KR20170080579A - 파괴된 과민성 반응 박스를 갖는 유발제 펩티드 및 그의 용도 - Google Patents

파괴된 과민성 반응 박스를 갖는 유발제 펩티드 및 그의 용도 Download PDF

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플랜트 헬스 케어, 인코포레이티드
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Abstract

활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때 과민성 반응을 유도하지 않는 펩타이드가 개시된다. 이들 펩타이드는 또한 바람직하게는, 개선된 용해도, 안정성, 화학 분해에 대한 저항성, 또는 이들 특성의 조합을 나타낸다. 식물 생화학적 신호전달을 부여하거나, 식물에게 질환 내성을 부여하거나, 생물 스트레스에 내한 내성을 부여하거나, 비생물 스트레스에 대한 내성 및 내성을 부여하거나, 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성을 부여하거나, 과일 또는 야채에 수거 후 질환 또는 수거 후 건조 내성을 부여하거나, 또는 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키기 위한 이들 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드, 또는 이를 인코딩하는 DNA 작제물의 용도가 또한 개시되어 있다.

Description

파괴된 과민성 반응 박스를 갖는 유발제 펩타이드 및 그것의 용도{ELICITOR PEPTIDES HAVING DISRUPTED HYPERSENSITIVE RESPONSE BOX AND USE THEREOF}
본원은 하기 특허원의 우선권 이익을 청구한다: U.S. 가특허 출원 시리즈 번호62/058,535(2014년 10월 1일 출원), 및 U.S. 가특허 출원 시리즈 번호62/186,527 (2015년 6월 30일 출원) (이들 각각은 그 전체가 참고로 편입되어 있음).
본 발명은 신규 파괴된 과민성 반응 박스를 갖는 유발제 펩타이드 및 성장 향상, 질환 저항성, 해충 또는 곤충 저항성, 및 스트레스 저항성을 활성 식물 반응을 유도하는 그것의 용도에 관한 것이다.
하핀 단백질(harpin proteins)의 확인 및 단리는 식물 병원성 박테리아가 식물과 상호작용하는 방법을 이해하는 것을 시도한 코넬 대학(Cornell University)에서의 기본 연구로부터 왔다. 제1의 방어 선은 감염 부위에서 국재화된 식물 세포사인, 과민성 반응(HR)이다. 세포사는 병원체의 운동에 대한 물리적 방벽을 생성하며 일부 식물에서 죽은 세포는 침입하는 병원체에 대해 독성인 화합물을 방출할 수 있다. 연구는 병원성 박테리아가 HR을 개시하는데 관여하는 단일 인자를 가질 수 있음을 나타내었다. 코넬 연구의 근본적인 목표는 HR을 유발하는데 관여하는 특이적인 박테리아 단백질을 확인하는 것이었다. 표적 단백질은 과민성 반응 및 병원성(hrp) 유전자 클러스터라고 불리는 박테리아 유전자의 그룹 중 하나에 의해 인코딩된 것으로 알려져 왔다. 배 및 사과에서 부란병(fire blight)를 유발하는, 박테리움 어위니아 아밀로보라(어위니아 아밀로보라) (Ea)에서 hrp 클러스터가 해부되어 특정 식물에서 HR을 유발한 단일 단백질이 확인되었다. 당해 단백질은 하핀(및, 후에, 하핀Ea) 이름이 부여되었으며 상응하는 유전자는 hrpN로 지정되었다. 이는 그와 같은 단백질 및 임의의 박테리아 종으로부터 확인된 유전자의 첫 번째 예였다.
수많은 상이한 하핀 단백질은, 이후로 다른 것 중에서 어위니아, 슈도모나스, 랄스토니아, 크산토모나스, 및 판토에아 종으로부터 확인되었다. 하핀 단백질은, 1차 아미노산 서열 수준에서 다양하지만, 공통의 생화학적 및 생체물리학적 특징 뿐만 아니라 생물학적 기능도 공유한다. 그것의 독특한 특성을 기반으로, 하핀 단백질은 문헌에서 단백질의 단일 부류에 속하는 것으로 고려되고 있다.
그것의 확인 및 단리에 이어서, 그 후에 하핀이 식물에서 질환 내성을 유발하고 식물 성장을 증가시킴이 발견되었다. 중요한 조기 발견은 정제된 하핀 단백질의 적용이 식물을 후속의 병원체 공격, 및 식물이 주사 부위로부터 매우 떨어진 위치에서 내성이 되도록 할 수 있다는 것이다. 이는 하핀 단백질이 전신 획득된 내성 (SAR), 다양한 바이러스, 박테리아, 및 진균 병원체에 대한 내성을 제공하는 식물 방어 메커니즘을 개시할 수 있음을 의미한다.
작물 보호에 있어서, 식물의 건강을 개선시키는 조성물에 대한 요구가 지속되고있다. 보다 건강한 식물은 이들이 더 나은 수율을 초래하고/하거나 더 나은 품질의 식물 또는 농작물을 생성하기 때문에 바람직하다. 보다 건강한 식물은 또한 항생제 및 비생물 스트레스를 더 잘 견딜 수 있다. 생물 스트레스에 대한 높은 내성은 결국 재배자가 적용된 살충제의 양을 감소시키고 결과적으로 각 살충제에 대한 내성의 발달을 지연시킬 수 있도록 한다.
하핀αβ은 몇 개의 상이한 하핀으로부터 유도된 융합 단백질이다. 하핀은 선충 에크 생산을 억제하고, 식물의 성장, 품질 및 수율을 향상시키며, 식물의 활력을 증가시키는 것으로 나타났다. 그것의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열은 다음에 상세히 기재되어 있다: U.S. 공개 출원번호 제2010/0043095호.
현재까지, 하핀 및 하핀αβ 생산 및 농업적 및 원예 적용에서 그것의 용도는 전분 상에 코팅된 분말화된 고형물로서 얻었다. 물 속에서 분말화된 하핀 단백질의 액체 현탁액은 유의미한 분해 및 활성의 손실 전에 단지 48 내지 72시간의 유효한 유효 기간을 가지므로, 이는 하핀 단백질의 용도 및 다능성을 제한한다. 하핀 용액을 사용한 또 다른 문제는 단백질 용해도 및 안정성이다.
수용액에서 쉽게 용해되고, 안정한, 화학 분해에 대해 내성있고, 다른 것 중에서, 향상된 식물 성장 및 생산, 뿐만 아니라 무생물적 및 생물 스트레스요인에 대한 저항성을 포함하는 활성 식물 반응을 유도하는데 유효한 합성 및 유도성 하핀 펩타이드를 확인하는 것이 바람직하다.
본 발명은 당해 기술에서 이들 및 다른 제한을 극복하는 것을 지향한다.
본 발명의 제1 측면은 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
J-X-X-X-J-J-X-X-X-J-J-X-X-X-J-J (서열식별번호: 1) 여기서
펩타이드는 시스테인 및 메티오닌을 포함하지 않고;
위치 2, 3, 7, 8, 12, 및 13에서의 각 X는 선택적이고, 존재할 때, 임의의 아미노산이고;
위치 4, 9, 및 14에서의 각 X는 임의의 아미노산이고;
1, 5, 6, 10, 11, 15, 및 16번 위치에서 J 잔기 중 1 내지 3개는 비-소수성 아미노산 또는 A이고, 그리고 J 잔기 중 다른 것 모두는 L, I, V, 또는 F이고, 그리고 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제2 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
XXGISEKXXXXXXXXXXXXXXXX (서열식별번호: 2, 변형된 P1/P4 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 선택적이고 S, N, D, 이소D, G, A, 또는 S이며;
2번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
9번 위치에서 X는 M, L, I, F, 또는 V, 또는 비-소수성 아미노산이고;
10번 위치에서 X는 선택적이고 D 또는 이소D이며;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
12번 위치에서 X는 M, L, I, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
13번 위치에서 X는 M, L, 또는 I, 또는 비-소수성 아미노산이고;
14번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 S, T, D, 이소D, K, 또는 Q, 및 선택적으로 A 또는 C일 수 있고;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
16번 위치에서 X는 M, L, I, V, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
17번 위치에서 X는 M, L, I, A, 또는 V, 또는 비-소수성 아미노산이고;
18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, M, T, 또는 K이며;
19번 위치에서 X는 A, D, 이소D, S, V, T, K, R, E, H, 또는 G이고;
20번 위치에서 X는 M, L, 또는 I이며;
21번 위치에서 M, L, I, V, S, 또는 F, 또는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S이며;
23번 위치에서 X는 P, Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
여기서 9, 12, 13, 16, 17, 및 20번 위치에서 잔기 중 적어도 1개는 비-소수성 아미노산이거나, 또는 21번 위치에서 잔기는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고; 그리고 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제3 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
SXGISEKXXDXXXXXXXXAXXXP (서열식별번호: 3, 변형된 P4 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
9번 위치에서 X는 M, S, L, A, I, V, 또는 F, 또는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
12번 위치에서 X는 L, I, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
13번 위치에서 X는 L, A, I, V, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
14번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산이고;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
16번 위치에서 X는 L, A, I, V, M, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
17번 위치에서 X는 M, I, S, 또는 F, 또는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고;
18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
20번 위치에서 X는 M, L, I, V, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
21번 위치에서 X는 M, L 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고; 그리고
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고,
여기서 9, 12, 13, 16, 20, 및 21번 위치에서 잔기 중 하나는 비-소수성 아미노산 또는 A이거나, 또는 17번 위치에서 잔기는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고; 그리고 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제4 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
XXGISEKXJDXJJTXJJXAJJXX (서열식별번호: 4, 변형된 P1 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 N, D, 이소D, G, A, 또는 S이고;
2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
18번 위치에서 X는 M, T, K, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
23번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
9, 12, 13, 16, 17, 20, 및 21번 위치에서 J는 L,V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 하나는 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제5 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) KPXDSXSXJAKJJSXJJXSJJX (서열식별번호: 5, 변형된 P15b/P20 공통), 여기서
3번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
15번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이며;
18번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
22번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
9, 12, 13, 16, 17, 20, 및 21번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
또는
(ii) JAKJJSXJJXSJJX (서열식별번호: 6, 변형된 P15/20 min 공통), 여기서
7번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이고;
10번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
14번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
1, 4, 5, 8, 9, 12, 및 13번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 그리고
상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제6 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
PSPJTXJJXXJJGXJJXAXN (서열식별번호: 7, 변형된 P6/6a 공통), 여기서
6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
9번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이며;
10번 위치에서 X는 H 또는 N이고;
14번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 또는 이소D이며;
17번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
19번 위치에서 J는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고; 그리고
4, 7, 8, 11, 12, 15, 및 16번 위치에서 J는 L, V, I, M, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제7 국면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) XXXXXXJXXJJXXJJXJJK (서열식별번호: 8, 변형된 P14d 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 Q, N, D, E, g-글루타메이트, 이소D, 또는 S일 수 있고;
2번 위치에서 X는 D, E, g-글루타메이트, 이소D일 수 있으며;
3번 위치에서 X는 P, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
4번 위치에서 X는 M, A, S, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
5번 위치에서 X는 Q, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
6번 위치에서 X는 A, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
8번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
9번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
12번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
13번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
16번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
위치 7, 10, 11, 14, 15, 17, 및 18번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이거나; 또는
(ii) JXXJJXXJJXJJK (서열식별번호: 9, 변형된 P14d min 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
3번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
6번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
7번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
1, 4, 5, 8, 9, 11, 및 12번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제8 측면은 하기 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) JXXJJXJJXXJJ (서열식별번호: 10, 변형된 P25 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
3번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
6번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
9번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
10번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고; 그리고
1, 4, 5, 7, 8, 10, 및 11번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 또는
(ii) JXXJJXXJJXJJXXJJ (서열식별번호: 11, 변형된 P25 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 T, S, A, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이고;
3번 위치에서 X는 G, T, S, A, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이며;
6번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
7번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
13번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G이고;
14번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고;
1, 4, 5, 8, 9, 11, 12, 및 15번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 16번 위치에서 및 J는 선택적이고 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고; 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제9 측면은 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) XXXXXXXXXXXJXXJJXXJJXXJJXXX (서열식별번호: 12, 변형된 P17/18), 여기서
1번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, N, 이소D, K, 또는 R이며;
5번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 D, 이소D, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, N, Q, K, 또는 R이고;
6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, 또는 K이며;
7번 위치의 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
8번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 T, Q, S, E, g-글루타메이트, A, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
9번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R일 수 있고;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 E, g-글루타메이트, Q, S, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
13번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
14번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
17번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
18번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
21번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
22번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
25번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이며;
26번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있고;
27번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R일 수 있고;
12, 15, 16, 19, 20, 23, 및 24번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; or
(ii) JXXJJXXJJXXJJ (서열식별번호: 13, 변형된 P17/18 min 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R일 수 있고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있고; 그리고
1, 4, 5, 8, 9, 12, 및 13번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제10 측면은 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
XJXXJJXJJXXJJ (서열식별번호: 14, 변형된 P19 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 선택적이고 L, I, V, F, 또는 M이고;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 K일 수 있고; 그리고
2, 5, 6, 8, 9, 12, 및 13번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제11 측면은 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
Z1-LLXLFXXIL-Z2 (서열식별번호: 126, P3 최소) 여기서
3번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
6번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고; 그리고
여기서 Z1 및 Z2 중 하나는 존재하지만, 바람직하게는 둘 모두는 아니고, Z1는 LXX- (여기서 각 X는 친수성 아미노산임), 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R을 포함하고, 그리고 Z2를 -XXLF (여기서 각 X는 친수성 아미노산, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R임)을 포함한다.
본 발명의 제12 측면은 the 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드에 관한 것이다: L-X-X-(L/I)-(L/I)-X-X-(L/I/V)-(L/I/V) (서열식별번호: 116), 여기서 상기 펩타이드는 시스테인 및 메티오닌이 없고; 2, 3, 6, 7번 위치에서 각 X는 임의의 아미노산이고; 그리고 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
본 발명의 제13 측면은 본 발명의 제1 내지 제12 측면의 펩타이드를, 정제 태그, 용해도 태그, 또는 본 발명의 제1 내지 제12 측면 중 하나에 따른 제2 펩타이드 중 1종 이상고 함께 포함하는 융합 단백질에 관한 것이다.
본 발명의 제14 측면은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 단리된 펩타이드에 관한 것이다: DVGQLIGELIDRGLQ (서열식별번호: 15), GDVGQLIGELIDRGLQSVLAG (서열식별번호: 16), SSRALQEVIAQLAQELTHN (서열식별번호: 17), 또는 GLEDIKAALDTLIHEKLG (서열식별번호: 18). 또한 본 발명의 이러한 측면은 이들 펩타이드 중 하나를, 정제 태그, 용해도 태그, 또는 본 발명의 제1 내지 제12 및 제14 측면 중 하나에 따른 제2 펩타이드 중 1종 이상과 함께 포함하는 융합 단백질을 포함한다.
본 발명의 제15 측면은 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13, 또는 제14 측면에 따른 펩타이드 또는 융합 단백질 중 1종 이상, 및 캐리어를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제16 측면은 질환 저항성을 식물에 부여하는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 하기를 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 또는 제14 측면에 따른 단리된 펩타이드 또는 융합 단백질 또는 본 발명의 제15 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 상기 적용은 질환 저항성을 부여하는데 유효한 단계.
본 발명의 제17 측면은 식물 성장을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 하기를 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 또는 제14 측면에 따른 단리된 펩타이드 또는 융합 단백질 또는 본 발명의 제15 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 상기 적용은 식물 성장을 향상시키는데 유효한 단계.
본 발명의 제18 측면은 생물 스트레스요인에 대한 식물의 내성 및 저항성을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 하기를 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 또는 제14 측면에 따른 단리된 펩타이드 또는 융합 단백질 또는 본 발명의 제15 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 여기서 상기 적용은 해충 예컨대 곤충, 거미류, 선충, 잡초, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 생물 스트레스 인자에 대한 을 증가시키는데 유효한 단계.
본 발명의 제19 측면은 비생물 스트레스에 대한 식물의 내성을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 하기를 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 또는 제14 측면에 따른 단리된 펩타이드 또는 융합 단백질 또는 본 발명의 제15 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 여기서 상기 적용은 염 스트레스, 물 스트레스 (가뭄 및 홍수 포함), 오존 스트레스, 중금속 스트레스, 차가운 스트레스, 열 스트레스, 영양 스트레스 (포스페이트, 칼륨, 질소 결핍) 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 비생물 스트레스 인자 에 대한 식물의 내성을 증가시키는데 유효한 단계.
본 발명의 제20 측면은 건조 저항성을 원예 식물로부터 제거된 절단물에 부여하는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 하기를 포함한다: 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 또는 제14 측면에 따른 단리된 펩타이드 또는 융합 단백질 또는 본 발명의 제15 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물이 성장하고 있는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 여기서 상기 적용은 건조 저항성을 상기 원예 식물로부터 제거된 절단물에 부여하는데 효과적인 단계.
본 발명의 제21은 수확후 질환 또는 수확후 건조 저항성을 또는 야채에 부여하는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 하기를 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 또는 제14 측면에 따른 단리된 펩타이드 또는 융합 단백질 또는 본 발명의 제15 측면에 따른 조성물을 과일 또는 야채를 포함하는 식물 또는 식물이 성장하고 있는 유전자좌에 적용하는 단계; 또는 유효량의 상기 단리된 펩타이드 또는 조성물을 수확된 과일 또는 야채에 적용하는 단계로서, 여기서 상기 적용은 수확후 질환 저항성 또는 건조 저항성을 상기 과일 또는 야채에 부여하는데 효과적인 단계.
본 발명의 제22 측면은 과일의 장수 또는 야채 성숙을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 하기를 포함한다: 유효량의 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 또는 제14 측면에 따른 단리된 펩타이드 또는 융합 단백질 또는 본 발명의 제15 측면에 따른 조성물을 과일 또는 야채를 포함하는 식물 또는 식물이 성장하고 있는 유전자좌에 적용하는 단계; 또는 유효량의 상기 단리된 펩타이드 또는 조성물을 수확된 과일 또는 야채에 적용하는 단계로서, 여기서 상기 적용은 과일의 장수 또는 야채 성숙을 향상시키는데 유효한 단계.
본 발명의 제23 측면은 식물의 1종 이상의 생물학적 신호전달 과정을 조절하는 방법에 관한 것이다. 당해 방법은 하기를 포함한다: 유효량의, 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 또는 제14 측면에 따른 단리된 펩타이드 또는 본 발명의 제15 측면에 따른 조성물을 식물 또는 식물이 성장하고 있는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 여기서 상기 적용은 1종 이상의 생화학적 신호전달 과정을 개시하는데 유효한 단계.
본 발명의 제24 측면은 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9, 제10, 제11, 제12, 제13 또는 제14 측면에 따른 펩타이드를 인코팅하는 제1 핵산 분자 또는 이 분자를 함유하는 융합 폴리펩타이드; 및 상기 제1 핵산 분자에 작동가능하게 커플링된 프로모터-유효한 핵산 분자를 포함하는 DNA 작제물에 관한 것이다. 본 발명의 당해 측면은 또한 DNA 작제물을 함유하는 재조합 발현 벡터, DNA 작제물을 함유하는 재조합 숙주세포 뿐만 아니라 본 발명의 재조합 식물 세포를 포함하는 형질전환 식물 또는 식물 종자(이는 DNA 작제물을 함유한다)를 포함한다.
본 발명의 제25 측면은 질환 저항성을 식물에 부여하고, 식물 성장을 향상시키고, 내성 및 저항성을 생물 스트레스요인에 부여하고, 내성을 비생물 스트레스에 부여하거나, 또는 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 본 발명의 제24 측면에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및 DNA 작제물이 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 발현시켜 질환 저항성을 부여하고, 식물 성장을 향상시키고, 내성 및 저항성을 생물 스트레스요인에 부여하고, 내성을 비생물 스트레스에 부여하거나, 또는 형질전환 식물에 대한 생화학적 신호전달을 조절하는데 유효한 조건 하에서 식물을 성장시키는 단계를 포함한다.
본 발명의 제26 측면은 건조 저항성을 원예 식물로부터 제거된 절단물에 부여하고, 수확후 질환 또는 수확후 건조 저항성을 과일 또는 야채에 부여하거나, 또는 과일의 장수 또는 야채 성숙을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 본 발명의 제24 측면에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및 DNA 작제물이 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 발현시켜, 건조 저항성을 형질전환 원예 식물로부터 제거된 절단물에 부여하고, 수확후 질환 저항성 또는 건조 저항성을 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 부여하거나, 또는 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 대한 성숙의 장수를 향상시키는데 유효한 조건 하에서 식물을 성장시키는 단계를 포함한다.
본 발명의 27 측면은 질환 저항성을 식물에 부여하고, 식물 성장을 향상시키고, 내성 및 저항성을 생물 스트레스요인에 부여하고, 내성을 비생물 스트레스에 부여하거나, 또는 생화학적 신호전달을 조절하는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 본 발명의 제24 측면에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 제공하고; 토양에 형질전환 식물 종자를 심고; 그리고 상기 식물 종자로부터의 형질전환 식물을 증식시켜, DNA 작제물이 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 발현시켜, 질환 저항성, 식물 성장을 향상시키고, 내성을 생물 스트레스에 그리고 저항성을 생물 스트레스요인에 부여하거나, 또는 내성을 비생물 스트레스에 부여하는 것을 포함한다.
본 발명의 제28 측면은 건조 저항성을 원예 식물로부터 제거된 절단물에 부여하고, 수확후 질환 또는 수확후 건조 저항성을 과일 또는 야채에 부여하거나, 또는 과일의 장수 또는 야채 성숙을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 이 방법은 본 발명의 제24 측면에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 제공하고; 토양에 형질전환 식물 종자를 심고; 그리고 상기 식물 종자로부터의 형질전환 식물을 증식시켜, DNA 작제물이 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 발현시켜 건조 저항성을 형질전환 원예 식물로부터 제거된 절단물에 부여하고, 수확후 질환 저항성 또는 건조 저항성을 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 부여하거나, 또는 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 대한 성숙의 장수를 향상시키는 것을 포함한다.
과민성 반응을 유도하지 않지만 다른 것 중에서, 과산화물 생산, 성장 향상, 및 생물 및 비생물 스트레스에 대한 저항성을 포함하는 다른 활성 식물 반응을 유도하는 펩타이드를 제공하여, 그와 같은 펩타이드가 바람직하게는 개선된 용해도, 안정성, 화학 분해에 대한 저항성, 또는 이들 특성의 조합을 나타내는 경우, 식물에게 그것의 밭 또는 온실에서 이들 HR-음성 펩타이드를 함유하는 유효한 양 조성물을 준비, 취급 및 전달할 때 큰 융통성을 재배자에게 제공할 것이다. 재배자를 위한 적용 공정의 간소화는 보다 더 큰 순응도로 이어지며, 따라서, 질환 내성, 성장 향상, 생물 스트레스인자에 대한 내성 및 내성, 비생물 스트레스에 대한 내성, 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대한 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대한 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대한 과일 또는 야채의 개선된 성숙 수명 중의 1종 이상과 관련하여 개선된 결과를 가져올 것이다. 이들 및 다른 이점은 본 명세서에 기재되어 있다.
본 발명의 일 측면은 활성 식물 반응을 유도하지만 과민성 반응을 유도하기 않는 능력을 소유하고 하기 속성 중 1종 이상을 부여하는 능력을 갖는 신규 펩타이드에 관한 것이다: 변형된 생화학적 신호전달; 향상된 성장; 병원체 저항성; 및/또는 생물 또는 비생물 스트레스 저항성.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 천연 발생 아미노산은 하기 목록에 따른, 아미노산의 통속명에 상응하는 종래의 3-문자 및/또는 1-문자 약어를 통해 확인된다: 알라닌 (Ala, A), 아르기닌 (Arg, R), 아스파라긴 (Asn, N), 아스파르트산 (Asp, D), 시스테인 (Cys, C), 글루탐산 (Glu, E), 글루타민 (Gln, Q), 글리신 (Gly, G), 히스티딘 (His, H), 이소류신 (Ile, I), 류신 (Leu, L), 라이신 (Lys, K), 메티오닌 (Met, M), 페닐알라닌 (Phe, F), 프롤린 (Pro, P), 세린 (Ser, S), 트레오닌 (Thr, T), 트립토판 (Trp, W), 티로신 (Tyr, Y), 및 발린 (Val, V). 다음 약어는 펩타이드에서 허용되며 생화학적 명명법에서 IUPAC-IUB 위원회에 의해 권고되어 있다. 아미노산의 천연 발생 변화는, 비제한적으로, 감마-글루타메이트 (g-Glu) 및 이소아스파르테이트 (이소-Asp 또는 이소D)를 포함한다.
용어 “아미노산"은 추가로, 본 명세서에서 언급된 임의의 특정 아미노산의 유사체, 유도체, 및 동족체, 뿐만 아니라 C-말단 또는 N-말단 보호된 아미노 산 유도체 (예를 들면, 지질의아세틸화, 포르밀화, 메틸화, 아미드화, 에스테르화, 페길화, 및 부가를 비제한적으로 포함하여 N-말단, 측쇄, 또는 C-말단 보호 그룹 에 의해 변형됨)을 포함한다. 비-천연 발생 아미노산은 잘 알려져 있으며 아래에서 기재된 바와 같은 고상 합성을 사용하여 본 발명의 펩타이드내로 도입될 수 있다. 더욱이, 용어 “아미노산"은 D- 및 L-아미노산 둘 다를 포함한다. 그러므로, 그것의 이름, 3 문자 또는 1문자 기호에 의해 본원에 확인되고 D 또는 L 입체배치를 가진 것으로 구체적으로 확인되지 않은 아미노산은 D 또는 L 입체배치중 임의의 하나를 추정하는 것으로 이해된다. 일 구현예에서, 펩타이드는 모든 L-아미노산을 포함한다.
특정 구현예에서, 펩타이드는 인용된 서열"로 구성된" 것으로 확인되며, 이 경우에 펩타이드는 이의 N- 또는 C-말단에서 임의의 이질적인 아미노산을 제외한 인용된 아미노산 서열(들) 만을 포함한다. 인용된 서열이 공통 서열의 형태인 정도로(여기서 주목된 X 또는 Xaa 잔기의 1종 이상은 1종 이상의 아미노산 중 어느 것일 수 있다), 다중 펩타이드 서열은 그와 같은 인용된 서열로 구성된 펩타이드에 포함된다.
특정 다른 구현예에서, 펩타이드는 인용된 서열로 “본질적으로 구성된" 것으로 확인되며, 이 경우에 상기 펩타이드는 이의 N- 및/또는 C-말단에서 임의로 1종 이상의 이질적인 아미노산을 지닌 인용된 아미노산 서열(들)을 포함하며, 이러한 이질적인 아미노산은 하기 특성의 1종 이상을 물질적으로 변경시키지 않는다: (i) 활성 식물 반응을 유도하기 위한 펩타이드의 능력, (ii) 물 또는 수용액에서 펩타이드의 용해도, (iii) 50 ℃에서 일정 기간에 걸쳐 물 수용액에서 용해된 펩타이드의 안정성 (예를 들면, 3 주), (iv) 하기 예의 살생물제를 포함하는 수성 완충된 용액의 존재에서 화학 분해에 대한 펩타이드의 저항성 (예를 들면, Proxel®GXL), 50 ℃에서 일정 기간에 걸쳐 (예를 들면, 3 주); 및 (v) 식물에의 침윤 또는 적용시 과민성 반응을 유도하기 위한 펩타이드의 무능.
간단히, 펩타이드의 안정성 및 화학 분해에 대한 내성은 초기 순도가 적어도 약 80%, 적어도 약 82%, 적어도 약 84%, 적어도 약 86%, 적어도 약 88%, 적어도 약 90%, 적어도 약 92%, 적어도 약 94%, 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 98%인 펩타이드 샘플을 사용하여 아래와 같이 평가된다. 물 안정성의 경우, 펩타이드는 탈이온수에 직접 용해된다. 화학 분해 시험의 경우, 펩타이드는 50 mM pH 버퍼 및 0.25% 프록셀 GXL을 함유하는 수용액에 용해된다. 예시적인 pH 버퍼는 비제한적으로 하기를 포함한다: (i) 시트레이트 pH 5.6; (ii) MES pH 6.2; (iii) MOPS pH 6.5; (iv) 이미다졸 pH 7.0; (v) 시트레이트 pH 7.2; (vi) EDDS, pH 7.3; (vii) EDTA pH 8.0; (viii) 인산나트륨 pH 8.0; 또는 (ix) TES pH 8.0.펩타이드는 우선 0.5 mg/ml의 농도에서 수용액에 용해된다. 샘플은 가속화된 분해를 허용하기 위해 50 ℃에서 인큐베이션된다. 펩타이드의 초기 샘플은 제거되고, 물로 10x 희석되며, 역상 HPLC로 분해된다. 간단히, 샘플의 20 l는 HPLC 기기의 용매 흐름에 주입되고 상이한 펩타이드 종을 분리하기 위해 트리에틸아민 포스페이트을 물/아세토니트릴 구배로 또는 물/0.1% TFA 중0.1% TFA를 아세토니트릴 구배로 사용하여 C18 HPLC 칼럼 (YMC ProPack C18, YMC, Japan, 또는 C18 Stablebond, Agilent Technologies, USA) 상에서 분석된다. 펩타이드의 용출을 218 n메서 UV 흡광도로 로 모니터링하고 피크하 영역을 기반으로 정량화한다. 초기 펩타이드 샘플에 대한 피크하 영역을 후속의 작업에서 상대적인 정량화를 위한 표준으로서 처리한다. 규칙적 간격(예를 들면, 1, 3, 7, 10, 14, 17, 및 21일)에서, 각 펩타이드 샘플을 조사하고 상기에서 기재된 바와 같이 HPLC로 분석한다. 분해를 관찰하는데 필요한 경우(즉, 펩타이드가 고도의 화학 안정성을 나타내는 경우), 당해 프로토콜을 몇 주까지 연장시켜 분해를 관찰한다. 후속의 펩타이드 작업의 정량화는 최초 (0 일째) HPLC 결과의 퍼센트로 나타낸다.
물 또는 수용액 속에서 적어도 부분적으로 가용성인 펩타이드는 0.1 mg/ml, 바람직하게는 적어도 약 1.0 mg/ml보다 높은, 적어도 약 2.0 mg/ml, 적어도 약 3.0 mg/ml, 또는 적어도 약 4.0 mg/ml의 용해도를 나타낸다. 특정 구현예에서, 펩타이드는 물 또는 수용액 속에서 높은 용해도, 적어도 약 5.0 mg/ml, 적어도 약 10.0 mg/ml, 적어도 약 15.0 mg/ml, 또는 적어도 약 20 mg/ml의 용해도를 나타낸다.
물 또는 수용액에서 안정한 펩타이드는 50 ℃에서 인큐베이션된 지정된 기간에 걸쳐 최초 펩타이드 농도의 적어도 약 66%, 적어도 약 68%, 적어도 약 70%, 적어도 약 72 %, 적어도 약 74 %, 적어도 약 76%, 적어도 약 78%, 적어도 약 80%, 적어도 약 82%, 적어도 약 84%, 적어도 약 86%, 적어도 약 88%, 또는 적어도 약 90%를 나타낸다. 특정 구현예에서, 상기 지정된 기간은 3일, 7일, 14일, 21일, 28일, 1개월, 2개월, 또는 3개월이다.
화학 분해에 대해 내성이 있는 펩타이드는 50 ℃에서 인큐베이션된 지정된 기간에 걸쳐 최초 펩타이드 농도의 적어도 약 66%, 적어도 약 68%, 적어도 약 70%, 적어도 약 72 %, 적어도 약 74 %, 적어도 약 76%, 적어도 약 78%, 적어도 약 80%, 적어도 약 82%, 적어도 약 84%, 적어도 약 86%, 적어도 약 88%, 또는 적어도 약 90%를 나타낸다. 특정 구현예에서, 지정된 기간은 3 일, 7 일, 14 일, 21 일, 28 일, 1 개월, 2 개월, 3 개월, 또는 4 개월이다. 50 ℃에서 4 개원의 안정성은 실온에서 2년의 안정성과 거의 같다.
식물 조직에 대해 펩타이드의 침윤 또는 적용 시 과민성 반응을 유도하거나 유도하지 않는 펩타이드의 특성은 건조 분말 형태 또는 용액 형태의 상기 펩타이드를 특히 배타적으로 식물 잎에서 만이 아닌 식물에 적용하여 측정할 수 있다. 적용율은 액체 용액의 경우 1-500 ug/ml 및 분말 적용의 경우 0.0001 - 0.5% (w/w)를 포함한다. 용액 형태의 펩타이드의 예시적인 적용은 첨부된 실시예에 기재되어 있다. 식물이 48시간내 영향받은 조직의 시들음 및 갈변을 동반하면서, 나안으로 가시성인 광범위한 거시적인 세포 사멸을 나타내는 경우, 이들은 HR-양성(“HR+")으로 고려된다. 식물이 나안으로 관찰가능한 인식할 수 있는 시들음 또는 조직 사멸을 나타내지않는 경우, 이들은 HR-음성 (“HR-")으로 고려된다. HR- 펩타이드는, 나안으로 관측되지 않는 처리된 조직에서 세포의 작은 부분의 사망을 야기할 수 있다.
특정 구현예에서, 1종 이상의 특성의 물질 변경은 1종 이상의 이질적인 아미노산을 지닌 펩타이드를 1종 이상의 이질적인 아미노산을 결여하는 다른 동일한 펩타이드와 비교하는 경우 인용된 특성에 있어서 20% 미만의 변화, 15% 미만의 변화, 10% 미만의 변화, 또는 5% 미만의 변화가 있는 경우를 의미하는 것으로 의도된다. 특정 구현예에서, N- 또는 C-말단에서 다수의 이질적인 아미노산은 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 20개 아미노산, 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 15 아미노산, 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 10개의 아미노산, 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 7개 아미노산, 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 5개의 아미노산, 또는 1개 또는 둘 모두의 말단에서 최대 3개의 아미노산이다. 또한, 인용된 서열이 공통 서열의 형태로 존재하는 정도까지(여기서 나타낸 X 또는 Xaa 잔기의 1종 이상은 1종 이상의 아미노산 중 어느것일 수 있다), 다중 펩타이드 서열은 이의 N- 및/또는 C-말단에서 이질적인 아미노산의 존재에 의해 영향받은 이러한 서열의 추가의 변화없이, 본질적으로 그와 같은 인용된 서열로 구성된 펩타이드에 의해 포함된다.
본 발명의 다양한 구현예에서, 개시된 펩타이드는 예를 들면, 지정된 펩타이드 서열의 N-말단 또는 C-말단에서 친수성 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 친수성 아미노산 서열은 길이가 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 또는 적어도 10개의 아미노산이고, 지정된 펩타이드(즉, 활성 식물 반응을 유도하는 펩타이드)의 아미노산 서열에 인접한 아미노산 서열의 친수성 특성이 기여하는 아미노산 잔기를 포함한다. 상이한 방법이 당해 기술에 사용되어 아미노산 잔기 및 단백질의 상대적 소수성/친수성을 계산하여 왔다(Kyte 등,“A Simple Method for Displaying the Hydropathic Character of a Protein," J. Mol. Biol. 157:105-32 (1982); Eisenberg D, “Three-dimensional Structure of Membrane and Surface Proteins," Ann. Rev.Biochem.53:595-623 (1984); Rose 등,“Hydrogen Bonding, Hydrophobicity, Packing, and Protein Folding," Annu.Rev.Biomol.Struct. 22:381-415 (1993); Kauzmann, “Some Factors in the Interpretation of Protein Denaturation," Adv.Protein Chem. 14:1-63 (1959)(이들은 그 전체가 참고로 편입되어 있다). 이들 소수성 규모중 임의의 하나가 본 발명을 위해 사용될 수 있으나; Kyte-Doolittle 소수성 규모가 아마도 가장 흔히 참고된 규모이다. 이들 소수성 규모는 아미노산 잔기의 상대적인 소수성에 대한 순위 목록을 제공한다. 예를 들면, 친수성에 기여하는 아미노 산은 Arg (R), Lys (K), Asp (D), Glu (E), Gln (Q), Asn (N), 및 His (H) 뿐만 아니라, 더 적은 정도이지만, Ser (S), Thr (T), Gly (G), Pro (P), Tyr (Y), 및 Trp (W)도 포함한다. 예를 들면, 폴리글루타메이트 서열은 단백질 및 다른 약물 분자의 용해도를 향상시키는데 사용될 수 있다(Lilie 등, Biological Chemistry 394(8):995-1004(2013); Li 등, Cancer Research 58: 2404-2409(1998))(이들 각각은 그 전체가 참고로 편입된다).
단백질 또는 아미노산 서열의 “소수성 지수"는 이의 평균 친수성 또는 소수성 특성을 나타내는 숫자이다. 음성 소수성 지수는 목적한 아미노산 서열의 친수성을 정의한다. 소수성 지수는 목적한 아미노산 서열의 친수성에 직접적으로 비례하므로; 지수가보다 음성일수록, 이의 친수성은 더 크다. 특정 구현예에서, 위에서 기술된 부가된 친수성 아미노산 서열은 0, -0.4, -0.9, -1.3, -1.6, -3.5, -3.9, 또는 -4.5 미만의 소수성 지수를 갖는다. 특정 구현예에서, 수득한 전체 펩타이드는 소수성 지수가 0.3, 0.2, 0.1, 또는 0.0 미만, 바람직하게는 -0.1, -0.2, -0.3, -0.4 미만, 더 바람직하게는 -0.5, -0.6, -0.7, -0.8, -0.9, 또는 -1.0 미만일 것이다.
본 발명의 펩타이드에서, 펩타이드 전체적으로 또는 부가된 친수성 아미노산 서열에 대해 친수성 소수성 지수에 기여하는 아미노산은 Arg (R), Lys (K), Asp (D), Glu (E), Gln (Q), Asn (N), His (H), Ser (S), Thr (T), Gly (G), Pro (P), Tyr (Y), 및 Trp (W)를 포함한다. 이들 중, Asp (D), Glu (E), Gln (Q), Asn (N) 또는 그것의 변이체가 바람직하다. 예시적인 변이체는 Glu의 경우 g-글루타메이트 및 Asp의 경우 이소아스파르트산 (또는 이소D)를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 본 발명의 이들 및 다른 측면에서, 용어 “소수성 아미노산" 은 지정된 아미노산 서열의 소수성 지수에 대해 소수성을 부여하는 아미노산을 말하는 것으로 의도된다. 전체적으로 펩타이드 또는 이의 특정한 아미노산 서열에 대해 소수성 소수성 지수에 기여하는 아미노산은 Ile (I), Val (V), Leu (L), Phe (F), Cys (C), Met (M), 및 Ala (A)을 포함한다. 특정 구현예에서, 용어 “소수성 아미노산"은 Ile (I), Val (V), Leu (L), Phe (F), Cys (C), Met (M), 및 Ala (A)중의 임의의 하나; 또는 대안적으로, Ile (I), Val (V), Leu (L), Phe (F), 및 Ala (A) 중의 임의의 하나를 언급할 수 있다. 특정 다른 구현예에서, 용어 “소수성 아미노산"은 Ile (I), Val (V), Leu (L), 및 Phe (F) 중 하나를 말할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 “비-소수성 아미노산"은 상기-확인된 소수성 규모들 중 하나에서 친수성(또는 소수성이 아닌)인 아미노산을 의미하는 것으로 의도된다. 당해 용어는 일반적으로 펩타이드 전체 또는 부가된 친수성 아미노산 서열에 대해 친수성 소수성 지수에 기여하는 아미노산을 말한다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 펩타이드는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
J-X-X-X-J-J-X-X-X-J-J-X-X-X-J-J (서열식별번호: 1)
여기서 상기 펩타이드는 시스테인 및 메티오닌이 없고, 위치 2, 3, 7, 8, 12, 및 13에서의 각 X는 선택적이고, 존재할 때, 임의의 아미노산, 4, 9, 및 14번 위치에서 각 X 잔기는 임의의 아미노산, 1, 5, 6, 10, 11, 15, 및 16번 위치에서 J 잔기 중 1 내지 3개는 비-소수성 아미노산 또는 A (바람직하게는, A가 존재할 때, 1, 5, 6, 10, 15, 또는 16번 위치 하나에 있음)이고, 그리고 J 잔기 중 다른 것 모두는 L, I, V, 또는 F, (바람직하게는 L, I, 또는 V)이고; 그리고 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
특정 구현예에서, 펩타이드는 하기를 포함하지 않거나 그것으로 구성되지 않는다: 아미노산 서열 DVGQLIGELIDRGLQ (서열식별번호: 15), GDVGQLIGELIDRGLQSVLAG (서열식별번호: 16), SSRALQEVIAQLAQELTHN (서열식별번호: 17), 또는 GLEDIKAALDTLIHEKLG (서열식별번호: 18). 이들 펩타이드 각각은 하기에서 확인된다: Haapalainen 등,Functional Mapping of Harpin HrpZ of Pseudomonas syringae Reveals the Sites Responsible for Protein Oligomerization, Lipid Interactions, and Plant Defence Induction," Mol.Plant Pathol.12(2):151-66 (2011)(이것은 본 명세서에 참조로서 전체적으로 편입되어 있음).
일 구현예에서, 1, 5, 6, 10, 11, 15, 및 16번 위치에서 J 잔기 중 1 내지 3개는 비-소수성 아미노산이고, 그리고 모든 다른 것은 바람직하게는 L, I, V, 또는 F이다. 특정한 구현예에 따르면, 1, 5, 6, 10, 11, 15, 및 16번 위치에서 J 잔기 중 2개 이하는 비-소수성이다. 또 다른 구현예에서, 1, 5, 6, 10, 11, 15, 및 16번 위치에서 J 잔기의 1개 이하는 비-소수성이다.
일 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 1, 5, 6, 10, 15, 및 16번 위치 중 하나에 있고; 잔여 J 잔기 중 1 또는 2개는 선택적으로 비-소수성 아미노산이고, 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다. 특정 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 1, 5, 6, 10, 15, 및 16번 위치 중 하나에 있고; 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다.
특정 구현예에서, 위치 1에서의 잔기를 5 및 6번 위치, 10 및 11번 위치, 및 15 및 16번 위치로부터 분리하는 아미노산의 수는 1 내지 3개의 아미노산일 수 있다. 일 구현예에서, 2 및 3번 위치에서 X 잔기 중 하나는 존재하지 않고, 7 및 8번 위치에서 X 잔기 중 하나는 존재하지 않고, 12 및 13번 위치에서 X 잔기 중 하나는 존재하지 않고, 또는 이들 위치에서 X 잔기 중 2개 이상은 존재하지 않는다. 예를 들어, 일 구현예에서, 2 및 3번 위치에서 X 잔기 중 하나 및 7 및 8번 위치에서 X 잔기 중 하나는 존재하지 않는다. 또 다른 구현예에서, 12, 13번 위치, 또는 둘 모두에서 X 잔기는 존재하지 않는다. 또 다른 구현예에서, 2 및 3번 위치에서 X 잔기 중 하나, 7 및 8번 위치에서 X 잔기 중 하나, 및 12 및 13번 위치에서 X 잔기 중 하나는 존재하지 않는다.
또 다른 구현예에서, 2, 3, 7, 및 8번 위치에서 각각의 X 잔기는 존재한다 (즉, 펩타이드는 위치 1에서의 잔기를 5 및 6번 위치에서 잔기로부터, 그리고 5 및 6번 위치에서 잔기를 10 및 11번 위치에서 잔기로부터 분리하는 3개의 아미노산을 포함한다). 또 다른 구현예에서, 12번 위치에서 X 잔기는 존재하거나 12 및 13번 위치에서 X 잔기는 존재한다 (즉, 펩타이드는 10 및 11번 위치에서 잔기를 15 및 16번 위치에서 잔기로부터 분리하는 2 또는 3개의 아미노산을 포함한다).
이전의 단락에서, 잔기 넘버링은 서열식별번호: 1을 지칭하지만, 특정 잔기는 선택적이기 때문에, J 잔기 및 개입 잔기의 실제 위치는 임의의 하나의 특정한 펩타이드와 상이할 수 있다.
이 구현예에서 펩타이드 길이는 100개 미만의 아미노산, 또는 대안적으로 90 개 미만의 아미노산, 80 개 미만의 아미노산, 70 개 미만의 아미노산, 60 개 미만의 아미노산, 또는 약 50 개 미만의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 펩타이드 길이는 12 내지 약 50개의 아미노산의 길이이다.
상기에서 기재된 구현예에서, 서열식별번호: 1의 각각의 위치 2, 3, 7, 8, 12 (존재할 때)에서 X 잔기는 임의의 아미노산일 수 있는 경우, 특정 구현예에서 이들 잔기는 Arg (R), Lys (K), Asp (D), Glu (E), Gln (Q), Asn (N), Ser (S), Thr (T), Gly (G), 이소아스파르트산 (이소D), 및 g-글루타메이트 의 그룹으로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 4, 9, 및 13번 위치에서 각 X 잔기는 G, A, S, T, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 및 R 로 구성된 군으로부터 로부터 독립적으로 선택된다.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 제1 측면에 따른 예시적인 펩타이드는 아래의 표 1에서 확인된 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00001
특정 구현예에서, 이들 펩타이드는 서열식별번호: 19-46 중 1개 이상의 아미노산으로 본질적으로 구성되거나 그것으로 구성된다.
본 발명의 제1 측면에 따른 다른 예시적인 펩타이드는 아래의 표 2에서 확인된 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00002
특정 구현예에서, 이들 펩타이드는 서열식별번호: 47-68 중 1개 이상의 아미노산으로 본질적으로 구성되거나 그것으로 구성된다.
본 발명의 제1 측면에 따른 추가의 예시적인 펩타이드는 아래의 표 3에서 확인된 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00003
표 3에서, 펩타이드 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그 SEEEEE를 포함한다. 서열 3에 나타낸 서열을 포함하지만 특이적인 용해도 태그를 결여한(또는 상이한 용해도 태그를 지닌) 펩타이드 또한 본원에서 고려된다.
특정 구현예에서, 이들 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산으로 본질적으로 구성되거나 그것으로 구성된다: 69-84.
본 발명의 제1 측면의 펩타이드는 또한, 아래의 표 4에서 확인된 아미노산 서열을 포함할 수 있다:
Figure pct00004
표 4에서, 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그 SEEEEE를 포함한다. 표 4에서 나타낸 서열을 포함하지만 이러한 특정 용해도 태그가 없거나 (또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본 명세서에서 또한 고려된다.
특정 구현예에서, 이들 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산으로 본질적으로 구성되거나 그것으로 구성된다: 85-98.
본 발명의 제1 측면의 또 다른 구현예에서, 펩타이드는 아래의 표 5에서 확인된 아미노산 서열을 포함한다:
Figure pct00005
표 5에서, 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그 SEEEEE를 포함한다. 표 5에서 나타낸 서열을 포함하지만 이러한 특정 용해도 태그가 없거나 (또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본 명세서에서 또한 고려된다.
특정 구현예에서, 이들 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산으로 본질적으로 구성되거나 그것으로 구성된다: 99-112.
본 발명의 또 다른 측면은 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드에 관한 것이다: 113, 114, 117-123, 127, 133-138, 140-142, 144, 145, 148-150, 및 153-155 (아래의 표 6에서 나타냄):
Figure pct00006
표 6에서, 몇 개의 펩타이드는 용해도 태그 S-polyE를 포함하고, 여기서 상기 polyE 세그먼트는 이탤릭체로 나타낸 3 내지 7개의 Glu (E) 잔기를 함유한다. 표 6에 나타낸 서열을 포함하지만 당해 특이적인 용해도 태그를 포함하는(또는 상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본원에 또한 고려된다.
특정 구현예에서, 이들 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산으로 본질적으로 구성되거나 그것으로 구성된다: 113, 114, 117-123, 127, 133-138, 140-142, 144, 145, 148-150, 153-159.
본 발명의 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
XXGISEKXXXXXXXXXXXXXXXX (서열식별번호: 2, 변형된 P1/P4 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 선택적이고 S, N, D, 이소D, G, A, 또는 S이며;
2번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
9번 위치에서 X는 M, L, I, F, 또는 V, 또는 비-소수성 아미노산이고;
10번 위치에서 X는 선택적이고 D 또는 이소D이며;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
12번 위치에서 X는 M, L, I, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
13번 위치에서 X는 M, L, 또는 I, 또는 비-소수성 아미노산이고;
14번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 친수성 아미노산, S, T, D, 이소D, K, 또는 Q, 및 선택적으로 A 또는 C일 수 있고;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
16번 위치에서 X는 M, L, I, V, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
17번 위치에서 X는 M, L, I, A, 또는 V, 또는 비-소수성 아미노산이고;
18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, M, T, 또는 K이며;
19번 위치에서 X는 A, D, 이소D, S, V, T, K, R, E, H, 또는 G이고;
20번 위치에서 X는 M, L, 또는 I이며;
21번 위치에서 M, L, I, V, S, 또는 F, 또는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S이며;
23번 위치에서 X는 P, Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
여기서 9, 12, 13, 16, 17, 및 20번 위치에서 잔기 중 적어도 1개는 비-소수성 아미노산이거나, 또는 21번 위치에서 잔기는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고; 그리고 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 이러한 측면에 따른 펩타이드의 하나의 예시적인 계열은 하기의 아미노산 서열을 갖는다:
SXGISEKXXDXXXXXXXXAXXXP (서열식별번호: 3, 변형된 P4 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
9번 위치에서 X는 M, S, L, A, I, V, 또는 F, 또는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
12번 위치에서 X는 L, I, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
13번 위치에서 X는 L, A, I, V, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
14번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산이고;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
16번 위치에서 X는 L, A, I, V, M, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
17번 위치에서 X는 M, I, S, 또는 F, 또는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고;
18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
20번 위치에서 X는 M, L, I, V, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
21번 위치에서 X는 M, L 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고; 그리고
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
여기서 9, 12, 13, 16, 20, 및 21번 위치에서 잔기 중 하나는 비-소수성 아미노산 또는 A이거나, 또는 17번 위치에서 잔기는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고; 그리고 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다. 바람직하게는, 9, 12, 13, 16, 20, 및 21번 위치에서 잔기 중 1 내지 4, 3 이하, 2개 이하는, 또는 정확하게 하나는 비-소수성 아미노산이거나, 또는 17번 위치에서 잔기는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이다.
특정 구현예에서, 다음에 따른 이들 펩타이드: 서열식별번호: 2는 또한 다음의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징을 충족하며: 서열식별번호: 1, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기은 존재하지 않는다. 따라서, 이들 구현예에서, 14번 위치에서의 X는 메티오닌 또는 시스테인 이외의임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 S 또는 T일 수 있다.
다음과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드: 서열식별번호: 3, 또는 다음에서 유도된 펩타이드: 서열식별번호: 3은 아래의 표 7에서 확인된다:
Figure pct00007
특정 다른 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 48-56, 58, 59, 61 및 161-163.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 이러한 측면에 따른 펩타이드의 또 다른 예시적인 계열은 하기의 아미노산 서열을 갖는다:
XXGISEKXJDXJJTXJJXAJJXX (서열식별번호: 4, 변형된 P1 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 N, D, 이소D, G, A, 또는 S이고;
2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
18번 위치에서 X는 M, T, K, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
23번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고; 그리고
9, 12, 13, 16, 17, 20, 및 21번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 하나는 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다. 바람직하게는, 9, 12, 13, 16, 17, 20, 및 21번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산 또는 A이다. 일 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 위치 9, 12, 13, 16, 20, 및 21번 위치 중 하나에 있고; 잔여 J 잔기 중 1 또는 2개는 선택적으로 비-소수성 아미노산이고, 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다. 특정 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 위치 9, 12, 13, 16, 20, 및 21번 위치 중 하나에 있고; 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다.
특정 구현예에서, 서열식별번호: 4에 따른 이들 펩타이드는 서열식별번호: 1의 펩타이드를 정의하는 구조적 특징에 부합하고, 이 경우에 메티오닌 및 시스테인 잔기은 존재하지 않는다. 따라서, 이들 구현예에서, 18 번 위치에서 X는 T, K, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이다.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
다음과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드: 서열식별번호: 4은 아래의 표 8에서 확인된다:
Figure pct00008
이들 펩타이드의 추가의 변이체는 전술한 T, K, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S 에 의한 18번 위치에 있는 메티오닌의 치환을 포함할 수 있다.
특정 다른 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 164, 166-179.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 여전히 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
(i) KPXDSXSXJAKJJSXJJXSJJX (서열식별번호: 5, 변형된 P15b/P20 공통), 여기서
3번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
8번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
15번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이며;
18번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
22번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
9, 12, 13, 16, 17, 20, 및 21번 위치에서 J는 로부터 선택된 소수성 아미노산이고 L, V, I, F, 및 A, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산이거나; 또는
(ii) JAKJJSXJJXSJJX (서열식별번호: 6, 변형된 P15/20 min 공통), 여기서
7번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이고;
10번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
14번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
1, 4, 5, 8, 9, 12, 및 13번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 그리고
상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다. 바람직하게는, 서열식별번호: 5 중 9, 12, 13, 16, 17, 20, 및 21번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 그리고 서열식별번호: 6의 1, 4, 5, 8, 9, 12, 및 13 번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산 또는 A이다. 일 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 하기중 하나에 있고: 서열식별번호: 5의 9, 12, 13, 16, 20, 및 21번 위치 또는 서열식별번호: 6의 1, 4, 5, 8, 12, 및 13번 위치; 잔여 J 잔기 중 1 또는 2개는 선택적으로 비-소수성 아미노산이고, 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다. 특정 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 하기 중 하나에 있고: 서열식별번호: 5의 9, 12, 13, 16, 20, 및 21번 위치 또는 서열식별번호: 6의 1, 4, 5, 8, 12, 및 13번 위치; 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다.
서열식별번호: 5 또는 6와 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드는 아래의 표 9에서 확인된다:
Figure pct00009
이들 펩타이드의 추가의 변이체는 전술한 E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K 에 의한 18번 위치에 있는 메티오닌의 치환을 포함할 수 있다.
특정 다른 구현예에서, 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 180-193.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 추가의 측면은 하기의 아미노산 서열을 갖는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
PSPJTXJJXXJJGXJJXAXN (서열식별번호: 7, 변형된 P6/6a 공통), 여기서
6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
9번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이며;
10번 위치에서 X는 H 또는 N이고;
14번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 또는 이소D이며;
17번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
19번 위치에서 J는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고; 그리고
4, 7, 8, 11, 12, 15, 및 16번 위치에서 J는 L, V, I, M, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 1종 이상은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다. 바람직하게는, 4, 7, 8, 11, 12, 15, 및 16 번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산 또는 A이다. 일 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 서열식별번호: 7의 4, 7, 8, 11, 15, 및 16번 위치에 있고; 잔여 J 잔기 중 1 또는 2개는 선택적으로 비-소수성 아미노산이고, 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, M, 또는 F이다. 특정 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 서열식별번호: 7의 4, 7, 8, 11, 15, 및 16번 위치에 있고; 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, M, 또는 F이다.
다음과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드: 서열식별번호: 7은 아래의 표 10에서 확인된다:
Figure pct00010
이들 펩타이드의 추가의 변이체는 전술한 L, I, V, F, 비-소수성 아미노산, 또는 A 에 의한 7번 위치에서 메티오닌의 치환; 및 전술한 L, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K 에 의한 9번 위치에서 메티오닌의 치환을 포함할 수 있다.
특정 다른 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 194-207.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 관한 것이다:
(i) XXXXXXJXXJJXXJJXJJK (서열식별번호: 8, 변형된 P14d 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 Q, N, D, E, g-글루타메이트, 이소D, 또는 S일 수 있고;
2번 위치에서 X는 D, E, g-글루타메이트, 이소D일 수 있으며;
3번 위치에서 X는 P, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
4번 위치에서 X는 M, A, S, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
5번 위치에서 X는 Q, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
6번 위치에서 X는 A, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
8번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
9번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
12번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
13번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
16번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
위치 7, 10, 11, 14, 15, 17, 및 18번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이거나; 또는
(ii) JXXJJXXJJXJJK (서열식별번호: 9, 변형된 P14d min 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
3번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
6번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
7번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
1, 4, 5, 8, 9, 11, 및 12번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 여기서 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다. 바람직하게는, 서열식별번호: 8의 7, 10, 11, 14, 15, 17, 및 18번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 그리고 서열식별번호: 9의 위치 1, 4, 5, 8, 9, 11, 및 12번 위치에서 번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산 또는 A이다. 일 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 하기중 하나에 있고: 서열식별번호: 8의 7, 10, 11, 14, 17, 및 18번 위치 또는 서열식별번호: 9의 1, 4, 5, 8, 11, 및 12번 위치; 잔여 J 잔기 중 1 또는 2개는 선택적으로 비-소수성 아미노산이고, 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다. 특정 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 하기 중 하나에 있고: 서열식별번호: 8의 7, 10, 11, 14, 17, 및 18번 위치 또는 서열식별번호: 9의 1, 4, 5, 8, 11, 및 12번 위치; 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다.
다음과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드: 서열식별번호: 8 또는 9은 아래의 표 11에서 확인된다:
Figure pct00011
이들 펩타이드의 추가의 변이체는 전술한 L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 에 의한 4 및 8번 위치 중 하나 또는 둘 모두에서 메티오닌의 치환을 포함할 수 있다.
특정 다른 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 208-221.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 추가의 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 관한 것이다:
(i) JXXJJXJJXXJJ (서열식별번호: 10, 변형된 P25 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
3번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
6번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
9번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
10번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고; 그리고
1, 4, 5, 7, 8, 10, 및 11번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 또는
(ii) JXXJJXXJJXJJXXJJ (서열식별번호: 11, 변형된 P25 공통) 여기서
2번 위치에서 X는 T, S, A, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이고;
3번 위치에서 X는 G, T, S, A, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이며;
6번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
7번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
13번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G이고;
14번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고;
1, 4, 5, 8, 9, 11, 12, 및 15번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 그리고
16번 위치에서 J는 선택적이고 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고;
상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다. 바람직하게는, 서열식별번호: 10의 1, 4, 5, 7, 8, 10, 및 11 번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산이고, 그리고 서열식별번호: 11의 1, 4, 5, 8, 9, 11, 12, 15, 및 16 번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산이다. 일 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 하기 중 하나에 있고: 서열식별번호: 10의 1, 4, 5, 7, 10, 및 11번 위치 또는 서열식별번호: 11의 1, 4, 5, 8, 11, 12, 15, 및 16번 위치; 잔여 J 잔기 중 1 또는 2개는 선택적으로 비-소수성 아미노산이고, 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다. 특정 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 하기 중 하나에 있고: 서열식별번호: 10의 1, 4, 5, 7, 10, 및 11번 위치 또는 서열식별번호: 11의 1, 4, 5, 8, 11, 12, 15, 및 16번 위치; 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, 또는 F이다.
다음과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드: 서열식별번호: 10 또는 11은 아래의 표 12에서 확인된다:
Figure pct00012
이들 펩타이드의 추가의 변이체는 전술한 L, V, I, 및 F 에 의한 13번 위치에서 메티오닌의 치환을 포함할 수 있다.
특정 다른 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 222-239.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 여전히 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는펩타이드에 관한 것이다:
(i) XXXXXXXXXXXJXXJJXXJJXXJJXXX (서열식별번호: 12, 변형된 P17/18), 여기서
1번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, N, 이소D, K, 또는 R이며;
5번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 D, 이소D, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, N, Q, K, 또는 R이고;
6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, 또는 K이며;
7번 위치의 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
8번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 T, Q, S, E, g-글루타메이트, A, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
9번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R일 수 있고;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 E, g-글루타메이트, Q, S, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
13번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
14번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
17번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
18번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
21번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
22번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
25번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이며;
26번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있고;
27번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R일 수 있고; 그리고
12, 15, 16, 19, 20, 23, 및 24번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
또는
(ii) JXXJJXXJJXXJJ (서열식별번호: 13, 변형된 P17/18 min 공통), 여기서
2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R일 수 있고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있고; 그리고
1, 4, 5, 8, 9, 12, 및 13번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다. 바람직하게는, 서열식별번호: 12의 12, 15, 16, 19, 20, 23, 및 24 번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 그리고 서열식별번호: 13의 1, 4, 5, 8, 9, 12, 및 13 번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산 또는 A이다. 일 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 하기 중 하나에 있고: 서열식별번호: 12의 12, 15, 16, 19, 23, 및 24번 위치 또는 서열식별번호: 13의 1, 4, 5, 8, 12, 및 13번 위치; 잔여 J 잔기 중 1 또는 2개는 선택적으로 비-소수성 아미노산이고, 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, F, 또는 M이다. 특정 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 하기 중 하나에 있고: 서열식별번호: 12의 12, 15, 16, 19, 23, 및 24번 위치 또는 서열식별번호: 13의 1, 4, 5, 8, 12, 및 13번 위치; 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, F, 또는 M이다.
서열식별번호: 12 또는 13과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드는, 서열식별번호: 12 또는 13로부터 유도되고 및 서열식별번호: 1의 공통 구조에 부합하고, 아래의 표 13에서 확인된다:
Figure pct00013
표 13에서, 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그 SEEEEE를 포함한다. 표 13에서 나타낸 서열을 포함하지만 이러한 특정 용해도 태그가 없거나 (상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본 명세서에서 또한 고려된다.
특정 다른 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 1개 이상의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 85-98.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 또 다른 측면은 다음의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드에 관한 것이다:
XJXXJJXJJXXJJ (서열식별번호: 14, 변형된 P19 공통), 여기서
1번 위치에서 X는 선택적이고 L, I, V, F, 또는 M이고;
3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있고;
11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 K일 수 있고; 그리고
2, 5, 6, 8, 9, 12, 및 13번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다. 바람직하게는, 2, 5, 6, 8, 9, 12, 및 13 번 위치에서 잔기 중 1 내지 4개, 3개 이하, 2개 이하, 또는 정확하게 1개는 비-소수성 아미노산이다. 일 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 서열식별번호: 14의 2, 5, 6, 8, 12, 및 13번 위치 중 하나에 있고; 잔여 J 잔기 중 1 또는 2개는 선택적으로 비-소수성 아미노산이고, 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, F, 또는 M이다. 특정 구현예에서, J 잔기의 1개 이하는 A이고, 그리고 바람직하게는 A 잔기는 서열식별번호: 14의 2, 5, 6, 8, 12, 및 13번 위치 중 하나에 있고; 그리고 모든 다른 J 잔기는 L, I, V, F, 또는 M이다.
서열식별번호: 14 중 하나와 공통 구조를 공유하거나 서열식별번호: 14 중 하나로부터 유도되는 예시적인 펩타이드는 서열식별번호: 1의 공통 구조에 부합하고, 아래의 표 14에서 확인된다:
Figure pct00014
표 14에서, 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그 SEEEEE를 포함한다. 표 14에서 나타낸 서열을 포함하지만 이러한 특정 용해도 태그가 없거나 (상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본 명세서에서 또한 고려된다.
특정 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기의 서열식별번호의 아미노산으로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 99-112.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 추가 측면은 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
Z1-LLXLFXXIL-Z2 (서열식별번호: 126, P3 최소) 여기서
3번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
6번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
7번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고; 그리고
여기서 Z1 및 Z2 중 하나는 존재하지만, 바람직하게는 둘 모두는 아니고, Z1는 LXX- (여기서 각 X는 친수성 아미노산임), 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R을 포함하고, 그리고 Z2를 -XXLF (여기서 각 X는 친수성 아미노산, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R임)을 포함한다.
상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
일 구현예에서, Z1 는 존재하지만, Z2는 아니다. 대안적인 구현예에서, Z2 but not Z1는 존재한다.
서열식별번호: 126과 공통 구조를 공유하거나 서열식별번호: 126로부터 유도되고 서열식별번호: 1의 공통 구조에 부합하는 예시적인 펩타이드는 아래의 표 15에서 확인된다:
Figure pct00015
표 15에서, 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그 SEEE, SEEEE, 및 SEEEEEE을 포함한다. 표 15에서 나타낸 서열을 포함하지만 이러한 특정 용해도 태그가 없거나 (상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본 명세서에서 또한 고려된다.
특정 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기의 서열식별번호의 아미노산으로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 156-159.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 또 다른 측면은 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드에 관한 것이다:
L-X-X-(L/I)-(L/I)-X-X-(L/I/V)-(L/I/V) (서열식별번호: 116)
여기서 상기 펩타이드는 시스테인 및 메티오닌이 없고; 2, 3, 6, 7번 위치에서 각 X는 임의의 아미노산이고; 그리고 상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
특정 구현예에서, 2, 3, 6, 및 7번 위치 중 1개 이상에서 X는 비-소수성 아미노산이고, 2, 3, 6, 및 7번 위치 중 2개 이상에서 X은 비-소수성 아미노산이고, 2, 3, 6, 및 7번 위치에서 3개 이상에서 X은 비-소수성 아미노산이거나, 또는 각각의 2, 3, 6, 및 7번 위치에서 X는 비-소수성 아미노산이다. 이 구현예에서, 비-소수성 아미노산은 독립적으로 G, A, S, T, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 및 R 중 임의의 하나일 수 있다.
본 발명의 이러한 측면에 따른 펩타이드는 일반적으로 HR 박스 서열의 절단에 의해 나타내고, 이것은 공동계류중 PCT 출원 PCT/US15/53387, 명칭 “Hypersensitive Response Elicitor Peptides and Use Thereof" (2015년, 10월 1일 출원, 이것은 본 명세서에 참조로서 전체적으로 편입되어 있음)에서 기재된다. 따라서, HR 박스 서열의 절단에 의해, 펩타이드의 종료 또는 HR 박스 서열의 일부를 형성하는 아미노산 잔기의 치환에 의해, 이러한 측면에 따른 단리된 펩타이드는 하기의 아미노산 서열을 포함하지 않는다:
(L/I/V/F)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I)-X-X-(L/I/V)-(L/I)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I/V/F) (서열식별번호: 125)
여기서 2, 3, 6, 7, 10, 11번 위치에서 각 X는 임의의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
다음과 공통 구조를 공유하는 예시적인 펩타이드: 서열식별번호: 116은 아래의 표 16에서 확인된다:
Figure pct00016
표 16에서, 펩타이드는 이탤릭체로 나타낸 용해도 태그 SEEEE 및 SEEEEE을 포함한다. 표 15에서 나타낸 서열을 포함하지만 특정 용해도 태그가 없거나 (상이한 용해도 태그를 갖는) 펩타이드가 본 명세서에서 또한 고려된다.
특정 구현예에서, 단리된 펩타이드는 하기의 서열식별번호의 아미노산으로 본질적으로 구성되거나, 그것으로 구성된다: 115, 124, 128-132, 139, 143, 146, 147, 151, 152, 및 160.
이 구현예에서, 단리된 펩타이드는 바람직하게는 물에서 용해될 때 안정하고; 상기에서 기재된 바와 같이 수성 조건에서 pH 완충액 및 살생물제의 존재에서 화학 분해에 대해 내성이 있고/거나; 적어도 약 1.0 mg/ml의 수용액 중 용해도를 갖는다.
본 발명의 단리된 펩타이드는 또한 펩타이드 결합을 통해 본 발명의 펩타이드에커플링된 제2의 아미노산 서열을 또한 포함하는 융합 펩타이드의 형태로 나타낼 수 있다. 제2 아미노산 서열은 정제 태그, 예컨대 폴리-히스티딘 (His6-), 글루타티온-S-전달효소 (GST-), 또는 말토오스-결합 단백질 (MBP-)일 수 있으며, 이는 정제시 보조되나 후에 제거될 수 있는데, 즉, 회복 후 펩타이드로부터 절단될 수 있다. 프로테아제-특이적인 절단 부위 또는 화학-특이적인 절단 부위 (즉 , 절단가능 링커 서열내에서)는 정제 태그 와 원하는 펩타이드 사이에 도입될 수 있다. 프로테아제-특이적인 절단 부위는 문헌에 잘 알려져 있으며, 비제한적으로, 엔테로키나제 특이적인 절단 부위 (Asp)4-Lys(이는 라이신 후 절단된다); 인자 Xa 특이적인 절단 부위 Ile-(Glu 또는 Asp)-Gly-Arg(이는 아르기닌 이후 절단된다); 트립신 특이적인 절단 부위(이는 Lys 및 Arg 이후 절단된다); 및 Genenase™ I 특이적인 절단 부위 Pro-Gly-Ala-Ala-His-Tyr를 포함한다. 화학물질 및 그것의 특이적인 절단 부위는, 비제한적으로, 시아노겐 브로마이드 (CNBr)(이는 메티오닌 (Met) 잔기에서 절단한다); BNPS-스카톨(skatole)(이는 트립토판 (Trp) 잔기에서 절단한다); 포름산(이는 아스파르트산-프롤린 (Asp-Pro) 펩타이드 결합에서 절단한다); 하이드록실아민(이는 아스파라긴-글리신 (Asn-Gly) 펩타이드 결합 잔기에서 절단한다); 및 2-니트로-5-티오시아노벤조산 (NTCB)(이는 시스테인 (Cys) 잔기 잔기에서 절단한다(참고 Crimmins 등,“ Chemical Cleavage of Proteins in Solution," Curr.Protocol.Protein Sci.,Chapter 11:Unit 11.4 (2005) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 이들 절단 방법중 하나를 사용하기 위하여, 원하는 펩타이드 서열내에서 돌연변이에 의해 원치않는 절단 부위를 제거하는 것이 필요할 수 있다. 예를 들어, P14-22E,26E-R (서열식별번호: 23)는 트립신과의 혼용성을 위해 돌연변이되었다: 위치 9에 있는 라이신 잔기는 글루타메이트로 돌연변이되고 C-말단 아르기닌은 부가되어 이론적 트립신 절단의 생성물을 나타낸다. 원하는 펩타이드 생성물은 추가로 정제하여 절단된 정제 태그를 제거할 수 있다.
본 발명의 단리된 펩타이드는 또한 링커 서열과 함께 연결된 본 발명의 다중 펩타이드 서열을 포함하는 융합 펩타이드의 형태로 나타낼 수 있으며, 이는 상기 기재된 유형의 절단가능한 아미노산 서열의 형태를 취하거나 취하지 않을 수 있다. 이러한 다량체 융합 단백질은 정제 태그를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 일 구현예에서, 각 모노머성 서열은 제1 절단가능 펩타이드 서열에 의해 본 발명의 펩타이드에 연결된 정제 태그를 포함할 수 있으며; 몇 개의 모노머성 서열은 제2 절단가능 펩타이드 서열에 의해 인접한 모노머성 서열에 연결될 수 있다. 결과적으로, 즉, 숙주 세포내에서 다량체 융합 단백질의 발현시, 회수된 융합 단백질은 제2 절단가능 펩타이드 서열를 절단하는데 효과적인 프로테아제 또는 화학물질로 처리함으로써 정제 태그를 함유하는 개별적인 모노머성 펩타이드 서열을 방출할 수 있다. 친화도 정제시, 회수된 모노머성 펩타이드 서열은 제1 절단가능 펩타이드 서열 을 절단하는데 유효한 프로테아제 또는 화학물질로 처리함으로써 목적한 펩타이드로부터 정제 태그를 방출할 수 있다. 후자는 상기 에 기재된 바와 같이 겔 여과 및/또는 HPLC를 사용하여 추가로 정제될 수 있다.
이들 융합 단백질은 서열식별번호: 15-18로서 상기에서 확인된 서열을 포함할 수 있고, 이것은 하기에서 이전에 확인되었다: Haapalainen 등, Functional Mapping of Harpin HrpZ of Pseudomonas syringae Reveals the Sites Responsible for Protein Oligomerization, Lipid Interactions, and Plant Defence Induction," Mol. Plant Pathol. 12(2): 151-66 (2011)(이것은 본 명세서에 참조로서 전체적으로 편입되어 있음).
하나의 접근법에 따라서, 본 발명의 펩타이드는 표준 펩타이드 합성 작업으로합성될 수 있다. 이들은 자동화 고상 펩타이드 합성 기기, 예를 들면 비제한적으로, Applied Biosystems 431 A, 433 A 합성기 및 펩타이드 기술 Symphony Symphony 또는 대규모 Sonata 또는 CEM Liberty 자동화 고상 펩타이드 합성기에서 수행될 수 있는 FMOC (9-플루오레닐메틸옥시-카보닐) 및 tBoc (tert-부틸옥시-카보닐) 합성 프로토콜 둘 다를 포함한다. 대안적인 펩타이드 합성 기기의 사용 또한 고려된다. 고상 합성을 사용하여 제조된 펩타이드는 실질적으로 순수한 형태로 회수된다.
본 발명의 펩타이드는 또한 재조합 발현 시스템에 이어 재조합으로 제조된 펩타이드의 분리 및 정제에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이는 인코딩 핵산 분자를 상기 분자가 이종성(즉, 정상적으로 존재하지 않는) 발현 시스템내로 삽입함을 포함한다. 본 발명의 펩타이드를 코딩하는 1종 이상의 원하는 핵산 분자는 벡터내로 삽입될 수 있다. 이종성 핵산 분자는 발현 시스템 또는 벡터내에 적절한 센스(5'―3') 방향 및 촉진제 및 임의의 다른 5' 및 3' 조절 분자에 대해 정확한 해독 틀내로 삽입된다. 박테리아 및 식물 호스트에서 발현을 위한 대표적인 뉴클레오타이드 서열은 아래의 표 17에서 포함된다:
Figure pct00017
본원에 열거된 인코딩된 아미노산 서열 및 원하는 형질전환 유기체의 지식내에서, 추가의 코돈-최적화된 DNA 서열 및 RNA 서열은 일상적인 기술 이하에서 생성될 수 있다.
DNA 작제물에 의한 본 발명의 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드의 발현(전사 및 번역 포함)은 발현 수준, 발현이 일어나는 조직 유형(들) 및/또는 발현의 발달 단계와 관련하여 조절될 수 있다. 수많은 이종성 조절 서열 (예를 들면, 촉진제 및 인핸서)이 DNA 작제물의 발현을 조절하기 위해 이용가능하다. 이들은 구성적, 유도성 및 조절가능 촉진제뿐만 아니라 조직- 또는 일시적-특이적 방식으로 발현을 조절하는 촉진제 및 인핸서를 포함한다. 예시적인 항시성 촉진제는 하기를 포함한다: 랩스베리 E4 촉진제(U.S. 특허번호들5,783,393 및 5,783,394, 이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로 편입된다), 노팔라인 합성효소 (NOS) 촉진제 (Ebert 등,Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S. A.)84:5745-5749 (1987) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 옥토핀 합성효소 (OCS) 촉진제(이는 아그로박테리움 투메파시엔스의 종양-유도 플라스미드 상에서 운반된다), 카울리모 바이러스 촉진제 예컨대, 꽃양배추 모자이크 바이러스 (CaMV) 19S 촉진제 (Lawton 등,Plant Mol.Biol.9:315-324 (1987)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다) 및 CaMV 35S 촉진제 (Odell 등,Nature 313:810-812 (1985) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 피크워트(figwort) 모자이크 바이러스 35S-촉진제 (U.S. 특허번호5,378,619 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 리불로스-1,5-비스-포스페이트 카복실라제(ssRUBISCO)의 작은 서브유닛으로부터의 광 -유도성 촉진제, Adh 촉진제(Walker 등,Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S. A.)84:6624-6628 (1987) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 수크로오스 합성효소 촉진제(Yang 등,Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S. A.)87:4144-4148 (1990) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), R 유전자 복합체 촉진제 (Chandler 등,식물 세포 1:1175-1183 (1989) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 클로로필 a/b 결합 단백질 유전자 촉진제, CsVMV 촉진제 (Verdaguer 등,식물 Mol Biol.,37:1055-1067 (1998) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 및 멜론 액틴 촉진제 (PCT 공개번호WO00/56863 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 예시적인 조직-특이적인 촉진제는 하기를 포함한다: 토마토 E4 및 E8 촉진제 (U.S. 특허번호5,859,330 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다) 및 토마토 2AII 유전자 촉진제(Van Haaren 등,식물 Mol Bio.,21:625-640 (1993) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
하나의 바람직한 구현예에서, DNA 작제물의 발현은 이의 발현이 조기 종자 및/또는 배아 발달에 관련된 유전자로부터의 조절 서열의 조절하에 있다. 사실상, 바람직한 구현예에서, 사용된 촉진제는 종자-향상된 촉진제이다. 이러한 촉진제의 예는 다음과 같은 이러한 유전자로부터의 5' 조절 영역을 포함한다: 나핀 (Kridl 등,종자 Sci.Res.1:209:219 (1991) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 글로불린 (Belanger 및 Kriz, Genet.129:863-872 (1991), 유전자은행 수탁 번호L22295(이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로 편입된다), 감마 제인 Z 27 (Lopes 등,Mol Gen Genet.247:603-613 (1995) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), L3 올레오신 촉진제 (U.S. 특허번호6,433,252 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 파세올린 (Bustos 등,식물 세포 1(9):839-853 (1989) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 아르셀린 5 (U.S. 공개 출원번호2003/0046727 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 대두 7S 촉진제, 7Sa 촉진제(U.S. 공개 출원번호2003/0093828(이것은 본 명세서에 참조로서 전체적으로 편입되어 있음)), 대두 7Sαβ 콘글리시닌 프로모터, 7Sβ 프로모터 (Beachy 등,EMBO J.4:3047 (1985); Schuler 등,Nucleic Acid Res.10(24):8225-8244 (1982)(이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로 편입된다), 대두 트립신 저해제 (Riggs 등,식물 세포 1(6):609-621 (1989)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), ACP (Baerson 등,Plant Mol.Biol.,22(2):255-267 (1993) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), 스테아로일-ACP 데사투라제(Slocombe 등,Plant Physiol.104(4):167-176 (1994)(이것은 본 명세서에 참조로서 전체적으로 편입되어 있음)), β-콘글리시닌의 대두 a' 서브유닛 (Chen 등,Proc.Natl.Acad.Sci.83:8560-8564 (1986) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다), Vicia faba USP (U.S. 공개 출원번호2003/229918 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다) 및 옥수수 L3 올레오신 촉진제(Hong 등,Plant Mol.Biol.,34(3):549-555 (1997) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
본 발명의 펩타이드를 인코딩하는 핵산 분자는 고체상 합성을 통해, 예를 들면, 포스포르아미다이트 방법 및 보호된 2′-데옥시뉴클레오사이드로부터 유도된 포스포르아미다이트 빌딩 블록을 사용하여 제조할 수 있다. 원하는 올리고뉴클레오타이드를 수득하기 위하여, 빌딩 블록은 생성물의 서열에 의해 요구된 순서로 성장하는 올리고뉴클레오타이드 사슬에 순차적으로 커플링된다. 사슬 어셈블리의 완료시, 상기 생성물은 고상으로부터 용액으로 방출되고, 탈보호되며, 수집되고, 및 전형적으로 HPLC를 사용하여 정제된다. 고상 합성은 길이가 최대 약 200nt인 올리고뉴클레오타이드를 제조하는데 적합하며, 이는 약 65개 아미노산 또는 그 미만의 순서로 펩타이드를 인코딩한다. 합성된 올리고뉴클레오타이드의 말단은 합성된 올리고뉴클레오타이드의 발현 벡터내로의 결찰을 용이하게 하는 특이적인 제한 효소 절단 부위를 포함하도록 설계될 수 있다.
더 긴 펩타이드의 경우, 올리고뉴클레오타이드는 고상 합성 및 그 다음 다양한기술을 사용하여 함께 결찰된 합성 올리고뉴클레오타이드 서열을 통해 제조될 수 있다. 전체의 합성 유전자의 제작을 위한 재조합 기술은, 예를 들면, 다음에서 고려된다: Hughes 등,“Chapter Twelve - Gene Synthesis:Methods and Applications," Methods in Enzymology 498:277-309 (2011) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다.
적합한 발현 벡터가 선택되면, 원하는 핵산 서열을 다음에 기재도니 당해 기술에서 표준 클로닝 절차를 상요하여 벡터내로 클로닝한다: Sambrook 등,Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Cold Springs Laboratory, Cold Springs Harbor, N.Y.(1989), 또는 U.S. 특허번호4,237,224 (코헨 및 Boyer에게 허여됨)(이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다). 이후에 상기 벡터는 적합한 숙주내로 도입된다.
다양한 숙주-벡터 시스템을 이용하여 본 발명의 펩타이드를 재조합적으로 발현시킬 수 있다. 주로, 벡터 시스템은 사용된 숙주와 양립가능하여야 한다. 숙주-벡터 시스템은 비제한적으로, 하기를 포함한다: 박테리오파아지 DNA, 플라스미드 DNA, 또는 코스미드 DNA로 형질전환된 박테리아; 미생물, 예컨대 효모 벡터를 함유하는 효모; 바이러스(예를 들면, 백시니아 바이러스, 아데노바이러스, 등)로 감염된 포유동물 세포 시스템; 바이러스 (예를 들면, 배큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 및 아그로박테리움으로 감염된 식물 세포.이들 벡터의 발현 요소는 그것의 강도 및 특이성이 각기 다르다. 이용된 숙주-벡터 시스템에 따라서, 수많은 적합한 전사 및 번역 요소중 임의의 하나를 사용하여 본 발명의 이들 및 다른 측면을 수행할 수 있다.
정제된 펩타이드는 몇 개의 방법으로 수득될 수 있다. 펩타이드는 종래의 기술에 의해 정제된 형태 (바람직하게는 적어도 약 80% 또는 85% 순수한, 더 바람직하게는 적어도 약 90% 또는 95% 순수한)로 바람직하게 생산된다. 재조합 숙주세포가 펩타이드를 성장 배지내로 분리하도록 제조된 여부에 따라서(참고 U.S. 특허번호6,596,509(Bauer 등에 허여됨 (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다)), 펩타이드는 원심분리 (분비된 펩타이드를 함유하는 상청액으로부터의 세포성 구성요소를 분리하기 위해)이후 상청액의 순차적인 암모늄 설페이트 침전에 의해 단리 및 정제될 수 있다. 상기 펩타이드를 함유하는 분획을 적절하게 크기의 덱스트란 또는 폴리아크릴아미드 칼럼내 겔 여과에 적용시켜 다른 단백질로부터 펩타이드를 분리한다. 필요하면, 펩타이드 분획은 HPLC에 의해 추가로 정제될 수 있다.
대안적으로, 목적한 펩타이드가 분비되지 않는 경우, 이는 재조합 세포로부터 표준 단리 및 정제 반응을 사용하여 분리할 수 있다. 이는 세포를 파괴(예를 들면, 초음파처리, 동결, 프렌치 프레스(French press), 등)한 후 세포성 장해로부터 펩타이드를 회수함을 포함한다. 정제는 상기 기재된 원심분리, 침전, 및 정제를 사용하여 달성할 수 있다. 상기 기재된 정제 태그의 사용은 당해 공정을 간소화할 수 있다.
특정 구현예에서, 정제는 요구되지 않는다. 정제가 수행되지 않는 경우, 무세포 분해물은 세포성 잔해의 제거를 위한 원심분리 후 회수될 수 있다. 수득한 무세포 용해물은 열로 충분한 양의 시간 동안 처리하여 회수된 분획 속에서 임의의 원상태 프로테아제를 불활성화할 수 있다: 예를 들면, 100 ℃에서 10분.원한다면, 살생물제, 프로테아제 저해제, 및 비-이온성 계면활성제 중 1종 이상은 그와 같은 무세포 준비에 도입될 수 있다 (참고 U.S. 공개 출원번호20100043095(Wei에 허여됨) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
본 발명의 펩타이드가 회수되면, 이들을 사용하여 담체, 및 살박테리아 또는 살생물제, 프로테아제 저해제, 비-이온성 계면활성제, 비료, 제초제, 살충제, 살진균제, 살선충제, 생물학적 접종물, 식물 조절물질, 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 포함하는 조성물을 제조할 수 있다.
특정 구현예에서, 상기 조성물은 약 1 nM 초과의 펩타이드, 약 10 nM 초과의 펩타이드, 약 20 nM 초과의 펩타이드, 약 30 nM 초과의 펩타이드, 약 40 nM 초과의 펩타이드, 약 50 nM 초과의 펩타이드, 약 60 nM 초과의 펩타이드, 약 70 nM 초과의 펩타이드, 약 80 nM 초과의 펩타이드, 약 90 nM 초과의 펩타이드, 약 100 nM 초과의 펩타이드, 약 150 nM 초과의 펩타이드, 약 200 nM 초과의 펩타이드, 또는 약 250 nM 초과의 펩타이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 조성물은 약 1 nM 미만의 펩타이드를 포함한다. 예를 들면, 특정 펩타이드는 약 2 ng/ml 미만, 약 1.75 ng/ml 미만, 약 1.5 ng/ml 미만, 약 1.25 ng/ml 미만, 약 1.0 ng/ml 미만, 약 0.75 ng/ml 미만, 약 0.5 ng/ml 미만, 약 0.25 ng/ml 미만, 또는 심지어 약 0.1 ng/ml 미만을 포함한다.
적합한 담체는 물, 1종 이상의 보조용매, 슬러리, 및 고형 담체 입자를 선택적으로 함유하는 수용액을 포함한다. 예시적인 고형 담체는 광물 석지 예컨대 실리케이트, 실리카겔, 탈크, 카올린, 석회석, 라임, 백악, 교회 점토, 황토, 점토, 백운석, 규조토, 황산칼슘, 황산마그네슘, 산화마그네슘, 토양 합성 물질, 및 야채 기원의 생성물, 예컨대 곡물 식사, 나무껍질분, 목재 식사 및 견과껍질 식사, 셀룰로오스 분말, 전분 및 전분 유도체, 뿐만 아니라 다른 모노-, 디-, 및 폴리-사카라이드를 포함한다.
적합한 비료는, 비제한적으로, 암모늄 설페이트, 암모늄 포스페이트, 암모늄 니트레이트, 우레아, 및 이들의 조합을 포함한다.
적합한 살충제는, 비제한적으로, 네오니코티노이드 부류의 구성원, 예컨대 이미디클로프리드, 클로티아니딘, 및 티아메톡삼; 오르가노포스페이트 부류의 구성원, 예컨대 클로르피리포스 및 말라티온; 피레트로이드 부류의 구성원, 예컨대 페르메트린; 다른 천연 살충제, 예컨대 니코틴, 노르니코틴, 및 파이레트린; 카바메이트 부류 의 구성원, 예컨대 알디카브, 카보푸란, 및 카바릴; 거대환식 락톤 부류 의 구성원, 예컨대 다양한 아바멕틴, 아베르멕틴, 및 이베르멕틴 생성물; 디아미드 부류 의 구성원, 예컨대 클로르안트라닐리프롤, 시안트라닐리프롤, 및 플루벤디아미드; 키틴 합성 저해제, 특히 벤조일우레아 부류의 것들, 예컨대 루페누론 및 디플루베주론; 및 이들의 임의의 조합, 예를 들면, 2종 이상, 3종 이상, 또는 4종 이상의 살충제의 조합을 포함한다. 추가의 살충제는 Alan Wood에 의해 작업되고 alanwood.net 인터넷 사이트에서 전자 형태로 이용가능한 데이타베이스인, 살충제 통상 명칭의 개요서에 나열되어 있다.
적합한 살진균제는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 스트로빌루린 부류의 구성원 예컨대 아족시스트로빈, 파이라클로스트로빈, 트리플록시스트로빈, 피콕시스트로빈, 및 플루옥사스트로빈; 트리아졸 부류의 구성원 예컨대 이프코나졸, 메트코나졸, 테부코나졸, 트리티코나졸, 테트라코나졸, 디페노코나졸, 플루트리아폴, 프로피코나졸 및 프로티오코나졸; 석시네이트 탈수소효소 부류의 구성원 예컨대 카복신, 플룩사파이록사드, 보스칼리드 및 세닥산:페닐아미드 부류의 구성원 예컨대 메탈락실, 메페녹삼, 베나락실, 및 옥사딕실; 페닐피롤 부류의 구성원 예컨대 플루디옥소닐; 프탈이미드 부류의 구성원 예컨대 캅탄; 디티오카바메이트 부류의 구성원 예컨대 만코젭 및 티람; 벤즈이미다졸 부류의 구성원 예컨대 티아벤다졸; 및 이들의 임의의 조합 (2종 이상, 3종 이상, 또는 4종 이상의 살진균제의 조합물 포함). 추가의 살진균제는 Alan Wood에 의해 작업되고 alanwood.net 인터넷 사이트에서 전자 형태로 이용가능한 데이타베이스인, 살충제 통상 명칭의 개요서에 나열되어 있다.
적합한 살선충제는, 비제한적으로, 카바메이트 부류의 화학물질 예컨대 알디카브, 알독시카브, 옥사밀, 카보푸란, 및 클레오토카브; 및 오르가노포스페이트 부류의 화학물질, 예컨대 티오나진, 에토프로포스, 페나미포스, 펜설포티온, 터부포스, 아사조포스, 및 에부포스를 포함한다. 추가의 살선충제는 Alan Wood에 의해 작업되고 alanwood.net 인터넷 사이트에서 전자 형태로 이용가능한 데이타베이스인, 살충제 통상 명칭의 개요서에 열거되어 있다.
적합한 살균제는, 비제한적으로, 디클로로펜 및 벤질알코올 헤미 포르말 (ICI로부터의 Proxel® 또는 Thor Chemie로부터의 Acticide® RS 및 Rohm & Haas로부터의 Kathon® MK) 및 이소티아졸리논 유도체, 예컨대 알킬이소티아졸리논 및 벤즈이소티아졸리논(Thor Chemie로부터의 Acticide® MBS; ICI로부터의 Proxel® GXL)을 포함한다. 추가의 살균제는 Alan Wood에 의해 작업되고 alanwood.net 인터넷 사이트에서 전자 형태로 이용가능한 데이타베이스인, 살충제 통상 명칭의 개요서에 나열되어 있다.
적합한 접종물은, 비제한적으로 하기를 포함한다: 브래디히조비움 아종(브래디히조비움 spp.), 특히 브래디히조비움 야포니쿰(브래디히조비움 야포니쿰) (BASF Vault® 생성물), 바실러스 서브틸리스(바실러스 서브틸리스), 바실러스 피르무스(바실러스 피르무스), 바실러스 푸밀리스(바실러스 pumilis), 스트렙토마이세스 라이디쿠스(스트렙토마이세스 라이디쿠스), 트리코데르마 아종(트리코데르마 spp.) ,파스퇴리아 아종(파스퇴리아 spp.), 리조비알 세포의 다른 배양물(BASF Nodulator® 및 Rhizo-Flo®), 및 이들의 임의의 조합, 예를 들면, 2종 이상, 3종 이상, 또는 4종 이상의 접종물.
식물 조절물질은 식물 생화학적 신호전달을 자극 또는 억제하는 천연 또는 합성의 화학 물질이다. 이들은 보통, 그러나 배타적으로, 세포의 표면에서 수용체에 의해 인지되어 세포내에서 반응의 캐스케이드를 유발한다. 적합한 식물 조절물질은 비제한적으로, 에테폰; 에틸렌; 살리실산; 아세틸살리실 산; 자스몬산; 메틸 자스모네이트; 메틸 디하이드로자스모네이트; 키틴; 키토산; 압시스 산; 임의의 옥신 화합물 또는 저해제, 예를 들면, 비제한적으로 (4-클로로페녹시)아세트산, (2,4-디클로로페녹시)아세트산, 및 2,3,5-트리아이오도벤조산; 임의의 사이토키닌, 예를 들면, 비제한적으로 키네틴 및 지아틴; 지베렐린; 브라시놀라이드; 및 이들의 임의의 조합, 예를 들면, 2종 이상, 3종 이상, 또는 4종 이상의 조절물질의 조합을 포함한다.
다른 적합한 첨가제는 완충제, 습윤제, 코팅제, 및 연마제를 포함한다. 이들 물질은 본 발명에 따른 조성물의 적용을 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 조성물은 다른 종래의 종자 제형 및 처리 물질, 예를 들면, 점토 및 다당류와 함께 식물 종자에 적용될 수 있다.
식물 종자 처리를 위한 조성물 또는 시스템 용도는 하기를 포함한다: 본 발명의 펩타이드 중 1종 이상은, 바람직하게는 하기 중 1종 이상을 비제한적으로 포함한다: 펩타이드 p4-14s-9a (서열식별번호: 57), p4-14s-12d (서열식별번호: 59), p14 (서열식별번호: 113), p14a (서열식별번호: 114), p14-22E,26E (서열식별번호: 23), p1-29 (서열식별번호: 130), 및 p4-14S-16S (서열식별번호: 55) , 다중 살충제, 또는 다중 살선충제, 다중 살진균제, 다중 다른 접종물, 또는 다중 식물 조절물질의 조합물을 포함하는1종 이상의 살충제, 살선충제, 살진균제, 다른 접종물, 또는 다른 식물 조절물질과 함께.이들 병용 치료를 위한 적합한 살충제, 살선충제, 살진균제, 접종물, 및 식물 조절물질은 상기 확인된 것들을 포함한다. 이들 조성물은 종자 처리 시기에 단일 조성물의 형태로 존재한다. 그에 반해서, 종자 처리에 사용된 시스템은 다중 처리를 포함할 수 있는데, 예를 들면, 펩타이드를 함유하는 조성물은 하나의 치료에 사용되고 1종 이상의 살충제, 살선충제, 살진균제, 식물 조절물질 및/또는 살균제를 포함하는 조성물은 별도의 처리시 사용된다. 후자의 구현예에서, 이들 처리 둘 다는 동시에, 즉, 식재 전 또는 대략 식재 시기에 수행된다.
하나의 그와 같은 예는 하기 중 1종 이상을 (비제한적으로) 포함하는 본 발명의 펩타이드 중 1종 이상을 포함한다: 펩타이드 p4-14s-9a (서열식별번호: 57), p4-14s-12d (서열식별번호: 59), p14 (서열식별번호: 113), p14a (서열식별번호: 114), p14-22E,26E (서열식별번호: 23), p1-29 (서열식별번호: 130), 및 p4-14S-16S (서열식별번호: 55), , Poncho™ (클로티아니딘) (Bayer Crop Science로부터 이용가능), Poncho™ VOTiVO (클로티아니딘 및 바실러스 피르무스 생물학적 살선충제) (Bayer Crop Science로부터 이용가능), 및 Gaucho™ (이미디클로프리드) (Bayer Crop Science로부터 이용가능) 중 하나와 함께.
또 다른 예는 하기 중 1종 이상을 (비제한적으로) 포함하는 본 발명의 펩타이드 중 1종 이상을 포함한다: 펩타이드 p4-14s-9a (서열식별번호: 57), p4-14s-12d (서열식별번호: 59), p14 (서열식별번호: 113), p14a (서열식별번호: 114), p14-22E,26E (서열식별번호: 23), p1-29 (서열식별번호: 130), 및 p4-14S-16S (서열식별번호: 55), , Cruiser™ (티아메톡삼) (Syngenta로부터 이용가능), CruiserMaxx™ (티아메톡삼, 메페녹삼, 및 플루디옥시닐) (Syngenta로부터 이용가능), Cruiser Extreme™ (티아메톡삼, 메페녹삼, 플루디옥시닐, 및 아족시스트로빈) (Syngenta로부터 이용가능), Avicta™ (티아메톡삼 및 아바멕틴) (Syngenta로부터 이용가능), 및 Avicta™ Complete (티아메톡삼, 아바멕틴, 및 Clariva Complete™ (이것은 contains the 파스퇴리아 니쉬자와에 - Pn1 생물학적 접종물을 함유함, Syngenta로부터 이용가능), 및 Avicta Complete™ Corn (티아메톡삼, 메페녹삼, 플루디옥시닐, 아족시스트로빈, 티아벤다졸 및 아바멕틴) (Syngenta로부터 이용가능) 중 1종과 함께.
또 다른 예는 하기 중 1종 이상을 (비제한적으로) 포함하는 본 발명의 펩타이드 중 1종 이상을 포함한다: 펩타이드 p4-14s-9a (서열식별번호: 57), p4-14s-12d (서열식별번호: 59), p14 (서열식별번호: 113), p14a (서열식별번호: 114), p14-22E,26E (서열식별번호: 23), p1-29 (서열식별번호: 130), 및 p4-14S-16S (서열식별번호: 55), , Vault Liquid plus Integral (브래디히조비움 종 및 바실러스 서브틸리스 균주 MBI 600 접종물) (BASF로부터 이용가능), Vault NP (브래디히조비움 야포니쿰 접종물) (BASF로부터 이용가능), 및 Subtilex NG (바실러스 서브틸리스 생물학적 접종물) (BASF로부터 이용가능) 중 1종 이상과 함께.
본 발명은 추가로, 질환 저항성을 식물에 부여하고, 식물 성장을 향상시키고, 해충 방제 (곤충 및 선충 포함)에 영향을 주고, 생물 또는 비생물 스트레스 내성을 식물에 부여하고/거나 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 방법에 관한 것이다. 이들 방법은 유효량의 본 발명의 단리된 펩타이드, 또는 본 발명의 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하거나 성장할 것으로 예상되는 유전자좌에 적용함을 포함한다. 이러한 적용의 결과로서, 펩타이드는 식물의 세포 또는 식물 종자와 접촉하여, 식물 또는 식물 종자로부터 성장된 식물에서 식물 종자 질환 내성, 성장 향상, 생물 스트레스에 대한 내성, 비생물 스트레스에 대한 내성, 또는 변경된 생화학적 신호전달을 유도한다. 대안적으로, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 식물에 적용될 수 있고, 이로써 그와 같은 식물 자체로부터 회수된 종자는 질환 저항성을 식물에서 부여하고, 식물 성장을 향상시키고, 곤충 제어에 영향을 주고, 내성을 생물 또는 비생물 스트레스에 부여하고/거나 생화학적 신호전달을 조절할 수 있다.
이들 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물이 적용된 식물 또는 식물 종자 또는 유전자좌를 선택하는 것이 가능하다. 예를 들면, 높은 선충 함량을 함유하는 것으로 공지된 경작지의 경우, 이러한 경작지, 또는 경작지(위치)에서 성장될 식물 또는 식물 종자는 본발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 적용함으로써 선택적으로 처리할 수 있는 반면; 이러한 처리는 낮은 선출 함량을 함유하는 경작지에서 성장된 식물 또는 식물 종자의 경우에 필수적이지 않을 수 있다. 유사하게, 관개가 감소된 경작지의 경우, 이러한 경작지, 또는 경작지(위치)에서 성장될 식물 또는 식물 종자는, 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 적용하여 선택적으로 처리할 수 있는 반면; 이러한 처리는 관개가 적절한 경장지에서 성장된 식물 또는 식물 종자의 경우에 필수적이지 않을 수 있다. 마찬가지로, 홍수가 나는 경향이 있는 경작지의 경우, 이러한 경작지, 또는 경작지(위치)에서 성장될 식물 또는 식물 종자는 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 적용할 수 있는 반면에; 이러한 처리는 홍수가 나지 않는 경장지에서 상장된 식물 또는 식물 종자의 경우에 필수적이지 않을 수 있다. 이러한 선택의 여전히 다른 예로서, 성장하는 계절의 특정 시기에 곤충이 공격하는 경향이 있는 경작지의 경우, 이러한 경작지, 또는 경작지(위치)에서 성장될 식물 또는 식물 종자는 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 적용함으로써 선택적으로 처리할 수 있는 반면; 성장하는 계절의 부적절한 시기 또는 이러한 공격이 없는 동일한 경작지는 처리되지 않을 수 있다. 이러한 선택 단계는 본원에 기재된 각각의 사용 방법을 실시하는 경우, 즉, 식물에 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 해충을 방제 (곤충 및 선충 포함)하고/하거나, 식물에 항생제 또는 비생물 스트레스 내성을 부여하고/하거나 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 경우 수행될 수 있다.
단리된 펩타이드 또는 이를 함유하는 조성물을 식물 또는 식물 종자에 적용하여 식물에서 질환 저항성을 부여하고, 식물 성장에 영향을 주고, 곤충을 제어하고, 스트레스 저항성, 및/또는 조절된 생화학적 신호전달을 식물 또는 종자로부터 성장된 식물에 부여하는 대안으로서, 형질전환 식물 또는 식물 종자가 이용될 수 있다. 형질전환 식물을 이용할 때, 이것은 형질전환 식물 전환을 본 발명의 펩타이드를 인코딩하는 DNA 분자에 제공하는 단계 및 DNA 분자가 질환 저항성을 식물에 부여하고, 식물 성장을 향상시키고, 곤충을 제어하고/거나 내성을 생물 또는 비생물 스트레스에 부여하도록 하는데 유효한 조건 하에서 식물을 성장시키는 단계를 수반한다. 대안적으로, 본 발명의 펩타이드를 암호화하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하여 토양에 식재할 수 있다. 그 다음 식물은, DNA 분자가 펩타이드를 발현시키고 그렇게 함으로써 질환 저항성을 형질전환 식물에게 부여하고, 식물 성장을 향상시키고, 곤충을 제어하고/거나 내성을 생물 또는 비생물 스트레스에 부여하도록 하는데 유효한 조건 하에서 식재된 종자로부터 번식된다.
이들 구현예에서, 본 발명을 수행하기 위한 형질전환 식물 또는 식물 종자를 선택하는 것 또한 가능하다. 예를 들면, 높은 선충 함량을 함유하는 것으로 알려진 경작지의 경우, 형질전환 식물 또는 식물 종자를 이러한 경작지에서 선택적으로 성장시킬 수 있는 반면; 비 -형질전환 식물 또는 식물 종자는 낮은 선충 함량을 함유하는 경작지에서 성장시킬 수 있다. 유사하게, 관개가 감소된 경작지의 경우, 형질전환 식물 또는 식물 종자를 이러한 경작지에서 선택적으로 성장시킬 수 있는 반면; 비 -형질전환 식물 또는 식물 종자는 관개가 적절한 경작지에서 상장시킬 수 있다. 마찬가지로, 홍수가 나는 경향이 있는 경작지의 경우, 형질전환 식물 또는 식물 종자를 이러한 경작지에서 성장시킬 수 있는 반면; 비-형질전환 식물 또는 식물 종자는 홍수가 나지 않는 경작지에서 성장시킬 수 있다. 이러한 선택의 여전히 또 다른 예로서, 성장하는 계절의 특정 시기에 곤충이 공격하는 경향이 있는 경작지의 경우, 형질전환 식물 또는 식물 종자를 이러한 경작지에서 선택적으로 성장시킬 수 있는 반면; 비-형질전환 식물 또는 식물 종자는 이러한 곤충 공격이 없는 경장지에서 성장시킬 수 있다. 이러한 선택 단계는 본원에 기재된 각각의 사용 방법을 실시하는 경우, 즉, 식물에 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 해충을 방제 (곤충 및 선충 포함)하고/하거나, 식물에 항생제 또는 비생물 스트레스 내성을 부여하고/하거나 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 경우 수행될 수 있다.
본 발명은 또한 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 부여하는 방법에 관한 것이다. 이들 방법은 유효량의 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 본 발명에 따른 조성물을 식물 또는 식물이 성장하는 위치에 적용함을 포함한다. 이러한 적용의 결과로서, 상기 펩타이드는 식물의 세포 또는 식물 종자와 접촉하여 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도한다. 대안적으로, 유효량의 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 본 발명에 따른 조성물은 수확된 과일 또는 야채에 적용시킬 수 있다. 이러한 적용의 결과로서, 상기 펩타이드는 수확된 과일 또는 야채의 세포와 접촉하여, 처리된 과일 또는 채소류에 대해 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 처리된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도한다.
이들 구현예에서, 식물, 절단부, 과일, 채소류, 또는 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물이 적용되는 위치를 선택하는 것이 또한 가능하다. 예를 들면, 먼 거리로 출하되거나 장기간 동안 저장되는 수확된 절단부 또는 과일 또는 채소류의 경우, 이들은 본 발명의 단리된 펩타이드 또는 조성물을 본원에서 기재된 바와 같이 선택적으로 처리될 수 있는 반면; 근거리로 출하되어 실질적인 보관 기간 없이 소비되는 것으로 의도되는 수확된 절단부 또는 과일 또는 채소류는 이러한 처리로부터 제외될 수 있다.
원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성, 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도하기 위해 단리된 펩타이드 또는 이를 함유하는 조성물을 식물 또는 식물 종자에 적용하기 위한 대안으로서, 형질전환 식물 또는 식물 종자를 이용할 수 있다. 형질전환 식물을 이용하는 경우, 이는 본 발명의 펩타이드를 인코딩하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하고 당해 식물을 DNA 분자가 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도하기에 효과적인 조건 하에서 성장시킴을 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 펩타이드를 암호화하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하여 토양에 식재할 수 있다. 이후에, 식물을 식재된 종자로부터 DNA 분자가 펩타이드를 발현함으로써 원예 식물로부터 제거된 절단부에 대해 건조 내성, 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 형질전환 식물로부터 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 유도하도록 하는 조건하에서 증식시킨다.
이들 구현예에서, 본 발명을 수행하기 위한 형질전환 식물 또는 식물 종자를 선택하는 것 또한 가능하다. 예를 들면, 형질전환 식물 또는 식물 종자를 수확된 절단부 또는 과일 또는 채소류가 먼 거리로 출하되거나 수확 후 장기간 동안 저장되는 경우 성장을 위해 선택할 수 있는 반면; 비-형질전환 식물 또는 식물 종자는 수확된 절단부 또는 과일 또는 채소류가 근거리로 출하되어 실질적인 보관 기간 없이 소비되는 것으로 의도되는 경우 이러한 처리로부터 제외될 수 있다.
적합한 식물은 천연 또는 유전자 변형 형태에 상관없이, 쌍떡잎 및 외떡잎 식물, 예를 들면 농업, 산림, 장식 및 원예 식물을 포함한다. 예시적인 식물은, 비제한적으로 하기를 포함한다: 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 종), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 승도복숭아, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추, 피튜니아, 소나무 (피누스 종), 자두, 포플러 (파퓰러스 종), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 종),아라비돕시스 탈리아나, 세인트폴리아, 포인세티아, 크라이산테멈, 카네이션, 및 지니아.
변형된 생화학적 신호전달과 관련하여, 이는 특정 식물 생화학적 경로의 향상 및 특정 다른 식물 생화학적 경로의 약화 둘 다를 포함한다. 본 발명에 따라 변경될 수 있는 생화학적 신호전달 경로는 유전자 발현 및 단백질 생산, 대사물의 생산, 및 신호전달 분자/2차 대사물의 생산을 포함한다. 예시적인 생화학적 신호전달 경로 및 그것의 변형은, 비제한적으로 하기를 포함한다: 산화질소 생산, 과산화물 생산, 및 다른 2차 대사물의 유도; 에틸렌 신호전달 경로 효능제 및 에틸렌-반응성 유전자 발현의 유도(참고 Dong 외,Plant Phys.136:3628-3638 (2004); Li 등,Planta 239:831-46 (2014); Chang 등,PLoS 1 10,e0125498 (2015)(이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로편입된다); 살리실산 신호전달 경로의 효능제 및 살리실산-반응성 유전자 발현의 유도(참고 Dong 등,Plant J.20:207-215 (1999)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다); 압시스 산 경로의 유도 및 압시스 산-반응성 유전자 발현의 유도(참고 Dong 등,Planta 221:313-327 (2005)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다); 지베렐린 신호전달 경로의 효능제 및 지베렐린-반응성 유전자 발현의 유도(참고 Li 등,Planta 239:831-46 (2014) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다); 자스몬산 신호전달의 길항제 및 자스몬산-반응성 유전자의 발현의 억제(참고 Dong 등,Plant Phys.136:3628-3638 (2004) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다); 프로테아제 저해제 발현의 유도(참고 Laluk 및 Mengiste, Plant J.68:480-494 (2011); Xia 등,Chin.Sci.Bull 56:2351-2358 (2011)(이들 각각은 이로써 그 전체가 참고로 편입된다); 식물 조직에서 반응성 산소 종 생산의 유도; 면역-관련된 및 항미생물 펩타이드 생산의 유도, 예컨대, 비제한적으로, 페록시다아제, 슈퍼옥사이드 디스무타제, 키티나제, 및 β-1,3-글루카나제 (Wang 등,J.Agric.Food Chem.59:12527-12533 (2011)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다)의 유도; 및 엑스판신 유전자 발현 및 생산의 유도(참고 Li 등,Planta 239:831-46 (2014)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
질환 내성과 관련하여, 감염에 대한 절대적인 면역력이 부여되지 않을 수 있지만, 질환의 중증도는 감소되고 증상 발달은 지연된다. 병변 수, 병변 크기, 및 진균 병원체의 포자형성 모두는 감소된다. 질환 내성을 부여하는 이러한 방법은 이전에 치료할 수 없는 질환을 치료하고, 비용으로 인하여 별도로 처리될 수 없는 질환을 전신적으로 치료하고, 감염원 또는 환경적으로 유해한 물질을 피하기 위한 포텐셜을 갖는다.
본 발명에 따라 식물에 병원체 내성을 부여하는 방법은 다양한 병원체, 예를 들면, 바이러스, 박테리아, 및 진균에 대해 내성을 부여하는데 유용하다. 내성, 특히, 하기 바이러스에 대한 내성은 본 발명의 방법에 의해 달성될 수 있다: 담배 모자이크 바이러스 및 토마토 모자이크 바이러스.내성, 특히, 하기 박테리아에 대한 내성 또한 본 발명에 따라 식물에 부여될 수있다: 병원성 슈도모나스 spp., 병원성 어위니아 spp., 병원성 크산토모나스 spp., 및 병원성 랄스토니아 spp.식물은 본 발명의 방법의 사용에 의해 특히, 하기 진균에 대해 내성이 될 수 있다: 푸사리움 spp. 및 파이토프토라 spp.
식물 성장을 향상시키기 위한 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 사용과 관련하여, 다양한 형태의 식물 성장 향상 또는 촉진이 달성될 수 있다. 이는 식물 성장이 종자로부터 개시되는 경우와 같이 조기에 또는 식물의 생애 중 후에 발생할 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 식물 성장은 더 큰 수율, 증가된 식물 활력, 씨딩의 증가된 활력(즉, 발아후), 증가된 식물 중량, 증가된 바이오매스, 식물당 증가된 꽃의 수, 더 큰 그레인 및/또는 과일 수확량, 생상된 종자의 증가된 양, 발아된 종자의 증가된 백분율, 증가된 발아 속도, 증가된 식물 크기, 감소된 식물 높이 (밀의 경우), 더 큰 바이오매스, 보다 더 및 큰 과일, 조기 과일 천연색, 조기 싹, 과일 및 식물 성숙, 더 큰 어린나무 또는 곁가지, 더 큰 잎, 지연된 잎 노화, 증가된 싹 성장, 증가된 뿌리 성장, 변경된 뿌리/싹 분배, 증가된 단백질 함량, 증가된 오일 함량 증가된 탄수화물 함량 증가된 안료 함량 증가된 클로로필 함량 증가된 총 광합성, 증가된 광합성 효율, 감소된 호흡 (lower O2 용법), 수율-감소 처리에 대한 보충, 줄기의 증가된 내구성 (및 줄기 쓰러짐에 대한 내성), 뿌리의 증가된 내구성 (및 뿌리 쓰러짐에 대한 내성), 낮은 광 조건하에서 더 나은 식물 성장, 및 이들의 조합을 포함한다. 그 결과, 본 발명은 재배자에게 유의미한 경제적 이점을 제공한다. 예를 들면, 조기 발아 및 조기 성숙은 짧은 성장 계절이 그 지역에서 그것의 성장을 달리 불가능하게 할 수 있는 지역에서 농작물이 성장하도록 한다. 종자 발아의 증가된 백분율은 개선된 작물 스탠드(crop stand) 및 더 효율적인 종자 사용을 생성한다. 더 큰 수율, 증가된 크기, 및 향상된 바이오매스 생산은 지역의 주어진 플롯으로부터 더 큰 매출 생성을 허용한다.
해충 (생물 스트레스요인인 곤충 및 선충을 비제한적으로 포함)을 제어하기 위한 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 사용에 관해서, 그와 같은 해충 방제는 해충이 본 발명의 펩타이드 또는 조성물이 적용된 식물과 접촉하는 것을 방지하고, 상해를 일으켜서 식물에 직접적으로 손상을 방지하고, 해충을 그와 같은 식물로부터 떼어내고, 그와 같은 식물에 근접한 해충을 사멸시키고, 그와 같은 식물 상의 곤충 유충을 방해하며, 해충이 숙주 식물을 식민지시키지 못하도록 하고, 식물독소를 방출하는 것으로 곤충을 식민지화하는 것을 방지하고, 숙주 식물 상의 난(egg) 침착을 방해하는 것, 등을 포함한다. 본 발명은 또한 해충 감염으로부터 생성된 식물에 대한 후속의 질환 손상을 방지한다.
본 발명은 다양한 곤충 (생물 스트레스유발인자)에 대해 효과적이다. 유럽 옥수수 천곤충(유럽 옥수수 천곤충)은 옥수수(덴트(dent) 및 단맛 옥수수)의 주요 해충일 뿐만 아니라 200개 이상의 식물 종, 예를 들면, 녹색, 왁스, 및 리마콩(lima bean) 및 식용 대두, 후추, 감자, 및 토마토 플러스 많은 잡초 종을 먹는다. 다양한 야채 농작물을 손상시키는 추가의 곤충 유충 섭식 해충은 하기를 포함한다: 비트무(beet) 거염벌레, 양배추 총채벌레, 큰담배밤나방의 유충(옥수수 귀 worm), 가을 거염벌레(fall 거염벌레), 배추좀나방 애벌레(다이아몬드back moth), 양배추 뿌리 구더기(양배추 뿌리 maggot), 양파 구더기, 종자 옥수수 구더기, 명나방과의 나방(pickleworm)(메론웜(melonworm)), 후추 구더기, 및 토마토 요충.집합적으로, 이러한 해충의 그룹은 전세계적으로 야채 생산을 위한 경제적으로가장 중요한 그룹을 나타낸다. 본 발명은 또한 선충, 또 다른 부류의 경제적으로 중요한 생물 스트레스유발인자에 대해 효과적이다. 대두 시스트 선충(헤테로데라 글리신스(헤테로데라 글리신))는 대두의 주요 해충이다. 콩팥모양 선충(로틸렌쿨루스 레니포르미스(Rotylenchulus reniformis))는 추가의 작물 종, 특히 대두 및 옥수수에 기생할 수 있으므로 면화의 주요 해충이다. 추가의 선충 해충은 멜로이도기네(Meloidogyne) 속의 뿌리 혹 선충(특히, 면, 밀, 및 보리에서), 헤테로데라(헤테로dera) 속의 곡물 포자 선충 (특히, 대두, 밀, 및 보리에서), 프라틸렌쿠스(Pratylenchus) 속의 뿌리 병변 선충, 안구이나(Anguina)속의 종자 혹 선충(종자 gall 선충)(특히, 밀, 보리, 및 호밀에서), 및 디틸렌쿠스(Ditylenchus) 속의 줄기 선충을 포함한다. 다른 생물 스트레스유발인자는 거미류, 잡초, 및 이들의 조합을 포함한다.
식물에 비생물 스트레스 내성을 부여하기 위한 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 사용과 관련하여, 이러한 비생물 스트레스는 식물 생리학 및 발달에 역효과를 갖는 임의의 환경적인 인자를 포함한다. 이러한 환경적인 스트레스의 예는 기후-관련된 스트레스(예를 들면, 가뭄, 홍수, 서리, 차가운 온도, 고온, 과도한 빛, 및 불충분한 빛), 대기 오염 스트레스 (예를 들면, 이산화탄소, 일산화탄소, 이산화황, NOx, 탄화수소, 오존, 자외선 방사선, 산성비), 화학 (예를 들면, 살충제, 살진균제, 제초제, 중금속), 영양 스트레스 (예를 들면, 비료, 미량영양소, 다량영양소, 특히 칼륨, 질소 유도체, 및 아인산 유도체의 과다 및 부족), 및 상처에 대한 개선된 치유 반응을 포함한다. 본 발명의 펩타이드의 사용은 식물에게 이러한 형태의 환경적인 스트레스에 대한내성을 부여한다.
본 발명의 추가의 측면은 안정제(safener)로서 본 발명의 펩타이드를 다음에 기재된 바와 같이 물 속에 수생 잡초의 방제를 위한 1종 이상의 활성제와 함께 사용하는 것을 포함한다: U.S. 공개번호20150218099(Mann에게 허여됨) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
본 발명의 또 다른 측면은 감소된 물 관개의 조건 하에서 성장된 식물에 적용하기 위한 조성물에서 식물 강화제로서 본 발명의 펩타이드의 용도에 관한 것이며, 여기서 조성물은 또한 다음에 기재된 바와 같은 적어도 1종의 항산화제 및 적어도 1종의 방사선 매니저, 및 선택적으로 적어도 1종의 식물 성장 조절제를 포함한다: U.S. 공개번호20130116119(Rees 등에게 허여됨) (이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다.
상기 펩타이드 또는 조성물의 적용을 포함하는 본 발명의 방법은 식물의 모두 또는 일부, 예를 들면, 잎, 줄기, 뿌리, 무성아 (예를 들면, 절단부), 과일, 등을 처리하는 경우 다양한 절차를 통해 수행할 수 있다. 이는 식물내로 상기 펩타이드의 침윤(필수적인 것은 아니다)을 포함할 수 있다. 적합한 적용 방법은 높은 또는 낮은 압력 분무, 주사, 및 펩타이드가 적용되는 시기에 근접하여 잎 마모를 포함한다. 본 발명의 적용 구현예에 따라 식물 종자를 처리하는 경우, 과민성 반응 유발제 단백질 또는 폴리펩타이드를 낮은 또는 고압 분무, 코팅, 액침 (예를 들면, 침지), 또는 주사에 의해 적용할 수 있다. 다른 적합한 적용 절차는 식물 또는 식물 종자의 세포와 과민성 반응 유발제 폴리펩타이드 또는 단백질을 접촉시킬 수 있는 당해 분야의 숙련가에 의해 구체화될 수 있다. 본 발명의 펩타이드 또는 조성물이 처리되면, 종자는 종재의 절차를 사용하여 천연 또는 인공 토양에 식재되고 재배되어 식물을 생산한다. 식물이 본 발명에 따라 처리된 종자로부터 증식된 경우, 상기 식물을 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 1회 이상의 적용으로 처리하여 식물에 대해 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 식물에서 곤충을 방제하고/하거나, 항생제 또는 비생물 스트레스 내성을 부여하고/하거나, 제거된 절단부의 건조 내성을 개선하고/하거나, 수확된 과일 또는 채소류에 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하고/하거나, 수확된 과일 또는 채소루에 대해 과일 또는 야채 성숙 수명을 개선시킬 수 있다.
본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 본 발명에 따라서 식물 또는 식물 종자에 단독으로 또는 다른 물질과의 혼합물로 적용될 수 있다. 대안적으로, 펩타이드 또는 조성물을 상이한 시간에 적용된 다른 물질과 함께 식물에 별도로 적용할 수 있다.
형질전환 식물 및 형질전환 종자의 사용을 포함하는 본 발명의 대안적인 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 식물 또는 종자에 국소 적용될 필요가 없다. 대신에, 본 발명의 펩타이드를 암호화하는 DNA 분자로 형질전환된 형질전환 식물을 당해 기술에서 잘 알려진 절차에 따라서 생산한다. 식물에서 발현시키기에 적합한 벡터(즉, 식물에서 작동가능한 번역 및 전사 조절 서열을 함유하는)를 마이크로피펫을 사용함으로써 식물 세포내로 직접 미세주사하여 재조합 DNA를 기계적으로 전달한다. Crossway, Mol.Gen.Genetics , 202:179-85 (1985)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 유전 물질은 또한, 식물 세포내로 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 전달할 수 있다. Krens, 등,Nature, 296:72-74 (1982)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
본 발명에 따른 펩타이드를 인코딩하는 유전자를 사용하여 형질전환 식물 세포내로 형질전환하는 또 다른 접근법은 숙주 세포의 입자 폭격(바이오리스틱 형질전환으로도 공지된다) 이다. 이것은 몇개이 방식들 중 하나로 달성될 수 있다. 하나는 세포에서 불활성 또는 생물학적 활성 입자를 추진함을 포함한다. 당해 기술은 다음에 개시된다: U.S. 특허 번호4,945,050, 5,036,006, 및 5,100,792(모든 Sanford 등에 허여됨)(이는 이로써 참고로 편입된다). 일반적으로, 당해 절차는 세포의 외표면을 침투하여 이의 내부에 편입되도록 하기에 유효한 조건 하에서 세포에서 불활성 또는 생물학적 활성 입자을 추진함을 포함한다. 불활성 입자가 이용된 경우, 벡터는 이종성 DNA를 함유하는 벡터를 사용하여 입자를 코팅함으로써 세포내로 도입시킬 수 있다. 대안적으로, 표적 세포는 벡터에 의해 둘러싸이므로 벡터는 입자를 따라 세포내로 운반된다. 생물학적 활성 입자(예를 들면, 벡터 및 이종성 DNA를 함유하는 건조된 박테리아 세포)를 또한 식물 세포내로 추진할 수 있다.
도입의 여전히 또 다른 방법은 다른 독립체, 미니셀(minicell), 세포, 리소좀 또는 다른 가용성 지질-표면화된 바디를 사용한 원형질의 융합이다. Fraley, 등,Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 79:1859-63 (1982)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 상기 DNA 분자는 또한, 전기천공에 의해 식물 세포내로 도입될 수 있다. Fromm 등,Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 82:5824 (1985)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다). 당해 기술에서, 식물 원형질은 발현 카세트를 함유하는 플라스미드의 존재하에서 전기천공된다. 높은 자기장의 전기 자극은 생체막을 가역적으로 침투하여 플라스미드의 도입을 허용한다. 전기천공된 식물 원형질은 세포벽을 재구성하고, 분열하여, 재생된다.
DNA 분자를 식물 세포에 도입하는 또 다른 방법은 유전자에 의한 형질전환 저에 식물 세포를 아그로박테리움 투메파시엔스 또는 A. 라이조게네스로 감염시키는 것이다. 당해 기술에 공지된 적절한 조건 하에서, 형질전환된 식물 세포는 성장하여 순 또는 뿌리를 형성시키고 식물로 발달한다. 일반적으로, 당해 절차는 식물 조직을 박테리아의 현탁액과 함께 접종하고 당해 조직을 48 내지 72 시간 동안 항생제가 들어있지 않은 재생 배지 속에서 25-28°C에서 인큐베이팅함을 포함한다. 아그로박테리움는 그램-음성 계열 라이조비아세아제의 대표적인 속이다. 그것의 종은 근두 암종 (A. 투메파시엔스) 및 털이 많은 뿌리 질환 (A. 라이조게네스)에 책임이 있다. 근두 암종 종양 및 뿌리털 질환에 걸린 식물 세포는 박테리아에 의해서만 대사되는, 오핀으로 공지된 아미노산 유도체를 생산한다. 오핀의 발현에 관여하는 박테리아 유전자는 키메라성 발현 카세트를 위한 편리한 공급원이다. 또한, 오핀의 존재를 검정하는 것은 형질전환된 조직을 확인하는데 사용될 수 있다. 이종성 유전적 서열은 적절한 식물 세포내에 에이. 투메파시엔스의 Ti 플라스미드 또는 에이. 리조게네스 의 Ri 플라스미드 수단에 의해 도입시킬 수 있다. 상기 Ti 또는 Ri 플라스미드는 아그로박테리움에 의한 감염시 식물 세포내로 전달되어 식물 게놈내로 안정되게 통합된다. J.Schell, Science, 237:1176-83 (1987)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다).
형질전환후, 형질전환된 식물 세포는 재생되어야 한다. 배양된 원형질로부터 식물 재생은 다음에 기재되어 있다: Evans 등, >Handbook of Plant Plant Cell Cultures , Vol.1:(MacMillan Publishing Co.,New York, 1983); 및 Nasil I.R.(ed.), Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants , Acad.Press, Orlando, Vol.1, 1984, 및 Vol.Ill (1986)(이는 이로써 그 전체가 참고로 편입된다).
실제로 모든 식물이 배양 세포 또는 조직으로부터 재생될 수 있음을 공지되어 있다. 재생 수단은 식물의 종에 따라 상이하지만, 일반적으로 형질전환된 원형질의 현탁액 또는 형질전환된 외식편을 함유하는 페트리 디쉬가 먼저 제공된다. 가골 조직(가골 조직)이 형성되고 순이 가골로부터 유도된 후 뿌리가 내린다. 대안적으로, 배아 형성은 가골 조직내에서 유도될 수 있다. 이들 배아는 천연 배아로서 발아하여 식물을 형성한다. 배양 배지는 일반적으로 다양한 아미노산 및 호르몬, 예컨대, 옥신 및 사이토키닌을 함유할 것이다. 특히 옥수수 및 알팔파와 같은 이러한 종의 경우 글루탐산 및 프롤린을 배지에 가하는 것이 또한 유리할 수 있다. 효율적인 재생은 배지, 유전자형, 및 배양 이력에 의존할 것이다. 이들 3가지 변수가 제어된 후, 재생은 보통 재생산가능하고 및 반복가능하다.
발현 카세트가 형질전환 식물내에 안정되게 편입된 후, 이는 성 교배에 의해 다른 식물로 전달될 수 있다. 임의의 수의 표준 품종개략 기술을 교차시킬 종에 따라 사용할 수 있다.
이러한 유형의 형질전환 식물이 생산되면, 식물 자체를 종래의 절차에 따라 과민성 반응 유발제를 인코딩하는 유전자의 존재하에 배양하여 질환 내성, 향상된 식물 성장, 식물에서 곤충의 방제, 무생물적 또는 생물 스트레스 내성, 제거된 절단부의 개선된 건조 내성, 수거 후 질환 내성 또는 수확된 과일 또는 채소류에서 건조 내성, 및/또는 수확된 과일 또는 체소류에 대한 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 생성한다.
대안적으로, 형질전환 종자는 형질전환 식물로부터 회수된다. 이들 종자는 이후에 토양에 식재되어 종래의 절차를 사용하여 재배됨으로써 형질전환 식물을 생산한다. 형질전환 식물은 식물에 대해 질환 내성을 부여하고/하거나, 식물 성장을 향상시키고/시키거나, 곤충을 방제하고/하거나, 무생물적 또는 생물 스트레스 내성을 부여하고/하거나, 제거된 절단부의 건조 내성을 부여하고/하거나, 수확된 과일 또는 채소류에서 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하거나, 수확된 과일 또는 채소류에 대해 과일 또는 야채 성숙의 개선된 수명을 부여하기에 유효한 조건하에서 시재된 형질전환종자로부터 번식된다.
형질전환 식물 및 식물 종자가 본 발명에 따라 사용된 경우, 이들은 본 발명의펩타이드 또는 본 발명의 조성물이 적용된 식물 및 종자를 치료하기 위해 사용된 바와 동일한 물질로 처리할 수 있다. 이들 다른 물질, 예를 들면, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 상기-주목된 절차, 예를 들면 높은 또는 낮은 압력 분무, 주사, 코팅, 및 액침에 의해 형질전환 식물 및 식물 종자에 적용될 수 있다. 유사하게, 식물이 형질전환 식물 종자로부터 번식되면, 당해 식물을 본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 1종 이상의 적용으로 처리하여 질환 내성을 부여하고, 성장을 향상시키고, 곤충을 방제하고, 무생물적 또는 생물 스트레스 내성, 제거된 절단부의 건조 내성, 수확된 과일 또는 채소류에서 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성, 및/또는 수확된 과일 또는 채소류에 대해 개선된 과일 또는 야채 성숙 수명을 부여한다.
이러한 형질전환 식물은 또한, 종래의 식물 처리 제제, 예를 들면, 살박테리아 또는 살생물제, 프로테아제 저해제, 비-이온성 계면활성제, 비료, 제초제, 살충제, 살진균제, 살선충제, 생물학적 접종물, 식물 조절물질, 및 이들의 혼합물로, 상기에서 기재된 바와 같이 처리할 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 구현예를 나열하기 위해 제공되나 그것의 범위를한정하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예 1 - 과민성 반응 분석
담배에서 HR은 Wei, Science 257:85-88 (1992)(이는 이로써 그 자체가 참고로 편입된다)에 기재된 바와 같이 시험하였다. 간단히, 펩타이드를 수용액 속에서 500 mg/ml의 농도로 용해하였다. 4개의 시리즈 희석물을 동등 용적의 물을 사용하여 수행하여, 펩타이드 샘플을 500, 250, 125, 62.5, 31.25 mg/ml 펩타이드 용액에서 수득하였다. 니코티아나 타바큠 컬티바 크산티(cultivar xanthi) 식물을 5-7 주령(개화전)에서 사용하였다. 잎을 중간 잎 패널에서 이쑤시개로 약하게 펀칭하였다. 이후에, 펩타이드 용액을 무-바늘 주사기를 통해 상처내로 주입하고, 패널을 필링하였다. 각 펩타이드 샘플을 2개의 상이한 식물의 잎내로 주입하였다. 잎을 관측하고 전형적인 프로그래밍된 세포사인, 고사 및 갈변에 대해 다음 48시간에 걸쳐 스코어하였다.
과민성 반응 시험은 많은 펩타이드에 대해 수행되었고, 음성인 것으로 결정되었다. 일부 펩타이드가 아직 시험되지 않았고, 아래의 표 18에서 “결정된" 또는 “TBD"으로서 설계되었지만, 밀접하게 관련된 펩타이드에 대한 결과를 기반으로 HR-음성 인 것으로 예상된다.
Figure pct00018
실시예 2 - 과산화물 반응 분석
과산화수소에 대한 제이철-자일레놀 오렌지 복합 검정 (Gay 등, Analytical Biochemistry 273:149-55 (1999)(이것은 본 명세서에 참조로서 전체적으로 편입되어 있음))을 사용하여 식물 잎 조직에 의한 과산화물 생산을 결정했다. 간단히, 시약 A를, 물이 있는 1 mL 의 총 용적에서 10 mg의 제일철 암모늄 설페이트를 133 uL의 황산과 혼합하여 준비했다. 시약 B를, 80 mL의 물에서 2g의 소르비톨을 9.34 mg의 자일레놀 오렌지와 혼합하여 준비했다. 1M 염산을, 용액이 황색으로 변할 때까지 서서히 부가했다. 그 다음 용액을 100mL의 총 용적으로 물로 희석하고, 4°C에서 어두은 병에서 보관했다.
담배 식물 (6개의 진정한 잎으로 성장된 식물) 또는 대두 식물 (6개의 진정한 잎으로 성장된 식물)로부터의 잎을 검정 전에 사용했다. 잎을 식물로부터 먼저 제거하고 종이 타월 위에 두었다. 그 다음 0.5 cm 잎 조직 원을, 가죽 펀치 도구를 사용하여 잎으로부터 제거했다. 그 다음 이들 디스크를 96-웰 플레이트의 웰들에 두었다. 250 mL의 물을 각 디스크에 부가했다. 플레이트를 파라필름으로 덮고 어둠에서 12시간 동안 두었다. 그 다음 과잉의 물을 제거하고 웰들을 추가의 250 uL의 물로 세정했다. 그 다음 세정물을 웰로부터 제거하고 물 또는 물 블랭크, 일반적으로 4배로 펩타이드의 105 uL의 0.5ug/ml 용액으로 대체했다. 펩타이드 용해도가 문제되는 경우, pH 완충제를 블랭크 및 펩타이드 샘플 둘 모두에 부가했다. 잎 디스크를 형광성 조명 하에서 1 시간 동안 펩타이드와 함께 인큐베이션했다. 각 잎 샘플로부터의 50 ul의 용액을 신규 웰로부터 제거하여 화학 분석했다.
분석 직전에, 시약 A 및 B를 1:100 비로 새롭게 혼합하여 검정 시약을 생성했다. 200 ul의 이러한 혼합물을, 50 ul의 잎-처리된 용액을 함유하는 각 웰에 부가했다. 플레이트를 어둠 속에서 20분 동안 인큐베이션하고 595nm에서의 흡광도가 검출되었다. 결과를, 2-테일 스튜던트T-시험을 사용하여 분석했다. 결과는 몇 개의 반응 클래스로 분할되었다. XR++는 음성 대조군보다 >0.05 단위 초과의 흡광도 및 스튜던트T-시험 p < 0.05를 갖는 양성 반응을 나타내었다. XR+는 블랭크보다 < 0.05 단위 초과의 흡광도 및 스튜던트T-시험 p < 0.05를 나타내었다. 약한 XR는 유의미하지 않은 p-값을 갖는 음성 대조군 초과의 반응 >0.02 단위를 나타내었다. XR-은 음성 대조군의 0.02 단위 내의 흡광도를 나타내었다. 식물 연령, 잎 내의 디스크의 위치, 및 다른 인자로 인해 과산화물 반응에서 유의미한 생물학적 가변성이 있을 수 있다는 것에 유의해야 한다. 그 결과, T-시험의 p-값은 가이드이고 절대적인 포함 기준이 아니다.
이들 연구의 결과는 아래의 표 19에서 요약되어 있다:
Figure pct00019
Figure pct00020
일반적으로, 대다수의 펩타이드는 대두에서 XR+를 시험했다. 그러나, 담배는 더 차별적이었다. HR+ 서열로부터 단일 돌연변이인 대부분의 펩타이드는 담배에서 XR+였다. 심지어 제2 돌연변이조차도 종종 XR+ 표현형으로 수득되었다. 그러나, p14 변이체에 대한 시험은, 3개의 류신 잔기의 알라닌으로의 돌연변이가 일반적으로 XR 유발의 손실을 초래했다는 것을 보여주었다. 마찬가지로, p15 (p15-62 및 p15-63)의 C-말단 절단된 변이체는 담배에서 XR-였다.
실시예 3 - 뿌리 & 싹 성장 분석
펩타이드를 순(대지 위) 및 뿌리(대지 아래)에 대한 성장원의 배치에 있어서의 생물학적 효과에 대해 시험하였다. 펩타이드를 총 100 ml 용적의 탈이온수 속에 0.2, 2, 또는 5 μg/ml로 용해하였다. 옥수수 또는 대두 종자를 이후에 펩타이드 용액 속에 1시간 동안 침지시켰다. 미처리된 대조군 (UTC) 식물은 탈이온수에 침지하였다. 투명한 플라스틱 300 ml 음료 컵 (Solo®, Dart Container Corporation)를 최하부를 4개의 동일한 사분면으롤 나누어서 최하부를 십자로 표시하여 식재하기 위해 준비했다. 그 다음 컵에 ¼"로 체질된 Sunshine Mix #1 토양 (SunGro Horticulture)을 채웠다. 100 mL의 물을 토양에 부가했다. 처리된 종자를 이후에 종자를 토양의 최상부에 약하게 가압하여 식재하였다. 이후에, 종자를 추가의 50ml의 느슨한 토양으로 커버하였다. 종자가 발아하여 12 내지 14일 동안 성장하도록 하였다.
순의 길이는 토양으로부터 각 식물에 대해 최고 잎의 약간 신장된 팁까지의 거리로 측정하였다. 발아하지 않거나 저해된 성장을 나타낸 식물은 당해 시도로부터 제거하였다. 저해는 데이터 수집시기에 완전히 팽창된 실제 잎의 결여 또는 나안에 의해 치료 그룹의 평균 잎 부위의 < ½인 것으로 판단되는 팽창된 실제 잎을 가진 것으로 정의하였다. 일반적으로, 30개의 종자를 치료 그룹 당 식재하고 15 - 25개 식물을 데이터 수집을 위해 사용하였다.
뿌리 성장은 1차 뿌리가 컵의 최하부에서 사분면 표지를 지나가는 횟수를 곱하여 추정하였다. 일부가 컨테이너의 측면을 따라 가시적이지만 이들은 종종 컵의 최하부 둘레를 따라 관측되었으며 사분면 라인의 수직 확대를 교차하는 것으로 카운트되었다. 당해 수를 4로 나누어 뿌리 성장 지수를 생산하였다. 당해 지수는 측정된 총 1차 뿌리 길이(뿌리로부터 토양의 세정 및 직접적인 측정 후 모든 1차 뿌리의 길이의 합)와 ~90% 관련된 것으로 밝혀졌다.
이들 연구의 결과는 아래의 표 20에서 요약되어 있다. 각 숫자는 미처리 대조군 값에 대한 백분율 증가를 나타낸다. 별표는, 차이가 스튜던트T-시험에 의한 측정시 p < 0.05로 통계적으로 유의미하다는 것을 나타낸다.
Figure pct00021
증가된 뿌리 성장 (p4-14s-16s, p14, 및 p14a)는 식물의 물-수집 능력을 증가시키고 가뭄 및 홍수 저항성을 증가시킬 것이다. 반대로, 증가된 싹 성장 (0.2 μg/ml의 p4-14s-9a, p4-14s-20s, 및 p14a 대두에서와 같이)는 집광 및 에너지 전환을 증가시킨다. p14a가 투여량에 따라 뿌리 또는 싹 성장의 증가를 야기할 수 있음을 주목한다. P4-14s-16s는 뿌리 성장에 대한 자원 할당의 강한 이동을 야기한다.
실시예 4 - 성장 시험
콩 종자 (또는 나타낸 대로 옥수수 종자)을 온실 시설에 있는 평지 내에서 세포 당 2종의 펑자를 평지에 식재했다. 종자가 발아하도록 하고 더 작은 식물을 도태시켜 세포당 1개 식물을 남긴다. 제1의 실제 잎이 완전히 팽창되고 제2의 잎이 확장되기 시작하면, 식물을 초기에 높이에 대해 측정하였다. 이것은 최고 잎을 상향으로 스트레칭하고 토양까지의 거리를 측정하여 수행하였다. 펩타이드는 나타낸 농도로 물에서 용해되었다 (아래의 표 21). 이후에, 식물을 액체가 잎으로부터 흐를 때까지 널리 이용가능한 분무 병을 사용하여 엽면 분무로 처리하였다. 조건 (펩타이드 또는 대조군) 당 14종의 식물 각 6개를 처리했다. 지정된 미처리된 대조군 식물에 물이 분무되었다. 식물을 14일 동안 성장하도록 하였다. 식물의 높이를 다시 측정하여 최초 높이와 비교함으로써 성장을 정량화하였다. 마지막으로, 싹을 제거하여 식물 수확했다 (모들 상기-지상 물질). 일부 실험에 대해, 이것을, 신선한 질량 (물 중량 포함)을 결정하기 위해 수확시 칭량했다. 그 다음 싹을 70 ℃에서 72시간 동안 건조시키고, 다시 칭량하여 건성 바이오매스를 결정했다. 이러한 방법은 상기 실시예 3에서와 유사한 측정 (성장)을 사용하지만, 처리 방법은 상이하다 (종자 침지 대 잎 분무). 그 결과, 실험은 결과는 다양할 수 있다.
Figure pct00022
몇 개의 연구된 펩타이드는 성장 및 건성 바이오매스 (p4-14s-9a, p14, p14a, 및 p14-32)에서 증가를 야기한다. 또한, 몇 개의 펩타이드는 시행 완료에서 가뭄 스트레스를 겪은 UTC 식물과 비교하여 물의 증가된 보존을 야기했다. 보존된 수분 함량은 p14a- 및 p14-32-처리된 식물에서 발견되는 것과 같이 신선한 질량에서>10% 증가율까지 나타내었다. 성장 효과는 비제한적으로 대두였고; 옥수수는 또한 p1-29에 의한 펩타이드 처리시 보통의 성장 이점을 나타내었다.
현저히, 절단된 C-말단을 편입한 P14-dc4는, p14에 대해 관측된 유의미한 성장, 건성 바이오매스, 및 신선한 질량 이점을 잃은 것으로 보인다. 그에 비해, P14 N-말단 서열 (P14a 샘플)의 제거는 모두 3종의 측정물에 대한 증가를 여전히 초래한다.
실시예 5 -담배 모자이크 바이러스에 대한 저항성의 유도
펩타이드를 담배에서 담배 모자이크 바이러스 (TMV)에 대한 내성의 유도를 위해 시험하였다. 간단히, 6-8 주령의 3개의 담배 식물을 그룹 (샘플 및 대조군)당 선택하였다. 식물의 대부분의 잎 최하부를 덮고 식물에 물 용액 (음성 대조군), 펩타이드, 또는 Proact (양성 대조군)를 분무하였다. 분무는 잎으로부터 액체가 흐르는 것에 의해 나타나는, 잎이 완전히 젖을 때까지 적용하였다. 이후에, 식물이 건조되도록 하고 잎 커버를 제거하였다.
3일 처리후, 이전에-커버된 잎 및 식물의 반대 측 잎을 이후에 규조토로 약간 분진시키고 20 ul의 정제된 담배 모자이크 바이러스의 1.7 ug/ml 용액을 적용하였다. 이후에 TMV 용액을 용액 및 규조토를 잎의 표면에 걸쳐 약간 문질러서 잎 표면에 걸쳐 분무하였다. 2분 후, 규조토는 물로 잎을 세정하여 제거하였다. TMV 접종 3일 후, 잎을 관측된 TMV 병변의 수를 기반으로 점수매겼다. 잎을 또한 과민성 반응, 예를 들면, 황변 및 영향받은 잎의 시들음의 신호에 대해점수매겼다.
표 22에서 기재된 유효성은 처리시 TMV 병변의 기울기 % 대 UTC 식물을 지칭한다. 커버된 잎에서 TMV의 감소는 식물에서 전신 면역 반응을 나타내나 덮여 있지 않은 잎에서의 감소는 국부 반응을 나타낸다. 별표는 T-시험으로부터 유도된 P-값이 < 0.05이었음을 나타낸다.
Figure pct00023
Figure pct00024
몇 개의 HR-음성 펩타이드는 유의미한 국부 및 전신 반응을 야기한다: P4-14S-9A, P4-14S-17A, P4-14S-12D, 및 P4-14S-16V은 최상의 결과는 나타냈다. 일반적으로, 대부분의 펩타이드는 일부 항-TMV 활성을 나타냈다. 그러나, 온전한 HR-박스 (참고 PCT 출원 PCT/US15/53387, 명칭 “Hypersensitive Response Elicitor Peptides and Use Thereof" (2015년, 10월 1일 출원, 이것은 본 명세서에 참조로서 전체적으로 편입되어 있음)) (예를 들면, p4-116, P14-dc4)와 비교하여 더 큰 C-말단 절단을 갖는 펩타이드는, TMV 감염에 대한 감소된 유효성을 나타낸다. 더 짭은 C-말단 절단은 일반적으로 약간 더 약한 속도 (50-75% 대조군)에서 TMV 저항성을 유발했다. P4-d10,14,18에 잔기 간격의 더 큰 파괴는 또한 TMV 감염에 대한 유효성에서 중간 정도의 감소를 나타낸다. 또한, 일부 류신 위치의 돌연변이는 더 약한 TMV 반응과 관련있는 것으로 보인다: P19min-13S, P18min-7D, P18min-11S, P14d-18D, P4-14S-20V, P4-14S-20S, P4-14s-16A.현저히, 몇 개의 소수성 서열을 함유하지만, P25-14는 TMV 감염의 더 약한 통제를 나타낸다. 몇 개의 HR-유도 서열에 걸쳐 중요한 류신 및 이소류신 잔기 의 돌연변이의 체계적인 조사는, 몇 개의 위치에서의 돌연변이가 면역 반응의 감소를 야기할 수 있음이 밝혀졌다. (p14d-7S, p18min-7D, 및 p25-9D에서) 제1 소수성 잔기의 돌연변이는 전신 면역 반응의 감소를 나타내는 덮힌 잎에 대한 감소된 효능을 야기할 수 있다. P15b-12S는 또한 잎 덮힌 임에서 전신 반응에서의 유사한 감소를 나타낸다. P19min-13S는 좋지 못한 면역 활성화를 나타낸다. 마지막 소수성 이중항을 마지막으로 제거할 수 있는데, 이것은 (예를 들면 P1-31 및 P1-111에서) 항-TMV 활성을 여전히 허용한다. 그러나, 추가 단축된 소수성 서열은 P4-116 및 P14-dc4에 의해 입증된 바와 같이 TMV 에 대항하는 활성의 감소와 관련된다.
본 발명의 기본 개념이 기재되어 있지만, 전술한 상세한 개시내용은 단지 예로써 나타낸 것으로 의도되며, 제한하는 것이 아님은 당해 분야의 숙련가에게 오히려 명백할 것이다. 다양한 변경, 개선, 및 변형이 일어날 것이며, 본원에 명확히 언급되지 않았지만, 당해 분야의 숙련가에게 의도될 것이다. 이들 변경, 개선, 및 변형은 본원에 시사된 것으로 의도되며, 본 발명의 사상 및 범위내에 있다. 추가로, 인용된 공정 요소의 순서 또는 서열, 또는 순자, 문자, 또는 다른 지정의 사용은 청구범위에 명시될 수 있는 바와 같은 것을 제외하고는 청구된 공정을 임의의 순서로 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 따라서, 본 발명은 하기 청구범위 및 이에 대한 등가물에 의해서만 제한된다.
<110> Plant Health Care, Inc. <120> ELICITOR PEPTIDES HAVING DISRUPTED HYPERSENSITIVE RESPONSE BOX AND USE THEREOF <130> 29517.0352 <150> 62/058,535 <151> 2014-10-01 <150> 62/186,527 <151> 2015-06-30 <160> 243 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus Peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is L, I, V, or F, or is a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 is optional, any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 is optional, any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 is L, I, V, or F, or is a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 is L, I, V, or F, or is a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 is optional, any amino acid <220> 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D, isoD, K, or Q, and optionally A or C <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) <223> X at position 15 is Q, E, g-glutamate, G, A, S, K, or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> X at position 16 is M, L, I, V, or F, or a non-hydrophobic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> X at position 17 is M, L, I, A, or V, or a non-hydrophobic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18) <223> X at position 18 is Q, E, g-glutamate, G, A, S, M, T, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19) <223> X at position 19 is A, D, isoD, S, V, T, K, R, E, H, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20) <223> X at position 20 is M, L, or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21) <223> X at position 21 is M, L, I, V, S, or F, or a non-hydrophobic amino acid other than serine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> X at position 22 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23) <223> X at position 23 is P, Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 2 Xaa Xaa Gly Ile Ser Glu Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 3 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P4 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is M, S, L, A, I, V, or F, or a non-hydrophobic amino acid other than serine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 is L, A, I, V, or F, or a non-hydrophobic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> X at position 14 is any hydrophilic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) <223> X at position 15 is Q, E, g-glutamate, G, A, S, K, or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> X at position 16 is L, A, I, V, M, or F, or a non-hydrophobic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> X at position 17 is M, I, S, or F, or a non-hydrophobic amino acid other than serine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18) <223> X at position 18 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20) <223> X at position 20 is M, L, I, V, or F, or a non-hydrophobic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21) <223> X at position 21 is M, L or F, or is a non-hydrophobic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> X at position 22 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 3 Ser Xaa Gly Ile Ser Glu Lys Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Pro 20 <210> 4 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P1 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is N, D, isoD, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) <223> X at position 15 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> X at position 16 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> X at position 17 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18) <223> X at position 18 is M, T, K, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20) <223> X at position 20 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21) <223> X at position 21 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> X at position 22 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23) <223> X at position 23 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 4 Xaa Xaa Gly Ile Ser Glu Lys Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Xaa 20 <210> 5 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P15b/P20 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 is N, D, or isoD <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is N, D, or isoD <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) <223> X at position 15 is optional and can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> X at position 16 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> X at position 17 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18) <223> X at position 18 is M, E, g-glutamate, G, A, S, T, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20) <223> X at position 20 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21) <223> X at position 21 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> X at position 22 is optional and can be Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 5 Lys Pro Xaa Asp Ser Xaa Ser Xaa Xaa Ala Lys Xaa Xaa Ser Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa 20 <210> 6 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P15/P20 min consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 is optional and can be any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 is M, E, g-glutamate, G, A, S, T, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> X at position 14 is optional and can be Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 6 Xaa Ala Lys Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 7 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P6/6a consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is L, V, I, M or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 is L, V, I, M or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is L, V, I, M or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is M, E, g-glutamate, G, A, S, T, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 is H or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 is L, V, I, M or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, V, I, M or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> X at position 14 is E, g-glutamate, D, or isoD <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) <223> X at position 15 is L, V, I, M or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> X at position 16 is L, V, I, M or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> X at position 17 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19) <223> X at position 19 is Q, E, g-glutamate, G, A, or S <400> 7 Pro Ser Pro Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Ala Xaa Asn 20 <210> 8 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P14d consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 can be: Q, N, D, E, g-glutamate, isoD, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 can be: D, E, g-glutamate, isoD <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 can be: P, D, E, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 can be M, A, S, D, E, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 can be Q, E, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 can be A, E, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 can be M, L, E, Q, D, N, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> X at position 14 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) <223> X at position 15 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> X at position 16 can be K, Q, N, E, D, R, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> X at position 17 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18) <223> X at position 18 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <400> 8 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Lys <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P14d min consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 can be M, L, E, Q, D, N, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 can be Q, N, E, D, G, A, S, isoD, or g-glutamate <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 can be K, Q, N, E, D, R, G, A, or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 is L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 L, V, I, or F, or a non-hydrophobic amino acid, or A <400> 9 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys 1 5 10 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P25 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 can be Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 can be K, Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 can be K, Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 can be E, g-glutamate, D, isoD, Q, N, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 can be A, G, S, T, E, g-glutamate, D, isoD, Q, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <400> 10 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P25 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 can be T, S, A, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 can be G, T, S, A, D, isoD, E, g-glutamate, Q, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 can be Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 can be K, Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 can be K, Q, N, E, g-glutamate, D, isoD, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 can be E, g-glutamate, D, isoD, Q, N, T, S, A, or G <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> X at position 14 can be A, G, S, T, E, g-glutamate, D, isoD, Q, or N <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) <223> X at position 15 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> X at position 16 is optional and is L, V, I, or F <400> 11 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 12 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P17/18 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 can be any amino acid, but preferably P, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 can be any amino acid, but preferably I, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, N, isoD, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 can be any amino acid, but preferably D, isoD, S, E, g-glutamate, A, T, G, N, Q, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 can be any amino acid, but preferably R, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X of position 7 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 can be any amino acid, but preferably T, Q, S, E, g-glutamate, A, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 can be any amino acid, but preferably I, Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 can be any amino acid, but preferably E, g-glutamate, Q, S, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 can be any amino acid, but preferably Q, S, E, g-glutamate, A, T, G, D, isoD, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> X at position 14 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) <223> X at position 15 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> X at position 16 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> X at position 17 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18) <223> X at position 18 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19) <223> X at position 19 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20) <223> X at position 20 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21) <223> X at position 21 can be any amino acid, but preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> X at position 22 can be any amino acid, but preferably S, A,T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23) <223> X at position 23 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24) <223> X at position 24 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25) <223> X at position 25 can be any amino acid, but preferably S, A, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26) <223> X at position 26 can be any amino acid, but preferably P, S, A, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27) <223> X at position 27 can be any amino acid, but preferably Q, S, A, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <400> 12 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P17/18 min consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is L, I, V, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is L, I, V, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 is L, I, V, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 can be any amino acid, but preferably Q, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is L, I, V, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is L, I, V, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 can be any amino acid, but preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 can be any amino acid, but preferably S, A,T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, I, V, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 is L, I, V, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <400> 13 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified P19 consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is optional and can be L, I, V, F, or M <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 can be any amino acid, but preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 can be any amino acid, but preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 can be any amino acid, but preferably A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, K, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 can be any amino acid, but preferably R, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or K <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 is L, V, I, F, or M, or a non-hydrophobic amino acid, or A <400> 14 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 15 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 15 Asp Val Gly Gln Leu Ile Gly Glu Leu Ile Asp Arg Gly Leu Gln 1 5 10 15 <210> 16 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 16 Gly Asp Val Gly Gln Leu Ile Gly Glu Leu Ile Asp Arg Gly Leu Gln 1 5 10 15 Ser Val Leu Ala Gly 20 <210> 17 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 17 Ser Ser Arg Ala Leu Gln Glu Val Ile Ala Gln Leu Ala Gln Glu Leu 1 5 10 15 Thr His Asn <210> 18 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 18 Gly Leu Glu Asp Ile Lys Ala Ala Leu Asp Thr Leu Ile His Glu Lys 1 5 10 15 Leu Gly <210> 19 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22L,26E <400> 19 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Leu Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 20 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22A,26L <400> 20 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Leu Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 21 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22A,26E <400> 21 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 22 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22E,26L <400> 22 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Glu Gln Ala Leu Leu Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 23 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22E,26E <400> 23 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Glu Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 24 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22E,26E-R <400> 24 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Glu Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Glu Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val Arg <210> 25 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22E,26A <400> 25 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Glu Ala Leu Ala Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 20 25 30 <210> 26 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22L,26A <400> 26 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Leu Gln Ala Leu Ala Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 27 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22A,26A <400> 27 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Ala Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 28 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22L,25-26A <400> 28 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Leu Gln Ala Ala Ala Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 29 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22L,28-29A <400> 29 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Leu Gln Ala Leu Leu Gln Ala Ala Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 30 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22L,32-33A <400> 30 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Leu Gln Ala Leu Leu Gln Leu Leu Glu Asp Ala 20 25 30 Ala <210> 31 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22L,26,29A <400> 31 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Leu Gln Ala Leu Ala Gln Leu Ala Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 32 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14-22L,29,32A <400> 32 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Leu Gln Ala Leu Leu Gln Leu Ala Glu Asp Ala 20 25 30 Val <210> 33 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-7D <400> 33 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Asp Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 34 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-10D <400> 34 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Asp Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 35 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-11D <400> 35 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Asp Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 36 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-14D <400> 36 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Asp Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 37 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-15D <400> 37 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Asp Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 38 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-17D <400> 38 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Asp Leu Lys <210> 39 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-18D <400> 39 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Asp Lys <210> 40 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-7S <400> 40 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Ser Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 41 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-10S <400> 41 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Ser Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 42 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-11S <400> 42 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Ser Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 43 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-14S <400> 43 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 44 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-15S <400> 44 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Ser Lys 1 5 10 15 Leu Leu Lys <210> 45 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-17S <400> 45 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Ser Leu Lys <210> 46 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> p14f-18S <400> 46 Gln Asp Pro Ala Gln Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Ser Lys <210> 47 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-13A <400> 47 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Ala Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 48 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-13D <400> 48 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Asp Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 49 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-17D <400> 49 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Asp Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 50 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-21D <400> 50 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Asp Gln Pro 20 <210> 51 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-d18 <400> 51 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 52 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-9S <400> 52 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Ser Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 53 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-9Y <400> 53 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Tyr Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 54 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-13Q <400> 54 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Gln Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 55 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-16S <400> 55 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Ser 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 56 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-20S <400> 56 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Ser Leu Gln Pro 20 <210> 57 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-9A <400> 57 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Ala Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile 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Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ile Leu Glu Ala Ser 20 <210> 85 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-7D <400> 85 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Asp Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 86 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-10D <400> 86 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Asp Leu Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 87 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-11D <400> 87 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Asp Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 88 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-14D <400> 88 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Asp Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 89 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-15D <400> 89 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Asp Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 90 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-18D <400> 90 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Asp Leu <210> 91 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-19D <400> 91 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Asp <210> 92 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-7S <400> 92 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ser Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 93 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-10S <400> 93 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Ser Leu Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 94 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-11S <400> 94 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Ser Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 95 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-14S <400> 95 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Ser Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 96 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-15S <400> 96 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Ser Lys 1 5 10 15 Ser Leu Leu <210> 97 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-18S <400> 97 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Ser Leu <210> 98 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P18min-19S <400> 98 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ala Gln Leu Leu Ala Gln Leu Leu Lys 1 5 10 15 Ser Leu Ser <210> 99 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P19min-7D <400> 99 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Asp Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala Arg 1 5 10 15 Leu Leu <210> 100 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P19min-10D <400> 100 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Asp Leu Lys Leu Ile Ala Arg 1 5 10 15 Leu Leu <210> 101 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P19min-11D <400> 101 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Asp Lys Leu Ile Ala Arg 1 5 10 15 Leu Leu <210> 102 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Leu Leu <210> 108 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P19min-11S <400> 108 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Ser Lys Leu Ile Ala Arg 1 5 10 15 Leu Leu <210> 109 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P19min-13S <400> 109 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Ser Ile Ala Arg 1 5 10 15 Leu Leu <210> 110 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P19min-14S <400> 110 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ser Ala Arg 1 5 10 15 Leu Leu <210> 111 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P19min-17S <400> 111 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala Arg 1 5 10 15 Ser Leu <210> 112 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P19min-18S <400> 112 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Lys Ala Leu Leu Lys Leu Ile Ala Arg 1 5 10 15 Leu Ser <210> 113 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14 <400> 113 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 114 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14a <400> 114 Ala Asn Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp 1 5 10 15 Leu Val <210> 115 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-22L,26L <400> 115 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Leu Gln Ala Leu Leu Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 Val <210> 116 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HR Box Truncation Peptide Consensus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is L or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 is L or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is L, I, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is L, I, or V <400> 116 Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 117 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-dN2 <400> 117 Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala Asn Asn 1 5 10 15 Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 20 25 30 <210> 118 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-dN4 <400> 118 Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala Asn Asn Gln Asp 1 5 10 15 Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 20 25 <210> 119 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-dN6 <400> 119 Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala Asn Asn Gln Asp Pro Met 1 5 10 15 Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 20 25 <210> 120 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-dN8 <400> 120 Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala Asn Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala 1 5 10 15 Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 20 25 <210> 121 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-dc1 <400> 121 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu 20 25 30 <210> 122 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-dc2 <400> 122 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp 20 25 30 <210> 123 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-dc4 <400> 123 Gln Ala Gly Pro Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gly Asn Val Asp Asp Ala 1 5 10 15 Asn Asn Gln Asp Pro Met Gln Ala Leu Met Gln Leu Leu 20 25 <210> 124 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-32 <400> 124 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val Lys 1 5 10 15 Leu Leu <210> 125 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HR Box consensus peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is L, I, V, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> X at position 2 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> X at position 3 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is L, I, V, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5) <223> X at position 5 is L or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> X at position 6 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is L, I, or V <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> X at position 9 is L or I <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10) <223> X at position 10 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12) <223> X at position 12 is L, I, V, or F <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13) <223> X at position 13 is L, I, V, or F <400> 125 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 126 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P3 minimum <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> X at position 1 is an optional tripeptide LXX, where each X is a hydrophilic amino acid, preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> X at position 4 is any hydrophilic amino acid, preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> X at position 7 is any hydrophilic amino acid, preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8) <223> X at position 8 is any hydrophilic amino acid, preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11) <223> X at position 11 is an optional tetrapeptide XXLF, where each X is a hydrophilic amino acid, preferably K, A, S, T, G, D, isoD, E, g-glutamate, Q, N, or R <400> 126 Xaa Leu Leu Xaa Leu Phe Xaa Xaa Ile Leu Xaa 1 5 10 <210> 127 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-40 <400> 127 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Met Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 1 5 10 15 <210> 128 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-41 <400> 128 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Leu Leu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 1 5 10 15 <210> 129 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P14-31 <400> 129 Ser Glu Glu Glu Glu Glu Ala Leu Glu Gln Leu Leu Glu Asp Leu Val 1 5 10 15 Lys Leu Leu <210> 130 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-29 <400> 130 Asn Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu 1 5 10 15 Ile <210> 131 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-31 <400> 131 Ser Glu Glu Glu Glu Leu Asp Gln Leu Leu Thr Gln Leu Ile 1 5 10 <210> 132 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-111 <400> 132 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile <210> 133 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-13V <400> 133 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 134 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-13F <400> 134 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Phe Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 135 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-16V <400> 135 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Val 1 5 10 15 Ile Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 136 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-17F <400> 136 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Phe Gln Ala Leu Leu Gln Pro 20 <210> 137 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P4-14S-20V <400> 137 Ser Gln Gly Ile Ser Glu Lys Gln Leu Asp Gln Leu Leu Ser Gln Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ala Val Leu Gln Pro 20 <210> 138 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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228 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-16D <400> 228 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Asp 1 5 10 15 Asn Ala Leu Val Gln 20 <210> 229 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-19D <400> 229 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Asp Val Gln 20 <210> 230 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-20D <400> 230 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Leu Asp Gln 20 <210> 231 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-5S <400> 231 Gly Gly Leu Thr Ser Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Leu Val Gln 20 <210> 232 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-8S <400> 232 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Ser Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Leu Val Gln 20 <210> 233 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-9S <400> 233 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Ser Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Leu Val Gln 20 <210> 234 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-12S <400> 234 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Ser Met Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Leu Val Gln 20 <210> 235 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-13S <400> 235 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Ser Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Leu Val Gln 20 <210> 236 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-15S <400> 236 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ser Leu 1 5 10 15 Asn Ala Leu Val Gln 20 <210> 237 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-16S <400> 237 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Ser 1 5 10 15 Asn Ala Leu Val Gln 20 <210> 238 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-19S <400> 238 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Ser Val Gln 20 <210> 239 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P25-20S <400> 239 Gly Gly Leu Thr Leu Thr Gly Val Leu Gln Lys Leu Met Lys Ile Leu 1 5 10 15 Asn Ala Leu Ser Gln 20 <210> 240 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P14 A. thaliana <400> 240 caagctggac ctcaatctgc taataagact ggaaatgttg atgatgctaa taatcaagat 60 cctatgcaag ctcttatgca acttcttgaa gatcttgtt 99 <210> 241 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P14 e.coli <400> 241 caggcaggtc cgcagagcgc aaataaaacc ggtaatgttg atgatgcaaa taatcaggat 60 ccgatgcagg cactgatgca gctgctggaa gatctggtt 99 <210> 242 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P14d-10D A. thaliana <400> 242 caagatccta tgcaagctct tatgcaagat cttgaagatc ttgttaagct tcttaag 57 <210> 243 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P14d-10D e.coli <400> 243 caggatccga tgcaggcact gatgcaggat ctggaagatc tggttaaact gctgaaa 57

Claims (192)

  1. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    J-X-X-X-J-J-X-X-X-J-J-X-X-X-J-J (서열식별번호: 1) 여기서
    펩타이드는 시스테인 및 메티오닌을 포함하지 않고;
    위치 2, 3, 7, 8, 12, 및 13에서의 각 X는 선택적이고, 존재할 때, 임의의 아미노산이고;
    위치 4, 9, 및 14에서의 각 X는 임의의 아미노산이고;
    1, 5, 6, 10, 11, 15, 및 16번 위치에서 J 중 1 내지 3개는 비-소수성 아미노산 또는 A이고, 그리고 J 중 다른 모두는 L, I, V, 또는 F이고; 그리고
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 아미노산 서열을 포함하거나 그것으로 구성되지 않는, 단리된 펩타이드:
    DVGQLIGELIDRGLQ (서열식별번호: 15)
    GDVGQLIGELIDRGLQSVLAG (서열식별번호: 16),
    SSRALQEVIAQLAQELTHN (서열식별번호: 17), 또는
    GLEDIKAALDTLIHEKLG (서열식별번호: 18).
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 그 길이가 100개 미만의 아미노산이거나, 또는 상기 펩타이드는 그 길이가 12 내지 50개의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 하기 중 하나 이상에 의해 특성규명되는, 단리된 펩타이드: (i) 물 또는 수용액에서 용해될 때 안정함, (ii) 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액에서 용해될 때 화학 분해에 대해 내성있음, (iii) 물 또는 수용액 중 약 0.1% 초과의 용해도.
  5. 청구항 1에 있어서, 1, 5, 6, 10, 11, 15, 및 16번 위치에서 J 중 2개 이하는 비-소수성인, 단리된 펩타이드.
  6. 청구항 1에 있어서, 1, 5, 6, 10, 11, 15, 및 16번 위치에서 J 중 1개 이하는 비-소수성인, 단리된 펩타이드.
  7. 청구항 1에 있어서, 2 및 3번 위치에서 X 중 하나는 존재하지 않고, 7 및 8번 위치에서 X 중 하나는 존재하지 않거나, 또는 위치 2 및 3번 위치에서 X 중 둘 모두 및 7 및 8번 위치에서 X 중 하나는 존재하지 않는, 단리된 펩타이드.
  8. 청구항 1에 있어서, 2, 3, 7, 및 8번 위치에서 각 X는 존재하는, 단리된 펩타이드.
  9. 청구항 1 또는 7에 있어서, 12, 13번, 또는 둘 모두의 위치에서 X는 존재하지 않는, 단리된 펩타이드.
  10. 청구항 1 또는 8에 있어서, 12번 위치에서 X는 존재하는, 단리된 펩타이드.
  11. 청구항 1에 있어서, 12 및 13번 위치에서 X는 존재하는, 단리된 펩타이드.
  12. 청구항 1에 있어서,
    2, 3, 7, 8, 및 12번 위치에서 각 X는, 존재할 때, G, A, S, T, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, R로 구성된 군으로부터 선택되고; 그리고
    위치 4, 9, 및 13번 위치에 각 X는 G, A, S, T, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, R로 구성된 군으로부터 선택되는, 단리된 펩타이드.
  13. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드에 의해 유도된 활성 식물 반응은 과산화물 유도, 향상된 성장, 병원체 저항성, 해충 저항성, 및 생물 또는 비생물 스트레스 저항성으로 구성된 군으로부터 선택되는, 단리된 펩타이드.
  14. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 19-46 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  15. 청구항 14에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 19-46 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  16. 청구항 14에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 19-46 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  17. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 47-68 및 164 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  18. 청구항 17에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 47-68 또는 서열식별번호: 164 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  19. 청구항 17에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 47-68 또는 서열식별번호: 164 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  20. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 69-84 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  21. 청구항 20에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 69-84 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  22. 청구항 20에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 69-84 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  23. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 85-98 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  24. 청구항 23에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 85-98 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  25. 청구항 23에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 85-98 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  26. 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 99-112 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  27. 청구항 26에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 99-112 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  28. 청구항 26에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 99-112 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  29. 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드: 113, 114, 117-123, 127, 133-138, 140-142, 144, 145, 148-150, 및 153-155.
  30. 청구항 29에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드: 113, 114, 117-123, 127, 133-138, 140-142, 144, 145, 148-150, 및 153-155.
  31. 청구항 29에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드: 113, 114, 117-123, 127, 133-138, 140-142, 144, 145, 148-150, 및 153-155.
  32. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    XXGISEKXXXXXXXXXXXXXXXX (서열식별번호: 2, 변형된 P1/P4 공통),
    여기서
    1번 위치에서 X는 선택적이고 S, N, D, 이소D, G, A, 또는 S이며;
    2번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    9번 위치에서 X는 M, L, I, F, 또는 V, 또는 비-소수성 아미노산이고;
    10번 위치에서 X는 선택적이고 D 또는 이소D이며;
    11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    12번 위치에서 X는 M, L, I, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
    13번 위치에서 X는 M, L, 또는 I, 또는 비-소수성 아미노산이고;
    14번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 친수성 아미노산이며;
    15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
    16번 위치에서 X는 M, L, I, V, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
    17번 위치에서 X는 M, L, I, A, 또는 V, 또는 비-소수성 아미노산이고;
    18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, M, T, 또는 K이며;
    19번 위치에서 X는 A, D, 이소D, S, V, T, K, R, E, H, 또는 G이고;
    20번 위치에서 X는 M, L, 또는 I이며;
    21번 위치에서 M, L, I, V, S, 또는 F, 또는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고;
    22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S이며;
    23번 위치에서 X는 P, Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    여기서 9, 12, 13, 16, 17, 및 20번 위치에서 잔기 중 적어도 1개는 비-소수성 아미노산이거나, 또는 21번 위치에서 잔기는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고; 그리고
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  33. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    SXGISEKXXDXXXXXXXXAXXXP (서열식별번호: 3 변형된 P4 공통),
    여기서
    2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    9번 위치에서 X는 M, S, L, A, I, V, 또는 F, 또는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고;
    11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    12번 위치에서 X는 L, I, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
    13번 위치에서 X는 L, A, I, V, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
    14번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산이고;
    15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, S, K, 또는 I이며;
    16번 위치에서 X는 L, A, I, V, M, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
    17번 위치에서 X는 M, I, S, 또는 F, 또는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고;
    18번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    20번 위치에서 X는 M, L, I, V, 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고;
    21번 위치에서 X는 M, L 또는 F, 또는 비-소수성 아미노산이고; 그리고
    22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S인, 단리된 펩타이드.
    여기서 9, 12, 13, 16, 20, 및 21번 위치에서 잔기 중 하나는 비-소수성 아미노산 또는 A이거나, 또는 17번 위치에서 잔기는 세린 이외의 비-소수성 아미노산이고; 그리고
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  34. 청구항 33에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드: 48-56, 58, 59, 61, 및 161-163.
  35. 청구항 34에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드: 48-56, 58, 59, 61, 및 161-163.
  36. 청구항 34에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드: 48-56, 58, 59, 61, 및 161-163.
  37. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    XXGISEKXJDXJJTXJJXAJJXX (서열식별번호: 4, 변형된 P1 공통),
    여기서
    1번 위치에서 X는 N, D, 이소D, G, A, 또는 S이고;
    2번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    8번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    11번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    15번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    18번 위치에서 X는 M, T, K, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    22번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    23번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    9, 12, 13, 16, 17, 20, 및 21번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 하나는 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  38. 청구항 37에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 164 및 166-179 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  39. 청구항 37에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 164 및 166-179 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  40. 청구항 37에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 164 및 166-179 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  41. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    (i) KPXDSXSXJAKJJSXJJXSJJX (서열식별번호: 5, 변형된 P15b/P20 공통), 여기서
    3번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
    6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    8번 위치에서 X는 N, D, 또는 이소D이고;
    15번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이며;
    18번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
    22번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
    9, 12, 13, 16, 17, 20, 및 21번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
    또는
    (ii) JAKJJSXJJXSJJX (서열식별번호: 6, 변형된 P15/20 min 공통), 여기서
    7번 위치에서 X는 선택적이고 임의의 아미노산이고;
    10번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이고;
    14번 위치에서 X는 선택적이고 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
    1, 4, 5, 8, 9, 12, 및 13번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 그리고
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  42. 청구항 41에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 180-193 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  43. 청구항 42에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 180-193 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  44. 청구항 42에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 180-193 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  45. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    PSPJTXJJXXJJGXJJXAXN (서열식별번호: 7, 변형된 P6/6a 공통),
    여기서
    6번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이며;
    9번 위치에서 X는 M, E, g-글루타메이트, G, A, S, T, 또는 K이며;
    10번 위치에서 X는 H 또는 N이고;
    14번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 또는 이소D이며;
    17번 위치에서 X는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고;
    19번 위치에서 J는 Q, E, g-글루타메이트, G, A, 또는 S이고; 그리고
    4, 7, 8, 11, 12, 15, 및 16번 위치에서 J는 L, V, I, M, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  46. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 194-207 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  47. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 194-207 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  48. 청구항 45에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 194-207 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  49. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    (i) XXXXXXJXXJJXXJJXJJK (서열식별번호: 8, 변형된 P14d 공통), 여기서
    1번 위치에서 X는 Q, N, D, E, g-글루타메이트, 이소D, 또는 S일 수 있고;
    2번 위치에서 X는 D, E, g-글루타메이트, 이소D일 수 있으며;
    3번 위치에서 X는 P, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    4번 위치에서 X는 M, A, S, D, E, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
    5번 위치에서 X는 Q, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    6번 위치에서 X는 A, E, 또는 g-글루타메이트일 수 있으며;
    8번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    9번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
    12번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트 일 수 있고;
    13번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    16번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
    위치 7, 10, 11, 14, 15, 17, 및 18번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이거나; 또는
    (ii) JXXJJXXJJXJJK (서열식별번호: 9, 변형된 P14d min 공통), 여기서
    2번 위치에서 X는 M, L, E, Q, D, N, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    3번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    6번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    7번 위치에서 X는 Q, N, E, D, G, A, S, 이소D, 또는 g-글루타메이트일 수 있고;
    10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, D, R, G, A, 또는 S일 수 있고; 그리고
    1, 4, 5, 8, 9, 11, 및 12번 위치에서 J는 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  50. 청구항 49에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 208-221 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  51. 청구항 49에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 208-221 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  52. 청구항 49에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 208-221 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  53. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    (i) JXXJJXJJXXJJ (서열식별번호: 10, 변형된 P25 공통) 여기서
    2번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    3번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
    6번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    9번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G일 수 있고;
    10번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고; 그리고
    1, 4, 5, 7, 8, 10, 및 11번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 또는
    (ii) JXXJJXXJJXJJXXJJ (서열식별번호: 11, 변형된 P25 공통) 여기서
    2번 위치에서 X는 T, S, A, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이고;
    3번 위치에서 X는 G, T, S, A, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, 또는 N이며;
    6번 위치에서 X는 Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
    7번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이며;
    10번 위치에서 X는 K, Q, N, E, g-글루타메이트, D, 이소D, T, S, A, 또는 G이고;
    13번 위치에서 X는 E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, N, T, S, A, 또는 G이고;
    14번 위치에서 X는 A, G, S, T, E, g-글루타메이트, D, 이소D, Q, 또는 N일 수 있고;
    1, 4, 5, 8, 9, 11, 12, 및 15번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고; 그리고
    16번 위치에서 J는 선택적이고 L, V, I, 및 F로부터 선택된 소수성 아미노산이고;
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  54. 청구항 53에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 222-239 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  55. 청구항 53에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 222-239 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  56. 청구항 53에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 222-239 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  57. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    (i) XXXXXXXXXXXJXXJJXXJJXXJJXXX (서열식별번호: 12, 변형된 P17/18), 여기서
    1번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
    3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, N, 이소D, K, 또는 R이며;
    5번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 D, 이소D, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, N, Q, K, 또는 R이고;
    6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, 또는 K이며;
    7번 위치의 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    8번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 T, Q, S, E, g-글루타메이트, A, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    9번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 I, Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R일 수 있고;
    10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 E, g-글루타메이트, Q, S, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이고;
    11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, E, g-글루타메이트, A, T, G, D, 이소D, N, K, 또는 R이며;
    13번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    14번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
    17번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    18번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
    21번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이고;
    22번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    25번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이며;
    26번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 P, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있고;
    27번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, S, A, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R일 수 있고; 그리고
    12, 15, 16, 19, 20, 23, 및 24번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
    또는
    (ii) JXXJJXXJJXXJJ (서열식별번호: 13, 변형된 P17/18 min 공통), 여기서
    2번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
    6번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 Q, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, N, K, 또는 R이며;
    10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R일 수 있고;
    11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 S, A,T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있고; 그리고
    1, 4, 5, 8, 9, 12, 및 13번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  58. 청구항 57에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 12 또는 서열식별번호: 13의 아미노산으로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  59. 청구항 57에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 12 또는 서열식별번호: 13의 아미노산으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  60. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    XJXXJJXJJXXJJ (서열식별번호: 14, 변형된 P19 공통), 여기서
    1번 위치에서 X는 선택적이고 L, I, V, F, 또는 M이고;
    3번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
    4번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R이고;
    7번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 R이며;
    10번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 또는 R일 수 있고;
    11번 위치에서 X는 임의의 아미노산일 수 있지만, 바람직하게는 R, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 또는 K일 수 있고; 그리고
    2, 5, 6, 8, 9, 12, 및 13번 위치에서 J는 L, V, I, F, 및 M으로부터 선택된 소수성 아미노산이고, 단, 이들 위치에서 아미노산 중 적어도 1종은 비-소수성 아미노산 또는 A이고;
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  61. 청구항 60에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 14의 아미노산으로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  62. 청구항 60에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 14의 아미노산으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  63. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    L-X-X-(L/I)-(L/I)-X-X-(L/I/V)-(L/I/V) (서열식별번호: 116),
    여기서
    펩타이드는 시스테인 및 메티오닌을 포함하지 않고;
    2, 3, 6, 7번 위치에 각 X는 임의의 아미노산이고; 그리고
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  64. 청구항 63에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 아미노산을 포함하지 않거나 그것으로 구성되지 않는, 단리된 펩타이드:
    (L/I/V/F)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I)-X-X-(L/I/V)-(L/I)-X-X-(L/I/V/F)-(L/I/V/F) (서열식별번호: 125)
    여기서 2, 3, 6, 7, 10, 11번 위치에서 각 X는 임의의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  65. 청구항 63에 있어서, 상기 펩타이드는 그 길이가 100개 미만의 아미노산이거나, 또는 상기 펩타이드는 그 길이가 12 내지 50개의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  66. 청구항 63에 있어서, 2, 3, 6, 및 7번 위치 중 1개 이상에서 X는 비-소수성 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  67. 청구항 63에 있어서, 각각의 2, 3, 6, 및 7번 위치에서 X는 비-소수성 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  68. 청구항 63에 있어서,
    각각의 2, 3, 6, 및 7번 위치에서 X는 하기로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되는, 단리된 펩타이드: G, A, S, T, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, K, 및 R.
  69. 청구항 63에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드: 115, 124, 128-132, 139, 143, 146, 147, 151, 152, 및 160.
  70. 청구항 63에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드: 115, 124, 128-132, 139, 143, 146, 147, 151, 152, 및 160.
  71. 청구항 63에 있어서, 상기 펩타이드는 하기의 서열식별번호 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드: 115, 124, 128-132, 139, 143, 146, 147, 151, 152, 및 160.
  72. 하기의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩타이드:
    Z1-LLXLFXXIL-Z2 (서열식별번호: 126, P3 최소) 여기서
    3번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산이고;
    6번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산이고;
    7번 위치에서 X는 임의의 친수성 아미노산이고; 그리고
    여기서 하나의 Z1 및 Z2가 존재하고, Z1는 LXX- (여기서 각 X는 친수성 아미노산임)을 포함하고, 그리고 Z2는 -XXLF (여기서 각 X는 친수성 아미노산임)을 포함하고;
    상기 펩타이드는 활성 식물 반응을 유도하지만, 식물 조직에 적용될 때, 과민성 반응을 유도하지 않는다.
  73. 청구항 72에 있어서, Z1는 존재하는, 단리된 펩타이드.
  74. 청구항 72에 있어서, Z2는 존재하는, 단리된 펩타이드.
  75. 청구항 73 또는 74에 있어서, Z1 또는 Z2 에서 각 X는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 및 R로부터 독립적으로 선택되는, 단리된 펩타이드.
  76. 청구항 72에 있어서, 3, 6, 및 7번 위치에서 X는 K, A, S, T, G, D, 이소D, E, g-글루타메이트, Q, N, 및 R로부터 독립적으로 선택되는, 단리된 펩타이드.
  77. 청구항 72에 있어서, 상기 펩타이드는 그 길이가 12 내지 50개의 아미노산인, 단리된 펩타이드.
  78. 청구항 72에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 156 내지 159 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  79. 청구항 63에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 156 내지 159 중 하나의 아미노산 서열로 본질적으로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  80. 청구항 63에 있어서, 상기 펩타이드는 서열식별번호: 156 내지 159 중 하나의 아미노산 서열로 구성되는, 단리된 펩타이드.
  81. 청구항 32 내지 80 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 펩타이드는 하기 중 하나 이상에 의해 특성규명되는, 단리된 펩타이드: (i) 물 또는 수용액에서 용해될 때 안정함, (ii) 살생물제를 함유하는 수성 완충 용액에서 용해될 때 화학 분해에 대해 내성있음, (iii) 물 또는 수용액 중 약 0.1% 초과의 용해도.
  82. 청구항 32 내지 80 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드에 의해 유도된 활성 식물 반응은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 단리된 펩타이드: 과산화물 유도, 향상된 성장, 병원체 저항성, 생물 또는 비생물 스트레스 저항성, 및 변형된 생화학적 신호전달.
  83. 청구항 1 내지 82 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드는 적어도 90% 순수한, 단리된 펩타이드.
  84. 청구항 1 내지 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32 내지 34, 37, 38, 41, 42, 45, 46, 49, 50, 53, 54, 57, 60, 63, 66 내지 69, 및 72 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드는 상기 아미노산 서열에 펩타이드 결합을 통해 커플링된 제2 아미노산 서열을 포함하는 융합 폴리펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  85. 청구항 84에 있어서, 상기 제2 아미노산 서열을 정제 태그를 포함하는, 단리된 펩타이드.
  86. 청구항 85에 있어서, 상기 제2 아미노산 서열은 추가로, 상기 정제 태그와 상기 아미노산 서열 사이의 절단가능 링커 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  87. 청구항 84에 있어서, 상기 펩타이드는 상기 펩타이드의 제2 아미노산 서열에 연결된 상기 펩타이드의 제1 아미노산 서열를 포함하는 융합 폴리펩타이드인, 단리된 펩타이드.
  88. 청구항 84에 있어서, 상기 제2 아미노산 서열은 N-말단 또는 C-말단 친수성 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드.
  89. 청구항 88에 있어서, 상기 친수성 아미노산 서열은 복수의 Glu (E) 아미노산 잔기를 포함하는, 단리된 펩타이드.
  90. 연속적으로 함께 연결된 복수의 아미노산 서열을 포함하는 융합 폴리펩타이드로서, 각각의 복수의 아미노산 서열은 청구항 1 내지 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32 내지 34, 37, 38, 41, 42, 45, 46, 49, 50, 53, 54, 57, 60, 63, 66 내지 69, 및 72 내지 78 중 어느 한 항의 펩타이드를 포하는 융합 폴리펩타이드.
  91. 청구항 90에 있어서, 상기 복수의 아미노산 서열은 절단가능 링커 서열에 의해 함께 연결되는, 융합 폴리펩타이드.
  92. 청구항 90에 있어서, 상기 복수의 아미노산 서열 각각은 정제 태그, N-말단 또는 C-말단 친수성 아미노산 서열, 또는 둘 모두를 포함하는, 융합 폴리펩타이드.
  93. 청구항 1 내지 89 중 어느 한 항의 1종 이상의 펩타이드 또는 청구항 90 내지 92 중 어느 한 항의 융합 폴리펩타이드, 및 캐리어를 포함하는 조성물.
  94. 청구항 93에 있어서, 본 조성물은 정화된 세포 추출물인, 조성물.
  95. 청구항 93에 있어서, 비료, 제초제, 살충제, 살진균제, 살선충제, 살균 제제, 생물학적 접종물, 식물 조절물질, 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 첨가제를 추가로 포함하는, 조성물.
  96. 청구항 95에 있어서, 상기 살충제는 네오니코티노이드 살충제, 오르가노포스페이트 살충제, 피레트로이드 살충제, 거대환식 락톤 살충제, 카바메이트 살충제, 디아미드 살충제, 아베르멕틴 살충제, 키틴 합성 저해제, 또는 이들의 임의의 조합인, 조성물.
  97. 청구항 95에 있어서, 상기 살진균제는 스트로빌루린 살진균제, 트리아졸 살진균제, 석시네이트 탈수소효소 살진균제, 페닐아미드 살진균제, 페닐피롤 살진균제, 프탈이미드 살진균제, 디티오카바메이트 살진균제, 벤즈이미다졸 살진균제, 또는 이들의 임의의 조합인, 조성물.
  98. 청구항 95에 있어서, 상기 살선충제는 카바메이트 살선충제인, 조성물.
  99. 청구항 95에 있어서, 상기 살균 제제는 디클로로펜 및 벤질알코올 반형식적 살균제, 이소티아졸리논 살균제, 또는 이들의 조합인, 조성물.
  100. 청구항 95에 있어서, 생물학적 접종물은 브래디히조비움 spp., a 바실러스 spp., 스트렙토마이세스 spp., 트리코데르마 spp., 파스퇴리아 spp., or 이들의 임의의 조합인, 조성물.
  101. 청구항 95에 있어서, 상기 조성물은 하기를 포함하는, 조성물:
    하기 중 1종 이상: 펩타이드 p4-14s-9a (서열식별번호: 57), p41-4s-12d (서열식별번호: 59), p14 (서열식별번호: 113), p14a (서열식별번호: 114), p14-22E,26E (서열식별번호: 23), p1-29 (서열식별번호: 130), p4-14S-16S (서열식별번호: 55); 및
    클로티아니딘, 클로티아니딘 및 바실러스 피르무스(바실러스 피르무스)의 조합, 이미디클로프리드, 또는 이미디클로프리드 및 바실러스 피르무스의 조합.
  102. 청구항 95에 있어서, 상기 조성물은 하기를 포함하는, 조성물:
    하기 중 1종 이상: 펩타이드 p4-14s-9a (서열식별번호: 57), p41-4s-12d (서열식별번호: 59), p14 (서열식별번호: 113), p14a (서열식별번호: 114), p14-22E,26E (서열식별번호: 23), p1-29 (서열식별번호: 130), p4-14S-16S (서열식별번호: 55); 및
    티아메톡삼; 티아메톡삼, 메페녹삼, 및 플루디옥시닐의 조합; 티아메톡삼, 메페녹삼, 플루디옥시닐 및 아족시스트로빈의 조합; 티아메톡삼 및 아바멕틴의 조합; 티아메톡삼, 아바멕틴, 및 파스퇴리아 살선충제의 조합; 또는 티아메톡삼, 메페녹삼, 플루디옥시닐, 아족시스트로빈, 티아벤다졸, 및 아바멕틴의 조합.
  103. 청구항 95에 있어서, 상기 조성물은 하기를 포함하는, 조성물:
    하기 중 1종 이상: 펩타이드 p4-14s-9a (서열식별번호: 57), p41-4s-12d (서열식별번호: 59), p14 (서열식별번호: 113), p14a (서열식별번호: 114), p14-22E,26E (서열식별번호: 23), p1-29 (서열식별번호: 130), p4-14S-16S (서열식별번호: 55); 및
    브래디히조비움 아종, 바실러스 아종, 및 이들의 조합을 포함하는 생물학적 접종물.
  104. 청구항 93에 있어서, 상기 캐리어는 수성 캐리어인, 조성물.
  105. 청구항 104에 있어서, 상기 수성 캐리어는 살생물제, 프로테아제 저해제, 비-이온성 계면활성제, 또는 이들의 조합 중 1종 이상을 추가로 포함하는, 조성물.
  106. 청구항 93에 있어서, 상기 캐리어는 미립 형태의 고형 캐리어인, 조성물.
  107. 청구항 106에 있어서, 상기 고형 캐리어는 건조 분말인, 조성물.
  108. 하기로 구성된 군으로부터 선택된 단리된 펩타이드:
    DVGQLIGELIDRGLQ (서열식별번호: 15)
    GDVGQLIGELIDRGLQSVLAG (서열식별번호: 16),
    SSRALQEVIAQLAQELTHN (서열식별번호: 17), 및
    GLEDIKAALDTLIHEKLG (서열식별번호: 18).
  109. 연속적으로 함께 연결된 복수의 아미노산 서열, 내지 청구항 108에 따른 펩타이드를 포함하는 아미노산 서열 중 하나, 및 청구항 1 내지 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32 내지 34, 37, 38, 41, 42, 45, 46, 49, 50, 53, 54, 57, 60, 63, 66 내지 69, 72 내지 78, 및 108 중 어느 한 항에 따른 펩타이드, 또는 용해도 또는 정제 태그를 포함하는 아미노산 서열 중 제2의 것을 포함하는 융합 폴리펩타이드.
  110. 청구항 108에 따른 1종 이상의 펩타이드 또는 내지 청구항 109에 따른 융합 폴리펩타이드, 및 캐리어를 포함하는 조성물.
  111. 하기를 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 89 및 108 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 90 내지 92 및 109 중 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 93 내지 107 및 110 중 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 상기 적용은 질환 저항성을 부여하는데 유효한 단계.
  112. 청구항 111에 있어서, 상기 질환은 바이러스성 질환, 박테리아 질환, 또는 진균 질환인, 방법.
  113. 청구항 111에 있어서, 상기 적용은 식물로 수행되는, 방법.
  114. 청구항 113에 있어서, 상기 식물은 적어도 1종의 제초제에 대해 내성이 있는, 방법.
  115. 청구항 111에 있어서, 상기 적용은 식물 종자로 수행되고, 상기 방법은 상기 천연 또는 인공 토양에서의 펩타이드 또는 조성물로 처리된 종자를 조림하고, 토양에서 조림된 종자로부터의 식물을 증식시키는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  116. 청구항 111에 있어서, 상기 적용은 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에서 수행되는, 방법.
  117. 청구항 111에 있어서, 상기 식물은 농업적, 조림, 장식용 및 원예 식물로부터 선택되고, 이들 각각은 그것의 천연 또는 유전자 변형 형태인, 방법.
  118. 청구항 111에 있어서, 상기 식물은 유전자 변형 식물인, 방법.
  119. 청구항 111에 있어서, 상기 처리될 식물은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 spec.), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추, 피튜니아, 소나무 (피누스 spec.), 포플러 (파퓰러스 spec.), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 spec.).
  120. 하기를 포함하여, 식물 성장을 향상시키는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 89 및 108 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 90 내지 92 및 109 중 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 93 내지 107 및 110 중 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 상기 적용은 식물 성장을 향상시키는데 유효한 단계.
  121. 청구항 120에 있어서, 상기 향상된 성장은 개선된 식물 활력, 증가된 식물 중량, 증가된 바이오매스, 식물 당 증가된 수의 꽃, 더 많은 그레인 및/또는 과일 수확량, 더 많은 어린나무 또는 측면 싹, 더 큰 잎, 증가된 싹 성장, 증가된 단백질 함량, 증가된 오일 함량, 증가된 전분 함량, 증가된 안료 함량, 증가된 클로로필 함량, 및 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  122. 청구항 120에 있어서, 상기 적용은 식물로 수행되는, 방법.
  123. 청구항 122에 있어서, 상기 식물은 적어도 1종의 제초제에 대해 내성이 있는, 방법.
  124. 청구항 120에 있어서, 상기 적용은 식물 종자로 수행되고, 상기 방법은 상기 천연 또는 인공 토양에서의 펩타이드 또는 조성물로 처리된 종자를 조림하고, 토양에서 조림된 종자로부터의 식물을 증식시키는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  125. 청구항 120에 있어서, 상기 적용은 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에서 수행되는, 방법.
  126. 청구항 120에 있어서, 상기 식물은 농업적, 조림, 장식용 및 원예 식물로부터 선택되고, 이들 각각은 그것의 천연 또는 유전자 변형 형태인, 방법.
  127. 청구항 120에 있어서, 상기 식물은 유전자 변형 식물인, 방법.
  128. 청구항 120에 있어서, 상기 처리될 식물은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 spec.), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추, 피튜니아, 소나무 (피누스 spec.), 포플러 (파퓰러스 spec.), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 spec.).
  129. 하기를 포함하는, 생물 스트레스에 대한 식물의 내성 및 저항성을 증가시키는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 89 및 108 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 90 내지 92 및 109 중 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 93 내지 107 및 110 중 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 상기 적용은 곤충, 거미류, 선충, 잡초, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 생물 스트레스 인자에 대한 식물의 내성 및 저항성을 증가시키는데 유효한 단계.
  130. 청구항 129에 있어서, 상기 적용은 식물로 수행되는, 방법.
  131. 청구항 130에 있어서, 상기 식물은 적어도 1종의 제초제에 대해 내성이 있는, 방법.
  132. 청구항 129에 있어서, 상기 적용은 식물 종자로 수행되고, 상기 방법은 상기 천연 또는 인공 토양에서의 펩타이드 또는 조성물로 처리된 종자를 조림하고, 토양에서 조림된 종자로부터의 식물을 증식시키는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  133. 청구항 129에 있어서, 상기 적용은 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에서 수행되는, 방법.
  134. 청구항 129에 있어서, 상기 식물은 농업적, 조림, 장식용 및 원예 식물로부터 선택되고, 이들 각각은 그것의 천연 또는 유전자 변형 형태인, 방법.
  135. 청구항 129에 있어서, 상기 식물은 유전자 변형 식물인, 방법.
  136. 청구항 129에 있어서, 상기 처리될 식물은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 spec.), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추, 피튜니아, 소나무 (피누스 spec.), 포플러 (파퓰러스 spec.), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 spec.).
  137. 하기를 포함하는, 비생물 스트레스에 대한 식물 내성을 증가시키는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 89 및 108 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 90 내지 92 및 109 중 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 93 내지 107 및 110 중 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 상기 적용은 염 스트레스, 물 스트레스, 오존 스트레스, 중금속 스트레스, 차가운 스트레스, 열 스트레스, 영양 스트레스, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 비생물 스트레스 인자에 대한 식물의 내성을 증가시키는데 유효한 단계.
  138. 청구항 137에 있어서, 상기 적용은 식물로 수행되는, 방법.
  139. 청구항 138에 있어서, 상기 식물은 적어도 1종의 제초제에 대해 내성이 있는, 방법.
  140. 청구항 137에 있어서, 상기 적용은 식물 종자로 수행되고, 상기 방법은 상기 천연 또는 인공 토양에서의 펩타이드 또는 조성물로 처리된 종자를 조림하고, 토양에서 조림된 종자로부터의 식물을 증식시키는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  141. 청구항 137에 있어서, 상기 적용은 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에서 수행되는, 방법.
  142. 청구항 137에 있어서, 상기 식물은 농업적, 조림, 장식용 및 원예 식물로부터 선택되고, 이들 각각은 그것의 천연 또는 유전자 변형 형태인, 방법.
  143. 청구항 137에 있어서, 상기 식물은 유전자 변형 식물인, 방법.
  144. 청구항 137에 있어서, 상기 처리될 식물은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 알팔파, 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 보리, 콩, 너도밤나무 (파거스 spec.), 베고니아, 자작나무, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 캄포르, 카놀라, 당근, 피마자유 식물, 체리, 신나몬, 사이트루스, 코코아 빈, 커피, 옥수수, 면, 오이, 조롱박, 유칼립투스, 전나무, 아마, 사료용 비트, 후크시아, 마늘, 제라늄, 포도, 땅콩, 삼, 홉, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 황마, 렌즈콩, 상추, 아마인, 멜론, 머스타드, 오크, 귀리, 오일 야자나무, 오일-종자 평지, 올리브, 양파, 파프리카, 완두콩, 복숭아, 배, 펠라고늄, 후추, 피튜니아, 소나무 (피누스 spec.), 포플러 (파퓰러스 spec.), 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 쌀, 고무 나무, 호밀, 수수, 대두, 시금치, 가문비나무, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 차, 티크, 담배, 토마토, 라이밀, 잔디, 수박, 밀 및 버드나무 (살릭스 spec.).
  145. 하기를 포함하여 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 89 및 108 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 90 내지 92 및 109 중 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 93 내지 107 및 110 중 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물이 성장하고 있는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 상기 적용은 건조 저항성을 상기 원예 식물로부터 제거된 절단물에 부여하는데 효과적인, 방법.
  146. 청구항 145에 있어서, 상기 적용은 원예 식물로 수행되는, 방법.
  147. 청구항 145에 있어서, 상기 적용은 원예 식물이 성장하고 있는 유전자좌에서 수행되는, 방법.
  148. 청구항 145에 있어서, 상기 원예 식물은 유전자 변형 원예 식물인, 방법.
  149. 청구항 145에 있어서, 상기 처리될 식물은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 너도밤나무 (파거스 spec.), 베고니아, 자작나무, 관상용 양배추, 전나무, 후크시아, 마늘, 제라늄, 오크, 관상용 양파, 펠라고늄, 피튜니아, 소나무 (피누스 spec.), 포플러 (파퓰러스 spec.), 해바라기, 티크, 담배, 잔디, 및 버드나무 (살릭스 spec.).
  150. 하기를 포함하여, 과일 또는 야채에 수거 후 질환 또는 수거 후 건조 내성을 부여하는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 89 및 108 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 90 내지 92 및 109 중 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 93 내지 107 및 110 중 어느 한 항에 따른 조성물을 과일 또는 야채를 포함하는 식물 또는 식물이 성장하고 있는 유전자좌에 적용하는 단계, 또는
    유효량의 상기 단리된 펩타이드 또는 상기 조성물을 수확된 과일 또는 야채에 적용시키는 단계,
    상기 적용은 수확후 질환 저항성 또는 건조 저항성을 상기 과일 또는 야채에 부여하는데 효과적인, 방법.
  151. 청구항 150에 있어서, 상기 적용은 식물로 수행되는, 방법.
  152. 청구항 151에 있어서, 상기 식물은 적어도 1종의 제초제에 대해 내성이 있는, 방법.
  153. 청구항 150에 있어서, 상기 적용은 식물이 성장하고 있는 유전자좌에서 수행되는, 방법.
  154. 청구항 150에 있어서, 상기 적용은 수확된 과일 또는 야채로 수행되는, 방법.
  155. 청구항 150에 있어서, 상기 식물은 유전자 변형 식물인, 방법.
  156. 청구항 150에 있어서, 상기 식물은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 당근, 체리, 사이트루스, 옥수수, 오이, 조롱박, 사료용 비트, 마늘, 포도, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 상추, 멜론, 머스타드, 올리브, 양파, 완두콩, 복숭아, 배, 후추, 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 시금치, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 차, 토마토, 라이밀, 및 수박.
  157. 하기를 포함하여, 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 89 및 108 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 90 내지 92 및 109 중 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 93 내지 107 및 110 중 어느 한 항에 따른 조성물을 과일 또는 야채를 포함하는 식물 또는 식물이 성장하고 있는 유전자좌에 적용하는 단계, 또는
    유효량의 상기 단리된 펩타이드 또는 상기 조성물을 수확된 과일 또는 야채에 적용시키는 단계,
    상기 적용은 과일 또는 야채 성숙 수명을 연장시키는데 효과적인, 방법.
  158. 청구항 157에 있어서, 상기 적용은 식물로 수행되는, 방법.
  159. 청구항 157에 있어서, 상기 식물은 적어도 1종의 제초제에 대해 내성이 있는, 방법.
  160. 청구항 157에 있어서, 상기 적용은 식물이 성장하고 있는 유전자좌에서 수행되는, 방법.
  161. 청구항 157에 있어서, 상기 적용은 수확된 과일 또는 야채로 수행되는, 방법.
  162. 청구항 157에 있어서, 상기 식물은 유전자 변형 식물인, 방법.
  163. 청구항 157에 있어서, 상기 식물은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 사과, 살구, 아스파라거스, 아보카도, 바나나, 블랙베리, 블루베리, 양배추, 당근, 체리, 사이트루스, 옥수수, 오이, 조롱박, 사료용 비트, 마늘, 포도, 채진목, 갓 (브라씨카 준세아), 상추, 멜론, 머스타드, 올리브, 양파, 완두콩, 복숭아, 배, 후추, 이과류, 감자, 평지, 랩스베리, 시금치, 호박, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 차, 토마토, 라이밀, 및 수박.
  164. 하기를 포함하여 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 방법:
    유효량의 청구항 1 내지 89 및 108 중 어느 한 항에 따른 단리된 펩타이드, 청구항 90 내지 92 및 109 중 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드, 또는 청구항 93 내지 107 및 110 중 어느 한 항에 따른 조성물을 식물 또는 식물 종자 또는 식물이 성장하고 있거나 성장이 예상되는 유전자좌에 적용하는 단계로서, 상기 적용은 식물 생화학적 신호전달을 조절하는데 유효한 단계.
  165. 청구항 164에 있어서, 상기 식물 생화학적 신호전달은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 산화질소 생산, 과산화물 생산, 또는 2차 대사물의 유도; 에틸렌 신호전달 경로의 작용적 조절 및 에틸렌-반응성 유전자 발현의 유도; 살리실산 신호전달 경로의 작용적 조절 및 살리실산-반응성 유전자 발현의 유도; 압시스 산 경로의 작용적 조절 및 압시스 산-반응성 유전자 발현의 유도; 지베렐린 신호전달 경로의 작용적 조절 및 지베렐린-반응성 유전자 발현의 유도; 자스몬산 신호전달의 길항적 조절 및 자스몬산-반응성 유전자의 발현 억제; 프로테아제 저해제 발현의 유도; 식물 조직에서 반응성 산소 종 생산의 유도; 면역-관련된 및 항미생물 펩타이드 생산의 유도; 및 엑스판신 유전자 발현 및 생산의 유도.
  166. 청구항 1 내지 89 및 108 중 어느 한 항에 따른 폴리펩타이드 단리된 펩타이드 또는 청구항 90 내지 92 및 109 중 어느 한 항에 따른 융합 폴리펩타이드를 인코딩하는 제1 핵산 분자, 및 상기 제1 핵산 분자에 작동가능하게 커플링된 프로모터-유효한 핵산 분자를 포함하는 DNA 작제물.
  167. 청구항 166에 따른 DNA 작제물을 포함하는 재조합 발현 벡터.
  168. 청구항 166에 따른 DNA 작제물을 포함하는 재조합 숙주세포.
  169. 청구항 168 에 있어서, 상기 재조합 숙주세포는 식물 원형질인, 재조합 숙주세포.
  170. 청구항 168 에 있어서, 상기 재조합 숙주세포는 박테리움인, 재조합 숙주세포.
  171. 청구항 168에 따른 재조합 숙주세포를 포함하는 형질전환 식물.
  172. 청구항 168에 따른 재조합 숙주세포를 포함하는 형질전환 식물 종자.
  173. 청구항 166에 따른 DNA 작제물을 포함하는 형질전환 식물.
  174. 청구항 166에 따른 상기 DNA 작제물을 포함하는 형질전환 식물 종자.
  175. 하기를 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 질환 내성을 부여하는데 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  176. 하기를 포함하여, 식물 성장을 향상시키는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 식물 성장을 향상시키는데 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  177. 하기를 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 질환 내성을 부여하는데 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  178. 하기를 포함하는, 생물 스트레스에 대한 식물의 내성 및 저항성을 증가시키는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을, DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현시키도록 하는데 유효한 조건 하에서 성장시켜 곤충, 거미류, 선충, 잡초, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 생물 스트레스 인자에 대한 식물의 내성 및 저항성을 증가시키는 단계.
  179. 하기를 포함하여, 비생물 스트레스에 대한 식물 내성을 증가시키는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을, DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현시키도록 하는데 유효한 조건 하에서 성장시켜 염 스트레스, 물 스트레스, 오존 스트레스, 중금속 스트레스, 차가운 스트레스, 열 스트레스, 영양 스트레스, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 비생물 스트레스 인자에 대한 식물의 내성을 증가시키는 단계.
  180. 하기를 포함하여, 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는 방법:
    청구항 166에 따른 상기 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 원예 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 형질전환 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는데 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  181. 하기를 포함하여, 과일 또는 야채에 수거 후 질환 또는 수거 후 건조 내성을 부여하는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하기에 효과적인 효건하에서 성장시키는 단계.
  182. 하기를 포함하여, 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물을 제공하는 단계; 및
    상기 식물을 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하여 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채의 성숙 수명을 향상시키기에 효과적인 조건하에서 성장시키는 단계.
  183. 하기를 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 하여 질환 내성을 부여하는 단계.
  184. 하기를 포함하여, 식물 성장을 향상시키는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 하여 식물 성장을 향상시키는 단계.
  185. 하기를 포함하여 식물에게 질환 내성을 부여하는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 씨드로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 하여 질환 내성을 부여하는 단계.
  186. 하기를 포함하는, 생물 스트레스에 대한 식물의 내성 및 저항성을 증가시키는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 식물 종자로부터의 형질전환 식물을 증식시켜 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 하여 곤충, 거미류, 선충, 잡초, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 생물 스트레스 인자에 대한 식물의 내성 및 저항성을 증가시키는 단계.
  187. 하기를 포함하여, 비생물 스트레스에 대한 식물 내성을 증가시키는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 식물 종자로부터의 형질전환 식물을 증식시켜 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 하여 염 스트레스, 물 스트레스, 오존 스트레스, 중금속 스트레스, 차가운 스트레스, 열 스트레스, 영양 스트레스, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 비생물 스트레스 인자에 대한 식물의 내성을 증가시키는 단계.
  188. 하기를 포함하여, 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 원예 식물 종자를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 원예 식물 종자를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 원예 식물 종자로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 하여 형질전환 원예 식물로부터 제거된 절단부에 건조 내성을 부여하는 단계.
  189. 하기를 포함하여, 과일 또는 야채에 수거 후 질환 또는 수거 후 건조 내성을 부여하는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 식물 종자로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 하여 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 수거 후 질환 내성 또는 건조 내성을 부여하는 단계.
  190. 하기를 포함하여, 과일 또는 야채 성숙 수명을 향상시키는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 식물 종자로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 하여 상기 형질전환 식물로부터 제거된 과일 또는 야채에 대한 성숙 수명을 향상시키는 단계.
  191. 하기를 포함하여 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 방법:
    청구항 166에 따른 DNA 작제물로 형질전환된 형질전환 식물 종자를 제공하는 단계;
    상기 형질전환 식물 종자를 토양에 식재하는 단계; 및
    상기 형질전환 식물 종자로부터 형질전환 식물을 증식시켜 상기 DNA 작제물이 상기 펩타이드 또는 상기 융합 폴리펩타이드를 발현하도록 하여 식물 생화학적 신호전달을 조절하는 단계.
  192. 청구항 191에 있어서, 상기 식물 생화학적 신호전달은 하기로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법: 산화질소 생산, 과산화물 생산, 또는 2차 대사물의 유도; 에틸렌 신호전달 경로의 작용적 조절 및 에틸렌-반응성 유전자 발현의 유도; 살리실산 신호전달 경로의 작용적 조절 및 살리실산-반응성 유전자 발현의 유도; 압시스 산 경로의 작용적 조절 및 압시스 산-반응성 유전자 발현의 유도; 지베렐린 신호전달 경로의 작용적 조절 및 지베렐린-반응성 유전자 발현의 유도; 자스몬산 신호전달의 길항적 조절 및 자스몬산-반응성 유전자의 발현 억제; 프로테아제 저해제 발현의 유도; 식물 조직에서 반응성 산소 종 생산의 유도; 면역-관련된 및 항미생물 펩타이드 생산의 유도; 및 엑스판신 유전자 발현 및 생산의 유도.
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