KR20170032233A - 세포 분리 필터 및 세포 배양 용기 - Google Patents
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Abstract
세포 분리 필터는, 판상의 기부와, 기부에 설치되고, 유체 샘플 중에서 분리 대상 세포를 분리하기 위한 구멍이 형성된 다공 영역과, 기부에 일체적으로 형성되고, 다공 영역을 둘러싸는 벽부를 갖는다.
Description
본 개시는, 세포 분리 필터 및 세포 배양 용기에 관한 것이다.
일본 특허 공표 제2013-541958호 공보에는, 혈액, 생리학적 유체 등의 유체 샘플로부터 표적 세포를 분리하여 채집하기 위한 스크린 필터를 포함하는 세포 채집 장치가 개시되어 있다. 이 세포 채집 장치에서는, 유체 샘플에 포함되어 있는 표적 세포를 비표적 세포로부터 여과하여 채집하도록 되어 있다. 또한, 표적 세포로서 암 세포를 선택하고, 비표적 세포로서 적혈구와 백혈구를 선택하는 것이 개시되어 있다.
상기한 종래예에서는 언급되어 있지 않지만, 유체 샘플로부터 분리한 세포에 대해서는, 그 후 관찰용 기구나 배양 용기 등에 옮겨 이용하는 것이 행해진다.
그러나, 옮길 때에 세포가 손상되는 경우가 있으므로, 분리한 세포에는 가능한 한, 접촉하지 않는 것이 바람직하다.
본 개시는, 유체 샘플로부터 분리한 세포를, 다른 기구에 옮기는 일 없이, 그대로 이용할 수 있도록 하는 것을 목적으로 한다.
제1 양태에 관한 세포 분리 필터는, 판상의 기부와, 상기 기부에 설치되고, 유체 샘플 중으로부터 분리 대상 세포를 분리하기 위한 구멍이 형성된 다공 영역과, 상기 기부에 일체적으로 형성되고, 상기 다공 영역을 둘러싸는 벽부를 갖는다.
분리 대상 세포를 포함하는 유체 샘플을, 세포 분리 필터의 벽부측으로부터 벽부와 반대측으로 흐르게 하면, 다공 영역의 구멍을 통과할 수 없는 크기의 세포가 포착되어, 구멍을 통과한 세포로부터 분리된다. 세포 분리 필터에 있어서의 판상의 기부에는, 다공 영역을 둘러싸는 벽부가 일체적으로 형성되어 있으므로, 벽부의 내측에서 포착된 세포를, 당해 벽부의 내측에 남겨 두기 쉽다. 이로 인해, 유체 샘플로부터 분리한 세포를, 다른 기구에 옮기는 일 없이, 그대로 이용할 수 있다.
제2 양태는, 제1 양태에 관한 세포 분리 필터에 있어서, 상기 벽부로 둘러싸인 상기 다공 영역이 복수 설치되어 있다.
이 세포 분리 필터에서는, 벽부로 둘러싸인 다공 영역이 복수 설치되어 있으므로, 유체 샘플을 세포 분리 필터에 통과시키면, 분리 대상 세포가, 복수의 다공 영역에서 각각 포착된다. 다공 영역은 각각 벽부로 둘러싸여 있으므로, 세포를 복수의 조건하에서 이용하는 것이 가능해진다.
제3 양태는, 제1 양태 또는 제2 양태에 관한 세포 분리 필터에 있어서, 금속으로 구성되어 있다.
이 세포 분리 필터는, 금속에 의해 구성되어 있으므로, 재이용성을 높이는 등, 저비용화를 도모할 수 있다.
제4 양태는, 제1 양태 또는 제2 양태에 관한 세포 분리 필터에 있어서, 수지로 구성되어 있다.
이 세포 분리 필터는, 수지에 의해 구성되어 있으므로, 더욱 저비용화를 도모할 수 있다.
제5 양태는, 제4 양태에 관한 세포 분리 필터에 있어서, 상기 수지가 투명하다.
이 세포 분리 필터는, 투명한 수지에 의해 구성되어 있으므로, 세포 분리 필터의 하측으로부터 광을 조사함으로써, 현미경에 의한 세포의 관찰을 행하기 쉬워진다.
제6 양태에 관한 세포 배양 용기는, 제1 내지 제5 양태 중 어느 하나의 양태에 관한 세포 분리 필터와, 상기 세포 분리 필터의 상기 기부에 있어서의 상기 벽부와 반대측의 면에 설치되고, 상기 다공 영역을 폐색하는 폐색 부재를 갖는다.
이 세포 배양 용기에서는, 세포 분리 필터에 의한 세포의 분리를 행한 후, 기부에 있어서의 벽부와 반대측의 면에 폐색 부재가 설치되고, 당해 폐색 부재에 의해 다공 영역이 폐색된다. 이에 의해, 벽부의 내측에 배양액을 유지할 수 있다. 유체 샘플로부터 분리한 세포를, 다른 용기에 옮기는 일 없이, 그대로 배양할 수 있다.
본 개시에 관한 세포 분리 필터 및 세포 배양 용기에 의하면, 유체 샘플로부터 분리한 세포를, 다른 기구에 옮기는 일 없이, 그대로 이용할 수 있다고 하는 우수한 효과가 얻어진다.
도 1은 본 실시 형태에 관한 세포 분리 필터를 도시하는 사시도이다.
도 2의 (A)∼(C)는 다공 영역에 있어서의 각종 구멍 형상과, 당해 구멍에 포착된 세포를 도시하는 확대 단면도이다.
도 3은 본 실시 형태에 관한 세포 분리 필터의 변형예를 도시하는 사시도이다.
도 4는 본 실시 형태에 관한 세포 배양 용기를 모식적으로 도시하는 단면도이다.
도 5는 금속제의 세포 분리 필터의 제조 공정을 모식적으로 도시하는 단면도이다.
도 6은 수지제의 세포 분리 필터의 제조 공정을 모식적으로 도시하는 단면도이다.
도 2의 (A)∼(C)는 다공 영역에 있어서의 각종 구멍 형상과, 당해 구멍에 포착된 세포를 도시하는 확대 단면도이다.
도 3은 본 실시 형태에 관한 세포 분리 필터의 변형예를 도시하는 사시도이다.
도 4는 본 실시 형태에 관한 세포 배양 용기를 모식적으로 도시하는 단면도이다.
도 5는 금속제의 세포 분리 필터의 제조 공정을 모식적으로 도시하는 단면도이다.
도 6은 수지제의 세포 분리 필터의 제조 공정을 모식적으로 도시하는 단면도이다.
이하, 본 발명을 실시하기 위한 형태를 도면에 기초하여 설명한다.
[세포 분리 필터]
도 1에 있어서, 본 실시 형태에 관한 세포 분리 필터(10)는, 판상의 기부(12)와, 다공 영역(14)과, 벽부(16)를 갖고 있다. 이 세포 분리 필터(10)는, 금속 또는 수지로 구성되어 있다. 금속제의 세포 분리 필터(10)는, 예를 들어 X선 또는 자외선에 의한 리소그래피 및 전주를 이용하여 제조된다. 수지제의 세포 분리 필터(10)는, 예를 들어 X선 또는 자외선에 의한 리소그래피 및 전주를 이용하여 제조한 금형을 사용하여 성형된다. 수지는, 투명한 것이 바람직하지만, 불투명해도 된다.
금속의 재질은, 예를 들어 팔라듐(Pd), 백금(Pt), 금(Au), 은(Ag), 이리듐(lr), 로듐(Rh) 또는 루테늄(Ru) 중 적어도 어느 하나를 포함한다. 이 재질은, 팔라듐(Pd), 백금(Pt), 금(Au), 은(Ag), 이리듐(lr), 로듐(Rh) 혹은 루테늄(Ru)의 단체 금속이어도 되고, 예를 들어 팔라듐(Pd)·니켈(Ni) 합금, 백금(Pt)·니켈(Ni) 합금이어도 되고, 금(Au)·니켈(Ni) 합금 등이어도 된다. 합금의 경우, 니켈 등의 상대 금속에 대해, 상기한 금속의 비율이 많은 것이 바람직하다.
이들 금속은, 예를 들어 니켈(Ni) 등의 금속과 비교하면, 세포에 대한 독성이 매우 낮다. 이유로서는, 팔라듐(Pd) 자체의 독성이 낮은 것과, Pd와 니켈(Ni)의 합금은 고용체를 형성함으로써 니켈(Ni)의 용출을 방지할 수 있기 때문이다. 이들 중, 금속 비용, 저독성 점에서, 팔라듐 또는 팔라듐(Pd)·니켈(Ni)의 합금이 바람직하고, Pd·Ni 합금의 경우, Pd가 50%(중량) 초과인 합금, 예를 들어 Pd 80%·Ni 20%의 합금이 바람직하다. Pd와 Ni의 합금 필터, Pd 필터 등은, 내산성, 내열성을 가져, 필터 그대로 FISH법 등의 다양한 염색이 가능하고, 그대로(정립) 현미경 관찰할 수 있다. 또한, 경성 또한 내구성이 높아, 표면 처리 없이도 세포가 접착되기 어렵다.
판상의 기부(12)는, 예를 들어 원반 형상으로 형성되어 있다. 또한, 기부(12)는, 도시하지 않은 세포 분리 디바이스의 여과 유닛에 장착되는 필터링(카세트)에 배치 가능하면 되고, 기부(12)의 형상은 사각형 등이어도 된다. 기부(12)의 사이즈는, 혈액 등의 유체 샘플량, 후술하는 구멍(20)의 직경, 시간, 유속, 내압 등의 물리적 요인, 조작성, 비용 등을 고려하여 적절하게 결정된다. 예를 들어, 혈액 5mL를 처리하는 경우, 직경(원형인 경우), 또는 세로, 가로의 길이(사각형인 경우)는, 통상 약 10∼15㎜이지만, 혈액량에 따라서, 사이즈를 비한정적으로, 예를 들어 약 5∼20㎜의 범위로 할 수도 있다. 또한, 기부(12)의 두께는, 구멍 밀도, 내압, 비용 등과의 관계를 고려하여 적절하게 결정되고, 통상 10∼40㎛, 바람직하게는 약 15∼40㎛이다.
다공 영역(14)은, 기부(12)에 형성되어 있다. 이 다공 영역(14)에는, 도시하지 않은 유체 샘플 중으로부터 분리 대상 세포(18)(도 2의 (A)∼(C))를 분리하기 위한 구멍(20)이 다수 형성되어 있다. 구멍(20)은, 균일하고 규칙적으로 배치되어 있다. 필터 표면적 1㎠당 구멍(20)의 밀도는, 배열의 형태에 따라 상이하지만, 통상 1×104∼2×105/㎠, 바람직하게는 5×104∼1×105/㎠이다.
또한, 구멍(20)의 구멍 직경은, 분리 대상 세포(18)를 통과시키지 않고, 또한 분리 대상 외의 세포(도시하지 않음)를 통과시킬 수 있는 사이즈를 갖는 것이다. 분리 대상 세포(18)라 함은, 예를 들어 말초 순환 종양 세포(Circulating Tumor Cell; 「CTC」라고도 함), 또는 희소 세포와 같은 암 세포이다. 분리 대상 외의 인간 혈구 성분의 크기(긴 직경)는, 히스토그램 해석의 결과, 적혈구에서 약 6∼7㎛, 백혈구에서 약 7∼9㎛, 혈소판에서 5㎛ 미만이다. 이에 반해, 분리 대상이 되는 세포(18)의 크기는, 약 10∼20㎛이다. 따라서, 구멍(20)의 최소 직경은, 통상 약 7∼10㎛, 바람직하게는 약 7.5∼9㎛, 더욱 바람직하게는 약 7.5∼8.5㎛이다.
구멍(20)의 단면 형상은, 예를 들어 도 2의 (A)∼(C)에 도시되는 바와 같다. 도 2의 (A)에 도시되는 예에서는, 구멍(20)이 입구측(상측)으로부터 출구측(하측)을 향해 직경 축소됨과 함께, 구멍(20)의 내벽이, 당해 구멍(20)의 중심측을 향해 볼록한 단면 호 형상으로 형성되어 있다. 도 2의 (B)에 도시되는 예에서는, 구멍(20)이 입구측(상측)으로부터 출구측(하측)을 향해 직경 축소되는 테이퍼 형상으로 형성되어 있다.
도 2의 (C)에 도시되는 예에서는, 구멍(20)의 입구측(상측)에 당해 구멍(20)보다 대직경의 오목부(22)가 형성되어 있다. 구멍(20)의 입구측(하측)은, 도 2의 (A)에 도시되는 구멍(20)의 형상을 상하 반전시킨 형상으로 되어 있다. 바꾸어 말하면, 구멍(20)은, 당해 구멍(20)의 입구측(상측)으로부터 출구측(하측)을 향해 직경 확장됨과 함께, 구멍(20)의 내벽이, 당해 구멍(20)의 중심측을 향해 볼록한 단면 호 형상으로 형성되어 있다. 오목부(22)의 사이즈는, 분리 대상 세포(18)를 포착 가능한 사이즈이면 되고, 비한정적으로, 예를 들어 직경 20∼30㎛ 및 깊이 5∼15㎛, 바람직하게는 직경 25∼30㎛ 및 깊이 10㎛이다.
도 1에 있어서, 벽부(16)는, 기부(12)에 일체적으로 형성되고, 다공 영역(14)을 둘러싸고 있다. 벽부(16)는, 예를 들어 원환상으로 형성되고, 기부(12)의 상면측(도 2의 (A)∼(C)에 있어서의 구멍(20)의 입구측)에 기립 설치되어 있다. 기부(12)의 상면으로부터의 벽부(16)의 높이는, 분리 대상 세포(18)의 직경보다 큰 것이 바람직하고, 예를 들어 5∼10㎛, 바람직하게는 6∼8㎛이다.
벽부(16)로 둘러싸인 다공 영역(14)은, 복수 형성되어 있다. 도 1에 도시되는 예에서는, 벽부(16)로 둘러싸인 다공 영역(14)이 원형으로 배열되어 예를 들어 5개소 형성되어 있다. 또한, 벽부(16)로 둘러싸여 있지 않은 부분을, 또한 다공 영역(14)으로 해도 된다. 또한, 각각의 다공 영역(14)마다, 구멍(20)의 크기나 형상을 바꾸어도 된다.
벽부(16)의 배치는, 도 1에 도시되는 예에 한정되지 않고, 도 3에 도시되는 바와 같이, 벽부(16)를 기부(12)의 중앙부로부터 방사상으로 연장되는 직선부(16A)와, 기부(12)의 외주를 따라 원환상으로 연장되는 환상부(16B)로 구성해도 된다. 직선부(16A)와 환상부(16B)는, 복수의 다공 영역(14)을 각각 둘러싸도록 일체적으로 형성되어 있다. 이 예에서는, 기부(12)의 주위 방향으로, 벽부(16)로 둘러싸인 8개소의 다공 영역(14)이 형성되어 있다. 이 밖에, 벽부(16)를 격자 형상으로 구성해도 된다.
[세포 배양 용기]
도 4에 있어서, 본 실시 형태에 관한 세포 배양 용기(30)는, 세포 분리 필터(10)와, 폐색 부재(32)를 갖고 있다. 폐색 부재(32)는, 세포 분리 필터(10)의 판상의 기부(12)에 있어서의 벽부(16)와 반대측의 면(이면)에 설치되고, 다공 영역(14)을 폐색하는 부재이다. 이 폐색 부재(32)는, 예를 들어 기부(12)와 동등한 면적을 갖는 엘라스토머나 고무 등으로 구성되어 있다. 그리고, 폐색 부재(32)는, 분리 대상 세포(18)를 포착한 상태의 세포 분리 필터(10)의 이면측에, 접착이나 점착 등에 의해 설치된다. 이 폐색 부재(32)에 의해, 다공 영역(14)의 구멍(20)(도 2의 (A)∼(C))이 폐색된다.
(작용)
본 실시 형태는, 상기한 바와 같이 구성되어 있고, 이하 그 작용에 대해 설명한다. 도 2의 (A)∼(C)에 있어서, 본 실시 형태에 관한 세포 분리 필터(10)에서는, 분리 대상 세포(18)를 포함하는 유체 샘플을, 세포 분리 필터의 벽부(16)측으로부터 벽부(16)와 반대측으로 화살표 A 방향으로 흐르게 하면, 다공 영역(14)의 구멍(20)을 통과할 수 없는 크기의 세포(18)가 포착되어, 구멍(20)을 통과한 세포(도시하지 않음)로부터 분리된다. 세포 분리 필터에 있어서의 판상의 기부(12)에는, 다공 영역(14)을 둘러싸는 벽부(16)가 일체적으로 형성되어 있으므로, 벽부(16)의 내측에서 포착된 세포(18)를, 당해 벽부(16)의 내측에 남겨 두기 쉽다. 이로 인해, 유체 샘플로부터 분리한 세포(18)를, 다른 기구로 옮기는 일 없이, 그대로 이용할 수 있다.
특히, 본 실시 형태에서는, 벽부(16)로 둘러싸인 다공 영역(14)이 복수 형성되어 있으므로, 유체 샘플을 세포 분리 필터(10)에 통과시키면, 분리 대상 세포(18)(도 2의 (A)∼(C))가, 복수의 다공 영역(14)에 있어서 각각 포착된다. 다공 영역(14)은 각각 벽부(16)로 둘러싸여 있으므로, 세포(18)를 복수의 조건하에서 이용하는 것이 가능해진다.
세포 분리 필터(10)가 금속에 의해 구성되어 있는 경우, 재이용성을 높이는 등, 저비용화를 도모할 수 있다. 또한, 세포 분리 필터(10)가 수지에 의해 구성되어 있는 경우, 고가인 금속과 비교하여 더욱 저비용화를 도모할 수 있다. 또한, 세포 분리 필터(10)가 투명한 수지에 의해 구성되어 있는 경우, 세포 분리 필터(10)의 하측으로부터 광을 조사함으로써, 현미경에 의한 세포(18)의 관찰을 행하기 쉬워진다. 또한, 수지에 의해 구성된 세포 분리 필터(10)는 1회용이다.
도 4에 있어서, 세포 배양 용기(30)에서는, 세포 분리 필터(10)에 의한 세포(18)의 분리를 행한 후, 기부(12)에 있어서의 벽부(16)와 반대측의 면에 폐색 부재(32)가 설치되고, 당해 폐색 부재(32)에 의해 다공 영역(14)이 폐색된다. 이에 의해, 벽부(16)의 내측에 배양액(33)을 유지할 수 있다. 이 결과, 유체 샘플로부터 분리한 세포(18)를, 다른 용기로 옮기는 일 없이, 그대로 배양할 수 있다. 바꾸어 말하면, 세포 분리 필터(10)를 배양 접시로서 이용할 수 있다. 벽부(16)로 둘러싸인 다공 영역(14)이 복수 형성되어 있는 경우에는, 각 다공 영역(14)에서 배양된 세포(18)를, 서로 다른 조건하에서 이용할 수 있다. 일례로서, 복수 종류의 항암제를, 1개의 세포 배양 용기(30) 상에서 시험할 수 있다. 또한 이 경우에는, 세포(18)를 복수의 용기로 옮길 필요가 없으므로, 옮길 때에 세포(18)를 손상시켜, 배양에 적합하지 않게 되는 것을 방지할 수 있다.
[금속제의 세포 분리 필터의 양산 방법]
도 5의 (A)∼(E)에 있어서, 금속제의 세포 분리 필터(10)를 양산할 때에는, 상기한 바와 같이 X선 또는 자외선에 의한 리소그래피 및 전주를 이용하여, 기초가 되는 세포 분리 필터(10)를 제조한다(도 5의 (A)). 다음으로, 이 세포 분리 필터(10)에 대해 수지 성형을 행한다(도 5의 (B)). 이때, 다공 영역(14)의 구멍(20)의 내부까지 수지(24)가 충전되도록 한다. 다음으로, 탈형을 행하여, 수지형(26)을 얻는다(도 5의 (C)). 이 수지형(26)에 대해 전주를 행하고(도 5의 (D)), 탈형을 행함으로써, 금속제의 세포 분리 필터(10)를 얻을 수 있다(도 5의 (E)). 마찬가지로, 수지형(26)에의 전주와 탈형을 반복함으로써, 다공 영역(14) 및 벽부(16)를 갖는 금속제의 세포 분리 필터(10)를 양산할 수 있다.
[수지제의 세포 분리 필터의 양산 방법]
도 6의 (A)∼(E)에 있어서, 수지제의 세포 분리 필터(10)를 양산할 때에는, 상기한 바와 같이, X선 또는 자외선에 의한 리소그래피를 이용하여, 세포 분리 필터(10)(도 5의 (A))에 상당하는 형상의 포토레지스트(34)를 제조한다(도 6의 (A)). 다음으로, 이 포토레지스트(34)에 대해 전주를 행한다(도 6의 (B)). 이때, 포토레지스트(34)에 있어서의 다공 영역(14)의 구멍(20)(도 5의 (A))에 상당하는 부분의 내부까지 전주 금속(35)이 충전되도록 한다. 다음으로, 탈형을 행하여, 금형(36)을 얻는다(도 6의 (C)). 이 금형(36)에 대해 수지 성형을 행하고(도 6의 (D)), 탈형을 행함으로써, 수지제의 세포 분리 필터(10)를 얻을 수 있다(도 6의 (E)). 마찬가지로, 금형(36)에의 수지 성형과 탈형을 반복함으로써, 다공 영역(14) 및 벽부(16)를 갖는 수지제의 세포 분리 필터(10)를 양산할 수 있다.
[다른 실시 형태]
이상, 본 발명의 실시 형태의 일례에 대해 설명하였지만, 본 발명의 실시 형태는, 상기에 한정되는 것은 아니며, 상기 이외에도, 그 주지를 일탈하지 않는 범위 내에 있어서 다양하게 변형하여 실시 가능한 것은 물론이다.
예를 들어, 벽부(16)로 둘러싸인 다공 영역(14)이 복수 형성되어 있는 것으로 하였지만, 벽부(16)로 둘러싸인 다공 영역(14)을 1개소로 해도 된다. 또한, 세포 분리 필터(10)가 금속 또는 수지로 구성되는 것으로 하였지만, 다른 재료로 구성되는 것이어도 된다.
2015년 8월 6일에 출원된 일본 특허 출원 제2015-155937호의 개시는, 그 전체가 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.
본 명세서에 기재된 모든 문헌, 특허 출원 및 기술 규격은, 개개의 문헌, 특허 출원 및 기술 규격이 참조에 의해 포함되는 것이 구체적 또한 개별적으로 기재된 경우와 동일 정도로, 본 명세서 중에 참조에 의해 포함된다.
Claims (6)
- 판상의 기부와,
상기 기부에 설치되고, 유체 샘플 중에서 분리 대상 세포를 분리하기 위한 구멍이 형성된 다공 영역과,
상기 기부에 일체적으로 형성되고, 상기 다공 영역을 둘러싸는 벽부를 갖는, 세포 분리 필터. - 제1항에 있어서,
상기 벽부로 둘러싸인 상기 다공 영역이 복수 설치되어 있는, 세포 분리 필터. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
금속으로 구성된, 세포 분리 필터. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
수지로 구성된, 세포 분리 필터. - 제4항에 있어서,
상기 수지는 투명한, 세포 분리 필터. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 기재된 세포 분리 필터와,
상기 세포 분리 필터의 상기 기부에 있어서의 상기 벽부와 반대측의 면에 설치되고, 상기 다공 영역을 폐색하는 폐색 부재를 갖는, 세포 배양 용기.
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3838370A4 (en) * | 2018-09-28 | 2022-07-06 | Murata Manufacturing Co., Ltd. | FILTRATION FILTER AND FILTRATION METHOD |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
USD851276S1 (en) * | 2015-06-11 | 2019-06-11 | Yamaha Hatsudoki Kabushiki Kaisha | Placement and cluster sifting cell plate |
JP6464340B2 (ja) * | 2016-07-25 | 2019-02-06 | 株式会社オプトニクス精密 | 細胞のスライドグラス標本作製方法 |
JP6443604B1 (ja) * | 2017-03-10 | 2018-12-26 | 株式会社村田製作所 | 細胞濾過フィルタ |
JP1586945S (ko) * | 2017-03-31 | 2020-09-28 | ||
EP3978593A4 (en) * | 2019-05-24 | 2023-06-14 | Ogic Technologies Co. Ltd. | TARGET CELL CAPTURE FILTER AND TARGET CELL CAPTURE METHOD |
CN112940914A (zh) * | 2021-01-29 | 2021-06-11 | 赵彬 | 一种促进表皮干细胞分化和生长的实验装置 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5047215A (en) * | 1985-06-18 | 1991-09-10 | Polyfiltronics, Inc. | Multiwell test plate |
US20020041834A1 (en) * | 1996-05-06 | 2002-04-11 | Benny Ballin | Method and device for handling specimens |
KR20150035571A (ko) * | 2013-07-24 | 2015-04-06 | 가부시끼가이샤 옵토니쿠스 세이미쯔 | 말초 순환 종양 세포 또는 희소 세포 분리용 디바이스 및 말초 순환 종양 세포 또는 희소 세포 분리 방법 |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3730352A (en) * | 1971-12-06 | 1973-05-01 | New Brunswick Scientific Co | Filtration apparatus |
US4493815A (en) * | 1983-07-28 | 1985-01-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Supporting and filtering biochemical test plate assembly |
US4575406A (en) * | 1984-07-23 | 1986-03-11 | Polaroid Corporation | Microporous filter |
US4948442A (en) * | 1985-06-18 | 1990-08-14 | Polyfiltronics, Inc. | Method of making a multiwell test plate |
US5650323A (en) * | 1991-06-26 | 1997-07-22 | Costar Corporation | System for growing and manipulating tissue cultures using 96-well format equipment |
JP4173357B2 (ja) * | 2002-11-27 | 2008-10-29 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 組織培養、蛋白質抽出並びに蛋白質濃縮用デバイス |
GB0500035D0 (en) * | 2005-01-04 | 2005-02-09 | Nanotecture Ltd | Filter |
WO2006110537A2 (en) * | 2005-04-07 | 2006-10-19 | Janssen Pharmaceutica Nv | Particulate separation filters and methods |
WO2006116327A1 (en) * | 2005-04-21 | 2006-11-02 | California Institute Of Technology | Uses of parylene membrane filters |
WO2011139445A1 (en) * | 2010-05-03 | 2011-11-10 | Creatv Microtech, Inc. | Polymer microfilters and methods of manufacturing the same |
CN103270150B (zh) * | 2010-10-25 | 2016-10-19 | 西托根有限公司 | 细胞采集装置 |
WO2013054786A1 (ja) * | 2011-10-14 | 2013-04-18 | 日立化成株式会社 | 金属フィルターの製造方法 |
CA3164569A1 (en) * | 2011-11-21 | 2013-05-30 | Creatv Microtech, Inc. | Polymer microfiltration devices, methods of manufacturing the same and the uses of the microfiltration devices |
JP6028563B2 (ja) * | 2012-12-26 | 2016-11-16 | 日立化成株式会社 | 金属フィルターの製造方法 |
JP2014060996A (ja) * | 2013-11-05 | 2014-04-10 | Screencell | 生きた細胞をフィルタ上で単離および培養するかまたはその遺伝子材料を抽出するための装置および方法 |
-
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5047215A (en) * | 1985-06-18 | 1991-09-10 | Polyfiltronics, Inc. | Multiwell test plate |
US20020041834A1 (en) * | 1996-05-06 | 2002-04-11 | Benny Ballin | Method and device for handling specimens |
KR20150035571A (ko) * | 2013-07-24 | 2015-04-06 | 가부시끼가이샤 옵토니쿠스 세이미쯔 | 말초 순환 종양 세포 또는 희소 세포 분리용 디바이스 및 말초 순환 종양 세포 또는 희소 세포 분리 방법 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3838370A4 (en) * | 2018-09-28 | 2022-07-06 | Murata Manufacturing Co., Ltd. | FILTRATION FILTER AND FILTRATION METHOD |
US11833472B2 (en) | 2018-09-28 | 2023-12-05 | Murata Manufacturing Co., Ltd. | Filtration filter and filtration method |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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