KR20170073058A - 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕 - Google Patents

항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕 Download PDF

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Abstract

본 발명은 약초를 이용한 기능성 생리활성 조성물에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 숙지황, 백작약, 청궁, 당귀, 백수오 등을 혼합하여 추출한 것을 발효시킨 것으로서 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 및 및 그에 따른 발효사물탕에 관한 것이다.
본 발명은 숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정,
상기의 추출한 조성물에 L.delbruekil, L.acidophilus, L.casei, S.thermophilus 또는/및 Yo-mix의 균을 접종시켜서 발효를 시키는 과정,
상기한 발효 과정 후에 추출하는 과정을 수행하는 것을 포함하는 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정에서 숙지황 대신 백수오를 혼합하여 추출한 조성물로 준비하는 과정으로 대체하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정에서 숙지황을 빼고 추출한 조성물로 준비하는 과정으로 대체하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기한 발효사물탕 제조 방법으로 제조된 발효사물탕을 제공한다.

Description

항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕{the fermented samultang extracting method with the function of both anti-oxidation and immunity and the samultang extract using thereof}
본 발명은 약초를 이용한 기능성 생리활성 조성물에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 숙지황, 백작약, 청궁, 당귀, 백수오 등을 혼합하여 추출한 것을 발효시킨 것으로서 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 및 및 그에 따른 발효사물탕에 관한 것이다.
현대사회는 산업화로 인한 생활수준의 향상과, 라이프스타일의 변화로 전통적인 식생활이 위협받고 있으며, 이러한 식생활 변화에 따라, 비만, 고혈압, 고지혈증 등의 다양한 성인병이 급증하고 있는 실정이다. 이러한 문제점을 극복하고자 다양한 건강지향성 제품들이 개발되고 있으며, 근래에는 한방재료를 이용한 약선식품에 대한수요가 매우 높으며, 특히 간편하게 언제 어디서라도 음용할 수 있는 약선 한방차에 대한 관심이 급증하고 있는 실정이다.
일반적으로 한약은 한의학의 기본 이론을 바탕으로 질병의 예방이나, 치료를 위해 천연물 또는 가공된 약제를 혼합 조제한 약물을 의미하며, 다양한 동물, 식물, 광물의 추출물을 추출하여 사용하나 대부분은 약용 식물을 사용하고 있다. 각각의 한약재 추출물은 각각 특유한 고도의 생리활성을 나타내는 데, 그 예로서 특정 조성의 한약 조성물이 항암 활성, 항당뇨 활성, 동맥경화 예방활성, 면역기능 증강활성, 숙취 해소 활성, 뇌졸중 예방 및 아토피 치료 활성 등을 나타냄이 알려져 있다.
현재까지, 대한민국 등록특허에는 암치료와 암예방을 위한 한약 조성물(제 10-0671762호, 2007년 1월 15일), 당뇨병 및 이로 인한 합병증 치료 및 예방용 한약 조성물(제 10-0712659호, 2007년 4월 23일), 반하, 백출, 천마,진피, 복령, 산사, 희렴 및 황련을 포함하는 한약 제제 혼합물의 동맥경화 및 관련 질환의 예방 및 치료용 추출물과, 이를 유효성분으로 함유하는 동맥경화 및 관련 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물(제 10-0787174호, 등록특허 10-14088142007년 12월 12일), 루푸스 치료용 한약 추출물(제 10-0682046호, 2007년 2월 6일), 숙취 해소용 한약 조성물및 이를 함유하는 음료(제 10-1176590호, 2012년 8월 17일), 뇌졸중과 치매를 포함하는 퇴행성 뇌질환의 예방과 치료용 건강 기능성 식품 및 약제학적 조성물(제 10-0950164호, 2010년 3월 23일), 아토피 피부염 개선능을 갖는 화장료 조성물 및 이의 사용방법(제 10-1183893호, 2012년 9월 12일) 등이 다양한 한방 제제를 이용한 기능성 제품 개발로 개시되어 있다.
최근에는 한약재의 추출 기술이 발전되고, 각종 제형 기술이 발달되면서, 한약재의 약효가 향상되고, 휴대가 용이하며, 기호성이 강화된 한약 관련 제품이 개발되어 한약의 대중화 및 보급에 기여하고 있다. 그 예로서, 농축된 한약 추출물을 포함하는 초콜렛의 제조방법(제 10-0812826호, 2008년 3월 5일) 및 초콜릿 한약 및 가나슈 초콜릿 한약(제 10-0769699호, 2007년 10월 17일)이 알려져 있다.
상기한 종래기술 및 선행기술은 항산화에 효과가 있으나 항산화 및 면역 효능이 미비한 실정이다.
따라서 본 발명은 항산화 및 면역에 효능이 있는 기능성 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕을 제공하고자 한다.
특히 본 발명은 종래의 약초 성분을 혼합하여 추출한 조성물에 발효 미생물을 이용하여 발효된 사물탕을 제공함으로써 항산화 및 면역에 효능이 현저히 증강되는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕을 제공하고자 한다.
본 발명은 상기한 문제점 및 요구를 해결하기 위하여,
숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정,
상기의 추출한 조성물에 L.delbruekil, L.acidophilus, L.casei, S.thermophilus 또는/및 Yo-mix의 균을 접종시켜서 발효를 시키는 과정,
상기한 발효 과정 후에 추출하는 과정을 수행하는 것을 포함하는 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정에서 숙지황 대신 백수오를 혼합하여 추출한 조성물로 준비하는 과정으로 대체하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정에서 숙지황을 빼고 추출한 조성물로 준비하는 과정으로 대체하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기한 발효사물탕 제조 방법으로 제조된 발효사물탕을 제공한다.
본 발명에 따른 발효사물탕 제조 방법으로 제조된 발효사물탕은 종래의 약초를 정제수와 함께 혼합하여 일반적인 탕제 또는 추출한 조성물과 비교하여 항산화 및 면역 효능에 현저한 효과가 나타난다.
또한 본 발명에 따른 발효사물탕 제조 방법으로 제조된 발효사물탕은 항암 효능 및 혈액 순환 기능에 현저한 효과가 나타난다.
도 1은 본 발명에 따른 발효사물탕의 세포 독성을 대조군과 비교한 것을 보여주는 도면.
이하 본 발명을 상세히 설명하고자 한다.
본 발명은 숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물로 이루어진 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕을 제공한다.
또한 본 발명은 상기한 숙지황 대신 백수오를 혼합하여 추출하여 조성한 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕을 제공한다.
즉, 백수오, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물로 이루어진 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕을 제공한다.
또한 본 발명은 상기한 숙지황을 빼고 혼합하여 추출한 조성물로 이루어진 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕을 제공한다.
즉, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물로 이루어진 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕을 제공한다.
본 발명은 상기한 숙지황 100중량부에 백작약 50~150중량부, 천궁 50~150중량부, 당귀 50~150 중량부를 혼합하여 조성한 것이 항산화 및 면역 효능에 최적의 효과가 있다.
또한 본 발명은 상기한 백수오 100중량부에 백작약 50~150중량부, 천궁 50~150중량부, 당귀 50~150 중량부를 혼합하여 조성한 것이 항산화 및 면역 효능에 최적의 효과가 있다.
또한 본 발명은 상기한 백작약 50~150중량부, 천궁 50~150중량부, 당귀 50~150 중량부를 혼합하여 조성한 것이 항산화 및 면역 효능에 최적의 효과가 있다.
본 발명의 상기한 숙지황은 지황(地黃)의 뿌리를 쪄서 말린 한약재를 의미한다.
지황은 현삼과에 딸린 여러해살이 약용식물로 그 뿌리를 한방에서 약재로 쓰는데, 날것을 생지황, 말린 것을 건지황이라 하며, 숙지황 중 특히 술에 담갔다가 쪄서 말리기를 9번 되풀이하여 만든 것은 구지황이라 하여 그 약효를 으뜸으로 친다. 맛은 달면서도 쓴맛이 돌고 따뜻한 성질이 있어 혈을 보(補)하고 정(精:생명이 발생하고 활동하는 데 기본이 되는 물질)을 보충해서 허리와 무릎이 시리고 아픈 증상이나 월경이상, 어지럼증 등을 치료하고 머리를 검게 하는 효능이 있다.
본 발명의 상기한 백작약은 쌍떡잎식물 미나리아재비목 미나리아재비과의 여러해살이풀을 의미한다.
강작약이라고도 한다. 깊은 산에서 자란다. 높이 40∼50cm이다. 뿌리는 굵고 육질이며 밑부분이 비늘 같은 잎으로 싸여 있다. 잎은 3∼4개가 어긋나고 3개씩 2번 갈라진다. 작은잎은 긴 타원형이거나 달걀을 거꾸로 세워놓은 모양이고 가장자리가 밋밋하며 털이 없다.
꽃은 6월에 흰색으로 피고 지름 4∼5cm이며 원줄기 끝에 1개씩 달린다. 꽃받침조각은 달걀 모양이며 3개, 꽃잎은 달걀을 거꾸로 세워놓은 모양이고 5∼7개이다. 수술은 여러 개이며 3∼4개의 씨방이 있다. 열매는 골돌과로서 벌어지면 안쪽이 붉고 덜 자란 붉은 종자와 성숙한 검은 종자가 나타난다.
잎의 뒷면에 털이 난 것을 털백작약(var.pilosa), 잎의 뒷면에 털이 나고 암술대가 길게 자라서 뒤로 말리며 꽃이 붉은색인 것을 산작약(P.obovata), 산작약 중에서 잎의 뒷면에 털이 없는 것을 민산작약(p.o.var.glabra)이라고 한다. 뿌리를 진통·진경·부인병에 사용한다. 한국·일본·중국·사할린섬 등지에 분포한다.
본 발명의 상기한 천궁은 쌍떡잎식물 이판화군 산형화목 미나리과의 여러해살이풀을 의미한다.
중국 원산이며 약용 식물로 재배한다. 높이 30∼60cm이며 속이 비어 있고 가지가 다소 갈라진다. 잎은 어긋나고 2회 3출 깃꼴겹잎이며 갈래조각은 달걀 모양의 바소꼴이고 다소 깊은 톱니가 있다. 뿌리잎과 밑부분의 잎은 긴 잎자루가 있고 밑부분이 잎집으로 되어 줄기를 감싼다.
꽃은 8~9월에 피고 흰색이며 복산형꽃차례를 이룬다. 꽃잎은 5개이고 안쪽으로 말리며 수술은 5개, 암술은 1개이다. 총포와 소총포는 각각 5∼6개이며 줄 모양이다. 열매는 열리지만 성숙하지 않는다. 땅 속에 있는 마디 사이는 길이 5∼10cm, 지름 3∼5cm의 덩어리처럼 생기고 강한 향기가 있다.
진정 ·진통 ·강장 등에 효능이 있어 두통 ·빈혈증 ·부인병 등을 치료하는데 쓴다. 9~11월에 근경을 캐어 잎과 줄기를 제거하고 햇볕에 말린후 3~6g을 달여서 복용하거나, 환제(丸劑)나 산제(散劑)로 하여 사용한다.
본 발명의 상기한 당귀는 한국에서는 산형과 참당귀(Angelica gigas Nakai), 중국에서는 산형과 중국당귀(Angelica sinensis (Oliv.) Diels)의 건조시킨 뿌리를 말한다. 일본에서는 산형과 왜당귀(Angelica acutiloba (Siebold. & Zucc.) Kitag.) 또는 홋카이당귀(Angelica acutiloba (Siebold. & Zucc.) Kitag. var. sugiyamae Hikino)의 뿌리를 말려서 사용한다.
본 발명의 상기한 백수오는 한국 및 북한에서 협죽도과(Apocynaceae)의 하위분류인 박주가리아과(Asclepiadoideae)에 속하는 큰조롱(Cynanchum wilfordii (Maximowicz) J.D.Hooker)의 건조시킨 덩이뿌리를 말한다.
백하수오라고도 하는데, 기원이 되는 식물인 큰조롱은 '은조롱'으로 알려져 있는 덩굴식물로써 산기슭 양지의 풀밭이나 바닷가의 경사지에서 자란다. 가을에서 겨울에 걸쳐 뿌리를 수확하여 말린 후 약으로 쓴다. 적하수오로 알려져 있는 약재 하수오는 마디풀과의 하수오(Fallopia multiflora (Thunberg) Haraldson)라는 식물을 기원으로 하며, 백수오와는 다른 약재이다.
백수오는 맛이 달고 약간 쓰며, 기운은 약간 따뜻하다(甘微苦微). 이 약재는 한의학적인 의미에서 간신(肝腎)을 보충해주어 근육과 뼈를 튼튼하게 하고, 소화기를 좋게 하며, 해독의 기능이 있다. 이런 효능을 이용해 간신허증(肝腎虛證), 양위증(陽?證 ), 유정(遺精), 요슬산연(腰膝?軟), 비허불운(脾虛不運), 완복창만(脘腹脹滿), 설사, 나이에 비해 흰 머리가 빨리 날 때, 산후 젖이 부족할 때 등에 활용할 수 있다.
본 발명의 기술적 특징은 상기한 원재료를 혼합하고 정제수 또는 물을 혼합하고 가열하여 추출한 추출물에 발효균을 접종하여 발효시킨 발효사물탕인 점이다.
이와 같이 발효시킨 발효사물탕은 종래의 원재료를 단순히 혼합하고 정제수 또는 물을 혼합하여 가열하여 추출한 사물탕의 효능과는 현저한 차이점이 있으며, 특히 항산화 및 면역 효능이 현저한 것에 특징이 있다.
본 발명은 숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정을 수행한다(1형).(1과정)
상기한 바와 같이 본 발명은 숙지황 대신 백수오를 넣은 백수오, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정을 수행한다(2형).
또한 본 발명은 숙지황을 뺀 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정을 수행한다(3형).
조성물 추출 방법은 물을 혼합하여 가열하거나 알코올을 이용하거나 환류 추출하는 방법을 사용할 수 있다.
조성물에서 물을 혼합하는 비율은 통상 원재료 중량의 3~20배 정도를 포함하는 것이 좋으며, 알코올을 이용하는 경우도 원재료 중량의 1~20배 정도를 포함하는 것이 좋다.
본 발명은 상기한 1형, 2형 또는 3형의 추출한 조성물에 L.delbruekil, L.acidophilus, L.casei, S.thermophilus 또는/및 Yo-mix의 5가지의 균을 접종시켜서 발효를 시키는 과정을 수행한다.(2과정)
상기한 Yo-mix는 L.delbruekil, L.acidophilus 및 L.casei 균을 혼합한 것을 의미한다. 혼합비율은 자유롭게 할 수 있으며 균등한 비율로 하는 것이 좋다.
즉, 상기한 1형, 2형 또는 3형의 추출한 조성물 각각에 L.delbruekil, L.acidophilus, L.casei, S.thermophilus 또는 Yo-mix의 5가지의 각각의 균을 접종시켜 발효시키는 과정을 수행하는 것을 의미한다.
또한 상기한 상기한 1형, 2형 또는 3형의 추출한 조성물 각각에 L.delbruekil, L.acidophilus, L.casei, S.thermophilus 및 Yo-mix의 5가지의 균을 모두 혼합하여 접종시켜 발효시키는 과정을 수행하는 것을 의미한다.
혼합비율은 자유롭게 할 수 있으며 균등한 비율로 하는 것이 좋다.
상기한 발효 과정은 균을 접종하고 30~40도씨에서 20~138시간 정도 발효시키는 과정을 의미한다.
본 발명은 상기한 1형, 2형 또는 3형의 추출한 조성물에 항산화 및 면역 효능을 증진시키는데 효과적인 부가 조성물을 혼합하여 상기한 접종과정 및 발효과정을 수행할 수 있다.
상기한 부가 조성물은 로즈마리 100중량부에 부추 50~150 중량부, 감잎 20~50 중량부, 가죽 20~50중량부를 혼합하여 추출한 조성물을 의미한다.
특히 상기의 부가 조성물에서 부추는 외떡잎식물 백합목 백합과의 여러해살이풀을 의미한다.
비늘줄기는 밑에 짧은 뿌리줄기가 있고 겉에 검은 노란색의 섬유가 있다. 잎은 녹색으로 줄 모양으로 길고 좁으며 연약하다. 잎 사이에서 길이 30~40cm 되는 꽃줄기가 자라서 끝에 큰 산형(傘形)꽃차례를 이룬다.
본 발명의 상기한 부추는 항산화 기능 및 면역 기능을 더욱 증진시키는 작용을 한다.
상기한 감잎은 통상의 감나무 잎을 의미하여 건조하여 사용하는 것이 효과적이다.
상기한 감잎은 면역 기능을 증진시키는 기능을 수행하게 된다.
본 발명의 상기한 가죽은 우상복엽으로 13~25개의 작은잎으로 되어있으며 넓은 바소형 달걀모양이다. 잎의 밑부분에 1~2쌍의 크고 둔한 거치가 있다. 꽃은 6~7월에 피며 백녹색의 원추화서로 피며 가지의 끝부분에 달린다. 꽃받침은 5개로 갈라지며 꽃잎은 5개로 끝부분이 안으로 말린다. 수술은 10개이고 암술대는 5개고 갈라진다. 열매는 시과로 9~10월에 익으며 긴 타원모양이고 종자의 양쪽에 날개가 있다.
상기한 가죽은 가죽 나무에서 채취한 잎을 건조하여 사용하는 것이 바람직하다.
상기한 가죽은 본 발명의 발효사물탕에서 항산화 기능 및 면역 기능을 증진시키는 작용을 한다.
본 발명은 상기한 1형, 2형 또는 3형의 추출한 조성물 100중량부에 부가 조성물은 20~30 중량부 혼합하는 것이 항산화 및 면역 증진에 매우 효과적이다.
본 발명은 본 발명은 상기한 1형, 2형 또는 3형의 추출한 조성물에 항암 기능 및 혈액 순환을 증진시키는데 효과적인 오감(五感) 조성물을 혼합하여 상기한 접종과정 및 발효과정을 수행할 수 있다.
본 발명의 상기한 오감 조성물은 산수유 추출물, 자일리톨, 피톤치드 원액, 올리고당을 혼합하여 조성한 조성물을 의미한다.
상기한 오감 조성물은 산수유 추출물 100 중량부에 자일리톨 1~10 중량부, 피톤치드 원액 1~10 중량부, 올리고당 50~80 중량부 혼합한 것을 의미한다.
상기한 산수유 추출물은 앞서 설명한 추출방법과 같이 통상의 산수유 열매를 물을 섞어 가열하고 추출하거나 알코올로 추출한 것을 의미한다.
본 발명은 상기한 1형, 2형 또는 3형의 추출한 조성물 100중량부에 오감 조성물은 20~30 중량부 혼합하는 것이 항암 작용 및 혈액 순환 증진에 매우 효과적이다.
본 발명은 상기한 발효 과정 후에 추출하는 과정을 수행하여 1형, 2형 또는 3형의 발효사물탕을 수득하게 된다.(3과정)
상기한 발효사물탕을 추출하는 방법은 통상의 추출 방법 또는 rotary vacuum evaporator에서 감압 농축하는 과정으로 수행할 수 있다.
본 발명의 상기한 1형, 2형 또는 3형의 발효사물탕은 항산화 및 면역에 매우 효과적인 특징을 가지게 된다.
<실시예>
본 발명은 숙지황 5g, 백작약 5g, 천궁 5g, 당귀 5g을 정제수 200g에 넣고 환류 추출하여 수득한 추출 조성물 30g을 준비한다.(1형)
또한 백수오 5g, 백작약 5g, 천궁 5g, 당귀 5g을 정제수 200g에 넣고 환류 추출하여 수득한 추출 조성물 30g을 준비한다.(2형)
또한 백작약 5g, 천궁 5g, 당귀 5g을 정제수 200g에 넣고 환류 추출하여 추출 조성물 30g을 준비한다.(3형)
상기한 추출 조성물에 L.delbruekil(A), L.acidophilus(B), L.casei(C), S.thermophilus(D) 또는 Yo-mix(E)의 5가지의 균을 각각 접종하여 발효시키는 과정을 수행한다.
또한 상기한 추출 조성물에 L.delbruekil(A), L.acidophilus(B), L.casei(C), S.thermophilus(D) 및 Yo-mix(E)의 5가지의 균을 모두 혼합한 균(F)을 접종하여 발효시키는 과정을 수행한다.
상기의 발효시킨 것을 각각 rotary vacuum evaporator에서 감압 농축하여 아래의 [표 0] 같은 1형, 2형 및 3형의 추출 조성물에 대한 상기의 L.delbruekil(A), L.acidophilus(B), L.casei(C), S.thermophilus(D) 또는 Yo-mix(E)의 5가지의 균을 각각 접종하여 발효시킨 발효사물탕을 15 종류 수득하였다.
접종균 1형 2형 3형
A 1형A 2형A 3형A
B 1형B 2형B 3형B
C 1형C 2형C 3형C
D 1형D 2형D 3형D
E 1형E 2형E 3형E
[수득한 발효사물탕의 종류 및 이름]
상기 15종류로 수득한 발효사물탕 농축된 용액을 freeze dryer로 동결 건조하였다. 동결 건조된 시료는 3차 증류수에 희석하여 실험에 사용하였다.
<실험>
상기의 실시 예에서 수득한 15종류로 수득한 발효사물탕에 대하여 1) 항산화 효능 및 2) 면역 효능을 측정하였다.
1. 항산화 효능 측정
(1) 총 페놀 함량 측정
시료 각각의 약재 1 ㎖에 50% Foiln-Ciocalteu's phenol reagent 0.5 ㎖를 가하여 실온에서 3분간 반응시켰다. 반응용액에 Na2CO3 포화용액 1 ㎖와 증류수 7.5 ㎖ 차례로 혼합하여 30분간 정치시킨 뒤, 12,000 rpm에서 10분간 원심분리 하였다. 상등액을 취해 96 well plate로 옮긴 뒤, 760 nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 gallic acid를 표준물질로 이용하여 작성한 검량 선에 따라 시료의 총 폴리페놀 함량을 구하였으며 측정단위로는 GAE (gallic acid equivalent)/g을 사용하였다.
각 시료에 존재하는 총 페놀 함량을 gallic acid를 표준물질로 하여 측정한 결과는 [표 1]과 같으며 Conrol(대조군)에 비하여 높은 페놀 함량을 포함하고 있어 매우 유의성 있는 결과를 보여주고 있다.
(여기서 Samultang-1은 1형을 의미하고, Samultang-2는 2형을 의미하고, Samultang-3은 3형을 의미하며,
Control은 1형, 2형 및 3형 추출 조성물에 균을 접종하지 않는 경우를 나타내는 것이며,
L.delbruekil, L.acidophilus, L.casei, S.thermophilus 또는 Yo-mix는 각각의 균을 1형, 2형 및 3형 추출 조성물에 접종하여 발효시켜서 수득한 것을 의미한다.
또한 본 발명에서 유의성 있는 결과를 보여준다는 것은 대조군에 비하여 효과가 더 높다는 것을 의미한다.
이하 동일한 의미로 해석된다)
[Total Phenol Contents of Extract of Samultang]
Samultang-1 Total phenolics (㎎/g)
Control 130.3±2.7
L.delbruekil 136.1±8.1
L.acidophilus 135.2±3.4
S.casei 141.7±6.7
S.thermophilus 132.3±4.3
Yo-mix 137.8±12.1
Samultang-2 Total phenolics (㎎/g)
Control 93.0±2.7
L.delbruekil 115.3±3.8
L.acidophilus 90.4±4.6
S.casei 122.3±5.7
S.thermophilus 115.4±5.9
Yo-mix 109.2±9.1
Samultang-3 Total phenolics (㎎/g)
Control 129.0±10.7
L.delbruekil 128.4±8.1
L.acidophilus 144.4±4.6
S.casei 127.5±7.5
S.thermophilus 133.0±2.9
Yo-mix 98.7±8.3
2) 총 플라보노이드 함량 측정
Flavonoid 함량은 Nieva Moreno 등의 방법을 응용하여 측정하였다. 각 샘플 0.1 ㎖와 80% 에탄올 0.9 ㎖를 혼합한 혼합물 0.5 ㎖에 10% aluminium niatate와 1M potassium acetate 0.1 ㎖ 그리고 80% 에탄올 4.3 ㎖을 가하여 실온에 40분 방치한 뒤 415 nm에서 흡광도를 측정하였으며, quercetin을 이용한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다.
각 시료에 존재하는 총 플라보노이드 함량을 quercetin을 표준물질로 하여 측정한 결과는 [표 2]와 같으며, Conrol(대조군)에 비하여 매우 유의성 있는 결과를 보여주고 있다.
[Total Flavonoid Contents of Extract of Samultang]
Samultang-1 Total phenolic contents (quercetin ㎍/㎖)
Control 35.5±2.9
L.delbruekil 38.5±3.8
L.acidophilus 38.7±1.0
S.casei 56.8±5.6
S.thermophilus 38.5±4.0
Yo-mix 36.9±0.6
Samultang-2 Total phenolic contents (quercetin ㎍/㎖)
Control 41.5±3.7
L.delbruekil 18.9±1.8
L.acidophilus 15.5±6.3
S.casei 32.7±8.2
S.thermophilus 19.3±0.7
Yo-mix 26.1±7.7
Samultang-3 Total phenolic contents (quercetin ㎍/㎖)
Control 37.1±8.2
L.delbruekil 22.2±2.2
L.acidophilus 37.0±5.3
S.casei 23.5±3.4
S.thermophilus 26.2±2.6
Yo-mix 36.1±7.1
3) DPPH 라디컬 소거능 측정
자유라디칼 소거 활성 시험은 안정한 자유라디칼 DPPH를 사용하는 방법이다. 에탄올에 용해시킨 0.2 mM의 DPPH 용액 150 ㎕와 시료 1, 10, 100, 1000 (㎍/㎖)의 농도로 100 ㎕를 혼합하여, 37℃, 암실에서 30분간 반응 시켰다. 반응 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료액 대신 증류수를 넣었으며, DPPH 용액대신 에탄올을 넣어 보정값을 얻었다. 자유라디칼 소거율은 아래의 (식 1)에 따라 계산하였다.
(식 1)
소거율(%) =[(대조군의 흡광도-시료 첨가군의 흡광도)/(대조군의 흡광도)]×100
각 시료의 DPPH 라디컬 소거에 미치는 영향은 [표 3]과 같으며, 대조군에 비하여 매우 유의성 있는 결과를 보여주고 있다.
Samultang-1 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
Control 1.6±0.8 1.5±1.1 15.2±.4 70.1±3.5
L.delbruekil 0.3±0.5 1.1±2.0 9.4±1.4 66.8±1.2
L.acidophilus 0.1±0.9 0.2±1.9 8.9±2.0 61.1±3.0
S.casei 0.0±0.5 1.8±0.8 13.2±1.3 64.9±0.9
S.thermophilus 0.0±1.0 0.2±2.4 11.5±2.1 62.8±1.9
Yo-mix 0.0±0.3 0.1±0.3 9.9±1.6 61.9±0.8
Samultang-2 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
Control 2.2±1.7 4.2±0.6 5.1±0.4 53.4±1.1
L.delbruekil 2.1±0.6 4.9±1.7 7.1±0.3 59.5±1.5
L.acidophilus 0.0±1.1 0.0±1.3 5.3±0.9 50.1±1.4
S.casei 2.9±2.3 5.5±2.0 11.9±0.6 66.4±1.0
S.thermophilus 0.0±0.7 0.0±0.7 6.4±0.9 59.0±0.4
Yo-mix 0.0±2.0 3.2±2.1 5.4±0.7 58.7±0.8
Samultang-3 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
Control 0.0±1.8 0.0±1.3 12.2±1.9 77.1±1.6
L.delbruekil 0.0±0.9 1.2±0.7 10.4±1.9 74.6±1.4
L.acidophilus 0.0±1.0 3.5±1.3 10.0±0.9 72.9±1.6
S.casei 0.0±0.7 1.6±3.8 12.7±2.4 82.9±2.8
S.thermophilus 0.0±5.7 0.0±2.7 10.6±5.6 73.4±6.6
Yo-mix 1.2±1.2 3.5±1.9 3.5±4.8 61.5±1.3
[DPPH Radical Scavenging Activity of Extracts from Samultang]
4) ABTS 라디컬 소거능 측정
ABTS assay 방법은 기존에 보고된 방법을 96 well plate에 맞게 수정하여 실시하였다. ABTS 용액은 7.4 mM ABTS (2,2-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6- sulfonic acid))와 2.6 mM potassium persulphate를 제조한 후, 암소에 하루 동안 방치하여 양이온 (ABTS+)을 형성시킨 다음 734 nm에서 흡광도를 측정하여 O.D. 값이 1.5 이하가 나오도록 희석하고, 희석된 ABTS+ 용액과 시료 1, 10, 100, 1000 (㎍/㎖)의 농도로 혼합하여 실온에서 10분간 반응시킨 후, 734 nm에서 흡광도를 측정하였다. 항산화능은 증류수를 대조군으로 하여 대조군에 대한 라디칼 소거능을 아래의 (식 2)와 같이 백분율로 나타내었다.
(식 2)
소거율(%) =[(1-시료 첨가군의 흡광도)/(대조군의 흡광도)]×100
각 시료의 DPPH 라디컬 소거에 미치는 영향은 [표 4]와 같으며, 대조군에 비하여 매우 유의성 있는 결과를 보여주고 있다.
[ABTS Radical Scavenging Activity of Extracts from Samultang]
Samultang-1 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
Control 0.8±0.3 2.4±0.3 10.6±2.2 78.2±9.6
L.delbruekil 0.0±0.6 0.1±1.0 8.0±1.5 65.4±4.1
L.acidophilus 1.1±0.3 2.3±0.5 9.9±0.4 70.3±7.4
S.casei 0.2±0.5 0.2±0.6 8.4±0.7 67.4±4.1
S.thermophilus 0.7±0.5 1.4±0.1 8.5±1.5 68.3±9.1
Yo-mix 0.0±0.9 0.5±0.6 7.5±2.1 82.6±2.8
Samultang-2 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
Control 0.9±1.1 1.2±1.1 5.8±1.5 46.7±8.2
L.delbruekil 1.8±0.2 0.0±0.5 7.2±0.8 62.6±10.7
L.acidophilus 0.7±0.2 1.0±1.1 13.4±0.9 44.1±5.4
S.casei 1.1±1.7 1.6±2.8 6.1±0.6 59.4±6.3
S.thermophilus 0.0±1.1 0.1±0.3 7.9±0.1 51.7±5.0
Yo-mix 0.0±0.9 0.0±0.5 5.1±1.6 55.7±4.4
Samultang-3 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 1000 ㎍/㎖
Control 2.6±1.4 2.3±0.8 14.6±1.4 78.5±6.4
L.delbruekil 0.0±1.1 0.0±1.0 9.9±1.8 68.2±1.4
L.acidophilus 2.4±1.7 2.5±0.6 10.4±0.7 67.1±3.0
S.casei 0.3±0.3 0.0±0.5 9.2±1.1 73.5±1.7
S.thermophilus 0.6±1.5 1.6±1.2 9.6±0.9 74.8±5.3
Yo-mix 0.3±0.2 1.6±1.3 6.0±1.5 56.5±3.0
5) ROS 생성에 미치는 영향
RAW 264.7 세포를 12 well plate에 2×105 cells/well이 되게 분주하였다. 24시간 동안 배양한 후, 시료 각각을 1, 10, 100 (㎍/㎖)의 농도와 LPS 1 ㎍/㎖의 농도를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 세포를 모두 걷어 원심분리 후 모은 세포를 차가운 PBS로 2회 세척하였다. 세포에 10 μM의 DCF-DA를 첨가하여 15분 동안 37℃ 인큐베이터에서 염색하였다. 염색 후 차가운 PBS를 넣어 세척한 후 1,200 rpm에서 5분간 원심 분리한 다음 상등액을 제거하고 다시 PBS 400 ㎕를 넣어 부유시켰다. 유세포 분석기를 이용하여 형광강도의 세기에 따른 ROS 생성 변화를 분석하였다.
각 시료의 ROS 생성에 미치는 영향은 [표 5]와 같으며, 대조군에 비하여 매우 유의성 있는 결과를 보여주고 있다.
[Effects of Extracts from Samultang on ROS Production in RAW 264.7 Cells]
Samultang-1 Normal Control 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 64.5±0.7 100.0±0.0 94.1±2.3 99.1±2.6 95.5±6.0
L.delbruekil 64.5±0.7 100.0±0.0 95.8±3.3 95.7±3.5 86.7±1.7*
L.acidophilus 64.5±0.7 100.0±0.0 90.6±2.5* 93.5±3.6 86.2±2.1*
S.casei 68.4±1.9 100.0±0.0 82.6±1.8* 101.6±1.9 110.0±2.4
S.thermophilus 68.4±1.9 100.0±0.0 110.3±3.1 94.2±4.4 103.9±2.8
Yo-mix 68.4±1.9 100.0±0.0 95.2±4.1 115.4±1.7 106.9±2.0
Samultang-2 Normal Control 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 65.9±5.0 100.0±0.0 102.0±1.9 100.8±0.1 115.1±6.5
L.delbruekil 65.9±5.0 100.0±0.0 110.2±7.2 103.4±6.4 107.3±6.8
L.acidophilus 65.9±5.0 100.0±0.0 103.3±6.5 102.6±6.2 100.5±9.0
S.casei 65.8±2.5 100.0±0.0 106.5±0.6 124.9±2.2 126.3±4.3
S.thermophilus 65.9±5.0 100.0±0.0 113.8±9.7 101.9±7.2 99.1±10.8
Yo-mix 65.8±2.5 100.0±0.0 109.9±7.8 114.9±2.9 125.9±6.1
Samultang-3 Normal Control 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 μg/m
Control 50.5±6.3 100.0±0.0 95.0±2.2 102.7±0.5 103.7±0.1
L.delbruekil 50.5±6.3 100.0±0.0 107.7±0.1 105.1±3.0 111.2±2.4
L.acidophilus 50.5±6.3 100.0±0.0 102.2±2.2 96.1±1.0 91.4±1.0*
S.casei 64.6±7.4 100.0±0.0 86.5±2.4* 93.0±0.8 84.5±2.6**
S.thermophilus 64.6±7.4 100.0±0.0 97.8±1.0 76.4±1.1*** 69.8±1.4***
Yo-mix 64.6±7.4 100.0±0.0 61.7±4.4*** 54.4±2.1*** 69.6±6.6***
*p<0.05, **p<0.01, and ***p<0.001
2. 면역 효능 측정
1) 면역 유관 사이토카인 측정
RAW 264.7 세포 내에서 면역 유관 사이토카인을 측정하기 위하여 luminex를 사용하였다. 12 well plate에 RAW 264.7 세포를 5×10
Figure pat00001
cell/well이 되게 분주하였다. 24시간 동안 배양한 후, 시료 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도와 LPS 1 ㎍/㎖의 농도를 처리하여 24시간 동안 배양기 (37℃, 5% CO
Figure pat00002
)에서 배양하였다. 원심분리 후 상청액으로 IL-1β, IL-6, TNF-α를 측정하였다.
1) IL-1β
각 시료의 IL-1β 생성에 미치는 영향은 [표 6]과 같으며 대조군에 비하여 매우 유의성 있는 결과를 보여주고 있다.
[Effects of Extracts from Samultang on IL-1β Production in RAW 264.7 Cells]
Samultang-1 Normal 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 17.4±3.4 11.9±2.0 18.5±2.0 28.9±2.7*
L.delbruekil 17.4±3.4 18.4±1.9 17.2±3.7 18.3±2.2
L.acidophilus 17.4±3.4 16.9±5.2 15.6±5.0 15.6±4.7
S.casei 17.4±3.4 20.6±5.4 21.0±2.1 17.6±3.6
S.thermophilus 17.4±3.4 11.4±2.5 16.1±4.7 20.6±3.5
Yo-mix 17.4±3.4 23.9±1.3 19.5±2.6 19.7±2.7
Samultang-2 Normal 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 17.4±3.4 15.1±2.7 15.6±3.8 11.9±2.1
L.delbruekil 17.4±3.4 14.7±2.9 21.9±3.2 19.5±3.6
L.acidophilus 17.4±3.4 27.2±2.5* 21.2±3.4 16.9±3.4
S.casei 17.4±3.4 16.6±3.8 19.3±2.7 17.1±4.2
S.thermophilus 17.4±3.4 4.2±0.4 8.3±0.2 5.9±2.4
Yo-mix 17.4±3.4 8.3±0.2 6.3±2.0 6.3±2.0
Samultang-3 Normal 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 17.4±3.4 3.0±1.8 3.5±1.0 3.0±1.5
L.delbruekil 17.4±3.4 2.8±0.4 2.0±0.7 3.2±2.9
L.acidophilus 17.4±3.4 1.3±1.0 3.4±3.0 7.2±2.6
S.casei 17.4±3.4 3.0±2.5 13.7±0.4 9.8±3.3
S.thermophilus 17.4±3.4 11.3±2.1 9.0±0.8 6.7±3.8
Yo-mix 17.4±3.4 4.2±2.5 7.0±1.4 3.9±1.5
*p<0.05
2) IL-6
각 시료의 IL-6 생성에 미치는 영향은 [Table 7]과 같으며, 대조군에 비하여 매우 유의성 있는 결과를 보여주고 있다.
[Effects of Extracts from Samultang on IL-6 Production in RAW 264.7 Cells]
Samultang-1 Normal 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 4.3±0.4 2.8±0.4 3.3±0.5 3.5±0.6
L.delbruekil 4.3±0.4 3.1±0.9 2.8±0.7 2.9±0.6
L.acidophilus 4.3±0.4 3.5±0.4 3.7±0.3 3.2±0.7
S.casei 4.3±0.4 3.9±0.8 3.0±0.8 3.0±1.0
S.thermophilus 4.3±0.4 2.3±0.2 2.3±0.1 4.5±0.6
Yo-mix 4.3±0.4 3.0±0.5 3.0±1.1 3.4±0.7
Samultang-2 Normal 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 4.3±0.4 2.9±0.5 2.2±0.4 2.3±0.5
L.delbruekil 4.3±0.4 1.8±0.8 4.4±0.9 3.2±0.3
L.acidophilus 4.3±0.4 3.6±0.6 4.0±0.4 2.5±0.6
S.casei 4.3±0.4 2.6±0.3 2.1±0.4 2.1±0.5
S.thermophilus 4.3±0.4 0.5±0.2 0.6±0.3 0.5±0.4
Yo-mix 4.3±0.4 0.4±0.5 0.4±0.1 0.8±0.1
Samultang-3 Normal 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 4.3±0.4 0.9±0.4 0.4±0.4 0.8±0.3
L.delbruekil 4.3±0.4 0.5±0.1 0.4±0.2 0.7±0.4
L.acidophilus 4.3±0.4 0.4±0.2 0.6±0.4 1.1±0.5
S.casei 4.3±0.4 0.8±0.0 1.1±0.5 1.0±0.3
S.thermophilus 4.3±0.4 1.2±0.4 0.8±0.3 0.7±0.1
Yo-mix 4.3±0.4 0.7±0.3 0.8±0.3 1.5±0.2
3) TNF -α
각 시료의 TNF-α 생성에 미치는 영향은 [표 8]과 같으며, 대조군에 비하여 매우 유의성 있는 결과를 보여주고 있다.
[Effects of Extracts from Samultang on TNF-α Production in RAW 264.7 Cells]
Samultang-1 Normal 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 107.6±14.9 95.2±7.9 111.8±6.8 250.4±27.3***
L.delbruekil 107.6±14.9 111.1±8.7 117.4±18.9 220.5±30.5**
L.acidophilus 107.6±14.9 104.4±3.5 108.2±5.2 155.8±15.4
S.casei 107.6±14.9 113.3±18.4 99.6±5.6 140.0±9.5
S.thermophilus 107.6±14.9 108.5±15.7 130.0±7.9 298.7±18.5***
Yo-mix 107.6±14.9 107.5±9.2 115.5±10.3 198.3±16.7*
Samultang-2 Normal 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 107.6±14.9 99.0±12.7 109.9±8.4 380.2±15.4***
L.delbruekil 107.6±14.9 92.7±7.9 121.5±7.9 336.6±21.6***
L.acidophilus 107.6±14.9 122.7±8.8 109.6±7.7 182.0±21.4*
S.casei 107.6±14.9 84.7±7.1 95.4±15.2 162.9±19.3*
S.thermophilus 107.6±14.9 61.5±18.5 83.1±32.1 321.9±25.6***
Yo-mix 107.6±14.9 66.4±21.6 63.4±20.7 236.1±13.6*
Samultang-3 Normal 1 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖
Control 107.6±14.9 76.1±2.2 67.6±4.8 174.4±20.9**
L.delbruekil 107.6±14.9 74.1±9.4 72.0±5.1 171.0±12.3**
L.acidophilus 107.6±14.9 79.2±5.4 91.8±10.3 91.2±26
S.casei 107.6±14.9 80.6±9.9 88.4±20.3 126.2±14.4
S.thermophilus 107.6±14.9 95.3±15.8 89.8±4.9 246.9±36.0***
Yo-mix 107.6±14.9 77.6±11.2 92.2±15.4 201.0±19.3***
*p<0.05, **p<0.01, and ***p<0.001
2) 세포독성 측정
RAW 264.7 세포는 96 well plates에 2×104 cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양 하였다. 배양 후 새로운 배양액으로 교체하였고 시료는 각각 1 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖의 농도로 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 10 ㎕의 WST solution을 첨가하여 배양기 (37℃, 5% CO2)에서 30분간 반응 시켰다. 반응 후 450 nm에서 흡광도의 변화를 측정하여 대조군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시 하였다.
각 시료의 세포독성은 [도 1]에서 보는 바와 같으며 Control(대조군)에 비하여 세포 독성이 현저히 낮아지는 특성을 보이고 있으며 매우 유의성 있는 결과를 보여주고 있다.
본 발명은 상기한 구성과 기능으로 이루어진 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법 및 그에 따른 발효사물탕을 제공한다.
본 발명은 약초를 이용하여 항산화 및 면역 효능이 있는 조성물을 제조, 생산, 가공, 유통 및 연구하는 산업에 매우 유용하다.

Claims (4)

  1. 숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정,
    상기의 추출한 조성물에 L.delbruekil, L.acidophilus, L.casei, S.thermophilus 또는/및 Yo-mix의 균을 접종시켜서 발효를 시키는 과정,
    상기한 발효 과정 후에 추출하는 과정을 수행하는 것을 포함하는 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정에서 숙지황 대신 백수오를 혼합하여 추출한 조성물로 준비하는 과정으로 대체하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    숙지황, 백작약, 천궁, 당귀를 혼합하여 추출한 조성물을 준비하는 과정에서 숙지황을 빼고 추출한 조성물로 준비하는 과정으로 대체하는 것을 특징으로 하는 항산화 및 면역 효능이 있는 발효사물탕 제조 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 발효사물탕 제조 방법으로 제조된 발효사물탕.
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