KR20170100189A - 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 더덕 추출물은 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성이 우수하면서 천연물 유래로 독성 및 부작용도 없어 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있으며, 체내에서도 안정한 효과가 있다.

Description

더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진용 조성물{Composition for anti-oxidant or anti-cancer or anti-obesity or immune-enhancing containing Codonopsis lanceolata extract}

본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진용 조성물에 관한 것이다.

더덕은 쌍떡잎식물, 합판화군 초롱꽃과의 여러해살이 덩굴식물로서 학명은 (Codonopsis lanceolata )이며, 분포 지역은 한국, 일본, 중국 및 러시아 극동지방 등 습기가 있는 초지, 숲, 또는 계곡에 자생하는 식물이다. 주로 뿌리를 식용하고 사삼 또는 백삼이라고도 부른다. 더덕의 뿌리는 도라지처럼 굵으며, 식물을 자르면 흰색의 액즙이 나온다. 잎은 어긋나고 짧은 가지 끝에서는 4개의 잎이 서로 접근하여 마주 나므로 모여 달린 것 같으며 길이 3-10cm, 너비 1.5-4cm로 긴 타원형이다. 잎 가장자리는 밋밋하고 앞면은 녹색, 뒷면은 흰색이다. 8-9월에 종모양의 자주 꽃이 짧은 가지 끝에서 밑을 향해 달린다. 꽃받침은 끝이 뾰족하게 5개로 갈라지며 녹색이고, 길이 2-5cm, 나비 6-10cm이다. 화관은 길이 2.7~3.5cm이고 끝이 5개로 갈라져서 뒤로 말리며 겉은 연한 녹색이고 안쪽에는 자주색의 반점이 있다. 열매는 9월에 익는다. 봄에 어린 잎을, 가을에 뿌리를 식용한다. 생약의 사삼(沙蔘)은 뿌리를 말린 것을 칭하는 말이다.

비만은 최근 생활 수준의 향상으로 위생환경이 개선되고 식생활이 서구화하여 평균 수명이 연장되면서, 질병의 양상 또한 선진국형으로 급격히 변화되고 있는 양상 중에 가장 대표적인 질환이다. 따라서, 성인병이 오늘날 가장 큰 의학적 과제로 등장하게 되었으며 이러한 성인병의 주요한 원인이 되고 있는 비만도 급격하게 증가되고 있는 상황이다. 비만은 소모하는 열량에 비해 과다한 열량을 섭취함으로써 여분의 열량이 체내에 지방의 형태로 축적되어지는 현상을 말한다. 비만은 유전적 영향, 서구화되는 식생활에 의한 환경적인 영향, 스트레스에 의한 심리적인 영향 등 다양한 원인에 의해 유발되어지는 것으로 생각되고 있으나 아직 그 정확한 원인이나 기작에 관해서는 명확히 정립된 바가 없는 상황이다. 그러나 비만은, 비만 그 자체가 갖는 문제점뿐만 아니라, 심혈관계 질환이나 당뇨와 같은 질병의 원인으로도 작용할 수 있기 때문에(Manson et al., New England J. Med., 333, pp677-685, 1995; Kopleman P.G., Nature, 404 pp635-643, 2000; Must et al., JAMA, 282, pp1523-1529, 1999) 전세계적으로 비만치료에 많은 관심이 모아지고 있는 실정이다.

또한, 천연 추출물에 대한 인체 면역계 조절작용에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있는데 이는 면역계의 이상 현상이 건강을 깨뜨리고 다양한 질환을 일으키기 때문이다. 따라서 부작용을 최소화시킬 수 있는 안전한 천연물에 대한 면역조절제의 개발은 식품, 화장품 및 의약품 개발에 매우 중요한 소재가 될 수 있다. 실례로 상백피(뽕나무 껍질), 표고버섯 등이 면역증강제로, 별불가사리, 영지·상황버섯이 항암보조제로 연구가 이루어지고 있고, 감초, 감초성분 글리시진(glycyrrhizin), 해삼, 웅담 성분 UDCA 등이 세포분화물질로 연구가 진행되고 있다. 이러한 천연물 소재를 이용한 면역조절제의 개발은 부작용 없이 암이나 만성적인 염증 질환 등을 안전하게 치료할 수 있기 때문에 많은 사람들의 관심과 흥미를 불러일으키고 있다.

이러한 문제점을 해결하기 위하여, 부작용이 문제되지 아니하고 안전성이 확보되는 천연물질 유래 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 효능을 가지는 조성물의 개발이 시급히 요구되고 있다.

한국공개특허 제10-2010-0071397호

이에 본 발명자들은 더덕 추출물이 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 가짐을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 더덕은 한국산으로 화순, 무주, 제천, 횡성 또는 울진에서 재배한 3년근인 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 물 및 헥산으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매로 추출된 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출물은 DPPH, 아질산염 또는 ABTS 양이온 소거 활성을 증가시키는 것일 수 있다.

본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 더덕은 한국산으로 화순, 무주, 제천, 횡성 또는 울진에서 재배한 3년근인 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.

본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 조성물 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 더덕 추출물은 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성이 우수하여 약학적 조성물로 유용하게 사용할 수 있다. 또한, 세포독성이 일어나지 않으며, 약물에 대한 독성 및 부작용도 없어 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있어 체내에서도 안정한 효과가 있다.

도 1은 본 발명에서 사용한 더덕의 종류이다.
도 2는 더덕 뿌리 추출물 및 이의 분획을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명에 따른 산지별 더덕 추출물 분획물의 SOD 효소 활성 검정 결과 그래프이다.
n-H: n-hexane
MC: Methylene chloride
EA: Ethyl acetate
BA: Butyl alcohol
DW: distilled water
도 4는 본 발명에 따른 산지별 에탄올 함량에 따른 더덕 추출물의 SOD 효소 활성 검정 결과 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 산지별 더덕 추출물 분획물의 CAT 활성 검정 결과 그래프이다.
n-H: n-hexane
MC: Methylene chloride
EA: Ethyl acetate
BA: Butyl alcohol
DW: distilled water
도 6은 본 발명에 따른 산지별 에탄올 함량에 따른 더덕 추출물의 CAT 활성 검정 결과 그래프이다.
도 7은 본 발명에 따른 산지별 더덕 추출물 분획물의 APX 활성 검정 결과 그래프이다.
n-H: n-hexane
MC: Methylene chloride
EA: Ethyl acetate
BA: Butyl alcohol
DW: distilled water
도 8은 본 발명에 따른 산지별 에탄올 함량에 따른 더덕 추출물의 APX 활성 검정 결과 그래프이다.
도 9는 본 발명에 따른 산지별 더덕 추출물 분획물의 POD 활성 검정 결과 그래프이다.
n-H: n-hexane
MC: Methylene chloride
EA: Ethyl acetate
BA: Butyl alcohol
DW: distilled water
도 10은 본 발명에 따른 산지별 에탄올 함량에 따른 더덕 추출물의 POD 활성 검정 결과 그래프이다.
도 11은 3T3-L1 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 화순 더덕 추출물의 세포 생존율 측정 결과이다.
도 12는 3T3-L1 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 울진 더덕 추출물의 세포 생존율 측정 결과이다.
도 13은 3T3-L1 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 횡성 더덕 추출물의 세포 생존율 측정 결과이다.
도 14은 3T3-L1 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 제주 더덕 추출물의 세포 생존율 측정 결과이다.
도 15는 3T3-L1 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 제천 더덕 추출물의 세포 생존율 측정 결과이다.
도 16은 3T3-L1 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 무주 더덕 추출물의 세포 생존율 측정 결과이다.
도 17은 인간 T 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 화순 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 18은 인간 T 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 울진 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 19는 인간 T 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 횡성 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 20은 인간 T 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 제주 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 21은 인간 T 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 제천 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 22는 인간 T 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 무주 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 23은 인간 B 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 화순 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 24는 인간 B 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 울진 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 25는 인간 B 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 횡성 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 26은 인간 B 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 제주 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 27은 인간 B 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 제천 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.
도 28은 인간 B 세포를 대상으로 한 에탄올 함량에 따른 용매 이용 무주 더덕 추출물의 세포 성장 측정 결과이다.

본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진용 약학적 조성물을 제공함을 그 특징으로 한다.

본 발명에 따른 더덕은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 ‘추출물’은 적절한 용매를 이용하여 더덕으로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 더덕의 열수 추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함할 수 있다.

더덕으로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 당업계에서 허용되는 용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있다. 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 본 발명의 더덕 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 더덕 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다.

따라서 본 발명에 있어서 더덕 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명의 약학적 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.

상기 약학적 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

상기 약학적 조성물의 제제 형태는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 액제, 에어로졸, 엑스제, 주사제, 경피 투여제, 좌제 등의 형태일 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액제로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 본 발명의 더덕 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 μg/ml 내지 500 μg/ml의 농도로 포함될 수 있다.

한편, 본 발명의 ‘더덕’은 쌍떡잎식물, 합판화군 초롱꽃과의 여러해살이 덩굴식물로서 학명은 (Codonopsis lanceolata )이며, 분포 지역은 한국, 일본, 중국 및 러시아 극동지방 등 습기가 있는 초지, 숲, 또는 계곡에 자생하는 식물이다. 주로 뿌리를 식용하고 사삼 또는 백삼이라고도 부른다. 더덕의 뿌리는 도라지처럼 굵으며, 식물을 자르면 흰색의 액즙이 나온다. 잎은 어긋나고 짧은 가지 끝에서는 4개의 잎이 서로 접근하여 마주 나므로 모여 달린 것 같으며 길이 3-10cm, 너비 1.5-4cm로 긴 타원형이다. 잎 가장자리는 밋밋하고 앞면은 녹색, 뒷면은 흰색이다. 8-9월에 종모양의 자주 꽃이 짧은 가지 끝에서 밑을 향해 달린다. 꽃받침은 끝이 뾰족하게 5개로 갈라지며 녹색이고, 길이 2-5cm, 나비 6-10cm이다. 화관은 길이 2.7~3.5cm이고 끝이 5개로 갈라져서 뒤로 말리며 겉은 연한 녹색이고 안쪽에는 자주색의 반점이 있다. 열매는 9월에 익는다. 봄에 어린 잎을, 가을에 뿌리를 식용한다.

본 발명자들은 상기 더덕 추출물이 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성이 있음을 실험을 통해 규명하였다.

보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에 의하면, 더덕 추출물의 항산화 활성을 검증하고자 하였고, 더덕 추출물을 시료로 하여 이들의 DPPH, ABTS, 아질산염 소거능 효과를 조사하였다.

본 발명자들은 또 다른 일실시예를 통해 더덕 추출물의 항암 효과를 측정하기 위해 MTT assay를 실시하였고, 이러한 효과는 인체암세포주를 이용하여 검증한 결과, 본 발명의 더덕 추출물이 항암 효과가 있음을 확인하였다.

또한 본 발명자들은 다른 일실시예를 통해 더덕 추출물의 면역기능 증강효과를 검증하고자 하였고, 이러한 효과는 인간 면역세포인 T cell과 B cell을 이용하여 검증한 결과, 본 발명의 더덕 추출물이 세포의 생육촉진을 나타냄을 확인하였다.

나아가 본 발명자들은 3T3-L1 cell을 이용하여 더덕 추출물의 항비만 예방 효과를 평가한 결과, 더덕 추출물의 처리 농도에 따라 세포 생존율 정도가 농도 의존적으로 감소하였으며, 제주 더덕과 에탄올 70% 추출 농도에서 높은 효능을 보였다.

그러므로 본 발명자들은 하기 실시예에서 입증된 실험 결과를 토대로 본 발명의 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물이 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진용 조성물로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.

또한 본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 효능이 있는 건강기능식품을 제공함을 그 특징으로 한다.

본 발명에서 ‘면역증진’또는‘면역증강’이라 함은 T cell 과 B cell의 세포 생육촉진 작용을 하는 것으로, 상술된 면역세포 외의 면역세포를 포함할 수 있다.

본 발명에서 ‘항비만’이라 함은 세포의 α-amylase, α-glucose, pancreatic lipase 저해활성 및 지방세포 분화 억제능이 있는 것으로, 항비만을 위한 조성물의 농도는 10~1000㎍/ml 일 수 있다.

본 발명에서 '비만'이란 체내의 지방 조직량이 과잉으로 증가된 상태를 의미한다. 비만은 지방세포내 지방의 합성과 분해의 불균형으로 나타나는데 필요 이상의 지방 축적으로 발생하는 비만은, 만성적 퇴행성 질환 발생의 위험성을 증가시키며, 관상동맥 질환, 고혈압, 뇌졸중, 고지혈증 및 당뇨병의 위험성을 증가시킬 수 있다.

본 발명에서 '예방'은 본 발명의 조성물의 투여로 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 '개선'은 본 발명의 조성물의 투여로 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 '치료'는 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본원에서 사용된 상기 치료란 용어는 '치료하는'이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다.

본 발명에서 사용되는 용어 '투여'는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명의 조성물은 식품 조성물일 수 있는데, 이러한 식품 조성물은 유효성분인 더덕 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 상기 약제학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.

또한 상기 식품 조성물은 유효성분인 더덕 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명의 유효성분인 더덕 추출물은 천연물질로서 독성 및 부작용은 거의 없으므로 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증강을 위한 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품은 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증강을 위한 목적으로 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.

본 발명에서 건강기능식품이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.

본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.

상기 식품 첨가물 공전에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다.

예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 더덕 추출물을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다.

캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분인 더덕 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 더덕 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.

환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 더덕 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다.

과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 더덕 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.

상기 건강기능식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등일 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 추가적으로 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<준비예 1> 더덕의 준비

본 발명에서 사용한 재료는 6개 지역(제주도, 전남 화순, 전북 무주, 충북 제천, 강원 횡성, 경북 울진)에서 재배한 3년근 더덕을 농가로부터 구입하여 사용하였다(도 1 참조). 상기의 재료는 더덕을 이용한 혈압강하 효능을 가지는 건강기능식품을 개발하기 위한 최적 추출조건 확립을 위한 실험에 사용되었다.

<실시예 1> 열수추출

열수추출의 조건에 따른 최적 추출 조건을 도출하기 위해 2가지 조건을 이용하여 더덕 열수추출물을 수득하였다. 먼저 동결 건조한 더덕 시료 50g에 10배의 증류수를 가하여 20분씩 100℃에서 3회 추출하여 열수추출물을 수득하였고, 또다른 조건으로 동결 건조한 더덕 시료 50g에 10배의 증류수를 가하여 3시간씩 70℃에서 3회 반복 추출하여 열수추출물을 수득하였다. 상기에서 수득한 각각의 열수추출물은 실온에서 냉각·여과한 후 추출액을 회전 감압농축기로 농축하였다. 농축한 추출물을 동결건조한 후 무게를 측정하는 방법으로 수율을 조사한 결과, 모든 지역의 더덕에서 100℃ 추출이 70℃에서 추출한 열수추출물보다 높은 회수율을 나타냈으며, 이의 항산화능 또한 100℃ 열수추출물에서 높은 효능을 나타냈다(표 1 내지 3 참조).

한편, 동결건조 더덕 시료는 각 지역별로 수집한 더덕의 원료 균일성을 위해 부패하거나 이물질이 붙어있는 불량한 것은 선별하여 제거하고, 흐르는 물에 브러쉬를 이용하여 세척하고 적정 크기로 절단하여 동결건조기를 이용 건조한 다음, 분말화하여 실험시료로 사용하였다.

Yield of extract sample according to hot water extraction

Extraction temperature	Yield (g)
	Culture region
	Hwasun	Uljin	Hoengseong	Jeju	Jecheon	Muju
100℃	31.25±0.51	30.62±0.71	31.81±0.63	32.39±0.41	30.87±0.62	32.08±0.37
70℃	26.50±0.48	27.17±0.25	26.85±0.82	27.92±0.38	25.79±0.27	24.86±0.45
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

DPPH radical scavenging activities according to hot water extraction

Culture region	Extraction temperature	DPPH radical scavenging activity, % of control
		Concentration (mg/mL)
		1	2.5	5	10	20
Hwasun	100℃	8.56±0.28	11.03±0.67	16.38±0.58	21.35±0.77	48.55±0.49
	70℃	9.15±1.08	12.37±0.58	15.92±0.51	22.27±1.09	45.65±0.57
Uljin	100℃	9.52±0.67	12.18±0.39	15.22±0.83	19.28±1.21	45.28±1.15
	70℃	8.26±0.37	12.67±0.45	16.35±0.92	17.56±0.78	42.51±0.76
Hoengseong	100℃	8.92±0.25	10.28±0.21	15.05±0.68	20.16±0.65	40.38±1.31
	70℃	9.29±0.85	13.08±0.78	16.72±0.62	21.23±1.37	41.61±1.03
Jeju	100℃	10.29±0.89	13.52±0.37	20.88±0.56	23.62±0.94	47.95±0.86
	70℃	8.67±0.63	13.71±0.57	19.25±0.83	24.07±0.75	46.19±0.79
Jecheon	100℃	9.38±0.52	10.92±0.73	14.69±0.48	18.86±0.59	46.29±0.83
	70℃	10.32±0.62	11.62±0.48	13.97±0.69	17.57±0.72	45.27±0.61
Muju	100℃	8.65±0.85	10.87±0.62	15.48±1.18	20.86±0.71	45.62±0.86
	70℃	9.07±0.39	11.15±0.27	15.86±0.82	18.92±0.73	44.85±1.25
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

ABTS radical scavenging activities according to hot water extraction

Culture region	Extraction temperature	ABTS radical scavenging activity, % of control
		Concentration (mg/mL)
		0.5	1	2.5	5	10	20
Hwasun	100℃	6.58±0.67	9.07±0.92	17.62±0.86	27.35±0.78	39.53±1.21	68.72±1.36
	70℃	6.23±0.76	8.75±0.59	17.92±0.48	25.83±0.96	39.08±0.82	65.28±1.83
Uljin	100℃	7.53±0.73	9.81±0.65	19.62±0.79	26.28±0.85	41.25±0.57	69.65±0.83
	70℃	8.06±0.69	10.12±0.85	18.85±0.64	28.51±0.93	37.85±1.45	68.31±1.31
Hoengseong	100℃	7.82±0.41	10.31±0.77	18.63±0.84	26.77±1.25	38.52±0.87	70.25±0.81
	70℃	8.16±0.66	11.08±0.58	18.33±0.93	27.09±0.57	39.57±0.92	67.82±0.87
Jeju	100℃	8.81±0.63	11.92±0.83	20.35±0.86	27.67±0.68	41.39±1.91	72.16±1.87
	70℃	8.63±0.81	10.75±0.58	20.86±1.25	29.28±0.84	38.25±1.45	72.08±1.37
Jecheon	100℃	7.62±0.73	11.06±0.82	17.82±0.57	26.77±1.08	40.21±1.36	68.37±1.68
	70℃	8.32±0.85	10.83±0.68	16.59±0.61	28.31±0.95	39.25±1.28	69.13±1.23
Muju	100℃	8.29±0.72	11.27±0.55	18.92±0.78	26.85±1.25	39.57±1.36	67.83±0.98
	70℃	8.12±0.69	9.78±0.85	16.38±0.63	29.18±0.52	37.62±1.75	68.36±1.36
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

< 실시예 2> 상온추출

상온추출은 동결 건조한 더덕 분말 50g을 에탄올(EtOH) 30%, 50%, 70%, 100% 비율로 3회 반복 추출한 다음, 추출액을 감압농축기로 완전히 농축한 후에 무게를 측정하는 방법으로 에탄올 비율별 회수율을 조사하였다.

그 결과, 6개 지역 재배 더덕 모두에서 에탄올(EtOH) 50% 추출물에서 에탄올 30%와 70% 추출물에서보다 상대적으로 높은 회수율을 보였으며, 에탄올 100% 추출물에서는 낮은 수율을 보였음을 확인하였다.

Yield of extract sample according to the percentage EtOH solvent

solvent	Yield (g)
	Culture region
	Hwasun	Uljin	Hoengseong	Jeju	Jecheon	Muju
EtoH 30%	16.12±0.44	13.08±0.65	16.55±0.44	7.17±0.05	11.04±0.41	17.64±0.60
EtoH 50%	19.50±0.55	14.46±0.47	18.22±0.54	10.53±0.18	13.65±0.85	16.62±0.55
EtoH 70%	16.31±0.09	12.67±0.09	16.64±0.36	7.13±0.17	12.34±0.36	14.24±0.74
EtoH 100%	6.36±0.48	5.11±0.14	4.73±0.25	2.70±0.74	14.24±0.33	4.89±0.07
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

< 실시예 3> 환류냉각추출

환류냉각추출은 수직 환류냉각기가 부착된 플라스크에 동결건조 더덕 시료 50g에 10배의 증류수를 가한 후 100℃에서 12시간 동안 3회 반복 추출하였으며, 에탄올 추출도 수직 환류냉각기가 부착된 플라스크에 5배의 70% 주정 알코올을 가한 다음 70℃에서 3시간 동안 3회 반복 추출하였다. 추출액을 실온에서 냉각·여과한 후 회전 감압농축기로 농축한 추출물을 동결건조한 다음 무게를 측정하는 방법으로 수율을 조사하였다.

그 결과, 물 추출 환류냉각추출이 에탄올 환류냉각추출보다 높은 회수율을 보였으며, 항산화능은 모든 지역의 재배더덕에서 에탄올 추출에서 높은 효능을 나타냄을 확인했다.

Yield of extract sample according to reflux extraction

Reflux extraction	Yield (g)
	Culture region
	Hwasun	Uljin	Hoengseong	Jeju	Jecheon	Muju
D.W.	31.25±0.51	30.62±0.71	31.81±0.63	32.39±0.41	30.87±0.62	32.08±0.37
70% EtOH	26.50±0.48	27.17±0.25	26.85±0.82	27.92±0.38	25.79±0.27	24.86±0.45
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

DPPH radical scavenging activities according to reflux extraction

Culture region	Reflux extraction	DPPH radical scavenging activity, % of control
		Concentration (mg/mL)
		1	2.5	5	10	20
Hwasun	D.W.	9.62±0.36	15.21±0.87	19.63±0.65	25.38±0.92	53.26±0.88
	70% EtOH	10.58±0.53	17.21±0.46	19.86±0.93	27.15±1.16	56.28±0.97
Uljin	D.W.	8.21±0.51	13.68±0.78	18.57±0.92	23.62±1.03	47.39±0.82
	70% EtOH	10.37±0.85	16.53±0.71	20.29±0.86	26.32±0.63	53.98±0.73
Hoengseong	D.W.	10.21±0.47	14.83±0.66	20.08±0.25	23.89±0.39	51.67±1.56
	70% EtOH	9.83±0.78	16.52±0.93	21.05±0.72	25.61±1.31	54.29±1.75
Jeju	D.W.	9.11±0.33	12.52±0.65	16.48±0.68	27.92±1.58	53.96±0.87
	70% EtOH	10.75±0.65	19.17±0.86	22.18±0.71	27.06±0.76	55.86±1.47
Jecheon	D.W.	8.52±0.28	12.92±0.92	18.53±0.58	24.16±0.69	49.69±0.86
	70% EtOH	10.18±0.73	13.28±0.29	17.83±0.63	23.73±1.31	52.32±1.27
Muju	D.W.	9.26±0.83	17.35±0.65	18.92±0.62	23.75±0.93	48.62±0.88
	70% EtOH	9.03±0.38	16.84±0.32	21.06±0.58	25.66±0.86	49.78±0.93
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

ABTS radical scavenging activities according to reflux extraction

Culture region	Reflux extraction	ABTS radical scavenging activity, % of control
		Concentration (mg/mL)
		0.5	1	2.5	5	10	20
Hwasun	D.W.	7.89±0.53	9.63±0.78	18.21±0.53	28.09±0.68	41.36±1.17	69.85±0.97
	70% EtOH	10.07±0.81	12.28±0.63	23.08±0.63	31.27±0.87	42.31±0.91	72.99±0.88
Uljin	D.W.	8.25±0.75	9.69±0.69	19.68±0.82	26.76±0.69	42.21±0.59	69.38±0.79
	70% EtOH	9.27±0.52	12.18±0.81	24.17±0.51	28.62±0.78	42.86±1.18	73.21±1.12
Hoengseong	D.W.	8.63±0.36	11.92±0.72	20.36±0.93	27.81±0.81	43.52±0.89	67.82±1.23
	70% EtOH	10.12±0.28	12.98±0.55	24.57±0.78	29.38±0.59	44.19±0.78	70.27±0.93
Jeju	D.W.	9.21±0.83	11.39±0.87	22.67±0.59	29.38±0.98	41.27±0.75	70.18±1.31
	70% EtOH	8.93±0.48	12.81±0.71	25.18±0.63	30.21±0.89	44.36±0.86	73.84±1.08
Jecheon	D.W.	7.82±0.59	12.05±0.85	21.17±0.52	26.93±1.02	40.81±1.67	68.92±1.25
	70% EtOH	9.06±0.76	12.88±0.65	23.62±0.68	27.85±0.91	45.06±1.18	68.73±0.75
Muju	D.W.	9.15±0.72	10.87±0.59	19.63±0.71	27.87±0.82	39.56±0.93	67.22±0.82
	70% EtOH	10.25±0.53	11.68±0.81	20.92±0.85	29.65±0.52	43.08±1.22	69.76±0.79
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

< 실시예 4> 효소분해 추출

생더덕 1kg에 가온 정제수를 30%(v/w) 첨가 후 효소 cellulase : pectinase : amyloglucosidase를 3:2:1, 3:2:2, 3:1:2의 비율 (w:w:w)로 혼합하여 이러한 비율별 혼합효소를 각각 생더덕량의 2% (w/w)를 첨가하여 45℃, 10시간 동안 추출하였다. 각 효소추출액을 실온에서 냉각·여과한 후 회전 감압농축기로 농축하여 30 brix 농축물 수득량을 기준으로 수율을 조사하였다. 그 결과, 3:2:2 효소 비율에서 상대적으로 다소 높은 수득율을 나타냈지만, 최적의 비율을 보다 면밀히 조사하기 위해서는 효소 혼합비율을 보다 다양하게 처리하여 보완실험을 할 필요가 있다고 사료된다. 항산화능 또한 3:2:2 비율에서 대체적으로 높은 효능을 나타냈다.

Effect of mixing ratio of macerating enzyme on yield of extracted by macerating enzymatic extraction

Mixing ratio (W/W/W)	Yield (g/30brix)
	Culture region
	Hwasun	Uljin	Hoengseong	Jeju	Jecheon	Muju
Control	280.75±8.57	302.58±7.51	305.58±10.21	315.62±6.28	306.25±6.21	311.27±7.53
3:2:1	316.32±8.57	328.25±7.51	326.38±10.21	335.63±6.28	323.52±6.21	335.27±7.53
3:2:2	319.83±8.57	331.26±7.51	329.67±10.21	337.26±6.28	327.86±6.21	336.75±7.53
3:1:2	317.76±8.57	330.29±7.51	329.83±10.21	335.29±6.28	326.55±6.21	335.87±7.53
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments. The control was value by hot-water(100℃) extraction method.

DPPH radical scavenging activities according to mixing ratio by macerating enzymatic extraction

Culture region	Mixing ratio (W/W/W)	DPPH radical scavenging activity, % of control
		Concentration (mg/mL)
		1	2.5	5	10	20
Hwasun	Control	8.25±0.35	10.38±0.27	18.52±0.62	23.01±0.58	39.53±0.86
	3:2:1	9.38±0.92	12.25±1.02	19.78±0.76	25.36±0.92	42.27±0.81
	3:2:2	9.25±0.77	13.18±0.92	22.26±0.83	26.93±1.13	43.55±0.99
	3:1:2	10.08±1.03	13.22±0.75	20.38±0.79	25.65±0.81	43.26±0.87
Uljin	Control	9.32±0.63	10.53±0.52	19.77±0.93	22.51±0.85	40.29±0.81
	3:2:1	10.23±0.29	12.38±0.87	21.08±0.56	24.58±0.27	43.31±0.92
	3:2:2	9.86±0.39	13.72±0.79	23.62±0.53	27.06±0.67	45.28±0.87
	3:1:2	10.03±0.86	14.16±0.92	23.08±0.75	24.29±0.93	44.32±0.59
Hoengseong	Control	9.29±0.67	11.85±0.85	19.27±0.63	21.69±0.91	39.87±0.75
	3:2:1	10.93±0.55	13.21±0.46	20.18±1.25	24.63±0.78	43.57±0.92
	3:2:2	9.85±0.53	15.29±0.77	24.06±0.86	25.86±0.63	44.29±0.76
	3:1:2	10.12±0.33	13.83±0.92	21.68±0.63	25.05±0.52	43.93±0.82
Jeju	Control	10.23±0.76	13.51±0.55	18.65±0.73	25.02±0.92	40.35±0.85
	3:2:1	10.03±0.86	15.69±0.78	23.27±0.67	25.13±1.18	42.95±1.34
	3:2:2	9.78±0.53	16.05±0.81	25.29±0.75	26.87±0.62	46.16±0.58
	3:1:2	10.15±0.29	14.87±0.52	23.86±0.48	25.32±0.73	45.36±0.69
Jecheon	Control	8.26±0.81	10.68±0.76	17.28±0.59	22.06±0.52	40.24±0.75
	3:2:1	9.52±0.63	14.29±0.78	22.09±0.95	25.27±0.65	41.38±0.72
	3:2:2	9.78±0.82	13.85±0.49	21.52±0.78	25.62±0.56	43.27±0.76
	3:1:2	10.18±0.35	12.399±0.62	22.86±0.69	23.27±0.85	43.07±0.82
Muju	Control	9.25±0.26	10.79±0.91	16.85±0.68	22.28±0.71	39.82±0.65
	3:2:1	8.79±0.76	12.18±0.92	20.83±0.78	23.69±1.19	40.79±0.87
	3:2:2	9.87±0.52	13.63±0.41	22.18±0.73	23.93±0.65	42.51±0.58
	3:1:2	9.26±0.65	14.53±0.36	21.66±0.31	22.78±0.86	42.16±0.73
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

ABTS radical scavenging activities according to mixing ratio by macerating enzymatic extraction

Culture region	Mixing ratio (W/W/W)	ABTS radical scavenging activity, % of control
		Concentration (mg/mL)
		0.5	1	2.5	5	10	20
Hwasun	Control	6.82±0.53	8.73±0.33	15.66±0.97	23.59±0.75	35.82±0.65	61.58±1.23
	3:2:1	6.33±0.65	8.56±0.96	18.61±0.82	22.72±0.68	36.39±1.26	65.25±0.82
	3:2:2	7.23±0.73	9.83±0.62	17.95±0.86	26.89±0.75	38.56±0.58	66.28±1.53
	3:1:2	7.54±0.87	9.37±0.52	18.18±0.66	25.35±0.93	38.05±1.51	65.78±1.32
Uljin	Control	6.21±0.58	9.35±0.83	17.29±0.38	26.86±0.83	37.29±0.68	63.57±0.75
	3:2:1	7.16±0.83	10.25±0.75	19.53±0.59	25.78±0.68	38.55±1.29	66.29±0.85
	3:2:2	7.15±0.79	9.83±0.91	19.86±0.69	26.58±0.81	39.83±1.58	70.17±1.69
	3:1:2	7.85±0.66	10.09±0.39	18.69±0.53	27.52±0.72	38.65±0.85	70.28±0.68
Hoengseong	Control	7.56±0.52	9.27±0.49	17.85±0.83	25.68±0.71	36.73±0.39	65.28±1.42
	3:2:1	8.23±0.61	10.09±0.89	18.92±0.77	26.58±0.58	38.78±1.53	68.59±1.39
	3:2:2	7.51±0.75	11.18±0.68	19.85±0.89	29.53±0.49	40.62±0.85	71.64±1.15
	3:1:2	8.78±0.69	10.85±0.81	19.18±0.86	26.79±0.78	39.13±1.71	69.72±1.53
Jeju	Control	7.25±0.93	10.29±0.52	16.58±0.85	28.35±0.78	36.53±0.56	65.02±1.09
	3:2:1	7.38±0.73	10.57±0.65	19.68±0.81	29.52±0.58	39.48±0.85	68.12±1.18
	3:2:2	8.36±0.85	9.53±0.52	21.68±0.66	28.58±0.79	42.52±1.29	70.82±0.78
	3:1:2	8.52±0.59	10.18±0.88	18.62±0.82	29.49±0.65	38.58±0.58	70.75±1.42
Jecheon	Control	6.88±0.69	9.52±0.73	17.92±0.75	27.58±0.83	39.15±1.68	66.27±1.55
	3:2:1	8.05±0.82	10.18±0.98	18.73±0.56	27.88±0.85	40.53±0.78	70.58±1.31
	3:2:2	8.69±0.61	10.13±0.59	17.83±0.51	30.25±0.85	38.83±0.67	68.19±1.45
	3:1:2	7.25±0.56	9.83±0.98	18.28±0.89	28.63±0.68	40.48±1.56	66.93±1.12
Muju	Control	7.37±0.72	10.15±0.59	17.18±0.79	25.35±0.68	39.53±0.58	63.82±0.83
	3:2:1	8.16±0.59	9.87±0.63	19.38±0.58	28.52±0.83	41.25±1.35	69.15±1.52
	3:2:2	7.83±0.82	9.58±0.78	17.55±0.71	28.63±0.59	39.68±0.89	68.65±1.12
	3:1:2	9.13±0.73	10.25±0.91	18.69±0.82	27.52±0.75	37.62±1.51	69.39±1.45
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

< 실시예 4> 추출용매별 , 분획별 추출물 조제

4-1. 추출 및 용매분획

지역별 재배 더덕을 선별하여 세척한 다음 동결건조 후, 70% 주정알코올로 3회 반복 상온 추출한 다음, 감압 농축하여 추출물을 얻었다. 또한 농축한 추출물을 동결건조한 다음 다시 증류수에 현탁시켜 n-hexane, Methylene chloride, Ethyl acetate, Butyl alcohol, D.W. 등의 용매를 사용하여 순차적으로 연속 추출하여 분획하였다(도 2 참조).

4-2. 용매분획별 수율

동결 건조한 더덕을 70% 주정알코올로 3회 반복 상온 추출한 다음, 감압 농축한 추출물을 동결 건조하여 분말화하였다. 동결건조 분말 50g을 n-hexane, Methylene chloride, Ethyl acetate, Butyl alcohol, D.W.(distilled water) 등의 용매별로 3회 반복하여 분획을 행한 다음, 추출액을 감압농축기로 완전히 농축한 후에 무게를 측정하는 방법으로 각 분획물의 회수율을 조사하였다. 지역에 관계없이 모든 시료에서 물 추출에서 가장 높은 회수율을 보였고, Ethyl acetate 층에서는 극히 미미한 수준의 수율을 나타냈다(표 11 참조).

Yield of extract sample according to solvent fractions

solvent	Yield (g)
	Culture region
	Hwasun	Uljin	Hoengseong	Jeju	Jecheon	Muju
n-Hexane	0.66±0.03	0.43±0.07	0.69±0.11	1.36±0.08	0.68±0.07	0.42±0.07
MethyleneChloride	0.24±0.12	0.51±0.05	0.21±0.09	0.41±0.10	0.50±0.05	0.28±0.14
Ethyl Acetate	0.10±0.04	0.14±0.03	0.11±0.02	0.16±0.12	0.17±0.07	0.11±0.09
n-BuOH	2.61±0.10	2.91±0.07	1.83±0.07	3.43±0.09	3.89±0.12	2.78±0.02
D.W	46.39±0.45	46.01±0.24	47.16±0.87	44.64±0.29	44.76±0.88	46.41±0.65
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

4-3. 추출용매별 수율

동결 건조한 더덕 분말 10g을 EtOH, MeOH, Ether, Acetone, erD.W.(distilled water) 등의 용매별로 3회 반복 추출한 다음, 추출액을 감압농축기로 완전히 농축한 후에 무게를 측정하는 방법으로 각 용매별 회수율을 조사하였다. 그 결과, 6개 지역 재배 더덕 모두에서 물 추출이 가장 높은 회수율을 보였고, Ether와 Acetone 층에서는 수율이 상대적으로 낮았다.

Yield of extract sample according to extract solvents

solvent	Yield (g)
	Culture region
	Hwasun	Uljin	Hoengseong	Jeju	Jecheon	Muju
EtOH	1.25±0.01	0.80±0.03	0.68±0.01	0.38±0.03	0.72±0.01	0.73±0.01
MeOH	3.29±0.02	2.09±0.02	3.06±0.02	1.23±0.04	1.91±0.03	2.31±0.01
Ether	0.11±0.01	0.10±0.01	0.13±0.01	0.12±0.01	0.11±0.02	0.12±0.02
Acetone	0.12±0.01	0.11±0.02	0.10±0.01	0.12±0.02	0.11±0.01	0.13±0.01
Water	5.06±0.04	2.26±0.02	4.66±0.04	3.59±0.07	4.96±0.09	3.91±0.03
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

< 실험예 1> 지역별 재배더덕의 추출조건에 따른 항산화 활성 검정

각 추출조건에 따른 더덕의 다양한 생리기능성의 차이를 검증함으로서 최적 추출물 조제의 기준을 설정하고자 실험하였다.

1-1. DPPH radical 소거능

각 추출물을 Choi 등(2003)의 방법에 의한 수소전자공여능에 의해 항산화 활성을 측정하였다. 여러 농도의 시료를 메탄올 (or DMSO) 용매로 용해하여, 900 μL의 DPPH 용액 (100 μM)과 각 시료 100 μL를 혼합하여 교반한다. 이 혼합 시료를 암소에서 30분간 반응시킨 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 수소전자공여능은 각 실험을 3회 반복하여 평균을 낸 다음 대조구에 대한 흡광도의 감소 정도를 다음 식에 의하여 계산하였다.

An= (A0-A)/A0 × 100

An : DPPH radical 소거능에 대한 항산화 활성(%)

A0 : 시료가 첨가되지 않은 DPPH 용액의 흡광도

A : 반응용액 중의 DPPH와 시료의 반응한 흡광도

DPPH radical scavenging activities according to culture region in Codonopsis lanceolata

Plant	Culture region	DPPH radical scavenging activity, % of control
		Concentration (mg/mL)
		0.5	1	2.5	5	10
Codonopsis lanceolata	Hwasun	7.67±0.30	8.50±0.70	10.07±0.29	11.37±0.46	13.45±0.49
	Uljin	8.70±0.24	9.84±0.24	10.98±0.76	13.50±0.35	16.54±1.07
	Hoengseong	8.89±0.15	10.18±0.26	10.41±0.35	12.47±0.40	15.27±0.24
	Jeju	9.53±0.25	10.68±0.23	11.48±0.43	13.84±0.35	14.98±0.41
	Jecheon	9.34±0.38	10.64±0.91	12.59±0.35	13.69±0.43	17.25±0.30
	Muju	10.03±0.80	11.25±0.77	12.70±0.46	13.58±0.61	18.16±0.26
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

DPPH radical scavenging activities according to extract solvents in Codonopsis lanceolata

Plant	Culture region	Solvent	DPPH radical scavenging activity, % of control
			Concentration (mg/mL)
			1	2.5	5	10	20
Codonopsis lanceolata	Hwasun	EtOH	9.21±0.13	11.65±1.53	19.57±1.40	22.00±1.20	41.51±0.24
		MeOH	11.17±1.12	14.14±0.62	19.30±0.59	22.17±1.38	52.45±0.40
		D.W	7.82±0.76	12.17±0.72	18.28±0.67	22.50±0.80	54.15±0.34
		Acetone	7.13±0.84	9.87±0.81	13.43±0.78	18.40±0.74	43.62±0.31
		Ether	9.70±0.76	13.16±1.24	15.81±1.20	20.04±1.14	46.47±1.19
	Uljin	EtOH	8.55±1.36	10.34±1.65	18.39±1.50	21.13±0.69	41.60±1.30
		MeOH	9.95±0.78	12.96±0.75	18.19±0.71	23.74±0.12	51.62±0.81
		D.W	5.56±0.54	10.02±0.52	16.28±0.48	24.12±1.07	51.07±0.41
		Acetone	9.01±0.99	11.69±0.96	15.17±0.92	20.04±0.87	43.53±0.82
		Ether	9.05±0.76	12.82±0.72	15.47±0.70	19.72±0.67	43.91±0.81
	Hoengseong	EtOH	9.51±0.13	11.65±0.69	19.57±0.12	20.32±0.40	39.49±0.82
		MeOH	10.69±0.98	13.68±0.95	18.87±0.89	22.86±1.49	55.87±0.56
		D.W	6.70±0.44	11.11±0.41	17.29±0.39	24.10±0.46	53.97±0.47
		Acetone	9.60±0.31	11.44±1.13	14.94±1.09	19.82±1.02	46.53±1.18
		Ether	9.89±0.80	14.64±1.18	17.24±1.14	21.40±1.08	47.23±0.98
	Jeju	EtOH	9.36±0.71	11.50±0.69	19.44±0.63	22.65±1.45	39.49±0.60
		MeOH	10.19±0.84	13.19±0.81	18.41±0.76	22.62±0.32	51.90±0.65
		D.W	9.88±0.41	14.96±1.09	20.88±1.02	23.82±0.22	54.53±0.61
		Acetone	8.86±0.87	11.36±1.02	14.86±0.98	19.75±0.93	45.16±0.60
		Ether	8.10±0.47	11.90±0.45	14.59±0.44	18.88±0.41	45.53±0.60
	Jecheon	EtOH	6.99±1.10	9.19±1.07	17.33±0.98	21.38±0.70	42.61±0.60
		MeOH	9.81±0.80	12.83±0.78	18.07±0.73	22.86±1.54	52.08±0.72
		D.W	8.49±0.89	13.97±2.09	19.95±1.94	25.63±0.23	52.85±1.38
		Acetone	6.16±0.26	8.60±0.25	12.21±0.24	17.25±0.23	49.87±0.79
		Ether	7.88±0.54	10.69±0.52	14.38±0.50	18.68±0.48	50.21±0.78
	Muju	EtOH	7.11±0.67	9.31±0.65	17.44±0.60	22.72±1.04	41.41±0.18
		MeOH	12.74±0.33	15.66±0.32	20.73±0.30	24.93±0.43	51.80±1.07
		D.W	10.42±0.40	15.65±0.45	21.51±0.41	22.22±0.50	51.73±0.95
		Acetone	8.15±1.11	10.59±1.35	14.12±1.29	19.05±1.22	49.61±0.68
		Ether	7.23±0.24	11.07±0.23	13.78±0.22	18.11±0.21	49.96±0.68
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

DPPH radical scavenging activities according to the percentage of EtOH solvent in Codonopsis lanceolata

Plant	Cuture region	Solvent	DPPH radical scavenging activity, % of control
			Concentration (mg/mL)
			1	2.5	5	10	20
Codonopsis lanceolata	Hwasun	EtOH30%	3.65±0.34	7.88±0.91	11.08±1.14	23.39±1.02	34.47±1.40
		EtOH50%	3.24±0.44	8.03±0.38	10.65±0.57	21.31±0.28	26.70±0.48
		EtOH70%	4.71±0.45	9.32±0.21	12.14±0.38	20.30±0.83	31.40±0.33
		EtOH100%	9.32±0.95	11.09±0.24	16.17±0.56	25.31±0.77	41.13±1.83
	Uljin	EtOH30%	3.64±0.38	8.69±0.94	9.93±0.66	21.24±1.38	31.36±1.99
		EtOH50%	2.33±0.11	8.65±0.24	11.56±0.41	22.90±0.42	26.50±0.77
		EtOH70%	4.30±0.15	9.12±0.73	12.39±0.47	23.29±0.53	35.10±1.68
		EtOH100%	7.26±0.36	10.67±0.36	13.42±0.42	25.31±1.09	44.31±0.31
	Hoengseong	EtOH30%	4.14±0.75	9.96±0.59	12.11±0.80	23.26±2.04	36.12±2.87
		EtOH50%	4.77±0.03	6.54±0.43	11.68±0.20	20.68±0.16	27.25±0.27
		EtOH70%	3.44±0.45	8.66±0.21	12.23±0.34	20.52±1.33	31.99±1.26
		EtOH100%	7.42±0.91	12.10±0.73	12.80±0.91	25.04±0.21	43.61±0.40
	Jeju	EtOH30%	6.07±0.44	7.17±0.94	11.33±0.82	23.48±1.35	37.48±0.46
		EtOH50%	2.89±0.17	9.97±0.09	9.25±0.57	20.86±0.97	31.11±1.54
		EtOH70%	4.92±0.06	10.32±0.13	13.58±0.87	22.80±1.30	35.70±0.88
		EtOH100%	8.28±0.33	13.31±0.43	16.35±0.35	25.97±1.54	40.71±0.42
	Jecheon	EtOH30%	6.39±0.26	9.31±0.91	12.31±0.83	21.59±1.19	36.71±0.77
		EtOH50%	2.90±0.10	8.66±0.22	9.12±0.35	21.53±1.25	27.47±0.12
		EtOH70%	4.60±0.22	9.15±0.36	13.20±0.50	20.25±0.56	30.73±0.52
		EtOH100%	8.30±0.94	13.24±0.67	14.11±0.37	28.03±1.12	43.48±0.76
	Muju	EtOH30%	3.95±0.86	9.91±0.62	12.53±0.83	23.64±0.99	36.53±1.17
		EtOH50%	5.08±0.73	7.56±0.32	9.96±0.25	21.15±1.92	26.22±1.02
		EtOH70%	3.28±0.55	8.75±0.75	12.27±0.35	21.03±1.17	30.99±0.81
		EtOH100%	9.27±0.67	12.44±0.76	13.95±0.90	25.88±1.59	42.69±1.53
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

1, 2.5, 5, 10, 20 mg/mL 등 5 가지 농도에서의 추출용매별, EtOH 추출농도별 DPPH 소거 활성을 분석한 결과를 보면, 지역별 재배더덕 간에는 큰 차이를 보이지 않지만 물 추출과 메탄올 추출에서 상대적으로 높게 나타났으며, 또한 EtOH 농도가 높을수록 비교적 높은 효능을 보였다. 전체적으로 DPPH 소거활성의 증가는 농도에 비례하는 농도의존적 경향을 나타냈다.

1-2. ABTS 양이온( ABTS +) 소거능

7.4 mM ABTS(2,2'-azinbis-(3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid) 용액과 2.6 mM 과황산칼륨(potassium persulphate)을 혼합, 암소에서 약 15시간 반응시킨 후 414 nm에서 흡광도가 1.5가 되도록 희석하였다. 희석한 용액 3 ㎖에 각 농도별로 조제한 시료 150 ㎕를 첨가, vortex mixer로 10초간 진탕하고 실온에 90분간 방치한 후 414 nm에서 흡광도를 측정하였다. 한편, ascorbic acid를 시료와 같은 농도로 조제하여 동일한 방법으로 흡광도를 측정함으로써 비교하였다. 양이온 소거능은 AEAC(relative ascorbic acid equivalent antioxidant capacity)로 나타내었으며, 이는 ascorbic acid의 소거능을 1.000으로 하였을 때 동일농도 시료의 ABTS 양이온 소거능을 나타내는 것으로 다음과 같은 식에 의해 계산하였다.

RAEAC = Caa × △As

△Aaa Cs

ΔAaa : ascorbic acid 넣었을 때 흡광도 변화, Caa : ascorbic acid의 농도

ΔAs : 시료 넣었을 때 흡광도 변화, Cs : 시료 농도

ABTS radical scavenging activities according to extract solvents in Codonopsis lanceolata

Plant	Culture region	Solvent	ABTS radical scavenging activity, % of control
			Concentration (mg/mL)
			0.5	1	2.5	5	10		20
Codonopsis lanceolata	Hwasun	EtOH	8.17±0.69	11.13±0.67	18.71±0.61	22.21±0.67	34.70±1.02	65.11±0.71
		MeOH	7.48±1.79	10.58±1.73	12.87±0.94	23.16±1.00	35.06±1.63	70.15±1.78
		D.W	5.28±0.62	8.15±0.60	19.01±0.53	26.87±0.48	38.25±1.11	68.66±0.94
		Acetone	6.35±0.84	10.20±0.81	19.51±0.72	26.58±0.66	35.84±1.41	71.72±1.44
		Ether	7.79±0.42	10.27±0.41	18.07±1.05	27.53±0.93	37.89±1.71	72.26±0.22
	Uljin	EtOH	6.71±0.94	9.71±0.91	12.35±0.89	21.58±0.80	33.17±0.68	65.54±0.71
		MeOH	7.68±0.60	10.78±0.58	15.55±0.55	25.83±0.49	37.34±1.24	70.30±0.59
		D.W	6.65±0.51	9.48±0.49	20.18±0.44	27.93±0.39	40.01±0.33	69.01±1.12
		Acetone	6.57±0.84	10.40±1.27	15.21±0.59	22.66±0.53	31.93±0.96	70.00±0.42
		Ether	4.62±0.84	7.18±0.81	13.48±0.78	23.46±0.69	34.72±1.77	71.01±2.05
	Hoengseong	EtOH	6.64±0.96	9.65±0.93	17.35±0.85	26.05±0.76	38.48±2.04	71.64±0.90
		MeOH	9.38±0.58	12.42±0.56	17.16±1.09	26.43±1.15	39.20±1.41	71.14±1.02
		D.W	8.28±0.63	11.06±0.61	21.57±0.54	29.19±0.49	43.19±0.62	71.75±1.24
		Acetone	6.35±0.71	10.20±0.69	16.87±0.72	24.17±0.66	33.74±0.58	73.00±2.07
		Ether	5.93±1.34	8.46±1.31	15.28±1.21	25.05±1.07	36.97±1.34	71.16±1.52
	Jeju	EtOH	7.77±0.40	10.74±0.39	18.76±0.93	27.32±0.83	38.65±1.39	72.09±0.75
		MeOH	8.50±0.85	11.56±0.82	18.84±0.97	28.73±0.85	40.65±0.71	71.88±0.34
		D.W	5.67±0.91	8.53±0.89	19.34±0.78	27.18±0.71	40.22±1.35	71.21±1.55
		Acetone	8.99±0.99	12.73±0.95	21.78±0.85	28.65±0.78	37.65±0.68	72.52±0.30
		Ether	7.72±0.55	10.20±0.53	16.89±0.49	26.48±0.44	38.62±0.36	71.66±0.62
	Jecheon	EtOH	6.38±0.63	9.39±0.61	17.94±1.10	24.16±1.13	37.35±0.94	72.82±1.77
		MeOH	7.68±1.07	10.78±1.03	15.55±0.98	25.29±1.34	39.02±1.89	72.09±1.34
		D.W	8.47±0.60	11.25±0.58	21.74±0.51	29.34±0.46	41.18±0.38	69.09±0.61
		Acetone	6.57±0.84	10.40±0.81	19.69±0.72	26.75±0.86	34.52±1.13	71.23±1.14
		Ether	6.48±0.52	8.99±0.51	12.17±0.76	22.31±0.68	34.22±1.58	69.09±0.74
	Muju	EtOH	7.51±0.81	10.48±0.78	18.71±0.93	28.53±0.37	39.22±1.57	71.96±1.52
		MeOH	9.11±0.60	12.16±0.58	17.10±0.97	26.82±1.11	40.88±1.72	72.20±0.62
		D.W	5.35±0.79	8.22±0.77	19.06±0.68	26.93±0.61	40.13±1.63	70.37±1.94
		Acetone	6.35±1.18	10.20±1.13	19.51±1.01	26.58±0.92	34.38±1.42	71.08±0.63
		Ether	7.66±0.57	10.13±0.55	15.59±0.67	25.33±0.60	38.26±1.75	70.99±0.82
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

ABTS radical scavenging activities according to the percentage of EtOH solvent in Codonopsis lanceolata

Plant	Culture region	Solvent	ABTS radical scavenging activity, % of control
			Concentration (mg/mL)
			0.5	1	2.5	5	10	20
Codonopsis lanceolata	Hwasun	EtOH30%	4.95±0.58	13.94±0.21	19.87±1.28	42.27±0.07	62.05±0.78	82.91±0.19
		EtOH50%	5.35±0.59	6.13±0.25	10.47±0.13	29.05±0.34	38.08±1.08	73.04±0.54
		EtOH70%	7.21±0.18	13.21±0.71	20.23±0.34	35.45±1.27	55.96±1.04	77.33±1.15
		EtOH100%	4.32±0.97	13.17±1.45	18.89±0.96	33.50±0.52	46.87±0.41	79.35±0.30
	Uljin	EtOH30%	7.21±0.46	10.02±0.26	16.11±1.57	37.56±1.24	55.26±0.87	77.20±1.30
		EtOH50%	3.40±0.64	7.78±0.27	13.58±0.38	27.53±1.08	40.12±1.12	76.83±0.18
		EtOH70%	5.98±0.40	15.15±0.27	23.83±0.58	42.42±0.89	58.94±0.65	83.61±0.50
		EtOH100%	5.52±0.69	10.59±0.64	17.83±0.69	30.84±2.92	46.79±0.28	79.31±0.58
	Hoengseong	EtOH30%	5.61±0.70	12.06±0.23	19.70±1.20	38.73±0.18	58.21±1.23	79.52±0.84
		EtOH50%	4.78±0.74	5.86±0.22	14.70±0.71	29.02±1.20	38.51±0.94	73.63±0.20
		EtOH70%	7.86±0.70	12.72±0.85	21.40±0.92	37.30±0.93	52.02±0.78	78.23±1.48
		EtOH100%	6.20±0.66	13.68±0.80	22.69±1.17	38.11±0.44	54.72±1.11	81.77±0.33
	Jeju	EtOH30%	5.91±0.43	11.96±0.38	19.75±0.30	38.00±2.41	57.51±1.08	81.62±1.17
		EtOH50%	6.86±0.68	8.28±0.42	17.21±0.61	30.01±1.80	44.46±0.78	80.50±0.37
		EtOH70%	8.83±0.46	13.53±0.41	25.74±1.47	35.38±0.23	59.46±1.05	84.11±0.13
		EtOH100%	7.00±0.29	14.05±0.88	25.91±0.55	44.46±0.05	63.15±0.26	85.62±0.02
	Jecheon	EtOH30%	5.04±0.80	11.93±0.40	16.44±0.27	34.59±0.82	59.03±1.60	77.88±1.70
		EtOH50%	4.83±0.79	5.63±0.53	12.47±0.89	31.23±2.13	48.86±0.75	77.15±0.51
		EtOH70%	7.83±0.38	11.77±0.71	22.42±0.82	38.28±1.95	55.64±1.37	80.37±1.07
		EtOH100%	4.89±0.78	15.52±0.50	25.12±0.56	44.77±0.51	65.31±1.82	85.08±0.20
	Muju	EtOH30%	7.26±0.90	11.98±0.63	15.08±1.04	32.33±0.58	52.62±0.44	77.62±0.66
		EtOH50%	5.25±0.33	7.22±0.31	11.45±0.97	31.67±1.78	38.73±0.81	73.60±0.20
		EtOH70%	5.03±0.37	10.14±0.39	23.16±0.98	33.53±1.36	53.58±1.12	77.36±0.80
		EtOH100%	7.57±0.41	12.01±0.30	21.22±0.90	37.80±1.33	59.89±0.95	83.04±0.51
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

ABTS 양이온 소거활성을 추출용매별, EtOH 추출농도별 검증한 결과를 보면, 추출물의 농도가 증가할수록 비례적으로 증가되는 경향을 보였지만, EtOH, MeOH, DW, Aceton, Ether 등 추출용매 간에는 큰 차이를 보이지 않았으며, 대체적으로 고농도의 EtOH에서 상대적으로 높은 소거활성을 나타냈다.

1-3. 아질산염 소거능

시료 추출물의 아질산염 소거작용의 측정은 1mM NaNO2 20㎕에 시료의 추출액 40㎕와 0.1N HCl(pH 1.2) 또는 0.2M citrate buffer (pH 4.2, 6.0)를 140㎕ 사용하여 부피를 200㎕로 맞추었다. 이 반응액을 37℃ 항온수조에서 1시간 반응시킨 후 2% acetic acid 1000㎕, Griess 시약 (30% acetic acid로 조제한 1% sulfanilic acid와 1% naphthylamine을 1:1 비율로 혼합한 것, 사용직전에 조제) 80㎕를 가하여 잘 혼합시켜 빛을 차단한 상온에서 15분간 반응시킨 후 520nm에서 흡광도를 측정하여 아래와 같이 아질산염 소거능을 구하였다.

N(%) = [1-(A-C)/B]×100

N : nitrite scavenging ability

A : absorbance of 1mM NaNO2 added sample after standing for 1hour

B : absorbance of 1NaNO2

C : absorbance of control

Nitrite scavenging activities according to the percentage of EtOH solvent in Codonopsis lanceolata

Plant	Culture region	Solvent	Nitrite scavenging activity(%)
			pH 1.2	pH 4.2	pH 6.0
Codonopsis lanceolata	Hwasun	EtOH30%	76.94	27.60	1.44
		EtOH50%	65.27	10.51	N.D
		EtOH70%	63.40	3.53	N.D
		EtOH100%	33.80	N.D	N.D
	Uljin	EtOH30%	74.14	21.20	2.47
		EtOH50%	60.78	14.52	N.D
		EtOH70%	57.80	8.12	N.D
		EtOH100%	34.30	N.D	N.D
	Hoengseong	EtOH30%	76.66	26.25	N.D
		EtOH50%	65.27	12.42	N.D
		EtOH70%	61.16	8.98	N.D
		EtOH100%	32.03	N.D	N.D
	Jeju	EtOH30%	77.40	21.49	1.34
		EtOH50%	65.27	12.89	N.D
		EtOH70%	59.29	7.83	N.D
		EtOH100%	32.87	N.D	N.D
	Jecheon	EtOH30%	73.86	22.54	1.54
		EtOH50%	66.11	11.37	N.D
		EtOH70%	61.06	7.35	N.D
		EtOH100%	35.95	N.D	N.D
	Muju	EtOH30%	77.87	25.98	N.D
		EtOH50%	66.67	13.28	N.D
		EtOH70%	63.49	6.02	N.D
		EtOH100%	33.89	N.D	N.D
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

pH 1.2, 4.2, 6.0에서의 각 시료 추출물을 반응하여 EtOH 추출농도에 따른 아질산염에 대한 소거능을 조사한 결과, 반응 용액의 pH 1.2일 경우 시료 추출물 대부분이 아질산염을 60% 이상 분해시킬 수 있었지만, 100% EtOH 추출농도에서는 40% 이하의 분해능을 나타냈다. 또한 pH 4.2에서도 대부분 30% 이하의 아질산염 소거활성을 나타냈지만, pH 6.0에서는 거의 대부분 활성이 없었다. 따라서 pH 변화에 따른 더덕의 EtOH 추출농도별 추출물의 아질산염 소거활성은 pH 1.2에서 가장 높았으며 pH가 증가함에 따라 활성도 점차 감소되거나 상실되었다.

< 실험예 2> 지역별 재배더덕의 추출조건에 따른 항산화효소 활성 검정

2-1. 효소액 조제

시료 0.5g에 Extract Buffer [100 mM K-PO4 buffer(pH7.5), 100 mM EDTA, 1% PVP, 100 mM PMSF] 2 ml로 균질화하여 15.000g 로 20분간 원심분리한 다음 상층액을 항산화활성 측정에 사용하였다. Ascorbate peroxidase (APX)의 경우 extraction buffer에 위의 조성액에 10mM를 첨가하여 사용하였다. 단백질 정량은 BSA를 표준물질로 사용하여 Bradford (1976)방법에 따라 측정하였다.

2-2. SOD ( SuperOxide Dismutase )

SOD효소 활성 검정은 분석용 Kit (Sigma사,19160)를 사용하여 측정하였다. 즉, SOD의 효소활성이 NBT(Nitroblue tetrazolium)의 환원을 저해하는 능력을 검정하는 photochemical NBT method를 사용하였다. 반응액은 50 mM carbonic buffer (pH 10.2), 0.1 mM EDTA, 0.1 mM Xanthine, 0.025 mM NBT로 하였으며, NBT환원 저해율을 흡광도 450nm에서 측정하였다. 각 시료에 대하여 3회 반복으로 하였으며, SOD효소 활성은 다음의 계산식에 의해 환산하였다(도 3 및 4 참조).

SOD활성 (NBT환원 저해율, %) = [(Ablank1-Ablank3)-(Asample-Ablank2)] / (Ablank1-Ablank3)x100

그 결과, 각 더덕 시료의 분획별, EtOH 추출농도별 추출물의 항산화효소 활성을 보면, SOD 활성의 경우 EA>BA>MC>n-H>DW 순으로 활성이 높게 나타났으며, EtOH 추출농도와 지역별 재배더덕 간에는 큰 차이를 보이지 않았다.

2-3. CAT ( Catalase )

CAT활성은 Aebi 등(1984)의 방법에 의해 측정하였으며, 반응액은 50 mM potassium phosphate buffer (pH 7.0)와 10 mM H2O2로 하였다. CAT 활성은 반응액에 추출액을 가한 다음 240 mM에 2분간의 흡광도 변화를 측정하였다(도 5 및 6 참조).

그 결과, CAT 활성의 경우는 EA 분획물에서 가장 높은 활성을 보였고, 또한 EtOH 50%와 100% 추출농도와 제주 재배더덕에서 상대적으로 활성이 높은 결과를 나타냈다.

2-4. APX ( Ascorbate Peroxidase )

APX 활성은 Nacano and Asada(1981)방법에 따라 ascorbate의 산화 정도를 290nm에서 2분간의 흡광도 변화를 측정하였다. APX의 반응액은 0.5mM ascorbate와 0.2mM H2O2가 첨가된100mM potassium phosphate buffer (pH 7.5)로 하였다(도 7 및 8 참조).

그 결과, APX 활성의 경우는 EA>MC>n-H>BA>DW 순으로 활성이 높게 나타났지만, 특히 BA와 DW 분획물에서 상대적으로 낮은 활성을 보였다. EtOH 추출농도에 따른 APX 활성은 30% 추출농도에서 비교적 높은 결과를 보였으며 재배지역에 있어서는 제주 재배더덕이 다소 높은 활성을 나타냈다.

2-5. POD ( Peroxidase )

POD 활성은 Egley 등 (1983)의 방법에 의해 측정하였으며, 반응액은 최종농도가 40mM K-PO4 buffer (pH6.9), 1.5mM guaiacol, 6.5mM H2O2가 되도록 만든다. POD 활성은 반응액에 sample을 혼합하여 spectrophotometer를 이용해서 470nm에서 2분간 흡광도 변화를 측정하였다(도 9 및 10 참조).

그 결과, POD 활성의 경우을 보면, EA 분획물에서 상대적으로 높은 활성을 나타냈고 그 외의 분획물에서는 큰 차이를 보이지 않았으며, 또한 EtOH 50%와 100% 추출농도에서 다소 높은 활성을 보였다.

<실험예 3> 지역별 재배더덕의 추출조건에 따른 인체암세포주에 대한 더덕의 항암 활성 분석

6개 지역 재배 더덕의 인체암세포주에 대한 항암 효과를 측정하기 위해 MTT (3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazoliumbromide) assay를 실시하여 측정하였다. 자궁암세포인 HeLa, 유방암세포인 MCF-7, 폐암세포인 Calu-6, 인간유래 신장 정상세포인 HEK293 세포주를 96well plate에 분주하고 37℃, 5%, CO2 incubator에서 24시간 동안 배양하였다. 배양한 세포에 시료 농도가 50, 100, 200, 400, 800 ㎍/ml가 되도록 10㎕ 처리한 후, 각각 24시간 배양하였고, 0.2㎎/㎖의 MTT 용액 10㎕를 각 well에 넣고 incubator에서 4시간 동안 배양하였다. 배양 종료 후 상등액을 제거하고 각 well에 100㎕의 DMSO를 첨가하여 상온에서 10분 동안 반응시킨 후 microplate reader로 540nm에서 흡광도를 측정하였고, 세포독성은 시료의 흡광도를 대조군의 흡광도에 대한 백분율로 나타내었다.

Cytotoxicity of extracts from Codonopsis lanceolata cultured at different region on three cancer cell lines and Human embryonic kidney 293(HEK293) cell

Cell line	Culture region	Cell viability (% of control)
		Concentration (ug/mL)
		50	100	200	400	800
HeLa	Hwasun	92.25±4.63	79.64±7.95	80.53±9.70	78.31±8.64	73.09±3.03
	Uljin	93.99±3.32	94.63±4.37	93.07±4.14	87.46±3.39	88.12±1.17
	Hoengseong	95.28±1.56	97.80±3.63	97.12±1.50	92.47±1.23	84.84±0.39
	Jeju	92.08±7.41	87.90±1.59	85.51±0.79	83.56±2.61	83.16±4.69
	Jecheon	99.23±5.85	97.12±9.27	99.27±7.91	86.35±4.47	75.28±3.12
	Muju	94.39±1.56	91.91±2.16	87.39±6.88	84.07±1.53	81.91±2.20
Calu-6	Hwasun	87.44±6.99	84.11±3.72	83.35±4.10	84.91±3.10	83.32±2.21
	Uljin	89.75±5.30	88.88±7.30	86.15±8.89	82.33±3.66	68.97±2.11
	Hoengseong	92.67±1.65	92.85±5.05	89.90±4.08	91.18±0.25	88.09±5.40
	Jeju	84.57±2.73	81.99±1.14	78.00±1.25	78.14±2.21	79.71±2.77
	Jecheon	71.19±5.46	74.33±4.74	74.40±5.26	67.80±3.75	64.28±2.96
	Muju	87.82±2.44	82.16±5.47	79.73±1.77	73.91±5.00	67.43±1.26
MCF-7	Hwasun	90.51±5.50	89.53±4.58	91.59±3.97	93.88±6.22	92.86±3.95
	Uljin	94.70±1.68	95.21±1.99	95.70±3.13	93.61±3.74	90.86±1.73
	Hoengseong	92.10±0.54	95.24±0.43	93.38±1.42	93.61±1.61	93.59±5.59
	Jeju	91.02±3.41	90.05±4.27	91.40±5.19	90.05±0.76	90.40±4.21
	Jecheon	89.38±2.74	86.65±1.76	86.47±1.56	86.56±8.38	87.22±4.40
	Muju	81.47±8.50	83.27±3.63	83.56±3.20	81.12±2.62	76.25±5.66
HEK293	Hwasun	106.12±2.04	103.74±4.72	99.33±2.48	91.17±2.45	89.35±0.23
	Uljin	100.92±0.42	97.96±1.77	92.70±0.51	88.37±2.84	88.39±4.40
	Hoengseong	102.28±1.67	98.53±4.40	92.22±3.45	85.94±0.49	84.81±3.77
	Jeju	102.92±7.27	103.85±4.92	102.24±2.36	96.79±1.26	87.64±0.37
	Jecheon	103.94±0.75	101.78±1.07	96.48±2.95	90.39±0.43	87.86±3.32
	Muju	99.78±1.82	94.10±3.72	84.85±2.91	86.96±6.80	86.78±3.33
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

Cytotoxicity of extracts according to the percentage of EtOH solvent on human cancer cell line (Calu-6)

Cell line	Culture region	Solvent	Cell viability (% of control)
			Concentration (ug/mL)
			50	100	200	400	800	1000
Calu-6	Hwasun	EtoH 30%	97.07±2.67	94.02±5.77	91.89±4.79	81.31±4.78	73.33±9.70	71.44±4.60
		EtoH 50%	89.32±1.84	85.80±1.33	85.24±2.07	83.97±0.67	78.89±1.09	69.23±6.16
		EtoH 70%	82.57±5.10	82.53±1.82	82.91±3.57	79.69±0.49	71.66±7.51	64.30±4.63
		EtoH100%	85.67±6.53	77.38±4.38	73.36±6.07	66.42±2.32	64.23±2.80	63.48±3.32
	Uljin	EtoH 30%	90.89±5.30	89.09±5.29	85.19±6.84	82.45±7.17	78.45±2.40	70.69±7.54
		EtoH 50%	88.13±0.89	85.31±0.55	88.26±0.52	82.10±4.80	59.92±3.33	41.72±5.67
		EtoH 70%	85.27±8.29	83.54±2.67	80.62±1.04	72.81±4.26	56.37±2.63	38.85±4.65
		EtoH100%	82.91±7.73	82.34±3.48	75.24±9.78	72.98±6.96	67.81±7.77	57.23±1.91
	Hoengseong	EtoH 30%	85.79±5.75	83.06±4.78	81.66±5.60	80.81±6.10	79.41±7.77	59.64±4.75
		EtoH 50%	86.34±1.06	82.24±2.76	80.62±1.89	77.98±2.37	70.48±3.11	59.49±1.44
		EtoH 70%	83.21±7.02	80.78±1.88	79.10±2.69	74.08±4.38	65.13±4.41	47.82±7.25
		EtoH100%	69.31±8.73	59.10±6.94	61.10±6.48	55.39±9.30	53.72±6.18	50.51±6.19
	Jeju	EtoH 30%	90.27±5.01	81.49±7.54	80.29±1.98	77.81±6.24	62.46±4.77	61.66±3.19
		EtoH 50%	98.45±1.60	89.67±4.62	92.87±3.54	88.96±1.66	51.00±5.88	35.66±5.20
		EtoH 70%	88.96±1.87	83.89±4.00	86.08±3.62	86.53±1.98	52.66±1.51	38.46±6.28
		EtoH100%	94.25±9.73	90.34±7.64	85.05±9.03	79.94±4.03	70.74±2.48	68.83±7.40
	Jecheon	EtoH 30%	92.13±2.16	81.91±2.02	87.77±9.61	84.48±7.35	76.51±10.08	76.16±6.80
		EtoH 50%	92.69±9.78	84.86±2.41	78.93±8.08	77.03±6.88	73.88±3.76	47.45±4.37
		EtoH 70%	80.71±3.49	82.82±6.68	69.31±6.26	66.70±6.34	38.07±8.34	37.63±6.45
		EtoH100%	93.29±3.31	90.41±6.91	83.67±5.50	82.11±7.09	74.19±8.85	58.97±5.42
	Muju	EtoH 30%	87.53±5.61	77.83±2.32	75.20±6.64	72.84±9.26	59.93±4.32	54.58±3.88
		EtoH 50%	87.73±7.75	85.72±1.63	80.55±5.42	78.88±7.57	77.60±7.91	47.26±5.76
		EtoH 70%	86.50±5.56	83.01±0.79	77.66±4.75	72.90±6.11	35.58±3.59	35.35±5.29
		EtoH100%	88.07±8.46	83.71±8.14	81.97±8.53	79.18±9.12	70.76±4.23	68.97±1.87
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

Cytotoxicity of extracts according to the percentage of EtOH solvent on human cancer cell line (MCF-7)

Cell line	Culture region	Solvent	Cell vability (% of control)
			Concentration (ug/mL)
			50	100	200	400	800	1000
MCF-7	Hwasun	EtoH 30%	89.90±7.95	91.86±9.70	89.98±5.14	90.54±8.28	85.64±4.74	79.50±4.91
		EtoH 50%	93.56±8.03	88.93±2.04	83.99±5.06	80.99±2.93	80.76±3.43	75.70±10.67
		EtoH 70%	80.68±3.83	75.39±2.81	71.09±2.81	69.64±3.57	66.04±0.07	65.02±2.78
		EtoH100%	89.41±8.45	86.76±9.58	81.36±5.35	77.35±6.05	73.22±6.14	72.72±5.04
	Uljin	EtoH 30%	87.66±10.52	86.95±1.54	81.34±3.51	80.88±4.96	75.20±4.10	74.65±4.32
		EtoH 50%	94.71±3.71	94.22±5.59	86.81±8.44	82.25±9.84	74.80±8.58	52.86±3.06
		EtoH 70%	88.76±2.64	84.99±7.06	78.18±0.98	75.09±8.26	75.77±8.33	58.03±6.63
		EtoH100%	83.36±6.24	67.78±6.48	66.39±8.11	60.00±4.87	60.16±5.08	58.26±2.84
	Hoengseong	EtoH 30%	88.95±4.44	87.33±9.29	85.03±8.83	85.03±1.63	77.12±3.80	69.72±4.04
		EtoH 50%	84.46±1.17	78.44±0.70	78.49±2.81	78.25±7.08	70.34±3.99	60.56±6.13
		EtoH 70%	86.87±2.66	78.60±2.63	77.12±2.38	73.44±0.66	65.06±3.18	64.48±2.99
		EtoH100%	77.27±3.47	70.89±5.90	71.36±9.57	70.92±5.53	63.79±9.27	62.42±2.03
	Jeju	EtoH 30%	87.33±6.61	81.39±6.43	77.49±4.83	74.48±5.39	65.37±1.78	54.63±5.80
		EtoH 50%	87.21±2.71	83.06±1.68	79.68±1.89	76.03±2.94	56.48±1.02	46.63±5.01
		EtoH 70%	85.43±1.19	79.50±3.10	77.09±0.64	72.55±1.85	56.44±2.08	49.91±2.51
		EtoH100%	79.13±5.49	75.40±9.94	64.51±2.90	60.22±2.03	51.35±3.32	54.91±6.57
	Jecheon	EtoH 30%	90.89±6.80	83.78±7.04	83.88±8.24	75.89±6.13	57.69±6.89	52.84±1.49
		EtoH 50%	93.46±7.61	80.20±5.02	78.87±2.95	74.03±2.84	51.17±5.54	43.09±8.44
		EtoH 70%	67.01±2.35	65.06±9.55	52.89±2.32	50.34±4.32	31.66±6.05	28.88±5.35
		EtoH100%	84.16±7.63	78.47±8.28	71.05±8.09	70.60±3.27	68.42±7.18	66.56±5.23
	Muju	EtoH 30%	90.83±12.38	77.28±1.01	69.66±6.36	66.81±5.96	66.09±8.77	62.17±11.03
		EtoH 50%	83.38±1.47	85.06±5.39	77.76±8.51	74.17±1.59	75.45±6.44	67.08±1.79
		EtoH 70%	74.62±3.06	69.04±1.82	65.84±3.43	66.40±1.38	45.83±3.23	38.67±1.11
		EtoH100%	84.34±5.53	74.52±1.14	72.02±6.14	65.08±5.98	61.12±5.18	60.55±9.94
*Data represent the mean values±SE of three independent experiments.

MTT방법에 의한 각 더덕시료 추출물의 인체암세포주에 대한 세포독성도를 확인한 결과, 800 ug/mL 농도에서도 지역별 재배더덕 간에 인체암세포주에 대해서 다소 낮은 독성도를 보였는데 이는 차후에 추가실험을 수행하여 재현성을 검증할 필요가 있다고 사료된다. 또한 EtOH 추출농도별로 보면 Calu-6와 MCF-7 세포주 모두에서 제주지역 재배더덕에서 좋은 효과가 있는 것으로 나타났으며, 전반적으로 70% EtOH 추출물에서 비교적 높은 독성도를 보였음을 알 수 있었다.

< 실험예 4> 지역별 재배더덕의 추출조건에 따른 추출물의 3T3-L1 cell 이용 항비만 효과 검정

3T3-L1 세포는 한국세포주은행에서 분양(KCLB NO. 10092.1)받아 배양해 사용하였다. 세포는 10% FBS이 포함된 DMEM을 사용하여 75T-flask에서 5% CO2, 37℃ incubator에서 배양하였다. 3~4일 후 세포가 confluent하게 되면 0.05% Trypsin/0.53mM EDTA를 처리하여 세포를 분리하고 원심분리기(2000rpm, 2min)에서 세포를 모은 후 세포밀도를 1104 cell/ml로 희석하여 12well plate에 1mL 씩 planting하여 배양하였다. 2일에 한번씩 10% FBS가 포함된 새로운 DMEM 배양액으로 바꿔주고 3~4일 후 세포가 confluent하게 되면 이틀 후에 DMEM 배양액에 5mg/mL insulin, 0.25mM dexamethasone, 0.5mM IBMX가 첨가된 배지를 처리하여 분화를 유도하였다. 2일 후에는 5mg/mL insulin만 포함된 배양액으로 교환하고 2일에 한 번씩 새 배양액으로 갈아주면서 분화를 유도하였다(Mac Dougald OA, Hwang C.S., Fan H., Lane M.D. 1995). 6일째에는 insulin이 함유되어 있지 않은 배양액을 세포를 배양한 후 7일째에 시료를 처리하고 24시간 후에 Oil red O 염색을 실시하였다.

4-1. 세포독성 측정

세포 생존율의 측정을 위한 MTT(methylthiazolyldiphenyltetrazolium bromide) assay는 Sladowski 등의 방법을 따라 행하였다. 배양시킨 3T3-L1 세포를 96well plate에 1105 cell/well로 분주하여 16~18시간 배양한 후 농도별로 희석한 시료 추출물을 24시간 처리하였다. 5mg/ml로 용해한 MTT용액을 10uL/990ul medium으로 첨가한 후 5% CO2, 37℃에서 3시간 배양하였다. 배양이 끝난 다음 배양액을 제거한 뒤 DMSO 200uL/well로 넣고 20분간 교반하여 ELISA reader로 595nm에서 흡광도를 측정하였다.

4-2. Oil red O 염색

세포 배양액을 버리고 세포를 고정시키기 위해 10% formaldehyde를 50uL 씩 각 well에 넣고 4℃에서 1시간 동안 배양하였다. 그 후에 formaldehyde를 버리고 PBS로 세 번 세척한 후 Oil red O 염색액(Oil red O 0.25g을 isopropyl alcohol 50mL에 녹인 용액을 증류수와 3:2의 비율로 혼합한 후 0.45um filter로 여과한 용액)을 500uL씩 넣고 다시 상온에서 1시간 동안 염색한 후 PBS로 3회 세척하였다. 염색된 세포는 현미경으로 관찰하였으며, 관찰 후 well당 500uL의 isoprophyl alcohol로 지방세포 내 염색된 염색약을 추출하여 spectrophotometer로 520nm에서 흡광도를 측정하였다(도 11 내지 16 참조).

3T3-L1 세포의 세포독성에 미치는 영향을 조사한 결과, 각 시료의 처리농도에 따라 세포 생존율 정도가 농도 의존적으로 감소하였으며, 전체적으로 제주 재배더덕과 EtOH 70% 추출농도에서 상대적으로 다소 높은 효능을 보였다.

<실험예 5> 지역별 재배더덕의 추출조건에 따른 추출물의 면역세포 생육증진 효과 검증

추출용매 EtOH의 농도에 따른 면역기능 증강효과는 인간 면역세포인 T cell과 B cell (RPMI 8226, KCLB No.10155)을 이용하여 검증하였다. 세포의 생육은 10% FBS를 함유하는 RPMI 1640 배지에서 5% CO2, 37℃에서 배양하였으며, 면역기능 증강효과는 24 well plate에 세포를 2.5104 cells 농도로 조절한 후, 0.2 μm의 filter로 여과되어진 시료 (0.5 μg/μL)들은 24시간 경과한 각각의 well에 첨가한 후 8일간 다시 배양하였다. 8일 동안 배양하면서 각 well의 세포를 혈구계수기로 세포 수를 측정하였다. 그리고 시료 추출물들을 처리하지 않은 대조구와 비교하여 세포의 생육과 세포 수에 따라 면역활성을 측정하였다(도 17 내지 28 참조).

EtOH 추출농도에 따른 각 지역 재배더덕에 대한 인간 면역세포인 T cell과 B cell의 생육촉진 실험결과를 보면, T cell, B cell 모두에서 농도의존적으로 생육촉진을 나타냈으며, 재배지역 간에 큰 차이를 보이지는 않았다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (7)

1. 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 약학적 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 더덕은 한국산으로 화순, 무주, 제천, 횡성 또는 울진에서 재배한 3년근인 것을 특징으로 하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 약학적 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 물 및 헥산으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매로 추출된 것을 특징으로 하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 약학적 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 추출물은 DPPH, 아질산염 또는 ABTS 양이온 소거 활성을 증가시키는 것을 특징으로 하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 약학적 조성물.
5. 더덕 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 건강기능식품.
6. 제5항에 있어서,
   상기 더덕은 한국산으로 화순, 무주, 제천, 횡성 또는 울진에서 재배한 3년근인 것을 특징으로 하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 건강기능식품.
7. 제5항에 있어서,
   상기 식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항산화, 항암, 항비만 또는 면역증진 활성을 갖는 건강기능식품.

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