KR20170038030A - 방광내 주입을 위한 생물학 제형 - Google Patents

Abstract

클로스트리듐 유도체 및 방광내 주입을 위한 투과제를 포함하는 약제학적 제형이 개시된다.

Description

방광내 주입을 위한 생물학 제형{FORMULATIONS OF BIOLOGICS FOR INTRAVESICAL INSTILLATION}

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 모두 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 2014년 7월 31일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/031,302호의 유익을 주장한다.

기술분야

본 개시내용은 클로스트리듐(clostridial) 유도체를 포함하는 약제학적 제형 및 이의 사용방법에 관한 것이다. 특히, 본 개시내용은 방광 주입을 위한 클로스트리듐 유도체를 함유하는 약제학적 제형에 관한 것이다.

신경독소 치료법, 특히 보툴리눔 독소는 과민성 방광(OAB) 및 배뇨근 과활동성과 같은 비뇨기과학적 병태를 포함하는 다양한 의학적 병태의 치료에서 사용되었다.

방광 장애, 예컨대 과민성 방광(OAB), 비뇨기과학적 병태와 관련된 배뇨근 과활동성을 치료하기 위한 보툴리눔 독소 치료법은 전형적으로 방광벽을 가로질러 그리고 방광 주위의 활력을 잃은 근조직 내의 주사에 의해 투여된다. 이 접근은 도 1에 나타낸 바와 같이 방광벽을 통해 약 30 내지 40회 주사를 투여하는 것을 필요로 한다. 주사에 의한 약제학적 투여는 국소화된 통증을 야기할 수 있고, 잠재적으로 환자를 혈액매개 질환에 노출시킨다. 대안의 투여 경로 중에서, 방광내 주입은 방광벽을 가로지름으로써 방광 내로 약물이 직접 전달되도록 허용한다.

방광벽은 대부분의 물질에 대해 불침투성이다. 도 2에 나타내는 바와 같이, 층상 요로상피는 3가지 세포층(우산세포, 중층세포 및 기저세포)으로 이루어진다. 기저 세포는 세포 분할을 통해 부분적으로 차별화된 중층 세포를 대체하는 생식 세포이다. 고도로 차별화된 그리고 분극화된 우산세포는 방광의 내강에 위치되며, 혈액과 소변 사이의 물질 이동에 대한 주된 물리적 장벽이다. 우산세포의 꼭지면 막은 유로플라킨으로 불리는 단백질로 이루어진 플라크로 뒤덮여 있으며, 꼭지면 막에 두꺼운 외관을 제공한다. 우산세포는 또한 상피를 통한 소변 및 거대분자의 세포간 이동을 제한하는 밀착연접을 함유한다.

따라서, 비경구 투여 대신 방광벽을 거쳐서 전달을 향상시킬 수 있는 약제학적 제형에 대한 필요가 남아있다.

일부 양상에서, 본 개시내용은 환자의 방광벽을 투과하고, 클로스트리듐 유도체의 생 활성을 유지하여 목적으로 하는 치료적 효과를 야기할 수 있는 적어도 1종의 투과제(permeabilizing agent) 및 클로스트리듐 유도체를 포함하는 방광내(방광) 투여를 위한 약제학적 제형을 제공한다.

일 양상에서, 본 개시내용은 치료적 유효량의 클로스트리듐 유도체 및 적어도 1종의 투과제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하되, 적어도 1종의 투과제는 클로스트리듐 유도체에 대한 방광벽의 투과성을 실질적으로 그리고 가역적으로 증가시키는 데 효과적인 양으로 존재한다.

다른 양상에서, 본 개시내용은 방광내 방광 투여에 적합한 약제학적 제형의 제조방법을 제공하며, 상기 방법은 적어도 1종의 투과제를 포함하는 용액을 제공하는 단계; 클로스트리듐 유도체를 포함하는 조성물에 용액을 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 약 50㎖ 내지 약 100㎖의 용액을 클로스트리듐 유도체에 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소이다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 약 1%(w/v) 키토산, 유사체 또는 유도체 및 약 0.1%(w/v) 트리톤(Triton)(상표명)X-100, 유사체 또는 유도체를 포함하는 수용액 약 50㎖ 내지 약 100㎖를 보툴리눔 독소 A형에 첨가하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 1%(w/v) 키토산 및 0.1%(w/v) 트리톤(상표명)X-100를 포함하는 수용액 50㎖를 약 100 단위 또는 200 단위의 동결건조 보툴리눔 독소 A형을 함유하는 바이알에 첨가하는 단계; 및 동결건조된 보툴리눔 독소 A형을 재수화시키기 위해 부드럽게 혼합하는 단계를 포함한다.

다른 양상에서, 본 약제학적 제형은 카테터에 대한 클로스트리듐 유도체의 흡수를 방지하거나 또는 최소화함으로써 클로스트리듐 유도체의 생체 이용가능성을 최대화하고, 장치 표면(주사기, 패치, 마이크로니들, 공학처리 주사기(바이오젝트(Bioject) 등), 관 및 용기를 전달한다.

다른 양상에 따르면, 본 개시내용은 환자에서 의학적 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 본 개시내용에 따라 제공된 약제학적 조성물을 투여함으로써, 의학적 장애를 치료하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 본 방법은 의학적 장애의 하나 이상의 증상을 완화시킨다. 일 실시형태에서, 의학적 장애는 신경성 특발성 방광 기능장애, 또는 방광 통증을 포함한다. 일부 양상에서, 치료적으로 효과적인 속도로 클로스트리듐 유도체에 대한 방광벽의 투과성을 실질적으로 증가시키는데 효과적인 양으로 존재하는 적어도 1종의 투과제 및 치료적 유효량의 클로스트리듐 유도체를 포함하는 약제학적 조성물을 환자의 방광내로 방광내 주입시키는 단계를 포함하는, 신경성 또는 특발성 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하기 위한 방법이 제공된다.

본 약제학적 제형 및 상기 요약한 방법의 다른 양상 및 변형이 또한 고안되며, 다음의 개시내용에 대해 고려할 때 더 완전하게 이해될 것이다.

도 1은 방광벽에 대한 보툴리눔 독소의 선행 기술 낭내 주사를 도시한 도면;
도 2A 내지 도 2C는 요로상피의 개략도를 도시한 도면, 여기서:
A) 요로상피는 3개의 세포층(기저, 중층 및 표피 우산세포)으로 이루어진다.
B) 우산세포는 꼭지면 막 상의 플라크 및 밀착연접에서 결합된 피브릴을 함유하는 소포의 세포질 네트워크 및 평활 기저막 상의 데스모솜(desmosome)을 나타낸다.
C) 내강에 대해 보이는 요로상피의 꼭지면 막은 플라크 및 힌지 영역을 나타낸다.
도 3은 시험 제형의 방광 내로의 침투 정도를 평가하기 위한 기준을 확립하는 그림 다이어그램을 도시한 도면; 절단된 SNAP 25는 시냅스 말단에서 보톡스(BOTOX)(등록상표) 활성의 바이오마커로서 사용되었고, 시냅토파이신 발현을 사용하여 시냅스 말단을 동정하고 절단된 SNAP 25 국소화의 특이성을 보장하였다. 침투 정도는 SNAP25-197 염색 정도와 상관 관계가 있었다;
도 4는 IHC 스코어가 "4" 및 "0"인 두 방광으로부터의 예시적인 면역조직화학 결과를 나타내는 그림 다이어그램을 도시한 도면; 절단된 SNAP 25는 시냅스 말단에서 보톡스(BOTOX)(등록상표) 활성의 바이오마커로서 사용되었고, 시냅토파이신 발현을 사용하여 시냅스 말단을 동정하고 절단된 SNAP 25 국소화의 특이성을 보장하였다;
도 5a 내지 도 5d는 주입 후 상이한 상태의 방광 조직을 나타내는 예시적인 현미경 사진을 도시한 도면; 및
도 6 은 본 개시내용의 양상에 따른 일부 예시적인 제형의 면역조직화학(IHC) 스코어를 나타내는 그래프를 도시한 도면.

보툴리눔 신경독소(BoNT), 예를 들어, BoNT/A, BoNT/B 등은 신경전달물질을 포함하는 신경분비 물질의 방출을 차단함으로써 신경계 상에서 작용한다. BoNT의 작용은 세포 표면 상의 수용체 분자에 대한 그의 결합에 의해 개시된다. 이어서, 얻어진 독소-수용체 복합체는 내포작용을 겪는다. 일단 세포 내부에 있다면, BoNT는 SNARE 단백질(가용성 N-에틸말레이미드-민감성 인자 부착 단백질 수용체)로서 알려진 세포로부터의 신경전달물질 도킹 및 방출을 초래하는 외포작용 특이적 단백질을 절단한다. 얻어진 일시적 화학적 신경차단은 신경근 접합부에서 운동 신경전달을 의학적으로 차단시켜 다양한 치료적 용도를 야기하는데 이용되었다.

본 개시내용의 양상은, 부분적으로, 클로스트리듐 유도체 및 적어도 하나의 투과제를 포함하는 방광내 방광 전달에 적합한 약제학적 제형을 제공한다.

일 양상에서, 본 개시내용은 치료적 유효량의 클로스트리듐 유도체 및 적어도 1종의 투과제를 포함하는 약제학적 조성물을 부분적으로 제공하되, 적어도 1종의 투과제는 클로스트리듐 유도체에 대한 방광벽의 투과성을 실질적으로 그리고 가역적으로 증가시키는 데 효과적인 양으로 존재한다. 일부 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소이다. 일부 실시형태에서, 적어도 1종의 투과제는 계면활성제 및 점막접착제를 포함한다.

정의

본 명세서에서 사용된 바와 같은, 이하에 제시하는 단어 또는 용어는 다음의 정의를 가진다:

본 명세서에 사용되는 바와 같은 "약" 또는 "대략"은 당업자에 의해 결정된 바와 같은 특정 값에 대한 허용 가능한 오차 범위 내를 의미하며, 값이 측정되거나 또는 결정되는 방법(즉, 측정 시스템의 제한)에 부분적으로 의존할 것이다. 예를 들어, "약"은 당업계에서 실행 당 1 이내 또는 1 초과의 표준 편차를 의미할 수 있다. 특정 값이 적용 및 청구범위에 기재되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, 용어 "약"은 특정 값에 대한 허용 가능한 오차 범위 내를 의미한다.

"활성 약제학적 성분"(API)은 대상체 또는 환자에게 투여 시 또는 투여 후 효과를 발휘하는 성분을 의미한다. API는, 예를 들어, 천연 또는 재조합, 클로스트리듐 신경독소, 예를 들어, 보툴리눔 독소, 재조합 변형 독소, 이들의 단편, TEM 및 이들의 조합을 포함할 수 있다.

"투여", 또는 "투여하기 위한"은 대상체 또는 대안적으로 약제학적 조성물을 받는 대상체에게 약제학적 조성물을 제공하는(즉, 투여하는) 단계를 의미한다. 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물은 다양한 방법에 의해 국소로 투여될 수 있다. 예를 들어, 근육내, 진피내, 피하 투여, 척추강내 투여, 복강내 투여, 국소(경피), 주입 및 (예를 들어, 서방출 장치, 예컨대 중합체 이식물 또는 미니삼투 펌프의) 이식은 모두 적절한 투여 경로일 수 있다.

"완화시키는"은 통증, 두통, 과민성 근육, 또는 병태 또는 장애의 임의의 증상 또는 원인의 발생 감소를 의미한다. 따라서, 완화시키는 것은 일부 감소, 상당한 감소, 거의 전체의 감소 및 전체 감소를 포함한다.

"무 동물성 단백질"은 혈액 유래, 혈액 풀링 및 기타 동물 유래 생성물 또는 화합물이 없음을 의미한다. "동물"은 포유류(예컨대, 인간), 조류, 파충류, 어류, 곤충, 거미 또는 기타 동물 종을 의미한다. "동물"은 박테리아와 같은 미생물을 제외한다. 따라서, 무 동물성 단백질 약제학적 조성물은 보툴리눔 신경독소, 재조합 변형 독소, 또는 TEM을 포함할 수 있다. 예를 들어, "무 동물성 단백질" 약제학적 조성물은 혈청 유래 알부민, 젤라틴 및 기타 동물 유래 단백질, 예컨대 면역글로불린이 실질적으로 없거나 또는 본질적으로 없거나 또는 완전히 없는 약제학적 조성물을 의미한다. 무 동물성 단백질 약제학적 조성물의 예는 보툴리눔 독소, TEM, 또는 (활성 성분으로서)재조합 변형 독소 및 안정제 또는 부형제로서 적합한 다당류를 포함하거나 또는 이루어진 약제학적 조성물이다.

"생물학적 활성"은 살아있는 물질에 대한 약물의 유리한 또는 유해한 효과를 기재한다. 약물이 복잡한 화학적 혼합물일 때, 이 활성은 물질의 활성 성분에 의해 발휘되지만, 다른 구성성분에 의해 변형될 수 있다. 생물학적 활성은 각각 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 미국 특허 공개 제20100203559호, 제20100233802호, 제20100233741호 및 미국 특허 제8,198,034호에 기재된 바와 같은 생체내 LD₅₀ 또는 ED₅₀ 분석에 의해, 또는 시험관내 분석을 통해, 예를 들어, 세포 기반 효능 분석에 의해 효능 또는 독성으로서 평가될 수 있다.

"보툴리눔 독소"는 클로스트리듐 보툴리눔뿐만 아니라 비클로스트리듐 종에 의해 재조합적으로 생성된 보툴리눔 독소(또는 이들의 경쇄 또는 중쇄)에 의해 생성된 신경독소를 의미한다. 본 명세서에 사용되는 어구 "보툴리눔 독소"는 보툴리눔 독소 혈청형 A, B, C, D, E, F 및 G, 및 그들의 아형 및 이들의 임의의 다른 유형의 아형, 또는 임의의 재공학처리된 단백질, 각각의 경우에 임의의 앞서 언급한 것의 유사체, 유도체, 상동체, 부분, 하위 부분, 변이체 또는 형태를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 "보툴리눔 독소"는 또한 "변형된 보툴리눔 독소"를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 추가적인 "보툴리눔 독소"는 또한 보툴리눔 독소 복합체(예를 들어, 300, 500 및 900kDa 복합체)뿐만 아니라 복잡한 단백질과 관련되지 않은 보툴리눔 독소의 신경독소 성분(150 kDa)을 포함한다.

"클로스트리듐 유도체"는 클로스트리듐 독소의 임의의 부분을 함유하는 분자를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "클로스트리듐 유도체"는 천연 또는 재조합 신경독소, 재조합 변형 독소, 이의 단편, 표적화된 방광 외포작용 조절자(TEM), 또는 이들의 조합을 포함한다.

"클로스트리듐 독소"는 클로스트리듐 독소가 세포를 중독시키고, 저친화도 또는 고친화도 클로스트리듐 독소 수용체, 독소/수용체 복합체의 내재화, 세포질 내로 클로스트리듐 독소 경쇄의 전좌 및 클로스트리듐 독소 기질의 효소 변형에 대한 클로스트리듐 독소의 결합을 포함하는, 전체 세포 메커니즘을 실행할 수 있는 클로스트리듐 독소 균주에 의해 생성되는 임의의 독소를 지칭한다. 클로스트리듐 독소의 비제한적 예는 보툴리눔 독소 유사 BoNT/A, BoNT/B, BoNT/C₁, BoNT/D, BoNT/E, BoNT/F, BoNT/G, 파상풍 독소(TeNT), 바라티(Baratii) 독소(BaNT) 및 뷰티리쿰 독소(BuNT)를 포함한다.　 신경독소가 아닌 BoNT/C₂ 세포독소 및 BoNT/C₃ 세포독소는 용어 "클로스트리듐 독소"로부터 제외된다.　 본 명세서에 개시된 클로스트리듐 독소는 천연 유래 클로스트리듐 독소 변이체, 예컨대, 클로스트리듐 독소 아이소폼 및 클로스트리듐 독소 아형; 비-천연 유래 클로스트리듐 독소 변이체, 예컨대, 보존적 클로스트리듐 독소 변이체, 비보존적 클로스트리듐 독소 변이체, 클로스트리듐 독소 키메라 변이체 및 활성 클로스트리듐 독소 이의 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.　클로스트리듐 독소는 또한 클로스트리듐 독소 복합체를 포함한다.　 본 명세서에서 사용되는 용어 "클로스트리듐 독소 복합체"는 클로스트리듐 독소 및 비독소 결합 단백질(NAP)을 포함하는 복합체, 예컨대, 보툴리눔 독소 복합체, 파상풍 독소 복합체, 바라티 독소 복합체, 및 뷰티리쿰 독소 복합체를 지칭한다.　 클로스트리듐 독소 복합체의 비제한적 예는 클로스트리듐 보툴리눔에 의해 생성된 것, 예컨대, 900-kDa BoNT/A 복합체, 500-kDa BoNT/A 복합체, 300-kDa BoNT/A 복합체, 500-kDa BoNT/B 복합체, 500-kDa BoNT/C₁ 복합체, 500-kDa BoNT/D 복합체, 300-kDa BoNT/D 복합체, 300-kDa BoNT/E 복합체, 및 300-kDa BoNT/F 복합체를 포함한다.

생물학적으로 활성인 성분에 적용되는 바와 같은 "유효량"은 대상체에서 목적으로 하는 변화를 유도하는 데 일반적으로 충분한 성분의 양을 지칭한다. 예를 들어, 목적으로 하는 효과가 자가면역 장애 증상의 감소인 경우, 유효량의 성분은 자가면역 장애 증상의 적어도 실질적인 감소를 야기하고, 상당한 독성이 없는 양이다.

약제학적 조성물의 비활성성분 구성성분(예컨대 보툴리눔 독소와 혼합을 위해 사용되는 안정제)에 적용되는 "유효량"은 개체에게 투여될 때 활성 성분의 방출 및/또는 활성에 긍정적으로 영향을 미치는데 충분한 비활성 성분의 양을 지칭한다. 이 "유효량"은 본 명세서의 교시 및 당업계의 일반적 지식에 기반하여 결정될 수 있다.

"완전히 없는(즉, 전문용어로 "이루어진")은 사용 중인 기기 또는 과정의 범위 내에서, 물질이 검출될 수 없거나 또는 그의 존재가 확인될 수 없다는 것을 의미한다.

"본질적으로 없는"(또는 "본질적으로 이루어진")은 미량의 물질만이 검출될 수 있다는 것을 의미한다.

"경쇄"는 클로스트리듐 신경독소의 경쇄를 의미한다. 이는 분자량이 약 50 kDa이며, 보툴리눔 신경독소의 L 쇄, L, 또는 단백질분해 도메인(아미노산 서열)으로서 지칭될 수 있다.

"중쇄"는 보툴리눔 신경독소의 중쇄를 의미한다. 이는 분자량이 약 100kDa이며, H 쇄로서, 또는 H로서 지칭될 수 있다.

H_C는 H 쇄의 카복실 말단 세그먼트, 또는 무결손 H 쇄 중의 해당 단편에 대응하는 부분과 거의 동일한 보툴리눔 신경독소의 H쇄로부터 유래된 단편(약 50 kDa)을 의미한다. 이는 운동 뉴런에 대한 고친화도 시냅스전 결합에 수반된 천연 또는 야생형 보툴리눔 신경독소의 일부를 포함하는 것으로 여겨진다.

H_N은 H 쇄의 아미노 말단 세그먼트, 또는 해당 단편에 대응하는 부분과 거의 동일한 보툴리눔 신경독소의 H 쇄로부터 유래된 단편(약 50kDa)을 의미한다. 이는 세포내 엔도솜 막을 가로지른 L쇄의 전좌에 수반된 천연 또는 야생형 보툴리눔 신경독소의 일부를 포함하는 것으로 여겨진다.

LH_N 또는 L-H_N은 H_N 도메인에 결합된 L 쇄 또는 이의 기능성 단편을 포함하는 클로스트리듐 신경독소로부터 유래된 단편을 의미한다. 이는 H_C 도메인을 제거하거나 또는 변형하기 위해 단백질 분해에 의해 무결손 클로스트리듐 신경독소로부터 얻을 수 있다.

"이식물"은 제어 방출(예를 들어, 박동성 또는 연속적) 조성물 또는 약물 전달 시스템을 의미한다. 이식물은, 예를 들어, 인간 신체 내로 주사, 삽입 또는 이식될 수 있다.

"방광내 투여"는 요관 카테터를 통해 방광 내로 직접적으로 제공된 물질의 주사를 지칭한다.

"국소 투여"는, 예를 들어, 근육내 또는 진피내 또는 피하 주사 또는 국소 투여를 통해, 약제의 생물학적 효과가 요망되는 부위인 동물 신체 상의 또는 내의 부위에서 또는 근처에서의 약제의 직접 투여를 의미한다. 국소 투여는 전신 투여 경로, 예컨대 정맥내 또는 경구 투여를 제외한다. 국소 투여는 약제학적 제제가 환자 피부에 적용되는 국소 투여 유형이다.

"변형된 보툴리눔 독소"는 천연 보툴리눔 독소에 비해 그의 아미노산 중 적어도 하나의 결실, 변형 또는 대체된 보툴리눔 독소를 의미한다. 추가적으로, 변형된 보툴리눔 독소는 재조합적으로 생성된 신경독소, 또는 유도체 또는 재조합적으로 생성된 신경독소의 단편일 수 있다. 변형된 보툴리눔 독소는 천연 보툴리눔 독소의 적어도 하나의 생물학적 활성, 예컨대, 보툴리눔 독소 수용체에 결합하는 능력, 또는 뉴런으로부터 신경전달물질 방출을 저해하는 능력을 보유한다. 변형된 보툴리눔 독소 중 하나의 예는 하나의 보툴리눔 독소 혈청형(예컨대, 혈청형 A)으로부터의 경쇄, 및 상이한 보툴리눔 독소 혈청형(예컨대, 혈청형 B)으로부터의 중쇄를 갖는 보툴리눔 독소이다. 변형된 보툴리눔 독소의 다른 예는 신경전달물질, 예컨대 물질 P에 결합된 보툴리눔 독소이다.

"돌연변이"는 천연 유래 단백질 또는 핵산 서열의 구조적 변형을 의미한다. 예를 들어, 핵산 돌연변이의 경우에, 돌연변이는 DNA 서열 내 하나 이상의 뉴클레오타이드의 결실, 첨가 또는 치환일 수 있다. 단백질 서열 돌연변이의 경우에, 돌연변이는 단백질 서열 내 하나 이상의 아미노산의 결실, 첨가 또는 치환일 수 있다. 예를 들어, 단백질 서열을 포함하는 특정 아미노산은 다른 아미노산, 예를 들어, 아미노산 알라닌, 아스파라긴, 시스테인, 아스팔트산, 글루탐산, 페닐알라닌, 글리신, 히스티딘, 아이소류신, 라이신, 류신, 메티오닌, 프롤린, 글루타민, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판, 타이로신 또는 임의의 다른 천연 또는 비천연 유래 아미노산 또는 화학적으로 변형된 아미노산을 포함하는 군으로부터 선택된 아미노산을 대체할 수 있다. 단백질 서열에 대한 돌연변이는 전사될 때, 번역된 얻어진 mRNA가 돌연변이 단백질 서열을 생성하는 DNA 서열에 대한 돌연변이 결과일 수 있다. 단백질 서열에 대한 돌연변이는 또한 목적으로 하는 돌연변이를 포함하는 펩타이드 서열을 목적으로 하는 단백질 서열에 융합시킴으로써 생성될 수 있다.

"환자"는 의학적 또는 수의학적 치료를 받는 인간 또는 비인간 대상체를 의미한다. 따라서, 본 명세서에 개시된 바와 같은, 조성물 및 방법은 임의의 동물, 예컨대 포유류 등을 치료하는 데 사용될 수 있다.

"말초에 투여하는" 또는 "말초 투여"는 피하, 진피내, 경피 또는 피하 투여를 의미하지만, 근육내 투여를 제외한다. "말초"는 피하 위치를 의미하며, 내장 부위를 제외한다.

"투과제"는 API(활성 약제학적 성분)와 같은 선택 화합물에 대한 피부, 방광벽 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 표면의 투과성을 향상시키는 능력을 갖는 임의의 천연 유래 또는 합성 화합물, 물질 또는 분자를 지칭한다.

"투과-유효량"은 치료적으로 효과적인 속도로 치료제에 대한 표면의 투과성을 실질적으로 증가시키는데 효과적인 양을 지칭한다. 방광내 방광 전달을 위해, 투과 유효량은 방광벽의 본래의 선택적 불투과성이 회복될 수 있는 시간 후에 방광벽을 비가역적으로 손상시키는 일 없이 목적으로 하는 시간 간격 동안 클로스트리듐 유도체에 대해 방광벽의 투과성을 실질적으로 증가시키는데 충분한 양을 지칭한다.

"약제학적 조성물"은 활성 약제학적 성분, 예를 들어, 보툴리눔 독소, 및 적어도 하나의 추가적인 성분, 예를 들어, 안정제 또는 부형제 등을 포함하는 조성물을 의미한다. 따라서 약제학적 조성물은 인간 환자와 같은 대상체에 대한 진단적 또는 치료적 투여에 적합한 제형이다. 약제학적 조성물은, 예를 들어, 동결건조 또는 진공건조 조건에서, 동결건조 또는 진공건조 약제학적 조성물의 재구성 후에 형성된 용액, 또는 재구성이 필요하지 않은 용액 또는 고체일 수 있다.

약제학적 조성물의 구성성분은 단일 조성물 중에(즉, 임의의 필요한 재구성 유체를 제외한 모든 구성성분이 약제학적 조성물의 초기 조제 시 존재함) 또는 2성분 시스템, 예를 들어 약제학적 조성물의 초기 조제 시 존재하지 않은 성분을 함유할 수 있는 재구성 비히클에 의해 재구성되는, 예를 들어, 진공건조 조성물로서 포함될 수 있다. 2-성분 시스템은 2 성분 시스템 중 첫 번째 성분과 장기간 보관 저장동안 충분히 양립가능하지 않은 성분의 혼입을 허용하는 것을 포함하는, 몇몇 이점을 제공할 수 있다. 예를 들어, 재구성 비히클은 사용 기간, 예를 들어 1주의 냉장 저장 동안 미생물 성장에 대해 충분한 보호를 제공하지만, 독소를 분해하는 시간 동안 2년 냉동 저장 동안에 제공되지 않는 보존제를 포함할 수 있다. 장기간의 시간 동안 보툴리눔 독소 또는 다른 성분과 양립가능하지 않을 수 있는 다른 성분은 이 방식으로 혼입될 수 있고; 즉, 대략의 사용 시 제2 비히클 중에서(예를 들어, 재구성 비히클 중에서) 첨가된다. 약제학적 조성물은 또한 벤질 알코올, 벤조산, 페놀, 파라벤 및 솔브산과 같은 보존제를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은, 예를 들어, 부형제, 예컨대 표면 활성제; 분산제; 비활성 희석제; 과립제 및 붕해제; 결합제; 윤활제; 보존제; 생물학적으로 분해 가능한 조성물, 예컨대 젤라틴; 수성 비히클 및 용매; 유성 비히클 및 용매; 현탁제; 분산제 또는 습윤제; 유화제, 완화제; 완충제; 염; 증점제; 충전제; 항산화제; 안정제; 및 약제학적으로 허용 가능한 중합체 또는 소수성 물질 및 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Genaro, ed., 1985, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa.]에 기재된 다른 성분을 포함할 수 있다.

"재조합체 변형 독소"는 보툴리눔 독소와 일부 또는 대부분의 도메인을 공유하지만, 천연 보툴리눔 신경독소와 동일한 세포를 표적화할 수도 있거나 또는 표적화하지 않을 수도 있는 재조합 독소를 의미한다.

"안정화하는", "안정화하다" 또는 "안정화"는 재구성 전 API에 비교할 때, 재구성된 활성 약제학적 성분("API")의 생물학적 활성의 적어도 약 20%의 보유를 의미한다. 예를 들어, (1) 벌크 또는 저장액으로부터 일련의 희석액의 제조 시, 또는 (2) 6개월 내지 4년 동안 약 -2℃ 이하에 저장된 약제학적 조성물을 함유하는 동결건조 또는 진공건조 보툴리눔 독소의 재구성 시, 또는 (3) 6개월 내지 4년 동안 약 2℃ 내지 약 8℃에서 저장된 약제학적 조성물을 함유하는 수용액 보툴리눔 독소에 대해, 재구성된 또는 수용액 약제학적 조성물 중에 존재하는 보툴리눔 독소는 (API에 대해 안정화 중인, 안정화하는 또는 안정화를 제공하는 화합물의 존재에서) 약제학적 조성물 내로 혼입되기 전에 생물학적으로 활성인 보툴리눔 독소가 가진 효능 또는 독성의 약 20% 초과 및 약 100%까지를 가진다.

"안정화 제제", "안정화제" 또는 "안정제"는 약제학적 조성물의 효능이 비안정 조성물에 비해 증가되도록 API를 안정화시키는 작용을 하는 물질을 의미한다.

"안정제"는 부형제를 포함할 수 있고, 단백질 및 비-단백질 분자를 포함할 수 있다.

"실질적으로 없는"은 약제학적 조성물의 중량으로 1% 미만의 수준의 존재를 의미한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 "TEM"은 "표적화된 외포작용 조절제" 또는 "재표적화된 엔도펩티다제"와 동의어이다. 수많은 특징 때문에, "TEM"은 "정의" 부문의 마지막에서 추가로 상세하게 개시할 것이다.

"치료적 제형"은 장애 또는 질환, 예를 들어, 말초 근육의 과다활동(즉, 경직)을 특징으로 하는 장애 또는 질환을 치료하고, 이에 의해 완화시키는 데 사용될 수 있는 제형을 의미한다.

"치료적 유효량"은 목적으로 하는 치료적 효과를 달성하는 데 충분한 양을 지칭한다.

"국소 투여"는 신경독소의 전신 투여를 제외한다. 다시 말해서, 그리고 통상적인 치료적 경피 방법과 달리, 보툴리눔 독소의 국소 투여는 상당한 양, 예컨대 대부분의 신경독소가 환자의 순환계 내로 통과하도록 초래하지 않는다.

"치료하는"은 병태 또는 장애의 적어도 하나의 증상, 예를 들어, 주름, 경직, 우울증, 통증(예를 들어, 두통), 방광 과다반응 등을 일시적으로 또는 영구적으로 완화시키는 것(또는 제거하는 것)을 의미한다.

"변이체"는 표적 세포에 의해 인식되고, 표적 세포에 의해 내재화되며, 표적 세포 내 SNARE(SNAP(가용성 NSF 부착 단백질) 단백질) 단백질을 촉매적으로 절단하는 야생형 보툴리눔 독소에 대한 적어도 하나의 아미노산의 대체, 변형, 첨가 또는 결실에 의해 변형된 클로스트리듐 신경독소, 예컨대 야생형 보툴리눔 독소 혈청형 A, B, C, D, E, F 또는 G를 의미한다.

변이체 신경독소 성분의 예는 치환, 변형, 결실 및/또는 첨가된 하나 이상의 아미노산을 갖는 보툴리눔 독소의 변이체 경쇄를 포함할 수 있다. 이 변이체 경쇄는 외포작용, 예를 들어, 신경전달물질 소포의 방출을 방지하는 동일한 또는 더 양호한 능력을 가질 수 있다. 추가적으로, 변이체의 생물학적 효과는 모 화학적 독립체에 비해 감소될 수 있다. 예를 들어, 제거된 아미노산 서열을 갖는 보툴리눔 독소 A형의 변이체 경쇄는 모(또는 천연) 보툴리눔 독소 A형 경쇄에 비해 더 짧은 생물학적 지속을 가질 수 있다.

"비히클" 또는 "재구성 비히클"은 고체 보툴리눔 제형을 액체 보툴리눔 약제학적 조성물로 재구성하기 위해 사용될 수 있는 액체 조성물을 의미한다.

"야생형 신경 결합 모이어티"는 신경독소에 대해 천연이고 뉴런 상의 수용체에 특이적인 결합 친화도를 나타내는 신경독소 부분을 의미한다. 따라서, 야생형 또는 천연 신경 결합 모이어티는 신경독소에 대해 천연이 아닌 결합 모이어티를 제외한다.

TEM

일반적으로, TEM은 클로스트리듐 독소 경쇄로부터의 효소 도메인, 클로스트리듐 독소 중쇄로부터의 전좌 도메인, 및 표적화 도메인을 포함한다. TEM의 표적화 도메인은 천연 유래 클로스트리듐 독소에 의해 이용되는 천연 클로스트리듐 독소 수용체 이외의 수용체에 대해 분자를 표적화하는 변경된 세포 표적화 능력을 제공한다. 이 재표적화된 능력은 클로스트리듐 독소의 천연 유래 결합 도메인을 비클로스트리듐 독소 수용체에 대해 결합 활성을 갖는 표적화 도메인으로 대체함으로써 달성된다. 비-클로스트리듐 독소 수용체에 대한 결합에도 불구하고, TEM은 세포질 내로 TEM/수용체 복합체의 내재화, 소포막 및 2쇄 분자에서 기공의 형성, 효소 도메인의 세포질 내로의 전좌, 및 표적 세포의 SNARE 복합체 성분에 대한 단백질 분해 효과 발휘를 포함하는 중독 과정의 모든 다른 단계들을 겪는다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "클로스트리듐 독소 효소 도메인"은 중독 과정의 효소 표적 변형 단계를 실행하는 클로스트리듐 독소의 경쇄 내에 위치된 클로스트리듐 독소 폴리펩타이드를 지칭한다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 신경전달물질 방출 장치의 코어 성분을 특이적으로 표적화하는 아연-의존적 엔도펩티다제 활성을 함유하는 메탈로프로테아제 영역을 포함한다. 따라서, 클로스트리듐 독소 효소 도메인은 클로스트리듐 독소 기질, 예컨대, SNAP-25 기질, VAMP 기질 및 신탁신(Syntaxin) 기질과 같은 SNARE 단백질을 특이적으로 표적화하고, 단백질 분해로 절단한다.

클로스트리듐 독소 효소 도메인은 천연 유래 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예컨대, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 아이소폼 및 클로스트리듐 독소 효소 도메인 아형; 비-천연 유래 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 예컨대, 보존적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 비보존적 클로스트리듐 독소 효소 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 효소 도메인 키메라, 활성 클로스트리듐 독소 효소 도메인 이의 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 클로스트리듐 독소 효소 도메인의 비제한적 예는, 예를 들어, BoNT/A 효소 도메인, BoNT/B 효소 도메인, BoNT/C1 효소 도메인, BoNT/D 효소 도메인, BoNT/E 효소 도메인, BoNT/F 효소 도메인, BoNT/G 효소 도메인, TeNT 효소 도메인, BaNT 효소 도메인, 및 BuNT 효소 도메인을 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "클로스트리듐 독소 전좌 도메인"은 중독 과정의 전좌 단계를 실행하는 클로스트리듐 독소 중쇄의 아미노-말단 절반 내에 위치된 클로스트리듐 독소 폴리펩타이드를 지칭한다. 전좌 단계는 세포내 소포 내에서 pH의 감소에 의해 야기된 전좌 도메인의 입체장애 입체배좌 변화를 수반하는 것으로 나타난다. 이런 입체배좌 변화는 소포 내로부터 세포질로의 경쇄 이동을 허용하는 소포막 내 기공의 형성을 초래한다. 따라서, 클로스트리듐 독소 전좌 도메인은 세포의 세포질 내로 세포내 소포의 막을 가로지른 클로스트리듐의 이동을 용이하게 한다.

클로스트리듐 독소 전좌 도메인은 천연 유래 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 변이체, 예를 들어, 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 아이소폼 및 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 아형; 비-천연 유래 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 변이체, 예를 들어, 보존적 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 변이체, 비-보존적 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 변이체, 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 키메라, 활성 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 이의 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 클로스트리듐 독소 전좌 도메인의 비제한적 예는, 예를 들어, BoNT/A 전좌 도메인, BoNT/B 전좌 도메인, BoNT/C1 전좌 도메인, BoNT/D 전좌 도메인, BoNT/E 전좌 도메인, BoNT/F 전좌 도메인, BoNT/G 전좌 도메인, TeNT 전좌 도메인, BaNT 전좌 도메인, 및 BuNT 전좌 도메인을 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "표적화 도메인"은 "결합 도메인" 또는 "표적화 모이어티"와 동의어이며, 중독 과정의 수용체 결합 및/또는 복합체 내재화 단계를 실행하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 지칭하고, 단, 결합 도메인은 클로스트리듐 독소의 중쇄 절반의 카복실-말단 절반 내에서 발견되는 클로스트리듐 독소 결합 도메인과 동일하지 않다. 표적화 도메인은 그의 동족 수용체에 대해 결합 활성 및/또는 특이성을 부여하는 수용체 결합 영역을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "동족 수용체"는 생리적 조건 하에서 또는 생리적 조건에 실질적으로 근접한 시험관내 조건 하에서 표적화 도메인과 우선적으로 상호작용하는 수용체를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "우선적으로 상호작용한다"는 "우선적으로 결합하는"과 동의어이며, 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 더 큰 정도인 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 개시된 표적화 도메인을 참고하면, 표적화 도메인은 비동족 수용체에 대해 통계적으로 유의하게 더 큰 정도로 그의 동족 수용체에 결합한다. 다른 방법을 언급하면, 비동족 수용체에 비해 그의 동족 수용체에 대해 표적화 도메인의 차별적인 결합이 있다. 따라서, 표적화 도메인은 표적 세포의 혈장막에 위치된 TEM-특이적 수용체에 대한 결합을 지시한다.

본 명세서에 개시된 표적화 도메인은 감각 뉴런 상에 위치된 수용체와 우선적으로 상호작용하는 것일 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 표적화 도메인은 교감신경세포, 또는 부교감신경세포 상에 위치된 수용체와 우선적으로 상호작용하는 것일 수 있다.

다른 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 표적화 도메인은 오피오이드 펩타이드 표적화 도메인, 갈라닌 펩타이드 표적화 도메인, PAR 펩타이드 표적화 도메인, 소마토스타틴 펩타이드 표적화 도메인, 뉴로텐신 펩타이드 표적화 도메인, SLURP 펩타이드 표적화 도메인, 안지오텐신 펩타이드 표적화 도메인, 타키키닌 펩타이드 표적화 도메인, 뉴로펩타이드 Y 관련 펩타이드 표적화 도메인, 키닌 펩타이드 표적화 도메인, 멜라노코틴 펩타이드 표적화 도메인, 또는 그라닌 펩타이드 표적화 도메인, 글루카곤 유사 호르몬 펩타이드 표적화 도메인, 세크레틴 펩타이드 표적화 도메인, 뇌하수체 아데닐산 고리화효소 활성화 펩타이드(PACAP) 펩타이드 표적화 도메인, 성장 호르몬-방출 호르몬(GHRH) 펩타이드 표적화 도메인, 혈관 작동성 장 펩타이드(VIP) 펩타이드 표적화 도메인, 위 억제 펩타이드(GIP) 펩타이드 표적화 도메인, 칼시토닌 펩타이드 표적화 도메인, 내장 펩타이드 표적화 도메인, 뉴로트로핀 펩타이드 표적화 도메인, 헤드 활성화제(HA) 펩타이드, 리간드(GFL) 펩타이드 표적화 도메인의 신경교세포주-유래 신경영양인자(GDNF) 패밀리, RF-아마이드 관련 단백질(RFRP) 펩타이드 표적화 도메인, 신경호르몬 펩타이드 표적화 도메인, 또는 신경조절 사이토카인 펩타이드 표적화 도메인, 인터류킨(IL) 표적화 도메인, 혈관내피성장인자(VEGF) 표적화 도메인, 인슐린-유사 성장 인자(IGF) 표적화 도메인, 표피성장인자(EGF) 표적화 도메인, 형질전환 성장인자-β(TGFβ) 표적화 도메인, 뼈 형성 단백질(BMP) 표적화 도메인, 성장 및 분화 인자(GDF) 표적화 도메인, 액티빈 표적화 도메인, 또는 섬유아세포 성장인자(FGF) 표적화 도메인, 또는 혈소판 유래 성장인자(PDGF) 표적화 도메인이다.

오피오이드 펩타이드 표적화 도메인은 엔케팔린 펩타이드, 소 부신수질-22(BAM22) 펩타이드, 엔도몰핀 펩타이드, 엔돌핀 펩타이드, 다이놀핀 펩타이드, 노시셉틴 펩타이드 또는 헤몰핀 펩타이드를 포함할 수 있다.

따라서, TEM은 임의의 및 모든 위치에서 표적화 도메인을 포함할 수 있으며, 단, TEM은 중독 과정을 수행할 수 있다. 비-제한적 예는 TEM의 아미노 말단에 표적화 도메인을 위치시키는 것; TEM의 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 사이에 표적화 도메인을 위치시키는 것; 및 TEM의 카복실 말단에 표적화 도메인을 위치시키는 것을 포함한다. 다른 비-제한적 예는 TEM의 클로스트리듐 독소 효소 도메인과 클로스트리듐 독소 전좌 도메인 사이에 표적화 도메인을 위치시키는 것을 포함한다. 천연 유래 클로스트리듐 독소의 효소 도메인은 천연 시작 메티오닌을 포함한다. 따라서, 효소 도메인이 아미노-말단 위치에 있지 않은 도메인 조직에서, 시작 메티오닌을 포함하는 아미노산 서열은 아미노-말단 도메인 앞에 위치되어야 한다. 마찬가지로, 표적화 도메인이 아미노-말단 위치에 있는 경우, 시작 메티오닌 및 프로테아제 절단 부위를 포함하는 아미노산 서열은 표적화 도메인이 유리 아미노 말단을 필요로 하는 위치에서 작동가능하게 연결될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 셴웬 리(Shengwen Li) 등의 발명의 명칭: Degradable Clostridial Toxins, 미국 특허 출원 제11/572,512호(2007년 1월 23일) 참조). 추가로, 시작 메티오닌을 포함하는 다른 폴리펩타이드의 아미노 말단에 작동가능하게 연결된 폴리펩타이드를 첨가할 때, 본래의 메티오닌 잔기가 결실될 수 있다는 것은 당업계에 공지되어 있다.

본 명세서에 개시된 TEM은 TEM의 단일쇄 폴리펩타이드를 그의 활성 2쇄 형태로 전환하기 위해 외인성 프로테아제의 사용을 허용하는 외인성 프로테아제 절단 부위를 선택적으로 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "외인성 프로테아제 절단 부위"는 "비-천연 유래 프로테아제 절단 부위" 또는 "비-천연 프로테아제 절단 부위"와 동의어이고, 천연 유래 클로스트리듐 독소로부터의 2쇄 루프 영역에서 자연적으로 발견되지 않는 프로테아제 절단 부위를 의미한다.

TEM은 표적화 도메인의 크기 때문에 그들의 전반적인 분자량이 다르지만, 활성화 과정 및 외인성 절단 부위에 대한 그의 의존도는 재조합적으로 생성된 클로스트리듐 독소와 본질적으로 동일하다. 예를 들어, 스튜워드(Steward) 등의 발명의 명칭: Activatable Clostridial Toxins, 미국 특허 공개 제2009/0081730호; 스튜워드 등의, 발명의 명칭: Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non- Clostridial Toxin Target Cells, 미국 특허 출원 제11/776,075호; 스튜워드 등의, 발명의 명칭: Modified Clostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity for Clostridial Toxin Target Cells, 미국 특허 공개 제2008/0241881호; 스튜워드 등의, 발명의 명칭: Degradable Clostridial Toxins, 미국 특허 공개 제2011/0287517호를 참조하며, 이들 각각은 본 명세서에 참고로 포함된다. 일반적으로, 외인성 프로테아제를 이용하여 측쇄 폴리펩타이드를 그의 2쇄 형태로 전환시키는 활성화 과정은 아미노 제시, 중앙의 제시 또는 카복실 제시 배열에서 조직화된 표적화 도메인을 갖는 TEM을 처리하기 위해 사용될 수 있다. 이는 대부분의 표적화 도메인에 대해 모이어티의 아미노-말단이 수용체 결합에 참여하지 않기 때문이다. 이것으로서, 넓은 범위의 프로테아제 절단 부위는 TEM의 활성 2쇄 형태를 생성하는 데 사용될 수 있다. 그러나, 수용체 결합을 위해 유리 아미노 말단을 필요로 하는 표적화 도메인은 절단 가능한 결합이 카복실 말단에 위치되는 프로테아제 절단 부위를 필요로 한다. TEM의 설계에서 프로테아제 절단 부위의 사용은, 예를 들어, 스튜워드 등의, 발명의 명칭: Activatable Clostridial toxins, 미국 특허 공개 제2009/0069238호; 간사니(Ghanshani) 등의 발명의 명칭: Modified Clostridial Toxins Comprising an Integrated Protease Cleavage Site-Binding Domain, 미국 특허 공개 제2011/0189162호; 및 간사니 등의 발명의 명칭: Methods of Intracellular Conversion of Single-Chain Proteins into their Di-chain Form, 국제 특허 출원 PCT/US2011/22272에 기재되어 있으며, 이들 각각은 그들의 전문이 참고로 포함된다.

약제학적 조성물

본 개시내용의 양상은 부분적으로, 클로스트리듐 유도체 및 적어도 1종의 투과제를 포함하는, 방광내 방광 전달에 적합한 약제학적 조성물을 제공한다.

클로스트리듐 유도체:

본 명세서에 정의된 바와 같은 클로스트리듐 유도체는 천연 또는 재조합 신경독소, 재조합 변형 독소, 이의 단편, 표적화된 방광 외포작용 조절자(TEM), 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 천연 또는 변형된 보툴리눔 독소이다. 일 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소 A형이다. 일부 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 B, C₁, D, E 또는 F형이다. 대안의 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 TEM을 포함한다.

일부 실시형태에서, 본 약제학적 조성물은 치료적 유효량의 클로스트리듐 유도체를 포함한다. 치료적 유효량은 하나의 상황에서 개체에게 투여된 클로스트리듐 유도체의 총량을 지칭한다. 그것으로서, 유효량의 클로스트리듐 유도체 및/또는 TEM은 부위 당 투여된 양을 지칭하지 않는다. 예를 들어, 개체에게 투여된 유효량의 클로스트리듐 독소, 예컨대 보툴리눔 독소는 10U일 수 있는 반면, 부위 당 투여되는 독소의 양은 2U, 즉, 5개의 상이한 부위에서 2U일 수 있다. 일부 실시형태에서, 치료적 유효량의 보툴리눔 독소는 10U 내지 1000U, 더 바람직하게는 약 50U 내지 약 500U의 범위이다.

클로스트리듐 독소 및 TEM을 포함하는 병용요법을 참고하여, 유효량의 클로스트리듐 독소는 TEM과 병용하여 클로스트리듐 독소의 양이 목적으로 하는 치료적 효과를 달성하지만, 투여되는 이러한 양 독립적으로는 비효과적인 것이다. 예를 들어, 전형적으로 약 75 내지 125U의 보톡스(등록상표)(캘리포니아주 어바인에 소재한 앨러간 인코포레이티드(Allergan, Inc.))인 BoNT/A는 목의 운동이상을 치료하기 위해 통증성 경련을 겪은 근육마다 근육내 주사에 의해 투여된다. 병용 요법에서, 이러한 독소가 TEM과의 병용요법에서 사용될 때 차선의 유효량의 BoNT/A는 목의 운동이상을 치료하기 위해 투여될 것이다.

투과제

투과제의 예는 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 글리콜, 킬레이터, 양이온성 중합체, 점막접착제, 폴리펩타이드 또는 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

일부 실시형태에서, 투과제는 보툴리눔 독소와 같은 클로스트리듐 유도체에 선택적으로 결합하여 복합체를 형성한다. 대안의 실시형태에서, 투과제는 보툴리눔 독소에 결합하지 않는다. 대안의 실시형태에서, 투과제는 반데르발스 상호작용을 통해 클로스트리듐 유도체와 상호작용한다.

특정 실시형태에서, 투과제는 음이온성 계면활성제일 수 있다. 본 제형에 적합한 음이온성 계면활성제의 예는 SDS, 라우릴황산나트륨, 그들의 유사체, 유도체 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

특정 실시형태에서, 투과제는 양이온성 계면활성제일 수 있다. 본 제형에 적합한 양이온성 계면활성제의 예는 황산프로타민, 브롬화벤즈알코늄, 4차 암모늄 염, 예컨대 폴리(다이메틸이미노)-2-뷰텐-1,4-다이일 클로라이드, 오닉스 코포레이션(ONYX Corporation)으로부터의 폴리쿼터늄 1(polyquaternium 1)(등록상표)로서 일반적으로 이용 가능한 α-[4-트리스(2-하이드록시에틸) 암모늄-2-뷰텐일-ω-트리스(2-하이드록시에틸) 암모늄]-다이클로라이드(화학물질 등록번호 75345-27-6), 할로겐화 벤즈알코늄 및 비구아니드, 예컨대 알렉시딘의 염, 알렉시딘 유리 염기, 클로르헥시딘의 염, 헥사메틸렌 비구아니드 및 그들의 중합체, 유사체 및 유도체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 알렉시딘 및 클로르헥시딘의 염은 유기 또는 무기일 수 있으며, 전형적으로 질산염, 아세트산염, 인산염, 황산염, 할로겐화물 등, 또는 이들의 임의의 조합 등이다.

특정 실시형태에서, 투과제는 폴리(에틸렌이민)(PEI), 올레일아민, 다이올레일-포스파티딜에탄올아민(DOPE) 및 다이올레오일-트라이메틸암모늄-프로판(DOTAP), 그들의 유사체, 유도체, 또는 이들의 조합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다른 양이온성 제제일 수 있다.

특정 실시형태에서, 투과제는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리에틸렌 옥사이드(PEO)를 포함할 수 있다. PEG는, 예를 들어, 분자량이 약 200그램/몰(g/m) 내지 약 20,000그램/몰(g/m)의 범위에 있는 PEG를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 투과제는 폴리에틸렌 글리콜 3350을 포함한다.

특정 실시형태에서, 투과제는 폴록사머를 포함할 수 있다. 폴록사머는, 예를 들어, P80, P124, P188, P237, P338, 및 P407, 그들의 유사체, 유도체 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 투과제는 포비돈(PVP)을 포함할 수 있다. PVP는, 예를 들어, PVP 중합체 및 유사체 또는 유도체를 포함할 수 있다.

특정 실시형태에서, 투과제는 분자량이 약 1000 내지 약 100000 달톤의 범위인 L 또는 D 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 투과제는 폴리-L-라이신이다. 다른 실시형태에서, 투과제는 세포-침투 펩타이드를 포함한다.

특정 실시형태에서, 투과제는 벤질 알코올 등, 폴리헥사메틸렌 비구아니드(고분자량 및/또는 저분자량) 등, 천연 또는 재조합 인간 혈청 알부민, 폴리믹신 B 등 또는 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 단백질을 포함할 수 있다.

특정 실시형태에서, 투과제는 비이온성 계면활성제를 포함한다. 본 제형에 적합한 비이온성 계면활성제의 예는 알킬 알릴 폴리에터 및 이의 유사체, 유도체(예를 들어 TX-100, 유사체 또는 유도체), 폴록사머, 폴리옥시에틸렌 에터(예를 들어 Brij 패밀리), 트윈(Tween), 빅(Big) CHAPS, 데옥시 빅 CHAPS, 틸록사폴, 솔비탄 모노올레이트(SPAN) 20, 40, 60, 크레모포 EL, 알파-토코페롤 TPGS, 폴리옥실 스테아레이트 40, 유사체 및 유도체, 또는 이들의 조합물을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

일부 실시형태에서, 투과제는 알킬 알릴 폴리에터, 유사체 또는 유도체를 포함한다. 일 실시형태에서, 투과제는 옥틸 페놀 에톡실레이트, 유사체 또는 유도체를 포함한다. 옥틸 페놀 에톡실레이트는 또한 폴리옥시에틸렌 옥시 페닐 에터, 4-옥틸페놀 폴리에톡실레이트, 모노(Mono) 30, TX-100, t-옥틸페녹시폴리에톡시에탄올, 옥톡시놀-9, 또는 더 통상적으로 공지된 상표명 트리톤(Triton)(상표명) X-100으로서 알려져 있다. 대안의 실시형태에서, 투과제는 노녹시놀 9, 유사체, 또는 유도체를 포함한다.

특정 실시형태에서, 투과제는 양이온성 중합체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 양이온성 중합체는 점막접착제이다. 일부 실시형태에서, 양이온성 중합체는 키토산, 콘드로이틴, 키토산 유사체, 콘드로이틴 유사체, 키토산 유도체 또는 콘드로이틴 유도체를 포함한다.

일부 실시형태에서, 본 약제학적 조성물은 클로스트리듐 유도체 및 적어도 1종의 투과제를 포함한다. 일 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소이다. 일 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소를 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 1종의 투과제는 키토산, 키토산 유사체 또는 키토산 유도체 및 TX-100, TX-100 유사체 또는 TX-100 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 약제학적 조성물은 보툴리눔 독소, 키토산, 키토산 유사체 또는 키토산 유도체 및 노녹시놀-9, 노녹시놀-9 유사체 또는 노녹시놀-9 유도체를 포함한다. 대안의 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 TEM이다. 대안의 실시형태에서, 제형은 보툴리눔 독소 및 TEM을 포함한다.

특정 실시형태에서, 투과제는 EDTA, EGTA(에틸렌 글리콜 테트라아세트산), 사이클로헥산다이아민 테트라아세테이트(CDTA), 하이드록시에틸에틸렌다이아민 트라이아세테이트(HEDTA), 다이에틸렌트라이아민 펜타아세테이트(DTPA), 1,2-다이아미노사이클로헥산 테트라아세테이트 및 헥사메타포스페이트를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 킬레이터를 포함할 수 있다. 이들 제제는 바람직하게는 염, 전형적으로 나트륨 염, 예컨대 2나트륨 EDTA, 3나트륨 HEDTA, 헥사메타인산나트륨 또는 이들의 임의의 조합 등으로서 사용된다.

따라서, 일 양상에서, 본 약제학적 조성물은 클로스트리듐 유도체, 및 적어도 1종의 투과제를 포함하되, 약제학적 제형은 방광내 방광 전달에 적합하다. 일부 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소를 포함하고, 투과제는 점막접착제 및 계면활성제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 점막접착제는 키토산, 키토산 유사체, 키토산 유도체, 콘드로이틴, 콘드로이틴 유사체 및 콘드로이틴 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 계면활성제는 비이온성 계면활성제를 포함한다. 일 실시형태에서, 본 약제학적 조성물은 보툴리눔 독소 A형, 키토산, 키토산 유사체 또는 키토산 유도체 및 TX-100, TX-100 유사체 또는 TX-100 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 계면활성제는 노녹시놀-9, 노녹시놀-9 유사체 또는 노녹시놀-9 유도체를 포함한다. 대안의 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 TEM이다.

일부 실시형태에서, 투과제는 투과-유효량으로 존재한다. 일 실시형태에서, 투과 유효량은 방광 무결성에 대해 제한된 손상을 지니는 방광벽 표면의 투과성을 실질적으로 증가시키는데 효과적인 양을 지칭한다. 일 실시형태에서, 투과-유효량은 치료적으로 효과적인 속도로 방광벽을 통해 치료적 유효량의 보툴리눔 신경독소의 투과를 허용하는 유효량을 지칭한다. 일 실시형태에서, 투과 유효량은 방광벽을 비가역적으로 손상시키는 일 없이 치료적으로 효과적인 속도로 독소의 치료적 유효량에 대해 목적으로 하는 시간 간격 동안 방광벽 표면의 투과성을 실질적으로 증가시키는데 효과적인 양을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 증가된 투과성은 목적으로 하는 시간 간격 후에 가역적이며, 이후에, 방광벽은 그의 본래의 불투과성 또는 선택적 투과성을 완전히 또는 부분적으로 회복할 수 있다. 일부 실시형태에서, 방광벽은 방광내 주입 후 약 1시간 내지 약 24시간 범위의 시간 간격 후에 그의 본래의 불투과성 또는 선택적 투과성을 회복한다. 일부 실시형태에서, 시간 간격은 약 3시간 내지 약 18시간의 범위이다. 일부 실시형태에서, 시간 간격은 약 4시간 내지 약 12시간의 범위이다. 방광벽이 그의 본래의 선택적 투과성 또는 불투과성을 회복함에 의한 회복률은 선택된 투과제의 특징, 양, 투과면의 특징, 노출 시간 및 투과면 주위의 환경에 의해 영향받을 수 있다. 일 실시형태에서, 본 약제학적 조성물의 투여 후 방광 무결성은 면역 반응의 정도, 예컨대 특정 면역 세포의 존재에 의해 평가될 수 있다.

투과-유효량은 클로스트리듐 유도체의 특징, 투과면(예를 들어 방광벽)의 특징, 투과제의 유형, 및 투과면 주위의 환경을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 몇몇 인자에 따라서 다르다.

일부 실시형태에서, 투과제의 투과 유효량은 약 0.005% 내지 약 10%(w/v), 더 바람직하게는 약 0.025% 내지 약 5%(w/v), 및 가장 바람직하게는 약 0.05% 내지 약 0.5%(w/v)의 범위이다. 일부 실시형태에서, 본 약제학적 제형은 0.005% 내지 약 10%(w/v), 더 바람직하게는 약 0.025% 내지 약 5%(w/v), 및 가장 바람직하게는 약 0.1% 내지 약 0.5%(w/v)의 트리톤(상표명)X-100, 트리톤(상표명)X-100 유사체 또는 유도체의 투과 유효량을 포함한다. 일 구체적 실시형태에서, 트리톤(상표명) X-100의 투과 유효량은 약 0.1%(w/v)이다.

일부 실시형태에서, 투과제는 점막접착제와 병용하여 사용된다. 일부 실시형태에서, 점막접착제는 양이온성 중합체이다. 일부 실시형태에서, 점막접착제는 키토산, 키토산 유사체, 키토산 유도체, 콘드로이틴, 콘드로이틴 유사체 또는 콘드로이틴 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 점막접착제의 투과 유효량은 약 0.005% 내지 10%(w/v), 더 바람직하게는 약 0.02% 내지 약 5%(w/v), 및 가장 바람직하게는 약 0.05% 내지 약 2%(w/v)의 범위이다. 일 실시형태에서, 키토산, 키토산 유사체 또는 키토산 유도체의 투과 유효량은 약 1%(w/v)이다. 일부 실시형태에서, 제형은 하기를 포함한다: (1) 보툴리눔 독소, (2) 트리톤(상표명)X-100, 트리톤(상표명) X-100 유사체, 트리톤(상표명)X-100 유도체 또는 이들의 혼합물; 및 (3) 키토산, 키토산 유사체, 키토산 유도체, 또는 이들의 혼합물. 일부 실시형태에서, 제형은 하기를 포함한다: (1) 보툴리눔 독소 A형, (2) 트리톤(상표명)X-100, 트리톤(상표명)X-100 유사체, 트리톤(상표명)X-100 유도체 또는 이들의 혼합물; 및 (3) 키토산, 키토산 유사체, 키토산 유도체, 또는 이들의 혼합물. 일부 실시형태에서, 제형은 약 20개 단위 내지 약 300개 단위의 보툴리눔 독소 A형, 약 0.5% 내지 약 2%(w/v) 키토산, 키토산 유사체, 유도체; 또는 이들의 혼합물 및 약 0.05% 내지 약 1%(w/v) 트리톤(상표명) X-100, 유사체, 유도체 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 일 실시형태에서, 제형은 보툴리눔 독소 A형, 약 1% 키토산 및 약 0.1%(w/v) 트리톤(상표명)X-100의 약 100 또는 200개 단위를 포함한다.

일부 실시형태에서, 투과제는 노녹시놀 9이다. 일부 실시형태에서, 노녹시놀 9의 투과 유효량은 약 0.005% 내지 약 10%(w/v), 더 바람직하게는 약 0.025% 내지 약 5%(w/v), 및 가장 바람직하게는 약 0.05% 내지 약 0.5%(w/v)의 범위이다. 일 구체적 실시형태에서, 본 약제학적 제형은 약 0.1%(w/v)의 노녹시놀 9의 투과-유효량을 포함한다. 일 구체적 실시형태에서, 본 약제학적 제형은 약 0.5%(w/v)의 노녹시놀 9의 투과 유효량을 포함한다. 일부 실시형태에서, 노녹시놀 9는 점막접착제와 병용하여 사용된다. 일부 실시형태에서, 점막접착제는 키토산, 키토산 유사체, 키토산 유도체, 콘드로이틴, 콘드로이틴 유사체 또는 콘드로이틴 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 점막접착제의 투과 유효량은 약 0.005% 내지 10%(w/v), 더 바람직하게는 약 0.02% 내지 약 5%(w/v), 및 가장 바람직하게는 약 0.1% 내지 약 2%(w/v)의 범위이다. 일부 실시형태에서, 키토산 또는 키토산 유도체의 투과 유효량은 약 0.005% 내지 10%(w/v), 더 바람직하게는 약 0.02% 내지 약 5%(w/v), 및 가장 바람직하게는 약 0.1% 내지 약 2%(w/v)의 범위이다. 일 실시형태에서, 키토산 또는 키토산 유도체의 투과 유효량은 약 1%(w/v)이다.

일부 실시형태에서, 투과제는 재조합 또는 천연 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

일부 실시형태에서, 본 조성물은 임의의 동물 유래 단백질을 포함하지 않는다. 일 실시형태에서, 본 조성물은 보툴리눔 독소, TEM, 또는 재조합 변형 독소(활성 성분으로서) 및 적합한 다당류, 또는 안정제 또는 부형제로서 비-단백질 부형제를 포함한다.

따라서_, 본 개시내용의 양상은 클로스트리듐 유도체 및 하나 이상의 투과제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하되, 약제학적 조성물은 방광내 방광 전달에 적합하고, 하나 이상의 투과제는 본 명세서에 개시된 바와 같은 투과-유효량으로 존재한다. 본 조성물의 실시형태는 클로스트리듐 유도체의 약학적 효과를 야기하거나 또는 향상시킬 치료제 및/또는 부형제를 포함한다.

부형제는 또한 제형의 안정성을 증가시키기 위해, 투과제(예를 들어 EDTA 또는 기타 킬레이트제)의 작용을 증가시키기 위해 또는 즉시 발생할 증가된 점성 특성을 통해 제형(예: 카복시메틸 셀룰로스(CMC), 하이드록시프로필 셀룰로스(HPMC), 알긴산염)의 체류를 증가시기키 위해 또는 온도(예: 폴록사머 407), pH(카보폴 P-934, P940) 및/또는 이온성(예: 젤라이트(Gelrite) 젤라틴 검, 알긴산염) 환경의 변화 시 첨가될 수 있다.

부형제는 또한 제형의 전달, 안정성, 생체 이용성 및/또는 치료적 활성을 증가시키기 위해 소변 및 피부의 긴장성 및/또는 pH를 조절하는데 첨가될 수 있다.

다른 양상에서, 본 개시내용은 방광내 방광 투여에 적합한 약제학적 제형의 제조방법을 제공하며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 투과제를 포함하는 용액을 제공하는 단계, 본 명세서에 개시된 바와 같은 클로스트리듐 유도체를 포함하는 조성물에 용액을 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 약 50㎖ 내지 약 100㎖의 용액을 클로스트리듐 유도체를 포함하는 조성물에 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소이다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 약 1%(w/v) 키토산, 유사체 또는 유도체 및 약 0.1%(w/v) 트리톤(Triton)(상표명)X-100, 유사체 또는 유도체를 포함하는 수용액 약 50㎖ 내지 약 100㎖를 보툴리눔 독소 A형에 첨가하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 약 1%(w/v) 키토산 및 약 0.1%(w/v) 트리톤(상표명)X-100를 포함하는 수용액 50㎖를 약 100 단위 또는 200 단위의 동결건조 보툴리눔 독소 A형을 함유하는 바이알에 첨가하는 단계; 및 동결건조된 보툴리눔 독소 A형을 재수화시키기 위해 부드럽게 혼합하는 단계를 포함한다.

일부 실시형태에서, 부형제는 또한 클로스트리듐 유도체의 담체로서 작용하도록 첨가될 수 있다. 일 실시형태에서, 폴리-L-라이신은 담체로서 첨가된다.

본 명세서에 개시된 조성물은 일반적으로 약제학적으로 허용가능한 조성물로서 투여된다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용가능한"은 개체에게 투여될 때 이상 반응, 알레르기 반응 또는 다른 뜻밖의 또는 원치않는 반응을 생성하지 않는 임의의 분자 독립체 또는 조성물을 의미한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용 가능한 조성물"은 "약제학적 조성물"과 동의어이며, 활성 성분, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 임의의 클로스트리듐 독소 및/또는 TEM의 치료적으로 유효한 농도를 의미한다. 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물은 의학적 및 수의학적 용도에 유용하다. 약제학적 조성물은 개체에게 단독으로 또는 다른 보충적 활성 성분, 제제, 약물 또는 호르몬과 병용하여 투여될 수 있다. 약제학적 조성물은 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 드라제 제조, 분쇄, 에멀전화, 캡슐화, 포괄(entrapping) 및 동결건조를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 임의의 다양한 공정을 이용하여 제조될 수 있다. 약제학적 조성물은 멸균 용액, 현탁액, 에멀전, 동결건조물, 정제, 알약, 펠렛, 캡슐, 분말, 시럽, 엘릭시르 또는 투여에 적합한 임의의 다른 제형을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 임의의 다양한 형태를 취할 수 있다.

본 약제학적 조성물은 활성 성분의 약제학적으로 허용 가능한 조성물로의 가공을 용이하게 하는 약제학적으로 허용 가능한 담체를 선택적으로 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 "약학적 담체"와 동의어이며, 투여될 때 실질적으로 장기간이 아닌 또는 영구적인 해로운 효과를 갖는 임의의 담체를 의미하고, "약제학적으로 허용 가능한 비히클, 안정제, 희석제, 첨가제, 보조제 또는 부형제"와 같은 용어를 포함한다. 이러한 담체는 일반적으로 활성 화합물과 혼합되거나, 또는 활성 화합물을 희석시키거나 또는 둘러싸도록 허용되며, 고체, 반고체 또는 액체 제제일 수 있다. 활성 성분은 가용성일 수 있거나 또는 목적으로 하는 담체 또는 희석제 중의 현탁액으로서 전달될 수 있다는 것이 이해된다. 수성 매질, 예를 들어, 물, 식염수, 글리신, 하이알루론산 등;고체 담체, 예를 들어, 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 사카린나트륨, 활석, 셀룰로스, 글루코스, 수크로스, 탄산마그네슘 등; 용매, 분산 매질, 코팅; 항균제 및 항진균제; 등장제 및 흡수지연제 또는 활성 성분 중의 임의의 다른 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 임의의 다양한 약제학적으로 허용 가능한 담체가 사용될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체의 선택은 투여 방식에 의존할 수 있다. 임의의 약제학적으로 허용 가능한 담체가 활성 성분과 양립가능하지 않은 경우를 제외하고, 약제학적으로 허용 가능한 조성물 중의 그의 용도가 상정된다. 이러한 약제학적 담체의 구체적 용도의 비제한적 예는 문헌[Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(Howard C. Ansel et al., eds., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 7^th ed. 1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Alfonso R. Gennaro ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 20^th ed. 2000); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Joel G. Hardman et al., eds., McGraw-Hill Professional, 10^th ed. 2001); 및 Handbook of Pharmaceutical Excipients (Raymond C. Rowe et al., APhA Publications, 4^th edition 2003)]에서 찾을 수 있다. 이들 프로토콜은 일상적인 절차이며, 임의의 변형은 당업자의 범주 내이며 본 명세서의 교시로부터 용이하다.

본 명세서에 개시된 약제학적 조성물은 선택적으로 완충제, 보존제, 등장 조절제, 염, 항산화제, 삼투질 농도 조절제, 생리학적 물질, 약학적 물질, 증량제, 유화제, 습윤제, 감미제 또는 향미제 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다른 약제학적으로 허용 가능한 성분(또는 약제학적 성분)을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다. pH를 조절하기 위한 다양한 완충제 및 수단은 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물을 제조하기 위해 사용될 수 있고, 단, 얻어진 제제는 약제학적으로 허용 가능하다. 이러한 완충제는 아세트산염 완충제, 시트르산염 완충제, 인산염 완충제, 중성 완충 식염수, 인산염 완충 식염수 및 붕산염 완충제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 산 또는 염기는 필요하다면 조성물의 pH를 조절하기 위해 사용될 수 있다는 것이 이해된다. 약제학적으로 허용 가능한 항산화제는 메타중아황산나트륨, 티오황산나트륨, 아세틸시스테인, 뷰틸화된 하이드록시아니솔 및 뷰틸화된 하이드록시톨루엔을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 유용한 보존제는 염화벤즈알코늄, 클로로뷰탄올, 티메로살, 아세트산페닐수은, 질산페닐수은, 안정화된 옥시 클로로 조성물 및 켈레이트제, 예를 들어, DTPA 또는 DTPA-비스아마이드, 칼슘 DTPA 및 CaNaDTPA-비스아마이드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 약제학적 조성물에서 유용한 등장 조절제는 염, 예를 들어, 염화나트륨, 염화칼륨, 만니톨 또는 글리세린 및 기타 약제학적으로 허용 가능한 등장 조절제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 약제학적 조성물은 염으로서 제공될 수 있고, 염산, 황산, 아세트산, 락트산, 타르타르산, 말산, 숙신산 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다수의 산에 의해 형성될 수 있다. 염은 대응하는 유리 염기 형태보다 수성 또는 다른 양성자성 용매 중에서 더 가용성이되는 경향이 있다. 약학 분야에 공지된 이들 및 다른 물질은 약제학적 조성물 중에 포함될 수 있다는 것이 이해된다. 클로스트리듐 독소 및 TEM을 포함하는 예시적인 약제학적 조성물은 헌트(Hunt) 등의 발명의 명칭: Animal Protein-Free Pharmaceutical Compositions, 미국 특허 공개 제12/331,816호; 및 다사리(Dasari) 등의 발명의 명칭: Clostridial Toxin Pharmaceutical Compositions, WO/2010/090677에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 전문이 참고로 포함된다.

적합한 약제학적으로 허용 가능한 담체의 선택은 요망되는 특정 제형의 정확한 특성, 예를 들어, 본 조성물이 액체 용액으로 제형화될지의 여부, 사용 시 재구성될 동결건조 분말, 현탁액 용액, 나노입자, 리포좀 또는 마이크로에멀전에 의존할 것이다.

적합한 약제학적으로 허용 가능한 담체의 선택은 또한 투여 경로에 의존할 것이다. 바람직하게는, 담체는 선택된 투여 경로에 적합하게 되도록 제형화된다. 본 약제학적 제형의 투여 방식은 주사, 무바늘 주사(예를 들어, 바이오젝트(Bioject), 제트터치(JetTouch)), 기전, 경피 전달 또는 방광내 주입을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일 구체적 실시형태에서, 제형은 방광 주입을 위한 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 일 실시형태에서, 약제학적 담체는 폴리 리신을 포함한다.

치료 방법

본 개시내용의 양상은 부분적으로, 클로스트리듐 유도체 및 적어도 1종의 투과제를 포함하는 약제학적 조성물을 이용하여 의학적 병태를 치료하는 방법을 제공하되, 본 약제학적 조성물의 투여는 치료 중인 의학적 병태와 관련된 증상을 예방하거나 또는 구한다. 일부 실시형태에서, 투여는 주사에 의한다. 대안의 실시형태에서, 투여는 경피, 피하 또는 국소이다. 또 다른 실시형태에서, 투여는 방광내 전달에 의한다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용은 개선된 환자 기능을 생성하는데 충분한 양으로 치료가 필요한 대상체에게 본 개시내용의 약제학적 제형을 투여하는 단계를 포함하는 질환, 장애, 병태 등을 치료하는 방법을 제공한다. 특정 실시형태에서, 상기 질환은 신경근육 특성, 예를 들어, 근육 및 신경 제어, 예를 들어, 과민성 방광 등에 영향을 미치는 해당 질환을 가진다. 특정 실시형태는 통증 치료, 예를 들어, 두통 또는 요통, 또는 근육통 등의 치료에 관한 것이다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법은, 예를 들어, 우울증, 불안 등을 포함하는 정신 장애의 치료를 포함한다.

비뇨기과학적 장애의 치료

일부 실시형태에서, 의학적 장애는 과민성 방광(OAB), 방광염, 방광암, 신경성 배뇨근 과활동성(NDO)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 비뇨기과학적 방광 질환 및 병태를 포함한다. 실시형태에서, 본 개시내용은 또한, 예를 들어, 신경학적 병태(NOAB), 또는 특발성 OAB(IOAB)에 기인하여 과민성 방광(OAB)으로 고통받는 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

신경성 방광 기능장애는 배뇨와 관련된 정상 신경 경로에 의한 개입으로부터 초래되는 기능장애이다. 신경성 방광 기능장애의 일 유형은 과민성(경련성 또는 과잉 활동성) 방광이다. 과민성 신경성 방광은 방광으로부터의 소변의 조절되지 않은 빈번한 배출을 특징으로 한다. 감소된 방광 용량 및 소변의 불완전한 비우기가 있을 수 있다. 강직성 방광은 합리적인 양의 소변이 축적될 때까지 비우는 수축을 저해하는 방광의 배뇨근의 불능에 의해 야기될 수 있다. 종종, 배뇨에 대한 강한 욕구는 단지 소량의 소변이 방광 내에 있을 때 경험된다. 환자는 긴급, 빈번함, 야간뇨 및 실금 증상을 보고할 수 있다. 신경성 방광 기능장애의 다른 유형은 요도 괄약근을 이완시키는 것의 어려움을 특징으로 한다. 조임근은 강직성일 수 있다. 이는 방광을 비우는 것의 어려움을 야기하는데, 이는 요폐 및 요로 감염을 야기할 수 있다. 신경학적 방광 기능장애의 다른 유형에서, 배뇨근과 요로 조임근이 둘 다 동시에 수축되어 요폐를 야기한다. 배뇨근과 요로 조임근 둘 다의 동시 수축과 관련된 기능장애는 배뇨근-외조임근협동장애(DESD)로 불린다. 각각 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 미국 특허 제7,449,192호; 제8,062,807호 및 제7,968,104호는 치료적 유효량의 보툴리눔 독소를 환자의 방광벽 내로 주사함으로써 신경학적 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하는 방법을 개시한다.

간질성 방광염(IC)은 방광 통증, 만성 골반 통증, 자극적 배뇨 증상 및무균 소변을 특징으로 하는 방광의 불치, 만성, 쇠약성 질환이다. IC에서, 방광벽은 전형적으로 평활근 수축, 감소된 소변 용량, 혈뇨 및 빈뇨, 통증성 배뇨를 야기하는 점막 궤양 및 흉터형성과 관련된 염증 침윤을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 약제학적 제형은 방광 또는 그의 주변, 예를 들어 배뇨근에 투여될 수 있되, 제형의 투여는 과민성 방광과 관련된 절박성 요실금을 감소시킨다. 특정 실시형태에서, 투약량은 치료 당 약 10 단위 내지 약 200U일 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 약제학적 제형은 방광내 방광 전달에 의해 투여될 수 있다.

따라서, 본 개시내용의 양상은 추가로 본 명세서에 개시된 바와 같은 약제학적 조성물을 제공하는 단계, 클로스트리듐 유도체, 및 적어도 1종의 투과제를 포함하는 단계, 및 카테터를 통해 방광에 약제학적 조성물을 주입함으로써 방광 병태를 치료하는 단계를 포함하는 치료가 필요한 환자에서 방광 병태를 치료하는 방법을 제공하되, 투과제는 치료적으로 효과적인 속도로 그리고 방광벽을 비가역적으로 손상시키는 일 없이 클로스트리듐 유도체에 대한 방광벽의 투과성을 실질적으로 향상시키는 데 효과적인 양으로 존재한다. 일 실시형태에서, 상기 방법은 주입하는 단계 전에 방광벽을 약제학적 조성물로 전처리하는 단계를 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 환자에서 방광 병태를 치료하는 방법은 투과제를 포함하는 용액을 제공하는 단계; 클로스트리듐 유도체에 용액을 첨가하여 치료적 제형을 형성하는 단계, 환자의 방광 내로 카테터를 통해 치료적 제형을 주입하는 단계를 포함하는 환자에서 방광 병태를 포함한다. 일부 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소이다. 대안의 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 TEM이다. 일 실시형태에서, 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소 A형이다. 일부 실시형태에서, 투과제는 계면활성제이다. 일 실시형태에서, 투과제는 비이온성 계면활성제이다. 일부 실시형태에서, 투과제는 양이온성 중합체를 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 양이온성 중합체는 생접착제 또는 점막접착제이다. 일부 실시형태에서, 점막접착제는 키토산, 키토산 유사체 또는 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 비이온성 계면활성제 및 양이온성 중합체를 포함하는 용액을 보툴리눔 독소에 혼합하는 단계를 포함한다.

다른 양상에서, 본 개시내용은 환자에서 간질성 방광염(IC) 증상을 완화시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약제학적 조성물을 제공하는 단계, 클로스트리듐 유도체 및 적어도 1종의 투과제를 포함하는 단계 및 카테터를 통해 방광에 약제학적 조성물을 주입함으로써 IC의 증상을 완화시키는 단계를 포함하되, 투과제는 치료적으로 효과적인 속도로 그리고 방광벽을 비가역적으로 손상시키는 일 없이 클로스트리듐 유도체에 대한 방광벽의 투과성을 실질적으로 향상시키는데 효과적인 양으로 존재한다.

다른 양상에서, 본 제형은 카테터에 대한 클로스트리듐 유도체의 흡수를 방지하거나 또는 최소화함으로써 클로스트리듐 유도체의 생체 이용가능성을 최대화하고, 장치 표면(주사기, 패치, 마이크로니들, 공학처리 주사기(바이오젝트 등), 관 및 용기를 전달한다.

다른 양상에서, 본 제형은 점막접착제 상호작용을 통해 피부 또는 내부 방광벽면에 대한 클로스트리듐 유도체의 체류를 향상시킴으로써 클로스트리듐 유도체의 생체이용성을 최대화시킨다.

기타 의학적 장애:

통증 치료

다른 실시형태에서, 본 개시내용은 통증을 감소시키는 데 충분한 양으로 치료가 필요한 대상체에게 본 발명의 약제학적 제형을 투여하는 단계를 포함하는 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 다른 실시형태에서, 상기 환자는 근막동통, 편두통, 긴장성 두통, 신경성 동통, 안면통, 하부 요통, 굴-두통, 턱관절 질환과 관련된 통증, 경직 또는 목의 운동이상과 관련된 통증, 수술후 상처 통증 또는 신경통으로 고통받는다. 치료 시간은 다회 치료를 포함할 수 있다.

실시형태에서, 환자는 안면통으로 고통받는다. 안면통으로 고통받고 있는 환자는, 예를 들어, 본 개시내용의 약제학적 제형의 치료 당 약 4 내지 40U를 받는다. 치료 당 40U 초과의 투약량은 또한 치료적 반응을 달성하기 위해 안면통을 지니는 환자에게 투여될 수 있다. 치료 시간은 다회 치료를 포함할 수 있다.

실시형태에서, 환자는 근막동통으로 고통받는다. 근막동통으로 고통받는 대상체는, 예를 들어, 본 발명의 약제학적 제형의 치료 당 약 5 내지 100U를 받는다. 치료 당 100U 초과의 투약량은 또한 치료적 반응을 달성하기 위해 근막동통을 지니는 환자에게 투여될 수 있다. 치료 시간은 다회 치료를 포함할 수 있다.

실시형태에서, 대상체는 하부 요통으로 고통받는다. 하부요통으로 고통받는 대상체는, 예를 들어, 본 발명의 약제학적 제형의 치료 당 약 15 내지 150U를 받는다. 치료 당 150U 초과의 투약량은 또한 치료적 반응을 달성하기 위해 하부요통을 지니는 환자에게 투여될 수 있다. 치료 시간은 다회 치료를 포함할 수 있다.

실시형태에서, 환자는 편두통으로 고통받되, 환자는 1개월 당 15일 이상을 4시간 이상으로 편두통으로 고통받는다. 편두통으로 고통받는 대상체는, 예를 들어, 본 발명의 약제학적 제형의 치료 당 약 0.5 내지 200U를 받는다. 치료 시간은 다회 치료를 포함할 수 있다.

예를 들어, 치료 부위 당 약 0.5U, 약 1.0U, 약 1.5U, 약 2.0U, 약 2.5U, 약 3.0U, 약 3.5U, 약 4.0U, 약 4.5U, 약 5.0U, 약 5.5U, 약 6.0U, 약 6.5U, 약 7.0U, 약 7.5U, 약 8.0U, 약 8.5U, 약 9.0U, 약 9.5U, 약 10.0U, 약 12U, 약 15U, 약 17U, 약 20U, 약 22U, 약 25U, 약 27U, 약 30U, 약 32U, 약 35U, 약 37U, 약 40U, 약 42U, 약 45U, 약 47U 또는 약 50U가 편두통을 지니는 환자에게 투여된다. 환자는 2개 부위로부터 35개까지의 범위에 있는 다수의 부위에서 치료될 수 있다. 실시형태에서, 편두통으로 고통받고 있는 환자는 추미근(각각 5U의 2회 주사), 비근근(5U의 1회 주사), 전두근(각각 5U의 4회 주사), 측두근(각각 5U의 8회 주사), 후두근(각각 5U의 6회 주사), 목근육(각각 5U의 4회 주사), 및 승모근(각각 5U의 6회 주사)에 걸쳐 0.1㎖ 주사 당 5U로 31회이다. 중앙에 주사될 수 있는 비근근을 제외하고, 모든 근육은, 특정 실시형태에서, 두경부의 좌측에 대해 주사 부위의 절반 그리고 우측에 대해 절반으로 양 방향으로 주사될 수 있다. 치료 당 200U 초과의 투약량이 또한 치료적 반응을 달성하기 위해 편두통을 지니는 환자에게 투여될 수 있다. 치료 시간은 다회 치료를 포함할 수 있다. 대안의 실시형태에서, 약제학적 조성물은 경피로 또는 국소로 투여된다.

실시형태에서, 환자는 굴두통으로 고통받는다. 굴두통으로 고통받는 대상체는, 예를 들어, 본 발명의 약제학적 제형의 치료 당 약 4 내지 40U를 받는다. 추가 예에서, 대상체는 치료 당 약 4U 내지 40U를 받는다. 치료 당 40U 초과의 투약량이 또한 치료적 반응을 달성하기 위해 굴두통을 지니는 환자에게 투여될 수 있다. 치료 시간은 다회 치료를 포함할 수 있다.

실시형태에서, 환자는 긴장성 두통으로 고통받는다. 긴장성 두통으로 고통받는 대상체는, 예를 들어, 본 발명의 약제학적 제형의 치료 당 약 5 내지 50U를 받는다. 실시형태에서, 긴장성 두통으로 고통받고 있는 환자는 추미근(각각 5U의 2회 주사), 비근근(5U의 1회 주사), 전두근(각각 5U의 4회 주사), 측두근(각각 5U의 8회 주사), 후두근(각각 5U의 6회 주사), 목근육(각각 5U의 4회 주사), 및 승모근(각각 5U의 6회 주사)에 걸쳐 0.1㎖ 주사 당 5U로 31회이다. 중앙에 주사될 수 있는 비근근을 제외하고, 모든 근육은, 특정 실시형태에서, 두경부의 좌측에 대해 주사 부위의 절반 그리고 우측에 대해 절반으로 양 방향으로 주사될 수 있다. 치료 당 200U 초과의 투약량이 또한 치료적 반응을 달성하기 위해 긴장성 두통을 지니는 환자에게 투여될 수 있다. 치료 시간은 다회 치료를 포함할 수 있다. 대안의 실시형태에서, 약제학적 제형은 국소로 또는 경피로 투여될 수 있다.

실시형태에서, 환자는 급성 또는 재발성 만성 부비강염과 관련된 굴두통 또는 안면통으로 고통받는다. 예를 들어 본 발명의 약제학적 제형은 비강 점막에 또는 부비강 위에 놓인 피하 구조에 투여될 수 있되, 제형의 투여는 급성 또는 만성 부비강염과 관련된 두통 및/또는 안면통을 구한다. 추가 실시형태에서, 본 발명의 임의의 약제학적 제형은 부비강 위에 놓인, 예컨대 사골; 상악골; 꼭지돌기; 전두골 및 설상골로 이루어진 군으로부터 선택되는 부비강 중 하나 이상 위의 비강 점막에 또는 피하 구조에 투여될 수 있다. 다른 실시형태에서, 부비강 위에 놓인 피하 구조는 이마, 협골, 관자놀이, 이후방 및 입술로 이루어진 군으로부터 선택된 영역 중 하나 이상 내에 놓여있다. 실시형태에서, 각각 5U의 다회 주사가 급성 또는 재발성 만성 부비강염과 관련된 굴두통 또는 안면통을 치료하기 위해 투여된다.

다른 실시형태에서, 급성 또는 재발성 만성 부비강염과 관련된 굴두통 또는 안면통으로 고통받고 있는 환자는 환자의 고통받는 영역에 본 발명의 임의의 약제학적 제형을 투여함으로써 치료된다. 추가 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 약제학적 제형은 부비강을 자극하는 삼차신경의 돌출부에 투여된다.

급성 또는 재발성 만성 부비강염과 관련된 굴두통 또는 안면통으로 고통받는 환자는 종종 비염, 부비강 분비과다 및/또는 누런 콧물을 포함하는 증상을 나타낸다. 일 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 제형에 의해 치료되는 환자는 부비강 분비과다 및 고름분비물의 증상을 나타낸다.

본 개시내용의 실시형태는 또한 급성 또는 재발성 만성 부비강염과 관련된 굴두통 또는 안면통으로 고통받고 있는 환자를 치료하는 방법을 제공하되, 대상체는 신경통으로 고통받는다. 특정 실시형태에서, 신경통은 삼차신경 신경통이다. 다른 실시형태에서, 신경통은 감각 신경 상의 압축력과 관련되거나; 고유 신경 손상, 탈수초 질환, 또는 유전 장애와 관련되거나; 대사 장애와 관련되거나; 중심 신경 혈관 질환과 관련되거나 또는 외상과 관련된다. 본 개시내용의 다른 실시형태에서, 통증은 발치 또는 재건과 관련된다.

실시예

다음의 실시예는 본 발명의 실시형태 및 양상을 예시하며, 본 개시내용의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

실시예 1

본 연구의 목적은 암컷 스프레그 돌리 래트 암컷의 소변 방광 내로 주입에 의해 투여되는 8개 비히클 제형 중 하나에서 보톡스(등록상표)로서 알려진 보툴리눔 독소 A형의 효과를 평가하는 것이었다. 투여 후 8일에 효과를 시험하되, 효능 및 내약성을 각각 면역조직화학(IHC) 및 조직병리학 각각에 의해 평가하였다.

양성 대조군: 4마리 래트에 배뇨근 내로 주사에 의해 식염수 중의 보톡스(등록상표) 10 단위를 투여하였다.

음성 대조군: 비히클만을 함유하는 제형(보톡스(등록상표)의 첨가 없이 표 1에 나타낸 바와 같음).

절단된 SNAP 25를 시냅스 말단에서 보톡스(등록상표) 활성의 바이오마커로서 그리고 전달 방법의 기능성의 잠재적 지표로서 사용하였다. 이 연구에서 이를 요로상피에 걸친 보톡스(등록상표)의 성공적인 이동을 확인하기 위해 사용하였다. 시냅토파이신 발현을 사용하여 시냅스 말단을 동정하고 절단된 SNAP 25 국소화의 특이성을 보장하였다. 조직병리학을 행하여서 방광 조직 상의 제형 영향을 평가하였다.

체중이 150 내지 200 그램인 암컷 래트에 표 1에 따라 0.5㎖ 비히클 제형 또는 비히클 제형 + 30U 보톡스(등록상표)를 투여하였다:

제형의 방광내 주입을 다음과 같이 수행하였다: 아이소플루란을 이용하여 래트를 마취시키고, 하복부 상에 적용한 손가락 끝 압력의 방법에 의해 방광을 비웠다. 마취 하에 있는 동안, 요도를 통해 방광 내로 카테터를 도입하였다. 후속적으로, 제형을 0.5㎖ + 0.1㎖의 용량 용적으로 방광 내에 2분 과정에 걸쳐 서서히 투여하였다(카테터에 의해 생긴 죽은 공간에 대해 적용). 마취 회복 전 제형을 60분 동안 머무르게 하였다. 래트를 주입 후 1주에 안락사시켰다.

방광을 수집하고, 10% 포말린 중에서 고정시키고 나서, 표준 조직학 기법을 이용하여 처리하였다. 추가 박편을 준비하고 나서, 절단된 SNAP 25 및 시냅토파이신에 대한 형광 면역조직화학에 대해 처리하였다.

면역형광 : 동물 당 하나의 조직 블록은 세로방향 면 및 슬라이드 장착에서 동결조직 절편화하였다(14㎛-두께). 3개의 슬라이드를 각각의 블록으로부터 준비하였고, 3개의 박편은 각각의 슬라이드 상에서 대략 140㎛ 간격이었다. 2개의 슬라이드를 면역형광을 위해 처리하였다. 조직 박편을 차단 완충제(1X PBS + 0.1% TX-100 + 10% 정상 당나귀 혈청) 중에서 비특이적 신호에 대해 처음 차단시켰고, 이어서, 차단 완충제 중에서 4℃에서 밤새 목적으로 하는 농도에서 항 절단 SNAP25 및 항-시냅토파이신을 포함하는 1차 항체의 조합물과 함께 인큐베이션시켰다. 세척 후, 박편을 4℃에서 2시간 동안 2차 항체(잭슨 이뮤노리서치(Jackson ImmunoResearch))와 함께 인큐베이션시키고, 이어서 다시 세척하였다. 슬라이드 장착 박편을 1.5㎍/㎖ DAPI와 함께 플루오로마운트-G(Fluoromount-G)를 이용하여 커버슬립하였다. 해부학적 평가를 위해 세번째 슬라이드를 헤마톡실린과 에오신(H&E)을 이용하여 염색하였다.

데이터 분석 및 정량화: 이미지를 분석하고 나서, 이미지-프로(Image-Pro)(등록상표)(메디아사이버넥틱스(MediaCybernectics)), 메타몰프(Metamorph)(등록상표)(몰레큘러 디바이스(Molecular Devices)) 또는 ZEN(칼 제이스(Carl Zeiss)) 소프트웨어를 이용하여 레이카(Leica) DMLB 브라이트필드 현미경, 니콘(Nikon) E800 형광 광시야 현미경 또는 제이스(Zeiss) LSM-710 공초점 현미경 상에서 캡쳐하였다. 신경 섬유의 공간 관계를 확립하기 위해 이마리스(Imaris)(등록상표)(비트플레인(Bitplane)) 소프트웨어를 고해상도, 3D 정량적 분석을 위해 사용하였다. 신경 섬유 유형을 그들의 형태 및 신경화학을 기준으로 동정하였다. 준정량적 분석을 위해, 각각의 슬라이드에 대해, 모두 3개 박편을 현미경 하에 조심해서 관찰하였고, SNAP25₁₉₇ 염색 정도에 대해(도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같음) 또는 방광 해부구조의 무결성에 대해(H&E)(도 5a 내지 도 5d에 나타낸 바와 같음) 각각의 동물에 대해 스코어(0 내지 4)를 제공하였다. 평균 스코어를 각각의 치료/제형에 대해 계산하였고, 결과를 표 2 및 도 6에 부분적으로 제시한다.

제형을 다음에 기반하여 평가하였다:

1. 방광벽 내 조직학적 변화(여기서, "방추상 세포 침윤물"의 진단은 방광에 대해 이루어졌고, 이때, 비결정적 유래의 증가된 수의 방추상 세포는 프로프리아층을 침윤하는 것으로 발견되었으며(도 5); 반응성 변화로서, 이들을 섬유증에 대한 잠재적 전구체로서 바람직하지 않은 것으로 고려함); 및

2. 절단된 SNAP 25 스코어.

결과의 요약: 결과를 표 2에 요약한다.

시험 제형: 양성 면역조직 스코어를 0.1%(w/v) 틸록사폴 제형을 제외하고 보톡스(등록상표)의 방광내 주입 후 모든 샘플에서 관찰하였다. 도 6은 일부 예시적 제형의 IHC 스코어를 나타낸다.

실시예 2

과민성 방광의 치료

이 실시예는 신경성 또는 특발성 방광 기능장애에 기인하는 과잉 활동성 방광을 지니는 환자의 치료를 기재한다.

신경성 또는 특발성 방광 기능장애에 기인하는 과잉 활동성 방광 증상(방광 감염, 실금 및 절박성 요실금)을 지니는 몇몇 환자를 방광 주입에 의해 치료한다. 보톡스(등록상표), 0.1%(w/v) 트리톤(상표명)X-100 및 1%(w/v) 키토산 약 100 단위를 포함하는 약제학적 조성물. 약제학적 조성물을 얕은 진정 작용 하에 있는 동안 환자의 방광에 주입한다. 평균 최대 방광 용량의 상당한 증가 및 평균 최대 배뇨근 배뇨 압력의 평균 최대 방광 용량을 치료 후 7일에 관찰한다.

실시예 3: 방광벽의 트리톤 X-100 유도 증가된 투과성은 가역적이였다

인간 방광 요로 상피 세포(CELLnTEC 카탈로그 번호 HBEP.05)를 폴리카보네이트 막 삽입물 상에서 웰 당 대략 150,000개의 생존 세포의 농도로 플레이팅하였다. 삽입물을 24 웰 조직 배양 플레이트 내에 두었다. 이어서, CELLnTEC CnT-58 배지(성장 배지)를 웰에 첨가하고 나서, 세포가 합류될 때까지 세포를 2일 동안 37℃에서(5% CO₂) 인큐베이션시켰다. 인큐베이션의 마지막에, 성장 배지를 제거하고 나서, CELLnTEC CnT-21 배지(분화 배지)로 대체하였다. 이어서, 세포를 7일 동안 분화시키고, 이후에 2 내지 3개 세포 인간 요로상피층을 확립하였다. 다음의 비히클을 이용하여 세포를 1시간 동안 처리하였다: 0.9% 식염수, 0.9% 식염수 중의 0.1% 트리톤 X-100 및 식염수 중의 0.5% 트리톤 X-100. 각각의 비히클을 3회 중복해서 시험하였다. 세포를 성장시킨 막 표면에 0.1㎖ 용적의 각각의 비히클을 적용함으로써 세포를 처리하였다. 노출 비히클 용액을 삽입물로부터 제거한 후에, 분화 배지를 각각의 삽입물에 첨가하였다. 이어서, 세포를 인큐베이션시키고 나서, 0, 24, 또는 48시간 동안 회복시켰다. 0.9% 식염수(음성 대조군)을 0시간에만 시험하였다는 것을 주의한다. 이어서, 젤라틴 투과성 분석을 수행하였다. 각각의 삽입물로부터 배지를 제거함으로써 젤라틴 투과성 분석을 수행한 다음, 식염수 중에서 제형화한 0.1㎖ 용적의 0.1㎎/㎖ 오레곤 그린(Oregon Green) 488 표지 젤라틴을 각각의 삽입물에 첨가하였다. 삽입물을 0.8㎖ 용적의 이글스 균형 염 용액을 함유하는 웰에 넣었다. 1시간 노출 후에, 통과액을 수집하고 나서, 엔비전(Envision) 기기를 이용하여 형광에 대해 측정하였다. 이어서, 24시간 및 48시간 시험 결과를 0시간 데이터와 비교하여 젤라틴 투과성의 감소가 일어났는지의 여부를 결정하였다.

0.1% 트리톤 X-100으로 처리한 시험관내 요로상피를 통해 확산된 젤라틴의 양이 24 및 48시간 회복 후에 더 낮다는 것을 발견하였다. 이들 결과는 0.1% 트리톤 X-100에 의한 처리 후 시험관내 인간 방광 투과성의 회복을 시사한다.

다수의 변경 및 변형이 개시내용의 정신과 범주로부터 벗어나는 일 없이 당업자에 의해 이루어질 수 있다. 따라서, 기재된 실시형태는 실시예의 목적을 위해서만 제시되었고, 실시형태는 다음의 청구범위의 범주를 제한하는 것으로 취해져서는 안된다는 것이 이해되어야 한다. 따라서 다음의 청구범위는 문자 그대로 제시된 구성요소의 조합뿐만 아니라 실질적으로 동일한 결과를 얻기 위해 실질적으로 동일한 방법으로 실질적으로 동일한 기능을 수행하기 위한 모든 동등한 구성요소를 포함하는 것으로 읽어야 한다. 따라서 청구범위는 상기 기재된 것, 개념적으로 동등한 것 및 개시내용의 생각을 포함하는 것을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

Claims (20)

1. 치료적 유효량의 클로스트리듐 유도체 및 적어도 1종의 투과제(permeabilizing agent)를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 적어도 1종의 투과제는 상기 클로스트리듐 유도체에 대한 방광벽의 투과성을 실질적으로 그리고 가역적으로 증가시키는 데 효과적인 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소이고, 상기 적어도 1종의 투과제는 계면활성제 및 점막접착제를 포함하는, 약제학적 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 계면활성제는 비이온성 계면활성제이고, 상기 점막접착제는 양이온성 중합체인, 약제학적 조성물.
4. 제2항에 있어서, 상기 계면활성제는 비이온성 계면활성제인, 약제학적 조성물.
5. 제2항에 있어서, 상기 계면활성제는 알킬 아릴 폴리에터인, 약제학적 조성물.
6. 제2항에 있어서, 상기 점막접착제는 키토산, 키토산 유사체, 키토산 유도체 또는 이들의 조합물을 포함하는, 약제학적 조성물.
7. 제2항에 있어서, 상기 계면활성제는 약 0.01% 내지 약 0.5%(w/v) 범위의 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
8. 제5항에 있어서, 상기 점막접착제는 약 0.01% 내지 약 5%(w/v) 범위의 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
9. 제1항에 있어서, 상기 클로스트리듐 유도체는 보툴리눔 독소인, 약제학적 조성물.
10. 제2항에 있어서, 상기 계면활성제는 옥토시놀-9인, 약제학적 조성물.
11. 제2항에 있어서, 상기 계면활성제는 노녹시놀-9인, 약제학적 조성물.
12. 제10항에 있어서, 상기 계면활성제는 약 0.1%(w/v)의 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
13. 제11항에 있어서, 상기 계면활성제는 약 0.1%(w/v)의 양으로 존재하는, 약제학적 조성물.
14. 신경성 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하는 방법으로서, 상기 환자의 방광벽에 약제학적 조성물을 방광내로 주입하는 단계를 포함하되, 치료적 유효량의 클로스트리듐 유도체 및 적어도 1종의 투과제를 포함하는 상기 약제학적 조성물은 치료적으로 효과적인 속도로 보툴리눔 신경독소에 대한 상기 방광벽의 투과성을 실질적으로 증가시키는 데 효과적인 양으로 존재하는, 신경성 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하는 방법.
15. 제14항에 있어서, 상기 적어도 1종의 투과제는 계면활성제 및 점막접착제를 포함하는, 신경성 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하는 방법.
16. 제15항에 있어서, 상기 계면활성제는 비이온성 계면활성제를 포함하는, 신경성 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하는 방법.
17. 제15항에 있어서, 상기 점막접착제는 키토산, 키토산 유사체, 키토산 유도체 또는 이들의 조합물을 포함하는, 신경성 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하는 방법.
18. 제16항에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제는 알킬 아릴 폴리에터를 포함하는, 신경성 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하는 방법.
19. 제15항에 있어서, 상기 점막접착제는 중합체 폴리페놀을 포함하는, 신경성 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하는 방법.
20. 제15항에 있어서, 상기 점막접착제는 중합체 폴리티올을 포함하는, 신경성 방광 기능장애를 지니는 환자를 치료하는 방법.

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