KR20170026242A

KR20170026242A - 간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR20170026242A
Application number: KR1020160109039A
Authority: KR
Inventors: 전성수
Original assignee: 김병용; 전의혁
Priority date: 2015-08-28
Filing date: 2016-08-26
Publication date: 2017-03-08

Abstract

본 발명은 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린을 유효성분으로 포함하는 간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

Description

간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for treatment or prevention of liver disease}

간 질환은 국내에서 성인병 및 사망의 중요한 원인으로 부각되고 있다. 간은 완충능력이 큰 기관으로 질환의 초기 단계에 자각증상이 없어 질병이 상당히 진전된 상태에 발견되는 경우가 많을 뿐 아니라 효과적인 치료제 및 진단방법이 부족한 실정이다. 간 질환의 원인으로는 알코올, 약물, 화학약품, 간염 바이러스, 비만과 인슐린 내성 같은 대사성 질환, 자가면역성 질환 등이 있으나 그 원인을 알 수 없는 경우도 많다. 또한 간은 인체에서 혈액의 저장과 순환, 혈액량 조절과 해독작용의 중추로서 최근 산업화에 따라 증가된 유해물질에 노출되는 기회가 증가되면서 끊임없는 해독작용에 시달리고 있으며 특히 정신적 스트레스의 증가와 과음, 흡연 등의 원인에 의해 간손상이 증가됨으로써 면역체계의 이상 초래와 더불어 다른 질병의 원인이 되는 경우가 증가하고 있다.

대부분의 간 질환에 있어서 질환의 예후에 중대한 영향을 미치는 여러 합병증과 간암 등은 일단 간섬유화(hepatic fibrosis)와 간경변으로 진행된 이후 발생하는 경우가 대부분이므로 간 질환 진행 과정에 대한 이해와 이의 진전을 억제하는 치료제의 개발이 필요한 실정이다.

간 질환 치료 효과를 갖는 조성물에 관하여 한국공개특허 제10-2014-0137288호에서는 고량강 추출물의 간 질환 치료효과가 기재되어 있고, 한국공개특허 제10-2014-0137289호에는 포공영 추출물을 포함하는 간 질환 치료용 조성물이 기재되어 있다. 그러나, 보다 경제적이고 안정하며, 효과적인 간 질환 치료제의 개발이 요구되고 있다.

이러한 배경 하, 본 발명자는 간 기능 개선에 효과적인 5종의 활성성분을 포함하는 신규 복합 약학적 조성물을 개발하고, 상기 조성물이 간 질환의 예방 또는 치료에 효과적인 것을 확인함으로써 본 발명의 완성에 이르렀다.

한국공개특허 제10-2014-0137288호 한국공개특허 제10-2014-0137289호

본 발명의 목적은 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린을 유효성분으로 포함하는 간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하기 위한 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서 본 발명은 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린을 유효성분으로 포함하는 간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 '비타민 D'는 지용성 비타민으로 비타민 D2 (ergocalciferol)는 효모와 식물스테롤인 에르고스테롤(ergosterol)로부터 합성되고, 비타민 D3 (cholecalciferol)는 햇빛을 받아 피부세포에서 콜레스테롤 전구체로부터 합성되거나, 식품으로 섭취될 수 있다.

본 발명에서 '비타민 B12'는 시아노코발라민(cyanocobalamine)이라고도 하는 항빈혈인자를 말한다.

본 발명에서 '비타민 B6'는 식품에서 피리독신(pyridoxine), 피리독살(pyridoxal), 피리독사민(pyridoxamine) 또는 각각의 인산화 형태로 존재하는 물질로서, 상기 피리독신과 피리독살 및 피리독사민의 세 가지가 생체 내에서 상호 변환이 가능하며, 단백질 대사에 중요한 효소의 구성성분이자, 헤모글로빈의 구성성분인 헴 합성과정에 관여하는 것으로 알려져 있다.

본 발명에서 '비타민 B9'은 비타민 B군의 수용성 비타민인 엽산을 말한다.

본 발명에서 '콜린'은 비타민 B 복합체의 한 종류로 항지간인자(lipotropic factor)이며, 레시틴이나 플라스마로겐 등의 복합지질의 성분이고, 아세틸콜린의 성분으로 신경의 흥분전달에 관여하는 물질로 알려져 있다.

본 발명에서 상기 비타민 D는 콜레칼시디올(cholecalcidiol), 콜레칼시트리올(cholecalcitriol) 또는 에르고칼시페롤(ergocalciferol), 비타민 B12는 코발라민(cobalamine) 유도체, 비타민 B6는 피리독살 또는 피리독사민, 비타민 B9은 엽산(folate) 염, 콜린은 레시틴(lecithin) 또는 메티오닌(methionine)으로 대치 가능하며, 상호호환적으로 사용될 수 있다.

또한, 본 발명에서 상기 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린은 유리 염기 형태, 이의 유도체 또는 당업계에 공지된 염의 형태로도 사용될 수 있다.

본 발명에서 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린은 상업적으로 판매되는 것을 사용하거나, 당업계에 공지된 방법으로 합성하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용하거나, 또는 자연에서 얻은 식물을 당업계에 공지된 방법으로 처리하여 수득한 것을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 목적상 상기 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린은 간 질환의 예방 및 치료용으로 사용된다.

본 발명의 상기 비타민 D는 바람직하게 비타민 D3이다. 상기 비타민 D3는 본 발명의 약학적 조성물 중 바람직하게 900 IU 내지 20,000 IU, 1000 IU 내지 20,000 IU, 1100 IU 내지 20,000 IU, 1500 IU 내지 20,000 IU, 1800 IU 내지 20,000 IU, 2000 IU 내지 20,000 IU, 5000 IU 내지 20,000 IU, 또는 10,000 IU 내지 20,000 IU일 수 있고, 보다 바람직하게, 1000 IU 내지 20,000 IU, 2000 IU 내지 20,000 IU, 5000 IU 내지 20,000 IU이고, 특히 바람직하게 1000 IU 내지 10,000 IU, 또는 2000 IU 내지 10,000 IU, 또는 1000 IU, 2000 IU, 5000 IU, 10,000 IU 또는 20,000 IU의 함량으로 포함된다.

비타민 D, 구체적으로는 비타민 D3를 위와 같은 함량으로 포함하는 본 발명의 조성물은 투여시 ALT, AST, BUN 수치를 효과적으로 낮추는 등 간 질환을 예방 및 치료하는 효과가 매우 탁월하다.

본 발명에서 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린은 일종의 그룹과 같이 공통된 기능성을 가지는데, 그 대표적인 기능은 다음과 같다: 1) 간 재생 유전자의 작동 가속화, 2) 간 질환시 파괴되는 대사 진행 효소의 생성, 3) 간 대사 기능과 관련된 유전자의 메틸화, 4)DNA 합성, 5) 상해 유전자의 수복, 6) 적혈구, 백혈구 등의 합성, 7) 단백질, 지방, 탄수화물을 고분자로 합성, 8) 지방산의 합성, 9) 간 질환에서 간염, 간경화 또는 간암으로의 악화를 유발하는 호모시스테인의 제거 및 10) 독성물질을 메틸화시킴으로서 해독작용.

본 발명의 상기 약학적 조성물은 바람직하게 비타민 E, 비타민 C, 실리마린 및 비페닐디메틸디카복실레이트에서 선택되는 어느 하나 이상을 더 포함한다.

본 발명의 목적상 상기 비타민 E, 비타민 C, 실리마린 및 비페닐디메틸디카복실레이트는 간 질환의 예방 및 치료용으로 사용된다.

바람직하게, 본 발명의 약학적 조성물은 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9, 콜린, 비타민 E 및 비타민 C를 포함할 수 있다.

바람직하게, 본 발명의 약학적 조성물은 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9, 콜린, 비타민 E, 비타민 C, 실리마린 및 비페닐디메틸디카복실레이트를 포함할 수 있다.

본 발명에서 '비타민 E'는 지용성 비타민으로 토콜(tocol) 유도체로 천연에는 α-, β-, γ-, δ-토코페롤과 α-, β-, γ-, δ-토코트리에놀의 8종이 존재한다.

본 발명에서 '비타민 C'는 상호전환이 가능한 환원형의 아스코르빈산(ascorbic acid) 및 산화형인 디하이드로아스코르빈산(dehydroascorbic acid)를 모두 포함하며, 결합조직과 지지 조직의 형성에 관계되고 항산화 물질인 것으로 알려져 있다.

상기 비타민 E 및 C의 대표적인 기능으로는 ROS (Reactive oxygen species)의 연속적 산화 스트레스 제거 작용이 있다.

간은 한 개의 세포 안에서 500개 이상의 기능을 지니며 2,000여 생화학 반응이 연속적으로 전개되는데, 무수한 생화학 반응이 주로 산화 환원 반응이어서 정상 상태에서도 ROS가 매우 많이 만들어진다. ROS는 근처에 있는 효소, 단백질 또는 세포막의 지질로부터 전자 하나를 탈취하여, 효소를 산화시켜 파괴하고, 단백질을 산화시켜 파괴하고, 지질을 산화시켜 과산화지질로 만든다. 비타민 E과 C는 이러한 ROS에 의한 산화 스트레스를 효과적으로 제거하여 이를 통하여 1) 지방간의 예방 및 치료, 2) 간염의 예방 및 치료, 3) 간경화의 예방 및 치료 및 4) 간암의 예방 및 치료에 도움을 줄 수 있다.

본 발명에서 '실리마린(Silymarin)'은 국화과에 속하는 약용식물인 카르두스 마리아누스(Carduus marianus Linne (Silybum mariannum))의 학명을 가진 마리아 엉겅퀴에서 추출한 성분으로서, 플라보노이드(flavonoid)계 화합물의 일종이다. 이 식물은 남유럽과 북아프리카가 원산지이나 이후에 아메리카 대륙에도 정착하여 현재는 관상용이나 약용으로 재배되고 있다. 실리마린은 간세포막을 안정화시켜 유해물질의 세포 내 유입을 억제하며, 간세포의 단백질 합성을 활성화시켜 간세포의 재생을 촉진시킨다는 것이 알려져 있으며, 특히 강력한 항산화 작용을 가지며, 인지질 합성 감소, 중성지질의 과다축적 방지, 혈정 LDL 감소, 항염, 항암, 급성 바이러스성 간염, 만성 간염, 간경화 합병증 환자의 회복 촉진 작용을 갖는 것으로 알려져 흡연, 음주, 과로 및 각종 공해에 의한 환경오염 등으로 인하여 발병되는 다양한 간 질환 치료에 널리 응용되고 있다.

실리마린을 주성분으로 함유하는 제제의 경우, 이미 임상적으로 간 질환 치료에 널리 응용되고 있으며, 실리마린의 대표적 약리 효과는 다음과 같다: 1) 항산화작용, 2) 글루타치온의 증가 작용, 3) 간 세포막 안정화 작용으로 간 세포 파괴를 방지, 4) 독성물질 중화, 해독, 유입의 억제, 5) 단백질 합성 촉진, 6) 간 경화 과정 억제, 7) 간 세포 염증 과정 억제, 8) 허혈상태, 방사능, 철분 축적, 간염 바이러스로부터 간 세포 파괴를 억제, 9) TNF-알파를 억제하여 과산화지질 축적을 방지, 및 10) 급성 바이러스성, 만성 간염, 알코올성 간염, 간경화, 지방간의 임상적 치료에 사용.

보다 상세하게, 실리마린의 상기 항산화 작용과 관련하여, 실리마린은 주로 불포화 지방산의 산화를 억제하고, ROS의 중화, 과산화 지질의 생성 억제, LDH (Lactate dehydrogenase)의 감소 억제, Urea Cycle 대사 효소 파괴 억제, 간세포 내 칼슘 농도의 증가를 감소시켜 수명연장 효과, 간염 바이러스, 알코올, 독성물질, 약물, 허혈성 상태로 유발되는 산화적 스트레스를 억제하여 간 내 각종 효소 파괴를 억제, 세포내 환원형 글루타치온의 농도를 증가시켜 간 세포 파괴를 방지, 간 세포막이 파괴되는 것을 억제하여 간 세포 효소 상실을 방지하는 효과를 나타낸다.

또한, 실리마린의 지방간에 대한 효과와 관련하여, 실리마린은 인지질 합성을 감소시키고, 글리세롤이 지방산에 결합하여 중성지질이 과다축적됨을 방지하며, 혈청 지질(LDL)을 감소시키는 효과를 나타낸다.

또한, 실리마린의 항염 작용과 관련하여, 실리마린은 호중구 이동을 억제하여 간 세포의 파괴를 방지하고, 간 쿠퍼셀의 과잉 염증 유발작용을 억제하며, 염증 유발물질인 프로스타글란딘 및 류코트리엔의 합성을 억제한다.

또한, 실리마린의 항암 작용과 관련하여 실리마린은 발암세포 분화증식을 억제한다.

또한, 실리마린의 항섬유화 작용과 관련하여, 실리마린은 간의 성상세포의 증식을 감소시키며, 염증 과정 없이 간 섬유화 진행을 억제한다.

본 발명의 실리마린은 주성분인 실리빈(Silybin), 실리빈의 이성질체인 실리크리스틴(Silicristin), 실리디아닌 (Silidianin) 및 이소실리빈(isosilybin) 등이 혼합되어 있는 플라보리그난(flavolignans)을 포함할 수 있다.

바람직하게 본 발명의 실리마린에는 실리마린 및 그외 활성성분(예를 들어, 실리비닌(실리빈 : 실리빈 A + 실리빈 B), 이소실리비닌, 실리크리스틴, 실리디아닌 등)을 65 중량% 내지 80 중량% 함유할 수 있다.

본 발명에서 '비페닐디메틸디카복실레이트'는 약어로 'DDB'라고도 지칭되며, 종래 간장질환 치료제 및 간 보호제로 사용되어 왔다. 비페닐디메틸디카복실레이트는 임상적으로 혈청트랜스아미네이즈(Serum transaminase), 특히 혈청 글루타민 피루베이트 트랜스아미네이즈 (Serum glutamic pyruvic transaminase; SGPT)의 활성을 저하하는 기능이 있으며, 사염화탄소 또는 티오아세트아마이드(thioacetamide) 독성에 의한 간 손상으로부터의 보호 작용이 있으며, 사이토크롬(cytochrome) P450　2B1 mRNA와 벤질옥시 레조루핀-O-디알킬라제(benzyloxyresorufin-O-dealkylase) 활성을 증가시키고, 유리 라디칼(free radical)의 제거 기능이 있는 것으로 알려져 있다. 상기 비페닐디메틸디카복실레이트의 대표적인 약리효과는 다음과 같다: 1) 항산화 작용, 2) 지방간, 만성 간염 개선효과, 3) ALT 상승 정상화, 4) 글루타치온 증가, 5) 바이러스성 간염 발병 및 악화의 예방, 치료, 6) 유해물질로부터 간 보호, 해독, 7) 간 중독증상 개선, 8) 간암 예방 유전자의 변이 억제, 9) 면역 증강 및 10) 간 세포 보호, 간 재생 촉진.

본 발명에서 실리마린은 밀크시슬 추출물, 비페닐디메틸디카복실레이트 은 오미자 추출물로 대치 가능하며, 상호호환적으로 사용될 수 있다.

또한, 본 발명에서 상기 비타민 E, 비타민 C는 유리 염기 형태, 이의 유도체 또는 당업계에 공지된 염의 형태로도 사용될 수 있다.

본 발명에서 비타민 E, 비타민 C, 실리마린 및 비페닐디메틸디카복실레이트는 상업적으로 판매되는 것을 사용하거나, 당업계에 공지된 방법으로 합성하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용하거나, 또는 자연에서 얻은 식물을 당업계에 공지된 방법으로 처리하여 수득한 것을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 약학적 조성물 중 비타민 E는 10 IU 내지 1,000 IU의 함량으로, 비타민 C는 10 mg 내지 2,000 mg의 함량으로, 실리마린은 50 mg 내지 5,000 mg의 함량으로, 비페닐디메틸디카복실레이트는 50 mg 내지 5,000 mg의 함량으로 포함될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 간 질환의 예방 또는 치료제로서 사용된다.

본 발명에서 '간 질환'이란 본 발명의 조성물에 의해 치료될 수 있는 간 질환은 제한없이 포함되나, 그 예로 비알콜성 지방간, 알콜성 지방간, 간염, 간경화, 간암 등이 있을 수 있다.

상기 지방간은 중성지방이 정상적인 경우와는 다르게 간 세포 내에 비정상적으로 침착되어 보이는 현상이 나타난 것을 말한다. 정상 간은 약 5%가 지방조직으로 구성되어 있으며 중성지방, 지방산, 인지질, 콜레스테롤 및 콜레스테롤 에스터가 지방의 주성분이나, 일단 지방간이 발생되면 대부분의 성분이 중성지방으로 대체되며, 중성지방의 양이 간 중량의 5%이상이면 지방간으로 진단된다. 지방간은 간세포 내의 지방대사 장애나 과잉지방을 운반하는 과정에서의 결함 등에 의하여 초래되는 것으로서, 주로 간에서의 지방대사 장애로 인하여 발생한다. 상기 지방간에서 축적된 지방의 대부분은 중성지방(triglyceride)이며, 지방간은 크게 비만, 당뇨병, 고지혈증, 약물 등으로 인한 비알코올성 지방간과 과음으로 인한 알코올성 지방간으로 나눌 수 있다.

상기 비알코올성 지방간은 알코올 섭취 과거력이 없으면서 지방간을 동반하는 경우를 말하며, 비만, 당뇨, 고 지혈증 등 대사성 질환과 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 이러한 비알코올성 지방간에는 단순히 간 내에 지방이 축적된 것 뿐만 아니라, 비알코올성 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis) 또는 말기 섬유화 간 질환 등이 여기에 속한다.

또한, 상기 알코올성 지방간은 알코올을 많이 섭취하게 되어 간에서 지방 합성이 촉진되고 정상적인 에너지 대사가 이루어지지 않아 발생하게 되는 것을 말한다. 알코올은 체내에 저장되지 못하고 간에서 산화작용에 의하여 완전히 없어지게 되는데, 구체적으로 보면, 간에서 알코올은 크게 알코올 탈수소효소 (alcohol dehydrogenase : ADH) 경로, 미소체 알코올 산화체계 (microsomal ethanol oxidizing system : MEOS) 경로 및 카탈라제 (catalase) 경로의 세가지 경로에 의해 대사되어 아세트알데히드로 변환되고, 이는 다시 탈수소효소 (aldehyde dehydrogenase : ALDH)에 의하여 아세트염으로 대사된다. 이때, 아세트알데히드는 독성이 있어 간세포에 손상을 줄 수 있고, 또한 이러한 알코올의 대사 결과 지방산이 많이 만들어져 간에 지방이 축적되게 되며 특히 알코올로 인해 급증하는 유해산소(ROS)가 지방대사효소를 파괴하므로 인해 과산화 지질이 축적되는데, 상기와 같은 원인으로 간에 축적된 지방간을 알코올성 지방간이라고 한다.

또한, 간경화란 상당량의 간세포의 상실, 섬유조직의 증식, 재생결절을 특징으로 하는 모든 형태의 간 질환을 말한다. 간경변의 주된 원인은 간염 바이러스나 알코올, 및 대사증후군으로 인한 유해산소(ROS) 등이며, 이로 인해 저장 기능을 지닌 간 성상세포의 유전자가 변질되어 제1형 교원질(Type1 collagen) 섬유를 만들어냄으로써 간 실질 세포를 섬유화시켜 간경화가 유발되는 바, 항바이러스 치료나 금주 또는 영양공급과 대중요법 등으로 치료하고 있다.

또한 상기 간암은 간경변환자, 알코올 등의 원인에 의한 만성 간 질환 환자로부터 생기는 병을 말하며, 전형적인 간종괴가 보이거나 혈액 검사에서 알파태아단백질(AFP)가 증가되어 있다면 간암으로 진단한다.

모든 간 질환은 발생 원인은 환자마다 다를 수 있지만, 만성화가 되면 유해산소(ROS)가 급증하여 간염, 간경화증, 간암으로 점점 병이 진행된다.

본 발명의 약학적 조성물은 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린의 복합 유효성분을 포함함으로써, 간 질환에서 증가하는 ROS를 없애고 파괴된 효소를 생성시켜주는 등의 작용으로 간 기능을 현저하게 개선하고, 간 세포 손상으로부터 보호 및 치유하는 효과가 우수하여, 각종 간 질환의 예방 및 치료제로 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 간 질환 유발시 발현이 증가하는 아스파테이트 아미노기전이효소(Aspartate Aminotransferase, AST), 알라닌 아미노기전이효소(Alanine Aminotransferase, ALT), 및 혈액요소질소(Blood Urea Nitrogen, BUN)를 정상 수준으로 감소시키고, 간의 항산화 활성(SOD activity)을 향상시키므로 간 질환의 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명에서 '예방'은 본 발명에 따른 조성물의 투여로 간 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다.

또한, 본 발명에서 치료는 본 발명에 따른 조성물의 투여로 간 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 제조한다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 제형화될 수 있다.

본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 '약학적으로 유효한 양'은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 조성물의 유효한 투여량은 간질환이 지닌 병태학적 특성에 따라 결정할 수 있다. 즉, 간질환은 병태학적으로 지방간에서 간염으로, 간염에서 간경화나 간암으로 악화되지만 병태조직학적 관점에서는 지방간에서부터 간염과 간경화, 및 간암 세포가 혼재할 수 있다. 또한, 간질환을 유발시키는 최초의 원인은 알코올, 독성물질, 대사증후군, 또는 간염 바이러스 등이지만 이 같은 원인에 의해 급증하는 유해산소(ROS)와 인체의 사이토카인계 염증 유발물질 등이 간 내의 각종 효소를 파괴시키고 세포를 변질 및 파괴시키므로, 지방간, 간염, 간경화 또는 간암이 될 수 있다(Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology 12, 387-400 2015). 따라서, 본 발명 조성물은 지방간을 치료하는 하루 용량을 기준으로 하여 지방간의 경우 하루 1회 용량, 간염의 경우 하루 2회 용량, 간경화, 간암, 및 간이식자의 경우 하루 3회 투여할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

예를 들어, 본 발명의 조성물은 1,100 mg ~ 11,000 mg의 양으로 투여될 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 간 질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 다른 약물 치료와 병용하여 사용할 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린의 복합 유효성분을 포함하여, 간 기능을 현저하게 개선하고, 간 세포 손상으로부터 보호 및 치유하는 효과가 우수하여, 각종 간 질환의 예방 및 치료제로 널리 활용될 수 있다.

도 1은 실시예 1에 따른 정제의 물에서의 용출 그래프이다.
도 2는 실시예 5에 따른 단일조성물의 투여에 따른 체중 변화를 나타낸 그래프이고,
도 3은 실시예 5에 따른 단일조성물의 투여에 따른 간의 무게를 비교한 그래프이고,
도 4는 실시예 5에 따른 단일조성물의 투여에 따른 신장의 무게를 비교한 그래프이고,
도 5는 실시예 5에 따른 단일조성물의 투여에 따른 심장의 무게를 비교한 그래프이다. (*와 **는 G2와의 통계적 유의성을 의미, 각각 P<0.05 및 P<0.01을 나타냄. 이하 동일)
도 6은 실시예 5에 따른 단일조성물의 투여에 따른 아미노기전이효소(AST)의 수치를 비교한 그래프이고,
도 7은 실시예 5에 따른 단일조성물의 투여에 따른 알라닌아미노기전이효소(ALT)의 수치를 비교한 그래프이고,
도 8은 실시예 5에 따른 단일조성물의 투여에 따른 간의 항산화 활성(SOD activity)을 비교한 그래프이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의하여 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

참고예 1: 재료

비타민 B12는 DSM (스위스) 또는 LYCORED에서, 비타민 B6는 DSM (독일)에서, 비타민 B9는 DSM (스위스)에서, 주석산수소콜린 분말은 Balcehm (이탈리아) 또는 Algry에서, 비타민 D는 DMS (스위스)에서, 비타민 E는 DSM (스위스)에서, 비타민 C는 DSM (영국)에서, 밀크시슬 추출물은 Monteloeder (스페인)에서, 실리마린은 Teva(이스라엘) 또는 Monteloeder에서, 오미자엑스는 코시스 (한국)에서, 오미자추출물은 조은푸드텍 (한국)에서, 비페닐디메틸디카르복실레이트(Biphenyl Dimethyl Dicarboxylate)는 Zhejiang Hisoar에서 구입하여 사용하였다. 또한 0.5% 카르복시메틸셀룰로오스(Carboxymethylcellulose, CMC)의 멸균주사용수는 CMC는 주식회사 대정화금으로부터 구입하였고 멸균주사용수는 주식회사 대한약품공업으로부터 구입하였다. 또한, D-갈락토사민(D-galactosamine)은 Sigma-Aldrich Ltd에서 구입하여 사용하였다.

실시예 1 내지 4에 사용한 비타민 D는 비타민 D3 90,000 ~110,000 IU/g 이었고, 실시예 5에서는 기재된 함량별 비타민 D를 사용하였다. 또한, 비타민 B12 (1% 분말)는 비타민 B12를 부형제(인산칼슘)로 배산한 제품으로서, 상기 비타민 B12 (1% 분말) 중 비타민 B12가 1 중량% 포함됨을 의미하고, 비타민 E 혼합분말(비타민 E 50%)은 혼합분말 중 비타민 E가 50 중량% 포함됨을 의미한다.

참고예 2: 동물모델의 준비

오리엔트바이오(성남, 한국)에서 7주령된 Sprague-Dawley 계 랫드(SD)를 구입하여 실험에 사용하였다. 입수 후 시험을 실시하는 경기바이오센터 동물사육구역 5 호실의 폴리카보네이트 사육상자(W235 * L380 * H175, 3마리/사육상자)에서 7일간 순화시켰다. 사육상자는 주 1회 이상 교환하였다.

순화 및 실험조건은 온도 23 ± 3℃, 상대습도 55 ± 15 %, 환기횟수 10 내지 20 회/시간, 조명시간 12 시간(오전 8 시 점등-오후 8 시 소등) 및 조도 150-300 Lux를 유지하였다. 온도와 상대습도는 매시간 컴퓨터 시스템을 이용하여 측정하였고, 환기횟수 및 조도는 정기적으로 측정하였다.

사료는 주식회사 두열바이오텍에서 공급받은 설치류용 고형사료(Teklad certified irradiated global 18 % protein rodent diet; 2918C, ENVIGO, 영국)를 급이기에 넣고 자유섭취 하도록 하였다.

물은 자외선 살균기 및 미세여과장치로 소독한 상수도수를 폴리카보네이트제 음수병에 넣고 자유섭취 하도록 하였다. 수질검사는 경기도보건환경연구원에서 수행하였고, 먹는 물 수질기준에 적합함을 확인하였다. 음수병은 주 1회 이상 교환하였다.

실험동물의 윤리규정은 경기바이오센터의 실험동물운영위원회에 의해 승인되었다(일련번호: 2016-04-0010).

참고예 3: 통계적 분석

통계 분석은 의학에 대한 SPSS 통계 22(SPSS statistics 22 for medical science)를 사용하였으며, 측정 결과는 ONE-WAY ANOVA 및 Student’s t-test를 이용하여 실시하였다. 정상군 및 단일조성물 투여군은 부형제대조군과 비교하였으며, P<0.05인 경우 통계학적으로 유의하다고 판단하였다.

실시예 1: 단일정제의 제조

다음 표 1과 같이 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9, 주석산수소콜린 분말, 비타민 D, 비타민 E, 비타민 C, 실리마린 및 비페닐디메틸디카복실레이트를 미결정셀룰로오스와 혼합하여 35호체로 체과하고, 고속혼합기(Diosna, 독일) 내에서 혼합하였다. 별도로 히드록시프로필셀룰로오스를 물과 에탄올의 1:1 혼액에 녹여 만든 결합액을 상기의 혼합물이 들어있는 고속혼합연합기에 투입하여 연합하였다. 연합이 끝나면 25호체를 이용하여 제립하고 이를 건조기(제이오텍, 한국)를 이용하여 60 ℃에서 건조한 후 건조가 끝나면 다시 25호체로 정립하였다. 상기 정립된 과립물을 V-형 믹서(Erweka, 독일)로 혼합하고, 여기에 전분 글리콘산 나트륨, 이산화규소를 혼합한 다음, 스테아르산 마그네슘을 넣어 V-형 믹서로 혼합하였다. 혼합물을 로타리 타정기(세종, 한국)를 사용하여 정당 980 mg 으로 타정한 다음 하이코터(세종, 한국)를 사용하여 필름코팅층을 형성하여 정당 1,020 mg 의 단일정제를 제조하였다.

실시예 2: 단일정제의 제조

다음 표 1과 같이 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9, 주석산수소콜린 분말, 비타민 D, 비타민 E, 비타민 C, 실리마린 및 비페닐디메틸디카복실레이트를 미결정셀룰로오스와 혼합하여 35호체로 체과하고, 고속혼합기(Diosna, 독일) 내에서 혼합하였다. 별도로 히드록시프로필셀룰로오스를 물과 에탄올의 1:1 혼액에 녹여 만든 결합액을 상기의 혼합물이 들어있는 고속혼합연합기에 투입하여 연합하였다. 연합이 끝나면 25호체를 이용하여 제립하고 이를 건조기(제이오텍, 한국) 를 이용하여 60 ℃에서 건조한 후 건조가 끝나면 다시 25호체로 정립하였다 상기 정립된 과립물을 V-형 믹서(Erweka, 독일)로 혼합하고, 여기에 크로스카멜로오스 나트륨, 이산화규소를 혼합한 다음, 스테아르산 마그네슘을 넣어 V-형 믹서로 혼합하였다. 상기 혼합물을 로타리 타정기(세종, 한국)를 사용하여 정당 980 mg 으로 타정한 다음 하이코터(세종, 한국)를 사용하여 필름코팅층을 형성하여 정당 1,020 mg 의 정제를 제조하였다.

실시예 3: 단일정제의 제조

1) 1차 과립의 제조

다음 표 2와 같이 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9, 주석산수소콜린 분말을 미결정셀룰로오스와 혼합하여 35호체로 체과하고, 고속혼합기(Diosna, 독일)로 혼합하였다. 별도로 히드록시프로필셀룰로오스를 물에 녹여 결합액을 제조하고, 고속혼합기 내의 혼합물과 연합하였다. 연합이 끝나면 25호체를 이용하여 제립하고 이를 건조기(제이오텍, 한국) 를 이용하여 60 ℃에서 건조한 후 건조가 끝나면 다시 25호체로 정립하였다.

2) 2차 과립의 제조

다음 표 2와 같이 비타민 D, 비타민 E, 비타민 C, 실리마린 및 비페닐디메틸디카복실레이트를 미결정셀룰로오스와 혼합하여 35호체로 체과하고, 고속혼합기(Diosna, 독일)로 혼합하였다. 별도로 히드록시프로필셀룰로오스를 물에 녹여 결합액을 제조하고, 고속혼합기 내의 혼합물과 연합하였다. 연합이 끝나면 25호체를 이용하여 제립하고 이를 건조기(제이오텍, 한국)를 이용하여 60 ℃에서 건조한 후 건조가 끝나면 다시 25호체로 정립하였다.

3) 후혼합, 타정 및 코팅

앞선 1) 및 2) 단계에서 제조된 1차 과립 및 2차 과립을 V-형 믹서(Erweka, 독일)로 혼합하고, 여기에 전분 글리콘산 나트륨, 이산화규소를 혼합한 다음, 스테아르산 마그네슘을 넣어 V-형 믹서로 최종 혼합하였다. 상기 최종 혼합물을 로타리 타정기(세종, 한국)를 사용하여 정당 960 mg 으로 타정한 다음 하이코터(세종, 한국)를 사용하여 필름코팅층을 형성하여 정당 1,000 mg 의 단일정제를 제조하였다.

실시예 4: 단일정제의 제조

1) 1차 과립의 제조

다음 표 2와 같이 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9, 주석산수소콜린 분말을 미결정셀룰로오스와 혼합하여 35호체로 체과하고, 고속혼합기(Diosna, 독일)로 혼합하였다. 별도로 폴리비닐피롤리돈을 물에 녹여 결합액을 제조하고, 고속혼합기 내의 혼합물과 연합하였다. 연합이 끝나면 25호체를 이용하여 제립하고 이를 건조기(제이오텍, 한국) 를 이용하여 60 ℃에서 건조한 후 건조가 끝나면 다시 25호체로 정립하였다.

2) 2차 과립의 제조

다음 표 2와 같이 비타민 D, 비타민 E, 비타민 C, 실리마린 및 비페닐디메틸디카복실레이트를 미결정셀룰로오스와 혼합하여 35호체로 체과하고, 고속혼합기(Diosna, 독일)로 혼합하였다. 별도로 폴리비닐피롤리돈을 물에 녹여 결합액을 제조하고, 고속혼합기 내의 혼합물과 연합하였다. 연합이 끝나면 25호체를 이용하여 제립하고 이를 건조기(제이오텍, 한국)를 이용하여 60 ℃에서 건조한 후 건조가 끝나면 다시 25호체로 정립하였다.

3) 후혼합, 타정 및 코팅

앞선 1) 및 2) 단계에서 제조한 1차 과립 및 2차 과립을 V-형 믹서(Erweka, 독일)로 혼합하고, 여기에 크로스카멜로오스 나트륨, 이산화규소를 혼합한 다음, 스테아르산 마그네슘을 넣어 V-형 믹서로 혼합하였다. 상기 혼합물을 로타리 타정기(세종, 한국)를 사용하여 정당 960 mg 으로 타정한 다음 하이코터(세종, 한국)를 사용하여 필름코팅층을 형성하여 정당 1,000 mg의 단일정제를 제조하였다.

실시예 5: 단일조성물의 제조

다음 표 3의 성분을 기재된 함량으로 칭량하고 혼합하여 단일조성물(A1-A3)을 제조하였다.

성분(단위)	A1	A2	A3
비타민 D3 (DSM, 독일)(IU)	2,000	5,000	10,000
비타민 B12 (Lycored)(mg)	1	1	1
비타민 B6 (DSM, 독일)(mg)	60	60	60
비타민 B9 (DSM, 스위스)(mg)	0.4	0.4	0.4
주석산수소콜린 (Balchem, 이탈리아)(mg)	50	50	50
비타민 E (DSM, 스위스)(IU)	100	100	100
비타민 C (DSM, 영국)(mg)	100	100	100
밀크시슬추출물 (Monteloeder, 스페인)(mg)	130	130	130
오미자추출물 (조은푸드텍, 한국)(mg)	400	400	400

또한, 다음 표 4의 성분을 기재된 함량으로 칭량하고 혼합하여 단일조성물(B1-B3)을 제조하였다.

성분(단위)	B1	B2	B3
비타민 D3 (DSM, 독일)(IU)	2,000	5,000	10,000
비타민 B12 (Lycored)(mg)	1	1	1
비타민 B6 (DSM, 독일)(mg)	60	60	60
비타민 B9 (DSM, 스위스)(mg)	0.4	0.4	0.4
주석산수소콜린 (Algry)(mg)	50	50	50
비타민 E (DSM, 스위스)(IU)	100	100	100
비타민 C (DSM, 영국)(mg)	100	100	100
실리마린 (Teva)(mg)	420	420	420
비페닐디메틸디카르복실레이트 (Zhejiang Hisoar)(mg)	150	150	150

제조된 A1-A3 및 B1-B3 조성물을 표 5의 투여량에 따라 칭량하고 0.5% 카르복시메틸셀룰로오스(Carboxymethylcellulose, CMC)의 멸균주사용수에 용해시켜 투여용 조성물을 조제한 후, 이를 냉장보관하였다. 상기 투여량의 경우, 체표면적의 환산없이 동물의 무게(kg)당 mg을 기준으로 하여 10 배 용량을 투여량으로 다음과 같이 설정하였다.

	A1	A2	A3	B1	B2	B3
투여량 (mg/head/day)	152.9	154.7	157.7	235.1	276.6	315.5
투여액량 (ml/head/day)	3	3	3	3	3	3

실험예 1: 단일정제 용출시험

실시예 1에 따라 제조된 단일정제의 용출시험을 실시하였다. 비타민 B6 (피리독신염산염) 및 비타민 D (콜레칼시페롤)을 지표성분으로 하여 물에서 용출시험을 실시하였다.

[비타민 B6 (피리독신) 시험방법]

1)용출시험 근거 : 대한약전 제 11 개정 중 일반시험법의 용출시험법

2)용출 시험 방법 : 패들법(Paddle method), 50회전/분

3)용출 시험액 : 물

4)분석방법 : HPLC 법

-검출기 : 자외흡광광도계 (검출 파장 = 최대 270nm )

-컬럼 : 안지름 약 4.6mm, 길이 약 25cm 인 스테인레스강관에 5~10μm의 다공성실리카입자를 충전한 컬럼

-이동상 : 트리에틸아민 0.4mL, 아세트산 (100) 15.0mL, 메탄올 350mL을 2000mL 용량플라스크에 넣고, 0.008mol/L 헥산설폰산나트륨을 넣어 2000mL로 한 액 (용시조제)

[비타민 D (콜레칼시페롤) 시험방법]

2)용출 시험 방법 : 패들법(Paddle method), 50회전/분

3)용출 시험액 : 물

4)분석방법 : HPLC 법

-검출기 : 자외흡광광도계 (검출 파장 = 최대 265nm )

-컬럼 : 안지름 약 4.6mm, 길이 약 15cm 인 스테인레스강관에 10μm의 액체크로마토그래프용 아미노프로필실릴다공성 실라카겔을 충전한 컬럼

-이동상 : n-헥산·이소프로판올 (99:1)

그 결과 도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 비타민 B6는 30분에 95%, 비타민 D3는 30분에 83%의 용출률을 나타내었다.

실험예 2: 단일조성물의 투여에 따른 부작용 발생여부 및 손상된 간의 개선 효과 확인

1) 단일조성물의 투여 및 간손상 유도

상기 참고예 2와 같이 1주일의 순화기간을 거친 동물들을 하기 표 6과 같이 군을 분리하여 상기 실시예 5에 따라 제조된 단일조성물 A1-A3 및 B1-B3을 경구투여하였다(G3-G8). 1회/일(7회/주) 간격으로 42일간 투여하였고, 모든 투여는 15:00 이전에 실시하였으며, 6주 경과 후 부검을 실시하였다. 순화기간 중 건강한 것으로 판정한 동물의 체중을 순위화하고, 각 군의 평균체중이 균일하게 분포하도록 무작위로 분배하였다.

G1 군과 G2 군에 투여되는 부형제는 실시예 5에서 조성물의 조제에 사용한 0.5% 카르복시메틸셀룰로오스(Carboxymethylcellulose, CMC)의 멸균주사용수를 사용하였다.

한편, 동물모델에 간 손상을 유발하기 위해 최초 단일조성물을 투여한 후 1시간 경과시, G1 군을 제외한 모든 군에 200 mg/kg의 D-갈락토사민(D-galactosamine)을 복강투여하였다.

군	성별	동물수	동물번호	투여액량 (mL/head/day)	투여물질
G1	수컷	6	1-6	3	부형제
G2	수컷	6	7-12	3	부형제
G3	수컷	6	13-18	3	A1
G4	수컷	6	19-24	3	A2
G5	수컷	6	25-30	3	A3
G6	수컷	6	31-36	3	B1
G7	수컷	6	37-42	3	B2
G8	수컷	6	43-48	3	B3

(G1: 정상군, G2: 부형제대조군, G3-8: 단일조성물투여군)

2) 단일조성물 투여에 따른 부작용 발생 여부 확인

단일조성물이 동물모델에 부작용을 나타내는지 확인하기 위해, 단일조성물의 투여시 이상증상의 발현 유무, 발현일, 증상의 정도, 및 관찰기간 동안 사망여부를 1일 1회 개체별로 관찰하였다. 최초 단일조성물 투여일을 Day 1로 하였으며, 6주간 관찰 후 부검을 실시하였다.

동물모델의 체중은 입수시, 군분리 시, 실험기간 중 1회/주, 및 부검일에 측정하였고, 장기의 무게는 부검일에 채혈을 완료한 후 간장, 심장 및 신장의 무게를 측정하였다.

칼슘이온(Ca²⁺)의 수치는 부검 후 혈액생화학 검사를 실시하여 측정하였다.

시험기간 동안 일반적인 증상을 관찰한 결과, 단일조성물의 최초 투여일부터 부검일까지 사망한 동물은 관찰되지 않았으며, 단일조성물의 투여에 의한 이상증상을 나타내는 동물도 관찰되지 않았다(표 7).

일	증상	그룹
일	증상	G1	G2	G3	G4	G5	G6	G7	G8
1-43	정상	6/6	6/6	6/6	6/6	6/6	6/6	6/6	6/6
43	부검	6/6	6/6	6/6	6/6	6/6	6/6	6/6	6/6

시험기간 동안 동물모델의 체중을 측정한 결과, 모든 군에서 체중의 유의한 차이는 관찰되지 않았다(표 8, 도 2)

	G1	G2	G3	G4	G5	G6	G7	G8
0주	298.91±8.54	300.66±9.85	299.90±8.74	301.39±9.14	299.97±5.97	298.93±7.46	299.58±7.53	302.73±5.43
1주	348.76±11.64	345.84±9.98	345.23±9.83	347.30±15.26	344.12±9.14	345.89±18.23	349.36±14.22	348.40±8.64
2주	386.73±13.11	384.61±10.15	384.17±11.75	387.03±20.19	389.56±17.21	387.45±29.18	395.42±24.18	381.68±21.84
3주	415.99±9.94	412.34±13.14	407.75±12.88	418.66±25.34	415.91±23.98	411.55±33.54	420.50±30.34	405.01±20.55
4주	445.82±13.14	442.05±15.29	431.18±18.69	447.16±29.81	440.16±26.85	434.87±40.84	447.54±37.40	428.65±24.44
5주	468.66±13.26	467.23±18.65	451.16±18.78	471.93±31.67	464.22±33.19	458.40±49.08	475.01±40.03	450.59±26.25
6주	487.67±16.14	485.19±24.52	469.57±22.28	492.49±34.82	481.72±34.55	478.94±53.61	493.57±45.47	468.79±29.51
부검	459.25±15.91	457.74±23.87	445.85±22.36	463.70±32.35	451.04±33.80	448.76±51.64	467.04±43.11	444.49±28.62

또한, 시험종료 후 간의 무게를 측정한 결과, 단일조성물 투여군들은 부형제대조군과 비교하여 유의한 차이를 보이지 않았고(도 3, 표 9), 신장의 무게를 측정한 결과, 모든 군에서 유의한 차이를 보이지 않았으며(도 4, 표 9), 심장의 무게를 측정한 결과, 모든 군에서 유의한 차이를 보이지 않았음을 확인하였다(도 5, 표 9).

	장기의 무게 (g)
	간	신장(왼쪽)	신장(오른쪽)	심장
G1	13.265±1.277^**	1.652±0.142	1.692±0.122	1.552±0.086
G2	16.870±1.795	1.665±0.082	1.666±0.109	1.434±0.088
G3	15.545±1.249	1.623±0.129	1.650±0.135	1.442±0.084
G4	17.185±3.312	1.772±0.130	1.741±0.091	1.499±0.123
G5	16.194±2.283	1.644±0.107	1.615±0.075	1.494±0.158
G6	16.156±3.030	1.715±0.125	1.730±0.187	1.515±0.110
G7	16.927±1.450	1.767±0.155	1.814±0.177	1.522±0.165
G8	15.429±2.228	1.873±0.185^*	1.876±0.236^*	1.441±0.180

(*와 **는 G2와의 통계적 유의성을 의미, 각각 P<0.05 및 P<0.01을 나타냄)

또한, 칼슘이온 수치의 측정 결과, 모든 단일조성물 투여군은 부형제대조군과 비교하여 유의한 차이를 보이지 않았음을 확인하였다(표 10).

	G1	G2	G3	G4	G5	G6	G7	G8
칼슘이온 (mg/dL)	10.02±0.08	9.92±0.12	10.17±0.16	10.25±0.09	10.02±0.16	10.09±0.11	10.17±0.19	10.25±0.10

이를 통해, 단일조성물은 체내 투여된 경우에도 간 독성 등의 부작용이 나타나지 않고, 특히 비타민 D를 고용량 함유하는 경우에도 독성 작용이 유발되지 않는 안전한 물질임을 확인하였다.

3) 손상된 간의 지표성분의 개선 여부 확인

단일조성물이 손상된 간의 보호 효과를 나타내는지 확인하기 위해, 간 손상시 발현량이 증가하는 성분인 아스파테이트 아미노기전이효소(AST), 알라닌 아미노기전이효소(ALT) 및 혈액요소질소(BUN)의 수치를 측정하였고, 간 기능의 회복 효과를 나타내는지 확인하기 위해 항산화 활성(SOD activity)을 측정하였다.

구체적으로, D-갈락토사민을 투여한 후 24시간 동안 절식시킨 뒤 경정맥 채혈을 실시하였고, 응고 촉진제(clot activator)가 존재하는 진공 채혈관(vacutainer tube)을 이용하여 혈청을 분리하였다. 부검일에는 AST, ALT, 및 BUN에 대한 혈액생화학 검사를 실시하였다.

또한, 부검 후 간의 일부 조직을 절취하여 조직을 파쇄한 후 SOD 키트를 사용하여 항산화 활성(SOD activity)을 측정하였다.

AST 측정 결과, 간 손상이 유도된 부형제대조군은 정상군과 비교하여 AST 수치가 상승하였음을 확인하였다. 반면, 단일조성물 투여군들은 부형제대조군과 비교하여 AST 수치가 감소하였음을 확인하였다. 구체적으로, 단일조성물 A1-A3 투여군들(G3-G5)은 부형제대조군과 비교하여 약 74.18, 80.62 및 77.90 %의 개선율을 나타내고, 단일조성물 B1-B3 투여군들(G6-G8)은 부형제대조군과 비교하여 약 84.98, 77.42 및 89.34 %의 개선율을 나타냄을 확인하였다(도 6, 및 표 11).

ALT 측정 결과, 간 손상이 유도된 부형제대조군은 정상군과 비교하여 ALT 수치가 상승하였음을 확인하였다. 반면, 단일조성물 투여군들은 부형제대조군과 비교하여 ALT 수치가 감소하였음을 확인하였다. 구체적으로, 단일조성물 A1-A3 투여군들(G3-G5)은 부형제대조군과 비교하여 약 77.40, 82.90 및 82.15 %의 개선율을 나타내고, 단일조성물 B1-B3 투여군들(G6-G8)은 부형제대조군과 비교하여 약 90.35, 88.35 및 92.95 %의 개선율을 나타냄을 확인하였다(도 7, 및 표 11).

또한 BUN 측정 결과, 간 손상이 유도된 부형제대조군은 정상군과 비교하여 BUN 수치가 상승하였음을 확인하였다. 반면, 단일조성물 투여군들은 부형제대조군과 비교하여 BUN 수치가 감소하였음을 확인하였다(표 11).

또한 SOD 측정 결과, 간 손상이 유도된 부형제대조군은 정상군과 비교하여 SOD 가 감소하였음을 확인하였다. 반면, 단일조성물 투여군들은 부형제대조군과 비교하여 SOD가 증가하였음을 확인하였다(도 8, 및 표 11).

	AST(U/L)	ALT(U/L)	BUN(mg/dL)	SOD활성(%)
G1	172.60±6.19^*	34.55±2.13^*	12.02±0.25^*	52.90±5.39^*
G2	2936.42±770.25	2000.60±526.22	14.40±0.95	41.31±8.31
G3	758.42±315.79^*	452.68±203.78^*	12.68±1.01	57.91±2.32^**
G4	569.17±112.02^*	342.00±132.52^*	11.80±0.59	63.32±6.55^**
G5	649.86±216.02^*	357.10±141.14^*	13.82±1.68	62.46±6.45^**
G6	441.22±121.11^*	193.34±70.66^*	11.44±0.58^*	57.20±5.66^**
G7	663.15±410.18^*	293.63±217.14^*	11.02±0.22^**	51.22±8.13
G8	313.52±158.91^*	141.93±101.30^*	12.12±0.44	49.17±3.47

이를 통해, 단일조성물은 간 기능의 회복효과를 나타내고, 간 질환의 예방 및 치료 효과를 나타냄을 확인하였다.

Claims

비타민 D, 비타민 B12, 비타민 B6, 비타민 B9 및 콜린을 유효성분으로 포함하는 간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 비타민 E, 비타민 C, 실리마린 및 비페닐디메틸디카복실레이트에서 선택되는 어느 하나 이상을 더 포함하는 약학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 비타민 D는 비타민 D3인 약학적 조성물.
제3항에 있어서, 비타민 D3가 1,000 IU 내지 20,000 IU의 함량으로 포함되는 약학적 조성물.
제3항에 있어서, 비타민 D3가 2,000 IU 내지 20,000 IU의 함량으로 포함되는 약학적 조성물.
제3항에 있어서, 비타민 D3가 5,000 IU 내지 20,000 IU의 함량으로 포함되는 약학적 조성물.
제3항에 있어서, 비타민 D3가 2,000 IU 내지 10,000 IU의 함량으로 포함되는 약학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 간 질환은 지방간, 간염, 간경화 및 간암 중 어느 하나인 약학적 조성물.