JP2001187799A - アポトーシスを誘導するペプチドおよびその用途 - Google Patents
アポトーシスを誘導するペプチドおよびその用途Info
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 ＦａｓまたはＦａｓリガンド上のアミノ
酸配列から導かれるアミノ酸配列を有する、Ｆａｓ発現
細胞に選択的にアポトーシスを誘導することができる新
規ペプチド、該ペプチドを用いたアポトーシス誘導方
法、該ペプチドを含むアポトーシス研究用試薬、該ペプ
チドを有効成分とする疾患治療剤、特に抗癌剤、並びに
該ペプチドを含む抗癌剤選択のための診断キット。 【効果】 本発明のペプチドは、Ｆａｓ発現細胞に選択
的にアポトーシスを誘導することができるので、Ｆａｓ
Ｌ／Ｆａｓ系を介するアポトーシスが関与する様々な生
命現象の解明のための新たなツールと成り得る。また、
ＦａｓＬ／Ｆａｓ系が関与する疾患の新たな治療手段を
提供し得る点で極めて有用である。
酸配列から導かれるアミノ酸配列を有する、Ｆａｓ発現
細胞に選択的にアポトーシスを誘導することができる新
規ペプチド、該ペプチドを用いたアポトーシス誘導方
法、該ペプチドを含むアポトーシス研究用試薬、該ペプ
チドを有効成分とする疾患治療剤、特に抗癌剤、並びに
該ペプチドを含む抗癌剤選択のための診断キット。 【効果】 本発明のペプチドは、Ｆａｓ発現細胞に選択
的にアポトーシスを誘導することができるので、Ｆａｓ
Ｌ／Ｆａｓ系を介するアポトーシスが関与する様々な生
命現象の解明のための新たなツールと成り得る。また、
ＦａｓＬ／Ｆａｓ系が関与する疾患の新たな治療手段を
提供し得る点で極めて有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、アポトーシスを誘
導し得る新規ペプチド、詳細には、ある種のＦａｓ発現
細胞に選択的にアポトーシスを誘導し得る新規オリゴペ
プチドに関する。本発明はまた、該ペプチドを用いたア
ポトーシスの誘導方法、該ペプチドを含むアポトーシス
研究用試薬、該ペプチドを有効成分とする疾患治療剤、
特に抗癌剤、および該ペプチドを含む抗癌剤選択のため
の診断キットに関する。
導し得る新規ペプチド、詳細には、ある種のＦａｓ発現
細胞に選択的にアポトーシスを誘導し得る新規オリゴペ
プチドに関する。本発明はまた、該ペプチドを用いたア
ポトーシスの誘導方法、該ペプチドを含むアポトーシス
研究用試薬、該ペプチドを有効成分とする疾患治療剤、
特に抗癌剤、および該ペプチドを含む抗癌剤選択のため
の診断キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）／Ｆａｓ系
は、最も盛んに解析が行われているアポトーシス誘導経
路である。両者はともに膜貫通タンパク質であり、Ｆａ
ｓリガンドを細胞膜上に発現する細胞とＦａｓを発現す
る細胞とが結合すると、後者にアポトーシスが誘導され
る。また、抗Ｆａｓ抗体も同様にＦａｓ発現細胞にアポ
トーシスを誘導することができる。
は、最も盛んに解析が行われているアポトーシス誘導経
路である。両者はともに膜貫通タンパク質であり、Ｆａ
ｓリガンドを細胞膜上に発現する細胞とＦａｓを発現す
る細胞とが結合すると、後者にアポトーシスが誘導され
る。また、抗Ｆａｓ抗体も同様にＦａｓ発現細胞にアポ
トーシスを誘導することができる。
【０００３】ＦａｓＬ／Ｆａｓ系の異常が種々の疾患に
密接に関与していることが明らかになってきている。例
えば、ＦａｓまたはＦａｓリガンドの機能を欠損したマ
ウスでは、異常Ｔ細胞の増殖蓄積が見られ、自己抗体の
産生が高まり、糸球体腎炎やリウマチ様関節炎などの全
身性自己免疫疾患を発症して死に至ることが知られてい
る [Cell, 76: 969-976 (1994); Nature, 356: 314-317
(1992)]。
密接に関与していることが明らかになってきている。例
えば、ＦａｓまたはＦａｓリガンドの機能を欠損したマ
ウスでは、異常Ｔ細胞の増殖蓄積が見られ、自己抗体の
産生が高まり、糸球体腎炎やリウマチ様関節炎などの全
身性自己免疫疾患を発症して死に至ることが知られてい
る [Cell, 76: 969-976 (1994); Nature, 356: 314-317
(1992)]。
【０００４】また、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）がウイ
ルス感染細胞や癌細胞などの標的細胞を攻撃する際、Ｃ
ＴＬはＦａｓリガンドを発現するとともに、ＴＮＦなど
を分泌して標的細胞にＦａｓを発現させることにより、
標的細胞にアポトーシスを誘導していると考えられてい
る [Cell, 88: 355-365 (1997)] 。ＨＢＶやＨＣＶによ
る肝炎においては、感染細胞表面上のＭＨＣクラスＩ分
子に提示されたウイルス抗原を認識して活性化したＣＴ
ＬがＦａｓリガンドを発現するが、この際、ウイルス感
染細胞だけでなく正常な肝細胞に発現しているＦａｓに
も作用してアポトーシスを誘導することにより、劇症肝
炎を発症するとのメカニズムが提唱されている [Cell
(1997),上述; Nature Med., 3: 409-413 (1997)] 。
ルス感染細胞や癌細胞などの標的細胞を攻撃する際、Ｃ
ＴＬはＦａｓリガンドを発現するとともに、ＴＮＦなど
を分泌して標的細胞にＦａｓを発現させることにより、
標的細胞にアポトーシスを誘導していると考えられてい
る [Cell, 88: 355-365 (1997)] 。ＨＢＶやＨＣＶによ
る肝炎においては、感染細胞表面上のＭＨＣクラスＩ分
子に提示されたウイルス抗原を認識して活性化したＣＴ
ＬがＦａｓリガンドを発現するが、この際、ウイルス感
染細胞だけでなく正常な肝細胞に発現しているＦａｓに
も作用してアポトーシスを誘導することにより、劇症肝
炎を発症するとのメカニズムが提唱されている [Cell
(1997),上述; Nature Med., 3: 409-413 (1997)] 。
【０００５】さらに、ＡＩＤＳにおけるＣＤ４陽性Ｔ細
胞の減少にもＦａｓＬ／Ｆａｓ系を介したアポトーシス
の関与が示唆されている。ＨＩＶに感染したＣＤ４陽性
Ｔ細胞はＦａｓＬを発現するとともに、ＴＮＦなどのシ
グナル因子を介して近傍の正常なＴ細胞に強制的にＦａ
ｓを発現させて、これらの細胞にアポトーシスを誘導す
ると考えられている [Curr. Opin. Immunol., 6: 605-6
15 (1994); Science,260: 1269-1270 (1993)]。
胞の減少にもＦａｓＬ／Ｆａｓ系を介したアポトーシス
の関与が示唆されている。ＨＩＶに感染したＣＤ４陽性
Ｔ細胞はＦａｓＬを発現するとともに、ＴＮＦなどのシ
グナル因子を介して近傍の正常なＴ細胞に強制的にＦａ
ｓを発現させて、これらの細胞にアポトーシスを誘導す
ると考えられている [Curr. Opin. Immunol., 6: 605-6
15 (1994); Science,260: 1269-1270 (1993)]。
【０００６】このようなＦａｓＬ／Ｆａｓ系を介したア
ポトーシス誘導と密接に関連する疾患の治療におけるア
プローチの１つとして、この系を人為的に制御すること
ができる物質の探索が盛んに行われている。現在のとこ
ろ、その主たるターゲットは抗Ｆａｓ抗体であり、これ
までに種々の抗ヒトＦａｓモノクローナル抗体が開発さ
れているが、いずれも、毒性が高い、コントロールが困
難である等の理由で、未だ臨床に応用できるようなもの
は得られていないのが現状である。また、抗Ｆａｓ抗体
がすべてのＦａｓ発現細胞に対してアポトーシスを誘導
するわけではない。例えば、種々のヒト卵巣癌細胞株に
おけるＦａｓ発現細胞の頻度は６０〜７８％程度である
が、同程度にＦａｓを発現する癌細胞株でも、その種類
によって抗Ｆａｓ抗体により誘導されるアポトーシスに
対する感受性が異なる場合がある [Cancer Lett., 140:
113-119 (1999)]。したがって、抗Ｆａｓ抗体に対して
非感受性のＦａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導し得る
新規物質の開発が必要とされている。
ポトーシス誘導と密接に関連する疾患の治療におけるア
プローチの１つとして、この系を人為的に制御すること
ができる物質の探索が盛んに行われている。現在のとこ
ろ、その主たるターゲットは抗Ｆａｓ抗体であり、これ
までに種々の抗ヒトＦａｓモノクローナル抗体が開発さ
れているが、いずれも、毒性が高い、コントロールが困
難である等の理由で、未だ臨床に応用できるようなもの
は得られていないのが現状である。また、抗Ｆａｓ抗体
がすべてのＦａｓ発現細胞に対してアポトーシスを誘導
するわけではない。例えば、種々のヒト卵巣癌細胞株に
おけるＦａｓ発現細胞の頻度は６０〜７８％程度である
が、同程度にＦａｓを発現する癌細胞株でも、その種類
によって抗Ｆａｓ抗体により誘導されるアポトーシスに
対する感受性が異なる場合がある [Cancer Lett., 140:
113-119 (1999)]。したがって、抗Ｆａｓ抗体に対して
非感受性のＦａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導し得る
新規物質の開発が必要とされている。
【０００７】さらに、抗Ｆａｓ抗体は、ＦａｓＬ／Ｆａ
ｓ系を介したアポトーシスを研究するための重要なツー
ルとして広く使用されているが、抗Ｆａｓ抗体は高価な
ため、これらの機能を代替するより安価な研究用試薬が
要望されている。
ｓ系を介したアポトーシスを研究するための重要なツー
ルとして広く使用されているが、抗Ｆａｓ抗体は高価な
ため、これらの機能を代替するより安価な研究用試薬が
要望されている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
目的は、Ｆａｓと相互作用してＦａｓ発現細胞にアポト
ーシスを誘導し得る新規物質、特に臨床応用の可能性の
ある新規物質を提供することである。また、従来の抗Ｆ
ａｓ抗体に比べて、より安価なアポトーシス研究用試薬
を提供することである。
目的は、Ｆａｓと相互作用してＦａｓ発現細胞にアポト
ーシスを誘導し得る新規物質、特に臨床応用の可能性の
ある新規物質を提供することである。また、従来の抗Ｆ
ａｓ抗体に比べて、より安価なアポトーシス研究用試薬
を提供することである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の目
的を達成するために、ＦａｓリガンドおよびＦａｓの構
造的特徴から、Ｆａｓリガンドの作用を擬制するペプチ
ドの作製を試みた。抗Ｆａｓ抗体の毒性の要因の１つと
して抗原性が挙げられるが、低分子のオリゴペプチドで
あれば、抗原性の問題を最小限にすることができる。
的を達成するために、ＦａｓリガンドおよびＦａｓの構
造的特徴から、Ｆａｓリガンドの作用を擬制するペプチ
ドの作製を試みた。抗Ｆａｓ抗体の毒性の要因の１つと
して抗原性が挙げられるが、低分子のオリゴペプチドで
あれば、抗原性の問題を最小限にすることができる。
【００１０】まず第一に、本発明者らは、Blalock ら
[Biochem. Biophys. Res. Commun.,121: 203-207 (198
4)]により提唱された、いわゆるセンス−アンチセンス
理論に着目した。これは、あるペプチド（センスペプチ
ド）をコードするｍＲＮＡの塩基配列に相補的な塩基配
列によってコードされるペプチド（アンチセンスペプチ
ド）は、該センスペプチドと相互作用するという経験的
に導かれた仮説である。したがって、科学的な裏付けが
乏しく、これまでにも成立例ばかりでなく不成立例も数
多く報告されている [例えば、Receptor Res., 11: 13-
43 (1991); Biochem. Biophys. Res. Commun., 149: 93
0-938 (1987)を参照] 。
[Biochem. Biophys. Res. Commun.,121: 203-207 (198
4)]により提唱された、いわゆるセンス−アンチセンス
理論に着目した。これは、あるペプチド（センスペプチ
ド）をコードするｍＲＮＡの塩基配列に相補的な塩基配
列によってコードされるペプチド（アンチセンスペプチ
ド）は、該センスペプチドと相互作用するという経験的
に導かれた仮説である。したがって、科学的な裏付けが
乏しく、これまでにも成立例ばかりでなく不成立例も数
多く報告されている [例えば、Receptor Res., 11: 13-
43 (1991); Biochem. Biophys. Res. Commun., 149: 93
0-938 (1987)を参照] 。
【００１１】本発明者らは、本理論に基づいて、Ｆａｓ
リガンド中に存在する、Ｆａｓのアミノ酸配列と相補的
なアミノ酸配列を有する領域（アンチセンスホモロジー
ボックス）を検索し、ヒトＦａｓリガンドの２５６〜２
６５位のアミノ酸配列がヒトＦａｓの３４〜２５位のア
ミノ酸配列と７０％の高い相補性を示すことを見出し
た。これに基づいて、ヒトＦａｓリガンドの２５６〜２
６５位のアミノ酸配列を有するオリゴペプチドを合成
し、該ペプチドのＦａｓ発現癌細胞株に対するアポトー
シス誘導能を調べた結果、このペプチドがある種のＦａ
ｓ発現癌細胞株に高頻度にアポトーシスを誘導すること
ができ、しかも抗Ｆａｓ抗体に非感受性の細胞株に対し
て効率よくアポトーシスを誘導し得ることを見出した。
リガンド中に存在する、Ｆａｓのアミノ酸配列と相補的
なアミノ酸配列を有する領域（アンチセンスホモロジー
ボックス）を検索し、ヒトＦａｓリガンドの２５６〜２
６５位のアミノ酸配列がヒトＦａｓの３４〜２５位のア
ミノ酸配列と７０％の高い相補性を示すことを見出し
た。これに基づいて、ヒトＦａｓリガンドの２５６〜２
６５位のアミノ酸配列を有するオリゴペプチドを合成
し、該ペプチドのＦａｓ発現癌細胞株に対するアポトー
シス誘導能を調べた結果、このペプチドがある種のＦａ
ｓ発現癌細胞株に高頻度にアポトーシスを誘導すること
ができ、しかも抗Ｆａｓ抗体に非感受性の細胞株に対し
て効率よくアポトーシスを誘導し得ることを見出した。
【００１２】次いで、Ｆａｓと相互作用し得るさらに別
のペプチドを作製するために、本発明者らはFassina ら
[Arch. Biochem. Biophys., 296: 137-143 (1992)] の
理論に着目した。この理論は、あるペプチドの各アミノ
酸の持つ疎水度 [Kyte and Doolitle score; J. Mol. B
iol., 157: 105-132 (1982) を参照］と、絶対値が同程
度で正負が逆のアミノ酸からなるペプチドは、元のペプ
チドと相互作用するというものであり、センス−アンチ
センス理論同様、実験的に得られた知見であってその理
論的根拠は明らかにされていない。
のペプチドを作製するために、本発明者らはFassina ら
[Arch. Biochem. Biophys., 296: 137-143 (1992)] の
理論に着目した。この理論は、あるペプチドの各アミノ
酸の持つ疎水度 [Kyte and Doolitle score; J. Mol. B
iol., 157: 105-132 (1982) を参照］と、絶対値が同程
度で正負が逆のアミノ酸からなるペプチドは、元のペプ
チドと相互作用するというものであり、センス−アンチ
センス理論同様、実験的に得られた知見であってその理
論的根拠は明らかにされていない。
【００１３】本発明者らは、ＦａｓのＦａｓリガンドに
対するエピトープ [J. Exp. Med.,185: 1487-1492 (199
7)]および抗Ｆａｓ抗体に対するエピトープ [Int. Immu
nol., 10: 131-140 (1997)]のそれぞれについて、疎水
度が相補的なアミノ酸配列を有するペプチドを合成し、
各ペプチドのＦａｓ発現癌細胞株に対するアポトーシス
誘導能を調べた結果、これらのペプチドがある種のＦａ
ｓ発現癌細胞株に比較的低濃度で高頻度にアポトーシス
を誘導し得ること、また、癌細胞株の種類によって両者
に対する感受性に差異が認められることを見出して、本
発明を完成するに至った。
対するエピトープ [J. Exp. Med.,185: 1487-1492 (199
7)]および抗Ｆａｓ抗体に対するエピトープ [Int. Immu
nol., 10: 131-140 (1997)]のそれぞれについて、疎水
度が相補的なアミノ酸配列を有するペプチドを合成し、
各ペプチドのＦａｓ発現癌細胞株に対するアポトーシス
誘導能を調べた結果、これらのペプチドがある種のＦａ
ｓ発現癌細胞株に比較的低濃度で高頻度にアポトーシス
を誘導し得ること、また、癌細胞株の種類によって両者
に対する感受性に差異が認められることを見出して、本
発明を完成するに至った。
【００１４】すなわち本発明は次に述べるものである。 １．配列表配列番号１に示されるアミノ酸配列から実質
的になり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的に
アポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ２．配列表配列番号２に示されるアミノ酸配列からな
り、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的にアポト
ーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ３．配列表配列番号３に示されるアミノ酸配列から実質
的になり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的に
アポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ４．配列表配列番号４に示されるアミノ酸配列からな
り、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的にアポト
ーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ５．配列表配列番号５に示されるアミノ酸配列から実質
的になり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的に
アポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ６．２〜２０個の上記１〜５のいずれかのオリゴペプチ
ドを末端に有する分枝鎖ペプチド。 ７．上記１〜６のいずれかのペプチドを該ペプチドに感
受性のＦａｓ発現細胞に接触させることを特徴とする、
該細胞にアポトーシスを誘導する方法。 ８．該細胞が癌細胞である上記７記載の方法。 ９．上記１〜６のいずれかのペプチドを含むアポトーシ
ス研究用試薬。 １０．上記１〜６のいずれかのペプチドを有効成分とす
る、Ｆａｓリガンド／Ｆａｓ系の異常に起因する疾患用
治療剤。 １１．上記１〜６のいずれかのペプチドを有効成分とす
る抗癌剤。 １２．上記１〜６のペプチドからなる群より選択される
２種以上のペプチドを含む、癌患者に対して投与すべき
抗癌剤の選択のための診断キット。
的になり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的に
アポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ２．配列表配列番号２に示されるアミノ酸配列からな
り、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的にアポト
ーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ３．配列表配列番号３に示されるアミノ酸配列から実質
的になり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的に
アポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ４．配列表配列番号４に示されるアミノ酸配列からな
り、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的にアポト
ーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ５．配列表配列番号５に示されるアミノ酸配列から実質
的になり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的に
アポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 ６．２〜２０個の上記１〜５のいずれかのオリゴペプチ
ドを末端に有する分枝鎖ペプチド。 ７．上記１〜６のいずれかのペプチドを該ペプチドに感
受性のＦａｓ発現細胞に接触させることを特徴とする、
該細胞にアポトーシスを誘導する方法。 ８．該細胞が癌細胞である上記７記載の方法。 ９．上記１〜６のいずれかのペプチドを含むアポトーシ
ス研究用試薬。 １０．上記１〜６のいずれかのペプチドを有効成分とす
る、Ｆａｓリガンド／Ｆａｓ系の異常に起因する疾患用
治療剤。 １１．上記１〜６のいずれかのペプチドを有効成分とす
る抗癌剤。 １２．上記１〜６のペプチドからなる群より選択される
２種以上のペプチドを含む、癌患者に対して投与すべき
抗癌剤の選択のための診断キット。
【００１５】
【発明の実施の形態】本発明のオリゴペプチドは、
（１）相補的な関係にあるＦａｓリガンドとＦａｓのア
ミノ酸配列の対（アンチセンスホモロジーボックス）を
検索し、得られたアンチセンスホモロジーボックスのＦ
ａｓリガンドのアミノ酸配列またはそれと同等な配列を
有するオリゴペプチドを合成することによって得ること
ができる。ここで「相補的な関係にある」アミノ酸と
は、あるアミノ酸をコードするコドンに相補的なコドン
（アンチコドン）によってコードされるアミノ酸をい
う。例えば、グリシンはＧＧＮ（ＮはＵ、Ｃ、Ａまたは
Ｇ）によってコードされるので、相補的な塩基配列の組
み合わせはＮＣＣ（５’→３’）である。したがって、
グリシンに相補的なアミノ酸はスレオニン、アラニン、
セリンまたはプロリンである。センス−アンチセンス理
論に基づく各アミノ酸の相補的なアミノ酸を表１にまと
めた。本発明においては、配列内の相補的アミノ酸の比
率が６０％以上であるアミノ酸配列を相補的なアミノ酸
配列と定義する。好ましくは相補的アミノ酸の比率は７
０％以上である。なお、アンチセンスホモロジーボック
スの検索は適当なコンピュータープログラム（例えば、
本発明者らが開発したＳＡＳプログラム；Peptide Che
m., 217-220 (1996) を参照）を用いて行うことができ
る。
（１）相補的な関係にあるＦａｓリガンドとＦａｓのア
ミノ酸配列の対（アンチセンスホモロジーボックス）を
検索し、得られたアンチセンスホモロジーボックスのＦ
ａｓリガンドのアミノ酸配列またはそれと同等な配列を
有するオリゴペプチドを合成することによって得ること
ができる。ここで「相補的な関係にある」アミノ酸と
は、あるアミノ酸をコードするコドンに相補的なコドン
（アンチコドン）によってコードされるアミノ酸をい
う。例えば、グリシンはＧＧＮ（ＮはＵ、Ｃ、Ａまたは
Ｇ）によってコードされるので、相補的な塩基配列の組
み合わせはＮＣＣ（５’→３’）である。したがって、
グリシンに相補的なアミノ酸はスレオニン、アラニン、
セリンまたはプロリンである。センス−アンチセンス理
論に基づく各アミノ酸の相補的なアミノ酸を表１にまと
めた。本発明においては、配列内の相補的アミノ酸の比
率が６０％以上であるアミノ酸配列を相補的なアミノ酸
配列と定義する。好ましくは相補的アミノ酸の比率は７
０％以上である。なお、アンチセンスホモロジーボック
スの検索は適当なコンピュータープログラム（例えば、
本発明者らが開発したＳＡＳプログラム；Peptide Che
m., 217-220 (1996) を参照）を用いて行うことができ
る。
【００１６】
【表１】
【００１７】検索の結果、表２に示されるように、１０
アミノ酸中７アミノ酸が相補的なＦａｓリガンド−Ｆａ
ｓアンチセンスホモロジーボックスが見出された。これ
らは、それぞれＦａｓリガンドの２５６〜２６５位のア
ミノ酸配列およびＦａｓの３４〜２５位のアミノ酸配列
である。
アミノ酸中７アミノ酸が相補的なＦａｓリガンド−Ｆａ
ｓアンチセンスホモロジーボックスが見出された。これ
らは、それぞれＦａｓリガンドの２５６〜２６５位のア
ミノ酸配列およびＦａｓの３４〜２５位のアミノ酸配列
である。
【００１８】
【表２】
【００１９】したがって、本発明のオリゴペプチドは、
該ボックス内のＦａｓリガンドのアミノ酸配列に基づい
て、ＨＬＹＶＮＶＳＥＬＳ（配列番号１）から実質的に
なるアミノ酸配列を有する。ここで「実質的になる」と
は、上記アミノ酸配列の他、上記配列において、１また
は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入または付加された
ものも包含することを意味する。例えば、上記アミノ酸
配列において、Ｆａｓの配列と相補的でないＨ、Ｙおよ
びＥを、表１に基づいてＦａｓの対応アミノ酸と相補的
なアミノ酸に置換することができる。
該ボックス内のＦａｓリガンドのアミノ酸配列に基づい
て、ＨＬＹＶＮＶＳＥＬＳ（配列番号１）から実質的に
なるアミノ酸配列を有する。ここで「実質的になる」と
は、上記アミノ酸配列の他、上記配列において、１また
は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入または付加された
ものも包含することを意味する。例えば、上記アミノ酸
配列において、Ｆａｓの配列と相補的でないＨ、Ｙおよ
びＥを、表１に基づいてＦａｓの対応アミノ酸と相補的
なアミノ酸に置換することができる。
【００２０】本発明の別のオリゴペプチドは、Ｆａｓ上
のＦａｓリガンドに対するエピトープ、すなわちＦＳＳ
ＫＣＲＲＣＲＬＣＤＥＧ [配列番号７；J. Exp. Med.
(1997),上述] および抗Ｆａｓ抗体に対するエピトー
プ、すなわちＴＱＮＴＫＣＲＣＫＰＮＦＦＣ [配列番号
８；Int. Immunol. (1997), 上述] のそれぞれに対し
て、疎水度が相補的なアミノ酸配列を有するペプチドで
ある。ここで「疎水度が相補的」とは、対応するアミノ
酸同士の疎水度の絶対値が同程度で且つ正負が逆である
ことをいう。各アミノ酸の持つ疎水度は、Kyte and Doo
litle score [J. Mol.Biol., 157: 105-132 (1982) ］
として当業者に周知である。
のＦａｓリガンドに対するエピトープ、すなわちＦＳＳ
ＫＣＲＲＣＲＬＣＤＥＧ [配列番号７；J. Exp. Med.
(1997),上述] および抗Ｆａｓ抗体に対するエピトー
プ、すなわちＴＱＮＴＫＣＲＣＫＰＮＦＦＣ [配列番号
８；Int. Immunol. (1997), 上述] のそれぞれに対し
て、疎水度が相補的なアミノ酸配列を有するペプチドで
ある。ここで「疎水度が相補的」とは、対応するアミノ
酸同士の疎水度の絶対値が同程度で且つ正負が逆である
ことをいう。各アミノ酸の持つ疎水度は、Kyte and Doo
litle score [J. Mol.Biol., 157: 105-132 (1982) ］
として当業者に周知である。
【００２１】したがって、Ｆａｓリガンドエピトープに
疎水度が相補的な本発明のペプチドは、 Ｅ−Ｐ−Ｐ−Ｍ−Ｔ−Ｆ−Ｉ−Ｓ−Ｉ−Ｈ−Ｔ−Ｍ−Ｃ−Ｈ (Ｎ)(Ｓ)(Ｓ)(Ａ) (Ｃ)(Ｃ)(Ｐ)(Ｃ)(Ｎ) (Ａ)(Ｉ)(Ｎ) (Ｄ)(Ｗ)(Ｗ)(Ｃ) (Ｉ)(Ｌ)(Ｗ)(Ｌ)(Ｄ) (Ｃ)(Ｌ)(Ｄ) (Ｑ)(Ｙ)(Ｙ) (Ｌ)(Ｆ)(Ｙ)(Ｆ)(Ｑ) (Ｆ)(Ｑ) (Ｈ)(Ｎ)(Ｎ) (Ｖ)(Ｖ) (Ｖ)(Ｅ) (Ｖ)(Ｅ) (Ｐ)(Ｄ)(Ｄ) (Ｋ) (Ａ)(Ｋ) (Ｒ)(Ｑ)(Ｑ) (Ｐ) (Ｍ)(Ｐ) (Ｋ)(Ｅ)(Ｅ) (Ｒ) (Ｒ) (Ｈ)(Ｈ) （上段の配列は例示であって、各アミノ酸は下段に示さ
れる括弧内のアミノ酸のいずれであってもよい）であ
る。このうち、Ｄ、Ｎ、ＱおよびＥは疎水度が同一であ
るので、好ましくはＦａｓリガンドエピトープに疎水度
が相補的なペプチドは、ＸＰＰＭＴＦＩＳＩＨＴＭＣＨ
（ＸはＤ、Ｎ、ＱまたはＥ；配列番号３）である。
疎水度が相補的な本発明のペプチドは、 Ｅ−Ｐ−Ｐ−Ｍ−Ｔ−Ｆ−Ｉ−Ｓ−Ｉ−Ｈ−Ｔ−Ｍ−Ｃ−Ｈ (Ｎ)(Ｓ)(Ｓ)(Ａ) (Ｃ)(Ｃ)(Ｐ)(Ｃ)(Ｎ) (Ａ)(Ｉ)(Ｎ) (Ｄ)(Ｗ)(Ｗ)(Ｃ) (Ｉ)(Ｌ)(Ｗ)(Ｌ)(Ｄ) (Ｃ)(Ｌ)(Ｄ) (Ｑ)(Ｙ)(Ｙ) (Ｌ)(Ｆ)(Ｙ)(Ｆ)(Ｑ) (Ｆ)(Ｑ) (Ｈ)(Ｎ)(Ｎ) (Ｖ)(Ｖ) (Ｖ)(Ｅ) (Ｖ)(Ｅ) (Ｐ)(Ｄ)(Ｄ) (Ｋ) (Ａ)(Ｋ) (Ｒ)(Ｑ)(Ｑ) (Ｐ) (Ｍ)(Ｐ) (Ｋ)(Ｅ)(Ｅ) (Ｒ) (Ｒ) (Ｈ)(Ｈ) （上段の配列は例示であって、各アミノ酸は下段に示さ
れる括弧内のアミノ酸のいずれであってもよい）であ
る。このうち、Ｄ、Ｎ、ＱおよびＥは疎水度が同一であ
るので、好ましくはＦａｓリガンドエピトープに疎水度
が相補的なペプチドは、ＸＰＰＭＴＦＩＳＩＨＴＭＣＨ
（ＸはＤ、Ｎ、ＱまたはＥ；配列番号３）である。
【００２２】また、抗Ｆａｓ抗体エピトープに疎水度が
相補的な本発明のペプチドは、 Ｙ−Ａ−Ｍ−Ｐ−Ｌ−Ｓ−Ｉ−Ｓ−Ｗ−Ｔ−Ｃ−Ｅ−Ｅ−Ｔ (Ｐ)(Ｃ)(Ａ)(Ｓ)(Ｃ)(Ｐ)(Ｃ)(Ｐ)(Ｐ) (Ｉ)(Ｎ)(Ｎ) (Ｓ)(Ｍ)(Ｃ)(Ｗ)(Ｉ)(Ｗ)(Ｌ)(Ｗ)(Ｓ) (Ｌ)(Ｄ)(Ｄ) (Ｗ)(Ｇ) (Ｙ)(Ｆ)(Ｙ)(Ｆ)(Ｙ)(Ｙ) (Ｆ)(Ｑ)(Ｑ) (Ｎ)(Ｖ) (Ｖ) (Ｖ)(Ｈ)(Ｈ) (Ｄ) (Ａ)(Ｐ)(Ｐ) (Ｑ) (Ｍ)(Ｒ)(Ｒ) (Ｅ) (Ｋ)(Ｋ) (Ｈ) （上段の配列は例示であって、各アミノ酸は下段に示さ
れる括弧内のアミノ酸のいずれであってもよい）であ
る。このうち、Ｄ、Ｎ、ＱおよびＥは疎水度が同一であ
るので、好ましくは抗Ｆａｓ抗体エピトープに疎水度が
相補的なペプチドは、ＹＡＭＰＬＳＩＳＷＴＣＸＸＴ
（ＸはＤ、Ｎ、ＱまたはＥ；配列番号５）である。
相補的な本発明のペプチドは、 Ｙ−Ａ−Ｍ−Ｐ−Ｌ−Ｓ−Ｉ−Ｓ−Ｗ−Ｔ−Ｃ−Ｅ−Ｅ−Ｔ (Ｐ)(Ｃ)(Ａ)(Ｓ)(Ｃ)(Ｐ)(Ｃ)(Ｐ)(Ｐ) (Ｉ)(Ｎ)(Ｎ) (Ｓ)(Ｍ)(Ｃ)(Ｗ)(Ｉ)(Ｗ)(Ｌ)(Ｗ)(Ｓ) (Ｌ)(Ｄ)(Ｄ) (Ｗ)(Ｇ) (Ｙ)(Ｆ)(Ｙ)(Ｆ)(Ｙ)(Ｙ) (Ｆ)(Ｑ)(Ｑ) (Ｎ)(Ｖ) (Ｖ) (Ｖ)(Ｈ)(Ｈ) (Ｄ) (Ａ)(Ｐ)(Ｐ) (Ｑ) (Ｍ)(Ｒ)(Ｒ) (Ｅ) (Ｋ)(Ｋ) (Ｈ) （上段の配列は例示であって、各アミノ酸は下段に示さ
れる括弧内のアミノ酸のいずれであってもよい）であ
る。このうち、Ｄ、Ｎ、ＱおよびＥは疎水度が同一であ
るので、好ましくは抗Ｆａｓ抗体エピトープに疎水度が
相補的なペプチドは、ＹＡＭＰＬＳＩＳＷＴＣＸＸＴ
（ＸはＤ、Ｎ、ＱまたはＥ；配列番号５）である。
【００２３】本発明のオリゴペプチドは自体公知のいか
なる方法によっても合成することができる。例えば、ｔ
Ｂｏｃ法またはＦｍｏｃ法のいずれかの固相合成法が好
ましく挙げられる。
なる方法によっても合成することができる。例えば、ｔ
Ｂｏｃ法またはＦｍｏｃ法のいずれかの固相合成法が好
ましく挙げられる。
【００２４】Fassina ら（上述）によれば、エンドセリ
ンの多量体とその相補ペプチドの多量体との結合は、単
なる単量体同士の結合よりも強固であると報告されてい
る。また、Ｆａｓは細胞膜上で三量体を形成することが
知られているので、本発明のオリゴペプチドを、末端に
該オリゴペプチド単位を２〜２０個有するような分枝鎖
ペプチドの形態で提供することもまた好ましい。このよ
うな分枝鎖ペプチドの合成法もまた、当業者に知られて
いる [例えば、Proc. Natl. Acad. Sci. USA,85: 5409-
5413 (1988)を参照] 。すなわち、上記の固相合成法を
用いて、リジンのα−およびε−アミノ基にさらにリジ
ンを順次カップリングし、末端に所望の数のアミノ基を
含むコアリジン鎖を合成した後、その末端の各アミノ基
にｔＢｏｃ法またはＦｍｏｃ法により本発明のオリゴペ
プチドのアミノ酸配列を導入すればよい。得られた目的
のペプチドは、逆相ＨＰＬＣ等を用いて精製することが
できる。
ンの多量体とその相補ペプチドの多量体との結合は、単
なる単量体同士の結合よりも強固であると報告されてい
る。また、Ｆａｓは細胞膜上で三量体を形成することが
知られているので、本発明のオリゴペプチドを、末端に
該オリゴペプチド単位を２〜２０個有するような分枝鎖
ペプチドの形態で提供することもまた好ましい。このよ
うな分枝鎖ペプチドの合成法もまた、当業者に知られて
いる [例えば、Proc. Natl. Acad. Sci. USA,85: 5409-
5413 (1988)を参照] 。すなわち、上記の固相合成法を
用いて、リジンのα−およびε−アミノ基にさらにリジ
ンを順次カップリングし、末端に所望の数のアミノ基を
含むコアリジン鎖を合成した後、その末端の各アミノ基
にｔＢｏｃ法またはＦｍｏｃ法により本発明のオリゴペ
プチドのアミノ酸配列を導入すればよい。得られた目的
のペプチドは、逆相ＨＰＬＣ等を用いて精製することが
できる。
【００２５】本発明のオリゴペプチドあるいは該オリゴ
ペプチドの多量体である分枝鎖ペプチド（以下、これら
を総称して単に本発明のペプチドという場合もある）
は、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的にアポト
ーシスを誘導することができる。したがって、本発明は
また、上記のいずれかのペプチドを用いてＦａｓ発現細
胞にアポトーシスを誘導する方法を提供する。該Ｆａｓ
発現細胞は使用するペプチドに対して感受性の細胞であ
る。ここで「ペプチドに対して感受性である」とは、細
胞を該ペプチドに接触させることにより、その細胞にア
ポトーシスが誘導されることを意味する。Ｆａｓ発現細
胞は特に限定されないが、好ましくは癌細胞、例えば、
卵巣癌や乳癌患者から摘出された癌細胞、あるいはそれ
らに由来する樹立細胞株等が挙げられる。
ペプチドの多量体である分枝鎖ペプチド（以下、これら
を総称して単に本発明のペプチドという場合もある）
は、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的にアポト
ーシスを誘導することができる。したがって、本発明は
また、上記のいずれかのペプチドを用いてＦａｓ発現細
胞にアポトーシスを誘導する方法を提供する。該Ｆａｓ
発現細胞は使用するペプチドに対して感受性の細胞であ
る。ここで「ペプチドに対して感受性である」とは、細
胞を該ペプチドに接触させることにより、その細胞にア
ポトーシスが誘導されることを意味する。Ｆａｓ発現細
胞は特に限定されないが、好ましくは癌細胞、例えば、
卵巣癌や乳癌患者から摘出された癌細胞、あるいはそれ
らに由来する樹立細胞株等が挙げられる。
【００２６】細胞に接触させるペプチドの濃度は特に制
限はないが、例えば、１〜１，０００μｇ／ｍｌ、好ま
しくは１０〜３００μｇ／ｍｌである。
限はないが、例えば、１〜１，０００μｇ／ｍｌ、好ま
しくは１０〜３００μｇ／ｍｌである。
【００２７】アポトーシス誘導は、細胞の形態学的変化
の観察、フローサイトメトリーによるＤＮＡ断片化の検
出、および／またはゲル電気泳動法による染色体ＤＮＡ
の断片化の検出により確認することができる。
の観察、フローサイトメトリーによるＤＮＡ断片化の検
出、および／またはゲル電気泳動法による染色体ＤＮＡ
の断片化の検出により確認することができる。
【００２８】本発明のペプチドは、研究用および臨床用
等、さまざまな分野で利用することができる。まず、該
ペプチドは、ＦａｓＬ／Ｆａｓ系を介したアポトーシス
を研究するための、抗Ｆａｓ抗体に代わる有用なツール
となる。したがって、本発明は、上記のいずれかのペプ
チドを含むアポトーシス研究用試薬を提供する。例え
ば、種々のＦａｓ発現癌細胞株が本発明のペプチドに対
して異なる感受性を示す理由の１つとして、Ｆａｓ遺伝
子に変異が生じていることが考えられるので、本発明の
ペプチドはＦａｓ遺伝子の変異の可能性のある癌細胞の
スクリーニングに使用することができる。
等、さまざまな分野で利用することができる。まず、該
ペプチドは、ＦａｓＬ／Ｆａｓ系を介したアポトーシス
を研究するための、抗Ｆａｓ抗体に代わる有用なツール
となる。したがって、本発明は、上記のいずれかのペプ
チドを含むアポトーシス研究用試薬を提供する。例え
ば、種々のＦａｓ発現癌細胞株が本発明のペプチドに対
して異なる感受性を示す理由の１つとして、Ｆａｓ遺伝
子に変異が生じていることが考えられるので、本発明の
ペプチドはＦａｓ遺伝子の変異の可能性のある癌細胞の
スクリーニングに使用することができる。
【００２９】また、本発明のペプチドは、細胞のＦａｓ
Ｌ／Ｆａｓ系を介したアポトーシスを代替するので、Ｆ
ａｓＬ／Ｆａｓ系の異常に起因する種々の疾患、例え
ば、Ｆａｓリガンドの欠損による自己免疫疾患、ウイル
ス感染症等の治療に使用することができる。したがっ
て、本発明はまた、上記のいずれかのペプチドを有効成
分とする、ＦａｓＬ／Ｆａｓ系の異常に起因する疾患用
治療剤を提供する。
Ｌ／Ｆａｓ系を介したアポトーシスを代替するので、Ｆ
ａｓＬ／Ｆａｓ系の異常に起因する種々の疾患、例え
ば、Ｆａｓリガンドの欠損による自己免疫疾患、ウイル
ス感染症等の治療に使用することができる。したがっ
て、本発明はまた、上記のいずれかのペプチドを有効成
分とする、ＦａｓＬ／Ｆａｓ系の異常に起因する疾患用
治療剤を提供する。
【００３０】特に、本発明のペプチドは、癌細胞がＦａ
ｓを発現する癌患者の治療に好ましく使用することがで
きる。
ｓを発現する癌患者の治療に好ましく使用することがで
きる。
【００３１】本発明のペプチドを有効成分とする該治療
剤は、治療上有効な量の該ペプチドを医薬上許容される
担体と適宜混合し、液状製剤、粉末、顆粒、錠剤、カプ
セル剤、シロップ剤、注射剤、エアロゾル剤等の剤形
で、経口的または非経口的に投与することができる。
剤は、治療上有効な量の該ペプチドを医薬上許容される
担体と適宜混合し、液状製剤、粉末、顆粒、錠剤、カプ
セル剤、シロップ剤、注射剤、エアロゾル剤等の剤形
で、経口的または非経口的に投与することができる。
【００３２】医薬上許容される担体としては、例えば、
ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グ
ルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭
酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロー
ス、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロ
リドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコ
ール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボ
キシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、
ナトリウム−グリコール−スターチ、炭酸水素ナトリウ
ム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊
剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、
ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントー
ル、グリシルリジン・アンモニウム塩、グリシン、オレ
ンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナ
トリウム、メチルパラバン、プロピルパラバン等の保存
剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、
メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン
酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、
水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ
脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワック
スなどが挙げられるが、それらに限定されるものではな
い。
ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グ
ルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭
酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロー
ス、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロ
リドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコ
ール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボ
キシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、
ナトリウム−グリコール−スターチ、炭酸水素ナトリウ
ム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊
剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、
ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントー
ル、グリシルリジン・アンモニウム塩、グリシン、オレ
ンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナ
トリウム、メチルパラバン、プロピルパラバン等の保存
剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、
メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン
酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、
水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ
脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワック
スなどが挙げられるが、それらに限定されるものではな
い。
【００３３】非経口的な投与に好適な製剤としては、水
性および非水性の等張な無菌の注射液剤があり、これに
は抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、等張化剤等が含まれてい
てもよい。また、水性および非水性の無菌の懸濁液剤が
挙げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、肥厚剤、安定化
剤、防腐剤等が含まれていてもよい。本発明のペプチド
製剤は、アンプルやバイアルのように単位投与量あるい
は複数回投与量ずつ容器に封入することができる。ま
た、該ペプチドおよび医薬上許容される担体を凍結乾燥
（フリーズドライ）し、使用直前に適当な無菌のビヒク
ルに溶解または懸濁すればよい状態で保存することもで
きる。
性および非水性の等張な無菌の注射液剤があり、これに
は抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、等張化剤等が含まれてい
てもよい。また、水性および非水性の無菌の懸濁液剤が
挙げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、肥厚剤、安定化
剤、防腐剤等が含まれていてもよい。本発明のペプチド
製剤は、アンプルやバイアルのように単位投与量あるい
は複数回投与量ずつ容器に封入することができる。ま
た、該ペプチドおよび医薬上許容される担体を凍結乾燥
（フリーズドライ）し、使用直前に適当な無菌のビヒク
ルに溶解または懸濁すればよい状態で保存することもで
きる。
【００３４】本発明のペプチド製剤の投与量は、治療す
べき疾患の種類、病気の進行度、投与対象動物種、投与
対象の薬物受容性、体重、年齢等によって異なるが、通
常、成人１日あたり３０μｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、好
ましくは３００μｇ〜１ｍｇ／ｋｇ体重であり、この量
を１回または数回に分けて投与することができる。
べき疾患の種類、病気の進行度、投与対象動物種、投与
対象の薬物受容性、体重、年齢等によって異なるが、通
常、成人１日あたり３０μｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、好
ましくは３００μｇ〜１ｍｇ／ｋｇ体重であり、この量
を１回または数回に分けて投与することができる。
【００３５】本発明のペプチドはまた、個々のペプチド
が種々のＦａｓ発現癌細胞に対して異なるアポトーシス
誘導能を有することを特徴とする。したがって、この能
力の差を利用して、どのペプチドが個々の癌患者に対し
て最も治療効果があるかを、患者の癌細胞を用いて予め
予測することができる。すなわち、本発明は、本発明の
ペプチドを２種以上含む、個々の癌患者に対して投与す
べき抗癌剤を選択するための診断キットを提供する。具
体的には、患者から採取した癌細胞を個々のペプチドに
それぞれ接触させてアポトーシス誘導を比較し、最もア
ポトーシス誘導能が高かったペプチドを有効成分とする
抗癌剤を選択する。
が種々のＦａｓ発現癌細胞に対して異なるアポトーシス
誘導能を有することを特徴とする。したがって、この能
力の差を利用して、どのペプチドが個々の癌患者に対し
て最も治療効果があるかを、患者の癌細胞を用いて予め
予測することができる。すなわち、本発明は、本発明の
ペプチドを２種以上含む、個々の癌患者に対して投与す
べき抗癌剤を選択するための診断キットを提供する。具
体的には、患者から採取した癌細胞を個々のペプチドに
それぞれ接触させてアポトーシス誘導を比較し、最もア
ポトーシス誘導能が高かったペプチドを有効成分とする
抗癌剤を選択する。
【００３６】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、これらは単なる例示であって、本発明の範
囲を何ら限定するものではない。
説明するが、これらは単なる例示であって、本発明の範
囲を何ら限定するものではない。
【００３７】実施例１ ペプチドの合成（１） 本発明者らが開発したコンピュータープログラム（ＳＡ
Ｓ）を用いて、ヒトＦａｓリガンドの任意の連続するア
ミノ酸配列について、センス−アンチセンス理論に基づ
く相補的な配列を、ヒトＦａｓのアミノ酸配列上で検索
した。その結果、表２に示されるように７０％の相補性
を有するＦａｓリガンド−Ｆａｓアンチセンスホモロジ
ーボックスが見出された。そこで、ＨＬＹＶＮＶＳＥＬ
Ｓからなるオリゴペプチドを、自動ペプチド合成機（ア
プライドバイオシステム社；ＡＢＩ ４３１Ａ）を用い
てｔＢｏｃ法により合成した。合成したペプチドは、通
常の逆相ＨＰＬＣにより精製した。該ペプチドをＦＲＰ
−１と命名した。
Ｓ）を用いて、ヒトＦａｓリガンドの任意の連続するア
ミノ酸配列について、センス−アンチセンス理論に基づ
く相補的な配列を、ヒトＦａｓのアミノ酸配列上で検索
した。その結果、表２に示されるように７０％の相補性
を有するＦａｓリガンド−Ｆａｓアンチセンスホモロジ
ーボックスが見出された。そこで、ＨＬＹＶＮＶＳＥＬ
Ｓからなるオリゴペプチドを、自動ペプチド合成機（ア
プライドバイオシステム社；ＡＢＩ ４３１Ａ）を用い
てｔＢｏｃ法により合成した。合成したペプチドは、通
常の逆相ＨＰＬＣにより精製した。該ペプチドをＦＲＰ
−１と命名した。
【００３８】試験例１ ＦＲＰ−１による癌細胞株のア
ポトーシス誘導 実施例１で得られたＦＲＰ−１のアポトーシス誘導能
を、２種のヒト卵巣癌細胞株（ＮＯＳ４およびＳＫＯＶ
−３；Cancer Lett. (1999),上述）を用いて調べた。Ｎ
ＯＳ４は、重症の卵巣癌患者から切除した癌細胞より、
本発明者らの研究室で樹立され、維持されている。ま
た、ＳＫＯＶ−３はアメリカン・タイプ・カルチャー・
コレクション（ＡＴＣＣ；Rockville, MD, USA）より入
手した。これらの細胞株は、いずれも１０％ウシ胎仔血
清含有ＲＰＭＩ１６４０培地中、５％ＣＯ2 湿気下、３
７℃で培養した。各細胞株について、５×１０6 個の細
胞を１μｇ／ｍｌマウス抗ＦａｓポリクローナルＩｇＭ
抗体（ＣＨ−１１；医学生物学研究所）および種々の濃
度のＦＲＰ−１で３７℃、２４時間処理した。細胞の形
態学的変化を位相差顕微鏡で観察した。ＤＮＡ断片化
（ＤＮＡ含量）は、細胞核をヨウ化プロピジウム（Ｐ
Ｉ）で染色し、ＦＡＣＳ装置（FACS Calibur, Jose., C
A ）を用いたフローサイトメトリーにより測定して、％
断片化を決定した。また、１×１０6 個の細胞を溶解用
バッファー［５０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ７．８），１０
ｍＭ ＥＤＴＡ，０．５％ Ｎ−ラウリルサルコシン酸
ナトリウム］５０μｌに溶解し、０．５ｍｇ／ｍｌ Ｒ
ＮａｓｅＡで５０℃、３０分、次いで０．５ｍｇ／ｍｌ
プロテイナーゼＫで５０℃、９０分間処理した後、ＤＮ
Ａ溶液を２％アガロースゲル上の電気泳動にかけ、エチ
ジウムブロマイドで染色してＵＶトランスイルミネータ
ー上で検出した。
ポトーシス誘導 実施例１で得られたＦＲＰ−１のアポトーシス誘導能
を、２種のヒト卵巣癌細胞株（ＮＯＳ４およびＳＫＯＶ
−３；Cancer Lett. (1999),上述）を用いて調べた。Ｎ
ＯＳ４は、重症の卵巣癌患者から切除した癌細胞より、
本発明者らの研究室で樹立され、維持されている。ま
た、ＳＫＯＶ−３はアメリカン・タイプ・カルチャー・
コレクション（ＡＴＣＣ；Rockville, MD, USA）より入
手した。これらの細胞株は、いずれも１０％ウシ胎仔血
清含有ＲＰＭＩ１６４０培地中、５％ＣＯ2 湿気下、３
７℃で培養した。各細胞株について、５×１０6 個の細
胞を１μｇ／ｍｌマウス抗ＦａｓポリクローナルＩｇＭ
抗体（ＣＨ−１１；医学生物学研究所）および種々の濃
度のＦＲＰ−１で３７℃、２４時間処理した。細胞の形
態学的変化を位相差顕微鏡で観察した。ＤＮＡ断片化
（ＤＮＡ含量）は、細胞核をヨウ化プロピジウム（Ｐ
Ｉ）で染色し、ＦＡＣＳ装置（FACS Calibur, Jose., C
A ）を用いたフローサイトメトリーにより測定して、％
断片化を決定した。また、１×１０6 個の細胞を溶解用
バッファー［５０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ７．８），１０
ｍＭ ＥＤＴＡ，０．５％ Ｎ−ラウリルサルコシン酸
ナトリウム］５０μｌに溶解し、０．５ｍｇ／ｍｌ Ｒ
ＮａｓｅＡで５０℃、３０分、次いで０．５ｍｇ／ｍｌ
プロテイナーゼＫで５０℃、９０分間処理した後、ＤＮ
Ａ溶液を２％アガロースゲル上の電気泳動にかけ、エチ
ジウムブロマイドで染色してＵＶトランスイルミネータ
ー上で検出した。
【００３９】フローサイトメトリーの分析結果を図１に
示す。図中、Ａは未処理の細胞、Ｄはコントロールペプ
チド（ＶＱＶＨＮＡＴＫＰＲ；配列番号９）で処理した
細胞である。抗Ｆａｓ抗体ＣＨ−１１はＮＯＳ４にアポ
トーシスを誘導したが、ＳＫＯＶ−３にはアポトーシス
を誘導しなかった（図１Ｂ）。これに対し、ＦＲＰ−１
は、ＮＯＳ４にはアポトーシスを誘導しなかったが、Ｓ
ＫＯＶ−３にはアポトーシスを誘導した（図１Ｃ）。ま
た、位相差顕微鏡観察により、ＦＲＰ−１で処理したＳ
ＫＯＶ−３細胞は、アポトーシスに特徴的な形態学的変
化を生じていることがわかった。さらに、ＦＲＰ−１で
処理したＳＫＯＶ−３細胞より抽出したＤＮＡの電気泳
動では、約１８０ｂｐの整数倍の長さのバンドがラダー
状に検出された。また、ＳＫＯＶ−３細胞におけるＦＲ
Ｐ−１の効果は濃度依存的に増大した（図２）。これら
の結果から、ＦＲＰ−１は、従来の抗Ｆａｓ抗体とはア
ポトーシス誘導能において異なる細胞特異性を示すこと
が明らかとなった。
示す。図中、Ａは未処理の細胞、Ｄはコントロールペプ
チド（ＶＱＶＨＮＡＴＫＰＲ；配列番号９）で処理した
細胞である。抗Ｆａｓ抗体ＣＨ−１１はＮＯＳ４にアポ
トーシスを誘導したが、ＳＫＯＶ−３にはアポトーシス
を誘導しなかった（図１Ｂ）。これに対し、ＦＲＰ−１
は、ＮＯＳ４にはアポトーシスを誘導しなかったが、Ｓ
ＫＯＶ−３にはアポトーシスを誘導した（図１Ｃ）。ま
た、位相差顕微鏡観察により、ＦＲＰ−１で処理したＳ
ＫＯＶ−３細胞は、アポトーシスに特徴的な形態学的変
化を生じていることがわかった。さらに、ＦＲＰ−１で
処理したＳＫＯＶ−３細胞より抽出したＤＮＡの電気泳
動では、約１８０ｂｐの整数倍の長さのバンドがラダー
状に検出された。また、ＳＫＯＶ−３細胞におけるＦＲ
Ｐ−１の効果は濃度依存的に増大した（図２）。これら
の結果から、ＦＲＰ−１は、従来の抗Ｆａｓ抗体とはア
ポトーシス誘導能において異なる細胞特異性を示すこと
が明らかとなった。
【００４０】実施例２ ペプチドの合成（２） Ｆａｓ上の、Ｆａｓリガンドエピトープに対して疎水度
が相補的なペプチドＥＰＰＭＴＦＩＳＩＨＴＭＣＨ［Ｆ
ＲＰ−２；配列番号３（配列中、ＸａａはＧｌｕ）］お
よび抗Ｆａｓ抗体エピトープに対して疎水度が相補的な
ペプチドＹＡＭＰＬＳＩＳＷＴＣＥＥＴ［ＦＲＰ−３；
配列番号５（配列中、ＸａａはいずれもＧｌｕ）］を、
それぞれ末端に８個有する分枝鎖ペプチドをTam ら [Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA (1988),上述］の方法に従っ
て合成した。すなわち、ヒドロキシメチルフェニルアセ
トアミド樹脂（ＰＡＭ樹脂）にリンカーを介してアミノ
基をｔＢｏｃで保護したアラニンを結合させ、これに自
動ペプチド合成機（アプライドバイオシステム社；ＡＢ
Ｉ ４３１Ａ）を用いて、まずリジンをカップリングし
た。次いでリジン残基のα−およびε−アミノ基にさら
にリジンをカップリングした。同じ操作を繰り返して、
７個のリジンとアラニンからなり、８個のアミノ末端を
有する分枝鎖ペプチドを合成した。得られたペプチドの
各アミノ基に、同様にｔＢｏｃ法により順次所定のアミ
ノ酸残基をカップリングさせ、末端にＦＲＰ−２または
ＦＲＰ−３を８個有する分枝鎖ペプチドをそれぞれ合成
した（以下、これらの分枝鎖ペプチドを、便宜的に単に
ＦＲＰ−２およびＦＲＰ−３ということとする）。
が相補的なペプチドＥＰＰＭＴＦＩＳＩＨＴＭＣＨ［Ｆ
ＲＰ−２；配列番号３（配列中、ＸａａはＧｌｕ）］お
よび抗Ｆａｓ抗体エピトープに対して疎水度が相補的な
ペプチドＹＡＭＰＬＳＩＳＷＴＣＥＥＴ［ＦＲＰ−３；
配列番号５（配列中、ＸａａはいずれもＧｌｕ）］を、
それぞれ末端に８個有する分枝鎖ペプチドをTam ら [Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA (1988),上述］の方法に従っ
て合成した。すなわち、ヒドロキシメチルフェニルアセ
トアミド樹脂（ＰＡＭ樹脂）にリンカーを介してアミノ
基をｔＢｏｃで保護したアラニンを結合させ、これに自
動ペプチド合成機（アプライドバイオシステム社；ＡＢ
Ｉ ４３１Ａ）を用いて、まずリジンをカップリングし
た。次いでリジン残基のα−およびε−アミノ基にさら
にリジンをカップリングした。同じ操作を繰り返して、
７個のリジンとアラニンからなり、８個のアミノ末端を
有する分枝鎖ペプチドを合成した。得られたペプチドの
各アミノ基に、同様にｔＢｏｃ法により順次所定のアミ
ノ酸残基をカップリングさせ、末端にＦＲＰ−２または
ＦＲＰ−３を８個有する分枝鎖ペプチドをそれぞれ合成
した（以下、これらの分枝鎖ペプチドを、便宜的に単に
ＦＲＰ−２およびＦＲＰ−３ということとする）。
【００４１】ＰＡＭ樹脂からの開裂およびアミノ酸側鎖
の脱保護をフッ化水素を用いて行い、通常の逆相ＨＰＬ
Ｃにより得られたペプチドを精製した。
の脱保護をフッ化水素を用いて行い、通常の逆相ＨＰＬ
Ｃにより得られたペプチドを精製した。
【００４２】試験例２ ＦＲＰ−２およびＦＲＰ−３に
よるアポトーシスの誘導 実施例２で得られたＦＲＰ−２およびＦＲＰ−３のアポ
トーシス誘導能を、２種のヒト卵巣癌細胞株ＮＯＳ４お
よびＳＫＯＶ−３、並びに２種のヒト乳癌細胞株Ｔ４７
０およびＭＢ２３１を用いて調べた。Ｔ４７０およびＭ
Ｂ２３１は、いずれもＡＴＣＣ（Rockville, MD, USA）
より入手した（それぞれカタログ番号ＨＴＢ−１３３お
よびＨＴＢ−２６）。各細胞株は、試験例１と同様の条
件下で培養した。試験例１と同様に、各細胞株につい
て、５×１０6 個の細胞を種々の濃度のＦＲＰ−２また
はＦＲＰ−３で３７℃、２４時間処理した。ＤＮＡ断片
化（ＤＮＡ含量）は、細胞核をヨウ化プロピジウム（Ｐ
Ｉ）で染色し、ＦＡＣＳ装置（FACSCalibur, Jose., CA
）を用いたフローサイトメトリーにより測定して、％
断片化を決定した。結果を表３に示す。
よるアポトーシスの誘導 実施例２で得られたＦＲＰ−２およびＦＲＰ−３のアポ
トーシス誘導能を、２種のヒト卵巣癌細胞株ＮＯＳ４お
よびＳＫＯＶ−３、並びに２種のヒト乳癌細胞株Ｔ４７
０およびＭＢ２３１を用いて調べた。Ｔ４７０およびＭ
Ｂ２３１は、いずれもＡＴＣＣ（Rockville, MD, USA）
より入手した（それぞれカタログ番号ＨＴＢ−１３３お
よびＨＴＢ−２６）。各細胞株は、試験例１と同様の条
件下で培養した。試験例１と同様に、各細胞株につい
て、５×１０6 個の細胞を種々の濃度のＦＲＰ−２また
はＦＲＰ−３で３７℃、２４時間処理した。ＤＮＡ断片
化（ＤＮＡ含量）は、細胞核をヨウ化プロピジウム（Ｐ
Ｉ）で染色し、ＦＡＣＳ装置（FACSCalibur, Jose., CA
）を用いたフローサイトメトリーにより測定して、％
断片化を決定した。結果を表３に示す。
【００４３】
【表３】
【００４４】ＦＲＰ−２およびＦＲＰ−３は、比較的低
濃度（１０μｇ／ｍｌ以上）で効率よくＮＯＳ４にアポ
トーシスを誘導した。両者ともＳＫＯＶ−３に対しても
アポトーシスを誘導したが、その効果はＮＯＳ４に対す
る効果に比べて低かった。また、ＦＲＰ−２とＦＲＰ−
３は、ＭＢ２３１に対しては同程度の弱いアポトーシス
誘導能を示したが、Ｔ４７０に対してはＦＲＰ−２の方
がＦＲＰ−３よりも高いアポトーシス誘導を引き起こし
た。これらの結果は、複数のペプチドを組み合わせて癌
細胞のペプチドに対する感受性を調べることにより、よ
り治療効果の高いペプチド抗癌剤を予め予測することが
できることを示唆している。
濃度（１０μｇ／ｍｌ以上）で効率よくＮＯＳ４にアポ
トーシスを誘導した。両者ともＳＫＯＶ−３に対しても
アポトーシスを誘導したが、その効果はＮＯＳ４に対す
る効果に比べて低かった。また、ＦＲＰ−２とＦＲＰ−
３は、ＭＢ２３１に対しては同程度の弱いアポトーシス
誘導能を示したが、Ｔ４７０に対してはＦＲＰ−２の方
がＦＲＰ−３よりも高いアポトーシス誘導を引き起こし
た。これらの結果は、複数のペプチドを組み合わせて癌
細胞のペプチドに対する感受性を調べることにより、よ
り治療効果の高いペプチド抗癌剤を予め予測することが
できることを示唆している。
【００４５】
【発明の効果】本発明のペプチドは、Ｆａｓ発現細胞に
選択的にアポトーシスを誘導することができ、また低分
子で抗原性が問題となる可能性が少ないので、ＦａｓＬ
／Ｆａｓ系の異常に起因する疾患の治療剤として有用で
ある。特に、本発明のペプチドのあるものは、アポトー
シス誘導能において抗Ｆａｓ抗体とは異なる細胞特異性
を示すので、抗Ｆａｓ抗体が作用しないタイプの癌など
の治療に極めて有用である。また、本発明のペプチド
は、抗Ｆａｓ抗体の代わりにアポトーシス研究用の試薬
として使用することができる。該ペプチドは慣用のペプ
チド合成技術を用いて容易に合成することができるの
で、従来より安価にアポトーシス研究のツールを提供で
きるという点でも有用である。さらに本発明のペプチド
を複数組み合わせることにより、癌患者の治療により有
効なペプチド製剤を予め予測することが可能であり、診
断薬としても有効である。
選択的にアポトーシスを誘導することができ、また低分
子で抗原性が問題となる可能性が少ないので、ＦａｓＬ
／Ｆａｓ系の異常に起因する疾患の治療剤として有用で
ある。特に、本発明のペプチドのあるものは、アポトー
シス誘導能において抗Ｆａｓ抗体とは異なる細胞特異性
を示すので、抗Ｆａｓ抗体が作用しないタイプの癌など
の治療に極めて有用である。また、本発明のペプチド
は、抗Ｆａｓ抗体の代わりにアポトーシス研究用の試薬
として使用することができる。該ペプチドは慣用のペプ
チド合成技術を用いて容易に合成することができるの
で、従来より安価にアポトーシス研究のツールを提供で
きるという点でも有用である。さらに本発明のペプチド
を複数組み合わせることにより、癌患者の治療により有
効なペプチド製剤を予め予測することが可能であり、診
断薬としても有効である。
【００４６】
【配列表フリーテキスト】配列番号１：ヒトＦａｓリガ
ンドの部分アミノ酸配列（２５６位〜２６５位）と同一
のアミノ酸配列を有する、Ｆａｓ発現細胞にアポトーシ
スを誘導するオリゴペプチド。 配列番号２：Ｆａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導する
オリゴペプチド。 配列番号３：Ｆａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導する
オリゴペプチド。 配列番号４：Ｆａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導する
オリゴペプチド。 配列番号５：Ｆａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導する
オリゴペプチド。 配列番号６：ヒトＦａｓの部分アミノ酸配列（２５位〜
３４位）。 配列番号７：ヒトＦａｓリガンドにより認識されるエピ
トープである、ヒトＦａｓの部分アミノ酸配列（９７位
〜１１０位）。 配列番号８：抗ヒトＦａｓ抗体により認識されるエピト
ープである、ヒトＦａｓの部分アミノ酸配列（１２２位
〜１３５位）。 配列番号９：ヒトＩｇＧから派生したオリゴペプチド。
ンドの部分アミノ酸配列（２５６位〜２６５位）と同一
のアミノ酸配列を有する、Ｆａｓ発現細胞にアポトーシ
スを誘導するオリゴペプチド。 配列番号２：Ｆａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導する
オリゴペプチド。 配列番号３：Ｆａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導する
オリゴペプチド。 配列番号４：Ｆａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導する
オリゴペプチド。 配列番号５：Ｆａｓ発現細胞にアポトーシスを誘導する
オリゴペプチド。 配列番号６：ヒトＦａｓの部分アミノ酸配列（２５位〜
３４位）。 配列番号７：ヒトＦａｓリガンドにより認識されるエピ
トープである、ヒトＦａｓの部分アミノ酸配列（９７位
〜１１０位）。 配列番号８：抗ヒトＦａｓ抗体により認識されるエピト
ープである、ヒトＦａｓの部分アミノ酸配列（１２２位
〜１３５位）。 配列番号９：ヒトＩｇＧから派生したオリゴペプチド。
【００４７】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Kojima, Taiki; Del Carpio, C.A., Hayakawa, Akemi; Tanuma, Sei-ichi <120> Peptide Inducing Apoptosis and Use Thereof <130> A-4132 <160> 9 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligopeptide inducing apoptosis in Fas-expressing cells, which has amono acid sequence identical to partial amino acid sequence of human Fas ligand (from position 256 to position 265). <400> 1 His Leu Tyr Val Asn Val Ser Glu Leu Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Artficial Sequence <220> <223> Oligopeptide inducing apoptosis in Fas-expressing cells. <220> <221> UNSURE <222> (1) <223> Glu, Asn, Asp, Gln, His, Pro, Arg or Lys. <220> <221> UNSURE <222> (2) <223> Pro, Ser, Trp, Tyr, Asn, Asp, Gln, Glu or His. <220> <221> UNSURE <222> (3) <223> Pro, Ser, Trp, Tyr, Asn, Asp, Gln, Glu or His. <220> <221> UNSURE <222> (4) <223> Met, Ala or Cys. <220> <221> UNSURE <222> (6) <223> Phe, Cys, Ile, Leu or Val. <220> <221> UNSURE <222> (7) <223> Ile, Cys, Leu, Phe or Val. <220> <221> UNSURE <222> (8) <223> Ser, Pro, Trp or Tyr. <220> <221> UNSURE <222> (9) <223> Ile, Cys, Leu, Phe or Val. <220> <221> UNSURE <222> (10) <223> His, Asn, Asp, Gln, Glu, Lys, Pro or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (12) <223> Met, Ala or Cys. <220> <221> UNSURE <222> (13) <223> Cys, Ile, Leu, Phe, Val, Ala or Met. <220> <221> UNSURE <222> (14) <223> His, Asn, Asp, Gln, Glu, Lys, Pro or Arg. <400> 2 Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 3 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligopeptide inducing apoptosis in Fas-expressing cells. <220> <221> UNSURE <222> (1) <223> Glu, Asn, Asp or Gln. <400> 3 Xaa Pro Pro Met Thr Phe Ile Ser Ile His Thr Met Cys His 1 5 10 <210> 4 <211> 14 <212> PRT <213> Artficial Sequence <220> <223> Oligopeptide inducing apoptosis in Fas-expressing cells. <220> <221> UNSURE <222> (1) <223> Tyr, Pro, Ser or Trp. <220> <221> UNSURE <222> (2) <223> Ala, Cys, Met or Gly. <220> <221> UNSURE <222> (3) <223> Met, Ala or Cys. <220> <221> UNSURE <222> (4) <223> Pro, Ser, Trp, Tyr, Asn, Asp, Gln, Glu or His. <220> <221> UNSURE <222> (5) <223> Leu, Cys, Ile, Phe or Val. <220> <221> UNSURE <222> (6) <223> Ser, Pro, Trp or Tyr. <220> <221> UNSURE <222> (7) <223> Ile, Cys, Leu, Phe or Val. <220> <221> UNSURE <222> (8) <223> Ser, Pro, Trp or Tyr. <220> <221> UNSURE <222> (9) <223> Trp, Pro, Ser, Tyr. <220> <221> UNSURE <222> (11) <223> Cys, Ile, Leu, Phe, Val, Ala or Met. <220> <221> UNSURE <222> (12) <223> Glu, Asn, Asp, Gln, His, Pro, Arg or Lys. <220> <221> UNSURE <222> (13) <223> Glu, Asn, Asp, Gln, His, Pro, Arg or Lys. <400> 4 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Thr 1 5 10 <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligopeptide inducing apoptosis in Fas-expressing cells. <220> <221> UNSURE <222> (12) <223> Glu, Asn, Asp or Gln. <220> <221> UNSURE <222> (13) <223> Glu, Asn, Asp or Gln. <400> 5 Tyr Ala Met Pro Leu Ser Ile Ser Trp Thr Cys Xaa Xaa Thr 1 5 10 <210> 6 <211> 1０ <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Partial amino acid sequence of human Fas (from position 25 to position 34). <400> 6 Ala Gln Val Thr Asp Ile Asn Ser Lys Gly 1 5 10 <210> 7 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Partial amino acid sequence of human Fas (from position 97 to position 110), which is epitope recognized by human Fas ligand. <400> 7 Phe Ser Ser Lys Cys Arg Arg Cys Arg Leu Cys Asp Glu Gly 1 5 10 <210> 8 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Partial amino acid sequence of human Fas (from position 122 to position 135), which is epitope recognized by anti-human Fas anitibody. <400> 8 Thr Gln Asn Thr Lys Cys Arg Cys Lys Pro Asn Phe Phe Cys 1 5 10 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligopeptide derived from human IgG. <400> 9 Val Gln Val His Asn Ala Thr Lys Pro Arg 1 5 10
【図１】ＮＯＳ４（左パネル）およびＳＫＯＶ−３（右
パネル）において、抗Ｆａｓ抗体およびＦＲＰ−１がＤ
ＮＡ断片化を生じさせる活性を示す図である。縦軸は細
胞数を、横軸は蛍光強度を示す。数値は％断片化を示
す。Ａ：未処理の細胞；Ｂ：抗Ｆａｓ抗体ＣＨ−１１
（１μｇ／ｍｌ）で処理した細胞；Ｃ：ＦＲＰ−１（２
００μｇ／ｍｌ）で処理した細胞；Ｄ：コントロールペ
プチド（２００μｇ／ｍｌ）で処理した細胞
パネル）において、抗Ｆａｓ抗体およびＦＲＰ−１がＤ
ＮＡ断片化を生じさせる活性を示す図である。縦軸は細
胞数を、横軸は蛍光強度を示す。数値は％断片化を示
す。Ａ：未処理の細胞；Ｂ：抗Ｆａｓ抗体ＣＨ−１１
（１μｇ／ｍｌ）で処理した細胞；Ｃ：ＦＲＰ−１（２
００μｇ／ｍｌ）で処理した細胞；Ｄ：コントロールペ
プチド（２００μｇ／ｍｌ）で処理した細胞
【図２】ＳＫＯＶ−３細胞におけるＦＲＰ−１によるＤ
ＮＡ断片化の用量依存性を示す図である。白抜きのボッ
クスはコントロールペプチドで処理した細胞、斜線入り
のボックスはＦＲＰ−１で処理した細胞である。
ＮＡ断片化の用量依存性を示す図である。白抜きのボッ
クスはコントロールペプチドで処理した細胞、斜線入り
のボックスはＦＲＰ−１で処理した細胞である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 500011447 早川 あけみ 愛知県春日井市石尾台１−１ タウン石尾 台16−２ (71)出願人 594072683 田沼 靖一 東京都八王子市別所２−21−８−707 (72)発明者 小島 泰樹 愛知県渥美郡田原町田原十七谷111−１ (72)発明者 カルロス アドリエル デル カルピオ 愛知県豊橋市浜道町管石32−２−202 (72)発明者 早川 あけみ 愛知県春日井市石尾台１−１ タウン石尾 台16−２ (72)発明者 田沼 靖一 東京都八王子市別所２−21−８−707 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA07 BA01 BA08 BA17 BA18 CA59 DC50 ZB072 ZB262 ZB332 4H045 AA10 AA30 BA15 BA16 EA28 EA50 FA34
Claims (12)
- 【請求項１】 配列表配列番号１に示されるアミノ酸配
列から実質的になり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞
に選択的にアポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 - 【請求項２】 配列表配列番号２に示されるアミノ酸配
列からなり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的
にアポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 - 【請求項３】 配列表配列番号３に示されるアミノ酸配
列から実質的になり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞
に選択的にアポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 - 【請求項４】 配列表配列番号４に示されるアミノ酸配
列からなり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞に選択的
にアポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 - 【請求項５】 配列表配列番号５に示されるアミノ酸配
列から実質的になり、少なくとも１種のＦａｓ発現細胞
に選択的にアポトーシスを誘導し得るオリゴペプチド。 - 【請求項６】 ２〜２０個の請求項１〜５のいずれかに
記載のオリゴペプチドを末端に有する分枝鎖ペプチド。 - 【請求項７】 請求項１〜６のいずれかに記載のペプチ
ドを、該ペプチドに感受性のＦａｓ発現細胞に接触させ
ることを含む、該細胞にアポトーシスを誘導する方法。 - 【請求項８】 該細胞が癌細胞である請求項７記載の方
法。 - 【請求項９】 請求項１〜６のいずれかに記載のペプチ
ドを含むアポトーシス研究用試薬。 - 【請求項１０】 請求項１〜６のいずれかに記載のペプ
チドを有効成分とする、Ｆａｓリガンド／Ｆａｓ系の異
常に起因する疾患用治療剤。 - 【請求項１１】 請求項１〜６のいずれかに記載のペプ
チドを有効成分とする抗癌剤。 - 【請求項１２】 請求項１〜６に記載のペプチドからな
る群より選択される２種以上のペプチドを含む、癌患者
に対して投与すべき抗癌剤の選択のための診断キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP37442399A JP2001187799A (ja) | 1999-12-28 | 1999-12-28 | アポトーシスを誘導するペプチドおよびその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP37442399A JP2001187799A (ja) | 1999-12-28 | 1999-12-28 | アポトーシスを誘導するペプチドおよびその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001187799A true JP2001187799A (ja) | 2001-07-10 |
Family
ID=18503827
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP37442399A Pending JP2001187799A (ja) | 1999-12-28 | 1999-12-28 | アポトーシスを誘導するペプチドおよびその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001187799A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7160462B2 (ja) | 2015-04-30 | 2022-10-25 | 東レ株式会社 | 免疫誘導剤 |
-
1999
- 1999-12-28 JP JP37442399A patent/JP2001187799A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7160462B2 (ja) | 2015-04-30 | 2022-10-25 | 東レ株式会社 | 免疫誘導剤 |
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|
| A072 | Dismissal of procedure |
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