KR20200034958A - 암 요법에서 면역 관련된 유해 사례를 치료하기 위한 가용성 cd24의 사용 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 암 면역요법과 연관된 면역-관련 유해 사례 (irAE)를 치료하기 위한 CD24 단백질에 관한 것이다. CD24 단백질을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함에 의해 암 면역요법과 연관된 면역-관련 유해 사례(irAE)를 치료하는, 경감시키는, 최소화하는, 또는 예방하는 방법이 본 명세서에 제공된다. irAE는 설사 또는 또 다른 위장 장애, 순수 적혈구 무형성증, 소적혈구성 빈혈, 낭창, 자가면역 신염, 자가면역 간염, 폐렴, 심근염, 심막염, 내분비병증, 애디슨병, 생식샘기능저하증, 쇼그렌 증후군, 또는 제1형 당뇨병일 수 있다. CD24 단백질은 성숙한 인간 CD24 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다.

Description

암 요법에서 면역 관련된 유해 사례를 치료하기 위한 가용성 CD24의 사용 방법

본 발명은 암 면역요법과 연관된 면역-관련 유해 사례(irAE)를 치료하기 위한 CD24 단백질의 사용에 관한 것이다.

면역계는 실험 모델계 및 환자에서 암을 인식하고 제거하는 능력을 갖는다. 결과적으로, 암 면역요법은 암 치료의 가장 유망한 분야 중 하나로 부상하고 있다. 활성 암 면역요법은 자연 면역 반응을 증폭시키는 제제(PD-1, PD-L1 또는 CTLA-4에 대한 항체 포함함); 종양 미세환경을 조정하는 소분자; 또는, 생체외 자극된 종양 침윤 림프구(TIL), 활성화된 자연 살해(NK) 세포 또는 유전자적으로 조작된 T 세포(키메라 항원 수용체 [CAR] 및 T 세포 수용체 [TCR] 변형 T 세포)를 사용하는 입양 세포 전달(ACT)을 포함한다. 대안적으로, 종양을 직접 표적화하는 다른 암 면역요법은 면역계의 활성화를 간접적으로 야기할 수 있다(고형암의 경우 항-Her-2 항체와 같은 암-표적화 항체, B-세포 악성종양의 경우 항-CD20 항체, 또는 신경모세포종의 경우 항-GM2 항체를 포함함). PD-1, PD-L1 및 CTLA-4에 대한 항체뿐만 아니라 종양 표적화 항체는 고형 종양 및 혈액학적 종양을 치료하는 데 있어서의 실질적인 이점을 입증하였다. CAR T 세포와 같은 입양 세포 면역치료법은 혈액학적 종양 예컨대 백혈병에 대해 인상적인 효과를 입증하였지만, 현재까지 고형 종양에 대해서는 제한된 효과만을 나타냈다. CAR-T 면역요법이 혈액학적 악성종양에 대해 보다 표적화되는 반면에, 유전자-변형 TCR을 사용한 T 세포 면역요법은 고형 종양에 대해 보다 표적화되었다.

종양은 높은 면역허용원성 및 면역억제성 종양 미세환경(TME)을 생성함으로써 면역 제거를 회피한다. 따라서, 면역-종양학의 중요한 목표는 종양에 의해 이용되는 다양한 내성 메커니즘을 이해해서 그 메커니즘을 제거하여 면역계에 의한 종양 침윤, 활성화 및 종양 세포의 파괴가 이루어질 수 있도록 하는 것이다. 그러나, 그것의 치료적 약속에도 불구하고, 면역요법의 전신 전달은 또한 자기-내성에서의 위반을 야기할 수 있다. 이것은 결국에는 다양한 기관 시스템에 걸쳐 경증 내지 중증의 염증 반응을 초래하고, 어떤 경우에는 일반적으로 면역-관련 유해 사례(irAE)로 언급되는 생명을 위협하는 자가면역을 초래한다. 면역요법 접근법이 더 많은 암 적응증으로 확장되고, 더욱 효과적인 조합에서는 비-특이적 irAE를 제어하는 것이 이들 차세대 암 면역요법의 중요한 목표가 될 것이다.

PD-1, PD-L1 및 CTLA-4에 대한 항체로의 치료는 전임상 모델에서 항-종양 면역을 향상시키기 위한 강력한 도구인 것으로 밝혀졌다. CTLA4에 대한 항체로의 단일요법은 다양한 기원의 이식가능한 종양의 거부를 촉진시켰다. 유망한 전임상 종양 모델 연구에 기반하여, CTLA4에 대한 항체의 임상적 잠재력은 상이한 인간 악성종양에서 탐구되었다. 비록 항-CTLA4(미국 특허 번호 6,984,720에 개시된, Yervoy로 시판되는 이필리무맙(Ipilimumab)이 흑색종을 치료하는 데 효능을 입증하였지만, CTLA4의 치료 및 표적화는 자가면역-유사 독성과 관련이 있다. 항-PD-1 및 항-PD-L1 항체는 상당히 높은 임상 반응 및 상당히 낮은 irAE를 나타낸다. 그러나, 암 환자의 대략 15-20%에서 심각한 자가 면역 유해 사례가 여전히 발생한다. 또한, 이필리무맙 및 트레멜리무맙과 같은 항-CTLA4 mAb는 우수한 치료적 효과를 갖는 항-PD-1/PD-L1 항체와의 병용 요법에 사용된다. 그러나 개선된 치료 효과는 3 등급 및 4 등급 기관 독성의 더 높은 비율과 연관된다. irAE의 사례는 위장관, 피부, 신장, 췌장, 간, 및 중추 및 말초 신경계를 포함한 여러 신체 부위에 걸쳐서 보고되었다. irAE의 발병률과 중증도는 전반적인 환자 반응 및 생존율 대 체크포인트 차단과 상관관계가 있으며, 이는 항-종양 및 자가면역 반응이 항-체크포인트 면역요법에 민감하다는 것을 시사한다. 이러한 irAE는 "자가면역 독성" 또는 소위 "표적상, 종양을 벗어난 독성"으로 광범위하게 분류될 수 있으며, 이는 표적화된 종양 관련 항원이 비악성 조직에서 발현될 때 숙주 조직에 대한 항원-특이적 공격으로부터 유래한다. 자가면역 독성은 MAGE-A3을 표적화하는 유전자적으로 조작된 T 세포의 주입 후 치명적인 독성을 초래하였다.

CAR-T와 같은 유전자적으로 조작된 T 세포 요법은 또한 여기서 유해 사례가 보다 일반적으로 사이토카인-관련 독성이지만, 이들의 사용을 제한하는 irAE와 관련되어 있다. CAR-T 세포는 생체내 T-세포 확장으로 이어지고, 이는 사이토카인 스톰 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)으로 다양하게 언급되는 전신 염증성 반응인 사이토카인의 독성 수준의 방출로 이어질 수 있다. 주입 반응은 또한 항체 및 Fc-융합 단백질 치료제와 공통이며, 경증 메스꺼움 및 발열에서부터 생명을 위협하는 다수의 기관 부전에 이르는 증상과 연관된다. 적극적인 지원 치료가 CAR T-세포 독성을 경험하는 모든 환자에게 필요하며, 저혈압 및 동시 감염의 치료에 대한 조기 개입이 필수적이다. 그러나, 약리학적 관리는 CART 세포의 항-악성 활성을 제거하는 면역억제 요법의 위험에 의해 복잡해지고, 예방적 면역억제가 사용되지 않는 주요 이유이다. 투여에 대한 징후가 치료 센터마다 다양하지만, 토실리주맙으로의 인터루킨-6 수용체 봉쇄는 CRS에 대한 주된 약리학적 치료법으로 남아 있다.

CRS는 또한 악성 세포의 신속한 용해와 연관된 다른 형태의 암 요법으로도 발생하여, 급성 아나필락시스 또는 종양 용해 증후군(TLS)으로 불리는 현상을 초래한다. 세포 용해는 위험(손상)-관련된 분자 패턴(DAMP)으로 불리는 세포내 성분의 방출을 야기할 수 있기 때문에, 적절하게 조절되지 않으면 염증을 야기하고 자가면역 질환에 대한 단계를 설정할 수 있다. 그러나, 모든 형태의 암 요법이 직접적으로 또는 간접적으로 항암 면역 반응을 요하는 것으로 여겨지므로, 전통적인 면역 억제제는 암 요법에서 유해 사례에 대해 문제가 될 수 있다.

따라서, 암 면역성을 보존하면서 irAE를 치료하는 것에 대한 큰 충족되지 않은 의학적 요구가 있다.

CD24 단백질을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함에 의해 암 면역요법과 연관된 면역-관련 유해 사례(irAE)를 치료하는, 경감시키는, 최소화하는, 또는 예방하는 방법이 본 명세서에 제공된다. irAE는 설사 또는 또 다른 위장 장애, 순수 적혈구 무형성증, 소적혈구성 빈혈, 낭창, 자가면역 신염, 자가면역 간염, 폐렴, 심근염, 심막염, 내분비병증, 애디슨병, 생식샘기능저하증, 쇼그렌 증후군, 또는 제1형 당뇨병일 수 있다. CD24 단백질은 성숙한 인간 CD24 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. 성숙한 인간 CD24의 서열은 서열번호: 1 또는 2에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. CD24 단백질은 인간 CD24의 임의의 또는 모든 세포외 도메인을 포함할 수 있다. CD24 단백질의 서열은 단백질을 발현하는 세포로부터 분비될 수 있도록 서열번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 신호 서열을 포함할 수 있다. 신호 펩타이드 서열은 다른 막관통 또는 분비된 단백질에서 발견되는 것, 또는 당업계에 공지된 현존하는 신호 펩타이드로부터 변형된 것일 수 있다. CD24 단백질은 가용성일 수 있고/있거나 당화될 수 있다. CD24 단백질은 진핵 단백질 발현 시스템을 사용하여 생성될 수 있어, 이는 차이니즈 햄스터 난소 세포주에 함유된 벡터 또는 복제-결함있는 레트로바이러스 벡터를 포함할 수 있다. 복제 결함있는 레트로바이러스 벡터는 진핵 세포의 게놈에 안정적으로 통합될 수 있다.

CD24 단백질은 CD24 단백질의 N- 또는 C-말단에 융합될 수 있는 단백질 태그를 포함할 수 있다. 단백질은 인간 Ig 단백질의 Fc 영역일 수 있는 포유동물 면역글로불린(Ig)의 일부를 포함할 수 있다. 인간 Ig 단백질은 인간 Ig 단백질의 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 도메인을 포함할 수 있고, 인간 Ig 단백질은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 IgA일 수 있다. Fc 영역은 또한 힌지 영역 및 IgM의 CH2, CH3 및 CH4 도메인을 포함할 수 있다. CD24 단백질은 서열번호: 5, 6, 8, 9, 11 또는 12에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

암 면역요법은 이필리무맙일 수 있는 항-CTLA4 항체일 수 있다. 항-CTLA4 항체는 또 다른 요법과 조합하여 투여될 수 있다. 암 요법은 또한 또 다른 요법과 조합하여 투여될 수 있는 항-PD-1 항체일 수 있다. 암 요법은 또한 또 다른 요법과 조합하여 투여될 수 있는 항-PD- L1 항체일 수 있다. 암 요법은 또한 키메라 항원 T 세포, T 세포 수용체 변형된 T 세포, 또는 활성화된 천연 살해 세포일 수 있다. 암 요법은 또한 조사 요법, 화학요법, 또는 암 세포-표적화 항체를 포함하는 암 요법일 수 있다.

CD24 단백질을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함에 의해 동종이계 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 후 활성화된 자연 살해(aNK) 세포를 수용할 수 있거나, 수용하였거나 또는 수용하는 대상체에서 이식편 대 숙주 질환(GvHD)을 치료하는, 감소시키는, 또는 예방하는 방법이 또한 본 명세서에 기재되어 있다.

CD24를 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여함에 의해 암 요법 동안 대규모 종양 용해와 연관된 irAE의 예방 또는 치료의 방법이 본 명세서에 추가로 기재된다. 암 요법은 암 세포의 직접적인 사멸을 야기하는 방사선 요법, 화학요법, 또는 항암 항체일 수 있다.

도 1a는 전장 CD24 융합 단백질인, CD24Fc(본 명세서에서 CD24Ig로도 지칭됨)(서열번호: 5)의 아미노산 조성을 도시한다. 밑줄 친 26개 아미노산은 CD24의 신호 펩타이드(서열번호: 4)이며, 이는 단백질을 발현하는 세포로부터 분비하는 동안 절단되고 따라서 단백질의 가공된 버전(서열번호: 6)으로부터 누락된다. 서열의 굵은 글자체 부분은 융합 단백질(서열번호: 2)에 사용된 성숙 CD24 단백질의 세포외 도메인이다. 성숙 CD24 단백질에 통상적으로 존재하는 마지막 아미노산(A 또는 V)은 면역원성을 회피하기 위해 작제물로부터 결실되었다. 밑줄이 없는, 굵지 않은 글자는 힌지 영역 및 CH1 및 CH2 도메인(서열번호: 7)을 포함하는 IgG1 Fc의 서열이다. 도 1b는 성숙 인간 CD24 단백질(굵은 글자체)이 서열번호: 1의 발린 다형성 변이체인 CD24^VFc(서열번호: 8)의 서열을 나타낸다. 도 1c는 성숙 인간 CD24 단백질(굵은 글자체)이 서열번호: 1의 알라닌 다형성 변이체인 CD24^AFc(서열번호: 9)의 서열을 도시한다. 도 1b 및 1c에서 융합 단백질의 다양한 부분은 도 1a에서와 같이 표시되어 있고, 변이체 발린/알라닌 아미노산은 이중 밑줄이 쳐져 있다.
도 2는 마우스(서열번호: 3)와 인간(서열번호: 2)으로부터의 성숙 CD24 단백질들 사이의 아미노산 서열 변이를 도시한다. 잠재적인 O-글리코실화 부위는 굵은 글자체로 되어있고 N-글리코실화 부위는 밑줄이 쳐져 있다.
도 3: CD24IgG1(CD24Fc)의 약동학의 WinNonlin 구획 모델링 분석. 개도 원은 3마리 마우스의 평균을 나타내고, 선은 예측된 약동학의 곡선이다. 도 3a: 1 mg CD24IgG1의 i.v. 주사. 도 3b: 1 mg CD24IgG1(CD24Fc)의 s.c. 주사. 도 3c: 곡선 하 면적(AUC)에 의해 측정된 혈액 내 항체의 총량, 반감기 및 최대 혈액 농도의 비교. 전체적으로, s.c. 주사의 AUC와 Cmax는 i.v. 주사의 약 80%이지만, 차이는 통계적으로 유의하지 않았다는 것에 유의한다.
도 4: CD24-Siglec G(10) 상호작용은 PAMP와 DAMP 사이를 구별한다. 도 4의 A: PAMP에 대한 숙주 반응은 CD24-Siglec G(10) 상호작용에 의해 영향을 받지 않았다. 도 4의 B: CD24-Siglec G(10) 상호작용은 가능하기로는 Siglec G/10-연계된 SHP-1을 통해 DAMP에 대한 숙주 반응을 억제한다.
도 5: CD24 Fc는 Siglec 10 및 HMGB1에 결합하여 인간 Siglec 10의 마우스 상동체인 Siglec G를 활성화시킨다. 도 5a: CD24-Fc-Siglec 10 상호작용의 친화도 측정. 도 5b: CD24-Fc는 특이적으로 양이온-의존 방식으로 HMGB-1과 상호작용한다. CD24-Fc는 양이온 킬레이트 EDTA의 존재 또는 부재에서 0.1 mM의 CaCl₂ and MgCl₂내에서 HMGB1과 함께 배양된다. CD24Fc는 단백질 G-비드로 당겨지고, HMGB1, CD24Fc 또는 대조군 Fc의 양은 웨스턴 블랏에 의해 결정된다. 도 5c: CD24-Fc는 티로신 인산화(중간 패널) 및 SHP-1과의 연계(상단 패널)를 유도함에 의해 마우스 Siglec G를 활성화시킨다. Siglec G의 양은 하단 패널에 도시되어 있다. CD24^-/- 비장 세포를 1 μg/ml의 CD24-Fc, 대조군 Fc 또는 비히클(PBS) 대조군으로 30분 동안 자극하였다. 그 다음 Siglec G를 면역침전시키고 항-포스포-티로신 또는 항-SHP-1로 탐색하였다.
도 6: CD24Fc는 항-CD3 활성화된 인간 T 세포에 의한 TNF-α 및 IFN-γ의 생성을 억제한다. 인간 PBML을 CD24Fc의 존재 또는 부재에서 4일 동안 항-CD3으로 자극하였고, 세포 배양물의 상청액에서 방출된 IFN-γ 및 TNF-α의 양을 ELISA로 측정하였다. 도시된 데이터는 3회 평균이다. 에러 바, SEM.
도 7: CD24는 인간 대식세포에 의한 염증성 사이토카인 생성을 억제한다. 도 7a: CD24의 ShRNA 침묵은 TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 자발적인 생산을 이끈다. THP1 세포는 뒤엉킨 또는 2개의 독립적인 CD24 shRNA 분자를 인코딩하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입되었다. 형질도입된 세포는 PMA(15 ng/ml)로 4 일 동안 배양함에 의해 대식세포로 분화되었다. PMA 및 비-부착성 세포를 세정한 후, 세포를 사이토카인 비드 어레이에 의해 염증성 사이토카인의 측정을 위해 추가 24시간 동안 배양하였다. 도 7b: 주어진 농도의 CD24Fc 또는 대조군 IgG Fc가 마지막 24시간에 대식세포에 첨가되는 것을 제외하고는 도 7a에서와 같았다. 도 4의 A에 도시된 데이터는 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균 및 S.D.이고 반면, 도 4의 B의 데이터는 적어도 3개의 독립적인 실험의 대표적인 것이다.
도 8: 2개의 독립적인 실험으로부터의 요약 데이터인, CD24Fc 및 CsA의 치료 효능의 카플란-마이어 생존 분석.
도 9는 인간 대상체에서 PK 평가가능한 집단에 대한 치료에 의한 평균 혈장 CD24Fc 농도(±SD)의 플롯을 도시한다. PK = 약동학; SD = 표준 편차.
도 10은 PK 평가가능한 집단에 대한 CD24Fc C_max 대 용량의 용량 비례 플롯을 도시한다.
도 11은 PK 평가가능한 집단에 대한 CD24Fc AUC_0-42d 대 용량의 용량 비례 플롯을 도시한다.
도 12는 PK 평가가능한 집단에 대한 CD24Fc AUC_0-inf 대 용량의 용량 비례 플롯을 도시한다.

본 발명자들은 놀랍게도, 가용성 형태의 CD24가 면역-관련 유해 사례(irAE)를 치료하는 데 매우 효과적이다는 것을 발견하였다. 본 효과는 DAMP를 통해 매개될 수 있다. 패턴 인식은 각각 PAMP 및 DAMP로 불리는 병원체-연관된 및 조직 손상-연관된 분자 패턴 둘 모두에 의해 유발된 염증 반응에 관여한다. 본 발명자들은 최근 연구가 DAMP에 대한 악화된 숙주 반응이 염증성 및 자가면역 질환의 발병에서 일부 역할을 할 수 있음을 실증하였다는 것을 깨달았다. DAMP는 염증성 사이토카인의 생성을 촉진하는 것으로 밝혀졌으며, 그리고 자가면역 질환 및 동물 모델에서, DAMP의 억제제 예컨대 HMGB1 및 HSP90은 결과적으로 류마티스성 관절염(RA)을 개선하는 것으로 밝혀졌다(4-6). TLR, RAGE-R, DNGR(Clec9A에 의해 인코딩됨) 및 Mincle은 다양한 DAMP에 의해 개시되는 염증을 매개하는 수용체인 것으로 나타났다(2, 7-14).

본 발명자들의 최근 연구는 CD24-Siglec G 상호작용이 PAMP로부터의 DAMP에 대한 선천적 면역력을 식별한다는 것을 실증하였다(15, 16). Siglec 단백질은 다양한 시알산-함유 구조를 인식하는 막-연관된 면역글로불린(Ig) 슈퍼패밀리 일원이다. 대부분의 Siglec은 SHP-1, -2 및 Cbl-b와 연관되어 염증 반응의 주요 조절물질을 제어하는 세포내 면역-티로신 억제성 모티프(ITIM)를 갖는다. 본 발명자들은 CD24를 Siglec, 마우스의 Siglec G 및 인간의 Siglec 10에 대한 최초의 천연 리간드로 보고하였다(15). Siglec G는 SHP-1/2 신호전달 기전을 통해 HMGB1과 같은 DAMP에 대한 TLR-매개된 숙주 반응을 억제하기 위해 시알릴화된 CD24와 상호작용한다(15).

인간 CD24는 CD24 유전자에서 240개 염기쌍의 오픈-리딩 프레임에 의해 인코딩된 작은 GPI-고정된 분자이다(28). 80개 아미노산 중에 처음 26개는 신호 펩타이드를 구성하고, 반면 마지막 23개는 GPI 꼬리의 부착을 가능하게 하는 절단을 위한 신호로 작용한다. 그 결과, 성숙 인간 CD24 분자는 단지 31개 아미노산을 갖는다. 31개 아미노산 중 하나는 인간 모집단 중에서 다형성이다. 오픈-리딩 프레임의 뉴클레오타이드 170에서 C 대 T 전이는 발린(v)으로 알라닌(a)의 치환을 초래한다. 이 잔기는 절단 부위에 대해 즉각적인 N-말단에 있고, 대체는 비-보존적이기 때문에, 이들 2개의 대립유전자는 세포 표면 상에서 상이한 효율성으로 발현될 수 있다. 실제로, cDNA로 형질감염 연구는 CD24^v 대립유전자가 세포 표면에서 보다 효율적으로 발현됨을 실증하였다(28). 이와 일치하여, CD24^v/v PBL은 특히 T 세포 상에서 더 높은 수준의 CD24를 표현하였다.

본 발명자들은 CD24가 조직 또는 기관 손상의 결과로서 방출되는 세포성 DAMP에 대한 숙주 반응을 부정적으로 조절하고, 적어도 2개의 중첩 기전이 이 활성을 설명할 수 있음을 실증하였다. 먼저, CD24는 HSP70, HSP90, HMGB1 및 뉴클레올린을 포함한 여러 DAMP에 결합하고 이들 DAMP에 대한 숙주 반응을 억제한다. 이를 위해, CD24는 염증성 자극을 포획하여 그것의 수용체인, TLR 또는 RAGE와의 상호작용을 방지할 수 있다는 것이 추정된다. 둘째로, 간 괴사의 아세트아미노펜-유도된 마우스 모델을 사용하고 염증을 보장하여, 본 발명자들은 그것의 수용체인, Siglec G와의 상호작용을 통해, CD24가 조직 손상에 대한 숙주 반응에 대해 강력한 음성 조절을 제공한다는 것을 실증하였다. 이 활성을 달성하기 위해, CD24는 Siglec G-연관된 SHP1이 음성 조절을 촉발하는 Siglec G에 의한 신호전달을 결합하고 자극할 수 있다. 양 기전은 훨씬 강한 염증 반응이 실장된 어느 하나의 유전자의 표적화된 돌연변이를 갖는 마우스로서 함께 작용할 수 있다. 실제로, CD24-/- 또는 Siglec G-/- 마우스로부터의 골수로부터 배양된 DC는 HMGB1, HSP70 또는 HSP90 중 어느 하나로 자극될 때 더 높은 수준의 염증성 사이토카인을 생산하였다. 본 발명자들의 지식으로는, CD24는 DAMP에 의해 유발된 염증을 차단할 수 있는 유일한 억제성 DAMP 수용체이고, 조직 손상에 대한 숙주 염증성 반응을 특이적으로 표적화하는 이용가능한 약물은 현재 없다. 게다가, 본 발명자들은 RA, MS 및 GvHD의 마우스 모델을 사용하여 DAMP-매개된 자가면역 질환을 완화시키는 외인성 가용성 CD24 단백질의 능력을 실증하였다.

1. 정의.

본 명세서에서 사용된 용어는 특정 구현예만을 설명하기위한 것이며 제한하려는 것이 아니다. 명세서 및 첨부된 청구 범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥 상 명백하게 다르게 지시되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다.

본 명세서에서 수치 범위의 인용의 경우, 동일한 정도의 정밀도를 갖는 그 사이에 있는 각각의 개재하는 수가 명시적으로 고려된다. 예를 들어, 6 내지 9의 범위의 경우, 6 및 9 외에 7과 8의 숫자가 고려되고, 6.0 내지 7.0의 경우에는, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 및 7.0의 수가 명시적으로 고려된다.

"펩타이드" 또는 "폴리펩타이드"는 아미노산의 연결된 서열이고, 천연, 합성, 또는 천연과 합성의 변형 또는 조합일 수 있다.

"실질적으로 동일한"은 제1 및 제2 아미노산 서열이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 또는 300 아미노산의 영역에 걸쳐 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%에 있다는 것을 의미할 수 있다.

질병으로부터 동물의 보호를 언급할 때, "치료" 또는 "치료하는"은 질병을 예방, 억제, 억압 또는 완전히 제거하는 것을 의미한다. 질병을 예방하는 것은 질병의 발병 이전에 동물에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 질환을 억제하는 것은 질환의 유도 후이지만 그것의 임상적 출현 이전에 본 발명의 조성물을 동물에게 투여하는 것을 포함한다. 질병을 억압하는 것은 질병의 임상적 출현 후 본 발명의 조성물을 동물에게 투여하는 것을 포함한다.

"변이체"는 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지하지만 아미노산의 삽입, 결실, 또는 보존적 치환에 의해 아미노산 서열이 다른 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 의미할 수 있다. "생물학적 활성"의 대표적인 예는 톨-유사 수용체에 결합하고 특정한 항체에 의해 결합되는 능력을 포함한다. 변이체는 또한 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지하는 아미노산 서열을 갖는 언급된 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질을 의미할 수 있다. 아미노산의 보존적 치환, 즉 아미노산을 유사한 특성(예를 들어, 친수성, 하전된 영역의 정도 및 분포)의 상이한 아미노산으로 대체하는 것은 당업계에서 전형적으로 작은 변화를 포함하는 것으로 인식되어 있다. 이들 작은 변화는 당업계에서 이해되는 바와 같이 아미노산의 소수성 지수를 고려함으로써 부분적으로 확인될 수 있다. 문헌[Kyte et al., J. Mol. Biol. 157:105-132 (1982)]. 아미노산의 소수성 지수는 그것의 소수성 및 전하의 고려에 기초한다. 유사한 소수성 지수의 아미노산이 치환될 수 있고 여전히 단백질 기능을 유지할 수 있다는 것이 당업계에 공지되어 있다. 일 양태에서, ±2의 소수성 지수를 갖는 아미노산이 치환된다. 아미노산의 친수성은 또한 생물학적 기능을 유지하는 단백질을 초래하는 치환을 밝히기 위해 사용될 수 있다. 펩타이드와 관련하여 아미노산의 친수성의 고려는, 항원성 및 면역원성과 잘 관련이 있는 것으로 보고된 유용한 척도인, 그 펩타이드의 가장 큰 국소 평균 친수성을 계산할 수 있게 한다. 본 명세서에 전체가 원용되어 포함된 미국 특허 번호 4,554,101. 유사한 친수성 값을 갖는 아미노산의 치환은 당업계에서 이해되는 바와 같이, 생물학적 활성, 예를 들어 면역원성을 보유하는 펩타이드를 초래할 수 있다. 치환은 서로의 ±2 이내의 친수성 값을 갖는 아미노산으로 수행될 수 있다. 아미노산의 소수성 지수 및 친수성 값 둘 모두는 아미노산의 특정한 측쇄에 의해 영향을 받는다. 그 관찰과 일치하여, 생물학적 기능과 양립가능한 아미노산 치환은 소수성, 친수성, 전하, 크기 및 다른 특성에 의해 밝혀진 바와 같이 아미노산의 상대적 유사성, 그리고 특히 그들 아미노산의 측쇄에 의존하는 것으로 이해된다.

2. CD24

성숙 CD24 또는 이의 변이체를 포함할 수 있는 CD24 단백질이 본 명세서에 제공된다. 성숙 CD24는 CD24의 세포외 도메인(ECD)에 해당한다. 성숙 CD24는 인간 또는 다른 포유동물로부터 유래된 것일 수 있다. 상기한 바와 같이, 성숙 인간 CD24 단백질은 31개 아미노산 길이이며, 그것의 C-말단에 가변성 알라닌(A) 또는 발린(V) 잔기를 갖는다:

SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTK(V/A)(서열번호: 1)

C-말단 발린 또는 알라닌은 면역원성일 수 있고 CD24 단백질로부터 생략될 수 있어, 그것의 면역원성을 감소시킬 수 있다. 따라서, CD24 단백질은 C-말단 아미노산을 결하는 인간 CD24의 아미노산 서열을 포함할 수 있다:

SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTK(서열번호: 2)

마우스 및 인간으로부터 성숙 CD24 단백질의 아미노산 서열에서 상당한 서열 변동에도 불구하고, 이들은 인간 CD24Fc가 마우스에서 활성인 것으로 밝혀진 바와 같이 기능적으로 동등하다. 인간 CD24 ECD의 아미노산 서열은 마우스 단백질로 일부 서열 보존을 나타낸다(39% 동일성; 유전자은행 수탁 번호 NP_033976). 그러나, CD24 ECD가 종에 따라 길이가 단지 27-31개 아미노산이고 Siglec 10/G와 같은 그것의 수용체(들) 중 일부에 결합하는 것은 그것의 시알산 및/또는 당단백질의 갈락토스 당류에 의해 매개되기 때문에 동일성 백분율이 보다 높지 않다는 것은 놀라운 일이 아니다. 인간 Siglec-10(유전자은행 수탁 번호 AF310233)의 세포외 도메인과 그것의 쥣과 동족체 Siglec-G(유전자은행 수탁 번호 NP_766488) 수용체 단백질 사이의 아미노산 서열 동일성은 63%이다(도 2). 주로 C-말단에서 그리고 당화 부위가 풍부한 마우스와 인간 CD24 사이의 서열 보존의 결과로서, 특히 이들 변이가 C-말단에서 보존된 잔기에 영향을 미치지 않거나, 또는 마우스 또는 인간 CD24로부터의 당화 부위에 영향을 미치지 않는 경우, 성숙 CD24 단백질에서의 상당한 변이가 CD24 단백질을 사용하여 용인될 수 있다. 따라서, CD24 단백질은 성숙 쥣과 CD24의 아미노산 서열을 포함할 수 있다:

NQTSVAPFPGNQNISASPNPTNATTRG(서열번호: 3).

인간 CD24 ECD의 아미노산 서열은 마우스로보다는 사이노몰구스 원숭이 단백질(52% 동일성; UniProt 수탁 번호 UniProtKB - I7GKK1)로 더 많은 서열 보존을 나타낸다. 또 한편, ECD가 이들 종에서 길이가 단지 29-31개 아미노산이고 그것의 수용체(들)에 결합하는 당 잔기의 역할로 인해 동일성 백분율이 더 높지 않다는 점은 놀라운 일이 아니다. 사이노몰구스 Siglec-10 수용체의 아미노산 서열은 결정되지 않았지만, 인간 및 레수스 원숭이 Siglec-10(유전자은행 수탁 번호 XP_001116352) 단백질 사이의 아미노산 서열 동일성은 89%이다. 따라서, CD24 단백질은 또한 성숙 사이노몰구스(또는 레수스) 원숭이 CD24의 아미노산 서열을 포함할 수 있다:

TVTTSAPLSSNSPQNTSTTPNPANTTTKA(서열번호: 10)

CD24 단백질은 가용성일 수 있다. CD24 단백질은 추가로 N-말단 신호 펩타이드를 포함하여, 단백질을 발현하는 세포로부터 분비를 허용할 수 있다. 신호 펩타이드 서열은 아미노산 서열 MGRAMVARLGLGLLLLALLLPTQIYS(서열번호: 4)를 포함할 수 있다. 대안적으로, 신호 서열은 임의의 다른 막관통 또는 분비된 단백질 상에서 발견된 것들, 또는 당업계에서 알려진 현존하는 신호 펩타이드로부터 변형된 것들일 수 있다.

a. 융합

CD24 단백질은 그것의 N- 또는 C-말단에서 단백질 태그에 융합될 수 있으며, 이는 인간 또는 마우스 또는 다른 종으로부터의 것일 수 있는 포유동물 Ig 단백질의 부분을 포함할 수 있다. 상기 부분은 Ig 단백질의 Fc 영역을 포함할 수 있다. Fc 영역은 Ig 단백질의 힌지 영역, CH2, CH3 및 CH4 도메인 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. Ig 단백질은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 IgA 일 수 있고, Fc 영역은 힌지 영역, 및 Ig의 CH2 및 CH3 도메인을 포함할 수 있다. Fc 영역은 인간 면역글로불린 G1(IgG1) 아이소타입(서열번호: 7)을 포함할 수 있다. Ig 단백질은 또한 IgM일 수 있고, Fc 영역은 힌지 영역 및 IgM의 CH2, CH3 및 CH4 도메인을 포함할 수 있다. 단백질 태그는 단백질의 정제를 돕는 친화성 태그 및/또는 기능성 단백질의 용해도 및 회수를 향상시키는 용해도-향상 태그일 수 있다. 단백질 태그는 또한 CD24 단백질의 원자가를 증가시킬 수 있다. 단백질 태그는 또한 GST, His, FLAG, Myc, MBP, NusA, 티오레독신(TRX), 작은 유비퀴틴-유사 개질제(SUMO), 유비퀴틴(Ub), 알부민, 또는 낙타과 Ig를 포함할 수 있다. 융합 단백질을 제조하고 융합 단백질을 정제하는 방법은 당해 기술에 공지되어 있다.

전임상 연구에 기초하여, 실시예에서 확인된 융합 단백질 CD24Fc의 구축을 위해, GPI 신호 절단 부위 전에 최종 다형성 아미노산을 결하는 30개 아미노산의 절단된 형태의 고유 CD24 분자(즉, 서열번호: 2를 갖는 성숙 CD24 단백질)가 사용되었다. 성숙 인간 CD24 서열은 인간 IgG1 Fc 도메인(서열번호: 7)에 융합된다. 전장 CD24Fc 융합 단백질은 서열번호: 5에 제공되고(도 1), 세포로부터 분비된 CD24Fc 융합 단백질의 가공된 버전(즉, 절단된 신호서열을 결함)은 서열번호: 6으로 제공된다. IgG1 Fc에 융합된 성숙 CD24의 가공된 다형성 변이체(즉, 서열번호: 1을 갖는 성숙 CD24 단백질)는 서열번호: 11 또는 12 포함할 수 있다.

b. 생산

CD24 단백질은 심하게 당화될 수 있고, 면역 세포의 상호자극 및 손상-관련 분자 패턴 분자(DAMP)와의 상호작용과 같은 CD24의 기능에 관여할 수 있다. CD24 단백질은 진핵 발현 시스템을 사용하여 제조될 수 있다. 발현 시스템은 포유동물 세포, 예컨대 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포에서 벡터로부터의 발현을 수반할 수 있다. 본 시스템은 또한 진핵 세포를 감염시키는 데 사용될 수 있는 바이러스 벡터, 예컨대 복제-결함있는 레트로바이러스 벡터일 수 있다. CD24 단백질은 또한 세포 게놈으로 통합된 벡터 또는 벡터의 일부로부터 CD24 단백질을 발현하는 안정한 세포주로부터 생산될 수 있다. 안정한 세포주는 통합된 복제-결함있는 레트로바이러스 벡터로부터 CD24 단백질을 발현할 수 있다. 발현 시스템은 GPEx™일 수 있다.

c. 약제학적 조성물

CD24 단백질은 약제학적으로 허용가능한 양의 CD24 단백질을 포함할 수 있는 약제학적 조성물에 함유될 수 있다. 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 연장된 기간에 걸쳐 CD24 단백질을 안정하게 유지할 수 있는 용매를 포함할 수 있다. 용매는 -20℃(-15℃ ~ -25℃)에서 적어도 66개월 동안 CD24 단백질을 안정하게 유지할 수 있는 PBS일 수 있다. 용매는 또 다른 약물과 조합하여 CD24 단백질을 수용할 수 있다.

약제학적 조성물은, 비제한적으로, 주사로 또는 연속적 주입을 포함한 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있다. 주사용 제형은 현탁액, 용액, 또는 유성 또는 수성 비히클에서 에멀션의 형태일 수 있고, 비제한적으로, 현탁제, 안정화제 및 분산제를 포함한 제형화제를 함유할 수 있다. 조성물은 또한 비제한적으로 멸균, 무발열원 물을 포함한 적합한 비히클로 재구성하기 위한 분말 형태로 제공될 수 있다.

약제학적 조성물은 또한 이식에 의해 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있는 데포 제제로 제형화될 수 있다. 본 조성물은 적합한 중합체 또는 소수성 물질(예를 들어, 허용가능한 오일에서 에멀션으로), 이온 교환 수지, 또는 난용성 유도체(예를 들어, 난용성 염으로)로 제형화될 수 있다. 피하 주사용 제형은 낭창 및 그것의 연관된 징후 및 합병증 같은 조짐에 대해 특히 관련될 수 있다.

d. 투약량

CD24 단백질의 용량은 허용가능한 독성 및 임상 효능이 있는 용량을 결정하는 임상시험을 통해 궁극적으로 결정될 수 있다. 초기 임상 용량은 설치류 및 비-인간 영장류에서 약동학 및 독성 연구를 통해 추정될 수 있다. CD24 단백질의 용량은 0.01 mg/kg 내지 1000mg/kg일 수 있고, 원하는 효과 및 투여 경로에 따라 1 내지 500 mg/kg일 수 있다. CD24 단백질은 정맥내 주입 또는 피하, 점막내(즉, 공동 또는 장기의 벽 내), 또는 복강내 주사에 의해 투여될 수 있고, 용량은 대상체가 인간인 경우 10-1000 mg, 10-500 mg, 10-240 mg, 10-120 mg, 또는 10, 30, 60, 120, 또는 240 mg일 수 있다.

3. 치료 방법

a. 면역-관련 유해 사례

CD24 단백질을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함에 의해 irAE를 경감시키는, 감소시키는, 최소화하는, 또는 치료하는 방법이 본 명세서에 제공된다. irAE는 암 요법과 연관될 수 있고, 대상체는 암 환자일 수 있다. 암 요법은 암 면역요법일 수 있다. CD24 단백질은 암 요법과 연관된 irAE가 있거나 또는 전개할 위험이 있는 대상체에게 투여될 수 있다. CD24 단백질은 암 요법이 개시되기 전 또는 irAE의 임상 징후가 나타나기 전에 irAE를 방지하기 위해 예방적으로 사용될 수 있다. CD24 단백질은 또한 암 요법이 개시되고 임상 증상이 진단된 후 irAE를 치료하기 위해 치료적으로 투여될 수 있다. irAE는 설사 또는 또 다른 위장 장애, 순수 적혈구 무형성증, 소적혈구성 빈혈, 낭창, 자가면역 신염, 자가면역 간염, 폐렴, 심근염, 심막염, 내분비병증, 애디슨병, 생식샘기능저하증, 쇼그렌 증후군, 또는 제1형 당뇨병일 수 있다.

암 요법은 활성 면역요법일 수 있다. 활성 면역요법의 예는 항-CTLA4, 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-TNF, 또 다른 TNF-수용체 패밀리 일원에 대한 항체, 항-LAG3, 항-TIM3, 및 종양 미세환경을 조절하는 작은 또는 큰 분자 억제제를 포함한다. 특히, 암 요법은 항-CTLA4 면역요법일 수 있고, CD24 단백질은 항-CTLA4 면역요법과 조합하여, 또는 그의 배경으로 대상체에게 투여될 수 있다. 항-CTLA4 항체의 예는 이필리무맙(Ipilimumab, Yervoy) 및 트레밀리무맙(Tremilimumab)을 포함한다.

또 다른 구현예에서, 암 요법은 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체일 수 있는 항-PD-1/PD-L1 면역요법일 수 있다. 항-PD-1 항체의 예는 니볼루맙, (Opdivo - Bristol Myers Squibb) 및 펨브롤리주맙(키트루다, MK-3475, Merck)을 포함한다. 항-PD-L1 항체의 예는 아테졸리주맙(Tecentriq, Roche), 아벨루맙(Merck KGaA 및 Pfizer) 및 더발루맙(Imfinzi, Astra-Zeneca)을 포함한다.

또 다른 구현예에서, 암 요법은 항-CTLA-4 및 항-PD-1 단클론성 항체(mAb)를 포함하는 병용 요법일 수 있다. 항-CTLA-4 및 항-PD-1과의 병용 요법은 가장 강력한 및 내구성 암 면역요법으로 부각되었다. 그러나, 본 병용 요법과 연관된 자가면역 역효과는 3 등급 및 4 등급 기관 독성을 전개하는 흑색종 환자의 50% 초과로 상당히 심각하다. 따라서, 암 면역요법의 주요한 도전은 치료적 효능에 영향을 미치지 않으면서 병용 요법의 역효과를 감소시키는 방법이다. 병용 요법의 2가지 성분 중, 항-CTLA-4 mAb는 훨씬 더 많은 면역요법-관련된 역효과(irAE)를 나타낸다.

암 요법은 생체외 자극된 종양 침윤하는 림프구(TIL) 또는 유전자적으로-조작된 T 세포(키메라 항원 수용체 [CAR] 또는 T 세포 수용체 [TCR] 변형된 T 세포)를 사용한 입양 세포 전달(ACT)일 수 있다. 특히, 정상 및 암 세포의 신속한 사망을 유발함에 의한 암 요법 예컨대 CAR-T 세포는 손상 연관된 분자 패턴(DAMP)의 방출 및, 결과적으로, 널리 퍼진 장기 기능이상으로 또한 이어질 수 있는 사이토카인 방출 증후군을 야기할 수 있다. 따라서, CD24 단백질은 DAMP의 효과를 감소시키거나 중화시키고 생성된 사이토카인 스톰을 완화시키거나, 최소화하거나 또는 치료하는 데 사용될 수 있다. CAR-T 세포는 비-종양 세포 및 조직에서도 또한 발현되는 종양-관련 항원을 표적화하는 경우 정상 세포를 손상시킬 수 있다. CAR-T 요법은 혈액성 종양 예컨대 급성 림프아구성 백혈병(ALL), B-세포 급성 림프아구성 백혈병, 성인 골수성 백혈병,(AML), 미만성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 비-호지킨 림프종(NHL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 원발성 종격동 B-세포 림프종(PMBCL), 외투 세포 림프종(MCL), 및 다발성 골수종(MM)의 치료에 사용될 수 있다. CAR-T 요법의 예는 B 세포 표면 항원 CD19(예컨대 JCAR017 및 JCAR014 [Juno Therapeutics]), CTL019(티사젠렉류셀-T [Novartis] 및 KTE-C19 [악시캅타젠 실로류셀, Kite Pharma]), 및 CD22(JCAR014 [Juno Therapeutics])를 표적화하는 것들을 포함한다. CAR-T 요법의 다른 예는 L1-CAM(JCAR023 [Juno Therapeutics]), ROR-1(JCAR024 [Juno Therapeutics]) 및 MUC16(JCAR020 [Juno Therapeutics])을 표적화하는 것들을 포함한다. TCR 변형된 T 세포에 대한 표적의 예는 MAGE-A3, 예컨대 KITE-718(Kite Pharma), 윌름스 종양 항원 1(WT-1), 예컨대 JTCR016(Juno Therapeutics), 및 NY-ESO-1을 표적화하는 것들을 포함한다.

암 요법은 조사 및 화학요법과 같은 암 세포의 신속한 사멸을 포함하는 것일 수 있다. 생성된 종양 용해는 염증성 캐스케이드를 개시하는 DAMP의 방출로 이어질 수 있다. 이러한 징후는 특히 CD24 단백질로 예방적 치료에 순응할 수 있다.

b. 이식편 대 숙주 질환

CD24 단백질을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함에 의해 동종이계 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 후 활성화된 자연 살해(aNK) 세포를 수용할 수 있거나 또는 수용한 대상체에서 이식편 대 숙주 질환(GvHD)을 감소시키는 또는 치료하는 방법이 또한 본 명세서에 제공된다. NK 세포는 동종이계 HSCT 후 생착을 향상시키고 이식편-대-백혈병을 매개할 수 있지만, HSCT 후 자연적으로 NK 세포를 재구성함으로써 매개된 이식편-대-백혈병의 효력은 제한적이다. 전임상 연구는 NK 세포의 활성화가 활성 수용체 발현을 상향 조절하고 사멸 용량을 확대시킨다는 것을 입증한다(Shah et al 2015). 이것은 그런 다음 초-고위험 고형 종양이 있는 소아 및 청소년에서 HLA-매칭된, T-세포-감손된 비골수절제 말초 혈액 줄기 세포 이식 후 공여체-유래된 활성화된 NK 세포(aNK-DLI)의 입양 전달을 연구하는 임상시험에서 시험되었다. aNK-DLI는 강력한 사멸 능력을 실증하였고 높은 수준의 활성 수용체 발현을 나타냈다. 그러나, 9명의 이식 수용체 중 5명은 aNK-DLI 후 급성 이식편 대 숙주 질환(GVHD)을 경험하였고, 3명의 대상체에서 4 등급의 GVHD가 관찰되었다. GVHD는 매칭된 형제자매 공여체 수령체 대비 매칭된 관련 없는 공여체에서 보다 일반적이었고 더 높은 공여체 CD3 키메리즘과 연관되었다. 이 설정에서 T-세포 용량이 GVHD에 대해 요구되는 역치 미만인 것을 고려하면, aNK-DLI는 마찬가지로 근본적인 T-세포 동종반응성을 확대시킴에 의해 관찰된 급성 GVHD에 기여한 것으로 결론지어 졌다.

c. 투여

약제학적 조성물의 투여 경로는 비경구일 수 있다. 비경구 투여는, 비제한적으로, 정맥내, 동맥내, 복강내, 피하, 근육내, 척추강내, 관절내, 및 직접적인 주사를 포함한다. 약제학적 조성물은 인간 환자, 고양이, 개, 또는 큰 동물에게 투여될 수 있다. 본 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 회/일 투여될 수 있다.

d. 병용 치료

CD24 단백질은 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 추가로 감소, 완화 또는 치료하기 위한 또 다른 제제와 함께 사용될 수 있다. 사이토카인 방출 증후군은 인터류킨(IL)-6 및 IFN-γ를 포함하는 몇 개의 사이토카인의 상승된 순환 수준과 연관된다. 따라서, 다른 제제는 토실리주맙(악템라), 항-IL-6 수용체 항체, 또는 또 다른 사이토카인 표적 치료제일 수 있고, 면역억제로 사용될 수 있고, 특히 CAR-T를 수용한 환자에서 증후군을 역전시키기 위해 사용될 수 있는 코르티코스테로이드가 있거나 없을 수 있다. CRS 관리를 위해 사용된 다른 제제는 실툭시맙(항-IL-6, 실반트), 에타네르셉트(TNFα 억제제, 엔브렐), 인플릭시맙(항-TNFα, 레미케이드), 또는 아나킨라(인터류킨 1 수용체 길항제, Kineret)일 수 있다. CD24 단백질은 손상된 조직으로부터 방출되고 염증성 캐스케이드를 개시하는 DAMP의 효과를 표적화하고 완화시키기 위해 사용될 수 있지만, 병용 요법은 효과기 사이토카인 분자를 표적화할 수 있으며, 그것에 의해 CRS를 완화, 감소 또는 치료하기 위한 상보적 2-갈래 접근법을 제공할 수 있다.

CD24 단백질은 다른 치료와 동시에 또는 도량형으로 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "동시" 또는 "동시에"는 CD24 단백질 및 다른 치료가 서로 48 시간, 바람직하게는 24 시간, 더 바람직하게는 12 시간, 더욱더 바람직하게는 6 시간, 그리고 가장 바람직하게는 3 시간 또는 그 미만 이내에 투여된다는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "도량형으로"는 다른 치료와 상이한 시간에 그리고 반복 투여에 대해 특정 빈도에서 제제의 투여를 의미한다.

CD24 단백질은 약 120 시간, 118 시간, 116 시간, 114 시간, 112 시간, 110 시간, 108 시간, 106 시간, 104 시간, 102 시간, 100 시간, 98 시간, 96 시간, 94 시간, 92 시간, 90 시간, 88 시간, 86 시간, 84 시간, 82 시간, 80 시간, 78 시간, 76 시간, 74 시간, 72 시간, 70 시간, 68 시간, 66 시간, 64 시간, 62 시간, 60 시간, 58 시간, 56 시간, 54 시간, 52 시간, 50 시간, 48 시간, 46 시간, 44 시간, 42 시간, 40 시간, 38 시간, 36 시간, 34 시간, 32 시간, 30 시간, 28 시간, 26 시간, 24 시간, 22 시간, 20 시간, 18 시간, 16 시간, 14 시간, 12 시간, 10 시간, 8 시간, 6 시간, 4 시간, 3 시간, 2 시간, 1 시간, 55 분, 50 분, 45 분, 40 분, 35 분, 30 분, 25 분, 20 분, 15 분, 10 분, 9 분, 8 분, 7 분, 6 분, 5 분, 4 분, 3 분, 2 분, 및 1 분을 포함한 또 다른 치료 이전 임의의 시점에서 투여될 수 있다. CD24 단백질은 약 120 시간, 118 시간, 116 시간, 114 시간, 112 시간, 110 시간, 108 시간, 106 시간, 104 시간, 102 시간, 100 시간, 98 시간, 96 시간, 94 시간, 92 시간, 90 시간, 88 시간, 86 시간, 84 시간, 82 시간, 80 시간, 78 시간, 76 시간, 74 시간, 72 시간, 70 시간, 68 시간, 66 시간, 64 시간, 62 시간, 60 시간, 58 시간, 56 시간, 54 시간, 52 시간, 50 시간, 48 시간, 46 시간, 44 시간, 42 시간, 40 시간, 38 시간, 36 시간, 34 시간, 32 시간, 30 시간, 28 시간, 26 시간, 24 시간, 22 시간, 20 시간, 18 시간, 16 시간, 14 시간, 12 시간, 10 시간, 8 시간, 6 시간, 4 시간, 3 시간, 2 시간, 1 시간, 55 분, 50 분, 45 분, 40 분, 35 분, 30 분, 25 분, 20 분, 15 분, 10 분, 9 분, 8 분, 7 분, 6 분, 5 분, 4 분, 3 분, 2 분, 및 1 분을 포함한 CD24 단백질의 제2 치료 이전 임의의 시점에서 투여될 수 있다.

CD24 단백질은 약 1분, 2 분, 3 분, 4 분, 5 분, 6 분, 7 분, 8 분, 9 분, 10 분, 15 분, 20 분, 25 분, 30 분, 35 분, 40 분, 45 분, 50 분, 55 분, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간, 12 시간, 14 시간, 16 시간, 18 시간, 20 시간, 22 시간, 24 시간, 26 시간, 28 시간, 30 시간, 32 시간, 34 시간, 36 시간, 38 시간, 40 시간, 42 시간, 44 시간, 46 시간, 48 시간, 50 시간, 52 시간, 54 시간, 56 시간, 58 시간, 60 시간, 62 시간, 64 시간, 66 시간, 68 시간, 70 시간, 72 시간, 74 시간, 76 시간, 78 시간, 80 시간, 82 시간, 84 시간, 86 시간, 88 시간, 90 시간, 92 시간, 94 시간, 96 시간, 98 시간, 100 시간, 102 시간, 104 시간, 106 시간, 108 시간, 110 시간, 112 시간, 114 시간, 116 시간, 118 시간, 및 120 시간을 포함한 또 다른 치료 후 임의의 시점에서 투여될 수 있다. CD24 단백질은 약 120 시간, 118 시간, 116 시간, 114 시간, 112 시간, 110 시간, 108 시간, 106 시간, 104 시간, 102 시간, 100 시간, 98 시간, 96 시간, 94 시간, 92 시간, 90 시간, 88 시간, 86 시간, 84 시간, 82 시간, 80 시간, 78 시간, 76 시간, 74 시간, 72 시간, 70 시간, 68 시간, 66 시간, 64 시간, 62 시간, 60 시간, 58 시간, 56 시간, 54 시간, 52 시간, 50 시간, 48 시간, 46 시간, 44 시간, 42 시간, 40 시간, 38 시간, 36 시간, 34 시간, 32 시간, 30 시간, 28 시간, 26 시간, 24 시간, 22 시간, 20 시간, 18 시간, 16 시간, 14 시간, 12 시간, 10 시간, 8 시간, 6 시간, 4 시간, 3 시간, 2 시간, 1 시간, 55 분, 50 분, 45 분, 40 분, 35 분, 30 분, 25 분, 20 분, 15 분, 10 분, 9 분, 8 분, 7 분, 6 분, 5 분, 4 분, 3 분, 2 분, 및 1 분을 포함한 이전의 CD24 후 이전 임의의 시점에서 투여될 수 있다.

실시예 1

마우스에서 CD24 약동학

1 mg의 CD24Fc(CD24Fc)을 미접촉 C57BL/6 마우스에 주입하고 각각의 시점에서 3마리 마우스로 상이한 시점(5 분, 1 시간, 4 시간, 24 시간, 48 시간, 7 일, 14 일 및 21 일)에서 혈액 샘플을 수집하였다. 혈청은 1:100으로 희석하고 CD24Fc의 수준은 검출 항체로 페록시다아제 접합된 염소 항-인간 IgG Fc(5 μg/ml)와 포획 항체로 정제된 항-인간 CD24(3.3 μg/ml)를 사용하여 샌드위치 ELISA를 사용하여 검출하였다. 도 3a에서 나타낸 바와 같다. CD24Fc의 쇠퇴 곡선은 단백질의 전형적인 2상 쇠퇴를 드러냈다. 제1 체내분포 상은 12.4 시간의 반감기를 가졌다. 제2 상은 중심 구획으로부터 1차 제거의 모델을 따른다. 제2 상에 대한 반감기는 9.54 일이었고, 이것은 생체내 항체의 것과 유사하다. 이들 데이터는 융합 단백질이 혈류에서 매우 안정하다는 것을 시사한다. 융합 단백질을 피하로 주사된 또 다른 연구에서, 9.52 일의 거의 동일한 반감기가 관찰되었다(도 3b). 더욱 중요하게는, CD24Fc가 혈액에서 피크 수준에 도달하는 데 대략 48 시간이 걸렸지만, AUC에 의해 측정된 바와 같이 혈액에서 융합 단백질의 총량은 어느 주사 경로에서도 실질적으로 동일하였다. 따라서, 치료적 관점에서, 상이한 주사의 경로는 약물의 치료 효과에 영향을 미치지 않아야 한다. 이 관찰은 영장류 독성 및 임상시험을 위한 실험 설계를 크게 간소화시켰다.

실시예 2

조직 손상에 대한 숙주 반응에서 CD24- Siglec 10 상호작용

거의 이십 년 전, Matzinger는 대중적으로 위험 이론이라고 불리는 것을 제안했다. 본질적으로, 그녀는 면역계가 숙주의 위험을 감지할 때 작동한다는 것을 주장했다. 비록 위험의 본질은 그 당시에 잘 정의되지 않았지만, 괴사는 위험-관련 분자 패턴에 대해, HMGB1 및 DAMP라고 불리는 열-충격 단백질과 같은 세포내 성분의 방출과 관련이 있는 것으로 결정되었다. DAMP는 염증성 사이토카인 및 자가면역 질환의 생성을 촉진시키는 것으로 밝혀졌다. 동물 모델에서, HMGB1 및 HSP90의 억제제는 RA를 개선시키는 것으로 밝혀졌다. DAMP의 관여는 DAMP에 대한 숙주 반응에 대한 음성 조절이 RA 요법에 대해 탐구될 수 있다는 전망을 높였다.

아세트아미노펜-유도된 간 괴사를 사용하고 염증을 보장함으로써, CD24는 Siglec G와 상호작용을 통해 조직 손상에 대한 숙주 반응에 대한 강력한 음성 조절을 제공하는 것이 관찰되었다. CD24는 조혈 세포 및 다른 조직 줄기 세포에서 광범위하게 발현되는 GPI 고정 분자이다. 다발성 경화증, 전신 홍반성 낭창, RA, 및 거대세포 관절염을 포함한 인간의 다양한 자가면역 질환의 유전적 분석은 CD24 다형성과 자가면역 질환의 위험 사이에 유의한 연관성을 나타냈다. Siglec G는 시알산 함유 구조를 인식하는 그것의 능력에 의해 정의된 I-렉틴 계열의 구성원이다. Siglec G는 CD24상의 시알산 함유 구조를 인식하고 수지상 세포에 의한 염증성 사이토카인의 생산을 음성적으로 조절한다. CD24와 상호작용하는 그것의 능력의 관점에서, 인간 Siglec 10 및 마우스 Siglec G는 기능적으로 동등하다. 그러나, 마우스와 인간 동족체 사이에 일대일 상관관계가 있는지는 불확실하다. 기전은 완전히 밝혀져 있지만, SiglecG-관련 SHP1이 음성 조절에 관여할 가능성이 있다. 과학계에 최근에 보고된 이들 데이터는 CD24-Siglec G/10 상호작용이 DAMP로부터의 식별력 병원체-연관된 분자 패턴(PAMP)에서 결정적인 역할을 할 수 있는 새로운 모델로 이어진다(도 4).

적어도 2개의 중첩 기전이 CD24의 기능을 설명할 수 있다. 먼저, 다양한 DAMP에 결합함에 의해, CD24는 염증성 자극을 포착하여 TLR 또는 RAGE와 그것의 상호작용을 방지할 수 있다. 이 개념은 CD24가 HSP70, 90, HMGB1 및 뉴클레올린을 포함한 여러 DAMP 분자와 연관되어 있다는 관찰에 의해 지지된다. 둘째로, 아마 DAMP와 연관된 후, CD24는 Siglec G에 의한 신호전달을 자극할 수 있다. 양 기전은 훨씬 강한 염증 반응이 실장된 어느 하나의 유전자의 표적화된 돌연변이를 갖는 마우스로서 함께 작용할 수 있다. 실제로, CD24-/- 또는 Siglec G-/- 마우스로부터의 골수로부터 배양된 DC는 HMGB1, HSP70 또는 HSP90 중 어느 하나로 자극될 때 훨씬 더 높은 염증성 사이토카인을 생산하였다. 그에 반해서, LPS 및 PolyI:C와 같은 PAMP에 대한 반응에서 그것의 효과가 발견되지 않았다. 이들 데이터는 선천성 면역계가 병원체를 조직 손상과 구별하기 위한 기전을 제공했을 뿐만 아니라, CD24 및 Siglec G가 조직 손상과 연관된 질환에 대한 잠재적 치료 표적임을 시사한다.

실시예 3

CD24 및 GvHD의 예방

CD24Fc는 HMGB1, Siglec 10과 상호작용하고 Siglec G와 SHP-1 사이에서 연관을 유도한다.

CD24Fc와 Siglec 10 사이의 상호작용을 측정하기 위해, 본 발명자들은 CD24Fc를 칩상에 고정시키고 Biacore를 사용하여 상이한 농도의 Siglec-10Fc의 결합을 측정하였다. 도 5a에서 나타낸 바와 같이, CD24Fc는 1.6x10^-7M의 Kd로 Siglec 10과 결합한다. 이것은 대조군 Fc보다 100-배 더 높은 친화도이다. CD24Fc와 HMGB1 사이의 상호작용은 CD24Fc-결합된 단백질 G 비드를 사용한 풀 다운 실험에 이어서 항-IgG 또는 항-HMGB1 중 어느 하나로 웨스턴 블랏에 의해 확인되었다. 이들 데이터는 Fc가 아닌 CD24Fc가 HMGB1에 결합하고 이 결합이 양이온-의존적임을 입증한다(도 5b). CD24Fc가 인간 Siglec 10의 마우스 대응물인, Siglec G의 효능제인지를 결정하기 위해, 본 발명자들은 CD24Fc, 대조군 Fc 또는 비히클(PBS) 대조군으로 30 분 동안 CD24-/- 비장 세포를 자극하였다. 그 다음 Siglec G를 면역침전시키고 항-포스포-티로신 또는 항-SHP-1로 탐색하였다. 도 5C에 도시된 바와 같이, CD24Fc는 Siglec G의 실질적인 인산화와 적응성 및 선천성 면역력 둘 모두에 대한 잘 알려진 억제제인, SHP-1의 연관을 유도하였다.

CD24Fc의 시험관내 효능 연구.

인간 T 세포에 의한 염증성 사이토카인의 생성에 대한 CD24Fc의 영향을 연구하기 위해, 인간 PBML에서 성숙 T 세포가 상이한 농도 of CD24Fc 또는 인간 IgG1 Fc의 존재에서 T 세포 수용체의 효능제로 통상적으로 사용된, 항-CD3 항체(OKT3)에 의해 활성화되었다. 4일 후, 상청액을 수집하고 IFN-γ 및 TNF-α의 생성을 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 측정하여 활성화를 확인하였다. 도 6에서의 결과는 2개의 상이한 제조 로트로부터 CD24Fc가 대조 IgG Fc 대조군과 비교하여 활성화된 인간 PBML로부터의 IFN-γ 및 TNF-α 생성을 상당히 감소시켰음을 실증하였다. 또한, CD24Fc를 첨가할 때, 사이토카인 생성이 용량-의존 방식으로 억제되었다. 따라서, CD24Fc는 시험관내에서 항-CD3 유도된 인간 PBML 활성화를 억제할 수 있다. 이 연구는 CD24Fc의 작용 기전이 T 세포 활성화의 억제를 통한 것일 수 있음을 나타낼 뿐만 아니라, 약물 효력 및 안정성 시험을 위한 신뢰할 수 있는 생물검정을 확립할 수 있다.

CD24Fc가 인간 세포주에서 염증성 사이토카인의 생성을 조절하는지 여부를 결정하기 위해, 본 발명자들은 먼저 RNAi를 사용하여 인간 급성 단구성 백혈병 THP1 세포주에서 CD24를 침묵화시키고 그 다음 PMA로 이들을 처리함에 의해 대식세포로의 분화를 유도하였다. 도 7a에서 나타낸 바와 같이, CD24 침묵화는 TNFα, IL-1β 및 IL-6의 생성을 실질적으로 증가시켰다. 이들 데이터는 염증성 사이토카인의 생성을 제한하는 데 있어서 내인성 인간 CD24에 대한 필수적인 역할을 입증한다. 중요하게는, CD24Fc는 CD24-침묵화된 세포주에서의 TNFα의 억제(도 7b)뿐만 아니라 IL-1β 및 IL-6의 억제를 회복시켰다. 이들 데이터는 인간 세포의 염증 반응에서 CD24의 관련성을 입증할 뿐만 아니라 CD24Fc의 생물학적 활성을 평가하기 위한 간단한 검정을 제공한다.

종합하면, 이들 데이터는 CD24Fc가 적응성 및 선천적 자극에 의해 유발된 사이토카인 생성을 억제할 수 있음을 입증한다. 그러나, 약물이 선천적 효과기에 의한 사이토카인 생성을 감소시키는 데 훨씬 더 효과적이기 때문에, 본 발명자들은 그것의 예방적 기능을 위한 주요한 기전은 이식의 초기 단계에서 조직 손상에 의해 유발되는 염증을 예방하는 것이라고 생각한다.

인간화된 마우스 GvHD 모델에서 CsA와 CD24Fc 사이의 치료 효과의 비교.

GvHD는 동종이계 BM 이식에서 주요 합병증으로 알려져 있다. 그러나, 모든 인간화된 동물 모델에서 GvHD 유도는 다량의 인간 PBMC의 이식에 의존한다. 이들 인간화된 동물 모델 중 일부는 인간에서 볼 수 있는 전신 GvHD를 달성할 수 없다. 따라서, 인간화된 전신 GvHD 동물 모델은 신생 NOD/SCID IL2rγ-무효(NSG) 마우스에서 50만 개의 인간 BM 세포를 사용하여 개발되었다. 결과는 마우스가 100% 침투성을 갖는 이종발생성 GvHD를 발달시켰고, 모든 마우스는 이식 후 14일 만큼 일찍 높은 인간 키메리즘을 나타냈고, 이는 7 일 후에 거의 2 배로 상당히 증가하였다(데이터는 도시되지 않음)는 것을 나타낸다. 사용된 공여체에 따라 이식의 1-2 개월 이내에 총 사망률은 100%이다(데이터는 도시되지 않음). 나아가, 인간 T 세포는 폐, 간, 피부 및 장을 포함하여 다수의 표적 기관에 침투한다. 본 발명자들의 지식에 따르면, 이것은 인간 급성 GVHD의 발병에 대한 최상의 모델이지만, 질환의 중증도 및 신속한 개시로 인해 치료적으로 보다 도전적이다.

2개의 실험에 사용된 공여체는 유래없이 신속한 및 중증 GVHD를 야기하였다. 사이클로스포린 A(CsA) 및 CD24Fc의 치료적 효과를 비교하기 위해, 이식 후 1 주일에서 NSG 마우스를 CsA의 매일 최대 내성있는 용량(마우스의 연령에 의존하여 최대 4 주 동안 0.3 내지 1 mg/kg) 또는 CD24Fc(5 mg/kg)의 2-4 매주 용량으로 처리하였다. 도 8에서 나타낸 바와 같이, 제2 주에서 개시하는, 비히클 군에서 GVHD-관련된 사망의 신속한 개시가 관찰되었다. CD24Fc는 수령체 마우스의 생존을 상당하게 연장시켰지만(P=0.015), CsA는 생존을 상당하게 연장시키지 못했다(P=0.097). 이들 데이터는 CD24Fc가 CsA와 비교하여 우수한 치료적 효능을 갖는다는 것을 입증한다.

실시예 4

인간에서 CD24 약동학

본 실시예는 인간에서 CD24 단백질의 약동학의 분석을 나타낸다. 이것은 건강한 남성 및 여성 성인 대상체에서 CD24Fc의 안전성, 내성 및 PK를 평가하기 위한 단계 I, 무작위화된, 이중맹검, 위약 대조된, 단일 상승 용량 연구로부터 유래되었다. 이 연구에는 5 집단의 각각 8명의 대상체에서의 총 40명의 대상체가 등록되었다. 각각의 집단에서 8명의 대상체 중 6명은 연구 약물을 투여 받았고, 2명의 대상체는 위약(0.9% 염화나트륨, 식염수)을 투여 받았다. 첫 번째 집단은 10 mg으로 투여되었다. 후속 집단은 30 mg, 60 mg, 120 mg 및 240 mg의 CD24Fc 또는 상응하는 위약을 투여 받았으며 각각의 이전 집단에 대한 안전성 및 내성 데이터의 검토를 할 수 있도록 3주 이상 간격을 두었다. 적절한 안전성과 내성이 입증된 경우에만 새로운 대상체의 집단에 더 높은 용량의 투여가 허용되었다.

각각의 집단에서, 초기 2명의 대상체는 1일째에 1명의 연구 약물 수령체 및 1명의 위약 수령체였다. 3번째 내지 5번째 및 6번째 내지 8번째 대상체는 7일째 후(하위그룹 간에 최소의 24 시간 이격됨) 투약되었다. 각각의 대상체는 동일한 하위그룹에서 1시간 이상 간격을 두고 투약되었다. 필요한 경우, 나머지 대상체의 투약은 그 집단의 첫 번째 및 두 번째 하위그룹을 포함한 투약후 기간 동안 발생할 수 있는 임의의 중대한 안전성 문제를 검토하는 동안 지연되었다. 후속 집단은 이전 집단 적어도 3 주 후에 투약되었다.

스크리닝 기간:

스크리닝 방문(방문 1)은 활성 치료 기간의 개시 최대 21 일 이전에 발생하였다. 고지에 의한 동의를 제공한 후, 대상체는 적격성에 대해 스크리닝 절차를 거쳤다.

치료 기간:

대상체는 -1 일(방문 2)에 임상 약리학 단위(CPU)에 입원하였고, 무작위화된 치료 기간은 10-시간 최소 밤새 금식 후 1 일에 시작하였다. 대상체를 단일 용량으로서 CD24Fc 또는 위약으로의 치료에 무작위로 할당하였다. 상체는 4일째의 아침까지 갇혀 있었다.

후속조치:

모든 대상체는 후속조치 방문들(방문 3, 방문 4, 방문 5, 방문 6, 및 방문 7)을 위해 7일째, 14일째, 21일째, 28 일째, 및 42일째(±1 일)에 CPU로 복귀하였다. 방문 7은 모든 대상체에 대한 최종 방문이었다.

치료의 기간: 각각의 대상체에 대한 총 연구 기간은 최대 63일이었다. 단일-용량 투여는 1일째에 발생하였다.

대상체의 수:

계획: 40명 대상체

선별: 224명 대상체

무작위화된 배정: 40명 대상체

완료: 39명 대상체

중단: 1명 대상체

진단 및 포함에 대한 주요 기준: 이 연구에 대한 모집단은 18 내지 55세 사이의 건강한 남성 및 여성이며, 18 kg/m² 내지 30 kg/m² 사이로 포괄적인 체질량 지수를 가졌다.

조사 제품 및 비교기 정보:

CD24Fc: IV 주입을 통해 투여된 단일 용량의 10 mg, 30 mg, 60 mg, 120 mg, 또는 240 mg; 로트 번호: 09MM-036. CD24Fc는 인간 CD24의 성숙 서열 및 인간 면역글로불린 G1(IgG1Fc)의 단편 결정화가능 영역으로 구성된 완전 인간화된 융합 단백질이었다. CD24Fc는 IV 투여를 위해 멸균, 투명, 무색, 보존제-없는, 수용액으로 공급되었다. CD24Fc는 10 mg/mL의 농도 및 pH 7.2에서 단일 용량 주사 용액으로 제형화되었다. 각각의 CD24Fc 바이알은 16 mL ± 0.2 mL의 CD24Fc에 160 mg의 CD24Fc, 5.3 mg의 염화나트륨, 32.6 mg의 제이인산나트륨 6수화물, 및 140 mg의 제일인산나트륨 일수화물을 함유했다. CD24Fc는 클로로부틸 고무 마개 및 알루미늄 플립-오프 씰을 갖는 투명한 보로실리케이트 유리 바이알에 공급되었다.

IV 주입을 통해 투여된 매칭 위약(0.9% 염화나트륨, 식염수); 로트 번호: P296855, P311852, P300715, P315952.

치료 목적(ITT) 모집단은 적어도 1 용량의 연구 약물을 투여 받은 모든 대상체로 구성되었다. ITT 모집단은 대상체 정보 및 안전성 평가를 위한 주분석 모집단이었다.

임상 실험실 평가(화학, 혈액학, 및 요검사)는 치료 및 방문에 의해 요약되었다. 기준선으로부터의 변화도 또한 요약되었다. 활력 징후(혈압, 심박수, 호흡수 및 온도)를 치료 및 시점으로 요약하였다. 기준선으로부터의 변화도 또한 요약되었다. 모든 신체 검사 데이터가 열거되었다. 심전도 파라미터 및 기준선으로부터의 변화가 요약되었다. 전반적인 해석이 열거되었다.

혈장 CD24Fc 농도

도 9에서 나타낸 바와 같이, CD24Fc의 평균 혈장 농도는 투여된 CD24Fc의 용량에 비례하여 증가하였다. 120 mg을 제외한 모든 용량 그룹에 대해, CD24Fc의 최대 평균 혈장 농도는 투여 후 1 시간에 도달하였다. 120 mg 그룹에 대한 CD24Fc의 최대 평균 혈장 농도는 투여 후 2 시간에 도달하였다. 42일(984 시간)까지, 모든 그룹에 대한 CD24Fc의 평균 혈장 농도는 최대 평균 혈장 농도의 2% 내지 4%로 감소하였다.

표 1은 PK 평가가능한 모집단에 대한 치료에 의한 혈장 CD24Fc PK 파라미터를 요약한다.

혈장 CD24Fc 용량 비례 분석

도 10은 PK 평가가능한 집단에 대한 CD24Fc C_max 대 용량의 용량 비례 플롯을 도시한다. 도 11은 PK 평가가능한 집단에 대한 CD24Fc AUC_0-42d 대 용량의 용량 비례 플롯을 도시한다. 도 12는 PK 평가가능한 집단에 대한 CD24Fc AUC_0-inf 대 용량의 용량 비례 플롯을 도시한다. 표 2는 용량 비례의 검정력 분석을 나타낸다.

C_max 기울기 추정은 1.105 내지 1.240의 90% CI로 1.172였다. AUC_0-42d 기울기 추정은 1.027 내지 1.148의 90% CI로 1.088이었다. AUC_0-inf 기울기 추정은 1.026 내지 1.1의 90% CI로 1.087이었다.

약동학적 결론

혈장 CD24Fc의 C_max 및 AUC는 마우스, 원숭이 및 인간에 투여된 용량에 비례하여 증가했다. 혈장 CD24Fc는 1.01 내지 1.34 시간에 T_max에 도달했다. 혈장 CD24Fc의 t_½는 280.83 내지 327.10 시간 사이의 범위였다.

참조문헌

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Claims (40)

1. 대상체에서 암 요법과 연관된 면역-관련 유해 사례 (irAE)의 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
2. 제1항에 있어서, 상기 암 요법은 항-CTLA4 항체인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
3. 제2항에 있어서, 상기 항-CTLA4 항체는 이필리무맙인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
4. 제2항에 있어서, 상기 항-CTLA4 항체는 또 다른 요법과 조합하여 투여되는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
5. 제1항에 있어서, 상기 암 요법은 항-PD-1 항체인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
6. 제5항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체는 또 다른 요법과 조합하여 투여되는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
7. 제1항에 있어서, 상기 암 요법은 항-PD-L1 항체인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
8. 제7항에 있어서, 상기 항-PD-L1 항체는 또 다른 요법과 조합하여 투여되는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
9. 제1항에 있어서, 상기 암 요법은 키메라 항원 수용체 T 세포인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
10. 제1항에 있어서, 상기 암 요법은 T 세포 수용체 (TCR) 변형된 T 세포인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
11. 제1항에 있어서, 상기 암 요법은 활성화된 천연 살해 세포인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
12. 제1항에 있어서, 상기 암 요법은 조사 요법인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
13. 제1항에 있어서, 상기 암 요법은 화학요법인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
14. 제1항에 있어서, 상기 암 요법은 암 세포-표적화 항체를 포함하는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
15. 제1항에 있어서, 상기 CD24 단백질은 성숙한 인간 CD24 또는 이의 변이체를 포함하는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 성숙한 인간 CD24는 서열번호: 1 또는 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD24 단백질은 단백질 태그를 추가로 포함하고 여기서 상기 단백질 태그는 CD24 단백질의 N-말단 또는 C-말단에 융합되는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
18. 제17항에 있어서, 상기 단백질 태그는 포유동물 면역글로불린 (Ig) 단백질의 일부분을 포함하는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
19. 제18항에 있어서, 상기 Ig 부분은 인간 Ig 단백질의 Fc 영역인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
20. 제19항에 있어서, 상기 Fc 영역은 인간 Ig 단백질의 힌지 영역 및 CH2 및 CH3 도메인을 포함하고 여기서 Ig는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 및 IgA로 구성된 군으로부터 선택된, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
21. 제18항에 있어서, 상기 Fc 영역은 IgM의 힌지 영역 및 CH2, CH3 및 CH4 도메인을 포함하는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
22. 제20항에 있어서, 상기 CD24 단백질의 서열은 서열번호: 6, 11, 또는 12에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
23. 제1항에 있어서, 상기 CD24 단백질은 진핵 단백질 발현 시스템을 사용하여 생산되는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
24. 제23항에 있어서, 상기 발현 시스템은 차이니즈 햄스터 난소 세포주에 함유된 벡터 또는 복제-결함있는 레트로바이러스 벡터를 포함하는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
25. 제24항에 있어서, 상기 복제-결함있는 레트로바이러스 벡터는 진핵 세포의 게놈 안으로 안정적으로 통합되는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
26. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 설사 또는 또 다른 위장 장애인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
27. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 순수 적혈구 무형성증인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
28. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 소적혈구성 빈혈인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
29. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 낭창인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
30. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 자가면역 신염인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
31. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 자가면역 간염인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
32. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 폐렴인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
33. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 심장병 예컨대 심근염 및 심막염인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
34. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 내분비병증인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
35. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 애디슨병인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
36. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 생식샘기능저하증인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
37. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 쇼그렌 증후군인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
38. 제1항에 있어서, 상기 irAE는 제1형 당뇨병인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD24 단백질은 가용성인, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.
40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD24 단백질은 당화되는, 치료에 사용하기 위한 CD24 단백질.

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