KR20170083642A - 인공 피부 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인간 표피 유래의 케라티노사이트 및 인간 진피 유래의 섬유아세포를 포함하여 이루어지는 인공 피부 형성 배지 중에 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제를 첨가하고, 상기 인공 피부 형성 배지 중의 세포를 배양하고, 그리고 인공 피부를 형성시키는 것을 특징으로 하는, 인공 피부의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

인공 피부{ARTIFICIAL SKIN}
본 발명은 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제 및 헤파라나제 저해제를 이용하는 것에 의한 인공 피부의 신규한 제조 방법, 및 상기 방법에 의해 제조되는 신규한 인공 피부에 관한 것이다.
인류를 비롯한 여러가지 동물의 신체 전체를 덮는 피부는, 일광, 건조, 산화, 환경에 의한 스트레스, 정신적 스트레스 등의 외적 인자 및 가령(加齡)에 따른 주름의 형성, 경화, 검버섯, 칙칙함, 탄력성의 저하 등의 변화에 노출되어 있다.
천연 피부에 있어서는, 크게 나누어, 표피와 진피의 2개의 층으로 구성되어 있고, 표피와 진피의 사이에는 표피 기저막이라고 불리는 얇고 섬세한 막이 존재한다. 표피 기저막은, 약 0.1 ㎛ 정도의 매우 얇은 구조체이며, 표피와 진피의 접합부에 시트형으로 존재한다. 표피 기저막은, 기본 구조인 라미나 덴사(lamina densa)와 라미나 루시다(lamina lucida)에 더하여, 케라티노사이트의 헤미데스모솜(hemidesmosome), 앵커링 필라멘트, 앵커링 섬유 등으로 구성되어 있고, 특히 상기 기본 구조는 IV형 콜라겐, 각종 라미닌 및 프로테오글리칸 등으로 구성되어 있다. 표피 기저 세포와 기본 구조, 특히 라미나 덴사를 결합하고 있는 앵커링 필라멘트의 주요한 성분은 라미닌 5이며, 기본 구조와 진피의 콜라겐 섬유는, VII형 콜라겐을 주성분으로 하는 앵커링 섬유에 의해 연결되어 있다. 또한 앵커링 필라멘트와 앵커링 섬유는 서로 결합할 수 있고, 이들은 앵커링 복합체라고 칭해지는 복합체를 형성한다. 이러한 구조에 의해, 생체의 최외층에 존재하는 피부는 외계로부터의 역학적인 스트레스에 지지 않는 강도를 유지하고 있다(화장품 사전, 일본 화장품 기술자회 편저, p405-406).
그러나, 어떠한 원인에 의해 타고난 피부(즉, 천연 피부)가 손상을 입은 경우에는, 그의 대체물로서의 인공 피부의 수요가 높아지고 있다. 또한, 피부에 대한 의약이나 화장품의 작용이나 약품을 시험하기 위한 실험 재료로서도 인공 피부의 개발이 매우 중요하고, 어느 용도에 있어서도, 천연의 피부의 구조를 가능한 한 모방한 인공 피부가 강하게 요구되고 있다.
종래의 인공 피부의 제조 방법으로서는, 인간 섬유아세포를 포함하는 수축 I형 콜라겐 겔의 위에 정상 인간 표피 케라티노사이트를 배양하여 표피층을 형성시키는 방법이 알려져 있다. 그러나, 이 방법에 있어서는, 진피를 모방하는 콜라겐 겔과 표피를 모방하는 표피층의 사이에 기저막이 충분히 형성되지 않기 때문에, 이러한 인공 피부를 이용하는 경우에는, 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제, 또는 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 매트릭스 단백질 산생 항진제의 양자를 투여함으로써 피부 기저막 구조의 재형성을 촉진시켜 왔다(일본 특허 공개 제2001-269398호 공보). 또한, 세린프로테아제를 저해하는 물질 및 표피 기저막 성분의 주요 구성 성분인 IV형, VII형 콜라겐 또는 라미닌 5의 산생량을 높이는 물질이, 매트릭스 프로테아제 저해제에 의한 기저막 형성 촉진 효과를 촉진시키는 것이 알려져 있다(일본 특허 공개 제2004-75661호 공보). 그러나, 이러한 종래 기술에 의해 제조된 인공 피부에 있어서는, 여전히, 표피 기저막과 진피의 고차 구조의 형성이 미성숙하여, 표피 기저막과 진피 사이의 커뮤니케이션이 충분히 달성되어 있다고는 할 수 없다.
또한, 헤파라나제 활성을 저해하는 화합물이 피부의 주름 형성 과정에 있어서 생체 내의 기저막 기능을 개선하고, 이에 의해 주름의 형성을 억제하는 것이 알려져 있지만(WO2009/123215호), 이러한 화합물과 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제를 조합함으로써 인공 피부의 표피 기저막과 진피의 재형성을 촉진하는 것에 대해서는 알려져 있지 않다.
특허문헌 1: 일본 특허 공개 제2001-269398호 공보 특허문헌 2: 일본 특허 공개 제2004-75661호 공보 특허문헌 3: WO2009/123215호
본 발명은 표피 기저막과 진피 사이의 커뮤니케이션이 충분히 달성되어 있고, 천연 피부의 구조에 한없이 가까운 인공 피부를 제공하는 것을 목적으로 한다.
이번에, 본 발명자는 인간 표피 유래의 케라티노사이트 및 인간 진피 유래의 섬유아세포를 포함하여 이루어지는 인공 피부 형성 배지 중에 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제를 첨가하고, 상기 배지 중의 세포를 배양함으로써 인공 피부를 형성시킨 바, 표피 기저막 및 진피의 고차 구조가 천연 피부에 매우 근사한 인공 피부를 얻는 것에 성공하였다.
따라서, 본원은 이하의 발명을 포함한다:
[1] 인간 표피 유래의 케라티노사이트 및 인간 진피 유래의 섬유아세포를 포함하여 이루어지는 인공 피부 형성 배지 중에 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제를 첨가하고, 상기 인공 피부 형성 배지 중의 세포를 배양하고, 그리고 인공 피부를 형성시키는 것을 포함하는, 인공 피부의 제조 방법.
[2] 연속한 라미나 덴사 및 상기 라미나 덴사로부터 생기는 앵커링 섬유를 포함하는 표피 기저막과 콜라겐 섬유를 포함하는 진피를 포함하여 이루어지는 인공 피부로서, 상기 표피 기저막 중에 존재하는 연속한 라미나 덴사로부터 생기는 앵커링 섬유와 진피 중에 존재하는 콜라겐 섬유가 결합함으로써, 표피 기저막과 진피가 강고하게 접착되어 있는 것을 특징으로 하는, 인공 피부.
[3] 상기 진피가 피브리포지터(fibripositor)를 더 포함하여 이루어지는, 상기 [2]에 기재된 인공 피부.
[4] 상기 진피에 있어서 엘라스틴 섬유가 형성되는 것을 특징으로 하는, 상기 [2] 또는 [3]에 기재된 인공 피부.
[5] 상기 [1]에 기재된 방법에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는, 상기 [2]∼[4] 중 어느 하나에 기재된 인공 피부.
[6] 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제를 포함하여 이루어지는 배지 중에서 형성되는 인공 세포로서, 상기 인공 세포가 연속한 라미나 덴사 및 상기 라미나 덴사로부터 생기는 앵커링 섬유를 포함하는 표피 기저막과 콜라겐 섬유를 포함하는 진피를 포함하여 이루어지고, 상기 표피 기저막 중에 존재하는 연속한 라미나 덴사로부터 생기는 앵커링 섬유와 진피 중에 존재하는 콜라겐 섬유가 결합함으로써, 표피 기저막과 진피가 강고하게 접착되어 있는 것을 특징으로 하는, 인공 피부.
놀랍게도, 본 발명의 방법에 의해 얻어진 인공 피부의 표피 기저막 내에 있어서, 종래의 인공 피부에서는 관찰되지 않았던 연속한 균일한 라미나 덴사 및 상기 라미나 덴사에 결합하는 앵커링 섬유의 형성이 확인되었다. 더욱, 상기 인공 피부의 진피 내에서는, 지금까지 천연 피부에서밖에 보고되어 있지 않은 피브리포지터(fibripositor)가 관찰되고, 또한 종래의 방법에서는 재구축이 매우 곤란하였던 엘라스틴 섬유의 형성이 확인되었다. 이들 표피 기저막 및 진피의 고차 구조는, 천연 피부의 것과 매우 근사한 것이다.
도 1은 대조군, 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP) 저해제만을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(A군), 헤파라나제 저해제만을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(B군), MMP 저해제와 헤파라나제 저해제의 양방을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(C군)의 기저막의 구조를 나타내는 사진이다.
도 2는 대조군, 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP) 저해제만을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(A군), 헤파라나제 저해제만을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(B군), MMP 저해제와 헤파라나제 저해제의 양방을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(C군)의 기저막 바로 아래의 진피에 존재하는 섬유아세포를 나타내는 사진이다. 대조군, A군, B군은 통상의 섬유아세포인 데 대하여, C군은 피브리포지터를 포함하는 섬유아세포를 나타내고 있다.
도 3은 MMP 저해제와 헤파라나제 저해제의 양방을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(C군)의 진피 내에 형성된 엘라스틴 섬유를 나타내는 사진이다.
매트릭스 메탈로프로테아제(MMP) 저해제
본 발명에 있어서 사용하는 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제로서는, 매트릭스 메탈로프로테아제에 대하여 저해 활성을 갖는 물질이면 좋고, 특별히 제한은 없다. 매트릭스 메탈로프로테아제로서는, 예컨대 겔라티나제, 콜라게나제, 스트로멜리신, 매트릴라이신(matrilysin) 등을 들 수 있다. 따라서, 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제는, 예컨대 겔라티나제, 콜라게나제, 스트로멜리신, 매트릴라이신 등을 저해하는 물질로서 선택할 수 있다.
매트릭스 메탈로프로테아제 저해제의 구체예로서는, CGS27023A 물질(N-히드록시-2-[[(4-메톡시페닐)술포닐]3-피콜릴)아미노]-3-메틸부탄아미드염산염)(J. Med. Chem. 1997, Vol.40, p.2525-2532), MMP-인히비터-(p-NH2-Bz-Gly-Pro-D-Leu-Ala-NHOH)(FN-437)(BBRC, 1994, Vol.199, p.1442-1446) 등을 들 수 있다. 적합하게는, 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제는 CGS27023A 물질이다.
헤파라나제 저해제
본 발명에 있어서 사용하는 헤파라나제 저해제로서는, 헤파라나제에 대하여 저해 활성을 갖는 물질이면 좋고, 특별히 제한은 없다. 헤파라나제는 여러가지 세포에 존재하고, 여러가지 헤파란황산프로테오글리칸의 헤파란황산쇄를 특이적으로 분해하는 효소이다. 피부에서는, 표피를 구성하는 표피 각화 세포 및 진피의 섬유아세포, 혈관 내피 세포 등이 산생한다.
헤파라나제 저해제의 구체예로서는, 1-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-3-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-우레아를 들 수 있다.
인공 피부
본 발명에 있어서의 인공 피부의 제조에 이용하는 기초 배지로서는, 인공 피부의 제조에 종래부터 사용되고 있는 임의의 배지를 이용할 수 있고, 이들 배지로서는 10％의 소 태아 혈청을 포함하는 둘베코 개변 이글 배지(DMEM); 10％의 소 태아 혈청, 트랜스페린 5 ㎍/㎖, 인슐린 5 ㎍/㎖, 트리-요오도티로닌 2 nM, 콜레라 독소 0.1 nM, 히드로코르티손 0.4 ㎍/㎖를 포함하는 DMEM-Ham'sF12(3:1); 케라티노사이트 증식 배지(KGM)와 10％ 소 태아 혈청을 포함하는 DMEM을 1:1로 혼합한 배지 등을 들 수 있다. 이들 기초 배지에 첨가되는 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제의 양은, 그 종류에 따라 다르지만, 전형적으로는 약 10 ㎍/L∼10 g/L이며, 적합하게는 약 100 ㎍/L∼1 g/L이고, 그리고 최적으로는 약 1 ㎎/L∼100 ㎎/L이다. 또한 기초 배지에 첨가되는 헤파라나제 저해제의 양은, 그 종류에 따라 다르지만, 전형적으로는 약 10 ㎍/L∼100 g/L이며, 적합하게는 약 100 ㎍/L∼10 g/L이고, 그리고 최적으로는 약 1 ㎎/L∼1 g/L이다.
본 발명의 인공 피부의 제조에 있어서는 우선, 금망의 위에 인간 섬유아세포를 포함하는 수축 I형 콜라겐 겔을 정치한다. 인간 섬유아세포를 포함하는 수축 I형 콜라겐 겔은, 예컨대 다음과 같이 하여 조제할 수 있다. 섬유아세포 현탁 콜라겐 용액을 빙상에서 제작 후, 페트리 접시 내에서 콜라겐을 겔화시켜 조제한다. 그 후, 페트리 접시 벽면으로부터 겔을 박리하고, 콜라겐 겔을 CO2 인큐베이터 내에서 수축시킨다.
다음에, 상기 콜라겐 겔의 위에, 표피 세포, 예컨대 인간 정상 표피 케라티노사이트를 배양하여, 표피를 형성한다. 피부 세포의 배양에 의한 표피층의 형성은 다음과 같이 하여 행할 수 있다. 수축 콜라겐 겔을 금망의 위에 놓고, 또한 유리링을 이 겔의 위에 놓는다. 이 유리링 내에 누액을 시키지 않도록 인간 포피 유래의 표피 케라티노사이트 현탁액을 넣는다. CO2 인큐베이터 내에서 케라티노사이트를 접착시키고, 링을 벗긴다. 상기 배지를 표피층의 경계까지 채우고, 표피층을 공기에 노출시키면서, 배양을 계속하여, 각층을 형성시킨다.
이 방법에 따르면, 배양으로부터 약 1일∼4주간, 전형적으로는 약 4일∼2주간이라는 매우 짧은 기간에, 천연 피부의 구조에 매우 가까운 인공 피부를 얻을 수 있다. 구체적으로는, 본 발명의 인공 피부의 표피 기저막 내에 있어서는, 종래의 인공 피부에서는 관찰되지 않았던 연속한 균일의 라미나 덴사 및 상기 라미나 덴사에 결합하는 앵커링 섬유의 형성이 확인되었다.
라미나 덴사는 IV형 콜라겐, 각종 라미닌 및 프로테오글리칸 등으로 구성되는 표피 기저막의 기본 구조이며, 그리고 VII형 콜라겐을 주성분으로 하는 앵커링 섬유는 상기 기본 구조인 라미나 덴사로부터 생기고 있고, 이것이 진피의 콜라겐 섬유와 서로 얽힘으로써, 표피 기저막과 진피를 강고하게 연결하는 기능을 갖는다. 따라서, 본 발명의 인공 피부의 표피 기저막 중의 연속한 라미나 덴사 및 상기 라미나 덴사로부터 생기는 앵커링 섬유의 형성은, 본 발명의 인공 피부가, 천연 피부와 마찬가지로 외계로부터의 역학적인 스트레스에 대하여 매우 강한 강도를 갖는 것을 의미한다.
또한 놀랍게도, 본 발명의 인공 피부의 진피 내에 있어서는, 발달한 조면 소포체 및 피브리포지터(fibripositor)에 의해 특징지어지는 섬유아세포의 고차 구조의 형성이 확인되었다. 조면 소포체에서는, 상기 내부에 존재하는 막결합 리보솜에 의해 분비 단백질이 합성되는 것이 알려져 있다. 또한, 피브리포지터는 그 내부에 콜라겐원 섬유를 갖고 있고, 섬유아세포로부터 돌출되어 있는 액틴 리치(actin-rich)한 원형(原形) 질막 돌기로서 알려져 있으며, 피브리포지터에 의해, 인접하는 섬유아세포에 의해 형성되는 세포외 채널에 콜라겐원 섬유가 침착되는 것이 보고되어 있다(Elizabeth G. Canty et al., The Journal of Cell Biology, Vol.165, No.4, 2004, pp.553-563, Elizabeth G. Canty et al., The Journal of Biological Chemistry, Vol.281-No.50, December 15, 2006, Sally M. Humphries et al., The Journal of Biological Chemistry, Vol.283, No.18, pp.12129-12135, 및 Zoher Kapacee et al., Matrix Biology 27(2008) 371-375). 따라서, 본 발명의 인공 피부의 진피 내에 있어서, 조면 소포체가 발달한 섬유아세포 및 내부에 피브리포지터(fibripositor)를 갖는 섬유아세포가 존재한다고 하는 사실은, 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제 및 헤파라나제 저해제에 의해, 재형성된 인공 피부의 진피 내에 존재하는 섬유아세포의 기능이 유의하게 활성화된 것을 나타내고, 본 발명의 인공 피부에 있어서는, 천연 피부와 마찬가지로, 분비 단백질의 합성이나 콜라겐 섬유라고 하는 세포 매트릭스의 산생이 활발히 행해지고 있는 것을 의미한다.
더욱 중요한 것으로서, 본 발명의 인공 피부의 진피 내에 있어서는, 종래의 인공 피부에서는 재구축이 매우 곤란하였던 엘라스틴 섬유의 형성이 확인되었다. 엘라스틴 섬유는, 주성분으로서 마이크로피브릴과 무정형 엘라스틴으로 구성되어 있고, 천연 피부에 있어서는, 성숙한 엘라스틴 섬유는 메쉬형층의 콜라겐 섬유의 사이에 분포하고 있다. 엘라스틴 섬유의 주된 기능은 피부에 탄력성을 부여하고, 피부의 탄력을 유지하는 일이다. 또한, 기저막 바로 아래에 수직으로 주행하고 있는 마이크로피브릴은, 기저막을 진피에 연결하는 중요한 역할을 달성하고 있다. 따라서, 본 발명의 인공 피부의 진피 내에 있어서의 엘라스틴 섬유의 형성은, 본 발명의 인공 피부가 천연 피부와 동일한 기능을 갖는 것을 나타내는 매우 중요한 증거이다.
본 발명의 인공 피부는, 생체의 천연 피부가 어떠한 원인에 의한 병변 또는 손상을 수반하는 경우에는, 그의 대체물로서 임상적으로 이식할 수 있다. 또한, 본 발명의 인공 피부는, 화상에 의한 켈로이드 흉터, 피부 이식 흉터, 수술 흉터, 깊은 주름, 깊은 상처 흉터, 여드름 흉터, 큰 모공, 잔주름 등을 보정하기 위해, 피부 상의 요철 표면에 미용학적으로 적용하는 것도 가능하다. 또한, 본 발명의 인공 피부는, 연구용 또는 시험용 모델로서, 예컨대 의약 또는 화장료의 피부 투과 시험 또는 효능 혹은 독성을 시험하기 위해, 혹은 창상 치유, 세포 유주(migration), 암 세포의 침입, 암 세포의 전이 또는 암의 진행 등을 연구하기 위해 이용할 수 있다.
전술한 바와 같이, 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제의 조합은, 인공 피부에 있어서 정상적인 천연 피부와 매우 근사한 표피 기저막 및 진피의 고차 구조를 가져오기 때문에, 이들의 조합은 본 발명의 인공 피부를 형성시키기 위한 배양액으로서도 유용하다. 따라서, 본 발명의 다른 양태로서, 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제를 포함하여 이루어지는 인공 피부 배양액이 제공된다. 또한, 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제 및 헤파라나제 저해제를 생체의 피부에 적용한 경우에는, 표피 기저막 및 진피의 재생·수복이 유의하게 촉진되는 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명의 또 다른 양태에 있어서는, 1 또는 복수의 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제를 포함하여 이루어지는 피부 기저막 및/또는 진피의 재생·수복을 촉진시키기 위한 피부 부활(賦活)용 조성물이 제공된다. 여기서 「피부 부활」이란, 예컨대 가령 등에 따른 기저막 및/또는 신비의 구조 변화에 따른 피부의 기능 저하, 구체적으로는 피부의 주름, 경화 등을 방어·개선하는 것을 의미한다.
상기 인공 피부 배양액 또는 피부 부활 조성물에는, 활성 성분으로서 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제가 피부 기저막 및 진피의 재생·수복을 촉진시키기 위해 충분한 농도에 있어서 함유되고, 전형적으로는 배양액 또는 조성물에 대하여 각각 0.0000001 중량％∼10 중량％, 적합하게는 0.000001 중량％∼10 중량％로 함유된다.
또한, 상기 인공 피부 배양액 또는 피부 부활 조성물에는, 이들을 조제할 때에 상용되고 있는 부형제 등을 비롯하여, 향료, 유지류, 계면 활성제, 방부제, 금속 이온 봉쇄제, 수용성 고분자, 증점제, 분말 성분, 자외선 방어제, 보습제, 약효 성분, 산화 방지제, pH 조정제, 세정제, 건조제, 유화제 등을 적절하게 배합할 수 있다. 이들 각종 성분을 본 발명의 인공 피부 배양액 또는 피부 부활 조성물에 배합하는 경우에는, 본 발명의 소기의 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 행할 필요가 있다.
실시예
1. 피부 모델의 배양 방법
피부 모델(EFT-400, MatTeK사 제조)을 전용 배지(EFT-400-ASY, MatTeK사 제조) 중에서 배양하였다. 대조군으로서, 디메틸술폭시드(DMSO)와 에탄올을 최종 농도가 0.1％가 되도록 전용 배지에 첨가하고, 헤파라나제 저해제군으로서, 최종 농도가 50 μM가 되도록 50 mM의 1-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-3-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-우레아(DMSO 용매)를 전용 배지에 첨가하며, MMP 저해제군으로서, 최종 농도가 10 μM가 되도록 10 mM의 N-히드록시-2-[[(4-메톡시페닐)술포닐]3-피콜릴)아미노]-3-메틸부탄아미드염산염(CGS27023A, 에탄올 용매)을 전용 배지에 첨가하고, 그리고 헤파라나제 저해제+MMP 저해제군으로서, 각각 최종 농도가 50 μM 및 10 μM가 되도록 50 mM의 1-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-3-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-우레아(DMSO 용매) 및 10 mM의 CGS27023A(에탄올 용매)를 전용 배지에 첨가하여, 이들을 배양하였다.
2. 전자 현미경 관찰
반으로 컷트한 배양 후의 상기 피부 모델을 잼보니 고정액으로 고정하고, 오스뮴산으로 후고정 후, 정법에 따라 수지에 포매하였다. 조직의 관찰은 초박 절편을 제조하고, 초산우라늄에 의해 염색한 후 전자 현미경(니혼덴시가부시키가이샤 제조 JEM-1230)을 이용하여 행하였다. 통상의 배양액에 용매를 첨가하여 배양한 피부 모델(대조군), MMP 저해제로서 N-히드록시-2-[[(4-메톡시페닐)술포닐]3-피콜릴)아미노]-3-메틸부탄아미드염산염(CGS27023A)만을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(A군), 헤파라나제 저해제로서 1-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-3-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-우레아만을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(B군), 및 N-히드록시-2-[[(4-메톡시페닐)술포닐]3-피콜릴)아미노]-3-메틸부탄아미드염산염(CGS27023A)과 1-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-3-[4-(1H-벤조이미다졸-2-일)-페닐]-우레아의 양방을 배양액에 첨가하여 배양한 피부 모델(C군)의 비교를 미세 형태학적으로 행하였다. 상기 결과를 이하의 표에 나타낸다.
Figure pat00001
◎ 명백한 연속성이 관찰됨; △ 약한 연속성이 관찰됨; × 연속성이 없음; ― 관찰되지 않음
정상 인간 피부에서 관찰되는 구조 중, 계류 섬유 구조의 형성은 C군, 즉 MMP 저해제와 헤파라나제 저해제의 양방을 첨가한 경우만 관찰되었다. 또한 지금까지 보고된 피부 모델에서는 출현시킬 수 없었던, 피부의 매트릭스 형성에 중요한 역할을 담당하고 있다고 생각되고 있는 피브리포지터의 출현도 C군에서만 관찰되었다. 또한, 피부 모델의 기저막 바로 아래에 있어서 구조 형성된 엘라스틴의 출현이 C군에서만 관찰되었다. 이들 결과는 이 피부 모델 C군이 이전에 없이, 생체 피부에 유사하고 있는 것을 나타내고 있다.

Claims (5)

  1. 인간 표피 유래의 케라티노사이트 및 인간 진피 유래의 섬유아세포를 포함하여 이루어지는 인공 피부 형성 배지 중에 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제를 첨가하고, 상기 인공 피부 형성 배지 중의 세포를 배양하고, 그 리고 인공 피부를 형성시키는 것을 포함하는 인공 피부의 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 인공 피부가 연속한 라미나 덴사(lamina densa) 및 상기 라미나 덴사로부터 생기는 앵커링 섬유를 포함하는 표피 기저막과 콜라겐 섬유를 포함하는 진피를 포함하여 이루어지고, 상기 표피 기저막 중에 존재하는 연속한 라미나 덴사로부터 생기는 앵커링 섬유와 진피 중에 존재하는 콜라겐 섬유가 결합함으로써, 표피 기저막과 진피가 강고하게 접착되어 있는 것을 특징으로 하는 인공 피부의 제조 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 인공 피부의 진피가 피브리포지터(fibripositor)를 더 포함하여 이루어지는 것인 인공 피부의 제조 방법.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 인공 피부의 진피에 있어서 엘라스틴 섬유가 형성되는 것을 특징으로 하는 인공 피부의 제조 방법.
  5. 매트릭스 메탈로프로테아제 저해제와 헤파라나제 저해제를 포함하는 피부 부활용(皮膚賦活用) 조성물.
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