KR20180051631A

KR20180051631A - 태반 세포를 사용한 당뇨병성 말초 신경병증의 치료 방법

Info

Publication number: KR20180051631A
Application number: KR1020187010423A
Authority: KR
Inventors: 스티븐 에이. 피쉬코프; 드네쉬 치트카라
Original assignee: 셀룰래리티, 인코포레이티드
Priority date: 2015-09-15
Filing date: 2016-09-14
Publication date: 2018-05-16
Also published as: EP3957315A1; US20220072063A1; ZA201801708B; CN108367028A; WO2017048741A1; JP2018529683A; US20180264048A1; EA201890720A1; BR112018005014B1; IL258048A; JP2023171769A; IL281185A; AU2016323120A1; CO2018003759A2; EP3349771A1; SG10201912572VA; JP2021183635A; BR112018005014A2; MX2018003275A; EP3349771A4

Abstract

당뇨병성 말초 신경병증(DPN)의 치료에 있어서, CD10⁺, CD34^-, CD105⁺, CD200⁺ 조직 배양 플라스틱-부착성(plastic-adherent) 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포를 사용하는 방법이 본원에 제공된다.

Description

태반 세포를 사용한 당뇨병성 말초 신경병증의 치료 방법

본 출원은 2015년 9월 15일자로 출원된 미국 특허 가출원 제62/218,885호의 우선권 이익을 청구하며, 이의 내용은 이의 전문으로 본원에 포함된다.

1. 분야

당뇨병성 말초 신경병증(DPN)의 치료에 있어서, 조직 배양 플라스틱-부착성 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포를 사용하는 방법이 본원에 제공된다.

2. 배경

태반은 줄기 세포의 특히 매력적인 공급원이다. 포유동물 태반은 풍부하고 일반적으로 의료 폐기물로 버려지기 때문에, 이들은 의학적으로 유용한 줄기 세포의 유일한 공급원임을 나타낸다.

3. 요약

이를 필요로 하는 대상체에게 치료학적 유효량의 조직 배양 플라스틱-부착성 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포, 예컨대, CD34^-, CD10⁺, CD105⁺, CD200⁺ 태반 줄기 세포를 투여함을 포함하여, 상기 대상체에서 당뇨병성 말초 신경병증(DPN)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특수한 구현예에서, 태반 세포는 약제학적 조성물로서 제형화된다.

특수한 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 DPN을 지닌 대상체는 제I형 당뇨병을 지닌다. 다른 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 DPN을 지닌 대상체는 제II형 당뇨병을 지닌다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 대상체는 팔, 손, 다리, 또는 발 중 하나 이상에서 DPN을 지닌다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 대상체는 팔, 손, 다리, 및 발 각각에서 DPN을 지닌다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 대상체는 DPN을 지니고 또한 대상체의 말초 혈관구조에서 혈액 흐름에 있어 붕괴를 유발하는 상태를 지닌다. 특정 구현예에서, 대상체는 말초 동맥 질환(PAD)을 지닌다. 특정 구현예에서, 대상체는 말초 혈관 질환을 지닌다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 대상체에서 DPN의 하나 이상의 증상의 검출가능한 개선을 야기한다. DPN의 예시적인 증상은 손발저림 또는 통증 또는 온도 변화를 느끼는 능력의 감소, 사지에서 아린감 또는 화끈거림, 날카로운 통증 또는 경련, 접촉에 대한 증가된 민감성, 근육 약화, 반사작용의 상실(예컨대, 발목에서), 균형 및/또는 조정력의 상실, 발 문제(예컨대, 궤양, 감염, 변형, 및 골 및 관절 통증)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)을 DPN을 지닌 대상체에게 하나 이상의 개선 징후에 있어서 검출가능한 개선에 충분한 양으로 및 이러한 시간 동안 투여함을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 개선 징후는 기본선과 비교한 것으로서, 치료 후 상피 신경 섬유 밀도에 있어서의 변화이다. 상피 신경 섬유 밀도는 말초 당뇨병성 신경병증의 정도를 평가하는데 사용된 측정이다. 상피 신경 섬유 밀도를 평가하기 위해, 피부 생검에서 다수의 신경 섬유가 측정된다. 신경 섬유의 수/밀도에 있어서의 증가는 신경병증의 개선을 나타낸다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)를 DPN을 지닌 대상체에게 예컨대, (i) 36-항목 단형 건강 조사(36-item Short Form Health Survey: SF-36)(참고: 예컨대, Ware et al., Medical Care 30(6):473-483); (ii) 삶의 질에 있어서 당뇨병성 말초 신경병증의 충격을 측정하는, 당뇨병성 말초 신경병증 규모 단기 형태(Diabetic peripheral neuropathy Scale Short Form: DFS-SF)(참고: 예컨대, Bann et al., Pharmacoeconomics, 2003, 21(17):1277-90); (iii) 시간에 따른 신경병증에 있어서의 변화를 평가하기 위한 치료 만족도 규모(Patient Global Impression of Change Scale)(참고: 예컨대, Kamper et al., J. Man. Manip. Ther., 2009, 17(3):163-170); 및/또는 (iv) 환자의 건강 상태에 대한 설명 프로파일 및 단일 지수치를 수득하는데 사용된 건강 질문서인, EuroQol5D(EQ-5D^TM) 규모에 의해 평가된 것으로서 대상체의 삶의 질에 있어서 검출가능한 개선에 충분한 양으로 및 이러한 시간 동안 투여함을 포함한다.

본원에 기술된 DPN의 치료 방법의 특정 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 주사로 투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료 방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 치료되는 대상체 내에서 태반 세포를 포함하는 매트릭스 또는 스캐폴드(scaffold)의 이식에 의해 상기 대상체에게 투여된다.

본원에 기술된 DPN의 치료 방법의 특정 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 근육내 투여된다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 DPN의 부위(예컨대, 다리, 발, 팔, 또는 손 중 하나 이상에) 근육내 투여된다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 DPN의 부위에 인접하게 근육내 투여된다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 DPN으로 진단된 대상체의 무릎 아래 및 발목 위에 투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료 방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 정맥내 투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 피하 투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 국소투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 전신계 투여된다.

특정 구현예에서, 본원에 기술된 DPN의 치료방법은 약 1 x 10³, 3 x 10³, 5 x 10³,1 x 10⁴, 3 x 10⁴, 5 x 10⁴,1 x 10⁵, 3 x 10⁵, 5 x 10⁵,1 x 10⁶, 3 x 10⁶, 5 x 10⁶, 1 x 10⁷, 3 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 3 x 10⁸, 5 x 10⁸, 1 x 10⁹, 5 x 10⁹, 또는 1 x 10¹⁰개의 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물의 일부로서)의 투여를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 DPN의 치료방법은 약 1 x 10³ 내지 3 x 10³, 3 x 10³내지 5 x 10³, 5 x 10³ 내지 11 x 10⁴, 1 x 10⁴ 내지 3 x 10⁴, 3 x 10⁴ 내지 5 x 10⁴, 5 x 10⁴ 내지 11 x 10⁵, 1 x 10⁵ 내지 3 x 10⁵, 3 x 10⁵ 내지 5 x 10⁵, 5 x 10⁵ 내지 11 x 10⁶, 1 x 10⁶ 내지 3 x 10⁶, 3 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶, 5 x 10⁶ 내지 11 x 10⁷, 1 x 10⁷ 내지 3 x 10⁷, 3 x 10⁷ 내지 5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 내지 11 x 10⁸, 1 x 10⁸ 내지 3 x 10⁸, 3 x 10⁸ 내지 5 x 10⁸, 5 x 10⁸ 내지 11 x 10⁹, 1 x 10⁹ 내지 5 x 10⁹, 또는 5 x 10⁹ 내지 11 x 10¹⁰개의 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물의 일부로서)의 투여를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 DPN의 치료방법은 약 3 x 10⁶개의 태반 세포의 투여를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 본원에 기술된 DPN의 치료방법은 약 1 x 10⁷개의 태반 세포의 투여를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 본원에 기술된 DPN의 치료방법은 약 3 x 10⁷개의 태반 세포의 투여를 포함한다.

본원에 기술된 DPN의 치료방법의 특정 구현예에서, 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 대상체에게 1회 이상, 1주 사이의 투여 간격으로 투여되는데, 예컨대, 태반 세포는 1일째(투여 첫날)에 투여되고 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)의 제2 투여량은 1주 후(즉, 8일째)에 투여된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 방법은 각각의 투여일(즉, 1일째 및 8일째)에 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포의 투여를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 방법은 각각의 투여일(즉, 1일째 및 8일째)에 약 3 x 10⁷개의 태반 세포의 투여를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포는 약 1주의 투여 간격으로 적어도 3개의 상이한 때에 대상체에게 투여된다.

본원에 기술된 DPN의 치료방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 1개월 투여 간격으로 1회 이상 대상체에게 투여되는데, 예컨대, 태반 세포는 1일째(투여 첫날) 투여되고 제2 투여량의 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 약 1개월 후(예컨대, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33일째에) 투여된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 각각의 투여일에 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포의 투여를 포함한다(예컨대, 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포는 1일째에 투여되고, 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포는 1일 후 약 1개월 째에, 예컨대, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33일째에 투여된다). 다른 구체적인 구현예에서, 방법은 각각의 투여 일에 약 3 x 10⁷개의 태반 세포의 투여를 포함한다(예컨대, 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포가 1일 째에 투여되고, 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포는 1일 후 약 1개월째에, 예컨대, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33일 째에 투여된다). 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포는 약 1개월의 투여 간격으로, 적어도 3개의 상이한 때에 대상체에게 투여된다.

특정 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)의 투여량은 다수의 상이한 주사를 사용하여 투여되는데, 예컨대, 단일 투여량의 태반 세포(예컨대, 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량 또는 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량)가 다수회 치료되는 대상체에게 주사에 의해 투여된다. 특정 구현예에서, 태반 세포의 투여량(예컨대, 약 3 x 10⁶ 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량 또는 약 3 x 10⁷ 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량)이 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20회의 주사에 걸쳐 투여된다. 단일 투여량의 태반 세포의 투여를 이루는 개개 주사는 특정 구현예에서, 0.1ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물), 0.2ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물), 0.3ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물), 0.4ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물), 또는 0.5ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물)를 포함한다. 특정 구현예에서, 단일 투여량의 태반 세포를 전체적으로 구성하는 개개 주사(예컨대, 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량 또는 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량)은 0.3ml의 태반 세포를 포함한다.

특정 구현예에서, 태반 세포의 투여량(예컨대, 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량 또는 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량)이 15회의 별도의 주사에 걸쳐 투여되며, 여기서 각각의 주사는 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물)를 포함하는 0.3ml의 용액을 함유한다. 특정 구현예에서, 상기 투여는 근육내이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 투여는 근육내이고, 근육내 주사는 DPN을 지닌 대상체의 무릎 아래 및 발목 위에 투여된다.

특정 구현예에서, 대상체에서 DPN을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 당해 방법은 상기 대상체에게 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포의 투여량을 투여함을 포함하며, 여기서 (i) 상기 태반 줄기 세포는 적어도 3개월 동안 약 1개월 기준으로 근육내 투여되고(예컨대, 태반 줄기 세포는 1일 째; 27, 28, 29, 30, 31, 또는 32일째; 및 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 63일째에 투여된다), (ii) 각각의 투여량은 15회의 별도의 주사에 걸쳐 투여되며, 여기서 각각의 주사는 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물)를 포함하는 0.3ml의 용액을 포함하고, (iii) 상기 근육내 주사는 DPN을 지닌 대상체의 무릎 아래 및 발목 위에 투여된다.

특정 구현예에서, 대상체에서 DPN을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 당해 방법은 상기 대상체에게 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포를 투여함을 포함하고, 여기서 (i) 상기 태반 줄기 세포는 적어도 3개월 동안 약 1개월 기준으로 근육내 투여되고(예컨대, 태반 줄기 세포는 1일째; 27, 28, 29, 30, 31, 또는 32일째; 및 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 63일째 투여된다), (ii) 각각의 투여량은 15회의 별도의 주사에 걸쳐 투여되며, 여기서 각각의 투여는 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물)를 포함하는 0.3ml의 용액을 함유하고, (iii) 상기 근육내 주사는 DPN을 지닌 대상체의 무릎 아래 및 발목 위에 투여된다.

본원에 기술된 방법에 사용된 태반 세포는 조직 배양 플라스틱에 부착되어 있으며 예컨대, 유동 세포분석법에 의해 검출가능한 것으로서, CD34^-, CD10⁺, CD105⁺ 및 CD200⁺이다. 본원에 제공된 방법에서 사용된 태반 세포의 추가의 특징은 4.1 단락에 기술되어 있다. 본원에 제공된 방법에서 사용될 태반 줄기 세포를 포함하는 조성물, 예를 들어, 약제학적 조성물은 단락 4.3에 기술되어 있다.

3.1 정의

본원에 사용된 것으로서, 용어 "약"은 기술된 수치를 언급하는 경우, 기술된 수치의 ± 10% 내의 값을 나타낸다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "기원한"은 ~로부터 분리되거나 달리 정제됨을 의미한다. 예컨대, 태반 기원한 부착 세포는 태반으로부터 분리된 것이다. 용어 "기원한"은 조직, 예컨대, 태반으로부터 직접 분리된 세포로부터 배양된 세포 및 1차 분리물로부터 배양되거나 증식된 세포를 포함한다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "분리된 세포", 예컨대, "분리된 태반 세포, "분리된 태반 줄기 세포" 등은 줄기 세포가 기원하는 조직, 예컨대, 태반의 다른 상이한 세포로부터 실질적으로 분리된 세포를 의미한다. 세포는, 당해 세포, 예컨대, 이와 줄기 세포가 천연적으로 연관되어 있는 비-줄기 세포, 또는 상이한 마커 프로파일을 나타내는 줄기 세포의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 적어도 99%가 예컨대, 상기 줄기 세포의 수집 및/또는 배양 동안에 상기 줄기 세포로부터 제거되는 경우, "분리된다".

본원에 사용된 것으로서, 용어 "분리된 세포의 집단"은 이로부터 세포의 집단이 기원하는 조직, 예컨대, 태반의 다른 세포로부터 실질적으로 분리된 세포의 집단을 의미한다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "태반 세포"는 1차 분리물 또는 배양된 세포로서, 예컨대, 하기 단락 4.1에 기술된 바와 같이, 포유동물 태반으로부터 분리되거나, 1차 배양 후 계대배양(passage)의 수와 상관없이, 포유동물 태반으로부터 분리된 세포로부터 배양된 줄기 세포 또는 후대 세포를 말한다. 특정 구현예에서, 본원에 사용된 것으로서, 그러나, 용어 "태반 세포"는 영양세포, 세포 영양아층, 합포체영양막(syncitiotrophoblast), 혈관모세포(angioblast), 혈관모세포(hemangioblast), 배아 생식 세포, 배아 줄기 세포, 배반포의 내부 세포 덩어리로부터 수득된 세포, 또는 말기 배아의 생식선 릿지(gonadal ridge), 예컨대, 배아 생식 세포로부터 수득된 세포를 말한다.

본원에 사용된 것으로서, 태반 세포는 마커가 배경 이상으로 검출가능한 경우 특수한 마커에 대해 "양성"이다. 특수한 마커의 검출은 예컨대, 항체의 사용에 의해, 또는 마커를 암호화하는 유전자 또는 mRNA의 서열을 기준으로 올리고뉴클레오타이드 프로브(probe) 또는 프라이머에 의해 달성될 수 있다. 예컨대, 태반 세포는 예컨대, CD73에 대해 양성인데 이는 CD73이 배경보다 검출가능하게 더 큰 양(예컨대, 동형 대조군과 비교시)으로 태반 세포에서 검출가능하기 때문이다. 세포는 또한 마커가 적어도 하나의 다른 세포 유형으로부터의 세포를 구별하기 위해 사용될 수 있거나 세포에 의해 존재하거나 발현된 경우 세포를 선택하거나 분리하기 위해 사용될 수 있는 경우 마커에 대해 양성이다. 예컨대, 항체-매개된 검출과 관련하여, 특수한 세포 표면 마커를 나타내는 것으로서 "양성"은, 당해 마커가 항체, 예컨대, 이러한 마커에 대해 특이적인 형광적으로 표지된 항체를 사용하여 검출가능함을 의미하며; "양성"은 또한 세포분석기 속에서 검출가능하게 배경 이상인 시그날을 생산하는 양의 마커를 나타내는 세포를 말한다. 예컨대, 세포는 "CD200⁺"이며, 여기서 세포는 CD200에 대해 특이적인 항체로 검출가능하게 표지되고, 이러한 항체로부터의 시그날은 대조군(예컨대, 배경 또는 동형 대조군)의 것보다 검출가능하게 더 높다. 역으로, 동일한 내용에서 "음성"은 세포 표면 마커가 대조군(예컨대, 배경 또는 동형 대조군)과 비교하여, 상기 마커에 대해 특이적인 항체를 사용하여 검출가능하지 않음을 의미한다. 예를 들면, 세포는 "CD34^-"이고, 여기서 당해 세포는 대조군(예컨대, 배경 또는 동형 대조군)보다 더 큰 정도까지 CD34에 대해 특이적인 항체로 재생가능하고 검출가능하게 표지되지 않는다. 항체를 사용하여 검출되지 않거나 검출할 수 없는 마커는 적절한 대조군을 사용하여, 유사한 방식에서 양성 또는 음성으로 측정된다. 예를 들면, 세포 또는 세포의 집단은 세포 또는 세포의 집단으로부터 검출된 OCT-4 RNA의 양이 예컨대 RT-PCR, 슬롯 블롯(slot blot) 등과 같은 RNA의 검출 방법에 의해 측정된 것으로서의 배경보다 검출가능하게 더 큰 경우 OCT-4⁺인 것으로 측정될 수 있다. 본원에서 달리 나타내지 않는 한, 분화("CD") 마커의 집단은 항체를 사용하여 검출된다. 특정 구현예에서, OCT-4는 존재하는 것으로 측정되며 세포는 OCT-4가 RT-PCR을 사용하여 검출될 수 있는 경우 "OCT-4⁺"이다.

본원에 사용된 것으로서, 용어 "대상체", "환자", 및 "개인"은 본원에 기술된 치료 방법으로 치료되는 포유동물을 말하기 위해 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 구체적인 구현예에서, 치료될 대상체는 사람이다.

4. 상세한 설명

당뇨병성 말초 신경병증(DPN)의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료학적 유효량의 조직 배양 플라스틱-부착성 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포, 예컨대, CD34^-, CD10⁺, CD105⁺, CD200⁺ 태반 줄기 세포를 투여함을 포함하여, 상기 대상체에서 당뇨병성 말초 신경병증(DPN)을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 상기 태반 세포는 약제학적 조성물로 제형화된다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 DPN을 지닌 대상체는 제I형 당뇨병을 지닌다. 다른 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 DPN을 지닌 대상체는 제II형 당뇨병을 지닌다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 대상체는 팔, 손, 다리, 또는 발 중 하나 이상에서 DPN을 지닌다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 대상체는 팔, 손, 다리, 및 발 각각에서 DPN을 지닌다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 대상체는 대상체의 말초 혈관 구조 내 혈액의 흐름에 있어 차단을 유발하는 상태를 지닌다. 특정 구현예에서, 대상체는 말초 동맥 질환(PAD)을 지닌다. 특정 구현예에서, 대상체는 말초 혈관 질환을 지닌다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)을 DPN을 지닌 대상체에게 하나 이상의 개선 징후에 있어서 검출가능한 개선에 충분한 양 및 시간 동안 투여함을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 개선 징후는 기본선과 비교한 것으로서, 치료 후 상피 신경 섬유 밀도에 있어서의 변화이다. 상피 신경 섬유 밀도는 말초 당뇨병성 신경병증의 정도를 평가하는데 사용된 측정이다. 상피 신경 섬유 밀도를 평가하기 위해, 피부 생검에서 다수의 신경 섬유가 측정된다. 신경 섬유의 수/밀도에 있어서의 증가는 신경병증의 개선을 나타낸다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)을 DPN을 지닌 대상체에게 예컨대, (i) 36-항목 단형 건강 조사(SF-36)(참고: 예컨대, Ware et al., Medical Care 30(6):473-483); (ii) 삶의 질에 있어서 당뇨병성 말초 신경병증의 충격을 측정하는, 당뇨병성 말초 신경병증 규모 단기 형태(DFS-SF)(참고: 예컨대, Bann et al., Pharmacoeconomics, 2003, 21(17):1277-90); (iii) 시간에 따른 신경병증에 있어서의 변화를 평가하기 위한 치료 만족도 규모(참고: 예컨대, Kamper et al., J. Man. Manip. Ther., 2009, 17(3):163-170); 및/또는 (iv) 환자의 건강 상태에 대한 설명 프로파일 및 단일 지수치를 수득하는데 사용된 건강 질문서인, EuroQol5D(EQ-5D^TM) 규모에 의해 평가된 것으로서 대상체의 삶의 질에 있어서 검출가능한 개선에 충분한 양으로 및 시간 동안 투여함을 포함한다.

본원에 기술된 DPN의 치료 방법의 특정 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 주사로 투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료 방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 치료되는 대상체 내에서 태반 세포를 포함하는 매트릭스 또는 스캐폴드의 이식에 의해 상기 대상체에게 투여된다.

본원에 기술된 DPN의 치료 방법의 특정 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 근육내 투여된다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 DPN의 부위(예컨대, 다리, 발, 팔, 또는 손 중 하나 이상에)에서 근육내 투여된다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 DPN의 부위에 인접하게 근육내 투여된다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 DPN으로 진단된 대상체의 무릎 아래 및 발목 위에 투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료 방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 정맥내 투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 피하 투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 국소투여된다. 본원에 기술된 DPN의 치료방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 전신계 투여된다.

본원에 기술된 DPN의 치료방법의 다른 구체적인 구현예에서, 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 1개월 투여 간격으로 1회 이상 대상체에게 투여되는데, 예컨대, 태반 세포는 1일째(투여 첫날) 투여되고 제2 투여량의 태반 줄기 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)는 약 1개월 후에(예컨대, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33일째에) 투여된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 각각의 투여일에 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포의 투여를 포함한다(예컨대, 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포는 1일째에 투여되고, 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포는 1일 후 약 1개월 째에, 예컨대, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33일째에 투여된다). 다른 구체적인 구현예에서, 상기 방법은 각각의 투여 일에 약 3 x 10⁷ 개의 태반 세포의 투여를 포함한다(예컨대, 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포가 1일 째에 투여되고, 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포는 1일 후 약 1개월째에, 예컨대, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33일 째에 투여된다). 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포는 약 1개월의 투여 간격으로, 적어도 3개의 상이한 때에 대상체에게 투여된다.

특정 구현예에서, 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물)의 투여량은 다수의 상이한 주사를 사용하여 투여되는데, 예컨대, 단일 투여량의 태반 세포(예컨대, 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량 또는 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량)가 다수회 치료되는 대상체에게 주사된다. 특정 구현예에서, 태반 세포의 투여량(예컨대, 약 3 x 10⁶ 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량 또는 약 3 x 10⁷ 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량)이 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20회의 주사에 걸쳐 투여된다. 단일 투여량의 태반 세포의 투여를 이루는 개개 주사는 특정 구현예에서, 0.1ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물), 0.2ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물), 0.3ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물), 0.4ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물), 또는 0.5ml의 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물)를 포함한다. 특정 구현예에서, 단일 투여량의 태반 세포의 투여를 이루는 개개 주사(예컨대, 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량 또는 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포를 포함하는 투여량)은 0.3ml의 태반 세포를 포함한다.

특정 구현예에서, 대상체에서 DPN을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 당해 방법은 상기 대상체에게 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포의 투여량을 투여함을 포함하고, 여기서 (i) 상기 태반 줄기 세포는 적어도 3개월 동안 약 1개월 기준으로 근육내 투여되고(예컨대, 태반 줄기 세포는 1일째; 27, 28, 29, 30, 31, 또는 32일째; 및 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 63일째 투여된다), (ii) 각각의 투여량은 15회의 별도의 주사에 걸쳐 투여되며, 여기서 각각의 주사는 태반 세포(또는 이의 약제학적 조성물)를 포함하는 0.3ml의 용액을 함유하고, (iii) 상기 근육내 주사는 DPN을 지닌 대상체의 무릎 아래 및 발목 위에 투여된다.

본원에 기술된 방법에 사용된 태반 세포는 조직 배양 플라스틱에 부착되어 있으며 예컨대, 유동 세포분석법에 의해 검출가능한 것으로서, CD34^-, CD10⁺, CD105⁺ 및 CD200⁺이다. 본원에 제공된 방법에서 사용된 태반 세포의 추가의 특징은 4.1 단락에 기술되어 있다. 태반 줄기 세포를 포함하는 조성물, 예를 들어, 약제학적 조성물은 단락 4.3에 기술되어 있다.

4.1 분리된 태반 세포 및 분리된 태반 세포 집단(populations)

본원에 제공된 DPN의 치료 방법에서 유용한, 본원에서 PDAC로서 때때로 언급된(및 또한 "PDA-002"로서 때때로 지정된) 분리된 태반 세포는 태반 또는 이의 일부로부터 수득가능하며 조직 배양 기질에 부착하고, 다능성 세포 또는 줄기 세포의 특성을 지니지만, 영양세포가 아니다. 특정 구현예에서, 본원에 개시된 방법에서 유용한 분리된 태반 세포는 비-태반 세포 유형으로 분화하는 능력을 지닌다.

본원에 개시된 방법에서 유용한 분리된 태반 세포는 기원이 태아 또는 모체(maternal)일 수 있다(즉, 태아 또는 모체 각각의 유전형을 지닐 수 있다). 바람직하게는, 분리된 태반 세포 및 분리된 태반 세포의 집단은 기원이 태아이다. 본원에 사용된 것으로서, 어구 "기원이 태아" 또는 "기원이 비-모체"는 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단이 탯줄 또는, 태아와 연관된, 즉, 태아 유전형을 갖는 태반 구조로부터 수득됨을 나타낸다. 본원에 사용된 것으로서, 어구 "기원이 모체"는 세포 또는 세포의 집단이 모체와 연관된, 예컨대, 모체 유전형을 지닌 태반 구조로부터 수득됨을 나타낸다. 분리된 태반 세포, 예컨대, PDAC, 또는 분리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단은 기원이 태아 단독 또는 모체인 분리된 태반 세포를 포함할 수 있거나 태아 및 모체 기원 둘 다의 분리된 태반 세포의 혼합된 집단을 포함할 수 있다. 분리된 태반 세포, 및 분리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단은 하기 논의된 형태학, 마커, 및 배양 특징에 의해 확인되고 선택될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포 중 어느 것도 수용체, 예컨대, DPN을 지닌 개인에 대해 자기조직 유래이다. 특정의 다른 구현예에서, 본원에 기술된 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포는 수용체, 예컨대, DPN을 지닌 개인에 대해 이종기원이다.

4.1.1 물리적 및 형태학적 특성

본원에 기술된 분리된 태반 세포(PDAC)는, 1차 배양물 또는 세포 배양물 속에서 배양되는 경우, 조직 배양 기질, 예컨대, 조직 배양 용기 표면(예컨대, 조직 배양 플라스틱)에, 또는 라미닌, 콜라겐(예컨대, 천연 또는 변성된), 젤라틴, 피브로넥틴, 오르니틴, 비트로넥틴, 및 세포외 막 단백질(예컨대, MATRIGEL^®(BD Discovery Labware, 매사츄세츠주 베드포드 소재)과 같은 세포외 매트릭스 또는 리간드로 코팅된 조직 배양 표면에 부착한다. 배양물 속에서 분리된 태반 세포는 중심 세포 체(cell body)로부터 확장되는 다수의 세포질 공정으로, 일반적으로 섬유아세포형, 별모양 외관(stellate appearance)인 것으로 추정된다. 그러나, 세포는 분리된 태반 세포가 섬유아세포보다 더 큰 수의 이러한 공정을 나타내므로, 동일한 조건 하에서 배양된 섬유아세포로부터 형태학적으로 구별될 수 있다. 형태학적으로, 분리된 태반 세포는 또한 배양물 속에서 일반적으로 보다 둥글거나, 자갈 형태인 것으로 추정되는, 조혈 줄기 세포와는 구별가능하다.

특정 구현예에서, 본원에 개시된 방법에서 유용한 분리된 태반 세포는 성장 배지 속에서 배양되는 경우, 배아-유사체로 발전한다. 배아-유사체는 증식하는 분리된 태반 세포의 인접한 층의 상단에서 성장할 수 있는 세포의 비연속적 무리이다. 용어 "배아-유사"는 세포의 무리가 배아 줄기 세포의 배양물로부터 성장하는 세포의 무리인, 배아체(embryoid body)와 닮아서 사용된다. 배아-유사체가 분리된 태반 세포의 증식 배양물 속에서 발전할 수 있는 성장 배지는 예컨대, DMEM-LG(예컨대, Gibco로부터); 2%의 태아 송아지 혈청(예컨대, Hyclone Labs.으로부터); 1x 인슐린-트랜스페린-셀레늄(ITS); 1x 리놀레산-소 혈청 알부민(LA-BSA); 10^-9M 덱사메타손(예컨대, Sigma로부터); 10^-4M 아스코르브산 2-포스페이트(예컨대, Sigma로부터); 상피 성장 인자 10ng/mL(예컨대, R&D Systems으로부터); 및 혈소판-기원 성장 인자(PDGF-BB) 10ng/mL(예컨대, R&D Systems으로부터)를 포함한다.

4.1.2 세포 표면, 분자 및 유전자 마커

본원에 개시된 방법에서 유용한, 분리된 태반 세포, 예컨대, 분리된 다능성 태반 세포 또는 분리된 태반 줄기 세포, 및 이러한 분리된 태반 세포의 집단은 다능성 세포 또는 줄기 세포의 특징을 갖는 조직 배양 플라스틱-부착성 사람 태반 세포이며, 줄기 세포를 포함하는 세포, 또는 세포의 집단을 확인하고/하거나 분리하기 위해 사용될 수 있는 다수의 마커를 발현한다. 특정 구현예에서, PDAC는 예컨대, 시험관내(in vitro) 또는 생체내(in vivo)에서 혈관형성적이다. 본원에 기술된 분리된 태반 세포, 및 태반 세포 집단(즉, 2개 이상의 분리된 태반 세포)는 태반, 또는 이의 어떠한 부위(예컨대, 융모막, 태반의 자엽 등)로부터 직접 수득된 태반 세포 및 태반 세포-함유 세포 집단을 포함한다. 분리된 태반 세포 집단은 또한 배양물내(즉, 2개 이상의) 분리된 태반 세포의 집단, 및 용기, 예컨대 백 속의 집단을 포함한다. 본원에 기술된 분리된 태반 세포는 골수-기원한 중간엽 세포, 지방조직-기원한 중간엽 줄기 세포, 또는 제대 혈액, 태반 혈액, 또는 말초 혈액으로부터 수득된 중간엽 세포가 아니다. 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한, 태반 세포, 예컨대, 태반 다능성 세포 및 태반 세포는 본원 및, 예컨대, 이의 개시내용이 참고에 의해 이의 전문으로 본원에 포함된, 예컨대, 미국 특허 제7,311,904호; 제7,311,905호; 및 제7,468,276호; 및 미국 특허출원 공보 제2007/0275362호에 기술되어 있다.

특정 구현예에서, 분리된 태반 세포는 분리된 태반 줄기 세포이다. 특정의 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 분리된 태반 다능성 세포이다. 일 구현예에서, 분리된 태반 세포, 예컨대, PDAC는, 유동 세포분석법에 의해 검출된 것으로서 CD34^-, CD10⁺ 및 CD105⁺이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34^-, CD10⁺, CD105⁺ 태반 세포는 신경 표현형의 세포, 골형성 표현형의 세포, 및/또는 연골원성 표현형의 세포로 분화하는 잠재능을 갖는다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34^-, CD10⁺, CD105⁺ 태반 세포는 또한 CD200⁺이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34^-, CD10⁺, CD105⁺ 태반 세포는 또한 CD45^- 또는 CD90⁺이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34^-, CD10⁺, CD105⁺ 태반 세포는 또한 유동 세포분석법에 의해 검출된 것으로서 CD45^- 및 CD90⁺이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34^-, CD10⁺, CD105⁺, CD200⁺ 태반 세포는 유동 세포분석법에 의해 검출된 것으로서, 또한 CD90⁺ 또는 CD45^-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34^-, CD10⁺, CD105⁺, CD200⁺ 태반 세포는 유동 세포분석법에 의해 검출된 것으로서 또한 CD90⁺ 및 CD45^-이며, 즉 세포는 CD34^-, CD10⁺, CD45^-, CD90⁺, CD105⁺ 및 CD200⁺이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 CD34^-, CD10⁺, CD45^-, CD90⁺, CD105⁺, CD200⁺ 세포는 또한 CD80^- 및 CD86^-이다.

특정 구현예에서, 상기 태반 세포는 유동 세포분석법에 의해 검출된 것으로서, CD34^-, CD10⁺, CD105⁺ 및 CD200⁺이고, CD38^-, CD45^-, CD80^-, CD86^-, CD133^-, HLA-DR,DP,DQ^-, SSEA3^-, SSEA4^-, CD29⁺, CD44⁺, CD73⁺, CD90⁺, CD105⁺, HLA-A, B, C⁺, PDL1⁺, ABC-p⁺, 및/또는 OCT-4⁺중 하나 이상이다. 다른 구현예에서, 상기 기술된 CD34^-, CD10⁺, CD105⁺ 세포 중 어느 것도 또한 CD29⁺, CD38^-, CD44⁺, CD54⁺, SH3⁺ 또는 SH4⁺ 중 하나 이상이다. 다른 구체적인 구현예에서, 세포는 또한 CD44⁺이다. 상기 분리된 CD34^-, CD10⁺, CD105⁺ 태반 세포 중 어느 것의 다른 구체적인 구현예에서, 세포는 또한 CD117^-, CD133^-, KDR^- (VEGFR2^-), HLA-A, B, C⁺, HLA-DP, DQ, DR^-, 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드(Programmed Death-1 Ligand PDL1)⁺, 또는 이의 어떠한 조합 중 하나 이상이다.

다른 구현예에서, CD34-, CD10+, CD105+ 세포는 또한 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+(CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-cadherinlow, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A, B, C+, HLA-DP, DQ,DR-, HLA-G-, 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드(PDL1)+, 또는 이의 조합 중 하나 이상이다. 다른 구현예에서, CD34-, CD10+, CD105+ 세포는 또한 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-cadherinlow, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A, B, C+, HLA-DP, DQ, DR-, HLA-G-, 및 프로그램화된 사멸-1 리간드(PDL1)+이다.

다른 구체적인 구현예에서, 위에서 기술된 태반 세포 중 어느 것도 또한 유동 세포분석법에 의해 검출된 것으로서, ABC-p+, 또한 RT-PCR에 의해 측정된 것으로서, OCT-4+ (POU5F1+)이며, 여기서 ABC-p는 태반-특이적인 ABC 수송인자 단백질(또한 유방암 내성 단백질(BCRP)로서 및 미톡산트론 내성 단백질(MXR)로서 공지됨)이고, OCT-4는 옥타머-4 단백질(POU5F1)이다. 다른 구체적인 구현예에서, 본원에 기술된 태반 세포 중 어느 것도 유동 세포분석법에 의해 측정된 것으로서, 또한 SSEA3- 또는 SSEA4-이고, 여기서 SSEA3는 단계 특이적인 배아 항원 3이고, SSEA4는 단계 특이적인 배아 항원 4이다. 다른 구체적인 구현예에서, 본원에 기술된 태반 세포 중 어느 것도 또한 SSEA3- 및 SSEA4-이다.

다른 구체적인 구현예에서, 본원에 기술된 태반 세포 중 어느 것도 또한 MHC-I+(예컨대, HLA-A, B, C+), MHC-II-(예컨대, HLA-DP, DQ, DR-) 또는 HLA-G- 중 하나 이상이다. 다른 구체적인 구현예에서, 본원에 기술된 태반 세포 중 어느 것도 또한 MHC-I+(예컨대, HLA-A, B, C+), MHC-II-(예컨대, HLA-DP, DQ, DR-) 및 HLA-G- 중 하나 이상이다.

본원에 개시된 방법 및 조성물에 유용한, 분리된 태반 세포의 집단, 또는 세포의 집단, 예컨대, 분리된 태반 세포를 포함하는, 예컨대, 당해 세포가 풍부한 태반 세포의 집단이 본원에 또한 제공된다. 분리된 태반 세포를 포함하는 바람직한 세포의 집단(여기서 세포의 집단은, 예컨대, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98%의 분리된 CD10+, CD105+ 및 CD34- 태반 세포를 포함한다); 즉, 상기 집단내 세포의 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98%는 분리된 CD10+, CD105+ 및 CD34- 태반 세포이다. 특정 구현예에서, 분리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 또한 유동 세포분석법에 의해 검출된 것으로서, CD90+ 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포 중의 어느 하나는 유동 세포분석법에 의해 검출된 것으로서, 또한 CD90+ 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 위에서 기술된 분리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포 중 어느 것도 또한 CD29+, CD38-, CD44+, CD54+, SH3+ 또는 SH4+ 중 하나 이상이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포, 또는 분리된 CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 또한 CD44+이다. 상기 분리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포를 포함하는 세포의 집단 중 어느 것의 특정 구현예에서, 분리된 태반 세포는 또한 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-cadherinlow, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A, B, C+, HLA-DP, DQ, DR-, HLA-G-, 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드(PDL1)+, 또는 이의 어떠한 조합 중 하나 이상이다. 다른 구체적인 구현예에서, CD34-, CD10+, CD105+ 세포는 또한 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-cadherinlow, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A, B, C+, HLA-DP, DQ, DR-, HLA-G-, 및 프로그램화된 사멸-1 리간드(PDL1)+이다.

특정 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에서 유용한 분리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+, 및 ABC-p+ 중 하나 이상, 또는 모두이고, 여기서 상기 분리된 태반 세포는 태반 조직의 물리적 및/또는 효소적 파괴에 의해 수득된다. 특정 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 ABC-p+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 CD34-이고, 여기서 상기 분리된 태반 세포는 다음 특성들 중 적어도 하나를 갖는다: CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH3+, SH4+, SSEA3-, 및 SSEA4-. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH3+, SH4+, SSEA3-, 및 SSEA4-이다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, SSEA3-, 및 SSEA4-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 CD34-이고, SH2+ 또는 SH3+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, SH2+, 및 SH3+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, SSEA3-, 및 SSEA4-이고, SH2+ 또는 SH3+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 CD34-이고, SH2+ 또는 SH3+이며, CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SSEA3-, 또는 SSEA4- 중 적어도 하나이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SSEA3-, 및 SSEA4-이고, SH2+ 또는 SH3+이다.

다른 구현예에서, 본원에 개시된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 SH2+, SH3+, SH4+ 및 OCT-4+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD44+, CD54+, CD90+, CD34-, CD45-, SSEA3-, 또는 SSEA4-이다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3- 및 SSEA4-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3- 및 SSEA4--, CD10+, CD29+, CD44+, CD54+, CD90+, OCT-4+, CD34- 또는 CD45-이다.

다른 구현예에서, 본원에 개시된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, 및 SH4+이고; 여기서 상기 분리된 태반 세포는 또한 OCT-4+, SSEA3- 또는 SSEA4- 중 하나 이상이다.

특정 구현예에서, 본원에 개시된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 CD200+ 또는 HLA-G-이다이다. 특정 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD200+ 및 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 또한 CD73+ 및 CD105+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 줄기 세포는 CD34-, CD38-, CD45-, CD73+ 및 CD105+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+ 또는 HLA-G- 태반 세포는 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 분리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단 속에서 배아-유사체의 형성을 촉진한다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 줄기 또는 다능성 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 CD200+, HLA-G- 줄기 세포를 포함하는, 예컨대, 당해 세포가 풍부한 세포의 집단이다. 특정 구현예에서, 상기 집단은 태반 세포의 집단이다. 다양한 구현예에서, 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%는 분리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포이다. 바람직하게는, 상기 세포 집단내의 세포의 적어도 약 70%는 분리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포이다. 보다 바람직하게는, 상기 세포의 적어도 약 90%, 95%, 또는 99%는 분리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포이다. 세포 집단의 특정 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD73+ 및 CD105+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38-, CD45-, CD73+ 및 CD105+이다. 다른 구현예에서, 상기 세포 집단은 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양하는 경우 하나 이상의 배아-유사체를 생산한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 줄기 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포는 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 CD73+, CD105+, 및 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD34-, CD38-, CD45-, 및 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD73+, CD105+, 및 CD200+ 태반 세포는 분리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단 내에서, 당해 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우, 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진한다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 분리된 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 분리된 CD73+, CD105+, CD200+ 태반 세포를 포함하는, 예컨대, 당해 세포가 풍부한 세포의 집단이다. 다양한 구현예에서, 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%는 분리된 CD73+, CD105+, CD200+ 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 집단 중 상기 세포의 적어도 약 70%는 분리된 CD73+, CD105+, CD200+ 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포 집단의 세포 중 적어도 약 90%, 95% 또는 99%는 분리된 CD73+, CD105+, CD200+ 태반 세포이다. 상기 집단의 특정 구현예에서, 분리된 태반 세포는 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 또한 CD34-, CD38-, CD45-, 및 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우 하나 이상의 배야-유사체를 생산한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 태반 세포의 집단은 줄기 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 태반 세포의 집단은 이들 특징을 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

특정의 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+, HLA-G- 또는 ABC-p+ 중 하나 이상이다. 특정 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, 및 OCT-4+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD45-, CD54+, SH2+, SH3+, 및 SH4+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD45-, CD54+, SH2+, SH3+, SH4+ 및 OCT-4+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, HLA-G-, SH2+, SH3+, SH4+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 ABC-p+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 SH2+, SH3+, SH4+ 및 OCT-4+이다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, SSEA3-, 및 SSEA4-이다. 특정 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+, CD34-, SSEA3-, 및 SSEA4- 태반 세포는 또한 CD10+, CD29+, CD34-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, 및 SH4+이다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 CD34-이고, SH3+ 또는 SH4+이다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD34-이고 CD10+, CD29+, CD44+, CD54+, CD90+, 또는 OCT-4+이다.

다른 구현예에서, 세포 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반세포는 CD200+ 및 OCT-4+이다. 특정 구현예에서, 분리된 태반 세포는 CD73+ 및 CD105+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 CD34-, CD38-, CD45-, CD73+, CD105+ 및 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 분리된 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우, 당해 태반 세포의 집단에 의한 하나 이상의 배아-유사체의 생산을 촉진한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 줄기 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 이들 특징을 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 CD200+, OCT-4+ 태반 세포를 포함하는, 예컨대, 당해 세포가 풍부한 세포의 집단이다. 다양한 구현예에서, 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%는 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 적어도 약 70%는 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 약 80%, 90%, 95%, 또는 99%는 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포이다. 분리된 집단의 특정 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD73+ 및 CD105+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 또한 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38-, CD45-, CD73+, CD105+ 및 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 세포 집단은 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우 하나 이상의 배아-유사체를 생산한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 분리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 CD73+, CD105+ 및 HLA-G-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD73+, CD105+ 및 HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 또한 OCT-4+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38-, CD45-, OCT-4+ 및 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 상기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우, 상기 태반 세포의 집단 내에서 배아-유사체의 형성을 촉진한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 분리된 CD73+, CD105+ 및 HLA-G- 태반 세포를 포함하는, 예컨대, 이들 세포가 풍부한 세포의 집단이다. 다양한 구현예에서, 상기 세포의 집단 중 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%는 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 집단 중 세포의 적어도 약 70%는 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 집단 중 세포의 적어도 약 90%, 95% 또는 99%는 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포이다. 상기 집단의 특정 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 또한 OCT-4+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38-, CD45-, OCT-4+ 및 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 CD73+ 및 CD105+이고 상기 CD73+, CD105+ 세포를 포함하는 분리된 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우, 상기 분리된 태반 세포의 집단 중 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 또한 OCT-4+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 또한 OCT-4+, CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 이들 특징을 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은, CD73+, CD105+인 분리된 태반 세포를 포함하는, 예컨대, 이들 세포가 풍부한 세포의 집단이고 상기 세포를 포함하는 분리된 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우, 상기 분리된 태반 세포를 포함하는 분리된 태반 세포의 집단내 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진한다. 다양한 구현예에서, 상기 세포의 집단 중 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%는 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 집단 중 세포의 적어도 약 70%는 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 집단 중 세포의 적어도 약 90%, 95% 또는 99%는 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포이다. 상기 집단의 특정 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 또한 OCT-4+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38-, CD45-, OCT-4+ 및 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 상기 분리된 CD73+, CD105+ 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 OCT-4+이고 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양하는 경우 상기 세포를 포함하는 분리된 태반 세포의 집단 속에서 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진한다. 특정 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD73+ 및 CD105+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38-, 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD73+, CD105+, CD200+, CD34-, CD38-, 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 OCT-4+ 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 이들 특징을 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 OCT-4+인 분리된 태반 세포를 포함하는, 예컨대, 당해 세포가 풍부한 세포의 집단이고 분리된 태반 세포를 포함하는 분리된 태반 세포의 집단을 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양하는 경우 상기 분리된 태반 세포의 집단 속에서 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진한다. 다양한 구현예에서, 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%는 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 집단 중 세포의 적어도 약 70%는 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 약 80%, 90%, 95% 또는 99%는 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포이다. 상기 집단의 특정 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD73+ 및 CD105+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 OCT-4+ 태반 세포는 또한 CD73+, CD105+, CD200+, CD34-, CD38-, 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 분리된 HLA-A, B, C+, CD45-, CD133- 및 CD34- 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 분리된 태반 세포를 포함하는 세포 집단이고, 여기서 상기 분리된 세포 집단 중 세포의 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%는 분리된 HLA-A, B, C+, CD45-, CD133- 및 CD34- 태반 세포이다. 특정 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단은 HLA-A, B, C+, CD45-, CD133- 및 CD34- 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 비-모체(maternal) 기원이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포의 집단은 실질적으로 모체 성분을 포함하지 않는데; 예컨대, 태반 세포의 상기 분리된 집단 중 상기 세포의 적어도 약 40%, 45%, 5-0%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 비-모체 기원이다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 분리된 CD10+, CD13+, CD33+, CD45-, CD117- 및 CD133- 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 분리된 태반 세포를 포함하는 세포 집단이고, 여기서 상기 세포 집단중 세포의 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%는 분리된 CD10+, CD13+, CD33+, CD45-, CD117- 및 CD133- 태반 세포이다. 특정 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단은 상기 분리된 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 CD10+, CD13+, CD33+, CD45-, CD117- 및 CD133- 태반 세포는 비-모체 기원, 즉, 태아 유전형이다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포의 상기 분리된 집단 중 세포의 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 비-모체 기원이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단은 이들 특징을 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 분리된 CD10-, CD33-, CD44+, CD45-, 및 CD117- 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에서 유용한 세포 집단은 분리된 태반 세포를 포함하는, 예컨대, 분리된 태반 세포가 풍부한 세포의 집단이고, 여기서 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%는 분리된 CD10-, CD33-, CD44+, CD45-, 및 CD117- 태반 세포이다. 특정 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단은 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단 중 상기 세포의 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 비-모체 기원이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 분리된 CD10-, CD13-, CD33-, CD45-, 및 CD117- 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 분리된 CD10-, CD13-, CD33-, CD45-, 및 CD117- 태반 세포를 포함하는, 예컨대 당해 세포가 풍부한 세포 집단이고, 여기서 상기 집단 중 세포의 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%는 CD10-, CD13-, CD33-, CD45-, 및 CD117- 태반 세포이다. 특정 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단은 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단 중 상기 세포의 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 비-모체 기원이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단은 이들 특징을 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 HLA A, B, C+, CD45-, CD34-, 및 CD133-이고, 또한 CD10+, CD13+, CD38+, CD44+, CD90+, CD105+, CD200+ 및/또는 HLA-G-이고/이거나, CD117에 대해 음성이다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법에 유용한 세포 집단은 분리된 태반 세포를 포함하는 세포 집단이고, 여기서 상기 집단 중 세포의 적어도 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 약 99%는 HLA A,B,C-, CD45-, CD34-, CD133-이고, CD10, CD13, CD38, CD44, CD90, CD105, CD200에 대해 또한 양성이고/이거나 CD117 및/또는 HLA-G에 대해 음성인 분리된 태반 세포이다. 특정 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단은 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 분리 제거된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 비-모체 기원이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 분리 제거된다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 항체 결합에 의해 측정된 것으로서 CD200+ 및 CD10+이고, 항체 결합 및 RT-PCR 둘 다에 의해 측정된 것으로서, CD117-인 분리된 태반 세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 분리된 태반 세포, 예컨대, CD10+, CD29-, CD54+, CD200+, HLA-G-, MHC 부류 I+ 및 β-2-마이크로글로불린+인, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 태반 세포이고, 여기서 적어도 하나의 세포 마커의 발현은 간엽성 줄기 세포(예컨대, 골수 기원한 간엽성 줄기 세포)의 경우보다 적어도 2배 더 크다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단의 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 비-모체 기원이다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 분리된 태반 세포, 예컨대, CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, CD80-, CD86-, CD103-, CD104-, CD105+, CD106/VCAM+, CD144/VE-캐드헤린로우, CD184/CXCR4-, β2-마이크로글로불린로우, MHC-Ilow, MHC-II-, HLA-Glow, 및/또는 PDL1low 중 하나 이상인, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포이다. 특정 구현예에서, 분리된 태반 세포는 적어도 CD29+ 및 CD54+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 적어도 CD44+ 및 CD106+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 적어도 CD29+이다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 분리된 태반 세포를 포함하고, 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62-E-, CD62-L-, CD62-P-, CD80-, CD86-, CD103-, CD104-, CD105+, CD106/VCAM+, CD144/VE-캐드헤린딤, CD184/CXCR4-, β2-마이크로글로불린딤, HLA-Idim, HLA-II-, HLA-Gdim, 및/또는 PDL1dim 중 하나 이상인 분리된 태반 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 집단 중 세포의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62-E-, CD62-L-, CD62-P-, CD80-, CD86-, CD103-, CD104-, CD105+, CD106/VCAM+, CD144/VE-캐드헤린딤, CD184/CXCR4-, β2-마이크로글로불린딤, MHC-Idim, MHC-II-, HLA-Gdim, 및 PDL1dim이다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+, 및 ABC-p+ 중 하나 이상, 또는 모두인 분리된 태반 세포이고, 여기서 ABC-p는 태반-특이적인 ABC 수송인자 단백질(또한 유방암 내성 단백질(BCRP) 및 미톡산트론 내성 단백질(MXR)로서 공지됨)이고, 여기서 상기 분리된 태반 세포는 제대 혈액이 빠지고 잔류 혈액을 제거하기 위해 관류된 포유동물, 예컨대 사람 태반의 관류에 의해 수득된다.

상기 특징 중 어느 것의 다른 구체적인 구현예에서, 세포 마커(예컨대, 분화 또는 면역원성 마커의 집단)의 발현은 유동 세포분석법으로 측정되며; 다른 구체적인 구현예에서, 상기 마커의 발현은 RT-PCR에 의해 측정된다.

유전자 프로파일링(gene profiling)은 분리된 태반 세포, 및 분리된 태반 세포의 집단이 다른 세포, 예컨대, 간엽성 줄기 세포, 예컨대, 골수 기원한 간엽성 줄기 세포로부터 구별될 수 있음을 입증한다. 본원에 기술된 분리된 태반 세포는 예컨대, 하나 이상의 유전자의 발현을 기준으로 간엽성 줄기 세포로부터 구별될 수 있으며, 이의 발현은 골수 기원한 간엽성 줄기 세포와 비교하여, 분리된 태반 세포에서, 또는 특정의 분리된 제대 줄기 세포에서 유의적으로 더 높다. 특히, 본원에 제공된 치료 방법에서 유용한 분리된 태반 세포는 하나 이상의 유전자의 발현을 기준으로 간엽성 줄기 세포로부터 구별가능하며, 이의 발현은 동일한 수의 골수 기원한 간엽성 줄기 세포에서보다 분리된 태반 세포에서 유의적으로 더 높고(즉, 적어도 2배 더 높다), 여기서 상기 세포가 동일한 조건 하에서 성장하는 경우, 하나 이상의 유전자는 ACTG2, ADARB1, AMIGO2, ARTS-1, B4GALT6, BCHE, C11orf9, CD200, COL4A1, COL4A2, CPA4, DMD, DSC3, DSG2, ELOVL2, F2RL1, FLJ10781, GATA6, GPR126, GPRC5B, HLA-G, ICAM1, IER3, IGFBP7, IL1A, IL6, IL18, KRT18, KRT8, LIPG, LRAP, MATN2, MEST, NFE2L3, NUAK1, PCDH7, PDLIM3, PKP2, RTN1, SERPINB9, ST3GAL6, ST6GALNAC5, SLC12A8, TCF21, TGFB2, VTN, ZC3H12A, 또는 상기 중 어느 것의 조합이다. 예컨대, 이의 개시내용이 전문으로 본원에 참고로 포함된, 미국 특허 출원 공보 제2007/0275362호를 참고한다. 특정의 구체적인 구현예에서, 상기 하나 이상의 유전자의 상기 발현은 예컨대, RT-PCR에 의해 또는 예컨대 U133-A 미세배열 (Affymetrix)을 사용하는 미세배열 분석에 의해 측정된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 DMEM-LG(예컨대, Gibco로부터); 2%의 태아 송아지 혈청(예컨대, Hyclone Labs.로부터); 1x 인슐린-트랜스페린-셀레늄(ITS); 1x 리놀레산-소 혈청 알부민(LA-BSA); 10-9 M 덱사메타손(예컨대, Sigma로부터); 10-4M 아스코르브산 2-포스페이트(예컨대, Sigma로부터); 상피 성장 인자 10ng/mL(예컨대, R&D Systems으로부터); 및 혈소판-기원한 성장 인자(PDGF-BB) 10ng/mL(예컨대, R&D Systems으로부터)를 포함하는 배지 속에서 다수의 집단 배가(population doublings)를 위해 배양되는 경우, 예컨대, 약 3 내지 약 35개 집단 배가로부터의 어디든 상기 하나 이상의 유전자를 발현한다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포-특이적이거나 분리된 제대 세포-특이적인 유전자는 CD200이다.

이들 유전자에 대한 특이적인 서열은 GenBank에서 수탁 번호 NM_001615 (ACTG2), BC065545 (ADARB1), (NM_181847 (AMIGO2), AY358590 (ARTS-1), BC074884 (B4GALT6), BC008396 (BCHE), BC020196 (C11orf9), BC031103 (CD200), NM_001845 (COL4A1), NM_001846 (COL4A2), BC052289 (CPA4), BC094758 (DMD), AF293359 (DSC3), NM_001943 (DSG2), AF338241 (ELOVL2), AY336105 (F2RL1), NM_018215 (FLJ10781), AY416799 (GATA6), BC075798 (GPR126), NM_016235 (GPRC5B), AF340038 (ICAM1), BC000844 (IER3), BC066339 (IGFBP7), BC013142 (IL1A), BT019749 (IL6), BC007461 (IL18), (BC072017) KRT18, BC075839 (KRT8), BC060825 (LIPG), BC065240 (LRAP), BC010444 (MATN2), BC011908 (MEST), BC068455 (NFE2L3), NM_014840 (NUAK1), AB006755 (PCDH7), NM_014476 (PDLIM3), BC126199 (PKP-2), BC090862 (RTN1), BC002538 (SERPINB9), BC023312 (ST3GAL6), BC001201 (ST6GALNAC5), BC126160 or BC065328 (SLC12A8), BC025697 (TCF21), BC096235 (TGFB2), BC005046 (VTN), 및 BC005001 (ZC3H12A)로 2008년 3월부터 찾을 수 있다.

특정의 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 당해 세포가 동일한 조건 하에서 성장하는 경우, ACTG2, ADARB1, AMIGO2, ARTS-1, B4GALT6, BCHE, C11orf9, CD200, COL4A1, COL4A2, CPA4, DMD, DSC3, DSG2, ELOVL2, F2RL1, FLJ10781, GATA6, GPR126, GPRC5B, HLA-G, ICAM1, IER3, IGFBP7, IL1A, IL6, IL18, KRT18, KRT8, LIPG, LRAP, MATN2, MEST, NFE2L3, NUAK1, PCDH7, PDLIM3, PKP2, RTN1, SERPINB9, ST3GAL6, ST6GALNAC5, SLC12A8, TCF21, TGFB2, VTN, 및 ZC3H12A 각각을 동일한 수의 골수 기원한 간엽성 줄기 세포보다 검출가능하게 더 높은 수준으로 발현한다.

특정의 구현예에서, 태반 세포는 CD200 및 ARTS1(제1형 종양 괴사 인자의 아미노펩티다제 조절인자); ARTS-1 및 LRAP(백혈구-기원한 아르기닌 아미노펩티다제); IL6(인터루킨-6) 및 TGFB2(형질전환 성장 인자, 베타 2); IL6 및 KRT18(케라틴 18); IER3(이미디에이트 얼리 반응(immediate early response) 3), MEST(중배엽 특이적인 전사 동족체) 및 TGFB2; CD200 및 IER3; CD200 및 IL6; CD200 및 KRT18; CD200 및 LRAP; CD200 및 MEST; CD200 및 NFE2L3(핵 인자(적혈구-기원한 2)-유사 3); 또는 CD200 및 TGFB2를 동일한 수의 골수-기원한 간엽성 줄기 세포(BM-MSC)보다 검출가능하게 더 높은 수준으로 발현하며, 여기서 상기 골수 기원한 간엽성 줄기 세포는 배양물 속에서 상기 분리된 태반 세포가 겪은 계대배양의 수와 동일한 계대배양의 수를 겪는다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 세포는 ARTS-1, CD200, IL6 및 LRAP; ARTS-1, IL6, TGFB2, IER3, KRT18 및 MEST; CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3, 및 TGFB2; ARTS-1, CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3, 및 TGFB2; 또는 IER3, MEST 및 TGFB2를 동일한 수의 골수-기원한 간엽성 줄기 세포 BM-MSC보다 검출가능하게 더 높은 수준으로 발현하며, 여기서 상기 골수-기원한 간엽성 줄기 세포는 배양물 속에서 상기 분리된 태반 세포가 겪은 계대배양 수와 동일한 계대배양 수를 겪는다.

상기-언급한 유전자의 발현은 표준 기술로 평가될 수 있다. 예를 들면, 유전자(들)의 서열을 기준으로 한 프로브를 개별적으로 선택하여 통상의 기술에 의해 작제할 수 있다. 유전자의 발현은 예컨대, 유전자들 중 하나 이상에 대한 프로브를 포함하는 미세배열, 예컨대, Affymetrix GENECHIP® 사람 게놈 U133A 2.0 배열, 또는 Affymetrix GENECHIP® 사람 게놈 U133 Plus 2.0(캘리포니아주 산타 클라라 소재) 상에서 평가될 수 있다. 이들 유전자의 발현은 보정된 서열에 대해 특이적인 프로브가 잘 공지된 표준 기술을 사용하여 용이하게 생성될 수 있으므로 특수한 GenBank 수탁 번호에 대한 서열이 보정되는 경우에도 평가될 수 있다.

이들 유전자의 발현 수준은 분리된 태반 세포의 집단의 실제를 확인하거나, 세포의 집단을 적어도 다수의 분리된 태반 세포를 포함하는 것으로서 확인하는 등에 사용될 수 있다. 이의 실체가 확인된 분리된 태반 세포의 집단은 클론성, 예컨대, 단일 분리된 태반 세포로부터 확장된 분리된 태반 세포, 또는 줄기 세포의 혼합된 집단, 예컨대, 다수의 분리된 태반 세포로부터 확장된 단독으로 분리된 태반 세포, 또는 본원에 기술된 것으로서, 분리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단, 및 적어도 하나의 다른 유형의 세포일 수 있다.

이들 유전자의 발현 수준을 사용하여 분리된 태반 세포의 집단을 선택할 수 있다. 예를 들면, 세포의 집단, 예컨대, 클론적으로 확장된 세포는 상기 나열된 유전자중 하나 이상의 발현이 간엽성 줄기 세포의 동일한 집단에서보다 세포의 집단으로부터의 샘플에서 유의적으로 더 높은 경우 선택될 수 있다. 이러한 선택은 다수의 분리된 태반 세포 집단으로부터, 이의 실체가 알려지지 않는, 다수의 세포집단 등으로부터의 집단 중에서 이루어질 수 있다.

분리된 태반 세포는 예컨대, 간엽성 줄기 세포 대조군에서 상기 하나 이상의 유전자에 있어서의 발현 수준, 예를 들면, 동일한 수의 골수-기원한 간엽성 줄기 세포에서 상기 하나 이상의 유전자의 발현 수준과 비교하여, 하나 이상의 이러한 유전자의 발현 수준을 기준으로 선택될 수 있다. 일 구현예에서, 동일한 수의 간엽성 줄기 세포를 포함하는 샘플에서 상기 하나 이상의 유전자의 발현 수준은 대조군으로서 사용된다. 다른 구현예에서, 특정의 조건 하에서 시험된 분리된 태반 세포의 경우 대조군은 상기 조건 하에서 간엽성 줄기 세포에서 상기 하나 이상의 유전자의 발현 수준을 나타내는 수치이다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법에서 유용한 태반 세포(예컨대, PDAC)는 1 내지 100 ng/mL의 VEGF에 4 내지 21일 동안 노출시킨 후, 면역조직화에 의해 검출된 것으로서, CD34를 발현하지 않는다. 특정 구현예에서, 상기 태반 부착 세포는 조직 배양 플라스틱에 대해 부착성이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포의 집단은 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 내피 성장 인자(EGF), 혈소판 기원한 성장 인자(PDGF) 또는 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF)와 같은 혈관형성 인자의 존재하에서, 예컨대, MATRIGEL^TM과 같은 기질 위에서 배양되는 경우 내피 세포가 스프라우트(sprout) 또는 튜브-유사 구조를 형성하도록 한다.

다른 국면에서, 본원에 제공된 PDAC, 세포의 집단, 예컨대, PDAC의 집단, 또는 상기 분리된 세포의 집단 중 세포의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%가 PDAC인 세포의 집단은 VEGF, HGF, IL-8, MCP-3, FGF2, 폴리스타틴, G-CSF, EGF, ENA-78, GRO, IL-6, MCP-1, PDGF-BB, TIMP-2, uPAR, 또는 갈렉틴-1 중 하나 이상 또는 모두를 예컨대, 세포 또는 세포들이 성장하는 배양 배지내로 분비한다. 다른 구현예에서, PDAC는 정상 조건(약 20% 또는 약 21%의 O2)과 비교하여 저산소 상태(예컨대, 약 5% 미만의 O2) 하에서 증가된 수준의 CD202b, IL-8 및/또는 VEGF를 발현한다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 PDAC들 또는 PDAC를 포함하는 세포의 집단 중 어느 것도 상기 태반 기원한 부착성 세포와 접촉시 내피 세포의 집단에서 스프라우트 또는 튜브-유사 구조의 형성을 유발할 수 있다. 특정 구현예에서, PDAC는 사람 내피 세포와 함께 동시-배양되며, 이는 예컨대 콜라겐 제I형 및 제IV형과 같은 세포외 매트릭스 단백질, 및/또는 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 내피 성장 인자(EGF), 혈소판 기원한 성장 인자(PDGF) 또는 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF)와 같은 혈관형성 인자의 존재하에서 예컨대, 태반 콜라겐 또는 MATRIGEL^TM과 같은 기질 속 또는 위에서 배양되는 경우, 스프라우트 또는 튜브-유사 구조를 형성하거나, 내피 세포 스프라우트의 형성을 지지한다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된, 태반 기원한 부착성 세포를 포함하는 세포의 집단 중 어느 것도 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 간세포 성장 인자(HGF), 혈소판 기원한 성장 인자(PDGF), 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF), 또는 인터루킨-8(IL-8)과 같은 혈관형성 인자를 분비함으로써 콜라겐 제I형 및 제IV형과 같은 세포외 매트릭스 단백질의 존재하에서, 예컨대, 태반 콜라겐 또는 MATRIGEL^TM과 같은 기질 속에서 또는 위에서 배양되는 경우 사람 내피 세포를 유도하여 스프라우트 또는 튜브-유사 구조를 형성시킬 수 있다.

다른 구현예에서, 태반 기원한 부착 세포(PDAC)를 포함하는 상기 세포의 집단 중 어느 것도 혈관형성 인자를 분비한다. 특정의 구현예에서, 상기 세포의 집단은 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 간세포 성장 인자(HGF), 혈소판 기원한 성장 인자(PDGF), 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF), 및/또는 인터루킨-8(IL-8)을 분비한다. 다른 구체적인 구현예에서, PDAC를 포함하는 세포의 집단은 하나 이상의 혈관형성 인자를 분비함으로써 사람 내피 세포가 시험관내 상처 치유 검정에서 이주하도록 유도한다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 기원한 부착 세포를 포함하는 세포의 집단은 사람 내피 세포, 내피 후대세포, 근세포 또는 근아세포의 성숙, 분화 또는 증식을 유도한다.

본원에 기술된 분리된 태반 세포는 1차 배양물 속에서, 또는 예컨대, DMEM-LG(Gibco), 2%의 태아 송아지 혈청(FCS)(Hyclone Laboratories), 1x 인슐린-트랜스페린 셀레늄(ITS), 1x 레놀렌산-소-혈청-알부민(LA-BSA), 10-9 M 덱사메타손(Sigma), 10-4 M의 아스코르브산 2-포스페이트(Sigma), 상피 성장 인자(EGF) 10ng/ml (R&D Systems), 혈소판 기원한 성장 인자(PDGF-BB) 10ng/ml(R&D Systems), 및 100U의 페니실린/1000U의 스트렙토마이신을 포함하는 배지 속에서 증식 동안 상기 특징(예컨대, 세포 표면 마커 및/또는 유전자 발현 프로파일의 조합)을 나타낸다.

본원에 개시된 태반 세포 중 어느 것의 특정 구현예에서, 세포는 사람의 것이다. 본원에 개시된 태반 세포 중 어느 것의 특정 구현예에서, 세포 마커 특징 또는 유전자 발현 특징은 사람 마커 또는 사람 유전자이다.

상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단의 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 또는 집단은 확장되는데, 예를 들면, 적어도, 약, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20회 또는 이하로, 또는 이상으로 계대배양되거나, 적어도 약, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50회 또는 이하의 집단 배가로 증식된다. 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포를 포함하는 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포 또는 집단은 1차 분리물이다. 본원에 개시된, 분리된 태반 세포, 또는 분리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단의 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 태아 기원이다(즉, 태아 유전형을 갖는다).

특정 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 성장 배지, 즉, 증식을 촉진하도록 제형화된 배지 속에서 배양 동안, 예컨대, 성장 배지 속에서 증식 동안 분화되지 않는다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 증식하기 위하여 배양보조세포층(feeder layer)을 필요로 하지 않는다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 단지 배양보조 세포 층의 결여로 인하여, 배양보조 세포 층의 존재 하에서 배양물 속에서 분화하지 않는다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 세포는 분리된 태반 세포이고, 여기서 다수의 상기 분리된 태반 세포는 알데하이드 데하이드로게나제 활성 검정에 의해 평가된 것으로서, 알데하이드 데하이드로게나제(ALDH)에 대해 양성이다 이러한 검정은 당해 분야에 공지되어 있다(참고: 예컨대, Bostian and Betts, Biochem. J., 173, 787, (1978)). 특정 구현예에서, 상기 ALDH 검정은 알데하이드 데하이드로게나제 활성의 마커로서 Aldefluor®(Aldagen, Inc., 오레곤주 아쉬랜드 소재)를 사용한다. 특정 구현예에서, 상기 다수는 상기 세포의 집단 중 세포의 약 3% 내지 약 25%이다. 다른 구현예에서, 분리된 제대 세포, 예컨대, 다능성 분리된 제대 세포의 집단이 본원에 제공되며, 여기서, 다수의 상기 분리된 제대 세포는 알데하이드 데하이드로게나제 활성의 지시인자로서 Aldefluor®를 사용하는 알데하이드 데하이드로게나제 활성 검정에 의해 평가된 것으로서, 알데하이드 데하이드로게나제에 대해 양성이다. 특정 구현예에서, 상기 다수는 상기 세포 집단 중의 세포의 약 3% 내지 약 25%이다. 다른 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 제대 세포의 집단은 대략 동일한 수의 세포를 갖고 동일한 조건 하에서 배양된 골수-기원한 간엽성 줄기 세포의 집단 보다 적어도 3배, 또는 적어도 5배 더 높은 ALDH 활성을 나타낸다.

본원에 기술된 분리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단 중 어느 것의 특정 구현예에서, 상기 세포 집단 중 태반 세포는 모체 유전형을 지닌 세포를 실질적으로 포함하지 않으며; 예컨대, 상기 집단 중 태반 세포의 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 태아 유전형을 갖는다. 본원에 기술된 분리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단 중 어느 것의 특정의 다른 구현예에서, 상기 태반 세포를 포함하는 세포의 집단은 모체 유전형을 갖는 세포를 실질적으로 포함하지 않으며; 예컨대, 상기 집단 중 세포의 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 태아 유전형을 갖는다.

상기 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포의 세포 집단 중 어느 것의 특정 구현예에서, 상기 집단 중 세포, 또는 세포의 적어도 약 95% 또는 약 99%의 핵형은 정상이다. 상기 태반 세포 또는 세포 집단 중 어느 것의 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포, 또는 상기 세포 집단 중 세포는 비-모체 기원이다.

마커의 상기 조합 중 어느 것을 지닌, 분리된 태반 세포, 또는 분리된 태반 세포의 집단은 어느 비로도 조합될 수 있다. 상기 분리된 태반 세포 집단 중 어느 2개 이상은 조합되어 분리된 태반 세포 집단을 형성할 수 있다. 예를 들면, 분리된 태반 세포의 집단은 상기 기술된 마커 조합 중 하나에 의해 정의된 제1의 분리된 태반 세포의 집단, 및 상기 기술된 마커 조합 중 다른 것으로 정의된 제2의 분리된 태반 세포의 집단을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 제1 및 제2의 집단은 약 1:99, 2:98, 3:97, 4:96, 5:95, 10:90, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 70:30, 80:20, 90:10, 95:5, 96:4, 97:3, 98:2, 또는 약 99:1의 비로 조합된다. 유사한 방식으로, 상술한 분리된 태반 세포 또는 분리된 태반 세포 집단 중 어느 3개, 4개, 5개 이상이 조합될 수 있다.

본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포는 예컨대, 효소 분해(참고: 단락 4.2.3) 또는 관류(참고: 4.2.4)를 사용하거나 사용하지 않고, 태반 조직을 파괴시켜 수득할 수 있다. 예를 들면, 분리된 태반 세포의 집단은 제대 혈액이 제거되거나 관류되어 잔류 혈액이 제거된 포유동물 태반을 관류시키는 단계; 상기 태반을 관류 용액으로 관류시키는 단계; 및 상기 관류 용액을 수집하는 단계(여기서 관류 후 상기 관류 용액은 분리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단을 포함한다); 및 상기 세포의 집단으로부터 다수의 상기 분리된 태반 세포를 분리하는 단계를 포함하는 방법에 따라 생산될 수 있다. 특정 구현예에서, 관류 용액은 제정맥(제대 정맥) 및 제동맥(umbilical artery) 둘 다를 통과하여 이것이 태반으로부터 스며나온 후 수집된다. 다른 구체적인 구현예에서, 관류 용액은 제대 정맥을 통과하여 제대 동맥으로부터 수집되거나, 제대 동맥을 통과하여 제대 정맥으로부터 수집된다.

다양한 구현예에서, 태반의 관류로부터 수득된 세포의 집단 속에 함유된, 분리된 태반 세포는 태반 세포의 상기 집단의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 적어도 99.5%이다. 다른 구체적인 구현예에서, 관류에 의해 수집된 분리된 태반 세포는 태아 및 모체 세포를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 관류에 의해 수집된 분리된 태반 세포는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 적어도 99.5%의 태아 세포이다.

다른 구체적인 구현예에서, 관류에 의해 수집된, 본원에 기술된 것으로서의 분리된 태반 세포의 집단을 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 상기 조성물은 분리된 태반 세포를 수집하는데 사용된 관류 용액의 적어도 일부를 포함한다.

본원에 기술된 분리된 태반 세포의 분리된 집단은 태반 조직을 조직-파괴 효소로 분해하여 세포를 포함하는 태반 세포의 집단을 수득하고, 상기 태반 세포의 나머지로부터 다수의 태반 세포를 분리하거나 실질적으로 분리함으로써 생산될 수 있다. 태반의 전체, 또는 이의 어떠한 일부도 분해되어 본원에 기술된 분리된 태반 세포를 수득할 수 있다. 특정의 구현예에서, 예를 들면, 상기 태반 조직은 전체 태반, 양막, 융모막, 양막과 융모막의 조합, 또는 앞서의 것들 중 어느 것의 조합일 수 있다. 다른 구체적인 구현예에서, 조직-파괴 효소는 트립신 또는 콜라게나제이다. 다양한 구현예에서, 태반의 분해로부터 수득된 세포의 집단 속에 함유된 분리된 태반 세포는 상기 태반 세포의 집단의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 적어도 99.5%이다.

상기 기술된 태반 세포의 분리된 집단, 및 분리된 태반 세포의 집단은 일반적으로 약, 적어도 1 x 10³, 3 x 10³, 5 x 10³,1 x 10⁴, 3 x 10⁴, 5 x 10⁴,1 x 10⁵, 3 x 10⁵, 5 x 10⁵,1 x 10⁶, 3 x 10⁶, 5 x 10⁶, 1 x 10⁷, 3 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 3 x 10⁸, 5 x 10⁸, 1 x 10⁹, 5 x 10⁹, 또는 1 x 10¹⁰ 또는 이하의 분리된 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물의 일부로서) 또는 약 1 x 10³ 내지 3 x 10³, 3 x 10³ 내지 5 x 10³, 5 x 10³ 내지 11 x 10⁴, 1 x 10⁴ 내지 3 x 10⁴, 3 x 10⁴내지 5 x 10⁴, 5 x 10⁴ 내지 11 x 10⁵, 1 x 10⁵ 내지 3 x 10⁵, 3 x 10⁵ 내지 5 x 10⁵, 5 x 10⁵ 내지 11 x 10⁶, 1 x 10⁶ 내지 3 x 10⁶, 3 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶, 5 x 10⁶ 내지 11 x 10⁷, 1 x 10⁷내지 3 x 10⁷, 3 x 10⁷ 내지 5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 내지 11 x 10⁸, 1 x 10⁸ 내지 3 x 10⁸, 3 x 10⁸ 내지 5 x 10⁸, 5 x 10⁸ 내지 11 x 10⁹, 1 x 10⁹ 내지 5 x 10⁹, 또는 5 x 10⁹ 내지 11 x 10¹⁰개의 분리된 태반 세포(예컨대, 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물의 일부로서)를 포함할 수 있다. 본원에 기술된 치료 방법에 유용한 분리된 태반 세포의 집단은 예컨대, 트립판 블루 배제에 의해 측정된 것으로서, 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%의 생존가능한 분리된 태반 세포를 포함한다.

4.2 분리된 태반 세포를 수득하는 방법

4.2.1 줄기 세포 수집(Stem Cell Collection) 조성물

또한, 태반 세포, 예컨대, 상기 단락 4.1에 기술된 분리된 태반 세포를 수집하고 분리하는 방법이 본원에 제공된다. 일반적으로, 이러한 세포는 생리학적으로 허용되는 용액, 예컨대, 세포 수집 조성물을 사용하여 포유동물 태반으로부터 수득된다. 예시적인 세포 수집 조성물은 "태반 줄기 세포를 수집하고 기관을 보존하기 위한 개선된 배지"란 명칭의 관련된 미국 특허출원 공보 제2007/0190042호에 상세히 기술되어 있으며, 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.

세포 수집 조성물은 세포, 예컨대, 본원에 기술된 분리된 태반 세포의 수집 및/또는 배양에 적합한 어떠한 생리학적으로 허용되는 용액, 예를 들면, 염수 용액(예컨대, 포스페이트-완충된 염수, 크레브스 용액(Kreb's solution), 개질된 크레브스 용액(modified Kreb's solution), 이글스 용액(Eagle's solution), 0.9% NaCl 등), 배양 배지(예컨대, DMEM, H.DMEM 등) 등을 포함할 수 있다.

세포 수집 조성물은 분리된 태반 세포를 보존하는, 즉, 분리된 태반 세포를 염색으로부터 예방하거나, 분리된 태반 세포의 사멸을 지연시키거나, 사멸하는 세포의 집단에서 분리된 태반 세포의 수를 감소시키는 등의 경향이 있는 하나 이상의 성분을 수집 시간으로부터 배양 시간까지 포함할 수 있다. 이러한 성분은 예컨대, 세포자멸사 억제제(예컨대, 카스파제 억제제 또는 JNK 억제제); 혈관확장제(예컨대, 황산마그네슘, 항고혈압 약물, 심방성 나트륨이뇨펩타이드(ANP), 아드레노코르티코트로핀, 코르티코트로핀-방출 호르몬, 나트륨 니트로프루시드, 하이드랄라진, 아데노신 트리포스페이트, 아데노신, 인도메타신 또는 황산마그네슘, 포스포디에스테라제 억제제 등); 괴사 억제제(예컨대, 2-(1H-인돌-3-일)-3-펜틸아미노-말레이미드, 피롤리딘 디티오카바메이트, 또는 클로나제팜); TNF-α 억제제; 및/또는 산소-운반 퍼플루오로카본(예컨대, 퍼플루오로옥틸 브로마이드, 퍼플루오로데실 브로마이드 등)일 수 있다.

세포 수집 조성물은 하나 이상의 조직-분해 효소, 예컨대, 메탈로프로테아제, 세린 프로테아제, 중성 프로테아제, RNase, 또는 DNase 등을 포함할 수 있다. 이러한 효소는 콜라게나제(예컨대, 콜라게나제 I, II, III 또는 IV, 크롤스트리디움 히스톨리티쿰(Clostridium histolyticum)으로부터의 콜라게나제 등); 디스파제, 테르몰라이신, 엘라스타제, 트립신, LIBERASE, 하이알루로니다제 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

세포 수집 조성물은 살세균적으로 또는 세균발육저지적으로 유효한 양의 항생제를 포함할 수 있다. 특정의 비-제한적인 구현예에서, 항생제는 마크롤라이드(예컨대, 토브라마이신), 세팔로스포린(예컨대, 세팔렉신, 세프라딘, 세푸록심, 세프프로질, 세파클로르, 세픽심 또는 세파드록실), 클로리트로마이신, 에리트로마이신, 페니실린(예컨대, 페니실린 V) 또는 퀴놀론(예컨대, 오플록사신, 시프로플록사신 또는 노르플록사신), 테트라사이클린, 스트렙토마이신 등이다. 특수한 구현예에서, 항생제는 그람(+) 및/또는 그람(-) 세균, 예컨대, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 등에 대해 활성이다. 일 구현예에서, 항생제는 예컨대, 배양 배지 속에서 약 0.005% 내지 약 0.01% (w/v)인 겐타마이신이다.

세포 수집 조성물은 또한 다음 화합물 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 아데노신(약 1 mM 내지 약 50 mM); D-글루코즈(약 20 mM 내지 약 100 mM); 마그네슘 이온(약 1 mM 내지 약 50 mM); 분자량이 20,000 달톤을 초과하는 거대분자를 포함할 수 있으며, 일 구현예에서, 내피세포 통합성 및 세포 생존능을 유지하기에 충분한 양(예컨대, 합성 또는 천연적으로 존재하는 콜로이드, 텍스트란 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 다당류는 약 25 g/l 내지 약 100 g/l, 또는 약 40 g/l 내지 약 60 g/l에서 존재한다); 항산화제(예컨대, 약 25 μM 내지 약 100 μM로 존재하는 부틸화된 하이드록시아니솔, 부틸화된 하이드록시톨루엔, 글루타티온, 비타민 C 또는 비타민 E); 환원제(예컨대, 약 0.1 mM 내지 약 5 mM로 존재하는 N-아세틸시스테인); 세포내로의 칼슘 도입을 방지하는 제제(예컨대, 약 2 μM 내지 약 25 μM로 존재하는 베라파밀); 니트로글리세린(예컨대, 약 0.05 g/L 내지 약 0.2 g/L); 일 구현예에서, 잔류 혈액의 응고를 방지하는데 도움이 되기에 충분한 양으로 존재하는 항응고제(예컨대, 약 1000 단위/l 내지 약 100,000 단위/l의 농도로 존재하는 헤파린 또는 히루딘); 또는 아밀로라이드 함유 화합물(예컨대, 약 1.0 μM 내지 약 5 μM로 존재하는 아밀로라이드, 에틸 이소프로필 아밀로라이드, 헥사메틸렌 아밀로라이드, 디메틸 아밀로라이드 또는 이소부틸 아밀로라이드).

4.2.2 태반의 수집 및 취급

일반적으로, 사람 태반은 출생후 이의 배출 직후에 회수된다. 바람직한 구현예에서, 태반은 고지된 동의 후 및 환자의 완전한 의학적 병력이 입수되고 태반과 연관된 후 환자로부터 회수된다. 바람직하게는, 의학적 병력은 전달 후 지속된다. 이러한 의학적 병력은 태반 또는 이로부터 수거된 분리된 태반 세포의 후속적인 사용을 조정하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 분리된 사람 태반 세포는 의학적 병력의 측면에서 태반과 연관된 영아, 또는 환자, 영아의 형제자매 또는 다른 친척에 대한 개별맞춤 의약에 사용될 수 있다.

분리된 태반 세포의 회수 전에, 제대 혈액 및 태반 혈액이 바람직하게 제거된다. 특정 구현예에서, 전달 후, 태반 속의 제대 혈액이 회수된다. 태반은 통상의 제대 혈액 회수 공정에 적용될 수 있다. 전형적으로 침 또는 캐뉼러(cannula)를 중력의 도움으로, 태반에서 방혈시키기위해 사용한다(참고: 예컨대, Anderson의, 미국 특허 제5,372,581호; Hessel 등의 미국 특허 제5,415,665호). 침 또는 캐뉼러는 일반적으로 제대 정맥 속에 위치하며 태반을 온화하게 마사지하여 태반으로부터 제대 혈액을 방혈시킬 수 있다. 이러한 제대 혈액 회수는 상업적으로, 예컨대, LifeBank USA(뉴저지주 세다 놀스 소재)에 의해 수행될 수 있다. 바람직하게는, 태반을 추가의 조작없이 중력 배출시킴으로써 제대 혈액 회수 동안 조직 파괴를 최소화하도록 한다.

전형적으로, 태반은 분만실 또는 출산실로부터 다른 위치, 예컨대, 실험실로 예컨대, 관류 또는 조직 해리에 의해 제대 혈액의 회수 및 줄기 세포의 수집을 위해 수송된다. 태반은 예를 들면, 태반을, 클램핑된 인접한 탯줄과 함께 멸균 집-록 플라스틱 백(zip-lock plastic bag)에 둠으로써, 바람직하게는, 멸균된, 열적으로 절연된 수송 장치(태반의 온도를 20 내지 28℃로 유지시킴) 속에서 수송하며, 당해 백은 이후 절연 용기 속에 둔다. 다른 구현예에서, 태반은 이의 개시내용이 본원에 참고로 포함된, 계류중인 미국 특허 제7,147,626호에 실질적으로 기술된 바와 같은 제대 혈액 수집 키트 속에 수송된다. 바람직하게는, 태반은 전달 후 4 내지 24시간째에 실험실로 전달된다. 특정의 구현예에서, 인접한 탯줄은 바람직하게는 제대 혈액 수집 전에 태반 디스크(disc) 내로 4 내지 5cm(센티미터) 이내 삽입으로 클램핑된다. 다른 구현예에서, 인접한 탯줄은 제대 혈액 회수 후 그러나 태반의 추가의 가공 전에 클램핑된다.

세포 수집 전에 태반을 멸균 조건 하에서 및 실온 또는 5℃ 내지 25℃의 온도에서 저장할 수 있다. 태반은 어떠한 잔류 제대 혈액도 제거하기 위해 태반을 관류하기 전에 4 내지 24시간, 24시간 이하, 또는 48시간 이상의 기간 동안 저장할 수 있다. 일 구현예에서, 태반은 배출 후 약 0 시간 내지 약 2시간 째에 수거된다. 태반은 바람직하게는 항응고 용액 속에 5℃ 내지 25℃에서 저장된다. 적합한 항응고제 용액은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 예를 들면, 헤파린 또는 와파린 나트륨(warfarin sodium) 용액을 사용할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 항응고제 용액은 헤파린 용액(예컨대, 1:1000 용액 중 1% w/w)이다. 배출된 태반은 바람직하게는 태반 세포가 수집되기 전 36시간 이하 동안 저장된다.

포유동물 태반 또는 이의 일부는, 일단 수집되어 일반적으로 상기와 같이 제조되면, 어떠한 당해 분야에 공지된 방식으로도 처리할 수 있는데, 예컨대, 관류하거나 파괴시키거나, 예컨대, 하나 이상의 조직-파괴 효소로 분해하여 분리된 태반 세포를 수득할 수 있다.

4.2.3 태반 조직의 물리적 파괴(Disruption) 및 효소적 분해(Digestion)

일 구현예에서, 줄기 세포는 기관의 모두 중 일부의 물리적 파괴에 의해 포유동물 태반으로부터 수집된다. 예를 들면, 태반, 또는 이의 일부를 예컨대, 파쇄하거나, 베거나, 갈거나, 다지거나, 썰거나, 불릴 수 있다. 이후에, 조직을 배양하여 분리된 태반 세포의 집단을 수득할 수 있다. 전형적으로, 태반 조직은 예컨대, 배양 배지, 염수 용액, 또는 줄기 세포 수집을 사용하여 파괴한다.

태반은 물리적 파괴 및/또는 효소 분해 및 줄기 세포 회수 전에 성분으로 해부될 수 있다. 분리된 태반 세포는 전체 태반으로부터를 포함하는, 양막, 융모막, 탯줄, 태반의 자엽, 또는 이의 어떠한 조합의 전분 또는 부분으로부터 수득될 수 있다. 바람직하게는, 분리된 태반 세포는 양막 및 융모막을 포함하는 태반 조직으로부터 수득된다. 전형적으로, 분리된 태반 세포는 태반 조직의 작은 블록, 예컨대, 용적이 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 또는 약 1000 입방 밀리미터인 태반 조직의 블록의 파괴에 의해 수득될 수 있다. 물리적 파괴의 어떠한 방법도 사용할 수 있으며, 단, 파괴 방법은 다수, 보다 바람직하게는 대부분, 및 보다 바람직하게는 예컨대, 트리판 블루 배제에 의해 측정된 것으로서, 상기 생존가능한 기관의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%를 남긴다.

분리된 부착성 태반 세포는 일반적으로 배출 후 약 처음 3일 내에, 그러나 바람직하게는, 배출 후 약 8시간 내지 약 18시간 사이이 어떠한 시간에, 태반 또는 이의 일부로부터 수집될 수 있다.

특정 구현예에서, 파괴된 조직은 분리된 태반 세포의 증식에 적합한 조직 배양 배지 속에서 배양된다.

다른 구체적인 구현예에서, 분리된 태반 세포는 태반 조직의 물리적 파괴에 의해 수집되며, 여기서 물리적 파괴는 하나 이상의 조직-분해 효소의 사용에 의해 달성될 수 있는, 효소 분해를 포함한다. 태반, 또는 이의 일부는 또한 하나 이상의 효소를 사용하여 물리적으로 파괴되거나 분해되며, 수득되는 물질은 이후 세포 수집 조성물 내로 침지되거나 혼합된다.

바람직한 세포 수집 조성물은 하나 이상의 조직-파괴 효소(들)를 포함한다. 태반 조직을 파괴하기 위해 사용될 수 있는 효소는 파파인, 데옥시리보뉴클레아제, 세린 프로테아제, 예를 들면, 트립신, 키모트립신, 콜라게나제, 디스파제 또는 엘라스타제를 포한한다. 세린 프로테아제는 혈청 속에서 알파 2 마이크로글로불린에 의해 억제될 수 있으므로 분해에 사용된 배지는 일반적으로 혈청을 포함하지 않는다. EDTA 및 DNase는 효소 분해 과정에서 일반적으로 사용되어 세포 회수 효율을 증가시킨다. 소화물은 점성 소화액 속에서 세포를 트랩핑(trapping)하는 것을 방지하기 위하여 바람직하게 희석된다.

조직 소화 효소 중 어떠한 조합도 사용될 수 있다. 트립신을 사용하는 소화의 대표적인 농도는 0.1% 내지 약 2%의 트립신, 예컨대, 약 0.25%의 트립신이다. 프로테아제는 동일한 소화 반응에서 2개 이상의 프로테아제의 조합으로 사용될 수 있거나 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포 및 태반 다능성 세포를 유리시키기 위하여 후속적으로 사용할 수 있다. 예를 들면, 일 구현예에서, 태반, 또는 이의 일부는 약 1 내지 약 2 mg/ml에서 적절한 양의 콜라게나제 I으로 예컨대, 30분 동안 분해된 후, 약 0.25%의 농도에서 트립신으로 예컨대, 37℃에서 10분 동안 분해된다. 세린 프로테아제는 바람직하게는 다른 효소의 사용 후 연속하여 사용된다.

다른 구현예에서, 조직은 또한 킬레이터(chelator), 예컨대, 에틸렌 글리콜 비스(2-아미노에틸 에테르)-N,N,N'N'-테트라아세트산(EGTA) 또는 에틸렌디아미노테트라아세트산(EDTA)의 첨가에 의해 줄기 세포를 포함하는 줄기 세포 수집 조성물, 또는 조직이 파괴되고/되거나 줄기 세포 수집 조성물을 사용한 줄기 세포의 분리 전에 분해된 용액에 첨가함으로써 추가로 파괴될 수 있다.

분해 후, 소화물은 예를 들면, 배양 배지로 3회 세척하고, 세척된 세포는 배양 플라스크 내로 씨딩(seeding)한다. 이후에, 세포를 차등적 부착으로 분리하고, 예컨대, 생존능, 세포 표면 마커, 분화 등에 대해 특징화한다.

전체 태반, 또는 태반의 일부가 태아 및 모체 세포 둘 다를 포함하는 경우(예를 들면, 태반의 일부가 융모막 또는 태반엽을 포함하는 경우), 분리된 태반 세포는 태아 및 모체 공급원 둘 다로부터 기원한 태반 세포의 혼합물을 포함할 수 있음이 인지될 것이다. 모체 세포(예를 들면, 양막)을 포함하지 않거나 무시할 정도의 수로 포함하는 태반의 일부의 경우, 이로부터 분리된 태반 세포는 거의 전적으로 태아 태반 세포(즉, 태아의 유전형을 지닌 태반 세포)를 포함할 것이다.

태반 세포, 예컨대, 상기 단락 4.1에 기술된 태반 세포는 차등적인 트립신화(참고: 하기 단락 4.2.5)에 이어 신선한 증식 배지 속에서 하나 이상의 새로운 배양 용기 속에서의 배양에 이어, 임의로 제2의 차등적인 트립신화 단계에 의해 파괴된 태반 조직으로부터 분리될 수 있다.

4.2.4 태반 관류(Perfusion)

태반 세포, 예컨대, 상기 단락 4.1에 기술된 태반 세포는 또한 포유동물 태반의 관류에 의해 수득될 수 있다. 포유동물 태반을 관류하여 태반 세포를 수득하는 방법은 예컨대, Hariri의, 미국 특허 제7,045,148호 및 제7,255,729호, 미국 특허 공개 공보 제2007/0275362호 및 제2007/0190042호에 개시되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 이들의 전문이 참고로 본원에 포함된다.

태반 세포는 관류에 의해, 예컨대, 태반 혈관화를 통해, 예컨대, 관류 용액으로서 세포 수집 조성물을 사용하여 수득할 수 있다. 일 구현예에서, 포유동물 태반은 제대 동맥 및 제대 정맥 중의 하나 또는 둘 다를 통해 관류 용액을 통과시켜 관류한다. 태반을 통한 관류 용액의 유동은 예컨대, 태반내로의 중력 유동을 사용하여 달성할 수 있다. 바람직하게는, 관류 용액을 펌프, 예컨대, 연동 펌프를 사용하여 태반을 통과하도록 한다. 제대 정맥은, 멸균 튜빙(tubing)과 같은 멸균 연결 장치에 연결된, 캐뉼러(cannula), 예컨대, TEFLON® 또는 플라스틱 캐뉼러를 사용하여 캐뉼러를 삽입할 수 있다. 멸균 연결 장치는 관류 매니폴드(perfusion manifold)에 연결된다.

관류를 위한 준비 시, 태반은 바람직하게는 제대 동맥 및 제대 정맥이 태반의 최고점에 위치하도록 하는 방식으로 배향(즉, 현탁)된다. 태반은 관류 유체를 태반 혈관화 및 주변 조직에 통과시킴으로써 관류시킬 수 있다. 태반은 또한 관류 유체를 제대 동맥내로 통과시키고 제대 동맥으로부터 수집하거나, 관류 유체를 제대 동맥내로 통과시키고 제대 정맥으로부터 수집함으로써 관류시킬 수 있다.

일 구현예에서, 예컨대, 제대 동맥 및 제대 정맥은 예컨대, 굴곡성 연결기를 통해 관류 용액의 저장기에 연결된 피펫에 동시에 연결된다. 관류 용액은 제대 정맥 및 동맥내로 통과한다. 관류 용액은 혈관의 벽으로부터 스며나오고/나오거나 이를 통해 태반의 주변 조직내로 통과하며, 임신 동안 모태의 자궁에 부착된 태반의 표면으로부터 적합한 개방 혈관내에 수집된다. 관류 용액은 또한 제대 개방을 통해 도입되어 모태 자궁 벽과 마주접한 태반의 벽내 개구부 밖으로 흐르거나 스며들도록 한다. "팬(pan)" 방법으로 언급될 수 있는, 당해 방법으로 수집된 태반 세포는 전형적으로 태아 및 모체 세포의 혼합물이다.

다른 구현에에서, 관류 용액은 제대 정맥을 통과하여 제대 동맥으로부터 수집되거나, 제대 동맥을 통과하여 제대 정맥으로부터 수집된다. "패쇄된 회로(closed circuit)"로 언급될 수 있는, 당해 방법으로 수집된 태반 세포는 전형적으로 거의 전적으로 태아 세포이다.

팬 방법, 즉 당해 방법에 의해 관류물이 태반의 모체 측으로부터 스며나온 후 수집되는 방법을 사용한 관류는 태아 및 모체 세포의 혼합물을 생성한다. 그 결과, 당해 방법으로 수집된 세포는 태아 및 모체 기원 둘 다의 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포의 혼합된 집단을 포함할 수 있다. 대조적으로, 주입액이 하나 또는 2개의 태반 혈관을 통과하여 나머지 혈관(들)을 통해 단독으로 수집되는, 폐쇄된 회로 방법에서 태반 혈관화를 단독으로 통하는 관류는 거의 전적으로 태아 기원의 태반 세포의 집단의 수집을 야기한다.

일 구현예에서, 폐쇄된 회로 관류 방법은 다음과 같이 수행할 수 있다. 산후 태반을 출생 후 약 48시간 내에 수집한다. 탯줄을 클램핑(clamping)하고 클램프 위에서 절단한다. 탯줄을 버리거나, 가공하여 예컨대, 제대 줄기 세포를 회수하고/하거나 생체적합물질의 생산을 위해 탯줄 막을 가공할 수 있다. 양막은 관류 동안 보유할 수 있거나, 융모막으로부터 예컨대, 손가락으로 둔적 박리(blunt dissection)를 사용하여 분리할 수 있다. 양막이 관류 전에 융모막으로부터 분리되는 경우, 이는 예컨대, 페기하거나, 가공하여, 예컨대, 효소 분해에 의해 줄기 세포를 수득하거나, 양막 생체물질, 예컨대, 이의 개시내용이 이의 전문으로 본원에 참고로 포함된, 미국 특허 공개 공보 제2004/0048796호에 기술된 생체물질을 생산할 수 있다. 모든 가시적인 혈액 응괴 및 나머지 혈액이 있는 태반을 예컨대, 멸균 거즈를 사용하여 세정한 후, 제대 혈관을 예컨대, 탯줄 막을 부분적으로 절단하여 탯줄의 횡단면을 노출시킴으로써 노출시킨다. 혈관을 확인하여, 예컨대, 닫힌 앨리게이터 클램프(alligator clamp)를 각각의 혈관의 절단 끝을 통해 전진시킴으로써 개방시킨다. 장치, 예컨대, 관류 장치 또는 연동 펌프에 연결된 플라스틱 튜빙을 이후에 태반 동맥 각각으로 삽입한다. 펌프는 이러한 목적에 적합한 어떠한 펌프, 예컨대, 연동 펌프일 수 있다. 멸균 수집 저장기, 예컨대 250 mL의 수집 백과 같은 혈액 백에 연결된 플라스틱 튜빙을 이후에 태반 정맥내로 삽입한다. 또한, 펌프에 연결된 튜빙을 태반 정맥내로 삽입하고 수집 저장기(들)에 연결된 튜브를 태반 동맥 하나 또는 둘 다에 삽입한다. 이후에, 태반을 특정한 용적의 관류 용액, 예컨대 약 750ml의 관류 용액으로 관류한다. 관류액 속의 세포를 이후에, 예컨대, 원심분리에 의해 수집한다. 특정 구현예에서, 태반은 관류 용액, 예컨대, 100 내지 300 mL의 관류 용액으로 관류하여 관류 전에 잔류 혈액을 제거함으로써 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포 및/또는 태반 다능성 세포를 수집한다. 다른 구현예에서, 태반은 태반 세포를 수집하기 위한 관류 전에 잔류 혈액을 제거하기 위해 관류 용액으로 관류시키지 않는다.

일 구현예에서, 인접한 탯줄은 관류 동안 클램핑되며, 보다 바람직하게는 태반 디스크내로 탯줄 삽입의 4 내지 5 cm(센티미터) 내에서 클램핑된다.

방혈 공정 동안 포유동물 태반으로부터의 관류 유체의 제1 수집은 일반적으로 탯줄 혈액 및/또는 태반 혈액의 잔류 적혈 세포로 착색된다. 관류 유체는 관류가 진행되면서 점점 더 무색으로 되며 잔류 탯줄 혈액 세포는 태반으로부터 세척되어 나온다. 일반적으로 30 내지 100ml(밀리리터)의 관류 유체가 태반을 초기에 방혈시키는데 적절하지만, 다소의 관류 유체를 관찰한 결과에 따라 사용할 수 있다.

태반 세포를 분리하는데 사용된 관류 액체의 용적은 수집될 세포의 수, 태반의 크기, 단일 태반으로부터 제조될 수집물의 수 등에 따라 변할 수 있다. 다양한 구현예에서, 관류 유체의 용적은 50 mL 내지 5000 mL, 50 mL 내지 4000 mL, 50 mL 내지 3000 mL, 100 mL 내지 2000 mL, 250 mL 내지 2000 mL, 500 mL 내지 2000 mL, 또는 750 mL 내지 2000 mL일 수 있다. 전형적으로, 태반은 방혈 후 700 내지 800ml의 관류 액체로 관류된다.

태반은 수 시간 또는 수일의 과정에 걸쳐 다수회 관류될 수 있다. 태반이 다수회 관류되어야 하는 경우, 이는 용기 또는 다른 적합한 그릇(vessel) 속에 무균 조건 하에서 유지되거나 배양되고, 세포 수집 조성물, 또는 표준 관류 용액(예컨대, 포스페이트 완충된 염수("PBS")와 같은 정상 염수 용액)으로 항응고제(예컨대, 헤파린, 와파린 나트륨, 코우마린, 비스하이드록시코우마린)의 존재 또는 부재하에, 및/또는 항미생물제(예컨대, β-머캅토에탄올(0.1 mM); 항생제, 예컨대, 스트렙토마이신(예컨대, 40 내지 100μg/ml에서), 페니실린(예컨대, 40U/ml에서), 암포테리신 B(예컨대, 0.5 ㎍/ml에서)의 존재 또는 부재하에 관류될 수 있다. 일 구현예에서, 분리된 태반은 관류물의 수집없이 일정 기간 동안 유지되거나 배양됨으로써, 태반이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24일 동안, 또는 관류 및 관류물의 수집 전 2 또는 3일 이상 동안 유지되거나 배양되도록 한다. 관류된 태반은 1회 이상의 추가의 시간(들), 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 시간 이상 동안 유지될 수 있거나 예컨대, 700-800 mL의 관류유체로 두번째 관류된다. 태반은 1, 2, 3, 4, 5회 이상, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6시간마다 1회 관류될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 태반의 관류 및 관류 용액의 수집, 예컨대, 세포 수집 조성물은 회수된 핵화된 세포의 수가 100개의 세포/ml 미만에 속할 때까지 반복된다. 상이한 시점에서 관류물은 개별적으로 추가로 진행시켜 세포, 예컨대 줄기 세포의시간-의존성 집단을 회수할 수 있다. 상이한 시점으로부터의 관류물을 또한 혼주(pooling)시킬 수 있다. 바람직한 구현예에서, 축출 후 약 8시간 내지 약 18시간 사이의 시간 또는 시간들에서 수집된다.

관류는 바람직하게는 상기 용액으로 관류되지 않거나, 태반 세포를 수득하기 위해(예를 들면, 조직 파괴, 예를 들면, 효소 분해에 의해) 달리 처리되지 않은 포유동물 태반으로부터 수득가능한 수보다 유의적으로 더 많은 태반 세포의 수집을 야기한다. 이와 관련하여, "유의적으로 더"는 적어도 10% 이상을 의미한다. 관류는 예컨대, 태반, 또는 이의 일부가 배양된 배양 배지로부터 분리가능한 태반 세포의 수보다 유의적으로 더 태반 세포를 생성한다.

태반 세포는 하나 이상의 프로테아제 또는 다른 조직-파괴 효소를 포함하는 용액을 사용한 관류에 의해 태반으로부터 분리될 수 있다. 구체적인 구현에에서, 태반 또는 이의 일부(예컨대, 양막이 있는 막, 양막 및 융모막, 태반 소엽 또는 태반엽, 탯줄, 또는 앞서의 것들 중 어느 것의 조합)은 25 내지 37℃가 되도록 하고, 200ml의 배양 배지 속에서 30분 동안 하나 이상의 조직-파괴 효소와 함께 항온처리한다. 관류물로부터의 세포를 수집하고, 4℃가 되도록 하고, 5 mM EDTA, 2 mM 디티오트레이톨 및 2 mM 베타-머캅토에탄올을 포함하는 냉 억제제 혼합물로 세척한다. 태반 세포는 냉(예컨대, 4℃) 줄기 세포 수집 조성물을 사용하여 수 분 후에 세척한다.

4.2.5 태반 세포의 분리(Isolation), 분류(Sorting), 및 특성화

분리된 태반 세포, 예컨대, 상기 단락 4.1에 기술된 세포를, 관류 또는 물리적 파괴, 예컨대, 효소 분해에 의해 수득된 것에 상관없이, 초기에 피콜 구배 원심분리(Ficoll gradient centrifugation)에 의해 다른 세포로부터 정제(즉, 분리)할 수 있다. 이러한 원심분리는 원심분리 속도 등에 대해 어떠한 표준 프로토콜도 따를 수 있다. 일 구현예에서, 예를 들면, 태반으로부터 수집된 세포는 예컨대, 오염되는 세포 부스러기 및 혈소판으로부터 세포를 분리하는, 실온에서 5000 xg에서 15분 동안 원심분리에 의해 관류물로부터 수거한다. 다른 구현예에서, 태반 관류물을 약 200 ml로 농축시키고, 피콜(Ficoll) 위에 온화하게 적층하고, 22℃에서 약 1100 xg으로 20분 동안 원심분리하고, 세포의 저-밀도 계면 층을 추가의 가공을 위해 수집한다.

세포 펠렛을 신선한 줄기 세포 수집 조성물, 또는 세포 유지, 예컨대, 줄기 세포 유지에 적합한 배지, 예를 들면, 2U/ml의 헤파린 및 2mM EDTA(GibcoBRL, NY)를 함유하는 IMDM 혈청-유리된 배지 속에서 재현탁시킨다. 전체 단핵 세포 분획을 예를 들면, Lymphoprep(Nycomed Pharma, 노르웨이 오슬로 소재)을 사용하여 제조업자의 추천된 과정에 따라 분리할 수 있다.

관류 또는 분해에 의해 수득된 태반 세포는 예를 들면, 추가로, 또는 초기에 예컨대, 0.2% EDTA가 들어있는 0.05% 트립신의 용액(Sigma, 미주리주 세인트 루이스 소재)을 사용한 차등적 트립신처리에 의해 분리할 수 있다. 차등적 트립신처리는 조직 배양 플라스틱-부착성인, 분리된 태반 세포가 전형적으로 약 5분 내에 플라스틱 표면으로부터 탈착되지만 다른 부착성 집단은 전형적으로 20 내지 30분 이상의 항온처리를 필요로 하기 때문에 가능하다. 탈착된 태반 세포를 수거한 후 트립신 처리하고 예컨대, 트립신 중화 용액(TNS, Cambrex)을 사용하여 트립신 중화처리한다. 부착성 세포의 분리의 일 구현예에서, 예를 들면, 약 5-10 x 10⁶개 세포의 분취량을 수개의 T-75 플라스크, 바람직하게는 피브로넥틴-코팅된 T75 플라스트 각각에 둔다. 이러한 구현예에서, 세포는 시판되는 간엽성 줄기 세포 성장 배지(MSCGM)(Cambrex)로 배양하여, 조직 배양 항온처리기(37℃, 5% CO2) 속에 둘 수 있다. 10 내지 15일 후, 비-부착성 세포를 PBS로 세척하여 플라스크로부터 제거한다. 이후에, PBS를 MSCGM으로 교체한다. 플라스크는 바람직하게는 매일 다양한 부착성 세포 유형의 존재 및 특히, 섬유아세포타입 세포의 집단의 확인 및 확장에 대해 시험한다.

포유동물 태반으로부터 수집된 세포의 수 및 유형은 예를 들면, 유동 세포분석법, 세포 분류, 면역세포화학(예컨대, 조직 특이적이거나 세포-마커 특이적인 항체를 사용한 염색) 형광성 활성화된 세포 분류(FACS), 자기 활성화된 세포 분류(MACS)와 같은 표준 세포 검출 기술을 사용하여 형태학 및 세포 표면 마커에 있어서의 변화를 측정하고/하거나, 광 또는 공초점 현미경을 사용하여 세포의 형태학을 시험하고/하거나 PCR 및 유전자 발현 프로파일과 같이, 당해 분야에 잘 공지된 기술을 사용하여 유전자 발현에 있어서의 변화를 측정함으로써, 모니터링할 수 있다. 이들 기술은 또한 하나 이상의 특수한 마커에 대해 양성인 세포를 확인하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, CD34에 대한 항체를 사용하여, 상기 기술을 사용하여, 세포가 검출가능한 양의 CD34를 포함하는지를 측정할 수 있으며; 그럴 경우, 당해 세포는 CD34+이다. 유사하게, 세포가 RT-PCR에 의해 검출될 수 있기에 충분한 OCT-4 RNA, 또는 성체 세포보다 유의적으로 더 OCT-4 RNA를 생산하는 경우, 당해 세포는 OCT-4+이다. 세포 표면 마커(예컨대, CD34와 같은 CD 마커)에 대한 항체 및 OCT-4와 같은 줄기 세포-특이적인 유전자의 서열은 당해 분야에 잘 공지되어 있다.

태반 세포, 특히 피콜 분리, 차등적 부착, 또는 이들 둘 다의 조합에 의해 분리된 세포는 형광성 활성화된 세포 분류기(FACS)를 사용하여 분류할 수 있다. 형광성 활성화된 세포 분류(FACS)는 입자의 형광성 특성을 기준으로 하여, 세포를 포함하는 입자를 분리하는 잘 공지된 방법이다(Kamarch, 1987, Methods Enzymol, 151:150-165). 개개 입자에서 형광성 잔사의 레이저 여기(excitation)는 혼합물로부터 양성 및 음성 입자의 전자기적 분리를 허용하는 작은 전하를 생성한다. 일 구현예에서, 세포 표면 마커-특이적인 항체 또는 리간드는 병백한 형광성 표지로 표지된다. 세포는 세포 분류기를 통해 가공되어, 사용된 항체에 결합하는 이들의 능력을 기준으로 세포가 분리되도록 한다. FACS 분류된 입자는 96-웰 또는 384-웰 플레이트내로 직접 침착되어 분리 및 클로닝을 촉진할 수 있다.

하나의 분류 도식에서, 태반으로부터의 세포, 예컨대, PDAC는 마커 CD34, CD38, CD44, CD45, CD73, CD105, OCT-4 및/또는 HLA-G 중 하나 이상의 발현을 기준으로 하여 분류된다. 이는 배양물 속에서 이들의 부착 특성을 기준으로 하여 이러한 세포를 선택하는 과정과 연관하여 달성될 수 있다. 예를 들면, 조직 배양 플라스틱 부착성 선택은 마커 발현을 기준으로 한 분류 전 또는 후에 달성될 수 있다. 일 구현에에서, 예를 들면, 세포는 CD34의 이들 발현을 기준으로 우선 분류되며; CD34- 세포는 유지되고, 또한 CD200+ 및 HLA-G-인 CD34-세포는 모든 다른 CD34- 세포로부터 분리된다. 다른 구현예에서, 태반으로부터의 세포는 마커 CD200 및/또는 HLA-G의 이들 반현을 기준으로 분류되는데; 예를 들면, CD200을 나타내고 HLA-G를 결여한 세포가 추가의 사용을 위해 분리된다. 예컨대, CD200을 발현하고/하거나 예컨대, HLA-G를 결여한 세포는 특정 구현예에서, CD73 및/또는 CD105, 또는 항체 SH2, SH3 또는 SH4에 의해 인식된 에피토프의 발현, 또는 CD34, CD38 또는 CD45의 발현의 결여를 기준으로 추가로 분류될 수 있다. 예를 들면, 추가의 구현예에서, 태반 세포는 CD200, HLA-G, CD73, CD105, CD34, CD38 및 CD45의 발현, 또는 이의 결여에 의해 분류되고, CD200+, HLA-G-, CD73+, CD105+, CD34-, CD38- 및 CD45-인 태반 세포는 추가의 사용을 위해 다른 태반 세포로부터 분리된다.

분류된 태반 세포의 상기 구현예 중 어느 것의 특정 구현예에서, 분류 후 남아있는 세포 집단 속의 세포의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 상기 분리된 태반 세포이다. 태반 세포는 상기 단락 4.1에 기술된 마커들 중 어느 것의 하나 이상에 의해 분류될 수 있다.

특정 구현예에서, 예를 들면, (1) 조직 배양 플라스틱, 및 (2) CD10+, CD34- 및 CD105+에 대해 부착성인 태반 세포는 다른 태반 세포로부터 분류(즉, 분리)된다. 다른 구체적인 구현예에서, (1) 조직 배양 플라스틱, 및 (2) CD10+, CD34-, CD105+ 및 CD200+에 대해 부착성인 태반 세포는 다른 태반 세포로부터 분류(즉, 분리)된다. 다른 구체적인 구현예에서, (1)조직 배양 플라스틱, 및 (2) CD10+, CD34-, CD45-, CD90+, CD105+ 및 CD200+에 대해 접착성인 태반 세포는 다른 태반 세포로부터 분류(즉, 분리)된다.

태반 세포의 뉴클레오타이드 서열을 기준으로 한 검출과 관련하여, 본원에 나열된 마커에 대한 서열은 GenBank 또는 EMBL과 같은 공공 이용가능한 데이타베이스에서 용이하게 이용가능하다.

태반 세포의 항체-매개된 검출 및 분류와 관련하여, 예컨대, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포, 특수한 마커에 대해 특이적인 어느 항체도 세포의 검출 및 분류(예컨대, 형광성-활성화된 세포 분류)에 적합한 어떠한 형광단 또는 다른 표지와 함께 사용할 수 있다. 특이적인 마커에 대한 항체/형광단 조합은 HLA-G(노쓰 캐롤라이나주 랄라이(Raleigh) 소재의 Serotec으로부터 이용가능), CD10(캘리포니아주 산 조세 소재의 BD Immunocytometry Systems로부터 이용가능), CD44(캘리포니아주 산 조세 소재의 BD Biosciences Pharmingen으로부터 이용가능), 및 CD105(미네소타주 미네아폴리스 소재의 R&D Systems Inc.로부터 이용가능); CD44, CD200, CD117, 및 CD13에 대해 피코에리트린(PE) 접합된 모노클로날 항체(BD Biosciences Pharmingen); CD33 및 CD10에 대해 피코에리트린-Cy7(PE Cy7) 접합된 모노클로날 항체(BD Biosciences Pharmingen); CD38에 대해 알로피코시아닌(APC) 접합된 스트렙타비딘 및 모노클로날 항체 CD38(BD Biosciences Pharmingen); 및 바이오티닐화된 CD90(BD Biosciences Pharmingen)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 사용될 수 있는 다른 항체는 CD133-APC(Miltenyi), KDR-바이오틴(CD309, Abcam), 사이토케라틴 K-Fitc (Sigma 또는 Dako), HLA ABC-Fitc(BD), HLA DR, DQ, DP-PE(BD), β-2-마이크로글로불린-PE(BD), CD80-PE(BD) 및 CD86-APC(BD)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 사용될 수 있는 다른 항체/표지 조합은 CD45-PerCP(페리딘 클로로필 단백질); CD44-PE; CD19-PE; CD10-F(플루오레세인); HLA-G-F 및 7-아미노-악티노마이신-D(7-AAD); HLA-ABC-F 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 당해 목록은 완전하지 않으며, 다른 공급업자로부터의 항체 또한 상업적으로 이용가능하다.

본원에 제공된 분리된 태반 세포는 CD117 또는 CD133에 대해, 예를 들면, 피코에리트린-Cy5(PE Cy5) 접합된 스트렙타비딘 및 CD117 또는 CD133에 대한 바이오틴 접합된 모노클로날 항체에 대해 검정될 수 있으나, 당해 시스템을 사용하여, 세포는 상대적으로 높은 배경으로 인하여, CD117 또는 CD133 각각에 대해 양성인 것으로 여겨질 수 있다.

분리된 태반 세포는 단일 마커에 대한 항체로 표지되고 검출되고/되거나 분류될 수 있다. 태반 세포는 또한 상이한 마커에 대한 다수의 항체로 동시 표지될 수 있다.

다른 구현예에서, 자기 비드를 사용하여 세포를 분리할 수 있다. 세포는 자기 비드(0.5-100 ㎛의 직경)에 결합하는 이들의 능력을 기준으로 입자를 분리하는 방법인, 자기 활성화된 세포 분류(MACS) 기술을 사용하여 분류할 수 있다. 특수한 세포 표면 분자 또는 합텐을 특이적인 인식하는 항체의 공유결합 첨가를 포함하는, 다양한 유용한 변형을 자기 미세구에서 수행할 수 있다. 이후에, 비드를 세포와 혼합하여 결합하도록 한다. 이후에, 세포를 자기장에 통과시켜 특이적인 세포 표면 마커를 지닌 세포를 분리한다. 일 구현예에서, 이들 세포를 이후에 분리하고 추가의 세포 표면 마커에 대한 항체에 커플링된 자기 비드와 재-혼합시킬 수 있다. 세포를 다시 자기장을 통과시켜, 항체 둘 다에 결합한 세포를 분리한다. 이러한 세포는 이후에 클론 분리를 위한 마이크로역가 디쉬(microtiter dish)와 같은 별도의 디쉬 내로 희석시킬 수 있다.

분리된 태반 세포를 또한 특징화하고/하거나 세포 형태학 및 성장 특징을 기준으로 분류할 수 있다. 예를 들면, 분리된 태반 세포를 배양물 속에서 섬유아세포타입 외관을 갖는 것으로서 특징화하고/하거나 선택할 수 있다. 분리된 태반 세포는 또한 배아-유사체를 형성하는 이들의 능력을 갖는 것으로 특징화하고/하거나 이를 기준으로 선택할 수 있다. 일 구현에에서, 예를 들면, 형태가 섬유아세포타입인 태반 세포는 CD73 및 CD105를 발현하며, 다른 태반 세포로부터 분리된 배양물 속에서 하나 이상의 배아-유사체를 생산한다. 다른 구현예에서, 배양물 속에서 하나 이상의 배아-유사체를 생산하는 OCT-4+ 태반 세포는 다른 태반 세포로부터 분리된다.

다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 콜로니 형성 단위 검정에 의해 확인되고 특징화될 수 있다. 콜로니 형성 단위 검정은 MesenCult^TM 배지(Stem Cell Technologies, Inc., 브리티쉬 콜롬비아주의 밴쿠버 소재)와 같이 당해 분야에 일반적으로 공지되어 있다.

분리된 태반 세포는 트립판 블루 배제 검정, 플루오레세인 디아세테이트 흡수 검정, 프로피디움 요오다이드 흡수 검정(생존능을 평가하기 위해); 및 티미딘 흡수 검정, MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드) 세포 증식 검정(증식을 평가하기 위해)과 같은, 당해 분야에 공지된 표준 기술을 사용하여 생존능, 증식 잠재력 및 장수에 대해 평가될 수 있다. 장수는 연장된 배양물 속에서 집단 배가의 최대 수를 측정함에 의한 것과 같이, 당해 분야에 공지된 방법으로 측정할 수 있다.

분리된 태반 세포, 예컨대, 상기 단락 4.1에 기술된 분리된 태반 세포는 또한 당해 분야에 공지된 다른 기술, 예컨대, 목적한 세포의 선택적인 성장(양성 선택), 원치않는 세포의 선택적인 파괴(음성 선택); 예를 들면, 대두 응집소를 사용하는 것과 같이, 혼합된 집단 속에서 분화된 세포 응집성을 기준으로 한 분리; 동결-해동 과정; 여과; 통상의 및 구역 원심분리; 원심분리성 정화(역-스티밍 원심분리(counter-streaming centrifugation)); 단위 중력 분리; 역류 분배법; 전기영동을 사용하여 다른 태반 세포로부터 분리할 수 있다.

4.2.6 분리된 태반 세포의 집단(Population)

본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포, 예컨대, 상기 단락 4.1에 기술된 분리된 태반 세포의 집단이 또한 본원에 제공된다. 분리된 태반 세포의 집단은 하나 이상의 태반으로부터 직접 분리될 수 있는데; 즉, 세포 집단은 분리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단일 수 있으며, 여기서 분리된 태반 세포는 관류물로부터 수득되거나, 관류물 속에 함유되거나, 파괴된 태반 조직, 예컨대, 태반 조직 분해물(즉, 태반 또는 이의 일부의 효소 분해에 의해 수득된 세포의 수집물)로부터 수득되거나, 당해 분해물 내에 함유된다. 본원에 기술된 분리된 태반 세포는 또한 분리된 태반 세포의 집단을 생산하도록 배양되고 증식될 수 있다. 분리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단은 또한 배양되고 증식되어 태반 세포 집단을 생산할 수 있다.

본원에 기술된 치료 방법에 유용한 태반 세포 집단은 분리된 태반 세포, 예를 들면, 본원의 단락 4.1에 기술된 바와 같은 분리된 태반 세포를 포함한다. 다양한 구현예에서, 태반 세포 집단중 세포의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%는 분리된 태반 세포이다. 즉, 분리된 태반 세포의 집단은 예컨대, 분리된 태반 세포가 아닌 세포를 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%와 같이 많이 포함할 수 있다.

본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포 집단은 예컨대, 효소 분해 또는 관류로부터 기원한 것에 상관없이, 특수한 마커 및/또는 특수한 배양 또는 형태학적 특징을 발현하는 분리된 태반 세포를 선택함으로써 생산될 수 있다. 일 구현예에서, 예를 들면, (a) 기질에 부착하여, (b) CD200을 발현하고 HLA-G의 발현을 결여한 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단을 생산하는 방법이 본원에 제공된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 CD200을 발현하고 HLA-G의 발현은 결여한 태반 세포를 선택하고, 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성시킴에 의해 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 (a) 기질에 대해 부착성이고, (b) CD73, CD105, 및 CD200를 발현하는 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 CD73, CD105, 및 CD200를 발현하는 태반 세포를 확인하고, 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 (a) 기질에 대해 부착성이고 (b) CD200 및 OCT-4를 발현하는 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 CD200 및 OCT-4를 발현하는 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 (a) 기질에 대해 부착성이고, (b) CD73 및 CD105를 발현하며, (c) 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우 상기 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단 속에서 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진하는 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 CD73 및 CD105를 발현하고, 상기 줄기 세포를 포함하는 태반 세포 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우 상기 태반 세포의 집단에서 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진하는 태반 세포를 선택하고, 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 (a) 기질에 대해 부착성이고, (b) CD73 및 CD105를 발현하며, HLA-G의 발현은 결여하는 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 CD73 및 CD105를 발현하고 HLA-G의 발현은 결여한 태반 세포를 선택하고, 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, (a) 기질에 부착성이고, (b) OCT-4를 발현하며, (c) 상기 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단을 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양하는 경우 상기 태반 세포의 집단 속에서 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진하는 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 OCT-4를 발현하고, 상기 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우, 상기 태반 세포의 집단 속에서 하나 이상의 배아-유사체이 형성을 촉진하는 태반 세포를 선택하고, 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다.

다른 구현예에서, 세포 집단은 (a) 기질에 대해 부착성이고, (b) CD10 및 CD105를 발현하고, CD34는 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 CD10 및 CD105를 발현하고, CD34는 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고, 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 (a) 기질에 대해 부착성이고, (b) CD10, CD105, 및 CD200을 발현하며, CD34는 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구현예에서, 세포 집단은 CD10, CD105, 및 CD200을 발현하고, CD34는 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고, 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구체적인 구현예에서, 세포 집단은 (a) 기질에 대해 부착성이고, (b) CD10, CD90, CD105 및 CD200을 발현하며, CD34 및 CD45는 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고; 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다. 다른 구체적인 구현예에서, 세포 집단은 CD10, CD90, CD105 및 CD200을 발현하고, CD34 및 CD45는 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고, 당해 세포를 다른 세포로부터 분리하여 세포 집단을 형성함으로써 생산된다.

상기 단락 4.1에 기술된 마커 조합 중 어느 것을 갖는 태반 세포를 포함하는 세포 집단의 선택은 유사한 양식으로 분리하거나 수득할 수 있다.

상기 구현예 중 어느 것에서도, 분리된 세포 집단의 선택은 또한 ABC-p(태반 특이적인 ABC 수송인자 단백질(transporter protein); 예컨대, Allikmets et al., Cancer Res. 58(23):5337-9 (1998) 참고)를 발현하는 태반 세포를 선택함을 포함할 수 있다. 당해 방법은 또한 예컨대, 간엽성 줄기 세포에 대해 특이적인 적어도 하나의 특징, 예를 들면, CD44의 발현, CD90의 발현, 또는 이들의 조합의 발현을 나타내는 세포를 선택함을 포함할 수 있다.

상기 구현예에서, 기질은 세포, 예컨대, 분리된 태반 세포의 배양 및/또는 선택이 달성될 수 있는 어떠한 표면일 수 있다. 전형적으로, 기질은 플라스틱, 예컨대, 조직 배양 디쉬 또는 멀티웰 플레이트 플라스틱(multiwell plate plastic)이다. 조직 배양 플라스틱은 생체분자, 예컨대, 라미닌 또는 피브로넥틴으로 코팅될 수 있다.

세포, 예컨대, 분리된 태반 세포는 세포 선택의 당해 분야에 공지된 어떠한 수단에 의해서도 태반 세포 집단에 대해 선택될 수 있다. 예를 들면, 세포는 하나 이상의 세포 표면 마커에 대한 항체 또는 항체들을 사용하여, 예를 들면, 유동 세포분석법 또는 FACS 속에서 선택할 수 있다. 선택은 자기 비드와 함께 항체를 사용하여 달성할 수 있다. 특정의 줄기 세포-관련 마커에 대해 특이적인 항체는 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 1OCT-4(Abcam, Cambridge, MA), CD200(Abcam), HLA-G(Abcam), CD73(BD Biosciences Pharmingen, 캘리포니아주 샌 디에고 소재), CD105(Abcam; BioDesign International, Saco, ME)에 대한 항체 등이다. 다른 마커에 대한 항체는 또한 상업적으로 이용가능한데, 예컨대, CD34, CD38 및 CD45는 예컨대, StemCell Technologies 또는 BioDesign International로부터 상업적으로 이용가능하다.

분리된 태반 세포 집단은 줄기 세포가 아닌 태반 세포, 또는 태반 세포가 아닌 세포를 포함할 수 있다.

본원에 기술된 태반 기원한 부착 세포를 포함하는 분리된 세포 집단은 제2의 세포 유형, 예컨대, 태반 기원한 부착 세포가 아닌 태반 세포, 또는 예컨대, 태반 세포가 아닌 세포를 포함할 수 있다. 예를 들면, 태반 기원한 부착 세포의 분리된 집단은 다음을 포함, 예컨대, 제2 유형의 세포의 집단과 조합될 수 있는데, 여기서 상기 제2 유형의 세포는 예컨대, 배아 줄기 세포, 혈액 세포(예컨대, 태반 혈액, 태반 혈액 세포, 제대 혈액, 제대 혈액 세포, 말초 혈액, 말초 혈액 세포, 태반 혈액, 제대 혈액, 또는 말초 혈액으로부터 핵화된 세포 등), 혈액으로부터 분리된 줄기 세포(예컨대, 태반 혈액, 제대 혈액 또는 말초 혈액으로부터 분리된 줄기 세포), 태반 관류물로부터 핵화된 세포, 예컨대, 태반 관류물로부터 전체 핵화된 세포; 탯줄 줄기세포, 혈액-기원한 핵화된 세포의 집단, 골수-기원한 간엽성 기질 세포, 골수-기원한 핵화된 세포의 집단, 골수-기원한 간엽성 기질 세포, 골수-기원한 간엽성 줄기 세포, 골수 기원한 조혈 줄기 세포, 조 골수, 성체(체세포) 줄기 세포, 조직내에 함유된 줄기 세포의 집단, 배양된 세포, 예컨대, 배양된 줄기 세포, 완전히 분화된 세포(예컨대, 연골세포, 섬유아세포, 양막 세포, 조골세포, 근육 세포, 심장 세포 등)의 집단, 주피 세포 등이다. 특정 구현예에서, 태반 유도된 부착성 세포를 포함하는 세포의 집단은 탯줄로부터의 태반 줄기 세포 또는 줄기 세포를 포함한다. 제2 유형의 세포가 혈액 또는 혈액 세포인 특정 구현예에서, 적혈구는 세포의 집단으로부터 제거된다.

특정 구현예에서, 제2 유형의 세포는 조혈 줄기 세포이다. 상기 조혈 줄기 세포는 예를 들면, 프로세싱되지 않은 태반, 제대 혈액 또는 말초 혈액 내에; 태반 혈액, 제대 혈액 또는 말초 혈액으로부터의 전체 핵화된 세포; 태반 혈액, 제대 혈액 또는 말초 혈액으로부터의 CD34+ 세포의 분리된 집단; 프로세싱되지 않은 골수; 골수로부터의 전체 핵화된 세포; 골수로부터의 CD34+ 세포의 분리된 집단 등 속에 함유될 수 있다.

다른 구현예에서, 태반 기원한 부착성 세포의 분리된 집단은 혈관계로부터의 다수의 성체 또는 후대 세포와 조합된다. 다양한 구현예에서, 세포는 내피 세포, 내피 후대세포, 근육세포, 심근세포, 주피세포, 혈관아세포, 근아세포 또는 심근모세포(cardiomyoblast)이다.

다른 구현예에서, 제2 세포 유형은 다능성 및 배아 줄기 세포와 관련된 기능의 마커를 발현하기 위해 배양물 속에서 조작된 비-배아 세포 유형이다.

태반 기원한 부착성 세포의 상기 분리된 집단의 특정의 구현예에서, 태반 기원한 부착성 세포 및 제2 유형의 세포 중 하나 또는 둘 다는 세포의 의도된 수용체에 대해 자가조직이거나, 동종이계이다.

다른 구체적인 구현예에서, 조성물은 태반 기원한 부착성 세포, 및 배아 줄기 세포를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 조성물은 태반 기원한 부착성 세포 및 간엽성 기질 세포 또는 줄기 세포, 예컨대, 골수-기원한 간엽성 기질 또는 줄기 세포를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 조성물은 골수-기원한 조혈 줄기 세포를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 조성물은 태반 기원한 부착성 세포 및 조혈 후대세포, 예컨대, 골수, 태아 혈액, 제대 혈액, 태반 혈액, 및/또는 말초 혈액으로부터의 조혈 후대 세포를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 조성물은 태반 기원한 부착성 세포 및 체세포 줄기 세포를 포함한다. 보다 구체적인 구현예에서, 상기 체세포 줄기 세포는 신경 줄기 세포, 간 줄기 세포, 췌장 줄기 세포, 내피 줄기 세포, 심장 줄기 세포, 또는 근육 줄기 세포이다.

다른 구체적인 구현예에서, 제2 유형의 세포는 상기 집단 중 세포의 약 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 또는 50% 또는 이들 이하를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 조성물 중 PDAC는 상기 조성물 중 세포의 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 또는 90%를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 태반 기원한 부착성 세포는 상기 집단 중 약, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 또는 45%, 또는 이들 이하를 포함한다.

태반 기원한 부착성 세포의 분리된 집단 중 세포는 다른 유형의 다수의 세포, 예컨대, 줄기 세포의 집단과 각각의 집단 중 전체 핵화된 세포의 수들과 비교하여, 약 100,000,000:1, 50,000,000:1, 20,000,000:1, 10,000,000:1, 5,000,000:1, 2,000,000:1, 1,000,000:1, 500,000:1, 200,000:1, 100,000:1, 50,000:1, 20,000:1, 10,000:1, 5,000:1, 2,000:1, 1,000:1, 500:1, 200:1, 100:1, 50:1, 20:1, 10:1, 5:1, 2:1, 1:1; 1:2; 1:5; 1:10; 1:100; 1:200; 1:500; 1:1,000; 1:2,000; 1:5,000; 1:10,000; 1:20,000; 1:50,000; 1:100,000; 1:500,000; 1:1,000,000; 1:2,000,000; 1:5,000,000; 1:10,000,000; 1:20,000,000; 1:50,000,000; 또는 약 1:100,000,000의 비로 조합될 수 있다. 태반 기원한 부착성 세포의 분리된 집단 중 세포는 또한 다수의 세포 유형의 다수의 세포와 조합될 수 있다.

다른 구현예에서, 본원에 기술된 태반 세포의 집단, 예컨대, 위에 기술된 PDAC는 골원성 태반 부착성 세포(OPAC), 예컨대, "태반 줄기 세포를 사용한 골 결함의 치료를 위한 방법 및 조성물"이라는 명칭으로 2009년 8월 24일자에 출원된 특허 출원 제12/546,556호에 기술된 OPAC와 조합되거나, 양막-기원한 혈관형성 세포(AMDAC), 예컨대, "양막 기원한 혈관형성 세포"라는 명칭의 미국 특허 출원 제12/622,352호에 기술된 AMDAC와 조합되며, 이들 문헌의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.

4.3 분리된 태반 세포를 포함하는 조성물

본원, 예컨대, 단락 4.1에 기술된 태반 세포는 본원에 기술된 방법 및 조성물에서 사용하기 위한 어떠한 생리학적으로 허용되거나 의학적으로 허용되는 화합물, 조성물 또는 장치와 조합될 수 있다. 본원에 제공된 치료 방법에 유용한 조성물은 본원에 기술된 태반 세포 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 조성물은 약제학적으로 허용되는 조성물, 예컨대, 약제학적으로 허용되는 담체 속에 태반 세포를 포함하는 조성물이다.

특정 구현예에서, 분리된 태반 세포를 포함하는 조성물은 매트릭스, 예컨대, 세포제거된 매트릭스(decellularized matrix) 또는 합성 매트릭스를 추가로 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 매트릭스는 3차원 스캐폴드(scaffold)이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 매트릭스는 콜라겐, 젤라틴, 라미닌, 피브로넥틴, 펙틴, 오르니틴, 또는 비트로넥틴을 포함한다. 다른 하나의 구체적인 구현예에서, 매트릭스는 양막 또는 양막-기원한 생체물질이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 매트릭스는 세포외 막 단백질을 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 매트릭스는 합성 화합물을 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 매트릭스는 생체활성 화합물을 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 생체활성 화합물은 5,000 달톤 미만의 성장 인자, 사이토킨, 항체, 또는 유기 분자이다.

다른 구현예에서, 본원에 제공된 치료 방법에 유용한 조성물은 전술한 태반 세포 중 어느 것, 또는 전술한 태반 세포 집단 중 어느 것으로 조건화된 배지를 포함한다.

4.3.1 동결보존된 분리된 태반 세포

본원에 기술된 방법 및 조성물에 유용한 분리된 태반 세포 집단은 예를 들면, 후자의 용도로 동결보존될 수 있다. 줄기 세포와 같은, 세포의 동결보존 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 분리된 태반 세포 집단은 개인에게 용이하게 투여가능한 형태, 예컨대, 의학적 용도에 적합한 용기 내에 함유된 분리된 태반 세포 집단으로 제조될 수 있다. 이러한 용기는 예를 들면, 주사기, 멸균 플라스틱 백, 플라스크, 자아(jar), 또는 이로부터 분리된 태반 세포 집단이 용이하게 조제될 수 있는 다른 용기일 수 있다. 예를 들면, 용기는 혈액 백 또는 수용체에게 액체를 정맥내 투여하기에 적합한 다른 플라스틱의, 의학적으로 허용되는 백일 수 있다. 특정의 구현예에서, 용기는 조합된 세포 집단의 동결보존을 허용하는 것이다.

동결보존된 분리된 태반 세포 집단은 단일의 공여자, 또는 다수의 공여자로부터 기원한 분리된 태반 세포를 포함할 수 있다. 분리된 태반 세포 집단은 의도된 수용체에 대해 완전히 HLA-조화되거나, 부분적으로 또는 완전하게 HLA-부조화될 수 있다.

따라서, 일 구현예에서, 분리된 태반 세포는 용기 속에서 조직 배양 플라스틱-부착성 태반 세포 집단을 포함하는 조성물의 형태로 상기 방법에 사용되고 본원에 기술될 수 있다. 특정 구현예에서, 분리된 태반 세포는 동결 보존된다. 다른 구체적인 구현예에서, 용기는 백, 플라스크, 또는 자아(jar)이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 백은 멸균 플라스틱 백이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 백은 예컨대, 정맥내 주입에 의해 상기 분리된 태반 세포 집단의 정맥내 투여에 적합하거나, 이를 허용하거나 이를 촉진시킨다. 백은 분리된 태반 세포와 하나 이상의 다른 용액, 예컨대, 약물을 투여 전, 또는 투여 동안에 혼합하도록 상호연결된 다수의 관강 또는 구획을 포함할 수 있다. 다른 구체적인 구현예에서, 조성물은 조합된 세포 집단의 동결보존을 촉진시키는 하나 이상의 화합물을 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 집단은 생리학적으로 허용되는 수용액 속에 함유된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 생리학적으로 허용되는 수용액은 0.9% NaCl 용액이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포 집단은 상기 세포 집단의 수용체에 대해 HLA-조화된 태반 세포를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 조합된 세포 집단은 상기 세포 집단의 수용체에 대해 적어도 부분적으로 HLA-부조화된 태반 세포를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 다수의 공여자로부터 기원한다.

특정 구현예에서, 용기 속의 분리된 태반 세포는 분리된 CD10+, CD34-, CD105+ 태반 세포이며, 여기서 상기 세포는 동결보존되고, 용기 속에 함유된다. 특정 구현예에서, 상기 CD10+, CD34-, CD105+ 태반 세포는 또한 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ 태반 세포는 또한 CD45- 또는 CD90+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ 태반 세포는 또한 CD45- 및 CD90+이다. 다른 구체적인 구현예에서, CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-캐드헤린딤(캐드헤린딤), CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A, B, C+, HLA-DP, DQ, DR-, HLA-G-, 또는 프로그램된 사멸-1 리간드(PDL1)+, 또는 이의 어떠한 조합 중 하나 이상이다. 다른 구체적인 구현예에서, CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-캐드헤린딤, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A, B, C+, HLA-DP, DQ, DR-, HLA-G-, 및 프로그램된 사멸-1 리간드(PDL1)+이다.

특정의 다른 구현예에서, 상기 언급한 분리된 태반 세포는 분리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포이고, 여기서 상기 세포는 동결보존되었고, 용기내에 함유된다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 동결보존되고 용기내에 함유된 CD73+, CD105+, CD200+ 세포이다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 동결보존되고, 용기내에 함유된 CD200+, OCT-4+ 줄기 세포이다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 동결보존되고, 용기내에 함유된 CD73+, CD105+ 세포이며, 여기서 상기 분리된 태반 세포는 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 태반 세포의 집단과 함께 배양하는 경우 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진한다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 동결보존되고, 용기내에 함유된 CD73+, CD105+, HLA-G- 세포이다. 다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 동결보존되고, 용기내에 함유된 OCT-4+ 태반 세포이며, 여기서 상기 세포는 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 태반 세포의 집단과 함께 배양시 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진한다.

다른 구체적인 구현예에서, 상기 언급한 분리된 태반 세포는 유동 세포분석법(예컨대, PDAC)에 의해 검출된 것으로서 CD34-, CD10+ 및 CD105+인 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 중성 표현형의 세포, 골형성 표현형의 세포, 또는 분화 표현형의 세포로 분화할 잠재능을 갖는다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 또한 CD200+이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 또한 유동 세포분석기에 의해 검출된 것으로서, CD90+ 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, 분리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 또한 유동 세포분석기에 의해 검출된 것으로서, CD90+ 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 또한 유동 세포분석기에 의해 검출된 것으로서, CD90+ 또는 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 세포는 또한 유동 세포분석기에 의해 검출된 것으로서, CD90+ 및 CD45-이다. 다른 구체적인 구현예에서, CD34-, CD10+, CD105+, CD200+, CD90+, CD45- 세포는 또한 유동 세포분석기에 의해 검출된 것으로서, CD80- 및 CD86-이다. 다른 구체적인 구현예에서, CD34-, CD10+, CD105+ 세포는 또한 CD29+, CD38-, CD44+, CD54+, CD80-, CD86-, SH3+ 또는 SH4+ 중 하나 이상이다. 다른 구체적인 구현예에서, 세포는 또한 CD44+이다. 상기 분리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포 중 어느 것의 특정 구현예에서, 상기 세포는 또한 CD117-, CD133-, KDR- (VEGFR2-), HLA-A, B, C+, HLA-DP, DQ, DR-, 및/또는 PDL1+ 중 하나 이상이다.

앞서의 동결보존된 분리된 태반 세포 중 어느 것의 특정 구현예에서, 상기 용기는 백이다. 다양한 특정 구현예에서, 상기 용기는 약, 적어도, 또는 최대 1 x 10⁶의 상기 분리된 태반 세포, 5 x 10⁶의 상기 분리된 태반 세포, 1 x 10⁷의 상기 분리된 태반 세포, 5 x 10⁷의 상기 분리된 태반 세포, 1 x 10⁸의 상기 분리된 태반 세포, 5 x 10⁸의 상기 분리된 태반 세포, 1 x 10⁹의 상기 분리된 태반 세포, 5 x 10⁹의 상기 분리된 태반 세포, 1 x 10¹⁰의 상기 분리된 태반 세포, 또는 1 x 10¹⁰의 상기 분리된 태반 세포를 포함한다. 상기 동결보존된 집단 중 어느 것의 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 약, 적어도, 5배 이하, 10배 이하, 15배 이하, 또는 20배 이하 계대배양된다. 상기 동결보존된 분리된 태반 세포 중 어느 것의 다른 구체적인 구현예에서, 상기 분리된 태반 세포는 상기 용기 내에서 증식된다.

특정 구현예에서, 태반 기원한 부착성 세포의 단일 단위 투여량은, 다양한 구현예에서, 약, 적어도, 1 x 10³, 3 x 10³, 5 x 10³,1 x 10⁴, 3 x 10⁴, 5 x 10⁴,1 x 10⁵, 3 x 10⁵, 5 x 10⁵,1 x 10⁶, 3 x 10⁶, 5 x 10⁶, 1 x 10⁷, 3 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 3 x 10⁸, 5 x 10⁸, 1 x 10⁹, 5 x 10⁹, 또는 1 x 10¹⁰개 또는 이들 이하의 태반 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 태반 기원한 부착성 세포의 단일 단위 투여량은 1 x 10³ 내지 3 x 10³, 3 x 10³ 내지 5 x 10³, 5 x 10³ 내지 1 x 10⁴, 1 x 10⁴ 내지 3 x 10⁴, 3 x 10⁴ 내지 5 x 10⁴, 5 x 10⁴ 내지 1 x 10⁵, 1 x 10⁵ 내지 3 x 10⁵, 3 x 10⁵ 내지 5 x 10⁵, 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁶, 1 x 10⁶ 내지 3 x 10⁶, 3 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷, 1 x 10⁷ 내지 3 x 10⁷, 3 x 10⁷ 내지 5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸, 1 x 10⁸ 내지 3 x 10⁸, 3 x 10⁸ 내지 5 x 10⁸, 5 x 10⁸ 내지 1 x 10⁹, 1 x 10⁹ 내지 5 x 10⁹, 또는 5 x 10⁹ 내지 1 x 10¹⁰개의 태반 세포를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 50% 이상의 생존 세포(즉, 집단 중 세포의 적어도 50%는 작용성이거나 살아있다)를 포함하는, 태반 기원한 부착성 세포의 집단을 포함한다. 바람직하게는, 집단 중 세포의 적어도 60%는 생존가능하다. 보다 바람직하게는, 약제학적 조성물내 집단 중 세포의 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%는 생존가능하다.

4.3.2 약제학적 조성물

분리된 태반 세포, 예컨대, PDAC의 집단, 또는 분리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단은 생체내에서, 예컨대, 본원에 제공된 치료 방법에서 사용하기 위해 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다. 이러한 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체, 예컨대, 염수 용액 또는 생체내 투여하기 위한 다른 허용된 생리학적으로 허용된 용액 속에, 분리된 태반 세포의 집단, 또는 분리된 태반 세포의 집단을 포함한다. 본원에 기술된 분리된 태반 세포를 포함하는 약제학적 조성물은 본원의 어딘가에 기술된, 분리된 태반 세포 집단, 또는 분리된 태반 세포 중 어느 것, 또는 어떠한 조합도 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 태아, 모체, 또는 태아와 모체 둘 다의 분리된 태반 세포를 포함할 수 있다. 본원에 제공된 약제학적 조성물은 또한 개인 또는 태반으로부터, 또는 다수의 개인 또는 태반들로부터 수득된 분리된 태반 세포를 포함할 수 있다.

본원에 제공된 약제학적 조성물은 어떠한 수의 분리된 태반 세포도 포함할 수 있다. 예를 들면, 태반 기원한 부착성 세포의 단일 단위 투여량은 약, 적어도 1 x 10³, 3 x 10³, 5 x 10³,1 x 10⁴, 3 x 10⁴, 5 x 10⁴,1 x 10⁵, 3 x 10⁵, 5 x 10⁵,1 x 10⁶, 3 x 10⁶, 5 x 10⁶, 1 x 10⁷, 3 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 3 x 10⁸, 5 x 10⁸, 1 x 10⁹, 5 x 10⁹, 또는 1 x 10¹⁰개 또는 이들 이하의 태반 세포 또는 1 x 10³ 내지 3 x 10³, 3 x 10³ 내지 5 x 10³, 5 x 10³ 내지 1 x 10⁴, 1 x 10⁴ 내지 3 x 10⁴, 3 x 10⁴ 내지 5 x 10⁴, 5 x 10⁴ 내지 1 x 10⁵, 1 x 10⁵ 내지 3 x 10⁵, 3 x 10⁵ 내지 5 x 10⁵, 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁶, 1 x 10⁶ 내지 3 x 10⁶, 3 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷, 1 x 10⁷ 내지 3 x 10⁷, 3 x 10⁷ 내지 5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸, 1 x 10⁸ 내지 3 x 10⁸, 3 x 10⁸ 내지 5 x 10⁸, 5 x 10⁸ 내지 1 x 10⁹, 1 x 10⁹ 내지 5 x 10⁹, 또는 5 x 10⁹ 내지 1 x 10¹⁰개의 태반 세포를 포함할 수 있다.

특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 당뇨병성 말초 신경병증을 지닌 대상체에게 1회 투여된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 당뇨병성 말초 신경병증을 지닌 대상체에게 다수회, 예컨대, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 또는 10회 이상 투여된다. 용량 사이의 간격은 1주, 2주, 1개월, 2개월 또는 1년일 수 있다. 간격은 또한 불규칙적일 수 있다. 이러한 용법에 따라 투여된 태반 줄기 세포의 투여량은 1 x 10³, 3 x 10³, 5 x 10³,1 x 10⁴, 3 x 10⁴, 5 x 10⁴,1 x 10⁵, 3 x 10⁵, 5 x 10⁵,1 x 10⁶, 3 x 10⁶, 5 x 10⁶, 1 x 10⁷, 3 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 3 x 10⁸, 5 x 10⁸, 1 x 10⁹, 5 x 10⁹, 또는 1 x 10¹⁰개의 태반 세포 또는 1 x 10³ 내지 3 x 10³, 3 x 10³ 내지 5 x 10³, 5 x 10³ 내지 1 x 10⁴, 1 x 10⁴ 내지 3 x 10⁴, 3 x 10⁴ 내지 5 x 10⁴, 5 x 10⁴ 내지 1 x 10⁵, 1 x 10⁵ 내지 3 x 10⁵, 3 x 10⁵ 내지 5 x 10⁵, 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁶, 1 x 10⁶ 내지 3 x 10⁶, 3 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷, 1 x 10⁷ 내지 3 x 10⁷, 3 x 10⁷ 내지 5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸, 1 x 10⁸ 내지 3 x 10⁸, 3 x 10⁸ 내지 5 x 10⁸, 5 x 10⁸ 내지 1 x 10⁹, 1 x 10⁹ 내지 5 x 10⁹, 또는 5 x 10⁹ 내지 1 x 10¹⁰개의 태반 줄기 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는다.특정 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 1 x 10³개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10³개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁴개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁵개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 1 x 10⁶개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포이다.

특정 구현예에서, 태반 줄기 세포(예컨대, CD10+, CD105+, CD200+, CD34- 태반 줄기 세포)를 포함하는 약제학적 조성물은 당뇨병성 말초 신경병증을 지닌 대상체에게 단일 투여량으로서 1회 투여된다. 특정 구현예에서, 태반 줄기 세포(예컨대, CD10+, CD105+, CD200+, CD34- 태반 줄기 세포)를 포함하는 약제학적 조성물은 당뇨병성 말초 신경병증을 지닌 대상체에게 단일 투여량으로서 투여되고 이어서 1주 후 제2 투여량이 투여된다. 특정 구현예에서, 태반 줄기 세포(예컨대, CD10+, CD105+, CD200+, CD34- 태반 줄기 세포)를 포함하는 약제학적 조성물은 당뇨병성 말초 신경병증을 지닌 대상체에게 1회 투여량에 이어서 약 1주 후 제2 투여량 및 이후 약 1주후(즉, 초기 투여 후 약 2주째) 제3 투여량이 투여된다. 이러한 요법에 따라 투여된 태반 줄기 세포의 투여량은 1 x 10³, 3 x 10³, 5 x 10³,1 x 10⁴, 3 x 10⁴, 5 x 10⁴,1 x 10⁵, 3 x 10⁵, 5 x 10⁵,1 x 10⁶, 3 x 10⁶, 5 x 10⁶, 1 x 10⁷, 3 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 3 x 10⁸, 5 x 10⁸, 1 x 10⁹, 5 x 10⁹, 또는 1 x 10¹⁰개의 태반 세포 또는 1 x 10³ 내지 3 x 10³, 3 x 10³ 내지 5 x 10³, 5 x 10³ 내지 1 x 10⁴, 1 x 10⁴ 내지 3 x 10⁴, 3 x 10⁴ 내지 5 x 10⁴, 5 x 10⁴ 내지 1 x 10⁵, 1 x 10⁵ 내지 3 x 10⁵, 3 x 10⁵ 내지 5 x 10⁵, 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁶, 1 x 10⁶ 내지 3 x 10⁶, 3 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷, 1 x 10⁷ 내지 3 x 10⁷, 3 x 10⁷ 내지 5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸, 1 x 10⁸ 내지 3 x 10⁸, 3 x 10⁸ 내지 5 x 10⁸, 5 x 10⁸ 내지 1 x 10⁹, 1 x 10⁹ 내지 5 x 10⁹, 또는 5 x 10⁹ 내지 1 x 10¹⁰개의 태반 줄기 세포를 포함하거나 이에 제한되지 않는다.특정 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 1 x 10³개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10³개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁴개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁵개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 1 x 10⁶개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포이다.

특정 구현예에서, 태반 줄기 세포(예컨대, CD10+, CD105+, CD200+, CD34- 태반 줄기 세포)를 포함하는 약제학적 조성물은 당뇨병성 말초 신경병증을 지닌 대상체에게 단일 투여량에 이어서 약 1개월 후(예컨대, 초기 투여량 후 약 27, 28, 29, 30, 31, 32, 또는 33일째에) 제2 투여량으로 투여된다. 특정 구현예에서, 태반 줄기 세포(예컨대, CD10+, CD105+, CD200+, CD34- 태반 줄기 세포)를 포함하는 약제학적 조성물은 당뇨병성 말초 신경병증을 지닌 대상체에게 단일 투여량에 이어서 약 1개월 후 제2 투여량에 이어서 이후 약 1개월째(즉, 약 초기 투여 후 2개월, 예컨대, 초기 투여 후 약 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 또는 64일째)에 제3 투여량으로 투여된다. 이러한 요법에 따라 투여된 태반 줄기 세포의 투여량은 1 x 10³, 3 x 10³, 5 x 10³,1 x 10⁴, 3 x 10⁴, 5 x 10⁴,1 x 10⁵, 3 x 10⁵, 5 x 10⁵,1 x 10⁶, 3 x 10⁶, 5 x 10⁶, 1 x 10⁷, 3 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 3 x 10⁸, 5 x 10⁸, 1 x 10⁹, 5 x 10⁹, 또는 1 x 10¹⁰개의 태반 세포 또는 1 x 10³ 내지 3 x 10³, 3 x 10³ 내지 5 x 10³, 5 x 10³ 내지 1 x 10⁴, 1 x 10⁴ 내지 3 x 10⁴, 3 x 10⁴ 내지 5 x 10⁴, 5 x 10⁴ 내지 1 x 10⁵, 1 x 10⁵ 내지 3 x 10⁵, 3 x 10⁵ 내지 5 x 10⁵, 5 x 10⁵ 내지 1 x 10⁶, 1 x 10⁶ 내지 3 x 10⁶, 3 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷, 1 x 10⁷ 내지 3 x 10⁷, 3 x 10⁷ 내지 5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸, 1 x 10⁸ 내지 3 x 10⁸, 3 x 10⁸ 내지 5 x 10⁸, 5 x 10⁸ 내지 1 x 10⁹, 1 x 10⁹ 내지 5 x 10⁹, 또는 5 x 10⁹ 내지 1 x 10¹⁰개의 태반 줄기 세포를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.특정 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 1 x 10³개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10³개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁴개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁵개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 1 x 10⁶개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포이다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물 중 태반 줄기 세포의 투여량은 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포이다.

본원에 제공된 약제학적 조성물은 50% 이상의 생존 세포(즉, 집단 중 세포의 적어도 50%는 기능성이거나 살아있다)를 포함하는 세포의 집단을 포함한다. 바람직하게는, 집단 중 세포의 적어도 60%는 살아있다. 보다 바람직하게, 약제학적 조성물내 집단 중 세포의 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%는 살아있다.

본원에 제공된 약제학적 조성물은 예컨대, 이식을 촉진하는 하나 이상의 화합물(예컨대, 항-T-세포 수용체 항체, 면역억제제 등); 알부민, 덱스트란 40, 젤라틴, 하이드록시에틸 전분, 플라스말라이트(plasmalyte) 등을 포함할 수 있다.

주사가능한 용액으로 제형화하는 경우, 하나의 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 1% 내지 11.5%의 HSA 및 약 2.5%의 덱스트란을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 약제학적 조성물은 5% HSA 및 10%의 덱스트란을 포함하고, 임의로 면역억제제, 예컨대, 사이클로스포린 A, 예컨대, 10mg/kg을 포함하는 용액 속에 밀리리터당 약 5 x 106개의 세포 내지 밀리리터당 약 2 x 10⁷개의 세포를 포함한다.

다른 구현예에서, 약제학적 조성물, 예컨대, 용액은 다수의 세포, 예컨대, 분리된 태반 세포, 예를 들면, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포를 포함하며, 여기서 약제학적 조성물은 밀리리터당 약 1.0 ±0.3 x 10⁶개의 세포 내지 밀리리터당 약 5.0 ± 1.5 x 10⁶개의 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 밀리리터당 약 1.5 x 10⁶개의 세포 내지 밀리리터당 약 3.75 x 10⁶개의 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 1 x 10⁶개의 세포/mL 내지 약 50 x 10⁶개의 세포/mL, 약 1 x 10⁶개의 세포/mL 내지 약 40 x 10⁶개의 세포/mL, 약 1 x 10⁶개의 세포/mL 내지 약 30 x 10⁶개의 세포/mL, 약 1 x 10⁶개의 세포/mL 내지 약 20 x 10⁶개의 세포/mL, 약 1 x 10⁶개의 세포/mL 내지 약 15 x 10⁶개의 세포/mL, 또는 약 1 x 10⁶개의 세포/mL 내지 약 10 x 10⁶개의 세포/mL를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 가시적인 세포 무리를 포함하지 않거나(즉, 거대 세포 무리를 포함하지 않는다), 이러한 가시적인 무리를 실질적으로 포함하지 않는다. 본원에 사용된 것으로서, "거대 세포 무리"는 확대없이도 가시적인, 예컨대, 나안에 대해 가시적인 세포의 집합체를 의미하며 일반적으로 약 150 마이크론보다 큰 세포 집합체를 말한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 2.5%, 3.0%, 3.5%, 4.0%, 4.5%, 5.0%, 5.5%, 6.0%, 6.5%, 7.0%, 7.5% 8.0%, 8.5%, 9.0%, 9.5% 또는 10%의 덱스트란, 예컨대, 덱스트란-40을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 약 7.5% 내지 약 9%의 덱스트란-40을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 약 5.5%의 덱스트란-40을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 1% 내지 약 15%의 사람 혈청 알부민(HSA)을 포함한다. 특정의 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 65, 75, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15%의 HSA를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 세포는 동결보존 및 동결된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포는 70 μM 내지 1100 μM 여과기를 통해 여과된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 조성물은 가시적인 세포 무리를 포함하지 않는다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 조성물은 106개 세포당 약 200개 미만의 세포 무리를 포함하며, 여기서 상기 세포 무리는 현미경, 예컨대, 광학 현미경 하에서만 가시적이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 조성물은 10⁶개 세포당 약 150개 미만의 세포 무리를 포함하며, 여기서 상기 세포 무리는 현미경, 예컨대, 광학 현미경 하에서 가시적이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 조성물은 10⁶개 세포당 약 100개 미만의 세포 무리를 포함하며, 여기서 상기 세포 무리는 현미경, 예컨대, 광학 현미경 하에서만 가시적이다.

특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 밀리리터당 약 1.0 ±0.3 x 10⁶개의 세포, 약 5.5% 덱스트란-40 (w/v), 약 10% HSA (w/v), 및 약 5% DMSO(v/v)를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 태반 줄기 세포를 포함하는 약제학적 조성물은 약 5.75% 덱스트란 40, 약 10% 사람 혈청 알부민, 및 약 2.5% DMSO를 포함한다.

다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 10% 덱스트란-40를 포함하는 용액 속에 다수의 세포, 예컨대, 다수의 분리된 태반 세포를 포함하며, 여기서 약제학적 조성물은 밀리리터당 약 1.0 ± 0.3 x 10⁶개의 세포 내지 밀리리터당 약 5.0 ±1.5 x 10⁶개의 세포를 포함하고, 여기서 상기 조성물은 나안으로 가시적인 세포 무리를 함유하지 않는다(즉, 거대 세포 무리를 포함하지 않는다). 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 밀리리터당 약 1.5 x 10⁶개의 세포 내지 밀리리터당 약 3.75 x 10⁶개의 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 세포는 동결보존되고 동결된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 세포는 70 μM 내지 1100 μM 여과기를 통해 여과된다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 조성물은 10⁶개의 세포당 약 200 마이크로 미만의 세포 무리(즉, 확대시에만 가시적인 세포 무리)를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물은 10⁶개의 세포당 약 150 마이크로 미만의 세포 무리를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물은 10⁶개의 세포당 약 100 마이크로 미만의 세포 무리를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물은 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 또는 2% 미만의 DMSO, 또는 1%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 또는 0.1% 미만의 DMSO를 포함한다.

세포를 포함하는 조성물이 또한 본원에 제공되며, 여기서 상기 조성물은 본원에 개시된 방법들 중 하나에 의해 생산된다. 예를 들면, 일 구현예에서, 약제학적 조성물은 세포를 포함하고, 여기서 약제학적 조성물은 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포를 포함하는 용액을 여과하여 여과된 세포-함유 용액을 형성시키는 단계; 예를 들면, 동결보존하기 전에 여과된 세포-함유 용액을 제1 용액으로 밀리리터당 약 1 내지 50 x 10⁶, 1 내지 40 x 10⁶, 1 내지 30 x 10⁶, 1 내지 20 x 10⁶, 1 내지 15 x 10⁶, 또는 1 내지 10 x 10⁶개의 세포까지 희석시키는 단계; 및 수득되는 여과된 세포-함유 용액을 덱스트란을 포함하지만 상기 조성물을 생산하기 위한 사람 혈청 알부민(HSA)은 포함하지 않는 제2 용액으로 여과하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 희석은 밀리리터당 약 15 x 10⁶개 이하의 세포이다. 특정 구현예에서, 상기 희석은 밀리리터당 약 10 ± 3 x 10⁶개 이하의 세포이다. 특정 구현예에서, 상기 희석은 밀리리터당 약 7.5 x 10⁶개 이하의 세포이다. 다른 특정 구현예에서, 희석 전에, 여과된 세포-함유 용액이 밀리리터당 약 15 x 10⁶개 미만의 세포를 포함하는 경우, 여과는 선택사항이다. 다른 특정 구현예에서, 희석 전에, 여과된 세포-함유 용액이 밀리리터당 약 10 ± 3 x 10⁶개 미만의 세포를 포함하는 경우, 여과는 선택사항이다. 다른 특정 구현예에서, 희석 전에, 여과된 세포-함유 용액이 밀리리터당 약 7.5 x 10⁶개 미만의 세포를 포함하는 경우, 여과는 선택사항이다.

특정 구현예에서, 세포는 제1 희석 용액을 사용한 상기 희석과 상기 제2 희석 용액을 사용한 상기 희석 사이에서 동결보존된다. 다른 구체적인 구현예에서, 제1 희석 용액은 덱스트란 및 HSA를 포함한다. 제1 희석 용액 또는 제2 희석 용액 속의 덱스트란은 어떠한 분자량의 덱스트란, 예컨데, 분자량이 약 10 kDa 내지 약 150 kDa인 덱스트란일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 제1 희석 용액 또는 상기 제2 희석 용액 속의 상기 덱스트란은 약 2.5%, 3.0%, 3.5%, 4.0%, 4.5%, 5.0%, 5.5%, 6.0%, 6.5%, 7.0%, 7.5% 8.0%, 8.5%, 9.0%, 9.5% 또는 10%의 덱스트란이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 제1 희석 용액 또는 상기 제2 희석 용액 속의 덱스트란은 덱스트란-40이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 제1 희석 용액 및 상기 제2 희석 용액 속의 덱스트란은 덱스트란-40이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 제1 희석 용액 속의 상기 덱스트란-40은 5.0% 덱스트란-40이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 제1 용액 속의 상기 덱스트란-40은 5.5% 덱스트란-40이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 제2 희석 용액 속의 상기 덱스트란-40은 10% 덱스트란-40이다. 다른 구체적인 구현예에서, HAS를 포함하는 상기 용액 속의 HSA는 1 내지 115 % HSA이다. 다른 구체적인 구현예에서, HSA를 포함하는 상기 용액 속의 HSA는 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15% HSA이다. 다른 구체적인 구현예에서, HSA를 포함하는 상기 용액 속의 HSA는 10% HSA이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 제1 희석 용액은 HSA를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 제1 희석 용액 속의 HSA는 10% HSA이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 제1 희석 용액은 동결보호제를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 동결보호제는 DMSO이다. 다른 구체적인 구현예에서, 상기 제2 희석 용액 속의 상기 덱스트란-40은 약 10% 덱스트란-40이다. 다른 구체적인 구현예에서, 세포를 포함하는 상기 조성물은 약 7.5% 내지 약 9% 덱스트란을 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물은 밀리리터당 약 1.0 ±0.3 x 10⁶개의 세포 내지 밀리리터당 약 5.0 ±1.5 x 10⁶개의 세포를 포함한다. 다른 구체적인 구현예에서, 약제학적 조성물은 밀리리터당 약 1.5 x 10⁶개의 세포 내지 밀리리터당 약 3.75 x 10⁶개의 세포를 포함한다.

다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 (a) 동결보전하기 전에, 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포를 포함하는 세포-함유 용액을 여과하여 여과된 세포-함유 용액을 생산하는 단계; (b) 여과된 세포-함유 용액 속에서 세포를 밀리리터당 약 1 내지 50 x 10⁶, 1 내지 40 x 10⁶, 1 내지 30 x 10⁶, 1 내지 20 x 10⁶, 1 내지 15 x 10⁶, 또는 1 내지 10 x 10⁶개의 세포에서 동결보존하는 단계; (c) 세포를 해동하는 단계; 및 (d) 여과된 세포-함유 용액을 덱스트란-40 용액을 사용하여 약 1:1 내지 약 1:11(v/v)로 희석시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다. 특정 구현예에서, 세포의 수가 단계 (a) 전에 밀리리터당 약 10 ± 3 x 10⁶개의 미만의 세포인 경우, 여과는 선택사항이다. 다른 구체적인 구현예에서, 단계 (b)에서 세포가 밀리리터당 약 10 ± 3 x 10⁶개의 세포에서 동결보존되는 경우, 단계 (b)에서 세포는 약 5% 내지 약 10% 덱스트란-40 및 HSA를 포함하는 용액 속에서 동결보존된다. 특정 구현예에서, 단계 (b)에서 상기 희석단계는 밀리리터당 약 15 x 10⁶개 이하의 세포까지이다.

다른 구현예에서, 약제학적 조성물은: (a) 태반 세포, 예컨대, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능성 세포를 10% HSA를 포함하는 5.5% 덱스트란-40 용액 속에 현탁시켜 세포-함유 용액을 형성시키는 단계; (b) 세포-함유 용액을 70μM 여과기를 통해 여과하는 단계; (c) 세포-함유 용액을 5.5% 덱스트란-40, 10% HSA, 및 5% DMSO를 포함하는 용액을 사용하여 밀리리터당 약 1 내지 50 x 10⁶, 1 내지 40 x 10⁶, 1 내지 30 x 10⁶, 1 내지 20 x 10⁶, 1 내지 15 x 10⁶, 또는 1 내지 10 x 10⁶개의 세포로 희석시키는 단계; (d) 세포를 동결보존시키는 단계; (e) 세포를 해동시키는 단계; 및 (f) 세포 함유 용액을 10% 덱스트란-40을 사용하여 1:1 내지 1:11 (v/v)로 희석시키는 단계를 포함하는 방법으로 제조된다. 특정 구현예에서, 단계 (c)에서 상기 희석은 밀리리터당 약 15 x 10⁶개 이하의 세포이다. 특정 구현예에서, 단계 (c)에서 상기 희석은 약 10 ± 3 x 10⁶개 이하의 세포/mL이다. 특정 구현예에서, 단계 (c)에서 상기 희석은 약 7.5 x 10⁶개 이하의 세포/mL이다.

다른 구현예에서, 세포를 포함하는 조성물은 (a) 다수의 세포를 원심분리하여 세포를 수집하는 단계; (b) 세포를 5.5% 덱스트란-40 속에 재현탁시키는 단계; (c) 세포를 원심분리하여 세포를 수집하는 단계; (d) 세포를 10% HSA를 포함하는 5.5% 덱스트란-40 용액 속에 재현탁시키는 단계; (e) 세포를 70μM 여과기를 통해 여과하는 단계; (f) 세포를 5.5% 덱스트란-40, 10% HSA, 및 5% DMSO 속에 밀리리터당 약 1 내지 50 x 10⁶, 1 내지 40 x 10⁶, 1 내지 30 x 10⁶, 1 내지 20 x 10⁶, 1 내지 15 x 10⁶, 또는 1 내지 10 x 10⁶개의 세포로 희석시키는 단계; (g) 세포를 동결보존하는 단계; (h) 세포를 해동하는 단계; 및 (i) 세포를 10% 덱스트란-40을 사용하여 1:1 내지 11:11 (v/v)로 희석하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다. 특정 구현예에서, 단계 (f)에서 상기 희석은 밀리리터당 약 15 x 10⁶개 이하의 세포이다. 특정 구현예에서, 단계(f)에서 상기 희석은 약 10 ± 3 x 10⁶개 이하의 세포/mL이다. 특정 구현예에서, 단계(f)에서 상기 희석은 약 7.5 x 10⁶개의 세포/mL이다. 다른 특정 구현예에서, 세포의 수가 밀리리터당 약 10 ± 3 x 10⁶개 미만의 세포인 경우, 여과는 선택사항이다.

조성물, 예컨대, 본원에 기술된, 분리된 태반 세포를 포함하는 약제학적 조성물은 본원에 기술된 분리된 태반 세포 중 어느 것도 포함할 수 있다.

세포 생성물의 투여에 적합한, 다른 주사가능한 제형도 사용할 수 있다.

일 구현예에서, 약제학적 조성물은 실질적으로, 또는 완전히 비-모체 기원인, 즉, 태아 유전형을 지닌, 예컨대, 적어도 약 90%, 95%, 98%, 99% 또는 약 100% 비-모체 기원인 분리된 태반 세포를 포함한다. 예를 들면, 일 구현예에서, 약제학적 조성물은 CD200+ 및 HLA-G-; CD73+, CD105+, 및 CD200+; CD200+ 및 OCT-4+; CD73+, CD105+ 및 HLA-G-; CD73+ 및 CD105+이고, 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우 분리된 태반 세포의 상기 집단을 포함하는 태반 세포의 집단 속에서 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진하거나; OCT-4+이고 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우 분리된 태반 세포의 상기 집단을 포함하는 태반 세포의 집단에서 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진하는 분리된 태반 세포의 집단; 또는 이의 조합을 포함하고, 여기서 상기 분리된 태반 세포의 적어도 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%는 비-모체 기원이다. 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 CD10+, CD105+ 및 CD34-; CD10+, CD105+, CD200+ 및 CD34-; CD10+, CD105+, CD200+, CD34- 및 CD90+ 또는 CD45- 중 적어도 하나; CD10+, CD90+, CD105+, CD200+, CD34- 및 CD45-; CD10+, CD90+, CD105+, CD200+, CD34- 및 CD45-; CD200+ 및 HLA-G-; CD73+, CD105+, 및 CD200+; CD200+ 및 OCT-4+; CD73+, CD105+ 및 HLA-G-; CD73+ 및 CD105+이고, 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우 분리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단에서 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진하거나; OCT-4+이고 태반 세포의 집단이 배아-유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양되는 경우 상기 분리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단내에서 하나 이상의 배아-유사체의 형성을 촉진하거나; CD117-, CD133-, KDR-, CD80-, CD86-, HLA-A, B, C+, HLA-DP, DQ, DR- 및/또는 PDL1+ 중 하나 이상인 분리된 태반 세포의 집단; 또는 상기 세포의 집단의 조합을 포함하며, 여기서 상기 분리된 태반 세포 중 적어도 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%는 비-모체 기원이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 또한 태반으로부터 수득되지 않은 줄기 세포를 포함한다.

본원에서 제공된, 조성물, 예컨대, 약제학적 조성물 중 분리된 태반 세포는 단일 공여자, 또는 다수의 공여자로부터 기원한 태반 세포를 포함할 수 있다. 분리된 태반 세포는 의도된 수용체에 대해 완전하게 HLA-일치하거나, 부분적으로 또는 완전히 HLA-불일치될 수 있다.

4.3.3 분리된 태반 세포를 포함하는 매트릭스

태반 세포, 또는 분리된 태반 세포의 집단을 포함하는 매트릭스, 하이드로겔, 스캐폴드 등을 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 이러한 조성물은 액체 현탁액 속에서 세포 대신, 또는 세포 외에 사용될 수 있다.

본원에 기술된 분리된 태반 세포는 천연 매트릭스, 예컨대, 양막 물질과 같은 태반 생체물질 위에 씨딩될 수 있다. 이러한 양막 물질은 예컨대, 포유동물 태반으로부터 직접 절개되거나; 고정되거나 열 처리된 양막, 실질적으로 건조된(즉, <20% H2O) 양막, 융모막, 실질적으로 건조된 융모막, 실질적으로 건조된 양막 및 융모막 등일 수 있다. 분리된 태반 세포가 씨딩된 바람직한 태반 생체물질은 해리리(Hariri)의 미국 특허 공보 제2004/0048796호에 기술되어 있으며, 이의 개시내용은 이의 전문이 참고로 본원에 포함된다.

본원에 기술된 분리된 태반 세포는 예컨대, 주사에 적합한 하이드로겔 용액 속에 현탁될 수 있다. 이러한 조성물에 적합한 하이드로겔은 RAD16와 같은 자가-조립되는 펩타이드를 포함한다. 일 구현예에서, 세포를 포함하는 하이드로겔 용액은 예를 들면, 주형 속에서 경화되도록 하여 이식을 위해 속에 분산된 세포를 갖는 매트릭스를 형성할 수 있다. 이러한 매트릭스 속의 분리된 태반 세포는 또한 세포가 이식 전에 유사분열적으로 증식되도록 배양할 수 있다. 하이드로겔은 공유결합, 이온 결합, 또는 수소 결합을 통해 가교결합되어 물 분자를 가두어 겔을 형성하는 3차원의 개방-격자 구조를 생성하는 유기 중합체(천연 또는 합성)이다. 하이드로겔-형성 물질은 이온적으로 가교결합된, 알기네이트 및 이의 염과 같은 다당류, 펩타이드, 폴리포스파진, 및 폴리아크릴레이트, 또는 온도 또는 pH 각각에 의해 가교결합된 폴리에틸렌 옥사이드-폴리프로필렌 글리콜 블록 공중합체와 같은 블록 중합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 하이드로겔 또는 매트릭스는 생분해가능하다.

일부 구현예에서, 제형은 반응계내에서(in situ) 중합가능한 겔을 포함한다(참고: 예컨대, 미국 특허 출원 공보 제2002/0022676호, 이의 개시내용은 이의 전문이 본원에 참고로 포함됨; Anseth et al., J. Control Release, 78(1-3):199-209 (2002); Wang et al., Biomaterials, 24(22):3969-80 (2003)).

일부 구현예에서, 중합체는 하전된 측쇄 그룹, 또는 이의 1가 이온 염을 갖는, 물, 완충된 염 용액, 또는 수성 알코올 용액과 같은 수용액 속에서 적어도 부분적으로 가용성이다. 양이온과 반응할 수 있는 산성 측쇄 그룹을 지닌 중합체의 예는 폴리(포스파젠), 폴리(아클릴산), 폴리(메타크릴산), 아크릴산과 메타크릴산의 공중합체, 폴리(비닐 아세테이트) 및 설폰화된 폴리스티렌과 같은 설폰화된 중합체이다. 아크릴산 또는 메타크릴산과 비닐 에테르 단량체 또는 중합체의 반응에 의해 형성된 산성 측쇄 그룹을 지닌 공중합체를 또한 사용할 수 있다. 산성 그룹의 예는 카복실산 그룹, 설폰산 그룹, 할로겐화된(바람직하게는 불소화된) 알코올 그룹, 페놀성 OH 그룹, 및 산성 OH 그룹이다.

특정 구현예에서, 매트릭스는 생흡수가능한 물질, 예컨대, PGA, PLA, PCL 공중합체 또는 배합물, 또는 하이알루론산으로부터 제조된 멀티필라멘트 방적사로 구성될 수 있는 펠트(felt)이다. 방적사는 크립핑(crimping), 컷팅, 카딩(carding) 및 니들링(needling)으로 이루어진 표준 직물 가공 기술을 사용하여 펠트로 제조된다. 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명의 세포는 복합체 구조일 수 있는 발포체 스캐폴드 위에 씨딩된다. 또한, 3차원 프레임워크는 회복되거나, 대체되거나, 증강될 체내의 특수한 구조와 같이, 유용한 형태로 성형될 수 있다. 사용될 수 있는 스캐폴드의 다른 예는 부직 매트, 다공성 발포체, 또는 자가 조립되는 펩타이드를 포함한다. 부직 매트는 글리콜산 및 락트산(예컨대, PGA/PLA)(VICRYL, Ethicon, Inc., 뉴저지주 소머빌 소재)의 합성의, 흡수가능한 공중합체로 구성된 섬유를 사용하여 형성시킬 수 있다. 예컨대, 냉동-건조 또는 동결건조(참고: 예컨대, 미국 특허 제6,355,699호)와 같은 공정에 의해 형성된 폴리(ε-카프롤락톤)/폴리(글리콜산)(PCL/PGA) 공중합체로 구성된 발포체를 또한 스캐폴드로서 사용할 수 있다.

본원에 기술된 분리된 태반 세포 또는 이의 공-배양물은 3차원 프레임워크 또는 스캐폴드 위에 씨딩되어 생체내 이식될 수 있다. 이러한 프레임워크는 어떠한 하나 이상의 성장 인자, 세포, 약물 또는 예컨대, 조직 형성을 자극하는 다른 성분과 함께 이식될 수 있다.

사용될 수 있는 스캐폴드의 예는 부직 매트, 다공성 발포체, 또는 자가 조립되는 펩타이드를 포함한다. 부직 매트는 글리콜산 및 락트산(예컨대, PGA/PLA)(VICRYL, Ethicon, Inc., 뉴저지주 소머빌 소재)의 합성의, 흡수가능한 공중합체로 구성된 섬유를 사용하여 형성시킬 수 있다. 예컨대, 냉동-건조, 또는 동결건조(참고: 예컨대, 미국 특허 제6,355,699호)와 같은 공정에 의해 형성된, 폴리(ε-카프롤락톤)/폴리(글리콜산)(PCL/PGA) 공중합체로 구성된 발포체를 또한 스캐폴드로서 사용할 수 있다.

다른 구현예에서, 분리된 태반 세포는 예컨대, PGA, PLA, PCL 공중합체 또는 배합물, 또는 하이알루론산과 같은 생흡수가능한 물질로 제조된 멀티필라멘트 방적사로 구성될 수 있는 펠트 위에 씨딩되거나, 이와 접촉될 수 있다.

본원에 제공된 분리된 태반 세포는, 다른 구현예에서, 복합체 구조일 수 있는 발포체 스캐폴드 위에 씨딩될 수 있다. 이러한 발포체 스캐폴드는 회복되거나, 대체되거나, 증강될 체내에서 특수한 구조의 일부의 형태와 같은 유용한 형태로 성형될 수 있다. 일부 구현예에서, 프레임워크는 예컨대, 0.1M 아세트산으로 처리한 후 세포 부착을 향상시키기 위해 세포의 항온처리 전에, 폴리리신, PBS, 및/또는 콜라겐 속에 항온처리함으로서 처리된다. 매트릭스의 외부 표면은 매트릭스를 혈장-코팅하거나, 하나 이상의 단백질(예컨대, 콜라게나제, 탄성 섬유, 그물모양 섬유), 당단백질, 글리코사미노글리칸(예컨대, 헤파린 설페이트, 콘드로이틴-4-설페이트, 콘드로이틴-6-설페이트, 더마탄 설페이트, 케라틴 설페이트 등), 세포 매트릭스, 및/또는 젤라틴, 알기네이트, 아가, 아가로즈, 및 식물 검 등과 같지만 이에 한정되지 않는 다른 물질의 첨가와 같은, 세포의 부착 또는 성장 및 조직의 분화를 증진시키도록 개질시킬 수 있다.

일부 구현예에서, 스캐폴드는 이를 비-트롬보겐성으로 되도록 하는 물질을 포함하거나, 이로 처리된다. 이들 처리 및 물질은 또한 내피 성장, 이주, 및 세포외 매트릭스 침착을 촉진시키고 지속킬 수 있다. 이들 물질 및 처리의 예는 라미닌 및 제IV형 콜라겐과 같은 기저막 단백질과 같은 천연 물질, EPTFE와 같은 합성 물질, 및 PURSPAN^TM(The Polymer Technology Group, Inc., 캘리포니아주 버클리 소재)와 같은 세그먼트화된 폴리우레탄우레아 실리콘을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 스캐폴드는 또한 헤파린과 같은 혈전방지제를 포함할 수 있으며; 스캐폴드는 또한 분리된 태반 세포로 씨딩하기 전에 표면 전하를 변경시키기 위해(예컨대, 혈장으로 코팅) 처리할 수 있다.

본원에 제공된 태반 세포(예컨대, PDAC)는 또한 모노-, 디-, 트리-, 알파-트리-, 베타-트리-, 및 테트라-인산칼슘, 하이드록시아파타이트, 플루오로아파타이트, 황산칼슘, 불화칼슘, 산화칼슘, 탄산칼슘, 인산칼슘마그네슘, BIOGLASS®과 같은 생물학적으로 활성인 유리, 및 이의 혼합물을 포함하나, 이에 한정되지 않는 생리학적으로 허용되는 세라믹 물질 위에 씨딩하거나, 이와 접촉시킬 수 있다. 현재 상업적으로 이용가능한 다공성 생접합성 세라믹 물질은 SURGIBONE®(CanMedica Corp., 캐나다 소재), ENDOBON®(Merck Biomaterial France, 프랑스 소재), CEROS®(Mathys, AG, 스위스 베틀라흐 소재), 및 HEALOS^TM(DePuy, Inc., 매사츄세츠주 라인햄 소재) 및 VITOSS®, RHAKOSS^TM, 및 CORTOSS®(Orthovita, 펜실베이니아 맬버른 소재)와 같은 광물화된 콜라겐 골 이식 생성물을 포함한다. 프레임워크는 천연 및/또는 합성 물질의 혼합물, 배합물 또는 복합체일 수 있다.

일 구현예에서, 분리된 태반 세포는 약 0.5 x 10⁶ 내지 약 8 x 10⁶개의 세포/mL에서 적합한 스캐폴드 위에 씨딩되거나 이와 접촉된다.

5. 실시예

5.1 실시예 1: 치료 방법

5.1.1 태반 줄기 세포를 사용한 DPN의 치료

제I형 당뇨병을 지닌 52세의 남성은 그의 왼쪽 다리에 저림과 통증을 나타낸다. 당뇨병성 말초 신경병증이 진단된다. 진단 후, 대상체는 다음의 요법에 따라 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ 태반 줄기 세포로 치료된다: 3 x 10⁷ CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ 태반 줄기 세포를 3회의 연속적인 개월 동안 1개월 기준으로 근육내 투여된다. 당해 개인은 DPN의 어떠한 증상에 있어서 개선의 신호에 대해 다음 24개월에 걸쳐 모니터링된다. 치료학적 효능은 DPN의 증상 중 어느 것이 피부 생검에서 상피 신경 섬유의 정량화 및 정성화(qualification)에 의해 측정된 것으로서, 상피 신경 섬유 밀도에 있어서의 개선을 포함하여, 모니터링 기간 동안 개선되는지의 여부로 입증된다.

5.2 실시예 2: DPN 치료 프로토콜

당뇨병성 말초 신경병증(DPN)을 지닌, 적어도 18세의 대상체를 CD10⁺, CD34^-, CD105⁺, CD200⁺ 태반 줄기 세포로 치료한다. 대상체 그룹 I: 3 x 10⁶개의 CD10⁺, CD34^-, CD105⁺, CD200⁺ 태반 줄기 세포를 1일(치료 첫날), 29일 및 57일째에 근육내 투여한다. 대상체 그룹 II: 3 x 10⁷개의 CD10⁺, CD34^-, CD105⁺, CD200⁺ 태반 줄기 세포를 1일(치료 첫날), 29일, 및 57일에 근육내 투여한다. 대상체 그룹 III: 위약을 1일(치료 첫날), 29일, 및 57일에 근육내 투여한다. 태반 줄기 세포의 각각의 투여량은 0.30 ml의 15회 주사로서 투여되며, 투여는 대상체의 무릎 아래 및 발목 위이다.

임상적 종점(Endpoints)

DPN을 치료하기 위한 CD10⁺, CD34^-, CD105⁺, CD200⁺ 태반 줄기 세포의 효능에 대한 주요 임상 종점은 피부 생검에서 상피 신경 섬유의 정량화 및 정성화에 의해 측정된 것으로서 상피 신경 섬유 밀도에 있어서의 개선일 수 있다. 신경 섬유의 수/밀도에 있어서의 증가는 신경병증 개선의 지표이다.

대상체 선택

다음의 적임 기준을 사용하여 CD10⁺, CD34^-, CD105⁺, CD200⁺ 태반 줄기 세포를 사용한 치료가 적절하게 고려되는 대상체를 선택할 수 있다. 모든 관련된 의학적 및 비-의학적 상태는 당해 치료 프로토콜이 특수한 대상체에 대해 적합한지를 결정하는 경우 고려된다.

대상체는 치료 프로토콜에 대해 적격한 다음 조건을 충족하여야 한다:

· 적어도 18세 이상의 남성 및 여성.

· 미국 당뇨병 협회(ADA) 또는 세계 보건 기구(WHO) 기준에 의해 정의된 제2형 당뇨병(DM).

· 다음을 지닌 제2형 당뇨병으로 인하여 당뇨병성 말초 신경병증(DPN)에 대해 확립된 기준을 충족한다: (a) 비정상인 증상(NTSS-6 = 6점(전체 점수) 또는 하나 이상의 증상에 대해 ≥ 2.0점), 및 (b) 비정상적인 신호(2-24의 UENS 점수 및/또는 2-10의 NIS-LL 점수).

· 임신 가능성이 있는 여성은 연구 치료요법을 사용한 치료 전에 스크리닝에서 혈청 임신 시험에 음성이고 뇨 임신 시험에 음성이어야 한다. 또한, 성적으로 왕성한 임신가능성이 있는 여성(FCBP)은 연구 기간 동안, 경구, 주사가능한, 또는 이식가능한 호르몬 피임법, 관 결찰술(tubal ligation), 자궁내 장치(IUD), 살정자제가 들어있는 차단식 피임수단 또는 정관절제수술한 파트너와 같이 적절한 형태의 피임 방법중 2개의 동시 사용에 동의하여야 한다.

· 남성(정관수술한 남성 포함)은 연구 기간 동안 FCBP와의 성 활동에 참여시 차단식 피임수단(라텍스 콘돔)을 사용하는 것에 동의하여야 한다.

다음 상태 중 하나 이상을 지닌 대상체는 치료 프로토콜로부터 배제될 수 있다:

· 대상체가 연구에 참여하는 것을 방지할 수 있는 어떠한 유의적인 의학적 상태, 실험실적 이상, 또는 정신의학적 질병.

· 당뇨병 대상체에서 신경병증의 다른 원인: 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증; 비타민 B12 결핍으로 인한 신경병증, 갑상선기능저하증, 및 요독증; 또는 포착(entrapment) 또는 외상으로 인한 신경병증.

· 급성의 고통스러운 당뇨병성 신경병증 증후군의 회복 과정: 급격한 혈당증 조절의 설정시 존재하는 치료-유도된 당뇨병성 신경변증; 당뇨병성 신경병증 악액질; 및 당뇨병성 식욕부진, 의도적인 체중 감소로 관찰되는 당뇨병성 신경병증.

· 심각한 말초 동맥 질환(PAD)의 진단 전 병력.

· 다수의 근육내(IM) 주사로 인한 심각한 고통(bruising) 또는 출혈을 피하기 위한 혈소판감소증 및 응고장애.

· 대상체가 연구에 참여한 경우 그 또는 그녀가 있는 실험실적 비정상의 존재를 포함한 어떠한 상태.

· 연구로부터 데이타를 해석하는 능력을 혼동하는 어떠한 상태.

· DPN의 치료를 위해 아편유사물질을 섭취하는 대상체.

· 임식중이거나 수유중인 여성.

· 스크리닝에서 체질량 지수가 > 40 kg/m2인 대상체.

· DM 및/또는 유의적인 신경학적 합병 질환(예컨대, 파킨슨 질환(Parkinson's disease), 간질, 다발경화증, 알코올성 말초 신경병증), 또는 신경병증의 증상을 유발하는 것으로 의심된 제제에 대한 노출(메트로니다졸, 항결핵제 의약, 및 중금속을 포함하나, 이에 한정되지 않음).

· 감각 신경 활동 전위의 부재, 또는 UENS>24 및 또는 NIS-LL>10에 의해 측정된 것으로서 진전된 신경병증.

· 임계 사지 허혈(Critical Limb Ischemia)의 사전 진단 병력.

· 진성 당뇨병(DM)으로 인한 당뇨병성 발 궤양(어느 시기이든지) 및/또는 사지 혈관재형성 수술(들) 및/또는 절단(들)의 병력.

· 제1형 DM 및/또는 다음 중 어느 것의 진단: 35세 이전에 DM의 진단; DM 진단 후 1년 내에 DM을 치료하는데 필요한 인슐린; 당뇨병성 케토산증의 병력.

· 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제(AST), 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 또는 알칼린 포스파타제 ≥ 2.5 x 스크리닝시 정상의 상한치(ULN).

· 신장병 연구 등식의 식이(diet)의 변형을 사용하여 계산한 스크리닝시 추정된 사구체 여과율(eGFR) < 30 mL/분/1.73 m2 또는 과거에 비정상 eGFR의 병력 < 60 및 정상 이하 > 15 mL/min/1.73 m2의 감소의 병력.

· 스크리닝시 빌리루빈 수준 > 2 mg/dL(대상체가 공지된 질베르트병(Gilbert's disease)을 가지지 않는 경우).

· IP를 투여하기 전 4주내에 전신계 항생제를 사용한 어떠한 감염의 치료 또는 치료되지 않는 만성 감염.

· 조절되지 않은 고혈압(대상체가 적어도 5분 동안 앉아서 쉬고 있는 동안 취해진 2회의 독립된 측정에서 > 100 mmHg의 확장기 혈압 또는 > 180 mmHg의 수축기 혈압으로 정의됨).

· 피험자 동의서(ICF)에 서명하기 전 6개월내 악성 심실 부정맥, CCS 제III 내지 제IV 부류 협심증, 심근경색/관상동맥 중재술(percutaneous coronary intervention: PCI)/관상 동맥 우회술(CABG)의 병력, 이후 3개월내 진행중인 관상 동맥 재개통술, 피험자 동의서에 서명하기 전 6개월내 일과성 허혈성 발작/뇌혈관 사고, 및/또는 뉴욕 심장 연합회(New York Heart Association)[NYHA] 단계 III 또는 IV 울혈성 심부전. 주목: 안정한 캐나다 심혈관 학회(Canadian Cardiovascular Society: CCS) 제I 내지 제II 부류 협심증이 허용된다.

· 스크리닝시 불량하게 조절된 DM(헤모글로빈 A1c > 10%).

· 스크리닝시 치료되지 않은 증식성 망막병증.

· 수반성 질병으로 인한 2년 미만의 기대 수명.

· 다음의 상황을 제외한 5년내 악성종양의 병력: 피부의 기저 세포 또는 평편 세포 암종, 현재 치유되거나 후속적인 추가 조사에 음성을 갖는 양성인 파파니콜로도말표본(positive Pap smear)으로 고려되는 암의 원격 병력.

· 소 또는 돼지 생성물의 성분, 덱스트란 40, 및 디메틸 설폭사이드[DMSO])중 어느 것에 대한 과민성의 병력.

· 대상체가 연구 치료요법을 사용한 치료 전 90일내(또는 보다 더 길 수도 있는, 5의 반감기)에 연구용 제제 - 미국 식품의약국(FDA)에 의해 특정 처방의 시판 용으로 승인되지 않은 제제 또는 장치 - 를 제공받거나 당해 연구의 완료 전에 다른 치료요법 연구에 참여하기로 계획되어 있거나 특정 시기에 앞서의 유전자 또는 세포 치료요법을 받은 경우.

임상 결과

하나 이상의 임상 종점에 있어서의 개선이 입증되는 경우, DPN의 치료시 CD10⁺, CD34^-, CD105⁺, CD200⁺ 태반 줄기 세포의 효능이 입증된다.

등가물:

본 개시내용은 본원에 기술된 특정 구현예에 의해 영역이 제한되어서는 안된다. 더욱이, 기술된 것 외에, 본원에 제공된 주제의 다양한 변형이 앞성의 설명으로부터 당해 분야의 숙련가에게 명백해질 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 영역 내에 속하는 것으로 의도된다.

다양한 공보, 특허 및 특허출원이 본원에 인용되어 있으며, 이의 개시내용은 이의 전문이 참고로 포함된다.

Claims

당뇨병성 말초 신경병증(diabetic peripheral neuropathy)을 가진 대상체(subject)에게 CD10⁺, CD34^-, CD105⁺, CD200⁺ 태반 줄기 세포를 포함하는 조성물을 투여함을 포함하는, 당뇨병성 말초 신경병증을 지닌 대상체를 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 당뇨병성 말초 신경병증이 상기 대상체의 손, 발, 팔, 또는 다리 중 하나 이상에 영향을 미치는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 당뇨병성 말초 신경병증이 상기 대상체의 손, 발, 팔, 또는 다리 각각에 영향을 미치는, 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 태반 줄기 세포를 포함하는 상기 조성물이 근육 내로(intramuscularly) 투여되는, 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 1 x 10⁵ 내지 1 x 10⁶, 1 x 10⁶ 내지 3 x 10⁶, 3 x 10⁶ 내지 5 x 10⁶, 5 x 10⁶ 내지 1 x 10⁷, 1 x 10⁷ 내지 3 x 10⁷, 3 x 10⁷ 내지 5 x 10⁷, 5 x 10⁷ 내지 1 x 10⁸, 1 x 10⁸ 내지 3 x 10⁸, 3 x 10⁸ 내지 5 x 10⁸, 5 x 10⁸ 내지 1 x 10⁹, 1 x 10⁹ 내지 5 x 10⁹, 또는 5 x 10⁹ 내지 1 x 10¹⁰개의 태반 줄기 세포를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 약 1 x 10⁵, 3 x 10⁵, 5 x 10⁵, 1 x 10⁶, 3 x 10⁶, 5 x 10⁶, 1 x 10⁷, 3 x 10⁷, 5 x 10⁷, 1 x 10⁸, 3 x 10⁸, 5 x 10⁸, 1 x 10⁹, 5 x 10⁹, 또는 1 x 10¹⁰개의 태반 줄기 세포를 포함하는, 방법.
제6항에 있어서, 상기 조성물이 약 3 x 10⁶개의 태반 줄기 세포를 포함하는, 방법.
제6항에 있어서, 상기 조성물이 약 3 x 10⁷개의 태반 줄기 세포를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료가 상기 대상체에서 상피 신경 섬유 밀도의 증가를 야기하는, 방법.
제9항에 있어서, 상기 대상체에서 상피 신경 섬유 밀도에 있어서 상기 증가가 피부 생검으로 측정되는 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료가 상기 당뇨병성 말초 신경병증의 하나 이상의 증상에 있어서의 개선을 야기하는, 방법.
제11항에 있어서, 상기 하나 이상의 증상이 저림 또는, 통증 또는 온도 변화를 느끼는 능력의 감소, 사지에서 아린감 또는 화끈거림(buring sensation), 날카로운 통증 또는 경련(cramps), 접촉에 대한 증가된 민감성, 근육 약화, 반사작용의 상실(예컨대, 발목에서), 균형 및/또는 조정력(coordination)의 상실, 및/또는 발 문제(예컨대, 궤양, 감염, 변형, 및 골 및 관절 통증)인, 방법.