KR20160104987A - 실매화풀 추출물을 이용한 항알러지 및 피부보호용 조성물 - Google Patents

실매화풀 추출물을 이용한 항알러지 및 피부보호용 조성물 Download PDF

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KR20160104987A
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Abstract

본 발명은 항알러지 및 피부보호용 조성물 및 기능성 식품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 실매화풀(Ludwigia adscendens) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지 및 피부보호용 조성물 및 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지 및 피부보호용 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 의힌 실매화풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 항알러지 및 피부보호용 용도로 널리 활용할 수 있다.

Description

실매화풀 추출물을 이용한 항알러지 및 피부보호용 조성물 {Composition for Anti-a1lergy and Skin Protection Using Extract of Ludwigia adscendens}
본 발명은 항알러지 및 피부보호용 조성물에 관한 것으로써, 구체적으로는 실매화풀의 추출물을 이용한 항알러지 및 피부보호용 조성물 및 이를 활용한 기능성 식품에 관한 것이다.
사회가 복잡해지고 산업과 문명의 발달로 인해 자연환경오염의 증가, 식생활의 변화, 스트레스의 가중 등으로 인해 알러지성 질환이 매년 증가하고 있다.
1980년에 아토피성 피부염을 비롯한 알러지 환자는 1% 미만이었으나, 2000년대에는 5% 이상으로 급증하고 있으며 잠재적인 환자까지 포함하면 10%가 넘는 것으로 생각되고 있다.
알러지(Allergy)란 이물질(항원, Allergen)에 대한 특이하고 변형된 반응을 나타내는 생화학적 현상이며, 이 때 방출된 물질이 증상을 일으키게 되면 알러젠(Allergen)이라 하고 그 결과 생긴 질환을 알러지 질환이라고 한다. 알러지(Allergy)의 발생원인 항원항체반응의 결과로 나타나는 생체의 병적 과정이며, 일반적으로 반응을 일으키는데 필요한 시간 및 보체관여의 유로부터 1~4형으로 분류되고 있다.
이 중 제1형은 아나필락틱(anaphylatctic[cytotropic;즉시형]) 형태로 표적기관이 주로 소화장기, 피부 및 폐장으로 일반적인 증상은 위장관알러지, 담마진, 위축성 피부염, 알러지성 비염 및 기관지성 천식 등이 있다. 제1형의 병리기전은 항원이 비만세포와 호염기구의 표면에 부착되어 있는 IgE 항체에 접촉됨으로써 표적세포를 활성화시켜 히스타민, 세로토닌, 루코트리엔,PAF 등의 화학매체를 분비하여 혈관과 평활근을 수축시킨다고 알려져 있는데 이는 주로 제4형(지연형)과 복합되는 경우가 많다.
즉, 이 아나필라시스와 알레르기 반응은 비만 세포 등에서 일어나는 다양한 변화에 기인된다.
탈과립을 유도하는 비만세포의 활성화는 Fc 수용제에 대한 항원, 안티(anti)-IgE, 렉틴(lectin) 등의 결합, 아나필라톡신(anaphylatoxin) 등의 자극, 칼슘 이오노포어(calcium ionopore), K48/80 혼합물(compound K48/80), 코데인(codeine) 등 합성피질 자극 호르몬과 같은 약물에 의해 야기된다.
최근에 여러 종류의 알레르기성 질환의 증가로 이에 대한 연구가 활발히 진행되어 급진적인 면역학의 발전으로 알레르기성 질환의 구명 및 치료에 많은 진보가 있었음에도 불구하고, 아직까지 충분히 알레르기성 질환을 치료할 수 있는 약물의 개발이 이루어져 있지 않다. 알러지 환자는 지금까지 개발된 약물 중에 완치를 할 수 있는 약물은 없으며 증상개선을 기대하고 있으나 부작용이 크다
한편, 실매화풀(Ludwigia adscendens)은 수면위에서 수평하게 성장하는 신생하거나 정박될 수 있거나 자유롭게 부유하는 수생 또는 반수생의 다년생 풀이다. 특징적인 흰색 꽃을 갖는 이 식물은 수면으로부터 수면 깊숙이 확장하는 물앵초(Water primrose)의 한 종류이다.
이에, 본 발명자들은 항알러지 및 피부보호용 조성물을 개발하고자 노력하던 중, HMC-1 세포, 피부각질세포, 섬유모세포 등을 통한 실험 결과, 실매화풀 추출물이 뛰어난 항알러지 및 피부보호용 조성물로 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
한국등록특허공보 제0829846호
본 발명의 목적은 항알러지 및 피부보호용 조성물과 이를 이용한 기능성 식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 실매화풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지 및 피부보호용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 실매화풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지 및 피부보호용 식품 조성물을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 실매화풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지 및 피부보호용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 항알러지 및 피부보호용 조성물에 있어서, 상기 추출물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명은 알러지성 질환과 관련된 비만세포주에서 세포의 유주운동, 염증성 사이토카인 분비, 사람의 피부각질세포 및 섬유모세포에서 실매화풀(Ludwigia adscendens, 'L.a.'라고 약칭함) 추출물의 효과를 조사하였다. 그 결과 L.a. 추출물이 효과가 있었고, 이를 통해 L.a. 추출물의 알러지성 질환에 대한 치료효과 가능성을 확인하였다.
구체적으로, 비만세포주인 HMC-1 세포에서의 유주운동에 대한 L.a. 추출물의 효과, 비만세포주인 HMC-1 세포에서의 IL-6의 분비에 대한 L.a. 추출물의 효과, 피부각질세포에서 필라그린(filaggrin) 발현에 대한 L.a. 추출물의 효과, 섬유모세포의 유주운동을 통한 상처 치유에 대한 L.a. 추출물의 효과를 확인하였다.
구체적으로, 본 발명의 항알러지 및 피부보호용 조성물에 있어서, 상기 실매화풀에 5 내지 10배의 물을 가하고 20 내지 100℃에서 10 내지 24시간 동안 추출한 후 여과하여 얻어지거나, 5 내지 10배의 90% 에탄올을 가하고 20 내지 100℃에서 10 내지 24시간 동안 추출한 후 여과하여 얻어지는 것이 바람직하다.
구체적으로, 상기 추출물은 각 약재를 물 또는 유기용매로 추출하여 얻을 수 있는데, 유기용매로는 저급알콜, 아세톤, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 헥산 등을 예시할 수 있다. 저급알콜로는 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 예시할 수 있으며, 에탄올이 가장 바람직하다.
또는 L.a. 건조물 또는 분말에 1 내지 20배, 바람직하게는 2 내지 15배, 더욱 바람직하게는 10배의 물을 첨가하고 80 내지 150℃, 바람직하게는 100 내지 120℃의 온도에서 1 내지 24시간, 바람직하게는 3 내지 5시간, 더욱 바람직하게는 4시간 동안 추출한 후 여과하여 각 약재의 열수 추출물을 제조할 수 있으며, 이를 여과하여 얻어진 여액을 감압농축하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법들에서 추출공정은 필요에 따라 2회 이상 반복하여 실시할 수 있으며, 여과 후 얻어진 추출물을 동결 건조 또는 감압건조시켜 분말 형태로 만들 수도 있다.
구체적으로, L.a. 건조물 또는 분말에 1 내지 20 배, 바람직하게는 2 내지 15 배, 더욱 바람직하게는 10배의 10~50% 에탄올 수용액을 첨가하고 40 내지 100℃, 바람직하게는 50 내지 60℃의 온도에서 1 내지 24시간, 바람직하게는 3 내지 5시간, 더욱 바람직하게는 4시간 동안 추출한 후 여과하여 각 약재의 에탄올 추출물을 제조할 수 있으며, 이를 여과하여 얻어진 여액을 감압농축하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법들에서 추출공정은 필요에 따라 2회 이상 반복하여 실시할 수 있으며, 여과 후 얻어진 추출물을 동결 건조 또는 감압건조시켜 분말 형태로 만들 수도 있다.
또한, 본 발명의 약학 조성물은 약리효과를 증진시키기 위해 약학적으로 허용가능한 다른 생약재 또는 그의 추출물을 추가로 포함할 수 있다. 이 경우, 상기 추출방법에 따라 생약재의 추출물을 제조한 후 약학 조성물에 가하거나 상기 L.a. 약재와 생약재를 혼합한 후 상기 방법으로 추출하여 얻어진 추출물을 조성물에 포함시킬 수도 있다. 상기에서 '약학적으로 허용가능한'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말한다.
또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다.
또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 항알러지 및 피부보호용 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 약학적 조성물은 경피 투여될 수 있다. 상기에서 '경피 투여'란 본 발명의 약학적 조성물을 세포 또는 피부에 투여하여 남성 성기능 개선 및 불임 치료용 약학적 조성물에 함유된 활성성분이 피부 내로 전달되도록 하는 것을 말한다. 예컨대, 본 발명의 약학적 조성물을 주사형 제형으로 제조하여 이를 30 게이지의 가는 주사 바늘로 피부를 가볍게 단자 (prick)하는 방법, 또는 피부에 직접적으로 도포하는 방법으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화할 수 있다.
경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.
본 발명의 조성물의 유효 성분인 L.a. 추출물의 총 유효량은 단일 투여량 (single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량 (multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법 (fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 실매화풀 추출물로부터 선택된 1종 이상의 추출물의 바람직한 전체 용량은 1일당 환자 체중 1 ㎏ 당 약 100 ㎍ 내지 5 ㎎, 가장 바람직하게는 500 ㎍ 내지 1 ㎎일 수 있다. 그러나, 상기 추출물의 용량은 약학적 조성물의 투여경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 추출물을 항알러지 및 피부보호용 치료제로서의 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.
또한, 본 발명은 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 L.a. 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지 및 피부보호용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품 (functional food), 영양 보조제 (nutritional supplement), 건강식품 (health food) 및 식품 첨가제 (food additives) 등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 L.a. 추출물 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 본 발명의 L.a. 추출물과 항알러지 및 피부보호 예방 효과가 있다고 알려진 공지의 물질 또는 활성성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.
또한, 기능성 식품으로는 음료 (알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품 (예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품 (예: 햄, 소시지콘비이프 등), 빵류 및 면류 (예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품 (예: 버터, 치즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료 (예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 L.a. 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 본 발명의 L.a. 추출물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.
상기와 같이 구성되는 본 발명의 실매화풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 항알러지 및 피부보호용 용도로 널리 활용할 수 있다.
도 1은 L.a. 추출물이 HMC-1 세포에 어떠한 세포독성을 끼치지 않음을 나타내는 그래프이고,
도 2는 L.a. 추출물이 SCF(stem cell factor; 줄기세포인자) 반응에서 HMC-1 세포 이동을 감소시키는 것을 나타내는 그래프이고,
도 3은 L.a. 추출물이 HMC-1 세포에서 IL-6 생성을 저해시키는 것을 나타내는 그래프이고,
도 4는 L.a. 추출물이 HaCaT 세포에서 필라그린의 발현을 증가시키는 것을 나타내는 웨스턴 블럿 사진이고,
도 5는 L.a. 추출물이 섬유모세포의 이동을 증가시키는 것을 나타내는 사진이다.
이하, 본 발명에 따른 바람직한 실시예를 더욱 구체적으로 제시하여 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 이하의 실시예는 이 기술분야에서 통상적인 지식을 가진 자에게 본 발명이 충분히 이해되도록 제공되는 것으로서 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 상기와 같은 실시예들에 의하여 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 세포 배양
<1-1> 비만세포주 배양
비만세포주인 HMC-1 세포를 2.0 x 105/ml로 각각 IMDM 배지에 항생제 (페니실린 104 U/㎖, 스트렙토마이신 10 mg/㎖, 암포테리신(amphotericin) B 25 ㎍/㎖)와 10% FBS(Fetal Bovine Serum, 우태아혈청)를 넣고, 37℃ CO2 배양기에서 3일간 배양하였다.
<1-2> HaCaT 세포 및 섬유모세포 배양
사람의 각질형성세포인 HaCaT 세포 및 섬유모세포(fibroblast)를 2.0 x 105/ml로 DMEM((Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지, 항생제 (페니실린 104 U/㎖, 스트렙토마이신 10 mg/㎖, 암포테리신 B 25 ㎍/㎖)와 10% FBS를 넣고, 37℃ CO2 배양기에서 3일간 배양하였다.
< 실시예 2> 실매화풀 추출물의 제조
실매화풀을 경동시장에서 구입하였다. 상기 약초에 대한 동정은 한국약물시험연구소(Korean drug test laboratory)에서 확인하였다. 상기 약초를 건조 및 세절한 후에, 상기 약초 중량의 약 3배의 80% 에탄올을 넣고 약 2시간 끓인 다음, 추출물을 여과하고 -70℃에서 동결 건조하여 15 g의 분말 형태의 실매화풀 추출물을 얻었다. 상기 분말을 증류수로 추출한 후 여과하여 4℃에 보관하였다. 상기 분말은 생리식염수에 녹여 필요한 농도로 사용하였다.
< 실시예 3> HMC-1 세포에서의 실매화풀 추출물의 세포독성 측정
HMC-1 세포를 5.0 x 104 /ml로 96 웰 플레이트(well plate)에 분주하였다. 상기 실시예 2에서 얻은 실매화풀 추출물(최종 농도 1 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖)을 처리한 후 24시간 동안 37℃ CO2 배양기에서 배양하였다. 각각의 웰에 10 ㎕ MTT 용액을 넣고 37℃ CO2 배양기에서 4시간 동안 배양한 후, 100 ㎕ 가용화(solubilization) 용액을 처리하였다. 24시간 배양한 후에 ELISA 판독기를 이용해 550 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다(도 1).
구체적으로, L.a. 추출물의 세포 독성 여부를 확인하기 위하여, HMC-1 세포에 L.a. 추출물을 1, 5, 10, 50 g/ml를 처리한 후 24시간 뒤 MTT 분석을 실시하였다. 그 결과, L.a. 추출물 처리시 대조군에 비하여 세포 생존율이 감소하지 않았으므로, L.a. 추출물이 상기 농도에서 세포에 대한 독성을 나타내지 않음을 나타낸다 (도 1).
<실시예 4> L.a. 추출물의 HMC-1 세포의 유주운동 활성 억제 측정
세포의 유주운동은 48 웰 마이크로챔버(well microchamber)를 이용하여 측정하였고, 아래쪽 웰에 SCF(stem cell factor; 줄기세포인자)를 포함한 28 ㎕의 완충액을 넣었다. 피브로넥틴(Fibronectin)을 함유한 RPMI 1640 배지를 이용해 코팅 처리한 폴리비닐피롤라돈(polyvinylpyrrolidone)-배제 필터를 아래쪽 챔버(chamber) 위에 덮고 위쪽 챔버를 조립한 후 5.0 x 106 세포/ml의 세포농도의 HMC-1 세포 부유액을 각 웰에 50 ㎕씩 분주하였다. 37℃ CO2 배양기에서 5시간 동안 배양한 후 필터를 염색하여 이동한 세포의 수를 측정하였다.
상기 실험은 Stem cell factor(SCF)에 의한 HMC-1 세포의 이동에 있어서 L.a. 추출물의 억제 효과를 확인한 것이다. 즉, 줄기세포 인자에 의한 HMC-1 비만세포의 유주운동에서 L.a. 추출물의 억제 효과를 확인하였다(도 2). 구체적으로, 천식을 유발시키는 원인세포 중 하나인 비만세포에 대하여 L.a. 추출물의 효과를 in vitro (생체 외) 실험을 한 것으로서, 줄기세포인자 에 의한 비만세포 (HMC-1) 의 이동에 대하여 L.a. 추출물이 억제효과가 있었고, 이를 통하여 알러지성 질환에 대한 치료효과의 가능성이 있음을 확인하였다. 그 결과, HMC-1 세포에 각각의 L.a. 추출물 10 g/ml를 처리하여 24시간 동안 처리한 다음 이동한 세포 수를 측정한 결과, L.a. 추출물에 의해 HMC-1 세포의 유주운동이 감소함을 확인하였다 (도 2).
<실시예 5> L.a. 추출물의 HMC-1 세포에서 염증과 관련된 IL-6 사이토카인 생성의 억제 측정
염증 관련 세포에서 염증성 사이토카인인 IL-6에 대한 L.a. 추출물의 억제 효과를 확인하였다. 구체적으로, 비만세포주인 HMC-1에 각각 PMA/CaI, 처리 후 세포 배양 상층액 안의 IL-6의 농도를 샌드위치 ELISA 방법을 이용하여 측정하였다.
염증 관련 세포들은 천식과 같은 급만성 염증반응에서 다양한 사이토카인 및 케모카인을 생산하여 질병을 악화시킨다. 사람의 비만세포인 HMC-1를 이용한 in vitro (생체 외) 실험에서 확인한 결과 L.a. 추출물은 염증반응에 관여하는 사이토카인 IL-6를 억제하고 이는 알러지성 질환에 대한 치료에 효과가 있음을 나타낸다 (도 3).
구체적으로, HMC-1 세포에 50 ng/ml PMA와 1 ㅅM CaI를 24시간 동안 처리한 다음 ELISA를 이용하여 상층액에서 IL-6의 양을 측정하였다. 그 결과, PMA/CaI에 의해 IL-6 가 증가하고, 증가한 IL-6는 L.a. 추출물에 의해 억제되었다(도 3).
IL-6의 특징은 염증전(pro-inflammatory) 및 항염증 사이토카인이고, T 세포 및 대식세포에서 분비되어 면역반응을 촉진한다. 열병 및 급성기 반응의 가장 중용한 매개체중의 하나이며, 당뇨병, 죽상동맥경화증(atherosclerosis), 우울증(depression), 알츠하이머 질환, 전신 홍반 루프스(systemic lupus erythematosus), 전립선암 및 류마티스 관절염에 관여되는 물질이다. 또한, 진행암/전이암 환자는 혈액에 높은 IL-6 수치를 가지며, 상기 질환들중 많은 것에 대한 치료법으로써 항-IL-6제를 개발하는데 많은 관심이 가고 있으며, 토실리주맙(tocilizumab) 및 ALD518은 이러한 방식으로 류마트스 관절염을 치유한다.
<실시예 6> 피부각질세포에서 필라그린 발현
L.a. 추출물의 필라그린 발현에 대한 효과를 알기 위해 웨스턴 블럿으로 확인하였다. 구체적으로, 5 X 10 6cells/ml 으로 HaCaT 세포를 6 웰 플레이트에 분주한 후 L.a. 추출물과 TNF-a/IFN-r를 처리하였다. HaCaT 세포를 50 ㎕ 의 분해 완충액(lysis buffer)로 분해시킨 후 얻어진 단백질 샘플을 전기영동을 통해서 분리하고, 니트로셀룰로스(nitrocellulose) 필터로 옮겨 필라그린 항체로 감작하여 화학발광 방법을 이용하여 블럿을 확인하였다.
그 결과, TNF-a/IFN-r에 의해 줄어든 필라그린이 10 ug/ml L.a. 추출물에 의해서 다시 증가함을 확인하였다 (도 4).
필라그린은 다크 스팟 마커로서 외부 공격에 대한 피부 저항과 관계된 물질이다다. 이 단백질이 부족하게 되면, 피부는 외부 공격을 막지 못하게 되어 멜라노사이트가 활성화된다. 멜라닌은 과잉 생산되고 피부 표면에는 스팟이 형성된다. 디올의 연구진들은 독자적 연구를 통해 스팟이 있는 부분과 그 주변 조직의 피부를 분석하였다. 그 결과, 주변 부분에 비해 스팟이 있는 곳에서는 필라그린이 부족하였고, 이로 인해 필라그린이 피부침착을 표시하는 주요 마커로 인식되고 있다.
<실시예 7> 시험관내(In vitro) 상처 치유 측정(Wound healing assay) (scratch wound test)
섬유모세포 또는 HaCaT cell을 분주한 다음 24시간 동안 배양하였다. 멸균된 0.1 ~ 1.0 ml 피펫 팁(tip)을 이용하여 스크래치(scratch) 상처를 생성하였다. 부유된 세포 제거 후 다시 배지에 첨가하였다 (동시에 약제 첨가). 6시간 배양 후에 세포를 PBS내 3.7% 포르말린으로 30분 동안 고정하였다. 실온에서 30분 동안 0.1% 톨루이딘블루(toluidine blue)로 염색하였다. 디지털 카메라와 이미지 J 소프트웨어를 이용한 상 분석을 통해 0시간과 배양 6시간 후의 상처의 넓이를 측정하였다.
그 결과, L.a. 추출물의 5 ug/ml, 10 ug/ml에서 피부의 섬유모세포(fibroblast)의 유주운동을 촉진시킨다. 이러한 결과는 상처치유의 효능이 있을 것으로 판단된다(12번) (도 5 및 표 1).
대조군 대비 이동 효과
2
5 ㎍/㎖		 + 2
10 ㎍/㎖		 + 6
5 ㎍/㎖		 ++ 6
10 ㎍/㎖		 ++
7
5 ㎍/㎖		 ++ 7
10 ㎍/㎖		 +++ 9
5 ㎍/㎖		 + 9
10 ㎍/㎖		 +++
12
5 ㎍/㎖		 +++ 12
10 ㎍/㎖		 ++++
물질 2, 6, 7, 9, 12의 용매가 DMSO와 대조군의 이동된 정도를 + 설정, 이 + 수치를 기본으로 하여 각 시료의 이동 효과를 측정함
<기타 제조예 1> L.a. 추출물을 유효성분으로 함유하는 항알러지 및 피부보호용 치료제의 제조
본 발명자들은 상기 실시예를 통해 L.a. 추출물의 항알러지 및 피부보호의 치료 효능이 뛰어남을 확인하여 L.a. 추출물을 유효성분으로 함유하는 항알러지 및 피부보호 치료제를 하기와 같이 제조하였다. 또한, 하기 치료제의 제조예는 치료제 뿐만 아니라 건강식품의 제조에도 응용하여 사용될 수 있다.
<1-1> L.a. 추출물을 함유하는 연질캅셀(soft gelatin capsules)
L.a. 추출물 20%
비타민 C 4.5%
비타민 D3 0.001%
황산망간 0.1%
밀납 10%
팜유 25%
홍화씨유 30.399%
<1-2> L.a. 추출물을 함유하는 정맥주사용 제제의 제조
L.a. 추출물 0.2%
만니톨 0.3%
생리식염수 9.5%
<1-3> L.a. 추출물을 함유하는 정제(tablet)
L.a. 추출물 35%
비타민 C 10%
비타민 D3 0.001%
황산망간 0.1%
결정셀룰로오즈 25.0%
유당 17.999%
스테아린산마그네슘 2%
<기타 제조예 2> L.a. 추출물을 유효성분으로 함유하는 기능성 식품의 제조
본 발명자들은 상기 실시예를 통해 L.a. 추출물이 항알러지 및 피부보호 치료 활성이 뛰어남을 확인하여 이를 유효성분으로 함유하는 기능성 식품을 하기와 같이 제조하였다.
<2-1> 음료의 제조
꿀 522 ㎎
치옥토산아미드 5 ㎎
니코틴산아미드 10 ㎎
염산리보플라빈나트륨 3 ㎎
염산피리독신 2 ㎎
이노시톨 30 ㎎
오르트산 50 ㎎
L.a. 추출물 0.48 ~ 1.28 ㎎
물 200 ㎖
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.
<2-2> 츄잉껌의 제조
껌베이스 20 %
설탕 76.36 ~ 76.76 %
L.a. 추출물 0.24 ~ 0.64 %
후르츠향 1 %
물 2 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.
<2-3> 캔디의 제조
설탕 50 ~ 60 %
물엿 39.26 ~ 49.66 %
L.a. 추출물 0.24 ~ 0.64 %
오렌지향 0.1 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.
<2-4> 비스켓의 제조
박력1급 88 ㎏
중력1급 76.4 ㎏
정백당 16.5 ㎏
식염 2.5 ㎏
포도당 2.7 ㎏
팜쇼트닝 40.5 ㎏
암모 5.3 ㎏
중조 0.6 ㎏
중아황산나트륨 0.55 ㎏
쌀가루 5.0 ㎏
비타민 B1 0.003 ㎏
비타민 B2 0.003 ㎏
밀크향 0.16 ㎏
물 71.1 ㎏
전지분유 4 ㎏
대용분유 1 ㎏
제일인산칼슘 0.1 ㎏
살포염 1 ㎏
분무유 25 ㎏
L.a. 추출물 0.2 ~ 0.5 ㎏
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 비스켓을 제조하였다.
<2-5> 아이스크림의 제조
유지방 10.0 %
무지유고형분 10.8 %
설탕 12.0 %
물엿 3.0 %
유화안정제(스팬, span) 0.5 %
향료(스트로베리) 0.15 %
물 63.31 ~ 62.91 %
L.a. 추출물 0.24 ~ 0.64 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 아이스크림을 제조하였다.
<2-6> 쵸코렛의 제조
설탕 34.36 ~ 34.76 %
코코아 버터 34 %
코코아 매스 15 %
코코아 파우다 15 %
레시틴 0.5 %
바닐라향 0.5 %
L.a. 추출물 0.24 ~ 0.64 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 초코렛을 제조하였다.
이상, 본 발명의 바람직한 실시예를 들어 상세하게 설명하였으나, 본 발명은 상기 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 기술적 사상의 범위내에서 당 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의하여 여러 가지 변형이 가능하다.

Claims (3)

  1. 실매화풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지 및 피부보호용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  3. 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 실매화풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지 및 피부보호용 식품 조성물.
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