KR20160138309A - Cd147에 결합하는 항체 치료제 - Google Patents

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Abstract

항-CD147 항체와 관련되거나 이로부터 유도된 조성물 및 방법이 개시된다. 더 구체적으로는, CD147에 결합하는 완전 사람 항체, CD147-결합 단편 및 상기 항체의 유도체, 및 상기 단편을 포함하는 CD147-결합 폴리펩타이드가 개시된다. 또한 추가로, 상기 항체, 항체 단편 및 유도체 및 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산, 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포, 상기 항체, 항체 단편 및 유도체 및 폴리펩타이드를 제조하는 방법, 및 CD147 관련 장애 또는 병태를 갖는 피험자를 치료하거나 진단하는 방법을 포함하는, 상기 항체, 항체 단편 및 유도체 및 폴리펩타이드를 사용하는 방법이 개시된다. 간세포 암종 및 편평세포 암종을 포함하는 CD147-발현 종양, 및 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 비-종양 질환을 치료하는 방법이 또한 개시된다.

Description

CD147에 결합하는 항체 치료제{ANTIBODY THERAPEUTICS THAT BIND CD147}
본 발명은 항-CD147 항체와 관련되거나 이로부터 유도된 조성물 및 방법을 제공한다. 더 구체적으로는, 본 발명은 CD147에 결합하는 완전 사람 항체, CD147-결합 단편 및 상기 항체의 유도체, 및 상기 단편을 포함하는 CD147-결합 폴리펩타이드를 제공한다. 또한 추가로, 본 발명은 상기 항체, 항체 단편 및 유도체 및 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산, 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포, 상기 항체, 항체 단편 및 유도체 및 폴리펩타이드를 제조하는 방법, 및 CD147 관련 장애 및 병태를 갖는 피험자를 치료하거나 진단하는 방법을 포함하는, 상기 항체, 항체 단편 및 유도체 및 폴리펩타이드를 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명은 추가로 간세포 암종(hepatocellular carcinoma) 및 편평세포 암종(squamous carcinoma)을 포함하는 CD147-발현 종양, 및 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 실험 폐 손상(experimental lung injury), 죽상경화증(atherosclerosis), C형 간염 바이러스(hepatitis C virus)에 의해 유도된 만성 간 질환(chronic liver disease), 허혈 심근 손상(ischemic myocardial injury) 및 심부전(heart failure)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 비-종양 질환(non-oncology disease)을 치료하는 방법을 제공한다.
CD147은 림프구 반응성, 정자형성, 착상, 수정 및 발달의 초기 단계에서의 신경계 기능과 같은 다수의 생리적 기능에 연루되어 있다. CD147은 면역글로불린 수용체 패밀리의 구성원이다. 이러한 패밀리의 구성원은 다수의 면역-관련 기능, 분화 및 발달에 연루된 세포간 소통에서 역할을 한다. CD147은 정자형성, 림프구 활성화, 모노카복실레이트 수송체(MCT)의 발현에서 역할을 하며, 알츠하이머병 아밀로이드 β-펩타이드 생산에서 γ-세크리타제 복합체의 조절 서브유닛으로서 확인되었다(Gabison and Mourah Connect Tissue Res. 49: 175-179, 2008: lacono et al. Exp . Mol . Pathol . 83:283-295, 2007; Nabeshima et al. Pathol . Int . 56:359-367, 2006; Gabison et al. Biochimie 87:361-368, 2005; and Muramatsu et al. Histol . Histopathol . 18: 981-987, 2003).
이러한 식견 중 일부는 cdl47-/-마우스의 연구로부터 얻어졌다. 이들 동물은 기질 금속단백분해효소(matrix metalloproteinase; MMP) 조절, 정자형성, 림프구 반응성 및 발달의 초기 단계에서의 신경계 기능에 결함이 있다. 이러한 암컷 마우스는 착상 및 수정의 실패로 인해 불임이다(Muramatsu et al. Histol . Histopathol. 18:981-987, 2003). CD147은 MCT-1 및 MCT-3의 형질막으로의 수송에 연루되어 있으며, 그 이유는 이들 수송체의 감소된 축적이 cdl47 녹아웃 마우스의 망막에서 관찰되었기 때문이다. 세포 부착에서의 CD147의 기능적 역할은 혈액-뇌 장벽에 대한 이의 관련 및 이의 인테그린과의 상호작용에 의해 지지된다.
CD147은 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전과 같은 다수의 병리학적 과정에 연루되었다(Gabison et al. Biochimie 87:361-368, 2005). 이식 환자의 CD147 항체로의 치료는 T-세포 활성화의 억제로 인해 효과적이었다(Deeg et al., Blood 98:2052-2058, 2001).
면역글로불린(Ig) 수퍼패밀리(superfamily)의 막통과 단백질인 CD147은 상이한 종에서 독립적으로 확인되었고, M6, 뉴로텔린(Neurothelin), 5A11, HT7, OX-47, CE9, EMMPRIN, 바시진(Basigin) 및 gp42와 같이 상이한 종에 걸쳐 여러 명칭을 갖는다(Kasinrerk et al. J. Immunol . 149:847-854, 1992; Altruda et al. Gene 85:445-451, 1989; Miyauchi et al. J. Biochem . 107:316-323, 1990; Seulberger et al. EMBO J. 9:2151-2158, 1990; 및 Fossum et al. Eur. J. Immunol. 21:671-679, 1991). 가장 만연한 표준 이소형은 21개의 아미노산 신호 서열, 2개의 Ig-유사 도메인으로 구성된 186개 잔기-길이 세포외 도메인, 21개 아미노산의 막통과 도메인 및 41개 잔기의 세포질 도메인으로 구성된 단일쇄 유형 I 막통과 분자이다.
막통과 영역은 류신 지퍼(leucine zipper) 및 하전된 잔기(글루탐산)를 갖는다. 상응하는 유전자는 염색체 19p13.3에 위치하며, 29kDa 주쇄 단백질을 인코딩한다. 3개의 N 당화 부위가 확인되었고, 나트륨 도데실-설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE) 상에서의 이동은 당화의 정도에 따라 39 내지 65kDa에서 일어난다.
CD147은 조혈 세포 및 비-조혈 세포, 예를 들면, 단핵구, 과립구, 상피 세포 및 내피 세포에 대해 광범위한 발현 패턴을 갖는다. 약한 발현은 휴지(resting) T 림프구에서 나타난 반면, 발현은 활성화된 T 림프구 및 단핵구에 대해 증가된다(Kasinrerk et al. J. Immunol . 149:847-854, 1992; Altruda et al. Gene 85:445-451, 1989; Miyauchi et al. J. Biochem . 107:316-323, 1990; Seulberger et al. EMBO J. 9:2151-2158, 1990; Fossum et al. Eur. J. Immunol. 21:671-679, 1991; 및 Ochrietor et al. Invest. Ophthalmol . Vis . Sci. 44:4086-4096, 2003). 상기 기재된 바와 같이 모든 열거된 종들에 걸쳐 막통과 서열의 아미노산 서열의 완벽한 보존(Iacono et al. Exp . Mol . Pathol . 83:283-295, 2007)은 주목할 만한 특징이며, 이는 보존된 글루탐산 잔기의 존재를 포함한다. 이러한 발견은 형질막 내의 단백질-단백질 상호작용에서 막통과 아미노산이 연루됨을 나타낸다. 세포질 도메인은 세포외 도메인보다 더 보존적이며, 그 이유는 세포질에 위치한 단백질과의 보존된 단백질-단백질 상호작용에 대한 유사한 고찰을 이유로 들었다. RNAi에 의한 CD147 발현의 억제는 시험관내에서 상당히 감소된 혈관형성을 유발했다. CD147은 증식, 생존, MMP 분비 및 포스포이노시타이드 3 키나제/단백질 키나제 B(PI3K/Akt) 활성화를 포함하는 수 개의 기전에 의해 혈관형성을 조절할 수 있다.
수 개의 암 세포주에서, CD147은 항-아폽토시스 기능 및 항암제내성(chemoresistance)의 매개체로서 확인되었다. HO-8910 난소 암종 세포에서, CD147 RNAi는 종양 세포 침입, 종양형성능(tumorigenicity) 및 파클리탁셀에 대한 화학감수성(chemosensitivity)을 감소시킨다(Zou et al. Cancer Lett . 248: 211-218, 2007). CD147의 상향 조절은 수 개의 다제약물(muitidrug)-내성 암 세포주에서 관찰되었다(Toole et al. Drug Resist. Update 11:110-121, 2008).
독립적으로, 다양한 화학요법제에 대한 암 세포의 내성에서 CD147의 관련성이 보고되었다(Li et al. Cell. Mol . Life Sci . 66:504-515, 2009). 또한, CD147은 종양 세포의 안드로겐-독립적 성장을 히알루로난(hyaluronan)-의존적 방식으로 촉진시키는 수용체로서 확인되었다(Marieb et al. Cancer Res. 64:1229-1232, 2004). 사람 경구 편평세포 암종 세포(SCC)에서, CD147-유도된 RNAi는 아폽토시스 단백질의 X-염색체 연결된 억제제(X-chromosome linked inhibitor of apoptosis protein; XIAP) 발현을 감소시켰고, 5 플루오로우라실에 대한 화학감수성을 증가시켰다(Kuang et al. Cancer Lett . 276:189-195, 2009). 유방암 세포주에서, 카스파제의 활성화에 의해 입증된 바와 같이 CD147이 아노이키스(anoikis)에 대한 내성을 부여하는 것으로 나타났다.
뚜렷이 다른 에피토프와 상호작용하는 CD147에 대해 유도된 다수의 mAb가 확립되었다(Koch et al. Int . Immunol . 11:777-786, 1999). 대부분의 항체는 휴지 T-세포가 아닌, 오직 식물적혈구응집소(phytohemagglutinin; PHA) 자극된 T-세포에만 결합한다. 이러한 현상은 활성화된 T-세포 상에 특이적으로 나타난 네오에피토프(neoepitope)에 의한 것이 아닌, 활성화된 T-세포 상에 클러스터링(clustering)된 CD147 분자에 대한 낮은-친화성 항체의 2가 결합에 의해 설명되었다. 높은 친화성 항체는 휴지 T-세포에 대해 1가 방식으로 결합할 수 있었으며, 이는 CD147의 낮은 발현자(expressor)이다.
낮은-친화성 항체에 의한 이량체화의 유도는 CD3-매개된 T-세포 활성화의 억제를 초래했다. 독특한 에피토프를 인식하는, 높은-친화성 mAb MEM-M6/6은 T 세포 활성화를 80%까지 억제하고, 이전 섹션에서 개괄된 바와 같이 또한 결장암 및 흑색종 세포의 증식을 억제하지만, 비-형질전환된 섬유아세포(fibroblast)는 억제하지 않는다(Baba et al. Biochem . Biophys . Res. Commun . 374:111-116, 2008). mAb에 의한 CD147의 유발은 사람 T-림프구 내 미세 영역(microdomain)으로부터 글리코실포스파티딜이노시톨(GPI)-부착된 공-수용체 CD48 및 CD59의 전위를 유발하는 것으로 나타났다(Staffler et al. J. Immunol . 171:1707-1714, 2003). 미세 영역의 교란은 T-세포 증식의 억제를 초래한다. COS-7 형질감염주(transfectant) 및 상이한 CD147 에피토프를 커버하는 mAb를 사용함으로써, CD147이 세포 부착(동형 세포 응집(homotypic cell aggregation))의 조절 및 림프구 활성화에 연루된 상이한 에피토프를 함유하는 것으로 나타났다(Chiampanichayakul et al. Immunobiology 211:167-78, 2006).
상이한 세트의 CD147-유도된 mAb는 간세포 암종(HCC)의 치료에 대해 평가되었다(Xu et al. Mol . Cancer Res. 5:605-614, 2007.). mAb Hb18G 및 mAb Hb18G의 131I-표지된 F(ab')2 단편인, 리카르틴(Licartin)은 공동배양된 섬유아세포에서 MMP 분비의 저해를 매개하고, 침입을 억제하며, 리카르틴은 HCC 세포의 성장을 유의미하게 억제했다. mAb Hb18G 및 리카르틴은 성장 및 전이 뿐만 아니라 MMP, VEGF 및 섬유아세포 표면 단백질과 같은 기질 인자의 발현을 효과적으로 감소시켰다(Xu et al. Mol . Cancer Res. 5:605-614, 2007). 임상적 연구는 HCC 환자의 리카르틴으로의 표적화된 방사면역요법에 대해 보고되었다(Xu et al. Hepatology 45:269-276, 2007). II상 시험에서 2회 사이클을 완료한 73명의 환자 중에서, 6명(8%)이 부분적 반응을 갖고, 14명(19%)이 최소 반응을 갖고, 43명(59%)이 안정한 질환(stable disease)을 가진 것으로 나타났다. 무진행(progression-free) 환자의 생존율은 진행 질환을 갖는 환자의 생존율보다 상당히 더 높았다. CNTO 3899로도 지칭되는 키메라 CD147 항체(IgG1)는 두경부 편평세포 암종의 잠재적인 치료를 위한 제제로서 평가되었다(Dean et al. Clin . Cancer Res. 15:4058-4065, 2009.). 항체는 SSC-1 및 FaDu 세포의 증식을 57% 이하로 억제했다. 콜라겐 분해의 억제도 마찬가지로 주목되었다. 상당한 종양 성장 억제는 SSC-1 이종이식편에서 주목되었다. CNTO 3899는 시험관내에서 및 이종이식편에서 SSC-1 및 FaDu 세포의 방사선 반응을 증강시킨다. 더욱이, 동일한 연구에 의하면, CD147 기능이 IL1β, 1L6, IL8 및 VEGF와 같은 전염증성 및 전혈관형성(proangiogenic) 인자의 사이토카인 생산과 관련된다는 것을 보여주었다. 사이토카인, MMP 및 VEGF의 억제는 이러한 mAb의 작용 기전을 매개하는 것 같이 보인다. 개괄된 상기 연구는, 면역 효과기 세포(immune effector cell)의 부재 하에 CD147 mAb에 의한 종양 세포의 증식 억제가 세포-유형-특이적이고/이거나 mAb가 유도되는 뚜렷이 다른 에피토프에 의존적일 수 있음을 시사할 것이다. T-세포 활성화 및/또는 고갈의 억제는 CNTO 3899, Hb18G 또는 리카르틴으로 연구되지 않았다.
본 발명은 CD147 에피토프에 적어도 10-6M의 결합 친화도로 결합하는 IgG 부류의 완전 사람 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다. 바람직하게는, 완전 사람 항체는 중쇄 및 경쇄 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2(본원에서 C4R1A2로 지칭됨), 서열 번호 3/서열 번호 4(본원에서 C4R1A5로 지칭됨), 서열 번호 5/서열 번호 6(본원에서 C4R1A6으로 지칭됨), 서열 번호 7/서열 번호 8(본원에서 C4R1A8로 지칭됨), 서열 번호 9/서열 번호 10(본원에서 C4R1A9로 지칭됨), 서열 번호 11/서열 번호 12(본원에서 C4R1B2로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 14(본원에서 C4R1C10으로 지칭됨), 서열 번호 15/서열 번호 16(본원에서 C4R1C11로 지칭됨), 서열 번호 17/서열 번호 18(본원에서 C4R1C3으로 지칭됨), 서열 번호 19/서열 번호 20(본원에서 C4R1D11로 지칭됨), 서열 번호 21/서열 번호 22(본원에서 C4R1F12로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 25(본원에서 C4R1G1로 지칭됨), 서열 번호 26/서열 번호 27(본원에서 C4R1G4로 지칭됨), 서열 번호 28/서열 번호 29(본원에서 C4R1G7로 지칭됨), 서열 번호 30/서열 번호 31(본원에서 C4R1H10으로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 32(본원에서 C4R1H11로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 33(본원에서 C4R1H4로 지칭됨), 서열 번호 34/서열 번호 35(본원에서 C4sh1A1로 지칭됨), 서열 번호 36/서열 번호 37(본원에서 C4sh1A2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 39(본원에서 C4sh1A3으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 40(본원에서 C4sh1A4로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 42(본원에서 C4sh1A5로 지칭됨), 서열 번호 43/서열 번호 44(본원에서 C4sh1A6으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 45(본원에서 C4sh1A9로 지칭됨), 서열 번호 46/서열 번호 47(본원에서 C4sh1B10으로 지칭됨), 서열 번호 48/서열 번호 49(본원에서 C4sh1B11로 지칭됨), 서열 번호 50/서열 번호 51(본원에서 C4sh1B2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 52(본원에서 C4sh1C10으로 지칭됨), 서열 번호 53/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C5로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C6으로 지칭됨), 서열 번호 56/서열 번호 57(본원에서 C4sh1E10으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 58(본원에서 C4sh1E12로 지칭됨), 서열 번호 59/서열 번호 60(본원에서 C4sh1F11로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 61(본원에서 C4sh1G4로 지칭됨), 서열 번호 62/서열 번호 63(본원에서 C4sh1H9로 지칭됨) 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
본 발명은 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역을 갖는 Fab 완전 사람 항체 단편을 제공하며, 여기서 상기 항체 단편은 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다. 바람직하게는, 완전 사람 항체 Fab 단편은 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
본 발명은 중쇄로부터의 가변 도메인 영역, 경쇄로부터의 가변 도메인 영역, 및 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 영역을 연결하는 펩타이드 링커를 갖는 단일쇄 사람 항체를 제공하며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다. 바람직하게는, 완전 사람 단일쇄 항체는 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 단일쇄 완전 사람 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
본 발명은 추가로 항-CD147 폴리펩타이드를 투여함을 포함하는, 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 완전 사람 항체는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 가지며;
Fab 완전 사람 항체 단편은 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 가지며;
단일쇄 사람 항체는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
바람직하게는, 완전 사람 항체는 중쇄 및 경쇄 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2(본원에서 C4R1A2로 지칭됨), 서열 번호 3/서열 번호 4(본원에서 C4R1A5로 지칭됨), 서열 번호 5/서열 번호 6(본원에서 C4R1A6으로 지칭됨), 서열 번호 7/서열 번호 8(본원에서 C4R1A8로 지칭됨), 서열 번호 9/서열 번호 10(본원에서 C4R1A9로 지칭됨), 서열 번호 11/서열 번호 12(본원에서 C4R1B2로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 14(본원에서 C4R1C10으로 지칭됨), 서열 번호 15/서열 번호 16(본원에서 C4R1C11로 지칭됨), 서열 번호 17/서열 번호 18(본원에서 C4R1C3으로 지칭됨), 서열 번호 19/서열 번호 20(본원에서 C4R1D11로 지칭됨), 서열 번호 21/서열 번호 22(본원에서 C4R1F12로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 25(본원에서 C4R1G1로 지칭됨), 서열 번호 26/서열 번호 27(본원에서 C4R1G4로 지칭됨), 서열 번호 28/서열 번호 29(본원에서 C4R1G7로 지칭됨), 서열 번호 30/서열 번호 31(본원에서 C4R1H10으로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 32(본원에서 C4R1H11로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 33(본원에서 C4R1H4로 지칭됨), 서열 번호 34/서열 번호 35(본원에서 C4sh1A1로 지칭됨), 서열 번호 36/서열 번호 37(본원에서 C4sh1A2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 39(본원에서 C4sh1A3으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 40(본원에서 C4sh1A4로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 42(본원에서 C4sh1A5로 지칭됨), 서열 번호 43/서열 번호 44(본원에서 C4sh1A6으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 45(본원에서 C4sh1A9로 지칭됨), 서열 번호 46/서열 번호 47(본원에서 C4sh1B10으로 지칭됨), 서열 번호 48/서열 번호 49(본원에서 C4sh1B11로 지칭됨), 서열 번호 50/서열 번호 51(본원에서 C4sh1B2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 52(본원에서 C4sh1C10으로 지칭됨), 서열 번호 53/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C5로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C6으로 지칭됨), 서열 번호 56/서열 번호 57(본원에서 C4sh1E10으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 58(본원에서 C4sh1E12로 지칭됨), 서열 번호 59/서열 번호 60(본원에서 C4sh1F11로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 61(본원에서 C4sh1G4로 지칭됨), 서열 번호 62/서열 번호 63(본원에서 C4sh1H9로 지칭됨) 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다. 바람직하게는, 완전 사람 항체 Fab 단편은 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2(본원에서 C4R1A2로 지칭됨), 서열 번호 3/서열 번호 4(본원에서 C4R1A5로 지칭됨), 서열 번호 5/서열 번호 6(본원에서 C4R1A6으로 지칭됨), 서열 번호 7/서열 번호 8(본원에서 C4R1A8로 지칭됨), 서열 번호 9/서열 번호 10(본원에서 C4R1A9로 지칭됨), 서열 번호 11/서열 번호 12(본원에서 C4R1B2로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 14(본원에서 C4R1C10으로 지칭됨), 서열 번호 15/서열 번호 16(본원에서 C4R1C11로 지칭됨), 서열 번호 17/서열 번호 18(본원에서 C4R1C3으로 지칭됨), 서열 번호 19/서열 번호 20(본원에서 C4R1D11로 지칭됨), 서열 번호 21/서열 번호 22(본원에서 C4R1F12로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 25(본원에서 C4R1G1로 지칭됨), 서열 번호 26/서열 번호 27(본원에서 C4R1G4로 지칭됨), 서열 번호 28/서열 번호 29(본원에서 C4R1G7로 지칭됨), 서열 번호 30/서열 번호 31(본원에서 C4R1H10으로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 32(본원에서 C4R1H11로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 33(본원에서 C4R1H4로 지칭됨), 서열 번호 34/서열 번호 35(본원에서 C4sh1A1로 지칭됨), 서열 번호 36/서열 번호 37(본원에서 C4sh1A2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 39(본원에서 C4sh1A3으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 40(본원에서 C4sh1A4로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 42(본원에서 C4sh1A5로 지칭됨), 서열 번호 43/서열 번호 44(본원에서 C4sh1A6으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 45(본원에서 C4sh1A9로 지칭됨), 서열 번호 46/서열 번호 47(본원에서 C4sh1B10으로 지칭됨), 서열 번호 48/서열 번호 49(본원에서 C4sh1B11로 지칭됨), 서열 번호 50/서열 번호 51(본원에서 C4sh1B2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 52(본원에서 C4sh1C10으로 지칭됨), 서열 번호 53/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C5로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C6으로 지칭됨), 서열 번호 56/서열 번호 57(본원에서 C4sh1E10으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 58(본원에서 C4sh1E12로 지칭됨), 서열 번호 59/서열 번호 60(본원에서 C4sh1F11로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 61(본원에서 C4sh1G4로 지칭됨), 서열 번호 62/서열 번호 63(본원에서 C4sh1H9로 지칭됨) 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다. 바람직하게는, 완전 사람 단일쇄 항체는 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 여기서 단일쇄 완전 사람 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
바람직하게는, 상기 방법은 다양한 암, 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전을 치료하기 위한 것이다.
도 1 및 2는 7개의 항-CD147 항체가 사람 또는 마우스 CD147 모두에 결합할 수 있음을 보여준다.
도 3a는 유동 세포 분석법에 의해 분석될 때, 전립선암 세포(PC3)의 표면에서 발현된 사람 CD147에 대한 예시적인 항-CD147 항체의 결합을 도시한다.
도 3b는 유동 세포 분석법에 의해 분석될 때, 골수성 백혈병 세포(K562)의 표면에서 발현된 사람 CD147에 대한 예시적인 항-CD147 항체의 결합을 도시한다.
도 3c는 유동 세포 분석법에 의해 분석될 때, 비-소세포 폐 암종 세포(A549)의 표면에서 발현된 사람 CD147에 대한 예시적인 항-CD147 항체의 결합을 도시한다.
도 4는 단백질 G-DM1 분자와 복합체화될 때 항-CD147 항체의 세포독성 잠재력을 설명한다.
본 발명은 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, CD147 에피토프에 10-6M 이하의 결합 친화도로 결합하는 IgG 부류의 완전 사람 항체를 제공한다. 바람직하게는, 상기 완전 사람 항체는 중쇄 및 경쇄 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2(본원에서 C4R1A2로 지칭됨), 서열 번호 3/서열 번호 4(본원에서 C4R1A5로 지칭됨), 서열 번호 5/서열 번호 6(본원에서 C4R1A6으로 지칭됨), 서열 번호 7/서열 번호 8(본원에서 C4R1A8로 지칭됨), 서열 번호 9/서열 번호 10(본원에서 C4R1A9로 지칭됨), 서열 번호 11/서열 번호 12(본원에서 C4R1B2로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 14(본원에서 C4R1C10으로 지칭됨), 서열 번호 15/서열 번호 16(본원에서 C4R1C11로 지칭됨), 서열 번호 17/서열 번호 18(본원에서 C4R1C3으로 지칭됨), 서열 번호 19/서열 번호 20(본원에서 C4R1D11로 지칭됨), 서열 번호 21/서열 번호 22(본원에서 C4R1F12로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 25(본원에서 C4R1G1로 지칭됨), 서열 번호 26/서열 번호 27(본원에서 C4R1G4로 지칭됨), 서열 번호 28/서열 번호 29(본원에서 C4R1G7로 지칭됨), 서열 번호 30/서열 번호 31(본원에서 C4R1H10으로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 32(본원에서 C4R1H11로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 33(본원에서 C4R1H4로 지칭됨), 서열 번호 34/서열 번호 35(본원에서 C4sh1A1로 지칭됨), 서열 번호 36/서열 번호 37(본원에서 C4sh1A2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 39(본원에서 C4sh1A3으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 40(본원에서 C4sh1A4로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 42(본원에서 C4sh1A5로 지칭됨), 서열 번호 43/서열 번호 44(본원에서 C4sh1A6으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 45(본원에서 C4sh1A9로 지칭됨), 서열 번호 46/서열 번호 47(본원에서 C4sh1B10으로 지칭됨), 서열 번호 48/서열 번호 49(본원에서 C4sh1B11로 지칭됨), 서열 번호 50/서열 번호 51(본원에서 C4sh1B2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 52(본원에서 C4sh1C10으로 지칭됨), 서열 번호 53/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C5로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C6으로 지칭됨), 서열 번호 56/서열 번호 57(본원에서 C4sh1E10으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 58(본원에서 C4sh1E12로 지칭됨), 서열 번호 59/서열 번호 60(본원에서 C4sh1F11로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 61(본원에서 C4sh1G4로 지칭됨), 서열 번호 62/서열 번호 63(본원에서 C4sh1H9로 지칭됨) 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
본 발명은 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역을 갖는 Fab 완전 사람 항체 단편을 제공하며, 여기서 상기 항체 단편은 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다. 바람직하게는, 상기 완전 사람 항체 Fab 단편은 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
본 발명은 중쇄로부터의 가변 도메인 영역, 경쇄로부터의 가변 도메인 영역, 및 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 영역을 연결하는 펩타이드 링커를 갖는 단일쇄 사람 항체를 제공하며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다. 바람직하게는, 상기 완전 사람 단일쇄 항체는 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 단일쇄 완전 사람 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
본 발명은 추가로 항-CD147 폴리펩타이드를 투여함을 포함하는, 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 항-CD147 폴리펩타이드는 CD147 에피토프에 적어도 10-6M의 결합 친화도로 결합하는, IgG 부류의 완전 사람 항체; 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역을 갖는 Fab 완전 사람 항체 단편; 중쇄로부터의 가변 도메인 영역, 경쇄로부터의 가변 도메인 영역, 및 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 영역을 연결하는 펩타이드 링커를 갖는 단일쇄 사람 항체; 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
상기 완전 사람 항체는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 가지며;
상기 Fab 완전 사람 항체 단편은 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 가지며;
상기 단일쇄 사람 항체는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
바람직하게는, 완전 사람 항체는 중쇄 및 경쇄 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어지는 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다. 바람직하게는, 완전 사람 항체 Fab 단편은 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 여기서 상기 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다. 바람직하게는, 완전 사람 단일쇄 항체는 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 여기서, 상기 단일쇄 완전 사람 항체는 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는다.
바람직하게는, 상기 방법은 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전을 치료하기 위한 것이다.
"항원 결합 단백질"은 항원에 결합하는 부분 및 임의로 항원 결합 부분이 항원으로의 항원 결합 단백질의 결합을 촉진하는 입체형태를 채택하도록 하는 스캐폴드(scaffold) 또는 프레임워크(framework) 부분을 포함하는 단백질이다. 항원 결합 단백질의 예는 항체, 항체 단편(예를 들면, 항체의 항원 결합 부분), 항체 유도체 및 항체 유사체를 포함한다. 항원 결합 단백질은, 예를 들면, 이식된 CDR 또는 CDR 유도체를 갖는 대안적 단백질 스캐폴드 또는 인공 스캐폴드를 포함할 수 있다. 상기 스캐폴드는, 예를 들면, 항원 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화시키기 위해 도입된 돌연변이를 포함하는 항체-유래 스캐폴드 뿐만 아니라, 예를 들면, 생체적합성 중합체를 포함하는 완전 합성 스캐폴드를 포함하지만, 이들에 제한되지는 않는다. 예를 들면, 문헌[참조: Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, Volume 53, Issue 1:121-129; Roque et al., 2004, Biotechnol . Prog. 20:639-654]을 참조한다. 또한, 펩타이드 항체 모방체("PAM") 뿐만 아니라 스캐폴드로서 피브로넥션(fibronection) 성분을 사용하는 항체 모방체를 토대로 한 스캐폴드가 사용될 수 있다.
항원 결합 단백질은, 예를 들면, 천연 발생 면역글로불린의 구조를 가질 수 있다. "면역글로불린"은 사량체 분자이다. 천연 발생 면역글로불린에서, 각각의 사량체는 폴리펩타이드 쇄의 2개의 동일한 쌍으로 구성되며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄"(약 25kDa) 및 하나의 "중쇄"(약 50 내지 70kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부분은 항원 인식을 주로 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 초과의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각각의 쇄의 카복시-말단 부분은 효과기(effector) 기능을 주로 담당하는 불변 영역을 규정한다. 사람 경쇄는 카파 또는 람다 경쇄로 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로 분류되며, 항체의 이소형(isotype)을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 규정한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되며, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌[Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y.(1989))](모든 목적을 위해 이의 전문이 참고로 포함됨)을 참조한다. 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 온전한 면역글로불린이 2개의 결합 부위를 갖도록 항체 결합 부위를 형성한다.
천연 발생 면역글로불린 쇄의 가변 영역은 상보성 결정 영역 또는 CDR로도 지칭되는 3개의 초가변 영역(hypervariable region)에 의해 연결된 비교적 보존된 프레임워크 영역(FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. N-말단으로부터 C-말단까지, 경쇄 및 중쇄 둘 모두는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 대한 아미노산의 배정은 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991] 내의 카밧 등(Kabat et al.)의 정의에 따른다. 면역글로불린 쇄 내의 아미노산에 대한 다른 넘버링 시스템은 IMGT.RTM.(international ImMunoGeneTics information system; Lefranc et al, Dev . Comp. Immunol. 29:185-203; 2005) 및 AHo(Honegger and Pluckthun, J. Mol . Biol . 309(3):657-670; 2001)를 포함한다.
항체는 다양한 항원 특이성을 갖는 면역글로불린을 함유하는 혈청 또는 혈장과 같은 공급원으로부터 수득될 수 있다. 상기 항체가 친화성 정제에 적용되는 경우, 이는 특정 항원 특이성에 대해 강화될(enriched) 수 있다. 상기 항체의 강화된 제제는 통상적으로 특정 항원에 대한 특정 결합 활성을 갖는 약 10% 미만의 항체로 구성된다. 상기 제제를 여러 차례 친화성 정제에 적용시켜 항원에 대한 특정 결합 활성을 갖는 항체의 비율을 증가시킬 수 있다. 이러한 방식으로 제조된 항체는 종종 "단일특이적(monospecific)"으로 언급된다. 단일특이적 항체 제제는 특정 항원에 대한 특정 결합 활성을 갖는 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% 또는 99.9%의 항체로 구성될 수 있다.
"항체"는, 달리 명시되지 않는 한, 특정 결합에 대해 온전한 항체와 경쟁하는 온전한 면역글로불린 또는 이의 항원 결합 부분을 나타낸다. 항원 결합 부분은 재조합 DNA 기술 또는 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 항원 결합 부분은 특히 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 도메인 항체(dAb), 및 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 단일쇄 항체(scFv), 키메라 항체, 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 테트라바디(tetrabody), 및 폴리펩타이드에 특정 항원 결합을 부여하기에 충분한 면역글로불린의 적어도 일부를 함유하는 폴리펩타이드를 포함한다.
Fab 단편은 VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 갖는 1가 단편이고; F(ab')2 단편은 힌지 영역에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 갖는 2가 단편이고; Fd 단편은 VH 및 CH1 도메인을 갖고; Fv 단편은 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인을 갖고; dAb 단편은 VH 도메인, VL 도메인, 또는 VH 또는 VL 도메인의 항원-결합 단편을 갖는다(미국 특허 6,846,634; 6,696,245, 미국 출원 공개공보 20/0202512; 2004/0202995; 2004/0038291; 2004/0009507; 2003/0039958, 및 Ward et al., Nature 341:544-546, 1989).
단일쇄 항체(scFv)는 VL 및 VH 영역이 링커(예를 들면, 아미노산 잔기의 합성 서열)를 통해 연결되어 연속적 단백질 쇄를 형성하는 항체이며, 여기서 상기 링커는 단백질 쇄가 스스로 다시 폴딩되고 1가 항원 결합 부위를 형성하는 것을 가능케 하기에 충분히 길다(참조: 예를 들면, Bird et al., 1988, Science 242:423-26 및 Huston et al., 1988, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 85:5879-83). 디아바디는 2개의 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 2가 항체이며, 여기서 각각의 폴리펩타이드 쇄는 동일 쇄 상의 2개의 도메인 사이에 쌍을 형성시키기에 너무 짧아, 각각의 도메인이 또 다른 폴리펩타이드 쇄 상의 상보성 도메인과 쌍을 이루도록 하는 링커에 의해 연결된 VH 및 VL 도메인을 포함한다(참조: 예를 들면, Holliger et al., 1993, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90:6444-48, 및 Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-23). 디아바디의 2개의 폴리펩타이드 쇄가 동일한 경우, 이들의 쌍형성(pairing)으로부터 초래된 디아바디는 2개의 동일한 항원 결합 부위를 가질 것이다. 상이한 서열을 갖는 폴리펩타이드 쇄는 2개의 상이한 항원 결합 부위를 갖는 디아바디를 제조하는데 사용될 수 있다. 유사하게, 트리바디 및 테트라바디는 각각 3개 및 4개의 폴리펩타이드 쇄를 포함하고, 동일하거나 상이할 수 있는 3개 및 4개의 항원 결합 부위를 각각 형성하는 항체이다.
주어진 항체의 상보성 결정 영역(CDR) 및 프레임워크 영역(FR)은 문헌[Kabat et al. 상기; Lefranc et al., 상기 및/또는 Honegger and Pluckthun, 상기]에 의해 기재된 시스템을 사용하여 확인될 수 있다. 하나 이상의 CDR이 이를 항원 결합 단백질로 만들기 위해 공유적으로 또는 비공유적으로 분자 내에 도입될 수 있다. 항원 결합 단백질은 더 큰 폴리펩타이드 쇄의 일부로서 CDR(들)을 포함할 수 있거나, CDR(들)을 또 다른 폴리펩타이드 쇄에 공유적으로 연결시킬 수 있거나, CDR(들)을 비공유적으로 포함할 수 있다. CDR은 항원 결합 단백질이 목적하는 특정 항원에 특이적으로 결합하는 것을 가능하게 한다.
항원 결합 단백질은 하나 이상의 결합 부위를 가질 수 있다. 하나 초과의 결합 부위가 존재하는 경우, 결합 부위는 서로 동일할 수 있거나, 상이할 수 있다. 예를 들면, 천연 발생 사람 면역글로불린은 통상적으로 2개의 동일한 결합 부위를 갖는 한편, "이중특이적(bispecific)" 또는 "이기능적(bifunctional)" 항체는 2개의 상이한 결합 부위를 갖는다.
용어 "사람 항체"는 사람 면역글로불린 서열로부터 유도된 하나 이상의 가변 및 불변 영역을 갖는 모든 항체를 포함한다. 한 양태에서, 모든 가변 및 불변 도메인은 사람 면역글로불린 서열(완전 사람 항체)로부터 유도된다. 이들 항체는 다양한 방식으로 제조될 수 있고, 이의 예는 사람 중쇄 및/또는 경쇄-인코딩 유전자로부터 유도된 항체를 발현시키도록 유전적으로 변형된 마우스의 목적하는 항원으로의 면역화를 통한 것을 포함하여, 하기에 기재되어 있다.
사람화된 항체는 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 및/또는 첨가에 의해 비-사람 종으로부터 유도된 항체의 서열과 상이한 서열을 가져, 상기 사람화된 항체가 사람 피험자에 투여되는 경우에, 비-사람 종 항체와 비교하여, 면역 반응을 유도할 가능성이 더 적고/적거나 덜 심각한 면역 반응을 유도하도록 한다. 한 양태에서, 비-사람 종 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 및 불변 도메인 내의 특정 아미노산은 사람화된 항체를 생성하도록 돌연변이된다. 또 다른 양태에서, 사람 항체로부터의 불변 도메인(들)은 비-사람 종의 가변 도메인(들)에 융합된다. 또 다른 양태에서, 비-사람 항체의 하나 이상의 CDR 서열 내에 하나 이상의 아미노산 잔기는 사람 피험자에게 투여되는 경우에, 비-사람 항체의 가능성 있는 면역원성을 감소시키도록 변경되며, 상기 변경된 아미노산 잔기는 항체의 이의 항원에 대한 면역특이적 결합에 중요하지 않거나, 이루어지는 아미노산 서열에 대한 변화가 보존적인 변화여서, 사람화된 항체의 항원에 대한 결합이 비-사람 항체의 항원에 대한 결합보다 유의미하게 악화되지 않게 한다. 사람화된 항체를 제조하는 방법의 예는 미국 특허 6,054,297, 5,886,152 및 5,877,293에서 확인할 수 있다.
용어 "키메라 항체"는 한 항체로부터의 하나 이상의 영역 및 하나 이상의 다른 항체로부터의 하나 이상의 영역을 함유하는 항체를 나타낸다. 한 양태에서, 하나 이상의 CDR은 사람 항-CD147 항체로부터 유도된다. 또 다른 양태에서, CDR 모두는 사람 항-CD147 항체로부터 유도된다. 또 다른 양태에서, 하나 초과의 사람 항-CD147 항체로부터의 CDR이 혼합되고, 키메라 항체에서 매치된다. 예를 들면, 키메라 항체는 첫번째 사람 항체의 경쇄로부터의 CDR1, 두번째 사람 항-CD147 항체의 경쇄로부터의 CDR2 및 CDR3, 및 세번째 항-CD147 항체로부터의 중쇄로부터의 CDR을 포함할 수 있다. 다른 조합이 가능하다.
추가로, 프레임워크 영역은 동일한 항-CD147 항체 중 하나, 하나 이상의 상이한 항체, 예를 들면, 사람 항체, 또는 사람화된 항체로부터 유도될 수 있다. 키메라 항체의 일례로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 종으로부터의 항체와 동일하거나, 이와 상동성이거나, 이로부터 유도되거나, 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 한편, 나머지 쇄(들)는 또 다른 종으로부터의 항체(들)와 동일하거나, 이와 상동성이거나, 이로부터 유도되거나, 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속한다. 목적하는 생물학적 활성(즉, CD147에 특이적으로 결합하는 능력)을 나타내는 상기 항체의 단편도 또한 포함된다.
항체의 단편 또는 유사체는 본 명세서의 교시에 따라서 당해 분야에 공지된 기술을 사용하여 당업자에 의해 용이하게 제조될 수 있다. 단편 또는 유사체의 바람직한 아미노-말단 및 카복시-말단은 기능적 도메인의 경계 근처에서 발생한다. 구조적 및 기능적 도메인은 공공의(public) 또는 사유(proprietary) 서열 데이타베이스에 대한 뉴클레오타이드 및/또는 아미노산 서열 데이타의 비교에 의해 확인될 수 있다. 공지된 구조 및/또는 기능의 다른 단백질에서 발생하는 서열 모티프 또는 예측 단백질 입체형태 도메인을 확인하기 위해 컴퓨터화된 비교 방법이 사용될 수 있다. 공지된 3차원 구조로 폴딩되는 단백질 서열을 확인하는 방법이 공지되어 있다(참조: Bowie et al., 1991, Science 253:164).
"CDR 이식된 항체"는 특정 종 및 이소형의 항체로부터 유도된 하나 이상의 CDR, 및 동일하거나 상이한 종 또는 이소형의 또 다른 항체의 프레임워크를 포함하는 항체이다.
"다중-특이적 항체"는 하나 이상의 항원 상의 하나 초과의 에피토프를 인식하는 항체이다. 상기 유형의 항체의 서브클래스는 동일하거나 상이한 항원 상의 2개의 별개의 에피토프를 인식하는 "이중특이적 항체"이다.
항원 결합 단백질이 1 나노몰 이하의 해리 상수로 항원에 결합하는 경우, 항원 결합 단백질은 항원(예를 들면, 사람 CD147)에 "특이적으로 결합"한다.
"항원 결합 도메인", "항원 결합 영역" 또는 "항원 결합 부위"는 항원과 상호작용하고, 항원에 대한 항원 결합 단백질의 특이성 및 친화성에 기여하는 아미노산 잔기(또는 다른 모이어티(moiety))를 함유하는 항원 결합 단백질의 일부이다. 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 경우, 이는 이의 CDR 도메인 중 적어도 하나의 적어도 일부를 포함할 것이다.
"에피토프"는 항원 결합 단백질(예를 들면, 항체)에 의해 결합되는 분자의 부분이다. 에피토프는 분자의 비-인접 부분(예를 들면, 폴리펩타이드 내에서, 폴리펩타이드의 1차 서열에 인접하지 않지만, 폴리펩타이드의 3차 및 4차 구조의 상황에서 항원 결합 단백질에 의해 서로 결합되기에 충분히 가까운 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다.
2개의 폴리뉴클레오타이드 또는 2개의 폴리펩타이드 서열의 "동일성 퍼센트"는 디폴트 파라미터를 사용하는 GAP 컴퓨터 프로그램(GCG Wisconsin Package의 일부, version 10.3 (Accelrys, San Diego, Calif.))을 사용하여 서열을 비교함으로써 결정된다.
용어 "폴리뉴클레오타이드", "올리고뉴클레오타이드" 및 "핵산"은 전체에 걸쳐 상호교환적으로 사용되며, 이는 DNA 분자(예를 들면, cDNA 또는 게놈 DNA), RNA 분자(예를 들면, mRNA), 뉴클레오타이드 유사체를 사용하여 생성된 DNA 또는 RNA의 유사체(예를 들면, 펩타이드 핵산 및 비-천연 발생 뉴클레오타이드 유사체), 및 이들의 하이브리드를 포함한다. 핵산 분자는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있다. 한 양태에서, 본 발명의 핵산 분자는 항체, 또는 이의 단편, 유도체, 뮤테인(mutein) 또는 변이체를 인코딩하는 인접 열린 해독틀(open reading frame)을 포함한다.
2개의 단일-가닥 폴리뉴클레오타이드는 이들의 서열이, 하나의 폴리뉴클레오타이드 내의 모든 뉴클레오타이드가, 갭의 도입 없이, 그리고 양쪽 서열의 5' 또는 3' 말단에서 쌍을 이루지 않은 뉴클레오타이드가 없이, 다른 폴리뉴클레오타이드 내의 이의 상보적 뉴클레오타이드와 반대되도록 역평행 배향으로 정렬될 수 있는 경우에 서로 "상보적"이다. 폴리뉴클레오타이드는 2개의 폴리뉴클레오타이드가 적당히 엄격한 조건하에서 서로 하이브리드화될 수 있는 경우에 또 다른 폴리뉴클레오타이드에 "상보적"이다. 따라서, 폴리뉴클레오타이드는 이의 보체 없이 또 다른 폴리뉴클레오타이드에 상보적일 수 있다.
"벡터"는 이에 연결된 또 다른 핵산을 세포로 도입하는데 사용될 수 있는 핵산이다. 벡터의 한 유형은 추가의 핵산 세그먼트가 연결될 수 있는 선형 또는 원형 이중 가닥 DNA 분자를 나타내는 "플라스미드"이다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터(예를 들면, 복제 불능 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스)이며, 여기서 추가의 DNA 세그먼트가 바이러스 게놈 내에 도입될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포 내에서 자동 복제할 수 있다(예를 들면, 박테리아 복제 기점을 포함하는 박테리아 벡터 및 에피솜(episomal) 포유동물 벡터). 다른 벡터(예를 들면, 비-에피솜 포유동물 벡터)가 숙주 세포 내로 도입시 숙주 세포의 게놈 내로 통합되며, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. "발현 벡터"는 선택된 폴리뉴클레오타이드의 발현을 유도할 수 있는 벡터의 유형이다.
뉴클레오타이드 서열은 조절 서열이 뉴클레오타이드 서열의 발현(예를 들면, 발현 수준, 시기 또는 위치)에 영향을 주는 경우에 조절 서열에 "작동 가능하게 연결"된다. "조절 서열"은 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현(예를 들면, 발현 수준, 시기 또는 위치)에 영향을 주는 핵산이다. 조절 서열은, 예를 들면, 조절되는 핵산에 직접 이의 효과를 발휘할 수 있거나, 하나 이상의 다른 분자(예를 들면, 조절 서열 및/또는 핵산에 결합하는 폴리펩타이드)의 작용을 통해 이의 효과를 발휘할 수 있다. 조절 서열의 예는 프로모터, 인핸서 및 다른 발현 조절 요소(예를 들면, 폴리아데닐화 신호)를 포함한다. 조절 서열의 추가의 예는, 예를 들면, 문헌(참조: Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. and Baron et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23:3605-06)에 기재되어 있다.
"숙주 세포"는 핵산, 예를 들면, 본 발명의 핵산을 발현시키는데 사용될 수 있는 세포이다. 숙주 세포는 원핵생물, 예를 들면, 이. 콜라이(E. coli )일 수 있거나, 진핵생물, 예를 들면, 단세포 진핵생물(예를 들면, 효모 또는 다른 진균), 식물 세포(예를 들면, 담배 또는 토마토 식물 세포), 동물 세포(예를 들면, 사람 세포, 원숭이 세포, 햄스터 세포, 랫트 세포, 마우스 세포 또는 곤충 세포) 또는 하이브리도마일 수 있다. 숙주 세포의 예는 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주(ATCC CRL 1651)(참조: Gluzman et al., 1981, Cell 23:175), L 세포, C127 세포, 3T3 세포(ATCC CCL 163), 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 이들의 유도체, 예를 들면, Veggie CHO 및 혈청-비함유 배지에서 성장하는 관련 세포주(참조: Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28:31) 또는 DHFR이 결핍된 CHO 균주 DX-BI1(참조: Urlaub et al., 1980, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216-20), HeLa 세포, BHK(ATCC CRL 10) 세포주, 아프리카 녹색 원숭이(African green monkey) 신장 세포주 CV1로부터 유도된 CV1/EBNA 세포주(ATCC CCL 70)(참조: McMahan et al., 1991, EMBO J. 10:2821), 사람 배아 신장 세포, 예를 들면, 293,293 EBNA 또는 MSR 293, 사람 표피 A431 세포, 사람 Colo205 세포, 다른 형질전환된 영장류 세포주, 정상 두배수체 세포(normal diploid cell), 일차 조직의 시험관내 배양으로부터 유도된 세포주, 일차 체외이식편(explant), HL-60, U937, HaK 또는 저캇(Jurkat) 세포를 포함한다. 통상적으로, 숙주 세포는 이후 숙주 세포에서 발현될 수 있는 폴리펩타이드-인코딩 핵산으로 형질전환되거나 형질감염될 수 있는 배양된 세포이다. 어구 "재조합 숙주 세포"는 발현될 핵산으로 형질전환되거나 형질감염된 숙주 세포를 나타내는데 사용될 수 있다. 숙주 세포는 또한 핵산을 포함하지만, 조절 서열이 숙주 세포 내로 도입되어, 핵산과 작동가능하게 연결되지 않는 한 이를 목적하는 수준으로 발현시키지 않는 세포일 수 있다. 용어 숙주 세포는 특정 대상 세포 뿐만 아니라 상기 세포의 자손(progeny) 또는 잠재적 자손을 나타내는 것으로 이해된다. 특정 변형이, 예를 들면, 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 다음 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 상기 자손은 사실상 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 이는 여전히 본원에서 사용된 용어의 범위 내에 포함된다.
본 발명의 폴리펩타이드는 당해 분야에 공지된 임의의 표준 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 일례로, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 서열(예를 들면, cDNA)을 재조합 발현 벡터 내에 삽입하고, 발현을 촉진시키는 조건 하에 DNA 서열을 발현시킴으로써 재조합 DNA 방법에 의해 생성된다.
본원에 개시된 다양한 폴리펩타이드 중 임의의 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산은 화학적으로 합성될 수 있다. 코돈 사용은 세포에서의 발현을 개선시키도록 선택될 수 있다. 상기 코돈 사용은 선택된 세포 유형에 의존적일 것이다. 이. 콜라이 및 다른 박테리아, 뿐만 아니라 포유동물 세포, 식물 세포, 효모 세포 및 곤충 세포에 대해 특수화된 코돈 사용 패턴이 개발되었다. 예를 들면, 문헌[참조: Mayfield et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA. 2003 100(2):438-42; Sinclair et al. Protein Expr . Purif . 2002 (1):96-105; Connell N D. Curr . Opin . Biotechnol . 2001 12(5):446-9; Makrides et al. Microbiol. Rev. 1996 60(3):512-38; and Sharp et al. Yeast. 1991 7(7):657-78]을 참조한다.
핵산 조작을 위한 일반적인 기술은, 예를 들면, 참조로 본원에 포함된 문헌[참조: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2 ed., 1989, or F. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing and Wiley-Interscience: New York, 1987)] 및 주기적 업데이트에 기재되어 있다. 폴리펩타이드를 인코딩하는 DNA는 포유동물, 바이러스 또는 곤충 유전자로부터 유도된 적합한 전사 또는 번역 조절 요소에 작동가능하게 연결된다. 상기 조절 요소는 전사 프로모터, 전사를 조절하기 위한 임의의 작동자(operator) 서열, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 인코딩하는 서열, 및 전사 및 번역의 종료를 조절하는 서열을 포함한다. 통상적으로 복제 기점에 의해 부여되는 숙주에서 복제하는 능력, 및 형질전환주(transformant)의 인지를 용이하게 하는 선택 유전자가 추가로 포함된다.
재조합 DNA는 또한 단백질을 정제하는데 유용할 수 있는 임의의 유형의 단백질 태그 서열을 포함할 수 있다. 단백질 태그의 예는 히스티딘 태그, FLAG 태그, myc 태그, HA 태그 또는 GST 태그를 포함하지만, 이들에 제한되지는 않는다. 박테리아, 진균, 효모 및 포유동물 세포 숙주와 함께 사용하기에 적절한 클로닝 및 발현 벡터는 문헌[참조: Cloning Vectors: A Laboratory Manual, (Elsevier, N.Y., 1985)]에서 확인할 수 있다.
발현 작제물은 숙주 세포에 대해 적절한 방법을 사용하여 숙주 세포 내로 도입된다. 전기천공; 염화칼슘, 염화루비듐, 인산칼슘, DEAE-덱스트란, 또는 다른 물질을 사용한 형질감염; 미세사출법(microprojectile bombardment); 리포펙션; 및 감염(벡터가 감염원(infectious agent)인 경우)을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는, 숙주 세포 내로 핵산을 도입시키기 위한 다양한 방법이 당해 분야에 공지되어 있다. 적합한 숙주 세포는 원핵생물, 효모, 포유동물 세포 또는 박테리아 세포를 포함한다.
적합한 박테리아는 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예를 들면, 이. 콜라이 또는 바실러스 종(Bacillus spp .)을 포함한다. 효모, 바람직하게는 사카로마이세스(Saccharomyces) 종으로부터의 효모, 예를 들면, 에스 . 세레비시아에(S. cerevisiae )가 또한 폴리펩타이드의 생성에 사용될 수 있다. 다양한 포유동물 또는 곤충 세포 배양 시스템이 또한 재조합 단백질을 발현시키는데 사용될 수 있다. 곤충 세포에서 이종성 단백질의 생성을 위한 바큘로바이러스(Baculovirus) 시스템은 문헌[참조: Luckow and Summers, (Bio/Technology, 6:47, 1988)]에서 검토된다. 적합한 포유동물 숙주 세포주의 예는 내피 세포, COS-7 원숭이 신장 세포, CV-1, L 세포, C127, 3T3, 차이니즈 햄스터 난소(CHO), 사람 배아 신장 세포, HeLa, 293, 293T 및 BHK 세포주를 포함한다. 정제된 폴리펩타이드는 재조합 단백질을 발현시키는데 적합한 숙주/벡터 시스템을 배양함으로써 제조된다. 다수의 적용에서, 본원에 개시된 작은 크기의 다수의 폴리펩타이드는 발현을 위한 바람직한 방법으로서 이. 콜라이에서 발현될 것이다. 이후, 단백질은 배양 배지 또는 세포 추출물로부터 정제된다.
본원에 개시된 단백질은 또한 세포-번역 시스템을 사용하여 생성될 수 있다. 상기 목적을 위해, 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산은 시험관내 전사에서 mRNA를 생성시키는 것을 가능케 하고, 사용되는 특정 세포-비함유 시스템(진핵 세포, 예를 들면, 포유동물 또는 효모 세포-비함유 번역 시스템 또는 원핵 세포, 예를 들면, 박테리아 세포-비함유 번역 시스템)에서의 mRNA의 세포-비함유 번역을 가능케 하도록 변형되어야 한다.
CD147-결합 폴리펩타이드는 또한 화학적 합성(예를 들면, 문헌(참조: Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984, The Pierce Chemical Co., Rockford, I11.)에 기재된 방법에 의한 화학적 합성)에 의해 생성될 수 있다. 단백질에 대한 변형은 또한 화학적 합성에 의해 생성될 수 있다. 본 발명의 폴리펩타이드는 단백질 화학 분야에서 일반적으로 공지된 단백질에 대한 단리/정제 방법에 의해 정제될 수 있다. 비제한적인 예는 추출, 재결정화, 염석(salting out)(예를 들면, 황산암모늄 또는 황산나트륨을 사용한 염석), 원심분리, 투석, 초미세여과, 흡착 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 정상상(normal phase) 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 겔 여과, 겔 투과 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 전기천공, 역류 분배(countercurrent distribution) 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 정제 후, 폴리펩타이드는 상이한 완충제로 교환될 수 있고/있거나, 여과 및 투석을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는, 당해 분야에 공지된 다양한 방법 중 임의의 방법에 의해 농축될 수 있다.
정제된 폴리펩타이드는 바람직하게는 적어도 85% 순도, 더 바람직하게는 적어도 95% 순도, 가장 바람직하게는 적어도 98% 순도를 갖는다. 순도의 정확한 수치 값과 상관없이, 폴리펩타이드는 약제학적 생성물로 사용하기에 충분히 순수하다.
폴리펩타이드의 번역후 변형
특정 양태에서, 본 발명의 결합 폴리펩타이드는 번역후 변형을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 번역후 단백질 변형은 인산화, 아세틸화, 메틸화, ADP-리보실화, 유비퀴틴화, 당화, 카보닐화, 수모화(sumoylation), 비오티닐화 또는 폴리펩타이드 측쇄 또는 소수성 그룹의 첨가를 포함한다. 그 결과, 변형된 가용성 폴리펩타이드는 비-아미노산 요소, 예를 들면, 지질, 다당류 또는 단당류 및 포스페이트를 함유할 수 있다. 당화의 바람직한 형태는 하나 이상의 시알산 모이어티를 폴리펩타이드에 접합시키는 시알화(sialylation)이다. 시알산 모이어티는 용해도 및 혈청 반감기를 개선시키는 한편, 또한 단백질의 가능한 면역원성(immunogeneticity)을 감소시킨다(참조: Raju et al. Biochemistry. 2001 31; 40(30):8868-76).
한 양태에서, 본 발명의 가용성 폴리펩타이드의 변형된 형태는 본 발명의 가용성 폴리펩타이드를 비단백질성 중합체에 연결시키는 것을 포함한다. 한 양태에서, 중합체는 미국 특허 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192 또는 4,179,337에 기재된 방식의 폴리에틸렌 글리콜("PEG"), 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌이다.
PEG는 상업적으로 이용가능하거나 당해 분야에 익히 공지된 방법에 따라 에틸렌 글리콜의 개환 중합에 의해 제조될 수 있는 수용성 중합체이다(Sandler and Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, Vol. 3, pages 138-161). 용어 "PEG"는 PEG의 말단에서의 변형 또는 크기와 상관없이 임의의 폴리에틸렌 글리콜 분자를 포함하도록 광범위하게 사용되며, 이는 화학식 X--O(CH2CH2O)n-CH2CH2OH (1)로 표시될 수 있으며, 상기 화학식에서 n은 20 내지 2300이고, X는 H 또는 말단 변형, 예를 들면, C1 -4 알킬이다. 한 양태에서, 본 발명의 PEG는 한쪽 말단에서 하이드록시 또는 메톡시로 종료되며, 즉, X는 H 또는 CH3("메톡시 PEG")이다. PEG는 결합 반응에 필요하거나, 분자의 화학적 합성으로부터 발생하거나, 분자의 부분들의 최적 거리를 위한 스페이서인 추가의 화학적 그룹을 함유할 수 있다. 또한, 이러한 PEG는 함께 연결되는 하나 이상의 PEG 측쇄로 구성될 수 있다. 하나 초과의 PEG 쇄를 갖는 PEG는 다중아암(multiarmed) 또는 분지된 PEG로 지칭된다. 분지된 PEG는, 예를 들면, 글리세롤, 펜타에리트리올 및 소르비톨을 포함하는 다양한 폴리올로의 폴리에틸렌 옥사이드의 첨가에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 4-아암의 분지된 PEG는 펜타에리트리올 및 에틸렌 옥사이드로부터 제조될 수 있다. 분지된 PEG는, 예를 들면, EP-A 0 473 084 및 미국 특허 5,932,462에 기재되어 있다. PEG의 한 형태는 리신의 일차 아미노 그룹을 통해 연결된 2개의 PEG 측쇄(PEG2)를 포함한다(Monfardini et al., Bioconjugate Chem. 6 (1995) 62-69).
PEG-변형된 폴리펩타이드의 혈청 청소율(clearance rate)은 변형되지 않은 결합 폴리펩타이드의 청소율에 비해 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 심지어 90%까지 감소될 수 있다. PEG-변형된 폴리펩타이드는 변형되지 않은 단백질의 반감기에 비해 향상된 반감기(t1 /2)를 가질 수 있다. PEG-결합 폴리펩타이드의 반감기는 변형되지 않은 결합 폴리펩타이드의 반감기에 비해 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 400% 또는 500%, 또는 심지어 1000%까지 향상될 수 있다. 일부 양태에서, 단백질 반감기는 시험관 내에서, 예를 들면, 완충된 염수 용액 또는 혈청에서 결정된다. 다른 양태에서, 단백질 반감기는 생체내 반감기, 예를 들면, 동물의 혈청 또는 다른 체액 내의 단백질의 반감기이다.
치료 제형 및 투여 방식
본 발명은, 항-CD147 폴리펩타이드의 투여를 포함하는, 에스 . 아우레우스(S. aureus ) 감염을 치료하거나 예방하는 방법을 특징으로 한다. 투여 기술 및 투여량은 특정 폴리펩타이드의 유형 및 치료되는 특정 병태에 따라 달라지지만, 숙련가에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 관리 기관은, 치료제로 사용되는 단백질 시약이 허용가능하게 낮은 수준의 발열원을 갖도록 제형화되는 것을 요구한다. 따라서, 치료 제형은 일반적으로 이들이 적절한 관리 기관(예를 들면, FDA)에 의해 결정될 때 실질적으로 발열원을 함유하지 않거나, 적어도 허용가능한 수준을 초과하지 않는 발열원을 함유한다는 점에서 다른 제형과 구별될 것이다.
본 발명의 치료 조성물은 단위 투여 형태로 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제와 함께 투여될 수 있다. 투여는, 비제한적인 예로서, 비경구(예를 들면, 정맥내, 피하), 경구 또는 국소 투여일 수 있다. 또한, 본 발명의 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산을 사용한 임의의 유전자 요법 기술, 예를 들면, 네이키드(naked) DNA 전달, 재조합 유전자 및 벡터, 세포-기반 전달, 예를 들면, 환자의 세포의 생체외 조작 등이 사용될 수 있다.
조성물은 경구 투여를 위한 환제, 정제, 캡슐, 액체, 또는 지속 방출 정제; 또는 정맥내, 피하 또는 비경구 투여를 위한 액체; 국소 투여를 위한 겔, 로션, 연고, 크림, 또는 중합체 또는 다른 지속 방출 비히클의 형태일 수 있다.
제형의 제조를 위한 당해 분야에 익히 공지된 방법은, 예를 들면, 문헌[참조: "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20th ed., ed. A. R. Gennaro A R., 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.)]에서 확인된다. 비경구 투여를 위한 제형은, 예를 들면, 부형제, 멸균수, 염수, 폴리알킬렌 글리콜, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜, 식물 기원 오일, 또는 수소화된 나프탈렌을 함유할 수 있다. 생체적합성, 생분해성 락티드 중합체, 락티드/글리콜리드 공중합체, 또는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체가 화합물의 방출을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 나노입자 제형(예를 들면, 생분해성 나노입자, 고체 지질 나노입자, 리포솜)이 화합물의 생체분포(biodistribution)를 조절하기 위해 사용될 수 있다. 다른 잠재적으로 유용한 비경구 전달 시스템은 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체 입자, 삼투 펌프(osmotic pump), 이식가능한 주입 시스템 및 리포솜을 포함한다. 제형 내의 화합물의 농도는 투여될 약물의 투여량 및 투여 경로를 포함하는 다수의 요인에 따라 달라진다.
폴리펩타이드는 임의로 제약 업계에서 통상적으로 사용되는 약제학적으로 허용되는 염, 예를 들면, 비독성 산부가염 또는 금속 복합체로 투여될 수 있다. 산부가염의 예는 유기산, 예를 들면, 아세트산, 락트산, 파모산, 말레산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 석신산, 벤조산, 팔미트산, 수베르산, 살리실산, 타르타르산, 메탄설폰산, 톨루엔설폰산 또는 트리플루오로아세트산 등; 중합체 산, 예를 들면, 탄닌산, 카복시메틸 셀룰로스 등; 및 무기산, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산 등을 포함한다. 금속 복합체는 아연, 철 등을 포함한다. 일 예로, 폴리펩타이드는 열 안정성을 증가시키기 위해 아세트산나트륨의 존재 하에 제형화된다.
경구용 제형은 활성 성분(들)을 비-독성 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합물로 함유하는 정제를 포함한다. 이들 부형제는, 예를 들면, 불활성 희석제 또는 충전제(예를 들면, 수크로스 및 소르비톨), 윤활제, 활택제 및 접착방지제(예를 들면, 마그네슘 스테아레이트, 아연 스테아레이트, 스테아르산, 실리카, 수소화된 식물성 오일 또는 탈크)일 수 있다.
경구용 제형은 또한 저작성 정제, 또는 활성 성분이 불활성 고체 희석제와 혼합된 경질 젤라틴 캡슐 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로 제공될 수 있다.
치료적 유효 용량은 투여되는, 치료 효과를 야기하는 용량을 나타낸다. 정확한 용량은 치료될 장애에 의존적일 것이며, 공지된 기술을 사용하여 당업자에 의해 확인될 수 있다. 일반적으로, 폴리펩타이드는 1일 체중 1kg당 약 0.01μg 내지 약 50mg, 바람직하게는 1일 체중 1kg당 0.01mg 내지 약 30mg, 가장 바람직하게는 1일 체중 1kg당 0.1mg 내지 약 20mg으로 투여된다. 폴리펩타이드는 매일(예를 들면, 1일 1회, 2회, 3회 또는 4회) 또는 바람직하게는 더 적은 빈도(예를 들면, 매주, 격주, 3주에 1회, 매월, 또는 연 4회)로 제공될 수 있다. 또한, 당해 분야에 공지된 바와 같이, 연령 뿐만 아니라 체중, 전반적 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 약물 상호작용 및 질환의 중증도에 대한 조정이 필요할 수 있고, 이는 당업자에 의해 일상적인 실험으로 확인가능할 것이다.
예시적 용도
CD147 결합 폴리펩타이드는 단독으로 또는 하나 이상의 추가의 요법, 예를 들면, 화학요법, 방사선요법, 면역요법, 외과적 시술 또는 이들의 임의의 조합과 함께 투여될 수 있다. 장기간 요법은 상기 기재된 바와 같이 다른 치료 전략의 상황에서 보조 요법과 동일하게 가능하다.
상기 방법의 특정 양태에서, 하나 이상의 폴리펩타이드 치료제는 함께(동시에) 또는 상이한 시점에(순차적으로) 투여될 수 있다. 또한, 폴리펩타이드 치료제는 암을 치료하거나 간세포 암종 및 편평세포 암종을 포함하는 CD147-발현 종양, 및 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 비-종양 질환을 치료하기 위한 또 다른 유형의 화합물과 함께 투여될 수 있다.
특정 양태에서, 본 발명의 대상 항-CD147 항체 제제는 단독으로 사용될 수 있다.
특정 양태에서, 결합 폴리펩타이드 또는 이의 단편은 진단 목적을 위해 표지되거나 표지되지 않을 수 있다. 전형적으로, 진단 검정은 CD147에 대한 결합 폴리펩타이드의 결합으로부터 초래되는 복합체의 형성을 검출하는 것을 수반한다. 결합 폴리펩타이드 또는 단편은 항체와 유사하게 직접 표지될 수 있다. 방사성핵종, 형광물질, 효소, 효소 기질, 효소 보조인자, 효소 억제제 및 리간드(예를 들면, 비오틴, 합텐)을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는, 다양한 표지가 사용될 수 있다. 다수의 적절한 면역검정은 숙련가에게 공지되어 있다(참조: 예를 들면, 미국 특허 3,817,827; 3,850,752; 3,901,654; 및 4,098,876). 표지되지 않는 경우, 결합 폴리펩타이드는 검정, 예를 들면, 응집 검정(agglutination assay)에 사용될 수 있다. 표지되지 않은 결합 폴리펩타이드는 또한, 결합 폴리펩타이드를 검출하는데 사용될 수 있는 또 다른 (하나 이상의) 적합한 시약, 예를 들면, 결합 폴리펩타이드 또는 다른 적합한 시약(예를 들면, 표지된 단백질 A)과 반응성인 표지된 항체와 함께 사용될 수 있다.
한 양태에서, 본 발명의 결합 폴리펩타이드는 효소 면역검정에서 사용될 수 있으며, 여기서 대상 폴리펩타이드는 효소에 접합된다. CD147 단백질을 포함하는 생물학적 샘플이 대상 결합 폴리펩타이드와 배합되는 경우, 결합 폴리펩타이드와 CD147 단백질 사이에서 결합이 일어난다. 한 양태에서, CD147 단백질을 발현시키는 세포(예를 들면, 내피 세포)를 함유하는 샘플은 대상 항체와 배합되고, 결합 폴리펩타이드와 결합 폴리펩타이드에 의해 인식되는 CD147 단백질을 보유하는 세포 사이에 결합이 일어난다. 이들 결합된 세포는 결합되지 않은 시약으로부터 분리될 수 있고, 세포에 특이적으로 결합된 결합 폴리펩타이드-효소 접합체의 존재는, 예를 들면, 샘플을, 효소에 의해 작용될 때 색 또는 기타 검출가능한 변화를 초래하는 효소의 기질과 접촉시킴으로써 결정될 수 있다. 또 다른 양태에서, 대상 결합 폴리펩타이드는 표지되지 않을 수 있으며, 대상 결합 폴리펩타이드를 인식하는 제2 표지된 폴리펩타이드(예를 들면, 항체)가 첨가될 수 있다.
특정 측면에서, 생물학적 샘플에서 CD147 단백질의 존재를 검출하는데 사용하기 위한 키트가 또한 제조될 수 있다. 이러한 키트는 CD147 단백질 또는 상기 수용체의 일부에 결합하는 CD147 결합 폴리펩타이드, 뿐만 아니라 결합 폴리펩타이드와 수용체 단백질 또는 이의 일부 간의 복합체의 존재를 검출하는데 적합한 하나 이상의 보조적인 시약을 포함할 것이다. 본 발명의 폴리펩타이드 조성물은 단독으로 또는 다른 에피토프에 대해 특이적인 추가의 항체와 함께 동결된 형태로 제공될 수 있다. 표지되거나 표지되지 않을 수 있는 결합 폴리펩타이드 및/또는 항체는 보조 성분(예를 들면, 완충제, 예를 들면, Tris, 포스페이트 및 카보네이트, 안정화제, 부형제, 살생물제 및/또는 불활성 단백질, 예를 들면, 소 혈청 알부민)과 함께 키트 내에 포함될 수 있다. 예를 들면, 결합 폴리펩타이드 및/또는 항체는 보조 성분과 함께 동결된 혼합물로 제공될 수 있거나, 보조 성분은 사용자에 의한 배합을 위해 별도로 제공될 수 있다. 일반적으로 이들 보조 물질은 활성 결합 폴리펩타이드 또는 항체의 양을 기준으로 약 5중량% 미만으로 존재할 것이며, 통상적으로는 폴리펩타이드 또는 항체 농도를 기준으로 적어도 약 0.001중량%의 총량으로 존재할 것이다. 결합 폴리펩타이드에 결합할 수 있는 제2 항체가 사용되는 경우, 이러한 항체는 키트 내에, 예를 들면, 별도의 바이알 또는 용기로 제공될 수 있다. 제2 항체는, 존재하는 경우, 전형적으로 표지되고 상기 기재된 항체 제형과 유사한 방식으로 제형화될 수 있다.
폴리펩타이드 서열은 표준 1-글자 또는 3-글자 약어를 사용하여 표시된다. 달리 지시되지 않는 한, 각각의 폴리펩타이드 서열은 왼쪽에 아미노 말단을 가지며 오른쪽에 카복시 말단을 가지며; 각각의 단일 가닥 핵산 서열, 및 각각의 이중 가닥 핵산 서열의 상부 가닥은 왼쪽에 5' 말단을 가지며 오른쪽에 3' 말단을 갖는다. 특정 폴리펩타이드 서열은 또한 이것이 기준 서열과 어떻게 상이한지를 설명함으써 기재될 수 있다.
하기 용어는, 달리 지시되지 않는 한, 하기 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다:
용어 "펩타이드", "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 각각 펩타이드 결합에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 분자를 나타낸다. 이들 용어는, 예를 들면, 천연 및 인공 단백질, 단백질 서열의 단백질 단편 및 폴리펩타이드 유사체(예를 들면, 뮤테인, 변이체 및 융합 단백질) 뿐만 아니라 번역후 또는 그 밖에 공유적으로 또는 비공유적으로 변형된 단백질을 포함한다. 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질은 단량체 또는 중합체일 수 있다.
폴리펩타이드(예를 들면, 항체)의 "변이체"는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 하나 이상의 아미노산 잔기가 또 다른 폴리펩타이드 서열과 비교하여 상기 아미노산 서열 내에 삽입되고/되거나, 상기 아미노산 서열로부터 결실되고/되거나, 상기 아미노산 서열 내에 치환된다. 개시된 변이체는, 예를 들면, 융합 단백질을 포함한다.
폴리펩타이드의 "유도체"는, 예를 들면, 또 다른 화학적 모이어티(예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 또는 알부민, 예를 들면, 사람 혈청 알부민)로의 접합, 인산화 및 당화를 통해 화학적으로 변형된 폴리펩타이드(예를 들면, 항체)이다. 달리 지시되지 않는 한, 용어 "항체"는 2개의 전장 중쇄 및 2개의 전장 경쇄를 포함하는 항체에 더하여, 이의 유도체, 변이체, 단편, 및 뮤테인을 포함하며, 이의 예는 하기 기재된다.
"항원 결합 단백질"은 항원에 결합하는 부분, 및 임의로 항원 결합 부분이 항원에 대한 항원 결합 단백질의 결합을 촉진시키는 입체형태를 채택하는 것을 가능케 하는 스캐폴드 또는 프레임워크 부분을 포함하는 단백질이다. 항원 결합 단백질의 예는 항체, 항체 단편(예를 들면, 항체의 항원 결합 부분), 항체 유도체 및 항체 유사체를 포함한다. 항원 결합 단백질은, 예를 들면, 이식된 CDR 또는 CDR 유도체를 갖는 대안적 단백질 스캐폴드 또는 인공 스캐폴드를 포함할 수 있다. 상기 스캐폴드는, 예를 들면, 항원 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화시키도록 도입된 돌연변이를 포함하는 항체-유도 스캐폴드 뿐만 아니라, 예를 들면, 생체적합성 중합체를 포함하는 완전 합성 스캐폴드를 포함하지만, 이들에 제한되지는 않는다(참조: 예를 들면, Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, Volume 53, Issue 1:121-129; Roque et al., 2004, Biotechnol . Prog. 20:639-654). 또한, 펩타이드 항체 모방체("PAM") 뿐만 아니라 스캐폴드로서 피브로넥션 성분을 사용하는 항체 모방체를 토대로 한 스캐폴트가 사용될 수 있다.
항원 결합 단백질은, 예를 들면, 천연 발생 면역글로불린의 구조를 가질 수 있다. "면역글로불린"은 사량체 분자이다. 천연 발생 면역글로불린에서, 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩타이드 쇄로 구성되며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄"(약 25kDa) 및 하나의 "중쇄"(약 50 내지 70 kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부분은 항원 인식을 주로 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 초과의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각각의 쇄의 카복시-말단 부분은 효과기 기능을 주로 담당하는 불변 영역을 규정한다. 사람 경쇄는 카파 또는 람다 경쇄로 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로 분류되고, 이는 항체의 이소형을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 규정한다. 바람직하게는, 본원에 개시된 항-EGFR 항체는 중쇄 VH 및 경쇄 VL 아미노산 서열 내의 이들의 가변 도메인 영역 서열을 특징으로 한다. 바람직한 항체는 카파 IgG 항체인 A6이다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되고, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌[참조: Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989))]을 참조한다. 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 온전한 면역글로불린이 2개의 결합 부위를 갖도록 하는 항체 결합 부위를 형성한다.
"다중특이적 항체"는 하나 이상의 항원 상의 하나를 초과하는 에피토프를 인식하는 항체이다. 상기 유형의 항체의 서브클래스는 동일하거나 상이한 항원 상의 2개의 별개의 에피토프를 인식하는 "이중특이적 항체"이다.
항원 결합 단백질은 100 나노몰 이하의 해리 상수로 항원에 결합하는 경우 항원(예를 들면, 사람 CD147)에 "특이적으로 결합"한다.
"항원 결합 도메인", "항원 결합 영역" 또는 "항원 결합 부위"는 항원과 상호작용하고, 항원에 대한 항원 결합 단백질의 특이성 및 친화성에 기여하는 아미노산 잔기(또는 다른 모이어티)를 함유하는 항원 결합 단백질의 일부이다. 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 경우, 이는 이의 CDR 도메인 중 적어도 하나의 적어도 일부를 포함할 것이다.
"에피토프"는 항원 결합 단백질(예를 들면, 항체)에 의해 결합되는 분자의 부분이다. 에피토프는 분자의 비-인접 부분(예를 들면, 폴리펩타이드 내에서, 폴리펩타이드의 1차 서열에서는 인접하지 않지만, 폴리펩타이드의 3차 및 4차 구조의 상황에서 항원 결합 단백질에 의해 결합되기에 서로 충분히 가까운 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다.
2개의 폴리뉴클레오타이드 또는 2개의 폴리펩타이드 서열의 "상동성 퍼센트"는 디폴트 파라미터를 사용하는 GAP 컴퓨터 프로그램(GCG Wisconsin Package의 일부, version 10.3 (Accelrys, San Diego, Calif.))을 사용하여 서열을 비교함으로써 결정된다.
"숙주 세포"는 핵산을 발현시키도록 사용될 수 있는 세포이다. 숙주 세포는 원핵생물, 예를 들면, 이. 콜라이일 수 있거나, 이는 진핵생물, 예를 들면, 단세포 진핵생물(예를 들면, 효모 또는 다른 진균), 식물 세포(예를 들면, 담배 또는 토마토 식물 세포), 동물 세포(예를 들면, 사람 세포, 원숭이 세포, 햄스터 세포, 랫트 세포, 마우스 세포 또는 곤충 세포) 또는 하이브리도마일 수 있다. 숙주 세포의 예는 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주(ATCC CRL 1651)(Gluzman et al., 1981, Cell 23:175), L 세포, C127 세포, 3T3 세포(ATCC CCL 163), 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 이들의 유도체, 예를 들면, Veggie CHO 및 혈청-비함유 배지에서 성장하는 관련 세포주(Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28:31) 또는 DHFR이 결핍된 CHO 균주 DX-B11(Urlaub et al., 1980, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216-20), HeLa 세포, BHK(ATCC CRL 10) 세포주, 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포주 CV1로부터 유도된 CV1/EBNA 세포주(ATCC CCL 70)(McMahan et al., 1991, EMBO J. 10:2821), 사람 배아 신장 세포, 예를 들면, 293,293 EBNA 또는 MSR 293, 사람 표피 A431 세포, 사람 Colo205 세포, 다른 형질전환된 영장류 세포주, 정상 두배수체세포, 일차 조직의 시험관내 배양으로부터 유도된 세포주, 일차 체외이식편, HL-60, U937, HaK 또는 저캇 세포를 포함한다. 전형적으로, 숙주 세포는 이후에 숙주 세포에서 발현될 수 있는 폴리펩타이드-인코딩 핵산으로 형질전환되거나 형질감염될 수 있는 배양된 세포이다. 어구 "재조합 숙주 세포"는 발현될 핵산으로 형질전환되거나 형질감염된 숙주 세포를 나타내는데 사용될 수 있다. 숙주 세포는 또한 핵산을 포함하지만, 조절 서열이 숙주 세포 내에 도입되어, 핵산과 작동가능하게 연결되지 않는 한 목적하는 수준으로 이를 발현시키지 않는 세포일 수 있다. 용어 숙주 세포는 특정 대상 세포 뿐만 아니라 상기 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 나타내는 것으로 이해된다. 특정 변형이, 예를 들면, 돌연변이 또는 환경 영향으로 인해 다음 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 상기 자손은 사실상 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 이는 여전히 본원에서 사용되는 용어의 범위 내에 포함된다.
항원 결합 단백질
항원 결합 단백질(예를 들면, 항체, 항체 단편, 항체 유도체, 항체 뮤테인 및 항체 변이체)은 CD147에 결합하는 폴리펩타이드이다.
하나 이상의 항원 결합 단백질을 함유하는 올리고머가 CD147 길항제로서 사용될 수 있다. 올리고머는 공유적으로 연결되거나 비공유적으로 연결된 이량체, 삼량체 또는 더 고차의 올리고머의 형태일 수 있다. 2개 이상의 항원 결합 단백질을 포함하는 올리고머가 사용에 고려되며, 일 예는 동종이량체이다. 다른 올리고머는 이종이량체, 동종삼량체, 이종삼량체, 동종사량체, 이종사량체 등을 포함한다.
한 양태는 항원 결합 단백질에 융합된 펩타이드 모이어티 사이의 공유적 또는 비공유적 상호작용을 통해 연결된 다수의 항원 결합 단백질을 포함하는 올리고머에 관한 것이다. 이러한 펩타이드는 펩타이드 링커(스페이서), 또는 올리고머화를 촉진시키는 특성을 갖는 펩타이드일 수 있다. 류신 지퍼 및 항체로부터 유도된 특정 폴리펩타이드가 하기에 더욱 상세히 기재되는 바와 같은, 펩타이드에 부착된 항원 결합 단백질의 올리고머화를 촉진할 수 있는 펩타이드이다.
특정 양태에서, 올리고머는 2 내지 4개의 항원 결합 단백질을 포함한다. 올리고머의 항원 결합 단백질은 임의의 형태, 예를 들면, 상기 기재된 형태 중 어느 형태, 예를 들면, 변이체 또는 단편일 수 있다. 바람직하게는, 올리고머는 CD147 결합 활성을 갖는 항원 결합 단백질을 포함한다.
한 양태에서, 올리고머는 면역글로불린으로부터 유도된 폴리펩타이드를 사용하여 제조된다. 항체-유도된 폴리펩타이드의 다양한 부분(Fc 도메인 포함)에 융합된 특정 이종성 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질의 제조는, 예를 들면, 문헌(참조: Ashkenazi et al., 1991, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 88: 10535; Byrn et al., 1990, Nature 344:677; 및 Hollenbaugh et al., 1992 "Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", in Current Protocols in Immunology, Suppl. 4, pages 10.19.1-10.19.11)에 기재되었다.
한 양태는 항체의 Fc 영역에 항-CD147 항체의 CD147 결합 단편을 융합시켜 제작된 2개의 융합 단백질을 포함하는 이량체에 관한 것이다. 이량체는, 예를 들면, 적절한 발현 벡터 내로 융합 단백질을 인코딩하는 유전자 융합물을 삽입하고, 재조합 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포에서 유전자 융합물을 발현시키고, 발현된 융합 단백질이 항체 분자와 훨씬 더 닮게 조립되는 것을 가능케 하여, Fc 모이어티 사이에 사슬간 이황화 결합을 형성하여 이량체를 산출함으로써 제조될 수 있다.
용어 "Fc 폴리펩타이드"는 항체의 Fc 영역으로부터 유도된 폴리펩타이드의 천연 및 뮤테인 형태를 포함한다. 이량체화를 촉진시키는 힌지 영역을 함유하는 상기 폴리펩타이드의 절단된(truncated) 형태가 또한 포함된다. Fc 모이어티를 포함하는 융합 단백질(및 이로부터 형성된 올리고머)은 단백질 A 또는 단백질 G 컬럼 상에서의 친화성 크로마토그래피에 의한 용이한 정제의 장점을 제공한다.
올리고머 항원 결합 단백질을 제조하기 위한 또 다른 방법은 류신 지퍼의 사용을 포함한다. 류신 지퍼 도메인은 이들이 발견되는 단백질의 올리고머화를 촉진시키는 펩타이드이다. 류신 지퍼는 본래 여러 DNA-결합 단백질에서 확인되었고(Landschulz et al., 1988, Science 240:1759), 이는 이후에 다양한 상이한 단백질에서 발견되었다. 공지된 류신 지퍼는 이량체화되거나 삼량체화되는 천연 발생 펩타이드 및 이의 유도체이다. 가용성 올리고머 단백질을 생성하는데 적합한 류신 지퍼 도메인의 예는 WO 94/10308에 기재되어 있고, 폐 계면활성제 단백질 D(lung surfactant protein D; SPD)로부터 유도된 류신 지퍼는 문헌[참조: Hoppe et al., 1994, FEBS Letters 344:191]에 기재되어 있다. 류신 지퍼에 융합된 이종성 단백질의 안정한 삼량체화를 가능케 하는 변형된 류신 지퍼의 사용은 문헌[참조: Fanslow et al., 1994, Semin . Immunol . 6:267-78]에 기재되어 있다. 한 접근법에서, 류신 지퍼 펩타이드에 융합된 항-CD147 항체 단편 또는 유도체를 포함하는 재조합 융합 단백질은 적합한 숙주 세포에서 발현되고, 형성된 가용성 올리고머 항-CD147 항체 단편 또는 유도체는 배양 상청액으로부터 회수된다.
본 발명의 항원 결합 단백질의 항원-결합 단편은 통상적인 기술에 의해 제조될 수 있다. 상기 단편의 예는 Fab 및 F(ab')2 단편을 포함하지만, 이들에 제한되지는 않는다.
본 발명은 CD147에 결합하는 모노클로날 항체를 제공한다.
모노클로날 항체는 당해 분야에 공지된 임의의 기술을 사용하여, 예를 들면, 면역화 스케줄의 완료 후에 트랜스제닉(transgenic) 동물로부터 수거된 비장 세포를 불멸화(immortalizing)시킴으로써 생성될 수 있다. 비장 세포는 당해 분야에 공지된 임의의 기술을 사용하여, 예를 들면, 이들을 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마를 생성시킴으로써 불멸화될 수 있다. 하이브리도마-생성 융합 절차에서 사용하기 위한 골수종 세포는 바람직하게는 비-항체-생성 골수종 세포이고, 높은 융합 효율을 가지며, 이들을 목적하는 융합된 세포(하이브리도마)만의 성장을 지지하는 특정 선택 배지에서 성장할 수 없게 만드는 효소 결핍을 갖는다. 마우스 융합에서 사용하기 위한 적합한 세포주의 예는 Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NS1/1.Ag 4 1, Sp210-Agl4, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 및 S194/5XX0 Bul을 포함하고; 랫트 융합물에서 사용된 세포주의 예는 R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F 및 48210을 포함한다. 세포 융합물에 유용한 다른 세포주는 U-266, GM1500-GRG2, LICR-LON-HMy2 및 UC729-6이다.
CD147에 대해 유도된 항원 결합 단백질은, 예를 들면, 시험관내 또는 생체내에서 CD147 폴리펩타이드의 존재를 검출하기 위한 검정에서 사용될 수 있다. 항원 결합 단백질은 또한 면역친화성 크로마토그래피에 의해 CD147 단백질을 정제하는데 사용될 수 있다. 항원 결합 단백질을 차단하는 것이 본원에 개시된 방법에서 사용될 수 있다. CD147 길항제로서 기능하는 상기 항원 결합 단백질은 다양한 암을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 임의의 CD147-유도성 병태를 치료하는데 사용될 수 있다.
항원 결합 단백질은 시험관내 절차에서 사용될 수 있거나, CD147-유도성 생물학적 활성을 억제하기 위해 생체내 투여될 수 있다. 예가 본원에 제공된, CD147의 단백질분해 활성화에 의해 (직접적으로 또는 간접적으로) 유발되거나 악화된 장애가 이에 따라 치료될 수 있다. 한 양태에서, 본 발명은 CD147-유도성 생물학적 활성을 감소시키는데 효과적인 양의 CD147 차단 항원 결합 단백질을 이를 필요로 하는 포유동물에게 생체내 투여하는 것을 포함하는 치료 방법을 제공한다.
항원 결합 단백질은 CD147의 생물학적 활성을 억제하는 완전 사람 모노클로날 항체를 포함한다.
항원 결합 단백질은 다수의 통상적인 기술 중 어느 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면, 이들은, 이들을 자연스럽게 발현시키는 세포로부터 정제될 수 있거나(예를 들면, 항체는 이를 생성하는 하이브리도마로부터 정제될 수 있다), 당해 분야에 공지된 임의의 기술을 사용하여 재조합 발현 시스템에서 생성될 수 있다[참조: 예를 들면, Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet et al. (eds.), Plenum Press, New York (1980); and Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Land (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1988)].
당해 분야에 공지된 임의의 발현 시스템이 본 발명의 재조합 폴리펩타이드를 제조하는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 숙주 세포는 목적하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 DNA를 포함하는 재조합 발현 벡터로 형질전환된다. 사용될 수 있는 숙주 세포 중에는 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵 세포가 있다. 원핵생물은 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예를 들면, 이. 콜라이 또는 바실러스(bacilli)를 포함한다. 더 고등한 진핵 세포는 곤충 세포 및 포유동물 기원의 확립된 세포주를 포함한다. 적합한 포유동물 숙주 세포주의 예는 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주(ATCC CRL 1651)(Gluzman et al., 1981, Cell 23:175), L 세포, 293 세포, C127 세포, 3T3 세포(ATCC CCL 163), 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, HeLa 세포, BHK(ATCC CRL 10) 세포주, 및 문헌[참조: McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821]에 의해 기재된 바와 같은 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포주 CV1로부터 유도된 CV1/EBNA 세포주(ATCC CCL 70)를 포함한다. 박테리아, 진균, 효모 및 포유동물 세포 숙주와 함께 사용하기 위해 적절한 클로닝 및 발현 벡터는 문헌[참조: Pouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., 1985)]에 기재되어 있다.
형질전환된 세포는 폴리펩타이드의 발현을 촉진시키는 조건 하에 배양될 수 있으며, 폴리펩타이드는 통상적인 단백질 정제 절차에 의해 회수될 수 있다. 하나의 상기 정제 절차는, 예를 들면, 매트릭스에 결합된 CD147의 전부 또는 일부(예를 들면, 세포외 도메인)를 갖는 매트릭스 상에서의 친화성 크로마토그래피의 사용을 포함한다. 본원에서 사용하기 위해 고려되는 폴리펩타이드는 내인성 오염 물질을 실질적으로 함유하지 않는 실질적으로 균질한 재조합 포유동물 항-CD147 항체 폴리펩타이드를 포함한다.
항원 결합 단백질은 다수의 공지된 기술 중 어느 기술에 의해 제조되고, 목적하는 특성에 대해 스크리닝될 수 있다. 특정 기술은 목적하는 항원 결합 단백질(예를 들면, 항-CD147 항체)의 폴리펩타이드 쇄(또는 이의 일부)를 인코딩하는 핵산을 단리하고, 재조합 DNA 기술을 통해 핵산을 조작하는 것을 포함한다. 핵산은 또 다른 목적하는 핵산에 융합될 수 있거나, 예를 들면, 하나 이상의 아미노산 잔기를 첨가하거나, 결실시키거나, 치환시키도록 (예를 들면, 돌연변이유발 또는 다른 통상적 기술에 의해) 변경될 수 있다.
단일쇄 항체는 아미노산 브릿지(짧은 펩타이드 링커)를 통해 중쇄 및 경쇄 가변 도메인(Fv 영역) 단편을 연결시켜 단일 폴리펩타이드 쇄를 형성함으로써 형성될 수 있다. 상기 단일쇄 Fv(scFv)는 2개의 가변 도메인 폴리펩타이드(VL 및 VH)를 인코딩하는 DNA 사이의 펩타이드 링커를 인코딩하는 DNA를 융합시킴으로써 제조되었다. 수득된 폴리펩타이드는 스스로 다시 폴딩되어 항원-결합 단량체를 형성할 수 있거나, 이들은 2개의 가변 도메인 사이의 가요성 링커의 길이에 따라 다량체(예를 들면, 이량체, 삼량체 또는 사량체)를 형성할 수 있다(Kortt et al., 1997, Prot . Eng . 10:423; Kortt et al., 2001, Biomol . Eng. 18:95-108). 상이한 VL 및 VH-포함 폴리펩타이드를 조합함으로써, 상이한 에피토프에 결합하는 다량체 scFv를 형성할 수 있다(Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng . 18:31-40). 단일쇄 항체의 생성을 위해 개발된 기술은 문헌[U.S. Patent 4,946,778; Bird, 1988, Science 242:423; Huston et al., 1988, Proc . Natl. Acad . Sci . USA 85:5879; Ward et al., 1989, Nature 334:544, de Graaf et al., 2002, Methods Mol . Biol . 178:379-87]에 기재된 것들을 포함한다.
목적하는 항체로부터 상이한 서브클래스 또는 이소형의 항체를 유도하는 기술, 즉, 서브클래스 스위칭(subclass switching)이 공지되어 있다. 따라서, IgG 항체는, 예를 들면, IgM 항체로부터 유도될 수 있고, 반대로 IgM 항체는 IgG 항체로부터 유도될 수 있다. 이러한 기술은 제공된 항체(모 항체)의 항원-결합 특성을 갖지만, 또한 모 항체의 것과 상이한 항체 이소형 또는 서브클래스와 관련된 생물학적 특성을 나타내는 신규한 항체의 제조를 가능하게 한다. 재조합 DNA 기술이 사용될 수 있다. 특정 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 클로닝된 DNA, 예를 들면, 목적하는 이소형의 항체의 불변 도메인을 인코딩하는 DNA가 상기 절차에서 사용될 수 있다(Lantto et al., 2002, Methods Mol . Biol . 178:303-16). 더욱이, IgG4가 바람직한 경우, IgG4 항체에서 불균질성을 발생시킬 수 있는 H 쇄내 디설파이드 결합을 형성하는 경향을 완화시키기 위해 힌지 영역에 점 돌연변이(CPSCP->CPPCP)를 도입하는 것이 또한 바람직할 수 있다(Bloom et al., 1997, Protein Science 6:407).
특정 양태에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 적어도 106의 CD147에 대한 결합 친화도(Ka)를 갖는다. 다른 양태에서, 항원 결합 단백질은 적어도 107, 적어도 108, 적어도 109 또는 적어도 1010의 Ka를 나타낸다. 또 다른 양태에서, 항원 결합 단백질은 본원의 실시예에 기재된 항체의 Ka와 실질적으로 동일한 Ka를 나타낸다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 CD147로부터 낮은 해리 속도를 갖는 항원 결합 단백질을 제공한다. 한 양태에서, 항원 결합 단백질은 1 X 10-4 내지 10-1 또는 그 미만의 Koff를 갖는다. 또 다른 양태에서, Koff는 5 X 10-5 내지 10-1 또는 그 미만이다. 또 다른 양태에서, Koff는 본원에 기재된 항체와 실질적으로 동일하다. 또 다른 양태에서, 항원 결합 단백질은 본원에 기재된 항체와 실질적으로 동일한 Koff로 CD147에 결합한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 CD147의 활성을 억제하는 항원 결합 단백질을 제공한다. 한 양태에서, 항원 결합 단백질은 1000nM 이하의 IC50을 갖는다. 또 다른 양태에서, IC50은 100nM 이하이고; 또 다른 양태에서, IC50은 10nM 이하이다. 또 다른 양태에서, IC50은 본원의 실시예에 기재된 항체의 IC50과 실질적으로 동일하다. 또 다른 양태에서, 항원 결합 단백질은 본원에 기재된 항체와 실질적으로 동일한 IC50으로 CD147의 활성을 억제한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 세포의 표면상에서 발현된 사람 CD147에 결합하고, 이렇게 결합되는 경우, 세포 표면상의 CD147 양의 상당한 감소를 유발하지 않으면서 세포에서 CD147 시그널링 활성을 억제하는 항원 결합 단백질을 제공한다. 세포의 표면상 및/또는 내부에서의 CD147의 양을 결정하거나 평가하기 위한 임의의 방법이 사용될 수 있다. 다른 양태에서, CD147-발현 세포에 대한 항원 결합 단백질의 결합은 세포-표면 CD147의 약 75%, 50%, 40%, 30%, 20%, 15%, 10%, 5%, 1% 또는 0.1% 미만이 내재화되도록 한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 (예를 들면, 사람 피험자에게 투여되는 경우) 시험관내 또는 생체내에서 적어도 1일의 반감기를 갖는 항원 결합 단백질을 제공한다. 한 양태에서, 항원 결합 단백질은 적어도 3일의 반감기를 갖는다. 또 다른 양태에서, 항원 결합 단백질은 4일 이상의 반감기를 갖는다. 또 다른 양태에서, 항원 결합 단백질은 8일 이상의 반감기를 갖는다. 또 다른 양태에서, 항원 결합 단백질은 유도체화되지 않거나 변형되지 않은 항원 결합 단백질과 비교하여 더 긴 반감기를 갖도록 유도체화되거나 변형된다. 또 다른 양태에서, 항원 결합 단백질은, 본원에 참고로 포함된, WO00/09560에 기재된 바와 같이, 혈청 반감기를 증가시키기 위해 하나 이상의 점 돌연변이를 함유한다.
본 발명은 추가로 다중특이적 항원 결합 단백질, 예를 들면, 이중특이적 항원 결합 단백질, 예를 들면, 2개의 상이한 항원 결합 부위 또는 영역을 통해 CD147의 2개의 상이한 에피토프, 또는 CD147의 에피토프 및 또 다른 분자의 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질을 제공한다. 더욱이, 본원에 개시된 이중특이적 항원 결합 단백질은 본원에-기재된 항체 중 하나로부터의 CD147 결합 부위, 및 다른 공개공보를 참조하여 본원에 기재된 것들을 포함하는, 본원에-기재된 항체 중 또 다른 것으로부터의 제2 CD147 결합 영역을 포함할 수 있다. 대안적으로, 이중특이적 항원 결합 단백질은 본원에 기재된 항체 중 하나로부터의 항원 결합 부위, 및 당해 분야에 공지된 또 다른 CD147 항체, 또는 공지된 방법 또는 본원에 기재된 방법에 의해 제조된 항체로부터의 제2 항원 결합 부위를 포함할 수 있다.
이중특이적 항체를 제조하는 다수의 방법이 당해 분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 문헌(참조: Milstein et al., 1983, Nature 305:537)에 기재된 하이브리드-하이브리도마, 및 항체 단편의 화학적 커플링(Brennan et al., 1985, Science 229:81; Glennie et al., 1987, J. Immunol . 139:2367; U.S. Patent 6,010,902)의 사용을 포함한다. 더욱이, 이중특이적 항체는 재조합 수단을 통해, 예를 들면, 류신 지퍼 모이어티(즉, 이종이량체를 우선적으로 형성하는 Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 모이어티; Kostelny et al., 1992, J. Immunol . 148: 1547) 또는 미국 특허 5,582,996에 기재된 다른 자물쇠-열쇠(lock and key) 상호작용 도메인 구조를 사용함으로써 생성될 수 있다. 추가의 유용한 기술은 미국 특허 5,959,083; 및 5,807,706에 기재된 것들을 포함한다.
또 다른 측면에서, 항원 결합 단백질은 항체의 유도체를 포함한다. 유도체화된 항체는, 특정 용도에서 반감기의 증가와 같이 항체에 목적하는 특성을 부여하는 임의의 분자 또는 물질을 포함할 수 있다. 유도체화된 항체는, 예를 들면, 검출가능한(또는 표지된) 모이어티(예를 들면, 방사성, 비색, 항원 또는 효소 분자), 검출가능한 비드(예를 들면, 자기 또는 전자고밀도(electrodense)(예를 들면, 금) 비드), 또는 또 다른 분자에 결합하는 분자(예를 들면, 비오틴 또는 스트렙타비딘), 치료 또는 진단 모이어티(예를 들면, 방사성, 세포독성, 또는 약제학적 활성 모이어티), 또는 특정 용도(예를 들면, 피험자, 예를 들면, 사람 피험자로의 투여 또는 다른 생체내 또는 시험관내 용도)를 위한 항체의 적합성을 증가시키는 분자를 포함할 수 있다. 항체를 유도체화시키기 위해 사용될 수 있는 분자의 예는 알부민(예를 들면, 사람 혈청 알부민) 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. 항체의 알부민-결합된 유도체 및 페길화된 유도체는 당해 분야에 익히 공지된 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 한 양태에서, 항체는 트랜스티레틴(transthyretin; TTR) 또는 TTR 변이체에 접합되거나 또는 달리 연결된다. TTR 또는 TTR 변이체는, 예를 들면, 덱스트란, 폴리(n-비닐 피롤리돈), 폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 폴리올 및 폴리비닐 알코올로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화합물질로 화학적으로 변형될 수 있다.
모든 확인된 mAb는 ELISA 스크리닝을 사용할 때 재조합 사람 및 뮤린 CD147 단백질(R&D Systems 또는 Sino Biologics로부터 상업적으로 이용가능함)과 교차반응성이었다. OctetRed 기기를 사용하여, 개시된 mAb는 재조합 사람 CD147 단백질에 대한 친화성에 대해 평가되었고, 친화성 데이타를 토대로 등급화되었다. 개시된 클론은 사람 CD147에 대해 적어도 한 자릿수 나노몰 친화성을 입증하였다.
바람직하게는, 개시된 항체는 흡입에 의해 투여되지만, 완전 IgG 항체의 에어로졸화는 이들의 분자 크기(~150kDa)로 인해 제한적인 것으로 입증될 수 있다. 이용가능한 상업적 에어로졸화 디바이스를 최대화하기 위해, 더 작은 Fab 단편을 필요로 할 수 있다. 이러한 경우에, 본 발명자들은 또한 모 IgG 분자로부터 Fab 단편을 생성할 필요가 있을 수 있다. 따라서, 본 발명자들은 Fab 단편의 생성을 위한 표준 효소-기반 소화 방법을 사용하여 초기 연구를 수행할 것이며, 이후 완전 IgG 분자와 병행하여 특성화될 것이다.
실시예 1
이 실시예는 재조합 마우스 CD147에 대한 CD147 결합제의 교차-반응성의 분석을 제공한다. 간략히, NI-NTA ELISA 플레이트는 재조합 사람 또는 마우스 CD147로 포획되었고, 이어서 항-CD147 항체와 항온배양되었다. 항체의 결합을 측정했다. 도 1 및 2는 7개의 항-CD147 항체가 사람 또는 마우스 CD147 모두에 결합할 수 있음을 보여준다.
실시예 2
이 실시예는, 유동 세포 분석법에 의해 검정될 때, 사람 암세포 상에서 발현된 내인성 사람 CD147에 대한 항-CD147 항체의 결합을 설명한다. 항체에 대한 EC50 값은 하기와 같이 결정되었다.
CD147 발현 세포(PC-3, A549 또는 K562)를 효소-비함유 세포 해리 완충제(GIBCO)로 수거하고, V-기저 96 웰-플레이트로 옮겼다(50,000개 세포/웰). 세포를 FACS 완충제(PBS+ 2% FBS) 중에서 항-CD147 항체의 연속 희석물과 함께 얼음 위에서 45분 동안 항온배양했다. FACS 완충제로 2회 세척 후, 피코에리트린 접합된 항-사람 IgG(γ-쇄 특이적)의 1:1000 희석물을 첨가하고, 20분 동안 항온배양했다. 최종 세척 후, 형광 강도를 인텔리사이트(Intellicyt) 고속 대량 유동 세포 측정기(High Throughput Flow Cytometer; HTFC) 상에서 측정했다. 데이타를 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism) 소프트웨어 및 비-선형 회귀 피트(non-linear regression fit)를 사용하여 분석했다. 데이타 포인트는 양성으로 표지된 세포의 중간 형광 강도(MFI) +/- 표준 오차로 도시된다. EC50 값은 CD147 발현 세포에 대한 CD147 항체의 최대 결합의 50%를 달성하기 위한 항체의 농도로서 보고된다.
도 3a 내지 3c 및 표 1에 나타난 바와 같이, 선택된 항체는 다양한 친화성으로 발현된 세포 CD147에 결합했고, 0.6 내지 168nM 범위의 EC50 값을 나타냈다. 표 1: 표 1은 CD147을 발현시키는 세포에 대한 항-CD147 항체의 결합 특성(EC50, 나노몰.L-1)을 요약한다.
Figure pct00001
실시예 2
이 실시예는 2차 항체-약물 접합 기술(*)을 사용하는 세포독성 검정에서 항-CD147 항체의 평가를 보여주는 시험관내 데이타를 설명한다. 이 실시예는 항체 약물 접합체로서 사용될 항-CD147의 가능성을 입증한다.
* "ADC 발견을 위한 툴로서의 2차 항체-약물 접합체(Secondary Antibody-Drug Conjugates As Tools for ADC Discovery)". Helen Mao, Poster (IBC 24th Annual, 2013).
CD147 발현 세포(A549 또는 PC-3)를 효소-비함유 세포 해리 완충제(GIBCO)로 수거하고, 백색 96-웰 투명 기저 플레이트(90ul 중 1,000개 세포/웰) 내로 시딩하고, 37℃에서 밤새 부착시켰다. 항체를 세포 배양 배지에서 단백질G-DM1(Concortis Biosystems)과 1:4 몰 비로 미리 복합체화했다. 실온에서 10분 후, 항체-단백질G-DM1 복합체의 연속 희석물을 세포 배양 배지에서 제조하고, 실온에서 10분 이상 항온배양하고, 세포(10μl/웰)에 3중으로 첨가했다. 37℃에서 96시간 항온배양 후, 세포 증식을 하기와 같이 분석했다: 100μl의 셀 타이터 글로(Cell Titer Glo) 완충제(Promega)를 각 웰에 첨가했다. 플레이트를 실온에서 20분 동안 진탕시키면서 항온배양했다. 이후 발광 신호를 플렉스스테이션(Flexstation) 3 플레이트 판독기(Molecular Device) 상에서 측정했다. 데이타를 상대 발광 단위로 보고했다. 용량-반응 곡선을 그래프패드 프리즘에서 생성했고, IC50 값을 비-선형 회기 피트(log(억제제) 대 반응 - 가변 기울기 방정식)를 사용하여 계산했다.
도 2에 나타난 결과는, 항-CD147 항체, 특히 C4sh1A6 및 C4sh1B2가 DM-1과 같은 세포독소와 복합체화되는 경우 세포 사멸을 유도할 수 있음을 나타낸다. 이는 CD147 항체의 항체-약물 접합체로서의 가능성을 설명한다.
서열 목록
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
<110> SORRENTO THERAPEUTICS, INC. <120> ANTIBODY THERAPEUTICS THAT BIND CD147 <130> CD147-1A <150> US 61/980,544 <151> 2014-04-16 <160> 64 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 115 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 1 Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr 20 25 30 Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 40 45 Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 50 55 60 Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Asn Leu Phe Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 2 Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr 20 25 30 Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 3 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Thr Tyr Asn Gly Asn Thr Leu Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Thr Asp Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 4 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 4 Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Asp Lys Pro Pro Lys Leu 35 40 45 Ile Ile Tyr Tyr Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Tyr Arg Ser Asn 85 90 95 Thr Asn Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 5 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 5 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Ser Glu 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Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 42 <211> 115 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 42 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Trp Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gln Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 43 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 43 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ala Thr Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr 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Ser Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Gly Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Met Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 46 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 46 Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Leu Val Ala Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Ser His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110 <210> 47 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 47 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 48 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 48 Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr 20 25 30 Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Glu Val Arg Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Ala Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Phe Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 49 <211> 115 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 49 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Trp Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gln Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 50 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 50 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Thr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Phe Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Met 85 90 95 Arg Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 51 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 51 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ser Thr Asn Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 52 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 52 Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ile Asn Ser 85 90 95 Gly Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 53 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 53 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ala Asp Val Gly His Tyr 20 25 30 Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Thr Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 54 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 54 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser His 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Ser Glu Ala Tyr Tyr His Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 55 Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu 85 90 95 Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 56 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 56 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Asn Ile Lys Thr Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu His Ser Gly Val Thr Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 57 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 57 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Lys Pro Ala Asn Gly Asp Ile Thr Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Gly Asp Ile Ser Ala Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Gly Gly Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 58 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 58 Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Trp Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ala Tyr 20 25 30 Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Thr Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 59 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 59 Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asp Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Phe Thr Ser Arg 85 90 95 Thr Thr Pro Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 60 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 60 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys Asn Ala Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Trp Val Val His Ala Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 61 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 61 Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Ser Asn 85 90 95 Thr Leu Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 <210> 62 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 62 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr 20 25 30 Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Leu Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 63 <211> 115 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 63 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Trp Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gln Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 64 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapians <400> 64 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His His Pro Asp Arg Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Leu Tyr His Val Thr Gln Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Thr 85 90 95 Ser Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 105 110

Claims (12)

  1. 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, CD147 에피토프에 적어도 10-6M의 결합 친화도로 결합하는 IgG 부류의 완전 사람 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체가 서열 번호 1/서열 번호 2(본원에서 C4R1A2로 지칭됨), 서열 번호 3/서열 번호 4(본원에서 C4R1A5로 지칭됨), 서열 번호 5/서열 번호 6(본원에서 C4R1A6으로 지칭됨), 서열 번호 7/서열 번호 8(본원에서 C4R1A8로 지칭됨), 서열 번호 9/서열 번호 10(본원에서 C4R1A9로 지칭됨), 서열 번호 11/서열 번호 12(본원에서 C4R1B2로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 14(본원에서 C4R1C10으로 지칭됨), 서열 번호 15/서열 번호 16(본원에서 C4R1C11로 지칭됨), 서열 번호 17/서열 번호 18(본원에서 C4R1C3으로 지칭됨), 서열 번호 19/서열 번호 20(본원에서 C4R1D11로 지칭됨), 서열 번호 21/서열 번호 22(본원에서 C4R1F12로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 25(본원에서 C4R1G1로 지칭됨), 서열 번호 26/서열 번호 27(본원에서 C4R1G4로 지칭됨), 서열 번호 28/서열 번호 29(본원에서 C4R1G7로 지칭됨), 서열 번호 30/서열 번호 31(본원에서 C4R1H10으로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 32(본원에서 C4R1H11로 지칭됨), 서열 번호 13/서열 번호 33(본원에서 C4R1H4로 지칭됨), 서열 번호 34/서열 번호 35(본원에서 C4sh1A1로 지칭됨), 서열 번호 36/서열 번호 37(본원에서 C4sh1A2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 39(본원에서 C4sh1A3으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 40(본원에서 C4sh1A4로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 42(본원에서 C4sh1A5로 지칭됨), 서열 번호 43/서열 번호 44(본원에서 C4sh1A6으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 45(본원에서 C4sh1A9로 지칭됨), 서열 번호 46/서열 번호 47(본원에서 C4sh1B10으로 지칭됨), 서열 번호 48/서열 번호 49(본원에서 C4sh1B11로 지칭됨), 서열 번호 50/서열 번호 51(본원에서 C4sh1B2로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 52(본원에서 C4sh1C10으로 지칭됨), 서열 번호 53/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C5로 지칭됨), 서열 번호 41/서열 번호 54(본원에서 C4sh1C6으로 지칭됨), 서열 번호 56/서열 번호 57(본원에서 C4sh1E10으로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 58(본원에서 C4sh1E12로 지칭됨), 서열 번호 59/서열 번호 60(본원에서 C4sh1F11로 지칭됨), 서열 번호 38/서열 번호 61(본원에서 C4sh1G4로 지칭됨), 서열 번호 62/서열 번호 63(본원에서 C4sh1H9로 지칭됨) 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, 완전 사람 항체.
  3. 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역을 갖는 Fab 완전 사람 항체 단편으로서, 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, Fab 완전 사람 항체 단편.
  4. 제3항에 있어서, 상기 항체가 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, 완전 사람 항체 Fab 단편.
  5. 중쇄로부터의 가변 도메인 영역, 경쇄로부터의 가변 도메인 영역, 및 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 영역을 연결하는 펩타이드 링커를 갖는 단일쇄 사람 항체로서, 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, 단일쇄 사람 항체.
  6. 제5항에 있어서, 상기 단일쇄 완전 사람 항체가 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, 완전 사람 단일쇄 항체.
  7. 제5항에 있어서, 상기 완전 사람 단일쇄 항체가 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 상기 단일쇄 완전 사람 항체가 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51 , 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, 완전 사람 단일쇄 항체.
  8. 유효량의 항-CD147 폴리펩타이드를 투여함을 포함하는, 간세포 암종(hepatocellular carcinoma) 및 편평세포 암종(squamous carcinoma)을 포함하는 CD147-발현 종양, 및 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 실험 폐 손상(experimental lung injury), 죽상경화증(atherosclerosis), C형 간염 바이러스(hepatitis C virus)에 의해 유도된 만성 간 질환(chronic liver disease), 허혈 심근 손상(ischemic myocardial injury) 및 심부전(heart failure)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 비-종양 질환(non-oncology disease)을 치료하는 방법으로서, 상기 항-CD147 폴리펩타이드는 CD147 에피토프에 적어도 10-6M의 결합 친화도로 결합하는, IgG 부류의 완전 사람 항체; 중쇄로부터의 가변 도메인 영역 및 경쇄로부터의 가변 도메인 영역을 갖는 Fab 완전 사람 항체 단편; 중쇄로부터의 가변 도메인 영역, 경쇄로부터의 가변 도메인 영역, 및 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 영역을 연결하는 펩타이드 링커를 갖는 단일쇄 사람 항체; 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되며;
    상기 완전 사람 항체는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 가지며;
    상기 Fab 완전 사람 항체 단편은 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 가지며;
    상기 단일쇄 사람 항체는 서열 번호 1, 서열 번호 3, 서열 번호 5, 서열 번호 7, 서열 번호 9, 서열 번호 11, 서열 번호 13, 서열 번호 15, 서열 번호 17, 서열 번호 19, 서열 번호 21, 서열 번호 23, 서열 번호 26, 서열 번호 28, 서열 번호 30, 서열 번호 34, 서열 번호 36, 서열 번호 38, 서열 번호 41, 서열 번호 43, 서열 번호 46, 서열 번호 48, 서열 번호 50, 서열 번호 53, 서열 번호 56, 서열 번호 59, 서열 번호 62 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 중쇄 가변 도메인 서열, 및 서열 번호 2, 서열 번호 4, 서열 번호 6, 서열 번호 8, 서열 번호 10, 서열 번호 12, 서열 번호 14, 서열 번호 16, 서열 번호 18, 서열 번호 20, 서열 번호 22, 서열 번호 24, 서열 번호 25, 서열 번호 27, 서열 번호 29, 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 35, 서열 번호 37, 서열 번호 39, 서열 번호 40, 서열 번호 42, 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 47, 서열 번호 49, 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 54, 서열 번호 55, 서열 번호 57, 서열 번호 58, 서열 번호 60, 서열 번호 61, 서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 완전 사람 항체가 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, 간세포 암종 및 편평세포 암종을 포함하는 CD147-발현 종양, 및 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 비-종양 질환을 치료하는 방법.
  10. 제8항에 있어서, 상기 완전 사람 항체 Fab 단편이 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 상기 항체가 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31 , 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, 간세포 암종 및 편평세포 암종을 포함하는 CD147-발현 종양, 및 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 비-종양 질환을 치료하는 방법.
  11. 제8항에 있어서, 상기 완전 사람 단일쇄 항체가 중쇄 가변 도메인 영역 및 경쇄 가변 도메인 영역 둘 모두를 가지며, 상기 단일쇄 완전 사람 항체가 서열 번호 1/서열 번호 2, 서열 번호 3/서열 번호 4, 서열 번호 5/서열 번호 6, 서열 번호 7/서열 번호 8, 서열 번호 9/서열 번호 10, 서열 번호 11/서열 번호 12, 서열 번호 13/서열 번호 14, 서열 번호 15/서열 번호 16, 서열 번호 17/서열 번호 18, 서열 번호 19/서열 번호 20, 서열 번호 21/서열 번호 22, 서열 번호 13/서열 번호 25, 서열 번호 26/서열 번호 27, 서열 번호 28/서열 번호 29, 서열 번호 30/서열 번호 31, 서열 번호 13/서열 번호 32, 서열 번호 13/서열 번호 33, 서열 번호 34/서열 번호 35, 서열 번호 36/서열 번호 37, 서열 번호 38/서열 번호 39, 서열 번호 38/서열 번호 40, 서열 번호 41/서열 번호 42, 서열 번호 43/서열 번호 44, 서열 번호 38/서열 번호 45, 서열 번호 46/서열 번호 47, 서열 번호 48/서열 번호 49, 서열 번호 50/서열 번호 51, 서열 번호 38/서열 번호 52, 서열 번호 53/서열 번호 54, 서열 번호 41/서열 번호 54, 서열 번호 56/서열 번호 57, 서열 번호 38/서열 번호 58, 서열 번호 59/서열 번호 60, 서열 번호 38/서열 번호 61, 서열 번호 62/서열 번호 63 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 중쇄/경쇄 가변 도메인 서열을 갖는, 간세포 암종 및 편평세포 암종을 포함하는 CD147-발현 종양, 및 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 비-종양 질환을 치료하는 방법.
  12. 제8항에 있어서, 상기 질환이 간세포 암종, 결장 선암종(colon adenocarcinoma), 폐 암종(lung carcinoma), 유방암(breast cancer), 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 간세포 암종 및 편평세포 암종을 포함하는 CD147-발현 종양, 및 류마티스 관절염, 실험 폐 손상, 죽상경화증, C형 간염 바이러스에 의해 유도된 만성 간 질환, 허혈 심근 손상 및 심부전으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 비-종양 질환을 치료하는 방법.
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