KR101682096B1

KR101682096B1 - 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 신경안정용 조성물

Info

Publication number: KR101682096B1
Application number: KR1020140151573A
Authority: KR
Inventors: 박용만; 신은지; 김윤수; 윤성균; 김병천
Original assignee: (주)퓨젠바이오농업회사법인
Priority date: 2014-11-03
Filing date: 2014-11-03
Publication date: 2016-12-02
Also published as: KR20160051465A; CN106998777A; CN106998777B; WO2016072710A1

Abstract

본 발명은 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경안정용 조성물에 관한 것으로서, 상기 조성물은 우울증 또는 불안증의 예방 또는 치료를 위한 신경안정제로서, 또는 신경안정 효능을 갖는 건강기능식품으로서 이용될 수 있다.

Description

세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체를 유효성분으로 함유하는 신경안정용 조성물{TRANQUILIZER COMPOSITION COMPRISING EXOPOLYSACCHARIDE PRODUCED BY CERIPORIA LACERATA AS AN ACTIVE INGREDIENT}

본 발명은 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경안정용 조성물에 관한 것이다.

최근 경제성장률과 같은 경제문제, 이혼과 자녀문제 등 다양한 원인으로 인해 우울증 또는 불안증 환자가 급증하고 있는 추세이다. 불안(anxiety)이란, 광범위하게 매우 불쾌한, 그리고 막연히 불안한 느낌으로, 관련된 신체증상(가슴 두근거림, 진땀 증)과 행동증상(과민성, 서성댐 등)을 동반하는 것이다(Robert F. Scmidt., Human physiology, pp366; 민성길, 최신정신의학, pp238-40; Argyropoulos S.V.,et al., Pharmacol. Ther. 88, pp213-27, 2000). 불안이 있을 때 뇌 전체는 각성(arousal) 상태에 들어가며, 따라서 말초의 행동, 자율신경계, 감각, 지각 등에 지장이 나타난다. 주로 관계된 기관은 대뇌 변연계(특히 해마와 대상회), 대뇌 피질(전두엽, 측두엽), 시상하부, 상행망상체, 뇌하수체 등이고 말초에서는 갑상선과 부신 피질이다. 최근 뇌 영상 연구에 의하면 불안은 오른쪽 반구의 장애와 관련되며 기타 전두엽, 측두엽, 후두엽 장애와 관련되어 있다고 알려져 있다(Robert F. Scmidt., Human physiology, pp366; 민성길, 최신정신의학, pp238-40). 불안에 대한 치료 약물의 연구는 오래된 약물의 재평가 및 적응증의 확대뿐만 아니라 새로운 약물의 개발, 특히 글루타메이트 수용체 억제제 등의 개발에 관심이 모아지고 있다. 또한, 해마세포 내의 칼슘농도를 감소시킬 수 있는 약물은 글루타메이트 수용체 억제제로서 작용하여 신경안정제로서 사용될 수 있음이 당 분야에 잘 알려져 있다(Pharmacological Reviews March 1., vol. 51 no. 1, pp.7-62, 1999). 그러나 임상적으로 유효한 항불안 약물들은 항불안의 효과뿐만 아니라 진정, 금단 현상의 유발 등의 부작용 때문에 사용에 신중을 기해야 하는 단점이 있다고 할 수 있다.

이상적인 신경안정제는 낮 시간에 지나친 졸음을 초래하지 않고 육체적 정신적 의존성을 일으키지 않으며 환자를 침착하게 만드는 것이다. 현재 상용되는 대표적 신경안정제는 벤조디아제핀(benzodiazepine), 디아제팜(diazepam), 옥사제팜(oxazepam), 프라제팜(prazepam), 로라제팜(lorazepam), 알프라졸람(alprazolam), 헬라제팜(helazepam), 클로나제팜(clonazepam) 등이 있으며, 이들 약물들은 주로 진정 및 수면유도의 목적으로도 사용된다(윤도준, 정신과 약물의 부작용, 대한의사협회지, 38(10), pp1196-1202, 1995). 벤조디아제핀은 가장 흔히 사용되는 신경안정제로서, 중추신경계에서 대표적 억제성 신경전달물질인 GABA 수용체의 친화력을 증가시켜 인접한 Cl^- 통로를 더 자주 열어 Cl^-이온의 투과성을 상승시킨다고 알려져 있다. 이 벤조디아제핀은 효과가 즉각 나타나지만 습관성과 중독성으로 인해 전문의의 치료에 따라 약을 사용하지 않으면 증상이 재발하거나 금단증상이 나타나며, 다른 부작용으로 졸음, 운동실조, 기립성 저혈압, 호흡억제, 두통, 만성수면장애, 간질환 등이 나타난다고 보고되고 있다(Mary J. Mycek, et al., Pharmacology 2nd edition, Lipincott Williams & Wilkins, pp89-93, 2000). 따라서, 부작용이 없는 신경안정물질을 개발하고자 하는 연구가 활발하게 진행되고 있다.

이와 관련하여, 천연물은 오래 전부터 임상적 효능이 입증되어 왔고 일반적으로 화학물질보다 부작용이 적으므로 신경안정용 조성물의 개발을 위한 적절한 후보물질이다.

세리포리아 락세라타는 백색 부후균의 일종으로서, 생태계에서 셀룰로오스, 헤미 셀룰로오스, 기타 다당류 및 글리세롤 등의 탄소원을 이용하기 위하여 리그닌 분해라는 공동대사(cometabolism)를 수행하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 세리포리아 락세라타는 2002년 처음으로 학계에 보고된 이후 이의 산업화에 대한 연구는 아직 미비한 실정이다.

이에, 본 발명자들은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물이 신경안정 효과를 갖는 것을 발견하고, 이를 유효성분으로 함유하는 신경안정용 조성물에 관한 본 발명을 완성하였다.

Robert F. Scmidt., Human physiology, pp366 민성길, 최신정신의학, pp238-40, 2006 Argyropoulos S.V.,et al., Pharmacol. Ther. 88, pp213-27, 2000 Pharmacological Reviews March 1., vol. 51 no. 1, pp7-62, 1999 윤도준, 정신과 약물의 부작용, 대한의사협회지, 38(10), pp1196-1202, 1995 Mary J. Mycek, et al., Pharmacology 2nd edition, Lipincott Williams & Wilkins, pp89-93, 2000

본 발명의 목적은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 약리 활성 성분을 함유하는 신경안정용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 약리 활성 성분을 함유하는 신경안정 효능을 갖는 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경안정용 조성물을 제공한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경안정 효능을 갖는 건강기능식품을 제공한다.

본 발명에 따른 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 신경안정 용도로 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 EPS의 농도가 100 ug/mL일 때의 세포 내 칼슘 농도 변화비율(억제%)을 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명은 세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는, 신경안정용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 세포외다당체는 약 40~60 중량%의 당과 약 30~40 중량%의 단백질, 약 40~50 중량%의 당과 약 32~38 중량%의 단백질, 또는 약 43~47 중량%의 당과 약 33~36 중량%의 단백질을 포함할 수 있고, 바람직하게는 약 45 중량%의 당과 약 34 중량%의 단백질을 포함할 수 있다.

상기 당은 만노오스, 갈락토오스 및 글루코오스를 함유할 수 있다.

상기 세포외다당체는 약 100~150 kDa, 약 110~140 kDa 또는 약 115~125 kDa의 분자량을 가질 수 있고, 바람직하게는 약 120 kDa의 분자량을 가질 수 있다.

바람직한 하나의 구체예로서, 상기 세포외다당체는, (a) 세리포리아 락세라타 균사체를 액체 배양하여 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하는 단계, (b) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 건조시켜 분말화하는 단계, 및 (c) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 용매로 추출한 후 이를 여과하고 감압농축하는 단계를 포함하는 제조방법에 의하여 제조될 수 있다.

상기 (a) 단계에서의 세리포리아 락세라타 균사체의 액체 배양을 위한 배지는 설탕, 포도당, 전분, 수수분, 대맥분, 대두분, 황산마그네슘(MgSO₄), 1인산칼륨(KH₂PO₄), 2인산칼륨(K₂HPO₄) 및 물을 포함하고, 수소이온농도가 pH 4.5~6.0인 것일 수 있다.

바람직한 하나의 구체예로서, 상기 배지는, 설탕 0.2~3 중량%, 포도당 0.2~3 중량%, 전분 0.2~4 중량%, 수수분 0.1~0.5 중량%, 대맥분 0.1~0.5 중량%, 대두분 0.2~3 중량%, 황산마그네슘(MgSO₄) 0.05~0.1 중량%, 1인산칼륨(KH₂PO₄) 0.05~0.25 중량%, 2인산칼륨(K₂HPO₄) 0.05~0.25 중량% 및 잔량의 물을 포함할 수 있다.

상기 (a) 단계에서의 액체 배양은 청색 LED 광원 하에서 수행될 수 있고, 이산화탄소의 농도를 1,000~2,000 ppm으로 유지하여 수행될 수 있다.

이때, 액체 배양은 예를 들어, 20~25℃에서, 수소이온농도(pH) 4.5~6.0, 광원은 청색 LED, 조도는 0.5 LUX를 유지하며 공기는 0.5~1.5 kgf/cm²으로 주입하고 이산화탄소의 농도는 1,000~2,000 ppm으로 유지하면서 8~13일간 수행될 수 있고, 22℃, pH 5.0, 1.0 kgf/cm², 1,500 ppm 조건에서 10일간 수행되는 것이 세포외다당체의 함량이 높으므로 바람직하다.

상기 (a) 단계에서의 모균주로는 PDA(Potato dextrose agar) 배지 상태로 4℃에 보관중인 우량균주 1개를, 삼각플라스크에 PDB(Potato dextrose broth) 배지를 사용하여 진탕배양기에서 25℃의 항온을 유지하며 7~9일간 배양과정을 거친 것을 사용할 수 있다. 이때 접종원으로 투입될 균사체의 양은 배양할 용액의 양을 기준으로 0.5%(w/v) 정도인 것이 바람직하다. 균사체량(%/100ml)이 많다고 세포외다당체의 함량도 같이 높아지는 것이 아니므로 배지 조성은 균사체의 성장에 가장 양호한 영양 비율 및 환경조건이 아닌, 세포외다당체의 함량을 가장 높게 형성시키는 선택적 배양조건을 적용하는 것이 바람직하다.

상기 배양액은 균사체와 수용액으로 분리 정제할 수 있다. 상기 분리 정제를 위해 원심분리기로 균사체를 제거한 용액을 다중필터프레스(Multi-Sheet Filter Press)와 진동원심막분리기(PALLSEP)로 반복하여 정제한 후 1분간 자외선(UV)을 조사할 수 있다. 또한, 용액은 산소를 제거한 후 밀봉 보관하는 것이 필요한데, 이는 용액속에 균사가 존재할 경우 균사의 성장으로 유효성분의 함량에 변화를 가져오기 때문이다.

상기 (b) 단계에서는 상기 (a) 단계에서 제조된 균사체 배양액을 진공건조 또는 동결건조시켜 분말화할 수 있다. 상기의 건조는 유효물질의 소멸을 방지하기 위해 40℃ 이하의 온도, 바람직하게는 30℃ 이하의 온도에서 48~96시간 동안 수행되는 것이 바람직하다. 그리고 (b) 단계에서의 건조는 증발온도를 상대적으로 높게 설정하는 진공건조기보다 진공동결건조기를 사용하는 것이 유효물질 함량 변화가 최소화되므로 바람직하다.

상기 (c) 단계에서는 (b) 단계에서 얻은 균사체 배양액 건조분말을 용매로 추출한 후 본 발명에 따른 조성물의 유효성분인 세포외다당체를 분리, 제조한다. 구체적으로, 건조 분말 5g에 증류수 100 mL을 첨가하여 잘 현탁한 후, 원심분리(8,000 rpm, 20 min)하여 이의 상등액에 그 양의 2~3배에 해당하는 추출용매를 첨가하고 냉장고(4℃)에 넣어 12시간 정치시킬 수 있다. 상기의 정치물에서 상등액만을 다시 원심분리(8,000 rpm, 20 min)한 후, 침전물을 회수하여 조(crude) 세포외다당체를 제조할 수 있다. 상기 조 세포외다당체를 30℃ 이하에서 진공동결건조하는 것이 바람직하다.

상기 추출용매는 물, 에탄올, 메탄올, 아세톤, 부탄올 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있으며, 바람직하게는, 물 또는 50%(w/w)~80%(w/w)의 에탄올 수용액일 수 있다.

본 발명에 따른 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경안정용 조성물에는 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제가 더 포함될 수 있다.

상기 세포외다당체는 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 80 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물은 상기 세포외다당체의 함량에 해당하는 양으로 적절히 포함될 수 있다. 그러나, 가장 바람직한 세포외다당체 또는 이를 포함하는 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물의 유효 함량은 조성물의 사용방법 및 목적에 따라 적절히 조절될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 제형화하여 사용될 수 있다. 적합한 제형으로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 당의정, 경질 또는 연질의 캡슐제, 용액제, 현탁제 또는 유화액제, 주사제, 좌제 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 불활성인 유기 또는 무기 담체를 이용하여 적합한 제형으로 제조할 수 있다. 즉, 제형이 정제, 코팅된 정제, 당의정 및 경질 캡슐제인 경우 락토스, 수크로스, 전분 또는 그 유도체, 탈크, 칼슘 카보네이트, 젤라틴, 스테아르산 또는 그 염을 사용할 수 있다. 또한, 제형이 연질 캡슐제인 경우에는 식물성 오일, 왁스, 지방, 반고체 및 액체의 폴리올이 사용 가능하다. 또한, 제형이 용액 또는 시럽 형태인 경우에는 물, 폴리올, 글리세롤, 및 식물성 오일 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 상기의 담체외에도 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 용해제, 감미제, 착색제, 삼투압 조절제, 산화방지제 등을 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 투여방법은 제형에 따라 용이하게 선택될 수 있으며, 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 투여량은 환자의 나이, 성별, 체중, 병증의 정도, 투여경로에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 유효성분인 세포외다당체를 기준으로 5 내지 500mg/kg의 양, 바람직하게는 100 내지 250mg/kg의 양을 1일 1회 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 따른 조성물은 우수한 신경안정 효과를 제공할 뿐만 아니라 약물에 의한 독성 및 부작용도 거의 없어 신경안정용 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 조성물은 신경안정을 필요로 하는 질환, 예를 들어, 우울증, 불안증, 수면 장애, 주의력 결핍/과잉행동 장애(ADHD) 등의 예방 및 치료를 위해 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경안정 효능을 갖는 건강기능식품을 제공한다.

본 발명에 따른 건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료의 형태일 수 있고, 캔디, 초콜릿, 음료, 껌, 차, 비타민복합체, 건강보조식품 등일 수 있다.

이때, 상기 식품 중의 본 발명에 따른 세포외다당체 또는 이를 포함하는 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 20 중량%로 포함될 수 있고, 건강 음료 조성물의 경우 100ml를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 포함될 수 있다.

상기 식품은 본 발명의 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물과 함께 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 더 포함할 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

제조예 1. 세리포리아 락세라타 배양액, 이의 건조분말, 추출물 및 세포외다당체(exopolysaccharide; 이하, "EPS"라 함)의 제조

1.1 세리포리아 락세라타 배양액의 제조

경북 상주시에서 채취한 참나무 변제부 속에서 분리한 세리포리아 락세라타를 계대배양을 통해 육성한 모균을 -80℃에 냉동보관하였고, 보관중인 균주를 PDA(Potato dextrose agar) 배지(87플라스틱 배양구; Difco, Becton Dickinson and Company)에서 2~3회 계대 후 충분한 수량의 완전한 균주만을 4℃ 냉장고에 보관하여 사용하였다. 그리고 삼각플라스크에 PDB(Potato dextrose broth) 배지(Difco, Becton Dickinson and Company) 600ml를 조성한 후, PDA 배양균주 1개를 넣고 8일간 진탕배양하였다. 그리고 설탕 1.5 중량%, 포도당 0.5 중량%, 감자전분 0.5 중량%, 수수분 0.25 중량%, 대맥분 0.25 중량%, 대두분 0.75 중량%, 황산마그네슘(MgSO₄) 0.05 중량%, 1인산칼륨(KH₂PO₄) 0.05 중량%, 2인산칼륨(K₂HPO₄) 0.05 중량% 및 잔량의 물을 포함하는 액체 배양 배지를 800 L 발효조에서 121℃, 1.5 kgf/cm²로 20분간 살균한 후, 23℃로 냉각한 상태에서 스타터로 사용할 PDB 배양균주 600 ml를 접종하고, 공기를 0.5~1.5 kgf/cm²로 통기시키면서, 이산화탄소의 농도는 1,000~2,000 ppm으로 세리포리아 락세라타 균사체를 23℃의 항온에서 10일간 액체 배양함으로써 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하였다.

1.2 세리포리아 락세라타 배양액 건조분말의 제조

제조예 1.1에서 제조된 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 진공동결건조기를 이용하여 25℃의 저온에서 72시간 동안 동결건조시켜 분말화함으로써 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 건조분말을 제조하였다.

1.3 세리포리아 락세라타 배양액 추출물의 제조

제조예 1.2에서 제조된 건조 분말 5g에 증류수 100ml를 첨가하여 잘 현탁한 후, 원심분리(8,000rpm, 20분)한 다음 이의 상등액에 그 양의 2~3배에 해당하는 에탄올을 첨가하고 냉장고(4℃)에 넣어 12시간 정치시켰다. 상기의 정치물에서 상등액을 취해 세리포리아 락세라타 균사체 배양액의 추출물을 제조하였다.

1.4 세리포리아 락세라타 배양액으로부터 EPS의 제조

제조예 1.3에서 제조된 추출물을 다시 원심분리(8,000rpm, 20분)한 후, 침전물을 회수하여 조(crude) EPS를 얻었다. 조 EPS를 동결건조기에서 72시간 건조시켜 완전한 EPS를 획득하였다.

실시예 1. EPS의 특성 평가

1.1 겔투과 크로마토그래피(Gel Permeation Chromatography, GPC)를 이용한 EPS의 분자량 측정

제조예 1에서 제조한 EPS를 0.1 M Na₂SO₄/0.05 M NaN₃(빙초산(glacial acetic acid)으로 pH를 4로 조정) 용액에 1%(w/v) 되도록 녹인 다음, 원심분리 후 상층액 만을 0.45 μm 시린지 필터(syringe filter)로 여과하여 GPC로 분석하였다.

분석조건은 검출기로 굴절지수를 이용하였으며, GPC 칼럼은 OHpak SB 805 HQ(Shodex, Japan)를 이용하여 이동상을 0.1 M Na₂SO₄/0.05 M NaN₃(빙초산으로 pH를 4로 조정)로 유속은 1.0 mL/min의 속도로 흘려주었다. 표준곡선은 각기 다른 분자량(130, 400, 770, 1200 kDa)을 가진 덱스트란(American Polymer Corporation, USA)을 이용하여 작성하였으며, 굴절지수(refractive index, RI) 측정기 Knauer K-2310(Germany)를 이용하여 EPS의 분자량을 측정하였다(표 1).

1.2 EPS의 당 및 단백질 함량 측정

EPS를 2차 정제하고 단백질 가수분해 효소를 처리하여 당 및 단백질 함량을 측정하였다.

구체적으로, 1차 정제된 EPS를 다시 증류수에 녹이고 원심분리(8,000rpm, 20분)하여 상등액을 분리한 후, 분리된 상등액에 그 양의 2~3배에 해당하는 에탄올을 첨가하고 냉장고(4℃)에 넣어 12시간 정치시켰다. 상기의 정치물에서 상등액만을 다시 원심분리(8,000rpm, 20분)한 후, 침전물을 회수하여 2차 정제된 EPS를 획득하였다. 다음으로, 정제된 EPS를 증류수에 용해시킨 후 단백질 가수분해 효소인 알칼레이즈(alcalase)를 0.5%(w/v)의 농도로 50℃에서 30분간 처리하였다.

당 함량은 페놀-황산법(phenol-sulfuric acid method)에 의해 측정하였다. 농도별로 희석한 시료 1 mL에 80% 페놀을 25 μL 첨가한 후 황산을 2.5 mL 첨가하여 실온에서 냉각하고 465 nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 단백질 함량은 BCA 방법(Smith PK, et al., Analytical Biochemistry, 150(1):76-85 (1985) 참고)에 의해 측정되었고 표준품으로 소혈청 알부민을 사용하였다.

그 결과, 아래 표 2와 같이, 당 함량은 45~51 중량%이고 단백질 함량은 33~34 중량%인 것으로 나타났다.

또한, EPS의 당 구성 분석 결과, EPS는 주로 만노오스, 갈락토오스 및 글루코오스를 함유하고 있는 것으로 나타났다.

실시예 2. EPS의 신경안정 효과 검증

세리포리아 락세라타 균사체 배양액으로부터 분리된 EPS의 신경안정 효과를 조사하기 위하여, 상기 제조예 1에서 제조된 EPS를 흰쥐의 태아 해마 신경조직에서 분리한 해마 단일 세포에 처리한 후 세포내 칼슘농도 변화를 측정하였다. 구체적으로, 임신 18일 내지 19일된 흰쥐의 태아로부터 해마 신경조직을 해부 현미경하에서 분리하여 0.25% 트립신(trypsin)을 첨가한 후 37℃에서 10분간 반응시켰다. 이어서, 상기 조직을 HBSS(Hanks' Balanced Salt Solution)로 수회 세척하여 트립신을 제거한 후 1ml 파이펫으로 해마세포를 단일세포로 분리하였다. 분리된 해마 단일 세포에 상기 제조예 1에서 제조된 EPS를 100 ug/mL의 농도로 처리한 후, 세포내 칼슘 농도의 변화를 문헌(Dunlap K., et al., Trends Neurosci., Vol. 18 No. 2, pp.89-98, 1995)에 기재된 방법을 참조하여 측정하였다.

상기 세포내 칼슘 농도 변화를 표 3 및 도 1에 나타내었다.

상기 표 3에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 EPS의 농도가 100 ug/mL일 때 해마 세포 내 칼슘 농도는 EPS 처리전과 비교하여 평균 38.282% (n=14)감소하였다. 글루타메이트 수용체는 칼슘이 자유롭게 세포 속으로 들어올 수 있도록 하고, 이 때 신경세포가 칼슘에 만성적으로 과도하게 노출될 경우, 흥분성 신경전달 작용이 빠르게 일어나게 된다. 본 발명에 따른 EPS는 수용체에 위치한 이동통로에서 친화력이 낮은 길항제로 작용하면서 칼슘채널(Ca² ⁺ channel) 활성의 억제 및 칼슘 이온(Ca² ⁺)의 세포 내 유입을 상당히 감소시킴으로써 글루타메이트 수용체의 활성을 감소시킨다. 따라서, 상기 결과는 본 발명에 따른 EPS가 글루타메이트(흥분성 신경전달물질) 수용체의 억제를 통해 신경안정 효과가 있음을 보여준다.

Claims

세리포리아 락세라타(Ceriporia lacerata)에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는, 신경안정용 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 세포외다당체는 40~60 중량%의 당과 30~40 중량%의 단백질을 포함하고 100~150 kDa의 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 2 항에 있어서,
상기 세포외다당체는 43~47 중량%의 당과 33~36 중량%의 단백질을 포함하고 115~125 kDa의 분자량을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 2 항에 있어서,
상기 당은 만노오스, 갈락토오스 및 글루코오스를 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 세포외다당체는, (a) 세리포리아 락세라타 균사체를 액체 배양하여 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 제조하는 단계, (b) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액을 건조시켜 분말화하는 단계, 및 (c) 세리포리아 락세라타 균사체 배양액 분말을 용매로 추출한 후 이를 여과하고 감압농축하는 단계를 포함하는 제조 방법에 의하여 제조된 것을 특징으로 하는 조성물.
제 5 항에 있어서,
상기 액체 배양을 위한 배지는 설탕, 포도당, 전분, 수수분, 대맥분, 대두분, 황산마그네슘(MgSO₄), 1인산칼륨(KH₂PO₄), 2인산칼륨(K₂HPO₄) 및 물을 포함하고, 수소이온농도가 pH 4.5~6.0인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 5 항에 있어서,
상기 액체 배양은 청색 LED 광원 하에서 수행되고, 이산화탄소의 농도를 1,000~2,000 ppm으로 유지하여 수행되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 있어서,
상기 세포외다당체는 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 80 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
세리포리아 락세라타에 의해 생산되는 세포외다당체 또는 이를 포함하는 세리포리아 락세라타의 균사체 배양액, 이의 건조분말 또는 추출물을 유효성분으로 함유하는, 신경안정 효능을 갖는 건강기능식품.
제 9항에 있어서,
상기 식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료의 형태인 것을 특징으로 하는, 건강기능식품.
제 9항에 있어서,
상기 식품은 캔디, 초콜릿, 음료, 껌, 차, 비타민복합체, 건강보조식품 등인 것을 특징으로 하는, 건강기능식품.