KR20170017425A - 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 피로회복 증진용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)에 의해 생산되는 세포외다당체; 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액; 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 건조분말; 또는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 피로회복 증진 효과가 우수하여 피로회복 증진용 약학 조성물 및 건강기능식품으로 유용하게 활용될 수 있다.

Description

세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 피로회복 증진용 조성물{COMPOSITION FOR RELIEVING FATIGUE COMPRISING EXOPOLYSACCHARIDE PRODUCED BY CERIPORIA LACERATA AS AN ACTIVE INGREDIENT}
본 발명은 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)에 의해 생산되는 세포외다당체; 상기 세포외다당체를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액; 상기 균사체 배양액의 건조분말; 또는 상기 균사체 배양액의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피로회복 증진용 조성물에 관한 것이다.
통상적으로 '피로'란 '작업을 할 때 작업능률이 저하되는 상태', '항상성의 혼란이 일어나는 상태' 또는 '대뇌피질의 제지작용이 일어나는 상태'로서 '육체적·정신적 활동을 하기 위한 능력의 감소'라고 정의할 수 있다.
피로(fatigue) 혹은 스트레스(stress)가 쌓였다고 표현하는 것은 심신의 기능이 원활히 이루어지지 않는 경우를 이르는 것으로서, 상기 피로는 근 수축 활동에 요구되는 힘을 충분히 발휘하지 못하는 상태, 즉 운동수행능력이 감소된 상태(Gibson H, et al, Sports Med. 1985. 2(2):120-32)라고 할 수 있으며, 육체적인 피로와는 대조적으로 스트레스는 정신적인 과부하로 인해 오는 신체리듬의 불균형으로 이해할 수 있다. 따라서 넓은 의미의 피로는 fatigue와 stress를 모두 포함하는 개념으로 육체적 또는 정신적 활동을 하기 위한 능력의 감소라고 할 수 있고, 구체적으로는 fatigue는 주로 육체적 피로로 작업능률이 저하되는 상태, 그리고 Stress는 정신적 피로로 항상성의 혼란이 일어나는 상태를 말한다(식약청 건강기능식품의 피로회복 관련 기능성 평가체계 구축, 연구결과보고서).
또한, 피로의 축적은 자칫 만성피로를 유발하고, 소화성 궤양, 고혈압, 당뇨병 등의 많은 질병을 유발할 수도 있다. 그리고 암, 뇌졸증, 심장질환은 현대인의 주요 3대 사망원인이기도 하며, 과로는 이들의 주요 원인이 되고 있는 실정이다. 최근 효율적인 피로회복을 위한 과학적인 식품 섭취에 대한 필요성이 증가하고 있다.
한편, 세리포리아 락세라타는 백색 부후균의 일종으로서, 생태계에서 셀룰로오스, 헤미 셀룰로오스, 기타 다당류 및 글리세롤 등의 탄소원을 이용하기 위하여 리그닌 분해라는 공동대사(co-metabolism)를 수행하는 것으로 알려져 있다.
세리포리아 락세라타를 이용한 의학적 치료 용도와 관련하여, 본 발명자들에 의하여 출원된 대한민국 특허 제10-1031605호에 세리포리아 락세라타 배양액 추출물의 당뇨 치료 용도만이 지금까지 알려져 있을 뿐, 세리포리아 락세라타를 이용한 피로회복 증진 효과는 아직까지 보고된 바 없다.
이에, 본 발명자들은 세리포리아 락세라타로부터 분리한 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물이 피로회복 증진 효과를 나타낸다는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
대한민국 등록특허 제10-1031605호
Gibson H, et al, Sports Med. 1985. 2(2):120-32 식약청 건강기능식품의 피로회복 관련 기능성 평가체계 구축, 연구결과보고서
본 발명의 목적은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 활성 성분을 함유하는 피로회복 증진용 조성물 및 피로회복 증진용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체; 상기 세포외다당체를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액; 상기 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 건조분말; 또는 상기 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피로회복 증진용 조성물 및 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에 따른 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체; 상기 세포외다당체를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액; 상기 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 건조분말; 또는 상기 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 피로회복 효과가 우수하여 피로회복 증진용 조성물; 및 이를 포함하는 약학 조성물 또는 이를 포함하는 건강기능식품으로 유용하게 활용될 수 있다.
도 1은 실시예 2의 강제수영장치로를 이용한 마츠모토식 유영유수조의 모식도이다.
도 2는 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체를 다양한 농도로 투여한 ICR 마우스의 강제수영 시간을 나타낸 그래프이다.
도 3은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체를 다양한 농도로 투여한 ICR 마우스의 강제수영 이후 혈청 내 LDH 농도를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체; 상기 세포외다당체를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액; 상기 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 건조분말; 또는 상기 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피로회복 증진용 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 세포외다당체는 40 ~ 60 중량%의 당과 30 ~ 40 중량%의 단백질, 40 ~ 50 중량%의 당과 32 ~ 38 중량%의 단백질, 또는 43 ~ 47 중량%의 당과 33 ~ 36 중량%의 단백질을 포함할 수 있고, 보다 구체적으로는 약 45 중량%의 당과 약 34 중량%의 단백질을 포함할 수 있다.
상기 당은 만노오스, 갈락토오스 및 글루코오스를 함유할 수 있다.
상기 세포외다당체는 100 ~ 150 kDa, 110 ~ 140 kDa 또는 115 ~ 125 kDa의 분자량을 가질 수 있고, 보다 구체적으로는 약 120 kDa의 분자량을 가질 수 있다.
바람직한 하나의 구체예로서, 상기 세포외다당체는, (a) 세리포리아 락세라타 균사체를 액체 배양하여 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하는 단계; (b) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 건조시켜 분말화하는 단계; 및 (c) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 용매로 추출한 후 이를 여과하고 감압농축하는 단계를 포함하는 제조방법에 의하여 제조될 수 있다.
상기 (a) 단계에서의 세리포리아 락세라타 균사체의 액체 배양을 위한 배지는 설탕, 포도당, 전분, 수수분, 대맥분, 대두분, 황산마그네슘(MgSO4), 1인산칼륨(KH2PO4), 2인산칼륨(K2HPO4) 및 물을 포함할 수 있고, 수소이온농도가 pH 4.5 ~ 6.0인 것일 수 있다.
바람직한 하나의 구체예로서, 상기 배지는, 설탕 0.2 ~ 3 중량%, 포도당 0.2 ~ 3 중량%, 전분 0.2 ~ 4 중량%, 수수분 0.1 ~ 0.5 중량%, 대맥분 0.1 ~ 0.5 중량%, 대두분 0.2 ~ 3 중량%, 황산마그네슘(MgSO4) 0.05 ~ 0.1 중량%, 1인산칼륨(KH2PO4) 0.05 ~ 0.25 중량%, 2인산칼륨(K2HPO4) 0.05 ~ 0.25 중량% 및 잔량의 물을 포함할 수 있다.
상기 (a) 단계에서의 액체 배양은 청색 LED 광원 하에서 수행될 수 있고, 이산화탄소의 농도를 1,000 ~ 2,000 ppm으로 유지하여 수행될 수 있다.
이때, 액체 배양은 예를 들어, 20 ~ 25℃에서, 수소이온농도(pH) 4.5 ~ 6.0, 광원은 청색 LED, 조도는 0.5 LUX를 유지하며 공기는 0.5 ~ 1.5 kgf/㎠으로 주입하고 이산화탄소의 농도는 1,000 ~ 2,000 ppm으로 유지하면서 8 ~ 13일간 수행될 수 있고, 22℃, pH 5.0, 1.0 kgf/㎠, 1,500 ppm 조건에서 10일간 수행되는 것이 세포외다당체의 함량이 높으므로 바람직하다.
상기 (a) 단계에서의 모균주로는 PDA(Potato dextrose agar) 배지 상태로 4℃에 보관중인 우량균주 1개를, 삼각플라스크에 PDB(Potato dextrose broth) 배지를 사용하여 진탕배양기에서 25℃의 항온을 유지하며 7 ~ 9일간 배양과정을 거친 것을 사용할 수 있다. 이때 접종원으로 투입될 균사체의 양은 배양할 용액의 양을 기준으로 0.5%(w/v) 정도인 것이 바람직하다. 균사체량(%/100 ㎖)이 많다고 세포외다당체의 함량도 같이 높아지는 것이 아니므로 배지 조성은 균사체의 성장에 가장 양호한 영양 비율 및 환경조건이 아닌, 세포외다당체의 함량을 가장 높게 형성시키는 선택적 배양조건을 적용하는 것이 바람직하다.
상기 배양액은 균사체와 수용액으로 분리 정제할 수 있다. 상기 분리 정제를 위해 원심분리기로 균사체를 제거한 용액을 다중필터프레스(Multi-Sheet Filter Press)와 진동원심막분리기(PALLSEP)로 반복하여 정제한 후 1분간 자외선(UV)을 조사할 수 있다. 또한, 용액은 산소를 제거한 후 밀봉 보관하는 것이 필요한데, 이는 용액 속에 균사가 존재할 경우 균사의 성장으로 유효성분의 함량에 변화를 가져오기 때문이다.
상기 (b) 단계에서는 상기 (a) 단계에서 제조된 균사체 배양액을 진공건조 또는 동결건조시켜 분말화할 수 있다. 상기의 건조는 유효물질의 소멸을 방지하기 위해 40℃ 이하의 온도, 보다 구체적으로는 30℃ 이하의 온도에서 48 내지 96시간 동안 수행되는 것이 바람직하다. 그리고 (b) 단계에서의 건조는 증발온도를 상대적으로 높게 설정하는 진공건조기보다 진공동결건조기를 사용하는 것이 유효물질 함량 변화가 최소화되므로 바람직하다.
상기 (c) 단계에서는 (b) 단계에서 얻은 균사체 배양액 건조분말을 용매로 추출한 후 본 발명에 따른 조성물의 유효성분인 세포외다당체를 분리, 제조한다. 구체적으로, 건조 분말 3 ~ 10g에 증류수 100 ㎖를 첨가하여 잘 현탁한 후, 5,000 rpm ~ 10,000 rpm으로 10분 ~ 30분 동안 원심분리하여 이의 상등액에 그 양의 2 ~ 3배에 해당하는 추출 용매를 첨가하고 1 ~ 5℃의 냉장고에 넣어 10 ~ 15시간 정치시킬 수 있다. 상기의 정치물에서 상등액만을 다시 5,000 rpm ~ 10,000 rpm으로 10분 ~ 30분 동안 원심분리한 후, 침전물을 회수하여 조(crude) 세포외다당체를 제조할 수 있다. 상기 조 세포외다당체를 30℃ 이하에서 진공동결건조하는 것이 바람직하다.
상기 추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 아세톤, 에테르, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있고, 보다 구체적으로는, 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올, 아세톤 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있으며, 더욱 바람직하게는, 물 또는 50 내지 80 %(w/w)의 에탄올 수용액일 수 있다.
본 발명의 피로회복 증진용 조성물은 우수한 피로회복 증진 효과를 제공할 뿐만 아니라 약물에 의한 독성 및 부작용도 거의 없어 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다. 상기 피로회복 증진 효과는 락트산 탈수소효소(lactate dehydrogenase; LDH)의 증가에서 비롯되는 증상이 예방 또는 억제되는 작용을 의미한다. 본 발명의 일구현예에 따르면, 본 발명의 피로회복 증진용 약학 조성물은 투여군의 LDH 농도를 감소시켜 피로회복 증진 효과를 나타냈다.
본 발명에 따른 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체; 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액; 상기 균사체 배양액의 건조분말; 또는 상기 균사체 배양액의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피로회복 증진용 조성물은 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제가 더 포함될 수 있다.
상기 세포외다당체는 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 80 중량%, 구체적으로는 0.1 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 상기 균사체 배양액의 추출물은 상기 세포외다당체의 함량에 해당하는 양으로 적절히 포함될 수 있다. 그러나 가장 구체적으로는 세포외다당체; 이를 포함하는 배양액; 상기 배양액의 건조분말; 또는 상기 배양액의 추출물의 유효 함량은 조성물의 사용방법 및 목적에 따라 적절히 조절될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 제형화하여 사용될 수 있다. 적합한 제형으로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 당의정, 경질 또는 연질의 캡슐제, 용액제, 현탁제 또는 유화액제, 주사제, 좌제 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 불활성인 유기 또는 무기 담체를 이용하여 적합한 제형으로 제조할 수 있다. 즉, 제형이 정제, 코팅된 정제, 당의정 및 경질 캡슐제인 경우 락토스, 수크로스, 전분 또는 그 유도체, 탈크, 칼슘 카보네이트, 젤라틴, 스테아르산 또는 그 염을 사용할 수 있다. 또한, 제형이 연질 캡슐제인 경우에는 식물성 오일, 왁스, 지방, 반고체 및 액체의 폴리올이 사용 가능하다. 또한, 제형이 용액 또는 시럽 형태인 경우, 물, 폴리올, 글리세롤, 및 식물성 오일 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 상기의 담체외에도 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 용해제, 감미제, 착색제, 삼투압 조절제, 산화방지제 등을 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물의 투여방법은 제형에 따라 용이하게 선택될 수 있으며, 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 투여량은 환자의 나이, 성별, 체중, 병증의 정도, 투여경로에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 유효성분인 세포외다당체를 기준으로 5 내지 500 mg/kg체중의 양, 구체적으로는 100 내지 250mg/kg체중의 양을 1일 1회 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명은 상술한 바와 같은 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 상기 건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료의 형태일 수 있고, 캔디, 초콜릿, 음료, 껌, 차, 비타민복합체 또는 건강보조식품일 수 있다.
이때, 상기 건강기능식품 중에 포함되는 본 발명에 따른 세포외다당체; 이를 포함하는 균사체 배양액; 상기 균사체 배양액의 건조분말; 또는 이의 추출물의 함량은, 통상적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량%, 구체적으로는 0.1 내지 20 중량%로 포함될 수 있다. 또한, 건강 음료 조성물의 경우, 건강 음료 조성물 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 구체적으로는 0.3 내지 1 g의 함량으로 포함될 수 있다.
상기 건강기능식품은 본 발명의 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물과 함께 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체; 상기 세포외다당체를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액; 상기 균사체 배양액의 건조분말; 또는 상기 균사체 배양액의 추출물은 피로회복 증진 효과를 나타내기 위한 목적으로 약학 조성물 및/또는 건강기능식품 등에 첨가제로서 사용될 수 있으며, 이때 사용량 및 사용 형태는 제조 목적에 따라 적절히 조절할 수 있다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
[ 실시예 ]
제조예 1. 세리포리아 락세라타 배양액, 이의 건조분말, 추출물 및 세포외다당체( exopolysaccharide ; 이하, "EPS"라 함)의 제조
1.1 세리포리아 락세라타 배양액의 제조
경북 상주시에서 채취한 참나무 변제부 속에서 분리한 세리포리아 락세라타를 계대배양을 통해 육성한 모균을 -80℃에 냉동보관하였고, 보관중인 균주를 PDA(Potato dextrose agar) 배지(87 플라스틱 배양구; Difco, Becton Dickinson and Company)에서 2 ~ 3회 계대 후 충분한 수량의 완전한 균주(이하 "PDA 배양균주"라 함)만을 4℃ 냉장고에 보관하여 사용하였다. 그리고 삼각플라스크에 PDB(Potato dextrose broth) 배지(Difco, Becton Dickinson and Company) 600 ㎖를 조성한 후, 여기에 PDA 배양균주 1개를 넣고 8일간 진탕배양하여, PDB 배양균주를 수득하였다.
이후 설탕 1.5 중량%, 포도당 0.5 중량%, 감자전분 0.5 중량%, 수수분 0.25 중량%, 대맥분 0.25 중량%, 대두분 0.75 중량%, 황산마그네슘(MgSO4) 0.05 중량%, 1인산칼륨(KH2PO4) 0.05 중량%, 2인산칼륨(K2HPO4) 0.05 중량% 및 잔량의 물을 포함하는 액체 배양 배지를 800 L 발효조에서 121℃, 1.5 kgf/㎠으로 20분간 살균한 후, 23℃로 냉각한 상태에서 스타터로 사용할 상기 PDB 배양균주 600 ㎖를 접종하고, 공기를 0.5 ~ 1.5 kgf/㎠으로 통기시키면서, 광원은 청색 LED, 조도는 0.5 LUX를 유지하며, 이산화탄소의 농도는 2,000 ppm으로 세리포리아 락세라타 균사체를 23℃의 항온에서 10일간 액체 배양함으로써 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하였다.
1.2 세리포리아 락세라타 배양액 건조분말의 제조
제조예 1.1에서 제조된 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 진공동결건조기를 이용하여 25℃에서 72시간 동안 동결건조시켜 분말화함으로써 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 건조분말을 제조하였다.
1.3 세리포리아 락세라타 배양액 추출물의 제조
제조예 1.2에서 제조된 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 건조분말 5g에 증류수 100 ㎖를 첨가하여 잘 현탁한 후, 원심분리(8,000 rpm, 20분)한 다음 이의 상등액에 그 양의 2 ~ 3배에 해당하는 에탄올을 첨가하고 4℃에서 12시간 정치시켰다. 이후 정치물에서 상등액을 취해 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 추출물을 제조하였다.
1.4 세리포리아 락세라타 배양액으로부터 EPS의 제조
제조예 1.3에서 제조된 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 추출물을 다시 원심분리(8,000 rpm, 20분)한 후, 침전물을 회수하여 조(crude) EPS를 얻었다. 조 EPS를 72시간 진공동결건조시켜 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 EPS를 획득하였다.
실시예 1. EPS의 특성 평가
1.1 겔투과 크로마토그래피(Gel Permeation Chromatography, GPC )를 이용한 EPS의 분자량 측정
제조예 1에서 제조한 EPS를 0.1 M Na2SO4/0.05 M NaN3(빙초산(glacial acetic acid)으로 pH를 4로 조정) 용액에 1%(w/v)가 되도록 녹인 다음, 4,000 rpm으로 0.5 시간 동안 원심분리 후 상층액만을 0.45 ㎛ 시린지 필터(syringe filter)로 여과하여 GPC로 분석하였다. 분석 결과는 도 1에 나타냈다.
구체적으로, GPC 분석조건은 검출기로 굴절지수를 이용하였으며, GPC 칼럼은 OHpak SB 805 HQ(Shodex, Japan)를 이용하여 이동상을 0.1 M Na2SO4/0.05 M NaN3(빙초산으로 pH를 4로 조정)로 이동상의 유속은 1.0 ㎖/분의 속도로 흘려주었다. 표준곡선은 각기 다른 분자량(130 kDa, 400 kDa, 770 kDa 및 1200 kDa)을 가진 덱스트란(American Polymer Corporation, USA)을 이용하여 작성하였으며, 굴절지수(refractive index, RI) 측정기 Knauer K-2310(Germany)를 이용하여 EPS의 분자량을 측정하였다. 측정 조건을 정리하면 하기 표 1과 같다.
Figure pat00001
그 결과, 본 발명의 EPS의 분자량은 약 120 kDa인 것으로 나타났다.
1.2 EPS의 당 및 단백질 함량 측정
제조예 1에서 제조한 EPS를 2차 정제하고 단백질 가수분해 효소를 처리하여 당 및 단백질 함량을 측정하였다.
구체적으로, 1차 정제된 EPS(제조예 1에서 제조한 EPS)를 증류수에 녹이고 원심분리(8,000 rpm, 20분)하여 상등액을 분리한 후, 분리된 상등액에 그 양의 2 ~ 3배에 해당하는 에탄올을 첨가하고 냉장고(4℃)에 넣어 12시간 정치시켰다. 이후 정치물에서 상등액만을 다시 원심분리(8,000 rpm, 20분)한 후, 침전물을 회수하여 2차 정제된 EPS를 획득하였다. 2차 정제된 EPS를 증류수에 용해시킨 후 단백질 가수분해 효소인 알칼레이즈(alcalase)를 0.5%(w/v)의 농도로 50℃에서 30분간 처리하였다.
당 함량은 페놀-황산법(phenol-sulfuric acid method)에 의해 측정하였다. 농도별로 희석한 시료 1 ㎖에 80% 페놀을 25 ㎕ 첨가한 후 황산 2.5 ㎖를 첨가하여 실온에서 냉각하고 465 nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 또한, 단백질 함량은 BCA 방법(Smith PK et al., Analytical Biochemistry, 150(1):76-85, 1985)에 의해 측정되었고 표준품으로 소혈청 알부민을 사용하였다.
상술한 바와 같이 측정한 당 함량 및 단백질 함량은 하기 표 2에 나타냈으며, 당 함량은 45 ~ 51 중량%이고 단백질 함량은 33 ~ 34 중량%인 것으로 나타났다.
Figure pat00002
또한, EPS의 당 구성 분석 결과, EPS는 주로 만노오스, 갈락토오스 및 글루코오스를 함유하고 있는 것으로 나타났다.
실시예 2. EPS의 피로회복 증진 효과 시험
제조예 1의 세리포리아 락세라타 균사체 배양액으로부터 분리된 EPS의 피로회복 증진 효과를 확인하기 위하여, EPS를 투여한 시험동물에 대해 강제수영 시험을 실시하고 수영시간의 증가 정도로 피로회복 증진 효과를 평가하였다.
구체적으로, 8 주령의 ICR 마우스에 제조예 1의 EPS를 음용수에 분산시켜 준비하고 존대를 이용하여 1주간 실험동물에 투여하였다. 투여량은 1일 1회 100 ㎎/㎏체중, 250 ㎎/㎏체중 또는 500 ㎎/㎏체중으로 하였다. 비교를 위해, 양성대조군의 경우, EPS 대신 홍삼농축액(제조사: 정관장, 제품명: 홍삼정 플러스)을 500 ㎎/㎏체중을 투여하거나, 음성대조군의 경우, 음용수를 투여하였다. 강제수영장치로는 도 1에 나타낸 마츠모토식 유영유수조를 사용하였고 유속은 30 L/분으로 조절하였다.
시험당일(실험 3일과 7일) 실험동물에게 EPS(실험군), 홍삼농축액(양성대조군) 또는 음용수(음성대조군)을 투여하고 60분 후 최장 수영시간을 측정하였다. 실험동물 체중의 약 5%에 달하는 추를 꼬리에 달아 부하를 주었고, 최장 수영시간은 실험동물의 머리가 물 아래로 5초 이상 잠긴 시점으로 정하였다. 실험 7일째에는 수영 종료 후 60분의 휴식시간을 두고 반복하여 최장 수영시간을 측정하였으며, 측정된 최장 수영시간은 도 2에 나타냈다. 또한, 실험 7일차 강제수영 이후 피로 유발물질인 혈청 내의 LDH 수준을 측정하여 도 3에 나타내었다.
도 2에서 보는 바와 같이, 실험 3일차 강제수영 시, 음성대조군과 양성대조군과 비교하여, 본 발명의 EPS를 100 ㎎/㎏체중 또는 250 ㎎/㎏체중 투여한 실험군에서 유의적으로 수영시간이 증가하였다. 또한, 실험 7일차 강제수영 시, 본 발명의 EPS를 투여한 실험군에서 수영시간이 증가하였다.
도 3에서 보는 바와 같이, 음성대조군과 비교하여, 본 발명의 EPS를 투여한 실험군 모두에서 피로 유발물질인 혈청 내의 LDH가 감소하였다.

Claims (11)

  1. 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)에 의해 생산되는 세포외다당체; 상기 세포외다당체를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액; 상기 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 건조분말; 또는 상기 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액의 추출물을 유효성분으로 함유하는, 피로회복 증진용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 세포외다당체는 40 ~ 60 중량%의 당 및 30 ~ 40 중량%의 단백질을 포함하고 100 ~ 150 kDa의 분자량을 갖는, 피로회복 증진용 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 세포외다당체는 43 ~ 47 중량%의 당 및 33 ~ 36 중량%의 단백질을 포함하고 115 ~ 125 kDa의 분자량을 갖는, 피로회복 증진용 조성물.
  4. 제2항에 있어서,
    상기 당은 만노오스, 갈락토오스 및 글루코오스를 함유하는, 피로회복 증진용 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 세포외다당체가,
    (a) 세리포리아 락세라타 균사체를 액체 배양하여 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하는 단계;
    (b) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 건조시켜 분말화하는 단계; 및
    (c) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 용매로 추출한 후 이를 여과하고 감압 농축하는 단계를 포함하는 제조 방법에 의하여 제조된, 피로회복 증진용 조성물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 액체 배양을 위한 배지는 설탕, 포도당, 전분, 수수분, 대 맥분, 대두분, 황산마그네슘(MgSO4), 1인산칼륨(KH2PO4), 2인산칼륨(K2HPO4) 및 물을 포함하고, 수소이온농도가 pH 4.5 ~ 6.0인, 피로회복 증진용 조성물.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 액체 배양은 청색 LED 광원 하에서 수행되고, 이산화탄소의 농도를 1,000 ~ 2,000 ppm으로 유지하여 수행되는, 피로회복 증진용 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 세포외다당체는 약학 조성물 총 중량 대비 0.1 내지 80 중량%의 함량으로 포함되는, 피로회복 증진용 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 피로회복 증진용 건강기능식품.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료의 형태인 것을 특징으로 하는, 피로회복 증진용 건강기능식품.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 건강기능식품은 캔디, 초콜릿, 음료, 껌, 차, 비타민복합체 또는 건강보조식품인 것을 특징으로 하는, 피로회복 증진용 건강기능식품.
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