CN106573041A - 用于膀胱内灌注的生物制品的制剂 - Google Patents

Abstract

公开了用于膀胱内灌注的包含梭菌衍生物和透化剂的药物制剂。

Description

用于膀胱内灌注的生物制品的制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2014年7月31日提交的美国临时申请系列第62/031,302号的权益，其通过引用整体并入本文。

领域

本公开涉及包含梭菌衍生物的药物制剂及其使用方法。具体地，本公开涉及用于膀胱灌注的含有梭菌衍生物的药物制剂。

背景

神经毒素疗法，特别是肉毒杆菌毒素已用于治疗各种医学病状，包括泌尿科病状诸如膀胱过度活动症(OAB)和逼尿肌过度活动症。

治疗膀胱病症诸如膀胱过度活动症(OAB)、与神经病状相关的逼尿肌过度活动症的肉毒杆菌毒素疗法通常通过穿过膀胱壁并进入膀胱周围的无力的肌肉组织的注射来施用。该方法需要施用约30至40次通过膀胱壁的注射，如图1所示。通过注射的药物施用可导致局部疼痛，并且可能使患者暴露于血源性疾病。在替代施用途径中，膀胱内灌注允许药物通过穿过膀胱壁被直接递送至膀胱内。

膀胱壁对大多数物质是不可渗透的。如图2所示，分层尿路上皮由三个细胞层组成：伞细胞、中间细胞和基底细胞。基底细胞是通过细胞分裂代替部分分化的中间细胞的生发细胞。高度分化且极化的伞细胞位于膀胱的管腔上，并且是物质在血液与尿液之间运动的主要物理屏障。伞细胞的顶膜被由称为尿空斑蛋白(uroplakin)的蛋白质组成的斑块覆盖，并且给予顶膜厚的外观。伞细胞还含有紧密连接，其限制尿和更大的分子通过上皮的旁细胞运动。

因此，仍然需要替代肠胃外施用的可增强穿过膀胱壁的递送的药物制剂。

发明概述

在一些方面，本公开提供了用于膀胱内(膀胱)施用的药物制剂，其包含梭菌衍生物和至少一种透化剂，所述透化剂可渗透患者的膀胱壁并保留梭菌衍生物的生物活性以产生所需的治疗效果。

在一个方面，本公开提供了包含治疗有效量的梭菌衍生物和至少一种透化剂的药物组合物，其中所述至少一种透化剂以有效地显著且可逆地增加膀胱壁对梭菌衍生物的渗透性的量存在。

在另一方面，本公开提供了一种制备适合于膀胱内膀胱施用的药物制剂的方法，所述方法包括提供包含至少一种透化剂的溶液；将所述溶液添加至包含梭菌衍生物的组合物。在一些实施方案中，所述方法包括向梭菌衍生物中添加约50ml至约100ml的溶液。在一些实施方案中，梭菌衍生物是肉毒杆菌毒素。在一个实施方案中，所述方法包括向肉毒杆菌毒素A型中添加约50ml至约100ml的包含约1％(w/v)壳聚糖、类似物或衍生物和约0.1％(w/v)Triton^TMX100、类似物或衍生物的水溶液。在一个实施方案中，所述方法包括将包含1％(w/v)壳聚糖和0.1％(w/v)Triton^TMX-100的50ml水溶液添加至含有约100个单位或200个单位的冻干肉毒杆菌毒素A型的小瓶中；以及轻轻混合以使冻干的A型肉毒杆菌毒素再水化。

在另一个方面，本发明的药物制剂通过防止或最小化梭菌衍生物至导管、递送装置表面(注射器、贴片、微针、工程化注射器(Bioject，等))、管和容器的吸附来最大化梭菌衍生物的生物利用度。

根据另一个方面，本公开提供了用于治疗患者的医学病症的方法，所述方法包括施用根据本公开提供的药物组合物，从而治疗所述医学病症的步骤。在一个实施方案中，本发明的方法减轻了医学病症的一个或多个症状。在一个实施方案中，所述医学病症包括神经源性特发性膀胱功能障碍或膀胱疼痛。在一些方面，提供了用于治疗患有神经源性或特发性膀胱功能障碍、膀胱疼痛的患者的方法，其包括：向患者的膀胱经膀胱内灌注药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的梭菌衍生物和至少一种透化剂(其以对于显著增加膀胱壁对梭菌衍生物以治疗有效速率的渗透有效的量存在)。

还设想了上文中概述的本发明的药物制剂和方法的其它方面和变化，并且当考虑以下公开内容时，所述方面和变化将被更充分地理解。

附图简述

图1显示现有技术肉毒杆菌毒素至膀胱壁的膀胱内(intracystinal)注射；

图2A-2C是尿路上皮的示意图，其中：

A)尿路上皮由三个细胞层组成：基底细胞、中间细胞和表面伞细胞。

B)伞细胞展示在其顶膜上的斑块和囊泡的细胞质网络，所述细胞质网络含有在紧密连接处连接的原纤维和在平滑基底膜上的桥粒。

C)观察到腔的尿路上皮的顶膜显示斑块和铰链区。

图3是建立用于评估测试制剂渗透至膀胱中的程度的基础的直观图；其中切割的SNAP 25用作突触末稍处的活性的生物标志物，并且突触囊泡蛋白表达用于鉴定突触末稍和确保切割的SNAP 25定位的特异性。渗透程度与SNAP25-197染色的程度相关；

图4是显示来自具有“4”和“0”的IHC分数的两个膀胱的示例性免疫组织化学结果的直观图；其中切割的SNAP 25用作突触末稍处的活性的生物标志物，突触囊泡蛋白表达用于鉴定突触末稍和确保切割的SNAP 25定位的特异性；

图5A-5D是显示灌注后膀胱组织的不同状态的示例性显微照片；并且

图6是显示根据本公开的方面的一些示例性制剂的免疫组织化学(IHC)评分的图。

优选实施方案的详细描述

肉毒杆菌神经毒素(BoNT)，例如BoNT/A、BoNT/B等，通过阻断神经分泌物质(包括神经递质)的释放而作用于神经系统。BoNT的作用通过其与细胞表面上的受体分子的结合而引发。所得的毒素-受体复合物随后经历胞吞作用。一旦在细胞内，BoNT就切割负责神经递质对接的胞吐特异性蛋白并从细胞释放称为SNARE的蛋白(可溶性N-乙基马来酰亚胺-敏感因子附着蛋白受体)。所得的瞬时化学去神经已被医学上用于阻断神经肌肉接头处的运动神经传递，从而导致各种治疗应用。

本公开的方面部分地提供了适于膀胱内膀胱递送的药物制剂，其包含梭菌衍生物和至少一种透化剂。

在一个方面，本公开部分地提供了包含治疗有效量的梭菌衍生物和至少一种透化剂的药物组合物，其中所述至少一种透化剂以有效地显著且可逆地增加膀胱壁对梭菌衍生物的渗透性的量存在。在一些实施方案中，梭菌衍生物是肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，所述至少一种透化剂包含表面活性剂和粘膜粘附剂。

定义

如本文所使用的，下面所示的词语或术语具有以下定义：

如本文中所用，“约”或“大约”意指如由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，其将部分地取决于如何测量或测定该值(即，测量系统的局限性)。例如，根据本领域的实践，“约”在本领域中可意指每实践在1个或不止1个标准偏差内。当在本申请和权利要求中描述具体值时，除非另有说明，否则术语“约”是指对于特定值在可接受的误差范围内。

“活性药物成分”(API)意指在向受试者或患者施用时或施用后发挥作用的成分。API可以包括，例如，天然或重组的梭菌神经毒素，例如肉毒杆菌毒素、重组修饰的毒素、其片段，TEM及其组合。

“施用”或“施予”意指将药物组合物给予(即施用)受试者或可选地接受药物组合物的受试者的步骤。本文公开的药物组合物可通过各种方法局部施用。例如，肌内、皮内、皮下施用、鞘内施用、腹膜内施用、局部(经皮肤)、灌注和植入(例如，缓释装置诸如聚合物植入物或微渗透泵)都可是适当的施用途径。

“缓解”意指疼痛、头痛、活动过度肌肉，或病状或病症的任何症状或原因的发生减少。因此，减轻包括一定的减少，显著减少，接近总的减少和总的减少。

“无动物蛋白质”是指不存在血液来源的、血液汇集的和其它动物来源的产物或化合物。“动物”意指哺乳动物(诸如人)、鸟、爬行动物、鱼、昆虫、蜘蛛或其它动物物种。“动物”不包括微生物，诸如细菌。因此，无动物蛋白的药物组合物可包括肉毒杆菌神经毒素、重组修饰的毒素或TEM。例如，“无动物蛋白质”药物组合物意指大体上不含或基本上不含或完全不含血清来源的白蛋白、明胶和其它动物来源的蛋白质(诸如免疫球蛋白)的药物组合物。无动物蛋白质的药物组合物的实例是包含肉毒杆菌毒素、TEM或重组修饰的毒素(作为活性成分)和合适的多糖作为稳定剂或赋形剂或由其组成的药物组合物。

“生物活性”描述了药物对生命物质的有益或不利影响。当药物是复杂的化学混合物时，该活性由物质的活性成分施加，但可通过其它成分改性。生物活性可以通过体内LD₅₀或ED_5o测定或通过体外测定诸如例如基于细胞的效力测定(如在美国出版物20100203559、20100233802、20100233741和美国专利8,198,034中描述的，所述出版物的每一个通过引用整体并入本文)来评估为效力或毒性。

“肉毒杆菌毒素”意指由肉毒梭菌(Clostridium botulinum)产生的神经毒素，以及由非梭菌物种重组制备的肉毒杆菌毒素(或其轻链或重链)。如本文中所用，短语“肉毒杆菌毒素”包括肉毒杆菌毒素A、B、C、D、E、F和G血清型以及它们的亚型和任何其它类型的其亚型，或在每种情况下任何前述类型的任何再工程化的蛋白质、类似物、衍生物、同源物、部分、子部分、变体或形式。如本文中所用，“肉毒杆菌毒素”还包括“经修饰的肉毒杆菌毒素”。如本文中所用，另外的“肉毒杆菌毒素”还包括肉毒杆菌毒素复合物(例如300kDa、500kDa和900kDa复合物)，以及不与复合蛋白缔合的肉毒杆菌毒素的神经毒性组分(150kDa)。

“梭菌衍生物”是指含有梭菌毒素的任何部分的分子。如本文中所用，术语“梭菌衍生物”包括天然或重组神经毒素、重组修饰的毒素、其片段、靶向囊泡胞吐调节剂(TEM)或其组合。

“梭菌毒素”是指由梭菌毒素菌株产生的任何毒素，其可执行整个细胞机制，通过所述机制梭菌毒素刺激细胞并且包括梭菌毒素与低或高亲和力梭菌毒素受体的结合、毒素/受体复合物的内化、梭菌毒素轻链至细胞质中的易位和梭菌毒素底物的酶促修饰。梭菌毒素的非限制性实例包括肉毒杆菌毒素如BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C₁、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F、BoNT/G、破伤风毒素(TeNT)、Baratii毒素(BaNT)和酪酸毒素(BuNT)。从术语“梭菌毒素”中排除不是神经毒素的BoNT/C₂细胞毒素和BoNT/C₃细胞毒素。本文公开的梭菌毒素包括但不限于天然存在的梭菌毒素变体，诸如例如梭菌毒素同种型和梭菌毒素亚型；非天然存在的梭菌毒素变体，诸如例如保守梭菌毒素变体、非保守梭菌毒素变体、梭菌毒素嵌合变体及其活性梭菌毒素片段或其任意组合。本文公开的梭菌毒素还包括梭菌毒素复合物。如本文中所用，术语“梭菌毒素复合物”是指包含梭菌毒素和非毒素相关蛋白(NAP)的复合物，诸如，例如肉毒杆菌毒素复合物、破伤风毒素复合物、Baratii毒素复合物和酪酸毒素复合物(Butyricum toxin complex)。梭菌毒素复合物的非限制性实例包括由肉毒梭菌产生的那些复合物，诸如，例如900-kDa BoNT/A复合物、500-kDa BoNT/A复合物、300-kDa BoNT/A复合物、500-kDa BoNT/B复合物、500-kDa BoNT/C₁复合物、500-kDa BoNT/D复合物、300-kDaBoNT/D复合物、300-kDa BoNT/E复合物和300-kDa BoNT/F复合物。

用于生物活性成分的“有效量”意指通常足以在受试者中诱导所需变化的成分的量。例如，当期望的作用是自身免疫性疾病的症状的减少时，成分的有效量是引起自身免疫性疾病的症状的至少显著减少并且不导致显著毒性的那个量。

应用于药物组合物的非活性成分成分(诸如用于与肉毒杆菌毒素混合的稳定剂)的“有效量”是指当向个体施用时，足以积极影响活性成分的释放和/或活性的非活性成分组份的量。该“有效量”可基于本说明书中的教导和本领域的一般知识来确定。

“完全不含(即由术语“组成”)”意指在所使用的仪器或方法的检测范围内，不能检测到物质或不能确认其存在。

“基本上不含”(或“基本上由......组成”)意指仅可检测到痕量的物质。

“轻链”意指梭菌神经毒素的轻链。其具有约50kDa的分子量，并且可被称为肉毒杆菌神经毒素的L链L，或被称为其蛋白水解结构域(氨基酸序列)。

“重链”意指肉毒杆菌神经毒素的重链。其具有约100kDa的分子量，并且可被称为H链或H。

H_C意指来源于肉毒杆菌神经毒素的H链的片段(约50kDa)，其大约相当于H链的羧基末端区段或对应于完整H链中的该片段的部分。据信其含有牵涉对运动神经元的高亲和力、突触前结合的天然或野生型肉毒杆菌神经毒素的部分。

H_N表示来源于肉毒杆菌神经毒素的H链的片段(约50kDa)，其大约相当于H链的氨基末端区段或对应于该片段的部分。据信其含有牵涉L链穿过胞内内体膜的易位的天然或野生型肉毒杆菌神经毒素的部分。

LH_N或L-H_N意指来源于梭菌神经毒素的片段，其含有与H_N结构域偶联的L链或其功能片段。其可通过蛋白水解从完整的梭菌神经毒素中获得，以去除或修改H_C结构域。

“植入物”意指受控释放(例如，脉冲或连续)组合物或药物递送系统。植入物可以被例如注射、插入或植入人体中。

“膀胱内施用”是指通过尿导管将给定物质直接注射至膀胱中。

“局部施用”意指药物诸如通过例如肌内或真皮内或皮下注射或局域施用，在动物体上或体内的在其上需要药物的生物学作用的部位处或其附近的直接施用。局部施用不包括全身性施用途径，诸如静脉内或口服施用。局域施用是一种其中将药剂施用于患者的皮肤的局部施用。

“经修饰的肉毒杆菌毒素”意指与天然肉毒杆菌毒素相比，其氨基酸中至少一个已被删除、修饰或替换的肉毒杆菌毒素。另外，经修饰的肉毒杆菌毒素可以是重组产生的神经毒素，或重组制备的神经毒素的衍生物或片段。经修饰的肉毒杆菌毒素保留天然肉毒杆菌毒素的至少一种生物活性，诸如结合肉毒杆菌毒素受体的能力或抑制神经递质从神经元释放的能力。经修饰的肉毒杆菌毒素的一个实例是具有来自一种肉毒杆菌毒素血清型(诸如血清型A)的轻链和来自不同肉毒杆菌毒素血清型(诸如血清型B)的重链的肉毒杆菌毒素。经修饰的肉毒杆菌毒素的另一个实例是与神经递质偶联的肉毒杆菌毒素，例如物质P。

“突变”意指天然存在的蛋白质或核酸序列的结构修饰。例如，在核酸突变的情况下，突变可以是DNA序列中一个或多个核苷酸的缺失、添加或取代。在蛋白质序列突变的情况下，突变可以是蛋白质序列中一个或多个氨基酸的缺失、添加或取代。例如，包含蛋白质序列的特定氨基酸可取代另一个氨基酸，例如选自包括氨基酸丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、酪氨酸或任何其它天然或非天然存在的氨基酸或化学修饰的氨基酸的组的氨基酸。蛋白质序列的突变可以是DNA序列突变的结果，当转录时，所得的mRNA翻译，产生突变的蛋白质序列。蛋白质序列的突变还可通过将含有所需突变的肽序列与所需蛋白质序列融合来产生。

“患者”是指接受医学或兽医护理的人或非人受试者。因此，如本文所公开的，所述组合物和方法可用于治疗任何动物，诸如哺乳动物等。

“周围施用”或“外周施用”意指皮下、皮内、经皮或皮下施用，但不包括肌内施用。“外周”意指在皮下位置中，并且不包括内脏部位。

“透化剂”是指任何天然存在的或合成的化合物、物质或分子，其具有能够增强表面(包括但不限于皮肤、膀胱壁等)对选定的化合物诸如API(活性药物成分)的渗透性。

“渗透有效量”是指对于显著增加表面对治疗剂以治疗有效速率的渗透有效的量。对于膀胱内膀胱递送，渗透有效量是指这样的量，该量足以显著增加膀胱壁对梭菌衍生物的渗透性持续所需的时间间隔，而不会不可逆地损坏膀胱壁，在此之后，可恢复膀胱壁的原始选择性不可渗透性。

“药物组合物”意指包含活性药物成分诸如，例如肉毒杆菌毒素和至少一种另外的成分诸如，例如稳定剂或赋形剂等的组合物。因此，药物组合物是适于向受试者诸如人患者诊断或治疗性施用的制剂。药物组合物可以以例如冻干或真空干燥状态存在、可以是在冻干或真空干燥的药物组合物复溶后形成的溶液，或作为不需要复溶的溶液或固体。

药物组合物的组成成分可被包括在单一组合物中(即，除了任何所需的复溶流体之外，在药物组合物的初始配混时存在所有组成成分)或包括为两组分系统，例如用复溶媒介物复溶的真空干燥的组合物，所述重组媒介物可以例如含有在药物组合物的初始配混中不存在的成分。两组分体系可提供若干益处，包括允许掺入与两组分系统的第一组分的长期货架储存不充分相容的成分的益处。例如，复溶媒介物可包括防腐剂，其在使用期间(例如冷藏储存的一周)提供足够的抗微生物生长的保护，但在两年的冷冻储存期期间不存在，在所述冷冻储存期期间其可能降解毒素。可以以这种方式掺入其它成分(其可能不与肉毒杆菌毒素或其它成分长时间相容)；即，在即将使用时将其添加在第二媒介物中(例如，在复溶媒介物中)。药物组合物还可包括防腐剂，诸如苯甲醇、苯甲酸、苯酚、对羟基苯甲酸酯和山梨酸。药物组合物可包括例如赋形剂，诸如表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；造粒和崩解剂；结合剂；润滑剂；防腐剂；生理上可降解的组合物诸如明胶；水性媒介物和溶剂；油性媒介物和溶剂；混悬剂；分散或润湿剂；乳化剂、缓和剂；缓冲剂；盐；增稠剂；填料；抗氧化剂；稳定剂；和药学上可接受的聚合物或疏水材料以及本领域已知的和例如在Genaro，编辑，1985，Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.(其通过引用并入本文)中描述的其它成分。

“重组修饰的毒素”意指与肉毒杆菌毒素共有一些或大部分结构域但可以靶向或可以不靶向与天然肉毒杆菌神经毒素相同的细胞的重组毒素。

“稳定化”、“稳定”或“稳定作用”意指当与复溶之前的API相比时，至少约20％的已被复溶的活性药物成分(“API”)的生物活性的保留。例如，在(1)从本体溶液或原液制备系列稀释液时，或(2)在复溶冻干或真空干燥的含肉毒杆菌毒素的药物组合物(所述药物组合物在约-2℃或低于约-2℃已储存6个月至4年)时，或(3)对于已在约2℃至约8℃之间储存6个月至4年的含肉毒杆菌毒素药物组合物水溶液，存在于复溶溶液或水溶液药物组合物中的肉毒杆菌毒素具有(在稳定、稳定化API或为API提供稳定作用的化合物存在的情况下)大于约20％和高达约100％的所述生物活性肉毒杆菌毒素在被掺入药物组合物之前所具有的效力或毒性。

“稳定化剂”、“稳定作用剂”或“稳定剂”意指用于稳定API以使得药物组合物的效力相对于未被稳定的组合物增加的物质。

“稳定剂”可包括赋形剂，并且可以包括蛋白质和非蛋白质分子。

“基本上不含”意指以小于按重量计1％的药物组合物的水平存在。

如本文中所用，“TEM”与“靶向胞吐作用调节剂”或“重靶向内肽酶”同义。由于其众多特征，将在“定义”部分的末尾进一步详细公开“TEM”。

“治疗制剂”意指制剂可用于治疗，从而减轻病症或疾病，诸如，例如特征在于周围肌肉的活动过度(即痉挛状态)的病症或疾病。

“治疗有效量”是指足以实现所需治疗效果的量。

“局部施用”不包括神经毒素的全身性施用。换句话说，与常规治疗性经皮肤的方法不同，肉毒杆菌毒素的局部施用不会导致显著量，诸如大部分的神经毒素进入患者的循环系统。

“治疗”意指暂时地或永久地缓解(或消除)病状或病症的至少一种症状，诸如，例如皱纹、痉挛、抑郁、疼痛(诸如，例如，头痛)、膀胱活动过度等。

“变体”意指相对于野生型内毒杆菌毒素已通过至少一个氨基酸的替代、修饰、添加或缺失而修饰的梭菌神经毒素，诸如野生型肉毒杆菌毒素血清型A、B、C、D、E、F或G，其被靶细胞识别，被靶细胞内化，并催化切割靶细胞中的SNARE(SNAP(可溶性NSF附着蛋白)受体)蛋白。

变体神经毒素组分的实例可包含一个或多个氨基酸被取代、修饰、删除和/或添加的肉毒杆菌毒素的变体轻链。该变体轻链可具有相同或更好的防止胞吐作用(例如，神经递质囊泡的释放)的能力。另外，相较于母体化学实体，变体的生物学作用可以降低。例如，去除了氨基酸序列的A型肉毒杆菌毒素的变体轻链可具有比母体(或天然)肉毒杆菌毒素A型轻链短的生物学持久性。

“媒介物”或“复溶媒介物”意指可用于将固体肉毒杆菌制剂复水成液体肉毒杆菌药物组合物的液体组合物。

“野生型神经元结合部分”意指对于神经毒素是天然的并且对神经元上的受体表现出特异性结合亲和力的神经毒素的那部分。因此，野生型或天然神经元结合部分不包括对神经毒素是非天然的结合部分。

TEM

通常，TEM包含来自梭菌毒素轻链的酶促结构域、来自梭菌毒素重链的易位结构域和靶向结构域。TEM的靶向结构域提供改变的细胞靶向能力，其将分子靶向除天然存在的梭菌毒素所利用的天然梭菌毒素受体外的受体。通过用具有对非梭菌毒素受体的结合活性的靶向结构域替换梭菌毒素的天然存在的结合结构域来实现该再靶向能力。尽管结合非梭菌毒素受体，但TEM经历中毒过程的所有其它步骤，包括TEM/受体复合物至细胞质中的内化，囊泡膜和二链分子中孔的形成，酶促结构域至细胞质的易位，和对靶细胞的SNARE复合物的组分施加蛋白水解作用。

如本文中所用，术语“梭菌毒素酶促结构域”是指位于梭菌毒素轻链中的梭菌毒素多肽，其执行中毒过程的酶促靶修饰步骤。梭菌毒素酶促结构域包括含有锌依赖性内肽酶活性的金属蛋白酶区域，其特异性靶向神经递质释放装置的核心组分。因此，梭菌毒素酶促结构域特异性靶向和蛋白水解切割梭菌毒素底物，诸如，例如SNARE蛋白，如SNAP-25底物、VAMP底物和突触融合底物。

梭菌毒素酶促结构域包括但不限于天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体，诸如，例如梭菌毒素酶促结构域同种型和梭菌毒素酶促结构域亚型；非天然存在的梭菌毒素酶促结构域变体，诸如，例如保守性梭菌毒素酶促结构域变体、非保守性梭菌毒素酶促结构域变体、梭菌毒素酶促结构域嵌合体、其活性梭菌毒素酶促结构域片段或其任意组合。梭菌毒素酶促结构域变体的非限制性实例，例如BoNT/A酶促结构域、BoNT/B酶促结构域、BoNT/C1酶促结构域、BoNT/D酶促结构域、BoNT/E酶促结构域、BoNT/F酶促结构域、BoNT/G酶促结构域、TeNT酶促结构域、BaNT酶促结构域和BuNT酶促结构域。

如本文中所用，术语“梭菌毒素易位结构域”是指位于梭菌毒素重链氨基末端一半内的梭菌毒素多肽，其执行中毒过程的易位步骤。易位步骤似乎牵涉由细胞内囊泡内pH的降低引起的易位结构域的变构构象变化。该构象变化导致在囊泡膜中形成孔，其允许轻链从囊泡内移动进入细胞质。因此，梭菌毒素易位结构域促进梭菌毒素轻链移动穿过细胞内囊泡的膜，进入细胞的细胞质。

梭菌毒素易位结构域包括但不限于天然存在的梭菌毒素易位结构域变体，诸如，例如梭菌毒素易位结构域同种型和梭菌毒素易位结构域亚型；非天然存在的梭菌毒素易位结构域变体，诸如，例如，保守性梭菌毒素易位结构域变体、非保守性梭菌毒素易位结构域变体、梭菌毒素易位结构域嵌合体、其活性梭菌毒素易位结构域片段或其任意组合。梭菌毒素易位结构域的非限制性实例包括例如BoNT/A易位结构域、BoNT/B易位结构域、BoNT/C1易位结构域、BoNT/D易位结构域、BoNT/E易位结构域、BoNT/F易位结构域、BoNT/G易位结构域、TeNT易位结构域、BaNT易位结构域和BuNT易位结构域。

如本文中所用，术语“靶向结构域”与“结合结构域”或“靶向部分”同义，并且是指执行受体结合和/或中毒过程的复杂内化步骤的肽或多肽，其条件是所述结合结构域与在梭菌毒素的重链的羧基末端一半内发现的梭菌毒素结合结构域不相同。靶向结构域包括赋予靶向结构域对其同源受体的结合活性和/或特异性的受体结合区。如本文中所用，术语“同源受体”是指靶向结构域在生理条件下或在基本上接近生理条件的体外条件下优先与其相互作用的受体。如本文中所用，术语“优先相互作用”与“优先结合”同义，是指相对于对照在统计上显著更大程度的相互作用。关于本文公开的靶向结构域，靶向结构域相对于非同源受体以统计上显著更高的程度结合其同源受体。换句话说，相对于非同源受体，靶向结构域对其同源受体存在鉴别性结合。因此，靶向结构域指导对位于靶细胞的质膜表面上的TEM特异性受体的结合。

本文公开的靶向结构域可以是优先与位于感觉神经元上的受体相互作用的结构域。在另一个实施方案中，本文公开的靶向结构域可以是优先与位于交感神经元或副交感神经元上的受体相互作用的结构域。

在另一个实施方案中，本文公开的靶向结构域是阿片样肽靶向结构域、甘丙肽靶向结构域、PAR肽靶向结构域、生长抑素肽靶向结构域、神经降压肽靶向结构域、SLURP肽靶向结构域、血管紧张素肽靶向结构域、速激肽肽靶向结构域、神经肽Y相关肽靶向结构域、激肽肽靶向结构域、黑皮质素肽靶向结构域或鸟尿素肽靶向结构域、胰高血糖素样激素肽靶向结构域、胰泌素肽靶向结构域、垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)肽靶向结构域、生长激素释放激素(GHRH)肽靶向结构域、血管活性肠肽(VIP)肽靶向结构域、胃抑肽(GIP)肽靶向结构域、降钙素肽靶向结构域、内脏肠肽靶向结构域、神经营养因子肽靶向结构域、头部激活剂(HA)肽、配体的胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)家族(GFL)肽靶向结构域、RF酰胺相关肽(RFRP)肽靶向结构域、神经激素肽靶向结构域或神经调节性细胞因子肽靶向结构域、白细胞介素(IL)靶向结构域、血管内皮生长因子(VEGF)靶向结构域、胰岛素样生长因子(IGF)靶向结构域、表皮生长因子(EGF)靶向结构域、转化生长因子-β(TGF β)靶向结构域、骨形态发生蛋白(BMP)靶向结构域、生长和分化因子(GDF)靶向结构域、激活蛋白靶向结构域或成纤维细胞生长因子(FGF)靶向结构域或血小板衍生生长因子(PDGF)靶向结构域。

阿片样肽靶向结构域可包括脑啡肽、牛肾上腺髓质22(BAM22)肽、内吗啡肽、内啡肽、强啡肽、孤腓肽或血衍吗啡(hemorphin)肽。

因此，TEM可在任何和所有位置包含靶向结构域，条件是TEM能够进行中毒过程。非限制性实例包括，将靶向结构域定位在TEM的氨基末端；将靶向结构域定位在TEM的梭菌毒素酶促结构域与梭菌毒素易位结构域之间；以及将靶向结构域定位在TEM的羧基末端。其它非限制性实例包括将靶向结构域定位在TEM的梭菌毒素酶促结构域与梭菌毒素易位结构域之间。天然存在的梭菌毒素的酶促结构域包含天然起始甲硫氨酸。因此，在其中酶促结构域不在氨基末端位置的结构域组织中，包含起始甲硫氨酸的氨基酸序列应置于氨基末端结构域之前。同样地，当靶向结构域位于氨基末端位置时，可在其中靶向结构域需要游离氨基末端的情况下可操作地连接包含起始甲硫氨酸和蛋白酶切割位点的氨基酸序列，参见，例如Shengwen Li等，Degradable Clostridial Toxins，美国专利申请11/572,512(2007年1月23日)，其通过引用整体并入本文。另外，在本领域中已知当添加与包含起始甲硫氨酸的另一多肽的氨基末端可操作地连接的多肽时，可删除原始甲硫氨酸残基。

本文公开的TEM可任选地包含外源蛋白酶切割位点，其允许使用外源蛋白酶将TEM的单链多肽形式转化为其更具活性的双链形式。如本文中所用，术语“外源性蛋白酶切割位点”与“非天然存在的蛋白酶切割位点”或“非天然蛋白酶切割位点”同义，并且意指在来自天然存在的梭菌毒素的二链环区域中非天然存在的蛋白酶切割位点。

尽管TEM的总分子量不同，因为靶向结构域的大小、激活过程及其对外源切割位点的依赖性基本上与重组产生的梭菌毒素相同。参见例如，Steward等，ActivatableClostridial Toxins，US 2009/0081730；Steward等，Modified Clostridial Toxins withEnhanced Translocation Capabilities and Altered Targeting Activity For Non-Clostridial Toxin Target Cells，美国专利申请第11/776,075号；Steward等，Mo difiedClostridial Toxins with Enhanced Translocation Capabilities an d AlteredTargeting Activity for Clostridial Toxin Target Cells，US 2008/0241881；Steward等，Degradable Clostridial Toxins，US 2011/0287517，其每一个通过引用并入本文。通常，使用外源蛋白酶将单链多肽转化成其双链形式的激活过程可用于加工具有以氨基展示、中心展示或羧基展示排列组织的靶向结构域的TEM。这是因为对于大多数靶向结构域，所述部分的氨基末端不参与受体结合。因此，宽范围的蛋白酶切割位点可用于产生TEM的活性双链形式。然而，需要游离氨基端用于受体结合的靶向结构域需要蛋白酶切割位点，其易断键位于羧基末端。在TEM的设计中使用蛋白酶切割位点描述于例如Steward等，Activatable Clostridial toxins，US 2009/0069238；Ghans hani等，ModifiedClostridial Toxins Comprising an Integrated Protease Cleavage Site-BindingDomain，US 2011/0189162；和Ghanshani等，Methods of Intracellular Conversion ofSingle-Chain Proteins into their Di-chain Form，国际专利申请系列第PCT/US2011/22272号，其每一个通过引用整体并入本文。

药物组合物

本公开的方面部分地提供了适合于膀胱内膀胱递送的药物组合物，其包含梭菌衍生物和至少一种透化剂。

梭菌衍生物：

如本文定义的梭菌衍生物包括天然或重组神经毒素、重组修饰的毒素、其片段、靶向囊泡胞吐调节剂(TEM)或其组合。在一些实施方案中，梭菌衍生物是天然或经修饰的肉毒杆菌毒素。在一个实施方案中，梭菌衍生物是A型肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，梭菌衍生物是B型、C₁型、D型、E型或F型肉毒杆菌。在替代实施方案中，梭菌衍生物包含TEM。

在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含治疗有效量的梭菌衍生物。治疗有效量是指在一个环境中向个体施用的梭菌衍生物的总量。这样，梭菌衍生物和/或TEM的有效量不是指每个部位施用的量。例如，向个体施用的梭菌毒素(诸如，肉毒杆菌毒素)的有效量可以是10U，而每个部位施用的毒素的量可以是2U，即在5个不同部位为2U。在一些实施方案中，肉毒杆菌毒素的治疗有效量的范围为10U至1000U，更优选约50U至约500U。

关于包含梭菌毒素和TEM的联合疗法，梭菌毒素的有效量是当与TEM组合，梭菌毒素的量实现所需治疗作用时的量，但此其单独的这样的施用量将是无效的。例如，为了治疗颈肌张力障碍，通常通过每经历张力障碍痉挛的肌肉的肌内注射施用约75-125U的(Allergan，Inc.，Irvine，CA)、BoNT/A。在联合治疗中，当此类毒素用于使用TEM的联合治疗中时，将施用次最佳有效量的BoNT/A以治疗颈部肌张力障碍。

透化剂

透化剂的实例包括但不限于阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、二醇、螯合剂、阳离子聚合物、粘膜粘着剂、多肽或其混合物。

在一些实施方案中，透化剂选择性结合梭菌衍生物，诸如肉毒杆菌毒素，以形成复合物。在替代实施方案中，透化剂不结合肉毒杆菌毒素。在替代实施方案中，透化剂通过范德华相互作用(Van der Wall interaction)与梭菌衍生物相互作用。

在某些实施方案中，透化剂可以是阴离子表面活性剂。适用于本发明制剂的阴离子表面活性剂的实例包括但不限于SDS、十二烷基硫酸钠、其类似物、衍生物或其任意组合。

在某些实施方案中，透化剂可以是阳离子表面活性剂。适用于本发明制剂的阳离子表面活性剂的实例包括但不限于硫酸鱼精蛋白、苯扎溴铵、季铵盐诸如聚(二甲基亚氨基)-2-丁烯-1,4-二基氯化物，α-[4-三(2-羟基乙基)铵-2-丁烯基-ω-三(2-羟乙基)铵]-二氯化物(化学注册号75345-27-6)(通常可作为从ONYX Corporation获得)、卤化苯甲烃铵和双胍诸如阿来西定的盐、阿来西定游离碱、氯己定的盐、六亚甲基双胍及其聚合物、类似物和衍生物。阿来西定和氯己定的盐可以是有机的或无机的，并且通常是硝酸盐、乙酸盐、磷酸盐、硫酸盐、卤化物等，或其任意组合等。

在某些实施方案中，透化剂可以是其它阳离子剂，包括但不限于聚(乙烯亚胺)(PEI)、油胺、二油酰基-磷脂酰乙醇胺(DOPE)和二油酰基-三甲基铵-丙烷(DOTAP)、它们的类似物、衍生物或其组合。

在某些实施方案中，透化剂可包含聚乙二醇(PEG)或聚环氧乙烷(PEO)。PEG可包含例如具有在约200克/摩尔(g/m)至约20,000克/摩尔(g/m)的范围内的分子量的PEG。在一个实施方案中，透化剂包含聚乙二醇3350。

在某些实施方案中，透化剂可包含泊洛沙姆。泊洛沙姆可包括例如P80、P124、P188、P237、P338和P407、它们的类似物、衍生物或其组合。在某些实施方案中，透化剂可包含聚维酮(PVP)。PVP可包括例如PVP聚合物，以及类似物或衍生物。

在某些实施方案中，透化剂可包含具有在约1000至约100000道尔顿的范围内的分子量的L或D多肽。在一个实施方案中，透化剂是聚-L-赖氨酸。在另一个实施方案中，透化剂包括细胞穿透肽。

在某些实施方案中，透化剂可包括苯甲醇及类似物、聚六亚甲基双胍(高和/或低分子量)及类似物、蛋白质(包括但不限于天然或重组人血清白蛋白)、多粘菌素B及类似物，或其混合物。

在某些实施方案中，透化剂包括非离子表面活性剂。适用于本发明制剂的非离子表面活性剂的实例包括但不限于烷基芳基聚醚及其衍生物、衍生物(例如，TX-100、类似物或衍生物)、泊洛沙姆、聚氧乙烯醚(例如，Brij家族)、Tween、Big CHAPS、Deoxy Big CHAPS、泰洛沙泊、脱水山梨糖醇单油酸酯(SPAN)20、40、60、Cremophor EL、α-生育酚TPGS、硬脂酸聚烃氧酯40(Polyoxyl stearate 40)、其类似物和衍生物或组合。

在一些实施方案中，透化剂包含烷基丙烯酰基聚醚、类似物或衍生物。在一个实施方案中，透化剂包括辛基苯酚乙氧基化物、类似物或衍生物。辛基苯酚乙氧基化物也称为聚氧乙烯辛基苯基醚、4-辛基苯酚聚乙氧基化物、Mono 30、TX-100、叔-辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、辛苯聚醇-9或更通常已知的商品名Triton^TM X-100。在替代实施方案中，透化剂包含壬苯聚醇9、类似物或衍生物。

在某些实施方案中，透化剂包含阳离子聚合物。在一些实施方案中，阳离子聚合物是粘膜粘着剂。在一些实施方案中，阳离子聚合物包括壳聚糖、软骨素、壳聚糖类似物、软骨素类似物、壳聚糖衍生物或软骨素衍生物。

在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含梭菌衍生物和至少一种透化剂。在一个实施方案中，梭菌衍生物是肉毒杆菌毒素。在一个实施方案中，梭菌衍生物包括肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，所述至少一种透化剂包括壳聚糖、壳聚糖类似物或壳聚糖衍生物以及TX-100、TX-100类似物或TX-100衍生物。在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含肉毒杆菌毒素、壳聚糖、壳聚糖类似物或脱乙酰壳多糖衍生物和壬苯聚醇-9，壬苯聚醇-9类似物或壬苯聚醇-9衍生物。在替代实施方案中，梭菌衍生物是TEM。在替代实施方案中，制剂包含肉毒杆菌毒素和TEM。

在某些实施方案中，透化剂可包含螯合剂，包括但不限于EDTA、EGTA(乙二醇四乙酸)、环己烷二胺四乙酸盐(CDTA)、羟基乙基乙二胺三乙酸盐(HEDTA)、二亚乙基三胺五乙酸盐(DTPA)、1，2-二氨基环己烷四乙酸盐和六偏磷酸盐。这些试剂优选以盐的形式(通常为钠盐如EDTA二钠、HEDTA三钠、六偏磷酸钠或其任意组合等)使用。

因此，在一方面，本发明的药物组合物包含梭菌衍生物和至少一种透化剂，其中所述药物制剂适用于膀胱内膀胱递送。在一些实施方案中，梭菌衍生物包含肉毒杆菌毒素，并且透化剂包含粘膜粘着剂和表面活性剂。在一些实施方案中，粘膜粘着剂包括壳聚糖、壳聚糖类似物、壳聚糖衍生物、软骨素、软骨素类似物和软骨素衍生物。在一些实施方案中，表面活性剂包括非离子表面活性剂。在一个实施方案中，本发明的药物组合物包含A型肉毒杆菌毒素、壳聚糖、壳聚糖类似物或壳聚糖衍生物和TX-100、TX-100类似物或TX-100衍生物。在一些实施方案中，表面活性剂包含壬苯聚醇-9、壬苯聚醇-9类似物或壬苯聚醇-9衍生物。在替代实施方案中，梭菌衍生物是TEM。

在一些实施方案中，透化剂以渗透有效量存在。在一个实施方案中，渗透有效量是指对于在对膀胱完整性的损伤有限的情况下显著增加膀胱壁表面的渗透性有效的量。在一个实施方案中，渗透有效量是指对于允许治疗有效量的肉毒杆菌神经毒素以治疗有效速率渗透通过膀胱壁有效的量。在一个实施方案中，渗透有效量是指对于显著增加膀胱壁表面对治疗有效量的毒素以治疗有效速率的渗透(持续所需的时间间隔)而不会不可逆地损伤膀胱壁有效的量。在一些实施方案中，增加的渗透性在所需时间间隔之后是可逆的，此后膀胱壁可完全或部分恢复其初始不可渗透性或选择性渗透性。在一些实施方案中，膀胱壁在膀胱内灌注后约1小时至约24小时的时间间隔后恢复其初始不可渗透性或选择性渗透性。在一些实施方案中，时间间隔的范围为约3小时至约18小时。在一些实施方案中，时间间隔的范围为约4小时至约12小时。膀胱壁恢复其原始选择性渗透性或不可渗透性的恢复速率可受所选择的透化剂的特性、量、渗透表面的特性、暴露时间和围绕渗透表面的环境影响。在一个实施例，可通过免疫应答的程度(诸如特异性免疫细胞的存在)评价本发明药物组合物施用后的膀胱完整性。

渗透有效量取决于几个因素而变化，包括但不限于梭菌衍生物的特征、渗透表面(例如膀胱壁)的特征、透化剂的类型以及渗透表面周围的环境。

在一些实施方案中，透化剂的渗透有效量的范围为约0.005％至约10％(w/v)，更优选约0.025％至约5％(w/v)，最优选从约0.05％至约0.5％(w/v)。在一些实施方案中，本发明的药物制剂包含0.005％至约10％(w/v)，更优选约0.025％至约5％(w/v)和最优选约0.1％至约0.5％(w/v)的渗透有效量的Triton^TM X-100、Triton^TM X-100类似物或衍生物。在一个具体实施方案中，Triton^TM X-100的渗透有效量为约0.1％(w/v)。

在一些实施方案中，将透化剂与粘膜粘着剂组合使用。在一些实施方案中，粘膜粘着剂是阳离子聚合物。在一些实施方案中，粘膜粘着剂包括壳聚糖、壳聚糖类似物、壳聚糖衍生物、软骨素、软骨素类似物或软骨素衍生物。在一些实施方案中，粘膜粘着剂的渗透有效量的范围为约0.005％至10％(w/v)，更优选约0.02％至约5％(w/v)，最优选约0.05％至约2％(w/v)。在一个实施方案中，壳聚糖、，壳聚糖类似物或壳聚糖衍生物的渗透有效量为约1％(w/v)。在一些实施方案中，所述制剂包含：(1)肉毒杆菌毒素，(2)Triton^TM X-100、Triton^TM X-100类似物、Triton^TM X-100衍生物或其混合物；和(3)壳聚糖、壳聚糖类似物、壳聚糖衍生物或其混合物。在一些实施方案中，所述制剂包含：(1)A型肉毒杆菌毒素，(2)Triton^TM X-100、Triton^TM X-100类似物、Triton^TM X-100衍生物或其混合物；和(3)壳聚糖、壳聚糖类似物、壳聚糖衍生物或其混合物。在一些实施方案中，所述制剂包含约20个单位至约300个单位的A型肉毒杆菌毒素，约0.5％至约2％(w/v)壳聚糖、壳聚糖类似物、衍生物；或其混合物，以及约0.05％至约1％(w/v)Triton^TM X-100、其类似物、衍生物或混合物。在一个实施方案中，所述制剂包含约100个或200个单位的A型肉毒杆菌毒素、约1％壳聚糖和约0.1％(w/v)Triton^TM X-100。

在一些实施方案中，透化剂为壬苯聚醇9。在些实施方案中，壬苯聚醇9的渗透有效量的范围为约0.005％至约10％(w/v)，更优选约0.025％至约5％(w/v)，和最优选约0.05％至约0.5％(w/v)。在一个具体实施方案中，本发明的药物制剂包含约0.1％(w/v)的渗透有效量的壬苯聚醇9。在一个具体实施方案中，本发明的药物制剂包含约0.5％(w/v)的渗透有效量的壬苯聚醇9。在一些实施方案中，将壬苯聚醇9与粘膜粘着剂组合使用。在一些实施方案中，粘膜粘着剂包括壳聚糖、壳聚糖类似物、壳聚糖衍生物、软骨素、软骨素类似物或软骨素衍生物。在一些实施方案中，粘膜粘着剂的渗透有效量的范围为约0.005％至10％(w/v)，更优选约0.02％至约5％(w/v)，最优选约0.1％至约2％(w/v)。在一些实施方案中，壳聚糖或壳聚糖衍生物的渗透有效量为约0.005％至10％(w/v)，更优选约0.02％至约5％(w/v)，最优选约0.1％至约2％(w/v)。在一个实施方案中，壳聚糖或壳聚糖衍生物的渗透有效量为约1％(w/v)。

在一些实施方案中，透化剂可包含重组或天然人血清白蛋白。

在一些实施方案中，本发明组合物不包含任何动物来源的蛋白质。在一个实施方案中，本发明的组合物包含肉毒杆菌毒素、TEM或重组修饰的毒素(作为活性成分)和合适的多糖或非蛋白赋形剂(作为稳定剂或赋形剂)。

因此，本公开内容的方面提供了包含梭菌衍生物和一种或多种透化剂的药物组合物，其中所述药物组合物适合于膀胱内膀胱递送，并且其中所述一种或多种透化剂以渗透有效量存在，如本文所公开的。本发明的组合物的实施方案包括将引起或增强梭菌衍生物的药理学作用的治疗剂和/或赋形剂。

还可添加赋形剂以增加制剂的稳定性，增强透化剂(例如EDTA或其它螯合剂)的作用，或通过将立即发生或当温度(例如：泊洛沙姆407)、pH(卡波姆P-934、P940)和/或离子(例如：Gelrite结冷胶、海藻酸盐)环境改变时发生的增强的粘弹性性质(例如：羧甲基纤维素(CMC)，羟丙基纤维素(HPMC)、海藻酸盐)增加制剂的保留。

还可添加赋形剂以调节尿和皮肤的张力和/或pH，以增加制剂的递送、稳定性、生物利用度和/或治疗活性。

在另一个方面，本公开提供了一种用于制备适于膀胱内膀胱施用的药物制剂的方法，所述方法包括提供包含至少一种如本文公开的透化剂的溶液，将所述溶液加入包含如本文公开的梭菌衍生物的组合物。在一些实施方案中，所述方法包括向包含梭菌衍生物的组合物中添加约50ml至约100ml的溶液。在一些实施方案中，梭菌衍生物是肉毒杆菌毒素。在一个实施方案中，所述方法包括向A型肉毒杆菌毒素中添加约50ml至约100ml的包含约1％(w/v)壳聚糖、类似物或衍生物和约0.1％(w/v)Triton^TM X-100、类似物或衍生物的水溶液。在一个实施方案中，所述方法包括向包含约100个单位或200个单位冻干的A型肉毒杆菌毒素的小瓶中添加50m1的包含约1％(w/v)壳聚糖和约0.1％(w/v)Triton^TM X-100的水溶液；和轻轻混合以使冻干的A型肉毒杆菌毒素再水化。

在一些实施方案中，还可加入赋形剂以用作梭菌衍生物的载体。在一个实施方案中，加入聚-L-赖氨酸作为载体。

通常将本文公开的组合物作为药学上可接受的组合物来施用。如本文中所用，术语“药学上可接受的”意指当向个体施用时不产生不利的、过敏的或其它不利的或不想要的反应的任何分子实体或组合物。如本文中所用，术语“药学上可接受的组合物”与“药物组合物”同义，意指治疗有效浓度的活性成分，诸如，例如本文公开的任何梭菌毒素和/或TEM。本文公开的药物组合物可用于医学和兽医应用。可将药物组合物单独向个体施用，或与其它补充活性成分、试剂、药物或激素组合施用。药物组合物可使用多种方法中的任一种来制备，包括但不限于常规混合、溶解、制粒、糖衣丸制备、研磨、乳化、包封、包埋和冻干。药物组合物可以采取多种形式中的任一种，包括但不限于无菌溶液、悬浮液、乳液、冻干剂、片剂、丸剂、小丸(pellet)、胶囊、粉剂、糖浆剂、酏剂或适于施用的任何其它剂型。

本发明的药物组合物可任选地包括有利于将活性成分加工成药学上可接受的组合物的药学上可接受的载体。如本文中所用，术语“药理学上可接受的载体”与“药理学载体”同义，并且意指当施用时大体上上没有长期或永久有害作用的任何载体，并包括术语诸如“药理学上可接受的载体、稳定剂、稀释剂、辅助剂或赋形剂”。通常将此类载体与活性化合物混合，或者允许其稀释或包封活性化合物，并且其可以是固体、半固体或液体试剂。应当理解，活性成分可以是可溶的或可作为所需载体或稀释剂中的悬浮液递送。可使用多种药学上可接受的载体中的任何一种，包括但不限于水性介质诸如，例如水、盐水、甘氨酸、透明质酸等；固体载体诸如，例如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等；溶剂；分散介质；包衣；抗菌和抗真菌剂；等渗和吸收延迟剂；或任何其它无活性成分。药理学上可接受的载体的选择可取决于施用方式。除非任何药理学上可接受的载体与活性成分不相容，其在药学上可接受的组合物中的用途是可预期的。此类药物载体的具体用途的非限制性实例可见于PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUGDELIVERY SYSTEMS(Howard C.Ansel等，编辑，Lippincott Williams&WilkinsPublishers，第7版，1999)；REMINGTON：THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(AlfonsoR.Gennaro编辑，Lippincott，Williams&Wilkins，第20版，2000)；GOODMAN&GILMAN′S THEPHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS(Joel G.Hardman等，编辑，McGraw-HillProfessional，第10版，2001)；和HANDBOOK oF PHARMACEUTICAL ExCIPIENTS(RaymondC.Rowe等，APhA Publications，第4版，2003)中。这些方案是常规方法，并且任何修饰都在本领域技术人员的能力范围内以及来自本文中的教导。

本文公开的药物组合物可任选地包括但不限于其它药学上可接受的组分(或药物组分)，包括但不限于缓冲剂、防腐剂、张力调节剂、盐、抗氧化剂、渗透压调节剂、生理物质、药理学物质、填充剂、乳化剂、润湿剂、甜味剂或调味剂等。用于调节pH的各种缓冲液和方法可用于制备本文公开的药物组合物，条件是所得制剂是药学上可接受的。此类缓冲液包括但不限于乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水和硼酸盐缓冲液。应当理解，可按需要使用酸或碱来调节组合物的pH。药学上可接受的抗氧化剂包括但不限于焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰基半胱氨酸、丁基化羟基苯甲醚和丁基化羟基甲苯。有用的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、氯丁醇、硫柳汞、乙酸苯汞、硝酸苯汞、稳定化的氧氯组合物和螯合剂诸如，例如DTPA或DTPA-双酰胺、DTPA钙和CaNaDTP A-双酰胺。用于药物组合物的张力调节剂包括但不限于盐诸如，例如氯化钠、氯化钾、甘露醇或甘油和其它药学上可接受的张力调节剂。药物组合物可以作为盐提供，并且可以用许多酸来形成，所述酸包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐倾向于更易溶于水性或其它质子溶剂(相较于在相应的游离碱形式)中。应当理解，药理学领域中已知的这些和其它物质可以包括在药物组合物中。包含梭菌毒素和TEM的示例性药物组合物描述于Hunt等，Animal Protein-Free Pharmaceutical Compositions，美国系列第12/331,816号；和Dasari等，Clostridial Toxin Pharmaceutical Compos itions，WO/2010/090677中，其每一篇通过引用整体并入本文。

合适的药学上可接受的载体的选择将取决于所需的特定制剂的确切性质，例如，本发明的组合物是被配制成液体溶液、在使用时复溶的冻干粉末、悬浮液、纳米颗粒、脂质体还是被配制成微乳液。

合适的药学上可接受的载体的选择还将取决于施用途径。优选地，将载体配制成适于选择的施用途径。本发明的药物制剂的给药方式包括但不限于注射、无针注射(例如Bioject、JetTouch)、电动、经皮肤递送或囊内滴注。在一个具体实施方案中，制剂包含用于膀胱灌注的药学上可接受的载体。在一个实施方案中，药物载体包含聚赖氨酸。

治疗方法

本公开的方面部分地提供了使用包含梭菌衍生物和至少一种透化剂的药物组合物治疗医学病状的方法，其中本发明的药物组合物的施用预防或减少与待治疗的医学病状相关的症状。在一些实施方案中，施用是通过注射。在替代实施方案中，施用是经皮肤的、皮下的或局部的。在另外的替代实施方案中，施用是通过膀胱内递送。

在一些实施方案中，本公开提供了治疗疾病、病症、病状等的方法，包括以足以产生改善的患者功能的量向有此需要的受试者施用本公开的药物制剂。在某些实施方案中，所述疾病为神经肌肉性质的，诸如，例如影响肌肉和其神经控制的那些疾病，诸如，例如膀胱过度活动症等。某些实施方案涉及疼痛的治疗，诸如，例如头痛或背痛或肌肉疼痛等的治疗。在某些实施方案中，本发明的方法包括心理障碍(包括例如抑郁、焦虑等)的治疗。

泌尿病症的治疗

在一些实施方案中，所述医学病症包括泌尿膀胱疾病和病状，包括但不限于膀胱过度活动症(OAB)、膀胱炎、膀胱癌、神经性逼尿肌过度活动症(NDO)。在一个实施方案中，本公开还提供了用于治疗患有膀胱过动症(OAB)诸如，例如由于神经病状而引起的膀胱过动症(NOAB)或特发性OAB(IOAB)的患者的方法。

神经性膀胱功能障碍是由干扰与排尿相关的正常神经途径引起的功能障碍。一种类型的神经源性膀胱功能障碍是膀胱过度活动(痉挛或超反射)。活动过度的神经源性膀胱的特征在于尿从膀胱不受控制地频繁排出。膀胱容量可能会减少以及尿不完全排空。痉挛性膀胱可因膀胱的逼尿肌不能在合理量的尿积聚之前抑制排空收缩而引起。通常，当仅有少量尿液在膀胱中时，经历了强烈的排尿冲动。患者可以报告紧迫性、频率、夜尿和失禁的症状。另一种类型的神经源性膀胱功能障碍的特征在于难以舒张尿道括约肌。括约肌可能痉挛。这导致排空膀胱困难，这可能导致尿潴留和尿道感染。在另一种类型的神经源性膀胱功能障碍中，逼尿肌和尿道括约肌同时收缩，导致尿潴留。与逼尿肌和尿道括约肌同时收缩相关的功能障碍被称为逼尿肌-外括约肌协同失调(DESD)。美国专利第7,449,192号、第8,062,807号和第7,968,104号(其每一篇通过引用整体并入本文)公开了通过将治疗有效量的肉毒杆菌毒素注射入患者的膀胱壁中来治疗患有神经源性膀胱功能障碍的患者的方法。

间质性膀胱炎(IC)是不可治愈的，慢性的，衰弱性膀胱疾病，其特征在于膀胱疼痛、慢性骨盆疼痛、刺激性排尿症状和无菌尿。在IC中，膀胱壁通常显示具有粘膜溃疡和瘢痕形成的炎性浸润，这引起平滑肌收缩，减小的泌尿能力，血尿和频繁的疼痛排尿。

在一些实施方案中，可将本公开的药物制剂施用于膀胱或其附近，例如逼尿肌，其中所述制剂的施用减少与膀胱过度活动症相关的欲望性尿失禁。在某些实施方案中，剂量的范围可以为每次治疗约10个单位至约200U。在一些实施方案中，本发明的药物制剂可通过膀胱内膀胱递送来施用。

因此，本公开的方面还提供了用于治疗有此需要的患者的膀胱病状的方法，其包括：提供如本文所公开的药物组合物，其包含梭菌衍生物和至少一种透化剂，其中所述透化剂以对于显著增加膀胱壁对梭菌衍生物以治疗有效速率的渗透并且不会不可逆地损伤膀胱壁有效的量存在；并通过导管将药物组合物灌注至膀胱中；从而治疗膀胱病症。在一个实施方案中，所述方法还包括在灌注步骤之前用药物组合物预处理膀胱壁。

在一些实施方案中，用于治疗患者膀胱疾病的方法包括提供包含透化剂的溶液；将所述溶液添加至梭菌衍生物中以形成治疗制剂，将所述治疗制剂通过导管灌注至患者的膀胱中。在一些实施方案中，所述梭菌衍生物是肉毒杆菌毒素。在替代实施方案中，所述梭菌衍生物是TEM。在一个实施方案中，所述梭菌衍生物是A型肉毒杆菌毒素。在一些实施方案中，所述透化剂是表面活性剂。在一个实施方案中，所述透化剂是非离子表面活性剂。在一些实施方案中，所述透化剂还包含阳离子聚合物。在一些实施方案中，所述阳离子聚合物是生物粘着剂或粘膜粘着剂。在一些实施方案中，所述粘膜粘着剂包含壳聚糖、壳聚糖类似物或衍生物。在一些实施方案中，所述方法包括将包含非离子表面活性剂和阳离子聚合物的溶液混合至肉毒杆菌毒素中。

在另一个方面，本公开提供了用于缓解患者的间质性膀胱炎(IC)的症状的方法，所述方法包括：提供包含梭菌衍生物和至少一种透化剂的药物组合物，其中所述透化剂以对于显著增加膀胱壁对梭菌衍生物以治疗有效速率的渗透且不会不可逆地损伤膀胱壁有效的量存在；以及通过导管将药物组合物灌注至膀胱中；从而减轻IC的症状。

在另一个方面，本发明的制剂通过防止或最小化梭菌衍生物至导管、递送装置表面(注射器、贴片、微针、工程化注射器(Bioject等)、管道和容器)的吸附使梭菌衍生物的生物利用度最大化。

在另一个方面，本发明的制剂通过增强(通过粘膜粘着剂相互作用)梭菌衍生物至皮肤或膀胱内壁表面上的保留而使梭菌衍生物的生物利用度最大化。

其它医学病症：

疼痛的治疗

在另一个实施方案中，本公开提供了治疗疼痛的方法，其包括以足以减轻疼痛的量向有此需要的受试者施用本发明的药物制剂的步骤。在另一个实施方案中，患者患有肌筋膜疼痛、偏头痛、紧张性头痛、神经性疼痛、面部疼痛、下背痛、窦性头痛、与颞下颌关节疾病相关的疼痛、与痉挛状态或颈肌张力障碍相关的疼痛、手术后伤口疼痛或神经痛。一个疗程可包括多次治疗。

在一个实施方案中，患者患有面部疼痛。患有面部疼痛的受试者例如每次治疗接受约4至40U的本公开的药物制剂。还可向具有面部疼痛的患者施用每次治疗大于40U的剂量以实现治疗反应。一个疗程可包括多次治疗。

在一个实施方案中，患者患有肌筋膜疼痛。例如，患有肌筋膜疼痛的受试者接受每次治疗约5至100U的本发明的药物制剂。还可向患有肌筋膜疼痛的患者施用每次治疗大于100U的剂量者以实现治疗反应。一个疗程可包括多次治疗。

在一个实施方案中，受试者患有下背疼痛。例如，患有下背痛的受试者接受每次治疗约15至150U的本发明的药物制剂。还可向患有下背痛的患者施用每次治疗大于150U的剂量以实现治疗反应。一个疗程可包括多次治疗。

在一个实施方案中，患者患有偏头痛，包括其中患者患有每月4小时或更多天，或每月15或更多天的偏头痛。例如，患有偏头痛的受试者接受每次治疗约0.5至200U的本发明的药物制剂。一个疗程可包括多次治疗。

例如，向患有偏头痛的患者施用每个治疗部位约0.5U、约1.0U、约1.5U、约2.0U、约2.5U、约3.0U、约3.5U、约4.0U、约4.5U、约5.0U、约5.5U、约6.0U、约6.5U、约7.0U、约7.5U、约8.0U、约8.5U、约9.0U、约9.5U、约10.0U、约12U、约15U、约17U、约20U、约22U、约25U、约27U、约30U、约32U、约35U、约37U、约40U、约42U、约45U、约47U或约50U。可在范围从2个部位至35个部位的多个部位治疗患者。在一个实施方案中，患有偏头痛的患者是31次注射(每0.1mL注射5U)，遍及皱尾肌(2次注射，每次5U)、降眉间肌(1次5U的注射)、额肌(4次注射，每次5U)、颞肌(8次注射，每次5U)、枕肌(6次注射，每次5U)、颈椎椎旁(4次注射，每次5U)和斜方肌(6次注射，每次5U)肌肉。除了可在中线注射的降眉间肌之外，在某些实施方案中，可通过一半注射部位在头和颈的左侧并且另一半注射部位在右侧来两侧注射所有肌肉。还可向患有偏头痛的患者施用每次治疗大于200U的剂量以实现治疗反应。一个疗程可包括多次治疗。在替代实施方案中，经皮肤或局部施用药物组合物。

在一个实施方案中，患者患有窦性头痛。例如，患有窦性头痛的受试者接受每次治疗约4至40U的本发明的药物制剂。在另一个实例中，受试者接受每次治疗约4U至40U。还可向患有窦性头痛的患者施用每次治疗大于40U的剂量以实现治疗反应。一个疗程可包括多次治疗。

在一个实施方案中，患者患有紧张性头痛。例如，患有紧张性头痛的受试者接受每次治疗约5至50U的本发明的药物制剂。在一个实施方案中，将患有紧张性头痛的患者注射31次(每0.1mL注射5U)，遍及皱眉肌(2次注射，每次5U)、降眉间肌(1次注射，5U)、额肌(4次注射，每次5U)、颞肌(8次注射，每次5U)、枕肌(6次注射，每次5U)、颈椎椎旁(4次注射，每次5U)和斜方肌(每次5U的6次注射)肌肉。除了可在中线对降眉间肌进行注射外，在某些实施方案中，可通过一半注射部位在头和颈的左侧并且另一半注射部位在右侧来两侧注射所有肌肉。还可对患有紧张性头痛的患者施用每次治疗大于200U的剂量以实现治疗反应。一个疗程可包括多次治疗。在替代实施方案中，可局部或经皮肤施用药物制剂。

在一个实施方案中，患者患有与急性或复发性慢性鼻窦炎相关的窦性头痛或面部疼痛。例如，可将本发明的药物制剂施用至鼻粘膜或覆盖鼻窦的皮下结构，其中所述制剂的施用减少与急性复发性或慢性鼻窦炎相关的头痛和/或面部疼痛。在另外的实施方案中，可将本发明的任何药物制剂施用至鼻粘膜或覆盖鼻窦的皮下结构，诸如选自由以下组成的组的鼻窦上方的结构：筛窦；上颌窦；乳突窦；额窦和蝶窦。在另一个实施方案中，覆盖鼻窦的皮下结构位于选自由以下组成的组的一个或多个区域内：前额；颧骨；颞颥；耳后和唇。在实施方案中，施用每次5U的多次注射以治疗与急性或复发性慢性鼻窦炎相关的窦性头痛或面部疼痛。

在另一个实施方案中，通过向患者的患病区域施用本发明的任何药物制剂来治疗患有与急性或复发性慢性鼻窦炎相关的窦性头痛或面部疼痛的患者。在另一个实施方案中，将本文公开的药物制剂施用于神经支配窦的三叉神经的突出部。

患有与急性或复发性慢性鼻窦炎相关的窦性头痛或面部疼痛的患者通常表现出症状，包括鼻炎、窦性过度分泌和/或脓性鼻分泌物。在一个实施方案中，用本发明的药物制剂治疗的患者表现出鼻窦分泌过多和脓性鼻分泌物的症状。

本公开的实施方案还提供了用于治疗患有与急性或复发性慢性鼻窦炎相关的窦性头痛或面部疼痛的患者的方法，其中所述受试者患有神经痛。在某些实施方案中，神经痛是三叉神经痛。在另一个实施例中，神经痛与感觉神经上的压缩力相关；与内源性神经损伤、脱髓鞘疾病或遗传性病症相关；与代谢病症相关；与中枢神经系统血管疾病相关；或与创伤相关。在本公开的另一个实施方案中，疼痛与拔牙或牙齿重建相关。

实施例

以下实施例说明了本发明的实施方案和方面，并且不意在限制本公开的范围。

实施例1

本研究的目的是评价通过灌注施用至雌性Sprague Dawley大鼠的膀胱中的8种媒介物制剂之一中的称为的A型肉毒杆菌毒素的作用。在施用后8天检查作用，其中分别通过免疫组织化学(IHC)和组织病理学评价功效和耐受性。

阳性对照：通过注射到逼尿肌中给四只大鼠施用10个单位的盐水中的

阴性对照：仅含有媒介物的制剂(如表1所示，未添加)。

切割的SNAP 25用作突触末稍处的活性的生物标志物和递送方法的功能性的潜在指标。在该研究中，其被用来确认穿过尿路上皮的成功运动。将突触囊泡蛋白表达用于鉴定突触末稍和确保切割的SNAP 25定位的特异性。进行组织病理学以评估制剂对膀胱组织的影响。

根据表1向体重在150-200克之间的雌性大鼠施用0.5ml媒介物制剂或媒介物制剂+30U

表1：

^a＝仅5个媒介物+BOTOX处理的膀胱被提交用于评估。

如下进行制剂的膀胱内滴注：用异氟烷麻醉大鼠，通过施加在下腹部上的指尖压力使膀胱排空。在麻醉下，将导管经由尿道引入膀胱。随后，将制剂以0.5ml+0.1ml的剂量体积(以适应由导管产生的死空间)在两分钟的过程中缓慢地施用至膀胱中。使该制剂在麻醉恢复之前在膀胱中停留60分钟。灌注后一周对大鼠实施安乐死。

收集膀胱，将其在10％福尔马林中固定，并使用标准组织学技术进行处理。制备另外的切片并将其处理以用于切割的SNAP 25和突触囊泡蛋白的荧光免疫组织化学。

免疫荧光：在纵向平面中对每个动物的一个组织块进行低温恒温器切片(14μm厚)并将切片安装在载片上。从每个块制备三个载玻片，每个载玻片上放置3个切片，间隔约140μm。处理两个载玻片以进行免疫荧光。首先在封闭缓冲液(1X PBS+0.1％TX-100+10％正常驴血清)中封闭组织切片的非特异性信号，然后在4℃以封闭缓冲液中的所需浓度用第一抗体的组合(包括抗-切割的SNAP25和抗-突触囊泡蛋白)孵育过夜。洗涤后，将切片与第二抗体(Jackson ImmunoResearch)在4℃一起孵育2小时，然后再次洗涤。使用Fluoromount-G和1.5μg/ml DAPI，用盖玻片覆盖安装在载玻片上的切片。用苏木精和伊红(H&E)对第三载玻片进行染色以用于解剖评估。

数据分析和定量：使用(MediaCybernectics)、 (Molecular Devices)或ZEN(Carl Zeiss)软件在Leica DMLB亮视野显微镜、Nikon E800荧光宽视野显微镜或Zeiss LSM-710共聚焦显微镜上分析和捕获图像。(Bitplane)软件用于高分辨率3D定性分析，以建立神经纤维的空间关系。基于它们的形态和神经化学鉴定神经纤维类型。对于半定量分析，对于每个载玻片，在显微镜下仔细观察所有3个切片，并且针对每只动物的SNAP25₁₉₇染色程度(从0到4)(如图3和4所示)或膀胱解剖的完整性(H&E)(如图5A-D所示)给出评分。计算每个处理/制剂的平均分，结果部分示于表2和图6中。

基于以下评价制剂：

1.膀胱壁中的组织学变化；其中对于其中发现增加的数目的不确定来源的梭形细胞浸润粘膜固有层(图5)的膀胱进行“梭形细胞浸润”的诊断；作为反应性变化，认为这些作为纤维化的潜在前体是不合需要的；以及

2.切割的SNAP 25评分。

结果总结：结果概述于表2中。

表2：

测试制剂：除了0.1％(w/v)泰洛沙泊的制剂外，在膀胱内灌注后的所有样品中观察到阳性免疫组织评分。图6显示了一些示例性制剂的IHC评分。

实施例2

膀胱过度活动症的治疗

本实施例描述了具有因神经原性或特发性膀胱功能障碍而导致的超反射性膀胱的患者的治疗。

通过膀胱灌注治疗具有因神经源性或特发性膀胱功能障碍而导致的超反射性膀胱症状(膀胱感染、失禁和欲望性尿失禁)的几个患者。药物组合物包含约100个单位的0.1％(w/v)Triton^TMX-100和1％(w/v)壳聚糖。在轻度镇静下，将药物组合物灌注至患者的膀胱中。在治疗后7天观察到平均最大膀胱容量的显著增加和平均最大逼尿肌排泄压力的显著减小。

实施例3：Triton X-100诱导的增加的膀胱壁的渗透性是可逆的

将人膀胱尿路上皮细胞(CELLnTEC目录号HBEP.05)以约150,000个活细胞/孔的浓度涂铺在聚碳酸酯膜插入物上。将插入物置于24孔组织培养板的孔内。然后将CELLnTECCnT-58培养基(生长培养基)添加至孔中，并将细胞在37℃(5％CO₂)下孵育2天直至细胞汇合。在温育结束时，除去生长培养基并用CELLnTEC CnT-21培养基(分化培养基)代替。然后使细胞分化7天，之后建立2至3个细胞的人尿路上皮层。用以下媒介物体处理细胞1小时：0.9％盐水、0.9％盐水中的0.1％Triton X-100和盐水中的0.5％Triton X-100。以一式三份测试每种媒介物。通过将0.1mL体积的每种载体施加至其中在其上生长细胞的膜插入物的表面来处理细胞。在暴露之后，从插入物去除媒介物溶液，并将分化培养基添加至每个插入物中。然后将细胞孵育并使其恢复0、24或48小时。注意，仅在0小时测试0.9％盐水(阴性对照)。然后进行明胶渗透性测定。通过从每个插入物中除去培养基，然后向每个插入物添加0.1mL体积的配制在盐水中的0.1mg/mL Oregon Green 488标记的明胶，进行明胶渗透性测定。将插入物置于含有0.8mL体积的Earl平衡盐溶液的孔中。在1小时的暴露后，收集流过物并使用Envision仪器测量其荧光。然后将24小时和48小时的测试结果与0小时的数据比较以确定明胶渗透性的降低是否已发生。

发现在24和48小时的恢复后，扩散通过用0.1％Triton X-100处理的体外尿路上皮的明胶的量较低。这些结果表明在用0.1％Triton X-100处理后体外人尿路上皮渗透性的恢复。

在不脱离本公开的精神和范围的情况下，本领域普通技术人员可进行许多改变和修改。因此，必须理解，所描述的实施方案仅出于示例的目的已被阐述，并且实施方案不应被视为限制所附权利要求的范围。因此，以下权利要求应被理解为不仅包括字面上阐述的要素的组合，而且包括用于以大体上相同的方式执行大体上相同的功能以获得大体上相同的结果的所有等效要素。因此，权利要求应被理解为包括上面已经描述的那些要素，在概念上等同的那些要素，以及包括本公开的思想的那些要素。

Claims (20)

1.一种药物组合物，其包含治疗有效量的梭菌衍生物和至少一种透化剂，其中所述至少一种透化剂以对于显著且可逆地增加膀胱壁对所述梭菌衍生物的渗透性有效的量存在。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述梭菌衍生物是肉毒杆菌毒素，并且其中所述至少一种透化剂包含表面活性剂和粘膜粘着剂。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述表面活性剂是非离子表面活性剂，并且所述粘膜粘着剂是阳离子聚合物。

4.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述表面活性剂包含非离子表面活性剂。

5.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述表面活性剂包含烷基芳基聚醚。

6.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述粘膜粘着剂包括壳聚糖、壳聚糖类似物、壳聚糖衍生物或其组合。

7.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述表面活性剂以在约0.01％至约0.5％(w/v)的范围内的量存在。

8.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述粘膜粘着剂以在约0.01％至约5％(w/v)的范围内的量存在。

9.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述梭菌衍生物是肉毒杆菌毒素。

10.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述表面活性剂包含辛苯聚醇-9。

11.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述表面活性剂包含壬苯聚醇-9。

12.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述表面活性剂以约0.1％(w/v)的量存在。

13.根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述表面活性剂以约0.1％(w/v)的量存在。

14.一种用于治疗患有神经源性膀胱功能障碍的患者的方法，所述方法包括：向所述患者的膀胱壁膀胱内灌注药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的梭菌衍生物和以对于显著增加膀胱壁对所述肉毒杆菌神经毒素以治疗有效速率的渗透有效的量存在的至少一种透化剂。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述至少一种透化剂包含表面活性剂和粘膜粘着剂。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述表面活性剂包括非离子表面活性剂。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述粘膜粘着剂包含壳聚糖、壳聚糖类似物、壳聚糖衍生物或其组合。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述非离子表面活性剂包含烷基芳基聚醚。

19.根据权利要求15所述的方法，其中所述粘膜粘着剂包括聚合多酚。

20.根据权利要求15所述的方法，其中所述粘膜粘着剂包含聚合多硫醇。