KR20160090171A - 원발성 갑상선암 전이의 진단방법 및 이를 이용한 진단키트 - Google Patents

원발성 갑상선암 전이의 진단방법 및 이를 이용한 진단키트 Download PDF

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Abstract

본 발명은 원발성 갑상선암 전이진단을 위한 정보제공방법에 관한 것이다. 본 발명자들은 Slit-Robo 경로의 활성 저하는 큰 종양 크기, 림프절 전이, 원격전이와 재발 등의 갑상선암의 나쁜 예후와 연관 있음을 최초로 규명하였다. 이에 본 발명자들은 Slit2-Robo1 발현율 측정을 이용하여 원발성 갑상선암 전이여부를 진단할 수 있는 방법을 제안한다. 본 발명은 최초로 갑상선암에서 종양 억제 인자로서의 Slit-Robo 경로의 역할을 확인하였으며, 새로운 바이오마커 및 새로운 분자 치료 표적으로 Slit2의 가능성을 제시한다.

Description

원발성 갑상선암 전이의 진단방법 및 이를 이용한 진단키트 {A method for diagnosing a metastasis of a primary thyroid cancer and a diagnostic kit using the method}
본 발명은 갑상선암 원발성 전이의 진단방법 및 이를 이용한 진단키트로서, 보다 상세하게는 Slit-Robo 경로 활성 측정을 통한 갑상선암 원발성 전이의 진단방법 및 이를 이용한 진단키트에 관한 것이다.
전체 갑상선암의 90%를 차지하는 분화 갑상선암은 유두암과 여포암을 총칭한다. 최근 수 십여 년간 분화 갑상선암의 발생은 전세계적으로 증가하였지만 대부분 적절한 수술적 치료와 방사성 요오드 동위원소 치료로 양호한 예후를 보여 10년 생존율이 90%에 이른다.1) 수술과 방사성 요오드 동위원소를 포함하는 초치료가 끝나고 나면 환자들은 갑상선 호르몬 보충 요법과 함께 주기적으로 혈청 내 티로글로불린(thyroglobulin)을 측정하고 경부 초음파 등의 검사를 시행하여 재발 여부를 확인한다. 약 30%의 환자는 재발하며, 국소 재발의 경우 재수술 등의 치료를 받게된다. 약 15%의 환자에서는 수술 전 및 수술 후 원격 전이가 발견되는데, 원격전이의 절반가량은 폐에서 발생하고 그 다음으로는 뼈가 흔하다. 원격전이가 발견되면 갑상선암으로 인한 사망이 급격히 증가하는데, 이전 연구는 10년 생존율이 약 40% 라고 보고하였다.2,3) 반복적인 국소 재발 또는 원격전이를 동반한 진행성 고위험 갑상선암 환자들의 경우 수술이 불가능하다면 방사성 요오드 치료가 유일한 치료이나 약 30%의 환자들만 방사성 요오드 치료에 반응을 보여 보다 효과적인 치료방법이 필요하다. 2,4)
최근 10여 년 사이 갑상선암의 발생과 관련된 세포 신호 전달체계와 유전자 이상에 대한 연구가 활발히 진행되었다.5) 갑상선암에서 가장 잘 알려진 것은 MAPK (mitogen-activated protein kinase)와 PI3K (phosphatidyl inositol 3-kinase)/AKT(v-akt murine thymoma viral oncogene) 경로로서 이들 중 BRAF, RAS, RET/PTC, PAX8/PPARG 돌연변이가 가장 잘 알려진 주된 유전자 이상들이다.6) 갑상선 유두암에서 가장 흔한 유전자 이상은 BRAF 점돌연변이로 600번 아미노산인 발린이 글루탐산으로 치환되는 것이 대표적이며(V600E) 외국의 경우 30-40%, 우리나라에서는 60-80%의 유두암이 BRAF 변이에 의해 발생하는 것으로 알려졌다. 여포암에서는 RAS 돌연변이가 가장 흔히 발견되고(20-35%) NRAS 61코돈과 HRAS의 61코돈의 돌연변이가 대표적으로, 원격전이의 유발과 연관이 있을 것으로 알려졌다.7) 그 외 RET/PTC 재배열은 방사선 노출에 의한 유두암 발생에 관련된 것으로 생각되며 약 15-40%에서 발견되고, PAX8/PPARG 재배열은 여포암의 30-40%에서 관찰되는 것으로 알려졌다. 갑상선암은 또한 혈관이 매우 발달하는 종양으로 VEGF (Vascular Endotehlial Growth Factor) 및 VEGFR(VEGF receptors) 의 과발현도 흔히 관찰된다.4,5)
갑상선암의 발생과 진행에 관한 분자생물학적 과정에 대한 이해의 진전으로, 이를 바탕으로 한 새로운 진단 및 예후의 바이오마커에 대한 연구가 진행되고 있다. 가장 많은 연구가 이루어진 것은 역시 BRAF V600E 돌연변이에 관한 것으로 이는 림프절 전이와 피막 침범, 재발 등의 진행성 갑상선암의 특성과 연관이 있으며 실험실적 연구에서 BRAF V600E 돌연변이를 유발하면 VEGF와 MET 등의 과발현을 유도하여 종양의 공격성을 유발한다. 또한 BRAF V600E돌연변이는 갑상선 세포로의 요오드 섭취를 담당하는 Sodium-Iodide Sympoter (NIS) 유전자의 발현을 억제하여 방사성 동위원소 불응성 유발에 기여하는 것으로 보고되었다.8,9) 때문에 BRAF V600E 돌연변이를 진단과 예후 예측의 바이오마커로 이용하려는 시도들이 있는데, 한 연구에서 BRAF V600E 돌연변이를 진단 검체에서 확인하는 것이 갑상선암 예측에 매우 높은 특이도와 양성 예측도를 보였다.10)
또한 진행성, 방사성 요오드 동위원소 불응성 갑상선암에 대해 많은 인산화효소억제제가 분자 표적 치료제로서 이용되고 있다. 그 중 대표적으로, sorafenib은 RET, BRAF 등의 MAPK 경로와 VEGFR, PDGFR (platelet-derived growth factor receptor) 을 억제하며 3상 임상연구에서 의미 있는 무진행 생존기간(progression-free survival) 연장 효과가 확인되었다.11) 또 다른 연구에서는 MEK 억제제인 selumetinib이 방사성 요오드 동위원소 불응성 갑상선암의 요오드 섭취능을 충분히 회복시킴을 보고하였다.12) 이 외에도 많은 약제에 대한 연구가 진행 중이지만 일부 환자에서만 치료에 대한 반응을 보이고 부작용으로 인해 치료를 중단해야 하는 경우도 빈번하며, 대다수의 환자에서 경과 호전 후 다시 병이 진행하게 되는 등 한계가 있어 더 효과적인 표적치료제에 대한 필요성이 상존한다.13)
최근 다른 암종 연구에서 액손 유도 분자들이 새로운 분자생물학적 표적으로 대두되고 있다.14) Slit-Robo 경로는 그 중 하나인데, Slit 당단백은 대표적인 액손 유도 분자로 다양한 조직과 세포에서 분비되며 생리학적 활성은 그 수용체인 Roundabout (Robo)을 통한다. 1800년대 후반, 액손 유도 분자가 존재한다는 것이 처음 알려진 이 후 많은 연구가 이루어져왔는데 이들은 처음에는 신경계의 발생과정 동안에 뉴런과 액손의 이동을 조절하는 것으로만 생각되었지만 점차 심장, 폐, 신장, 유방 조직 등 다양한 조직에서 다양한 세포 내 과정을 조절하는 인자로서의 역할이 있는 것으로 알려졌으며 특히 최근에는 세포의 성장과 부착능, 이동능의 조절에 중요한 역할이 있음이 밝혀져 다양한 암의 발생 및 진행과정에 영향을 미치는 것으로 생각되고 있다.15)
Slit은 인체에서 Slit 1-3의 세 가지 형태로 존재하는데, 그 중 가장 많이 알려진 것이 Slit2로서 정상 조직과 비교하여 신장암16 ), 대장암17 ), 폐암 및 유방암18 ) 등에서는 Slit2의 발현이 감소되었음이 확인된 바 있고, Slit2를 knock-down하였을 때 위암의 성장과 전이능이 활성화 되고19 ) 최근의 한 연구는 Slit2-Robo 경로가 억제되었을 때 췌장암의 신경 침습과 전이가 증가함을 발표하였다.20) Slit1의 역할에 대해서는 아직 알려진 것이 없고 최근 Slit3는 배아 혈관 신생에 역할이 있는 것으로 알려졌다. Robo 또한 인체에서 Robo 1-4의 네 가지 형태로 존재하는데 Robo 1,2,3은 비슷한 구조와 기능을 가지고 있으나 Robo 4는 상당히 다른 구조와 기능을 가지고 있으며 특히 혈관 신생에 중요한 역할을 할 것으로 알려졌다.21,22) 최근 한 연구에서는 췌장암에서 Robo 2 발현이 억제되면 불량한 생존율을 보임을 발표하기도 하였다.23)
Slit과 Robo 아형의 각각의 역할과 서로 다른 아형과의 상호작용이 어떻게 다른 역할을 나타내는지에 대해서는 확실하지 않다. 현재까지 가장 많이 연구된 것은 Slit2와 Robo1의 상호작용으로서 유방암 및 폐암 유래 세포주를 이용한 연구에서 이들의 결합은 PI3K/Akt 경로 억제와 glycogen synthase kinase-3 beta (GSK-3b)의 활성을 통해 beta-catenin의 핵 내 이동은 억제하고 E-cadherin의 안정화를 유도하여 세포 간의 연결을 안정화하고 세포 이동과 성장을 억제하였다.24,25) 또한 교모세포종 유래 세포를 이용한 연구에서Slit2와 Robo1의 결합은 Rho GTPase를 통해 Cdc42 등 액틴 세포골격 조절 인자들을 억제함으로써 세포 이동능을 억제하였다26 ) (도 1). 하지만 대장암 유래 세포주를 이용한 한 연구에서는Slit2-Robo1의 발현 증가가 유비퀴틴접합단백질의 활성을 유도하여 오히려 E-cadherin의 분해를 촉진하고 세포 성장과 상피-간엽 전환(epithelial-mesenchmal transition)을 촉진함을 보고하여 전혀 반대의 결과를 보였다.27) 이에 Slit과 Robo경로는 암세포 종류와 그 단계에 따라 역할이 상이할 것으로 생각되고 있다.15)
현재 갑상선암에서 Slit-Robo의 발현 정도와 그 것이 갑상선암에 미치는 영향에 대해서는 거의 알려진 것이 없다. 하지만 최근 갑상선암의 빈도가 높은 가족을 대상으로 전장유전체 연관분석을 시행하여 연관성을 분석하였을 때 Slit-Robo Rho GTPase activating protein 1 (srGAP1) 유전자의 intron4에 위치한 SNP rs2168411이 갑상선 유두암의 감수성과 연관되어있음이 보고된바 있어 Slit-Robo 경로가 갑상선암의 발생에서도 중요한 역할이 있을 가능성을 시사하였다.28) 이에 본 연구는 갑상선암 세포주와 갑상선암 조직을 이용하여 Slit-Robo 경로가 갑상선암의 성장과 침습에 미치는 영향을 분석해보고자 하며, 이를 통해 새로운 바이오마커 및 새로운 치료 표적으로서 Slit-Robo 경로의 가능성을 확인해보고자 한다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허 문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 새로운 바이오마커 및 새로운 분자치료 표적을 이용한 갑상선암의 진단방법을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 본 발명자들은 Slit-Robo 경로의 활성 저하가 종양 크기, 림프절 전이, 원격전이 및 재발 등의 갑상선암의 나쁜 예후와 연관 있음을 확인하였다. 또한, Slit의 투여로서 갑상선암 세포주의 성장 및 이동능이 뚜렷이 억제됨을 확인하였으며 이는 베타-카테닌(beta-catenin) 활성의 억제 및 E-카데린(E-cadherin) 활성 유도에 의한 것임을 규명하였다. 이로써 본 발명자들은 최초로 갑상선암에서 종양 억제 인자로서의 Slit-Robo 경로의 역할을 확인하였고, 새로운 바이오마커 및 새로운 분자 치료 표적으로서 Slit2 및 Robo1의 가능성을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 원발성 갑상선암 전이진단을 위한 정보제공방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 원발성 갑상선암 전이진단키트를 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 원발성 갑상선암 전이 억제물질의 스크리닝 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 원발성 갑상선암 진단을 위한 정보제공방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 원발성 갑상선암 진단키트 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체로부터 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 측정하는 단계; 및 (b) 전이되지 않은 갑상선암 검체와 비교하여 상기 SLIT2 또는 ROBO1의 발현이 감소하는 경우 원발성 갑상선암이 전이된 것으로 판단하는 단계를 포함하는 원발성 갑상선암 전이진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.
본 발명자들은 새로운 바이오마커 및 새로운 분자치료 표적을 이용한 갑상선암의 진단방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, Slit-Robo 경로의 활성 저하가 종양 크기, 림프절 전이, 원격전이 및 재발 등의 갑상선암의 나쁜 예후와 연관 있음을 확인하였다. 또한, Slit의 투여로서 갑상선암 세포주의 성장 및 이동능이 뚜렷이 억제됨을 확인하였으며 이는 베타-카테닌(beta-catenin) 활성의 억제 및 E-카데린(E-cadherin) 활성 유도에 의한 것임을 규명하였다. 이로써 본 발명자들은 최초로 갑상선암에서 종양 억제 인자로서의 Slit-Robo 경로의 역할을 확인하였고, 새로운 바이오마커 및 새로운 분자 치료 표적으로서 Slit2 및 Robo1의 가능성을 확인하였다.
Slit-Robo 경로는 신경계 발생 과정에서 처음 발견되었으나 신경계 외에서도 다양한 세포의 성장과 이동능 등의 기능을 조절하는 것으로 생각되고 있다. 이에 Slit-Robo 경로가 정상 세포의 암성 변화를 유발하는 중요 원인일 가능성이 제기되었는데 실제로 신장암, 췌장암, 대장암 등에서 이들의 발현이 감소함이 보고된 바 있고 최근 연구는 췌장암에서 Slit-Robo 경로의 발현 감소가 나쁜 예후와 연관이 있음을 발표하였다. 현재까지 갑상선암에서 Slit-Robo 경로의 발현 정도와 그 것이 갑상선암에 미치는 영향에 대해서는 거의 알려진 것이 없는데, 최근 갑상선 유두암을 대상으로 한 전장유전체 연관분석에서 Slit-Robo Rho GTPase activation protein 1 (SRGAP1) 유전자의 변이가 갑상선 유두암 감수성에 영향을 주는 원인으로 밝혀져 갑상선암에서도 Slit-Robo 경로가 중요한 역할을 할 것을 시사하였다. 이에 본 연구에서는 갑상선암 세포주와 갑상선암 조직을 이용하여 Slit-Robo 경로가 갑상선암의 성장과 침습에 미치는 영향을 다각적으로 분석해 보고자 한다.
원발성 갑상선암(primary thyroid cancer)의 대부분은 분화암으로서 대표적으로 갑상선 유두암과 갑상선 여포암이 있다. 이 중 갑상선 유두암은 전체 갑상선암의 60%-70%를 차지하는 암으로서, 어느 연령에나 발생하지만 20대-30대에서 주로 발생한다. 갑상선 유두암은 주로 림프계로 전이 되지만 전체적으로 매우 천천히 자라고 10년 생존율이 90%이상으로 예후가 좋은 암이지만, 드물게 폐나 뼈 등으로 원격전이하는 예가 있어 초기치료가 중요하게 여겨진다.
본 발명의 일 예에 따르면, 상기 갑상선암은 갑상선 유두암이다.
본 발명의 검출대상인 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 단백질은 서열목록 제1서열(NP_004778.1; 1529 aa), 서열목록 제2서열(NP_001276064; 1525 aa) 또는 서열목록 제3서열(NP_001276065.1; 1521aa) 의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 아미노산 서열은 각각 서열목록 제4서열(NM_004787.2; 6398 bp), 서열목록 제5서열(NM_001289135.1; 6386 bp) 또는 서열목록 제6서열(NM_001289136.1; 6374 bp) 의 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된다. 한편, 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1) 단백질은 서열목록 제7서열(NP_002932.1; 1651 aa), 서열목록 제8서열(NP_598334.2; 1606 aa) 또는 서열목록 제9서열(NP_001139317.1; 1551 aa) 의 아미노산 서열을 포함하며, 상기 아미노산 서열은 각각 서열목록 제10서열(NM_002941.3; 6895 bp), 서열목록 제11서열(NM_133631.3; 7550 bp) 및 서열목록 제12서열(NM_001145845.1 (7385 bp) 의 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된다.
본 발명에서 용어 “진단하고자 하는 개체”는 갑상선암이 이미 발생한 대상 또는 갑상선암을 갖기 쉬운 대상을 포함하며, 포유동물일 수 있다. 바람직한 포유동물은, 예를 들면, 인간, 인간이 아닌 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말, 및 소를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 방법을 실시하기 위하여, 진단하고자 하는 개체로부터 생물학적 시료를 수집할 수 있으며, 이로부터 상기 갑상선암 조직/세포와 정상 조직/세포에서 Slit2 또는 Robo1 단백질의 발현량을 측정할 수 있다. 상기 생물학적 시료는, 신체의 조직 및 체액, 혈액, 혈청 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 시료로부터 Slit2 또는 Robo1의 발현율을 측정할 수 있으며, 이 경우 Slit2 또는 Robo1의 유전자 레벨 또는 단백질 레벨의 발현율을 측정할 수 있다. 유전자 레벨은 mRNA 레벨을 측정함으로써 분석할 수 있으며, 예컨대 RT-PCR, 노던 블로팅(northern blotting), 마이크로어레이(microarray), NPA (nuclease protection assay (NPA) 또는 인 시투 하이브리다이제이션(in situ hybridization)을 이용할 수 있으며 이에 한정되는 것은 아니다. 한편, 단백질 수준을 측정하기 위한 방법으로는, 웨스턴 블롯, ELISA, 방사선면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법, 보체 고정 분석법, FACS, 단백질 칩 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상술한 방법으로서 Slit2 또는 Robo1의 발현율을 측정하여, 전이되지 않은 갑상선암 검체와 비교하여 Slit2 또는 Robo1 발현이 감소하는 경우 원발성 갑상선암이 전이(metastasis)된 것으로 판단한다.
갑상선암 전이는 크게 4 단계로 나뉠 수 있으며, 암 조직이 주변 림프절 전이 없이 갑상선 조직 일부를 침범한 단계(제1기); 암조직이 주변 림프절로 전이하지는 않았으나 갑상선 조직 전체를 침범한 단계(제2기); 주변 림프절로의 전이가 있는 단계(제3기); 및 다른 신체부위로 전이되는 원격전이(distant metastasis)가 있는 단계(제4기)로 나뉠 수 있다. 본 발명의 방법은 림프절 전이 및 원격전이가 일어나는 제3기 및 제4기의 갑상선암을 진단할 수 있는 방법으로서, 보다 바람직하게는 원격전이가 일어난 제4기의 갑상선암을 진단할 수 있는 방법이다.
본 발명의 일 예에 따르면, 상기 전이는 림프절 전이 또는 원격전이(distant metastasis)이다.
본 발명의 일 예에 따르면, 본 발명의 정보제공방법은 갑상선 종양의 크기, 림프절 전이 발생율, 원격전이 발생율 또는 재발율을 판단하는 단계를 추가적으로 실시할 수 있다. 상기 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체에서의 Slit2 및 Robo1의 발현이 양성인 경우 갑상선 종양의 크기가 작고, 림프절 전이, 원격전이 및 재발의 발생율이 낮은 것으로 판단한다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체로부터 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 측정하는 원발성 갑상선암 전이진단키트를 제공한다. 상기 키트에서는 전이되지 않은 갑상선암 검체와 비교하여 상기 Slit2 또는 Robo1의 발현이 감소하는 경우 원발성 갑상선암이 전이된 것으로 판단한다.
본 발명의 키트는 상술한 원발성 갑상선암 전이진단을 위한 정보제공방법을 이용하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 원발성 갑상선암 전이 억제물질의 스크리닝 방법을 제공한다:
(a) 원발성 갑상선암 세포에 시험물질을 접촉시키는 단계; 및
(b) 상기 세포 내의 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 분석하는 단계,
시험물질을 접촉시키지 않은 대조군과 비교하여, 상기 시험물질을 처리한 세포 내의 SLIT2 또는 ROBO1의 발현이 증가하는 경우, 원발성 갑상선암 전이 억제물질로 판단한다.
본 발명의 스크리닝 방법은 시험물질의 존재 및 부재하에서 Slit2 또는 Robo1의 발현율을 비교분석하는 방법으로서 원발성 갑상선암 전이 억제물질을 스크리닝하는데 유용하게 사용될 수 있다. 즉, 시험물질을 접촉시키지 않은 대조군과 비교하여, 시험물질을 처리한 세포 내의 Slit2 또는 Robo1의 발현이 증가하는 경우, 상기 시험물질을 원발성 갑상선암 전이 억제물질로 판단할 수 있다.
본 발명을 각각의 단계 별로 상세하게 설명하면 다음과 같다:
단계 (a): 원발성 갑상선암 세포와 시험물질의 접촉
우선, 원발성 갑상선암 세포에 시험물질을 처리한다.
상기 시험물질은 원발성 갑상선암 세포와 접촉하여, 암 전이와 관련된 기전(예컨대, 세포이동성, 전이능력, 혈관신생 관련 단백질 발현)에 영향을 준다.
상기 접촉은 인 비트로 또는 인 비보 상에서 수행될 수 있으며, 예컨대 상기 방법이 (1) 인 비트로 분석방법일 경우에는 상기 세포 및 시험물질을 인 비트로 상(예컨대, 세포 배양 플레이트)에서 결합시켜 수행할 수 있고, (2) 인 비보 분석방법일 경우에는 원발성 갑상선암 세포를 포함하는 인 비보 상의 개체에 상기 시험물질을 투여하여, 상기 세포와 시험물질을 접촉을 유도할 수 있다.
본 발명의 암 전이 억제물질의 스크리닝 방법에 의해 분석되는 시험물질은 화학물질, 뉴클레오타이드, 안티센스-RNA, siRNA(small interference RNA), miRNA, 펩타이드, 단백질, 항체 및 천연 추출물을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 전이억제 활성 평가방법에 의해 분석되는 시험물질이 화합물인 경우, 상기 화합물은 단일 화합물 또는 화합물들의 혼합물(예컨대, 천연 추출물 또는 세포 또는 조직 배양물)일 수 있다. 시험물질은 합성 또는 천연 화합물의 라이브러리로부터 얻을 수 있다. 이러한 화합물의 라이브러리를 얻는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예컨대, 합성 화합물 라이브러리는 Maybridge Chemical Co.(UK), Comgenex(USA), Brandon Associates(USA), Microsource(USA) 및 Sigma-Aldrich(USA)에서 상업적으로 구입 가능하며, 천연 화합물의 라이브러리는 Pan Laboratories(USA) 및 MycoSearch(USA)에서 상업적으로 구입 가능하다. 시험 물질은 당업계에 공지된 다양한 조합 라이브러리 방법에 의해 얻을 수 있으며, 예를 들어, 생물학적 라이브러리, 공간 어드레서블 패러럴 고상 또는 액상 라이브러리(spatially addressable parallel solid phase or solution phase libraries), 디컨볼루션이 요구되는 합성 라이브러리 방법, “1-비드 1-화합물” 라이브러리 방법, 그리고 친화성 크로마토그래피 선별을 이용하는 합성 라이브러리 방법에 의해 얻을 수 있다. 분자 라이브러리의 합성 방법은, DeWitt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 6909, 1993; Erb et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 11422, 1994; Zuckermann et al., J. Med. Chem. 37, 2678, 1994; Cho et al., Science 261, 1303, 1993; Carell et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33, 2059, 1994; Carell et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33, 2061; Gallop et al., J. Med. Chem. 37, 1233, 1994 등에 개시되어 있다.
한편, 본 발명의 스크리닝 방법에 있어서, 시험물질은 검출가능한 표지(detectable label)로 레이블링될 수 있다. 예를 들어, 상기 검출가능한 표지(detectable label)는, 화학적 표지(예컨대, 바이오틴), 효소 표지(예컨대, 호스래디쉬 퍼옥시다아제, 알칼린 포스파타아제, 퍼옥시다아제, 루시퍼라아제, β-갈락토시다아제 및 β-글루코시다아제), 방사능 표지(예컨대, C14, I125, P32 및 S35), 형광 표지[예컨대, 쿠마린, 플루오레세인, FITC(fluoresein Isothiocyanate), 로다민 6G(rhodamine 6G), 로다민 B(rhodamine B), TAMRA(6-carboxy-tetramethyl-rhodamine), Cy-3, Cy-5, Texas Red, Alexa Fluor, DAPI(4,6-diamidino-2-phenylindole), HEX, TET, Dabsyl 및 FAM], 발광 표지, 화학발광(chemiluminescent) 표지, FRET(fluorescence resonance energy transfer) 표지 또는 금속 표지(예컨대, 금 및 은)이다.
검출가능한 표지가 레이블링된 시험물질을 이용하는 경우, 시험물질의 세포 내 위치 또는 특정 단백질과의 결합 여부는 표지로부터 나오는 시그널을 검출하여 분석할 수 있다. 예를 들어, 표지로서 알칼린 포스파타아제가 이용되는 경우에는, 브로모클로로인돌일 포스페이트(BCIP), 니트로 블루 테트라졸리움(NBT), 나프톨-AS-B1-포스페이트(naphthol-AS-B1-phosphate) 및 ECF(enhanced chemifluorescence)와 같은 발색반응 기질을 이용하여 시그널을 검출한다. 표지로서 호스 래디쉬 퍼옥시다아제가 이용되는 경우에는 클로로나프톨, 아미노에틸카바졸, 디아미노벤지딘, D-루시페린, 루시게닌(비스-N-메틸아크리디늄 니트레이트), 레소루핀 벤질 에테르, 루미놀, 암플렉스 레드 시약(10-아세틸-3,7-디하이드록시페녹사진), HYR(p-phenylenediamine-HCl and pyrocatechol), TMB(tetramethylbenzidine), ABTS(2,2‘-Azine-di[3-ethylbenzthiazoline sulfonate]), o-페닐렌디아민(OPD) 및 나프톨/파이로닌와 같은 기질을 이용하여 시그널을 검출한다.
단계 (b): Slit2 또는 Robo1 의 발현율 분석
이어, Slit2 또는 Robo1의 발현율을 분석한다.
본 발명에 따르면, (ⅰ) 상기 시험물질이 처리된 세포의 Slit2 또는 Robo1의 mRNA 발현 레벨을 분석하거나, (ⅱ) 상기 시험물질이 처리된 세포 내의 Slit2 또는 Robo1의 단백질 발현 레벨을 분석함으로써 실시할 수 있다. 시험물질을 접촉시키지 않은 대조군과 비교하여, 상기 시험물질을 처리한 세포 내의 Slit2 또는 Robo1의 발현이 증가하는 경우, 원발성 갑상선암 전이 억제물질로 판단한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체로부터 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 측정하는 단계; 및 (b) 정상 갑상선 검체와 비교하여 상기 SLIT2 또는 ROBO1의 발현이 높은 경우 원발성 갑상선암인 것으로 판단하는 단계를 포함하는 원발성 갑상선암 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.
본 발명은 원발성 갑상선암 진단을 위한 정보제공방법으로서, 상술한 “원발성 갑상선암 전이진단을 위한 정보제공방법”과 공통되는 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
본 발명의 일 예에 따르면, 상기 갑상선암은 갑상선 유두암이다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에 따르면, 본 발명자들은 갑상선암 세포주와 갑상선암 조직에서 실시간 중합효소 연쇄반응 방법을 통해 Slit-Robo 경로의 발현을 비교하였다. 갑상선 유두암, 양성 갑상선 종양, 정상 갑상선 조직으로 구성된 갑상선 조직 코호트를 구성하고, 이들에서 조직미세배열 슬라이드를 제작하여 Slit과 Robo의 면역화학염색을 시행하였으며 임상병리적 특성에 따른 Slit-Robo 발현의 차이를 비교하였다. 그 결과, 모든 갑상선암 세포주에서 Slit의 모든 아형과(Slit1, Slit2 및 Slit3), Robo의 모든 아형(Robo1, Robo2, Robo3 및 Robo4)의 발현이 확인되었고, 특히 Slit2, Slit3 및 Robo1, Robo4의 발현이 높았다(도 4a 및 도 4b 참조). 또한, 신선동결갑상선 조직을 이용하여 정상 및 갑상선 유두암 조직에서 Slit및 Robo 발현을 확인하였고 정상 조직에 비해 유두암 조직에서 Slit 및 Robo 발현이 증가하여 있었다(도 5 참조). 갑상선 조직미세배열 슬라이드에서 Slit2와 Robo1의 면역화학염색을 시행하였을 때 Slit2 및 Robo1 모두 정상 또는 양성 조직 보다 갑상선 유두암에서 발현이 뚜렷하게 증가하였다(도 6 및 도 7 참조). 하지만 림프절 전이 또는 원격전이가 있는 경우 Slit2와 Robo1의 발현이 오히려 감소하였는데, 이러한 차이는 Slit2에서 더 뚜렷하였다. Slit-Robo 발현과 환자의 임상경과의 연관성을 분석하였을 때 Slit2의 발현 저하는 림프절 전이 및 원격전이, 재발 위험 증가와 유의한 연관을 보였고, 이러한 연관성은 BRAF 변이 유무와는 무관하였다(표 1 및 표 2 참조).
본 발명의 일 예에 따르면, 본 발명의 정보제공방법은 Slit 1, Slit 3, Robo 2, Robo 3 및 Robo 4 로 구성된 군에서 선택된 1 이상의 발현여부를 측정하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 방법에서 Slit2 또는 Robo1의 발현율은 유전자 발현 레벨 또는 단백질 발현 레벨을 측정함으로서 분석할 수 있고, 그 상세한 방법은 상술한 바와 같다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체로부터 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 측정하는 원발성 갑상선암 전이진단키트를 제공한다. 상기 키트에서는 정상 갑상선 검체와 비교하여 상기 SLIT2 또는 ROBO1의 발현이 높은 경우 원발성 갑상선암인 것으로 판단한다.
본 발명의 키트는 상술한 원발성 갑상선암 진단을 위한 정보제공방법을 이용하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 원발성 갑상선암 전이진단을 위한 정보제공방법 및 이를 이용한 전이진단키트에 관한 것이다.
(b) 본 발명자들은 SLIT-Robo 경로의 활성 저하는 큰 종양 크기, 림프절 전이, 원격전이와 재발 등의 갑상선암의 나쁜 예후와 연관 있음을 최초로 규명하였다.
(c) 본 발명자들은 SLIT2-Robo1 발현율 측정을 이용하여 원발성 갑상선암 전이여부를 진단할 수 있는 방법을 제안한다.
(d) 또한, 본 발명은 최초로 갑상선암에서 종양 억제 인자로서의 SLIT-Robo 경로의 역할을 확인하였으며, 새로운 바이오마커 및 새로운 분자 치료 표적으로 SLIT2의 가능성을 제시한다.
도 1은 SLIT2-Robo1 경로 활성에 따른 세포 내 신호체계 변화 모식도이다.
*β-cat, beta-catenin; PI3K, phosphatidyl inositol 3-kinase; Akt, v-akt murine thymoma viral oncogene; GSK3 β, glycogen synthase kinase-3 beta; srGAP, SLIT-Robo Rho GTPase activating protein; E-cad, E-cadherin.
도 2는 갑상선 조직 미세 슬라이드에서 SLIT2 면역화학염색 결과의 예를 나타낸 것이다. A/C/E/F는 SLIT2 발현 음성의 예이고, B/D/G/H는 SLIT2 발현 양성의 예시이다. Normal : 대응되는 정상 조직; NH :결절성과증식증; FA :여포성 선종; PTC :갑상선 유두암.
도 3은 갑상선 조직 미세 슬라이드에서 Robo1 면역화학염색 결과의 예를 나타낸 것이다. A/B/D/E/F는 Robo1 발현 음성의 예이고 C/G/H는 Robo1 발현 양성의 예시이다. Normal : 대응되는 정상 조직; NH :결절성과증식증; FA :여포성 선종; PTC :갑상선 유두암
도 4a 및 도 4b는 갑상선암 세포주의 SLIT-Robo 발현정도를 나타낸 것이다. 모든 Robo, SLIT 아형의 발현을 18S 발현과 비교하여 ΔCT value를 구하였으며, 그 중 가장 ΔCT value가 큰 Robo 및 SLIT의 아형을 기준으로 하여 상대발현도(2-ΔΔCT value)을 나타내었다. (4a) Robo, (4b) SLIT.
도 5는 정상 및 갑상선암 신선동결조직에서 SLIT과 Robo 발현을 비교한 결과이다. 모든 Robo 및 SLIT 아형의 발현을 18S 발현과 비교하여 ΔCT value를 구하였으며, 정상 조직 중 가장 ΔCT value가 큰 Robo 및 SLIT의 아형을 기준으로 하여 상대발현도(2-ΔΔCT value)을 나타내었다.
도 6은 갑상선 조직형에 따른 Robo1 면역화학염색 양성률을 비교한 결과이다. 대응되는 정상 조직과 양성 갑상선 종양에 비해 갑상선 유두암에서 현저한 Robo1 양성률 증가를 나타내었다. Benign: 양성 갑상선 종양 ; PTC : 갑상선 유두암; Normal : 대응되는 정상 조직.
도 7은 갑상선 조직형에 따른 SLIT2 면역화학염색 양성률을 비교한 결과이다. 대응되는 정상 조직과 양성 갑상선 종양에 비해 갑상선 유두암에서 현저한 SLIT2 양성률 증가를 나타내었다. Benign: 양성 갑상선 종양 ; PTC : 갑상선 유두암; Normal : 대응되는 정상 조직.
도 8은 Robo1 및 SLIT2 면역화학염색 양성률과 림프절 전이 및 원격 전이의 관련성을 비교한 것이다. 갑상선 유두암에서 림프절 전이가 동반되면 Robo1 및 SLIT2 양성률이 의미 있게 감소하였다. 또한 원격전이의 동반은 SLIT2 양성률 감소와 뚜렷한 연관성을 나타내었다.
도 9는 Robo1/SLIT2 발현에 따른 무재발 생존율을 비교한 결과이다. SLIT2 발현 감소는 현저한 무재발 생존 악화와 통계적으로 유의한 연관성을 나타내었다.
도 10은 SLIT 투여에 따른 갑상선암 세포주의 성장 변화를 나타낸 결과이다(세포 수 측정). BCPAP 와 TPC-1 세포주에서 농도 의존적인 성장 감소 효과가 관찰되었다.
도 11은 SLIT 투여에 따른 갑상선암 세포주의 성장 변화를 나타낸 결과이다(BrdU 측정). BCPAP와 TPC-1 세포주에서 농도 의존적인 성장 감소 효과가 관찰되었으며 세포 수 측정 결과와 유사한 결과를 나타내었다.
도 12는 SLIT 투여 후 갑상선암 세포주의 이동능 변화를 나타낸 결과이다(상처치유분석). BCPAP 세포주에 SLIT2와 SLIT3 3nM을 투여하고 24시간 관찰하였을 때 대조군에 비해 현저한 상처치유억제가 관찰되었다.
도 13은 SLIT 투여 후 갑상선암 세포주의 이동능 변화를 나타낸 결과이다(Transwell chamber 침습분석). 대조군과 비교하여, BCPAP 세포주에 SLIT2와 SLIT3를 투여하였을 때 아래 공간으로 침습한 세포의 수 및 흡광도가 모두 현저히 감소하였다.
도 14는 SLIT 투여 후 분자신호전달체계의 변화를 나타낸다. SLIT2 및 SLIT3 투여시 활성(active) 베타카테닌의 발현이 감소하고 E-cadherin의 발현이 증가하는 것을 확인하였다.
도 15는 SLIT 투여 후 Wnt/beta-catenin 활성도의 변화를 나타낸다. SLIT 투여는 STF(Super 19X TOPFlash) 형질전환 세포에서 Wnt3A 투여로 활성된 LEF/TCF 전사를 의미 있게 억제하였다(*p < 0.01).
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
연구재료
세포 배양에 필요한 열불활성화된 우태아 혈청, 페니실린-스트렙토마이신계 항생제, 인산염 완충용액 (PBS), 2.5% Trypsin-EDTA, RPMI-1640, DMEM 배지는 Gibco (Grand Island, NY, USA) 에서 구입하였다. SLIT2 단백과 조직의 면역화학염색에 이용된 Robo1 일차 항체, GAPDH 일차항체는 Abcam (Cambridge, MA, USA)에서 구입하였고 SLIT3 단백은 Abnova (Jhongli, Taiwan)에서 구입하였다. RNeasy Mini 키트와 QuantiFastSYBRGreen PCR 키트, QIAampDNA FFPE 조직 키트는 Qiagen (Valencia, CA, USA) 에서 구입하였다. 한천은 Bioline (Taunton, MA, USA)에서, 니트로셀룰로스막은 Amersham Bioscience (Piscataway, NJ, USA)에서 구입하였다. TRIzol RNA 분리시약, NuPAGE 겔, HRP 화학발광면역기질시약, LipofectamineTM 2000은 Invitrogen (Carlsbad, CA, USA)에서, RevertAid 첫가닥 상보적DNA 합성키트는 Fermentas (Glen Brunie, MD, USA)에서 구입하였다. Cell proliferation ELISA, BrdU kit는 Roche (Mannheim, Germany) 에서 구입하였다. 세포 침습능 분석을 위한 transwell chamber 키트는 Cell biolabs (San Diego, CA, USA) 에서 구입하였다. 단백질 정량에 사용된 Quanti-iTTM 단백 분석키트는 Molecular Prob (Eugene, OR, USA) 에서 구입하였다. 조직의 면역화학염색에 이용된SLIT2 일차 항체와 beta-catenin에 대한 일차항체는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입하였다. 활성화 beta-catenin에 대한 일차 항체는 EMD Milipore (Billerica, MA, USA)에서, E-cadherin에 대한 일차항체는 Cell signaling (Danver, MA, USA)에서 구입하였다. 이차항체는 Vector Laboratories (Burlingame, CA, USA)에서 구입하였다. 발광리포터 분석을 위한 이중 발광효소 키트는 Promega (Madison, WI, USA) 에서 구입하였다. 발광 리포터 분석을 위해 사용된 super 19X TOPFlash(STF)와 8XFOPFlash(SFF) 벡터 및 Renilla 발광효소 벡터, Wnt3A 분비 L 292세포는 Amiee Kohn의 실험실에서 구하였다.
연구방법
1. 세포배양
갑상선암 세포주들은 각 세포에 적합한 배지를 이용하여 5% 이산화탄소, 37℃ 조건의 항온배양기에서 배양되었다. 대표적으로 이용된 BCPAP와 TPC-1 세포주는 10% 우태아 혈청과 항생제를 첨가한RPMI-1640 배지에서 배양되었고, Cal62 세포주는 20% 우태아 혈청과 항생제를 첨가한 DMEM 배지에서 배양되었다. 배양액은 2-3일마다 교환하였으며 세포가 80% 정도 차면 계대배양을 하였다.
2. 실시간 중합 효소 연쇄 반응
세포에서 RNA 분리는 RNeasy Mini 키트 (Qiagen) 를 이용하였는데, 세포의 펠렛에 600 의 RLT 완충용액과 beta-mercaptoethanol 혼합용액을 넣고 섞어준 후 70% 에탄올 동량을 넣고 10000 rpm에서 1분간 원심분리한다. 하등액은 버리고 RWI 용액 700 , RPE 500 , RPE 500 용액을 차례로 넣고 원심분리 하면서 하등액을 버리고 말린다. RNase free 증류수 30 를 넣고 5분간 기다린 후 다시 13000 rpm에서 2분간 원심분리하고 얻어진 하등액으로 RNA 정량하였다.
조직에서 RNA 분리는 TRIzol RNA 분리시약을 이용하였고 조직에 1 mL의 trizol 용액을 투여한 후 갈고, 클로로포름 200 을 넣고 3분간 섞은 후 4℃, 12000 rpm에서 15분간 원심분리 하였다. 상층액만 모아 이소프로필 알콜 500 을 추가하여 섞어주고 이 후 10분간 상온에서 반응시켰다. 다시 10분간 원심분리 후 상층액을 버리고 75% 에탄올 1 mL을 추가하여 섞어준 후 4℃, 15000 rpm에서 5분간 원심분리하였다. 이 후 상층액을 버리고 말린 후 RNase free 증류수 30 을 넣고 60℃에서 10 여분간 열고정한 후 정량하였다.
추출된 RNA 에서 RevertAid 첫가닥 상보적DNA 합성키트 (Fermentas) 를 이용하여 첫 번째 상보DNA를 합성하였다. RNA 1 에 oligo(dT) 18 primer (0.5 / ) 1 와 DEPC 처리수를 추가하여 12 를 만들고 5배 reaction buffer, RioLock RNase 억제제 (20 U/) 1 , 10 mM dNTP 2 , RevertAid 역전사효소 (200 U/) 1 를 추가하여 총 20 를 만든다. 시료를 42℃ 60분, 70℃ 5분간 반응한 후 얼음에 식혔다.
이 후 QuantiFastSYBRGreen PCR 키트를 이용하였고 합성된 상보 DNA 1 에 2배 QuantiFast SYBR Green PCR 혼합액 12.5 와 10 pM의 전방 및 후방 프라이머 각각1 , RNAse free 증류수를 혼합하여 25 의 시료를 만들었다. 사용된 프라이머 염기 서열과 생성물 크기는 다음과 같다. Robo1, 전방 프라이머 5’-ccatcagtccactgccactc-3’, 후방 프라이머 5’-catgtggccagtctcctctg-3’, 92 bp; Robo2, 전방 프라이머 5’-agtgtcaccttgtcctggca-3’, 후방 프라이머 5’-gccagctgttgctcactgat-3’, 101 bp; Robo3, 전방 프라이머 5’-ctttggattgggcatgtgag-3’, 후방 프라이머 5’-actgagggagccagatgctt-3’, 100 bp; Robo4, 전방 프라이머 5’-gtttcggtctagagcccagg-3’, 후방 프라이머 5’-aggaagatctcatcccgtgg-3’, 86 bp ; SLIT1 , 전방 프라이머 5’-gtgtgggcaactacacctgc-3’, 후방 프라이머 5’-atgggttcagatccggagag-3’, 97 bp ; SLIT2, 전방 프라이머 5’-gcttgccaaacaaccaagaa-3’, 후방 프라이머 5’-acaaaggaggagccgtcagt-3’, 136 bp; SLIT3, 전방 프라이머 5’- gcagaagcccatagcaacaa-3’, 후방 프라이머 5’-ttccatttgttcgaccctca-3’, 126 bp. 18S rRNA가 housekeeping gene으로 이용되었고 이의 전방 프라이머는 5’-aaacggctaccacatccaag-3’, 후방 프라이머는5’-cctccaatggatcctcgtta-3’ 였다. PCR에는 7500 Fast Real-time PCR system (Applied biosystems, Foster city, CA, USA) 이 사용되었고 95℃에서 10초간 분리, 60℃에서 30초간 합성되는 과정을 40주기 반복하여 증폭하였다. 이 후 증폭 곡선을 그려 정량하였다.
3. 갑상선 조직 코호트 구성 및 조직미세배열 슬라이드제작
본 연구는 본원의 임상연구심의위원회의 허가를 얻어 2003년부터 2012년까지 본원에서 갑상선 유두암 또는 양성 갑상선 종양으로 갑상선 절제술을 시행 받고 수술 후 보관 중인 파리핀 블록 조직이 있는 239명의 환자들로 갑상선암 조직 코호트를 구성하였고 이들의 임상병리학적 소견에 대한 자료를 수집하였다. 이 중 양성 갑상선 결절인 결절성 과증식증과 여포성 선종 조직을 보이는 경우는 각각 36명, 41명이었고 갑상선 유두암 환자가 160명 이었는데 이들 중 대응되는 정상 갑상선 조직이 있는 환자는 154명이었고 림프절 전이를 동반한 경우는 68명 이었다. 전체 393개의 조직에 대해 조직미세배열 슬라이드를 제작하였다.
모든 조직은 Hematoxylin-Eosin 염색을 시행하였고 숙련된 병리 의사에 의해 다시 한 번 검토 후 적절한 부분을 선택하여 조직미세배열 슬라이드를 제작하였다. 슬라이드 제작에는 tissue-arraying instrument (Beecher Instruments, Sliver Spring, USA)가 사용되었으며 공여 블록에서 지름 2 mm의 조직 실린더를 이용하여 지정한 부분을 펀치하여 수여 블록으로 옮겼고 정상 조직과 양성 갑상선 종양 조직에서는 한 샘플당 1개, 갑상선 유두암 조직에서는 한 샘플당 2개의 코어를 얻었다.
4. 갑상선 조직의 면역화학염색
조직미세배열 슬라이드를 이용하여 SLIT2 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, USA)와 Robo1(Abcam, Cambridge, UK) 에 대한 면역화학염색을 시행하였고 Bench markautomatic immunostaining device (Roche Tissue Diagnostics, Tucson, USA)와 UltraviewTM Universal DAB Detection 키트(Ventana Medical Systems, Tucson, USA)가 이용되었다. 면역화학염색 결과는 반정량적으로 양성 또는 음성으로 판단되었는데, 숙련된 병리과 의사가 염색 강도를 0-3점으로 분류하고 2점 이상인 경우를 양성으로 하였다. 대표적인 예시를 도 2 및 도 3에 정리하였다.
5. 갑상선 조직 BRAF V600E 돌연변이 분석
SLIT-Robo 경로의 발현과 BRAF 돌연변이의 연관성을 확인하기 위해 조직미세배열 슬라이드를 제작한 갑상선 조직 코호트에서 DNA를 추출하여 BRAF V600E변이 유무를 확인하였다. 파라핀블록은 미세절단하였고, 미세절단된 조직에서 QIAampDNA FFPE 조직키트를 이용하여 유전체 DNA를 추출하였다. V600E 변이가 위치한 BRAF 유전자의 exon 15번을 증폭하였고 전방 프라이머는 5’-tgcttgctctgataggaaaa-3’, 후방 프라이머는 5’-ctgatgggacccactccat-3’을 이용하였으며 Takara PCR thermal cycler (Applied biosystems) 에서 94℃ 에서 30초, 58℃에서 30초, 70℃에서 30초의 과정을 36회 반복하였다. 증폭된 DNA는 1% 한천 겔에서 전기 영동하였으며 Gel-doc 시스템에서 사진을 찍어 확인하였다.
6. 세포 생존 및 이동능 분석
세포 생존은 직접 세포 수를 측정하는 방법과 Bromodeoxyuridine(BrdU)을 이용한 발색분석법을 이용하여 확인하였다. 세포 수는 24 웰 플레이트에 각각 1.5X103 세포를 분주하고 24시간 후 다양한 농도의 SLIT을 투여하고 72시간 후 측정하였는데, 10 의 시료와 동량의 트립판 블루 용액을 혼합한 후 EVETM automated cell counter (NanoEnTek, Korea)를 이용하였다. BrdU 발색분석은 96웰 플레이트에 3000개의 세포를 100 로 분주한 후 24시간 후 다양한 농도의 SLIT을 투여하고 48시간 후 진행하였고, 10 의 BrdU labeling 용액을 각 웰 플레이트에 분주하고 2시간 반응시킨 후 배양액을 제거하고 200 의 fixDent 용액을 넣고 30분간 상온에서 반응시킨 후 이를 제거하고 100 의 anti-BrdU POD 용액을 넣고 90분간 반응, 세척 후 기질 용액을 넣고 370 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.
세포 이동능은 상처치유분석 및 transwell chamber 침습검사를 통해 측정하였는데, 상처치유분석은 세포를 6 웰 플레이트에 8 X 105 개 씩 분주하고 24시간 후 상처를 만들고 3 nM의 Slit2 와 Slit3 을 처리한 후 24시간 동안의 상처거리 변화를 관찰하였다. Transwell chamber 침습검사는 CytoSelect TM 24-well cell invasion assay 키트를 이용하여 내부 공간에는 세포 5 X 105 개와 우태아혈청 무첨가 배지 및 Slit2 3 nM 및 Slit3 3 nM를 넣었고, 외부 공간에는 우태아혈청 첨가 배지를 넣고 매뉴얼에 따라 실험을 진행하였다. 결과는 2 곳의 고배율(X 1000) 시야 에서 염색된 세포 수를 측정하여 평균값을 구하고 추출 용액으로 염색약을 녹여낸 후 560 nm 파장에서 흡광도를 측정한 것을 나타내었다.
7. 웨스턴 블롯 분석
단백 추출을 위해 샘플을 만들 세포를 차게 유지된 PBS 용액으로 2회 세척하여 반응을 종료시켰다. 이 후 단백질 분해 효소 억제제를 첨가한 세포용해완충액을 이용하여 세포를 모아 분해한 후 4℃, 13,000 rpm에서 30분 동안 원심분리하였고, 단백질을 포함하는 상층액을 분리하여 단백질 정량을 하였다. 30 ug의 단백질을 10% NuPAGE 겔에서 전기영동하여 전개시킨 후 니트로셀룰로스막으로 이동시켰다. 막에 해당하는 일차항체 (1:1000 희석)와 18시간 동안 냉장 반응 시킨 후, HRP가 연결되어 있는 이차항체 (1:5000 희석)로 2시간 동안 반응 시켰으며 이 후HRP 화학발광면역기질시약을 이용하여 필름 감광 하였다. 단백 발현량은 각각의 샘플에서 GAPDH 발현량으로 비교하였다.
8. 발광 리포터 분석
24웰 플레이트에 1 X 105 세포를 분주하고 70% 정도 차면 DNA 형질주입을 진행하였다. 먼저 각 우물 당 50 의 DNA-Lipofectamine 혼합액 (500 ng의 STF 또는 SFF 및 50 ng renilla 벡터, lipofectaminTM 2000 1.5 ) 을 넣고 4시간 동안 반응시켰다. 이 후 각 우물의 조건에 따라 Wnt3A 조건배지 또는 일반 배지를 투여하였고, SLIT 투여가 필요한 경우 SLIT2 5 nM을 투여하였다. Wnt3A 조건 배지는 L292 세포를 안정화되게 키운 후 세포가 100 mm 배양 접시에서 90% 정도 찼을 때2% 우태아혈청을 포함한 DMEM 배지를 넣어 2-3일 째에 배지를 모아 0.45 로 필터하여 사용하였고, 세포에는 20% 농도로 투여하였다. 24시간 후 발광효소 활성도를 확인하였고, 먼저 100 발광효소분석 시약과 20 세포 lysate를 반응시킨 후 firefly 발광 활성을 확인, Stop & Go 용액 100 를 투여한 후 renilla 발광효소 발광활성을 확인하였으며, 결과는 firefly 발광 활성도를 renilla 발광 활성도로 나눈 값으로 나타내었다.
이 실험은 Wnt/beta-catenin 경로의 활성도를 알아보기 위한 방법으로 Wnt가 세포 표면 복합 수용체와 결합하면 이것은 beta-catenin의 인산화를 억제, beta-catenin의 핵 내로의 이동을 촉진하고 이는 lymphoid enhancer factor/T-cell factor (LEF/TCF) 전사 인자와 결합하여 유전자 발현을 조절하는 것을 이용하였다. STF는 정상적인 LEF/TCF 전사인자와 firefly 발광효소가 결합된 벡터이고, SFF는 변형된 LEF/TCF 전사인자가 결합된 것으로 음성 대조군으로 이용된다.29)
결과
1. 갑상선암 세포주와 갑상선암 조직의 SLIT-Robo mRNA 발현
다양한 갑상선암 세포주에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 통해 SLIT과 Robo 아형의 mRNA 발현량을 확인하였다. 그림에서 보는 것과 같이 갑상선암 모든 세포주에서 모든 SLIT과 Robo 아형의 mRNA 발현이 확인되었는데, 특히 Robo1, Robo4 및 Slit2, Slit3의 발현이 많았다(도 4a 및 도 4b). 신선 동결 갑상선암 조직과 그에 대응되는 정상 갑상선 조직에서 12 개에서 Slit과 Robo의 발현을 확인하였을 때도 정상 조직에 비해 갑상선암 조직에서 SLIT과 Robo 모든 아형의 발현이 증가하였다 (도 5).
2. 갑상선 조직의 Slit-Robo 발현
갑상선암 조직 코호트를 대상으로 제작한 조직 미세배열 슬라이드를 이용하여 Robo1 및 SLIT2의 면역화학염색을 시행하였다. Robo1의 경우 정상 조직, 양성 갑상선 종양에서는 각각 29%, 21% 의 양성률을 보였으나 갑상선 유두암 조직에서는 81%에서 양성을 보여 정상 및 양성 조직 보다 갑상선 유두암 조직에서 발현이 유의하게 증가하였다. Slit2 또한 유사한 결과를 보였는데, 양성 갑상선 종양에서 Slit2의 양성률은 65%, 갑상선 유두암 조직의 양성률은 85%였고, 정상 조직에서는 2.6%로 정상 또는 양성 갑상선 조직에 비해 갑상선 유두암 조직의 Slit2 발현이 유의하게 증가하는 것을 확인하였다. (도 6 및 도 7).
3. 면역화학염색에 따른 Slit-Robo 발현 정도와 환자 임상양상 비교 분석
조직 미세배열 슬라이드 면역화학염색 결과에 따른 Slit-Robo 발현 정도와 환자의 임상 양상을 비교 분석하였다. Slit2와 Robo1의 발현 저하는 림프절 전이의 증가와 통계적으로 유의한 관련을 보였는데 림프절 전이가 없는 갑상선 유두암의 Robo1 양성률은 87%, Slit2 양성률을 95% 이나 림프절 전이가 동반된 경우 각각 72%, 72% 로 낮았다. 특히 Slit2 발현 감소는 림프절 전이뿐 만 아니라 종양의 림프혈관계 침범, 원격전이 및 재발 위험 증가와도 통계적으로 유의한 연관을 보였다. 그러나 이러한 연관성은 BRAF 변이 유무와는 무관하였다. (도 8, 표 1, 표 2, 그림 도 9)
Robo1 발현에 따른 임상양상 비교
- 전체(total) Robo1 p-value
음성 양성
number 160 31 129 -
나이 47.4 ± 13.6 46.0 ± 13.0 47.7 ± 13.8 0.51
성 (male) 30 (18.8%) 4 (12.9%) 26 (20.2%) 0.35
종양크기 (cm) 2.6 ± 1.3 2.9 ± 1.4 2.5 ± 1.3 0.08
갑상선외 침윤 119 (74.4%) 20 (64.5%) 99 (76.7%) 0.16
림프혈관 침윤 10 (6.3%) 4 (12.9%) 6 (4.7%) 0.09
자궁경부 림프절 전이 68 (42.5%) 19 (61.3%) 49 (38.0%) 0.025
원발성 전이 17 (10.6%) 5 (16.1%) 13 (10.1%) 0.34
재발율 36/155 (23.2%) 5 (16.7%) 31 (24.8%) 0.47
BRAF V600E 113/158 21 (70.0%) 92 (71.9%) 0.84
Slit2 발현에 따른 임상양상 비교
- 전체(total) SLIT2 p-value
음성 양성
number 160 24 136 -
나이 47.4 ± 13.6 44.7 ± 13.1 47.9 ± 13.7 0.29
성 (male) 30 (18.8%) 7 (29.2%) 23 (16.9%) 0.16
종양크기 (cm) 2.6 ± 1.3 2.9 ± 1.5 2.5 ± 1.3
 0.20
갑상선외 침윤 119 (74.4%) 18 (75.0%) 101 (74.3%) 0.94
림프혈관 침윤 10 (6.3%) 4 (16.7%) 6 (4.4%)
 0.022
자궁경부 림프절 전이 68 (42.5%) 19 (79.2%) 49 (36.0%) < 0.001
원발성 전이 17 (10.6%) 10 (41.7%) 8 (5.9%) < 0.001
재발율 36/155 (23.2%) 14 (63.6%) 22 (16.5%) < 0.001
BRAF V600E 113/158 14 (58.3%) 99 (73.9%) 0.12
또한, 대상 환자들을 Slit2와 Robo1의 발현이 모두 양성인 군과 그렇지 않은 군으로 나누어 추가 분석을 시행하였을 때, Slit2와 Robo1이 모두 양성인 경우 종양의 크기가 더 작고 림프절 전이 및 원격전이, 재발이 통계적으로 유의하게 적게 발생함을 확인할 수 있었다 (표 3)
Robo1 및 Slit2 발현에 따른 임상양상 비교
- 전체(total) Robo1 & SLIT2 p-value
기타(others) 모두 양성
number 160 54 106 -
나이 47.4 ± 13.6 45.7 ± 13.6 48.3 ± 13.6 0.26
성 (male) 30 (18.8%) 10 (18.5%) 20 (18.9%)
 0.96
종양크기 (cm) 2.6 ± 1.3 3.0 ± 1.7 2.4 ± 1.0 0.006
갑상선외 침윤 119 (74.4%) 35 (64.8%) 84 (79.2%) 0.06
림프혈관 침윤 10 (6.3%) 6 (11.1%) 4 (3.8%) 0.09
자궁경부 림프절 전이 68 (42.5%) 35 (64.8%) 33 (31.1%) < 0.001
원발성 전이 17 (10.6%) 12 (22.2%) 6 (5.7%) 0.003
재발율 36/155 (23.2%) 17 (33.3%) 19 (18.3%) 0.044
BRAF V600E 113/158 34 (64.2%) 79 (75.2%) 0.191
4. Slit 투여에 따른 갑상선암 세포주 증식 변화
이러한 조직 면역염색결과를 바탕으로 본 연구자들은 갑상선암 세포 모델에서 Slit 투여에 따른 갑상선암 세포주의 변화를 관찰하기로 하였다. 먼저 Slit 투여에 따른 갑상선암 세포주의 증식 변화를 확인하기 위해 무작위로 3가지 갑상선암 세포주 (BCPAP, TPC-1, Cal62)를 선택하였고 0.1 에서 10 nM 사이의 다양한 농도의 Slit2 와 Slit3를 투여하고 72시간 후 세포 성장 변화를 확인하였다. 세포 성장 변화는 세포 수 측정 및 BrdU 측정의 두 가지 방법으로 확인하였으며, 두 방법은 유사한 경향을 보였는데, Slit2 와 Slit3 모두 비교적 농도 의존적으로 세포의 성장을 억제하였다. 그 효과는 갑상선 유두암 유래 세포주인 BCPAP 및 TPC-1에서 좀 더 뚜렷하였는데, 10 nM 농도의 Slit2 투여 시 BCPAP는 최대 43%, TPC-1 는 33% 의 성장 억제 효과가 관찰되었다 (도 10 및 도 11).
5. Slit 투여에 따른 갑상선암 세포주 이동능 변화
BCPAP 갑상선암 세포주를 선택하여 상처치유분석을 통해 Slit 투여에 따른 갑상선암 세포주 이동능 변화를 확인하였다. 3 nM 농도의 Slit2 와 Slit3를 투여하고 24시간 동안 관찰하였을 때 Slit2 및 Slit3 모두 상처치유를 뚜렷하게 억제함을 확인할 수 있었다 (도 12). 또한 Transwell chamber 침습분석에서도 Slit2 와 Slit3 3 nM 투여에 의한 세포 이동능 억제 효과를 관찰할 수 있었다 (도 13).
6. Slit 투여가 세포 성장과 이동에 관련된 신호 전달체계에 미치는 영향
Slit 투여로 성장 억제 및 뚜렷한 세포 이동 감소를 보인 BCPAP 세포주에서 웨스턴 블롯 분석을 통해 세포 내 신호 전달 체계의 변화를 확인하였다. 기존 연구에서 알려진 바와 같이 갑상선암 세포주에서도 Slit 투여는 활성화 beta-catenin의 발현을 억제하고 E-cadherin 활성을 유도하였다 (도 14).
7. Slit 투여에 따른 wnt3A 유도 beta-catenin 경로 활성 변화
Slit의 성장억제 및 세포이동능 억제 효과가 beta-catenin의 활성도 저하에 따른 것임을 한 번 더 확인하기 위해 BCPAP 세포주를 이용하여 발광효소 리포터 분석을 시행하였다. STF 가 형질전환된 세포에서는 wnt3A 조건배지를 투여하였을 때 발광효소 활성비가 280 배 가량 증가하였으나 SFF 형질전환된 세포에서는 그러한 증가가 보이지 않았다. Slit2의 투여는 wnt3A 투여로 인해 활성화된 wnt/beta-catenin 경로를 의미 있게 억제하였으며 STF가 형질전환된 세포에서 wnt3A 조건배지와 Slit2를 같이 투여하였을 때 발광효소 활성비는 평균 67배 였다 (도 15).
고찰
본 연구에서 Slit-Robo 경로의 발현 감소는 림프절 전이, 원격전이, 재발 등 갑상선암의 나쁜 예후와 연관이 있었고, 세포 실험에서 갑상선암 세포주에 Slit을 투여하면 세포의 이동능이 현저히 억제되었으며 beta-catenin의 활성이 억제되고 E-cadherin의 발현이 증가되었다. 이에 Slit-Robo 경로의 발현 감소로 세포 이동능이 증가한 것이 전이 등 나쁜 예후 인자들을 나타내는 종양 표현형을 유발한 것으로 생각된다. 또한, Slit2 및 Slit3의 투여는 농도 의존적으로 갑상선암 세포의 증식을 억제하였고, Slit2 및 Robo1의 조직면역화학염색 결과에서 Slit2 및 Robo1이 모두 양성인 경우 그렇지 않은 경우에 비해 종양 크기가 감소하였다. 이를 통해 Slit-Robo 경로의 활성이 갑상선암의 이동능 뿐 만 아니라 성장 또한 억제하였음을 알 수 있었다. 이러한 결과들은 Slit2가 종양 억제 유전자로서의 역할이 있음을 보고한 이전 다른 암종 연구들의 결과와 일치하며, 갑상선암에서도 Slit이 종양 억제 유전자로서 기능이 있음을 처음으로 확인한 것이다. 또한 본 연구 결과는 갑상선암에서 Slit2가 예후를 예측하는 새로운 바이오마커로서의 역할이 있음을 시사하고 Slit2 단백의 투여가 갑상선암의 새로운 표적 치료제로서 작용할 수 있을 가능성도 보여주었다.
Beta-catenin은 E-cadherin에 의한 세포-세포간의 부착과 EMT를 조절하는 중요한 인자로 알려져 있다. 이전 많은 연구들에서 beta-catenin/E-cadherin 복합체는 Slit과 연관된 세포 이동능 조절에 연관성이 있는 것으로 알려졌고 대표적으로 유방암 세포를 이용한 연구에서도 주변 연조직에서 Slit2의 발현이 증가하면 beta-catenin 경로 억제를 통해 세포의 이동을 억제함을 밝혔다.24) 갑상선암 세포를 이용한 본 연구에서도 웨스턴 블롯 및 발광리포터 분석을 통해 Slit이 beta-catenin 경로 억제를 통해 그 역할을 나타내는 것을 확인하였다. 하지만 Slit-Robo 경로와 beta-catenin 경로가 어떻게 연관이 되는지 그 중간 분자에 대해서는 별로 알려진 바가 없다. 이전 한 연구는 탈유비퀴틴화 효소 USP33이 Robo1의 안정화를 돕고 GSK3b를 활성화하여 beta-catenin을 억제함을 밝힌 바 있으나 이 것만으로 설명은 힘들다.30) 향후 이 중간 경로 분자에 대한 추가 연구가 필요하다.
본 연구에서는 Slit 투여가 갑성선암의 성장도 억제하는 효과를 보였는데, 이전 폐암 세포주 및 췌장암 세포주를 이용한 연구에서는 Slit2 가 종양의 이동능은 억제하지만 성장을 억제하지는 못하였고, 이의 원인은 밝히지 못하였다.20,25) 종양의 크기과 관련하여서는 Slit2와 Robo4의 상호작용 또한 고려가 필요한데, 이전 연구들에서 Slit2와 Robo4의 결합은GTPase ARF6의 활성을 억제함으로써 혈관 안정성을 증가시키고 VEGF 등은 억제하여 오히려 Slit2-Robo4 경로의 활성은 암 조직의 성장을 촉진시킬 수 있을 것으로 알려졌다21 ,22). 이에 본 연구자들은 추가적으로 조직미세배열 슬라이드를 이용하여Robo4에 대한 면역조직화학검사를 시행하였으나 대부분의 (155/160) 의 갑상선 유두암 조직에서 Robo4가 양성으로 확인되었고 정상 갑상선 조직의 96%에서도 Robo4가 양성으로 나타나 이를 통해 Robo4의 역할을 추론하기는 어려웠다 (Data not shown). 향후 Robo4의 역할에 대해 확인이 필요할 것으로 생각된다.
이전 다른 암종 연구 결과에서 정상 조직에 비해 암조직의 Slit-Robo 경로의 활성이 감소하였던 것과 달리16 ,20,25) 갑상선암에서는 정상 조직 보다 암 조직에서 Slit-Robo 경로의 발현이 현저하게 증가하였다. 본 연구에서는 정상에 비해 암 조직에서 Slit2의 발현이 증가하는 원인을 밝히지는 못하였으나 Slit 투여가 갑상선암 세포주 모델에서 뚜렷한 종양의 성장과 전이 억제 효과를 보인 것 및 갑상선 조직 코호트에서 Slit-Robo 경로 활성 저하가 나쁜 예후인자와 결부됨을 고려할 때 정상 조직에서 보다 갑상선암에서 Slit-Robo 경로 활성이 증가하는 것이 갑상선암 발생의 원인이 아닌 그 결과일 수 있다. 즉, 다른 알 수 없는 원인 경로의 변이에 의해 갑상선암이 발달하는 것을 Slit-Robo 경로가 억제하기 위해 이차적으로 증가되었다가, 이러한 증가가 억제되면 갑상선암의 성장과 전이가 활성화 될 가능성이 있다. 또한 갑상선암 자체가 췌장암, 폐암 등 암세포에서 Slit 발현이 감소하였던 다른 암종 보다 악성도가 낮은 것이 이러한 차이의 원인일 수도 있다. 한편, 액손 유도 분자중 하나인 netrin1은 DCC (deleted in colorectal cancer) 와 UNC5 transmembrane 수용체와 결합하여 MAPK 및 AKT 경로를 활성화 하여 세포 사멸을 억제하고 세포의 생존을 돕는 것으로 알려져31 ,32) Slit-Robo 경로 활성 증가 자체가 갑상선암 발생 자체에 영향을 주었을 가능성도 배제할 수 없다. 이를 정확히 규명하기 위해서는 Slit-Robo knockdown 및 과발현 모델을 이용한 추가적인 in vitro 및 in vivo 연구가 필요할 것이다.
서론에서 밝힌 바와 같이 종양 형성과 암세포 이동능에 대한 Slit-Robo 경로의 역할은 단순하지가 않아 각 연구마다 상이한 결과를 보여 주고 있다. 이에 Slit-Robo 경로는 각 암종에 따라, 같은 암종이라 할지라도 그 단계에 따라 각기 다른 영향을 미치고, 각각 Slit과 Robo 아형의 상호작용에 따라서도 각각 다른 역할을 하는 것으로 생각된다15 ). 때문에 다른 암종의 연구 결과를 갑상선암에 그대로 적용하기에는 어려움이 있다. 본 연구는 처음으로 Slit-Robo 경로의 역할을 다각적으로 분석하였고 갑상선암에서 Slit2가 암세포 이동 억제 능력을 가진 종양 억제 유전자로서의 역할이 있음을 밝힌 최초의 연구라는 점에서 그 의의가 크다.
결론
Slit-Robo 경로의 활성 저하, 특히 Slit2의 발현 저하는 갑상선암의 림프절 전이, 원격전이와 재발 등의 나쁜 예후와 연관이 있었다. 세포 실험에서Slit의 투여는 갑상선암 세포주의 이동능을 뚜렷이 억제하였으며 이는 beta-catenin 활성의 억제, E-cadherin 활성 유도에 의한 것으로 생각된다. 본 연구는 처음으로 갑상선암에서 Slit-Robo 경로의 활성과 예후의 연관성을 확인한 것으로, 새로운 바이오마커 및 새로운 분자 치료 표적으로 Slit의 가능성을 제안하였다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
참고문헌
1. Davies, L. and H.G. Welch, Increasing incidence of thyroid cancer in the United States, 1973-2002. Jama, 2006. 295(18): p. 2164-7.
2. Frohlich, E. and R. Wahl, The current role of targeted therapies to induce radioiodine uptake in thyroid cancer. Cancer Treat Rev, 2014. 40(5): p. 665-74.
3. Durante, C., N. Haddy, E. Baudin, S. Leboulleux, D. Hartl, J.P. Travagli, et al., Long-term outcome of 444 patients with distant metastases from papillary and follicular thyroid carcinoma: benefits and limits of radioiodine therapy. J Clin Endocrinol Metab, 2006. 91(8): p. 2892-9.
4. Haugen, B.R. and S.I. Sherman, Evolving approaches to patients with advanced differentiated thyroid cancer. Endocr Rev, 2013. 34(3): p. 439-55.
5. Xing, M., B.R. Haugen, and M. Schlumberger, Progress in molecular-based management of differentiated thyroid cancer. Lancet, 2013. 381(9871): p. 1058-69.
6. Nikiforov, Y.E., N.P. Ohori, S.P. Hodak, S.E. Carty, S.O. LeBeau, R.L. Ferris, et al., Impact of mutational testing on the diagnosis and management of patients with cytologically indeterminate thyroid nodules: a prospective analysis of 1056 FNA samples. J Clin Endocrinol Metab, 2011. 96(11): p. 3390-7.
7. Jang, E.K., D.E. Song, S.Y. Sim, H. Kwon, Y.M. Choi, M.J. Jeon, et al., NRAS Codon 61 Mutation Is Associated with Distant Metastasis in Patients with Follicular Thyroid Carcinoma. Thyroid, 2014. 24(8): p. 1275-81.
8. Xing, M., BRAF mutation in papillary thyroid cancer: pathogenic role, molecular bases, and clinical implications. Endocr Rev, 2007. 28(7): p. 742-62.
9. Xing, M., A.S. Alzahrani, K.A. Carson, D. Viola, R. Elisei, B. Bendlova, et al., Association between BRAF V600E mutation and mortality in patients with papillary thyroid cancer. Jama, 2013. 309(14): p. 1493-501.
10. Rossi, M., M. Buratto, S. Bruni, C. Filieri, F. Tagliati, G. Trasforini, et al., Role of ultrasonographic/clinical profile, cytology, and BRAF V600E mutation evaluation in thyroid nodule screening for malignancy: a prospective study. J Clin Endocrinol Metab, 2012. 97(7): p. 2354-61.
11. Brose, M.S., C.M. Nutting, B. Jarzab, R. Elisei, S. Siena, L. Bastholt, et al., Sorafenib in radioactive iodine-refractory, locally advanced or metastatic differentiated thyroid cancer: a randomised, double-blind, phase 3 trial. Lancet, 2014. 384(9940): p. 319-28.
12. Ho, A.L., R.K. Grewal, R. Leboeuf, E.J. Sherman, D.G. Pfister, D. Deandreis, et al., Selumetinib-enhanced radioiodine uptake in advanced thyroid cancer. N Engl J Med, 2013. 368(7): p. 623-32.
13. Dadu, R., C. Devine, M. Hernandez, S.G. Waguespack, N.L. Busaidy, M.I. Hu, et al., Role of salvage targeted therapy in differentiated thyroid cancer patients who failed first-line sorafenib. J Clin Endocrinol Metab, 2014. 99(6): p. 2086-94.
14. Mehlen, P., C. Delloye-Bourgeois, and A. Chedotal, Novel roles for Slits and netrins: axon guidance cues as anticancer targets? Nat Rev Cancer, 2011. 11(3): p. 188-97.
15. Ballard, M.S. and L. Hinck, A roundabout way to cancer. Adv Cancer Res, 2012. 114: p. 187-235.
16. Ma, W.J., Y. Zhou, D. Lu, D. Dong, X.J. Tian, J.X. Wen, et al., Reduced expression of Slit2 in renal cell carcinoma. Med Oncol, 2014. 31(1): p. 768.
17. Dallol, A., D. Morton, E.R. Maher, and F. Latif, SLIT2 axon guidance molecule is frequently inactivated in colorectal cancer and suppresses growth of colorectal carcinoma cells. Cancer Res, 2003. 63(5): p. 1054-8.
18. Dallol, A., N.F. Da Silva, P. Viacava, J.D. Minna, I. Bieche, E.R. Maher, et al., SLIT2, a human homologue of the Drosophila SLIT2 gene, has tumor suppressor activity and is frequently inactivated in lung and breast cancers. Cancer Res, 2002. 62(20): p. 5874-80.
19. Shi, R., Z. Yang, W. Liu, B. Liu, Z. Xu, and Z. Zhang, Knockdown of SLIT2 promotes growth and motility in gastric cancer cells via activation of AKT/beta-catenin. Oncol Rep, 2014. 31(2): p. 812-8.
20. Gohrig, A., K.M. Detjen, G. Hilfenhaus, J.L. Korner, M. Welzel, R. Arsenic, et al., Axon guidance factor SLIT2 inhibits neural invasion and metastasis in pancreatic cancer. Cancer Res, 2014. 74(5): p. 1529-40.
21. Jones, C.A., N.R. London, H. Chen, K.W. Park, D. Sauvaget, R.A. Stockton, et al., Robo4 stabilizes the vascular network by inhibiting pathologic angiogenesis and endothelial hyperpermeability. Nat Med, 2008. 14(4): p. 448-53.
22. Marlow, R., M. Binnewies, L.K. Sorensen, S.D. Monica, P. Strickland, E.C. Forsberg, et al., Vascular Robo4 restricts proangiogenic VEGF signaling in breast. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(23): p. 10520-5.
23. Biankin, A.V., N. Waddell, K.S. Kassahn, M.C. Gingras, L.B. Muthuswamy, A.L. Johns, et al., Pancreatic cancer genomes reveal aberrations in axon guidance pathway genes. Nature, 2012. 491(7424): p. 399-405.
24. Chang, P.H., W.W. Hwang-Verslues, Y.C. Chang, C.C. Chen, M. Hsiao, Y.M. Jeng, et al., Activation of Robo1 signaling of breast cancer cells by SLIT2 from stromal fibroblast restrains tumorigenesis via blocking PI3K/Akt/beta-catenin pathway. Cancer Res, 2012. 72(18): p. 4652-61.
25. Tseng, R.C., S.H. Lee, H.S. Hsu, B.H. Chen, W.C. Tsai, C. Tzao, et al., SLIT2 attenuation during lung cancer progression deregulates beta-catenin and E-cadherin and associates with poor prognosis. Cancer Res, 2010. 70(2): p. 543-51.
26. Yiin, J.J., B. Hu, M.J. Jarzynka, H. Feng, K.W. Liu, J.Y. Wu, et al., SLIT2 inhibits glioma cell invasion in the brain by suppression of Cdc42 activity. Neuro Oncol, 2009. 11(6): p. 779-89.
27. Zhou, W.J., Z.H. Geng, S. Chi, W. Zhang, X.F. Niu, S.J. Lan, et al., SLIT-Robo signaling induces malignant transformation through Hakai-mediated E-cadherin degradation during colorectal epithelial cell carcinogenesis. Cell Res, 2011. 21(4): p. 609-26.
28. He, H., A. Bronisz, S. Liyanarachchi, R. Nagy, W. Li, Y. Huang, et al., SRGAP1 is a candidate gene for papillary thyroid carcinoma susceptibility. J Clin Endocrinol Metab, 2013. 98(5): p. E973-80.
29. Yasuhara, R., T. Yuasa, J.A. Williams, S.W. Byers, S. Shah, M. Pacifici, et al., Wnt/beta-catenin and retinoic acid receptor signaling pathways interact to regulate chondrocyte function and matrix turnover. J Biol Chem, 2010. 285(1): p. 317-27.
30. Yuasa-Kawada, J., M. Kinoshita-Kawada, Y. Rao, and J.Y. Wu, Deubiquitinating enzyme USP33/VDU1 is required for SLIT signaling in inhibiting breast cancer cell migration. Proc Natl Acad Sci U S A, 2009. 106(34): p. 14530-5.
31. Tang, X., S.W. Jang, M. Okada, C.B. Chan, Y. Feng, Y. Liu, et al., Netrin-1 mediates neuronal survival through PIKE-L interaction with the dependence receptor UNC5B. Nat Cell Biol, 2008. 10(6): p. 698-706.
32. Mehlen, P., S. Rabizadeh, S.J. Snipas, N. Assa-Munt, G.S. Salvesen, and D.E. Bredesen, The DCC gene product induces apoptosis by a mechanism requiring receptor proteolysis. Nature, 1998. 395(6704): p. 801-4.
<110> THE ASAN FOUNDATION <120> A method for diagnosing a metastasis of a primary thyroid cancer and a diagnostic kit using the method <130> PN140592 <160> 12 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1529 <212> PRT <213> slit homolog 2 protein isoform 1 precursor [Homo sapiens] <400> 1 Met Arg Gly Val Gly Trp Gln Met Leu Ser Leu Ser Leu Gly Leu Val 1 5 10 15 Leu Ala Ile Leu Asn Lys Val Ala Pro Gln Ala Cys Pro Ala Gln Cys 20 25 30 Ser Cys Ser Gly Ser Thr Val Asp Cys His Gly Leu Ala Leu Arg Ser 35 40 45 Val Pro Arg Asn Ile Pro Arg Asn Thr Glu Arg Leu Asp Leu Asn Gly 50 55 60 Asn Asn Ile Thr Arg Ile Thr Lys Thr Asp Phe Ala Gly Leu Arg His 65 70 75 80 Leu Arg Val Leu Gln Leu Met Glu Asn Lys Ile Ser Thr Ile Glu Arg 85 90 95 Gly Ala Phe Gln Asp Leu Lys Glu Leu Glu Arg Leu Arg Leu Asn Arg 100 105 110 Asn His Leu Gln Leu Phe Pro Glu Leu Leu Phe Leu Gly Thr Ala Lys 115 120 125 Leu Tyr Arg Leu Asp Leu Ser Glu Asn Gln Ile Gln Ala Ile Pro Arg 130 135 140 Lys Ala Phe Arg Gly Ala Val Asp Ile Lys Asn Leu 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aaaaaatgtt gagaagcgtt tttaacctgt tttgttaatg 6240 ctctatgttt gtatttggaa tatttgaata atgacagatg gtgaagtaac atgcatactt 6300 tattgtgggc catgaaccaa atggttctta cttttcctgg acttaaagaa aaaaagaggt 6360 ttaagtttgt tgtggccaat gtcgaaacct acaagatttc cttaaaatct ctaatagagg 6420 cattacttgc tttcaattga caaatgatgc cctctgacta gtagatttct atgatccttt 6480 tttgtcattt tatgaatatc attgatttta taattggtgc tatttgaaga aaaaaatgta 6540 catttattca tagatagata agtatcaggt ctgaccccag tggaaaacaa agccaaacaa 6600 aactgaacca caaaaaaaaa ggctggtgtt caccaaaacc aaacttgttc atttagataa 6660 tttgaaaaag ttccatagaa aaggcgtgca gtactaaggg aacaatccat gtgattaatg 6720 ttttcattat gttcatgtaa gaagcccctt atttttagcc ataattttgc atactgaaaa 6780 tccaataatc agaaaagtaa ttttgtcaca ttatttatta aaaatgttct caaatacata 6840 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 6895 <210> 11 <211> 7550 <212> DNA <213> Homo sapiens roundabout, axon guidance receptor, homolog 1 (Drosophila) (ROBO1) <400> 11 aattgagctg gagaggaggc agcgtgagag cagaaacttc 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catcaaaacc tgaagtgaca gatgtcagca gaaatacagt cacattatcg tggcaaccaa 2640 atttgaattc aggagcaact ccaacatctt atattataga agccttcagc catgcatctg 2700 gtagcagctg gcagaccgta gcagagaatg tgaaaacaga aacatctgcc attaaaggac 2760 tcaaacctaa tgcaatttac cttttccttg tgagggcagc taatgcatat ggaattagtg 2820 atccaagcca aatatcagat ccagtgaaaa cacaagatgt cctaccaaca agtcaggggg 2880 tggaccacaa gcaggtccag agagagctgg gaaatgctgt tctgcacctc cacaacccca 2940 ccgtcctttc ttcctcttcc atcgaagtgc actggacagt agatcaacag tctcagtata 3000 tacaaggata taaaattctc tatcggccat ctggagccaa ccacggagaa tcagactggt 3060 tagtttttga agtgaggacg ccagccaaaa acagtgtggt aatccctgat ctcagaaagg 3120 gagtcaacta tgaaattaag gctcgccctt tttttaatga atttcaagga gcagatagtg 3180 aaatcaagtt tgccaaaacc ctggaagaag cacccagtgc cccaccccaa ggtgtaactg 3240 tatccaagaa tgatggaaac ggaactgcaa ttctagttag ttggcagcca cctccagaag 3300 acactcaaaa tggaatggtc caagagtata aggtttggtg tctgggcaat gaaactcgat 3360 accacatcaa caaaacagtg gatggttcca ccttttccgt ggtcattccc tttcttgttc 3420 ctggaatccg atacagtgtg gaagtggcag ccagcactgg ggctgggtct ggggtaaaga 3480 gtgagcctca gttcatccag ctggatgccc atggaaaccc tgtgtcacct gaggaccaag 3540 tcagcctcgc tcagcagatt tcagatgtgg tgaagcagcc ggccttcata gcaggtattg 3600 gagcagcctg ttggatcatc ctcatggtct tcagcatctg gctttatcga caccgcaaga 3660 agagaaacgg acttactagt acctacgcgg gtatcagaaa agtaacttac cagagaggag 3720 gcgaagctgt cagcagtgga gggaggcctg gacttctcaa catcagtgaa cctgccgcgc 3780 agccatggct ggcagacacg tggcctaata ctggcaacaa ccacaatgac tgctccatca 3840 gctgctgcac ggcaggcaat ggaaacagcg acagcaacct cactacctac agtcgcccag 3900 ctgattgtat agcaaattat aacaaccaac tggataacaa acaaacaaat ctgatgctcc 3960 ctgagtcaac tgtttatggt gatgtggacc ttagtaacaa aatcaatgag atgaaaacct 4020 tcaatagccc aaatctgaag gatgggcgtt ttgtcaatcc atcagggcag cctactcctt 4080 acgccaccac tcagctcatc cagtcaaacc tcagcaacaa catgaacaat ggcagcgggg 4140 actctggcga gaagcactgg aaaccactgg gacagcagaa acaagaagtg gcaccagttc 4200 agtacaacat cgtggagcaa aacaagctga acaaagatta tcgagcaaat gacacagttc 4260 ctccaactat cccatacaac caatcatacg accagaacac aggaggatcc tacaacagct 4320 cagaccgggg cagtagtaca tctgggagtc aggggcacaa gaaaggggca agaacaccca 4380 aggtaccaaa acagggtggc atgaactggg cagacctgct tcctcctccc ccagcacatc 4440 ctcctccaca cagcaatagc gaagagtaca acatttctgt agatgaaagc tatgaccaag 4500 aaatgccatg tcccgtgcca ccagcaagga tgtatttgca acaagatgaa ttagaagagg 4560 aggaagatga acgaggcccc actccccctg ttcggggagc agcttcttct ccagctgccg 4620 tgtcctatag ccatcagtcc actgccactc tgactccctc cccacaggaa gaactccagc 4680 ccatgttaca ggattgtcca gaggagactg gccacatgca gcaccagccc gacaggagac 4740 ggcagcctgt gagtcctcct ccaccaccac ggccgatctc ccctccacat acctatggct 4800 acatttcagg acccctggtc tcagatatgg atacggatgc gccagaagag gaagaagacg 4860 aagccgacat ggaggtagcc aagatgcaaa ccagaaggct tttgttacgt gggcttgagc 4920 agacacctgc ctccagtgtt ggggacctgg agagctctgt cacggggtcc atgatcaacg 4980 gctggggctc agcctcagag gaggacaaca tttccagcgg acgctccagt gttagttctt 5040 cggacggctc ctttttcact gatgctgact ttgcccaggc agtcgcagca gcggcagagt 5100 atgctggtct gaaagtagca cgacggcaaa tgcaggatgc tgctggccgt cgacattttc 5160 atgcgtctca gtgccctagg cccacaagtc ccgtgtctac agacagcaac atgagtgccg 5220 ccgtaatgca gaaaaccaga ccagccaaga aactgaaaca ccagccagga catctgcgca 5280 gagaaaccta cacagatgat cttccaccac ctcctgtgcc gccacctgct ataaagtcac 5340 ctactgccca atccaagaca cagctggaag tacgacctgt agtggtgcca aaactccctt 5400 ctatggatgc aagaacagac agatcatcag acagaaaagg aagcagttac aaggggagag 5460 aagtgttgga tggaagacag gttgttgaca tgcgaacaaa tccaggtgat cccagagaag 5520 cacaggaaca gcaaaatgac gggaaaggac gtggaaacaa ggcagcaaaa cgagaccttc 5580 caccagcaaa gactcatctc atccaagagg atattctacc ttattgtaga cctacttttc 5640 caacatcaaa taatcccaga gatcccagtt cctcaagctc aatgtcatca agaggatcag 5700 gaagcagaca aagagaacaa gcaaatgtag gtcgaagaaa tattgcagaa atgcaggtac 5760 ttggaggata tgaaagagga gaagataata atgaagaatt agaggaaact gaaagctgaa 5820 gacaaccaag aggcttatga gatctaatgt gaaaatcatc actcaagatg cctcctgtca 5880 gatgacacat gacgccagat aaaatgttca gtgcaatcag agtgtacaaa ttgtcgtttt 5940 tattcctctt attgggatat cattttaaaa actttattgg gtttttattg ttgttgtttg 6000 atccctaacc ctacaaagag ccttcctatt cccctcgctg ttggagcaaa ccattatacc 6060 ttacttccag caagcaaagt gctttgactt cttgcttcag tcatcagcca gcaagaggga 6120 acaaaactgt tcttttgcat tttgccgctg agatatggca ttgcactgct tatatgccaa 6180 gctaatttat agcaagatat tgatcaaata tagaaagttg atattcaacc tcacaagggc 6240 tctcaaagta taatctttct atagccaact gctaatgcaa attaaaacat atttcatttt 6300 aacatgattt caaaatcagt ttttcatact accctttgct ggaagaaact aaaaatatag 6360 caaatgcaga accacaaaca attcgaatgg ggtagaaaca ttgtaaatat ttactctttg 6420 caaaccctgg tggtatttta ttttggcttc atttcaatca ttgaagtata ttcttattgg 6480 aaatgtactt ttggataagt agggctaagc cagttggatc tctggttgtc tagtcattgt 6540 cataagtaaa cctagtaaaa ccttgttcta tttttcaatc atcaaaaagt aattataaat 6600 acgtattaca aacaagtgga tgtttttaat gaccaattga gtaagaacat ccctgtctta 6660 actggcctaa atttcttctg gtagtgtcag ttcaactttc agaagtgcca cttaaggaag 6720 tttgattttt gtttttgtaa tgcactgttt ttaatctctc tctctttttt tttttttttt 6780 tggttttaaa agcacaatca ctaaacttta tttgtaaacc attgtaacta ttaacctttt 6840 ttgtcttatt gaaaaaaaaa atgttgagaa gcgtttttaa cctgttttgt taatgctcta 6900 tgtttgtatt tggaatattt gaataatgac agatggtgaa gtaacatgca tactttattg 6960 tgggccatga accaaatggt tcttactttt cctggactta aagaaaaaaa gaggtttaag 7020 tttgttgtgg ccaatgtcga aacctacaag atttccttaa aatctctaat agaggcatta 7080 cttgctttca attgacaaat gatgccctct gactagtaga tttctatgat ccttttttgt 7140 cattttatga atatcattga ttttataatt ggtgctattt gaagaaaaaa atgtacattt 7200 attcatagat agataagtat caggtctgac cccagtggaa aacaaagcca aacaaaactg 7260 aaccacaaaa aaaaaggctg gtgttcacca aaaccaaact tgttcattta gataatttga 7320 aaaagttcca tagaaaaggc gtgcagtact aagggaacaa tccatgtgat taatgttttc 7380 attatgttca tgtaagaagc cccttatttt tagccataat tttgcatact gaaaatccaa 7440 taatcagaaa agtaattttg tcacattatt tattaaaaat gttctcaaat acataaaaaa 7500 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 7550 <210> 12 <211> 7385 <212> DNA <213> Homo sapiens roundabout, axon guidance receptor, homolog 1 (Drosophila) (ROBO1) <400> 12 aattgagctg gagaggaggc agcgtgagag cagaaacttc agacgccgct gatccgggag 60 gagctggggt gagccgcggc ggccgtctct cccacccgca gcagcatcct ctctgccctt 120 ctctgccacc ccggggagag ccgggagctg cctctttaca gcttccacga gccaggggtg 180 caggcagctg cccccaggaa gtttgggctt ctgcgtagtt taggggtgcc tgcgagcgcc 240 ccagagggcg aggggccgag ggcgatgttg ggcgccgcgc ggggctgggg gcgcccagaa 300 gacgtgcgag tgtccgcggt cctgctgctg tctccagtac cctccgcatc ccccaagtga 360 tgggaacaag ggcccgccca ggcagccgct gtcgccgcac cgccccctcg ctcgctctct 420 gcgcgcggag tcacccagtc acactcccgg caccccgagc ccttcctccg gagctgctgc 480 ttctactttg gctgctatcg ccgccgccgc gggtggcccg ctgctgactg ggctcgccgg 540 gagacggaga agcacttttt ggccctccct cagcagctct cacaccccaa ctttgccgcc 600 gccgccgcgc ctgccctcgc agcggcgctc ggccgcacat tgtgggggcg cacgccggga 660 ggctccgcaa gaccgtggag gcaggaaacg gcactactgc gcttctgcct cggctctttg 720 ttgttcgctt tggatggttc ttgaaagtgt ctgagcctcc tcggaaatcc tggggccgga 780 gaagacaaac cttggaattc ttcctctgca aaagtctctg agatactgac aagcgtccgg 840 aaaggtcgac gagtaattgc cctgaaaact cttggctaat tgacccacgt tgcttatatt 900 aagcctttgt gtgtggtgtg tggcttcata catttgggga ccctatttcc actccctcct 960 cttggcatga gactgtatac aggatccacc cgaggacaat gattgcggag cccgctcact 1020 tttacctgtt tggattaata tgtctctgtt caggctcccg tcttcgtcag gaagattttc 1080 cacctcgcat tgttgaacac ccttcagacc tgattgtctc aaaaggagaa cctgcaactt 1140 tgaactgcaa agctgaaggc cgccccacac ccactattga atggtacaaa gggggagaga 1200 gagtggagac agacaaagat gaccctcgct cacaccgaat gttgctgccg agtggatctt 1260 tatttttctt acgtatagta catggacgga aaagtagacc tgatgaagga gtctatgtct 1320 gtgtagcaag gaattacctt ggagaggctg tgagccacaa tgcatcgctg gaagtagcca 1380 tacttcggga tgacttcaga caaaaccctt cggatgtcat ggttgcagta ggagagcctg 1440 cagtaatgga atgccaacct ccacgaggcc atcctgagcc caccatttca tggaagaaag 1500 atggctctcc actggatgat aaagatgaaa gaataactat acgaggagga aagctcatga 1560 tcacttacac ccgtaaaagt gacgctggca aatatgtttg tgttggtacc aatatggttg 1620 gggaacgtga gagtgaagta gccgagctga ctgtcttaga gagaccatca tttgtgaaga 1680 gacccagtaa cttggcagta actgtggatg acagtgcaga atttaaatgt gaggcccgag 1740 gtgaccctgt acctacagta cgatggagga aagatgatgg agagctgccc aaatccagat 1800 atgaaatccg agatgatcat accttgaaaa ttaggaaggt gacagctggt gacatgggtt 1860 catacacttg tgttgcagaa aatatggtgg gcaaagctga agcatctgct actctgactg 1920 ttcaagttgg gtctgaacct ccacattttg ttgtgaaacc ccgtgaccag gttgttgctt 1980 tgggacggac tgtaactttt cagtgtgaag caaccggaaa tcctcaacca gctattttct 2040 ggaggagaga agggagtcag aatctacttt tctcatatca accaccacag tcatccagcc 2100 gattttcagt ctcccagact ggcgacctca caattactaa tgtccagcga tctgatgttg 2160 gttattacat ctgccagact ttaaatgttg ctggaagcat catcacaaag gcatatttgg 2220 aagttacaga tgtgattgca gatcggcctc ccccagttat tcgacaaggt cctgtgaatc 2280 agactgtagc cgtggatggc actttcgtcc tcagctgtgt ggccacaggc agtccagtgc 2340 ccaccattct gtggagaaag gatggagtcc tcgtttcaac ccaagactct cgaatcaaac 2400 agttggagaa tggagtactg cagatccgat atgctaagct gggtgatact ggtcggtaca 2460 cctgcattgc atcaaccccc agtggtgaag caacatggag tgcttacatt gaagttcaag 2520 aatttggagt tccagttcag cctccaagac ctactgaccc aaatttaatc cctagtgccc 2580 catcaaaacc tgaagtgaca gatgtcagca gaaatacagt cacattatcg tggcaaccaa 2640 atttgaattc aggagcaact ccaacatctt atattataga agccttcagc catgcatctg 2700 gtagcagctg gcagaccgta gcagagaatg tgaaaacaga aacatctgcc attaaaggac 2760 tcaaacctaa tgcaatttac cttttccttg tgagggcagc taatgcatat ggaattagtg 2820 atccaagcca aatatcagat ccagtgaaaa cacaagatgt cctaccaaca agtcaggggg 2880 tggaccacaa gcaggtccag agagagctgg gaaatgctgt tctgcacctc cacaacccca 2940 ccgtcctttc ttcctcttcc atcgaagtgc actggacagt agatcaacag tctcagtata 3000 tacaaggata taaaattctc tatcggccat ctggagccaa ccacggagaa tcagactggt 3060 tagtttttga agtgaggacg ccagccaaaa acagtgtggt aatccctgat ctcagaaagg 3120 gagtcaacta tgaaattaag gctcgccctt tttttaatga atttcaagga gcagatagtg 3180 aaatcaagtt tgccaaaacc ctggaagaag cacccagtgc cccaccccaa ggtgtaactg 3240 tatccaagaa tgatggaaac ggaactgcaa ttctagttag ttggcagcca cctccagaag 3300 acactcaaaa tggaatggtc caagagtata aggtttggtg tctgggcaat gaaactcgat 3360 accacatcaa caaaacagtg gatggttcca ccttttccgt ggtcattccc tttcttgttc 3420 ctggaatccg atacagtgtg gaagtggcag ccagcactgg ggctgggtct ggggtaaaga 3480 gtgagcctca gttcatccag ctggatgccc atggaaaccc tgtgtcacct gaggaccaag 3540 tcagcctcgc tcagcagatt tcagatgtgg tgaagcagcc ggccttcata gcaggtattg 3600 gagcagcctg ttggatcatc ctcatggtct tcagcatctg gctttatcga caccgcaaga 3660 agagaaacgg acttactagt acctacgcgg gtatcagaaa agtaacttac cagagaggag 3720 gcgaagctgt cagcagtgga gggaggcctg gacttctcaa catcagtgaa cctgccgcgc 3780 agccatggct ggcagacacg tggcctaata ctggcaacaa ccacaatgac tgctccatca 3840 gctgctgcac ggcaggcaat ggaaacagcg acagcaacct cactacctac agtcgcccag 3900 ggcagcctac tccttacgcc accactcagc tcatccagtc aaacctcagc aacaacatga 3960 acaatggcag cggggactct ggcgagaagc actggaaacc actgggacag cagaaacaag 4020 aagtggcacc agttcagtac aacatcgtgg agcaaaacaa gctgaacaaa gattatcgag 4080 caaatgacac agttcctcca actatcccat acaaccaatc atacgaccag aacacaggag 4140 gatcctacaa cagctcagac cggggcagta gtacatctgg gagtcagggg cacaagaaag 4200 gggcaagaac acccaaggta ccaaaacagg gtggcatgaa ctgggcagac ctgcttcctc 4260 ctcccccagc acatcctcct ccacacagca atagcgaaga gtacaacatt tctgtagatg 4320 aaagctatga ccaagaaatg ccatgtcccg tgccaccagc aaggatgtat ttgcaacaag 4380 atgaattaga agaggaggaa gatgaacgag gccccactcc ccctgttcgg ggagcagctt 4440 cttctccagc tgccgtgtcc tatagccatc agtccactgc cactctgact ccctccccac 4500 aggaagaact ccagcccatg ttacaggatt gtccagagga gactggccac atgcagcacc 4560 agcccgacag gagacggcag cctgtgagtc ctcctccacc accacggccg atctcccctc 4620 cacataccta tggctacatt tcaggacccc tggtctcaga tatggatacg gatgcgccag 4680 aagaggaaga agacgaagcc gacatggagg tagccaagat gcaaaccaga aggcttttgt 4740 tacgtgggct tgagcagaca cctgcctcca gtgttgggga cctggagagc tctgtcacgg 4800 ggtccatgat caacggctgg ggctcagcct cagaggagga caacatttcc agcggacgct 4860 ccagtgttag ttcttcggac ggctcctttt tcactgatgc tgactttgcc caggcagtcg 4920 cagcagcggc agagtatgct ggtctgaaag tagcacgacg gcaaatgcag gatgctgctg 4980 gccgtcgaca ttttcatgcg tctcagtgcc ctaggcccac aagtcccgtg tctacagaca 5040 gcaacatgag tgccgccgta atgcagaaaa ccagaccagc caagaaactg aaacaccagc 5100 caggacatct gcgcagagaa acctacacag atgatcttcc accacctcct gtgccgccac 5160 ctgctataaa gtcacctact gcccaatcca agacacagct ggaagtacga cctgtagtgg 5220 tgccaaaact cccttctatg gatgcaagaa cagacagatc atcagacaga aaaggaagca 5280 gttacaaggg gagagaagtg ttggatggaa gacaggttgt tgacatgcga acaaatccag 5340 gtgatcccag agaagcacag gaacagcaaa atgacgggaa aggacgtgga aacaaggcag 5400 caaaacgaga ccttccacca gcaaagactc atctcatcca agaggatatt ctaccttatt 5460 gtagacctac ttttccaaca tcaaataatc ccagagatcc cagttcctca agctcaatgt 5520 catcaagagg atcaggaagc agacaaagag aacaagcaaa tgtaggtcga agaaatattg 5580 cagaaatgca ggtacttgga ggatatgaaa gaggagaaga taataatgaa gaattagagg 5640 aaactgaaag ctgaagacaa ccaagaggct tatgagatct aatgtgaaaa tcatcactca 5700 agatgcctcc tgtcagatga cacatgacgc cagataaaat gttcagtgca atcagagtgt 5760 acaaattgtc gtttttattc ctcttattgg gatatcattt taaaaacttt attgggtttt 5820 tattgttgtt gtttgatccc taaccctaca aagagccttc ctattcccct cgctgttgga 5880 gcaaaccatt ataccttact tccagcaagc aaagtgcttt gacttcttgc ttcagtcatc 5940 agccagcaag agggaacaaa actgttcttt tgcattttgc cgctgagata tggcattgca 6000 ctgcttatat gccaagctaa tttatagcaa gatattgatc aaatatagaa agttgatatt 6060 caacctcaca agggctctca aagtataatc tttctatagc caactgctaa tgcaaattaa 6120 aacatatttc attttaacat gatttcaaaa tcagtttttc atactaccct ttgctggaag 6180 aaactaaaaa tatagcaaat gcagaaccac aaacaattcg aatggggtag aaacattgta 6240 aatatttact ctttgcaaac cctggtggta ttttattttg gcttcatttc aatcattgaa 6300 gtatattctt attggaaatg tacttttgga taagtagggc taagccagtt ggatctctgg 6360 ttgtctagtc attgtcataa gtaaacctag taaaaccttg ttctattttt caatcatcaa 6420 aaagtaatta taaatacgta ttacaaacaa gtggatgttt ttaatgacca attgagtaag 6480 aacatccctg tcttaactgg cctaaatttc ttctggtagt gtcagttcaa ctttcagaag 6540 tgccacttaa ggaagtttga tttttgtttt tgtaatgcac tgtttttaat ctctctctct 6600 tttttttttt ttttttggtt ttaaaagcac aatcactaaa ctttatttgt aaaccattgt 6660 aactattaac cttttttgtc ttattgaaaa aaaaaatgtt gagaagcgtt tttaacctgt 6720 tttgttaatg ctctatgttt gtatttggaa tatttgaata atgacagatg gtgaagtaac 6780 atgcatactt tattgtgggc catgaaccaa atggttctta cttttcctgg acttaaagaa 6840 aaaaagaggt ttaagtttgt tgtggccaat gtcgaaacct acaagatttc cttaaaatct 6900 ctaatagagg cattacttgc tttcaattga caaatgatgc cctctgacta gtagatttct 6960 atgatccttt tttgtcattt tatgaatatc attgatttta taattggtgc tatttgaaga 7020 aaaaaatgta catttattca tagatagata agtatcaggt ctgaccccag tggaaaacaa 7080 agccaaacaa aactgaacca caaaaaaaaa ggctggtgtt caccaaaacc aaacttgttc 7140 atttagataa tttgaaaaag ttccatagaa aaggcgtgca gtactaaggg aacaatccat 7200 gtgattaatg ttttcattat gttcatgtaa gaagcccctt atttttagcc ataattttgc 7260 atactgaaaa tccaataatc agaaaagtaa ttttgtcaca ttatttatta aaaatgttct 7320 caaatacata aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 7380 aaaaa 7385

Claims (10)

  1. (a) 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체로부터 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 측정하는 단계; 및 (b) 전이되지 않은 갑상선암 검체와 비교하여 상기 SLIT2 또는 ROBO1의 발현이 감소하는 경우 원발성 갑상선암이 전이된 것으로 판단하는 단계를 포함하는 원발성 갑상선암 전이진단을 위한 정보제공방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 갑상선암은 갑상선 유두암인 것을 특징으로 하는 정보제공방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 전이는 림프절 전이 또는 원격전이(distant metastasis)인 것을 특징으로 하는 정보제공방법.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 정보제공방법은 갑상선 종양의 크기, 림프절 전이 발생율, 원격전이 발생율 또는 재발율을 판단하는 단계를 추가적으로 실시하며, 상기 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체에서의 SLIT2 및 ROBO1의 발현이 양성인 경우 갑상선 종양의 크기가 작고, 림프절 전이, 원격전이 및 재발의 발생율이 낮은 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는 정보제공방법.
  5. 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체로부터 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 측정하는 원발성 갑상선암 전이진단키트로서, 전이되지 않은 갑상선암 검체와 비교하여 상기 SLIT2 또는 ROBO1의 발현이 감소하는 경우 원발성 갑상선암이 전이된 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는 원발성 갑상선암 전이진단키트.
  6. 다음의 단계를 포함하는 원발성 갑상선암 전이 억제물질의 스크리닝 방법:
    (a) 원발성 갑상선암 세포에 시험물질을 접촉시키는 단계; 및
    (b) 상기 세포 내의 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 분석하는 단계,
    시험물질을 접촉시키지 않은 대조군과 비교하여, 상기 시험물질을 처리한 세포 내의 SLIT2 또는 ROBO1의 발현이 증가하는 경우, 원발성 갑상선암 전이 억제물질로 판단한다.
  7. (a) 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체로부터 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 측정하는 단계; 및 (b) 정상 갑상선 검체와 비교하여 상기 SLIT2 또는 ROBO1의 발현이 높은 경우 원발성 갑상선암인 것으로 판단하는 단계를 포함하는 원발성 갑상선암 진단을 위한 정보제공방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 갑상선암은 갑상선 유두암인 것을 특징으로 하는 정보제공방법.
  9. 제 7 항에 있어서, 상기 정보제공방법은 SLIT1, SLIT3, ROBO2, ROBO3 및 ROBO4 로 구성된 군에서 선택된 1 이상의 발현여부를 측정하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 정보제공방법.
  10. 진단하고자 하는 개체로부터 분리된 갑상선암 검체로부터 인간 SLIT2 (Slit homolog 2) 또는 인간 ROBO1 (Roundabout homolog 1)의 발현율을 측정하는 원발성 갑상선암 전이진단키트로서, 정상 갑상선 검체와 비교하여 상기 SLIT2 또는 ROBO1의 발현이 높은 경우 원발성 갑상선암인 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는 원발성 갑상선암 전이진단키트.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114277152A (zh) * 2022-01-14 2022-04-05 张赟建 用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因及制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030236210A1 (en) * 2002-03-08 2003-12-25 Jian-Guo Geng Detection and modulation of Slit and roundabount (Robo) mediated angiogenesis and uses thereof
KR20070018925A (ko) * 2004-03-31 2007-02-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ｒｏｂｏ1항체를 이용하는 암의 진단 및 치료
JP2010518115A (ja) * 2007-02-09 2010-05-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗Ｒｏｂｏ４抗体およびそれらのための使用
KR20130023262A (ko) * 2010-04-30 2013-03-07 상하이 인스티튜츠 포 바이올로지컬 사이언시스, 차이니즈 아카데미 오브 사이언시스 슬릿 및 라운드어바우트(로보) 매개 림프관 형성의 진단 및 조절 및 이의 용도
KR20130141395A (ko) * 2012-06-15 2013-12-26 재단법인 아산사회복지재단 Slit-Robo 시스템을 이용한 골절 또는 골다공증의 예방 또는 치료용 조성물

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030236210A1 (en) * 2002-03-08 2003-12-25 Jian-Guo Geng Detection and modulation of Slit and roundabount (Robo) mediated angiogenesis and uses thereof
KR20070018925A (ko) * 2004-03-31 2007-02-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ｒｏｂｏ1항체를 이용하는 암의 진단 및 치료
EP2226636A1 (en) * 2004-03-31 2010-09-08 Hiroyuki Aburatani Cancer diagnosis and treatment using anti-robo1 antibody
JP2010518115A (ja) * 2007-02-09 2010-05-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗Ｒｏｂｏ４抗体およびそれらのための使用
KR20130023262A (ko) * 2010-04-30 2013-03-07 상하이 인스티튜츠 포 바이올로지컬 사이언시스, 차이니즈 아카데미 오브 사이언시스 슬릿 및 라운드어바우트(로보) 매개 림프관 형성의 진단 및 조절 및 이의 용도
KR20130141395A (ko) * 2012-06-15 2013-12-26 재단법인 아산사회복지재단 Slit-Robo 시스템을 이용한 골절 또는 골다공증의 예방 또는 치료용 조성물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Rishi K. Gara et al., Drug Discov Today (Published online 2014.09.20.), vol. 20(1), pp 156-164. *
Yohei Mano et al., Human Pathology (2013), vol. 44, pp 2419-2426. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114277152A (zh) * 2022-01-14 2022-04-05 张赟建 用于预测甲状腺乳头状癌淋巴结转移的特异性基因及制备方法

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