au sens de l’invention des autres fractions contenues dans le lysat après thermolyse et protéolyse, à savoir le résultat de la séparation physiques des autres fractions englobant la fraction peptidique/protéique, la fraction lipidique, la fraction d’acides nucléiques et la fraction contenant les métabolites issus de la culture des bactéries, tels que les acides aminés non consommés, les composés intermédiaires de synthèse utilisés dans les voies métaboliques cellulaires.

Dans un mode de réalisation particulier, la fraction glucidique est dépourvue d’acides aminés, de peptides, de protéines, d’acides gras, de lipides, de nucléotides, nucléosides, acides nucléiques, intermédiaires de synthèse, intermédiaires métaboliques, et leur mélange. • Bactéries appartenant au genre Vitreoscilla sp. (notamment espèces: Vitreoscilla filiformis)

Comme précisé ci-dessus, le microorganisme considéré selon l’invention à l’état de lysat est une bactérie filamenteuse non synthétique telle que définie selon la classification de Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology (Vol. 3, sections 22 et 23, 9ème édition, 1989), et appartenant au genre Vitreoscilla sp. (notamment espèce : Vitreoscilla filiformis).

Comme il ressort des exemples présentés ci-après, les inventeurs ont découvert de manière inattendue que la fraction glucidique d’un lysat d’une biomasse d’une telle bactérie, éventuellement formulé dans un milieu de fermentation complet, présente des propriétés cosmétologiques et/ou dermatologiques inattendues.

Plus particulièrement, il s’agit d’une bactérie appartenant au genre Beggiatoa, Vitreoscilla, Flexithrix ou Leucothrix.

Selon une variante préférée de l’invention, il s’agit de la bactérie Vitreoscilla filiformis.

Dans un mode de réalisation particulier, la bactérie est la souche Vitreoscilla filiformis, de préférence la souche Vitreoscilla filiformis ATCC 15551. • Milieu de fermentation complet

Dans un mode de réalisation particulier, le lysat de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. comprend en outre un milieu de fermentation complet.

Au sens de la présente invention, l’expression « lysat dans un milieu de fermentation complet » signifie que le lysat est formulé dans le milieu de culture complet dans lequel les bactéries ont été cultivées jusqu’après la phase de croissance microbienne ayant conduit à rutilisation des substrats nutritifs présents initialement dans le milieu de culture.

Au sens de la présente invention, l’expression « milieu de fermentation complet » entend désigner un milieu issu du procédé de culture ayant été utilisé pour la croissance et la lyse cellulaire du microorganisme, ledit milieu n’ayant subi par ailleurs aucune manipulation additionnelle visant à séparer et/ou éliminer tout ou partie de ses constituants non aqueux.

Plus particulièrement, l’actif considéré selon l’invention est formé de la fraction glucidique d’un lysat de microorganismes et de tout ou partie, en terme de quantité, du milieu de culture ayant servi à la fermentation de ladite bactérie et dans lequel il a été procédé consécutivement à sa lyse cellulaire (i.e. milieu de fermentation complet).

En conséquence, un actif selon l’invention, c'est-à-dire un actif obtenu à partir d’une fraction glucidique d’un lysat de bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (notamment espèce: Vitreoscillaflliformis), éventuellement dans un milieu de fermentation complet, est clairement distinct d’un lysat total ou d’un surnageant d’un milieu de fermentation d’une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (notamment espèce : Vitreoscilla flliformis).

Par ailleurs, l’actif considéré selon l’invention, est distinct d’une fraction peptidique/protéique, d’une fraction lipidique, d’une fraction d’acides nucléiques, et de leur mélange, qui serait isolée ou obtenue à partir d’un lysat d’une biomasse de bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (notamment espèce: Vitreoscilla flliformis), éventuellement dans un milieu de fermentation complet

En effet, l’actif considéré selon l’invention par opposition à cette biomasse, ou une fraction de biomasse autre que la fraction glucidique, ce lysat ou fraction de lysat, autre que la fraction glucidique, contient une quantité significative de polysaccharides hydrosolubles cellulaires, c’est-à-dire contenus dans ladite bactérie, ou de polysaccharides hydrosolubles extracellulaires, lesquels polysaccharides sont libérés naturellement dans le milieu de culture lors de la prolifération de ladite bactérie.

Ainsi, l’expression milieu complet s’étend également à une forme de milieu complet dite concentrée au regard du fait qu’elle est obtenue à l’issue d’une évaporation partielle de l’eau constituant un milieu de fermentation dans lequel ont été réalisée consécutivement la culture du microorganisme correspondant et la lyse cellulaire de celui-ci. Bien entendu, cette évaporation est conduite dans des conditions opératoires ajustées pour ne pas altérer l’intégrité des constituants non aqueux formant ce milieu complet.

Au sens de la présente invention, l’expression « constituants non aqueux » sous-entend que l’eau, qui est un constituant majoritaire des milieux de fermentation conventionnels, ne fait pas partie des constituants devant demeurer en tant que tels, c’est-à-dire à quantité égale, dans le milieu de culture complet selon l’invention. • Composition milieu de fermentation

Par définition, un milieu de fermentation ou encore de culture est un support qui permet la culture et donc selon le cas, le développement de cellules, de bactéries, de levures. En principe, les cellules trouvent dans ce milieu les composants indispensables pour leur multiplication en grand nombre rapidement, mais aussi parfois des éléments qui permettront de privilégier le développement d’un genre bactérien spécifique ou d’une famille particulière, en l’occurrence une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (notamment, espèce: Vitreoscillafiliformis).

Sa composition doit donc satisfaire les exigences nutritives du microorganisme considéré et nécessaire à la prolifération de celui-ci.

Plus précisément, la composition de ce milieu de culture doit : - couvrir les besoins en ions minéraux, en facteurs de croissance, apporter la source de carbone et d’énergie ; - présenter un pH voisin du pH optimal ; et - présenter une force ionique optimale (le milieu peut être isotonique mais ce n’est pas obligatoire).

Ainsi, la composition d’un milieu de fermentation convenant à l’invention comprend au moins : - une source de carbone et d’énergie, généralement figurée par un sucre et avantageusement le glucose ; - une source de potassium et de phosphore à l’image par exemple du K2HPO4 ; - une source d’azote et de soufre pouvant être représentée par le composé (NH4)2S04 ; - une source de magnésium telle que par exemple MgCh ; - une source de calcium telle que par exemple CaCh ; - une source de fer et plus particulièrement du citrate de fer, le citrate ayant pour rôle de maintenir le fer en solution ; - une source d’oligo-éléments choisis notamment parmi les sels de Cu, Zn, Co,

Ni, B, Ti ; - une source d’eau, généralement stérile, indispensable à toute forme de vie ; et - un tampon pH pouvant être figuré par le KH2PO4. A défaut de présence de l’un de ces composants, les bactéries ne se développent pas, car elles ne peuvent par elles-mêmes suppléer à son absence. A titre illustratif d’un milieu de fermentation convenant au développement d’un microorganisme conforme à l’invention, il peut notamment être fait mention du milieu figurant en exemple 1 ci-après.

Une quantité efficace du microorganisme considéré selon l’invention y est introduite et l’ensemble est placé dans des conditions propices à sa prolifération. • Lyse des bactéries pour l’obtention d’un actif selon l’invention

Un lysat désigne communément un matériau obtenu à l’issue de la destruction ou dissolution de cellules biologiques (biomasse) par un phénomène dit de lyse cellulaire provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires et cellulaires naturellement contenus dans les cellules biologiques considérées.

Au sens de la présente invention, le terme « lysat » désigne l’intégralité du matériel intracellulaire et extracellulaire, obtenu par lyse du microorganisme concerné (biomasse), à savoir une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (notamment espèce : Vitreoscilla filiformis).

Autrement dit, le lysat mis en œuvre est donc formé de l’intégralité de ses constituants biologiques intracellulaires notamment ses métabolites et les constituants des parois et membranes cellulaires générés lors de sa lyse cellulaire.

Au sens de l’invention, le terme « métabolite » désigne toute substance issue du métabolisme du microorganisme considéré selon l’invention.

En conséquence, un lysat considéré selon l’invention peut être obtenu via un procédé consistant en : -la culture d’au moins une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (notamment espèce: Vitreoscilla filiformis) sur un milieu de fermentation dans des conditions propices à la prolifération de ladite bactérie, et - la lyse cellulaire desdites bactéries dans ledit milieu de fermentation.

La fraction glucidique au sens de l’invention désigne les polysaccharides issus de la thermolyse et protéolyse de ladite biomasse.

Pour obtenir un lysat d’une biomasse de bactéries appartenant au genre Vitreoscilla sp. dans un milieu de fermentation complet, selon un procédé comprenant une étape de culture desdites bactéries, l’homme du métier peut se référer notamment à l’exemple 1.

Avantageusement, pour obtenir un lysat de bactéries appartenant au genre Vitreoscilla sp. dans un milieu de fermentation complet, la biomasse (cellules bactériennes après la phase de croissance, présentes dans le milieu dans lequel elles ont été cultivées) peut être préalablement congelée, par exemple à une température de -20 °C, puis est stérilisée, de préférence par la chaleur, en particulier en soumettant la biomasse préalablement congelée à une étape de chauffage à une température supérieure à 100 °C. A titre illustratif, l’étape de stérilisation de la biomasse peut être réalisée par autoclavage, par exemple à une température de 121 °C.

Comme il ressort de ce qui précède, à l’issue de cette culture dudit microorganisme celui est transformé à l’état de lysat directement au sein du milieu de fermentation ayant servi à sa culture.

Dans un mode de réalisation particulier, ledit lysat est obtenu par une étape de thermolyse et une étape de protéolyse de ladite biomasse.

Dans un mode de réalisation particulier, la protéolyse précède la thermolyse.

Dans un mode de réalisation préféré, la thermolyse précède la protéolyse. • Composition

La fraction glucidique selon l’invention est facile à formuler au sein d’une composition qui comprend au moins un ingrédient conventionnellement utilisé en cosmétique et/ou dermatologie.

En effet, elle ne présente pas d’odeur, et ne nécessite donc pas la présence concomitante de parfum, notamment afin de masquer une odeur désagréable.

De plus, la fraction glucidique selon l’invention est incolore, et n’induit donc pas de coloration intempestive ou non souhaitée, une fois qu’elle a été introduite dans une composition cosmétique et/ou dermatologique.

Ainsi, l’invention concerne aussi une composition, notamment cosmétique et/ou dermatologique, comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, une fraction glucidique telle que décrite par la présente invention.

Par milieu physiologiquement acceptable, on entend un milieu compatible avec les matières kératiniques d’êtres humains, en particulier avec la peau, les cheveux.

Dans un mode de réalisation particulier, une composition cosmétique et/ou dermatologique comprenant une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat clarifié obtenu par thermolyse et protéolyse d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp., lequel lysat comprend en outre un milieu de fermentation complet.

Une composition contenant l’actif selon l’invention peut être appliquer par voie topique.

Une composition selon l’invention est donc appliquée à des fins purement esthétiques, c’est-à-dire afin d’améliorer l’aspect, la texture, de la peau, d’une muqueuse, du cuir chevelu et des matières kératiniques. En d’autres termes, au sens de l’invention, le terme « appliquer » n’englobe pas un traitement à des fins médicales.

Une composition selon l’invention comprend avantageusement une quantité de fraction glucidique isolée à partir d’un lysat clarifié obtenu par thermolyse et protéolyse d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp., éventuellement dans un milieu de fermentation complet, allant de 0.1 % à 10 % en poids, par rapport au poids total d’extrait sec de ladite composition.

Dans certains modes de réalisation, une composition selon l’invention comprend avantageusement une quantité de fraction glucidique allant de 0.5 % à 5 % en poids, par rapport au poids total d’extrait sec de ladite composition.

Dans d’autres modes de réalisation, une composition selon l’invention comprend avantageusement une quantité de fraction glucidique allant de 1 % à 5 % en poids, par rapport au poids total d’extrait sec de ladite composition.

Une composition selon l’invention peut donc se présenter sous toutes les formes galéniques normalement disponibles pour le mode d’administration spécifique retenu.

Le support peut être de nature diverse selon le type de composition considérée.

En ce qui concerne plus particulièrement les compositions destinées à une administration par voie topique externe, il peut s’agir de solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, de solutions ou dispersions du type lotion ou sérum, d’émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion d’une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), ou de suspensions ou émulsions, de consistance molle, semi-solide ou solide, du type crème, de gel aqueux ou anhydre, de microémulsions, de microcapsules, de microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique.

Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.

Ces compositions peuvent notamment constituer des crèmes de nettoyage, de protection, de traitement ou de soin des lotions, gels ou mousses pour le soin de la peau, des muqueuses, du cuir chevelu et/ou des matières kératiniques.

Elles peuvent être utilisées pour le traitement cosmétique et/ou dermatologique de la peau, des muqueuses, du cuir chevelu et/ou des matières kératiniques, sous la forme de solutions, de crèmes, de gels, d’émulsions, de mousses ou encore sous la forme de compositions adaptées pour la mise en œuvre d’un aérosol, par exemple contenant également un agent propulseur sous pression.

Dans certains modes de réalisation, une composition par voie topique selon l’invention peut avantageusement être formulée sous toute forme galénique convenant au soin capillaire, notamment sous forme d’une lotion capillaire, d’un shampoing, d’un après-shampoing, d’un démêlant, d’une crème ou d’un gel capillaire, d’une laque coiffante, d’une lotion de mise en plis, d’une lotion traitante, d’une composition de teinture (notamment d'oxydation) éventuellement sous forme de shampooing colorant, d’une lotion restructurante pour cheveux, d’une composition de permanente, d’une lotion ou d’un gel antichute, d’un shampoing antiparasitaire, ou d’un shampoing traitant, notamment antiséborrhéique, d’un produit de soin du scalp notamment anti-irritant, anti-âge, restructurant, ou activateur de la circulation sanguine.

De façon connue, les formes galéniques dédiées à une administration topique peuvent contenir également des adjuvants conventionnels dans le domaine cosmétique, et/ou dermatologique, tels que les épaississants, les huiles, les cires, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres UV et les matières colorantes.

Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine considéré, et par exemple de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse et/ou dans la phase aqueuse.

La composition de l’invention peut également contenir de façon avantageuse de l’eau. L’eau peut être une eau thermale et/ou minérale, notamment choisie parmi l’eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy et l’eau de la Roche Posay. L’eau peut être présente en une teneur allant de 5 à 99 % en poids, par rapport au poids total de la composition, de préférence allant de 20 à 95 % en poids, préférentiellement allant de 40 à 95 % en poids. • Utilisation et procédés L’invention concerne, par ailleurs, une utilisation d’une fraction glucidique susceptible d’être obtenue par le procédé de l’invention, à titre d’actif cosmétique et/ou dermatologique, de préférence à titre d’actif anti-âge.

Par « actif cosmétique et/ou dermatologique », on entend un actif ayant des propriétés bénéfiques après application sur les matières kératiniques. L’invention concerne aussi un procédé cosmétique, non thérapeutique, pour traiter une matière kératinique, comprenant une étape d’application topique sur la matière kératinique d’une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. ou d’une composition comprenant une telle fraction, étant entendu que ladite fraction glucidique est obtenue après clarification d’un lysat obtenu par thermolyse et protéolyse d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp.

Dans le cadre de l’invention, par « traitement d’une matière kératinique », on entend l’application topique d’une fraction glucidique selon l’invention pour le soin de la peau, des muqueuses, des lèvres, des ongles, du cuir chevelu et des cheveux. L’invention concerne aussi un procédé cosmétique, non thérapeutique, pour le traitement et/ou la prévention des signes du vieillissement de la peau, comprenant une étape d’application topique sur la peau d’une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. ou d’une composition comprenant une telle fraction, étant entendu que ladite fraction glucidique est obtenue après clarification d’un lysat obtenu par thermolyse et protéolyse d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp.

Dans le cadre de la présente invention, par « traitement des signes du vieillissement de la peau », on entend la diminution ou l’atténuation des rides, des ridules, du flétrissement de la peau, de la perte d’élasticité de la peau, de la perte de tonus de la peau, de l’amincissement du derme, de la dégradation des fibres de collagène, de la perte de la fermeté de la peau, de la sécheresse de la peau.

Dans le cadre de la présente invention, par « prévention des signes du vieillissement de la peau », on entend l’absence d’apparition ou le retardement de l’apparition des rides, des ridules, du flétrissement de la peau, de la perte d’élasticité de la peau, de la perte de tonus de la peau, de l’amincissement du derme, de la dégradation des fibres de collagène, de la perte de la fermeté de la peau, de la sécheresse de la peau.

Dans un mode de réalisation particulier, le lysat d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. comprend en outre un milieu de fermentation complet. L’invention concerne aussi un procédé de préparation d’une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp., comprenant les étapes consistant à : - fournir une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. ; - thermolyser et protéolyser ladite biomasse, afin d’obtenir un lysat ; - clarifier le lysat, afin d’obtenir un lysat clarifié ; - purifier les polysaccharides du lysat clarifié.

Par « biomasse » on entend tout ou partie de la masse des organismes vivants ou morts contenus dans une culture menée à son terme, c’est-à-dire après disparition de tout ou partie des éléments nutritifs constitutifs du milieu de fermentation complet initial.

Dans un mode de réalisation préféré, la thermolyse précède la protéolyse.

Dans un mode de réalisation particulier, le lysat d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. comprend en outre un milieu de fermentation complet.

Selon un mode de réalisation particulier, la thermolyse peut être réalisée à une température comprise entre 60 °C et 120 °C, de préférence une température comprise entre 70 °C et 100 °C, de préférence une température d’environ 80 °C.

Par environ 80 °C, on entend une température de 80 °C ± 5 °C.

Selon un mode de réalisation particulier, la thermolyse peut être réalisée pendant une durée comprise entre 30 min et 240 min, de préférence une durée comprise entre 45 min et 90 min, de préférence une durée d’environ 60 min.

Par environ 60 min, on entend une durée de 60 min ± 5 min.

Selon un mode de réalisation particulier, la protéolyse peut être réalisée par n’importe quelle enzyme protéolytique connue dans l’état de l’art, parmi lesquelles on peut citer la chymotrypsine, la trypsine, la papaïne, la pepsine, la subtilisine et leur mélange.

Dans un mode de réalisation particulier, la protéolyse peut être réalisée par l’alcalase® 2.4LG (subtilisine commercialisée par Novozyme®).

Dans un mode de réalisation préféré, la protéolyse n’est pas réalisée par la protéinase K.

Lorsque la protéolyse est réalisée au moyen d’une enzyme protéolytique commercialement disponible, on se reportera aux instructions du fabricant pour se ce qui est de la quantité de protéase à utiliser, de la durée et de la température d’incubation du lysat avec la protéase, du pH du milieu réactionnel.

Par « milieu réactionnel », on entend la solution aqueuse comprenant le lysat de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp., éventuellement dans un milieu de fermentation complet, la protéase, tout autre ingrédient éventuellement nécessaire à la protéolyse, par exemple un tampon permettant l’ajustement des concentrations en sels, l’ajustement du pH.

Il est dans les compétences d’un homme du métier de déterminer les conditions optimales pour réaliser la protéolyse du lysat éventuellement dans son milieu de fermentation complet.

En général, la protéolyse peut être réalisée avec une quantité d’enzyme dans le milieu réactionnel compris entre 0,005 % et 5 % en poids, de préférence entre 0,05 % et 1,5 % en poids, par rapport au poids total du milieu réactionnel.

Par ailleurs, la durée de la protéolyse est comprise entre 30 min et 24h, en fonction de la quantité de protéase utilisée et la teneur en protéine du milieu initial.

Dans un mode de réalisation particulier, le milieu réactionnel est conservé à une température constante comprise entre 20 °C et 80 °C, de préférence une température comprise entre 30 °C et 60 °C).

Dans un mode de réalisation particulier, le pH du milieu réactionnel est compris entre 3 et 10, de préférence entre 6 et 9.5, de préférence aux alentours de 8.

Dans un mode de réalisation particulier, lorsque la protéolyse est réalisée en présence de subtilisine, le pH du milieu réactionnel est compris aux alentours de 7.5.

Par ailleurs, le procédé de préparation de la fraction lipopolysaccharidique en utilisant la protéinase K, telle que décrite dans le document FR 2 838 056, se différencie du procédé de préparation d’une fraction glucidique tel que décrit par l’invention par le fait que l’étape de thermolyse est suivie par une étape de centrifugation, le surnageant étant alors soumis à l’étape de protéolyse au moyen de la protéinase K.

Contrairement au procédé décrit par le document FR 2 838 056, il est important que la thermolyse et la protéolyse, telles que réalisées selon l’invention, soient effectuées dans le même milieu réactionnel, afin de conserver toutes fractions glucidiques contenu(e)s dans le lysat, et concomitamment, réduire le nombre de manipulations des polysaccharides et s’affranchir ainsi d’une perte de ceux-ci au cours des différentes étapes de purification.

Selon un mode de réalisation particulier, la protéolyse peut être suivie par une étape d’inactivation de la protéolyse, par exemple au moyen d’un inhibiteur de la protéase utilisée ou un cocktail d’inhibiteurs ; par incubation du milieu réactionnel à une température comprise entre 70 °C et 90 °C, par exemple une température d’environ 85 °C ; par une variation du pH par rapport au pH du milieu réactionnel.

Sans vouloir être lié par une quelconque théorie, les inventeurs estiment que la thermolyse et la protéolyse du lysat condui(sen)t à éliminer des enzymes intrinsèques à la souche bactérienne qui pourraient avoir un rôle négatif dans la cohésion de la peau et de la jonction dermo-épidermique.

Dans un mode de réalisation particulier, l’étape d’inactivation de la protéolyse est réalisée pendant une durée allant de quelques minutes à plusieurs heures, par exemple une durée comprise entre 5 min et 2 h, de préférence une durée comprise entre 10 min et 30 min.

Les conditions de l’étape d’inactivation de la protéolyse peuvent être adaptées par un homme du métier.

Dans certains modes de réalisation particuliers, le lysat ne comprend pas d’agent dénaturant et/ou chaotropique.

Dans le cadre de la présente invention, par « agent dénaturant et/ou chaotropique », on entend un agent capable, dans les conditions usuelles, de déplier les protéines contenues dans le lysat, c’est-à-dire de notamment abolir toute ou parties des structures secondaires et tertiaires, ce qui résulte en une structure dépliée et sensiblement linéaire des protéines.

Selon un mode de réalisation particulier, le procédé de préparation d’une fraction glucidique selon l’invention peut comprendre, en outre, une étape d’acidification du milieu, en général, après l’étape de thermolyse et/ou protéolyse de la biomasse. Tout acide adapté à cette étape peut être utilisé, comme par exemple un acide sélectionné dans un groupe comprenant l’acide citrique, l’acide chlorhydrique, l’acide sulfurique, l’acide phosphorique et leur mélange.

Selon un mode de réalisation particulier, le procédé de préparation d’une fraction glucidique selon l’invention peut comprendre, en outre, une étape de clarification du lysat, éventuellement acidifié, par exemple par succession de filtrations en profondeur, au moyen de filtres adaptés, par exemple des filtres ayant des pores d’un diamètre compris entre environ 0,4 pm et 20 pm, ce qui inclue des filtres ayant des plage de rétention d’environ 0,4-0,8 pm, 1-4 pm, 4-7 pm, 7-15 pm et 8-20 pm.

La mise en œuvre de l’invention comprend une étape de purification des polysaccharides, qui peut être réalisée par toute méthode connue dans l’état de l’art (Gonçalves et al. 2007 ; Communicating Current Research and Educational Topics and Trends in Applied Microbiology ; Mendez-Vilas Ed.).

Par exemple, la purification des polysaccharides peut être notamment réalisée par précipitation alcoolique, notamment par précipitation éthanolique ; plus préférentiellement par séparation par filtration membranaire.

Dans un mode de réalisation particulier, le procédé de préparation d’une fraction glucidique selon l’invention peut comprendre, en outre, une étape de concentration des polysaccharides par ultrafiltration membranaire suivie de purification par dia-filtration membranaire. Il est connu dans l’état de l’art que le volume de dia-filtration détermine le grade de pureté désiré.

Dans ce mode de réalisation particulier, le procédé peut mettre en œuvre une étape d’ultrafiltrations membranaire, notamment au moyen de filtres ayant des seuils de coupures adaptés.

En pratique, les filtres adaptées sont par exemple des filtres ayant des seuils de 30 000 Da, 10 000 Da ou 1000 Da.

Dans un mode de réalisation particulier, un filtre adapté à une ultrafiltration membranaire est à base d’hydroxyéthyl cellulose régénérée, de polyéther sulfone.

Dans un mode de réalisation particulier, de préférence un filtre adapté à une ultrafiltration membranaire possède un seuil de coupure de 30 000 Da et est à base d’hydroxyéthyl cellulose régénérée.

Dans ce mode de réalisation particulier, une concentration finale en polysaccharides peut être comprise entre 0,1 % et 10 % en poids, de préférence entre 0,5 et 5 % en poids, de préférence entre 1% et 2% en poids, par rapport au poids total de la fraction.

Dans un mode de réalisation particulier, un ou plusieurs conservateur(s) cosmétique(s) utilisé(s) en routine dans le domaine de la cosmétique et/ou de la dermatologie, par exemple le phénoxyéthanol, peut/peuvent être ajouté(s) afin de renforcer la stabilité de l’actif lors de son stockage.

Exemples 1- Préparation d’une fraction glucidique au sens de l’invention

La culture de la souche bactérienne Vitreoscilla filiformis est réalisée dans un fermenteur industriel de 3000 litres. Enfin de culture, le pH spontané est de 6,2, la teneur en matière sèche est de 0,6 % et la teneur en glucose libre de 0,035 %.

La fermentation de la souche V. filiformis est réalisée dans son milieu de culture complet, dont la composition est décrite dans le tableau 1 ci-dessous.

Tableau 1 : composition du milieu nutritif complet pour la culture de V. filiformis.

Pour obtenir un actif cosmétique selon l’invention, il est procédé comme décrit ci-après.

La souche initiale de V. filiformis est obtenue auprès de l’ATCC (souche 15551).

La biomasse est obtenue par une fermentation dans un bioréacteur industriel de 3000 litres efficaces, la composition du milieu de culture est donnée ci-dessus. Durant la culture, le pH est maintenu constant (7.00), de même que la température (26 °C) et l’oxygène dissous (0,5 %). La culture est stoppée lorsque la teneur en matière sèche atteint 0,6 % et la teneur en glucose atteint 0,035 %.

Pour une extraction des polysaccharides à partir de la culture, un cycle de thermolyse est d’abord appliqué pendant une durée de 15 min à une température de 80 °C.

Après un refroidissement du milieu à une température de 55 °C, le pH est ajusté et maintenu à pH=8 par addition d’une solution aqueuse de soude IM. Une protéolyse est ensuite réalisée par l’ajout de 0,1 % (p/p) de protéase isolée de Bacillus liceniformis : Alcalase 2.4 L FG® (de chez Novozyme).

Au bout de 3 heures de protéolyse, le milieu est neutralisé à pH 7 à l’aide d’une solution aqueuse d’acide phosphorique à 20 % en poids. L’inactivation de l’enzyme est réalisée en chauffant le milieu à une température de 90 °C durant 10 minutes.

Afin d’évider un colmatage, le milieu est clarifié sur membranes de cellulose régénérée de porosité K700, K100, EKS et 0.45+0.2pm (de chez Pall).

Une étape de concentration est ensuite réalisée sur une cassette en cellulose régénérée, avec un seuil de coupure de 30 kDa (de chez Pall).

Au rétentat obtenu après concentration, 1.5 % de phenoxyéthanol sont finalement ajoutés. 2/Activité d’une fraction glucidique selon l ’invention sur le plan sensoriel L’actif à 5 % dans l’eau, sur mèche de cheveu, a montré une activité positive sur le plan sensoriel des fibres. 20 ml d’une solution d’actif est préparée en diluant l’actif obtenu dans l’exemple 1 dans l’eau de ville.

Préparation de mèche 1 mèche standard de 2.7g, de qualité SA11.2, a été divisée en trois de poids équivalent de 0.9g.

Traitement des mèches Mèche témoin : la mèche témoin a été trempée dans 10 ml d’eau de ville pendant 5 min, sous agitation magnétique, à une vitesse de 400 rpm. Puis 3 lavages successifs sont effectués avec de l’eau de ville, avec essorage manuel entre chaque lavage. A la fin du dernier lavage, la mèche a été séchée au sèche-cheveux. 2 Mèches traitées : les mèches ont été trempées dans 10 ml de solution d’actif pendant 5 min, sous agitation magnétique, à une vitesse de 400 rpm. Les mèches traitées avec l’actif sont ensuite manipulées comme la mèche témoin (lavage et séchage).

Appréciation sensorielle L’appréciation sensorielle a été évaluée par un panel de 4 personnes. Chaque personne touche les mèches en faisant glisser la mèche entre le pouce et l’index. Résultats

Les deux mèches qui ont été traités avec l’actif à 5 % ont un touché beaucoup plus doux et lisse par rapport à la mèche traitée avec de l’eau de ville. De plus, les deux mèches traitées se démêlent beaucoup plus facilement.

Claims

REVENDICATIONS

1. Fraction glucidique isolée à partir d’un lysat clarifié obtenu par thermolyse et protéolyse d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp.
2. Fraction glucidique selon la revendication 1, dans laquelle le lysat de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. comprend en outre un milieu de fermentation complet.
3. Fraction glucidique selon la revendication 2, laquelle comprend des polysaccharides dissous dans le milieu de fermentation complet et un mélange de polysaccharides intracellulaires et de polysaccharides de la membrane bactérienne.
4. Fraction glucidique selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle ladite bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. est la souche V. flliformis, de préférence la souche V. filiformis ATCC 15551.
5. Composition comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, une fraction glucidique selon l’une quelconque des revendications 1 à 4.
6. Composition selon la revendication 5, dans laquelle le lysat de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. comprend en outre un milieu de fermentation complet.
7. Utilisation d’une fraction glucidique selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, à titre d’actif cosmétique et/ou dermatologique, de préférence à titre d’actif anti-âge.
8. Procédé cosmétique pour traiter une matière kératinique, comprenant une étape d’application topique sur la matière kératinique d’une fraction glucidique selon l’une quelconque des revendications 1 à 4 ou d’une composition cosmétique et/ou dermatologique selon l’une quelconque des revendications 5 à 6.
9. Procédé cosmétique pour le traitement et/ou la prévention des signes du vieillissement de la peau, comprenant une étape d’application topique sur la peau d’une fraction glucidique selon l’une quelconque des revendications 1 à 4 ou d’une composition selon l’une quelconque des revendications 5 à 6.
10. Procédé de préparation d’une fraction glucidique isolée à partir d’un lysat d’une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp., comprenant les étapes consistant à : - fournir une biomasse de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. ; - thermolyser et protéolyser ladite biomasse, afin d’obtenir un lysat ; - clarifier le lysat, afin d’obtenir un lysat clarifié ; - purifier les polysaccharides du lysat clarifié.
11. Procédé selon la revendication 10, dans lequel la thermolyse précède la protéolyse.