KR20170141670A - 면역 유도제 - Google Patents

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Abstract

이 발명은 (a)서열표의 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 및 상기 아미노산 서열 중의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드, (b)상기 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열과 85% 이상의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 및 상기 폴리펩티드의 아미노산 서열 중의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드, 및 (c)상기 (a) 또는 (b)의 폴리펩티드를 부분서열로서 포함하는 폴리펩티드로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 하나의 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 또한 생체내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터를 유효 성분으로서 포함하는 면역 유도제를 제공한다.

Description

면역 유도제
본 발명은 암의 치료 및/또는 예방제 등으로서 유용한 신규인 면역 유도제에 관한 것이다.
본 발명은 또한 암면역 요법에 사용하기 위한 항원 제시 세포 또는 세포장해성 T세포, 또는 상기 세포의 제작 방법에 관한 것이다.
암은 전체 사망 원인의 제1위를 차지하는 질환이며, 현재 행해지고 있는 치료는 수술 요법을 주체로 방사선 요법과 화학 요법을 조합시킨 것이다. 최근의 새로운 수술법의 개발이나 새로운 항암제의 발견에도 불구하고, 일부의 암을 제외하고, 암의 치료 성적은 그다지 향상되지 않은 것이 현상황이다. 최근, 분자생물학이나 암면역학의 진보로 암에 반응하는 세포장해성 T세포에 의해 인식되는 암항원이나 암항원을 코드하는 유전자가 동정됨으로써 항원특이성 면역 요법에의 기대가 높아지고 있다.
면역 요법에 있어서는 부작용을 경감하기 위해서, 그 항원으로서 인식되는 펩티드 또는 단백질은 정상세포에는 거의 존재하지 않고, 암세포에 특이적으로 존재하고 있는 것이 필요로 된다. 1991년, 벨기에 Ludwig 연구소의 Boon 들은 자기 암세포주와 암반응성 T세포를 사용한 cDNA 발현 클로닝법에 의해 CD8 양성 T세포가 인식하는 인간 멜라노마 항원 MAGE1을 단리했다(비특허문헌 1). 그 후에 암환자의 생체내에서 자기의 암에 반응해서 생산되는 항체가 인식하는 종양항원을 유전자의 발현 클로닝의 방법을 받아 들여서 동정하는, SEREX(serological identification of antigens by recombinant expression cloning)법이 보고되고(특허문헌 1, 비특허문헌 2), 이 방법에 의해, 몇개의 암항원이 단리되어 있다. 또한, 그 일부를 타겟으로 해서 암면역 요법의 임상시험이 개시되어 있다.
한편, 인간과 마찬가지로, 개나 고양이에게도 유선종양, 편평상피암 등 다수의 종양이 알려져 있고, 개나 고양이의 질병통계에서도 상위에 랭크되어 있다. 그러나 개나 고양이의 암에 대한 유효한 치료약, 예방약 및 진단약은 현재에서는 존재하지 않는다. 대부분의 개나 고양이의 종양은 진행해서 종유가 커지고나서 주인이 알아차리는 케이스가 대부분이며, 내원해서 외과적 수술에 의해 절제하거나, 인체약(항암제 등)을 투여하거나 해도, 이미 때를 놓쳐서 처치후 곧 사망하는 일이 많다. 이러한 현상황 중에서 개나 고양이에게 유효한 암의 치료약 및 예방약이 입수 가능해지면 개의 암에 대한 용도가 열린다고 기대된다.
Chondroitin Sulfate Proteoglycan 5(CSPG5)는 1형의 막관통 단백질이며, 뉴레귤린 패밀리 단백질의 하나이다. 또한 ErbB3에 결합해서 증식인자로서 작용하는 것, BRCA1에 변이가 있는 난소암에 있어서 발현이 상승하고 있는 것이 보고되고 있다(비특허문헌 3, 4). 또한 CSPG5는 망막 신경절세포나 푸르키네 세포, 해마 등의 신경계의 조직에서 고발현되고, 신경 세포의 증식·분화 인자로서 작용함으로써 신경축색돌기의 신장에 관여하는 것이 알려진다(비특허문헌 5, 6, 7). 그러나, CSPG5 단백질이 암세포에 대한 면역 유도 활성을 갖고, 그것에 의해서 상기 단백질이 암의 치료나 예방에 유용하다고 하는 보고는 없다.
미국 특허 제5698396호
Bruggen, P. et al., Science, 254:1643-1647(1991) Sahin, U et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:11810-11813(1995) Kinugasa, Y. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun 321:1045(2004) Press, JZ. et al., Neoplasia. Dec;12(12):993-1002.(2010) Yasuda, Y. et al., Neurosci. Res.32:313(1998) Aono, S. et al., J. Neurosci. Res.83:110(2006) Nakanishi, K. et al., J. Biol. Chem.281:24970(2006)
본 발명의 목적은 암의 치료 및/또는 예방제 등으로서 유용한 신규인 폴리펩티드를 찾아내고, 상기 폴리펩티드의 면역 유도제에의 사용을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 예의 연구의 결과, 개 정소 유래 cDNA 라이브러리와 담암견의 혈청을 사용한 SEREX법에 의해, 담암생체 유래의 혈청 중에 존재하는 항체와 결합하는 단백질을 코드하는 cDNA를 취득하고, 그 cDNA를 기초로 해서 서열번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 개 Chondroitin Sulfate Proteoglycan 5(이하, 「CSPG5」라고 기재한다)의 폴리펩티드를 제작했다. 또한 취득한 유전자의 인간, 고양이 및 마우스 상동성 유전자를 기초로 해서 서열번호 4, 6, 8, 10, 12, 14 및 16으로 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 인간, 고양이 및 마우스 CSPG5 폴리펩티드를 제작했다. 그리고 이들 CSPG5 폴리펩티드가 유방암, 폐암, 뇌종양, 난소암, 백혈병, 악성 림프종, 선암, 비만세포종, 편평상피암, 멜라노마 또는 신경아종의 조직 또는 세포에 특이적으로 발현하고 있는 것을 찾아냈다. 또한 이들 CSPG5를 생체에 투여함으로써, 생체내에 CSPG5에 대한 면역세포를 유도할 수 있는 것, 및 CSPG5를 발현하는 생체내의 종양을 퇴축시킬 수 있는 것을 찾아냈다. 또한 CSPG5의 폴리펩티드 또는 그 단편을 코드하는 폴리뉴클레오티드를 발현 가능한 재조합 벡터가 CSPG5를 발현하는 암에 대해서 생체내에서 항종양효과를 유도하는 것을 찾아냈다.
또한 CSPG5의 폴리펩티드가 항원 제시 세포에 의해 제시되어서, 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포장해성 T세포를 활성화 및 증식시키는 능력(면역 유도 활성)을 갖는 것, 이 때문에, 상기 폴리펩티드가 암의 치료 및/또는 예방에 유용하며, 또한 상기 폴리펩티드와 접촉한 항원 제시 세포나, 상기 항원 제시 세포와 접촉한 T세포가 암의 치료 및/또는 예방에 유용한 것을 찾아내어 본 발명을 완성시켰다.
따라서, 본 발명은 이하의 특징을 갖는다.
(1) (i)이하의 (a), (b) 및 (c)의 폴리펩티드류로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 1개의 폴리펩티드, 또는 (ii)상기 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 또한 생체내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능하게 하는 재조합 벡터를 유효성분으로서 포함하는 면역 유도제.
(a)서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 및 상기 아미노산 서열 중의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드
(b)서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열과 85% 이상의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 및 상기 폴리펩티드의 아미노산 서열 중의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드
(c)상기 (a) 또는 (b)의 폴리펩티드를 부분서열로서 포함하는 폴리펩티드
(2)상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드인, 상기 (1)에 기재된 면역 유도제.
(3)항원 제시 세포의 처리용인, 상기 (1) 또는 (2)에 기재된 면역 유도제.
(4)암의 치료 및/또는 예방용인, 상기 (1) 또는 (2)에 기재된 면역 유도제.
(5)상기 암이 CSPG5를 발현하는 암인, 상기 (4)에 기재된 면역 유도제.
(6)상기 암이 뇌종양, 백혈병, 악성 림프종, 또는 신경아종인, 상기 (4) 또는 (5)에 기재된 면역 유도제.
(7)면역 증강제를 더 포함하는, 상기 (1)∼(6) 중 어느 하나에 기재된 면역 유도제.
(8)상기 면역 증강제가 프로인트의 불완전 애주번트, 몬타니드, 폴리 IC 및 그 유도체, CpG 올리고뉴클레오티드, 인터류킨 12, 인터류킨 18, 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 ω, 인터페론 γ, 및 Flt 3 리간드로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인, 상기 (7)에 기재된 면역 유도제.
(9)상기 (1)에 정의하는 폴리펩티드와 피험체 유래의 항원 제시 세포를 ex vivo 또는 인비트로에서 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 항원 제시 세포의 제작 방법.
(10)상기 항원 제시 세포가 MHC 클래스 I 분자를 보유하는 수상 세포 또는 B세포인, 상기 (9)에 기재된 방법.
(11)상기 (9) 또는 (10)에 기재된 방법에 의해 얻어지는 항원 제시 세포와 피험체 유래의 T세포를 ex vivo 또는 인비트로에서 접촉시켜서 상기 T세포를 활성화하는 것을 포함하는, 상기 (1)에 정의하는 폴리펩티드에 특이적인 세포장해성 T세포의 제작 방법.
(12)상기 (9) 또는 (10)에 기재된 방법에 의해 얻어지는, 또한 상기 (1)에 정의하는 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 것을 특징으로 하는 항원 제시 세포.
(13)상기 (11)에 기재된 방법에 의해 얻어지는, 또한 상기 (1)에 정의하는 폴리펩티드에 특이적인 것을 특징으로 하는 세포장해성 T세포.
본 명세서는 본원의 우선권의 기초가 되는 일본국 특허 출원번호 2015-093354호의 개시 내용을 포함한다.
본 발명에 의해, 암의 치료 및/또는 예방 등에 유용한 신규인 면역 유도제가 제공된다. 후술의 실시예에 있어서 구체적으로 나타내어지듯이, 본 발명에서 사용되는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 코드하는 벡터를 피험체에 투여하면, 피험체의 생체내에 있어서 면역세포를 유도할 수 있고, 또한, 이미 생기고 있는 암을 축소 또는 퇴축시킬 수 있다. 따라서, 상기 폴리펩티드 또는 상기 벡터는 암의 치료나 예방에 유용하다.
도 1은 동정한 CSPG5 유전자의 도시한 개 종양조직 또는 암세포주에서의 발현 패턴을 나타내는 도면이다. 참조번호 1;개 CSPG5 유전자의 개의 각 조직 및 세포주에서의 발현 패턴, 참조번호 2;개 GAPDH 유전자의 개의 각 조직 및 세포주에서의 발현 패턴.
도 2는 동정한 CSPG5 유전자의, 도시한 인간 종양조직 또는 암세포주에서의 발현 패턴을 나타내는 도면이다. 인간 GAPDH 유전자의 인간의 각 조직 및 세포주에서의 발현은 전부 확인되었다.
도 3은 동정한 CSPG5 유전자의, 도시한 마우스 종양조직 또는 암세포주에서의 발현 패턴을 나타내는 도면이다. 참조번호 3;마우스 CSPG5 유전자의 마우스의 각 조직 및 세포주에서의 발현 패턴, 참조번호 4;마우스 GAPDH 유전자의 마우스의 각 조직 및 세포주에서의 발현 패턴을 나타낸다.
본 발명을 더 상세하게 설명한다.
1.폴리펩티드
본 발명의 면역 유도제에 유효성분으로서 포함되는, 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드로서는 이하의 (a)∼(c)의 것을 들 수 있다.
(a)서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 또는 상기 아미노산 서열 중의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드
(b)서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열과 85% 이상의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드의 아미노산 서열 중의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드
(c) (a) 또는 (b)의 폴리펩티드를 부분서열로서 포함하는 폴리펩티드.
본 명세서에 있어서 「폴리펩티드」란 복수의 아미노산이 펩티드 결합함으로써 형성되는 분자를 말하고, 구성하는 아미노산수가 많은 폴리펩티드 분자 뿐만 아니라, 아미노산수가 적은 저분자량의 분자(올리고펩티드)나, 전체 길이 단백질도 포함되고, 본 발명에서는 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 CSPG5의 전체 길이 단백질도 포함된다.
본 명세서에 있어서, 「아미노산 서열을 갖는」이란 특별히 기재하지 않는 한, 아미노산 서열에 나타내어진 순서로 아미노산 잔기가 배열되어 있는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들면 「서열번호 8에 의해 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드」란 서열번호 8에 나타내어지는 Met Gly Arg Ala, Gly··(중략)··Asn, Asn, Leu, Thr의 아미노산 서열을 갖는, 566 아미노산 잔기의 사이즈의 폴리펩티드를 의미한다. 또한 예를 들면 「서열번호 8에 의해 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드」를 「서열번호 8의 폴리펩티드」라고 약기하는 일이 있다. 「염기 서열을 갖는다」라는 표현에 대해서도 동일하다. 이들의 경우, 「아미노산 서열을 갖는다」 또는 「염기 서열을 갖는다」에 있어서의 「갖는다」라고 하는 용어는 특별히 기재하지 않는 한, 「로 이루어진다」라는 표현으로 치환해도 좋다.
본 명세서에 있어서, 「면역 유도 활성」이란 피험체의 생체내에서 인터페론 등의 사이토카인을 분비되는 면역세포를 유도하는 능력을 의미한다.
본 명세서에 있어서, 「피험체」란 암(또는 종양)의 치료 또는 예방을 위해서 본 발명의 면역 유도제에 의한 면역 유도를 필요로 하는 동물, 바람직하게는 포유 동물을 가리키고, 예를 들면 인간, 개나 고양이 등의 애완동물, 동물원 등에서 사육되는 판다 등의 동물, 소 등의 가축동물, 말 등의 경기용 동물 등을 포함한다.
상기 폴리펩티드가 면역 유도 활성을 갖는지 아닌지는 예를 들면 공지의 엘리스폿 앳세이(ELISpot Assay; Enzyme-Linked ImmunoSpot Assay) 등을 이용하여 확인할 수 있다. 구체적으로는 예를 들면 후술의 실시예에 기재되듯이, 면역 유도 활성을 평가해야 할 폴리펩티드가 투여된 동물로부터 말초혈 단핵구 등의 세포를 얻고, 상기 세포를 상기 폴리펩티드와 공존 배양하고, 상기 세포로부터의 사이토카인 생산량을, 특이항체를 이용하여 측정함으로써, 상기 세포 중의 면역세포수를 측정할 수 있으므로, 이것에 의해 면역 유도 활성을 평가할 수 있다.
또한 후술의 실시예에 기재되듯이, 상기 (a)∼(c)의 폴리펩티드(바람직하게는 재조합 폴리펩티드)를 담암생체에 투여하면, 그 면역 유도 활성에 의해 종양을 퇴축시킬 수 있다. 따라서, 상기 면역 유도 활성은 암세포의 증식을 억제하거나 또는 암조직(종양)을 축소 또는 소멸시키는 능력(이하, 「항종양 활성」이라고 한다)으로서 평가할 수도 있다. 폴리펩티드의 항종양 활성은 예를 들면 후술의 실시예에 구체적으로 기재되듯이, 실제로 상기 폴리펩티드를 담암동물에 투여해서 종양이 축소 등 되는지 아닌지를 조사함으로써 확인할 수 있다. 또한 상기 폴리펩티드를 담암동물에 투여해서 유도된 세포장해성 T세포가 종양에 대해서 세포 장해 활성을 나타내는지 아닌지를 조사함으로써 폴리펩티드의 항종양 활성을 평가할 수도 있다. 생체내에 있어서의 T세포의 세포 장해 활성의 측정은 예를 들면 T세포를 생체내에서 제거하는 항체를 담암동물에 투여하고, 종양이 축소 등 되는지 아닌지를 조사함으로써 확인할 수 있지만 이것에 한정되지 않는다.
또는 상기 폴리펩티드로 자극한 T세포(즉, 상기 폴리펩티드를 제시하는 항원 제시 세포와 접촉시킨 T세포)가, 생체외에서 종양세포에 대해서 세포 장해 활성을 나타내는지 아닌지를 조사함으로써, 폴리펩티드의 항종양 활성을 평가할 수도 있다. T세포와 항원 제시 세포의 접촉은 후술하는 바와 같이, 양자를 액체 배지 중에서 공존 배양함으로써 행할 수 있다. 세포 장해 활성의 측정은 예를 들면 D. D. Kharkevitch et al., Int. J. Cancer, 58: 317-323, 1994에 기재된 51Cr 릴리스 앳세이라고 불리는 공지의 방법에 의해 행할 수 있다. 상기 폴리펩티드를 암의 치료 및/또는 예방 용도에 사용할 경우에는 특별히 한정되지 않지만, 항종양 활성을 지표로서 면역 유도 활성을 평가하는 것이 바람직하다.
본 발명이 개시하는 서열표의 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열은 개 정소 유래 cDNA 라이브러리와 담암견의 혈청을 사용한 SEREX법에 의해, 담암견 유래의 혈청 중에 존재하는 특이적인 항체와 결합하는 폴리펩티드 및 그 인간, 고양이, 및 마우스 상동인자로서 단리된 CSPG5의 아미노산 서열이다(실시예 1 참조). 개 CSPG5의 인간 상동인자인 인간 CSPG5에서는 서열 동일성이 염기 서열 87%, 아미노산 서열 87%이며, 고양이 상동인자인 고양이 CSPG5에서는 서열 동일성은 염기 서열 92%, 아미노산 서열 91%이며, 마우스 상동인자인 마우스 CSPG5에서는 서열 동일성은 염기 서열 84%, 아미노산 서열 85%이다.
상기 (a)의 폴리펩티드는 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 중의 연속하는 7개 이상, 바람직하게는 연속하는 8, 9 또는 10개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드로서, 면역 유도 활성을 갖는 것이다. 보다 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 서열번호 8로 나타내어지는 아미노산 서열과 서열 동일성이 85% 이상인 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드이며, 특히 바람직하게는 상기 폴리펩티드는 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는다. 또, 이 분야에서 공지한 대로, 약 7아미노산 잔기 이상의 폴리펩티드이면 항원성 및 면역원성을 발휘할 수 있다. 따라서, 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14의 아미노산 서열 중의 연속하는 7아미노산 잔기 이상의 폴리펩티드이면, 면역 유도 활성을 가질 수 있으므로, 본 발명의 면역 유도제의 조제에 사용할 수 있다.
또한 암항원 폴리펩티드를 투여하는 것에 의한 면역 유도의 원리로서, 폴리펩티드가 항원 제시 세포에 도입되고, 그 후 상기 세포내에서 펩티다아제에 의한 분해를 받아서 보다 작은 단편이 되고, 상기 세포의 표면 상에 제시되고, 그것을 세포장해성 T세포 등의 면역세포가 인식하고, 그 항원을 제시하고 있는 세포를 선택적으로 사멸시키는 것이 알려져 있다. 항원 제시 세포의 표면 상에 제시되는 폴리펩티드의 사이즈는 비교적 작고, 아미노산수로 7∼30 정도이다. 따라서, 항원 제시 세포 상에 제시시킨다고 하는 관점으로부터는 상기 (a)의 폴리펩티드로서는 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열 중의 연속하는 7∼30 정도인 것이 바람직한 형태의 하나이며, 보다 바람직하게는 8∼30 또는 9∼30 정도의 아미노산으로 이루어지는 것이면 충분하다. 이들 비교적 작은 사이즈의 폴리펩티드는 항원 제시 세포내에 도입되지 않고, 직접 항원 제시 세포 상의 세포 표면에 제시되는 경우도 있다.
또한 항원 제시 세포에 도입된 폴리펩티드는 상기 세포내의 펩티다아제에 의해 랜덤인 위치에서 절단을 받아 여러가지 폴리펩티드 단편이 생기고, 이들 폴리펩티드 단편이 항원 제시 세포 표면 상에 제시되므로, 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14의 전체 길이 영역과 같이 큰 사이즈의 폴리펩티드를 투여하면, 항원 제시 세포내에서의 분해에 의해, 항원 제시 세포를 개재하는 면역 유도에 유효한 폴리펩티드 단편이 필연적으로 생긴다. 따라서, 항원 제시 세포를 개재하는 면역 유도에 있어서도, 사이즈가 큰 폴리펩티드를 바람직하게 사용할 수 있고, 아미노산수를 30 이상, 더 바람직하게는 100 이상, 더 바람직하게는 200 이상, 더 바람직하게는 250 이상, 더 바람직하게는 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14의 전체 길이 영역의 폴리펩티드로 해도 좋다.
상기 (b)의 폴리펩티드는 상기 (a)에 기재된 서열표의 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 중 소수의(바람직하게는 1개 또는 수개의) 아미노산 잔기가 치환, 결실 및/또는 부가 또는 삽입된, 또한, 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드, 또는 미개변의 원래의 서열과 85% 이상, 90% 이상, 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더 바람직하게는 99% 이상 또는 99.5% 이상의 서열 동일성을 갖고, 또한, 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드이다. 일반적으로, 단백질 항원에 있어서, 상기 단백질의 아미노산 서열 중 소수의 아미노산 잔기가 치환, 결실 또는 부가 또는 삽입된 경우이어도 원래의 단백질과 거의 같은 항원성을 갖고 있는 경우가 있는 것은 당업자에게 있어서 널리 알려져 있다. 따라서, 상기 (b)의 폴리펩티드도 면역 유도 활성을 발휘할 수 있으므로, 본 발명의 면역 유도제의 조제에 사용할 수 있다. 또한 상기 (b)의 폴리펩티드는 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열 중, 1개 또는 수개의 아미노산 잔기가 치환, 결실, 및/또는 부가 또는 삽입된 폴리펩티드인 것도 바람직하다. 본 명세서 중의 「수개」란 2∼10의 정수, 바람직하게는 2∼6의 정수, 더 바람직하게는 2∼4의 정수를 나타낸다.
본 명세서에 있어서, 아미노산 서열(또는 염기 서열)의 「서열 동일성」이란 비교해야 할 2개의 아미노산 서열(또는 염기 서열)의 아미노산 잔기(또는 염기)가 가능한 한 많이 일치하도록 양 아미노산 서열(또는 염기 서열)을 정렬시키고, 일치한 아미노산 잔기수(또는 일치한 염기수)를 전체 아미노산 잔기수(또는 전체 염기수)로 나눈 것을 백분률로 나타낸 것이다. 상기 정렬시에는 필요에 따라, 비교하는 2개의 서열의 한쪽 또는 쌍방에 적당하게 갭을 삽입한다. 이러한 서열의 정렬화는 예를 들면 BLAST, FASTA, CLUSTAL W 등의 주지의 알고리즘을 이용하여 행할 수 있다. 갭이 삽입될 경우, 상기 전체 아미노산 잔기수는 1개의 갭을 1개의 아미노산 잔기로 해서 카운트한 잔기수가 된다. 이렇게 해서 카운트한 전체 아미노산 잔기수가, 비교하는 2개의 서열간에서 다른 경우에는 서열 동일성(%)은 긴 쪽의 서열의 전체 아미노산 잔기수로, 일치한 아미노산 잔기수를 나누어서 산출된다.
또, 천연의 단백질을 구성하는 20종류의 아미노산은 저극성 측쇄를 갖는 중성 아미노산(Gly, Ile, Val, Leu, Ala, Met, Pro), 친수성 측쇄를 갖는 중성 아미노산(Asn, Gln, Thr, Ser, Tyr, Cys), 산성 아미노산(Asp, Glu), 염기성 아미노산(Arg, Lys, His), 방향족 아미노산(Phe, Tyr, Trp)과 같이 유사의 성질을 갖는 것으로 그룹 분류가 가능하며, 그룹내의 아미노산간에서의 치환이면 폴리펩티드의 성질이 변화하지 않는 경우가 많은 것이 알려져 있다. 따라서, 상기 (a)의 폴리펩티드 중의 아미노산 잔기를 치환할 경우에는 이들의 각 그룹내의 아미노산간에서 치환함으로써, 면역 유도 활성을 유지할 수 있는 가능성이 높아지므로 바람직하다.
상기 (c)의 폴리펩티드는 상기 (a) 또는 (b)의 폴리펩티드를 부분서열로서 포함하고, 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드이다. 즉, (a) 또는 (b)의 폴리펩티드의 일단 또는 양단에 다른 적어도 1개의 아미노산 잔기 또는 다른 (단수 또는 복수의) 폴리펩티드가 부가된 것으로서, 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드이다. 이러한 폴리펩티드도 본 발명의 면역 유도제의 조제에 사용할 수 있다.
상기 폴리펩티드는 예를 들면 Fmoc법(플루올레닐메틸옥시카르보닐법), tBOC법(t-부틸옥시카르보닐법) 등의 공지의 펩티드 합성법 등의 화학 합성법에 따라서 합성할 수 있다. 또한 각종의 시판의 펩티드 합성기를 이용해서 상법에 의해 합성할 수도 있다. 또한 공지의 유전자 공학적 방법을 이용하여, 상기 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 조제하고, 상기 폴리뉴클레오티드를 발현 벡터에 편입해서 숙주세포에 도입하고, 상기 숙주세포 중에서 폴리펩티드를 생산시킴으로써, 목적으로 하는 폴리펩티드를 얻을 수 있다.
상기 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드는 공지의 유전자 공학적 방법이나 시판의 핵산 합성기를 사용한 상법에 의해, 용이하게 조제할 수 있다. 예를 들면 서열번호 1의 염기 서열을 갖는 DNA는 개 염색체 DNA 또는 cDNA 라이브러리를 주형으로서 사용하고, 서열번호 1에 기재한 염기 서열을 증폭할 수 있도록 설계한 한쌍의 프라이머를 이용하여 PCR을 행함으로써 조제할 수 있다. 서열번호 3의 염기 서열을 갖는 DNA이면, 상기 주형으로서 인간 염색체 DNA 또는 cDNA 라이브러리를 사용함으로써 마찬가지로 조제할 수 있다. PCR의 반응 조건은 적당하게 설정할 수 있고, 예를 들면 94℃에서 30초간(변성), 55℃에서 30초∼1분간(어닐링), 72℃에서 2분간(신장)으로 이루어지는 반응 공정을 1사이클로 하고, 예를 들면 30사이클 행한 후, 72℃에서 7분간 반응시키는 조건 등을 들 수 있지만, 이것에 한정되지 않는다. 또한 본 명세서 중의 서열표의 각각 서열번호 1 및 3에 나타내어지는 염기 서열 및 아미노산 서열의 정보에 의거하여 적당한 프로브나 프라이머를 조제하고, 그것을 이용하여 개나 인간 등의 cDNA 라이브러리를 스크리닝함으로써, 소망의 DNA를 단리할 수 있다. cDNA 라이브러리는 서열번호 2, 4의 단백질을 발현하고 있는 세포, 기관 또는 조직으로부터 제작하는 것이 바람직하다. 상기한 프로브 또는 프라이머의 조제, cDNA 라이브러리의 구축, cDNA 라이브러리의 스크리닝, 및 목적 유전자의 클로닝 등의 조작은 당업자에게 기지이며, 예를 들면, 몰레큘러 클로닝: 어 라보라토리 매뉴얼 제2판(Cold Spring Harbor Laboratory Press), 커런트 프로토콜즈 인 몰레뮬러 바이올로지(JOHN WILLY & SONS) 등에 기재된 방법에 준해서 행할 수 있다. 이렇게 해서 얻어진 DNA로부터 상기 (a)의 폴리펩티드를 코드하는 DNA를 얻을 수 있다. 또한 각 아미노산을 코드하는 코돈은 주지이므로, 특정 아미노산 서열을 코드하는 폴리뉴클레오티드의 염기 서열은 용이하게 특정할 수 있다. 따라서, 상기한 (b) 또는 (c)의 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드의 염기 서열도 용이하게 특정할 수 있으므로, 그러한 폴리뉴클레오티드도, 시판의 핵산 합성기를 이용하여 상법에 의해 용이하게 합성할 수 있다.
상기 숙주세포로서는 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 세포이면 어떠한 것이어도 좋고, 원핵세포의 예로서는 대장균 등, 진핵세포의 예로서는 원숭이 신장세포 COS1, 차이니즈 햄스터 난소세포 CHO 등의 포유 동물 배양세포, 출아 효모, 분열 효모, 누에 세포, 아프리카발톱개구리 난세포 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
숙주세포로서 원핵세포를 사용할 경우, 발현 벡터로서는 원핵세포 중에서 복제 가능한 오리진, 프로모터, 샤인-달가노 서열(또는 리보솜 결합부위), DNA 클로닝 부위, 터미네이터 등을 갖는 발현 벡터를 사용한다. 대장균용 발현 벡터로서는 pUC계, pBluescript II, pET 발현 시스템, pGEX 발현 시스템 등을 예시할 수 있다. 상기 폴리펩티드를 코드하는 DNA를 이러한 발현 벡터에 편입하고, 상기 벡터로 원핵 숙주 세포를 형질 전환한 후, 얻어진 형질 전환체를 배양하면, 상기 DNA가 코드하고 있는 폴리펩티드를 원핵 숙주 세포 중에서 발현시킬 수 있다. 이 때, 상기 폴리펩티드를 다른 단백질과의 융합 단백질로서 발현시킬 수도 있다.
숙주세포로서 진핵세포를 사용할 경우, 발현 벡터로서는 프로모터, 스프라이싱 영역, 폴리(A) 부가 부위 등을 갖는 진핵세포용 발현 벡터를 사용한다. 그러한 발현 벡터로서는 pKA1, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV 벡터, pRS, pcDNA3, pMSG, pYES2 등을 예시할 수 있다. 상기와 마찬가지로, 상기 폴리펩티드를 코드하는 DNA를 이러한 발현 벡터에 편입하고, 상기 벡터로 진핵 숙주 세포를 형질 전환한 후, 얻어진 형질 전환체를 배양하면, 상기 DNA가 코드하고 있는 폴리펩티드를 진핵 숙주 세포 중에서 발현시킬 수 있다. 발현 벡터로서 pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-N1, pEGFP-C1 등을 사용했을 경우에는 His 태그, FLAG 태그, myc 태그, HA 태그, GFP 등 각종 태그를 부가한 융합 단백질로서 상기 폴리펩티드를 발현시킬 수 있다.
발현 벡터의 숙주세포에의 도입은 전기천공법, 인산 칼슘법, 리포솜법, DEAE 덱스트란법 등의 주지의 방법을 사용할 수 있다.
숙주세포로부터 목적의 폴리펩티드를 단리 정제하기 위해서는 공지의 분리 조작을 조합해서 행할 수 있다. 예를 들면 요소 등의 변성제나 계면활성제에 의한 처리, 초음파 처리, 효소 소화, 염석이나 용매 분별 침전법, 투석, 원심 분리, 한외 여과, 겔여과, SDS-PAGE, 등전점 전기 영동, 이온 교환 크로마토그래피, 소수 크로마토그래피, 어피니티 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
이상의 방법에 의해 얻어지는 폴리펩티드에는 전술한 바와 같이, 다른 임의의 단백질과의 융합 단백질의 형태로 있는 것도 포함된다. 예를 들면 글루타티온-S-트란스페라제(GST) 또는 His 태그와의 융합 단백질 등을 예시할 수 있다. 이러한 융합 단백질의 형태의 폴리펩티드도, 상기 (c)의 폴리펩티드로서 본 발명의 범위에 포함된다. 또한, 형질 전환 세포로 발현된 폴리펩티드는 번역된 후, 세포내에서 각종 수식을 받는 경우가 있다. 이러한 번역 후 수식된 폴리펩티드도 면역 유도 활성을 갖는 한, 본 발명의 범위에 포함된다. 이러한 번역 수식으로서는 N 말단 메티오닌의 탈리, N 말단 아세틸화, 당쇄 부가, 세포내 프로테아제에 의한 한정 분해, 미리스토일화, 이소프레닐화, 인산화 등을 예시할 수 있다.
2.면역 유도제
후술의 실시예에 구체적으로 기재되는 바와 같이, 상기한 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드를 담암동물에 투여하면, 이미 생기고 있는 종양을 퇴축시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 면역 유도제는 암의 치료 및/또는 예방용으로서 사용할 수 있다. 또한 상기한 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드는 면역 유도에 의한 암의 치료 및/또는 예방 방법에 사용할 수 있다.
본 명세서에 있어서, 「종양」 및 「암」이라고 하는 용어는 악성 신생물을 의미하고, 호환적으로 사용된다.
이 경우, 대상이 되는 암으로서는 CSPG5를 발현하고 있는 암인 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 유방암, 폐암, 뇌종양, 난소암, 백혈병, 악성 림프종, 선암, 비만세포종, 편평상피암, 멜라노마 또는 신경아종이며, 특히 바람직하게는 유방암, 폐암, 뇌종양, 백혈병, 악성 림프종, 비만세포종, 멜라노마 또는 신경아종이다.
또한 대상이 되는 동물(피험체)은 상기한 바와 같이, 바람직하게는 포유 동물이며, 보다 바람직하게는 영장류, 애완동물, 동물원 등에서 사육되고 있는 동물, 가축류, 경기용 동물 등을 포함하는 포유 동물이며, 특히 바람직하게는 인간, 개 또는 고양이이다.
본 발명의 면역 유도제의 생체에의 투여경로는 경구투여이어도 비경구투여이어도 좋지만, 근육내투여, 피하투여, 정맥내투여, 동맥내투여 등의 비경구투여가 바람직하다. 암의 치료 목적으로 상기 면역 유도제를 사용할 경우에는 항암작용을 높이기 위해서, 후술의 실시예에 기재하는 바와 같이, 치료 대상이 되는 종양의 근방의 소속 림프절에 투여할 수도 있다. 투여량은 면역 유도하는데에 유효한 양이면 좋고, 예를 들면 암의 치료 및/또는 예방에 사용하는 것이라면, 암의 치료 및/또는 예방에 유효한 양이면 좋다. 암의 치료 및/또는 예방에 유효한 양은 종양의 크기나 증상 등에 따라 적당하게 선택되지만, 통상, 대상동물에 대해서 1일당의 유효량으로서 0.0001∼1000μg, 바람직하게는 0.001∼1000μg이며, 1회 또는 수회에 나누어서 투여할 수 있다. 바람직하게는 수회에 나누어, 수일 내지 수개월간격으로 투여한다. 후술의 실시예에 구체적으로 나타내는 바와 같이, 본 발명의 면역 유도제는 이미 형성되어 있는 종양을 퇴축시킬 수 있다. 따라서, 발생 초기의 소수의 암세포에도 항암작용을 발휘할 수 있으므로, 암의 발증전이나 암의 치료후에 사용하면, 암의 발증이나 재발을 방지할 수 있다. 즉, 본 발명의 면역 유도제는 암의 치료와 예방의 쌍방에 유용하다.
본 발명의 면역 유도제는 폴리펩티드만으로 이루어져 있어도 좋고, 각 투여 형태에 적합한, 제약 상 허용 가능한 담체, 희석제, 부형제 등의 첨가제를 적당하게 혼합시켜서 제제할 수도 있다. 여기에서 「제제」는 「면역 유도용 조성물」 및 「면역 유도용 의약품」과 호환적으로 사용해도 좋다. 제제 방법 및 사용 가능한 첨가제는 의약제제의 분야에 있어서 주지이며, 어느 방법 및 첨가제도 사용할 수 있다. 첨가제의 구체예로서는 생리 완충액과 같은 희석제; 설탕, 유당, 옥수수전분, 인산 칼슘, 소르비톨, 글리신 등과 같은 부형제; 시럽, 젤라틴, 아라비아검, 소르비톨, 폴리비닐클로라이드, 트라간트 등과 같은 결합제; 스테아린산 마그네슘, 폴리에틸렌글리콜, 탤크, 실리카 등의 활택제 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다. 제제 형태로서는 정제, 캅셀제, 과립제, 산제, 시럽제 등의 경구제, 흡입제, 주사제, 좌제, 액제 등의 비경구제 등을 들 수 있다. 이들의 제제는 일반적으로 알려져 있는 제법에 의해 만들 수 있다.
본 발명의 면역 유도제는 생체내에서의 면역학적 응답을 강화할 수 있는 면역 증강제와 조합시켜서 사용할 수 있다. 면역 증강제는 본 발명의 면역 유도제에 포함되어 있어도 좋고, 별개의 조성물로서 본 발명의 면역 유도제와 병용해서 환자에게 투여해도 좋다.
상기 면역 증강제로서는 예를 들면 애주번트를 들 수 있다. 애주번트는 항원의 저장소(세포외 또는 마크로파지내)를 제공하고, 마크로파지를 활성화하고, 또한 특정 세트의 림프구를 자극함으로써, 면역학적 응답을 강화할 수 있으므로, 항암작용을 높일 수 있다. 따라서, 특히, 본 발명의 면역 유도제를 암의 치료 및/또는 예방에 사용할 경우, 면역 유도제는 유효성분인 상기 폴리펩티드에 추가해서 애주번트를 더 포함하는 것이 바람직하다. 다수 종류의 애주번트가 당업계에서 주지이며, 어느 애주번트로도 사용할 수 있다. 애주번트의 구체예로서는 MPL(SmithKline Beecham), 살모네라속의 Salmonella minnesota Re 595 리포다당류의 정제 및 산가수분해후에 얻어지는 동류물;QS21(SmithKline Beecham), Quillja saponaria 추출물로부터 정제되는 순QA-21 사포닌;PCT 출원 WO96/33739(SmithKline Beecham)에 기재된 DQS21; QS-7, QS-17, QS-18 및 QS-L1(So et al., "Molecules and Cells", 1997, Vol. 7, p. 178-186); 프로인트의 불완전 애주번트; 프로인트의 완전 애주번트;비타민E;몬타니드; 명반 또는 수산화알루미늄(Alum); CpG 올리고뉴클레오티드(예를 들면 크레이그(Kreig) 등, 「네이쳐(Nature)」, 제374권, p.546-549를 참조); 폴리 IC 및 그 유도체(폴리 ICLC 등) 및 스쿠알렌 및/또는 토코페롤과 같은 생분해성 오일로부터 조제되는 여러가지 유중수 에멀젼;α가락토실세라미드 등을 들 수 있다. 그 중에서도, 프로인트의 불완전 애주번트, 몬타니드, 폴리 IC 및 그 유도체 및 CpG 올리고뉴클레오티드가 바람직하다. 상기 애주번트와 폴리펩티드의 혼합비는 전형적으로는 약 1:10∼10:1, 바람직하게는 약 1:5∼5:1, 보다 바람직하게는 약 1:1이다. 단, 애주번트는 상기 예시에 한정되지 않고, 당업계에서 공지의 상기 이외의 애주번트도 본 발명의 면역 유도제를 투여할 때에 사용될 수 있다(예를 들면, 고딩(Goding)저, 「Monoclonal Antibodies: Principles and Practice」, 제2판, 1986년을 참조). 폴리펩티드 및 애주번트의 혼합물 또는 에멀젼의 조제 방법은 예방접종의 당업자에게는 주지이다.
또한 상기 면역 증강제로서는 상기 애주번트 이외에도, 대상의 면역응답을 자극하는 인자를 사용할 수도 있다. 예를 들면 림프구나 항원 제시 세포를 자극하는 특성을 갖는 각종 사이토카인을 면역 증강제로서 본 발명의 면역 유도제와 조합시켜서 사용할 수 있다. 그러한 면역학적 응답을 증강 가능한 다수의 사이토카인이 당업자에게 공지이며, 그 예로서는 백신의 방어 작용을 강화하는 것이 나타내어져 있는 인터류킨-12(IL-12), GM-CSF, IL-18, 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 ω, 인터페론 γ 및 Flt3 리간드를 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다. 이러한 인자도 상기 면역 증강제로서 사용할 수 있고, 본 발명의 면역 유도제에 포함시키거나, 또는 별개의 조성물로서 본 발명의 면역 유도제와 병용해서 환자에게 투여할 수 있다.
또한 상기 폴리펩티드와 (피험체 유래의) 항원 제시 세포를 ex vivo 또는 인비트로에서 접촉시킴으로써, 상기 폴리펩티드를 항원 제시 세포에 제시시킬 수 있다. 즉, 상기한 (a), (b) 또는 (c)의 폴리펩티드는 항원 제시 세포의 처리용으로서 사용할 수 있다. 여기에서, 항원 제시 세포로서는 MHC 클래스 I 분자를 보유하는 수상 세포 또는 B세포를 바람직하게 사용할 수 있다. 여러가지 MHC 클래스 I 분자가 동정되어 있고, 주지이다. 인간에게 있어서의 MHC 분자는 HLA라고 부른다. HLA클래스 I 분자로서는 HLA-A, HLA-B, HLA-C를 들 수 있고, 보다 구체적으로는 HLA-A1, HLA-A0201, HLA-A0204, HLA-A0205, HLA-A0206, HLA-A0207, HLA-A11, HLA-A24, HLA-A31, HLA-A6801, HLA-B7, HLA-B8, HLA-B2705, HLA-B37, HLA-Cw0401, HLA-Cw0602 등을 들 수 있다.
상기 폴리펩티드를 항원 제시 세포의 처리용으로서 사용하는 예로서, 하기 3.에서 설명한 바와 같이, 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 항원 제시 세포를 제작하는 것, 및, 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포장해성 T세포를 제작하는 것 등에의 폴리펩티드의 사용을 들 수 있다.
MHC 클래스 I 분자를 보유하는 수상 세포 또는 B세포는 주지의 방법에 의해 말초혈로부터 조제할 수 있다. 예를 들면 골수, 제대혈 또는 환자말초혈로부터 과립구 마크로파지 콜로니 자극인자(GM-CSF)와 IL-3(또는 IL-4)을 사용해서 수상 세포를 유도하고, 그 배양계에 종양 관련 펩티드를 추가함으로써 종양 특이적인 수상 세포를 유도할 수 있다.
이 수상 세포를 유효량 투여함으로써 암의 치료에 바람직한 응답을 유도할 수 있다. 사용하는 세포는 건강인에게서 제공된 골수나 제대혈, 환자 본인의 골수나 말초혈 등을 사용할 수 있지만, 환자 본래의 자가세포를 사용하는 경우에는 안전성이 높고, 중독된 부작용을 회피하는 것도 기대할 수 있다. 말초혈 또는 골수는 신선 시료, 저온 보존 시료 및 동결 보존 시료 어느 것이라도 좋다. 말초혈은 전체 혈을 배양해도 좋고, 백혈구 성분만을 분리해서 배양해도 좋지만, 후자의 쪽이 효율적이어서 바람직하다. 또한 백혈구 성분 중에서도 단핵구를 분리해도 좋다. 또한 골수나 제대혈을 기원으로 할 경우에는 골수를 구성하는 세포 전체를 배양해도 좋고, 이것으로부터 단핵구를 분리해서 배양해도 좋다. 말초혈이나 그 백혈구 성분, 골수세포에는 수상 세포의 기원이 되는 단핵구, 조혈간세포 또는 미성숙 수상 세포나 CD4 양성 세포 등이 포함되어 있다. 사용되는 사이토카인은 안전성과 생리활성이 확인된 특성의 것이라면, 천연형, 또는 유전자 재조합형 등, 그 생산 방법에 대해서는 묻지 않지만, 바람직하게는 의료용으로 사용되는 품질이 확보된 표품이 필요 최저량으로 사용된다. 첨가하는 사이토카인의 농도는 수상 세포가 유도되는 농도이면 특별히 한정되지 않고, 통상 사이토카인의 합계 농도로 10∼1000ng/mL 정도가 바람직하고, 보다 바람직하게는 20∼500ng/mL 정도이다. 배양은 백혈구의 배양에 통상 사용되고 있는 주지의 배지를 이용하여 행할 수 있다. 배양 온도는 백혈구의 증식이 가능하면 특별히 한정되지 않지만, 인간의 체온인 37℃ 정도가 가장 바람직하다. 또한 배양 중의 기체환경은 백혈구의 증식이 가능하면 특별히 한정되지 않지만, 5% CO2를 통기하는 것이 바람직하다. 또한 배양 기간은 필요수의 세포가 유도되는 기간이면 특별히 한정되지 않지만, 통상 3일∼2주일의 사이에서 행해진다. 세포의 분리나 배양에 제공되는 기기는 적절하게 적당한 것을 사용할 수 있지만, 의료용으로 안전성이 확인되고, 또한 조작이 안정되고 간편한 것이 바람직하다. 특히 세포 배양 장치에 대해서는 샤알레, 플라스크, 병 등의 일반적 용기에 상관없이, 적층형 용기나 다단식 용기, 롤러병, 스피너식 병, 백식 배양기, 중공사 컬럼 등도 사용할 수 있다.
또한 본 발명에 의하면, 상기 (a), (b) 또는 (c)의 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 대상 동물의 체내에서 발현시킴으로써도, 상기 생체내에서 항체생산이나 세포장해성 T세포를 유도할 수 있고, 상기 폴리펩티드를 투여하는 것과 동등한 암에 대한 상기 치료 및 예방 등의 효과가 얻어진다. 즉, 본 발명의 면역 유도제는 상기 (a), (b) 또는 (c)의 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 생체내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터를 유효성분으로서 포함하는 것이어도 좋다. 후술의 실시예에 나타내어지듯이, 이러한 항원 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터는 유전자 백신이라고도 불린다.
유전자 백신을 제조하기 위해서 사용하는 벡터는 대상동물 세포내(바람직하게는 포유동물 세포내)에서 발현 가능한 벡터이면 특별히 한정되지 않고, 플라스미드 벡터이어도 바이러스 벡터이어도 좋고, 유전자 백신의 분야에서 공지의 어떠한 벡터를 사용해도 좋다. 또, 상기 폴리펩티드를 코드하는 DNA나 RNA 등의 폴리뉴클레오티드는 전술한 바와 같이, 상법에 의해 용이하게 조제할 수 있다. 또한 벡터에의 상기 폴리뉴클레오티드의 편입은 당업자에게 주지의 방법을 이용하여 행할 수 있다.
유전자 백신의 투여 경로는 바람직하게는 근육내투여, 피하투여, 정맥내투여, 동맥내투여 등의 비경구투여 경로이며, 투여량은 항원의 종류 등에 따라 적당하게 선택할 수 있지만, 통상, 체중 1kg당, 유전자 백신의 중량으로 0.1μg∼100mg 정도, 바람직하게는 1μg∼10mg 정도이다.
바이러스 벡터에 의한 방법으로서는 예를 들면 레트로 바이러스, 센다이 바이러스, 아데노 바이러스, 아데노 수반 바이러스, 헤르페스 바이러스, 백시니아 바이러스, 폭스 바이러스, 폴리오 바이러스, 신드비스 바이러스 등의 RNA 바이러스 또는 DNA 바이러스에, 상기 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 편입하고, 이것을 대상 동물에게 감염시키는 방법을 들 수 있다. 이 중에서, 레트로 바이러스, 아데노 바이러스, 아데노 수반 바이러스, 백시니아 바이러스 등을 사용한 방법이 특히 바람직하다.
그 밖의 방법으로서는 발현 플라스미드를 직접 근육내에 투여하는 방법(DNA 백신법), 리포솜법, 리포펙틴법, 마이크로 인젝션법, 인산 칼슘법, 일렉트로포레이션법 등을 들 수 있고, 특히 DNA 백신법, 리포솜법이 바람직하다.
본 발명에서 사용되는 상기 폴리펩티드를 코드하는 유전자를 실제로 의약으로서 작용시키기 위해서는 유전자를 직접 체내에 도입하는 in vivo 방법, 및 대상동물로부터 어느 종의 세포를 채취해서 체외에서 유전자를 상기 세포에 도입해서 그 세포를 체내에 돌려주는 ex vivo 방법이 있지만(닛께이 사이언스(일본), 1994년4월, p20-45, 월간 약사(일본), 1994년, 제36권, 제1호, p.23-48, 실험 의학 증간(일본), 1994년, 제12권, 제15호, 및 이들의 인용문헌 등), in vivo 방법이 보다 바람직하다.
in vivo 방법에 의해 투여하는 경우에는 치료 목적의 질환, 증상 등에 따른 적당한 투여경로에 의해 투여될 수 있다. 예를 들면 정맥, 동맥, 피하, 근육내 등에 투여할 수 있다. in vivo 방법에 의해 투여하는 경우에는 예를 들면 액제 등의 제제 형태를 취할 수 있지만, 일반적으로는 유효성분인 본 발명의 상기 펩티드를 코드하는 DNA를 함유하는 주사제 등으로 되고, 필요에 따라서, 제약 상 허용 가능한 담체(예를 들면 생리식염수, 완충액, 등)를 첨가해도 좋다. 또한 상기 DNA를 함유하는 리포솜 또는 막융합 리포솜(센다이 바이러스(HVJ)-리포솜 등)에 있어서는 현탁제, 동결제, 원심분리 농축 동결제 등의 리포솜 제제의 형태로 할 수 있다.
또, 본 발명에 있어서, 「서열번호 1에 나타내어지는 염기 서열」이라고 한 경우에는 서열번호 1에 실제로 나타내어져 있는 염기 서열 외에, 이것과 상보적인 서열도 포함한다. 따라서, 「서열번호 1에 나타내어지는 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드」라고 했을 경우에는 서열번호 1에 실제로 나타내어져 있는 염기 서열을 갖는 단일쇄 폴리뉴클레오티드, 그 상보적인 염기 서열을 갖는 단일쇄 폴리뉴클레오티드, 및 이들로 이루어지는 이중쇄 폴리뉴클레오티드가 포함된다. 본 발명에서 사용되는 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 조제할 경우에는 적당하게 어느 하나의 염기 서열을 선택하게 되지만, 당업자라면 용이하게 그 선택을 할 수 있다.
3.항원 제시 세포 또는 세포장해성 T세포
본 발명은 또한, 상기의 폴리펩티드와 피험체 유래의 항원 제시 세포를 ex vivo 또는 인비트로(in vitro)에서 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 항원 제시 세포의 제작 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 이 방법에 의해 얻어지는, 또한 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 것을 특징으로 하는 항원 제시 세포를 제공한다.
상기 폴리펩티드와 항원 제시 세포를 ex vivo 또는 인비트로에서 접촉시키는 방법 자체는 주지의 방법에 의해 행할 수 있다. 예를 들면 항원 제시 세포를, 상기 폴리펩티드를 포함하는 배양액 중에서 배양함으로써 행할 수 있다. 배지에 대해서는 시판의 항원 제시 세포 배양 배지를 사용할 수 있다. 배지 중의 펩티드 농도는 특별히 한정되지 않지만, 통상 1∼100μg/ml 정도, 바람직하게는 5∼20μg/ml 정도이다. 배양시의 세포밀도는 특별히 한정되지 않지만, 통상 103∼107세포/ml 정도, 바람직하게는 5×104∼5×106세포/ml 정도이다. 배양은 상법에 따라 37℃, 5% CO2 분위기 중에서 행하는 것이 바람직하다. 또, 항원 제시 세포가 표면 상에 제시할 수 있는 펩티드의 길이는 통상, 최대 30 아미노산 잔기 정도이다. 따라서, 특별히 한정되지 않지만, 항원 제시 세포와 폴리펩티드를 ex vivo 또는 인비트로에서 접촉시킬 경우, 상기 폴리펩티드를 약 30 아미노산 잔기 이하의 길이로 조제해도 좋다.
상기한 폴리펩티드의 공존 하에 있어서 항원 제시 세포를 배양함으로써, 상기 폴리펩티드가 항원 제시 세포의 MHC 분자에 도입되고, 항원 제시 세포의 표면에 제시된다. 따라서, 상기 폴리펩티드를 이용하여, 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는, 단리 항원 제시 세포를 조제할 수 있다. 이러한 항원 제시 세포는 생체내 또는 ex vivo 또는 인비트로에 있어서, T세포에 대해서 상기 폴리펩티드를 제시하고, 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포장해성 T세포를 유도하고, 증식시킬 수 있다.
본 발명은 또한, 상기의 항원 제시 세포와 피험체 유래의 T세포를 ex vivo 또는 인비트로에서 접촉시켜서 상기 T세포를 활성화하는 것을 포함하는, 상기의 폴리펩티드에 특이적인 세포장해성 T세포의 제작 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 이 방법에 의해 얻어지는, 또한 상기의 폴리펩티드에 특이적인 것을 특징으로 하는 세포장해성 T세포를 제공한다.
상기한 바와 같이 해서 조제되는, 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 항원 제시 세포를, T세포와 ex vivo 또는 인비트로에서 접촉시킴으로써, 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포장해성 T세포를 유도하고, 증식시킬 수 있다. 이것은 상기 항원 제시 세포와 T세포를 액체 배지 중에서 공존 배양함으로써 행할 수 있다. 예를 들면 항원 제시 세포를 액체 배지에 현탁하고, 마이크로 플레이트의 웰 등의 용기에 넣고, 이것에 T세포를 첨가해서 배양함으로써 행할 수 있다. 공존 배양시의 항원 제시 세포와 T세포의 혼합비율은 특별히 한정되지 않지만, 통상, 세포수의 비율로 약 1:1∼약 1:100, 바람직하게는 약 1:5∼약 1:20이다. 또한 액체 배지 중에 현탁하는 항원 제시 세포의 밀도는 특별히 한정되지 않지만, 통상, 약 100∼1000만 세포/ml, 바람직하게는 약 10000∼100만 세포/ml이다. 공존 배양은 상법에 따라 37℃, 5% CO2 분위기 중에서 행하는 것이 바람직하다. 배지에 대해서는 시판의 항원 제시 세포/T세포 배양 배지를 사용할 수 있다. 배양 시간은 특별히 한정되지 않지만, 통상, 약 2일∼3주일, 바람직하게는 약 4일∼2주일 정도이다. 또한 공존 배양은 IL-2, IL-6, IL-7 및 IL-12와 같은 인터류킨의 1종 또는 복수의 존재 하에서 행하는 것이 바람직하다. 이 경우, IL-2 및 IL-7의 농도는 통상 약 5∼20U/ml, IL-6의 농도는 통상 약 500∼2000U/ml, IL-12의 농도는 통상 약 5∼20ng/ml이지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 상기의 공존 배양은 신선한 항원 제시 세포를 추가해서 1회 또는 수회 반복해도 좋다. 예를 들면 공존 배양 후의 배양 상청을 버리고, 신선한 항원 제시 세포의 현탁액을 첨가해서 공존 배양을 더 행한다고 하는 조작을, 1회 또는 수회 반복해도 좋다. 각 공존 배양의 조건은 상기와 동일하여도 좋다.
상기의 공존 배양에 의해, 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포장해성 T세포가 유도되어, 증식된다. 따라서, 상기 폴리펩티드를 이용하여, 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 선택적으로 결합하는, 단리 T세포를 조제할 수 있다.
후술의 실시예에 기재되는 바와 같이, CSPG5 유전자는 유방암세포, 유방암조직, 폐암세포, 폐암조직, 간암세포, 간암조직, 뇌종양세포, 뇌종양조직, 난소암세포, 난소암조직, 백혈병, 악성 림프종, 선암세포, 선암조직, 비만세포종, 편평상피암세포, 멜라노마 세포 또는 신경아종세포에 특이적으로 발현하고 있다. 따라서, 이들의 암종에 있어서는 CSPG5가 정상세포보다 유의하게 많이 존재하고 있다고 생각된다. 따라서, 암세포내에 존재하는 CSPG5의 폴리펩티드의 일부가 암세포 표면 상의 MHC 분자에 제시되도록, 상기한 바와 같이 해서 조제한 세포장해성 T세포가 생체내에 투여되면, 이것을 마크로 해서 세포장해성 T세포가 암세포를 장해할 수 있다. 또한 CSPG5의 폴리펩티드의 일부를 제시하는 항원 제시 세포는 생체내에 있어서도 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포장해성 T세포를 유도하고, 증식시킬 수 있으므로, 상기 항원 제시 세포를 생체내에 투여함으로써도, 암세포를 장해할 수 있다. 즉, 상기 폴리펩티드를 이용하여 조제된 상기 세포장해성 T세포나 상기 항원 제시 세포도 또한 본 발명의 면역 유도제와 마찬가지로, 암의 치료 및/또는 예방용으로서 유용하다.
상기한 단리 항원 제시 세포나 단리 T세포를 생체에 투여하는 경우에는 이들의 세포를 이물로서 공격하는 생체내에서의 면역응답을 회피하기 위해서, 치료를 받는 환자로부터 채취한 항원 제시 세포 또는 T세포를, 상기한 바와 같이 상기 (a), (b) 또는 (c)의 폴리펩티드를 이용하여 조제한 것이 바람직하다.
항원 제시 세포 또는 단리 T세포를 유효성분으로서 포함하는 암의 치료 및/또는 예방제의 투여 경로는 정맥내투여나 동맥내투여와 같은 비경구투여가 바람직하다. 또한 투여량은 증상이나 투여 목적 등에 따라 적당하게 선택되지만, 통상 1개∼10조개, 바람직하게는 100만개∼10억개이며, 이것을 수일 내지 수개월에 1회 투여하는 것이 바람직하다. 제제는 예를 들면 세포를 생리완충 식염수에 현탁한 것 등이어도 좋고, 다른 항암제나 사이토카인 등과 병용할 수도 있다. 또한 제제 분야에 있어서 주지의 1 또는 2 이상의 첨가제를 첨가할 수도 있다.
실시예
이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명의 범위는 상기 실시예에 의해 제한되지 않는 것으로 한다.
[실시예 1]
<SEREX법에 의한 신규 암항원 단백의 취득>
(1)cDNA 라이브러리의 제작
개의 정소로부터 산구아니듐-페놀-클로로포름법(Acid guanidium-Phenol-Chloroform법)에 의해 전체 RNA를 추출하고, Oligotex-dT30 mRNA purification Kit (Takara Shuzo Co., Ltd., Kyoto, Japan)를 이용하여 키트 첨부의 프로토콜에 따라서 폴리A RNA를 정제했다.
이 얻어진 ｍRNA(5μg)를 이용하여 cDNA 파지 라이브러리를 합성했다. cDNA 파지 라이브러리의 제작에는 cDNA Synthesis kit, Zap-cDNA Synthesis Kit, ZAP-cDNA GigapackIII Gold Cloning Kit(STRATAGENE사)를 사용하고, 키트 첨부의 프로토콜에 따라서 라이브러리를 제작했다. 제작한 cDNA 파지 라이브러리의 사이즈는 1×106pfu/ml이었다.
(2)혈청에 의한 cDNA 라이브러리의 스크리닝
상기 제작한 cDNA 파지 라이브러리를 이용하여, 임노스크리닝을 행했다. 구체적으로는 Φ90×15mm의 NZY 아가로스 플레이트에 2340 클론이 되도록 숙주 대장균(XL1-Blue MRF')에 감염시키고, 42℃, 3∼4시간 배양하고, 용균반(플라크)을 제작하고, IPTG(이소프로필-β-D-티오갈락토시드)를 침투시킨 니트로셀룰로오스 멤브레인(Hybond C Extra: GE Healthcare Bio-Science사)으로 플레이트를 37℃에서 4시간 덮음으로써 단백질을 유도·발현시키고, 멤브레인에 단백질을 전사했다. 그 후 멤브레인을 회수해서 0.5% 탈지분유를 포함하는 TBS(10mM Tris-HCl, 150 mM NaCl pH7.5)에 담그고 4℃에서 하룻밤 진탕함으로써 비특이 반응을 억제했다. 이 필터를 500배 희석한 환견 혈청과 실온에서 2∼3시간 반응시켰다.
상기 환견 혈청으로서는 유방암의 환견으로부터 채취한 혈청을 사용했다. 이들 혈청은 -80℃에서 보존하고, 사용 직전에 전처리를 행했다. 혈청의 전처리 방법은 이하의 방법에 의한다. 즉, 외래 유전자를 삽입하지 않는 λ ZAP Express 파지를 숙주 대장균(XL1-Blure MRF')에 감염시킨 후, NZY 플레이트 배지 상에서 37℃, 밤새 배양했다. 다음에 0.5M NaCl을 포함하는 0.2M NaHCO3 pH 8.3의 버퍼를 플레이트에 첨가하고, 4℃에서 15시간 정치 후, 상청을 대장균/파지 추출액으로서 회수했다. 다음에 회수한 대장균/파지 추출액을 NHS-컬럼(GE Healthcare Bio-Science사)에 통액해서 대장균·파지 유래의 단백질을 고정화했다. 이 단백 고정화 컬럼에 환견 혈청을 통액·반응시키고, 대장균 및 파지에 흡착하는 항체를 혈청으로부터 제거했다. 컬럼을 통과한 혈청 획분은 0.5% 탈지분유를 포함하는 TBS로 500배 희석하고, 이것을 임노스크리닝 재료로 했다.
이러한 처리 혈청과 상기 융합 단백질을 블롯한 멤브레인을 TBS-T(0.05% Tween20/TBS)로 4회 세정을 행한 후, 2차 항체로서 0.5% 탈지분유를 함TBS로 5000배 희석을 행한 염소 항견 IgG(Goat anti Dog IgG-h+l HRP conjugated; BETHYL Laboratories사)를 실온에서 1시간 반응시키고, NBT/BCIP 반응액(Roche사)을 사용한 효소 발색 반응에 의해 검출하고, 발색 반응 양성 부위에 일치하는 콜로니를 Φ90×15mm의 NZY 아가로스 플레이트 상에서 채취하고, SM 완충액(100 mM NaCl, 10 mM MgClSO4, 50 mM Tris-HCl, 0.01% 젤라틴 pH 7.5) 500μl에 용해시켰다. 발색 반응 양성 콜로니가 단일화될 때까지 상기와 동일한 방법으로, 2차, 3차 스크리닝을 반복하고, 혈청 중의 IgG와 반응하는 9110개의 파지 클론을 스크리닝하고, 1개의 양성 클론을 단리했다.
(3)단리 항원 유전자의 서열 동일성 검색
상기 방법에 의해 단리한 1개의 양성 클론을 염기 서열 해석에 제공하기 위해서, 파지 벡터로부터 플라스미드 벡터로 전환하는 조작을 행했다. 구체적으로는 숙주 대장균(XL1-Blue MRF')을 흡광도 OD600이 1.0이 되도록 조제한 용액 200μl와, 정제한 파지 용액 100μl 또한 ExAssist helper phage(STRATAGENE사) 1μl를 혼합한 후 37℃에서 15분간 반응 후, LB 배지를 3ml 첨가하고 37℃에서 2.5∼3시간 배양을 행하고, 바로 70℃의 수욕에서 20분간 보온한 후, 4℃, 1000×g, 15분간 원심을 행하고, 상청을 파지미드 용액으로서 회수했다. 이어서 파지미드 숙주 대장균(SOLR)을 흡광도 OD600이 1.0이 되도록 조제한 용액 200μl와, 정제한 파지 용액 10μl를 혼합한 후 37℃에서 15분간 반응시키고, 50μl를 암피실린(종농도 50μg/ml) 함유 LB 한천배지에 뿌리고 37℃에서 밤새 배양했다. 트랜스폼한 SOLR의 싱글 콜로니를 채취하고, 암피실린(종농도 50μg/ml) 함유 LB 배지 37℃에서 배양 후, QIAGEN plasmid Miniprep Kit(QIAGEN사)를 사용해서 목적의 인서트를 갖는 플라스미드 DNA를 정제했다.
정제한 플라스미드는 서열번호 17에 기재된 T3 프라이머와 서열번호 18에 기재된 T7 프라이머를 이용하여, 프라이머 워킹법에 의한 인서트 전체 길이 서열의 해석을 행했다. 이 시퀀스 해석에 의해 서열번호 1에 기재된 유전자 서열을 취득했다. 이 유전자의 염기 서열 및 아미노산 서열을 이용하여, 서열 동일성 검색 프로그램 BLAST 서치(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)를 행하고 기지 유전자와의 서열 동일성 검색을 행한 결과, 얻어진 유전자는 CSPG5 유전자인 것이 판명되었다. 개 CSPG5의 인간 상동인자인 인간 CSPG5에서는 서열 동일성이 염기 서열 87%, 아미노산 서열 87%이며, 고양이 CSPG5에서는 서열 동일성이 염기 서열 92%, 아미노산 서열 91%이며, 마우스 상동인자인 마우스 CSPG5에서는 서열 동일성이 염기 서열 84%, 아미노산 서열 85%였다. 인간 CSPG5의 염기 서열을 서열번호 3, 5, 7, 9 또는 11, 아미노산 서열을 서열번호 4, 6, 8, 10 또는 12에, 고양이 CSPG5의 염기 서열을 서열번호 13, 아미노산 서열을 서열번호 14에, 마우스 CSPG5의 염기 서열을 서열번호 15, 아미노산 서열을 서열번호 16에 각각 나타낸다.
(4)각 조직에서의 발현 해석
상기 방법에 의해 얻어진 유전자에 대해서 개, 인간 및 마우스의 각종 인간 정상조직 및 각종 암조직 및 암세포주에 있어서의 발현을 RT-PCR(Reverse Transcription-PCR)법에 의해 조사했다. 역전사 반응은 이하와 같이 행했다. 즉, 각 조직 50∼100mg 및 각 세포주 5∼10×106개의 세포로부터 TRIZOL 시약(Invitrogen사)을 이용하여 첨부의 프로토콜에 따라 전체 RNA를 추출했다. 이 전체 RNA를 이용하여 Superscript First-Strand Synthesis System for RT-PCR(Invitrogen사)에 의해 첨부의 프로토콜에 따라 cDNA를 합성했다. 인간 정상조직(뇌, 해마, 정소, 결장, 태반)의 cDNA는 유전자풀 cDNA(Invitrogen사), QUICK-Clone cDNA(Clontech사) 및 Large-Insert cDNA Library(Clontech사)를 사용했다. PCR 반응은 취득한 유전자 특이적인 프라이머(개 프라이머는 서열번호 19 및 20, 인간 프라이머는 서열번호 21 및 22, 마우스 프라이머는 서열번호 23 및 24에 기재)를 이용하여 이하와 같이 행했다. 즉, 역전사 반응에 의해 조제한 샘플 0.25μl, 상기 프라이머를 각 2μM, 0.2mM의 각 dNTPs, 0.65U의 ExTaq 폴리메라아제(Takara Shuzo Co., Ltd.)가 되도록 각 시약과 첨부 버퍼를 첨가하여 전량을 25μl로 하고, Thermal Cycler(BIO RAD사)를 이용하여, 94℃-30초, 55℃-30초, 72℃-1분의 사이클을 30회 반복해서 행했다. 비교 대조를 위해서 GAPDH 특이적인 프라이머(개 및 인간 GAPDH 프라이머는 서열번호 25 및 26, 마우스 GAPDH 프라이머는 서열번호 27 및 28에 기재)도 동시에 사용했다. 그 결과, 도 1에 나타내듯이, 개 CSPG5 유전자는 건상인 개 조직에서는 거의 조직에서 발현이 보여지지 않고, 한편 개 종양조직에서는 강한 발현이 보여졌다. 인간 및 마우스 CSPG5 유전자의 발현도, 개 CSPG5 유전자와 마찬가지로 인간 및 마우스 정상조직에서는 거의 발현을 확인할 수 없고, 암세포에서는 유방암, 폐암, 뇌종양, 난소암, 백혈병, 악성 림프종의 세포주에서 발현이 검출되었다(도 2, 도 3).
[실시예 2]
<CSPG5의 생체내에서의 암항원성의 해석>
(1)생체내에서 CSPG5를 발현하는 재조합 벡터의 제작
서열번호 15의 염기 서열을 기초로, 이하의 방법으로 생체내에서 CSPG5를 발현하는 재조합 벡터를 제작했다. PCR은 실시예 1에 있어서 발현이 보여진 마우스 신경아종 세포주 1(N2a:ATCC로부터 구입)로 조제했다. cDNA를 1μl, HindIII 및 XbaI 제한 효소절단 서열을 포함하는 2종류의 프라이머(서열번호 29 및 30에 기재)을 각 0.4μM, 0.2mM dNTPs, 1.25U의 PrimeSTAR HS 폴리메라아제(Takara Shuzo Co., Ltd.)가 되도록 각 시약과 첨부 버퍼를 첨가해서 전량을 50μl로 하고, Thermal Cycler(BIO RAD사)를 이용하여, 98℃-10초, 55℃-15초, 72℃-4분의 사이클을 30회 반복함으로써 행했다. 또, 상기 2종류의 프라이머는 서열번호 15의 아미노산 서열 전체 길이를 코드하는 영역을 증폭하는 것이었다. PCR후, 증폭된 DNA를 1% 아가로스겔로 전기영동하고, QIAquick Gel Extraction Kit(QIAGEN사)를 이용하여 약 1000bp의 DNA 단편을 정제했다.
정제한 DNA 단편을 클로닝 벡터 pCR-Blunt(Invitrogen사)에 라이게이션했다. 이것을 대장균으로 형질 전환 후 플라스미드를 회수하고, 증폭된 유전자 단편이 목적 서열과 일치하는 것을 시퀀스로 확인했다. 목적 서열과 일치한 플라스미드를 HindIII 및 XbaI 제한 효소로 처리하고, QIAquick Gel Extraction Kit로 정제 후, 목적 유전자 서열을 HindIII, XbaI 제한 효소로 처리한 포유류 발현 벡터 PCDNA 3.1(Invitrogen사)에 삽입했다. 이 벡터의 사용에 의해 포유류의 세포내에서 CSPG5 단백이 생산된다.
상기에서 제작한 플라스미드 DNA100μg에 50μg의 금입자(Bio Rad사), 스펠미딘 100μl(SIGMA사), 1M CaCl2 100μl(SIGMA사)를 첨가하고, 와류(vortex)에 의해 교반하고 10분 실온에서 정치했다(이후 「금-DNA 입자」라고 기재한다). 3000rpm으로 1분 원심한 후, 상청을 버리고 100% 에탄올(WAKO사)에 의해 3회 세정했다. 금-DNA 입자에 100% 에탄올 6ml를 첨가하고 와류에 의해 충분히 교반한 후, 금-DNA 입자를 Tefzel Tubing(Bio Rad사)에 흘려 넣고, 벽면에 침전시켰다. 금-DNA 입자가 부착된 Tefzel Tubing의 에탄올을 풍건하고, 유전자총에 적합한 길이로 커트했다.
(2)DNA 백신법에 의한 CSPG5의 항종양 효과
10마리의 A/J 마우스(7주령, 수컷, 니폰 SLC사에서 구입)에 대해서, 상기에서 제작한 튜브를 유전자총에 고정하고, 순 헬륨 가스를 이용하여 400psi의 압력으로 털을 깎은 마우스의 복강에 DNA 백신을 7일마다 총 3회, 경피투여한 후에 (플라스미드 DNA 접종량은 2μg/마리가 된다) 마우스 신경아종 세포주 N2a 세포를 이식해서 항종양 효과를 평가했다(예방 모델). 또, 컨트롤로서 CSPG5 유전자가 삽입되어 있지 않은 플라스미드 DNA를 각 모델에서 10마리씩 투여했다.
항종양 효과는 종양의 크기(장경×단경2/2) 및 생존 마우스의 비율로 평가했다. 본 검토의 결과, 예방 모델에 있어서, 21일후에는 컨트롤 군 및 CSPG5 플라스미드 투여군에서 각각 1866mm3, 459mm3이 되고, CSPG 5플라스미드 투여군에서는 종양의 현저한 퇴축이 관찰되었다. 또한 생존의 경과를 관찰한 결과, 예방 모델에 있어서, 컨트롤군에서는 투여후 54일에 전예 사망한 것에 대해서 CSPG5 플라스미드 투여군에서는 60%의 마우스가 생존하고 있었다. 이상의 결과로부터, CSPG5 플라스미드 투여군은 컨트롤군에 비해서 유의한 항종양 효과가 확인되었다.
(산업상의 이용 가능성)
본 발명은 각종 암에 대해서 항종양 활성을 발휘하는 폴리펩티드를 포함하는 면역 유도제를 제공하므로 암의 치료 및/또는 예방에 유용하다.
(서열표 프리텍스트)
서열번호 17:T3 프라이머
서열번호 18:T7 프라이머
서열번호 19:개 RT 프라이머 센스
서열번호 20:개 RT 프라이머 안티센스
서열번호 21:인간 RT 프라이머 센스
서열번호 22:인간 RT 프라이머 안티센스
서열번호 23:마우스 RT 프라이머 센스
서열번호 24:마우스 RT 프라이머 안티센스
서열번호 25 및 26:GAPDH 프라이머
서열번호 27 및 28:GAPDH 프라이머
서열번호 29:mus-fullCSPG5 프라이머 센스
서열번호 30:mus-fullCSPG5 프라이머 안티센스
본 명세서에서 인용한 모든 간행물, 특허 및 특허출원은 그대로 인용에 의해 본 명세서에 도입되어지는 것으로 한다.
SEQUENCE LISTING <110> TORAY INDUSTRIES, INC. <120> Immunoinducer <130> PH-6534-PCT <150> JP 2015-093354 <151> 2015-04-30 <160> 30 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 2270 <212> DNA <213> Canis familiaris <220> <221> CDS <222> (1)..(1434) <223> <400> 1 ggg gag gag gag acc tcg tgt act gca cct ggc ggc ctg ccg gcc gtg 48 Gly Glu Glu Glu Thr Ser Cys Thr Ala Pro Gly Gly Leu Pro Ala Val 1 5 10 15 gtg ggg cct ggg gtc ggg cca gag gag gcg ctg gag gcg tcc gcg gcc 96 Val Gly Pro Gly Val Gly Pro Glu Glu Ala Leu Glu Ala Ser Ala Ala 20 25 30 gtg acc ggc aca gcc tgg ctg gag gct gac agc ccg ggc ctg ggc gga 144 Val Thr Gly Thr Ala Trp Leu Glu Ala Asp Ser Pro Gly Leu Gly Gly 35 40 45 gcg acc gta gag gct ggc agc ggc gac acc cag gcc ctt ccg gcc acg 192 Ala Thr Val Glu Ala Gly Ser Gly Asp Thr Gln Ala Leu Pro Ala Thr 50 55 60 ctc ccg act ccg gag gag gcc ctc cga cgt gca tcg gtg gcc ccc gcc 240 Leu Pro Thr Pro Glu Glu Ala Leu Arg Arg Ala Ser Val Ala Pro Ala 65 70 75 80 acc ccc gag act aca gag gcc agc gga cca ccc tcc ccc act cct ggc 288 Thr Pro Glu Thr Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser Pro Thr Pro Gly 85 90 95 gac cag cta cgc cca ggc ccc gaa ctc ccc aag gag agc ccc ttg gag 336 Asp Gln Leu Arg Pro Gly Pro Glu Leu Pro Lys Glu Ser Pro Leu Glu 100 105 110 gtt tgg ctg aac ctg gga ggc agc aca cat gac ccg cat ggg cca gag 384 Val Trp Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr His Asp Pro His Gly Pro Glu 115 120 125 ccc acg ttc ccc ttt cag ggc aca ctg gag ccc cgg ccg gcg tca gat 432 Pro Thr Phe Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Arg Pro Ala Ser Asp 130 135 140 atc att gac atc gac tac ttc gaa gga ttg gat ggt gag ggc cgt ggc 480 Ile Ile Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly Glu Gly Arg Gly 145 150 155 160 gcc gac ttg ggg agc ttc ccg gtg tcg cca gga acc tca gag cac cac 528 Ala Asp Leu Gly Ser Phe Pro Val Ser Pro Gly Thr Ser Glu His His 165 170 175 ccc gat act ggg gga gag acc cct tcc tgg agc ctg ctt gac tta tac 576 Pro Asp Thr Gly Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu Asp Leu Tyr 180 185 190 gat gac ttc acc ccc ttt gat gaa tct gac ttc tac ccc act aca tcc 624 Asp Asp Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro Thr Thr Ser 195 200 205 ttc tat gat gac ttg gag gaa gag gag gag gaa gag gat gac gac aag 672 Phe Tyr Asp Asp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Asp Lys 210 215 220 gat gca gcg gaa ggt gga gac ctg gaa gat gaa agt gac ctt ctg gtg 720 Asp Ala Ala Glu Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Ser Asp Leu Leu Val 225 230 235 240 ccc act gag aag cct ggg ctg agg cca ggg cct ggc cag ccc acc agt 768 Pro Thr Glu Lys Pro Gly Leu Arg Pro Gly Pro Gly Gln Pro Thr Ser 245 250 255 cgg tgg cat gct gtc ccc cca cag cat act ctg ggg ttg gtc cct ggc 816 Arg Trp His Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Leu Val Pro Gly 260 265 270 agc agc atc gcc ctc aga ccc cgt ccg gga gag ccg ggc agg gac ctg 864 Ser Ser Ile Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu Pro Gly Arg Asp Leu 275 280 285 gcc ccg agc gag aac ggc act gag tgc cgc agc ggc ttt gtg cgg cat 912 Ala Pro Ser Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser Gly Phe Val Arg His 290 295 300 aac ggc tcc tgc cga tcc gtg tgc gac ctc ttc cca agt tac tgt cac 960 Asn Gly Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr Cys His 305 310 315 320 aac ggc ggc cag tgc tac ctg gtg gac aac ata ggg gcc ttc tgc agg 1008 Asn Gly Gly Gln Cys Tyr Leu Val Asp Asn Ile Gly Ala Phe Cys Arg 325 330 335 tgt aac aca cag gac tac atc tgg cac aag ggg atg cgc tgc gag tcc 1056 Cys Asn Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys Glu Ser 340 345 350 atc atc acc gac ttc cag gtg atg tgc gtg gcc gtc ggc tca gcc gcc 1104 Ile Ile Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser Ala Ala 355 360 365 ctc gtg ctg ctc ctg ctc ttc atg atg aca gtg ttc ttc gcc aag aag 1152 Leu Val Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala Lys Lys 370 375 380 ctg tat ctg ctc aag aca gag aat acc aag ctg cgt agg acc aac aaa 1200 Leu Tyr Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr Asn Lys 385 390 395 400 ttc cgg acc ccg tct gag ctc cac aac gat aac ttc tcc ctt tcc acc 1248 Phe Arg Thr Pro Ser Glu Leu His Asn Asp Asn Phe Ser Leu Ser Thr 405 410 415 att gcc gaa ggc tct cac cca aac gac gat ccc agt gct tcc cac aaa 1296 Ile Ala Glu Gly Ser His Pro Asn Asp Asp Pro Ser Ala Ser His Lys 420 425 430 atc cag gag gtt ctc aag tcc tgc ctg aaa gag gag gag tca ttt aac 1344 Ile Gln Glu Val Leu Lys Ser Cys Leu Lys Glu Glu Glu Ser Phe Asn 435 440 445 atc cag aac tcc atg tcc ccc aaa ctg gag ggt ggc aaa ggt gac cag 1392 Ile Gln Asn Ser Met Ser Pro Lys Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asp Gln 450 455 460 gct gac ttg gag gtg aac tgt ctt cag aac aac ctc acc taa 1434 Ala Asp Leu Glu Val Asn Cys Leu Gln Asn Asn Leu Thr 465 470 475 agcagagcaa gaagagaggg aatgggggag ggcggggggt ggcaggggaa gaaacatgac 1494 ctcctcttgt acagagtcta tttcttgtaa ccatttgtta aactctcttc tttttctggt 1554 ctcatggcat gccttgatgt attttgtaca ggagggagaa aacacaaaat aagcaaagaa 1614 cctgaacaga atcgcataca ccgggttgtt tcgtctgtgc tgtctgtata ttgcttctgc 1674 tgctgtgatt tctaaaccta tgctgttatt caactgactt tttttttgta ctttgaccca 1734 cctttttttg aaataagagt taaaaaacaa agttcttgaa ataaaacttt ttaaaaagcc 1794 attttccatc agtgtgtcca cttcctaccc attcttgtca gcttgagttg aattcttacg 1854 ttccctgaag atgtatattt atatgtgttt gaaatcctgg aagtgctctc tgtattagcc 1914 taggttgccg taactaaaca tcatagactg gatcacttaa gcaatagaaa tttatttttg 1974 aacagtaata gaggctggat ccccaagatc aaggtgccaa cagagttggt ttctggcagg 2034 gcctctctgc ctggcttgca aagagccatc ttcttgctat gtcctcacaa ggccttttgt 2094 ctgtgcacat ctcttcctct tctgataagg acaccagtcc tattggccta ggatccattt 2154 aacctcaatt acctcctcat aggccctact ccagatacag tcacacttag gggttatggc 2214 ttcaacatga cttttggggt gacataattc agtccacaag tctgtagcac ctgatt 2270 <210> 2 <211> 477 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 2 Gly Glu Glu Glu Thr Ser Cys Thr Ala Pro Gly Gly Leu Pro Ala Val 1 5 10 15 Val Gly Pro Gly Val Gly Pro Glu Glu Ala Leu Glu Ala Ser Ala Ala 20 25 30 Val Thr Gly Thr Ala Trp Leu Glu Ala Asp Ser Pro Gly Leu Gly Gly 35 40 45 Ala Thr Val Glu Ala Gly Ser Gly Asp Thr Gln Ala Leu Pro Ala Thr 50 55 60 Leu Pro Thr Pro Glu Glu Ala Leu Arg Arg Ala Ser Val Ala Pro Ala 65 70 75 80 Thr Pro Glu Thr Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser Pro Thr Pro Gly 85 90 95 Asp Gln Leu Arg Pro Gly Pro Glu Leu Pro Lys Glu Ser Pro Leu Glu 100 105 110 Val Trp Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr His Asp Pro His Gly Pro Glu 115 120 125 Pro Thr Phe Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Arg Pro Ala Ser Asp 130 135 140 Ile Ile Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly Glu Gly Arg Gly 145 150 155 160 Ala Asp Leu Gly Ser Phe Pro Val Ser Pro Gly Thr Ser Glu His His 165 170 175 Pro Asp Thr Gly Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu Asp Leu Tyr 180 185 190 Asp Asp Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro Thr Thr Ser 195 200 205 Phe Tyr Asp Asp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Asp Lys 210 215 220 Asp Ala Ala Glu Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Ser Asp Leu Leu Val 225 230 235 240 Pro Thr Glu Lys Pro Gly Leu Arg Pro Gly Pro Gly Gln Pro Thr Ser 245 250 255 Arg Trp His Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Leu Val Pro Gly 260 265 270 Ser Ser Ile Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu Pro Gly Arg Asp Leu 275 280 285 Ala Pro Ser Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser Gly Phe Val Arg His 290 295 300 Asn Gly Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr Cys His 305 310 315 320 Asn Gly Gly Gln Cys Tyr Leu Val Asp Asn Ile Gly Ala Phe Cys Arg 325 330 335 Cys Asn Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys Glu Ser 340 345 350 Ile Ile Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser Ala Ala 355 360 365 Leu Val Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala Lys Lys 370 375 380 Leu Tyr Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr Asn Lys 385 390 395 400 Phe Arg Thr Pro Ser Glu Leu His Asn Asp Asn Phe Ser Leu Ser Thr 405 410 415 Ile Ala Glu Gly Ser His Pro Asn Asp Asp Pro Ser Ala Ser His Lys 420 425 430 Ile Gln Glu Val Leu Lys Ser Cys Leu Lys Glu Glu Glu Ser Phe Asn 435 440 445 Ile Gln Asn Ser Met Ser Pro Lys Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asp Gln 450 455 460 Ala Asp Leu Glu Val Asn Cys Leu Gln Asn Asn Leu Thr 465 470 475 <210> 3 <211> 2175 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (177)..(1796) <223> <400> 3 ggggaggcgc 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Glu Val Leu Gln Glu Ser Ala Ala Val Thr Gly 85 90 95 acc gcc tgg ctg gaa gct gac agc cca ggc ctg gga gga gtg acc gca 515 Thr Ala Trp Leu Glu Ala Asp Ser Pro Gly Leu Gly Gly Val Thr Ala 100 105 110 gag gcg ggc agc ggc gat gcc cag gcc ctt cca gct acg ctc cag gct 563 Glu Ala Gly Ser Gly Asp Ala Gln Ala Leu Pro Ala Thr Leu Gln Ala 115 120 125 ccc cac gag gtc ctc ggg cag tca atc atg ccc cct gcc att cct gag 611 Pro His Glu Val Leu Gly Gln Ser Ile Met Pro Pro Ala Ile Pro Glu 130 135 140 145 gct aca gag gcc agc ggg cca ccc tcc ccc acc ccc ggc gac aag ctg 659 Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser Pro Thr Pro Gly Asp Lys Leu 150 155 160 agc cca gct tct gaa ctc ccc aag gag agc ccc ttg gag gtt tgg ctg 707 Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro Lys Glu Ser Pro Leu Glu Val Trp Leu 165 170 175 aac ctg ggg ggc agc aca ccc gac cct caa ggg cca gag ctg act tac 755 Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro Asp Pro Gln Gly Pro Glu Leu Thr Tyr 180 185 190 cca ttt cag ggc acc ctg gag ccc caa ccg gca tca gat atc att gac 803 Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Gln Pro Ala Ser Asp Ile Ile Asp 195 200 205 atc gac tac ttc gaa gga ctg gat ggt gag ggt cgt ggc gca gat ctg 851 Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly Glu Gly Arg Gly Ala Asp Leu 210 215 220 225 ggg agc ttc cca ggg tca cca gga acc tca gag aac cac cct gat act 899 Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr Ser Glu Asn His Pro Asp Thr 230 235 240 gag gga gag acc cct tcc tgg agc ctg ctt gac tta tac gat gat ttc 947 Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Asp Asp Phe 245 250 255 acc ccc ttc gat gaa tct gat ttc tac ccc acc aca tcc ttt tat gat 995 Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe Tyr Asp 260 265 270 gac ttg gat gaa gag gag gag gaa gag gag gat gac aaa gat gca gta 1043 Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Lys Asp Ala Val 275 280 285 gga ggt gga gac cta gaa gat gaa aat gag ctt cta gtg ccc act ggg 1091 Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Asn Glu Leu Leu Val Pro Thr Gly 290 295 300 305 aag cct ggt ctg ggg ccc ggg aca ggc cag ccc acc agt cgg tgg cat 1139 Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly Thr Gly Gln Pro Thr Ser Arg Trp His 310 315 320 gct gtc cct cca cag cac act ctg ggg tcg gtc ccc ggc agc agc atc 1187 Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Ser Val Pro Gly Ser Ser Ile 325 330 335 gcc ctc agg ccc cgc cca gga gag cca ggc agg gac ttg gcc tcc agt 1235 Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu Pro Gly Arg Asp Leu Ala Ser Ser 340 345 350 gaa aat ggc act gag tgc cgc agt ggc ttt gtg cgg cat aac ggc tcc 1283 Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser Gly Phe Val Arg His Asn Gly Ser 355 360 365 tgc cgg tca gtg tgc gac ctc ttc cca agt tac tgt cac aat ggc ggc 1331 Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly Gly 370 375 380 385 cag tgc tac ctg gtg gag aac ata ggg gcc ttc tgc agg tgc aac acg 1379 Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn Thr 390 395 400 cag gac tac atc tgg cac aag ggg atg cgc tgc gag tcc atc atc acc 1427 Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile Thr 405 410 415 gac ttc cag gtg atg tgc gtg gcc gtg ggc tcg gct gcc ctc gtc ctg 1475 Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser Ala Ala Leu Val Leu 420 425 430 ctc ctg ctc ttc atg atg acg gtg ttc ttt gcc aag aag ctc tac ctg 1523 Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr Leu 435 440 445 ctc aag acg gag aat acc aag ctg cgt agg acc aac aaa ttc cgg acc 1571 Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr Asn Lys Phe Arg Thr 450 455 460 465 cca tct gag ctc cac aat gat aac ttc tcc ctc tcc acc att gcc gag 1619 Pro Ser Glu Leu His Asn Asp Asn Phe Ser Leu Ser Thr Ile Ala Glu 470 475 480 ggc tct cac cca aat gat gat cct agt gct ccc cac aaa atc cag gag 1667 Gly Ser His Pro Asn Asp Asp Pro Ser Ala Pro His Lys Ile Gln Glu 485 490 495 gtt ctc aag tcc tgc ctg aaa gag gag gag tca ttt aac atc cag aac 1715 Val Leu Lys Ser Cys Leu Lys Glu Glu Glu Ser Phe Asn Ile Gln Asn 500 505 510 tcc atg tcg ccc aaa ctt gag ggt ggc aaa ggt gac cag gct gac ttg 1763 Ser Met Ser Pro Lys Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asp Gln Ala Asp Leu 515 520 525 gat gtg aac tgt ctt cag aat aat tta acc taa agcagagcaa gaagagagga 1816 Asp Val Asn Cys Leu Gln Asn Asn Leu Thr 530 535 agcgggggta gtgggtgggg ggtaggggaa gaaacattat ctcctcttgt acagagtcta 1876 tttcttgtaa ccatttgtta aactcttttc tttttctgat ctcatggcat gcttttatgt 1936 attttgtaca ggaggcaaaa aaatacttaa aataagcaaa gaaactgaac agaattgcat 1996 acattgggtt gttttttctg tgctgtctgt acattgcttc tgctgctgtg atttctaaac 2056 ctgtgctgtt attcaactga cttttttttg tactttgacc cacgtttttt tgaaatacca 2116 gtaaaaaaca aagttcttga aataaaactt tttaaaaagt taaaaaaaaa aaaaaaaaa 2175 <210> 4 <211> 539 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Gly Arg Ala Gly Gly Gly Gly Pro Gly Arg Gly Pro Pro Pro Leu 1 5 10 15 Leu Leu Phe Leu Gly Ala Ala Leu Val Leu Ala Ser Gly Ala Val Pro 20 25 30 Ala Arg Glu Ala Gly Ser Ala Val Glu Ala Glu Glu Leu Val Lys Gly 35 40 45 Ser Pro Ala Trp Glu Pro Pro Ala Asn Asp Thr Arg Glu Glu Ala Gly 50 55 60 Pro Pro Ala Ala Gly Glu Asp Glu Ala Ser Trp Thr Ala Pro Gly Gly 65 70 75 80 Glu Leu Ala Gly Pro Glu Glu Val Leu Gln Glu Ser Ala Ala Val Thr 85 90 95 Gly Thr Ala Trp Leu Glu Ala Asp Ser Pro Gly Leu Gly Gly Val Thr 100 105 110 Ala Glu Ala Gly Ser Gly Asp Ala Gln Ala Leu Pro Ala Thr Leu Gln 115 120 125 Ala Pro His Glu Val Leu Gly Gln Ser Ile Met Pro Pro Ala Ile Pro 130 135 140 Glu Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser Pro Thr Pro Gly Asp Lys 145 150 155 160 Leu Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro Lys Glu Ser Pro Leu Glu Val Trp 165 170 175 Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro Asp Pro Gln Gly Pro Glu Leu Thr 180 185 190 Tyr Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Gln Pro Ala Ser Asp Ile Ile 195 200 205 Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly Glu Gly Arg Gly Ala Asp 210 215 220 Leu Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr Ser Glu Asn His Pro Asp 225 230 235 240 Thr Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Asp Asp 245 250 255 Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe Tyr 260 265 270 Asp Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Lys Asp Ala 275 280 285 Val Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Asn Glu Leu Leu Val Pro Thr 290 295 300 Gly Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly Thr Gly Gln Pro Thr Ser Arg Trp 305 310 315 320 His Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Ser Val Pro Gly Ser Ser 325 330 335 Ile Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu Pro Gly Arg Asp Leu Ala Ser 340 345 350 Ser Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser Gly Phe Val Arg His Asn Gly 355 360 365 Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly 370 375 380 Gly Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn 385 390 395 400 Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile 405 410 415 Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser Ala Ala Leu Val 420 425 430 Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr 435 440 445 Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr Asn Lys Phe Arg 450 455 460 Thr Pro Ser Glu Leu His Asn Asp Asn Phe Ser Leu Ser Thr Ile Ala 465 470 475 480 Glu Gly Ser His Pro Asn Asp Asp Pro Ser Ala Pro His Lys Ile Gln 485 490 495 Glu Val Leu Lys Ser Cys Leu Lys Glu Glu Glu Ser Phe Asn Ile Gln 500 505 510 Asn Ser Met Ser Pro Lys Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asp Gln Ala Asp 515 520 525 Leu Asp Val Asn Cys Leu Gln Asn Asn Leu Thr 530 535 <210> 5 <211> 2253 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (669)..(1874) <223> <400> 5 agtccagtga ggaataactg tagataagat gagatgatgg gcattaagtg taactgctga 60 gaagccttca tagagggaaa ggtgataaga actgagtttt tctggcatga ggagtttacc 120 aggcaggaga ggtggagacg ctaggctagg caaataggct gcagccatag ttctgctgag 180 aaacaggttt tgaaccaagg caactccatc tggagatatg tatcagaaag attaggagat 240 agaatctcca tcttggtcac ttatttggtc ttctaagaca gcaatgggac cgtctcttaa 300 atactggagt tgtcctatct ccttgggctg ataccctgaa ctgtcatttg gcgcgtgagg 360 cgggcagcgc ggttgaggcc gaagagctgg tgaagggcag cccggcgtgg gagccgcctg 420 ccaacgacac gcgggaagaa gccggcccac cagcggctgg ggaagatgag gcgtcgtgga 480 cggcgcccgg tggcgagctg gccgggccag aagaggtgct gcaggagtcg gctgcggtga 540 ccggcaccgc ctggctggaa gctgacagcc caggcctggg aggagtgacc gcagaggcgg 600 gcagcggcga tgcccaggcc cttccagcta cgctccaggc tccccacgag gtcctcgggc 660 agtcaatc atg ccc cct gcc att cct gag gct aca gag gcc agc ggg cca 710 Met Pro Pro Ala Ile Pro Glu Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro 1 5 10 ccc tcc ccc acc ccc ggc gac aag ctg agc cca gct tct gaa ctc ccc 758 Pro Ser Pro Thr Pro Gly Asp Lys Leu Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro 15 20 25 30 aag gag agc ccc ttg gag gtt tgg ctg aac ctg ggg ggc agc aca ccc 806 Lys Glu Ser Pro Leu Glu Val Trp Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro 35 40 45 gac cct caa ggg cca gag ctg act tac cca ttt cag ggc acc ctg gag 854 Asp Pro Gln Gly Pro Glu Leu Thr Tyr Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu 50 55 60 ccc caa ccg gca tca gat atc att gac atc gac tac ttc gaa gga ctg 902 Pro Gln Pro Ala Ser Asp Ile Ile Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu 65 70 75 gat ggt gag ggt cgt ggc gca gat ctg ggg agc ttc cca ggg tca cca 950 Asp Gly Glu Gly Arg Gly Ala Asp Leu Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro 80 85 90 gga acc tca gag aac cac cct gat act gag gga gag acc cct tcc tgg 998 Gly Thr Ser Glu Asn His Pro Asp Thr Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp 95 100 105 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Glu Cys Arg 210 215 220 agt ggc ttt gtg cgg cat aac ggc tcc tgc cgg tca gtg tgc gac ctc 1382 Ser Gly Phe Val Arg His Asn Gly Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu 225 230 235 ttc cca agt tac tgt cac aat ggc ggc cag tgc tac ctg gtg gag aac 1430 Phe Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly Gly Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn 240 245 250 ata ggg gcc ttc tgc agg tgc aac acg cag gac tac atc tgg cac aag 1478 Ile Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys 255 260 265 270 ggg atg cgc tgc gag tcc atc atc acc gac ttc cag gtg atg tgc gtg 1526 Gly Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val 275 280 285 gcc gtg ggc tcg gct gcc ctc gtc ctg ctc ctg ctc ttc atg atg acg 1574 Ala Val Gly Ser Ala Ala Leu Val Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr 290 295 300 gtg ttc ttt gcc aag aag ctc tac ctg ctc aag acg gag aat acc aag 1622 Val Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys 305 310 315 ctg cgt agg acc aac aaa ttc cgg acc cca tct gag ctc cac aat gat 1670 Leu Arg Arg Thr Asn Lys Phe Arg Thr Pro Ser Glu Leu His Asn Asp 320 325 330 aac ttc tcc ctc tcc acc att gcc gag ggc tct cac cca aat gat gat 1718 Asn Phe Ser Leu Ser Thr Ile Ala Glu Gly Ser His Pro Asn Asp Asp 335 340 345 350 cct agt gct ccc cac aaa atc cag gag gtt ctc aag tcc tgc ctg aaa 1766 Pro Ser Ala Pro His Lys Ile Gln Glu Val Leu Lys Ser Cys Leu Lys 355 360 365 gag gag gag tca ttt aac atc cag aac tcc atg tcg ccc aaa ctt gag 1814 Glu Glu Glu Ser Phe Asn Ile Gln Asn Ser Met Ser Pro Lys Leu Glu 370 375 380 ggt ggc aaa ggt gac cag gct gac ttg gat gtg aac tgt ctt cag aat 1862 Gly Gly Lys Gly Asp Gln Ala Asp Leu Asp Val Asn Cys Leu Gln Asn 385 390 395 aat tta acc taa agcagagcaa gaagagagga agcgggggta gtgggtgggg 1914 Asn Leu Thr 400 ggtaggggaa gaaacattat ctcctcttgt acagagtcta tttcttgtaa ccatttgtta 1974 aactcttttc tttttctgat ctcatggcat gcttttatgt attttgtaca ggaggcaaaa 2034 aaatacttaa aataagcaaa gaaactgaac agaattgcat acattgggtt gttttttctg 2094 tgctgtctgt acattgcttc tgctgctgtg atttctaaac ctgtgctgtt attcaactga 2154 cttttttttg tactttgacc cacgtttttt tgaaatacca gtaaaaaaca aagttcttga 2214 aataaaactt tttaaaaagt taaaaaaaaa aaaaaaaaa 2253 <210> 6 <211> 401 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Pro Pro Ala Ile Pro Glu Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser 1 5 10 15 Pro Thr Pro Gly Asp Lys Leu Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro Lys Glu 20 25 30 Ser Pro Leu Glu Val Trp Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro Asp Pro 35 40 45 Gln Gly Pro Glu Leu Thr Tyr Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Gln 50 55 60 Pro Ala Ser Asp Ile Ile Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly 65 70 75 80 Glu Gly Arg Gly Ala Asp Leu Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr 85 90 95 Ser Glu Asn His Pro Asp Thr Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu 100 105 110 Leu Asp Leu Tyr Asp Asp Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr 115 120 125 Pro Thr Thr Ser Phe Tyr Asp Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu 130 135 140 Glu Asp Asp Lys Asp Ala Val Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Asn 145 150 155 160 Glu Leu Leu Val Pro Thr Gly Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly Thr Gly 165 170 175 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Gly Asp Gln Ala Asp Leu Asp Val Asn Cys Leu Gln Asn Asn Leu 385 390 395 400 Thr <210> 7 <211> 2256 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (177)..(1877) <223> <400> 7 ggggaggcgc ggcgcgccgg ggacagcggc ggacggcggc ggcggcggca tgcggctcct 60 cgcgctgccc atcgtgggct gaggcggccg cagaaccggc gggaggcgcg gcggccgggc 120 gagccgaggg cgcagccagc cgggcggacc gcggacagcg gtcggggcgc cgcgcc atg 179 Met 1 ggg cga gcc ggg ggc ggg ggc ccg ggc cgg ggg ccg ccg cca ctg ctg 227 Gly Arg Ala Gly Gly Gly Gly Pro Gly Arg Gly Pro Pro Pro Leu Leu 5 10 15 ctg ttt ctg ggg gcc gcg ctg gtc ctg gcc tct ggg gcc gtg ccg gcg 275 Leu Phe Leu Gly Ala Ala Leu Val Leu Ala Ser Gly Ala Val Pro Ala 20 25 30 cgt gag gcg ggc agc gcg gtt gag gcc gaa gag ctg gtg aag ggc agc 323 Arg Glu Ala Gly Ser Ala Val Glu Ala Glu Glu Leu Val Lys Gly Ser 35 40 45 ccg gcg tgg gag ccg cct gcc aac gac acg cgg gaa gaa gcc ggc cca 371 Pro Ala Trp Glu Pro Pro Ala Asn Asp Thr Arg Glu Glu Ala Gly Pro 50 55 60 65 cca gcg gct ggg gaa gat gag gcg tcg tgg acg gcg ccc ggt ggc gag 419 Pro Ala Ala Gly Glu Asp Glu Ala Ser Trp Thr Ala Pro Gly Gly Glu 70 75 80 ctg gcc ggg cca gaa gag gtg ctg cag gag tcg gct gcg gtg acc ggc 467 Leu Ala Gly Pro Glu Glu Val Leu Gln Glu Ser Ala Ala Val Thr Gly 85 90 95 acc gcc tgg ctg gaa gct gac agc cca ggc ctg gga gga gtg acc gca 515 Thr Ala Trp Leu Glu Ala Asp Ser Pro Gly Leu Gly Gly Val Thr Ala 100 105 110 gag gcg ggc agc ggc gat gcc cag gcc ctt cca gct acg ctc cag gct 563 Glu Ala Gly Ser Gly Asp Ala Gln Ala Leu Pro Ala Thr Leu Gln Ala 115 120 125 ccc cac gag gtc ctc ggg cag tca atc atg ccc cct gcc att cct gag 611 Pro His Glu Val Leu Gly Gln Ser Ile Met Pro Pro Ala Ile Pro Glu 130 135 140 145 gct aca gag gcc agc ggg cca ccc tcc ccc acc ccc ggc gac aag ctg 659 Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser Pro Thr Pro Gly Asp Lys Leu 150 155 160 agc cca gct tct gaa ctc ccc aag gag agc ccc ttg gag gtt tgg ctg 707 Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro Lys Glu Ser Pro Leu Glu Val Trp Leu 165 170 175 aac ctg ggg ggc agc aca ccc gac cct caa ggg cca gag ctg act tac 755 Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro Asp Pro Gln Gly Pro Glu Leu Thr Tyr 180 185 190 cca ttt cag ggc acc ctg gag ccc caa ccg gca tca gat atc att gac 803 Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Gln Pro Ala Ser Asp Ile Ile Asp 195 200 205 atc gac tac ttc gaa gga ctg gat ggt gag ggt cgt ggc gca gat ctg 851 Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly Glu Gly Arg Gly Ala Asp Leu 210 215 220 225 ggg agc ttc cca ggg tca cca gga acc tca gag aac cac cct gat act 899 Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr Ser Glu Asn His Pro Asp Thr 230 235 240 gag gga gag acc cct tcc tgg agc ctg ctt gac tta tac gat gat ttc 947 Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Asp Asp Phe 245 250 255 acc ccc ttc gat gaa tct gat ttc tac ccc acc aca tcc ttt tat gat 995 Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe Tyr Asp 260 265 270 gac ttg gat gaa gag gag gag gaa gag gag gat gac aaa gat gca gta 1043 Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Lys Asp Ala Val 275 280 285 gga ggt gga gac cta gaa gat gaa aat gag ctt cta gtg ccc act ggg 1091 Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Asn Glu Leu Leu Val Pro Thr Gly 290 295 300 305 aag cct ggt ctg ggg ccc ggg aca ggc cag ccc acc agt cgg tgg cat 1139 Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly Thr Gly Gln Pro Thr Ser Arg Trp His 310 315 320 gct gtc cct cca cag cac act ctg ggg tcg gtc ccc ggc agc agc atc 1187 Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Ser Val Pro Gly Ser Ser Ile 325 330 335 gcc ctc agg ccc cgc cca gga gag cca ggc agg gac ttg gcc tcc agt 1235 Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu Pro Gly Arg Asp Leu Ala Ser Ser 340 345 350 gaa aat ggc act gag tgc cgc agt ggc ttt gtg cgg cat aac ggc tcc 1283 Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser Gly Phe Val Arg His Asn Gly Ser 355 360 365 tgc cgg tca gtg tgc gac ctc ttc cca agt tac tgt cac aat ggc ggc 1331 Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly Gly 370 375 380 385 cag tgc tac ctg gtg gag aac ata ggg gcc ttc tgc agg tgc aac acg 1379 Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn Thr 390 395 400 cag gac tac atc tgg cac aag ggg atg cgc tgc gag tcc atc atc acc 1427 Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile Thr 405 410 415 gac ttc cag gtg atg tgc gtg gcc gtg ggc tcg gct gcc ctc gtc ctg 1475 Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser Ala Ala Leu Val Leu 420 425 430 ctc ctg ctc ttc atg atg acg gtg ttc ttt gcc aag aag ctc tac ctg 1523 Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr Leu 435 440 445 ctc aag acg gag aat acc aag ctg cgt agg acc aac aaa ttc cgg acc 1571 Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr Asn Lys Phe Arg Thr 450 455 460 465 cca tct gag ctc cac aat gat aac ttc tcc ctc tcc acc att gcc gag 1619 Pro Ser Glu Leu His Asn Asp Asn Phe Ser Leu Ser Thr Ile Ala Glu 470 475 480 ggc tct cac cca aat gta agg aaa ctt tgc aac act ccc cgt acc tcc 1667 Gly Ser His Pro Asn Val Arg Lys Leu Cys Asn Thr Pro Arg Thr Ser 485 490 495 tcc ccc cat gcc cgt gcc ttg gct cac tat gat aac gtt atc tgt cag 1715 Ser Pro His Ala Arg Ala Leu Ala His Tyr Asp Asn Val Ile Cys Gln 500 505 510 gat gat cct agt gct ccc cac aaa atc cag gag gtt ctc aag tcc tgc 1763 Asp Asp Pro Ser Ala Pro His Lys Ile Gln Glu Val Leu Lys Ser Cys 515 520 525 ctg aaa gag gag gag tca ttt aac atc cag aac tcc atg tcg ccc aaa 1811 Leu Lys Glu Glu Glu Ser Phe Asn Ile Gln Asn Ser Met Ser Pro Lys 530 535 540 545 ctt gag ggt ggc aaa ggt gac cag gct gac ttg gat gtg aac tgt ctt 1859 Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asp Gln Ala Asp Leu Asp Val Asn Cys Leu 550 555 560 cag aat aat tta acc taa agcagagcaa gaagagagga agcgggggta 1907 Gln Asn Asn Leu Thr 565 gtgggtgggg ggtaggggaa gaaacattat ctcctcttgt acagagtcta tttcttgtaa 1967 ccatttgtta aactcttttc tttttctgat ctcatggcat gcttttatgt attttgtaca 2027 ggaggcaaaa aaatacttaa aataagcaaa gaaactgaac agaattgcat acattgggtt 2087 gttttttctg tgctgtctgt acattgcttc tgctgctgtg atttctaaac ctgtgctgtt 2147 attcaactga cttttttttg tactttgacc cacgtttttt tgaaatacca gtaaaaaaca 2207 aagttcttga aataaaactt tttaaaaagt taaaaaaaaa aaaaaaaaa 2256 <210> 8 <211> 566 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Gly Arg Ala Gly Gly Gly Gly Pro Gly Arg Gly Pro Pro Pro Leu 1 5 10 15 Leu Leu Phe Leu Gly Ala Ala Leu Val Leu Ala Ser Gly Ala Val Pro 20 25 30 Ala Arg Glu Ala Gly Ser Ala Val Glu Ala Glu Glu Leu Val Lys Gly 35 40 45 Ser Pro Ala Trp Glu Pro Pro Ala Asn Asp Thr Arg Glu Glu Ala Gly 50 55 60 Pro Pro Ala Ala Gly Glu Asp Glu Ala Ser Trp Thr Ala Pro Gly Gly 65 70 75 80 Glu Leu Ala Gly Pro Glu Glu Val Leu Gln Glu Ser Ala Ala Val Thr 85 90 95 Gly Thr Ala Trp Leu Glu Ala Asp Ser Pro Gly Leu Gly Gly Val Thr 100 105 110 Ala Glu Ala Gly Ser Gly Asp Ala Gln Ala Leu Pro Ala Thr Leu Gln 115 120 125 Ala Pro His Glu Val Leu Gly Gln Ser Ile Met Pro Pro Ala Ile Pro 130 135 140 Glu Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser Pro Thr Pro Gly Asp Lys 145 150 155 160 Leu Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro Lys Glu Ser Pro Leu Glu Val Trp 165 170 175 Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro Asp Pro Gln Gly Pro Glu Leu Thr 180 185 190 Tyr Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Gln Pro Ala Ser Asp Ile Ile 195 200 205 Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly Glu Gly Arg Gly Ala Asp 210 215 220 Leu Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr Ser Glu Asn His Pro Asp 225 230 235 240 Thr Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Asp Asp 245 250 255 Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe Tyr 260 265 270 Asp Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Lys Asp Ala 275 280 285 Val Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Asn Glu Leu Leu Val Pro Thr 290 295 300 Gly Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly Thr Gly Gln Pro Thr Ser Arg Trp 305 310 315 320 His Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Ser Val Pro Gly Ser Ser 325 330 335 Ile Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu Pro Gly Arg Asp Leu Ala Ser 340 345 350 Ser Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser Gly Phe Val Arg His Asn Gly 355 360 365 Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly 370 375 380 Gly Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn 385 390 395 400 Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile 405 410 415 Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser Ala Ala Leu Val 420 425 430 Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr 435 440 445 Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr Asn Lys Phe Arg 450 455 460 Thr Pro Ser Glu Leu His Asn Asp Asn Phe Ser Leu Ser Thr Ile Ala 465 470 475 480 Glu Gly Ser His Pro Asn Val Arg Lys Leu Cys Asn Thr Pro Arg Thr 485 490 495 Ser Ser Pro His Ala Arg Ala Leu Ala His Tyr Asp Asn Val Ile Cys 500 505 510 Gln Asp Asp Pro Ser Ala Pro His Lys Ile Gln Glu Val Leu Lys Ser 515 520 525 Cys Leu Lys Glu Glu Glu Ser Phe Asn Ile Gln Asn Ser Met Ser Pro 530 535 540 Lys Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asp Gln Ala Asp Leu Asp Val Asn Cys 545 550 555 560 Leu Gln Asn Asn Leu Thr 565 <210> 9 <211> 2099 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (177)..(1610) <223> <400> 9 ggggaggcgc ggcgcgccgg ggacagcggc ggacggcggc ggcggcggca tgcggctcct 60 cgcgctgccc atcgtgggct gaggcggccg cagaaccggc gggaggcgcg gcggccgggc 120 gagccgaggg cgcagccagc cgggcggacc gcggacagcg gtcggggcgc cgcgcc atg 179 Met 1 ggg cga gcc ggg ggc ggg ggc ccg ggc cgg ggg ccg ccg cca ctg ctg 227 Gly Arg Ala Gly Gly Gly Gly Pro Gly Arg Gly Pro Pro Pro Leu Leu 5 10 15 ctg ttt ctg ggg gcc gcg ctg gtc ctg gcc tct ggg gcc gtg ccg gcg 275 Leu Phe Leu Gly Ala Ala Leu Val Leu Ala Ser Gly Ala Val Pro Ala 20 25 30 cgt gag gcg ggc agc gcg gtt gag gcc gaa gag ctg gtg aag ggc agc 323 Arg Glu Ala Gly Ser Ala Val Glu Ala Glu Glu Leu Val Lys Gly Ser 35 40 45 ccg gcg tgg gag ccg cct gcc aac gac acg cgg gaa gaa gcc ggc cca 371 Pro Ala Trp Glu Pro Pro Ala Asn Asp Thr Arg Glu Glu Ala Gly Pro 50 55 60 65 cca gcg gct ggg gaa gat gag gcg tcg tgg acg gcg ccc ggt ggc gag 419 Pro Ala Ala Gly Glu Asp Glu Ala Ser Trp Thr Ala Pro Gly Gly Glu 70 75 80 ctg gcc ggg cca gaa gag gtg ctg cag gag tcg gct gcg gtg acc ggc 467 Leu Ala Gly Pro Glu Glu Val Leu Gln Glu Ser Ala Ala Val Thr Gly 85 90 95 acc gcc tgg ctg gaa gct gac agc cca ggc ctg gga gga gtg acc gca 515 Thr Ala Trp Leu Glu Ala Asp Ser Pro Gly Leu Gly Gly Val Thr Ala 100 105 110 gag gcg ggc agc ggc gat gcc cag gcc ctt cca gct acg ctc cag gct 563 Glu Ala Gly Ser Gly Asp Ala Gln Ala Leu Pro Ala Thr Leu Gln Ala 115 120 125 ccc cac gag gtc ctc ggg cag tca atc atg ccc cct gcc att cct gag 611 Pro His Glu Val Leu Gly Gln Ser Ile Met Pro Pro Ala Ile Pro Glu 130 135 140 145 gct aca gag gcc agc ggg cca ccc tcc ccc acc ccc ggc gac aag ctg 659 Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser Pro Thr Pro Gly Asp Lys Leu 150 155 160 agc cca gct tct gaa ctc ccc aag gag agc ccc ttg gag gtt tgg ctg 707 Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro Lys Glu Ser Pro Leu Glu Val Trp Leu 165 170 175 aac ctg ggg ggc agc aca ccc gac cct caa ggg cca gag ctg act tac 755 Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro Asp Pro Gln Gly Pro Glu Leu Thr Tyr 180 185 190 cca ttt cag ggc acc ctg gag ccc caa ccg gca tca gat atc att gac 803 Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Gln Pro Ala Ser Asp Ile Ile Asp 195 200 205 atc gac tac ttc gaa gga ctg gat ggt gag ggt cgt ggc gca gat ctg 851 Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly Glu Gly Arg Gly Ala Asp Leu 210 215 220 225 ggg agc ttc cca ggg tca cca gga acc tca gag aac cac cct gat act 899 Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr Ser Glu Asn His Pro Asp Thr 230 235 240 gag gga gag acc cct tcc tgg agc ctg ctt gac tta tac gat gat ttc 947 Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Asp Asp Phe 245 250 255 acc ccc ttc gat gaa tct gat ttc tac ccc acc aca tcc ttt tat gat 995 Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe Tyr Asp 260 265 270 gac ttg gat gaa gag gag gag gaa gag gag gat gac aaa gat gca gta 1043 Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Lys Asp Ala Val 275 280 285 gga ggt gga gac cta gaa gat gaa aat gag ctt cta gtg ccc act ggg 1091 Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Asn Glu Leu Leu Val Pro Thr Gly 290 295 300 305 aag cct ggt ctg ggg ccc ggg aca ggc cag ccc acc agt cgg tgg cat 1139 Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly Thr Gly Gln Pro Thr Ser Arg Trp His 310 315 320 gct gtc cct cca cag cac act ctg ggg tcg gtc ccc ggc agc agc atc 1187 Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Ser Val Pro Gly Ser Ser Ile 325 330 335 gcc ctc agg ccc cgc cca gga gag cca ggc agg gac ttg gcc tcc agt 1235 Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu Pro Gly Arg Asp Leu Ala Ser Ser 340 345 350 gaa aat ggc act gag tgc cgc agt ggc ttt gtg cgg cat aac ggc tcc 1283 Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser Gly Phe Val Arg His Asn Gly Ser 355 360 365 tgc cgg tca gtg tgc gac ctc ttc cca agt tac tgt cac aat ggc ggc 1331 Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly Gly 370 375 380 385 cag tgc tac ctg gtg gag aac ata ggg gcc ttc tgc agg tgc aac acg 1379 Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn Thr 390 395 400 cag gac tac atc tgg cac aag ggg atg cgc tgc gag tcc atc atc acc 1427 Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile Thr 405 410 415 gac ttc cag gtg atg tgc gtg gcc gtg ggc tcg gct gcc ctc gtc ctg 1475 Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser Ala Ala Leu Val Leu 420 425 430 ctc ctg ctc ttc atg atg acg gtg ttc ttt gcc aag aag ctc tac ctg 1523 Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr Leu 435 440 445 ctc aag acg gag aat acc aag ctg cgt agg acc aag atg atc cta gtg 1571 Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr Lys Met Ile Leu Val 450 455 460 465 ctc ccc aca aaa tcc agg agg ttc tca agt cct gcc tga aagaggagga 1620 Leu Pro Thr Lys Ser Arg Arg Phe Ser Ser Pro Ala 470 475 gtcatttaac atccagaact ccatgtcgcc caaacttgag ggtggcaaag gtgaccaggc 1680 tgacttggat gtgaactgtc ttcagaataa tttaacctaa agcagagcaa gaagagagga 1740 agcgggggta gtgggtgggg ggtaggggaa gaaacattat ctcctcttgt acagagtcta 1800 tttcttgtaa ccatttgtta aactcttttc tttttctgat ctcatggcat gcttttatgt 1860 attttgtaca ggaggcaaaa aaatacttaa aataagcaaa gaaactgaac agaattgcat 1920 acattgggtt gttttttctg tgctgtctgt acattgcttc tgctgctgtg atttctaaac 1980 ctgtgctgtt attcaactga cttttttttg tactttgacc cacgtttttt tgaaatacca 2040 gtaaaaaaca aagttcttga aataaaactt tttaaaaagt taaaaaaaaa aaaaaaaaa 2099 <210> 10 <211> 477 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Met Gly Arg Ala Gly Gly Gly Gly Pro Gly Arg Gly Pro Pro Pro Leu 1 5 10 15 Leu Leu Phe Leu Gly Ala Ala Leu Val Leu Ala Ser Gly Ala Val Pro 20 25 30 Ala Arg Glu Ala Gly Ser Ala Val Glu Ala Glu Glu Leu Val Lys Gly 35 40 45 Ser Pro Ala Trp Glu Pro Pro Ala Asn Asp Thr Arg Glu Glu Ala Gly 50 55 60 Pro Pro Ala Ala Gly Glu Asp Glu Ala Ser Trp Thr Ala Pro Gly Gly 65 70 75 80 Glu Leu Ala Gly Pro Glu Glu Val Leu Gln Glu Ser Ala Ala Val Thr 85 90 95 Gly Thr Ala Trp Leu Glu Ala Asp Ser Pro Gly Leu Gly Gly Val Thr 100 105 110 Ala Glu Ala Gly Ser Gly Asp Ala Gln Ala Leu Pro Ala Thr Leu Gln 115 120 125 Ala Pro His Glu Val Leu Gly Gln Ser Ile Met Pro Pro Ala Ile Pro 130 135 140 Glu Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser Pro Thr Pro Gly Asp Lys 145 150 155 160 Leu Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro Lys Glu Ser Pro Leu Glu Val Trp 165 170 175 Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro Asp Pro Gln Gly Pro Glu Leu Thr 180 185 190 Tyr Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Gln Pro Ala Ser Asp Ile Ile 195 200 205 Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly Glu Gly Arg Gly Ala Asp 210 215 220 Leu Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr Ser Glu Asn His Pro Asp 225 230 235 240 Thr Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Asp Asp 245 250 255 Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe Tyr 260 265 270 Asp Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Lys Asp Ala 275 280 285 Val Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Asn Glu Leu Leu Val Pro Thr 290 295 300 Gly Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly Thr Gly Gln Pro Thr Ser Arg Trp 305 310 315 320 His Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Ser Val Pro Gly Ser Ser 325 330 335 Ile Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu Pro Gly Arg Asp Leu Ala Ser 340 345 350 Ser Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser Gly Phe Val Arg His Asn Gly 355 360 365 Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly 370 375 380 Gly Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn 385 390 395 400 Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile 405 410 415 Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser Ala Ala Leu Val 420 425 430 Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr 435 440 445 Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr Lys Met Ile Leu 450 455 460 Val Leu Pro Thr Lys Ser Arg Arg Phe Ser Ser Pro Ala 465 470 475 <210> 11 <211> 2334 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (669)..(1955) <223> <400> 11 agtccagtga ggaataactg tagataagat gagatgatgg gcattaagtg taactgctga 60 gaagccttca tagagggaaa ggtgataaga actgagtttt tctggcatga ggagtttacc 120 aggcaggaga ggtggagacg ctaggctagg caaataggct gcagccatag ttctgctgag 180 aaacaggttt tgaaccaagg caactccatc tggagatatg tatcagaaag attaggagat 240 agaatctcca tcttggtcac ttatttggtc ttctaagaca gcaatgggac cgtctcttaa 300 atactggagt tgtcctatct ccttgggctg ataccctgaa ctgtcatttg gcgcgtgagg 360 cgggcagcgc ggttgaggcc gaagagctgg tgaagggcag cccggcgtgg gagccgcctg 420 ccaacgacac gcgggaagaa gccggcccac cagcggctgg ggaagatgag gcgtcgtgga 480 cggcgcccgg tggcgagctg gccgggccag aagaggtgct gcaggagtcg gctgcggtga 540 ccggcaccgc ctggctggaa gctgacagcc caggcctggg aggagtgacc gcagaggcgg 600 gcagcggcga tgcccaggcc cttccagcta cgctccaggc tccccacgag gtcctcgggc 660 agtcaatc atg ccc cct gcc att cct gag gct aca gag gcc agc ggg cca 710 Met Pro Pro Ala Ile Pro Glu Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro 1 5 10 ccc tcc ccc acc ccc ggc gac aag ctg agc cca gct tct gaa ctc ccc 758 Pro Ser Pro Thr Pro Gly Asp Lys Leu Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro 15 20 25 30 aag gag agc ccc ttg gag gtt tgg ctg aac ctg ggg ggc agc aca ccc 806 Lys Glu Ser Pro Leu Glu Val Trp Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro 35 40 45 gac cct caa ggg cca gag ctg act tac cca ttt cag ggc acc ctg gag 854 Asp Pro Gln Gly Pro Glu Leu Thr Tyr Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu 50 55 60 ccc caa ccg gca tca gat atc att gac atc gac tac ttc gaa gga ctg 902 Pro Gln Pro Ala Ser Asp Ile Ile Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu 65 70 75 gat ggt gag ggt cgt ggc gca gat ctg ggg agc ttc cca ggg tca cca 950 Asp Gly Glu Gly Arg Gly Ala Asp Leu Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro 80 85 90 gga acc tca gag aac cac cct gat act gag gga gag acc cct tcc tgg 998 Gly Thr Ser Glu Asn His Pro Asp Thr Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp 95 100 105 110 agc ctg ctt gac tta tac gat gat ttc acc ccc ttc gat gaa tct gat 1046 Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Asp Asp Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp 115 120 125 ttc tac ccc acc aca tcc ttt tat gat gac ttg gat gaa gag gag gag 1094 Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe Tyr Asp Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu 130 135 140 gaa gag gag gat gac aaa gat gca gta gga ggt gga gac cta gaa gat 1142 Glu Glu Glu Asp Asp Lys Asp Ala Val Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp 145 150 155 gaa aat gag ctt cta gtg ccc act ggg aag cct ggt ctg ggg ccc ggg 1190 Glu Asn Glu Leu Leu Val Pro Thr Gly Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly 160 165 170 aca ggc cag ccc acc agt cgg tgg cat gct gtc cct cca cag cac act 1238 Thr Gly Gln Pro Thr Ser Arg Trp His Ala Val Pro Pro Gln His Thr 175 180 185 190 ctg ggg tcg gtc ccc ggc agc agc atc gcc ctc agg ccc cgc cca gga 1286 Leu Gly Ser Val Pro Gly Ser Ser Ile Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly 195 200 205 gag cca ggc agg gac ttg gcc tcc agt gaa aat ggc act gag tgc cgc 1334 Glu Pro Gly Arg Asp Leu Ala Ser Ser Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg 210 215 220 agt ggc ttt gtg cgg cat aac ggc tcc tgc cgg tca gtg tgc gac ctc 1382 Ser Gly Phe Val Arg His Asn Gly Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu 225 230 235 ttc cca agt tac tgt cac aat ggc ggc cag tgc tac ctg gtg gag aac 1430 Phe Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly Gly Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn 240 245 250 ata ggg gcc ttc tgc agg tgc aac acg cag gac tac atc tgg cac aag 1478 Ile Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys 255 260 265 270 ggg atg cgc tgc gag tcc atc atc acc gac ttc cag gtg atg tgc gtg 1526 Gly Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val 275 280 285 gcc gtg ggc tcg gct gcc ctc gtc ctg ctc ctg ctc ttc atg atg acg 1574 Ala Val Gly Ser Ala Ala Leu Val Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr 290 295 300 gtg ttc ttt gcc aag aag ctc tac ctg ctc aag acg gag aat acc aag 1622 Val Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys 305 310 315 ctg cgt agg acc aac aaa ttc cgg acc cca tct gag ctc cac aat gat 1670 Leu Arg Arg Thr Asn Lys Phe Arg Thr Pro Ser Glu Leu His Asn Asp 320 325 330 aac ttc tcc ctc tcc acc att gcc gag ggc tct cac cca aat gta agg 1718 Asn Phe Ser Leu Ser Thr Ile Ala Glu Gly Ser His Pro Asn Val Arg 335 340 345 350 aaa ctt tgc aac act ccc cgt acc tcc tcc ccc cat gcc cgt gcc ttg 1766 Lys Leu Cys Asn Thr Pro Arg Thr Ser Ser Pro His Ala Arg Ala Leu 355 360 365 gct cac tat gat aac gtt atc tgt cag gat gat cct agt gct ccc cac 1814 Ala His Tyr Asp Asn Val Ile Cys Gln Asp Asp Pro Ser Ala Pro His 370 375 380 aaa atc cag gag gtt ctc aag tcc tgc ctg aaa gag gag gag tca ttt 1862 Lys Ile Gln Glu Val Leu Lys Ser Cys Leu Lys Glu Glu Glu Ser Phe 385 390 395 aac atc cag aac tcc atg tcg ccc aaa ctt gag ggt ggc aaa ggt gac 1910 Asn Ile Gln Asn Ser Met Ser Pro Lys Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asp 400 405 410 cag gct gac ttg gat gtg aac tgt ctt cag aat aat tta acc taa 1955 Gln Ala Asp Leu Asp Val Asn Cys Leu Gln Asn Asn Leu Thr 415 420 425 agcagagcaa gaagagagga agcgggggta gtgggtgggg ggtaggggaa gaaacattat 2015 ctcctcttgt acagagtcta tttcttgtaa ccatttgtta aactcttttc tttttctgat 2075 ctcatggcat gcttttatgt attttgtaca ggaggcaaaa aaatacttaa aataagcaaa 2135 gaaactgaac agaattgcat acattgggtt gttttttctg tgctgtctgt acattgcttc 2195 tgctgctgtg atttctaaac ctgtgctgtt attcaactga cttttttttg tactttgacc 2255 cacgtttttt tgaaatacca gtaaaaaaca aagttcttga aataaaactt tttaaaaagt 2315 taaaaaaaaa aaaaaaaaa 2334 <210> 12 <211> 428 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Met Pro Pro Ala Ile Pro Glu Ala Thr Glu Ala Ser Gly Pro Pro Ser 1 5 10 15 Pro Thr Pro Gly Asp Lys Leu Ser Pro Ala Ser Glu Leu Pro Lys Glu 20 25 30 Ser Pro Leu Glu Val Trp Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro Asp Pro 35 40 45 Gln Gly Pro Glu Leu Thr Tyr Pro Phe Gln Gly Thr Leu Glu Pro Gln 50 55 60 Pro Ala Ser Asp Ile Ile Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Gly 65 70 75 80 Glu Gly Arg Gly Ala Asp Leu Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr 85 90 95 Ser Glu Asn His Pro Asp Thr Glu Gly Glu 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Leu Val Asp Thr Arg Arg Pro Pro Arg Asp Pro Ser Pro Pro Arg Thr 35 40 45 cgg cat tgg cgc aga aat ctg aga ggt ccg tgc acc ccg ggc tcg gct 192 Arg His Trp Arg Arg Asn Leu Arg Gly Pro Cys Thr Pro Gly Ser Ala 50 55 60 cat ttc cac agc tcc agc tcg ggc ttc cgc ccc ctg cgg ccc ttc cga 240 His Phe His Ser Ser Ser Ser Gly Phe Arg Pro Leu Arg Pro Phe Arg 65 70 75 80 gcc ccg ccc caa gct tgc ggg tgt ctg ggc ccc cgc ctc cgt gct cgc 288 Ala Pro Pro Gln Ala Cys Gly Cys Leu Gly Pro Arg Leu Arg Ala Arg 85 90 95 cgc gtg gcg ggt ggg ttc ctc gca ggt ggg ggg ccc gtg cca gct ctc 336 Arg Val Ala Gly Gly Phe Leu Ala Gly Gly Gly Pro Val Pro Ala Leu 100 105 110 cac ggg gag ggc ggg ccc cgc ccc aca ggt ctc ccg ccc gtg cac ctg 384 His Gly Glu Gly Gly Pro Arg Pro Thr Gly Leu Pro Pro Val His Leu 115 120 125 tcg gct aac gcc acg cac ggc gct gtg ctc cgc acc cgc gct act cca 432 Ser Ala Asn Ala Thr His Gly Ala Val Leu Arg Thr Arg Ala Thr Pro 130 135 140 cgt ccg ttt gtc tcg gcg tcc cga gcc ggg ggt acc gac tgc gac cag 480 Arg Pro Phe Val Ser Ala Ser Arg Ala Gly Gly Thr Asp Cys Asp Gln 145 150 155 160 gac ccc cgc ggc cct cgc gcc cca ccc tgg gcc agg gtc ccg ctg gcc 528 Asp Pro Arg Gly Pro Arg Ala Pro Pro Trp Ala Arg Val Pro Leu Ala 165 170 175 tcg ggt aca ggc gga gtt agc gag ctg tgg caa ggg ggc ggg gca gct 576 Ser Gly Thr Gly Gly Val Ser Glu Leu Trp Gln Gly Gly Gly Ala Ala 180 185 190 cct tgc ccg cga ccg ggg cgg ggg aag ggg cgc gcg aag agg tgg gat 624 Pro Cys Pro Arg Pro Gly Arg Gly Lys Gly Arg Ala Lys Arg Trp Asp 195 200 205 act tgg ggg agg ccg agg ggt tgg ggg cgg ccc cgg ccc ggg tgt ccg 672 Thr Trp Gly Arg Pro Arg Gly Trp Gly Arg Pro Arg Pro Gly Cys Pro 210 215 220 gac aga gcc cgt gag gct ggc agc gcc gtc gag gcc cac gag cag gtg 720 Asp Arg Ala Arg Glu Ala Gly Ser Ala Val Glu Ala His Glu Gln Val 225 230 235 240 aag agc atc ctg gcg agg gag ccg act gcc aac gaa acg agg gag aag 768 Lys Ser Ile Leu Ala Arg Glu Pro Thr Ala Asn Glu Thr Arg Glu Lys 245 250 255 gcc ggc cca cca gca gct gag gaa gac gag acc tcg tgg acc gca cct 816 Ala Gly Pro Pro Ala Ala Glu Glu Asp Glu Thr Ser Trp Thr Ala Pro 260 265 270 ggc ggt gag cag gcc atg atg ggg cct agt gtc ggg cca gag gag gtg 864 Gly Gly Glu Gln Ala Met Met Gly Pro Ser Val Gly Pro Glu Glu Val 275 280 285 ctg gag gcg tcg gca gcg gtg acc ggc gca ccc tgg ctg gag gct gac 912 Leu Glu Ala Ser Ala Ala Val Thr Gly Ala Pro Trp Leu Glu Ala Asp 290 295 300 agc cct ggc ctg ggt gga gtg acc gca gag gcc ggc agc ggc gac acc 960 Ser Pro Gly Leu Gly Gly Val Thr Ala Glu Ala Gly Ser Gly Asp Thr 305 310 315 320 cag gcc ctt cca gct acg ctc ccg gct ccc aag gag gcc ctg gga cag 1008 Gln Ala Leu Pro Ala Thr Leu Pro Ala Pro Lys Glu Ala Leu Gly Gln 325 330 335 tca tcg atg gcc ccc tcc atc ccc aag gct aca gag gcc agc aga cca 1056 Ser Ser Met Ala Pro Ser Ile Pro Lys Ala Thr Glu Ala Ser Arg Pro 340 345 350 ccc tcc ccc aca cct ggc gac atg ctg agc ccc ggc cca gaa cac ccc 1104 Pro Ser Pro Thr Pro Gly Asp Met Leu Ser Pro Gly Pro Glu His Pro 355 360 365 aag gag agt ccc ttg gag gtt tgg ttg aac ctg gga ggc agc aca cat 1152 Lys Glu Ser Pro Leu Glu Val Trp Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr His 370 375 380 gac cct cat ggg cca gag ccc aca ttc ccc ttt cag ggc aca atg gag 1200 Asp Pro His Gly Pro Glu Pro Thr Phe Pro Phe Gln Gly Thr Met Glu 385 390 395 400 ccc cag cca gtg tca gat ata att gac atc gac tac ttc gaa gga ttg 1248 Pro Gln Pro Val Ser Asp Ile Ile Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu 405 410 415 gat ggt gag ggc cgt ggt gcc gac ctg gag agc ttc cca ggg tcg cca 1296 Asp Gly Glu Gly Arg Gly Ala Asp Leu Glu Ser Phe Pro Gly Ser Pro 420 425 430 gga acc tca gag cac cac cct gat act ggg gga gag acc cct tcc tgg 1344 Gly Thr Ser Glu His His Pro Asp Thr Gly Gly Glu Thr Pro Ser Trp 435 440 445 agc ctg ctt gac tta tac gat gac ttc acc ccc ttt gat gaa tct gac 1392 Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Asp Asp Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp 450 455 460 ttc tac ccc acc aca tcc ttc tat gat gac ctt gat gaa gag gag gag 1440 Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe Tyr Asp Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu 465 470 475 480 gaa gag gat gac aag gat gca gcg gga ggt gaa gac ctg gaa gat gaa 1488 Glu Glu Asp Asp Lys Asp Ala Ala Gly Gly Glu Asp Leu Glu Asp Glu 485 490 495 agt gac ctt ctg gtg cct acc gag aag cct ggt ctg ggg ccc ggg act 1536 Ser Asp Leu Leu Val Pro Thr Glu Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly Thr 500 505 510 ggc cag cct acc agt cgg tgg cat gct gtg ccc cca cag cat act ctg 1584 Gly Gln Pro Thr Ser Arg Trp His Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu 515 520 525 ggg atg gtc cct ggc agc agc atc gcc ctc agg ccc cgc cct gga gag 1632 Gly Met Val Pro Gly Ser Ser Ile Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu 530 535 540 cca ggc agg gac ctg acc cca agc gag aat ggc act gag tgc cgc agc 1680 Pro Gly Arg Asp Leu Thr Pro Ser Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser 545 550 555 560 ggc ttt gtg cga cat aac ggc tcc tgc cgg tca gtg tgc gac ctc ttt 1728 Gly Phe Val Arg His Asn Gly Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe 565 570 575 cca agt tac tgt cac aat ggc ggc cag tgc tac ctg gtg gag aac ata 1776 Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly Gly Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile 580 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Asp Asp Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp 450 455 460 Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe Tyr Asp Asp Leu Asp Glu Glu Glu Glu 465 470 475 480 Glu Glu Asp Asp Lys Asp Ala Ala Gly Gly Glu Asp Leu Glu Asp Glu 485 490 495 Ser Asp Leu Leu Val Pro Thr Glu Lys Pro Gly Leu Gly Pro Gly Thr 500 505 510 Gly Gln Pro Thr Ser Arg Trp His Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu 515 520 525 Gly Met Val Pro Gly Ser Ser Ile Ala Leu Arg Pro Arg Pro Gly Glu 530 535 540 Pro Gly Arg Asp Leu Thr Pro Ser Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Ser 545 550 555 560 Gly Phe Val Arg His Asn Gly Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe 565 570 575 Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly Gly Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile 580 585 590 Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly 595 600 605 Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala 610 615 620 Val Gly Ser Ala Ala Leu Val Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val 625 630 635 640 Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu 645 650 655 Arg Arg Thr Asn Lys Phe 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ctaggacacg tatgtctggt tgccactctc 480 tagatgtcat acagacccta catagccacc tccgagccag gatataagag cctagctgct 540 ggaattttgt cagccttgag gggactctaa gctgcaacca tacttgtgag agaaaaggag 600 tgttgaacca aggcaactca ctagaagaca ggtatgagac agattaaatg atggtcctcc 660 atcttgttca tatttggtca ctgacagaag actatcaaca ccagcatcgc ccttggacta 720 acccttggac tgagctgaac atgatcattt aggtcgataa taaaacatca atatgtaggc 780 tatttggagg cggggaaagc caggtgacta agctgtagtt ctgcctccct tccaacaggt 840 ctcccagtaa gcagtgaacc tgggttagga acagagacct ctctctccac gttgcatgtg 900 cacctggcag tgatctagac ctcttggttt aaccaggaac ttgggtttgg gtagtactgg 960 tcacctgcgg aaggccgccc tggatttaga aaacgcaagg tggagtccaa atactgggga 1020 ccggataaca cgttgggtgg acctggctgt gcaagattta aactaatggc tttggctgtg 1080 gacagattag gtctgatcca attagagcct aggccgtagt attcgcctcc ttgccaggct 1140 ctgtcgatgt tctccctgct ctccggaaga agacttagag tcggactgga gaaccttctg 1200 gacaccgaat tctggattgg caccggacag tccgtgcccc gggctccgct ctctccacac 1260 tgggggcgcg ggcttccgcc ccctgtggcc cttccgagcc ccgccccgag cctgcgggtg 1320 tcggagcccg cgacgtcccc gcctcccctg cgcgcgcgtg gcgggtgggt tcctcgcagg 1380 tccgcggccc agcgcgctca gcactggaag cgcaagcggg ccccgtgggc tgccgccggt 1440 gcacctgtcg gcttccccca gtggctctgc tgccgcccct gcgcgccgcg cttgcatcgc 1500 tctccacgtc ccgtgccaga ggggtctgac tgtcccctgg cgaggaagac cgagaggggc 1560 cggcgtcaac gcgacgtgct gcggggcggg cggagtgggg gcggcgccga acgcggcagc 1620 ggcaagcggc agcggcggcg cgggaggcgg ggaggcgcgg cgctcggagg acagcggctg 1680 acggcggcat gcggcggctc atgctgccca ccgtgggctg aggcggccgc acacgggcgg 1740 caggcgcagc ggccgggcaa gccgagggcg cagccaagcc gcgcgcaccg cgcacagcgg 1800 caggggctcc gcgca atg ggc cga gct gga ggc ggg ggc ccg gac tgg ggg 1851 Met Gly Arg Ala Gly Gly Gly Gly Pro Asp Trp Gly 1 5 10 ccg ccg cca gtg ctg ctg ctt ctg ggg gtc acg ctg gtg ctc acc gct 1899 Pro Pro Pro Val Leu Leu Leu Leu Gly Val Thr Leu Val Leu Thr Ala 15 20 25 ggg gcc gta ccg gca cgg gaa aca ggc agt gcg atc gag gct gaa gag 1947 Gly Ala Val Pro Ala Arg Glu Thr Gly Ser Ala Ile Glu Ala Glu Glu 30 35 40 ctg gtg agg agc agc ctg gca tgg gag tcg cgt gcc aat gac acg cgg 1995 Leu Val Arg Ser Ser Leu Ala Trp Glu Ser Arg Ala Asn Asp Thr Arg 45 50 55 60 gag gaa gcc ggc ctg cca gca gct ggg gaa gat gag acc tcg tgg aca 2043 Glu Glu Ala Gly Leu Pro Ala Ala Gly Glu Asp Glu Thr Ser Trp Thr 65 70 75 gag cgg ggc agt gag atg gct gcg gtg ggc cct ggg gtc ggg cca gag 2091 Glu Arg Gly Ser Glu Met Ala Ala Val Gly Pro Gly Val Gly Pro Glu 80 85 90 gag gca cta gag gca tcg gct gca gtg act ggc act gcc tgg cta gag 2139 Glu Ala Leu Glu Ala Ser Ala Ala Val Thr Gly Thr Ala Trp Leu Glu 95 100 105 gca gat ggc cca ggc ctg ggt gga gtg act gca gag gct ggc agt ggc 2187 Ala Asp Gly Pro Gly Leu Gly Gly Val Thr Ala Glu Ala Gly Ser Gly 110 115 120 gac gcc cag acc ctt cca gct acg ctc cag gct cct gat gag gcc ctt 2235 Asp Ala Gln Thr Leu Pro Ala Thr Leu Gln Ala Pro Asp Glu Ala Leu 125 130 135 140 ggg tca tct aca atg ccc cct gcc atc cct gag gct act gaa acc agt 2283 Gly Ser Ser Thr Met Pro Pro Ala Ile Pro Glu Ala Thr Glu Thr Ser 145 150 155 gga cct ccc tcc cct gct gtc cat gat aag cct agt gta ggc cct gaa 2331 Gly Pro Pro Ser Pro Ala Val His Asp Lys Pro Ser Val Gly Pro Glu 160 165 170 ctc cct aaa gag atc ccc ttg gag gtt cgg ctg aac ctg gga ggc agc 2379 Leu Pro Lys Glu Ile Pro Leu Glu Val Arg Leu Asn Leu Gly Gly Ser 175 180 185 aca cca gag ccc act ttt ccc ctt cag ggc act ctc gag acc caa cca 2427 Thr Pro Glu Pro Thr Phe Pro Leu Gln Gly Thr Leu Glu Thr Gln Pro 190 195 200 gcc tca gat ata att gac att gat tac ttt gaa gga ttg gat agt gag 2475 Ala Ser Asp Ile Ile Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Ser Glu 205 210 215 220 ggt cgt ggt gca gac atg ggc agc ttc ccg ggg tca cca gga acc tca 2523 Gly Arg Gly Ala Asp Met Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr Ser 225 230 235 gaa aat cac cct gat acc gaa gga gag acc cct tcc tgg agc ctg ctt 2571 Glu Asn His Pro Asp Thr Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu 240 245 250 gat ttg tat gat gac ttc acc cct ttt gat gag tct gat ttc tac ccc 2619 Asp Leu Tyr Asp Asp Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro 255 260 265 acc aca tcc ttc tat gat gat ttg gaa gag gag gaa gaa gag gag gag 2667 Thr Thr Ser Phe Tyr Asp Asp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu 270 275 280 gat aag gat aca gta gga ggt gga gac ctg gaa gat gaa aac gac ctt 2715 Asp Lys Asp Thr Val Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Asn Asp Leu 285 290 295 300 ctc ctg ccc tct caa aag cct ggt gtg ggg cct ggg aca gga cag ccc 2763 Leu Leu Pro Ser Gln Lys Pro Gly Val Gly Pro Gly Thr Gly Gln Pro 305 310 315 acc aac cgg tgg cat gct gtt ccc cca cag cat act ctg ggg atg gta 2811 Thr Asn Arg Trp His Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Met Val 320 325 330 cct ggc agc agc atc tct ctt agg ccc cgc ccc gga gat cca ggc aag 2859 Pro Gly Ser Ser Ile Ser Leu Arg Pro Arg Pro Gly Asp Pro Gly Lys 335 340 345 gac ctg gcc tca gga gaa aat ggc aca gag tgc cga gtt ggc ttc gtc 2907 Asp Leu Ala Ser Gly Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Val Gly Phe Val 350 355 360 agg cac aat ggc tcc tgc cgg tca gtc tgt gac ctc ttt ccg agt tac 2955 Arg His Asn Gly Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr 365 370 375 380 tgt cac aac ggc ggc cag tgc tac ctg gtg gag aac ata ggg gct ttc 3003 Cys His Asn Gly Gly Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile Gly Ala Phe 385 390 395 tgc agg tgt aac acc cag gac tac atc tgg cac aag ggg atg cgc tgt 3051 Cys Arg Cys Asn Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys 400 405 410 gag tcc atc atc acg gac ttc cag gtg atg tgc gtg gcc gtt ggc tcg 3099 Glu Ser Ile Ile Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser 415 420 425 gct gct ctc gtg ctt ctc ctc ctg ttc atg atg act gtg ttc ttt gcc 3147 Ala Ala Leu Val Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala 430 435 440 aag aag ctc tat ctg ctc aag act gag aat acc aag ctg cgg agg acc 3195 Lys Lys Leu Tyr Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr 445 450 455 460 aat aaa ttc cgg acc cca tct gag ctc cac aac gac aac ttc tcc ctc 3243 Asn Lys Phe Arg Thr Pro Ser Glu Leu His Asn Asp Asn Phe Ser Leu 465 470 475 tcc acc att gcc gag ggc tct cat cca aat gta agg aaa ttt tgc gac 3291 Ser Thr Ile Ala Glu Gly Ser His Pro Asn Val Arg Lys Phe Cys Asp 480 485 490 act ccc cgt gtc tcc tcc ccc cat gcc cgt gcc ttg gct cac tat gat 3339 Thr Pro Arg Val Ser Ser Pro His Ala Arg Ala Leu Ala His Tyr Asp 495 500 505 aac att gtc tgt cag gac gac ccc agc gct ccc cac aaa atc cag gac 3387 Asn Ile Val Cys Gln Asp Asp Pro Ser Ala Pro His Lys Ile Gln Asp 510 515 520 cct ctc aag tcc cgc ctg aag gag gaa gag tcc ttt aac atc cag aac 3435 Pro Leu Lys Ser Arg Leu Lys Glu Glu Glu Ser Phe Asn Ile Gln Asn 525 530 535 540 tcc atg tca ccc aaa ctt gag ggt ggc aaa ggt gac cag gat gac ttg 3483 Ser Met Ser Pro Lys Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asp Gln Asp Asp Leu 545 550 555 ggg gtg aac tgt ctg cag aat aac cta acc tga gactgaggaa gaagagagga 3536 Gly Val Asn Cys Leu Gln Asn Asn Leu Thr 560 565 aaggggggtg ggggagggaa ggactgttgt ctcctctcgg gcagagtcgg cttcttgtaa 3596 ccatttgtta agcttttctt tttctgatct catggcatgc tctgatgtgt tttgtaggag 3656 gggaaacact taaaataagc aaagaaaccg agcaggattg catatatcgg atggttcttg 3716 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160 Pro Ala Val His Asp Lys Pro Ser Val Gly Pro Glu Leu Pro Lys Glu 165 170 175 Ile Pro Leu Glu Val Arg Leu Asn Leu Gly Gly Ser Thr Pro Glu Pro 180 185 190 Thr Phe Pro Leu Gln Gly Thr Leu Glu Thr Gln Pro Ala Ser Asp Ile 195 200 205 Ile Asp Ile Asp Tyr Phe Glu Gly Leu Asp Ser Glu Gly Arg Gly Ala 210 215 220 Asp Met Gly Ser Phe Pro Gly Ser Pro Gly Thr Ser Glu Asn His Pro 225 230 235 240 Asp Thr Glu Gly Glu Thr Pro Ser Trp Ser Leu Leu Asp Leu Tyr Asp 245 250 255 Asp Phe Thr Pro Phe Asp Glu Ser Asp Phe Tyr Pro Thr Thr Ser Phe 260 265 270 Tyr Asp Asp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Lys Asp Thr 275 280 285 Val Gly Gly Gly Asp Leu Glu Asp Glu Asn Asp Leu Leu Leu Pro Ser 290 295 300 Gln Lys Pro Gly Val Gly Pro Gly Thr Gly Gln Pro Thr Asn Arg Trp 305 310 315 320 His Ala Val Pro Pro Gln His Thr Leu Gly Met Val Pro Gly Ser Ser 325 330 335 Ile Ser Leu Arg Pro Arg Pro Gly Asp Pro Gly Lys Asp Leu Ala Ser 340 345 350 Gly Glu Asn Gly Thr Glu Cys Arg Val Gly Phe Val Arg His Asn Gly 355 360 365 Ser Cys Arg Ser Val Cys Asp Leu Phe Pro Ser Tyr Cys His Asn Gly 370 375 380 Gly Gln Cys Tyr Leu Val Glu Asn Ile Gly Ala Phe Cys Arg Cys Asn 385 390 395 400 Thr Gln Asp Tyr Ile Trp His Lys Gly Met Arg Cys Glu Ser Ile Ile 405 410 415 Thr Asp Phe Gln Val Met Cys Val Ala Val Gly Ser Ala Ala Leu Val 420 425 430 Leu Leu Leu Leu Phe Met Met Thr Val Phe Phe Ala Lys Lys Leu Tyr 435 440 445 Leu Leu Lys Thr Glu Asn Thr Lys Leu Arg Arg Thr Asn Lys Phe Arg 450 455 460 Thr Pro Ser Glu Leu His Asn Asp Asn Phe Ser Leu Ser Thr Ile Ala 465 470 475 480 Glu Gly Ser His Pro Asn Val Arg Lys Phe Cys Asp Thr Pro Arg Val 485 490 495 Ser Ser Pro His Ala Arg Ala Leu Ala His Tyr Asp Asn Ile Val Cys 500 505 510 Gln Asp Asp Pro Ser Ala Pro His Lys Ile Gln Asp Pro Leu Lys Ser 515 520 525 Arg Leu Lys Glu Glu Glu Ser Phe Asn Ile Gln Asn Ser Met Ser Pro 530 535 540 Lys Leu Glu Gly Gly Lys Gly Asp Gln Asp Asp Leu Gly Val Asn Cys 545 550 555 560 Leu Gln Asn Asn Leu Thr 565 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> T3 primer <400> 17 aattaaccct cactaaaggg 20 <210> 18 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> T7 primer <400> 18 taatacgact cactatagg 19 <210> 19 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> canis RT primer sense <400> 19 aagttactgt cacaacggcg 20 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> canis RT primer antisense <400> 20 tcatcatgaa gagcaggagc 20 <210> 21 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> human RT primer sense <400> 21 aagttactgt cacaatggcg g 21 <210> 22 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> human RT primer antisense <400> 22 tcatcatgaa gagcaggagc 20 <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> mouse RT primer sense <400> 23 gagttactgt cacaacggcg 20 <210> 24 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> mouse RT primer antisense <400> 24 tcatcatgaa caggaggaga 20 <210> 25 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> GAPDH primer <400> 25 gggctgcttt taactctg 18 <210> 26 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial <220> 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Claims (13)

  1. (i)이하의 (a), (b) 및 (c)의 폴리펩티드류로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 1개의 폴리펩티드, 또는 (ii)상기 폴리펩티드를 코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 또한 생체내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능하게 하는 재조합 벡터를 유효성분으로서 포함하는 면역 유도제.
    (a)서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 및 상기 아미노산 서열 중의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드
    (b)서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열과 85% 이상의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드, 및 상기 폴리펩티드의 아미노산 서열 중의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드
    (c)상기 (a) 또는 (b)의 폴리펩티드를 부분서열로서 포함하는 폴리펩티드
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 서열번호 8, 4, 6, 10, 12, 2 또는 14에 의해 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드인 면역 유도제.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    항원 제시 세포의 처리용인 면역 유도제.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    암의 치료 및/또는 예방용인 면역 유도제.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 암이 CSPG5를 발현하는 암인 면역 유도제.
  6. 제 4 항 또는 제 5 항에 있어서,
    상기 암이 뇌종양, 백혈병, 악성 림프종, 또는 신경아종인 면역 유도제.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역 증강제를 더 포함하는 면역 유도제.
  8. 제 7 항에 있어서,
    상기 면역 증강제가, 프로인트의 불완전 애주번트, 몬타니드, 폴리 IC 및 그 유도체, CpG 올리고뉴클레오티드, 인터류킨 12, 인터류킨 18, 인터페론 α, 인터페론 β, 인터페론 ω, 인터페론 γ, 및 Flt3 리간드로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나인 면역 유도제.
  9. 제 1 항에 정의하는 폴리펩티드와 피험체 유래의 항원 제시 세포를 ex vivo 또는 인비트로에서 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 항원 제시 세포의 제작 방법.
  10. 제 9 항에 있어서,
    상기 항원 제시 세포가 MHC 클래스 I 분자를 보유하는 수상 세포 또는 B세포인 방법.
  11. 제 9 항 또는 제 10 항에 기재된 방법에 의해 얻어지는 항원 제시 세포와 피험체 유래의 T세포를 ex vivo 또는 인비트로에서 접촉시켜서 상기 T세포를 활성화하는 것을 포함하는 제 1 항에 정의하는 폴리펩티드에 특이적인 세포장해성 T세포의 제작 방법.
  12. 제 9 항 또는 제 10 항에 기재된 방법에 의해 얻어지는, 또한 제 1 항에 정의하는 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 것을 특징으로 하는 항원 제시 세포.
  13. 제 11 항에 기재된 방법에 의해 얻어지는, 또한 제 1 항에 정의하는 폴리펩티드에 특이적인 것을 특징으로 하는 세포장해성 T세포.
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5698396A (en) 1995-06-07 1997-12-16 Ludwig Institute For Cancer Research Method for identifying auto-immunoreactive substances from a subject
JP2003079374A (ja) * 2001-09-07 2003-03-18 Seikagaku Kogyo Co Ltd プロテオグリカンのコアタンパク質のポリペプチド、それをコードするｄｎａおよびそのプロモーターｄｎａ
WO2006091861A2 (en) * 2005-02-25 2006-08-31 Ppd Biomarker Discovery Sciences, Llc Compositions and methods relating to cns lymphoma

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH09194502A (ja) * 1995-11-13 1997-07-29 Seikagaku Kogyo Co Ltd 新規コンドロイチン硫酸プロテオグリカン、そのコア蛋白質、それをコードするｄｎａおよびそれに対する抗体
JP2000095795A (ja) * 1998-09-18 2000-04-04 Seikagaku Kogyo Co Ltd プロテオグリカンのコアタンパク質のポリペプチド及びそれをコードするｄｎａ
JP2001187799A (ja) 1999-12-28 2001-07-10 Yasuki Kojima アポトーシスを誘導するペプチドおよびその用途
ES2539603T3 (es) * 2008-08-05 2015-07-02 Toray Industries, Inc. Agente inductor de inmunidad
CN114377112A (zh) 2009-09-03 2022-04-22 东丽株式会社 免疫诱导剂
KR101949186B1 (ko) 2011-05-19 2019-02-18 도레이 카부시키가이샤 면역 유도제
AU2012256756B2 (en) * 2011-05-19 2017-06-08 Toray Industries, Inc. Immunity induction agent
CA2847837A1 (en) 2011-09-05 2013-03-14 Hanmi Science Co., Ltd. A pharmaceutical composition for treating cancer, comprising interferon alpha conjugate

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5698396A (en) 1995-06-07 1997-12-16 Ludwig Institute For Cancer Research Method for identifying auto-immunoreactive substances from a subject
JP2003079374A (ja) * 2001-09-07 2003-03-18 Seikagaku Kogyo Co Ltd プロテオグリカンのコアタンパク質のポリペプチド、それをコードするｄｎａおよびそのプロモーターｄｎａ
WO2006091861A2 (en) * 2005-02-25 2006-08-31 Ppd Biomarker Discovery Sciences, Llc Compositions and methods relating to cns lymphoma

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Aono, S. et al., J. Neurosci. Res.83:110(2006)
Bruggen, P. et al., Science, 254:1643-1647(1991)
Kinugasa, Y. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun 321:1045(2004)
Nakanishi, K. et al., J. Biol. Chem.281:24970(2006)
Press, JZ. et al., Neoplasia. Dec;12(12):993-1002.(2010)
Sahin, U et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92:11810-11813(1995)
Yasuda, Y. et al., Neurosci. Res.32:313(1998)

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