KR20160061430A

KR20160061430A - 자가면역 수포성 질환의 치료를 위한 가용성 Fc 감마 수용체

Info

Publication number: KR20160061430A
Application number: KR1020167012579A
Authority: KR
Inventors: 랄프 루드비히; 피터 썬더만; 도미닉 테르 메르
Original assignee: 수프레몰 게엠베하
Priority date: 2013-10-16
Filing date: 2013-10-16
Publication date: 2016-05-31
Also published as: JP2016539920A; AU2013403046A1; EP3057606B1; EA201690766A1; IL245116A0; WO2015055240A1; KR102138219B1; US9981009B2; AU2013403046B2; CN105873600A; CN105873600B; CA2927263C; NZ719745A; EA034176B1; BR112016008288A2; CA2927263A1; MX371137B; IL245116B; MX2016004799A; EP3057606A1

Abstract

본 발명은 일반적으로 생물공학 및 의학 분야에 관한 것이다. 본 발명은 자가면역 수포성 질환(AMDB)의 치료를 위한 작용제, 약학 조성물 및 키트를 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 AMDB의 치료를 위한 가용성 Fc 감마 수용체의 용도, 및 상기 수용체를 포함하는 약학 조성물 및 키트에 관한 것이다. 본 발명은 또한 AMDB의 치료 방법을 포함한다.

Description

자가면역 수포성 질환의 치료를 위한 가용성 Fc 감마 수용체{SOLUBLE FC GAMMA RECEPTOR FOR TREATMENT OF AUTOIMMUNE BULLOUS DISEASES}

본 발명은 일반적으로 생물공학 및 의학 분야에 관한 것이다. 본 발명은 자가면역 수포성 질환(AMDB)의 치료를 위한 작용제, 약학 조성물 및 키트를 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 AMDB의 치료를 위한 가용성 Fc 감마 수용체의 용도, 및 상기 수용체를 포함하는 약학 조성물 및 키트에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 AMDB의 치료 방법을 포함한다.

종종 인체의 가장 큰 기관으로 지칭되는 피부는 인체를 극단적인 온도, 일광 손상, 유해 화학물질 및 병원체에 대해 보호하는 방수성의 단열성 보호물로서 작용한다. 피부는 체온 및 수분 발산의 조절을 돕고, 외부 자극을 감지하고 전달하기 위한 신경들로 충전된 거대한 센서로서 작용한다. 피부는 2개의 주요 층으로 구성된다. 가장 바깥층은 고도로 조직화된 각질세포로 주로 이루어지는 표피이다. 복합 세포 연접부(데스모솜)는 상기 각질세포들을 서로 결합시켜, 피부에 역학적 강도를 제공하는 세포외 기질을 형성하는 각질 단백질 및 지질을 분비한다. 상기 표피는 진피로서 공지된 하부의 보다 깊은 피부층에 결합되며, 상기 진피는 결합 조직으로 이루어지고 프로테오글리칸 중에 묻혀있는 콜라겐 피브릴, 미세피브릴, 및 탄성 섬유로 구성된 세포외 기질을 통해 상기 피부에 인장 강도 및 탄성을 제공한다. 표피 및 진피는 기저막이라 칭하는 박층에 의해 분리된다. 상기 진피-표피 연접부(DEJ)는 상기 피부의 표피와 진피층을 연결하는 조직 영역이다.

자가면역 수포성 질환(AMDB)은 주로 피부 및 점막을 침범하는 일단의 피부 질환이다. AMDB에서, 숙주 면역계는 피부의 기저막 및 점막 표면의 세포간 부착 분자 또는 성분들을 붕괴시켜, 전형적으로는 수포가 형성되게 한다. 신체를 탈수 및 감염에 대해 보호하기 위해서는 완전한 피부가 지극히 중요하기 때문에, AMDB는 종종 고도의 사망률과 관련되며 생명을 위협할 수도 있다.

AMDB는 4개의 주요 그룹으로 세분될 수 있다. 표피내 수포성 질환('천포창 그룹')은 세포간 결합, 예를 들어, 데스모솜의 상실, 각질세포의 세포간 연접부에 면역반응물질의 침착 및 세포-세포 부착장애로부터 생성되는 표피내 수포의 형성을 특징으로 한다. 전형적인 표피내 자가면역 수포성 질환은 심상성 천포창(PV)과 낙엽상 천포창(PF)을 포함한다. 상기 질환의 나머지는 세포-기질 부착장애로부터 생성되는 표피상 수포 형성 및 진피-표피 연접부(DEJ)에서의 자가항체의 침착을 특징으로 한다. '유천포창 그룹'은 수포성 유천포창(BP), 점막 유천포창(MMP), 임신성 유천포창, 점막 유천포창 및 선형 IgA 질환을 포함한다. 편평태선 유천포창은 때때로 BP의 드문 변형으로서 간주된다. 다른 2개의 그룹은 후천성 수포성 표피박리증(EBA) 및 포진성 피부염을 포함한다[참조: Mihai and Sitaru, 2007]. 수포성 전신 홍반성 루푸스(BSLE)는 전신 홍반성 루푸스 환자에서 발생하는 일반화된 표피하 수포성 질환이다.

AMDB에서 전형적인 수포 형성을 유도하는 피부 구조 요소의 붕괴는 주로 자가반응성 항체에 기인하였다. 그 밖에, 보체 시스템 및 자가반응성 T 세포가 AMDB 병인에 관련되는 것으로 생각된다[참조: Liu and Rubinstein(2008)]. 대부분의 AMDB는, 전형적으로 Fc 부분을 통해 선천적인 면역계의 인자들, 예를 들어, 보체 시스템 및 염증 세포와 상호작용하고 하류 신호전달 캐스케이드를 촉발하여 최종적으로 조직을 파괴시키는, 조직-결합되고 순환성인 IgG 부류의 자가반응성 항체들과 관련된다[참조: Sitaru et al., 2007]. Fc 감마 수용체(FcγR)는 AMDB에서 자가반응성 IgG 항체의 효과기 기능을 매개하는데 핵심적인 역할을 한다.

FcγR은 인간 유기체를 감염에 대해 방어하는데 중요한 Fc 수용체(FcR)과에 속한다. 일반적으로 FcγR를 활성화하고 FcγR을 억제하는 것은 구분되어야 한다. 인간에서 3개의 주 FcγR 중 FcγRI은 단량체성 IgG에 결합할 수 있는 반면, FcγRII 및 FcγRIII은 항체 및 항원으로 구성된 다가의 면역 복합체(IC)에 결합한다[참조: Takai(2002)]. FcγR에 의해 촉발된 효과기 기능은 발현되는 FcγR 유형 및 관련 단백질에 따라, 병원체 및 항원 표출의 후속 중화를 갖는 내포작용, 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC), 매개체의 분비 또는 항체 생산의 조절을 포함한다[참조: Fridman et al.(1992), van de Winkel and Capel(1993)].

치료 성공의 예측 불가성에 대한 일례는 리툭시맙이다. 상기 항체는 B 세포상에서 광범위하게 발현되는 CD20-항원을 인식한다. 표적에 결합 후 리툭시맙은 면역계의 도움으로 B 세포의 살해를 매개한다. 리툭시맙은 B 세포 림프종의 치료를 위해 개발되었으나 그때 이후로 병원성 자가항체를 생산하는 것으로 공지된 B 세포 관련된 자가면역 질환의 치료에도 또한 사용되어 왔다. 자가면역 질환의 치료에 친숙한 의사는 상당 수준의 자가항체로 인해 ITP, SLE 또는 ANCA 관련된 혈관염을 리툭시맙으로 치료할 수 있는 것으로 분명히 생각할 것이다. 그러나, 높은 수준의 자가항체를 특징으로 하는 SLE에 대한 치료 성공은 2개의 임상 연구에서 입증될 수 없었다[참조: Coca and Sanz(2009)]. 유사하게, ANCA 관련된 혈관염에서 환자의 단지 2/3만이 리툭시맙 치료에 적합하게 반응하는 반면[참조: Stone(2010)], ITP에서는 60%가 반응하지 않는다[참조: Patel(2010)]. 다른 한편으로, 리툭시맙은 다발성 경화증[참조: Hauser(2008)] 및 I형 당뇨병[참조: Pescowitx(2009): 이들 질병은 모두 상당한 수준의 자가항체들이 우세하지 않음]에서 효능을 입증할 수 있었다.

지금까지 통상적인 AMDB 치료는 보통, 종종 높은 투여량의 면역억제제 및 소염제, 및 피부 병변의 치료로 이루어진다. 불행하게도, 상기 질환의 치료에 사용되는 약물들 중 다수는 심한 부작용을 가지며, 환자들:을 감염, 신장 및 간 기능 이상, 전해질 교란, 고혈압, 당뇨병, 빈혈 및 위장 출혈에 대해 면밀히 모니터해야 한다[참조: Mutasim(2007)].

따라서 본 발명의 근원적인 기술적 문제를 AMDB를 치료하기 위한 대체 수단 및 방법의 제공으로 찾을 수 있다.

본 발명자들은 놀랍게도 가용성 Fc 감마 수용체(sFcγR)가 생체내 AMDB 마우스 모델에서 질환 중증도 및 순환하는 자가반응성 항체를 감소시킴을 발견하였다. 더욱이, sFcγR은 호중구로부터 IgG-유도된 ROS 방출 및 자가항체-치료된 피부 이식편에서 손상된 진피 표피 분리(이는 전형적인 수포발생에 중요한 역할을 수행하는 것으로 생각된다)를 현저하게 감소시켰다. 따라서, 첨부된 실시예에 나타내고 도면에 예시되는 본 발명자들에 의해 제공된 결과를 근거로, sFcγR은 다수의 자가면역 수포성 질환의 치료 약제로서 상당한 가능성을 가졌다.

AMDB의 개시 및 진행에 관련된 완전히 복잡하고 독특한 사건들, 및 자가면역 질환의 sFcγR 치료를 적용하는 상이한 연구들에서 보고된 부분적으로 상반되는 발생 효과들에 비추어, AMDB의 치료를 위한 sFcγR의 치료학적 가능성은 예견될 수 없었고 명백하게 예견되지 않았다. 실제로, sFcγR 치료가 전임상 및 임상 시험에서 ITP, SLE, MS의 치료에 이로운 것으로 입증되었지만, 다른 자가면역 질환의 치료도 또한 이로울 것이라는 결론을 내릴 수는 없다. 오히려, 모든 자가면역 질환은 그 자신의 특수성을 가지며 각각이 상이하고, 따라서 비교할만하지 않으며, 조직-침착된 면역 복합체(IC)를 수반하는 하나의 자가면역 질환의 성공적인 치료가 IC를 또한 수반하는 또 다른 자가면역 질환에도 또한 이로울 수 있다는 결론을 내릴 수는 없다. 실제로, 수반은 상기 IC가 자가면역 질환의 유일한 원인 인자임을 의미하지 않으며, 다수의 다른 인자들이 존재하고, 따라서 지금까지는 IC를 수반하는 자가면역 질환의 공통의 원인인자를 알아낼 수 없었다. 실제로, 자가면역 질환들, 예를 들어, IC를 수반하는 질환들의 유일한 공통 분모는 면역계가 신체 자신의 구조에 대해서 반응한다는 것이다. IC의 활성화를 억제하는 것으로 생각할 수 있는 전신 치료는 EP1870422에 암시된 바와 같이 항체에 의해 면역세포의 Fc 수용체를 차단하는 것이다. 그러나, IC에 관련된 자가항체의 Fc 부분에 대한 sFcγR의 결합이 AMDB의 치료에 이로운 효과를 생성시킬 것이라는 것은 예상되지 않았을 것이며 예상할 수도 없었을 것이다. 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, sFcγR은 IC에 대해서 막 FcγR과 경쟁하는 것으로 생각된다. 상기 경쟁의 결과로서 막 FcγR 시스템을 통한 면역 반응의 활성화는 하향 조절된다. 상기 추정된 작용 방식은 시험관내 및 마우스 모델 모두에서 나타난 바와 같이 그다지 유효한 것으로 생각될 수 없었다. 따라서, sFcγR이 AMDB의 치료에 작용한다는 것은 놀라운 것으로 다가왔다.

상응하게, 첫 번째 태양에서, 본 발명은 대상체에서 자가면역 수포성 질환의 치료에 사용하기 위한 가용성 Fc 감마 수용체에 관한 것이다. 상기 대상체는 바람직하게는 포유동물, 예를 들어, 인간, 개, 말, 고양이, 양, 소, 토끼, 래트 또는 마우스이며, 인간이 바람직하다. 상기 가용성 Fc 감마 수용체를 다수의 수포성 질환의 치료에 사용할 수 있는 것으로 구상되고, 보다 구체적으로 상기 가용성 Fc 감마 수용체를 예를 들어, 심상성 천포창(PV), 낙엽상 천포창(PF), 수포성 유천포창(BP), 점막 유천포창(MMP), 임신성 유천포창, 점막 유천포창, 선형 IgA 질환(선형 IgA 수포성 피부병), 편평태선 유천포창, 후천성 수포성 표피박리증(EBA), 포진성 피부염, 및 수포성 전신홍반성 루푸스(BSLE)의 그룹 중에서 선택된 질환들 중 어느 하나의 치료에 사용할 수 있을 것으로 구상된다. 현 발명자들이 유천포창 질환의 치료에 가용성 인간 FcγRIIB의 사용에 대해서 고려하였지만[참조: Clinical Presentation, Pathogenesis, Diagnosis, and Treatment of Epidermolysis Bullosa Acquisita, Ralf J. Ludwig, ISRN Dermatology Volume 2013], 저 농도의 가용성 인간 FcγRIIB가 생체내에서 상기 질환을 개선시킬 수 있음은 놀라운 것이었다. 저 농도의 가용성 인간 FcγRIIB의 효과는, 당해 분야의 숙련가가 IC의 IgG의 Fc 부분을 통한 병원성 면역-복합체의 결합을 차단(유천포창 질환에서 자가항체 구동된 수포 형성을 정지시키는데 필요할 수 있다)할 수 있기 위해서는 적어도 동몰량의 가용성 인간 FcγRIIB를 사용해야 할 것으로 의심하였기 때문에 놀라운 것이다. 상기 유천포창 질환을 가용성 FcγR이 사용된 질환과 구분하는 두 번째 태양은 피부 조직에 엄격하게 국소화된 병원성 반응의 구획화이다. 가용성 FcγR이 피부의 전문화된 구획에서 임의의 효과를 이끌어낼 수 있음을 본 발명 이전에는 예견할 수도 없었고 알 수도 없었다. 따라서 당해 분야의 숙련가가 자가면역 유천포창 질환의 치료에 가용성 FcγR의 사용을 심사숙고하는 것으로 기울어졌을 수도 있지만, 상기 질환에 대한 저 농도 가용성 FcγR의 이로운 효과는 놀라운 것이다. 지금까지, 가용성 인간 FcγRIIB는, 면역 복합체가 존재하고 피부와 같은 구획이 아닌 혈액 중에서 발생하는 자가면역 질환의 치료에 성공적으로 사용되어 왔다. 따라서, 숙련가는 본 발명자들에 의해 관찰된 상기 놀라운 결과 및 성공을 예상할 수 없었다. 본 발명을 루드비히(Ludwig)의 리뷰 논문[참조: ISRN Dermatology Volume 2013]과 구분하는 세 번째 태양은 상기 리뷰는 유천포창 질환의 병인학에서 FcγRIIB의 역할에 관하여 전혀 명확하지가 않다는 사실이다. 특히, 상기 리뷰는 FcγRIIA 및 FcγRIIIB가 인간의 유천포창 질환에서 조직을 파괴하는데 현저한 역할을 한다고 보고하는 유(Yu) 등의 발표[참조: J. Inv. Dermatol. 2010, Vol. 130, No. 12, 2841-2844]를 언급하고 있다. 상기 리뷰는 또한 인간의 유천포창 질환에서 조직을 파괴함에 있어서 FcγRIV의 현저한 역할을 암시하는 문헌[참조: Kasperkiewicz et al. (J. Pathol. (2012), Vol. 228, No. 1, 8-19]의 발표를 언급하고 있다. 요약하면, 상기 리뷰는 유천포창 질환에 관한 역할을 하는 적어도 3개의 FcγR을 명명하며, 따라서, 상기 리뷰에서 언급된 다른 3개의 FcγR 중 어느 하나의 가용성 버전이 유천포창 질환의 대항에 유망한 도구일 수 있기 때문에, 가용성 FcγRIIB의 사용이 유천포창 질환의 치료에 이로운 역할을 한다는 것은 예상할 수도 없었고 예상하지도 않았을 것이다.

Fc 감마 수용체는 다양한 동형으로 존재한다. 본 발명에 따라, 상기 가용성 Fc 감마 수용체는 Fc 감마 RIIA, Fc 감마 RIIB, Fc 감마 RIIIA 또는 Fc 감마 RIIIB일 수 있다. 그러나, 하나의 바람직한 실시태양에서, 상기 가용성 Fc 감마 수용체는 Fc 감마 RIIB이다.

상기 가용성 Fc 감마 수용체는 인간 기원의 것이 바람직하다. 상기는 예를 들어,서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 및 서열번호 11의 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 언급된 아미노산 서열은 각각 서열번호 2, 4, 6, 8, 10 및 12에 나타낸 뉴클레오티드 서열들에 의해 암호화된다. 이들 뉴클레오티드 서열은 바람직하게는, 본 발명에 개시된 바와 같은 벡터 및 숙주 세포계에 의해 합성적으로, 본 발명에 개시된 sFcγR, 특히 각각 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9 또는 서열번호 11에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 것들 중 어느 하나의 생성에 사용될 수 있다.

본 출원이 언급하는 서열들을 하기에 나타낸다.

서열번호 1(SM101)

서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열에서, 1번 위치에서(즉,아미노산 서열의 출발에서) M(메티오닌) 잔기가 없을 수도 있다. 이러한 변형 아미노산 서열을 본 발명에서 서열번호 11로서 개시한다.

서열번호 2(SM101, cDNA)

서열번호 3(인간 FcγRIIB)

서열번호 4(인간 FcγRIIB, cDNA)

서열번호 5(인간 FcγRIIA)

서열번호 6(인간 FcγRIIA, cDNA)

서열번호 7(인간 FcγRIIIA)

서열번호 8(인간 FcγRIIIA, cDNA)

서열번호 9(인간 FcγRIIIB)

서열번호 10(인간 FcγRIIIB, cDNA)

서열번호 11(SM101 변이체)

서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열에서, 1번 위치에서(즉,아미노산 서열의 출발에서) M(메티오닌) 잔기가 없을 수도 있다. 이러한 변형 아미노산 서열을 본 발명에서 서열번호 11로서 개시하며, 상기 서열은 본 발명의 바람직한 아미노산 서열이다.

서열번호 12(SM101 변이체, cDNA)

상기 가용성 Fc 감마 수용체를 임의의 적합한 형태로 투여할 수 있다. 그러나, 하나의 바람직한 실시태양에서 상기 수용체를 정맥내로 투여한다.

상기 가용성 Fc 감마 수용체는 단독으로 또는 반복해서 투여될 수 있음이 또한 고려된다.

본 발명은 또한 자가면역 수포성 질환의 치료를 위한 가용성 Fc 감마 수용체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 약학 조성물은 또한 임의로 소염제, 면역억제제, 및/또는 항-CD20 항체를 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 함께 포함할 수 있다.

추가의 태양에서, 본 발명은 자가면역 수포성 질환의 치료를 위한 가용성 Fc 감마 수용체를 포함하는 키트를 수반한다. 상기 키트는 또한 임의로 소염제, 면역억제제 및/또는 항-CD20 항체를 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 함께 포함할 수 있다.

더욱 추가의 태양에서, 본 발명은 또한 자가면역 수포성 질환의 치료가 필요한 대상체에게 치료 유효량의 가용성 Fc 감마 수용체를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 상기 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 또한 대상체에서 자가면역 수포성 질환의 치료를 위한 약학 조성물의 제조를 위한 가용성 Fc 감마 수용체의 용도에 관한 것이다.

더욱 또 다른 태양에서, 본 발명은 대상체에서 자가면역 수포성 질환의 치료를 위한 가용성 Fc 감마 수용체의 용도에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 가용성 Fc 감마 수용체를 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합함을 포함하는, 대상체에서 자가면역 수포성 질환의 치료를 위한 약학 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

도 1 인간 IgG를 96-웰 플레이트상에서 항온처리하여 IC를 생성시켰다. 세척 후에, 인간 호중구를 sCD32의 존재 또는 부재하에서 가하였다. 호중구 활성화를 ROS 생성을 측정하여 분석하였다. sCD32(SM101)는 IC-활성화된 호중구로부터 ROS 생성을 용량-의존적인 방식으로 억제하였다. 데이터는 그룹당 5회의 실험에 근거하며(*p<0.05, ANOVA), 평균±SEM으로 나타낸다.
도 2 정상적인 인간 피부로부터의 동결 절편을 수포성 유천포창 환자의 혈청과 함께 항온처리하였다. 후속으로 건강한 혈액 제공자의 백혈구를 가하였다. 상기는 sCD32(SM101)의 부재하에서 진피-표피 분리를 유도하였다. sCD32(SM101)의 존재하에서, 자가항체-유도된, 백혈구-의존적인 진피-표피 분리가 현저하게 손상되었다. 데이터는 그룹당 21회의 실험에 근거하며(*p<0.05, ANOVA), 평균±SEM으로 나타낸다.
도 3 a 실험 EBA를 vWFA2에 의한 면역화에 의해 SJL/J 마우스에서 유도하였다. 개별적인 마우스를 그의 체-표면적의 2% 이상이 피부 병변에 의해 침범된 후에, sCD32(SM101) 또는 PBS 처리에 배정하였다. 좌측 패널에서, 0주는 처리의 출발점, 및 포함시간(0주)에 대한 임상 질병 중증도의 발생을 가리킨다. PBS 주사된 마우스에 비해, sCD32(SM101) 처리는 현저하게 더 낮은 임상 질병 중증도를 유도하였다. 데이터는 그룹당 총 13마리 마우스에 근거하며(*p<0.05, t-검정), 평균±SEM으로 나타낸다. 처리 배정시(0주), 평균 질환 점수는 상이하지 않았다[PBS 및 sCD32(SM101) 처리에서 각각 3.4±0.21% 및 3.4±0.20%]. b sCD32(SM101)로 처리된 마우스에서 전체적인 질병 중증도(AUC)가 더 낮은 것으로 도시된다(p=0.031, t-검정). c PBS(좌측 상부 패널) 및 sCD(SM101)(우측 상부 패널) 처리된 마우스에서 처리 배정 후 4주째의 전형적인 임상 사진.
도 4 a 진피 침윤물의 점수는 sCD32(SM101) 처리된 마우스에서 현저하게 더 낮다(p<0.05, t-검정). b 전형적인 조직구조 사진은 PBS(좌측)와 비교된 sCD32(SM101)(우측) 처리된 마우스에서 감소된 진피 염증성 침윤물을 도시한다.
도 5 처리 기간의 끝에서 ELISA에 의해 측정된 vWFA2에 대한 혈청 자가항체. sCD32(SM101)로 처리된 마우스는 대조용 마우스에 비해 대략 20% 적은 항원-특이성 자가항체를 가졌다(p=0.048; t-검정).
도 6 a 처리 기간의 끝에서 이미지(Image)J에 의해 측정된 조직-침착물 IgG의 상대적인 형광 강도 수준. 모든 마우스는 직접 면역형광(DIF)에 의해 DEJ에서 IgG 침착물을 나타낸다. 상기 형광 강도는 처리 간에 상이하지 않았다. b 처리 기간의 끝에서 IgG 침착물의 전형적인 DIF 사진.

본 발명자들은 놀랍게도 가용성 Fc 감마 RII 수용체(sCD32 = SM101)(특히 및 바람직하게 상기 sCD32는 본 발명에 개시된 바와 같이 SM101이다)가 시험관내에서 IgG 면역 복합체(IC)에 의해 활성화된 호중구로부터 반응성 산소종(ROS)의 방출을 억제할 수 있음을 관찰하였다. 더욱이, sCD32는 말초 혈액 단핵세포(PBMC)의 존재하에서 수포성 유천포창 환자의 혈청과 함께 항온처리된 인간 피부의 동결절편상에서 표피-진피 분리를 손상시킬 수 있었다. 현저하게, sCD32의 유망한 치료학적 가능성을 후천성 수포성 표피박리증(EBA)의 마우스 모델에서 확인할 수 있었다: sCD32는 임상 질환 중증도를 현저하게 감소시켰고, 조직학적으로, 진피 백혈구 침윤을 현저하게 감소시켰으며 순환하는 항원-특이성 자가항체를 대조용에 비해 대략 20% 감소시켰다. 이러한 유망한 결과는 가용성 Fc 감마 수용체가 자가면역 수포성 질환의 치료에 상당한 가능성을 가짐을 암시한다.

따라서, 첫 번째 태양에서, 본 발명은 자가면역 수포성 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 가용성 Fc 감마 수용체의 용도에 관한 것이다.

"Fc 감마 수용체"란 용어는 본 발명에서 "FcgR" 또는 "Fcγ 수용체" 또는 "FcγR"과 호환적으로 사용되며 막성 FcgR 및 가용성 FcgR을 모두 포함한다. Fc 감마 수용체는 단백질의 면역글로불린 상과에 속하며 다수의 조혈 계통상에서 발견된다. Fc 수용체는 그의 명칭이 암시하는 바와 같이 항체의 Fc(단편, 결정성) 부분, 즉,항체의 2개 중쇄 모두의 2개의 C-말단 도메인에 상응하고 전형적으로는 효과기 분자 및 세포와 상호작용하는 단편을 인식하고 이에 결합한다.

FcγR은 IgG 항체를 인식한다. 인간에서 4개의 IgG 하위부류가 존재하며, 혈청 중 그의 풍부성 순서로 명명된다(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 이때 IgG1이 가장 풍부한 IgG 유형이다). 3개 부류의 FcγR이 인간에 존재한다: FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 FcγRIIIA(CD16). 더욱 또한, FcγR은 다양한 동형, 즉,유사하지만 동일하지는 않은 아미노산 서열을 갖는 기능상 유사한 Fc 감마 수용체로 존재한다. 상기 동형은 FcγRIA, B1, B2, C; FcγRIIA1-2, B1-3, C 및 추가로 다수의 대립유전자(FcγRIIa1-HR, -LR; FcγRIIIb-NA1,-NA2)를 포함한다 [참조: van de Winkel and Cape, Immunol. Today 1993, 14:215-221]. FcγR의 상이한 부류 및 동형들은 IgG 및 구체적으로 상이한 IgG 하위부류에 대한 그들의 친화성에 관하여 상이할 수 있다. 전형적으로, FcγR은 I형 막관통 단백질로서 또는 가용성 형태로 존재하지만 또한 FcγRIII의 글리코실포스파티딜이노시톨 고정된 형태(FcγRIIIB)로 존재한다.

본 발명은 가용성 FcγR을 포함하는 키트 및 조성물 및 AMDB의 치료 방법을 제공한다. "가용성 FcγR"을 또한 "sFcγR"이라 칭한다. 일반적으로, 임의의 FcγR 부류, 동형 또는 대립유전자의 가용성 형태들은 선행하는 "s"에 의해 확인될 수 있다, 예를 들어, sCD32 또는 sFcγRII는 가용성 Fc 감마 RII 수용체를 지칭한다. 본 발명에 따른 방법, 키트 및 조성물에 바람직한 가용성 Fc 감마 수용체는 Fc 감마 RIIA, Fc 감마 RIIB, Fc 감마 RIIIA 또는 Fc 감마 RIIIB이다. 그러나, 가용성 FcγRIIB 수용체, 특히 본 발명에 개시된 바와 같은 SM101이 특히 바람직하다. 따라서, 보다 바람직한 실시태양에서, 본 발명에서 sCD32 또는 sFcγRII를 언급하는 경우, SM101을 의미한다.

전형적으로, 막성(즉,막-결합된) FcγR과 대조적으로, 가용성 FcγR은 막관통 영역 또는 세포질내 꼬리를 포함하지 않는다.

바람직하게, 본 발명의 가용성 sFcγR은 인간 기원의 것이다. "인간 기원의"란 용어는 그의 가장 넓은 의미로 해석되어야 한다. 일반적으로 상기는 sFcγR(또는 그의 영역 또는 단편)이 아미노산 서열 및/또는 구조에 관하여 인간 sFcγR(즉,인체에서 발견되는 단백질)을 닮거나 또는 그와 유사함을 의미한다. 일반적으로, 가용성 단백질 및 펩티드를 선행 기술에 개시된 방법[참조: Burnouf(2007)]인 혈장 분획화를 사용함으로써 인간 조직 또는 체액으로부터, 예를 들어, 혈장으로부터 추출에 의해 수득할 수 있다.

한편으로, "인간 기원의" 가용성 sFcγR은 예를 들어, 문헌[참조: Sondermann and Jacob (1999)]에 의해 개시된 바와 같이, 숙주 세포에서 재조합 핵산의 발현에 의해 획득되는 재조합 sFcγR일 수 있다. 간단히, 관심 유전자를 유기체로부터 획득하고 벡터, 예를 들어, 플라스미드 또는 바이러스에 도입시키고, 이어서 상기 유전자를, 상기 재조합 유전자를 발현하고 재조합 단백질 산물을 생산하는 숙주 세포로 옮긴다. 적합한 숙주 세포는 비제한적으로 원핵생물 세포(예를 들어, 에스케리키아 콜라이, 바실러스 서브틸리스) 또는 진핵생물 세포, 예를 들어, 효모 세포(예를 들어, 사카로마이세스, 피키아), 곤충 세포(예를 들어, Sf9, Hi5 세포) 또는 포유동물 세포(예를 들어, COS, CHO, BHK, HEK293, VERO, HeLa, MDCK, Wi38, Swiss 3T3, NIH 3T3, PER C6, SP2/0)를 포함한다. 당해 분야의 숙련가는 특정한 AMDB의 치료 및/또는 약학 조성물의 제조에 적합한 sFcγR을 획득하기 위해 어떤 숙주 세포를 선택하는지를 쉽게 알 것이다. 예를 들어, 일부 실시태양에서, 글리코실화되지 않은 sFcγR이 요구될 수 있다. 이때 당해 분야의 숙련가는 sFcγR의 발현을 위해서 단백질 글리코실화에 필요한 효소 기구가 없는 원핵생물 숙주 세포를 선택할 수 있다.

상기 용어는 또한, 야생형 sFcγR에 비해, 아미노산 서열에 관하여 변형되거나 변경되었고 예를 들어, 추가의 글리코실화 부위 등을 포함하는 sFcγR을 포함한다. 그러나, sFcγR의 비-글리코실화된 형태도 또한 구상되며 상기 형태는 sFcγR의 바람직한 실시태양이다.

바람직한 실시태양에서, 본 발명의 가용성 FcγR은 서열번호 1(SM101, 재조합 가용성 인간 FcγRIIB), 서열번호 3(FcγRIIB), 서열번호 5(FcγRIIA), 서열번호 7(FcγRIIIA), 서열번호 9(FcγRIIIB), 또는 서열번호 11(SM101 변이체)의 경우에 상응하는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 상기로 이루어진다. 본 발명은 또한 서열번호 1, 3, 5, 7 또는 9의 단백질과 적어도 90%, 바람직하게는 95%의 일치성을 갖는 가용성 FcγR의 용도를 포함한다. 상기 서열 일치성을 측정하기 위해서, 상기 서열들을 아미노산의 최대의 일치를 제공하는 방식으로 정렬시킴으로써 비교를 수행한다. 바람직한 실시태양에서, 상기 가용성 인간 수용체는 가용성 FcγRIIB 수용체인 SM101(서열번호 1 또는 서열번호 11)이다.

본 발명에 따라, sFcγR은 자가면역 수포성 질환의 치료에 사용된다. AMBD라 약기되고, 때때로 본 발명에 사용되는 바와 같이 "자가면역 물집 질환", "자가면역 수포성 피부병" 또는 "자가면역 물집 피부병"이라 지칭되는 "자가면역 수포성 질환"은, 피부 및/또는 점막의 수포를 특징으로 하는 후천성 만성 질환이며 전형적으로 세포-세포 및/또는 세포-기질 부착을 유지하는 구조 단백질에 대한 면역 반응과 관련된다. 다수의 연구들이 자가면역 질환에서 FcγR의 중추적인 역할을 제시하였다. 그러나, 본 발명자들은 AMDB의 치료에 대해 sFcγR의 가능성을 최초로 인식하였으며 상기 접근법이 수포성 유천포창(BP) 환자의 혈청을 갖는 간접-전달 셋업에서뿐만 아니라 후천성 수포성 표피박리증(EBA)의 마우스 모델 모두에서 뜻밖의 유망한 효과를 생성시킴을 보일 수 있었다. 자가면역 수포성 질환은 4개의 주요 그룹, 즉,천포창 질환 및 유천포창 질환, 후천성 수포성 표피박리증 및 포진성 피부염으로 분류될 수 있다. 상기 천포창 그룹은 전형적으로 표피내 수포 형성, 각질세포의 세포-세포 부착의 상실 및 각질세포의 세포간 연접부 중의 자가항체의 침착을 특징으로 하는 수포성 질환을 포함한다.

다른 질환들은 전형적으로 하부 기저막에의 기저 각질세포의 부착의 상실에 의해 야기된 표피하 수포발생을 특징으로 하며 상기 진피-표피 연접부 중 면역반응물의 침착과 관련된다. "면역반응물"은 면역반응성을 나타내는 물질, 예를 들어,항체 또는 보체 단백질이다. 특히, Fc 감마 수용체가 심상성 천포창(PV), 낙엽상 천포창(PF), 수포성 유천포창(BP), 점막 유천포창(MMP), 임신성 유천포창, 점막 유천포창, 선형 IgA 질환, 편평태선 유천포창, 후천성 수포성 표피박리증(EBA), 포진성 피부염, 및 수포성 전신홍반성 루푸스(BSLE)의 그룹 중에서 선택된 질환의 치료에 사용됨이 고려된다.

특정한 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, AMDB는 피부의 구조 요소들, 예를 들어, 데스모글레인, 인테그린, VII형 콜라겐 및 BP 단백질을 인식하고 상기에 결합하여 면역 복합체(IC)를 형성하는, 주로 IgG 유형의 자가반응성 항체에 의해 매개되는 것으로 가정된다. 이어서 면역 복합체 중에 결합된 IgG 항체의 Fc 부분은, 면역 효과기 세포의 표면상에서 발현된 FcγR을 활성화시킴으로써 인식되어, 염증 및 파괴 반응, 예를 들어, 산화적 폭발, 사이토킨 방출 및 대식세포에 의한 식균작용, 천연 살해 세포에 의한 항체-의존성 세포독성(ADCC), 비만세포의 탈과립, 및 호중구로부터의 ROS 방출을 촉발할 수 있다. sFcγR은 부분적으로 상기 IC에의 면역계의 효과기 세포상에서 발현된 막-결합된 FcγR의 결합을 방해함으로써 그의 이로운 효과를 이끌어낼 수도 있는 것으로 생각된다. 더욱이, 상기는 상기 보체 시스템의 C1q의 결합 및 활성화를 방지할 수도 있다.

"자가반응성 항체"란 용어는 본 발명에서 "자가항체"란 용어와 호환적으로 사용되며 숙주 자신의 단백질들 중 하나 이상에 대한 항체를 개시한다.

AMDB는 진행되고 있는 연구의 목적이며 일부 AMDB 질환들은 대단히 희귀하다. 따라서, 보다 독특한 AMDB 질환 또는 공지된 AMDB 질환의 변형들은 장차 특성화될 수 있다. 상기와 같은 질환들 및 변형들의 치료가 또한 구상된다.

상기 치료하고자 하는 대상체는 바람직하게는 포유동물, 및 보다 바람직하게는 인간이다.

본 발명의 sFcγR의 투여를 위해 다양한 경로들, 예를 들어, 비제한적으로 경구, 국소, 경피, 피하, 정맥내, 복강내, 근육내 또는 안내 경로를 적용할 수 있다. 하나의 바람직한 실시태양에서, sFcγR을 정맥내, 경피, 피내 또는 피하로 투여한다. 그러나, 목적하는 경우 임의의 다른 경로들이 당해 분야의 숙련가에 의해 용이하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 sFcγR을 바람직하게는 피내로 투여할 때, 예를 들어, 주사기 또는 펜으로 주사에 의해, 수포 또는 유천포창 질환의 임의의 다른 미시적으로 또는 거시적으로 볼 수 있는 징후 또는 증상에 가깝게, 그 옆에, 또는 그 부근에 투여한다.

경피 전달용 시스템을, 약물 저장소 또는 약물-중합체 기질이 2개의 중합체성 층, 즉,배면을 통한 약물 손실을 방지하는 외부 불투과성 배면층 및 접착막 및/또는 유량-조절막으로서 기능하는 내부 중합체성 층 사이에 샌드위치된 다층 중합체성 적층물로서 제작한다. 경피 약물 전달 시스템은 상이한 시스템들, 예를 들어,저장소 시스템, 미세저장소 시스템, 및 저장소 및 기질-분산 시스템의 조합을 포함한다.

상기 저장소 시스템에서, 약물 저장소는 불투과성 배면층과 유량-조절막 사이에 삽입된다. 상기 약물은 오직 상기 유량-조절막(미세다공성 또는 비-다공성일 수 있음)을 통해서만 방출된다. 상기 약물 저장소 구획에서, 상기 약물은 용액, 현탁액, 또는 젤의 형태로 존재하거나 또는 고체 중합체 기질 중에 분산될 수 있다. 상기 중합체성 막의 외부 표면상에 박층의 약물-상용성, 저자극성 접착 중합체가 적용될 수 있다. 상기 기질 시스템 및 접착제-중-약물 시스템에서 상기 약물 저장소는, 상기 약물을 접착 중합체 중에 분산시키고 이어서 상기 약물첨가된 중합체 접착제를 용매 주조에 의해서 또는 상기 접착제를 용융시킴으로써(고온-용융 접착제의 경우에) 불투과성 배면층상에 스프레딩함으로써 형성된다. 상기 저장소의 상부에, 약물 첨가되지 않은 접착 중합체층이 적용된다. 상기 기질-분산 시스템에서 상기 약물은 친수성 또는 친지성 중합체 기질 중에 균질 분산된다. 이어서 상기 약물-함유 중합체 디스크를 약물-불투과성 배면층으로부터 제작된 구획 중 폐쇄성 기판상에 고정시킨다. 상기 접착제를 상기 약물 저장소의 면상에 적용하는 대신에, 주변 경계를 따라 스프레딩하여 접착제 테두리의 스트립을 형성시킨다. 상기 약물 전달 시스템은 저장소와 기질-분산 시스템의 조합이다. 상기 약물 저장소는 먼저 상기 약물을 수용성 중합체의 수용액 중에 현탁하고 이어서 상기 용액을 친지성 중합체 중에 균질 분산시켜 수천 개의 약물 저장소의 비여과성 미세구를 형성시킴으로써 형성된다. 상기 열역학적으로 불안정한 분산액은 상기 중합체의 원위치에서의 즉시 가교결합에 의해 신속하게 안정화된다. 경피 약물 전달 기술은 가장 급속하게 진보중인 신규 약물 전달 분야 중 하나를 나타낸다. 이러한 성장은 중합체 과학 분야의 발달에 의해 촉진된다. 중합체는 경피 전달 시스템에 다양한 방식으로, 예를 들어, 기질 형성제, 유량-조절막, 감압성 접착제(PSA), 배면층 또는 이형 라이너로서 사용된다.

경피 전달 시스템에 사용되는 중합체는 생체적합성 및 약물 및 상기 시스템의 다른 성분들, 예를 들어, 침투 증진제 및 PSA와의 화학적 상용성을 가져야 한다. 상기 중합체는 또한 제품의 의도된 보관수명 또는 전달 기간 전체를 통해 약물의 일관되고 유효한 전달을 제공해야 하며 일반적으로 안전하다고 인정되는 상태를 가져야 한다.

직장 적용을 다수의 형태로 조합할 수 있다. 액체 직장 약물 용액을 관장약에 의해 제공한다. 크림, 로션 및 연고를 도포기를 사용하여 외부적으로 적용하거나 내부적으로 삽입한다. 약물을 왁스같은 물질과 혼합하여 직장내 삽입 후 용융될 반-고형, 탄환 모양의 형태를 형성시킴으로써 좌약을 제조할 수도 있다. 복강내 주사 또는 IP 주사는 복막내(복강)로의 물질의 주사이다. 본 발명 조성물의 추가의 투여 형태는 예를 들어, 연고 또는 크림 형태의 국소 투여이다. 상기와 같은 연고 또는 크림은 본 발명에 개시된 바와 같은 담체 또는 부형제와 같은 통상적인 성분들을 추가로 포함할 수 있다. 상기 sFcγR을 또한 예를 들어, 흡입을 위해 스프레이 중에 사용할 수 있다. 상기 sFcγR을 또한 음식물에 첨가할 수도 있다.

상기 sFcγR의 투여는 1회 수행되거나, 또는 예를 들어, 구간에 걸쳐, 예를 들어,12시간마다, 24시간마다, 36시간마다, 48시간마다, 60시간마다 또는 72시간마다 반복해서 요구될 수 있다. 다른 실시태양에서, sFcγR을 매주 또는 매달 투여할 수 있다.

본 발명에 따라 사용되는 가용성 Fc 감마 수용체를 화학적으로 변형시킬 수도 있다. 일반적으로, 상기 가용성 Fc 감마 수용체의 모든 종류의 변형이, 상기 수용체의 치료학적 효과를 없애지 않는 한, 본 발명에 의해 포함된다. 본 발명과 관련하여, "치료학적 효과"란 용어는 일반적으로 치료의 바람직한 또는 이로운 영향, 예를 들어, 질환 표출의 개선 또는 경감을 지칭한다. 질환의 "표출"이란 용어는 본 발명에서 상기 질환의 인지 가능한 표시를 개시하는데 사용되며, 임상적 표출[본 발명에서 이후에 신체 검사 도중 검출될 수 있고/있거나 환자에 의해 인지될 수 있는 질환의 표시(즉, 증상)로서 정의된다] 및 병적인 표출(세포 및 분자 수준의 상기 질환의 표현을 의미한다) 모두를 포함한다.

본 발명에 개시된 용도 및 방법의 치료학적 효과는 AMDB 치료에서 치료 효과를 암시하기 위해 확립된 모든 방법 및 접근법에 의해 추가로 검출될 수 있다. 본 발명에 따른 화합물의 치료 효과를 모니터하기 위한 방법은 비제한적으로 문헌[Mihai and Sitaru(2007)]에 개시된 방법들, 예를 들어, 피부 병변의 존재, 수 및 중증도에 대한 환자의 임상적 검사, H&E 염색에 의한 새로운 수포의 조직학적 검사, 직접 및 간접적인 면역형광 현미경검사, 및 면역형광, 면역블럿팅, 효소-결합된 면역흡수 분석(ELISA) 및 면역침전을 포함한 면역분석들을 사용하는 자가반응성 순환 항체의 검출을 포함한다. 조직-결합된 자가반응성 항체의 검출을 위해서, 직접 면역형광 현미경검사를, 병변주위 또는 관련되지 않은 피부로부터 조직을 검사하고 후속으로 예를 들어, 형광-표지된 항-IgG 항체로 처리함으로써 적용할 수 있다. 순환하는 자가반응성 혈청 항체를 정상적인 조직, 예를 들어, 원숭이 식도, 설치류 또는 원숭이 방광 및 인간 피부의 동결된 절편상에서 수행된 간접적인 면역형광 현미경검사에 의해 검출할 수 있다. 상기 기법을 1M NaCl 중에서 사전 항온처리시킨 염-분할된 피부상에서 수행할 수 있다. 환자의 혈청을 상기 조직에 가하고 2차 형광-표지된 항체를 가하여 상기 피부 중의 항원에 결합된 자가반응성 항체를 검출한다.

추가로 또는 한편으로, 각 환자의 일반적인 외관(예를 들어, 체력, 웰빙)을 또한 평가할 수 있으며, 이는 숙련의가 치료 효과의 유도 여부를 평가할 수 있게 도울 것이다. 상기 숙련가는 본 발명 화합물의 치료학적 효과를 관찰하기에 적합한 다수의 다른 방법들을 알고 있다.

상기 sFcγR의 가능한 화학적 변형은 아미노-말단 단부의 아실화 또는 아세틸화 또는 카복시-말단 단부의 아미드화 또는 에스테르화, 또는 한편으로 이들 모두를 포함한다. 상기 변형은 또한 리신의 측쇄 중 아미노기 또는 쓰레오닌의 하이드록실기에 영향을 미칠 수 있다. 다른 적합한 변형은 예를 들어, 다양한 길이의 폴리펩티드 쇄에 의한 아미노기의 연장(예를 들어, XTEN 기술 또는 PASylation®), N-글리코실화, O-글리코실화 및 탄수화물의 화학적 접합, 예를 들어, 하이드록시에틸 전분(예를 들어, HESylation®) 또는 폴리시알산(예를 들어, PolyXen® 기술)을 포함한다. 화학적 변형, 예를 들어, 알킬화(예를 들어, 메틸화, 프로필화, 부틸화), 아릴화 및 에테르화가 가능할 수 있으며, 이들이 또한 구상된다.

상기 언급된 변형들은 본 발명에 개시된 바와 같은 sFcγR의 유리한 능력들을 감소시키거나 없애지 않는 것이 바람직하다, 즉,본 발명의 화학적으로 변형된 화합물은 바람직하게는 첨부된 실시예에서 평가된 화합물들의 능력에 필적하는 능력을 가져야 한다. 본 발명에 사용된 바와 같은 필적하다는 하기를 의미한다.

상기 sFcγR을 또한 약학 조성물의 부분으로서 사용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 추가의 실시태양은 AMDB의 치료를 위한 약학 조성물의 제조를 위한 상기 sFcγR의 용도이다. 본 발명에 따른 sFcγR의 용도와 관련하여 개시된 실시태양들을 상기 sFcγR을 포함하는 약학 조성물의 용도에 필요한 부분만 수정해서 동등하게 적용할 수 있음은 물론이다. 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 약제의 제조에 대해 그 자체로서 공지된 공정들이 문헌[참조: Forth, Henschler, Rummel (1996) Allgemeine und spezielle Pharmakologie und Toxikologie, Urban & Fischer]에 나타나 있다.

본 발명의 약학 조성물은 치료 유효량의 sFcγR을 포함하며, 예를 들어, 고체, 액체, 기상 또는 동결건조된 형태로 제형화될 수 있고 특히 연고, 크림, 경피 패치, 젤, 분말, 정제, 용액, 에어로졸, 과립, 환제, 현탁액, 유화액, 캡슐, 시럽, 액체, 엘릭서, 추출물, 팅크제 또는 유동 추출물의 형태 또는 국소 또는 경구 투여에 특히 적합한 형태일 수 있다.

"치료 유효량"은 본 발명에 개시된 바와 같은 치료 효과를 이끌어내는 sFcγR의 양을 의미한다. 상기의 정확한 용량은 치료 목적에 따라 변할 것이며, 공지된 기법을 사용하여 당해 분야의 숙련가에 의해 확인될 수 있을 것이다. 당해 분야에 공지되고 상술한 바와 같이, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 식이요법, 약물 상호작용 및 상태의 중증도에 따라 조절이 필요할 수도 있으며, 이는 당해 분야의 숙련가들에 의해 통상적인 실험으로 확인될 수 있을 것이다. 예를 들어, 상기 sFcγR, 특히 인간 sFcγRIIB를 약 0.1 내지 약 100 ㎎/㎏, 예를 들어, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100 ㎎/㎏의 용량으로 투여할 수 있다. 다른 바람직한 용량은 약 0.1-50 ㎎/㎏, 1-10 ㎎/㎏, 1-20 ㎎/㎏, 1-30 ㎎/㎏, 1-40 ㎎/㎏, 1-50 ㎎/㎏, 1-60 ㎎/㎏, 1-70 ㎎/㎏, 1-80 ㎎/㎏, 1-90 ㎎/㎏, 또는 1-100 ㎎/㎏이다. 추가의 바람직한 용량은 약 10-100 ㎎/㎏, 20-100 ㎎/㎏, 30-100 ㎎/㎏, 40-100 ㎎/㎏ 또는 50-100 ㎎/㎏이다.

상기 약학 조성물을 본 발명에 개시된 바와 같이, 환자에게 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 투여할 수 있다. 특정한 실시태양에서, "약학적으로 허용 가능한"이란 용어는 동물, 및 보다 특히 인간에서의 사용에 대해 규제 당국 또는 다른 일반적으로 인정되는 약전에 의해 승인됨을 의미한다. 상응하게, 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 제형화에 적합한 약학적으로 허용 가능한 담체는 상기 조성물에 대해 하기에 개시하는 것들을 포함한다. 예시적인 담체는 (생분해성) 리포솜; 생분해성 중합체 폴리(D,L-락틱-코글리콜산(PLGA))으로 제조된 미소구, 알부민 미소구; 합성 중합체(가용성); 나노섬유, 단백질-DNA 복합체; 단백질 접합체; 적혈구 또는 바이로솜을 포함한다. 다양한 담체 기반 투여형은 고체 액체 나노입자(SLN), 중합체성 나노입자, 세라믹 나노입자, 하이드로젤 나노입자, 공중합된 펩티드 나노입자, 나노결정 및 나노현탁액, 나노결정, 나노튜브 및 나노와이어, 기능화된 나노담체, 나노구, 나노캡슐, 리포솜, 지질 유화액, 지질 미세소관/미세실린더, 지질 미세소관, 지질구, 지질폴리플렉스, 역 지질 미셀, 덴드리머, 에토솜, 다중복합성 초박 캡슐, 아쿠아솜, 파마코솜, 콜로이도솜, 니오솜, 디스콤, 프로니오솜, 미소구, 미세유화액 및 중합체성 미셀을 포함한다. 다른 적합한 약학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제들이 특히 문헌[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, 15^th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991)] 및 문헌[Bauer et al., Pharmazeutische Technologie, 5^th Ed., Govi-Verlag Frankfurt (1997)]에 개시되어 있다.

본 발명의 약학 조성물은 하나 이상의 추가적인 작용제를 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게, 상기 작용제는 AMDB의 치료에 치료학적으로 유효하며, 보다 바람직하게는 소염제, 면역억제제 및/또는 항-CD20 항체의 그룹 중에서 선택된다. 바람직하게, 숙련가는 다루고자 하는 특정 AMDB의 치료에 치료학적으로 유효한 작용제를 선택할 것이다. 다양한 AMDB의 치료를 위한 치료학적 접근법은 예를 들어, 문헌[참조: Han et al. (2009), Mutasim (2007), and Bickle and York (2002)]에 의해 리뷰되었다.

"소염제"는 예를 들어, 소염성 매개체의 생성을 유도하고/하거나 염증전 매개체의 생성을 억제함으로써 염증을 억제하거나 감소시킨다. AMDB의 치료에 적합한 소염제는 글루코코르티코이드, 예를 들어, 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론, 및 소염 효과를 갖는 항생제, 예를 들어, 답손 및 테트라사이클린뿐만 아니라 니아신아미드를 포함한다.

면역억제제는 예를 들어, 림프구 증식을 감소시킴으로써 면역계의 활성을 억제하거나 방지한다. AMDB의 치료에 적합한 예시적인 면역억제제는 예를 들어, 아자티오프린, 마이코페놀레이트 모페틸(MMF), 사이클로포스파미드, 메토트렉세이트, 및 사이클로스포린을 포함한다. 당해 분야의 숙련가는 일부 면역억제제가 또한 소염제로서 분류될 수 있고, 이와 역으로 분류될 수도 있음을 인정할 것이다.

AMDB 치료에 적합한 예시적인 항-CD20 항체는 리툭시맙이다.

상기 sFcγR을 키트의 부분으로서 사용할 수 있음이 또한 구상된다. 상응하게, 추가의 태양에서, 본 발명은 또한 자가면역 수포성 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 sFcγR을 포함하는 키트에 관한 것이다.

상기 키트는 2개 이상 부분의 키트일 수 있으며, sFcγR 및 임의로 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함한다. 상기 키트의 성분들은 용기 또는 바이알 중에 함유될 수 있다. 상기 sFcγR, 상기 sFcγR을 포함하는 약학 조성물 및 치료 방법과 관련하여 개시된 모든 실시태양들을 본 발명의 키트에, 필요한 부분만 약간 수정하여 또한 적용할 수 있음을 알아야 한다. 일반적으로 모든 담체는 약학적으로 허용 가능하게 적합하며 목적하는 작용 부위에의 방출을 가능하게 한다. 당해 분야의 숙련가는 어느 담체 유형이 선택된 투여 경로에 따라 적합한지를 안다. 예를 들어, 직장 적용에 관한 담체는 예를 들어, 메타크릴산 공중합체를 사용하는 다중 기질 시스템이다. 예를 들어, 상기 목적하는 작용 부위가 결장이고 상기 sFcγR을 경구로 적용하는 경우, 상기 담체는 상기 결장에 상기 sFcγR의 방출이 가능하도록 위산에 내성이어야 한다.

상기 키트는 소염제, 면역억제제 및/또는 항-CD20 항체의 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 작용제를 약학적으로 허용 가능함 담체 또는 희석제와 함께 추가로 포함할 수 있다. 상기 키트에 사용하기에 적합한 작용제는 본 발명에 개시되었다. 상기 작용제를 sFcγR 투여에 관하여 동시에, 또는 연속적으로 또는 별도로 적용하는 것이 구상된다. 본 발명은 또한 상이한 투여 경로를 통한 상기 작용제의 적용을 포함한다. 따라서, 상기 키트에 사용하기에 적합한 작용제는 예를 들어, 정맥내 투여된 sFcγR과 동시에, 또는 연속적으로, 또는 별도로 사용하기 위한 국소용 글루코코르티코이드 제형을 추가로 포함한다.

본 발명의 또 다른 태양은 AMDB의 치료가 필요한 대상체에게 치료 유효량의 가용성 Fc 감마 수용체를 투여함을 포함하는, 상기 대상체에서의 상기 AMDB의 치료 방법이다. 당해 분야의 숙련가는 상기 sFcγR, 본 발명의 약학 조성물 및 키트와 관련하여 본 발명에 개시된 실시태양들을 상기 치료 방법에, 필요한 부분만 약간 수정하여 적용할 수 있음을 알 것이다. 상기 sFcγR의 투여 단계는 하나 이상의 AMDB 치료 단계와 임의로 추가로 병행될 수 있으며, 상기 단계는 IVIg 주사, 혈장교환술, 및 체외 광선요법의 그룹 중에서 선택된다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 또한 대상체에서 자가면역 수포성 질환의 치료를 위한 약학 조성물의 제조를 위한 가용성 Fc 감마 수용체의 용도에 관한 것이다. 더욱 또 다른 태양에서, 본 발명은 대상체에서 자가면역 수포성 질환의 치료를 위한 가용성 Fc 감마 수용체의 용도에 관한 것이다. 당해 분야의 숙련가는 상기 sFcγR, 본 발명의 약학 조성물 및 키트와 관련하여 본 발명에 개시된 실시태양들을 상기 용도에, 필요한 부분만 약간 수정하여 적용할 수 있음을 알 것이다.

"IVIg" 또는 "고용량 정맥내 면역글로불린"은 1000명 이상의 혈액 제공자의 혈장으로부터 추출된 혼합된 다가 IgG를 함유하고 정맥내로 투여되는 혈액 제품이다. 본 발명에 사용되는 "혈장교환술"은 환자로부터 혈액을 회수하고, 세포 성분을 여과해 내고, 이를 다시 환자에게 반환함을 의미한다. "체외 광선요법"은 광활성제(예를 들어, 메톡시프소랄렌)를 환자에게 투여하고, 상기 환자의 말초 혈액을 채혈하고, 상기 말초 림프구의 일부를 자외선(UV-A)에 노출시킴을 포함한다. 후속으로, 상기 혈액을 상기 치료된 림프구와 함께 상기 환자에게 재주입한다. 이들 방법은 무타심(2007)에 의해 리뷰되었다. 당해 분야의 숙련가는 이들 치료 중 어느 하나와 sFcγR의 구상된 투여와의 병행을 목적하는 치료 효과를 유발하기 위해서, 예를 들어, 적용 시점에 관하여 조심스럽게 평가해야 함을 쉽게 알 것이다. 이어서 치료 효과는 본원에 기재된 바와 같이 평가될 수 있다.

상기 sFcγR의 정확한 용량은 치료 목적(예를 들어, 질환의 경감 유지 대 급성 악화)에 따라 변할 것이며, 이는 공지된 기법을 사용하여 당해 분야의 숙련가에 의해 확인될 것이다. 당해 분야에 공지되고 상술한 바와 같이, 투여경로, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 식이요법, 투여시기, 약물 상호작용 및 상태의 중증도에 따라 조절이 필요할 수도 있으며, 이는 당해 분야의 숙련가들에 의해 통상적인 실험으로 확인될 수 있을 것이다.

모든 문법적 형태의 "치료"란 용어는 AMDB의 치료학적 또는 예방학적 치료를 포함한다. "치료학적 또는 예방학적 치료"는 임상 및/또는 병적인 표출의 완전한 방지를 목적으로 하는 예방학적 치료 또는 임상 및/또는 병적인 표출의 개선 또는 경감을 목적으로 하는 치료학적 치료를 포함한다. 따라서 "치료"란 용어는 AMDB의 개선 또는 방지를 포함한다.

본 발명 및 그의 이점은, 단지 예시를 목적으로 제공된 하기의 실시예들로부터 보다 잘 이해될 것이다. 이들 실시예는 본 발명의 범위를 어떠한 식으로도 제한하고자 하지 않는다.

실시예

실시예 1: 재조합 가용성 CD32의 제조

인간 sCD32(SM101)를 다른 곳에 개시된 바와 같이 발현하고 정제하였다[참조: Sondermann and Jacob, 1999].

실시예 2: EBA 마우스의 생성

실시예 2.1: 유지

SJL/J 마우스를 더 잭슨 레보라토리즈(미국 메인주 바하버 소재)로부터 수득하였다. 동물에게 산성화된 음료수 및 표준 사료를 자유롭게 공급하였으며, 뤼벡 대학교 동물 시설에서 12-h 명암주기로 유지시켰다. 8 내지 10주 된 마우스를 상기 실험에 사용하였다. 모든 임상 검사, 생검 및 채혈을, 케타민(100 ㎍/g) 및 자일라진(15 ㎍/g)의 혼합물을 복강내 투여하여 마취시켜 수행하였다. 상기 실험은 동물 보호 사용 위원회(독일 키엘 소재)에 의해 승인되었으며 유자격자에 의해 수행되었다.

실시예 2.2: 마우스의 sCD32에 의한 면역화 및 처리

면역화 및 평가를 앞서 개시된 바와 같이 수행하였다[참조: Iwata et al, 2013]. 간단히, 마우스를 비이온성 차단 공중합체 항원보강제 티터맥스(TiterMax: ALEXIS 바이오케미칼스) 중에 유화된 COL7[참조: Leineweber et al, 2011]의 재조합 쥐 vWFA2 도메인 60 ㎍으로 뒷발바닥에서 면역화시켰다. 마우스를 피부 병변(즉,홍반, 수포, 미란, 탈모 및 부스럼 딱지)의 존재에 대해 매주 평가하였다. 질환 중증도를 피부 병변에 의해 침범된 체표면적의 백분율로서 나타내고, 관찰 기간 동안의 전체 질환 중증도를 상기 관찰 기간 동안의 보고된 질환 중증도의 곡선아래면적(AUC)으로서 계산하였다. 상대적인 질환 점수를 배정 치료시의 질환 점수로서 계산하였다. sCD32 또는 PBS에 의한 치료학적 치료를 상기 체표면적의 2% 이상이 피부 병변에 의해 침범되었을 때 복강내 주사에 의해 개시하였다. 마우스를 매주 200 ㎍의 sCD32로 처리하고, 대조용 마우스에게는 PBS를 제공하였다. 혈청을 매주 수집하였다. 혈청, 귀 피부, 꼬리 피부 샘플을 4주 처리후 최종일에 수득하고 조직병리학 및 면역형광(IF) 현미경검사에 의한 검사를 위해 준비하였다.

PBS 주사된 마우스에 비해, sCD32 처리는 현저하게 더 낮은 임상 질환 중증도를 도출하였다(도 3A, 좌측, *p<0.05, t-검정). 처리에 포함시(0주), 평균 질환 점수는 PBS 및 sCD32 각각의 처리에서 그룹들간에 병든 체표면적의 차이가 없었다(3.4±0.21% 및 3.4±0.20%). 전체 관찰 동안 AUC로서 표현된 누적 질환 중증도가 또한 PBS 대조용 마우스에 비해 sCD32 처리된 마우스에서 현저하게 더 낮았다(도 3B, 우측, p=0.031, t-검정). 상기 감소 정도는 고용량 코르티코스테로이드(20 ㎎/㎏, i.p. 매일) 처리에서 관찰된 경우[참조: Hirose et al, 2013]와 유사하다. 상기 4-주 처리 기간의 끝에서, PBS 처리된 마우스는 귀 및 꼬리상의 확산된 홍반 및 부스럼 딱지, 및 눈 주변 털손실을 보였다(도 3C, 좌측). 대조적으로, sCD32로 처리된 마우스에서는 귀상에 적은 홍반 및 꼬리상에 또는 눈 주변에 질환이 없는 것으로 관찰되었다(도 3C, 우측).

실시예 3: 생체외 분석

실시예 3.1: ROS 생성

수포성 유천포창에 의한 반응성 산소종(ROS) 방출 능력을 이전에 보고된 바와 같이[참조: Yu et al, 2010] 생체외 분석을 사용하여 평가하였다. 간단히, ROS 생성을 연구하기 위해서, 면역 복합체(IC)를 밤새 4 ℃에서 96-웰 플레이트[맥시솝(Maxisorb); 눙크(Nunc), 덴마크 로스킬데 소재]상에서 500 ng 인간 IgG(50 ㎕ x 10 ㎍/㎖)의 항온처리에 의해 생성시켰다. 플레이트 세척 후에, 새로 단리된 인간 호중구(50 ㎕ x 10⁷ 세포/㎖)를 0.01, 0.1 및 0.5 ㎎/㎖의 sCD32의 존재 또는 부재하에서 가하였다. 호중구 활성화를 분석하여 플레이트 판독기(VICTOR3, 퍼킨엘머, 미국 캘리포니아주 산타클라라 소재)에 의해 ROS의 생성을 측정하였다.

sCD32는 IC-유도된 호중구 ROS 생성을 용량-의존적인 방식으로 억제하였다(도 1). 상세하게, 양성 대조용에 비해, 0.01, 0.1 및 0.5 ㎎/㎖의 sCD32는 ROS 생성을 각각 30%, 65% 또는 75%까지 현저하게 감소시켰다.

실시예 3.2: 진피-표피 분리

상기 연구를 위해서 21명의 수포성 유천포창 환자의 혈청 샘플을 사용하였다. 모든 환자가 하기의 포함 기준을 충족하였다: (i) 피부의 수포성 질환의 임상 사진, (ii) 간접적인 면역형광(IF) 현미경검사에 의해 입증된 바와 같은 1M NaCl-분할된 정상 인간 피부 중 수포의 상피면에 대한 IgG 자가항체의 결합, (iii) ELISA에 의한 NC16A에 대한 반응성. 건강한 자원자로부터의 혈청은 음성 대조용으로서 제공되었다. 모든 과정에 앞서 모든 환자 및 대조군으로부터 서면 동의서를 획득하였다. 상기 연구는 뤼벡 대학의 윤리 위원회에 의해 승인되었으며 헬싱키 선언에 따라 수행되었다.

생체외 자가항체-유도된, 호중구-의존적인 진피-표피 분리를 앞서 개시된 바와 같이 수행하였다(Sitaru et al, 2002). 간단히, 정상적인 인간 피부로부터 6 ㎛ 두께 동결절편을 37 ℃에서 1시간 동안 BP 환자의 혈청과 함께 항온처리하였다. PBS로 세척 후에, 절편을 37 ℃에서 3시간 동안 0.01, 0.1 및 0.5 ㎎/㎖의 sCD32의 존재 또는 부재하에서 10⁷ 세포/㎖의 새로 단리된 인간 백혈구와 함께 항온처리하였다. 후속으로, 절편을 H&E로 염색하였다. 각 절편 중 진피로부터 분리된 표피의 백분율로서 표현된 진피-표피 분리 정도를 상기 절편의 처리를 알지 못하는 관찰자에 의해 평가하였다.

상기 화합물은 PBMC의 존재하에서 BP 환자의 혈청과 함께 항온처리된 인간 피부의 동결절편상에서 FcγR-의존적인[참조: Yu et al, 2010] 진피-표피 분리를 손상시켰다(도 2).

실시예 4: 조직학적 및 IF 현미경검사 연구

귀 피부의 샘플을 4% 완충된 포르말린 중에 고정시켰다. 파라핀에 묻힌 조직으로부터 4 ㎛ 두께의 절편을 H&E로 염색하였다. 조직학적으로, 상대적인 진피 침윤물을 0(침윤물 없음), 1(순한), 2(중간) 및 3(심한)으로서 맹검 정량분석하였다. 조직-결합된 항체를, 토끼 IgG[다코사이토메이션: DakoCytomation) 및 쥐 C3(카펠 올가논 테크니카(Cappel Organon-Teknika)]에 특이적인 100-배 희석된 FITC-표지된 항체를 사용하여 조직 생검으로부터 마련된 6 ㎛ 동결 절편상에서 직접적인 IF 현미경검사에 의해 검출하였다. DEJ에서 형광 강도를 배경 공제용 피부 형광을 사용하여, 이미지J(http://rsbweb.nih.gov/ij/)에 의해 측정하였다.

sCD32로 처리된 마우스는 PBS 처리된 마우스에 비해, 피부 백혈구 침윤의 현저한 감소를 나타내었다(p<0.05, 도 4A 및 B).

실시예 5: 혈청 IgG 및 항- vWFA2 항체의 측정

혈청 항-vWFA2 항체 수준을 앞서 개시된 바와 같이 ELISA에 의해 측정하였다[참조: Iwata H et al, 2013]. 전체 IgG를 제조자의 설명에 따라 마우스 IgG ELISA 정량분석 세트(베틸 레보라토리즈(Bethyl Laboratories), 미국 텍사수주 몽고메리 소재)에 의해 측정하였다.

sCD32 처리는 또한 PBS 처리된 마우스에 비해 순환하는 항원-특이성 자가항체의 대략 20% 감소를 도출한 반면(도 5, p=0.048; t-검정), 전체 IgG는 그다지 상이하지 않았다(데이터 도시 안 됨). 동일한 시점에서, 모든 마우스는 직접 면역형광에 의해 측정된 바와 같이 DEJ에서 유사한 IgG 침착물을 나타내었다(도 6A). DIF의 전형적인 사진은 DEJ에서의 IgG 침착물을 나타낸다(도 6B). 순환 및 조직 결합된 자가항체간의 이러한 불일치는 상이한 반감기에 기인할 수 있다[참조: Kasperkiewicz et al, 2010].

인용된 참고문헌

Claims

대상체에서 자가면역 수포성 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 가용성 인간 Fc 감마 수용체.
제1항에 있어서,
수용체가 Fc 감마 RIIB, Fc 감마 RIIA, Fc 감마 RIIIA 또는 Fc 감마 RIIIB인 가용성 Fc 감마 수용체.
제1항 또는 제2항에 있어서,
수용체가 Fc 감마 RIIB인 가용성 Fc 감마 수용체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
수용체가 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11의 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 가용성 Fc 감마 수용체.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
수용체가 서열번호 1 또는 11에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 가용성 Fc 감마 수용체.
제5항에 있어서,
수용체가 약 0.1 내지 약 1.0 ㎎/㎖의 용량으로 투여되는 가용성 Fc 감마 수용체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
대상체가 포유동물, 바람직하게는 인간인 가용성 Fc 감마 수용체.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
수용체가 정맥내로 또는 피내로 투여되는 가용성 Fc 감마 수용체.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
수용체가 반복적으로 투여되는 가용성 Fc 감마 수용체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
질환이 심상성 천포창, 낙엽상 천포창, 수포성 유천포창, 점막 유천포창, 임신성 유천포창, 점막 유천포창, 선형 IgA 질환, 편평태선 유천포창, 후천성 수포성 표피박리증, 포진성 피부염, 및 수포성 전신홍반성 루푸스의 그룹 중에서 선택되는 가용성 Fc 감마 수용체.
자가면역 수포성 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 가용성 Fc 감마 수용체를 포함하는 약학 조성물.
제11항에 있어서,
약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 함께 소염제, 면역억제제, 및/또는 항-CD20 항체의 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 작용제를 더 포함하는 약학 조성물.
자가면역 수포성 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 가용성 Fc 감마 수용체를 포함하는 키트.
제13항에 있어서,
약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 함께 소염제, 면역억제제, 및/또는 항-CD20 항체의 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 작용제를 더 포함하는 키트.