KR20170045244A - 림프절 b 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 car-t 림프구 - Google Patents

림프절 b 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 car-t 림프구 Download PDF

Info

Publication number
KR20170045244A
KR20170045244A KR1020177006518A KR20177006518A KR20170045244A KR 20170045244 A KR20170045244 A KR 20170045244A KR 1020177006518 A KR1020177006518 A KR 1020177006518A KR 20177006518 A KR20177006518 A KR 20177006518A KR 20170045244 A KR20170045244 A KR 20170045244A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
receptor
lymphocyte
skin
lymphocytes
cells
Prior art date
Application number
KR1020177006518A
Other languages
English (en)
Inventor
비타오 리앙
웨이 리우
티앙지앙 리
Original Assignee
안트로제네시스 코포레이션
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 안트로제네시스 코포레이션 filed Critical 안트로제네시스 코포레이션
Priority to KR1020227037473A priority Critical patent/KR20220150428A/ko
Publication of KR20170045244A publication Critical patent/KR20170045244A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001129—Molecules with a "CD" designation not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
    • A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70546—Integrin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7158—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for chemokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/10—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the structure of the chimeric antigen receptor [CAR]
    • A61K2239/22—Intracellular domain
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/51—Stomach
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/57—Skin; melanoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/38—Vitamins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/21—Chemokines, e.g. MIP-1, MIP-2, RANTES, MCP, PF-4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2312—Interleukin-12 (IL-12)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/385—Hormones with nuclear receptors of the family of the retinoic acid recptor, e.g. RAR, RXR; Peroxisome proliferator-activated receptor [PPAR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/515—CD3, T-cell receptor complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

한 구체예에서, 세포들, 가령, 특이적 해부학상 영역, 가령, 림프절의 B 세포 구역, 상기 위장관, 또는 상기 피부로 귀소하는 수용체를 세포가 발현시키도록 이 수용체들을 발현시키는 T 세포들을 본 명세서에서 제공한다. 질환, 이를 테면 암을 치료하기 위하여 이러한 세포들, 가령, T 림프구의 용도를 또한 제공한다.

Description

림프절 B 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 CAR-T 림프구{CAR-T LYMPHOCYTES ENGINEERED TO HOME TO LYMPH NODE B CELL ZONE, SKIN, OR GASTROINTESTINAL TRACT}
본 출원은 2014년 8월 12일자로 제출된 미국 가출원 번호 62/036,447을 우선권으로 주장하며, 이의 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
1. 분야
본 명세서는 면역학 분야에 관련된 것이며, 더욱 구체적으로 T 림프구 또는 다른 면역 세포들의 변형에 관련된다.
2. 배경
T 림프구는 종양-결부된 또는 종양-특이적 항원들이 포함된, 특이적 항원들을 인지하고, 이와 상호작용한다. T 림프구는 종양 세포들을 죽일 수 있기 때문에, 하나 또는 그 이상의 키메라 항원 수용체들을 발현시키기 위하여, 최근 25 년 동안 종양 세포에게 항원-특이적 T 림프구, 또는 유전적으로 변형된 T 림프구와 같은 T-림프구를 표적화시키는데 상당한 관심을 보여왔었다 (CARs; 가령, Eshhar, U.S. 특허 번호. 7,741,465; Eshhar, U.S. 특허 출원 공개 번호. 2012/0093842 참고). 그러나, CAR T 세포들을 신체의 필요 부위로 표적화시키는 것이 어렵다는 것을 고려해볼 때, CAR T 세포들의 귀소(homing)를 강화시키는 새로운 방법을 찾는 것이 바람직할 수 있다.
3. 요약
유전적으로 변형된 세포들, 예를 들면 면역 세포들, 이를 테면 T 림프구, 가령, 전술한 수용체를 발현시키는 세포가 해부학상 특정 구역, 특정 조직, 또는 특정 유형의 세포, 가령, 림프절, 위장관, 또는 피부의 B 세포 구역으로 귀소하게 만드는 수용체를 포함하는 인간 T 림프구가 본 명세서에서 제공된다. 특이적 구체예에서, 본 발명에서 제공되는 유전적으로 변형된 세포들은 T 림프구, 예를 들면, 원발성(primary) T 림프구이다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현시킨다. 임의의 특정 기전 또는 이론에 결부되는 것을 원하지는 않지만, 본 명세서의 유전적으로 변형된 세포들이 전술한 수용체를 발현시키는 세포를 특정 구역으로 귀소하게 만드는 수용체를 발현시킬 때, 이들은 고유의(native) 항원에 노출될 가능성이 더 크고, 이때 상기 세포들, 예를 들면, CAR를 발현시키는 세포들이 활성화되는 것으로 간주된다.
제 1 측면에 있어서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 귀소 수용체 및 CAR을 포함하는 원발성 T 림프구 또는 이러한 세포들의 집단이 본 명세서에서 제공되는데, 이들 세포들 또는 집단은 귀소 수용체 및 CAR을 발현시키도록 조작되었다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 귀소 수용체는 림프구에서 정상적 또는 내생적으로 발견되지 않는다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 귀소 수용체는 B 세포 구역 귀소 수용체이다. 특이적 구체예에서, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5이다. 더욱 특이적 구체예에서, 상기 귀소 수용체, 가령, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체를 포함하는 세포 또는 세포 집단은 추가적으로 T 세포 구역 귀소 수용체, 가령, CXCR7의 발현이 부족하거나, 또는 정상적 T 세포들과 비교하였을 때 전술한 T 세포 구역 귀소 수용체의 발현이 감소되었으며, 가령, 이들 세포 또는 세포들의 집단은 정상적 T 세포들보다 더 낮은 수준에서 T 세포 귀소 수용체를 발현시키도록 조작된다.
특정 구체예들에 있어서, 상기 귀소 수용체는 위장관 귀소 수용체이다. 특이적 구체예에서, 상기 위장관 귀소 수용체는 인테그린 α4β7 (림프구 파이어판(Peyer patch) 부착 분자로도 또한 알려짐)이다. 다른 특이적 구체예들에서, 상기 위장관 귀소 수용체는 CCR9 (C-C 케모킨 수용체 유형 9)이다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단은 가령, 하나 이상의, 가령, 제 2의 위장관 귀소 수용체를 발현시키도록 조작되었는데, 가령, 상기 원발성 T 림프구는 CCR9와 인테그린 α4β7을 포함한다.
한 구체예에서, 상기 세포, 가령, T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단은 비타민 A 대사산물 존재 하에서 활성화되거나, 확장되거나, 또는 활성화 및 확장되는 위장관 귀소 수용체를 발현시키도록 조작되었고, 이를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 비타민 A 대사산물은 레티노산이다.
특정 구체예들에 있어서, 상기 귀소 수용체는 피부 귀소 수용체이다. 특이적 구체예에서, 상기 피부 귀소 수용체는 CLA (피부의 림프구-결부된 항원 수용체)이다. 다른 특이적 구쳉예들에서, 상기 피부 귀소 수용체는 CCR4, CCR8, 또는 CCR10이다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단은 가령, 제2의 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 조작되었으며, 이를 포함한다. 여전히 다른 구체예들에 있어서, 상기 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단은 가령, 제3의 피부 귀소 수용체를 발현하며, 이를 포함한다. 여전히 다른 구체예들에 있어서, 상기 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단, 가령, 제4의 피부 귀소 수용체를 발현하며, 이를 포함한다. 다른 구체예들에 있어서, 상기 세포 또는 세포들의 집단은 가령, 2개 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들, 가령, 2개 또는 그 이상의 CLA, CCR4, CCR8, 및/또는 CCR10을 발현하며, 이를 포함한다.
한 구체예에서, 상기 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 상기 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단은 가령, 비타민 D 대사산물 존재 하에서 활성화되거나, 확장되거나, 또는 활성화 및 확장되는 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 조작되었고, 이를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 비타민 D 대사산물은 1,26-디히드록시콜레칼시페롤 (1,25(OH)2D3)이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 상기 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단은 존재 하에서 활성화되거나, 확장되거나, 또는 활성화 및 확장되었다. 특이적 구체예들에서, 상기 세포 , 가령, T 림프구, 예를 들면, 상기 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단은 IL-12 및 비타민 D 대사산물 모두 존재 하에서 활성화되거나, 확장되거나, 또는 활성화 및 확장되었다.
일부 구체예들에 있어서, 상기 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 상기 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단은 가령, 위장관 귀소 수용체 또는 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 조작되었으며, 이를 포함하고, 추가적으로 B 세포 귀소 수용체를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 B 세포 귀소 수용체는 CXCR5이다.
또다른 측면에서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법이 본 명세서에서 제공되는데, 이들은 귀소 수용체를 발현한다. 특정 구체예들에 있어서, 림프절의 B 세포 구역으로 귀소하는 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 상기 세포 또는 세포들의 집단이 림프절의 B 세포 구역으로 귀소하게 만드는데 충분한 양 또는 수준으로 B 세포 구역 귀소 수용체를 발현시키도록 상기 세포 또는 세포들의 집단을 조작하는 것을 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5이다.
특정 구체예들에 있어서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 위장관으로 귀소하는 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 상기 세포 또는 세포들의 집단이 위장관으로 귀소하게 만드는데 충분한 양 또는 수준으로 위장관 귀소 수용체를 발현시키도록 상기 세포 또는 세포들의 집단을 조작하는 것을 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 위장관 귀소 수용체는 인테그린 α4β7이다. 다른 특이적 구쳉예들에서, 상기 위장관 귀소 수용체는 CCR9이다. 특정 구체예들에 있어서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 추가적인 위장관 귀소 수용체를 발현시키도록, 가령, 추가적으로 제2의 위장관 귀소 수용체를 발현시키도록 상기 세포 또는 세포들의 집단을 조작하는 것을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 제공된 방법들 추가적으로 비타민 A 대사산물 존재 하에서 활성화되거나, 확장되거나, 또는 활성화 및 확장된다. 특이적 구체예들에서, 상기 비타민 A 대사산물은 레티노산이다.
특정 구체예들에 있어서, 특정 구체예들에 있어서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 피부로 귀소하는 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 상기 세포 또는 세포들의 집단이 피부로 귀소하게 만드는데 충분한 양 또는 수준으로 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 상기 세포 또는 세포들의 집단을 조작하는 것을 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 다른 특이적 구쳉예들에서, 상기 피부 귀소 수용체는 CCR4, CCR8, 또는 CCR10이다. 특정 구체예들에 있어서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 추가적인 피부 귀소 수용체를 발현시키도록, 가령, 추가적으로 제2의 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 상기 세포 또는 세포들의 집단을 조작하는 것을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 추가적으로 제3의 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 상기 세포 또는 세포들의 집단을 조작하는 것을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 추가적으로 제4의 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 상기 세포 또는 세포들의 집단을 조작하는 것을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 제공된 방법들 추가적으로 비타민 D 대사산물 존재 하에서 활성화되거나, 확장되거나, 또는 활성화 및 확장된다. 특이적 구체예들에서, 상기 비타민 D 대사산물은 1,26-디히드록시콜레칼시페롤 (1,25(OH)2D3)이다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 제공된 방법들 추가적으로 IL-12 존재 하에서 활성화되거나, 확장되거나, 또는 활성화 및 확장된다.
특정 구체예들에 있어서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 위장관 귀소 수용체 또는 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 조작되고, 그리고 추가적으로 B 세포 구역 귀소 수용체를 발현시키도록 조작된 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공한다. 특이적 구체예들에서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 위장관 귀소 수용체 또는 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 조작되고, 그리고 추가적으로 CXCR5를 발현시키도록 조작된 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공한다.
특정 구체예들에 있어서, 세포, 가령, T 림프구, 예를 들면, 위장관 귀소 수용체 또는 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 조작된 원발성 T 림프구, 또는 이러한 세포들의 집단을 만드는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 T 림프구에 키메라 항원 수용체 (CAR)가 인코드된 렌티바이러스 벡터를 투여하는 단계를 포함한다.
또다른 측면에서, 개인의 암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 (i) B 세포 구역 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5이다.
특정 구체예들에 있어서, 개인의 위암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 (i) 위장관 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 발현시키는, 이를 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 위장관 귀소 수용체는 인테그린 α4β7이다. 다른 특이적 구쳉예들에서, 상기 위장관 귀소 수용체는 CCR9이다. 특정 구체예들에 있어서, 개인의 위암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 추가적으로 가령, 제2의 위장관 귀소 수용체를 발현시키고, 이를 포함하는 T 림프구, 또는 Ty 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함한다.
특정 구체예들에 있어서, 개인의 피부 암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 (i) 피부 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 다른 특이적 구쳉예들에서, 상기 피부 귀소 수용체는 CCR4, CCR8, 또는 CCR10이다. 특정 구체예들에 있어서, 개인의 피부 암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 추가적으로 가령, 제2의 피부 귀소 수용체를 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 개인의 피부 암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 추가적으로 가령, 제3의 피부 귀소 수용체를 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 개인의 피부 암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 추가적으로 가령, 제4의 피부 귀소 수용체를 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함한다.
특정 구체예들에 있어서, 개인의 위암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 (i) 위장관 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 발현시키는, 이를 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함하고, 이때 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단은 B 세포 구역 귀소 수용체를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5이다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 T 림프구는 위장관 암 또는 종양 치료 방법에 용도가 있다.
특정 구체예들에 있어서, 개인의 피부 암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 (i) 피부 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 발현시키는, 이를 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함하고, 이때 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단은 B 세포 구역 귀소 수용체를 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5이다. 특정 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 T 림프구는 피부 암 또는 종양 치료 방법에 용도가 있다.
이때 특이적 구체예들에서, 개인의 암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 (i) 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR를 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함하며, 이때 CAR의 세포외 도메인은 Her2, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 알파-태아단백질 (AFP), 암배아 항원 (CEA), 암 항원-125 (CA-125), CA19-9, 칼레티닌, MUC-1, 상피 막 단백질 (EMA), 상피 종양 항원 (ETA), 티로시나제, 흑색종-결부된 항원 (MAGE), CD19, CD34, CD45, CD99, CD117, 크로모그라닌, 사이토케라틴, 데스민, 신경교 섬유성 산성 단백질 (GFAP), 육안적 낭포증 유체 단백질 (GCDFP-15), HMB-45 항원, 고분자량 흑색종-결부된 항원 (HMW-MAA), 단백질 멜란-A (T 림프구에 의해 인지되는 흑색종 항원; MART-1), myo-D1, 근육-특이적 액틴 (MSA), 신경미세섬유, 뉴런-특이적 에놀라제 (NSE), 태반 알칼리 포스포타제, 시냅토피시스(synaptophysis), 티로글로블린, 갑상선 전사 인자-1, 피루베이트 키나제 이소자임 유형 M2 (종양 M2-PK)의 이량체 형태, 비정상적 ras 단백질, 비정상적 p53 단백질, fuc-GM1, GM2 (종양성태아성 항원-면역원성-1; OFA-I-1); GD2 (OFA-I-2), GM3, GD3, 알파-액티닌-4, Bage-1, BCR-ABL, Bcr-Abl 융합 단백질, 베타-카테닌, CA 15-3 (CA 27.29\BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, Casp-8, cdc27, cdk4, cdkn2a, coa-1, dek-can 융합 단백질, EBNA, EF2, 엡스타인 바르(Epstein Barr) 바이러스 항원들, ETV6-AML1 융합 단백질, HLA-A2, HLA-A11, hsp70-2, KIAAO205, Mart2, Mum-1, 2, 및 3, neo-PAP, 미오신 류별 I, OS-9, pml-RARα 융합 단백질, PTPRK, 트리오세포스페이트 이소메라제, Gage 3,4,5,6,7, GnTV, Herv-K-mel, Lage-1, NA-88, NY-Eso-1/Lage-2, SP17, SSX-2, TRP2-Int2, , gp100 (Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2, MAGE-1, MAGE-3, RAGE, GAGE-1, GAGE-2, p15(58), RAGE, , SCP-1, Hom/Mel-40, PRAME, HER-2/neu, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, 인간 파필로마바이러스 (HPV) 항원들 E6 및 E7, TSP-180, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG-72-4, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, 13-카테닌, Mum-1, p16, TAGE, PSMA, CT7, 텔로메라제, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 13HCG, BCA225, BTAA, , CD68\KP1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB\70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90, TAAL6, TAG72, TLP, TPS, CD19, CD22, CD27, CD30, CD70, EGFRvIII (상피 성장 인자 변이체 III), 정자 단백질 17 (Sp17), 메소테린, PAP (전립선 산 포스포타제), 프로스테인, TARP (T 세포 수용체 감마 대체 판독 프레임 단백질), Trp-p8, STEAP1 (전립선 1의 6개-막통과 상피 항원), 인테그린 αvβ3 (CD61), 갈락틴, 및 Ral-B로부터 선택된 항원에 결합한다. 특이적 구체예들에서, 개인의 위장관 암 또는 종양을 치료하는 방법들이 본 명세서에서 제공되는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 (i) 위장관 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함하고, 이때 CAR의 세포외 도메인은 가령, 위장관 종양 또는 암에 의해 발현되는 것과 결부된 항원에 결합한다. 특이적 구체예들에서, 가령, 위장관 종양 또는 암에 의해 발현되는 것과 결부된 항원은 CEA, Her2, CA242, MUC1, CA125, 또는 CA19-9이다. 특이적 구체예들에서, 본 명세서에서 제공되는 T 림프구는 암 또는 종양 치료 방법에 용도가 있다.
다른 특이적 구쳉예들에서, 개인의 피부 암 또는 종양을 치료하는 방법을 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 이를 필요로 하는 개인에게 (i) 피부 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 포함하는 T 림프구, 또는 T 림프구의 집단을 투여하는 것을 포함하고, 이때 CAR의 세포외 도메인은 피부 종양 또는 암과 결부된 항원에 결합한다. 특이적 구체예들에서, 가령, 피부 종양 또는 암에 의해 발현되는 항원은 HMW-MAA, Her2, GD2, GD3, CEA, 또는 SPAG9이다. 다른 특이적 구쳉예들에서, 본 명세서에서 제공되는 T 림프구는 피부 암 또는 종양 치료 방법에 용도가 있다.
4. 상세한 설명
적응성 면역 반응은 림프절이 포함된, 제2의 림프 장기에서 개시된다. B 세포들과 T 세포들은 림프절의 겉 피질, 또는 여포에 위치한 ＂B 세포 구역＂이라고 불리는 림프절의 별개 영역과 여포의 주변 영역(곁피질이라고도 알려진)에 더욱 미만적으로 분포된 ＂T 세포 구역＂에 각각에 격리되어 있다. B 세포들과 T 세포들은 이들 각 구역으로 이들의 귀소를 허용하는 수용체들을 발현시키고, 따라서 이들은 항원에 노출될 수 있다. 무손상 항원들은 상기 B 세포 구역에 존재하는 반면, T 세포 구역에서 항원들은 항원-제시 세포들, 이를 테면 수지상 세포들에 의해 제시된다. 무손상 항원들, 이를 테면 종양 항원들은 또한 종양 부위에 존재한다.
유전적으로 변형된 세포들, 예를 들면 면역 세포들, 이를 테면 T 림프구, 가령, 전술한 수용체를 발현시키는 세포가 특정 해부학상 구역, 특정 조직, 또는 특정 유형의 세포, 가령, 림프절, 위장관, 또는 피부의 B 세포 구역으로 귀소하게 만드는 수용체를 포함하는 인간 T 림프구가 본 명세서에서 제공된다. 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 제공되는 상기 유전적으로 변형된 세포들은 T 림프구이다. 특정 구체예들에 있어서, 단락 4.4에서 설명된 바와 같이, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현시킨다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 CAR을 발현시키고, 그리고 가령, 귀소 수용체들을 발현시키는 세포들을 림프절의 B 세포 구역, 위장관, 또는 피부로 귀소하게 하는 하나 또는 그 이상의 귀소 수용체들을 내생적으로 발현시킨다. 임의의 특정 기전 또는 이론에 결부되는 것을 원하지는 않지만, 본 명세서의 유전적으로 변형된 세포들이 전술한 수용체를 발현시키는 세포를 특정 구역으로 귀소하게 만드는 수용체를 발현시킬 때, 이들은 고유의 항원에 노출될 가능성이 더 크고, 이때 상기 세포들, 예를 들면, CAR를 발현시키는 세포들이 활성화되는 것으로 간주된다.
4.1 B-세포 구역 귀소 수용체들을 포함하는 세포, 이를 만들고 이용하는 방법들
한 구체예에서, 림프절의 B 세포 구역, 가령, 림프절의 여포로 세포를 귀소하게 만드는 수용체를 발현시키도록 조작되어, 이를 포함하는 유전적으로 변형된 세포들, 예를 들면 면역 세포들, 이를 테면 T 림프구, 가령, 인간 T 림프구가 본 명세서에서 제공된다. 본 명세서에서 이러한 수용체는 ＂B 세포 구역 귀소 수용체＂로 지칭된다. 특이적 구체예들에서, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5, 예를 들면, 인간 CXCR5이다. GenBankTM 수탁 번호 NM_001716.4 및 NM_032966.2는 인간 CXCR5의 예시적인 뉴클레오티드 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NP_116743.1 및 NP_001707.1은 인간 CXCR5의 아미노산 서열을 제공한다. 인간 귀소 수용체들의 예시적인 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은 표 1에서 찾아볼 수 있다. 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 유전적으로 변형된 세포는 T 림프구이다. 특정 구체예들에 있어서, 단락 4.4에서 설명된 바와 같이, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 B 세포 구역 귀소 수용체를 발현시키고, 또한 CAR도 발현시킨다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 CAR을 발현시키고, 그리고 내생적으로 하나 또는 그 이상의 B 세포 구역 귀소 수용체들을 발현시킨다.
림프절의 B 세포 구역, 가령, 림프절의 여포로 귀소하는 유전적으로 조작된 T 림프구를 만드는 방법 또한 본 명세서에서 제공하는데, 이 방법은 B 세포 구역 귀소 수용체, 가령, CXCR5를 발현시키도록 T 림프구를 조작하는 단계를 포함하고, 이때 전술한 B 세포 구역 귀소 수용체는 상기 세포가 림프절의 B 세포 구역으로 귀소하도록 충분한 수준 또는 충분한 양으로 세포에 의해 발현된다. 일부 구체예들에 있어서, B 세포 구역 귀소 수용체를 발현시키도록 T 세포를 조작하는 단계는 상기 수용체(들)을 인코드하는 핵산 서열(들)을 포함하는 하나 또는 그 이상의 벡터를 상기 세포들로 도입시키는 단계를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CXCR5의 핵산 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, B 세포 구역 귀소 수용체를 발현시키도록 T 세포를 조작하는 단계는 당업자에 공지된 임의의 방법에 의해 실행된다.
B 세포 구역 귀소 수용체를 발현시키도록 T 림프구를 조작하는데 유용한 예시적인 핵산은 예를 들면, 단락 4.5에 공개된다.
개인의 암 또는 종양을 치료하는 방법들이 또한 본 명세서에서 제공되는데, 이 방법은 (i) 림프절의 B 세포 구역, 가령, 림프절의 여포로 전술한 수용체를 발현시키는 세포를 귀소하게 하는 수용체, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구의 치료요법적으로 효과량을 상기 개인에게 투여하는 것을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5이다. 특정 구체예들에 있어서, (i) 림프절의 B 세포 구역, 가령, 림프절의 여포로 전술한 수용체를 발현시키는 세포를 귀소하게 하는 수용체, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 상기 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구는 종양 세포들의 증식을 억제한다. 특정 구체예들에 있어서, (i) 림프절의 B 세포 구역, 가령, 림프절의 여포로 전술한 수용체를 발현시키는 세포를 귀소하게 하는 수용체, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 상기 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구는 종양의 성장을 억제한다. 특정 구체예들에 있어서, (i) 림프절의 B 세포 구역, 가령, 림프절의 여포로 전술한 수용체를 발현시키는 세포를 귀소하게 하는 수용체, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 상기 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구는 종양 세포들을 사멸시킨다. 특이적 구체예들에서, CAR의 세포외 도메인은 Her2, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 알파-태아단백질 (AFP), 암배아 항원 (CEA), 암 항원-125 (CA-125), CA19-9, 칼레티닌, MUC-1, 상피 막 단백질 (EMA), 상피 종양 항원 (ETA), 티로시나제, 흑색종-결부된 항원 (MAGE), CD19, CD34, CD45, CD99, CD117, 크로모그라닌, 사이토케라틴, 데스민, 신경교 섬유성 산성 단백질 (GFAP), 육안적 낭포증 유체 단백질 (GCDFP-15), HMB-45 항원, 고분자량 흑색종-결부된 항원 (HMW-MAA), 단백질 멜란-A (T 림프구에 의해 인지되는 흑색종 항원; MART-1), myo-D1, 근육-특이적 액틴 (MSA), 신경미세섬유, 뉴런-특이적 에놀라제 (NSE), 태반 알칼리 포스포타제, 시냅토피시스, 티로글로블린, 갑상선 전사 인자-1, 피루베이트 키나제 이소자임 유형 M2 (종양 M2-PK)의 이량체 형태, 비정상적 ras 단백질, 비정상적 p53 단백질, fuc-GM1, GM2 (종양성태아성 항원-면역원성-1; OFA-I-1); GD2 (OFA-I-2), GM3, GD3, 알파-액티닌-4, Bage-1, BCR-ABL, Bcr-Abl 융합 단백질, 베타-카테닌, CA 15-3 (CA 27.29\BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, Casp-8, cdc27, cdk4, cdkn2a, coa-1, dek-can 융합 단백질, EBNA, EF2, 엡스타인 바르(Epstein Barr) 바이러스 항원들, ETV6-AML1 융합 단백질, HLA-A2, HLA-A11, hsp70-2, KIAAO205, Mart2, Mum-1, 2, 및 3, neo-PAP, 미오신 류별 I, OS-9, pml-RARα 융합 단백질, PTPRK, 트리오세포스페이트 이소메라제, Gage 3,4,5,6,7, GnTV, Herv-K-mel, Lage-1, NA-88, NY-Eso-1/Lage-2, SP17, SSX-2, TRP2-Int2, , gp100 (Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2, MAGE-1, MAGE-3, RAGE, GAGE-1, GAGE-2, p15(58), RAGE, , SCP-1, Hom/Mel-40, PRAME, HER-2/neu, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, 인간 파필로마바이러스 (HPV) 항원들 E6 및 E7, TSP-180, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG-72-4, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, 13-카테닌, Mum-1, p16, TAGE, PSMA, CT7, 텔로메라제, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 13HCG, BCA225, BTAA, , CD68\KP1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB\70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90, TAAL6, TAG72, TLP, TPS, CD19, CD22, CD27, CD30, CD70, EGFRvIII (상피 성장 인자 변이체 III), 정자 단백질 17 (Sp17), 메소테린, PAP (전립선 산 포스포타제), 프로스테인, TARP (T 세포 수용체 감마 대체 판독 프레임 단백질), Trp-p8, STEAP1 (전립선 1의 6개-막통과 상피 항원), 인테그린 αvβ3 (CD61), 갈락틴, 및 Ral-B로부터 선택된 항원에 결합한다. 암 또는 종양을 치료하는 방법에 유용한 유전적으로 변형된 세포들을 또한 제공한다.
4.2. 위장관 귀소 수용체들을 포함하는 세포, 이를 만들고 이용하는 방법들
한 구체예에서, 상기 위장관, 가령, 위장관 장기, 조직, 또는 세포들로 전술한 수용체를 발현시키는 세포를 귀소하게 하는 수용체를 발현하도록 조작되어, 이를 포함하는 유전적으로 변형된 세포들, 예를 들면 면역 세포들, 이를 테면 T 림프구, 가령, 인간 T 림프구를 본 명세서에서 또한 제공한다. 상기 위장관으로 세포를 귀소하게 만드는 이러한 수용체는 본 명세서에서 ＂위장관 귀소 수용체＂로 지칭된다. 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 상기 유전적으로 변형된 세포들은 T 림프구이다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 위장관 귀소 수용체는 CCR9 또는 인테그린 α4β7, 예를 들면, 인간 CCR9 또는 인간 인테그린 α4β7이다. GenBankTM 수탁 번호 NM_031200.2 및 NM001256369.1은 인간 CCR9의 예시적인 뉴클레오티드 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NP_112477.1 및 NP_001243298.1은 인간 CCR9의 아미노산 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NM_000885.4 및 NM_000889.2는 인간 α4 및 인간 β7에 대한 각각의 예시적인 뉴클레오티드 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NP_000876.3 및 NP_000880.1은 인간 α4 및 인간 β7에 대한 각각의 예시적인 아미노산 서열을 제공한다. 인간 귀소 수용체들의 예시적인 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은 표 1에서 찾아볼 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제2의 위장관 귀소 수용체를 더 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 위장관 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 위장관 귀소 수용체는 CCR9이며, 제2의 위장관 귀소 수용체를 더 포함하며, 이때 제2의 위장관 귀소 수용체는 인테그린 α4β7이다. 다른 특이적 구쳉예들에서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 상기 위장관-귀소 수용체 CXCR3이다.
특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 위장관 귀소 수용체들을 포함하는 유전적으로 변형된 세포들은 비타민 A 대사산물 존재하에 확장되고, 활성화되거나, 또는 확장되고 그리고 활성화된다. 특이적 구체예들에서, 확장, 활성화, 또는 확장 및 활성화는 생체내, 시험관내, 또는 생체외에서 발생된다. 특이적 구체예들에서, 상기 비타민 A 대사산물은 레티노산이다. 특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 위장관 귀소 수용체들을 포함하는 유전적으로 변형된 세포들은 추가적으로 B 세포 구역 귀소 수용체를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5이다. 특정 구체예들에 있어서, 단락 4.4에서 설명된 바와 같이, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 위장관 구역 귀소 수용체를 발현시키고, 또한 CAR도 발현시킨다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 CAR을 발현시키고, 그리고 내생적으로 하나 또는 그 이상의 위장관 구역 귀소 수용체들을 발현시킨다.
하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 상기 위장관, 가령, 위장관 장기, 피부, 또는 조직으로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들을 포함하는 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구를 만드는 방법 또한 본 명세서에서 제공된다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 위장관으로 하나 또는 그 이상의 수용체들, 가령, CCR9 또는 인테그린 α4β7를 발현시키는 세포를 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들을 포함하는 T 림프구는 하나 또는 그 이상의 위장관 귀소 수용체들을 발현시키도록 T 림프구를 조작하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성된다. 일부 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 위장관 귀소 수용체들을 발현시키도록 T 세포를 조작하는 단계는 상기 수용체를 인코드하는 핵산 서열이 포함된 하나 또는 그 이상의 벡터를 상기 세포 안으도 도입시키는 것을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR9의 핵산 서열, 인간 인테그린 α4β7의 핵산 서열, 또는 이 둘 모두를 포함한다.
특정 구체예들에 있어서, 상기 위장관으로 귀소되는 T 림프구는 하나 또는 그 이상의 위장관 귀소 수용체들, 가령, CCR9 또는 α4β7의 발현을 유도하는 분자로 상기 세포를 처리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성된다. 특이적 구체예들에서, 상기 분자는 비타민 A이다.
특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 위장관으로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들을 포함하는 유전적으로 변형된 T 림프구를 만드는 방법은 상기 세포들을 확장시키는 단계를 포함하며, 이 단계는 비타민 A 대사산물의 존재 하에 실행된다. 특정 구체예들에 있어서, 위장관으로 귀소하는 하나 또는 그 이상의 수용체들을 포함하는 유전적으로 변형된 T 림프구를 만드는 방법은 상기 세포들을 활성화시키는 단계를 포함하며, 이 단계는 비타민 A 대사산물의 존재 하에 실행된다. 특정 구체예들에 있어서, 확장 및 활성화 단계는 비타민 A 대사산물의 존재하에 실행된다. 특정 구체예들에 있어서 상기 비타민 A 대사산물은 레티노산이다. 특정 구체예에서, 위장관 귀소 수용체를 발현시키도록 T 세포를 조작하는 단계는 당업자에 공지된 임의의 방법에 의해 실행된다.
위장관 귀소 수용체수용체를 발현시키도록 T 림프구를 조작하는데 유용한 예시적인 핵산은 예를 들면, 단락 4.5에 공개된다.
개인의 위장관 암 또는 종양을 치료하는 방법들이 또한 본 명세서에서 제공되는데, 이 방법은 (i) 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 위장관으로 귀소하게 하는 하나 또는 그 이상의 수용체들, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구의 치료요법적으로 효과량을 상기 개인에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 위장관 귀소 수용체는 CCR9 또는 α4β7이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제2의 위장관 귀소 수용체를 더 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 위장관 귀소 수용체를 포함하며, 이때 제1 위장관 귀소 수용체는 CCR9이며, 제2의 위장관 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 위장관 귀소 수용체는 α4β7이다. 특정 구체예들에 있어서, (i) 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 위장관으로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 상기 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구는 종양 세포들의 증식을 억제한다. 특정 구체예들에 있어서, (i) 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 위장관으로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 상기 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구는 종양의 성장을 억제한다. 특정 구체예들에 있어서, (i) 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 위장관으로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 상기 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구는 종양 세포들을 사멸시킨다. 특이적 구체예들에서, 상기 위장관 암 또는 종양은 간암, 위암, 식도암, 방광암, 직장암, 항문암, 또는 췌장암이다. 특정 구체예들에 있어서, CAR의 세포외 도메인은 위장관 암 또는 종양과 결부된 항원에 결합한다. 본 명세서에서 위장관 암 또는 종양을 치료하는 방법에 이용되는 유전적으로 변형된 세포들을 또한 제공한다.
4.3. 피부 귀소 수용체들을 포함하는 세포, 이를 만들고 이용하는 방법들
한 구체예에서, 피부, 가령, 피부 조직, 또는 피부 세포들로 귀소하게 만드는 수용체를 포함하는 유전적으로 변형된 세포들, 예를 들면 면역 세포들, 이를 테면 T 림프구, 가령, 인간 T 림프구를 본 명세서에서 제공한다. 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 상기 유전적으로 변형된 세포들은 T 림프구이다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 피부 귀소 수용체는 CCR10, CCR8, CCR4, 또는 CLA, 예를 들면, 인간 CCR10, 인간 CCR8, 인간 CCR4, 또는 인간 CLA이다. GenBankTM 수탁 번호 NM_016602.2 및 AF215981.1은 인간 CCR10의 예시적인 뉴클레오티드 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NP_057686.2 및 P46092.3은 인간 CCR10의 아미노산 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NM_005201.3 및 BC107159.1은 인간 CCR8의 예시적인 뉴클레오티드 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NP_005192.1 및 AAI07160.1은 인간 CCR8의 아미노산 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NM_005508.4는 인간 CCR4의 예시적인 뉴클레오티드 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 P51679.1은 인간 CCR4의 아미노산 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NM_001206609.1 및 NM_003006.4는 인간 CLA의 예시적인 뉴클레오티드 서열을 제공한다. GenBankTM 수탁 번호 NP_001193538.1 및 NP_002997.2는 인간 CLA아미노산 서열을 제공한다. 인간 귀소 수용체들의 예시적인 뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열은 표 1에서 찾아볼 수 있다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR4이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR4이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하며, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR4이며, 그리고 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제3의 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하며, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR8이고, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CLA, CCR4, 또는 CCR10이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR8이며, 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CLA, CCR4, 또는 CCR10이며, 그리고 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제3의 피부 귀소 수용체는 제2의 피부 귀소 수용체와는 별개의 것이며, 그리고 CLA, CCR4, 및 CCR10으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하며, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR4이며, 그리고 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제3의 피부 귀소 수용체는 CLA이고, 그리고 제4의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제4의 피부 귀소 수용체는 CCR8이다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 하나 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들을 포함한다. 다른 특이적 구쳉예들에서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 상기 피부-귀소 수용체 CCR6을 포함한다.
특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들이 포함된 유전적으로 변형된 세포들은 비타민 D 대사산물 존재하에 확장되고, 활성화되거나, 또는 확장되고 그리고 활성화된다. 특이적 구체예들에서, 확장, 활성화, 또는 확장 및 활성화는 생체내, 시험관내, 또는 생체외에서 발생된다. 특이적 구체예들에서, 상기 비타민 D 대사산물은 1,25-디히드록시콜레칼시페롤 (1,25(OH)2D3)이다. 특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들이 포함된 유전적으로 변형된 세포들은 IL-12 존재 하에 확장되고, 활성화되거나, 또는 확장되고 그리고 활성화된다. 특이적 구체예들에서, 확장, 활성화, 또는 확장 및 활성화는 생체내, 시험관내, 또는 생체외에서 발생된다. 더욱 특이적 구체예들에서, 하나 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들이 포함된 유전적으로 변형된 세포들은 비타민 D 대사산물 및 IL-12 존재하에 확장되고, 활성화되거나, 또는 확장되고 그리고 활성화된다. 특이적 구체예들에서, 확장, 활성화, 또는 확장 및 활성화는 생체내, 시험관내, 또는 생체외에서 발생된다. 특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들을 포함하는 유전적으로 변형된 세포들은 추가적으로 B 세포 구역 귀소 수용체를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5이다. 특정 구체예들에 있어서, 단락 4.4에서 설명된 바와 같이, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 피부 귀소 수용체를 발현시키고, 또한 CAR도 발현시킨다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 CAR을 발현시키고, 그리고 내생적으로 하나 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들을 발현시킨다.
피부, 가령, 피부 조직 또는 세포들로 귀소하는 하나 또는 그 이상의 수용체들을 포함하는 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구를 만드는 방법 또한 본 명세서에서 제공된다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 피부로 귀소하는 T 림프구는 피부 귀소 수용체, 가령, CCR4, CCR8, CCR10, 또는 CLA를 발현시키도록 T 림프구를 만드는 단계가 포함된 방법에 의해 생성된다. 일부 구체예들에 있어서, 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 T 림프구를 조작하는 단계는 수용체 핵산 서열(들), 가령, 이 수용체(들)이 인코드된 핵산 서열(들)이 포함된 하나 또는 그 이상의 벡터를 상기 세포로 도입시키는 것을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR10의 핵산 서열, 인간 CLA의 핵산 서열, 또는 이 둘 모두를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR4의 핵산 서열, 그리고 임의선택적으로 인간 CLA의 핵산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR4의 핵산 서열 및 인간 CCR10의 핵산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR10의 핵산 서열, 인간 CCR4의 핵산 서열, 그리고 인간 CLA의 핵산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR8의 핵산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR8의 핵산 서열, 그리고 임의선택적으로 인간 CLA의 핵산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR8의 핵산 서열 및 인간 CCR10의 핵산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR8의 핵산 서열, 인간 CCR4의 핵산 서열, 그리고 인간 CLA의 핵산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR8의 핵산 서열, 인간 CCR10의 핵산 서열, 그리고 인간 CLA의 핵산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR8의 핵산 서열, 인간 CCR4의 핵산 서열, 그리고 인간 CCR10의 핵산 서열을 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 벡터는 인간 CCR8의 핵산 서열, 인간 CCR4의 핵산 서열, CCR10의 핵산, 그리고 인간 CLA의 핵산 서열을 포함한다.
특정 구체예들에 있어서, 상기 피부로 귀소하는 세포들, 가령, T 림프구는 하나 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들, 가령, CCR4, CCR10, CCR8, 또는 CLA의 발현을 유도, 가령, 증가시키는 분자로 상기 세포들, 가령, T 림프구를 처리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성된다. 특이적 구체예들에서, 상기 분자는 비타민 D이다. 특정 구체예들에 있어서, 피부 귀소 수용체들의 발현 유도는 상기 세포들, 가령, T 림프구를 IL-12로 처리하는데, 가령, 전술한 세포들에 의해 하나 또는 그 이상의 CCR4, CCR8, CCR10, 또는 CLA 발현을 증가시키는데 충분한 양의 IL-12를 충분한 시간 동안 상기 세포에 접촉시킴으로써 도움을 받는다.
특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 피부로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들을 포함하는 유전적으로 변형된 T 림프구를 만드는 방법은 상기 세포들을 확장시키는 단계를 포함하며, 이 단계는 비타민 D 대사산물과 임의선택적으로 IL-12의 존재 하에 실행된다. 특정 구체예들에 있어서, 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 위장관으로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들을 포함하는 유전적으로 변형된 T 림프구를 만드는 방법은 상기 세포들을 활성화시키는 단계를 포함하며, 이 단계는 비타민 D 대사산물과 임의선택적으로 IL-12의 존재 하에 실행된다. 특정 구체예들에 있어서, 확장 및 활성화 단계는 모두 비타민 D 대사산물, 그리고, 임의선택적으로, IL-12의 존재 하에 실행된다. 특정 구체예들에 있어서 상기 비타민 D 대사산물은 1,25(OH)2D3.이다. 특정 구체예에서, 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 T 세포를 조작하는 단계는 당업자에 공지된 임의의 방법에 의해 실행된다.
피부 귀소 수용체수용체를 발현시키도록 T 림프구를 조작하는데 유용한 예시적인 핵산은 예를 들면, 단락 4.5에 공개된다.
개인의 피부 암 또는 종양을 치료하는 방법들이 또한 본 명세서에서 제공되는데, 이 방법은 (i) 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 피부로 귀소하게 하는 하나 또는 그 이상의 수용체들, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구의 치료요법적으로 효과량을 상기 개인에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 피부 귀소 수용체는 CCR10, CCR8, CCR4, 또는 CLA이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR4이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR8이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR4이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR4이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR8이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하고, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CLA이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR8이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하며, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR4이며, 그리고 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제3의 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하며, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR4이며, 그리고 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제3의 피부 귀소 수용체는 CCR8이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하며, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR8이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR4이며, 그리고 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제3의 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하며, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR8이며, 그리고 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제3의 피부 귀소 수용체는 CLA이다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제4의 피부 귀소 수용체를 더 포함한다. 일부 구체예들에 있어서, 상기 유전적으로 변형된 세포들은 제1 피부 귀소 수용체를 포함하며, 이때 제1 피부 귀소 수용체는 CCR10이며, 그리고 제2의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제2의 피부 귀소 수용체는 CCR4이며, 그리고 제3의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제3의 피부 귀소 수용체는 CLA이고, 그리고 제4의 피부 귀소 수용체를 더 포함하고, 이때 제4의 피부 귀소 수용체는 CCR8이다. 특정 구체예들에 있어서, (i) 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 피부로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 상기 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구는 종양 세포들의 증식을 억제한다. 특정 구체예들에 있어서, (i) 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 피부로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 상기 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구는 종양의 성장을 억제한다. 특정 구체예들에 있어서, (i) 하나 또는 그 이상의 수용체들을 발현시키는 세포를 피부로 귀소하게 만드는 하나 또는 그 이상의 수용체들, 그리고 (ii) CAR을 포함하는 상기 유전적으로 변형된 세포들, 가령, 인간 T 림프구는 종양 세포들을 사멸시킨다. 특이적 구체예들에서, 상기 피부 암 또는 종양은 흑색종, 편평 세포 암종, 또는 기저 세포 암종이다. 특정 구체예들에 있어서, CAR의 세포외 도메인은 피부 암 또는 종양과 결부된 항원에 결합한다. 본 명세서에서 피부 암 또는 종양을 치료하는 방법에 이용되는 유전적으로 변형된 세포들을 또한 제공한다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
4.4. 키메라 항원 수용체들
본 명세서에서 제공된 세포가 상기에서 설명된 귀소 수용체들이 포함된 T 림프구인 경우, 특정 구체예들에 있어서 이러한 T 림프구는 T 림프구를 항원으로 보내고, 그리고 T 림프구를 자극하여 이 항원을 도시하는 세포를 사멸시키도록 자극시키는 인공 막-결합된 단백질인 키메라 항원 수용체들 (CARs)을 포함한다. 가령, Eshhar, U.S. 특허 번호. 7,741,465 참고. 최소한으로, CAR은 항원, 가령, 세포 상의 항원에 결합하는 세포외 도메인, 막통과 도메인, 그리고 원발성 활성화 신호를 면역 세포로 전송하는 세포내 (세포질) 신호생성 도메인을 포함한다. CAR이 가령, T 림프구, 예를 들면, 원발성 T 림프구의 표면에서 발현되고, 그리고 CAR의 세포외 도메인이 항원에 결합하면, 다른 모든 조건이 충족된다면, 상기 세포내 신호생성 도메인은 만약 이 항원이 세포 표면에 존재하는 경우, 신호를 T 림프구에게 전달하여 이 항원을 발현시키는 세포가 활성화되고 및/또는 증식되며, 그리고, 사멸된다. T 림프구는 최대로 활성화되기 위하여 2개의 신호, 원발성 활성화 신호 및 공동자극 신호을 필요로 하기 때문에, 전형적으로 CARs는 또한 공동자극 도메인을 포함하여, 이 항원이 세포외 도메인에 결합함으로써 원발성 활성화 신호와 공동자극 신호 모두 전송하게 된다.
4.4.1. 일반적인 CAR 구조 세포내 도메인
특정 구체예들에 있어서, CAR의 세포내 도메인은 T 림프구의 표면에서 발현되는 세포내 도메인 또는 단백질의 모티프이거나, 또는 이를 포함하고, 그리고 전술한 T 림프구의 활성화 및/또는 증식을 촉발시킨다. 이러한 도메인 또는 모티프는 CAR의 세포외 부분에 항원 결합에 대한 응답으로 T 림프구의 활성화에 필수적인 원발성 항원-결합 신호를 전달할 수 있다. 전형적으로, 이 도메인 또는 모티프는 ITAM (면역수용체 티로신-기반된 활성화 모티프)이거나, 또는 이를 포함한다. CARs에 적합한 ITAM-함유된 폴리펩티드는 예를 들면, 제타 CD3 쇄 (CD3ξ) 또는 ITAM-함유된 이의 부분을 포함한다. 특이적 구체예에서, 상기 세포내 도메인은 CD3ξ 세포내 신호생성 도메인이다. 다른 특이적 구쳉예들에서, 상기 세포내 도메인은 림프구 수용체 쇄, TCR/CD3 복합 단백질, Fc 수용체 아단위 또는 IL-2 수용체 아단위로부터의 것이다.
특정 구체예들에 있어서, 상기 CAR은 가령, 폴리펩티드의 세포내 도메인의 일부로써 하나 또는 그 이상의 공동-자극 도메인 또는 모티프를 추가적으로 포함한다. 하나 또는 그 이상의 공동-자극 도메인 또는 모티프는 하나 또는 그 이상의 공동-자극 CD27 폴리펩티드 서열, 공동-자극 CD28 폴리펩티드 서열, 공동-자극 OX40 (CD134) 폴리펩티드 서열, 공동-자극 4-1BB (CD137) 폴리펩티드 서열, 또는 공동-자극 유도성 T-세포 공동자극 (ICOS) 폴리펩티드 서열, 또는 다른 공동자극 도메인 또는 모티프이거나 또는 이를 포함할 수 있다.
막통과 영역은 CD4 또는 CD8 분자의 기능적 CAR, 전형적으로 막통과 영역 안으로 통합될 수 있는 임의의 막통과 영역일 수 있다.
4.4.2. CAR 세포외 도메인
폴리펩티드의 세포외 도메인은 관심 항원에 결합한다. 본 명세서에서 설명된 임의의 폴리펩티드의 특정 구체예들에 있어서, 상기 세포외 도메인은 전술한 항원에 결합하는 수용체, 또는 수용체의 부분을 포함한다. 상기 세포외 도메인은 가령, 전술한 항원에 결합하는 수용체, 또는 수용체의 부분일 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 세포외 도메인은 항체 또는 이의 항원-결합 부분이거나, 또는 이를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 세포외 도메인은 단일-쇄 Fv 도메인이거나, 또는 이를 포함한다. 상기 단일-쇄 Fv 도메인은 예를 들면, 유연성 링커에 의해 V H 에 연계된 V L 을 포함할 수 있으며, 이때 전술한 V L 및 V H 는 전술한 항원에 결합하는 항체의 것이다.
상기 폴리펩티드의 세포외 도메인이 결합하는 항원은 임의의 관심 대상의 항원, 가령, 종양 세포 상에 있는 항원일 수 있다. 상기 종양 세포는 가령, 고형 종양에 있는 세포, 혈액 암의 세포일 수 있다. 상기 항원은 임의의 종양 또는 암 유형의 세포, 가령, 림프종, 폐암, 유방암, 전립선 암, 부신피질 암종, 갑상선 암종, 비인두 암종, 흑색종, 가령, 악성 흑색종, 피부 암종, 결장직장암종, 섬유상(desmoid) 종양, 섬유조직형성의 작은 둥근 세포 종양, 엔도크린 종양, Ewing 육종, 말초원시신경외배엽종양, 고형 생식 세포 종양, 간모세포종, 신경모세포종, 비-횡문근육종 연조직 육종, 골육종, 망막모세포종, 횡문근육종, Wilms 종양, 교모세포종, 점액종, 섬유종, 지방종, 또는 이와 유사한 것의 세포들 상에서 발현되는 임의의 항원일 수 있다. 더욱 특이적 구체예들에서, 전술한 림프종은 만성림프구백혈병 (작은 림프구성 림프종), B-세포 전림프구성 백혈병, 림프구형질세포성 림프종,
Figure pct00017
고분자글로불린혈증, 비장의 변연대 림프종, 혈장 세포 골수종, 형질세포종, 림프절외 변연대 B 세포 림프종, MALT 림프종, 결절성 변연대 B 세포 림프종, 소포 림프종, 외투 세포 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 종격 (흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 유출 림프종, Burkitt의 림프종, T 림프구 전림프구성 백혈병, T 림프구 거대 과립 림프구성 백혈병, 공격성 NK 세포 백혈병, 성인 T 림프구 백혈병/림프종, 림프절외 NK/T 림프구 림프종, 비강 유형, 소장병증-유형 T 림프구 림프종, 간비장의 T 림프구 림프종, 출아형 NK 세포 림프종, 균상식육종, Sezary 증후군, 원발성 피부의 역형성 거대 세포 림프종, 림프종모양 구진증, 맥관면역출아형 T 림프구 림프종, 말초 T 림프구 림프종 (불특정), 역형성 거대 세포 림프종, Hodgkin 림프종, 또는 비-Hodgkin 림프종일 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 상기 항원은 종양-결부된 항원 또는 종양-특이적 항원이다. 다양한 특이적 구체예들에 있어서, 상기 종양-결부된 항원 또는 종양-특이적 항원은 Her2, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 알파-태아단백질 (AFP), 암배아 항원 (CEA), 암 항원-125 (CA-125), CA19-9, 칼레티닌, MUC-1, 상피 막 단백질 (EMA), 상피 종양 항원 (ETA), 티로시나제, 흑색종-결부된 항원 (MAGE), CD19, CD34, CD45, CD99, CD117, 크로모그라닌, 사이토케라틴, 데스민, 신경교 섬유성 산성 단백질 (GFAP), 육안적 낭포증 유체 단백질 (GCDFP-15), HMB-45 항원, 고분자량 흑색종-결부된 항원 (HMW-MAA), 단백질 멜란-A (T 림프구에 의해 인지되는 흑색종 항원; MART-1), myo-D1, 근육-특이적 액틴 (MSA), 신경미세섬유, 뉴런-특이적 에놀라제 (NSE), 태반 알칼리 포스포타제, 시냅토피시스, 티로글로블린, 갑상선 전사 인자-1, 피루베이트 키나제 이소자임 유형 M2 (종양 M2-PK)의 이량체 형태, 비정상적 ras 단백질, 또는 비정상적 p53 단백질이나, 이에 국한되지 않는다.
특정 구체예들에 있어서, TAA 또는 TSA는 암/고환 (CT) 항원, 가령, BAGE, CAGE, CTAGE, FATE, GAGE, HCA661, HOM-TES-85, MAGEA, MAGEB, MAGEC, NA88, NY-ESO-1, NY-SAR-35, OY-TES-1, SPANXB1, SPA17, SSX, SYCP1, 또는 TPTE이다.
특정 다른 구체예들에 있어서, TAA 또는 TSA는 탄수화물 또는 강글리오시드, 가령, fuc-GM1, GM2 (종양성태아성 항원-면역원성-1; OFA-I-1); GD2 (OFA-I-2), GM3, GD3, 및 이와 유사한 것들이다.
특정 다른 구체예들에 있어서, TAA 또는 TSA는 알파-액티닌-4, Bage-1, BCR-ABL, Bcr-Abl 융합 단백질, 베타-카테닌, CA 125, CA 15-3 (CA 27.29\BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, Casp-8, cdc27, cdk4, cdkn2a, CEA, coa-1, dek-can 융합 단백질, EBNA, EF2, 엡스타인 바르 바이러스 항원들, ETV6-AML1 융합 단백질, HLA-A2, HLA-A11, hsp70-2, KIAAO205, Mart2, Mum-1, 2, 및 3, neo-PAP, 미오신 류별 I, OS-9, pml-RARα 융합 단백질, PTPRK, K-ras, N-ras, 트리오세포스페이트 이소메라제, Gage 3,4,5,6,7, GnTV, Herv-K-mel, Lage-1, NA-88, NY-Eso-1/Lage-2, SP17, SSX-2, TRP2-Int2, gp100 (Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2, MAGE-1, MAGE-3, RAGE, GAGE-1, GAGE-2, p15(58), RAGE, , SCP-1, Hom/Mel-40, PRAME, p53, H-Ras, HER-2/neu, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, 인간 파필로마바이러스 (HPV) 항원들 E6 및 E7, TSP-180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG-72-4, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, 13-카테닌, Mum-1, p16, TAGE, PSMA, CT7, 텔로메라제, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 13HCG, BCA225, BTAA, CD68\KP1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB\70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90, TAAL6, TAG72, TLP, TPS, CD19, CD22, CD27, CD30, CD70, GD2 (강글리오시드 G2), EGFRvIII (상피 성장 인자 변이체 III), 정자 단백질 17 (Sp17), 메소테린, PAP (전립선 산 포스포타제), 프로스테인, TARP (T 세포 수용체 감마 대체 판독 프레임 단백질), Trp-p8, STEAP1 (전립선 1의 6개-막통과 상피 항원), 비정상적 ras 단백질, 또는 비정상적 p53 단백질이다. 또다른 특이적 구체예에 있어서, 전술한 종양-결부된 항원 또는 종양-특이적 항원은 인테그린 αvβ3 (CD61), 갈락틴, K-Ras (V-Ki-ras2 Kirsten 렛 육종 바이러스성 종양유전자), 또는 Ral-B이다. 기타 종양-결부된 항원들 및 종양-특이적 항원들은 당분자에 공지되어 있다.
TSAs 및 TAAs에 결합하는 항체들 및 scFvs는 이들을 인코드하는 뉴클레오티스 서열들이 공지된 바와 같이, 당분야에 공지되어 있다.
특정 특이적 구체예들에 있어서, 상기 항원은 TSA 또는 TAA로 간주되지 않는 항원이지만, 그럼에도 불구하고 이는 종양 세포들, 또는 종양에 의해 야기되는 손상으로 간주된다. 특정 구체예들에 있어서, 예를 들면, 상기 항원은 가령, 성장 인자, 사이토킨 또는 인터루킨, 가령, 혈관신생(angiogenesis) 또는 맥관형성(vasculogenesis)과 결부된 성장 인자, 사이토킨, 또는 인터루킨이다. 이러한 성장 인자, 사이토킨, 또는 인터루킨은 가령, 맥관 내피 성장 인자 (VEGF), 염기성 섬유아세포 성장 인자 (bFGF), 혈소판-유도된 성장 인자 (PDGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 또는 인터루킨-8 (IL-8)을 포함할 수 있다. 종양은 종양에게 국소적으로 저산소 환경을 또한 창출할 수 있다. 이와 같은 경우, 다른 특이적 구쳉예들에서, 상기 항원은 저산소증-결부된 인자, 가령, HIF-1α, HIF-1β, HIF-2α, HIF-2β, HIF-3α, 또는 HIF-3β이다. 종양은 정상 조직에 국소화된 손상을 또한 야기시켜, 손상 결부된 분자 패턴 분자 (DAMPs; 알라민으로도 또한 공지됨)로 알려진 분자의 방출 원인이 된다. 특정의 다른 특이적 구쳉예들에서, 따라서, 상기 항원은 DAMP, 가령, 열 쇼크 단백질, 크로마틴-결부된 단백질 고이동성 집단 상자 1 (HMGB1), S100A8 (MRP8, 칼그라눌린 A), S100A9 (MRP14, 칼그라눌린 B), 혈청 아밀로이드 A (SAA)이거나, 또는 can be a 데옥시리보핵산, 아데노신 트리포스페이트, 요산, 또는 헤파린 술페이트일 수 있다.
암이 위장관 암, 예를 들면, 간암, 위암, 식도암, 담낭암, 결장직장암, 항문암, 또는 췌장암인 특이적 구체예에서, 상기 항원은 위장관 암에 특이적이거나 또는 이와 결부된 항원이다. 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 T 림프구는 위장관 귀소 수용체를 발현시키고, 위장관 암과 결부된 항원에 결합하는 세포외 도메인을 갖는 CAR을 또한 발현시킨다. 특이적 구체예에서, CAR의 세포외 도메인은 CEA에 결합한다. 다른 특이적 구쳉예들에서, CAR의 세포외 도메인은 Her2, CA242, MUC1, CA125, 또는 CA19-9에 결합한다.
암이 피부 암, 예를 들면, 흑색종, 편평 세포 암종, 또는 기저 세포 암종인 특이적 구체예에서, 상기 항원은 피부암에 특이적인 또는 이와 결부된 항원이다. 특이적 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 T 림프구는 피부 귀소 수용체를 발현시키고, 피부 암과 결부된 항원에 결합하는 세포외 도메인을 갖는 CAR을 또한 발현시킨다. 특이적 구체예에서, CAR의 세포외 도메인은 HMW-MAA에 결합한다. 다른 특이적 구쳉예들에서, CAR의 세포외 도메인은 Her2, GD2, GD3, CEA, 또는 SPAG9에 결합한다.
본 명세서에서 설명된 특정 구체예들에 있어서, 상기 세포외 도메인은 링커, 스페이스 또는 힌지 폴리펩티드 서열, 가령, CD28의 서열에 의해 전술한 막통과 도메인에 결합된다.
4.5. 단리된 핵산
한 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩티드 (가령, 키메라 수용체들과 귀소 수용체들)를 인코드하는 폴리뉴클레오티드 서열이 본 명세서에서 제공된다. 상기 폴리뉴클레오티드는 면역 세포들, 가령, T 림프구의 형질변환에 적합한 임의의 폴리뉴클레오티드 벡터 안에 포함될 수 있다. 예를 들면, T 림프구는 제1 및 제2의 폴리펩티드 (가령, 키메라 수용체들)를 인코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 합성 벡터, 렌티바이러스성 또는 레트로바이러스성 벡터, 독자적으로 복제하는 플라스미드, 바이러스 (가령, 레트로바이러스, 렌티바이러스, 아데노바이러스, 또는 헤르페스 바이러스), 또는 이와 유사한 것을 이용하여 형질변환될 수 있다. T 림프구의 형질변환에 적합한 렌티바이러스성 벡터는 U.S. 특허 번호. 5,994,136; 6,165,782; 6,428,953; 7,083,981; 그리고 7,250,299에서 설명된 가령, 렌티바이러스성 벡터에 설명된 것이 포함되나, 이에 국한되지 않으며, 이의 본 명세서는 전체가 참고자료에 편입된다. T 림프구의 형질변환에 적합한 HIV 벡터는 가령, U.S. 특허 번호. 5,665,577에서 설명된 벡터를 포함하나 이에 국한되지 않으며, 이의 본 명세서는 전체가 참고자료에 편입된다.
가령, T 림프구 안에 본 명세서에서 설명된 폴리펩티드의 생산에 유용한 핵산은 DNA, RNA, 또는 핵산 유사체를 포함한다. 핵산 유사체는 상기 염기 모이어티, 당 모이어티, 또는 포스페이트 기본골격에서 변형될 수 있으며, 그리고 데옥시티미딘, 5-메틸-2＇-데옥시시티딘을 대신한 데옥시우리딘 치환 또는 데옥시시티딘에 대한 5-브로모-2＇-데옥시시티딘 치환을 포함할 수 있다. 당 모이어티의 변형은 2＇-O-메틸 또는 2＇-O-알릴 당을 형성하기 위하여 리보스 당의 2＇ 히드록실의 변형을 포함할 수 있다. 데옥시리보스 포스페이트 기본골격은 몰포리노 핵산을 만들기 위하여 변형될 수 있고, 이때 각 염기 모이어티는 6 구성원의, 몰포리노 고리, 또는 펩티드 핵산에 연계되며, 이때 데옥시포스페이트 기본골격는 슈도펩티드 기본골격에 의해 대체되며 그리고 4개 염기는 유지된다. 예를 들면, Summerton and Weller (1997) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 7:187-195; 그리고 Hyrup et al. (1996) Bioorgan. Med. Chain. 4:5-23 참고. 추가적으로, 데옥시포스페이트 기본골격은 예를 들면, 포스포로티오에이트 또는 포스포로디티오에이트 기본골격, 포스포로아미디트, 또는 알킬 포스포트리에스테르 기본골격으로 대체될 수 있다.
본 명세서에서 제공된 폴리펩티드를 인코드하는 핵산은 벡터의 일부로써, 이를 테면, 가령, 발현 벡터의 일부분으로써 숙주 안으로 도입될 수 있다. 추가적으로, 본 명세서에서 제공된 폴리펩티드는 이러한 폴리펩티드를 인코드하는 핵산으로 숙주 세포를 형질감염시킴으로써 만들어질 수 있고, 이러한 핵산은 벡터의 일부분이 될 수 있다. 특이적 구체예에서, 상기 벡터는 본 명세서에서 제공된 폴리펩티드를 인코드하는 핵산의 발현을 지시할 수 있는 발현 벡터이다. 발현 벡터의 비-제한적인 예는 플라스미드 및 바이러스성 벡터, 이를 테면 복제 결함성 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-결부된 바이러스, Newcastle 질환 바이러스, 바치니바이러스 및 배큘로바이러스를 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 표준 분자 생물학 기술을 이용하여 본 명세서에서 제공된 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산을 발현 벡터 안으로 도입시킬 수 있다.
발현 벡터는 숙주 세포 또는 비-인간 대상에서 핵산 발현에 적합한 형태로 본 명세서에서 제공된 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산을 포함한다. 특이적 구체예에서, 발현 벡터는 발현에 이용되는 숙주 세포에 근거하여 선택된, 그리고 발현되는 핵산에 작용가능하도록 연계된 하나 또는 그 이상의 조절 서열을 포함한다. 발현 벡터 안에서, ＂작용가능하도록 연계된＂이란 이 핵산의 발현을 허용하는 방식으로(가령, 시험관내 전사/해독 시스템 또는 상기 벡터가 숙주 세포 안으로 도입될 때, 숙주 세포 안에서) 조절 서열(들)에 연계된다는 의미다 . 조절 서열은 프로모터, 인헨서 및 기타 발현 제어 요소들 (가령, 폴리아데닐화 신호)을 포함한다. 조절 서열은 많은 유형의 숙주 세포들 안에서 구성적 발현을 지시하는 것들, 특정 숙주 세포들 안에서 오직 핵산 (가령, 조직-특이적 조절 서열)만의 발현을 지시하는 것들, 그리고 특정 물질로 자극시 핵산의 발현을 지시하는 것들 (가령, 유도성 조절 서열)을 포함한다. 상기 발현 벡터의 기획은 이러한 인자들, 가령, 형질변환되는 숙주 세포의 선택, 바람직한 단백질의 발현 수준, 등에 따라 달라진다는 것은 당업자들이 인지할 것이다.
발현 벡터는 통상적인 형질변환 또는 형질감염 기술을 통하여 숙주 세포들 안으로 도입될 수 있다. 이러한 기술은 인산 칼슘 또는 염화칼슘 공동-침전, DEAE-덱스트란-중개된 형질감염, 리포펙션, 및 전기천공을 포함하나, 이에 국한되지 않는다. 숙주 세포들을 형질변환 또는 형질감염을 위한 적합한 방법은 Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning - A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Press, New York, 및 다른 실험 메뉴얼에서 찾아볼 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, 숙주 세포는 본 명세서에서 제공된 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산을 함유하는 발현 벡터로 일시적으로 형질감염된다. 다른 구체예들에 있어서, 숙주 세포는 본 명세서에서 제공된 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산을 함유하는 발현 벡터로 안정적으로 형질감염된다.
4.6. 세포들
상기 귀소 수용체들이 이용될 수 있는 세포들의 비-제한적인 예로는 자연 킬러 (NK) 세포들, 수지상 세포들 (DC), 태반 줄기 세포들 (가령, U.S. 특허 번호. 7,468,276; 8,057,788 및 8,202,703에서 공개된 태반 줄기 세포, 이의 내용은 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다), 제대혈, 태반 혈액, 말초 혈액, 골수, 치수(dental pulp), 지방 조직, 골연골 조직, 및 이와 유사한 것들; 배아 줄기 세포들, 배아 생식 세포들, 신경관 줄기 세포들, 신경 줄기 세포들, 및 분화된 세포들 (가령, 섬유모세포, 등)로부터 중간엽-유사 줄기 세포들을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.　 상기 귀소 수용체들은 가령, 동물 모델 실험 목적으로 종양 세포 계통에 또한 이용될 수 있다.
특이적 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩티드가 포함된 세포는 T 림프구이다. 본 명세서에서 제공된 폴리펩티드가 포함된 T 림프구는 순수(naive) T 림프구 또는 MHC-제한된 T 림프구일 수 있다. 특정 구체예들에 있어서, T 림프구는 종양 침윤성 림프구 (TILs)이다. 특정 구체예들에 있어서, T 림프구는 종양 생검으로부터 단리되었거나, 또는 종양 생검으로부터 단리된 T 림프구로부터 확장되었다. 특정 다른 구체예들에 있어서, T 림프구는 말초 혈액, 제대혈, 또는 림프로부터 단리되었거나 또는 이로부터 확장된 T 림프구로부터 확장된다.
특정 구체예들에 있어서, 본 발명에 이용된 면역 세포들, 가령, T 림프구는 T 림프구가 투여되는 개체 안에서 자생적이다. 특정 구체예들에 있어서, T 림프구는 T 림프구가 투여되는 개체 안에서 동종이계(allogeneic)이다. 동종이계 T 림프구가 T 림프구의 준비에 이용될 때, 개체 안에서 이식편-대-숙주 질환 (GVHD)의 가능성을 감소시키는 T 림프구를 선택하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 특정 구체예들에 있어서, T 림프구의 제조를 위하여 바이러스-특이적 T 림프구가 선택되며; 이러한 림프구는 임의의 수용자 항원들에 결합하는 고유의 능력이 상당히 감소될 것으로 기대되며, 따라서 임의의 수용자 항원에 의해 활성화될 것이다. 특정 구체예들에 있어서, 동종이계 T 림프구의 수용자-중개된 거부는 하나 또는 그 이상의 면역억제성 물질, 가령, 시클로스포린, 타크로리무스, 시로리무스, 시클로포스파미드, 또는 이와 유사한 것을 상기 숙주에게 공동-투여함으로써 감소될 수 있다.
한 구체예에서, T 림프구는 개체로부터 획득되고, 그 다음 임의선택적으로 확장되고, 그 다음 하나 또는 그 이상의 귀소 수용체들을 인코드하는 폴리뉴클레오티드, 그리고 임의선택적으로 하나 또는 그 이상의 CAR(들)을 인코드하는 하나 또는 그 이상의 폴리뉴클레오티드로 형질변환되고, 그리고 그 다음 임의선택적으로 확장된다. 또다른 구체예에서, T 림프구는 개체로부터 획득되고, 그 다음 임의선택적으로 확장되고, 그 다음 하나 또는 그 이상의 귀소 수용체들을 인코드하는 폴리뉴클레오티드, 그리고 임의선택적으로 하나 또는 그 이상의 CAR(들)을 인코드하는 하나 또는 그 이상의 폴리뉴클레오티드로 형질변환되고, 그리고 그 다음 임의선택적으로 확장된다. 세포들 함유된 임의의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포는 하나 또는 그 이상의 선택성 표지들을 이용하여 선별될 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 제공된 임의의 T 림프구는 고유의 TCR 단백질들, 가령, 고유의 TCR 복합체를 형성할 수 있는 TCR-α 및 TCR-β를 발현시키거나 또는 포함한다. 특정 다른 구체예들에 있어서, T 림프구 안에서 TCR-α 및 TCR-β를 인코드하는 고유 유전자 하나 또는 둘 모두는 비-기능적, 가령, 일부분 또는 모든 기능적 부분이 결손되고, 돌연변이가 삽입된다.
특정 구체예들에 있어서, 본 명세서에서 제공된 임의의 T 림프구는 종양 병소로부터 단리되며, 가령, 종양-침윤성 림프구이며; 이러한 T 림프구는 TSA 또는 TAA에 특이적인 것으로 예상된다.
T 림프구, 및 CD3ξ 신호생성 도메인과 CD28 공동-자극 도메인이 포함된 폴리펩티드를 포함하는 T 림프구는 CD3 및 CD28에 대한 항체, 가령, 비드에 부착된 또는 세포 배양 플레이트의 표면에 부착된 항체를 이용하여 확장될 수 있다; 가령, U.S. 특허 번호. 5,948,893; 6,534,055; 6,352,694; 6,692,964; 6,887,466; 그리고 6,905,681 참고.
특정 구체예들에 있어서, 상기 항원 및/또는 항체는 T 림프구가 배양된 배지에서 자유롭게 존재하거나, 이중 하나 또는 이들 모두는 고형 지지물, 가령, 조직 배양 플라스틱 표면, 비드, 또는 이와 유사한 것에 부착된다.
4.7. 귀소 수용체들이 포함된 세포를 이용하는 방법들
한 측면에서, 본 발명의 도체에서 설명된 바와 같이 상기 세포들, 가령, 하나 또는 그 이상의 귀소 수용체들과 임의선택적으로 하나 또는 그 이상의 CAR들이 포함된 T 림프구는 본 명세서에서 설명된 세포들에 의해 표적화되는 하나 또는 그이상의 유형 세포들, 가령, 사멸되는 하나 또는 그 이상의 유형 세포들을 보유한 개체를 치료하는데 이용된다. 특정 구체예들에 있어서, 세멸되는 세포들은 암 세포, 가령, 종양 세포이다. 특이적 구체예들에서, 상기 암 세포는 고형 종양 세포다. 특이적 구체예들에서, 상기 세포들은 림프종, 폐암, 유방암, 전립선 암, 부신피질 암종, 갑상선 암종, 비인두 암종, 흑색종, 가령, 악성 흑색종, 피부 암종, 결장직장암종, 섬유상(desmoid) 종양, 섬유조직형성의 작은 둥근 세포 종양, 엔도크린 종양, Ewing 육종, 말초원시신경외배엽종양, 고형 생식 세포 종양, 간모세포종, 신경모세포종, 비-횡문근육종 연조직 육종, 골육종, 망막모세포종, 횡문근육종, Wilms 종양, 교모세포종, 점액종, 섬유종, 지방종, 또는 이와 유사한 것의 세포들이다. 더욱 특이적 구체예들에서, 전술한 림프종은 만성림프구백혈병 (작은 림프구성 림프종), B-세포 전림프구성 백혈병, 림프구형질세포성 림프종,
Figure pct00018
고분자글로불린혈증, 비장의 변연대 림프종, 혈장 세포 골수종, 형질세포종, 림프절외 변연대 B 세포 림프종, MALT 림프종, 결절성 변연대 B 세포 림프종, 소포 림프종, 외투 세포 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 종격 (흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 유출 림프종, Burkitt의 림프종, T 림프구 전림프구성 백혈병, T 림프구 거대 과립 림프구성 백혈병, 공격성 NK 세포 백혈병, 성인 T 림프구 백혈병/림프종, 림프절외 NK/T 림프구 림프종, 비강 유형, 소장병증-유형 T 림프구 림프종, 간비장의 T 림프구 림프종, 출아형 NK 세포 림프종, 균상식육종, Sezary 증후군, 원발성 피부의 역형성 거대 세포 림프종, 림프종모양 구진증, 맥관면역출아형 T 림프구 림프종, 말초 T 림프구 림프종 (불특정), 역형성 거대 세포 림프종, Hodgkin 림프종, 또는 비-Hodgkin 림프종일 수 있다.
특정 구체예들에 있어서, 상기 변형된 세포들, 가령, 본 명세서에서 설명된 변형된 T 림프구는 이를 필요로 하는 대상에게 투여되며, 선택된 귀소 수용체들의 조합은 상기 세포들, 가령, T 림프구가 투여되는 환자 집단(또는 아집단)과 양립된다. 예를 들면, 귀소 수용체들의 조합은 환자에 존재하는 종양 또는 암의 유형에 근거하여 선택된다.
특이적 구체예들에서, 위장관 귀소 수용체들을 발현시키는 T 림프구는 위장관 종양 또는 암을 가진 환자들에게 투여된다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 위장관 종양 또는 암은 식도암, 위암, 간암, 담낭암, 췌장암, 결장직장암, 또는 항문암이다. 특이적 구체예에서, 전술한 T 세포들은 위장관 종양 또는 암과 결부된 항원에 결합하는 세포외 도메인을 갖는 CAR을 더 포함한다.
다른 특이적 구쳉예들에서, 피부 귀소 수용체들을 발현시키는 T 림프구는 피부 종양 또는 암을 가진 환자들에게 투여된다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 피부 종양 또는 암은 흑색종, 기저 세포 암종, 또는 편평 세포 암종이다. 특이적 구체예에서, 전술한 T 세포들은 피부 종양 또는 암과 결부된 항원에 결합하는 세포외 도메인을 갖는 CAR을 더 포함한다. 특이적 구체예들에서, 귀소 수용체를 포함하는 T 림프구는 상기 환자의 종양 또는 암 세포들에서 발현되는 항원에 결합하는 세포외 도메인을 갖는 CAR을 또한 포함한다.
이러한 세포들, 가령, T 림프구에 의해 치료가능한 질환 또는 장애를 가진 개체, 가령, 암을 갖는 개체에게 상기 세포들, 가령, T 림프구가 투여된 후, 이의 효과는 상기 질환 또는 장애의 진행 지표로 당업자에게 공지된, 특정 질환 또는 장애에 특이적인 하나 또는 그 이상의 기준에 의해 평가된다. 일반적으로 하나 또는 그 이상의 전술한 탐지가능한 기준이 가령, 질환 상태 값 또는 범위로부터 정상 값 또는 범위로 유의미적으로 이동될 때, 이러한 개체에게 상기 세포들의 투여는 효과적이다.
특정 구체예들에 있어서, 상기 세포들, 가령, T 림프구는 약학적으로-수용가능한 용액 안에서 제형화된다. 바람직한 구체예들에 있어서, 상기 약학적으로-수용가능한 용액은 살아있는 세포들의 운반에 적합하다. 특이적 구체예들에서, 상기 약학적으로-수용가능한 용액은 예를 들면, 염수 용액 (이를 테면 Ringer 용액), 젤라틴, 탄수화물 (가령, 락토스, 아밀로스, 전분, 또는 이와 유사한 것), 지방산 에스테르, 히드록시메틸셀룰로오스, 또는 폴리비닐 피롤리돈이다. 더욱 특이적 구체예들에서, 상기 약학적으로-수용가능한 용액은 상기 세포들이 추가되기 전, 살균된다. 다른 더욱 특이적 구체예들에서, 상기 약학적으로-수용가능한 용액은 보조 물질, 이를 테면 윤활제, 보존제, 안정제, 유화제, 삼투압에 영향을 주는 염, 완충액, 및 발색제와 혼합될 수 있다. 상기 세포들을 제형화하는데 이용하기에 적합한 약학 운반체는 당분야에 공지되어 있고, 그리고 예를 들면, WO 96/05309에 설명된다.
특정 구체예들에 있어서, 상기 세포들, 가령, T 림프구는 개별 투여분량으로 제형화되며, 이때 전술한 개별 투여분량은 최소한, 최대 또는 대략 1×104, 5×104, 1×105, 5×105, 1×106, 5×106, 1×107, 5×107, 1×108, 5×108, 1×109, 5×109, 1×1010, 5×1010, 또는 1×1011 T 림프구를 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 세포들, 가령, T 림프구는 개별 투여분량으로 제형화되며, 이때 전술한 개별 투여분량은 1×104 내지 5×104, 5×104 내지 1×105, 1×105 내지 5×105, 5×105 내지 1×106, 1×106 내지 5×106, 5×106 내지 1×107, 1×107 내지 5×107, 5×107 내지 1×108, 1×108 내지 5×108, 5×108 내지 1×109, 1×109 내지 5×109, 5×109 내지 1×1010, 1×1010 내지 5×1010, 또는 5×1010 내지 1×1011의 T 림프구 범위를 포함한다. 특정 구체예들에 있어서, 상기 세포들은 정맥내, 동맥내, 장관외, 근육내, 피하, 척추강내, 또는 안구내 투여용으로 제형화되거나 또는 특정 장기 또는 조직 안에 투여용으로 제형화된다.
5. 실시예들
5.1. 실시예 1: 뮤린 CXCR5 + CAR T 세포들의 생성 및 생체내 연구
T 림프구는 B6 Thy 1.1 마우스 비장으로부터 획득된다. 인간화된 마우스 항-인간 CEA-scFv 또는 항-인간 HER2-scFv 그리고 마우스 공동-투여 세포내 도메인과 CD3ξ이 포함된 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 렌티바이러스성 구조체가 생성된다. CAR T 세포들의 확인은 표현형 특징과 마우스 CXCL13 화학주성 분석을 통한 기능적 평가에 의해 실행된다.
생체내 분석을 위하여, 뮤린 CXCR5+ CAR T 세포들의 활성은 CXCR5- CAR T 세포들과 비-형질도입된 T 세포들의 활성과 비교된다. CEA+ 위장관 종양 (또는 HER2+ 유선 종양)을 자발적으로 발달시킬 수 있는 인간 CEA (또는 HER2)-형질도입된 마우스가 대조로 이용된다. 상기 세포들의 채택 전달은 하나 또는 그 이상의 투여분량의 정맥 투여에 의해 실행된다.
배출 림프절, (CEA 형질도입된 마우스의 경우 장간막 림프절 또는 HER2 형질도입된 마우스의 경우 액와림프절)에서 채택적으로 전달된 CAR T 세포 위치를 검사하기 위하여, 배출 림프절(draining lymph node) 면역조직화학을 통하여 판독 분석이 실행된다. 동물은 희생되고, 배출 림프절이 확인된다. 림프절은 곡면 집게로 잡아두고, 부착된 조직이 없도록 뽑아낸다. 림프절은 최적 컷팅 온도 화합물에 매립하고, 드라이아이스에서 동결시키고, 그 다음 -80℃에 보관된다. 생물조직부분(Cryosections)은 절단되고, 공기-건조되고, 아세톤에 고정된다. 상기 부분들은 실온에서 토끼 (또는 염소) 혈청으로 사전-항온처리되고, 그리고 후속적으로 원발성 항체 (렛 항-마우스 CD3, CD8, CD4, 비오티닐화된 마우스 항-마우스 Thy-1.1, 비오티닐화된 염소-항-인간 IgG (H+L)), 그리고 비오티닐화된 토끼 (또는 염소) 항-렛 IgG (마우스 흡착된)와 함께 후속적으로 항온처리되고, 이어서 아비딘-과산화효소 (또는 또는 형광색소) 접합물에 의해 항온처리된다. 그 다음 이 부붑들은 색 발달을 위하여 과산화효소 기질과 함께 항온처리된다. 면역조직화학 착색 결과 영상은 공촛점 현미경을 이용하여 획득된다. 기증자 T 세포들은 항-마우스 Thy1.1을 통하여 확인되며, CAR T 세포들은 항-인간 IgG로 확인된다.
상기 배출 림프절에서 상기 항원-특이적 면역 반응 확립을 검사하기 위하여, 배출 림프절로부터 단리된 CAR T 세포들의 유동 세포분석에 의해 판독 분석이 실행된다. 표면 표지들 Thy 1.1, 항-인간 IgG, CXCR5, CD69, 및 HLA-DR의 표현형 특징화가 실행된다. CD69는 활성화된 T 세포들의 표지다. HLA-DR은 항원-제공 세포들의 표지다. 기능적 평가는 분석 증식, Ki67 발현, 그리고 CAR T 세포들의 수치화에 의해 실행된다. 사이토킨 생산은 자극시 세포내 사이토킨 착색에 의해 평가된다.
종양 부위에서 CAR T 세포들의 종양 사멸 활성을 검사하기 위하여, 종양 용적 및 생존이 분석된다. 종양의 용적은 외부 칼리퍼에 의해 생체내에서 결정된다. 최대 종축 직경(길이) 및 최대 횡단 직경(폭)이 결정된다. 칼리퍼 측정에 기초된 종양 용적은 변형된 타원체 공식에 의해 산출된다: 종양 용적 = ½(길이 × 폭2).
5.2. 실시예 2: 인간 CXCR5 + CAR T 세포들의 생성
T 림프구는 인간 PBMCs로부터 획득된다. 인간화된 마우스 항-인간 CEA-scFv 또는 항-인간 HER2-scFv 그리고 인간 공동-투여 세포내 도메인과 CD3ξ이 포함된 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 렌티바이러스성 구조체가 생성되고, 그리고 CEA-특이적 CAR T 세포들의 집단을 만들기 위하여, T 세포들을 형질변환시키는데 이용된다. 상기 CAR T 세포들은 인간 CXCR5가 인코드된 핵산 서열이 포함된 렌티바이러스성 벡터로 추가 형질변환되고; CXCR5를 발현시키는 CAR T 세포들이 추가 연구용으로 선택된다. CAR T 세포들의 확인은 표현형 특징과 인간 CXCL13 화학주성 분석을 통한 기능적 평가에 의해 확인된다.
5.3. 실시예 3: 뮤린 위장관 귀소 CAR T 세포들의 생성 및 생체내 연구
T 림프구는 마우스 비장으로부터 획득된다. CAR T 세포들은 상기에서 설명된 바와 같이, 인간화된 마우스 항-인간 CEA-scFv 및 마우스 공동-투여 세포내 도메인과 CD3ξ가 포함된 CAR을 인코드하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 렌티바이러스성 구조체를 이용하여 생성된다. 상기 위장관 귀소 수용체들은 마우스 CCR9 및 α4β7 핵산 서열의 렌티바이러스성 형질도입에 의하여 도입된다. 레티노산 처리는 T 세포 활성화 동안 실행된다. CAR T 세포들의 확인은 표현형 특징과 마우스 TECK (흉선 발현된 케모킨, 또는 CCL25) 화학주성 분석 (Binger, et al., 2009, Experimental Cell Research 315:1468-79)을 통한 기능적 평가에 의해 실행된다. TECK에 대한 화학주석 반응은 96-다중웰 형태 화학주성 플레이트에서 5 μm 구멍-크기 폴리카보네이트 막을 이용하여 평가된다. 박탈 배지(deprivation medium)에서 함유된 TECK를 포함하는 하부 웰은 막에 의해 상부 웰과 분리된다. 박탈 배지 안에 T 세포들은 상부 웰로 접종되며, 37℃에서 20 시간동안 항온처리된다. 막의 상부에 남아있는 비-이동된 세포들이 제거된다. 이동된 세포들은 고정되고, 착색되고, 그리고 현미경에 의해 열거되거나, 또는 카운팅 비드와 함께 유동세포분석을 통하여 열거된다. 음성 대조는 케모킨 없이 박탈 배지로 실행되며, 양성 대조는 10% FBS가 함유된 세포 배양을 위한 배지에서 실행된다.
생체내 분석을 위하여, CEA+ 위장관 종양을 자발적으로 발달시킬 수 있는 인간 CEA-형질도입된 마우스가 대조로 이용된다. 상기 세포들의 채택 전달은 하나 또는 그 이상의 투여분량의 정맥 투여에 의해 실행된다.
확립된 위장관 종양에서 채택 전달된 CAR T 세포들의 위치를 검사하기 위하여, 위장관 면역면역화학에 의해 판독 분석이 실행된다. 동물은 희생되고, 상기 위장관은 제거된다. 소장은 침수 고정에 앞서 4-5개 부분으로 절단된다. 상기 부분들은 실온에서 토끼 (또는 염소) 혈청으로 사전-항온처리되고, 그리고 후속적으로 원발성 항체 (렛 항-마우스 CD3, 비오티닐화된 마우스 항-마우스 Thy-1.1, 비오티닐화된 염소-항-인간 IgG (H+L)), 그리고 비오티닐화된 토끼 (또는 염소) 항-렛 IgG (마우스 흡착된)와 함께 후속적으로 항온처리되고, 이어서 아비딘-과산화효소 (또는 또는 형광색소) 접합물에 의해 항온처리된다. 그 다음 이 부붑들은 색 발달을 위하여 과산화효소 기질과 함께 항온처리된다. 면역조직화학 착색 결과 영상은 현미경을 이용하여 획득된다. 기증자 T 세포들은 항-마우스 Thy1.1을 통하여 확인되며, CAR T 세포들은 항-인간 IgG로 확인된다. 상기 조직에서 이동된 CAR T 세포들의 탐지를 위한 위장관의 qRT-PCR 또는 PCR이 또한 실행된다.
상기 위장관에서 상기 항원-특이적 면역 반응 확립을 검사하기 위하여, 위장관으로부터 단리된 CAR T 세포들의 유동 세포분석에 의해 판독 분석이 실행된다. 표면 표지들 Thy 1.1, 항-인간 IgG, CCR9, α4β7, CD69, 및 HLA-DR의 표현형 특징화가 실행된다. 기능적 평가는 분석 증식, Ki67 발현, 그리고 CAR T 세포들의 수치화에 의해 실행된다. 사이토킨 생산은 자극시 세포내 사이토킨 착색에 의해 평가된다.
종양 부위에서 CAR T 세포들의 종양 사멸 활성을 검사하기 위하여, 종양 용적 및 생존이 분석된다.
5.4. 실시예 4: 인간 위장관 귀소 CAR T 세포들의 생성
T 림프구는 인간 PBMCs로부터 획득된다. CAR T 세포들의 생성은 인간화된 마우스 항-인간 CEA-scFv 및 마우스 공동-투여 세포내 도메인과 CD3ξ이 포함된 CAR을 이용하여 실행된다. 상기 CAR T 세포들은 인간 인간 CCR9 및 α4β7가 인코드된 핵산 서열이 포함된 렌티바이러스성 벡터로 추가 형질변환되고; 이들 두 단백질 모두를 발현시키는 CAR T 세포들이 추가 연구용으로 선택된다. 후속적으로 T 세포 활성화 동안, 상기 CAR T 세포에 레티노산이 접촉되고, CCR9 및 α4β7의 수준은 이들 두 단백질들을 발현하지만, 레티노산에 접촉되지 않은 CAR T 세포들의 수준과 비교하여 증가되었다. CAR T 세포들의 확인은 표현형 특징과 인간 TECK 화학주성 분석을 통한 기능적 평가에 의해 확인된다.
5.5. 실시예 5: 마우스 피부 귀소 CAR T 세포들의 생성 및 생체내 연구
T 림프구는 마우스 비장으로부터 획득된다. CAR T 세포들의 생성은 인간화된 마우스 항-인간 HMW-MAA-scFv 및 마우스 공동-투여 세포내 도메인과 CD3ξ이 포함된 CAR을 이용하여 실행된다. 상기 CAR T 세포들은 인간 인간 CCR10 또는 CCR4, 및/또는 CLA가 인코드된 핵산 서열이 포함된 렌티바이러스성 벡터로 추가 형질변환되고; 이들 두 단백질 모두를 발현시키는 CAR T 세포들이 추가 연구용으로 선택된다. CAR T 세포들의 확인은 표현형 특징과 마우스 CCL27 화학주성 분석을 통한 기능적 평가에 의해 실행된다. CCL27에 대한 화학주석 반응은 96-다중웰 형태 화학주성 플레이트에서 5 μm 구멍-크기 폴리카보네이트 막을 이용하여 평가된다. 박탈 배지에서 함유된 CCL27을 포함하는 하부 웰은 막에 의해 상부 웰과 분리된다. 박탈 배지 안에 T 세포들은 상부 웰로 접종되며, 37℃에서 20 시간동안 항온처리된다. 막의 상부에 남아있는 비-이동된 세포들이 제거된다. 이동된 세포들은 고정되고, 착색되고, 그리고 현미경에 의해 열거되거나, 또는 카운팅 비드와 함께 유동세포분석을 통하여 열거된다. 음성 대조는 케모킨 없이 박탈 배지로 실행되며, 양성 대조는 10% FBS가 함유된 세포 배양을 위한 배지에서 실행된다.
생체내 분석을 위하여, HMW-MAA를 발현시키는 인간 흑색종 세포계통으로 접목시킨 면역결핍 마우스는 대조로 이용된다. 세포들은 다중 투여분량의 정맥내 투여로 채택 전달을 통하여 투여된다.
확립된 흑색종에서 채택 전달된 CAR T 세포들의 위치를 검사하기 위하여, 면역면역화학에 의해 판독 분석이 실행된다. 기증자 T 세포들은 항-CD3을 통하여 확인되며, CAR T 세포들은 항-마우스 IgG로 확인된다. 상기 조직에서 이동된 CAR T 세포들의 탐지를 위한 위장관의 qRT-PCR 또는 PCR이 또한 실행된다.
상기 흑색종에서 상기 항원-특이적 면역 반응 확립을 검사하기 위하여, 흑색종으로부터 단리된 CAR T 세포들의 유동 세포분석에 의해 판독 분석이 실행된다. 표면 표지들 CD3, 항-마우스 IgG, CCR10 (또는 CCR4), CLA, CD69, 및 HLA-DR의 표현형 특징화가 실행된다. 기능적 평가는 분석 증식, Ki67 발현, 그리고 CAR T 세포들의 수치화에 의해 실행된다. 사이토킨 생산은 자극시 세포내 사이토킨 착색에 의해 평가된다.
종양 부위에서 CAR T 세포들의 종양 사멸 활성을 검사하기 위하여, 종양 용적 및 생존이 분석된다.
5.6. 실시예 6: 인간 피부 귀소 CAR T 세포들의 생성
T 림프구는 인간 PBMCs로부터 획득된다. CAR T 세포들의 생성은 인간화된 마우스 항-인간 HMW-MAA-scFv 및 인간 공동-투여 세포내 도메인과 CD3ξ이 포함된 CAR을 이용하여 실행된다. 상기 위장관 귀소 수용체들은 인간 CCR10 또는 CCR4, 및 CLA 핵산 서열의렌티바이러스성 형질도입에 의하여 도입된다. 1,25(OH)2VD3 및 IL-12로 처리는 T 세포 활성화 동안 실행된다. 실시예 5에서와 같이, CAR T 세포들의 확인은 표현형 특징과 인간 인간 CCL27 화학주성 분석을 통한 기능적 평가에 의해 확인된다.
5.7. 실시예 7: 위장관 종양의 치료
한 개체는 위장관 종양, 예를 들면, 샘종폴립 대장폴립증이 있다. 개체로부터 종양 세포들의 테스트로 이 종양 세포들이 CEA를 발현시킨다는 것을 결정한다. 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코드하는 뉴클레오티드 서열이 포함된 렌티바이러스성 벡터로 형질감염되고, 인간 CCR9 및/또는 α4β7 핵산 서열이 인코드된 뉴클레오티드 서열이 포함된 제2의 렌티바이러스성 벡터에 의해 형질감염된 개체로부터 T 림프구가 획득된다. 투여를 위하여 충분한 숫자를 확보하기 위하여 T 림프구는 레티노산 존재하에 CD3+CD28-피복된 비드를 이용하여 확장된다. 상기 키메라 수용체는 CEA에 결합하는 세포외 항원-결합 영역; 막통과 도메인; CD28의 세포내 공동-자극 도메인; 그리고 세포내 CD3ξ 도메인을 포함한다. 상기 개체에게 200 mL 염수 용액 안에 109 내지 1010의 T 림프구를 30분에 걸쳐 정맥 주입을 통하여 투여한다. 상기 개체에게서 상기 위장관 종양 단계 및 림프절로의 확산을 재-평가하고, 그리고 생검된 위장관 조직은 투여 후 30, 60, 및 90 일에 실행된다.
5.8. 실시예 8: 흑색종의 치료
개체는 흑색종이 있다. 개체로부터 종양 세포들의 테스트로 이 종양 세포들이 HMW-MAA를 발현시킨다는 것을 결정한다. 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코드하는 뉴클레오티드 서열이 포함된 렌티바이러스성 벡터로 형질감염되고, 인간 CCR10 (또는 CCR4) 및 CLA 핵산 서열이 인코드된 뉴클레오티드 서열이 포함된 제2의 렌티바이러스성 벡터에 의해 형질감염된 개체로부터 T 림프구가 획득된다. 투여를 위하여 충분한 숫자를 확보하기 위하여 T 림프구는 1,25(OH)2VD3 및 IL-12 존재하에 CD3+CD28-피복된 비드를 이용하여 확장된다. 상기 키메라 수용체는 HMW-MAA에 결합하는 세포외 항원-결합 영역; 막통과 도메인; CD28의 세포내 공동-자극 도메인; 그리고 세포내 CD3ξ 도메인을 포함한다. 상기 개체에게 200 mL 염수 용액 안에 109 내지 1010의 T 림프구를 30분에 걸쳐 정맥 주입을 통하여 투여한다. 상기 개체에게서 상기 흑색종 단계 및 림프절로의 확산을 재-평가하고, 그리고 생검된 피부 조직은 투여 후 30, 60, 및 90 일에 실행된다.
등가물(EQUIVALENTS)
본 발명은 본 명세서에서 설명된 특정 구체예들로 그 범위가 제한되지 않는다. 또한, 본 명세서에서 설명된 것들에 추가하여 전술한 설명으로부터 본 발명의 다양한 변형 또한 당업자에게 자명할 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 범위 안에 속하는 것으로 의도된다.
다양한 공개, 특허 및 특허 출원이 본 명세서에서 언급되며, 이의 내용은 이들의 전문이 참고자료에 편입된다.
본 발명의 T 림프구는 본 명세서에서 공개된 방법에 이용된다.

Claims (74)

  1. T 림프구에 의해 정성작으로 발현되지 않는 귀소 수용체, 그리고 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현시키는 T 림프구.
  2. 청구항 1에 있어서, 이때 상기 귀소 수용체는 B 세포 구역 귀소 수용체인, T 림프구.
  3. 청구항 2에 있어서, 이때 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5인, T 림프구.
  4. 청구항 1에 있어서, 이때 상기 귀소 수용체는 위장관 귀소 수용체인, T 림프구.
  5. 청구항 4에 있어서, 이때 상기 위장관 귀소 수용체는 α4β7인, T 림프구.
  6. 청구항 4에 있어서, 이때 상기 위장관 귀소 수용체는 CCR9인, T 림프구.
  7. 청구항 4에 있어서, 제2의 위장관 귀소 수용체를 포함하는, T 림프구.
  8. 청구항 4-7중 임의의 한 항에 있어서, 이때 T 림프구는 비타민 A 대사물질 존재 하에서 하나 또는 그 이상의 위장관 귀소 수용체들의 발현 증가를 야기하기 위한 충분한 양과 시간 동안 활성화되고, 확장되고 또는 활성화 및 확장되는, T 림프구.
  9. 청구항 8에 있어서, 이때 상기 비타민 A 대사산물은 레티노산인, T 림프구.
  10. 청구항 1에 있어서, 이때 상기 귀소 수용체는 피부 귀소 수용체인, T 림프구.
  11. 청구항 10에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CLA인, T 림프구.
  12. 청구항 10에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CCR4인, T 림프구.
  13. 청구항 10에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CCR10인, T 림프구.
  14. 청구항 10에 있어서, 제2의 피부 귀소 수용체를 포함하는, T 림프구.
  15. 청구항 14에 있어서, 제3의 피부 귀소 수용체를 포함하는, T 림프구.
  16. 청구항 10-15중 임의의 한 항에 있어서, 이때 T 림프구는 비타민 D 대사물질 존재하에 하나 또는 그 이상의 위장관 귀소 수용체들의 발현 증가를 야기하기 위한 충분한 양과 시간 동안 활성화되고, 확장되고 또는 활성화 및 확장되는, T 림프구.
  17. 청구항 16에 있어서, 이때 상기 비타민 D 대사산물은 1,26-디히드록시콜레칼시페롤 (1,25(OH)2D3)인, T 림프구.
  18. 청구항 10-17중 임의의 한 항에 있어서, 이때 T 림프구는 IL-12 존재하에 하나 또는 그 이상의 위장관 귀소 수용체들의 발현 증가를 야기하기 위한 충분한 양과 시간 동안 활성화되고, 확장되고 또는 활성화 및 확장되는, T 림프구.
  19. 청구항 4-18중 임의의 한 항에 있어서, B 세포 구역 귀소 수용체를 추가로 포함하는, T 림프구.
  20. 청구항 19에 있어서, 이때 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5인, T 림프구.
  21. T 림프구의 집단을 생성하는 방법에 있어서, 이때 다수의 전술한 T 림프구는 림프절의 B 세포 구역으로 귀소하며, 전술한 방법은 B 세포 구역 귀소 수용체를 발현시키도록 T 림프구의 집단을 조작하는 것을 포함하는, 방법.
  22. 청구항 21에 있어서, 이때 상기 수용체는 CXCR5인, 방법.
  23. T 림프구의 집단을 생성하는 방법에 있어서, 이때 다수의 전술한 T 림프구는 위장관으로 귀소하며, 전술한 방법은 위장관 귀소 수용체를 발현시키도록 T 림프구의 집단을 조작하는 것을 포함하는, 방법.
  24. 청구항 23에 있어서, 이때 상기 위장관 귀소 수용체는 α4β7인, 방법.
  25. 청구항 23에 있어서, 이때 상기 위장관 귀소 수용체는 CCR9인, 방법.
  26. 청구항 23에 있어서, 이때 T 림프구 집단은 제2의 위장관 귀소 수용체를 발현시키도록 조작된, 방법.
  27. 청구항 23-26중 임의의 하나에 있어서, 상기 방법은 T 림프구는 비타민 A 대사물질 존재 하에서 하나 또는 그 이상의 위장관 귀소 수용체들의 발현 증가를 야기하기 위한 충분한 양과 시간 동안 활성화되고, 확장되고 또는 활성화 및 확장되는 단계를 더 포함하는, 방법.
  28. 청구항 27에 있어서, 이때 상기 비타민 A 대사산물은 레티노산인, 방법.
  29. T 림프구의 집단을 생성하는 방법에 있어서, 이때 다수의 전술한 T 림프구는 피부 조직 또는 세포로 귀소하며, 전술한 방법은 피부 조직 또는 세포로 귀소하는 수용체를 발현시키도록 T 림프구의 집단을 조작하는 것을 포함하는, 방법.
  30. 청구항 29에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CLA인, 방법.
  31. 청구항 29에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CCR4인, 방법.
  32. 청구항 29에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CCR10인, 방법.
  33. 청구항 29에 있어서, 이때 T 림프구 집단은 제2의 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 조작된, 방법.
  34. 청구항 33에 있어서, 이때 T 림프구 집단은 제3의 피부 귀소 수용체를 발현시키도록 조작된, 방법.
  35. 청구항 29-34중 임의의 하나에 있어서, 상기 방법은 T 림프구는 비타민 D 대사물질 존재 하에서 하나 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들의 발현 증가를 야기하기 위한 충분한 양과 시간 동안 활성화되고, 확장되고 또는 활성화 및 확장되는 단계를 더 포함하는, 방법.
  36. 청구항 35에 있어서, 이때 상기 비타민 D 대사산물은 1,26-디히드록시콜레칼시페롤 (1,25(OH)2D3)인, 방법.
  37. 청구항 29-36중 임의의 하나에 있어서, 상기 방법은 T 림프구는 IL-12 존재 하에서 하나 또는 그 이상의 피부 귀소 수용체들의 발현 증가를 야기하기 위한 충분한 양과 시간 동안 활성화되고, 확장되고 또는 활성화 및 확장되는 단계를 더 포함하는, 방법.
  38. 청구항 23-37중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 방법은 B 세포 구역 귀소 수용체를 발현시키도록 T 림프구 집단을 조작하는 단계를 포함하는, 방법.
  39. 청구항 38에 있어서, 이때 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5인, 방법.
  40. 청구항 21-39중 임의의 항에 있어서, 이때 상기 방법은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코드하는 렌티바이러스성 벡터를 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  41. (i) B 세포 구역 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR이 포함된 T 림프구를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체의 암 또는 종양을 치료하는 방법.
  42. 청구항 41에 있어서, 이때 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5인, 방법.
  43. (i) 위장관 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR이 포함된 T 림프구를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체의 위장관 암 또는 종양을 치료하는 방법.
  44. 청구항 43에 있어서, 이때 상기 위장관 귀소 수용체는 α4β7인, 방법.
  45. 청구항 43에 있어서, 이때 상기 위장관 귀소 수용체는 CCR9인, 방법.
  46. 청구항 43에 있어서, 이때 T 림프구는 제2의 위장관 귀소 수용체를 포함하는, 방법.
  47. 청구항 43 내지 46중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CAR의 세포외 도메인은 위장관 암 또는 종양과 결부된 항원에 결합하는, 방법.
  48. (i) 피부 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR이 포함된 T 림프구를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체의 피부 암 또는 피부 종양을 치료하는 방법.
  49. 청구항 48에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CLA인, 방법.
  50. 청구항 48에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CCR4인, 방법.
  51. 청구항 48에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CCR10인, 방법.
  52. 청구항 48에 있어서, 이때 T 림프구는 제2의 피부 귀소 수용체를 포함하는, 방법.
  53. 청구항 52에 있어서, 이때 T 림프구는 제3의 피부 귀소 수용체를 포함하는, 방법.
  54. 청구항 48 내지 53중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CAR의 세포외 도메인은 피부 종양 또는 암과 결부된 항원에 결합하는, 방법.
  55. 청구항 41-46 또는 48-53중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CAR의 세포외 도메인은 Her2, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 알파-태아단백질 (AFP), 암배아 항원 (CEA), 암 항원-125 (CA-125), CA19-9, 칼레티닌, MUC-1, 상피 막 단백질 (EMA), 상피 종양 항원 (ETA), 티로시나제, 흑색종-결부된 항원 (MAGE), CD19, CD34, CD45, CD99, CD117, 크로모그라닌, 사이토케라틴, 데스민, 신경교 섬유성 산성 단백질 (GFAP), 육안적 낭포증 유체 단백질 (GCDFP-15), HMB-45 항원, 고분자량 흑색종-결부된 항원 (HMW-MAA), 단백질 멜란-A (T 림프구에 의해 인지되는 흑색종 항원; MART-1), myo-D1, 근육-특이적 액틴 (MSA), 신경미세섬유, 뉴런-특이적 에놀라제 (NSE), 태반 알칼리 포스포타제, 시냅토피시스, 티로글로블린, 갑상선 전사 인자-1, 피루베이트 키나제 이소자임 유형 M2 (종양 M2-PK)의 이량체 형태, 비정상적 ras 단백질, 비정상적 p53 단백질, fuc-GM1, GM2 (종양성태아성 항원-면역원성-1; OFA-I-1); GD2 (OFA-I-2), GM3, GD3, 알파-액티닌-4, Bage-1, BCR-ABL, Bcr-Abl 융합 단백질, 베타-카테닌, CA 15-3 (CA 27.29\BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, Casp-8, cdc27, cdk4, cdkn2a, coa-1, dek-can 융합 단백질, EBNA, EF2, 엡스타인 바르(Epstein Barr) 바이러스 항원들, ETV6-AML1 융합 단백질, HLA-A2, HLA-A11, hsp70-2, KIAAO205, Mart2, Mum-1, 2, 및 3, neo-PAP, 미오신 류별 I, OS-9, pml-RARα 융합 단백질, PTPRK, 트리오세포스페이트 이소메라제, Gage 3,4,5,6,7, GnTV, Herv-K-mel, Lage-1, NA-88, NY-Eso-1/Lage-2, SP17, SSX-2, TRP2-Int2, , gp100 (Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2, MAGE-1, MAGE-3, RAGE, GAGE-1, GAGE-2, p15(58), RAGE, , SCP-1, Hom/Mel-40, PRAME, HER-2/neu, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, 인간 파필로마바이러스 (HPV) 항원들 E6 및 E7, TSP-180, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG-72-4, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, 13-카테닌, Mum-1, p16, TAGE, PSMA, CT7, 텔로메라제, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 13HCG, BCA225, BTAA, , CD68\KP1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB\70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90, TAAL6, TAG72, TLP, TPS, CD19, CD22, CD27, CD30, CD70, EGFRvIII (상피 성장 인자 변이체 III), 정자 단백질 17 (Sp17), 메소테린, PAP (전립선 산 포스포타제), 프로스테인, TARP (T 세포 수용체 감마 대체 판독 프레임 단백질), Trp-p8, STEAP1 (전립선 1의 6개-막통과 상피 항원), 인테그린 αvβ3 (CD61), 갈락틴, 및 Ral-B로부터 선택된 항원에 결합하는, 방법.
  56. 청구항 43-54중 임의의 한 항에 있어서, 이때 T 림프구는 B 세포 구역 귀소 수용체를 더 포함하는, 방법.
  57. 청구항 56에 있어서, 이때 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5인, 방법.
  58. (i) B 세포 구역 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 포함하는 T 림프구를 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체의 암 또는 종양을 치료하는 방법에 용도를 갖는 T 림프구.
  59. 청구항 58에 있어서, 이때 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5인, T 림프구의 용도.
  60. (i) 위장관 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 포함하는 T 림프구로서, 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체의 위장관 암 또는 종양을 치료하는 방법에 사용되는 T 림프구.
  61. 청구항 60에 있어서, 이때 상기 위장관 귀소 수용체는 α4β7인, T 림프구.
  62. 청구항 60에 있어서, 이때 상기 위장관 귀소 수용체는 CCR9인, T 림프구.
  63. 청구항 60에 있어서, 이때 전술한 T 림프구는 제2의 위장관 귀소 수용체를 포함하는, T 림프구.
  64. 청구항 60 내지 63중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CAR의 세포외 도메인은 위장관 암 또는 종양과 결부된 항원에 결합하는, T 림프구.
  65. (i) 피부 귀소 수용체; 그리고 (ii) CAR을 포함하는 T 림프구로서, 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체의 피부 암 또는 피부 종양을 치료하는 방법에 사용되는 T 림프구.
  66. 청구항 65에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CLA인, T 림프구.
  67. 청구항 65에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CCR4인, T 림프구.
  68. 청구항 65에 있어서, 이때 상기 피부 귀소 수용체는 CCR10인, T 림프구.
  69. 청구항 65에 있어서, 이때 전술한 T 림프구는 제2의 피부 귀소 수용체를 포함하는, T 림프구.
  70. 청구항 69에 있어서, 이때 전술한 T 림프구는 제3의 피부 귀소 수용체를 포함하는, T 림프구.
  71. 청구항 65 내지 70중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CAR의 세포외 도메인은 피부 종양 또는 암과 결부된 항원에 결합하는, T 림프구.
  72. 청구항 58-63 또는 65-70중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CAR의 세포외 도메인은 Her2, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 알파-태아단백질 (AFP), 암배아 항원 (CEA), 암 항원-125 (CA-125), CA19-9, 칼레티닌, MUC-1, 상피 막 단백질 (EMA), 상피 종양 항원 (ETA), 티로시나제, 흑색종-결부된 항원 (MAGE), CD19, CD34, CD45, CD99, CD117, 크로모그라닌, 사이토케라틴, 데스민, 신경교 섬유성 산성 단백질 (GFAP), 육안적 낭포증 유체 단백질 (GCDFP-15), HMB-45 항원, 고분자량 흑색종-결부된 항원 (HMW-MAA), 단백질 멜란-A (T 림프구에 의해 인지되는 흑색종 항원; MART-1), myo-D1, 근육-특이적 액틴 (MSA), 신경미세섬유, 뉴런-특이적 에놀라제 (NSE), 태반 알칼리 포스포타제, 시냅토피시스, 티로글로블린, 갑상선 전사 인자-1, 피루베이트 키나제 이소자임 유형 M2 (종양 M2-PK)의 이량체 형태, 비정상적 ras 단백질, 비정상적 p53 단백질, fuc-GM1, GM2 (종양성태아성 항원-면역원성-1; OFA-I-1); GD2 (OFA-I-2), GM3, GD3, 알파-액티닌-4, Bage-1, BCR-ABL, Bcr-Abl 융합 단백질, 베타-카테닌, CA 15-3 (CA 27.29\BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, Casp-8, cdc27, cdk4, cdkn2a, coa-1, dek-can 융합 단백질, EBNA, EF2, 엡스타인 바르(Epstein Barr) 바이러스 항원들, ETV6-AML1 융합 단백질, HLA-A2, HLA-A11, hsp70-2, KIAAO205, Mart2, Mum-1, 2, 및 3, neo-PAP, 미오신 류별 I, OS-9, pml-RARα 융합 단백질, PTPRK, 트리오세포스페이트 이소메라제, Gage 3,4,5,6,7, GnTV, Herv-K-mel, Lage-1, NA-88, NY-Eso-1/Lage-2, SP17, SSX-2, TRP2-Int2, , gp100 (Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2, MAGE-1, MAGE-3, RAGE, GAGE-1, GAGE-2, p15(58), RAGE, , SCP-1, Hom/Mel-40, PRAME, HER-2/neu, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, 인간 파필로마바이러스 (HPV) 항원들 E6 및 E7, TSP-180, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG-72-4, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, 13-카테닌, Mum-1, p16, TAGE, PSMA, CT7, 텔로메라제, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 13HCG, BCA225, BTAA, , CD68\KP1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB\70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90, TAAL6, TAG72, TLP, TPS, CD19, CD22, CD27, CD30, CD70, EGFRvIII (상피 성장 인자 변이체 III), 정자 단백질 17 (Sp17), 메소테린, PAP (전립선 산 포스포타제), 프로스테인, TARP (T 세포 수용체 감마 대체 판독 프레임 단백질), Trp-p8, STEAP1 (전립선 1의 6개-막통과 상피 항원), 인테그린 αvβ3 (CD61), 갈락틴, 및 Ral-B로부터 선택된 항원에 결합하는, T 림프구.
  73. 청구항 60-71중 임의의 한 항에 있어서, 이때 T 림프구는 B 세포 구역 귀소 수용체를 더 포함하는, T 림프구.
  74. 청구항 73에 있어서, 이때 상기 B 세포 구역 귀소 수용체는 CXCR5인, T 림프구.
KR1020177006518A 2014-08-12 2015-08-11 림프절 b 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 car-t 림프구 KR20170045244A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020227037473A KR20220150428A (ko) 2014-08-12 2015-08-11 림프절 b 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 car-t 림프구

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462036447P 2014-08-12 2014-08-12
US62/036,447 2014-08-12
PCT/US2015/044611 WO2016025454A2 (en) 2014-08-12 2015-08-11 Car-t lymphocytes engineered to home to lymph node b cell zone, skin, or gastrointestinal tract

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227037473A Division KR20220150428A (ko) 2014-08-12 2015-08-11 림프절 b 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 car-t 림프구

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20170045244A true KR20170045244A (ko) 2017-04-26

Family

ID=55304746

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227037473A KR20220150428A (ko) 2014-08-12 2015-08-11 림프절 b 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 car-t 림프구
KR1020177006518A KR20170045244A (ko) 2014-08-12 2015-08-11 림프절 b 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 car-t 림프구

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227037473A KR20220150428A (ko) 2014-08-12 2015-08-11 림프절 b 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 car-t 림프구

Country Status (11)

Country Link
US (2) US20180080008A1 (ko)
EP (2) EP3194579A4 (ko)
JP (3) JP2017524365A (ko)
KR (2) KR20220150428A (ko)
CN (1) CN106795497A (ko)
AU (1) AU2015301921A1 (ko)
CA (1) CA2957929A1 (ko)
NZ (1) NZ729046A (ko)
SG (1) SG11201701111SA (ko)
TW (2) TW201614072A (ko)
WO (1) WO2016025454A2 (ko)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2013204922B2 (en) 2012-12-20 2015-05-14 Celgene Corporation Chimeric antigen receptors
US10238690B2 (en) 2013-03-15 2019-03-26 Celgene Corporation Modified T lymphocytes comprising an inducible caspase and methods of apoptosis
DK3298033T4 (da) 2015-05-18 2023-10-02 Tcr2 Therapeutics Inc Sammensætninger og medicinske anvendelser til tcr-reprogrammering under anvendelse af fusionsproteiner
US11499168B2 (en) * 2016-04-25 2022-11-15 Universitat Basel Allele editing and applications thereof
JP7109789B2 (ja) 2016-08-02 2022-08-01 ティーシーアール２ セラピューティクス インク． 融合タンパク質を使用したｔｃｒの再プログラム化のための組成物及び方法
CA3036745A1 (en) 2016-10-07 2018-04-12 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for t-cell receptors reprogramming using fusion proteins
EP4092049A1 (en) 2016-10-20 2022-11-23 Celgene Corporation Cereblon-based heterodimerizable chimeric antigen receptors
CA3044593A1 (en) 2016-11-22 2018-05-31 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
US20200054677A1 (en) * 2017-02-21 2020-02-20 The University Of Adelaide T cells expressing chemokine receptors for treating cancer
WO2018160622A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Endocyte, Inc. Compositions and methods for car t cell therapy
CA3062506A1 (en) 2017-05-12 2019-05-23 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology
US11166985B2 (en) 2017-05-12 2021-11-09 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology
CN107287207B (zh) * 2017-08-01 2019-02-26 上海优卡迪生物医药科技有限公司 一种用于体内示踪和人工清除car-t细胞的标签和应用
WO2019032699A1 (en) * 2017-08-09 2019-02-14 Eureka Therapeutics, Inc. CELLS EXPRESSING ANTIBODIES AND CELL SURFACE RECEPTORS
JP2020533981A (ja) * 2017-09-19 2020-11-26 中山大学 Ｃｘｃｒ５を過剰発現する間葉系幹細胞、その製造方法及び使用
CA3087706A1 (en) 2018-01-08 2019-07-11 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. Compositions and methods for targeting cd99-expressing cancers
US11779602B2 (en) 2018-01-22 2023-10-10 Endocyte, Inc. Methods of use for CAR T cells
BR112020022879A2 (pt) 2018-05-11 2021-02-23 Crispr Therapeutics Ag métodos e composições para tratamento de câncer
US20220403001A1 (en) 2018-06-12 2022-12-22 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy
KR20210033025A (ko) 2018-07-18 2021-03-25 암젠 인크 Steap1에 대한 키메라 수용체 및 이의 사용 방법
CN109666074B (zh) * 2018-12-29 2020-04-24 广州百暨基因科技有限公司 一种趋化因子受体cxcr5的用途
AU2020237633A1 (en) * 2019-03-08 2021-08-05 Klinikum Der Universität München CCR8 expressing lymphocytes for targeted tumor therapy
WO2020222176A1 (en) 2019-04-30 2020-11-05 Crispr Therapeutics Ag Allogeneic cell therapy of b cell malignancies using genetically engineered t cells targeting cd19

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5665577A (en) 1989-02-06 1997-09-09 Dana-Farber Cancer Institute Vectors containing HIV packaging sequences, packaging defective HIV vectors, and uses thereof
IL104570A0 (en) 1992-03-18 1993-05-13 Yeda Res & Dev Chimeric genes and cells transformed therewith
US8211422B2 (en) 1992-03-18 2012-07-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric receptor genes and cells transformed therewith
US6309853B1 (en) 1994-08-17 2001-10-30 The Rockfeller University Modulators of body weight, corresponding nucleic acids and proteins, and diagnostic and therapeutic uses thereof
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US5948893A (en) 1996-01-17 1999-09-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Murine hybridoma and antibody binding to CD28 receptor secreted by the hybridoma and method of using the antibody
US5994136A (en) 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
EP1171624B1 (en) 1999-04-29 2007-07-25 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
CA2438153C (en) 2001-02-14 2015-06-02 Anthrogenesis Corporation Post-partum mammalian placenta, its use and placental stem cells therefrom
MXPA05010140A (es) * 2003-03-24 2006-03-17 Tap Pharmaceutical Prod Inc Uso de agonistas de receptor de quimiocina para trasplante de celulas madre.
JP2005336062A (ja) * 2004-05-24 2005-12-08 Mitsubishi Chemicals Corp Ｔ細胞の腸組織へのホーミング誘導剤
DK2471903T3 (en) 2005-12-29 2018-05-28 Anthrogenesis Corp Placenta stem cell populations
WO2010003002A2 (en) * 2008-07-02 2010-01-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Modulation of follicular helper t cells
WO2013123061A1 (en) * 2012-02-13 2013-08-22 Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
AU2013274416B2 (en) * 2012-06-11 2019-07-04 Wilson Wolf Manufacturing, LLC Improved methods of cell culture for adoptive cell therapy
CN103483452B (zh) * 2012-06-12 2021-08-13 上海细胞治疗集团有限公司 双信号独立的嵌合抗原受体及其用途
US11471486B2 (en) * 2012-09-04 2022-10-18 Inven2 As Selective and controlled expansion of educated NK cells
US9393268B2 (en) * 2013-03-15 2016-07-19 Thomas Jefferson University Cell-based anti-cancer compositions with reduced toxicity and methods of making and using the same

Also Published As

Publication number Publication date
KR20220150428A (ko) 2022-11-10
TW201614072A (en) 2016-04-16
JP2023011593A (ja) 2023-01-24
CN106795497A (zh) 2017-05-31
CA2957929A1 (en) 2016-02-18
AU2015301921A1 (en) 2017-03-02
US20210254003A1 (en) 2021-08-19
WO2016025454A3 (en) 2016-04-07
EP3194579A4 (en) 2018-04-04
US20180080008A1 (en) 2018-03-22
SG11201701111SA (en) 2017-03-30
WO2016025454A2 (en) 2016-02-18
JP2017524365A (ja) 2017-08-31
EP3828267A2 (en) 2021-06-02
NZ729046A (en) 2022-07-29
TW202235619A (zh) 2022-09-16
JP2021035366A (ja) 2021-03-04
EP3194579A2 (en) 2017-07-26
EP3828267A3 (en) 2021-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20170045244A (ko) 림프절 b 세포 구역, 피부, 또는 위장관으로 귀소하도록 조작된 car-t 림프구
JP6888225B2 (ja) 改善された特異性を有する改変型ｔリンパ球
US11806365B2 (en) Modified T lymphocytes comprising a CD52 antibody-inducible caspase and methods of apoptosis
JP2023040152A (ja) Ｔリンパ球へのベクター導入効率の改善方法
AU2013204923A1 (en) Modified t lymphocytes having improved specificity
NZ712373B2 (en) Modified t lymphocytes

Legal Events

Date Code Title Description
AMND Amendment
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
X601 Decision of rejection after re-examination