KR20180036982A - 베타-턴 펩티도미메틱 사이클릭 염의 용액상 합성 및 결정화 - Google Patents

베타-턴 펩티도미메틱 사이클릭 염의 용액상 합성 및 결정화 Download PDF

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Abstract

본 개시는 화학식 I의 β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 염을 제조하고, 결정화시키는 방법에 관한 것이다: 상기 화학식에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R10, X, Y 및 n은 명세서에서 정의된 바와 같다. 본 개시는 β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 화합물 및 이의 염의 결정질형을 제조하기 위한 보다 효율적인 경로를 제공한다.

Description

베타-턴 펩티도미메틱 사이클릭 염의 용액상 합성 및 결정화
상호-참조
본 출원은 2015년 7월 9일자 출원된 미국 가특허 출원 번호 62/190,596의 우선권을 주장하며, 그 전체 내용이 본원에 참고로 포함된다.
발명의 분야
본 개시는 β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 염(β-turn cyclic peptidomimetic salt)의 결정질형을 제조하는 방법에 관한 것이다.
서론
β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 화합물의 부류 중 몇몇 화합물의 유망한 약리학적 활성을 고려하면, 확장성 및/또는 비용 효율적인 생산을 가능하게 하는 새로운 합성 방법론의 개발이 필요하다.
따라서, 본 발명의 일 양태는 β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 화합물을 제조하는 신규 합성 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 추가의 양태는 이들 화합물을 생성하는 상업적으로 실행가능한 방법을 제공하는 것이다.
이들 염의 개선된 정제 방법을 제공하기 위해 β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 염을 결정화하거나 침전시키는 방법을 개발하는 것이 유리할 것이다. 추가로, β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 염의 결정질 또는 고도로 정제된 침전형이 약제 조성물을 제형하는데 유용할 것이다. 따라서, 결정질 또는 침전된 β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 화합물 또는 이의 염을 생성하는 방법이 필요하다.
발명의 개요
여러 구체예에서, 본 발명은 β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 염의 합성 방법을 제공한다. 합성 방법은 도 1(도식 1)에 표시된 구체예에서 예시된다.
본 개시의 특정 구체예는 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 결정질 염을 제조하는 방법으로서,
(a) 하기 화학식(IV)의 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 제공하는 단계;
(b) 화학식(IV)의 화합물을 선택적으로 탈보호시켜 하기 화학식(III)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 형성시키는 단계;
(c) 화학식(III)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 분자내 방향족 친핵성 치환 반응에 의해 고리화시켜 하기 화학식(II)의 화합물을 형성시키는 단계;
(d) 화학식(II)의 화합물 중의 아미노산 측쇄 보호기를 탈보호시켜 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염을 얻는 단계; 및
(e) 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염을 결정화시켜 결정질형의 화학식(I)의 화합물을 얻는 단계를 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
상기 식에서,
R1은 수소, C1 내지 C6 알킬, 아릴, 또는 천연 또는 비천연 아미노산의 아미노산 측쇄 치환기이고;
R3은 수소, C1 내지 C6 알킬, 아릴, 또는 천연 또는 비천연 아미노산의 아미노산 측쇄 치환기이고;
R2 및 R4는 독립적으로 수소 또는 C1 내지 C6 알킬이거나, R1 및 R2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실 기를 형성하거나, R1 및 R2, R3 및 R4는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실 기를 형성하고;
Y는 수소, -NO2, -COOR14, -OC(R14)3, -SO3R14, 및 -SO2R14로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R5, R6, R7, R8, 및 R9는 독립적으로 수소 또는 C1 내지 C6 알킬이고;
R10은 수소, 메틸, t-부틸, 또는 보호기이고;
각각의 R14는 수소, 알킬 또는 아릴이고;
X는 O, NR9, S, P, Se, C1 내지 C6 알킬렌, SO, SO2 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택되고;
n은 0, 1, 2, 3, 4 또는 5이고;
R11 및 R13은 독립적으로 수소 또는 보호기이고;
R12는 보호기이고;
W1 및 W3은 독립적으로 각각 R11 및 R13에 대한 결합 지점에서 하나의 수소 원자가 적은 천연 또는 비천연 아미노산의 아미노산 측쇄 치환기이고;
Z는 F, Cl, Br 및 I로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 구체예에서, 본 개시는 화학식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 결정질 HCl 염 및 이의 제조 방법을 제공한다.
도면은 일반적으로, 본 발명에서 논의되는 여러 구체예를 예시적으로, 그러나 비제한적으로 예시한다.
도 1은 본 개시의 구체예에 따른 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염의 결정질형을 제조하는 합성 방법의 일반적인 개략도이다.
도 2는 본 개시의 구체예에 따른 구조식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 HCl 염의 결정질형을 제조하기 위한 예시적인 반응식이다.
도 3은 겔 중에 존재하는 불규칙 형태로부터 산성 용액 중에 존재하는 니들형(needle-like) 결정으로의 D3의 결정의 결정 변환을 도시한 현미경 이미지를 도시한 것이다.
도 4는 결정화 동안 상이한시간에서 HCl의 다양한 농도로 처리된 후 본 개시의 구체예에 따라 제조된 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염의 함량을 나타내는 막대 챠트이다.
도 5는 본 개시의 구체예에 따른 시간에 따른 결정화 단계 동안 생성된 불순물의 함량을 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 개시의 구체예에 따른 시간에 따른 결정화 단계 동안 생성된 또 다른 불순물의 함량을 나타내는 그래프이다.
도 7은 본 개시의 구체예에 따른 시간에 따른 결정화 단계 동안 생성된 또 다른 불순물의 함량을 나타내는 그래프이다.
도 8은 본 개시의 구체예에 따른 결정화 단계에 대한 시간 사이클링 프로파일의 도표이다.
도 9는 겔 중에 존재하는 불규칙 모양으로부터 산성 용액 중에 존재하는 니들형 결정으로의 D3 HCl 염의 결정의 출현을 나타내는 현미경 이미지를 나타낸다.
도 10은 건조시 D3 HCl 염의 결정의 결정질형 V로부터 형 IV로의 결정 변환을 나타내는 현미경 이미지를 나타낸다.
도 11은 0.1M HCl 용액 중 미정제 D3 HCl 염 슬러리의 XRPD(X-선 분말 회절) 분석의 결과이다.
도 12는 0.001M HCl 용액 중 미정제 D3 HCl 염 슬러리의 XRPD 분석의 결과이다.
도 13a은 안정성 검사를 위한 3주 후의 0.1M HCl 용액 중 미정제 D3 HCl 염 슬러리(상부 곡선) 및 기준 D3 HCl 염 결정질형 V(하부 곡선)의 XRPD 분석의 결과이다.
도 13b는 기준 D3 HCl 염 결정질형 V의 XRPD 분석의 결과이다.
도 14는 본 개시의 구체예에 따른 D3 HCl 염의 형 IV을 나타내는 현미경 이미지를 나타낸다.
도 15는 D3 샘플의 비정질 HCl 염의 XRPD 분석의 결과이다.
도 16은 D3의 비정질 HCl 염의 시차 주사 열량측정(differential scanning calorimetry)(DSC)이다.
도 17은 D3의 비정질 HCl 염의 열중량 분석(thermogravimetric analysis)(TGA)이다.
도 18은 시간의 함수로서 백분율로서의 질량 변화 및 시간의 함수로서 목표 P/Po(즉, 설정점 상대 습도)를 나타내는, D3의 비정질 HCl 염의 동적 증기 흡착(dynamic vapor sorption)(DVS)이다.
도 19는 변화가 목표 P/Po(즉, 설정점 상대 습도)에 대한 질량인 것을 나타내는, D3의 비정질 HCl 염에 대한 동적 증기 흡착(DVS) 등온 플롯이다.
도 20은 DVS-분석으로부터의 D3 물질의 비정질 HCl 염의 열중량 분석(TGA)이다.
도 21은 DVS 전 및 후의 D3 샘플의 비정질 HCl 염의 XRPD 분석의 결과이다.
도 22는 데시케이터(desicator)에 제공된 수증기와의 평형 후 D3의 비정질 HCl 염의 열중량 분석(TGA)이다.
도 23은 수증기와의 평형 후 D3의 비정질 HCl 염의 XRPD 분석이다.
발명의 상세한 설명
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 단수형은 특허 문헌에서 일반적인 것과 같이 사용되어 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"의 어떠한 다른 예 또는 사용과 무관하게, 하나 또는 하나 초과를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약"은 명시된 양과 동일한 부근에 있거나 대략적으로, 근접하게, 거의 같거나, 동일한 양을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "미정제"는 순도가 90% 미만인 화합물 또는 이의 염을 나타낸다.
β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 순도는 "퍼센트 순도"로 언급된다. 순도 측정이 결정질 제제의 결정도의 척도는 아니다. 순도는 핵자기 공명(nuclear magnetic resonance)(NMR), 가스 크로마토그래피/질량 분광법(gas chromatography/mass spectroscopy)(GC/MS), 액체 크로마토그래피/질량 분광법(LC/MS), 또는 고압 액체 크로마토그래피(high pressure liquid chromatography)(HPLC)를 포함하는 어떠한 수단에 의해 측정될 수 있다.
"결정"은 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 하나 이상의 결정을 나타낸다. 결정의 측정은 광학 현미경, 전자 현미경, x-선 분말 회절, 고체 상태 핵자기 공명(SSNMR) 또는 편광 현미경을 포함하는 어떠한 수단에 의해 측정될 수 있다. 현미경검사는 결정 길이, 직경, 폭, 크기 및 모양 뿐만 아니라 결정이 단일 입자로 존재하는지 또는 다결정질 인지를 알아내는데 사용될 수 있다.
"결정질" 또는 "결정질형"은 결정을 포함하는 화합물을 나타낸다. 본 발명의 구체예에서, β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정질 또는 결정질형은 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정을 포함한다. 일 구체예에서, 결정질 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염은 소정량의 비정질 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염을 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 결정질 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염은 50 중량% 초과의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 결정질 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염은 60 중량%, 70 중량%, 80 중량%, 90 중량% 또는 95 중량% 초과의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정을 포함한다. 결정질 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염은 50-60 중량%, 60-70 중량%, 70-80 중량%, 80-90 중량% 또는 90-95 중량%의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 결정질의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염은 95 중량% 초과의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정, 예를 들어, 적어도 96 중량%, 97 중량%, 98 중량% 또는 99 중량%의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정 또는 100 중량%의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정을 포함한다.
"비정질"형의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염은 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정을 거의 또는 전혀 포함하지 않는 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염 제제를 나타낸다. 일 구체예에서, 비정질 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염은 20 중량%, 10 중량%, 5 중량% 또는 1 중량% 미만의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물 또는 이의 염의 결정을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "염"은 침전제로서 작용할 수 있는 이온성 화합물을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 무기 산, 예컨대 염산, 브롬화수소산; 또는 유기 산, 예컨대 벤젠 설폰산, 말레산, 옥살산, 푸마르산, 석신산, p-톨루엔설폰산 및 말산으로부터 선택된 적합한 산으로 형성되는 산 부가 염 화합물을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비천연 아미노산"은 상기 기술된 바와 같은 천연 아미노산이 아닌 모든 아미노산을 나타낸다. 이러한 아미노산은 상기 기술된 19개의 광학 활성 및 글리신 천연 발생 아미노산 중 어느 하나의 D-이성질체를 포함한다. 비천연 아미노산은 또한 호모세린, 호모시스테인, 시트룰린, 2,3-디아미노프로피온산, 하이드록시프롤린, 오르니틴, 노르류신, 및 티록신을 포함한다. 추가의 비천연 아미노산은 당업자들에게 잘 알려져 있다. 비천연 아미노산은 D- 또는 L-이성질체일 수 있다. 비천연 아미노산은 또한 알파 아미노산, 베타 아미노산 또는 감마 아미노산일 수 있다. 비천연 아미노산은 또한 번역후 변형된 아미노산, 예컨대 포스포릴화된 세린, 트레오닌 또는 티로신, 아실화된 라이신, 또는 알킬화된 라이신 또는 아르기닌일 수 있다. 많은 형태의 번역후 변형된 아미노산이 알려져 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "보호기"는 반응이 다작용성 화합물의 또 다른 반응성 자리에서 선택적으로 수행될 수 있도록 특정 작용성 모이어티, 예를 들어, O, S, 또는 N가 일시적으로 블록킹(blocking)됨을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "양성자성 용매"는 하이드록실 기에서와 같이 산소에 결합되거나 아민 기에서와 같이 질소에 결합된 수소를 지닌 용매를 나타낸다. 이러한 용매는 H+(양성자)를 줄 수 있다. 양성자성 용매의 예는 물, 에탄올, 3차-부탄올, 및 디에틸아민을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비양성자성 용매"는 하이드록실 기에서와 같이 산소에 결합되거나 아민 기에서와 같이 질소에 결합된 수소를 거의 또는 전혀 지니지 않은 용매를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "고리"는 원자가 화학식에 사이클릭 형태로 배열되어 있는 화합물을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알킬"은 명시된 탄소 원자 수(즉, C1-C6은 1 내지 6개의 탄소 원자를 의미함)를 갖는 선형, 사이클릭, 분지형 또는 이들의 조합일 수 있는 탄화수소 기를 의미한다. 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 2차-부틸, 펜틸, 이소-아밀, 헥실, 옥틸, 노일 등을 포함한다. 알킬 기는 본원에서 정의되는 바와 같이 임의로 치환될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "알킬렌"은 둘 이상의 위치에 결합된 직쇄 또는 분지쇄 포화된 탄화수소로부터 유도된 포화된 지방족 기, 예컨대, 메틸렌(-CH2-)을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알릴"은 알릴 기(즉, CH2=CH-CH2-)를 함유하는 화합물을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "아릴"은 하나, 두 개 또는 세 개의 고리를 함유하고, 이러한 고리는 함께 펜던트 방식으로 결합될 수 있거나 융합될 수 있는 카보사이클릭 방향족 시스템을 의미한다. 용어 "아릴"은 방향족 라디칼, 예컨대 벤질, 페닐, 나프틸, 안트라세닐, 페난트릴, 인다닐, 인데닐, 안눌레닐, 아줄레닐, 테트라하이드로나프틸, 및 바이페닐을 포함한다. 아릴 기는 본원에서 정의되는 바와 같이 임의로 치환될 수 있다. 용어 "아릴렌"은 수소 원자를 축출함으로써 아릴(상기 정의된 바와 같은)로부터 유도된 어떠한 2가 기를 나타낸다.
기가 "영(null)"인 것으로 정의되는 경우, 이는 기가 없음을 의미한다.
기가 치환되는 경우, 치환기는 비제한적으로, 단독으로 또는 조합하여 하기 기들 또는 특별하게 명시된 기들의 세트로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있다: 저급 알킬, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 알카노일, 저급 헤테로알킬, 저급 헤테로사이클로알킬, 저급 할로알킬, 저급 할로알케닐, 저급 할로알키닐, 저급 퍼할로알킬, 저급 퍼할로알콕시, 저급 사이클로알킬, 페닐, 아릴, 아릴옥시, 저급 알콕시, 저급 할로알콕시, 옥소, 저급 아실옥시, 카보닐, 카복실, 저급 알킬카보닐, 시아노, 수소, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 저급 알킬아미노, 아릴아미노, 아미도, 니트로, 티올, 저급 알킬티오, 아릴티오, 저급 알킬설피닐, 저급 알킬설포닐, 아릴설피닐, 아릴설포닐, 아릴티오, 설포네이트, 설폰산, 삼치환된 실릴, N, SH, SCH3, C(O)CH3, 피리디닐, 티오펜, 푸라닐, 저급 카바메이트, 및 저급 우레아.
본원에서 개시되고 청구되는 바와 같이, 명료함을 목적으로 하고 본 발명을 이해하는데 도움이 되는 하기의 용어 및 약어가 아래에 정의된다:
AcOH―아세트산
BAEA―비스아미노에틸아민(디에틸렌트리아민)
Boc―t-부틸옥시카보닐
tBu―3차-부틸
Cbz―벤질옥시카보닐
CTC―클로로트리틸 클로라이드
DBU―1,8-디아조바이사이클로[5.4.0]운데크-7-엔
DCM―디클로로메탄
DIC―1,3-디이소프로필카보디이미드
DIPEA―N,N-디이소프로필에틸아민
DIPE―디이소프로필 에테르
DMF―디메틸포름아미드
EDC―N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카보디이미드
EtOAc-에틸 아세테이트
Fmoc―9-플루오레닐메톡시카보닐
FNBA―2-플루오로-5-니트로-벤조산
Glu―글루탐산
Gly―글리신
HBTU―O-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸-우로늄-헥사플루오로-포스페이트
HSer―호모세린
HMPB-MBHA―4-하이드록시메틸-3-메톡시페녹시부티르산 MBHA, 또는 4-(4-하이드록시메틸-3-메톡시페녹시)-부티릴-p-메틸-벤즈하이드릴아민
HOBt―N-하이드록시벤조트리아졸
LPPS―액상 펩티드 합성
Lys―라이신
MeCN―아세토니트릴
MeTHF―2-메틸테트라하이드로푸란
MTBE―메틸-3차-부틸 에테르
Mtt―메틸트리틸
Pbf―펜타메틸디하이드로벤조푸란설포닐
SPPS―고상 펩티드 합성
TBAF―테트라부틸암모늄 플루오라이드
TBDMS―3차-부틸디메틸실란
tBu―3차-부틸 에스테르
TFA―트리플루오로아세트산
THF―테트라하이드로푸란
TIS―트리이소프로필실란
TMG―테트라메틸구아니딘
Trt―트리틸
도 1은 (a) 화학식(IV)의 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 제공하는 단계; (b) 화학식(IV)의 화합물을 선택적으로 탈보호시켜 화학식(III)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 형성시키는 단계; (c) 화학식(III)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 분자내 방향족 친핵성 치환 반응에 의해 고리화시켜 화학식(II)의 화합물을 형성시키는 단계; (d) 화학식(II)의 화합물 중의 아미노산 측쇄 보호기를 탈보호시켜 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염을 얻는 단계; 및 (e) 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염을 결정화시켜 결정질형의 화학식(I)의 화합물을 얻는 단계를 포함하는, 화학식(I) β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염의 결정질형을 제조하기 위한 일반적인 경로를 나타내는 도식 1을 나타낸다.
특정 구체예에서, 본 발명은 14 내지 16개의 고리 원자의 매크로사이클릭 고리(macrocyclic ring)를 갖는, 화학식(I)의 결정질 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 염을 제조하는 방법을 제공한다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 R1 및 R3이 아미노산 측쇄 치환기인 화합물을 제공한다. 전형적으로, R1 및 R3이 독립적으로 천연 또는 비천연 아미노산으로부터 유도된다. 예를 들어, R1 및 R3이 독립적으로 거울상이성질체 구조의, 20개의 천연 발생 단백질 아미노산(천연), 또는 변형된 아미노산(비천연)으로부터 유도될 수 있다. 20개의 천연 아미노산은 글리신(Gly), 알라닌(Ala), 발린(Val), 류신(Leu), 이소류신(Ile), 라이신(Lys), 아르기닌(Arg), 히스티딘(His), 프롤린(Pro), 세린(Ser), 트레오닌(Thr), 페닐알라닌(Phe), 티로신(Tyr), 트립토판(Trp), 아스파르트산(Asp), 글루탐산(Glu), 아스파라긴(Asn), 글루타민(Gln), 시스테인(Cys) 및 메티오닌(Met)을 포함하는 알파-아미노산이다. 알파-아미노산의 일반적인 구조식은 화학식 A: H2NCH(R*)COOH로 표시된다. R*는 본 개시에서 R1 또는 R3으로서 나타내는 아미노산의 측쇄 치환기를 나타낸다.
비천연 아미노산은 전형적으로 R* 기가 20개의 천연 아미노산에 사용되는 것이 아닌 어떠한 치환기인 화학식 A를 갖는 어떠한 구조이다. 예를 들어, 문헌(Biochemistry by L. Stryer, 31(1 ed. 1988), Freeman and Company, New York, for structures of the twenty natural amino acids)을 참조하라. 비천연 아미노산은 또한 상기 20개의 알파-아미노산 이외의 천연 발생 화합물일 수 있다.
이러한 비천연 아미노산은 상기 기술된 19개의 광학 활성 및 글리신 천연 발생 아미노산 중 어느 하나의 D-이성질체를 포함한다. 비천연 아미노산은 또한 호모세린, 호모시스테인, 시트룰린, 2,3-디아미노프로피온산, 하이드록시프롤린, 오르니틴, 노르류신, 및 티록신을 포함한다. 추가의 비천연 아미노산은 당업자들에게 잘 알려져 있다. 비천연 아미노산은 D- 또는 L-이성질체일 수 있다. 비천연 아미노산은 또한 화학식 B: H2N(CH)n(R*)COOH(여기서, n은 2 또는 3이고, R*는 20개의 단백질성(proteinogenic) 아미노산 중 어느 하나의 측쇄 치환기 또는 20개의 천연 아미노산에 사용되는 것이 아닌 어떠한 치환기를 나타냄)를 갖는 베타 아미노산 또는 감마 아미노산일 수 있다. 비천연 아미노산은 또한 번역후 변형된 아미노산, 예컨대 포스포릴화된 세린, 트레오닌 또는 티로신, 아실화된 라이신, 또는 알킬화된 라이신 또는 아르기닌일 수 있다. 많은 형태의 번역후 변형된 아미노산이 알려져 있다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 R1 및 R3이 독립적으로 두 개의 상이한 아미노산의 측쇄 치환기인 화합물을 제공한다. 이러한 특정 구체예에서, R1 및 R3은 독립적으로 라이신, 글루탐산, 티로신, 이소류신, 아스파라긴, 아르기닌 또는 트레오닌의 측쇄 치환기이다. 특정 구체예에서, R1 및 R3은 독립적으로 글루탐산, 라이신, 이소류신 또는 아르기닌의 측쇄 치환기이다. 일 구체예에서, R1 및 R3은 독립적으로 글루탐산 또는 라이신의 측쇄 치환기이다. 또 다른 구체예에서, R1 및 R3은 독립적으로 이소류신 또는 아르기닌의 측쇄 치환기이다.
일반적으로, 아미노산 측쇄 치환기(R1 및 R3)는 본 개시의 β-턴 사이클릭 펩티도미메틱 화합물을 제조하는 방법에서 고리화 단계 전에 적합한 보호기(각각, R11 및 R13)에 의해 보호된다. 아미노산 측쇄 치환기, R1 및 R3가 보호되면, 이들은 각각 W1R11 및 W3R33으로 표현되며, 여기서 W1 및 W3은 독립적으로 각각 R11 및 R13에 대한 결합 지점에서 하나의 수소 원자가 적은 천연 또는 비천연 아미노산의 아미노산 측쇄 치환기이다. 하나의 수소 원자는 보통 작용기, 예컨대, 아미노산 측쇄 치환기의 카복실산, 아민, 티올, 아미드, 하이드록실 및 구아니딘에 있다.
본 개시에 기술된 방법의 어떠한 단계에서 합성에 관련된 어떠한 분자의 어떠한 다른 민간함 반응성 기의 아미노산 측쇄 보호는 문헌[T. W. Greene & P. G. M. Wuts(Protective Groups In Organic Synthesis 1991, John Wiley and Sons, New-York); 및 Sewald and Jakubke(Peptides: chemistry and Biology, 2002, Wiley-VCH, Wheinheim p. 142)]에 의해 기술된 바와 같은 통상적인 보호기에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 알파 아미노 보호기는 아실 타입 보호기(예를 들어, 트리플루오로아세틸, 포르밀, 아세틸), 지방족 우레탄 보호기(예를 들어, t-부틸옥시카보닐(Boc), 사이클로헥실옥시카보닐), 방향족 우레탄 타입 보호기(예를 들어, 플루오레닐-9-메톡시-카보닐(Fmoc), 벤질옥시카보닐(Cbz), Cbz 유도체) 및 알킬 타입 보호기(예를 들어, 트리페닐 메틸, 벤질)를 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
아미노산 측쇄 보호기는 세린, 트레오닌, 및 티로신에 대해 3차-부틸 에테르; 라이신, 트립토판, 및 히스티딘에 대해 Boc; 세린, 트레오닌 아스파라긴, 글루타민, 시스테인 및 히스티딘에 대해 트리틸; 아스파르테이트 및 글루타메이트에 대해 3차-부틸 또는 알릴 에스테르, 아르기닌에 대해 Pbf; 트레오닌 및 세린에 대해 벤질; 티로신, 트레오닌, 세린, 아르기닌, 및 라이신에 대해 Cbz; 세린 및 트레오닌에 대해 알킬 실란; 및 당업계에 공지되어 있는 모든 그 밖의 보호기를 포함할 수 있다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 R11 및 R13이 독립적으로 트리플루오로아세틸, 포르밀, 아세틸, t-부틸옥시카보닐(BOC), 사이클로헥실옥시카보닐, 플루오레닐-9-메톡시-카보닐(Fmoc), 벤질옥시카보닐(Cbz), Cbz 유도체, 트리페닐, 메틸, 벤질, 알릴옥시카보닐, 3차-부틸, 알킬 실란 및 알릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물을 제공한다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 R1이 글루탐산의 측쇄 치환기이고, R11이 알릴 또는 3차-부틸인 화합물을 제공한다. 이러한 특정 구체예에서, R1은 글루탐산의 측쇄 치환기이고, R11은 3차-부틸이다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 R3이 라이신의 측쇄 치환기이고, R13이 벤질옥시카보닐, 알릴옥시카보닐, 또는 3차-부틸옥시카보닐(BOC)인 화합물을 제공한다. 이러한 특정 구체예에서, R3은 라이신의 측쇄 치환기이고, R13은 3차-부틸옥시카보닐(BOC)이다.
보호기는 당업계에 공지되어 있는 방법을 사용하여 편리한 후속 단계에서 제거될 수 있다. 특정 구체예에서, 아미노산 측쇄 R1 및 R3의 보호기는 고체 지지체로부터 펩티도미메틱 화합물을 분리시키는데 사용되는 동일한 조건 하에서 제거되지 않는다. 이러한 특정 구체예에서, 아미노산 측쇄 R1 및 R3의 보호기는 고체 지지체로부터 펩티도미메틱 화합물을 분리시키는데 사용되는 동일한 산성 조건 하에서 제거되지 않는다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 R2 및 R4는 독립적으로 수소 또는 C1 내지 C6 알킬인 화합물을 제공한다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 R5, R6 및 R7이 수소인 화합물을 제공한다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 W1 및 W3이 독립적으로 작용기 상에 하나의 수소 원자가 적은, 두 개의 상이한 아미노산인 화합물을 제공한다. 특정 구체예에서, W1 및 W3은 독립적으로 작용기 상에 하나의 수소 원자가 적은, 라이신, 글루탐산, 티로신, 이소류신, 아스파라긴, 아르기닌 또는 트레오닌의 측쇄 치환기이다. 특정 구체예에서, W1 및 W3은 독립적으로 글루탐산 또는 라이신의 측쇄 치환기이다. 특정 구체예에서, W1 및 W3은 독립적으로 이소류신 또는 아르기닌의 측쇄 치환기이다. 특정 구체예에서, W1은 작용기 상에 하나의 수소 원자가 적은 글루탐산의 측쇄 치환기이고, R11은 알릴 또는 3차-부틸이다. 특정 구체예에서, W3은 라이신의 측쇄 치환기이고, R13은 벤질옥시카보닐, 알릴옥시카보닐, 또는 3차-부틸옥시카보닐(BOC)이다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 Y가 아미드 기의 결합 지점에 대해 메타 위치에서 화학식의 벤젠 고리에 결합되는 화합물을 제공한다. 특정 구체예에서, Y는 -NO2이다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 Z가 아미드 기의 결합 지점에 대해 오르쏘 위치에서 화학식의 벤젠 고리에 결합되는 화합물을 제공한다. 특정 구체예에서, Z는F이다.
특정 구체예에서, 상기 방법은 n이 1인 화합물을 제공한다.
특정 구체예에서, 말단 작용기 X는 보호될 수 있다(즉, R12가 보호기인 경우). 특정 구체예에서, X는 O이고 R12는 트리틸(Trt), 3차-부틸디메틸실란(TBDMS), 또는 약산성 조건과 같이 화학식에 존재하는 나머지 보호기의 탈보호를 야기하지 않는 조건 하에서 제거될 수 있는 어떠한 보호기이다. 이러한 특정 구체예에서, X는 O이고, R12는 트리틸(Trt), 또는 3차-부틸디메틸실란(TBDMS)이다. 특정 구체예에서, X는 S이고, R12는 트리틸이다. 특정 구체예에서, X는 NH이고, R12는 4-메틸트리틸(Mtt)이다.
부분적 탈보호
보호기 R12는 화학식(IV)의 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 약산성 용액, 예컨대 약 0.01% 내지 약 50%(v/v), 0.1% 내지 10%(v/v), 0.5% 내지 5%(v/v), 또는 2% 내지 5%(v/v)의 산, 예컨대 트리플루오로 아세트산(TFA), 또는 아세트산(예를 들어, 50%-95%, 또는 60%-90%(v/v))을 함유하는 용액으로 처리함으로써 제거될 수 있다. 작용성 아미노산 측쇄는 이러한 약산성 조건 하에서 분리되지 않거나 탈보호되지 않는, 보다 안정한 보호기를 사용하여 보호된다. 이러한 작용성 아미노산 측쇄는 작용기 상에 강산 불안정성 보호기로 보호될 수 있다. 작용성 아미노산 측쇄 상에 사용되는 보호기가 본원에서 기술된다. 따라서, 보호기 R12의 제거는 화학식(IV)에 존재하는 어떠한 보호되는 작용기 R11 및 R13의 유의한 탈보호를 야기하지 않는다.
보호기 R12의 제거는 상이한 용매 시스템에서 수행될 수 있다. 용매 시스템은 유기 용매 또는 유기 용매의 혼합물이다. 용매 시스템은 극성, 비양성자성 용매, 예컨대, 디클로로메탄, 아세토니트릴 또는 테트라하이드로푸란 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.
스캐빈져(scavenger)가 약산성 용액에 첨가되어 반응 동안에 형성되는 알킬-카베늄 이온에 의한 X 기의 알킬화를 방지할 수 있다. 적합한 스캐빈져는 트리이소프로필실란(TIS), 티오아니솔, 트리알킬실란(예를 들어, 트리메틸실란, 트리에틸실란), 또는 이들의 혼합물을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다. 일 구체예에서, 스캐빈져는 트리이소프로필실란(TIS)이다.
특정 구체예에서, 약산성 용액은 10%, 5%, 또는 3% 미만의 산과 스캐빈져의 혼합물을 함유한다. 보호기 R12를 제거하는데 사용되는 약산성 용액 중의 산성 물질 대 스캐빈져의 상대적 부피비는 약 1:1 내지 약 1:5, 약 1:1 내지 약 1:3, 또는 약 1:2일 수 있다. 일 구체예에서, 보호기 R12의 제거는 약 1:1 내지 약 1:5의 부피비로 10% 미만의 TFA과 TIS의 혼합물을 포함하는 용액 중에서 수행된다.
고리화
고리화 반응은 친핵체 X에 의한 방향족 친핵성 치환 반응을 통해 수행될 수 있다.
고리화 반응은 극성 비양성자성 용매, 예컨대, 아세토니트릴, 테트라하이드로푸란(THF), 디옥산, 또는 이들의 혼합물 중에서 수행될 수 있다. 일 구체예에서, 고리화 반응은 THF 중에서 수행된다. 물 및 메탄올과 같은 상당량의 용매는 이들이 친핵체로서 작용하여 고리화를 방해할 수 있기 때문에 피해져야 한다. 일 구체예에서, 고리화 반응은 약 0.5% 미만의 수 중에서, 또는 물의 부재 하에서 수행된다. 일 구체예에서, 고리화 반응은 약 0.5% 미만의 메탄올 중에서, 또는 메탄올 부재 하에서 수행된다. 일 구체예에서, 고리화 반응은 약 0.5% 미만의 물 및 약 0.5% 미만의 메탄올 중에서 수행된다.
특정 구체예에서, 고리화 반응은 염기-촉매작용 고리화 반응이다. 고리화 반응에서 염기의 역할은 작용기 X의 친핵성 특징을 증가시키는 것이다. 사용될 수 있는 염기의 예는 t-BuOK, CsCO3, K2CO3, 또는 이들의 혼합물이다.
고리화 단계의 중요한 측면은 다이머 부 생성물(dimeric side product)의 형성을 피하기 위해 반응 동안 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 중간체(III)의 농도를 조절하는 것이다. 고리화 반응이 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 중간체(III)의 보다 높은 농도, 예를 들어, 0.05 M 초과에서 수행되는 경우, 분자내 반응 속도가 증가하고, 이에 따라 다이머 부 생성물 형성 속도를 가속화시킨다. 결과적으로, 다이머의 형성을 피하기 위해, 고리화 반응은 0.05 M 미만의 농도에서, 특히, 0.03 M 미만의 농도에서, 또는 0.02 M 미만의 농도에서 수행될 수 있다. 이러한 낮은 농도(즉, 고희석)는 다량의 용매를 사용하여 달성될 수 있다. 대안적으로, 고리화 반응은 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 중간체(III)를 반응 매질에 서서히 첨가함으로써 수행될 수 있으며, 이는 다량의 용매를 사용하는 것을 피할 수 있다.
고리화 반응은 -20℃ 내지 15℃, -10℃ 내지 5℃, 또는 -8℃ 내지 -1℃의 온도에서 수행될 수 있다. 실온에서의 반응 시간은 고리 크기, 반응에 관여되는 친핵체, 염기 및 용매에 따라 5분 내지 5시간에서 달라질 수 있다. 특정 구체예에서, 실온에서의 고리화 반응 시간은 약 5분 내지 약 1시간, 약 5분 내지 약 30분, 또는 약 15분 내지 약 20분이다.
반응은 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 중간체(III)로서 분석용 HPLC, LC-MS 또는 UV에 의해 모니터링될 수 있으며, 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물은 상이한 체류 시간, 질량 및 UV 프로파일을 갖는다.
고리화가 완료되면, 산 용액이 반응 혼합물에 첨가되어 반응 혼합물을 중화시킬 수 있다. 적합한 산은 HCl, KHSO4, AcOH를 포함한다. 예를 들어, 수성 산 용액이 사용될 수 있다. 산 용액의 농도는 약 0.1 M 내지 약 1 M, 또는 약 0.05 N 내지 약 0.2 N로 달라질 수 있다. 이어서, 유기 용매는 예를 들어, 증발에 의해 제거되어 미정제 잔류물 슬러리를 얻을 수 있다.
대안적으로, 미정제 잔류물 슬러리는 미정제물을 수거하기 위해 여과될 수 있다. 잔류물 또는 필터는 용매, 예를 들어, DIPE 또는 이들의 혼합물로 세척될 수 있다.
미정제 생성물은 30-40분 동안 40℃에서 EtOAc 중에서 슬러리화되고, 0℃로 냉각되고, 여과되어 생성물을 수거할 수 있다.
탈보호
아미노산 측쇄 보호기의 최종 탈보호를 위해, 화학식(IV)의 보호된 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물은 화학식에 존재하는 보호기의 타입에 따라 적합한 시약으로 처리된다. 특정 구체예에서, 산성 용액이 사용된다. 일부 구체예에서, 산성 용액은 10% 내지 60%, 20% 내지 50% 또는 30% 내지 40%의 농도를 갖는 HCl 용액을 포함한다. HCl은 물 또는 유기 용매, 예컨대 아세토니트릴 중에 용해될 수 있다. 일 구체예에서, 산성 용액은 농축된 HCl 용액(예를 들어, 30-40%) 및 아세토니트릴을 포함한다.
최종 탈보호는 약 5℃ 내지 약 25℃, 약 10℃ 내지 약 20℃, 또는 약 12℃ 내지 약 17℃의 온도에서 수행될 수 있다. 특정 구체예에서, 화학식(IV)의 보호된 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물은 약 5℃ 내지 약 25℃, 약 10℃ 내지 약 20℃, 또는 약 12℃ 내지 약 17℃(예를 들어, 약 15℃에서)의 온도에서 산성 용액 중에 현탁될 수 있다.
결정화
특정 구체예에서, 화학식(I) β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물은 염기성화-산성화 방법을 통해 결정화되거나 침전될 수 있다. 염기성화-산성화 방법은 화학식(I)의 화합물 또는 염을 염기성 pH를 갖는 수중 염기성 용액과 접촉시키는 단계, 및 pH를 감소시켜 산성 pH를 얻음으로써 화학식(I)의 화합물 또는 염을 침전시키거나 결정화시키는 단계를 포함한다.
화학식(I)의 화합물은 무기 염기, 예컨대 NaOH, LiOH, KOH, Mg(OH)2 또는 이들의 혼합물을 함유하는 수성 염기성 용액으로 처리될 수 있다. 염기성 용액은 약 30℃ 내지 약 70℃, 또는 약 40℃ 내지 약 60℃의 온도로 가열될 수 있다. 염기성 용액의 농도는 약 0.1 M 내지 약 5 M, 약 1 M 내지 약 3 M, 또는 약 1.5 M 내지 약 2 M일 수 있다. 전형적으로, 미정제 최종 생성물(즉, 화학식(I))에 대해 약 2 내지 약 8 당량, 약 3 내지 약 7 당량, 또는 약 3 내지 약 5 당량의 무기 염기가 사용될 수 있다. 염기성 pH는 약 9 내지 약 12, 약 9 내지 약 11, 약 8 내지 약 12일 수 있다.
상기 방법은 염기성 용액의 pH를 감소시키기 전에 화학식(I)의 화합물을 함유하는 염기성 용액을 여과하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 여과의 목적은 어떠한 불용성 물질을 제거하는 것이다. 여과는 실온보다 높은 온도, 예를 들어, 약 40℃ 내지 약 70℃, 또는 약 45℃ 내지 약 60℃에서 수행될 수 있다.
여액 또는 염기성 용액 혼합물은 약 0 내지 약 4, 약 0 내지 약 3, 또는 약 0 내지 약 2의 산성 pH를 달성하기 위해 염기성 용액을 산과 혼합함으로써 산성화될 수 있다. 무기 산이 염기성 용액을 산성화시키기 위해 사용될 수 있다. 무기 산의 예는 HCl, HBr, 질산, 황산, 인산 또는 이들의 혼합물을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다. 전형적으로, 화학식(I)의 미정제 최종 생성물에 대해 약 3 내지 약 9 당량, 약 4 내지 약 8 당량, 또는 약 5 내지 약 7 당량의 산이 사용될 수 있다.
화학식(V)의 염의 결정은 산성화된 용액으로부터 형성되거나 침전될 수 있다. 산성 pH는 겔의 형성을 촉진시키고, 이어서 결정을 함유한 슬러리/혼탁 용액으로 변환시킬 수 있다. 너무 적은 산은 겔에서 슬러리로의 변환을 느려지게 할 수 있다. 전형적으로, 미정제 최종 생성물(즉, 화학식(I))에 대해 약 3 내지 7 당량, 약 4 내지 6 당량, 또는 약 5 당량의 산이 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 화학식(IV)의 화합물의 결정화를 촉진시키기 위해 염기에 대해 최소 2 당량 과량의 산이 필요하다. 니들 결정(형 V)이 형성되면, 이들은 슬러리 중에서 안정하고 실온에서 적어도 3주 동안 저장될 수 있다.
최소량의 불순물 형성으로 결정의 성장 또는 침전을 용이하게 하기 위해, 산성화된 용액은 소정 기간 동안 교반되거나 저어지고(stirred)/거나 약 0℃ 내지 약 60℃의 온도 하에 유지될 수 있다. 결정화 공정 동안, 샘플이 산성화된 용액으로부터 취해지고, 현미경 조사에 의해 결정 또는 침전물 형성에 대해 모니터링될 수 있고, 수율이 분광 광도법(예를 들어, HPLC)로 구해질 수 있다. 결정의 형성 동안 불순물의 형성을 피하기 위해, 그리고 결정의 성장 또는 침전을 용이하게 하기 위해, 온도 프로파일이 결정화 동안에 사용될 수 있다. 즉, 산성화된 용액이 특정 기간 동안 하나 이상의 각각의 온도 범위 하에서 교반될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 온도는 제1 온도, 제2 온도, 제3 온도 등을 포함할 수 있고, 각각의 온도는 독립적으로, 하기 온도 범위 중 어느 하나로부터 선택될 수 있다: 약 0℃ 내지 약 30℃, 약 0℃ 내지 약 20℃, 약 0℃ 내지 약 10℃, 약 10℃ 내지 약 40℃, 약 10℃ 내지 약 30℃, 약 10℃ 내지 약 20℃, 약 20℃ 내지 약 50℃, 약 20℃ 내지 약 40℃, 약 20℃ 내지 약 30℃, 약 30℃ 내지 약 60℃, 약 30℃ 내지 약 50℃, 약 30℃ 내지 약 40℃, 약 40℃ 내지 약 70℃, 약 40℃ 내지 약 60℃, 약 40℃ 내지 약 50℃, 약 50℃ 내지 약 70℃, 약 50℃ 내지 약 60℃, 등. 산성화된 용액은 각 온도 범위에서 소정 기간 동안 교반될 수 있고, 각 기간은 독립적으로, 하기 시간 범위 중 어느 하나로부터 선택될 수 있다: 적어도 5, 10, 15, 또는 60분 동안 또는 1, 2, 3시간 등, 및 1개월 이하의 기간 동안. 특정 구체예에서, 교반 기간은 약 5분 내지 약 20시간, 약 15분 내지 약 15시간, 약 30분 내지 약 10시간, 약 1시간 내지 약 5시간, 약 2시간 내지 약 4시간, 등일 수 있다.
본 개시의 방법은 적어도 약 30 몰 %, 또는 약 35 내지 약 45 몰 %의 수율로 생성할 수 있다. 이들 수율은 제한되는 반응물의 몰, 예를 들어, HSer 화합물의 몰을 기반으로 한다.
일 특정 양태에서, 본 개시는 본원에서 간단히 "D3"로도 언급되는, 화학식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 결정질 HCl 염 및 이의 제조 방법을 제공한다. D3의 HCl 염의 구조식을 하기에 나타낸다:
Figure pct00005
D3의 HCl 염
도 2는 화학식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 결정질 HCl 염을 제조하기 위한 경로를 나타내는, 예시적인 반응식(도식 2)을 나타낸다.
구체예들에서, 본 개시는 하기 구조식을 갖는 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 HCl 염의 결정질형을 제조하는 방법으로서,
(a) 하기 화학식(4a)의 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 제공하는 단계;
(b) 화학식(4a)의 화합물을 선택적으로 탈보호시켜 하기 화학식(3a)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 형성시키는 단계;
(c) 화학식(3a)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 분자내 방향족 친핵성 치환 반응에 의해 고리화시켜 하기 화학식(2a)의 화합물을 형성시키는 단계;
(d) 하기 화학식(II)의 화합물 중의 아미노산 측쇄 보호기를 탈보호시켜 D3의 HCl 염을 얻는 단계; 및
(e) D3의 HCl 염을 결정화시켜 결정질형의 D3의 HCl 염을 얻는 단계를 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00006
D3의 HCl 염
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
.
구체예들에서, 화학식(4a)의 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물은 Fmoc-Hser(Trt)-OH를 H-Gly-OtBu.HCl과 커플링시킴으로써 디펩티드 Fmoc -Hser(Trt)-Gly-OtBu를 형성시키는 단계를 포함하는 액상 펩티드 합성 공정으로부터 얻어질 수 있다. 공정은 추가로 디펩티드 H-Hser(Trt)-Gly-OtBu를 Fmoc-Lys(Boc)-OH와 커플링시킴으로써 트리펩티드 Fmoc-Lys(Boc)-Hser(Trt)-Gly-OtBu를 형성시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 공정은 트리펩티드 H-Lys(Boc)-Hser(Trt)-Gly-OtBu를 Fmoc=Glu(Otbu)-OH와 커플링시킴으로써 테트라펩티드 Fmoc-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Hser(Trt)-Gly-OtBu를 형성시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
하나 이상의 커플링 단계는 디이소프로필아민(DIPEA) 및 축합 시약(condensation reagent), 예컨대 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸-우로늄-테트라플루오로보레이트(HATU), 1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(EDC.HCl), O-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸-우로늄-헥사플루오로-포스페이트(HBTU), 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt), 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스-피롤리디노-포스포늄헥사플루오로 포스페이트(PyBOP), 1-하이드록시-7-아자벤조 트리아졸, TBTU((벤조트리아졸릴) 테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트), TATU((7-아자벤조트리아졸릴) 테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트) 및 COMU((1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트), 옥시마 [에틸 2-시아노-2-(하이드록시이미노)아세테이트], K-옥시마(2-시아노-2-(하이드록시이미노)아세트산 에틸 에스테르, 포타슘 염) 또는 이들의 혼합물의 존재 하에서 수행될 수 있다. 일 구체예에서, 축합 시약은 EDC.HCl/HOBt이다. Fmoc-Hser(Trt)-OH과 H-Gly-OtBu.HCl의 커플링 단계는 DIPEA 및 EDC.HCl/HOBt의 존재 하에서 수행될 수 있다. 디펩티드 H-Hser(Trt)-Gly-OtBu과 Fmoc-Lys(Boc)-OH의 커플링 단계는 DIPEA 및 EDC.HCl/HOBt의 존재 하에서 수행될 수 있다. 트리펩티드 H-Lys(Boc)-Hser(Trt)-Gly-OtBu과 Fmoc-Glu(Otbu)-OH의 커플링 단계는 DIPEA 및 EDC.HCl/HOBt의 존재 하에서 수행될 수 있다.
펩티드 중 어느 하나의 N-말단 Fmoc 보호기를 제거하는 단계는 BAEA의 존재 하에서 수행되어 N-말단 유리 아미노 기를 제공할 수 있다.
특정 구체예에서, 본 개시의 결정질형은 결정질형 IV, 형 V 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 이들 결정질형은 본원에서 기술되는 방법에 의해 생성될 수 있으며, 다른 결정질형(즉, 형 IV 또는 형 V 이외)을 실질적으로 함유하지 않는다. 용어 "실질적으로 함유하지 않는"은 다른 형의 양이 10% 미만, 예를 들어, 다른 형의 양이 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 미만인 것을 나타낸다. 본 개시의 결정질형은 X-선 분말 회절(XRPD), 시차 주사 열량계(DSC) 및 열중량 분석(TGA)에 의한 열적 데이터, 동적 증기 흡착(DVS), 및/또는 중량 중기 흡착(gravimetric vapor sorption)(GVS)에 의해 특징화될 수 있다.
일 구체예에서, 본 개시는 화학식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 HCl 염의 결정질형 IV을 제공한다. 일 구체예에서, 본 개시는 화학식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 HCl 염의 결정질형 V를 제공한다. 일 구체예에서, 본 개시는 화학식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 HCl 염의 형 IV와 형 V의 혼합물을 포함하는 결정질형을 제공한다.
특정 구체예에서, 형 IV은 흡습성(hygroscopic)이다. 특정 구체예에서, 결정질형 IV은 60% 내지 100%의 상대 습도(RH)에서 약 10% 내지 약 30%의 중량 증가를 가질 수 있으며, 중량 증가는 물 함량의 중량 증가에 기인한다. 특정 구체예에서, 결정질형의 물 탈착 또는 흡착은 가역적일 수 있다. 특정 구체예에서, 결정질형 IV은 불규칙한 모양을 갖는다. 특정 구체예에서, 결정질형 V는 니들 모양 형태이다.
본 개시의 결정질형의 변환(형 IV과 형 V간의)은 RH가 변하는 경우에 발생한다. 예를 들어, 형 IV은 높은 상대 습도, 예컨대 75% 내지 100%, 85% 내지 100%, 또는 95% 내지 100% RH에 노출되는 경우, 형 V로 변환될 수 있다. 형 IV은 산성 용액, 예를 들어, 염산 수용액으로 처리되는 경우에 형 V로 변환될 수 있으며, 이때 염산의 농도는 약 0.001M 내지 약 0.5M, 약 0.01M 내지 약 0.2M, 약 0.05M 내지 약 0.1M이다. 형 IV은 예를 들어, 0.001M 미만의 농도를 갖거나 순수(pure water)(즉, 산 또는 염기의 부재 하에)을 갖는 매우 희석된 산성 용액으로 처리되는 경우 형 V와 소정의 다른 형의 혼합물로 변환될 수 있다. 형 V은 건조시 형 IV로 다시 변환될 수 있다. 변환 속도는 산성 용액의 농도에 의존할 수 있다. 일반적으로, 형 V에서 형 IV로의 변환 속도는 결정질형 V가 보다 높은 농도의 산성 용액으로 처리되는 경우에 더 빠르다.
특정 구체예에서, 화학식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 결정질 염은 니들 모양 결정을 함유한다.
특정 구체예에서, 화학식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염의 결정질형은 적어도 60% 물을 함유하는 용액으로부터 얻어진다.
특정 구체예에서, 화학식 D3의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염의 결정질형은 수화물이다.
특정 구체예에서, D3의 HCl 염의 결정질형은 6.7±0.2 및 9.1±0.2의 회절각(°2쎄타)에서 특징적인 피크를 갖는 XRPD 패턴에 의해 특징화된다. 일 구체예에서, D3의 HCl 염의 결정질형은 6.7±0.2, 9.1±0.2, 4.4±0.2, 5.1±0.2 및 2.6±0.2의 회절각(°2쎄타)에서 특징적인 피크를 갖는 XRPD 패턴에 의해 특징화된다.
일 구체예에서, D3의 HCl 염의 결정질형은 6.7±0.2, 9.1±0.2, 4.4±0.2, 5.1±0.2, 2.6±0.2, 11.5±0.2, 15.3±0.2, 16.6±0.2, 17.7±0.2, 18.2±0.2, 20.2±0.2, 21.6±0.2, 22.1±0.2, 22.5±0.2, 23.2±0.2, 24.1±0.2로부터 선택된 회절각(°2쎄타)에서 두 개 이상, 세 개 이상, 네 개 이상, 또는 다섯 개 이상의 특징적인 피크를 갖는 XRPD 패턴에 의해 특징화된다.
이러한 양태의 일 구체예에서, 실질적으로 도 13b에 보여지는 바와 같은 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 결정형이 제공된다.
실시예
하기 실시예는 단지 본 개시의 예시이며, 이들 실시예 및 이의 다른 등가물이 본 개시 및 첨부되는 청구 범위에 비추어 당업자에게 명백하게 될 것이므로, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다. 달리 명시하지 않는 한, 본 출원에 사용된 모든 백분율은 중량 퍼센트(w/w)이다.
실시예 1
도 2(도식 2)는 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 일 구체예인, D3의 HCl 염의 합성을 도시한 것이다.
화합물 4a의 합성은 표준 단계식 LPPS(액상 펩티드 합성) 절차에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 문헌(L.A. Carpino et al., Organic Process Research & Development 2003, 7, 28-37))을 참조하라.
(a) 디펩티드 H- Hser ( Trt )- Gly - OtBu의 합성
Figure pct00010
Fmoc-Hser(Trt)OH(37.5g), HC1 x H-GlyOtBu(12g) 및 HOBt(10.8g)를 함유하는 용기에 EtOAc(227 ml) 및 DMF(45 ml)를 첨가하였다. 혼합물을 5℃에서 교반하였다. DIPEA(12.5 ml) 및 EDC x HC1(15g)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 교반하여 완전히 변환시켰다(일반적으로 < 2 시간). 완료시, 반응 혼합물을 NaCl(23 %, 113 ml)로 2회 세척하였다. 반응기에 수성 상이 남지 않고, 세척 후 유기 층 부분이 버려지지 않았음을 확인하였다.
유기 용액에 DMF(45 ml) 및 BAEA(34.5 ml)을 첨가하였다. 혼합물을, Fmoc 기의 완전한 제거를 위해 30분 동안 20℃에서 교반하였다. 완료시, 반응 혼합물을 NaCl(23 %, 113 ml)로 1회, 그리고 NaHCO3(4.8 %, 113 ml)로 2회 추출하였다. 유기 용액이 다음 커플링을 위해 준비되었다. 반응기에 수성 상이 남지 않고, 세척 후 유기 층 부분이 버려지지 않았음을 확인하였다.
(b) 트리펩티드 H- Lys ( Boc )- Hser ( Trt )- GlyOtBu의 합성
Figure pct00011
디펩티드를 함유하는 유기 용액을 DMF(227 ml)로 희석하고, 5℃에서 저어 주었다. 이 용액에 Fmoc-Lys(Boc)OH(30g), HOBt(10.8g), 및 EDC x HC1(15g) 및 EtOAc(45 ml)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 교반하여 완전히 변환시켰다(일반적으로 < 1 시간). 완료시, BAEA(34.5 ml)를 첨가하고, Fmoc 기의 완전한 제거를 위해 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 완료시, 반응 혼합물을 NaCl(23 %, 170 ml)과 물(150 ml)의 혼합물로 1회, 그리고 NaHCO3(4.8 %, 113 ml)로 2회 세척하였다. 유기 층을 EtOAc(30 ml)로 희석하였고, 다음 커플링을 위해 준비되었다. 반응기에 수성 상이 남지 않고, 세척 후 유기 층 부분이 버려지지 않았음을 확인하였다.
(c) 테트라펩티드 H- Glu ( OtBu )- Lys ( Boc )- Hser ( Trt )- GlyOtBu의 합성
Figure pct00012
트리펩티드를 함유하는 유기 용액을 DMF(227 ml)로 희석하고, 5℃에서 저어 주었다. 이 용액에 Fmoc-Glu(OtBu)OH(28.5g), HOBt(10.8g), 및 EDC x HC1(15g)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 교반하여 완전히 변환시켰다(일반적으로 < 2 시간). 완료시, BAEA(34.5 ml)를 첨가하고, 혼합물을 Fmoc 기의 완전한 제거를 위해 30분 동안 교반하였다. 완료시, 반응 혼합물을 NaCl(23 %, 113 ml)과 물(49 ml)의 혼합물로 세척하였다. 유기 용액을 DMF(169 ml) 및 EtOAc(113 ml)로 희석한 후, 40℃로 가열하였다. 이 용액을 40℃에서 NaCl(23 %, 113 ml)과 물(38 ml)의 혼합물로 세척하였다. 상 분리 후, 유기 층을 40℃에서 NaCl(23 %, 56 ml)과 물(56 ml)의 혼합물로 세척하였다. 수성 층의 pH를 KHSO4(1 M)에 의해 pH 5-5.5(인디케이터 스틱(indicator stick))로 조절하고, 상을 분리시켰다. 유기 용액이 다음 커플링을 위해 준비되었다. 반응기에 수성 상이 남지 않고, 세척 후 유기 층 부분이 버려지지 않았음을 확인하였다.
(d) 테트라펩티드 FNBA - Glu ( OtBu )- Lys ( Boc )- HSer ( Trt )- G1y - OtBu , 화합물 4a의 합성
Figure pct00013
테트라펩티드를 함유하는 유기 용액을 DMF(227 ml)로 희석하고, 5℃에서 저어주었다. 이 용액에 FNBA(14.3g), EDC x HCl(15 g) 및 DIPEA(13.4 ml)을 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 교반하여 변환을 완료하였다(일반적으로 < 5 시간). 완료시, 반응 혼합물을 MeTHF(450 ml), NaCl(23 %, 113 ml) 및 NaHCO3(4.8 %, 113 ml)과 함께 저어주었다. 층들을 분리시키고, 유기 층을 40℃로 가열하고, 이어서 이 온도에서 NaHCO3(4.8 %, 226 ml)로 세척하고, 끝으로 물(226ml)로 세척하였다. 반응기에 수성 상이 남지 않고, 세척 후 유기 층 부분이 버려지지 않았음을 확인하였다.
유기 층을 진공 하에 40℃에서 약 226 ml로 농축시켰다. 잔류물에 MeTHF(226 ml)를 첨가한 후, 약 226 ml로 농축시키는 것을 반복하였다. 잔류물에 MeTHF(226 ml) 및 MTBE(450 ml)를 첨가하고, 슬러리를 20℃에서 5시간 동안 교반하였다. 고체 생성물을 필터 상에서 수거하고, MTBE(226 ml)로 2회 세척하고, 진공 하에 20℃에서 건조시켰다. 건조 생성물, 화합물 4a(55.6g)을 분석 보정으로 수율: 85.5%로 얻었다. HPLC: 90.6%, 디벤조풀벤: 9%.
(e) 펜타펩티드의 부분적 탈보호 (탈- 트리틸화 ), 화합물 3a
Figure pct00014
펜타펩티드(55.2g)를 40℃에서 5-7개의 부분으로 나누어 아세트산(450 ml)과 물(50 ml)의 혼합물에 첨가하였다. 첨가 후, 백색 현탁액을 7-9시간 동안 교반하여 변환을 완료시켰다(>98%). 완료시, 반응 혼합물을 20℃로 냉각시킨 후, MTBE(552 ml), NaCl(23 %, 276 ml) 및 물(110 ml)의 혼합물로 추출하였다. 유기 층을 20℃에서 KHSO4(1M, 276 ml)로 2회, 40℃에서 NaHCO3(4.8 %, 276 ml)로 3회, 그리고 물(276 ml)로 1회 추출하였다. 반응기에 수성 상이 남지 않고, 세척 후 유기 층 부분이 버려지지 않았음을 확인하였다. 유기 층을 20℃로 냉각시키고, 밤새 교반하여 생성물이 침전되게 하였다. 헵탄(552 ml)을 슬러리에 첨가하고, 이를 1시간 동안 교반하였다(더 많은 생성물이 침전됨). 고체 생성물을 필터 상에서 수거하고, 헵탄으로 2회(2 x 276 ml), 그리고 DIPE로 2회(2 x 414 ml) 세척하였다. 진공 하에서 건조(52℃, 4 시간) 후, 39.4 g의 요망하는 부분적으로 탈보호된 선형 펩티드, 화합물 3a을 분석 보정 없이 수율: 93%로 얻었다.
(f) 고리화
Figure pct00015
THF(196 ml) 중의 t-BuOK(8.13g)의 슬러리를 THF(1560 ml) 중의 부분적으로 탈보호된 선형 펩티드(39.4g)의 냉각된(-8 내지 -1℃) 용액에 첨가하였다. 혼합물을 15-20분 동안 교반하여 (내부 온도가 4℃로 상승함) 완전히 변환시켰다. 완료 시, 수성 HC1(0.1 N, 189 ml)을 반응 혼합물에 첨가하였다. THF를 40℃에서 진공 증발에 의해 제거하였다. 잔류물을 물(200 ml)로 희석하고, 약 3분 동안 교반하였다. 고체 미정제 생성물을 필터 상에서 수거하고, 물로 2회(2 x 200 ml), DIPE로 2회(2 x 200m1) 세척하고, 진공 하에 2시간 동안 45℃에서 건조시켰다. 건조된 미정제 생성물(36.1 g)을 EtOAc(788 ml) 중에 현탁시켰다. 현탁액을 약 40분 동안 40℃에서 교반한 후, 0℃로 냉각하고, 2시간 동안 계속 교반하였다. 고체 생성물인, 화합물 2a를 필터 상에서 수거하고, 필터 상에서 DIPE로 2회(2 x 200 ml) 세척하였다. 건조 후, 34.6g의 정제된 사이클릭 펩티드가 분석 보정으로 수율: 78.6%, HPLC 96.8%로 얻어졌다.
(g) 최종 탈보호
고리화 단계로부터 얻어진 정제된 사이클릭 펩티드(33.3g)를 MeCN(330 ml)과 농축된 HC1(37%, 54 ml)의 혼합물 중에 현탁시켰다. 현탁액을 1시간 동안 15℃에서 교반하였다. 현탁액이 용액으로 변한 후, 다시 슬러리로 변하였다. 완료시, MeCN(330 ml)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물인 D3의 HCl 염을 필터 상에서 수거하고, MeCN로 2회(2 x 330 ml) 세척하고, 진공 하에 20℃에서 건조시켰다. 수율: 24.5g.
(h) 결정화
염기성화-산성화 방법:
미정제 생성물(24.5g)을 물(245 ml) 중에 현탁시키고, 50℃로 가열하였다. 이 현탁액(겔로 보일 수 있음)에 NaOH(2 M, 47.6 ml)를 첨가하였다. 용액이 얻어질 때까지(탁할 수 있음) 혼합물을 1시간 동안 50℃에서 저어주었다. 이 용액을 고온 여과하여 어떠한 불용성 물질을 제거하였다. 용기를 물(74 ml)로 헹구고, 헹굼액을 필터를 통과시키고, 여액을 합하였다. 합한 여액을 또 다른 용기에 옮기고, 효율적인 교반과 함께 50℃로 가열하였다. 이러한 가온된 용액에 HCl(4 M, 47.6 ml)를 첨가하였다. 겔이 초기에 형성되었다. 40분 동안 50℃에서, 50분 동안 40℃에서, 14시간 동안 30℃에서, 그리고 8시간 동안 1℃에서 교반을 계속하여 백색 슬러리를 얻었다. 정제된 최종 생성물(백색 니들)을 필터 상에서 수거하고, HCl(1 M, 50 ml)로 세척하고, 진공 하에 20℃에서 건조시켰다. 수율: 21g, 분석: 85.66%. HPLC: 98.9%. 전체 수율: Fmoc-Hser(Trt)OH로부터 출발하는 분석 보정으로 53.6 %.
최종 생성물은 pH 2-8에서 겔을 형성하는 경향이 있었지만, pH>9에서 깨끗한 여과에 적합한 안정한 용액을 형성하였다. pH ≤0이 되도록 37 % HCl로 등명한 용액을 산성화시킨 후, 최종 생성물인 HCl 염이 먼저 겔을 형성하였고, 이후, 겔이 고순도의 미세 비늘(도 3 참조)로 변환되었다.
실시예 2
결정화 공정의 최적화
결정화 동안 불순물의 형성을 피하고, 보다 큰 규모의 견고한 공정을 얻기 위해 일련의 실험을 수행하였다. HCl의 온도 및 강도를 달리하였고, 하기 표 1에 요약되어 있다. 샘플을 각 실험으로부터 특정 시간: 2시간, 4시간, 8시간 및 22시간에 제거하였다. 최종 생성물 및 샘플 중 세 개의 주요 불순물의 함량을 HPLC로 모니터링하였다(도 4-7).
표 1
Figure pct00016
도 4는 결정화 동안 2시간, 4시간, 8시간 및 22시간에 상이한 조건(즉, HCl의 다양한 온도 및 농도(A, B, C, D, E 및 F)로서 라벨링됨)에서 최종 생성물의 HPLC 퍼센트 면적을 나타내는 막대 챠트이다. 출발 순도는 96.2%였다.
도 5는 22시간 동안 시간 경과에 따른 결정화 동안 불순물 Des-Gly의 형성을 보여주는 그래프이다. 하기와 같은 결론을 내릴 수 있다: (a) 40℃에서, 최종 생성물은 22시간 동안 5 및 7 당량의 HCl의 존재 하에서 안정하다; (b) 50℃에서, 최종 생성물은 4시간 동안 5 및 7 당량의 HCl의 존재 하에서 안정하다; (c) 60℃에서, 최종 생성물은 2시간 후 분해되기 시작한다.
도 6은 12시간 동안 시간 경과에 따른 결정화 동안 미지의 불순물의 형성을 보여주는 그래프이다. 불순물은 HPLC에 의해 측정되는 0.93 상대 체류 시간(RRT0.93)에서 용리되었다. 하기와 같은 결론을 내릴 수 있다: (a) 40℃에서, RT0.93의 형성은 5당량 또는 7당량의 HC1이 첨가되는 지와 무관하게 매우 느리다; (b) 50℃에서, RT0.93의 형성은 8시간 내에서 40℃에서의 것보다 약간 더 높다. 8시간 후에 가속화되고, 5당량의 HC1에 비해 7당량의 HC1을 사용하여 보다 많은 RT0.93이 생성된다; (c) 60℃에서, RT0.93의 형성이 급격히 증가한다.
도 7은 12시간 동안 시간 경과에 따른 결정화 동안 미지의 불순물의 형성을 보여주는 그래프이다. 불순물은 HPLC에 의해 측정되는 1.11 상대 체류 시간(RRT1.11)에서 용리되었다. 하기와 같은 결론을 내릴 수 있다: (a) 40℃에서, RRT1.11의 형성은 5당량 또는 7당량의 HC1이 첨가되는 지와 무관하게 매우 느리다; (b) 50℃에서, RRT1.11의 형성은 4시간 내에서 40℃에서의 것보다 약간 더 높다. 4시간 후에 가속화되고, 5당량의 HC1에 비해 7당량의 HC1을 사용하여 보다 많은 알려지지 않은 불순물이 생성된다; (c) 60℃에서, RRT1.11의 형성이 급격히 증가한다.
실시예 3
결정화 동안 온도 사이클링
결정화 공정을 이해하기 위해, 온도를 50℃에서 20℃로 낮춘 후, 50℃로 올리고, 다시 20℃로 낮춤으로써 결정화 동안 사이클링하였다. 온도 사이클링 도표가 도 8에 도시되어 있다. 샘플을 간격을 두고 슬러리로부터 제거하고, 현미경검사에 의해 분석하였다. 도 9는 현미경 분석 하의 최종 생성물의 결정 변환을 보여준다. 겔이 40℃에서 14시간 후 결정질(니들) 슬러리로 변환되었다. 이들 니들은 5℃에서의 장기간 냉각을 포함하는, 총 47시간 동안의 온도 사이클링 동안 손상되지 않았다. 이는 이러한 결정질형이 이들 조건 하에서 안정하고, 변환은 오랜 시간이 걸렸음을 의미한다. 결정화 방법의 진행 내내, 여러 실험은 미정제 최종 생성물의 순도가 겔에서 결정질 물질로의 변환 속도에 영향을 미침을 나타냈다. 결정화 후, 결정질 생성물의 순도는 HPLC에 의해 측정되어 97% 초과(예를 들어, 97.2% - 99.1%)였다. 결정질 생성물은 여과 시간이 상대적으로 오래 걸리긴 하지만, 겔보다 여과가 더 용이하였다. 건조 후, 니들이 소정의 결정도를 갖는 불규칙한 고체로 변환되었다. 도 10은 현미경 분석 하의 필터 상의 결정 변환을 보여준다.
실시예 4
결정형의 변환 연구
가능한 변환을 연구하기 위해 D3 샘플의 미정제 배치(batch)를 0.1M HCl 용액, 0.001M HCl 용액 중에서 슬러리화시켰다. 대략 60 mg의 미정제 D3 샘플이 0.6 ml 용액에 슬러리화되었다. 슬러리를 실온에서 자기 교반 하에 방치하였다. 0.1M HCl 슬러리에서, 1-2일 후에 니들이 관찰되었다. 슬러리를 다공성 플레이트 상에서 XRPD에 의해 분석하였다(도 11 참조).
결정형은 형 V에 상응하였다. 즉, 형 IV로부터 형 V로의 빠른 변환이 발생하였다. 순수 중에서, 변환은 훨씬 더 느렸으며, 분석이 2주 후에 이루어졌다. 슬러리는 주로 형 V를 포함하지만, 다른 형의 존재를 나타낼 수 있는 소정의 추가 피크가 존재하였다. 미정제 물질이 pH에 영향을 미치는 과량의 HCl을 함유할 수도 있음이 인지되어야 한다. 순수 슬러리의 pH는 대략 3이었다.
0.001M HCl 용액에서, 변환은 또한 느렸고, 분석이 2주 후에 이루어졌다. XRPD(도 12 참조)는, 결정질 물이 형성되었음을 보여준다. 순수(즉, 100% 물) 슬러리와 유사점이 많았다. 즉, 형 V와 일부 다른 형과의 혼합물인 것으로 보였다.
0.1M HCl 슬러리를 3주 후 2차 분석하였다(도 13a 참조). 여전히 V 형에 상응하였다. 즉, 슬러리가 다형성 형에 대해 매우 안정한 것처럼 보였다.
실시예 5
D3의 비정질형의 특징화
도 14는 D3의 비정질 HCl 염의 건조 샘플의 현미경 사진을 보여주며, 이는 결정화되었으나, 결정화 전에 얻어진 건조시 결정도는 보이지 않았다.
D3 샘플의 비정질 HCl 염을 XRPD에 의해 분석하였다(도 15 참조). 물질이 주로 비정질이기는 하지만 형 IV인 것으로 결론지을 수 있다. 2쎄타=32°에서의 피크는 물질 중 염화나트륨에 상응한다.
D3의 비정질 HCl 염의 DSC이 도 16에 도시된다. 60℃ 부근의 작은 흡열과 180-190℃ 부근의 1주간의 발열 이벤트(event)에 이어, 220℃ 부근의 흡열이 있다. IV 형은 주로 비정질이기 때문에, 열 이벤트가 보다 작고 잘 규정되지 않는 것으로 예상된다.
D3의 비정질 HCl 염의 열중량 분석(TGA)이 도 17에 도시되어 있으며, 이는 100-110℃까지 대략 1.7%의 중량 손실을 나타낸다.
D3 샘플의 비정질 HCl 염을 동적 증기 흡착(DVS)에 의해 분석하였다(도 18 참조). 32%의 중량 증가에 상응하는 95% 이하의 상대 습도의 물 흡수가 계속된다. 20% RH(상대 습도)에서, 질량 변화는 4%이고, 40% RH에서는 대략 7%이다. 다량의 물 흡수에도 불구하고, 상기 공정은 완전히 가역적으로 보이고, 히스테리시스 효과(hysteresis effect)가 거의 없다. 즉, 중량의 상승 및 손실이 거의 동일하다(도 19 참조). 두 사이클 모두 거의 동일한 것으로 주지된다.
DVS-분석 후 D3 샘플의 비정질 HCl 염을 TGA로 분석하였다(도 20 참조). 3.9%의 중량 손실이 있었으며, 이는 RH=20%에서의 물 흡수에 잘 상응한다.
D3 샘플의 비정질 HCl 염을 다시 XRPD에 의해 분석하였으며(도 21 참조), 이는 물질이 출발 물질과 여전히 매우 유사함을 보여준다.
매우 높은 RH(거의 100%)에서의 거동을 연구하기 위해, D3 샘플의 비정질 HCl 염을 현미경 슬라이드에 첨가하고, 수증기로 포화된 데시케이터에 넣었다. 샘플을 밤새 방치한 후, TGA에 의해 신속히 분석하였다(도 22 참조). TGA 분석은 대략 30%의 물 손실을 나타냈다. 샘플이 여전히 고체 형태로 존재한다는, 즉, 조해(deliquescence)가 없다는 점이 주지되어야 한다. 샘플을 또한 XRPD에 의해 분석하였다(도 23 참조). 분석은 샘플이 출발 물질(도 21)보다 더욱 결정질이고, 형 V와 큰 유사성을 나타냈다. 기준 형 V의 피크가 더 작은 2쎄타 값 쪽으로, 즉, 보다 큰 d-값 쪽으로 이동하였다. 이는 물이 구조식에 첨가될 때 팽창함을 나타낸다. XRPD-분석을 ZBH로 수행하였으며, 이에 따라 다공성 기재로부터 2쎄타=26, 35 및 38에서의 강한 피크가 나타나지 않았음을 주목하라.
실시예 6
방법
DSC 및 TGA
DSC 분석을 Mettler Toledo DSC 모델 822로 수행하였다. TGA 분석을 Mettler Toledo TGA/SDTA 851로 수행하였다.
DVS ­분석
DVS 분석을 DVS AdVantage(Surface Measurement Systems)로 수행하였다.
XRPD
X-선 분말 회절 패턴을, PIXcel 검출기, 자동 발산 및 안티-스캐터 슬릿(anti-scatter slit), 솔러 슬릿(soller slit) 및 Ni-필터가 구비된 구리 방사선을 이용하는 PANalytical X´Pert PRO 회절계로 수집하였다. 건조 샘플을 XRPD에 대한 표준 기술로 ZBH에 적용하였다. 습식 샘플을 용매 효과의 일부를 제거하기 위해 다공성 Al2O3 플레이트를 사용하여 분석하였다.
현미경
사진을 Malvern 결과와 비교하기 위해 현미경으로 촬영하였다. 건조 샘플을 현미경 슬라이드 상에 적용하고 소정의 Miglyol을 첨가하였다. 슬러리 샘플을 그대로 분석하거나 Miglyol 한 방울을 사용하여 분석하였다.
장치
슬러리 실험을 자기 교반을 사용하여 4 ml 바이알(vial)에서 수행하였다.
본 발명은 이의 작동가능한 구체예를 참조하여 상세히 기술되고, 언급되었지만, 본 발명의 사상을 벗어나지 않고 다양한 변경, 수정, 대체 및 생략이 이루어질 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다. 따라서, 본 발명은 하기 청구 범위의 범위 내에서 그러한 등가물을 포함하는 것으로 의도된다.

Claims (70)

  1. 하기 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물(β-turn peptidomimetic cyclic compound)의 염의 결정질형을 제조하는 방법으로서,
    (a) 하기 화학식(IV)의 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 제공하는 단계;
    (b) 화학식(IV)의 화합물을 선택적으로 탈보호시켜 하기 화학식(III)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 형성시키는 단계;
    (c) 화학식(III)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 분자내 방향족 친핵성 치환 반응에 의해 고리화시켜 하기 화학식(II)의 화합물을 형성시키는 단계;
    (d) 화학식(II)의 화합물 중의 아미노산 측쇄 보호기를 탈보호시켜 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염을 얻는 단계; 및
    (e) 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염을 결정화시켜 결정질형의 화학식(I)의 화합물을 얻는 단계를 포함하는 방법:
    Figure pct00017

    Figure pct00018

    Figure pct00019

    Figure pct00020

    상기 식에서,
    R1은 수소, C1 내지 C6 알킬, 아릴, 또는 천연 또는 비천연 아미노산의 아미노산 측쇄 치환기이고;
    R3은 수소, C1 내지 C6 알킬, 아릴, 또는 천연 또는 비천연 아미노산의 아미노산 측쇄 치환기이고;
    R2 및 R4는 독립적으로 수소 또는 C1 내지 C6 알킬이거나, R1 및 R2는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실 기를 형성하거나, R1 및 R2, R3 및 R4는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실 기를 형성하고;
    Y는 수소, -NO2, -COOR14, -OC(R14)3, -SO3R14, 및 -SO2R14로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R5, R6, R7, R8, 및 R9는 독립적으로 수소 또는 C1 내지 C6 알킬이고;
    R10은 수소, 메틸, t-부틸, 또는 보호기이고;
    각각의 R14는 수소, 알킬 또는 아릴이고;
    X는 O, NR9, S, P, Se, C1 내지 C6 알킬렌, SO, SO2 및 NH로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    n은 0, 1, 2, 3, 4 또는 5이고;
    R11 및 R13은 독립적으로 수소 또는 보호기이고;
    R12는 보호기이고;
    W1 및 W3은 독립적으로 각각 R11 및 R13에 대한 결합 지점에서 하나의 수소 원자가 적은 천연 또는 비천연 아미노산의 아미노산 측쇄 치환기이고;
    Z는 F, Cl, Br 및 I로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물이 14 내지 16개의 고리 원자의 매크로사이클릭 고리(macrocyclic ring)를 갖는 방법.
  3. 제1항에 있어서, R1 및 R3이 독립적으로 두 개의 상이한 아미노산의 측쇄 치환기인 방법.
  4. 제3항에 있어서, R1 및 R3이 독립적으로 라이신, 글루탐산, 티로신, 이소류신, 아스파라긴, 아르기닌 또는 트레오닌의 측쇄 치환기인 방법.
  5. 제1항에 있어서, R1 및 R3이 독립적으로 글루탐산 또는 라이신의 측쇄 치환기인 방법.
  6. 제1항에 있어서, R1 및 R3이 독립적으로 이소류신 또는 아르기닌의 측쇄 치환기인 방법.
  7. 제1항에 있어서, R11 및 R13이 독립적으로 트리플루오로아세틸, 포르밀, 아세틸, t-부틸옥시카보닐(BOC), 사이클로헥실옥시카보닐, 플루오레닐-9-메톡시-카보닐(Fmoc), 벤질옥시카보닐(Cbz), Cbz 유도체, 트리페닐, 메틸, 벤질, 알릴옥시카보닐, 3차-부틸, 알킬 실란 및 알릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  8. 제1항에 있어서, R12가 트리틸 또는 3차-부틸디메틸실란(TBDMS)인 방법.
  9. 제1항에 있어서, R1이 글루탐산의 측쇄 치환기이고, R11이 알릴 또는 3차-부틸인 방법.
  10. 제9항에 있어서, R11이 3차-부틸인 방법.
  11. 제1항에 있어서, R3이 라이신의 측쇄 치환기이고, R13이 벤질옥시카보닐, 알릴옥시카보닐, 또는 3차-부틸옥시카보닐(BOC)인 방법.
  12. 제11항에 있어서, R13이 3차-부틸옥시카보닐(BOC)인 방법.
  13. 제1항에 있어서, R2 및 R4이 독립적으로 수소 또는 C1 내지 C6 알킬인 방법.
  14. 제1항에 있어서, R5, R6 및 R7이 수소인 방법.
  15. 제1항에 있어서, W1 및 W3이 독립적으로 작용기 상에 하나의 수소 원자가 적은, 두 개의 상이한 아미노산의 측쇄 치환기인 방법.
  16. 제1항에 있어서, W1 및 W3이 독립적으로 작용기 상에 하나의 수소 원자가 적은, 라이신, 글루탐산, 티로신, 이소류신, 아스파라긴, 아르기닌 또는 트레오닌의 측쇄 치환기인 방법.
  17. 제1항에 있어서, W1 및 W3이 독립적으로 글루탐산 또는 라이신의 측쇄 치환기인 방법.
  18. 제1항에 있어서, W1 및 W3이 독립적으로 이소류신 또는 아르기닌의 측쇄 치환기인 방법.
  19. 제1항에 있어서, W1이 작용기 상에 하나의 수소 원자가 적은, 글루탐산의 측쇄 치환기이고, R11이 알릴 또는 3차-부틸인 방법.
  20. 제1항에 있어서, W3이 라이신의 측쇄 치환기이고, R13이 벤질옥시카보닐, 알릴옥시카보닐, 또는 3차-부틸옥시카보닐(BOC)인 방법.
  21. 제1항에 있어서, X가 O, S 또는 NH인 방법.
  22. 제21항에 있어서, X가 O이고, R12가 트리틸 또는 3차-부틸디메틸실란(TBDMS)인 방법.
  23. 제21항에 있어서, X가 S이고, R12가 트리틸인 방법.
  24. 제21항에 있어서, X가 NH이고, R12가 4-메틸트리틸(Mtt)인 방법.
  25. 제1항에 있어서, Y가 아미드 기의 결합 지점에 대해 메타 위치에서 화학식의 벤젠 고리에 결합되는 방법.
  26. 제1항에 있어서, Y가 -NO2인 방법.
  27. 제1항에 있어서, Z가 아미드 기의 결합 지점에 대해 오르쏘 위치에서 화학식의 벤젠 고리에 결합되는 방법.
  28. 제1항에 있어서, Z가 F인 방법.
  29. 제1항에 있어서, n이 1인 방법.
  30. 제1항에 있어서, 고리화가 염기의 존재 하에서 수행되는 방법.
  31. 제30항에 있어서, 염기가 t-BuOK, CsCO3, K2CO3, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 방법.
  32. 제1항에 있어서, 고리화가 극성 비양성자성 용매 중에서 수행되는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 극성 비양성자성 용매가 아세토니트릴, 테트라하이드로푸란, 디옥산, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 방법.
  34. 제1항에 있어서, 고리화가 약 0.5% 미만의 물 및 약 0.5% 미만의 메탄올 중에서 수행되는 방법.
  35. 제1항에 있어서, 고리화가 0.05 M 미만의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 중간체(III)의 농도에서 수행되는 방법.
  36. 제1항에 있어서, 고리화가 -20℃ 내지 15℃의 온도에서 수행되는 방법.
  37. 제1항에 있어서, 탈보호가 강산성 조건 하에서 수행되는 방법.
  38. 제1항에 있어서, 강산성 조건이 10% 내지 60%의 농도를 갖는 HCl 용액을 포함하는 방법.
  39. 제1항에 있어서, 염이 HCl 염인 방법.
  40. 제1항에 있어서, 염이 약제학적으로 허용되는 염인 방법.
  41. 제1항에 있어서, 결정화가 화학식(IV)의 화합물 또는 염을 염기성 pH를 갖는 염기성 용액과 접촉시키고, pH를 감소시켜 산성 pH를 얻음으로써 화학식(IV)의 화합물 또는 염을 침전시키거나 결정화시키는 것을 포함하는 방법.
  42. 제41항에 있어서, 염기성 pH가 약 8 내지 약 12인 방법.
  43. 제41항에 있어서, 염기성 용액이 무기 염기를 포함하는 방법.
  44. 제43항에 있어서, 염기성 용액의 농도가 약 0.1 M 내지 약 5 M인 방법.
  45. 제43항에 있어서, 무기 염기가 NaOH, LiOH, KOH, Mg(OH)2 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  46. 제41항에 있어서, pH가 염기성 pH를 갖는 용액을 산과 혼합하여 산성화된 용액을 얻음으로써 감소되는 방법.
  47. 제46항에 있어서, 산성 pH가 약 0 내지 약 4인 방법.
  48. 제46항에 있어서, 약 3 내지 약 9 당량의 산이 사용되는 방법.
  49. 제46항에 있어서, 산이 무기 산인 방법.
  50. 제49항에 있어서, 무기 산이 HCl, HBr, 질산 및 황산, 인산, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  51. 제46항에 있어서, 용액을 혼합하는 것이 약 0℃ 내지 약 60℃의 온도에서 수행되는 방법.
  52. 제51항에 있어서, 온도가 약 0℃ 내지 약 30℃의 제1 온도를 포함하는 방법.
  53. 제51항에 있어서, 온도가 30℃ 내지 약 60℃의 제2 온도를 추가로 포함하는 방법.
  54. 제1항에 있어서, 화학식(I)의 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 결정질 염이 적어도 약 30 몰 %의 수율로 생성되는 방법.
  55. 하기 D3의 HCl 염의 구조식을 갖는 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 HCl 염의 결정질형을 제조하는 방법으로서,
    (a) 하기 화학식(4a)의 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 제공하는 단계;
    (b) 화학식(4a)의 화합물을 선택적으로 탈보호시켜 하기 화학식(3a)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 형성시키는 단계;
    (c) 화학식(3a)의 부분적으로 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물을 분자내 방향족 친핵성 치환 반응에 의해 고리화시켜 화학식(2a)의 화합물을 형성시키는 단계;
    (d) 하기 화학식(II)의 화합물 중의 아미노산 측쇄 보호기를 탈보호시켜 D3의 HCl 염을 얻는 단계; 및
    (e) D3의 HCl 염을 결정화시켜 결정질형의 D3의 HCl 염을 얻는 단계를 포함하는 방법:
    Figure pct00021

    D3의 HCl 염
    Figure pct00022

    Figure pct00023

    Figure pct00024
    .
  56. 제55항에 있어서, HCl 용액과 아세토니트릴의 혼합물에 화학식(2a)의 화합물을 현탁시킴으로써 화학식(2a)의 화합물을 탈보호시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  57. 제56항에 있어서, 혼합물이 약 12℃ 내지 약 17℃의 온도를 갖는 방법.
  58. 제55항에 있어서, 화학식(4a)의 보호된 선형 펩티도미메틱 화합물이 Fmoc-Hser(Trt)-OH를 H-Gly-OtBu.HCl과 커플링시키는 단계를 포함함으로써 디펩티드 Fmoc-Hser(Trt)-Gly-OtBu를 형성시키는 액상 펩티드 합성 공정으로부터 얻어지는 방법.
  59. 제58항에 있어서, Fmoc-Hser(Trt)-OH와 H-Gly-OtBu.HCl의 커플링 단계가 DIPEA 및 EDC.HCl/HOBt의 존재 하에서 수행되는 방법.
  60. 제58항에 있어서, 공정이 BAEA를 사용하여 N-말단 Fmoc 보호기를 제거함으로써 N-말단 유리 아미노 기를 제공하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  61. 제58항에 있어서, 액상 펩티드 합성 공정이 디펩티드 H-Hser(Trt)-Gly-OtBu를 Fmoc-Lys(Boc)-OH와 커플링시켜 트리펩티드 Fmoc-Lys(Boc)-Hser(Trt)-Gly-OtBu를 형성시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  62. 제61항에 있어서, 디펩티드 H-Hser(Trt)-Gly-OtBu와 Fmoc-Lys(Boc)-OH의 커플링 단계가 DIPEA 및 EDC.HCl/HOBt의 존재 하에서 수행되는 방법.
  63. 제61항에 있어서, 공정이 BAEA를 사용하여 N-말단 Fmoc 보호기를 제거함으로써 N-말단 유리 아미노 기를 제공하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  64. 제61항에 있어서, 액상 펩티드 합성 공정이 트리펩티드 H-Lys(Boc)-Hser(Trt)-Gly-OtBu를 Fmoc-Glu(Otbu)-OH와 커플링시킴으로써 테트라펩티드 Fmoc-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Hser(Trt)-Gly-OtBu를 형성시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  65. 제64항에 있어서, 트리펩티드 H-Lys(Boc)-Hser(Trt)-Gly-OtBu와 Fmoc-Glu(Otbu)-OH의 커플링 단계가 DIPEA 및 EDC.HCl/HOBt의 존재 하에서 수행되는 방법.
  66. 제64항에 있어서, 공정이 BAEA를 사용하여 N-말단 Fmoc 보호기를 제거함으로써 N-말단 유리 아미노 기를 제공하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  67. 하기 구조식을 갖는 β-턴 펩티도미메틱 사이클릭 화합물의 염의 결정질형:
    Figure pct00025
  68. 제67항에 있어서, 결정질형이 적어도 60% 물을 함유하는 용액으로부터 얻어지는 결정질형.
  69. 제67항에 있어서, 결정질형이 수화물인 결정질형.
  70. 제67항에 있어서, 결정질형이 6.7±0.2, 9.1±0.2, 4.4±0.2, 5.1±0.2, 2.6±0.2, 11.5±0.2, 15.3±0.2, 16.6±0.2, 17.7±0.2, 18.2±0.2, 20.2±0.2, 21.6±0.2, 22.1±0.2, 22.5±0.2, 23.2±0.2, 24.1±0.2로부터 선택된 회절각(°2쎄타)에서 두 개 이상의 특징적인 피크를 갖는 XRPD 패턴에 의해 특징되는 결정질형.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2991661A1 (en) 2015-07-09 2017-01-12 Mimetogen Pharmaceuticals, Inc. Solution phase synthesis and crystallization of beta-turn peptidomimetic cyclic salts
US11021514B2 (en) 2016-06-01 2021-06-01 Athira Pharma, Inc. Compounds
KR20210015816A (ko) * 2018-05-31 2021-02-10 갭 펩티드 엘엘씨 용액-상 펩티드의 합성 방법 및 그에 따른 보호 전략
US11427612B2 (en) * 2018-08-21 2022-08-30 Wayne State University Epimerization-free N to C solid-phase peptide synthesis

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AUPP254898A0 (en) * 1998-03-24 1998-04-23 University Of Queensland, The Peptide turn mimetics
DE60123399T2 (de) 2000-01-18 2007-08-23 The Texas A & M University System, College Station Pharmazeutische zubereitungen enthaltend beta-turn peptidomimetische zyklische substanzen
KR20080058509A (ko) 2002-06-11 2008-06-25 일라이 릴리 앤드 캄파니 흥분성 아미노산의 전구약물
US8293713B2 (en) * 2008-04-04 2012-10-23 Mimetogen Pharmaceuticals, Inc. Beta-turn peptidomimetic cyclic compounds for treating dry eye
CN102333537B (zh) * 2009-02-27 2014-08-13 米梅托根药物公司 用于治疗色素性视网膜炎的模拟肽环状化合物
JP6248103B2 (ja) * 2012-06-22 2017-12-13 ミメトゲン ファーマシュウティカルズ インコーポレイテッドＭｉｍｅｔｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． β−ターン環式ペプチド模倣化合物の合成
CA2991661A1 (en) * 2015-07-09 2017-01-12 Mimetogen Pharmaceuticals, Inc. Solution phase synthesis and crystallization of beta-turn peptidomimetic cyclic salts

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Publication number Publication date
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EP3319978A1 (en) 2018-05-16
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AU2016290654C1 (en) 2021-11-11
KR102056257B1 (ko) 2019-12-16
AU2016290654A1 (en) 2018-01-25
CN114874288A (zh) 2022-08-09
JP6801835B2 (ja) 2020-12-16
US20190194251A1 (en) 2019-06-27
TW201716425A (zh) 2017-05-16
HK1255355A1 (zh) 2019-08-16
US20210300966A1 (en) 2021-09-30
JP2018528928A (ja) 2018-10-04
US11078234B2 (en) 2021-08-03
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