EA034176B1 - РАСТВОРИМЫЙ Fc-ГАММА РЕЦЕПТОР ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММУННЫХ БУЛЛЕЗНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ - Google Patents

Abstract

Изобретение, в целом, относится к области биотехнологии и медицины. Оно предлагает средство, фармацевтическую композицию и набор для лечения аутоиммунных буллезных заболеваний (AMDB). Более конкретно, изобретение относится к применению растворимого Fc-гамма рецептора для лечения AMDB, а также фармацевтической композиции и набора, содержащих указанный рецептор. Оно дополнительно предусматривает способ лечения AMDB.

Description

Область изобретения

Настоящее изобретение в целом относится к области биотехнологии и медицины. Оно предлагает средство, фармацевтическую композицию и набор для лечения аутоиммунных буллезных заболеваний (AMDB). Более конкретно, настоящее изобретение относится к применению растворимых Fc-гамма рецепторов для лечения AMDB, а также к фармацевтической композиции и набору, содержащим данный рецептор. Оно дополнительно предусматривает способ лечения AMDB.

Предпосылки создания изобретения

Кожа, часто называемая наиболее крупным органом организма человека, служит в качестве водонепроницаемого, теплоизолирующего покрова, защищающего организм от экстремальных значений температуры, повреждающего солнечного света, вредных химических веществ и патогенов. Она помогает регулировать температуру тела и испарение, а также служит огромным сенсором, заполненным нервами, для восприятия и передачи внешних стимулов. Кожа состоит из двух главных слоев. Наружный представляет собой эпидермис, который состоит в основном из высокоорганизованных кератиноцитов. Сложные межклеточные контакты (десмосомы) соединяют между собой кератиноциты, которые секретируют кератины и липиды, образующие внеклеточный матрикс, обеспечивающий механическую прочность кожи. Эпидермис связан с более глубоким слоем кожи, известным как дерма, который состоит из соединительной ткани и придает коже прочность на разрыв и эластичность благодаря внеклеточному матриксу, состоящему из фибрилл коллагена, микрофибрилл и эластичных волокон, окруженных протеогликанами. Эпидермис и дерма разделены тонким слоем, называемым базальной мембраной. Дермоэпидермальное соединение (DEJ) представляет собой участок кожи, который соединяет эпидермальный и дермальный слои кожи.

Аутоиммунные буллезные заболевания (AMDB) представляют собой группу нарушений со стороны кожи, которые главным образом поражают кожу и слизистые оболочки. При AMDB иммунная система хозяина разрушает молекулы межклеточной адгезии или компоненты базальной мембраны в поверхностных слоях кожи и слизистых оболочек, что обычно приводит к образованию пузырей. Поскольку неповрежденная кожа является жизненно необходимой для защиты организма от обезвоживания и инфекций, AMDB часто связывают с высоким уровнем смертности, и они могут являться опасными для жизни.

AMDB можно разделить на четыре основные группы. Интраэпидермальные пузырчатки (группа пузырчатки) характеризуются потерей межклеточных соединений, таких как десмосомы, накоплением иммуномедиаторов в межклеточных контактах кератиноцитов и образованием интраэпидермальных пузырчаток, вызванных в результате нарушения адгезии между клетками. Обычные интраэпидермальные аутоиммунные пузырчатки включают обыкновенную пузырчатку (PV) и листовидную пузырчатку (PF). Остальные заболевания характеризуются образованием субэпидермальных пузырей, вызванных нарушением адгезии между клетками и матриксом, а также накоплением аутоиммунных антител в месте дермоэпидермального соединения (DEJ). Пемфигоидная группа включает буллезный пемфигоид (BP), пемфигоид слизистых оболочек (MMP), гестационный пемфигоид, пемфигоид слизистых оболочек и линейный IgA-зависимый дерматоз. Иногда считается, что пемфигоидный плоский лишай представляет собой редкий вариант BP. Две другие группы включают приобретенный буллезный эпидермолиз (EBA) и герпетиформный дерматит (Mihai and Sitaru, 2007). Буллезная системная красная волчанка (BSLE) представляет собой генерализованную субэпидермальную пузырчатку, встречающуюся у пациентов с системной красной волчанкой.

Разрушение структурных элементов в коже, приводящее к формированию типичных пузырей при AMDB, объясняли, главным образом, наличием аутореактивных антител. Кроме того, считалось, что система комплемента и аутореактивные T-клетки вовлечены в патогенез AMDB (Liu and Rubinstein (2008)). Большую часть AMDB ассоциируют с тканевыми антителами и циркулирующими аутореактивными антителами класса IgG, которые, как правило, взаимодействуют посредством своих Fc-областей с факторами врожденной иммунной системы, такими как система комплемента и клетки воспаления, и запускают последующие сигнальные каскады, что в итоге приводит к разрушению тканей (Sitaru et al., 2007). Fcгамма рецепторы (FcyR) при AMDB играют ключевую роль в опосредовании эффекторных функций аутореактивных антител класса IgG.

FcyR относятся к семейству Fc-рецепторов (FcR), которые являются крайне важными для защиты организма человека от инфекций. В целом, необходимо выделить активацию FcyR и ингибирование FcyR. Среди трех главных FcyR у людей, FcyRI способны связываться с мономерным IgG, в то время как FcyRII и FcyRIII связываются с поливалентными иммунными комплексами (IC), состоящими из антител и антигенов (Takai (2002)). Эффекторные функции, инициированные FcyR, включают, в зависимости от типа экспрессируемого FcR и связанных белков, эндоцитоз с последующей нейтрализацией патогенов и презентацией антигена, антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC), секрецию медиаторов или регуляцию выработки антител (Fridman et al. (1992), van de Winkel and Capel (1993)).

Одним примером непрогнозированной эффективности терапии является ритуксимаб. Антитело распознает антиген CD20, который экспрессируется исключительно на B-клетках. После связывания с мишенью ритуксимаб опосредует цитолиз B-клеток при помощи иммунной системы. Ритуксимаб разрабатывали для лечения B-клеточной лимфомы, но с тех пор его также использовали для лечения аутоим

- 1 034176 мунных заболеваний с участием B-клеток, известных в качестве продуцентов патогенных аутоиммуных антител. Врач, хорошо ориентирующийся в лечении аутоиммунных заболеваний, определенно бы посчитал ассоциированные с ITP, SLE или ANCA васкулиты такими, которые поддаются лечению с помощью ритуксимаба в связи с значительными уровнями аутоиммунных антител при данных заболеваниях. Однако эффективность лечения SLE, которая характеризуется высокими уровнями аутоиммунных антител, не была продемонстрирована в двух клинических исследованиях (Coca and Sanz (2009)). Подобным образом, при ассоциированном с ANCA васкулите только две трети пациентов в достаточной степени реагируют на лечение ритуксимабом (Stone (2010)), в том время как при ITP не реагируют 60% (Patel (2010)). С другой стороны, ритуксимаб способен демонстрировать эффективность при множественном склерозе (Hauser (2008)) и диабете I типа (Pescowitz (2009)), при этом оба заболевания не превосходят по значительным уровням антител.

К настоящему моменту традиционное лечение AMDB обычно включает иммунодепрессанты и противовоспалительные средства, часто в больших дозах, а также лечение повреждений кожи. К сожалению, множество лекарственных средств, используемых для лечения данного заболевания, имеют серьезные побочные эффекты, и пациентов необходимо подвергать тщательному мониторингу на наличие инфекции, нарушений функций почек и легких, нарушений электролитного баланса, гипертонии, диабета, анемии и кровотечения в желудочно-кишечном тракте (Mutasim (2007)).

Таким образом, техническую проблему, лежащую в основе настоящего изобретения, можно рассматривать с точки зрения предоставления альтернативных средств и способа лечения AMDB.

Краткое описание изобретения

Авторы настоящего изобретения, к немалому их удивлению выявили, что растворимый Fc-гамма рецептор (sFcyR) уменьшил степень тяжести заболевания и уровень циркулирующих аутореактивных антител в мышиных моделях AMDB in vivo. Кроме того, sFcyR значительно уменьшил высвобождение ROS, индуцируемое IgG, из нейтрофилов и замедлил разделение дермы и эпидермиса - которое, как считают, играет решающую роль в образовании обычной пузырчатки - при проведении пересадок кожи, обработанной аутоиммуными антителами. Таким образом, исходя из результатов, предоставленных авторами настоящего изобретения, которые показаны в прилагающихся примерах и проиллюстрированы при помощи чертежей, sFcyR сохраняют значительный потенциал в качестве средства для лечения множества аутоиммунных буллезных заболеваний.

Ввиду крайне сложных и выраженных явлений, вовлеченных в возникновение и прогрессирование AMDB, и частично нестабильных выявленных эффектов, о которых сообщалось в различных исследованиях в отношении лечения аутоиммунных заболеваний с помощью sFc терапевтический потенциал лечения AMDB с помощью sFcyR невозможно было четко прогнозировать, и он не был спрогнозирован. В действительности, хотя лечение с помощью sFcyR являлось целесообразным для лечения ITP, SLE, MS, что было показано в доклинических и клинических исследованиях, на основании этого нельзя сделать заключение о том, что лечение других аутоиммунных заболеваний также было бы эффективным. Скорее, каждое аутоиммунное заболевание обладает своими собственными отличительными свойствами и каждое является отличающимся, таким образом они являются несопоставимыми, и нельзя сделать заключение о том, что успешное лечение одного аутоиммунного заболевания, включающего накопление в тканях иммунных комплексов (IC), может также способствовать лечению другого аутоиммунного заболевания, также включающего накопление IC. На самом деле включение не означает, что различные IC являются единственными причинными факторами аутоиммунного заболевания, поскольку существует множество других факторов, и, таким образом, до сих пор еще не было обнаружено ни одного общего причинного фактора аутоиммунного заболевания, в которое вовлечены разные IC. По сути, единой общей предпосылкой у аутоиммунных заболеваний, таких как заболевания, в которые вовлечены разные IC, является то, что иммунная система реагирует против структур собственного организма. Системное лечение, предполагаемое для ингибирования активации комплексов IC, заключается в блокировке Fc-рецепторов иммунных клеток посредством антитела, как предложено в EC1870422. Однако не ожидали, что связывание различных sFcyR с Fc-областью аутоиммунных антител, вовлеченных в разные IC, в результате приведет к благоприятному эффекту в лечении AMDB. Не вдаваясь в теорию, считается, что sFcyR конкурируют с мембранными FcyR разных IC. В результате конкуренции активация иммунного ответа посредством системы мембранных FcyR снижается. Не предполагали, что данный предложенный механизм действия является настолько эффективным, как было выявлено in vitro и в мышиной модели. Следовательно, полной неожиданностью явилось то, что sFcyR принимают участие в лечение AMDB.

Соответственно в первом аспекте настоящее изобретение относится к применению растворимого Fc-гамма рецептора человека для лечения у субъекта аутоиммунных буллезных заболеваний, где рецептор состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или 11. Указанным субъектом предпочтительно является млекопитающее, такое как человек, собака, лошадь, кошка, овца, крупный рогатый скот, корова, кролик, крыса или мышь, причем предпочтительным является человек. Рассматривается возможность применения растворимого Fc-гамма рецептора в лечении заболеваний, выбранных из группы, включающей буллезный пемфигоид (BP) и приобретенный буллезный эпидермолиз (EBA). Несмотря на то что авторы настоящего изобретения в теории предполагали о применении растворимого FcRIIB

- 2 034176 человека в лечении пемфигоидных заболеваний (Clinical Presentation, Pathogenesis, Diagnosis, and Treatment of Epidermolysis Bullosa Acquisita, Ralf J. Ludwig, ISRN Dermatology Volume 2013), было неожиданным обнаружить, что низкие концентрации растворимого FcRIIB человека уменьшали тяжесть симптомов заболевания in vivo. Влияние низких концентраций растворимого FcRIIB человека является неожиданным, поскольку специалист в данной области предположил бы, что необходимо применить, по меньшей мере, эквимолярное количество растворимого FcRIIB человека для того, чтобы он был способен блокировать связывание патогенных иммунных комплексов через Fc-участок IgG различных IC, что было бы необходимо для остановки формирования пузырей, стимулируемого аутоиммунными антителами при пемфигоидных заболеваниях. Второй аспект, который отделяет пемфигоидные заболевания от заболеваний, где применяли растворимый FcR, представляет собой изоляцию патогенной реакции, которая строго локализована в тканях кожи. Также до настоящего изобретения не было спрогнозировано или известно, что растворимый FcR был способен вызывать какой-либо эффект в определенном слое кожи. Таким образом, специалист в данной области мог сделать предположение о применении растворимого FcR в лечении аутоиммунных пемфигоидных заболеваний, однако благоприятный эффект низких концентраций растворимого FcgR в отношении течения заболевания является неожиданным. До сих пор растворимый FcRIIB человека успешно применяли в лечении аутоиммунных заболеваний, в которых присутствуют иммунные комплексы, при этом они встречаются в крови, но не в таком компартменте, как кожа. Следовательно, специалист в данной области не мог ожидать неожиданных результатов и успеха, полученных авторами настоящего изобретения. Третий аспект, проводящий различие между настоящим изобретением и обзорной статьей Ludwig в ISRN Dermatology Volume 2013, представляет собой тот факт, что в обзоре не все ясно в отношении роли FcRIIB в этиологии пемфигоидных заболеваний. В частности, данный обзор ссылается на публикацию Yu et al. (J. Inv. Dermatol. 2010, Vol. 130, No. 12, 2841-2844), в которой сообщают, что FcRIIA и FcRIIIB играют важную роль в разрушении ткани при пемфигоидных заболеваниях у человека. Данный обзор также ссылается на публикацию Kasperkiewicz et al. (J. Pathol. (2012), Vol. 228, No. 1, 8-19), в которой отмечена важная роль FcRIV в разрушении ткани при пемфигоидных заболеваниях у человека. В целом, в данном обзоре упоминается не менее трех FcR, которые играют роль в течение пемфигоидного заболевания, при этом не ожидали, что применение растворимого FcRIIB имеет практическую значимость в лечении пемфигоидных заболеваний, поскольку растворимый вариант какого-либо из других трех FcR, как указано в обзоре, мог бы стать перспективным средством для борьбы с пемфигоидными заболеваниями.

Fc-гамма рецепторы встречаются в разных изоформах. В соответствии с настоящим изобретением растворимый Fc-гамма рецептор может представлять собой Fc-гамма RIIA, Fc-гамма RIIB, Fc-гамма RIIIA или Fc-гамма RIIIB. Однако в одном предпочтительном варианте осуществления растворимый Fcгамма рецептор представляет собой Fc-гамма RIIB.

Растворимый Fc-гамма рецептор является растворимым Fc-гамма рецептором человеческого происхождения. Он может содержать аминокислотную последовательность, выбранную из группы, включающей SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 11. Вышеупомянутые аминокислотные последовательности кодируются нуклеотидными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 2 и 12 соответственно. Данные нуклеотидные последовательности предпочтительно можно применять для выработки как синтетическим путем, так и с помощью системы вектор и клетка-хозяин, как описано в данном документе, какого-либо из sFcyR, раскрытых в данном документе, в частности имеющих аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 11 соответственно.

Последовательности, относящиеся к настоящей заявке, показаны ниже.

SEQ ID NO: 1 (SM101)

MAPPKAVLKL EPQWINVLQE DSVTLTCRGT HSPESDSIQW FHNGNLIPTH TQPSYRFKAN NNDSGEYTCQ TGQTSLSDPV HLTVLSEWLV LQTPHLEFQE GETIVLRCHS WKDKPLVKVT FFQNGKSKKF SRSDPNFSIP QANHSHSGDY HCTGNIGYTL YSSKPVTITV QAPSSSP

В аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 1, остаток М (метионина) в положении 1 (то есть в начале аминокислотной последовательности) может отсутствовать. Этот вариант аминокислотной последовательности раскрыт в данном документе под SEQ ID NO: 11.

SEQ ID NO: 2 (SM101, кДНК)

ATGGCACCGC CGAAAGCAGT TCTGAAACTG GAACCGCAGT GGATTAACGT TCTGCAGGAA

GATAGCGTTA CCCTGACCTG TCGTGGCACC CATAGCCCGG AAAGCGATAG CATTCAGTGG

121 TTTCACAACG GCAATCTGAT TCCGACCCAT ACCCAGCCGA GCTATCGTTT TAAAGCGAAC 181 AACAACGATA GCGGCGAATA TACCTGTCAG ACCGGTCAGA CCAGCCTGAG CGATCCGGTT 241 CATCTGACCG TTCTGAGCGA ATGGCTGGTT CTGCAGACCC CGCATCTGGA ATTTCAGGAA 301 GGCGAAACCA TTGTTCTGCG TTGCCACAGC TGGAAAGATA AACCGCTGGT TAAAGTTACC 361 TTCTTCCAGA ACGGCAAAAG CAAAAAATTC AGCCGTAGCG ATCCGAATTT TAGCATTCCG 421 CAGGCGAATC ATAGCCATAG CGGCGATTAT CATTGTACCG GCAACATTGG CTATACCCTG 481 TATAGCAGCA AACCGGTGAC CATTACCGTT CAGGCGCCGA GCAGCAGCCC GTAA

SEQ ID NO: 3 (FcyRIIB человека)

- 3 034176

MGTPAAPPKA VLKLEPQWIN VLQEDSVTLT CRGTHSPESD SIQWFHNGNL IPTHTQPSYR FKANNNDSGE YTCQTGQTSL SDPVHLTVLS EWLVLQTPHL EFQEGETIVL RCHSWKDKPL VKVTFFQNGK SKKFSRSDPN FSIPQANHSH SGDYHCTGNI GYTLYSSKPV TITVQAPSSS P

SEQ ID NO: 4 (FeyRIIB человека, кДНК) atggggacac ctgcagctcc cccaaaggct gtgctgaaac tcgagcccca gtggatcaac gtgctccagg aggactctgt gactctgaca tgccggggga ctcacagccc tgagagcgac

121 tccattcagt ggttccacaa tgggaatctc attcccaccc acacgcagcc cagctacagg

181 ttcaaggcca acaacaatga cagcggggag tacacgtgcc agactggcca gaccagcctc

241 agcgaccctg tgcatctgac tgtgctttct gagtggctgg tgctccagac ccctcacctg

301 gagttccagg agggagaaac catcgtgctg aggtgccaca gctggaagga caagcctctg

361 gtcaaggtca cattcttcca gaatggaaaa tccaagaaat tttcccgttc ggatcccaac

421 ttctccatcc cacaagcaaa ccacagtcac agtggtgatt accactgcac aggaaacata

481 ggctacacgc tgtactcatc caagcctgtg accatcactg tccaagctcc cagctcttca

541 ccg

SEQ ID NO: 5 (FeyRIIA человека)

MGTPAAPPKA VLKLEPPWIN VLQEDSVTLT CQGARSPESD SIQWFHNGNL IPTHTQPSYR FKANNNDSGE YTCQTGQTSL SDPVHLTVLS EWLVLQTPHL EFQEGETIML RCHSWKDKPL VKVTFFQNGK SQKFSHLDPT FSIPQANHSH SGDYHCTGNI GYTLFSSKPV TITVQVPSMG SSSP

SEQ ID NO: 6 (FeyRIIA человека, кДНК) atggggacac ctgcagctcc cccaaaggct gtgctgaaac ttgagccccc gtggatcaac gtgctccagg aggactctgt gactctgaca tgccaggggg ctcgcagccc tgagagcgac

121 tccattcagt ggttccacaa tgggaatctc attcccaccc acacgcagcc cagctacagg

181 ttcaaggcca acaacaatga cagcggggag tacacgtgcc agactggcca gaccagcctc

241 agcgaccctg tgcatctgac tgtgctttcc gaatggctgg tgctccagac ccctcacctg

301 gagttccagg agggagaaac catcatgctg aggtgccaca gctggaagga caagcctctg

361 gtcaaggtca cattcttcca gaatggaaaa tcccagaaat tctcccattt ggatcccacc

421 ttctccatcc cacaagcaaa ccacagtcac agtggtgatt accactgcac aggaaacata

481 ggctacacgc tgttctcatc caagcctgtg accatcactg tccaagtgcc cagcatgggc

541 agctcttcac caat

SEQ ID NO: 7 (FeyRIIIA человека)

MDLPKAVVFL EPQWYRVLEK DSVTLKCQGA YSPEDNSTQWF HNESLISSQA SSYFIDAATV DDSGEYRCQ TNLSTLSDPV QLEVHIGWLL LQAPRWVFKEE DPIHLRCHSW KNTALHKVTY LQNGKGRKY FHHNSDFYIP KATLKDSGSY FCRGLVGSKNV SSETVNITIT QGLSVSTISS F

SEQ ID NO: 8 (FeyRIIIA человека, кДНК) atggatctcccaa aggctgtggt gttcctggag cctcaatggt acagggtgct cgagaaggac agtgtgactc tgaagtgcca gggagcctac tcccctgagg acaattccac acagtggttt

121 cacaatgaga gcctcatctc aagccaggcc tcgagctact tcattgacgc tgccacagtt

181 gacgacagtg gagagtacag gtgccagaca aacctctcca ccctcagtga cccggtgcag

241 ctagaagtcc atatcggctg gctgttgctc caggcccctc ggtgggtgtt caaggaggaa

301 gaccctattc acctgaggtg tcacagctgg aagaacactg ctctgcataa ggtcacatat

361 ttacagaatg gcaaaggcag gaagtatttt catcataatt ctgacttcta cattccaaaa

421 gccacactca aagacagcgg ctcctacttc tgcagggggc ttgttgggag taaaaatgtg

481 tcttcagaga ctgtgaacat caccatcact caaggtttgt cagtgtcaac catctcatca

541 ttc

SEQ ID NO: 9 (FeyRIIIB человека)

MDLPKAVVFLE PQWYSVLEKD SVTLKCQGAY SPEDNSTQWF HNENLISSQA SSYFIDAATV NDSGEYRCQT NLSTLSDPVQ LEVHIGWLLL QAPRWVFKEE DPIHLRCHSW KNTALHKVTY LQNGKDRKYF HHNSDFHIPK ATLKDSGSYF CRGLVGSKNV SSETVNITIT QGLAVSTISS F

SEQ ID NO: 10 (FeyRIIIB человека, кДНК) atggatctcc caaaggctgt ggtgttcctg gagcctcaat ggtacagcgt gcttgagaag gacagtgtga ctctgaagtg ccagggagcc tactcccctg aggacaattc cacacagtgg

121 tttcacaatg agaacctcat ctcaagccag gcctcgagct acttcattga cgctgccaca

181 gtcaacgaca gtggagagta caggtgccag acaaacctct ccaccctcag tgacccggtg

241 cagctagaag tccatatcgg ctggctgttg ctccaggccc ctcggtgggt gttcaaggag

301 gaagacccta ttcacctgag gtgtcacagc tggaagaaca ctgctctgca taaggtcaca

361 tatttacaga atggcaaaga caggaagtat tttcatcata attctgactt ccacattcca

421 aaagccacac tcaaagatag cggctcctac ttctgcaggg ggcttgttgg gagtaaaaat

481 gtgtcttcag agactgtgaa catcaccatc actcaaggtt tggcagtgtc aaccatctca

541 tcattc

SEQ ID NO: 11 (отличающийся SM101)

APPKAVLKL EPQWINVLQE DSVTLTCRGT HSPESDSIQW FHNGNLIPTH

TQPSYRFKAN NNDSGEYTCQ TGQTSLSDPV HLTVLSEWLV LQTPHLEFQE GETIVLRCHS WKDKPLVKVT FFQNGKSKKF SRSDPNFSIP QANHSHSGDY HCTGNIGYTL YSSKPVTITV QAPSSSP

В аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 1, остаток М (метионина) в положении 1 (то есть в начале аминокислотной последовательности) может отсутствовать. Этот вариант аминокислотной последовательности раскрыт в данном документе под SEQ ID NO: 11 и представляет собой предпочтительную аминокислотную последовательность по настоящему изобретению.

SEQ ID NO: 12 (вариант SM101, кДНК)

- 4 034176

GCACCGC CGAAAGCAGT TCTGAAACTG GAACCGCAGT GGATTAACGT TCTGCAGGAAGAT 61 AGCGTTA CCCTGACCTG TCGTGGCACC CATAGCCCGG AAAGCGATAG CATTCAGTGGTTT 121 CACAACG GCAATCTGAT TCCGACCCAT ACCCAGCCGA GCTATCGTTT TAAAGCGAACAAC 181 AACGATA GCGGCGAATA TACCTGTCAG ACCGGTCAGA CCAGCCTGAG CGATCCGGTTCAT 241 CTGACCG TTCTGAGCGA ATGGCTGGTT CTGCAGACCC CGCATCTGGA ATTTCAGGAAGGC 301 GAAACCA TTGTTCTGCG TTGCCACAGC TGGAAAGATA AACCGCTGGT TAAAGTTACCTTC 361 TTCCAGA ACGGCAAAAG CAAAAAATTC AGCCGTAGCG ATCCGAATTT TAGCATTCCGCAG 421 GCGAATC ATAGCCATAG CGGCGATTAT CATTGTACCG GCAACATTGG CTATACCCTGTAT 481 AGCAGCA AACCGGTGAC CATTACCGTT CAGGCGCCGA GCAGCAGCCC GTAA.

Растворимый Fc-гамма рецептор можно вводить внутривенно или внутрикожно.

Дополнительно предполагается, что растворимый Fc-гамма рецептор можно вводить периодично.

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество растворимого Fc-гамма рецептора, для лечения аутоиммунных буллезных заболеваний, где рецептор состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или 11. Указанная фармацевтическая композиция может дополнительно необязательно содержать противовоспалительные средства, иммунодепрессанты и/или антитело к CD20 вместе с фармацевтически приемлемыми носителем или разбавителем.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает набор, содержащий растворимый Fc-гамма рецептор, для лечения аутоиммунных буллезных заболеваний, причем указанный набор может содержать одно или более из противовоспалительных средств, иммунодепрессантов и/или антитела к CD20 вместе с фармацевтически приемлемыми носителем или разбавителем, где рецептор состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или 11.

В еще одном дополнительном аспекте настоящее изобретение также относится к способу лечения у нуждающегося в этом субъекта аутоиммунных буллезных заболеваний, который предусматривает стадию введения указанному субъекту терапевтически эффективного количества растворимого Fc-гамма рецептора человека, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или 11.

В другом аспекте настоящее изобретение также относится к применению растворимого Fc-гамма рецептора для получения фармацевтической композиции для лечения у субъекта аутоиммунных буллезных заболеваний.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению растворимого Fc-гамма рецептора человека для лечения у субъекта аутоиммунных буллезных заболеваний, где рецептор состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или 11.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 - формирование IC индуцировали путем инкубации IgG человека в 96-луночных микропланшетах. После промывания нейтрофилы человека добавляли в присутствии или в отсутствие sCD32. Активацию нейтрофилов анализировали путем измерения выработки ROS. В зависимости от дозировки sCD32 (SM101) ингибировал выработку ROS нейтрофилами, активированными IC. Данные основаны на 5 экспериментах на группу (*p<0,05, ANOVA) и выражены как среднее значение ± SEM.

Фиг. 2 - криосрезы нормальной кожи человека инкубировали с сывороткой крови от пациентов с буллезным пемфигоидом. Затем добавляли лейкоциты от здоровых доноров крови. Это вызывало разделение дермы и эпидермиса в отсутствие sCD32 (SM101). В присутствии sCD32 (SM101) индуцированное аутоиммунным антителом, зависимое от лейкоцитов разделение дермы и эпидермиса существенно замедлялось. Данные основаны на 21 эксперименте на группу (*p<0,05, ANOVA) и выражены как среднее значение ± SEM.

Фиг. 3A - экспериментальный EBA вызывали у мышей SJL/J путем иммунизации с помощью vWFA2. После того как у отдельных мышей 2% или более площади поверхности их тела имели повреждения кожи, их распределили в группы лечения с помощью sCD32 (SM101) или с помощью PBS. В левой панели неделя 0 указывает на время начала лечения и тяжесть клинического заболевания по отношению ко времени включения в фазу лечения (0 неделя). В сравнении с мышами, которым вводили PBS, лечение с помощью sCD32 (SM101) приводило к значительно более низкой тяжести протекания клинического заболевания. Данные основаны на 13 мышах на группу в целом (*p<0,05, t-тест) и выражены как среднее значение ± SEM. В момент назначения лечения (0 неделя) средние показатели тяжести заболевания не отличались (3,4±0,21% и 3,4±0,20% при лечении с помощью PBS и sCD32 (SM101) соответственно). Фиг. 3B - показано, что общая степень тяжести заболевания (AUC) была более низкой у мышей, которых лечили с помощью sCD32 (SM101) (p=0,031, t-тест). Фиг. 3C - репрезентативные клинические изображения после 4 недель с момента назначения лечения у мышей, которых лечили с помощью PBS (левая верхняя панель) и sCD32 (SM101) (правая верхняя панель).

Фиг. 4A - показатель инфильтрации кожи является значительно более низким у мышей, которых лечили с помощью sCD32 (SM101) (p<0,05, t-тест). Фиг. 3B - репрезентативные гистологические изображения свидетельствуют об уменьшении воспалительных дермальных инфильтратов у мышей, которых лечили с помощью sCD32 (SM101) (справа) в сравнении с PBS (слева).

Фиг. 5 - антитела к vWFA2 в сыворотке крови, измеренные при помощи ELISA, в конце периода лечения. Мыши, которых лечили с помощью sCD32 (SM101), имели примерно на 20% меньше антигенспецифических аутоиммунных антител в сравнении с контрольными мышами (p=0,048; t-тест).

Фиг. 6A - уровень относительной интенсивности флуоресценции тканевого IgG, измеренный при

- 5 034176 помощи ImageJ, в конце периода лечения. У всех мышей наблюдается накопление IgG в месте DEJ при анализе с помощью прямой флуоресценции (ПИФ). Интенсивность флуоресценции не отличалась среди типов лечения. Фиг. 6B - репрезентативные изображения накоплений IgG, полученные с помощью, в конце периода лечения.

Подробное описание

Авторы настоящего изобретения неожиданно установили, что растворимый Fc-гамма RII рецептор (sCD32=SM101), в частности и предпочтительно sCD32, представляющий собой SM101, как описано в данном документе, был способен ингибировать высвобождение активных форм кислорода (ROS) из нейтрофилов, активированных in vitro иммунными комплексами (IC) с участием IgG. Кроме того, sCD32 способен замедлить разделение дермы и эпидермиса, выявляемое на криосрезах кожи человека, инкубированных с сывороткой от пациентов с буллезным пемфигоидом в присутствии мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC). Удивительно, но перспективный терапевтический потенциал sCD32 был доказан на мышиных моделях с приобретенным буллезным эпидермолизом (EBA): sCD32 в значительной степени уменьшал тяжесть клинического проявления заболевания, при этом гистологически подтвердили значительное уменьшение инфильтрации лейкоцитами дермы, а также примерно 20% уменьшение циркулирующих антиген-специфических аутоиммунных антител по сравнению с контролем. Эти перспективные результаты указывают на то, растворимые Fc-гамма рецепторы обладают значительным потенциалом для лечения аутоиммунных буллезных заболеваний.

Следовательно, в первом аспекте настоящее изобретение относится к применению растворимого Fc-гамма рецептора для использования в способе лечения аутоиммунных буллезных заболеваний.

Термин Fc-гамма рецептор используется в данном документе взаимозаменяемо c TcgR, или Fcy -рецептор, или FcyR и предусматривает как мембранные FcgR, так и растворимые FcgR. Fc-гамма рецепторы относятся к суперсемейству белков-иммуноглобулинов, и их выявили во многих ростках кроветворения. Как указывает их название, Fc-рецепторы распознают Fc (фрагмент, способный кристаллизоваться) часть антител и связываются с ней, т.е. фрагмент, соответствующий двум C-концевым доменам обеих тяжелых цепей антитела, и, как правило, взаимодействуют с эффекторными молекулами и клетками.

FcyR распознают антитела IgG. У человека существует четыре подкласса IgG, названных в порядке их концентрации в сыворотке крови (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, причем IgG1 является наиболее преобладающим типом IgG). У человека существует три класса FcyR: FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) и FcyRIIIA (CD16). Кроме того, FcyR встречаются в различных изоформах, т.е. функционально подобные Fc-гамма рецепторы, которые имеют подобную, но не идентичную аминокислотную последовательность. Указанные изоформы включают FcyRIA, B1, B2, С; FcyRIIA1-2, B1-3, C и, кроме того, несколько аллелей (FcyRIIa1-HR, -LR; FcyRIIIb-NA1,-NA2) (van de Winkel and Capel, Immunol. Today 1993, 14:215-221). Разные классы и изоформы FcyR могут отличаться в отношении их аффинности к IgG и в особенности к различным подклассам IgG. Как правило, FcyR встречаются в виде трансмембранных белков типа I или растворимых форм, но также существует заякоренная форма FcyRIII (FcyRIIIB).

Настоящее изобретение предлагает наборы и композиции, содержащие растворимые FcyR, и способы лечения AMDB. Растворимые FcyR также обозначают как sFcyR. В целом, растворимые формы какого-либо из класса, изоформу или аллель FcyR можно идентифицировать по стоящей впереди s, например sCD32, или FcyR относится к растворимому Fc-гамма-рецептору RII. Предпочтительные растворимые Fc-гамма рецепторы для способов, наборов и композиций в соответствии с настоящим изобретением представляют собой Fc-гамма RIIA, Fc-гамма RIIB, Fc-гамма RIIIA или Fc-гамма RIIIB. Однако растворимые FcyRIIB-рецепторы являются особенно предпочтительными, в частности SM101, как описано в данном документе. Таким образом, в более предпочтительном варианте осуществления, если в данном документе указывают sCD32 или sFcyRII, то подразумевают SM101.

Как правило, в отличие от мембранного (т.е. мембранносвязанного) FcyR, растворимый FcyR не содержит трансмембранный участок или внутрицитоплазматический хвост.

Предпочтительно растворимый FcyR по настоящему изобретению имеет человеческое происхождение. Выражение человеческое происхождение следует истолковывать в его наиболее широком смысле. В целом, оно означает, что sFcyR (или его участок или фрагмент) имеет сходство с человеческим sFcyR (то есть с белком, обнаруживаемым в человеческом организме) или является подобным ему по аминокислотной последовательности и/или структуре. В целом, растворимые белки и пептиды можно получить путем экстракции из тканей человека или биологических жидкостей, например из плазмы крови, путем применения фракционирования плазмы крови, способа, описанного в предшествующем уровне техники (Burnouf (2007)).

В качестве альтернативы растворимый sFcyR человеческого происхождения может быть рекомбинантным sFcyR, получен путем экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты в клетке-хозяине, например, как описано у Sondermann and Jacob (1999). Вкратце, представляющий интерес ген получают из организма и встраивают в вектор, например плазмиду или вирус, который далее используют для переноса гена в клетку-хозяина, экспрессирующую рекомбинантный ген и вырабатывающую рекомбинантный белковый продукт.

- 6 034176

Подходящие клетки-хозяева включают без ограничения прокариотические клетки (например, E. coli, B. subtilis) или эукариотические клетки, такие как клетки дрожжей (например, Saccharomyces, Pichia), клетки насекомых (например, клетки Sf9, Hi5) или клетки млекопитающих (например, COS, CHO, BHK, HEK293, VERO, HeLa, MDCK, Wi38, Swiss 3T3, NIH 3T3, PER C6, SP2/0). Специалист в данной области без труда определит, какую клетку-хозяина выбрать для того, чтобы получить sFcyR, который, например, является подходящим для получения фармацевтической композиции. Например, в некоторых вариантах осуществления может потребоваться негликозилированный sFcyR. Далее специалист в данной области может выбрать прокариотическую клетку-хозяина для экспрессий sFcyR, лишенную ферментного аппарата, требующегося для гликозилирования белка.

Термин дополнительно охватывает sFcyR, которые в сравнении с sFcyR дикого типа модифицировали или изменили по аминокислотной последовательности, и они включают в себя, например, дополнительные сайты гликозилирования и им подобные. Тем не менее, также предусмотрены негликозилированные формы sFcyR, и они являются предпочтительными вариантами осуществления sFcyR.

В предпочтительном варианте осуществления растворимый FcyR по настоящему изобретению содержит аминокислотную последовательность или же состоит из нее, соответствующую последовательности SEQ ID NO: 1 (SM101, рекомбинантный растворимый человеческий FcyRIIB), SEQ ID NO: 3 (FcyRIIB), SEQ ID NO: 5 (FcyRIIA), SEQ ID NO: 7 (FcyRIIIA), SEQ ID NO: 9 (FcyRIIIB) или SEQ ID NO: 11 (вариант SM101). Настоящее изобретение также охватывает применение растворимых FcyR, которые по меньшей мере на 90%, предпочтительно на 95% идентичны белкам с SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7 или 9. Для определения идентичности последовательности сравнение осуществляют путем выравнивания последовательностей таким образом, чтобы обеспечить максимальное соответствие аминокислот. В предпочтительном варианте осуществления растворимый человеческий рецептор представляет собой SM101 (SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 11), который представляет собой растворимый рецептор FcyRIIB.

В соответствии с настоящим изобретением FcyR применяют для лечения аутоиммунных буллезных заболеваний. Термин аутоиммунные буллезные заболевания, сокращенно AMBD, иногда также относится к аутоиммунным пузырчаткам, аутоиммунным буллезным дерматозам или аутоиммунным пузырчатым дерматозам, как используется в данном документе, представляющим собой приобретенные хронические заболевания, которые характеризуются пузырчаткой кожи и/или слизистых оболочек и обычно ассоциированы с иммунным ответом на структурные белки, которые поддерживают адгезию типа клетка-клетка и/или клетка-матрикс. В ряде исследований указали на решающую роль FcyR в аутоиммунных заболеваниях. Однако авторы настоящего изобретения первыми выявили потенциал у sFcyR для лечения AMDB, и они смогли показать, что их подход приводил к неожиданным и перспективным эффектам как в схеме с непрямым переносом сывороток пациентов с буллезным пемфигоидом (BP), так и в мышиной модели с приобретенным буллезным эпидермолизом (EBA). Аутоиммунные буллезные заболевания можно классифицировать по четырем основным группам: виды пузырчатки и виды пемфигоида, приобретенный буллезный эпидермолиз и герпетиформный дерматит. Группа пузырчатки предусматривает пузырчатки, обычно характеризующиеся формированием интрадермальных пузырей, потерей кератиноцитами адгезии типа клетка-клетка и накоплением аутоантител в межклеточных контактах кератиноцитов.

Другие заболевания обычно характеризуются субэпидермальной пузырчаткой, вызванной потерей базальными кератиноцитами связи с расположенной ниже базальной мембраной, и эти заболевания ассоциируются с накоплением иммуномедиаторов в месте дермоэпидермального соединения. Иммуномедиаторы представляют собой вещества, проявляющие иммунологическую реактивность, такие как антитела или белки системы комплемента. В частности, предусмотрено применение Fc-гамма рецептора для лечения заболевания, выбранного из группы, включающей обыкновенную пузырчатку (PV), листовидную пузырчатку (PF), буллезный пемфигоид (BP), пемфигоид слизистых оболочек (MMP), гестационный пемфигоид, пемфигоид слизистых оболочек, линейный IgA-зависимый дерматоз, пемфигоидный плоский лишай, приобретенный буллезный эпидермолиз (EBA), герпетиформный дерматит и буллезную системную красную волчанку (BSLE).

Не вдаваясь в конкретную теорию, полагают, что AMDB опосредованы аутореактивными антителами, главным образом типа IgG, которые распознают структурные элементы кожи и связываются с ними, включая десмоглеины, интегрины, коллагены типа VII и белки BP, формируя тем самым иммунные комплексы (IC). Fc-фрагменты антитела IgG, связанные в иммунных комплексах, затем могут распознаваться при помощи активауции FcyR экспрессируемых на поверхности иммунных эффекторных клеток, запускающих воспалительные и деструктивные ответы, такие как оксидантная реакция, высвобождение цитокинов и фагоцитоз макрофагами, антитело-зависимая питотоксичность (ADCC) натуральными клетками-киллерами, дегрануляция тучных клеток и высвобождение ROS из нейтрофилов. Предполагается, что sFcyR может частично проявлять свои благоприятные эффекты путем препятствования связывания мембранно-связанного FcyR, экспрессируемого на эффекторных клетках иммунной системы, с различными IC. Кроме того, это может предупреждать связывание C1q и активацию системы комплемента.

Выражение аутореактивное антитело используется в данном документе взаимозаменяемо с термином аутоиммунное антитело и описывает антитело, направленное против одного или более собст

- 7 034176 венных белков хозяина.

AMDB представляют собой объект настоящего исследования, и некоторые заболевания AMDB являются чрезвычайно редкими. Таким образом, в будущем могут быть описаны более различимые заболевания AMDB или варианты известных заболеваний AMDB. Также рассматривается лечение таких заболеваний и их вариантов.

Субъект, подлежащий лечению, предпочтительно является млекопитающим и более предпочтительно человеком.

Применимым является множество путей введения sFcyR по настоящему изобретению, включая без ограничений пероральный, местный, трансдермальный, подкожный, внутривенный, внутрибрюшинный, внутримышечный или внутриглазной. В одном предпочтительном варианте осуществления sFcyR вводят внутривенно, трансдермально, внутрикожно или подкожно. Однако при необходимости какой-либо другой путь может быть с легкостью выбран специалистом в данной области. Например, если sFcyR по настоящему изобретению предпочтительно вводят внутрикожно, то введение предпочтительно осуществляют путем инъекции, например, с помощью шприца или шприца-ручки, близко к пузырям, рядом с пузырями или совсем рядом с пузырями или какими-либо другими микроскопическими или макроскопическими видимыми признаками или симптомами пемфигоидного заболевания.

Системы для трансдермальной доставки изготавливают в виде многослойных полимерных слоев, где депо лекарственного средства или полимерная матрица с лекарственным средством расположены между двумя полимерными слоями: наружным непроницаемым защитным слоем, который предупреждает потерю лекарственного средства через защитную поверхность, и внутренним полимерным слоем, который выполняет функцию адгезива и/или мембраны, регулирующей скорость высвобождения. Системы для трансдермальной доставки лекарственного средства предусматривают разные системы, такие как резервуарные системы, микрорезервуарные системы и комбинация резервуарных и матричнодисперсных систем.

В резервуарной системе депо лекарственного средства заключено в непроницаемый защитный слой и мембрану, контролирующую скорость высвобождения. Лекарственное средство высвобождается только через мембрану, контролирующую скорость высвобождения, которая может быть микропористой или не иметь пор. В компартменте депо лекарственного средства лекарственное средство может быть в форме раствора, суспензии или геля, или может быть диспергировано в твердой полимерной матрице. На наружную поверхность полимерной мембраны можно нанести тонкий слой гипоаллергенного адгезивного полимера, совместимого с лекарственным средством. В матричных системах и системах лекарственного средства в адгезиве депо препарата формируют путем диспергирования лекарственного средства в адгезивном полимере с последующим распределением на непроницаемом защитном слое содержащего лекарственное средство полимерного адгезива путем формования окунанием в раствор или расплавления адгезива (в случае с термоплавкими адгезивами). На верхнюю часть резервуара наносят слои необработанного адгезивного полимера. В матрично-дисперсных системах лекарственное средство равномерно распределяют в гидрофильной или липофильной полимерной матрице. Этот полимерный диск, содержащий лекарственное средство, затем закрепляют на герметично закрытом основании в компартменте, изготовленном из непроницаемого для лекарственного средства защитного слоя. Вместо нанесения адгезива на поверхность депо лекарственного средства его распределяют по периферии с формированием полоски адгезивного ободка. Система для доставки лекарственного средства представляет собой комбинацию резервуарной и матрично-дисперсной систем. Депо лекарственного средства сперва формируют при помощи суспендирования лекарственного средства в водном растворе водорастворимого полимера, а затем путем однородного диспергирования раствора в липофильном полимере с образованием множества невыщелачиваемых микроскопических сфер, представляющих депо лекарственного средства. Термодинамически нестабильную дисперсию быстро стабилизируют путем непосредственного перекрестного сшивания полимера in situ. Трансдермальная технология доставки лекарственного средства представляет одну из наиболее быстро развивающихся областей доставки новых лекарственных средств. Этот рост ускоряется развитием области науки о полимерах. Полимеры применяют в трансдермальных системах доставки различными способами, включая матрицеобразующие средства, мембраны, контролирующие скорость высвобождения, чувствительные к давлению адгезивы (PSA), защитные слои или высвобождающие подложки.

Полимеры, используемые в трансдермальных системах доставки, должны обладать биологической совместимостью и химической совместимостью с лекарственным средством и другими компонентами системы, такими как вещества, способствующие проникновению, и PSA. Они также должны обеспечивать постоянную эффективную доставку лекарственного средства на протяжении предполагаемого срока годности продукта или периода доставки и должны быть признаны абсолютно безвредными.

Препараты для ректального введения могут быть составлены в виде множества форм. Жидкие медицинские растворы для ректального введения вводят с помощью клизмы. Кремы, лосьоны и мази наносят наружно или вводят внутренне с использованием аппликатора. Суппозитории могут быть получены путем смешивания терапевтического средства с воскоподобным веществом с получением полутвердой, пулевидной формы, которая плавится после введения в прямую кишку. Внутрибрюшинная инъекция или

- 8 034176

IP инъекция представляет собой инъекцию вещества в перитонеальную (брюшную полость). Дополнительная форма введения композиции по настоящему изобретению представляет собой местное нанесение, например, в форме мази или крема. Такая мазь или крем могут дополнительно содержать традиционные ингредиенты, как, например, носители или наполнители, как описано в данном документе. sFcyR можно также применять в форме аэрозольного спрея, например, для ингаляции. Также sFcyR можно добавлять в еду.

Введение sFcyR можно осуществлять однократно или может потребоваться периодичное введение, в частности, с интервалами, например, каждые 12, каждые 24, каждые 36, каждые 48, каждые 60 или каждые 72 ч. В других вариантах осуществления sFcyR можно вводить каждую неделю или каждый месяц.

Растворимые Fc-гамма рецепторы, которые применяют в соответствии с настоящим изобретением, могут быть химически модифицированы. В целом, все виды модификаций растворимого Fc-гамма рецептора относятся к настоящему изобретению до тех пор, пока они не прекращают оказывать терапевтический эффект в отношении рецептора. В контексте настоящего изобретения выражение терапевтический эффект в целом относится к требуемому или благоприятному воздействию лечения, например к уменьшению интенсивности проявлений заболевания или к ремиссии заболевания. Термин проявление заболевания используется в данном документе для описания видимого проявления заболевания и включает как клинические проявления, далее определенные как признаки заболевания, которые можно обнаружить во время физического осмотра и/или которые ощущает пациент (то есть симптомы), так и патологические проявления, подразумевающие проявления заболевания на клеточном и молекулярном уровнях.

Кроме того, терапевтический эффект, обусловленный применениями и способами, описанными в настоящем документе, поддается обнаружению при помощи всех способов и подходов, которые утверждены для проведения оценки терапевтического эффекта во время лечения AMDB. Способы мониторинга терапевтической эффективности соединения в соответствии с настоящим изобретением включают без ограничения способы, описанные Mihai and Sitaru (2007), такие как клиническое обследование пациента на наличие, количество и степень тяжести повреждений кожи, гистологическое исследование свежих пузырей путем окрашивания при помощи H&E, прямой и непрямой флуоресцентной микроскопии, и обнаружение аутореактивных циркулирующих антител с помощью иммунологических анализов, включая иммунофлуоресценцию, иммуноблоттинг, иммуноферментный твердофазный анализ (ELISA) и иммунопреципитацию. Для обнаружения тканевых аутореактивных антител можно использовать прямую флуоресцентную микроскопию, которую осуществляют после биопсии кожи, расположенной по периферии патологического очага, или нетронутой кожи, и последующей обработки при помощи, например, флуоресцентно-меченых антител к IgG.

Циркулирующие аутореактивные антитела в сыворотке крови можно обнаружить путем непрямой флуоресцентной микроскопии, выполняемой с замороженными срезами нормальных тканей, таких как пищевод обезьян, мочевой пузырь грызунов или обезьян и кожа человека. Методику можно проводить с расщепленной солью кожей, которую предварительно инкубировали в 1 М NaCl. Сыворотку крови пациента добавляют к ткани и флуоресцентно-меченые вторичные антитела добавляют для обнаружения аутореактивных антител, связавшихся с антигенами в коже.

Дополнительно или в качестве альтернативы также можно оценивать общее состояние соответствующего пациента (например, физическую форму, хорошее самочувствие), которое также поможет специалисту в данной области оценить, был ли достигнут терапевтический эффект. Специалист в данной области осведомлен о ряде других способов, подходящих для определения терапевтического эффекта соединений по настоящему изобретению.

Возможные химические модификации sFcyR включают ацилирование или ацетилирование аминоконца или амидирование или этерификацию карбоксиконца либо в качестве альтернативы и первую, и вторую. Модификации также могут воздействовать на аминогруппу в боковой цепи лизина или гидроксильную группу треонина. Другие подходящие модификации включают, например, удлинение аминогруппы с помощью полипептидных цепей различной длины (например, технология XTEN или PASylation®), N-гликозилирование, O-гликозилирование и химическую конъюгацию углеводов, таких как гидроксиэтиловый крахмал (например, HESylation®) или полисиаловая кислота (например, технология PolyXen®). Также возможны и предусмотрены такие химические модификации, как алкилирование (например, метилирование, пропилирование, бутилирование), арилирование и этерификация.

Предпочтительно, чтобы указанные модификации не уменьшали или не отменяли благоприятных свойств sFcyR, описанных в данном документе, то есть химическим модифицированные соединения по настоящему изобретению должны предпочтительно характеризоваться свойствами, аналогичными свойствам соединений, которые оценивали в прилагающихся примерах.

Также sFcyR можно применять в составе фармацевтической композиции. Таким образом, дополнительный вариант осуществления по настоящему изобретению представляет собой применение sFcyR для изготовления фармацевтической композиции для лечения AMDB. Необходимо признать, что варианты осуществления, описанные в контексте применений в sFcyR соответствии с настоящим изобретением, являются в равной степени пригодными для применений фармацевтической композиции, содержащей

- 9 034176 указанные sFcyR, с соответствующими изменениями. Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемые носитель или разбавитель. Известные per se способы получения терапевтических препаратов указаны в Forth, Henschler, Rummel (1996) Allgemeine und spezielle Pharmakologie und Toxikologie, Urban & Fischer.

Фармакологические композиции по настоящему изобретению содержат терапевтически эффективное количество FcyR и их можно составлять в различных формах, например в твердой, жидкой, газообразной или лиофилизированной формах, и они могут быть, в частности, в форме мази, крема, трансдермальных пластырей, геля, порошка, таблетки, раствора, аэрозоля, гранул, пилюль, суспензий, эмульсий, капсул, сиропов, жидкостей, эликсиров, экстрактов, настойки или жидких экстрактов, или в форме, которая является частично подходящей для местного нанесения или перорального введения.

Под терапевтически эффективным количеством подразумевают количество sFcyR, которое проявляет терапевтический эффект, описанный в данном документе. Точная величина дозы будет зависеть от цели лечения и ее определят специалисты в данной области, использующие известные методики. Как известно из уровня техники и описано выше, может быть необходимым внесение поправок на возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, взаимодействие лекарственных средств и тяжесть состояния, при этом специалист в данной области определит их путем общепринятых в уровне техники экспериментальных исследований. Например, FcyR, в частности sFcyRIIB, человека можно вводить в дозе от приблизительно 0,1 до приблизительно 100 мг/кг, например 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 мг/кг. Другие предпочтительные дозы составляют приблизительно 0,1-50, 1-10, 1-20, 1-30, 1-40, 1-50, 1-60, 1-70, 1-80, 1-90 или 1-100 мг/кг. Дополнительно предпочтительные дозы составляют приблизительно 10-100, 20-100, 30-100, 40-100 или 50-100 мг/кг.

Как описано в данном документе, пациенту можно вводить фармацевтическую композицию с фармацевтически приемлемым носителем. В конкретном варианте осуществления выражение фармацевтически приемлемый означает утвержденный регуляторным органом или другим общепризнанным органом фармаконадзора для применения у животных и, более конкретно, у людей. Таким образом, фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемые носитель или наполнитель.

Фармацевтически приемлемые носители, подходящие для составления композиции в соответствии с настоящим изобретением, содержат вещества, которые описаны ниже для композиции. Иллюстративные носители включают (биоразлагаемые) липосомы; микросферы, полученные из биоразлагаемого сополимера П,Т-молочной и гликолевой кислот (PLGA), альбуминовые микросферы; синтетические полимеры (растворимые); нановолокна, комплексы белок-ДНК; белковые конъюгаты; эритроциты или виросомы. Лекарственные формы на основе разных носителей содержат твердые липидные наночастицы (SLN), полимерные наночастицы, керамические наночастицы, гидрогелевые наночастицы, сополимеризованные белковые наночастицы, нанокристаллы и наносуспензии, нанокристаллы, нанотрубки и нанонити, функционализированные наноносители наносферы, нанокапсулы, липосомы, липидные эмульсии, липидные микротрубки/микроцилиндры, липидные микропузырьки, липосферы, липополиплексы, обращенные липидные мицеллы, дендримеры, этосомы, мультикомпозитные ультратонкие капсулы, аквасомы, фармакосомы, коллоидосомы, ниосомы, дискомы, прониосомы, микросферы, микроэмульсии и полимерные мицеллы. Другими подходящими фармацевтически приемлемыми носителями и вспомогательными веществами являются описанные среди прочих в Remington's Pharmaceutical Sciences, 15^th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991) и Bauer et al., Pharmazeutische Technologie, 5^th Ed., Govi-Verlag Frankfurt (1997).

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать одно или более дополнительных средств. Предпочтительно указанные средства являются терапевтически эффективными в лечении AMDB и более предпочтительно выбраны из группы, включающей противовоспалительные средства, иммунодепрессанты и/или антитела к CD20. Предпочтительно специалист в данной области выберет средства, которые являются терапевтически эффективными в лечении, направленном на конкретное AMDB. Терапевтические подходы для лечения разных AMDB были рассмотрены, например, в Han et al. (2009), Mutasim (2007) и Bickle and York (2002).

Противовоспалительные средства ингибируют или уменьшают воспаление, например, индуцируя выработку противовоспалительных медиаторов и/или ингибируя выработку провоспалительных медиаторов. Подходящие противовоспалительные средства для лечения AMDB включают глюкокортикоиды, например преднизон или метилпреднизолон, и антибиотики, обладающие противовоспалительным действием, такие как дапсон и тетрациклин, а также ниацинамид.

Иммунодепрессанты ингибируют или предупреждают активацию иммунной системы, например уменьшают пролиферацию лимфоцитов.

Иллюстративные иммунодепрессанты, подходящие для лечения AMDB, включают, например, азатиоприн, микофенолата мофетил (MMF), пиклофосфамид, метотрексат и циклоспорин. Специалист в данной области подтвердит, что некоторые иммунодепрессанты также можно отнести к противовоспалительным средствам и наоборот.

Иллюстративным антителом к CD20, подходящим для лечения AMDB, является ритуксимаб.

- 10 034176

Также предусматривается, что sFcyR можно использовать в составе набора. Таким образом, в дополнительном аспекте настоящее изобретение также относится к набору, содержащему sFcyR, для приме нения в способе лечения аутоиммунных буллезных заболеваний.

Набор может представлять собой набор из двух или более частей, и содержит sFcyR и необязательно фармацевтически приемлемые носитель, разбавитель или наполнитель. Компоненты набора могут содержаться в контейнере или флаконах. Необходимо отметить, что все варианты осуществления, описанные в контексте sFcyR, фармацевтическая композиция, содержащая указанный sFcyR, и способы лечения также можно применять по отношению к набору по настоящему изобретению с соответствующими изменениями. В целом, подходящими являются все носители, которые являются фармацевтически приемлемыми и обеспечивают высвобождение в необходимом месте приложения действия. Специалисту в данной области известно, какой тип носителя является подходящим в зависимости от выбранного пути введения. Например, носители в контексте, например, ректального введения представляют собой, например, многоматричные системы, в которых используются сополимеры метакриловой кислоты. Если, например, необходимым местом приложения действия является толстая кишка, a sFcyR вводят перорально, то носитель должен быть устойчивым к желудочному соку, чтобы обеспечить высвобождение sFcgR в толстом кишечнике.

Набор может дополнительно содержать одно или более средств, выбранных из группы, включающей противовоспалительные средства, иммунодепрессанты и/или антитело к CD20, вместе с фармацевтически приемлемыми носителем или разбавителем. Подходящие средства для применения в наборе были описаны в данном документе. Предусматривается, что применительно к введению FcyR средства вводят одновременно, или последовательно, или раздельно. Настоящее изобретение дополнительно охватывает введение средств посредством разных путей введения. Таким образом, подходящие средства для применения в наборе дополнительно содержат, например, составы на основе топических глюкокортикоидов для одновременного, или последовательного, или раздельного применения с вводимым внутривенно sFcyR.

Другой аспект по настоящему изобретению представляет собой способ лечения AMDB у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества растворимого Fc-гамма рецептора. Специалист в данной области подтвердит, что варианты осуществления, описанные в данном документе, в контексте sFcyR фармацевтической композиции и набора по настоящему изобретению, являются применимыми к способу лечения с соответствующими изменениями. Стадию введения sFcyR можно необязательно дополнительно объединить с одной или более стадиями лечения AMDB, при этом указанные стадии выбраны из группы с введением IVIg, проведением плазмафереза и экстракорпоральной фототерапии.

В другом аспекте настоящее изобретение также относится к применению растворимого Fc-гамма рецептора в получении фармацевтической композиции для лечения у субъекта аутоиммунных буллезных заболеваний. В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению растворимого Fcгамма рецептора для лечения у субъекта аутоиммунных буллезных заболеваний. Специалист в данной области подтвердит, что варианты осуществления, описанные в данном документе, в контексте FcyR, фармацевтической композиции и набора по настоящему изобретению, являются применимыми к данным способам лечения с соответствующими изменениями.

Также настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции для лечения у субъекта аутоиммунных буллезных заболеваний, предусматривающему смешивание растворимого Fc-гамма рецептора с фармацевтически приемлемыми носителем, разбавителем или наполнителем.

IVIg или высокодозированный внутривенный иммуноглобулин представляет собой препарат крови, который содержит объединенный в пул поливалентный IgG, выделенный из плазмы крови, полученной от более чем 1000 доноров крови, и который вводят внутривенно. Плазмаферез, как используется в данном документе, означает отбор крови у пациента, фильтрацию клеточных компонентов и их обратное введение пациенту. Экстракорпоральная фототерапия включает введение пациенту фотоактивирующего средства (например, метоксипсоралена), отбор у пациента периферической крови и воздействие на часть периферических лимфоцитов ультрафиолетовым (UV-A) светом. В дальнейшем осуществляют реинфузию крови пациенту вместе с обработанными лимфоцитами. Данные способы были рассмотрены, среди прочих, у Mutasim (2007). Специалист в данной области без труда установит, что комбинацию какого-либо из данных видов лечения с предусмотренным введением FcyR необходимо тщательно оценивать, например, относительно момента времени введения, чтобы вызвать требуемые терапевтические эффекты. Затем терапевтический эффект можно оценить, как описано в данном документе.

Точная доза sFcyR будет зависеть от цели лечения (например, поддержание ремиссии в противоположность обострению заболевания) и будет определена специалистом в данной области с использованием известных методик. Как известно из уровня техники и описано выше, может быть необходимым внесение поправок на возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, время введения, взаимодействие лекарственных средств и тяжесть состояния, при этом специалист в данной области определит их путем общепринятых в уровне техники экспериментальных исследований.

- 11 034176

Выражение лечение во всех своих грамматических формах включает терапевтическое или профилактическое лечение AMDB. Терапевтическое или профилактическое лечение предусматривает виды профилактического лечения, направленные на полное предупреждение клинических и/или патологических проявлений, или терапевтическое лечение, направленное на уменьшение интенсивности клинических и/или патологических проявлений или на ремиссию заболевания. Таким образом, выражение лечение также включает уменьшение интенсивности или предупреждение AMDB.

Лучшее понимание настоящего изобретения и его преимуществ будет получено из следующих примеров, представленных исключительно для иллюстративных целей. Примеры не предполагают ограничение объема настоящего изобретения каким-либо образом.

Примеры

Пример 1. Выработка рекомбинантного растворимого CD32.

Человеческий sCD32 (SM101) экспрессировали и очищали, как описано в других разделах (Sondermann and Jacob, 1999).

Пример 2. Получение потомства мышей с EBA.

Пример 2.1. Содержание.

Мышей SJL/J получали из The Jackson Laboratories (Бар Харбор, Мэн). Животным без ограничения выпаивали подкисленную питьевую воду и скармливали стандартный рацион, при этом в виварии Университета Любека поддерживали 12-часовой цикл чередования освещения и затемнения. Для экспериментов использовали мышей возрастом 8-10 недель. Все клинические исследования, биопсии и кровопускания проводили под анестезией с внутрибрюшинным введением смеси кетамина (100 мкг/г) и ксилазина (15 мкг/г). Эксперименты были одобрены Комитетом по содержанию и использованию лабораторных животных (Киль, Германия), и эксперименты проводил квалифицированный персонал.

Пример 2.2. Иммунизация и лечение мышей с помощью sCD32.

Иммунизацию и оценку проводили, как описано ранее (Iwata et al., 2013). Вкратце, мышей иммунизировали в подушечку стопы задней конечности с использованием 60 мкг рекомбинантного домена vWFA2 из COL7 мыши (Leineweber et al., 2011), эмульгированного в неиногенном блок-сополимерном адъюванте TiterMax (ALEXIS Biochemicals). Оценивание мышей проводили каждую неделю в отношении наличия повреждения кожи (то есть эритемы, пузырей, эрозий, участков выпадения волос и струпов). Степень тяжести заболевания выражали в виде процента площади повреждений поверхности тела, а общую тяжесть заболевания в течение периода наблюдения рассчитывали в виде площади под кривой (AUC) установленной тяжести заболевания в течение периода наблюдения. Относительный показатель тяжести заболевания рассчитывали в виде показателя тяжести заболевания на момент назначения лечения. Терапевтическое лечение при помощи sCD32 или PBS начинали с внутрибрюшинной инъекции, если 2% или более площади поверхности тела имели повреждения кожи. Каждую неделю мышам вводили 200 мкг sCD32, при этом контрольные мыши получали PBS. Сыворотку крови отбирали каждую неделю. Образцы сыворотки крови, кожи уха, кожи хвоста отбирали в заключительный день 4-недельного периода лечения и готовили для гистологического исследования и иммунофлуоресцентной (ИФ) микроскопии.

В сравнении с мышами, которым вводили PBS, лечение с помощью sCD32 приводило к значительному снижению тяжести клинического заболевания (фиг. 3A, слева, *p<0,05, t-тест). На момент включения в фазу лечения (0 неделя) средние показатели тяжести заболевания по площади пораженной поверхности тела не отличались среди групп (3,4 ± 0,21% и 3,4 ± 0,20%) при лечении с помощью PBS и sCD32 соответственно). Суммарная степень тяжести заболевания, выраженная в виде AUC, во время всего наблюдения также в значительной степени снижалась у мышей, которых лечили с помощью sCD32, в сравнении с контрольными мышами, которых лечили с помощью PBS (фиг. 3B, справа, p=0,031, t-тест). Данная степень уменьшения является похожей на ту, которую отмечали при лечении высокими дозами кортикостероидов (20 мг/кг внутрибрюшинно, ежедневно) (Hirose et al., 2013). В конце 4-недельного периода лечение у мышей, которых лечили с помощью PBS, проявлялись разлитая эритема и струпья на ушах и хвосте, а также выпадение волос вокруг глаз (фиг. 3C, слева). Напротив, отмечали менее интенсивную эритему на ушах и отсутствие поражений на хвосте или вокруг глаз у мышей, которых лечили с помощью sCD32 (фиг. 3C, справа).

Пример 3. Анализы ex vivo.

Пример 3.1. Выработка ROS.

Способность к высвобождению активных форм кислорода (ROS) аутоиммунными антителами при буллезном пемфигоиде оценивали с использованием анализов ex vivo, как сообщали ранее (Yu et al., 2010). Вкратце, для изучения выработки ROS индуцировали формирование иммунных комплексов (IC) путем инкубации 500 нг IgG человека (50 мкл ^χ 10 мкг/мл) в 96-луночных микропланшетах (Maxisorb; Nunc, Роскилле, Дания) при 4°С в течение ночи. После промывания планшета добавляли свежевыделенные нейтрофилы человека (50 мкл ^χ 10⁷ клеток/мл) в присутствии или в отсутствие 0,01, 0,1 и 0,5 мг/мл sCD32. Активацию нейтрофилов анализировали для измерения выработки ROS с помощью планшетридера (VICTOR3, PerkinElmer, Санта Клара, Калифорния).

Индуцированную IC выработку нейтрофилами ROS ингибировал sCD32 в зависимости от дозы

- 12 034176 (фиг. 1). Более подробно, по сравнению с положительным контролем 0,01, 0,1 и 0,5 мг/мл sCD32 в значительной степени уменьшали выработку ROS соответственно на 30, 65 или 75%.

Пример 3.2. Разделение дермы и эпидермиса.

Для данного исследования использовали образцы сыворотки крови от 21 пациента с буллезным пемфигоидом. Все пациенты соответствовали следующим критериям включения в фазу лечения: (i) клиническая картина пузырчатки кожи, (ii) связывание аутоиммунных антител IgG с эпидермальной стороной пузырей нормальной кожи человека, расщепленной при помощи 1 М NaCl, как показано при помощи непрямой флуоресцентной (ИФ) микроскопии, (iii) способность вступать в реакцию с NC16A в ELISA. Отрицательным контролем служила сыворотка крови от здоровых добровольцев. Перед началом всех процедур получили информированное согласие в письменной форме от всех пациентов и контрольных пациентов. Исследование было одобрено комитетом по этике Университета Любека и его проводили в соответствии с Хельсинкской Декларацией.

Ex vivo зависимое от нейтрофилов разделение дермы и эпидермиса, вызванное аутоиммунным антителом, проводили, как описано ранее (Sitaru et al., 2002). Вкратце, криосрезы нормальной кожи человека толщиной 6 мкм инкубировали с сывороткой крови пациентов с BP при 37°С в течение 1 ч. После промывания с использованием PBS срезы инкубировали со свежевыделенными лейкоцитами человека в концентрации 10 клеток/мл в присутствии или отсутствие 0,01, 0,1 и 0,5 мг/мл sCD32 при 37°С на протяжении 3 ч. Затем срезы окрашивали при помощи H&E. Эксперт, не информированный о проведении лечения пациентов, у которых отбирали срезы, в каждом срезе оценивал степень разделения дермы и эпидермиса, выраженную в виде процента эпидермиса, отделившегося от дермы.

Данное соединение замедляло FcyR-зависимое (Yu et al., 2010) разделение дермы и эпидермиса в криосрезах кожи человека, инкубированных с сывороткой крови пациентов с BP в присутствии PBMC (фиг. 2).

Пример 4. Гистологические исследования и исследование при помощи ИФ-микроскопии.

Образцы кожи ушей фиксировали в забуференном 4% формалине. Срезы толщиной 4 мкм, полученные из залитых в парафин тканей, окрашивали при помощи H&E. При слепой гистологической оценке дермальных инфильтратов им присваивали следующий балл: 0 (отсутствие инфильтратов), 1 (умеренный), 2 (средний) и 3 (тяжелый). Тканевые антитела обнаруживали при помощи прямой ИФмикроскопии замороженных срезов толщиной 6 мкм, приготовленных из тканевых биоптатов, при использовании разбавленных в 100 раз ФИТЦ-меченных антител, специфичных к IgG кролика (DakoCytomation) и C3 мыши (Cappel Organon-Teknika). Интенсивность флуоресценции в месте DEJ вычисляли при помощи ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/), используя флуоресценцию дермы для вычитания фона.

У мышей, которых лечили с помощью sCD32, проявлялось значительное уменьшение лейкоцитарной инфильтрации дермы по сравнению с мышами, которых лечили с помощью PBS (p<0,05, фиг. 4A и B).

Пример 5. Измерение уровня IgG и антител к vWFA2 в сыворотке крови.

Уровень антител к vWFA2 в сыворотке крови измеряли при помощи ELISA, как описано ранее (Iwata H. et al., 2013). Общее количество IgG измеряли при помощи набора ELISA для количественного определения IgG мыши (Bethyl Laboratories, Монтгомери, Техас) согласно инструкции производителя.

Лечение с помощью sCD32 также приводило примерно к 20% уменьшению циркулирующих антиген-специфичных аутоиммунных антител по сравнению с мышами, которых лечили с помощью PBS (фиг. 5, p=0,048; t-тест), в то время как общее количество IgG в значительной степени не отличалось (данные не представлены). В тоже время, у всех мышей проявились аналогичные накопления IgG в месте DEJ, что определили при помощи прямой иммунофлуоресценции (фиг. 6A). Репрезентативные изображения, полученные в результате ПИФ, демонстрируют накопление IgG в месте DEJ (фиг. 6B). Данное несоответствие между циркулирующими антителами и тканевыми антителами может возникать по причине разного времени полужизни (Kasperkiewicz et al., 2010).

- 13 034176

Список литературы.

Bickle, К М, Т R Roark and S Hsu. Autoimmune Bullous Dermatoses: A review. American Family Physician 2002: 1861-1870.

Bumouf, T. „Modem plasma fractionation.“ Transfusion Medicine Reviews 2007: 101117.

Collin, M und M Ehlers. „The carbohydrate switch between pathogenic and immunosuppressive antigen-specific antibodies.“ Experimental Dermatology 2013: 511-514.

Coca A, Sanz I В cell depletion in lupus and Sjogren's syndrome: an update. Current Opinions in Rheumatology 2009: 483-8.

Hauser SL et al. В-cell depletion with rituximab in relapsing-remitting multiple sclerosis. The New England Journal of Medicine 2008 :676-88.

Herd, M und D Zillikens. „Clinical and Molecular characterization of Autoimmune Bullous Diseases.“ Journal of Investigative Dermatology 2008: E19-21.

Kasperkiewicz et al., J. Pathol. (2012), Vol. 228, No. 1, 8-19

Konterman, R E. „Strategies for extended serum half-life of protein therapeutics.“ Current Opinion in Biotechnology 2011, 22 Ausg.: 868-876.

Liu, Z und D S Rubinstein. „Pathophysiology of autoimmune bullous diseases.“ The Journal of Investigative Dermatology 2008: E22-24.

Ludwig,R. J., ISRN Dermatology Volume 2013

Magnusson, S E, M Andren und К E Nilsson. „Amelioration of collagen-induced arthritis by human recombinant soluble Fc gamma RIIb.“ Clinical Immunology 2008: 225-233.

Mihai, S and C Sitaru. Immunopathology and molecular diagnosis of autoimmune bullous diseases. Journal of Cellular and Molecular Medicine 2007: 462-481.

Mutasim, D F. Therapy of autoimmune bullous diseases. Therapeutics and Clinical Risk Management 2007: 29-40.

- 14 034176

Patel VL et al. Long-term outcome following В-cell depletion therapy with rituximab in children and adults with immune thrombocytopenia. Blood2010:72.

Pescovitz MD et al. (2009) Rituximab, B-lymphocyte depletion, and preservation of beta-cell function. The New England Journal of Medicine 2009:2143-52.

Schmidt, E und R J Zillikens. „Pemphigoid diseases.“ Lancet 2013: 320-332.

Sitaru, C, S Mihai und D Zillikens. „The relevance of IgG subclass of autoantibodies for blister induction in autoimmune bullous skin disease s.“ Archives of

Dermatological Research 2007: 1-8.

Sondermann, P und U Jacob. „Human Fcgamma receptor lib expressed in Escherichia coli reveals IgG binding capability/ Biological Chemistry 1999: 717-721.

Stone JH et al. Rituximab versus cyclophosphamide for ANCA-associated vasculitis.

The New England Journal of Medicine. 2010: 221-32.

Takai, T. „Roles of Fc Receptors in Autoimmune diseases/ Nature Reviews

Immunology 2002: 580-592.

Weinblatt, Μ E, A Kavanaugh und M C Genovese. „An oral spleen tyrosine kinase (Syk) inhibitor for rheumatoid arthritis. “ The New England Journal of Medicine 2010:

1303-1312.

Werwitzke, S, D Trick und P Sondermann. „Treatment of lupus-prone NZB/NZW Fl mice with recombinant soluble Fc gamma receptor II (CD32).“ Annals of the

Rheumatic Diseases 2008: 154-161.

Yu et al. J. Inv. Dermatol. 2010, Vol. 130, No. 12, 2841-2844.

Claims (9)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Применение растворимого Fc-гамма рецептора человека для лечения у субъекта аутоиммунных буллезных заболеваний, где рецептор состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или 11.
2. 2. Способ лечения у субъекта аутоиммунных буллезных заболеваний, включающий введение субъекту растворимого Fc-гамма рецептора человека, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или 11, в дозе от 0,1 до 1,0 мг/мл.
3. 3. Способ по п.2, где субъектом является млекопитающее, предпочтительно человек.
4. 4. Способ по п.2, где рецептор вводится внутривенно или внутрикожно.
5. 5. Способ по п.2, где рецептор вводится периодично.
6. 6. Применение по п.1, где заболевание выбрано из группы, включающей буллезный пемфигоид и приобретенный буллезный эпидермолиз.
7. 7. Применение фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество растворимого Fc-гамма рецептора, для лечения аутоиммунных буллезных заболеваний, где рецептор состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или 11.
8. 8. Применение по п.7, где композиция дополнительно содержит одно или более средств, выбранных из группы, включающей противовоспалительные средства, иммунодепрессанты и/или антитело к CD20, вместе с фармацевтически приемлемыми носителем или разбавителем.
9. 9. Применение набора, содержащего растворимый Fc-гамма рецептор и одно или более средств, выбранных из группы, включающей противовоспалительные средства, иммунодепрессанты и/или антитело к CD20, вместе с фармацевтически приемлемыми носителем или разбавителем, для лечения аутоиммунных буллезных заболеваний, где рецептор состоит из аминокислотной последовательности в SEQ ID NO: 1 или 11.