KR20160068558A - 마우스 cmv 프로모터를 포함하는 융합 폴리뉴클레오타이드 및 이를 이용한 목적 폴리펩타이드의 생산 방법 - Google Patents

마우스 cmv 프로모터를 포함하는 융합 폴리뉴클레오타이드 및 이를 이용한 목적 폴리펩타이드의 생산 방법 Download PDF

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Abstract

마우스 CMV 프로모터 및 인트론을 포함하는 융합 폴리뉴클레오타이드, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드 및 목적 폴리펩타이드 암호화 유전자를 포함하는 재조합 벡터, 상기 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포, 및 상기 재조합 벡터 또는 재조합 세포를 이용하여 목적 폴리펩타이드를 생산하는 방법이 제공된다.

Description

마우스 CMV 프로모터를 포함하는 융합 폴리뉴클레오타이드 및 이를 이용한 목적 폴리펩타이드의 생산 방법{Fusion Polynucleotide Containing Murine CMV Promoter and Method of Preparing a Polypeptide of Interest Using the Same}
마우스 CMV 프로모터 및 인트론을 포함하는 융합 폴리뉴클레오타이드, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드 및 목적 폴리펩타이드의 유전자를 포함하는 재조합 벡터, 상기 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포, 및 상기 재조합 벡터 또는 재조합 세포를 이용하여 목적 폴리펩타이드를 생산하는 방법이 제공된다.
항체 등의 치료용 단백질이 신약 시장의 강자로 자리매김 하면서, 다양한 타겟에 대한 치료제로 개발되고 있다. 개발된 단백질 치료제의 제품화는 물론 효능을 시험하기 위해서 단백질의 생산은 필수적이다.
동물세포를 이용한 단백질의 생산은 미생물을 이용하여 치료제를 생산하는 것에 비해 물질의 효능은 증대를 시키지만, 생산량은 제한적이라는 한계점이 있다. 이러한 문제점을 해결하기 위한 하나의 방법으로, 단백질을 생산하기 위한 가장 기본적인 요소인 재조합 벡터에 대한 연구와 개발이 꾸준히 진행되고 있다 (US 5168062 A 등).
일 예는 마우스 CMV 프로모터 및 인트론을 포함하는 융합 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 상기 융합 폴리뉴클레오타이드는 프로모터, 예컨대 동물세포에서 작동 가능한 프로모터로서 사용될 수 있다.
따라서, 다른 예는 마우스 CMV 프로모터 및 인트론을 포함하는 융합 프로모터를 제공한다.
다른 예는 마우스 CMV 프로모터 및 인트론을 포함하는 융합 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 상기 재조합 벡터는, 발현시키고자 하는 목적 폴리펩타이드의 암호화 유전자가 작동 가능하게 연결될 경우, 적절한 숙주 세포에서 상기 목적 폴리펩타이드를 높은 효율로 발현시킬 수 있는 목적 폴리펩타이드의 발현 벡터로 사용될 수 있다. 상기 재조합 벡터는 숙주 세포에서 발현 가능한 것일 수 있다.
다른 예는 마우스 CMV 프로모터 및 인트론을 포함하는 융합 폴리뉴클레오타이드 및 목적 폴리펩타이드 암호화 유전자를 포함하고, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드는 상기 폴리펩타이드 암호화 유전자에 작동 가능하게 연결된 것인 재조합 벡터를 제공한다. 상기 재조합 벡터는 숙주 세포에서 발현 가능한 것일 수 있다.
다른 예는 상기 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포를 제공한다.
다른 예는 상기 재조합 벡터 또는 상기 재조합 세포를 이용하는 목적 폴리펩타이드의 생산 방법을 제공한다.
본 발명은 마우스 CMV 프로모터 및 인트론의 목적 폴리펩타이드의 생산을 위한 재조합 벡터 제작을 위한 용도에 관한 것이다.
구체적으로, 마우스 CMV 프로모터 및 인트론을 포함하는 융합 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 상기 융합 폴리뉴클레오타이드는 프로모터, 예컨대 동물 세포 (예컨대, 포유동물 세포)에서 작동 가능한 프로모터로서 사용될 수 있다. 따라서, 다른 예는 마우스 CMV 프로모터 및 인트론을 포함하는 융합 프로모터를 제공한다.
상기 마우스 CMV 프로모터(murine cytomegalo virus promoter)는 마우스 CMV 즉시 조기 인핸서/프로모터(murine CMV immediate-early enhancer/promoter; 마우스 CMV IE 인핸서/프로모터)의 전부 또는 일부일 수 있다. 상기 마우스 CMV IE 인핸서/프로모터는 서열번호 113의 염기서열을 포함하는 것이 수 있다.
예컨대, 상기 마우스 CMV 프로모터는 i) 마우스 CMV IE 인핸서/프로모터(서열번호 113)를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 단편, ii) 마우스 CMV IE 인핸서/프로모터 내의 100bp 이상, 200bp 이상, 300bp 이상, 500bp 이상, 또는 700bp 이상, 예컨대, 100 내지 1391bp, 200 내지 1391bp, 300 내지 1391bp, 500 내지 1391bp, 700 내지 1391bp, 100 내지 1000bp, 200 내지 1000bp, 300 내지 1000bp, 500 내지 1000bp, 700 내지 1000bp, 100 내지 700bp, 200 내지 700bp, 300 내지 700bp, 또는 500 내지 700bp 의 연속하는 염기서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 단편, 또는 iii) 상기 폴리뉴클레오타이드 단편 i) 또는 ii)와 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 폴리뉴클레오타이드 단편 변이체(프로모터 기능 유지) 또는 상기 폴리뉴클레오타이드 단편 i) 또는 ii)의 5' 말단, 3' 말단, 또는 양 말단 모두에 1 내지 100bp 또는 5 내지 60bp 길이의 임의의 염기 (독립적으로 A, T, G, 및 C 중에서 선택됨)로 이루어진 염기서열이 추가로 포함된 폴리뉴클레오타이드 단편 변이체(프로모터 기능 유지)일 수 있다.
인트론 (intron)은 전사 후 단백질로 해독되는 엑손 (exon) 영역 사이에 위치(intervening sequence)하는 비해독 염기서열이다. 전사된 mRNA 전구체는 스플라이싱(splicing)에 의해 비해독 영역인 인트론이 제거되어 성숙 mRNA로 전환된다. 본 명세서에서 사용된 바로서, 인트론은 스플라이싱 공여체와 수용체, 3배수 구아닌 모티프, 및/또는 분기점 서열을 포함하는 의미로도 사용된다.
본 발명에서 사용 가능한 인트론은 동물, 예컨대 포유 동물 (예컨대, 인간)으로부터 유래하는 유전자에서 분리된 인트론일 수 있다. 상기 인트론은 면역글로불린(Immunoglobulin) 인트론 (예컨대, IGLV 인트론, IGKV 인트론, IGH 인트론 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상), 키메라 인트론, 인트론 A 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 일 예에서, 상기 인트론은 IGLV 인트론, IGKV 인트론, 및 IGH 인트론으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
IGLV (immunoglobulin lambda variable) 인트론은 면역글로불린 람다 경쇄의 가변 영역 코딩 유전자의 인트론 부분을 의미하는 것으로, 본 발명에서 사용 가능한 IGLV 인트론은, 예컨대, 인간 IGLV 인트론 (IGLV-1L1; 예컨대, Accession No. X59707의 71~185 부위; 115 bp; 서열번호 109); 상기 서열번호 109 내의 연속하는 10 내지 114bp, 30 내지 114bp, 50 내지 114bp, 80 내지 114bp 또는 100 내지 114bp 길이의 인트론 단편; 상기 서열번호 109의 인트론 또는 이의 인트론 단편과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 인트론 변이체; 또는 상기 서열번호 109의 인트론 또는 이의 인트론 단편의 5' 말단, 3' 말단, 또는 양 말단 모두에 1 내지 50bp 또는 10 내지 30bp 길이의 임의의 염기 (독립적으로 A, T, G, 및 C 중에서 선택됨)로 이루어진 염기서열이 추가로 포함된 인트론 변이체일 수 있다.
IGKV (immunoglobulin kappa variable) 인트론은 면역글로불린 카파 경쇄의 가변 영역 코딩 유전자의 인트론 부분을 의미하는 것으로, 본 발명에서 사용 가능한 IGKV 인트론은, 예컨대 인간 IGKV 인트론 (예컨대, Accession No. M27751.1, 또는 X12688.1의 269~474 부위; 206 bp; 서열번호 110); 상기 서열번호 110 내의 연속하는 100 내지 205bp, 130 내지 205bp, 150 내지 205bp, 180 내지 205bp 또는 200 내지 205bp 길이의 인트론 단편; 상기 서열번호 110의 인트론 또는 이의 인트론 단편과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 인트론 변이체; 또는 상기 서열번호 110의 인트론 또는 이의 인트론 단편의 5' 말단, 3' 말단, 또는 양 말단 모두에 1 내지 50bp 또는 10 내지 30bp 길이의 임의의 염기 (독립적으로 A, T, G, 및 C 중에서 선택됨)로 이루어진 염기서열이 추가로 포함된 인트론 변이체일 수 있다.
IGH (immunoglobulin heavy locus) 인트론은 면역글로불린 중쇄 코딩 유전자의 인트론 부분을 의미한다. IGH은 IgA, IgD, IgG, IgM, 또는 IgE의 서브타입에서 유리하는 것일 수 있다. 본 발명에서 사용 가능한 IGH 인트론은 인간 IGH 인트론 (예컨대, Accession No. M29811의 197~278 부위; 82 bp; 서열번호 111); 상기 서열번호 111 내의 연속하는 10 내지 81bp, 30 내지 81bp, 또는 50 내지 81bp 길이의 인트론 단편; 상기 서열번호 111의 인트론 또는 이의 인트론 단편과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 인트론 변이체; 또는 상기 서열번호 111의 인트론 또는 이의 인트론 단편의 5' 말단, 3' 말단, 또는 양 말단 모두에 1 내지 50bp 또는 10 내지 30bp 길이의 임의의 염기 (독립적으로 A, T, G, 및 C 중에서 선택됨)로 이루어진 염기서열이 추가로 포함된 인트론 변이체일 수 있다.
본 발명에서 사용 가능한 키메라 인트론 (chimeric intron)은 예컨대 서열번호 112 (133bp)의 염기서열을 갖는 것; 상기 서열번호 112 내의 연속하는 10 내지 132bp, 30 내지 132bp, 50 내지 132bp, 80 내지 132bp 또는 100 내지 132bp 길이의 인트론 단편; 상기 서열번호 112의 인트론 또는 이의 인트론 단편과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 인트론 변이체; 또는 상기 서열번호 112의 인트론 또는 이의 인트론 단편의 5' 말단, 3' 말단, 또는 양 말단 모두에 1 내지 50bp 또는 10 내지 30bp 길이의 임의의 염기 (독립적으로 A, T, G, 및 C 중에서 선택됨)로 이루어진 염기서열이 추가로 포함된 인트론 변이체일 수 있다.
상기 융합 폴리뉴클레오타이드 또는 융합 프로모터에 있어서, 상기 인트론은 상기 마우스 CMV 프로모터의 3' 말단 또는 5' 말단 또는 3' 말단과 5' 말단 모두 (동종 또는 이종의 인트론이 2개 이상 포함되는 경우)에 연결된 것일 수 있으며, 예컨대, 상기 인트론은 상기 마우스 CMV 프로모터의 3' 말단에 연결된 것일 수 있다. 상기 융합 폴리뉴클레오타이드 또는 융합 프로모터에 있어서, 상기 프로모터와 인트론은 적절한 링커를 통하여 연결되거나 링커 없이 직접 연결된 것일 수 있다.
다른 예는 마우스 CMV 프로모터의 3' 말단 또는 5' 말단 또는 3' 말단과 5' 말단 모두 (동종 또는 이종의 인트론이 2개 이상 포함되는 경우)에 인트론을 연결시키는 단계를 포함하는 융합 프로모터 제조 방법을 제공한다. 상기 융합 프로모터는 동물세포, 예컨대 포유 동물 세포에서 작동 가능한 것일 수 있다. 상기 마우스 CMV 프로모터 및 인트론의 상세한 사항은 앞서 설명한 바와 같다.
상기 융합 폴리뉴클레오타이드 (또는 융합 프로모터)는 작동 가능하게 연결된 유전자의 강력한 전사 개시를 유도하는 기능을 가질 수 있다. 상기 융합 폴리뉴클레오타이드는 모든 숙주 세포, 예컨대, 바이러스 세포, 박테리아 세포, 진핵 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 또는 동물 세포에서 전사 개시를 강력하게 유도할 수 있는 것일 수 있으며, 예컨대, 포유동물 세포와 같은 동물세포에서 전사 개시를 유도하는 것일 수 있다. 상기 포유동물 세포는 마우스 세포 (예컨대, COP, L, C127, Sp2/0, NS-0, NS-1, At20, NIH3T3 등), 래트 세포 (예컨대, PC12, PC12h, GH3, MtT 등), 햄스터 (예컨대, BHK, CHO, GS 유전자 결함 CHO, DHFR 유전자 결함 CHO 등), 원숭이 세포 (예컨대, COS1, COS3, COS7, CV1, Vero 등), 인간 세포 (예컨대, Hela, HEK-293, 망막-유래 PER-C6, 이배체 섬유모세포로부터 유래된 세포, 골수종 세포, HepG2 등), 하이브리도마 세포 등으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
다른 예는 상기 융합 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 상기 재조합 벡터는, 발현시키고자 하는 목적 폴리펩타이드의 암호화 유전자(이하, "목적 유전자")가 작동 가능하게 연결되는 경우, 적절한 숙주 세포에서 상기 목적 폴리펩타이드를 높은 효율로 발현시킬 수 있는 목적 폴리펩타이드의 발현 벡터로 사용될 수 있다.
다른 예에서, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드 및 목적 폴리펩타이드 암호화 유전자를 포함하는 재조합 벡터가 제공된다. 이 때, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드는 프로모터로서 작용하며 상기 목적 유전자에 작동 가능하게 연결된 것일 수 있다.
상기 용어 "벡터(vector)"는 숙주 세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단을 의미한다. 상기 벡터는 목적 유전자 발현을 위한 요소 (elements)를 포함하는 것으로, 복제원점 (replication origin), 프로모터, 작동 유전자 (operator), 전사 종결 서열 (terminator) 등을 포함할 수 있고, 숙주 세포의 게놈 내로의 도입을 위한 적절한 효소 부위 (예컨대, 제한 효소 부위) 및/또는 숙주 세포 내로의 성공적인 도입을 확인하기 위한 선별 마커 및/또는 단백질로의 번역을 위한 리보좀 결합 부위 (ribosome binding site; RBS), IRES (Internal Ribosome Entry Site) 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 벡터는 프로모터로서 상기한 융합 폴리뉴클레오타이드 (융합 프로모터)를 갖도록 통상적인 유전공학적 방법으로 조작된 것일 수 있다. 상기 벡터는 상기 프로모터 이외의 전사 조절 서열 (예컨대 인핸서 등)을 추가로 포함할 수 있다.
예컨대, 상기 벡터는 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터 및 박테리오파아지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터를 포함한다. 상기 재조합 벡터로 사용될 수 있는 벡터는 당업계에서 사용되는 플라스미드 (예를 들면, pcDNA 시리즈 (Invitrogen), pCI (Promega), Mammalian expression vector (Sigma), pCMV-Tag epitope taggging mammalian vector(Stratagene), pSC101, pGV1106, pACYC177, ColE1, pKT230, pME290, pBR322, pUC8/9, pUC6, pBD9, pHC79, pIJ61, pLAFR1, pHV14, pGEX 시리즈, pET 시리즈, pUC19 등), 파지 (예를 들면, λgt4λB, λ-Charon, λΔz1, M13 등) 또는 바이러스 (예를 들면, SV40 등)를 기본으로 하여 제작될 수 있다.
상기 재조합 벡터에서 상기 목적 유전자는 상기 융합 폴리뉴클레오타이드에 작동가능하게 연결될 수 있다. 용어 "작동 가능하게 연결된(operatively linked)"은 유전자 발현 조절 서열(예컨대, 마우스 CMV 프로모터 서열)과 다른 뉴클레오타이드 서열 사이의 기능적인 결합을 의미한다. 상기 유전자 발현 조절 서열은 "작동 가능하게 연결(operatively linked)"됨으로써 다른 뉴클레오타이드 서열의 전사 및/또는 해독을 조절할 수 있다. 상기 재조합 벡터에 있어서, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드가 상기 목적 유전자에 작동 가능하게 연결되기 위해서, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드는 상기 목적 유전자의 5' 말단에 연결된 것일 수 있다.
상기 재조합 벡터는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있다.
상기 재조합 벡터는 상기 융합 폴리뉴클레오타이드에 포함된 마우스 CMV 프로모터 이외의 전사 조절 서열을 추가로 포함할 수 있다. 상기 마우스 CMV 프로모터 이외의 전사 조절 서열은 폴리아데닐화 서열(pA; 예컨대, 서열번호 115)과 같은 전사 종결 서열; f1 복제원점, SV40 복제원점, pMB1 복제원점, 아데노 복제원점, AAV 복제원점, BBV 복제원점 등의 복제 원점 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
또한, 상기 재조합 벡터는 선별 마커를 추가로 포함할 수 있다. 상기 선별 마커는 재조합 벡터가 숙주 세포 내에 성공적으로 도입되었는지 여부를 확인하거나 안정적인 세포주 구축을 위한 유전자로서, 예컨대, 항생제와 같은 약물 저항 유전자, 대사 관련 유전자, 유전자 증폭 유전자 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 선별마커는 본 발명의 핵심적 기술인 벡터의 최적의 조합에 따른 발현 효율에 크게 영향을 미치는 요소가 아니므로, 선별 마커로서 일반적으로 사용되는 모든 유전자 (예컨대, 항생제 저항 유전자 및/또는 대사 관련 효소 유전자 등)를 제한 없이 사용할 수 있다. 예컨대, 상기 선별마커는 암피실린(ampicilin) 저항 유전자, 테트라사이클린(tetracyclin) 저항 유전자, 카나마이신(kanamycin) 저항 유전자, 클로람페니콜(chloroamphenicol) 저항 유전자, 스트렙토마이신 (streptomycin) 저항 유전자, 네오마이신(neomycin) 저항 유전자, 블라스티시딘(Blasticidin) 저항 유전자, 제오신(Zeocin) 저항 유전자, 하이그로마이신(Hygromycin) 저항 유전자, 퓨로마이신 (Puromycin) 저항 유전자, 티미딘 키나아제 (TK) 유전자, 디하이드로폴레이트 환원효소 (Dihydrofolate reductase, DHFR) 유전자, 글루타민 합성효소 (Glutamine synthetase, GS) 유전자 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 구체예에 따른 재조합 벡터를 도 1에 예시적으로 나타내었다.
다른 예는 상기 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포를 제공한다. 상기 재조합 세포는 상기 재조합 벡터가 숙주 세포 내로 도입(tranfection)된 것을 의미한다. 상기 재조합 세포가 목적 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 (목적 유전자)를 추가로 포함할 수 있으며, 이 경우, 상기 목적 유전자는 상기 마우스 CMV 프로모터와 인트론을 포함하는 재조합 벡터와 동일한 벡터 또는 별개의 벡터를 통하여 숙주 세포로 도입될 수 있다.
상기 숙주 세포로는 상기 융합 폴리뉴클레오타이드가 마우스 CMV 프로모터로서 작동 가능하고 (즉, 전사 개시 기능을 나타낼 수 있고), 목적 유전자의 발현을 허용하는 모든 종류의 세포, 예컨대 포유동물 세포가 사용될 수 있다. 예컨대, 본 발명을 위해 적합한 포유동물 숙주 세포는 마우스 (예컨대, COP, L, C127, Sp2/0, NS-0, NS-1, At20, NIH3T3 등), 래트 (예컨대, PC12, PC12h, GH3, MtT 등), 햄스터 (예컨대, BHK, CHO, GS 유전자 결함 CHO, DHFR 유전자 결함 CHO 등), 원숭이 (예컨대, COS1, COS3, COS7, CV1, Vero 등), 인간 (예컨대, HeLa, HEK-293, 망막-유래 PER-C6, 이배체 섬유모세포로부터 유래된 세포, 골수종 세포, HepG2 등) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 숙주 세포는 생체에서 분리된 것일 수 있다.
상기 재조합 벡터의 숙주 세포 내로의 운반(도입)은, 당업계에 널리 알려진 운반 방법을 사용할 수 있다. 상기 운반 방법은 예컨대, 미세 주입법, 칼슘 포스페이트 침전법, 전기 천공법, 리포좀-매개 형질감염법, 유전자 밤바드먼트 (gene bombardment) 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 재조합 벡터가 도입된 재조합 세포(형질전환체)를 선별하는 방법은 통상적인 선별 마커를 이용하여, 당업계에 널리 알려진 방법에 따라 용이하게 실시할 수 있다. 예컨대, 상기 선별 마커가 앞서 설명한 바와 같은 특정 항생제 저항 유전자인 경우에는, 상기 항생제가 함유된 배지에서 상기 세포를 배양함으로써 재조합 벡터가 도입된 재조합 세포를 용이하게 선별할 수 있다.
상기 목적 폴리펩타이드가 질병 또는 병적 증상의 예방, 치료 및/또는 경감과 관련된 기능을 갖는 것인 경우, 본 발명의 다른 예는 상기 재조합 벡터, 상기 재조합 세포 및 상기 재조합 세포의 배양물 (세포 포함 또는 무세포)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
다른 예에서, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 재조합 벡터 및/또는 상기 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포의 목적 폴리펩타이드 생산 증진 용도가 제공된다. 구체적으로, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드 및 상기 융합 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된 목적 폴리펩타이드 암호화 유전자를 포함하는 재조합 벡터, 상기 재조합 벡터를 포함하는 재조합 세포, 또는 이들의 조합을 포함하는 목적 폴리펩타이드 생산용 조성물을 제공한다.
다른 예는 상기 재조합 벡터 또는 상기 재조합 세포를 이용하는 목적 폴리펩타이드의 생산 방법을 제공한다.
일 예에서, 상기 생산 방법은 상기 재조합 세포에서 상기 목적 폴리펩타이드의 유전자의 발현시키는 단계를 포함할 수 있다. 상기 유전자를 발현시키는 단계는 생체 외에서 수행되는 것일 수 있다. 상기 유전자를 발현시키는 단계는 상기 재조합 세포를 상기 유전자의 발현을 허용하는 조건 및 세포 배양 배지 내에서 배양하는 단계를 포함할 수 있다. 또한 상기 생산 방법은 상기 발현시키는 단계 또는 배양하는 단계 이후에, 상기 발현물 또는 배양물로부터 상기 목적 폴리펩타이드를 수득하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 폴리펩타이드의 수득 단계는 상기 재조합 세포의 파쇄물 및/또는 상기 배양 배지(폴리펩타이드가 배지로 분비되는 경우)로부터 폴리펩타이드를 분리하는 단계에 의하여 수행될 수 있다. 상기 생산 방법은 수득된 폴리펩타이드가 목적하는 품질 및/또는 순도를 갖도록 하기 위한 추가의 처리 단계, 예컨대, 정제 및/또는 변형 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 사용된 용어 "폴리펩타이드"는 펩타이드 결합(들)에 의해 함께 연결된 아미노산의 중합체를 포함하는 분자를 의미한다. 폴리펩타이드는 2 이상의 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드, 예컨대, 단백질 또는 펩타이드 일 수 있다.
본 발명에서의 "목적 폴리펩타이드"는 생체에서 목적하는 활성 (예컨대 특정 질병 또는 증상의 예방, 경감, 및/또는 치료 활성 또는 생체 필요 물질을 대체하는 활성)을 갖는 단백질 및/또는 펩타이드일 수 있으며, 예컨대, 효소 활성의 단백질 또는 펩타이드 (예컨대, 프로테아제, 키나제, 포스파타제 등), 수용체 단백질 또는 펩타이드, 수송체 단백질 또는 펩타이드, 살균 및/또는 내독소-결합 폴리펩타이드, 구조 단백질 또는 펩타이드, 면역 폴리펩타이드(예컨대, 면역글로불린), 독소, 항생제, 호르몬, 성장 인자, 백신 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 목적 폴리펩타이드는 내부 또는 외래의 것일 수 있으며, 외래의 것인 경우 숙주세포와 동종 또는 이종의 세포에서 유래하는 것일 수 있다.
일 예에서, 상기 목적 폴리펩타이드는 호르몬, 사이토카인, 조직 플라스미노겐 활성인자, 면역글로불린 (예컨대, 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 변이체) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 면역글로불린 (항체)은 임의의 이소타입 (예컨대, IgA, IgD, IgG, IgM 또는 IgE)의 것일 수 있으며, 예컨대, IgG (예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4) 분자일 수 있다. 상기 항원 결합 단편은 본래 항체의 항원 결합 능력을 보유하는 단편으로, 약 20개 이상의 아미노산, 예컨대, 약 100개 이상의 아미노산을 포함하는 항체의 임의의 단편일 수 있다. 상기 항원 결합 단편은 항체의 항원 결합 부위, 예컨대, CDS, Fab 단편, F(ab)2 단편, Fv, scFv, 다수의 결합 도메인을 포함하는 멀티바디 (multibody) (예컨대, 디아바디 (diabody), 트리아바디 (triabody), 테트라바디 (tetrabody) 등), 단일 도메인 항체, 애피바디 (affibody) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이 상일 수 있다. 상기 항체 변이체는 항체와 동일한 결합 기능을 갖지만 본래 항체와 변경된 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 유도체이다. 상기 항체 및/또는 항원 결합 단편은 예컨대, 마우스 항체, 인간 항체, 키메라 (chimera) 항체, 또는 인간화 항체일 수 있으며, 생체에서 분리된 것 또는 비자연적으로 생성된 것 (예컨대, 재조합 또는 합성적으로 생성된 것)일 수 있다. 상기 항체는 단클론 항체일 수 있다. 목적 폴리펩타이드가 항체 또는 항원 결합 단편인 경우, 상기 재조합 벡터는 i) 중쇄 유전자, 및/또는 경쇄 유전자, 또는 항원 결합 단편 유전자와, ii) 이와 작동 가능하게 연결된 융합 프로모터(융합 폴리뉴클레오타이드)를 포함하는 것일 수 있다. 이 때, 상기 중쇄 유전자와 경쇄 유전자는 하나의 벡터에 함께 포함되거나 각각 별도의 벡터에 포함될 수 있다. 숙주 세포에 도입시에 중쇄 유전자와 경쇄 유전자는 이들이 함께 포함된 하나의 재조합 벡터 또는 각각을 포함하는 별개의 재조합 벡터를 통하여 숙주세포에 도입될 수 있다. 다른 구체예에서, 상기 목적 폴리펩타이드는 인슐린, 사람 성장 호르몬(hGH), 인슐린-유사 성장 인자, EGF, VERF 등의 각종 성장 인자, 각종 수용체, 조직 플라스미노겐 활성인자(tPA), 에리트로포이에틴(EPO), 사이토카인 (예컨대, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18과 같은 인터루킨), 인터페론(IFN)-알파, -베타, -감마, -오메가 또는 -타우, TNF-알파, 베타 또는 감마와 같은 종양 괴사 인자(TNF), TRAIL, G-CSF, GM-CSF, M-CSF, MCP-1 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 목적 폴리펩타이드를 암호화하는 목적 유전자는 내부 또는 외래의 것일 수 있으며, 외래의 것인 경우 숙주세포와 동종 또는 이종의 세포에서 유래하는 것일 수 있다. 상기 목적 유전자는 상기와 같은 목적 폴리펩타이드 정의에 의하여 이 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자가 그 구체적 사항 (예컨대 염기서열 등)을 명확하게 알 수 있다.
일 구체예에서, 상기 목적 폴리펩타이드는 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다.
상기 항 c-Met 항체는 c-Met의 특정 부위, 예컨대 SEMA 도메인 내의 특정 부위를 에피토프로 인식하는 것일 수 있으며, c-Met에 작용하여 세포내이동(internalization) 및 분해(degradation)를 유도하는 모든 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다.
HGF(Hepatocyte growth factor)의 수용체인 c-Met은 세포외 부위, 막투과 부위, 세포내 부위의 세 부분으로 구분되며, 세포외 부위의 경우, 이황화 결합에 의해 α-소단위체와 β-소단위체가 연결된 형태로 HGF 결합 도메인인 SEMA 도메인, PSI 도메인(plexin-semaphorins-integrin homology domain) 및 IPT 도메인(immunoglobulin-like fold shared by plexins and transcriptional factors domain)으로 이루어진다. c-Met 단백질의 SEMA 도메인은 서열번호 79의 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있으며, c-Met의 세포외 부위에 존재하는 도메인으로서, HGF가 결합하는 부위에 해당한다. SEMA 도메인 중에서 특정 부위, 예컨대, 106번째부터 124번째까지에 해당하는 서열번호 71의 아미노산 서열을 갖는 영역은 c-Met 단백질의 SEMA 도메인 내의 에피토프 중 2번과 3번 프로펠러 도메인 사이의 루프(loop) 부위에 해당하며, 본 발명에서 제안되는 항 c-Met 항체의 에피토프로 작용할 수 있다.
용어, "에피토프(epitope)"는 항원 결정 부위(antigenic determinant)로서, 항체에 의해 인지되는 항원의 일부분을 의미하는 것으로 해석된다. 일 구체예에 따르면, 상기 에피토프는 c-Met 단백질의 SEMA 도메인(서열번호 79) 내의 연속하는 5개 이상의 아미노산을 포함하는 부위, 예컨대, c-Met 단백질의 SEMA 도메인(서열번호 79) 내의 106번째부터 124번째까지에 해당하는 서열번호 71 내에 위치하는 연속하는 5개 내지 19개의 아미노산을 포함하는 것일 수 있다. 예컨대, 상기 에피토프는 서열번호 71의 아미노산 서열 중 서열번호 73(EEPSQ)을 포함하여 연속하는 5 내지 19개의 아미노산으로 이루어진 것일 수 있으며, 예컨대, 서열번호 71, 서열번호 72 또는 서열번호 73의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드일 수 있다.
상기 서열번호 72의 아미노산 서열을 갖는 에피토프는 c-Met 단백질의 SEMA 도메인 내의 2번과 3번 프로펠러 구조의 도메인 사이의 루프 부위 중 가장 바깥으로 위치한 부위에 해당하며, 상기 서열번호 73의 아미노산 서열을 갖는 에피토프는 일 구체예에 따른 항체 또는 항원 결합 단편이 가장 특이적으로 결합하는 부위이다.
따라서, 항 c-Met 항체는 서열번호 서열번호 71의 아미노산 서열 중 서열번호 73(EEPSQ)을 포함하는 연속하는 5 내지 19개의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 것일 수 있으며, 예컨대, 서열번호 71, 서열번호 72, 또는 서열번호 73의 아미노산 서열을 갖는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편일 수 있다.
일 구체예에 따르면, 상기 항 c-Met 항체는,
서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 5의 아미노산 서열, 서열번호 2의 아미노산 서열, 또는 서열번호 2의 아미노산 서열 내의 3번째부터 10번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 8 내지 19개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 및 서열번호 6의 아미노산 서열, 서열번호 85의 아미노산 서열, 또는 서열번호 85의 아미노산 서열 내의 1번째부터 6번째까지의 아미노산을 포함하는 연속하는 6 내지 13개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역(CDR), 또는 상기 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역;
서열번호 7의 아미노산 서열의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 9의 아미노산 서열, 서열번호 15의 아미노산 서열, 서열번호 86의 아미노산 서열, 또는 서열번호 89의 아미노산 서열 내의 1번째부터 9번째까지의 아미노산을 포함하는 9 내지 17개의 아미노산으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역, 또는 상기 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역;
상기 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역 및 상기 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역의 조합; 또는
상기 중쇄 가변 영역 및 상기 경쇄 가변 영역의 조합
을 포함하고,
상기 서열번호 4 내지 서열번호 9는 각각 하기 일반식 Ⅰ 내지 일반식 Ⅵ으로 표시되는 아미노산 서열인 항체 또는 항원 결합 단편일 수 있다:
일반식 Ⅰ
Xaa1-Xaa2-Tyr-Tyr-Met-Ser (서열번호 4),
일반식 Ⅱ
Arg-Asn-Xaa3-Xaa4-Asn-Gly-Xaa5-Thr (서열번호 5),
일반식 Ⅲ
Asp-Asn-Trp-Leu-Xaa6-Tyr (서열번호 6),
일반식 Ⅳ
Lys-Ser-Ser-Xaa7-Ser-Leu-Leu-Ala-Xaa8-Gly-Asn-Xaa9-Xaa10-Asn-Tyr-Leu-Ala (서열번호 7)
일반식 Ⅴ
Trp-Xaa11-Ser-Xaa12-Arg-Val-Xaa13 (서열번호 8)
일반식 Ⅵ
Xaa14-Gln-Ser-Tyr-Ser-Xaa15-Pro-Xaa16-Thr (서열번호 9)
상기 일반식 Ⅰ에서, Xaa1은 존재하지 않거나 Pro 또는 Ser이고, Xaa2는 Glu 또는 Asp이며,
상기 일반식 Ⅱ에서, Xaa3은 Asn 또는 Lys이며, Xaa4는 Ala 또는 Val이고, Xaa5는 Asn 또는 Thr이며,
상기 일반식 Ⅲ에서, Xaa6은 Ser 또는 Thr이고,
상기 일반식 Ⅳ에서, Xaa7은 His, Arg, Gln 또는 Lys이고, Xaa8은 Ser 또는 Trp이고, Xaa9은 His 또는 Gln이며, Xaa10는 Lys 또는 Asn이고,
상기 일반식 Ⅴ에서, Xaa11은 Ala 또는 Gly이며, Xaa12은 Thr 또는 Lys이고, Xaa13는 Ser 또는 Pro이며,
상기 일반식 Ⅵ에서, Xaa14은 Gly, Ala 또는 Gln이고, Xaa15는 Arg, His, Ser, Ala, Gly 또는 Lys이며, Xaa16는 Leu, Tyr, Phe 또는 Met이다.
일 구체예에서, 상기 CDR-H1은 서열번호 1, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다. 상기 CDR-H2는 서열번호 2, 서열번호 25, 및 서열번호 26으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다. 상기 CDR-H3는 서열번호 3, 서열번호 27, 서열번호 28, 및 서열번호 85로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
상기 CDR-L1은 서열번호 10, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 106으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다. 상기 CDR-L2는 서열번호 11, 서열번호 34, 서열번호 35, 및 서열번호 36으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다. 상기 CDR-L3은 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 37, 서열번호 86, 및 서열번호 89로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은
서열번호 1, 서열번호 22, 서열번호 23 및 서열번호 24로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(CDR-H1), 서열번호 2, 서열번호 25, 및 서열번호 26으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(CDR-H2), 및 서열번호 3, 서열번호 27, 서열번호 28, 및 서열번호 85으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(CDR-H3)를 포함하는 중쇄 가변 영역;
서열번호 10, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 106으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(CDR-L1), 서열번호 11, 서열번호 34, 서열번호 35, 및 서열번호 36으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(CDR-L2), 및 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 37, 서열번호 86, 및 서열번호 89로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(CDR-L3)를 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
상기 중쇄 가변 영역과 상기 경쇄 가변 영역의 조합
을 포함하는 것일 수 있다.
일 구체예에 따르면, 항 c-Met 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 17, 서열번호 74, 서열번호 87, 서열번호 90, 서열번호 91, 서열번호 92, 서열번호 93 또는 서열번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 상기 중쇄 가변 영역, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 75, 서열번호 88, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 97, 서열번호 98, 서열번호 99 또는 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 상기 경쇄 가변 영역, 또는 상기 중쇄 가변 영역 및 상기 경쇄 가변 영역의 조합을 포함하는 것일 수 있다.
일 구체예에서, 항 c-Met 항체는 수탁번호 KCLRF-BP-00220인 하이브리도마 세포에서 생산되는, c-Met 단백질의 세포외 부위(extracellular region)에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체일 수 있다 (대한민국 공개특허 제2011-0047698호 참조; 상기 문헌은 본 명세서에 참조로서 포함됨).
상기의 항 c-Met 항체는 대한민국 공개특허 제2011-0047698호에 정의된 항체를 모두 포함할 수 있다.
일 구체예에 따르면, 상기 항 c-Met 항체는,
서열번호 62의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 17번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임), 서열번호 62의 18번째부터 462번째까지의 아미노산 서열, 서열번호 64의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 17번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임), 서열번호 64의 18번째부터 461번째까지의 아미노산 서열, 서열번호 66의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 17번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임), 및 서열번호 66의 18번째부터 460번째까지의 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및
서열번호 68의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 20번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임), 서열번호 68의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열, 서열번호 70의 아미노산 서열 (이 중에서 1번째부터 20번째까지의 아미노산 서열은 시그널 펩타이드임), 서열번호 70의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열, 및 서열번호 108의 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것일 수 있다.
예컨대, 상기 항-c-Met 항체는,
서열번호 62의 아미노산 서열 또는 서열번호 62의 18번째부터 462번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열 또는 서열번호 68의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 64의 아미노산 서열 또는 서열번호 64의 18번째부터 461번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열 또는 서열번호 68의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 66의 아미노산 서열 또는 서열번호 66의 18번째부터 460번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열 또는 서열번호 68의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 62의 아미노산 서열 또는 서열번호 62의 18번째부터 462번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70의 아미노산 서열 또는 서열번호 70의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 64의 아미노산 서열 또는 서열번호 64의 18번째부터 461번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70의 아미노산 서열 또는 서열번호 70의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 66의 아미노산 서열 또는 서열번호 66의 18번째부터 460번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70 또는 서열번호 70의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 62의 아미노산 서열 또는 서열번호 62의 18번째부터 462번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
서열번호 64의 아미노산 서열 또는 서열번호 64의 18번째부터 461번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; 및
서열번호 66의 아미노산 서열 또는 서열번호 66의 18번째부터 460번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 항 c-Met 항체는 서열번호 66의 아미노산 서열 또는 서열번호 66의 18번째부터 460번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열 또는 서열번호 68의 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체일 수 있다.
한편, 상기 서열번호 70의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드는 인간의 카파 불변영역으로 이루어진 경쇄이며, 서열번호 68의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드는 상기 서열번호 70의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드에서 36번 (kabat numbering에 따름, 서열번호 68 내의 62번째 아미노산 위치) 히스티딘 (histidine)이 티로신 (tyrosine)으로 치환된 형태의 폴리펩타이드다. 상기 치환으로 인하여, 일 구체예에 따른 항체의 생산량이 증가될 수 있다. 또한 상기 서열번호 108의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드는 상기 서열번호 68의 아미노산 서열 중 1번째부터 20번째까지의 시그널 펩타이드를 제외한 21번째부터 240번째까지의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드에서 kabat numbering에 의한 27e 위치(kabat numbering에 따름, 서열번호 108 내 32번째 위치; CDR-L1 내부)의 세린(Ser)이 트립토판(Trp)으로 치환된 것으로, 상기 치환으로 인하여, 일 구체예에 따른 항체의 활성(예컨대, c-Met에 대한 결합친화도, c-Met 분해 활성 및 Akt 인산화 억제 활성 등)이 보다 증진될 수 있다.
일 구체예에 따르면, 상기 항체는 마우스 유래 항체, 마우스-인간 키메릭 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체일 수 있다. 상기 항체는 생체로부터 분리되거나 비자연적으로 생성된 것일 수 있다. 상기 항체는 합성적 또는 재조합적으로 생산된 것일 수 있다.
이에, 본 발명의 일 구체예에서, 항원 결합 효율성을 증진시키기 위하여, 상기 항 c-Met 항체 또는 항원 결합 단편은 하나 이상의 아미노산이 결실, 부가 또는 치환되어 아미노산 서열이 변형된 힌지 영역을 포함하는 것일 수 있다. 예컨대, 상기 항체는 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 102, 서열번호 103, 서열번호 104, 또는 서열번호 105의 아미노산 서열을 갖는 힌지 영역을 포함하는 것일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 힌지 영역은 서열번호 100 또는 서열번호 101의 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.
상기 항 c-Met 항체 또는 항 EGFR 항체의 앞서 정의된 CDR 부위 또는 경쇄 가변 영역과 중쇄 가변 영역을 제외한 부위, 예컨대, 경쇄 불변 영역과 중쇄 불변 영역은 모든 서브타입의 면역글로불린(예컨대, IgA, IgD, IgE, IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, 등)에서 유래하는 것일 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "항원 결합 단편"은 면역글로불린 전체 구조에 대한 그의 단편으로, 항원이 결합할 수 있는 부분을 포함하는 폴리펩타이드의 일부를 의미한다. 예컨대, 항원 결합 단편은 scFv, (scFv)2, scFv-Fc, Fab, Fab' 또는 F(ab')2일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
상기 목적 폴리펩타이드가 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 경우, 이를 암호화하는 목적 유전자는 상기 항 c-Met 항체의 앞서 설명한 중쇄 CDR 또는 경쇄 CDR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 앞서 설명한 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 앞서 설명한 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 예컨대, 상기 목적 유전자는 서열번호 38, 서열번호 39, 서열번호 47, 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 55, 서열번호 58, 서열번호 59, 서열번호 60, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67, 서열번호 69, 서열번호 76, 및 서열번호 77로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
본 발명은 치료용 단백질 또는 항체의 고발현을 위한 동물세포 재조합 벡터를 제공하며, 이는 항 c-Met 항체를 비롯한 다양한 치료용 단백질의 대량 생산에 유용하게 적용될 수 있다.
도 1은 마우스 CMV 프로모터와 인트론의 융합 폴리펩타이드를 포함하는 재조합 벡터의 개열지도를 예시적으로 보여주는 것이다.
도 2는 마우스 CMV 프로모터와 인트론의 융합 폴리펩타이드의 발현 벡터 제조에 사용된 벡터의 개열지도를 보여준다.
도 3은 마우스 CMV 프로모터와 인트론의 융합 폴리펩타이드의 발현 벡터 제조에 사용된 마우스 CMV 프로모터를 포함하는 기본 벡터의 개열지도를 보여준다.
도 4는 마우스 CMV 프로모터와 인트론의 융합 폴리펩타이드의 발현 벡터의 개열지도를 보여준다.
도 5는 CHO 세포에서 마우스 CMV 프로모터와 인트론의 융합 폴리펩타이드를 포함하는 재조합 벡터를 이용하여 항 c-Met 항체를 발현한 경우의 항체의 생산량을 인트론을 포함하지 않은 재조합 벡터의 생산량을 비교하여 나타낸 그래프이다 (hCMV: human CMV promoter, mCMV: mouse CMV promoter, mCC: mouse CMV + chimeric intron, mCK: mouse CMV + IGK Intron, mCL: mouse CMV + IGLV intron).
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 재조합 벡터의 제작
본 실시예는 mouse CMV (mCMV) 프로모터 및 인트론이 조합(combination)된 융합 프로모터의 제어 하에서 목적단백질의 발현을 시험하기 위한 것이다.
유전자 합성을 통하여 mCMV 프로모터(서열번호 114)를 일차적으로 합성하고, 이를 기존의 pCA vector (도 2 참조)에서 MluI/EcoRI으로 human CMV promoter와 Intron A를 제거하고 상기 합성한 mCMV를 MluI/EcoRI site에 cloning 하여 기본 벡터 pmCMV를 제작하였다 (도 3 참조). 도 2에 나타낸 바와 같이, 상기 벡터는 mCMV 프로모터를 기점으로 5'-말단에는 제한효소 (restriction enzyme) MluI 인식 부위를, 3'-말단에는 EcoRI, NheI, 및 XhoI 인식 부위를 가지도록 설계하였다.
각각의 인트론은 유전자 합성을 통해 일차적으로 생성하였으며, mCMV 프로모터와 인트론의 융합된 융합 프로모터를 생성하기 위해서, 인트론의 5'-말단에 MfeI 제한효소 (5'-CAATTG-3') 부위를 가지는 프라이머 (LInt-Fw, KInt-Fw, HInt-Fw, CInt-Fw: 표 2 참조)와, 3'-말단에 XhoI 제한효소 (5'-CTCGAG-3') 부위를 가지는 역방향 프라이머 (CA-Rv)를 이용하고 합성한 각각의 intron fragment를 주형으로 하여 94℃ 5분 처리 후, 94℃ 30초, 55℃ 30초, 72℃ 40초 과정을 20회 반복 한 후 72℃ 5분간 연장하는 PCR반응을 수행하여 5'-말단에 MfeI 제한효소 부위(5'-CAATTG-3')와 3'-말단에 XhoI 제한효소를 비롯한 EcoRI 제한효소 부위를 가지는 Intron 단편들을 (Intron short fragment) 증폭하였다. 상기 PCR 반응으로 증폭된 Intron 단편들을 MfeI과 EcoRI의 제한효소로 처리 한 후 상기 제작된 pmCMV vector의 EcoRI site에 각각의 Intron 단편들을 cloning 하여 융합 프로모터를 가지는 벡터 pmCMV-Intron (도 4 참조)를 생성하였다.
융합 프로모터의 효과를 검정하기 위하여 목적 단백질로서 사용된 항 c-Met 항체를 생산하였다. 상기에서 구축된 mCMV 프로모터와 각각의 다른 인트론 조합의 융합 프로모터를 가지는 벡터에 제한 효소 EcoRI와 XhoI를 처리 한 후, 항 c-Met 항체의 중쇄 코딩 폴리뉴클레오티드 (서열번호 67)와 경쇄 코딩 폴리뉴클레오티드 (서열번호 69)를 각각 cloning 하여, 항 c-Met 항체의 중쇄 재조합 벡터 및 경쇄 재조합 벡터를 각각 제작하였다.
mCMV 프로모터와 인트론의 조합에 사용된 인트론 유전자를 아래의 표 1에 나타내었다:
서열번호
IGLV-1L1 Int(115 bP) GTGACAGGATGGGGACCAAGAAAGGGGCCCTGGGAAGCCCATGGGGCCCTGCTTTCTCCTCTTGTCTCCTTTTGTCTCTTGTCAATCACCATGTCTGTGTCTCTCTCACTTCCAG 109
IGKV Int (206 bp) Gtgagaatatttagaaaaagctaaaactaattctttgaaccattaattttcttaattaggaacctggcaccatatggaacttggcttgtttttaaatgtgatttttttttaagtaatgcgtattctttcatcttgtgctactagattagtggtgatttcattaagcagatgcttatattgtgctaatgtttgctgtatgttttcag 110
IGH Int (82 bp) Gtgagtgtctcagggatccagacatgggggtatgggaggtgcctctgatcccagggctcactgtgggtctctctgttcacag 111
Chimeric Intron (133 bp) GTAAGTATCAAGGTTACAAGACAGGTTTAAGGAGACCAATAGAAACTGGGCTTGTCGAGACAGAGAAGACTCTTGCGTTTCTGATAGGCACCTATTGGTCTTACTGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAG 112
PCR에 사용한 primer
SEQ ID No. Oligomer Name Sequence
114 CA-Fw 5`- TAACAGGGTAATATAG acgcgtgga - 3`
115 LInt-Fw 5`- agagctct CAATTG gtgacagga - 3`
116 KInt-Fw 5`- agagctct CAATTG gt gagaatat - 3`
117 HInt-Fw 5`- agagctct CAATTG gtga gtgtct - 3`
118 CInt-Fw 5`- agagctct CAATTG GTAAGTATC - 3`
119 CA-Rev 5`- ttctcgagttctccgctagctcct - 3`
실시예 2: 재조합 벡터의 단백질 발현효과 비교
상기 실시예 1에서 구축된 재조합 벡터 (항 c-Met 항체의 중쇄 재조합 벡터 및 경쇄 재조합 벡터)는 각각 Qiagen EndoFree Plasmid Mega kit (Cat no. 12381)을 이용하여 분리하였으며, 동물세포에 transient transfection 한 후, 벡터에 cloning 되어 있는 항 c-Met 항체 유전자로부터 발현된 후 분비되는 단백질(항체) 양을 비교 하였다.
CHO-S (Invitrogen) 세포주는 세포주 CHO-K1 의 변이체이다. CHO-S 세포주를 8mM Glutamine이 포함된 FreeStyle™ CHO expression medium을 배지로 사용하여 부유배양방식으로 일상적으로 증식시켰으며, 2 x 105 cells/mL의 농도로 접종하여 매 4일마다 분할하였다. 플라스크는 36.5℃, 5% CO2, 80% humidity, 130 rpm 조건에서 배양하였다. Transient gene expression 하루 전 세포를 5x105 cells/mL의 농도로 준비한 후, 24시간이 지난 뒤 cell수가 1x106 cells/mL이 되었을 때 transfection을 진행하였다.
CHO-S 세포를 250 mL Erlenmeyer flask에 1x106 cells/mL의 농도로 90mL을 준비한 후, FreestyleTM MAX reagent (Invitrogen)을 사용한 liposomal reagent법으로 형질도입(transfection)을 진행 하였으며, 15ml tube에 중쇄 DNA: 경쇄 DNA=1:1의 비율이 되도록 실시예 1에서 제작된 각각의 재조합 벡터를 준비하여 OptiPro™ SFM (invtrogen) 2ml과 mix하고(tube A), 또 다른 15ml tube에 FreestyleTM MAX reagent 100㎕와 OptiPro™ SFM 2ml을 mix(tube B)한 후, (tube A)와 (tube B)을 mix하여 15분간 incubation 한 후, 상기 혼합액을 준비한 세포에 천천히 방울로 떨어뜨려 섞어주었다. 형질도입 완료 후, 37 ℃, 80% humidity, 5% CO2 , 130 rpm incubator에서 5일간 배양한 후 상층액을 수확하여 항 c-Met 항체의 농도를 Octet system (ForteBio)의 Protein A biosensor을 이용하여 측정하였다. 항체 생산량을 비교하기 위하여, 프로모터로서 단독 hCMV 프로모터 (서열번호 120; pcDNA 3.3 TOPO vector (Invitrogen) 유래) 또는 단독 mCMV 프로모터 (서열번호 113)를 가지는 벡터를 이용하여 동일한 시험을 수행하였다 (대조군).
각각의 융합 프로모터를 사용하여 얻어진 항체 농도를 단독 hCMV 프로모터를 사용하여 얻어진 농도에 대한 비율로 도 5에 나타내었다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 대조군과 비교하여 서열번호 113의 mCMV 프로모터와 다양한 인트론이 조합된 융합 프로모터를 포함하는 경우에 항체 생산량이 현저하게 증가한 것을 확인할 수 있다.
<110> Samsung Electronics Co. Ltd <120> Fusion Polynucleotide Containing Murine CMV Promoter and Method of Preparing a Polypeptide of Interest Using the Same <130> DPP20143573KR <160> 120 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR1 of AbF46 <400> 1 Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 2 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR2 of AbF46 <400> 2 Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR3 of AbF46 <400> 3 Asp Asn Trp Phe Ala Tyr 1 5 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR1 of c-Met antibody <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> X is Pro or Ser or absent <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> X is Glu or Asp <400> 4 Xaa Xaa Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR2 of c-Met antibody <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> X is Asn or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> X is Ala or Val <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> X is Asn or Thr <400> 5 Arg Asn Xaa Xaa Asn Gly Xaa Thr 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR3 of c-Met antibody <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> X is Ser or Thr <400> 6 Asp Asn Trp Leu Xaa Tyr 1 5 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR1 of c-Met antibody <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> X is His, Arg, Gln or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> X is His or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> X is Lys or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> X is Ser or Trp <400> 7 Lys Ser Ser Xaa Ser Leu Leu Ala Xaa Gly Asn Xaa Xaa Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR2 of c-Met antibody <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> X is Ala or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> X is Thr or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> X is Ser or Pro <400> 8 Trp Xaa Ser Xaa Arg Val Xaa 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR3 of c-Met antibody <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> X is Gly, Ala or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> X is Arg, His, Ser, Ala, Gly or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> X is Leu, Tyr, Phe or Met <400> 9 Xaa Gln Ser Tyr Ser Xaa Pro Xaa Thr 1 5 <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR1 of AbF46 <400> 10 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR2 of AbF46 <400> 11 Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR3 of AbF46 <400> 12 Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 derived from L3-1 clone <400> 13 Gln Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Tyr Thr 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 derived from L3-2 clone <400> 14 Gly Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Leu Thr 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 derived from L3-3 clone <400> 15 Ala Gln Ser Tyr Ser His Pro Phe Ser 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 derived from L3-5 clone <400> 16 Gln Gln Ser Tyr Ser Arg Pro Phe Thr 1 5 <210> 17 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 18 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Arg Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 19 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 19 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Arg Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 20 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 20 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser His Pro Phe Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 21 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region of anti c-Met humanized antibody(huAbF46-H4) <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Arg Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H1 derived from H11-4 clone <400> 22 Pro Glu Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence 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caacaccaat aacgccattt aatctaagcg catcaccaac attttctggc gtcagtccac 2160 cagctaacat aaaatgtaag ctctcggggc tctcttgcct tccaacccag tcagaaatcg 2220 agttccaatc caaaagttca cctgtcccac ctgcttctga atcaaacaag ggaataaacg 2280 aatgaggttt ctgtgaagct gcactgagta gtatgttgca gtcttttgga aatacgagtc 2340 ttttaataac tggcaaaccg aggaactctt ggtattcttg ccacgactca tctccgtgca 2400 gttggacgat atcaatgccg taatcattga ccagagccaa aacatcctcc ttaggttgat 2460 tacgaaacac gccaaccaag tatttcggag tgcctgaact atttttatat gcttttacaa 2520 gacttgaaat tttccttgca ataaccgggt caattgttct ctttctattg ggcacacata 2580 taatacccag caagtcagca tcggaatcta gagcacattc tgcggcctct gtgctctgca 2640 agccgcaaac tttcaccaat ggaccagaac tacctgtgaa attaataaca gacatactcc 2700 aagctgcctt tgtgtgctta atcacgtata ctcacgtgct caatagtcac caatgccctc 2760 cctcttggcc ctctcctttt cttttttcga ccgaatttct tgaagacgaa agggcctcgt 2820 gatacgccta tttttatagg ttaatgtcat gataataatg gtttcttagg acggatcgct 2880 tgcctgtaac ttacacgcgc ctcgtatctt ttaatgatgg aataatttgg gaatttactc 2940 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aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag 3840 aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga 3900 gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg 3960 cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga 4020 atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt 4080 tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact 4140 ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt 4200 ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg 4260 ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacgggcagt caggcaacta 4320 tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac 4380 tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta 4440 aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt 4500 tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt 4560 tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt 4620 gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc 4680 agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg 4740 tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg 4800 ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt 4860 cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac 4920 tgagatacct acagcgtgag cattgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg 4980 acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg 5040 ggaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat 5100 ttttgtgatg ctcgtcaggg gggccgagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt 5160 tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg 5220 attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa 5280 cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc 5340 ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga 5400 aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttacct cactcattag gcaccccagg 5460 ctttacactt tatgcttccg gctcctatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc 5520 acacaggaaa cagctatgac catgattacg ccaagctcgg aattaaccct cactaaaggg 5580 aacaaaagct ggctagt 5597 <210> 57 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> U6-HC7 hinge <400> 57 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 58 <211> 435 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding CDR-L3 derived from L3-1 clone <400> 58 gaattcacta gtgattaatt cgccgccacc atggattcac aggcccaggt cctcatgttg 60 ctgctgctat cggtatctgg tacctgtgga gatatccaga tgacccagtc cccgagctcc 120 ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtcacc atcacctgca agtccagtca gagtctttta 180 gctagtggca accaaaataa ctacttggcc tggcaccaac agaaaccagg aaaagctccg 240 aaaatgctga ttatttgggc atccactagg gtatctggag tcccttctcg cttctctgga 300 tccgggtctg ggacggattt cactctgacc atcagcagtc tgcagccgga agacttcgca 360 acttattact gtcagcagtc ctacagccgc ccgtacacgt tcggacaggg taccaaggtg 420 gagatcaaac gtacg 435 <210> 59 <211> 435 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding CDR-L3 derived from L3-2 clone <400> 59 gaattcacta gtgattaatt cgccgccacc atggattcac aggcccaggt cctcatgttg 60 ctgctgctat cggtatctgg tacctgtgga gatatccaga tgacccagtc cccgagctcc 120 ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtcacc atcacctgca agtccagtca gagtctttta 180 gctagtggca accaaaataa ctacttggcc tggcaccaac agaaaccagg aaaagctccg 240 aaaatgctga ttatttgggc atccactagg gtatctggag tcccttctcg cttctctgga 300 tccgggtctg ggacggattt cactctgacc atcagcagtc tgcagccgga agacttcgca 360 acttattact gtgggcagtc ctacagccgt ccgctcacgt tcggacaggg taccaaggtg 420 gagatcaaac gtacg 435 <210> 60 <211> 435 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding CDR-L3 derived from L3-3 clone <400> 60 gaattcacta gtgattaatt cgccgccacc atggattcac aggcccaggt cctcatgttg 60 ctgctgctat cggtatctgg tacctgtgga gatatccaga tgacccagtc cccgagctcc 120 ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtcacc atcacctgca agtccagtca gagtctttta 180 gctagtggca accaaaataa ctacttggcc tggcaccaac agaaaccagg aaaagctccg 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tggcaaggag 1020 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1080 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1140 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1200 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1260 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1320 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1380 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga ctcgag 1416 <210> 77 <211> 759 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of light chain of anti-c-Met antibody (AbF46 or huAbF46-H1) <220> <221> misc_difference <222> (1)..(6) <223> EcoRI restriction site <220> <221> misc_difference <222> (7)..(90) <223> signal sequence <220> <221> misc_difference <222> (91)..(432) <223> VL - light chain variable region <220> <221> misc_difference <222> (430)..(435) <223> BsiWI restriction site <220> <221> misc_difference <222> (433)..(750) <223> CL - light 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gagctcgccc 720 gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt tgactcgag 759 <210> 78 <211> 4170 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide encoding c-Met protein <400> 78 atgaaggccc ccgctgtgct tgcacctggc atcctcgtgc tcctgtttac cttggtgcag 60 aggagcaatg gggagtgtaa agaggcacta gcaaagtccg agatgaatgt gaatatgaag 120 tatcagcttc ccaacttcac cgcggaaaca cccatccaga atgtcattct acatgagcat 180 cacattttcc ttggtgccac taactacatt tatgttttaa atgaggaaga ccttcagaag 240 gttgctgagt acaagactgg gcctgtgctg gaacacccag attgtttccc atgtcaggac 300 tgcagcagca aagccaattt atcaggaggt gtttggaaag ataacatcaa catggctcta 360 gttgtcgaca cctactatga tgatcaactc attagctgtg gcagcgtcaa cagagggacc 420 tgccagcgac atgtctttcc ccacaatcat actgctgaca tacagtcgga ggttcactgc 480 atattctccc cacagataga agagcccagc cagtgtcctg actgtgtggt gagcgccctg 540 ggagccaaag tcctttcatc tgtaaaggac cggttcatca acttctttgt aggcaatacc 600 ataaattctt cttatttccc agatcatcca ttgcattcga tatcagtgag aaggctaaag 660 gaaacgaaag atggttttat gtttttgacg gaccagtcct acattgatgt tttacctgag 720 ttcagagatt cttaccccat taagtatgtc catgcctttg aaagcaacaa ttttatttac 780 ttcttgacgg tccaaaggga aactctagat gctcagactt ttcacacaag aataatcagg 840 ttctgttcca taaactctgg attgcattcc tacatggaaa tgcctctgga gtgtattctc 900 acagaaaaga gaaaaaagag atccacaaag aaggaagtgt ttaatatact tcaggctgcg 960 tatgtcagca agcctggggc ccagcttgct agacaaatag gagccagcct gaatgatgac 1020 attcttttcg gggtgttcgc acaaagcaag ccagattctg ccgaaccaat ggatcgatct 1080 gccatgtgtg cattccctat caaatatgtc aacgacttct tcaacaagat cgtcaacaaa 1140 aacaatgtga gatgtctcca gcatttttac ggacccaatc atgagcactg ctttaatagg 1200 acacttctga gaaattcatc aggctgtgaa gcgcgccgtg atgaatatcg aacagagttt 1260 accacagctt tgcagcgcgt tgacttattc atgggtcaat tcagcgaagt cctcttaaca 1320 tctatatcca ccttcattaa aggagacctc accatagcta atcttgggac atcagagggt 1380 cgcttcatgc aggttgtggt ttctcgatca ggaccatcaa cccctcatgt gaattttctc 1440 ctggactccc atccagtgtc tccagaagtg attgtggagc atacattaaa ccaaaatggc 1500 tacacactgg ttatcactgg gaagaagatc acgaagatcc cattgaatgg cttgggctgc 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aatgaagtca taggaagagg gcattttggt tgtgtatatc atgggacttt gttggacaat 3300 gatggcaaga aaattcactg tgctgtgaaa tccttgaaca gaatcactga cataggagaa 3360 gtttcccaat ttctgaccga gggaatcatc atgaaagatt ttagtcatcc caatgtcctc 3420 tcgctcctgg gaatctgcct gcgaagtgaa gggtctccgc tggtggtcct accatacatg 3480 aaacatggag atcttcgaaa tttcattcga aatgagactc ataatccaac tgtaaaagat 3540 cttattggct ttggtcttca agtagccaaa ggcatgaaat atcttgcaag caaaaagttt 3600 gtccacagag acttggctgc aagaaactgt atgctggatg aaaaattcac agtcaaggtt 3660 gctgattttg gtcttgccag agacatgtat gataaagaat actatagtgt acacaacaaa 3720 acaggtgcaa agctgccagt gaagtggatg gctttggaaa gtctgcaaac tcaaaagttt 3780 accaccaagt cagatgtgtg gtcctttggc gtgctcctct gggagctgat gacaagagga 3840 gccccacctt atcctgacgt aaacaccttt gatataactg tttacttgtt gcaagggaga 3900 agactcctac aacccgaata ctgcccagac cccttatatg aagtaatgct aaaatgctgg 3960 caccctaaag ccgaaatgcg cccatccttt tctgaactgg tgtcccggat atcagcgatc 4020 ttctctactt tcattgggga gcactatgtc catgtgaacg ctacttatgt gaacgtaaaa 4080 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Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 109 <211> 115 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGLV-1L1 Intron <400> 109 gtgacaggat ggggaccaag aaaggggccc tgggaagccc atggggccct gctttctcct 60 cttgtctcct tttgtctctt gtcaatcacc atgtctgtgt ctctctcact tccag 115 <210> 110 <211> 206 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGKV Intron <400> 110 gtgagaatat ttagaaaaag ctaaaactaa ttctttgaac cattaatttt cttaattagg 60 aacctggcac catatggaac ttggcttgtt tttaaatgtg attttttttt aagtaatgcg 120 tattctttca tcttgtgcta ctagattagt ggtgatttca ttaagcagat gcttatattg 180 tgctaatgtt tgctgtatgt tttcag 206 <210> 111 <211> 82 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGH Intron <400> 111 gtgagtgtct cagggatcca gacatggggg tatgggaggt gcctctgatc ccagggctca 60 ctgtgggtct ctctgttcac ag 82 <210> 112 <211> 133 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric Intron <400> 112 gtaagtatca aggttacaag acaggtttaa ggagaccaat agaaactggg cttgtcgaga 60 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<220> <223> LInt-Fw primer <400> 115 agagctctca attggtgaca gga 23 <210> 116 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> KInt-Fw primer <400> 116 agagctctca attggtgaga atat 24 <210> 117 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HInt-Fw primer <400> 117 agagctctca attggtgagt gtct 24 <210> 118 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CInt-Fw primer <400> 118 agagctctca attggtaagt atc 23 <210> 119 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CA-Rev primer <400> 119 ttctcgagtt ctccgctagc tcct 24 <210> 120 <211> 680 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hCMV promoter <400> 120 gttgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata 60 gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc 120 ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag 180 ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta aactgcccac ttggcagtac 240 atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg 300 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Claims (15)

  1. 마우스 CMV 프로모터 및 인트론을 포함하고,
    상기 인트론은 면역글로불린 인트론 및 키메라 인트론으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인,
    융합 폴리뉴클레오타이드.
  2. 제1항에 있어서, 상기 마우스 CMV 프로모터는 서열번호 113의 염기서열을 포함하는 마우스 CMV 프로모터, 상기 마우스 CMV 프로모터 내의 연속하는 100bp 이상의 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오타이드 단편, 또는 상기 폴리뉴클레오타이드 단편의 5' 말단, 3' 말단, 또는 양 말단 모두에 1 내지 100bp 길이의 염기를 추가로 포함하는 폴리뉴클레오타이드 단편인,
    융합 폴리뉴클레오타이드.
  3. 제1항에 있어서, 상기 면역글로불린 인트론은 IGLV 인트론, IGKV 인트론, 및 IGH 인트론으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 융합 폴리뉴클레오타이드.
  4. 제1항에 있어서, 상기 인트론은 서열번호 109 내지 서열번호 112로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 융합 폴리뉴클레오타이드.
  5. 제1항에 있어서, 상기 인트론은 상기 마우스 CMV 프로모터의 3' 말단에 연결된 것인, 융합 폴리뉴클레오타이드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 세포에서 작동 가능한 프로모터로 사용하기 위한 것인, 융합 폴리뉴클레오타이드.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 융합 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 재조합 벡터.
  8. 제7항에 있어서, 목적 폴리펩타이드를 암호화하는 유전자를 추가로 포함하고, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드는 상기 목적 폴리펩타이드를 암호화하는 유전자에 작동 가능하게 연결된 것인, 재조합 벡터.
  9. 제8항에 있어서, 상기 목적 폴리펩타이드는 효소 활성 폴리펩타이드, 수용체 폴리펩타이드, 수송체 폴리펩타이드, 살균 또는 내독소-결합 폴리펩타이드, 구조 폴리펩타이드, 면역 폴리펩타이드, 조직 플라스미노겐 활성인자, 독소, 항생제, 호르몬, 성장 인자, 및 백신으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 재조합 벡터.
  10. 제9항에 있어서, 상기 목적 폴리펩타이드는 항체이고, 상기 융합 폴리뉴클레오타이드는 상기 항체의 경쇄 유전자, 중쇄 유전자, 및 항원결합단편의 유전자로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상과 작동 가능하게 연결된 것인, 재조합 벡터.
  11. 제10항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 71의 아미노산 서열 내의 서열번호 73의 아미노산 서열(EEPSQ)을 포함하는 연속하는 5 내지 19개의 아미노산으로 이루어진 에피토프에 특이적으로 결합하는 항 c-Met 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 재조합 벡터.
  12. 제7항의 재조합 벡터가 숙주 세포에 도입된, 재조합 세포.
  13. 제12항에 있어서, 상기 재조합 벡터는 목적 폴리펩타이드를 암호화하는 유전자를 추가로 포함하는 것인, 재조합 세포.
  14. 제12항에 있어서, 상기 숙주세포는 포유동물 세포인, 재조합 세포.
  15. 제13항의 재조합 세포에서 상기 목적 폴리펩타이드를 암호화하는 유전자를 발현시키는 단계를 포함하는 폴리펩타이드의 생산 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3079416A1 (en) * 2017-10-20 2019-04-25 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Methods and materials for nt-3 gene therapy
WO2020034097A1 (en) * 2018-08-14 2020-02-20 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Transcriptional regulatory element and its use in enhancing the expression of exogenous protein

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US330543A (en) * 1885-11-17 Skate
KR100423022B1 (ko) 2000-11-24 2004-03-12 (주) 벡터코어에이 쥐 사이토메갈로바이러스 즉시 초기 유전자의인핸서/프로모터 및 사람 베타글로빈 인트론을 포함하는포유동물용 발현벡터, 이 발현벡터로 형질전환된 세포 및이 세포를 이용한 이종단백질의 생산 방법
KR100432151B1 (ko) 2001-03-26 2004-05-17 한국생명공학연구원 포유동물용 발현벡터, 이 발현벡터로 형질전환된 세포 및 이 세포를 이용한 이종단백질의 생산방법
US20040156832A1 (en) * 2002-09-30 2004-08-12 Centec Limited Immunoglobulin compositions and methods
SI1601776T1 (sl) 2003-03-11 2008-10-31 Serono Lab Ekspresijski vektorji, ki vsebujejo mcmv ie2 promotor
CA2631240A1 (en) 2004-12-03 2006-06-08 Xoma Technology Ltd. Methods and materials for expression of a recombinant protein
AU2006237193B2 (en) 2005-04-22 2012-02-02 Lonza Biologics Plc. Mammalian expression vector comprising the mCMV promoter and first intron of hCMV major immediate early gene
CN1952160B (zh) 2005-06-23 2010-08-11 北京乾景立康基因科技有限公司 智能腺病毒载体与khp53基因的重组体及其应用
US8545839B2 (en) * 2008-12-02 2013-10-01 Pierre Fabre Medicament Anti-c-Met antibody
KR101671378B1 (ko) 2009-10-30 2016-11-01 삼성전자 주식회사 ｃ-Ｍｅｔ에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
JP5209693B2 (ja) 2010-12-10 2013-06-12 ロンザ・バイオロジクス・ピーエルシー Ｃｈｏ細胞において組換えタンパク質を発現する方法
KR20130037153A (ko) 2011-10-05 2013-04-15 삼성전자주식회사 항 ｃ-Ｍｅｔ 항체 및 그의 용도

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