KR20180073661A

KR20180073661A - 안지오텐신 수용체 길항제 및 중성 엔도펩티다아제 억제제의 착물

Info

Publication number: KR20180073661A
Application number: KR1020187014874A
Authority: KR
Inventors: 잉 왕; 롱 후앙; 용제 시앙; 구오동 센; 지안구오 리; 지안징 지아; 키앙키앙 리우; 양 리우; 하이타오 양; 킹 동
Original assignee: 청두 이스턴 바이오파마슈티컬 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2015-11-09
Filing date: 2016-09-01
Publication date: 2018-07-02
Also published as: US20180318259A1; JP6824266B2; CA2999589C; CA2999589A1; PT3380456T; US10537555B2; JP2018534302A; EP3380456A1; DK3380456T3; EP3380456B1; KR102579373B1; WO2017080290A1; CN105669581B; AU2016353765A1; ES2749979T3; EP3380456A4; CN105669581A; AU2016353765B2

Abstract

본 발명은 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆·XCa²⁺·YNa⁺·ZH₂O의 착물을 제공하며, 여기서 X는 1 내지 3이고, Y는 12 내지 16이고, Z는 9 내지 18이고, 2X+Y=18이고, 화학식 (Ⅰ)로 표시된다. 또한 본 발명은 상기 착물의 제조방법 및 상기 착물을 포함하는 의약을 사용한 만성심부전 치료방법을 제공한다.

Description

안지오텐신 수용체 길항제 및 중성 엔도펩티다아제 억제제의 착물

본 발명은 안지오텐신 수용체 차단제(Angiotensin receptor blocker, ARB) 및 중성 엔도펩티다아제 억제제(Neutral endopeptidase inhibitor, NEPi)를 포함하는 착물, 특히 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트] 소듐 칼슘 착물, 그의 제조방법 및 만성심부전의 치료에서 그의 용도에 관한 것이다.

심부전의 임상적 증상으로는 호흡 곤란, 피로, 체액저류(폐울혈 및 말초 부종)가 있다. 심부전을 앓고 있는 환자들은 생활 방식과 나트륨 및 체액 흡입 제한에 대한 조정이 가능한 빨리 구현될 수 있도록 체액저류를 검출하기 위해 매일 체중을 모니터링할 필요가 있다. 나트륨 섭취를 줄이면 체내의 혈액량, 수분 및 나트륨이 줄어들고, 혈압을 낮추어 심부전 증상을 완화시킨다.

만성심부전은 주로 심실 근세포 수축의 꾸준한 감소로 인한 펌프 기능 장애로 인한 심장 기능 장애이다. 만성심부전의 과정에서, 심근의 칼슘 항상성이 손상되고 세포 내 칼슘 존재의 증가에서의 감소와 그것의 더욱 느린 감쇄를 보여준다. 이러한 변화는 심근 수축 장애의 주요 원인으로 간주된다. 따라서, 칼슘 섭취의 증가는 정상적인 심근 수축력을 유지하면서 혈압과 나트륨 보유량을 줄일 수 있다. 또한, 칼슘 이온은 신체의 다양한 생리 활동, 예를 들어 세포막 양측의 생물학적 포텐셜, 정상적인 신경 전도도 및 정상적인 근육 수축 및 이완에 필수적이다.

LCZ696(Entresto)는 Novartis가 개발한 안지오텐신 수용체 네프릴리신 억제제(ARNi)로, 2015년 7월에 FDA 승인을 받았다. 이는 박출률(ejection fraction)이 감소된 만성심부전 환자를 치료하고, 심부전으로 인한 사망 및 입원을 줄일 수 있다. LCZ696는 1:1 비율의 사쿠비트릴(AHU-377)과 발사르탄(valsartan)의 음이온 형태, 소듐 양이온 및 물 분자를 포함하는 착물이다. 중국 특허 CN 200680001733.0은 상기 착물과 그 결정형을 다룬다.

LCZ696는 고흡습성이다. 고습 조건에서 10일 후, LCZ696가 물을 흡수하여 액체 형태로 변하는 것을 발견한다. 흡습성이 제제화 과정에서 과립화, 분해, 고체 형태의 용해에 어려움을 야기하여 약물 제품의 안정성 및 효능에 영향을 미치는 것으로 잘 알려져 있다.

또한 흡습성 화합물은 보다 비싸고 복잡한 부형제, 제조 공정 및 저장 시설을 필요로 한다. 따라서, 흡습성이 낮고, 보다 안정하며, 전체적으로 보다 효과적인 화합물을 얻는 것이 바람직하다.

본 출원의 발명자들은 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]를 포함하는 착물에 대한 대체 염 형태를 찾기 위해 많은 양의 실험을 수행했다. 예를 들어, 상기 착물의 칼륨염이 연구되었지만 발사르탄의 칼륨염만이 얻어졌다. 칼륨과 소듐 양이온을 모두 포함하는 착물을 연구하였다. 그러나, 생성된 착물은 LCZ696과 유사한 소듐 함량을 가졌고, 칼륨은 검출되지 않았고, 이는 상기 착물이 소듐과 칼륨을 동시에 포함하지 않음을 보여주었다.

암모늄, 트리에탄올아민(triethanolamine) 및 피페라진(piperazine) 등과 같은 유기 염기도 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]와 공-결정(co-crystal) 착물을 얻는데 사용되었지만 결정 구조를 형성하지 못했다. 또한, [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]의 칼슘염이 조사되었지만 착물은 형성되지 않았다. 그럼에도 불구하고, 그 칼슘염이 아세톤에 용해될 수 있다는 것을 예기치 않게 발견하였다.

칼슘 및 다른 금속의 양이온을 포함하는 광범위한 스크리닝 후, [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트] 뿐만 아니라 소듐 및 칼슘 양이온을 포함하는 안정한 착물이 수득되었다. 특징적인 피크를 갖는 그들의 XRPD 패턴은 일부 실시예에서 나타났으며, 이는 매우 안정하고 제어 가능한 조성물로 특징화된 공 결정이 형성되었음을 나타낸다.

일 실시예의 상기 착물은 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]_6·XCa²⁺ _·YNa⁺ _·ZH₂O이고, 여기서, X는 1 내지 3이고, Y는 12 내지 16이고, Z는 9 내지 18이고, 2X+Y=18이며, X, Y 및 Z는 바람직하게는 정수이다. 본 발명에서, X 및/또는 Y가 숫자인 착물의 화학식에서, X 및/또는 Y는 아래 첨자로 기재되고, Ca 및 Na에 대한 원자가 번호는 가독성을 향상시키기 위해 생략된다. 상기 착물의 구조는 아래와 같이 표시된다.

일부 실시예에서, X는 1이고, Y는 16이고, Z는 9 내지 18이다. 다른 실시예에서, X는 1이고, Y는 16이고, Z는 12 내지 18이다. 또 다른 실시예에서, X는 1이고, Y는 16이고, Z는 12, 15 또는 18이다. 바람직한 일 실시예에서, X는 1이고, Y는 16일 때, Z는 15이다.

추가의 실시예에서, X는 2이고, Y는 14이고, Z는 9 내지 18; X는 2이고, Y는 14이고, Z는 9 내지 15; 또는 바람직하게는 X는 2이고, Y는 14일 때, Z는 12, 15 또는 9이다. 바람직한 일 실시예에서, X는 2이고, Y는 14이고, Z는 15이다.

또 다른 실시예에서, X는 3이고, Y는 12이고, Z는 9 내지 18; X는 3이고, Y는 12이고, Z는 9 내지 15; 바람직하게는 X는 3이고, Y는 12일 때, Z는 12, 9 또는 15이다. 바람직한 일 실시예에서, X는 3이고, Y는 12이고, Z는 15이다.

일부 특정한 실시예에서, X는 1이고, Y는 16이고, Z는 9; X는 1이고, Y는 16이고, Z는 12; X는 1이고, Y는 16이고, Z는 15; X는 1이고, Y는 16이고, Z는 18; 바람직하게는 X는 1이고, Y는 16일 때, Z는 12, 15 또는 18이고;

X는 2이고, Y는 14이고, Z는 18; X는 2이고, Y는 14이고, Z는 15; X는 2이고, Y는 14이고, Z는 12; X는 2이고, Y는 14이고, Z는 9; 바람직하게는 X는 2이고, Y는 14일 때, Z는 9, 12 또는 15이고;

X는 3이고, Y는 12이고, Z는 18; X는 3이고, Y는 12이고, Z는 15; X는 3이고, Y는 12이고, Z는 12; X는 3이고, Y는 12이고, Z는 9; 바람직하게는 X는 3이고, Y는 12일 때, Z는 9, 12 또는 15이다.

상기 기재된 착물은 바람직하게는 결정형이다.

착물 I은 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆·XCa²⁺·YNa⁺·ZH₂O이고, 여기서, X는 1이고, Y는 16이고, Z는 15이다. 바람직하게 상기 착물은 결정형이다. Cu Kα X-선 분말 회절(XRPD)이 상기 착물 I의 특성을 조사하는데 사용되었다. 상기 착물 I의 XRPD 패턴에서 피크의 회절각, d-간격 및 상대 강도를 표 I에 나타냈다.

^*회절각 2θ의 오차한계는 ±0.2이다.

추가의 실시예에서, 상기 착물 I의 XRPD 패턴은 표 II에 기재된 피크의 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는다.

^*회절각 2θ의 오차한계는 ±0.2이다.

또 다른 실시예에서, 상기 착물 I은 실제로 도 1의 XRPD 패턴을 갖는다.

착물 II은 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆·XCa²⁺·YNa⁺·ZH₂O이고, 여기서, X는 2이고, Y는 14이고, Z는 15이다. 바람직하게 상기 착물은 결정형이다. Cu Kα X-선 분말 회절(XRPD)이 상기 착물 II의 특성을 조사하는데 사용되었다.

상기 착물 II의 XRPD 패턴은 표 III에 기재된 피크의 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는다.

^*회절각 2θ의 오차한계는 ±0.2이다.

또한, 상기 착물 II의 결정형은 하기 표 IV에 기재된 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는다.

^*회절각 2θ의 오차한계는 ±0.2이다.

또 다른 실시예에서, 상기 착물 II은 실제로 도 2의 XRPD 패턴을 갖는다.

착물 III은 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆·XCa²⁺·YNa⁺·ZH₂O이고, 여기서, X는 3이고, Y는 12이고, Z는 15이다. 바람직하게 상기 착물은 결정형이다. Cu Kα X-선 분말 회절(XRPD)이 상기 착물 III의 특성을 조사하는데 사용되었다. 상기 착물 III의 XRPD 패턴은 표 V에 기재된 피크의 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는다.

^*회절각 2θ의 오차한계는 ±0.2이다.

또한, 상기 착물 III의 결정형은 하기 표 VI에 기재된 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는다.

^*회절각 2θ의 오차한계는 ±0.2이다.

또 다른 실시예에서, 상기 착물 III은 실제로 도 3의 XRPD 패턴을 갖는다.

또한 본 발명은 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆·XCa²⁺·YNa⁺·ZH₂O로 표시되는 착물의 제조방법을 제공하며, 여기서, X는 1 내지 3이고, Y는 12 내지 16이고, Z는 9 내지 18이고, 2X+Y=18이다. 상기 제조방법은 다음 단계를 포함한다: (1) 아세톤에 AHU-377 의 칼슘염 및 AHU-377을 첨가하고, 상기 염이 완전히 용해되어 제1 용액을 형성할 때까지 30분 동안 교반하는 단계; (2)발사르탄 또는 발사르탄의 소듐염을 상기 제1 용액에 첨가하고, 상기 발사르탄 또는 발사르탄의 소듐염이 완전히 용해되어 제2 용액을 형성할 때까지 교반하는 단계; 상기 제2 용액에 수산화나트륨(NaOH) 수용액을 5분 안에 첨가하고, 일정한 속도로 교반하여, 약 20분 내지 30분 내에 고체 침전물이 침전되기 시작하는 단계; 및 (3) 6시간 이상 동안 교반하고, 상기 용액을 필터링하여 고체 침전물을 얻고, 상기 고체 침전물을 아세톤으로 3회 세척하고, 실온에서 공기 중에서 상기 고체를 건조하는 단계;를 포함한다.

상이한 X 및 Y를 갖는 본 발명의 착물을 형성하도록 상이한 Ca² ⁺:Na⁺의 몰비를 선택했고, 예를 들어, Ca² ⁺:Na⁺의 몰비는 1:16, 2:14, 3:12, 4:10, 5:8 또는 6:6일 수 있다. 상기 Ca² ⁺:Na⁺의 몰비가 1:16, 2:14 및 3:12일 때, 상기 착물의 결정형은 물리적 외관 및 화학적 조성 모두에서 안정하다는 것을 발견했다. 그 결과는 재현성이 있었다. 한편, 상기 Ca² ⁺:Na⁺의 몰비가 4:10, 5:8 또는 6:6일 때, 상기 착물은 불안정했다. 상기 Ca² ⁺:Na⁺의 몰비가 3:12를 초과하는 착물을 만들 때 추가적 칼슘이 발사르탄 칼슘염의 추가 또는 수산화 칼슘의 추가를 통하여 도입되는 것이 필요하고, 그것들은 아세톤에 완전히 용해될 수 없었다는 것을 발견했다. 상기 생성된 착물은 약제를 제조하기에 덜 적합하다.

또한 본 발명은 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆·XCa²⁺·YNa⁺·ZH₂O의 착물을 포함하는 의약을 사용하는 만성심부전의 치료방법을 제공하며, 여기서, X는 1 내지 3이고, Y는 12 내지 16이고, Z는 9 내지 18이고, 2X+Y=18이다.

1. 본 발명의 제조방법에 따라 제조된 샘플 착물의 품질은 안정하고 쉽게 제어 가능하다. 상기 샘플은 우수한 화학적 안정성을 갖는다. 상기 샘플의 용해도는 비교 샘플과 유사하지만 흡습성이 현저히 낮다. 상기 샘플의 제조 및 저장 공정은 특별한 조건을 필요로 하지 않고, 그것은 더 우수한 효과와 안정성을 유도한다.

2. 비글견에 대한 약물 대사 실험에서, 실시예 1 및 3의 발사르탄 피크는 비교 샘플의 피크보다 빨리 빠져 나갔고, 이는 실시예 1 및 3이 더 빨리 효력을 발생할 수 있음을 나타낸다. 실시예 1, 3 및 5에서 발사르탄, AHU377 및 LBQ657(AHU377의 대사산물)은 비교 샘플보다 상당히 높은 C_ma 및 AUC를 가지며, 이는 실시예 1, 3 및 5가 생체이용률이 더 우수함을 나타낸다. 따라서, 실시예 1, 3 및 5가 환자에게 더 잘 흡수될 수 있다.

도 1은 착물 I의 X-선 회절 패턴이다.
도 2는 착물 II의 X-선 회절 패턴이다.
도 3은 착물 III의 X-선 회절 패턴이다.

본 발명은 하기 실시예를 사용하여 더욱 상세하게 설명된다. 본 명세서의 실시예는 기술 스킴(technical scheme)을 예시하고 결코 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 본원에 개시된 화합물 또는 방법의 임의의 등가물은 본 개시 내용의 범위 내에 있다.

HPLC 스펙트럼은 Shimadzu LC-20A 액체 크로마토 그래프를 사용하여 수득하였다. X-선 분말 회절(XRPD) 패턴은 Dandong Haoyuan DX-2700 X 분말 회절계를 사용하여 수득하였다. 그 매개 변수는 다음과 같다.

시차 주사 열량계 (DSC) 데이터는 TAQ2000 시차 주사 열량계를 사용하여 얻었으며, 열 중량 분석 (TGA) 데이터는 TAQ5000 TGA 장비를 사용하여 측정하였다. 계측기들의 매개 변수는 다음과 같다.

원자 흡광 분광법(AAS)을 사용하여 본 발명의 착물의 소듐 함량을 측정하였다. 사용된 도구 및 재료는 Puxi General TAS-990 원자 흡광 분광계(Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd.); 및 표준 소듐 용액: 1000μg/ml, GSB-04-1738-2004 (153050-2) National Non-Ferrous Metals and Electronic Materials Analysis Center을 포함한다. 실험 조건은 다음과 같다: 화염 분무기(flame atomizer)를 사용하여 샘플을 분무(atomize)하였다; 파장 589nm; 기압: 0.25MPa; 가스 유속: 1300ml/min; 용매: 0.1% KCl 용액, 표준 곡선에서 선형 범위: 0.1μg/ml-0.5μg/ml, 시험 용액의 농도: 4μg/ml.

상기 착물 내의 칼슘 함량은 EDTA 착물 적정법에 의해 결정되었다. 사용된 물질: EDTA 적정 용액(0.05mol/L), 칼슘 푸르푸린(purpurin) 지시약, 수산화소듐 용액, 1ml 마이크로뷰렛. 방법: (약 1.6mg의 칼슘을 함유하는)착물 샘플의 무게를 정밀하게 재고, 50ml의 물을 첨가하고, 50ml의 수산화소듐 용액을 첨가하여 초음파 처리로 용해시키고, 칼슘 푸르푸린 0.1g을 첨가하여, EDTA 적정 용액(0.05mol/L)을 사용해 보라색에서 순수 청색(pure blue)으로 변화시켜 적정하였다. 공백 실험(blank experiment)이 교정(calibration)을 위해 수행되었다. 적정 용액의 1mL는 칼슘 2mg과 등가이다. 본 명세서에서, "실온"은 10 내지 25℃의 온도를 의미한다.

실시예 1

[3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆CaNa₁₆·15H₂O의 제조

AHU-377(2.4g, 5.83mmol) 및 AHU-377의 칼슘염(1.26g, 2.92mmol)을 25ml 아세톤에 첨가하고 30분 동안 교반하여 맑은 용액을 얻었다. 발사르탄(3.81g, 8.75mmol)을 상기 맑은 용액에 첨가하고, 상기 발사르탄이 완전히 용해될 때까지 교반하였다.

물(2.7mL)에 NaOH(933mg, 23.33mmol)를 넣어 NaOH 용액을 제조하였다. 상기 NaOH 용액을 일정한 교반 하에 5분 이내에 상기 제조된 용액에 방울(dropwise)로 적가하였다. 고체가 약 20 내지 30분 내에 침전되기 시작했다. 상기 용액을 6시간 이상 동안 연속적으로 교반한 후, 상기 고체를 여과 분리하였다. 상기 고체를 아세톤을 사용하여 3회 세척한 후 실온에서 공기 중에서 건조시켰다. 착물이 7.4g 얻어졌으며, 수율은 87.5%였다.

외부 표준을 갖는 HPLC를 사용하여, 상기 착물의 조성이 45.35% 발사르탄 및 42.86% AHU-377를 포함하는 것으로 계산되었다. 원자 흡광 분광법(AAS)을 사용하여 수득한 소듐 함량은 6.41%였다. EDTA 착물 적정법을 사용하여 칼슘 함량은 0.71%임을 얻었다. 칼 피셔 적정법(Karl Fischer titration)으로 측정한 수분 함량은 4.66%였다.

이 결정형 샘플의 DSC는 약 120℃ 및 151℃에서 특징적인 흡착 피크를 보였다.

상기 결정형 샘플은 착물 I의 결정형으로 정의되었다. 상기 착물 I의 Cu Kα 방사 X-선 분말 회절 패턴은 표 VII에 기재된 피크의 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는다.

상기 착물 I의 X-선 분말 회절 패턴은 도 1에 나타냈다.

실시예 2

AHU-377(2.41g, 5.85mmol) 및 AHU-377의 칼슘염(1.26g, 2.93mmol)을 25ml 아세톤에 첨가하고 30분 동안 교반하여 맑은 용액을 얻었다. 발사르탄의 소듐염(4.21g, 8.78mmol)을 상기 맑은 용액에 첨가하였다. 상기 염이 완전히 용해될 때까지 상기 용액을 교반하였다.

물(0.3mL)에 NaOH(234mg, 5.85mmol)를 넣어 NaOH 용액을 제조한 다음, 5분 이내에 방울(dropwise)로 상기 용액에 적가하고, 일정하게 교반하였다. 고체가 약 20 내지 30분 내에 침전되기 시작했다. 상기 용액을 6시간 이상 동안 연속적으로 교반한 다음, 상기 고체를 여과 분리하였다. 상기 고체를 아세톤을 사용하여 3회 세척한 후 실온에서 공기 중에서 건조시켰다. 착물이 6.8g 얻어졌으며, 수율은 81.0%였다.

외부 표준을 갖는 HPLC를 사용하여, 상기 착물의 조성이 45.30% 발사르탄 및 42.89% AHU-377를 포함하는 것으로 계산되었다. 원자 흡광 분광법(AAS)을 사용하여 수득한 소듐 함량은 6.41%였다. EDTA 착물 적정법을 사용하여 수득한 칼슘 함량은 0.70%였다. 칼 피셔 적정법(Karl Fischer titration)으로 측정한 수분 함량은 4.70%였다.

이 결정형 샘플의 DSC는 약 121℃ 및 152℃에서 특징적인 흡착 피크를 보였다.

상기 결정형 샘플은 실시예 1의 것과 일치하는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

실시예 3

[3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆Ca₂Na₁₄·15H₂O의 제조

AHU-377(1.27g, 3.08mmol) 및 AHU-377의 칼슘염(2.66g, 6.17mmol)을 25ml 아세톤에 첨가하고 30분 동안 교반하여 맑은 용액을 얻었다. 발사르탄(4.03g, 9.26mmol)을 상기 맑은 용액에 첨가하였다. 상기 발사르탄이 완전히 용해될 때까지 상기 용액을 교반하였다.

물(0.9mL)에 NaOH(864mg, 21.60mmol)를 넣어 NaOH 용액을 제조하고, 일정한 교반 동안 5분 이내에 방울(dropwise)로 상기 용액에 적가하였다. 고체가 약 20 내지 30분 내에 침전되기 시작했다. 상기 용액을 6시간 이상 동안 교반한 다음, 상기 고체를 여과 분리하였다. 상기 고체를 아세톤을 사용하여 3회 세척하고 실온에서 공기 중에서 건조시켰다. 착물이 7.4g 얻어졌으며, 수율은 83.5%였다.

외부 표준을 갖는 HPLC를 사용하여, 상기 착물의 조성이 45.47% 발사르탄 및 43.03% AHU-377를 포함하는 것으로 계산되었다. 원자 흡광 광도법(AAS)을 사용하여 수득한 소듐 함량은 5.63%였다. EDTA 착물 적정법을 사용하여 수득한 칼슘 함량은 1.38%였다. 칼 피셔 적정법(Karl Fischer titration)으로 측정한 수분 함량은 4.76%였다.

이 결정형 샘플의 DSC는 약 125℃ 및 155℃에서 특징적인 흡착 피크를 보였다.

상기 결정형 샘플은 착물 II의 결정형으로 정의된다. 상기 착물 II의 Cu Kα 방사 X-선 분말 회절 패턴은 표 VIII에 기재된 피크의 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는다.

상기 결정형 샘플의 X-선 분말 회절 패턴은 도 2에 나타냈다.

실시예 4

AHU-377(1.27g, 3.08mmol) 및 AHU-377의 칼슘염(2.66g, 6.17mmol)을 25ml 아세톤에 첨가하고 30분 동안 교반하여 맑은 용액을 얻었다. 발사르탄의 소듐염(4.44g, 9.26mmol)을 상기 맑은 용액에 첨가하였다. 상기 소듐염이 완전히 용해될 때까지 상기 용액을 교반하였다.

물(0.15mL)에 NaOH(123mg, 3.08mmol)를 넣어 NaOH 용액을 제조하고, 일정한 교반 하에 방울(dropwise)로 5분 이내에 상기 용액에 적가하였다. 고체가 약 20 내지 30분 내에 침전되기 시작했다. 상기 용액을 6시간 이상 동안 계속 교반한 다음, 상기 고체를 여과 분리하고, 아세톤을 사용하여 3회 세척하고, 실온에서 공기 중에서 건조시켰다. 착물이 7.2g 얻어졌으며, 수율은 81.4%였다.

외부 표준을 갖는 HPLC를 사용하여, 상기 착물의 조성이 45.33% 발사르탄 및 42.95% AHU-377를 포함하는 것으로 계산되었다. 원자 흡광 분광법(AAS)을 사용하여 수득한 소듐 함량은 5.64%였다. EDTA 착물 적정법을 사용하여 수득한 칼슘 함량은 1.38%였다. 칼 피셔 적정법(Karl Fischer titration)으로 측정한 수분 함량은 4.77%였다.

이 결정형 샘플의 DSC는 약 123℃ 및 154℃에서 특징적인 흡착 피크를 보였다.

상기 결정형 샘플은 실시예 3의 것과 일치하는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.

실시예 5

[3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆Ca₃Na₁₂·15H₂O의 제조

AHU-377의 칼슘염(2.66g, 6.17mmol)을 25ml 아세톤에 용해시키고 30분 동안 교반하여 맑은 용액을 얻었다. 발사르탄의 소듐염(2.96g, 6.17mmol)을 상기 맑은 용액에 첨가하였다. 상기 소듐염이 완전히 용해될 때까지 상기 용액을 교반하였다. 실온에서 30 내지 60분 동안 교반한 후, 백색의 고체가 침전되기 시작했다. 8시간 이상 동안 계속해서 교반한 다음 상기 고체를 여과하고, 아세톤으로 3회 세척하고, 실온에서 공기 중에서 건조시켰다. 착물이 4.6g 얻어졌으며, 수율은 78.0%였다.

외부 표준을 갖는 HPLC를 사용하여, 상기 착물의 조성이 45.61% 발사르탄 및 43.01% AHU-377를 포함하는 것으로 계산되었다. 원자 흡광 분광법(AAS)을 사용하여 수득한 소듐 함량은 4.76%였다. EDTA 착물 적정법을 사용하여 수득한 칼슘 함량은 2.06%였다. 칼 피셔 적정법(Karl Fischer titration)으로 측정한 수분 함량은 4.65%였다.

이 결정형 샘플의 DSC는 약 117℃ 및 153℃에서 특징적인 흡착 피크를 보였다.

상기 결정형 샘플은 착물 III의 결정형으로 정의된다. 상기 착물 III의 Cu Kα 방사 X-선 회절 패턴은 표 IX에 나타낸 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는다.

상기 결정형 샘플의 X-선 분말 회절 패턴은 도 3에 나타냈다.

실시예 6

AHU-377의 칼슘염(2.66g, 6.17mmol)을 25ml 아세톤에 첨가하고 20분 동안 교반하여 맑은 용액을 얻었다. 발사르탄(2.69g, 6.17mmol)을 상기 맑은 용액에 첨가하였다. 상기 발사르탄이 완전히 용해될 때까지 상기 용액을 교반하였다.

물(0.5mL)에 NaOH(494mg, 12.34mmol)를 넣어 NaOH 용액을 제조하고, 5분 이내에 방울(dropwise)로 상기 용액에 적가하였다. 실온에서 30 내지 60분 동안 교반한 후, 백색의 고체가 침전되기 시작했다. 8시간 이상 동안 계속해서 교반하고 여과하여 상기 용액으로부터 분리하고, 아세톤으로 3회 세척하고, 실온에서 공기 중에서 건조시켰다. 착물이 4.8g 얻어졌으며, 수율은 81.5%였다.

외부 표준을 갖는 HPLC를 사용하여, 상기 착물의 조성이 45.57% 발사르탄 및 42.93% AHU-377를 포함하도록 계산되었다. 원자 흡광 분광법(AAS)을 사용하여 수득한 소듐 함량은 4.84%였다. EDTA 착물 적정법을 사용하여 수득한 칼슘 함량은 2.13%였다. 칼 피셔 적정법(Karl Fischer titration)으로 측정한 수분 함량은 4.72%였다.

이 결정형 샘플의 DSC는 약 119℃ 및 154℃에서 특징적인 흡착 피크를 보였다.

상기 결정형 샘플의 X-선 분말 회절 패턴은 실시예 5의 것과 일치한다.

비교예 LCZ696의 제조

비교예 LCZ696은 ZL200680001733.0, 단락 [282] 내지 [285]의 실시예 1에 따라 제조되었다.

시험예 1: 화학적 안정성 시험

고온(60℃), 고습(25℃, RH 90%±5%) 또는 강한 빛(4500럭스±500럭스) 하에서 안정성을 시험하기 위해 실시예 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 비교예를 각각의 배양 접시에 놓았다. 5일째 및 10일째에 순도를 시험하기 위해 각각의 시험 샘플을 채취하였다. 시험 결과는 하기 표 X에 나타내었다.

안정성 시험의 결과, 고온(60℃), 고습도(25℃, RH 90%±5%) 또는 강한 빛(4500럭스±500럭스)에 10일 동안 노출시킨 후, 실시예 1, 2, 3, 4, 5, 6 뿐만 아니라 비교예도 HPLC를 사용하여 결정된 순도에 약간의 감소만을 보였으며, 이는 결정형 착물 모두 양호한 안정성을 갖는다는 것을 나타낸다.

시험예 2: 평형 용해도 실험

실시예 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 비교예의 용해도를 조사하기 위해, 37℃에서 pH 1.0(0.1 mol/L) 염산, pH 3.5 암모늄 아세테이트/암모니아 완충액, pH 6.8 인산 이수소 칼륨-수산화소듐(potassium dihydrogen phosphate-sodium hydroxide) 완충액 및 물에서 각각 실험하였다. 결과는 하기 표 XI에 나타내었다.

실험 결과는 pH 3.5 완충액 또는 pH 1.0 염산에서 실시예의 용해도가 비교예와 유사하지만 비교예만큼 높지 않다는 것을 보여준다.

시험예 3: 흡습 실험

물 흡수로 인한 무게 증가를 평가하기 위해 25±1℃에서 RH 80%±2% 하에 24시간 동안 실시예 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 비교예를 깨끗하고 개방된 저울병에 평평하게 놓았다. 결과는 하기 표 XII에 나타내었다.

상기 흡습 실험 결과, 고습도에서 24시간 후, 모든 실시예 1 내지 6이 7% 미만의 중량 증가를 나타냈다. 실시예 6만이 2.09%의 중량 증가를 보이고, 외관을 유지하였다. 대조적으로, 비교예는 수분 흡수로 인해 15% 이상의 중량 증가를 보이고 24시간 후에 거의 액체가 되었다. 이 결과는 비교예가 매우 흡습성이고 하류 공정(downstream process) 및 저장에서 보다 엄격한 조건을 필요로 함을 보여준다. 이 때문에, 비교예와 비교하여, 본 발명의 실시예는 보통의, 덜 까다로운 조건 하에 처리되고 저장될 수 있다.

시험예 4: 비글견의 생체 내 약물 동태학 연구

1. 목적

본 발명의 실시예 1, 3, 5 및 비교예의 동일한 몰 투여량의 경구 투여를 통한 단일 투여(one single dose) 후, 기본적인 약물 동태학 특성뿐만 아니라 발사르탄, AHU377 및 AHU377의 대사 산물-LBQ657의 농도를 알아내고, C_max, T_max 및 AUC_last 등의 주요 변수를 비교하는 것이다.

2. 재료 및 방법

2.1 검사약물

실시예 1 캡슐제: Chengdu Eastern Pharma Co.의 약물 제제 부서에서 제공한 실시예 1을 함유하는 캡슐, 투여량 312μmol/캡슐, 로트(Lot): 150901;

실시예 3 캡슐제: Chengdu Eastern Pharma Co.의 약물 제제 부서에서 제공한 실시예 3을 함유하는 캡슐, 투여량 312μmol/캡슐, 로트: 150901;

실시예 5 캡슐제: Chengdu Eastern Pharma Co.의 약물 제제 부서에서 제공한 실시예 5를 함유하는 캡슐, 투여량 312μmol/캡슐, 로트: 150901;

비교예 LCZ696 캡슐제: Chengdu Eastern Pharma Co.의 약물 제제 부서에서 제공한 LCZ696 캡슐제, 투여량 312μmol/캡슐, 로트: 150831;

2.2 실험 대상

Chengdu Dashuo Biological Technology Co., Ltd.에서 구입한 체중이 8±2kg이고, 10 내지 12개월된 4마리의 수컷 비글견, 공인적합인증(Certificate of Conformity): SCXK(쓰촨) 2013-24.

2.3 실험 설계

약물 투여 기간: 4Х4 교차 파일롯(pilot) 연구에서 비글견을 사용하였다. 실험 주기가 총 4회였다. 매 주기마다 4마리의 개에게 4가지 다른 약물 캡슐을 투여하였다. 매 주기 후, 다음 실험 주기를 시작하기 전에 약물이 완전히 대사되도록 2일 동안 일시 중지되었다. 세부 사항은 하기 표 XIII에 나타내었다.

참고: MD=수컷개(Male Dog)

2.4 샘플 수집

매 주기마다, 1 ml 혈액 샘플을 5분, 15분, 0.5시간, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 24시간, 36시간, 48시간 전에 EDTA-K2 튜브에서 수집하고 1회 복용량을 앞다리 또는 뒷다리 정맥에 투여한 후 3000r/분에서 10분 간 원심분리하였다. 혈장을 분리하여 -70℃의 냉동실에 보관하였다.

2.5 LC/MS/MS 생물학적 샘플 분석

50μl의 혈장을 5μl의 작업 용액(working solution) 또는 희석제(blank diluent)와 균일하게 혼합하고, 내부 표준을 함유하는 침전제 아세토니트릴 150μl를 첨가하고, 2분 동안 소용돌이(vortex) 혼합하고, 12,000rpm으로 5분 동안 원심분리하였다. 상층액 100μl를 순수한 물 100μl와 혼합하였다. 주입 샘플 크기는 10μl이다.

2.6 통계 방법

SPSS가 통계 분석에 사용되었으며 실험 데이터는 평균 플러스 또는 마이너스 표준 편차로 표시되었다. 분산 분석(ANOVA)을 사용한 여러 데이터 세트 간에 비교하는 한편, LSD(Least Significant Difference) 테스트가 두 데이터 포인트를 비교하기 위해 도입되었다.

2.7 실험 결과

"^*P": 비교예와 비교된, P<0.05;

약물 캡슐의 단일 경구 투여 후, 실시예 1 및 3에 대한 발사르탄의 T_MAX는 상당히 일찍 이동하였다. 특히, 실시예 1에 대한 발사르탄의 T_MAX는 비교예(^*P<0.05)와 비교하여 통계적 유의성을 나타내었다. 실시예 1, 3 및 5에서, 발사르탄, AHU377, 및 LBQ657 (AHU377의 대사 산물)은 비교 샘플(^*P<0.05)보다 명백하게 더 높은 C_MAX 및 AUC 값을 나타내어, 발사르탄 및 AHU377이 비교예보다 비글견에 더 잘 흡수되었음을 입증하였다.

결론

비글견의 신진 대사 시험은 실시예 1 및 3이 비교예보다 더 빠르게 발사르탄에서 피크값에 도달한 것을 보여주며, 이는 실시예 1 및 3이 더 빨리 효력이 발생됨을 나타낸다. 실시예 1, 3 및 5는 비교예보다 발사르탄, AHU377 및 LBQ657(AHU377의 대사 산물)에서 더 높은 C_max 및 AUC를 명백하게 나타내었으며, 이는 보다 높은 생체 이용률을 나타낸다. 즉, 이 일련의 실험 조건 하에서, 실시예 1, 3 및 5는 비교예보다 우수한 흡수를 나타내었다.

상기 결과에 따르면, 본원에 개시된 본 발명의 실시예는 보다 우수한 생체 이용성을 가지며 심부전 예방에 보다 효과적일 수 있다. 당업자는 변형 또는 변경이 청구 범위 및 그 균등물의 범위 내에 있는 한, 본 발명의 사상 또는 범위를 벗어나지 않으면서 상기 착물, 결정형 및 다양한 제조방법을 변형 또는 변경시킬 수 있다.

Claims

[3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트] 소듐 칼슘(sodium calcium [3-((1S,3R)-1-biphenyl-4-ylmethyl-3-ethoxycarbonyl-1-butylcarbamoyl)propionate-(S)-3′-methyl-2′-(pentanoyl{2″-(tetrazol-5-ylate)biphenyl-4′-ylmethyl}amino)butyrate])의 착물.
제1항에 있어서,
상기 착물이 [3-((1S,3R)-1-비페닐-4-일메틸-3-에톡시카보닐-1-부틸카바모일)프로피오네이트-(S)-3′-메틸-2′-(펜타노일{2″-(테트라졸-5-일레이트)비페닐-4′-일메틸}아미노)부티레이트]₆·XCa²⁺·YNa⁺·ZH₂O이고, 하기 화학식으로 표시되는 것을 특징으로 하는 착물:

상기 화학식에서,
X는 1 내지 3이고, Y는 12 내지 16이고, Z는 9 내지 18이고, 2X+Y=18이다.
제2항에 있어서,
X는 1이고, Y는 16이고, Z는 12 내지 18인 것을 특징으로 하는 착물.
제2항에 있어서,
X는 1이고, Y는 16이고, Z는 12, 15 또는 18인 것을 특징으로 하는 착물.
제2항에 있어서,
X는 2이고, Y는 14이고, Z는 9 내지 15인 것을 특징으로 하는 착물.
제2항 또는 제5항에 있어서,
X는 2이고, Y는 14이고, Z는 12, 15 또는 9인 것을 특징으로 하는 착물.
제2항에 있어서,
X는 3이고, Y는 12이고, Z는 9 내지 15인 것을 특징으로 하는 착물.
제2항에 있어서,
X는 3이고, Y는 12이고, Z는 12, 15 또는 9인 것을 특징으로 하는 착물.
제1항에 있어서,
상기 착물이 결정형인 것을 특징으로 착물.
제4항에 있어서,
상기 착물이 결정형이고, X는 1이고, Y는 16이고, Z는 15이고, 하기 표에 기재된 피크의 회절각(diffraction angle), d-간격(d-spacing) 및 상대 강도(relative intensity)를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 가지는 것을 특징으로 하는 착물:

상기 표에서, 상기 회절각의 오차한계(margin of error)는 ±0.2이다.
제10항에 있어서,
상기 착물이 실제로 도 1의 X선 분말 회절 패턴을 가지는 것을 특징으로 하는 착물.
제6항에 있어서,
상기 착물이 결정형이고, X는 2이고, Y는 14이고, Z는 15이고, 하기 표에 기재된 피크의 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 가지는 것을 특징으로 하는 착물:

상기 표에서, 상기 회절각의 오차한계는 ±0.2이다.
제12항에 있어서,
상기 착물이 실제로 도 2의 X선 분말 회절 패턴을 가지는 것을 특징으로 하는 착물.
제8항에 있어서,
상기 착물이 결정형이고, X는 3이고, Y는 12이고, Z는 15이고, 하기 표에 기재된 피크의 회절각, d-간격 및 상대 강도를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 가지는 것을 특징으로 하는 착물:

상기 표에서, 상기 회절각의 오차한계는 ±0.2이다.
제14항에 있어서,
상기 착물이 실제로 도 3의 X선 분말 회절 패턴을 가지는 것을 특징으로 하는 착물.
제2항 내지 제15항 중 어느 하나의 항에 따른 착물의 제조방법이고,
상기 착물의 제조방법이
AHU-377 및/또는 그의 칼슘염을 아세톤에 용해시켜 제1 용액을 형성하는 단계;
발사르탄(valsartan) 및/또는 그의 소듐염을 상기 제1 용액에 용해시켜 제2 용액을 형성하는 단계;
상기 제2 용액에 수산화나트륨(NaOH) 용액을 첨가하는 단계;
상기 제2 용액을 일정하게 교반하여 고체 침전물을 형성하는 단계;
상기 고체 침전물을 상기 제2 용액으로부터 분리하는 단계;
상기 고체 침전물을 아세톤으로 세척하는 단계; 및
상기 고체 침전물을 공기 중에서 건조하여 상기 착물을 얻는 단계;를
포함하는 착물의 제조방법.
제16항에 있어서,
상기 제2 용액에 상기 수산화나트륨 용액을 첨가한 후 상기 제2 용액에서 Ca²⁺:Na⁺의 몰비가 1:16 내지 6:6인 것을 특징으로 하는 착물의 제조방법.
제17항에 있어서,
상기 Ca² ⁺:Na⁺의 몰비가 1:16 내지 3:12인 것을 특징으로 하는 착물의 제조방법.
만성심부전의 치료방법이고,
상기 치료방법은 제2항의 착물을 포함하는 유효량의 의약을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료방법.