KR20180001893A - 표적핵산의 검출방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 표적핵산의 비표지 검출방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 특이적 증폭반응으로부터 얻어지는 표적핵산의 증폭 산물을 질량분석을 이용하여 효과적으로 분석하는 비표지 검출방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 질량분석 기반의 비표지 표적핵산 검출방법은 분석 방법이 편리하고 정확할 뿐 아니라 반응 종료점에서의 분석을 이용하기 때문에, 다양한 바이오센서의 플랫폼으로 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 다중 표적핵산 분석이 가능한 장점이 있어 다양한 표적핵산 분석을 통한 질병의 예방, 조기 진단 및 개인 맞춤 의약품 개발과 처방에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

표적핵산의 검출방법 {Method for detection of target nucleic acids}

본 발명은 표적핵산의 비표지 검출방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 특이적 증폭반응으로부터 얻어지는 표적핵산의 증폭 산물을 질량분석을 이용하여 효과적으로 분석하는 비표지 검출방법에 관한 것이다.

생물체 내의 핵산(DNA 또는 RNA) 분석을 위해 혈액 등의 생체 시료로부터 핵산을 추출하게 되면 일반적으로 추출되는 양은 다양한 분석에 바로 사용되기에는 매우 적기 때문에, 이를 정확히 분석하기 위해서는 추출된 핵산의 증폭이 필요하다. 현재까지 다양한 방법의 핵산 증폭 기술이 개발되었으며, 특히 DNA를 증폭하는 대표적인 방법인 PCR (Polymerase Chain Reaction, 중합효소연쇄반응)은 표적 유전자를 선택적으로 대량 증폭하여 주는 고효율의 증폭기술이기 때문에, 다양한 분야에서 광범위하게 사용되고 있다. 그러나 PCR은 반응 용액의 미세한 온도 조절을 해주는 PCR 기기를 필요로 하여 비용이 많이 들고 현장진단 등에 사용하기 어려운 단점이 있다.

따라서, 이를 개선하기 위해 핵산의 등온 증폭기술이 개발되어 왔으며, 이 중 대표적인 기술 중 하나인 EXPAR (exponential isothermal amplification reaction)는 짧은 단일가닥의 표적핵산을 DNA 중합효소와 절단효소를 이용하여, 등온의 반응조건 상에서 표적 핵산을 기하급수적으로 증폭하는 기술이다 (J. V. Ness et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 2003, 100(8), 4504 - 4509). EXPAR는 증폭효율이 좋고 반응시간이 30분 정도로 짧아 표적 핵산 분석을 비롯한 다양한 생체분자 분석에 활용되고 있으며, 특히 microRNA 분석 등에 효과적으로 사용되었다 (H. Jia et al., Angew . Chem . Int . Ed ., 2010, 49, 5498 - 5501). 그러나 EXPAR는 표적 핵산이 없는 경우에도 증폭반응이 진행되는, 이른바 비특이적 증폭반응이 일어나는 큰 문제점을 가지고 있다. 이러한 EXPAR의 비특이적 증폭반응의 원인은 명확히 밝혀지지는 않았으나, 등온 반응조건 상에서 EXPAR 주형의 2차 구조 형성 및 이와 효소와의 반응으로 인해 일어나는 것으로 여겨지고 있다 (E. Tan et al., Biochemistry, 2008, 47, 9987 - 9999). 이러한 비특이적 증폭반응으로 인해 EXPAR의 특이도 및 재현성이 떨어지며, 다중 표적 분석도 어렵다. 따라서 보다 효과적인 핵산의 등온증폭을 위해서는 비특이적 증폭반응이 충분히 억제되어야 한다.

이에 본 출원의 발명자들은 기존의 방법에 비해 증폭된 표적핵산을 효과적이고 정확하게 분석할 수 있는 방법을 개발하고자 예의 노력한 결과, 그래핀 산화물 기반 등온 지수 증폭반응의 산물을 질량분석을 통하여 비표지 방식으로 효과적으로 분석할 수 있다는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 등온 지수 증폭반응에서, 증폭된 표적핵산을 비표지 방식을 통하여 효과적이고 정확한 검출방법을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 표적 핵산과 상보적인 서열을 포함하는 단일가닥 주형과 그래핀 또는 그래핀 산화물을 혼합한 다음, dNTP, DNA 중합효소, 절단효소 및 분석 대상 샘플을 첨가하고 등온 지수 증폭 반응을 수행하는 단계; 및 (b) 상기 증폭 반응산물의 질량분석에 의해 표적핵산의 존재 여부를 확인하는 단계를 포함하는 표적핵산의 검출방법을 제공한다.

본 발명에 따른 질량분석 기반의 비표지 표적핵산 검출방법은 분석 방법이 편리하고 정확할 뿐 아니라 반응 종료점에서의 분석을 이용하기 때문에, 다양한 바이오센서의 플랫폼으로 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 다중 표적핵산 검출이 가능한 장점이 있어 다양한 표적핵산 분석을 통한 질병의 예방, 조기 진단 및 개인 맞춤 의약품 개발과 처방에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 그래핀 산화물을 이용한 EXPAR의 반응 과정을 나타낸 개략도이다.
도 2는 기존의 EXPAR에서 그래핀 산화물을 첨가했을 때, 첨가한 그래핀 산화물의 양에 따른 표적 핵산의 증폭 양상을 실시간 형광 분석을 통해 확인한 결과이다.
도 3은 일반적인 EXPAR과 그래핀 산화물 기반 EXPAR의 최종 반응산물을 이용한 질량분석 결과이다.
도 4는 형광분석을 이용한 그래핀 산화물 기반 EXPAR의 표적핵산 검출 민감도 테스트 결과이다.
도 5는 상기 도 4의 민감도 분석을 위한 그래핀 산화물 기반 EXPAR의 최종산물을 이용하여 질량분석을 수행한 결과이다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 및 이하에 기술하는 실험 방법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명은 일 관점에서, (a) 표적 핵산과 상보적인 서열을 포함하는 단일가닥 주형과 그래핀 또는 그래핀 산화물을 혼합한 다음, dNTP, DNA 중합효소, 절단효소 및 분석 대상 샘플을 첨가하고 등온 지수 증폭 반응을 수행하는 단계; 및 (b) 상기 증폭 반응 산물의 질량분석에 의해 표적핵산의 존재 여부를 확인하는 단계를 포함하는 표적핵산의 검출방법에 관한 것이다.

본 발명에 있어, 그래핀 또는 그래핀 산화물은 탄소원자들이 2차원 상에서 sp2 결합에 의한 벌집 모양의 배열을 이루면서 원자 한 층의 두께를 가지는 반금속성 나노 물질로, 일반적인 탄소 구조체에 비하여 넓은 비표면적(2,630 m²g^-1)을 가지고 있다. 또한, 구조적 및 화학적으로 매우 안정할 뿐만 아니라, 전기전도도 및 열전도도가 우수하여 다양한 분야에서 응용 가능한 물질로 알려져 있다.

단일가닥 핵산내의 염기와 그래핀 또는 그래핀 산화물은 서로간의 상호작용 (π-π stacking interaction)을 통해 단일가닥 핵산을 그래핀 또는 그래핀 산화물 표면에 결합하게 하는 특징을 가지고 있다. 이와 같이 그래핀 또는 그래핀 산화물에 결합된 핵산에는 효소 등이 정확히 접근할 수 없기 때문에 효소의 반응에 안전하게 보호된다. 이 때, 이와 상보적인 핵산을 추가하게 되면 그래핀 또는 그래핀 산화물 표면에 붙어있던 핵산과 서로 혼성화하면서 그래핀 또는 그래핀 산화물 표면으로부터 떨어져 나오게 된다 (Z. Tang et al., Small, 2010, 6(11), 1205 - 1209).

따라서, 표적핵산과 상보적 서열을 가지는 주형을 그래핀 또는 그래핀 산화물에 우선 결합시킨 채로 등온증폭, 예를 들어 EXPAR를 진행하게 되면 등온 반응조건 상에서 주형의 2차 구조 형성 및 효소의 접근을 억제하여 EXPAR의 비특이적 증폭반응을 억제할 수 있고, 표적 핵산이 존재할 경우에는 EXPAR 주형이 타겟과 혼성화하여 그래핀 산화물 표면으로부터 떨어져 나오게 되어 EXPAR가 정상적으로 진행된다 (J. Wang et. al. Microchim. Acta, 2015, 182, 1095-1101).

본 발명에 있어서, 효과적인 표적핵산의 등온증폭을 하기 위한 그래핀 또는 그래핀 산화물의 첨가량은 2 내지 4 mg/L인 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에서 용어 '핵산(nucleic acid)'은 단일가닥 또는 이중가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드 중합체, 또는 이들의 조합을 의미하며, 천연 뉴클레오티드 및 합성 뉴클레오티드를 포함한다. 따라서, 본 양태의 핵산증폭 방법의 증폭 대상은 원핵세포 핵산, 진핵세포 핵산, 바이러스 핵산, 또는 비로이드 핵산과 같은 천연 유래핵산 분자, 공지된 핵산 유사체 또는 화학적으로 합성 가능한 핵산 분자를 포함할 수 있다.

본 발명에서 용어 '표적핵산'은 검출하고자 하는 핵산서열을 의미하고, 본 명세서에서 사용되는 용어 '타겟핵산' 또는 '타겟서열'과 차이가 없으며, 본 명세서에서 혼용된다. 또한 용어 '주형(template)'은 표적핵산과 상보적인 서열을 갖는 핵산을 지칭한다.

본 발명에 있어서, 그래핀 또는 그래핀 산화물은 흑연으로부터 화학적 합성법을 이용해 제작된 그래핀 또는 그래핀 산화물을 특징으로 할 수 있으며, 이에 한정되지 않고, 수용액 상에 녹을 수 있는 그래핀이라면 화학적 또는 물리적으로 합성되는 어떤 것이든 사용할 수 있다.

또한, 그래핀 산화물과 유사한 단일가닥의 핵산과 상호작용을 할 수 있는 탄소나노튜브 등의 탄소화합물, 금 나노입자 등의 금속 입자 또는 세라믹 입자 등을 이용할 수 있다.

본 발명에서의 용어 EXPAR (exponential isothermal amplification reaction)는 짧은 길이의 핵산을 DNA 중합효소와 절단효소를 이용하여 증폭시키는 분자생물학적 기술로서, 올리고뉴클레오티드 서열, 열 안정성 중합효소(polymerase) 및 절단효소(nicking enzyme)를 사용하여 DNA의 짧은 절편을 특이적으로 증폭시키는 신속한 등온 증폭방법이다.

본 발명의 EXPAR에 사용되는 EXPAR 주형은 표적 핵산과 상보적인 염기서열을 3' 및 5' 양 말단에 모두 포함하고 있으며, 그 사이에는 절단효소 인식부위를 포함할 수 있다.

본 발명의 '혼성화'는 상보적인 단일가닥 핵산들이 이중-가닥 핵산을 형성하는 것을 의미한다. 혼성화는 2개의 핵산 가닥 간의 상보성이 완전할 경우(perfect match) 일어나거나 또는 일부 부정합(mismatch) 염기가 존재하여도 일어날 수 있다. 혼성화에 필요한 상보성의 정도는 혼성화 조건에 따라 달라질 수 있으며, 특히 온도에 의하여 조절될 수 있다.

본 발명의 용어, '절단효소'는 완전한 또는 부분적 이중 가닥의 뉴클레오티드 서열을 인식하고, 인식 서열에 대해 특이적 위치에서 하나의 가닥만을 절단시키는 엔도뉴클레아제를 지칭한다. 상기 인식서열은 절단효소에 따라 다르며, 예를 들어 Nt.BstNBI은 5'-GAGTCNNNN/N-3' (N 은 임의의 염기, /는 절단 위치) 서열을 인식하는 것으로 알려져 있다.

본 발명에 있어서, 사용되는 절단효소는 Nb.BtsI, Nt.BstNBI, Nb.BbvCI, Nt.BbvCI 및 Nt.AlwI으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있으며, 이에 한정되지 않고, DNA 절단효소라면 어떤 것이든 사용할 수 있다.

또한, 본 발명에 있어서, 사용되는 중합효소는 Klenow DNA 중합효소, Bsu DNA 중합효소, Vent DNA 중합효소 및 Bst DNA 중합효소로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있으며, 이에 한정되지 않고, 중합 활성 및 치환 활성을 가지는 핵산 중합효소라면 어떤 것이든 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 그래핀 산화물 기반 등온증폭반응으로 생성된 반응산물의 분석은 질량분석기기를 이용하여 분석하는 것을 특징으로 할 수 있다. 질량분석기기는 분석하고자 하는 샘플 내에 존재하는 물질을 직접 측정하여 어떠한 질량 값을 가지는지 분석할 수 있는 장비다. 생체 분자 분석에 있어서는 형광 신호 측정 등 간접적인 분석방법에 비하여 직접적으로 해당 분자량을 가지는 분자의 존재 유무를 분석하기 때문에 그 정확도가 높다. 이에 따라, 질량분석 기술은 단백질 분석, 미생물 동정, 표적핵산 분석 등 다양한 생체 분자 분석에 활용되고 있는 기술이다.

본 발명에 있어서, 질량분석을 이용한 결과는 형광분석에 비해 민감도는 낮을 수 있지만, 분석 결과로 정확한 질량 값을 제공하기 때문에, 비특이적 증폭반응이 아닌 표적핵산의 증폭 유무를 정확히 판별할 수 있는 장점이 있다 (도 4 및 도 5).

또한, 질량분석을 이용한 그래핀 산화물 기반 등온 지수 증폭반응 산물의 분석은 단일의 표적핵산 검출이 가능할 뿐만 아니라, 복수의 표적 핵산을 인지하는 복수의 EXPAR 주형을 사용하여, 한 번의 반응으로 복수의 표적 핵산 검출을 수행할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 질량분석에 사용되는 질량분석기기는 ESI-MS, MALDI-TOF MS, LC-MS 등을 이용할 수 있으며, 이에 한정되지 않고, 핵산을 분석할 수 있는 질량분석기기라면 어떤 것이든 사용할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, EXPAR 반응용액 내에 이중가닥 DNA와 결합할 수 있는 형광염료 (fluorescence dye)를 첨가하여 형광 세기를 반응과정 중에 실시간으로 분석함으로써 EXPAR 산물이 생성되는지 여부를 판단할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 EXPAR의 반응산물 분석에 사용되는 형광염료는 SYBR green, Eva green, SYBR gold로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있으며, 이에 한정되지 않고, 이중가닥 또는 단일가닥 DNA와 결합하여 형광을 발하는 형광염료라면 어떤 것이든 사용할 수 있다.

또한 본 발명에 있어서, 표적핵산의 생성여부 확인은 절단효소 증폭반응 산물에 대해 상보적인 염기서열을 가지며, 형광물질(fluorophore)와 소광제(Quencher)를 포함하는 분자 비콘(molecular beacon) 형태의 프로브를 이용할 수 있다.

또한, 본 발명의 EXPAR의 결과로 증폭된 표적 핵산의 생성유무를 확인하는 단계에서는 분석될 샘플 내의 특정 핵산 서열의 존재 또는 부재를 결정하는 젤 전기영동, 폴리아크릴아마이드 전기영동, 액상 크로마토그래피 등 정성적 검출을 또한 허용한다. 정성적 검출은 당업계에 공지된 방법에 따른 표지 기의 결정을 포함할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 형광분석을 이용한 그래핀 산화물기반의 EXPAR를 이용한 표적 핵산 검출

우선, EXPAR 주형(서열번호 1)을 그래핀 산화물(www.graphenesupermarket.com에서 graphene oxide solution을 구입)에 결합시키기 위해 한 반응 튜브에 100 nM 의 EXPAR 주형을 40 ng 내지 80 ng(도 2B-F), 즉 2 내지 4 mg/L의 그래핀 산화물과 섞은 후 5분 간 상온에 놓아두었다. 이와 함께, 대조군 분석을 위한 그래핀 산화물이 포함되지 않은 EXPAR 주형(도 2A)도 준비하였다. 다른 반응튜브에는 EXPAR를 위해 필요한 1X Thermopol 버퍼, 0.5X NEBuffer 3.1, 250 μM dNTPs, 1X Eva green, 1 U 의 Vent (exo-) DNA 중합효소와 4 U 의 Nt.BstNBI 절단효소 및 표적핵산(서열번호 2)을 섞었다. 초기 표적 핵산의 농도는 1 nM, 1 pM, 1 fM, 그리고 blank (0 nM)로 구성하였다. 상기의 반응용액에 그래핀 산화물에 결합시켜둔 EXPAR 주형을 섞고 EXPAR를 수행하였다. 상기 용액을 실시간 형광분석이 가능한 55℃ 등온 반응챔버에 넣고 시간별 형광의 세기를 30초 간격으로 1시간 동안 측정하였다.

그 결과, 60 ng(3 mg/L)의 그래핀 산화물이 첨가되었을 때 EXPAR 분석 효율이 최대임을 확인하였다(도 2).

[서열번호 1] 5'-TGTTCTCTTCATACGACTCTTGTTCTCTTC-3'

[서열번호 2] 5'-GAAGAGAACA-3'

실시예 2: 질량분석을 이용한 그래핀 산화물 기반의 EXPAR를 이용한 표적 핵산 검출

상기 실시예 1에서 수행한 그래핀 산화물 기반 EXPAR에서, 최적의 분석 효율을 갖는 60 ng의 그래핀 산화물이 포함된 EXPAR의 최종 반응산물(도 3B)과, 이를 비교하기 위하여 대조군으로 수행한 일반적인 EXPAR(그래핀 산화물 무첨가, 도 3A)의 최종 반응산물을 이용하여 질량분석을 수행하였다. 우선, 탈염수지(desalting resin)을 이용하여 반응용액 내에 존재하는 염들을 제거하였다. 준비된 반응산물 20 μl에 5 mg의 탈염수지를 섞은 후, vortexing 및 spin down을 하였다. 이 과정에서 염들은 수지와 함께 바닥에 가라앉으며, 질량분석을 위해 상층액만 이용하였다. 본 실시예에서 사용한 질량분석기기는 MALDI-TOF 질량분석기기를 이용하였다 (Bruker Autoflex Ⅲ). 질량분석을 수행하기 위한 매트릭스는 50 mg의 3-히드록시피콜린산과 10 mg의 시트르산 수소 이암모늄(diammonium hydrogen citrate)를 1 ml의 50% 아세토니트릴(acetonitrile)에 섞어 제조하였다. 제조된 매트릭스를 MALDI 플레이트에 1 μl 로딩한 후 완전히 건조시키고, 그 위에 탈염한 샘플을 1 μl 다시 로딩한 후 완전히 건조시켰다. 이후 질량분석기기를 이용하여 해당 샘플 내에 증폭된 표적 핵산이 존재하는지 유무를 판별하였다.

그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 일반적인 EXPAR(도 3A)에서는 표적 핵산 (trigger로 표시)이 존재하지 않는 경우에도 질량분석 피크가 나타났다. 반면, 그래핀 산화물 기반 EXPAR의 경우(도 3B)에는 표적핵산이 존재하지 않으면 질량분석 피크가 나타나지 않았다. ∇ 표시가 표적핵산의 질량분석 피크 (3,172 Da) 이며, * 표시는 표적핵산에서 아데닌이 추가된 질량분석 피크 (3,485 Da) 이다.

실시예 3: 형광분석 및 질량분석을 이용한 표적핵산 농도별 표적핵산 검출 효율 분석

상기 실시예 1 및 2를 통한 분석에서 얻어진 그래핀 산화물 기반 EXPAR의 최적의 반응조건을 이용하여, 초기 표적핵산의 농도에 따른 검출 효율을 형광분석과 질량분석을 통해 수행하였다. 초기 표적핵산의 농도는 100 aM 내지 1 nM 및 blank로 구성하였으며, 60 ng의 그래핀 산화물을 첨가하였다.

그 결과, 초기 표적핵산의 농도가 증가함에 따라 형광강도가 증가하였으며(도 4), 질량분석을 통해서 동일한 결과를 확인하였다(도 5).

도 5는 질량분석 결과로서, ∇ 표시가 표적핵산의 질량분석 피크 (3,172 Da) 이며, * 표시는 표적핵산에서 아데닌이 추가된 질량분석 피크 (3,485 Da) 이다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> Korea Advanced Institute of Science and Technology <120> Method for detection of target nucleic acids <130> P16-B057 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Template <400> 1 tgttctcttc atacgactct tgttctcttc 30 <210> 2 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Target nucleic acid <400> 2 gaagagaaca 10

Claims (6)

1. 다음 단계를 포함하는 등온 지수 증폭 반응 (EXPAR; exponential isothermal amplification reaction)을 이용한 표적핵산의 검출방법:
   (a) 표적 핵산과 상보적인 서열을 포함하는 단일가닥 주형과 그래핀 또는 그래핀 산화물을 혼합한 다음, dNTP, DNA 중합효소, 절단효소 및 분석 대상 샘플을 첨가하고 등온 지수 증폭 반응을 수행하는 단계; 및
   (b) 상기 증폭 반응산물의 질량분석에 의해 표적핵산의 존재 여부를 확인하는 단계.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 주형은 3' 및 5' 양 말단에 표적 핵산과 상보적인 서열을 포함하고, 표적 핵산과 상보적인 서열들 사이에 절단효소 인식 부위를 포함하는 것을 특징으로 하는 표적핵산의 검출방법.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 그래핀 또는 그래핀 산화물의 첨가량은 2 내지 4 mg/L인 것을 특징으로 하는 표적핵산의 검출방법.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 DNA 중합효소는 Klenow DNA 중합효소, Bsu DNA 중합효소, Vent DNA 중합효소 및 Bst DNA 중합효소로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 표적핵산의 검출방법.
   
5. 제1항에 있어서, 상기 절단효소는 Nb.BtsI, Nt.BstNBI, Nb.BbvCI, Nt.BbvCI 및 Nt.AlwI로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 표적핵산의 검출방법.
   
6. 제1항에 있어서, 상기 질량분석에 사용되는 장치는 ESI-MS, MALDI-TOF MS 및 LC-MS로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 표적핵산의 검출방법.
   

Images