KR20160045063A - 스크리닝 방법 - Google Patents

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프라이드리히 메츠거
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

본 발명은 암의 치료에 사용하기 위한 신규한 화합물을 확인하는 스크리닝 방법을 개시한다.

Description

스크리닝 방법{SCREENING METHOD}
본 발명은 암의 치료에 유용한 화합물 및 본 발명의 방법에 의해 확인된 화합물을 확인하는 스크리닝 방법에 관한 것이다.
FoxM1은 포크헤드(Forkhead) 계열의 전사 인자이다. 이는 또한 트리덴트(Trident)(마우스에서), HFH-11(인간에서), WIN 또는 INS-1(래트에서), MPP-2(부분적인 인간 cDNA) 또는 FKHL-16으로서 문헌에 공지되어 있다. 포크헤드 계열은 포크헤드로 불리는 보존된 DNA 결합 도메인 또는 익상-나선형(winged-helix) 도메인에 의해 정의된 다수의 전사 인자를 포함한다. FoxM1 유전자는 보존된 포크헤드 DNA 결합 도메인을 갖는 동종체(homologue)에 대한 프라이머를 퇴화시키는 cDNA 라이브러리를 스크리닝하여 클로닝되었다(문헌[W. Korver, J. Roose, H. Clevers, Nucleic Acids Res. 25(1997) 1715-1719]). FoxM1 유전자는 5개의 가장 가깝게 관련된 포크헤드 일원, 즉, FoxA3(HNF-3γ), FoxC1(fkh-1), FoxF2(FREAC-2), FoxK1(ILF) 및 FoxN2(HTLF)를 갖는 DNA 결합 도메인에서 45% 동일성을 나타내는 포크헤드 전사 인자 계열 일원을 암호화하는 것으로 밝혀졌다. FoxM1 C-말단 영역은 MPP-2로 명명된 221개 아미노산의 오픈 리딩 프레임을 암호화하는 인간 부분적인 cDNA와 상동성(76% 동일성)임이 밝혀졌다. MPP-2는, MPM-2-반응성 인단백질-2를 나타내고, 포스포세린-프롤린 의존 방식으로 인산화된 유사분열 단백질에서 에피토프에 특이적으로 결합하는 MPM-2 단클론 항체를 사용하여 림포블라스트-유도된 cDNA 라이브러리를 스크리닝한 후 확인되었다. FoxM1은 컨센서스 부위 TAAACA를 통해 시험관 내에서 DNA와 결합한다. 이 모티프(motif)는 포크헤드 계열의 다른 일원으로 인식된 코어 서열을 공유한다. 특히, 이러한 모티프의 반복은 교대 방향으로 종종 FoxM1에 대한 선택된 결합 서열 내에서 특징을 갖는다.
인간 FoxM1 유전자는 12p13-3 염색체 밴드(텔로머 위치)에서 대략 25 kb에 걸쳐 이어진 10-엑손 구조이다(문헌[W. Korver, J. Roose, H. Clevers, Nucleic Acids Res. 25(1997) 1715-1719]). 또한 엑손 A1(또는 래트 엑손 6) 및 A2로서 각각 지칭되는 2개의 엑손, 즉, 엑손 Va 및 VIIa는 대안적으로 스플라이싱된다(문헌[H. Ye, T.F. Kelly, U. Samadani, L. Lim, S. Rubio, D.G. Overdier, K.A. Roebuck, R.H. Costa, Mol. Cell Biol. 17(1997) 1626-1641]). 엑손 Va는 DNA 결합 도메인의 C-말단 부분 내에 15개 아미노산 삽입을 암호화하고, 임의의 다른 포크헤드 전사 인자 계열 일원에서 보이지 않는다. 엑손 VIIa는 단백질의 C-말단 내에 38개 아미노산 삽입을 나타낸다. 인간 FoxM1에서 엑손 Va 및 VIIa의 차등 스플라이싱은 다음 3가지 부류의 전사를 유발한다: 2개의 대안적 엑손을 함유하는 부류 A, 대안적 엑손을 함유하지 않는 부류 B, 및 오직 엑손 Va만을 보유하는 부류 C(문헌[H. Ye, T.F. Kelly, U. Samadani, L. Lim, S. Rubio, D.G. Overdier, K.A. Roebuck, R.H. Costa, Mol. Cell Biol. 17(1997) 1626-1641]). FoxM1B 및 FoxM1C는 둘다 전사적으로 활성인 반면, FoxM1A는 C-말단 전사촉진 도메인에서 엑손 VIIa의 삽입으로 인해 전사적으로 불활성이다. FoxM1A에서 전사촉진 도메인의 이러한 분열은 전사 불활성화를 야기할 뿐만 아니라, 이는 또한 우성-음성 변이체로서 작용하기 위해 이 변이체를 야기할 수 있지만, 기능적 전사촉진 도메인의 부재하에 정상 DNA 결합 활성을 보유하였다(문헌[H. Ye, T.F. Kelly, U. Samadani, L. Lim, S. Rubio, D.G. Overdier, K.A. Roebuck, R.H. Costa, Mol. Cell Biol. 17(1997) 1626-1641]).
FoxM1은 신경, 위장 및 재발 기원의 종양을 비롯한 광범위한 종양 유형에서 과발현된다(문헌[Bektas et al., supra; Nakamura et al., 2004, Oncogene 23: 2385-400; Pilarsky et al., 2004, Neoplasia Q: 744-50; Liu et al., 2006, Cancer Res 66: 3593-602] 참조). FoxM1의 이 발현 패턴은 세포 주기 진행에 필요한 전사활성 유전자에 대한 FoxM1의 능력에 기여한다(문헌[Wang et al.,2002, Proc Nat. Acad Sci US A 99:16881-6]). 인간 기저 세포 암종에서 발견된 FoxM1B의 증가된 핵 염색은, FoxM1이 인간 암에서 세포 분화를 위해 필요하다는 것을 시사한다(문헌[Teh et al., 2002, Cancer Res. 62: 4773-80]). 그러나, 종양 진행 및 질병 관리를 설정하거나 촉진하는 FoxM1의 구체적인 역할은 완전히 설명되지 않았다.
EP 2 298 896은 FoxM1B 단백질의 발현을 억제하는 siRNA 분자 및 종양 성장을 억제하기 위한 상기 siRNA 분자의 사용을 개시한다.
WO 2011/127297은 FoxM1 억제제를 포함하는 조성물 및 유방암의 치료를 위한 허셉틴(Herceptin)을 개시한다. 상기 억제제는 예를 들면, FoxM1 특이적 siRNA 또는 티아졸 항생제, 예컨대 티오스트렙톤이다.
본 발명이 해결하고자 하는 문제는 암의 치료를 위한 신규한 화합물을 제공하는 것이다.
제 1 양상에서, 본 발명은 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 FoxM1 유전자(스플라이싱 변형인자)의 대안적인 스플라이싱을 유도하는 화합물을 제공하고, 상기 화합물은 전사적으로 불활성인 FoxM1 변이체를 유도한다.
특정 실시양태에서 전사적으로 불활성인 FoxM1 변이체는 FoxM1A이다.
특정 실시양태에서 FoxM1 유전자는 인간 FoxM1 유전자이다.
특정 실시양태에서 암은 간, 전립선, 뇌, 유방, 폐, 결장, 췌장, 피부, 자궁 경관, 난소, 구강, 혈액 및 신경계의 암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 FoxM1 스플라이싱 변형인자는 하기 화학식 I의 화합물이다:
[화학식 I]
Figure pct00001
상기 식에서,
R1은 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클로알킬로부터 선택되되, 상기 3개의 치환기는 모두 C1 -7 알킬, C1 -7 알콕시, C1 -7 할로알콕시, C1 -7 할로알킬, 할로겐, 하이드록실, 시아노 또는 NO2로 임의적으로 치환되고;
R2는 헤테로사이클로알킬로 임의적으로 치환된 C1 -7 알콕시, NR'R", 또는 하이드록시로 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, NR'R"-C1 -7 알킬, 하이드록시-C1 -7 알킬, C3 -8 사이클로프로필, 헤테로사이클로알킬, C1 -7 알콕시-C1 -7 알킬, 하이드록시-C1-7 알콕시-C1 -7 알킬, 할로겐 또는 아자스피로사이클로알킬, 아자바이사이클로알킬, NR'R"으로 임의적으로 치환된 C2 -7 알킨일, 또는 C1 -7 알킬로 임의적으로 치환된 헤테로아릴이고;
R3은 할로겐 또는 C1 -7 알킬이고;
R' 및 R"은 독립적으로 수소, C1 -7 알킬 및 하이드록시-C1 -7 알킬로부터 선택된다.
특정 실시양태에서 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 FoxM1 스플라이싱 변형인자는, R1이 아릴 또는 헤테로아릴이되, 2개의 치환기가 C1 -7 알킬, C1 -7 할로알킬, 할로겐, C1 -7 알콕시 또는 NR'R"으로 임의적으로 치환되고, R2가 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이되, 2개의 치환기가 C1 -7 알킬, 하이드록시-C1 -7 알킬 또는 할로-C1 -7 알킬로 임의적으로 치환되고, R3이 C1 -7 알킬인 화학식 I의 화합물이다.
특정 실시양태에서 본 발명은, R1이 페닐, 이미다조[1,2-a]피라진일, 피라졸로[1,5-a]피라진일, 이미다조[1,2-a]피리딘일, 1,3-벤즈옥사졸릴 또는 인다졸릴인 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.
특정 실시양태에서 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 FoxM1 스플라이싱 변형인자는, R2가 피페리딘일, 모폴린일, 피페라진일, 피리딘일, 1,2,3,6-테트라하이드로피리딘일 또는 피롤리딘일인 화학식 I의 화합물이다.
본 발명은 암의 예방용 또는 치료용 약제의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도를 추가로 제공한다.
추가 양상에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 제형을 제공한다.
추가 양상에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 효과량으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
추가 양상에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료를 위한 화합물의 스크리닝 방법을 제공한다:
a) FoxM1 유전자를 발현하는 증식 세포를 시험 화합물과 접촉시키는 단계; 및
b) 상기 단계 a)의 세포에서 FoxM1 변이체 FoxM1A를 측정하되, 대조군과 비교하여 FoxM1A 변이체의 증가된 수준이 암의 예방 또는 치료를 위한 화합물임을 나타내는 단계.
추가 양상에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료를 위한 화합물의 스크리닝 방법을 제공한다:
a) FoxM1 유전자를 발현하는 증식 세포를 시험 화합물과 접촉시키는 단계; 및
b) 상기 단계 a)의 세포에서 FoxM1 변이체 FoxM1B 및/또는 변이체 FoxM1C를 측정하되, 대조군과 비교하여 변이체 FoxM1B 및/또는 변이체 FoxM1C의 감소된 수준이 암의 예방 또는 치료를 위한 화합물임을 나타내는 단계.
본 발명의 방법의 특정 실시양태에서 세포는 섬유아세포이다.
본 발명의 방법의 특정 실시양태에서 FoxM1 변이체는 RNA 수준에서 측정된다.
본 발명의 방법의 특정 실시양태에서 FoxM1 변이체는 단백질 수준에서 측정된다.
도 1: 섬유아세포에서 FoxM1A 쪽으로 FoxM1의 대안적인 스플라이싱의 유도. 인간 섬유아세포를 24시간 동안 상이한 용량의 화합물 1 내지 4로 항온처리하고, FoxM1A RNA(엑손 A2 함유) 및 FoxM1B/C(엑손 A2 결핍) mRNA 발현에서의 변화를 RT-qPCR로 평가하였다. 용량 반응 곡선을 힐(Hill) 결합 방정식에 일치시켜 EC50을 추정하였다. 도 1a는 FoxM1A mRNA의 상향조절을 도시하고; 도 1b는 FoxM1B/C mRNA의 하향조절을 도시하고; 도 1c는 FoxM1A 상향조절 및 FoxM1B/C 하향조절에 대한 EC50 값의 상관관계를 도시한다. 데이타는 4개의 독립적인 관찰의 평균 ± SEM을 나타낸다.
도 2: 화합물에 의한 증식 저지 및 세포 사멸의 유도. 섬유아세포에서 FoxM1A 쪽으로 FoxM1 스플라이싱을 교대로 한다. 인간 섬유아세포를 5일 동안(120시간) 상이한 용량의 화합물 1 내지 4로 항온처리하고, 세포 임피던스(세포 지수)에서의 변화를 온라인 평가하였다. 각각의 웰의 출발 값에 대한 표준화 후 델타 세포 지수로서 데이타를 나타내었다. 72, 96 및 120시간 시점에서의 데이타(화살표 참조)를 정량으로 평균내었다. 도 2a는 화합물 2의 용량 증가에 따른 섬유아세포의 성장 곡선을 도시하고, 낮은 용량은 증식을 늦추는 것으로 보이고, 1 μM 초과의 용량은 세포에 독성이라는 것에 주목한다. 도 2b는 미처리된 대조군의 %로서 나타낸 화합물 1 내지 4에 의한 세포 지수의 용량-의존 감소를 도시한다. 증식 및 세포 성장에서 중요한 영향의 농도로 정의된 75%에서 컷오프(cut-off)(EC75%, 파선)가 관찰되었다. 데이타는 4개의 독립적인 관찰의 평균 ± SEM을 나타낸다.
도 3: 섬유아세포에서 FoxM1A 쪽으로 대안적인 스플라이싱의 유도는 세포 지수에 대한 영향과 관련이 있다. 도 1 및 2에서 수득된 세포 지수에 대한 FoxM1 변이체 및 EC75%의 상향조절 또는 하향조절에 대한 EC50 값은 관련되어 있다. 도 3a는 EC75%(세포 지수)와 EC50(FoxM1B/C)의 상관관계를 도시하고, 도 3b는 EC75%(세포 지수)와 EC50(FoxM1A)의 상관관계를 도시한다. 데이타는 4개의 독립적인 관찰의 평균 ± SEM을 나타낸다.
도 4: 근아세포에서 FoxM1A 단백질의 상향조절은 세포독성과 관련이 있다. 인간 근아세포를 증식 조건하에(혈청의 존재하에) 5일 동안 화합물 3(0.1, 1 및 10 μM)으로 처리하고, FoxM1A 및 액틴 단백질 수준에 대하여 총 단백질 추출물을 SDS PAGE 및 웨스턴 블롯(Western Blot)으로 분석하였다. 도 4a는 화합물 3(0.1, 1 및 10 μM)으로 처리하거나 처리하지 않은(대조군) 샘플로부터의 FoxM1A 및 액틴 웨스턴 블롯을 도시하고; 도 4b는 액틴의 단백질 수준(세포 수 대용)을 도시하고; 도 4c는 FoxM1A의 단백질 수준을 도시하고; 도 4d는 FoxM1A/액틴 비를 도시한다. 데이타는 3개의 독립적인 관찰의 평균 ± SEM을 나타낸다. 일방향 아노바(ANOVA) 후 듀넷(Dunnet) 사후 검증에 의해 통계적 비교를 수행하였다. *, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001.
도 5: 비증식 근아세포에서 FoxM1A 단백질은 변하지 않고 세포독성은 없다. 인간 근아세포를 분화 조건하에(혈청의 부재하에) 5일 동안 화합물 3(0.1, 1 및 10 μM)으로 처리하고, FoxM1A 및 액틴 단백질 수준에 대하여 총 단백질 추출물을 SDS PAGE 및 웨스턴 블롯으로 분석하였다. 도 5a는 화합물 3(0.1, 1 및 10 μM)으로 처리하거나 처리하지 않은(대조군) 샘플로부터의 FoxM1A 및 액틴 웨스턴 블롯을 도시한다. FoxM1A 단백질이 검출불가함을 주목한다. 도 5b는 액틴의 단백질 수준을 도시한다. 데이타는 3개의 독립적인 관찰의 평균 ± SEM을 나타낸다. 일방향 아노바 후 듀넷 사후 검증에 의해 통계적 비교를 수행하였다.
도 6: 유방암 세포에서 FoxM1A 단백질의 상향조절은 세포독성과 관련이 있다. 인간 BT474 유방암 세포를 증식 조건하에(혈청의 존재하에) 1 또는 2일 동안 10 μM의 화합물 2로 처리하고, FoxM1A 및 액틴 단백질 수준에 대하여 총 단백질 추출물을 SDS PAGE 및 웨스턴 블롯으로 분석하였다. 도 6a는 화합물 2(10 μM)로 1일(연회색) 또는 2일(짙은 회색) 동안 처리하거나 처리하지 않은(대조군) 샘플로부터의 FoxM1A 및 액틴 웨스턴 블롯을 도시한다. 도 6b는 액틴의 단백질 수준(세포 수 대용)을 도시한다. 도 6c는 FoxM1A의 단백질 수준을 도시한다. 도 6d는 FoxM1A/액틴 비를 도시한다. 데이타는 3개의 독립적인 관찰의 평균 ± SEM을 나타낸다. 일방향 아노바 후 듀넷 사후 검증에 의해 통계적 비교를 수행하였다. *, p<0.05; ***, p<0.001.
용어 "FoxM1 폴리펩티드"는 임의의 동물, 예를 들면, 인간을 포함하는 포유류 종으로부터의 원생 FoxM1 폴리펩티드, 및 FoxM1 변이체를 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 인간 FoxM1A 폴리펩티드의 아미노산 서열은 서열번호 1로 주어지고, 인간 FoxM1B의 아미노산 서열은 서열번호 2로 주어지고, FoxM1C 폴리펩티드의 아미노산 서열은 서열번호 3으로 주어진다.
3개의 FoxM1 변이체의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 4(FoxM1A), 서열번호 5(FoxM1B) 및 서열번호 6(FoxM1C)으로 제시된다.
용어 "FoxM1 유전자의 스플라이싱을 변형시키는 화합물"은 전사적으로 불활성인 형태, 특히 FoxM1A가 생성되도록 FoxM1 스플라이싱을 변형시키고, 전사적으로 활성인 FoxM1 변이체, 특히 FoxM1B 및 FoxM1C의 생성을 억제함으로써 FoxM1 폴리펩티드의 전사적으로 불활성인 형태의 생성, 특히 FoxM1A 변이체의 생성을 야기하는 화합물을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다.
용어 "화합물"은 본 발명의 분석과 관련하여 기재된 "시험 화합물" 또는 "약물 후보 화합물"의 맥락에서 본원에 사용된다. 상기와 같이, 이러한 화합물은 합성적으로 또는 천연 공급원으로부터 유도된 유기 또는 무기 화합물을 포함한다. 상기 화합물은 비교적 적은 분자량을 특징으로 하는 무기 또는 유기 화합물, 예컨대, 폴리뉴클레오티드, 지질 또는 호르몬 유사체를 포함한다. 다른 생체고분자 유기 시험 화합물은 약 2 내지 약 40개의 아미노산을 포함하는 펩티드 및 약 40 내지 약 500개의 아미노산을 포함하는 큰 폴리펩티드, 예컨대, 항체 또는 항체 접합물을 포함한다.
생물학적 물질에서 폴리펩티드를 검출하고/하거나 측정하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 웨스턴 블롯팅(Western-blotting), 유동 세포계측법(Flow cytometry), ELISA 또는 RIA, 또는 다양한 프로테오믹스 기법을 포함하나 이로 제한되지 않는다. 폴리펩티드를 측정하기 위한 방법의 예는 ELISA이다. 이 유형의 단백질 정량은 특이적인 항원을 포획할 수 있는 항체, 및 포획된 항원을 검출할 수 있는 제 2 항체에 기초를 둔다. 위에 언급된 분석법은 문헌[Harlow, E. and Lane, D. Antibodies: A Laboratory Manual, (1988), Cold Spring Harbor Laboratory Press]에 기재되어 있다.
생물학적 물질에서 RNA를 검출하고/하거나 측정하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 노던 블롯팅(Northern-blotting), RNA 검출 분석, RT-PCR을 포함하나 이로 제한되지 않는다. 적합한 방법은 문헌[Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Fourth Edition) By Michael R. Green, Joseph Sambrook, Peter MacCallum ⓒ 2012, 2,028 pp, ISBN 978-1-936113-42-2]에 기재되어 있다.
용어 "본 발명의 화합물"은 FoxM1 유전자의 스플라이싱을 변형시키는 화합물, 특히 화학식 I의 화합물, 및 이의 입체이성질체, 호변이성질체, 용매화물, 및 염(예를 들면, 약학적으로 허용되는 염)을 지칭한다.
용어 "약학적으로 허용되는 염"은 생물학적으로 또는 달리 바람직한 염을 지칭한다. 약학적으로 허용되는 염은 산 및 염기 부가 염을 둘다 포함한다.
용어 "약학적으로 허용되는 산 부가 염"은 무기산, 예컨대, 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 탄산, 인산; 및 유기산의 지방족, 사이클로지방족, 방향족, 지환족, 헤테로환형, 탄소환형, 및 솔포닉 부류로부터 선택된 유기산, 예컨대, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 글루콘산, 락트산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 아스파르트산, 아스코르브산, 글루탐산, 안트라닐산, 벤조산, 신남산, 만델산, 엠본산, 페닐아세트산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 및 살리실산으로부터 선택된 유기산으로형성된 약학적으로 허용되는 염을 나타낸다.
용어 "약학적으로 허용되는 염기 부가 염"은 유기 또는 무기 염기로 형성된 약학적으로 허용되는 염을 나타낸다. 허용되는 무기 염기의 예는 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간, 및 알루미늄 염을 포함한다. 약학적으로 허용되는 유기 무독성 염기로부터 유도된 염은 1차, 2차 및 3차 아민, 천연 치환된 아민을 비롯한 치환된 아민, 환형 아민 및 염기성 이온 교환 수지, 예컨대, 이소프로필아민, 트라이메틸아민, 다이에틸아민, 트라이에틸아민, 트라이프로필아민, 에탄올아민, 2-다이에틸아미노에탄올, 트라이메타민, 다이사이클로헥실아민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 하이드라바민, 콜린, 베타인, 에틸렌다이아민, 글루코사민, 메틸글루카민, 테오브로민, 퓨린, 피페리진, 피페리딘, N-에틸피페리딘, 및 폴리아민 수지의 염을 포함한다.
용어 "알콕시"는 화학식 -O-R'(여기서, R'은 알킬 기이다)의 기를 나타낸다. 알콕시 잔기의 예는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 및 t-부톡시를 포함한다.
용어 "알콕시알킬"은 알킬 기의 하나 이상의 수소 원자가 알콜시 기로 대체되는 알킬 기를 나타낸다. 알콕시알킬 기의 예는 2-메톡시에틸, 3-메톡시프로필, 1-메틸-2-메톡시에틸, 1-(2-메톡시에틸)-3-메톡시프로필, 및 1-(2-메톡시에틸)-3-메톡시프로필을 포함한다.
용어 "알킬"은 1 내지 12개의 탄소 원자의 1가 선형 또는 분지형 포화된 탄화수소 기를 나타낸다. 특정 실시양태에서 알킬은 1 내지 7개의 탄소 원자를 갖고, 더욱 특정한 실시양태에서 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다. 알킬의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소-부틸, s-부틸, 또는 t-부틸을 포함한다.
용어 "알킨일"은 1, 2 또는 3개의 삼중 결합을 포함하는 2 내지 7개의 탄소 원자의 1가 선형 또는 분지형 포화된 탄화수소 기를 나타낸다. 특정 실시양태에서 알킨일은 1 또는 2개의 삼중 결합을 포함하는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다. 알킨일의 예는 에틴일, 프로핀일, 프로프-2-인일, 이소프로핀일, n-부틴일, 및 이소-부틴일을 포함한다.
용어 "아릴"은 6 내지 10개의 탄소 고리 원자를 포함하는 1가 방향족 탄소환형 일환형 또는 이환형 고리 시스템을 나타낸다. 아릴 잔기의 예는 페닐 및 나프틸을 포함한다.
용어 "사이클로알킬"은 3 내지 10개의 고리 탄소 원자의 1가 포화된 일환형 또는 이환형 탄화수소 기를 나타낸다. 특정 실시양태에서 사이클로알킬은 3 내지 8개의 고리 탄소 원자의 1가 포화된 일환형 탄화수소 기를 나타낸다. 이환형은 공통적으로 하나 이상의 탄소 원자를 갖는 2개의 포화된 탄소환으로 이루어진 것을 의미한다. 특정한 사이클로알킬 기는 일환형이다. 일환형 사이클로알킬의 예는 사이클로프로필, 사이클로부탄일, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 또는 사이클로헵틸이다. 이환형 사이클로알킬의 예는 바이사이클로[2.2.1]헵탄일 또는 바이사이클로[2.2.2]옥탄일이다.
용어 "할로알콕시"는 알콕시 기의 하나 이상의 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자, 특히 플루오로 원자로 대체되는 알콕시 기를 나타낸다. 할로알콕실의 예는 모노플루오로-, 다이플루오로- 또는 트라이플루오로-메톡시, -에톡시 또는 -프로폭시, 예를 들면, 3,3,3-트라이플루오로프로폭시, 2-플루오로에톡시, 2,2,2-트라이플루오로에톡시, 플루오로메톡시, 또는 트라이플루오로메톡시를 포함한다. 용어 "퍼할로알콕시"는 알콕시 기의 모든 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자로 대체되는 알콕시 기를 나타낸다.
용어 "할로알킬"은 알킬 기의 하나 이상의 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자, 특히 플루오로 원자로 대체되는 알킬 기를 나타낸다. 할로알킬의 예는 모노플루오로-, 다이플루오로- 또는 트라이플루오로-메틸, -에틸 또는 -프로필, 예를 들면, 3,3,3-트라이플루오로프로필, 2-플루오로에틸, 2,2,2-트라이플루오로에틸, 플루오로메틸, 또는 트라이플루오로메틸을 포함한다. 용어 "퍼할로알킬"은 알킬 기의 모든 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자로 대체되는 알킬 기를 나타낸다.
용어 "헤테로아릴"은 N, O 및 S로부터 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로 원자를 포함하고 나머지 고리 원자가 탄소인, 5 내지 12개의 고리 원자의 1가 방향족 헤테로환형 일환형 또는 이환형 고리 시스템을 나타낸다. 헤테로아릴 잔기의 예는 피라졸로[1,5-a]피라진일, 피롤릴, 푸란일, 티엔일, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 트라이아졸릴, 옥사다이아졸릴, 티아다이아졸릴, 테트라졸릴, 피리딘일, 피라진일, 피라졸릴, 피리다진일, 피리미딘일, 트라이아진일, 아제핀일, 다이아제핀일, 이속사졸릴, 벤조푸란일, 이소티아졸릴, 벤조티엔일, 인돌릴, 이소인돌릴, 이소벤조푸란일, 벤즈이미다졸릴, 벤즈옥사졸릴, 벤조이속사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조이소티아졸릴, 벤조옥사다이아졸릴, 벤조티아다이아졸릴, 벤조트라이아졸릴, 퓨린일, 퀴놀린일, 이소퀴놀린일, 퀴나졸린일, 또는 퀴녹살린일을 포함한다.
용어 "헤테로사이클로알킬"은 N, O 및 S로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 헤테로 원자를 포함하고 나머지 고리 원자가 탄소인, 3 내지 9개의 고리 원자의 1가 포화된 또는 부분적으로 불포화된 일환형 또는 이환형 고리 시스템을 나타낸다. 특정 실시양태에서 헤테로사이클로알킬은 N, O 및 S로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 헤테로 원자를 포함하고 나머지 고리 원자가 탄소인, 4 내지 7개의 고리 원자의 1가 포화된 일환형 고리 시스템이다. 일환형 포화된 헤테로사이클로알킬의 예는 아지리딘일, 옥시란일, 아제티딘일, 옥세탄일, 피롤리딘일, 테트라하이드로푸란일, 테트라하이드로-티엔일, 피라졸리딘일, 이미다졸리딘일, 옥사졸리딘일, 이속사졸리딘일, 티아졸리딘일, 피페리딘일, 테트라하이드로피란일, 테트라하이드로티오피란일, 피페라진일, 모폴린일, 티오모폴린일, 1,1-다이옥소-티오모폴린-4-일, 아제판일, 다이아제판일, 호모피페라진일, 또는 옥사제판일이다. 이환형 포화된 헤테로사이클로알킬의 예는 8-아자-바이사이클로[3.2.1]옥틸, 퀴누클리딘일, 8-옥사-3-아자-바이사이클로[3.2.1]옥틸, 9-아자-바이사이클로[3.3.1]논일, 3-옥사-9-아자-바이사이클로[3.3.1]논일, 또는 3-티아-9-아자-바이사이클로[3.3.1]논일이다. 부분적으로 불포화된 헤테로사이클로알킬의 예는 다이하이드로푸릴, 이미다졸린일, 다이하이드로-옥사졸릴, 테트라하이드로-피리딘일, 또는 다이하이드로피란일이다.
용어 "하이드록시알킬"은 알킬 기의 하나 이상의 수소 원자가 하이드록시 기로 대체되는 알킬 기를 나타낸다. 하이드록시알킬의 예는 하이드록시메틸, 2-하이드록시에틸, 2-하이드록시프로필, 3-하이드록시프로필, 1-(하이드록시메틸)-2-메틸프로필, 2-하이드록시부틸, 3-하이드록시부틸, 4-하이드록시부틸, 2,3-다이하이드록시프로필, 2-하이드록시-1-하이드록시메틸에틸, 2,3-다이하이드록시부틸, 3,4-다이하이드록시부틸 또는 2-(하이드록시메틸)-3-하이드록시프로필을 포함한다.
용어 "임의적인" 또는 "임의적으로"는 이후에 기재된 사건 또는 상황이 발생할 필요가 없고, 상세한 설명이 사건 또는 상황이 발생하는 경우 및 사건 또는 상황이 발생하지 않는 경우를 포함하는 것을 나타낸다.
용어 "치환된"은 명시된 기가 하나 이상의 치환기를 갖는 것을 나타낸다. 임의의 기가 다수의 치환기를 전달할 수 있고 다양한 가능한 치환기가 제공되는 경우, 상기 치환기는 독립적으로 선택되고 동일할 필요는 없다. 용어 "비치환된"은 명시된 기가 치환기를 갖지 않음을 의미한다. 용어 "임의적으로 치환된"은 명시된 기가 가능한 치환기의 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 치환되거나 비치환되는 것을 의미한다. 다수의 치환기를 나타내는 경우, 용어 "하나 이상"은 하나의 치환기로부터 가장 많은 가능한 수의 치환기, 즉, 1개의 수소의 대체로부터 치환기에 의한 모든 수소의 대체까지를 의미한다.
약학 조성물 및 투여
또 다른 실시양태는 본 발명의 화합물 및 치료적으로 불활성인 담체, 희석제 또는 부형제를 함유하는 약학 조성물 또는 약제, 뿐만 아니라 상기 조성물 및 약제를 제조하기 위한 본 발명의 화합물의 사용 방법을 제공한다. 일 예에서, 화학식 I의 화합물은 주변 온도에서 적절한 pH에서, 및 목적 순도에서 생리적으로 허용되는 담체, 즉, 생약 투여 형태로 이용되는 투여량 및 농도에서 수용체에게 무독성인 담체를 포함하여 제형화될 수 있다. 제형의 pH는 주로 특정한 용도 및 화합물의 농도에 따르지만, 바람직하게는 약 3 내지 약 8의 범위이다. 일 예에서, 화학식 I의 화합물은 pH 5에서 아세테이트 완충액으로 제형화된다. 또 다른 실시양태에서 화학식 I의 화합물은 멸균된다. 화합물은 예를 들면, 고체 또는 무정형 조성물로서, 동결건조된 제형으로서, 또는 수성 용액으로서 저장될 수 있다.
조성물은 우수한 의료 실시와 일치하는 방식으로 제형화되고 복용되고 투여된다. 이 맥락에서 고려하기 위한 인자는 치료되는 특정한 장애, 치료되는 특정한 포유동물, 개별적인 환자의 임상 상태, 장애 원인, 약제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정, 및 의사에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 투여될 화합물의 "효과량"은 상기 고려사항에 의해 승인될 것이고, FoxM1 유전자 스플라이싱을 변형시키기 위해 필요한 최소량이다. 예를 들면, 상기 양은 정상 세포, 또는 전체로서 포유동물에게 독성인 양의 미만일 수 있다.
본 발명의 화합물은 임의의 적합한 방식으로, 예컨대, 경구로, 국소로(구강 및 설하 포함함), 직장으로, 질로, 경피로, 비경구로, 피하로, 복강내로, 폐내로, 피내로, 척추강내로, 경막외로, 및 비강내로 투여될 수 있고, 국소 치료가 바람직한 경우, 병소내 투여일 수 있다. 비경구 투입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다.
본 발명의 화합물은 임의의 통상적인 투여 형태로, 예를 들면, 정제, 분말, 캡슐, 용액, 분산액, 현탁액, 시럽, 스프레이, 좌제, 젤, 에멀젼, 패치 등으로 투여될 수 있다. 상기 조성물은 약학 제제에 통상적인 성분, 예를 들면, 희석제, 담체, pH 개질제, 당의정, 벌크제, 및 추가 활성제를 함유할 수 있다.
전형적인 제형은 본 발명의 화합물을 담체 또는 부형제와 혼합하여 제조된다. 적합한 담체 및 부형제는 당업자에게 널리 공지되어 있고 예를 들면, 문헌[Ansel, Howard C., et al., Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004]; [Gennaro, Alfonso R., et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000]; 및 문헌[Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical Excipients. Chicago, Pharmaceutical Press, 2005]에 기재되어 있다. 제형은 또한 하나 이상의 완충제, 안정화제, 계면활성제, 습윤제, 윤활제, 유화제, 현탁제, 보존제, 산화방지제, 불투명화제, 활주제, 가공 보조제, 착색제, 당의정, 향미제, 방향제, 희석제 및 약물(즉, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물)의 우아한 제시를 제공하거나 약학 생성물(즉, 약제)의 제조를 돕기 위한 다른 공지된 첨가제를 포함할 수 있다.
적합한 경구 투여 형태의 예는 약 90 내지 30 mg의 무수 락토스, 약 5 내지 40 mg의 나트륨 크로스카멜로스, 약 5 내지 30 mg의 폴리비닐피롤리돈(PVP) K30, 및 약 1 내지 10 mg의 마그네슘 스테아레이트를 갖는 약 25 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg, 또는 500 mg의 본 발명의 화합물을 함유하는 정제이다. 분말화된 성분을 먼저 함께 혼합하고 이어서 PVP의 용액과 혼합하였다. 생성된 조성물을 건조하고, 과립화하고, 마그네슘 스테아레이트와 혼합하고, 통상적인 기계를 사용하여 정제 형태로 압축할 수 있다. 에어로졸 제형의 예는 예를 들면, 5 내지 400 mg의 본 발명의 화합물을 적합한 완충 용액, 예를 들면, 포스페이트 완충액에 용해하고, 필요한 경우, 긴장제, 예를 들면, 나트륨 클로라이드와 같은 염을 첨가하여 제조될 수 있다. 용액을 예를 들면, 0.2 ㎛ 필터를 사용하여 여과하여 불순물 및 오염물을 제거할 수 있다.
따라서, 실시양태는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 약학 조성물을 포함한다. 추가 실시양태에서 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약학적으로 허용되는 염을 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 포함하는 약학 조성물이 포함된다.
또 다른 실시양태는, 과증식성 질병의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 포함한다. 또 다른 실시양태는, 암의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 포함한다.
특정 실시양태에서 본 발명의 화합물로 치료된 암은 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 결장암, 위암, 시력 감퇴, 급성 단핵구성 백혈병, 유방암, 간세포 암종, 간상체-추상체 이영양증, 포상 연부 육종, 골수종, 피부 흑색종, 전립선염, 췌장염, 췌장암, 망막염, 선암종, 아데노이드 인두염, 선양 낭포 암종, 백내장, 망막 퇴화, 위장관 간질성 종양, 베게너 육아종증, 육종, 근질환, 전립선 선암종, 호지킨 림프종, 난소암, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 신 세포 암종, 이행 세포 암종, 대장암, 만성 림프구성 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 신장암, 유방암, 자궁경부암이다.
특정 실시양태에서 본 발명에 따라 예방되고/되거나 치료된 암은 기저 세포 암종, 배상 세포 변질 형성, 또는 악성 신경교종, 간, 유방, 폐, 전립선, 자궁경부, 자궁, 결장, 췌장, 신장, 위, 방광, 난소, 또는 뇌의 암이다.
특정 실시양태에서 본 발명에 따라 예방되고/되거나 치료된 암은 머리, 목, 눈, 입, 인후, 식도, 흉부, 뼈, 폐, 신장, 결장, 직장, 또는 다른 소화 기관, 위, 비장, 골격근, 피하 조직, 전립선, 유방, 난소, 고환 또는 다른 생식 기관, 피부, 갑상선, 혈액, 림프절, 신장, 간, 췌장, 및 뇌 또는 중추신경계의 암을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
본 발명에 따라 예방되고/되거나 치료될 수 있는 암의 특정한 예는 하기를 포함하지만 이로 제한되지 않는다: 신장암(renal cancer), 신장암(kidney cancer), 다형성 교아종, 전이성 유방암; 유방 암종; 유방 육종; 신경섬유종; 신경섬유종증; 소아 종양; 신경아세포종; 악성 흑색종; 표피의 암종; 백혈병, 예컨대, 비제한적으로, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 예컨대, 골수아세포성, 전골수성, 골수단구성, 단구성, 적백혈병 및 골수이형성 증후군, 만성 백혈병, 예컨대, 비제한적으로, 만성 골수성(과립성) 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 모발 세포 백혈병; 진성다혈구증; 림프종, 예컨대, 비제한적으로 호지킨병, 비호지킨병; 다발성 골수종, 예컨대, 비제한적으로 스몰더링(smoldering) 다발성 골수종, 비분비형 골수종, 골경화 골수종, 형질 세포 백혈병, 고립성 형질세포종 및 골수외 형질세포종; 발덴스트롬 마크로글로불린혈증; 의미 불명 단클론 감마글로불린장애; 양성 단클론 감마글로불린장애; 중쇄병; 골암 및 결합 조직 육종, 예컨대, 비제한적으로 골육종, 골수종 골병, 다발성 골수종, 진주종-유도성 뼈 골육종, 뼈의 파세트병, 골육종, 연골육종, 에윙 육종, 악성 거대 세포 종양, 뼈의 섬유 육종, 척색종, 골막 육종, 연조직 육종, 혈관 육종(혈관아육종), 섬유 육종, 카포시 육종, 평활근 육종, 지방 육종, 림프관 육종, 신경초종, 횡문근 육종, 및 활액막 육종; 뇌 종양, 예컨대, 비제한적으로, 신경교종, 성상세포종, 뇌간 신경교종, 뇌교종, 희돌기교신경교종, 비교질 종양, 청신경종, 두개인두종, 수모세포종, 수막종, 송과체세포종, 송과체아세포종, 및 1차 뇌 림프종; 유방암, 예컨대, 비제한적으로 선암종, 소엽성(소세포) 암종, 관내 암종, 수질 유방암, 점액 유방암, 관상 유방암, 유두 유방암, 파제트병(청소년 파제트병 포함함) 및 염증성 유방암; 부신암, 예컨대, 비제한적으로 크롬친화성 세포종 및 부신피질 암종; 갑상선암, 예컨대, 비제한적으로 유두 또는 여포성 갑상선암, 수질 갑상선암 및 악성 갑상선암; 췌장암, 예컨대, 비제한적으로, 인슐린종, 가스트린종, 글루카곤종, 비포마, 소마토스타틴-분비 종양, 및 카르시노이드 또는 섬세포 종양; 뇌하수체암, 예컨대, 비제한적으로 쿠싱병, 프로락틴-분비 종양, 말단비대증, 및 요붕증; 안구암, 예컨대, 비제한적으로 안구 흑색종, 예컨대, 홍채 흑색종, 맥락막 흑색종, 및 섬모체 흑색종, 및 망막아종; 질암, 예컨대, 편평상피세포 암종, 선암종, 및 흑색종; 외음부암, 예컨대, 편평상피세포 암종, 흑색종, 선암종, 기저세포 암종, 육종, 및 파제트병; 자궁경부암, 예컨대, 비제한적으로, 편평상피세포 암종, 및 선암종; 자궁암, 예컨대, 비제한적으로 자궁내막 암종 및 자궁 육종; 난소암, 예컨대, 비제한적으로, 난소 상피 암종, 경계성 종양, 생식 세포 종양, 및 기질 종양; 자궁경부 암종; 식도암, 예컨대, 비제한적으로, 편평세포암, 선암종, 선낭포성 암종, 점막표피성 암종, 선편평상피세포 암종, 육종, 흑색종, 형질세포종, 우상 암종, 및 귀리 세포(소세포) 암종; 위암, 예컨대, 비제한적으로, 선암종, 돌출성(폴립성), 궤양성, 표재 확장성, 만성적 전이, 악성 림프종, 지방 육종, 섬유 육종, 및 암 육종; 결장암; KRAS 돌연변이된 결장직장암; 결장 암종; 직장암; 간암, 예컨대, 비제한적으로 간세포 암종 및 간모세포종, 담낭암, 예컨대, 선암종; 담관 암종, 예컨대, 비제한적으로 유두, 결절, 및 미만성; 폐암, 예컨대, KRAS-돌연변이된 비소세포 폐암, 비소세포 폐암, 편평상피세포 암종(표피 암종), 선암종, 대세포 암종 및 소세포 폐암; 폐 암종; 고환암, 예컨대, 비제한적으로 초기 종양, 정상피종, 악성, 고전적(전형적), 정모세포성, 비정상피종, 태생성 암종, 기형종 암종, 융모암종(난황낭 종양), 전립선암, 예컨대, 비제한적으로, 안드로겐-비의존성 전립선암, 안드로겐-의존성 전립선암, 선암종, 평활근 육종, 및 횡문근 육종; 음경암; 경구암, 예컨대, 비제한적으로 편평상피세포 암종; 기저암; 침샘암, 예컨대, 비제한적으로 선암종, 점막표피성 암종, 및 선양낭포성 암종; 인두암, 예컨대, 비제한적으로 편평상피세포암, 및 우상; 피부암, 예컨대, 비제한적으로, 기저세포 암종, 편평상피세포 암종 및 흑색종, 표재 확장성 흑색종, 결절 흑색종, 노인성 악성 흑색종, 말단흑자 흑색종; 신장암, 예컨대, 비제한적으로 신 세포암, 선암종, 부신종, 섬유 육종, 이행 세포암(신우 및/또는 자궁); 신장 암종; 빌름스 종양; 방광암, 예컨대, 비제한적으로 이행 세포 암종, 편평상피세포암, 선암종, 암 육종. 또한, 암은 점액 육종, 골형성 육종, 내피 육종, 림프관내피 육종, 중피종, 활액막종, 혈관모세포종, 상피성 암종, 낭포성 선암종, 기관지원성 암종, 땀샘 암종, 피지샘 암종, 유두 암종 및 유두 선암종을 포함한다.
특정 실시양태에서 본 발명에 따라 예방되고/되거나 치료될 수 있는 암은 하기를 포함한다: 소아의 고형 종양, 유윙 육종, 빌름스 종양, 신경아세포종, 신경섬유종, 표피의 암종, 악성 흑색종, 자궁경부 암종, 대장 암종, 폐 암종, 신장 암종, 유방 암종, 유방 육종, 전이성 유방암, HIV-관련된 카포시 육종, 전립선암, 안드로겐-비의존성 전립선암, 안드로겐-의존성 전립선암, 신경섬유종증, 폐암, 비소세포 폐암, KRAS-돌연변이된 비소세포 폐암, 악성 흑색종, 흑색종, 결장암, KRAS-돌연변이된 결장직장암, 다형성 교아종, 신장암(renal cancer), 신장암(kidney cancer), 방광암, 난소암, 간세포 암종, 갑상선 암종, 횡문근 육종, 급성 골수성 백혈병, 및 다발성 골수종.
특정 실시양태에서 본 발명에 따라 예방되고/되거나 치료되는 것과 관련된 암 및 질환은 유방 암종, 폐 암종, 위장 암종, 식도 암종, 결장직장 암종, 간 암종, 난소 암종, 난포막종, 남성배세포종, 자궁경부 암종, 자궁내막 암종, 자궁내막 과형성, 자궁내막증, 섬유 육종, 융모암종, 두경부암, 비인두 암종, 후두 암종, 간모세포종, 카포시 육종, 흑색종, 피부 암종, 혈관종, 해면상 혈관종, 혈관모세포종, 췌장 암종, 망막아종, 성상세포종, 교아종, 신경초종, 희돌기교신경교종, 수모세포종, 신경아세포종, 횡문근 육종, 골형성 육종, 평활근 육종, 요로 암종, 갑상선 암종, 빌름스 종양, 신 세포 암종, 전립선 암종, 모반증과 관련된 비정상적인 혈관 증식, 부종(예컨대, 뇌 종양과 관련된 부종), 또는 메이그스 증후군이다. 구체적인 실시양태에서 암은 성상세포종, 희돌기교신경교종, 희돌기교신경교종과 성상세포종 요소의 혼합물, 뇌교종, 수막종, 뇌하수체 선종, 원시 신경외배엽성 종양, 수모세포종, 원발성 중추 신경계(CNS) 림프종, 또는 CNS 생식 세포 종양이다.
특정 실시양태에서 본 발명에 따라 치료된 암은 청신경종, 미분화 성상세포종, 다형성 교아종, 또는 수막종이다.
다른 구체적인 실시양태에서 본 발명에 따라 치료된 암은 뇌간 신경교종, 두개인두종, 수강상피, 청소년 모양세포성 성상세포종, 수모세포종, 광 신경 교종, 원시 신경외배엽성 종양, 또는 간상소체 종양이다.
화합물 3의 제조
Figure pct00002
단계 A: 아세톤(200 mL) 중 다이에틸 1H-피라졸-3,5-다이카복실레이트(10.0 g, 47 mmol) 및 클로로아세톤(3.76 mL, 47 mmol)의 용액에 칼륨 카보네이트(7.2 g, 52 mmol)를 첨가하였다. 30℃에서 6시간 동안 가열한 후, 혼합물을 농축하여 휘발성 물질을 제거하였다. 잔사를 EtOAc로 취하고 물로 세척하였다. 유기물을 MgSO4로 건조하고 농축하여 연갈색 고체로서 다이에틸 1-(2-옥소프로필)-1H-피라졸-3,5-다이카복실레이트를 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다; MS m/z 269.1 [M+H]+.
단계 B: 아세트산(300 mL) 중 다이에틸 1-(2-옥소프로필)-1H-피라졸-3,5-다이카복실레이트(약 47 mmol)의 용액에 암모늄 아세테이트(72 g, 940 mmol)를 첨가하였다. 48시간 동안 환류한 후, 혼합물을 최소 용량으로 농축하고 물로 희석하였다. 침전물을 여과하고, 물 및 MeCN으로 세척하여 황갈색 고체로서 에틸 4-하이드록시-6-메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-카복실레이트(6.7 g, 64%)를 수득하였다; MS m/z 222.1 [M+H]+.
단계 C: POCl3(80 mL) 중 에틸 4-하이드록시-6-메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-카복실레이트(7.18 g, 32.5 mmol)의 혼합물을 15시간 동안 환류하였다. 짙은 혼합물을 농축하고 MeCN으로 세척하여 회백색 고체로서 에틸 4-클로로-6-메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-카복실레이트(5.197 g)를 수득하였다. 여액을 농축하고 크로마토그래피하여 추가 1.42 g의 생성물(6.617 g, 85%)을 수득하였다; MS m/z 240.1 [M+H]+, 242.1 [M+2+H]+.
단계 D: DMF(100 mL) 중 에틸 4-클로로-6-메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-카복실레이트(5.197 g, 21.7 mmol), MeB(OH)2(3.90 g, 65.1 mmol), K2CO3(14.8 g, 107.5 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(456 mg, 0.65 mmol)의 혼합물을 탈기하고 N2 하에 15시간 동안 가열하였다. 혼합물을 로토뱁(rotovap)에서 농축하여 대부분의 DMF를 제거하고 물로 세척하였다. 잔사를 크로마토그래피(CH2Cl2 중 2% 내지 5% MeOH)하여 황색 고체로서 에틸 4,6-다이메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-카복실레이트(3.90 g, 82%)를 수득하였다; MS m/z 220.1 [M+H]+; 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6): δ 8.54(1H, s), 7.49(1H, s), 4.36(2H, q, J = 7.2 Hz), 2.70(3H, s), 2.42(3H, s), 1.34(3H, t, J = 7.2Hz).
단계 E: -78℃에서 THF(50 mL) 중 t-부틸 아세테이트(1.63 mL, 12.1 mmol)의 용액에 LDA(1.5 M, 0.97 mL, 14.5 mmol)를 첨가하였다. 0.5시간 후, 용액을 THF(100 mL) 중 에틸 4,6-다이메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-카복실레이트(1.33 g, 6.07 mmol)의 용액에 -30℃에서 캐뉼러 삽입하였다. 1시간 후, 혼합물을 포화 NH4Cl로 급랭하고, pH 5 내지 6으로 조정하고 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기물을 건조하고 농축하였다. 잔사를 크로마토그래피(CH2Cl2 중 2% 내지 4% MeOH)하여 황색 오일로서 t-부틸 3-(4,6-다이메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)-3-옥소프로판오에이트(1.696 g, 97%)를 수득하였다; MS m/z 290.2 [M+H]+; 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6): δ 8.57(1H, s), 7.50(1H, s), 4.02(2H, s), 2.70(3H, s), 2.43(3H, s), 1.38(9H, s).
단계 F: EtOH(30 mmol) 중 t-부틸 3-(4,6-다이메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)-3-옥소프로판오에이트(4.86 g, 16.8 mmol)의 용액을 캡핑된 튜브 내에서 120℃에서 가열하였다. 1시간 후, 용액을 실온으로 냉각하고 휘발성 물질을 제거하여 황색 고체로서 에틸 3-(4,6-다이메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)-3-옥소프로판오에이트(4.44 g, 98%)를 수득하였다; MS m/z 262.2 [M+H]+.
단계 G: 2-아미노-5-플루오로-피리딘(134 mg, 1.2 mmol), 에틸 3-(4,6-다이메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)-3-옥소프로판오에이트(261 mg, 1.0 mmol) 및 PPT(12.6 mg, 0.05 mmol)의 혼합물을 130℃에서 가열하였다. 8시간 후, 혼합물을 실온으로 냉각하고 크로마토그래피하여 황색 고체로서 2-(4,6-다이메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)-7-플루오로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(220 mg, 71%)을 수득하였다; MS m/z 310.2 [M+H]+; 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6): δ 8.97-8.95(1H, m), 8.55(1H, s), 8.16-8.12(1H, m), 7.87-7.85(1H, m), 7.56(1H, s), 7.03(1H, s), 2.73,(3H, s), 2.43(3H, s).
단계 H: DMA(1.0 mL) 중 2-(4,6-다이메틸피라졸로[1,5-a]피라진-2-일)-7-플루오로-4H-피리도[1,2-a]피리미딘-4-온(309 mg, 1.0 mmol) 및 피페라진(1.1 mL, 10 mmol)을 120℃에서 가열하였다. 15시간 후, 휘발성 물질을 제거하고 잔사를 MeCN으로 세척하여 황색 고체로서 표제 화합물(313 mg, 80%)을 수득하였다. 융점: 254 내지 256℃; MS m/z 390.4 [M+H]+; 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6): δ 8.55(1H, s), 8.27(1H, d, J = 2.7 Hz), 8.12(1H, dd, J = 2.8 Hz, 9.7 Hz), 7.71(1H, d, J = 9.7 Hz), 7.54(1H, s), 6.95(1H, s), 3.25(4H, m), 2.72(3H, s), 2.51(4H, m, DMSO-d6에 의해 불명료함), 2.43(3H, s), 2.25(3H, s).
본원에 개시된 추가 화합물은, 적합한 출발 물질, 시약 및 반응 조건을 대체하여 상기 실시예에 따라 제조될 수 있다.
WO 2013/119916은 FoxM1 스플라이싱 변형에 의해 암의 예방 또는 치료에 사용될 수 있는 추가 화합물을 개시한다. WO 2013/119916은 본원에 참조로서 포함된다.
용어 "M.P."는 "융점(℃)"을 나타내고, 용어 "MS"는 "질량 분광 피크 m/z [M+H]+, [M+2+H]+, [M-H]- 또는 [M+2-H]-"를 나타내고, 용어 "D"는 "분해/분해된"을 나타낸다.
Figure pct00003
실시예
실시예 1: 화합물은 FoxM1A 쪽으로 FoxM1 의 대안적인 스플라이싱을 유도한다.
FoxM1의 스플라이싱에 대한 효과를 조사하기 위해, 인간 섬유아세포를 용량 반응에 있어서 화합물 1 내지 4로 24시간 동안 처리하고, Δ9 엑손을 포함하는 mRNA(FoxM1A) 또는 Δ9 엑손을 제외하는 mRNA(FoxM1B/C)에 대하여 RT-qPCR로 분석하였다. 생성된 용량 반응 곡선을 힐(Hill) 결합 방정식에 맞췄다. 도 1a는 모든 화합물이 엑손 9를 포함하는 FoxM1A mRNA의 발현을 증가시킴을 보여주고, 화합물 1, 2, 3 및 4 각각에 대한 EC50 값을 0.246, 0.016, 1.210 및 0.068 μM로 계산하였다. 상대적으로, 엑손 9가 부족한(Δ9 버전) FoxM1B/C 이소폼(isoform)에 대한 mRNA는 화합물 1, 2, 3 및 4 각각에 대하여 0.724, 0.014, 3.541 및 0.104 μM의 EC50 값으로 감소하였다. FoxM1A의 상향조절 및 FoxM1B/C의 하향조절에 대한 EC50 값의 상관관계 분석은 동일한 선으로부터 분명한 이동 없이 뛰어난 선형 상관관계(r2 = 0.992)를 입증하였다(도 1c). 상기 데이타는 FoxM1A의 상향조절 및 FoxM1B/C의 하향조절의 밀접하고 직접적인 함수 관계를 시사한다.
실시예 2: FoxM1A 쪽으로의 대안적인 스플라이싱은 세포독성을 유도한다.
세포 증식 및 생존에 있어서 변화된 FoxM1 발현의 효과를 조사하기 위해, 인간 섬유아세포를, 용량 반응에 있어서 온라인 증식률 및 세포사를 모니터링하는 xCELLigence 플랫폼으로 화합물 1 내지 4로 120시간 동안 처리하였다. 도 2a에 도시된 바와 같이, 화합물 2는 5일 시간 과정에 걸쳐서 0.1 및 0.3 μM 용량에서 증식시 중간 효과를 갖지만, 이는 1 μM 이상의 용량에서 강한 독성을 유도하였다. 증식 및 세포다 유도를 늦추기 위한 판독으로서 세포 지수를 감소시키기 위한 정량적인 측정을 정의하기 위해, 미처리된 대조군에 대하여 세포 지수가 75%까지 감소된 화합물의 농도를 나타내는 75% 컷오프(cut-off)(ED75 %)를 추정하였다. 72, 96 및 120시간에서 세포 지수를 정량화하는 것은, 모든 화합물이 높은 용량으로 ED75 % 를 도달했음을 입증하였다(도 2b). 상기 데이타는 FoxM1A 쪽으로 FoxM1의 대안적인 스플라이싱의 유도가 증식 및 세포사를 느리게 유도함을 시사한다.
실시예 3: FoxM1 의 대안적인 스플라이싱은 세포독성과 관련된다.
세포 지수에서의 감소에 대한 ED75 % 대 FoxM1B/C 감소에 대한 EC50의 상관관계는 뛰어난 선형 상관관계(r2 = 0.963)를 입증하였다. 이로 인해, 활성시 약 10배 이동은, FoxM1B/C 감소에 대한 EC50의 10배 초과의 농도가 ED75 %에 도달하기 위해 요구됨을 나타낸다(도 3a). 유사하게, FoxM1A 유도에 대한 EC50과 관련된 세포 지수의 감소에 대한 ED75 %는 또한 뛰어난 선형 상관관계(r2 = 0.951)를 보이고, 활성시 10 내지 15배 이동은, FoxM1A 유도에 대하여 10 내지 15배 초과의 농도의 EC50이 ED75%에 도달하기 위해 요구됨을 나타낸다(도 3b). 상기 데이타는, FoxM1A 쪽으로 FoxM1B/C로부터 FoxM1 스플라이싱에서 90 초과 이동이 세포 증식 및 생존을 측정함으로써 세포 지수에서 중요한 감소를 유도하기 위해 요구됨을 시사한다.
실시예 4: FoxM1A 단백질의 증가는 세포독성과 관련된다.
FoxM1A 쪽으로 FoxM1의 대안적인 스플라이싱이 단백질 수준 및 세포사에서 중요한 변화를 초래하는 경우를 추정하기 위해, 인간 1차 근아세포를 증식 조건하에 처리하여 FoxM1 발현을 조절하고 이의 결과를 평가하였다. 증식 조건하에, FoxM1A는 낮은 농도에서지만 웨스턴 블롯으로 검출가능하다(도 4a). 10 μM 이하 용량의 화합물 3으로의 처리는 세포 수의 직접 마커인 액틴의 단백질 수준을 강하게 감소시키지만, FoxM1A의 단백질 수준을 증가시킨다(도 4a). 단백질 수준의 정량 분석은, 액틴은 대조군과 비교하여 6배까지 감소되는 반면(도 4b), FoxM1A 수준은 동일한 샘플에서 거의 5배까지 증가됨(도 4c)을 나타내었다. 액틴으로 표준화되는 경우, FoxM1A 단백질 수준은 가장 높은 용량으로 30배까지 증가되었다(도 4d). 상기 데이타는 근아세포 증식에 있어서, FoxM1A 쪽으로 대안적인 스플라이싱이 FoxM1A 단백질을 증가시키고 세포사를 유도함을 시사한다.
실시예 5: 비증식성 조건에서 FoxM1A 단백질은 변하지 않는다.
FoxM1A 쪽으로 FoxM1의 대안적인 스플라이싱이 또한 증식하지 않는 세포에서 존재하는 경우를 추정하기 위해, 동일한 인간 1차 근아세포를, FoxM1 발현이 또한 존재하는 경우를 조사하기 위해 분화시키고 이러한 조건하에 유사하게 조절할 수 있다. 분화 조건하에, FoxM1A는 웨스턴 블롯으로 검출불가하다(도 5a). 10 μM 이하 용량의 화합물 3으로의 처리는 세포 수의 마커로서 액틴의 단백질 수준에서 어떠한 감소도 보이지 않았다(도 5a). 단백질 수준의 정량 분석은, 액틴은 대조군에 비해 변화하지 않는 반면(도 5b), 액틴에 대하여 표준화된 FoxM1A 수준은 검출불가함을 나타내었다. 상기 데이타는, FoxM1A 발현이 증식 세포에 대하여 제한되고, FoxM1A 쪽으로 대안적인 스플라이싱이 증식하지 않는 세포에서 세포사를 유도하지 않음을 시사한다.
실시예 6: FoxM1A 단백질의 증가는 유방암 세포에서 세포독성을 유도한다.
FoxM1A 쪽으로 FoxM1의 대안적인 스플라이싱에 의한 FoxM1A 단백질에서의 증가가 암 조건에서 세포사를 유도하는 경우를 추정하기 위해, 인간 유방암 세포(BT474)를 처리하여 FoxM1 발현을 조절하고, FoxM1A 단백질 수준을 처리 1일 및 2일에 평가하였다. 대조군 조건하에 1일 및 2일에, FoxM1A는 낮은 농도에서지만 웨스턴 블롯으로 검출가능하다(도 6a). 10 μM의 화합물 2로 처리는 FoxM1A 단백질에서 어떠한 효과도 갖지 않았지만, 단백질 수준에서 수반되는 증가와 함께 1일에 액틴 단백질은 약간 감소하였고, 2일에 액틴 단백질은 강하게 감소하였다(도 6a). 단백질 수준의 정량 분석은, 액틴은 10 μM의 화합물 2로의 처리에 의해 1일에 18%까지 감소하고 2일에 90% 초과까지 감소하는 반면(도 6b), FoxM1A 수준은 동일한 샘플에서 거의 3배까지 증가함을 나타내었다(도 6c). 액틴으로 표준화되는 경우, FoxM1A 단백질 수준은 10 μM의 화합물 2로의 처리에 의해 28배까지 증가하였다(도 6d). 상기 데이타는, 유방암 세포에서 FoxM1A 쪽으로 대안적인 스플라이싱이 FoxM1A 단백질을 증가시키고 세포사를 유도함을 시사한다.
방법
실시간 정량적 PCR 을 사용하여 FoxM1 스플라이스 변이체의 발현 수준의 모니터링
10000 세포/cm2의 섬유아세포를 다양한 용량(0.01 내지 10 μM)의 화합물로 24시간 동안 처리하였다. RNA 추출을 어플라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems: 등록상표)로부터의 앰비온(Ambion: 등록상표) 세포-대-CT(상표) 키트에 언급된 지시에 따라 수행하였다. RNA 샘플을, 추가 분석할 때까지 -20℃에서 냉동시켰다. FoxM1A 또는 FoxM1B/C와 함께 내부 대조용 GAPDH의 상대적인 발현 수준을, 1 단계 멀티플렉스 역전사-중합효소 쇄 반응(RT-PCR)을 사용하여 측정하였다. 택맨(TaqMan: 등록상표) FAM 프로브를 FoxM1A 또는 FoxM1B/C 발현 수준의 상대적인 정량을 위해 사용하고 택맨(등록상표) VIC 프로브를 인간 GAPDH 수준의 상대적인 정량을 위해 사용하였다. 증폭 방법의 정확도를 정량 PCR에 대한 ΔΔCt 상대적인 정량화 방법을 사용하여 측정하였다.
섬유아세포에서 증식 뿐만 아니라 독성에 대한 실시간 효과의 모니터링
10000 세포/cm2의 섬유아세포를 xCELLigence E 플레이트-16 포맷 중에서 5일 동안 다양한 용량(0.1 내지 10 μM)의 화합물로 처리하였다. 플레이트를 xCELLigence RTCA-DP 장치로 옮기고 37℃, 5% CO2 항온처리기에 넣고 모든 웰의 배경 임피던스 측정을 기록하였다. 섬유아세포를 웰에 시딩하고 약 5시간 동안 항온처리하여 세포의 살포 및 안정화를 더욱 촉진하였다. 세포를 부착하고 살포함으로써 막의 하면을 덮는 금 마이크로전극에서 임피던스의 변화를 측정하고 120시간(5일)에 걸쳐서 30분 마다 기록하였다. 임피던스는 세포 지수(CI)라 칭하는 상대적이고 무한한 파라미터를 나타낸다. 세포 지수 값 = Zt-Zi/15 [Ohm]; 여기서 Zi는 시험 시작시 초기 임피던스이고, Zt는 실험 동안 개별적인 시점이다(문헌[A.K. Bosserhoff, L. Ellmann, S. Kuphal.S: Melanoblasts in culture as an in vitro system to determine molecular changes in Melanoma. 2011. Experimental Dermatology, 20, 435-440]). 초기 6시간 내에 수득된 값을 경사 계산으로부터 제거하여 임의의 경우, 처리에 대한 세포의 부착력의 차이로 인해 관찰된 임의의 변수를 고려하였다.
인간 근아세포 또는 유방암 세포 배양 및 웨스턴 블롯 분석
인간 근아세포를 ECACC로부터 획득하고, BT474 세포를 ATCC로부터 수득하고, 공급자 프로토콜에 따라 경작하였다. 실험 목적을 위해, 인간 근아세포를 5일 동안 경작하고 다양한 용량(0.1 내지 10 μM)의 화합물(0.1 내지 10 μM)로 처리하였다. BT474 세포를 2일 동안 경작하고 10 μM의 화합물로 처리하였다. 웨스턴 블롯 분석을 위해, 5일간에 걸쳐서 처리된 근아세포 또는 2일 동안 처리된 BT474 세포를 100 mM 다이티올트레이톨을 함유하는 비등 래믈리 완충액(바이오래드(Bio-Rad))에서 용해하였다. SDS PAGE 블롯을 토끼-항 FoxM1 항체(셀 시그날링 테크놀로지(Cell Signaling Technology), 1:1000), 염소 항-액틴(산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology), 1:20000) 및 알렉사680/800 2차 항체(몰레큘라 프로브스(Molecular Probes), 1:10,000)로 침지하였다. 형광을 오디세이(Odyssey) 이미지 시스템(리코르 바이오사이언시스(Licor Biosciences))으로 획득하고, FoxM1A 강도를 액틴에 대하여 표준화하였다. 데이타를 그래프패드(GraphPad) 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
<110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> Screening method <130> 31257 WO <140> PCT/EP2014/067476 <141> 2014-08-15 <150> EP 13180825.5 <151> 2013-08-19 <160> 9 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 801 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Lys Thr Ser Pro Arg Arg Pro Leu Ile Leu Lys Arg Arg Arg Leu 1 5 10 15 Pro Leu Pro Val Gln Asn Ala Pro Ser Glu Thr Ser Glu Glu Glu Pro 20 25 30 Lys Arg Ser Pro Ala Gln Gln Glu Ser Asn Gln Ala Glu Ala Ser Lys 35 40 45 Glu Val Ala Glu Ser Asn Ser Cys Lys Phe Pro Ala Gly Ile Lys Ile 50 55 60 Ile Asn His Pro Thr Met Pro Asn Thr Gln Val Val Ala Ile Pro Asn 65 70 75 80 Asn Ala Asn Ile His Ser Ile Ile Thr Ala Leu Thr Ala Lys Gly Lys 85 90 95 Glu Ser Gly Ser Ser Gly Pro Asn Lys Phe Ile Leu Ile Ser Cys Gly 100 105 110 Gly Ala Pro Thr Gln Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gln Thr Gln Thr Ser 115 120 125 Tyr Asp Ala Lys Arg Thr Glu Val Thr Leu Glu Thr Leu Gly Pro Lys 130 135 140 Pro Ala Ala Arg Asp Val Asn Leu Pro Arg Pro Pro Gly Ala Leu Cys 145 150 155 160 Glu Gln Lys Arg Glu Thr 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atc aac agc act gag agg aag cgc atg act ttg aaa 1063 Ile Gln Phe Ala Ile Asn Ser Thr Glu Arg Lys Arg Met Thr Leu Lys 245 250 255 260 gac atc tat acg tgg att gag gac cac ttt ccc tac ttt aag cac att 1111 Asp Ile Tyr Thr Trp Ile Glu Asp His Phe Pro Tyr Phe Lys His Ile 265 270 275 gcc aag cca ggc tgg aag aac tcc atc cgc cac aac ctt tcc ctg cac 1159 Ala Lys Pro Gly Trp Lys Asn Ser Ile Arg His Asn Leu Ser Leu His 280 285 290 gac atg ttt gtc cgg gag acg tct gcc aat ggc aag gtc tcc ttc tgg 1207 Asp Met Phe Val Arg Glu Thr Ser Ala Asn Gly Lys Val Ser Phe Trp 295 300 305 acc att cac ccc agt gcc aac cgc tac ttg aca ttg gac cag gtg ttt 1255 Thr Ile His Pro Ser Ala Asn Arg Tyr Leu Thr Leu Asp Gln Val Phe 310 315 320 aag cca ctg gac cca ggg tct cca caa ttg ccc gag cac ttg gaa tca 1303 Lys Pro Leu Asp Pro Gly Ser Pro Gln Leu Pro Glu His Leu Glu Ser 325 330 335 340 cag cag aaa cga ccg aat cca gag ctc cgc cgg aac atg acc atc aaa 1351 Gln Gln Lys Arg Pro Asn Pro Glu Leu Arg Arg Asn Met Thr Ile Lys 345 350 355 acc gaa ctc ccc ctg ggc gca cgg cgg aag atg aag cca ctg cta cca 1399 Thr Glu Leu Pro Leu Gly Ala Arg Arg Lys Met Lys Pro Leu Leu Pro 360 365 370 cgg gtc agc tca tac ctg gta cct atc cag ttc ccg gtg aac cag tca 1447 Arg Val Ser Ser Tyr Leu Val Pro Ile Gln Phe Pro Val Asn Gln Ser 375 380 385 ctg gtg ttg cag ccc tcg gtg aag gtg cca ttg ccc ctg gcg gct tcc 1495 Leu Val Leu Gln Pro Ser Val Lys Val Pro Leu Pro Leu Ala Ala Ser 390 395 400 ctc atg agc tca gag ctt gcc cgc cat agc aag cga gtc cgc att gcc 1543 Leu Met Ser Ser Glu Leu Ala Arg His Ser Lys Arg Val Arg Ile Ala 405 410 415 420 ccc aag gtt ttt ggg gaa cag gtg gtg ttt ggt tac atg agt aag ttc 1591 Pro Lys Val Phe Gly Glu Gln Val Val Phe Gly Tyr Met Ser Lys Phe 425 430 435 ttt agt ggc gat ctg cga gat ttt ggt aca ccc atc acc agc ttg ttt 1639 Phe Ser Gly Asp Leu Arg Asp Phe Gly Thr Pro Ile Thr Ser Leu Phe 440 445 450 aat ttt atc ttt ctt tgt tta tca gtg ctg cta gct gag gag ggg ata 1687 Asn Phe Ile Phe Leu Cys Leu Ser Val Leu Leu Ala Glu Glu Gly Ile 455 460 465 gct cct ctt tct tct gca gga cca ggg aaa gag gag aaa ctc ctg ttt 1735 Ala Pro Leu Ser Ser Ala Gly Pro Gly Lys Glu Glu Lys Leu Leu Phe 470 475 480 gga gaa ggg ttt tct cct ttg ctt cca gtt cag act atc aag gag gaa 1783 Gly Glu Gly Phe Ser Pro Leu Leu Pro Val Gln Thr Ile Lys Glu Glu 485 490 495 500 gaa atc cag cct ggg gag gaa atg cca cac tta gcg aga ccc atc aaa 1831 Glu Ile Gln Pro Gly Glu Glu Met Pro His Leu Ala Arg Pro Ile Lys 505 510 515 gtg gag agc cct ccc ttg gaa gag tgg ccc tcc ccg gcc cca tct ttc 1879 Val Glu Ser Pro Pro Leu Glu Glu Trp Pro Ser Pro Ala Pro Ser Phe 520 525 530 aaa gag gaa tca tct cac tcc tgg gag gat tcg tcc caa tct ccc acc 1927 Lys Glu Glu Ser Ser His Ser Trp Glu Asp Ser Ser Gln Ser Pro Thr 535 540 545 cca aga ccc aag aag tcc tac agt ggg ctt agg tcc cca acc cgg tgt 1975 Pro Arg Pro Lys Lys Ser Tyr Ser Gly Leu Arg Ser Pro Thr Arg Cys 550 555 560 gtc tcg gaa atg ctt gtg att caa cac agg gag agg agg gag agg agc 2023 Val Ser Glu Met Leu Val Ile Gln His Arg Glu Arg Arg Glu Arg Ser 565 570 575 580 cgg tct cgg agg aaa cag cat cta ctg cct ccc tgt gtg gat gag ccg 2071 Arg Ser Arg Arg Lys Gln His Leu Leu Pro Pro Cys Val Asp Glu Pro 585 590 595 gag ctg ctc ttc tca gag ggg ccc agt act tcc cgc tgg gcc gca gag 2119 Glu Leu Leu Phe Ser Glu Gly Pro Ser Thr Ser Arg Trp Ala Ala Glu 600 605 610 ctc ccg ttc cca gca gac tcc tct gac cct gcc tcc cag ctc agc tac 2167 Leu Pro Phe Pro Ala Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Gln Leu Ser Tyr 615 620 625 tcc cag gaa gtg gga gga cct ttt aag aca ccc att aag gaa acg ctg 2215 Ser Gln Glu Val Gly Gly Pro Phe Lys Thr Pro Ile Lys Glu Thr Leu 630 635 640 ccc atc tcc tcc acc ccg agc aaa tct gtc ctc ccc aga acc cct gaa 2263 Pro Ile Ser Ser Thr Pro Ser Lys Ser Val Leu Pro Arg Thr Pro Glu 645 650 655 660 tcc tgg agg ctc acg ccc cca gcc aaa gta ggg gga ctg gat ttc agc 2311 Ser Trp Arg Leu Thr Pro Pro Ala Lys Val Gly Gly Leu Asp Phe Ser 665 670 675 cca gta caa acc tcc cag ggt gcc tct gac ccc ttg cct gac ccc ctg 2359 Pro Val Gln Thr Ser Gln Gly Ala Ser Asp Pro Leu Pro Asp Pro Leu 680 685 690 ggg ctg atg gat ctc agc acc act ccc ttg caa agt gct ccc ccc ctt 2407 Gly Leu Met Asp Leu Ser Thr Thr Pro Leu Gln Ser Ala Pro Pro Leu 695 700 705 gaa tca ccg caa agg ctc ctc agt tca gaa ccc tta gac ctc atc tcc 2455 Glu Ser Pro Gln Arg Leu Leu Ser Ser Glu Pro Leu Asp Leu Ile Ser 710 715 720 gtc ccc ttt ggc aac tct tct ccc tca gat ata gac gtc ccc aag cca 2503 Val Pro Phe Gly Asn Ser Ser Pro Ser Asp Ile Asp Val Pro Lys Pro 725 730 735 740 ggc tcc ccg gag cca cag gtt tct ggc ctt gca gcc aat cgt tct ctg 2551 Gly Ser Pro Glu Pro Gln Val Ser Gly Leu Ala Ala Asn Arg Ser Leu 745 750 755 aca gaa ggc ctg gtc ctg gac aca atg aat gac agc ctc agc aag atc 2599 Thr Glu Gly Leu Val Leu Asp Thr Met Asn Asp Ser Leu Ser Lys Ile 760 765 770 ctg ctg gac atc agc ttt cct ggc ctg gac gag gac cca ctg ggc cct 2647 Leu Leu Asp Ile Ser Phe Pro Gly Leu Asp Glu Asp Pro Leu Gly Pro 775 780 785 gac aac atc aac tgg tcc cag ttt att cct gag cta cag 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ctggcattga cgagaactca ggtggaggct tgagaaggcc gaaagggccc ctgacctgcc 3529 tggcttcctt agcttgcccc tcagctttgc aaagagccac cctaggcccc agctgaccgc 3589 atgggtgtga gccagcttga gaacactaac tactcaataa aagcgaaggt ggacatgaaa 3649 aaaaaaaaaa aaaaaa 3665 <210> 5 <211> 801 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Lys Thr Ser Pro Arg Arg Pro Leu Ile Leu Lys Arg Arg Arg Leu 1 5 10 15 Pro Leu Pro Val Gln Asn Ala Pro Ser Glu Thr Ser Glu Glu Glu Pro 20 25 30 Lys Arg Ser Pro Ala Gln Gln Glu Ser Asn Gln Ala Glu Ala Ser Lys 35 40 45 Glu Val Ala Glu Ser Asn Ser Cys Lys Phe Pro Ala Gly Ile Lys Ile 50 55 60 Ile Asn His Pro Thr Met Pro Asn Thr Gln Val Val Ala Ile Pro Asn 65 70 75 80 Asn Ala Asn Ile His Ser Ile Ile Thr Ala Leu Thr Ala Lys Gly Lys 85 90 95 Glu Ser Gly Ser Ser Gly Pro Asn Lys Phe Ile Leu Ile Ser Cys Gly 100 105 110 Gly Ala Pro Thr Gln Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gln Thr Gln Thr Ser 115 120 125 Tyr Asp Ala Lys Arg Thr Glu Val Thr Leu Glu Thr Leu Gly Pro Lys 130 135 140 Pro Ala Ala Arg Asp Val Asn Leu Pro Arg Pro Pro Gly Ala Leu Cys 145 150 155 160 Glu Gln Lys Arg Glu Thr Cys Ala Asp Gly Glu Ala Ala Gly Cys Thr 165 170 175 Ile Asn Asn Ser Leu Ser Asn Ile Gln Trp Leu Arg Lys Met Ser Ser 180 185 190 Asp Gly Leu Gly Ser Arg Ser Ile Lys Gln Glu Met Glu Glu Lys Glu 195 200 205 Asn Cys His Leu Glu Gln Arg Gln Val Lys Val Glu Glu Pro Ser Arg 210 215 220 Pro Ser Ala Ser Trp Gln Asn Ser Val Ser Glu Arg Pro Pro Tyr Ser 225 230 235 240 Tyr Met Ala Met Ile Gln Phe Ala Ile Asn Ser Thr Glu Arg Lys Arg 245 250 255 Met Thr Leu Lys Asp Ile Tyr Thr Trp Ile Glu Asp His Phe Pro Tyr 260 265 270 Phe Lys His Ile Ala Lys Pro Gly Trp Lys Asn Ser Ile Arg His Asn 275 280 285 Leu Ser Leu His Asp Met Phe Val Arg Glu Thr Ser Ala Asn Gly Lys 290 295 300 Val Ser Phe Trp Thr Ile His Pro Ser Ala Asn Arg Tyr Leu Thr Leu 305 310 315 320 Asp Gln Val Phe Lys Pro Leu Asp Pro Gly Ser Pro Gln Leu Pro Glu 325 330 335 His Leu Glu Ser Gln Gln Lys Arg Pro Asn Pro Glu Leu Arg Arg Asn 340 345 350 Met Thr Ile Lys Thr Glu Leu Pro Leu Gly 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tcc aac tct tgc aag ttt cca gct ggg atc aag att att aac cac ccc 487 Ser Asn Ser Cys Lys Phe Pro Ala Gly Ile Lys Ile Ile Asn His Pro 55 60 65 acc atg ccc aac acg caa gta gtg gcc atc ccc aac aat gct aat att 535 Thr Met Pro Asn Thr Gln Val Val Ala Ile Pro Asn Asn Ala Asn Ile 70 75 80 cac agc atc atc aca gca ctg act gcc aag gga aaa gag agt ggc agt 583 His Ser Ile Ile Thr Ala Leu Thr Ala Lys Gly Lys Glu Ser Gly Ser 85 90 95 100 agt ggg ccc aac aaa ttc atc ctc atc agc tgt ggg gga gcc cca act 631 Ser Gly Pro Asn Lys Phe Ile Leu Ile Ser Cys Gly Gly Ala Pro Thr 105 110 115 cag cct cca gga ctc cgg cct caa acc caa acc agc tat gat gcc aaa 679 Gln Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gln Thr Gln Thr Ser Tyr Asp Ala Lys 120 125 130 agg aca gaa gtg acc ctg gag acc ttg gga cca aaa cct gca gct agg 727 Arg Thr Glu Val Thr Leu Glu Thr Leu Gly Pro Lys Pro Ala Ala Arg 135 140 145 gat gtg aat ctt cct aga cca cct gga gcc ctt tgc gag cag aaa cgg 775 Asp Val Asn Leu Pro Arg Pro Pro Gly Ala Leu Cys Glu Gln Lys Arg 150 155 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Lys Val Pro Leu Pro Leu Ala Ala 375 380 385 tcc ctc atg agc tca gag ctt gcc cgc cat agc aag cga gtc cgc att 1495 Ser Leu Met Ser Ser Glu Leu Ala Arg His Ser Lys Arg Val Arg Ile 390 395 400 gcc ccc aag gtg ctg cta gct gag gag ggg ata gct cct ctt tct tct 1543 Ala Pro Lys Val Leu Leu Ala Glu Glu Gly Ile Ala Pro Leu Ser Ser 405 410 415 420 gca gga cca ggg aaa gag gag aaa ctc ctg ttt gga gaa ggg ttt tct 1591 Ala Gly Pro Gly Lys Glu Glu Lys Leu Leu Phe Gly Glu Gly Phe Ser 425 430 435 cct ttg ctt cca gtt cag act atc aag gag gaa gaa atc cag cct ggg 1639 Pro Leu Leu Pro Val Gln Thr Ile Lys Glu Glu Glu Ile Gln Pro Gly 440 445 450 gag gaa atg cca cac tta gcg aga ccc atc aaa gtg gag agc cct ccc 1687 Glu Glu Met Pro His Leu Ala Arg Pro Ile Lys Val Glu Ser Pro Pro 455 460 465 ttg gaa gag tgg ccc tcc ccg gcc cca tct ttc aaa gag gaa tca tct 1735 Leu Glu Glu Trp Pro Ser Pro Ala Pro Ser Phe Lys Glu Glu Ser Ser 470 475 480 cac tcc tgg gag gat tcg tcc caa tct ccc acc cca aga ccc aag aag 1783 His Ser Trp Glu Asp Ser Ser Gln Ser Pro Thr Pro Arg Pro Lys Lys 485 490 495 500 tcc tac agt ggg ctt agg tcc cca acc cgg tgt gtc tcg gaa atg ctt 1831 Ser Tyr Ser Gly Leu Arg Ser Pro Thr Arg Cys Val Ser Glu Met Leu 505 510 515 gtg att caa cac agg gag agg agg gag agg agc cgg tct cgg agg aaa 1879 Val Ile Gln His Arg Glu Arg Arg Glu Arg Ser Arg Ser Arg Arg Lys 520 525 530 cag cat cta ctg cct ccc tgt gtg gat gag ccg gag ctg ctc ttc tca 1927 Gln His Leu Leu Pro Pro Cys Val Asp Glu Pro Glu Leu Leu Phe Ser 535 540 545 gag ggg ccc agt act tcc cgc tgg gcc gca gag ctc ccg ttc cca gca 1975 Glu Gly Pro Ser Thr Ser Arg Trp Ala Ala Glu Leu Pro Phe Pro Ala 550 555 560 gac tcc tct gac cct gcc tcc cag ctc agc tac tcc cag gaa gtg gga 2023 Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Gln Leu Ser Tyr Ser Gln Glu Val Gly 565 570 575 580 gga cct ttt aag aca ccc att aag gaa acg ctg ccc atc tcc tcc acc 2071 Gly Pro Phe Lys Thr Pro Ile Lys Glu Thr Leu Pro Ile Ser Ser Thr 585 590 595 ccg agc aaa tct gtc ctc ccc aga acc cct gaa tcc tgg agg ctc acg 2119 Pro Ser Lys Ser Val Leu Pro Arg Thr Pro Glu Ser Trp Arg Leu Thr 600 605 610 ccc cca gcc aaa gta ggg gga ctg gat ttc agc cca gta caa acc tcc 2167 Pro Pro Ala Lys Val Gly Gly Leu Asp Phe Ser Pro Val Gln Thr Ser 615 620 625 cag ggt gcc tct gac ccc ttg cct gac ccc ctg ggg ctg atg gat ctc 2215 Gln Gly Ala Ser Asp Pro Leu Pro Asp Pro Leu Gly Leu Met Asp Leu 630 635 640 agc acc act ccc ttg caa agt gct ccc ccc ctt gaa tca ccg caa agg 2263 Ser Thr Thr Pro Leu Gln Ser Ala Pro Pro Leu Glu Ser Pro Gln Arg 645 650 655 660 ctc ctc agt tca gaa ccc tta gac ctc atc tcc gtc ccc ttt ggc aac 2311 Leu Leu Ser Ser Glu Pro Leu Asp Leu Ile Ser Val Pro Phe Gly Asn 665 670 675 tct tct ccc tca gat ata gac gtc ccc aag cca ggc tcc ccg gag cca 2359 Ser Ser Pro Ser Asp Ile Asp Val Pro Lys Pro Gly Ser Pro Glu Pro 680 685 690 cag gtt tct ggc ctt gca gcc aat cgt tct ctg aca gaa ggc ctg gtc 2407 Gln Val Ser Gly Leu Ala Ala Asn Arg Ser Leu Thr Glu Gly Leu Val 695 700 705 ctg gac aca atg aat gac agc ctc agc aag atc ctg ctg gac atc agc 2455 Leu Asp Thr Met Asn Asp Ser Leu Ser Lys Ile Leu Leu Asp Ile Ser 710 715 720 ttt cct ggc ctg gac gag gac cca ctg ggc cct gac aac atc aac tgg 2503 Phe Pro Gly Leu Asp Glu Asp Pro Leu Gly Pro Asp Asn Ile Asn Trp 725 730 735 740 tcc cag ttt att cct gag cta cag tag agccctgccc ttgcccctgt 2550 Ser Gln Phe Ile Pro Glu Leu Gln 745 gctcaagctg tccaccatcc cgggcactcc aaggctcagt gcaccccaag cctctgagtg 2610 aggacagcag gcagggactg ttctgctcct catagctccc tgctgcctga ttatgcaaaa 2670 gtagcagtca caccctagcc actgctggga ccttgtgttc cccaagagta tctgattcct 2730 ctgctgtccc tgccaggagc tgaagggtgg gaacaacaaa ggcaatggtg aaaagagatt 2790 aggaaccccc cagcctgttt ccattctctg cccagcagtc tcttaccttc cctgatcttt 2850 gcagggtggt ccgtgtaaat agtataaatt ctccaaatta tcctctaatt ataaatgtaa 2910 gcttatttcc ttagatcatt atccagagac tgccagaagg tgggtaggat gacctggggt 2970 ttcaattgac ttctgttcct tgcttttagt tttgatagaa gggaagacct gcagtgcacg 3030 gtttcttcca ggctgaggta cctggatctt gggttcttca ctgcagggac ccagacaagt 3090 ggatctgctt gccagagtcc tttttgcccc tccctgccac ctccccgtgt ttccaagtca 3150 gctttcctgc aagaagaaat cctggttaaa aaagtctttt gtattgggtc aggagttgaa 3210 tttggggtgg gaggatggat gcaactgaag cagagtgtgg gtgcccagat gtgcgctatt 3270 agatgtttct ctgataatgt ccccaatcat accagggaga ctggcattga cgagaactca 3330 ggtggaggct tgagaaggcc gaaagggccc ctgacctgcc tggcttcctt agcttgcccc 3390 tcagctttgc aaagagccac cctaggcccc agctgaccgc atgggtgtga gccagcttga 3450 gaacactaac tactcaataa aagcgaaggt ggacatgaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 3506 <210> 7 <211> 748 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Lys Thr Ser Pro Arg Arg Pro Leu Ile Leu Lys Arg Arg Arg Leu 1 5 10 15 Pro Leu Pro Val Gln Asn Ala Pro Ser Glu Thr Ser Glu Glu Glu Pro 20 25 30 Lys Arg Ser Pro Ala Gln Gln Glu Ser Asn Gln Ala Glu Ala Ser Lys 35 40 45 Glu Val Ala Glu Ser Asn Ser Cys Lys Phe Pro Ala Gly Ile Lys Ile 50 55 60 Ile Asn His Pro Thr Met Pro Asn Thr Gln Val Val Ala Ile Pro Asn 65 70 75 80 Asn Ala Asn Ile His Ser Ile Ile Thr Ala Leu Thr Ala Lys Gly Lys 85 90 95 Glu Ser Gly Ser Ser Gly Pro Asn Lys Phe Ile Leu Ile Ser Cys Gly 100 105 110 Gly Ala Pro Thr Gln Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gln Thr Gln Thr Ser 115 120 125 Tyr Asp Ala Lys Arg Thr Glu Val Thr Leu Glu Thr Leu Gly Pro Lys 130 135 140 Pro Ala Ala Arg Asp Val Asn Leu Pro Arg Pro Pro Gly Ala Leu Cys 145 150 155 160 Glu Gln Lys Arg Glu Thr Cys Ala Asp Gly Glu Ala Ala Gly Cys Thr 165 170 175 Ile Asn Asn Ser Leu Ser Asn Ile Gln Trp Leu Arg Lys Met Ser Ser 180 185 190 Asp Gly Leu Gly Ser Arg Ser Ile Lys Gln Glu Met Glu Glu Lys Glu 195 200 205 Asn Cys His Leu Glu Gln Arg Gln Val Lys Val Glu Glu Pro Ser Arg 210 215 220 Pro Ser Ala Ser Trp Gln Asn Ser Val Ser Glu Arg Pro Pro Tyr Ser 225 230 235 240 Tyr Met Ala Met Ile Gln Phe Ala Ile Asn Ser Thr Glu Arg Lys Arg 245 250 255 Met Thr Leu Lys Asp Ile Tyr Thr Trp Ile Glu Asp His Phe Pro Tyr 260 265 270 Phe Lys His Ile Ala Lys Pro Gly Trp Lys Asn Ser Ile Arg His Asn 275 280 285 Leu Ser Leu His Asp Met Phe Val Arg Glu Thr Ser Ala Asn Gly Lys 290 295 300 Val Ser Phe Trp Thr Ile His Pro Ser Ala Asn Arg Tyr Leu Thr Leu 305 310 315 320 Asp Gln Val Phe Lys Gln Gln Lys Arg Pro Asn Pro Glu Leu Arg Arg 325 330 335 Asn Met Thr Ile Lys Thr Glu Leu Pro Leu Gly Ala Arg Arg Lys Met 340 345 350 Lys Pro Leu Leu Pro Arg Val Ser Ser Tyr Leu Val Pro Ile Gln Phe 355 360 365 Pro Val Asn Gln Ser Leu Val Leu Gln Pro Ser Val Lys Val Pro Leu 370 375 380 Pro Leu Ala Ala Ser Leu Met Ser Ser Glu Leu Ala Arg His Ser Lys 385 390 395 400 Arg Val Arg Ile Ala Pro Lys Val Leu Leu Ala Glu Glu Gly Ile Ala 405 410 415 Pro Leu Ser Ser Ala Gly Pro Gly Lys Glu Glu Lys Leu Leu Phe Gly 420 425 430 Glu Gly Phe Ser Pro Leu Leu Pro Val Gln Thr Ile Lys Glu Glu Glu 435 440 445 Ile Gln Pro Gly Glu Glu Met Pro His Leu Ala Arg Pro Ile Lys Val 450 455 460 Glu Ser Pro Pro Leu Glu Glu Trp Pro Ser Pro Ala Pro Ser Phe Lys 465 470 475 480 Glu Glu Ser Ser His Ser Trp Glu Asp Ser Ser Gln Ser Pro Thr Pro 485 490 495 Arg Pro Lys Lys Ser Tyr Ser Gly Leu Arg Ser Pro Thr Arg Cys Val 500 505 510 Ser Glu Met Leu Val Ile Gln His Arg Glu Arg Arg Glu Arg Ser Arg 515 520 525 Ser Arg Arg Lys Gln His Leu Leu Pro Pro Cys Val Asp Glu Pro Glu 530 535 540 Leu Leu Phe Ser Glu Gly Pro Ser Thr Ser Arg Trp Ala Ala Glu Leu 545 550 555 560 Pro Phe Pro Ala Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Gln Leu Ser Tyr Ser 565 570 575 Gln Glu Val Gly Gly Pro Phe Lys Thr Pro Ile Lys Glu Thr Leu Pro 580 585 590 Ile Ser Ser Thr Pro Ser Lys Ser Val Leu Pro Arg Thr Pro Glu Ser 595 600 605 Trp Arg Leu Thr Pro Pro Ala Lys Val Gly Gly Leu Asp Phe Ser Pro 610 615 620 Val Gln Thr Ser Gln Gly Ala Ser Asp Pro Leu Pro Asp Pro Leu Gly 625 630 635 640 Leu Met Asp Leu Ser Thr Thr Pro Leu Gln Ser Ala Pro Pro Leu Glu 645 650 655 Ser Pro Gln Arg Leu Leu Ser Ser Glu Pro Leu Asp Leu Ile Ser Val 660 665 670 Pro Phe Gly Asn Ser Ser Pro Ser Asp Ile Asp Val Pro Lys Pro Gly 675 680 685 Ser Pro Glu Pro Gln Val Ser Gly Leu Ala Ala Asn Arg Ser Leu Thr 690 695 700 Glu Gly Leu Val Leu Asp Thr Met Asn Asp Ser Leu Ser Lys Ile Leu 705 710 715 720 Leu Asp Ile Ser Phe Pro Gly Leu Asp Glu Asp Pro Leu Gly Pro Asp 725 730 735 Asn Ile Asn Trp Ser Gln Phe Ile Pro Glu Leu Gln 740 745 <210> 8 <211> 3551 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (284)..(2575) <400> 8 tttcaaacag cggaacaaac tgaaagctcc ggtgccagac cccacccccg gccccggccc 60 gggaccccct cccctcccgg gatcccccgg ggttcccacc ccgcccgcac cgccggggac 120 ccggccggtc cggcgcgagc ccccgtccgg ggccctggct cggcccccag gttggaggag 180 cccggagccc gccttcggag ctacggccta acggcggcgg cgactgcagt ctggagggtc 240 cacacttgtg attctcaatg gagagtgaaa acgcagattc ata atg aaa act agc 295 Met Lys Thr Ser 1 ccc cgt cgg cca ctg att ctc aaa aga cgg agg ctg ccc ctt cct gtt 343 Pro Arg Arg Pro Leu Ile Leu Lys Arg Arg Arg Leu Pro Leu Pro Val 5 10 15 20 caa aat gcc cca agt gaa aca tca gag gag gaa cct aag aga tcc cct 391 Gln Asn Ala Pro Ser Glu Thr Ser Glu Glu Glu Pro Lys Arg Ser Pro 25 30 35 gcc caa cag gag tct aat caa gca gag gcc tcc aag gaa gtg gca gag 439 Ala Gln Gln Glu Ser Asn Gln Ala Glu Ala Ser Lys Glu Val Ala Glu 40 45 50 tcc aac tct tgc aag ttt cca gct ggg atc aag att att aac cac ccc 487 Ser Asn Ser Cys Lys Phe Pro Ala Gly Ile Lys Ile Ile Asn His Pro 55 60 65 acc atg ccc aac acg caa gta gtg gcc atc ccc aac aat gct aat att 535 Thr Met Pro Asn Thr Gln Val Val Ala Ile Pro Asn Asn Ala Asn Ile 70 75 80 cac agc atc atc aca gca ctg act gcc aag gga aaa gag agt ggc agt 583 His Ser Ile Ile Thr Ala Leu Thr Ala Lys Gly Lys Glu Ser Gly Ser 85 90 95 100 agt ggg ccc aac aaa ttc atc ctc atc agc tgt ggg gga gcc cca act 631 Ser Gly Pro Asn Lys Phe Ile Leu Ile Ser Cys Gly Gly Ala Pro Thr 105 110 115 cag cct cca gga ctc cgg cct caa acc caa acc agc tat gat gcc aaa 679 Gln Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gln Thr Gln Thr Ser Tyr Asp Ala Lys 120 125 130 agg aca gaa gtg acc ctg gag acc ttg gga cca aaa cct gca gct agg 727 Arg Thr Glu Val Thr Leu Glu Thr Leu Gly Pro Lys Pro Ala Ala Arg 135 140 145 gat gtg aat ctt cct aga cca cct gga gcc ctt tgc gag cag aaa cgg 775 Asp Val Asn Leu Pro Arg Pro Pro Gly Ala Leu Cys Glu Gln Lys Arg 150 155 160 gag acc tgt gca gat ggt gag gca gca ggc tgc act atc aac aat agc 823 Glu Thr Cys Ala Asp Gly Glu Ala Ala Gly Cys Thr Ile Asn Asn Ser 165 170 175 180 cta tcc aac atc cag tgg ctt cga aag atg agt tct gat gga ctg ggc 871 Leu Ser Asn Ile Gln Trp Leu Arg Lys Met Ser Ser Asp Gly Leu Gly 185 190 195 tcc cgc agc atc aag caa gag atg gag gaa aag gag aat tgt cac ctg 919 Ser Arg Ser Ile Lys Gln Glu Met Glu Glu Lys Glu Asn Cys His Leu 200 205 210 gag cag cga cag gtt aag gtt gag gag cct tcg aga cca tca gcg tcc 967 Glu Gln Arg Gln Val Lys Val Glu Glu Pro Ser Arg Pro Ser Ala Ser 215 220 225 tgg cag aac tct gtg tct gag cgg cca ccc tac tct tac atg gcc atg 1015 Trp Gln Asn Ser Val Ser Glu Arg Pro Pro Tyr Ser Tyr Met Ala Met 230 235 240 ata caa ttc gcc atc aac agc act gag agg aag cgc atg act ttg aaa 1063 Ile Gln Phe Ala Ile Asn Ser Thr Glu Arg Lys Arg Met Thr Leu Lys 245 250 255 260 gac atc tat acg tgg att gag gac cac ttt ccc tac ttt aag cac att 1111 Asp Ile Tyr Thr Trp Ile Glu Asp His Phe Pro Tyr Phe Lys His Ile 265 270 275 gcc aag cca ggc tgg aag aac tcc atc cgc cac aac ctt tcc ctg cac 1159 Ala Lys Pro Gly Trp Lys Asn Ser Ile Arg His Asn Leu Ser Leu His 280 285 290 gac atg ttt gtc cgg gag acg tct gcc aat ggc aag gtc tcc ttc tgg 1207 Asp Met Phe Val Arg Glu Thr Ser Ala Asn Gly Lys Val Ser Phe Trp 295 300 305 acc att cac ccc agt gcc aac cgc tac ttg aca ttg gac cag gtg ttt 1255 Thr Ile His Pro Ser Ala Asn Arg Tyr Leu Thr Leu Asp Gln Val Phe 310 315 320 aag cca ctg gac cca ggg tct cca caa ttg ccc gag cac ttg gaa tca 1303 Lys Pro Leu Asp Pro Gly Ser Pro Gln Leu Pro Glu His Leu Glu Ser 325 330 335 340 cag cag aaa cga ccg aat cca gag ctc cgc cgg aac atg acc atc aaa 1351 Gln Gln Lys Arg Pro Asn Pro Glu Leu Arg Arg Asn Met Thr Ile Lys 345 350 355 acc gaa ctc ccc ctg ggc gca cgg cgg aag atg aag cca ctg cta cca 1399 Thr Glu Leu Pro Leu Gly Ala Arg Arg Lys Met Lys Pro Leu Leu Pro 360 365 370 cgg gtc agc tca tac ctg gta cct atc cag ttc ccg gtg aac cag tca 1447 Arg Val Ser Ser Tyr Leu Val Pro Ile Gln Phe Pro Val Asn Gln Ser 375 380 385 ctg gtg ttg cag ccc tcg gtg aag gtg cca ttg ccc ctg gcg gct tcc 1495 Leu Val Leu Gln Pro Ser Val Lys Val Pro Leu Pro Leu Ala Ala Ser 390 395 400 ctc atg agc tca gag ctt gcc cgc cat agc aag cga gtc cgc att gcc 1543 Leu Met Ser Ser Glu Leu Ala Arg His Ser Lys Arg Val Arg Ile Ala 405 410 415 420 ccc aag gtg ctg cta gct gag gag ggg ata gct cct ctt tct tct gca 1591 Pro Lys Val Leu Leu Ala Glu Glu Gly Ile Ala Pro Leu Ser Ser Ala 425 430 435 gga cca ggg aaa gag gag aaa ctc ctg ttt gga gaa ggg ttt tct cct 1639 Gly Pro Gly Lys Glu Glu Lys Leu Leu Phe Gly Glu Gly Phe Ser Pro 440 445 450 ttg ctt cca gtt cag act atc aag gag gaa gaa atc cag cct ggg gag 1687 Leu Leu Pro Val Gln Thr Ile Lys Glu Glu Glu Ile Gln Pro Gly Glu 455 460 465 gaa atg cca cac tta gcg aga ccc atc aaa gtg gag agc cct ccc ttg 1735 Glu Met Pro His Leu Ala Arg Pro Ile Lys Val Glu Ser Pro Pro Leu 470 475 480 gaa gag tgg ccc tcc ccg gcc cca tct ttc aaa gag gaa tca tct cac 1783 Glu Glu Trp Pro Ser Pro Ala Pro Ser Phe Lys Glu Glu Ser Ser His 485 490 495 500 tcc tgg gag gat tcg tcc caa tct ccc acc cca aga ccc aag aag tcc 1831 Ser Trp Glu Asp Ser Ser Gln Ser Pro Thr Pro Arg Pro Lys Lys Ser 505 510 515 tac agt ggg ctt agg tcc cca acc cgg tgt gtc tcg gaa atg ctt gtg 1879 Tyr Ser Gly Leu Arg Ser Pro Thr Arg Cys Val Ser Glu Met Leu Val 520 525 530 att caa cac agg gag agg agg gag agg agc cgg tct cgg agg aaa cag 1927 Ile Gln His Arg Glu Arg Arg Glu Arg Ser Arg Ser Arg Arg Lys Gln 535 540 545 cat cta ctg cct ccc tgt gtg gat gag ccg gag ctg ctc ttc tca gag 1975 His Leu Leu Pro Pro Cys Val Asp Glu Pro Glu Leu Leu Phe Ser Glu 550 555 560 ggg ccc agt act tcc cgc tgg gcc gca gag ctc ccg ttc cca gca gac 2023 Gly Pro Ser Thr Ser Arg Trp Ala Ala Glu Leu Pro Phe Pro Ala Asp 565 570 575 580 tcc tct gac cct gcc tcc cag ctc agc tac tcc cag gaa gtg gga gga 2071 Ser Ser Asp Pro Ala Ser Gln Leu Ser Tyr Ser Gln Glu Val Gly Gly 585 590 595 cct ttt aag aca ccc att aag gaa acg ctg ccc atc tcc tcc acc ccg 2119 Pro Phe Lys Thr Pro Ile Lys Glu Thr Leu Pro Ile Ser Ser Thr Pro 600 605 610 agc aaa tct gtc ctc ccc aga acc cct gaa tcc tgg agg ctc acg ccc 2167 Ser Lys Ser Val Leu Pro Arg Thr Pro Glu Ser Trp Arg Leu Thr Pro 615 620 625 cca gcc aaa gta ggg gga ctg gat ttc agc cca gta caa acc tcc cag 2215 Pro Ala Lys Val Gly Gly Leu Asp Phe Ser Pro Val Gln Thr Ser Gln 630 635 640 ggt gcc tct gac ccc ttg cct gac ccc ctg ggg ctg atg gat ctc agc 2263 Gly Ala Ser Asp Pro Leu Pro Asp Pro Leu Gly Leu Met Asp Leu Ser 645 650 655 660 acc act ccc ttg caa agt gct ccc ccc ctt gaa tca ccg caa agg ctc 2311 Thr Thr Pro Leu Gln Ser Ala Pro Pro Leu Glu Ser Pro Gln Arg Leu 665 670 675 ctc agt tca gaa ccc tta gac ctc atc tcc gtc ccc ttt ggc aac tct 2359 Leu Ser Ser Glu Pro Leu Asp Leu Ile Ser Val Pro Phe Gly Asn Ser 680 685 690 tct ccc tca gat ata gac gtc ccc aag cca ggc tcc ccg gag cca cag 2407 Ser Pro Ser Asp Ile Asp Val Pro Lys Pro Gly Ser Pro Glu Pro Gln 695 700 705 gtt tct ggc ctt gca gcc aat cgt tct ctg aca gaa ggc ctg gtc ctg 2455 Val Ser Gly Leu Ala Ala Asn Arg Ser Leu Thr Glu Gly Leu Val Leu 710 715 720 gac aca atg aat gac agc ctc agc aag atc ctg ctg gac atc agc ttt 2503 Asp Thr Met Asn Asp Ser Leu Ser Lys Ile Leu Leu Asp Ile Ser Phe 725 730 735 740 cct ggc ctg gac gag gac cca ctg ggc cct gac aac atc aac tgg tcc 2551 Pro Gly Leu Asp Glu Asp Pro Leu Gly Pro Asp Asn Ile Asn Trp Ser 745 750 755 cag ttt att cct gag cta cag tag agccctgccc ttgcccctgt gctcaagctg 2605 Gln Phe Ile Pro Glu Leu Gln 760 tccaccatcc cgggcactcc aaggctcagt gcaccccaag cctctgagtg aggacagcag 2665 gcagggactg ttctgctcct catagctccc tgctgcctga ttatgcaaaa gtagcagtca 2725 caccctagcc actgctggga ccttgtgttc cccaagagta tctgattcct ctgctgtccc 2785 tgccaggagc tgaagggtgg gaacaacaaa ggcaatggtg aaaagagatt aggaaccccc 2845 cagcctgttt ccattctctg cccagcagtc tcttaccttc cctgatcttt gcagggtggt 2905 ccgtgtaaat agtataaatt ctccaaatta tcctctaatt ataaatgtaa gcttatttcc 2965 ttagatcatt atccagagac tgccagaagg tgggtaggat gacctggggt ttcaattgac 3025 ttctgttcct tgcttttagt tttgatagaa gggaagacct gcagtgcacg gtttcttcca 3085 ggctgaggta cctggatctt gggttcttca ctgcagggac ccagacaagt ggatctgctt 3145 gccagagtcc tttttgcccc tccctgccac ctccccgtgt ttccaagtca gctttcctgc 3205 aagaagaaat cctggttaaa aaagtctttt gtattgggtc aggagttgaa tttggggtgg 3265 gaggatggat gcaactgaag cagagtgtgg gtgcccagat gtgcgctatt agatgtttct 3325 ctgataatgt ccccaatcat accagggaga ctggcattga cgagaactca ggtggaggct 3385 tgagaaggcc gaaagggccc ctgacctgcc tggcttcctt agcttgcccc tcagctttgc 3445 aaagagccac cctaggcccc agctgaccgc atgggtgtga gccagcttga gaacactaac 3505 tactcaataa aagcgaaggt ggacatgaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 3551 <210> 9 <211> 763 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Met Lys Thr Ser Pro Arg Arg Pro Leu Ile Leu Lys Arg Arg Arg Leu 1 5 10 15 Pro Leu Pro Val Gln Asn Ala Pro Ser Glu Thr Ser Glu Glu Glu Pro 20 25 30 Lys Arg Ser Pro Ala Gln Gln Glu Ser Asn Gln Ala Glu Ala Ser Lys 35 40 45 Glu Val Ala Glu Ser Asn Ser Cys Lys Phe Pro Ala Gly Ile Lys Ile 50 55 60 Ile Asn His Pro Thr Met Pro Asn Thr Gln Val Val Ala Ile Pro Asn 65 70 75 80 Asn Ala Asn Ile His Ser Ile Ile Thr Ala Leu Thr Ala Lys Gly Lys 85 90 95 Glu Ser Gly Ser Ser Gly Pro Asn Lys Phe Ile Leu Ile Ser Cys Gly 100 105 110 Gly Ala Pro Thr Gln Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gln Thr Gln Thr Ser 115 120 125 Tyr Asp Ala Lys Arg Thr Glu Val Thr Leu Glu Thr Leu Gly Pro Lys 130 135 140 Pro Ala Ala Arg Asp Val Asn Leu Pro Arg Pro Pro Gly Ala Leu Cys 145 150 155 160 Glu Gln Lys Arg Glu Thr Cys Ala Asp Gly Glu Ala Ala Gly Cys Thr 165 170 175 Ile Asn Asn Ser Leu Ser Asn Ile Gln Trp Leu Arg Lys Met Ser Ser 180 185 190 Asp Gly Leu Gly Ser Arg Ser Ile Lys Gln Glu Met Glu Glu Lys Glu 195 200 205 Asn Cys His Leu Glu Gln Arg Gln Val Lys Val Glu Glu Pro Ser Arg 210 215 220 Pro Ser Ala Ser Trp Gln Asn Ser Val Ser Glu Arg Pro Pro Tyr Ser 225 230 235 240 Tyr Met Ala Met Ile Gln Phe Ala Ile Asn Ser Thr Glu Arg Lys Arg 245 250 255 Met Thr Leu Lys Asp Ile Tyr Thr Trp Ile Glu Asp His Phe Pro Tyr 260 265 270 Phe Lys His Ile Ala Lys Pro Gly Trp Lys Asn Ser Ile Arg His Asn 275 280 285 Leu Ser Leu His Asp Met Phe Val Arg Glu Thr Ser Ala Asn Gly Lys 290 295 300 Val Ser Phe Trp Thr Ile His Pro Ser Ala Asn Arg Tyr Leu Thr Leu 305 310 315 320 Asp Gln Val Phe Lys Pro Leu Asp Pro Gly Ser Pro Gln Leu Pro Glu 325 330 335 His Leu Glu Ser Gln Gln Lys Arg Pro Asn Pro Glu Leu Arg Arg Asn 340 345 350 Met Thr Ile Lys Thr Glu Leu Pro Leu Gly Ala Arg Arg Lys Met Lys 355 360 365 Pro Leu Leu Pro Arg Val Ser Ser Tyr Leu Val Pro Ile Gln Phe Pro 370 375 380 Val Asn Gln Ser Leu Val Leu Gln Pro Ser Val Lys Val Pro Leu Pro 385 390 395 400 Leu Ala Ala Ser Leu Met Ser Ser Glu Leu Ala Arg His Ser Lys Arg 405 410 415 Val Arg Ile Ala Pro Lys Val Leu Leu Ala Glu Glu Gly Ile Ala Pro 420 425 430 Leu Ser Ser Ala Gly Pro Gly Lys Glu Glu Lys Leu Leu Phe Gly Glu 435 440 445 Gly Phe Ser Pro Leu Leu Pro Val Gln Thr Ile Lys Glu Glu Glu Ile 450 455 460 Gln Pro Gly Glu Glu Met Pro His Leu Ala Arg Pro Ile Lys Val Glu 465 470 475 480 Ser Pro Pro Leu Glu Glu Trp Pro Ser Pro Ala Pro Ser Phe Lys Glu 485 490 495 Glu Ser Ser His Ser Trp Glu Asp Ser Ser Gln Ser Pro Thr Pro Arg 500 505 510 Pro Lys Lys Ser Tyr Ser Gly Leu Arg Ser Pro Thr Arg Cys Val Ser 515 520 525 Glu Met Leu Val Ile Gln His Arg Glu Arg Arg Glu Arg Ser Arg Ser 530 535 540 Arg Arg Lys Gln His Leu Leu Pro Pro Cys Val Asp Glu Pro Glu Leu 545 550 555 560 Leu Phe Ser Glu Gly Pro Ser Thr Ser Arg Trp Ala Ala Glu Leu Pro 565 570 575 Phe Pro Ala Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Gln Leu Ser Tyr Ser Gln 580 585 590 Glu Val Gly Gly Pro Phe Lys Thr Pro Ile Lys Glu Thr Leu Pro Ile 595 600 605 Ser Ser Thr Pro Ser Lys Ser Val Leu Pro Arg Thr Pro Glu Ser Trp 610 615 620 Arg Leu Thr Pro Pro Ala Lys Val Gly Gly Leu Asp Phe Ser Pro Val 625 630 635 640 Gln Thr Ser Gln Gly Ala Ser Asp Pro Leu Pro Asp Pro Leu Gly Leu 645 650 655 Met Asp Leu Ser Thr Thr Pro Leu Gln Ser Ala Pro Pro Leu Glu Ser 660 665 670 Pro Gln Arg Leu Leu Ser Ser Glu Pro Leu Asp Leu Ile Ser Val Pro 675 680 685 Phe Gly Asn Ser Ser Pro Ser Asp Ile Asp Val Pro Lys Pro Gly Ser 690 695 700 Pro Glu Pro Gln Val Ser Gly Leu Ala Ala Asn Arg Ser Leu Thr Glu 705 710 715 720 Gly Leu Val Leu Asp Thr Met Asn Asp Ser Leu Ser Lys Ile Leu Leu 725 730 735 Asp Ile Ser Phe Pro Gly Leu Asp Glu Asp Pro Leu Gly Pro Asp Asn 740 745 750 Ile Asn Trp Ser Gln Phe Ile Pro Glu Leu Gln 755 760

Claims (17)

  1. 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 FoxM1 유전자의 스플라이싱을 변형시키는, 전사적으로 불활성인 FoxM1 변이체를 유도하는 화합물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    전사적으로 불활성인 FoxM1 변이체가 FoxM1A인 화합물.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    FoxM1 유전자가 인간 FoxM1 유전자인 화합물.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    암이 간, 전립선, 뇌, 유방, 폐, 결장, 췌장, 피부, 자궁 경관, 난소, 구강, 혈액 및 신경계의 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기 화학식 I의 화합물:
    [화학식 I]
    Figure pct00004

    상기 식에서,
    R1은 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클로알킬로부터 선택되되, 상기 3개의 치환기는 모두 C1 -7 알킬, C1 -7 알콕시, C1 -7 할로알콕시, C1 -7 할로알킬, 할로겐, 하이드록실, 시아노 또는 NO2로 임의적으로 치환되고;
    R2는 헤테로사이클로알킬로 임의적으로 치환된 C1 -7 알콕시, NR'R", 또는 하이드록시로 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, NR'R"-C1 -7 알킬, 하이드록시-C1-7 알킬, C3 -8 사이클로프로필, 헤테로사이클로알킬, C1 -7 알콕시-C1 -7 알킬, 하이드록시-C1 -7 알콕시-C1 -7 알킬, 할로겐 또는 아자스피로사이클로알킬, 아자바이사이클로알킬, NR'R"으로 임의적으로 치환된 C2 -7 알킨일, 또는 C1 -7 알킬로 임의적으로 치환된 헤테로아릴이고;
    R3은 할로겐 또는 C1 -7 알킬이고;
    R' 및 R"은 독립적으로 수소, C1 -7 알킬 및 하이드록시-C1 -7 알킬로부터 선택된다.
  6. 제 5 항에 있어서,
    R1이 C1 -7 알킬, C1 -7 할로알킬, 할로겐, C1 -7 알콕시 또는 NR'R"으로 임의적으로 치환된, 아릴 또는 헤테로아릴이고;
    R2가 C1 -7 알킬, 하이드록시-C1 -7 알킬 또는 할로-C1 -7 알킬로 임의적으로 치환된, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고;
    R3이 C1 -7 알킬인, 화합물.
  7. 제 5 항 또는 제 6 항에 있어서,
    R1이 페닐, 이미다조[1,2-a]피라진일, 피라졸로[1,5-a]피라진일, 이미다조[1,2-a]피리딘일, 1,3-벤즈옥사졸릴 또는 인다졸릴인 화합물.
  8. 제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    R2가 피페리딘일, 모폴린일, 피페라진일, 피리딘일, 1,2,3,6-테트라하이드로피리딘일 또는 피롤리딘일인 화합물.
  9. 암의 예방용 또는 치료용 약제의 제조를 위한 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 약학 제형.
  11. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 효과량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암의 예방 또는 치료 방법.
  12. (a) FoxM1 유전자를 발현하는 증식 세포를 시험 화합물과 접촉시키는 단계; 및
    (b) 상기 단계 (a)의 세포에서 FoxM1 변이체 FoxM1A를 측정하되, 대조군과 비교하여 FoxM1A 변이체의 증가된 수준이 암의 예방 또는 치료를 위한 화합물임을 나타내는 단계
    를 포함하는, 암의 예방 또는 치료를 위한 화합물의 스크리닝 방법.
  13. (a) FoxM1 유전자를 발현하는 증식 세포를 시험 화합물과 접촉시키는 단계; 및
    (b) 상기 단계 (a)의 세포에서 FoxM1 변이체 FoxM1B 및/또는 변이체 FoxM1C를 측정하되, 대조군과 비교하여 변이체 FoxM1B 및/또는 변이체 FoxM1C의 감소된 수준이 암의 예방 또는 치료를 위한 화합물임을 나타내는 단계
    를 포함하는, 암의 예방 또는 치료를 위한 화합물의 스크리닝 방법.
  14. 제 12 항 또는 제 13 항에 있어서,
    세포가 섬유아세포인 방법.
  15. 제 12 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    FoxM1 변이체를 RNA 수준에서 측정하는 방법.
  16. 제 12 항 또는 제 15 항에 있어서,
    FoxM1 변이체를 단백질 수준에서 측정하는 방법.
  17. 본원에 기재된 바와 같은 발명.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024106737A1 (ko) * 2022-11-16 2024-05-23 한양대학교 에리카산학협력단 Foxm1 돌연변이체 또는 foxm1 shrna를 포함하는 암 치료용 약학 조성물

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2915764A1 (en) 2013-08-19 2015-02-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Screening method
EP3082820B1 (en) 2013-12-19 2022-07-20 PTC Therapeutics, Inc. Methods for modulating the amount of rna transcripts
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
CA2963288A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Cold Spring Harbor Laboratory Targeted augmentation of nuclear gene output
EP4249472A3 (en) 2015-05-30 2023-12-13 PTC Therapeutics, Inc. Methods for modulating rna splicing
CN107828871A (zh) * 2015-06-24 2018-03-23 湖北工业大学 基于肽核酸探针的Wnt信号通路中FoxM1基因P271Q突变的检测试剂
US10196639B2 (en) 2015-10-09 2019-02-05 University Of Southampton Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression
IL281633B (en) 2015-12-10 2022-07-01 Ptc Therapeutics Inc Methods for treating Huntington's disease
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
EP3390636B1 (en) 2015-12-14 2021-05-19 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of dravet syndrome
CN108473510B (zh) * 2016-04-28 2021-10-29 豪夫迈·罗氏有限公司 制备2-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮的方法
EP3544435A4 (en) 2016-11-28 2020-11-04 PTC Therapeutics, Inc. RNA SPLICE MODULATION PROCESSES
EP3634953B1 (en) 2017-06-05 2024-01-03 PTC Therapeutics, Inc. Compounds for treating huntington's disease
CN111372611A (zh) 2017-06-14 2020-07-03 Ptc医疗公司 修饰rna剪接的方法
CA3067591A1 (en) 2017-06-28 2019-01-03 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating huntington's disease
US11395822B2 (en) 2017-06-28 2022-07-26 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating Huntington's disease
CN111499615B (zh) 2017-08-04 2024-02-02 斯基霍克疗法公司 用于调节剪接的方法和组合物
WO2019040923A1 (en) 2017-08-25 2019-02-28 Stoke Therapeutics, Inc. ANTISENSE OLIGOMERS FOR THE TREATMENT OF DISEASE CONDITIONS AND OTHER DISEASES
GB2610100B (en) 2017-10-23 2023-08-16 Stoke Therapeutics Inc Antisense oligomers for treatment of non-sense mediated RNA decay based conditions and diseases
CA3094703A1 (en) 2018-03-27 2019-10-03 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for treating huntington's disease
CN112272666A (zh) * 2018-04-10 2021-01-26 斯基霍克疗法公司 用于治疗癌症的化合物
MX2020011695A (es) 2018-05-04 2021-02-26 Stoke Therapeutics Inc Métodos y composiciones para el tratamiento de la enfermedad por almacenamiento de éster de colesterilo.
WO2020005873A1 (en) 2018-06-27 2020-01-02 Ptc Therapeutics, Inc. Heterocyclic and heteroaryl compounds for treating huntington's disease
MX2020014116A (es) 2018-06-27 2021-06-15 Reborna Biosciences Inc Agente profilactico o terapeutico para atrofia muscular espinal.
US11685746B2 (en) 2018-06-27 2023-06-27 Ptc Therapeutics, Inc. Heteroaryl compounds for treating Huntington's disease
CN110627733A (zh) * 2018-07-20 2019-12-31 温宁 一种抗肿瘤小分子化合物的作用机制及应用
EP3920915A4 (en) 2019-02-05 2022-10-05 Skyhawk Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING SPLICE
EP3920928A4 (en) 2019-02-06 2022-09-28 Skyhawk Therapeutics, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATION OF SPLICING
US11129829B2 (en) 2019-06-17 2021-09-28 Skyhawk Therapeutics, Inc. Methods for modulating splicing
EP4150092A1 (en) 2020-05-11 2023-03-22 Stoke Therapeutics, Inc. Opa1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5994367A (en) * 1997-03-07 1999-11-30 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method for treating tumors using 2-aryl-naphthyridin-4-ones
WO2004100977A1 (en) 2003-03-25 2004-11-25 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Inhibition of tumor cell proliferation by foxm1b inhibitors
WO2005076979A2 (en) 2004-02-06 2005-08-25 Wyeth Diagnosis and therapeutics for cancer
EP1737979B9 (en) * 2004-03-23 2011-09-21 Oncotherapy Science, Inc. Method for diagnosing non-small cell lung cancer
EP1758999B1 (en) 2004-06-22 2011-03-09 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois METHODS OF INHIBITING TUMOR CELL PROLIFERATION WITH FOXM1 siRNA
AU2008290049B2 (en) 2007-08-20 2013-08-29 Oncotherapy Science, Inc. FOXM1 peptide and medicinal agent comprising the same
WO2009151546A2 (en) 2008-05-27 2009-12-17 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating spinal muscular atrophy
US8680254B2 (en) * 2009-01-14 2014-03-25 Philadelphia Health & Education Corporation Modulation of pre-mRNA using splice modulating oligonucleotides as therapeutic agents in the treatment of disease
WO2011127297A1 (en) 2010-04-07 2011-10-13 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method of treating tumor resistant to herceptin or paclitaxel using foxm1 inhibitors and detecting same
US9427531B2 (en) 2010-06-28 2016-08-30 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Auto-injector
CA2861609C (en) 2011-12-30 2021-02-16 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
US9399649B2 (en) 2012-01-26 2016-07-26 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for treating spinal muscular atrophy
PE20142364A1 (es) 2012-02-10 2015-01-10 Hoffmann La Roche Compuestos para tratar atrofia muscular espinal
KR102099997B1 (ko) 2012-03-01 2020-04-13 피티씨 테라퓨틱스, 인크. 척수성 근위축증을 치료하기 위한 화합물
EA028382B1 (ru) 2012-03-23 2017-11-30 ПиТиСи ТЕРАПЬЮТИКС, ИНК. Соединения для лечения спинальной мышечной атрофии
WO2014209841A2 (en) 2013-06-25 2014-12-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Compounds for treating spinal muscular atrophy
CA2915764A1 (en) 2013-08-19 2015-02-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Screening method
ES2761423T3 (es) 2014-05-15 2020-05-19 Hoffmann La Roche Compuestos para tratar la atrofia muscular espinal
KR102565544B1 (ko) 2014-06-25 2023-08-10 에프. 호프만-라 로슈 아게 척수성 근위축증을 치료하기 위한 이미다조[1,2-a]피라진-1일-벤즈아마이드 화합물
WO2016128343A1 (en) 2015-02-09 2016-08-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Compounds for the treatment of cancer
EP3298017B1 (en) 2015-05-20 2019-08-14 H. Hoffnabb-La Roche Ag Compounds for treating spinal muscular atrophy

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024106737A1 (ko) * 2022-11-16 2024-05-23 한양대학교 에리카산학협력단 Foxm1 돌연변이체 또는 foxm1 shrna를 포함하는 암 치료용 약학 조성물

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